RU2711152C1 - Method for unstructured freezing peripheral blood precursor cells at minus 80 °c with a hemicolite solution - Google Patents
Method for unstructured freezing peripheral blood precursor cells at minus 80 °c with a hemicolite solution Download PDFInfo
- Publication number
- RU2711152C1 RU2711152C1 RU2019101365A RU2019101365A RU2711152C1 RU 2711152 C1 RU2711152 C1 RU 2711152C1 RU 2019101365 A RU2019101365 A RU 2019101365A RU 2019101365 A RU2019101365 A RU 2019101365A RU 2711152 C1 RU2711152 C1 RU 2711152C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- freezing
- stage
- temperature
- minus
- cells
- Prior art date
Links
- 238000007710 freezing Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 230000008014 freezing Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 6
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 claims description 16
- 230000007774 longterm Effects 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 18
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 abstract description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 5
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 abstract description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 abstract description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 abstract description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- FWQTWRXMADAWFI-UHFFFAOYSA-N 5-[3-hydroxy-2-methyl-5-(phosphonooxymethyl)pyridin-4-yl]pyrrolidine-2,4,4-tricarboxylic acid Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C2C(CC(N2)C(O)=O)(C(O)=O)C(O)=O)=C1O FWQTWRXMADAWFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000006262 metallic foam Substances 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003507 refrigerant Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dentistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к технологии замораживания клеток-предшественников периферической крови (КППК) с гемопоэтическими стволовыми клетками (ГСК) до температуры минус 80°С без контроля скорости охлаждения с криоконсервантом Гекмолит. Гекмолит содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину (ГМБТОЭМ) и динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) при следующих соотношениях компонентов, мас.%: ГМБТОЭМ 30,0-50; ЭДТА 0,08-0,18, Бидистиллированная вода - Остальное. Коррегируют рН раствора до 7,0-7,2 с помощью 2 н. раствора х.ч. соляной кислоты (см. патент РФ №1772911 от 17.06.1993. Опубл. 10.04.1995).The invention relates to medicine, namely to the technology of freezing peripheral blood precursor cells (CPPK) with hematopoietic stem cells (HSC) to a temperature of minus 80 ° C without controlling the cooling rate with the cryopreservative Hekmolit. Hekmolit contains hexamethylenebistetraoxyethylurea (GMBTOEM) and disodium salt of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) in the following ratios of components, wt.%: GMBTOEM 30.0-50; EDTA 0.08-0.18, bidistilled water - The rest. The pH of the solution is adjusted to 7.0-7.2 with 2 N. h.ch. hydrochloric acid (see RF patent No. 1772911 from 06/17/1993. Publish. 04/10/1995).
Способ замораживания КППК с криоконсервантом Гекмолит включает смешивание раствора Гекмолит с нативной стабилизированной миеловзвесью (НСМ) в соотношении 1:1 в пластиковом криопакете, его герметизацию, маркировку, эквилибрацию взвеси ядросодержащих клеток (ЯК) с криоконсервантом при температуре плюс 4°С в течение 20÷30 мин, укладку в металлический пенал-холдер, поэтапное замораживание в электрических рефрижераторах с регулируемой установкой температуры изотермической холодовой адаптации клеток (ТА) по ступенчатой программе, причем на первом этапе криопакет с миеловзвесью помещают на 10 мин в электрический холодильник с температурой плюс 4°С, на втором этапе переносят в электроморозильник с ТА минус 28±2°С, выдерживают их в этих условиях в течение 10÷25 мин, после чего переносят в морозильник-хранилище с температурой минус 80±2°С для полного замораживания клеточной взвеси и длительной криоконсервации, после чего проводят отогревание криопакета в водной среде до температуры клеточной взвеси плюс 2÷4°С. Присутствие в растворе криоконсерванта Гекмолит базового криопротектора ГМБТОЭМ со среднелетальной дозой - ЛД50, равной 15,5±0,6 