UA124573C2 - Антитіло, яке специфічно зв'язується з tigit людини, та спосіб лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта - Google Patents

Abstract

Винахід стосується антитіла, яке специфічно зв'язується з TIGIT людини. Винахід також стосується полінуклеотиду, вектору, клітини-хазяїна, способу одержання антитіла, імунокон’югату, композиції, застосування антитіла, способу лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта, набору для лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта.

Description

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

У додатку до цієї заявки міститься перелік послідовностей, що був поданий в електронному вигляді у форматі АЗСІЇ і таким чином включений шляхом посилання в повному обсязі.

Зазначена копія АБСІЇ, створена 22 вересня 2016 року, носить назву 50474- 120М/03 бедциепсе і ібйпуд 9 22 16 5125, а її розмір становить 209 318 байт.

ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ

Винахід стосується анти-ТІСІТ антитіл (Т-клітинний імунорецептор з доменами Ід і ІТІМ (імунорецепторний інгібіторний мотив на базі тирозину)) і способів їх застосування.

РІВЕНЬ ТЕХНІКИ

Пов'язані з імунною системою захворювання (наприклад, рак) являють собою прояв або наслідок складних біологічних шляхів, що при нормальній фізіології мають вирішальне значення для відповіді на пошкодження або травму, ініціюючи відновлення після ушкодження або травми і встановлюючи вроджений і набутий захист. Захворювання або патологія виникає, якщо ці нормальні фізіологічні шляхи спричиняють додаткове пошкодження або травму, що безпосередньо пов'язані з інтенсивністю відповіді (наприклад, внаслідок аномального регулювання або надмірної стимуляції) або у формі реакції організму на самого себе.

Хоча генезис цих захворювань часто включає в себе багатосхідчасті шляхи і часто декілька різних біологічних систем/шляхів, втручання в критичних точках в одному або декількох з цих шляхів може здійснювати пом'якшуючий або терапевтичний вплив. Терапевтичне втручання може відбуватися за допомогою антагонізму шкідливому процесу/лшляху або стимуляції корисного процесу/шляху.

Багато захворювань, пов'язані з імунною системою, є відомими і широко вивчалися. До таких захворювань належать рак (неоплазія), імуноопосередковані запальні захворювання, неімуноопосередковані запальні захворювання, інфекційні захворювання та імунодефіцитні захворювання.

Т-лімфоцити (Т-клітини) є важливим компонентом імунної відповіді ссавців. Т-клітини розпізнають антигени, пов'язані з власною молекулою, яка кодується генами в основному комплексі гістосумісності (ОКГ (МНС)). Антиген може відображатися разом з молекулами ОКГ (МНОС) на поверхні антигенпрезентуючих клітин (АПК (АРС)), інфікованих вірусом клітин,

Зо ракових клітин, трансплантатів і т. д. Система Т-клітин усуває такі модифіковані клітини, що становлять загрозу здоров'ю ссавця-хазяїна. Т-клітини включають хелперні Т-клітини і цитотоксичні Т-клітини. Хелперні Т-клітини інтенсивно розмножуються після розпізнавання комплексу антиген-ОКГ (МНС) на АПК (АРС). Крім того, хелперні Т-клітини секретують різні цитокіни (тобто, лімфокіни), що відіграють центральну роль в активації В-клітин, цитотоксичних

Т-клітин та різних інших клітин, що беруть участь в імунній відповіді.

Регуляторні Т-клітини (Тгед) являють собою підмножину хелперних Т-клітин, що відіграють критичну роль у пригніченні імунних реакцій по відношенню до власних структур організму, і часто зустрічаються на ділянках хронічного запалення, таких як пухлинна тканина. Фенотипово,

Тгед визначаються високим рівнем експресії СО25, СІ ТА4, СІТК (індукований глюкокортикоїдом рецептор пухлинного некротичного фактора) і нейропіліну-ї (МАР-1) на поверхні клітини і знаходяться під контролем фактора транскрипції ЕОХРЗ. Тгед виконують свою супресивну функцію на активованих Т-клітинах через залежні від контакту механізми і продукування цитокінів. Крім того, Тгед модулюють імунні відповіді шляхом безпосередньої взаємодії з лігандами на дендритних клітинах (ДК (ОС)), такої як лігування СО40Ї і СТІ А4 з молекулами В7 на ДК (СС), що спричиняє індукцію індоламін-2,3-діоксигенази (ДО). ДК (ОС) являють собою професійні АПК (АРС), здатні індукувати імунітет або толерантність до власних або чужорідних антигенів. Підсилені ДК (0С) Тгед пригнічують алореактивні відповіді іп міго, а при адоптивному перенесенні відповідні Ттед пригнічують діабет у мишей МОЮ»5сідй або експериментально індуковану астму. Конкретна взаємодія лігандів з ДК (0С) із Тгтед додатково може нейтралізувати їх інгібіторну функцію, таку як залучення СІТЕК у мишей, наводячи на думку про те, що ДК (ОС) може відігравати множинні ролі в модуляції функції Тгед.

Молекули СТГА4 її СІТК є лігандами, що визначені в суперродинах костимулючих/пригнічуючих/ молекул СО28-87 і ТМЕ (пухлинний некротичний фактор), відповідно. Ці молекули високою мірою експресуються на Тгед, але зазвичай активізуються на активованих Т-клітинах. Зовсім нещодавно білок, позначений ТІСІТ (для Т-клітинного імунорецептора з доменами Ід і ІТІМ), був ідентифікований як білок, пов'язаний з клітинною поверхнею, що специфічно експресується на Т-клітинах, який містить домен Ід, трансмембранний домен і два передбачуваних імунорецепторних інгібіторних мотиви на базі тирозину (ІТІМ). Було показано, що ТІСІТ особливою мірою експресується на підмножинах Тгед і бо Т-клітин пам'яті, а також на природних клітинах-кілерах (ПК (МК)). Оскільки існує незадоволена потреба в нових терапевтичних засобах і способах лікування пов'язаних з імунною системою розладів і, зокрема, ракових захворювань, в цьому документі описані несподівано ефективні терапевтичні композиції, такі як анти-ТІСІТ антитіла і їх композиції, а також способи лікування пов'язаних з імунною системою розладів і ракових захворювань, що включають модулювання взаємодії ТІСІТ з його партнерами із зв'язування.

КОРОТКИЙ ОПИС СУТІ ВИНАХОДУ

В цьому винаході запропоновані анти-ТІСІТ (Т-клітинний імунорецептор з доменами Ід і

ІТІМ) антитіла і їх варіанти з покращеними властивостями, включаючи, наприклад, афінність зв'язування, перехресну реактивність, фармакокінетику та/або експресію. Зокрема, цей винахід відноситься до анти-ТІСІТ антитіл і їх варіантів, що володіють, наприклад, високою афінністю зв'язування з ТІСІТ людини; перехресної реактивністю між ТІСІТ людини, ТІСІТ яванського макака (яванця) та/або ТІСІї кролика; бажаними параметрами кліренсу у яванця; та біохімічними і біофізичними властивостями, що забезпечують антитілам і їх варіантам високу стабільність.

В одному аспекті винахід відноситься до антитіла, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ людини, причому антитіло зв'язується з епітопом на ТІСІТ людини, що містить один або більшу кількість з амінокислотних залишків Зег/8, Бег80 і їуз82 ТІСІТї людини. В одному варіанті реалізації винаходу епітоп містить амінокислотні залишки Зегв0 і І уз82 ТІСІТ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп містить амінокислотні залишки Зег7/78, Зег80 і Гуз82 ТІСІТ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп додатково містить амінокислотний залишок АІаб7 ТІСІТ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп додатково містить один або більшу кількість додаткових амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається із С1Іиб0О, І еи65 і Пеб8 ТІСІТ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп додатково містить один або більшу кількість додаткових амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається із сіІп5б, А5п70, Геи73 і Ніб111 ТІСІї людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп додатково містить один або більшу кількість додаткових амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається із Тпг55, А5зп58, А5рб3, с1пб4,

Ніз76, Пе77 і Рго79 ТІСІТ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп складається з амінокислотних залишків Тпг55, СіІп5б, А5п58, СіибО, Азрб3, Сі1пб4, І еиб65, Аіаб7, Пеб8, Авп70,

Зо І еи73, Ніз 76, Пе77, Зег78, Рго79, Зег80, І уз82 і Ніз111 ТІСІТ людини.

В іншому аспекті винахід відноситься до антитіла, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ людини, причому антитіло зв'язується з епітопом на ТІСІТ людини, що містить один або більшу кількість амінокислотних залишків Тпг55, Зег80 і Гуз82 ТІСІї людини. В одному варіанті реалізації винаходу епітоп містить амінокислотний залишок І у582 ТІСІЇ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп містить амінокислотні залишки Тпг55, 5егв0 і Гуз82 ТІСІТ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп додатково містить амінокислотний залишок СіІп5б ТІСІТ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп додатково містить амінокислотний залишок Пе77 або Рго79 ТІСІТ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп додатково містить амінокислотні залишки Рго79 Пе77 і ТІСІТ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп додатково містить амінокислотний залишок А5п58 або сСішбО ТІСІТ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп додатково містить амінокислотні залишки

Азп58 і бішбО ТІСІТ людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп додатково містить один або більшу кількість додаткових амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається із Геиб5, Пеб8, І еи73, Нібз7б, Зег/8 і Ніб111 ТІСІї людини. В іншому варіанті реалізації винаходу епітоп додатково містить амінокислотні залишки І е!и65, Пеб8, І еи73, Ні 76, зег78 і Ніб111 ТІСІТї людини. У ще одному варіанті реалізації винаходу епітоп складається з

ТАг55, СІп5б, Азп58, СІШб0, І еиб5, Пеб8, І еи73, Ніз 76, Пе77, Зег78, Рго79, Зегв80, І уз82 і Нібз111

ТІСІТ людини.

В іншому аспекті винахід відноситься до антитіла, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ людини, причому антитіло містить паратоп, що містить один або більшу кількість амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається із амінокислотних залишків варіабельної ділянки важкого ланцюга Азп32, Туг52, Агд52Б, Рпе53, І уз54, Туг5б, Азр58, Туго9,

А5р100, І еит100а, І еи100Б6 ї Аіат00с і амінокислотних залишків варіабельної ділянки легкого ланцюга Туг274, Туг92, зег93, Тпг94 і Рпе96. В одному варіанті реалізації винаходу паратоп складається з амінокислотних залишків варіабельної ділянки важкого ланцюга Азп32, Туг52,

Аго52б, Рпез53, Гуз54, Тугоб, Азр58, Туг99, Азр100, І еи100а, І еи1006 ї АІіа100с ії амінокислотних залишків варіабельної ділянки легкого ланцюга Туг27а, Туг92, Зег93, Тпг94 і Рпе96. У будь- якому з вищевказаних аспектів антитіло може бути здатним зв'язуватися з ТІСІТ кролика.

В іншому аспекті винахід відноситься до антитіла, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ 60 людини, причому антитіло зв'язується з епітопом на ТІСІТ людини, що містить один або більшу кількість амінокислотних залишків, вибраних з групи, що складається із СіІп53, Нібє111 і Туг113

ТІСІТ людини. У деяких варіантах реалізації епітоп додатково містить бІп5б ТІСІТ людини. У деяких варіантах реалізації епітоп додатково містить с1ІшбО, І еиб5, Пеб8, Азп70, І еи73 і Нібз 76

ТІСІТ людини.

В іншому аспекті винахід відноситься до антитіла, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ людини, причому антитіло містить наступні шість гіперваріабельних ділянок (ГВД (НМК)): НМА -

НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗМ5ААМММ (ЗЕО ІО МО: 1); НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність КТУУВЕКУ/УБОМАМБУКа (5ЕО ІЮ МО: 2); НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕЗТТУРІ АСРЕОМ (5ЕБО 10 МО: 3); НМК-Ї7, що містить амінокислотну послідовність К5БОТМІ У5ЗММККМІГА (5ЕБО ІЮ МО: 4); НМК-12, що містить амінокислотну послідовність МАБТКЕЗ (5ЕБО ІЮ МО: 5); ії НМАК-І3, що містить амінокислотну послідовність ООУУЗТРЕТ (ЗЕО ІЮО МО: 6). У деяких варіантах реалізації антитіло додатково містить наступні каркасні ділянки (КД (ЕК)) варіабельної ділянки легкого ланцюга: ЕК-11, що містить амінокислотну послідовність ОГІММТОЗРОБІ АМ5І СЕКАТІМС (5ЕО ІЮ МО: 7); ЕК-І2, що містить амінокислотну послідовність ММООКРООРРМІСІМ (5ЕО ІО МО: 8); ЕК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗМРОКЕЗОЗОЗОТОЕТІ ТІЗБІ ОАЛЕОМАМУМС (ЗЕО ІЮО МО: 9); і ЕК-

І 4, що містить амінокислотну послідовність ЕЗРОТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 10). У деяких варіантах реалізації антитіло додатково містить наступні КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-

НІ, що містить амінокислотну послідовність ХІ. МОЇ ООБИРИЇ МКРБОТІ 5І ТСАІЗИарБМУЗ (ЗЕО І

МО: 11), де Хі являє собою СО або Е; ЕК-Н2, що містить амінокислотну послідовність

МІВОБ5РОВСОГ ЕМО (5ЕБО 10 МО: 12); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність

КІТІМРОТЗКМОРЗГОЇ МЗМТРЕОЮОТАМЕУСТК (ЗЕО ІЮ МО: 13); і ЕК-НА, що містить амінокислотну послідовність УМ/ЗОСТІ МТМ (ЗБО ІЮ МО: 14). У деяких варіантах реалізації антитіло додатково містить наступні ділянки (КД) варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМО ОО5БОРОЇ МКРБЗОТІ 5СТСАІЗОО5М5 (5ЕБО ІЮО МО: 15); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність МЛКОЗРБКОЇ ЕУМІ о (5ЕО ІО МО: 12); ЕК-

НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕІТІМРОТЗКМОЕБ5І ОЇ МЗМТРЕОЮТАМЕМСТЕА (ЗЕО

ІО МО: 13); і ЕК-НА4, що містить амінокислотну послідовність МЗОСТІ МТУ (ЗЕО ІЮО МО: 14). У деяких варіантах реалізації антитіло додатково містить наступні КД варіабельної ділянки

Зо важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ОМО СОБаИаРИЇМКРБЗОТІ БІ САМ (ЗЕО ІО МО: 16); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМІКОБРБЗКОГЕММ ОО (5БО ІО МО: 12); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІТІМРОТЗКМОЕ5І ОЇ МЗМТРЕОЮТАМЕУСТЕК (ЗЕО ІЮ МО: 13); і ЕК-НА4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МТУ (5ЕБО ІО МО: 14). У деяких варіантах реалізації антитіло здатне зв'язуватися з ТІСІТ кролика.

В іншому аспекті винахід відноситься до антитіла, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ людини, причому антитіло містить наступні шість ГВД (НУК): НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗУРММ (ЗЕО ІЮ МО: 17); НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність

УМІМТМТаМмРтиМОаЕТа (5ЕО ІЮО МО: 18); НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність

ТаснтТМОБМАРОМ (5ЕБО 10 МО: 19); НМВ-Ї71, що містить амінокислотну послідовність

ВАБОМІЗОБІ А (5ЕО ІО МО: 20); НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ААЗТІ 05 (ЗЕО ІЮ МО: 21); і НМЕ-І3, що включає амінокислотну послідовність ОНІ НОМРХІМ (ЗЕО ІЮ МО: 22), де Хі являє собою С або 5. В деяких варіантах реалізації антитіло містить наступні шість

ГВД (НМК): НМЕ-НІ, що містить амінокислоту послідовність ЗХУРММ (ЗЕО ІЮ МО: 17); НМА-На2, що містить амінокислотну послідовність ММ МГТОМРТУМОСЕТО (5ЕО ІО МО: 18); НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ТОСНТУОЗМАРОМ (5ЕО ІЮ МО: 19); НМК-11, що містить амінокислотну послідовність КАБОМІЗЗ5І А (5ЕО ІЮ МО: 20); НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ААБТГ ОБ (ЗЕБО ІЮО МО: 21); ії НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність

ОНІНСУРБМ (З5ЕБО ІЮО МО: 23). У деяких варіантах реалізації антитіло додатково містить наступні КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМОЇ МОЗБИаБОЇ ККРАБУНУЗСКАБОИМУТеЕТ (ЗЕО І МО: 24); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М/Л/КОАРОНОГЕМУМО (5БО ІЮ МО: 25); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КЕМЕЗГОТЗММТАМІ ОІ55І КАЕОТАМУЕСАК (5ЕО ІЮО МО: 26); і ЕК-

Ні, що містить амінокислотну послідовність МОСТММУТУ55 (5БО ІО МО: 27). У деяких варіантах реалізації антитіло містить наступні шість ГВД (НМК): НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗУРММ (5ЕБО ІЮ МО: 17); НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність УЛІМТМТОМРТМУМУОСЕТО (ЗЕБЕО ІЮО МО: 18); НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ТОСНТУОБМАРОМ (5ЕБО ІО МО: 19); НМК-Ї71, що містить амінокислотну послідовність КАБОМІЗЗЗІ А (5ЕО І МО: 20); НМА-1І2, що містить амінокислотну послідовність 60 ААБТОБ (5БО ІЮ МО: 21); ї НМК-ЇЗ3, що містить амінокислотну послідовність ОНГНОУРСМ

(ЗЕО ІО МО: 28). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло додатково містить наступні КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ОМОГ МОаБОЇККРИаАБУНУЗСКАЗОИМТЕТ (5ЕО І МО: 29); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М/МКОАРОНОЇ ЕМММО (5БО ІО МО: 25); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КЕМЕ5І ОТЗММТАМІ ОІЗ5І КАЕОТАМУЕСАК (ЗЕО ІО МО: 26); і ЕБ-НА4, що містить амінокислотну послідовність УЗООТММУТМУ55 (ЗЕБО ІЮО МО: 27). У деяких варіантах реалізації антитіло додатково містить наступні КД варіабельної ділянки легкого ланцюга: ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність ОЮСТОЗРТЕЇ ЗАЗМООМКМТІТС (5ЕО ІО МО: 30); ЕК-1І2, що містить амінокислотну послідовність М/МООМРОКАРКИЇ ІМ (5ЕО ІО МО: 31); ЕВ-І 3, що містить амінокислотну послідовність ЗМРОЕКЕЗО5О5ОТЕБНЕТІ ТІЗ5І ОРЕОЕМТУМС (ЗЕО ІЮ МО: 32); і ЕК-

І 4, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (5ЕО ІО МО: 33).

В іншому аспекті винахід відноситься до антитіла, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ людини, причому антитіло містить (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга (МН), що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 95 95 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ

МО: 34 або 35; (Б) варіабельну ділянку легкого ланцюга (МІ), що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 95 95 відносно амінокислотної послідовності «ЕО ІЮ МО: 36; або (с) варіабельну ділянку важкого ланцюга, як в (а), і варіабельну ділянку легкого ланцюга, як у (Б). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга (МН), що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 9595 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІО МО: 34; (Б) варіабельну ділянку легкого ланцюга (МІ), що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 95 95 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ

МО: 36; або (с) варіабельну ділянку важкого ланцюга, як в (а), і варіабельну ділянку легкого ланцюга, як у (Б). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга (МН), що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 95 95 відносно амінокислотної послідовності ЕС ІЮО МО: 35; (Б) варіабельну ділянку легкого ланцюга (М), що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 9595 відносно амінокислотної послідовності 5ЕО 10 МО: 36; або (с) варіабельну ділянку важкого ланцюга, як в (а), і варіабельну ділянку легкого ланцюга, як у (Б). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло здатне зв'язуватися з ТІСІТ кролика.

В іншому аспекті винахід відноситься до антитіла, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ людини, причому антитіло містить (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга (МН), що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 95 95 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ

МО: 37; (Б) варіабельну ділянку легкого ланцюга (М), що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 95 95 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ МО: 38; або (с) варіабельну ділянку важкого ланцюга, як в (а), і варіабельну ділянку легкого ланцюга, як у (Б).

У ще одному аспекті винахід відноситься до антитіла, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ людини, причому антитіло містить (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга (МН), що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 95 95 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ

МО: 39; (Б) варіабельну ділянку легкого ланцюга (М), що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 95 95 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ МО: 40; або (с) варіабельну ділянку важкого ланцюга, як в (а), і варіабельну ділянку легкого ланцюга, як у (Б).

В будь-якому з аспектів, описаних вище, антитіло може бути здатним зв'язуватися як з ТІСІТ людини, так і з ТІСІТ яванського макака (яванця), але не з ТІСІТ миші. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло зв'язується з ТІСІТ людини із Ка близько 10 нМ або менше і з

ТІСІТ яванця з Ка близько 10 нМ або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло зв'язується з ТІСІТ людини із Ка від близько 0,1 нМ до близько 1 нМ і з ТІСІТ яванця з Ка від близько 0,5 нМ до близько 1 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло зв'язується з

ТІСІТ людини із Ка близько 0,1 нМ або менше і з ТІСІТ яванця з Ка близько 0,5 нМ або менше.

У будь-якому з аспектів, описаних вище, антитіло може бути антагоністичним антитілом або агоністичним антитілом.

У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністичне антитіло специфічно зв'язується з

ТІСІТ їі пригнічує або блокує взаємодію ТІСІТ з рецептором поліовірусу (ПВР (РУК)). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністичне антитіло інгібує внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням ТІСІї з ПВР (РМК). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ людини з ПВР (РУК) людини зі значенням ІС5О 10 нМ або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ людини з ПВР (РУК) людини зі значенням ІС5О від 1 нМ до 10 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ яванця з ПВР (РУК) яванця зі значенням ІС5О 50 бо НМ або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ яванця з ПВР (РМК) яванця зі значенням ІС50О від 1 нМ до близько 50

НМ. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ яванця з ПВР (РУК) яванця зі значенням ІС50 від 1 нМ до близько 5 НМ.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло специфічно зв'язується з ТІСІП і стимулює взаємодію ПВР (РУК) з СО226 або С09б6. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло специфічно зв'язується з ТІСІТ і стимулює взаємодію ПВР (РУК) з СО226 і

СОроОб. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло специфічно зв'язується з

ТІСІТ і стимулює взаємодію ПВР (РУК) людини з СО226 людини і СО0ОУОб людини. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло специфічно зв'язується з ТІСІТ і стимулює взаємодію ПВР (РУК) яванця з СО226 яванця і СОО9б яванця.

В іншому аспекті винахід відноситься до виділеного антитіла, яке конкурує за зв'язування з

ТІСІТ з антитілом, за допомогою одного з вищевказаних аспектів.

В іншому аспекті винахід відноситься до виділеного антитіла, яке зв'язується з тим же епітопом, що і антитіло, за допомогою одного з вищевказаних аспектів.

У деяких варіантах реалізації будь-якого з аспектів винаходу, описаних вище, антитіло є моноклональним. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло є людським, гуманізованим або гібридним. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло являє собою повнорозмірне антитіло. У деяких варіантах реалізації винаходу кліренс антитіла після введення (наприклад, ін'єкції, наприклад, внутрішньовенної ін'єкції) становить менше ніж близько 10 мл/кг/добу (наприклад, від близько З мл/кг/добу до близько 10 мл/кг/добу), У деяких варіантах реалізації винаходу кліренс антитіла становить близько З мл/кг/добу до близько 8 мл/кг/добу. У деяких варіантах реалізації винаходу введення антитіла проводять ссавцю (наприклад, мавпі, такий як яванський макак, або людині). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло являє собою фрагмент антитіла, що зв'язується з ТІСІТ. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла вибраний з групи, що складається із Раб, Бар РаБ'-5Н, Ем, одноланцюгового варіабельного фрагмента (з5сЕм) і фрагментів (Раб')». У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло являє собою антитіло класу дО. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло класу

ІцО є антитілом підкласу (901. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, описане в цьому документі, може бути застосоване як лікарський засіб. У деяких варіантах реалізації

Зо винаходу антитіло, описане в цьому документі, може бути застосоване для лікування або уповільнення прогресування раку у суб'єкта, що потребує цього. У деяких варіантах реалізації винаходу рак вибраний з групи, що включає недрібноклітинний рак легені, дрібноклітинний рак легені, рак нирки, колоректальний рак, рак яєчника, рак молочної залози, рак підшлункової залози, карциному шлунка, рак сечового міхура, рак стравоходу, мезотеліому, меланому, рак голови і шиї, рак щитоподібної залози, саркому, рак передміхурової залози, гліобластому, рак шийки матки, рак тимусу, лейкоз, лімфому, мієлому, грибоподібні мікози, рак клітин Меркель і злоякісні новоутворення кровотворної системи. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, описане в цьому документі, може бути застосоване для лікування або уповільнення прогресування множинної мієломи (ММ (ММ)). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, описане в цьому документі, може бути застосоване для лікування або уповільнення прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта, що потребує цього. У деяких варіантах реалізації винаходу пов'язане з імунною системою захворювання пов'язане з дисфункціональним розладом Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується виснаженням Т-клітин. У деяких варіантах пов'язане з імунною системою захворювання вибране з групи, що складається із неусуненої гострої інфекції, хронічної інфекції та пухлинного імунітету. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, описане в цьому документі, може бути застосоване для збільшення, підсилення або стимуляції імунної відповіді або функції у суб'єкта, що потребує цього.

В іншому аспекті винахід відноситься до полінуклеотиду (наприклад, виділеного полінуклеотиду), що кодує будь-яке з описаних в цьому документі антитіл. В іншому аспекті винахід відноситься до вектору (наприклад, вектор експресії), який містить полінуклеотид для експресії антитіла. В іншому аспекті винахід відноситься до клітин-хазяїв, що містить вищевказані полінуклеотиди та/або вектори. У деяких варіантах реалізації винаходу клітина- хазяїн є еукаріотичною (наприклад, клітина ссавця). У деяких варіантах реалізації винаходу еукаріотична клітина являє собою клітину 293, клітину яєчника китайського хом'ячка (ЯКХ (СНО)), дріжджову клітину або рослинну клітину. У деяких варіантах реалізації винаходу клітина-хазяїн являє собою клітини прокаріотів. У деяких варіантах реалізації винаходу прокаріотична клітина являє собою Е. соїїЇ.

В іншому аспекті винахід відноситься до способу одержання будь-якого з описаних в цьому документі антитіл, причому спосіб включає культивування клітини-хазяїна, що містить будь-який з вищевказаних векторів (наприклад, вектор експресії), в поживному середовищі. У деяких варіантах реалізації винаходу спосіб додатково включає виділення антитіла з клітини-хазяїна або поживного середовища. У деяких варіантах реалізації винаходу клітина-хазяїн є еукаріотичною клітиною, наприклад, клітиною ссавця, наприклад, клітиною 293, клітиною яєчника китайського хом'ячка (ЯКХ (СНО)), дріжджовою клітиною або рослинною клітиною. У деяких варіантах реалізації винаходу клітина-хазяїн являє собою прокаріотичну клітину. У деяких варіантах реалізації винаходу прокаріотична клітина являє собою Е. соїї.

В іншому аспекті винахід відноситься до імунокон'югату, що містить будь-яке з описаних в цьому документі антитіл і агент (наприклад, терапевтичний агент, наприклад цитотоксичний агент).

В іншому аспекті винахід відноситься до композиції, що містить антитіло, описане в цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу композиція додатково містить фармацевтично прийнятний носій, допоміжну речовину або розчинник. У деяких варіантах реалізації винаходу композиція призначена для діагностичного застосування (наприклад, для визначення рівнів експресії ТІСІТ, наприклад рівнів експресії білка ТІСІТ). У деяких варіантах реалізації винаходу композиція являє собою фармацевтичну композицію. У деяких варіантах реалізації винаходу композиція додатково містить антагоніст зв'язування осі РО-1 або додатковий терапевтичний агент.

В іншому аспекті винахід відноситься до застосування антитіла, описаного в цьому документі, при виробництві лікарського засобу для лікування або уповільнення прогресування раку у суб'єкта, що потребує цього. У деяких варіантах реалізації винаходу рак вибирають з групи, що складається із недрібноклітинного раку легені, дрібноклітинного раку легені, раку нирки, колоректального раку, раку яєчника, раку молочної залози, раку підшлункової залози, карциноми шлунка, раку сечового міхура, раку стравоходу, мезотеліоми, меланоми, раку голови і шиї, раку щитоподібної залози, саркоми, раку передміхурової залози, гліобластоми, раку шийки матки, раку тимусу, лейкозу, лімфоми, мієломи, грибоподібних мікозів, раку клітин Меркель і злоякісних новоутворень кровотворної системи. У деяких варіантах реалізації винаходу мієлома

Зо являє собою ММ. У деяких варіантах реалізації винаходу лікарський засіб складено для підшкірного, внутрішньовенного, внутрішньом'язового, місцевого застосування, перорального, трансдермального, внутрішньочеревинного, внутрішньоорбітального, шляхом імплантації, інгаляційного, інтратекального, інтравентрикулярного або інтраназального введення. У деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт є людиною.

В іншому аспекті винахід відноситься до застосування антитіла, описаного в цьому документі, при виробництві лікарського засобу для лікування або уповільнення прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта що потребує цього. У деяких варіантах реалізації винаходу пов'язане з імунною системою захворювання пов'язане з дисфункціональним розладом Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується виснаженням Т-клітин. У деяких варіантах пов'язане з імунною системою захворювання вибране з групи, що складається із неусуненої гострої інфекції, хронічної інфекції та пухлинного імунітету. У деяких варіантах реалізації винаходу лікарський засіб складено для підшкірного, внутрішньовенного, внутрішньом'язового, місцевого застосування, перорального, трансдермального, внутрішньочеревинного, внутрішньоорбітального, шляхом імплантації, інгаляційного, інтратекального, інтравентрикулярного або інтраназального введення. У деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт є людиною.

В іншому аспекті винахід відноситься до застосування антитіла, описаного в цьому документі, у виробництві лікарського засобу для збільшення, підсилення або стимуляції імунної відповіді або функції у суб'єкта, що потребує цього. У деяких варіантах реалізації винаходу лікарський засіб складено для підшкірного, внутрішньовенного, внутрішньом'язового, місцевого застосування, перорального, трансдермального, внутрішньочеревинного, внутрішньоорбітального, шляхом імплантації, інгаляційного, інтратекального, інтравентрикулярного або інтраназального введення. У деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт є людиною.

В іншому аспекті винахід відноситься до способу лікування або уповільнення прогресування раку у суб'єкта, причому спосіб включає введення суб'єкту ефективної кількості будь-якого одного або більшої кількості (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 або більша кількість) антитіл, описаних в цьому документі, з лікуванням або уповільненням в такий спосіб прогресування раку бо у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу рак вибирають з групи, що складається із недрібноклітинного раку легені, дрібноклітинного раку легені, раку нирки, колоректального раку, раку яєчника, раку молочної залози, раку підшлункової залози, карциноми шлунка, раку сечового міхура, раку стравоходу, мезотеліоми, меланоми, раку голови і шиї, раку щитоподібної залози, саркоми, раку передміхурової залози, гліобластоми, раку шийки матки, раку тимусу, лейкозу, лімфоми, мієломи, грибоподібних мікозів, раку клітин Меркель і злоякісних новоутворень кровотворної системи. У деяких варіантах реалізації винаходу мієлома являє собою ММ.

В іншому аспекті винахід відноситься до способу лікування або уповільнення прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта, причому спосіб включає введення суб'єкту ефективної кількості одного або більшої кількості (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, або 6 або більша кількість) антитіл, описаних в цьому документі, з лікуванням або уповільненням в такий спосіб прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу пов'язане з імунною системою захворювання пов'язане з дисфункціональним розладом Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується виснаженням Т-клітин. У деяких варіантах пов'язане з імунною системою захворювання вибране з групи, що складається із неусуненої гострої інфекції, хронічної інфекції та пухлинного імунітету.

В іншому аспекті винахід включає спосіб підвищення, підсилення або стимуляції імунної відповіді або функції у суб'єкта, що включає введення суб'єкту ефективної кількості одного або більшої кількості (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, або 6 або більша кількість) антитіл, описаних в цьому документі, таким чином підвищуючи, підсилюючи або стимулюючи імунну відповідь або функцію у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу спосіб додатково включає введення суб'єкту антагоніста зв'язування осі РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування осі РО-1 вводять до або після введення антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування осі РО-1 вводять одночасно з антитілом. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 вибраний з групи, що складається із антагоніста зв'язування РО-1, антагоніста зв'язування РО-І 1, і антагоніста зв'язування РО-12. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування осі РО-1 є антагоністом, що зв'язується з

РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування

Зо РО-1 з його партнерами-лігандами по зв'язуванню. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 з РО-І1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 з РО-І2. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою антитіло проти РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 вибраний з групи, що складається із

МОХ 1106 (ніволумаб), МК-3475 (пембролізумаб), СТ-011 (підилізумаб), МЕ0БІ-0680 (АМР-514),

РОКОО1, КЕОМ2810 ії ВОВ-108. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування

РО-1 є антагоністом РО-І 1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-Ї 1 інгібує зв'язування РО-І 1 з РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування

РО-І1 інгібує зв'язування РО-Ї1 з В7-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 1 інгібує зв'язування РО-І 1 як з РО-1, так і з В7-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-11, являє собою анти-РО-11 антитіло. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-?РО-Ї1 антитіло вибрано з групи, що складається із: МРОЇ 3280А (атезолізумаб), УМ/243.55.570, МОХ-1105, МЕО0І4736 (дурвалумаб) і М5ЗВО010718С (авелумаб).

У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло являє собою МРОЇ 3280А. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування осі РО-1 є антагоністом, що зв'язується з РО-12. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-І2 являє собою анти-РО-І2 антитіло. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-І2 є імуноадгезином.

В деяких варіантах реалізації винаходу будь-який з описаних вище способів лікування може додатково включати введення суб'єкту агоніста зв'язування ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування ОХ40 вводять до або після введення антитіла та/або антагоніста зв'язування осі РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування

ОХ40, вводять одночасно з антитілом та/або антагоністом, що зв'язуються з віссю РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу агоніст зв'язування ОХ40, вибирають з групи, що складається із агоніста ОХ40, фрагмента агоніста ОХ40І, олігомерного рецептора ОХ40 та імуноадгезину ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 виснажує клітини, що експресують ОХ40 людини. У деяких варіантах реалізації винаходу клітини, що експресують ОХ40 людини, являють собою СО4- ефекторні Т-клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу клітини, що експресують ОХ40 людини, є регуляторними Т- бо клітинами (Тгед). У деяких варіантах реалізації винаходу виснаження відбувається шляхом антитілозалежної клітинної цитотоксичності, АЗКЦ (АБСС) та/або фагоцитозу. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 зв'язується з ОХ40 людини з афінністю, що менше ніж або дорівнює близько 1 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 зв'язується з ОХ40 людини з афінністю, що менше ніж або дорівнює близько 0,45 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 зв'язується з ОХ40 людини з афінністю, що менше або дорівнює близько 0,4 НМ. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 зв'язується з ОХ40 людини з ЕС5О, що менше ніж або дорівнює 0,3 мкг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 зв'язується з ОХ40 людини з ЕС50, що менше ніж або дорівнює 0,2 мкг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 збільшує проліферацію СО4- Т-клітин та/або збільшує продукування цитокінів за допомогою ефекторних СО4- Т-клітин в порівнянні з проліферацією та/або продукуванням цитокінів до обробки агоністом ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 збільшує проліферацію Т-клітини пам'яті та/або продукування цитокінів за допомогою Т-клітини пам'яті. У деяких варіантах реалізації винаходу продукування цитокінів є продукуванням ІЄМ-у (інтерферону у). У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 пригнічує функцію Тгед. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 інгібує пригнічення Тгед ефекторних функції Т-клітин (наприклад, проліферації ефекторних Т-клітин та/або продукування цитокінів). У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна Т-клітина являє собою ефекторну СО4-- Т-клітину. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 підсилює передачу сигналу

ОХ40 в клітині-мішені, що експресує ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу передачу сигналу ОХ40 виявляють шляхом моніторингу передачі сигналів МЕКВ нижче в сигнальному шляху. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить варіант поліпептиду ЇДС1 Ес, що містить мутацію, яка усуває зв'язування з ефекторними клітинами людини, і володіє зниженою активністю по відношенню до агоніста ОХ40, що містить частину нативної послідовності ЇД01 Ес. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло

ОХх40 містить варіант поліпептиду ДОСІ Ес, що містить мутацію САМА. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить (а) домен МН, що містить (ї) НМАК-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 278, 279 або 280, (ії) НМА-Н2, що містить

Ко) амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 281, 282, 283, 284, 285 або 286 та (ії) НМЕ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО: 287, 288 або 289; і (б) домен МІ, що містить (ї) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 290, (ії) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 291 і (ії) НМАК-ІЗ3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298 або 299. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО: 278; (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 281; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 287; (4) НМАК-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 290; (є) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 291; ії (3) НМК-1І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з

ЗЕО ІО МО: 292. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить (а)

НМУВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 278; (Б) НУМВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 281; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО: 287; (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність «БО ІЮ МО: 290; (є) НМА-І2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 291; ї (3 НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО: 297. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО: 278; (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 281; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 287; (4) НМАК-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 290; (є) НМК-12, що містить амінокислотну

БО послідовність ЗЕО ІЮ МО: 291; і (ї) НУВ-І 3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з

ЗБОЮ МО: 298. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить послідовність МН, що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 9095 відносно амінокислотної послідовності будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 300-325. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить послідовність МН, що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 відносно амінокислотної послідовності 56 ІЮО МО: 300. У деяких варіантах в реалізації винаходу в 5ЕБЕО ІЮ МО: 300 здійснена заміна, вставка та/або делеція амінокислот загальною кількістю від 1 до 10. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить МН, що містить одну, дві або три ГВД (НУК), вибрані з: (а)

НМВА-НІ, який містить амінокислотну п Отже 5ЕБЕО ІЮ МО: 278, (Б) НМК-Н2, що містить 60 амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 281 і (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 287. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло

ОХ40 містить послідовність МІ, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 відносно амінокислотної послідовності будь-якого з 5ЕО ІЮ МО: 326-351. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить Мі, що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 відносно амінокислотної послідовності 5600 ІЮО МО: 326. У деяких варіантах реалізації винаходу в 5ЕО ІЮ МО: 326 здійснена заміна, вставка та/або делеція амінокислот загальною кількістю від 1 до 10. у деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить МІ, що містить одну, дві або три ГВД (НМК), вибрані з (а)

НМВ-І11, що містить амінокислотну послідовність 5 БО ОО МО: 290; (Б) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 291; ї (с) НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 292. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло

ОХ40 містить (а) послідовність МН 5ЕО ІЮ МО: 300; (Б) послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 326; або (с) послідовність МН, як в (а), і послідовність МІ, як у (Б). У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить (а) послідовність МН 5ЕО ІЮО МО: 319; (Б) послідовність МІ.

ЗЕБЕО ІЮ МО: 345; або (с) послідовність МН, як в (а), і послідовність Мі, як у (Б). У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить (а) послідовність МН ЗЕО ІЮ

МО: 320; (Б) послідовність МІ 5ЕО ІЮ МО: 346; або (с) послідовність УН, як в (а), і послідовність

МІ, як у (Б). У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 являє собою антитіло 1106, антитіло АСТ35, МЕОІЄЇ469 або МЕБІО562. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 являє собою повнорозмірне антитіло ІдДС1. У деяких варіантах реалізації винаходу імуноадгезин ОХ40 являє собою тримерний білок ОХ40-Ес.

У деяких варіантах реалізації винаходу будь-який з описаних вище способів лікування може додатково включати введення суб'єкту агента, що зменшує кількість або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коіїнгібуючих рецепторів. У деяких варіантах реалізації винаходу один або більша кількість додаткових імунних коінгібуючих рецепторів вибрані з групи, що складається із РО-1, СТІ А-4, ГАЗ, ТІМ3, ВТІ А, МІЗТА, В7НА і 2096. У деяких варіантах реалізації винаходу будь-який з описаних вище способів лікування може додатково включати введення суб'єкту додаткового терапевтичного агента. У деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний агент являє собою хіміотерапевтичний засіб. У деяких варіантах

Зо реалізації винаходу антитіло вводять підшкірно, внутрішньовенно, внутрішньом'язово, застосовують місцево, перорально, трансдермально, внутрішньочеревинно, внутрішньоорбітально, шляхом імплантації, шляхом інгаляції, інтратекально, інтравентрикулярно або інтраназально. У деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт є людиною.

В іншому аспекті винахід відноситься до набору, що містить одне або більшу кількість (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 або більша кількість) антитіл, описаних в цьому документі, і листок-вкладиш в упаковку, що містить інструкцію із застосування антитіла для лікування або уповільнення прогресування раку у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу рак вибирають з групи, що складається із недрібноклітинного раку легені, дрібноклітинного раку легені, раку нирки, колоректального раку, раку яєчника, раку молочної залози, раку підшлункової залози, карциноми шлунка, раку сечового міхура, раку стравоходу, мезотеліоми, меланоми, раку голови і шиї, раку щитоподібної залози, саркоми, раку передміхурової залози, гліобластоми, раку шийки матки, раку тимусу, лейкозу, лімфоми, мієломи, грибоподібних мікозів, раку клітин Меркель і злоякісних новоутворень кровотворної системи. У деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт є людиною. У деяких варіантах реалізації винаходу мієлома являє собою ММ.

В іншому аспекті винахід відноситься до набору, що містить одне або більшу кількість (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 або більша кількість) антитіл, описаних в цьому документі, і листок-вкладиш в упаковку, що містить інструкцію із застосування антитіла для лікування або уповільнення прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу пов'язане з імунною системою захворювання пов'язане з дисфункціональним розладом Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується виснаженням Т-клітин. У деяких варіантах пов'язане з імунною системою захворювання вибране з групи, що складається із неусуненої гострої інфекції, хронічної інфекції та пухлинного імунітету. У деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт є людиною.

В іншому аспекті винахід відноситься до набору, що містить одне або більшу кількість (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 або більша кількість) антитіл, описаних в цьому документі, і листок-вкладиш в упаковку, що містить інструкцію з підвищення, підсилення або стимуляції імунної відповіді або функції у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу суб'єкт є людиною.

КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛОВ

Фіг. ТА являє собою схематичну діаграму аналізу зв'язування ЯКХ (СНО)-ТІСІТ.

Фіг. 18 являє собою графік, що зображує результати аналізу зв'язування ЯКХ (СНО)-ТІСІТ, наведеного на фіг. ТА, із застосуванням клітин ЯКХ (СНО), що експресують ТІСІТ людини, і зазначених анти-ТІСІТ антитіл, одержаних з ОМТ, в різних концентраціях, за даними сортування клітин з активованою флуоресценцією, СКАФ (ГАС5).

Фіг. 1С являє собою графік, що зображує результати аналізу зв'язування ЯКХ (СНО)-ТІСІТ, наведеного на Фіг. 1А, із застосуванням клітин ЯКХ (СНО), що експресують ТІСІТ яванського макака (яванця), і зазначених ОМТ-анти-ТІСІТ антитіл в різних концентраціях, за даними СКАФ (ЕАС5Б).

Фіг. 10 являє собою графік, що зображує результати аналізу зв'язування ЯКХ (СНО)-ТІСІТ, наведеного на фіг. ТА, із застосуванням клітин ЯКХ (СНО), що експресують ТІСІТ людини, і зазначених 50-анти-ТІСІТ антитіл в різних концентраціях, за даними СКАФ (ЕГАС5).

Фіг. 1Е являє собою графік, що зображує результати аналізу зв'язування ЯКХ (СНО)-ТІСІТ, наведеного на Фіг. ТА, із застосуванням клітин ЯКХ (СНО), що експресують ТІСІТ яванця, і зазначених 5О-анти-ТІСІТ антитіл в різних концентраціях, за даними СКАФ (ЕАС5Б).

Фіг 2А являє собою графік, що зображує залежність зв'язування зазначених анти-ТІСІТ антитіл, одержаних з ОМТ, із СО4 Т-клітинами людини від концентрації антитіл.

Фіг. 2В являє собою графік, що зображує залежність зв'язування зазначених анти-ТІСІТ антитіл, одержаних з ОМТ, з СО8 Т-клітинами людини від концентрації антитіл.

Фіг. 2С являє собою графік, що зображує залежність зв'язування зазначених 50-анти- ТІСІТ антитіл з СО4 Т-клітинами людини від концентрації антитіл.

Фіг. 20 являє собою графік, що зображує залежність зв'язування зазначених 50-анти- ТІСІТ антитіл з СО8 Т-клітинами людини від концентрації антитіл.

Фі. ЗА являє собою графік, що зображує залежність результатів блокуючого імуноферментного аналізу, ІФА (ЕГІ5А) із застосуванням планшетів, вкритих гібридним білком

РУВ-Ес людини, ТІСІї людини і зазначеними анти-ТІСІї антитілами (10А7 і 4.103.01Е в

Зо форматі Раб або Ідс) або контрольним анти-СЗЕ1 Раб, від концентрації антитіла/Рар.

Фіг. ЗВ являє собою графік, що зображує залежність результатів блокуючого аналізу ІФА (ЕПІЗА) із застосуванням планшетів, вкритих гібридним білком ПВР (РМК) яванця-Ес, ТІСІТ яванця і зазначеними анти-ТІСІТ антитілами (10А7 ї 4.103.01ЄЕ в форматі Раб або Ідс) або контрольним анти-С5Е1 Раб, від концентрації антитіла/Рар.

Фіг. З3С являє собою графік, що зображує залежність результатів блокуючого аналізу ІФА (ЕПІ5А) із застосуванням планшетів, вкритих гібридним білком ПВР (РУК) миші-Ес, ТІСІТ миші і зазначеними анти-ТІСІТ антитілами (10А7 і 4.103.01Е в форматі Рабр або Ідс) або контрольним анти-С5Е1 Раб, від концентрації антитіла/Рар.

Фіг. ЗО являє собою таблицю, що зображує результати блокуючих аналізів ІФА (ЕЇГІ5А), описаних на Фіг. ЗА-3С.

Фіг. 4А являє собою схематичну діаграму блокуючого аналізу ЯКХ (СНО)-ТІСІТ ПВР (РУК).

Фіг. 4В являє собою графік, що зображує результати блокуючого аналізу ЯКХ (СНО)-ТІСІТ

ПВР (РУК), наведеного на Фіг. 4А, із застосуванням клітин ЯКХ (СНО), експресують ТІССІТ людини, і зазначених анти-ТІСІТ антитіл, одержаних з ОМТ, в різних концентраціях, за даними

СКАФ (ГАС5Б).

Фіг. 4С являє собою графік, що зображує результати блокуючого аналізу ЯКХ (СНО)-ТІСІТ

ПВР (РУК), наведеного на Фіг. 4А, із застосуванням клітин ЯКХ (СНО), експресують ТІСІТ яванця, і зазначених анти-ТІСІТ антитіл, одержаних з ОМТ, в різних концентраціях, за даними

СКАФ (ГАС5Б).

Фіг. 40 являє собою графік, що зображує результати блокуючого аналізу ЯКХ (СНО)-ТІСІТ

ПВР (РУК), наведеного на Фіг. 4А, із застосуванням клітин ЯКХ (СНО), що експресують ТІСІТ людини, і зазначених 5О-анти-ТІСІТ антитіл в різних концентраціях, за даними СКАФ (БГАС5).

Фіг. 4АЕ являє собою графік, що зображує результати блокуючого аналізу ЯКХ (СНО)-ТІСІТ

ПВР (РУК), наведеного на Фіг. 4А, із застосуванням клітин ЯКХ (СНО), що експресують ТІСІТ яванця, і зазначених 50-анти-ТІСІТ антитіл в різних концентраціях, за даними СКАФ (ГАС5).

Фіг. БА являє собою графік, що зображує фармакокінетичний кліренс зазначених анти-ТІСІТ антитіл в організмі яванця після внутрішньовенного введення 10 мг/кг як залежність концентрації в сироватці (мкг/мл) від часу (дні).

Фіг. 5В являє собою таблицю, що зображує розрахункові значення кліренсу для кожного бо антитіла, протестованого в експериментах з фармакокінетичним кліренсом на Фіг. 5А.

Фіг. 5С являє собою графік, що зображує фармакокінетичний кліренс анти-ТІСІТ антитіл

ПТОА7Т.К4СОЗ і 4.103 в організмі яванця після внутрішньовенного введення 10 мг/кг як залежність концентрації в сироватці (мкг/мл) від часу (дні, до-д7).

Фіг. 50 являє собою таблицю, що зображує розрахункові значення кліренсу для анти-ТІСІТ антитіл ПТОА7.К4О3 і 4.103, які були протестовані в експериментах з фармакокінетичним кліренсом на Фіг. 5С.

Фіг. бА являє собою інтерпретацію кристалічної структури 4.103 Раб, зв'язаного з ТІСІТ людини, з позначеними ділянками важкого ланцюга (НС) і легкого ланцюга (І С) 4.103 (І С), які відрізняються кольором.

Фіг. 6В являє собою інтерпретацію кристалічної структури 4.103 Раб, зв'язаного з ТІСІТ людини, накладену на відому структуру РМК-ТІСІТ (РОВ ЗОМ), яка демонструє, що антитіло 4.103 і ПВР (РУК) мають сайти зв'язування з ТІСІТ, що перекриваються.

Фіг. 6С являє собою інтерпретацію кристалічної структури 4.103 Раб, зв'язаного з ТІСІТ людини, із зазначенням відносного розташування сайту зв'язування з ПВР (РМК). Також зазначено відносне розташування петлі 72-79 ТІСІТ.

Фіг. 60 і 6Е являють собою інтерпретацію кристалічної структури 4.103 Раб, пов'язаного з

ТІСІТ людини, з різних точок зору, з ідентифікацією деяких ключових для контакту залишків 4.103 (залишки паратопу) і ТІСІТ (залишки епітопу). Залишки в прямокутнику, наведеному на

Фіг. б6Е, були ідентифіковані як важливі з функціональної точки зору залишки епітопу за допомогою аланінскануючого мутагенезу.

Фіг. 7А являє собою графік, що зображує значення Ко (НМ) для кожного з ідентифікованих анти-ТІСІТ антитіл для зазначеного мутанта ТІСІї людини, одержаного аланіновим скануванням.

Фіг. 7В являє собою графік, що зображує значення Ко (НМ) для кожного з ідентифікованих анти-ТІСІТ антитіл для зазначеного мутанта ТІСІї людини, одержаного аланіновим скануванням, нормалізоване проти мішені ТІСІТ людини дикого типу. Одержані аланіновим скануванням мутанти ТІСІТ, які призводили до 1-10-разового або більше ніж 10-разового зниження афінності зв'язування, позначені світло-сірим і темно-сірим штрихуванням, відповідно.

Фіг. 7С являє собою інтерпретацію у формі стрічки структури ТІСІТ людини, із залишками,

Зо що були ідентифіковані за допомогою аланінскануючого мутагенезу як важливі для розпізнавання 10А7, позначеними і представленими як сфери.

Фіг. 7О являє собою інтерпретацію у формі стрічки структури ТІСІТ людини, із залишками, які були ідентифіковані за допомогою аланінскануючого мутагенезу як важливі для розпізнавання П1А5, позначеними і представленими як сфери.

Фіг. 7 Е являє собою інтерпретацію у формі стрічки структури ТІСІТ людини, із залишками, які були ідентифіковані за допомогою аланінскануючого мутагенезу як важливі для розпізнавання 4.103, позначеними і представленими як сфери.

Фіг. 7Е являє собою інтерпретацію у формі стрічки структури ТІСІТ людини, із залишками, які були ідентифіковані за допомогою аланінскануючого мутагенезу як важливі для розпізнавання 7.4АЗ, позначеними і представленими як сфери.

Фіг. 70 являє собою інтерпретацію у формі стрічки структури ТІСІТ людини із залишками, які були ідентифіковані за допомогою аланінскануючого мутагенезу як важливі для розпізнавання 4.1А4, позначеними і представленими як сфери.

Фіг. 7Н являє собою інтерпретацію у формі стрічки структури ТІСІТ людини, із залишками, які були ідентифіковані за допомогою аланінскануючого мутагенезу як важливі для розпізнавання П6В82, позначеними і представленими як сфери.

Фіг. 7І являє собою інтерпретацію у формі стрічки структури ТІСІТ людини, із залишками, які були ідентифіковані за допомогою аланінскануючого мутагенезу як важливі для розпізнавання

А7Е7, позначеними і представленими як сфери.

Фіг. 8 являє собою інтерпретацію кристалічної структури 1А5 Рарб, зв'язаного з ТІСІТ людини, із зазначеними ділянками важкого ланцюга 1А5 (НС) і легкого ланцюга (І С), які відрізняються кольором.

Фіг. 9 являє собою інтерпретацію кристалічних структур комплексів 4.103-ТІСІТ, ТАБ5-ТІСП і 10А?7-ТІСІТ, накладених одна на одну по відношенню до ТІСІТ, яка демонструє, що три анти-

ТІСІТ антитіла зв'язуються з ТІСІТ людини на неідентичних епітопах.

Фіг. 10А являє собою інтерпретацію кристалічної структури 10А7 Раб, зв'язаного з ТІСІТ людини, із зазначеними ділянками важкого ланцюга (НС) і легкого ланцюга (ІС) 10А7, які відрізняються кольором.

Фіг. 108 являє собою інтерпретацію кристалічної структури 10А7 Раб, пов'язаного з ТІСІТ людини, із зазначенням відносного розташування сайту зв'язування ПВР (РМК). Також зазначено відносне розташування петлі 72-79 ТІСІТ.

Фіг. 11 являє собою серію інтерпретацій антитіл 4.103 (верхнє зліва), 10А7 (середнє по центру) і ТА5 (нижнє праворуч) і відносне розташування залишків Зег/8, Зегв80 і Гуз82 ТІСІТ людини. Структури демонструють, що залишки 5ег78, зег80 і Гуз82 ТІСІТ людини є ключовими залишками епітопу для 4.103, але не для 10А7 або 1А5, у яких зазначені три залишки розташовані на деякій відстані від кишені зв'язування з антитілом.

Фіг. 12 являє собою серію графіків, що ілюструють експресію на Т-клітинах СО45, РО-1,

ТІСІТ їі 20226 на Ср4-- і СО8х, виділених з кісткового мозку пацієнтів з множинною мієломою (ММ) (верхній ряд), та експресію РО-1, ТІСІТ ії 20226 на СО4- ії СО8.-- Т-клітинах, виділених з периферичної крові здорових пацієнтів (нижній ряд), за даними кольорової протокової цитометрії.

Фіг. 13 являє собою серію графіків протокової цитометрії (ліворуч) і супутніх графіків (праворуч), які демонструють, що ТІСІТ і РО-1 спільно експресуються на СО4-- і СОв'- Т-клітинах в кістковому мозку пацієнтів з ММ.

ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

Ї. Загальні методи

Методики і процедури, що описані або згадуються в цьому документі, як правило, є добре відомими і зазвичай застосовуються при використанні фахівцями в цій галузі техніки загальноприйнятої методології, такої як, наприклад, широко використовувані методології, описані у затюогоок еї аї., МоїІесшаг Сіопіпд: А І арогаїогу Мапиа! За еайіоп (2001) Со 5ргіпд

Нарог І арогаїогу Ргезв, Соїд 5ргіпд Натог, М.М.; Сийтепі Ргоїосоїв іп Моїесшіаг Віоіоду (Р.М.

А!йзибеї, еї аїЇ. ед5., (2003)); серія МеїШодь5 іп Еплутоіоду (Асадетіс Ргевзв5, Іпс.): РОСА 2: А

Ргасіїса! Арргоасі (М.). МасРНегзоп, В.О. Натез апа а.В. Тауог єдв». (1995)), Напом апа І апе, еаз. (1988) Апііродіе5, А І арогаїогу Мапиаї, ії Апіта! Се! СиПиге (К.І. Егезппеу, ей. (1987));

Оїїдописієоїіде 5упіпевів (М./. Саї, єд., 1984); Меїйодвз іп Моїесшіаг Віооду, Нитапа Ргезв; Сеї

Віоіоду: А І арогаїогу Моїероок (У.Е. Сеїї5, єд., 1998) Асадетіс Ргез5; Апіта! Сеїї Сийите (В...

ЕгезПпеу), ед., 1987); Іпігодисіоп го СеїЇ апа Тіввие Сийиге (9У.Р. Маїнег апа Р.Е. Робегів, 1998)

Коо) Ріепит Ргев5; СеїЇ апа Тізвиє СийПиге: І арогаюгу Ргоседигез (А. Ооуїє, У.В. Стіййнв5, апа О.а.

Мемеї, едв5., 1993-8) У. ММІеу апа бопв; Напаброок ої Ехрегітепіаї! Іттипоїіоау (О.М. МУвїіг апа 0.6.

ВіасКмеїЇ, еадв5.); Сепе Тгапеоїег Месюг5 ог Маттаїйап Сеїв (9У.М. МіПег апа М.Р. Саїов, єдв., 1987);

РСВ: Те Роїутегазе СНаіп Реасійп, (Миїїїв єї аї!., єдв., 1994); Ситепі Ргоїосоїв іп ІттипоЇоду (У.Е. Соїїдап еї аї., ед5., 1991); Зно РгоїосоЇв іп МоїІесшаг Віооду (УУПеу апа бопв, 1999);

Іттипобіоіоду (С.А. дапеумау апа Р. Тгамегв, 1997); Апіїродієвз (Р. Ріпсй, 1997); Апііродіев: А

Ргасіїсаї Арргоасп! (0. Сацу., єд., ІВ Ргев5, 1988-1989); Мопосіопа! Апііродієв: А Ргасіїіса)

Арргоасп (Р. Зперпега апа б. Овєап, єдв., Охіога Опімегейу Ргезв, 2000); Овіпд Апііродієв: А

ІГарогаїогу Мапиа! (Е. Напйом апа 0. Гапе (Со 5рііпд Нагбог Іарогаїогу Ргев5, 1999); Те

Апійродіез (М. 2апеці апа 9. 0. Сарга, еа5., Наглоод4 Асадетіс Рибіїєпеге, 1995); і Сапсег:

Ргіпсіріеєз апа Ргасіїсе ої Опсоіоду (М.Т. Оеміа еї а!., едв., 9У.В. Пірріпсоїї Сотрапу, 1993).

ІІ. Визначення

Термін "ТІСІТ" або "Т-клітинний імунорецептор з доменами Ід і ІТІМ", який використовується в цьому документі, відноситься до будь-якого нативного ТІСІТ з будь-якого джерела хребетних, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, людина) і гризуни (наприклад, миші та щури), якщо в тексті прямо не вказано інше. Додатково, ТІСІЇ відомий в цій галузі техніки як

ОКЕ2рбб7АгО5, РІ 239873, М-Кії і білок 9, що містить домен імуноглобуліну, М-КИЇ і білок 3, що містить трансмембранний домен, У5ІСЯ, М5ТМЗ і УММОСАМ. Термін охоплює "повнорозмірний" непроцесований ТІСІТ (наприклад, повнорозмірний ТІСБІї людини, що має амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 352), а також будь-яку форму ТІСІТ, що є результатом процесингу в клітині (наприклад, процесований ТІСІї людини без сигнальної послідовності, що має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 353). Крім того, термін включає природні варіанти

ТІСІТ, наприклад, сплайсингові варіанти або алельні варіанти. Амінокислотна послідовність типового ТІСІТ людини може бути знайдена під обліковим номером ОпіРгої О495А1.

Терміни "анти-ТІСІТ антитіло" і "антитіло, що специфічно зв'язується з ТІСІТ" відносяться до антитіла, що здатне зв'язуватися з ТІСІТ з достатньою афінністю, таким чином, що антитіло є придатним як діагностичний та/або терапевтичний агент при націлюванні на ТІСІТ. В одному варіанті реалізації винаходу ступінь зв'язування анти-ТІС|Т антитіла з неспорідненим ТІСІТ білком становить менше ніж близько 10 95 від зв'язування антитіла з ТІСІТ, за даними, наприклад, радіоіїмуноаналізу (РІА (КІА)). У деяких варіантах реалізації винаходу константа 60 дисоціації (Ка) антитіла, що зв'язується з ТІСІТ, становить х 1 мкМ, «х 100 НМ, 1О НМ «1 НМ,

0,1 нМ, х 0,01 нМ або х 0,001 нМ (наприклад, 108 М або менше, наприклад, від 1028 до 1073 М, наприклад, від 109 до 10-73 М). У деяких варіантах реалізації винаходу анти-ТІСІТ антитіло зв'язується з епітопом ТІСІТ, що є консервативним серед ТІСІТ різних видів, або епітопом на

ТІСІТ, що дозволяє виявляти перехресно-видову реактивність, таким як епітоп, що містить амінокислотні залишки Зег78, зегв80 і І уз82.

Термін "антитіло" включає моноклональні антитіла (в тому числі повнорозмірні антитіла, що містять ділянку Ес імуноглобуліну), композиції антитіл з поліепітопною специфічністю, поліспеціфічні антитіла (наприклад, біспеціфічні антитіла, диатіла і одноланцюгові молекули, а також фрагменти антитіл (наприклад, Раб, Е(аб» і Ем). В цьому документі термін "імуноглобулін" (Ід) використовується взаємозамінним чином з "антитілом".

Термін "виділене антитіло" при використанні для опису різних антитіл, описаних в цьому документі, означає антитіло, яке було ідентифіковане та виділене та/або добуте з клітини або клітинної культури, в якій його було експресовано. Забруднюючими компонентами його природного середовища є матеріали, які зазвичай перешкоджають діагностичному або терапевтичному застосуванню поліпептиду і можуть включати ферменти, гормони та інші білкові або небілкові розчинені речовини. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло очищають до чистоти більш ніж 9595 або 9995, за даними, наприклад, електрофорезу (наприклад, електрофорез в поліакриламідному гелі в присутності натрій додецилсульфату,

НДСО-ПААГ (505-РАСЕ), ізоелектричне фокусування (ІЕФ (ІЕР)), капілярний електрофорез) або хроматографії (наприклад, іонообмінна або обернено-фазова ВЕРХ). Огляд методів оцінки чистоти антитіл див., наприклад, у Ріаїтап еї аї., ). Спготаїйоаг. В 848:79-87 (2007). У кращих варіантах реалізації винаходу антитіло буде очищено (1) до ступеня, достатнього для одержання щонайменше 15 залишків М-кінцевої або внутрішньої послідовності амінокислот, із застосуванням секвенатора з обертальною склянкою або (2) до гомогенності за допомогою

НДС-ПААГ (505-РАСЕ) в невідновлюючих або відновлюючих умовах, із застосуванням барвника Кумасі синього або, переважно, сріблянки. Виділене антитіло включає антитіла іп 5йи в рекомбінантних клітинах, оскільки щонайменше один компонент поліпептидного природного середовища буде відсутній. Однак зазвичай виділений поліпептид одержують шляхом щонайменше однієї стадії очищення.

Зо Основним 4-ланцюговим модулем антитіла є гетеротетрамерний глікопротеїн, що складається з двох ідентичних легких (І) ланцюгів і двох ідентичних важких (Н) ланцюгів.

Антитіло ДМ складається з 5 основних гетеротетрамерних одиниць разом з додатковим поліпептидом, під назвою ланцюг), і містить 10 сайтів зв'язування з антигеном, тоді як антитіла

ІА складаються з 2-5 основних 4-ланцюгових модулів, що можуть полімеризуватися з утворенням полівалентних комплексів у поєднанні з ланцюгом .. В разі дсС розмір 4- ланцюгового модуля зазвичай становить близько 150000 Да. Кожен ланцюг І! зв'язаний з ланцюгом Н одним ковалентним дисульфідним зв'язком, тоді як два ланцюги Н зв'язані один з одним за допомогою одного або більшої кількості дисульфідних зв'язків, в залежності від ізотипу ланцюга Н. Кожен ланцюг Н і Ї додатково містить внутрішньоланцюгові дисульфідні містки з регулярними проміжками. Кожен ланцюг Н містить на М-кінці варіабельну ділянку (Мн), за якою слідують три константних ділянки (Сн) для кожного з а- і у-ланцюгів і чотири домени Сн для ізотипів Н і є. Кожен ланцюг І містить на М-кінці варіабельний домен (Мі), за яким слідує константний домен на іншому кінці. Мі вирівняний з Мн, а Сі вирівняний з першим константним доменом важкого ланцюга (Сні!). Вважається, що окремі амінокислотні залишки утворюють межу між варіабельними доменами легкого ланцюга і важкого ланцюга. Парування Мн і Мі утворює один антигензв'язуючий сайт. Опис структури та властивостей різних класів антитіл див., наприклад, у Вавзіс апа Сіїпіса! Іттипоіоду, 81й Едйіоп, Юапієї Р. 5(ез5, АбБбва І. Тегг апа

Тгівігат 6. РагзоМ; (еаз), Аррієїоп 5 Гапде, МогмаїкК, СТ, 1994, стор. 71 їі Розділ 6. Ланцюг І. будь-яких видів хребетних може бути віднесений до одного із двох чітко різних типів під назвою капа і лямбда, на базі амінокислотних послідовностей їх константних доменів. В залежності від амінокислотної послідовності константного домену їх важких ланцюгів (СН) імуноглобуліни можуть бути віднесені до різних класів або ізотипів. Існує п'ять класів імуноглобулінів: ІдА, дО,

ІЧДЕ, до і ДМ, що містять важкі ланцюги, позначені як а, б, є, у ї М, відповідно. Класи у ї « далі поділяються на підкласи на базі відносно невеликих відмінностей в послідовності і функції СН, наприклад, у людини експресуються такі підкласи: Ідс1, ІдсгА, Ідс28В, доз, Ідс4, ДАТ і ІдАг. "Варіабельна ділянка" або "варіабельний домен" антитіла відноситься до амінокінцевих доменів важкого або легкого ланцюга антитіла. Варіабельні домени важкого ланцюга і легкого ланцюга можуть мати назву "МН" ї "МІ", відповідно. Ці домени зазвичай є найбільш варіабельними частинами антитіла (відносно інших антитіл того ж класу) і містять бо антигензв'язуючі сайти.

Термін "варіабельний" стосується того факту, що послідовність деяких сегментів варіабельних доменів істотно відрізняється серед антитіл. М-домен опосередковує зв'язування з антигеном і визначає специфічність конкретного антитіла відносно його конкретного антигену.

Однак мінливість розподіляється нерівномірно по всьому діапазону варіабельних доменів.

Замість цього вона зосереджена в трьох сегментах, що мають назву гіперваріабельних ділянок (ГВД (НУК)), як у варіабельних доменах легкого ланцюга, так і у варіабельних доменах важкого ланцюга. Більш висококонсервативні частини варіабельних доменів мають назву каркасних ділянок (КД). Варіабельні домени нативних важких і легких ланцюгів містять чотири ділянки КД, що в основному набувають конфігурації бета-аркуша, з'єднаного трьома ГВД (НУК), які утворюють петлі, що з'єднують і в деяких випадках складають частину структури бета-аркуша.

ГВД (НУК) в кожному ланцюзі утримуються разом в безпосередній близькості ділянками КД, причому ГВД (НМК) з іншого ланцюга сприяють утворенню антигензв'язуючого сайту антитіл (див. Кабаї еї а!., ЗХедиепсев ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, РИ Еайіоп, Маїйопаї! Іпвійше ої Неан,

ВеїШезаа, МО (1991)). Константні домени не приймають безпосередньої участі у зв'язуванні антитіла з антигеном, але виявляють різні ефекторні функції, такі як участь антитіла в антитілозалежної клітинної токсичності. "Блокуючим антитілом" або "антагоністичним антитілом" є таке, яке пригнічує або знижує біологічну активність антигену, з яким воно зв'язується. У деяких варіантах реалізації винаходу блокуючі антитіла або антагоністичні антитіла істотною мірою або повністю пригнічують біологічну активність антигену. Анти-ТІСІТ антитіла за винаходом можуть блокувати передачу сигналів через ПВР (РУК), РМКІ2 та/або РМК 3, щоб відновити функціональну відповідь Т- клітин (наприклад, проліферацію, продукування цитокінів, знищення клітин-мішеней) з дисфункціонального стану до стимуляції антигеном. "Агоністичне антитіло" або "активуюче антитіло" являє собою антитіло, що підсилює або ініціює передачу сигналу антигеном, з яким воно зв'язується. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичні антитіла спричиняють або активують проведення сигналу за відсутності природного ліганду. Агоністичні антитіла до ОХ40 за винаходом можуть підсилювати проліферацію Т-клітини пам'яті, підвищувати продукування цитокінів за допомогою Т-клітини пам'яті, пригнічувати функцію клітин Тгед та/або інгібувати пригнічення клітинами Тгед

Зо ефекторних функції Т-клітин, наприклад, проліферації ефекторних Т-клітин та/або продукування цитокінів. "Епітоп" являє собою частину антигену, з якою специфічно зв'язується антитіло. У разі поліпептидного антигену епітоп зазвичай являє собою пептидну частину розміром близько 4-15 амінокислотних залишків, які можуть бути суміжними або несуміжними. "Антитіло, що зв'язується з тим же епітопом", що й референтне антитіло, відноситься до антитіла, що блокує зв'язування референтного антитіла з його антигеном в конкурентному аналізі на 50 95 або більше, і навпаки, контрольне антитіло блокує зв'язування антитіла з його антигеном в конкурентному аналізі на 5095 і більше. Типовий конкурентний аналіз представлений в цьому документі.

Під "паратопом" мається на увазі частина антитіла, яка вибірково зв'язується з епітопом антигену. Паратоп зазвичай містить амінокислоти ланцюгів МН і Мі антитіла і, зокрема, ділянки(ок) ГВД (НУК) антитіла.

Використовуваний в цьому документі термін "моноклональне антитіло" відноситься до антитіла, одержаного з популяції істотною мірою гомогенних антитіл, тобто, окремі антитіла, що складають популяцію, є ідентичними, за винятком можливих природних мутацій та/або посттрансляційних модифікацій (наприклад, ізомеризація, амідування), що можуть бути присутніми в незначних кількостях. Моноклональні антитіла є високоспецифічними і спрямовані проти одного антигенного сайту. На противагу препаратам поліклональних антитіл, що зазвичай містять різні антитіла, спрямовані проти різних детермінант (епітопів), кожне моноклональних антитіл спрямоване проти однієї детермінанти на антигені. На додаток до їх специфічності, моноклональні антитіла вигідні тим, що вони синтезуються гібридомною культурою, незабрудненою іншими імуноглобулінами. Модифікатор "моноклональний" вказує на характер антитіла, яке одержують з істотною мірою гомогенної популяції антитіл, і його не слід тлумачити як такий, що вимагає одержання антитіла в будь-який конкретний спосіб. Наприклад, моноклональні антитіла, що будуть застосовуватися відповідно до цього винаходу, можуть бути одержані різними способами, включаючи, наприклад, метод гібридоми (наприклад, Копіег апа

Міївієїп., Маїшге, 256:495-97 (1975); Ноподо есеї а!., Нургідота, 14 (3): 253-260 (1995), Напомиу вї аї.,

Апіїродієв: А І арогаїогу Мапаиаї, (Соїд брііпд Натог І арогайогу Ргез5, 279 ей. 1988); Наттепіпад еї аї,, в: Мопосіопа! Апііродіе5 апа Т-Сеї! Нуріідотавз 563-681 (ЕІбеміег, М.У., 1981)), способи 60 рекомбінантної ДНК (див., наприклад, патент США Мо 4816567), технології фагового дисплея

(див., наприклад, Сіаскзоп еї аї., Маїиге, 352: 624-628 (1991); Магкз5 еї аї., У. Мої. Віої. 222: 581- 597 (1992); Біапи еї аї., У. Мої. Віої. 338(2): 299-310 (2004); І ее еї аї., 9). Мої. Віої. 340(5): 1073- 1093 (2004); РейПоиве, Ргос. Майї). Асад. сі. ОБА 101(34): 12467-12472 (2004); і І ее еї аї.,..

Іттипої. Меїноа5 284(1-2): 119-132 (2004)), і технології одержання в організмі тварин людських або подібних до людських антитіл, що містять частини або повнорозмірні локуси або гени імуноглобуліну людини, які кодують послідовності імуноглобуліну людини (див., наприклад, УМО 1998/24893; МО 1996/34096; МО 1996/33735; МО 1991/10741; Уакобоміїзв вї аї., Ргос. Маї!. Асад. зЗсі. ОБА 90: 2551 (1993); даКобоміїв єї аї., Маїшге 362: 255-258 (1993); Вгиддетаптп есеї аї!., Уваг іп

Іптітипої. 7:33 (1993); патенти США МоМо 5545807; 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; и 5661016; МаїКк5 еї аї., Віо/ГТесппоіоду 10: 779-783 (1992); І опрегу еї аї., Маїште 368: 856-859 (1994); Моїгтізоп, Маїиге 368: 812-813 (1994); Рівпм/а еї аї., Маїшге Віоїесппої!. 14: 845-851 (1996);

Мешибрегодег, Маїиге Віотесппої. 14: 826 (1996); і опрегд апа Низлаг, Іпіегп. Кеу. Іттипої. 13: 65-93 (1995).

Термін "голе антитіло" відноситься до антитіла, що не є кон'югованим з цитотоксичним фрагментом або радіоактивною міткою.

Терміни "повнорозмірне антитіло", "інтактне антитіло" або "суцільне антитіло" використовуються взаємозамінним чином для позначення антитіла в його практично немодифікованій формі, на відміну від фрагмента антитіла. Конкретно, суцільні антитіла включають такі, в яких важкі і легкі ланцюги містять ділянку Ес. Константні домени можуть бути константними доменами з нативною послідовністю (наприклад, константними доменами з нативною послідовністю людини) або варіантами їх амінокислотної послідовності. У деяких випадках інтактне антитіло може володіти однією або більшою кількістю ефекторних функцій. "Фрагмент антитіла" містить частину інтактного антитіла, переважно антигензв'язуючу та/або варіабельну ділянку інтактного антитіла. Приклади фрагментів антитіл включають фрагменти

Еаб, Раб", Р(ар')» і Ем; димери; лінійні антитіла (див. патент США 5641870, Приклад 2, 7араїа єї аІ., Ргоївєїп Епдо. 8(10): 1057-1062 І11995)); молекули одноланцюгових антитіл і поліспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл. Розщеплення антитіл папаїном давало два ідентичних антигензв'язуючих фрагменти під назвою фрагменти Бар, і залишковий фрагмент "Ес", позначення якого вказує на його здатність з легкістю кристалізуватися. Фрагмент Еар

Зо складається з повнорозмірного ланцюга І, разом з доменом варіабельної ділянки ланцюга Н (Ми) і першим константним доменом одного з важких ланцюгів (Сні!). Кожен фрагмент Раб є одновалентним з точки зору зв'язування з антигеном, тобто, містить один антигензв'язуючий сайт. Обробка антитіла пепсином дає один великий фрагмент Е(аб)», який приблизно відповідає двом з'єднаним дисульфідними зв'язками фрагментами Бар, що виявляють різну антигензв'язуючу активність і, як і раніше, здатні до утворення перехресних зв'язків з антигеном.

Фрагменти Рар' відрізняються від фрагментів Бар наявністю декількох додаткових залишків на карбоксильному кінці домену Сні, включаючи один або більшу кількість залишків цистеїну шарнірної ділянки антитіла. В цьому документі Бар'-5Н є позначенням для Еар, в якому залишок(ки) цистеїну константних доменів несуть вільну тіольну групу. Фрагменти Е(ар)г2 спочатку були одержані у вигляді пар Рар'-фрагментів, між якими розташовані шарнірні залишки цистеїну. Крім того, відомі інші види хімічних зв'язків для з'єднання фрагментів антитіл.

Фрагмент Ес містить карбокси-кінцеві частини обох ланцюгів Н, що утримуються разом дисульфідними зв'язками. Ефекторні функції антитіл визначаються послідовністю ділянки Ес, ділянки, яка також розпізнається Ес-рецепторами (ЕсСК), знайденими на деяких видах клітин. "Ем' являє собою мінімальний фрагмент антитіла, який містить повнорозмірний сайт розпізнавання і зв'язування з антигеном. Цей фрагмент складається з димеру домену варіабельної ділянки одного важкого і одного легкого ланцюгів у щільній, нековалентній асоціації. Згортання цих двох доменів призводить до утворення шести гіперваріабельних петель (по З петлі з ланцюгів Н і У), які дають амінокислотні залишки для зв'язування з антигеном і забезпечують антитілу антигензв'язуючу специфічність. Однак навіть один варіабельний домен (або половина Ем, що містить тільки три ГВР (НУК), специфічних по відношенню до антигену), має здатність розпізнавати і зв'язуватися з антигеном, хоча і з більш низькою афінності, ніж весь сайт зв'язування. "Одноланцюгові Ру", також скорочено "5Ем" або "зсЕм", являють собою фрагменти антитіл, що містять домени антитіла Мн і М, з'єднані в один поліпептидний ланцюг. Переважно поліпептид 5Ем додатково містить поліпептидний лінкер між доменами Мн і Мі, який дозволяє 5Ем формувати бажану структуру для зв'язування з антигеном. Огляд 5Ем див. у Те

Рпагтасоїоду ої Мопосіопаї! Апіїродіеєв, мої. 113, Возепригуд апа Мооге еєав., Зргіпдег-Мепад, Мем чок, рр. 269-315 (1994).

"Функціональні фрагменти" антитіл за винаходом містять частину інтактного антитіла, що зазвичай містить антигензв'язуючу або варіабельну ділянку інтактного антитіла або ділянку Ес антитіла, що зберігає або володіє модифікованою здатністю до зв'язування з ЕСК. Приклади фрагментів антитіл включають лінійні антитіла, молекули одноланцюгових антитіл і поліспеціфічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл.

Термін "диатіла" відноситься до невеликих фрагментів антитіл, одержаних шляхом конструювання фрагментів 5Ем (див. попередній абзац) за допомогою коротких лінкерів (близько 5-10 залишків) між доменами Мн і Мі, таким чином, що досягається міжланцюгове, але не внутрішньоланцюгове спаровування М-доменів, приводячи до утворення двохвалентного фрагмента, тобто, фрагмента, що містить два антигензв'язуючих сайти. Біспецифічні диатіла є гетеродимерами двох "кросоверних" фрагментів 5Ем, у яких домени Мн і Мі двох антитіл присутні в різних поліпептидних ланцюгах. Диатіла описані більш детально, наприклад, у ЕР 404097; УМО 93/11161; НоїІпаоег еї а!., Ргос. Маї)!. Асад. 5сі. ОБА 90: 6444-6448 (1993).

Моноклональні антитіла в цьому документі конкретно включають "гібридні" антитіла (імуноглобуліни), в яких частина важкого та/або легкого ланцюга є ідентичною або гомологічною відповідним послідовностям в антитілах, що одержані з певного виду або належать до певного класу або підкласу антитіл, в той час як інший(ї) ланцюг(и) є ідентичним(ими) або гомологічним(ими) відповідним послідовностям в антитілах, що одержані з іншого виду або належать до іншого класу або підкласу антитіл, а також фрагментам таких антитіл, за умови, що вони виявляють бажану біологічну активність (патент США Мо 4816567, Моїтізоп еї а!., Ргос. Май.

Асад. Осі. ОБА, 81:6851-6855 (1984)). Запропоновані в цьому документі гібридні антитіла включають антитіла РКІМАТІ2ЕЮО?У, в яких антигензв'язуюча ділянка антитіла одержана з антитіла, що продукується, наприклад, мавпами макаками, імунізованими антигеном, що представляє інтерес. Використовуваний в цьому документі термін "гуманізоване антитіло" використовується як підмножина "гібридних антитіл". "Гуманізовані" форми нелюдських (наприклад, мишачих) антитіл являють собою гібридні антитіла, що містять мінімальну послідовність, одержану з імуноглобуліну, відмінного від людського. В одному варіанті реалізації винаходу гуманізоване антитіло являє собою імуноглобулін людини (антитіло-реципієнт), в якому залишки з ГВД (НМЕ) (визначені нижче)

Зо реципієнта замінені залишками з ГВД (НМК) видів, що не відносяться до людини (донорні антитіла), таких як миша, щур, кролик або не примат, що не належить до людини, які володіють бажаною специфічністю, афінністю та/або функціональною спроможністю. У деяких випадках каркасні ("КД") залишки людського імуноглобуліну замінені відповідними залишками, що не мають відношення до людини. Крім того, гуманізовані антитіла можуть містити залишки, що не виявлені в антитілі-реципієнті або в донорському антитілі. Такі модифікації можуть бути здійснені для подальшого вдосконалення характеристик антитіл, таких як афінність зв'язування.

Загалом, гуманізоване антитіло буде містити істотною мірою всі з щонайменше одного і, як правило, двох варіабельних доменів, у яких всі або істотною мірою всі гіперваріабельні петлі відповідають таким з послідовності імуноглобуліну, що не відноситься до людини, а всі або практично всі ділянки КД є ділянками послідовності людського імуноглобуліну, хоча ділянки КД можуть містити одну або більшу кількість індивідуальних замін фрагментів КД, що покращують характеристики антитіл, такі як афінність зв'язування, ізомеризація, імуногенність, тощо.

Кількість таких амінокислотних замін у КД зазвичай не перевищує 6 в ланцюзі Н, і не більше З в ланцюзі І. Крім того, гуманізоване антитіло необов'язково буде містити щонайменше частину константної ділянки імуноглобуліну (с), як правило, з людського імуноглобуліну. Більш детальну інформацію див., наприклад, у допез евї а!., Майге 321:522-525 (1986); Віесптапп 6ї аї.,

Маїште 332:323-329 (1988); і Ргевіа, Сит. Ор. Бігисі. ВіоїЇ. 2:593-596 (1992). Додатково див., наприклад, Мазмжапі апа Натійоп, Апп. АПегду, Азійта 4 Іттипої. 1:105-115 (1998); Наїтів,

Віоспет. бос. Тгапзасіюп5 23:1035-1038 (1995); Нипйпе апа Стов55, Сит. Ор. Віоїесп. 5:428-433 (1994); і патенти США МоМо 6982321 і 7087409. "Людське антитіло" являє собою антитіло, що має амінокислотну послідовність, яка відповідає послідовності антитіла, продукованого людиною, та/або яке було одержано із застосуванням будь-якого із способів одержання людських антитіл, як описано в цьому документі. Це визначення людського антитіла конкретно виключає гуманізоване антитіло, що містить антигензв'язуючі залишки, які не відносяться до людини. Людські антитіла можуть бути одержані із застосуванням різних методів, відомих в цій галузі техніки, включаючи бібліотеки фагового дисплея. Ноодепроот апа Уміптег, У. Мої. Віоі!., 227:381 (1991); Магкз еї аї., У. Мої. Віої., 222:581 (1991). Крім того, для одержання людських моноклональних антитіл доступні способи, описані в Соїе єї аі!., Мопосіопа! Апіїродієз апа Сапсег Тнегару, Аїап В. І івв, р. 77 (1985); Воегтег бо еї аї., У. Іттипої., 147(1):86-95 (1991). Див. також мап Оі)К апа мап де М/пкКеї, Сит. Оріп.

Ріаптасої!., 5: 368-74 (2001). Антитіла людини можуть бути одержані шляхом введення антигену трансгенній тварині, організм якої був модифікований для одержання таких антитіл у відповідь на антигенну стимуляцію, але чиї ендогенні локуси були відключені, наприклад, імунізованим ксеномишам (див., наприклад, патенти США МоМо 6075181 і 6150584 щодо технології

ХЕМОМОИЗ5БЕЇ ). Також, див., наприклад, Гі еї аїЇ., Ргос. Маї). Асай. 5сі. ОБА, 103:3557-3562 (2006) щодо людських антитіл, одержаних за допомогою технології гібридоми В-клітин людини.

