[go: up one dir, main page]

RS56462B1 - Liofilizovani preparat citotoksičnih dipeptida - Google Patents

Liofilizovani preparat citotoksičnih dipeptida

Info

Publication number
RS56462B1
RS56462B1 RS20171002A RSP20171002A RS56462B1 RS 56462 B1 RS56462 B1 RS 56462B1 RS 20171002 A RS20171002 A RS 20171002A RS P20171002 A RSP20171002 A RS P20171002A RS 56462 B1 RS56462 B1 RS 56462B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
melphalan flufenamide
solution
lyophilized
pharmaceutical preparation
melphalan
Prior art date
Application number
RS20171002A
Other languages
English (en)
Inventor
Jack Spira
Fredrik Lehmann
Original Assignee
Oncopeptides Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Oncopeptides Ab filed Critical Oncopeptides Ab
Publication of RS56462B1 publication Critical patent/RS56462B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/222—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin with compounds having aromatic groups, e.g. dipivefrine, ibopamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A61K38/105—Bombesin; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • F—MECHANICAL ENGINEERING; LIGHTING; HEATING; WEAPONS; BLASTING
    • F26—DRYING
    • F26B—DRYING SOLID MATERIALS OR OBJECTS BY REMOVING LIQUID THEREFROM
    • F26B5/00—Drying solid materials or objects by processes not involving the application of heat
    • F26B5/04—Drying solid materials or objects by processes not involving the application of heat by evaporation or sublimation of moisture under reduced pressure, e.g. in a vacuum
    • F26B5/06—Drying solid materials or objects by processes not involving the application of heat by evaporation or sublimation of moisture under reduced pressure, e.g. in a vacuum the process involving freezing

