TWI360549B - Novel pyridazine compound and use thereof - Google Patents

Description

1360549 九、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明關於新穎之噠嗪化合物及其用途。 【先前技術】

C型肝炎病毒爲黃病毒科（Flaviviridae)家族中一種 有被膜、單股、正意義之RNA病毒。HCV主要係在肝臟 的肝細胞中複製。血液循環中之HCV顆粒會與肝細胞表 面的受體結合且隨後進入該細胞中》—旦進入肝細胞中， HCV即會利用所需的細胞內機制來完成其自身的複製。 Lindenbach, B. Nature 436 (7053) : 932-8 (2005)。HCV 基因組經轉譯而製造出單獨一個約3011個胺基酸之蛋白 質。然後這條“聚蛋白質”會被病毒蛋白酶及細胞蛋白酶分 解而產生三種結構（與病毒粒子-結合的）蛋白質及七種 非結構（NS)蛋白質。 HCV編碼兩種蛋白酶：NS2半胱胺酸自解蛋白酶（ autoprotease )及NS3-4A絲胺酸蛋白酶。該等NS蛋白質 會結合病毒基因組來形成RNA複製複合體，其能與重組 之細胞膜結合。RNA複製作用係透過病毒RNA-依賴型 RNA聚合酶NS5B來進行，該聚合酶能製造負鏈RNA中 間體。而後把該負鏈RNA當作模板來製造新穎的正鏈病 毒基因組。新生的基因組可被轉譯、再複製或被包裹到新 的病毒顆粒中。據推測新的病毒顆粒會進入分泌途徑且於 細胞表面釋出。 -5- 1360549 HCV具有極高複製率，於受感染個體每天可製造約 —兆個顆粒。由於HCV RN A聚合酶缺乏校對能力，所以 HCV還具有極高突變率，此因素有助於彼逃避宿主的免 疫反應。 基於HCV分離物之基因差異，C型肝炎病毒被分成 六種基因型（1-6)且各基因型還有數種亞型。亞型基於 彼之基因歧異度再被分成數個準株種（quasispecies)。 全世界HCV基因型之優勢及分佈皆有所不同。舉例來說 ，於北美洲，以基因型la最具優勢，其次依序爲lb、2a 、2b及3a型。於歐洲，基因型lb最具優勢，其次依序 爲2a、2b、2c及3a型。非洲幾乎全都是第4及5型基因 型。基因型在臨床上很重要且能決定千擾素-爲主治療之 有效反應及此等治療所需之時間長短。干擾素-爲主之治 療對基因型第1及4型較其他基因型（2、3、5及6型） 的效果差。標準千擾素-爲主之治療對基因型第1及4型 之治療時間爲48週，而對基因型第2及3型的治療可於 24週內完成》 世界衛生組織推測全世界有1.7-2億人（全世界人口 之3%)長期感染HCV。這群人中約有75%血漿長期感 染了可偵測之HCV RNA。此等長期帶原者有發展成肝硬 化及/或肝癌之風險。於追蹤7-16年之硏究中’有7-16 %患者發展成肝硬化，〇 · 7 -1 · 3 %則轉成肝細胞癌及1 · 3 _ 3.7%死於肝臟-相關疾病。 至今唯一的治療策略爲單獨使用干擾素α _2 (或其聚 -6- 1360549 乙烯二醇化形式）或再合併使用三氮唑核（ribavirin)來 治療。然而，其僅對約40%患者長期有效且該治療伴有 嚴重副作用。因此極需要有效且具選擇性之HCV抑制劑

相關揭示包括美國專利第4,914，108、4,988,707、 4,990,518 ' 5,137,896、 5,208,242、 5,227,384 ' 5,302,601 、5,374,638 ' 5,405,964 、 5,438,063 、 5,486,525 、 6,479,508號，及美國專利公開案第 US2003/0 1 08862 A1 號，加拿大專利第2423800 A1號，德國專利第 42 1 1 474 A1、4236026、4309969、43 1 88 1 3 號，歐洲專利 第 EP 0 1 3 8 5 5 2 A2、EP 0 7 06 795 A2、EP 1 1 32 3 8 1 A1 號，英國專利第2 1 58440 A號、PCT專利公告第 WO 00/2041 6、WO 00/391 27、WO 00/405 83 ' WO 03/007945 Al、WO 03/0 1 0 1 40 A2、WO 03/010141 A2 、WO 93/02080 ' WO 93/14072、WO 96/1 1 1 92、 WO 96/1 2703、WO 99/27929、PCT-US2004/43 1 1 2、 PCT-BE2003/000 1 1 7、P C T - U S 2 0 0 5/2 6 6 0 6 ； Akamatsu 等人 ,“New Efficient Route for Solid-Phase Synthesis of Benzimidazole Derivates55, 4:475-483 > J. COMB.CHEM., 2 0 0 2 ； Baginski SG 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2000 Jul 5:97 ( 1 4): 798 1 -6; Cleve 等人，“Derivate des Imidazo[4.5-b]-und Imidazo[4.5-c]pyridins’’， 7 4 7:1 58-171,JUSTUS LIEBIGS ANNALEN DER CHEMICA, 1971 ； Kiyama 等人，“Synthesis and Evaluation of Novel 1360549

Nonpeptide Angiotensin II Receptor Antagonists: I n i d azo [ 4，5 - c] py ri d i ne Derivatives with an Aromatic Substituent”，43 ( 3 ) :450-60, CHEM PHARM BULL, 1995 ;Mederski 等人，“Synthesis and Structural Assignment of Some N-substituted Imidazopyridine Derivatives”，48 (48) :1 0549-58, TETRAHEDRON, 1992 ； Yutilov 等人，23 (1): 56-9, KHIMIKOFARMATSEVTICHESKII ZHURNAL, 1989 。此外，還可參考WO 05/063744。 人們需要具有所需抗-HCV治療及/或預防特性之化 合物，該等特性包括高效益、選擇性及口服生體可利用性 (適合每日投藥1到2次）、低毒性（包括於hERG片鉗 檢定具可接受之效能、無肺滲透性水腫及對QT間隔沒有 影響）、僅有極小或無代謝活化作用/麩胱甘肽加成物形 成、沒有基因毒性的跡象、低代謝轉換率及低血漿廓清性 、對HCV基因型（特別是la及lb、2、3及4型）有廣 效性、能有效對抗HCV耐性突變（於臨床測試中與其他 非核苷NS5B抑制劑之耐性特徵僅有有限的重疊），及與 其他HCV治療劑如甘擾素及三氮唑核具相容性。此等安 全性特徵應能容許至少1年之長期投藥。 【發明內容】 發明簡述 爲了達到本發明之前述目標，提供式（1)之化合物：

-8- 1360549

及其鹽及溶劑化物。IUPAC : 5 — ( [6- [2,4 —二（三 氟甲基）苯基]噠嗪_3 —基]甲基）一 2— (2—氟苯基） -5H -咪唑并[4,5-c]吡啶。CAS: 5H—咪唑并[4,5-c]吡啶 ，5— [[6 — [2,4 一二（三氟甲基）苯基]噠嗪一 3—基]甲基 ]—2—（2 —氟苯基）。 化合物（1 )可用於HCV感染之治療或預防法中，其 包含把治療或預防劑量之化合物（1)投予給個體。另一 具體例爲化合物（1)於製造供預防或治療哺乳動物（尤 其是人）之HCV感染的藥劑上之用途。 本發明之另一具體例爲製備式（1)化合物之方法：

其包含：（a)令5— [6-氯一噠嗪一 3_基甲基]—2 —(2 -氟苯基）—5H -咪唑并[4,5-c]吡啶與2,4一二（ -9- 1360549 三氟甲基）苯基硼酸於結構爲Ι^0Ι120(Ι140ΚΙ13 (其中各 個R1、R2、R3及R4係分別選自Ci - C6烷基且a爲0或1 )之溶劑的存在下反應，及（b)回收該化合物（1)。 於製備化合物（1)之另一具體例中，所提供之方法 包括提供中間體（2 )