Термін "гіперваріабельна ділянка", ""ВД (НМАК)" або "ГВ (НМ)" при використанні в цьому документі відноситься до ділянок варіабельного домену антитіла, які є гіперваріабельними за послідовністю та/або утворюють структурно визначені петлі. Як правило, антитіла містять шість

ГВД (НМК); три у МН (НІ, Н2, НЗ) ї три у МІ. (11, 12, ІЗ). В нативних антитілах НЗ і ІЗ виявляють найбільшу різноманітність шести ГВД (НУК), і вважається, що НЗ відіграє унікальну роль в наданні антитілам тонкої специфічності. Див., наприклад, Хи еї аї., Ітітипйу 13:37-45 (2000);

УЧоппбзоп апа Ми, у Меїпоад5 іп МоїІесшаг Віоїоду 248:1-25 (10, еєд., Нитап Ргевзв5, Тоїомжа, МУ, 2003). Дійсно, в природі зустрічаються антитіла верблюжих, що складаються тільки з важкого ланцюга, та є функціональними і стабільними за відсутності легкого ланцюга. Див., наприклад,

Натегв-Савієттап сеї аї., Маїште 363:446-448 (1993); ЗНетпй єї аї!., Майте 5ігисі. Вісі. 3:733-736 (1996).

Ряд розмежувань ГВД (НМК) застосовується і охоплюється цим документом. Ділянки визначення комплементарності за Кабатом (ДВК (СОК)) базуються на варіабельності послідовності і є найбільш часто застосовуваними (Кабаї еї аІ., Зедиепсе5 ої Ргоїеїіп5 ої

Іттипоіодіса! Іпієгеві, Бій Ей. Рибіїс Неацй 5егуісе, Маїййопаї! Інвзійшев ої Неанйй, Веїпезаа, МО. (1991)). Замість цього Чотиа посилається на розташування структурних петель (Споїпіа апа

Ї езК, у. Мої. Віої. 196:901-917 (1987)). АЬМ ГВД (НУК) являють собою компроміс між ГВД (НМК) за Кабатом і структурними петлями за Чотіа та використовуються для моделювання антитіл

АРМ в програмному забезпеченні Охтога Моїесшіаг. "Контактні" ГВД (НМЕ) базуються на аналізі наявних складних кристалічних структур. Залишки кожного із цих ГВД (НУК) відзначені нижче.

Петля за Кабатом АБМ за Чотіа Контактні

Ії І 24-і 34 І 24-І 34 26-32 130-І36

І2 І 50-І56 І 50-І56 І50--52 146-455

Зо ІЗ І 89-97 І 89-І 97 91-96 189-І96

НІ НЗІ-НЗ5В 0 нН2г6-НЗОВ Н2г6-НЗ2 / НЗО-НЗ5В (нумерація за Кабатом)

НІ НЗ1-нНЗЬ нгб-нНЗЬ Н2габ-НЗ2 /НЗО-НЗ5 (нумерація за Чотіа)

На ноо-нб5 н5оОо-Н58 нН5З-Н55 /нНа7-н5В

НЗ нНеб-НІ02 неб5-НІ02 Нн9Уб-НтТОї неОЗ-НІтТо1

ГВД (НУК) можуть містити "розширені ГВД (НМК)» наступним чином: 24-36 або 24-34 (11), 46-56 або 50-56 (І 2) і 89-97 або 89-96 (І 3) в МІ. і 26-35 (НІ), 50-65 або 49-65 (Н2) і 93-102, 94-102 або 95-102 (НЗ) в УН. Для кожного з цих визначень залишки варіабельної ділянки нумеруються відповідно до КарБбаї еї а!., вище.

Вирази "нумерація залишків варіабельних доменів за Кабатом" або "нумерація положень амінокислот за Кабатом" і їх варіації відносяться до системи нумерації, яка застосовується для варіабельних доменів важкого ланцюга або варіабельних доменів легкого ланцюга компіляції антитіл у Караї еї аї., вище. Із застосуванням цієї системи нумерації, фактична лінійна амінокислотна послідовність може містити менше або додаткові амінокислоти, що відповідають скороченню або введенню в КД або ГВД (НУК) варіабельного домену. Наприклад, варіабельний домен важкого ланцюга може містити вставку однієї амінокислоти (залишок 52а за Кабатом) після залишку 52 Н2 та вставку залишків (наприклад, залишки 82а, 825 і 82с і т. д. за Кабатом) після залишку 82 КД важкого ланцюга. Нумерація залишків за Кабатом може бути визначена для заданого антитіла шляхом вирівнювання на ділянках гомології послідовності антитіла зі "стандартною" послідовністю, пронумерованою за Кабатом.

БО "Каркасні" або "КД" залишки являють собою залишки варіабельної ділянки, відмінні від залишків ГВД (НУК), як визначено в цьому документі. "Консенсусний каркас людини" або "акцепторний каркас людини" є структурою, яка представляє амінокислотні залишки, що найбільш часто зустрічаються у вибірці послідовностей каркаса МІ або МН людського імуноглобуліну. Як правило, вибір послідовності МІ або УНН людського імуноглобуліну здійснюється з підгрупи послідовностей варіабельних доменів. Як правило, підгрупа послідовностей є підгрупою, як у Кабаї еї аіЇ., Зедцепсе5 ої Ргоївіп5 ої

Ітітипоїіодіса! Іпіегеві, 5" Ей. Рибіїс Неайй Ббегуісе, Маїйопаї! Іпвійціев ої Неанпй, Вейезаа, МО (1991). Приклади включають, у разі МІ, підгрупу, яка може бути підгрупою капа І, капа Ії, капа І або капа ІМ, як у Кабаї еї аїІ., вище. Крім того, у разі МН, підгрупа може бути підгрупою І, бо підгрупою ІЇ або підгрупою І, як у Кабаї еї аІ., вище. Як альтернатива, консенсусна структура людини може бути виведена з вищевикладеного, у якій конкретні залишки, такі як у разі, коли каркасний залишок людини вибирають на базі його гомології з донорною каркасною структурою, вирівнюючи послідовність донорного каркаса з набором різних послідовностей каркаса людини.

Акцепторний каркас людини, "виведений з" каркасу імуноглобуліну людини або консенсусного каркасу людини, може містити таку ж амінокислотну послідовність, або він може містити раніше існуючі модифікації амінокислотної послідовності. У деяких варіантах кількість раніше існуючих модифікацій амінокислот становить 10 або менше, 9 або менше, 8 або менше, 7 або менше, 6 або менше, 5 або менше, 4 або менше, З або менше або 2 або менше. "Консенсусний каркас МН підгрупа ПШ" містить консенсусну послідовність, одержану з амінокислотних послідовностей у варіабельній важкій підгрупі І Кабаї еї аІ., вище. В одному варіанті реалізації винаходу амінокислотна послідовність підгрупи МН ІІ консенсусного каркаса містить щонайменше частину або всі з кожної із наступних послідовностей:

ЕМОЇ МЕЗО МОРОИБІ ВІ 5СААБЗ (НО-ЕВ1) (5ЕО І МО: 229); МУВОАРИаКаї ЕМУМ (НОС-ЕНг2) (ЗЕО ІЮ МО: 230); ВЕТІЗАОТЗКМТАМІ ОММ5І ВАЕОТАМУМСАВ (НОС-ЕКЗ) (5ЕО ІЮО МО: 232); і

М СОСТІ МТУ5А (НОС-ЕН4) (З5ЕО ІЮ МО: 232). "Консенсусний каркас Мі капа |" містить консенсусну послідовність, одержану з амінокислотних послідовностей в підгрупі | легкої капа Кабаї еї аї.,, вище. В одному варіанті реалізації винаходу амінокислотна послідовність консенсусного каркасу МН підгрупи І! містить щонайменше частину або всі З кожної із наступних послідовностей:

РІОМТО5РБЗБІ БАБМИарАМТІТО (0-8!) (5БО 10 МО: 233); МУООКРИЕКАРКІСІМ (І10-ЕВ2г) (ЗЕО ІЮО МО: 234); СМРЗАЕЗОаЗИаБатТОвТІ ТЗІ ОРЕОБАТУМО (І10-ЕКЗ) (ЗЕО ІЮО МО: 235); і

ЕСОСТКМЕЇКА (І С-ЕВа4) (5ЕО ІЮ МО: 236). "Модифікація амінокислоти" в зазначеному положенні, наприклад, ділянки Ес, відноситься до заміни або делеції зазначеного залишку або вставки щонайменше одного амінокислотного залишку, суміжного із зазначеним залишком. Якщо вставка "прилягає" до зазначеного залишку, це означає вставку в межах одного-двох залишків від нього. Вставка може бути М-кінцевою або

С-кінцевою відносно зазначеного залишку. В цьому документі переважною модифікацією амінокислоти є заміна. "Афінність" відноситься до активності сумарної кількості нековалентних взаємодій між одним

Зо сайтом зв'язування молекули (наприклад, антитіла) і його партнером по зв'язуванню (наприклад, антигеном, наприклад, ТІСІТ). Якщо в тексті прямо не вказано інше, то, як використовується в цьому документі, "афінність зв'язування" відноситься до афінності власного зв'язування, що відображає взаємодію 1:1 між членами пари зв'язування (наприклад, антитілом і антигеном). Афінність молекули Х відносно її партнера У зазвичай може бути представлена константою дисоціації (Ка). Афінність може бути виміряна звичайними способами, відомими в цій галузі техніки, включаючи описані в цьому документі. Конкретні ілюстративні і типові варіанти реалізації винаходу для вимірювання афінності зв'язування, описані нижче.

Антитіло "з дозрілою афінністю" являє собою таке, яке містить одну або більшу кількість модифікацій в одній або більшій кількості ГВД (НМК), що приводить до покращення афінності антитіла до антигену в порівнянні з вихідним антитілом, яке не містить цих модифікацій. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло з дозрілої афінністю володіє афінністю до цільового антигену в наномолярному або навіть пікомолярному діапазоні. Антитіла з дозрілої афінністю одержують за способами, відомими в цій галузі техніки. Наприклад, у Магк5 еї аї.,

Віо/ТесппоІоду 10:779-783 (1992) описано дозрівання афінності шляхом перетасування УН- і МІ - домену. Випадковий мутагенез ГВД (НУК) та/або каркасних залишків описаний, наприклад, у

Вагбаз єї а!. Ргос Маї. Асад. бсі. ОБА 91:3809-3813 (1994); Зснівг єї ам. Сепе 169:147-155 (1995);

Уепгп еї аї. У. Іттипої. 155:1994-2004 (1995); дасК5оп еї аї., уУ. Іттипої. 154(7):3310-9 (1995); і

Намкіпз еї аї, у. Мої. Віої. 226:889-896 (1992).

Використовуваний в цьому документі термін "зв'язується", "специфічно зв'язується з" або "специфічний по відношенню до" відноситься до вимірної та відтворної взаємодії, такої як зв'язування між мішенню і антитілом, яка є визначальною для присутності мішені в присутності гетерогенної популяції молекул, включаючи біологічні молекули. Наприклад, антитіло, яке специфічно зв'язується з мішенню (що може бути епітопом), являє собою антитіло, яке зв'язується з цією мішенню з більшою афінністю, авідністю, з більшою легкістю та/або на більш тривалий час, ніж воно зв'язується з іншими мішенями. В одному варіанті реалізації винаходу ступінь зв'язування антитіла з неспорідненою мішенню становить менше ніж близько 10 95 від зв'язування антитіла з мішенню, за даними, наприклад, радіоіїмуноаналізу (РІА (КІА)). У деяких варіантах реалізації винаходу константа дисоціації (Ка) антитіла, яке специфічно зв'язується з мішенню, становить х 1 мкМ, х 100 нМ, х 10 НМ, х 1 нМ або х 0,1 нМ. У деяких варіантах бо реалізації винаходу антитіло специфічно зв'язується з епітопом на білку, який є консервативним для білка різних видів. В іншому варіанті реалізації винаходу специфічне зв'язування може включати ексклюзивне зв'язування, але не вимагає його. Використовуваний в цьому документі термін може бути представлений, наприклад, молекулою з Ка відносно мішені 107 М або менше, як альтернатива, 109 М або менше, як альтернатива, 105 М або менше, як альтернатива, 107 М або менше, як альтернатива, 108 М або менше, як альтернатива, 107 М або менше, як альтернатива, 1079 М або менше, як альтернатива, 107! М або менше, як альтернатива, 1072 М або менше, або Ка в діапазоні від 107 М до 105 М або від 105 М до 1079

М або від 1077 М до 107 М. Як буде зрозуміло фахівцю в цій галузі техніки, афінність і значення

Ка є зворотно пропорційними. Висока афінність до антигену відображається низьким значенням

Ка. В одному варіанті реалізації винаходу термін "специфічне зв'язування" відноситься до зв'язування, при якому молекула зв'язується з конкретним поліпептидом або епітопом на конкретному поліпептиді без істотного зв'язування з будь-яким іншим поліпептидом або поліпептидним епітопом.

Використовуваний в цьому документі термін "імуноадгезин" позначає антитілоподібні молекули, в яких специфічність зв'язування гетерологічного білка ("адгезин") поєднується з ефекторними функціями константних доменів імуноглобуліну. З точки зору структури імуноадгезини містять гібрид амінокислотної послідовності з бажаною специфічністю зв'язування, яка відрізняється від сайту розпізнавання і зв'язування антитіла з антигеном (тобто, є "гетерологічною") і послідовності константного домену імуноглобуліну. Адгезинова частина молекули імуноадгезину зазвичай являє собою безперервну амінокислотну послідовність, яка містить щонайменше сайт зв'язування з рецептором або лігандом. Послідовність константного домену імуноглобуліну в імуноадгезині може бути одержана з будь-якого імуноглобуліну, такого як ІД0-1, а-2 (включаючи ІдсгА і Ід28), Ідо-3 або Ідо-4 підтипи ІдА (включаючи ІдА-1 і ІдА- 2), ЗЕ, дО або ІдМ. Гібридні Ід переважно містять заміну домену поліпептиду або антитіла, описаного в цьому документі, в місці щонайменше однієї варіабельної ділянки в молекулі Ід. В особливо переважному варіанті реалізації винаходу гібридний імуноглобулін містить ділянки шарніра, СН2 і СНЗ, або шарніра, СНІ, СН2 і СНЗ молекули ІдсС1. Стосовно одержання гібридного імуноглобуліну додатково див. патент США Мо 5428130, виданий 27 червня 1995 року. Наприклад, імуноадгезини, придатні для комбінованої терапії, в цьому випадку включають поліпептиди, що містять позаклітинні або такі, що зв'язуються з ОХ40, частини ОХ40І або позаклітинні або такі, що зв'язуються з ОХ40І, частини ОХ40, злиті з константним доменом послідовності імуноглобуліну, такі як ЕСО-Бс ОХ40 або ЕСО-Рс ОХ401Ї. Імуноадгезинові комбінації Ід Ес і позаклітинні домени, ВКД (ЕСО) рецепторів клітинної поверхні іноді називають розчинними рецепторами. "Гібридний білок" і "гібридний поліпептид" відносяться до поліпептиду, що містить дві частини, ковалентно зв'язані одна з одною, причому кожна з частин представляє собою поліпептид з іншою властивістю. Властивість може бути біологічною властивістю, такою як активність іп міго або іп мімо. Крім того, властивість може бути простою хімічною або фізичною властивістю, такою як зв'язування з молекулою-мішенню, каталіз реакції і т.д. Дві частини можуть бути з'єднані безпосередньо одинарним пептидним зв'язком або за допомогою пептидного лінкера, але знаходяться в рамці зчитування одна з одною.

Термін "ділянка Ес" в цьому документі використовується для визначення С-кінцевої ділянки важкого ланцюга імуноглобуліну, включаючи ділянки Ес нативної послідовності і варіанти ділянок Ес. Хоча межі ділянки Ес важкого ланцюга імуноглобуліну можуть варіювати, ділянка Ес важкого ланцюга |дс людини зазвичай визначається як така, що продовжується від амінокислотного залишку в положенні Су5з226 або від Рго230 до його карбоксильного кінця. С- кінцевий лізин (залишок 447 відповідно до системи нумерації ЄС) ділянки Ес може бути видалений, наприклад, під час продукування або очищення антитіла або шляхом рекомбінантної інженерії нуклеїнової кислоти, що кодує важкий ланцюг антитіла. Відповідно, композиція інтактних антитіл може містити популяції антитіл з видаленими залишками К447, популяції антитіл без видалених залишків К447 і популяції антитіл, що містять суміш антитіл із залишком К447 і без нього. Відповідні природні послідовності ділянок Ес для застосування в антитілах за винаходом включають Ідс1 людини, Ідс2 (ІдД2А, Ід28), ДОЗ і Ід. "Рецептор Ес" або "БСК" описує рецептор, що зв'язується з ділянкою Ес антитіла.

Переважним ЕсК є ЕсК нативної послідовності людини. Крім того, переважним ЕсСК є такий, який зв'язується з антитілом ідо (гама-рецептор), що включає рецептори підкласів ЕсСуКІ, ЕсуКІЇ і ЕСуКкІ, включаючи алельні варіанти і, як альтернатива, сплайсингові форми цих рецепторів, рецептори ЕсукКіІ! включають ЕсукПА ("активуючий рецептор") і ЕсуКІіІВ («інгібіторний рецептор"), що мають подібні амінокислотні послідовності та в основному містять відмінності в бо їх цитоплазматичних доменах. Активуючий рецептор ЕсукКПА містить в цитоплазматичному домені імунорецепторний мотив активації на базі тирозину (ІМАТ (ІТАМ)). Інгібіторний рецептор

ЕсукКІІВ містить в цитоплазматичному домені імунорецепторний мотив інгібування на базі тирозину (ІМІТ (ІТІМ)). (Див. М. Юаєгоп, Аппи. Кем. Іттипої. 15:203-234 (1997)). Огляд ГСК наведений у в Камеїспй апа Кіпейї Аппи. Кем. ІтітипоїЇ. 9: 457-92 (1991); Сареї єї аї.,

Іттипотеїйнос5 4: 25-34 (1994); і де Нааз еї аї., 9. Таб. Сііп. Меа. 126: 330-41 (1995). Інші ГСК, включаючи ті, що будуть ідентифіковані в майбутньому, охоплюються терміном "ЕСЕ". "Ефекторні клітини людини" відносяться до лейкоцитів, що експресують один або більшу кількість ЕСК і виконують ефекторні функції. У деяких варіантах реалізації винаходу клітини експресують щонайменше ЕсукП ї виконують ефекторну(ї) функцію(ї) АЗКЦ (ОСС). Приклади лейкоцитів людини, що опосередковують АЗКЦ (АОСС), включають мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК (РВМС)), природні клітини-кілери (ПК (МК)), моноцити, цитотоксичні

Т-клітини і нейтрофіли. Ефекторні клітини можуть бути виділені з природного джерела, наприклад, з крові. "Ефекторні функції" відносяться до біологічної активності, яку відносять на рахунок ділянки

Ес антитіла і яка варіює в залежності від ізотипу антитіла. Приклади ефекторних функцій антитіла включають в себе: зв'язування з С1д і комплементзалежну цитотоксичність (КЗЦ (СОС)); зв'язування з рецептором с; антитілозалежну клітинно-опосередковану цитотоксичність (АЗКЦ (АОСС)); фагоцитоз; пригнічення рецепторів клітинної поверхні (наприклад, рецептора В-клітин); і активацію В-клітин.

Вираз "їстотною мірою знижений" або "такий, що істотною мірою відрізняється", як використовується в цьому документі, означає досить високий ступінь різниці між двома числовими значеннями (як правило, одне пов'язане з молекулою, а інше пов'язане з референтною молекулою/компаратором), таким чином, що фахівець в цій галузі техніки буде розглядати різницю між цими двома значеннями як статистично значущу в контексті біологічної характеристики, виміряної зазначеними значеннями (наприклад, значеннями Ка). Різниця між зазначеними двома значеннями становить, наприклад, більше ніж близько 10 95, більше ніж близько 20 95, більше ніж близько 30 95, більше ніж близько 40 95 та/або більше ніж близько 50 95 від значення референтної молекули/компаратора.

Термін "істотною мірою подібний" або "істотною мірою такий же", як використовується в цьому документі, означає досить високий ступінь подібності між двома числовими значеннями (наприклад, одне, пов'язане з антитілом за винаходом, а інше, пов'язане з референтним антитілом/компаратором), таким чином, що спеціаліст в цій галузі техніки буде розглядати різницю між цими двома значеннями, як таку, що має невелику або взагалі не має біологічної та/або статистичної значущості в контексті біологічної характеристики, виміряної зазначеними значеннями (наприклад, значеннями Ка). Різниця між зазначеними двома значеннями становить, наприклад, менше ніж близько 50 95, менше ніж близько 40 95, менше ніж близько 3095, менше ніж близько 20 95 та/"або менше ніж близько 10 95 від значення референтної молекули/компаратора.

Термін "антагоніст" використовується в найширшому розумінні і включає будь-яку молекулу, що частково або повністю блокує, пригнічує або нейтралізує біологічну активність нативного поліпептиду, описану в цьому документі. Аналогічним чином термін "агоніст" використовується в найширшому розумінні і включає будь-яку молекулу, що імітує біологічну активність нативного поліпептиду, описану в цьому документі. Придатні молекули агоністів або антагоністів конкретно включають агоністичні або антагоністичні антитіла або фрагменти антитіл, фрагменти або варіанти амінокислотних послідовностей нативних поліпептидів, пептидів, антисмислові олігонуклеотиди, органічні молекули невеликого розміру і т. д. Способи ідентифікації агоністів або антагоністів поліпептиду можуть включати приведення поліпептиду в контакт з потенційною молекулою-агоністом або -антагоністом та вимірювання змін, що можуть бути виявлені, в одному або більшій кількості видів біологічної активності, які зазвичай асоціюються з поліпептидом.

Використовуваний в цьому документі термін "антагоністичне антитіло" проти молекули- мішені відноситься до антитіла, яке перешкоджає нормальному функціонуванню молекули- мішені шляхом зменшення транскрипції або трансляції нуклеїнової кислоти, що кодує молекулу- мішень, або шляхом пригнічення або блокування активності молекули-мішені, або і того, і іншого. Наприклад, антагоністичне антитіло проти ТІСІТ можна розглядати як антитіло або його зв'язуючий анти-ТІСІТ фрагмент, що перешкоджає нормальному функціонуванню ТІСІТ шляхом зменшення транскрипції або трансляції нуклеїнової кислоти, що кодує ТІСІТ, або шляхом пригнічення або блокування активності поліпептиду ТІСІТ, або і того, і іншого. Фахівцю в цій галузі техніки буде зрозуміло, що в деяких випадках антагоністичне антитіло проти ТІСІТ може 60 протидіяти одному виду активності ТІСІї, не впливаючи на інший вид активності ТІСІТ.

Наприклад, бажане антагоністичне антитіло проти ТІСІТ для застосування в певних способах згідно з цим документом є антагоністичним антитілом ТІСІТ, яке протидіє активності ТІСІТ у відповідь на один з видів взаємодії з ПВР (РУК), взаємодії з РМКІ З або взаємодії з РМКІ2, наприклад, не зачіпаючи або мінімально зачіпаючи будь-який з інших видів взаємодії ТІСІТ.

Терміни "антагоніст ТІСЇТ" ії "антагоніст активності ТІСІї або експресії ТІСІТ" використовуються взаємозамінним чином і відносяться до сполуки, що перешкоджає нормальному функціонуванню ТІСІТї шляхом зменшення транскрипції або трансляції нуклеїнової кислоти, що кодує ТІСІТ, або шляхом пригнічення або блокування активності поліпептиду ТІСІТ або і того, і іншого. Приклади антагоністів ТІСІї включають, але не обмежуючись цим, антисмислові полінуклеотиди, інтерферуючі РНК, каталітичні РНК, гібриди

РНК-ДНК, специфічні по відношенню до ТІСІТ аптамери, анти-ТІСІТ антитіла, ТІСІТ-зв'язуючі фрагменти анти-ТІСІТ антитіл, молекули невеликого розміру, що зв'язуються з ТІСІТ, пептиди, що зв'язуються з ТІСІТ, та інші поліпептиди, що специфічно зв'язуються з ТІСІТ (включаючи, але не обмежуючись цим, фрагменти, що зв'язують з ТІСІТ, одного або більшої кількості лігандів ТІСІТ, необов'язково злиті з одним або більшою кількістю додаткових доменів), таким чином, що взаємодія між антагоністом ТІСІТ ї ТІСІТ приводить до зменшення або припинення прояву активності або експресії ТІСІТ. Фахівцю в цій галузі техніки буде зрозуміло, що в деяких випадках антагоніст ТІБІТ може протидіяти одному виду активності ТІСІТ, не впливаючи на інший вид активності ТІСІТ. Наприклад, бажаним антагоністом ТІСІТ для застосування в деяких із запропонованих в цьому документі способів є антагоніст ТІСІТ, який протидіє активності ТІСІТ у відповідь на один з видів взаємодії з ПВР (РУК), взаємодії з РМКІЗ або взаємодії з РМКІ 2, наприклад, не зачіпаючи або мінімально зачіпаючи будь-який інший вид взаємодії ТІСІТ.

Терміни "антагоніст ПВР (РМК)" і "антагоніст активності ПВР (РУК) або експресії ПВР (РМК)" використовуються взаємозамінним чином і відносяться до сполуки, що перешкоджає нормальному функціонуванню ПВР (РУК), шляхом зменшення транскрипції або трансляції нуклеїнової кислоти, що кодує ПВР (РУК), або шляхом пригнічення або блокування активності поліпептиду ПВР (РУК) або і того, і іншого. Приклади антагоністів ПВР (РУК) включають, але не обмежуючись цим, антисмислові полінуклеотиди, інтерферуючі РНК, каталітичні РНК, гібриди

РНК-ДНК, специфічні по відношенню до ПВР (РМК) аптамери, анти-ПВР (РУК) антитіла,

Зо фрагменти антитіл проти ПВР (РМК), що зв'язуються з ПВР (РУК), молекули невеликого розміру, що зв'язуються з ПВР (РМК), пептиди, що зв'язуються з ПВР (РУК), та інші поліпептиди, що специфічно зв'язуються з ПВР (РУК) (включаючи, але не обмежуючись цим, фрагменти одного або більшої кількості лігандів ПВР (РМК), що зв'язуються з ПВР (РМК), необов'язково злиті з одним або більшою кількістю додаткових доменів), таким чином, що взаємодія між антагоністом ПВР (РУК) і ПВР (РУК) приводить до зменшення або припинення прояву активності або експресії ПВР (РУК). Фахівцю в цій галузі техніки буде зрозуміло, що в деяких випадках антагоніст ПВР (РУК) може протидіяти одному виду активності ПВР (РУК), не впливаючи на інший вид активності ПВР (РУК). Наприклад, бажаним антагоністом ПВР (РМК) для застосування в деяких способах згідно з цим документом є антагоніст ПВР (РУК), що протидіє активності ПВР (РУК) у відповідь на взаємодію з ТІСІТ, не зачіпаючи взаємодії з РМА- сС096 та/або РУК-СО226.

Термін "антагоніст зв'язування осі РО-1" відноситься до молекули, що пригнічує взаємодію партнера по зв'язуванню з віссю РО-1 з одним або більшою кількістю його партнерів по зв'язуванню, щоб усунути дисфункцію Т-клітин, яка виникає в результаті проведення сигналу в

РО-1 - з метою відновлення або підсилення функції Т-клітин (наприклад, проліферації, продукування цитокінів, знищення клітин-мішеней). Як використовується в цьому документі, антагоніст зв'язування осі РО-1 включає антагоніст зв'язування РО-1, антагоніст зв'язування РО- 1 ії антагоніст зв'язування РО-1 2.

Термін "антагоніст зв'язування РО-1" відноситься до молекули, яка зменшує, блокує, пригнічує, усуває або перешкоджає трансдукції сигналу в результаті взаємодії РО-1 з одним або більшою кількістю його партнерів по зв'язуванню, таких як РО-І1, РО-І2. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою молекулу, що інгібує зв'язування

РО-1 з одним або більшою кількістю його партнерів по зв'язуванню. У конкретному аспекті антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 з РО-Ї1 та/або РО-І2. Наприклад, антагоністи, які зв'язуються з РО-1, включають антитіла проти РО-1, їх антигензв'язуючі фрагменти, імуноадгезини, гібридні білки, олігопептиди та інші молекули, які зменшують, блокують, інгібують, усувають або перешкоджають передачі сигналу, що виникає в результаті взаємодії РО-1 з РО-Ї1 та/або РО-І2. В одному варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 зменшує негативний костимулюючий сигнал, що опосередкований або бо передається білками клітинної поверхні, які експресуються на Т-лімфоцитах, що опосередковують передачу сигналу через РО-1, таким чином, що дисфункціональна Т-клітина стає менш дисфункціональною (наприклад, підсилює ефекторні відповіді на розпізнавання антигену). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою антитіло проти РО-1. У конкретному аспекті антагоніст зв'язування РО-1 являє собою МОХ-1106 (ніволумаб), описаний в цьому документі. В іншому конкретному аспекті антагоніст зв'язування

РО-1 являє собою МК-3475 (ламбролізумаб), описаний в цьому документі. В іншому конкретному аспекті антагоніст зв'язування РО-1 являє собою СТ-011 (підилізумаб), описаний в цьому документі. В іншому конкретному аспекті антагоніст зв'язування РО-1 являє собою МЕОБІ- 0680 (АМР-514), описаний в цьому документі. В іншому конкретному аспекті антагоніст зв'язування РО-1 являє собою РОКОО1, описаний в цьому документі. В іншому конкретному аспекті антагоніст зв'язування РО-1 являє собою КЕСМ2810, описаний в цьому документі. В іншому конкретному аспекті антагоніст зв'язування РО-1 являє собою ВОВ-108, описаний в цьому документі.

Термін "антагоніст зв'язування РО-Ї1" відноситься до молекули, яка зменшує, блокує, пригнічує, усуває або перешкоджає трансдукції сигналу, що виникає в внаслідок взаємодії РО-

Ї1 з одним або більшою кількістю його партнерів по зв'язуванню, таких як РО-1, В7-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-11, являє собою молекулу, яка інгібує зв'язування РО-Ї1 з його партнерами по зв'язуванню. У конкретному аспекті антагоніст зв'язування РО-1 1, інгібує зв'язування РО-І1 з РО-1 та/або В7-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністи, які зв'язуються з РО-Ї1, включають антитіла проти РО-Ї1, їх антигензв'язуючі фрагменти, імуноадгезини, гібридні білки, олігопептиди та інші молекули, які зменшують, блокують, інгібують, усувають або перешкоджають передачі сигналу, що виникає в результаті взаємодії РО-І 1 з одним або більшою кількістю його партнерів по зв'язуванню, таких як РО-1, В7-1. В одному варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-І1, зменшує негативний костимулюючий сигнал, що опосередковуються або передається білками клітинної поверхні на Т-лімфоцитах, які опосередковують передачу сигналу через РО-11, таким чином, що дисфункціональна Т-клітина стає менш дисфункціональною (наприклад, підсилює ефекторні відповіді на розпізнавання антигену). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-Ї1, являє собою антитіло проти РО-І1. У конкретному аспекті анти-РО-Ї 1

Зо антитіло являє собою УМУу/243.55.570, описаний в цьому документі. В іншому конкретному аспекті анти-РО-І1 антитіло являє собою МОХ-1105, описаний в цьому документі. У ще одному конкретному аспекті анти-РО-І1 антитіло являє собою МРОЇ 3280А (атезолізумаб), описаний в цьому документі. У ще одному конкретному аспекті анти-РО-І 1 антитіло являє собою МЕ0І4736 (дурвалумаб), описаний в цьому документі. У ще одному конкретному аспекті анти-РО-Ї 1 антитіло являє собою УУу/243.55.570, описаний в цьому документі. У ще одному конкретному аспекті анти-РО-Ї1 антитіло являє собою М5ВО0010718С (авелумаб), описаний в цьому документі.

Термін "антагоніст зв'язування РО-1/2" відноситься до молекули, яка зменшує, блокує, пригнічує, усуває або перешкоджає трансдукції сигналу в результаті взаємодії РО-І2 з одним або більшою кількістю з його партнерів по зв'язуванню, таких як РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-12, являє собою молекулу, яка інгібує зв'язування

РО-І?2 з одним або більшою кількістю його партнерів по зв'язуванню. У конкретному аспекті антагоніст зв'язування РО-12, інгібує зв'язування РО-І2 з РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністи РО-/2 включають антитіла проти РО-12, їх антигензв'язуючі фрагменти, імуноадгезини, гібридні білки, олігопептиди та інші молекули, які зменшують, блокують, інгібують, усувають або перешкоджають передачі сигналу, що виникає в результаті взаємодії

РО-І2 з одним або більшою кількістю його партнерів по зв'язуванню, таких як РО-1. В одному варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-І/2 зменшує негативний костимулюючий сигнал, що опосередкований або передається білками клітинної поверхні, які експресуються на

Т-лімфоцитах, що опосередковують передачу сигналу через РО-Ї2, таким чином, що дисфункціональна Т-клітина стає менш дисфункціональною (наприклад, підсилює ефекторні відповіді на розпізнавання антигену). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 2, є імуноадгезином.

Використовуваний в цьому документі термін "ОХ40" відноситься до будь-якого природного

ОХ40 з будь-якого джерела хребетних, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, людина) і гризунів (наприклад, миші і щури), якщо в тексті прямо не вказано інше. Термін включає "повнорозмірний", непроцесований ОХ40, а також будь-яку форму ОХ40, що виникає в результаті процесування в клітині. Додатково, термін включає природні варіанти ОХ40, наприклад, сплайсингові варіанти або алельні варіанти. Амінокислотна послідовність типового 60 ОХ40 людини представлена в 5ЕО ІЮО МО: 354.

"Активація ОХ40" відноситься до активації рецептора ОХ40. Як правило, активація ОХ40 призводить до передачі сигналу.

Термін "аптамер" відноситься до молекули нуклеїнової кислоти, що здатна зв'язуватися з молекулою-мішенню, такою як поліпептид. Наприклад, аптамер за винаходом може специфічно зв'язуватися з поліпептидом ТІСІї або з молекулою в сигнальному шляху, який модулює експресію ТІСІТ. В цій галузі техніки добре відомі генерація і терапевтичне застосування аптамерів. Див., наприклад, патент США Мо 5475096, і терапевтичну ефективність МАСОСЕМФО (Еуеїесп, Нью-Йорк) для лікування вікової дегенерації жовтої плями.

Термін "дисфункція" в контексті імунної дисфункції відноситься до стану зниженої імунної відповіді на антигенну стимуляцію.

Використовуваний в цьому документі термін "дисфункціональний" додатково включає резистентність або нечутливість до розпізнавання антигену, зокрема, порушену здатність трансформувати розпізнавання антигену в ефекторні функції Т-клітин нижче в сигнальному шляху, такі як проліферація, продукування цитокінів (наприклад, гама-інтерферону) та/або знищення клітини-мішені. "Антитілозалежна клітинно-опосередкована цитотоксичність" або "АЗКЦ о (АрСсС)" відноситься до форми цитотоксичності, при якій секретований імуноглобулін, зв'язаний з рецепторами Ес (БСК), що присутні на певних цитотоксичних клітинах (наприклад, ПК (МК)- клітинах, нейтрофілах і макрофагах), дозволяє цим цитотоксичним ефекторам специфічно зв'язуватися з антигенвмісною клітиною-мішенню і згодом викликати загибель клітини-мішені за допомогою цитотоксинів. Первинні клітини для опосередкування АЗКЦ (АОСС), ПК (МК) -клітини, експресують тільки ЕсуКІї, тоді як моноцити експресують ЕСУуКІ, ЕСУКІІ і ЕСУК. Експресія ГСК на гемопоетичних клітинах наведена в Табл. З на стор. 464 Камеїсп апа Кіпеї, Аппи. Кем.

Ітітипо!ї 9: 457-92 (1991). Для оцінки активності АЗКЦ (АОСС) молекули, що представляє інтерес, може бути проведений аналіз АЗКЦ (АОСС) іп міго, такий як описаний в патенті США

МоМо 5500362 або 5821337 або в патенті США Мо 6737056 (Ргезіа). Придатні для таких аналізів ефекторні клітини включають клітини МКПК (РМВО) і ПК (МК). Як альтернатива або додатково, активність АЗКЦ (АЮСС) молекули, що представляє інтерес, може бути оцінена іп мімо, наприклад, на тваринній моделі, такій як описана у Сіупез еї а. РМАБ5 (О5А) 95:652-656 (1998).

Зо Типовий аналіз для оцінки активності АЗКЦ (А0СС) представлений у наведених в цьому документі прикладах.

Термін "анергія" відноситься до стану нечутливості до антигенної стимуляції, спричиненого неповними або недостатніми сигналами, що передаються через рецептор Т-клітин (наприклад, підвищення внутрішньоклітинного рівня Са?" за відсутності активації гав). Крім того, анергія Т- клітин може бути наслідком стимуляції антигеном за відсутності костимуляції, в результаті чого клітини стають нечутливими до подальшої активації антигеном навіть у контексті костимуляції.

Стан нечутливості часто може бути усунений присутністю інтерлейкіну-2 (ІІ/-2). Анергічні Т- клітини не клонуються та/або не набувають ефекторних функцій. "Підсилення функції Т-клітин" означає індукувати, спричиняти або стимулювати ефекторну

Т-клітину або Т-клітину пам'яті для одержання оновленої, стійкої або підсиленої біологічною функції. Приклади підсилення функції Т-клітин включають: підвищену секрецію у-інтерферону ефекторними СО8: Т-клітинами, підсилення секреції у-інтерферону СО4-- Т-клітинами пам'яті та/або ефекторними Т-клітинами, збільшення проліферації СО4-- ефекторних Т-клітин та/або Т- клітин пам'яті, збільшення проліферації СО8- ефекторних Т-клітин, підвищення чутливості до антигенів (наприклад, кліренс) в порівнянні з рівнями таких показників до втручання. В одному варіанті реалізації винаходу ступінь покращення становить щонайменше 50 95, як альтернатива, бо бо, 70 95, 80 95, 90 95, 100 95, 120 96, 150 95, 200 95. Спосіб вимірювання такого покращення відомий фахівцю в цій галузі техніки.

Термін "виснаження" відноситься до виснаження Т-клітин як до стану дисфункції Т-клітин, що виникає внаслідок тривалої передачі сигналів Т-клітинним рецептором (ТКР (ТСК)), яка виникає під час багатьох хронічних інфекцій і раку. Цей стан відрізняється від анергії тим, що він виникає не через неповну або недостатню передачу сигналу, а через тривалу передачу сигналу. Він визначається слабкою ефекторних функцією, стійкою експресією інгібіторних рецепторів ії транскрипціональним станом, відмінним від стану функціональних ефекторних Т- клітин або Т-клітин пам'яті. Виснаження перешкоджає оптимальному контролю інфекції та пухлин. Виснаження може бути результатом як зовнішніх негативних регуляторних шляхів (наприклад, імунорегуляторних цитокінів), так і внутрішніх негативних регуляторних шляхів (костимулюючих) в клітині (РО-1, В7-НЗ, В7-НА і т. д.). "Підсилення функції Т клітин" означає індукувати, спричиняти або стимулювати Т-клітину 60 для одержання стійкої або підсиленої біологічною функції або відновлювати або реактивувати виснажені або неактивні Т-клітини. Приклади підсилення функції Т-клітин включають: підвищену секрецію у-інтерферону СО8: Т-клітинами, підвищену проліферацію, підвищену чутливість до антигенів (наприклад, кліренс вірусу, патогена або пухлини) в порівнянні з рівнями таких показників до втручання. В одному варіанті реалізації винаходу ступінь покращення становить щонайменше 50 9о, як альтернатива, 60 Ус, 70 о, 80 90, 90 95, 100 95, 120 95, 150 95, 200 9.

Спосіб вимірювання такого покращення відомий фахівцю в цій галузі техніки. "Дисфункціональний розлад Т-клітин" представляє собою розлад або стан Т-клітин, що характеризується зниженням чутливості до антигенної стимуляції. У конкретному варіанті реалізації винаходу дисфункціональне порушення Т-клітин являє собою розлад, що специфічно пов'язаний з неналежним чином зниженою передачею сигналу через ОХ40 та/або ОХ40І. В іншому варіанті реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин є таким, при якому Т- клітини є анергічними або знижена їх здатність секретувати цитокіни, проліферувати або виявляти цитолітичну активність. У конкретному аспекті зниження чутливості призводить до неефективного контролю патогена або пухлини, що експресують імуноген. Приклади дисфункціональних порушень Т-клітин, що характеризуються дисфункцією Т-клітин, включають неусунену гостру інфекцію, хронічну інфекцію і пухлинний імунітет. "Пухлинний імунітет" відноситься до процесу, в якому пухлини ухиляються від імунного розпізнавання і кліренсу. Таким чином, як терапевтична концепція пухлинний імунітет "вилікуваний", коли таке ухилення послаблюється, а пухлини розпізнаються та атакуються імунною системою. Приклади розпізнавання пухлини включають зв'язування з пухлиною, зменшення розміру пухлини і кліренс пухлини. "Імуногенність" відноситься до здатності конкретної речовини провокувати імунну відповідь.

Пухлини є імуногенними, і підсилення імуногенності пухлин сприяє кліренсу пухлинних клітин імунною відповіддю. Приклади підсилення імуногенності пухлини включають, але не обмежуючись цим, обробку агоністом зв'язування ОХ40 (наприклад, агоністичними анти-0ОХ40 антитілами) та інгібітором ТІСІТ (наприклад, блокуючі анти-ТІСІТ антитіла). "Стійка відповідь" відноситься до стійкого впливу у вигляді зменшення росту пухлини після припинення лікування. Наприклад, розмір пухлини може залишатися таким же або меншим у порівнянні з розміром на початку фази введення. У деяких варіантах реалізації винаходу тривалість стійкої відповіді є щонайменше такою же, як тривалість лікування, щонайменше 1,5Х, 2,0Х, 2,5Х або 3,0Х тривалості лікування. "Носії", як використовується в цьому винаході, включають фармацевтично прийнятні носії, наповнювачі або стабілізатори, що є нетоксичними для клітини або ссавця, впливаючи на нього в застосовуваних дозах і концентраціях. Часто фізіологічно прийнятний носій являє собою водний розчин з буферизованим рН. Приклади фізіологічно прийнятних носіїв включають буферні речовини, такі як фосфат, цитрат і інші органічні кислоти; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту; низькомолекулярний поліпептид (менше 10 залишків); білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші карбогідрати, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатуючі агенти, такі як ЕДТК; цукрові спирти, такі як маніт або сорбіт; солеутворюючі протиїони, такі як натрій; та/або неіонні поверхнево-активні речовини, такі як ТМ/ЕЕМ "М, поліетиленгліколь (ПЕГ (РЕС)) і РІШКОМІС5 М, "Листок-вкладиш" відноситься до інструкції, що зазвичай міститься в комерційних упаковках лікарських засобів, яка містить інформацію про показання, зазвичай міститься в комерційні упаковках лікарських засобів, яка містить інформацію про показання, застосування, дозування, способи введення, протипоказання, інші лікарські засоби для комбінування з продуктом, що міститься в упаковці, та/або попередження щодо застосування таких лікарських засобів.

Використовуваний в цьому документі термін "лікування" відноситься до клінічного втручання, призначеного для модифікації природного перебігу у індивідуума або клітини, яку лікують в ході клінічної патології. Бажані ефекти лікування включають зниження швидкості прогресування захворювання, покращення або полегшення патологічного стану, ремісію або покращення прогнозу. Наприклад, лікування індивідуума проходить успішно, якщо один або більша кількість симптомів, пов'язаних з раком, пом'якшуються або усуваються, включаючи, але не обмежуючись цим, зменшення проліферації (або руйнування) ракових клітин, зменшення симптомів, що виникають в результаті захворювання, підвищення якості життя тих, хто страждає на захворювання, зниження дози інших лікарських засобів, необхідних для лікування захворювання, уповільнення прогресування захворювання та/або збільшення тривалості життя індивідуумів.

Використовуваний в цьому документі термін "затримка прогресування захворювання" означає відтермінування, утруднення, зменшення швидкості, уповільнення, стабілізацію та/або відсунення в часі розвитку захворювання (наприклад, раку). Така затримка може бути різної тривалості, в залежності від історії захворювання та/або індивідуума, який проходить лікування.

Як очевидно для фахівця в цій галузі техніки, достатня або значна затримка може, по суті, включати профілактику, при якій захворювання у індивідуума не розвивається. Наприклад, пізня стадія раку, така як розвиток метастазів, може бути відсунута в часі.

Використовуваний в цьому документі термін "зменшення або пригнічення рецидиву раку" означає зменшення або пригнічення рецидиву пухлини або раку, прогресування пухлини або раку.

Як використовується в цьому документі, "рак" і "раковий" відносяться до або описують фізіологічний стан у ссавців, який зазвичай характеризується нерегульованим ростом клітин. До цього визначення включені доброякісні та злоякісні ракові утворення, а також латентні пухлини або мікрометастази. Приклади раку включають, але не обмежуючись цим, карциному, мієлому, лімфому, бластому, саркому і лейкоз. Більш конкретні приклади таких видів раку включають множинну мієлому (ММ), пласкоклітинний рак, рак легені (включаючи дрібноклітинний рак легені, недрібноклітинний рак легені, аденокарциному легені і пласкоклітинний рак легені), перитонеальний рак, печінково-клітинний рак, рак шлунка (включаючи рак шлунково-кишкового тракту), рак підшлункової залози, гліобластому, рак шийки матки, рак яєчника, рак печінки, рак сечового міхура, гепатому, рак молочної залози, рак товстої кишки, колоректальний рак, карциному ендометрію або матки, карциному слинної залози, рак нирки або нирковий рак, рак печінки, рак передміхурової залози, рак вульви, рак щитоподібної залози, карциному печінки, різні види раку голови і шиї, а також лімфому В-клітин (включаючи високодиференційовану/фолікулярну неходжкінську лімфому (НХЛ (МНІ)), дрібноклітинну лімфоцитарну (МЛ (53) НХЛ (МН), НХЛ (МН) проміжного ступеня диференціації/фолікулярну

НХЛ (МН), дифузну НХЛ (МНІ) проміжної ступеня диференціації, низькодиференційовану імунобластну нНХл (МН, низькодиференційовану лімфобластну нНХл (МН, низькодиференційовану дрібноклітинну НХЛ (МНІ) з нерозщепленими клітинами, НХЛ (МНІ) з масивним ураженням; мантійно-клітинну лімфому; пов'язану зі СНіДом лімфому; (4

Зо макроглобулінемію Вальденстрема), хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ (СІ 3), гострий лімфобластний лейкоз (ГЛЛ (АГ), волосатоклітинний лейкоз, хронічний мієлобластний лейкоз і посттрансплантаційний лімфопроліферативний розлад (ПТЛР (РТІО)), а також аномальну судинну проліферацію, пов'язану з факоматозами, набряк (такий як пов'язаний з пухлинами головного мозку) і синдром Мейгса.

Термін "пухлина" відноситься до будь-якого росту і проліферації пухлинних клітин, злоякісних або доброякісних, і всіх передракових і ракових клітин і тканин. Терміни "рак", "ракове", "клітинний проліферативний розлад", "проліферативний розлад" і "пухлина" не є взаємовиключними, як зазначено в цьому документі.

Використовуваний в цьому документі термін "метастаз" означає поширення раку з його основного місця розташування в інші ділянки організму. Ракові клітини можуть відриватися від первинної пухлини, проникати в лімфатичні і кровоносні судини, циркулювати в кровотоку і рости у віддаленій локації (утворювати метастази) в нормальних тканинах в будь-якому іншому місці організму. Метастази можуть бути локальними або віддаленими. Метастазування являє собою послідовний процес, який залежить від відриву пухлинних клітин від первинної пухлини, переміщення з кровотоком і зупинки на віддаленій ділянці На новому місці клітини організовують кровопостачання і можуть вирости з утворенням небезпечної для життя маси. Як стимулюючі, так і інгібіторні молекулярні шляхи всередині пухлинної клітини регулюють цю поведінку, причому значущою є також взаємодія між пухлинною клітиною і клітинами-хазяями на віддаленій ділянці. "Ефективна кількість" являє собою щонайменше мінімальну концентрацію, необхідну для досягнення вимірюваного покращення або профілактики певного розладу. Ефективна кількість в цьому документі може варіювати в залежності від таких факторів, як ступінь розвитку захворювання, вік, стать і маса тіла пацієнта, а також здатність антитіла спричиняти бажану відповідь у індивідуума. Крім того, ефективною кількістю є кількість, при якій сприятливі з терапевтичної точки зору ефекти переважають будь-які токсичні або шкідливі ефекти лікування.

Для профілактичного застосування корисні або бажані результати включають такі результати, як усунення або зниження ризику, зменшення тяжкості або відсунення в часі початку захворювання, включаючи біохімічні, гістологічні та/"або поведінкові симптоми захворювання, його ускладнення і проміжні патологічні фенотипи, презентовані під час розвитку захворювання. бо Для терапевтичного застосування корисні або бажані результати включають клінічні результати,

такі як зменшення однієї або більшої кількості симптомів, що виникають в результаті захворювання, підвищення якості життя людей, які страждають на це захворювання, зменшення дози інших лікарських засобів, необхідних для лікування захворювання, підвищення ефекту іншого лікарського засобу, наприклад, за допомогою націлювання, уповільнення прогресування захворювання та/або збільшення тривалості життя. У разі раку або пухлини ефективна кількість лікарського засобу може здійснювати ефект у вигляді зменшення кількості ракових клітин; зменшення розміру пухлини; пригнічення (тобто, уповільнення до деякої міри або, бажано, припинення) інфільтрації ракових клітин в периферичні органи; пригнічення (тобто, уповільнення розвитку до деякої міри і, бажано, припинення) метастазів пухлин; пригнічення до деякої міри росту пухлини; талабо полегшення до деякої міри одного або більшої кількості симптомів, пов'язаних з розладом. Ефективну кількість можна вводити в один або більшу кількість прийомів. Для цілей цього винаходу ефективна кількість лікарського засобу, сполуки або фармацевтичної композиції являє собою кількість, достатню для проведення профілактичного або терапевтичного лікування, прямо або непрямо. Як буде зрозуміло в клінічному контексті, ефективна кількість лікарського засобу, сполуки або фармацевтичної композиції може бути досягнута або може не бути досягнута в поєднанні з іншим лікарським засобом, сполукою або фармацевтичною композицією. Таким чином, "ефективна кількість" може розглядатися в контексті введення одного або більшої кількості терапевтичних агентів, причому один агент може вважатися зазначеним в ефективній кількості, якщо в поєднанні з одним або більшою кількістю інших агентів бажаний результат може бути досягнутий або досягається.

Використовуваний в цьому документі термін "в сполученні з" відноситься до застосування одного методу лікування на додаток до іншого методу лікування. Таким чином, "в поєднанні з" відноситься до застосування одного методу лікування до, під час або після застосування іншого методу лікування у індивідуума.

Використовуваний в цьому документі термін "суб'єкт" або "індивідуум" означає ссавця, в тому числі, але не обмежуючись цим, людину або ссавця, що не відноситься до людини, такого як жуйні тварини, кінські, собачі, овечі або котячі. Переважно, суб'єкт є людиною. Відповідно до цього опису, пацієнти також є суб'єктами.

Зо "Хіміотерапевтичний агент" включає хімічні сполуки, придатні для лікування раку. Приклади хіміотерапевтичних агентів включають ерлотиніб (ТАКСЕМАФ, Сепепіесп/О5І Рпагт.), бортезоміб (МЕ САОЕФ, МіПеппічт Ріагт.), дисульфірам, епігалокатехін гідрат, саліноспорамід

А, карфілзоміб, 17-ААС (гелданаміцин), радицикол, лактатдегідрогеназу А (ГОН-А), фулвестрант (БАБООЕХФ, Авігалепеса), сунітиб (ЗТЕМТФ, Ріїгег/5идеп), летрозол (ГЕМАКАФ, Момагії5), іматиніб мезилат (ЗІ ЕЕМЕСФ, Момапів), фінасунат (МАТАЇ АМІВФ,

Момапйів), оксаліплатин (ЕГОХАТІМФ, Запоїї), 5-ФУ (5-РО) (5-флуорурацил), лейковорин, рапаміцин (5ігоїйти5, КАРАМИОМЕФ, Умууеїй), лапатиніб (ТУКЕКВФ, 55К572016, Сіахо Зтій

Кіїпе), лонафаміб (5СН 66336), сорафеніб (МЕХАМАК Ф, Вауег І ар5), гефітиніб (ІКЕБЗАФ,

Авіга/епеса), АС14 78, алкілуючі агенти, такі як тіотепа і циклофосфамідї СУТОХАМФ); алкілсульфонати, такі як бусульфан, імсульфан і піросульфан; азиридини, такі як бензодопа, карбоквон, метидопа й уредопа; етиленіміни і метиламеламіни, в тому числі альтретамін, триетиленмеламін, триетиленфосфорамід, триеєтилентіофосфорамід і триметиломеламін; ацетогеніни (особливо булатацин і булатацинон); камптотецин (в тому числі топотекан та іринотекан); бріостатин; калістатин; СС-1065 (в тому числі синтетичні аналоги адозелезину, карцелезину і бізелезину); криптофіцини (зокрема, криптофіцин 1 і криптофіцин 8); адренокортикостероїди (в тому числі преднізон і преднізолон); ципротерон ацетат; 5а- редуктази, в тому числі фінастерид і дутастерид); вориностат, ромадипсин, панобіностат, вальпроєву кислоту, моцитиностат доластатин; алдеслейкін, тальк дуокарміцин (в тому числі синтетичні аналоги, КМ/-2189 і СВ1-ТМІ1); елейтеробін; панкратистатин; саркодиктин; спонгістатин; сполуки іпритного нітрогену, такі як хлорамбуцил, хломафазин, хлорфосфамід, естрамустин, іфосфамід, мехлоретамін, мехлоретамін оксид гідрохлорид, мелфалан, новембіхин, фенстерин, преднімустин, трофосфамід, іпритний урацил; похідні нітрозосечовини, такі як кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, німустин і ранімустин; антибіотики, такі як енедіїнові антибіотики (наприклад, каліхеаміцин, особливо каліхеаміцин УтІі і каліхеаміцин 11 (Апдем/ Спет. Іпії, Е4йа., 1994, 33: 183-186), динеміцин, в тому числі динеміцин А, бісфосфонати, такі як клодронат, еспераміцин; а також неокарциностатиновий хромофор і споріднені хромофори хромопротеїнових енедіїнових антибіотиків), аклациномізини, актиноміцин, аутраміцин, азасерин, блеоміцин, кактиноміцин, карабіцин, каміноміцин, карцинофілін, хромоміцини, дактиноміцин, даунорубіцин, деторубіцин, б-діазо-5-оксо-і - 60 норлейцин, АОКІАМУСІМФ (доксорубіцин), морфоліно-доксорубіцин, ціаноморфоліно-

доксорубіцин, 2-піроліно-доксорубіцин і дезоксидоксорубіцин), епірубіцин, езорубіцин, ідарубіцин, марцеломіцин, мітоміцини, такі як мітоміцин С, мікофенольна кислота, ногаламіцин, оливоміцини, пепломіцин, порфіроміцин, пуромицин, квеламіцин, родорубіцин, стрептонігрин, стрептозоцин, туберцидин, убенімекс, циностатин, зорубіцин; антиметаболіти, такі як метотрексат і 5-флуорурацил (5-ФУ); аналоги фолієвої кислоти, такі як деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуринові аналоги, такі як флударабін, 6- меркаптопурин, тіаміприн, тіогуанін; піримідинові аналоги, такі як анцитабін, азацитидин, 6- азауридин, кармофур, цитарабін, дидезоксиуридин, доксифлуридин, еноцитабін, флоксуридин; андрогени, такі як калустерон, дромоностанол пропіонат, епітіостанол, мепітіостан, тестолактон; засоби, що пригнічують функцію надниркових залоз, такі як аміноглутетімід, мітотан, трилостан; добавку для заповнення дефіциту фолієвої кислоти, таку як фролінова кислота; ацеглатон; альдофосфамідглікозід; амінолевулінову кислоту; енілурацил; амсакрин; бестрабуцил; бісантрен; едатраксат; дефофамін; демеколцин; діазиквон; елфомітин; еліптиній ацетат; епотилон; етоглюцид; галій нітрат; гідроксисечовини; лентинан; лонідайнін; майтансиноїди, такі як майтансин і ансамітоцини; мітогуазон; мітоксантрон; мопідамол; нітраерин; пентостатин; фенамет; пірарубіцин; лозоксантрон; подофілінову кислоту; 2-етилгідразид; прокарбазин; полісахаридний комплекс РОКФ (ОН Маїшига! Ргодисі5, Юджин, Орегон); разоксан; ризоксин; сизофуран; спірогерманій; тенуазонову кислоту; триазиквон; 2,2'2"-трихлортриєетиламін; трихотецени (особливо токсин Т-2, веракурин А, роридин А і ангідин); уретан; віндезин; дакарбазин; маномустин; мітобронітол; мітолактол; піпоброман; гацитозин; арабінозид ("Ага-С"); циклофосфамід; тіотепа; таксани, наприклад, ТАХОЇ (паклітаксел, ВгібіоІ-Муєет5 Зацірь

Опсоіоду, Принстон, штат Нью-Джерсі), АВКАХАМЕФ (без кремофору), композиції наночастинок паклітакселу з альбуміном (Атегісап РІаптасешіса! Рагіпег5, Шомберг, штат Іллінойс) і

ТАХОТЕКЕФ (доцетаксел, доксетаксел, Запоїїі-Амепіїз); хлорамбуцил; ЗЕМ2АКФ (гемцитабін); б-тіогуанін; меркаптопурин; метотрексат; платинові аналоги, такі як цисплатин і карбоплатин; вінбластин; етопозид (УР-16); іфосфамід; мітоксантрон; вінкристин; МАМЕЇ ВІМЕФ (вінорелбін); новантрон; теніпозид; едатрексат; дауноміцин; аміноптерин; капецитабин (ХЕГОБАФ); ібандронат; СРТ-11; інгібітор топоїзомерази КЕ5 2000; дифлуорметилорнітин (ОМЕО); ретиноїди, такі як ретиноєва кислота; і фармацевтично прийнятні солі, кислоти і похідні будь-

Зо якого з вищевказаного.

Крім того, хіміотерапевтичний засіб включає (ї) антигормональні агенти, дія яких спрямована на регулювання або пригнічення дії гормонів на пухлини, такі як антиестрогени і селективні модулятори рецепторів естрогенів (СМРЕ (ЗЕКМ)), в тому числі, наприклад, тамоксифен (в тому числі МОЇ МАБЕХФ,, тамоксифен цитрат) ралоксифен, дролоксифен, йодоксифен, 4- гідрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, І МУ117018, онпристон їі РЕАКЕЗТОМФО (тореміфен цитрат); (її) інгібітори ароматази, які інгібують фермент ароматазу, що регулює утворення естрогенів у надниркових залозах, такі як, наприклад, 4 (5)-імідазоли, аміноглутетімід,

МЕСАБЗЕФ (мегестрол ацетат), АКОМАЗБІМЕ (екземестан, Ріїгег- форместан, фадрозол,

ЕІМІБОКО (ворозол), РЕМАКАЄФ (летрозол, Момапів) і АКІМІОЕХФ (анастрозол, Авігагепеса); (ії) антіандрогени, такі як флутамід, нілутамід, бікалутамід, лейпролід і гозерелін; бусерелін, триптерелін, медроксипрогестерон ацетат, діетилстільбестрол, премарин, флуоксиместерон, повністю транс-ретиноєва кислота, фенретинід, а також /трокацитабін (1,3- діоксоланнуклеозидний аналог цитозину); (ім) інгібітори протеїнкінази; (м) інгібітори ліпідкінази; (м) антисмислові олігонуклеотиди, особливо ті, які пригнічують експресію генів у сигнальних шляхах, що беруть участь в аберантній проліферації клітин, таких як, наприклад, РКС-альфа,

Ка ії Н-Кав; (мії) рибозими, такі як інгібітори експресії фактора росту ендотелію судин, ФРЕС (МЕСБЕ) (наприклад, АМСІО2УМЕФ)) та інгібітори експресії НЕК2; (мії) вакцини, такі як вакцини проти генної терапії, наприклад, АГ'ОМЕСТІМОУ, ГЕОМЕСТІМФО ії МАХІОФ; РКО! ЕОКІМФ, гі -2; інгібітор топоїзомерази 1, такий як І ШЕТОТЕСАМФ; АВАКЕГІХФ гтЕнН; і (їх) фармацевтично прийнятні солі, кислоти і похідні будь-якого з вищевказаного.

Крім того, хіміотерапевтичний агент включає антитіла, такі як алемтузумаб (Сатраїй), бевацизумаб (АМАБТІМФ, Сепепіесп); цетуксимаб (ЕКВІТОХФ, Ітсіопе); панітумумаб (МЕСТІВІХФ, Атдеп), ритуксимаб (КІТОХАМФЕ», Сепепіесп/Віодеп дес), пертузумаб (ОММІТАКОФ), 204, Сепепіесії), трастузумаб (НЕКСЕРТІМФ), Сепепіесії), тозитумомаб (Веххаг,

Согіхіа) і кон'югат антитіла з лікарським засобом гемтузумаб озогаміцин (МУ ОТАКОФ, Умуеїй).

Додаткові гуманізовані моноклональні антитіла з терапевтичним потенціалом агентів в поєднанні із сполуками за цим винаходом включають: аполізумаб, азелізумаб, атлізумаб, бапінейзумаб, бітазузумаб мертансин, кантузумаб мертансин, седелізумаб, сертолізумаб пегол, цидфузитузумаб, цидтузумаб, даклізумаб, екулізумаб, ефалізумаб, епратузумаб, еклізумаб, 60 фелвізумаб, фонтолізумаб, гемтузумаб озогаміцин, інотузумаб озогаміцин, імілімумаб,

лабетузумаб, лінтузумаб, матузумаб, меполізумаб, мотавізумаб, мотовізумаб, наталізумаб, німотузумаб, ноловізумаб, нумавізумаб, окрелізумаб, омалізумаб, палівізумаб, пасколізумаб, пекфузитузумаб, пектузумаб, пекселізумаб, ралівізумаб, ранібізумаб, резлівізуаб, резлізумаб, резивізуаб, ровелізумаб. руплізумаб, сибротузумаб, сиплізумаб, сонтузумаб, такатузумаб тетраксетан, тадоцизумаб, талізумаб, тефибазумаб, тоцилізумаб, торалізумаб, тукотузумаб целмолейкін, туцуситузумаб, умавізуаб, уртоксазумаб, устекінумаб, візилізумаб та анти- інтерлейкін 12 (АВ Т-874/9У695, УмМуеїй Кезеагсп і Аррой Іарогаїогіеб), що являє собою рекомбінантне повнорозмірне Ідс1 А антитіло з виключно людської послідовністю, генетично модифіковане для розпізнавання білка інтерлейкін-12 ріє40.

Додатково, хіміотерапевтичний агент включає "інгібітори рецепторів епідермального фактора росту, РЕФР (ЕСЕРМ)», що відносяться до сполук, які зв'язуються з або іншим чином взаємодіють безпосередньо з РЕФР (ЕСЕК) і запобігають або зменшують його сигнальну активність і, як альтернатива, згадуються як "антагоніст РЕФР (ЕСЕК)». Приклади таких агентів включають антитіла і молекули невеликого розміру, що зв'язуються з РЕФР (ЕСЕК). Приклади антитіл, що зв'язуються з РЕФР (ЕСЕК), включають МАБ 579 (АТС СКІ НВ 8506), МАБ 455 (АТСС СВІ НВ8507), МАБ 225 (АТС СК 8508), МАЬ 528 (АТСС СК. 8509) (див. Патент США

Мо 4943533, Мепаеї5зопп еї аї.) та його варіанти, такі як гібридизоване 225 (С225 або Сейшхітаб,

ЕВАВИТІХ У) ї реконструйоване людське 225 (Н2г25) (див. УМО 96/40210, Ітсіопе Зузіетв Іпо.);

ІМО-11Е8, повністю людське, яке орієнтоване на РЕФР (ЕСЕБК) антитіло (Ітсіопе); антитіла, що зв'язуються з мутантним РЕФР (ЕСЕК) типу ІІ (патент США Мо 5212290); гуманізовані і гібридні антитіла, що зв'язуються з РЕФР (ЕСЕК), як описано в патенті США Мо 5891996; і людські антитіла, що зв'язуються з РЕФР (ЕСЕРЕК), такі як АВХ-ЕСЕ або панітумумаб (див. УМО98/50433,

Ардепіх/Атдеп); ЕМО 55900 (Бігадіюно єї а!., Еиг. У. Сапсег З2А: 636-640 (1996)); ЕМО7200 (матузумаб) гуманізоване антитіло проти РЕФР (ЕСЕЕК), спрямоване проти РЕФР (ЕСЕК), що конкурує як з епідермальним фактором росту, ЕФР (ЕСЕ), так і з трансформуючим фактором росту, ТФР (ТОБЕ)-альфа за зв'язування з РЕФР (ЕСЕК) (ЕМО/МегскК); людське антитіло проти

РЕФР (ЕСЕК), НиМах-ЕСЕК (СепМаб); повністю людські антитіла, відомі як Е1.1, Е2.4, Е2.5,

Еб.2, Еб.4, Е2.11, Еб.3 ії Е7.6.3 і описані в патенті США 6235883; МОХ-447 (Медагех Іпс); і тАБ 806 або гуманізоване тАБб 806 (дЧопп5 еї аї., У. ВіоІ!., Спет., 279 (29): 30375-30384 (2004)).

Зо Антитіло проти РЕФР (ЕСЕК) можна кон'югувати з цитотоксичним агентом, утворюючи таким чином імунокон'югат (див., наприклад, ЕРбЄ59439А2, МегсК Раїепі СтрН). Антагоністи РЕФР (ЕСЕК) включають невеликі молекули, такі як сполуки, описані в патентах США МоМо 5616582, 5457105, 5475001, 5654307, 5679683, 6084095, 6265410, 6455534, 6521620, 6596726, 6713484, 5770599, 6133332, 5866572, 6399602, 6344459, 6602863, 6391874, 6344455, 5760041, 6002008 та 5747498, а також наступні публікації РСТ: УМО 98/14451, УМО 98/50038, УМО 99/09016 і УМО 99/24037. Конкретні низькомолекулярні антагоністи РЕФР (ЕСЕК) включають О51-774 (СР-358 774, ерпотиніб, ТАКСЕМАП Сепепіесп/О5І Рпаптасеціїса!5); РО 183805 (СІ 1033, 2-пропенамід,

М-І4-(З-хлор-4-флуорфеніл)аміно |-7-ІЗ-(4-морфолін)пропокси|-6-хіназоліні|-, дигідрохлорид,

Ріїгег Іпс3; 201839, гефітиніб (ІКЕББЗАФ) /4-(3'-хлор-4-флуораніліно)-7-метокси-6-(3- морфолінопропокси)хіназолін, Авзігалепеса); М 105180 ((б-аміно-4-(З-метилфеніламіно)- хіназолін, -гепеса), ВІВХ-1382 (М8- (З-хлор-4-флуорфеніл)-М2-(1-метилпіперидин-4- іл)піримідо(|5,4-4|піримідин-2,8-діамін, Воепгіпдег ІпдеІпеїт), РКІ-166 ((2)-4-І4-(1- фенілетил)аміно|-1 Н-піроло|2,3-4|піримідин-6б-ілІфенол), (К)-6-(4-гідроксифеніл)-4-((1- фенілетил)аміно|-7Н-піроло|2,3-4|піримідин); СІ -387785 (М-(4-(3-бромфеніл)аміно |-6-хіназолін|- 2-бутинамід); ЕКВ-569 (М-(4-(З-хлор-4-флуорфеніл)аміно|-3-ціано-7-етокси-6-хінолін |-4- (диметиламіно)-2-бутенамід) (Уууеїй); Ас1478 (Ріїгех-; АС1571 (50 5271, Ріїй7ег); подвійні інгібітори тирозинкінази РЕФР (ЕСЕК)/НЕКЗ, такі як лапатиніб (ТУИКЕКВФ, 55К572016 або М-|З3- хлор-4-(З-флуорфеніл)метокси|феніл|-6(5((2-метилсульфоніл|етил|аміно|метил|-2-фураніл|/-4- хіназолінамін).

Хіміотерапевтичні агенти додатково включають "інгібітори тирозинкінази", в тому числі препарати, націлені на РЕФР (ЕСЕК), зазначені у попередньому абзаці; низькомолекулярний інгібітор тирозинкінази НЕК, такий як ТАК165, доступний від ТаКеда; СР-724,714, селективний інгібітор рецепторної тирозинкінази ЕгбВ2 для перорального застосування (Ріїгег і О51І); інгібітори подвійного НЕК, такі як ЕКВ-569 (доступний від Умуеїй), які переважно зв'язуються з

РЕФР (ЕСЕК), але пригнічують клітини, що надмірно експресують як НЕК, так і РЕФР (ЕСЕК); лапатиніб (55К572016, доступний від Сіахо-5тйНКіїпе), інгібітор тирозинкінази РЕФР (ЕСЕБЕ) і

НЕКЗ2 для перорального застосування; РКІ-166 (доступний від Момапгіів); інгібітори рап-НЕК, такі як канертиніб (СІ-1033; РВПагтасіа); інгібітори Каї-1, такі як антисмисловий агент І5І5-5132, доступний від ІЗБІЗ Рпаптасецшійса!5, що пригнічують передачу сигналів Каї-1; не націлені на НЕВ 60 інгібітори ТК, такі як іматиніб мезилат (СГ ЕЕМЕСФ, доступний від Сіахо ЗтіїКіїпе);

поліспеціфічні інгібітори тирозинкінази, такі як сунітиніб (ЗОТЕМТФ, доступний від Рії7ег); інгібітори рецепторної тирозинкінази ФРЕС (МЕСЕ), такі як ваталаніб (РТК787/2К222584, доступний від Момагііз/Зспегіпуд АС); МАРК інгібітор позаклітинної регульованої кінази І СІ-1040 (доступний від РВагтасіа); хіназоліни, такі як РО 153035, 4-(З-хлораніліно)хіназолін; піридопіримідини; піримідопіримідини; піролпіримідини, такі як СОР 59326, СОР 60261 і СОР 62706; піразолпіримідини, 4-(феніламіно)-7Н-піроло(|2,3-4|піримідин; куркумін (диферулоїлметан, 4,5-біс(4-флуораніліно)фталімід); тирфостини, що містять нітротіофенові фрагменти; РО-0183805 (У/агттег-Іатрег); антисмислові молекули (наприклад, такі, які зв'язуються з кодуючою НЕК нуклеїновою кислотою); хіноксалін (патент США Мо 5804396); трифостини (патент США Мо 5804396); 206474 (Авіга 7епеса); РТК-787 (Момапів/5сНегіпу АС); інгібітори рап-НЕРК, такі як СІ-1033 (Ріїйгег); афінітак (І5І5 3521; Івіб// Шу); іматиніб мезилат (СГ ЕЕМЕСФ)); РКІ 166 (Момапів); УМ2016 (Сіахо 5тіййКіїпе); СІ-1033 (Ріїге); ЕКВ-569 (УУуеєїй); семаксиніб (Ріїгег); 206474 (Азігалепеса); РТК-787 (Момапів/5спегіпд Ас); ІМСО-1С11 (Ітпсіопе), рапаміцин (сиролімус, КАРАМИОМЕФ)); або описані в будь-який з наступних патентних публікацій: патент США Мо 5804396; УМО 199 9/09016 (Атегісап Суапатід); М/О 1998/43960 (Атегісап

Суапатіа); У/О 1997/38983 (Уатег І атбеп); УУ/О 1999/06378 (У/атег І атбеп); УУ/О 1999/06396 (У/атег І атреп); УУО 1996/30347 (Ріїег, Іпс); УУО 1996/33978 (7епеса); МО 1996/3397 (7епеса) і УМО 1996/33980 (7епеса).

Крім того, хіміотерапевтичні агенти включають дексаметазон, інтерферони, колхіцин, метоприн, циклоспорин, амфотерицин, метронідазол, алемтузумаб, алітретиноїн, алопуринол, аміфостин, миш'як триоксид, аспарагіназу, живу БЦЖ (ВС), бевацузимаб, бексаротен, кладрибін, клофарабін, дарбепоетин альфа, денілейкін, дексазоксан, епоетин альфа, елотиніб, філграстим, гістерелін ацетат, ібритумомаб, інтерферон альфа-2а, інтерферон альфа-2Бб, леналідомід, левамізол, месну, метоксазален, нандролон, неларабін, нофетумомаб, опрелвекін, паліфермін, памідронат, пегадемазу, пегаспаргазу, пегфілграстим, пеметрексед динатрій, плікаміцин, порфимер натрій, хінакрин, расбуриказу, сарграмостим, темозоломід, ММ-26, 6-Та, тореміфен, третиноїн, повністю транс-ретиноєву кислоту, ПТРК (АТКА), валрубіцин, золедронат і золедронову кислоту та їх фФармацевтично прийнятні солі.

Додатково, хіміотерапевтичні агенти включають гідрокортизон, гідрокортизон ацетат, кортизон ацетат, тиксокотол півалат, триамцинолон ацетонід, мометазон, амцинонід, будесонід, десонід, флуоцинонід, флуоцинолон ацетонід, бетаметазон, бетаметазон натрій фосфат, дексаметазон, дексаметазон натрій фосфат, флуокортолон, гідрокортизон-17-бутират, гідрокортизон-17-валерат, аклометазон дипропіонат, бетаметазон валерат, бетаметазон дипропіонат, преднікарбат, клобетазон-17-бутират, клобетазол-17-пропіонат, флуокортолон капроат, флуокортолон півалат і флупредніден ацетат; імунні селективні протизапальні пептиди (мсСПЗпП (Іп5А!Ю)), такі як фенілаланін-глутамін-гліцин (ФГГ (РЕС)) і його Ю-ізомерна форма (бТеб) (ІМИОГСАМ ВіоТпегарешіс5, ГІС); протиревматичні препарати, такі як азатіоприн, циклоспорин (циклоспорин А), ЮО-пеніциламін, солі золота, гідроксихлорохін, лефлуномід, міноциклін, сульфасалазин, блокатори пухлинного некротичного фактору альфа (ТМЕО), такі як етанерсепт (Епьгеї), інфліксимаб (Кетісаде), адалімумаб (Нитіга), сертолізумаб пегол (Сіпттліа), голімумаб (Зітропі), блокатори інтерлейкіну 1 (1-1), такі як анакінра (Кіпеге), блокатори костимуляції Т-клітин, такі як абатасепт (Огепсіа), блокатори інтерлейкіну б (1-6), такі як тоцилізумаб (АСТЕМЕКАФ)); блокатори інтерлейкіну 13 (1-13), такі як лебрикізумаб; блокатори інтерферону альфа (ІЕМ), такі як ронталізумаб; блокатори бета-7-інтегрину, такі як гпимМАБ

Веїа7; блокатори шляхів ІДЕ, такі як анти-МІ прайм; секретований гомотримерний І Таз і мембранозв'язані гетеротримерні ІТа1/82-блокатори, такі як анти-лімфотоксин альфа (І Та); радіоактивні ізотопи (наприклад, А(211, 1131, 1125, 90, Ке186, Ке188, 5т153, Ві212, РЗ32, РЬ212 і радіоактивні ізотопи Гц); різні досліджувані агенти, такі як тіоплатин, Р5З-341, фенілбутират, ЕТ- 18-ОСНЗ або інгібітори фарнезилтрансферази (1-739 749, 1-744 832); поліфеноли, такі як кверцетин, ресвератрол, піцатанол, епігалокатехін галат, теафлавіни, флаваноли, проціанідини, бетулінова кислота та їх похідні; інгібітори аутофагії, такі як хлорохін; дельта-9- тетрагідроканабінол (дронабінол, МАКІМОЇ Ф); бета-лапахон; лапахол; колхіцин; бетулінова кислота; ацетилкамптотецин, скополектин і 9-амінокамптотецин); подофілотоксин; тегафур (ОЕТОКАЇФ); бексаротин (ТАКОКЕТІМФ); бісфосфонати, такі як клодронат (наприклад,

ВОМЕРОБФ або О5ТАСФ) етидронат (БІОКОСАЇ Ф), МЕ-58095, золедронова кислота/золедронат (ДОМЕТАФ)), алендронат (ЕО5БАМАХФ)), памідронат (АКЕОВІАФ)), тилудронат (ЗКЕПОФ) або ризедронат (АСТОМЕЇГ Ф); і рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕ-В); вакцини, такі як вакцина ТНЕКАТОРЕФ); перифозин, інгібітор ЦОГ-2 (наприклад, целекоксиб або еторикоксиб), інгібітор протеосоми (наприклад, РЗЗ341); ССІ-779; типіфарніб (К11577); орафеніб, 60 АВТ5Б10; інгібітор ВсіІ-2, такий як облімерсен натрій (ЗЕМАЗЕМЗЕФ); піксантрон; інгібітори фарнезилтрансферази, такі як лонафарніб (5СН 6636, ЗАКАБАКТМ); і фармацевтично прийнятні солі, кислоти або похідні будь-якого з вищевказаного; а також комбінації двох або більшої кількості з вищевказаного, такі як СНОР, скорочена назва комбінованої терапії циклофосфамідом, доксорубіцином, вінкристином і преднізолоном; і БОЇ РОХ, скорочена назва схеми лікування оксаліплатином (ЕГОХАТІМТМ) в поєднанні з 5-ФУ (5-Е) і лейковорином.

Хіміотерапевтичні агенти додатково включають нестероїдні протизапальні препарати (НПЗП) з болезаспокійливою, жарознижуючою і протизапальною дією. НПЗП включають неселективні інгібітори ферменту циклооксигенази. Конкретні приклади НПЗП включають аспірин, похідні пропіонової кислоти, такі як ібупрофен, фенопрофен, кетопрофен, флурбіпрофен, оксапрозин і напроксен, похідні оцтової кислоти, такі як індометацин, суліндак, етодолак, диклофенак, похідні єнольної кислоти, такі як піроксикам, мелоксикам, теноксикам, дроксикам, лорноксикам та ізоксикам, похідні фенамінової кислоти, такі як мефенамінова кислота, меклофенамова кислота, флуфенамова кислота, тофенамова кислота, та інгібітори

ЦОГ-2, такі як целекоксиб, еторикоксиб, люміракоксиб, парекоксиб, рофекоксиб, рофекоксиб і валдекоксиб. НПЗП можуть бути показані для симптоматичного полегшення таких станів, як ревматоїдний артрит, остеоартрит, запальні артропатії, анкілозивний спондилоартрит, псоріатичний артрит, синдром Рейтера, гостра подагра, дисменорея, метастатичний біль в кістках, головний біль і мігрень, післяопераційний біль, легкий і помірний біль внаслідок запалення і пошкодження тканин, підвищена температура, кишкова непрохідність і ниркова колька.

Використовуваний в цьому документі термін "цитокін" в загальному випадку відноситься до білків, які вивільняється однією клітинною популяцією, що діють на іншу клітину як міжклітинні медіатори або здійснюють аутокринну дію на клітини, які продукують білки. Приклади таких цитокінів включають лімфокіни, монокіни; інтерлейкіни (ІЛ (13), такі як 1-1, І -1Та, 1-2, 1-3, ІІ -4,

ІС-5, 1С-6, 1-7, 1-8, 1-9, 1-10, 12-11, 1-12, 17-13, 1-15, 1-17 А-Е, з 1-18 по 1І-29 (наприклад, ІІ- 23), 1-31, в тому числі РКО ЕШКІМО гі -2; пухлинний некротичний фактор, такий як ТМЕ-са або

ТМЕ-В, ТОБ-В1-3; та інші поліпептидні фактори, в тому числі фактор, що інгібує лейкоз (ФИЛ (СМЕ")), ціліаарний нейротрофічний фактор (ЦНТФ ("СМТЕ")), ЦНТФ (СМТР)-подібний цитокін (ЦПЦ СІ С")), кардіотрофін (КТ ("СТ") і КИ ліганд (КЛ ("КІ").

Зо Використовуваний в цьому документі термін "хемокін" відноситься до розчинних факторів (наприклад, цитокінів), що мають здатність вибірково індукувати хемотаксис і активацію лейкоцитів. Крім того, вони запускають процеси ангіогенезу, запалення, загоєння ран і утворення пухлин. Приклади хемокінів включають 1-8, людський гомолог хемоатрактанту кератиноцитів (ХК (КС)) миші. "Відсоток ідентичності амінокислотних послідовностей (95)" щодо референтної поліпептидної послідовності визначається як відсоток амінокислотних залишків в потенційній послідовності, які ідентичні амінокислотним залишкам в референтній поліпептидного послідовності після вирівнювання послідовностей і введення гепів, якщо це необхідно, для досягнення максимального відсотка ідентичності послідовності і без урахування будь-яких консервативних замін як частини ідентичності послідовностей. Вирівнювання для цілей визначення відсотка ідентичності амінокислотних послідовностей може бути досягнуте різними способами, які знаходяться в межах компетенції фахівця в цій галузі техніки, наприклад, із застосуванням загальнодоступного комп'ютерного програмного забезпечення, такого як програмне забезпечення ВІ АЗТ, ВІ А5ЗТ-2, АГІСМ або Медаїїдп (ОМА5ЗТАК). Фахівці в цій галузі техніки можуть визначити відповідні параметри для вирівнювання послідовностей, в тому числі будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині порівнюваних послідовностей. Однак для цілей цього винаходу значення ідентичності послідовностей амінокислот генеруються із застосуванням комп'ютерної програми порівняння послідовностей АГІОМ-2. Комп'ютерна програма порівняння послідовностей АГІОМ-2 була створена Сепепіесп, Іпс., а вихідний код був поданий з призначеною для користувача документацією в Бюро реєстрації авторських прав США, Вашинітон, округ Колумбія, 20559, де він зареєстрований під реєстраційним Мо авторських прав США ТХИО510087. Програма АСІСМ-2 є загальнодоступною в Сепепіесі, Іпс., Південний Сан-Франциско, штат Каліфорнія, або може бути скомпільована з вихідного коду. Програма АГІСМ-2 повинна бути скомпільована для застосування в операційній системі ОМІХ, в тому числі цифровий ОМІХ М4.00. Всі параметри порівняння послідовностей задаються програмою АГІСМ-2 і не змінюються.

В ситуаціях, коли АГІОМ-2 використовують для порівняння амінокислотних послідовностей, ідентичність амінокислотних послідовностей для заданої амінокислотної послідовності А відносно або проти заданої амінокислотної послідовності В (що може, як альтернатива, бути бо виражена як задана амінокислота послідовність А, що має або містить певну амінокислотну

Зо послідовність, ідентичну відносно або проти заданої амінокислотної послідовності В), обчислюють таким чином: 100 помножити на дріб Х/у де Х - кількість амінокислотних залишків, зазначених як ідентичні збіги програмою вирівнювання послідовностей АГІОМ-2 у вирівнюванні цією програмою А і В, а У - загальна кількість амінокислотних залишків у В. Необхідно розуміти, що якщо довжина амінокислотної послідовності А не дорівнює довжині амінокислотної послідовності В, то 95 ідентичності амінокислотної послідовності А відносно В не буде дорівнює 95 ідентичності амінокислотної послідовності В відносно А. Якщо в тексті прямо не вказано інше, то всі значення 95 ідентичності амінокислотних послідовностей, що використовуються в цьому документі, одержують, як описано в попередньому абзаці, із застосуванням комп'ютерної програми АГ ІОМ-2.

Вираз "фармацевтично прийнятний" вказує на те, що речовина або композиція повинні бути сумісними, з хімічної та/або токсикологічної точки зору, з іншими складовими інгредієнтами препарату та/або з організмом ссавця, що підлягає лікуванню ним.