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Mechanical Engineering (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis
Oblast tehnike
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na liofilizovane farmaceutske preparate koji sadrže citotoksične dipeptide ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, postupke za njihovu pripremu, preparate koji sadrže liofilizovane farmaceutske preparate i njihovu upotrebu u lečenju raka.
Stanje tehnike
[0002] Rak je bolest koja se teško leči i koja može biti smrtonosna. Shodno tome, napori u razvoju novih terapija za lečenje raka su u stalnom toku u istraživačkom društvu. Ogromna većina karcinoma je prisutna kao čvrsti tumori, npr. rak pluća, rak dojke, rak prostate, dok su ostali hematološki i limfoidni maligniteti, npr. leukemije i limfomi.
[0003] Hemoterapija je često korišćena u pokušajima lečenja ili palijacije bolesti. Kako se ćelije raka obično brzo dele, hemoterapija obično deluje tako što ubija ćelije koje se brzo dele. U širem smislu, većina hemoterapeutskih lekova deluje na oštećenje mitoze (tj. ćelijske deobe), efikasno ciljajući ćelije koje se brzo dele. Kako ovi lekovi uzrokuju oštećenje ćelija, oni se nazivaju citotoksičnim. Neki lekovi uzrokuju da ćelije prolaze apoptozu (tzv. "programiranu ćelijsku smrt"). Često se koristi kombinovana hemoterapija, kada se dva ili više lekova koji imaju različite načine delovanja koriste zajedno, kako bi se optimizovao antitumorski efekat, smanjili neželjeni efekti i sprečio razvoj rezistencije. Dobijeni rezultati sa hemoterapijom variraju u zavisnosti od tipa tumora. Neki tumori su veoma osetljivi i terapija ima veliku verovatnoću da dovodi do izlečenja.
[0004] Hemoterapeutski lekovi se generalno mogu podeliti na sredstva za alkilovanje, antimetabolite, antracikline, biljne alkaloide, inhibitore topoizomeraze i druge antitumorske agense. Lekovi utiču na ćelijsku deobu ili sintezu DNK.
[0005] Sredstva za alkilovanje, kao što su lekovi dobijeni iz azotnog iperita, koji su derivati bis (2-hloroetil) amina, korišćeni su kao hemoterapeutski lekovi u lečenju širokog spektra neoplastičnih bolesti. Sredstva za alkilovanje imaju sposobnost da kovalentno vezuju alkil grupe za elektronegativne položaje u ćelijama. Stoga, ovi agensi deluju tako da oštećuju ćelijske funkcije, formiranjem kovalentnih veza sa heteroatomima u biološki važnim molekulima poput RNK, DNK i proteina. Primeri sredstava za alkilovanje su mehloretamin, ciklofosfamid, hlorambucil, ifosfamid, temozolomid i melfalan koji hemijski modifikuju ćelijsku DNK.
[0006] WO01/96367 opisuje alkilujuće di- i tripeptide i jednu ili dve dodatne aminokiseline ili derivate aminokiselina. Ovi derivati su pokazali da imaju poboljšanu efikasnost kod različitih tipova tumora.
[0007] Melfalan, tj. p-[bis-(2-hloroetil) amino] fenilalanin, je konjugat azotnog iperita i aminokiseline fenilalanin, koji je sintetisan sredinom 1950-ih godina (US Patent br. 3,032,584). Ova klasična alkilirajuća supstanca je uskoro postala dragocen lek u hemoterapeutskom polju i još uvek je važna u lečenju, na primer, mijeloma. Međutim, klinička upotreba melfalana u lečenju kasnih stadijuma čvrstih tumora je imala ograničenu efikasnost. Stoga, u potrazi za selektivnim dejstvom na maligne ćelije, sintetisani su melfalanski analozi.
[0008] Larionov L. F., Cancer Res (1961), 21, 99-104 otkrivaju različite srodne derivate melfalana.
[0009] STN registarske datoteke RN: 1060633-95-5, RN: 887609-28-1, RN 790650-89-4, RN: 781606-39-1, RN: 773046-98-3, RN: 767621-58-9, RN: 760165-58-0 i RN: 757941-61-0 opisuju razne srodne derivate melfalana.
[0010] Koltun, M i sar., Biopharmaceutics & Drug disposition (210), 31, 450-454 otkrivaju oblike melfalana.
[0011] Ma D Q i sar., International Journal of Pharmaceutics (1999), 189, 227-234 otkrivaju opisane oblike melfalana.
[0012] Murav’ev I i sar., Farmatsiya (1978), 27, (2), 13-15 (sa apstraktom u Chemical Abstracts broj 1978: 412066) otkrivaju srodne derivate melfalana.
[0013] Liofilizacija ili sušenje zamrzavanjem je postupak za dehidriranje uzoraka, korišćen za očuvanje ili povećanje stabilnosti ili za zaustavljanje degradacije. Zahvaljujući niskom sadržaju vode u liofilizovanim proizvodima, tipično oko 1-4%, delovanje mikroorganizama i enzima je inhibirano i time se produžava životni vek proizvoda. U liofilizaciji, uzorak koji će biti liofilizovan se rastvara u vodenom rastvoru i naknadno zamrzava nakon čega se okolni pritisak smanjuje. Uzorak se zatim izlaže sublimaciji, opciono primenom toplote, kako bi zamrznuta voda direktno prešla iz čvrste faze u gasovitu fazu. Konačni sadržaj vode u proizvodu je vrlo nizak, obično oko 1% do 4%. Liofilizacija se obično koristi u farmaceutskoj oblasti kako bi se povećao rok upotrebe farmaceutskih proizvoda.
[0014] Baheti i sar. (J. Excipients and Food Chem, 2010, 1(1), 41-54) opisuju ekscipijense, korišćene u različitim liofilizovanim formulacijama malih molekula. U WO03/077882 opisan je postupak za proizvodnju sterilne, stabilizovane nanodisperzije ili napunjene micele koja sadrži polimer i biološki aktivnu kompoziciju, postupak obuhvata formiranje rastvora uključujući, najmanje jedno disperzno sredstvo, najmanje jedan biološki aktivni agens i najmanje jedan rastvarač; liofilizovanje pomenutog rastvora pri čemu nastaje čvrsti proizvod; i rehidriranje pomenutog čvrstog proizvoda.
Sažetak pronalaska
[0015] Generalno, lipofilni derivati dipeptidnih estara pokazuju slabu rastvorljivost u vodenim rastvorima. Stoga je upotreba organskih rastvarača, kao što je DMA (dimetilacetamid) potrebna, kako bi se takvi dipeptidi rastvorili. Međutim, organski rastvarači su često toksični i mogu takođe uzrokovati uništavanje medicinskih uređaja, koji se koriste za primenu dipeptida kod subjekata, kao što su pacijenti sa karcinomom. Prema tome, kako bi se prevazišli problemi u vezi sa rastvaranjem i obezbeđivanjem citotoksičnih dipeptida u organskom rastvaraču, postoji potreba za alternativnim farmaceutskim preparatima citotoksičnih dipeptida, koji poseduju dovoljnu rastvorljivost u fiziološki prihvatljivim rastvorima.
[0016] Sadašnji pronalazak se odnosi na liofilizovane preparate, koji sadrže etil estar melfalanil-L-p-fluorofenilalanina, takođe poznat i kao melfalan flufenamid, kao i njegovu farmaceutski prihvatljivu so, posebno, melfalanil-L-p-fluorofenilalanin etil estar hidrohlorid, takođe poznat i kao melfalan flufenamid hidrohlorid ili J1.
[0017] Jedan aspekt sadašnjeg pronalaska je usmeren na jedan liofilizovani farmaceutski preparat koji sadrži:
(i) melfalan flufenamid hidrohlorid (J1); i
(ii) saharozu.
[0018] Još jedan aspekt sadašnjeg pronalaska je jedan liofilizovani farmaceutski preparat koji je rastvorljiv u vodenom rastvoru.
[0019] Još jedan aspekt sadašnjeg pronalaska je postupak za pripremu liofilizovanog farmaceutskog preparata kao što je ovde opisano, pri čemu:
a. melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) je rastvoren u organskom rastvaraču da bi se dobio melfalan flufenamid hidrohloridni (J1) rastvor;
b. voda se dodaje u melfalan flufenamid hidrohloridni (J1) rastvor kako bi se dobio vodeni rastvor melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), u koncentraciji od 0,2-3,0 mg / ml; c. saharoza se dodaje u hidrohloridni rastvor melfalan flufenamida (J1); i
d. vodeni rastvor melfalan flufenamid hidrohlorida (J1) koji sadrži saharozu (i) se
podvrgava liofilizaciji.
[0020] Ovde je otkriven komplet delova, koji sadrži prvi kontejner, koji sadrži liofilizovani farmaceutski preparat, kao što je ovde definisano, a drugi kontejner sadrži fiziološki prihvatljiv rastvor.
[0021] Još jedan aspekt sadašnjeg pronalaska je liofilizovani farmaceutski preparat, kao što je ovde opisan, za upotrebu kao lek.
[0022] Ovde je otkriven komplet delova, kao što je ovde opisano, za upotrebu kao lek.
[0023] Jedan aspekt sadašnjeg pronalaska je liofilizovani farmaceutski preparat, kao što je ovde opisan, za upotrebu u lečenju i / ili prevenciji raka, kao što je rak jajnika, rak pluća, rak mokraćne bešike, mezoteliom, multipli mijelom, rak dojke i/ili bilo koji čvrsti ili hematološki kancer.
[0024] Ovde je otkriven komplet delova, kao što je ovde opisano, za upotrebu u lečenju i / ili prevenciji raka, kao što su rak jajnika, rak pluća, rak mokraćne bešike, mezoteliom, multipli mijelom, rak dojke i / ili bilo koji drugi čvrsti ili hematološki kancer.
[0025] Ovde je otkriven jedan postupak za lečenje i / ili prevenciju raka, kao što je rak jajnika, rak pluća, rak mokraćne bešike, mezoteliom, multipli mijelom, rak dojke i / ili bilo koji čvrsti ili hematološki kancer, pri čemu je liofilizovani farmaceutski preparat primenjen, kao što je ovde opisano, u terapijski efikasnoj dozi na subjektu, kome je to potrebno.
[0026] Ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni izrazi koji se ovde koriste imaju isto značenje, kao što je obično poznato prosečnim stručnjacima u oblasti na koju se ovaj pronalazak odnosi. Iako metode i materijali slični ili ekvivalentni onima ovde opisanim, mogu biti korišćeni u praksi ili testiranju sadašnjeg pronalaska, odgovarajuće metode i materijali su opisani u nastavku.
[0027] Druge karakteristike i prednosti pronalaska biće očigledne iz sledećeg detaljnog opisa, crteža, primera i zahteva.
Kratak opis crteža
[0028]
Sl. 1A-D sadrže grafikone od četiri ponovljena merenja brzine rastvaranja melfalan Flufenamida, liofilizovanog bez ekscipijenasa, u postupku A, prema Primeru 2. Uzorci su povučeni u naznačenim vremenskim tačkama i količina rastvorenog melfalan flufenamida je određena pomoću HPLC-a. Y-osa pokazuje količinu melfalan flufenamida u mg / ml.
Sl. 2A-E sadrže grafikone merenja brzine rastvaranja melfalan flufenamida,liofilizovanog u prisustvu ekscipijenasa, kao što je obeleženo na slikama postupkom A, prema Primeru 2. Uzorci su povučeni u naznačenim vremenskim tačkama i količina rastvorenog melfalan flufenamida je određena pomoću HPLC-a. Y-osa pokazuje količinu melfalan flufenamida u mg / ml.
Sl. 3 je grafikon merenja brzine rastvaranja melfalan flufenamida bez eksipijenasa, postupkom B, prema Primeru 2. Uzorci su povučeni u naznačenim vremenskim tačkama i količina rastvorenog melfalan flufenamida je određena pomoću HPLC-a. Y-osa pokazuje količinu melfalan flufenamida u mg / ml.
Sl. 4A-E sadrže grafikone merenja brzine rastvaranja melfalan flufenamida, liofilizovanog u prisustvu ekscipijenasa, kao što je naznačeno na slikama, pomoću postupka B. Uzorci su povučeni u naznačenim vremenskim tačkama i količina rastvorenog melfalan flufenamida je određena pomoću HPLC-a. Y-osa pokazuje količinu melfalan flufenamida u mg / ml.
Sl. 5 sadrži grafikone merenja brzine rastvaranja na sledeći način: A: melfalan flufenamid liofilizovan bez polisorbata 80; B melfalan flufenamid liofilizovan u prisustvu 10% polisorbata 80; C melfalan flufenamid liofilizovan u prisustvu 50% polisorbata 80; D melfalan flufenamid liofilizovan u prisustvu 100% polisorbata 80. Količine su relativne prema količini melfalan flufenamida. Y-osa pokazuje količinu rastvorenog melfalan flufenamida u odnosu na unutrašnji standard, kao što je određeno korišćenjem HPLC-a. Slika 6 je fotografija staklenih epruveta sa melfalan flufenamidom (J1), da je nakon liofilizacije rastvoren u koncentraciji od 1 mg / ml u 5% rastvoru glukoze koji sadrži 50% (mol) polisorbata 80 (levo) i ne sadrži polisorbat 80 ( desno).
Slika 7 sadrži strukturne formule melfalan flufenamida (L-melfalanil-L-pfluorofenilalanin etil estar), L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanin izopropil estar (JV28), L-prolinil-L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanin etil estar (J3).
Detaljan opis pronalaska
[0029] Citotoksični dipeptidi koji nisu liofilizovani ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu imati nisku rastvorljivost u vodenim rastvorima, što može zahtevati upotrebu organskih rastvarača, kao što je DMA (dimetilacetamid), za rastvaranje pomenutih dipeptida ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. Zbog toga, kada se citotoksični dipeptid primenjuje kod pacijenta, supstanca mora prvo biti rastvorena u organskom rastvaraču, kao što je DMA, a zatim razblažena u rastvoru za infuziju, pre primene pacijentu. Pacijent je ovim postupkom izložen organskim rastvaračima, čime takva izloženost može biti opasna za pacijenta. Takođe, organski rastvarač može uništiti medicinske uređaje korišćene za primenu melfalan flufenamida na subjektima, kao što su pacijenti sa kancerom.
[0030] Sadašnji pronalazači su sada iznenađujuće ustanovili da kada su izvesni citotoksični dipiptidi ili njihove farmaceutski prihvatljive soli liofilizovane u prisustvu ekscipijensa, dobijeni liofilizovani farmaceutski preparat može imati još veću rastvorljivost u fiziološki prihvatljivom rastvoru. Zapravo, rastvorljivost može biti toliko visoka da se korak rastvaranja citotoksičnog dipeptida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u organskom rastvaraču može izostaviti, a citotoksični dipeptid može biti direktno rastvoren u vodenom, fiziološki prihvatljivom rastvoru i primenjivati kod pacijenta. Poželjno, pomenuti citotoksični dipeptid je melfalan flufenamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0031] U prethodnim preparatima, melfalan flufenamid je dobijen iz sinteze, kao beli prašak, u kristalnom obliku. Ovaj kristalni oblik može biti rastvoren samo u jako kiselim vodenim rastvorima, što je praktično za proizvodne svrhe nemoguće. Prisustvo ekscipijenasa kao takvo, nije dovoljno poboljšalo rastvorljivost. Stoga je prethodno, melfalan flufenamid umesto toga rastvoren u DMA (dimetilacetamidu) u rastvoru glukoze. Priprema je izvodljiva, ali je nestabilna: 7% degradacija / h. Pored toga, dolazi do dimerizacije i rastvor postaje svetlo žut. Ovaj preparat je, međutim, nepouzdan i brzina polimerizacije je varirala na neprihvatljiv način.
[0032] Otuda, postoji potreba za identifikovanjem alternativnih načina u obezbeđivanju preparata koji sadrži melfalan flufenamid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, koja je rastvorljiva sa povećanom stabilnošću. Dalje, preparat treba da bude rastvorljiv u vodi, kako bi se izbegli negativni problemi usled prisustva organskog rastvarača u proizvodu, koji je obezbeđen za pacijenta (kao što je DMA).
[0033] Jedan aspekt predmetnog pronalaska je liofilizovani farmaceutski preparat koji sadrži:
(i) melfalan flufenamid hidrohlorid (J1); i
(ii) saharozu.
[0034] Pronalazak obezbeđuje liofilizovani preparat koji je stabilan u suvom obliku i rastvorljiv u vodenom rastvoru, bez prisustva organskog rastvarača. Iako je prethodno bilo moguće pripremiti liofilizovani preparat melfalan flufenamida samostalno, ovaj preparat se rastvarao jako sporo u vodenim rastvorima, u poređenju sa vremenom razgradnje. Inkorporiranje ekscipijensa u liofilizovanom preparatu melfalan flufenamida (preko inicijalnog rastvora u organskom rastvaraču) značajno poboljšava vreme rekonstitucije, ali ne menja značajno stabilnost rekonstituisanog melfalan flufenamida. Kao rezultat, vremenski okvir za rekonstituisani melfalan flufenamid je proširen, što poboljšava tretman pacijenata, npr. dopuštajući smanjenu brzinu infuzije, gde je to potrebno. Preparat "bez prisustva organskog rastvarača" može da sadrži količine organskog rastvarača u tragovima, obično manje od 0,5% (m/m).
