[go: up one dir, main page]

RU2522002C2 - Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом - Google Patents

Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом Download PDF

Info

Publication number
RU2522002C2
RU2522002C2 RU2012102602/10A RU2012102602A RU2522002C2 RU 2522002 C2 RU2522002 C2 RU 2522002C2 RU 2012102602/10 A RU2012102602/10 A RU 2012102602/10A RU 2012102602 A RU2012102602 A RU 2012102602A RU 2522002 C2 RU2522002 C2 RU 2522002C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
protein
binding
human
bispecific
region
Prior art date
Application number
RU2012102602/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2012102602A (ru
Inventor
Самьюэл ДЭВИС
Эрик СМИТ
Дуглас МАКДОНАЛД
Кара Луиз ОЛСОН
Original Assignee
Ридженерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=42738900&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2522002(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Ридженерон Фармасьютикалз, Инк.
Publication of RU2012102602A publication Critical patent/RU2012102602A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2522002C2 publication Critical patent/RU2522002C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C07K1/08—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using activating agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C07K1/08—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using activating agents
    • C07K1/088—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using activating agents containing other elements, e.g. B, Si, As
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/247—IL-4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/248—IL-6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/461—Igs containing Ig-regions, -domains or -residues form different species
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биохимии. Описан биспецифический антигенсвязывающий белок, который является гетеродимерным в отношении связывания белка А. При этом белок содержит первый полипептид, содержащий от N-конца до C-конца первую область связывания эпитопа, которая селективно связывает первый эпитоп, константную область иммуноглобулина, которая содержит первую область CH3 IgG человека, выбранную из IgG1, IgG2 и IgG4, где первая область СН3 связывается с белком А, и второй полипептид, содержащий от N-конца до C-конца вторую область связывания эпитопа, которая селективно связывает второй эпитоп, константную область иммуноглобулина, которая содержит вторую область CH3 IgG человека, выбранного из IgG1, IgG2 и IgG4, где вторая область CH3 содержит модификацию, которая снижает или предотвращает связывание второго домена CH3 с белком A. Изобретение позволяет быстро выделять белок А. 8 з.п. ф-лы, 10 ил., 3 табл., 12 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Изобретение относится к антигенсвязывающим белкам или антителам с гетеродимерами тяжелых цепей, т.е. антителам с двумя тяжелыми цепями иммуноглобулинов, которые отличаются по меньшей мере одной аминокислотой, что позволяет проводить выделение антигенсвязывающего белка на основе различной аффинности к аффинному реагенту тяжелой цепи иммуноглобулина и модифицированной или мутированной тяжелой цепи иммуноглобулина. Изобретение также относится к антигенсвязывающим белкам (в том числе к биспецифическим антителам), которые имеют участки CH2 и CH3 IgG с различными аффинностями к белку A, что обеспечивает их быстрое выделение за счет различного связывания участков IgG с белком A.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Антитела представляют собой многофункциональные молекулы, обладающие уникальной специфичностью связывания мишеневого антигена, а также способностью к взаимодействию с иммунной системой посредством механизмов, которые являются антиген-независимыми. Многие биологические лекарственные средства, используемые в настоящее время для лечения рака, представляют собой моноклональные антитела, направленные против антигенов, которые, как правило, сверхэкспрессированы на мишеневой злокачественной клетке. Если такие антитела связывают опухолевые клетки, то они могут запускать механизм антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) или комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC). К сожалению, злокачественные клетки часто обладают механизмами, которые подавляют эти нормальные иммунные ответы.
В последние годы значительные усилия были направлены на создание терапевтических средств, аналогичных антителам, которые обладают более чем одной антигенсвязывающей специфичностью, например биспецифических антител. В случае способов лечения злокачественной опухоли полиспецифический характер может обеспечить возможность применения, например, одной связывающей специфичности для нацеливания молекулы к антигену опухолевой клетки, а другой связывающей специфичности для индукции ответа, который в норме отсутствует в иммунной системе. Биспецифические антитела также могут быть использованы в качестве лигандов-заменителей для двухкомпонентных гетеродимерных рецепторных систем, которые в норме активируются их природным лигандом, который связывает и объединяет оба компонента.
В данной области разработаны различные форматы для направления терапевтического потенциала, обусловленного молекулами с многочисленными связывающими специфичностями. Желательно, такие молекулы должны представлять собой удобные в работе белки, которые легко получать и очищать и которые обладают подходящими свойствами in vivo, например фармакокинетикой, подходящей для намеченной мишени, минимальной иммуногенностью и, если необходимо, эффекторными функциями обычных антител.
Самый прямой способ получения биспецифического антитела (экспрессия двух различных антител в одной клетке) приводит к получению нескольких видов, поскольку соответствующие тяжелые цепи образуют и гомо- и гетеродимеры, а нужны только гетеродимеры. Также легкие и тяжелые цепи могут образовать пару несоответствующим образом. Ниже описаны некоторые примеры форматов, которые пытаются разрешить эти проблемы различными способами.
Один из форматов, используемый для биспецифичных молекул-активаторов T-клеток (BiTE) (см., например, Wolf, E. et al. (2005) Drug Discovery Today 10:1237-1244), основан на элементах одноцепочечного вариабельного фрагмента (scFv). scFv состоит из вариабельных областей легкой и тяжелой цепи антител, соединенных посредством гибкого линкера, который, как правило, может сворачиваться соответствующим образом, и благодаря этому области могут связывать “свой” антиген. BiTE последовательно соединяет две различные специфичности scFv на одной цепи (см. фиг.1A). Подобная конфигурация предотвращает получение молекул с двумя копиями вариабельной области одной и той же тяжелой цепи. Кроме того, конструируют конфигурацию линкера для обеспечения правильного объединения соответствующих легких и тяжелых цепей.
Формат BiTE имеет некоторые недостатки. Во-первых, общеизвестно, что молекулы scFv склонны к агрегации. И хотя иммуногенность линкеров scFv по общему мнению является низкой, нельзя исключить возможность продукции антител против BiTE. Отсутствие участка Fc в формате BiTE также делает его время полужизни в сыворотке очень коротким, и это влечет за собой сложности вследствие частых повторных введений или вследствие непрерывной инфузии посредством помпы. В конечном итоге, отсутствие Fc также подразумевает отсутствие эффекторных функций, опосредованных Fc, которые могут являться эффективными в некоторых условиях.
Второй формат (фиг.1B) представляет собой гибрид моноклонального антитела мыши и крысы и основывается на модификации общепринятой аффинной хроматографии с белком A (см., например, Lindhofer, H. et al. (1995) J. Immunol. 155:219-225). В данном формате, антитело IgG2a мыши и IgG2b крысы продуцируются вместе в одной клетке (например, либо в виде квадромы, полученной слиянием двух гибридом, либо в сконструированных клетках CHO). Так как легкие цепи каждого антитела связываются преимущественно тяжелыми цепями родственных видов, то можно получить только три отдельных вида антител: два исходных антитела и гетеродимер двух антител, содержащий одну пару тяжелой/легкой цепи каждого, связанную посредством их участков Fc. Требуемый гетеродимер можно легко очищать из смеси, так как его свойства связывания с белком A отличаются от свойств связывания исходных антител: IgG2b крысы не связывается с белком A, в то время как IgG2a мыши связывается. Таким образом, гетеродимер мышь-крыса связывается с белком A, но элюируется при более высоком значении pH, чем гомодимер IgG2a мыши, и это делает возможным селективную очистку биспецифического антитела. Как и в случае с форматом BiTE, этот гибридный формат обладает двумя моновалентными антигенсвязывающими участками.
Недостатком гибрида мышь/крыса в том, что он не является человеческим, это, вероятно, вызовет иммунный ответ у пациента, что может иметь побочные эффекты (например, реакции «HAMA» или «HARA»), и/или нейтрализовать эффект терапии.
На современном уровне техники обсуждали третий формат, обозначаемый как «выступы-во-впадины» (фиг.1C), как возможно эффективный для получения биспецифических антител (патент США № 7183076). В этой стратегии, конструируют участки Fc из двух антител для создания одного выступающего «выступа» и другой комплементарной «впадины». Утверждают, что будучи полученными в одной и той же клетке, тяжелые цепи преимущественно образуют гетеродимеры, а не гомодимеры, посредством объединения сконструированных «выступов» с конструированными «впадинами». Проблемы правильного спаривания легкой и тяжелой цепи решают посредством выбора антител, которые обладают различными специфичностями, но используют одинаковые легкие цепи.
Недостаток этого формата состоит в том, что стратегия «выступы-во-впадины» может приводить к продукции значительного количества гомодимеров, что, таким образом, влечет за собой дополнительные стадии очистки. Эта проблема осложняется тем фактом, что контаминирующие виды по многим своим свойствам очень похожи на желаемые виды. Сконструированные формы могут также являться иммуногенными, так как мутации, вводимые для создания «выступов» и «впадин», привносят чужеродные последовательности.
Сохраняется необходимость в формате биспецифического антитела, в частности для терапевтического применения, который минимизирует некоторые или все недостатки, перечисленные выше.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг.1 проиллюстрировано три формата биспецифического антитела: (A) биспецифический активатор T-клеток (BiTE); (B) гибрид мышь-крыса; и (C) “выступы-во-впадины” с общей легкой цепью.
На фиг.2 проиллюстрирована модификация Fc∆Adp: (A) выравнивание Fc-областей IgG1человека (SEQ ID NO:1) и IgG3 (SEQ ID NO:3), демонстрирующее модификацию Fc∆Adp, окаймленную рамкой; (B) схематическое изображение биспецифического антитела Fc∆Adp.
На фиг.3 проиллюстрировано выравнивание доменов CH3 IgG1 человека (с использованием нумерации экзонов IMGT и нумерацию EU), IgG2 и IgG4, с дипептидной модификацией ∆Adp и без дипептидной модификации ∆Adp, а также IgG3.
На фиг.4 показана регистрация результатов выделения биспецифического антитела на колонке с белком А, которые показывают профиль элюции с использованием ступенчатого градиента.
На фиг.5 представлен профиль связывания IL4-Ra и IL-6Ra в BIACORE™ для фракций, элюированных с колонки при хроматографическом разделении, показанном на фиг.4. Антитела во фракциях захватывали иммобилизованными антителами против Fc и затем растворимые IL-4Ra или IL-6Ra исследовали на связывание с захваченными антителами.
На фиг.6 показан фармакокинетический профиль биспецифического антитела Fc∆Adp (IL-6R∆/IL-4R), гомодимера Fc∆Adp (IL-6R∆/IL-6R∆), антитела IgG1 с последовательностью CH3 дикого типа (IL-4R/IL-4R) и контрольного моноспецифического антитела.
На фиг.7 проиллюстрирована эффективность биспецифического антитела CD20xCD3∆Adp в анализе цитолиза клеток Raji.
На фиг.8 проиллюстрирован неспецифический цитолиз клеток (293) с биспецифическим антителом CD20xCD3∆Adp.
На фиг.9 показаны результаты экспериментов по экспрессии, с использованием различных гетеродимеров mFc. Панель A: анализ Вестерн-блоттинг зависящего от pH разделения гетеродимерного mIgG2a/mIgG2aPTTTK от гомодимерного mIgG2a и гомодимерного IgG2aPTTTK; панель B: анализ Вестерн-блоттинг зависящего от pH разделения гетеродимерного mIgG2a/mIgG2aTTTK от гомодимерного mIgG2a и гомодимерного IgG2aTTTK; IP = исходная фракция; FT = фракция, пропущенная через колонку; W2 = вторая промывка (1x PBS pH 7,2); E1 = первая элюция (20 мМ Na цитрат, 1M NaCl pH 5,5); E2 = вторая элюция (20 мМ Na цитрат, 1M NaCl; 57% pH 5,5+43% pH 2,6); E3 = третья элюция (20 мМ Na цитрат, 1M NaCl pH 2,6).
На фиг.10 проиллюстрировано предпочтительное образование гетеродимеров мутантов IgG2a над образованием гетеродимеров смешанных изотипов (например, mIgG2a и mIgG1), с использованием соотношения 4:1 для конструкта IFNAR1:IFNAR2. Дорожка 1: IFNAR1-IgG2a:IFNAR2-IgG1; дорожка 2: INFAR1-IgG2a:IFNAR2-IgG2aTTT; дорожка 3: IFNAR1-IgG2a:IFNAR2-IgG2aTTTK; дорожка 4: IFNAR1-IgG2a:IFNAR2-IgG2aPTTTK; дорожка 5: IFNAR1-IgG2a:IFNAR2-IgG2aRF.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение по меньшей мере отчасти основано на использовании в биспецифическом антигенсвязывающем белке двух последовательностей константного домена CH3 тяжелой цепи иммуноглобулина, которые отличаются по меньшей мере одной аминокислотой. Отличие по меньшей мере в одной аминокислоте приводит к повышенной эффективности при выделении белка, так как отличие приводит к различной способности последовательностей домена CH3 связываться с аффинным средством.
В одном из аспектов разработан антигенсвязывающий белок, содержащий первый и второй полипептид, первый полипептид содержит, от N-конца до C-конца, первую антигенсвязывающую область, которая селективно связывает первый антиген, за которым следует константная область, которая содержит первую область CH3 IgG человека, выбранного из IgG1 (SEQ ID NO:1), IgG2 (SEQ ID NO:3), IgG4 (SEQ ID NO:5), и их комбинацию; и, второй полипептид, содержащий, от N-конца до C-конца, вторую антигенсвязывающую область, которая селективно связывает второй антиген, с последующей константной областью, которая содержит вторую область CH3 IgG человека, выбранную из IgG1, IgG2, IgG4, и их комбинацию, где вторая область CH3 содержит модификацию, которая снижает или устраняет связывание второго домена CH3 с белком A.
В одном из вариантов осуществления вторая область CH3 содержит модификацию 95R (при нумерации экзонов IMGT; 435R при нумерации EU). В другом варианте осуществления вторая область CH3 дополнительно содержит модификацию 96F (IMGT; 436F при EU). В конкретных вариантах осуществления вторая область CH3 выбрана из SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4 и SEQ ID NO:6.
В одном из вариантов осуществления вторая область CH3 происходит из модифицированного IgG1 человека (SEQ ID NO:2) и дополнительно содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из D16E, L18M, N44S, K52N, V57M и V82I (IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M и V422I при EU).
В одном из вариантов осуществления вторая область CH3 происходит из модифицированного IgG2 человека (SEQ ID NO:4) и дополнительно содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из N44S, K52N и V82I (IMGT; N384S, K392N и V422I при EU).
В одном из вариантов осуществления вторая область CH3 происходит из модифицированного IgG4 человека (SEQ ID NO:6) и дополнительно содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q и V82I (IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q и V422I при EU).
В одном из вариантов осуществления домен CH3 происходит из химерного домена, который содержит последовательности из двух или более IgG1 человека, IgG2 человека, IgG3 человека и IgG4 человека.
В одном из вариантов осуществления домен CH3 происходит из IgG1 человека, IgG2 человека или IgG4 человека, и антигенсвязывающий белок дополнительно содержит домен CH1 и CH2, где домен CH1 и домен CH2 независимо выбраны из группы, состоящей из домена CH1 или CH2 IgG1 человека, домена CH1 или CH2 IgG2 человека, химерного IgG1/IgG2 человек/человек, или химерного IgG1/IgG3 человек/человек, или химерного домена IgG2/IgG3 человек/человек, или химерного IgG1/IgG4 человек/человек, или химерного IgG3/IgG4, или химерного домена IgG2/IgG4. В конкретном варианте осуществления химерные домены IgG1/IgG2, IgG1/IgG3, IgG2/IgG3, IgG1/IgG4, IgG3/IgG4 и IgG2/IgG4 являются неиммуногенными или по существу неиммуногенными для человека.
В одном из вариантов осуществления антигенсвязывающий белок дополнительно содержит легкую цепь иммуноглобулина. В одном из вариантов осуществления легкая цепь иммуноглобулина выбрана из легкой цепи лямбда и каппа человека.
В одном из вариантов осуществления каждая первая и вторая антигенсвязывающие области содержат по меньшей мере один CDR, в другом варианте осуществления по меньшей мере два CDR, в другом варианте осуществления каждая содержит три CDR. В конкретном варианте осуществления CDR происходят из тяжелой цепи иммуноглобулина. В другом конкретном варианте осуществления тяжелая цепь представляет собой тяжелую цепь иммуноглобулина человека.
В одном из вариантов осуществления первая антигенсвязывающая область содержит первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина, а вторая антигенсвязывающая область содержит второй вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина.
В одном из вариантов осуществления первый и второй вариабельные домены тяжелой цепи иммуноглобулина независимо выбирают из домена иммуноглобулина мыши, крысы, хомяка, кролика, макака, человекообразной обезьяны и человека.
В одном из вариантов осуществления первый и второй вариабельные домены тяжелой цепи иммуноглобулина независимо содержат CDR человека, CDR мыши, CDR крысы, CDR кролика, CDR макака, CDR человекообразной обезьяны и гуманизированные CDR. В одном из вариантов осуществления CDR происходит из человека и является соматически мутированным.
В одном из вариантов осуществления первый и второй вариабельные домены тяжелой цепи иммуноглобулина содержат каркасную область человека (FR). В одном из вариантов осуществления FR человека представляет собой соматически мутированный FR человека.
В одном из вариантов осуществления первую и/или вторую антигенсвязывающие области получают скринингом фаговой библиотеки, содержащей вариабельные области антитела, по реактивности по отношению к представляющему интерес антигену. В другом варианте осуществления первую и/или вторую антигенсвязывающие области получают иммунизацией животного, не являющегося человеком, такого как мышь, крыса, кролик, макак или человекообразная обезьяна, представляющим интерес антигеном и идентификацией последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области антитела, кодирующей вариабельную область, специфичную для представляющего интерес антигена. В конкретном варианте осуществления животное, не являющееся человеком, содержит один или несколько генов вариабельной области иммуноглобулина человека. В другом конкретном варианте осуществления один или несколько генов вариабельной области иммуноглобулина человека представлены в животном, не являющемся человеком, внехромосомно, в виде перестановки в локусе эндогенного иммуноглобулина, или в виде трансгена, случайным образом интегрированного в геном животного, не являющегося человеком. В одном из вариантов осуществления первую и/или вторую антигенсвязывающие области получают из гибридомы или квадромы, в другом варианте осуществления посредством скрининга иммунных клеток иммунизированного животного, не являющегося человеком, используя сортировку клеток.
В одном из вариантов осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой биспецифическое антитело. В одном из вариантов осуществления биспецифическое антитело полностью является биспецифическим антителом человека и независимо обладает аффинностью для каждого эпитопа в микромолярном, наномолярном или пикомолярном диапазоне.
В одном из вариантов осуществления антигенсвязывающий белок является неиммуногенным или по существу неиммуногенным для человека. В конкретном варианте осуществления антигенсвязывающий белок не содержит неприродный эпитоп для T-клетки человека. В одном из вариантов осуществления модификация области CH3 является неиммуногенной или по существу неиммуногенной для человека. В конкретном варианте осуществления модификация области CH3 не приводит в результате к образованию неприродного эпитопа для T-клетки человека.
В одном из вариантов осуществления антигенсвязывающий белок содержит тяжелую цепь, где тяжелая цепь является неиммуногенной или по существу неиммуногенной для человека. В одном из вариантов осуществления тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность, которая не содержит неприродный эпитоп для T-клетки. В одном из вариантов осуществления тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, протеолиз которой не может привести к образованию аминокислотной последовательности из приблизительно 9 аминокислот, которые являются иммуногенными для человека. В конкретном варианте осуществления человек представляет собой человека, который подвергся действию антигенсвязывающего белка. В одном из вариантов осуществления тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, протеолиз которой не может привести к образованию аминокислотной последовательности, состоящей из приблизительно 13-17 аминокислот, которые являются иммуногенными для человека. В конкретном варианте осуществления человек представляет собой человека, который подвергся действию антигенсвязывающего белка.
В одном из аспектов представлен биспецифический связывающий белок, содержащий модификации в CH2 и/или CH3, как описано в настоящем документе, где биспецифический связывающий белок содержит первую связывающую молекулу, которая специфично распознает антиген на B-клетке, и вторую связывающую молекулу, которая специфично распознает антиген на T-клетке.
В одном из вариантов осуществления связывающий белок представляет собой биспецифическое антитело. В конкретном варианте осуществления биспецифическое антитело содержит тяжелую цепь IgG1 человека и тяжелую цепь IgG1∆Adp человека. В одном из вариантов осуществления первая связывающая молекула представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи человека, который специфично распознает CD20. В одном из вариантов осуществления вторая связывающая молекула представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина человека, который специфично распознает CD3. В одном из вариантов осуществления биспецифическое антитело демонстрирует, в анализе цитолиза Raji, EC50, приблизительно равное 2,8-3,2×10-12 M или приблизительно равное 2,8-3,0×10-12 M, и демонстрирует не более чем приблизительно 1-10%, или 1-5% неспецифического цитолиза в анализе неспецифического клеточного цитолиза, где “фоновая” клетка не содержит эпитоп CD20. В конкретном варианте осуществления “фоновая” клетка представляет собой клетку 293. В другом конкретном варианте осуществления неспецифический клеточный цитолиз в анализе измеряют в концентрации биспецифического антитела от приблизительно 10-8 M до приблизительно 10-14 M.
В одном из аспектов был создан способ для получения биспецифического антитела, где способ предусматривает: получение последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей первую тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую первый вариабельный домен, который распознает первый эпитоп, где первая тяжелая цепь иммуноглобулина содержит константный домен изотипов IgG1, IgG2 или IgG4 или химерный константный домен этих изотипов; получение второй последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вторую тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую второй вариабельный домен, который распознает второй эпитоп, где вторая тяжелая цепь иммуноглобулина содержит константный домен изотипов IgG1, IgG2 или IgG4 или химерный константный домен этих изотипов, который содержит модификацию в его домене CH3, которая устраняет или снижает связывание с белком A; получение третьей последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь иммуноглобулина, которая образует пару с первой и второй тяжелой цепью иммуноглобулина; введение первой, второй и третьей последовательности нуклеиновой кислоты в клетку млекопитающего; что позволяет клетке экспрессировать иммуноглобулин, и выделение иммуноглобулина с использованием белка A.
В одном из вариантов осуществления клетка выбрана из CHO, COS, 293, HeLa и клетки сетчатки, экспрессирующей вирусную последовательность нуклеиновой кислоты (например, клетка PERC.6™).
В одном из аспектов представлен биспецифический антигенсвязывающий белок, который содержит первую специфичность, которая связывает антиген и вторую специфичность, которая активирует рецептор, где биспецифический антигенсвязывающий белок содержит первый полипептид, содержащий первый домен CH3 IgG1, IgG2 или IgG4, который содержит связывающую белок A детерминанту, и второй полипептид, содержащий второй домен CH3 IgG1, IgG3 или IgG4, который лишен связывающей белок А детерминанты.
В одном из вариантов осуществления вторая специфичность, которая активирует рецептор, связывает рецептор с KD, которая представлена в молярном, миллимолярном, микромолярном, наномолярном или пикомолярном диапазоне.
В одном из вариантов осуществления вторая специфичность связывает рецептор, выбранный из рецептора, связывающего G-белок, рецептора тирозинкиназы, интегрина и Toll-подобного рецептора.
В одном из вариантов осуществления вторая специфичность связывается с рецептором и вызывает изменение рецептора или субъединицы или белка, физически связанного с ним для осуществления фосфорилирования серина, треонина или тирозина; обуславливает циклитизацию нуклеотида (например, цАМФ, цАДФ или цГМФ); обуславливает продукцию фосфатидилинозитола или его производных (например, IP3 или PIP3); обуславливает продукцию липидного вторичного мессенджера (например, диацилглицерола, церамида, лизофосфатидной кислоты, эйкозаноида); обуславливает дефосфорилирование (например, фосфатазную активность); обуславливает фосфорилирование липида для образования вторичного мессенджера; обуславливает гидролиз вторичного мессенджера; обуславливает протеолиз; обуславливает окислительно-восстановительный путь передачи сигнала; обуславливает перемещение белка в клеточные органеллы (например, в ядро); обуславливает агрегацию рецептора (самого с собой) для образования гомо- или (с другими рецепторами) гетеромультимеров; или обуславливает открытие или закрытие трансмембранного канала.
В одном из аспектов предоставлен способ получения биспецифического антитела, включающий: выделение представляющего интерес биспецифического антитела из квадромы, где представляющее интерес биспецифическое антитело содержит первую тяжелую цепь, которая представляет собой изотип IgG1, IgG2 или IgG4, вторую тяжелую цепь, которая представляет собой изотип IgG1, IgG2 или IgG4, обладающий константным доменом, который содержит модификацию в своем домене CH3, который устраняет или снижает связывание с белком A, где представляющее интерес биспецифическое антитело выделяют, используя белок A.
В одном из аспектов предоставлен способ получения биспецифического антитела, включающий стадию выделения из разрушенной клетки или смеси антител биспецифического антитела, имеющего селективно модифицированные домены CH3 IgG1, IgG2 или IgG4, где селективно модифицированный домен CH3 является неиммуногенным или по существу неиммуногенным для человека и где модификация приводит к получению биспецифического антитела с гетеродимерной тяжелой цепью, мономеры которых обладают различной аффинностью к белку A, и биспецифическое антитело выделяют из разрушенной клетки или смеси, используя белок A.
В одном из вариантов осуществления биспецифическое антитело выделяют, используя аффинную подложку с белком A, где биспецифическое антитело элюируется при pH от приблизительно 3,9 до приблизительно 4,4, от приблизительно 4,0 до приблизительно 4,3, от приблизительно 4,1 до приблизительно 4,2 или приблизительно pH 4,2. В одном из вариантов осуществления биспецифическое антитело элюируется при pH приблизительно 4, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4 или 4,5.
В одном из вариантов осуществления биспецифическое антитело выделяют, используя аффинную подложку с белком A и градиент pH или стадию, где градиент pH или стадия включает ионный модификатор. В конкретном варианте осуществления ионный модификатор представлен в молярной концентрации от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,0. В конкретном варианте осуществления ионный модификатор представляет собой соль. В одном из вариантов осуществления ионный модификатор выбран из группы, состоящей из бериллия, лития, натрия и калиевых солей ацетата; натрия и калия бикарбонатов; лития, натрия, калия и цезия карбонатов; лития, натрия, калия, цезия и хлорида магния; натрия и калия фторидов; натрия, калия и кальция нитратов; натрия и калия фосфатов; и кальция и сульфата магния. В конкретном варианте осуществления ионный модификатор представляет собой галоидную соль щелочного металла или щелочноземельного металла. В конкретном варианте осуществления ионный модификатор представляет собой хлорид натрия.