Використовуваний в цьому документі термін "введення" означає спосіб введення дози сполуки (наприклад, анти-ТІСІТ антитіла за винаходом або нуклеїнової кислоти, що кодує анти-

ТІСІТ антитіло за винаходом) або композиції (наприклад, фармацевтичної композиції, наприклад фармацевтичної композиції, що містить анти-ТІСІТ антитіло за винаходом) суб'єкту.

Композиції, які застосовуються в описаних в цьому документі способах, можна вводити, наприклад, внутрішньовенно, внутрішньом'язово, інтравітреально (наприклад, шляхом інтравітреальної ін'єкції), у вигляді очних крапель, під шкіру, трансдермально, внутрішньоартеріально, внутрішньочеревинно, внутрішньовогнищево, інтракраніально, внутрішньосуглобово, в передміхурову залозу, інтратрахеально, інтратекально, інтраназально, вагінально, інтраректально, застосовувати місцево, в пухлину, в черевну порожнину, підшкірно, субкон'юнктиючо, інтравезикулярно, на слизову оболонку, інтраперикардіально, в пупкову вену, в око, інтраорбітально, перорально, місцево, трансдермально, шляхом інгаляції, шляхом ін'єкції, шляхом імплантації, шляхом інфузії, шляхом безперервної інфузії, шляхом локалізованої перфузії, для безпосереднього омивання цільових клітин, за допомогою катетера, за допомогою лаважу, у вигляді кремів або ліпідних композицій. Крім того, композиції, що застосовуються в

Зо описаних в цьому документі способах, можна вводити системно або застосовувати місцево.

Спосіб введення може варіювати в залежності від різних факторів (наприклад, з'єднання або композиції для введення і ступеню тяжкості стану, захворювання або розладу, що підлягає лікуванню).

Використовуваний в цьому документі термін "вектор" призначений для позначення молекули нуклеїнової кислоти, здатної переносити іншу нуклеїнову кислоту, з якою вона пов'язана. Один тип вектора являє собою "плазміду", що відноситься до циклічної двохланцюгової петлі ДНК, в яку можуть бути ліговані додаткові сегменти ДНК. Іншим типом вектора є фаговий вектор. Іншим типом вектора є вірусний вектор, в якому додаткові сегменти ДНК можуть бути ліговані у вірусний геном. Деякі вектори здатні до автономної реплікації в клітині-хазяїні, в яку їх вводять (наприклад, бактеріальні вектори, що містять бактеріальне джерело реплікації та епісомальні вектори ссавців). Інші вектори (наприклад, неепісомальні вектори ссавців) можуть бути інтегровані в геном клітини-хазяїна при введенні в клітину-хазяїна і, таким чином, реплікуються разом з геномом хазяїна. Більш того, деякі вектори здатні спрямовувати експресію генів, з якими вони функціонально пов'язані. Такі вектори згадуються в цьому документі як "рекомбінантні вектори експресії" (або просто "рекомбінантні вектори" або "вектори експресії").

Загалом, вектори експресії, придатні для способів рекомбінантної ДНК, часто знаходяться у формі плазмід. В цьому описі "плазміда" і "вектор" можуть використовуватися взаємозамінним чином.

Використовуваний в цьому документі термін "близько" відноситься до звичайного діапазону помилок для відповідного значення, добре відомого фахівцю в цій галузі техніки. Посилання на "близько" значення або параметра в цьому документі включає (і описує) варіанти реалізації винаходу, які спрямовані на це значення або параметр як такий.

І. Типові анти-ТІСІТ антитіла

Винахід відноситься до анти-ТІСІТ антитіл, придатних для лікування або уповільнення прогресування раку або захворювання, пов'язаного з імунною системою (наприклад, дисфункціональні розлади Т-клітин) у суб'єкта (наприклад, людини).

В одному прикладі анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить один або більшу кількість амінокислотних залишків (наприклад, 1, 2 або З амінокислотних залишки), вибраних з групи, що складається із бег78, 5егв80 і І уз82 ТІСІТ людини. Наприклад, у 60 деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить амінокислотні залишки Зег80 і Її у582. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить амінокислотні залишки 5ег78 і 5ег80. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить амінокислотні залишки 5ег78 і І уз82. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить амінокислотні залишки Зег78, зег80 і І уз82.

В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить, крім Зег78, Зег80 та/або І уз82, залишок АІаб7 ТІСІТ людини. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить 5ег78 і АІаб7; 5ег80 і АІаб7;

І уз82 і АІіаб7; Зег7/8, 5егв80 і АІаб7; Зег78, І уз82 і АІаб7; Зегв0, І уз82 і АІаб7; або Зег78, бег80,

Гуз82 і АІаб7.

В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить, крім Зег78, Зег80 та/або І уз82, один або більшу кількість додаткових амінокислотних залишків (наприклад, 1, 2 або З амінокислотних залишки), вибраних з групи, що складається із

СіІшбО, їеиб5 і Пеб8 ТІСІї людини. У деяких випадках анти-ТІСІї антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить Зег/8 і СІшбО; Зег80 і СІибО; І уз82 і СіІибО; 5ег78 і

Ї еиб5; Зег80 і І еиб65; І уз82 і І еиб65; 5ег78 і Пеб8; 5ег80 і Пеб8; І уз82 і Пеб8. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить Зег78, Зег80 і СіІибО; зег78, Зег80 і Ї еиб5; 5ег7/8, Зег80 і Пеб8; Зег80, І уз82 і СІибО; 5ег80, І узв82 і І еиб5; зег80, І уз82 і Пеб8; Зег78, І уз82 і СІибО; Зег78, І уз82 і І еиб65; Зег78, І уз82 і Пеб8. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить 5ег78, Зегв80, І уз82 і СІибо;

Зег78, 5ег80, І уз82 і І еиб5; Зег7/8, Зег80, І уз82 і Пеб8. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить С1ІшибО, І еи65 і Зег78; С1Іиб0, І е!иб5 і б5ег80;

СІибО, І е!иб65 і І уз82; І еиб65, Пеб8 і бег78; І еиб5, Пебв8 і бег80; І еиб5, Пебв і І уз82; с1Іиб0О, Пеб8 і зЗег/8; СішбО, Пеб8 і Бег80; (СіІшбО, Пеб8 і їу582. У деяких випадках анти-ТІСІї антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить С1/ІшбО, І еи65, Пебв8 і Зег/8; СІшиб0О, І еиб65,

Пеб8 ї Зег80; СІШбО, І еиб65, Пеб8 і Гуз82. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить С1ІШибО, І еиб65, Зег78 і Зег80; С1ІШиб0О, І е!иб5, Зег78 і І уз82;

СІибО, І ей65, 5егво0 і І уз82; І еиб65, Пебв8, 5ег78 і бег80; І еиб5, Пеб8, Зег78 і І уз82; І еиб5, Пеб8, зег80 і І уз82; І еиб5, СІибО, бег/8 і бег80; І еиб65, СіІибО, Зег78 і І у582; І еи65, СіІнбО, Зег80 і

Гуз82. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТї людини, який містить СІшибО, І еиб5, бег/8, Зег80 і І уз82; І еиб65, Пеб8, Зег/8, бег80 і І уз82; СІШбО, І еиб5, зег/8, 5ег80 і Гуз82. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить Зег78, Зег80, С1Іиб0О, І еиб65 і Пеб8; 5ег78, І уз82, 160, І еиб65 і Пеб8; 5ег80 і Гуз82, С1ІШибО, І еиб5 і Пеб8. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на

ТІСІТ людини, який містить Зег78, Зег80, І уз82, С1ІШибО, І еиб5 і Пеб8.

В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить, крім бег/8, бБег80 і Гу582, один або більшу кількість додаткових амінокислотних залишків (наприклад, 1, 2, З або 4 амінокислотних залишки), вибраних з групи, що складається із СіІп5б, Абп70, Геи73 і Ніб111 ТІСІї людини. У деяких випадках анти-ТІС|ї антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить Зег78, Зег80, І уз82 і СіІп5б; Зег7/8, Зег80,

Гуз82 і Азп70; Зег78, Зег80, І уз82 і І е!73; 5ег78, Зегв80, І уз82 і Ніб5111. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить 5ег78, Зегв80, І уз82, СіІп5б і

А5п70; бег/8, бег80, І уз82, СіІп5б і І еи73; бег78, 5ег80, І уз82, СіІп5б і Нібз111; бег/8, 5ег80,

Гуз82, А5п70 і Ї еи73; Зег78, Зег80, І уз82, Азп70 і Ніз111; Зег78, Зег80, І уз82, І еи73 і Ніз111. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить зег/8, Зег80, І уз82, СІп5б, А5п70 і Геи73; Бег/8, Зег80, І ух82, СІп5б, Авп70 ї Ніб111; Зег78,

Бег80, І уз82, СіІп5б, І еи73 і Ніб111; бег7/8, бег80, І уз82, А5п70, І еи73 і Ніб111. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить Зег78, зег80, І уз82, сІп5б, Азп70, Геи73 і Ніз111. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з

БО епітопом на ТІСІї людини, який містить, крім Зег/8, бег80 та/або І уз82, один або більшу кількість додаткових амінокислотних залишків (наприклад, 1, 2 або З амінокислотних залишки), вибраних з групи, що складається із Тпг55, Азп58, Азрб3, СіІпб4, Нібз7б, Пе77 і Рго79 ТІСІТ людини.

У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить амінокислотні залишки Тпг55, сІп5б, А5п58, іІйбО, Азрб3, СіІпб4, І еи65, АІаб7, Пеб8, Азп70,

Г еи73, Ні 76, Пе77, зег78, Рго79, зег80, І уз82 і Ніз111 ТІСІТ людини. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який складається з амінокислотних залишків Тпг55, СіІп5б, А5п58, сІшбО, А5рб3, с1Іпб4, І еиб65, АІаб7, Пеб8, Авп70, І еи73, Нів76,

Пе77, 5ег78, Рго79, 5егв0, І уз82 і Ніб111 ТІСІТ людини.

В іншому прикладі анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить один або більшу кількість амінокислотних залишків (наприклад, 1, 2 або 3 амінокислотних залишки), вибраних з групи, що складається із Тпг55, 5ег80 і І ує82 ТІСІТ людини. Наприклад, у деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить амінокислотний залишок І у5з82. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить амінокислотні залишки 5егв80 і І уз82. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить амінокислотні залишки

Тиг55 і 5ег80. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить амінокислотні залишки Тйг55 і Гу582. У деяких випадках анти-ТІСІї антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТї людини, який містить амінокислотні залишки Трпг55, 5ег80 і

І уз82.

В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить, крім Тпг55, Зег80 та/або І уз82, залишок СіІп5б ТІСІТ людини. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить Тпг55 і СІп5б; 5ег80 і

СіІп5б; І уз82 і СІп5б; Тпг55, бег80 і СІп5б; ТАг55, І уз82 і СІп5б; 5ег80, І уз82 і СІп5б; або Тпг55, зег80, І уз82 і СІп5б.

В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить, крім Тпг55, 5ег80 та/або І уз82, один або більшу кількість додаткових амінокислотних залишків (наприклад, 1, 2 або З амінокислотних залишки), вибраних з групи, що складається із

Азп58, СіІйбО, Пе77 і Рго79 ТІСІТ людини. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить Тпг55 і Азп58; Тпг55 і СІибО; бег80 і Азп58; 5ег80 і

СІнбО; І уз82 і Азп58; І уз82 і СІб0О; Тпг55 і Пе77; бег8в0 і Пе77; І уз82 і Пе77; Тиг55 і Рго79; бег80 і

Рго79; Гуз82 і Рго79. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить Тпг55, Зег80 і А5п58; Тпг55, бБег80 і СішбО; Тиг55, 5ег80 і Пе77; Тпг55, зег80 і Рго79; 5ег80, І уз82 і Азп58; Зег80, І уз82 і сІйбО; Зег80, І уз82 і Пе77; Зег80, І уз82 і

Рго79; Тпг55, І уз82 і А5п58; ТПг55, І уз82 і СІибОо; Тпиг55, І уз82 і Пе77; Тпиг55, І уз82 і Рго79. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить

Тиг55, Зегв80, І уз82 і Азп58; ТАг55, 5етгв80, І уз82 і СІибО; Тиг55, 5егв80, І уз82 і Пе77; Тиг55, 5ег80,

Гуз82 і Рго79. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини,

Ко) який містить А5п58, Пе77 і Тпг55; СІибО, Пе77 і Тпг55; Азп58, Пе77 і Зег80; сІшбО, Пе77 і бег80;

А5п58, Пе77 і І уз82; СІибО, Пе77 і І уз82; Пе77, Рго79 і Тиг55; Пе77, Рго79 і бег80; Пе77, Рго79 і

І уз82; СИшибО, Рго79 і Тиг55; Азп58, Рго79 і Зег80; СіІШбО, Рго79 і Зег80; Азп58, Рго79 і І уз82;

СіІШбО, Рго79 і Гуз82. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить Азп58, Пе77, Рго79 і Тпг55; СІибО, Пе77, Рго79 і Тпг55; Азп58, Пе77, Рго79 і зег80; сІибО, Пе77, Рго79 і Бег80; Азп58, Пе77, Рго79 і Гуз82; б1ІибО, Пе77, Рго79 і Гуз82. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить

А5п58, Пе77, Тпг55 і Зег80; сіІибО, Пе77, Тпг55 і Зег80; А5п58, Пе77, ТАг55 і І ух82; сІиб0О, Пе77,

Тиг55 і Гуз82; Азп58, Пе77, 5егв0 і І ує82; СІибО, Пе77, Зег80 і І уз82; Пе77, Рго79, ТНг55 і Зег80;

Пе77, Рго79, ТНг55 і І уз82; Пе77, Рго79, Зегв80 і І уз82; Пе77, А5п58, ТАг55 і Зег80; Пе77, СіІибО,

Ти55 і 5ег80; Пе77, Азп58, ТАг55 і І уз82; Пе77, Азп58, ТАг55 і Гуз82; Пе77, С1ІибО, Тиг55 і І уз82;

Пе77, Азп58, Зег80 і Гуз82; Пе77, СіІибО, Зег80 і І уз82. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить Аз5п58, Пе77, Тпг55, Зег80 і Гуз82; С1ІибО,

Пе77, ТАг55, 5ег80 і І уз82; Пе77, Рго79, ТАг55, 5егв80 і І ує82; Азп58, Пе77, Тпг55, 5егво і І уз82; сСіІибО, Пе77, Тпг55, Зег80 і І уз82. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить Тпг55, бЗег80, А5п58, Пе77 і Рго79; Тпг55, Зег80, сіІиб0О, Пе77 і

Рго79; ТАг55, І уз82, Азп58, Пе77 і Рго79; ТАг55, І уз82, сІиб0О, Пе77 і Рго79; Зег80, І уз82, Азп58,

Пе77 ії Рго79; і Зег80, І уз82, СІйбО, Пе77 і Рго79. У деяких випадках анти-ТІСІї антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить Тпг55, 5ег80, І уз82, бо, Пе7 7 і Рго79. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить

ТАиг55, 5ег80, І уз82, Азп58, Пе77 і Рго79. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить ТАг55, Азп58, с1иб0О, Пе77, Рго79, зегв80 і І уз82.

У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить, крім Тйг55, Зег80 і Губз82, один або більшу кількість додаткових амінокислотних залишків (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 амінокислотних залишків), вибраних з групи, що включає

Ї еиб5, Пеб8, І еи73, Ні 76, 5ег78 і Ніб111, додатково містить амінокислотні залишки І е!и65, Пеб8,

Ї еи73, Ні 76, бег78 і Ніх111 ТІСІТ людини.

В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить амінокислотні залишки ТПг55, СіІп5б, А5п58, СіІшбО, І еиб5, Пебв8, Геи73, Ніз7б, Пе77, 5ег78,

Рго79, Зег80, І уз82 і Ні«111 ТІСІТ людини. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСЇТ людини, який складається з амінокислотних залишків Тпг55, СіІп5б, Азп58,

СІибО, І еиб65, Пеб8, І еи73, Нібз 76, Пе77, Зег78, Рго79, Зег80, І уз82 і Ніб«111 ТІСІТ людини.

В деяких випадках будь-яке з анти-ТІСІТ антитіл, описаних вище, може містити паратоп, який містить один або більшу кількість амінокислотних залишків (наприклад, 1, 2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, або 12 амінокислотних залишків), вибраних з групи, що складається із амінокислотних залишків варіабельної ділянки важкого ланцюга Азбп32, Туг52, Агуд52р, РПпе53, І уз54, Тугоб,

Азр58, Туг99, А5р100, Геи100а, Геи100Б0 і Аїаї00с та/або однієї або декількох аміногруп (наприклад, 1, 2, 3, 4 або 5 амінокислотних залишків), вибраних з групи, що складається із амінокислотних залишків варіабельної ділянки легкого ланцюга Туг 274, Туг92, б5ег93, Тпго4 і

Рпе96.

В деяких випадках анти-ТІСІї антитіла можуть містити паратоп, який складається з амінокислотних залишків варіабельної ділянки важкого ланцюга Аз5п32, Туг52, Агдб52р, РНезз,

Гуз54, Туг5б, А5зр58, Туг99, Азр100, Іеи100а, Геи100р ї АІа1700с і амінокислотних залишків варіабельної ділянки легкого ланцюга Туг27а, Туг92, Зег93, Тпг94 і Рпе9б.

В деяких варіантах реалізації винаходу анти-ТІСІТ антитіло цього винаходу забезпечує унікальні контакти з амінокислотами ТІСІТ людини на відстані 4,5 ангстрема, 3,7 ангстрема, 3,5 ангстрема, 3,25 ангстрема, 3,00 ангстрема, 2,75 ангстрема або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу пропонується антитіло, яке зв'язується з епітопом, що складається з однієї, двох, трьох, чотирьох або п'яти амінокислот ТІСІТ людини, на відстані 4,5 ангстрема, 3,7 ангстрема, 3,5 ангстрема, 3,25 ангстрема, 3,00 ангстрема, 2,75 ангстрема або менше. В одному варіанті реалізації винаходу анти-ТІСІТ антитіло за винаходом забезпечує унікальні контакти з амінокислотами ТІСІї людини на відстані 3,7 ангстрема або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу пропонується антитіло, яке зв'язується з епітопом, що складається з однієї, двох, трьох, чотирьох або п'яти амінокислот ТІСІТ людини, на відстані 3,7 ангстрема або менше.

У деяких випадках будь-яке з вищевказаних анти-ТІСІТ антитіл містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість ГВД (НУК), вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗМЗААМУМ (5ЕО ІЮ МО: 1); (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність

КТУУвВЕКУМУБОМАУЗУКа (5ЕО ІО МО: 2); (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність

Коо) ЕЗТТУРІГАСРЕОМ (5ЕБО 10 МО: 3); (40) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність

КЗБОТМІ У5ЗММККМІА (ЗЕО ІО МО: 4); (е) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність

УМА5БТКЕЗ (5ЕБО ІЮ МО: 5); та/"або (5 НМК-ІЇ3, що містить амінокислотну послідовність

ООМУБТРЕТ (5ЕО І МО: 6), або комбінацію однієї або більшої кількості вищевказаних ГВД (НМАК) і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 Фо, 95 Ус, 96 9, 97 У, 98 95 або 99 95) будь-який з ЗЕО ІЮО МО: 1-6. У деяких випадках будь-яке із вищевказаних анти-ТІСІТ антитіл містить (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗМЗААМУМ (ЗЕО

ІО МО: 1); (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність КТУУКЕКМУЗОМАМЗМКО (ЗЕО

ІО МО: 2); (с) НУВА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕТ ТУЮ ГАСРЕОМ (5ЕО ІО МО: 3); (4) НУВ-І1, що містить амінокислотну послідовність КОБОТМІ У5ЗММККУІ А (ЗЕО ІО МО: 4); (є) НУВ-І2, що містить амінокислотну послідовність УУАЗ5ТКЕ5 (ЗЕО ІО МО: 5); і (М НМА-І 3, що містить амінокислотну послідовність ООМУЗТРЕТ (5ЕО ІО МО: 6), такі як містяться в анти- ТІСІТ антитілі 4.103 і його похідних (наприклад, 4.103.01Е). У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло може містити домен МН, що містить амінокислотну послідовність, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, ідентичністю послідовності щонайменше 91 95, 92 Фо, 93 У, 94 95, 95 9, 96 У, 97 95, 98 95 або 99 95) відносно послідовності ЗЕО ІЮ МО: 34 або 35 та/або домен Мі, що містить амінокислотну послідовність, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, ідентичністю послідовності щонайменше 91 95, 92 96, 93 Ус, 94 9, 95 У, 96 Зо, 97 Уо, 98 95 або 99 95) відносно послідовності ЗЕО ІЮ МО: 36. У деяких випадках анти-ТІСІї антитіло може містити домен МН, що містить амінокислотну послідовність, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 9095 (наприклад, ідентичністю послідовності щонайменше 91 95, 92 Фо, 93 95, 94 95, 95 95, 96 У, 97 У, 98 96 або 9995) щодо послідовності ЗЕО І МО: 34 та/або домен Мі, що містить амінокислотну послідовність, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 9095 (наприклад, ідентичністю послідовності щонайменше 91 95, 92 95, 93 90 94 95, 95 95, 96 95, 97 Уо, 98 95 або 99 95) відносно послідовності зХЕО ІЮ МО: 36. У конкретному випадку анти-ТІСІТ антитіло може являти собою 4.103.01Е або його похідне або споріднений клон. У деяких випадках анти- ТІСІТ антитіло може містити домен МН, що містить амінокислотну послідовність, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 9095 (наприклад, ідентичністю послідовності 60 щонайменше 91 95, 92 Ов, 93 У, 94 9, 95 95, 96 9», 97 У, 98 9о або 99 95) відносно послідовності

ЗБО ІО МО: 35 та/або домен Мі, що містить амінокислотну послідовність, яка володіє щонайменше 9095 ідентичністю послідовності (наприклад, ідентичністю послідовності щонайменше 91 95, 92 Ов, 93 У, 94 9, 95 95, 96 9», 97 У, 98 9о або 99 95) відносно послідовності

ЗЕО ІЮ МО: 36. У конкретному випадку анти-ТІСІТ антитіло може являти собою 4.103 або його похідне або споріднений клон.

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних каркасних ділянок варіабельної ділянки легкого ланцюга (КД): ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність ОІММТОЗРОБІ АМ5І СЕКАТІМС (5ЕО ІЮО МО: 7); ЕК-12, що містить амінокислотну послідовність М/МООКРООРРМІСІМ (5БО 10 МО: 8); ЕК-ІЇ3, що містить амінокислотну послідовність ЗМРОКЕЗОЗО5СОСТОВЕТІ ТІЗБІ ОСАЕОМАМУУС (5БО ІЮО МО: 9); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕОРОТКМЕЇК (ЗЕ ІЮО МО: 10), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 9», 91 9, 92 У, 93 9Уо, 94 95, 95 Фо, 96 95, 97 90, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ФЕО ІЮ МО: 7-10. У деяких випадках, наприклад, антитіло додатково містить ЕК-11, що містить амінокислотну послідовність ОГІММТОЗРОБІ АМБІ СЕКАТІМС (5ЕО ІО МО: 7); ЕК-1 2, що містить амінокислотну послідовність УУМООКРООРРМІСІМ (ЗБО ОО МО: 8); ЕК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗМРОКЕЗОЗОЗОТОНЕТІ ТІЗ5І ОАЕОМАММУМУО (ЗЕО І МО: 9); і ЕК-1 4, що містить амінокислотну послідовність ЕЗРОТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 10), таку як анти-

ТІСІТ антитіла 4.103.О1Е і 4.103.

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕБ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність ХІ.МОЇ О0О5ОРОЇ МКРБЗОТІ І ТСАІЗОО5М5 (5ЕО ІЮ МО: 11), де Хі: являє собою о або Е; ЕК-Н2, що містить амінокислотну послідовність МЛКОБРОКОЇ ЕММС (ЗЕБЕО ІЮ МО: 12);

ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІТІМРОТЗКМОБЕБІ ОЇ МЗМТРЕОЮОТАМЕУСТК (ЗЕО ІО МО: 13); та/або ЕБК-НА4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МТМ (ЗЕО

ІО МО: 14), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 9, 91 9», 92 90, 93 Зо, 94 90, 95 о, 96 95, 97 95, 98 9о або 99 95) по

Ко) відношенню до будь-якої із БЕО ІЮО МО: 11-14. Анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити, наприклад, щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО! 0О5аРИЇ МКРБЗОТІ 5І ТСАІЗИарБМе (5ЕО ІЮ МО: 15); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМКОЗРОКОСЇ ЕМ СЯ (5ЕБО ІО МО: 12); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІТІМРОТЗКМОГББІ ОЇ МЗМТРЕЮТАМЕУСТА (ЗЕО ІЮО МО: 13); та/"або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 14), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕБЕО 10 МО: 12-15. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМО О0О5ОРОЇ МКРБЗОТІ 5І ТСАІ5ООБМ5 (5ЕО ІЮ МО: 15); ЕК-Н2, що містить амінокислотну послідовність УУЛІКОБРЗКОГ ЕУММ о (5ЕБО ІЮО МО: 12); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІТІМРОТЗКМОГББІОЇ МЗМТРЕЮТАМЕУСТАК (5ЕБО ІЮО МО: 13); і ЕК-НА, що містить амінокислотну послідовність ММООСТІ МУЗ (ЗЕО ІЮО МО: 14), таку як антитіло 4.103.С/1Е. В іншому випадку, наприклад, анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних КД варіабельної ділянки важкого ланцюга:

ЕВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ОМОЇ О0О050РОЇ МКРЗОТІ І ТСАІЗО0О5МУ5 (ЗЕО І МО: 16); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність МЛКОБРЗКОЇ ЕУМІ о (5ЕО І

МО: 12); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність

ЕІТІМРОТЗКМОББІОЇ М5МТРЕЮТАМЕМСТК (ЗЕБО ІО МО: 13); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МУЗОСТІ МТМ (5БО ІЮ МО: 14), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 Об, 92 Фо, 93 У, 94 95, 95 о, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 12-14 і 16. У деяких випадках, анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ОМОЇ ОО0О5ОРОЇІ МКРБЗОТІ ЗІ ТСАІЗОО5М5 (5БО ІЮ МО: 16); ЕК-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМІКОБРОКСГ ЕУМ СО (ЗБО 10 МО: 12); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІТІМРОТЗКМОБЗГОЇ МЗМТРЕЮТАМЕУСТК (5ЕО ІО МО: 13); і ЕК-

Н4, що містить амінокислотну послідовність ММООСТІ МТУ (ЗЕО ІО МО: 14), такі як містяться 60 в антитілі 4.103.

В іншому прикладі, у винаході пропонуються анти-ТІСІТ антитіла, що зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить один або більшу кількість амінокислотних залишків (наприклад, 1, 2 або 3 амінокислотних залишки), вибраних з групи, що складається із СіІп53, Ніз111 і Туг113

ТІСІТ людини. Наприклад, у деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на

ТІСІТ людини, який містить амінокислотні залишки Ніз111 ії Туг113. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить амінокислотні залишки

СіІп53З і Ніб111. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить амінокислотні залишки Сіп5З і Туг113.У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить амінокислотні залишки Сіп53, Ніб111 і

Тут 13.

У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить, крім сІп53, Ніб111 та/або Туг113, залишок СіІп56б ТІСІТ людини. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить СіІп5З і СІп5б; Ніб111 і

СіІп5б; Туг113 і СІп5б; СІп53, Ніб111 і сІп5б; СіІп53, Туг113 ї СіІп5б; Нібз111, Туг113 ії сІп5б; або

СіІп53, Ніб111, Туг113 і СІп56.

У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який додатково містить Сіп53, Нібє111, Туг113 та/або СіІп5б і один або більшу кількість додаткових амінокислотних залишків (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 амінокислотних залишків), вибраних з групи, що складається із С1ІибО, І еиб65, Пеб8, А5п7О, І еи73 і Нібз76 ТІСІТ людини. Наприклад, у деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить

СіІп53, Нібз111, Туг113, СІп56б і СІибО; СІп53, Ніб111, Туг113, (іІп5б і Ї ениб5; сІп53, Ніз111, Туг113,

СіІп5б і Пеб8; СіІп53, Ніб111, Туг113, сІп56б і А5п70; СіІп53, Ніб111, Туг113, СІп5б і І еи73; СіІп53,

Ніб111, Туг113, СІп5б і Нібз76. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на

ТІСІТ людини, який містить СіІп53, Ніб111, Туг113, Іп5б, С1ІибО і Геиб5; СіІп53, Ніз111, Туг113,

СіІп5б, СіІшбО і Пеб8; сіІп53, Нібз111, Туг113, сІп5б, СіІибО і А5п70; СіІп53, Ніб111, Туг113, сіІп5б,

СіІйбО ії Геи73; сіІп53, Ніб111, Туг113, сіІп5б, СішбО і Ніб7б6. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТї людини, який містить СіІп53, Нібз111, Туг113, СІп5б,

СІибО, І еиб65 і Пеб8; СіІп53, Ніб111, Туг113, СіІп5б, сІШбО, І еиб5 і А5п70; СіІп53, Ніб111, Туй13,

СіІп5б, СіІ0бО, І еиб5 і Ії еи73; СіІп53, Ніб111, Туг113, СіІп5б, СІшбО, І еиб5 і Ніб7б. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить (СіІп53,

Ніб111, Туг113, сІп5б, СіІибО, Пеб8 і А5п70; СіІп53, Нібз111, Туг113, сіІп5б, сІибО, Пеб8 і І еи73;

СіІп53, Нібз111, Туг113, сіп5б, СІшбО, Пеб8 і Ніб7б6. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить СІп53, Ніз111, Туг113, СІп56, СіІшбО, А5п70 і Геи73; сіІп53, Нібє111, Туг113, (іІп5б, сСІйбО, А5п70 і Нібє7б6. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТї людини, який містить СіІп53, Нібз111, Туг113, СІп5б,

СІШбО, І еи73 ї Ніз76.У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить СіІп53, Ніб111, Туг113, сІп5б, С1ІибО, І еиб65, Пеб8 ї А5п70; СіІп53, Нівб111,

Туг113, сіІп5б, СІибО, І еиб5, Пеб8 їі Геи73; СіІп53, Ніб111, Туг113, СіІп5б, С1ІибО, І еиб5, Пеб8 і

Ніз76. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить СіІп53, Ніб111, Туг113, СіІп5б, СіІибО, Пеб8, Абп70 і Геи73; СіІп53, Нібз111, Туг113, с1Іп5б, сСіІШбО, Пеб8, Аз5п70 і Ні576. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на

ТІСІТ людини, який містить СіІп53, Нібз111, Туг113, біІп5б, С1ІибО, І еиб65, Пеб8, Авп70 ії І еи73;

СіІп53, Ніб111, Туг113, сІп5б, СІибО, І еиб5, Пеб8, Авп70 ії Нібз76б; сіІп53, Ніб111, Туг113, сіІп5б, сСіІибО, Пеб8, А5п70, І еи73 і Ніб76.У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить СіІп53, Ніб111, Туг113, СІп5б, СІибО, І еи65, Пеб8, А5п7О, І е!и73 і

Нівз 76.

У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить

СіІп53, Ніб111, Туг113, СіІп5б, І еиб5 і Пеб8; СіІп53, Нібз111, Туг113, сіІп5б, І еиб5 і А5п70; СіІп53,

Ніб111, Туг113, СіІп5б, І еиб5 і Геи73; СіІп53, Ніб111, Туг113, СіІп5б, І еиб65 і Ніб7б6. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить (СіІп53,

Ніб111, Туг113, СіІп5б, І еиб5, Пеб8 ії А5п70; СіІп53, Нібз111, Туг113, СІп5б, І еиб5, Пеб8 і І еи73;

СіІп53, Ніб111, Туг113, СІп5б, І еиб65, Пеб8 і А5п70; СіІп53, Ніб111, Туг113, СІп5б, І еиб5, Пеб8 і

Ніз76. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить СіІп53, Нібє111, Туг113, Іп5б, І еиб5, А5п70 і Ї еи73; СІп53, Ніб111, Туг113, сІп56б, І еиб5,

Азп70 і Нібх76. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить СіІп53, Нібє111, Туг113, СіІп5б, І еиб5, І еи73 і Ніб7б6. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить СіІп53, Ніз111, Туг113, СІп5б,

Ї еиб65, Пеб8, Авп70 і І еи73; СіІп53, Ніб111, Туг113, СІп5б, І еиб5, Пеб8, Авбп70 і Нібз76. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить (СіІп53З, 60 Ніб111, Туг113, СІп56б, Геиб65, Ав5п70, Геи73 і Ніб7б6. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить Іп53, Нібз111, Туг113, Іп5б, І ейб65, Пеб8,

Аз5п7О, І еи73 і Ні 76.

В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить

СіІп53, Ніб111, Туг113, сІп5б, Пеб8 і А5п70; СіІп53, Ніб111, Туг113, СіІп5б, Пеб8 і І еи73; СіІп53,

Ніб111, Туг113, СбіІп5б, Пеб8 ії Нібз7б6. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТї людини, який містить Сіп53, Нібз111, Туг113, СІп5б, Пеб8, А5бп7О і І еи73;

СіІп53, Нібє111, Туг113, СіІп5б, Пеб8, Авп70 ї Ніб76б; сіІп53, Ніб111, Туг113, СІп5б, Пеб8, І еи73 і

Ніз76. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить СіІп53, Ніб111, Туг113, сІп5б, Пебв8, Азп70, І еи73З і Ні 76.

В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІТ людини, який містить

СіІп53, Ніб111, Туг113, сІп5б, А5п70 і Геи73; СіІп53, Ніб111, Туг113, СіІп5б, Авбп70 і Нібз76. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить

СіІп53, Ніб111, Туг113, СіІп5б, А5п70, Геи73 і Нібз7б6. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіла зв'язуються з епітопом на ТІСІї людини, який містить сіІп53, Нібз111, Туг113, СіІп5б, ГГ е!и73 і

Ні 76.

В деяких випадках будь-яке з анти-ТІСІТ антитіл із попереднього прикладу містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість ГВД (НУК), вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗУРММ (5ЕБО ІО МО: 17); (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ММ МГТОМРТУМОСЕТО (5ЕО ІЮО МО: 18); (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ТОСНТУОЗМАРОМ (5БО ІО МО: 19); (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність КАБОМІЗЗБІА (5БО І МО: 20); (ев) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність ААЗТГ ОБ (5ЕБО ІЮ МО: 21); талабо () НМК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ОНІНОМРХ:ІМ (ЗЕО ІЮО МО: 22), де Хі являє собою С або 5, або комбінацію однієї або більшої кількості вищевказаних ГВД (НМР) і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 9», 91 9, 92 У, 93 9Уо, 94 95, 95 Фо, 96 95, 97 90, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із БЕО ІЮ МО: 17-22. У деяких випадках будь-яке з вищевказаних анти-ТІСІТ антитіл із попереднього прикладу може містити, наприклад, (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗУРММ (5ЕБЕО ІО МО: 17); (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 0 УмМІМТМТамМмРТУМОСсЕТа (5ЕО ІО МО: 18); (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність тТаантТМОБМАРОМ (5ЕБО ІО МО: 19); (4) НМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність

ВАБОМІБЗЗ5ОІ А (5ЕО ІЮ МО: 20); (є) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ААЗТІ 05 (ЗЕО ІЮ МО: 21); ї () НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність ОНІ НОУРХІТМ (5ЕО ІЮ

МО: 22), такі як містяться в анти-ТІСІЇТ антитілі 7.4АЗ і його похідних (наприклад, 7.4А3.С965.01Є). У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло може містити (а) НМЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗУРММ (5ЕБЕО ІЮ МО: 17); (Б) НУМВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УММТМТОМРТУМОСЕТО (5ЕО ІЮО МО: 18); (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ТОСНТУОБМАРОМ (5БО І МО: 198); (4) НМАК-Ї1, що містить амінокислотну послідовність КАБОМІЗ55БІА (5БО ІЮ МО: 20); (е) НМУНВ-І2, що містить амінокислотну послідовність ААБТІГО5 (5ЕО ІО МО: 21); і () НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність

ОНІНОУРБМ (ЗЕО ІО МО: 23), такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі 7.АА3.С965.01Е. В інших випадках анти-ТІСІТ антитіло може містити (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЗУРММ (5ЕБО 10 МО: 17); (5) НМУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність

МІМТМТамРТУМОСеТа (ЗЕО ІО МО: 18); (с) НМВА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність тТОеантУрБМАРОМ (5ЕБО ІО МО: 19); (4) НМВ-ІТ, що містить амінокислотну послідовність

ВАБОМІБЗЗ5ОІ А (5ЕО ІЮ МО: 20); (є) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ААЗТІ 05 (ЗЕО ІЮО МО: 21); і ()ЮД. НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність ОНІНОМУРСМ (5ЕО ІЮ

МО: 28), такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі 7.4АЗ.

В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло може містити домен МН, що містить амінокислотну послідовність, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 9095 (наприклад, ідентичністю послідовності щонайменше 91 95, 92 Фо, 93 95, 94 95, 95 95, 96 У, 97 У, 98 96 або 99 95) відносно послідовності 5ЕО ІЮ МО: 37, талабо домен Мі, що містить амінокислотну послідовність, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 9095 (наприклад, ідентичністю послідовності щонайменше 91 95, 92 Фо, 93 95, 94 95, 95 95, 96 У, 97 У, 98 96 або 99 95) відносно послідовності зХЕО ІЮ МО: 38. У конкретному випадку анти-ТІСІТ антитіло може являти собою 7.4А3.С965.01Е або його похідне або споріднений клон. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіло може містити домен МН, що містить амінокислотну послідовність, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 9095 (наприклад, ідентичністю послідовності щонайменше 91 95, 92 Ов, 93 У, 94 9, 95 95, 96 9», 97 У, 98 9о або 99 95) відносно послідовності 60 ЗБО ІО МО: 39 та/або домен Мі, що містить амінокислотну послідовність, яка володіє щонайменше 9095 ідентичністю послідовності (наприклад, ідентичністю послідовності щонайменше 91 95, 92 Ов, 93 У, 94 9, 95 95, 96 9», 97 У, 98 9о або 99 95) відносно послідовності

ЗЕО ІЮ МО: 40. У конкретному випадку анти-ТІСІТ антитіло може являти собою 7.4АЗ або його похідне або споріднений клон.

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири із наступних каркасних ділянок варіабельної ділянки легкого ланцюга (КД):

РІОГТО5РТЕЇ ЗАЗМОаОВМТІТО (ЗЕО І МО: 30); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність

МУООМРОКАРКІ ІМ (5ЕО 10 МО: 31); ЕВ-І3, що містить амінокислотну послідовність

СМРОКЕ5ОЗО5СОСТЕБТІ ТІ ОРЕОЕМТУМС (5БО 10 МО: 32); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІО МО: 33), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об, 94 95, 95 У, 96 95, 97 У», 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 30-33, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі 7.4АЗ і його похідних (наприклад, 7.4А3.С965.С1Е).

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕБ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність ЕМОЇ МОЗОБОЇ ККРОАЗУАУЗСКАЗСУТЕТ (ЗЕБО ІЮО МО: 24) або амінокислотну послідовність ОМОЇ МО5БОЗОЇ ККРОАБУКУЗСКАБОМТЕТ (5ЕО ІЮО МО: 29); ЕК-Н2, що містить амінокислотну послідовність УУМКОАРСНОИГЕМУМИ (5БО 10 МО: 25); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КЕМЕБОТ5ММТАМІ ОІ55І КАЕОТАМУБСАК (5ЕБО І МО: 26); та/або ЕК-НА4, що містить амінокислотну послідовність УУЗОСТММУТМ55 (ЗЕО ІЮО МО: 27), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 9», 91 9, 92 У, 93 9Уо, 94 95, 95 Фо, 96 95, 97 90, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із БЕО ІЮ МО: 24-27 і 29. Анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити, наприклад, щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО! МОБОа5ЗОЇ ККРІАБУВУЗСКАЗИМТЕТ (ЗЕО І МО: 24); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М/МКОАРОНОЇ ЕМММО (5БО ІО МО: 25); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КЕМЕБІ ОТ5УМТАМІ ОІ55І КАЕОТАМУБСАК (5ЕБО ІЮО МО: 26); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність УУСОСТМУТУЗЗ (ЗЕО ІЮ МО: 27), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕБЕО ІЮ МО: 24-27. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМО МОБОЗОЇ ККРОАЗБУКУЗСКАБОМУТЕТ (5БО ІЮ МО: 24); ЕК-

Н2, що містить амінокислотну послідовність МЛ/ЕОАРОНОЇ ЕУУМО (ЗЕО ІО МО: 25); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КЕМЕБІ ОТ5УМТАМІ ОІ55І КАЕОТАМУЕСАК (ЗЕО ІЮ МО: 26); і ЕК-НА4, що містить амінокислотну послідовність МУСОСТМУТМЗ (ЗЕО ІЮО МО: 27), такі як містяться в антитілі 7,43А3.С965.01Е. В іншому випадку, наприклад, анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ОМОГ МОаБОЇККРИаАБУНУЗСКАЗОИМТЕТ (5ЕО І МО: 29); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М/МКОАРОНОЇ ЕМММО (5БО ІО МО: 25); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КЕМЕБІ ОТ5УМТАМІ ОІ55І КАЕОТАМУБСАК (5ЕБО ІЮО МО: 26); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність УУСОСТМУТУЗЗ (ЗЕО ІЮ МО: 27), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Фо, 94 Фо, 95 95, 96 95, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зХЕО ІЮ МО: 25-27 і 29. У деяких випадках, анти-ТІСІї антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ОМОЇ МО5БОЗОЇ ККРОАБУКУЗСКАБОМТЕТ (5ЕО ІЮО МО: 29); ЕК-Н2, що містить амінокислотну послідовність М/Л/КОАРОНОГЕМУМО (5БО ІЮ МО: 25); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КЕМЕЗГОТЗММТАМІ ОІ55І КАЕОТАМУЕСАК (5ЕО ІЮО МО: 26); і ЕК-

На4, що містить амінокислотну послідовність ММЗОСТММУТМ55 (ЗЕО ІЮО МО: 27), такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі проти 7.4АЗ.

В іншому прикладі, у винаході пропонуються анти-ТІСІТ антитіла, які містять щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість ГВД (НМ), вибраних з (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність МУРММ (ЗЕО ІЮ МО: 41); (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність УЛІМТМТОЗРАМАООЕТЕ (ЗЕО ІЮО МО: 42); (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну 60 послідовність ТАІТ5МУНЕОМ (5БО ІЮО МО: 43); (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність КАБОСІЗБМУГА (5БО ІЮ МО: 44); (є) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність ЗАТТГО5 (5ЕБО ІЮ МО: 45); та/"або () НМУВ-І3, що містить амінокислотну послідовність ОКІ МЗНРХІВ (5ЕО ІЮО МО: 46), де Хі являє собою С, 5 або МУ або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних ГВД (НМ) і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють щонайменше близько 90 95 ідентичністю послідовностей (наприклад, ідентичністю 90 9», 91 9, 92 У, 93 9Уо, 94 95, 95 Фо, 96 95, 97 90, 98 95 або 99 95) по відношенню до однієї із 5ЕО ІЮ МО: 41-46. У деяких випадках будь-яке із вищевказаних анти-ТІСІТ антитіл із попереднього прикладу може містити, наприклад, (а)» НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність МУРММ (5ЕО ІЮ МО: 41); (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність

УМІМТМТавзРАМАОЮЕТЕ (5ЕО ІО МО: 42); (с) НМУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність

ТАІЇТ5МУНЕРОМ (5ЕО І МО: 43); (4) НМВ-І71, що містить амінокислотну послідовність

ВАБОСІЗБЗМІ А (5ЕО ІО МО: 44); (є) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність САТТГ О5 (ЗЕО ІО МО: 45); і (І) НМЕ-І3, що містить амінокислотну послідовність ОКІМЗНРХ:ІБ5 (5ЕО ІЮ

МО: 46), де Хі являє собою С, 5 або У, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі 4.1А4 і його похідних (наприклад, 4.1А4.С965.201Е і 4.1А4.С96У.0О1Е). У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло може містити (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність МУРММ (5ЕО ІЮ МО: 41); (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УЛМТМТОЗРАМАООЕТЕ (ЗЕО ІЮ МО: 42); (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ТАЇТ5МУНЕЮМ (ЗЕО ІЮО МО: 43); (а)

НМВ-І111, що містить амінокислотну послідовність КАБОСІБЗМІ А (5ЕБЕО ІО МО: 44); (є) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність СОАТТГ О5 (5ЕБО ІЮО МО: 45); і (Ю НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ОКІ МЗНРОЗ (ЗЕО ІЮ МО: 47), такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі 4.1А4. В інших випадках анти-ТІСІТ антитіло може містити (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність МУРММ (ЗЕО ІЮ МО: 41); (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність УЛМТ МТ ОБРАМАООЕТЕ (5ЕО ІЮ МО: 42); (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ТАІТ5МУНЕОМ (5БО ІЮО МО: 43); (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність КАБОСІЗБМУГА (5ЕБО ІЮ МО: 44); (6) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність ЗОАТТГО5 (ЗЕО ІЮ МО: 45); і (Її НМАК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність

ОКІМЗНРБІБ (ЗЕО ІЮО МО: 48), такі, як містяться в анти-ТІСІТ антитілі 4.1А4.С965.01Е. В інших випадках анти-ТІСІТ антитіло може містити (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність

Коо) МУРММ (5ЕБО 10 МО: 41); (Б) НМУВ-НО, що містить амінокислотну послідовність

МІМТМТавзРАМАОЮЕТЕ (5ЕО ІО МО: 42); (с) НМВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність

ТАІЇТ5МУНЕРОМ (5ЕО І МО: 43); (040) НМВА-І71, що містить амінокислотну послідовність

ВАБОСІЗБЗМІ А (5ЕО ІО МО: 44); (є) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність САТТГ О5 (ЗЕО ІЮО МО: 45); і (3 НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність ОК М5НРУЗ (ЗЕО ІЮ МО: 49), такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі 4.1А4.С96У.С1Е.

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних каркасних ділянок варіабельної ділянки легкого ланцюга (КД): ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність ОПІЮСТО5РБЕЇ БАЗМООКМТІТС (5ЕО ІЮ МО: 56); ЕК-12, що містить амінокислотну послідовність УУУСООКРОКАРНКМІ ЇМ (5БО ІЮ МО: 57); ЕК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність СМРОКЕЗО5БЕВСТЕБЕТІТІЗБІ ОРЕ АТУМС (ЗЕБО ІЮО МО: 58); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕСОСТКМЕЇК (ЗЕО ІО МО: 59), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО І МО: 56-59, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі 4.1А4 і його похідних (наприклад, 1А4.С965.О1Е і 1А4.С96У.О1Е).

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХІ МОЇ МОЗОЗЕЇ ККРОАЗУКУЗСКАЗОМУТІ Т (ЗЕО ІО МО: 50), де Хі: являє собою Е

БО або С); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність МММКОАРОВОИЇ ЕМУМа (5ЕО ІО МО: 51);

ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КЕМЕБІ ОТ5МТТАМГ О1551 КАЕОТАМУУСАК (ЗЕО ІО МО: 52); та/або ЕБК-НА4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МТМ (ЗЕО

ІО МО: 53), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 9», 92 Фо, 93 90, 94 Фо, 95 Фо, 96 9», 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із 5ЕО ІЮ МО: 50-53. Анти-ТІСІї антитіло може додатково містити, наприклад, щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ОМОЇ МОЗОЗЕЇ ККРОАБУКУЗСКАБОМТІ Т (5ЕО І МО: 54); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну 60 послідовність М/МКОАРОКОСЇ ЕМММО (5БО ІО МО: 51); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КЕМЕ5І ОТ5МТТАМІ ОІ55І КАЕОТАМУУСАК (5ЕО ІЮО МО: 52); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 53), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 9, 94 Фо, 95 Фо, 96 90, 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 51-54, -

ТІСІТ антитіло 4.1А4. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМОЇ МО5ОБЕЇ ККРОАБЗУМКУЗСКАБОУТІ Т (5БО ІЮ МО: 55); ЕК-

Н2, що містить амінокислотну послідовність МУМКОАРОКОЇ ЕМУМО (5ЕО ІЮ МО: 51); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КЕМЕ5БІ ОТ5МТТАМІ ОЇ55І КАЕОТАМУУСАК (ЗЕО ІО МО: 52); та/або ЕК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МТУ (ЗЕО ІЮО МО: 53), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІО МО: 51-53 і 55, таку, як містить анти-ТІСІТ антитіло 1А4.С965.01Е або 1ТА4.С96М.О1Е.

В іншому прикладі у винаході пропонуються анти-ТІСіІТ антитіла, які містять щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість ГВД (НМ), вибраних з (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ТУОМОМ5 (5ЕО ІЮ МО: 68); (Б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність БІМУМУМОМТУУМРБІ КБ (ЗЕБО ІЮО МО: 69); (с) НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ТОСАМІТУМЕАМ (5БО І МО: 70); (4) НМК-І71, що містить амінокислотну послідовність КАБОБМОКМІА (5БО ІО МО: 71); (6) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність МАЗМАМТ (ЗЕБЕО ІЮ МО: 72); та/або () НМЕ-І3, що містить амінокислотну послідовність ОНІУМОРУР (ЗЕБО ІЮ МО: 73), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних ГВД (НУК) і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 905, 92 9, 93 9, 94 95, 9595, 96 95, 97 90, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЗЕО ІЮ МО: 68-73. У деяких випадках будь-яке із вищевказаних анти-ТІСІТ антитіл із попереднього прикладу може містити, наприклад, (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ТУОМОМУ5 (ЗЕО ІЮ

МО: 68); (5) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗІМММ/МОМГУУМРБЇІ КК (ЗЕО І

МО: 69); (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ТОСАМІТМУРАМ (ЗЕО ІЮО МО: 70);

Зо (4) НМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність КАБОБМОКМІА (5ЕО ІЮО МО: 71); (є) НМА- 2, що містить амінокислотну послідовність ХЗАЗМКУТ (5ЕО ІЮ МО: 72); і () НМК-1І3, що містить амінокислотну послідовність ОНІУММОРМУР (5ЕО ІО МО: 73), такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі га(бВ2 і його похідних (наприклад, П6В2.І1НІ, п6В2.12НІ1, п6В2.11нН2, пбвВ2.11Н3, пввВ2.І 1 На, пбВ2.1 1 Н5 і п6В2.12Н5).

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири із наступних каркасних ділянок варіабельної ділянки легкого ланцюга (КД): ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність ХІХаМТО5РХзОХ5Хх55МарАМТХ»в х 7С (5БО ІЮО МО: 88), де Хі являє собою О або М; Х2 являє собою О або У; Хз являє собою К або 5; Ха являє собою | або

М; Хо являє собою А або І; Хє являє собою І або М; і Х? являє собою М або Т; ЕК-12, що містить амінокислотну послідовність МУХООКРОХ 1 х «РКІ СІМ (ЗЕО ІО МО: 89), де Хі являє собою К або

О, а Хо» являє собою А або 5; ЕК-Ї3, що містить амінокислотну послідовність

СУРХІВЕХ»ахзавза ТОЕтТХАтІХ» х вХ7ОХвЕОХеАхХ о х 117 (БО ІЮ МО: 90), де Хі являє собою Ю або 5; Х? являє собою 5 або Т; Хз являє собою С або 5; Ха являє собою Е або І: Хо являє собою

М або 5; Хв являє собою 5 або Т; Х7 являє собою І або У; Хв являє собою А або Р; Хе являє собою А або І; Х:іо являє собою Е або Т; і Хії являє собою Е або У; та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕОХІСТКХ»ЕЇІК (ЗЕО ІО МО: 91), де Хі являє собою О або Т, і Хо являє собою І. або У, або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 9, 95 У, 96 95, 97 Фо, 98 9о

БО або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 88-91, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі га(бВ2 і його похідних (наприклад, П6В2.І1НІ, п6В2.12НІ1, п6В2.11нН2, пбвВ2.11Н3, п6вВ2. 1 НЯ, пбвВ2.11Н5 і пбВ2.12Н5).. Анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити, наприклад, щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки легкого ланцюга: ЕВК-11, що містить амінокислотну послідовність МІММТО5РКЗМ5ЗІЗБМООКМТММС (5ЕО

ІО МО: 92); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність УУМООКРООЗРКІ ІМ (ЗЕО ІЮ МО: 93); ЕВ-І З, що містить амінокислотну послідовність

СМРОКЕТОоСО5ОТОБЕТІТІМТМОАЕСААРЕМС (БО 10 МО: 94); та/"або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕСТСЄТКІ ЕІК (5ЕО ІЮ МО: 95), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють

Ге) ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 Об,

92 Фо, 93 У, 94 95, 95 о, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 92-65, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гаї(бВ2 і його похідних. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіло містить ЕВ-1, що містить амінокислотну послідовність

РПІОМТО5РБОБІБЗАБЗМООВАМТІТС (5ЕБО 10 МО: 96); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність М/УООКРОКЗРКІ ІМ (БО 10 МО: 97); ЕК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗМРОКЕЗОЗОБСТОЕТЕТІ55І ОРЕБІАТУМУС (5ЕО ІЮ МО: 99); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 100), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об, 94 Фо, 95 95, 96 95, 97 ую, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 96-97 і 99- 100, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах п6В2. 11, пбВ2. 12, пвВ2. 13, пбВ2г На і п6В2.ЇТ1Н5. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-Ї1, що містить амінокислотну послідовність РІОМТО5РЗБЗІБЗАБМООКМТІТС (БО 10 МО: 96) БЕК-І2, що містить амінокислотну послідовність УУМООКРОКАРКІ ІМ (5ЕО 10 МО: 98); ЕВ-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗУРЗЕЕЗО5ОЗОТОЕТЕТІ5БІ ОРЕБІАТУУС (5БО І МО: 99); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕЗЄОСТКМЕЇК (ЗЕО ІО МО: 100), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІЮ МО: 96 і 98-100, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах п6В2.І2НІ і пбВ2.І1 2Н5.

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХіУХ»іЇ КЕБОРХз х аХ5 х вРХл х аТІ ХеаЇ ТОХіоЕ5ОЕ5І 5 (5ЕО ІЮО МО: 74), де Х: являє собою Е або 0; Х2 являє собою 5 або Т; Хз являє собою А або б; Ха являє собою І або І: Х5 являє собою І або У; Хв являє собою К або 0; Х7 являє собою 5 або Т; Хв являє собою Н або 0);

Хо являє собою З або Т; і Хіо являє собою 5 або Т; ЕК-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМКОРХ І: х «КХзІ ЕММА (5ЕБЕО ІЮ МО: 75), де Хі: являє собою Р або 5; Хо являє собою Е або 0; і Хз являє собою А або с; ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІ-ТХ х 2КОХзОХ х 50)Хв х 7І Хв х 9 ТГХо х 110Х12 х іІіЮДТАТУМСАН (ЗЕО І МО: 76), де Хі: являє собою І або

Ко) М; Х2 являє собою 5 або Т; Хз являє собою А або Т; Ха являє собою К або М; Х5 являє собою Ю або М; Хв являє собою А або М; Х7 являє собою Е або М; Хв являє собою М або Т; Хо являє собою М або У; Х:іо являє собою М або 5; Хії являє собою М або У; Х:2 являє собою Р або Т; і

Хіз являє собою Т або М; та/або ЕМК-Н4, що містить амінокислотну послідовність

УМУСОСТІ МТМ55 (ЗЕО ІО МО: 77), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних

КД ії одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 Фо, 92 95, 93 о, 94 90, 95 90, 96 Фо, 97 Фо, 98 90 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЕС ІЮ МО: 74-77, таку як містяться в анти-ТІСІТ антитілі га(бВ2 і його похідних (наприклад, П6В2.І1НІ, п6В2.12НІ1, п6В2.11нН2, пбвВ2.11Н3, п6вВ2. 1 НЯ, пбвВ2.11Н5 і пбВ2.12Н5).. Анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити, наприклад, щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ОМ5І КЕЗОРОГОРБЗНТІ 5ІТСБЕБОБЕБ5І 5 (5ЕО ІЮО МО: 78); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність МЛКОРБЕКОСГ ЕММА (5БО ІЮО МО: 79); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІ ТУ5КОАЗМООАБІ МТ 5МОТТОТАТУМСАН (5ЕО ІЮ МО: 80); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 77), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 У, 94 9, 95 95, 96 9, 97 Фо, 98 90 або 99 95) по відношенню до будь-якої із «ЕО ІЮ МО: 77-80, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі га(бВ2. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕВ-

НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМТІ КЕ5ОРАЇ МКРТОТІ ТТОТЕЗСОЕ5І 5 (5ЕО І

МО: 81); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УЛЕОРРОКАГЕУМГ А (ЗЕО ІЮ МО: 82);

ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність К/ТУТКОАЗКМОАМІ ТМТММОРМОТАТУУСАН (ЗЕО ІО МО: 83); та/або ЕБК-НА4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МТМ (ЗЕО

ІО МО: 77), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 9», 92 Фо, 93 90, 94 Фо, 95 Фо, 96 9», 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із БЕО ІЮО МО: 77 і 81-83, анти-ТІСІТ антитіла п6В2. І1НІ ї пбВ2.12НІ1. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМ'ТКЕБОРАЇ МКРТОТІ ТІ ТСОТЕБИОЕБІ 5 (5ЕО ІЮ МО: 81); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну 60 послідовність МЛКОРРОКАГЕММА (5БО І МО: 82); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІ. ТІТКОАЗКМОАМІ ТМТЯММОРМОТАТУМСАН (5ЕО ІЮ МО: 84); та/або ЕБ-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 77), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІО МО: 77, 81-82 і 84, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі Н6В2.І1Н2. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕВ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМ'ТКЕБОРАЇ МКРТОТІ ТІ ТСОТЕБИОЕБІ 5 (5ЕО ІЮ МО: 81); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність МЛКОРРОКАГЕММА (5БО І МО: 82); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІ ТУТКОТ5КМОАМІ ТМТММОРМОТАТУМСАН (ЗЕО ІЮ МО: 85); та/або ЕК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 77), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІО МО: 77, 81-82 і 85, таку як міститься в анти-ТІСІТ антитілі п6В2.І11Н3. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕВ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМ'ТКЕБОРАЇ МКРТОТІ ТІ ТСОТЕБИОЕБІ 5 (5ЕО ІЮ МО: 81); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність МЛКОРРОКАГЕММА (5БО І МО: 82); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІ. ТУТКОАЗКМОУМ ТМ МЯІМОРМОТАТУМУСАН (5ЕО ІО МО: 86); та/або ЕВ-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 77), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІО МО: 77, 81-82 і 85, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі Н6В2.І1 На. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕВ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМ'ТКЕБОРАЇ МКРТОТІ ТІ ТСОТЕБИОЕБІ 5 (5ЕО ІЮ МО: 81); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність МЛКОРРОКАГЕММА (5БО І МО: 82); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність К.ЛІТКОТЗКМОУМІ ТМТММОРМОТАТУМСАН (5ЕО ІО МО: 87); та/або ЕБ-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 77), або комбінацію однієї

Зо або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Фо, 94 Фо, 95 95, 96 о, 97 Зо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 77, 81- 82 і 87, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах пП6В2.11 Н5 і пЄВ2.1 25.

В іншому прикладі, у винаході пропонуються анти-ТІСІТ антитіла, які містять щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість ГВД (НМ), вибраних і з (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ТУОМОМ5 (5БО ІО МО: 110); (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність БІМЛМММОМТУУМРБІКЗ (5ЕБЕО ІЮО МО: 111); (с) НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ТОСАМІТМУРАМ (БО ІЮ МО: 112); (4) НМАК-І1, що містить амінокислотну послідовність КАБОБЗМОКМІА (5ЕБО ІЮ МО: 113); (є) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність МАБМАМТ (5ЕБЕО ІЮ МО: 114); та/"або (5 НМЕ-13, що містить амінокислотну послідовність ОНІММОРУР (5ЕО ІЮО МО: 115), або комбінацію однієї або більшої кількості вищевказаних ГВД (НУК) і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 Об, 92 Фо, 93 У, 94 95, 95 о, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 110-115. У деяких випадках будь-яке із вищевказаних анти-ТІСІТ антитіл із попереднього прикладу може містити, наприклад, (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ТМамамМм5 (БО 10 МО: 110); (Б) НМУВ-Н?2, що містить амінокислотну послідовність

ЗІММ Мам УММРБІ АБЗ (ЗЕО ІО МО: 111); (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність

ТОааАМІТМУРАМ (БО 10 МО: 112); (4) НМВА-Ї1, що містить амінокислотну послідовність КАБОБМОКМІА (5ЕБО 10 МО: 113); (є) НМВ-І2, що містить амінокислотну послідовність

УАБМКУТ (5ЕО ІЮО МО: 114); ї (І) НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність ОНІУМЗРУР (ЗЕО ІО МО: 115), такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гам ОА5 ії його похідних (наприклад,

ПТОАБ.І НІ; ПТОАБ.І2НІ; МПТОА5БІЗНІ птТОА5І АНІ; ПТОАБІ1Н2; ПТОАБІ1НЗ; пТОАБНА і

НТОАБ.І АНА).

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири із наступних каркасних ділянок варіабельної ділянки легкого ланцюга (КД): ЕБ-І1, що містить амінокислотну послідовність ХІММТО5РХ» х зХаЗХ5оХваИаХ»ВХ а Хо х оС (ЗЕО ІЮ МО: 129), де Хі являє собою Е або М; Х» являє собою А або К; Хз являє собою 5 або Т; Ха являє собою І або М;

Х5 являє собою І або У; Хє являє собою І або Р; Х7 являє собою О або Е; Хв являє собою А або 60 М; Хо являє собою | або М; і Хіо являє собою М або 5; ЕБ-І2, що містить амінокислотну послідовність ММООКХСОХ»2РХзЗІ ІМ (5ЕО ІЮО МО: 130), де Х: являє собою Р або Т; Хо являє собою А або 5; і Хз являє собою СО або К; ЕК-І 3, що містить амінокислотну послідовність аХІРХ»ВЕХзахавзаХ5ЕТІ ТІХвХ?ОХвЕОХ»Ах о х 117 (ЗЕО ІЮ МО: 131), де Хі являє собою або М; Х2 являє собою А або 0; Хз являє собою 5 або Т; Х. являє собою С або 5; Х5 являє собою О або Е; Хв являє собою М або 5; Х7 являє собою І або У; Хв являє собою А або 5; Хо являє собою А або Е; Х:іо являє собою Е або У; і Хії являє собою Е або У; та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕХ ТКХ»ЕЇК (5ЕО ІЮ МО: 132), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІО МО: 129-132, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гай бА5 і його похідних (наприклад,

ПТОА5Б.Г1НІ; ПТОАБ.І2НІ; ПТОА5.ІЗНІ; пПТОА5Б.І АНІ; П1ОА5.І1Н2; пПТОА5.І1НЗ; пТОАБ НА і

ПТОАБ.І 4НА). Анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити, наприклад, щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки легкого ланцюга: ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність МІММТОЗРКЗМ5ЗІБІСОКМТММОС (5БО І МО: 133); ЕК-І2, що містить амінокислотну послідовність УУУОСОКТООБРОГСІМ (5ЕО ІЮО МО: 134); ЕВ-І 3, що містить амінокислотну послідовність СМРОКЕТОСО5ОТОЕТІ ТІМЗЕМОАЕОСААРЕМС (5БО ІЮ МО: 135); та/або ЕВ-14, що містить амінокислотну послідовність ЕСТОТКІ ЕІК (5ЕО ІО МО: 136), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІЮ МО: 133-136, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гам ОА5. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіло містить ЕВ-1, що містить амінокислотну послідовність

ЕІММТОЗРАТІЗУМО5РОЕВАТІ С (5БО 10 МО: 137); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність М/УООКРООЗРКІ ІМ (БО ІО МО: 138); ЕК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗМРАКЕЗО5ОЗОТЕНТІ ТІЗБІ О5ЕОБАМУМС (5ЕО ІЮ МО: 140); та/"або ЕБ-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 142), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об,

Зо 94 95, 95 9», 96 Фо, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЕО ІЮ МО: 137-138, 140 і 142, такі як містяться в анти-ТІСІї антитілах ПТОА5бБІ1НІ, МПТОА5.І1Н2, П10А5Б.1НЗ і

ПТОАБ.І НА. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність ЕЇММТОЗРАТІЗМЗРОЕКАТІ! С (5БО 10 МО: 137); ЕК-І2, що містить амінокислотну послідовність МУМОСОКРОСАРКІ СІМ (5БО І МО: 1398); ЕК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність СМРАКЕ5ЗО5ОЗСОСТЕНЕТІ ТІ О5ЕОБАМУМС (5БО ІЮО МО: 140); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕЗОСТКМЕЇК (ЗЕО ІО МО: 142), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІО МО: 137, 139-140 ї 142, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі НТОА5.І2НІ. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-Ї71, що містить амінокислотну послідовність

ЕІММТОЗРАТІЗУМО5РОЕВАТІ С (5БО 10 МО: 137); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність М/УООКРООЗРКІ ІМ (БО ІО МО: 138); ЕК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗІРАКЕ5О5ОЗСТЕНЕТІ ТІЗБІ ОБЕОБАМУМС (5ЕБЕО ІЮО МО: 141); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 142), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об, 94 96, 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 137-138 і 141-142, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах ПТ1ОАБ5.ІЗНІ. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність

ЕІММТОЗРАТІЗУМО5РОЕВАТІ С (5БО 10 МО: 137); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність М/УООКРОСАРКІ ІМ (БО І МО: 139); ЕК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗІРАКЕЗО5ОЗСТЕНЕТІ ТІЗБІ О5БЕОБАМУМС (5ЕБЕО ІЮО МО: 141); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 142), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об, 94 96, 95 96, 96 95, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЗЕО ІЮ МО: 137, 139 і 141-142, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах П1ОА5.І АНІ і ПТОАБІ АНА.

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири з бо наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність Х1ІУХ»ІЇ КЕБИОа РУХ х аХ5 х вРХ7 х в ТІ Хої ТОХіоЕ Завіт (ЗЕО І МО: 116), де Хі: являє собою Е або 0; Х2 являє собою 5 або Т; Хз являє собою А або б; Ха являє собою І або І: Х5 являє собою І або У; Хв являє собою К або 0; Х7 являє собою 5 або Т; Хв являє собою Н або 0);

Хо являє собою З або Т; і Хіо являє собою 5 або Т; ЕК-Н2, що містить амінокислотну послідовність МЛКОРХ 1 х «КХзі ЕММА (5ЕО ІЮ МО: 117), де Хі являє собою Р або 5; Хо являє собою Е або 0; і Хз являє собою А або с; ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІ-ТХ х 2КОТОХ» х 4О)Х5 х ві Х7 х в ТХо х 100Хч11 х 2ОТАТУУСАН (ЗЕО ІЮ МО: 118), де Х: являє собою І або

М; Х2 являє собою 5 або Т; Хз являє собою К або М; Ха являє собою О або М; Хо являє собою А або М; Хв являє собою Е або М; Х7 являє собою М або Т; Хв являє собою М або У; Хо являє собою М або 5; Хіо являє собою М або У; Хі: являє собою Р або Т; і Хі2 являє собою Т або М; та/або ЕБ-НА4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МТУ (ЗЕО ІО МО: 119), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІО МО: 116-119, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гай бА5 і його похідних (наприклад,

ПТОА5Б.Г1НІ; ПТОАБ.І2НІ; ПТОА5.ІЗНІ; пПТОА5Б.І АНІ; П1ОА5.І1Н2; пПТОА5.І1НЗ; пТОАБ НА і

ПТОАБ.І 4НА). Анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити, наприклад, щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕБК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ОМ5І КЕБОРОІГОРЗНТІ 5ІТСО5ЕБОББІТ (БО ІЮ МО: 120); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМІКОРЗЕКСОІ ЕУМГА (5ЕО ІЮ МО: 121); ЕК-

НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІ ТУЗКОТЗМООАРІ ММТЗМОТТОТАТУМСАН (5ЕО

ІО МО: 122); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МТУ (ЗЕО І

МО: 119), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 9», 92 Фо, 93 90, 94 Фо, 95 Фо, 96 9», 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ФЕО ІЮ МО: 119-122, наприклад, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гам ОА5. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМ'ТКЕБОРАЇ МКРТОТІ ТІ ТОТЕБаЕБІ ТТ (5ЕО ІО МО: 123); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМКОРРОКАГЕУМ А (5ЕБО ІО МО: 124); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КГ ТМУТКОТЗКМОАМІ ТМТММОРМОТАТУМСАН (5ЕО ІЮО МО: 125); та/або ЕК-НА, що містить амінокислотну послідовність УУЗОСТІ МУЗ (ЗЕО ІЮ МО: 119), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Фо, 94 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 119 і 123-125, такі як містяться в анти-ТІСІї антитілах П10А5.І1НІ, ПТОА5.І2НІ, ПІОА5ІЗНІ і

ПТОАБ.І АНІ. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМТІ КЕЗОРАЇ МКРТОТІ ТІ ТСТЕБОЕБІТ (5ЗЕО ІЮО МО: 123); ЕК-Н2, що містить амінокислотну послідовність МЛЕОРРОКАГЕУМА (ЗЕБО ІЮ МО: 124); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕІТІТКОТЗКМОАМІ ТМІТММОРМОТАТММСАН (5ЕО ІЮ МО: 126); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МТУ55 (ЗЕО ІЮО МО: 119), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 9», 91 9, 92 У, 93 9Уо, 94 95, 95 Фо, 96 95, 97 90, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із БЕО ІЮ МО: 119, 123-124 і 126, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі Н10А5.І1Н2. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМ'ТКЕБОРАЇ МКРТОТІ ТІ ТОТЕБаЕБІ ТТ (5ЕО ІО МО: 123); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМКОРРОКАГЕУМ А (5ЕБО ІО МО: 124); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КГ ТУТКОТЗКМОУМІ ТМТММОРМОТАТУМСАН (5ЕО ІЮО МО: 127); та/або ЕК-НА, що містить амінокислотну послідовність УУЗОСТІ МУЗ (ЗЕО ІЮ МО: 119), або комбінацію

БО однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 95, 95 95, 96 95, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із «ЕО ІЮ МО: 119, 123-124 і 127, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П10А5.І1Н3. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕВ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМ'ТКЕБОРАЇ МКРТОТІ ТІ ТОТЕБаЕБІ ТТ (5ЕО ІО МО: 123); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМКОРРОКАГЕУМ А (5ЕБО ІО МО: 124); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІ ЛІТКОТЗКМОММІ ТМТММОРМОТАТУМСАН (5ЕО ІЮ МО: 128); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 119), або комбінацію однієї або більшої кількості з вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що

Ге) володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об,

93 Ус, 94 95, 95 95, 96 95, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із «ЕО ІЮ МО: 119, 123-124 і 128, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах ПН10А5.І1НА їі ПТОАБ.І АНА.

В іншому прикладі, у винаході пропонуються анти-ТІСІТ антитіла, які містять щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість ГВД (НМ), вибраних з (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕУБІМ (ЗЕБО ІЮО МО: 153); (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність КІОРКМОАТУУМОКЕКМ (ЗЕО ІО МО: 154); (с) НМА-Н3З, що містить амінокислотну послідовність ІМОЕМЕОРЕ (5ЕО ІЮО МО: 155); (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність

КОБОММПК (МК) ММ (5ЕБЕО ІО МО: 156); (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність

МТОМСОБ (5ЕБО І МО: 157); та/або () НМК-13, що містить амінокислотну послідовність

МОУММОБТ (ЗЕО І МО: 158), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних ГВД (НМА) і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 Фо, 95 Ус, 96 9, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із «ЕО ІЮ МО: 153-158. У деяких випадках будь-яке із вищевказаних анти-ТІСІїТ антитіл із попереднього прикладу може містити, наприклад, (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМ5ІМ (ЗЕО ІЮО МО: 153); (Б)

НМУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність КІОРКМОКТУММОКЕКМ (ЗЕО ІЮО МО: 154); (с)

НМВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ІМОЕМЕОЕ (5ЕО ІЮ МО: 155); (4) НМВ-І/1, що містить амінокислотну послідовність КОБОММПК (МК) ММ (5ЕБЕО ІО МО: 156); (є) НМАК-І2, що містить амінокислотну послідовність МТОМСОВ (5БО ІЮ МО: 157); і () НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність МОУММОЕТ (ЗЕО ІЮ МО: 158), такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гаї/Е7 і його похідних (наприклад, П7Е7.Ї1НІ, п7Е7.12НІ1, п7Е7. І ЗНІ, п7Е7І АНІ,

И7Е7.І5НІ, п7Е7.ІТ1Н2, Н7Е7І11НЗ, П7Е7.1 1Н4, НП7Е7.1 1 Н5, Н7Е7.1 1Нб, п7Е7.11Н7, п7Е7.І 1 НВ,

П7Е7.ТНО, ТЕТ. 5НО і 7Е7.І 5анва).

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири із наступних каркасних ділянок варіабельної ділянки легкого ланцюга (КД): ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність ХіЇХ»ІЇ ТО5РОХзЗІ БАБМООВМТХ» х 5С (ЗЕО ІЮ МО: 180), де Хі являє собою О або М; Х2 являє собою Н або С); Хз являє собою Е або І: Ха являє собою І або |: і Х5 являє собою 5 або Т; ЕК-І2, що містить амінокислотну послідовність ММООКХахХхгАРК У (ЗЕО ІЮО МО: 181), де Хі являє собою | або Р; і Х» являє собою Е або К; ЕК-І 3, що містить

Ко) амінокислотну послідовність ХІРЗНЕБИаБИавБатхХ» х зі ТІББ ОРЕОХ»ААТУХ»С (5ЕБО ІЮ МО: 182), де Х: являє собою І або У; Х2 являє собою 0 або Е; Хз являє собою Е або У; Ха позначає А або Е; і Хо являє собою Е або У; та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕХ

СТКХ» ЕЇК (5ЕБО ІС МО: 183), де Хі являє собою О або 5; і Х» являє собою | або М або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9, 91 9», 92 90, 93 У, 94 90 95 95, 96 95, 97 У», 98 95 або 99 95 ідентичності) по відношенню до будь-якої із ФЕО ІЮ МО: 180-183, наприклад, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гаї7Е7 і його похідних (наприклад, П7Е7.Ї1Н1, пП7Е7.12НІ1, п7Е7. І ЗНІ, п7Е7.14НІ1, п7Е7І 5НІ, Н7Е7 І 1На2, п7Е7. 1 НЗ, п7Е7. 1 НЯ, п7Е?.І 1 НО, пП7Е7. І 16, П7Е7Т.1 17, П7Е7. 1НВ8, п7Е7Т.І 1 НО, ТЕТ. І 5НО, і 7ТЕ7.І5анвза). Анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити, наприклад, щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки легкого ланцюга: ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність МІНСТО5РБІ І! ЗАБМООКМТІ С (БО І МО: 184); ЕК-І2, що містить амінокислотну послідовність МУМООКІ ЗЕАРКІ ІМ (5ЕО ІО МО: 185); ЕК-І З, що містить амінокислотну послідовність СІРЗЕКЕЗОЗИаБЗИТОМТІ ТІЗ5 ОРЕВААТМЕС (5ЕБО ІО МО: 186); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕОЗСОТКІ БІК (ЗЕ ІЮ МО: 187), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІЮО МО: 184-187, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гаї7/Е7. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіло містить ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність

РІО ТО5РБЗРІ ЗАБМООВМТІТС (5ЕБО ОО МО: 188); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність М/УМООКРОКАРКІ ІМ (БО 10 МО: 189); ЕК-ІЗ3, що містить амінокислотну послідовність ОПІРЗЕКНЕЗО5ОЗСТЕМТІ ТІ ОРЕЮОБАТУРЕС (5ЕБО ІЮ МО: 190); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 196), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 Об, 92 Фо, 93 У, 94 95, 95 о, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 188-190 ії 196, такі як містяться в анти-ТІСІТї антитілах П7Е7.Ї1НІ1, пП7Е7.1Н2, НП7Е7.І1НЗ,

НИ7Е7.І 1 На, п7Е7.І 1 НО, п7Е7.І 1Нб, п7Е7. 17, п7Е7. І 1НВ8 ії П7Е7.Ї 1НО. У деяких випадках анти- 60 ТІСІТ антитіло містить ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність

РІО ТО5РБЗРІ ЗАБМООВМТІТС (5ЕБО ОО МО: 188); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність М/УМООКРОКАРКІ ІМ (БО 10 МО: 189); ЕК-ІЗ3, що містить амінокислотну послідовність ЗМРІОКЕЗО5ОЗОТЕУТІ ТІЗБІ ОРЕОБАТУРС (5ЕО ІО МО: 191); та/"або ЕБ-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 196), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 Об, 92 Фо, 93 У, 94 95, 95 о, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 188-189, 191 і 196, наприклад, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П7Е7.Г2НІ. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-Ї71, що містить амінокислотну послідовність

РІО ТО5РБЗРІ ЗАБМООВМТІТС (5ЕБО ОО МО: 188); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність М/УМООКРОКАРКІ ІМ (БО 10 МО: 189); ЕВ-ІЗ3, що містить амінокислотну послідовність ОПІРЗЕКЕЗОЗО5СОСТЕРНЕТІ ТІЗБІ. ОРЕОРБАТУРС (5ЕО ІЮО МО: 192); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 196), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об, 94 95, 95 9», 96 Фо, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зФЕО ІЮ МО: 188-189, 192 і 196, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах П7Е7.ІЗНІ1. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність ОГО ТОЗРОБІ БАЗМООКМТІТС (5ЗЕО І

МО: 188); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність УУМООКРОКАРКІ ІМ (5ЕО ІЮ МО: 189); ЕВ-І3, що містить амінокислотну послідовність

СІРБКЕЕ5О5ОЗОТЕМТІ ТІ ОРЕОБАТУУС (5БО ІО МО: 193); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІО МО: 196), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об, 94 95, 95 9», 96 Фо, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зФЕО ІЮ МО: 188-189, 193 і 196, наприклад, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П7Е7.1 4НІ. У деяких випадках анти- ТІСІТ антитіло містить ЕК-11, що містить амінокислотну послідовність ОІОЇТОЗРЗЕЇ ЗАЗМООКМТІТС (5ЕО ІО МО: 188); ЕВ-12, що містить амінокислотну послідовність ММООКРОКАРКИ М (ЗЕО 1О

МО: 189); ЕВ-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність

СМРОКЕ5ОЗО5СОСТЕБТІ ТІЗБ ОРЕОБАТУМС (5БО ІЮ МО: 194); та/"або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІО МО: 196), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об, 94 95, 95 9», 96 Фо, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЕО ІЮ МО: 188-189, 194 і 196, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах А7Е7.І 5НІ1 їі п7Е7.І 5НОУ. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіло містить ЕВ-1, що містить амінокислотну послідовність

РІО ТО5РБЗРІ ЗАБМООВМТІТС (5ЕБО ОО МО: 188); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність М/УМООКРОКАРКІ ІМ (БО 10 МО: 189); ЕК-ІЗ3, що містить амінокислотну послідовність ЗМРІОКЕЗОБОЗОТЕУТІ ТІЗБІ ОРЕОБАТУМС (5ЕО ІЮО МО: 195); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 196), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об, 94 96, 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 188-189 і 195-196, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі 7Е7.І БаНЗа.

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМОЇ Х:О5БИХ»ЕХ» х «ХхРАЗУКХЄЗСКАХ?ОУТЕТ (5ЕБЕО ІЮ МО: 159), де Хі: являє собою О або У; Х2 являє собою А або Р; Хз являє собою І або У; Х4 являє собою К або 0); Х5 являє собою К або К; Хє являє собою | або УМ; і Х7 являє собою 5 або Т; ЕБ-Н2, що містить 5О амінокислотну послідовність МУМХ:ОХ2РХзОХАї ЕХ» х ва (5ЕО ІО МО: 160), де Хі являє собою К або Е; Хо являє собою А або КЕ; Хз являє собою с або К; Ха являє собою Е або 5; Х5 являє собою І або МУ; ії Хв являє собою | або М; ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність

ВХІТХ»ТХзОТоХ» х ЗТАУМХві 551 Х75ЕОТАХвУиХоСХіоВ (ЗЕО ІО МО: 161), де Хі являє собою А або У; Хо являє собою І або І: Хз являє собою А або Е; Ха являє собою А або 5; Х5 являє собою

М або 5; Хв являє собою Е або СО); Х7 являє собою Е або Т; Хв являє собою Т або У; Хе являє собою Е або У; і Х:іо являє собою А або Т; та/або ЕБ-НА, що містить амінокислотну послідовність

МИадахХ: х2ТХз55 (ЗЕО ІЮ МО: 162), де Хі являє собою Т або У; Хо являє собою | або М; і Хз являє собою А або М або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД їі одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше 60 близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 9, 95 У, 96 95, 97 Фо, 98 9о або 99 95) по відношенню до будь-якої із 560 ІЮ МО: 159-162, наприклад, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гаг/ЕЄбд7 і його похідних (наприклад, П7Е7.Ї1Н1, п7Е7Т.І2НІ, п7Е7 І ЗНІ1,

НИ7Е7.І4НІ, п7Е7І 5НІ, П7Е7. 1 1Н2, П7Е7І 1НЗ, Н7Е7.1 1Н4, Н7Е7.1 1 Н5, П7Е7.І 1Нб, п7Е7.1 17,

А7Е7.СТ НВ, п7Е7. СТ НО, П7Е7. І 5НО ї 7Е7І 5анвоза). Анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити, наприклад, щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО! ОО5ОаРЕГОВАВРОАБЗУКІ ЗСКАТИаМТЕТ (ЗЕО І МО: 163); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М/У/КОКРКОБІ ЕПС (5ЕО 10 МО: 164); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТ ТАОТ5ЗМТАММОЇ 551 ТЗЕОТАТУЕСТЕ (5ЕО ІЮО МО: 165); та/або ЕБК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МЗОСМММУТАЗЗ (ЗЕО ІЮ МО: 166), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 95, 95 95, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЗЕО ІЮ МО: 163- 166, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гаї/ЕУ7. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕВ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 167); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М/УКОАРСОМКІ ЕП (БО ІО МО: 168); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТІ ТАОТЗАЗТАМЕЇ 551 К5ЕОТАМУЕСТА (5ЕО ІЮ МО: 172); та/або ЕК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 179), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 95, 95 95, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЗЕО ІЮ МО: 167- 138, 172 ії 179, такі як містяться в анти-ТІСІТї антитілах П7Е7.Ї1Н1, П7Е7.Г2НІ, п7Е7 І ЗНІ1,

А7Е7.І АНІ ї п7Е7.Ї5НІ1. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМО МО5БСАЕМККРОАБМКМУМЗСКАЗОУТЕТ (5ЕО ІО МО: 167); ЕК-

Н2, що містить амінокислотну послідовність М//КОАРОСОКІЕУМІС (5ЕО ІЮО МО: 169); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТІ ТАОТЗАЗТАМЕЇ 551 КЗЕОТАМУЕСТК (5ЕБЕО ІЮО МО: 172); та/або ЕК-НА, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МТУ55 (ЗЕО ІЮО МО: 179), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 9», 91 9, 92 У, 93 9Уо, 94 95, 95 Фо, 96 95, 97 90, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ФЕО ІО МО: 167, 169, 172 і 179, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П7Е7.І1Н2. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 167); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М/МКОАРСОКІГ ЕМО (5БО І МО: 170); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТІ ТАОТЗАЗТАМЕЇ 551 К5ЕОТАМУЕСТА (5ЕО ІЮ МО: 172); та/або ЕК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 179), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 90, 95 95, 96 95, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із «ЕО ІЮ МО: 167, 170, 172 і 179, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П7Е7.І1Н3. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕВ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 167); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М/УКОАРСОМКІ ЕП (БО ІО МО: 168); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕМТТАОЮОТЗАЗТАММЕЇ 551 КЗЕОТАМУЕСТЕ (5ЕО ІЮ МО: 173); та/або ЕК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 179), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО І МО: 167-168, 173 і 179, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П7Е7.І1Н4. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 167); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М/УКОАРСОМКІ ЕП (БО ІО МО: 168); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТІТАОТЗАЗТАМЕЇ 55І К5ЕОЮОТАМУЕСТК (5ЕО ІЮО МО: 174); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 179), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 95, 95 95, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЗЕО ІЮ МО: 167- 168, 174 і 179, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П7Е7.І1Н5. У деяких випадках анти-ТІСІТ 60 антитіло містить ЕВ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 167); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УУМКОАРСОВІ ЕПС (5БО 10 МО: 168); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТ ТЕОТ5ЗАЗТАУМЕЇ 551 Е5ЕОТАМУЕСТЕ (ЗЕО ІО МО: 175); та/або ЕБК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 179), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО І МО: 167-168, 175 і 179, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П7Е7.І1Нб. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО! МОБИАЕУМККРИаАБУКУЗСКАЗИмтЕТт (5ЕО ІО МО: 167); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність МУМАОСАРСОВІ ЕПС (5ЕБО 10 МО: 168); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТ ТАОТ5ЗАЗТАММЕЇ 551 К5ЕОТАМУУСТЕ (ЗЕО ІО МО: 176); та/або ЕБК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 179), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 95, 95 95, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЗЕО ІЮ МО: 167- 168, 176 і 179, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П7Е7.І 17. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕВ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 167); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УУМКОАРСОВІ ЕПС (5БЕО 10 МО: 168); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТ ТАЮОТ5ЗАЗТАМЕЇ 551 К5ЕОТАМУЕСАК (5ЕО ІЮ МО: 177); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 179), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 95, 95 95, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЗЕО ІЮ МО: 167- 168, 177 і 179, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П7Е7.І 1Н8. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕВ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 167); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УУМКОАРСОКІ ЕУММО (5ЕО ІО МО: 171); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕМТІТКОТЗАЗТАММЕЇ 551 К5ЕОТАМУМСАК (5ЕО ІЮО МО: 178); та/або ЕК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 179), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІЮ МО: 167, 171 і 178-179, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах П7Е7.11НО і П7Е7.І 5НО.