(2) 令2，4 -二（三氟甲基）苯基硼酸與3 -氯一 6 -甲基 噠嗪偶合以製備化合物（2a) 0 cf3 ㈣ 令化合物（2a )與氯化劑反應以產製烷化劑（3 ) -10- 1360549

(3) 及於鹼性條件下利用烷化劑（3 )烷化中間體（2 )以 生成化合物（1 )

F ^ F

(1) 該烷化劑（3 )係新的化合物且屬本發明之一部份， 當同一化合物具有甲基取代而非氯甲基時，或以溴、氟或 碘替代氯時，亦屬本發明之一部份。 本發明之另一具體例係關於含有至少一種藥學上可接 受之賦形劑及式（1)化合物之藥學組成物。於一具體例 中係把式（1)化合物與有機酸調合在一起且任意地調製 成藥學劑型如膠囊。於另一具體例中，式（1)化合物被 微粒化且調製成懸浮液。 -11 - 1360549 本發明之式（1)化合物或其藥學組成物可用來治療 或預防c型肝炎。 發明詳細說明 本發明之治療性化合物可以治療有效量（即HCV-抑 制量或HCV·複製抑制量）用任何此技術習知的方式如口 服、經鼻、皮下、肌肉內、皮內、靜脈內、動脈內、非經 腸或藉導管插入來投予給哺乳動物個體（包括人類）。該 治療有效童被認爲能確保藥物於血漿達到約1 0 0 η Μ濃度 (爲蛋白質調整EC90之三倍）。此濃度一般預期可用約 0.5-約5 mg/kg，典型地約0.7到2.2 mg/kg，更常見地爲 約1.2 mg/kg人類體重之份量口服投藥來提供。 本發明化合物之最適劑量將視此技術人士習知的多種 因素而定，其包括於既定調製劑中該化合物之生體可利用 率、該化合物於個體之代謝及分佈、個體爲禁食或餵食狀 態、調製劑中載體及賦形劑之選用，及其他因素等。典型 地，適當的投藥方式係以前-臨床及臨床背景來決定，且 爲熟悉此技術之人士所習知。本發明化合物之治療有效量 的投予任意地可爲每天分成數個次單位來提供，或者每日 投藥或者間隔1日以上來投藥，將視感染特性、患者一般 情況及本發明化合物之調製劑而定。一般而言，該化合物 係每曰投藥兩次。 本發明化合物可與能有效治療HCV感染之其他化學 劑劑一起使用。他們任意地可於一療程中分開投藥或者與 -12- 1360549 化合物（1 )整倂在單一劑型如錠劑' iv溶液或膠囊中。 此等其他的化學劑包括例如干擾素-α、三氮唑核及/或 述於 ΕΡ1162196、WO 03/010141、WO 03/007945、 WO 0 0/2 04 425及/或WO 03/010140(及其他於此等專利 家族中提及）之化合物。於療程中可與本發明化合物一起 投藥之其他化學劑包括現在正在進行臨床實驗之化合物， 尤其是 HCV 蛋白酶抑制劑如 VX-950 ( Vertex

Pharmaceuticals ) 、SCH 5 0 3 0 3 4 7 ( Schering Plough )及 BILN-2061 ( Boehringer Ingelheim)、核苷類 HCV 抑制 劑如 NM283、NM107(來自 Indenix/Novartis 兩者）及 R1626 ( Hoffmann-LaRoche)，以及非核苷類HCV抑制劑 包括}1(1：\/'-086 及-796 ('\^1'〇?1131'1113/'\^)^111)。可使用尋 常份量之輔助性抗病毒劑，不過如果本發明化合物與該輔 助性化合物之效能具有加成性，那麼任意地各活性劑的份 量可等量減少，若該等化學劑具有加乘作用，則用量可以 減少得更多。不過，一般地該等化學劑係於單一組合組成 物中以常見的活性份量來使用。 當共-投藥劑與本發明之化合物具化學相容性且意圖 以同樣途徑投藥時通常會把該等共投藥劑與本發明化合物 調製成單一組成物。若非如此，那麼任意地可用含有兩種 藥劑且各自位於個別容器或隔間內之醫學套組或包裝品來 提供。 本發明化合物可呈游離鹼或鹽類形式提供。典型地該 等鹽類係把有機及/或無機酸酸加成到游離鹼上製得。其 -13- 1360549 實例包括（1)無機酸如氫鹵酸像是氫氯酸及氫溴酸、硫 酸、硝酸、磷酸及磺胺酸；或（2)有機酸如乙酸、丙酸 、羥基乙酸、苯甲酸、2 —羥基丙酸、2 —氧丙酸、乳酸、 富馬酸、酒石酸、丙酮酸、馬來酸、丙二酸、蘋果酸、柳 酸（如2 —羥基苯甲酸）、對一胺基柳酸、2 —羥乙磺酸 、乳糖酸、琥珀酸、草酸及檸檬酸；有機磺酸類如甲烷磺 酸、乙烷磺酸、苯磺酸、對一甲苯磺酸、C1 一 C6烷基磺 酸、及環己烷磺胺酸。典型的鹽類爲氯化物、硫酸鹽、硫 酸氫鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、磷酸鹽、草酸 鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸、丙二酸鹽、及/或富 馬酸鹽。於本發明範圍中還包括本發明化合物與一或多種 蛋白質內之胺基酸所形成的鹽類。較佳地該酸性的對偶離 子係生理上無害且無毒的或者爲藥學上可接受的，不過如 果鹽類係用來當作製備化合物類的中間體，那麼是否有毒 就沒有關係。通常化合物（1 )係以游離鹼的形式投藥， 不過也能使用適當的鹽類如甲磺酸（甲烷磺酸）鹽及鹽酸 鹽。 本發明化合物還包括與該等化合物或其鹽類形成之溶 劑化物如水合物、醇化物等。 本發明之藥學性化合物任意地可與習知藥學載體及賦 形劑（其將依一般實務選用）調製在一起。錠劑可含有賦 形劑、流動劑、塡料、結合劑等。水性調製劑係以無菌形 式製得，且當意圖用口服投藥以外的方式遞送時一般會具 等張性。調製劑任意地可含有賦形劑如述於“Handbook of -14- 1360549