г/кг массы мыши, минимизирует токсичность рабочего раствора криоконсерванта на клеточном и организменном уровнях, не требует отмывания перед трансплантацией криоконсервированных КППК, способствует сохранности ЯК.The method of freezing KPPK with the Gekmolit cryopreservative involves mixing the Gekmolit solution with native stabilized myelogen suspension (NMS) in a 1: 1 ratio in a plastic cryopackage, sealing, labeling, and balancing the suspension of nucleated cells (UC) with a cryopreservative at a temperature of + 4 ° C 30 min, stacking metal foam Holder, gradual freezing in electric refrigerators with adjustable temperature setting isothermal cold adaptation cells (T a) of the program step, in which ervom step kriopaket with mielovzvesyu placed for 10 minutes in an electric refrigerator at + 4 ° C, the second stage is transferred to elektromorozilnik T A -28 ± 2 ° C, held them in these conditions for 10 ÷ 25 minutes, then transferred in the storage freezer with a temperature of minus 80 ± 2 ° С for complete freezing of the cell suspension and long-term cryopreservation, after which the cryopackage is heated in the aqueous medium to the cell suspension temperature plus 2 ÷ 4 ° С. The presence of the basic cryoprotectant GMBTOEM in the Gekmolit cryopreservative solution with an average lethal dose of LD 50 equal to 15.5 ± 0.6 g / kg of mouse weight minimizes the toxicity of the cryopreservative working solution at the cellular and organism levels, does not require washing before transplantation of the cryopreserved CPPP, and promotes safety Yak.
Способ замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80°С с раствором Гекмолит относится к медицине, в частности к трансфузиологии.The method of freezing peripheral blood precursor cells at a temperature of minus 80 ° C with Hekmolit solution relates to medicine, in particular to transfusion.
Важными составляющими в повышении эффективности клеточных технологий на основе применения криоконсервиованных КППК с ГСК для клинических целей являются обеспечение морфофункциональной сохранности большого процента ГСК, доступности лечебным учреждениям, простота выполнения, безопасность и экономичность.Important components in increasing the efficiency of cell technologies based on the use of cryopreserved KPPK with HSCs for clinical purposes are ensuring the morphofunctional preservation of a large percentage of HSCs, accessibility to medical institutions, ease of implementation, safety and cost-effectiveness.
В технологии замораживания КППК известны способы их длительной консервации, которые включают добавление криоконсерванта на основе ГМБТОЭМ в НСМ, поэтапное замораживание смеси в жидкоазотном программном замораживателе, длительное хранение при температуре минус 80÷ минус 196°С и последующее отогревание. Подбор значений температур и скоростей охлаждения произведены эмпирически лабораторным способом (Гордиенко Е.А., Пушкарь Н.С. Физические основы низкотемпературного консервирования клеточных суспензий. - Киев, Наук. Думка, - 1994. - С. 68-69; Сведенцов Е.П. Криоконсерванты для живых клеток. - Сыктывкар, 2010. - С. 44-45 (Коми научный центр УрО РАН).In the KPPK freezing technology, methods for their long-term preservation are known, which include the addition of a cryopreservative based on GMBTOEM in the NSM, stage-by-stage freezing of the mixture in a liquid nitrogen program freezer, long-term storage at a temperature of minus 80 ÷ minus 196 ° С and subsequent heating. The temperature and cooling rates were selected empirically by the laboratory method (Gordienko E.A., Pushkar N.S. Physical principles of low-temperature preservation of cell suspensions. - Kiev, Science. Dumka, - 1994. - P. 68-69; Swedentsov E.P. Cryopreservatives for living cells. - Syktyvkar, 2010. - P. 44-45 (Komi Scientific Center, Ural Branch of RAS).
Недостатками такого решения способа замораживания КППК являются: высокая затратность, потребность в дефицитном жидком азоте, сложности при работе с криогенной техникой и риск посттрансфузионных осложнений.The disadvantages of this solution of the KPPK freezing method are: high cost, the need for deficient liquid nitrogen, difficulties in working with cryogenic equipment, and the risk of post-transfusion complications.