У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 167); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УУМВОАРОСОВІ ЕІМС (5ЕБО 10 МО: 170); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕМТІТКОТЗАЗТАММЕЇ 551 К5ЕОТАМУМСАК (5ЕО ІЮО МО: 178); та/або ЕК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 179), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІЮ МО: 167, 170 і 178-179, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі 7Е7.І Банва.

В іншому прикладі винахід передбачає анти-ТІСІТ антитіла, які містять щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість ГВД (НУК), вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕНБІМ (5ЕО ІО МО: 215); (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність

ВІОРКМаВТтТУєМОКкКеКМ (ЗЕО ІО МО: 216); (с) НМА-Н3З, що містить амінокислотну послідовність

ІОСЕМРЕОГ (5ЕО ОО МО: 217); (4) НМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність КОБОМУПК (МК) ММ (ЗЕО ІО МО: 218); (е) НУВ-І2, що містить амінокислотну послідовність ЗТОМГО5 (ЗЕО

ІО МО: 219); та/або (ї) НМК-1І 3, що містить амінокислотну послідовність ХОУММОЕТ (5ЕО ІЮ МО: 220), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних ГВД (НМ) і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 95, 92 95, 93 Ус, 94 о, 95 95, 96 95, 97 Ус, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ФЕО ІЮ МО: 215-220. У деяких випадках будь-яке із вищевказаних анти-ТІСІТ антитіл попереднього прикладу може містити, наприклад, (а) НМЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕНБІМ (5ЕО ІЮ МО: 215); (Б) НМЕ-Н2, що містить амінокислотну послідовність КІОРКМОКТУЕМОКЕКМ (ЗЕО ІО МО: 216); (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ІНОСЕМРЕОР (5ЕО ІО МО: 217); (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність 60 КОБОММПК (МК) ММ (5ЕБЕО ІО МО: 218); (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність

ЗТОМСОБ5 (5ЕО ІО МО: 2159); і (У НУВ-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ХОУММОЕТ (ЗЕО ІО МО: 220), такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі га!15С8 і його похідних (наприклад, п15С8.І1НІ, п15С812Н1, п15С81З3НІ1, п15С08.14Н1, п15С08.15Н1, н15С08.11Н2, Нп15С8.11Н3,

Н15С8.І1Н4, н15С08.11Н5, п15С28.11Н6, п15С8.11Н7, п15С8.11Н8, п15Сс8.11Н9, п15С8.І 5Н9О і

БС8.І БанНза).

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири із наступних каркасних ділянок варіабельної ділянки легкого ланцюга (КД): ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність ХіЇХ»ІЇ ТО5РОХзЗІ БАБМООВМТХ»Х х 5С (ЗЕО ІЮ МО: 243), де Хі являє собою О або М; Х2 являє собою Н або С); Хз являє собою Е або І: Ха являє собою І або |: і Х5 являє собою 5 або Т; ЕК-І2, що містить амінокислотну послідовність ММООКХахХхгАРК У (ЗЕО ІЮО МО: 244), де Хі являє собою І або Р і Хо» являє собою Е або К; ЕК-ІЗ3, що містить амінокислотну послідовність ХІРЗНЕБИаБИавБатхХ» х зі ТІББ ОРЕОХ»ААТУХ»С (5ЕБО ІЮ МО: 245), де Х: являє собою Іі або У; Х2 являє собою 0 або Е; Хз являє собою Е або У; Ха позначає А або Е; і Хо являє собою Е або У; та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕСХ1

СТКХ» БІК (ЗЕО І МО: 246), де Хі являє собою О або 5, і Х?» являє собою | або М, або комбінацію одного або більшої кількості з вище КД і один або більшу кількість його варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО І МО: 243-246, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі га! 5С8 і його похідних (наприклад, п15С8.І1НІ, п15С8.12НІ, п15С8.І3НІ, п15С08.14Н1, п15С8.15Н1, п15С8.11Н2, п15С08. ІТНЗ, п15С8.11Н4, п15С8.11Н5, п15С8.1Н6, п15С8.11Н7, п15С8.11Н8, п15С 8.11Н9, п15С8.І 5НО і 5С8.Ї занза). Анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити, наприклад, щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки легкого ланцюга: ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність МІНСТО5РБІ І! ЗАЗМООКМТІ С (БО І МО: 247); ЕК-І2, що містить амінокислотну послідовність ММООКІ ЗЕАРКІ СІМ (5ЕО ІЮ МО: 248); ЕК-І З, що містить амінокислотну послідовність СІРЗЕКЕЗО5О5СОСТОМУТІ ТІВ ОРЕБААТУРС (5БО ІЮ МО: 249); та/або ЕВ-14, що містить амінокислотну послідовність ЕО5СТКІ ЕІК (ЗЕО ІО МО: 250), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад,

Зо 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІЮО МО: 247-250, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гаї15С8. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіло містить ЕВ-1, що містить амінокислотну послідовність

РІО ТО5РБЗРІ ЗАБМООВМТІТС (5ЕБО ОО МО: 251); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність УУМООКРОКАРКІЇІМ (ЗЕО 10 МО: 252); ЕВ-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ОПІРЗЕКНЕЗО5ОЗСТЕМТІ ТІ ОРЕОБАТУРЕС (5ЕБО ІЮО МО: 253); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 259), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об, 94 95, 95 9», 96 Фо, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із «ЕО ІЮ МО: 251-253 і 259, такі як містяться в анти-ТІСІї антитілах п15С8.11Н1, п15С8.11Н2, п15С8.11Н3, п15С8.11Н4, п15С8.Г 1 НО, п15С8.І 16, п15С8.1 137, п15С8.11Н8 ї п15С8.І1НО. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-11, що містить амінокислотну послідовність ОІОЇТОЗРЗЕЇ ЗАЗМООКМТІТС (5ЕО ІО МО: 251); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність ММООКРОКАРКИ М (ЗЕО 1О

МО: 252); ЕВ-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність

СМРОКЕ5О5О5СОСТЕМТІ ТІЗБІ ОРЕОБАТУБС (5БО ІЮ МО: 254); та/"або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІО МО: 259), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об, 94 95, 95 9», 96 Фо, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЕО ІЮ МО: 251-252, 254 і 259, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі Н15С8.І 2НІ1. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність ОГО ТОЗРОБІ БАЗМООКМТІТС (5ЗЕО І

МО: 251); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність УУМООКРОКАРКІ ІМ (5ЕО ІЮ МО: 252); ЕВ-І3, що містить амінокислотну послідовність

СІРБКЕЕ5О5ОЗОТЕРТІТІЗБІ ОРЕОБАТУЕС (5БО ІЮ МО: 255); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІО МО: 259), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 Об, 92 Фо, 93 У, 94 95, 95 о, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 251-252, 255 і 259, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі п15С8.ІЇ ЗНІ1. У деяких випадках анти- 60 ТІСІТ антитіло містить ЕК-І1, що містить амінокислотну послідовність

РІО ТО5РБЗРІ ЗАБМООВМТІТС (5ЕБО ОО МО: 251); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність МУМООКРОКАРКІ ІМ (5ЕБО 10 МО: 252); ЕК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗІРОЕКЕ5О5ОЗСТЕМТІ ТІЗБІ ОРЕЮОБАТУМУС (5ЕО ІЮО МО: 256); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 259), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 Об, 92 Фо, 93 У, 94 95, 95 о, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 251-252, 256 і 259, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах п15С8.І 4НІ1. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіло містить ЕВ-1, що містить амінокислотну послідовність

РІО ТО5РБЗРІ ЗАБМООВМТІТС (5ЕБО ОО МО: 251); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність МУМООКРОКАРКІ ІМ (5ЕБО 10 МО: 252); ЕК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗМРІОКЕЗО5ОЗОТЕНЕТІ ТІЗБІ ОРЕОБАТУМУС (5ЕО ІО МО: 257); та/або ЕБ-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 259), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 95, 91 90, 92 9, 93 Об, 94 95, 95 9», 96 Фо, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЕО ІЮ МО: 251-252, 257 і 259, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах п15С8.І 5НІ їі п15С8.І 5НО. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіло містить ЕВ-1, що містить амінокислотну послідовність

РІО ТО5РБЗРІ ЗАБМООВМТІТС (5ЕБО ОО МО: 251); ЕВ-І2, що містить амінокислотну послідовність МУМООКРОКАРКІ ІМ (5ЕБО 10 МО: 252); ЕК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗМРІОКЕЗОБОЗОТЕУТІ ТІЗБІ ОРЕОБАТУМС (5ЕО ІЮО МО: 258); та/або ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕБОСТКМЕЇК (ЗЕО ІЮО МО: 259), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 Об, 92 Фо, 93 У, 94 95, 95 о, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 251-252 і 258-259, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах 5С8.І Банвза.

В деяких випадках антитіло додатково містить щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМОЇ Х:О5ИаХ»2ЕХ»з х «Хх;РИАЗУМКХЄЗСКАБСУТЕТ (5ЕО ІЮО МО: 221), де Хі являє

Ко) собою О або У; Х2 являє собою А або Р; Хз являє собою І або У; Х4 являє собою К або 0); Х5 являє собою К або К; і Хє являє собою І. або М; ЕК-Н2, що містить амінокислотну послідовність

МУХі1 х2ОХзРХОХ5іІ ЕхХв х 70 (5ЕО ІЮ МО: 222), де Хі: являє собою І або У; Х2 являє собою К або

А; Хз являє собою А або Е; Ха; являє собою о або К; Хо являє собою Е або 5; Хє являє собою або МУ; і Х? являє собою І або М; ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕХ:ТХ2ТХз х 4Т5Х5 х вТАУМХ?І 55І Ха5ЕОТАХоУХіоСАК (5БО ІЮО МО: 223), де Хі являє собою А або М; Хо являє собою І або І; Хз являє собою РЕ або Т; Х4 являє собою О або М; Хо являє собою А або 5;

Хе являє собою М або 5; Х7 являє собою Е або 0); Хв являє собою Е або Т; Хе являє собою І або

М; і Хіо являє собою Е або У; та/або ЕК-НА4, що містить амінокислотну послідовність М/ООСХ 1 х 2МТХзЗ5 (ЗЕО ІЮ МО: 224), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 9, 95 У, 96 95, 97 Фо, 98 9о або 99 95) по відношенню до будь-якої із БЗЕО ІЮ МО: 221-224, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гай 5С8 і його похідних (наприклад, п15С8. 1 НІ, п15С8.12НІ1, п15С8.І ЗНІ, пП15С8.І1 АНІ, п15С8.І5НІ, п15С8.11Н2, п15С8.11Н3, п1508.11Н4, п15С8. І11Н5, н15С8.11Н6, п15С8.11Н7, п15С8.І1Н8, п15С8.11Н9, п15С8.15Н9 і 5С8.І5аноа). Анти-ТІСІТ антитіло може додатково містити, наприклад, щонайменше одну, дві, три або чотири з наступних ділянок КД варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО ОО5ОаРЕГОВАВРОАБУКІ ЗСКАБОМТЕТ (5ЕО ІЮО МО: 225); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ММ КОКРКОБІЕНПО (5БО 10 МО: 226), ЕК-НЗ, що містить амінокислотну

БО послідовність КАТІ ТМ 5ЗМТАММОЇ 551 Т5ЕОТАЇМЕСАК (5ЕБЕО ІЮО МО: 227); та/або ЕК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МЗОСМММУТАЗЗ (ЗЕО ІЮ МО: 228), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із 55 ЗЕО ІЮО МО: 225-228, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі гаї15С8. У деяких випадках анти-

ТІСІТ антитіло містить ЕВЕ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО ІЮ МО: 229); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМ КОАРОСОКІЕНПО (5ЕБО ІО МО: 230); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТ ТТОТЗАЗТАМУМЕЇ 551 КЗЕОТАМУЕСАК (5ЕО ІЮО МО: 235); та/або ЕБК-Н4А, що 60 містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 242), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 95, 95 95, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЗЕО ІЮО МО: 229- 230, 235 і 242, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах п15С8.1Н1, п15С8.1 2НІ1, п15С8. І ЗНІ1, пП15С8.Г АНІ ї п15С8.І| 5НІ. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМОЇ МОЗСАЕМККРОАБУКУЗСКАБОМУТЕТ (ЗЕО ІЮ МО: 229); ЕВ-

Н2, що містить амінокислотну послідовність М/МКОАРСОМКІЕПО (5ЕО ІО МО: 231); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТ ТТОТЗАЗТАУМЕЇ 551 К5ЕОТАМУЕСАК (5ЕО ІЮ МО: 235); та/або ЕБК-НА, що містить амінокислотну послідовність УУЗОСТІ МУЗ (ЗЕО І МО: 242), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 9, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІЮ МО: 229, 231, 235 і 242, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі пН15С8.11Н2. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО! МОБАЕУККРИаАБУКУЗСКАЗИмтЕТт (5ЕО ІО МО: 229); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМ КОАРОСОКІ ЕММО (5БО ІЮ МО: 232); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТ ТТОТЗАЗТАМУМЕЇ 551 КЗЕОТАМУЕСАК (5ЕО ІЮО МО: 235); та/або ЕБК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 242), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІЮ МО: 229, 232, 235 і 242, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі пН15С8.11Н3. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 229); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М КОАРСОКІ БІМО (5БО І МО: 233) ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТ ТТОТЗАЗТАМУМЕЇ 551 КЗЕОТАМУЕСАК (5ЕО ІЮО МО: 235); та/або ЕБК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮО МО: 242), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю

Зо 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІЮ МО: 229, 233, 235 і 242, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі пН15С8.11Н4. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 229); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМ КОАРОСОКІЕНПО (5ЕБО ІО МО: 230); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕМ. ТТОТЗАЗТАМУМЕЇГЇ 551 КЗЕОТАМУЕСАК (5ЕО ІЮО МО: 236); та/або ЕБК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (ЗЕО ІЮО МО: 242), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 95, 95 95, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЗЕО ІЮ МО: 229- 230, 236 і 242, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П15С8.Ї1Н5. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕВ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО ІЮ МО: 229); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМ КОАРОСОКІЕНПО (5ЕБО ІО МО: 230); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТІТТОТЗАЗТАММЕЇ 551 Е5ЕОТАМУЕСАК (5ЕО ІО МО: 237); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮО МО: 242), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 95, 95 95, 96 У, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із зЗЕО ІЮ МО: 229- 230, 237 і 242, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі П15С8.Ї1Нб. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕВ-НІ1, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО ІЮ МО: 229); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМ КОАРОСОКІЕНПО (5ЕБО ІО МО: 230); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТ ТЕОТ5ЗАЗТАУМЕЇ 551 К5ЕОТАМУРЕСАК (5ЕО ІЮ МО: 238); та/"або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 242), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІО МО: 229-230, 238 і 242, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі пП15С8.І1Н7. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність 60 ЕМО МОБОАЕУМККРОАБУКУЗСКАБОМТЕТ (5ЕО ОО МО: 229); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМ КОАРОСОКІЕНПО (5ЕБО ІО МО: 230); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТ ТТОТЗАЗТАУМЕЇ 551 КЗЕОТАМУМСАК (ЗЕО ІО МО: 239); та/або ЕК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮ МО: 242), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, ідентичністю 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 Зо, 94 95, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із

ЗЕО ІО МО: 229-230, 239 і 242, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі пП15С8.І1 НВ. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 229); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М/МКОАРОСОКГЕМУМО (5БО ІЮО МО: 234); ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕМТІТКОТЗАЗТАММЕЇ 551 К5ЕОТАМУМСАК (5ЕО ІЮ МО: 240); та/або ЕБК-Н4А, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (5ЕО ІЮО МО: 242), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 95, 95 95, 96 95, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із «ЕО ІЮ МО: 229, 234, 240 і 242, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілах п15С8.11Н9 ії п15С8.15Н9. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить ЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність

ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАБИМТЕТ (ЗЕО І МО: 229); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність М КОАРСОКІ БІМО (5БО І МО: 233) ЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КАТІТТОТЗАЗТАУМЕЇ 551 КЕ5ЕОТАМУУСАК (5ЗЕО ІЮО МО: 241); та/або ЕК-Н4, що містить амінокислотну послідовність МОСТІ МУЗ (ЗЕО ІЮО МО: 242), або комбінацію однієї або більшої кількості із вищевказаних КД і одного або більшої кількості їх варіантів, що володіють ідентичністю послідовності щонайменше близько 90 95 (наприклад, 90 9», 91 95, 92 Об, 93 Ус, 94 95, 95 95, 96 95, 97 Уо, 98 95 або 99 95) по відношенню до будь-якої із «ЕО ІЮ МО: 229, 233 і 241-242, такі як містяться в анти-ТІСІТ антитілі 5С8.ІЇ Банвза.

Крім того, пропонуються анти-ТІСІТ антитіла, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 9о, 97 95 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність будь-якої із ЗЕО ІЮ МО: 60, 62, 66, 101, 103, 104, 105, 106, 107, 145, 146, 147, 148, 197, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 213, 260, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270 або 276. Крім того, представлені анти-ТІСІТ антитіла, що містять варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність будь-якої із «ФЕО ІЮ МО: 61, 63, 64, 67, 102, 108, 109, 144, 149, 150, 151, 152, 198, 208, 209, 210, 211, 212, 214, 261, 271, 272, 273, 274, 275 або 277.

В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 Фо, 92 95, 93 95 або 94 9) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 965) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮО МО: 60, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95), або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 9о або 99 95) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮ

МО: 61. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮ МО: 62, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 9595 (наприклад, 96 95, 97 95, 9895 або 9995) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 63. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 Фо, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 62, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮО МО: 64. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 66, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 У», 98 95, або 99 95) по відношенню до або 60 має послідовність 5ЕО ІЮО МО: 67. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 101, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 102. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 103, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 108. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 104, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 108. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 105, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮ МО: 108. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 106, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 90 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо, 94 Фо) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 965) по відношенню до або має

Ко) послідовність 5ЕО ІЮ МО: 108. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 107, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 109. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 Фо, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 143, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 144. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 9, 92 9, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 Фо, 98 90 або 99 95) або послідовності ЗЕО ІО МО: 145, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 9595 (наприклад, 96 95, 97 95, 9895 або 9995) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮ МО: 149. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 Фо, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 145, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 150. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 Фо, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 145, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або 60 має послідовність ФЕО ІЮ МО: 151. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 145, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 152. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 147, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 149. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 148, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 149. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 148, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності по щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 9», 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮ МО: 152. В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 197, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 198. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮ МО: 199, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮО МО: 208. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 200, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95), або має послідовність

ЗЕО ІЮО МО: 208. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 965, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЖЕО ІЮ МО: 201, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 9595 (наприклад, 9695, 97 95, 9895 або 9995) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮ МО: 208. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 Фо, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 202, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 208. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 203, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або 60 має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 208. В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад,

91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 204, та варіабельну ділянку легкого ланцюга,

яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або

94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 208. У деяких випадках, анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад,

91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 205, та варіабельну ділянку легкого ланцюга,

яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 208. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад,

91 9, 92 9, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 Фо, 98 90 або 99 95) або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 206, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 9595 (наприклад, 96 95, 97 95, 9895 або 9995) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮ МО: 208. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад,

91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 207, та варіабельну ділянку легкого ланцюга,

яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або

94 95), або щонайменше, 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 208. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 207, та варіабельну ділянку легкого ланцюга,

яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або

94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 212. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад,

91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 199, та варіабельну ділянку легкого ланцюга,

яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або

94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 209. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад,

91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮ МО: 199, і варіабельну ділянку легкого ланцюга,

що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 210. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад,

91 Фо, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 199, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або

94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 211. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад,

91 Фо, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 199, та варіабельну ділянку легкого ланцюга,

яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або

94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 212. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 Фо, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 213, та варіабельну ділянку легкого ланцюга,

яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або

94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95 98 95 або 99 95) по відношенню до або має

60 послідовність 5ЕО ІЮ МО: 214. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 260, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 261. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 262, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 271. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 263, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 271. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 264, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95), або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 271. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 265, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 271. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮО МО: 266, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 271. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 267, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 271. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95 97 9», 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 268, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 96 або 99 95) або має послідовність

ЗЕО ІЮО МО: 271. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 965,

БО 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЖЕО ІЮ МО: 269, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 95 або 94 95) або щонайменше 9595 (наприклад, 96 95, 97 95, 9895 або 9995) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮ МО: 271. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 270, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або 60 має послідовність ФЕО ІЮ МО: 271. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 270, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 275. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 262, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 925 97 Фо, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність 5ЕО ІЮ МО: 272. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 262, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 273. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 262, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 274. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 262, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ФЕО ІЮ МО: 275. У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 У, 93 95 або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮО МО: 276, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 (наприклад, 91 95, 92 95, 93 Уо або 94 95) або щонайменше 95 95 (наприклад, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95) по відношенню до або має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 277.

В іншому аспекті пропонується анти-ТІСІТ антитіло, в якому антитіло містить УН, як в будь- якому з вищеописаних варіантів реалізації винаходу, і Мі, як в будь-якому з вищеописаних варіантів реалізації винаходу, причому одна або обидві послідовності варіабельного домену містять посттрансляційні модифікації.

В деяких випадках будь-яке з анти-ТІСІТ антитіл, описаних вище, може бути здатним зв'язуватися із ТІСІТ кролика, на додаток до ТІСІТ людини. У деяких випадках будь-яке з анти-

ТІСІТ антитіл, описаних вище, може бути здатним зв'язуватися як з ТІСІТ людини, так і з ТІСІТ яванського макака (яванця). У деяких випадках будь-яке з анти-ТІСІТ антитіл, описаних вище, може бути здатним зв'язуватися з ТІСІї людини, ТІСІТ яванця і ТІСІТ кролика. У деяких випадках будь-яке з анти-ТІСІТ антитіл, описаних вище (наприклад, 4.103 або його похідне), може бути здатним зв'язуватися з ТІСІТ людини, ТІСІТ яванця і ТІСІТ кролика, але не з ТІСІТ миші.

В деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло зв'язується з ТІСІТ людини із Ка близько 10 нМ або менше і з ТІСІТ яванця з Ка близько 10 нМ або менше (наприклад, зв'язується з ТІСІТ людини із

Ка від близько 0,1 нМ до близько 1 нМ і з ТІСІТ яванця з Ка від близько 0,5 нМ до близько 1 нМ, наприклад, зв'язується з ТІСІТ людини із Ка близько 0,1 нМ або менше і з ТІСІТ яванця з Ка близько 0,5 нМ або менше).

У деяких варіантах реалізації винаходу анти-ТІСІТ антитіло є антагоністичним антитілом.

Антагоністичне антитіло може специфічно зв'язуватися з ТІСІТ і інгібувати або блокувати взаємодію ТІСІТ з рецептором поліовірусу (ПВР (РУК)) (наприклад, антагоністичне антитіло інгібує внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням ТІСІТ з ПВР (РУК)). У деяких випадках антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ людини з ПВР (РУК) людини зі значенням ІС5О 10 нМ або менше (наприклад, від 1 нМ до 10 нМ). У бо деяких випадках антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ яванця з ПВР

(РУК) яванця зі значенням ІС50О 50 нМ або менше (наприклад, від 1 НМ до близько 50 нМ, наприклад від 1 нМ до близько 5 НМ).

В інших варіантах реалізації винаходу анти-ТІСІТ антитіло може бути агоністичним антитілом. Агоністичне антитіло може специфічно зв'язуватися з ТІСІТ і стимулювати взаємодію

ПВР (РУК) з СО226 або СО096. Наприклад, агоністичне антитіло може специфічно зв'язуватися з

ТІСІТ і стимулювати взаємодію ПВР (РУК) з СО226 і С0Об (наприклад, зв'язується з ТІСІТ людини і стимулює взаємодію ПВР (РУК) людини з людським СО226 і людським СО9Уб та/або зв'язується з ТІСІТ яванця і стимулює взаємодія ПВР (РУК) яванця з СО226 яванця і С0Об яванця).

В наступному аспекті винахід відноситься до виділеного антитіла, яке конкурує за зв'язування з ТІСІТ із будь-яким з анти-ТІСІТ антитіл, описаних вище. Ще в одному аспекті винахід відноситься до виділеного антитіла, яке зв'язується з тим же епітопом, що і анти- ТІСІТ антитіло, описане вище.

Анти-ТІСІТ антитіло за будь-яким із вищевказаних варіантів реалізації винаходу являє собою моноклональне антитіло, в тому числі гібридне, гуманізоване або людське антитіло. В одному варіанті реалізації винаходу анти-ТІСІТ антитіло являє собою фрагмент антитіла, наприклад, фрагмент Ем, Раб, Рар', 5сЕм, диатіло або Е(аб)». В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло являє собою повнорозмірне антитіло, наприклад, інтактне дО антитіло (наприклад, інтактне Ідс1 антитіло) або інший клас або ізотип антитіла, як визначено в цьому документі.

У ще одному аспекті анти-ТІСІТ антитіло відповідно до будь-якого з вищенаведених варіантів реалізації винаходу може володіти будь-якою з ознак, окремо або в комбінації, як описано в розділах 1-7 нижче. 1. Афінність антитіл

У деяких варіантах реалізації винаходу константа дисоціації антитіла (наприклад, анти-ТІСІТ антитіло), представленого в цьому документі, становить (Ка) х 1 мкМ, х 100 нМ, х 10 нМ, х 1 НМ, 0,1 НМ, х 0,01 нМ або «х 0,001 нМ (наприклад, 109 М або менше, наприклад, від 1029 М до 1073

М, наприклад, від 1079 М до 1073 М).

В одному варіанті реалізації винаходу Ка вимірюють за допомогою аналізу зв'язування

Зо радіоактивно міченого антигену (РІА (КІА)). В одному варіанті реалізації винаходу РІА (АКІА) виконують з ЕРар-версією антитіла, що представляє інтерес, та його антигену. Наприклад, афінність, зв'язування в розчині для Гар по відношенню до вимірюють шляхом врівноваження

Бар з мінімальною концентрацією (7125І)-міченого антигену в присутності титраційної серії неміченого антигену, з подальшим захопленням зв'язаного на планшеті, вкритим антитілом проти Раб (див., наприклад, Спеп еї аї., У. Мої. Віої. 293: 865-881 (1999)). Для проведення аналізу багатошарові планшети МІСКОТІТЕК? (Тпегто Зсіепійіс) вкривають протягом ночі 5 мкг/мл вловлюючого антитіла проти Рар (Сарреї І абз) в 50 мМ розчині натрій карбонату (рн 9,6), і потім блокують 2 95 (мас./06.) бичачого сироваткового альбуміну у фосфатно-сольовому буфері, ФСБ (РВ5) протягом двох-п'яти годин при кімнатній температурі (близько 23 С). На неадсорбуючому планшеті (Мипс Ме 269620) 100 пМ або 26 пм Г25ІЦ-антигену змішують із серійними розведеннями Еар, що представляє інтерес (наприклад, при оцінці антитіла проти

ФРЕС (МЕСБЕ), Рар-12, у Ргевіа еї аїЇ.,, Сапсег Ке5., 57: 4593-4599 (1997)). Далі ЕРар, що представляє інтерес, інкубують протягом ночі; однак інкубація може тривати протягом довшого періоду (наприклад, близько 65 годин), щоб забезпечити досягнення рівноваги. Після цього суміші переносять неадсорбуючий планшет для інкубації при кімнатній температурі (наприклад, протягом однієї години). Потім розчин видаляють, і планшет промивають вісім разів 0,1 95 полісорбатом 20 (ТМУЕЕМ-20У)У у ФСБ (РВ5). Після висушування планшетів додають 150 мкл/лунку сцинтиляційної рідини (Місгозсіпі-2г0г; РасКага), і планшети зчитують на гамма- лічильнику ТорСошипі! (РасКага) протягом десяти хвилин. Концентрації кожного Раб, які дають значення менш ніж або дорівнюючі 2095 максимального зв'язування, вибирають для застосування в аналізах конкурентного зв'язування.

Згідно з іншим варіантом реалізації Ка вимірюють із застосуванням аналізу методом поверхневого плазмонного резонансу ВІАСОРЕЄ. Наприклад, аналіз із застосуванням

ВІАСОВЕЄ-2000 або ВІАСОРЕЗ-3000 (ВІАсоге, Іпс., Піскатауей, штат Нью-Джерсі) проводять при 25 "С за допомогою іммобілізованих антигенів СМ5 в «- 10 одиниць відповіді (ОВ (КО). В одному варіанті реалізації винаходу карбоксиметильовані біосенсорні декстранові чіпи (СМ5,

ВІАСОКЕ, пс.) активують за допомогою М-метил-М'-(З-диметиламінопропіл)карбодіїмід гідрохлориду (ЕДК (ЕЮБС)) і М- гідроксисукциніміду (МН) відповідно до інструкцій постачальника. Антиген розбавляють 10 мм розчином натрій ацетату, рН 4,8, до 5 мкг/мл (- 0,2 бо мкм) перед інжекцією при швидкості потоку 5 мкл/хв до досягнення близько 10 одиниць відгуку

(КУ) зв'язаного білка. Після інжекції антигену вводять 1 М етаноламіну для блокування груп, що не прореагували. Для вимірювання кінетики здійснюють інжекції дворазових серійних розведень

Еаь (від 0,78 нМ до 500 нМ) в ФОБ (РВ5) з 0,05 95 поверхнево-активної речовини полісорбату 20 (Тжееп-201ї) (ПБПА (РВ5Т)) при 25"С із швидкістю потоку близько 25 мкл/хв. Швидкість асоціації (Кол) і швидкість дисоціації (Кої» обчислюють із застосуванням простої моделі зв'язування Ленгмюра один до одного (програмне забезпечення ВІАСОРЕ? ЕмаїІмайоп, версія 3.2) шляхом одночасної апроксимації сенсорних діаграм асоціації і дисоціації. Константу рівноважної дисоціації (Ка) обчислюють як співвідношення Копй/Коп. Див., наприклад, Спеп еї аї.,

У. Мої. Віої. 293:865-881 (1999). Якщо швидкість асоціації перевищує 105 М" с" за даними методу поверхневого плазмонного резонансу, описаного вище, то швидкість асоціації може бути визначена із застосуванням методики гасіння флуоресценції, в якій вимірюють збільшення або зменшення інтенсивності флуоресцентного випромінювання (збудження - 295 нм, випромінювання - 340 нм, смуга пропускання 16 нм) при 25 "С для 20 нМ антитіла проти антигену (форма Раб) у ФСБ (РВ5), рН 7,2, в присутності зростаючих концентрацій антигену, з вимірюванням на спектрометрі, такому як спектрофотометр із стоп-потоком (Амім Іпзігитепів) або спектрофотометр ЗІ М-АМІМСО)! серії 8000 (Тпегтозресігопіс) з перемішуваною кюветою. 2. Фрагменти антитіл

У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, представлене в цьому документі, є фрагментом антитіла. Фрагменти антитіла включають, але не обмежуючись цим, фрагменти

Еаб, Раб", РарД5Н, К(абр')», Ем і зсЕм та інші фрагменти, описані нижче. Огляд деяких фрагментів антитіл див. у Ниазоп еї аїІ. Маї. Меа. 9:129-134 (2003). Для огляду фрагментів 5сЕм див., наприклад, Рійскіййп, у Те РІПагтасоїоду ої Мопосіопа! Апііродіе5, мої. 113, Козепригд апа

Мооге еав., (Зргіпдег-Мепад, Мем Мої), рр. 269-315 (1994); див. також УМО 93/16185; і патенти

США Мо 5571894 та 5587458. Обговорення фрагментів Бар ії Е(аб)2, що містять залишки епітопів, які зв'язуються з рецептором реутилізації і володіють збільшеним періодом напіввиведення іп мімо, див. у патенті США Мо 5869046.

Диатіла являють собою фрагменти антитіл із двома антигензв'язуючими сайтами, що можуть бути двохвалентними або біспецифічними. Див., наприклад, ЕР 404097; МО 1993/01161;

Нидзоп еї аї. Маї. Мед. 9:129-134 (2003); і Ноїподег еї аї. Ргос. Маїй!. Асад. сі. ОБА 90: 6444-6448

Зо (1993). Крім того, триатіла і тетратіла описані у Ниазоп еї аї. Маї. Мед. 9:129-134 (2003).

Однодоменні антитіла являють собою фрагменти антитіл, що містять весь або частину варіабельного домену важкого ланцюга або весь або частину варіабельного домену легкого ланцюга антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу однодоменне антитіло являє собою однодоменне антитіло людини (Юотапії5, Іпс., Уолтхем, штат Массачусетс, див., наприклад, патент США Мо 6248516 В1).

Фрагменти антитіл можуть бути одержані різними способами, включаючи, але не обмежуючись цим, протеолітичне розщеплення інтактного антитіла, а також продукування рекомбінантними клітинами-хазяями (наприклад, Е. соїї або фаг), як описано в цьому документі. 3. Гібридні і гуманізовані антитіла

В деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, представлене в цьому документі, являє собою гібридне антитіло. Деякі гібридні антитіла описані, наприклад, у патенті США Мо 4816567; і Моїгтізоп єї аі. Ргос. Май). Асад. сі. ОБА, 81:6851-6855 (1984)). В одному прикладі гібридне антитіло містить варіабельну ділянку, що не відноситься до людини (наприклад, варіабельна ділянка, одержана від миші, щури, хом'яка, кролика або приматів, що не відносяться до людини, таких як мавпа) і константну ділянку людини. В іншому прикладі гібридне антитіло являє собою "клас-свіч" антитіло, в якому клас або підклас був модифікований в порівнянні з класом вихідного антитіла. Гібридні антитіла включають антигензв'язуючі фрагменти.

В деяких варіантах реалізації винаходу гібридне антитіло являє собою гуманізоване антитіло. Як правило, антитіло, що не відноситься до людини, гуманізують для зниження імуногенності у людини, зберігаючи при цьому специфічність і афінність вихідного антитіла, що не відноситься до людини. Як правило, гуманізоване антитіло містить один або більшу кількість варіабельних доменів, у яких ГВД (НМК), наприклад ДВК (СОБК) (або їх частини), одержують з антитіла, яке не відноситься до людини, а КД (або їх частини) одержують з послідовностей антитіл людини. Гуманізоване антитіло необов'язково буде додатково містити щонайменше частину константної ділянки людини. У деяких варіантах реалізації винаходу деякі залишки КД в гуманізованому антитілі заміщені відповідними залишками антитіла, що не відноситься до людини (наприклад, антитіло, з якого одержані залишки ГВД (НМЕК)), наприклад, для відновлення або покращення специфічності або афінності антитіла.

Гуманізовані антитіла і способи їх одержання розглядаються, наприклад, в АЇтадго апа 60 Екгапвзоп, Егопі. Віовсі. 13:1619-1633 (2008), і далі описані, наприклад, у Кіесптапп еї аї., Маїиге

332:323-329 (1988); Ойееп евї а!., Ргос. Маг! Асад. бсі. ОБА 86:10029-10033 (1989); патентах США

МоМо 5821337, 7527791, 6982321 и 7087409; Казптіїгі єї аіІ., Меїнод» 36:25-34 (2005) (описана пересадка ділянки, що визначає специфічність, ДВС (5ОК)); Радіап, Мої. Іттипої. 28:489-498 (1991) (описана "модифікація поверхні"); БаІгАсдца еї аї., МеїШоаз 36:43-60 (2005) (описана "перетасовка КД"); і ОзБрошт еї аї., Мейоз 36:61-68 (2005) і Кіїтка еї аї., Ве. 9. Сапсег, 83:252- 260 (2000) (описаний підхід "спрямованого відбору" до перетасування КД).

Каркасні ділянки людини, які можуть бути застосовані для гуманізації, включають, але не обмежуючись цим: каркасні ділянки, вибрані із застосуванням методу "найкращої відповідності" (див., наприклад, Ббіте5 еї аїЇ. У. Іттипої. 151:2296 (1993)); каркасні ділянки, одержані з консенсусної послідовності людських антитіл конкретної підгрупи варіабельних ділянок легкого або важкого ланцюга (див., наприклад, Сагіег еї аїЇ. Ргос. Май). Асай. Зсі. ОБА, 89:4285 (1992); і

Ргезіа еї аї. 9. Іттипої., 151:2623 (1993)); зрілі (соматично мутовані) каркасні ділянки людини або каркасні ділянки зародкової лінії людини (див., наприклад, АЇтадго апа Егап55оп, Егопі.

Віозсі. 13:1619-1633 (2008)); і каркасні ділянки, одержані в результаті скринінгу бібліотек КД (див., наприклад, Васа еї аї., 9. Віої. Спет. 272:10678-10684 (1997) и Козок еї аї., 9. Віої. Спет. 271:22611-22618 (1996)). 4. Людські антитіла

В деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, представлене в цьому документі, є людським антитілом. Людські антитіла можуть бути одержані із застосуванням різних методів, відомих в даній галузі техніки. Людські антитіла загалом описані у мап рі)кК апа мап де Уміпкеї,

Сит. Оріп. Рпаптасої. 5: 368-74 (2001) і Її опрегу, Сит. Оріп. Іттипої. 20:450-459 (2008).

Людські антитіла можуть бути одержані шляхом введення імуногену трансгенній тварині, організм якої був модифікований для одержання інтактних людських антитіл або інтактних антитіл з варіабельними ділянками людини у відповідь на антигенний виклик. Такі тварини зазвичай несуть всі або частину локусів імуноглобуліну людини, які замінюють ендогенні локуси імуноглобуліну або які присутні позахромосомно або інтегровані випадковим чином до хромосом тварини. У таких трансгенних мишей ендогенні локуси імуноглобуліну зазвичай є інактивованими. Огляд методів одержання антитіл людини від трансгенних тварин див. у

Гопрего, Маї. Віоїтесп. 23:1117-1125 (2005). Див. також, наприклад, патенти США МоМое 6075181 і 6150584, в яких описано технологію ХЕМОМОИЗЕ)! ; патент США Мо 5770429, в якому описано технологію НиМарФ; патент США Мо 7041870, в якому описано технологію К-М МООЗЕЄ, і публікацію патентної заявки США Мо 5 2007/0061900, в якій описано технологію

МеІосімМоизеФ). Варіабельні ділянки людини з інтактних антитіл, що продукуються такими тваринами, можуть бути додатково модифіковані, наприклад, шляхом комбінування з іншою константною ділянкою людини.

Людські антитіла додатково можуть бути одержані за допомогою гібридомних методів.

Описані клітинні лінії людської мієломи і мишачо-людської гетеромієломи для продукування людських моноклональних антитіл. (див., наприклад, Ко?рог 9. Іттипо!., 133: 3001 (1984);

Вгодешцг єї аїЇ., Мопосіопа! Апіїбоду Ргодисіюп Тесппіднез апа Арріїсайоп5, рр. 51-63 (Магсеї!

ОекКкКег, Іпс., Мем/ МогК, 1987); і Воегпег єї аї., У. Іттипої., 147: 86 (1991).) Людські антитіла, одержані за допомогою технології гібридоми В-клітин людини, також описані у Гі еї аї., Ргос.

Маї!. Асад. бсі. ОБА, 103:3557-3562 (2006). Додаткові способи включають описані, наприклад, у патенті США Мо 7189826 (в якому описано одержання моноклональних антитіл людини ІЗМ з клітинних ліній гібридоми) і Мі, Хіапдаї Міапуїхие, 26(4):265-268 (2006) (описані гібридоми людини-людини). Крім того, технологія гібридоми людини (технологія Тгіота) описана в роботах

МоПтег5 апа Вгапаїєїп, Нібюіоду апа Нієюрашйоіоду, 20(3):927-937 (2005) і МоїІтег5 апа

Вгапаїєїп, Меїнодз апа Ріпаїпод5 іп Ехрегітепіа! апа Сіїіпіса! Рнаппасоіоду, 27(3):185-91 (2005).

Людські антитіла також можуть бути одержані шляхом виділення послідовностей варіабельного домену клону Ем, вибраного з бібліотек фагового дисплея, одержаних від

БО людини. Такі послідовності варіабельних доменів потім можуть бути об'єднані з бажаним константним доменом людини. Методи відбору людських антитіл з бібліотек антитіл описані нижче. 5. Одержані з бібліотеки антитіла

Антитіла за винаходом можуть бути виділені шляхом скринінгу комбінаторних бібліотек для антитіл з бажаної активністю або видами активності. Наприклад, в даній галузі техніки відомі різні способи створення бібліотек фагового дисплея і скринінгу таких бібліотек щодо антитіл, які володіють бажаними характеристиками зв'язування. Такі способи розглядаються, наприклад, у

Ноодепроот еї а. у Меїйоад5 іп МоїІесшаг Віоюду 178:1-37 (О'"Вієп еї аї., ед., Нитап Ргезв5,

Тома, МУ, 2001), і додатково описані, наприклад, у МеСайепу еї аї., Маїште 348:552-554; 60 СіасКзоп еї а!., Маїшге 352: 624-628 (1991); МагїКкз еї аї., У. Мої. Віої. 222: 581-597 (1992); Магк5 бо апа Вгадригу, у Меїйтоав5 іп МоїІесшаг Віоюду 248:161-175 (Го, ед., Нитап Ргевв5, Тоїоуа, Му, 2003); Біани єї аї., у). Мої. Віо!ї. 398(2): 299-310 (2004); І еє еї аї., 9). Мої. Віо!. 340(5): 1073-1093 (2004); РеПоизе, Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА 101(34)3: 12467-12472 (2004); і І ее еї аї., 9. Іттипої.

Меїтоаз 284(1-2): 119-132 (2004).

У деяких способах фагового дисплея репертуари генів МН та Мі окремо клонують за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) і рекомбінують випадковим чином у фагових бібліотеках, для яких потім може бути проведений скринінг щодо антигензв'язуючого фага, як описано у Уміпіег єї аіЇ., Апп. Мем. Іттипої., 12: 433-455 (1994). Фаг зазвичай відображає фрагменти антитіл у вигляді одноланцюгових фрагментів Ем (зсЕм), або у вигляді фрагментів

Еабр. Бібліотеки з імунізованих джерел забезпечують високоафінні антитіла до імуногену без необхідності створення гібридом. Як альтернатива, наївний репертуар може бути клонований (наприклад, від людини), щоб забезпечити єдине джерело антитіл до широкого спектру неауто-, а також аутоантигенів без будь-якої імунізації, як описано сгіййНе єї аі., ЕМВО 3, 12: 725-734 (1993). Нарешті, наївні бібліотеки додатково можуть бути синтезовані шляхом клонування неаранжованих сегментів МУ-гену із стовбурових клітин та із застосуванням праймерів ПЛР, що містять випадкову послідовність, для кодування високо варіабельних областей СОКЗ і для здійснення перегрупування іп міїго, як описано Ноодепроот апа Уміптег, у). Мої. Віої!., 227: 381-388 (1992). Патентні публікації що описують бібліотеки фагів антитіл людини, включають, наприклад: патент США Мо 5750373 і патентні публікації США МоМо 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 і 2009/0002360.

Антитіла або фрагменти антитіл, виділені з бібліотек людських антитіл, вважаються в даному контексті людськими антитілами або фрагментами людського антитіла. 6. Поліспецифічні антитіла

В будь-якому з вищевказаних аспектів анти-ТІСІТ антитіла (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.201ЄЕ), представлені в цьому документі, можуть бути поліспецифічними антитілами, наприклад біспецифічними антитілами. Поліспецифічні антитіла можуть бути моноклональними антитілами, які володіють специфічністю зв'язування по відношенню до двох різних сайтів. У деяких варіантах реалізації винаходу біспецифічні антитіла можуть зв'язуватися з двома різними епітопами на ТІСІТ. У деяких варіантах реалізації

Зо винаходу одна зі специфічних характеристик зв'язування спрямована на ТІСІТ, а інша на будь- який інший антиген (наприклад, друга біологічна молекула, наприклад, антиген клітинної поверхні, наприклад, пухлинний антиген). Відповідно, біспецифічне анти-ТІСІТ антитіло може володіти специфічністю зв'язування по відношенню до ТІСІТ і другої біологічної молекули, такої як РО-1, РО-І1, РО-І2, ОХ40, РО-1, СТІ А-4, ГАСЗ, ТІМ3, ВТ А, МІЗТА, В7Н4А або Сов.

Біспецифічні антитіла додатково можуть бути одержані як повнорозмірні антитіла або фрагменти антитіл.

В інших варіантах реалізації винаходу біспецифічні антитіла можуть зв'язуватися з двома різними епітопами ТІСІТ, 0Х40, РО-1, РО-І1, РО-І2. В деяких варіантах реалізації винаходу одна зі специфічних характеристик зв'язування спрямована на ТІСІТ, а інша на будь-який інший антиген (наприклад, друга біологічна молекула, така як ОХ40). В інших варіантах реалізації винаходу біспецифічне антитіло може володіти специфічністю зв'язування по відношенню до

ТІСІТ ї РО-І 1; ТІСІТ ї РО-12; ТІСІТ і РО-1; ТІСІТ ї СТІ А-4; ТІСІТ і ГАСЗ; ТІСЇІТ і ТІМ3; ТОП і

ВТА; ТІСІ ії МІ5ТА; ТІСП і В7НА; або ТІСІТ ії С0О96, причому біспецифічне антитіло переважно являє собою антагоністичне антитіло проти ТІСІТ і антагоністичне антитіло проти його другий мішені В інших варіантах реалізації винаходу біспецифічне антитіло може володіти специфічністю зв'язування по відношенню до ТІСІТ і СО226; ТІСІТ ії 028; ТІСП і С027; ТІСІТ і

С0137; ТІСІТ ї НМЕМ; ТІСІТ ії СІТЕ; ТІСІТ ї МІСА; ТІСІТ і ІСО5; ТІСІТ і ПК (МК) с20; або ТІСП і 284, причому біспецифічне антитіло переважно являє собою антагоністичне антитіло проти

ТІ ії його другої мішені. В інших варіантах реалізації винаходу біспецифічне антитіло може володіти специфічністю зв'язування по відношенню до ТІСІТ, яка не є антагоністичною за своєю природою (тобто біспецифічне антитіло не діє як антагоніст ТІСІТ).

Методи одержання поліспецифічних антитіл включають, але не обмежуючись цим, рекомбінантну коекспресію двох пар важкого ланцюга-легкого ланцюга імуноглобуліну, які володіють різною специфічністю (див. Міїєтеїп апа СцейПо, Маїшге 305: 537 (1983)), МО 93/08829, і ТтаипескКег єї аІ., ЕМВО 3. 10: 3655 (1991)) та інжиніринг "виступ-у-западині" (див., наприклад, патент США Мо 5731168). Технологія "виступ-у-западині" для поліспецифічних антитіл може бути застосована для створення першого плеча, що містить виступ, і другого плеча, що містить западину, з якою може зв'язуватися виступ першого плеча. В одному варіанті реалізації винаходу виступ поліспецифічних антитіл за винаходом може являти собою анти-ТІСІТ плече. бо Як альтернатива, в одному варіанті реалізації винаходу виступ поліспецифічних антитіл за винаходом може являти собою анти-ТІСІТ плече. Крім того, поліспецифічні антитіла можуть бути сконструйовані із застосуванням технології імуноглобулінового кросоверу (також відомого як обмін доменів Рар або формат Сто55Маб) (див., наприклад, М/О2009/080253, Зспаєеєтег еї аї.,

Ргос. Маїй!. Асайд. босі. ОБА, 108:11187-11192 (2011)). Поліспецифічні антитіла додатково можуть бути одержані за допомогою інжинірингу електростатичних керуючих ефектів для одержання Ес- гетеродимерних молекул антитіл (УМО 2009/089004А1); поперечного зшивання двох або більшої кількості антитіл або фрагментів (див., наприклад, патент США Мо 4676980 і Вгеппап еї аї.,

Зсіепсе, 229: 81 (1985)); із застосуванням лейцинових зіперів для одержання біспецифічних антитіл (див., наприклад, КозіеїІпу еї аї., у. Іттипої., 148(5):1547-1553 (1992)); із застосуванням технології "диатіла" для одержання біспецифічних фрагментів антитіл (див., наприклад,

Ноїїїпдег єї аї. Ргос. Май). Асай. бсі. БА, 90:6444-6448 (1993)); та із застосуванням одноланцюгових димарів Ем (5Ем) (див., наприклад, сгибег еї аї., у. Іттипої., 152:5368 (1994)); і одержання триспецифічних антитіл, як описано, наприклад, у Тий еї аї. У. Іттипої. 147: 60 (1991).

Додатково, до цього винаходу включені інженерні антитіла з трьома або більшою кількістю функціональних сайтів зв'язування з антигеном, включаючи "восьминожі антитіла" (див., наприклад, О5 2006 / 0025576А1).

Крім того, антитіла або фрагменти антитіл можуть містити "Рар подвійної дії" або "ОАЕ", що містить сайт зв'язування з антигеном, який зв'язується із ТІСІТ, а також з іншим, відмінним антигеном (наприклад, друга біологічна молекула) (див., наприклад, О5 2008/0069820). 7. Варіанти антитіл

У деяких варіантах реалізації винаходу пропонуються варіанти амінокислотної послідовності анти-ТІСІТ антитіл за винаходом. Як детально описано в цьому документі, анти-ТІСІТ антитіла можуть бути оптимізовані на базі бажаних структурних та функціональних властивостей.

Наприклад, може бути бажаним покращити афінність зв'язування та/або інші біологічні властивості антитіла. Варіанти амінокислотної послідовності антитіла можуть бути одержані шляхом введення відповідних модифікацій до нуклеотидної послідовності, яка кодує антитіло, або шляхом синтезу пептидів. Такі модифікації включають, наприклад, делеції та/або вставки та/або заміни залишків у амінокислотних послідовностях антитіла. Будь-яка комбінація делеції,

Зо вставки та заміни може бути одержана для кінцевої конструкції, за умови, що кінцева конструкція володіє необхідними характеристиками, наприклад, зв'язування з антигеном.

І. Варіанти заміни, вставки та делеції

У деяких варіантах реалізації винаходу пропонуються варіанти антитіл, що містять одну або більшу кількість амінокислотних замін. Сайти, що представляють інтерес для мутагенезу із заміною, включають ГВД (НУК) і КД. Консервативні заміни наведені у Табл. 1 під заголовком "Переважні заміни". Більш суттєві модифікації наведені в Табл. 1 під заголовком "Типові заміни" і додатково описані нижче стосовно класів бічного ланцюга амінокислот. Амінокислотні заміни можуть бути введені в антитіло, що представляє інтерес, а продукти піддані скринінгу щодо бажаної активності, наприклад, збереження/покращення зв'язування з антигеном, зниження імуногенності або покращення антитілозалежної цитотоксичності, АЗКЦ (АОСС) або комплементзалежної цитотоксичності, КЗЦ (СОС).

Таблиця 1

Типові і переважні заміни амінокислот залишок

Таблиця 1

Типові і переважні заміни амінокислот

Вихідний Типові заміни Переважні заміни залишок

Пе (І) І ем; Маї; Меї; Аа; Ріє; норлейцин

Амінокислоти можуть бути згруповані у відповідності до загальних властивостей бічного ланцюга: (1) гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, Маї, Гей, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: Суб, Зег, ТАг, Азп, Сп; (3) кислі: Авр, Си; (4) основні: Ні, Г ув, Ага; (5) залишки, що впливають на орієнтацію ланцюгів: СУ, Рго; (6) ароматичні: Тгр, Туг, Ріє.

Неконсервативні заміни тягнуть за собою обмін членів одного з цих класів на інший клас.

Один тип варіанту заміни включає заміну одного або більшої кількості залишків гіперваріабельних ділянок початкового антитіла (наприклад, гуманізоване або людське антитіло). Як правило, результуючий варіант (варіанти), вибраний для подальшого вивчення, буде містити модифікації (наприклад, покращення) певних біологічних властивостей (наприклад, підвищена афінність, знижена імуногенність) щодо початкового антитіла та/або буде істотною мірою зберігати певні біологічні властивості початкового антитіла. Типовим варіантом заміни є антитіло з дозрілою афінністю, яке може бути традиційно згенеровано, наприклад, із застосуванням методів дозрівання афінності на базі фагового дисплея, таких як описані в цьому документі. Якщо коротко, один або більшу кількість залишків ГВД (НУК) піддають мутації, а варіанти антитіл відображають на фагу і піддають скринінгу щодо конкретної біологічної активності (наприклад, афінність зв'язування).

Модифікації (наприклад, заміни) можуть бути здійснені у ГВД (НМ), наприклад, для покращення афінності до антитіла. Такі модифікації можуть бути здійснені в "гарячих точках"

ГВД (НУК), тобто, в залишках, які кодуються кодонами, що з високою частотою піддаються мутації під час процесу соматичного дозрівання (див., наприклад, Спомапигу, Меїпоа5 Мої. Віо|. 207:179-196 (2008)), та/або залишках, які контактують з антигеном, причому одержаний варіант

МН або МГ. тестують щодо афінності зв'язування. Дозрівання афінності шляхом інжинірингу та повторної селекції із вторинних бібліотек було описано, наприклад, в Ноодепроот еї аї. в

Меїпоаз іп МоїІесшіаг Віоіоду 178:1-37 (О'Вгієп єї а!., ед., Нитап Рге55, Тоїома, МУ, (2001)). У деяких варіантах дозрівання афінності до варіабельних генів, вибраних для дозрівання, вносять генетичну різноманітність за допомогою будь-якого з численних способів (наприклад, ПЛР із застосуванням полімерази, що помиляється, перетасування ланцюгів або олігонуклеотид- спрямованого мутагенезу). Потім створюють вторинну бібліотеку. Далі бібліотеку піддають скринінгу для ідентифікації будь-яких варіантів антитіл з бажаною афінністю. Інший спосіб внесення різноманітності включає орієнтовані на ГВД (НМК) підходи, в яких рандомізують декілька залишків ГВД (НУК) (наприклад, 4-6 залишків за один раз). Залишки ГВД (НУК), що беруть участь у зв'язуванні з антигеном, можуть бути специфічно ідентифіковані, наприклад, із застосуванням аланінскануючого мутагенезу або моделювання. Зокрема, мішенню часто виступають СОК-НЗ ї СОК-Ї 3.

У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, вставки або делеції можуть відбуватися в межах однієї або більшої кількості ГВД (НУК), до тих пір, поки такі зміни не зменшать істотною мірою здатність антитіла зв'язуватися з антигеном. Наприклад, у ГВД (НМЕК) можуть бути здійснені консервативні модифікації (наприклад, консервативні заміни, як вказано в цьому документі), що не зменшують суттєво афінності зв'язування. Такі модифікації можуть, наприклад, бути розташовані поза межами залишків ГВД (НМК), що вступають в контакт з антигеном. У деяких варіантах МН і МІ, представлених вище, кожна ГВД (НМК) або є немодифікованою, або містить не більше однієї, двох або трьох замін амінокислот.

Придатний спосіб ідентифікації залишків або ділянок антитіла, що можуть бути націлені на мутагенез, має назву "аланінскануючого мутагенезу", як описано у статті Сиппіпопат апа уУмеїї5 (1989) Зсіепсе, 244: 1081-1085. В цьому способі залишок або групу цільових залишків (наприклад, заряджені залишки, такі як агуд, азр, Пів, уз ії дію) ідентифікують та замінюють нейтрально або негативно зарядженою амінокислотою (наприклад, аланіном або поліаланіном), щоб визначити, чи зачепить це взаємодію антитіла з антигеном. Подальші заміни можуть бути введені в місцях амінокислот, що демонструють функціональну чутливість до початкових замін.

Як альтернатива або додатково, кристалічна структура комплексу антигену-антитіла для ідентифікації точок контакту між антитілом і антигеном. Такі залишки, що вступають в контакт, і сусідні залишки можуть служити мішенями або бути виключені як кандидати для заміни.

Варіанти можуть бути піддані скринінгу, щоб визначити, чи володіють вони необхідними властивостями.

Вставки амінокислотної послідовності включають аміно- та/або карбокси-кінцеві злиття завдовжки від одного залишку до поліпептидів, що містять сто або більшу кількість залишків, а також вставки одного або більшої кількості амінокислотних залишків всередині послідовності.

Приклади кінцевих вставок включають антитіло з М-кінцевим метіонільним залишком. Інші варіанти вставок молекули антитіла включають злиття з М- або С-кінцем антитіла ферменту (наприклад, для антитіло-опосередкованої терапії із застосуванням ферментів і проліків,

АОТФП (АБЕРТ)) або поліпептиду, який збільшує період напіввиведення антитіла із сироватки.

ІІ. Варіанти глікозилювання

В деяких варіантах реалізації винаходу анти-ТІСІТ антитіла за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.201ЄЕ) можуть бути модифіковані для збільшення або зменшення ступеня глікозилювання антитіла. Додавання або видалення сайтів глікозилювання з анти-ТІСІТ антитіла за винаходом може бути з легкістю здійснене шляхом модифікації амінокислотної послідовності таким чином, що створюється або видаляється один або більша кількість сайтів глікозилювання.

Якщо антитіло містить ділянку Ес, то карбогідрат, приєднаний до нього, може бути модифікованим. Нативні антитіла, що продукуються клітинами ссавців, зазвичай містять розгалужений двохантенний олігосахарид, що зазвичай приєднаний М-зв'язком до А5п297 домену СНО ділянки Ес. Див., наприклад, УмМгідйі еї ані. ТІВТЕСН 15:26-32 (1997). Олігосахарид може включати різні карбогідрати, наприклад, манозу, М-ацетилглюкозамін (сіІсМАс), галактозу і сіалову кислоту, а також фукозу, приєднану до СіІсМАс у "стеблі" двохантенної олігосахаридної структури. В деяких варіантах реалізації винаходу можуть бути здійснені модифікації олігосахариду в антитілі за винаходом з метою створення варіантів антитіл з деякими покращеними властивостями.

В одному варіанті реалізації винаходу пропонуються варіанти анти-ТІСІї антитіла, що містять карбогідратну структуру, в якій відсутня фукоза, приєднана (прямо або непрямо) до ділянки Ес. Наприклад, кількість фукози в такому антитілі може становити від 1 95 до 80 9б, від 195 до 65 95, від 595 до 65 95 або від 20 95 до 40 95. Кількість фукози визначають шляхом обчислення середньої кількості фукози в цукровому ланцюзі при А5п297 по відношенню до суми всіх глікоструктур, приєднаних до Азп 297 (наприклад, комплексної, гібридної і високоманозної структури), за даними мас-спектрометрії з часопролітною іонізацією лазерною десорбцією із застосуванням матриці, ЧП-ІЛДЗМ (МАСОІ-ТОЕ), як описано, наприклад, у УМО 2008/077546. бо А5п297 відноситься до залишку аспарагіну, розташованого приблизно в положенні 297 на ділянці Ес (нумерація ЄС залишків ділянки Ес); однак через незначні варіації послідовності антитіл А5п297 також може бути розташований на близько х З амінокислоти в напрямку проти ходу транскрипції або по ходу транскрипції відносно положення 297, тобто, між положеннями 294 і 300. Такі варіанти фукозилювання можуть володіти покращеною функцією АЗКЦ (АОСС).

Див., наприклад, патентні публікації США МоМео ОЗ 2003/0157108 (Ргезіа, І.); 05 2004/0093621 (Куоула Накко Кодуо Со., а). Приклади публікацій, що відносяться до "дефукозильованих" або "фукозодефіцитних" варіантів антитіла, включають: ОБ 2003/0157108; УМО 2000/61739; УМО 2001/29246; ОБ 2003/0115614; ОБ 2002/0164328; 005 2004/0093621; 005 2004/0132140;. 05 2004/0110704; 05 2004/0110282; 005 2004/0109865; МО 2003/085119; МО 2003/084570; МО 2005/035586; МО 2005/035778; МО2005/053742; МО2002/031140; ОКалакі еї аїЇ. У. Мої. Віо!. 336:1239-1249 (2004); Матапе-ОНпикі еї а!. Віотесі. Віоепод. 87: 614 (2004). Приклади клітинних ліній, здатних продукувати дефукозильовані антитіла, включають клітини Гес13 ЯКХ (СНО), з дефіцитом фукозилювання білка (Кірка еї аЇ. Агсй. Віоспет. Віорпу5. 249:533-545 (1986) патентна заявка США Ме 05 2003/0157108 А1, Ргевіа, ЇЇ ї УМО 2004/056312 А1, Адатв еї аї., особливо у Прикладі 11), клітинні лінії що містять "нокаут", наприклад, гену альфа-1,6- фукозилтрансферази, РОТВ8, клітини ЯКХ (СНО) що містять "нокаут" (див., наприклад, Хатапе-

ОПпикі еї аї. Віоїеєсй. Віоепд. 87: 614 (2004); Капаа, У. еї аї., Віоїеснпої!. Віоепо., 94(4):680-688 (2006); і УМО2003/085107).

Варіанти анти-ТІСІї антитіл додатково забезпечені двохантенними олігосахаридами, наприклад, у яких двохантенний олігосахарид, приєднаний до ділянки Ес антитіла, ділиться

СІсСМАс навпіл. Таким варіантам антитіл може бути властивий знижений ступінь фукозилювання та/або покращена функція АЗКЦ (АОСС). Приклади таких варіантів антитіл описані, наприклад, у УМО 2003/011878 (уеап-Маїгеї єї аІ.); патент США Мо 6602684 (тапа еї аї.); і 5 2005/0123546 (Штапа еї а1І.). Крім того, передбачені варіанти антитіл з щонайменше одним галактозним залишком в олігосахариді, приєднаному до ділянки Ес. Такі варіанти антитіл можуть володіти покращеною функцією КЗЦ (СОС). Такі варіанти антитіл описані, наприклад, у УМО 1997/30087 (Рагеї єї аІ.); УМО 1998/58964 (Каїс, 5.); і УМО 1999/22764 (Каїс, 5.).

І. Варіанти ділянки Ес

В деяких варіантах реалізації винаходу одна або більша кількість модифікацій амінокислот можуть бути введені на ділянці Ес анти-ТІСІТ антитіла за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіанта, наприклад, 4.103.С/1Е), з генерацією тим самим варіанта ділянки Ес (див., наприклад,

ОБ 2012/0251531). Варіант ділянки Ес може містити послідовність ділянки Ес людини (наприклад, ділянку Ес людини /дс1, Ідс2, ІдОСЗ або Ідс4), що містить модифікацію амінокислоти (наприклад, заміну) в одному або декількох положеннях амінокислот.

В деяких варіантах реалізації винахід включає варіант анти-ТІСІТ антитіла, який володіє деякими, але не всіма ефекторними функціями, що робить його бажаним кандидатом для сфер застосування, в яких період напіввиведення антитіла іп мімо є суттєвим, а деякі ефекторні функції (такі як комплемент і АЗКЦ (АЮСС)) є непотрібними або шкідливими. Аналізи цитотоксичності іп о мйго та/або іп мімо можна проводити для підтвердження зниження/виснаження активності КЗЦ (СОС) та/"або АЗКЦ (АОСС). Наприклад, можуть бути проведені аналізи зв'язування з рецептором Ес (БСК), щоб гарантувати, що антитіло не зв'язується з сук (а отже, ймовірно, не володіє активністю АЗКЦ (АОСС)), але зберігає здатність до зв'язування з ЕсКп. Основними клітинами для опосередкування АЗКЦ (АОСС) є ПК (МК)-клітини, що експресують тільки ЕсСукКІї, тоді як моноцити експресують ЕсукіІ, ЕсукКІЇ і

ЕсуйІ. Експресія ЕСЕ на кровотворних клітинах коротко підсумована у Табл. З на стор. 464

Вамеїсі апа Кіпеї, Аппи. Веу. Іттипої. 9:457-492 (1991). Необмежуючі приклади аналізів іп міго для оцінки активності АЗКЦ (АОСС) молекули, що представляє інтерес, описані в патенті США

Мо 5500362 (див., наприклад, Неїї5ігот, І. еї аІ. Ргос. Маг! Асад. 5сі. ОБА 83:7059-7063 (1986)) і

Неївіго т, І єї аї., Ргос. Маг! Асад. сі. ОБА 82:1499-1502 (1985); 5821337 (див. Вгиддетапп, М. еї аІ,, У. Ехр. Мед. 166:1351-1361 (1987)). Як альтернатива, можуть бути застосовані методи нерадіоактивного аналізу (див., наприклад, нерадіоактивний аналіз цитотоксичності АСТІ "М для протокової цитометрії (СеПТесппоЇоду, Іпс. Маунтін-В'ю, штат Каліфорнія, і нерадіоактивний аналіз цитотоксичності СуїоТох 962 (Рготеда, Медісон, штат Вісконсин). Придатними ефекторними клітинами для таких аналізів є мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК (РВМС)) і природні клітини-кілери (ПК (МК)). Як альтернатива або додатково, активність АЗКЦ (АрСС) молекули, що представляє інтерес, може бути оцінена іп мімо, наприклад, на тваринній моделі, як, наприклад, розкрито в Сіупез еї аї. Ргос. Маг! Асад. 5сі. ОБА 95:652-656 (1998). Крім того, аналізи зв'язування з С1д4 можуть бути проведені для підтвердження того, що антитіло здатне зв'язуватися з С14, а, отже, не володіє активністю КЗЦ (СОС). Див., наприклад, ІФА бо (ЕСІЗА) зв'язування з С1д і СЗс у УМО 2006/029879 ії МО 2005/100402. Для оцінки активації комплементу може бути проведений аналіз КЗЦ (СОС) (див., наприклад, Салапо-Запіого 6вї аї.

У. Іттипої. Мешодз 202:163 (1996); Стада, М.5. єї аї. Віоса. 101:1045-1052 (2003); и Стадд, М.5. апа М.). Сієппіє Віоса. 103:2738-2743 (2004)). Крім того, зв'язування з ЕсКп і визначення кліренсу/періоду напіввиведення іп мімо можуть бути здійснені із застосуванням методів, відомих в даній галузі техніки (див., наприклад, РеїКома, 5.В. еї аї. ІП. Іттипої. 18(12):1759- 1769 (2006)).

Антитіла зі зниженою ефекторною функцією включають антитіла з заміною одного або більшої кількості залишків на ділянці Ес 238, 265, 269, 270, 297, 327 і 329 (патенти США МоМо 6737056 і 8219149). Такі мутанти Ес включають мутанти Ес із заміною в двох або більшій кількості положень амінокислот 265, 269, 270, 297 і 327, включаючи так званий мутант Ес "РАМА" із заміною залишків 265 і 297 на аланін (патенти США МоМо 7332581 і 8219149).

В деяких варіантах реалізації винаходу пролін в положенні 329 людської ділянки Ес дикого типу в антитілі заміщений гліцином або аргініном або амінокислотним залишком, досить великим для руйнування проліном сендвіча в межах поверхні рецептора Ес/Ес.гама, який утворюється між проліном 329 Ес і залишками триптофану Тгр 87 і Тгтр 110 ЕсукІ (Бопдегтапп еї а": Мате 406, 267-273 (20 9иІ. 2000)). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить щонайменше іще одну заміну амінокислоти. В одному варіанті реалізації винаходу додаткова заміна амінокислоти являє собою 5228Р, Е23З3Р, 1234А, 1235А, 1235Е, М297А,

М297О0 або РЗ3315, а ще в іншому варіанті реалізації винаходу щонайменше одна додаткова заміна амінокислоти являє собою 1234А і 1235А ділянки Ес ЇдДсе1 людини або 5228Р і 1235Е ділянки Ес Ідб54 людини (див., наприклад, 5 2012/0251531), і все ще в іншому варіанті реалізації винаходу щонайменше одна додаткова заміна амінокислоти являє собою І1234А і

ІЇ235А і РЗ329О ділянки Ес Ід1 людини.

Описані деякі варіанти антитіл з покращеним або зниженим зв'язуванням з ЕСЕ. (Див., наприклад, патент США Мо 6737056, УМО 2004/056312 і ЗПієїд5 еї аї., 9. Віої. Спет. 9(2): 6591- 6604 (2001)).

У деяких варіантах реалізації винаходу варіант антитіла містить ділянку Ес з однією або великою кількістю замін амінокислот, які покращують АЗКЦ (АОСС), наприклад, заміни в положеннях 298, 333 та/або 334 ділянки Ес (нумерація ЄС залишків).

Зо В деяких варіантах реалізації винаходу на ділянці Ес здійснюють модифікації, які призводять до зміни (наприклад, покращення або зниження) зв'язування з С14 та/або комплементзалежної цитотоксичності (КЗЦ (СОС)), наприклад, як описано в патенті США Мо 6194551, М/О 99/51642, і

Ідизодіє еї аї. У. Іттипої. 164: 4178-4184 (2000).

Антитіла зі збільшеним періодом напіввиведення і покращеним зв'язуванням з рецептором

Ес новонароджених (РсКп), що є відповідальним за передачу материнських до плоду (сСпуег еї а, У. ІттипоїЇ. 117:587 (1976) і Кіт сеї аїЇ., 9. Іттипої. 24:249 (1994)), описані в 0О52005/0014934А1 (Ніпіоп еї аї1.). Такі антитіла містять ділянку Ес з однією або декількома замінами, що покращують зв'язування ділянки Ес із ЕсКп. Такі варіанти Ес містять заміни одного або декількох залишків на ділянці Ес: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434, наприклад, заміну залишку 434 на ділянці Ес (патент США Мо 7371826).

Див. також ЮОипсап 5 Уміптег, Майиге 322:738-40 (1988); патент США Мо 5648260; патент США

Мо 5624821; і УМО 94/29351 щодо інших прикладів варіантів ділянки Ес.

В деяких аспектах анти-ТІСІТ антитіло (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01Є) містить ділянку Ес, що містить мутацію М2970.

В деяких варіантах реалізації винаходу анти-ТІСІТ антитіло (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.С1Е) містить один або більшу кількість константних доменів важкого ланцюга, причому один або більша кількість константних доменів важкого ланцюга вибрані з першого домену СНІ (СНІ 1), першого домену СН2 (СН2 1), першого домену СНЗ (СНЗ і), другого домену СНІ (СНІ 2), другого домену СНО (СНІ г), і другого домену СНЗ (СНЗ 2), В деяких випадках принаймні один з одного або більшої кількості константних доменів важкого ланцюга з'єднаний з іншим константним доменом важкого ланцюга. У деяких випадках кожен з доменів СНЗ : ї СНЗ 2 містить виступ або порожнину, причому виступ або порожнина в домені

СНЗ ї розташована у порожнині або виступі, відповідно, в домені СНЗ 2. У деяких випадках домени СНЗ ї і СНЗ 2 зустрічаються на межі поділу між виступом і порожниною. У деяких випадках кожен з доменів СН2 ї ії СН2 2 містить виступ або порожнину, причому виступ або порожнина в домені СН2 1 розташована, відповідно, у порожнині або виступі в домені СНІ ». В інших випадках домени СНАІА ї СН2 2 зустрічаються на межі поділу між виступом і порожниною.

У деяких випадках анти-ТІСІТ антитіло являє собою антитіло Їдс1. бо ЇМ. Модифіковані цистеїном варіанти антитіл

В деяких варіантах реалізації винаходу може бути бажаним створення модифікованих цистеїном антитіл, наприклад "тіомМАБб", в яких один або більша кількість залишків антитіла заміщені залишками цистеїну. В конкретних варіантах реалізації винаходу заміщені залишки знаходяться у доступних ділянках антитіла. При заміні цих залишків цистеїном, реакційноздатні тіольні групи, таким чином, розміщуються в доступних сайтах антитіла і можуть бути використані для кон'югації антитіла з іншими фрагментами, такими як фрагменти лікарського засобу або фрагменти лінкера-лікарського засобу, для створення імунокон'югату, як описано в цьому документі нижче, В деяких варіантах реалізації винаходу будь-який один або більша кількість з наступних залишків можуть бути заміщені цистеїном: М205 (нумерація за Кабатом) легкого ланцюга; А118 (нумерація ЄС) важкого ланцюга; і 5400 (нумерація ЄС) ділянки Ес важкого ланцюга. Модифіковані цистеїном антитіла можуть бути одержані, як описано, наприклад, у патенті США 7521541.

М. Похідні антитіл

В деяких варіантах реалізації винаходу анти-ТІСІТ антитіло за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01ЄЕ), запропоноване в даному винаході, може бути додатково модифіковане з метою введення додаткових небілкових фрагментів, які відомі в даній галузі техніки і є легко доступними. Групи, які підходять для дериватизації антитіла, включають, але не обмежуючись цим, водорозчинні полімери. Необмежуючі приклади водорозчинних полімерів включають, але не обмежуючись цим, поліетиленгліколь (ПЕГ), кополімери етиленгліколю/пропіленгліколю, карбоксиметилцелюлозу, декстран, полівініловий спирт, полівінілпіролідон, полі-1,3-діоксолан, полі-1,3,6--риоксан, кополімер етилену і малеїнового ангідриду, поліамінокислоти (гомополімери або статистичні кополімери) і декстрану або полі(н-вінілпіролідон)поліетиленгліколь, гомополімери пропропіленгліколю, кополімери проліпропіленоксиду/етиленоксиду, поліоксиетильовані поліоли (наприклад, гліцерол), полівініловий спирт та їх суміші. Поліетиленгліколь пропіональдегід може мати переваги у виробництві завдяки його стабільності в воді. Полімер може мати будь-яку молекулярну масу і може бути розгалуженим або нерозгалуженим. Кількість полімерів, приєднаних до антитіла, може варіювати, і якщо до нього прикріплено більше одного полімеру, вони можуть являти собою однакові або різні молекули. Загалом, кількість та/або вид полімерів, що застосовуються

Зо для дериватизації можуть бути визначені на базі міркувань, що включають (але не обмежуючись цим) конкретні властивості або функції покращуваного антитіла, незалежно від того, чи буде похідне антитіла застосовуватися при терапії певних станів, і т. п.

В іншому варіанті реалізації винаходу пропонуються кон'югати антитіла і небілкового фрагмента, які можуть вибірково нагріватися під впливом випромінювання. В одному варіанті реалізації винаходу небілкова частина являє собою карбонову нанотрубку (Кат еї аї., Ргос. Май.

Асад. бсі. ОБА 102: 11600-11605 (2005)). Випромінювання може мати будь-яку довжину хвилі і включає, але не обмежуючись цим, довжини хвиль, які не шкодять звичайним клітинам, але які нагрівають небілковий залишок до температури, при якій гинуть клітини, розташовані проксимально відносно небілкової частини антитіла.

ЇМ. Рекомбінантні способи і композиції

Анти-ТІСІТ антитіла за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01ЄЕ) можуть бути одержані із застосуванням рекомбінантних способів і композицій, наприклад, як описано в патенті США Мо 4816567, який включений до цього документу шляхом посилання в повному обсязі. В одному варіанті реалізації винаходу пропонується виділена нуклеїнова кислота, що кодує анти-ТІСІТ антитіло, описане в цьому документі. Така нуклеїнова кислота може кодувати амінокислотну послідовність, яка містить МІ, та/або амінокислотну послідовність, яка містить МН антитіла (наприклад, легкі та/або важкі ланцюги антитіла). В наступному варіанті реалізації винаходу пропонується один або більша кількість векторів (наприклад, векторів експресії), що містять таку нуклеїнову кислоту. В наступному варіанті реалізації винаходу пропонується клітина-хазяїн, що містить таку нуклеїнову кислоту. В одному з таких варіантів реалізації винаходу клітина-хазяїн містить (наприклад, була трансформована): (1) вектор, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує амінокислотну послідовність, яка містить

МІ. антитіла, і амінокислотну послідовність, яка містить УН антитіла, або (2) перший вектор, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує амінокислотну послідовність, яка містить Мі. антитіла, і другий вектор, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує амінокислотну послідовність, яка містить МН антитіла. В одному варіанті реалізації винаходу клітина-хазяїн є еукаріотичною, наприклад клітиною яєчника китайського хом'яка (ЯКХ (СНО)) або лімфоїдною клітиною (наприклад, МО, М5О, клітиною Зр20). В одному варіанті реалізації винаходу пропонується спосіб одержання анти-ТІСІТ антитіла, причому спосіб включає культивування клітини-хазяїна, 60 яка містить нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло, як вказано вище, в умовах, що підходять для експресії антитіла, і, необов'язково, виділення антитіла з клітини-хазяїна (або середовища культивування клітин-хазяїв).

Для рекомбінантного продукування анти-ТІСІї антитіла нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло, наприклад, як описано вище, виділяють і вставляють в один або більшу кількість векторів для подальшого клонування та/або експресії в клітині-хазяїні. Така нуклеїнова кислота може бути легко виділена і секвенована із застосуванням звичайних методів (наприклад, із застосуванням олігонуклеотидних зондів, які здатні специфічно зв'язуватися з генами, що кодують важкий і легкий ланцюги антитіла).

Придатні клітини-хазяї для клонування або експресії векторів, які кодують антитіло, включають прокаріотичні або еукаріотичні клітини, описані в цьому документі. Наприклад, антитіла можуть бути одержані в бактеріях, зокрема, якщо глікозилювання та ефекторна функція Ес непотрібні. Щодо експресії фрагментів антитіл і поліпептидів в бактеріях див., наприклад, патенти США МоМо 5648237, 5789199 та 5840523. (Див. також Спапоп, Метод іп

Моїесшіаг Віоіоду, Мої. 248 (В.К.С. Го, єд., Нитапа Ргезв5, Тоїомжа, МУ, 2003), рр. 245-254, де описано експресію фрагментів антитіл в Е. соїї). Після експресії, антитіло може бути виділено з пасти бактеріальних клітин в розчинній фракції і може бути додатково очищено.

На додаток до прокаріотів, еукаріотичні мікроби, такі як нитчасті гриби або дріжджі, є придатними хазяями клонування або експресії для векторів, що кодують антитіла, включаючи гриби і дріжджові штами, шляхи глікозилювання яких були "гуманізовані"? що приводить до продукування антитіла з частково або повністю людським характером глікозилювання. Див.

Сегпдгов5в, Маї. Віоїесн. 22:1409-1414 (2004), і | ї еї а!., Маї. Віоїтесі. 24:210-215 (2006).

Додатково, придатні клітини-хазяї для експресії глікозильованого антитіла одержують з багатоклітинних організмів (безхребетних і хребетних). Приклади клітин безхребетних включають клітини рослин і комах. Були ідентифіковані численні бакуловірусні штами, які можна застосовувати в поєднанні з клітинами комах, особливо для трансфекції клітин Зродоріега

Тгидірегаа.

Крім того, культури рослинних клітин можуть бути застосовані як хазяї. Див., наприклад, патенти США МоМо 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 та 6417429 (описують технологію

РІ АМТІВООІЕб5І | для одержання антитіл в трансгенних рослинах).

Зо Клітини хребетних також можна застосовувати як хазяї. Наприклад, придатними можуть бути клітинні лінії ссавців, адаптовані для росту в суспензії. Іншими прикладами придатних клітинних ліній ссавців є лінія СМІ нирки мавпи, трансформована 540 (СО5-7); (293 або клітини 293, як описано, наприклад, у сгапбат еї аї., У. бЗеп Мігої. 36:59 (1977)); клітини нирки дитинчати хом'яка (НДХ (ВНК)); клітини Сертолі миші (клітини ТМ4, як описано, наприклад, у

Маїпег", Віої. Нергоа. 23:243-251 (1980)); клітини нирки мавпи (СМ1); клітини нирки африканської зеленої мавпи (МЕКО-76); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГ А); клітини нирки собаки (МОСК), клітини печінки щура лінії Вийаю (ВК! ЗА), клітини легені людини (М/138), клітини печінки людини (Нер 02), пухлина молочної залози миші (ММТ 060562), клітини ТКІ, як описано, наприклад, у МайШег еї аї!., Аппаібє М.М. Асай. сі. 383:44-68 (1982); клітини МКС 5, а також клітини Е54. Інші придатні лінії клітин-хазяїв ссавців включають клітини яєчника китайського хом'яка (ЯКХ (СНО)), в тому числі дигідрофолатредуктаза-негативні, ДГФР- (ОНЕНУ клітини ЯКХ (СНО) (Опаць еї а!., Ргос. Май. Асад. сі. ОБА 77:4216 (1980)) і клітинні лінії мієломи, такі як МО,

М5О ї 5р2/0. Огляд деяких ліній клітин-хазяїнів ссавців, придатних для продукування антитіл, див., наприклад, в Таакі апа Ууи, Меїтоаз іп МоїІесшіаг Віоіоду, Мої. 248 (В.К.С. І о, еа., Нитапа

Ргез55, Тоїома, МУ), рр. 255-268 (2003).

М. Імунокон'югати

Винахід додатково відноситься до імунокон'югатів, які містить анти-ТІСІТ антитіло за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01Е), кон'юЮговане з одним або більшою кількістю цитотоксичних агентів, таких як хіміотерапевтичні агенти або лікарські засоби, інгібітори росту, токсини (наприклад, білкові токсини, що володіють ферментативною активністю токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження або їх фрагменти) або радіоактивні ізотопи.