В одном из аспектов,
связывающий белок, содержащий Fc, где Fc содержит первый домен CH3, который модифицирован, как описано в настоящем документе, и второй CH3, который не модифицируют, с тем чтобы создать гетеродимерный Fc, где избирательная модификация приводит к тому, что связывающий белок элюируется из аффинного материала с белком A при единицах рН, равных 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,2, 1,3 или 1,4, более высоких, чем единицы рН для соответствующего связывающего белка, который не имел избирательной модификации.
В одном из вариантов осуществления селективно модифицированный связывающий белок элюируется при pH приблизительно 4,2, тогда как немодифицированный связывающий белок элюируется при pH приблизительно 3. В одном из вариантов осуществления селективно модифицированный связывающий белок элюируется при значении pH, приблизительно равном 4,5, тогда как немодифицированный связывающий белок элюируется при значении pH, приблизительно равном 3,5. В одном из вариантов осуществления селективно модифицированный связывающий белок элюируется при значении pH, приблизительно равном 4, тогда как немодифицированный связывающий белок элюируется при значении pH, приблизительно равном 2,8-3,5, 2,8-3,2 или 2,8-3. В одном из вариантов осуществления селективно модифицированный связывающий белок элюируется при значении pH, приблизительно равном 4,2, тогда как немодифицированный связывающий белок элюируется при значении pH, приблизительно равном 2,8. В одном из вариантов осуществления селективно модифицированный связывающий белок элюируется при значении pH, приблизительно равном 4,4, тогда как немодифицированный связывающий белок элюируется при значении pH, приблизительно равном 3,6. В этих вариантах осуществления «немодифицированный» относится к отсутствию модификации в 435 (нумерация EU), или отсутствию модификации в 435 и 436 (нумерация EU), в обоих доменах CH3.
Любые варианты осуществления и аспекты, описываемые в настоящем документе можно использовать в комбинации друг с другом, если не указано иначе или не очевидно из контекста. Другие варианты осуществления будут очевидны специалистам в данной области из обзора последующего описания.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Изобретение не ограничено конкретными способами и описанными экспериментальными условиями, по существу способы и условия могут изменяться. Также следует понимать, что используемая в настоящем документе терминология представлена только для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения, так как объем настоящего изобретения определен пунктами формулы изобретения.
Если не определено иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в данной области, к которому относится настоящее изобретение. Несмотря на то что в практическом осуществлении или анализе по настоящему изобретению можно использовать любые способы и материалы, похожие или эквивалентные способам и материалам, описываемым в настоящем документе, конкретные способы и материалы описаны в документе. Все указанные публикации включены, таким образом, в качестве ссылки.
Как используется в настоящем документе термин «антитело» включает молекулы иммуноглобулинов, состоящие из четырех полипептидных цепей, двух тяжелых цепей (H) и двух легких цепей (L), связанных дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (сокращено в настоящем документе как HCVR или VH) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи содержит три домена, CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (сокращено в настоящем документе как LCVR или VL) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи содержит один домен CL. Области VH и VL можно дополнительно подразделять на области гипервариабельности, обозначаемые определяющими комплементарность областями (CDR), перемежающиеся с областями, которые являются более консервативными, обозначаемые каркасными областями (FR). Каждый VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминоконца до карбоксиконца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4 (CDR тяжелой цепи могут быть сокращены как HCDR1, HCDR2 и HCDR3; CDR легкой цепи могут быть сокращены как LCDR1, LCDR2 и LCDR3. Термин «высокая аффинность» антитела относится к таким антителам, которые обладают аффинностью связывания со своей мишенью, по меньшей мере равной 10-9 M, по меньшей мере 10-10 M; по меньшей мере 10-11 M; или по меньшей мере 10-12 M, как измерено поверхностным плазмонным резонансом, например, BIACORE™ или аффинной ELISA в растворе.
Выражение «антигенсвязывающий белок» включает белок, имеющий по меньшей мере один CDR и способный к избирательному распознаванию антигена, т.е. белок, который является способным к связыванию антигена с KD, которая представлена по меньшей мере в микромолярном диапазоне. Для терапевтических антигенсвязывающих белков (например, терапевтических антител) обычно требуется KD, которая представлена в наномолярном или пикомолярном диапазоне. Выражение «антигенсвязывающий белок» также включает белок, содержащий первый и второй домен CH3, как описано в настоящем документе, и первый белок или распознающий лиганд домен и второй белок или распознающий лиганд домен, где первый белок или распознающий лиганд домен и второй белок или распознающий лиганд домен, каждый независимо распознает один и тот же белок или лиганд, или вместе распознают один и тот же белок или лиганд, или каждый независимо, распознает различные белок или лиганд. Одним из примеров такого белка является иммуноадгезин, содержащий слитый белок - (гетеро- или гомо-) димер, где полипептиды димера представляют собой слитые полипептиды, которые содержат рецепторный компонент или лигандный компонент, где лигандный компонент включает аминокислотную последовательность, связывающую рецептор.
Выражение «биспецифическое антитело» включает антитело, способное селективно связывать два или более эпитопа. Биспецифические антитела, как правило, включают две различные тяжелые цепи, где каждая тяжелая цепь специфически связывает разные эпитопы или на различных молекулах (например, антигенах), или на одной и той же молекуле (например, на одном и том же антигене). Если биспецифическое антитело способно селективно связывать два различных эпитопа (первый эпитоп и второй эпитоп), аффинность первой тяжелой цепи для первого эпитопа, как правило будет по меньшей мере от одного до двух, или трех, или четырех порядков ниже, чем аффинность первой тяжелой цепи для второго эпитопа, и наоборот. Эпитопы, распознаваемые биспецифическим антителом, могут представлять собой одну и ту же или различную мишень (например, на одном и том же или различном белке). Биспецифические антитела можно получать, например, комбинированием тяжелых цепей, которые распознают различные эпитопы на одном и том же антигене. Например, последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие вариабельные последовательности тяжелой цепи, которые распознают различные эпитопы одного и того же антигена, могут быть слиты с последовательностями нуклеиновой кислоты, кодирующими различные константные области тяжелой цепи, и такие последовательности можно экспрессировать в клетке, которая экспрессирует легкую цепь иммуноглобулина. Типичное биспецифическое антитело имеет две тяжелые цепи, где каждая имеет три CDR тяжелой цепи, с последующим (от N-конца до C-конца) доменом CH1, шарнирной областью, доменом CH2 и доменом CH3, и легкой цепью иммуноглобулина, которая или не наделена антигенсвязывающей специфичностью, но может объединяться с каждой из тяжелой цепей, или может объединяться с каждой из тяжелых цепей и может связывать один или несколько эпитопов, ограниченных антигенсвязывающими областями тяжелой цепи, или может объединяться с каждой из тяжелых цепей и способствует связыванию или одной или обеих тяжелых цепей с одним или обоими эпитопами.
Термин «клетка» включает любую клетку, которая является подходящей для экспрессии рекомбинантной последовательности нуклеиновой кислоты. Клетки включают клетки прокариот и эукариот (одноклеточные или многоклеточные), бактериальные клетки (например, штаммы E. coli, Bacillus spp., Streptomyces spp., и т.д.), клетки микобактерий, клетки грибов, дрожжевые клетки (например, S. cerevisiae, S. pombe, P. pastoris, P. methanolica и т.д.), растительные клетки, клетки насекомых (например, SF-9, SF-21, клетки насекомых, инфицированные бакуловирусом, Trichoplusia ni, и т.д.), не относящиеся к человеку животные клетки, клетки человека, или слияния клеток, такие как, например, гибридомы или квадромы. В некоторых вариантах осуществления клетка представляет собой клетку человека, макака, человекообразной обезьяны, хомяка, крысы или мыши. В некоторых вариантах осуществления клетка является эукариотической и выбрана из следующих клеток: CHO (например, CHO K1, DXB-11 CHO, Veggie-CHO), COS (например, COS-7), клетки сетчатой оболочки глаза, Vero, CV1, почек (например, HEK293, 293 EBNA, MSR 293, MDCK, HaK, BHK), HeLa, HepG2, WI38, MRC 5, Colo205, HB 8065, HL-60 (например, BHK21), Jurkat, Daudi, A431 (эпидермальная), CV-1, U937, 3T3, клеток L, клеток C127, SP2/0, NS-0, MMT 060562, клеток Сертоли, клеток BRL 3A, клеток HT1080, миеломной клетки, опухолевой клетки и клеточной линии, полученной из указанных выше клеток. В некоторых вариантах осуществления клетка включает один или несколько вирусных генов, например клетка сетчатой оболочки глаза, которая экспрессирует вирусный ген (например, клетки PER.C6™).
Выражение «определяющая комплементарность область» или термин «CDR» включает аминокислотную последовательность, кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты генов иммуноглобулина организма, которые, как правило (т.е. у животных дикого типа), присутствуют между двумя каркасными областями в вариабельной области легкой или тяжелой цепи молекулы имуноглобулина (например, антитела или рецептора T-клетки). CDR может кодироваться, например, последовательностью зародышевой линии или перестроенной или неперестроенной последовательностью, и, например, природной или зрелой B-клеткой или T-клеткой. В некоторых случаях (например, для CDR3) CDR могут быть кодированы двумя или более последовательностями (например, последовательностями зародышевой линии), которые не являются смежными (например, в неперестроенной последовательности нуклеиновой кислоты), но являются смежными в последовательности нуклеиновой кислоты в B-клетке, например, в результате сплайсинга или соединения последовательностей (например, рекомбинация V-D-J для образования тяжелой цепи CDR3).
Выражение «тяжелая цепь» или «тяжелая цепь иммуноглобулина» включает последовательность константной области тяжелой цепи иммуноглобулина любого организма и, если не указано иначе, включает вариабельный домен тяжелой цепи. Вариабельные домены тяжелой цепи включают три области CDR тяжелой цепи и четыре FR, если не указано иначе. Фрагменты тяжелых цепей включают CDR, CDR и Fs и их комбинации. Характерная тяжелая цепь дополнительно содержит вариабельный домен (с N-конца до C-конца), домен CH1, шарнирную область, домен CH2 и домен CH3. Функциональный фрагмент тяжелой цепи включает фрагмент, который способен специфически распознавать антиген (например, распознавание антигена с KD в микромолярном, наномолярном или пикомолярном диапазоне), который способен экспрессироваться и секретироваться из клетки и который содержит по меньшей мере один CDR.
Выражение «содержащий Fc белок» включает антитела, биспецифические антитела, иммуноадгезины и другие связывающие белки, которые содержат по меньшей мере функциональную часть области CH2 и CH3 иммуноглобулина. «Функциональная часть» относится к областям CH2 и CH3, которые могут связывать рецептор Fc (например, FcγR; или FcRn, т.е., неонатальный рецептор Fc) и/или которые могут принимать участие в активации комплемента. Если области CH2 и CH3 содержат делеции, замены и/или вставки или другие модификации, которые не позволяют областям связывать любой рецептор Fc и также не позволяют активировать комплемент, то области CH2 и CH3 не являются функциональными.
Содержащие Fc белки могут содержать модификации в иммуноглобулиновых доменах, включающие такие модификации, которые оказывают влияние на одну или несколько эффекторных функций связывающего белка (например, модификации, которые затрагивают связывание FcγR, связывание FcRn) и, таким образом, влияют на время полужизни и/или активность CDC). Такие модификации включают, но ими не ограничиваются, следующие модификации и их комбинации, со ссылкой к нумерации EU константной области иммуноглобулина: 238, 239, 248, 249, 250, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 301, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 312, 315, 318, 320, 322, 324, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 337, 338, 339, 340, 342, 344, 356, 358, 359, 360, 361, 362, 373, 375, 376, 378, 380, 382, 383, 384, 386, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 428, 430, 433, 434, 435, 437, 438 и 439.
Например, но не в качестве ограничения, связывающий белок представляет собой белок, содержащий Fc и демонстрирует увеличенное время полужизни в сыворотке (по сравнению с тем же белком, содержащим Fc, без перечисленных модификаций), и имеет модификацию в положении 250 (например, E или Q); 250 и 428 (например, L или F); 252 (например, L/Y/F/W или T), 254 (например, S или T) и 256 (например, S/R/Q/E/D или T); или модификацию в положении 428 и/или 433 (например, L/R/SI/P/Q или K) и/или 434 (например, H/F или Y); или модификацию в положении 250 и/или 428; или модификацию в положении 307 или 308 (например, 308F, V308F) и 434. В другом примере, модификация может включать модификацию 428L (например, M428L) и 434S (например, N434S); модификацию 428L, 259I (например, V259I) и 308F (например, V308F); модификацию 433K (например, H433K) и 434 (например, 434Y); модификацию 252, 254 и 256 (например, 252Y, 254T и 256E); модификацию 250Q и 428L (например, T250Q и M428L); модификацию 307 и/или 308 (например, 308F или 308P).
Выражение «ионный модификатор» включает группы, которые снижают или устраняют неспецифические (т.е. неаффинные) ионные взаимодействия между белками. «Ионные модификаторы» включают, например, соли, ионные комбинации металлов группы I и группы II с ацетатом, бикарбонатом, карбонатом, галогеном (например, хлоридом или фторидом), нитратом, фосфатом или сульфатом. Неограничивающий иллюстративный перечень «ионных модификаторов» включает бериллий, литий, натрий и калиевые соли ацетата; натрия и калия бикарбонаты; лития, натрия, калия и цезия карбонаты; лития, натрия, калия, цезия и хлорида магния; натрия и калия фториды; натрия, калия и кальция нитраты; натрия и калия фосфаты; и кальция и сульфат магния. «Ионные модификаторы» включают такие группы, которые оказывают ионное воздействие, которые, при добавлении к линейному или ступенчатому градиенту рН, или при уравновешивании носителя с белком A в «ионном модификаторе» и применении линейного или ступенчатого градиента pH, приводят к увеличению промежутка между единицами pH при элюции гомодимерного IgG и гетеродимерного IgG (например, IgG дикого типа человека и подобного IgG, но несущего одну или несколько модификаций в его домене CH3, как описано в настоящем документе). Подходящую концентрацию «ионного модификатора» можно определять посредством его концентрации, применяя колонку, упомянутую выше, линейный или ступенчатый градиент рН, с увеличением концентрации «ионного модификатора» до тех пор, пока не достигнут максимального промежутка при данном ступенчатом или линейном градиенте pH.
Выражение «легкая цепь» включает последовательность константной области легкой цепи иммуноглобулина из любого организма и, если не указано иначе, включает легкие цепи каппа и лямбда человека. Вариабельные домены легкой цепи (VL), как правило, включают три CDR легкой цепи и четыре каркасных области (FR), если не указано иначе. Как правило, полноразмерная легкая цепь включает, от аминоконца до карбоксильного конца, домен VL, который включает FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 и константный домен легкой цепи. Легкие цепи, которые можно использовать по настоящему изобретению, включают такие легкие цепи, которые, например, не связывают селективно или первый или второй антиген, селективно связанный антигенсвязывающим белком. Подходящие легкие цепи включают легкие цепи, которые можно идентифицировать посредством скрининга обычно используемых легких цепей в существующих библиотеках антител (библиотеки в жидкостях или компьютерного моделирования), где легкие цепи по существу не влияют на аффинность и/или избирательность антигенсвязывающих доменов антигенсвязывающего белка. Подходящие легкие цепи включают такие легкие цепи, которые могут связывать один или оба эпитопа, которые связаны антигенсвязывающими областями антигенсвязывающего белка.
Выражение «микромолярный диапазон» предназначен для обозначения микромолярности 1-999; выражение «наномолярный диапазон» предназначен для обозначения наномолярности 1-999; выражение «пикомолярный диапазон» предназначен для обозначения пикомолярности 1-999.
Выражение «соматически мутированный» включает последовательность нуклеиновой кислоты из B-клетки, которая подверглась действию механизма переключения класса, где последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области иммуноглобулина (например, тяжелая цепь вариабельного домена или содержащая последовательность CDR или FR тяжелая цепь) в В-клетке, которую подвергли механизму переключения класса, не идентична последовательности нуклеиновой кислоты в B-клетке до переключения класса, такой как, например, различие в CDR или каркасной последовательности нуклеиновой кислоты между B-клеткой, которая не подверглась переключению класса и B-клеткой, которая подверглась действию механизма переключения класса. «Соматически мутированный» включает последовательности нуклеиновой кислоты B-клетки с созревшей аффинностью, которая не идентична соответствующим последовательностям в B-клетках, которые не являются аффинно созревшими (т.е. последовательности в геноме клеток зародышевой линии). Выражение «соматически мутированный» также включает последовательность нуклеиновой кислоты из B-клетки после представления B-клетки представляющему интерес антигену, где последовательность нуклеиновой кислоты отличается от соответствующей последовательности нуклеиновой кислоты до представления B-клетки представляющему интерес антигену. Выражение «соматически мутированный» относится к последовательностям антител, которые были получены от животного, например мыши, имеющей последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области иммуноглобулина человека, в ответ на антигенную стимуляцию, и которые является следствием процессов отбора, природно-действующих у такого животного.
Выражение «вариабельный домен» включает аминокислотную последовательность легкой или тяжелой цепи иммуноглобулина (модифицированных, как требуется), которые содержат следующие аминокислотные области, в последовательности от N-конца до C-конца (если не указано иначе): FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. «Вариабельный домен» включает аминокислотную последовательность, способную сворачиваться в канонический домен (VH или VL), обладающий двойной бета-складчатой структурой, где бета-складчатые структуры соединены дисульфидной связью между остатком первой бета-складчатой структурой и второй бета-складчатой структурой.
Биспецифические антитела с модифицированными областями CH3 IgG
Авторы изобретения разработали новый формат, в котором комбинируются общепринятая стратегия легких цепей с использованием схемы избирательной очистки с белком A, которую можно использовать с компонентами антитела человека.
Так как ранее отмечено (Lindhofer, H. et al. (1995) J. Immunol. 155:219-225), что IgG3 человека не связывается с белком A, то его теоретически можно использовать вместе с любыми другими тремя подклассами IgG человека в способе очистки, схожим со способом очистки, используемом для гибридов мышь-крыса. Однако, хотя последовательности всех четырех подклассов IgG человека являются высокогомологичными, не известно будут ли области Fc IgG1, IgG2 и IgG4 образовывать гомодимеры с IgG3; даже лишь преимущественное формирование гомодимеров будет, при некоторых условиях, иметь отрицательное влияние на общий выход желаемых гетеродимеров (например, выделение из квадром). Дополнительные модификации также могут быть необходимы для компенсирования различий между шарнирной областью IgG3 и шарнирной областью других подклассов. Дополнительные модификации были бы также предпочтительны в некоторых случаях, не требующих наличия полноразмерного Fc IgG3, из-за возможного влияния на эффекторные функции.
Таким образом, авторы изобретения разработали «минимальный» формат, который использует, по случайности, простую определяющую детерминанту для связывания белка A. Сообщали (Jendeberg, L. et al. (1997) J. Immunological Meth, 201:25-34), что неспособность IgG3 к связыванию белка A определяется одним аминокислотным остатком Arg435 (нумерация EU; Arg95 по IMGT), соответствующую позицию которого в других подклассах IgG занимает остаток гистидина. Таким образом, вместо IgG3 возможно использовать последовательность IgG1, в которой His435 заменен на Arg. Таким образом, согласно новой схеме очистки наличие единственной точечной мутации в IgG1 должно быть достаточным для получения различных значений аффинностей связывания. Данная модификация будет названа IgG1∆A, для обозначения неспособности иммуноглобулина к связыванию белка A (и, аналогично, IgG2∆A и IgG4∆A или в более общем смысле, Fc∆A).
Однако обозначенная точечная мутация приводит к образованию новой пептидной последовательности, которая, возможно, за счет мутации может быть иммуногенной. Точечная мутация, теоретически, может быть нагружена на молекулу MHC класса II и презентирована T-клеткам и ,таким образом, вызывать иммунный ответ. Для предотвращения этой опасности можно использовать дипептидную мутацию, H435R/Y436F (нумерация EU; H95R/Y96F по IMGT). Последовательность, полученная в результате в области модификации, является идентичной соответствующей последовательности IgG3 (см. фиг.2A) и, таким образом, можно было бы ожидать, что она будет иммунологически «невидимой», так как не присутствовало бы неприродных коротких пептидов, пригодных для презентации T-клеткам. Опубликовано, что такой двойной мутант по-прежнему не связывает белок A (Jendeberg, L. et al. (1997) J. Immunological Meth. 201:25-34). В результате, дипептидная мутация не включает какие-либо остатки, которые, как полагают, создают возможность димерного взаимодействия Fc, таким образом, маловероятно, что мутация затрагивает формирование гетеродимеров. Эту дипептидную мутацию обозначают как «IgG1∆Adp» (и, аналогично, IgG2∆Adp, IgG4∆Adp и Fc∆Adp). Положение дипептидной модификации в IgG1, IgG2 и IgG4 показано на фиг.3 в последовательностях, обозначенных IgG1∆Adp, IgG2∆Adp и IgG4∆Adp, представленных вместе с последовательностью дикого типа домена CH3 IgG человека, а также hIgG3, демонстрирующей нумерацию экзонов IMGT и нумерацию EU.
Модификация Fc∆Adp не включает какие-либо остатки, которые, как полагают, образуют возможность димерного взаимодействия Fc, таким образом, маловероятно, что модификация Fc∆Adp затрагивает формирование гетеродимеров. Так как Fc∆Adp является очень небольшой, ее, вероятно, также можно включать в другие сконструированные формы Fc. IgG2∆Adp и IgG4∆Adp могут быть полезными в случаях, при которых желательно наличие эффекторных функций (или их потеря), связанных с каждым из последних.
В сущности, формат биспецифического антитела, описанный выше, включает два антитела с различной специфичностью, которые используют одинаковые легкие цепи, где Fc-область одной из них модифицируют согласно формату Fc∆Adp (см. фиг.2B). Его конфигурация соответствует конфигурации природного антитела человека и, таким образом, должна разделять присущие ему положительные свойства, включающие низкую склонность к агрегации, стабильность in vivo, минимальную иммуногенность, биораспределение, аналогичное биораспределению антител, хорошую фармакокинетику и, необязательно, эффекторные функции. Разработаны способы выделения таких биспецифических антител, которые являются относительно быстрыми и простыми в исполнении.
Биспецифические связывающие белки с модифицированными областями CH IgG мыши.
Авторы изобретения разработали способ быстрого выделения связывающих белков, содержащих тяжелую цепь иммуноглобулина (или его фрагмента, содержащего функциональные CH2 и CH3), которые являются гетеродимерными в отношении одной или нескольких аминокислот в домене CH3. Тщательный отбор модификаций в домене CH IgG мыши и применение технологии индивидуального разделения предоставляет возможность быстрого выделения связывающего белка, содержащего две селективно модифицированных области CH мыши из гомодимеров и гетеродимеров, которые не содержат модификации.
IgG1 мыши, который содержит пролин в положении 247, треонин в положении 252, 254 и 256 и лизин в положении 258, только слабо связывается с белком A. Однако IgG2a и IgG2b мыши содержат различные остатки в этих положениях (за исключением положений 256 и 258 IgG2b) и IgG2a и 2b мыши хорошо связываются с белком A. Избирательное модифицирование областей CH двух IgG мыши в способе получения антитела, которое является гетеродимерным по тяжелым цепям, будет придавать такому антителу различные свойства связывания с белком A. Таким образом, разрабатываются различные схемы выделения на основе белка А, что предусматривает быстрое отделение модифицированного гетеродимера от любого гомодимера IgG мыши, будь то гомодимер IgG1 (который только очень слабо связал бы, если бы связывание произошло, белок A) или гомодимер IgG2a мыши, гомодимер IgG2b мыши или гетеродимер IgG2a/IgG2b. Например, биспецифическое антитело, обладающее двумя различными вариабельными доменами тяжелой цепи, но одного изотипа, например, IgG2a, можно экспрессировать в подходящей экспрессионной системе, которая задействует последовательности тяжелой цепи, где модифицируют только одну из СН областей IgG2a для снижения действия или удаления детерминанты, связывающей белок A. Таким образом, только одна из областей CH IgG2a будет демонстрировать значимую аффинность для белка A, и любое антитело, образованное из димера немодифицированного IgG2a и модифицированного IgG2a, будет быстро выделено из модифицированного гетеродимера.
В различных вариантах осуществления, антитело, отличающееся тем, что одна область CH димера Fc содержит модифицированную область CH, в то время как другая область CH димера Fc лишена модификаций. Область CH IgG модифицируют для включения конкретных аминокислот в конкретные положения (нумерация EU), выбранных из группы, состоящей из: 252T, 254T и 256T; 252T, 254T, 256T и 258K; 247P, 252T, 254T, 256T и 258K; 435R и 436F; 252T, 254T, 256T, 435R и 436F; 252T, 254T, 256T, 258K, 435R и 436F; 24tP, 252T, 254T, 256T, 258K, 435R и 436F; и 435R. В конкретном варианте осуществления выполняют конкретную группу модификаций, выбранных из групп, состоящих из: M252T, S254T, S256T; M252T, S254T, S256T, I258K; I247P, M252T, S254T, S256T, I258K; H435R, H436F; M252T, S254T, S256T, H435R, H436F; M252T, S254T, S256T, I258K, H435R, H436F; I247P, M252T, S254T, S256T, I258K, H435R, H436F; и H435R.
Гетеродимерные связывающие белки, основанные на IgG мыши, можно использовать для множества вариантов применения. Например, такие связывающие белки предусматривают способ выделения биспецифических антител с константными доменами мыши, где модификации не влияют или по существу не влияют на связывание антитела с одним или несколькими Fc-рецепторами мыши так, что антитело может принимать участие, например, в ADCC или CDC и также связывать два или более эпитопов на одной или различных мишенях.
В одном из аспектов способ выделения связывающего белка включает первую область CH IgG мыши и вторую область CH IgG мыши, где первую область CH IgG модифицируют (но не вторую область CH IgG), с тем чтобы снизить или устранить аффинность связывания с белком A первой области CH IgG мыши, но не второй области CH IgG мыши, и где связывающий белок содержит первый связывающий фрагмент, который связывает первый эпитоп и вторую связывающую детерминанту, которая связывает второй эпитоп.
В одном из вариантов осуществления модификации не изменяют или по существу не изменяют аффинность связывания связывающего белка с Fc-рецептором. В одном из вариантов осуществления связывающий белок содержит модификации, которые увеличивают или снижают аффинность связывающего белка к Fc-рецептору.
В одном из вариантов осуществления модификация не изменяет или по существу не изменяет время полужизни связывающего белка в сыворотке мыши, содержащей нативные FcγR-рецепторы мыши и/или нативный FcRn мыши, по сравнению с соответствующим связывающим белком, который не имеет модификаций.