Pharmaceutical Excipients”（ 2005 )之賦形劑且可包括抗 壞血酸及其他抗氧化劑、螯合劑如EDTA、碳水化合物如 糊精、羥烷基纖維素、羥烷基甲基纖維素及/或有機酸如 油酸或硬脂酸等。 在此使用時，術語“藥學上可接受之載體”意指能與該 活性成份調配在一起、用以促進其製備及/或施用或散佈 到欲治療部位之任何材料或物質。用於本發明組成物之適 當的藥學載體爲熟悉此技術者所習知。他們包括添加劑如 濕化劑、分散劑、黏合劑、乳化劑、溶劑、流動劑、塗覆 劑、抗菌劑及抗真菌劑（如苯酚、山梨酸、氯丁醇）及等 張劑（如糖類或氯化鈉），不過正如同藥學實務要求地， 他們需對哺乳動物無毒。 本發明之藥學組成物可用任何習知方式製備，如以單 一步驟或多個步驟把該等活性成份與所選用之載體材料均 質混合、塗覆及/或硏磨該等活性成份，且若適合，還可 含有其他添加劑如界面活性劑。含有本發明化合物且被調 製成微球體（通常直徑爲約1到1 0 gm )之組成物可用於 釋控或長效型調製劑。 於任一調製劑中，化合物（1)可被磨製成細分形式 ’典型地平均粒度係在約1-20微米的範圍。實施例lb之 產物爲結晶針狀且結晶大小範圍典型爲約25-40微米。任 意地此結晶可用Jet mill-00硏磨機以約60-80 psi微粒化 處理以得到約3-4微米大小且表面積約7-8平方公尺/g之 顆粒。然而，該起始結晶的大小將因批次不同而有所不同 -15- 1360549 且微粒化程度能透過選擇來決定。據此，微粒化 (η在接受在此所述之範例步驟之微粒化過程 簡單地定義成結晶或非晶形化合物（1 )。所得 度或表面積並不重要。微粒化化合物（1)會被 溶液中，任意地可使用下文進一步說明之懸浮劑 及/或界面活性劑來輔助。 典型地，該藥學調製劑爲化合物（1)的溶 其中該化合物（1)係被溶解在適當的溶劑、溶 組合中。溶解於有機溶劑內之化合物（1)可用 造結晶化合物（1)之中間體，不過典型地係被 治療性或預防性投藥之藥學上可接受之賦形劑中 可作爲藥學製劑之化合物（1)的適當溶液 及不同有機酸（典型地爲C2—C24有機酸）， 肪酸如癸酸、油酸、月桂酸、己酸、棕櫚酸及/ 酸。該等脂肪酸類任意地可爲飽和或不飽和，或 。此外，可補充地或取代該等有機酸地使用聚 PEGs)及/或短鏈、中鏈或長鏈之單-、二或三 任意地亦可以同樣形式來使用聚乙烯二醇化之短 或長鏈脂肪酸》 最常見的有機酸爲酸性由羧基- COOH提供 在此使用時，含有〇S03Η基團之磺酸屬強酸。 較佳的酸宜含有親脂性主體。以一元-或二元羧_ 任意地適當的界面活性劑可用於本發明任一 任一或多種如下化學劑，典型地不論何者皆可） 之化合物 處理後係 顆粒的粒 懸浮在水 、乳化劑 解形式， 解劑或其 來作爲製 溶在用於 〇 包括水以 通常爲脂 或肉豆蔻 其混合物 乙二醇（ 甘油酯。 鏈、中鏈 之羧酸。 大致上’ :爲宜。 調製劑（ 。此等化 -16- 1360549 學劑亦以乳膠劑或乳化劑爲人所知，且可用於本發明之藥 學組成物中。他們爲具有適當乳化、分散及/或濕化特性 之非離子、陽離子及/或陰離子物質。適當的陰離子界面 活性劑包括水溶性皂類及水溶性界面活性劑。適當的皂類 爲高級（c1G_c22)脂肪酸之鹼金屬或鹼土金屬鹽類、無取 代或取代之銨鹽，如油酸或硬脂酸或來自椰子油或獸脂油 之天然脂肪酸混合物之鈉鹽或鉀鹽。合成性界面活性劑包 括聚丙烯酸之鈉鹽或鈣鹽：脂肪磺酸酯及硫酸酯；磺酸化 苯并咪唑衍生物及烷芳基磺酸酯。脂肪磺酸酯或硫酸鹽通 常爲鹼金屬及鹼土金屬鹽類、無取代銨鹽或以8到22個 碳原子之烷基或醯基取代之銨鹽的形式，如木質磺酸或十 二烷基磺酸或得自天然脂肪酸類之脂肪醇硫酸酯類混合物 之鈣鹽或鈉鹽、硫酸或磺酸酯類之鹼金屬或鹼土金屬鹽類 (如硫酸月桂酯鈉）及磺酸類脂肪醇/環氧乙烯加成物。 適當的磺酸化苯并咪唑衍生物較佳地含有8到22個碳原 子。烷芳基磺酸鹽的實例有十二烷基苯磺酸或二丁基-萘 磺酸或萘-磺酸/甲醛縮合產物之鈉、鈣或醇胺鹽類。同 樣適用的還有對應的磷酸鹽類如磷酸酯的鹽類及對壬基苯 酚與乙烯及/或環氧丙烯之加成物，或磷脂質類。用於此 目的之適當磷脂質有腦磷脂或卵磷脂型之天然（來自動物 或植物細胞）或合成的磷脂質類’例如磷脂醯基乙醇胺、 磷脂醯基絲胺酸、磷脂醯基甘胺酸、脫脂酸卵磷脂、心肌 磷脂質、二辛基磷脂醯基-膽鹼、二棕櫚醯基磷脂醯基-膽 鹼及其混合物。含有此等化學劑之水性乳液亦屬本發明之 -17- 1360549 範圍。 適當的非離子性界面活性劑包括烷基苯酚類、脂肪醇 類、脂肪酸類、分子內含有至少12個碳原子之脂族胺類 或醯胺類、烷芳烯磺酸酯及二烷基硫琥珀酸酯類之聚乙氧 化及聚丙氧化衍生物，如脂族及環脂族醇類、飽和及不飽 和脂肪酸及烷基苯酚類之聚二醇醚衍生物，該等衍生物較 佳地含有3到10個二醇醚基團且於該（脂族）烴部份有 8到20個碳原子且於烷基苯酚的烷基部份有6到18個碳 原子。更合適的非離子界面活性劑有聚環氧乙烯與聚丙二 醇、乙二胺基聚丙二醇（烷基鏈內含有1到10個碳原子 )之水溶性加成物，該加成物含有20到250個乙二醇醚 基團及/或10到100個丙二醇醚基團。此等化合物於每 個丙二醇單元中通常含有1到5個乙二醇單元。非離子界 面活性劑之代表性實例爲壬基苯酚-聚乙氧基乙醇、篦麻 油聚二醇醚、聚丙烯/聚環氧乙烯加成物、三丁基苯氧基 多乙氧基乙醇、聚乙二醇及辛苯氧基多乙氧基乙醇。聚乙 烯山梨聚糖之脂肪酸酯類（如聚氧乙烯山梨聚糖三油酸酯 ) '甘油、山梨聚糖、蔗糖及五赤藻糖醇亦爲適當的非離 子界面活性劑》 適當的陽離子界面活性劑包括四級銨鹽，尤其是鹵化 物’具有4個烴基團任意地以鹵素、苯基、取代之苯基或 經基取代；舉例來說含有至少一個C8-C22烷基基團（如 鯨蠟基、月桂基、棕櫚基、肉豆蔻基及油醯基）作爲N-取代基之四級銨鹽，且以無取代或鹵化之低級烷基、苯甲 -18- 1360549 基及/或羥基-低級烷基作更進一步的取代。 可用於此目的之界面活性劑之更詳細的說明見於 * · “McCutcheon’s Detergents and Emulsifiers Annual” (MC Publishing Crop., Ridgewood, New Jersey, 19 8 1), “Tensid-Taschenbucw”，2nd ed. (Hanser Ver 1 ag, Vienna, 19 8 1 )及 “Encyclopaedia of Surfactants”， (Chemical