В качестве прототипа нами использован способ замораживания ЯК костного мозга с криоконсервантом на основе ГМБТОЭМ, включающего смешивание ГМБТОЭМ с НСМ в равных пропорциях, замораживание в жидком азоте в аппарате УОП 000 000 по двух- и трехэтапной программам. В образцах ЯК, замороженных с раствором Гекмолит по описанному методу, после отогревания сохраняется в среднем 86,4±1,5% миелокариоцитов, 70,7±3,7% мононуклеаров, 73,2±3,1% эозинорезистентных и 83,3±2,7% стволовых кроветворных клеток (Сведенцов Е.П. Криоконсерванты для живых клеток. - Сыктывкар, 2010. - С. 44-45 (Коми научный центр УрО РАН), патент 2049391 «Средство для криоконсервирования костного мозга».As a prototype, we used a method for freezing bone marrow UC with a cryopreservative based on GMBTOEM, including mixing GMBTOEM with NSM in equal proportions, freezing in liquid nitrogen in a UOP 000 000 apparatus according to two- and three-stage programs. In UC samples frozen with Hekmolit solution according to the described method, after heating, an average of 86.4 ± 1.5% of myelokaryocytes, 70.7 ± 3.7% of mononuclear cells, 73.2 ± 3.1% of eosin-resistant and 83.3 ± 2.7% of hematopoietic stem cells (Swedentsov EP Cryopreservatives for living cells. - Syktyvkar, 2010. - P. 44-45 (Komi Scientific Center, Ural Branch of the Russian Academy of Sciences), patent 2049391 "Means for bone marrow cryopreservation."
Недостатками прототипа являются высокая затратность, потребность в запасах дефицитного жидкого азота, опасность инфекционных, простудных заболеваний и ожоговых травм, потребность в высококвалифицированном обслуживающем персонале и негативный человеческий фактор.The disadvantages of the prototype are the high cost, the need for stocks of scarce liquid nitrogen, the danger of infectious, colds and burn injuries, the need for highly qualified staff and a negative human factor.
Поэтому поставленной задачей было устранение указанных недостатков, а также разработать доступный для широкой сети лечебных учреждений безазотный способ эффективного замораживания КППК.Therefore, the task was to eliminate these shortcomings, as well as to develop a nitrogen-free method for effective freezing of CPPP available to a wide network of medical institutions.
Цель изобретения - повысить сохраннность ЯК и экономичность их криоконсервирования.The purpose of the invention is to increase the safety of UC and the cost-effectiveness of their cryopreservation.
Поставленная цель достигается тем, что в вышеописанном способе при замораживании КППК в качестве хладоагента используют холод рефрижераторов.This goal is achieved by the fact that in the above method, when refrigerating the KPPK, refrigerators are used as a refrigerant.
Сущность изобретения заключается в совокупности существенных признаков, достаточной для достижения обеспечиваемого изобретением технического результата.The invention consists in the combination of essential features sufficient to achieve the technical result provided by the invention.
Существенными признаками предложенного способа, совпадающими с известными признаками, являются: А - заготовка концентрата НСМ с ГСК; Б - смешивание криоконсерванта Гекмолит с НСМ в равных пропорциях; В - эквилибрацию НСМ с криоконсервантом Гекмолит при температуре плюс 4°С в течение 20-30 мин, герметизацию, маркировку и укладку пластикового криопакета с ЯК в металлический пенал-холдер; Г - замораживание клеточной взвеси от температуры плюс 4°С до минус 80±2°С в режиме многоступенчатой программы; Д - размораживание биообъекта в водной среде с температурой плюс 39°С до температуры плюс 2÷4°С в клеточной взвеси.The essential features of the proposed method, which coincide with the known features, are: A - procurement of concentrate NSM with HSC; B - mixing cryopreservative Gekmolit with LFM in equal proportions; B - balancing the NSM with the Gekmolit cryopreservative at a temperature of + 4 ° C for 20-30 minutes, sealing, marking and laying the plastic cryopackage with the UC in a metal case holder; G - freezing of cell suspension from a temperature of plus 4 ° C to minus 80 ± 2 ° C in a multi-stage program; D - thawing of a biological object in an aqueous medium with a temperature of plus 39 ° C to a temperature of plus 2 ÷ 4 ° C in a cell suspension.