В одном из вариантов осуществления модификация не изменяет или по существу не изменяет, по сравнению со связывающим белком, который не имеет модификации, время полужизни связывающего белка в сыворотке мыши, которая содержит замену нативных высокоаффинных и низкоаффинных FcγR-рецепторов мыши и/или FcRn-рецептор.
В одном из вариантов осуществления первый и второй эпитопы различны и представлены на различных клетках или на различных белках. В одном из вариантов осуществления первый эпитоп и второй эпитоп различны и представлены на одной и той же клетке или белке.
В одном из вариантов осуществления Fc-рецептор выбран из высокоаффинного Fc-рецептора, низкоаффинного Fc-рецептора и FcRn. В конкретном варианте осуществления Fc-рецептор выбран из одного или нескольких FcRn мыши, FcγR мыши, FcγRIIB мыши, FcγRIII мыши, FcγRIV мыши и их комбинации. В конкретном варианте осуществления Fc-рецептор выбирают из одного или нескольких FcRn человека, FcγR человека, FcγRIIB человека, FcγRIIC человека, FcγRIIIB человека, FcγRIIIA человека, FcγRIIA человека и их комбинации.
Иммуногенность
Одним преимуществом многих вариантов осуществления изобретения является возможность использования модификации для создания биспецифического антитела, которое является как быстро выделяемым, основанным на различном связывании с белком А, так и неиммуногенным или по существу неиммуногенным для человека. Эта характеристика делает такие варианты осуществления особенно подходящим при создании биспецифических антител для применения в качестве терапевтических средств для человека и при создании иммуноадгезинов, которые например, являются неиммуногенными или по существу неимуногенными (с применением связывающих молекул человека, т.е. рецепторных компонентов человека и/или лигандов человека). Эта характеристика связана с биспецифическими антителами, обладающими доменами CH3 с модификациями H95R/Y96F (нумерация IMGT) в IgG1, IgG2 и IgG3, и такими доменами CH3, которые содержат дополнительные модификации, что приводит в результате к модифицированному положению, отражающему последовательность дикого типа различных изотипов IgG. Таким образом, хотя модификация не присутствует в природе, связанная с конкретным изотипом IgG модифицированная последовательность локально идентична последовательности дикого типа различных изотипов IgG, и, как ожидают, модификация не будет иммуногенной или по существу иммуногенной. Также возможно, что модификация является неиммуногенной, даже если ее последовательность локально не идентична любой нативной последовательности; такие модификации также могут быть полезны. Минимальная точечная мутация H95R (нумерация IMGT), при отсутствии иммуногенности, будет, таким образом, представлять собой подходящий вариант осуществления изобретения.
Таким образом, разработаны биспецифические антитела, которые являются неиммуногенным или по существу неиммуногенным для человека, в отношении их константных доменов тяжелой цепи, но которые, тем не менее, содержат одну или несколько различных модификаций в константном домене тяжелой цепи, включая модификацию, которая приводит к различной аффинности константных доменов тяжелой цепи в отношении аффинного реагента (например, белка A). Модификации включают те, которые описаны в настоящем документе. В конкретном варианте осуществления биспецифическое антитело, которое является неиммуногенным или по существу неиммуногенным для человека в отношении его домена CH3, даже с селективно модифицированной тяжелой цепью, представляет собой IgG1, IgG2 или IgG4 человека, содержащие домен CH3, который включает одну из следующих модификаций (или, в другом варианте осуществления, по существу содержит одну из следующих модификаций): H95R или H95R и Y96F (нумерация IMGT).
Как ожидают, биспецифические антитела являются неиммуногенными или по существу неиммуногенными, в отношении людей, у которых не была нарушена в какой-либо значительной степени толерантность к изоформам IgG1, IgG2 и IgG4 человека.
В частности, как ожидают, модификация Fc∆Adp является иммунологически «невидимой», так как связывающая бороздка молекул MHC класса II вмещает 9-мерный пептид, который содержит основную детерминанту, распознаваемую различными петлями рецептора T-клеток, таким образом, маловероятно, что пептиды, лишенные любой природной 9-мерной подпоследовательности, будут вызывать иммунный ответ. Однако пептиды, длиннее чем 9-мерные (как правило, от приблизительно 13- до 17-мерный) связываются MHC класса II, и возможно, что выступающие сегменты могут потенциально оказывать влияние на связывание. Таким образом, дополнительные модификации (дополнительно к модификации Fc∆Adp), которые устраняют более длинные неприродные последовательности, могут дополнительно снижать возможность развития иммуногенности. Одним конкретным примером является модификация V422I (EU; V82I по нумерации IMGT), которая увеличивает длину минимального неприродного пептида на величину от 14 до 39 остатков в IgG1∆Adp и до 43 остатков в аналогично обозначенном IgG2∆Adp. Другим примером является модификация L445P (EU; L105P по нумерации IMGT) в IgG4∆Adp, которая увеличивает длину на величину от 10 до 14 остатков.
Фармакокинетика
Участок связывания для белка A перекрывается с участком связывания для неонатального Fc-рецептора, FcRN, который, как полагают, отвечает за придание иммуноглобулинам более длительного времени полужизни в сыворотке. Таким образом, модификации, располагающиеся поблизости от участка связывания белка A, увеличивают возможность того, что формат иммуноглобулина, представленный в настоящем документе, может иметь более короткое время полужизни в сыворотке, чем формат IgG1, 2 и 4, учитывая то, что IgG3 человека обладает более коротким временем полужизни в сыворотке (приблизительно 7 суток), по сравнению с другими подклассами IgG (приблизительно 21 сутки). Показано, что некоторые мутанты Fc, с измененным His435, не связывают FcRN и у мышей обладают более коротким временем полужизни. Однако фармакокинетический анализ показал, что время полужизни в сыворотке гетеродимера IgG1∆A/IgG1 не существенно отличается от времени полужизни гомодимера IgG1 (см. пример 2). Таким образом, мутация IgG1∆Adp имеет преимущество при удалении способности связывания с белком А, в то время как все еще сохраняет более длинное время полужизни IgG1.
Таким образом, в одном из вариантов осуществления разработан биспецифичный антигенсвязывающий белок, который включает модификацию домена CH3, как описано в настоящем документе, где антигенсвязывающий белок демонстрирует фармакокинетический профиль, эквивалентный профилю такого же биспецифичного антигенсвязывающего белка, который не имеет модификации в домене CH3. В одном из вариантов осуществления разработано биспецифическое антитело, которое содержит гетеродимерный Fc IgG1∆A/IgG1, где биспецифическое антитело имеет время полужизни в сыворотке, которое приблизительно в 1,5 раза, приблизительно в 2 раза, приблизительно в 2,5 раза или приблизительно в 3 раза выше, чем время полужизни биспецифического антитела, которое в другом отношении является идентичным, но содержит домен CH3 IgG3, или которое в другом отношении идентично, но содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь IgG3. В одном из вариантов осуществления разработано биспецифическое антитело, содержащее гетеродимерный Fc IgG1∆A/IgG1, где биспецифическое антитело демонстрирует время полужизни в сыворотке, которое является приблизительно таким же, что и время полужизни биспецифического антитела без модификации IgG1∆A (т.е. гомодимерное биспецифическое антитело IgG1).
Тяжелые цепи иммуноглобулинов
Вариабельные области тяжелой цепи иммуноглобулина, которые можно использовать для создания биспецифических антител с желаемыми характеристиками (например, желаемой специфичностью, аффинностью, функциональными свойствами, например, блокирующие, неблокирующие, ингибирующие, активирующие и т.д.) можно получать, используя любой известный в данной области способ. Желаемые тяжелые цепи можно затем конструировать посредством клонирования последовательностей нуклеиновой кислоты, содержащей вариабельные области в конструкты, обладающие желаемыми константными областями тяжелой цепи, описываемыми в настоящем документе.
В одном из вариантов осуществления первая тяжелая цепь содержит вариабельную область, которая кодируется нуклеиновой кислотой, полученной из генома зрелой B-клетки первого животного, которое иммунизировано первым антигеном, и первую тяжелую цепь, которая специфично распознает первый антиген. В конкретном варианте осуществления вторая тяжелая цепь содержит вариабельную область, которая кодируется нуклеиновой кислотой, которую получают из генома зрелой B-клетки второго животного, которое иммунизировано вторым антигеном, и вторая тяжелая цепь специфично распознает второй антиген.
В одном из вариантов осуществления первое животное и/или второе животное представляют собой генетически модифицированное животное, содержащее неперестроенную вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина человека. В одном из вариантов осуществления первое животное и/или второе животное представляет собой генетически модифицированное животное, содержащее неперестроенную вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина человека и константную область иммуноглобулина человека. В одном из вариантов осуществления первое животное и/или второе животное представляет собой генетически модифицированную мышь, которая содержит неперестроенную вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина человека.
Последовательности вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина можно получать любым другим известным в данной области способом, например посредством фагового дисплея, и полученные таким образом последовательности можно использовать для создания нуклеиново-кислотных конструктов, соединенных с нуклеиновыми кислотами, кодирующими любую подходящую тяжелую цепь, например тяжелые цепи с модифицированными доменами CH3, как описано в настоящем документе, и помещать в экспрессирующую конструкцию и переносить в клетку, способную к созданию тяжелой цепи, например, в присутствии подходящей легкой цепи.
Легкие цепи иммуноглобулинов
Биспецифические антитела, содержащие две тяжелые цепи, которые распознают два различных эпитопа (или два различных антигена), более легко выделять, если они могут образовать пару с одинаковыми легкими цепями (т.е. легкими цепями, имеющими идентичные вариабельные и константные домены). В данной области известны различные способы создания легких цепей, которые могут образовывать пару с двумя тяжелыми цепями различной специфичности, не затрагивая при этом или по существу не затрагивая способность к избирательности и/или аффинность вариабельного домена тяжелой цепи по отношению к его антигену-мишени.
В одном из подходов легкую цепь можно отбирать посредством исследования статистических данных использования всех вариабельных доменов легких цепей, определяя наиболее часто используемую легкую цепь в антителе человека и образуя пару, в которой легкая цепь взаимодействует с двумя тяжелыми цепями различной специфичности.
В другом подходе легкую цепь можно отобрать, изучая последовательность легкой цепи в библиотеке в формате фагового дисплея (например, библиотека в формате фагового дисплея, содержащая последовательность вариабельной области легкой цепи человека, например, библиотека ScFv человека) и отбирая из библиотеки наиболее общеупотребительную вариабельную область легкой цепи.
В другом подходе легкую цепь можно отбирать, исследуя библиотеку вариабельных последовательностей легких цепей в формате фагового дисплея, используя вариабельные последовательности обоих тяжелых цепей в качестве зондов. Легкую цепь, которая связывается с обоими вариабельными последовательностями тяжелой цепи, отбирают в качестве легкой цепи для связывания с тяжелыми цепями и обеспечивают связывание и/или активацию в отношении обоих эпитопов.
В другом подходе легкую цепь можно отбирать комбинированием известных легких цепей с желаемыми тяжелыми цепями и исследованием полученного в результате биспецифического антитела на специфичность связывания, аффинность и/или способность к активации.
В тех случаях когда при осуществлении любого из подходов при отборе легкой цепи встречаются трудности (например, легкая цепь оказывает влияние на связывание с антигеном одной или обеих тяжелых цепей или легкая цепь не связывается в достаточной степени с одной или обеими тяжелыми цепями), легкая цепь может совпадать с легкой цепью, родственной тяжелым цепям, и модификации в легкой цепи создают с целью большей совместимости характеристик последовательностей, характерных для родственных легких цепей обеих тяжелых цепей. При необходимости минимизировать возможность иммуногенности, модификации, предпочтительно, приводят в результате к получению последовательностей, которые присутствуют среди известных последовательностей легкой цепи, таким образом, является маловероятным, что протеолетический процессинг приведет к получению эпитопа для T-клетки, если исходить из параметров и способов, известных в данной области для оценки вероятности возникновения иммуногенности (т.е. компьютерное моделирование, анализы в жидкостях).
Антитела и связывающие белки
Композиции и способы особенно подходят для создания биспецифических антител человека, т.е. биспецифических антител, содержащих константные и вариабельные домены иммуноглобулина человека. В некоторых вариантах осуществления антитела человека включают такие антитела, которые обладают вариабельными и константными доменами тяжелой цепи, полученными из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека, в некоторых вариантах осуществления полученных из соматически мутированных последовательностей иммуноглобулинов человека (полученных, например, от животного, которое содержит последовательности генов иммуноглобулина человека). В некоторых вариантах осуществления вариабельные или константные области иммуноглобулина человека могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые иммуноглобулиновыми последовательностями зародышевой линии человека или кодируемые в результате наличия рекомбинации и/или сплайсинга, например, в CDR и в частности CDR3. Антитела человека не предназначены для включения антител, в которых последовательности CDR, полученные из зародышевой линии других видов млекопитающих, таких как мышь, трансплантированы в каркасные последовательности человека. Такие антитела обозначают как гуманизированные или химерные антитела. Антитела человека не включают антитела, содержащие мутации, например, введенные in vitro случайным или сайт-специфическим мутагенезом, а мутации являются, предпочтительно, неиммуногенными для человека.
Способы и композиции можно использовать для создания химерных антител, предпочтительно, неиммуногенных для человека или с низкой иммуногенностью. Химерные антитела представляют собой антитела, в которых одна из вариабельных областей тяжелой цепи, или каркасная, или CDR, или константная область тяжелой цепи, или домен происходит из различных видов (например, человека и мыши или человека и примата). В некоторых вариантах осуществления химерные антитела включают антитела, обладающие вариабельной областью тяжелой цепи, происходящей из не принадлежащего к человеку вида (например, мыши), и константной областью тяжелой цепи человека. В некоторых вариантах осуществления химерные антитела включают антитела, обладающие вариабельной областью тяжелой цепи человека и константной областью тяжелой цепи не принадлежащего к человеку вида (например, мыши). В различных вариантах осуществления области, происходящие из мыши, идентичны или по существу идентичны последовательности зародышевой линии иммуноглобулина человека с соматической гипермутацией или без нее. Химерные антитела также включают антитела, обладающие константной областью легкой цепи, которая идентична или по существу идентична зародышевой линии иммуноглобулина человека, и не принадлежащей к человеку (например, мышь) тяжелой цепью или человеческой/не принадлежащей человеку химерной тяжелой цепью. Химерные антитела включают антитела, обладающие константным доменом легкой цепи, который идентичен или по существу идентичен не принадлежащей к человеку (например, мышь) последовательности иммуноглобулина зародышевой линии, и тяжелой цепью человеческого происхождения, или химерной тяжелой цепью, или человеческой/не принадлежащей человеку химерной тяжелой цепью.
В некоторых вариантах осуществления представлены композиции и способы для получения антител с созревшей аффинностью. В некоторых вариантах осуществления антитело с созревшей аффинностью содержит одно или несколько изменений в одном или нескольких CDR, которые приводят к более высокой аффинности (например, KD в наномолярном или пикомолярном диапазоне) антитела по отношению к его мишеневому антигену, по сравнению с по существу идентичным антителом, которое не содержит изменений. Антитела с созревшей аффинностью можно получать любым подходящим способом, известным в данной области, например случайным или сайт-специфическим мутагенезом CDR и/или каркасных областей с последующим скринингом аффинности, перестановкой домена VH и т.д.
В некоторых вариантах осуществления антитела представляют собой нейтрализующие антитела. Нейтрализующие антитела включают антитела, способные к нейтрализации, ингибированию или предотвращению биологической активности антигенов. Нейтрализующие антитела включают антитела, которые, при связывании с антигеном, предотвращают или снижают способность антигенов взаимодействовать с природной мишенью антигена in vivo и in vitro. Примеры нейтрализующих антител включают антитела к белковому лиганду биологического рецептора, который предотвращает связывание лиганда с рецептором, или антитело к биологическому рецептору, который предотвращает связывание рецептора, и его лиганду, при этом связывание лиганда в отсутствие антитела побуждает рецептор вызывать изменения внутри клетки. Определение того, является ли антитело нейтрализующим антителом, как правило, влечет за собой проведение функционального исследования, где измеряют эффект антител на биологическую активность антигена.
Способы и композиции по изобретению также могут использоваться для различных вариантов применения в отношении антител и других связывающих белков. Краткое описание некоторых эффективных вариантов применения представлены в настоящем документе.
Можно создать биспецифические связывающие белки, которые включают специфичность связывания по отношению к опухолевым антигенам и антигенам T-клеток, которые нацелены на антиген на клетке, например на CD20, и также нацелены на антиген на T-клетке, например на CD3. Таким образом, биспецифическое антитело нацелено на обе представляющие интерес клетки у пациента (например, на B-клетку у пациента с лимфомой, посредством связывания CD20), а также на T-клетку пациента. Биспецифическое антитело в различных вариантах осуществления сконструировано таким образом, чтобы активировать T-клетку при связывании CD3, таким образом связывая T-клеточную активацию с конкретной, выбранной опухолевой клеткой.
Также можно получать биспецифичные связывающие белки, которые содержат две связывающие молекулы, каждая из которых нацелена на партнера по связыванию (т.е. каждая нацелена на различные мишени) на поверхности одной и той же клетки. Такое конструирование особенно подходит для нацеливания на конкретные клетки или типы клеток, которые экспрессируют обе мишени на поверхности одной и той же клетки. Несмотря на то что мишени могут присутствовать по отдельности на других клетках, связывающие молекулы этих связывающих белков выбирают таким образом, чтобы каждая связывающая молекула связывала свою мишень с относительно низкой аффинностью (например, низкой микромолярной или высокой наномолярной, например, KD выше ста наномолей, например, 500, 600, 700, 800 наномолей). Таким образом, пролонгированное связывание мишени благоприятно только в случаях, когда две мишени близко расположены на одной и той же клетке.
Можно получать биспецифические связывающие белки, которые содержат две связывающие молекулы, которые связывают одну и ту же мишень, каждая в различном эпитопе одной и той же мишени. Такое конструирование особенно подходит для максимального увеличения возможности успешного блокирования мишени связывающим белком. Одну и ту же биспецифическую связывающую молекулу можно нацеливать на многочисленные внеклеточные петлевые структуры, например трансмембранный канал или клеточный поверхностный рецептор.
Можно получать биспецифические связывающие белки, которые включают две связывающие молекулы, которые кластерируют и активируют негативные регуляторы иммунного пути передачи сигнала с целью иммунной супрессии. Подавление в значении цис можно достигать, когда мишени представлены на одной и той же клетке; подавление в значении транс можно достигать, когда мишени представлены на различных клетках. Подавление в значении цис, например, можно получать со специфическим связывающим белком, обладающим связывающей группой к IgGRIIb и связывающей группой к FelD1, так как IgGRIIb способен к кластерированию только в присутствие FelD1, с целью подавления иммунного ответа к FelD1. Подавления в значении транс можно достигать, например, посредством биспецифического связывающего белка, обладающего связывающей группой к BTLA и связывающей группой, которая специфично связывает представляющий интерес тканеспецифический антиген, таким образом, кластерирование ингибиторной молекулы BTLA происходит только в выбранной мишеневой ткани, которая, возможно, связана с аутоиммунными заболеваниями.
Можно получать биспецифические связывающие белки, которые активируют многокомпонентные рецепторы. При таком конструировании две связывающие молекулы направляли против двух компонентов рецепторного связывания, поперечного связывания рецептора и активирования передачи сигнала с рецептора. Это можно осуществить, например, используя биспецифический связывающий белок со связывающей группой, которая связывает IFNAR1, и связывающей группой, которая связывает 1FNAR2, где связывание приводит к поперечному связыванию рецептора. Такой биспецифический связывающий белок можит являться альтернативой лечению интерфероном.
Можно получать биспецифические связывающие белки, которые осуществляют транспорт связывающих молекул через полупроницаемые барьеры, например гематоэнцефалический барьер. При таком конструировании одна связывающая молекула связывает мишень, которая может проходит через конкретный избирательный барьер; другая связывающая молекула нацелена на молекулу с терапевтической активностью, где мишеневая молекула с терапевтической активностью не может, в обычных условиях, пересекать барьер. Это свойство биспецифического связывания белка подходит для доставки терапевтических средств к тканям, которых терапевтическое средство иначе бы не достигло. Некоторые примеры включают нацеливание рецептора pIGR для транспортировки терапевтического средства в желудочно-кишечный тракт или легкие, или нацеливание трансферринового рецептора для транспортировки терапевтического средства через гематоэнцефалический барьер.
Можно получать биспецифические связывающие белки, которые транспортируют связывающие молекулы в конкретные клетки или типы клеток. При этом конструировании одна связывающая молекула нацелена на клеточный поверхностный белок (например, рецептор), который легко интернализуется в клетку. Другая связывающая молекула нацелена на внутриклеточный белок, в тех случаях когда связывание внутриклеточного белка вызывает терапевтический эффект.
Можно получать биспецифические связывающие белки, которые связывают поверхностный рецептор фагоцитарной иммунной клетки и поверхностную молекулу инфекционного патогена (например, дрожжей или бактерии), для передачи инфекционного патогена в окружение фагоцитарной иммунной клетки для облегчения фагоцитоза патогена. Примером такого конструирования было бы биспецифическое антитело, которое нацелено на молекулы CD64 или CD89, а также на патоген.
Можно получать биспецифические связывающие белки, которые имеют вариабельную область антитела в качестве одной из связывающих молекул, а в качестве второй связывающей молекулы не относящаяся к Ig молекула. Вариабельная область антитела осуществляет нацеливание, в то время как не относящаяся к Ig молекула представляет собой эффектор или токсин, соединенный с Fc. Таким образом, лиганд (например, эффектор или токсин) доставляют к мишени, связанной вариабельной областью антитела.
Можно получать биспецифические связывающие белки, которые имеют две молекулы, где каждая связывается с областью Ig (например, последовательностью Ig, содержащей области CH2 и CH3) таким образом, что любые две белковые молекулы можно приблизить друг к другу за счет Fc. Примеры такого конструирования включают ловушки, например гомо- или гетеродимерные молекулы-ловушки.
Нуклеиновые кислоты
Последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие моноклональные антитела, можно получать любыми подходящими способами, известными в данной области. Примеры подходящих способов получения моноклональных антител (и их последовательности нуклеиновой кислоты) включают, например, гибридомный способ (см., например, Kohler et al. (1975) Nature 256:495-497) или фаговой библиотеки антител (см., например, см. Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628).
В различных вариантах осуществления вариабельные домены тяжелой цепи получают из последовательностей нуклеиновой кислоты генетически модифицированного животного или трансгенного животного. В некоторых вариантах осуществления области получают из животного, которое содержит минилокус иммуноглобулина человека. В некоторых вариантах осуществления области получают из мышей, содержащих одну или несколько внехромосомных нуклеиновых кислот, которые содержат одну или несколько нуклеиновых кислот, кодирующих последовательности иммуноглобулина. В различных вариантах осуществления животное может иметь одну или несколько неперестроенных последовательностей нуклеиновых кислот иммуноглобулина человека. В некоторых вариантах осуществления животное включает последовательности вариабельной области легкой цепи человека, в некоторых вариантах осуществления вариабельные последовательности тяжелой цепи человека, в некоторых вариантах осуществления вариабельные последовательности тяжелой и легкой цепи, и в некоторых вариантах осуществления дополнительно содержит последовательности константной области человека. В конкретном варианте осуществления последовательности нуклеиновой кислоты получают из мыши, у которой эндогенные сегменты вариабельных генов тяжелой цепи и сегменты вариабельных генов легкой цепи мыши заменены на сегменты вариабельных генов тяжелой цепи и сегменты вариабельных генов легкой цепи человека.
В некоторых вариантах осуществления последовательности нуклеиновой кислоты получают из “наивных” B или T-клеток такого животного. В других вариантах осуществления последовательности нуклеиновой кислоты получают из B или T-клеток животного, которое иммунизировано антигеном, представляющим интерес.
В различных вариантах осуществления последовательности нуклеиновой кислоты получают из клеток, амплифицируя их с праймерами, включающими, например, наборы вырожденных праймеров, которые содержат одну или несколько FR, соединительную цепь или константные последовательности.
В различных вариантах осуществления вариабельные домены тяжелой цепи получают из нуклеиновых кислот животного, которое иммунизировано представляющим интерес антигеном. Например, не относящееся к человеку трансгенное или генетически модифицированное животное иммунизируют представляющим интерес антигеном (например, подвергая животное воздействию антигена или клетки, несущей антиген или нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемую форму антигена), позволяя животному перенести иммунный ответ, выделяют иммунные клетки из животного (например, B-клетки), необязательно иммортализующие клетки, и скринируют клетки для идентификации реакционной способности к антигену, и/или идентификации, и/или выделения последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует вариабельную область иммуноглобулина, который способен распознавать антиген, будучи помещенным в условия антитела. В некоторых вариантах осуществления клетка представляет собой B-клетку. В некоторых вариантах осуществления B-клетку иммунизированного животного используют для создания гибридомы и идентифицируют B-клетки, экспрессирующие антитела, которые специфично распознают эпитоп антигена, и идентифицируют и/или выделяют последовательности нуклеиновой кислоты, которые кодируют аминокислотную последовательность вариабельной области.
В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты получают из человекообразных, нечеловекообразных приматов (например, человекообразных обезьян, таких как шимпанзе), макак (например, яванская или резус), грызунов (например, мыши, крысы, хомяки), осла, коз, овцы и т.д.
В некоторых вариантах осуществления тяжелые цепи содержат последовательности, которые получают из клеток человека. Например, эмбриональных клеток человека, подвергающихся воздействию антигена in vitro и помещенных в подходящее животное-хозяина (например, мышь SCID).