Publishing Co., New York, 1981)。 • 本發明化合物可用任何適合欲治療病況之途徑如經口 、直腸、鼻、局部（包括眼、頰及舌下）、陰道及非經腸 (包括皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、氣管內及硬腦膜上 )投藥。投藥之較佳途徑將視例如接受者之狀況而異，不 過一般爲口服。 本發明化合物之口服投藥用調製劑通常係以各別分離 之單位存在，如各含有既定份量之膠囊、藥囊或錠劑；粉 末或顆粒形式；於水性液體或非水性液體之溶液或懸浮液 • ;或水包油之液態乳液或油包水之液態乳液。本發明化合 物任意地係以大九藥、舐劑或糊劑存在。 錠劑任意地可與一或多種輔助成份一起壓製或模製形 成。壓縮錠劑係於適當機器中把自由流動形式之本發明化 合物（如粉末或顆粒），任意地與結合劑、潤滑劑、惰性 稀釋劑、保存劑、界面活性劑及/或分散劑混合在一起壓 製而成。模製錠劑典型地係於適當機器中把用惰性液體稀 釋劑濕化之粉末狀化合物的混合物加以模製而成。該等錠 劑任意地可加上包衣或刻痕且可被調製成能緩緩地或調控 -19- 1360549 地釋放出其內的活性成份。 該等調製劑任意地可被製成局部用軟膏或乳膏，其所 含活性成份之份量爲例如0.075到20% w/w (包括活性 成份範圍在0.1 %到20%之間且以0.1% w/w漸增如0.6 % w/w、0.7% w/w 等等），較佳地爲 0.2 到 15% w/w 且最佳地爲0.5到10% w/w。當化合物被調製在軟膏內 時，該化合物係與石蠟系或水-可溶混性軟膏基底混合。 另一選擇地，該化合物可與水包油之乳膏基底一起調製成 乳膏。若有需要，該乳膏基底的水相可包括例如至少3 0 % w/w多元醇，如具有兩或多個羥基之醇類如丙二醇、 丁烷1，3—二醇，甘露醇 '山梨糖醇、甘油及聚乙二醇（ 包括PEG400 )及其混合物。該局部調製劑較佳地可包含 能增進活性成份吸收或促進其穿透皮膚或其他受感染部位 之化合物。此等皮膚穿透增強劑之實例包括二甲基亞楓及 相關類似物。 本發明乳液之油相係由習知成份用習知方式組成。雖 然此油相可僅含乳化劑（此外亦以乳膠劑爲人所知），不 過較佳地宜含有至少一種乳化劑與脂肪或油類或脂肪及油 類兩者所組成的混合物。任意地，可同時包括親水性乳化 劑及用來當作安定劑之親脂性乳化劑。同樣地最好同時含 有油及脂肪。該（一或多種）乳化劑以及安定劑（可有/ 無）構成所謂的乳化蠟質，且該蠟質與該油及脂肪構成所 謂的乳化性軟膏基底，其可成爲乳膏調製劑之油性分散相 -20- 1360549 適合調製劑之適當油類或脂肪的選擇係基於何者能提 供所需的修飾性質而定。因此乳膏任意地應爲具有適當黏 稠度之不油腻、不沾黏且可清洗掉之產物以避免藥物從軟 管或其他容器中滲露出來。可使用直鏈或分支、一元或二 元烷基酯類如二-異肥酸酯、硬脂酸異鯨蠟酯、椰子油脂 肪酸之丙二醇二酯、肉豆蔻酸異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸 異丙酯、硬脂酸異丁酯、棕櫚酸2-乙基己酯或習知的 Crodamol CAP之分支酯類的混合物，以後三者爲較佳酯 類。視所須性質而定’此等物質可單獨使用或組合使用。 另一選擇地，亦可使用高熔點脂質如白色軟石蠟及/或液 體石蠟或其他礦物油類。 可用於眼睛局部投藥之調製劑還包括眼藥水，其活性 成份係溶解或懸浮在適當載體，尤其是該活性成份之水性 溶劑中。任意地此等調製劑內之活性成份之濃度爲0.5到 2 0 %，較有利地爲0.5到1 0 %，特佳地爲約1 . 5 % w/w。 口內局部投藥之調製劑包括糖錠（其含有活性成份於 已調味基底，通常爲蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍膠）：軟糖（ pastille )(其含有活性成份於惰性基底如明膠及甘油酯 ，或蔗糖及阿拉伯膠）；及漱口水（其含有活性成份於適 當液體載劑）。 直腸投藥用之調製劑可爲含有例如可可脂或柳酸酯之 適當基底的栓劑。適用於經鼻投藥之調製劑，其固體載體 包括粒度範圍爲例如20到500微米（包括粒度範圍爲20 到5 00微米，其能以5微米漸增，例如爲30微米、35微 -21 - 1360549 米等等）之粗粉末，其可藉氣溶膠或粉末吸入器（其具有 多種實例）投藥。載體爲液體之適當調製劑（例如鼻噴劑 或鼻滴劑）包括了該等活性成份之水性或油性溶液。 用於陰道投藥之調製劑可爲含有活性成份以及此技術 習知之適當載劑之子宮托、棉墊、乳膏、凝膠劑、糊劑、 泡沬劑或噴劑調製劑。 非經腸投藥之調製劑包括水性及非水性無菌注射溶液 ，其可含有抗氧化劑、緩衝液、制菌劑及可令調製劑與目 標接受者之血液等張之溶劑；含有懸浮劑及增稠劑之水性 及非水性之無菌懸浮液。該等調製劑可置於含有單一劑量 或多劑量之容器（如密封安瓶及小管）內，可用凍乾（冷 凍乾燥）狀態儲存，其僅需在使用前加入無菌液體載劑如 注射用水即可。即用型注射溶液及懸浮液可從先前所述之 該類無菌粉末、顆粒及錠劑來製得。 本發明化合物任意地可被調製成釋控組成物，其化合 物的釋放被調控及調節使得人們無需頻繁地投藥或者改善 本發明化合物之藥物動力學或毒性特性。釋控組成物可用 習知方法製備，許多此等方法涉及把活性化合物與一或多 種聚合物載體如聚酯、聚胺基酸、聚乙烯基吡咯啶酮、乙 烯-醋酸乙烯酯共聚物、甲基纖維素、羧甲基纖維素及/ 或硫酸魚精蛋白酯調合在一起。藥物釋放的速率及作用時 間長短任意地係藉著把活性成份合倂到聚合性物質（如水 凝膠、聚酸、羥甲基纖維素、聚甲基丙烯酸甲酯及其他上 述的聚合物）之顆粒如微膠囊中來控制。同樣適用的還有 -22- 1360549 膠體藥物遞送系統如脂質體、微球體、微乳液、奈米顆粒 、奈米膠囊等。視投藥途徑而定，該等藥學組成物如錠劑 可能會需要保護性塗層。 參考如下實施例能更充份地瞭解本發明，該等實施例 僅係用來舉例而非限制本發明在申請專利範圍內主張之權 利範圍。 【實施方式】 實施例1 a 5— （{6 — [2,4_二（三氟甲基）苯基]噠嗪—3_基}甲基 )—2_ (2-氟苯基）—5H —咪唑并[4,5-c]吡啶之合成 於此方法中，發現到二甲氧乙烷或其相關溶劑（皆具 有通式RiOR^CKl^OhOR3之結構，其中R1、R2 ' R3及R4 各選自C^-Ce烷基且a爲0或1)較習知的溶劑DMF更有 利。典型地，其中R1、R2、R3及R4各選自C丨-C2烷基且 a通常爲〇。CrG烷基包括含有1到6個碳原子之全飽和 —級、二級或三級烴基團且因此包括但不限於甲基、乙基 、丙基、丁基等。 步驟1

-23- 1360549 化合物 MW 份量 毫莫耳數 當量數 SM 128.56 5 g 38.9 1 TCCA 232.41 3.62 g 15.6 0.4 CHC13 130 ml 於市售的起始材料（SM)於CHC13之溶液中於60°C 加入三氯異氰尿酸（TCCA)。然後將溶液攪拌1.5小時 ’冷卻且用HiFlo-Celite過濾。濾液於真空濃縮且烘乾。 產量爲5.037 g。

化合物 MW 份量 毫莫耳數 當量數 S.M. 163 5.073 g 3 1.12 1 核 2 13.2 6.635 g 3 1.12 1 N a 0 Η (1 0 %) 40 1.245 g 3 1.12 1 DMF 3 2 0 ml

於核（如文獻所述、於DMF (二甲基甲醯胺）中製 得）溶液中加入NaOH。然後把用於此步驟（來自步驟1 )之SM溶解在DMF ( 20 ml )且緩緩地加到該溶液內。 讓反應攪拌3小時，用水稀釋及用EtOAc萃取。有機層 -24- 1360549 以Na2S〇4脫水。除去溶劑且產物用DCM (二氯甲烷）再 結晶。產量爲5.7 g» 步驟3

化合物 MW 份量 莫耳數 當量數 A 453.79 95 mg 0.209 1 DME 500μ1 2N碳酸鈉水溶液 313 μΐ 0.626 3 2,4-二CF3-苯基硼酸 257.93 80.9 mg 0.313 1.5 Pd(PPh3)4 1155 12 mg 0.0104 0.05

把化合物A溶解在二甲氧乙烷（DME )。於此溶液 中加入2,4-—二（三氟甲基）苯基砸酸及2N碳酸鈉水溶 液。於所產生的兩相混合物中加入Pd(PPh3)4且將反應置 於80 °C下加熱72小時。讓反應冷卻到室溫且用塞里塑料 過濾且該塞里塑料用EtOAc清洗。濾液於真空濃縮。殘 物用6 g二氧化矽純化且用MeOH/CH2Cl2洗脫化合物。 -25- 1360549 如此得到的化合物已被PPh3(0)污染。所以產物需用1 mm Chromatotron 板以 0 到 5% MeOH/CH2Cl2 於 1% 步驟再 純化。合倂純化之餾份且於真空濃縮，然後於高度真空12 燥1 2小時。得到1 1 . 8 mg游離鹼狀態之化合物（1 )旦無 PPh3污染。 *H NMR ( 300MHz > CD3〇D) 6.20 ( s，2 )