В одному варіанті реалізації винаходу імунокон'югат є кон'югатом антитіла-лікарського засобу (КАЛС (А0С)), в якому антитіло кон'юговане з одним або більшою кількістю лікарських засобів, включаючи, але не обмежуючись цим, майтансиноїд (див. патенти США МоМо 5208020, 5416064 і європейський патент ЕР 0425235 ВІ); ауристатин, такий як фрагменти лікарського засобу монометилауристатину ОЕ і ОР (ММАЕ і ММАР) (див. патенти США МоМо 5635483 і 5780588 та 7498298); доластатин; каліхеаміцин або його похідне (див. патенти США МоМо 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001 і 5877296; Ніптап еї аї., 60 Сапсег Вез. 53:3336-3342 (1993); і І оде еї а!., Сапсег Вез. 58:2925-2928 (1998)); антрациклін,

такий як дауноміцин або доксорубіцин (див. Кгаї? єї а), Ситепі Мед. Спет. 13:477-523 (2006);

Уейтеу еї а!., Віоогдапіс 5 Мед. Спет. І ейег5 16:358-362 (2006); Тогдом еї аї., Віосопі. Спет. 16:717-721 (2005); Мааду єї аї., Ргос. Май). Асад. сі. ОБА 97:829-834 (2000); ВбБиромснік еї аї.,

Віоогу. 5. Мед. Спет. І еНег5 12:1529-1532 (2002); Кіпа еї а!., У. Мед. Спет. 45:4336-4343 (2002) і патент США Мо 6630579); метотрексат; віндезин; таксан, такий як доцетаксел, паклітаксел, ларотаксел, тезетаксел і ортатаксел; трихотецени; і СС1065.

В іншому варіанті реалізації винаходу імунокон'югат містить анти-ТІСІТ антитіло, як описано в цьому документі (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.О1Е), кон'югований з токсином або його фрагментом, що володіє ферментативною активністю, включаючи, але не обмежуючись цим, ланцюг А дифтерії, незв'язуючі активні фрагменти дифтерійного токсину, ланцюг А екзотоксину (з Рхзендотопах аегидіпоза), ланцюг А рицину, ланцюг А абрину, ланцюг

А модесину, альфа-сарцин, білки АїЇІешгйев Гогаїї, діантинові білки, білки Рпуїіаса атегісапа (РАРІ, РАРІЇ ї РАР-5), інгібітор Мотогаїса спагапііа, курцин, кротин, інгібітор Зарапагіа ойісіпаїї5, гелонін, мітогелін, рестриктоцин, феноміцин, еноміцин і трикотецени.

В іншому варіанті реалізації винаходу імунокон'югат містить анти-ТІСІТ антитіло, як описано в цьому документі (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.О1Е), кон'югований з радіоактивним атомом з утворенням радіокон'югату. Численні радіоактивні ізотопи доступні для одержання радіокон'югатів. Приклади включають А", 1191, 1125, 0, Де!86, Де!88, т!» Віг12, рзг,

РБ-"2 ї радіоактивні ізотопи и. Якщо для виявлення застосовується радіокон'югат, він може містити радіоактивний атом для сцинтиграфічних досліджень, наприклад, їс99т або 1123, або спін-мітку для візуалізації методом ядерного магнітного резонансу (ЯМР) (також відомий як магнітно-резонансна томографія, МРТ), таку як знову йод-123, йод-131, індій-111, флуор-19, карбон-13, нітроген-15, оксиген-17, гадоліній, марганець або залізо.

Кон'югати антитіла і цитотоксичного агента можуть бути одержані із застосуванням численних біфункціональних агентів, що зв'язуються з білком, таких як М-сукцинімідил-3-(2- піридилдітіо)упропіонат (СПДП (5РОР)), сукцинімідил-4-(М-малеїнімідометил)циклогексан-1- карбоксилат (СМЦК (5МСС)), імінотіолан (ІТ (ІТ)), біфункціональні похідні імідоестерів (таких як диметиладипімідат НС), активні естери (такі як дисукцинімідилсуберат), альдегіди (такі як глутаровий альдегід), біс-азидосполуки (такі як біс(п-азидобензоїл)гександіамін), похідні біс-

Зо діазонію (такі як біс-(п- діазонійбензоїл)-етилендіамін), діїзоціанат (такий як толуен-2,6- діїізоціанат) і біс-активні сполуки флуору (такі як 1,5-дифлуор-2,4-динітробензен). Наприклад, імунотоксин рицини може бути одержаний, як описано у Мієена евї а!., Зсієпсе 238:1098 (1987).

Мічена карбоном-14 1-ізотіоціанатобензил-З3-метилдіетилентриамінпентаоцтова кислота (МТ-

ДТПО (МХ-ОТРА)) є типовим хелатуючим агентом для кон'югації радіонуклеотиду з антитілом.

Див. УУО 94/11026. Лінкер може бути "розщеплюваним лінкером", який полегшує вивільнення цитотоксичного лікарського засобу в клітині. Наприклад, можна застосовувати кислотолабільний лінкер, чутливий до пептидази лінкер, фотолабільний лінкер, диметиловий лінкер або дисульфідовмісний лінкер (СнНагі еї а!І., Сапсег Вез. 52:127-131 (1992), патент США Мо 5208020).

Імунокон'югати або КАЛС (АОС) в цьому документі явно включають, але не обмежуючись цим, такі кон'югати, одержані за допомогою поперечно-зшиючих реагентів, включаючи, але не обмежуючись цим, (М-ІВ-малеїнімідопропілокси|Їсукцинімідний естер), БМПС (ВМР), (М-(5- малеїнімідокапроїлокси)-сукцинімідний естер), ІМКС (ЕМС5), 4-малеїнімідомасляной кислоти М- гідроксисукцинімідний естер, ММС (СМВ5), 1,6-гексан-біс-вінілсульфон, ГБВС (НВМ5), сукцинімідил-4-(М-малеїнімідометил)циклогексан-1-карбокси-(б-амідокапроат), АК-СМЦК (І с-

ЗМО), З-малеїнімідобензойної кислоти М-гідроксисукцинімідний естер, МБС (МВ5), 4-(4-М- малеїнімідофенілумасляної кислоти гідразид гідрохлорид ж- 1/2 діоксану, МФМГ (МРВН), сукцинімідил-3-(бромацетамідо)пропіонат, СБАП (ЗВАР), М5-сукцинімідилиодацетат, СИА (5ІА),

М-сукцинімідил-(4-йодацетил)амінобензоат, СЙАБ (ЗІАВ), М-сукцинімідил-4-(М- малеїнімідометил)циклогексан-1-карбоксилат, ЄсМЦцКк (5МСС), сукцинімідил-4-(М- малеїнімідофеніл)бутират, сМФБ (5МРВ), сукцинімідил-б-((р- малеїнімідопропіонамідо)угексаноат, СМПГ (5МРН), сульфо-ІМКС (ЕМС5), сульфо-ММГС (СМВ5), М-(к-малеїнімідоундеканоїлокси)сульфосукцинімідний естер, сульфо-КМУС (КМИЗ5), сульфо-МБС (МВ5), сульфо-СЙАБ (5ІАВ), сульфо-«СМЦК (ЗМСС) і сульфо-СМФБ (ЗМРВ) і

СВСБ (5М5В) (сукцинімідил-(4-вінілсульфон)бензоат), які є комерційно доступними (наприклад, від Ріегсе Віоїесппо!оду, Іпс., Рокфорд, штат Іллінойс, США).

МІ. Способи та композиції для діагностики і виявлення

В деяких варіантах реалізації винаходу будь-яке з анти-ТІСІї антитіл за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01ЄЕ) є придатним для виявлення присутності ТІСІТ в біологічному зразку. Використовуваний в цьому документі термін

"виявлення" включає кількісне або якісне виявлення. У деяких варіантах реалізації винаходу біологічний зразок містить клітину або тканину.

В одному варіанті реалізації винаходу пропонується анти-ТІСІТ антитіло для застосування в способі діагностики або виявлення. У ще одному аспекті представлений спосіб виявлення присутності ТІСІТ в біологічному зразку. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає приведення біологічного зразка в контакт з анти-ТІДІТ антитілом, як описано в цьому документі, в умовах, що дозволяють зв'язування анти-ТІСІї антитіла з ТІСІТ, і визначення того, чи утворюється комплекс між анти-ТІСІТ антитілом і ТІСІТ. Такий спосіб може бути способом іп міго або іп мімо.

У деяких варіантах реалізації винаходу пропонуються мічені анти-ТІСІї антитіла. Мітки включають, але не обмежуючись цим, мітки або фрагменти, які виявляються безпосередньо (наприклад, флуоресцентні, хромофорні, електронно-щільні, хемілюмінесцентні і радіоактивні мітки), а також такі фрагменти, як ферменти або ліганди, які виявляються непрямо, наприклад, за допомогою ферментативної реакції або молекулярної взаємодії. Типові мітки включають, але не обмежуючись цим, радіоїзотопи ЗР, 740, 1251, ЗН ї 19, флуорофори, такі як рідкоземельні хелати або флуоресцеїн і його похідні, родамін і його похідні, дансил, умбеліферон, люциферази, наприклад, люцифераза світлячків і люцифераза бактерій (патент США Мо 4737456), люциферин, 2,3-дигідрофталазиндіони, пероксидазу хрону (ПХ (НЕР)), лужну фосфатазу, В-галактозидазу, глюкоамілазу, лізоцим, сахаридоксидази, наприклад, глюкозооксидази, галактозооксидази і глюкозо-6б-фосфатдегідрогеназу, гетероциклічні оксидази, такі як уриказа і ксантиноксидаза, в поєднанні з ферментом, який використовує гідроген пероксид для окиснення прекурсору барвника, таким як ПХ (НЕР), лактопероксидаза або мікропероксидаза, біотин/авідин, спін-мітки, мітки бактеріофага, стабільні вільні радикали і т. п.

МІ. Фармацевтичні композиції

Фармацевтичні композиції анти-ТІСІТ антитіла за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіанта, наприклад, 4.103.01Е) одержують змішуванням такого антитіла, що володіє бажаним ступенем чистоти, з одним або більшою кількістю необов'язкових фармацевтично прийнятних носіїв (Ветіпдіоп'є РНаптасешіса! Зсієпсе5 16ї1й еаййоп, ОзоіІ, А. Ей. (1980)), у вигляді ліофілізованих композицій або водних розчинів. Фармацевтично прийнятні носії, як правило, є

Зо нетоксичними для реципієнтів у застосовуваних дозах і концентраціях та включають, але не обмежуючись цим: буферні речовини, такі як фосфат, цитрат та інші органічні кислоти; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту та метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламоній хлорид, гексаметоній хлорид, бензалконій хлорид, бензетоній хлорид, фенол, бутиловий або бензиловий спирт, алкілларабени, такі як метил- або пропілпарабен, катехол, резорцин, циклогексанол, З-пентанол і м-крезол); низькомолекулярні (менше 10 залишків) поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші карбогідрати, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатуючі агенти, такі як ЕДТК; цукри, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; солеутворюючі протиїони, такі як натрій; комплекси металів (наприклад, 2п-білкові комплекси); та/або неіонні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (ПЕГ). Типові фармацевтично прийнятні носії в даному винаході додатково включають дисперсійні агенти для лікарських засобів, що вводяться інстерстиціально, такі як розчинні нейтрально-активні гіалуронідазні глікопротеїни (РНАГГП (ЗзНАЗЕОСР)), наприклад, розчинні РН-20 гіалуронідазні глікопротеїни людини, такі як гНиИРН2г2О (НМ ЕМЕХ-, Вахіег

Іп'егпайіопа!, Іпс.). Деякі типові РНАГГП (5НАБЕСР) і способи їх застосування, включаючи

ГНиРН2О, описані в патентних публікаціях США МоМо 2005/0260186 і 2006/0104968. В одному аспекті рРНАГГП (5НАБЕОСР) об'єднують з одним або більшою кількістю додаткових глікозаміногліканів, таких як хондроїтинази.

В деяких випадках фармацевтична композиція, що містить анти-ТІСІї антитіло, представлене в цьому документі, може додатково містити антагоніст зв'язування осі РО-1, такий як антагоніст зв'язування РО-1 антагоніст зв'язування РО-1 1 і антагоніст зв'язування РО-1І 2.

В деяких випадках фармацевтична композиція, що містить анти-ТГІСІї антитіло, представлене в цьому документі, може додатково включати агоніст зв'язування ОХ40, такий як агоністичне антитіло до ОХ40, фрагмент агоніста ОХ40Ї, олігомерний рецептор ОХ40 та імуноадгезин ОХ40.

В деяких випадках фармацевтична композиція, що містить анти-ТГІСІї антитіло, представлене в цьому документі, може додатково містити додатковий терапевтичний агент, такий як хіміотерапевтичний агент або агент, який зменшує або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коінгібуючих рецепторів (наприклад, РО-1, СТІ А-4, І АСЗ, ТІМ3З,

ВТГА, МІ5ТА, В7НА та/або СООб).

В інших варіантах реалізації винаходу фармацевтична композиція, що містить анти- ТІСІТ антитіло, може додатково містити (а) антагоніст зв'язування осі РО-1 і агоніст зв'язування ОХ40; (Б) антагоніст зв'язування РО-1 і додатковий терапевтичний агент (наприклад, хіміотерапевтичний агент); (с) антагоніст зв'язування РО-1 і агент, який зменшує або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коінгібуючих рецепторів (наприклад, РО-1, СТІ А- 4, ГТ АСЗ, ТІМЗ, ВТ А, МІ5ТА, В7НА та/або СООб); (а) агоніст зв'язування ОХ40 і додатковий терапевтичний агент (наприклад, хіміотерапевтичний агент); (е) агоніст зв'язування ОХ40 і агент, який зменшує або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коінгібуючих рецепторів (наприклад, РО-1, СТІ А-4, ГАЗ, ТІМ3, ВТГА, МІБТА, В7Н4 та/або С0ООб); (ї додатковий терапевтичний агент (наприклад, хіміотерапевтичний агент) і агент, який зменшує або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коінгібуючих рецепторів (наприклад,

РО-1, СТІ А-4, І АСЗ, ТІМ3, ВТ А, МІЗТА, В7НА, та/або СО96); або (9) антагоніст зв'язування осі

РО-1, антагоніст зв'язування ОХ40 і агент, який зменшує або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коіїнгібуючих рецепторів (наприклад, РО-1, СТІ А-4, ГАСЗ, ТІМЗ, ВТІА,

МІ5ТА, В7НА та/або СООб). Необов'язково, фармацевтична композиція буде містити один або більшу кількість фармацевтично прийнятних носіїв, допоміжних речовин або розбавлювач.

Типові ліофілізовані композиції антитіл описані в патенті США Мо 6267958. Водні композиції антитіл включають композиції, описані в патенті США Мо 6171586 і УМО 2006/044908, причому останні композиції містять гістидин-ацетатний буфер.

При необхідності, композиція в цьому документі може додатково містити більше одного активного інгредієнта для конкретного показання, яке підлягає лікуванню, переважно такі, які володіють додатковими видами активності, що не здійснюють несприятливого впливу один на одного. Наприклад, може бути бажаним додатково запропонувати додатковий терапевтичний агент (наприклад, хіміотерапевтичний агент, цитотоксичний агент, агент, що пригнічує ріст, та/або антигормональний агент, такий як наведені вище). Такі активні інгредієнти придатним чином присутні в комбінації в кількостях, які є ефективними для досягнення поставленої мети.

Активні інгредієнти можуть бути захоплені в мікрокапсули, одержані, наприклад, методами

Зо коацервації або міжфазної полімеризації, наприклад, гідроксиметилцелюлозні або желатинові мікрокапсули і полі(метилметакрилатні) мікрокапсули, відповідно, в колоїдних системах доставки лікарських засобів (наприклад, ліпосоми, мікросфери альбуміну, мікроемульсії, наночастинки і нанокапсули) або в макроемульсії. Такі методи розкриті у Ветіпдіоп'є

Ріпаптасецііса! бсіепсез 161 єайіоп, Озої, А. Ес. (1980).

Можна виготовити препарати з уповільненим вивільненням. Відповідні приклади препаратів з уповільненим вивільненням включають напівпроникні матриці з твердих гідрофобних полімерів, що містять антитіло, причому матриці знаходяться у формі формованих виробів, наприклад, плівок або мікрокапсул.

Композиції, які повинні застосовуватися для введення іп мімо, зазвичай є стерильними.

Стерильність може бути з легкістю досягнута, наприклад, шляхом фільтрування крізь мембрани для стерильної фільтрації.

МІ. Терапевтичні способи

Будь-яке анти-ТІСІТ антитіло за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01Е) можна застосовувати в терапевтичних способах.

В одному аспекті пропонується анти-ТІСІТ антитіло для застосування як лікарський засіб. В інших аспектах пропонується анти-ТІСІТ антитіло, описане в цьому документі (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.21ЄЕ) для застосування при лікуванні або уповільненні прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу пропонується анти-ТІСІТ антитіло для застосування в способі лікування суб'єкта, який має пов'язане з імунною системою захворювання, що пов'язане з дисфункціональним розладом Т-клітин. В інших варіантах пов'язане з імунною системою захворювання являє собою вірусну інфекцію. У деяких варіантах реалізації винаходу вірусна інфекція є хронічною вірусною інфекцією. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується зниженням чутливості до антигенної стимуляції. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується анергією Т-клітин або зниженою здатністю до секреції цитокінів, проліферації або здійснення цитолітичної активності У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується виснаженням Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу Т-клітини являють собою СО4- і СО8- Т-клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин включає неусунену гостру інфекцію, хронічну інфекцію і пухлинний імунітет.

В іншому аспекті пропонується анти-ТІСІТ антитіло, описане в цьому документі (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01Е) для лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу рак вибраний з групи, що включає недрібноклітинний рак легені, дрібноклітинний рак легені, рак нирки, колоректальний рак, рак яєчника, рак молочної залози, рак підшлункової залози, шлункову карциному, рак сечового міхура, рак стравоходу, мезотеліому, меланому, рак голови та шиї, рак щитоподібної залози, саркому, рак передміхурової залози, гліобластому, рак шийки матки, карциному тимусу, лейкоз, лімфому, мієлому (наприклад, множинну мієлому (ММ)), грибоподібні мікози, рак клітин Меркель і злоякісні новоутворення кровотворної системи. Таким чином, можна лікувати різні види раку, або їх прогресування може бути відсунуто в часі. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума може бути присутній рак молочної залози (наприклад, потрійний негативний рак молочної залози). В інших варіантах реалізації винаходу у індивідуума може бути присутній рак підшлункової залози (наприклад, аденокарцинома підшлункової залози (АКПЖ (РОАС)). У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній недрібноклітинний рак легені.

Недрібноклітинний рак легені може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній дрібноклітинний рак легені. Дрібноклітинний рак легені може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак нирки. Рак нирки може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній колоректальний рак. Колоректальний рак може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак яєчника. Рак яєчника може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак молочної залози. Рак молочної залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак підшлункової залози. Рак підшлункової залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня карцинома шлунку. Карцинома шлунка може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак сечового міхура. Рак сечового міхура

Зо може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак стравоходу. Рак стравоходу може бути ранньої стадії або пізньої стадії У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня мезотеліома.

Мезотеліома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня меланома. Меланома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак голови та шиї. Рак голови та шиї може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак щитоподібної залози. Рак щитоподібної залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня саркома.

Саркома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак передміхурової залози. Рак передміхурової залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня гліобластома. Гліобластома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак шийки матки. Рак шийки матки може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня карцинома тимусу. Карцинома тимусу може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній лейкоз. Лейкоз може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутні лімфоми.

Лімфома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня мієлома (наприклад, ММ). Мієлома (наприклад, ММ) може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутні грибоподібні мікози. Грибоподібні мікози можуть бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак клітин Меркель. Рак клітин Меркель може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутні злоякісні новоутворення кровотворної системи. Злоякісні новоутворення кровотворної системи можуть бути ранньої стадії або пізньої стадії.

В іншому аспекті представлено анти-ТІСІТ антитіло, описане в цьому документі (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01Е) для застосування при підвищенні, підсиленні або стимулюванні імунної відповіді або функції у суб'єкта, що потребує цього. У деяких варіантах реалізації винаходу імунна відповідь або функція підвищується, підсилюється та/або бо стимулюється активуючими ефекторними клітинами (наприклад, Т-клітини, наприклад, СОв'ж та/лабо СОр4- Т-клітини), розширенням (збільшення) популяції ефекторних клітин та/або знищенням клітин-мішеней (наприклад, пухлинних клітин-мішеней) у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу СО4 та/або СОВ8 Т-клітинам у індивідуума властиве збільшене або підсилене праймування, активація, проліферація, вивільнення цитокінів та/або цитолітична активність в порівнянні з рівнем, що передує введенню комбінації. У деяких варіантах реалізації винаходу кількість СО4 та/або СО8 Т-клітин підвищується відносно рівня до введення комбінації. У деяких варіантах кількість активованих СО4 та/або СО8 Т-клітин підвищується відносно рівня до введення комбінації. У деяких варіантах реалізації винаходу активовані СО4 та/або СО8 Т-клітини характеризуються продукуючими у-ІЕМеСО4 та/або СО8 Т-клітинами та/або підвищеною цитолітичною активністю відносно рівня до введення комбінації. У деяких варіантах реалізації винаходу СО4 та/або СО8 Т-клітини демонструють підвищене вивільнення цитокінів, вибраних з групи, що складається із ІЕМ-у, ТМЕ-а та інтерлейкінів. У деяких варіантах реалізації способів за даним винаходом СО4 та/або СО8 Т-клітина являє собою ефекторну Т- клітину пам'яті. У деяких варіантах реалізації винаходу СО4 та/"або СО8 ефекторна Т-клітина пам'яті характеризується продукуючими у-ІЕМ"СО4 та/або СО8-Т-клітинами та/або підсиленою цитолітичною активністю. У деяких варіантах реалізації винаходу СО4 та/або СО8 ефекторна Т- клітина пам'яті характеризується експресією СО44"ое" СОбагі єм, У деяких варіантах реалізації винаходу раку властиві підвищені рівні інфільтрації Т-клітинами.

В будь-якому з вищевказаних аспектів анти-ТІЗІТ антитіло може бути застосоване в комбінації з іншим антагоністом ТІСІТ, антагоністом зв'язування осі РО-1, агоністом зв'язування

ОХ40, агентом, який зменшує або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коіїнгібуючих рецепторів, та/або додатковим терапевтичним агентом, таким як хіміотерапевтичний агент, як детально описано в цьому документі.

В іншому аспекті винаходу пропонується застосування описаного в цьому документі анти-

ТІСІТ антитіла (наприклад, 4.103 або його варіанта, наприклад, 4.103.01Е) у виробництві або приготуванні лікарського засобу. В одному варіанті реалізації винаходу лікарський засіб призначений для лікування або сповільнення прогресування раку. В іншому варіанті реалізації винаходу лікарський засіб призначений для лікування або сповільнення прогресування недрібноклітинного раку легені, дрібноклітинного раку легені, раку нирки, колоректального раку,

Зо раку яєчника, раку молочної залози, раку підшлункової залози, карциноми шлунка, раку сечового міхура, раку стравоходу, мезотеліоми, меланоми, раку голови та шиї, раку щитоподібної залози, саркоми, раку передміхурової залози, гліобластоми, раку шийки матки, раку тимусу, лейкозу, лімфоми, мієломи, грибоподібних мікозів, раку клітин Меркель і злоякісних утворень кровотворної системи. Таким чином, можна лікувати різні види раку, або їх прогресування може бути відсунуто в часі. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума може бути присутній рак молочної залози (наприклад, потрійний негативний рак молочної залози). В інших варіантах реалізації винаходу у індивідуума може бути присутній рак підшлункової залози (наприклад, аденокарцинома підшлункової залози, АКПЖ (РОСАС)). У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній недрібноклітинний рак легені.

Недрібноклітинний рак легені може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній дрібноклітинний рак легені. Дрібноклітинний рак легені може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак нирки. Рак нирки може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній колоректальний рак. Колоректальний рак може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак яєчника. Рак яєчника може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак молочної залози. Рак молочної залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак підшлункової залози. Рак підшлункової залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня карцинома шлунку. Карцинома шлунка може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак сечового міхура. Рак сечового міхура може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак стравоходу. Рак стравоходу може бути ранньої стадії або пізньої стадії У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня мезотеліома.

Мезотеліома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня меланома. Меланома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак голови та шиї. Рак голови та шиї може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у бо індивідуума присутній рак щитоподібної залози. Рак щитоподібної залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня саркома.

Саркома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак передміхурової залози. Рак передміхурової залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня гліобластома. Гліобластома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак шийки матки. Рак шийки матки може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня карцинома тимусу. Карцинома тимусу може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній лейкоз. Лейкоз може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутні лімфоми.

Лімфома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня мієлома (наприклад, ММ). Мієлома (наприклад, ММ) може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутні грибоподібні мікози. Грибоподібні мікози можуть бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак клітин Меркель. Рак клітин Меркель може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутні злоякісні новоутворення кровотворної системи. Злоякісні новоутворення кровотворної системи можуть бути ранньої стадії або пізньої стадії.

В іншому аспекті винахід передбачає застосування описаного в цьому документі анти-ТІСІТ антитіла (наприклад, 4.103 або його варіанта, наприклад, 4.103.СМ1Е), у виробництві лікарського засобу для лікування або сповільнення прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання. У деяких варіантах реалізації винаходу пов'язане з імунною системою захворювання пов'язане з дисфункціональним розладом Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу пов'язане з імунною системою захворювання являє собою вірусну інфекцію. У деяких варіантах реалізації винаходу вірусна інфекція є хронічною вірусною інфекцією. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується зниженням чутливості до антигенної стимуляції. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується анергією Т-клітин або зниженою здатністю секретувати цитокіни, проліферувати або здійснювати цитолітичну активність. У деяких варіантах реалізації

Зо винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується виснаженням Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу Т-клітини є СО4- і Ов Т-клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин включає неусунену гостру інфекцію, хронічну інфекцію і пухлинний імунітет.

В іншому аспекті, описаному в цьому документі, пропонується анти-ТІСІї антитіло (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01Е) у виробництві лікарського засобу для застосування при підвищенні, підсиленні або стимуляції імунної відповіді або функції у суб'єкта, що потребує цього. У деяких варіантах реалізації винаходу імунну відповідь або функцію підвищують, підсилюють та/або стимулюють шляхом активації ефекторних клітин (наприклад, Т-клітин, наприклад СОвж- та/або СО4- Т-клітин), розширення (збільшення) популяції ефекторних клітин та/або знищення клітин-мішеней (наприклад, пухлинних клітин- мішеней) у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу СО4 та/або СО8 Т-клітинам індивідуума властиве збільшене або підсилене праймування, активація, проліферація, вивільнення цитокінів та/або цитолітична активність в порівнянні з рівнем до введення комбінації. У деяких варіантах реалізації винаходу кількість СО4 та/або СО8 Т-клітин збільшується відносно рівня до введення комбінації. У деяких варіантах кількість активованих

СО4 та/або СО8 Т-клітин збільшується відносно рівня до введення комбінації. У деяких варіантах реалізації винаходу активовані СО4 та/або СО8 Т-клітини характеризуються продукуючими у-ІЕМ"С04 та/або СО8 Т-клітинами та/або підвищеною цитолітичною активністю відносно рівня до введення комбінації. У деяких варіантах реалізації винаходу СО4 та/або СОВ8

Т-клітини демонструють підвищене виділення цитокінів, вибраних з групи, що складається із

ІЕМ-у, ТМЕ-а та інтерлейкінів. У деяких варіантах реалізації способів за даним винаходом СО4 та/або СО8 Т-клітина являє собою ефекторну Т-клітину пам'яті. У деяких варіантах реалізації винаходу СО4 та/або СО8 ефекторна Т-клітина пам'яті характеризується продукуючими у-

ІРЕМАСО4 та/або СО8 Т-клітинами та/або підсиленою цитолітичною активністю. У деяких варіантах реалізації винаходу СО4 та/або СО8 ефекторна Т-клітина пам'яті характеризується експресією СО44гой СОбагі ом, У деяких варіантах реалізації винаходу раку властиві підвищені рівні інфільтрації Т-клітинами.

В будь-якому з вищевказаних аспектів анти-ГІСіІї антитіло може бути застосоване в комбінації з іншим антагоністом ТІСІТ, антагоністом зв'язування осі РО-1, агоністом зв'язування 60 ОХ40, агентом, який зменшує або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коіїнгібуючих рецепторів, та/або додатковим терапевтичним агентом, таким як хіміотерапевтичний агент, як детально описано в цьому документі.

В іншому аспекті винахід відноситься до способу лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта, причому спосіб включає введення суб'єкту ефективної кількості анти- ТІДІТ антитіла, описаного в цьому документі (наприклад, 4.103 або його варіанта, наприклад, 4.103.О1Е), з лікуванням або сповільненням в такий спосіб прогресування раку у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу рак вибраний з групи, що включає недрібноклітинний рак легені, дрібноклітинний рак легені, рак нирки, колоректальний рак, рак яєчника, рак молочної залози, рак підшлункової залози, шлункову карциному, рак сечового міхура, рак стравоходу, мезотеліому, меланому, рак голови та шиї, рак щитоподібної залози, саркому, рак передміхурової залози, гліобластому, рак шийки матки, карциному тимусу, лейкоз, лімфому, мієлому (наприклад, множинну мієлому (ММ)), грибоподібні мікози, рак клітин Меркель і злоякісні новоутворення кровотворної системи. Таким чином, можна лікувати різні види раку, або їх прогресування може бути відсунуто в часі. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума може бути присутній рак молочної залози (наприклад, потрійний негативний рак молочної залози). В інших варіантах реалізації винаходу у індивідуума може бути присутній рак підшлункової залози (наприклад, аденокарцинома підшлункової залози (АКПЖ (РОАС)). У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній недрібноклітинний рак легені.

Недрібноклітинний рак легені може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній дрібноклітинний рак легені. Дрібноклітинний рак легені може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак нирки. Рак нирки може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній колоректальний рак. Колоректальний рак може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак яєчника. Рак яєчника може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак молочної залози. Рак молочної залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак підшлункової залози. Рак підшлункової залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня

Зо карцинома шлунку. Карцинома шлунка може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак сечового міхура. Рак сечового міхура може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак стравоходу. Рак стравоходу може бути ранньої стадії або пізньої стадії У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня мезотеліома.

Мезотеліома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня меланома. Меланома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак голови та шиї. Рак голови та шиї може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак щитоподібної залози. Рак щитоподібної залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня саркома.

Саркома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак передміхурової залози. Рак передміхурової залози може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня гліобластома. Гліобластома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак шийки матки. Рак шийки матки може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня карцинома тимусу. Карцинома тимусу може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній лейкоз. Лейкоз може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутні лімфоми.

Лімфома може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутня мієлома (наприклад, ММ). Мієлома (наприклад, ММ) може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутні грибоподібні мікози. Грибоподібні мікози можуть бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутній рак клітин Меркель. Рак клітин Меркель може бути ранньої стадії або пізньої стадії. У деяких варіантах реалізації винаходу у індивідуума присутні злоякісні новоутворення кровотворної системи. Злоякісні новоутворення кровотворної системи можуть бути ранньої стадії або пізньої стадії.

В іншому аспекті винаходу пропонується спосіб лікування або сповільнення прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта, причому спосіб включає введення бо суб'єкту ефективної кількості анти-ТІСІТ антитіла, описаного в цьому документі (наприклад,

4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.СМ1Е), з лікуванням або сповільненням в такий спосіб прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу пов'язане з імунною системою захворювання пов'язане з дисфункціональним розладом Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу пов'язане з імунною системою захворювання являє собою вірусну інфекцію. У деяких варіантах реалізації винаходу вірусна інфекція є хронічною вірусною інфекцією. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується зниженням чутливості до антигенної стимуляції. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т- клітин характеризується анергією Т-клітин або зниженою здатністю секретувати цитокіни, проліферувати або здійснювати цитолітичну активність. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин характеризується виснаженням Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу Т-клітини є СО4- і СО8вж- Т-клітинами. У деяких варіантах реалізації винаходу дисфункціональний розлад Т-клітин включає неусунену гостру інфекцію, хронічну інфекцію і пухлинний імунітет.

В іншому аспекті винаходу пропонується спосіб підвищення, підсилення або стимуляції імунної відповіді або функції у суб'єкта, що включає введення суб'єкту ефективної кількості анти-ТІСІТ антитіла, описаного в цьому документі (наприклад, 4.103 або його варіанта, наприклад, 4.103.01Е), тим самим підвищуючи, підсилюючи або стимулюючи імунну відповідь або функцію у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації винаходу імунну відповідь або функцію підвищують, підсилюють та/або стимулюють шляхом активації ефекторних клітин (наприклад, Т- клітин, наприклад СО8-- та/або СО4-- Т-клітин), розширення (збільшення) популяції ефекторних клітин та/або знищення клітин-мішеней (наприклад, пухлинних клітин-мішеней) у суб'єкта. У деяких варіантах реалізації способів за даним винаходом СО4 та/або СО8 Т-клітинам індивідуума властиво збільшене або підсилене праймування, активація, проліферація, вивільнення цитокінів та/або цитолітична активність в порівнянні з рівнем до введення комбінації. У деяких варіантах реалізації способів за даним винаходом кількість СА та/або СЮО8

Т-клітин збільшується в порівнянні з рівнем до введення комбінації. У деяких варіантах реалізації способів за даним винаходом кількість активованих СО4 та/або СО8 Т-клітин збільшується відносно рівня до введення комбінації. У деяких варіантах реалізації способів за

Зо даним винаходом активовані СО4 та/або СО8 Т-клітини характеризуються продукуючими у-

ІЕМА-СО4 та/або СО8 Т-клітинами та/або підвищеною цитолітичною активністю в порівнянні з рівнем до введення комбінації. У деяких варіантах реалізації способів за даним винаходом СО4 та/або СО8 Т-клітини демонструють підвищене виділення цитокінів, вибраних з групи, що складається із ІЕМ-у, ТМЕ-а та інтерлейкінів. У деяких варіантах реалізації способів за даним винаходом СО4 та/або СО8 Т-клітина являє собою ефекторну Т-клітину пам'яті. У деяких варіантах реалізації способів за даним винаходом СО4 та/або СО8 ефекторна Т-клітина пам'яті характеризується продукуючими Уу-ІЕМеСО4 та/або СО8 Т-клітинами та/або підсиленою цитолітичною активністю. У деяких варіантах реалізації способів за даним винаходом СО4 та/"або СО8 ефекторна Т-клітина пам'яті характеризується експресією СО44"е СбОбагом, У деяких варіантах реалізації винаходу раку властиві підвищені рівні інфільтрації Т-клітинами.

В будь-якому з вищевказаних аспектів анти-ТІСІТ антитіло може бути введене в комбінації з іншим антагоністом ТІСІТ, антагоністом зв'язування РО-1, агоністом зв'язування ОХ40, агентом, який зменшує або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коінгібуючих рецепторів та/або додатковим терапевтичним агентом, таким як хіміотерапевтичний агент, як детально описано в даному документі.

В деяких варіантах реалізації винаходу інший (другий) антагоніст ТІСІї може бути антагоністом експресії та/або активності ТІСІТ, таким як низькомолекулярний інгібітор, інгібіторне антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, аптамери, інгібіторна нуклеїнова кислота та інгібіторний поліпептид. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст ТІСІТ являє собою інше анти-ТІСІї антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент (наприклад, зв'язується з іншим епітопом на ТІСІТ, який не перекривається або частково перекривається з епітопом, що розпізнається застосовуваним анти-ТІСІї антитілом за винаходом). У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст ТІСІТ являє собою інгібіторну нуклеїнову кислоту, вибрану з антисмислового полінуклеотиду, інтерферуючої РНК, каталітичної РНК і гібриди РНК-

ДНК.

В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст ТІСІТ може бути агентом, який модулює експресію та/або активність СО226. Наприклад, агент, який модулює експресію та/або активність СО22б6, що здатний збільшувати та/(або стимулювати експресію та/або активність с0226; збільшувати та/або стимулювати взаємодію СО226 з ПВР (РУК), РУКІ2 та/або РУКІ 3; і бо збільшувати та/або стимулювати внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням СО226 з ПВР (РМК), РМНКІ2 та/або РММКІЗ3. Як використовується в цьому документі, агент, що здатний збільшувати та/(або стимулювати експресію та/або активність

СО0226, включає, але не обмежуючись цим, агенти, які збільшують та/або стимулюють експресію та/або активність СО226. Як використовується в цьому документі, агент, що здатний збільшувати та/або стимулювати взаємодію СО226 з ПВР (РУК), РУНІ 2 та/або РМУКІ З, включає, але не обмежуючись цим, агенти, які збільшують та/або стимулюють взаємодію СО226 з ПВР (РМК), РМНКІ2 та/"або РМКІЗ.Як використовується в цьому документі, агент, що здатний збільшувати та/або стимулювати внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням СО226 з ПВР (РМК), РУНКІ 2 та/або РУМКІ З, включає, але не обмежуючись цим, агенти, які збільшують та/лабо стимулюють внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням СО226 з ПВР (РУК), РМКІ 2 та/або РМУКІ 3.

В деяких варіантах реалізації винаходу агент, який модулює експресію та/або активність

СО226, вибраний з агента, який інгібує та/"або блокує взаємодію СО226 з ТІСІТ, антагоніста експресії та/або активності ПВР (РУК), агента, який інгібує та/або блокує взаємодію ТІСІТ з ПВР (РУК), агента, який інгібує та/або блокує взаємодію ТІСІТ з РМКІ 2, агента, який інгібує та/або блокує взаємодію ТІСІТ з РМКІЗ, агента, який інгібує та/(або блокує внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням ТІСІТ з ПВР (РУК), агента, який інгібує та/або блокує внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням ТІСІТ з

РМКІ2, агента, який інгібує та/або блокує внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням ТІСІТ з РМУКІ 3, та їх комбінацій.

В деяких варіантах реалізації винаходу агент, який інгібує та/або блокує взаємодію СО226 з

ТІСІТ, являє собою низькомолекулярний інгібітор, інгібіторне антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, аптамери, інгібіторну нуклеїнову кислоту та інгібіторний поліпептид. У деяких варіантах реалізації винаходу агент, який інгібує та/або блокує взаємодію

СО226 з ТІСІТ, являє собою анти-ТІСЇ!ї антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент (наприклад, зв'язується з іншим епітопом на ТІСІТ, що не перекривається або тільки частково перекривається з епітопом, який розпізнається застосовуваним анти-ТІСІїТ антитілом за винаходом). У деяких варіантах реалізації винаходу агент, який інгібує та/або блокує взаємодію

СО226 з ТІСІТ, являє собою інгібіторну нуклеїнову кислоту, вибрану з антисмислового

Зо полінуклеотиду, інтерферуючої РНК, каталітичної РНК і гібриди РНК-ДНК.

В деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст експресії та/або активності ПВР (РМК) являє собою низькомолекулярний інгібітор, інгібіторне антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, аптамери, інгібіторну нуклеїнову кислоту та інгібіторний поліпептид. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст експресії та/"або активності ПВР (РМК) вибраний з низькомолекулярного інгібітору, інгібіторного антитіла або його антигензв'язуючого фрагмента, аптамеру, інгібіторної нуклеїнової кислоти та інгібіторного поліпептиду.

В деяких варіантах реалізації винаходу агент, який інгібує та/або блокує взаємодію ТІСІТ з

ПВР (РМК), являє собою низькомолекулярний інгібітор, інгібіторне антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, аптамер, інгібіторну нуклеїнову кислоту та інгібіторний поліпептид.

У деяких варіантах реалізації винаходу агент, який інгібує та/або блокує взаємодію ТІСІТ з ПВР (РМК), вибраний з низькомолекулярного інгібітору, інгібіторного антитіла або його антигензв'язуючого фрагмента, аптамеру, інгібіторної нуклеїнової кислоти та інгібіторного поліпептиду. У деяких варіантах реалізації винаходу агент, який інгібує та/або блокує взаємодію

ТІСІТ з РМНАІ2, вибраний з низькомолекулярного інгібітору, інгібіторного антитіла або його антигензв'язуючого фрагмента, аптамеру, інгібіторної нуклеїнової кислоти та інгібіторного поліпептиду. У деяких варіантах реалізації винаходу агент, який інгібує та/або блокує взаємодію

ТІСІТ з РМАЇЗ, вибраний з низькомолекулярного інгібітору, інгібіторного антитіла або його антигензв'язуючого фрагмента, аптамеру, інгібіторної нуклеїнової кислоти та інгібіторного поліпептиду.

В деяких варіантах реалізації винаходу агент, який інгібує та/або блокує внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням ТІСІї з ПВР (РМК), являє собою низькомолекулярний інгібітор, інгібіторне антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, аптамер, інгібіторну нуклеїнову кислоту та інгібіторний поліпептид. У деяких варіантах реалізації винаходу агент, який інгібує та/або блокує внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням ТІСІТ з ПВР (РУК), вибраний з низькомолекулярного інгібітору, інгібіторного антитіла або його антигензв'язуючого фрагмента, аптамеру, інгібіторної нуклеїнової кислоти та інгібіторного поліпептиду. У деяких варіантах реалізації винаходу агент, який інгібує та/"або блокує внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням ТІСІТ з РМКІ2, вибраний з низькомолекулярного інгібітору, інгібіторного антитіла бо або його антигензв'язуючого фрагмента, аптамеру, інгібіторної нуклеїнової кислоти та інгібіторного поліпептиду. У деяких варіантах реалізації винаходу агент, який інгібує та/або блокує внутрішньоклітинне проведення сигналу, опосередковане зв'язуванням ТІСІТ з РМАІ З, вибраний з низькомолекулярного інгібітору, інгібіторного антитіла або його антигензв'язуючого фрагмента, аптамеру, інгібіторної нуклеїнової кислоти та інгібіторного поліпептиду.

Інші антагоністи ТІСІТ, які можуть бути застосовані в комбінації з антитілами анти-ТІСІТ за винаходом, включають анти-ТІСІТ антитіла і композиції, що містять такі антитіла, описані у УМО 2009/126688, яка включена до цього документу шляхом в повному обсязі.

В деяких випадках запропоновані в цьому документі способи включають введення ефективної кількості антагоніста зв'язування осі РО-1 до, після або одночасно з анти-ТІСІТ антитілом за винаходом (і, необов'язково, одним або декількома додатковими агентами, такими як другий, інший антагоніст ТІСІТ, агоніст зв'язування ОХ40, хіміотерапевтичний агент і т.д.).

Антагоніст зв'язування осі РО-1 може бути вибраний з групи, що складається із антагоніста зв'язування РО-1, антагоніста зв'язування РО-1 1 і антагоніста зв'язування РО-1 2.

У деяких варіантах реалізації вищевказаного аспекту винаходу антагоніст зв'язування РО-1 є антагоністом РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 з його партнерами-лігандами по зв'язуванню. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 з РО-1І1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 з РО-1І2. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 з РО-11 і РО- 12. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 являє собою антитіло. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 вибраний з групи, що складається із МОХ1106 (ніволумаб), МК-3475 (пембролізумаб), СТ-011 (підилізумаб), МЕБІ- 0680 (АМР-514), РОКОО1, КЕСМ2810 і ВОВ-108.

В інших варіантах реалізації вищевказаного аспекту винаходу антагоніст зв'язування осі РО- 1 є антагоністом зв'язування РО-Ї1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-11 інгібує зв'язування РО-Ї1 з РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-І1 інгібує зв'язування РО-І 1-87-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1| 1 інгібує зв'язування РО-11 як з РО-1, так і з В7-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-Ї1 являє собою антитіло. У деяких

Зо варіантах реалізації винаходу антитіло вибрано з групи, що складається із: МРОЇ 3280А (атезолізумаб), УМ/243.55.570, МОХ-1105, МЕ0І4736 (дурвалумаб) і М5В0010718С (авелумаб).

В інших варіантах реалізації вищевказаного аспекту винаходу антагоніст зв'язування РО-1 є антагоністом зв'язування РО-12. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування

РО-І2 являє собою антитіло. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-

І2 є імуноадгезином.

Як загальне припущення, терапевтично ефективна кількість антагоніста зв'язування осі РО-1 (наприклад, антитіла проти РО-І 1) може бути введена людині в діапазоні від близько 0,01 до близько 50 мг/кг маси тіла пацієнта в один або більшу кількість прийомів. У деяких варіантах реалізації винаходу, наприклад, антагоніст (наприклад, анти-РО-11 антитіло) вводять в дозі від близько 0,01 до близько 45 мг/кг, від близько 0,01 до близько 40 мг/кг, від близько 0,01 до близько 35 мг/кг, від близько 0,01 до близько 30 мг/кг, від близько 0,01 до близько 25 мг/кг, від близько 0,01 до близько 20 мг/кг, від близько 0,01 до близько 15 мг/кг, від близько 0,01 до близько 10 мг/кг, від близько 0,01 до близько 5 мг/кг або близько від 0,01 до близько 1 мг/кг, наприклад, щоденно. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст (наприклад, анти-РО-Ї 1 антитіло) вводять у концентрації 15 мг/кг. Однак придатними можуть бути і інші схеми введення.

В одному варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування осі РО-1 (наприклад, антитіло проти РО-І1), вводять людині в дозі близько 100 мг, близько 200 мг, близько 300 мг, близько 400 мг, близько 500 мг, близько 600 мг, близько 700 мг, близько 800 мг, близько 900 мг, близько 1000 мг, близько 1100 мг, близько 1200 мг, близько 1300 мг, близько 1400 мг або близько 1500 мг. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування осі РО-1 (наприклад, антитіло проти РО-1І1), вводять в дозі від близько 800 до близько 850 мг кожні два тижні. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування РО-1 (наприклад, антитіло проти РО-І1 1) вводять в дозі близько 840 мг кожні два тижні. Дозу можна вводити за один або більшу кількість прийомів (наприклад, 2 або З дози), наприклад, у вигляді інфузій. Доза антитіла, що вводиться в комбінованому лікуванні, може бути знижена в порівнянні з монотерапією. У деяких варіантах реалізації винаходу, наприклад, спосіб лікування або сповільнення прогресування локально прогресувавшого або метастатичного раку молочної залози у індивідуума включає схему введення, що включає цикли лікування, в ході яких індивідууму вводять в дні 1 та 15 кожного циклу антагоніст зв'язування осі РО-1 людини (наприклад, анти-РО-11 антитіло) в дозі близько

840 мг, причому кожен цикл складає 28 днів (тобто, кожен цикл повторюється кожні 28 днів).

Прогрес такої терапії з легкістю контролюється звичайними методами.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоніст зв'язування ОХ40 включає, наприклад, агоністичне антитіло до ОХ40 (наприклад, антитіло проти агоніста ОХ40 людини), фрагмент агоніста ОХ40Ї,, олігомерний рецептор ОХ40 та імуноадгезин ОХ40.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 виснажує клітини, які експресують ОХ40 людини (наприклад, СО4ж ефекторні Т-клітини, СО8яж Т-клітини та/або клітини Тгед), наприклад, шляхом АЗКЦ (АБСС) та/або фагоцитозу. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 зв'язується з ОХ40 людини з афінністю, що менш ніж або дорівнює близько 1 нМ (наприклад, менш ніж або дорівнює близько 0,5 нМ, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 0,45 нМ, наприклад, менш ніж, ніж або дорівнює близько 0,4 НМ, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 0,3 НМ). У деяких варіантах реалізації винаходу афінність зв'язування агоністичного антитіла до ОХ40 визначають із застосуванням радіоімунологічного аналізу.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 зв'язується з ОХ40 людини і ОХ40 яванського макака. В інших варіантах реалізації винаходу зв'язування з ОХ40 людини і ОХ40 яванського макака визначають із застосуванням аналізу СКАФ (ЕГАС5). У деяких варіантах реалізації винаходу ЕС5О для зв'язування з ОХ40 людини становить менше ніж або дорівнює близько 1 мкг/мл (наприклад, менш ніж або дорівнює близько 0,7 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 0,5 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 0,4 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 0,3 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 0,2 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 0,1 мкг/мл). У деяких варіантах реалізації винаходу ЕС5О для зв'язування з ОХ40 яванця становить менш ніж або дорівнює З мкг/мл (наприклад, менш ніж або дорівнює близько 2 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 1,7 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 1,5 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 1,4 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 1,3 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 1,2 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 1,1 мкг/мл, наприклад, менш ніж або дорівнює близько 1,0 мкг/мл).

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 збільшує

Зо проліферацію СО4- Т-клітин та/або збільшує продукування цитокінів за допомогою СО4 ефекторних Т-клітин в порівнянні з проліферацією та/або продукуванням цитокінів до обробки агоністичним антитілом до ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу цитокін являє собою

ІЕМ-у.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 збільшує проліферацію Т-клітин пам'яті талабо підвищує продукування цитокінів клітиною пам'яті. У деяких варіантах реалізації винаходу цитокін являє собою ІЕМ-у.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 інгібує пригнічення Тгед ефекторних функції Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна функція Т- клітин є проліферацію ефекторних Т-клітин та/або продукуванням цитокінів. У деяких варіантах реалізації винаходу ефекторна Т-клітина являє собою ефекторну СО4-- Т-клітину.

У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 підсилює передачу сигналу ОХ40 в клітині-мішені, яка експресує ОХ40. В деяких варіантах реалізації винаходу передачу сигналу ОХ40 виявляють шляхом моніторингу передачі сигналу МЕКВ нижче в сигнальному шляху.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 залишається стабільним після обробки при 40 "С протягом від одного до чотирьох тижнів, наприклад, один тиждень, два тижні, три тижні або чотири тижні. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 залишається стабільним після обробки при 40 "С протягом двох тижнів.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить варіант поліпептиду ЇДС1 Ес, що містить мутацію, яка усуває зв'язування з ефекторними клітинами людини, і володіє зниженою активністю відносно агоністичного антитіла до ОХ40, яке містить частину Ес ІдО1 з нативною послідовністю. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить варіант Ес, що містить мутацію САМА.

У деяких варіантах реалізації винаходу поперечне зшивання антитіл потрібне для виконання функції антагоністичного антитіла проти ОХ40 людини.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить (а) домен МН, який містить (ї) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮ МО: 278, 279 або 280, (ії) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 281, 282, 283, 284, 285 або 286 60 та (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5ЕО ІЮО МО: 287, 288 або 289;

і (Б) домен МІ, який містить (ії) НМК-1.1, що містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІЮ МО: 290, (її) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 291 і (ії) НМАК-І3, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298 або 299. Наприклад, у деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІО МО: 278; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ МО: 281; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 287; (8) НМВА-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 290; (е) НМЕК-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО: 291; ї () НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО: 292. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність 52Е0 ІЮО МО: 278; (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зБЕО ІЮ МО: 281; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 287; (4) НМВ-І1, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 290; (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність «БО ІЮ МО: 291; і (3 НМА-1І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІО МО: 297. У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить (а) НМЕК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІО МО: 278; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ МО: 281; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 287; (84) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 290; (е) НМК-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО: 291; ї () НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО: 298.

У інших варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить послідовність

МН, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 9095 по відношенню до амінокислотної послідовності будь-якої із зЗЕО ІЮ МО: 300-325. Наприклад, агоністичне антитіло

ОХ40 містить послідовність УН, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 по відношенню до амінокислотної послідовності «ЕС ІЮ МО: 300 (наприклад, в якій від 1 до 10 амінокислот були замінені, вставлені та/або видалені із ФЕО ІЮ МО: 300). Таким чином, у деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить УН, що містить одну, дві або три ГВД (НУК), вибрані з: (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 278, (5) НМВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 281 ї (с) НМК-НЗ, що

Ко) містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 287.

У інших варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить послідовність

МІ, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 по відношенню до амінокислотної послідовності будь-якої із БЗЕО ІЮ МО: 326-351. Наприклад, агоністичне антитіло ОХ40 містить

МІ, яка володіє ідентичністю послідовності щонайменше 90 95 по відношенню до амінокислотної послідовності 5ЕО ІЮ МО: 326 (наприклад, в якій від 1 до 10 амінокислот були замінені, вставлені та/або видалені із ЗЕО ІЮО МО: 326). Таким чином, у деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить МІ, що містить одну, дві або три ГВД (НУК), вибрані з (а) НМК-1І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 290; (Б) НМА-І2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮО МО: 291; ї (с) НМАК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 292.

У деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить (а) послідовність МН 5ЕО ІЮ МО: 300; (Б) послідовність МІ ЗЕО ІЮО МО: 326; або (с) послідовність

МН, як в да), і послідовність МІ, як у (Б).

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить (а) послідовність МН 5ЕО ІЮ МО: 319; (Б) послідовність МІ ЗЕО ІЮО МО: 345; або (с) послідовність

МН, як в да), і послідовність МІ, як у (Б).

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 містить (а) послідовність МН 5ЕО ІЮ МО: 320; (Б) послідовність МІ ЗЕО ІЮО МО: 346; або (с) послідовність

МН, як в да), і послідовність МІ, як у (Б).

Крім того, конкретно включено агоністичне антитіло до ОХ40, таке як антитіло, що поділяє такі ж або істотною мірою такі ж послідовності ГВД (НУК) та/або послідовності МН і Мі. антитіл до ОХ40, розкритих у патенті США 7550140 та Міжнародних публікаціях МоМо УМО 2014/148895 і

УМО 2013/038191, які включені до цього документу шляхом посилання в повному обсязі.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 являє собою 1106 ВО (продукт Рпаптіпдеп Мо 340420). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість послідовностей гіперваріабельної ділянки (ГВД (НМЕК)) антитіла І 106 (продукт ВО Рпаптіпдеп Мо 340420). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга та/або послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга антитіла 106 (продукт ВО Рпагтіпдеп Мо (510) 340420).

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 являє собою АСТ35 (Запіа Сги7 Віоїесппоіоду, номер за каталогом 20073). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість послідовностей гіперваріабельної ділянки (ГВД (НМК)) антитіла АСТЗ5 (Запіа Сги7 ВіоїесппоІоду, номер за каталогом 20073). У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга та/або послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга антитіла АСТЗ5 (Запіа Сги? ВіоїесппоІоду, номер за каталогом 20073).

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 являє собою МЕОІб469. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість послідовностей гіперваріабельної ділянки (ГВД (НУК)) антитіла МЕ0Іб6Є469. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга та/або послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга антитіла МЕОІбЄ469.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 являє собою МЕОІО562. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість послідовностей гіперваріабельної ділянки (ГВД (НУК)) антитіла МЕ0ІО562. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга та/або послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга антитіла МЕРБІО562.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністичне антитіло ОХ40 являє собою агоністичне антитіло, яке зв'язується з тим же епітопом, що і будь-який із вказаних вище агоністів ОХ40.

В кожному з вищенаведених варіантів реалізації винаходу агоністичне антитіло до ОХ40 може являти собою повнорозмірне антитіло (наприклад, антитіло Їдо1) або фрагмент антитіла.

Агоністи ОХ40, придатні для описаних в цьому документі способів, жодним чином не обмежуються антитілами. Агоністи ОХ40, які не є антитілами, включені і добре відомі в даній галузі техніки.

Як описано вище, ОХ40І (також відомий як СО134І) служить як ліганд для ОХ40. Таким чином, агоністи, які представляють частину або всі з ОХ40І,, можуть служити агоністами ОХ40.

У деяких варіантах реалізації винаходу агоніст ОХ40 може містити один або більшу кількість позаклітинних доменів ОХ40. Приклади позаклітинних доменів ОХ40Ї. можуть включати ОХ40- зв'язуючі домени. У деяких варіантах реалізації винаходу агоніст ОХ40 може бути розчинною формою ОХ40Ї, яка містить один або більшу кількість позаклітинних доменів ОХ40Ї, але не містить інших нерозчинних доменів білка, наприклад, трансмембранних доменів. У деяких варіантах реалізації винаходу агоніст ОХ40 являє собою розчинний білок, що містить один або більшу кількість позаклітинних доменів ОХ40Ї, здатних зв'язуватися з ОХ40Ї. У деяких варіантах реалізації винаходу агоніст ОХ40 може бути зв'язаний з іншим білковим доменом, наприклад, для збільшення його ефективності, періоду напіввиведення або інших бажаних характеристик. У деяких варіантах реалізації винаходу агоніст ОХ40 може містити один або більшу кількість позаклітинних доменів ОХ401,, зв'язаних з доменом Ес імуноглобуліну.

У деяких варіантах реалізації винаходу агоніст ОХ40 може бути олігомерною або полімерною молекулою. Наприклад, агоніст ОХ40 може містити один або більшу кількість доменів (наприклад, домен лейцинового зіпера), що дозволяє олігомеризувати білки. У деяких варіантах реалізації винаходу агоніст ОХ40 може містити один або більшу кількість позаклітинних доменів ОХ40їЇ, зв'язаних з одним або більшою кількістю доменів лейцинового зіпера.

У деяких варіантах реалізації винаходу агоністом ОХ40 може бути будь-який з агоністів

ОХ40, описаних у Європейському патенті Мо ЕРОЄ72141 В1.

В деяких варіантах реалізації винаходу агоніст ОХ40 може являти собою тримерний гібридний білок ОХ40Ї. Наприклад, агоніст ОХ40 може містити один або більшу кількість позаклітинних доменів ОХ40Ї, зв'язаних з доменом Ес імуноглобуліну і доменом тримеризації (включаючи, але не обмежуючись цим, домен ізолейцинового зіпера).

В деяких варіантах реалізації винаходу агоністом ОХ40 може бути будь-який з агоністів

ОХ40, описаних у Міжнародній публікації Ме ММО 2006/121810, такий як імуноадгезин ОХ40. У деяких варіантах реалізації винаходу імуноадгезин ОХ40 може являти собою тримерний білок

ОХ40-Ес. У деяких варіантах реалізації винаходу агоніст ОХ40 являє собою МЕОІб6383.

Така комбінована терапія, вказана вище, включає комбіноване введення, для якого анти-

ТІСІТ антитіло і один або більшу кількість агентів (наприклад, антагоніст зв'язування РО-ї, агоніст зв'язування ОХ40, агент, який зменшує або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коінгібуючих рецепторів, та/або додатковий терапевтичний агент) вводять в одні і ті ж самі або різні препарати, і роздільне введення, при якому введення анти-ТІаїІТ антитіла за винаходом може відбуватися до, одночасно та/або після введення одного або 60 більшої кількості агентів (наприклад, антагоніста зв'язування РО-1, агоніста зв'язування ОХ40,

агента, який зменшує або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коінгібуючих рецепторів та/або додаткового терапевтичного агента). В одному варіанті реалізації винаходу введення анти-ТІСІТ антитіла і введення одного або більшої кількості агентів відбувається в межах близько одного місяця або протягом близько одного, двох або трьох тижнів або в межах близько одного, двох, трьох, чотирьох, п'яти або шести днів один від одного. Крім того, анти-

ТІСП антитіла за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01Е) можуть застосовуватися в поєднанні з променевою терапією.

Анти-ТІСІТ антитіло за винаходом (та/або будь-який додатковий терапевтичний засіб) можна вводити будь-яким придатним способом, включаючи парентеральне, внутрішньолегеневе та інтраназальне, і, при бажанні проведення місцевого лікування, внутрішньовогнищеве введення. Парентеральні інфузії включають внутрішньом'язове, внутрішньовенне, внутрішньоартеріальне, внутрішньочеревне або підшкірне введення. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло вводять шляхом підшкірного введення. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-ТІСІТ антитіло, яке вводять підшкірною ін'єкцією, спричиняє менш токсичну відповідь у пацієнта, ніж те ж саме анти-ТІСІї антитіло, яке вводять внутрішньовенною ін'єкцією. Дозування може бути здійснено будь-яким придатним шляхом, наприклад, шляхом ін'єкцій, таких як внутрішньовенні або підшкірні ін'єкції, в залежності від того, чи є введення короткочасним або хронічним. В даному документі розглядаються різні схеми введення, включаючи, але не обмежуючись цим, одноразове або багаторазове введення в різні моменти часу, введення болюсу і пульсуючу інфузію.

Анти-ТІСІТ антитіла за винаходом будуть складатися, дозуватися і вводитися відповідно до належної медичної практики. Фактори для розгляду в цьому контексті включають конкретний розлад, який підлягає лікуванню, конкретного ссавця, який підлягає лікуванню, клінічний стан окремого пацієнта, причину розладу, місце доставки агента, спосіб введення, розклад введення та інші чинники, відомі лікарям. Антитіло не обов'язково має бути, але може бути складено з одним або більшою кількістю агентів, які в цей час застосовуються для запобігання або лікування розладу, що підлягає лікуванню. Ефективна кількість таких інших агентів залежить від кількості антитіла, присутнього в препараті, виду розладу або лікування та інших чинників, розглянутих вище. Вони зазвичай застосовуються в тих же дозах і тими ж способами введення, як описано в цьому документі, або близько від 1 до 99 95 доз, описаних в цьому документі, або в будь-яких дозах і будь-яким способом введення, що емпірично/клінічно визначений як придатний.

Для профілактики або лікування захворювання придатна доза анти-ТІСІТ антитіла за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіанта, наприклад, 4.103.01Е), при застосуванні окремо або в поєднанні з одним або більшою кількістю додаткових агентів (наприклад, антагоніст зв'язування РО-1, агоніст зв'язування ОХ40, агент, який зменшує або пригнічує один або більшу кількість додаткових імунних коїнгібуючих рецепторів та/або додатковий терапевтичний агент), буде залежати від виду захворювання, яке підлягає лікуванню, виду застосовуваного антитіла, тяжкості і перебігу захворювання, незалежно від того, чи вводять антитіло з профілактичною або терапевтичною метою, попереднього лікування, клінічного анамнезу пацієнта і відповіді на антитіло, а також на розсуд лікаря. Антитіло придатним чином вводять пацієнтові одноразово або в ході ряду процедур.

Як загальне припущення, терапевтично ефективна кількість анти-ТІСІї антитіла, що вводиться людині, буде знаходитися в діапазоні від близько 0,01 до близько 100 мг/кг маси тіла пацієнта, за один або більшу кількість прийомів. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло застосовують, наприклад, в дозі від близько 0,01 до близько 45 мг/кг, від близько 0,01 до близько 40 мг/кг, від близько 0,01 до близько 35 мг/кг, від близько 0,01 до близько 30 мг/кг, від близько 0,01 до близько 25 мг/кг, від близько 0,01 до близько 20 мг/кг, від близько 0,01 до близько 15 мг/кг, від близько 0,01 до близько 10 мг/кг, від близько 0,01 до близько 5 мг/кг або від близько 0,01 до близько 1 мг/кг. В одному варіанті реалізації винаходу анти-ТІСІТ антитіло, описане в цьому документі, вводять людині в дозі близько 100 мг, близько 200 мг, близько 300 мг, близько 400 мг, близько 500 мг, близько 600 мг, близько 700 мг, близько 800 мг, близько 900 мг, близько 1000 мг, близько 1100 мг, близько 1200 мг, близько 1300 мг або близько 1400 мг в 1 день 21-денного циклу. Дозу можна вводити в один або більшу кількість прийомів (наприклад, 2 або З прийоми), наприклад, у вигляді інфузії. При повторному введенні протягом декількох днів або довше, в залежності від стану, лікування, як правило, слід продовжувати до тих пір, поки не відбудеться бажане пригнічення симптомів захворювання. Одна типова доза антитіла буде знаходитися в діапазоні від близько 0,05 мг/кг до близько 10 мг/кг. Таким чином, пацієнту може вводитися одна або більша кількість доз близько 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг або 10 мг/кг (або 60 будь-яка їх комбінація). Такі дози можна вводити періодично, наприклад, щотижня або кожні три тижні (наприклад, таким чином, щоб пацієнт одержував від близько двох до близько двадцяти або, наприклад, близько шести доз анти-ТІСІТ антитіла). Можна вводити початкову більш високу навантажуючу дозу, за якою слідують одна або більша кількість нижчих доз. Прогрес такого лікування з легкістю контролюється за допомогою звичайних способів та аналізів.

В деяких варіантах реалізації винаходу способи можуть додатково включати додаткові терапевтичні засоби. Додатковим терапевтичним засобом може бути променева терапія, хірургія, хіміотерапія, генна терапія, ДНК-терапія, вірусна терапія, РНК-терапія, імунотерапія, трансплантація кісткового мозку, нанотерапія, терапія моноклональними антитілами або комбінація вищевказаного. Додатковий терапевтичний засіб може набувати форми ад'ювантної або неоад'ювантної терапії. У деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний засіб являє собою введення низькомолекулярного ферментативного інгібітору або антиметастатичного агента. У деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний засіб являє собою введення обмежуючих побічні ефекти агентів (наприклад, агентів, призначених для зменшення виникнення та/або тяжкості побічних ефектів лікування, таких як засоби проти нудоти і т. д.). У деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний засіб являє собою променеву терапію. У деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний засіб являє собою хірургічне втручання. У деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний засіб являє собою комбінацію променевої терапії та хірургічного втручання. У деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний засіб являє собою гама-опромінення. У деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний засіб може являти собою окреме введення одного або більшої кількості терапевтичних агентів, описаних вище.

ЇХ. Промислові вироби

В іншому аспекті винаходу пропонується виріб або набір, який містить матеріали, придатні для лікування, профілактики та/або діагностики розладів, описаних вище. Промисловий виріб включає ємність та етикетку або листок-вкладиш в упаковку на або в поєднанні із ємністю.

Придатні ємності включають, наприклад, бутлі, флакони, шприци, пакети для в/в розчину і т.д.

Ємності можуть бути виготовлені з численних матеріалів, таких як скло або пластичний матеріал. Ємність містить композицію, що сама по собі або в поєднанні з іншою композицією є

Зо ефективною для лікування, профілактики та/або діагностики стану, і може бути забезпечена стерильним портом доступу (наприклад, ємність може являти собою пакет для внутрішньовенного розчину або флакон з пробкою, яку проколюють голкою для підшкірної ін'єкції). Щонайменше один активний агент в композиції являє собою анти-ТІСІТ антитіло за винаходом. На етикетці або в листку-вкладиші в упаковку вказується, що композиція застосовується для лікування вибраного стану. Крім того, виріб може включати (а) першу ємність з композицією, що міститься в ній, причому композиція містить антитіло за винаходом; і (Б) другу ємність з композицією, що міститься в ній, причому композиція містить додатковий цитотоксичний або інший терапевтичний агент. Промисловий виріб в цьому варіанті реалізації винаходу може додатково містити листок-вкладиш в упаковку, на якому вказано, що композиції можуть застосовуватися для лікування конкретного стану. Як альтернатива або додатково, виріб може додатково включати другу (або третю) ємність, що містить фармацевтично прийнятний буфер, такий як бактеріостатична вода для ін'єкцій (БВІ (ВУУЕЇ)), фосфатно- сольовий буфер, розчин Рингера та розчин глюкози. Крім того, він може включати інші матеріали, бажані з комерційної та користувацької точок зору, включаючи інші буферні речовини, розчинники, фільтри, голки і шприци.

В одному варіанті реалізації винаходу представлений набір, що включає анти-ТІСІТ антитіло за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.СМ1Е), і листок-вкладиш в упаковку, що містить інструкції із застосування анти-ТІСІї антитіла для лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта або для лікування або сповільнення прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта. У відповідному варіанті реалізації винахід відноситься до набору, що включає анти-ТІСІї антитіло за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01Е), антагоніст зв'язування осі РО-1 (наприклад, антагоніст зв'язування РО-1, антагоніст зв'язування РО-ІЇ1 і антагоніст зв'язування РО-ЇІ2) і листок-вкладиш в упаковку, що містить інструкцію із застосування анти-ТІСІї антитіла для лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта або для лікування або сповільнення прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта. У відповідному варіанті реалізації винахід відноситься до набору, що включає анти-ТІСІї антитіло за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01ЕЄ), агоніст зв'язування

ОХ40 (наприклад, агоністичне антитіло до ОХ40, фрагмент агоніста ОХ40Ї, олігомерний бо рецептор ОХ40 та імуноадгезин ОХ40) і листок-вкладиш в упаковку, що містить інструкцію із застосування анти-ТІСІТ антитіла для лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта або для лікування або сповільнення прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта. У відповідному варіанті реалізації винахід відноситься до набору, що включає анти-ТІСІТ антитіло за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.О1Е), антагоніст зв'язування осі РО-1 (наприклад, антагоніст зв'язування РО-1, антагоніст зв'язування РО-І1 і антагоніст зв'язування РО-12), агоніст зв'язування ОХ40 (наприклад, агоністичне антитіло до ОХ40, фрагмент агоніста ОХ40Ї, олігомерний рецептор ОХ40 та імуноадгезин ОХ40), і містить інструкцію із застосування анти-ТІСІТ антитіла для лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта або для лікування або сповільнення прогресування пов'язаного з імунною системою захворювання у суб'єкта У будь-якому з вищенаведених варіантів реалізації суб'єкт може бути, наприклад, людиною. Зокрема, передбачається, що будь-які анти-ТІСІТ антитіла, агоністи зв'язування ОХ40 і антагоністи зв'язування осі РО-1, описані в цьому документі, можуть бути включені до набору.

У ще одному варіанті реалізації винаходу пропонується набір, що включає анти-ТІСІТ антитіло за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.С1Е), і листок- вкладиш в упаковку, що містить інструкції з підвищення, підсилення або стимуляції відповіді або функції імунної системи у суб'єкта. У відповідному варіанті реалізації винаходу пропонується набір, що включає анти-ТІСІТї антитіло за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.С1ЄЕ), антагоніст зв'язування осі РО-1 (наприклад, антагоніст зв'язування РО- 1, антагоніст зв'язування РО-1 1 і антагоніст зв'язування РО-І 2) і листок вкладиш в упаковку, що містить інструкцію щодо підвищення, підсилення або стимуляції імунної відповіді або функції у суб'єкта. У відповідному варіанті реалізації винаходу пропонується набір, що включає анти-

ТІСІТ антитіло за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.СМ1Е), агоніст зв'язування ОХ40 (наприклад, агоністичне антитіло до ОХ40, фрагмент агоніста ОХ40Ї, олігомерний рецептор ОХ40 та імуноадгезин ОХ40) і листок-вкладиш в упаковку, що містить інструкцію із застосування анти-ТІСІТ антитіла для підвищення, підсилення або стимуляції імунної відповіді або функції у суб'єкта. У відповідному варіанті реалізації винаходу пропонується набір, що включає анти-ТІСІТ антитіло за винаходом (наприклад, 4.103 або його варіант, наприклад, 4.103.01ЄЕ), антагоніст зв'язування осі РО-1 (наприклад, антагоніст

Зо зв'язування РО-1, антагоніст зв'язування РО-Ї1 і антагоніст зв'язування РО-12), агоніст зв'язування ОХ40 (наприклад, агоністичне антитіло до ОХ40, фрагмент агоніста ОХ401, олігомерний рецептор ОХ40 та імуноадгезин ОХ40) і листок-вкладиш в упаковку, що містить інструкції із застосування анти-ТІСІї антитіла для підвищення, підсилення або стимуляції імунної відповіді або функції у суб'єкта. У будь-якому з вищенаведених варіантів реалізації винаходу суб'єкт може бути, наприклад, людиною. Зокрема, передбачається, що будь-які анти-

ТІСІТ антитіла, агоністи зв'язування ОХ40 і антагоністи зв'язування осі РО-1, описані в цьому документі, можуть бути включені до набору.

ПРИКЛАДИ

Винахід може бути краще зрозумілий з посиланням на наступні приклади, які наведені з метою ілюстрації і не призначені для обмеження.

Приклад 1. Генерація анти-ТІСІТ антитіл

Щурів Спрег-Доулі або трансгенних щурів ОМТ (Ореп Мопосіопа! Тесппоіоду, Пало-Альто, штат Каліфорнія) спільно імунізують підшкірно початковою дозою 50 мкг білка ТІСІТ людини (Сепеп'іесі, Іпс.) і 50 мкг білка ТІСІТ яванського макака (яванця) (Сепепіесії, Іпс.), змішаних з повним ад'ювантом Фрейнда (ВО, Франклін-Лейкс, штат Нью-Джерсі), а потім 25 мкг білка ТІСІТ людини і 25 мкг білка ТІСІТ яванця, розведених у ФСБ (РВ5) на декількох ділянках підшкірно і внутрішньочеревинно кожні два тижні.

Декілька лімфатичних вузлів витягають через три дні після останньої імунізації. В-клітини вказаних щурів збагачують із застосуванням негативної селекції за допомогою біотинільованих антитіл, націлених на не-В-клітини щура (ВО; еВіозсіеєпсе, Сан-Дієго, штат Каліфорнія) і магнітних гранул, вкритих стрептавідином (Мійепуї, Сан-Дієго, штат Каліфорнія). Здійснюють злиття одержаної популяції В-клітин з клітинами мієломи миші РЗ3Хб6З3-Ад80.1 (Американська

Колекція Типових Культур, Роквіль, штат Меріленд) за допомогою електрозлиття (Нагмага

Аррагай5, Холістон, штат Массачусетс). Злиті клітини інкубують при 37 І! С, 7 96 СО», протягом ночі в Середовищі С (5їетсСеї! Тесппоіодіе5, Ванкувер, Британська Колумбія, Канада) перед ресуспендування у напівтвердому Середовищі О (5їетсСеї! ТесппоЇодієз) з анти-щурячим Ідс- флуоресцеїн ізотіоціанатом, ФІТЦ (РІТС) (Зідта-Аїйагісй, Сент-Луїс, штат Місурі) і наносять на лотки Отпімеїй! (Тпепто Еі5пег Зсіепіййс, Рочестер, штат Нью-Йорк). Через сім днів після нанесення на лотки флуоресцентні колонії відбирають і переносять на 96-лункові планшети для бо культивування (ВО), що містять Середовище Е (5іетсСеїЇ Тесппоіодіє5), із застосуванням

СіІоперіх ЕР (Моїесшіаг Оемісе5, Санівейл, штат Каліфорнія). Проводять скринінг супернатантів за допомогою ІФА (ЕГІЗА) проти білка ТІСІТ людини через сім днів після збирання колоній. 384- лункові планшети (Сгеїпег МісгоЇоп, сСгеіпег Віо-Опе, Монро, штат Північна Кароліна) вкривають 1 мкг/мл білка, розведеного в 0,05 М буферному розчині натрій карбонату, рН 9,6, та інкубують протягом ночі при 4 "С. Потім лунки блокують 100 мкл ФСБ (РВ5), що містить 0,5 95 бичачого сироваткового альбуміну, БСА (ВЗА) і 0,5 956 Гуееп-20, протягом однієї години при кімнатній температурі. Після промивання додають супернатанти та/або сироватки в кількості 50 мкл і струшують протягом 30 хвилин при кімнатній температурі. Для виявлення специфічних антитіл, кон'юговані з пероксидазою хрону антитіла проти ДО щура (Веїпуї! І арогафгіе5, Монтгомері, штат Техас) розбавляють ФСБ (РВ5), що містить 0,595 БСА (ВБА) і 0,595 Тмжееп-20, до оптимальної концентрації і після промивання додають в кількості 50 мкл на лунку, а планшети струшують протягом 30 хвилин при кімнатній температурі. Планшети тричі промивають 100 мкл

ФСБ (РВ5), що містить 0,05 95 Гуееп-20. Додають 50 мкл субстрату тетраметилбензидину, ТМБ (ТМВ) (ВіогХ, Овінгс Мілс, штат Меріленд), і планшети інкубують протягом п'яти хвилин при кімнатній температурі з наступним додаванням 50 мкл стоп-розчину (ВіогХ), а потім зчитують при 630 нм. Клітинні лінії гібридоми, що зв'язуються з ТІСІТ людини, розводять і культивують протягом двох-чотирьох днів, а потім проводять скринінг за допомогою ІФА (ЕГІ5А) проти білків

ТІСІТ людини, ТІСІТ яванця і ТІСІТ миші (Сепепіесі, Іпс.). Супернатант клітинних ліній, що перехресно реагують з білками людини і яванця, збирають і очищують за допомогою білка о (Ргоїєїп 5 бЗерпагозе 4 Равзі Ріому, СЕ Неаййсаге, Пітсбург, штат Пенсільванія). Близько 500 клонів були піддані скринінгу. За допомогою скринінгу ідентифіковано клони 4.103, 7.4АЗ і 4.1А4, одержані в результаті імунізації щурів ОМТ, і клони 1.6Щ82, 1.10А5, 1.7Е7 ії 1.15С8, ідентифіковані після імунізації щурів Спрег-Доулі.

Приклад 2. Оптимізація анти-ТІСІТ антитіл

А. Доведення одержаного від щурів ОМТ моноклонального антитіла проти ТІСІТ людини

Щоб запобігти небажаному утворення піроглутамату для клонів 4.1А4, 4.103 і 7.4АЗ (також мають назву ТА4, 103 і 4АЗ, відповідно) і з метою вирішення проблеми неспарених залишків цистеїну для клонів 4.1А4 і 7.4АЗ, були згенеровані наступні оптимізовані варіанти анти-ТІСІТ антитіл: 4.1А4.С965.01Е, 4.1А4.С96М.О1Е, 4.103.01Е, 7.4А3.С965.01Е і 7.4А3.С96УО1Е

Зо (також мають назву ТА4.С965. С1Е, 1А4.С96У.С1Е, 103.01Е, 4АЗ.С965.01Е і 4АЗ.С96У.СЛ1Е, відповідно). Як описано в Табл. 2 нижче, афінність цих п'яти оптимізованих варіантів для ТІСІТ людини і яванського макака (яванця) в подальшому визначали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ППР (ЗЕР)) (аналіз ВІАСОКЕ "М) і порівнювали з афінністю відповідних батьківських клонів.

Якщо коротко, біосенсорний чіп серії 5 СМ5 активують за допомогою реагентів М-метил-М'- (З-диметиламінопропіл)карбодіїміду (ЕДК (ЕОС)) ії М-гідроксисукциніміду (МН) відповідно до інструкцій постачальника (СЕ Неайсаге Віозсіепсе5, Піскатауей, штат Нью-Джерсі), і набір для захоплення антитіл людини використовують для сполучення з козиними антитілами проти Ес дб людини для одержання близько 10 000 одиниць відповіді (ОВ (КО)) на кожній протоковій кюветі, а потім блокують групи, що не прореагували, за допомогою 1 М етаноламіну.

Для визначення показників кінетики кожен клон захоплюють до досягнення близько 250 ОВ (КУ) та здійснюють інжекцію 5-разових серійних розведень антигену ТІСІТ (від 1,23 до 300 нМ) в буфері ГСБ-П (НВЗ-Р) (0,01 М ГЕПЕС (НЕРЕЗ), рН 7,4, 0,15 М Масі, 0,005 95 поверхнево- активної речовини Р20) при 25 "С (швидкість потоку: 30 мл/хв.) без регенерації між інжекціями.

Сенсограми реєструють і оцінюють за допомогою програмного забезпечення ВіАсогег Т200

ЕмаїІчайоп (версія 2.0) після віднімання сигналу референтної кювети. Швидкість асоціації (Коп) і швидкість дисоціації (Ко) обчислюють із застосуванням простої моделі зв'язування один до одного Ленгмюра. Константу рівноважної дисоціації (Ко) обчислюють як співвідношення Кон/Коп.

Таблиця 2

Показники афінності ВІАСОКЕ "М для варіантів одержаного від щура ОМТ антитіла проти ТІСІТ людини і яванцям ТА4, 103 і 4АЗ

ТІСІТ людини ТІСІТ яванця

ХТІСІТ тАБ Коп Коїї Коп Кої (ло5Мест) | (1бяст) | КОМ) | (зо5Мист) | (10яс7) | КО(НМ) 1А4.0965.СМЕ 367,9 169

АСУ СНЕЇ /- 17771717 11115100 17771717 - 1177117 - 111 5100 103. Е 4АЗ 77171302 | 104 | 344 | 334 | 699 | 209 4АЗ3.С965.01Е 4АЗ.С96У.О1Е 364,7 140,5

Клони 4.1А4.С965.01Е, 7.4А3.С965.01ЄЕ і 4.103.01ЄЕ розглядалися як кінцеві молекули з аналогічною і прийнятною афінністю зв'язування з ТІСІї людини і яванця в порівнянні з батьківськими клонами. Додаткові аналізи ВІАСОКЕ М показали, що клон 4.103.01Е, зокрема, здатний перехресно реагувати і зв'язуватися з ТІСІТ кролика з афінністю в діапазоні низьких наномолярних значень (Табл. 3).

Таблиця З 4.103.01Е здатне перехресно реагувати з ТІСІТ людини, яванця і кролика

Аналіз кінетики ВІАсоге

ТІСІТ людини ТІСІТ яванця ТІСІТ кролика

Джерело Клон

Одновалентна афінність (НМ)

ОМ 4.103.01Е 7.4АЗ.О1Е.С965

ПТАБІ2НВ

В. Гуманізація моноклональних анти-ТІСІТ антитіл, одержаних від щурів СД (50)

Моноклональні антитіла 1.682, 1.10А5, 1.7Е7 і 1.15С28 (в даному документі мають назву 682, 10А5, 7Е7 та 1508, відповідно) були гуманізовані, як описано нижче. Номери залишків відповідають Караї еї аї. (Зедпепсез ої Ргоїеїп5 ої Іттипоїодісаї! Іпіегезі. 5 Еа., Рибіїс Неаїй зЗегмісе, Маїййопаї Іпзійшез ої Неайй, Веїпезаа, МО (1991)).

Для гуманізації антитіл 682 гіперваріабельні ділянки щурячого антитіла 682 (гаїб682) були сконструйовані в найближчих до них акцепторних каркасах людини з метою генерації гуманізованих 682 (п6В2.І1Н1). Зокрема, положення 24-34 (І 1), 50-56 (І 2) і 89-97 (І 3) домену

МІ. гаїб82 були пересаджені на ІЗКМ1-33701 зародкової лінії людини. Положення 26-35 (НІ), 50- 65 (Н2) їі 95-102 (НЗ) з домену МН гаїбВв2 були пересаджені на ІЗНМ2-5708 зародкової лінії людини. Крім того, положення 43 в каркасі ІІ МІ ї положення 69, 73, 78 в каркасі І МН були збережені із послідовності щура в пб6В2.Ї1Н1. Було виявлено, що ці залишки є частиною каркасних залишків, що діють як зона "верньєра" яка може регулювати структуру ДВК (СОК)УГВД (НУК) і точно налаштовувати відповідність антигену. Див., наприклад, ЕРооїе апа

Міпіег, у. Мої. Віої. 224: 487-499 (1992). Ці визначення ДВК (СОК)/ГВД (НУК) містять положення, які визначаються гіперваріабельністю їх послідовності (МУ, ТТ 4 Кабраї, ЕА (1970),), їх структурним розташуванням (СпПоїпіа, С. 5. І е5К, АМ (1987)) та їх участю в контактах антигену з антитілом (МассСаїй шт еї аї. 9. Мої. Віо!І. 262: 732-745 (1996)).

Додаткові гуманізовані варіанти 682 були одержані шляхом інжинірингу кожного залишку щура п6В2.І1НІ в зоні верньєра назад до залишку зародкової лінії людини, причому ці варіанти являють собою п6В82.І2НІ1 (МІ: 543А), п6В2.11Н2 (УН: М691І), п682.11НЗ (МН: А7ЗТ), п6В2.1 14 (МН: А7вУ), п6В2.1Н5 (МН: Мб69І, А7ЗТ, А78М) і п682.12Н5 (МІ: 543А, МН: М691І, А7ЗТ, А7ВУ, повністю гуманізована версія).