[0035] Liofilizovani farmaceutski preparat melfalan flufenamida ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kao što je ovde opisano, je beli, pahuljast prašak za razliku od melfalan flufenamida koji nije liofilizovan ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koji može biti u obliku gustog, blago žućkastog praška.
[0036] Tipično, liofilizacija obuhvata četiri koraka, predtretman, zamrzavanje, primarno sušenje i sekundarno sušenje. U koraku koji prethodi tretmanu, supstanca koja će biti liofilizovana je pripremljena za liofilizaciju, npr. pripremom rastvora koji ima željenu koncentraciju ili mešanjem supstance sa drugim komponentama kako bi se dobio prihvatljiv rezultat. Postupak zamrzavanja može biti izveden u bočici za sušenje zamrzavanjem, u ohlađenom kupatilu, npr. mehaničkim rashlađivanjem, suvim ledom i metanolom ili tečnim azotom. Mašine za sušenje zamrzavanjem su dostupne za liofilizaciju većih razmera. Obično su temperature zamrzavanja između -50 ° C i -80 ° C.
[0037] U primarnom koraku sušenja, pritisak se spušta do opsega od nekoliko milibara, a toplota se može isporučiti za sublimaciju vode iz materijala. Količina potrebne toplote se može izračunati pomoću latentne toplote sublimacije sublimirajućih molekula. Trajanje ovog perioda zavisi, ali može trajati danima kako bi se sačuvala struktura materijala.
[0038] Cilj završnog sekundarnog koraka sušenja je uklanjanje bilo kojih nezamrznutih molekula vode. U ovoj fazi, temperatura može biti onoliko visoka kao iznad 0 ° C, da bi se prekinule bilo koje fizičko-hemijske interakcije nastale između molekula vode i zamrznutog materijala.
[0039] U kontekstu sadašnjeg pronalaska, treba biti shvaćeno da je melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) liofilizovan. Izraz "jedan liofilizovani farmaceutski preparat melfalan flufenamida ili jedne njegove farmaceutski prihvatljive soli, prema tome, podrazumeva da je melfalan flufenamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so liofilizovana.
[0040] Takođe su ovde opisani, liofilizovani melfalan flufenamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, komplet delova koji obuhvata takav melfalan flufenamid, postupci pripreme takvog melfalan flufenamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, preparati koje sadrže takav liofilizovani melfalan flufenamid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i njihove upotrebe.
[0041] "Liofilizacija", "liofilizovani" itd. mogu se u sadašnjem kontekstu koristiti zamenljivo sa "sušenje zamrzavanjem", "osušen zamrzavanjem" itd.
[0042] Primeri citotoksičnih dipeptida koji mogu biti liofilizovani, kao što je ovde opisano, ali da oni ne spadaju svi unutar patentnih zahteva su dalje izneti u WO01/96367. Poželjno je da N-završetak molekula ne bude zaštićen kao amid ili karbamat. To znači da R4u formuli I ne bi trebalo da bude zaštitna grupa, kao što je formil, acetil ili propionil, ili benzoil, jer zaštićeni oblik jedinjenja generalno, ima nižu citotoksičnu aktivnost od odgovarajućeg slobodnog oblika. Prirodne aminokiseline se odnose na aminokiseline koje prirodno postoje i ispoljavaju njihove funkcije u živim organizmima. Modifikovane aminokiseline se odnose na aminokiseline koji su na neki način modifikovane u drugačiju hemijsku strukturu i hemijski sastav nego prirodna aminokiselina. Primer prirodne ciklične aminokiseline je prolin. Primeri aromatičnih aminokiselina su fenilalanin, tirozin, triptofan i histidin.
[0043] Citotoksični dipeptidi, kao što je melfalan flufenamid, mogu takođe sadržati neprirodne proporcije atomskih izotopa na jednom ili više njegovih atoma. Na primer, jedinjenja mogu biti radioobeležena sa radioaktivnim izotopima, kao što su na primer tricijum (<3>H), deuterijum (<2>H), jod-125 (<125>I) ili ugljenik-14 (<14>C ).
[0044] Citotoksični dipeptid melfalan flufenamid se jasno razlikuje od melfalana:
■ Razlika u strukturi (melfalan flufenamid je etil estar na C-završetku, umesto karboksilne kiseline kod melfalana. Melfalan je stoga cviter jon, ali melfalan flufenamid nije).
■ Razlika u veličini (melfalan flufenamid je jedan dipeptid, tj. otprilike dva puta veličine melfalana).
■ Razlika u lipofilnosti, pri čemu je melfalan flufenamid jasno lipofilniji.
■ Razlika u stabilnosti u vodenim rastvorima. Melfalan je 10000 puta stabilniji u vodenim rastvorima u poređenju sa J1. J1 brzo hidrolizuje u vodi.
■ Razlika u putevima degradacije. Glavni put razgradnje melfalan flufenamida uključuje hidrolizu etil estra, dok se glavna degradacija melfalana odnosi na reaktivnost (hloro) alkil grupa.
[0045] Na osnovu, ali ne ograničavajući se, na gornje diferencijacije, jasno je da se saznanja za melfalan, a naročito za preparate i njihove formulacije, ne primenjuju na melfalan flufenamid i njegove preparate i formulacije.
[0046] Liofilizovani farmaceutski preparat prema pronalasku, može sadržati samo melfalan flufenamid hidrohlorid (J1), ili mešavinu melfalan flufenamid hidrohlorida (J1) sa jednim ili više različitih citotoksičnih dipeptida ili njihove farmaceutski prihvatljive soli. Nadalje, liofilizovani farmaceutski preparat može sadržati smešu dve ili više različitih farmaceutski prihvatljivih soli.
[0047] Ovde je opisan jedan liofilizovani farmaceutski preparat, koji sadrži:
(i) melfalan flufenamid; i
(ii) kombinaciju dva ili više ekscipijenasa izabranih iz grupe koja sadrži polisorbat; polietilen glikol; β-ciklodekstrin; α-ciklodekstrin; hidroksipropil-β-ciklodekstrin; sulfobutiletar-β-ciklodekstrin; laktozu; benzil alkohol; dinatrijum sukcinat; propilenglikol; Cremophor EL; Dimetil sulfoksid; D-manitol; Trehalozu; Saharozu; i aminokiselinu.
[0048] Ovde je opisan liofilizovani farmaceutski preparat, koji sadrži:
(i) melfalan flufenamid hidrohlorid (J1); i
(ii) kombinaciju dva ili više ekscipijenasa izabranih iz grupe koja sadrži polisorbat; polietilen glikol; β-ciklodekstrin; α-ciklodekstrin; hidroksipropil-β-ciklodekstrin; sulfobutiletar-β-ciklodekstrin; laktozu; benzil alkohol; dinatrijum sukcinat; propilen glikol; Cremophor EL; Dimetil sulfoksid; D-manitol; Trehalozu; Saharozu; i amino kiselinu.
[0049] Farmaceutski prihvatljive soli mogu biti, na primer, kisela adiciona so jednog jedinjenja ovde opisana, koja je dovoljno bazična, na primer, kisela adiciona so sa, na primer, jednom neorganskom ili organskom kiselinom, kao što je na primer, hlorovodonična, bromovodonična, azotna, metansulfonska, sumporna, fosforna, trifluorosirćetna, paratoluen sulfonska, 2-mezitilen sulfonska, limunska, sirćetna, vinska, fumarna, mlečna, sukcinska, jabučna, malonska,
1
maleinska, 1,2-etandisulfonska, adipinska, aspartična, benzensulfonska, benzojeva, etansulfonska ili nikotinska kiselina.
[0050] U ovom dokumentu, kada se koristi izraz "melfalan flufenamid", on takođe namerava da uključuje njegove farmaceutski prihvatljive soli, čak i ako to nije eksplicitno navedeno. [0051] Još jedan aspekt pronalaska je jedan liofilizovani farmaceutski preparat prema pronalasku, pri čemu je količina saharoze 10-100 težinskih % od melfalan flufenamid hidrohlorida (J1).
[0052] Kao što je prethodno pomenuto, jedan efekat prisustva ekscipijensa tokom liofilizacije je taj što rezultujući liofilizovani farmaceutski preparat koji sadrži melfalan flufenamid, ima poboljšanu rastvorljivost u vodenim rastvorima, kao što je fiziološki prihvatljiv rastvor, u poređenju kada je melfalan flufenamid liofilizovan bez ekscipijensa, kao što je ovde opisano. Posebno, rastvorljivost u vodenim rastvorima melfalan flufenamida, kada je liofilizovan u prisustvu ekscipijensa (asa) je veća u odnosu na rastvorljivost proizvoda koji nije liofilizovan. Ova povećana rastvorljivost melfalan flufenamida, naročito kada je liofilizovan u prisustvu ekscipijensa, kao što je ovde opisano, u poređenju sa ne-liofilizovanim proizvodom, ima značajne prednosti kada je u pitanju primena melfalan flufenamida kod pacijenta.
[0053] Zbog niske rastvorljivosti ne-liofilizovanog melfalan flufenamida u vodenim fiziološki prihvatljivim rastvorima, korišćenim za davanje leka pacijentu, neophodno je prvo rastvoriti neliofilizovani melfalan flufenamid u organskom rastvaraču, kao što je DMA. Zbog toga se melfalan flufenamid često skladišti rastvoren u DMA. Ranije nije bilo moguće direktno rastvaranje melfalan flufenamida u vodenom rastvoru, ali su morali da se koriste organski rastvarači. Jednom kada se rastvori u organskom rastvaraču, ovaj rastvor melfalan flufenamida i organskog rastvarača može biti rastvoren u fiziološki prihvatljivim rastvorima, za primenu na subjektu.
[0054] Kako je melfalan flufenamid veoma toksičan, kako bi se smanjila izloženost medicinskog osoblja takvim lekovima, koriste se posebni uređaji za prenos lekova, nakon rastvaranja u organskim rastvaračima do rastvora za primenu. Ovi uređaji za prenos su često plastične cevi koje sadrže polikarbonat. Međutim, takve cevi su osetljive i mogu se uništiti organskim rastvaračima, kao što je DMA. Prema tome, u slučajevima kada je lek koji se primenjuje rastvoren u takvom organskom rastvaraču, možda neće biti moguće korišćenje prenosnog uređaja, a rastvoreni lek umesto toga treba biti direktno dodat u fiziološki prihvatljiv rastvor, korišćen za primenu neposredno, pre vremena primene na pacijentu. Ovo može biti opasno za medicinsko osoblje, koje je tada pod rizikom od izlaganja toksičnom leku.
[0055] Kao što je iznad pomenuto, liofilizacija melfalan flufenamida povećava njegovu rastvorljivost u fiziološki prihvatljivim rastvorima. Ovo povećanje rastvorljivosti može biti još izraženije kada se melfalan flufenamid liofilizuje u prisustvu jedne ili više pomoćnih supstanci.
Kao što je ovde opisano, kada je melfalan flufenamid liofilizovan u prisustvu ekscipijensa, kao što je ovde otkriveno, rastvorljivost melfalan flufenamida može biti povećana, u poređenju sa melfalan flufenamidom koji nije liofilizovan. Može se izbeći upotreba organskog rastvarača, kao što je korišćen DMA da se prvo rastvori melfalan flufenamid.
[0056] Melfalan flufenamid koji je liofilizovan u prisustvu najmanje jednog ekscipijensa, kao što je polisorbat, koji na primer može biti Polisorbat 80; polietilen glikol, koji na primer može biti PEG 400 ili PEG 300; β-ciklodekstrin; α-ciklodekstrin; hidroksipropil-β-ciklodekstrin; sulfobutiletar-β-ciklodekstrin; laktoza; benzil alkohol; dinatrijum sukcinat; propilenglikol; Cremophor EL; Dimetil sulfoksid; D-manitol; Trehaloza; Saharoza; ili aminokiselina kao što je histidin; ili kombinacija dva ili više ovih ekscipijenasa; može biti direktno rastvorena u fiziološki prihvatljivom rastvoru, kao što je oko 4,5-5,5 tež.%, npr. oko 5%, rastvor glukoze ili vodeni rastvor NaCl (npr. oko 0,9 tež.% NaCl). Na taj način, mogu se koristiti uređaji koji sadrže polikarbonat i koji se koriste za primenu melfalan flufenamida, minimizirajući rizik od izlaganja medicinskog osoblja leku. Takođe, na ovaj način se izbegava davanje toksičnog DMA pacijentu. To omogućava direktno pripremanje rastvora koji sadrži melfalan flufenamid, u koncentraciji pogodnoj za primenu, kod pacijenta. Alternativno, koncentrovani rastvor koji sadrži liofilizovani farmaceutski preparat melfalan flufenamida u fiziološki prihvatljivom rastvoru može biti prvo pripremljen i zatim prebačen u kesu za infuziju, korišćenjem najčešće korišćenih uređaja za transfer.
[0057] Takođe, kada je melfalan flufenamid rastvoren u DMA, može nastati privlačenje između melfalan flufenamida i DMA. Korišćenjem liofilizovanog farmaceutskog preparata obezbeđenog u skladu sa pronalaskom, moguće je rastvoriti liofilizovani melfalan flufenamid direktno u fiziološki prihvatljivom rastvoru, izbegavajući prvo rastvaranje melfalan flufenamida u DMA. Na taj način se može izbeći formiranje DMA-melfalan flufenamidnih komponenata usled njihove interakcije i ne treba primenjivati na pacijentu jedan takav proizvod interakcije niti DMA.
[0058] Takođe je obezbeđen farmaceutski preparat, koji sadrži liofilizovani farmaceutski preparat melfalan flufenamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je ovde definisano, opciono, dobijen postupkom za pripremu takvog liofilizovanog preparata, ovde opisanog. Takav farmaceutski preparat može dalje da sadrži fiziološki prihvatljiv rastvor, kao što je vodeni NaCl (npr. 0,9 tež.%) ili rastvor glukoze (npr. 4,5-5,5 tež.%, kao što je oko 5 tež.%, glukoza). Ovaj farmaceutski preparat može biti koncentrovani rastvor namenjen za razblaživanje pre primene na subjektu ili kao rastvor koji omogućava direktnu primenu na pacijentu.
[0059] Zbog povećane rastvorljivosti melfalan flufenamida nakon liofilizacije u prisustvu jednog ili više ekscipijenasa, kako je ovde opisano, moguće je pripremiti rastvoreni melfalan flufenamidni rastvor, kao što je farmaceutski preparat koji sadrži melfalan flufenamid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, koji je suštinski slobodan od organskih rastvarača, kao što su DMA, dihlorometan, tetrahidrofuran, 2-metil tetrahidrofuran, etil acetat, aceton, dimetilformamid, acetonitril, dimetil sulfoksid, dioksan, dietil etar, sirćetna kiselina, n-butanol, izopropanol, n-propanol, terc-butanol, sek-butanol, metanol, etanol i sirćetna kiselina. Pod "suštinski slobodnim" je u ovom dokumentu označeno da farmaceutska kompozicija sadrži količine organskog rastvarača samo u tragovima, kao što je manje od ukupno 0,1 tež.% organskog rastvarača. U jednom aspektu, liofilizovani preparat ili farmaceutska kompozicija ne sadrži nikakve merljive količine organskog rastvarača. Takvi preparati bi bili manje toksični i stoga bi bili bolje tolerisani od strane pacijenta, tj. davali manje neželjenih efekata kao što su povraćanje, mučnina ili drugi opšti simptomi prilikom infuzije.
[0060] U jednom aspektu pronalaska, obezbeđen je liofilizovani farmaceutski preparat prema pronalasku, koji je slobodan ili suštinski slobodan od organskih rastvarača.
[0061] Pronalazak obezbeđuje farmaceutski preparat koji se sastoji od liofilizovanog farmaceutskog preparata prema pronalasku i fiziološki prihvatljivog rastvora, pomenuti fiziološki prihvatljiv rastvor je rastvor glukoze.
[0062] Farmaceutski preparat može biti dobijen putem rastvaranja melfalan flufenamida prema pronalasku u fiziološki prihvatljivom rastvoru. Takođe je ovde opisan, postupak za pripremu farmaceutskog preparata, koji obuhvata korak rastvaranja liofilizovanog farmaceutskog preparata, koji sadrži melfalan flufenamid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so u fiziološki prihvatljivom rastvoru.
[0063] Izraz "fiziološki prihvatljiv rastvor" ovde definisan, je vodeni rastvor, kao što je rastvor NaCl (kao što je 0,9 tež.% NaCl) ili rastvor glukoze, kao što je oko 4,5-5,5 tež.% glukoze, npr. oko 5 težinskih %, ili drugi fiziološki prihvatljiv rastvor. Svaki takav rastvor može opciono biti puferovan.
[0064] Farmaceutska kompozicija, koja sadrži liofilizovani melfalan flufenamid i fiziološki prihvatljiv rastvor za direktnu primenu kod subjekta, generalno obuhvata melfalan flufenamid u koncentraciji od 1 mg / ml ili manje, kao što je 0,2 mg / ml. Međutim, farmaceutski preparat može sadržati melfalan flufenamid u koncentraciji do 4 mg / ml za razblaživanje u fiziološki prihvatljivom rastvoru, pre primene na pacijentu.