7.32 ( m > 3 ) 7.52 ( m，1 ) 7.78 ( d，1 ) 7.89 ( d - 1 ) 7.95 ( s > 2 ) 8.15 ( m > 3 ) 8.3 5 ( d，1 ) 9.12 ( s，1 ) LC/MS M + H = 5 1 8 實施例1 b 5—（{6—[2,4一二（三氟甲基）苯基]噠嗪一3_基}甲基 )一 2—（2—氟苯基）-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶之合成 此實施例係採用以下方案來製造化合物（1)的另一 種製法。 -26- 1360549

cf3 甲

rr^ N^nh2 3,4·二胺基耻啶 JO

2-氟苯甲酸 B(OM)2 ,cf3 ΓΥΝΜ3

NvANM2 3,4·二胺基吡啶 MW = 109 13

C〇2M cy 2-氟苯甲酸 MW = 140.11 1)甲烷磺酸 21五氧化二磷 3) lOO°C.4^nrs 4) h2〇. nh4〇m

-27- 1360549 把反應器維持在Ti50°C下活性冷卻且把甲烷磺酸加 到置於該反應器之2_氟苯甲酸中。然後把3,4 _二胺基 吡啶分數份加到維持在TS35°C之冷卻漿液內。然後把反 應器之內容物加熱到50°C。把五氧化二磷一口氣全部加 進去》然後反應以90-110 °C加熱至少3小時。採取反應 樣本，用HPLC分析以檢測反應是否完成。反應完成後， 把反應冷卻到室溫且把水分成數份緩緩地加入以淬熄該反 應。然後反應用水稀釋。濾除不溶物。把濾液pH値用氫 氧化銨調整成5.5-5.8。讓反應自種晶且置於室溫下4小 時以讓顆粒形成。然後把pH値用氫氧化銨再調整成8.0-9.3。漿液置於室溫下至少2小時。過濾分離出固體且用 水' 然後用IPE清洗。濾餅置於真空於不超過60°C下乾 燥直到僅剩下$1%水爲止。乾燥產物爲核（2)。

材料總結 分子量 重量比率 莫耳比率 3，4 -二胺基吡啶 109.13 1 .0 1.0 2-氟苯甲酸 140.11 1 .4 1 .1 甲烷磺酸 96.1 7.0 8.0 五氧化二磷 141.94 1.3 10 水 18.02 40 異丙醚 102.17 5.0 氫氧化銨 35.09 -1 0 • · · ./ ·、 -28- 1360549 方案la

MW - 517 41 把化合物（2a)於1，2—二氯乙烷之溶液加熱到40-45 °C。加入三氯異氰尿酸且混合物以60-70 °C加熱至少2 小時。採取反應樣本，用HPLC分析以檢測反應是否完成 。反應完成後，把反應冷卻到室溫。加入塞里塑料以吸收 不溶物，然後濾除固體。濾液用0.5N氫氧化鈉溶液清洗 。將有機層濃縮使得可攪拌體積減至最少，且用DMF置 換。加入核（2 )及1 0 %氫氧化鈉水溶液。反應於室溫下 攪拌至少8小時。採取反應樣本，用HPLC分析以檢測反 應是否完成。反應完成後，再加入10%添加量之10%氫 氧化鈉溶液。然後把反應混合物加到水中以分離粗產物。 放置至少1小時任顆粒形成，分離出固體且用水及異丙醚 清洗。加入醋酸乙酯且回流（內溫T爲70-77°C ) 1-5小 時以溶解產物，然後以4-8小時的時間緩慢冷卻到1 8-23 °C。於18-23 °C下攪動反應器內容物達8-20小時，並藉由 過濾收集固體且經醋酸乙酯沖洗。排放出低熔點（即， D S C約2 2 0 eC )非晶形化合物（1 )。以回流（內溫T爲 7 〇 - 7 7 °C )溫度加熱1 - 5小時促使非晶形化合物（1 )溶解 -29- 1360549 於醋酸乙酯。藉由凍乾移除水來把含水量控制在約0.2% (使用醋酸乙酯時含水量的上限爲約0.6重量％ ;含水量 達約0.9重量％時’非晶形物質會再沉澱且無法獲得結晶 )。以4-8小時的時間讓反應器內容物緩緩冷卻到18-23 °C，然後於18-23 °C下攪8-2 0小時並過濾收集固體。固體 用醋酸乙酯沖洗且於真空不超過60°C下乾燥而製得乾燥 的結晶化合物（1 )。

抖一覽表 I-氯-6-甲基噠嗪 -二（三氟甲基)苯基硼酸 -^-Phos 良酸鈀 分子量 128.56 257.93 476.72 224.49 重量比率 1.0 4.0 0.18 0.04 莫耳比率 1.0 2.0 0.05 0.025

二甲氧乙烷 ζΚ._mjtm_多異塑料__ 90.12 138.21 18.02 190.45 100.2 16.7 2.15 7.8 0.037 0.25 22.4 2.0 0.025 核磁共振（'H-、13C-及19F-NMR)光譜 化合物（1 )之核磁共振（NMR )光譜係與假設的結 棒一致。化合物（1)於DMS0-d6之丨3C-、"F-及 «Η-NMR 光譜係使用 Varian Unitylnova-400 FT-NMR 光譜 0十測量。光譜示於下表。該NMR化學位移係使用2D相 顏實驗（COSY、 HSQC、 HMBC 及 HSQCTOCSY)來建立 -30- 1360549