Существенными отличительными признаками заявляемого способа замораживания КППК с криоконсервантом Гекмолит являются: Е - в известном способе взвесь ЯК в растворе Гекмолит замораживали по 3-х ступенчатой программе с помощью жидкоазотного программного замораживателя клеточных суспензий УОП 000 000, требующего постоянного обеспечения жидким азотом, высококвалифицированного технического обслуживания, несущего риск человеческого фактора и микробной контаминации биообъекта при контакте с инфицированным жидким азотом; И - в предлагаемом изобретении замораживание клеточной взвеси осуществляют от плюс 4°С до минус 80°С в экономичных, простых в обслуживании и доступных широкой сети лечебных учреждений электрических рефрижераторах, например, марки Sanyo, с заранее установленной ТА.Salient features of the proposed method for freezing KPPK with the Hekmolit cryopreservative are: E - in the known method, UC suspension in Hekmolit solution was frozen according to a 3-step program using a liquid nitrogen program freezer of cell suspensions UOP 000 000, requiring constant maintenance with liquid nitrogen, high quality risky of the human factor and microbial contamination of the biological object in contact with infected liquid nitrogen; And - in the present invention, freezing of cell suspension is performed from + 4 ° C to minus 80 ° C in economical, easy to maintain and accessible to the network hospitals electric refrigerators, for example, brand Sanyo, a predetermined TA.
Предлагаемый способ обеспечивает прогнозируемые показатели сохранности ЯК после замораживания-отогревания. В том числе: количество морфологически сохранных клеток в пределах 90,71±6,79%, количество эозинорезистентных клеток - 85,7±1,47%, количество мононуклеаров -75,57±16,0%, количество CD34+ клеток - 77,63±16,70%.The proposed method provides predicted safety indicators for UC after freezing-warming. Including: the number of morphologically preserved cells within 90.71 ± 6.79%, the number of eosin-resistant cells - 85.7 ± 1.47%, the number of mononuclear cells -75.57 ± 16.0%, the number of CD34 + cells - 77, 63 ± 16.70%.
Заявляемый способ осуществляют следующим образом.The inventive method is as follows.
Пример выполненияExecution example
Криоконсервант Гекмолит готовят заблаговременно согласно рецепта по патенту РФ №1772911 от 17.06.1993. Опубл. 10.04.1995. Фасуют в полимерные криопакеты и длительно охлаждают в электрическом холодильнике при температуре плюс 4°С.The cryopreservative Gekmolit is prepared in advance according to the recipe according to the patent of the Russian Federation No. 1772911 from 06/17/1993. Publ. 04/10/1995. Packed in polymer cryopackages and cooled for a long time in an electric refrigerator at a temperature of + 4 ° C.