Для гуманізації антитіла 10А5 був здійснений інжиніринг гіперваріабельних ділянок щурячого антитіла 10А5 (гайОА5) в найближчих до них акцепторних каркасах людини для генерації гуманізованого ТОА5 (П1ОАБ.І НІ). Зокрема, положення 24-34 (11), 50-56 (12) ї 89-97 (І 3) з домену МІ. га бА5 були пересаджені на ІЗКМ3-15701 зародкової лінії людини. Положення 26-35 (НІ), 50-65 (Н2) і 95-102 (НЗ) з домену МН ганОА5 були пересаджені на ІЗНМ2-5708 зародкової лінії людини. Крім того, положення 43 в каркасі ІІ і положенні 58 в каркасі І МІ. і положення 69 і 78 в каркасі ІЇЇ МН були збережені із послідовності щура в ПТОА5.І 1НІ1. Було виявлено, що ці залишки є частиною каркасних залишків, що діють як зона "верньєра", як описано вище.

Додаткові гуманізовані варіанти 10А5 були одержані шляхом інжинірингу кожного залишку щура ПТОА5.І НІ в зоні верньєра назад до залишку зародкової лінії людини, і ці варіанти являють собою П10АБ5.І2НІ (МІ: 54З3А), ПТ1ОА5ІЗНІ (МІ: М581), ПТОАБІ4НІ (МІ: 54АЗА, М58І),

ПТОАБ.І НІ (МН: М69І), Н1ОА5І 1 НЗ (МН: АВМ), ПТОАБ. І НА (МН: М69І, А7ВУ) і П10АБІ АНА (МІ:

З4ЗА, УБ58І, МН: М69І, А78У, повністю гуманізована версія).

Для гуманізації антитіла 7Е7 був здійснений інжиніринг гіперваріабельних ділянок щурячого антитіла 7Е7 (га/Е7) в найближчих до них акцепторних каркасах людини для генерації гуманізованого 7Е7 (П/Е7.Г1Н1). Зокрема, положення 24-34 (І 1), 50-56 (І 2) і 89-97 (І 3) з домену

МІ. таї/Е7 були пересаджені на ІЗКМ1-9701 зародкової лінії людини. Положення 26-35 (НІ), 50- 65 (Н2) їі 95-102 (НЗ) з домену МН гаї7Е7 були пересаджені на ІЗНМ1-3701 зародкової лінії людини. Крім того, в П7Е7.Ї1НІ1 положення 58, 71 і 87 в каркасі І МІ, положення 47, 48 в каркасі

ІЇ МН і положення 67, 69, 71, 91 і 93 в каркасі І МН були збережені із послідовності щура. Було виявлено, що ці залишки є частиною каркасних залишків, що діють як зона "верньєра", як описано вище.

Додаткові гуманізовані варіанти 7Е7 були одержані шляхом інжинірингу кожного залишку щура П7Е7.Ї1НІ в зоні верньєра назад до залишку зародкової лінії людини, і ці варіанти являють собою П7Е7.І2НІ1 (МІ: І58М), п7Е7 І ЗНІ (МІ: 716), п7Е71 АНІ (МІ: 87), А7Е7 І 5НІ1 (МІ: 1Б58М, МЕ, Е87У), п7Е7.1На2 (МН: 147М), П7Е7 11 НЗ (МН: 148М), п7Е7 1 1На (МН: АбМ),

Зо И7Е7.ТН5 (МН: 1691), п7Е7.1Нб (МН: АЙТА), п7Е7. 1 1Н7 (МН: Б91У), п7Е7.11НВ (МН: Т9ЗА),

ТЕТ І1НО (МН: 147, І48М, Аб7М, І 691, А71ТК, Е91У, Т9ЗА), і П7Е7.І 5НО (МІ: І158М, М71Е, Е87У,

МН: 147, І48М, Аб7М, І 691, А71Е, Е91У, Т9ЗА, повністю гуманізована версія).

Для гуманізації антитіла 15028 було здійснено інжиніринг гіперваріабельних ділянок щурячого антитіла 1538 (гаїй15С8) в найближчих до них акцепторних каркасах людини для одержання гуманізованого 15С8 (п15С8.Ї1НІ1). Зокрема, положення 24-34 (І 1), 50-56 (12) і 89- 97 (3) з домену МІ гай5С8 були пересаджені на ІЗКМ1-9701 зародкової лінії людини.

Положення 26-35 (НІ), 50-65 (Н2) ії 95-102 (НЗ) з домену МН гай5сС8 були пересаджені на

ІСНМ1-3701 зародкової лінії людини. Крім того, в П15С8.І 1НІ1 були збережені положення 58, 71 і 87 в каркасі І МІ, положення 37, 47 і 48 в каркасі ІІ МН і положення 567, 69, 71 і 91 в каркасі Ш УНН із послідовності щура. Було виявлено, що ці залишки є частиною каркасних залишків, що діють як зона "верньєра", як описано вище.

Додаткові гуманізовані варіанти 1528 були одержані шляхом інжинірингу кожного залишку щура п15С8.Ї1НІ1 в зоні верньєра назад до залишку зародків людини, і ці варіанти являють собою п15С8.І2НІ1 (МІ: І58М), п15С8.І1 НІ (МІ: М71Б), п15Сс8.14Н1 (МІ: Е87Х), п15С8.І 5НІ1 (МІ:

ІБ8М, ЖЕ, Е87У), п1508.11Н2 (МН: Г37М), п1508.11НЗ (МН: 147), 15081 1Н4 (МН: 148М), "1508. 1 Н5 (МН: Аб7М), п15С8.1 16 (МН: 1 691), п1508.11 7 (МН: Т718), п1508.11Н8 (МН: Б91), п15С8.11НО (МН: І 37М, І47М, І48М, Аб7М, І 691, Т71Е, 91), ії П7Е7.1 5НО (МІ: І158М, У71Б, Е87У,

МН: 37, 147, І48М, Аб7М, І 691, Т71К, Е91У, повністю гуманізована версія).

Для перших гуманізованих версій п6В82, І 1НІ, пПТОА5Б. НІ, п7Е7, ІТ НІ ї п15С8.11НІ1, що містять як ДВК (СОК) щура, так і каркасні залишки в зоні верньєра, а також повністю гуманізованих версій п6В2.І 25, П1ОА5.І4На4, ПЕ. І 5НО ї п15С8.І1 5НО, що містять тільки ДВК (СОК) щура, проводили вимірювання афінності ВіАсоге в порівнянні з початковими антитілами щура, гаїбвВ2, гапоА5, гаї7Е7 і гай5С8. Для визначення афінності зв'язування антитіл ТІСІТ проти ТІСІТ людини, ТІСІТ яванського макака і аланінсканованих мутантів ТІСІї людини за допомогою однотактної кінетики, проводили вимірювання методом поверхневого плазмонного резонансу (ППР) за допомогою приладу ВІАСОКЕ М-1200, як описано вище. Результати

ВІАСОКЕ "М у Табл. 4 нижче показують, що всі гуманізовані варіанти демонструють зниження афінності зв'язування (тобто, підвищення Ко) приблизно в 5-10 разів у порівнянні з ТІСІТ людини і яванського макака. Повністю гуманізовані версії я6В2.І 2Н5 ї ПТОА5.І 4НА несподівано бо продемонстрували афінність зв'язування, подібну до перших гуманізованих версій п6В2.11НІ і

ПТОАБ.Г НІ, ї це свідчить про те, що каркасні залишки гаїбВ2 і гапбА5 в зоні верньєра не вносять вклад до зв'язування з ТІСІТ людини і яванця. Тому обидва пП6В2.І2Н5 і П1ОАБ.І 4НА являють собою остаточну гуманізовану версію для гаїбВ2 і гапОА5, відповідно. Навпаки, повністю гуманізовані версії П7Е7.І 5НО і п15С8.І| 5НО втратили здатність зв'язуватися з ТІСІТ людини і яванця.

Для подальшого з'ясування того, які залишки каркаса щура в положеннях верньєра для перших гуманізованих антитіл П7/Е7, Ї1НІ ї п15С8.11Н1 мають вирішальне значення для зв'язування, вимірювали афінність методом ВіАсоге для всіх варіантів доведення каркаса. У разі доведення каркаса 7Е7 варіанти П7Е7.І1Н2, П7Е7.І1Н9О ї П7Е7.І 5НО, що містять заміну МН:

І417ММ, продемонстрували зниження афінності зв'язування з ТІСІТ людини і яванця більш ніж у 100 разів, а варіанти П7Е7.ЇЗНІ ї П7Е7.І 5НІ, що містять заміну М: У71Е, продемонстрували зниження афінності зв'язування з ТІСІТ яванця приблизно в 2-3 рази. Таким чином, залишки каркаса МН: 147 їі МІ: М71 були збережені в остаточній гуманізованій версії 7Е7 під назвою

И7Е7.5аноа, для збереження зв'язування з ТІСІЇ людини і яванця. З метою доведення каркаса, варіанти 15028 п15С8.11Н3, п15С8.Ї1Н9 ї п15С8.І15НУ, що містять заміну МН: ІЛ, продемонстрували зниження афінності зв'язування з ТІСІТ людини і яванця більш ніж у 100 разів, а варіанти п15С8.І3НІ і п15С8.ІЇ5НІ, що містять заміну МІ: 71, продемонстрували зниження афінності зв'язування з ТІСІТ людини і яванця приблизно в 2-3 рази. Крім того, інші варіанти, п15С8.Ї1Н2, п15С8.11Н5 і п15С8.Ї1Н7, що містять заміни МН: Г37М, Аб7М і Т71К відповідно, продемонстрували зниження афінності зв'язування з ТІСІТ людини приблизно в 2-3 рази. Таким чином, всі п'ять залишків каркаса МН: 147, І 37, Аб7, 171 і МІ: У71 були збережені в остаточній гуманізованій версії 1528 під назвою п15С8.Ї 5заНЗа, щоб зберегти зв'язування з

ТІСІТ людини і яванця.

Таблиця 4

Коротка характеристика одержаних методом ВІАСОКЕ "М показників афінності гуманізованих варіантів антитіл 682, 10А5, 7Е7 та 15328, одержаних від щурів СД (50), по відношенню до

ТІСІТ людини і яванця

ХПІ тАБ Коп Ко Коп Кої опбвгілНІ | 467 | 2553 | 054 | 123 | 118 | 0,96 отамод5 | 9,05 | 084 | 009 | 678 | 281 оптЕТЛЛНа 1777-7777 - 11 5100. | щ- | - | 500 оп7ТЕТЛІЛНЯ 177-77-71 5100 | щ - | - | 00 оп7ТЕЛІВНІ 7777-1777 -1 1 5100 | щ- | - | » 00 отан5СВ8 | 522 | 018 | 003 | 381 | 096 | 0,25 птівсвІ2гНніІ | 771 | 506 | 066 | 502 | 502 | 7.00

Продовження таблиці 4 п15С8.ІЗНІ п15С8.1 АНІ п15С8.І5НІ п15с8. На п15С8.СТНЗ 7-17 - 11715100 | 7-11 - 1 | 5100 п15С8.СТНА п15С8.СТН5 п15С8. Нв п15С8.С1Н7 п15С8.С1НВ п15С8.11НУ 7-17 - 11715100 | 7-17 - 1 | 5100 п15С8.І5Н9 7-17 - 11715100 | 7-11 - | 5100 п15С8.І5аноа

Приклад 3. Дослідження зв'язування і блокування анти-ТІСІТ антитілами іп міго

А. Характеристика зв'язування анти-ТІСІТ антитіл іп міго

Одержані від ОМТ ії СД (50) анти-ТІСІТ антитіла охарактеризовані іп міго щодо їх здатності зв'язуватися з ТІСІТ і блокувати зв'язування рецептора поліовірусу (ПВР (РМК)) з ТІСІТ.

Зв'язування з ТІСІТ людини і яванця досліджували методом ВІАСОКЕ "М, як описано вище, в контексті як одновалентної, так і двохвалентної афінності та в умовах порівняння з анти- ТІСІТ антитілом, одержаним від миші (ТАБ), і гібридним анти-ТІСІТ антитілом, одержаним від хом'яка (10А?7, див., наприклад, патент США 2009/0258013, який включений до цього опису шляхом посилання в повному обсязі). Результати аналізу ВІАСОКЕ"М, наведені у Табл. 5, демонструють, що численні варіанти анти-ТІСІТ клонів, одержані від ОМТ, такі як 4.103.СЛ1Е і 7.4А3.С965.01ЄЕ, і одержані від СД (50) варіанти анти-ТІСІТ клонів здатні зв'язуватися як з

ТІСІТ людини, так і з ТІСІТ яванця, в кожному випадку з високим і подібним ступенем афінності.

Такі властивості є бажаними для терапевтичних анти-ТІСІТ антитіл, оскільки вони дозволяють з легкістю проводити тестування на токсичність з використанням яванського макака (Масаса

Тазсісціагіз) як неклінічного виду для вивчення токсичності. Додаткова перехресна реактивність клону 4.103.01Е з кроликом може забезпечити додатковий вид для вивчення токсичності.

Таблиця 5

Аналіз методом ВІАСОКЕ "М оптимізованих анти-ТІСІТ клонів, одержаних від ОМТ і СД (50)

Джерело Клон Аналіз кінетики методом ВіІАсоге

ТІСІТ людини | ТІСІТ яванця | ТІСІТ людини | ТІСІТ яванця

Одновалентна афінність |Двохвалентна афінність (НМ) (нм) 1 ралозоте 57173211 прлакзоговв ов

Продовження таблиці 5

Срлакзатвсяв 0 оз45 | 209, щЩщ (Б Ї5ж5жЖ Ю1

СотяАвотЕсвв | 287 | 25 11

Софряквотоюву 18656001

Щур СДІ Гібридне 1.682 0,035 «0,027 0,091

ЗО ши Гібридне 1.10А5 0,093 - 0,003 0,013 ши Гібридне 1.7Е7 - 0,018 0,067 « 0,004 « 0,009

С ретєтотня пок: НАННЯ ПОН ПОЛОН ши Гібридне 1.15С8 0,034 «0,007 « 0,013 стоАтдолюдськю) 21111101 05100822

Були проведені додаткові дослідження іп мійго зв'язування клонів анти-ТІСІТї антитіл, одержаних від ОМТ ії СД (50). Одержані від ОМТ і СД (503) анти-ТІСІТ клони тестували щодо зв'язування з ТІСІЇї людини і яванця, експресованим на поверхні клітин ЯКХ (СНО), за допомогою аналізу СКАФ (БГАС5). Клітини ЯКХ (СНО) трансфікують повнорозмірним ТІСІТ людини (СНО-ПТІСІТ) або ТІСІТ яванського макака (СНО-суТІСІТ). Клітини ЯКХ (СНО), що експресують ТІСІТ, інкубують з кожним анти-ТІСІТ антитілом у вказаних концентраціях, а потім проводять виявлення за допомогою міченого ФІТЦ (РІТС) анти-пІдс антитіла (див. Фіг. 1А) із застосуванням стандартних способів. Результати, наведені в Табл. б і на Фіг. 1В-1Е, підтверджують результати аналізу методом ВІАСОКЕ "М, описані вище.

Одержані від ОМТ ї СД (50) анти-ТІСІї клони додатково тестували щодо предмет зв'язування з первинними Т-клітинами людини за допомогою аналізу СКАФ (ГАС5). МКПК (РВМС) людини активують за допомогою зв'язаного з планшетом анти-СОЗ (5 мкг/мл) і розчинного анти-Сра28 (2 мкг/мл) протягом 2 днів, як описано у ХУи еї аїЇ. Маїшге Іттипої/оду. 10: 48-57, 2009, що включено до цього документу шляхом посилання в повному обсязі. Потім клітини промивають та інкубують з кожним анти-ТІСІТ антитілом у вказаних концентраціях, після чого проводять виявлення за допомогою міченого ФІТЦ (РІТС) антитіла проти пІдО. Додатково, клітини фарбують анти-СО4, анти-СО8 і анти-СО25 (ВО Бріозсіепсе). СО4-- (6025-0204) людини і Сов (0025-0085) Т-клітини людини оцінюють щодо зв'язування з ними анти-ТІСІТ клонів за допомогою СКАФ (БАС5). Всі зразки зчитують на приладах І ЗК- або І 5Е-Ропезза (ВО

Віозсіепсе5) та аналізують із застосуванням програмного забезпечення БіІомліо (Тгеевіаг). Як наведено у Табл. б і на Фіг. 2А-20, клони продемонстрували приблизно еквівалентне зв'язування з їх цільовим ТІСІТ.

Таблиця 6

Коротка характеристика зв'язування оптимізованих анти-ТІСІТ клонів, одержаних від ОМТ і СД (50), з СНО-ТІСІТ і Т-клітинами людини

Аналіз 10А? (ти ТІСІТ) 8 Клони ОМТ (пи ТІСІТ) Клони СД (50) (Пи

ТАБ (пи ТІСІТ) ТІСІТ)

Зв'язування с | ТОА?7 0,54 НМ 4.1А4.С965.01ЄЕ 0,90 нм 1,682 0,52 НМ

СНО-ТІСІТ ТАБ 0,14 НМ 4.103.01Е 1,04 нм 1,7Е7 0,10 нм (ЕС5БО) 7.4А3.С965.01Е 3,04 нм

Зв'язування з Т- | 10А7 0,63 нм 4.1А4.С965.01Е 0,38 нм 1,682 0,09 нм клітинами 1А5 0,14 нМ 4.103.01Е 1,36 нм 1,7Е7 0,11 нм людини (ЕС50) 7.4А3.С965.01Е 2,63 НМ

В. Характеристика блокування анти-ТІСІТ антитілами іп мйго

Одержані від ОМТ і СД (50) клони анти-ТІСІї антитіл додатково тестували щодо їх здатності блокувати взаємодію ТІСІТ-РМЕ і ТІСІТ-СО226.

Для перевірки здатності клонів блокувати взаємодію ТІСІТ-РМК застосовували блокуючий аналіз ІФА (ЕГІЗА). Якщо коротко, рекомбінантним гібридним білком РУК людини-Ес, гібридним білком РУК яванського макака-Ес або гібридним білком РУК миші-Ес в концентрації 4 мкг/мл у фосфатно-сольовому буфері, ФСБ (РВ5, рН 7,0) в кількості 25 мкл/лунку вкривають 384-лункові мікротитрувальні планшети Махізогр (МОМС, Данія) та інкубують протягом ночі при 4 "С. Потім розчин для покриття відкидають, планшет блокують із застосуванням 0,595 бичачого сироваткового альбуміну (БСА (В5А)) в ФСБ (РВ5) в кількості 80 мкл/лунку та інкубують з обережним перемішуванням протягом 1 години. Зразки для кривих титрування анти-ПатТ антитіл і контрольного ізотипу Раб розбавляють буфером аналізу (ФСБ (РВ5), 0,5 95 БСА (В5А), 0,05 95 Тмееп 20) із застосуванням 12 серійних 2,5-разових розведень (40000-1,7 нг/мл). До цих зразків для кривих титрування додають рівні об'єми ТІСІТ людини-АміРіад-біотину (1 мкг/мл),

ТІСІТ яванця-Амігіад-біотину (150 нг/мл) або ТІСІТ миші-Ніє (1 мкг/мл) та інкубують при кімнатній температурі протягом 1 години з обережним перемішуванням. Блокований планшет промивають Зх промивальним буфером (ФСБ (РВ5), 0,05 95 Тмееєп 20, рН 7 4) із застосуванням автоматичного пристрою для промивання мікропланшетів ЕЇ х405 (ВіоТек Іпзігитепів, Вермонт), додають суміш антитіла/ліганду-біотину або ліганду-Ніб5 в кількості 25 мкл/лунку та інкубують протягом 1 години при кімнатній температурі з обережним перемішуванням. Далі планшет промивають бх промивальним буфером і зв'язаний ТІСІТ людини-АміНіад-біотин, ТІСІТ яванця-

АмігІад-біотин або ТІСІТ миші-Ніх виявляють шляхом додавання 25 мкл/лунку кон'югованого з пероксидазою хрону стрептавідину (1: 10000, Атегепат, Великобританія) або кон'югованого з пероксидазою хрону мишачого анти-Ні5 (1: 2500, Оіадеп, Німеччина), розведених в буфері аналізу. Після інкубації протягом 30 хвилин або 1 години планшет промивають бх промивальним буфером і додають 100 мкл/лунку субстрату 3,3, 5,5'-т-етраметилбензидину (ТМБ (ТМВ)) (КРІ,, Іпс., Гайтерсберг, штат Меріленд, США), щоб надати можливість проявитися

Зо кольору. Реакцію гасять додаванням 1 М фосфорної кислоти. Оптичну щільність реєструють на довжині хвилі 450 нм на зчитуючому пристрої для мікротитрувальних планшетів МОГСТІЗКАМ

АБСЕМТФ (Тпепто Іарзузіетв, Гельсінкі, Фінляндія). На базі одержаних значень оптичної щільності на планшетах ІФА (ЕЇГІЗА) одержують криві залежності, а значення ІС50 обчислюють із застосуванням програмного забезпечення Сепедаїа 5сгеепег (Сепедаїа, Швейцарія). Як проілюстровано на Фіг. ЗА-3О0 нижче, вказані аналізи демонструють здатність 4.103.01ЄЕ до перехресно реагування і блокування по відношенню до ТІСІї людини і ТІСІТ яванця, що відрізняє 4.103.01ЄЕ від анти-ТІСІТ антитіла, одержаного від хом'яка, 10А7, яке перехресно реагує з ТІСІТ миші, але не з ТІСІТ яванця. Дані вказують на те, що 4.103.01Е більш активно блокує зв'язування ТІСІТ яванця з ПВР (РМК) яванця. Крім того, дані вказують на те, що 4.103.0О1Е є більш активним блокатором зв'язування ТІСІТ людини з ПВР (РУК) людини, ніж клон анти-ТІСІТ антитіла 10А7, одержаний від хом'яка.

Дані дослідження були додатково валідовані в експериментах із блокування СНО-ТІСІТ ПВР (РУК), в яких клітини ЯКХ (СНО), що експресують ТІСІТ, інкубують з міченим РУК-Ес гібридним білком в присутності анти-ТІСІТ антитіла або контрольного ЇдДО1 людини (Фіг. 4А). Як наведено у

Табл. 7 і на Фіг. 48-4Е, інкубація з 10 мкг/мл одержаного від ОМТ анти-ТІСІТ антитіла (Фіг. 4В і 4С) або одержаного від СД (50) анти-ТІСІТ антитіла (Фіг. 40 і 4Е) приводила до блокування зв'язування ТІСІТ-РМК як у разі пиТІСІТ-пПиРУК, так і в разі СУТІСІТ-суРМЕ, зі значеннями ІС50 в наномолярному і субнаномолярному діапазоні.

Для перевірки здатності клонів блокувати взаємодію ТІСІТ-С0О226 застосовували резонансний перенос енергії флуоресценції з розрізненням в часі, РЧ-РПЕФ (ТЕ-ЕНЕТ).

Спочатку, мічений 5МАР (51) 20226 з непереносними донорним і акцепторним флуорофорами експресують із введенням мітки за допомогою клітин СНО. 5Т-20226 людини спільно експресують з міченим гемаглютиніном, ГА (НА), ТІСІТ, в присутності клонів одержаних від ОМТ і СД (50) анти-ТІСІТ антитіл. Додавання кожного із тестованих клонів до культур клітин значно знижує здатність ТІСІТ ї СО226 до зв'язування (Табл. 7). Одержані дані свідчать про те, що анти-ТІСІТ обробка ідентифікованими анти-ТІСІТ антитілами може обмежувати взаємодію ТІСІТ з С0226, вказуючи на те, що ці антитіла можуть бути сприятливими терапевтичними засобами на базі їх здатності активувати активність Т-клітин шляхом вивільнення опосередкованого ТІСІТ пригнічення активності СО226 і запобігання подальшому виснаженню СО8- Т-клітин.

Таблиця 7

Коротка характеристика блокування ТІСІТ-ПВР (РУК) і блокування ТІСІТ-СО226 одержаними від ОМТ і СД (50) оптимізованими анти-ТІСІТ клонами

Аналіз 10А? (ти ТІСІТ) 8 Клони ОМТ (Пи ТІСІТ) Клони 50 (Пи

ТАБ (пи ТІСІТ) ТІСІТ)

Блокування 10ОА7 0,07 нм 4.1А4.С965.01Е 0,14 нм 1,682 0,08 нм

ТІСІТ-РМА (ІС5О) 1А5 0,18 нм 4.103.01Е 0,29 нм 1,7Е7 0,04 нм 7.4А3.С965.01Е 0,38 нм

Блокування 10А?7 17,6 нм 4.1А4.С965.01Е 25,2 НМ

ТтІСІТ-60226 1А5 13,7 нм 4.103.01Е 45,0 нм

РПЕФ (ІС50) 7.4А3.С965.01Е 19,3 нм

Приклад 4. Фармакокінетична характеристика анти-ТІСІТ антитіл

Далі, фармакокінетичні (ФК (РК)) властивості одержаних від ОМТ ії СД (50) клонів анти-

ТІСІТ антитіл були протестовані у яванського макака в порівнянні з одержаним від миші анти-

ТІСП антитілом, що несе мутацію аглікозілювання М2970 (1А5 М2970), і контрольним анти-д0 антитілом. У цих експериментах концентрацію антитіл в сироватці яванського макака вимірюють протягом 28 днів після внутрішньовенного введення 10 мг/кг. Дослідження ФК (РК) показали, що одержаний від СД (50) варіант п1.682 демонструє найшвидший кліренс, близько 20 мл/добу/кг (Фіг. 5А і 58). Досліджуваний варіант ТА5 також демонструє швидкий кліренс, близько 15 мл/добу/кг (Фіг. 5А і 58). На відміну від цих анти-ТІСІТ варіантів, досліджувані варіанти ОМТ (4.103.О1Е, 7.4А3.С965.01Е і 4.1А4.С965.01Е) демонструють кліренс близько 8-10 мл/добу/кг (Фіг. 5А і 58), який знаходиться на верхньому кінці історично прийнятого діапазону для яванця

Зо близько 4-8 мл/добу/кг. ФК (РК) профілі варіантів ОМТ є подібними до контрольного анти-40 антитіла аж до ді10, і в цей час опосередкований мішенню розподіл лікарського засобу (ОПРЛС (ТМОБ)) та/або ефекти антитерапевтичного антитіла (АТА (АТА)) відповідають теоретично оціненим.

Одержане від ОМТ анти-ТІСІТ антитіло 4.103, яке виявило сприятливі ФК (РК) властивості, додатково порівнювали з гуманізованим 10А7 (пП10А7.К403) у 7-денному дослідженні ФК (РК). В цьому експерименті вісім самок яванського макака ділять на дві групи по чотири макака, причому перша група одержує П10А7.К403, а друга група одержує 4.103. Обидва анти-ТІСІТ антитіла вводять у дозі 10 мг/кг (об'єм дози 5 мл/кг, концентрація 2 мг/мл) шляхом повільної внутрішньовенної ін'єкції болюсу. Зразки крові (0,5 мл) відбирають через 0 год. (до введення дози), 0,25 години, 2 години, 8 годин, 1 день, З дні і 7 днів після введення у відповідності до наступних "вікон" збирання:

Точка часу після введення дози "Вікно" збирання від О до 15 хвилин щ/- 1 хвилина від 16 до 30 хвилин ч/- 2 хвилини від 31 до 45 хвилин ч/- З хвилини від 46 до 60 хвилин -/- 4 хвиЛлИНИ від 61 хвилин до 2 годин ч/- 5 хвилини від » 2 до 8 годин я-/-10 хвилин від » 8 до 24 годин -/- 20 хвилин із застосуванням сепараторних пробірок для розділення гелю-сироватки. Кров зберігають при температурі навколишнього середовища і дозволяють згортатися протягом щонайменше 20 хвилин до центрифугування. Зразки центрифугують (приблизно від 10 до 15 хвилин при близько 1500-2000 х 9 сила), від 2 "С до 8 С) в межах 1 години після відбору. Сироватку збирають в межах 30 хвилин після початку центрифугування і переносять до маркованих штрих-кодом пробірок з верхньою кришкою, що нагвинчується, місткістю 0,5 мл (каталог Тпептоїї5пег

Зсіепіййс Мо 3744 або аналогічні). Зразок сироватки маркують номером тварини, видом, групою дози, днем збирання, видом зразка (тобто, ФК (РК) сироватка) і номерами досліджень. Потім зразки сироватки аналізують щодо концентрації П10А7.КА4АО3 або 4.103. Як проілюстровано на

Фіг. 5С і 50, дане дослідження ФК (РК) показало, що пПТ10А7.К4о3 демонструє більш швидкий кліренс (нижчу площа під кривою, ЛИС), ніж 4,103, і що кліренс ПТОА7.К40О3 (» 9 мл/добу/кг) є вищим за рекомендований для вибору моноклональних антитіл у яванського макака. Оціночний кліренс базувався на даних з 0 по 7 день і обчислений УмМіппопіїй із застосуванням некомпартментального аналізу, НКА (МСА).

Приклад 5. Молекулярний аналіз анти-ТІСІТ антитіл

Клони одержаних від ОМТ (4.103, 7.4АЗ3.С965 і 4.1А4.С965) і одержаних від СД (50) (п1.682.1 1 НІ, П1.10АБ.І НІ, п1.7Е7. НІ ії п1.15С8.Ї 1НІ) антитіл ТІСІТ додатково тестували в аналізах молекулярної оцінки (МО (МА)) щодо стабільних властивостей клітинної лінії. Якщо коротко, анти-ТІСІТ антитіла (1 мг/мл) тестують на стрес в хімічних умовах з 2,2-азобіс-(2- амідинопропан)-дигідрохлоридом, ААРГ (ААРН), молекулою невеликого розміру, що, як відомо, генерує вільні радикали, а також в умовах термічного стресу при різних значеннях рн (двотижневий тест термічного стресу при 40 "Сі рн 5,5 або рН 7,4). Як наведено в Табл. ві 9 нижче, 4.1А4.С965 було визначено як нестабільне, оскільки демонструвало неприйнятне зниження інтенсивності основного піку і підвищене дезамідування у дослідженнях МО (МА).

Аналогічно, п1.7Е7.ЇМТ НІ ії п1.15С28.Ї1 НІ показали високе початкове дезамідування (» 30 95). З іншого боку, анти-ТІСІТ антитіла 4.103, 7.4А3.С965, п1.682.11Н1 і П1.10А5.І1 НІ, як було знайдено, виявляють прийнятні властивості стабільності в дослідженнях МО (МА).

Таблиця 8

Коротка характеристика стабільності МО (МА) клонів анти-ТІСІТ антитіл, одержаних від ОМТ

ШИ 41А4.0965 4103 7.ААЗ3.С965 . - | М у СОК-НІ

М у СОВ-НІ стабільний М у СОК-НІ стабільний / Табільний

Стрес ААФГ : о М у СОК-Н2 стабільний

М у СОК-Н2 стабільний . - | М у СОК-Н2

М у СОК-І/2 стабільний : о стабільний

Термічний МУ у СОК-НІ стабільний | О5 у СОВ-НІ1 стрес М(52)Т у СОК-Н2 стабільний М(52)Т у СОК-Н2 рн 5,5 стабільні М у СОК-НІ1 стабільний (2 тижні) М(5УТ у СОК-Н2 стабільний М(54)Т у СОК-Н2

Аналіз стабільні ОМ у СОК-Н2 стабільний пептидної карти | ОМ у СОБ-НЗ стабільний | стабільний МР у СОВ-Н2

Об'ємний заряд | М5 у СОК-Ї З ОМ у СОК-НЗ стабільний

РХ/МС нестабільний - стабільний О5 у СОК-НЗ жЖХ/МС збільшення ступеню ММ у СОК-І 1 стабільний дезамідування на 15,7 95 | стабільний

Втрата мономеру (0,5 95) | Втрата мономеру Втрата мономеру є прийнятною (0,6 Ус) є прийнятною (1,1 У) є прийнятною

Зниження основного піку | Зниження основного Зниження основного (16,7 У) є неприйнятним | піку (11,1 Ос) є піку (7,3 Ус) Є

Значення маси прийнятним прийнятним відповідають очікуваним | Значення маси Значення маси відповідають відповідають очікуваним очікуваним

Термічний р5 СОВ-НІ збільшення стрес МУ у СОК-НІ без змін ступеню ізомеризації на Й рН 7,4 М(5г)т я М(Ба)Тту сові | 2,895 вов)т У СОВ-На без (2 тижні) Н2 без змін Мо СОВ-НІ без змін Й

Аналіз рУусОв-НЗбеззмін Оу у СОВ-НО без змін от У СОВ-На без

Об'ємний заряд | ступеню дезамідування | збільшення ступеню | МР У СОВ'НО без змін

РХ/МС на 9,4 95 ізомеризації на 2,7 95 У

ЖХ/МС ММ у СОКА-1Ї 1 без змін

Втрата мономеру (2,7 Ус) | Втрата мономеру Втрата мономеру

Зниження основного піку | (0,9 95) (2,3 У) (21,9 У) Зниження основного Зниження основного

Значення маси піку (27,7 95) піку (15,7 Ов) відповідають очікуваним | Значення маси Значення маси відповідають відповідають очікуваним очікуваним

Таблиця 9-1

Коротка характеристика стабільності МО (МА) клонів анти-ТІСІТ антитіл, одержаних від СД (50)

Термічний стрес . - рн 5,5 ОР у СОВ-Н2 стабільний ОР у СОВ-Н2 стабільний

В : о Ма у СОК-Н2 стабільний (2 тижні) МО у СОВ-НА2 стабільний ОС у СОВ-НЗ нестабільний лналіз пептидної | МТ у СОН1.2 стабільний (пі ви ення ступеню ізомеризації на карти МІ. у СОК-І2 стабільний е 95 (от 38 о, о 18.5 97 й й

Об'ємний заряд | М(92)М(93)0 у СОВ-І-З стабільний - | (92)м (93)с СОВА З стабільний І

РХ/МС ЖХ/МС високий початковий рівень М У в езамідування 31,5 95 високий початковий рівень д ' дезамідування 39,2 95

Втрата мономеру (0,8 95) є Втрата мономеру (0,9 95) є прийнятною прийнятною

Зниження основного піку (6,2 Ус) є | Зниження основного піку (10,3 90) Є прийнятним прийнятним

Значення маси відповідають Значення маси відповідають очікуваним очікуваним

Термічний стрес ОР у СОК-НЕ2 без змін ОР у СОК-НЕ2 без змін рн 7,4 Ма у СОВ-Н2 підвищення ступеню | МА у СОК-Н2 підвищення ступеню (2 тижні) дезамідування на 1,9 95 дезамідування на 3,3 95

Аналіз пептидної | МТ у СОК-І2 без змін ра у СОК-НЗ підвищення ступеню карти МІ. у СОК-І2 без змін ізомеризації на 7,0 95

Об'ємний заряд М(92)М(93)5 у СОКА-Ї З - М(92)М(93)5 у СОКА-Ї З -

РХ/МС ЖХ/МС підвищення ступеню підвищення ступеню дезамідування дезамідування на 24,3 95 на 15,5 95

Втрата мономеру (0,5 95) Втрата мономеру (1,5 95)

Зниження основного піку (16,7 Фо) Зниження основного піку (25,2 У)

Значення маси відповідають Значення маси відповідають очікуваним очікуваним

Таблиця 9-2

Коротка характеристика стабільності МО (МА) клонів анти-ТІСІТ антитіл, одержаних від СД (50) шини шиш Б

М у СОВ-НІ стабільний М у СОВ-НІ стабільний

Стрес ААФГ МУ(52) и М(53) у СОБ-Н2 стабільні | М/(52) и М/(53) у СОБ-НЕ2 стабільні

М/ у СОК-НЗ стабільний М/ у СОК-НЗ стабільний

Термічний стрес рН 5,5 (2 тижні)

Аналіз пептидної | Ма у СОВ-Н2 стабільний МО у СОК-Н2 стабільний карти МТ у СОВ-Н2 стабільний МТ у СОК-Н2 стабільний

Об'ємний заряд МР у СОК-Н2 стабільний МР у СОК-НЕІ2 стабільний

РХ/МС ЖХ/МС М5 у СОК-Ї З стабільний М5 у СОК-Ї З стабільний

Втрата мономеру (0,2 95) є Втрата мономеру (0,1 95) є прийнятною прийнятною

Зниження основного піку (2,4 Ус) є | Зниження основного піку (6,3 Ус) Є прийнятним прийнятним

Значення маси відповідають Значення маси відповідають очікуваним очікуваним

Термічний стрес

Джі С тижні Ма у СОБ-Н2 підвищення ступеню | МА у СОК-Н2 підвищення ступеню д дезамідування на 5,6 95 дезамідування на 4,8 95

Об'ємний заря МТ у СОВ-Н2 без змін МТ у СОВ-Н2 без змін

РХ/МС Ж МР у СОК-Н2 без змін МР у СОК-Н2 без змін

М5 у СОК-Ї З без змін М5 у СОК-Ї З без змін

Втрата мономеру (0,0 95) Втрата мономеру (0,2 95)

Зниження основного піку (9,9 Фо) Зниження основного піку (14,5 Фо)

Значення маси відповідають Значення маси відповідають очікуваним очікуваним

Приклад 6. Структурне і функціональне відображення епітопів ТІСІТ

Для кращого розуміння того, яким чином анти-ТІСІТ антитіло 4.103 ї його оптимізовані варіанти (наприклад, 4.103.01Є), зокрема, здатні до типової перехресної реактивності (наприклад, перехресної реактивності між ТІСІТ людини, яванця і кролика) з високою афінністю до ТІСІТ ї надійним блокуванням взаємодії/функції ТІСІТ-РМК і ТІСІТ-СО226 при виявленні властивостей фармакокінетики і молекулярної оцінки, визначали кристалічну структуру 4.103 в комплексі ТІСІТ ї порівнювали з кристалічною структурою мишачого анти-ТІСІТ антитіла 1А5, зв'язаного з ТІСІТ, та одержаного від хом'яка анти-ТІСІТ антитіла 10А7, зв'язаного з ТІСІТ, як детально описано нижче. Крім того, для ідентифікації функціональних залишків епітопа проводили експерименти з аналізу інтерфейсу ТІСІТ методом аланінскануючого мутагенезу.

А. Експресія, очищення і кристалізація ТІСІТ і Бар

Залишки ТІСІТ людини 23-128 експресують і очищують, як було описано (див., наприклад, зіепдеї! єї а. РМАБ. 109 (14): 5399-5404, 2012). Фрагменти Раб, включаючи важкі і легкі ланцюги, експресують і очищують, як було описано (див., наприклад, Сагег еї аї. Маї. Віоїесп. 1992).

Очищений ТІСІТ змішують з надлишком очищеного фрагменту Раб для одержання комплексу

ТІСІТ/Рар. Далі комплекс додатково очищають на ексклюзійній колонці, врівноваженій буферизованим ГЕПЕС (НЕРЕЗ) фізіологічним розчином (10 мМ ГЕПЕС (НЕРЕЗ), рН 7,5 і 100

ММ Масі), щоб одержати зразок, який містить тільки комплекси ТІСІТ і Раб 1:1. Потім кожен із комплексів ТІСІТ/Рар концентрують для кристалізації і обробляють стандартними методиками високопродуктивного скринінгу кристалізацією з дифузією пари. Для комплексу ТІСІТ/10А7 зразок концентрують до близько 25 мг/мл, причому було виявлено, що він кристалізується в 0,1

М ГЕПЕС (НЕРЕФ5), рН 7,5, 20 95 ПЕГ (РЕС) 4000 і 10 95 ізопропанолу. Для комплексу ТІСІТ/1А5 зразок концентрують до близько 25 мг/мл, причому було виявлено, що він кристалізується в 0,05 М ГЕПЕС (НЕРЕЗ), рН 7,0, 12 95 ПЕГ (РЕС) 3350 і 1 95 Тгуріопе. Для комплексу ТІСІТ/4.103 зразок концентрують до близько 25 мг/мл, і було виявлено, що він кристалізується в 01 М

ГЕПЕС (НЕРЕЗ), рН 7,5, 10 95 ПЕГ (РЕС) 6000 ї 5 95 МПД (МРО). Кристали піддають кріозахисту гліцерином і миттєво заморожують в рідкому нітрогені у відповідності до стандартних методів збирання даних.

В. Збирання даних та віднесення структури

Дані рентгеноструктурного аналізу одержують в умовах кріоохолодження при 100 Кельвінів із застосуванням різних рентгенівських променів синхротронного випромінювання на Адмапсей

Цой Бошгсе (Берклі, штат Каліфорнія) або Адмапсей Рроїоп бошгсе (Аргон, штат Іллінойс) у відповідності до стандартних способів. Дифракційні зображення обробляють і зменшують із застосуванням програмного забезпечення для обробки даних ХОЗ (Каресп МУ. Асіа Сгувзі. 0.

Віо!. Стувії. 66: 125-132, 2010). Моделі генерують із застосуванням методу молекулярної заміни за допомогою програми РНАЗЕК. Як пошукові моделі застосовують структуру ТІСІТ людини (беподеї еї. АІ. РМАБЗ 2012) і модель антитіла Бар (МаКатига еї. АЇІ. СеїїЇ Нові Місгоре 2013).

Структури проходять ітеративні раунди настройки моделі із застосуванням програми СООТ і уточнення із застосуванням програм РПепіх.геїйпе або ВОЗТЕК. Моделі уточнені до прийнятних значень К і вільного К та статистики Рамачандрана (обчислені за Мо!Іргобійу). Статистичні дані обробки і уточнення наведені у Табл. 10.

Таблиця 10

Статистика збирання і уточнення даних 11111100 тівітлоА? | 0 тІбІТЛА5 | тісілоЗз о Розмірикомрки.їд 17777711 66,52 1,84)" 1,91); нини оУточоенняд/ 17711111 и дв 1 зро | оо юр р квадр.

Довжина зв'язків (А) оРамачандран.////17777777171111111111Ї111111111111111 сприятливий " Значення в дужках відносяться до оболонки з найвищим розрізненням

С. Структура 4.103, зв'язаного з ТІСІТ людини

Комплекс 4.103 Раб з ТІСІТ кристалізувався у просторової групі І4 з двома комплексами в асиметричному блоці і дифракцією до 1,91 А. Накладення двох окремих комплексів в асиметричному блоці показує тільки незначні варіації розміщення основного ланцюга між окремими копіями. Структура 4.103, зв'язаного з ТІСІТ людини (Фіг. бА), показує, що 4.103 стерично перешкоджає зв'язуванню з ПВР (РУК) (Фіг. 6В і 6С). Площа прихованої поверхні між 4.103 і ТІСІТ становить близько 1630А?2. Взаємодія з легсими ланцюгами 4.103 групується навколо залишків ТІСІТ 77-82, причому СОК 11 Туг27а і СОК ІЗ Туг92, Зег93, Тпг94 і Рпе96б, вступають в контакт із залишками ТІСІТ Пе77, Рго79, Зег80 і Гуз82. СОК 12 не вступає в контакт з ТІСІТ. Взаємодія з важкими ланцюгами 4.103 в основному опосередковується СОК На і НЗ і забезпечує більш широкий контакт з ТІСІТ. 4.103 СОК НІ А5п32 вступає в контакт з ТІСІТ

Геи73. 4.103 СОК Н2 Туг52, Агд52р, Рпеб53, ІГуб554, Туг5б і Азр58 вступають в контакт із залишками ТІСІТ Тиг55, СіІп5б, А5п58, сіІибО, А5зрб3, СіІпб4,Ї еиб5, Пеб8, А5п70, 5егв0 і Ніб111.

Залишки 4.103 СОК НЗ Туг99, Азр100, Їеи100а Геи100Б0 і Аіа100с вступають в контакт із залишками ТІСІТ Геиб65, АІаб7, Пеб8, І еи73, Ніз76, Пе77, зег78, Рго79 і І уз82. 4.103 взаємодіє з

ТІСІТ, використовуючи комбінацію неполярних і полярних взаємодій. Залишок легкого ланцюга

СО ІЗ Тпг94 утворює полярні контакти з ТІСІТ Рго79 і Зег80. Залишки важкого ланцюга СОК

Н2 Аго52Б ї Туг5б утворюють гідрогенові зв'язки із залишками ТІСІТ Авбп58 і бІйб0. Залишок важкого ланцюга СОК НЗ І еи100а утворює гідрогеновий зв'язок із ТІСІТ Нібх76. Залишок СОК Н2

Гуз54 і залишок СОК НЗ Азр100 важкого ланцюга утворюють сольові містки із залишками ТІСІТ

Сб і І уз82, відповідно. Додатково див. Фіг. 6О і 6Е.

Базуючись на кристалічній структурі комплексу 4.103/ТІСІТ, визначені залишки ТІСІТ, з якими контактує 4.103 (тобто, залишки епітопа ТІСІТ, з якими зв'язується 4.103) і залишки 4.103, з якими вступає в контакт ТІСІТ (тобто, були визначені залишки паратопа 4.103, що вступають в контакт з ТІСІТ). У Табл. 11 і 12 нижче наведені залишки ТІСІТ і залишки легкого або важкого ланцюга 4.103, з якими вони вступають в контакт, за остаточною оцінкою із застосуванням жорсткості контактної відстані 3,7 А, точки, в якій сили ван-дер-ваальсівських (неполярних) взаємодій є максимальними.

Коо)

Таблиця 11

Залишки епітопа ТІСП і відповідні залишки паратопа на легкому ланцюгу 4.103 тат Легкий ланцюг 4.103 ле 177 | луг | ла 11711111 ве їв ни п ПО: ТЗ ПО УЧ веб 1 во | тк | в

Таблиця 12

Залишки епітопа ТІСП і відповідні залишки паратопа на важкому ланцюгу 4.103

ТтІСІТ Важкий ланцюг 4.103 ни а ПЕ З ПО а | в | це 347 11 тобБ ле | вв | їв | лоба не | з | м | в ни а ЕІ ПОЕТ ни а ЛЕ ПЕТ ни І ЕІ ЕТ тобБ тобБ

Веб | во | др. | вв

Додатково проведено аланінове сканування інтерфейсу ТІСІЇї людини з аланіновими мутаціями залишків ТІСІТ, здійсненими для СіІп53, (Іпоб, (31ибО, І еиб5, Пеб8, Авзп7б0, І еи73,

Ніз76, Ніб111, Туг113 і Тйг117. Зазначені мутанти, поряд з диким типом, тестували щодо зв'язування з Баб фрагментом 4.103. В цьому експерименті мутація залишків ТІСІТ (1иб0О,

Ї еиб65 і Пеб8 зменшувала зв'язування з 4.103 більш ніж у 10 разів (Фіг. 7А, 7В і 7Е). Мутація залишків ТІСІТ СІп5б, Азп70, І еи73, Ніб111 і Туг113 зменшувала зв'язування з 4.103 в межах від 1 до 10 разів (Фіг. 7А, 7В і 7Е). Мутація ТІСІТ СіІп53, Нібз7б і Тпг117 не впливала на зв'язування з 4.103 (Фіг. 7А, 7В і 7Е). Проведений аналіз узгоджується з аналізом кристалічної структури, причому виявлено, що залишки ТІСІТ, які найбільш схильні до зв'язування з 4.103, взаємодіють з 4.103 в структурі.

О. Структура 1А5, зв'язаного з ТІСІТ людини

Комплекс 1А5 Раб з ТІСІТ кристалізувався у просторовій групі Р1 з чотирма комплексами в асиметричному блоці і дифракцією до 2,77 А. Накладення чотирьох окремих комплексів в асиметричному блоці показує тільки незначні варіації розташування основних ланцюгів між окремими копіями. Структура 1А5, зв'язаного з ТІСІТ людини (Фіг. 8), показує, що ТА5 стерично перешкоджає зв'язуванню з ПВР (РУК), але епітоп на ТІСІТ людини, з яким зв'язується 1А5, не є ідентичним епітопу 4.103 (Фіг. 93. Площа прихованої поверхні між 1А5 і ТІСІТ становить близько 1715 Аг. Взаємодія легкого ланцюга 1А5 з ТІСІТ в основному групується між залишками 109 та 119 з одним зовнішнім контактом із сішбО. Легкий ланцюг ТА5 СОК 11 містить єдиний контактуючий залишок Тгр32, який вступає в контакт із залишками ТІСІТ Пе109, Тпг117 ї Тиг119.

Залишок ТАБ СОК 12 І уз50 вступає в контакт з ТІСІТ бІшб0. Залишки ТАБ СОК І З СІуЗ91, СІп92, зег93 і Туг94 вступають в контакт із залишками ТІСІТ Тпг112, Туг113, Рго114, Азр115, СІу116 і

Тп117. У разі важкого ланцюга 10А7 залишки СОК НІ ТпгЗО ї Азр31 вступають в контакт із залишком ТІСІТ Геи73. Залишки 10А7 СОК Н2 Туг52, Ма!І53, Зег54, Тугбо8 і Туг59 вступають в контакт із залишками ТІСІТ СіІп53, ТАг55, Азр72, І еи73 і Туг113. 10А7 СОМ НЗ РПео7, Аго98,

Рго100 і Ттрібб0а вступають в контакт із залишками ТІСІТ СіІп5б, А5п58, СІибО, Азрб3, СІпб4,

Ї еиб65, Пеб8, І еи73, Нівз76 і Ніз111. Контакти між 1А5 і ТІСІТї мають в основному неполярний характер, причому двома винятками є гідрогеновий зв'язок між залишком ТА5 СОК НІ 5зег5а4 і залишком ТІСІТ Авр72 і сольовий місток між залишком ТАЗ СОК НЗ Аго998 і залишком ТІСІТ

СсінбО.

На базі кристалічної структури комплексу 1А5/ГІСІТ визначені залишки ТІСІТ, з якими вступає в контакт 1А5 (тобто, залишки епітопа ТІСІТ, з якими зв'язується 1А5), і залишки 1А5, з якими вступає в контакт ТІСІТ (тобто, залишки паратопа 1А5, з якими зв'язується ТІСІТ). У

Табл. 13 і 14 нижче наведені залишки ТІСІТ і залишки легкого або важкого ланцюга 1А5, з якими вони вступають в контакт, за остаточною оцінкою із застосуванням жорсткості контактної відстані 3,7 А, в точці, в якій сили ван-дер-ваальсівських взаємодій (неполярних) є максимальними.

Таблиця 13

Залишки епітопа ТІСІТ і відповідні залишки паратопа на легкому ланцюгу ТА5

ТС Легкий ланцюг ТА5 нн и с т ПТ п а ПЕ ПО Р

Таблиця 14

Залишки епітопа ТІСІТ і відповідні залишки паратопа на важкому ланцюгу 1А5 тат Важкий ланцюг ТА5 1111111 | вв 11111111 лю | вв 111111 ою | оо ав | 501 а 1798 см во | лю | вв ви 165 | лю | вв 17111111 ма їв 1111111 1ве | в 11111111 др | з

17711111 ти | в

Додатково проведено аланінове сканування інтерфейсу ТІСІТ з аланіновими мутаціями залишків ТІСІТ для Сіп53, (Іп5б, сІШбО, І еи65, Пеб8, А5п70, І еи73, Нібз7б, Ніб111, Туп113 і

Тиг117. Вказані мутанти поряд з диким типом були протестовані щодо зв'язування з Рар фрагментом ТА5. В цьому експерименті мутація залишків ТІСІТ Сіп5б, СІибО, І еиб5, Пебв8 і

Туг113 зменшувала зв'язування с1А5 більш ніж у 10 разів (Фіг. 7А, 7В і 70). Мутація залишків

ТІСІТ Геи73, Ніз7б, А5п70, Ніз111 ї Тпг117 зменшувала зв'язування з Т1А5 в межах від 1 до 10 разів (Фіг. 7А, 7В і 703). Тільки мутація ТІСІТ СІп5З не впливала на зв'язування С1А5 (Фіг. 7А, 7В і 70). Проведений аналіз узгоджується з аналізом кристалічної структури, причому виявлено, що залишки ТІСІТ, які найбільш схильні до зв'язування з ТА5, взаємодіють з 1А5 в структурі.

Е. Структура 10А7, зв'язаного з ТІСІТ людини

Комплекс 10А7 Рар//ІСІТ кристалізувався у просторовій групі Р21 з двома комплексами 10А7/ТІСІТ в асиметричному блоці і дифракцією до 1,85 А. Накладення двох комплексів показує тільки незначні варіації розміщення основного ланцюгу як для ТІСІТ, так і для 10А7. Структура 10А7, зв'язаного з ТІСІї людини (Фіг. 10А), показує, що 10А7 стерично перешкоджає зв'язуванню з ПВР (РУК) (Фіг. 108), але епітоп на ТІСІТ людини, з яким зв'язується 10А7, не є ідентичним епітопу для 4.103 або 1ТА5 (Фіг. 9). Площа прихованої поверхні між 10А?7 і ТІСІТ становить близько 1420 Аг. Залишки ТІСІТ, що вступають в контакт, згруповані між І еиб5 і Пе77, із двома зовнішніми контактами 10А7 СОК з ТІСІТ СіІп56 і Рго87. Легкий ланцюг СОК 11 містить вставку розміром шість амінокислот і використовує залишки Туг27а, сіу271, МаІ28, Гуза29 і Ї еи32 для встановлення контактів із залишками ТІСІТ СіІп5б, І еиб5, Пеб8, Азп70, І еи73, Нібз76, бег78,

Пе77 ї Рго79. СОК 12 встановлює тільки два контакти через Туг5О і Пе5З з ТІСІТ Нів76, Пе77 і

Рго79. СОВ І З СПУуУЗ1, Пе92, Азп93 ії Азп94 вступають в контакт із залишками ТІСІТ Азр72, І е073 і Ніг76. У разі СОК важкого ланцюга залишки НІ не зв'язуються з ТІСІТ. У разі СОК Н2 РПеб5о і

Агд52 вступають в контакт з Азп70, АіІа71, Азр72, Геи73 і СІу74. У разі СОК НЗ залишки Агод95,

Ї ем97, СІуЗ8, Ніз99 і Азп100 вступають в контакт із залишками ТІСІТ Геи73, СІу74, Тгр75, Ніз76,

Пе77 і Рго87. В цілому, взаємодія між легким ланцюгом 10А7 і ТІСІї була в основному гідрофобною за своєю природою, з одним контактом у вигляді гідрогенового зв'язку між гідроксильною групою СОК 12 Туг50 і карбонілом основного ланцюга Пе77. У разі важкого

Зо ланцюга 10А7 полярні контакти знайдені між Агд52 і карбонільними групами основного ланцюга

ТІСІТ Аїа71 ії Азвр72, а також між Аг995 і карбонільними групами основного ланцюга сіу7а4 і

Тер75.

Базуючись на кристалічній структурі комплексу 10А7/ТІСІТ, визначені залишки ТІСІТ, з якими вступають в контакт 10А7 (тобто, залишки епітопа ТІСІТ, з якими зв'язується 10А7), і залишки 10А7, з якими вступає в контакт ТІСІТ (тобто, залишки паратопа 10А7, з якими зв'язується ТІСІТ). У Табл. 15 і 16 нижче наведені залишки ТІСІТ і залишки легкого або важкого ланцюга 10А7, з якими вони вступають в контакт, за остаточною оцінкою із застосуванням жорсткості контактної відстані 3,7 А, в точці, в якій сили ван-дер-ваальсівських взаємодій (неполярних) є максимальними.

Таблиця 15

Залишки епітопа ТІСП і відповідні залишки паратопа на легкому ланцюгу 10А7 1117171 е | в ни а ЕН ОЗ ни и п З ПО ле | ж | лю | во ( ни и п З ПО 1717171 їв

Таблиця 16

Залишки епітопа ТІСІТ і відповідні залишки паратопа на важкому ланцюгу 10А7 11те | вв нини шити ШЕ ни І ГЕ ПОЕТ ни и ТЕ З 17111111 су | в 11711111 не | в нео 1 761 су | вв ни І ГЕ ПОЕТ ле 1771 ву | ев

Додатково проведено аланінове сканування інтерфейсу ТІСІї з аланіновими мутаціями залишків ТІСІЇТ для Сіп53, СіІп5б, СІШбО, І еиб65, Пеб8, А5п70, І еи73, Ніб7б, Ніб111, Туг113 і

Тпт117. Зазначені мутанти, поряд з диким типом, тестували щодо зв'язування з ар фрагментом 10А7. В цьому експерименті тільки мутації І еи7ЗАЇїа і Ніб57бАйЇа впливали на зв'язування з 10А7 більш ніж у 10 разів (Фіг. 7А-7С). Мутація інших наведених залишків не впливала суттєво на зв'язування з 10А7 (Фіг. 7А-7С). Це узгоджується з кристалічною структурою 10А7, зв'язаного з

ТІСІТ, у якій І еи73З і Ніб76 були виявлені безпосередньо в епітопі, з яким зв'язується 10А7.

Е. Анти-ТІСІТ антитіла 4.103, 1А5 і 10А?7 розпізнають ТІСІТ на унікальних епітопах

Структурні дослідження, описані вище, показують, що три анти-ТІСІТ антитіла 4.103, 1А5 і 10А7 розпізнають ТІСІЇ на унікальних епітопах, що може пояснити їх різні функціональні властивості і характеристики. Як наведено в Табл. 17 нижче, наприклад, 4.103 зв'язується з

ТІСІТ на залишках Зег78, 5егв80 і І уз82, що не зв'язуються ані з 1А5, ані з 10А7 антитілами. На

Фіг. 11 зображена структурна інтерпретація, яка зображує, що залишки 5ег78, 5ег80 і І уз82

ТІСІТ вступають в тісний контакт з 4.103, але не з 1А5 або 10А7.

Таблиця 17

Залишки епітопа ТІСІТ в межах 3,7 А для анти-ТІСІТ антитіл 4.103, 1А5 і 10А7 43 ОА? вв вв 11151111 ввів ввів ввів нннннннниптнтнннниИнини ни тт 11111111 м в тв 11111111 тт тв ниж ши в вс нн нний нн тжннининишй в нини лнннинииий в 1 нний

Приклад 7. Характеристика експресії ТІСІТ, РО-1 ії 0226 на імунних клітинах

Далі ми охарактеризували експресію ТІСІТ, РО-1 і 20226 на Сра- ії СОвж Т-клітинах із зразків кісткового мозку множинної мієломи (ММ) із застосуванням кольорової протокової цитометрії. Клітини були виділені із замороженого кісткового мозку, витягнутого у пацієнтів з ММ (п-10). Від двох пацієнтів з ММ були одержані зразки при постановці діагнозу, і знову після ремісії. Заморожений кістковий мозок здорових донорів використовували як контроль (п-8). У цих експериментах зразки кісткового мозку фарбували наступними флуоресцентно кон'югованими моноклональними антитілами: ВУб6О5 (РО-1), АІеха Рішог 488 (ГохР3), РЕ-ОМАМ-

1 (60226), РЕ-Су7 (6045), ВОМ737 (208), РегбР-ег710 (СО4), АПК (АРС) (ТІСІТ), Діамантовий фіолетовий 421 (МКр46б), Діамантовий фіолетовий 421 (СО56), Діамантовий фіолетовий 510 (СО3), Діамантовий фіолетовий 510 (СО38), РЕ-Су/ (СО319), РЕ (СО19) ії ПМЕ/ЮЕАЮ

Еїхабіемеаг-ІК фарбник мертвих клітин (І Ге ТесппоЇодіеє5, ТпепгтоРівпег).

Було показано, що ТІСІТ, РО-1 і 20226 високою мірою експресуються на СО4- і Сов тТ- клітинах, одержаних з кісткового мозку пацієнтів з ММ, в порівнянні з СО4-- і Ов Т-клітинами, одержаними з периферичної крові здорових пацієнтів (Фіг. 12). СО4-- ії СОв8-- Т-клітини, одержані з кісткового мозку пацієнтів з ММ, також були визначені як такі, що спільно експресують ТІСІТ і

РО-1 (Фіг. 13). З огляду на цю картину експресії, анти-ТІСІї антитіла за винаходом є придатними для лікування пацієнтів із пов'язаним з імунною системою захворюванням або раком (наприклад, мієломою, наприклад, ММ) у вигляді монотерапії або в поєднанні з додатковим терапевтичним агентом, таким як антагоніст зв'язування осі РО-1 (наприклад, антагоніст зв'язування РО-Ї1, наприклад, антитіло проти РО-І/1, наприклад, МРОЇ 3280А (атезолізумаб)).

Інші варіанти реалізації винаходу

Хоча вищевикладений винахід було описано більш детально шляхом ілюстрації та прикладів з метою ясності розуміння, опис і приклади не слід інтерпретувати як обмежуючі об'єм винаходу. Необхідно розуміти, що різні інші варіанти реалізації винаходу можуть бути здійснені на практиці з урахуванням загального опису, наведеного вище. Вміст всієї патентної та наукової літератури, процитованої в цьому документі, включено шляхом посилання в повному обсязі.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1105» Сепепесі, Іпс.

Е. Ношпапп-І а Коспе АС -1205 АНТИ-ТІОІТ АНТИТІЛА І СПОСОБИ ЗАСТОСУВАННЯ

Коо) «1305» 50474-120ЖМ 03 «1505 05 62/369,299 «1515 2016-08-01 «1505 05 62/233,230 «1515 2015-09-25 «1605» 354 «170» РабепцЦап версія 3.5 «2105 1 «2115 7 «212» Білок «2135» Ното в5арієпе «4005» 1

Зег Авп 5ег Аа Аа Тгр Авп 501 5 «2105» 2 «211» 18

«212» Білок «213» Ното варієпе «400» 2

Гуз Тіт Туг Туг Аге Ре Муз Тгр Туг 5ег Авр Тутг Аа Маї 5ег Маї 1 5 10 15

Був Оу «210» З «2115 14 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» З

СІи 5ег Тіт Тіг Туг Авр І еи І еп Аа О1Ту Рго Ре Авр Туг 1 5 10 «2105» 4 «2115 17 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 4

Гуз бег 5ег Сп Тг Ма! І еи Туг 5ег 5ег Авп Авп ув Гув Туг Гей 1 5 10 15

Аа «210» 5 «2115 7 «212» Білок «213» Ното варієпе «4005» 5

Тгр Аа 5ег Тіг Аге ОїЇи 5ег 1 5

«2105 6 «2115 9 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 6

СІп Сп Туг Туг бег Тіг Рго Рре ТОг 1 5 «2105» 7 «2115 23 «212» Білок «2135» Ното варієпв «4005 7

Авр Це Уаї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 5етг Гей Аа Маї 5ег І еп О1у 201 5 10 15

СІ Аге Аа ТНг Це Авп Сув «2105» 8 «2115 15 «212» Білок «213» Ното в5арієпе «4005» 8

Тгр Туг СіІп Сп Гуз Рго СОІУ Сіп Рго Рго Авп І еи І еи Це Туг 1 5 10 15 «2105» 9 «2115 32 405212» Білок «213» Ното варієпе «400» 9 ОІТу МаїЇ Рго Авр Аге Ріе 5ег СТу 5ег СІу бег Оу Тіт Авр Ре ТІг 1 5 10 15

І ви ТІг Це 5ег 5ег І еи СіІп Аа СІши Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув 5О 20 25 30

«210» 10 «2115 10 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 10

Ре СІу Рго СТу Тг був МаїЇ СОЇши Це Гу 1 5 10 «2105 11 15. «2115 30 «212» Білок «213» Ното варієпе «2205» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (1)..0) «223» Хаа являє собою Сіп або СОЇ «400» 11

Хаа МУаї СіІп Геп Оп Сп 5ег СОТу Рго СОІУ Гени Маї Гуз Рго 5ег СЇп 1 5 10 15

Зо

Тіг Гей 5ег Геи Тіг Сув Аа Це 5ег СО1Ту Авр 5ег Маї 5ег 20 25 30 «210» 12 «2115 14 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 12

Тгр Це Аге Сіп 5ег Рго 5ег Аге СІу Гей СІи Тгр І еп С1у 1 5 10 «210» 13 «2115 32 «212» Білок «213» Ното варієпе

«400» 13

Ате Це ТІг Це Авп Рго Авр ТІг 5ег Гуз Авп Сп Ре 5ег І еи СІп 1 5 10 15

І еи Авп 5ег Маї Тіг Рго ОЇи Авр ТІг Аа Маї Ріе Туг Сувз Тіг Аге 20 25 30 «210» 14 «1511 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 14

Тгр О1Уу СіІп СІу Тіг Г еп Маї ТІг Маї 5ег 5ег 1 5 10 «210» 15 «2115 30 «212» Білок «213» Ното в5арієпе «400» 15

СІи МаїЇ СІп Гей Сп Оп 5ег СІТу Рго СТУ Геи Маї Гув Рго 5ег СІп зо 1 5 10 15

Тіг Гей 5ег Геи Тіг Сув Аа Це 5ег СО1Ту Авр 5ег Маї 5ег 20 25 30 «210» 16 «2115 30 «212» Білок «2135» Ното в5арієпе «400» 16

СІп МаїЇ СІп Гей Сп Оп 5ег СТу Рго СТУ Гей Маї Гув Рго 5ег СІп 1 5 10 15

Тіг Гей 5ег Геи Тіг Сув Аа Це 5ег СО1Ту Авр 5ег Маї 5ег 20 25 30

«210» 17 «2115 5 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 17

Зег Туг Рго Меї Авп 1 5 «210» 18 «2115 17 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 18

Ттр Це Авзп ТП Авп Тіг СТу Авп Рго Тіг Тут Ма! СІп СТу Ре Трг 1 5 10 15

ОСІу «210» 19 «2115 13 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 19 ТІг ОТу СТу Нів Тіг Туг Авр 5ег Туг Аа Ріе Авр Маї 1 5 10 «2105 20 «211511 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 20

Ате Аа 5ег СіІп Маї Це 5ег 5ег 5ег І еп Аа 1 5 10 «210» 21

«2115 7 «212» Білок «213» Ното варієпе хаб» 21

Аа Аа 5ег ТПг І еи Сп 5ег 1 5 «2105 22 «2115 9 «212» Білок «213» Ното варієпе «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (8)..(8) «223» Хаа являє собою Сув, 5ег або Туг «4005 22

СіІп Нів І еи Нів С1Ту Туг Рго Хаа Авп 1 5 «2105» 23 «2115 9 05212» Білок «213» Ното варієпе «4005 23

СІ Нів І еи Нів СТУ Туг Рго 5ег Авп 1 5 «2105 2А «2115 30 «212» Білок «213» Ното варієпе «4005» 24

СІи МаїЇ Сів Г еп МаїЇ СІп 5ег ОІу 5ег Авр Ге Гув Гув Рго С1у Аа 1 5 10 15 5ег Ма)Ї Аге Маї 5ег Суб Гув Аа 5ег СТу Туг Тг Ріе Трг

20 25 30 «2105» 25 к2115 14 «212» Білок «213» Ното варієпе «4005» 25

Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго Оу Нів ОС1уУ Гей Си Тгр Ме СТу 1 5 10 «2105 26 «2115 32 «212» Білок «213» Ното варієпе «4005» 26

Ате Ріє Маї Ре 5ег Геи Авр ТНг 5ег МаЇ Азп ТНг Аа Тут І еи СІп 1 5 10 15

Це 5ег 5ег ІГеи Гуз Аа СЇи Авр Тг Аа Маї Туг Рре Сув Аа Аге 20 25 30 з0 052105» 27 «1511 «212» Білок «213» Ното варієпе «4005 27

Тгр О1Уу СіІп СІу Тіт Меї Маї Тіг Маї 5ег 5ег 1 5 10 «210» 28 «2115 9 «212» Білок «213» Ното варієпе «4005» 28

СіІп Нів І еи Нів С1Ту Тут Рго Сув Авп 1 5

«2105» 29 «2115 30 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 29

СІп Маї Сів Г еп МаїЇ СІп 5ег ОІу 5ег Авр Ге Гув Гув Рго С1у Аа 1 5 10 15

Зег МаїЇ Аге Маї 5ег Суб Гув Аа 5ег СТУ Туг ТІг Ріе Трг 20 25 30 «2105» 30 «2115 23 «212» Білок «2135» Ното варієпе «400» 30

Авр Це Сіп Геп Тг Сп 5ег Рго ТПг Ре Гей 5ег Аа 5ег МУа!Ї СІТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тіг Сув 20

Зо «210» 31 «2115 15 «212» Білок «213» Ното в5арієпе «400» 31

Тгр Туг СіІп Сп Авп Рго СІу Гуз Аа Рго Гуз І еп І еи Це Туг 401 5 10 15 «2105» 32 «2115 32 05212» Білок «213» Ното варієпе «400» 32

ОТу Маї Рго 5ег Агео Ре 5ег СО1у 5ег СТу 5ег СТу Тіг СЇи Рре Трг

1 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи Сп Рго СЇшпи Авр Ре Маї ТІг Туг Туг Сув 20 25 30 «2105» 33 «2115 10 10212» Білок «213» Ното варієпе «4005» 33

Ріе СОІу СІп СОТу Тіт Гуз Ма! СОЇТш Пе Гув 1 5 10 «2105» 34 «2115 126 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 34

СІи МаїЇ СІп Гей Сп Оп 5ег СІТу Рго СТУ Геи Маї Гув Рго 5ег СІп 1 5 10 15 зо ТОПг ІТ ей 5ег Геи Тг Сув Аа Пе 5ег О1у Авр 5ег Маї 5ег 5ег Авп 20 25 30

Зег Аа Аа Тгтр Авп Тгр Це Аге Сіп 5ег Рго 5ег Аге О1Іу еп Сп 35 40 45

Тгр Гей ОСТу був ТНг Туг Туг Аге Ре Гуз Тгтр Туг 5ег Авр Туг Аа 50 55 60

Уа! 5ег Ма! був СТу Аге Це ТІг Це Авп Рго Авр Тг 5ег Мув Авп 65 70 75 80

СІп Ре 5ег І еи СіІп Ге Авп 5ег Ма! ТНг Рго СЇй Авр Тг Аа Маї 85 90 95

РБе Туг Сувз Тіг Аге Си 5ег ТПг ТІг Туг Авр Ге Гей Аа СІу Рго

100 105 110

РІе Авр Туг Ттр СТу СІп С1Ту ТНг Ге Ма! ТНг Маї 5ег 5ег 115 120 125 «2105» 35 «2115 126 10212» Білок «213» Ното варієпе «4005» 35

Сп МаїЇ СІп Гей СІп Сп 5ег СТу Рго С1у Гей Маї Гув Рго 5ег СЇп 1 5 10 15

Тіт Гей 5ег Геи Тіг Сув Аа Це 5ег СТу Авр 5ег Маї 5ег 5ег Авп 20 25 30

Зег Аа Аа Тгтр Авп Тгр Це Аге Сіп 5ег Рго 5ег Аге О1Іу Гей Си 35 40 45

Тгр Гей ОСТу був ТНг Туг Туг Аге Ре Гуз Тгтр Туг 5ег Авр Туг Аа 50 55 60

Зо

Уа! 5ег Ма! був СТу Аге Це ТІг Це Авп Рго Авр ТІг 5ег Гув Авп 65 70 75 80

СІп Рре 5ег І ей Сп Гей Авп 5ег Ма! Тіг Рго СЇш Авр Тіг Аа Маї 85 90 95

Ре Туг Суб ТПг Аге Оп 5ег ТІг Тіг Туг Авр Г еп Гец Аа Оу Рго 100 105 110

РІе Авр Туг Ттр СТу СІп С1Ту ТНг Ге Ма! ТНг Маї 5ег 5ег 115 120 125 «2105» 36 «2115 113 «212» Білок 00 «213» Ното варієпв

«400» 36

Авр Це Уаї Меї Тнг Сп 5ег Рго Авр 5етг Гей Аа Маї 5ег І еп О1у в і 5 10 15

СІ Аге Аа ТНг Це Авп Сув Муз 5ег 5ег СІп Тіг Маї Гей Туг 5ег 20 25 30 5Зег Авп Авзп Гу Муз Тут І ей Аа Тгтр Туг СіІп Сіп Гуз Рго О1у СІп 35 40 45

Рго Рго Авпі І еп І еи Це Туг Тгр Аа 5ег ТНг Аге ОЇи 5ег СТу Маї 50 55 60

Рго Авр Аге РНе 5ег СІу 5ег ОЇу 5ег О1у Тіт Авр Ре ТІг Гей ТОг 65 70 75 80

Це 5ег 5ег І еи СіІп Аа СІи Авр Маї Аа Маї Туг Туг Сув СІп СОЇп 85 90 95

Туг Туг 5ег Тіг Рго Ре Тіт Ре СІу Рго СІу Тіг Гуз МаїЇ СІи Це 100 105 110

Зо

Гув «2105» 37 «2115 122 «212» Білок «213» Ното варіепе «400» 37

СІи МаїЇ Сів Г еп МаїЇ СІп 5ег ОІу 5ег Авр Ге Гув Гув Рго С1у Аа 1 5 10 15

Зег МаїЇ Аге Маї 5ег Суб Гув Аа 5ег СТУ Туг ТІг Ріе Тіг 5ег Туг 20 25 30

Рго Меї Азвп Ттр Маї Аге Сіп Аа Рго Су Нів О1у еп Оп Ттр Меї 35 40 45

ОтТу Ттр Це Авп ТІг Авп ТІг О1у Авп Рго Тіг Туг МаїЇ СіІп О1у Ре 50 55 60

Ті О1у Аге Ре Маї Ре 5ег І еи Авр Тіт 5ег Ма! Азп Тг Аа Туг 65 70 75 80

І си СіІп Це 5ег 5ег Геи Гуз Аа СЇшйи Авр Ті Аа Маї Туг Ре Сув 85 90 95

Аа Атге Тіг СІу ОТу Нів Тіг Туг Авр 5ег Туг Аа Ре Авр Маї Тгр 100 105 110

СТУ ОЇп СТу Тіг Меї Ма! Тіг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105» 38 «2115 107 «212» Білок «213» Ното варієпе зо «400» 38

Авр Це Сіп Геп Тг Сп 5ег Рго Тіг Ре Гей 5ег Аа 5ег Ма! СІТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Маї Це 5ег 5ег 5ег 20 25 30

Гей Аа Ттр Туг СІп Сп Авп Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45

Туг Аа Аа 5ег ТІ Геи Сп 5ег СІу Маї Рго 5ег Аге Ріє 5ег СІу 60

Зег ОТу бег СТу Тіг См Ре ТПг І. еи Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80 50

СІ Авр Ре Маї Тіг Туг Туг Сув СіІп Нів Гей Нів ОС1у Туг Рго 5ег 85 90 95

Авп Рпе СТу СІп СТу Тіт Гуз Маї ОЇш Пе Гув 100 105 «2105» 39 «2115 122 «212» Білок «213» Ното варієпе х400» 39

СІп Маї Сів Г еп МаїЇ СІп 5ег ОІу 5ег Авр Ге Гув Гув Рго С1у Аа 1 5 10 15

Зег МаїЇ Аге Маї 5ег Суб Гув Аа 5ег СТУ Туг ТІг Ріе Тіг 5ег Туг 20 25 30

Рго Меї Авп Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго Су Нів О1уУ Ге ОЇ Тгр Ме

СІу Ттр Це Авп Тіг Авзп ТНг О1у Авп Рго Тіг Туг Ма! ОЇп СТу Рре

Зо 50 55 60

Ті О1у Аге Ре Маї Ре 5ег І еи Авр Тіт 5ег Ма! Азп Тг Аа Туг 65 70 75 80 35

І си СіІп Це 5ег 5ег Геи Гуз Аа СЇшйи Авр Ті Аа Маї Туг Ре Сув 85 90 95 40

Аа Атге Тіг СІу ОТу Нів Тіг Туг Авр 5ег Туг Аа Ре Авр Маї Тгр 100 105 110 45 ОСпІу СОЇп ОТу Тіг Меї Маї Тіг ХМаї 5ег 5ег 115 120 «210» 40 «2115 107

«212» Білок «213» Ното варієпе «400» 40

Авр Це Сіп Геп Тг Сп 5ег Рго Тіг Ре Гей 5ег Аа 5ег Ма! СІТу 1 5 10 15

Авр Аге МаїЇ Тіт Це Тнг Сув Агео Аа 5ег СІп Маї Це 5ег 5ег 5ег 20 25 30

І еи Аа Тгр Туг Сіп СіІп Авп Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Ге Ге Це 35 40 45

Туг Аа Аа 5ег ТІ еп Сп 5ег СІу Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СТу 50 55 60

Зег ОТу бег СТу Тіг См Ре ТПг І. еи Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Маї Тіг Туг Туг Сув СіІп Нів Гей Нів О1у Туг Рго Сув 85 90 95

Авп Ріе ОС1у СіІп О1у Тг Гув Маї ОЇи Це Гув 100 105 «210» 41 «2115 5 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 41

Авп Тут Рго Меї Авп 1 5 «2105» 42 «2115 17 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 42

Тгр Це Авп Тіт Авп Тог СтТу 5ег Рго Аа Туг Аа СІп Авр Ріе Трг 1 5 10 15

ОСІи «2105» 43 «1511 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 43

Тіг Аа Це Тнг 5ег Маї Туг Нів Ріє Авр Туг 1 5 10 «210» 44 «1511 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 44

Атге Аа 5ег СіІп СІу Це 5ег 5ег Туг Гей Аа 1 5 10

Зо «210» 45 «2115 7 «212» Білок «213» Ното в5арієпе «400» 45

СІу Аа ТП Тіг Г еп Сп 5ег 401 5 «210» 46 «2115 9 «212» Білок «213» Ното варієпе «220» «2215 МОЮ КЕ5

«222» (8)..(8) «223» Хаа являє собою Сув, 5ег або Туг «400» 46

СІп Гув Геп Авп 5ег Нів Рго Хаа 5ег 1 5 «2105 47 «2115 9 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 47

СІп Гув Геп Авп 5ег Нів Рго Сув 5ег 1 5 «210» 48 «2115 9 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 48

СІп Гув Геп Авп 5ег Нів Рго 5етг 5ег 1 5

Зо «210» 49 «2115 9 «212» Білок «213» Ното в5арієпе «400» 49

СІп Гуз Геп Авп 5ег Нів Рго Туг 5ег 401 5 «2105» 50 «2115 30 «212» Білок «213» Ното варієпе «220» «2215 МОЮ КЕ5

«222» (1)..0) «223» Хаа являє собою Си або Сіп «4005 50

Хаа Ма! СіІп Ге Маї Сіп 5ег СОТу бег СТи Ге Гув Гуз Рго С1у Аа 1 5 10 15 бег Ма! Гуз Ма! 5ег Сув Гу Аа 5ег СІу Туг ТІг Гей ТОг 20 25 30 «2105» 51 «2115 14 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 51

Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго Оу Аге С1Іу Гей ОЇпи Ттр Меї ОЇу 1 5 10 «2105 52 «2115 32 «212» Білок «213» Ното варієпе з0 «4005 52

Ате Ріє Маї Ріе 5ег Гей Авр ТНг 5ег Ма!Ї Тіт Тіг Аа Тут І еп Сп 1 5 10 15

Це 5ег 5ег Іеи Гуз Аа Си Авр Тг Аа Маї Туг Туг Сув Аа Аге 20 25 30 «2105» 53 «1511 «212» Білок «213» Ното варієпе «4005» 53

Тгр О1Уу СіІп СІу Тіг Г еп Маї ТІг Маї 5ег 5ег 1 5 10

«2105 54 «2115 30 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 54

СІп Маї Сів Г еп Маї СІп 5ег СТу 5ег ОЇи Гей Гув МГув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СІу Туг ТІг Гей Тог 20 25 30 «2105» 55 «2115 30 «212» Білок «213» Ното варієпе «4005» 55

СІи МаїЇ Сів Г еп Маї СІп 5ег СТу 5ег ОЇи Гей Гув МГув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СІу Туг ТІг Гей Тог 20 25 30

Зо «2105» 56 «2115 23 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 56

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре ГІ еп 5ег Аа 5ег Ма! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тіг Сув 20 «2105» 57 «2115 15 «212» Білок «213» Ното варієпе

«4005 57

Тгр Туг СіІп Сп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Аге Маї І еи Це Туг 1 5 10 15 «2105» 58 «2115 32 «212» Білок «2135 Ното варієпв «4005» 58

СОІУ Маї Рго 5ег Агео Ре 5ег СО1Ту 5ег СЇи 5ег СТу Тіг СЇи Ріе Трг 1 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи Сп Рго СЇши Авр Гей Аа Тіт Туг Туг Сув 20 «2105 59 «2115 10 «212» Білок 25 «213» Ното в5арієпе «4005» 59

Ре СІу СІп СПу ТІг Гув Маї ОЇш Це Гув зо 1 5 10 «210» 60 «2115 120 005212» Білок «213» Ното варієпе «400» 60

СІп Маї Сів Г еп Маї СІо 5ег СТу 5ег ОЇши Гей Гуз МГув Рго ОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз Маї 5ег Сув Гув Аа 5ег СТУ Тут ТІПг Гей Тіг Авп Туг 20 25 30

Рго Меї Азвп Ттр Маї Аге Сіп Аа Рго Су Аге ОС1у Гей ОЇш Ттр Меї 35 40 45

СІу Ттр Це Авп ТІг Авп Тіг О1у 5ег Рго Аа Туг Аа СіІп Авр Ре 50 55 60

Тін ОЇ Аге Ре Маї Ре 5ег І еи Авр ТІг 5ег Ма!Ї Тіг Трг Аа Туг 65 70 75 80

Гей СІп Це 5ег 5ег І еи Гу Аа Си Авр Тіг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Аа Аге ТІг Аа Це Тіг 5ег Ма! Туг Нів Ріє Авр Туг Тгр О1Іу СІп 100 105 110

СІу Тіг ГГ еи Маї Тг Маї 5ег 5ег 115 120 «210» 61 «2115 107 «212» Білок «213» Ното в5арієпе «400» 61

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у зо 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тіг Сув Аге Аа 5ег СІп СТу Це 5ег 5ег Туг 20 25 30

І еи Аа Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго О1у Гуз Аа Рго Аге Маї І еи Це 35 40 45

Туг О1у АІа Ті Тіт Геп Сп 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 50 55 60 бег ОЇш 5ег СТУ Тіг СЇш Ре ТПг Г.еи Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІи Авр Гей Аа Тіг Туг Туг Сув СіІп Гу Гей Авп 5ег Нів Рго Сув 5О 85 90 95

5Зег Ріе ОСІу СіІп СІу ТіПг Гув Маї СТи Це Гув 100 105 «2105» 62 «2115 120 «212» Білок «2135 Ното варієпв «400» 62

СІи МаїЇ Сів Г еп Маї СІп 5ег СТу 5ег ОЇи Гей Гув МГув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТУ Туг ТІПг Гей Тіг Авп Туг 20

Рго Меї Азвп Ттр Маї Аге Сіп Аа Рго Су Аге ОС1у Гей ОЇш Ттр Меї 25

СІу Ттр Це Авп ТІг Авп ТІг СТУ 5ег Рго Аа Туг Аа СіІп Авр Ре 60

Зо Тг ОЇй Аге Рре Маї Ре 5ег І еп Авр ТІг 5ег Ма! ТПг Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СіІп Це 5ег 5ег Ге Гуз Аа Си Авр ТІг Аа Маї Туг Туг Сув 35 85 90 95

Аа Аге ТІг Аа Це Тіг 5ег Ма! Туг Нів Ріє Авр Туг Тгр О1Іу СІп 100 105 110 40

СІу Тіг ГГ еи Маї Тг Маї 5ег 5ег 115 120 45 «210» 63 «2115 107 «212» Білок «213» Ното варієпе 50

«400» 63

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тіг Сув Аге Аа 5ег СІп СТу Це 5ег 5ег Туг 20 25 30

І еи Аа Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго О1у Гуз Аа Рго Аге Маї І еи Це 35 40 45 Туг СОТу АІа ТІПг Тіг І еи Сп 5ег О1у Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 50 55 60

Зег ОЇш 5ег СТУ Тіг См Ре ТПг І.еи Трг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 2065 70 75 80

СІи Авр Гей Аа Тіг Туг Туг Сув СіІп Гуз Геп Авп 5ег Нів Рго 5ег 85 90 95 25 5Зег Ріе ОСІу СіІп СІу ТіПг Гув Маї СТи Це Гув 100 105