В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты встраивают в клетку, используя вектор. Векторы включают, например, плазмиды, космиды, ретровирусы, аденовирусы, аденоассоциированные вирусы, вирусы растений, YAC, BAC, эписомы, полученные на основе EBV.
В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты представлены в векторе экспрессии или экспрессирующей конструкции. В некоторых вариантах осуществления вектор экспрессии или конструкт представляет собой вектор, который содержит промотор, функционально связанный с представляющей интерес последовательностью нуклеиновой кислоты, такой как представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты, которая способна экспрессироваться в подходящих условиях в подходящей клетке. Векторы экспрессии или конструкты могут включать лидерные последовательности, энхансеры, промоторные элементы, которые усиливают транскрипцию или трансляцию, последовательности, останавливающие транскрипцию, сплайсируемые последовательности, усиливающие транскрипцию интроны, элементы IRES, маркерные гены, выделенные последовательности, участки распознавания рекомбиназы, гомологичные плечи, вирусные последовательности, операторы (например, прокариотические операторы) и т.д. В некоторых вариантах осуществления векторы экспрессии содержат элементы, которые предусматривают индуцируемую экспрессию, например прокариотический оператор, функционально связанный с эукариотическим промотором. В некоторых вариантах осуществления экспрессию индуцируют при добавлении индуктора экспрессии. В других вариантах осуществления экспрессию индуцируют устранением ингибитора экспрессии. В некоторых вариантах осуществления экспрессию индуцируют изменением температуры.
В некоторых вариантах осуществления одна или несколько нуклеотидных последовательностей тяжелой цепи представлены на одном и том же векторе. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи и последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи в настоящем документе представлены на одном и том же векторе. В одном из вариантов осуществления две последовательности нуклеиновой кислоты тяжелой цепи и последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи представлены в одном и том же векторе.
В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты экспрессируются в клетке, которая содержит одну или несколько нуклеиновых кислот из вируса. В конкретных вариантах осуществления, вирус выбирают из аденовируса, аденоассоциированного вируса, SV-40, вируса Эпштейна-Барра, ретровируса, лентивируса, бакуловируса, коронавируса, вируса простого герпеса, полиовируса, вируса лихорадки леса Семлики, вируса Sindbis и вируса вакцинии.
Клетки-хозяева представляют собой клетки, которые могут быть трансформированы для экспрессии представляющей интерес нуклеиновой кислоты. В различных вариантах осуществления трансформация включает изменение нуклеиново-кислотного состава клетки таким образом, чтобы она содержала экзогенные нуклеиновые кислоты (например, нуклеиновую кислоту, не присутствующую в клетке в природе, или одну или несколько дополнительных копий нуклеиновой кислоты, соответствующих последовательности нуклеиновой кислоты, представленной в клетке в природе). Нуклеиново-кислотный состав клетки можно изменять любыми подходящими способами, известными в данной области, например интегрированием нуклеиновой кислоты в клеточный геном или помещением ее в клетку во внехромосомной или внегеномной форме. В некоторых вариантах осуществления нуклеиново-кислотное содержимое клетки можно изменять таким образом, чтобы клетка временно экспрессировала представляющую интерес нуклеиновую кислоту, или нуклеиново-кислотное содержимое можно изменять таким образом, чтобы клетка стабильно экспрессировала представляющую интерес нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах осуществления изменение в генетическом содержимом клетки наследуется при делении клетки.
Выделение биспецифического антигенсвязывающего белка
После того как выбрали подходящий набор модификаций, основываясь на информации, предоставленной в настоящем документе, были предприняты попытки выделить биспецифический антигенсвязывающий белок, используя способы, известные в данной области. Обычно применяемые опубликованные способы не при всех условиях могут обеспечить хорошее разделение.
Lindhofer et al. сконструировал биспецифическое антитело с гетеродимерной тяжелой цепью, где одна тяжелая цепь связывает белок A (IgG мыши), а другая тяжелая цепь не связывает белок А (IgG крысы), и успешно отделил гетеродимерное биспецифическое антитело крыса/мышь из смеси квадром и димеров мышь/мышь крыса/крыса, используя ступенчатый градиент pH со значениями от нейтрального до pH 5,8 для элюции гетеродимера и затем ступенчатый градиент со значениями pH от 5,8 до 3,5 для элюции гомодимера мышь/мышь. (См. Lindhofer et al. (1995) Preferential species-restricted heavy/light chain pairing in rat/mouse quadromas: Implications for a single-step purification of bispecific antibodies. J. Immunol. 155(1):219-225.)
Подход Lindhofer не подходит при применении его для отделения гомодимера IgG1 из гетеродимера IgG1 с двумя тяжелыми цепями IgG1, которые являлись идентичными, за исключением того, что один из доменов CH3 IgG1 содержал дипептидную модификацию H435R/Y436F. Авторы изобретения обнаружили, что при линейном градиенте pH, IgG1 с модифицированным дипептидом элюировался при pH со значением приблизительно 3,9, тогда как гомодимер IgG1 элюировался при pH со значением приблизительно 3,7. Различие в значениях pH посчитали недостаточным для достижения хорошего отделения гетеродимера от гомодимера, используя способ Lindhofer. Предсказуемым образом различие не воспроизводилось.
Изменение в характере хроматографии наблюдали в процессе хроматографии, при использовании довольно значительной ионной силы, вносимой ионной силой буферного раствора для сохранения конкретного значения pH или градиента. Но успешного разделения не достигали добавлением органического модификатора (1-пропанол). Напротив, несколько неожиданным явилось то, что для некоторых хроматографических процессов добавление от 0,5 молярного до 1,0 молярного ионного модификатора (например, NaCl) радикально и непредвиденно увеличило разделение гомодимерного IgG1 и гетеродимерного IgG1. Добавление ионного модификатора расширило диапазон pH для элюции (1,2 единиц pH с ионным модификатором, но 0,2 единицы pH без ионного модификатора), таким образом, при ступенчатом градиенте pH возможно успешное разделение двух видов. В других хроматографических процессах, однако, успешного разделения достигли при концентрации NaCl всего приблизительно 150 мМ (см. пример 4). Для того чтобы убедиться, что можно достичь успешного разделения, в одном из вариантов осуществления выделение биспецифического антигенсвязывающего белка выполнили в присутствии ионного модификатора с молярностью от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,0.
Таким образом, в одном из вариантов осуществления способ разделения биспецифического антигенсвязывающего белка, содержащего гетеродимерный IgG с одной цепью, содержащей модификацию, как описано в настоящем документе, включает стадию использования градиента pH в присутствии ионного модификатора. В одном из вариантов осуществления ионный модификатор представлен в концентрации, достаточной для максимального увеличения в различии pH между элюцией с подложки с белком A гомодимера IgG и гетеродимера IgG, как описано в настоящем документе (т.е. с модификациями CH3). В конкретном варианте осуществления ионный модификатор представлен в молярной концентрации от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,0. В другом конкретном варианте осуществления ионный модификатор представлен в молярной концентрации от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,5.
В одном из вариантов осуществления ионный модификатор представляет собой соль. В одном из вариантов осуществления ионный модификатор представляет собой соль щелочного металла или щелочноземельного металла и галоген. В конкретном варианте осуществления соль представляет собой хлористую соль щелочного металла или щелочноземельного металла, например NaCl, KCl, LiCl, CaCl2, MgCl2. В конкретном варианте осуществления соль представлена в молярности приблизительно 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 или 1,0.
В одном из вариантов осуществления значение градиента pH составляет от приблизительно pH 3,9 до приблизительно pH 4,5, в другом варианте осуществления от приблизительно pH 4,0 до приблизительно pH 4,4 и в другом варианте осуществления от приблизительно pH 4,1 до приблизительно pH 4,3. В конкретном варианте осуществления градиент представляет собой линейный градиент.
В одном из вариантов осуществления градиент pH представляет собой ступенчатый градиент. В одном из вариантов осуществления способ включает применение для уравновешивания колонки с белком A (уравновешенной, например, PBS или другим подходящим буфером или жидкостью) значения pH приблизительно 3,9, значения pH приблизительно 4,0, значения pH приблизительно 4,1, значения pH приблизительно 4,2, значения pH приблизительно 4,3 или значения pH приблизительно 4,4. В конкретном варианте осуществления значение рН составляет приблизительно 4,2.
В одном из вариантов осуществления биспецифическое антитело, содержащее гетеродимерный IgG с доменом CH3, элюируется с подложки с белком А в одной или нескольких фракциях, по существу не содержащих негетеродимерный IgG. В конкретном варианте осуществления элюированные фракции биспецифического антитела содержат менее чем приблизительно 1%, 0,5% или 0,1% суммарного белка по массе, который представляет собой негетеродимерное антитело.
ПРИМЕРЫ
Следующие примеры используют для представления описания специалистам в данной области того, каким образом получить и использовать способы и композиции по изобретению, и не предназначены для ограничения объема того, что авторы изобретения рассматривают в качестве своего изобретения. Были предприняты усилия для обеспечения точности используемых значений (например, количества, температура и т.д.), но необходимо учитывать некоторые экспериментальные ошибки отклонения. Если не указано иначе, части представляют собой массовые части, молекулярная масса представляет собой среднюю молекулярную массу, температура представлена в градусах Цельсия, и давление представлено в значении, соответствующем атмосферному или около атмосферного.
Пример 1: Биспецифический антигенсвязывающий белок IL-4Ra/IL-6Ra
Выявлено, что два известных антитела изотипа IgG1 человека, одно против IL-4Ra, а другое против IL-6Ra, имели легкие цепи, которые отличались только четырьмя аминокислотами. Эксперимент по совместной экспрессии показал, что легкая цепь антитела против IL-4Ra могла быть замещена легкой цепью из IL-6Ra и все еще сохранять высокую связывающую способность к IL-4Ra, таким образом позволяя ему продуцировать биспецифическое антитело, используя тяжелую цепь антитела против IL-4Ra и тяжелую цепь антитела против IL-6Ra и одну и ту же легкую цепь. Таким образом, модифицировали тяжелую цепь антитела IL-6Ra для создания Fc∆Adp (т.е. дипептидную модификацию CH3 H95R/Y96F, по нумерации экзонов IMGT).
Легкую цепь антитела против IL-6Ra затем совместно экспрессировали в клетках CHO с тяжелыми цепями антитела против IL4Ra/Fc и против IL6Ra/Fc∆Adp и кондиционированную среду из эти клеток подвергли хроматографии с белком А. После загрузки колонки с белком А клеточным супернатантами, содержащими смесь гомо- и гетеродимеров, проводили элюцию со ступенчатым градиентом pH, получаемым различной комбинацией двух буферов (A: 100 мМ цитрата Na, 150 мМ NaCl, pH 6,0 и B: 100 мМ цитрата Na, 150 мМ NaCl, pH 3,0; см. фиг.4), получая, таким образом, три ступени при pH 6,0, pH 4,2 и pH 3,0 соответственно. На фиг.4, IL-4R обозначает против IL-4Ra, и IL-6RA обозначает против IL-6Ra(IgG1∆Adp). Указанные фракции с колонки исследовали на связывание с белками IL-6Ra и IL-4Ra (см. фиг.5). Выполняли ступенчатую элюцию, что приводило к появлению одного пика при элюции при значении pH равном 4,2, и второму пику при значении pH, равном 3,0 (фиг.4). Анализ BIACORE™ показал, что проточный материал мог связывать растворимый IL-6Ra, но не IL-4Ra, как и ожидалось (фиг.5). Фракции, соответствующие пику при значении pH, равному 4,2, могли связывать приблизительно равные количества IL-6Ra и IL-4Ra, что согласуется с наличием гетеродимеров. Фракции, соответствующие пику элюции при значении pH, равном 3,0, могли связывать только IL-4Ra, а не IL-6Ra, что согласуется с ожидаемым гомодимером против IL-4Ra. Это доказывает, что гетеродимерное биспецифическое антитело могло быть эффективно выделено с использованием хроматографии с белком А, с простым ступенчатым градиентом pH.
Пример 2: Фармакокинетика белков Fc∆Adp
Для тестирования того, оказала ли влияние модификация Fc∆Adp на фармакокинетику гетеродимерной молекулы, содержащей Fc/Fc∆Adp, мышам вводили очищенные гетеродимерные виды белков против IL-4Ra/против IL-6Ra, описанные выше, и концентрации иммуноглобулина человека в сыворотке измеряли в течение периода 28 суток (фиг.6; таблица 1). Время полужизни в сыворотке гетеродимера составляло приблизительно 10 суток, аналогично гетеродимеру дикого типа. Это доказывает, что модификации Fc∆Adp не оказывают видимого действия на время полужизни в сыворотке.
Таблица 1
Фармакокинетика (n=5)
Лекарственное средство Тестируемое время полужизни
(Дни)
(avg.±s.d.)
IL-6R∆/IL-4R 11,2±1,8
IL-6R∆/IL-6R∆ 10,8±1,9
IL-4R/IL-4R 10,8±1,9
Контроль 11,2±1,9
Пример 3: Биспецифический антигенсвязывающий белок CD20/CD3
Выявлено, что тяжелая цепь известного антитела против CD20 человека, будучи совместно экспрессированной с легкой цепью известного (активирующего) антитела против CD3 человека, все еще способна связывать CD20. Легкую цепь белка против CD3 затем подвергали совместной экспрессии или с тяжелой цепью белка против CD20/Fc, тяжелой цепью белка против CD3/Fc∆Adp, или обеими тяжелыми цепями. Полученную в результате смешанную популяцию гомо- и гетеродимеров затем использовали в биоанализе для определения способности к уничтожению клеток-мишеней, экспрессирующих CD20 (фиг.7). В кратком изложении, 2×107 PBMC клеток человека активировали 6×107 гранул CD3×CD28 (Invitrogen) в течение 72 часов. Тридцать единиц IL-2 (система R&D) затем добавляли и клетки инкубировали дополнительно в течение 24 часов. Клетки затем разделяли до концентрации 0,5×106/мл и добавляли дополнительные 30 Ед IL-2. Клетки затем инкубировали дополнительные 48 часов и использовали в биоанализе. В сутки биоанализа 2×106/мл клеток-мишеней, экспрессирующих CD20 (Raji) метили в течение 30 минут 8 мкМ кальцеина-AM (Invitrogen). Промытые клетки-мишени добавляли к активированным клеткам hPBMC в отношении 1:10 мишень:эффекторные клетки (общее количество клеток на лунку 220000) в 200 микролитрах суммарного объема с указанным количеством супернатанта, содержащего антитело. Клетки инкубировали в течение 2 часов и получали супернатант и количественно определяли флуоресценцию. Цитотоксичность измеряли, рассчитывая отношение специфической флуоресценции к максимальной флуоресценции. Ни отдельно антитело против CD20 (использующее легкую цепь белка против CD3), ни антитело против CD3 не смогли вызвать цитолиз клеток-мишеней; даже смешивание двух реагентов не оказало действия. Однако в случае если все три компонента подвергались совместной экспрессии, наблюдали значительный цитолиз, что показывает, что эффект был вызван наличием гетеродимерных биспецифических видов. Основываясь на расчетном количестве биспецифического антитела в супернатанте временно трансфицированных клеток CHO, EC50 для цитолиза определили приблизительно равной 15 пМ.
Пример 4: Специфичность клеточного цитолиза у очищенного биспецифического антигенсвязывающего белка CD20/CD3
Супернатанты клеток CHO из эксперимента по трансфекции, который описаны в примере 3, подвергали аффинной хроматографии с белком А, используя ступенчатый градиент для элюции. Ступенчатый градиент получали посредством изменения комбинаций двух буферов (A: 20 мМ цитрата Na, 1M NaCl, pH 5,2; B: 20 мМ Na цитрат, 1M NaCl, pH 2,7). Таким образом, чтобы получить три ступени при значениях pH, равных 5,2, pH 4,2 и pH 2,8 соответственно. Белок, соответствующий пику элюции при pH 4,2 затем использовали в анализе цитолиза, как описано в примере 3. Цитолиз мишени наблюдали при EC50, равной 3 пМ (фиг.8). Дополнительный анализ цитотоксичности проводили для исследования специфичности наблюдаемого цитолиза к мишени. В этом эксперименте меченые клетки-мишени, экспрессирующие CD20 (Raji) или не экспрессирующие CD20 (293), инкубировали с активированными PBMC человека. Каждый тип клетки-мишени добавляли для анализа или отдельно или в комбинации с немеченными клетками-мишенями другого типа. Во всех случаях клетки-мишени, экспрессирующие CD20, подвергались специфичному цитолизу при EC50, равной 3 pM, тогда как клеточная линия, не экспрессирующая CD20, не подвергалась цитолизу.
Пример 5: Разделение с белком А селективно модифицированного hIgG2 Fc
Селективно модифицированный гетеродимерный IgG2 человека Fc/∆AdpFc и немодифицированный гомодимерный IgG2 человека Fc/Fc впервые получены способом “связывания и промывки” через колонку с белком A (rProtein A FF, GE). Для дополнительного отделения hIgG2 Fc/∆AdpFc из hIgG2 Fc/Fc, проводили элюцию посредством ступенчатого градиента, используя систему SMART™ (GE), как указано далее. Система растворов состояла из раствора A (PBS, 1X), раствора B (20 мМ цитрата натрия и 1M NaCl, pH 5,5) и раствора C (20 мМ цитрата натрия и 1M NaCl, pH 2,5). Элюцию начали с изократического элюирования с 100% A в первые 20 мин с последующим мгновенным переключением до 100% B в 20 мин. Затем начинали линейный градиент до 33,5% C и 66,5% B в течение следующих 10 мин; концентрацию 33,5% раствора C сохраняли в течение 20 мин до полной элюции первого пика (Fc/∆AdpFc). Линейный градиент от 33,5% C до 100% C следовал в течение следующих 30 мин. Скорость потока поддерживали на уровне 250 микролитров/мин и результаты хроматограммы детектировали при 280 нм детектором UV. hIgG2 Fc/∆AdpFc элюировался при pH 4,5, тогда как hIgG2 элюировался при pH 3,5.
Пример 6: Разделение с белком А селективно модифицированного hIgG4 Fc
Селективно модифицированный гетеродимерный IgG4 человека (Fc/∆AdpFc) и немодифицированный гомодимерный IgG4 (Fc/Fc) впервые получены способом “связывания и промывки” через колонку с белком A (rProtein A FF, GE). Для дополнительного отделения hIgG4 Fc/∆AdpFc из hIgG4 Fc/Fc, проводили элюцию посредством ступенчатого градиента, используя систему SMART™ (GE), как указано далее. Система растворов состояла из раствора A (PBS, 1X), раствора B (20 мМ цитрата натрия и 1M NaCl, pH 5,1) и раствора C (20 мМ цитрата натрия и 1M NaCl, pH 2,8). Элюцию начали с изократического элюирования с 100% A в первые 20 мин с последующим мгновенным переключением до 100% B в 20 мин. Затем начинали линейный градиент до 50% C и 50% B в течение следующих 10 мин; концентрацию 50% раствора C сохраняли в течение 20 мин вплоть до полной элюции первого пика (Fc/∆AdpFc). Линейный градиент от 50% C до 100% C следовал в течение следующих 30 мин. Скорость потока поддерживали на уровне 250 микролитров/мин и результаты хроматограмм детектировали при 280 нм посредством детектора UV. hIgG4 Fc/∆dpFc элюировался при pH приблизительно 4, тогда как гомодимер элюировался в течение градиента рН от приблизительно 4 до pH 2,8.
Пример 7: Разделение с белком А селективно модифицированного hIgG1 CD3xCD20
Селективно модифицированный гетеродимерный IgG1 против hCD3xCD20 (Fc/∆AdpFc) и немодифицированный гомодимерный белок против hCD20 разделяли на колонке в 1 мл rProtein AFF (GE Biosciences), как указано далее. Система растворов представляла собой буфер A1 (PBS 1X), буфер A2 (20 мМ цитрата натрия и 1M NaCl pH 5,1), буфер B (20 мМ цитрата натрия и 1M NaCl pH 2,8). Смешанный образец подвергали связыванию и промывали в PBS и буфере A2. Ступенчатый градиент использовали для получения pH 4,2, при котором элюировался биспецифический CD3*×CD20 IgG1 (Fc/∆AdpFc), затем использовали линейный градиент pH 4,2-2,8, при котором элюировался гомодимерный IgG1 против hCD20.
Пример 8: Аффинность связывания модифицированных CH3 с рецепторами Fc
Аффинность связывания биспецифического антитела изотипа IgG1 человека с модификацией ∆Adp (H435R и Y436F, нумерация EU) с различными рецепторами Fc человека тестировали в анализе стационарного равновесия связывания Biacore™.
В кратком изложении, чип на основе карбоксиметилированного декстрана (CM5) со связанным с амином mAb против penta-his (Qiagen) использовали для связывания различных конструктов рецепторов Fc человека. Далее с поверхностями различных покрытых белками против penta-his чипов CM5 связывали эктодомены рецептора Fc, меченые his: FcγRI, FcγRIIA(полиморф R131), FcγRIIB и FcγRIIIB (каждый из которых получен R&D Systems); и RcγRIIA(полиморф H131), FcγRIIIA(полиморф V176) и RcγRIIIA(полиморф F176) (каждый получен от Regeneron). Антитела пропускали через поверхность из расчета трех концентраций для высокоаффинного эктодомена рецептора FcγR1 (25 нМ, 50 нМ и 100 нМ) и из расчета между микромолярностью 5 до наномолярности 39 для низкоаффинных эктодоменов рецептора FcγR, и определяли значение констант скорости ассоциации и диссоциации (ka и kd), и использовали их для расчета равновесной константы диссоциации антител (KDs). Исследования связывания проводили при комнатной температуре, используя буфер HBS-T pH 7,2. Определили Kds для контрольного антитела (hmAb), антитела против CD20 и антитела против модификации CD3∆dp и биспецифического антитела CD20xCD3∆dp. Значения KD для антитела против CD3∆dp не показало значимых различий в связывании с любым из тестируемых рецепторов Fc, по сравнению с немодифицированным изотипом антител hIgG1 (таблица 2).
Таблица 2
KD (нМ) для связывания hIgG Ab к эктодоменам hFcγR
hFcR Гомодимер IgG1 человека IgG1 ∆Adp человека
  hmAb CD20-hFc Гомодимер CD3-hFc ∆Adp Биспецифический гетеродимер
CD20xCD3 ∆Adp
FcγR1 5,00 4,27 3,17 3,61
FCγRIIA(R131) 1460 739 588 328
FcγRIIA(H131) 915 458 451 222
FcγRIIB 3400 1850 1360 794
FCγRIIIA(V176) 810 430 218 248
FcγRIIIA(F176) 2500 533 407 267
FcγRIIIB 3700 1170 906 520
Пример 9: Фармакокинетика биспецифического hIgG1∆Adp у мышей hFcRn
Фармакокинетическую скорость выведения биспецифического антитела IgG1∆Adp против hCD3/hCD20 и его контролей, связанных с антителом (IgG против hCD3 и гомодимер IgG∆Adp против hCD3), определяли у мышей дикого типа (WT) и мышей, гомозиготных по замене FcRn мыши геном hFcRn (мышь hFcRn). Мыши дикого типа и мыши hFcRn представляли собой гибридные линии с исходной, содержащей C57BL6 (75%) и 129Sv (25%). Группы содержали по 4 мыши или WT или hFcRn, за исключением случая с одной группой мышей WT, получившей изотипически сходное контрольное антитело IgG1, в которой группа содержала 3 мыши. Мыши получили 1 мг/кг изотипически сходного (hIgG1) контрольного антитела, биспецифического IgG1∆Adp против hCD3xCD20, IgG1 против hCD3 или гомодимера IgG1∆Adp против hCD3. Все тестируемые компоненты вводили подкожно. Кровь собирали в 0 ч, 6 ч, 1 сут, 2 сут, 3 сут, 4 сут, 7 сут, 10 сут, 14 сут, 21 сут и 30 сут.
Уровни антител человека в сыворотке определяли “сэндвич” способом ELISA. В кратком изложении, поликлональным антителом козы против IgG человека (Fc-специфичное) (Jackson ImmunoResearch) покрыли 96-луночные планшеты из расчета концентрации один микрограмм/мл и инкубировали в течение ночи при 4°C. Затем планшеты блокировали БСА, образцы сыворотки в 6 кратных серийных разведениях и стандартные образцы соответствующих антител в 12-кратных серийных разведениях добавляли к планшету и инкубировали в течение одного часа при комнатной температуре. После промывания для удаления несвязавшегося антитела, детектировали связанные антитела человека, используя то же поликлональное антитело козы против IgG человека (Fc-специфичное), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) (Jackson ImmunoResearch), и выявляли посредством стандартного колориметрического тетраметилбензидинового субстрата (TMB) согласно рекомендациям производителя. Оптическую плотность при 450 нм регестрировали на спектрофотометре для чтения планшетов и рассчитывали концентрацию hIgG в образцах сыворотки, используя контрольную кривую, которую получали на той же плашке.
Не наблюдали значимого различия во времени полужизни в сыворотке четырех тестируемых антител IgG1 в течение периода в 30 суток. В частности, не наблюдали значимого различия между антителами IgG1, имеющими модификацию ∆Adp, и антителами IgG1 дикого типа. Не наблюдали различия среди антител мышей дикого типа (mFcRn) или мышей, имеющих гуманизированное антитело FcRn (hFcRn). Как и ожидалось, у мышей hFcRn наблюдали немного ускоренный клиренс, по сравнению с мышами дикого типа. Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3
Оценка среднего параметра PK после подкожной инъекции мышам
Генотип мыши Антитело n Cmax
(мкг/мл)		 AUC
((час)(мкг/мл))
mFcRn CD3×CD20 4 9,0±2,3 114,3+30,6
CD3 4 11,1±1,7 175,4±56,4
CD3∆Adp∆Adp 4 11,7±1,8 155,3±34,02
Контрольный hIgG 3 15,1±3,01 162,5±27,02
hFcRn CD3×CD20 4 12,3±0,98 83,2±18,6
CD3 4 7,7±2,2 65,2±16,5
CD3∆Adp∆Adp 4 9,9±1,34 70,4±15,4
Контрольный hIgG 4 16,1±2,7 131,3±20,4
Пример 10: Крупномасштабное выделение в буфере с низким содержанием соли
Биспецифическое антитело CD3xCD20∆Adp выделяли по изобретению из крупномасштабной культуры. В кратком изложении, клеточную линию CHO-K1, экспрессирующую биспецифическое антитело против hCD3×CD20∆Adp (модификация в тяжелой цепи CD3), культивировали в 11-литровом биореакторе. Клетки, несущие биспецифическое антитело, вырастали до плотности приблизительно 8,25×106 клеток/мл, выход приблизительно 250-350 мг антитела/л. В отличие от этого выход контрольного антитела против hCD3 составил приблизительно 100-150 мг/л.
Антитело выделяли на смоле MabSelect SuRe™ (GE) (толщина слоя 20 см, 1 см ID), уравновешенной 10 мМ фосфата натрия, 0,5M NaCl, pH 7,2, осветленную клеточную культуру наносили до 19 г/л и колонку промывали 10 мМ фосфата натрия, 0,5 M NaCl, pH 7,2, из расчета 3 объемов колонки, с последующим промыванием 20 мМ фосфата натрия, pH 7,2 (без NaCl) из расчета 2 объемов колонки. Антитело элюировали 40 мМ ацетата, pH 3,0.
Моноспецифическое антитело против CD30 элюировалось при pH 3,6, тогда как биспецифическое антитело hCD3xCD20DAdp элюировалось при pH 4,4.
Пример 11: Избирательная элюция гетеродимеров мыши в среднем диапазоне значений pH с колонки с белком A
Клетки CHO-K1 временно трансфицировали экспрессирующими конструкциями внеклеточного домена IFNAR1 человека (hIFNAR1) и IFNAR2 человека (hIFNAR2), слитого с последовательностью дикого типа или мутантной последовательностью (TTTK или PTTK) mIgG2a Fc. Отношение между hIFNAR1-mFc и hIFNAR2-mFc поддерживали из расчета 1:1 посредством трансфицирования клеток равными количествами двух экспрессионных плазмид. Среду для культивирования собирали через 4 суток после трансфекции и подвергали очистке с белком A, используя центрифужные колонки объемом 0,2 мл NAb Protein A Plus™ (Thermo Scientific/Pierce). В кратком изложении, колонки уравновешивали 1×PBS, pH 7,2. Один мл среды для культивирования CHO-K1 инкубировали со смолой с белком А в течение 10 минут при комнатной температуре. Колонку затем промывали три раза 1×PBS, pH 7,2. Связанные белки элюировали буфером с 20 мМ цитрата натрия, содержащим 1 M NaCl. Проводили три элюции, используя 0,4 мл элюирующего буфера с понижающими значениями pH. Белки в различных фракциях определяли посредством анализа вестерн-блоттинг.
Результаты показали, что при элюции с градиентом рН возможно отделение гетеродимеров дикого типа и звездчатого мутанта mIgG2a от гомодимеров дикого типа mIgG2a (см. фракцию E1 на обоих гелях фиг.9).
Пример 12: Преимущественное образование гетеродимеров мутантов mIgG2a над гетеродимерами изотипов
Конструировали ДНК плазмиды для экспрессии в млекопитающих внеклеточных доменов рецепторов интерферона I типа (hIFNAR1 и hIFNAR2) с C-концевым Fc мыши (mIgG2a или mIgG1). Мутации в последовательности mIgG2a вводили, используя сайт-специфический мутагенез. Мутанты представляли собой TTT = M252T, S254T, S256T; TTTK = M252T, S254T, S256T, I258K; PTTTK = I247P, M252T, S254T, S256T, I258K; RF = H435R, H436F. Клетки CHO-K1 временно трансфицировали экспрессирующими конструкциями. Отношение между IFNAR1-mFc и IFNAR2-mFc поддерживали из расчета 4:1 посредством трансфекции клеток 4-кратным избытком экспрессирующей плазмиды hIFNAR1-mFc (hIFNAR1-mIgG2a) по сравнению с hIFNAR2-mFc (mIgG1 или мутантный mIgG2a). Среду для культивирования собирали через 4 суток после трансфекции и белки mFc детектировали анализом вестерн-блоттинг.
Результат показал, что образование гетеродимеров между mIgG2a и mIgG1 намного менее эффективно, чем образование гетеродимеров между mIgG2a дикого типа и мутантами mIgG2a (сравни дорожки 1, 2, 5 фиг.10). Отношение 4:1 конструкт IFNAR1:IFNAR2 использовали для поддержания избытка конструкта IgG2a дикого типа в эксперименте.