Производят смешивание раствора Гекмолит с нативной стабилизированной миеловзвесью и концентратом ядросодержащих клеток (ЯК) в соотношении 1:1 в пластиковом криопакете, его герметизацию, маркировку, эквилибрацию взвеси ядросодержащих клеток (ЯК) с криоконсервантом при температуре плюс 4°С в течение 20÷30 мин, укладку в металлический пенал-холдер, поэтапное замораживание в электрических рефрижераторах с регулируемой установкой температуры изотермической холодовой адаптации клеток (ТА) по ступенчатой программе, на первом этапе биообъект помещают на 10 мин в электрический холодильник марки Sanyo MDF-U5411 с температурой плюс 4±1°С, на втором этапе биообъект переносят в электроморозильник марки Sanyo MDF-U333 с ТА минус 22±1°С и выдерживают в этих условиях 10 мин, на третьем этапе контейнер с ЯК переносят в электроморозильник марки Sanyo MDF-U5411 с установленной температурой минус 28±1°С, выдерживают в этих условиях в течение 25 мин, после чего на четвертом этапе биообъект быстро переносят в морозильник-хранилище марки Sanyo MDF-U53 с заданной температурой минус 80±2°С для окончательного замораживания и длительной (до 7 мес) криоконсервации ядерных клеток. Замороженные КППК с ГСК отогревают интенсивным покачиванием криопакета в водной среде при температуре плюс 39°С до достижения температуры в клеточной взвеси плюс 2 ÷ плюс 4°С. Берут пробу размороженного клеточного материала одноразовым шприцем для контрольных морфологических и функциональных тестов.The Hekmolit solution is mixed with native stabilized myelogen suspension and nucleated cell (UC) concentrate in a 1: 1 ratio in a plastic cryopack, its sealing, labeling, and balancing of suspension of nucleated cells (UC) with a cryopreservative at a temperature of + 4 ° С for 20 ÷ 30 min , a metal foam laying Holder, gradual freezing in electric refrigerators with adjustable temperature setting isothermal cold adaptation cells (T a) of the program step, in a first step bioobject omeschayut for 10 minutes in an electric refrigerator brand Sanyo MDF-U5411 with temperature plus 4 ± 1 ° C, the second stage bioobject transferred to elektromorozilnik brand Sanyo MDF-U333 T A minus 22 ± 1 ° C and maintained under these conditions for 10 minutes, at the third stage, the container with the UC is transferred to an Sanyo MDF-U5411 brand electric freezer with a set temperature of minus 28 ± 1 ° С, kept under these conditions for 25 minutes, after which at the fourth stage the biological object is quickly transferred to the Sanyo MDF-U53 brand freezer-storage with the set temperature minus 80 ± 2 ° С for final freezing and d itelnoy (7 months) cryopreservation of nucleated cells. Frozen KPPK with HSCs are heated by intensive swaying of a cryopackage in an aqueous medium at a temperature of plus 39 ° C until a temperature in the cell suspension plus 2 ÷ plus 4 ° C is reached. A sample of thawed cell material is taken with a disposable syringe for control morphological and functional tests.
Сравнительный анализ результатов криоконсервирования КППК, замороженных известным и заявляемым способами предоставлен в табл. 1.A comparative analysis of the results of cryopreservation of KPPK frozen by known and claimed methods is provided in table. 1.
Результаты исследований, представленные в табл. 1, показывают, с одной стороны, высокий уровень контрольных морфологических и функциональных тестов известного и заявляемого способов замораживания КППК с раствором Гекмолит, с другой стороны, отмечают повышенный класс опасности для жизни человека, осуществляющего замораживание КППК известным способом.The research results presented in table. 1, show, on the one hand, a high level of control morphological and functional tests of the known and claimed methods for freezing KPPK with Gekmolit solution, on the other hand, they note an increased hazard class for the life of a person who carries out KPPK freezing in a known manner.
При использовании фондов научно-технической литературы эквивалентных решений не обнаружено, что подтверждает новизну предлагаемого способа замораживания КППК.When using funds of scientific and technical literature, equivalent solutions were not found, which confirms the novelty of the proposed method of freezing KPPK.
Использование простых приемов и доступного оборудования подтверждает промышленную применимость.The use of simple techniques and available equipment confirms industrial applicability.
Неочевидность и оригинальный подход к решению проблемы подтверждает изобретательский уровень.The non-obviousness and original approach to solving the problem confirms the inventive step.