[0065] Jedan aspekt pronalaska obezbeđuje postupak za pripremu liofilizovanog farmaceutskog preparata, pri čemu:
1
a) melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) je rastvoren u jednom organskom rastvaraču da bi se dobio rastvor melfalan flufenamid hidrohlorida (J1);
b) voda se dodaje u rastvor melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), kako bi se dobio vodeni rastvor melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), u koncentraciji od 0,2-3,0 mg / ml;
c) saharoza se dodaje u melfalan flufenamid hidrohloridni (J1) rastvor; i
d) vodeni rastvor melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), koji sadrži saharozu je podvrgnut liofilizaciji.
[0066] U jednoj realizaciji ovog aspekta, obezbeđen je postupak, pri čemu:
a) melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) je rastvoren u jednom organskom rastvaraču;
b) dodaje se voda u rastvor dobijen u koraku a) kako bi se dobio rastvor pomenutog melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), u koncentraciji od 0,2-3,0 mg / ml;
c) saharoza se dodaje u rastvor dobijen u koraku b); i
d) rastvor dobijen u koraku c) je podvrgnut liofilizaciji.
[0067] Organski rastvarač može biti izabran od bilo kojeg od etanola, kiseline koja sadrži etanol, glicerina, propilenglikola, benzil alkohola, dimetilacetamida (DMA), N-metil-2-pirolidona, izopropanola, n-butanola, terc-butanola, metil terc-butil etra, dimetilsulfoksida, tetrahidrofurana, 2-metil tetrahidrofurana, acetona, dimetilformamida, acetonitrila, dioksana, sirćetne kiseline, mlečne kiseline, propionske kiseline, n-butanola, izopropanola, n- propanola, terc-butanola, sek-butanola, metanola i smeše etanola i vode. Poželjno, navedeni organski rastvarač je etanol.
[0068] Ovde je otkriven postupak za pripremu liofilizovanog farmaceutskog preparata, kao što je ovde opisano, pri čemu se
a) melfalan flufenamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so rastvara u jednom organskom rastvaraču;
b) dodaje se voda rastvoru dobijenom u koraku a) kako bi se dobio rastvor pomenutog melfalan flufenamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u koncentraciji od 0,2-3,0 mg / ml;
c) najmanje jedan ekscipijens, kao što je ovde definisan, dodaje se u rastvor dobijen u koraku b); i
d) rastvor dobijen u koraku c) je podvrgnut liofilizaciji.
[0069] Poželjno, pomenuti organski rastvarač je etanol.
[0070] Ovde je otkriven postupak za pripremu jednog liofilizovanog farmaceutskog preparata, kao što je ovde opisano, pri čemu
a) melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) je rastvoren u jednom organskom rastvaraču;
b) dodaje se voda rastvoru dobijenom u koraku a) kako bi se dobio rastvor pomenutog melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u koncentraciji od 0,2-3,0 mg / ml;
c) najmanje jedan ekscipijens, kao što je ovde definisan, dodaje se u rastvor dobijen u koraku b); i
d) rastvor dobijen u koraku c) je podvrgnut liofilizaciji.
[0071] Primeri organskih rastvarača korisnih za rastvaranje melfalan flufenamida, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u koraku a), mogu biti bilo koji odabrani od etanola, kiseline koja sadrži etanol, glicerina, propilenglikola, benzil alkohola, dimetilacetamida (DMA), N-metil-2-pirolidona, izopropanola, n-butanola, terc-butanola, metil terc-butil etra, propilen glikola, dimetilsulfoksida, tetrahidrofurana, 2-metil tetrahidrofurana, acetona, dimetilformamida, acetonitrila, dioksana, sirćetne kiseline, mlečne kiseline, propionske kiseline, n-butanola, izopropanola, n-propanola, terc-butanola, sek-butanola, metanola i smeše etanola i vode.
[0072] Ovde je otkriven postupak za pripremu liofilizovanog farmaceutskog preparata, kao što je ovde opisano, pri čemu
a) melfalan flufenamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so je rastvorena u
1
organskom rastvaraču izabranom od bilo kojeg od etanola, kiseline koja sadrži etanol, glicerina, propilenglikola, benzil alkohola, dimetilacetamida (DMA), N-metil-2-pirolidona, izopropanola, n-butanola, terc-butanola, metil terc-butil etra, propilenglikola, dimetilsulfoksida, tetrahidrofurana, 2-metil tetrahidrofurana, acetona, dimetilformamida, acetonitrila, dioksana, sirćetne kiseline, mlečne kiseline, propionske kiseline, n-butanola, izopropanola, n-propanola, terc-butanola, sek-butanola, metanola i smeše etanola i vode; b) dodaje se voda rastvoru dobijenom u koraku a) kako bi se dobio rastvor pomenutog melfalan flufenamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u koncentraciji od 0,2-3,0 mg / ml;
c) najmanje jedan ekscipijens, kao što je ovde definisan, dodaje se u rastvor dobijen u koraku b); i
d) rastvor dobijen u koraku c) je izložen liofilizaciji.
[0073] Ovde se nalazi otkriveni postupak za pripremu liofilizovanog farmaceutskog preparata kao što je ovde opisano, pri čemu je
a) melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) rastvoren u jednom organskom rastvaraču odabranom od bilo kojeg od etanola, kiseline koja sadrži etanol, glicerina, propilen glikola, benzil alkohola, dimetilacetamida (DMA), N-metil-2-pirolidona, izopropanola, n-butanola, terc-butanola, metil terc-butil etra, propilenglikola, dimetilsulfoksida, tetrahidrofurana, 2-metil tetrahidrofurana, acetona, dimetilformamida, acetonitrila, dioksana, sirćetne kiseline, mlečne kiseline, propionske kiseline, n-butanola, izopropanola, n-propanola, terc-butanola, sek-butanola, metanola i smeše etanola i vode;
b) dodaje se voda rastvoru dobijenom u koraku a) kako bi se dobio rastvor pomenutog melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u koncentraciji od 0,2-3,0 mg / ml;
c) najmanje jedan ekscipijens, kao što je ovde definisan, dodaje se rastvoru dobijenom u koraku b); i
d) rastvor dobijen u koraku c) je podvrgnut liofilizaciji.
1
[0074] Kada se kiselina koja sadrži etanol, koristi za rastvaranje melfalan flufenamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u koraku a) u gore navedenom postupku, kiselina može biti HCl, u koncentraciji od npr. 5-20 mM, ili koncentracija HCl može biti na primer 10 mM, u etanolu.
[0075] Kada je melfalan flufenamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so rastvorena u etanolu i vodi, koncentracija etanola može biti 10-100 vol.%, kao što je 10-90 vol.%, 50-90 vol.%, ili 70 vol.%.
[0076] Voda koja se koristi za rastvaranje i / ili razblaživanje uzoraka liofilizovanog farmaceutskog preparata, u skladu sa ovim pronalaskom, je sterilna ili prečišćena voda, ili voda za injekcije (WFI).
[0077] Kada se etanol koristi za rastvaranje melfalan flufenamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, rastvor dobijen u koraku a) je razblažen u koraku b), tako da je zapreminska koncentracija etanola 2% -100 %, kao što je 2, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ili 100% ili kao što je 5-15%, ili kao što je 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ili 15%. Tipično, koncentracija etanola nakon koraka razblaživanja b) je 9%.
[0078] Rastvor dobijen u koraku b) može biti sterilno filtriran pre koraka liofilizacije c).
[0079] Korak liofilizacije c) obuhvata tipične faze zamrzavanja i primarnog i sekundarnog sušenja, kao što je ovde opisano. Informacije o načinu izvođenja liofilizacije mogu se naći npr. u izdanju od Rey, L. i May, J. Freeze Drying / Lyophilization of Pharmaceutical and Biological Products (2010), ISBN 978-1439B2575-4. U koraku zamrzavanja uzorak je na primer zamrznut u kupatilu od suvog leda-acetona, pri temperaturi od -70 ° C do -90 ° C, kao što je -70 ° C, -75 ° C, -78 ° C, -80 ° C, -82 ° C, -85 ° C, -88 ° C ili -90 ° C, na primer, tokom 10 minuta do 120 minuta.
[0080] Alternativno, uzorak može biti zamrznut u zamrzivaču, pri temperaturi -14 ° C do -25 ° C, kao što je -14 ° C, -16 ° C, -18 ° C, -20 ° C, -22 ° C, ili -25 ° C, na primer za 10 min do 24 sati. Takođe je moguće zamrznuti uzorak u tečnom azotu.
[0081] Korak c) se može izvršiti primenom konvencionalnih tehnika za liofilizaciju, videti npr. Rey, L. i May, J. Freeze Drying / Lyophilization of Pharmaceutical and Biological Products (2010), ISBN 978-1439B2575-4.
[0082] Na primer, u primarnom koraku sušenja, pritisak se može sniziti na 0,1 mbar do 50 mbar, kao što je 1 mbar do 10 mbar. Temperatura je tipično ispod 0 ° C, kao što je -50 do 0 ° C, ili -20 do -1 ° C, npr. -50, -40, -30, -20, -10 ili -5 ° C. Ova faza može, na primer, da traje od 4 do 48 sati, npr. 12 sati do 24 sati.
[0083] U završnom sekundarnom koraku sušenja, kada je većina vode isparila, temperatura može biti kao u primarnom koraku sušenja ili iznad 0 ° C.
1
[0084] Kada jedan ili više ekscipijenasa, kao što je ovde definisano, treba da bude prisutno tokom liofilizacije, oni se mogu dodati u koraku b) pre ili posle razblaživanja rastvora dobijenog u koraku a) i pre izvođenja liofilizacije. Pomoćni sastojci se mogu dodati u praškastom obliku, ali se generalno dodaju kao vodeni rastvor. Stoga, ekscipijensi mogu biti prisutni tokom liofilizacije.
[0085] Takođe je ovde opisan jedan liofilizovani farmaceutski preparat, kao što je ovde definisano, dobijen pomoću gore opisanog postupka.
[0086] Takođe je ovde opisan komplet delova koji obuhvata:
(i) prvi kontejner koji sadrži liofilizovani farmaceutski preparat, koji sadrži melfalan flufenamid, kao što je ovde opisano; i
(ii) drugi kontejner koji sadrži fiziološki prihvatljiv rastvor, kao što je rastvor NaCl (kao što je 0,9 mas% NaCl) ili rastvor glukoze, kao što je 4,5-5,5 mas% rastvor glukoze, npr. 5 mas% rastvor glukoze ili drugi fiziološki prihvatljiv rastvor.
[0087] Takav komplet takođe može da sadrži uređaj za mešanje sadržaja dva kontejnera jednih sa drugima i / ili za transfer dobijene smeše do uređaja, kao što je, kesa za infuziju koja sadrži rastvor glukoze, za primenu kod pacijenta.
[0088] Takav komplet se može sastojati od prvog kontejnera, koji sadrži liofilizovani farmaceutski preparat, koji sadrži melfalan flufenamid, kao što je ovde opisano i drugog kontejnera, koji sadrži fiziološki prihvatljiv rastvor. Melfalan flufenamid u kompletu takođe može biti u smeši sa jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem i / ili ekscipijensom. Jedan primer je 5% glukoza sa npr. 1% albuminom ili drugi proteinom ili jedinjenjem. Količina fiziološki prihvatljivog rastvora može biti ili mala količina kako bi se pripremio koncentrovani rastvor liofilizovanog farmaceutskog preparata koji sadrži melfalan flufenamid, ili veća količina kako bi se omogućilo pripremanje rastvora koji ima željenu koncentraciju, za primenu kod pacijenta. Alternativno, komplet može da sadrži i kontejner koji sadrži jedan fiziološki prihvatljiv rastvor, za pripremu jednog koncentrovanog rastvora liofilizovanog farmaceutskog preparata i drugi kontejner, kao što je kesa za infuziju, koja sadrži veću količinu jednog fiziološki prihvatljivog rastvora, za pripremu razblaženog rastvora, za primenu na subjektu.
[0089] Liofilizovani farmaceutski preparat, farmaceutski preparat ili komplet, koji je ovde naveden, može da sadrži samo melfalan flufenamid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so kao antitumorsko sredstvo. Međutim, melfalan flufenamid se takođe može kombinovati sa jednim ili više antitumorskih sredstava, kao što su druge antitumorske supstance, kao što su
1
gemcitabin, etopozid, doksorubicin ili taksani ili druge terapeutski efikasne supstance. Kada se kombinuju sa drugim antitumorskim agensima, oni se mogu ili mešati sa melfalan flufenamidom ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli pre liofilizacije i posledično liofilizovati zajedno sa melfalan flufenamidom ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli ili kombinovati sa liofilizovanim melfalan flufenamidom ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli nakon liofilizacije, kao što je u jednom kompletu ili jednom farmaceutskom preparatu. Liofilizovani melfalan flufenamid se takođe može mešati sa jednom ili više antitumorskih supstanci u suvom obliku, čak iako nije liofilizovana, nakon liofilizacije melfalan flufenamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0090] Melfalan flufenamid koji je ovde obezbeđen, ima citotoksičnu aktivnost i stoga se može koristiti u prevenciji i / ili lečenju raka, kako je opisano na drugim mestima (videti npr. WO 01/96367). Smanjenje preživljavanja tumorskih ćelija od strane jedinjenja je pokazano u WO 01/96367, za različite hematološke i / ili čvrste tumore, npr. rak pluća, mijelom, limfom, leukemiju, rak dojke i karcinom jajnika. Dalje, u WO 01/96367 pokazano je da ovo jedinjene zaobilazi melfalansku rezistenciju. Stoga, ovo jedinjenje može biti korišćeno u prevenciji i / ili lečenju raka, smanjujući rast tumora i / ili ubijanjem tumorskih ćelija. Stoga, jedinjenje može biti korišćeno za lečenje i / ili produžavanje preživljavanja pacijenata pogođenih sa kancerogenim oboljenjima.
[0091] Takođe je ovde obezbeđen liofilizovani farmaceutski preparat ili farmaceutski sastav kao što je ovde opisano i zahtevano, za upotrebu kao lek. Pronalazak je takođe usmeren na jedan takav liofilizovani farmaceutski preparat ili farmaceutski sastav, za upotrebu u lečenju i / ili prevenciji raka, kao što je rak jajnika, rak pluća, rak mokraćne bešike, mezoteliom, multipli mijelom, rak dojke i / ili bilo koji drugi čvrsti ili hematološki kancer.
[0092] Takođe je ovde obezbeđena upotreba liofilizovanog farmaceutskog preparata, kompleta ili farmaceutskog sastava, kao što je ovde opisano i zahtevano, za pripremu leka za lečenje i / ili prevenciju raka, kao što je rak jajnika, rak pluća, rak mokraćne bešike, mezoteliom, multipli mijelom, rak dojke i / ili bilo koji drugi čvrsti ili hematološki kancer. [0093] Takođe je ovde otkriven liofilizovani farmaceutski preparat, komplet ili farmaceutski preparat koji sadrži melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) u kombinaciji sa drugim lekovima koji su korisni za lečenje raka, za upotrebu u lečenju i / ili prevenciji raka, kao što je rak jajnika, rak pluća, rak mokraćne bešike, mezoteliom, multipli mijelom, rak dojke i / ili bilo koji drugi čvrsti ili hematološki kancer.
[0094] Takođe je ovde otkriven postupak za lečenje i / ili prevenciju raka, kao što je rak jajnika, rak pluća, rak bešike, mezoteliom, multipli mijelom, rak dojke i / ili bilo kojeg drugog čvrstog
1
ili hematološkog kancera. Postupak može da obuhvata primenu liofilizovanog farmaceutskog preparata, kompleta ili farmaceutskog sastava kao što je ovde obezbeđeno, u
terapijski efikasnoj dozi, kod subjekta, kome je to potrebno. Subjekt je tipično čovek ili domaća životinja.
[0095] Takođe je ovde otkriven postupak za lečenje i / ili prevenciju raka, kao što je rak jajnika, rak pluća, rak bešike, mezoteliom, multipli mijelom, rak dojke i / ili bilo kojeg drugog čvrstog ili hematološkog kancera, pri čemu je liofilizovani farmaceutski preparat, komplet ili farmaceutski preparat koji sadrži melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) obezbeđen u terapeutski efikasnoj dozi, subjektu kome je to potrebno, u kombinaciji sa drugim lekom, korisnim u lečenju kancera. Subjekt je tipično čovek ili domaća životinja.