Claims (9)

1. Биспецифический антигенсвязывающий белок, который является гетеродимерным в отношении связывания белка А, содержащий:
a. первый полипептид, содержащий от N-конца до C-конца первую область связывания эпитопа, которая селективно связывает первый эпитоп, константную область иммуноглобулина, которая содержит первую область CH3 IgG человека, выбранную из IgG1, IgG2 и IgG4, где первая область СН3 связывается с белком А; и
b. второй полипептид, содержащий от N-конца до C-конца вторую область связывания эпитопа, которая селективно связывает второй эпитоп, константную область иммуноглобулина, которая содержит вторую область CH3 IgG человека, выбранного из IgG1, IgG2 и IgG4, где вторая область CH3 содержит модификацию, которая снижает или предотвращает связывание второго домена CH3 с белком A.
2. Биспецифический белок по п.1, где первый полипептид и второй полипептид представляют собой тяжелые цепи IgG человека.
3. Биспецифический белок по п.1, дополнительно содержащий легкую цепь иммуноглобулина.
4. Биспецифический белок по п.3, где легкая цепь иммуноглобулина представляет собой легкую цепь иммуноглобулина человека.
5. Биспецифический белок по п.1, где первый и второй полипептиды каждый представляют собой тяжелые цепи IgG1 человека.
6. Биспецифический белок по п.1, где модификация выбрана из группы, состоящей из (a) 95R и (b) 95R и 96F в нумерации экзонов IMGT, или (a') 435R и (b') 435R и 436F в нумерации системы EU.
7. Биспецифический белок по п.6, дополнительно содержащий от одной до пяти модификаций, выбранных из группы, состоящей из 16E, 18M, 44S, 52N, 57M и 82I в системе нумерации экзонов IMGT или 356E, 358M, 384S, 392N, 397M и 422I в системе нумерации EU.
8. Биспецифический белок по п.6, где домен CH3 биспецифического антитела является неиммуногенным или по существу неиммуногенным для человека.
9. Биспецифический белок по п.7, где домен CH3 биспецифического антитела является неиммуногенным или по существу неиммуногенным для человека.
RU2012102602/10A 2009-06-26 2010-06-25 Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом RU2522002C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US22068709P 2009-06-26 2009-06-26
US61/220,687 2009-06-26
PCT/US2010/040028 WO2010151792A1 (en) 2009-06-26 2010-06-25 Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014114172/10A Division RU2569157C2 (ru) 2009-06-26 2014-04-10 Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012102602A RU2012102602A (ru) 2013-08-10
RU2522002C2 true RU2522002C2 (ru) 2014-07-10

Family

ID=42738900

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012102602/10A RU2522002C2 (ru) 2009-06-26 2010-06-25 Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом
RU2014114172/10A RU2569157C2 (ru) 2009-06-26 2014-04-10 Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом
RU2015140911A RU2647758C2 (ru) 2009-06-26 2015-09-25 Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014114172/10A RU2569157C2 (ru) 2009-06-26 2014-04-10 Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом
RU2015140911A RU2647758C2 (ru) 2009-06-26 2015-09-25 Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом

Country Status (24)

Country Link
US (6) US8586713B2 (ru)
EP (3) EP2975051B1 (ru)
JP (6) JP5816170B2 (ru)
KR (5) KR101835648B1 (ru)
CN (2) CN102471378B (ru)
AU (2) AU2010265933B2 (ru)
CA (1) CA2766220C (ru)
CY (1) CY1124358T1 (ru)
DK (1) DK2975051T3 (ru)
ES (1) ES2865648T3 (ru)
HR (1) HRP20210637T1 (ru)
HU (1) HUE054257T2 (ru)
IL (2) IL217000A0 (ru)
LT (1) LT2975051T (ru)
MX (5) MX384993B (ru)
MY (4) MY199658A (ru)
PL (1) PL2975051T3 (ru)
PT (1) PT2975051T (ru)
RU (3) RU2522002C2 (ru)
SG (1) SG176868A1 (ru)
SI (1) SI2975051T1 (ru)
SM (1) SMT202100250T1 (ru)
TW (1) TWI507525B (ru)
WO (1) WO2010151792A1 (ru)