化合物（1)參考標準之1Η及13C-NMR化學位移 原子 5C/ppm(DMSO-d6) 5F/ppm(DMSO-d6) 8H/ppm(DMSO-d6) 1A 140.16 2A 128.32(qa,JCF=32 Hz) 3A 123.61, m 8.24(m,l H) 4A 130.27(q,JCF=34 Hz) 5A 129.54(q,JCF=3 Hz) 8.22(m,l H) 6A 133.36 7.88(m,l H) 7A 123.20(q,JCF=273 Hz) -56.4b 8A 123.02(q,JCF=275 Hz) -62.0b 1B 158.76 2B 128.16 8.01(d,l H, J=8.4 Hz) 3B 126.20 7.95(d,l H, J=8.8Hz) 4B 157.70 5B 60.49 6.17(s,2 H) 2C 131.86 8.31(m,l H) 3C 112.63 7.86(m，l H) 4C 155.44 6C 168_ll(d，JCF=6Hz) 8C 145.08 9C 133.06 9.25(s,l H) 1D 123.11(d,JCF=l〇Hz) 2D 160.46(d,JCF=254Hz) -111.7 3D 116.59(d,JCF=22 Hz) 7.29(m，l H) 4D 130.84(d,JcF=8 Hz) 7.46(m,l H) 5D 124.13(d,JcF=4 Hz) 7.31(m,l H) 6D 131.72(d,JCF=2Hz) 8.35(m,l H) a. 多重性，s:單線，d:雙線，q:四重線，m:多重線 b. 可互換訊號 示差掃描熱析法 -31 - 1360549 依實施例la (研究批次6)及lb (剩餘樣本）方法 製得之化合物（Π樣本係使用示差掃描熱析法（DSC ) 裝置（DSC2010，由 ΤΑ 儀器公司（TA instruments Corporation )製造），於氮氣氛、樣本重5;tlmg，溫度 上升速度：每分鐘1°C、每分鐘5。(：或每分鐘10。(：，於開 放式鋁盤上用銦標準物作爲參考來測量。測定所得DSC 曲線之吸熱峰的焓値'外插起始溫度及頂點溫度。 從代表性化合物（1 )批次得到之DSC結果總結於表 1。當實施例1 b方法製得之結晶化合物（1 )用KC /min 進行DSC掃描時，該吸熱峰之焓値爲約81 j/g±l J/g，且 外插起始溫度爲233.2 t ±2.0 °C。該吸熱峰之頂點爲233.9 °C ± 3 · 0 °C 。 表1化合物（1 )批次得到之實例D S C植 10°C/min 掃描 l°C/min 掃描 峰起始處 主峰 峰起始處 主峰 焓値(J/g) 化合物（1)檁進物 235.8 237.2 233.7 234.6 89.5 化合物⑴-A-1 n/a n/a 234.8 234.0 - 化合物(l)-B-l Cr〇〇 1 235.2 237.4 231.6 232.2 78.5 化合物⑴-B-l Crop2 236.1 238.5 234.3 235.6 80.9 ”硏究批次6 220.2 221.3 懸宕 懸宕 39.1 註：除了焓値外，單位都是。C μ批次6係以5°C /min掃描 -32- 1360549 χ-光粉末繞射測定法 以方法la及lb製得的樣本係依先前接受之同樣條件 來分析，唯在分析前先用刮勺攪拌。把樣本固定在鋁質小 室中’使用X -光粉末繞射儀（XRD-6000，Shimadzu Lab X，由 Shimadzu Corporation 製造，X-光光源：Cu-Kal 射 線，管電壓：35 kV，管電流：40 mA，掃描速度：每分 鐘2度’連續掃描模式，採樣階距：〇.〇2°，掃描範圍：4-35°，冷-軸旋轉速率：60rpm)進行測量》 以X -光粉末繞射儀測定來自實施例1方法之非微粒 化、囊狀化合物（1)結晶，其X-光粉末繞射型式之特徵 繞射峰之繞射角 20 (°)爲 13.46、15.59、16.90、17.48 、23.05及30_15(第1圖）。應注意地，於此實施例測 試之化合物（1 )的非-微粒化“高熔融”23 5 °C熔融囊狀結 晶形式會由於較佳取向及粒度而受到某些影響。因此，第 1圖應僅視爲舉例用的，因爲變更結晶大小及取向會改變 曲線圖中峰値的大小強度。此外，上述繞射角20 (。）之 繞射峰値可因測量儀器或測量條件等而顯示出些許測量誤 差。典型地’該測量誤差係在約±0.3的範圍。Shimadzu XRD-6000的規格則爲±〇.〇4。此外，由於產物及實驗差異 ’可預期到峰的位置也會有所不同，因此此等數値必需視 爲約略値。 依實施例la方法製得（或方法ib再漿液化步驟前製 得）之產物220 °C “低熔融”固態化合物（1 )所得到的繞 射型式與非晶形材料相符（第2圖）。 -33- 1360549 方法1 b之產物爲基本上不含非晶形化合物之結晶化 合物（1)。其於示差掃描熱析法（DSC)輪廓圖中係在 約235 °C表現出開始吸熱。其還展現出約81 J/g (42 KJ/ 莫耳）±1 J/g之約略熱融合値（DHf )。結晶化合物（1 ) 可藉由把反應產物置於實質上無水之結晶溶劑（如前文所 述）再漿液化來形成且基本上不含有非晶形化合物（1) 。該結晶溶劑可爲任何化合物（1)能溶解之溶劑或共溶 劑混合物。適當的溶劑包括醋酸異丙酯/醋酸乙酯共溶劑 ，或單獨只用醋酸乙酯。 實質上無水之溶劑係定義成含水量夠低之溶劑，其含 水量低得足以使得方法1 b產生之化合物（1 )組成物含有 結晶化合物（1 )且於該產物組成物中任何其他形式之化 合物（1 )(包括非晶形化合物（1 ))佔所有形式之化合 物（1)之總量係低於約40%，通常是低於約30、20、10 、5、3、2或1重量％。 一般而言，實質上無水之溶劑在結晶溶劑中含有低於 約0.5重量％到0.6重量％之水，不過所能容許之含水量 將視方法之目標而異。例如，如果所需產物可允許含有較 高比率之非晶形化合物（1 )時則可存在較多水。所能容 許之水量的決定及選擇皆在熟悉此技術者技藝的範圍內且 將因多種因素而定，包括溶劑本質及本體、吸收水份之化 學劑之存在、反應溫度及其他條件等。 實施例lb之化合物（1 )典型地顯現出0.7微克/ml 之固有溶解度、pKa値5.8、log P値2.8;於pH 2時其幾 -34- 1360549 何平均（3批次）pH値溶解度數據爲458微克/ml及於 .’ pH 7.3時其幾何平均（3批次）pH値溶解度數據爲0.7微 ' 克/ml。於模擬之腸液中（禁食時：PH6.4，0.75mM卵磷 脂，3 mM牛磺膽酸鈉，270 mOsmol;餵食時：pH 5.0, 3.75 mM卵磷脂，15 mM牛磺膽酸鈉，63 5 m〇Sm〇l )其幾 何平均（3批次）溶解度爲19.1微克/ml (禁食）及122 微克/ml (餵食）^ • 測量參數因批次而異，所以除了分子量以外的所有前 述參數應僅視爲約略値。 用酸類滴定顯示甲磺酸（>20 mg/ml)較氯化物（約 0_6 mg/ml)或硫酸鹽（約0.5 mg/ml)對偶離子有更高溶 解度。 實施例2 化合物（1 )之調製劑 ® 化合物（1)之調和物係以重量對重量爲基礎製備以 達到10 % w/w活性。爲了製得12 kg溶液，以下列出2〇 mg及40 mg之化合物（1)膠囊之示範性定量組成。 -35- 1360549 20mg及40 mg之化合物（1)膠囊之定量組成 成份 % w/w 膠囊單位配方 compendial 功能 (mg/單位） 參考 20 mg 40 mg 化合物1 10.00 20.0 40.0 Μ j\ \> 活性成份 油酸 84.55 169.1 338.2 NF 溶劑 聚山梨糖醇酯80 5.00 10.0 20.0 NF 界面活性劑 二丁羥基甲苯(BHT) 0.10 0.2 0.4 NF 抗氧化劑 丁基羥基甲氧苯(BHA) 0.35 0.7 1.4 NF 抗氧化劑 膠囊密封溶液a 膠囊密封劑 乙醇 …b …b …b USP 純水 b …b …b USP — 膠囊殼，尺寸〇號 Licaps™白色透明 N/A 各一 各一 M /»w 膠囊殼 總量 100.00 200.0 400.0

組成物爲1 : 1 W/W乙醇：水溶液 於膠囊密封步驟中會被除去 # •容器/器皿：12 kg不鏽鋼 •依序秤取如下物質： •0.012 kg 二丁羥基甲苯（0.10%) • 0.035 kg 丁基羥基甲氧苯（0.35%) • 1 .2 kg化合物（1 )游離鹼（10% ) • 0.6 kg山梨糖醇酯80(5%)秤過重 • 10_153kg 油酸（相當於 84.55g(84.55%)) 20 mg或40 mg之化合物（1 )膠囊係透過一系列單 -36- 1360549 元加工步驟來製造。把化合物（1)藥 糖醇酯80、二丁羥基甲苯（BHT)及 A )混合，直到形成溶液爲止。把溶 B月膠囊。閉合的膠囊而後用氫醇溶液（ 被揮發掉）密封。密封膠囊先通過真空 裝。 另一種調和物 式（1 )化合物任意地可用如下化 形式： •脂肪酸（短鏈、中鏈和長鏈以及 典型地爲C4-C22脂肪酸。典型的脂肪 或油酸。 •醇類如乙醇、苯甲醇、甘油、聚 二醇3 00、聚乙二醇400。 •界面活性劑包括離子及非離子界 界面活性劑之實例爲聚氧乙烯山梨聚糖 梨聚糖脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生 氧基硬脂酸酯、聚乙二醇60、氫化蓖 乙烯及氧化丙烯嵌段共聚物。 •抗氧化劑例如丁基羥基甲氧苯（ 甲苯（BHT)、維生素E，及/或維生^ 酸酯以獲得化學安定性。 •黏度誘生劑（二氧化矽、聚乙二 物、油酸、聚山梨 丁基羥基甲氧苯（ 液裝塡到2-片式硬 其於密封步驟中會 滲漏測試，然後包 學劑調製成溶解化 飽和和不飽和）， 酸有月桂酸、癸酸 乙二醇 200、聚乙 面活性劑。非離子 之脂肪酸酯類、山 物、聚氧乙烯甘油 麻油，及/或氧化 BHA )、二 丁羥基 转E PEG1 000琥珀 醇類、氧化鈦等） -37- 1360549 •及以上混合物。 膠囊化可用軟彈性明膠或硬明膠 素膠囊來進行。液態調製劑（溶液或 供較佳的口服生體可利用率。 膠囊裝塡 軟彈性明膠囊之組成物及製劑爲 成物典型地含有30-50重量％明膠 化劑混合物及約25-40重量％水。塑 梨糖醇或山梨糖醇衍生物、丙二醇等 可用不同方法來製造及塡充該等 機、封口膠機或accogel機等。硬 Capsugel，Greenwood，S.C.及其他供 或膠囊充塡機來裝塡。 調製劑的製備 一般來說，本發明組成物可用如 成份置於適當器皿中用高架攪拌機攪 氮氣）。於室溫混入藥學上可接受之 受之抗氧化劑（若需要可將溶液加熱 使用月桂酸，可加熱到約45 °C到來 入式（1)化合物且攪拌到溶解爲止 或硬羥丙基甲基纖維 包入膠囊之溶液）提 此技術所習知。該組 、10-40%塑化劑或塑 化劑可爲甘油酯、山 或其組合。 軟彈性明膠囊如旋轉 目膠或HPMC可購自 應商。膠囊可用人工 下方式製備。將該等 拌（該混合槽可充入 脂肪酸及藥學上可接 到適當溫度，例如若 吏脂肪酸液化）。加 。攪拌並加入藥學上 -38- 1360549 可接受之界面活性劑。把適當重量之所得混合物裝塡到硬 明膠囊中。 更多調製劑組成 式（1)化合物 PEG 400