[0096] Primena liofilizovanog farmaceutskog preparata, kompleta ili farmaceutskog sastava kod subjekta, kome je to potrebno može se vršiti intravenskim injekcijama. Takođe je moguće primeniti liofilizovani melfalan flufenamid ili farmaceutski preparat koji sadrži takav liofilizovani melfalan flufenamid u telesnim šupljinama, kao što je instilacija u bešiku ili u peritonealne ili pleuralne šupljine.
[0097] Melfalan flufenamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, može biti primenjena u količini od 20-130 mg, kao što je 30-75 mg, na primer 50 mg ukupne količine melfalan flufenamida po primeni. Farmaceutska kompozicija koja je ovde obezbeđena, koja sadrži melfalan flufenamid može stoga, imati količinu liofilizovanog melfalan flufenamida, tako da ova količina može biti primenjena.
[0098] Liofilizovani melfalan flufenamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, može biti primenjivana svakodnevno, svakog drugog ili trećeg dana, nedeljno, svake druge, treće ili četvrte nedelje ili čak kao visoka pojedinačna doza (npr. pre transplantacije), u zavisnosti od subjekta i oblika kancera koji treba lečiti.
[0099] Izraz "prevencija" kako se ovde koristi, ima za cilj da uključuje terapiju kod pacijenta, koji je bio podvrgnut hemoterapiji protiv bilo kog oblika raka, kao što je ovde opisano i koji je podvrgnut kontinuiranoj terapiji, u cilju sprečavanja bilo koje metastaze nastale usled pomenutog karcinoma.
[0100] Još jedan aspekt predmetnog pronalaska obezbeđuje upotrebu saharoze u liofilizovanom preparatu melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), za smanjenje vremena rekonstitucije liofilizovanog preparata melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), kada se rekonstituiše u vodenom rastvaraču.
[0101] Navedeni melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) je poželjno rastvoren u etanolu, pre izlaganja pomenutog melfalan flufenamid hidrohlorida (J1) pomenutom ekscipijensu, saharozi.
2
[0102] U ovom dokumentu mogu se zamenljivo koristiti izrazi "liofilizacija", "sušenje zamrzavanjem", "liofilizovani", "osušen-zamrzavanjem" i slično.
[0103] Melfalan flufenamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, može biti pripremljena kao što je opisano u WO 01/96367. Primer 1 WO 01/96367 opisuje sintetsku proceduru za izradu melfalan flufenamida (L-melfalanil-L-p-fluorofenilalan etil estar), kao i njegovu hidrohloridnu so - melfalan flufenamid hidrohlorid J1 (L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanin etil estar, jedinjenje J1).
[0104] Dipeptidni derivati otkriveni u WO01/96367, mogu biti sintetisani iz melfalana zaštićenog sa terc-butoksikarbonilom (Boc), kao što je u njemu opisano i mogu se liofilizovati i koristiti, kao što je ovde opisano. Takođe, WO01/96367 otkriva pripremu tripeptidnih derivata, u kojima su Boc-zaštićene aminokiseline kuplovane sa dipeptidnim derivatom, koji sadrži melfalan, korišćenjem EDC/NMM/HOBt kao reagensa za kuplovanje (EDC je trietilamin ili 1-[3-dimetilamino)propil]-3-etilkarbodiimid hidrohlorid, NMM je N-metilmorfolin i HOBt je 1-hidroksibenzotriazol). Ovde je otkriveno da takvi tripeptidni derivati mogu biti liofilizovani i upotrebljeni, kao što je ovde opisano.
[0105] Ovde je otkriveno da primeri derivata melfalana, koji se mogu liofilizovati i koristiti kao što je ovde opisano, u svim aspektima uključuju, bez ograničenja, melfalan flufenamid, L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanin izopropil estar (JV28), L-prolinil-L-melfalanil-L-pfluorofenilalanin etil estar (J3) (slika 7) i njihove farmaceutski prihvatljive soli. Ova jedinjenja su prethodno otkrivena u WO01/96367, koji takođe obezbeđuje metode za njihovu pripremu. Melfalan flufenamid, JV28 i J3 se mogu transformisati u melfalan u telu. U WO 01/96367, pokazano je da ovi derivati imaju povećanu aktivnost ubijanja ćelija protiv tumora, čak i kada se koriste pri nižim koncentracijama od melfalana. Dodatno, rezistencija na melfalan može biti zaobiđena.
[0106] Pronalazak će dalje biti opisan pomoću sledećih primera.
Eksperimentalna sekcija
Primer 1: Liofilizacija melfalan flufenamid hidrohlorida (J1) pod različitim uslovima
[0107] U ovom eksperimentu, ispitivana je liofilizacija melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), pod različitim uslovima.
Primer 1A
[0108] Izmerene količine J1 su rastvorene u različitim zapreminama dejonizovane vode, na ultrazvučnom kupatilu, uz blago zagrevanje, kako bi se dobili bistri rastvori. Uzorci su zamrznuti u kupatilu od suvog leda - acetona (-78 ° C, uzorci A1-A3) ili u zamrzivaču na -16 ° C (uzorci B1 - B3). Sušenje zamrzavanjem je zatim sprovedeno tokom 16 h, pri pritisku od 1 mbara, na sobnoj temperaturi sa hvatanjem suvim ledom i acetonom (-78 ° C), između boce za sušenje i pumpe.
[0109] Vizuelni izgled nakon sušenja je sažeto prikazan u tabeli 1.
Tabela 1. Šest različitih rastvora J1 pri različitim koncentracijama zamrzavanja ili temperaturama zamrzavanja
Eksp. br mg J1 mL vode konc (mg / mL) izgled nakon sušenja J1A1 2,4 6 0,4 bela, pahuljasta
J1A2 2,7 27 0,1 bela, pahuljasta - poneka nepotpuno suva
J1A3 2,5 10 0,25 bela, pahuljasta
J1 B1 2,7 6,75 0,4 bela, čvrsta supstanca J1 B2 2,5 25 0,1 svetlo žuti prašak
J1 B3 2,8 11,2 0,25 bela, pahuljasta
Primer 1 B
[0110] Uzorci osušenih jedinjenja su rastvoreni u 50% vodenom acetonitrilu i analizirani pomoću HPLC-a (kolona ACE, C8, 50x3 mm, 10-97% CH3CN u 3 min, 1 ml / min). U jednom slučaju (J1A1), vodeni rastvor je analiziran pomoću HPLC-a, pre sušenja zamrzavanjem (J1 A1 - početak). Čistoće nakon sušenja su sažete u Tabeli 2.
Tabela 2. Čistoća nakon sušenja zamrzavanjem. Rt = Vreme zadržavanja Eksp. br J1: Rt 2,27 (%) Rt 1,87 (%) Rt 1,44 (%)
J1 A1 -početak 88 12
J1A1 79 21
J1A2 80 20
J1A3 41 45 14
J1 B1 34 42 25
J1 B2 36 43 21
J1 B3 79 21
Primer 1 C
[0111] Zatim je ispitivano korišćenje ili blago kisele vode (na primer 0,01% HCl) da bi se poboljšala brzina rastvaranja, ili da se prvo rastvori J1 u etanolu, pre dodavanja vode (neutralan ili blago kiseli).
[0112] Tri uzorka J1 su pripremljena rastvaranjem melfalan flufenamida (oko 3 mg) u 70% vod. etanolu (0,5 ml). Rastvori su razblaženi sa 5 mM HCI da bi se dobila koncentracija od 0,4 mg / mL. Pošto se melfalan flufenamid brzo rastvara u vod. rastvoru etanola, nije bilo potrebno korišćenje ultrazvučnog kupatila ili grejanja za dobijanje bistrog rastvora. Rastvori su zatim zamrznuti u kupatilu od suvog leda - acetona (-78 ° C) između boce za sušenje i pumpe. Vizuelni izgled nakon sušenja je rezimiran u tabeli 3.
Tabela 3. Tri ponavljanja za J1 rastvoren u etanolu i kiselini.
Eksp. br mg J1 mL HCI konc.(mg / mL) izgled nakon sušenja
J1 C1 3,0 7,0 0,4 bela čvrsta supstanca, od koje je poneka prianjala za staklo J1 C2 3,2 7,0 0,4 bela čvrsta supstanca, od koje je poneka prianjala za staklo J1 C3 2,9 6,75 0,4 bela čvrsta supstanca, od koje je poneka prianjala za staklo
Primer 1 D
[0113] Na svakom uzorku su izvršene dve HPLC analize: jedna od čvrstog jedinjenja, koje se može ukloniti iz boce i jedna rastvaranjem ostatka u jedinjenju u boci (tabela 4).
Tabela 4. Čistoća nakon sušenja zamrzavanjem.
Protok 1
Eksp. br J1: Rt (%) Rt (%) Rt (%)
J1C1 2,25 (97%) 2,32 (3%)
J1C2 2,24 (97%) 1,87 (1%) 1,98 (1%)
J1C3 2,22 (99%) 1,87 (1%)
Protok 2
Eksp. br J1: Rt (%) Rt (%) Rt (%)
2
J1C1 2,25 (100%)
J1C2 2,25 (95%) 1,88 (3%) 1,98 (2%)
J1C3 2,25 (97%) 1,87 (3%)
[0114] U zaključku, rastvaranjem J1 u 70% etanolu, razblaživanjem sa 5mM HCl i liofilizacijom dobijena su tri uzorka čistoće > 95%.
Primer 1E
[0115] Zatim je testirano izostavljanje kiseline i umesto toga razblaživanje etanola sa dejonizovanom vodom. Tri uzorka J1 su pripremljena rastvaranjem J1 (oko 3 mg) u 70% vod. etanolu (0,5 mL) na sobnoj temperaturi. Rastvori su razblaženi dejonizovanom vodom da bi se dobila koncentracija od 0,4 mg / mL. Rastvori su zatim zamrznuti u kupatilu suvog ledaacetona (-78 ° C). Sušenje sa zamrzavanjem je zatim sprovedeno tokom 16 sati, pri pritisku od 1 mbara, na sobnoj temperaturi, sa hvatanjem suvim ledom i acetonom (-78 ° C) između boce za sušenje i pumpe. Vizuelni izgled nakon sušenja je sažet u tabeli 5 i čistoće u tabeli 6.
Tabela 5. Tri ponavljanja za J1 rastvoren u etanolu i vodi.
Eksp. br mg J1 mL vode konc.(mg / mL) izgled nakon sušenja
J1D1 3,15 7,37 0,4 bela, pahuljasta čvrsta supstanca J1D2 3,11 7,27 0,4 bela, pahuljasta čvrsta supstanca J1D3 3,17 7,42 0,4 bela, pahuljasta čvrsta supstanca
Tabela 6. Čistoća nakon sušenja zamrzavanjem.
Eksp. br J1: Rt (%)
J1D1 2,26 (oko 100%)
J1D2 2,26 (oko 100%)
J1D3 2,25 (oko 100%)
[0116] Rastvanjem J1 u 70% etanolu, razblaživanjem sa vodom i sušenjem zamrzavanjem; tri replikatna uzorka su dobijena sa istom čistoćom kao početni materijal.
Primer 2: Uticaj ekscipijenasa na brzinu rastvaranja liofilizovanog melfalan flufenamida
[0117] U ovom eksperimentu, ispitivan je uticaj brzine rastvaranja dodavanjem ekscipijenasa, u procesu sušenja zamrzavanjem melfalan flufenamid hidrohlorida (J1). Korišćeni su sledeći ekscipijensi, od kojih su svi uobičajeni agensi u formulaciji, generalno se smatraju kao bezbedni (GRAS) prema FDA (Američka Administracija za hranu i lekove):
- D-manitol, trehaloza i saharoza;
- Trizma hidrohlorid i L-histidin;
- Polisorbat 80, β-ciklodekstrin;
J1 je korišćen u svim eksperimentima.
D-Manitol, kupljen od Sigme br. 33440;
D - (+) - Trehaloza dihidrat, kupljena od Sigme br. T9449-25 g;
Trizma hidrohlorid, kupljen od Sigme br. T3253-100 g;
β-Ciklodekstrin hidrat, kupljen od Sigme br. 856088-5 g;
Polisorbat 80, kupljen od Fluke 59924-100 g.
[0118] Sušenje zamrzavanjem je izvedeno na opremi Leybold Lyovac GT2. LCMS (Tečna hromatografija-masena spektrometrija) je rađena na HP1100 sistemu korišćenjem acetonitril-0,1% trifluorosirćetne kiseline u vodi kao eluentu. Korišćena je ACE kolona C8, 50 x 3 mm i gradijent 10-97% acetonitrila u 3 min. Filter bočice su bile od Whatman, Mini-UniPrep, 0,45 μm.
(i) Postupak A, sušenje zamrzavanjem
[0119] Melfalan flufenamid (30,1 mg) je rastvoren u 5 mL 70% etanola sa 1 mM HCl, ukupno rastvaranje u okviru 12 min, pri 18-19 ° C. Rastvor je razblažen vodom (70 mL) i raspoređen (10 mL) u boce okruglog dna od 250 ml, sa i bez eksipijensa (npr. β-ciklodekstrin, 9 mg). Kada je sav materijal rastvoren, rastvori su zamrznuti uranjanjem u kupatilo suvog leda / acetona na -78 ° C. Zamrznuti rastvori su zatim osušeni zamrzavanjem, pri pritisku <0,1 mbara preko noći i sobnoj temperaturi, evaporacija je održavala uzorke zamrznutima do suvih.
(ii) Postupak A, merenje brzine rastvaranja
[0120] Rastvor 5% glukoze (10 mL) je dodat u jedan deo materijala osušen zamrzavanjem, pri 18,5-19°C i mešan sa magnetom. Alikvoti (oko 0,3 mL) su uzeti 1-mL špricem, pri različitim vremenima i filtrirani kroz filter bočicu (0,45 μm). Filtrat (8 μL) je analiziran pomoću HPLC.
2
(iii) Postupak B, sušenje zamrzavanjem
[0121] Melfalan flufenamid (10,2 mg) je rastvoren u 1,67 ml 70% etanola sa 5 mM HCl, ukupno rastvaranje unutar 5 min, na 25 ° C. Rastvor je razblažen vodom (23,3 mL) i raspoređen (10 mL) u bočice, sa i bez ekscipijenasa (npr. β-ciklodekstrin, 9 mg). Rastvor J1 i ekscipijensa je podeljen u plastične bočice sa podešavajućim umetkom filtera 0,45 μm (0,25 ml u svaku bočicu). Bočice su zamrznute uranjanjem u kupatilo suvog leda / acetona na -78 ° C, a zatim se držane na -20 ° C, tokom noći, u postolju podesnom za bočice. Zamrznute bočice su bile prekrivene aluminijumskom folijom, kako bi se sprečila unakrsna kontaminacija i držane u stalku prethodno ohlađenom na -20 ° C, dok je izlaganje postolja u eksikatoru preko noći na <0,1 mbara, evaporacijom održavalo uzorke zamrznutima do suvih.
(iv) Postupak B, merenje brzine rastvaranja
[0122] Dodaje se 5% rastvor glukoze (0,5 mL) koji sadrži interni standard (3-metoksibenzojevu kiselinu, 0,08 mg / mL). Posle različitih vremenskih perioda (15 s-12 min) sadržaj bočica je filtriran, filtrati su direktno prebačeni u staklene bočice, kako bi se sprečilo curenje nerastvorenog materijala u filtrat i 8 μl filtrata je ubrizgano u LCMS.
Određivanje brzine rastvaranja
[0123] U prvom pristupu, Postupak A, vodeni rastvori J1 sa različitim dodacima su sušeni zamrzavanjem u bocama sa okruglim dnom. Svakom jedinjenju osušenom zamrzavanjem, dodat je rastvor glukoze uz kontrolisano mešanje. Mali alikvoti su izvučeni špricem u određeno vreme i filtrirani kroz 0,45 μm filter GHP šprica. Stepen rastvaranja J1 u filtratu je zatim određen pomoću HPLC-a. Ova metoda je korišćena samo sa liofilizovanim melfalan flufenamidom samostalno i zajedno sa D-manitolom, trehalozom, saharozom, polisorbatom 80 i β-ciklodekstrinom. Rezultati ovih testova su pokazali da se J1 u potpunosti rastvara u roku od 2-4 min, bez obzira na ekscipijens (videti Sliku 1, bez ekscipijenasa i Slika 2 sa ekscipijensima. Videti takođe Tabelu 7). Zapravo, brzina rastvaranja za liofilizovani J1 sa pomoćnim supstancama je zapravo bila brža nego što je moglo biti izmereno korišćenjem ove metode.
2
Tabela 7. Dodavanje ekscipijenasa u J1 (4 mg) kod sušenja zamrzavanjem, Postupak A.
[0124] Da bi se poboljšala preciznost i omogućilo merenje rastvaranja u kraćim intervalima, razvijen je postupak B. U ovom postupku, vodeni rastvori melfalan flufenamida i ekscipijenasa (videti tabelu 2) su dodati u plastične bočice od 2 ml i osušeni zamrzavanjem. Zatim je dodat rastvor glukoze sa unutrašnjim standardom 3-metoksibenzojevom kiselinom bez mešanja. Nakon različitih vremenskih perioda (15 s-6 min) sadržaj bočice je filtriran sa 0,45 μm GHP umetkom bočice, filtrat je prebačen u staklenu bočicu i stepen rastvaranja melfalan flufenamid hidrohlorida (J1) je određen pomoću HPLC-a sa internim standardom. Nedostatak mešanja omogućio je sporiji proces rastvaranja, kako klinički relevantnijeg tako i lakšeg za merenje kinetike.
[0125] Ovim postupkom može biti praćena kinetika rastvaranja liofilizovanog J1, tako da je rastvaranje završeno nakon 3-4 min (videti sliku 3, bez eksipijenasa i Slika 4, sa ekscipijensima, videti takođe Tabelu 8).
2
Tabela 8. Dodavanje ekscipijenasa u J1 (4 mg) kod sušenja zamrzavanjem, Postupak B.
[0126] Brzina rastvaranja J1, sa i bez dodataka, određena postupkom A i postupkom B, su sažete u Tabeli 9.
Tabela 9. Pregled vremena rastvaranja J1 sa i bez dodataka, Postupci A i B.
2
Čistoća i obnavljanje J1
[0127] Uzorak melfalan flufenamid hidrohlorida (J1) je rastvoren u 50% vod. acetonitrila i odmah analiziran pomoću LCMS-a (Tečne hromatografije-masene spektrometrije), pokazujući samo jedan pik (> 99%). Utvrđeno je da čistoća J1, neposredno nakon rastvaranja u 70% etanolu koji sadrži 1 mM HCl ili 5 mM HCl iznosi oko 97%, sa manjim sporednim proizvodom od oko 3%. Količina ovog sporednog proizvoda je povećana ako je rastvor ostavljen na sobnoj temperaturi.
[0128] Rezultati pokazuju da je brzina rastvaranja liofilizovanog J1 u rastvoru glukoze uz mešanje bila brža nego što se mogla izmeriti (Postupak A), nije omogućavala da se vidi efekat dodavanja ekscipijenasa. Korišćenjem klinički relevantnijeg postupka B bez mešanja, rastvaranje liofilizovanog melfalan flufenamida u rastvoru glukoze može biti praćeno do završetka nakon 3-4 minuta. Dodavanje pomoćnih supstanci β-ciklodekstrina*, Polisorbata 80*, manitola* i trehaloze* u rastvor melfalan flufenamida, pre sušenja zamrzavanjem dalo je kompletno rastvaranje ispod 1 minuta. Najbrže rastvaranje je postignuto dodatkom Polisorbata 80*, dajući potpuno rastvaranje u prvoj vremenskom intervalu 15 sekundi.[*= primer izvan patentnih zahteva]