Families Citing this family (591)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
CA2872136C (en) 2002-07-18 2017-06-20 Merus B.V. Recombinant production of mixtures of antibodies
USRE47770E1 (en) 2002-07-18 2019-12-17 Merus N.V. Recombinant production of mixtures of antibodies
US20100069614A1 (en) 2008-06-27 2010-03-18 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
EP1639009B1 (en) 2003-05-30 2013-02-27 Merus B.V. Fab library for the preparation of a mixture of antibodies
CA2603408C (en) 2005-03-31 2018-08-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
AU2006236439B2 (en) 2005-04-15 2012-05-03 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US11254748B2 (en) 2005-04-15 2022-02-22 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
EP4001409A1 (en) 2006-03-31 2022-05-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
CN105177091A (zh) 2006-03-31 2015-12-23 中外制药株式会社 用于纯化双特异性抗体的抗体修饰方法
CA2978687C (en) 2007-09-26 2020-02-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant region
US9096651B2 (en) 2007-09-26 2015-08-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in CDR
LT2708559T (lt) 2008-04-11 2018-06-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigeną surišanti molekulė, galinti pakartotinai prisijungti prie dviejų ar daugiau antigeno molekulių
WO2010107109A1 (ja) 2009-03-19 2010-09-23 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
EP2409991B1 (en) 2009-03-19 2017-05-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
MY199658A (en) 2009-06-26 2023-11-14 Regeneron Pharma Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format
BR112012004697B8 (pt) * 2009-09-01 2021-05-25 Genentech Inc método para purificar um polipeptídeo compreendendo uma região ch2/ch3
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
US10150808B2 (en) 2009-09-24 2018-12-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant regions
KR101856792B1 (ko) * 2009-12-25 2018-05-11 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 폴리펩티드 다량체를 정제하기 위한 폴리펩티드의 개변방법
US9796788B2 (en) 2010-02-08 2017-10-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice expressing a limited immunoglobulin light chain repertoire
US20120021409A1 (en) 2010-02-08 2012-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
US20130045492A1 (en) 2010-02-08 2013-02-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods For Making Fully Human Bispecific Antibodies Using A Common Light Chain
RS54367B2 (sr) * 2010-02-08 2021-08-31 Regeneron Pharma Miš sa zajedničkim lakim lancem
WO2011108714A1 (ja) 2010-03-04 2011-09-09 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
BR112012026766B1 (pt) * 2010-04-20 2021-11-03 Genmab A/S Métodos in vitro para gerar um anticorpo igg heterodimérico, para a seleção de um anticorpo biespecífico, vetor de expressão, anticorpo igg heterodimérico, composição farmacêutica, e, uso de um anticorpo igg heterodimérico
JO3340B1 (ar) 2010-05-26 2019-03-13 Regeneron Pharma مضادات حيوية لـعامل تمايز النمو 8 البشري
EP2598530A2 (en) 2010-07-29 2013-06-05 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
MX339622B (es) 2010-08-02 2016-06-02 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y sus usos.
RU2612903C2 (ru) 2010-08-02 2017-03-13 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Мыши, у которых вырабатываются связывающие белки, содержащие vl-домены
ES2758994T3 (es) 2010-11-05 2020-05-07 Zymeworks Inc Diseño anticuerpo heterodimérico estable con mutaciones en el dominio Fc
ES2660151T3 (es) 2010-11-17 2018-03-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Molécula de unión a antígeno multiespecífica que tiene función alternativa a la función del factor VIII de coagulación sanguínea
JO3756B1 (ar) 2010-11-23 2021-01-31 Regeneron Pharma اجسام مضادة بشرية لمستقبلات الجلوكاجون
SG190727A1 (en) 2010-11-30 2013-07-31 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly
AU2011337697B2 (en) 2010-11-30 2016-10-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cytotoxicity-inducing therapeutic agent
WO2012132067A1 (ja) * 2011-03-30 2012-10-04 中外製薬株式会社 抗原結合分子の血漿中滞留性と免疫原性を改変する方法
SG192945A1 (en) 2011-02-25 2013-09-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fcgriib-specific fc antibody
TWI743461B (zh) 2011-03-28 2021-10-21 法商賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
KR102030531B1 (ko) 2011-05-21 2019-10-10 마크로제닉스, 인크. 탈면역화된 혈청-결합 도메인 및 혈청 반감기를 연장하기 위한 그것의 용도
EP4011913A1 (en) * 2011-06-30 2022-06-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Heterodimerized polypeptide
UA117901C2 (uk) 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
JP6510234B2 (ja) 2011-08-05 2019-05-08 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． ヒト化ユニバーサル軽鎖マウス
CA2791109C (en) 2011-09-26 2021-02-16 Merus B.V. Generation of binding molecules
EP3939996A1 (en) 2011-09-30 2022-01-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
RU2743589C2 (ru) * 2011-10-17 2021-02-20 Регенерон Фармасьютикалс, Инк. Мыши с ограниченной тяжелой цепью иммуноглобулина
ES2739808T3 (es) 2011-10-27 2020-02-04 Genmab As Producción de proteínas heterodiméricas
MX359775B (es) 2011-10-31 2018-10-10 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula enlazada al antigeno que tiene conjugacion regulada entre cadena ligera y cadena pesada.
HUE056462T2 (hu) 2011-11-04 2022-02-28 Zymeworks Inc Stabil heterodimer antestest tervezés mutációkkal az FC domainben
WO2013074557A1 (en) 2011-11-14 2013-05-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for increasing muscle mass and muscle strength by specifically antagonizing gdf8 and/or activin a
MX362286B (es) 2011-11-18 2019-01-10 Regeneron Pharma Microparticulas de polimero y proteina.
EP3517550A1 (en) 2011-11-30 2019-07-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Drug containing carrier into cell for forming immune complex
SI2794905T1 (sl) 2011-12-20 2020-08-31 Medimmune, Llc Modificirani polipeptidi za ogrodja bispecifičnega protitelesa
EP2813568B1 (en) 2012-02-09 2025-04-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified fc region of antibody
HK1200463A1 (en) 2012-03-02 2015-08-07 瑞泽恩制药公司 Human antibodies to clostridium difficile toxins
SG11201405088QA (en) 2012-03-06 2014-11-27 Regeneron Pharma Common light chain mouse
JP6273219B2 (ja) 2012-03-13 2018-01-31 ノビミューン エスアー 天然の免疫グロブリン形式を有する容易に単離される二重特異性抗体
CN107361011B (zh) 2012-03-16 2021-08-27 瑞泽恩制药公司 制备表达ph敏感性免疫球蛋白序列的非人动物的方法
PL2883449T3 (pl) 2012-03-16 2018-07-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Przekształcone histydyną łańcuchy lekkie przeciwciał i genetycznie zmodyfikowane gryzonie do wytwarzania tych przeciwciał
US20140013456A1 (en) 2012-03-16 2014-01-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Histidine Engineered Light Chain Antibodies and Genetically Modified Non-Human Animals for Generating the Same
RU2014141536A (ru) 2012-03-16 2016-05-10 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Мыши, которые продуцируют антигенсвязывающие белки с зависимыми от величины ph характеристиками связывания
GB2502127A (en) 2012-05-17 2013-11-20 Kymab Ltd Multivalent antibodies and in vivo methods for their production
KR102269650B1 (ko) 2012-04-20 2021-06-28 메뤼스 엔.페. Ig-유사 분자의 제조방법 및 제조수단
US20150065690A1 (en) 2012-04-27 2015-03-05 Bioatla, Llc Modified antibody regions and uses thereof
KR102266274B1 (ko) 2012-06-12 2021-06-17 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 제한된 면역글로불린 중쇄 유전자좌를 가지는 인간화된 비-인간 동물
US11142563B2 (en) 2012-06-14 2021-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule containing modified Fc region
WO2014004586A1 (en) 2012-06-25 2014-01-03 Zymeworks Inc. Process and methods for efficient manufacturing of highly pure asymmetric antibodies in mammalian cells
SG11201408646VA (en) 2012-07-06 2015-01-29 Genmab Bv Dimeric protein with triple mutations
EP3632462A1 (en) 2012-07-06 2020-04-08 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
US20150203591A1 (en) 2012-08-02 2015-07-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mutivalent antigen-binding proteins
JO3462B1 (ar) 2012-08-22 2020-07-05 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية تجاه gfr?3 وطرق لاستخدامها
AU2013306700B2 (en) 2012-08-24 2019-05-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha FcgammaRIIb-specific Fc region variant
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
AU2013322710A1 (en) 2012-09-25 2015-04-16 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Purification of hetero-dimeric immunoglobulins
US10358492B2 (en) * 2012-09-27 2019-07-23 Merus N.V. Bispecific IgG antibodies as T cell engagers
WO2014054804A1 (ja) 2012-10-05 2014-04-10 協和発酵キリン株式会社 ヘテロダイマータンパク質組成物
EP2914634B1 (en) 2012-11-02 2017-12-06 Zymeworks Inc. Crystal structures of heterodimeric fc domains
WO2014069647A1 (ja) 2012-11-05 2014-05-08 全薬工業株式会社 抗体又は抗体組成物の製造方法
TWI745610B (zh) * 2012-11-14 2021-11-11 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
CN120173124A (zh) 2012-11-28 2025-06-20 酵活英属哥伦比亚有限公司 工程化免疫球蛋白重链-轻链对及其用途
US9914785B2 (en) 2012-11-28 2018-03-13 Zymeworks Inc. Engineered immunoglobulin heavy chain-light chain pairs and uses thereof
DK2940135T5 (da) 2012-12-27 2021-09-20 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Heterodimeriseret polypeptid
BR112015016561B1 (pt) 2013-01-10 2023-01-10 Genmab B.V. Método para aumentar a citotoxicidade dependente de complemento
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
WO2014110601A1 (en) 2013-01-14 2014-07-17 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US9738722B2 (en) 2013-01-15 2017-08-22 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
TWI635098B (zh) 2013-02-01 2018-09-11 再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
DK2840892T3 (en) 2013-02-20 2018-07-23 Regeneron Pharma Non-human animals with modified heavy chain immunoglobulin sequences
US9487587B2 (en) 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
MX2015012540A (es) 2013-03-13 2016-04-19 Regeneron Pharma Ratón de cadena ligera común.
RS58669B1 (sr) 2013-03-13 2019-06-28 Regeneron Pharma Miševi koji eksprimiraju ograničeni repertoar lakog lanca imunoglobulina
MX383596B (es) 2013-03-14 2025-03-14 Macrogenics Inc Moleculas biespecificas que son inmunorreactivas con celulas efectoras inmunes que expresan un receptor activador y un antigeno expresado por una celula infectada por un virus y usos de las mismas.
CA2904644C (en) 2013-03-14 2022-09-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to grem1
US10472389B2 (en) * 2013-03-14 2019-11-12 Emd Millipore Corporation Methods of increasing protein purity using protein A based chromatography
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
CA2906927C (en) 2013-03-15 2021-07-13 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
KR102049990B1 (ko) 2013-03-28 2019-12-03 삼성전자주식회사 c-Met 항체 및 VEGF 결합 단편이 연결된 융합 단백질
US11267868B2 (en) 2013-04-02 2022-03-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Fc region variant
US11357866B2 (en) * 2013-04-03 2022-06-14 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Expression of HIV inhibitors by mesenchymal stem cells
CA2904806C (en) 2013-04-29 2021-11-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use
CN105164157B (zh) * 2013-04-29 2024-05-28 豪夫迈·罗氏有限公司 Fc-受体结合的修饰的非对称抗体及使用方法
TW201920262A (zh) 2013-07-30 2019-06-01 美商再生元醫藥公司 抗活化素ａ之抗體及其用途
UA116479C2 (uk) 2013-08-09 2018-03-26 Макродженікс, Інк. БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ Fc-ДІАТІЛО, ЯКЕ ОДНОЧАСНО ЗВ'ЯЗУЄ CD32B I CD79b, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
US11384149B2 (en) 2013-08-09 2022-07-12 Macrogenics, Inc. Bi-specific monovalent Fc diabodies that are capable of binding CD32B and CD79b and uses thereof
EP2839842A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
EP2840091A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
WO2015033223A2 (en) * 2013-09-03 2015-03-12 Novimmune S.A. Readily isolated bispecific binding molecules with native format having mutated constant regions
CN104418947A (zh) * 2013-09-11 2015-03-18 香港大学 抗her2和抗-igf-ir的双特异性抗体及其用途
KR20200103882A (ko) 2013-09-18 2020-09-02 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 히스티딘 엔지니어링된 경쇄 항체 및 그것을 생성하기 위한 유전자 변형된 비-인간 동물
CA2925256C (en) * 2013-09-27 2023-08-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
SG11201603244VA (en) 2013-11-04 2016-05-30 Glenmark Pharmaceuticals Sa Production of t cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins
US10155811B2 (en) 2013-11-20 2018-12-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. APLNR modulators and uses thereof
WO2015077891A1 (en) 2013-11-27 2015-06-04 Zymeworks Inc. Bispecific antigen-binding constructs targeting her2
JP6449295B2 (ja) 2013-12-17 2019-01-09 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ３抗体および使用方法
JP2017029001A (ja) * 2013-12-19 2017-02-09 国立研究開発法人産業技術総合研究所 プロテインｇの細胞膜外ドメインの新規な改変型タンパク質
CN105899534B (zh) 2014-01-15 2020-01-07 豪夫迈·罗氏有限公司 具有修饰的FCRN和保持的蛋白A结合性质的Fc区变体
CA2932364A1 (en) 2014-01-15 2015-07-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with improved protein a-binding
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
EP3107565A4 (en) * 2014-02-21 2017-08-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods, compositions and kits for cell specific modulation of target antigens
EP3110849B9 (en) 2014-02-28 2021-04-07 Merus N.V. Antibody that binds erbb-2 and erbb-3
EP3110846B1 (en) 2014-02-28 2020-08-19 Merus N.V. Antibodies that bind egfr and erbb3
TWI754319B (zh) 2014-03-19 2022-02-01 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
CN106255410B (zh) 2014-03-21 2020-01-10 瑞泽恩制药公司 产生单结构域结合蛋白的非人动物
JP2017510273A (ja) 2014-03-21 2017-04-13 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 異なる結合特性を示すｖｌ抗原結合タンパク質
PL3122781T3 (pl) 2014-03-28 2020-06-15 Xencor, Inc. Dwuswoiste przeciwciała, które wiążą się z CD38 i CD3
SG11201607434WA (en) 2014-04-07 2016-10-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Immunoactivating antigen-binding molecule
KR20170017916A (ko) * 2014-05-13 2017-02-15 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 면역 억제 기능을 갖는 세포에 대한 t 세포 리다이렉트 항원 결합 분자
JO3701B1 (ar) 2014-05-23 2021-01-31 Regeneron Pharma مضادات حيوية بشرية لمتلازمة الشرق الأوسط التنفسية - بروتين كورونا فيروس الشوكي
CA2946503C (en) 2014-05-28 2022-11-22 Zymeworks Inc. Modified antigen binding polypeptide constructs and uses thereof
PL3148579T3 (pl) 2014-05-28 2021-07-19 Agenus Inc. Przeciwciała anty-gitr i sposoby ich zastosowania
SG10201913324PA (en) 2014-05-29 2020-03-30 Macrogenics Inc Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
AR101262A1 (es) * 2014-07-26 2016-12-07 Regeneron Pharma Plataforma de purificación para anticuerpos biespecíficos
WO2016019969A1 (en) 2014-08-08 2016-02-11 Ludwig-Maximilians-Universität München Subcutaneously administered bispecific antibodies for use in the treatment of cancer
JP6886398B2 (ja) 2014-09-12 2021-06-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ａｎｔｉ−ｃｌｌ−１抗体及び免疫複合体
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
JP6932639B2 (ja) 2014-09-29 2021-09-08 デューク ユニバーシティ Ｈｉｖ‐１エンベロープ標的化アームを備える二重特異性分子
US11773166B2 (en) 2014-11-04 2023-10-03 Ichnos Sciences SA CD3/CD38 T cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins and methods of their production
MA40894A (fr) * 2014-11-04 2017-09-12 Glenmark Pharmaceuticals Sa Immunoglobulines hétéro-dimères reciblant des lymphocytes t cd3/cd38 et leurs procédés de production
KR20170076697A (ko) * 2014-11-06 2017-07-04 에프. 호프만-라 로슈 아게 개질된 FCRN-결합 특성 및 단백질 A-결합 특성을 가진 Fc-영역 변이체
RU2714116C2 (ru) * 2014-11-06 2020-02-11 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ С МОДИФИЦИРОВАННЫМ СВЯЗЫВАНИЕМ FcRn И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
US11566082B2 (en) 2014-11-17 2023-01-31 Cytiva Bioprocess R&D Ab Mutated immunoglobulin-binding polypeptides
PL3699198T3 (pl) 2014-11-17 2025-06-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sposoby leczenia nowotworów z wykorzystaniem dwuswoistego przeciwciała cd3xcd20
HRP20211273T1 (hr) 2014-11-26 2021-11-12 Xencor, Inc. Heterodimerna protutijela koja vežu cd3 i cd20
TN2017000222A1 (en) 2014-11-26 2018-10-19 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
ES2717308T3 (es) 2014-12-06 2019-06-20 Gemoab Monoclonals Gmbh Células madre pluri- o multi-potentes genéticamente modificadas y sus usos
TWI702229B (zh) 2014-12-19 2020-08-21 美商再生元醫藥公司 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體
ES2862701T3 (es) 2014-12-22 2021-10-07 Univ Rockefeller Anticuerpos agonistas anti-MERTK y usos de los mismos
EP3237449A2 (en) 2014-12-22 2017-11-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
TWI710573B (zh) 2015-01-26 2020-11-21 美商再生元醫藥公司 抗伊波拉病毒醣蛋白之人類抗體
WO2016141387A1 (en) 2015-03-05 2016-09-09 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
ES2929614T3 (es) 2015-03-17 2022-11-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticuerpos anti-MUC16 y usos de los mismos
JP2018508224A (ja) 2015-03-19 2018-03-29 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 抗原を結合する軽鎖可変領域を選択する非ヒト動物
TWI867535B (zh) 2015-03-27 2024-12-21 美商再生元醫藥公司 偵測生物污染物之組成物及方法
WO2016161010A2 (en) 2015-03-30 2016-10-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Heavy chain constant regions with reduced binding to fc gamma receptors
WO2016159213A1 (ja) 2015-04-01 2016-10-06 中外製薬株式会社 ポリペプチド異種多量体の製造方法
MX2017013267A (es) 2015-04-15 2018-08-15 Regeneron Pharma Metodos para aumentar la fuerza y funcionalidad con inhibidores del factor de diferenciacion y crecimiento 8 (gdf8).
PL3294775T3 (pl) 2015-05-12 2021-12-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Oznaczanie czystości białka multimerycznego
PE20180672A1 (es) 2015-05-29 2018-04-19 Agenus Inc Anticuerpos anti-ctla-4 y metodos de uso de los mismos
AU2016278586B2 (en) 2015-06-15 2022-05-19 Numab Therapeutics AG Hetero-dimeric multi-specific antibody format
US10501545B2 (en) 2015-06-16 2019-12-10 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and methods of use
JP6971153B2 (ja) 2015-06-23 2021-11-24 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムInnate Pharma Pharma S.A. 多重特異的ｎｋエンゲイジャータンパク質
AU2016289480C1 (en) 2015-07-06 2021-10-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific antigen-binding molecules and uses thereof
WO2017005649A1 (en) 2015-07-09 2017-01-12 Genmab A/S Bispecific and multispecific antibodies and method for isolation of such
PL3115376T3 (pl) 2015-07-10 2019-01-31 Merus N.V. Ludzkie przeciwciało wiążące cd3
EA201890272A1 (ru) 2015-07-10 2018-08-31 Генмаб А/С Axl-специфические конъюгаты антитело-лекарственное средство для лечения рака
JOP20160154B1 (ar) 2015-07-31 2021-08-17 Regeneron Pharma أجسام ضادة مضاد لل psma، وجزيئات رابطة لمستضد ثنائي النوعية الذي يربط psma و cd3، واستخداماتها
TWI797060B (zh) 2015-08-04 2023-04-01 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
WO2017034770A1 (en) 2015-08-26 2017-03-02 Bison Therapeutics Inc. Multispecific antibody platform and related methods
CN107949573B (zh) 2015-09-01 2022-05-03 艾吉纳斯公司 抗-pd-1抗体及其使用方法
PL3359576T3 (pl) 2015-10-08 2025-04-14 Zymeworks Bc Inc. Konstrukty polipeptydowe wiążące antygen zawierające łańcuchy lekkie kappa i lambda oraz ich zastosowania
TWI756187B (zh) 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途
CA3002957A1 (en) 2015-10-23 2017-04-27 Koninklijke Nederlandse Akademie Van Wetenschappen Binding molecules that inhibit cancer growth
EP3371217B1 (en) 2015-11-08 2025-06-11 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of screening for multispecific antibodies
WO2017086419A1 (ja) 2015-11-18 2017-05-26 中外製薬株式会社 液性免疫応答の増強方法
US11660340B2 (en) 2015-11-18 2023-05-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Combination therapy using T cell redirection antigen binding molecule against cell having immunosuppressing function
MX2018006333A (es) 2015-12-01 2018-08-01 Genmab Bv Anticuerpos anti-receptor de muerte 5 (dr5) y metodos de uso de los mismos.
EP3387013B1 (en) 2015-12-07 2022-06-08 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and psma
HRP20231156T1 (hr) 2015-12-22 2024-01-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Kombinacija anti-pd-1 antitijela i bispecifičnih anti-cd20/anti-cd3 antitijela za liječenje raka
SG11201803989WA (en) * 2015-12-28 2018-06-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for promoting efficiency of purification of fc region-containing polypeptide
GB201602156D0 (en) * 2016-02-05 2016-03-23 Jones Philip C And Boku University Of Natural Resources And Life Sciences Heterodimers and purification thereof
AU2017233658B2 (en) 2016-03-14 2023-09-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cell injury inducing therapeutic drug for use in cancer therapy
AU2017238172B2 (en) 2016-03-21 2024-06-27 Marengo Therapeutics, Inc. Multispecific and multifunctional molecules and uses thereof
SG11201807885PA (en) 2016-04-20 2018-10-30 Regeneron Pharma Compositions and methods for making antibodies based on use of expression-enhancing loci
JP7134868B2 (ja) * 2016-04-20 2022-09-12 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 発現強化座位の使用に基づく抗体を作製するための組成物および方法
JP7320943B2 (ja) 2016-04-28 2023-08-04 中外製薬株式会社 抗体含有製剤
EP3448891A1 (en) 2016-04-28 2019-03-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making multispecific antigen-binding molecules
US11708390B2 (en) 2016-05-11 2023-07-25 Cytiva Bioprocess R&D Ab Method of storing a separation matrix
US10889615B2 (en) 2016-05-11 2021-01-12 Cytiva Bioprocess R&D Ab Mutated immunoglobulin-binding polypeptides
US10730908B2 (en) 2016-05-11 2020-08-04 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Separation method
US10703774B2 (en) 2016-09-30 2020-07-07 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Separation method
JP7031934B2 (ja) 2016-05-11 2022-03-08 サイティバ・バイオプロセス・アールアンドディ・アクチボラグ 分離マトリックス
ES2909833T3 (es) 2016-05-11 2022-05-10 Cytiva Bioprocess R & D Ab Método de limpieza y/o desinfección de una matriz de separación
ES2874974T3 (es) 2016-05-11 2021-11-05 Cytiva Bioprocess R & D Ab Matriz de separación
US10654887B2 (en) 2016-05-11 2020-05-19 Ge Healthcare Bio-Process R&D Ab Separation matrix
TWI786044B (zh) 2016-05-13 2022-12-11 美商再生元醫藥公司 藉由投予ｐｄ-１抑制劑治療皮膚癌之方法
NZ747857A (en) 2016-05-20 2023-01-27 Regeneron Pharma Methods for breaking immunological tolerance using multiple guide rnas
TWI781934B (zh) 2016-05-27 2022-11-01 美商艾吉納斯公司 抗-tim-3抗體及其使用方法
HRP20241447T1 (hr) 2016-06-14 2025-01-03 Xencor, Inc. Bispecifična inhibitor antitijela kontrolnih točaka
ES2984352T3 (es) 2016-06-14 2024-10-29 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-C5 y usos de los mismos
CN116063545A (zh) 2016-06-28 2023-05-05 Xencor股份有限公司 结合生长抑素受体2的异源二聚抗体
WO2018005954A2 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Resolve Therapeutics, Llc Optimized binuclease fusions and methods
JP2019525772A (ja) 2016-07-08 2019-09-12 スターテン・バイオテクノロジー・ベー・フェー 抗ａｐｏｃ３抗体およびその使用方法
TW201815821A (zh) 2016-07-18 2018-05-01 美商再生元醫藥公司 抗茲卡病毒抗體及使用方法
US20210284733A1 (en) 2016-08-22 2021-09-16 Arbutus Biopharma Corporation Anti-pd-1 antibodies, or fragments thereof, for treating hepatitis b
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
KR102520731B1 (ko) 2016-09-23 2023-04-14 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 항-steap2 항체, 항체-약물 컨쥬게이트, 및 steap2 및 cd3에 결합하는 이중특이적 항원-결합 분자, 및 이의 용도
AU2017339711B2 (en) 2016-09-23 2024-06-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bi specific anti-MUC16-CD3 antibodies and anti-MUC16 drug conjugates
US12448411B2 (en) 2016-09-30 2025-10-21 Cytiva Bioprocess R&D Ab Separation method
AU2017343621B2 (en) 2016-10-11 2021-12-02 Agenus Inc. Anti-LAG-3 antibodies and methods of use thereof
KR102562519B1 (ko) 2016-10-14 2023-08-02 젠코어 인코포레이티드 IL-15/IL-15Rα FC-융합 단백질 및 PD-1 항체 단편을 포함하는 이중특이성 이종이량체 융합 단백질
JP7277363B2 (ja) 2016-11-01 2023-05-18 ジェンマブ ビー．ブイ． ポリペプチド変異体およびその使用
US11332521B2 (en) 2016-11-07 2022-05-17 Neuracle Science Co., Ltd. Anti-family with sequence similarity 19, member A5 antibodies and method of use thereof
JP2020503260A (ja) 2016-11-15 2020-01-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体による処置のための投与
AU2017373944B2 (en) 2016-12-07 2022-02-03 Agenus Inc. Anti-CTLA-4 antibodies and methods of use thereof
NZ754713A (en) 2016-12-21 2025-11-28 Teneobio Inc Anti-bcma heavy chain-only antibodies
US20190322767A1 (en) 2016-12-23 2019-10-24 Innate Pharma Heterodimeric antigen binding proteins
TWI781130B (zh) 2017-01-03 2022-10-21 美商再生元醫藥公司 抗金黃色葡萄球菌溶血素ａ毒素之人類抗體
SG11201907321TA (en) 2017-02-07 2019-09-27 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-gprc5d antibody and molecule comprising the antibody
US12173076B2 (en) 2017-02-10 2024-12-24 Genmab B.V. Polypeptide variants and uses thereof
MA47456A (fr) 2017-02-10 2019-12-18 Regeneron Pharma Anticorps anti-lag3 radiomarqués pour imagerie immuno-pet
US20200291089A1 (en) 2017-02-16 2020-09-17 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules comprising a trimeric ligand and uses thereof
JP7304288B2 (ja) 2017-02-17 2023-07-06 サノフイ ジストログリカンおよびラミニン２に対する特異性を有する多特異性結合性分子
WO2018151841A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Sanofi Multispecific binding molecules having specificity to dystroglycan and laminin-2
WO2018158719A1 (en) 2017-03-02 2018-09-07 Novartis Ag Engineered heterodimeric proteins
US20200330590A1 (en) 2017-03-27 2020-10-22 Celgene Corporation Methods and compositions for reduction of immunogenicity
BR112019020508A2 (pt) 2017-03-31 2020-08-04 Merus N.V. anticorpos biespecíficos de ligação a erbb-2 e erbb3 para utilização no tratamento de células que possuem um gene de fusão nrg1
AU2018242227B2 (en) 2017-03-31 2025-04-10 Genmab Holding B.V. Bispecific anti-CD37 antibodies, monoclonal anti-CD37 antibodies and methods of use thereof
US11603407B2 (en) 2017-04-06 2023-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation
CN110770255B (zh) 2017-04-11 2025-07-01 因荷布瑞克斯生物科学公司 具有受限cd3结合的多特异性多肽构建体及其使用方法
KR20240017409A (ko) 2017-04-13 2024-02-07 아게누스 인코포레이티드 항-cd137 항체 및 이의 사용 방법
AU2018255938A1 (en) 2017-04-21 2019-10-31 Staten Biotechnology B.V. Anti-ApoC3 antibodies and methods of use thereof
US11021537B2 (en) 2017-05-01 2021-06-01 Agenus Inc. Anti-TIGIT antibodies and methods of use thereof
KR102744809B1 (ko) 2017-05-17 2024-12-23 메뤼스 엔.페. 유방암 치료를 위한 ErbB-2/ErbB-3 이중특이적 항체와 내분비 치료의 조합
US20210246227A1 (en) 2017-05-31 2021-08-12 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific molecules that bind to myeloproliferative leukemia (mpl) protein and uses thereof
KR20200014379A (ko) * 2017-06-05 2020-02-10 얀센 바이오테크 인코포레이티드 비대칭 ch2-ch3 영역 돌연변이를 갖는 조작된 다중특이성 항체 및 다른 다량체 단백질
CN110719918B (zh) 2017-06-05 2024-05-24 努玛治疗有限公司 靶向至少cd3和hsa的异源二聚体多特异性抗体形式
WO2018224609A1 (en) 2017-06-07 2018-12-13 Genmab B.V. Therapeutic antibodies based on mutated igg hexamers
JP7348844B2 (ja) 2017-06-07 2023-09-21 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 内部移行酵素のための組成物および方法
SG10202109108UA (en) 2017-06-21 2021-09-29 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptors (cars), compositions and methods thereof
GB201709970D0 (en) 2017-06-22 2017-08-09 Kymab Ltd Bispecific antigen-binding molecules
HRP20240773T1 (hr) 2017-06-27 2024-09-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Rekombinirajući virusni vektori modificirani tropizmom i njihove uporabe za ciljano uvođenje genetskog materijala u ljudske stanice
JP7278978B2 (ja) 2017-06-27 2023-05-22 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ヒト化ａｓｇｒ１座位を含む非ヒト動物
EP3645041A4 (en) 2017-06-28 2021-03-17 The Rockefeller University AGONISTIC ANTIBODY-ANTIBODY-ACTIVE INGREDIENT CONJUGATES AGAINST MERTK AND THEIR USES
CN118978585A (zh) 2017-06-28 2024-11-19 里珍纳龙药品有限公司 抗人乳头瘤病毒（hpv）抗原结合蛋白及其使用方法
US11084863B2 (en) 2017-06-30 2021-08-10 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric Fc fusion proteins containing IL-15 IL-15alpha and antigen binding domains
EP3967765A1 (en) 2017-07-06 2022-03-16 FrieslandCampina Nederland B.V. Cell culture process for making a glycoprotein
CN111566214B (zh) * 2017-07-06 2024-03-08 日东纺绩株式会社 抗人IgG4单克隆抗体及利用该抗体的人IgG4测定试剂
TW202348250A (zh) 2017-07-24 2023-12-16 美商再生元醫藥公司 穩定化之抗體組合物及其製法
TWI799432B (zh) 2017-07-27 2023-04-21 美商再生元醫藥公司 抗ctla-4抗體及其用途
KR102794369B1 (ko) * 2017-08-01 2025-04-15 에이비 테라퓨틱스 인코퍼레이티드 이중특이 항체 및 그의 용도
TN2020000015A1 (en) 2017-08-03 2021-10-04 Amgen Inc Interleukin-21 muteins and methods of treatment
KR20200042485A (ko) 2017-08-09 2020-04-23 메뤼스 엔.페. EGFR 및 cMET에 결합하는 항체
WO2019035938A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Elstar Therapeutics, Inc. MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF
MX2020002070A (es) 2017-08-22 2020-03-24 Sanabio Llc Receptores solubles de interferon y usos de los mismos.
EP4403175A3 (en) 2017-09-08 2024-10-02 Amgen Inc. Inhibitors of kras g12c and methods of using the same
EP3681909A1 (en) * 2017-09-14 2020-07-22 Denali Therapeutics Inc. Anti-trem2 antibodies and methods of use thereof
MX394999B (es) 2017-09-29 2025-03-24 Regeneron Pharma Animales no humanos que comprenden un locus ttr humanizado y metodos de uso
CN111148758B (zh) 2017-09-29 2022-12-09 瑞泽恩制药公司 结合葡萄球菌属靶抗原和补体成分的双特异性抗原结合分子及其用途
MX2020003549A (es) 2017-10-04 2020-08-03 Amgen Inc Fusiones de transtiretina e inmunoglobulina.
CA3078157A1 (en) 2017-10-20 2019-04-25 F.Hoffmann-La Roche Ag Method for generating multispecific antibodies from monospecific antibodies
CA3078676A1 (en) 2017-10-30 2019-05-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for in vivo generation of multispecific antibodies from monospecific antibodies
JP7039694B2 (ja) 2017-10-31 2022-03-22 スターテン・バイオテクノロジー・ベー・フェー 抗ａｐｏｃ３抗体およびその使用方法
WO2019088143A1 (ja) 2017-11-01 2019-05-09 中外製薬株式会社 生物活性が低下した抗体バリアントおよびアイソフォーム
MX2020004561A (es) * 2017-11-02 2020-08-13 Bayer Ag Anticuerpos biespecificos que se unen a alk-1 y bmpr-2.
CN111741757B (zh) * 2017-11-03 2023-12-19 莱蒂恩技术公司 用于用抗ror1免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
JP2021502100A (ja) 2017-11-08 2021-01-28 ゼンコア インコーポレイテッド 新規抗ｐｄ−１配列を用いた二重特異性および単一特異性抗体
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
EP3713959A1 (en) 2017-11-21 2020-09-30 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
EP3585164B1 (en) 2017-11-30 2023-12-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Rats comprising a humanized trkb locus
WO2019118556A1 (en) 2017-12-13 2019-06-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-c5 antibody combinations and uses thereof
US11319355B2 (en) 2017-12-19 2022-05-03 Xencor, Inc. Engineered IL-2 Fc fusion proteins
EP4495142A3 (en) 2017-12-22 2025-05-07 Argenx BVBA Bispecific antigen binding construct
CN111479618B (zh) 2017-12-22 2022-08-02 瑞泽恩制药公司 用于表征药物产品杂质的系统和方法
EP3737692A4 (en) 2018-01-09 2021-09-29 Elstar Therapeutics, Inc. CALRETICULIN AND MODIFIED T-LYMPHOCYTES BINDING CONSTRUCTIONS FOR THE TREATMENT OF DISEASES
SG11202005605SA (en) 2018-01-12 2020-07-29 Amgen Inc Anti-pd-1 antibodies and methods of treatment
MA51666A (fr) 2018-01-24 2020-12-02 Genmab Bv Variants polypeptidiques et leurs utilisations
MX2020007772A (es) 2018-01-26 2020-09-18 Regeneron Pharma Anticuerpos humanos contra hemaglutinina de influenza.
MX2020008095A (es) 2018-01-31 2020-09-24 Regeneron Pharma Sistemas y métodos para caracterizar variantes de tamaño y carga de impurezas de productos farmacológicos.
TW202411650A (zh) 2018-02-01 2024-03-16 美商再生元醫藥公司 治療性單株抗體之品質屬性的定量及模型化
CA3089988A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies to galectin-3 and methods of use thereof
TWI786265B (zh) 2018-02-02 2022-12-11 美商再生元醫藥公司 用於表徵蛋白質二聚合之系統及方法
AU2019218892B2 (en) 2018-02-07 2025-08-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for therapeutic protein delivery
US11866498B2 (en) 2018-02-08 2024-01-09 Genentech, Inc. Bispecific antigen-binding molecules and methods of use
GB201802487D0 (en) 2018-02-15 2018-04-04 Argenx Bvba Cytokine combination therapy
US12460270B2 (en) 2018-02-28 2025-11-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for identifying viral contaminants
IL321873A (en) 2018-03-01 2025-08-01 Regeneron Pharma Methods for altering body composition
US20210009711A1 (en) 2018-03-14 2021-01-14 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules and uses thereof
US12152073B2 (en) 2018-03-14 2024-11-26 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
BR112020015291B1 (pt) 2018-03-19 2023-09-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc Tampão de amostra de eletroforese aquoso, método para identificar contaminantes ou impurezas em uma amostra de fármaco proteico, e, kit
US12253490B2 (en) 2018-03-19 2025-03-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
US12259355B2 (en) 2018-03-19 2025-03-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
CN116514959A (zh) 2018-03-24 2023-08-01 瑞泽恩制药公司 用于产生针对肽-mhc复合物的治疗性抗体的经过基因修饰的非人动物、其制造方法和用途
WO2019195623A2 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
CN112218686A (zh) 2018-04-11 2021-01-12 印希比股份有限公司 具有受限cd3结合的多特异性多肽构建体以及相关方法和用途
MX2020010910A (es) 2018-04-18 2021-02-09 Xencor Inc Proteinas de fusion heterodimericas dirigidas a pd-1 que contienen proteinas de fusion il-15 / il-15ra fc y dominios de union al antigeno pd-1 y usos de los mismos.
US11505595B2 (en) 2018-04-18 2022-11-22 Xencor, Inc. TIM-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15RA Fc-fusion proteins and TIM-3 antigen binding domains
US12037411B2 (en) 2018-04-30 2024-07-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibodies, and bispecific antigen-binding molecules that bind HER2 and/or APLP2, conjugates, and uses thereof
AU2019264217A1 (en) 2018-05-03 2020-12-17 Genmab B.V. Antibody variant combinations and uses thereof
EP3790898A4 (en) 2018-05-10 2022-03-02 Neuracle Science Co., Ltd SEQUENCE-LIKE ANTI-FAMILY ANTIBODIES 19, MEMBER A5, AND METHOD OF USE THEREOF
TW202016125A (zh) 2018-05-10 2020-05-01 美商再生元醫藥公司 用於定量及調節蛋白質黏度之系統與方法
MA52626A (fr) 2018-05-17 2021-03-24 Regeneron Pharma Anticorps anti-cd63, conjugués et leurs utilisations
JP7646361B2 (ja) 2018-06-01 2025-03-17 コンピュジェン リミテッド 抗ｐｖｒｉｇ／抗ｔｉｇｉｔ二重特異性抗体および使用方法
TWI848953B (zh) 2018-06-09 2024-07-21 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 針對癌症治療之多特異性結合蛋白
MA52966A (fr) 2018-06-19 2021-04-28 Regeneron Pharma Anticorps anti-facteur xii/xiia et leurs utilisations
TWI890661B (zh) 2018-06-21 2025-07-21 美商再生元醫藥公司 用雙特異性抗CD3xMUC16抗體及抗PD-1抗體治療癌症的方法
CA3104390A1 (en) 2018-06-22 2019-12-26 Genmab A/S Method for producing a controlled mixture of two or more different antibodies
EP3810194A1 (en) 2018-06-22 2021-04-28 Genmab Holding B.V. Anti-cd37 antibodies and anti-cd20 antibodies, compositions and methods of use thereof
TWI857959B (zh) 2018-06-26 2024-10-11 日商協和麒麟股份有限公司 與細胞黏著分子3 結合之抗體
KR20210025023A (ko) 2018-06-26 2021-03-08 쿄와 기린 가부시키가이샤 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸-5에 결합하는 항체
CN118754985A (zh) 2018-06-29 2024-10-11 爱必泰生物有限公司 抗l1cam抗体及其用途
JP7554742B2 (ja) 2018-07-03 2024-09-20 マレンゴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド 抗ｔｃｒ抗体分子およびその使用
EP3820891A1 (en) * 2018-07-10 2021-05-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Modifying binding molecules to minimize pre-existing interactions