EtOH 總量 8.0 82.8 9.2 100.0 式（1)化合物 EtOH PG Maisine 3 5-1 Cremophor RH40 總量 8.0 11.0 7.4 36.8 36.8 100.0 式（1)化合物 8.0 油酸 92.0 總量 100.0 -39- 1360549

式（1)化合物 8.0 油酸 73.6 EtOH 9.2 T ween 2 0 9.2 總量 100.0 式（υ化合物 8.00% 油酸 87.40% Tween 80 4.60% 總量 100.0% 式（1)化合物 20.00% 油酸 80.00% 總量 100.0% 式（1)化合物 20.00% 油酸 76.00 % Tween 80 4.00% 總量 100.0% '(s ) -40- 1360549 式（1)化合物 8.00 油酸 86.47% Tween 8 0 4.60% Aerosil 200 0.92% ΒΗΤ 0.01 % 總量 100.0% 式（1)化合物 8.00 油酸 8 5.5 5 % Tween 8 0 4.60% Aerosil 2 0 0 1.84% ΒΗΤ 0.0 1 % 總量 100.0% 式（1)化合物 8.00 油酸 8 5.5 5 % Tween 80 4.60% Aerosil 2 0 0 1.84% ΒΗΤ 0.0 1 % 100.0% 總量 1360549 式（1)化合物 10.00 油酸 84.5 5 % T ween 8 0 5.00% BHA 0.35% BHT 0.1% 總量 100.0% 實施例2a 化合物（1)之微粒化調製劑 把微粒化藥物（噴磨機用60-80 psi運轉；平均粒度 3-4微米，約7-8立方公尺/公克）與乳糖、微晶纖維素、 交聯羧甲纖維素鈉、硫酸月桂酯鈉、酒石酸及羥丙基纖維 素乾混合。混合物藉由噴出混合溶液來造粒。顆粒於流化 床乾燥。乾燥顆粒藉由通過硏磨機而製成所需尺寸，然後 _ 與額外的微晶纖維素及交聯羧甲纖維素鈉混合在一起。粉 末混合物藉著加入硬脂酸鎂潤滑且然後使用旋轉式壓錠機 壓製成錠。接著於錠劑上塗覆薄膜。 下表係把含有40 mg化合物（1)之不同調製劑於犬 隻（以相當於約4 mg/kg投藥）測試後所得結果之一覽表 。此表顯示出已溶解化合物（1)之調製劑的優越效能。

、f S -42- 1360549 活體內數據一覽表 劑型 加工法 配方 藥物載量 (%) Cmax (μΜ) auc24 (μΜΙΐΓ) F (%) RSD (%) 固體 粉末充塡3 PIC 50 0.7 2.9 8 52 溶解化 液體充塡 癸酸 20 4.8 25 79 17 月桂酸 20 26 14.3 44 29 油酸 8 3.8 23 67 27 20 2.1 14 44 56 25 7.9 42 125 24 固體 高剪切a 僅SLS 20 04 44 13 85 SLS& 酒石酸 20 04 2.7 8 82 SLS& 酒石酸b 20 0.9 6.9 20 67 流化床3 SLS& 酒石酸 20 0.3 44 14 77

使用微粒化API 對犬隻投藥時係與五胃泌素一起投予以降低胃pH値 實施例3 化合物（1)之抗病毒活性 本發明化合物顯示出對抗基因型la及lb之抗-HCV 複製子活性（該檢定述於WO 05/063744 )、極低的細胞 毒性（>50,000 nM 於 Huh-7、HepG2 及 MT4 細胞），及 高度有利的選擇性指數。基本上該化合物對基因型2a的 活性較差。 化合物（1)抗HCV基因型lb及la複製子之活性 把 HCV 基因型 1 b ( Con-1 /lucneo )及 1 a ( H77/neo ) 之複製子細胞與系列稀釋之化合物（1 ) 2'C-甲基腺苷（ -43- 1360549 2'CMeA)或IFNa於有或無40 mg/ml人類血清白蛋白（ HSA)下一起培育3天。培育後，經治療之細胞內的複製 子RN A含量可用螢光酶報導檢定（lb複製子）或定量即 時PCR檢定（la複製子）來測定且數據位點會被用來計 算該等抑制劑之EC5G値（50%有效抑制濃度）。化合物 (1)顯示出能同時抑制劑基因型lb及基因型la複製子 且EC50値分別爲0.6及3.6 nM (表1)。於存在人類血 清白蛋白時，該化合物（1)之EC 5〇値會增加到1 1 nM。 表A :化合物（1)抗HCV基因型lb及la複製子之活性 EC5〇 ΓηΜΓ 化合物 HCV lb-lucneo HCV lb-lucneo 40 mg/ml. HSA HCV-la 1 0.6土0.28 11 3·6±1·4 2'CMeA 175±70 250 170 IFN-a 2IU/ml n.d. n.d. n.d.，未測定；HSA，人類血清白蛋白 a EC5G平均値及標準差係以至少4個獨立實驗的結果來決 定 化合物（1 )抗HCV基因型la複製子及病毒之活性 化合物（1 )對HCV基因型2a之抗病毒活性係於基 因型2a病毒長期感染之細胞以及複製次基因組2a複製子 之細胞內測試。含有長期複製HCV基因組2a ( J6/JFh-Rluc)病毒或次基因組複製子之Huh-7細胞於無人類血清 白蛋白下與化合物（1)或2'CMeA —起培養3天。培養 -44- 1360549 後，分別使用Promega螢光酶檢定及新穎的時間-分解螢 光檢定來測定含2a-病毒細胞內之螢光酶含量及含2a·複 製子細胞內之HCVNS3蛋白酶活性。 化合物（1)之抗病毒活性於HCV-2a慢性感染細胞 培養模式（Ε<：5〇 = 2.9μΜ)及2a次基因組複製子模式（ Ε<：5() = 21.9μΜ)比複製HCV-lb次基因組複製子之Huh-7 細胞（Ε<35〇 = 0·0006μΜ)顯著減少（表2)。總括來說， 此等結果建議化合物（1)抗HCV基因型2a之效能低落 可能是由於HCV基因型第1型及基因型第2型間之基因 類型的差異所致。 表B :化合物（1 )抗HCV基因型lb及2a之活性 EC5〇 fnMl3 化合物 HCV lb-lucneo (次基因組複製子） HCV 2a (次基因組複製子 ) HCV-2a (報導病毒） 1 0.6±0.28 21898±18972 2900±1250 2'CMeA 175±70 1610士1099 194±26 IFN-a 2 IU/ml n.d. 1.2 IU/ml. n.d.，未測定；HSA，人類血清白蛋白 a EC5G平均値及標準差係以至少4個獨立實驗的結果來決 定 於包括含有HCV-複製子之細胞株（Huh-7，SL3及 MH4)和未含有複製子之細胞株（HepG2，MT4)之多種 細胞類型，使用 CellTiter-Glo發光細胞存活性檢定（ -45- 1360549