Primer 3: Ispitivanje efekta koncentracije ekscipijensa Polisorbata 80 na brzinu rastvaranja melfalan flufenamida [Primer izvan patentnih zahteva]
[0129] Sledeće je izvršeno da bi se ispitala količina ekscipijensa polisorbata 80, koji će se dodavati u procesu sušenja zamrzavanjem melfalan flufenamida i da se maksimizira brzina rastvaranja u 5% rastvoru glukoze. Korišćen je Polisorbat 80 u odnosu na melfalan flufenamid 0, 10, 50 i 100 težinskih %. Eksperimenti su izvođeni u duplikatu.
[0130] U svim eksperimentima, korišćen je melfalan flufenamid hidrohlorid (J1). Korišćeni polisorbat 80 je kupljen od Fluke, 59924-100 g.
[0131] Sušenje zamrzavanjem je izvršeno na opremi Leybold Lyovac GT2. LCMS je rađena na HP1100 sistemu, korišćenjem acetonitril-0,1% trifluorosirćetne kiseline u vodi kao eluentu. Korišćena je ACE kolona C8, 50 x 3 mm i gradijent 10-97% acetonitrila za 3 min. Filter bočice su bile Whatman-ove, Mini-UniPrep, 0,45 μm.
[0132] Opšta priprema osnovnog rastvora melfalan flufenamida 2 mg / mL pre sušenja zamrzavanjem izvedena je na sledeći način:
11,0 mg melfalan flufenamida je suspendovano u 10 mM rastvora HCl-a u apsolutnom
2
EtOH (0,5 mL). Smeša je mešana 30 minuta, pre dodavanja 0,2 mL vode. Smeša je mešana tokom 10 minuta, na sobnoj temperaturi (bistar rastvor), pre nego što je dodata vodenom rastvoru od 0 ° C (4,8 mL). 0,25 mL rastvora je prebačeno u plastičnu bočicu koja težinski sadrži 10%, 50% ili 100% polisorbata 80. Bočica je trešena, ohlađena i osušena zamrzavanjem.
[0133] Pripremljen je 5% rastvor glukoze sa internim standardom 3-metoksibenzojevom kiselinom, rastvaranjem 3-metoksibenzojeve kiseline (1,2 mg) u vodi (15 mL). Smeša je mešana tokom 1 sata, pre nego što je dodato 750 mg glukoze, tokom mešanja. 0,5 mL 5% rastvora glukoze je dodato u svaku liofilizovanu plastičnu bočicu i smeše su filtrirane, pri različitim vremenskim tačkama, prenete u staklenu bočicu i rastvaranje J1 je određeno pomoću HPLC-a.
Određivanje brzine rastvaranja
[0134] J1 (11 mg) je suspendovan u EtOH (0,5 mL) i mešan tokom 30 minuta, na sobnoj temperaturi, pre dodavanja vode (5 mL). Rastvor je podeljen u 4 različite boce koje sadrže 0%, 10%, 50% ili 100 težinskih % (u odnosu na J1) polisorbata 80. Rastvori su prebačeni u 2 ml plastične bočice i liofilizovani tokom noći.
[0135] U svaku bočicu bez mešanja, dodat je 5% rastvor glukoze sa internim standardom 3-metoksibenzojevom kiselinom i smeše su filtrirane kroz 0,45 μm GHP umetak bočice, pri različitim vremenskim intervalima (2 - 300 sekundi). Filtrat je odmah prebačen u staklenu bočicu kako bi se sprečilo curenje od nerastvorenog materijala. Količina rastvorenog J1 u odnosu na unutrašnji standard je određena pomoću HPLC-a.
Rezultati
[0136] Brzina rastvaranja J1 (1 mg / mL u 5% rastvoru glukoze) sa i bez polisorbata 80, sažeta je u Tabeli 10 i prikazana na Slici 5.
Tabela 10.
[0137] Tabela 10 pokazuje da se svi uzorci koji sadrže liofilizovani J1 i ekscipijens Polisorbat 80 rastvaraju mnogo brže od J1 liofilizovanog u odsustvu ekscipijensa. Posebna pažnja je posvećena uzorku koji sadrži 10% polisorbata 80, a vremenske tačke u ovom eksperimentu su bile:
trenutna filtracija, 2 sekunde, 15 sekundi, 30 sekundi i 5 minuta. U prvoj vremenskoj tački, kada je uzorak odmah filtriran, približno je rastvoreno 40 %, a nakon
2 sekunde rastvoreno je oko 70%. Potpuno rastvaranje je postignuto nakon 30-60 sekundi.
[0138] Brzina rastvaranja liofilizovanog J1, pri 1 mg / mL, koji sadrži različite količine Polisorbata 80 u 5% rastvoru glukoze je bila ispod 1 minuta za sve uzorke. Najmanja količina polisorbata 80 za brzo rastvaranje je bila između 10 i 50% težinski.
Primer 4: Ispitivanje efekta koncentracija ekscipijenasa Polisorbata 80, PEG 400 i βciklodekstrina na brzinu rastvaranja melfalan flufenamida [Primer izvan patentnih zahteva]
[0139] Ovaj primer je izveden kako bi se ispitao uticaj različitih koncentracija ekscipijenasa Polisorbata 80, PEG 400 i β-ciklodekstrina, dodatih u procesu sušenja zamrzavanjem melfalan flufenamida, kako bi se povećala rastvorljivost i brzina rastvaranja u 5% rastvoru glukoze, usmerenom ka dugoročnom cilju razvoja liofilizovanog materijala, stabilnog za skladištenje i lakom pripremom za doziranje.
[0140] U svim eksperimentima korišćen je melfalan flufenamid hidrohlorid (J1).
Korišćeni Polisorbat 80 je kupljen od kompanije Fluka (59924-100 g), β-ciklodekstrin od kompanije Aldrich (856088) i PEG 400 od kompanije Clariant (100316).
[0141] Sušenje zamrzavanjem je izvedeno na opremi Leybold Lyovac GT2. LCMS je rađena na HP1100 sistemu, korišćenjem acetonitril-0,1% trifluorosirćetne kiseline u vodi kao eluentu. Korišćena je ACE kolona C8, 50 x 3 mm i gradijent 10-97% acetonitrila za 3 min. Filter bočice su bile Whatman-ove, Mini-UniPrep, 0,45 μm.
1
Opšta priprema standardnog rastvora melfalan flufenamida od 2 mg/ml za sušenje zamrzavanjem
[0142] 11,1 mg melfalan flufenamida je suspendovano u 10 mM rastvora HCl-a, u apsolutnom EtOH (0,5 mL). Smeša je mešana 30 minuta, pre dodavanja 0,2 mL vode. Smeša je mešana tokom 10 minuta, na sobnoj temperaturi (bistar rastvor), pre nego što je dodata u kapima vodenom rastvoru od 0 ° C (4,8 mL). 0,25 mL ili 0,5 mL rastvora je prebačeno u plastičnu bočicu koja sadrži ekscipijense. Bočica je trešena, ohlađena i osušena zamrzavanjem.
Eksperiment rastvorljivosti
[0143] Rastvor 5% glukoze sa internim standardom je pripremljen rastvaranjem 3-metoksibenzojeve kiseline (1,2 mg) u vodi (15 mL). Smeša je mešana 1 sat, pre nego što je dodato 750 mg glukoze, uz mešanje. 0,2 ml 5% rastvora glukoze je dodato u svaku plastičnu bočicu osušenu zamrzavanjem i smeše su trešene 10-15 sekundi i filtrirane nakon 5 minuta. Filtrat je prebačen u staklenu bočicu i rastvorljivost melfalan flufenamida je određena pomoću HPLC-a i kalibracione krive.
Određivanje rastvorljivosti
[0144] Standardni rastvor melfalan flufenamid hidrohlorida (J1) 2 mg / mL je korišćen kao u prethodnim eksperimentima.
[0145] Za rastvorljivost 2,5 mg / mL J1 u 5% rastvoru glukoze, 0,25 mL osnovnog rastvora je podeljeno u plastične bočice od 2 ml, koje sadrže smešu ekscipijenasa određenih pomoću eksperimentalnog dizajna i smeše su odmah ohlađene i osušene zamrzavanjem.
[0146] Visoki / niski sadržaji svakog od ekscipijenasa (u težinskim-% u odnosu na melfalan flufenamid) su bili sledeći: Polisorbat 80 (8% -80%), PEG 400 (80% -400%) i β-ciklodekstrin (10% -50 %). Najveća količina svakog od ekscipijensa je određena iz baze podataka FDA za sastojke koji nisu aktivni, kod registrovanih lekova za intravensku primenu. β-ciklodekstrin je na listi FDA GRAS (generalno priznat kao siguran), ali ne postoje preporuke za intravenske injekcije prema našem znanju, što je uzrokovalo da bude postavljen prilično konzervativni visoki nivo. Težinski procenat svakog ekscipijensa u odnosu na melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) (težina) je prikazan u tabeli 11.
2
Tabela 11.Težinski procenat svakog ekscipijensa u odnosu na J1.
[0147] Kao što je pokazano u drugim eksperimentima ovde, brzina rastvaranja J1 se značajno povećala dodatkom Polisorbata 80, u procesu sušenja zamrzavanjem. Tri eksperimenta su izvedena kako bi se pokušala postići rastvorljivost od 5 mg / mL. Osnovni rastvor J1 je dodat u 3 različite plastične bočice (eksp. 12, 13 i 14) koje sadrže Polisorbat 80 (težinski 10%, 50% i 100% u odnosu na melfalan flufenamid). Smeše su trenutno ohlađene i osušene zamrzavanjem.
[0148] U svaku bočicu je dodat 5% rastvor glukoze sa internim standardom (3-metoksibenzojeva kiselina) i bočice su trešene i ostavljene da odstoje tokom 5 minuta. Smeše su filtrirane kroz 0,45 μm GHP filter bočicu i filtrat je odmah prebačen u staklenu bočicu, kako bi se sprečilo curenje od nerastvorenog materijala. Količina rastvorenog J1 je određena korišćenjem HPLC-a i kalibracione krive.
Rezultati
[0149] Rastvorljivosti J1 u mg/mL sa visokim/niskim sadržajima ekscipijenasa Polisorbata 80, PEG 400 i β-ciklodekstrina su sažete u tabeli 12.
Tabela 12. Rastvorljivost J1 u mg/mL.
[0150] Rezultati obezbeđeni u Tabeli 12 pokazuju da je rastvorljivost J1 povećana u svim eksperimentima koji sadrže ekscipijense u poređenju sa neliofilizovanim J1 (unos 15 i 16). Veliko odstupanje u rastvorljivosti J1 koji nije liofilizovan je verovatno zbog različite veličine čestica u seriji, jer je unos 15 bio suspenzija finog belog praška, dok je unos 16 bio veći komadi, koji daju nižu brzinu rastvaranja i time nižu rastvorljivost J1 za 5 minuta. Preciznost analize je prikazana u centralnim eksperimentima 9-11 (1,9, 1,8 i 1,7) sa identičnom koncentracijom ekscipijenasa. 3 uzorka sa Polisorbatom 80, kao ekscipijensom (10, 50 i 100%) su pokazala rastvorljivost od 1,0, 1,2 i 1,4 mg/mL, respektivno.
4
[0151] Unosi sa smešom ekscipijenasa Polisorbata 80, PEG 400 i β-ciklodekstrina su pokazali nekoliko kombinacija sa rastvorljivostima na ili blizu 2,0 mg/mL. Najveće određene rastvorljivosti 2,0 (unosi 3, 5 i 7) su postale dostižne samo sa visokim nivoima PEG 400, dajući tečnosti ili polučvrste proizvode, nakon sušenja zamrzavanjem.
[0152] Uzorci sa nižim sadržajem PEG 400 (unosi 2, 4, 6 i 8) formirali su beli, pahuljasti prašak, nakon sušenja zamrzavanjem, sa najvišom određenom rastvorljivošću od 1,9 mg/mL u unosu 8. Ovo je dovelo do ispitivanja da li bi se mogla dobiti veća rastvorljivost snižavanjem količine PEG 400 i povećanjem količine β-ciklodekstrina. Dodatni uzorak (red 17 u tabeli 12) je osušen liofilizacijom, koji sadrži 50% Polisorbata 80, 80% PEG 400 i 100% β-ciklodekstrina. Rastvorljivost J1 sa ovom smešom ekscipijenasa je bila 1,2 mg/mL.
[0153] Rezultati pokazuju da je maksimalna rastvorljivost J1 sa kombinacijama ekscipijenasa blizu 2 mg/mL.
[0154] Eksperimentom 13 pokazano je da rastvor J1 sa 50% Polisorbata daje rastvorljivost od približno 1,2 mg/mL, dovoljno za formulaciju od 1,0 mg/mL i time dozvoljava isključenje PEG 400 i β-ciklodekstrina.
Vizuelne potvrde eksperimenata
[0155] Da bi se potvrdilo rastvaranje u klinički relevantnijem ambijentu, izveden je veći eksperiment u providnim staklenim bočicama, umesto plastičnih bočica. Bočica 1 sadrži rastvor 4,8 mg melfalan flufenamid hidrohlorida (J1) i 2,4 mg polisorbata 80. Kao kontrolna, bočica 2 sadrži 4,8 mg melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), bez polisorbata 80. Bočice su osušene zamrzavanjem tokom noći.
[0156] U svaku bočicu koja je sadržala liofilizovani melfalan J1 kao beli, pahuljasti materijal, dodato je 4,70 ml 5% rastvora glukoze, dajući koncentraciju J1 od 1,02 mg/mL. Smeše su trešene 10-15 sekundi, a ispitivana epruveta koja sadrži J1 i 50% polisorbata 80 je pokazivala bistar rastvor nakon 15 sekundi, videti Sliku 6, leva bočica. Referentna epruveta sa liofilizovanim J1 bez Polisorbata je pokazala male čestice i nije bila potpuno rastvorena nakon 30 minuta, videti sliku 6, desna bočica. LC-MS analiza je otkrila da je čistoća melfalan flufenamida nakon 30 minuta bila> 95%, u obe bočice.
[0157] Ovde navedeni rezultati, pokazuju da se rastvorljivost J1 u 5% rastvoru glukoze može poboljšati korišćenjem smeše ekscipijenasa Polisorbata 80, Peg 400 i β-ciklodekstrina do 1,9 mg/mL. Takva smeša ekscipijenasa sa J1 u liofilizaciji, rezultirala je pahuljastom, belom čvrstom materijom.
[0158] Liofilizacija J1 sa težinski 50% Polisorbata 80, rezultirala je belom, pahuljastom čvrstom materijom koja se brzo rastvara u 5% rastvoru glukoze. Koncentracija zasićenja 1,2 mg/mL je dovoljna za korišćenje u kliničkom ambijentu za pripremu doziranja u količini od 1,0 mg/mL.
Primer 5: Test stabilnosti [Primer izvan patentnih zahteva]
[0159] Svrha prvog dela ove studije je bila ispitivanje brzine rastvaranja melfalan flufenamid hidrohlorida (J1) (osušenog zamrzavanjem zajedno sa Polisorbatom 80) u 5% rastvoru glukoze.
[0160] Brzina rastvaranja J1 (liofilizovanog) u 5% rastvoru glukoze koji sadrži Polisorbat 80 biće izmerena u drugom eksperimentu.
[0161] Konačno biće izmerena brzina rastvaranja J1 koji nije liofilizovan u 5% rastvoru glukoze, koji sadrži Polisorbat 80.
[0162] Drugi deo je ispitivanje degradacije J1 u dva različita preparata, pri povišenoj temperaturi. Prvi preparat je bio liofilizovana čvrsta supstanca koja sadrži Polisorbat 80, a drugi je rastvor J1 25 mg/ml u N, N-dimetilacetamidu (DMA). Degradacija je praćena tokom 1 meseca, na 40 ° C, korišćenjem dva preparata.
(i) Određivanje brzine rastvaranja.
[0163] U svaku plastičnu bočicu koja sadrži J1 dodat je 5% rastvor glukoze. Bočice su bile trešene i filtrirane u različitim vremenskim intervalima. Filtrat je prebačen u staklene bočice i količina rastvorenog J1 je određena pomoću HPLC-a.
(ii) Dizajn ubrzane studije stabilnosti.
[0164] 10 bočica sa liofilizovanim J1 i Polisorbatom 80 i 10 bočica sa J1 rastvorom u DMA, čuvano je na 40 ° C, tokom 1 meseca. Dve bočice sa liofilizovanim materijalom (nazvane liofilizovani 1 i 2 u tabeli ispod) i jedna bočica DMA rastvora (nazvana DMA u tabeli 1 ispod) su izvađene iz komore od 40 ° C i skladištene na -20 ° C i istovremeno analizirane za ispitivanje i čistoću J1. Vremena uzorkovanja su bila 0, 1, 3, 10 i 30 dana. Svaka bočica osušena zamrzavanjem sadrži 0,25 mg J1. Rastvor od 25 mg/ml u DMA je bio iz onkopeptida.
(iii) Analize i rezultati
[0165] Uzorci osušeni zamrzavanjem su rastvoreni u 500 μL DMA u Whatmanovim 0,45 μm filter bočicama. Uzorci su kratko centrifugirani, pre nego što su dva dela bočice pritisnuta zajedno i na taj način filtrirala uzorak. Uzorci rastvora od 25 mg/ml su razblaženi sa DMA alikvotiranjem 20 μl rastvora u HPLC bočice i razblaživanjem sa 980 μl DMA. 4μl je injektirano u hromatografski sistem.
[0166] Stabilnost je ocenjena kao relativna čistoća, pošto je došlo do neznatne varijacije u količini J1, u liofilizovanim bočicama. Korišćenjem relativne čistoće, svaki uzorak je standardizovan nasuprot sebi, a efekat različite količine J1 je minimiziran na rezultat stabilnosti.
[0167] Brzina rastvaranja J1 u 5% glukozi u prisustvu PS-a sažeto je prikazana u tabeli 13:
Tabela 13: Pregled eksperimenata rastvaranja.
Rezultati ispitivanja stabilnosti
[0168]
Tabela 14. Rezultati ispitivanja stabilnosti na 40 ° C, poređenje DMA rastvora i J1 osušenog zamrzavanjem, na 40 ° C / Relativna okolna vlažnost
[0169] Rezultati u tabeli 14 pokazuju da je materijal osušen zamrzavanjem suštinski nepromenjen, tokom perioda testiranja. Može se uočiti samo mala promena u čistoći. Takođe, brzina rastvaranja liofilizovanog J1, pri 1 mg/mL u 5% rastvoru glukoze je bila ispod 1 min u prisustvu Polisorbata 80. Brzina rastvaranja J1 koji nije liofilizovan, pri 1 mg/mL u 5% rastvoru glukoze koji sadrži Polisorbat 80 je procenjena na 1-2 min.
[0170] J1 u DMA rastvoru je značajno degradiran tokom skladištenja na 40 ° C, tokom jednog meseca. Relativna količina je smanjena od 96,8% na 86,9%. J1 skladišten kao čvrsta liofilizovana supstanca je pokazao samo malu degradaciju od 98,7% do 98,3% tokom istog vremenskog perioda.