Зо «210» 64 «2115 107 «212» Білок «213» Ното варієпе 35 «400» 64

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15 40

Авр Аге Маї Тіт Пе Тіг Сув Аге Аа 5ег СІп СТу Це 5ег 5ег Туг 45

І еи Аа Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго О1у Гуз Аа Рго Аге Маї І еи Це

Туг ОТу АІа ТіПг Тг І еи Сп 5ег СІу Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу

50 55 60

Зег ОЇш 5ег СТУ Тіг См Ре ТПг І.еи Трг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІи Авр Гей Аа Тіг Туг Туг Сув СіІп Гуз Г еп Авп 5ег Нів Рго Туг 85 90 95 5Зег Ріе ОСІу СіІп СІу ТіПг Гув Маї СТи Це Гув 100 105 «210» 65 «2115 9 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 65

СіІп Нів І ей Нів С1Ту Туг Рго Туг Авп 1 5 «210» 66 «2115 122 «212» Білок «213» Ното в5арієпе «400» 66

СІи МаїЇ Сів Г еп МаїЇ СІп 5ег ОІу 5ег Авр Ге Гув Гув Рго С1у Аа 1 5 10 15

Зег МаїЇ Аге Маї 5ег Суб Гув Аа 5ег СТУ Туг ТІг Ріе Тіг 5ег Туг 20 25 30

Рго Меї Азвп Ттр Маї Аге Сіп Аа Рго Су Нів О1у еп Оп Ттр Меї 35 40 45

СІу Ттр Це Авп Тіг Авзп ТНг О1у Авп Рго Тіг Туг Ма! ОЇп СТу Рре 60 50 ТІг ОТу Аге РІе Маї Ре 5ег І еп Авр ТІг 5ег Ма! Авп Тіг Аа Туг

65 70 75 80

І си СіІп Це 5ег 5ег Геи Гуз Аа СЇшйи Авр Ті Аа Маї Туг Ре Сув 85 90 95

Аа Атге Тіг СІу ОТу Нів Тіг Туг Авр 5ег Туг Аа Ре Авр Маї Тгр 100 105 110

СТУ ОЇп СТу Тіг Меї Ма! Тіг Маї 5ег 5ег 115 120 «210» 67 «2115 107 «212» Білок «213» Ното варієпе «400» 67

Авр Це Сіп Геп Тг Сп 5ег Рго Тіг Ре Гей 5ег Аа 5ег Ма! СІТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СІп Маї Це 5ег 5ег 5ег 20 25 30

Зо

І еи Аа Тгр Туг Сіп СіІп Авп Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Ге Ге Це 35 Туг АІа Аа 5ег ТНг Гей Сп 5ег СТу Маї Рго 5ег Аге Ріе 5ег ОЇу 60

Зег ОТу бег СТу Тіг См Ре ТПг І. еи Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 4065 70 75 80

СІ Авр Ре Маї Тіг Туг Туг Сув Сп Нів ГГ еп Нів СТУ Туг Рго Туг 85 90 95 45

Авп Рпе СТу СІп СТу Тіт Гуз Маї ОЇш Пе Гув 100 105 50

«210» 68 «2115 7 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 68

Тін Туг СО1у Ме С1Ту Маї 5ег 1 5 «210» 69 «2115 16 «212» Білок «213» Кайив погуерісив «400» 69

Зег Це Ттр Ттр Авп ОС1у Авп ТІг Туг Туг Авп Рго 5ег Ге Гу 5ег 201 5 10 15 «2105» 70 «1511 212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 70 зо ТОг ОТу СТУ Аа Маї Пе Тіг Тгтр Рре Аа Туг 1 5 10 «210» 71 «2115111 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 71

Гуз Аа 5ег Сіп 5ег Ма!Ї СТУ Суб Авзп Це Аа 1 5 10 «2105 72 «2115 7 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 72

Туг Аа 5ег Авп Агео Туг Тіг 1 5 «2105 73 «2115 9 212 Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 73

СІп Нів Це Туг Авп 5ег Рго Туг Рго 1 5 «210» 74 «2115 30 212 Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (1).41) «223» Хаа являє собою Сип або Сіп

Зо «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (3)..(3) «223» Хаа являє собою 5ег або Тіг

З5 «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (10)..410) «223» Хаа являє собою Аа або ОС1у «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (11).11) «223» Хаа являє собою Пе або І еп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (12)..412) «223» Хаа являє собою І еп або Маї

«2215 МОЮ КЕ5 «222» (13)..(13) «223» Хаа являє собою Іув або Сп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (15)..(15) «223» Хаа являє собою 5ег або Тіг «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (16)..016) «223» Хаа являє собою Нів або Сп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (19)..(19) «223» Хаа являє собою 5ег або Тіг «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (23)..(23) «223» Хаа являє собою 5ег або Тіг «4005 74

Хаа Уа! Хаа Іеи Гуз СОЇи 5ег О1у Рго Хаа Хаа Хаа Хаа Рго Хаа Хаа 1 5 10 15

Тіг Гей Хаа Геи Тіт Суб Хаа Ре 5ег СТу Ре 5ег І ей 5ег 20 25 30 «2105 75 «2115» 14 212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (6).(6) «223» Хаа являє собою Рго або 5ег 00 «220»

«2215 МОЮ КЕ5 «222» (17)..07) «223» Хаа являє собою Си або ОС1у в «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (9)..9) «223» Хаа являє собою Аа або ОС1у «400» 75

Тгр Це Аге Сіп Рго Хаа Хаа Гуз Хаа І еп Си Тгр Гей Аа 1 5 10 «210» 76 «2115 32 212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (4).(4) «223» Хаа являє собою Пе або Маї 00 «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (5)..(5) «223» Хаа являє собою 5ет або ТІг 00 «2205» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (8)..(8) «223» Хаа являє собою Аа або Тіг «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (10)..010) «223» Хаа являє собою ув або Авп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (11)..11) «223» Хаа являє собою Авр або Авп 00 «220»

«221» МОЮ КЕ5 «222» (13)..(13) «223» Хаа являє собою Аа або Маї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (14)..(14) «223» Хаа являє собою Ре або Маї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (16)..016) «223» Хаа являє собою Авп або ТІг «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (17)..(17) «223» Хаа являє собою Меї або Уаї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (19)..(19) «223» Хаа являє собою Авп або 5ег «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (20)..(20) «223» Хаа являє собою Меї або Уаї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (22)..022) «223» Хаа являє собою Рго або Тіг «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (23)..(23) «223» Хаа являє собою ТІг або Маї «4005» 76

Аге І еи Тіг Хаа Хаа Гуз Авр Хаа 5ег Хаа Хаа Сіп Хаа Хаа І еи Хаа 1 5 10 15

Хаа Тіг Хаа Хаа Авр Хаа Хаа Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 «2105 77

«212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «4005 77

Ттр СТУ СІп СТу ТПг Ге Маї ТНг Маї 5ег 5ег 1 5 10 «2105» 78 15. «2115 30 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 78

СІп Маї 5ег Геи Гув СЇи 5ег О1у Рго СОІУ Це ГІ еп Сіп Рго 5ег Нів 1 5 10 15 ТІПгІ ей бег Гей ТІг Сув 5ег Ре 5ег СТу РПе 5ег І еп 5ег 20 25 30 «2105 79 «2115 14 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 79

Тгр Це Аге Сіп Рго 5ег ОЇши Гуз ОТу Гей Оп Тгр Ге Аа 1 5 10 «2105» 80 «2115 32 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 80

Атге І еи Тіг Маї 5ег Гуз Авр Аа 5ег Авп Авр Сп Аа Ре Гей Авп 1 5 10 15

Уа! Тіт 5ег Ма! Ар Тіт Тіг Авр Тіг Аа Тіт Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 «2105» 81 «2115 30 «212» Білок -213» Штучна послідовність 10. «2205 «223» Синтетична конструкція «400» 81

СІ МаЇ Ті Гей Гув Си 5ег ОТу Рго Аа Гей Маї Гуз Рго Тіг Сп 1 5 10 15

Тіп Гей Ті Ге ТНг Сув Тіг Ре 5ег СТу Рре 5ег І ей 5ег 20 25 30 «2105» 82 «2115 14 212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція

Зо «4005 82

Тгр Це Аге Сіп Рго Рго СІу Гуз Аа ГІ еп ОїЇи Тгр Гей Аа 1 5 10 «2105» 83 «2115 32 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 83

Аге І еи Тіг Ма! Тіг був Авр Аа 5ег Суб Авп Сп Аа Маї І еп Трг 1 5 10 15

Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Уаї Авр Тіг Аа Тнг Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 «2105» 84 «2115 32 «212» Білок «213» Штучна послідовність 10. «2205 «223» Синтетична конструкція «4005 84

Аге Гецп Тіт Пе ТІг Гув Авр Аа 5ег Гув Авп Сп Аа Маї Гей Трг 1 5 10 15

Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Уаї Ар Тіг Аа Тнг Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 «2105» 85 «2115 32 212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція

Зо «4005» 85

Аге І еи Тіг Ма! Тіг був Авзр Тіг 5ег Гув Авп Сп Аа Маї І еи ТОг 1 5 10 15

Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Уаї Авр Тіг Аа Тнг Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 «2105» 86 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 86

Аге І еи Тіг Ма! Тіг був Авр Аа 5ег Гув Авп Сп Маї Ма! Гей Трг 1 5 10 15

Ме Тіт Авп Меї Авр Рго Маї Авр ТІг Аа ТІг Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 «2105» 87 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» х223» Синтетична конструкція «4005 87

Атге ви Тіг Це Тіт був Авр Тнг 5ег був Авп Сп Маї Ма! Гей Трг 201 5 10 15

Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Уаї Авр Тіг Аа Тнг Туг Туг Сув Аа Нів 25 «2105» 88 «2115 23 «212» Білок 30 «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція

З5 «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (1)..0) «223» Хаа являє собою Авр або Авп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (3)..(3) «223» Хаа являє собою Сп або Маї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (9)..(9) «223» Хаа являє собою Гуз або бет

«221» МОЮ КЕ5 «222» (11)..11) «223» Хаа являє собою І ей або Меї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (13)..(13) «223» Хаа являє собою Аа або Пе «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (21)..21) «223» Хаа являє собою Пе або Меї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (22).(22) «223» Хаа являє собою Авп або ТІг «400» 88

Хаа Це Хаа Меї Тіг Сіп 5ег Рго Хаа 5ег Хаа 5ег Хаа 5ег Ма! СОТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіг Хаа Хаа Сув 20 0) «210» 89 «211» 15 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (8)..(8) «223» Хаа являє собою Іув або Сп «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (9)..(9) «223» Хаа являє собою Аа або 5етг во «400» 89

Тгр Туг СіІп Сп Гуз Рго С1у Хаа Хаа Рго Гуз І еп І еи Це Туг 1 5 10 15

«210» 90

«2115 32

-212» Білок

-213» Штучна послідовність

«220»

«223» Синтетична конструкція «220»

«221» МОЮ КЕ5

«222» (4).(4)

«223» Хаа являє собою Авр або 5ег «220»

«221» МОЮ КЕ5

«222» (17)..(7)

«223» Хаа являє собою 5ег або Тіг «220»

«221» МОЮ КЕ5

«222» (9)..9)

«223» Хаа являє собою Су або бет «220»

«221» МОЮ КЕ5

«222» (17)..(17)

«223» Хаа являє собою Ре або І ей «220»

«221» МОЮ КЕ5

«222» (20)..(20)

«223» Хаа являє собою Авп або 5ег «220»

«221» МОЮ КЕ5

«222» (21)..021)

«223» Хаа являє собою 5ег або Тіг «220»

«221» МОЮ КЕ5

«222» (22)..022)

«223» Хаа являє собою І еп або МУаї «220»

«221» МОЮ КЕ5 «222» (2А).(24) «223» Хаа являє собою Аа або Рго «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (27)..(27) «223» Хаа являє собою Аа або Пе «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (29)..(29) «223» Хаа являє собою РПе або ТІг «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (30)..(30) «223» Хаа являє собою Ре або Туг «400» 90

СОІУ Маї Рго Хаа Аге Ріе Хаа СІу Хаа СІу б5ег ОТу Тіт Авр Ре ТОг 1 5 10 15

Хаа Тіг Це Хаа Хаа Хаа Сіп Хаа СІи Авр Хаа Аа Хаа Хаа Туг Суб 20 25 30 «210» 91 «2115 10 «212» Білок -213» Штучна послідовність

ЗБ 00 «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (3)..(3) «223» Хаа являє собою С1Іп або ТПг «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (17)..07) «223» Хаа являє собою І еп або МаїЇ «400» 91

Ре СІу Хаа С1у Тіт Гуз Хаа СЇи Це Гу 1 5 10 «2105» 92 «2115 23 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 92

Азвп Це Уаї Меї Тнг Сп 5ег Рго Гуз 5зег Меї 5ег Це 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге МаїЇ Тіт Меї Авп Сув 20 «2105» 93 «2115 15 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «А00» 93

Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго СОІУ Сіп 5ег Рго Гуз І еи І еи Це Туг 1 5 10 15

Зо «2105» 94 «2115 32 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 94

СІу Маї Рго Авр Аге Рпе Тіг СТу О1у О1у 5ег СТУ Тіг Авр Ріе Тіг 1 5 10 15

І ви ТІПг Це Авп ТІг Маї СІп Аа Си Авр Аа Аа Ре Ре Туг Сув 20 25 30 «210» 95 «2115 10 «212» Білок «213» Кацив погуерісив

«400» 95

РПе СіІу Тіг СІу Тіг Гув Гей ОЇи Це Гув 1 5 10 «2105» 96 «2115 23 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція хА00» 96

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тіг Сув 20 «2105» 97 «2115 15 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична конструкція «4005 97

Ттр Туг СОІп СІп Гув Рго СІу Гув бег Рго Гув Гец І .еи Це Туг 1 5 10 15 «210» 98 «2115 15 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 98

Тгр Туг СіІп СіІп Гув Рго О1у Гуз Аа Рго Гуз Ге І еи Це Туг 1 5 10 15

«210» 99 «2115 32 5212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 99

СІу Маї Рго 5ег Агео Ре 5ег СТу 5ег СІу 5ег О1у Тіт Авр Ре ТІг 1 5 10 15

Ре Ті Це 5ег 5ег І еи СіІп Рго СЇи Авр Пе Аа Тіт Туг Туг Сув 20 «2105 100 «2115 10 «212» Білок -213» Штучна послідовність 25 «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 100

Зо

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 1 5 10 «210» 101 «2115 121 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 101

СІп Маї 5ег Геи Гув СЇи 5ег О1у Рго СОІУ Це ГІ еп Сіп Рго 5ег Нів 1 5 10 15

Тіп Гей 5ег Гей Тіг Сув 5ег Рпе 5ег СТу Ре 5ег І еи 5ег ТІг Туг 20 25 30

ОтТу Мес СІу Маї 5ег Тгр Це Аге Сп Рго 5ег ОЇи Гуз О1у Гей СЇи

35 40 45

Тгр Гей Аа 5ег Це Тгр Тгр Авзп Оу Авп ТІг Туг Туг Авп Рго 5ег 50 55 60

І си Гуз 5ег Аго І еи Тг Маї 5ег МГув Авр Аа 5ег Авп Авр Сп Аа 65 70 75 80

Ре І еп Авп Маї Тіт 5ег Ма! Авр ТІг Тіг Авр Тіг Аа Тг Туг Туг 85 90 95

Сув Аа Нів Тіг Оїу С1у Аа Маї Це Тіг Тгр Ре Аа Туг Тгр С1Ту 100 105 110

ОСІп СІу ТіПг Ге Маї Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105 102 «2115 107 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 102

Зо

Азвп Це МУаї Меї Тнг Сп 5ег Рго Гуз 5ег Меї 5ег Це 5ег Ма! СТУ 1 5 10 15

Авр Аге Ма! ТІг Меї Авп Сув Гув Аа 5ег СІп 5ег Ма! СТУ Гув Авп 20 25 30

Пе Аа Ттр Туг СІп Сп Гуз Рго СОТу Сіп 5ег Рго Гуз Гей Гей Це 35 40 45

Туг Туг Аа 5ег Авп Аге Туг Тіг О1у Маї Рго Авр Аге Рре Тіг СТу 50 55 60

СІу ОТу бег СТу ТІг Авр Ре Тг Ге Тіт Це Авп ТНг Маї ОІпв Аа 65 70 75 80

СІи Авр Аа Аа РІ Ріе Туг Сув СіІп Нів Це Туг Авп 5ег Рго Туг 85 90 95 Рго Рбе СІу Тг СТу Тіг був Геп ОЇш Пе Гув 100 105 «2105» 103 «2115 121 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» х223» Синтетична конструкція «4005» 103

СІи Маї ТПг Гей Гув Си 5ег ОТу Рго Аа Гей Маї Гуз Рго Тіг СІп 201 5 10 15

Тіп Гей Трг Гей Тог Сув ТОг Рре 5ег СІу Ріе 5ег І еи 5ег ТП Туг 25

СІу Меїг С1Іу Маї 5ег Тгр Це Аге Сп Рго Рго О1Іу Гуз Аа Гей СЇи

Зо

Тгр Гей Аа 5ег Це Тгр Тгр Авзп Оу Авп ТІг Туг Туг Авп Рго 5ег 60 35 Ге Мув бБег Аге Геп Тіг Ма! Тіг Гуз Авр Аа 5ег Гуз Авп Сп Аа 65 70 75 80

Уа! Геи Тіг Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Маї Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг 40 85 90 95

Сув Аа Нів Тіг О1у С1у Аа Маї Це Тнг Тгр Ріе Аа Туг Тгр СІу 100 105 110 45

СІп ОТу ТПг Ге Ма! Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 50

«2105» 104 «2115 121 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 104

СІи Маї ТПг Гей Гув Си 5ег ОТу Рго Аа Гей Маї Гуз Рго Тіг СІп 1 5 10 15

Ті Гей ТП Гей Тг Сув ТНг Ре 5ег СТу Ре 5ег ІГеи 5ег Тіт Туг

СІу Меїг С1Іу Маї 5ег Тгр Це Аге Сп Рго Рго О1Іу Гуз Аа Гей СЇи 20 35 40 45

Тгр Гей Аа 5ег Це Тгр Тгр Авзп Оу Авп ТІг Туг Туг Авп Рго 5ег 50 55 60 25

І си Гуз 5ег Аге Геи ТІг Пе Тіг Гув Авр Аа 5ег МЦув Авп Сп Аа 65 70 75 80

Зо

Уа! Геи Тіг Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Маї Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг 85 90 95

Сув Аа Нів Тіт СІу СТу Аа Маї Це Тіт Тгр Ріе Аа Тут Ттр Оу 100 105 110

СІп ОТу ТПг Ге Ма! Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105» 105 «2115 121 212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція

«4005» 105

СІи Маї ТПг Гей Гув Си 5ег ОТу Рго Аа Гей Маї Гуз Рго Тіг СІп 1 5 10 15

Тіп Гей Трг Гей Тог Сув ТОг Рре 5ег О1у Рре 5ег І еи 5ег ТНг Туг 20 25 30

СІу Меїг С1Іу Маї 5ег Тгр Це Аге Сп Рго Рго О1Іу Гуз Аа Гей СЇи 35 40 45 Ттр Гей Аа 5ег Це Ттр Ттр Авп ОІу Азп ТП Туг Туг Авп Рго 5ег 50 55 60

І си Гуз б5ег Аге ЇГеи ТІг Маї ТПг був Авр Тіт 5ег був Авп Сп Аа 2065 70 75 80

Уа Геи Тіт Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Маї Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг 85 90 95

Сув Аа Нів Тіг Оїу С1у Аа Маї Це Тіг Тгр Ре Аа Туг Тгр С1Ту 100 105 110

Зо

СІп ОТу ТПг Ге Ма! Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 00 х210» 106 «2115 121 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична конструкція «4005» 106

СІш МаЇ ТПг Гей Гув СОЇи 5ег СТу Рго Аа І еи Маї Гув Рго Тіг СІп 1 5 10 15

Тіп Гей Трг Гей Тог Сув ТОг Рре 5ег СІу Ріе 5ег І еи 5ег ТП Туг 5О 20 25 30

СІу Меїг С1у Маї 5ег Тгр Це Аге Сп Рго Рго О1Іу Гуз Аа І ей Си 35 40 45

Тгр Гей Аа 5ег Це Тгр Тгр Авзп Оу Авп ТІг Туг Туг Авп Рго 5ег 50 55 60

І си Гуз б5ег Аге ЇГеи ТІг Маї ТІПг був Авр Аа 5ег Гув Авп Сп Маї 65 70 75 80

Ма) Гей ТП Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Маї Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг 85 90 95

Сув Аа Нів Тіг О1у С1у Аа Маї Це Тнг Тгр Ре Аа Туг Тгр СІу 100 105 110

СІп ОТу ТПг Ге Ма! Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105 107 «2115 121 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція з5 х400» 107

СІи Маї ТПг Гей Гув Си 5ег ОТу Рго Аа Гей Маї Гуз Рго Тіг СІп 1 5 10 15 40

Тіп Гей Трг Гей Тог Сув ТОг Рре 5ег СІу Ріе 5ег І еи 5ег ТП Туг 20 25 30 45 ОПІу Ме( СІу Маї 5ег Тгр Це Аге Сп Рго Рго О1Іу Гуз Аа Гей СЇи

Тгр Гей Аа 5ег Це Тгр Тгр Авзп Оу Авп ТІг Туг Туг Авп Рго 5ег 5О 50 55 60

І си Гуз 5ег Аге Геи ТІг Пе Тіг Гуз Авр Тг 5ег МГув Авп Сп Маї 65 70 75 80

Уа! Геи Тіг Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Маї Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг 85 90 95

Сув Аа Нів Тіг Оїу С1у Аа Маї Це Тіг Тгр Ре Аа Туг Тгр С1Ту 100 105 110 СІп СІу Тг Ге Маї Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105» 108 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 108

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу зо 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Це Тіг Сув Гув Аа 5ег СіІп 5ег Ма! СТУ Суб Авп 20 25 30

Пе Аа Ттр Туг СІп Сп Гуз Рго СОТу Муз бег Рго Гуз Гей Гей Це 35 40 45

Туг Туг Аа 5ег Авп Аге Туг Тіг О1у Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІТу 50 55 60 бег Оу 5ег ОТ1у Тіг Авр Ріе Тіт Ре Тіг Це 5ег 5ег Гей Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Це Аа ТІг Туг Туг Сув СІп Нів Це Туг Авп 5ег Рго Туг 5О 85 90 95

Рго Ре Оу СІп Сіу Тіг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «2105 109 «2115 107 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 109

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тіг Сув Гув Аа 5ег СіІп 5ег Ма! СТу Гув Авп 20 25 30

Це Аа Тгр Туг СіІп Сіп Гуз Рго С1у Гув Аа Рго Гуз Гей Гей Це

Туг Туг Аа 5ег Авп Аге Туг Тіг О1у Маї Рго 5ег Аге РПе 5ег СІу

Зо 50 55 60

Зег ОТу бег СТ1у Тіг Авр Ріе ТІг Ре ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80 35

СІ Авр Це Аа ТІг Туг Туг Сув СІп Нів Це Туг Авп 5ег Рго Туг 85 90 95 40

Рго Ре Оу СІп Сіу Тіг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 45 «2105 110 «2115 7 «212» Білок «213» Кацив погуерісив 5о «400» 110

Тін Туг СО1у Ме С1Ту Маї 5ег 1 5 «2105 111 «2115 16 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 111

Зег Це Ттр Ттр Авп О1у Авп ТІг Туг Туг Авп Рго 5ег Гей Аге 5ег 1 5 10 15 «2105 112 «1511 «212» Білок «213» Кайив погуерісив «4005 112

Ті О1у О1Уу Аа Маї Це Тнг Ттр Ре Аа Туг 1 5 10 «2105» 113 «1511 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 113 ув Аа 5ег СіІп 5ег Ма! ОТу Гуз Авп Це Аа 1 5 10 «210» 114 «2115 7 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 114

Туг Аа 5ег Авп Агео Туг Тіг 1 5 «210» 115

«2115 9 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 115

СІп Нів Це Туг Авп 5ег Рго Туг Рго 1 5 «210» 116 «2115 30 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (1).41) «223» Хаа являє собою ОЇши або Сіп «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (3).3) «223» Хаа являє собою 5ег або Тіг «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (10)..110) «223» Хаа являє собою Аа або ОС1у «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (11).411) «223» Хаа являє собою Пе або Ї ей «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (12)..412) «223» Хаа являє собою І еп або МУаї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (13)..(13) «223» Хаа являє собою Іув або Сп «220»

«221» МОЮ КЕ5 «222» (15)..(15) «223» Хаа являє собою 5ег або Тіг «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (16)..016) «223» Хаа являє собою Ні» або СіІп «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (19)..(19) «223» Хаа являє собою 5ег або Тіг «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (23)..(23) «223» Хаа являє собою 5ег або Тіг «400» 116

Хаа Уа! Хаа І еи Гув Си 5ег О1у Рго Хаа Хаа Хаа Хаа Рго Хаа Хаа 1 5 10 15

Тіг Гей Хаа Геи Тіт Сув Хаа Ре 5ег СТу Ріре 5ег Гей ТОг 20 25 30 «2105 117 «2115 14 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (6).(6) «223» Хаа являє собою Рго або 5ег «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (17)..07) «223» Хаа являє собою Си або ОС1у «220» 0 «2215 МОЮ КЕ5

«222» (9)..9) «223» Хаа являє собою Аа або ОС1у «400» 117

Тгр Це Аге Сіп Рго Хаа Хаа Гуз Хаа І еп Си Тгр Гей Аа 1 5 10 «210» 118 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (4).(4) «223» Хаа являє собою Це або Уаї! «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (5)..(5) «223» Хаа являє собою 5ет або ТНг «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (10)..010) «223» Хаа являє собою ув або Авп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (11).411) «223» Хаа являє собою Авр або Авп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (13)..(13) «223» Хаа являє собою Аа або МУаї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (14)..(14) «223» Хаа являє собою Ріє або МУаї «220» 0 «2215 МОЮ КЕ5

«222» (16)..016) «223» Хаа являє собою Авп або ТІг «220» «221» МОЮ ВБЕ5 «222» (17)..017) «223» Хаа являє собою Меї або Уаї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (19)..(19) «223» Хаа являє собою Авп або 5ег «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (20)..(20) «223» Хаа являє собою Меї або Уаї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (22).(22) «223» Хаа являє собою Рго або Тіг «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (23)..(23) «223» Хаа являє собою ТІг або Маї «400» 118 0)

Атге І еи Тіг Хаа Хаа Гуз Авр Тг 5ег Хаа Хаа Сіп Хаа Хаа І еи Хаа 1 5 10 15 Хаа Ті Хаа Хаа Авр Хаа Хаа Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 «210» 119 «211511 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 119

Тгр О1уУ СіІп СІу Тіг І еи Маї ТІг Маї 5ег 5ег 501 5 10

«2105» 120 «2115 30 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 120

Сп Маї 5ег Гей був СТи 5ег О1у Рго С1Ту Це Геп Сп Рго 5ег Нів 1 5 10 15

Тіг Гей 5ег Гей Тіг Су 5ег Рпе 5ег СІу Ре 5ег Гей Трг «2105» 121 «2115 14 20 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 121 25 Ттр Це Аге Сіп Рго 5ег СЇш Гув СТУ Гей ОЇи Тгр Гей Аа 1 5 10 «2105 122 30 «2115 32 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 122

Атге І еи Тіг Маї 5ег Гуз Авр Тг 5ег Авп Авр Сп Аа Ре Гей Авп 1 5 10 15

Маї Тіт 5ег Ма! Авзр Тіт Тіт Авр Тіг Аа ТІг Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 «2105» 123 «2115 30 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» 05223» Синтетична конструкція

«4005» 123

СІи Маї ТПг Гей Гув Си 5ег ОТу Рго Аа Гей Маї Гуз Рго Тіг СІп в 11 5 10 15

Тіп Гей Трг Гей Твг Суб ТОг Рре 5ег СІу Ре 5ег Гей Трг 20 25 30 «2105» 124 «2115 14 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 124

Тгр Це Аге Сіп Рго Рго СІу Гуз Аа ГГ еп ОЇи Тгр Гей Аа 1 5 10 «2105 125 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Синтетична конструкція «4005 125

Аге І еи Тіг Ма! Тіг був Авзр Тіг 5ег Гув Авп Сп Аа Маї І еи ТОг 1 5 10 15

Ме Тіт Авп Меї Авр Рго Маї Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 «2105 126 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» 05223» Синтетична конструкція

«4005 126

Атге ви Тіг Це Тіт Гув Авр ТНг 5ег був Авп Сп Аа Маї І еп ТНг в і 5 10 15

Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Уаї Авр Тіг Аа Тнг Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 «2105 127 «2115 32 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 127

Аге І еи Тіг Ма! Тіг був Авзр Тіг 5ег Суб Авп Сп Маї Ма! ей ТОг 1 5 10 15

Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Уаї Ар Тіг Аа Тнг Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 з0 «210» 128 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205 «223» Синтетична конструкція «4005» 128

Аге Геи ТІг Це Тіт Гуз Авр Тіг 5ег Гуз Авп Сп Маї Маї ей ТОг 1 5 10 15

Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Уаї Авр Тіг Аа Тнг Туг Туг Сув Аа Нів 20 25 30 «2105» 129 «2115 23 005212» Білок

«213» Штучна послідовність

«223» Синтетична конструкція

«220» «2215 МОЮ КЕ5 «2225. (13.1)

«223» Хаа являє собою Сни або Авп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (9)..9)

«223» Хаа являє собою Аа або ув «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (193.10)

«223» Хаа являє собою 5ег або ТІг «220» «2215 МОЮ КЕ5 «2225 (113.01)

«223» Хаа являє собою І ей або Меї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «2225. (133.13)

«223» Хаа являє собою Ше або Маї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (153.15)

«223» Хаа являє собою Це або Рго «220» «2215 МОЮ КЕ5 «2225 (173.17)

«223» Хаа являє собою Авр або СЇип «220» «2215 МОЮ КЕ5 «2225 (193.19

«223» Хаа являє собою Аа або Маї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (213.01)

«223» Хаа являє собою І ей або Меї

«2215 МОЮ КЕ5 «222» (22)..22) «223» Хаа являє собою Авп або 5ег «4005» 129

Хаа Це Уаї Меї Тнг Сп 5ег Рго Хаа Хаа Хаа 5ег Хаа 5ег Хаа СІу 1 5 10 15

Хаа Аге Хаа ТП Хаа Хаа Сув 20 «2105» 130 «2115 15 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (6).6) «223» Хаа являє собою Рго або ТПг

Зо «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (9)..(9) «223» Хаа являє собою Аа або 5ег

З5 «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (11).11) «223» Хаа являє собою Сіп або Аге «4005» 130

Тгр Туг СіІп Сп Гуз Хаа СТУ Сіп Хаа Рго Хаа І еп І еи Це Туг 1 5 10 15 «210» 131 «2115 32 «212» Білок 005213» Штучна послідовність

«223» Синтетична конструкція

«220»

«2215 МОЮ КЕ5

«222» (23.42)

«223» Хаа являє собою Пе або Маї

«220»

«2215 МОЮ КЕ5

«222» (4).(4)

«223» Хаа являє собою Аа або Авр

«220»

«2215 МОЮ КЕ5

«222» (7).7)

«223» Хаа являє собою 5ег або Тіг

«220»

«2215 МОЮ КЕ5

«222» (9)..9)

«223» Хаа являє собою Су або бет

«220»

«2215 МОЮ КЕ5

«222» (13.14

«223» Хаа являє собою Авр або Сп

«220»

«2215 МОЮ КЕ5

«222» (203.20)

«223» Хаа являє собою Авп або 5ег

«220»

«2215 МОЮ КЕ5

«222» (223.22)

«223» Хаа являє собою І еп або Маї

«220»

«2215 МОЮ КЕ5

«2225. (24).024)

«223» Хаа являє собою АЇа або 5ег

«220»

«2215 МОЮ КЕ5

«222» (273..(27)

«223» Хаа являє собою Аа або Ріе

«2215 МОЮ КЕ5 «222» (29)..(29) «223» Хаа являє собою Ре або Маї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (30)..(30) «223» Хаа являє собою Ре або Туг «400» 131

СОІУ Хаа Рго Хаа Аге Ре Хаа Оу Хаа О1у 5ег СТу ТІг Хаа Ре Тиг 1 5 10 15

І ви ТІг Це Хаа 5ег Хаа СіІп Хаа ОЇи Авр Хаа Аа Хаа Хаа Туг Сув 20 «2105» 132 «2115 10 «212» Білок -213» Штучна послідовність 25 «220» «223» Синтетична конструкція 30 0 «2205 «2215 МОЮ КЕ5 «222» (3)..(3) «223» Хаа являє собою Сіп або Тіг 0 «2205 «2215 МОЮ КЕ5 «222» (17)..07) «223» Хаа являє собою І еп або Маї «4005» 132

Ре СІу Хаа С1у Тіт Гуз Хаа СЇи Це Гу 1 5 10 «210» 133 «2115 23 «212» Білок «213» Кацив погуерісив

«400» 133

Азвп Це Уаї Меї Тіг Сп 5ег Рго Гуз 5ег Меї 5ег Це 5ег Пе СІТу 1 5 10 15

Авр Аге МаїЇ Тіт Меї Авп Сув 20 «2105» 134 «2115 15 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 134

Тгр Туг СіІп СІп Гуз Тіг О1у Сіп 5ег Рго Сів ГІ еи Гей Це Туг 1 5 10 15 «2105» 135 «2115 32 «212» Білок х213» Кайив погуерісив «4005» 135

СІу Маї Рго Авр Аге Рпе Тіг СТу О1у О1у 5ег СТУ Тіг Авр Ріе Тіг зо 1 5 10 15

І ви ТІг Це Авп 5ег МУаї СіІп Аа ОЇи Авр Аа Аа Ре Ре Туг Сув 20 25 30 «2105» 136 «2115 10 «212» Білок «213» Кайив погуерісив «4005» 136

РПе СіІу Тіг СІу Тіг Гув Гей ОЇи Це Гув 1 5 10 «2105 137 «2115 23 005212» Білок

-213» Штучна послідовність «223» Синтетична конструкція «4005» 137

СТи Це Маї Меї Тіг Сп 5ег Рго Аа ТНг Ге 5ег Маї 5ег Рго СТу 1 5 10 15

СІи Аге Аа ТНг І еп 5ег Сув 20 «2105» 138 «2115 15 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 138

Тгр Туг СіІп Сп Гуз Рго СОІУ Сіп 5ег Рго Аге І еп І еи Це Туг 1 5 10 15 «210» 139 «2115 15 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205 «223» Синтетична конструкція «4005» 139

Ттр Туг СОІп СІп Гуз Рго О1у Сіп Аа Рго Аге І еп І еи Це Туг 1 5 10 15 «210» 140 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» 05223» Синтетична конструкція

«400» 140

СІу Маї Рго Аа Аге Ре 5ег О1Іу 5ег СОТу 5ег СТу Тіт ОЇи Ре Трг в і 5 10 15

І ви ТІг Це 5ег 5ег І еи Сіп 5ег СЇши Авр Ре Аа Маї Туг Туг Сув 20 25 30 «210» 141 «2115 32 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 141

СОІУ Це Рго Аа Аге Ре 5ег О1у 5ег СТу 5ег СТу Тіг СТи Ріе Трг 1 5 10 15

І ви ТІг Це 5ег 5ег І еи Сіп 5ег СЇши Авр Ре Аа Маї Туг Туг Сув 20 25 30 «2105» 142 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 0 «2205 «223» Синтетична конструкція «4005» 142

Ріре СТу СОІп О1Ту Тіт Гуз Маї ОЇш Пе Гув 1 5 10 «210» 143 «2115 121 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 143

СІп Маї 5ег Геи Гув СЇи 5ег О1у Рго СОІУ Це ГІ еп Сіп Рго 5ег Нів 1 5 10 15 Тіг І еи 5ег Геи ТПг Сув 5ег Ре 5ег СО1Ту Ре 5ег еп Тіг ТНг Туг 20 25 30

СІу Меїг С1Іу Маї 5ег Тгр Це Аге Сп Рго 5ег ОЇи Гуз О1у Гей СЇи 35 40 45

Тгр Гей Аа 5ег Це Тгр Тгр Авзп Оу Авп ТІг Туг Туг Авп Рго 5ег 50 55 60

І ей Аге 5ег Аге І еи Тг Маї 5ег був Авр Тіг 5ег Авп Авр Сіп Аа 65 70 75 80

Ре І еп Авп Маї Тіт 5ег Ма! Авр ТІг Тіг Авр Тіг Аа Тг Туг Туг 85 90 95 Сув Аа Нів Тіт СІу ОТу Аа Маї Це Тіт Тгр Ріе Аа Тут Ттр Оу 100 105 110

СІп ОТу ТПг Ге Ма! Тнг Маї 5ег 5ег

Зо 115 120 «210» 144 «2115 107 005212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 144

Авп Це МаїЇ Меї Тіт Сіп 5ег Рго Гув 5ег Меї 5ег Це 5ег Це О1у 1 5 10 15

Авр Аге МаїЇ Тіт Меї Азп Сув Гуз Аа 5ег СІп 5ег Ма! СТУ Суб Авп 20 25 30

Це Аа Ттр Туг СОІп СІп Суб Тіг СТУ Сп 5ег Рго Сіп І еп Гей Це 35 40 45

Туг Туг Аа 5ег Авп Аге Туг Тіг О1у Маї Рго Авр Аге Рре Тіг СТу 50 55 60

СІу ОТу бег СТу Тіг Авр Ре ТІг Ге Тіг Це Авп 5ег Маї СІп Аа 65 70 75 80

ОЇ Авр Аа Аа РІ Ре Туг Сув Сп Нів Це Тутг Авп 5ег Рго Туг 85 90 95

Рго Ре ОС1Іу Тіт СТу Тіт Гуз Гей ОЇй Це Гу 100 105 «210» 145 «2115 121 20212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 25 «400» 145

СІи Маї ТПг Гей Гув Си 5ег ОТу Рго Аа Гей Маї Гуз Рго Тіг СІп 1 5 10 15

Зо

Тіп Гей Тг Гей ТВг Суб ТОг Рре 5ег СІТу Ріе 5ег Геи ТІрг Тіт Туг

СІу Меїг С1Іу Маї 5ег Тгр Це Аге Сп Рго Рго О1Іу Гуз Аа Гей СЇи 35 40 45

Ттр ей Аа 5ег Це Тгр Тгр Авп СІу Азп ТНг Туг Туг Авп Рго 5ег 50 55 60

І еи Аге 5ег Аге І еи Тіт Ма! Тіт Гуз Авр Тіг 5ег Суб Авп Сп Аа 65 70 75 80

Уа! Геи Тіг Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Маї Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг 85 90 95

Сув Аа Нів Тіг Оїу С1у Аа Маї Це Тіг Тгр Ре Аа Туг Тгр С1Ту 100 105 110

СІп ОТу ТПг Ге Ма! Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105» 146 «2115 121 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична конструкція «400» 146

ОТи МаїЇ ТПг Гей Гув Си 5ег СТу Рго Аа І еи Маї Гуз Рго Тіг Сп 1 5 10 15

Тіп Гей Тг Гей ТВг Суб ТОг Рре 5ег СІТу Ріе 5ег Геи ТІрг Тіт Туг 20 25 30

СІу Меїг С1Іу Маї 5ег Тгр Це Аге Сп Рго Рго С1Ту Гув Аа Гей Си

Зо

Тгр Гей Аа 5ег Це Тгр Тгр Авзп Оу Авп ТІг Туг Туг Авп Рго 5ег 60 35

І еи Аге 5ег Аге Іеи Тіт Це Тіг був Авзр Тг 5ег Суб Авп Сп Аа 65 70 75 80 40 МаїЇ Ге Тіг Меї Тіг Авп Ме: Авр Рго Маї Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг 85 90 95

Сув Аа Нів Тіг Оїу О1у Аа Маї Пе ТІг Тгр Ріе Аа Туг Тгр СІу 45 100 105 110

СІп ОТу ТПг Ге Ма! Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 50

«2105» 147 «2115 121 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 147

СІи Маї ТПг Гей Гув Си 5ег ОТу Рго Аа Гей Маї Гуз Рго Тіг СІп 1 5 10 15

Тіп Гей Тг Гей ТВг Суб ТОг Рре 5ег СІТу Ріе 5ег Геи ТІрг Тіт Туг 20 ОІу Мес СІу Маї 5ег Тгр Це Аге Сп Рго Рго О1Іу Гуз Аа Гей СЇи

Тгр Гей Аа 5ег Це Тгр Тгр Авзп Оу Авп ТІг Туг Туг Авп Рго 5ег 25 50 55 60

І еи Аге 5ег Аг І еи Тіт Ма! Тіт Гуз Авр Тіг 5ег Гуз Авп Сп Маї 65 70 75 80

Зо

Уа! Геи Тіг Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Маї Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг 85 90 95 35

Сув Аа Нів Тіг Оїу С1у Аа Маї Це Тіг Тгр Ре Аа Туг Тгр С1Ту 100 105 110 40 ОСІп СІу ТіПг Ге Маї Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 «210» 148 45 «2115 121 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» 05223» Синтетична конструкція

«400» 148

СІи Маї ТПг Гей Гув Си 5ег ОТу Рго Аа Гей Маї Гуз Рго Тіг СІп в і 5 10 15

Тіп Гей Тг Гей ТВг Суб ТОг Рре 5ег СІТу Ріе 5ег Геи ТІрг Тіт Туг 20 25 30

СІу Меїг С1Іу Маї 5ег Тгр Це Аге Сп Рго Рго О1Іу Гуз Аа Гей СЇи 35 40 45

Тгр Гей Аа 5ег Це Тгр Тгр Авзп Оу Авп ТІг Туг Туг Авп Рго 5ег 50 55 60

Гепц Агео 5ег Аге Геи ТІг Це Тіт Гуз Авр Тг 5ег Гуз Авп Сп Маї 65 70 75 80

Уа! Геи Тіг Меї Тіг Авп Меї Авр Рго Маї Авр Тіг Аа Тіг Туг Туг 85 90 95

Сув Аа Нів Тіг Оїу С1у Аа Маї Це Тіг Тгр Ре Аа Туг Тгр С1Ту 100 105 110

Зо

СІп ОТу ТПг Ге Ма! Тнг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105» 149 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 149

СІи Це МУаї Меї Тіг Сп 5ег Рго Аа ТНг І еп 5ег Маї 5ег Рго СТу 1 5 10 15

СІ Аге Аа ТНг Гей 5ег Сув Гуз Аа 5ег СіІп 5ег Ма! О1УуУ Гу Авп

20 25 30

Це Аа Ттр Туг СІп СіІп Гуз Рго СТу Сп 5ег Рго Аге І еп Геи Це 35 40 45

Туг Туг Аа 5ег Авзп Аге Туг Тіт О1у Маї Рго Аа Аге Ре 5ег СТу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг СЇш Ре ТПг І.еи Трг Це 5ег 5ег І еп Сп 5ег 65 70 75 80

СІи Авр РІ Аа Маї Туг Туг Сув СіІп Нів Це Туг Авп 5ег Рго Туг 85 90 95

Рго Ріе СІу СІп СІу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 100 105 «2105 150 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 150

СТи Це Маї Меї Тіг Сп 5ег Рго Аа ТНг Ге 5ег Маї 5ег Рго СТу 1 5 10 15

СІ Аге Аа ТНг Ге 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІп 5ег Ма! О1УуУ Гув Авп 20 25 30

Це Аа Ттр Туг СІп СІп Гуз Рго СОТу Сіп Аа Рго Аге І еп ІГ.еи Це 35 40 45

Туг Туг Аа 5ег Авзп Аге Туг Тіт О1у Маї Рго Аа Аге Ре 5ег СТу 60 50 бег ОЇу бег СТУ Тіг СЇш Ре ТПг Геи Тіг Це 5ег 5ег еп Оп 5ег

65 70 75 80

СІи Авр РІ Аа Маї Туг Туг Сув СіІп Нів Це Туг Авп 5ег Рго Туг 85 90 95

Рго Ріе Оу Сп Сіу Тіг Гув Маї ОЇи Це Гув 100 105 «210» 151 «2115 107 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 151

СІи Це МУаї Меї Тіг Сп 5ег Рго Аа ТНг І еп 5ег Маї 5ег Рго СТу 1 5 10 15

СІ Аге Аа ТНг Ге 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІп 5ег Ма! О1УуУ Гув Авп 20 25 30

Це Аа Тгр Туг СіІп Сп Гуз Рго СОІУ Сіп 5ег Рго Аге Геи І еи Це

Туг Туг Аа 5ег Авп Аге Туг Тіт О1у Це Рго Аа Аге Ре 5ег СІу 35 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг СЇш Ре ТПг І. еи Трг Це 5ег 5ег І еи Сп 5ег 65 70 75 80 40

СІи Авр РІ Аа Маї Туг Туг Сув СіІп Нів Це Туг Авп 5ег Рго Туг 85 90 95 45

Рго Ре Оу СІп Сіу Тіг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «2105» 152

«2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «4005 152

СІ Це Ма) Меї Тг Сп 5ег Рго Аа ТПг І еи 5ег Маї 5ег Рго СТу 1 5 10 15

СІ Аге Аа ТНг Ге 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІп 5ег Ма! О1УуУ Гув Авп

Пе Аа Ттр Туг СІп СІп Гуз Рго СТу Сіп Аа Рго Аге Ге Г.еи Це 20

Туг Туг Аа 5ег Авп Аге Туг Тіт О1у Це Рго Аа Аге Ре 5ег СІу 60 25

Зег ОТу бег СТУ Тіг СЇш Ре ТПг І. еи Трг Це 5ег 5ег І еи Сп 5ег 65 70 75 80 з0 ОЇ Авр Ре Аа Маї Туг Туг Сув СіІп Нів Це Туг Авп 5ег Рго Туг 85 90 95

Рго Ре Оу СІп Сіу Тіг Гув Маї ОЇш Це Гув 35 100 105 «2105 153 «2115 5 40 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 153 45 СІ Туг б5ег Це Туг 1 5 «2105 154 500 «2115 17

«212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 154

Ате Це Авр Рго ув Авп Су Агео ТІг Туг Туг МаїЇ Авр Гув Ре Гуз 1 5 10 15

Авп «2105 155 15. «2115 8 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 155

Пе Туг О1у Рре Туг Рре Авр Ріе 1 5 х2105» 156 «1511 «212» Білок «213» Кацив погуерісив зо х400» 156

Гуз О1Ту б5ег СіІп Авп Маї Авзп Гуз Туг Геи Маї 1 5 10 «2105 157 «2115 7 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 157

Авп ТІг Авр Авп І еи Сп 5ег 1 5 «2105» 158 «2115 8 «212» Білок «213» Кашйив погуерісив

«4005» 158

Туг СіІп Тут Авп Авп ОС1у Ріе Трг в 11 5 «210» 159 «2115 30 105212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (5)..(5) «223» Хаа являє собою Сіп або Маї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (9)..9) «223» Хаа являє собою Аа або Рго «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (11).411) «223» Хаа являє собою І еп або Маї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (12)..412) «223» Хаа являє собою ув або СіІп «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (13)..(13) «223» Хаа являє собою ув або Аге «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (20)..(20) «223» Хаа являє собою І еп або Маї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (25)..(25) «223» Хаа являє собою 5ег або ТІг

«400» 159

СІи МаїЇ Сів ГГ еп Хаа СіІп 5ег О1у Хаа Си Хаа Хаа Хаа Рго ОС1у Аа

Б 11 5 10 15

Зег Ма! Гу Хаа 5ег Суб Гув АІа Хаа СТУ Туг Тіг Рре ТОг 20 25 30 «210» 160 «211» 14 212 Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (3)..(3) «223» Хаа являє собою ув або Аге «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (5)..(5) «223» Хаа являє собою Аа або Аге

Зо «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (17)..07) «223» Хаа являє собою СІу або Гув

З5 «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (9)..(9) «223» Хаа являє собою Аге або 5ег «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (12)..412) «223» Хаа являє собою Пе або Ттр «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (13)..(13) «223» Хаа являє собою Це або Меї

«400» 160

Тгр Маї Хаа СіІп Хаа Рго Хаа Сіп Хаа І еп ОЇи Хаа Хаа Су 1 5 10 «210» 161 «211» 32 212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (2)..(2) «223» Хаа являє собою Аа або Маї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (4).(4) «223» Хаа являє собою Ше або І еп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (6).6) «223» Хаа являє собою Аа або Аге «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (10)..010) «223» Хаа являє собою АЇа або 5ег «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (11).411) «223» Хаа являє собою Авп або 5ег «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (16)..(16) «223» Хаа являє собою ОЇи або Сп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (21)..021) «223» Хаа являє собою Аге або Тіг

«221» МОЮ КЕ5 «222» (27)..(27) «223» Хаа являє собою Тіт або МУаї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (29)..(29) «223» Хаа являє собою Ре або Туг «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (31)..2331) «223» Хаа являє собою Аа або Тіг «400» 161

Ате Хаа Тіг Хаа ТІг Хаа Авр Тіг 5ег Хаа Хаа Тг Аа Туг Меї Хаа 1 5 10 15

І си 5ег 5ег І еп Хаа 5ег ОЇй Авр Тіг Аа Хаа Туг Хаа Сув Хаа Аге 20 25 30 «210» 162 «2115 11 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція

ЗБ 00 «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (5)..(5) «223» Хаа являє собою Тіт або МУаї «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (6).(6) «223» Хаа являє собою І еи або Меї 00 «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (9)..(9) «223» Хаа являє собою Аа або МУаї «400» 162

Тгр О1уУ СіІп СІу Хаа Хаа Маї Тіг Хаа 5ег 5ег 1 5 10 «210» 163 «2115 30 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 163

СІи МаїЇ Сів Гей Сп Со 5ег СТу Рго Сни Гей Сп Аге Рго С1у Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз Гей 5ег Суб Гуз АІа Тіт О1у Туг Тіг Ре Тиг 20 «2105» 164 «2115 14 «212» Білок «213» Кацив погуерісив 25 «4005» 164

Тгр МаїЇ Гуз СіІп Аге Рго Муз Сп 5ег ІГеи СЇи Це Це С1у 1 5 10

Зо «210» 165 «2115 32 «212» Білок «213» Кайив погуерісив «4005» 165

Ате Аа ТІ Ге ТНг Аа Авр Тг 5ег 5ег Авп Тіг Аа Тут Меї Сп 401 5 10 15

І си 5ег 5ег І еи Тг 5ег СЇи Авр ТНг Аа Тіг Туг Рре Сув Тіг Аге 20 25 30 «210» 166 «1511 «212» Білок «213» Кашйив погуерісив

«400» 166

Тгр О1уУ СіІп СІу Маї Меї Маї Тіг Аа 5ег 5ег в 11 5 10 «2105» 167 «2115 30 105212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 167

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз Маї 5ег Сув Гув Аа 5ег СТУ Туг ТІПг Ріе Трг 20 25 30 «210» 168 «2115 14 «212» Білок -213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 168

Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго О1у СіІп Аге Геп ОЇи Це Пе СІу 1 5 10 «210» 169 «2115 14 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205» «223» Синтетична конструкція «4005» 169

Ттр МаїЇ Атгя Сп Аа Рго СІу Сп Аге Геп Си Тгр Це Оу

1 5 10 «2105» 170 к2115 14 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 170

Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго О1у Сіп Аге Геп ОЇ Це Меї С1у 1 5 10 «2105» 171 «2115 14 20. х212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 25 «4005 171

Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго СОІУ Сіп Аге Гей ОЇп Тгтр Меї СІу 1 5 10

Зо «2105 172 «2115 32 «212» Білок 35 0213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 40 «4005» 172

Ате Аа ТІ Ге ТНг Аа Авр ТНг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Меї ОЇ 1 5 10 15 45

І еи 5ег 5ег Гей Аге 5ег СЇш Авр ТІг Аа Маї Тут Рпе Сув Тіг Аге «210» 173

«2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «4005 173

Аге Маї Тнг Гецп Тіг Аа Авр Тіт 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Меї ОїЇи 1 5 10 15

І еи 5ег 5ег Гей Аге 5ег СЇш Авр ТІг Аа Маї Туг Рпе Сув Тіг Аге «2105 174 «2115 32 20. х212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 25 «4005 174

Ате Аа Тіт Це Тіг Аа Авр Тіт 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Ме СЇи 1 5 10 15

Зо

І еи 5ег 5ег Гей Аге 5ег СЇш Авр ТІг Аа Маї Тут Рпе Сув Тіг Аге 20 25 30 «2105 175 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 175

Ате Аа ТІ Ге ТПг Аге Авр Тіт 5ег Аа 5ег ТНг Аа Туг Меї СЇи 1 5 10 15 Іепц 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇш Авр ТІг Аа Маї Туг Ре Сув Тіг Ага

20 25 30 «2105 176 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 176

Ате Аа ТІ Ге ТНг Аа Авр Тнг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Меї ОЇ 1 5 10 15

І си 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇш Авр Тіг Аа Маї Туг Туг Сув Тіг Аге 20 «2105 177 «2115 32 «212» Білок 25 «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція зо «400» 177

Ате Аа ТІ Ге ТНг Аа Авр ТНг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Меї ОЇ 1 5 10 15

І еи 5ег 5ег Гей Аге 5ег СЇш Авр ТІг Аа Маї Тут Ріре Сув Аа Аге 20 25 30 «2105» 178 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність

АБО «2205 «223» Синтетична конструкція «4005 178

Аге Маї Тіт Це ТІг Аге Авр ТНг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Меї ОЇ

1 5 10 15

І си 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇш Авр Тіг Аа Маї Туг Туг Сув Аа Аге 20 25 30 «210» 179 «1511 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 179

Тгр О1уУ СіІп СІу Тіг Г еп Маї ТІг Маї 5ег 5ег 1 5 10 «2105» 180 «2115 23 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція

Зо «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (1).41) «223» Хаа являє собою Авр або Авп

З5 «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (3)..(3) «223» Хаа являє собою Нів або Сіп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (10)..410) «223» Хаа являє собою Ре або І еп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (21)..21) «223» Хаа являє собою Пе або І еп

«2215 МОЮ КЕ5 «222» (22)..22) «223» Хаа являє собою 5ег або Тіг «4005» 180

Хаа Це Хаа І си Тіг Сіп 5ег Рго 5ег Хаа І еп 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіг Хаа Хаа Сув 20 «210» 181 «2115 15 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (6).6) «223» Хаа являє собою І еп або Рго 0 «2205 «2215 МОЮ КЕ5 «222» (8)..(8) «223» Хаа являє собою Сім або ув з5 «400» 181

Тгр Туг СіІп СіІп Гув Хаа О1у Хаа Аа Рго Гуз Гей І еи Це Туг 1 5 10 15 «2105» 182 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція

БО 0 «2205

«2215 МОЮ КЕ5 «222» (2).42) «223» Хаа являє собою Це або Маї в «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (14)..414) «223» Хаа являє собою Авр або Сп 10. «2205 «2215 МОЮ КЕ5 «222» (15)..(15) «223» Хаа являє собою Ре або Туг «2205 «2215 МОЮ КЕ5 «222» (271)..(27) «223» Хаа являє собою Аа або Ре «2205» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (31)..431) «223» Хаа являє собою Ре або Туг х4А00» 182

СОІУ Хаа Рго 5ег Аге Ре 5ег ОІу 5ег Оу 5ег СТ1у Тг Хаа Хаа ТОг 1 5 10 15

Зо

І ви ТІг Це 5ег 5ег І еи Сіп Рго Си Авр Хаа Аа Тіт Туг Хаа Сув 20 25 30 «2105 183 «2115 10 212 Білок -213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (3)..(3) «223» Хаа являє собою Сіп або 5ег «220» 00 «2215 МОЮ КЕ5

«222» (17)..(7) «223» Хаа являє собою І еп або Маї «400» 183

Ре СІу Хаа С1у Тіт Гуз Хаа СЇи Це Гу 1 5 10 «2105 184 «2115 23 «212» Білок «213» Кацив погуерісив х4А005» 184

Азвп Це Нів Гей Тг СІп 5ег Рго 5ег І еп І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіг Геи 5ег Сув 20 х210» 185 «2115 15 «212» Білок «213» Кацив погуерісив зо х400» 185

Тгр Туг СіІп СіІп Гув Гей СтТу ОЇи Аа Рго Гуз Гепц І еи Це Туг 1 5 10 15 «2105» 186 «2115 32 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 186

СТУ Це Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 5ег СІу 5ег О1у ТНг Авр Туг Тіг 1 5 10 15

І ви ТІг Це 5ег 5ег І еи Сіп Рго Си Авр Аа Аа Тіг Туг Рре Сув 20 25 30

«2105 187 «2115 10 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 187

Ре СІу 5ег О1у Тіг Гу Гей ОЇи Це Гув 1 5 10 «2105» 188 «2115 23 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція х4А00» 188

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тіг Сув 20 «2105» 189 «2115 15 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205 «223» Синтетична конструкція «4005» 189

Ттр Туг СОІп СІп Гув Рго СТУ Гув Аа Рго Гуз Гей ГГ еи Це Туг 1 5 10 15 «2105» 190 «2115 32 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» 05223» Синтетична конструкція

«4005» 190

СОІУ Це Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 5ег СТу б5ег СТУ Тіг СЇши Туг Тиг в і 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи СіІп Рго Си Авр Ре Аа ТІг Туг Рре Сув 20 25 30 «210» 191 «2115 32 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 191

СІу Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СО1у 5ег СТу 5ег СТу Тіг СІи Туг ТНг 1 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи Сп Рго СЇши Авр Ре Аа ТІг Туг Рпе Сув 20 25 30 з0 «210» 192 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205 «223» 5ед 193 «4005» 192

СОІУ Це Рго 5ег Аге Ре 5ег СОТу 5ег СТу 5ег СТУ Тіт ОЇи Ре Трг 1 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи Сп Рго СЇши Авр Ре Аа ТІг Туг Рпе Сув 20 25 30 «210» 193 «2115 32 005212» Білок

-213» Штучна послідовність «223» Синтетична конструкція «400» 193

СОІУ Це Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 5ег СТу б5ег СТУ Тіг СЇши Туг Тиг 1 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи Сп Рго СЇшпи Авр Ріє Аа Тг Туг Туг Сув 20 25 30 «2105» 194 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 194

СОІУ Маї Рго 5ег Агео Ре 5ег С1Ту 5ег СТу 5ег СТУ Тіг СЇи Ріе Трг 1 5 10 15 з30 Ге ТНг Це 5ег 5ег еп Сп Рго СЇши Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув 20 25 30 «2105» 195 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» х223» Синтетична конструкція «4005» 195

СІу Маї Рго 5ег Агео Ре 5ег СІТу 5ег СІу б5ег О1у Тіг ОЇи Туг ТНг 1 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи Сп Рго СЇшпи Авр Ріє Аа Тг Туг Туг Сув 20 25 30

«2105» 196 «2115 10 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 196

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 1 5 10 «2105 197 «2115 117 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 197

СІи МаїЇ Сп Гей Сп Сп 5ег СТу Рго Сни Гей Сп Аге Рго С1у Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз Гей 5ег Суб МГув АІа Тіт О1у Туг Тіг Рпе Тнг Сни Туг 20 25 30

Зо

Зег Це Туг Ттр МаїЇ Гув СІп Аге Рго Гуз Сіп 5ег Гей Си Це Це 35 ОПТу Аге Це Авр Рго Гуз Авп СІу Аге Тг Туг Туг Ма! Авр Гуз Ре 60

Гуз Авп Аге Аа Тіт І еи Тіг Аа Авр ТІг 5ег 5ег Авп Тг Аа Туг 4065 70 75 80

Меї Сів І еп 5ег 5ег Гей Тіг 5ег ОЇй Авр Тіг Аа Тіг Туг Ре Сув 85 90 95 45

Тіг Аге Це Туг О1Іу Ріе Тут Ріе Авр Ре Тгр СТу СІп СТУ Маї Ме 100 105 110 50

Уа! Тіг Аа 5ег 5ег «2105» 198 «2115 106 «212» Білок «213» Кацив погуерісив х400» 198

Азвп Це Нів Гей Тг СІп 5ег Рго 5ег І еп І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге МУаї Тіг Ге 5ег Сув був СТу 5ег СЇп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 ТІ ец Маї Ттр Туг СІп СІп Гув Гей СІу ОЇнп Аа Рго Гуз Геи Гей Це

Туг Авзп ТП Авр Авп І еи Сп 5ег СІу Це Рго 5ег Аге РПе 5ег СІу 25 50 55 60

Зег ОЇу бег СТу Тіг Авр Туг Тіг Геи ТІг Це 5ег 5ег І ей СіІп Рго 65 70 75 80

Зо

СІи Авр Аа Аа Тіг Туг Ріре Суз Туг Сіп Туг Авп Авзп СТу Ре Трг 85 90 95 35

Ре СІу 5ег О1у Тіг Гу Гей ОЇи Це Гув 100 105 40 «210» 199 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність 45 0 «2205» «223» Синтетична конструкція «4005» 199

СТи МаїЇ Сів Г еп Маї СІп 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго ОТу Аа

1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Си Туг 20 25 30

Зег Це Тут Ттр Маї Аге СіІп Аа Рго СІу Сп Аге Гей СІ Це Це 35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп ОС1Іу Аге Тг Туг Туг Ма! Авр Гуз Ре 50 55 60

Гуз Авп Аге Аа Тіт І еи Тіг Аа Авр ТІг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Мес Он ГГ еи 5ег 5ег І еп Аге 5ег СОЇш Авр Тіг Аа Маї Туг Ре Сув 85 90 95

Ті Аге Це Туг О1Іу Ре Туг Ріе Авр Ре Тгр СТУ СІп С1у Тнг І еп 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115

Зо «2105» 200 «2115 117 «212» Білок 0213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція хА00» 200

СІи МаїЇ Сів Г еп Маї Сів 5ег СОТу Аа СЇш Маї Гув Гуз Рго СІу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Си Туг 20 25 30 бег Це Туг Ттр МаїЇ Аге Сп Аа Рго СТу СіІп Аге Гей ОЇи Тгр Це

35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп ОС1Іу Аге Тг Туг Туг Ма! Авр Гуз Ре 50 55 60

Гуз Авп Аге Аа Тіт І еи Тіг Аа Авр Тіг 5ег Аа 5ег ТІіг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сн І еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇ Авр Тг Аа Маї Туг Рре Сув 85 90 95

Ті Аге Це Туг О1Іу Ре Туг Ре Авр Ре Тгр СТУ СІп С1у Тнг І ей 100 105 110

Маї Тіг Маї 5ег 5ег 115 «2105» 201 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 201

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Си Туг 20 25 30

Зег Це Тут Ттр Маї Аге Сп Аа Рго СІу СіІп Аге Гей ОЇи Це Меї 35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп ОС1Іу Аге Тг Туг Туг Ма! Авр Гуз Ре 60 50 Був Авп Аге Аа ТІг ІГеи ТІг Аа Авр ТНг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг

65 70 75 80

Меї Сн І еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇ Авр Тг Аа Маї Туг Рре Сув 85 90 95

Ті Аге Це Туг О1Іу Ре Туг Ріе Авр Ре Тгр СТУ СІп С1у Тнг І еп 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105» 202 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 202

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15 зо 5ег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг Тіт Ре Тіг Си Туг 20 25 30

Зег Це Тут Ттр Маї Аге СіІп Аа Рго СІу Сп Аге Гей СІ Це Це 35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп Оу Аге Тг Туг Туг Ма! Авр Гув Ре 50 55 60

Гуз Авп Аге Маї Тіт І еи Тіг Аа Авр Тг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сн І еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇ Авр Тг Аа Маї Туг Рре Сув 85 90 95

ТІг Аге Це Туг СІу Ре Туг Ре Авр Ре Тгр О1у СіІп СІу Тіг Гей

100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105» 203 «2115 117 105212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 203

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Си Туг 20 25 30

Зег Це Тут Ттр Маї Аге СіІп Аа Рго СІу Сп Аге Гей СІ Це Це

Зо ОТу Аге Це Авр Рго Гуз Авп СІу Аге Тг Туг Туг Ма! Авр Гуз Ре 60

Гуз Азп Аге Аа Тіт Пе ТІг Аа Авр ТНг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 35 65 70 75 80

Меї Сн І еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇ Авр Тг Аа Маї Туг Рре Сув 85 90 95 40

Ті Аге Це Туг О1Іу Ре Туг Ріе Авр Ре Тгр СТУ СІп С1у Тнг І еп 100 105 110 45

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 50 «210» 204

«2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «4005» 204

СТ МаїЇ СІ Гей Маї Сід 5ег СОТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Си Туг

Зег Це Тут Ттр Маї Аге СіІп Аа Рго СІу Сп Аге Гей СІ Це Це 20

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп ОС1Іу Аге Тг Туг Туг Ма! Авр Гуз Ре 60 25

Гуз Авп Аге Аа Тіт І еи Тіг Аге Авр ТНг 5ег Аа 5ег ТІг Аа Туг 65 70 75 80 з30 Ме Он І еи 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇш Авр Тіг Аа Маї Туг Ре Сув 85 90 95

Ті Аге Це Туг Оу Ре Туг Ріе Авр Ре Тгр СТУ СОІп СТу ТПг Гей 35 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 40 «2105» 205 «2115 117 «212» Білок 45 «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 50 х400» 205

СІи МаїЇ Сів ГГ еп Маї СІп 5ег СІу Аа СЇш Маї Гув Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Си Туг 20 25 30 бег Це Туг Тгр Маї Ате Сп Аа Рго СТУ СіІп Аге Ге Си Це Це 35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп ОС1Іу Аге Тг Туг Туг Ма! Авр Гуз Ре 50 55 60

Гуз Авп Аге Аа Тіт І еи Тіг Аа Авр ТІг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Ме Сни Гей 5ег 5ег І еп Аге 5ег СЇи Авр Тг Аа МУаї Туг Туг Сув 85 90 95

Ті Аге Це Туг О1Іу Ре Туг Ріе Авр Ре Тгр СТУ СІп С1у Тнг І еп 100 105 110 зо МаїЇ Тіг Маї 5ег 5ег 115 «210» 206 «2115 117 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 206

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Си Туг 20 25 30

Зег Це Тут Ттр Маї Аге СіІп Аа Рго СІу Сп Аге Гей СІ Це Це 35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп ОС1Іу Аге Тг Туг Туг Ма! Авр Гуз Ре 50 55 60

Був Авп Аго Аа ТІ Гей Тіг Аа Авр ТНг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сн І еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇ Авр Тг Аа Маї Туг Рре Сув 85 90 95

Аа Аге Це Туг О1Іу Ре Туг Ріе Авр Ре Тгр СТУ СІп С1у Тнг І еп 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105 207 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 207

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15 бег Ма! Гуз МаїЇ 5Бег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ре Тіг Си Туг 20 25 30

Зег Це Туг Ттр Маї Аге Сіп Аа Рго СТу Сп Аге І ей СІши Тгр Меї 35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Муз Авп О1у Аге Ті Туг Туг Ма! Авр Гуз Ре 60 50

Гуз Азп Аге Маї Тіт Пе ТІг Аге Авр Тіг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сн ГГ еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СЇи Авр Тг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Аа Аго Це Туг СІу Ріре Туг Рре Авр Ре Тгр С1у СЇІп ОС1у Тнг І ей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «210» 208 «2115 106 20212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 25 «4005» 208

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Зо

Авр Аге Маї Тіт Пе Тпг Сувз Гув СТу бег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг

І си Маї Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Г еп Геи Це 35 40 45

Туг Авп ТНг Авр Авп ГГ еп Сп 5ег СОТу Це Рго 5ег Аге Ре 5ег СТу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг СЇш Туг Тіг Ге Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІи Авр Ре Аа Тіг Туг Ре Сув Туг СіІп Туг Авп Авп ОС1у Ріе Трг 85 90 95

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 100 105 «2105» 209 «2115 106 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 209

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге МаЇ Тіт Це Тіг Сув Гуз О1у 5ег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 25 30

І си Маї Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Г еп Геи Це

Туг Авзп ТП Авр Авп І еи Сп 5ег СОІУ Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СТу 60

Зо

Зег ОТу бег СТУ Тіг СЇш Туг Тіг Ге Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80 35

СІи Авр Ре Аа Тіг Туг Ре Сув Туг СіІп Туг Авп Авп ОС1у Ріе Трг 85 90 95 40 Ріре СТу СОІп О1Ту Тіт Гуз Маї ОЇш Пе Гув 100 105 «210» 210 45 «2115 106 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» 50 05223» Синтетична конструкція

«400» 210

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у в і 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тпг Сувз Гув СТу бег СіІп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 25 30

І си Маї Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Г еп Геи Це 35 40 45

Туг Авзп ТП Авр Авп І еи Сп 5ег СІу Це Рго 5ег Аге Рре 5ег СІу 50 55 60 бег ОЇу бег СТУ Тіг СЇш Ре ТПг І.еи Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Тут Ріре Сув Туг Сп Туг Авп Авп ОС1у Ре Тіт 85 90 95

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 100 105

Зо «2105 211 «2115 106 «212» Білок 0213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 211

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тпг Сувз Гув СТу бег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 25 30

І еп МаїЇ Ттр Туг СІп СІп Гув Рго СТу був Аа Рго Гуз Гец Гей Це

35 40 45

Туг Авзп ТП Авр Авп І еи Сп 5ег СІу Це Рго 5ег Аге РПе 5ег СІу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг СЇш Туг Тіг Ге Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІи Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув Туг Сіп Туг Авп Авп Оу Ре ТНг 85 90 95

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 100 105 «2105» 212 «2115 106 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «4005» 212

Зо Авр Це Сп Гей Тіт Сіп 5ег Рго 5ег Ре І еи 5ег Аа 5ег Ма!Ї СІТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тпг Сувз Гув СТу бег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 25 30

І си Маї Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Г еп Геи Це 35 40 45

Туг Авзп ТП Авр Авп І еи Сп 5ег СОІУ Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СТу 50 55 60

Зег ОТу бег СТу Тіг См Ре ТПг І. еи Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

ОІш Авр Ре Аа Тіт Туг Туг Сув Туг Сіп Туг Авп Авп ОС1у Ріе Трг

85 90 95

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 100 105 «210» 213 «2115 117 10212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 213

СІи МаїЇ Сів Г еп Маї Сід 5ег СІу Аа СІи Маї Гув Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Си Туг 20 25 30

Зег Це Тут Ттр Маї Аге Сп Аа Рго СІу Сіп Аге Гецп ОЇпи Це Меї

Зо ОТу Аге Це Авр Рго Гуз Авп СІу Аге Тг Туг Туг Ма! Авр Гуз Ре 60

Гуз Азп Аге Маї Тіт Пе ТІг Аге Авр Тіг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 35 65 70 75 80

Меї Сн ГГ еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СЇи Авр Тг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95 40

Аа Аге Це Туг О1Іу Ре Туг Ріе Авр Ре Тгр СТУ СІп С1у Тнг І еп 100 105 110 45

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 50 «210» 214

«2115 106 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «4005» 214

Авр Пе Сп Гей Твг Сп 5ег Рго 5ег Ре ГІ еи 5ег Аа 5ег Ма! СІТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тпг Сувз Гув СТу бег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг

І си Маї Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Г еп Геи Це 20

Туг Авзп ТП Авр Авп І еи Сп 5ег СОІУ Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СТу 60 25

Зег ОТу бег СТУ Тіг СЇш Туг Тіг Ге Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80 з30 ОЇш Авр Ре Аа Тіт Туг Туг Сув Туг Сіп Туг Авп Авп ОС1у Ріе Трг 85 90 95

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 35 100 105 «210» 215 «2115 5 405212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 215 45 ОЇши Нів 5ег Це Туг 1 5 «210» 216 500 «2115 17

«212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 216

Ате Це Авр Рго Гув Авп ОС1у Аге ТІг Туг Рре Маї Авр Гув Ре Гуз 1 5 10 15

Авп «210» 217 15. «2115 8 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 217

Це Авр О1у Ре Туг Рре Авр Ріе 1 5 «2105» 218 «1511 «212» Білок «213» Кацив погуерісив зо х400» 218

Гуз О1Ту б5ег СіІп Авп Маї Авзп Гуз Туг Геи Маї 1 5 10 «210» 219 «2115 7 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 219

Зег Тіг Авр Авп І еи Сп 5ег 1 5 «2105» 220 «2115 8 «212» Білок «213» Кашйив погуерісив

«4005» 220

Туг СіІп Тут Авп Авп ОС1у Ріе Трг

Б 11 5 «2105» 221 «2115 30 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (5)..(5) «223» Хаа являє собою Сіп або Маї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (9)..(9) «223» Хаа являє собою Аа або Рго «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (11).11) «223» Хаа являє собою І еп або Маї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (12)..(12) «223» Хаа являє собою ув або СіІп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (13)..(13) «223» Хаа являє собою ув або Аге «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (20)..(20) «223» Хаа являє собою І еп або Маї «400» 221

СІи МаїЇ Сів ГГ еп Хаа СіІп 5ег О1у Хаа Си Хаа Хаа Хаа Рго ОС1у Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гу Хаа б5ег Суб Гув Аа 5ег СО1у Туг Тіт Рпе ТОг 20 25 30 «2105» 222 «211» 14 212 Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (2)..(2) «223» Хаа являє собою І еп або Маї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (3)..(3) «223» Хаа являє собою ув або Аге «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (5)..(5) «223» Хаа являє собою Аа або Аге

Зо «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (17)..(7) «223» Хаа являє собою СІу або Гув

З5 «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (9)..(9) «223» Хаа являє собою Аге або 5ег «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (12)..(12) «223» Хаа являє собою Пе або Ттр «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (13)..(13) «223» Хаа являє собою Це або Меї

«4005» 222

Тгр Хаа Хаа Сіп Хаа Рго Хаа Сіп Хаа І еи СЇши Хаа Хаа СІу 1 5 10 «2105» 223 «211» 32 212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (2)..(2) «223» Хаа являє собою Аа або Маї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (4).(4) «223» Хаа являє собою Ше або І еп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (6).6) «223» Хаа являє собою Аге або Тіг «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (17)..(7) «223» Хаа являє собою Авр або Авп «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (10)..010) «223» Хаа являє собою АЇа або 5ег «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (11).411) «223» Хаа являє собою Авп або 5ег «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (16)..(16) «223» Хаа являє собою ОЇи або Сп

«2215 МОЮ КЕ5 «222» (21)..21) «223» Хаа являє собою Аге або Тіг «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (271)..(27) «223» Хаа являє собою Це або Маї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (29)..(29) «223» Хаа являє собою Ре або Туг «4005» 223

Ате Хаа Тіг Хаа ТІг Хаа Хаа Тіт 5ег Хаа Хаа ТІг Аа Туг Меї Хаа 1 5 10 15

І еи 5ег 5ег І еп Хаа 5ег СОЇй Авр Тіг Аа Хаа Туг Хаа Сув Аа Аге 20 25 30 «2105 22А «211511 «212» Білок «2135 Штучна послідовність

Зо «220» «223» Синтетична конструкція 0 «2205 «2215 МОЮ КЕ5 «222» (5)..(5) «223» Хаа являє собою Тіт або Маї «2205 «2215 МОЮ КЕ5 «222» (6).6) «223» Хаа являє собою І еп або Меї 0 «2205» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (9)..(9) «223» Хаа являє собою Аа або Маї «4005 22А

Тгр О1уУ СіІп СІу Хаа Хаа Маї Тіг Хаа 5ег 5ег 1 5 10 «2105 225 «2115 30 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005 225

СІи МаїЇ Сп Гей Сп Сп 5ег СТу Рго Сни Гей Сп Аге Рго С1у Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Суб Гей 5ег Суб Мув Аа 5ег СО1у Туг Тіт Рпе ТНг 20 «2105» 226 «2115 14 «212» Білок «213» Кацив погуерісив 25 «4005» 226

Тгр Гей Був ОЇп Аге Рго Гув Сп 5ег Їеи Си Пе Це О1у 1 5 10

Зо «2105 227 «2115 32 «212» Білок «213» Кайив погуерісив «4005 227

Ате Аа Тіт Ге Тіт Тг Авоп ТНг 5ег 5ег Авп Тіг Аа Тут Меї Сп 401 5 10 15

І еи 5ег 5ег еп ТВг 5ег СЇи Ар ТНг Аа Пе Туг Ріе Сув Аа Аге 20 25 30 «2105» 228 «1511 «212» Білок «213» Кашйив погуерісив

«4005» 228

Тгр О1уУ СіІп СІу Маї Меї Маї Тіг Аа 5ег 5ег в 11 5 10 «2105» 229 «2115 30 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 229

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз Маї 5ег Сув Гув Аа 5ег СТУ Туг ТІПг Ріе Трг 20 25 30 «2105» 230 «2115 14 «212» Білок -213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 230

Тгр Гей Аге Сп Аа Рго СІу Сіп Аге Гей ОЇи Це Пе СІу 1 5 10 «2105 231 «2115 14 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205» «223» Синтетична конструкція «400» 231 тр МаїЇ Атя Сп Аа Рго СІу Сіп Аге Ге ОЇи Це Пе СІу

1 5 10 «2105 232 к2115 14 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 232

Тгр Гей Аге Сп Аа Рго СІу Сіп Аге Гей ОЇ Ттр Це С1у 1 5 10 «2105» 233 «2115 14 20. х212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 233

Тгр Гей Аге Сп Аа Рго СІу Сіп Аге Ге ОЇи Це Меї О1їу 1 5 10

Зо «210» 234 «2115 14 «212» Білок 0213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 234

Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго СОІУ Сіп Аге Гей ОЇп Тгтр Меї СІу 1 5 10 «2105 235 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність

«223» Синтетична конструкція «4005» 235

Ате Аа Тіт Ге ТНг Тг Авр ТНг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Меї ОЇ 1 5 10 15

ТГеп 5ег 5ег Ге Агео 5ег ОЇш Авр ТІг Аа Маї Туг Ріе Сув Аа Аге 20 25 30 «210» 236 «2115 32 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 236

Ате Маї Тіг Геи ТНг Тг Авр ТНг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Меї ОЇ 1 5 10 15

І еи 5ег 5ег Гей Аге 5ег СЇш Авр ТІг Аа Маї Туг Ре Сув Аа Аге 20 25 30

Зо «2105 237 «2115 32 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 237

Ате Аа Тіт Це Тіг Тіг Авр Трг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Меї СЇи 1 5 10 15

І еи 5ег 5ег Гей Аге 5ег СЇш Авр Тіт Аа Маї Туг Ріре Сув Аа Аге 20 25 30 «210» 238

«2115 32 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «4005» 238

Аге Аа ТП Гей Тіт Аге Авр ТПг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Ме СЇи 1 5 10 15

І еи 5ег 5ег Гей Аге 5ег СЇш Авр ТІг Аа Маї Туг Ре Сув Аа Аге «210» 239 «2115 32 20 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 25 «4005» 239

Ате Аа Тіт Ге ТНг Тг Авр ТНг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Меї ОЇ 1 5 10 15

Зо

І си 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇш Авр Тіг Аа Маї Туг Туг Сув Аа Аге 20 25 30 «210» 240 «2115 32 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 240

Ате Маї Тіг Це Тіг Агео Авр ТП 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Меї СЇи 1 5 10 15 Іенц 5ег 5ег Гей Аг 5ег ОЇш Авр Тіг Аа Маї Туг Туг Сув Аа Ага

20 25 30 «210» 241 «2115 32 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 241

Ате Аа Тіт Це Тіг Тіг Авр Трг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг Меї СЇи 1 5 10 15

І си 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇш Авр Тіг Аа Маї Туг Туг Сув Аа Аге 20 «2105» 242 «1511 «212» Білок 25 «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція зо «400» 242

Тгр О1уУ СіІп СІу Тіг Г еп Маї ТІг Маї 5ег 5ег 1 5 10

З5 «210» 243 «2115 23 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 0 «2205» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (1)..0) «223» Хаа являє собою Авр або Авп «2205

«221» МОЮ КЕ5 «222» (3)..(3) «223» Хаа являє собою Ні» або СіІп «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (10)..110) «223» Хаа являє собою Ре або І ей «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (21)..21) «223» Хаа являє собою Пе або Ї ей «220» «221» МОЮ КЕ5 «222» (22).(22) «223» Хаа являє собою 5ег або Тіг «400» 243

Хаа Це Хаа І еи Тіг Сп 5ег Рго 5ег Хаа І еп 5ег Аа 5ег Ма! СОТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіг Хаа Хаа Сув 20 «210» 244 «211» 15 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (6).(6) «223» Хаа являє собою І еп або Рго «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (8)..(8) «223» Хаа являє собою Сім або ув «400» 244

Тгр Туг СіІп СіІп Гув Хаа О1у Хаа Аа Рго Гуз Гей І еи Це Туг 1 5 10 15 «2105» 245 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність 10. «2205 «223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (2).42) «223» Хаа являє собою Це або Маї «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (14)..414) «223» Хаа являє собою Авр або Сп «220» х221х МОЮ КЕ5 «222» (15)..(15) «223» Хаа являє собою Ре або Туг «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (271)..(27) «223» Хаа являє собою Аа або Ре «220» 0 «2215 МОЮ КЕ5 «222» (31)..431) «223» Хаа являє собою Ре або Туг «4005» 245

СОІУ Хаа Рго 5ег Аге Ре 5ег ОІу 5ег Оу 5ег СТ1у Тг Хаа Хаа ТОг 1 5 10 15

Ге ТНг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго СЇши Авр Хаа Аа ТП Туг Хаа Сув 20 25 30 «210» 246 500 «2115 10

«212» Білок -213» Штучна послідовність «220» 223» Синтетична конструкція «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (3)..3) «223» Хаа являє собою Сіп або 5ег «220» «2215 МОЮ КЕ5 15.«222х (7).47) «223» Хаа являє собою І еп або Маї «400» 246

Ре СІу Хаа СІу Тіг Гуз Хаа СЇш Пе Гув 1 5 10 «2105 247 «15 23 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 247

Зо

Азвп Це Нів Гей Тг СІп 5ег Рго 5ег І еп І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15 Авр Аге Ма! ТІг І еи 5ег Суб 20 «2105» 248 «2115 15 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «400» 248

Тгр Туг СіІп СіІп Гув Гей СТу Ой Аа Рго Гуз Геп І еи Це Туг 1 5 10 15 0 «2105» 249

«2115 32 «212» Білок «213» Кацив погуерісив х4абО» 249

СТУ Це Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 5ег СІу 5ег О1у ТНг Авр Туг Тіг 1 5 10 15

І ви ТІг Це 5ег 5ег І еи Сіп Рго Си Авр Аа Аа Тіг Туг Рре Сув 20 25 30 х2105 250 «2115 10 «212» Білок «213» Кацив погуерісив хА00» 250

Ре СІу 5ег О1у Тіг Гу Гей ОЇ Це Гуз 1 5 10 «2105 251 «2115 23 «212» Білок «2135 Штучна послідовність

Зо «220» «223» Синтетична конструкція «4005 251

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге МаїЇ ТІг Це Тіг Сув 20 «2105 252 «2115 15 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» 05223» Синтетична конструкція

«4005 252

Тгр Туг СіІп СіІп Гув Рго О1у Гуз Аа Рго Гуз Ге І еи Це Туг в 11 5 10 15 «2105 253 «2115 32 105212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 253

СОІУ Це Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 5ег СТу б5ег СТУ Тіг СЇши Туг Тиг 1 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи Сп Рго СЇши Авр Ре Аа ТІг Туг Рпе Сув 20 25 30 «2105» 254 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 254

СІу Маї Рго 5ег Агео Ре 5ег СІТу 5ег СІу б5ег О1у Тіг ОЇи Туг ТНг 1 5 10 15

Ге ТНг Це 5ег 5ег еп Сп Рго Си Авр Ре Аа Тіг Туг Ріе Сув 20 25 30 «2105 255 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» 05223» Синтетична конструкція