EP3820890A1 (en) 2018-07-13 2021-05-19 Genmab A/S Trogocytosis-mediated therapy using cd38 antibodies
KR20210031932A (ko) 2018-07-13 2021-03-23 젠맵 에이/에스 Cd38 항체의 변이체 및 그의 용도
ES2981461T3 (es) 2018-07-13 2024-10-09 Regeneron Pharma Detección y cuantificación de péptidos glicosilados
TWI838389B (zh) 2018-07-19 2024-04-11 美商再生元醫藥公司 雙特異性抗-BCMAｘ抗-CD3抗體及其用途
US12195533B2 (en) 2018-07-24 2025-01-14 Inhibrx Biosciences, Inc. Multispecific polypeptide constructs containing a constrained CD3 binding domain and a receptor binding region and methods of using the same
WO2020036845A1 (en) 2018-08-13 2020-02-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic protein selection in simulated in vivo conditions
JP7527273B2 (ja) 2018-08-17 2024-08-02 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 多量体タンパク質の量および純度を決定するための方法およびクロマトグラフィーシステム
AU2019320814A1 (en) 2018-08-17 2021-02-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for de novo protein sequencing
AU2019325565B2 (en) 2018-08-23 2025-09-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-Fc epsilon-R1 alpha (FceR1a) antibodies, bispecific antigen-binding molecules that bind FceR1a and CD3, and uses thereof
CN120795059A (zh) 2018-08-27 2025-10-17 瑞泽恩制药公司 拉曼光谱在下游纯化中的应用
JP7511542B2 (ja) 2018-08-30 2024-07-05 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド タンパク質複合体を特徴づけるための方法
MA53495A (fr) 2018-08-31 2021-12-08 Regeneron Pharma Stratégie de dosage permettant d'atténuer le syndrome de libération de cytokines pour des anticorps bispécifiques cd3/c20
GB2576914A (en) 2018-09-06 2020-03-11 Kymab Ltd Antigen-binding molecules comprising unpaired variable domains produced in mammals
JP2022504287A (ja) 2018-10-03 2022-01-13 スターテン・バイオテクノロジー・ベー・フェー ヒト及びカニクイザルａｐｏｃ３に特異的な抗体、並びにその使用の方法
MA53822A (fr) 2018-10-03 2021-08-11 Xencor Inc Protéines de fusion fc hétérodimères d'il -12
MX2021003756A (es) 2018-10-04 2021-08-11 Genmab Holding B V Composiciones farmaceuticas que comprenden anticuerpos anti cumulo de diferenciacion 37 (cd37) biespecificos.
TWI863932B (zh) 2018-10-11 2024-12-01 美商因荷布瑞克斯生物科學公司 5t4單域抗體及其治療性組合物
CA3115089A1 (en) 2018-10-11 2020-04-16 Inhibrx, Inc. Dll3 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
JP2022512684A (ja) 2018-10-11 2022-02-07 インヒブルクス インコーポレイテッド Ｂ７ｈ３シングルドメイン抗体およびその治療用組成物
CN120623346A (zh) 2018-10-11 2025-09-12 因荷布瑞克斯生物科学公司 Pd-1单结构域抗体及其治疗组合物
EP3870612A2 (en) 2018-10-23 2021-09-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-npr1 antibodies and uses thereof
WO2020086893A1 (en) 2018-10-25 2020-04-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for analysis of viral capsid protein composition
US20210388106A1 (en) * 2018-10-26 2021-12-16 Teneobio, Inc. Heavy chain antibodies binding to cd38
AU2019369421A1 (en) 2018-10-31 2021-06-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method and system of identifying and quantifying a protein
BR112021008774A2 (pt) 2018-11-06 2021-11-30 BioNTech SE Formulação farmacêutica, agente de ligação, métodos para tratamento de uma doença, para produzir uma formulação farmacêutica, para induzir a morte celular ou inibir o crescimento e/ou a proliferação de uma célula tumoral, e, uso de uma formulação farmacêutica
EP3883961A1 (en) 2018-11-20 2021-09-29 Takeda Vaccines, Inc. Novel anti-zika virus antibodies and uses thereof
CN112867732A (zh) 2018-11-21 2021-05-28 瑞泽恩制药公司 抗葡萄球菌抗体和其用途
US11249089B2 (en) 2018-12-12 2022-02-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. System and method of analysis of a protein using liquid chromatography-mass spectrometry
TWI874341B (zh) 2018-12-18 2025-03-01 美商健生生物科技公司 產生異二聚體抗體之方法
GB201820687D0 (en) 2018-12-19 2019-01-30 Kymab Ltd Antagonists
US11782023B2 (en) * 2018-12-19 2023-10-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ce-western applications for antibody development
LT3723858T (lt) 2018-12-21 2022-02-10 Kymab Limited Fixaxfx bispecifiniai antikūnai, turintys bendrą lenvąją grandinę
CA3124762A1 (en) * 2018-12-24 2020-07-02 Seoul National University R&Db Foundation Type 1 interferon neutralizing fc-fusion protein and use thereof
WO2020136564A1 (en) 2018-12-24 2020-07-02 Sanofi Pseudofab-based multispecific binding proteins
BR112021009544A2 (pt) 2019-01-16 2021-10-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Métodos para identificar ligações dissulfeto embaralhadas em um medicamento de proteína e de produção de um medicamento de proteína, e, composição farmacêutica
US12463463B2 (en) 2019-01-28 2025-11-04 Ab Therapeutics, Inc. Bispecific antibodies and uses thereof
KR20210122803A (ko) 2019-01-31 2021-10-12 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 항체 전하 이질성의 고유 마이크로유체 ce-ms 분석
AU2020223205A1 (en) 2019-02-12 2021-08-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for using bispecific antibodies to bind complement and a target antigen
EP3927744A1 (en) 2019-02-21 2021-12-29 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to t cell related cancer cells and uses thereof
SG11202109056TA (en) 2019-02-21 2021-09-29 Marengo Therapeutics Inc Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
AU2020226904B2 (en) 2019-02-21 2025-05-01 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
CN114127111B (zh) 2019-02-21 2024-09-10 马伦戈治疗公司 与nkp30结合的抗体分子及其用途
CN114127112A (zh) 2019-02-21 2022-03-01 马伦戈治疗公司 与t细胞结合的多功能分子及其治疗自身免疫性病症的用途
ES2978570T3 (es) 2019-02-26 2024-09-16 Inspirna Inc Anticuerpos anti-MERTK de alta afinidad y sus usos
SG11202109406TA (en) 2019-03-01 2021-09-29 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind enpp3 and cd3
CA3133361A1 (en) 2019-04-03 2020-10-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for insertion of antibody coding sequences into a safe harbor locus
CN117178959A (zh) 2019-04-04 2023-12-08 瑞泽恩制药公司 包括人源化凝血因子12基因座的非人动物
WO2020210551A1 (en) 2019-04-10 2020-10-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies that bind ret and methods of use thereof
EP3966241A1 (en) 2019-05-09 2022-03-16 Genmab B.V. Dosage regimens for a combination of anti-dr5 antibodies for use in treating cancer
EA202193198A1 (ru) 2019-05-21 2022-02-24 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Способы идентификации и количественного определения белка клетки-хозяина
JP7610339B2 (ja) 2019-06-04 2025-01-08 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ベータスリップ変異を有するヒト化ｔｔｒ遺伝子座を含む非ヒト動物と使用方法
TW202110323A (zh) 2019-06-05 2021-03-16 美商再生元醫藥公司 具有表現自κ 基因座的有限λ 輕鏈組庫的非人類動物及其用途
MA54975B1 (fr) 2019-06-11 2023-08-31 Regeneron Pharma Anticorps anti-pcrv qui se lient à pcrv, compositions comprenant des anticorps anti-pcrv, et leurs méthodes d'utilisation
US20220306686A1 (en) * 2019-06-13 2022-09-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for Removing Undesired Components During Multistage Chromatographic Processes
AU2020296181A1 (en) 2019-06-21 2021-12-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of bispecific antigen-binding molecules that bind PSMA and CD3 in combination with 4-1BB co-stimulation
JP7743314B2 (ja) 2019-06-21 2025-09-24 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｍｕｃ１６およびｃｄ３に結合する二重特異性抗原結合分子の４－１ｂｂ共刺激と組み合わせての使用
SG11202112762TA (en) 2019-07-08 2021-12-30 Amgen Inc Multispecific transthyretin immunoglobulin fusions
GB201910900D0 (en) * 2019-07-31 2019-09-11 Scancell Ltd Modified fc-regions to enhance functional affinity of antibodies and antigen binding fragments thereof
US12215148B2 (en) 2019-08-08 2025-02-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antigen binding molecule formats
BR112022002540A2 (pt) 2019-08-15 2022-06-14 Janssen Biotech Inc Materiais e métodos para fragmentos variáveis de cadeia única aprimorados
AU2020330063A1 (en) 2019-08-15 2022-03-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific antigen-binding molecules for cell targeting and uses thereof
CR20220076A (es) 2019-08-30 2022-06-24 Agenus Inc Anticuerpos anti-cd96 y sus métodos de uso
US12297451B1 (en) 2019-10-25 2025-05-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cell culture medium
WO2021086899A1 (en) 2019-10-28 2021-05-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-hemagglutinin antibodies and methods of use thereof
AU2020379735A1 (en) 2019-11-05 2022-05-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. N-terminal SCFV multispecific binding molecules
JP2023500701A (ja) 2019-11-06 2023-01-10 ジェンマブ ビー．ブイ． 抗体変種の組み合わせおよびその使用
CN114760986A (zh) 2019-11-25 2022-07-15 里珍纳龙药品有限公司 使用非水性乳液的持续释放调配物
WO2021108363A1 (en) 2019-11-25 2021-06-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr/cas-mediated upregulation of humanized ttr allele
JP7726881B2 (ja) 2019-12-02 2025-08-20 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ペプチド－ｍｈｃ ｉｉタンパク質構築物およびそれらの使用
MX2022006714A (es) 2019-12-06 2022-08-08 Regeneron Pharma Métodos de tratamiento del mieloma múltiple con anticuerpos anti-bcma x anti-cd3 bisespecíficos.
PE20221770A1 (es) 2019-12-06 2022-11-11 Regeneron Pharma Composiciones de proteina anti-vegf y metodos para producir la misma
WO2021116337A1 (en) 2019-12-11 2021-06-17 Cilag Gmbh International Multispecific binding molecules comprising ltbr and edb binding domains and uses thereof
TWI890718B (zh) 2019-12-20 2025-07-21 美商再生元醫藥公司 新穎之il2促效劑及其使用方法(一)
EP4141025A4 (en) 2019-12-26 2024-04-24 ABL Bio, Inc. METHOD FOR PURIFICATION OF BIOLOGICALLY ACTIVE PEPTIDES USING PROTEIN A AFFINITY CHROMATOGRAPHY
WO2021138407A2 (en) 2020-01-03 2021-07-08 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to cd33 and uses thereof
IL294319A (en) 2020-01-08 2022-08-01 Regeneron Pharma Using amino acids to improve signals in mass spectrometry tests
US20230272105A1 (en) 2020-01-16 2023-08-31 Genmab A/S Formulations of cd38 antibodies and uses thereof
KR102544013B1 (ko) 2020-01-21 2023-06-19 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 당질화된 단백질의 전기영동을 위한 탈당질화 방법
US11639939B2 (en) 2020-01-27 2023-05-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Tandem mass tag multiplexed quantitation of post-translational modifications of proteins
EP4096396A1 (en) 2020-01-28 2022-12-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized pnpla3 locus and methods of use
IL294879A (en) 2020-01-29 2022-09-01 Inhibrx Inc Cd28 single domain antibodies and multivalent and multispecific constructs thereof
CN115210564A (zh) 2020-01-30 2022-10-18 瑞泽恩制药公司 用于天然液相色谱-质谱的平台
CA3166241A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Jikang WU High confidence compound identification by liquid chromatography-mass spectrometry
US20230081547A1 (en) 2020-02-07 2023-03-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized klkb1 locus and methods of use
EP4103617A1 (en) 2020-02-11 2022-12-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-acvr1 antibodies and uses thereof
WO2021190980A1 (en) 2020-03-22 2021-09-30 Quadrucept Bio Limited Multimers for viral strain evolution
US20230102342A1 (en) 2020-03-23 2023-03-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ttr locus comprising a v30m mutation and methods of use
KR20220156912A (ko) 2020-03-25 2022-11-28 일라이 릴리 앤드 캄파니 다중특이적 결합 단백질 및 그의 개발 방법
US12344674B2 (en) 2020-03-30 2025-07-01 Mie University Bispecific antibody
CN115461620A (zh) 2020-04-14 2022-12-09 瑞泽恩制药公司 通过正交偏最小二乘法对色谱性能进行紫外线监测
CA3180321A1 (en) 2020-04-24 2021-10-28 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to t cell related cancer cells and uses thereof
JP2023525034A (ja) 2020-05-08 2023-06-14 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｖｅｇｆトラップおよびミニトラップならびに眼障害およびがんの治療方法
WO2021228904A1 (en) 2020-05-11 2021-11-18 Academisch Medisch Centrum Neutralizing antibodies binding to the spike protein of sars-cov-2 suitable for use in the treatment of covid-19, compositions comprising the same and uses thereof
CA3172471A1 (en) 2020-05-12 2021-11-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-glp1r antagonist antibodies and methods of use thereof
MX2022014239A (es) 2020-05-12 2023-02-09 Regeneron Pharma Nuevos agonistas de il10 y metodos para su uso.
US11919956B2 (en) 2020-05-14 2024-03-05 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3
WO2021263146A2 (en) 2020-06-26 2021-12-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ace2 locus
WO2022018294A1 (en) 2020-07-23 2022-01-27 Genmab B.V. A combination of anti-dr5 antibodies and an immunomodulatory imide drug for use in treating multiple myeloma
LT4200018T (lt) 2020-08-18 2025-03-25 Cephalon Llc Anti-par-2 antikūnai ir jų panaudojimo būdas
MX2023001962A (es) 2020-08-19 2023-04-26 Xencor Inc Composiciones anti-cd28.
EP4200017A1 (en) 2020-08-20 2023-06-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for preventing and treating cardiac dysfunction and covid-19 with activin a antagonists
EP4204458A4 (en) 2020-08-26 2024-10-09 Marengo Therapeutics, Inc. METHODS FOR DETECTION OF TRBC1 OR TRBC2
CN116917316A (zh) 2020-08-26 2023-10-20 马伦戈治疗公司 与NKp30结合的抗体分子及其用途
EP4204450A4 (en) 2020-08-26 2024-11-13 Marengo Therapeutics, Inc. MULTIFUNCTIONAL CALRETICULIN-BINDING MOLECULES AND RELATED USES
EP4204578A1 (en) 2020-08-31 2023-07-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Asparagine feed strategies to improve cell culture performance and mitigate asparagine sequence variants
WO2022056276A1 (en) 2020-09-11 2022-03-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Identification and production of antigen-specific antibodies
AU2021345262A1 (en) 2020-09-18 2023-05-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antigen-binding molecules that bind cd38 and/or cd28, and uses thereof
US20230365714A1 (en) 2020-10-02 2023-11-16 Genmab A/S Antibodies capable of binding to ror2 and bispecific antibodies binding to ror2 and cd3
US20230374148A1 (en) 2020-10-15 2023-11-23 UCB Biopharma SRL Binding molecules that multimerise cd45
CA3190569A1 (en) 2020-10-22 2022-04-28 Christopher Daly Anti-fgfr2 antibodies and methods of use thereof
MX2023005132A (es) 2020-11-04 2023-05-25 Genentech Inc Dosificacion para el tratamiento con anticuerpos biespecificos anti-cd20/anti-cd3.
EP4245317A4 (en) 2020-11-10 2024-11-06 Shanghai Qilu Pharmaceutical Research and Development Centre Ltd. BISPECIFIC ANTIBODY FOR CLAUDIN 18A2 AND CD3 AND APPLICATION OF BISPECIFIC ANTIBODY
EP4251128A1 (en) 2020-11-25 2023-10-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulations using non-aqueous membrane emulsification
CN114539416B (zh) * 2020-11-26 2024-11-08 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种双特异性抗体的层析纯化工艺
CN116710124A (zh) 2020-12-17 2023-09-05 瑞泽恩制药公司 包封蛋白质的微凝胶的制造
WO2022133239A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin proteins that bind to npr1 agonists
MX2023007151A (es) 2020-12-20 2023-06-28 Regeneron Pharma Metodos para la identificacion de disulfuros aleatorizados en biomoleculas.
MX2023008190A (es) * 2021-01-11 2023-09-28 Adimab Llc Variantes de dominios ch3 genomodificados para la heterodimerización de ch3 preferencial, anticuerpos multi específicos que los comprenden, y sus métodos de fabricación.
AU2022209730A1 (en) 2021-01-20 2023-07-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of improving protein titer in cell culture
JP2024506831A (ja) 2021-01-28 2024-02-15 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド サイトカイン放出症候群を治療するための組成物及び方法
US11623949B2 (en) 2021-01-28 2023-04-11 Talem Therapeutics Llc Anti-spike glycoprotein antibodies and the therapeutic use thereof
AU2022217058A1 (en) 2021-02-04 2023-09-21 Genuv Inc. Anti-pd-1 antibody and use thereof
WO2022184659A1 (en) 2021-03-01 2022-09-09 Quadrucept Bio Limited Antibody domains & multimers
TW202246325A (zh) 2021-03-03 2022-12-01 美商再生元醫藥公司 用於定量及修飾蛋白質黏度之系統及方法
CA3212665A1 (en) 2021-03-09 2022-09-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
WO2022192586A1 (en) 2021-03-10 2022-09-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and gpc3
JP2024511465A (ja) 2021-03-26 2024-03-13 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニム Ｎｋ細胞エンゲージングのためにサイトカインに融合したｎｋｐ４６結合性部位、がん抗原結合性部位を含む多特異性タンパク質
IL305818A (en) 2021-03-29 2023-11-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Multispecific stable compound and its use
JP2024514530A (ja) 2021-04-02 2024-04-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 切断型ｃｄｃｐ１に対する抗体およびその使用
AR125255A1 (es) 2021-04-02 2023-06-28 Regeneron Pharma Métodos de predicción y modulación de la glicación de una proteína
GB2623199A (en) 2021-04-08 2024-04-10 Marengo Therapeutics Inc Multifunctional molecules binding to TCR and uses thereof
JP2024516401A (ja) 2021-04-27 2024-04-15 アムジエン・インコーポレーテツド 温度の使用による非対称抗体の製品品質の調節
CN117597365A (zh) * 2021-05-04 2024-02-23 再生元制药公司 多特异性fgf21受体激动剂及其应用
AU2022270075A1 (en) 2021-05-04 2023-11-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific fgf21 receptor agonists and their uses
IL308417A (en) 2021-05-14 2024-01-01 Genentech Inc Methods for the treatment of CD20-positive proliferative disorder with musuntozumab and folatuzumab and dotin
WO2022251853A1 (en) 2021-05-25 2022-12-01 Edelweiss Immune Inc C-x-c motif chemokine receptor 6 (cxcr6) binding molecules, and methods of using the same
CA3220848A1 (en) 2021-06-01 2022-12-08 Timothy Riehlman Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
WO2022258678A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkp30, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
AU2022288574A1 (en) 2021-06-09 2023-11-30 Innate Pharma Multispecific antibodies binding to cd20, nkp46, cd16 and conjugated to il-2
WO2022258691A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkg2d, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
BR112023025331A2 (pt) 2021-06-09 2024-02-27 Innate Pharma Proteína multiespecífica, composição farmacêutica, célula recombinante, ácido nucleico ou conjunto de ácidos nucleicos, uso de uma proteína ou composição, métodos ou uso
JP2024522213A (ja) 2021-06-14 2024-06-11 アルジェニクス ビーブイ 抗ｉｌ－９抗体及びその使用方法
US12448451B2 (en) 2021-06-25 2025-10-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-CTLA-4 antibody and use thereof
US20230051304A1 (en) 2021-07-19 2023-02-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Il12 receptor agonists and methods of use thereof
TW202322850A (zh) * 2021-08-05 2023-06-16 美商美國禮來大藥廠 抗體最佳化
AU2022331241A1 (en) 2021-08-16 2024-03-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Novel il27 receptor agonists and methods of use thereof
WO2023028612A2 (en) 2021-08-27 2023-03-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-tslpr (crlf2) antibodies
AU2022338208A1 (en) 2021-09-06 2024-03-21 Genmab A/S Antibodies capable of binding to cd27, variants thereof and uses thereof
WO2023039457A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. A high-throughput and mass-spectrometry-based method for quantitating antibodies and other fc-containing proteins
US20250017183A1 (en) 2021-11-04 2025-01-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a modified cacng1 locus
KR20240099460A (ko) 2021-11-11 2024-06-28 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Cd20-pd1 결합 분자 및 이의 사용 방법
KR20240103062A (ko) 2021-11-24 2024-07-03 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 이중 특이적 항CD3 x MUC16 항체 및 항CTLA-4 항체로 암을 치료하는 방법
CA3241006A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Daiichi Sankyo Company Limited Protease-cleavable masked antibodies
EP4444416A1 (en) 2021-12-06 2024-10-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antagonist anti-npr1 antibodies and methods of use thereof
IL312971A (en) 2021-12-08 2024-07-01 Regeneron Pharma Mutant myocilin disease model and uses thereof
US20250049006A1 (en) 2021-12-20 2025-02-13 C/O Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising humanized ace2 and tmprss loci
AU2023204751A1 (en) 2022-01-07 2024-07-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating recurrent ovarian cancer with bispecific anti-muc16 x anti-cd3 antibodies alone or in combination with anti-pd-1 antibodies
US20250084169A1 (en) 2022-01-12 2025-03-13 Biomolecular Holdings Llc Nk/monocyte engagers
TW202337900A (zh) 2022-01-12 2023-10-01 美商再生元醫藥公司 改良使用親和層析的異二聚蛋白質自雜質之解析的方法
EP4475671A1 (en) 2022-02-07 2024-12-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for defining optimal treatment timeframes in lysosomal disease
AU2023218678A1 (en) 2022-02-09 2024-08-01 Daiichi Sankyo Company, Limited Environmentally responsive masked antibody and use thereof
EP4476245A1 (en) 2022-02-11 2024-12-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for screening 4r tau targeting agents
AU2023226512A1 (en) 2022-02-23 2024-08-29 Bright Peak Therapeutics Ag Immune antigen specific il-18 immunocytokines and uses thereof
MX2024010339A (es) * 2022-02-23 2024-09-30 Xencor Inc Anticuerpos anti-cd28 x anti-psma.
US20230340128A1 (en) 2022-02-24 2023-10-26 Xencor, Inc. Anti-cd28 x anti-msln antibodies
US20240059786A1 (en) 2022-02-24 2024-02-22 Xencor, Inc. Anti-cd28 x anti-trop2 antibodies
TW202400228A (zh) 2022-02-25 2024-01-01 美商再生元醫藥公司 減輕細胞激素釋放症候群的給藥方案
CN119031932A (zh) 2022-03-16 2024-11-26 第一三共株式会社 多特异性分子和免疫检查点抑制剂的组合
WO2023177772A1 (en) 2022-03-17 2023-09-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating recurrent epithelioid sarcoma with bispecific anti-muc16 x anti-cd3 antibodies alone or in combination with anti-pd-1 antibodies
WO2023196903A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bispecific antigen-binding molecules that bind and cd3 and tumor associated antigens (taas) and uses thereof
IL316002A (en) 2022-04-11 2024-11-01 Regeneron Pharma Compositions and methods for universal tumor cell killing
JP2025514304A (ja) 2022-04-29 2025-05-02 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 遺伝子治療法のための組織特異的遺伝子外セーフハーバーの同定
US20250302998A1 (en) 2022-05-09 2025-10-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Vectors and methods for in vivo antibody production
WO2023220647A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific binding molecule proproteins and uses thereof
JP2025516631A (ja) 2022-05-12 2025-05-30 ジェンマブ エー／エス 併用療法においてｃｄ２７に結合する能力を有する結合剤
US20250325643A1 (en) 2022-05-12 2025-10-23 Genmab A/S Binding agents capable of binding to cd27 in combination therapy
KR20250010677A (ko) 2022-05-16 2025-01-21 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 이중특이적 항-PSMA x 항-CD3 항체를 단독으로 또는 항-PD-1 항체와 병용으로 전이성 거세 저항성 전립선암을 치료하는 방법
KR20250011926A (ko) 2022-05-18 2025-01-22 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 Cd38 및 4-1bb에 결합하는 다중특이적 항원 결합 분자, 및 이의 용도
WO2023230594A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interleukin-2 proproteins and uses thereof
WO2023235848A1 (en) 2022-06-04 2023-12-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interleukin-2 proproteins and uses thereof
KR20250035053A (ko) 2022-06-07 2025-03-11 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. T 세포 활성을 조절하기 위한 다중특이적 분자 및 이의 용도
WO2024020199A1 (en) 2022-07-21 2024-01-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Native microfluidic ce-ms analysis of antibody charge heterogeneity
CN120112164A (zh) 2022-07-29 2025-06-06 瑞泽恩制药公司 包含修饰的转铁蛋白受体基因座的非人动物
CN120659627A (zh) 2022-07-29 2025-09-16 瑞泽恩制药公司 用于转铁蛋白受体（tfr）介导的脑和肌肉递送的组合物和方法
WO2024026470A2 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-tfr:payload fusions and methods of use thereof
US20240043560A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of Treating Metastatic Castration-Resistant Prostate Cancer with Bispecific Anti-PSMA x Anti-CD28 Antibodies in Combination with Anti-PD-1 Antibodies
KR20250048583A (ko) 2022-08-18 2025-04-09 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 인터페론 전구단백질 및 이의 용도
US20240067691A1 (en) 2022-08-18 2024-02-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interferon receptor agonists and uses thereof
JP2025532464A (ja) 2022-09-15 2025-10-01 アビディキュア アイピー ビー．ブイ． Ｎｋ細胞の腫瘍標的化のための多重特異性抗原結合タンパク質及びその使用
EP4593590A1 (en) 2022-09-29 2025-08-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Correction of hepatosteatosis in humanized liver animals through restoration of il6/il6r/gp130 signaling in human hepatocytes
IL319818A (en) 2022-10-10 2025-05-01 Regeneron Pharma Methods for reducing alloantibody levels in patients requiring solid organ transplantation
WO2024086852A1 (en) 2022-10-21 2024-04-25 Diagonal Therapeutics Inc. Heteromeric agonistic antibodies to il-18 receptor
CN120769862A (zh) 2022-10-25 2025-10-10 赛斯米克治疗公司 变体IgG FC多肽及其用途
WO2024092133A1 (en) 2022-10-27 2024-05-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-acvr1 antibodies and their use in the treatment of trauma-induced heterotopic ossification
WO2024094660A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Genmab A/S Cd38 antibodies and uses thereof
EP4612184A1 (en) 2022-11-04 2025-09-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Calcium voltage-gated channel auxiliary subunit gamma 1 (cacng1) binding proteins and cacng1-mediated delivery to skeletal muscle
WO2024102948A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 Celgene Corporation Fc receptor-homolog 5 (fcrh5) specific binding molecules and bispecific t-cell engaging antibodies including same and related methods
CN120500498A (zh) 2022-11-14 2025-08-15 瑞泽恩制药公司 用于成纤维细胞生长因子受体3介导的至星形胶质细胞的递送的组合物及方法
AU2023379451A1 (en) 2022-11-14 2025-05-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-fgfr3 antibodies and antigen-binding fragments and methods of use thereof
WO2024123698A1 (en) 2022-12-08 2024-06-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods to characterizing a fragment crystallizable domain of a bispecific antibody
WO2024130175A2 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antigen-binding molecules that bind to aav particles and uses
US12195546B2 (en) 2022-12-19 2025-01-14 Sanofi CD28/OX40 bispecific antibodies
WO2024138191A1 (en) 2022-12-23 2024-06-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ace2 fusion proteins and uses thereof
AU2024207005A1 (en) 2023-01-13 2025-08-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Il12 receptor agonists and methods of use thereof
US20240247069A1 (en) 2023-01-13 2024-07-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fgfr3 binding molecules and methods of use thereof
WO2024155982A2 (en) 2023-01-20 2024-07-25 Invetx, Inc. Bispecific binding agents for use in companion animals
IL322397A (en) 2023-02-13 2025-09-01 Regeneron Pharma Treating muscle-related disorders with anti-human CACNG1 antibodies
AU2024223918A1 (en) 2023-02-17 2025-09-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Induced nk cells responsive to cd3/taa bispecific antibodies
WO2024182540A2 (en) 2023-02-28 2024-09-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. T cell activators and methods of use thereof
US20240309072A1 (en) 2023-02-28 2024-09-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multivalent anti-spike protein binding molecules and uses thereof
AU2024237581A1 (en) 2023-03-14 2025-10-02 Xencor, Inc. Anti-cd28 compositions
AU2024240129A1 (en) 2023-03-17 2025-10-09 Oxitope Pharma B.V. Anti-phosphocholine antibodies and methods of use thereof
WO2024194685A2 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Oxitope Pharma B.V. Anti-phosphocholine antibodies and methods of use thereof
TW202500193A (zh) 2023-03-22 2025-01-01 美商信立泰生物醫藥公司 抗５ｔ４抗原結合結構域、抗體－藥物共軛體及彼等之使用方法
AU2024254039A1 (en) 2023-04-07 2025-10-02 Diagonal Therapeutics Inc. Hinge-modified bispecific antibodies
US20250002588A1 (en) 2023-04-07 2025-01-02 Diagonal Therapeutics Inc. Bispecific agonistic antibodies to activin a receptor like type 1 (alk1)
WO2024216221A1 (en) 2023-04-14 2024-10-17 Xencor, Inc. Anti-cd28 x anti-trop2 antibodies
US20250084186A1 (en) 2023-04-14 2025-03-13 Xencor, Inc. Anti-cd28 x anti-enpp3 antibodies
WO2024229136A1 (en) 2023-05-01 2024-11-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multidose antibody drug products using phenol or benzyl alcohol
WO2024229105A1 (en) 2023-05-02 2024-11-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-human m-cadherin (cdh15) antibodies, conjugates, and uses thereof for delivery of genetic payloads to muscle cells
AU2024269008A1 (en) 2023-05-10 2025-11-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cd20-pd1 binding molecules and methods of use thereof
AR132668A1 (es) 2023-05-12 2025-07-16 Genmab As Anticuerpos capaces de unirse a ox40, variantes de los mismos y usos de los mismos
US20240376229A1 (en) 2023-05-12 2024-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interferon receptor antagonists and uses thereof
WO2024243048A1 (en) 2023-05-19 2024-11-28 Diagonal Therapeutics Inc. Bispecific agonistic antibodies to il12 receptor
AU2024285988A1 (en) 2023-06-08 2025-11-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Animal model with rapid onset of alzheimer's amyloid beta plaque pathology
WO2024251884A1 (en) 2023-06-09 2024-12-12 Innate Pharma Nk cell engager proteins comprising anti-cd20 and ant-nkp46 antibody, linked to il-2 in treatment of r/r b-nhl
US20250011449A1 (en) 2023-06-11 2025-01-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Circularized antibody molecules
WO2024258870A2 (en) 2023-06-12 2024-12-19 Amgen Inc. Lymphotoxin beta receptor agonist binding proteins
WO2024259206A1 (en) 2023-06-16 2024-12-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cd40 x cd40 bispecific antigen-binding molecules and uses thereof
WO2025014533A1 (en) 2023-07-10 2025-01-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-human cacng1 antibody-drug conjugates and uses thereof
US20250043017A1 (en) 2023-07-10 2025-02-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. BISPECIFIC PD-L1x4-1BB ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
TW202519559A (zh) 2023-07-10 2025-05-16 美商再生元醫藥公司 雙特異性PD-L1xCD28抗體及其使用方法
WO2025019789A1 (en) 2023-07-19 2025-01-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. ANTI-FACTOR XII/XIIa ANTIBODIES AND USES THEREOF
US20250049896A1 (en) 2023-07-28 2025-02-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-tfr:acid sphingomyelinase for treatment of acid sphingomyelinase deficiency
WO2025029657A2 (en) 2023-07-28 2025-02-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-tfr:gaa and anti-cd63:gaa insertion for treatment of pompe disease
WO2025030041A1 (en) 2023-08-02 2025-02-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating metastatic castration-resistant prostate cancer with bispecific anti-psma x anti-cd28 antibodies
WO2025030044A1 (en) 2023-08-02 2025-02-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating clear cell renal cell carcinoma with bispecific anti-psma x anti-cd28 antibodies
US20250188166A1 (en) 2023-08-23 2025-06-12 Bright Peak Therapeutics Ag Il-18 polypeptides fused to immune cell antigen specific binding polypeptides and uses thereof
WO2025049591A1 (en) 2023-08-28 2025-03-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-cxcr4 antibodies and uses thereof
AR133676A1 (es) 2023-08-28 2025-10-22 Xencor Inc Combiterapia de anti-cd20 x anti-cd28
WO2025090519A1 (en) 2023-10-23 2025-05-01 Diagonal Therapeutics Inc. Heteromeric agonistic antibodies to il-18 receptor
WO2025090973A2 (en) 2023-10-27 2025-05-01 Xencor, Inc. Anti-trop2 x anti-pdl1 x anti-cd28 antibodies
WO2025106469A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Engineered heavy chain variable domains and uses thereof
US20250163468A1 (en) 2023-11-21 2025-05-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Covalently surface modified adeno-associated virus production by in vitro conjugation, and purification of covalently surface modified adeno-associated virus
WO2025117869A1 (en) 2023-11-29 2025-06-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating recurrent ovarian cancer and endometrial cancer with bispecific anti-muc16 x anti-cd28 antibodies in combination with anti-pd-1 antibodies or bispecific anti-muc16 x anti-cd3 antibodies
WO2025114541A1 (en) 2023-11-30 2025-06-05 Genmab A/S Antibodies capable of binding to ox40 in combination therapy
WO2025122614A1 (en) 2023-12-05 2025-06-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Il18 receptor agonists and methods of use thereof
GB202318820D0 (en) 2023-12-08 2024-01-24 UCB Biopharma SRL Antibodies
WO2025128652A1 (en) 2023-12-12 2025-06-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating endometrial cancer with bispecific anti-muc16 x anti-cd3 antibodies alone or in combination with anti-pd-1 antibodies
WO2025133707A1 (en) 2023-12-19 2025-06-26 Vectory Therapeutics B.V. Anti-tdp-43 antibodies and uses thereof
WO2025151806A1 (en) 2024-01-11 2025-07-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. P75 neurotrophin receptor (p75ntr)-binding proteins and p75ntr-mediated delivery to the nervous system
WO2025149633A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Laigo Bio B.V. Bispecific antigen binding proteins
US20250242056A1 (en) 2024-01-26 2025-07-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for using plasma cell depleting agents and/or b cell depleting agents to suppress host anti-aav antibody response and enable aav transduction and re-dosing
WO2025160340A2 (en) 2024-01-26 2025-07-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination immunosuppression for inhibiting an immune response and enabling immunogen administration and re-administration
WO2025171124A1 (en) 2024-02-07 2025-08-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating prostate cancer with bispecific anti-psma x anti-cd3 antibodies and bispecific anti-psma x anti-cd28 antibodies
WO2025184603A2 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. The use of cd40 inhibitors for inhibiting an immune response and enabling immunogen administration and re-administration
WO2025184567A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for re-dosing aav using anti-cd40 antagonistic antibody to suppress host anti-aav antibody response
WO2025191136A1 (en) 2024-03-15 2025-09-18 Avidicure Ip B.V. Muteins of 4-1bb ligand extracellular domain, fusion proteins comprising the same and uses thereof
WO2025191144A1 (en) 2024-03-15 2025-09-18 Avidicure Ip B.V. Conjugates of egfr-specific antigen binding proteins and cytokines
WO2025191133A1 (en) 2024-03-15 2025-09-18 Avidicure Ip B.V. Il-21 muteins, fusion proteins comprising the same and uses thereof
WO2025199278A2 (en) 2024-03-20 2025-09-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Masked multispecific antigen-binding molecules with cleavable linkers
WO2025199243A1 (en) 2024-03-20 2025-09-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Trivalent multispecific binding molecules and methods of use thereof
WO2025213061A2 (en) 2024-04-04 2025-10-09 Ethyreal Bio, Inc. Anti-tshr antibodies and uses thereof
WO2025221728A2 (en) 2024-04-15 2025-10-23 Janssen Biotech, Inc. Ltbr binding molecules and uses thereof
WO2025240335A1 (en) 2024-05-13 2025-11-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fgfr3 binding molecules and methods of use thereof
WO2025240287A1 (en) 2024-05-13 2025-11-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating light chain amyloidosis with bispecific bcma x cd3 antibodies