Claims (12)

PATENTNI ZAHTEVI
1. Liofilizovani farmaceutski preparat koji sadrži
(i) melfalan flufenamid hidrohlorid (J1); i
(ii) saharozu.
2. Liofilizovani farmaceutski preparat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time, što je količina saharoze 10-100 težinskih % navedenog melfalan flufenamid hidrohlorida (J1).
3. Liofilizovani farmaceutski preparat prema patentnom zahtevu 1 ili 2, koji je slobodan, ili suštinski slobodan od organskih rastvarača.
4. Farmaceutski preparat koji sadrži jedan liofilizovani farmaceutski preparat prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 3 i jedan fiziološki prihvatljiv rastvor, pomenuti fiziološki prihvatljiv rastvor je rastvor glukoze.
5. Liofilizovani farmaceutski preparat prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, za upotrebu kao lek.
6. Liofilizovani farmaceutski preparat prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji raka.
7. Liofilizovani farmaceutski preparat za upotrebu prema patentnom zahtevu 6, naznačen time, što je pomenuti karcinom bilo koji od raka jajnika, raka pluća, raka mokraćne bešike, mezotelioma, multiplog mijeloma, raka dojke ili hematološkog raka.
8. Postupak za pripremu liofilizovanog farmaceutskog preparata prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, pri čemu:
a. melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) je rastvoren u jednom organskom rastvaraču da bi se dobio rastvor melfalan flufenamid hidrohlorida (J1);
b. voda se dodaje rastvoru melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), kako bi se dobio vodeni rastvor melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), u koncentraciji od 0,2-3,0 mg/ml;
c. saharoza se dodaje u melfalan flufenamid hidrohloridni (J1) rastvor; i
d. vodeni rastvor melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), koji sadrži saharozu je podvrgnut liofilizaciji.
9. Postupak prema patentnom zahtevu 8, pri čemu:
a. melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) je rastvoren u jednom organskom rastvaraču; b. dodaje se voda rastvoru dobijenom u koraku a) kako bi se dobio rastvor pomenutog melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), u koncentraciji od 0,2-3,0 mg/ml;
c. saharoza se dodaje u rastvor dobijen u koraku b); i
d. rastvor dobijen u koraku c) je podvrgnut liofilizaciji.
10. Postupak prema patentnom zahtevu 8 ili 9, naznačen time, što je organski rastvarač odabran od bilo kojeg od etanola, kiseline koja sadrži etanol, glicerina, propilen glikola, benzil alkohola, dimetilacetamida (DMA), N-metil-2-pirolidona, izopropanola, nbutanola, terc-butanola, metil terc-butil etra, propilen glikola, dimetilsulfoksida, tetrahidrofurana, 2-metil tetrahidrofurana, acetona, dimetilformamida, acetonitrila, dioksana, sirćetne kiseline, mlečne kiseline, propionske kiseline, n-butanola, izopropanola, n-propanola, terc-butanola, sek-butanola, metanola i smeše etanola i vode.
11. Upotreba saharoze, u liofilizovanom preparatu melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), za smanjenje vremena rekonstitucije liofilizovanog preparata melfalan flufenamid hidrohlorida (J1), kada se rekonstituiše u vodenom rastvaraču.
12. Upotreba prema patentnom zahtevu 11, naznačena time, što je pomenuti melfalan flufenamid hidrohlorid (J1) rastvoren u etanolu, pre izlaganja pomenutog melfalan flufenamid hidrohlorida (J1) pomenutoj saharozi.
4
RS20171002A 2011-04-28 2012-04-25 Liofilizovani preparat citotoksičnih dipeptida RS56462B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE1150371 2011-04-28
US201161535126P 2011-09-15 2011-09-15
EP12718949.6A EP2701720B1 (en) 2011-04-28 2012-04-25 Lyophilized preparation of cytotoxic dipeptides
PCT/EP2012/057577 WO2012146625A1 (en) 2011-04-28 2012-04-25 Lyophilized preparation of cytotoxic dipeptides