«4005 255

СТУ Це Рго 5ег Аге Ре 5ег ОТу 5ег СІТу 5ег ОТУ Тіг ОЇи Ре Трг в і 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи Сп Рго СЇши Авр Ре Аа ТІг Туг Рпе Сув 20 25 30 «2105 256 «2115 32 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція х4А00» 256

СОІУ Це Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 5ег СТу б5ег СТУ Тіг СЇши Туг Тиг 1 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи Сп Рго СЇшпи Авр Ріє Аа Тг Туг Туг Сув 20 25 30 з0 «2105» 257 «2115 32 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205 «223» Синтетична конструкція «4005 257

ОТу Маї Рго 5ег Агео Ре 5ег О1у 5ег СТу 5ег СТу Тіг СЇи Рре Трг 1 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи Сп Рго СЇшпи Авр Ріє Аа Тг Туг Туг Сув 20 25 30 «2105 258 «2115 32 005212» Білок

-213» Штучна послідовність «223» Синтетична конструкція «4005 258

СІу Маї Рго 5ег Агео Ре 5ег СІТу 5ег СІу б5ег О1у Тіг ОЇи Туг ТНг 1 5 10 15

І си ТІг Це 5ег 5ег І еи Сп Рго СЇшпи Авр Ріє Аа Тг Туг Туг Сув 20 25 30 «2105 259 «2115 10 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 259

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 1 5 10 «210» 260 «2115 117 «212» Білок «213» Кацив погуерісив зБ 0 х400» 260

СІи МаїЇ Сп Гей Сп Сп 5ег СТу Рго Сни Гей Сп Аге Рго С1у Аа 1 5 10 15 40

Зег Ма! Гуз Гей 5ег Суб МГув Аа 5ег СОТу Туг Тіт Ре Тіг Си Нів 20 25 30 45 бег Це Туг Ттр Гей Гуз Сіп Аге Рго Мув СіІп 5ег Геи СЇи Це Це

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп Оу Аге ТНг Туг Ре Маї Авр Гув Рре 5О 50 55 60

Гуз Авп Аге Аа Тіт Іеи Трг Тг Авп Тг 5ег 5ег Авп Тг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сп І еп 5ег 5ег Геи Тіг 5ег ОЇ Авр Тіг Аа Це Туг Ре Сув 85 90 95

Аа Аге Це Авр СТу Ре Туг Ре Авр Ре Тгр ОС1у СіІп СІу Маї Ме 100 105 110

МаїЇ Тіт Аа 5ег 5ег 115 «2105» 261 «2115 106 «212» Білок «213» Кацив погуерісив «4005» 261

Азвп Це Нів Гей Тг СІп 5ег Рго 5ег І еп І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге МаїЇ Тіг Гей 5ег Суб був ОТу б5ег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 25 30

І си Маї Тгр Туг СіІп СІп Гуз Гецп О1у ОЇп Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45

Туг бег Тіг Авр Авп Гей Сп 5ег СІу Це Рго 5ег Аге Ре 5ег ОЇу 50 55 60

Зег ОЇу бег СТу Тіг Авр Туг Тіг Геи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІи Авр Аа Аа Тіг Туг Ріре Суз Туг Сіп Туг Авп Авп СТу Рпе ТНг 85 90 95

Рре СІу 5ег СТу ТПг був Ге ОЇш Пе Гуз

100 105 «2105» 262 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 262

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІу Туг Тіг Рре Тіг ОЇи Нів 20

Зег Це Туг Ттр Гей Аге Сіп Аа Рго С1у Сіп Аге Геп СЇи Це Це 25

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп Оу Аге ТНг Туг Ре Маї Авр Гув Рре 60 30 Був Авп Аге Аа Тіг Геи ТІг Трг Авр ТНг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сн І еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇ Авр Тг Аа Маї Туг Рре Сув 35 85 90 95

Аа Аге Це Авр СТу Ріе Туг Ре Авр Ре Тгр О1Іу СІп СТу ТПг Гей 100 105 110 40

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 45 «210» 263 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність 50

«223» Синтетична конструкція «4005 263

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15 бег Ма! Гуз Ма! 5ег Сув Гуз Аа 5ег СОТу Туг Тіт Рре Тіг Си Нів 20 25 30

Зег Це Тут Ттр Маї Аге СіІп Аа Рго СІу Сп Аге Гей СІ Це Це 35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп Оу Аге ТНг Туг Ре Маї Авр Гуз Ре 50 55 60

Гуз Авп Аге Аа Тіт Іеи Трг Тіг Авр Тг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сн І еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇ Авр Тг Аа Маї Туг Рре Сув 85 90 95

Аа Аге Це Авр ОСІу Ре Туг Ре Авр Ріе Тгр СІу Сп СТу Тнг І еп 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «210» 264 «2115 117 405212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 264

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІу Туг Тіг Рре Тіг ОЇи Нів 20 25 30

Зег Це Туг Ттр Гей Аге Сіп Аа Рго СТУ Сіп Аге Гей Оп Ттр Це 35 40 45

ОІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп ОЇу Аге Тг Туг Ре Маї Авр Гув Ре 50 55 60

Гуз Авп Аге Аа Тіт Іеи Трг Тіг Авр Тг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сн І еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇ Авр Тг Аа Маї Туг Рре Сув 85 90 95

Аа Аге Це Авр СТу Ріе Туг Ре Авр Ре Тгр О1Іу СІп СТу ТПг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «210» 265 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205 «223» Синтетична конструкція «4005» 265

СІ МаїЇ Сів Г еп Маї СІп 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго ОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІу Туг Тіг Рре Тіг ОЇи Нів 20 25 30

Зег Це Тут Ттр Гей Аге Сіп Аа Рго СТУ Сіп Аге Гей СЇи Це Меї 35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп Оу Аге ТНг Туг Ре Маї Авр Гув Рре 50 55 60

Гуз Авп Аге Аа Тіт ІГеи Тіг Тіг Авр Тг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Мес Он Гей 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇш Авр Тіг Аа Маї Туг Ре Сув 85 90 95

Аа Аге Це Авр СТу Ріе Туг Ре Авр Ре Тгр О1у СіІп СІу Тіг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «210» 266 «2115 117 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція зо х400» 266

СІи Маї СіІп Г еп Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІу Туг Тіг Рре Тіг ОЇи Нів 20 25 30 бег Це Туг Ттр Гей Аге Сіп Аа Рго Су Сіп Аге Геп ОЇпи Це Це 35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп Оу Аге ТНг Туг Ре Маї Авр Гув Рре 60

Гуз Авп Аге Маї Тіт Геи Трг Тіг Авр Тг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80 50

Меї Сн І еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇ Авр Тг Аа Маї Туг Рре Сув 85 90 95

Аа Аге Це Авр СТу Ріе Туг Ре Авр Ре Тгр О1Іу СІп СТу ТПг Гей 100 105 110

Маї Ті Маї 5ег 5ег 115 «2105 267 15. «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 267

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІу Туг Тіг Рре Тіг ОЇи Нів 20 25 30

Зо

Зег Це Туг Ттр Гей Аге Сіп Аа Рго С1у Сіп Аге Геп СЇи Це Це 35

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп Оу Аге ТНг Туг Ре Маї Авр Гув Рре 60 40 ув Авп Аго Аа Тіт Це Тіг Тіг Авр Тіг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сн І еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇ Авр Тг Аа Маї Туг Рбе Сув 45 85 90 95

Аа Аге Це Авр СТу Ріе Туг Ре Авр Ре Тгр О1Іу СІп СТу ТПг Гей 100 105 110 50

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег «210» 268 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 268

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15 бег Ма! Гуз Маї 5ег Сув Суб Аа 5ег СТу Туг Тіг Ре Тіг Си Нів 20 25 30

Зег Це Туг Ттр Гей Аге Сіп Аа Рго С1у Сіп Аге Геп СЇи Це Це

СІу Аге Пе Авр Рго Гуз Авп О1у Аге ТП Туг Ре Маї Авр Гув Ріе 60

Зо

Гуз Авп Аге Аа Тіт І еи Тіг Аге Авр ТНг 5ег Аа 5ег ТІг Аа Туг 65 70 75 80 35

Меї Сн І еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СОЇ Авр Тг Аа Маї Туг Рре Сув 85 90 95 40 Аа Аге Це Авр ОСІу Ре Туг Ре Авр Ріе Тгр СІу Сп СТу Тнг І еп 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 45 115 «210» 269 «2115 117 50 005212» Білок

-213» Штучна послідовність «223» Синтетична конструкція «4005» 269

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІу Туг Тіг Рре Тіг ОЇи Нів 20 25 30

Зег Це Туг Ттр Гей Аге Сіп Аа Рго С1у Сіп Аге Геп СЇи Це Це 35 40 45

ОІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп Оу Аге ТНг Туг Ре Маї Авр Гув Рре 50 55 60

Гуз Авп Аге Аа Тіт Іеи Трг Тіг Авр Тг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Меї Сн ГГ еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СЇи Авр Тг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Зо

Аа Аге Це Авр СТу Ріе Туг Ре Авр Ре Тгр О1Іу СІп СТу ТПг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105 270 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205» «223» Синтетична конструкція «4005» 270

СТи МаїЇ Сів ГГ еп Маї СІп 5ег СТу Аа СІи Маї Гуз Гуз Рго СІу Аа

1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІу Туг Тіг Рре Тіг ОЇи Нів 20 25 30

Зег Це Туг Ттр Маї Аге Сіп Аа Рго СІу Сіп Аге Ге ОЇ Тгр Меї 35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп Оу Аге ТНг Туг Ре Маї Авр Гув Рре 50 55 60

Гуз Авзп Аге Маї Тіт Пе Тіг Аге Авр Тіг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Ме Сн ГГ еи 5ег 5ег І еп Аге 5ег СЇш Авр ТІг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Аа Аге Це Авр СІу Ріе Туг Ре Авр Ре Тгр О1у СІп СІу Тіг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115

Зо «2105 271 «2115 106 «212» Білок 0213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 271

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тпг Сувз Гув СТу бег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 25 30

І еп МаїЇ Ттр Туг СІп СІп Гув Рго СТу був Аа Рго Гуз Гец Гей Це

35 40 45

Туг бег ТНг Авр Авп ГІ еи Сп 5ег СІу Це Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг СЇш Туг Тіг Ге Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІи Авр Ре Аа Тіг Туг Ре Сув Туг СіІп Туг Авп Авп ОС1у Ріе Трг 85 90 95

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 100 105 «2105 272 «2115 106 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «4005 272

Зо Авр Це Сп Гей Тг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Уа! С1у 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тпг Сувз Гув СТу бег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 25 30

І си Маї Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Г еп Геи Це 35 40 45

Туг 5ег Тіг Авр Авп І ей Сп 5ег СІу Маї Рго 5ег Аге РПе 5ег СТу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг СЇш Туг Тіг Ге Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІи Авр Ре Аа Тг Туг Ре Сув Туг СіІп Туг Авп Авп ОС1у Ріе Трг

85 90 95

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 100 105 «2105 273 «2115 106 105212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 273

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! СОТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тпг Сувз Гув СТу бег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 25 30

І си Маї Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз І еп Гей Це 35 40 45

Туг бег Тіг Авр Авп Г еп Сп 5ег СТу Це Рго 5ег Аге Ре 5ег СТу 50 55 60

Зег ОТу бег СТу Тіг См Ре ТПг ІГеи ТНг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІи Авр Ре Аа Тіг Туг Ре Сув Туг СіІп Туг Авп Авп ОС1у Ріе Трг 85 90 95

РПе СІу СІп СТу ТПг був Маї СОЇи Це Гу 100 105 «2105 274 «2115 106 «212» Білок -213» Штучна послідовність

«223» Синтетична конструкція «4005» 274

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге МаїЇ Тіт Це Тіг Сув Гуз О1у 5ег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 25 30

І си Маї Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Г еп Геи Це 35 40 45

Туг бег ТНг Авр Авп ГІ еи Сп 5ег СІу Це Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг СЇш Туг Тіг Ге Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув Туг СіІп Туг Авп Авп О1у Ріе Трг 85 90 95 зо Рре СТу СОІп О1Ту Тіт Гуз Маї ОЇш Пе Гув 100 105 «2105 275 «2115 106 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» х223» Синтетична конструкція «4005 275

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тпг Сувз Гув СТу бег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 25 30

І си Маї Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Г еп Геи Це 35 40 45

Туг 5ег Тіг Авр Авп І ей Сп 5ег СІу Маї Рго 5ег Аге РПе 5ег СТу 50 55 60 бег ОТу 5ег СТу ТПг См Ріре ТПг Ге Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув Туг СіІп Туг Авп Авп О1у Ріе Трг 85 90 95

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 100 105 «2105» 276 «2115 117 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція зо х400» 276

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз Маї 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІТу Туг ТІПг Ре Тіг СТи Нів 20 25 30 бег Це Туг Ттр Гей Аге Сіп Аа Рго СТУ Сіп Аге І ей ОЇи Це Ме 35 40 45

СІу Аге Це Авр Рго Гуз Авп О1у Аге ТП Туг Ре Маї Авр Гув Ріе 60

Гуз Азп Аге Аа Тіт Пе ТІг Тіг Авр ТНг 5ег Аа 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80 50

Меї Сн ГГ еп 5ег 5ег Гей Аге 5ег СЇи Авр Тг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Аа Аге Це Авр СТу Ріе Туг Ре Авр Ре Тгр О1Іу СІп СТу ТПг Гей 100 105 110

Маї Ті Маї 5ег 5ег 115 «2105 277 15. «2115 106 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 277

Авр Це Сіп Геп ТНг Сп 5ег Рго 5ег Ре І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе Тпг Сувз Гув СТу бег СІп Авп Маї Авп Гуз Туг 20 25 30

Зо

І си Маї Тгр Туг СіІп СІп Гуз Рго СІу Гув Аа Рго Гуз Г еп Геи Це 35

Туг 5ег Тіг Авр Авп І ей Сп 5ег СІу Маї Рго 5ег Аге РПе 5ег СТу 60 40 бег ОЇу бег ОТ1у Тіг СЇш Туг Тіг Ге Тіг Це 5ег 5ег І еп Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув Туг СіІп Туг Авп Авп О1у Ріе Трг 45 85 90 95

Ре СІу СІп СТу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 100 105 50

«2105» 278 «2115 5 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 278

Авр 5ег Туг Меї 5ег 1 5 «2105 279 «2115 5 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 279

Авр Аа Туг Меї 5ег 1 5 «210» 280 «2115 5 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205 «223» Синтетична конструкція «4005» 280

СІи 5ег Тут Меї 5ег 1 5 «2105» 281 45. к2115 17 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція

«4005» 281

Авр Меї Тут Рго Авр Авп О1Ту Авр 5ег 5ег Туг Авп Сп Гув Ре Аге в і 5 10 15

ОСІи «2105 282 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 282

Авр Меї Туг Рго Авр Авп Аа Авр 5ег 5ег Туг Авп СіІп Гуз Ре Аге 1 5 10 15

ОСІи «2105 283 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність 0 «2205 «223» Синтетична конструкція «4005 283

Авр Меї Туг Рго Авр Авп Аа Авр Аа 5ег Туг Авп Сп Гув Ре Аге 1 5 10 15

ОСІи «210» 284 «2115 17 005212» Білок

«213» Штучна послідовність «223» Синтетична конструкція «4005» 284

Авр Меї Туг Рго Авр Авп С1Ту Авр Аа 5ег Туг Авп Сп Гув Ре Аг 1 5 10 15

ОСІи «2105 285 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 285

Авр Меї Туг Рго Авр 5ег СО1у Авр 5ег 5ег Туг Авп Сп Гуз Ре Аге 1 5 10 15 зо Ой «210» 286 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» х223» Синтетична конструкція «4005» 286

Авр Меї Туг Рго Авр Авп ОС1Іу 5ег 5ег 5ег Туг Авп Сіп Гуз Ре Атге 1 5 10 15

ОСІи

«2105 287 «2115 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 287

Аа Рго Аге Тгір Туг Ре 5ег Маї 1 5 «2105» 288 «2115 8 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 288

Аа Рго Аге Тгр Туг Ре 5ег Аа 1 5 «210» 289 «2115 8 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205 «223» Синтетична конструкція «4005» 289

Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе Аа Маї 1 5 «2105» 290 «21511 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» 05223» Синтетична конструкція 2А1

«4005» 290

Ате Аа 5ег СіІп Авр Це 5ег Авп Туг І ей Авп в 11 5 10 «2105» 291 «2115 7 105212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 291

Туг Тіт 5ег Аге Гей Аге 5ег 1 5 «2105» 292 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція зо х400» 292

СІп ОЇп ОС1Ту Нів Тг Геп Рго Рго Тіг 1 5 «2105» 293 «2115 9 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 293

СІп ОЇп ОС1Ту Нів Тг Гей Рго Аа Трг 1 5 «210» 294

«2115 9 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «4005» 294

Сп СЇп СТу Ні Тг Аа Рго Рго ТОг 1 5 «2105» 295 15. «2115 9 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 295

СІп ОЇп СТу Аа ТПг Гей Рго Рго Тіг 1 5 «210» 296 «2115 9 05212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція

З5 «4005» 296

СІп ОЇп ОТу Нів Аа Г еп Рго Рго Тіг 1 5 «2105 297 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 5о х400» 297

СІп Сп Аа Нів Тіт І ей Рго Рго ТОг 1 5 «2105» 298 «2115 9 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 298

СІп ОЇп СТу Нів Тг Гей Аа Рго Тіг 1 5 «210» 299 «2115 9 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 299

Зо СІп Аа СІу Нів Тіг І ей Рго Рго ТНг 1 5 «2105» 300 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» х223» Синтетична конструкція «4005» 300

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 50 55 60

Аге СЇй Аге МаїЇ Тіт Пе Тіг Аге Авр ТІг 5ег Тг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа! Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СТп СТу ТПг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105» 301 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 301

СІи МаїЇ Сів ГГ еп Маї СІп 5ег СІу Аа СЇш Маї Гув Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15 бег Ма! Гуз МаїЇ 5Бег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ре ТІг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей ОЇи Тгр Це 35 40 45

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 60 50

Ате СІи Аге Маї Тіг Це Тіг Маї Азр ТНг 5ег ТІг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Ма Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ре 5ег Ма! Ттр СОТу СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105» 302 «2115 117 20212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 25 «4005» 302

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зо

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

ОІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 50 55 60

Ате СІи Аге МаїЇ ТНг Ге Тіг Маї Авр ТІг 5ег ТОг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105 303 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична конструкція «4005 303

СІ МаїЇ Сів Г еп Маї СІп 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго ОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ре Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це

Зо

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп О1у Авр 5ег 5ег Туг Авп СіІп Гуз Ре 60 35

Ате СІи Аге Маї Тіг Це Тіг Маї Азр ТНг 5ег ТІг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80 40 Ге Сш ГГ еи 5ег 5ег І ей Аге 5ег СЇи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 45 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 50

«2105» 304 «2115 117 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція к4005» 304

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго СОІУ СІп СІу Геп Оп Ттр Це

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 25 50 55 60

Ате СІи Аге Маї Тіг Це Тіг Маї Азр ТНг 5ег ТІг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Зо

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95 35

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110 40 Маї Тіг Маї 5ег 5ег 115 «2105» 305 45 «2115 117 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» 05223» Синтетична конструкція

«4005 305

СІи МаїЇ Сів Г еп Маї Сів 5ег СОТу Аа СЇш Маї Гуз Гуз Рго СІу Аа в і 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СІп ОС1у Гей ОЇш Тгр Це 35 40 45

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 50 55 60

Аг СЇп Аге Маї ТІг Це Тіг МУаї Авзр Тнг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТу Тнг І еп 100 105 110

Зо

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «210» 306 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 306

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15 5ег Ма! Гуз Маї 5Бег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе ТІг Авр 5ег

20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 50 55 60

Ате СІи Аге Маї Тіг Це Тіг Маї Азр ТНг 5ег ТІг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Ма І ей Ада Рго Аге Тгр Туг Ре 5ег Маї Тгр О1у СІп С1у Тіг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105» 307 «2115 117 05212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 307

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз Маї 5ег Сув Гув Аа 5ег СТУ Туг ТІПг Ріе Тіг Авр Аа 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

ОІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп О1у Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Гуз Ре

50 55 60

Ате Си Аге МаїЇ Тіг Це Тіг Аге Авр Тіг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Авр ТІг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105» 308 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «400» 308 з30 СТи МаїЇ Сів Г еп Маї СІп 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго ОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІу Туг Тіг Ре Тіг ОїЇи 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 50 55 60

Ате Си Аге МаїЇ Тіг Це Тіг Аге Авр Тіг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80 Геп СЇш ГГ еи 5ег 5ег І ей Аге 5ег СЇи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув

85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105» 309 «2115 117 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 309

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 25 30 Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго СОІУ СІп СІу Геп Оп Ттр Це

СОІУ Авр Меї Туг Рго Авр Авп Аа Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 35 50 55 60

Ате СІи Аге Маї Тіг Це ТІг Аге Авр Тіт 5ег ТПг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80 40

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95 45

Уа! Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СТп СТу ТПг Гей 100 105 110

МаїЇ Тіг Маї 5ег 5ег

«210» 310 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 310

СІи МаїЇ Сів ГГ еп Маї СІп 5ег СОТу Аа СЇш Маї Гув Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго ОС1у СіІп О1у Гей Оп Тгр Це 25

СОІУ Авр Меї Туг Рго Авр Авп Аа Авр Аа 5ег Туг Авп Сп Гув Ре 60 30 Аге СЇшй Аге МаїЇ Тіг Це ТПг Аге Авр ТІг 5ег ТПг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 35 85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110 40

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 45 «210» 311 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність 50

«223» Синтетична конструкція «400» 311

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15 бег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гу Аа 5ег СТу Туг ТІг Рре Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

СОІУ Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр Аа 5ег Туг Авп Сп Гув Ре 50 55 60

Ате Си Аге МаїЇ Тіг Це Тіг Аге Авр Тіг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Ма Гей Ада Рго Аге Тгр Туг Ре 5ег Маї Тгр О1у СІп С1у Тіг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105» 312 «2115 117 405212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 312

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІу Туг ТІг Ре Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

ОІу Авр Меї Туг Рго Авр 5ег О1у Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Гуз Ре 50 55 60

Ате Си Аге МаїЇ Тіг Це Тіг Аге Авр Тіг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І еи СІ Г еп 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 з0 «210» 313 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205 «223» Синтетична конструкція «400» 313

СІ МаїЇ Сів Г еп Маї СІп 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго ОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

СІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу 5ег 5ег 5ег Туг Авп СіІп Гув Ре 50 55 60

Ате Си Аге МаїЇ Тіг Це Тіг Аге Авр Тіг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Геп СЇш Гей 5ег 5ег І ей Аго 5ег СЇи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «210» 314 «2115 117 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція зо х400» 314

СІи МаїЇ Сів Г еп Маї Сів 5ег СОТу Аа СЇш Маї Гуз Гуз Рго СІу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз Маї 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр Аа 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго О1у СіІп СІу Гей Оп Тгр Це 35 40 45

СОІУ Авр Меї Туг Рго Авр Авп Аа Авр Аа 5ег Туг Авп Сп Гув Ре 60

Ате СІи Аге Маї Тіг Це ТІг Аге Авр Тіт 5ег ТПг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80 50

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТу Тнг І еп 100 105 110

Маї Ті Маї 5ег 5ег 115 «210» 315 15. «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 315

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 25 30

Зо

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 60 40 Аг СЇшп Аге МаїЇ Тіг Це ТПг Аге Авр ТІг 5ег ТПг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 45 85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110 50

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег «210» 316 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 316

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15 бег Ма! Гуз МаїЇ 5Бег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг Тіт Рре Тіт Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп Сп Гуз Ре 60

Зо

Ате Си Аге МаїЇ Тіг Це Тіг Аге Авр Тіг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80 35

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Авр ТІг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95 40 Ма І ей Ада Рго Аге Тгр Туг Ре 5ег Маї Тгр О1у СІп С1у Тіг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 45 115 «210» 317 «2115 117 50 005212» Білок

-213» Штучна послідовність «223» Синтетична конструкція «400» 317

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45 ОІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 50 55 60

Ате Си Аге МаїЇ Тіг Це Тіг Аге Авр Тіг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Зо

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105» 318 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205» «223» Синтетична конструкція «400» 318

СТи МаїЇ Сів Г еп Маї СІп 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго ОТу Аа

1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 50 55 60

Ате СІи Аге Маї Тіг Це ТІг Аге Авр Тіт 5ег ТПг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

Ге СОш Гей 5ег 5ег І ей Аге 5ег СЇи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа! Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТу ТПг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115

Зо «2105» 319 «2115 117 «212» Білок 0213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 319

СІи МаїЇ Сів ГГ еп Маї СІп 5ег СОТу Аа СЇш Маї Гув Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 25 30 Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго СОІУ СІп СІу Гецп ОЇи Тгр Це

35 40 45

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 50 55 60

Ате Си Аге МаїЇ Тіг Це Тіг Аге Авр Тіг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110

Маї Тіг Маї 5ег 5ег 115 «2105» 320 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 320

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 60 50 Аг СЇп Аге МаїЇ Тіт Це ТПг Аге Авр ТІг 5ег ТПг 5ег Тіг Аа Туг

65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105» 321 «2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 321

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15 зо 5ег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гуз Аа 5ег СІу Туг ТІг Ре Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп О1у Авр 5ег 5ег Туг Авп СіІп Гуз Ре 50 55 60

Ате Си Аге МаїЇ Тіг Це Тіг Аге Авр Тіг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І еи СІнп Ге 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТП Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Ма І ей Аа Рго Аге Тгр Туг Ре 5ег Маї! Тгр О1у СІп С1у Тіг Гей

100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105 322 «2115 117 105212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 322

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це зо ОТу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 60

Ате Си Аге МаїЇ Тіг Це Тіг Аге Авр Тіг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 35 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95 40

Уа Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Аа Ттр СТУ СІп СТУ Тнг І еп 100 105 110 45

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 50 «2105» 323

«2115 117 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «4005 323

СТ Маї СІ Гей МаїЇ Сід 5ег СОТу Аа СЇш Маї Гуз Гуз Рго СІу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго СО1Ту СІп СТУ Гей ОЇш Тгр Це 20

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 60 25

Ате СІи Аге Маї Тіг Це ТІг Аге Авр Тіт 5ег ТПг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80 30 Геп СЇш Гей 5ег 5ег І ей Аге 5ег СЇи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа! Гей Аа Рго Аге Тгр Туг Ре Аа Маї Ттр СТУ СіІп С1у Тнг Гей 35 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 40 «2105» 324 «2115 117 «212» Білок 45 «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 5о х4005» 32А

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СТу Туг ТІг Ріе Тіг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго СОІУ СіІп СІу Геп Оп Ттр Це 35 40 45

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп СІп Суб Ре 50 55 60

Ате Си Аге МаїЇ Тіг Це Тіг Аге Авр Тіг 5ег Тіг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Азр ТПг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Аа еи Аа Рго Аге Тгр Туг Ріе 5ег Ма! Ттр СТУ СІп СТУ Тнг І еп 100 105 110 зо МаїЇ Тіг Маї 5ег 5ег 115 «2105 325 «2115 117 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» х223» Синтетична конструкція «4005 325

СІи МаїЇ Сів Ге Маї Сів 5ег СТу Аа СЇш Маї Гуз Гув Рго СОТу Аа 1 5 10 15

Зег Ма! Гуз МаїЇ 5ег Сув Гув Аа 5ег СІу Туг ТІг Ріе ТНг Авр 5ег 20 25 30

Туг Меї 5ег Тгр Маї Аге Сіп Аа Рго С1у СіІп О1у Гей Оп Ттр Це 35 40 45

ОСІу Авр Меї Туг Рго Авр Авп Оу Авр 5ег 5ег Туг Авп Сп Гуз Ре 50 55 60

Аге СЇй Аге МаїЇ Тіт Це Тіг Аге Авр ТІг 5ег ТПг 5ег Тіг Аа Туг 65 70 75 80

І си СІ Гейц 5ег 5ег Гей Агео 5ег ОЇй Авр ТІг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95

Уа Аа Аа Рго Аге Тгір Туг РІе 5ег Маї Тгр О1Уу СІп СІу Тіг Гей 100 105 110

Уа Тіх Хаї 5ег 5ег 115 «2105» 326 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 326

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Ма!Ї ТІг Це Тіг Сув Агео Аа 5ег СІп Авр Це 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 60 50

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп ОС1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Рбе СІу СЇІп СЛу Тіг був Маї ОЇи Це Гув 100 105 «2105 327 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005 327

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

Зо

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35

Туг Тут Тіт 5ег Ага ГГ еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 60 40 бег ОЇу 5ег ОТ1у Тіг Авр Ре ТІг ІГеи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп ОС1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 45 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 50

«2105» 328 «2115 107 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 328

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге МУаї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 ТГеп Авп Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго О1у Гуз Аа Рго Гуз Гей Гей Це

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Ріе 5ег С1у 25 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

Зо

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп СІу Нів Тг Гей Рго Рго 85 90 95 35

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 40 «2105 329 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність

АБО «2205 «223» Синтетична конструкція «4005» 329

Авр Це СЇп Меї Тіг СІп 5ег Рго 5ег 5ег І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у

1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгр Туг СІп СіІп Гуз Рго СТу Суб Тіг Маї Гуз Гей Гей Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп О1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «2105» 330 «2115 107 05212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 330

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгр Туг СІп СіІп Гуз Рго СТу Суб Тіг Маї Гуз Гей Гей Це 35 40 45

Туг Туг Тіг 5ег Агро І еи Аге 5ег СІу Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу

50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп ОС1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «2105» 331 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 331

Авр Це СіІп Меї Тіг Сп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Ма! СОТу 1 5 10 15

Авр Аге МаїЇ ТІг Це Тіг Сув Агео Аа 5ег СІп Авр Це 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгр Туг СІп СіІп Гуз Рго СТу Суб Тіг Маї Гуз Гей Гей Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Гуз Авр Туг ТІіг Геи ТПг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Ре Сув СіІп СІп СІу Нів Тіг Гей Рго Рго 85 90 95

ТІ Ррбе СІу СЇІп СТу Тіг був Маї ОТи Це Гув

100 105 «2105» 332 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 332

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Ма! СОТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20

І еи Авп Тгр Туг СІп СіІп Гуз Рго СТу Гуз Тіг Ма! Гув Гец Гей Це 25

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 60 зо бег ОЇу бег ОТ1у Гуз Авр Туг Тіт Геи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Ре Сув СіІп СІп СІу Нів Тіг Гей Рго Рго 35 85 90 95

Ті Ре О1у СіІп О1у Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 40 «2105» 333 «2115 107 «212» Білок 45 «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 5о х400» 333

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

Гей Авп Тгр Туг Сіп Сп Гуз Рго СО1у Гув Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 50 55 60

Зег ОТу бег СТ1у Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег І ей СіІп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп ОС1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СІп СТу Тіг Гуз Маї СТи Це Гу 100 105 зо «210» 334 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність 0 «2205 «223» Синтетична конструкція «400» 334

Авр Це СІп Меї Тіг СІп 5ег Рго 5ег 5ег І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

ОЇ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СіІп СіІп О1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «2105» 335 «2115 107 20212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 25 «4005 335

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Зо

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45 Туг Туг Тіг 5ег Агро І еи Аге 5ег СІу Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп ОС1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «210» 336 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 336

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге МаїЇ Тіт Це ТІг Сув Агео Аа 5ег СІп Авр Це 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це

Туг Тут Тіт 5ег Аге Ге Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 60

Зо

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80 35

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп ОС1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95 40 ТІ Рре СІу СІп СОТу Тіг був Маї ОТи Це Гув 100 105 «2105» 337 45 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» 50 05223» Синтетична конструкція

«4005 337

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу в і 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СТу Маї Рго 5ег Аге Ріе 5ег ОЇу 50 55 60 бег ОЇу 5ег ОТ1у Тіг Авр Ре ТІг ІГеи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СіІп Сіп ОС1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105

Зо «210» 338 «2115 107 «212» Білок 05213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 338

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

Геп Авп Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго О1у Гуз Аа Рго Гуз Гей Гей Це

35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге Гец Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СТу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп ОС1Іу Нів Тг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «2105 339 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «400» 339 зо Авр Це СЇІп Меї Тіг СІп 5ег Рго 5ег 5ег І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп О1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго

85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «210» 340 «2115 107 105212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 340

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це

Зо Туг Туг Тіг 5ег Агро І еи Аге 5ег СІу Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 35 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп ОС1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95 40

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 45 «2105» 341 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність 50

«223» Синтетична конструкція «4005» 341

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Ма! СОТу 1 5 10 15

Авр Аге МаїЇ Тіт Це Тнг Сув Аге Аа 5ег СІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СЇп Сп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Г.еи Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 50 55 60

Зег ОТу 5ег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СІп СІу Нів Тіт Гей Рго Аа 85 90 95 зо ТІг Ррбе СТу СЇп СТу Тіг був Маї ОТи Це Гув 100 105 «210» 342 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» х223» Синтетична конструкція «400» 342

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Ма! СІТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сп Гуз Рго С1у Суб Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 50 55 60 бег ОТу 5ег СТу ТіПг Авр Ре ТІг Геи ТІг Це 5ег 5ег Гей Сп Рго 65 70 75 80

СІи Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СІп СІу Нів Тіг Аа Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СІп СТу Тіг Гуз Маї СЇи Це Гу 100 105 «210» 343 «2115 107 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція зо х400» 343

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

Геп Авп Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго О1у Гуз Аа Рго Гуз Гей Гей Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 60

Зег ОТу бег СТ1у Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80 50

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СіІп СІп СІу Аа Тіг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «210» 344 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична конструкція «400» 344

Авр Це СІп Меї Тіг СіІп 5ег Рго 5ег 5ег І еп 5ег Аа 5ег Ма! О1у 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це

Зо

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 60 35

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80 40 СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув Сп СіІп О1Іу Нів Аа Ге Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 45 100 105 «210» 345 «2115 107 50 005212» Білок

-213» Штучна послідовність «223» Синтетична конструкція «400» 345

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45 Туг Туг Тіг 5ег Агро І еи Аге 5ег СІу Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув Сп СіІп Аа Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95

Зо

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «210» 346 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 346

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Ма! Тіт Це Тіг Сув Агео Аа 5ег СІп Авр Це 5ег Авп Туг

20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Ага ГГ еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СІп СІу Нів Тіг Гей Аа Рго 85 90 95

ТІ Рре СІу СІп СОТу Тіг був Маї ОТи Це Гув 100 105 «2105» 347 «2115 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «400» 347

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге МУаї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Ріе 5ег С1у 60 50 бег ОЇу 5ег ОТ1у Тіг Авр Ре ТІг Іеи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго

65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув Сп Аа ОС1у Нів Тг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «210» 348 «2115 107 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція «4005» 348

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

Геп Авп Тгр Туг СіІп СіІп Гуз Рго О1у Гуз Аа Рго Гуз Гей Гей Це

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 35 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80 40

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп ОС1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95 45

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «210» 349

«2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність «2205» «223» Синтетична конструкція «400» 349

Авр Пе Сп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Уа! СТу 1 5 10 15

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 20

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 60 25

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80 з30 СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп О1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 35 100 105 «2105» 350 «2115 107 405212» Білок -213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична конструкція 45 «4005» 350

Авр Це СіІп Меї Тіг Сп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Ма! СОТу 1 5 10 15 50

Авр Аге Маї Тіт Пе ТІг Сув Аге Аа 5ег СіІп Авр Пе 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гуз Аа Рго Гуз Гец Гей Це 35 40 45

Туг Туг Тіт 5ег Аге Гей Аге 5ег ОІу Маї Рго 5ег Аге Ре 5ег СІу 50 55 60

Зег ОТу бег СТУ Тіг Авр Ре ТІг І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп ОС1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Ріе О1у СіІп СІу Тг Гув Маї ОЇш Це Гув 100 105 «2105» 351 «2115 107 «212» Білок -213» Штучна послідовність

Зо «220» «223» Синтетична конструкція «4005 351

Авр Це СіІп Меї Тіг Сіп 5ег Рго 5ег 5ег І еи 5ег Аа 5ег Ма! СОТу 1 5 10 15

Авр Аге Ма!Ї ТІг Це Тіг Сув Агео Аа 5ег СІп Авр Це 5ег Авп Туг 20 25 30

І еи Авп Тгтр Туг СІп Сіп Гуз Рго СТу Гув Аа Рго Гуз ГГ еп Ге Це 35 40 45

Туг Тут Тіт 5ег Аге І еп Аге 5ег СО1у Маї Рго 5ег Аге Рре 5ег ОЇу 60 50

Зег ОТу бег СТу Тіг Авр Ре Тіт І.еи ТІг Це 5ег 5ег ІГеи Сп Рго 65 70 75 80

СІ Авр Ре Аа Тіг Туг Туг Сув СІп СіІп ОС1Іу Нів Тнг Гей Рго Рго 85 90 95

Ті Рбе СІу СІп СТу Тг Гув Маї ОЇи Це Гув 100 105 «2105 352 «2115 244 «212» Білок «213» Ното варієпе «4005 352

Меї Аге Тгр Сув Гей І еи І еи Це Ттр Аа СіІп СТУ Гепц Аге Сіп Аа 1 5 10 15 Рго Гей Аа 5ег ОЇу Меї Меї Тіт С1Ту Тіг Пе СТи Тг Тог СТу Авп 20 25 30

Це 5ег АІа СЇш Гуз СТу СТу 5ег Це Це Гец СіІп Сув Нів Ге 5ег

Ко 35 40 45

Зег Тіт ТНг Аа Сп Маї Тнг Сів Маї Авп Тгр ОЇнй Сп СіІп Авр Сп 50 55 60

І еп І еи Аа Це Сув Авп Аа Авр І еп СТу Ттр Нів Це 5ег Рго 5ег 65 70 75 80

Ріє Гуз Авр Аге Маї Аа Рго О1Ту Рго С1Іу Геп СТУ Гей Тіт Гей СІп 85 90 95 5ег Геи ПШг Маї Азп Авзр Тіт ОС1у СЇши Туг Ріе Суз Це Туг Нів ТНг 100 105 110

Туг Рго Авр СІу Тіг Туг Тіг ОІу Аге Це Ре І еи СІи МаїЇ еп Си 5О 115 120 125

Зег зег Ма! Аа Си Нів СІу Аа Аге Ре Сп Пе Рго І еп І еи О1у 130 135 140

Аа Меї Аа Аа Тг І еп Маї Маї Це Сувз ТІг Аа Маї Це Маї Маї 145 150 155 160

Уаї Ага Гей Тіт Аге був Гуз був Аа Гец Аго Це Нів 5ег Маї ОЇ 165 170 175 СтІу Авр Гей Аго Аге ув 5ег АІа СІу СІп СЇши Си Тгр 5ег Рго 5ег 180 185 190

Аа Рго 5ег Рго Рго С1у 5ег Сув МаїЇ СІп Аа Сп Аа Аа Рго Аа 195 200 205

СОІУ Гецп Сув СОІУ СЇш СІп Аге СТу СОЇ Авр Сув Аа СІ Геп Нів Авр 210 215 220

Туг Ре Авп Ма! І еи 5ег Туг Аге 5ег Гей С1у Авзп Сув 5ег Рпе Ре 225 230 235 240

Зо

Ті ОЇю Тіг О1у з35 х2105» 353 «2115 223 «212» Білок «213» Ното варієпе «4005 353

Меї Меї Тіг О1у Тіт Це СТш Тіг Тпг СТу Авп Це 5ег Аа СЇи Гув 1 5 10 15

СІу О1Ту бег Це Це Геп Сп Сув Нів Геи 5ег 5ег Тіг Тіг Аа Сп 20 25 30

МаїЇ Тіт СіІп МаїЇ Авп Тгр СЇш СІп СІп Авр Сп Гей Гей Аа Це Сув

35 40 45

Авп Аа Авр Ге СІу Тгр Нів Це 5ег Рго 5ег Ре Гуз Авр Аге Маї 50 55 60

Аа Рго ОС1у Рго С1у Ге СОІУ Гей Тіг еп Сп 5ег Гей Тг Маї Авп 65 70 75 80

Авр Тіг ОСТу ОЇш Туг Рпе Суз Це Туг Нів Тіг Тут Рго Авр СІу ТІг 85 90 95

Туг Ті О1у Аге Пе Ре Г еп СЇпи Маї І еп Он 5ег 5ег Ма! АІа Си 100 105 110

Нів ОЇу Аа Аге Ре Сп Це Рго І еи І еи СТу Аа Меї Аа Аа Тиг 115 120 125

І си Маї Ма! Це Сув ТІг Аа Маї Це Маї Маї Маї Аа І еи Тіг Аге 130 135 140

Гуз був Мув Аа І ей Аге Це Ні» 5ег Ма! ОЇи С1у Авр Гей Аге Аге 145 150 155 160

Зо

Гуз бег АІа СТУ Сіп ОЇн ОЇ Тгр 5ег Рго 5ег Аа Рго 5ег Рго Рго 165 170 175

СОІУ 5ег Сув Маї СіІп Аа СІи Аа Аа Рго Аа С1у Гей Сувз СОТу Си 180 185 190

СІп Аге О1у ОЇш Авр Сув Аа Сни ГГ еп Нів Авр Туг Ре Авп Маї І еп 195 200 205

Зег Туг Аге 5ег І еи СІу Авзп Сув 5ег Рпе Рпе Тіт СТи ТПг СТу 210 215 220 «2105» 354 «2115» 249 00 «212» Білок

«213» Ното варієпе «400» 354

Те Нів Сув МаЇ О1у Авр Тіт Туг Рго 5ег Авп Авр Аге Сув Сув Нів 1 5 10 15

СІи Сув Аге Рго ОС1у Авзп СІу Меї Маї 5ег Аге Сув 5ег Аге 5ег Сп 20 25 30

Авп Тіг МУаї Сув Аге Рго Сув О1у Рго О1у Ре Туг Авп Авр Маї Маї 35 40 45

Зег зег Гуз Рго Сув Гуз Рго Суб ТНг Ттр Сув Авп І еп Аге 5ег СТу 50 55 60

Зег ОЇш Аге МГув СІп еп Суб Тіт Аа Тіт СіІп Авр Тіг Маї Сув Аге 65 70 75 80 Сув Аго Аа ОСТу Тіг Сп Рго Гей Авр 5ег Туг Гув Рго О1у Маї Авр 85 90 95

Сув Аа Рго Сухз Рго Рго Су Нів Ре 5ег Рго О1у Авр Авп Сіп Аа

Зо 100 105 110

Сув Мув Рго Тгр Тіт Азп Сув ТНг Гей Аа С1у Гуз Нів ТПг Г еп Сп 115 120 125

Рго Аа 5ег Авп 5ег 5ег Авр Аа Це Сув СЇши Авр Аге Авр Рго Рго 130 135 140

Аа Тіг Сп Рго Сіп ОЇ ТНг Сп Оу Рго Рго Аа Аге Рго Це ТНг 145 150 155 160

МаїЇ СІп Рго Тіг СІ Аа Тгр Рго Аге Тіг 5ег СОІп ОТу Рго 5ег ТІг 165 170 175

Ате Рго Маї СЇши Маї Рго С1у О1Іу Аге Аа Маї Аа Аа Пе ГГ еп Су 5О 180 185 190

І еи СТУ Г еп Маї І еп СПТУ Ге Геп Оу Рго Гей Аа Пе Ге Геп Аа 195 200 205

І еи Туг Гей Гей Аге Аге Авр Сіп Аге Гей Рго Рго Авр Аа Нів Гуз 210 215 220

Рго Рго СІу ОТу О1Ту 5ег Рре Аге ТІг Рго Це Сіп Сіши СІи Сп Аа 225 230 235 240

Авр Аа Нів 5ег Тіг Гей Аа Гуз Це

Claims (3)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Антитіло, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ людини, причому антитіло містить наступні шість гіперваріабельних ділянок (ГВД (НМК)): НУВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗМБААМУМ (ЗЕО ІО МО: 1); НМУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність КТУУКЕКУУУЗОМАМЗМКО (ЗЕО ІО МО: 2); НМВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕЕТТ ОЇ ГАСОРЕЮОМ (5ЕО ІО МО: 3); НУВ-11, що містить амінокислотну послідовність КЗБОТМІ УЗ5ММККУМІ А (ЗЕО ІЮ МО: 4); НМВ-12, що містить амінокислотну послідовність МАБТКЕ5 (5ЕО ІО МО: 5); і НМВ-1І3, що містить амінокислотну послідовність ООУУОТРЕТ (ЗЕО ІЮ МО: 6).

2. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що вказане антитіло додатково містить наступні каркасні ділянки (КД) варіабельної ділянки легкого ланцюга: ЕВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ОІММТО5РОБІ АМ5І СЕКАТІМС (ЗЕО ІЮ МО: 7); ЕВ-12, що містить амінокислотну послідовність М/МОСОКРООРРМСІМ (5ЕБО ІО МО: 8); ЕВ-ІЇЗ3, що містить амінокислотну послідовність СМРОКЕЗОЗОЗОТОВЕТІ ТІ ОХЕОМАМУМУС (ЗЕО ІО МО: 9); а також ЕК-14, що містить амінокислотну послідовність ЕСЄРОТКМЕЇК (5ЕО І МО: 10).

3. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що вказане антитіло додатково містить наступні КД ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХІМО 0ОО0О5ОРОЇІ МКРБЗОТІ 5І ТСАІЗООБМУ5 (ЗЕО ІО МО: 11), де Х1 являє собою О або Е; ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМІКОЗБРОКОЇ ЕУМІ О (5ЕО ІЮ МО: 12); ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність КІТІМРОТЗКМОЕБІ ОЇ М5МТРЕОЮТАМЕУСТК (ЗЕО ІЮО МО: 13); і ЕВ-НА4, що містить амінокислотну послідовність МЗОСТІ МТУ (ЗЕО ІО МО: 14).

4. Антитіло за п. 3, яке відрізняється тим, що вказане антитіло додатково містить наступні КД ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕМО О0О5ОРОЇ МКРБОТІ 5І ТСАІЗОО5М5 (5ЕБЕО ІО МО: 15); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність МЛКОБРОЗКОЇ ЕУМІ о (5ЕО ІЮМО: 12); БО ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕПІМРОТЗКМОББ5І ОЇ МЗМТРЕОЮТАМЕУСТА (ЗЕО ІЮО МО: 13); і ЕВ-НА4, що містить амінокислотну послідовність МЗОСТІ МТУ (ЗЕО ІО МО: 14).

5. Антитіло за п. 3, яке відрізняється тим, що вказане антитіло додатково містить наступні КД ділянки варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ОМОГ О0О05ОРОЇІ МКРБЗОТІ І ТСАІЗО0О5МУ5 (ЗЕОІО МО: 16); ЕВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність УМІКОЗБРОКОЇ ЕУМІ О (5ЕО ІЮ МО: 12);

ЕВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕПІМРОТЗКМОББІ ОЇ МЗМТРЕЮОТАМЕУСТА (ЗЕО ІЮО МО: 13); ЕВ-НА4, що містить амінокислотну послідовність МЗОСТІ МТУ (ЗЕО ІО МО: 14).

6. Антитіло за будь-яким із пп. 1-5, причому антитіло містить (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга (МН), що має ідентичність послідовності щонайменше 95 95 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ МО: 34 або 35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга (МІ), що має ідентичність послідовності щонайменше 95 95 відносно амінокислотної послідовності зЕО ІЮ МО: 36.

7. Антитіло за п. 6, яке відрізняється тим, що антитіло містить (а) МН, що має ідентичність послідовності щонайменше 96 95 відносно амінокислотної послідовності зЕО ІЮ МО: 34 або 35, і МІ, що має ідентичність послідовності щонайменше 96 95 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ МО: З6.

8. Антитіло за п. 7, яке відрізняється тим, що антитіло містить (а) МН, що має ідентичність послідовності щонайменше 97 95 відносно амінокислотної послідовності зЕО ІЮ МО: 34 або 35, і МІ, що має ідентичність послідовності щонайменше 97 95 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ МО: З6.

9. Антитіло за п. 8, яке відрізняється тим, що антитіло містить (а) МН, що має ідентичність послідовності щонайменше 98 95 відносно амінокислотної послідовності зЕО ІЮ МО: 34 або 35, і МІ, що має ідентичність послідовності щонайменше 98 95 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ МО: З6.

10. Антитіло за п. 9, яке відрізняється тим, що антитіло містить (а) МН, що має ідентичність послідовності щонайменше 99 95 відносно амінокислотної послідовності зЕО ІЮО МО: 34 або 35; (б) Мі, що має ідентичність послідовності щонайменше 99 95 відносно амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ МО: 36; або (с) МН, як в (а), і МІ, як у (Б).

11. Антитіло, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ людини, причому антитіло містить домен МН, який містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІО МО: 34, і домен Мі, який містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 36.

12. Антитіло, яке специфічно зв'язується з ТІСІТ людини, причому антитіло містить домен МН, який містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІО МО: 35, і домен Мі, який містить Ко) амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 36.

13. Антитіло за будь-яким з пп. 1-12, яке відрізняється тим, що вказане антитіло здатне зв'язуватися з ТІСІТ кролика.

14. Антитіло за будь-яким з пп. 1-13, яке відрізняється тим, що вказане антитіло здатне зв'язуватися з ТІСІТ людини і ТІСІТ яванського макака (яванця), але не ТІСІТ миші.

15. Антитіло за п. 14, яке відрізняється тим, що вказане антитіло зв'язується з ТІСІТ людини із Ка близько 10 нМ або менше і з ТІСІТ яванця з Ка близько 10 нМ або менше.

16. Антитіло за п. 15, яке відрізняється тим, що вказане антитіло зв'язується з ТІСІТ людини із Ка від близько 0,1 нМ до близько 1 нМ і з ТІСІТ яванця з Ка від близько 0,5 нМ до близько 1 нМ.

17. Антитіло за п. 16, яке відрізняється тим, що вказане антитіло зв'язується з ТІСІТ людини із Ка близько 0,1 нМ або менше і з ТІСІТ яванця з Ка близько 0,5 нМ або менше.

18. Антитіло за будь-яким з пп. 1-17, яке відрізняється тим, що вказане антитіло являє собою антагоністичне антитіло.

19. Антитіло за п. 18, яке відрізняється тим, що вказане антагоністичне антитіло специфічно зв'язується з ТІСІТ і інгібує або блокує взаємодію ТІСІТ з рецептором поліовірусу (ПВР (РМК)).

20. Антитіло за п. 19, яке відрізняється тим, що вказане антагоністичне антитіло інгібує внутрішньоклітинну передачу сигналу, опосередковану зв'язуванням ТІСІТ з ПВР (РМК).

21. Антитіло за будь-яким з пп. 18-20, яке відрізняється тим, що вказане антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ людини з ПВР (РУК) людини зі значенням ІС50 10 НМ або менше.

22. Антитіло за будь-яким з пп. 18-21, яке відрізняється тим, що вказане антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ людини з ПВР (РУК) людини зі значенням ІС50 від 1 нМ до близько 10 нМ.

23. Антитіло за будь-яким з пп. 14-18, яке відрізняється тим, що вказане антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ яванця з ПВР (РУК) яванця зі значенням ІС5О 50 НМ або менше.

24. Антитіло за п. 23, яке відрізняється тим, що вказане антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ яванця з ПВР (РУК) яванця зі значенням І/С50 від 1 нМ до близько 50

НМ.

25. Антитіло за п. 24, яке відрізняється тим, що вказане антагоністичне антитіло інгібує або блокує зв'язування ТІСІТ яванця з ПВР (РУК) яванця зі значенням ІС50 від 1 нМ до близько 5

НМ.

26. Антитіло за будь-яким з пп. 1-25, яке відрізняється тим, що вказане антитіло є моноклональним.

27. Антитіло за будь-яким з пп. 1-25, яке відрізняється тим, що вказане антитіло є людським, гуманізованим або гібридним.

28. Антитіло за п. 27, яке відрізняється тим, що вказане антитіло є людським.

29. Антитіло за п. 27 або п. 28, яке відрізняється тим, що щонайменше частина каркасної послідовності являє собою консенсусну каркасну послідовність людини.

30. Антитіло за будь-яким з пп. 1-29, яке відрізняється тим, що вказане антитіло є повнорозмірним антитілом.

31. Антитіло за будь-яким з пп. 1-30, яке відрізняється тим, що кліренс вказаного антитіла після внутрішньовенної ін'єкції становить від близько З мл/кг/добу до близько 10 мл/кг/добу.

32. Антитіло за п. 31, яке відрізняється тим, що кліренс вказаного антитіла після внутрішньовенної ін'єкції становить від близько З мл/кг/добу до близько 8 мл/кг/добу.

33. Антитіло за будь-яким з пп. 1-29, яке відрізняється тим, що вказане антитіло являє собою фрагмент антитіла, який зв'язується з ТІСІТ.

34. Антитіло за п. 33, яке відрізняється тим, що вказаний фрагмент антитіла вибраний з групи, що складається із фрагментів Бар, Раб, БРар-5Н, Ем, одноланцюгового варіабельного фрагмента (5сЕм) і фрагментів (Баб)2.

35. Антитіло за будь-яким з пп. 1-34, яке відрізняється тим, що вказане антитіло являє собою антитіло класу до.

36. Антитіло за п. 35, яке відрізняється тим, що вказане антитіло класу ДО є антитілом підкласу ІдДС1.

37. Полінуклеотид, що кодує антитіло за будь-яким з пп. 1-36.

38. Вектор, що містить полінуклеотид за п. 37.

39. Клітина-хазяїн, що містить вектор за п. 38.

40. Клітина-хазяїн за п. 39, яка відрізняється тим, що клітина-хазяїн є прокаріотичною.

41. Клітина-хазяїн за п. 40, яка відрізняється тим, що клітина-хазяїн являє собою ЕвсПепісніа сої.

42. Клітина-хазяїн за п. 39, яка відрізняється тим, що клітина-хазяїн є еукаріотичною.

43. Клітина-хазяїн за п. 42, яка відрізняється тим, що клітина-хазяїн являє собою клітину 293, клітину СНО, дріжджову клітину або рослинну клітину.

44. Спосіб одержання антитіла за будь-яким з пп. 1-36, що включає культивування клітини- хазяїна за п. 39 в поживному середовищі.

45. Спосіб за п. 44, який відрізняється тим, що додатково включає виділення антитіла з клітини-хазяїна або поживного середовища.

46. Імунокон'югат, що містить антитіло за будь-яким з пп. 1-36 і цитотоксичний агент.

47. Композиція, яка містить антитіло за будь-яким із пп. 1-36 і фармацевтично прийнятний носій, допоміжну речовину або розбавлювач.

48. Композиція за п. 47, яка відрізняється тим, що композиція являє собою фармацевтичну композицію.

49. Композиція за п. 47 або п. 48, яка відрізняється тим, що композиція додатково містить антагоніст зв'язування осі РО-1 або додатковий терапевтичний агент.

50. Застосування антитіла за будь-яким з пп. 1-36 у виробництві лікарського засобу для лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта, який потребує цього.

51. Застосування за п. 50, в якому рак вибраний з групи, що складається із недрібноклітинного раку легені, дрібноклітинного раку легені, раку нирки, колоректального раку, раку яєчника, раку молочної залози, раку підшлункової залози, карциноми шлунка, раку сечового міхура, раку стравоходу, мезотеліоми, меланоми, раку голови та шиї, раку щитоподібної залози, саркоми, раку передміхурової залози, гліобластоми, раку шийки матки, карциноми тимусу, лейкозу, лімфоми, мієломи, грибоподібних мікозів, раку клітин Меркель і злоякісних новоутворень кровотворної системи.

52. Застосування за п. 51, в якому мієлома являє собою множинну мієлому (ММ).

53. Спосіб лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта, що включає введення суб'єкту ефективної кількості антитіла за будь-яким з пп. 1-36, з лікуванням або сповільненням в такий спосіб розвитку раку у суб'єкта.

54. Спосіб за п. 53, який відрізняється тим, що рак вибраний з групи, що складається із бо недрібноклітинного раку легені, дрібноклітинного раку легені, раку нирки, колоректального раку,

раку яєчника, раку молочної залози, раку підшлункової залози, карциноми шлунка, раку сечового міхура, раку стравоходу, мезотеліоми, меланоми, раку голови та шиї, раку щитоподібної залози, саркоми, раку передміхурової залози, гліобластоми, раку шийки матки, карциноми тимусу, лейкозу, лімфоми, мієломи, грибоподібних мікозів, раку клітин Меркель і злоякісних новоутворень кровотворної системи.

55. Спосіб за п. 54, який відрізняється тим, що мієлома являє собою множинну мієлому (ММ).

56. Спосіб за будь-яким з пп. 53-55, який додатково включає введення суб'єкту антагоніста зв'язування осі РО-1.

57. Спосіб за п. 56, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування осі РО-1 вводять до або після введення антитіла.

58. Спосіб за п. 56, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування осі РО-1 вводять одночасно з антитілом.

59. Спосіб за будь-яким з пп. 56-58, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування осі РО-1 вибраний з групи, що складається із антагоніста зв'язування РО-1, антагоніста зв'язування РО- 11 ї антагоніста зв'язування РО-І 2.

60. Спосіб за п. 59, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування осі РО-1 є антагоністом зв'язування РО-1.

61. Спосіб за п. 60, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 з його партнерами-лігандами по зв'язуванню.

62. Спосіб за п. 61, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 з РО-І1.

63. Спосіб за п. 61, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 з РО-12.

64. Спосіб за п. 61, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-1 інгібує зв'язування РО-1 як з РО-1 1, так і з РО-І 2.

65. Спосіб за будь-яким з пп. 61-64, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-1 являє собою анти-РО-1 антитіло.

66. Спосіб за п. 61, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-1 вибраний з групи, що складається із МОХ 1106 (ніволумаб), МК-3475 (пембролізумаб), МЕ0І-0680 (АМР-514), Зо РОКОО1, КЕСМ2810 і ВОВ-108.

67. Спосіб за п. 59, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-1 є антагоністом зв'язування РО-Ї 1.

68. Спосіб за п. 67, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-1 1 інгібує зв'язування РО-І1 з РО-1.

69. Спосіб за п. 67, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-1 1 інгібує зв'язування РО-І1 з В7-1.

70. Спосіб за п. 67, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-1 1 інгібує зв'язування РО-І1 як з РО-1, так і з В7-1.

71. Спосіб за будь-яким з пп. 67-70, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-Ї 1 являє собою анти-РО-11 антитіло.

72. Спосіб за п. 71, який відрізняється тим, що анти-РО-Ї1 антитіло вибрано з групи, що складається із: МРОЇІ 3280А (атезолізумаб), МОХ-1105, МЕ0І4736 (дурвалумаб) і М5В0О010718С (авелумаб).

73. Спосіб за п. 72, який відрізняється тим, що антитіло являє собою МРОЇ 3280А.

74. Спосіб за п. 59, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування осі РО-1 є антагоністом зв'язування РО-1 2.

175. Спосіб за п. 74, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-І 2 являє собою анти- РО-І2 антитіло.

76. Спосіб за п. 74, який відрізняється тим, що антагоніст зв'язування РО-1/2 являє собою імуноадгезин.

77. Спосіб за будь-яким з пп. 53-76, який додатково включає введення суб'єкту додаткового терапевтичного агента.

78. Спосіб за п. 77, який відрізняється тим, що додатковий терапевтичний агент являє собою хіміотерапевтичний засіб.

79. Спосіб за будь-яким з пп. 53-78, який відрізняється тим, що антитіло вводять підшкірно, внутрішньовенно, внутрішньом'язово, застосовують місцево, перорально, трансдермально, внутрішньочеревинно, внутрішньоорбітально, шляхом імплантації, шляхом інгаляції, інтратекально, інтравентрикулярно або інтраназально.

80. Спосіб за будь-яким з пп. 53-79, який відрізняється тим, що суб'єкт є людиною.

81. Набір для лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта, що містить упаковку, що містить антитіло за будь-яким з пп. 1-36, і листок-вкладиш в упаковку, який містить інструкцію із застосування антитіла для лікування або сповільнення прогресування раку у суб'єкта.

82. Набір за п. 81, який відрізняється тим, що суб'єкт є людиною. с з 5. о й з Ж оо ше КЕКВ ЗЕ ТОВЕВНКУ анти яки; мітка ДЯ СНО-УТКИТ шен г ОБокшЕнНИ 00000 «ОТ Що: ж ОВО я виш ос ко БОБ шої них а ЕЕ шва пшН "іш А 5 о ще Єооож шк я що Бо ун ув БЕ о У Ж і г як ї Б і ї яв : дЕінНМИ Ван звіг; А вон он о Кн нс нив нн нано т й : нку ї Н і : орднннвинниння : сві Ж Е о фпненицимх : ї Не снення МКК ї і риф жк : яко БА Мн в «й 4 жо реехлюкх Ф 1 в Тер ів и хо Ж. ен Є : я Теи хи коуи оку ЕК -ї т: рЕЯМК ом БЕ пт В то фе Кекхе г БЕ ТП і ром каш ї Я ар 7 7 ха : й КУ 1 В ЖЖ : : у Н їх ; : х ЖИ, ї КЯкя г - ІЗ БУ ї Я Е о, - ї МВ 1 : Ск х: : ї оч : кишОи Я М Пух КЕ : як ; й; ї зн КУ : хе ї зи що й Бу От Її НЯ ші бе Е о : ОО ! жу Я Кук -Е ї і у і у нау 1 Я ОА і Е : ї КЕ Н ї ВОК КЗ май ї не Н У : і Коло ва ї х й Ко Й і ОЙ ДТ Я ІЗ що ях 1 и о о НОЙ т БИ Е Саки -Х не ни ки 7 як Ап : ї ж : й З ЗМІЯ ща : ДИ -ї М и ТК СВО УУ ДК Хол ктААК АЖ КД о АЦАККАКА ДА АХ ЖАААЮ Їжа хо Нд ій і т шо я з ш че яко їх Н їх о - І доба т-х бук Ам Бім ХХ М яв ОлЛЕ й В х У ке нн нене нн нн в ння Кот уХуеер : їх Тіджетиан пидю Її шоб ТОЖ СЕМ Її Ме во б ПКдЄт Ве й НИ Б такі п МК ВУ Ор кТх мук БЖ КО РАК жо зей гади Крим кВт : мой Кожен ДІ сл «ЕМ шо айк Я. дк іх леттиоехх сю ЕАкуХ ЗЕ ОВ ЛЕО Бижижтюм вових КІМ Ов Є ІТУЛОВАЛЯМЬИОХ Я КІ Ж ї БОГ не ЖУКИ КО Кофти мі КЕ оо жуєтя уч кекс юокннвовН ЗІИНННКЯ пл ї т Ка М и ї - Є : г ол е ще ї г В

- о. ; З: на що СИН ее т І с й. шу ЗМК у Е Ой ит -ай УНН нн нен Дом У ей. я пох и ІЗ ну я СТЕ СХ по мисом М х ї ри Е КК БК пр Кит Я х КУ Код й х ПИ КАТЕ їх ї Кам г пох я В ху Н и ан з ре Кен х ї : НЯ еокя х - поле ті ї ї З мок вих с й Я -Е Су Аа Я : ї : рожтшь КА ї Я щої Сач : Зк Ще «винний ОК як кл. м соня ої ск КОМ Е бу ее го ; о ох х ї шк у : го ЖК Мекхижит кю У Кі ик ЩЕ Т.к туукі ж стек юві кі ку Кі нки. ши СОМИ МИ ФІХМ лоб з КЕ хх т же самими лим СІМ ЖІ БУ Зк щі

КЕ. Ж за дви ї ко Ж БАХ БІЖИ за є. Є;

Чі. АВ шу Кх с р са нн мо нн ванну ШО ре дою ук У У жк ужити хо ти ї КОопулоз : : РО інфу У во За локкК Н жо лм Бк ЖЕ Же о пНяюк ї о Бела с. : КОХ ро КЕ Й 7 и В ї г п ве ; мок в МИ : : ЕН хі о й ях тА я ї ПК х Н : ший ВЕ : ек : : ин ЯН ук : ех ІН Н . Нд де 1 З ї Я ий 1 шк х го МИ АТАК дит і Ех хх кВ БУ й до ТОЖ шик жо т ї ОА Ко я х шк нара Зі 4 - : ЖЖ ох 1 Бе ; пря и В і Н РОЗД і Н ше ке аг а : пі ше і Пк ШК й ї алея і оо Я : Е фену и : БИ Ин : В Ж 0 я о 204 Дю для ор ше й о ї МВ ї хх і во ! : В ! ! ї : і ЩЕ І : Олю ую ШК ЖЖ Сузукі КО КК юки що ра М У М У Б -М Б т МЕ У ді ів Б АВБЗВМВ дві біг 2

В 5. в бики дя тя дух С Ж ж и о о КН куту пф ї Ос хе пами а : з Я а ов і м ЗШ нене но НН НН З я Отже ТАКУ ВЕ, вх ще З я до Ва Хм ху ех пк і Я ою Ки У ще ! у: : ар хх под х фосяс воду паца Ух 8 і на, ох т Ба я і

: 2. й що . ДЕ джек і Добір фут А АК нА УНН ше хе НУ ту ! и нн: х х Н ів ВКА КМ вва, комерція ПМ І тт т КТК ТТ ТТ ТТ Т ТТ ТТ ть ть ТТ ть ть тьтьть ТТ ть пат таль чт па тт ТК пт пкт чк в ча тюль тить орел тю ту тю ть ть ть тьКт у ЕТ ВК АЛЕ ти ЕК ам пкт ТТ ТАТА ТЬ ТТ ТТ ТьТЬТь ТТ ТТ ТТ тьть ть тт тт ть ткть кети, й, шодо З я оку - І Е Ж п г їх Й 1 с Х.х Ж | і хв Фоеноя я ла Но ще х й поети я, вжж 1 шив нн ких хви і НН Е див сна вся ож С з то ше нн я і Н 15 ї я я Ж Ж х у і ше ши ! ї 35 х фр США Н х рх і 1 прах ки в х КЕ п пат нок юри : 155 ї де КЕКВ КОН В х З БО сен хожкт ке КОНЕМ. ок ' о - ск ДАМ У оо щре дув Вед Я я МОЖ ї ЯК зва уко Вме их і ї Не КК ав ня Н шо СИХ ВИМИ ек і дм ОО ЖАЄ КВ ях їх ї п жо: ДК УКВ, НЯ і Мед г я Е х 7 я : хм до Е Я пошко

3 и. ї Ше Же то Саме а Ї щх лм ху ж пк Се ххх пк ж х. Е З. хх їх х. ке КУ Я я хх ен ие ех в: На ї Ен ни НН 7 й і ї і: Е ї Ех щи павук ик зе Уже паю Я (й ІЧ вв маки. ке світоч М і Аегерефіюков коморі МОЗ дон твор фенв вовна М щі АХ

Ко Бимежчий ЧА 00000 блокуючи ТВА Блокуютвв РІФА і І дату що ро , ТЕМ | ПВ вки ВН» 000 Пе язання юю» ПР зпун» ант і й що І ча ск рекет ; ТТ АЧІРІВа 000 таптАУК Ва Кен І - свож Н т ; ж Е БО; вм | ВО. ям ОБО, нм з о М вн зн оо ня кооов о фін з о сов ! ТОАТКав | КЕН | і ща і і ..МАт7 юна еВ і В Ла : се В ЕН А НА м ВЕ, ддкуднююкчнннянннкі з Е п: коня ї я вен ЛОЗА Е гав І ОЗ і 18 135 ; Кк жк нт же тт ккккккжжкктккюккжкнж теж рення ин нн и каверн НИЙ нини нив вав: Оз етЕ посі. ще ІЙ ж хід ; нн нн м и ПН зни 1хеСВЕї гав хснтрольн 0133 | 158 13 фіг, 30 А | НЕ пИУВОКе А секкц вен некований ЗТ 7 хо. х Й ОЗ ОХ Хе г 6 55, снсвчниу я що анти: тнагк ви сю тнут 0 ИНеТКНКВНКИ В С ММ дтп ди таку т де чут пер у «Ме руту мт жу У пер пер ЖЖ тлу Н | ї КО ов ну м ші скло 4 НН о НН НИ ОБОВ. 5 : шт !

У. ою я про я: Н щ ее 1 ; Не ї ще ше ! ние о ши не НЕ ж ЗШ и: ша шин ПО ся жк пекли Ва КІМ у ММ КОЖ Я 4 ОТ ХХІХ М ша Мох щОк | УК ие ен а КК ЗНО аа Ї еч Я ос не чШ ПЕВ | пе ке ї КІ ІМ ху ї Медик: км а НКИ СУ ВОНОВЕ аеНВ с СО жему Мо сю жо Ям Сюклях вд дам ше КО МОЖ АЕСНМУ. о німі фіг АС

А. ВУСТ А я Кот У оман кон вас кос ом во о вівове оис вас що: з 4 од Тек МНН У ї ХП. пп НИ ШИН ж нн : і шН Сак : Би і їх Я Х ! дво я інд Й в : ба, в Е в : Г ще Еш а ше ов Іще Її - Н хлор і - т з ь : і «вх : К од ЯН й : Ж х : Я щ а ! ща ря пох, проси Н ї я е ї ве НИ ОСИ і ї Ку Е і Пе Ен ке ШЕ : ож см дові п пи ші х ХЕ реяя к Пд хх х щі ще віщо може

Фіг. Я0-3Е сан ВО ВЗ ВІДАННІ Щеня МТК НЕ сеіжанє НЯТТЯ АЗ ВВЕ: ження КТ а АВ ОМВБАНЕ схея нак ЇДЕ МОТО товооое Ав наО дк к зятя АДЕНЙ З зва ббовось а в. бло Шен 8 : ж Я ше ПЕ Що У ес Шк З я Її Ж ! я ни меди СИ о ЕКЗ Зо Бе Он ВЕ ще я У : ЕЕ НН з б й 7 Е т ее в ов о й ГЕС КЗ руту уж у ую у дру о т 6 2 я чЧасеаені фіг, ЗА дір | Ас : С | Се ! КО аа КЗ Варна | ай ше що щ наша і з ЯдДобат меж ОЗ Є малюбутх о Її чек і ! Н ї Н ние й і : Де Кент тн Кн нн нн кн тн нн : день ШО есяю с ко ВИ Є ЖЕ В ВЕ: Я 1555 : : ТАБ МІ? ! тах чав о чАЛЕ85 58 ! «Овнів БІВ 00 аа жо ик ЗЕ ви сих ВИ оіе винен ченні міння ие декана. Н ех х ч Н тугих д ЗК Н ке с о Е ! : Н ОоМмтТаА Ва сНЕ о ЗЖ00 Ж 0 Зо. аж і ее кіно нин ВВ ння песика вв, : | . | ! : й - я ох З ; ї : ; Н ск а. 1 ОМ ТАС. За я Аж. ев ж їва ! о ОМА СВЕВСНЕ Нео 00 воза Б : ПОН я З ПИКА ВАК, ФВ ; | й зе ПО ОА КАОУ і ж зи ПОП ЯЛОУ і ї й тд, ; КЗ ї а : 500000 ! ВЕ Ії КО поко : Я, я сосен у ! х 1 ще Й Ше З. Шин : КЕ Е Р й Ши і о ; : ! ; ! Е ! і : ; ПИ п, й Кз Я й й Кве С

Фіг. 5

АС Ї дабабзнате |. СВОЕЛНК фо , звчевня С) . зава- ПОП вІоА кава БАТісо, За зав ТТ АТО 1обб6ісо, 99 ріг. 50:

ОВ

З о. т -х У Х ЗЕ М ПИТ ХХ КО ках о. . зе - КО с . . ща т х ше що о ВЕ ще ох М ОВК ХК Ех ЗК У Ох Ко У Ї ОК сх й о МОХ С ЗК ХХ Я ЕК Вс с. . о. щ в Б о З ще : о У її їх и що о. 0 м ХО х оо х Х ОО Хо ще У Х Ко ве шої її 0 с 0 Же з ЗХ ке НЯ КВ С с КОЖ же В г. С о іх о ЗКУ 15 5 а З й З ик хх це ХО ОО ОХ За ТЕ в 35 х х Й ЩО Вони ще у ; Я З Х що дятх о сх п ж с ЗХ З с КЗ ж не ке ве ЕЕ с. г п що ще о -. 0 с ве я . о р С ї ї о. 5 . о Аа о Ах НИХ о о. с КО ще ря же СХ Хе шо о г ЩЕ же

ЕЕ. о й о ЗБ пох зх УМ щх ее М о М С С лу о с со с о тн що Кока: . . о. и а. хо ВХ М СО ЗУ ХК о. с о. ХК ЗО ово Я ХО С с ай о о Сх ХО ХХ ЗО З С с УЗ Фіг А . ЗО

Я и лоз --Х х 5 ;

ї5 . о щі ве Б ЗК .шб о - с шо о о о Ох о а їх ХУ ОЙ і ПТН й. Я ШЕ Я ж'йДФ о о ни ! о ОХ, ОО А ее СЕ о . /і г о Б те а с 5 Нау с 5 ву КО Во х п Е. . а, НО о т : і ; ; | і п Ту Ж ННЯ ВООНЯ НН У ЗК ЕК КО Я ОКХ За Б о. ям / . і с. СОЯ Ж о їй й с ж а о КО. 7 Х Зк жо ще З а | ї х У Як о Мо кожній Я а п п ве і Я о її св - Ву о ї Й я | «КЕ о. ЕЕ і М ше Дек К.. Ак Б ще «ЯКЕ ши баб чий -е о. ОС В К й й отв юн. о ба ЦВР 0 я й х дю Б Оу КЕ, о . т І Же НВ її Фі БСово зо02

ПЕ Вк, се - ЗА ще й 5» Я | а шле ШО асни ке : З КЗ З шо М 0: Де СЕ 8. - Ден о о о й ча в а Б Б шо я . жі ХК фу В я - ТЗ в М ко ох ШЕ ше а в В - о п пп шк ш :

ххх. М а В КК З що і. ЕХ пи З з о ; шу ЗО, ПЕСНЯ в В КУ З І Ко Е я КО я МКК Я КВ я зееоу ба ПО ко Ох ші а аа з кі 5 ш: ВО ; шо а нн ж М а а 0 З шо В 5 ВІ ЕЙ ЕЕ ща п то 0 а її г в ше й НО ПВ ее й й шо шановна сан і; Я шо Б и ВЕ щКтх 1. ПН ей я 6 ЦД (Д(ДЙйЙ о ЕК с ПЕН с ОО ОО НН УК ПО

Ф.Е ЗОЗ х х Лк ншеть яв кування КОМ чно Е чем Акти ует ух. Ї Атіка У КУ є ДК ОоеАи АхЕжхІХ Її МОН ЛАКИ, ; за тт лива а й ТЕН ЧНУ МАТ під щцЕ ЗД о В В В В Ок ОМХ Б да Уж и ї сБАКОя ОМ А Я ТМІд ДІДИ. ТОК ХХ ОА ОНИ З. ї Нео пе І Ж АТКЕ нн нн он нн нн нн а ння В зн нн он нн нн но нн ПА ХЕ БЖ БЕ ДИ АК о З ВИМ ЕЕ ОК МИ ЗО З ЕК ЗМ ВО Я МА узд п ІП Її КУЛЮ КЕ ик ПЛОЖЕ ж Во п па р о В Кв вв о в п В п іму. БАБИ па ЖІ ї пл | ак У пал З Ми БІ В НИ НН ВК НИ а МАЯ РОЗ ра М ДеЛДЕЕКЯ М Мік ї МГУ х ож ОБ. нен па а а п а в С А СН ОКО В М А о . МКК ЗЖКІ УЖ НЯ БЕЖ Ж ОщОУЮ М їжу молуЗ хм а: ВУ Я МЖК: ХЕ КТК ї ши Е ел У МК і. ОМИВАЄ Ма ЛЕК У БЕ НАСЕ ЗЕ Й Я не ї «АКТ Мем бле ЕНН нин Мен А ви нн сн ни вн пен ни УА ЗМК МІК Ж В Е МЕ З Б ХА 300 СМ я пана по и НИ п ВД ПО НН ПИ НН По Мп АННИ МИ Ко Таж КИ и ки І Ше: їі пал п В п Ки В но В п В а В ях Зкнекених пф кою ве я ув проек ДНЯ хо ЗІ КУТЯ. ККУ МЕД КОКО СК м КЕН Пр ху Є І й я во свовса Со УК УЖ СУХИМ ГО н: ЗУ У ОКХ КОМАХ СЮ М КАКНЕХ ММ ТЕКИ У нн он нн ви я нн а нн нн в вн Й Я Й БУКА й З З У КУ 4 А МЕ Шо МЕ З ІЗ Ж Ї: ЕЯ ІЮЮООЮЦООІООООООВООВООВООО ОО їх З Ух ТУХ в ; ЯЗ ОМ ККУ ЕФ пи ки Я ех ке дення З зн ши ши М ЗИ СН Ох и ЖЕ МО х і. М ос ой и С ПОН НН Є ЕЕ З ОХ МОХ СК МК и НН їх Я пк ї БУЯ нн оон кон ВХ о А КЛ нн В А мно не А ОО ОМ МИ ГІ пе ТА оон о овенововеях ож ЖЕ М я НН Див о НН КК ні НН КК Кн пе І. ОО ОБО ЗУ МК я нан хх ОО а и . ВО мя ОККО В У КК ВВ В: нн они нн нн ОК оо овен в У в ооо Ки нн ЗО СО СК СК о С КО ВК КО ВА КН: І ОМ МЕ у Тк ї ПИЛУ КХ ПК КК: ВВ ВО їх ВА ТА ПИ По ОКО ПВА. НЕ хоч ПОВЕ с МІ Ж ЗО ОО ЛКК ОК У ОХ З у ПМК я ен Но ЕІ В ВХ ВО ВН В ОВ ПЕТ ще фони свя дме о Сх вка х : Цех Ід ря ї Я НН ме З МЕ З Ко Е Тірозначениня: ООБВОвеУ ЗНИЖЕННЯ лити ПИ ек езих ВТед ху ЖЕК: ТО Ма ЗИНеКеНяХ тати ! відн ТНИТ е 10А2ИТНИ Го вмію Б Б Ку а що ст ї де з се че ШЕ ЗШ ШЕ Я Еш и Ше ще «І щш щі в. Еш ОО 0 ЩО У Ма ОО ЗШ ШЕ ЕН; | в 5 а ше шк От - в о о В У 5 Же В ж. шк ОХ их шив з ке жи ще ЕН ве НК, ж Й й Е «лоти ш ФАЗ. Зх пУхИТИ, шия й ше Я 5 Е СКАКХ я ща ШУ Па Е о НИ ХК ю а х. Ся мом ВО КИ КІ ХК ко ОС ї с ВО КО оо ОК ЩО Б о» Моя ї. га варям Б и ННЯ У ск ММ ЖК, пк ЩЕ ши З г Б не Це ши ек. о а шо в. ОСЛюЕТ ЖК пої СМУКЕЯ т ж а КЗ Б ЕХ ї ко й ЗК шо Ж а нЕщ: МН ре - ну мен ОВ МІ рух МКМ АК Ве МОЄ БА ДОХККЕ ся пе с. КЗ о Кожх ТЕХ СТЕ Зо5 є Н о «т дл хх еф о дер їх ду Ве ча я ЗАЗУТКНТ вЕвоиНе пІЕРУТНИХ Я ще я Спліт, , меня Ким, ше х ї сх «ЕВ ІЗ Е УК. : х ХЕ т З и ще я ше с ши ше - І ьо У жк па й т б а ва же я ме ще ВЕН і щи шо зи ; і Я 2 ЕМ ла Про В ОС 003 МОУ БОНН Же ОО З У МОХ. У ря ЩХ МЕ КЕКВ ОО ЛИЖ КУ ул я ПЕ Е ЖУК КЕ ПОМ щи БО є ко МІВ СБ -х ів в жа . БИ ОК й В ОК Се Бе шк а ШЕ ее ШЕ: й : ще в. я і ШЕ вт В Бі ЕЕ КН М о Б У В ЕТ, ШО: ШЕ. урн ; 3

Фіг. тЗ-ТІ

ЕавлЛАВБТІВЇТ А сх 0000 ВО зве м Б М м о ТАБ у ЗО МОЖ ЗО ОО ОО ОО о, Ця «нов

ОА 1 24573 Сг Кс де с хх Ве і щ а с с с і. о ри о о. З с 1пд? о (її. о . р і ш Зх сін Б о. ши ЗХ хх зх і ЖЕ 15 й. 703 Фіг Я 3о8

А Есв ТАТІ ща ЗАКО КААКААКАМнКкААн СО ку Я БОС ї : ЩІХ Ку НЕВЗЇ МИТИ по Ж зв й - ВМО В ОК, о ох с В ЕІ; пи о КК В пе о а що с щОй Ей ке ка ру Й що БЕК З ДЯ ся сих Ся «КЕ. Я ОВ ВЕ

Б. Ох я п Б ММК КК рн Ж ня КК КК КЕ ОМ о о Й шо, о ОО 0. й: в Ж в ее ВВЕ що и ще а 1 УЧ ск ЖЕ ПІВ і МКУ Пт, КУ ВО

Фіг. 40АяОВ у апа Ер с І В ШОВ НЯ ОЗ ке Ме ОК Я о о,

Б. сх дО з

ССС.

с о. 168? и» А ще шо шу як їде 25 - щх СК КОМ а Я ОК МАК ПО о З -- КОХ ї о. Зх У З ї -- 0000 ОО Ко ОО В МОЯ ОО НН а КВ КВ пн Я я хх о З га З п. о ов Ук БО ОО -к ПРИ ох їх 5 КАХ МОЯ хи Ко ос КЗ Як що З: Є «до ММ де В КІ В шо ОХ Х ях ока Б Ж ШИХ ВК Ж ла в М еВ З чи Мих Б А Я їй Фіг Її Твзнив в КМ РІГ єкопросія ТУТ експресія. СЛИВ єтяцнв В, К в ; зо; зв шо і їв Б ди Я їв їх 2 Ї Ж. е - о рю : ї сеефтя хх х ЗЕ. Я БЯ Ж як 8 вк ше: НН «и В З Я Китаї З са з як я п ще Х 5 НК т КЕ ЖЕ Ж. паї Й в мо СЯ ке скорйе захо; ММ КЗ шен х я й ж |в ЗУ: ИЕ; що Я | 2 зву пах зві як жі Жора Ж я шк Е ШУ Ям ще поро вва ван он рнунннннчнинн ВЖК нує фуру ФК ОСОБ рН спе с са ЗЕ в з, тк Н З - з вх зві В У ВИ Ше Зжчни кр про у о: ЩЕ М Зоря Ко «КЕ а 2 0-х мперидюрка ре н " ще КІ що еакуе й й зе рн ши. х ру Аве Н рок ж зів мен жи жа речо З ще зейсв. щ в мнения Мун тря ДМосечтлєтоттютутня що син «пе св ве со Зне2

Од інн Са клірнни БЕ т еиповашщ У ВЕК Кз ів ! ве ча Е я й зо й З доми Е ї х п Кк 2-4 М пкт щі он ово «Джин їоОБЯВ З кож КУ Ме ММО0 0 нн 1 рн нннння Я хе Б я СО ШК А, Хв Н Ж ям ще І ЗККИЙ їх ЛЮК : г --тек і у З наши у КОР ОЕе В З Й я ШІ ке. пи х ШКО САМ ї Не уз ї іх ща Б с ШО ши ше; по І шенню ОВ щ о ван і ж вк їі Зм що. ие АЖ чі кала у КК ХЕККООм лу кккалукчАААНКЯХ лу нене еирими прилив Я ще нн екс 3 Код сп ООСОВ. ФК гогоомоланкккчнамутчтнтннтевоооввевопегесевесевсееевеетететодеовогсох ФЛ