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002002781A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw Heterodimeric fusion proteins

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4444878A (en) * 1981-12-21 1984-04-24 Boston Biomedical Research Institute, Inc. Bispecific antibody determinants
JPH09100296A (ja) * 1984-09-26 1997-04-15 Takeda Chem Ind Ltd 蛋白質の相互分離方法
WO1986002068A1 (fr) 1984-09-26 1986-04-10 Takeda Chemical Industries, Ltd. Separation mutuelle de proteines
GB8626412D0 (en) 1986-11-05 1986-12-03 Clark M R Antibodies
GB8626413D0 (en) 1986-11-05 1986-12-03 Gilliland L K Antibodies
AU4116793A (en) * 1992-04-24 1993-11-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US5456909A (en) * 1992-08-07 1995-10-10 T Cell Sciences, Inc. Glycoform fractions of recombinant soluble complement receptor 1 (sCR1) having extended half-lives in vivo
US5945311A (en) * 1994-06-03 1999-08-31 GSF--Forschungszentrumfur Umweltund Gesundheit Method for producing heterologous bi-specific antibodies
DE122009000068I2 (de) * 1994-06-03 2011-06-16 Ascenion Gmbh Verfahren zur Herstellung von heterologen bispezifischen Antikörpern
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
JPH0987300A (ja) * 1995-07-14 1997-03-31 Takeda Chem Ind Ltd 雑種蛋白質およびその用途
DK0826695T3 (da) * 1996-09-03 2002-04-15 Gsf Forschungszentrum Umwelt Tilintetgørelse af kontaminerende tumorceller i stamcelletransplantater med bispecifikke antistoffer
DK0826696T3 (da) * 1996-09-03 2002-09-23 Gsf Forschungszentrum Umwelt Anvendelse af bi- og trispecifikke antistoffer til inducering af en tumorimmunitet
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
DE19725586C2 (de) * 1997-06-17 1999-06-24 Gsf Forschungszentrum Umwelt Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper
US6994853B1 (en) * 1998-09-25 2006-02-07 Trion Pharma Gmbh Time-staggered utilization of tumor cells in combination with intact antibodies for immunization
US20030224000A1 (en) * 2001-12-21 2003-12-04 Kokai-Kun John Fitzgerald Methods for blocking or alleviating staphylococcal nasal colonization by intranasal application of monoclonal antibodies
US7169903B2 (en) * 2001-12-21 2007-01-30 Biosynexus Incorporated Multifunctional monoclonal antibodies directed to peptidoglycan of gram-positive bacteria
CA2872136C (en) * 2002-07-18 2017-06-20 Merus B.V. Recombinant production of mixtures of antibodies
SI1545574T1 (sl) * 2002-09-13 2014-10-30 Biogen Idec Inc. Postopek za čiščenje polipeptidov s simulirano "moving bed" kromatografijo
US7923538B2 (en) * 2005-07-22 2011-04-12 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Recombinant antibody composition
CN105177091A (zh) * 2006-03-31 2015-12-23 中外制药株式会社 用于纯化双特异性抗体的抗体修饰方法
CA2669412A1 (en) * 2007-01-23 2008-07-31 Xencor, Inc. Optimized cd40 antibodies and methods of using the same
US9266967B2 (en) * 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
DK2235064T3 (en) 2008-01-07 2016-01-11 Amgen Inc A process for the preparation of heterodimeric Fc molecules using electrostatic control effects
JO3672B1 (ar) * 2008-12-15 2020-08-27 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9).
MY199658A (en) 2009-06-26 2023-11-14 Regeneron Pharma Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format
CA2791109C (en) 2011-09-26 2021-02-16 Merus B.V. Generation of binding molecules

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002002781A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw Heterodimeric fusion proteins

Also Published As

Publication number Publication date
JP2018035193A (ja) 2018-03-08
HRP20210637T1 (hr) 2021-08-20
EP3916011A1 (en) 2021-12-01
IL217000A0 (en) 2012-02-29
US20220024973A1 (en) 2022-01-27
RU2012102602A (ru) 2013-08-10
KR101835648B1 (ko) 2018-03-07
RU2569157C2 (ru) 2015-11-20
JP2015227386A (ja) 2015-12-17
MY199658A (en) 2023-11-14
CA2766220A1 (en) 2010-12-29
IL265732B (en) 2020-03-31
HUE054257T2 (hu) 2021-08-30
EP2445936A1 (en) 2012-05-02
US20160251395A1 (en) 2016-09-01
HK1219283A1 (en) 2017-04-28
CN102471378A (zh) 2012-05-23
JP2025026680A (ja) 2025-02-21
DK2975051T3 (da) 2021-04-26
US20140248664A1 (en) 2014-09-04
EP2975051A1 (en) 2016-01-20
MX342623B (es) 2016-10-06
RU2015140911A (ru) 2017-03-30
JP2012531439A (ja) 2012-12-10
SG176868A1 (en) 2012-02-28
MY152963A (en) 2014-12-15
JP2022173489A (ja) 2022-11-18
KR101747103B1 (ko) 2017-06-14
MX368932B (es) 2019-10-22
ES2865648T3 (es) 2021-10-15
AU2015207952A1 (en) 2015-08-20
AU2015207952B2 (en) 2016-06-02
PT2975051T (pt) 2021-05-04
US12157758B2 (en) 2024-12-03
KR101904065B1 (ko) 2018-10-04
KR20160141879A (ko) 2016-12-09
TWI507525B (zh) 2015-11-11
MX2011014008A (es) 2012-06-01
US11168111B2 (en) 2021-11-09
KR102010827B1 (ko) 2019-08-14
AU2010265933A1 (en) 2012-01-19
MY164121A (en) 2017-11-30
CY1124358T1 (el) 2022-07-22
US9982013B2 (en) 2018-05-29
KR20120027055A (ko) 2012-03-20
US8586713B2 (en) 2013-11-19
BRPI1015561A2 (pt) 2020-10-13
MY192182A (en) 2022-08-04
TW201116625A (en) 2011-05-16
EP2975051B1 (en) 2021-04-14
SI2975051T1 (sl) 2021-08-31
RU2647758C2 (ru) 2018-03-19
SMT202100250T1 (it) 2021-07-12
US20190031713A1 (en) 2019-01-31
US20220389055A1 (en) 2022-12-08
PL2975051T3 (pl) 2021-09-20
KR20180110190A (ko) 2018-10-08
LT2975051T (lt) 2021-07-12
JP7153048B2 (ja) 2022-10-13
MX2019012601A (es) 2019-12-16
AU2010265933B2 (en) 2015-05-14
JP5816170B2 (ja) 2015-11-18
CA2766220C (en) 2021-02-09
CN102471378B (zh) 2014-04-02
JP2021004261A (ja) 2021-01-14
MX384993B (es) 2025-03-14
KR20140112569A (ko) 2014-09-23
US20100331527A1 (en) 2010-12-30
CN103833855A (zh) 2014-06-04
WO2010151792A1 (en) 2010-12-29
IL265732A (en) 2019-05-30
RU2014114172A (ru) 2015-10-20
US9309326B2 (en) 2016-04-12
MX2021009234A (es) 2022-06-14
JP6247673B2 (ja) 2017-12-13
KR20180034638A (ko) 2018-04-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12157758B2 (en) Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format
HK40064507A (en) Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format
HK1219283B (en) Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format