Исследования выполнены на базе лаборатории клеточных технологий ФГБУН «Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России».The studies were performed on the basis of the laboratory of cellular technologies of the Federal State Budget Scientific Institution Kirov Research Institute of Hematology and Blood Transfusion FMBA of Russia.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019101365A RU2711152C1 (en) | 2019-01-17 | 2019-01-17 | Method for unstructured freezing peripheral blood precursor cells at minus 80 °c with a hemicolite solution |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019101365A RU2711152C1 (en) | 2019-01-17 | 2019-01-17 | Method for unstructured freezing peripheral blood precursor cells at minus 80 °c with a hemicolite solution |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2711152C1 true RU2711152C1 (en) | 2020-01-15 |
Family
ID=69171523
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019101365A RU2711152C1 (en) | 2019-01-17 | 2019-01-17 | Method for unstructured freezing peripheral blood precursor cells at minus 80 °c with a hemicolite solution |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2711152C1 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU1772911C (en) * | 1990-05-29 | 1995-04-10 | Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Solution for preservation of bone marrow of mammals at low temperatures |
| RU2049391C1 (en) * | 1981-01-20 | 1995-12-10 | Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Agent for bone marrow cryopreserving |
| RU2144290C1 (en) * | 1998-08-26 | 2000-01-20 | Кировский НИИ гематологии и переливания крови | Method of bone marrow preservation |
| RU2624214C1 (en) * | 2016-04-28 | 2017-07-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Method for cryopreservation of haemopoietic stem cells |
-
2019
- 2019-01-17 RU RU2019101365A patent/RU2711152C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2049391C1 (en) * | 1981-01-20 | 1995-12-10 | Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Agent for bone marrow cryopreserving |
| RU1772911C (en) * | 1990-05-29 | 1995-04-10 | Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Solution for preservation of bone marrow of mammals at low temperatures |
| RU2144290C1 (en) * | 1998-08-26 | 2000-01-20 | Кировский НИИ гематологии и переливания крови | Method of bone marrow preservation |
| RU2624214C1 (en) * | 2016-04-28 | 2017-07-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Method for cryopreservation of haemopoietic stem cells |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2588438T3 (en) | Materials and methods for hypothermic whole blood collection | |
| RU2416197C1 (en) | Method of cryopreservation of hematopoietic stem cells of umbilical blood | |
| CN104145943A (en) | Cryopreservation protection liquid for Wharton jelly tissues of human umbilical cord and preparation and application of cryopreservation protection liquid | |
| RU2624214C1 (en) | Method for cryopreservation of haemopoietic stem cells | |
| Criado et al. | Experimental contamination assessment of a novel closed ultravitrification device | |
| RU2711152C1 (en) | Method for unstructured freezing peripheral blood precursor cells at minus 80 °c with a hemicolite solution | |
| RU2639892C1 (en) | Method for human nucleated blood cells cryopreservation at temperature of minus 80°c | |
| Choudhery et al. | Stem cell banking of adipose tissue | |
| RU2195111C1 (en) | Method for cryogenic preservation of cellular suspensions | |
| RU2184449C1 (en) | Cryoprotective solution to freeze leucocytes at moderate-low temperature | |
| RU2233589C2 (en) | Method for cryopreserving human hemopoietic cells | |
| RU2716574C1 (en) | Method for adrift freezing of peripheral blood precursor cells at a temperature of minus 80 °c with a solution of hemodiolite | |
| RU2326532C1 (en) | Method of thrombocyte cryopreservation | |
| RU2707921C1 (en) | Method for unrestricted freezing peripheral blood precursor cells at minus 80 °c under protection of dimethylsulphoxid | |
| RU2569834C1 (en) | Method for cryopreservation of haemopoietic stem cells | |
| Aarattuthodi et al. | Cryopreservation of biological materials: applications and economic perspectives | |
| RU2720771C1 (en) | Method for unregulated freezing of peripheral blood precursor cells at temperature of minus 80 °c with gemgel solution | |
| Rowe | Cryopreservation of red cells by freezing and vitrification–some recollections and predictions | |
| Antoniewicz-Papis et al. | Microbial contamination risk in hematopoietic stem cell products: retrospective analysis of 1996–2016 data | |
| Sergushkina et al. | The use of pectins as part of a cryoprotective solution for long-term storage of human platelet concentrates | |
| RU2230454C2 (en) | Cold-safety solution for freezing platelets at moderately low temperature | |
| Zhdanov et al. | Storage and thawing requirements for blood products in russian federation and CIS countries | |
| RU2514349C1 (en) | Method for donor blood sampling | |
| RU2263448C1 (en) | Method of cryopreservation of umbilical blood | |
| Pavel et al. | A freezing protocol for hematopoietic stem cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210118 |