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS56462B1 true RS56462B1 (sr) 2018-01-31

Family

ID=47071620

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20201030A RS60719B1 (sr) 2011-04-28 2012-04-25 Liofilizovani preparat citotoksičnih dipeptida
RS20171002A RS56462B1 (sr) 2011-04-28 2012-04-25 Liofilizovani preparat citotoksičnih dipeptida
RS20221059A RS63747B1 (sr) 2011-04-28 2012-04-25 Liofilizovani preparat citotoksičnih dipeptida

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20201030A RS60719B1 (sr) 2011-04-28 2012-04-25 Liofilizovani preparat citotoksičnih dipeptida

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20221059A RS63747B1 (sr) 2011-04-28 2012-04-25 Liofilizovani preparat citotoksičnih dipeptida

Country Status (29)

Country Link
US (8) US20140128462A1 (sr)
EP (4) EP3656393B1 (sr)
JP (1) JP6042412B2 (sr)
KR (2) KR102122416B1 (sr)
CN (2) CN103547279A (sr)
AU (1) AU2012247545B2 (sr)
BR (2) BR122019017088B1 (sr)
CA (2) CA2833500C (sr)
CY (2) CY1119453T1 (sr)
DK (3) DK3228319T3 (sr)
ES (2) ES2642676T3 (sr)
FI (1) FIC20230004I1 (sr)
FR (1) FR23C1000I2 (sr)
HR (2) HRP20221355T1 (sr)
HU (3) HUE037863T2 (sr)
IL (3) IL228889A0 (sr)
LT (3) LT2701720T (sr)
LU (1) LUC00291I2 (sr)
MX (1) MX345102B (sr)
NL (1) NL301206I2 (sr)
NO (1) NO2023004I1 (sr)
PL (3) PL2701720T3 (sr)
PT (2) PT2701720T (sr)
RS (3) RS60719B1 (sr)
RU (1) RU2597154C2 (sr)
SI (2) SI3228319T1 (sr)
SM (3) SMT202000447T1 (sr)
WO (1) WO2012146625A1 (sr)
ZA (1) ZA201308765B (sr)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUE037863T2 (hu) 2011-04-28 2018-09-28 Oncopeptides Ab Citotoxikus dipeptidek liofilizált készítménye
JP5827178B2 (ja) * 2012-06-05 2015-12-02 北越紀州製紙株式会社 セルロース多孔質体及びその製造方法
HUE047813T2 (hu) * 2012-10-26 2020-05-28 Oncopeptides Ab Melphalan-flufenamidot tartalmazó liofilizált készítmények
BR112015009280B1 (pt) * 2012-10-26 2022-05-31 Oncopeptides Ab Preparação farmacêutica liofilizada de melfalana flufenamida, composição e kit de combinação de partes
GB201507903D0 (en) 2015-05-08 2015-06-24 Oncopeptides Ab Process for preparation of nitrogen mustard derivatives
GB201521217D0 (en) * 2015-12-01 2016-01-13 Oncopeptides Ab Dosage regimens
US10507165B2 (en) 2017-05-31 2019-12-17 Adienne Pharma & Biotech Sa Multi chamber flexible bag and methods of using same
US10369077B2 (en) * 2017-05-31 2019-08-06 Adienne Pharma & Biotech Sa Multi chamber flexible bag and methods of using the same
MA53904A (fr) * 2018-10-18 2021-08-25 Oncopeptides Ab Composés contenant du deutérium
JP2022527532A (ja) 2019-04-03 2022-06-02 オンコペプティデス エービー メルフルフェンによるａｌアミロイドーシスの治療
GB201905477D0 (en) * 2019-04-17 2019-05-29 Oncopeptides Ab Novel formulations
WO2021053185A1 (en) 2019-09-20 2021-03-25 Oncopeptides Ab Melflufen formulations and their use in the treatment or prophylaxis of osteosarcoma
CA3176803A1 (en) * 2020-05-08 2021-11-11 Cjb Applied Technologies, Llc Pesticidal compositions and related methods
CA3189720A1 (en) * 2020-08-19 2022-02-24 Davide GUGGI Etoposide toniribate formulation
US12077809B2 (en) 2021-04-27 2024-09-03 Enplas Corporation Freeze-dried structure and producing method thereof
EP4366721A1 (en) 2021-07-08 2024-05-15 Oncopeptides Innovation AB Melflufen for use in the treatment of multiple myeloma
GB202109896D0 (en) 2021-07-08 2021-08-25 Oncopeptides Ab Novel treatments
GB202109894D0 (en) 2021-07-08 2021-08-25 Oncopeptides Ab Novel treatments
GB202109895D0 (en) 2021-07-08 2021-08-25 Oncopeptides Ab Novel treatments
KR102757193B1 (ko) * 2021-10-19 2025-01-21 단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단 피리미딘-2,4-다이온 유도체를 유효성분으로 포함하는 근감소증의 예방 또는 치료용 조성물
GB202204171D0 (en) 2022-03-24 2022-05-11 Oncopeptides Ab Novel formulations

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB750155A (en) 1953-03-17 1956-06-13 Nat Res Dev Substituted alanines
GB8727157D0 (en) * 1987-11-19 1987-12-23 Wellcome Found Pharmaceutical formulations
JP3176716B2 (ja) 1991-06-21 2001-06-18 武田薬品工業株式会社 溶解性が向上した難水溶性薬物組成物
US5595756A (en) * 1993-12-22 1997-01-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents
DE60141398D1 (de) * 2000-06-13 2010-04-08 Oncopeptides Ab Melphalan-derivate und ihre verwendung als chemotherapeutika gegen krebs
SE0002202D0 (sv) * 2000-06-13 2000-06-13 Karolinska Innovations Ab New peptides
EP1438019A1 (en) 2001-10-24 2004-07-21 PARI GmbH Spezialisten für effektive Inhalation Kit for the preparation of a pharmaceutical composition
NZ534378A (en) * 2002-02-22 2006-10-27 Schering Corp Pharmaceutical formulations of antineoplastic agents, in particular temozolomide, processes of making and using the same
US6780324B2 (en) * 2002-03-18 2004-08-24 Labopharm, Inc. Preparation of sterile stabilized nanodispersions
US7323479B2 (en) 2002-05-17 2008-01-29 Celgene Corporation Methods for treatment and management of brain cancer using 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-methylisoindoline
US20040034099A1 (en) * 2002-06-27 2004-02-19 Ramsey Beverly J. Pharmaceutical composition
US20050152979A1 (en) * 2003-09-05 2005-07-14 Cell Therapeutics, Inc. Hydrophobic drug compositions containing reconstitution enhancer
DE602005022895D1 (de) 2004-08-12 2010-09-23 Schering Corp Stabile pegylierte interferon-formulierung
DK1658848T3 (da) * 2004-10-29 2007-11-26 Pharma Mar Sa Formuleringer omfattende ecteinascidin og et disaccharid
EP1674098A1 (en) 2004-12-23 2006-06-28 Schering Aktiengesellschaft Stable and tolerable parental formulations of highly reactive organic drug substances with low or no solubility in water
GB0522082D0 (en) * 2005-10-31 2005-12-07 Pharma Mar Sa Formulations
AR061969A1 (es) 2006-07-07 2008-08-10 Gilead Sciences Inc Derivados halogenados de imidazo-piridino, metodo de preparacion, composiciones farmaceuticas que los contienen y usos como agentes anti vhc
PT2101731T (pt) 2006-11-21 2018-04-18 Jina Pharmaceuticals Inc Endoxifeno para utilização no tratamento de cancro
CN101584669B (zh) * 2009-06-19 2010-12-29 江苏奥赛康药业有限公司 美法仑冻干粉针剂
WO2011078782A1 (en) * 2009-12-22 2011-06-30 Oncopeptides Ab A composition comprising of melphalan derivatives and gemcitabine or etoposide useful in the treatment of cancer
AR077384A1 (es) 2010-07-05 2011-08-24 Eriochem Sa Una formulacion farmaceutica inyectable de melfalano.
CA2832410C (en) * 2011-04-15 2019-07-23 Janssen Pharmaceutica Nv Freeze dried drug nanosuspensions
HUE037863T2 (hu) 2011-04-28 2018-09-28 Oncopeptides Ab Citotoxikus dipeptidek liofilizált készítménye
BR112015009280B1 (pt) 2012-10-26 2022-05-31 Oncopeptides Ab Preparação farmacêutica liofilizada de melfalana flufenamida, composição e kit de combinação de partes

Also Published As

Publication number Publication date
CA3024230C (en) 2022-10-18
JP2014512402A (ja) 2014-05-22
US20190240332A1 (en) 2019-08-08
LUC00291I2 (sr) 2025-05-12
NL301206I1 (en) 2022-12-14
HUE060783T2 (hu) 2023-04-28
HRP20171523T1 (hr) 2017-11-17
FR23C1000I2 (fr) 2024-03-15
PT3656393T (pt) 2022-11-03
IL265457B (en) 2021-02-28
IL265457A (en) 2019-05-30
PL2701720T3 (pl) 2017-12-29
SMT202000447T1 (it) 2020-09-10
KR20140041497A (ko) 2014-04-04
SMT201700459T1 (it) 2017-11-15
LT3656393T (lt) 2022-12-12
HUS2300005I1 (hu) 2023-02-28
NZ617197A (en) 2015-06-26
US11896668B2 (en) 2024-02-13
BR112013027584B1 (pt) 2020-11-03
EP3656393A1 (en) 2020-05-27
PT2701720T (pt) 2017-10-20
KR20170140409A (ko) 2017-12-20
US20170049894A1 (en) 2017-02-23
IL272429A (en) 2020-03-31
CY1119453T1 (el) 2018-03-07
WO2012146625A1 (en) 2012-11-01
AU2012247545B2 (en) 2016-08-11
HRP20221355T1 (hr) 2022-12-23
NL301206I2 (nl) 2023-01-24
US10543274B2 (en) 2020-01-28
PL3228319T3 (pl) 2021-02-08
ES2930140T3 (es) 2022-12-07
DK3228319T3 (da) 2020-09-07
DK2701720T3 (en) 2017-10-09
EP2701720A1 (en) 2014-03-05
SI2701720T1 (sl) 2017-11-30
MX2013012545A (es) 2014-04-16
US10322182B2 (en) 2019-06-18
IL272429B (en) 2022-05-01
CA2833500C (en) 2019-01-08
CA2833500A1 (en) 2012-11-01
CA3024230A1 (en) 2012-11-01
RS63747B1 (sr) 2022-12-30
BR112013027584A2 (pt) 2016-09-06
ZA201308765B (en) 2016-02-24
ES2642676T3 (es) 2017-11-17
KR101808895B1 (ko) 2017-12-13
US11344622B2 (en) 2022-05-31
US20140128462A1 (en) 2014-05-08
US20240358838A1 (en) 2024-10-31
BR122019017088B1 (pt) 2021-11-16
SMT202200450T1 (it) 2023-01-13
CN108096563A (zh) 2018-06-01
US20200009252A1 (en) 2020-01-09
PL3656393T3 (pl) 2023-01-16
EP2701720B1 (en) 2017-07-12
IL228889A0 (en) 2013-12-31
EP3656393B1 (en) 2022-08-24
EP4122482A1 (en) 2023-01-25
EP3228319B1 (en) 2020-06-03
RU2013152751A (ru) 2015-06-10
MX345102B (es) 2017-01-16
FIC20230004I1 (fi) 2023-01-19
US20220323585A1 (en) 2022-10-13
AU2012247545A1 (en) 2013-10-31
LT2701720T (lt) 2017-11-10
NO2023004I1 (no) 2023-01-16
JP6042412B2 (ja) 2016-12-14
CY1123242T1 (el) 2021-10-29
US10869928B2 (en) 2020-12-22
CN103547279A (zh) 2014-01-29
LTC2701720I2 (sr) 2024-09-25
US20200345848A1 (en) 2020-11-05
RS60719B1 (sr) 2020-09-30
KR102122416B1 (ko) 2020-06-12
SI3228319T1 (sl) 2020-10-30
EP3228319A1 (en) 2017-10-11
HUE037863T2 (hu) 2018-09-28
RU2597154C2 (ru) 2016-09-10
FR23C1000I1 (fr) 2023-03-10
DK3656393T3 (da) 2022-11-14
US20200121794A1 (en) 2020-04-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11896668B2 (en) Lyophilized preparation of cytotoxic dipeptides
RS60068B1 (sr) Liofilisani preparati melfalan flufenamida
ES2813979T3 (es) Preparación liofilizada de dipéptidos citotóxicos
HK40081253A (en) Lyophilized preparation of cytotoxic dipeptides
HK40018864B (en) Lyophilized preparation of cytotoxic dipeptides
HK40018864A (en) Lyophilized preparation of cytotoxic dipeptides
HK1245124B (en) Lyophilized preparation of cytotoxic dipeptides
HK1245124A1 (en) Lyophilized preparation of cytotoxic dipeptides
NZ617197B2 (en) Lyophilized preparation of cytotoxic dipeptides