Promega )來評估化合物（1)之細胞毒性。即使以最高濃 度（50/zM)測試時都沒有觀察到對任何細胞株產生有毒 影響（表C)。此等結果，搭配其對HCV-lb及HCV-la 複製子之有效抗病毒活性（EC5G = 0.62-3.6 nM)，顯示出 化合物（1)之高度選擇性指數（cc5()/ec50> 1 3,000-80,000 )。 表C :化合物（”對含有HCV複製子之細胞株的細胞毒性 CC5〇 ΓμΜΙ3 化合物 Huh-7 lucneob SL3b MH4b HepG2 MT4 1 >50 >50 >50 >50 >50 2’CMeA 7.2±6 3.9 16 24.3 士 2.1 3·5±1.9 n.d.，未測定；HSA，人類血清白蛋白 a EC5〇平均値及標準差係以至少4個獨立實驗的結果來決 定 b含HCV-複製子之細胞株 化合物（1 )與IFN於活體外共用時之抗-HCV活性 乙烯二醇化千擾素-a (PEG-INF-ct)倂用三氮唑核爲 目前對HCV感染患者之標準療法。化合物（1)及IFN-α倂用之活體外硏究係於複製子細胞內進行。數據係使用 Prichard及Shipman開發之MacSynergy模板來分析。此 等硏究之結果顯示化合物（1)及IFN· α有加成性交互作 用。 -46 - 1360549 實施例4 化合物（1 )於HCV基因型第1型-感染個體之首次人體 實驗第1期中的抗病毒、藥物動力學及安全性數據 .設計隨機、雙盲、安慰劑對照實驗以評估單劑量（A 部份）及多劑量（B部份）化合物（1 )(油酸溶液，如 上）對於被HCV基因型第1型（GT-1)長期感染但無失 償性肝硬化之個體之安全性/耐受性、藥物動力學及抗病 毒活性。目標個體年齡在18-60歲之間、對HCV治療不 排斥且大致上健康良好。 在已完成的A部份，五個連續組（每組6人）隨機 地（5 : 1 )接受單一漸增劑量之化合物1 ( 40 mg、120 mg、240 mg、240 mg -及食物，或480 mg)或安慰劑。於 正在進行之B部份，五個連續組（每組12人）隨機地（ 1 0 : 2 )接受渐增多劑量之化合物1 ( 40 mg BID，1 20 mg BID，240 mgQD，240mgBID)或安慰劑，爲期 8 天。 於A部份所納入之31名個體之平均年齡爲43.6歲， 主要爲男性（2 0/3 1)，高加索人（25/31)且已被HCV基 因型- la(24)或lb(6)感染。中間値（範圍）基線 HCV 病毒載量爲 6.6 LogI()RNA IU/ml ( 5.2-7.3)。單一 劑量之化合物（1)可被人體良好耐受，並沒有嚴重或治 療-限制性副作用（AEs )被報導。最常見的AE爲頭痛。 所有AE的嚴重性皆爲輕度的，只有一人有中度頭痛。並 沒有3級或4級治療引發之實驗異常。 -47- 1360549 整個群組中化合物（1 )之血漿半衰期中間値爲1 〇到 15小時。當化合物（1)與高脂肪飲食—起投予時，其系 統性曝露量增加爲約2倍。在禁食狀態以240 mg劑量投 藥時化合物（Ο之24小時濃度平均値爲該蛋白質結合調 整之活體外HCV GT_lb複製子EC5Q値的約7倍。可於單 一劑量曝露後24小時見到最大抗病毒效果，整個群組之 中間値衰退到0.46到1.49 Log1() HCV RNA IU/ml之範圍 。在曝露於單一劑量後，所有化合物（1)接受者之個體 HCV RN A 衰退到範圍爲 0.19 到 2.54 log1。IU/ml。 此爲化合物（1)抗病毒活性之首次臨床效果展示。 單一劑量地曝露於化合物（1)可被人體良好地耐受，並 顯示出有利的PK特性及有效抗病毒活性。 實施例5

把化合物（1 )之抗-HCV複製子活性與先前技術（ WO 05/063744)之式（4)化合物的活性作比較，

C S > -48- (4) 1360549 -*· 出乎意外地化合物（1)之效能約爲該式（4)化合物 -. 之3 30倍。 【圖式簡單說明】 第1圖顯示從實施例lb方法製得之結晶化合物（1) 參考標準物得到的x_光粉末繞射型式； φ 第2圖顯示從實施例la方法製得、硏究批次第6號 之非晶形化合物（1 )得到的χ·光粉末繞射型式； 第3圖顯示從實施例lb方法製得之結晶化合物（1) 參考標準物於1°C /min掃瞄得到的DSC溫度記錄圖； 第4圖顯示從實施例la方法製得、硏究批次第6號_ 之非晶形化合物（1 )於5°C /min掃瞄得到的dsc溫度記 錄圖。 -49-

Claims (1)

1360549

十、申請專利範圍 附件2: 第96124777號專利申請案 中文申請專利範圍替換本 民國98年4月28日修正 1. 一種製備式（1)化合物之方法：

其包含（a)令5— [6_氯_噠嗪_3_基甲基]—2 — (2-氟一苯基）_5H_咪唑并[4,5-c]吡啶與2,4_二（三 氟甲基）苯基硼酸於結構爲1^〇112〇(114〇)3113 (其中各個 R1、R2、R3及R4係分別選自CrCe烷基且a爲0或1 )之 溶劑的存在下反應，及（b)回收該化合物（1)。 • 2.如申請專利範圍第1項之方法，其中a爲0。 3. 如申請專利範圍第2項之方法，其中該溶劑爲二 甲氧乙烷。 4. 如申請專利範圍第1項之方法，其中a爲1。 5 · —種式（1 )化合物： 1360549

8 ·如申請專利範圍第5項之化合物，其係呈懸浮液 9 ·如申請專利範圍第5項之化合物，其係於水性基 質中。 10. 如申請專利範圍第5項之化合物，其係呈溶液。 11. 如申請專利範圍第1 0項之化合物，其係於含有 CM-C22脂肪酸之溶液中。 1 2·如申請專利範圍第1 1項之化合物，其中該脂肪 酸爲油酸或月桂酸。 13. —種組成物，其包含申請專利範圍第5項之化合 物及藥學上可接受之賦形劑。 1 4.如申請專利範圍第1 3項之組成物，其中該賦形 劑舄C4-C22脂肪酸。 15.如申請專利範圍第14項之組成物，其爲水溶液 -2- 1360549 且其中該脂肪酸爲油酸。 1 6 ·如申請專利範圍第5項之化合物，其係作爲藥物 17. —種申請專利範圍第5項之化合物於製造供預防 或治療哺乳動物之HCV感染的藥劑上之用途。 18. 如申請專利範圍第17項之用途，其中該哺乳動 物爲人。 19. 一種製備化合物（1)之方法，其包含提供中間 體（2)

令2，4_二（三氟甲基）苯基硼酸與3 —氯—6 —甲基 噠嗪偶合以產製化合物（2a)

(2a) 令化合物（2a )與氯化劑反應以產製烷化劑（3 ) 1360549

cf3 (3) 且利用烷化劑（3 )並於鹼性條件下烷化中間體（2 ) 以生成化合物（1 ) F ,- F

20. 一種式（3 )化合物：

cf3 CF3

(3) 及其經甲基而非氯甲基取代之類似物，以及其經溴、 氟或碘替代氯取代之類似物。 -4-