RU2195111C1 - Method for cryogenic preservation of cellular suspensions - Google Patents
Method for cryogenic preservation of cellular suspensions Download PDFInfo
- Publication number
- RU2195111C1 RU2195111C1 RU2001113532A RU2001113532A RU2195111C1 RU 2195111 C1 RU2195111 C1 RU 2195111C1 RU 2001113532 A RU2001113532 A RU 2001113532A RU 2001113532 A RU2001113532 A RU 2001113532A RU 2195111 C1 RU2195111 C1 RU 2195111C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- freezing
- temperature
- ethyl alcohol
- solution
- package
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000000725 suspension Substances 0.000 title abstract description 18
- 238000004321 preservation Methods 0.000 title abstract description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 title abstract 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 59
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims abstract description 26
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 16
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000003507 refrigerant Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 23
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 13
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 11
- 239000008150 cryoprotective solution Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 13
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 abstract description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 6
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000002631 hypothermal effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001757 thermogravimetry curve Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к способам консервирования замораживанием клеток костного мозга и компонентов крови человека, и может найти применение в гематологических, онкологических, хирургических и других центрах для лечения больных с депрессией кроветворения и инфекционными осложнениями. The invention relates to medicine, namely to methods for preserving by freezing bone marrow cells and human blood components, and can be used in hematological, oncological, surgical and other centers for the treatment of patients with hematopoiesis depression and infectious complications.
Известен способ консервирования клеток костного мозга в эластичных упаковках, заполненных на 10-30%, в охлажденном жидком хладагенте путем поэтапного замораживания в растворе этилового спирта 96 об.% с выдерживанием при температуре холодовой адаптации и последующего охлаждения до -40÷-50oС в морозильнике (Авт. св. 2144290, А 01 N 1/02). Этот способ взят в качестве прототипа. В нем использован экспоненциальный линейно-ступенчатый режим замораживания, повышающий сохранность и устойчивость любых открытых биологических систем (ОБС), в том числе, суспензии донорских клеток костного мозга, лейкоцитов и тромбоцитов к факторам криоповреждения.A known method of preserving bone marrow cells in elastic packages filled with 10-30% in a chilled liquid refrigerant by stage-by-stage freezing in a solution of ethanol of 96 vol.% With maintaining at a temperature of cold adaptation and subsequent cooling to -40 ÷ -50 o C in freezer (Aut. St. 2144290, A 01 N 1/02). This method is taken as a prototype. It used an exponential linear-step freezing mode, which increases the safety and stability of any open biological systems (OBS), including a suspension of donor bone marrow cells, white blood cells and platelets to cryo-damage factors.
Однако использование в технических целях раствора этилового спирта 96 об. % высокой очистки в качестве жидкого хладагента-выбора затратно и нежелательно, поскольку оказывает высокое токсическое воздействие на организм, а также является профессиональной и бытовой вредностью. However, the use for technical purposes of a solution of ethyl alcohol 96 vol. % of high purification as a liquid refrigerant of choice is expensive and undesirable, since it has a high toxic effect on the body, and is also a professional and household hazard.
Кроме того, не выдерживается соотношение объема замораживаемых контейнеров с биосредой и объема жидкого хладагента в морозильной камере. Поэтому не представляется возможным стандартизировать условия консервирования клеточных суспензий замораживанием и тем самым повысить сохранность биологических объектов. In addition, the ratio of the volume of frozen containers with a biological medium and the volume of liquid refrigerant in the freezer is not maintained. Therefore, it does not seem possible to standardize the conditions for preserving cell suspensions by freezing and thereby increase the safety of biological objects.
Задача изобретения: заменить раствор этилового спирта 96 об.% на дешевый и менее токсичный хладагент. Object of the invention: to replace a solution of ethyl alcohol 96 vol.% On a cheap and less toxic refrigerant.
Другая задача изобретения состоит в необходимости стандартизировать условия криоконсервирования клеточных суспензий. Another objective of the invention is the need to standardize the conditions for cryopreservation of cell suspensions.
Цель изобретения - повысить сохранность клеток и экономичность их криоконсервирования. The purpose of the invention is to increase the safety of cells and the efficiency of their cryopreservation.
Поставленная цель достигается тем, что в вышеописанном способе при замораживании упаковок, заполненных на 10-20%, и температуре холодовой адаптации -22÷-25oС используют в качестве жидкого хладагента раствор этилового спирта 38-40 об.%, а при замораживании упаковок, заполненных на 25-33,3%, и температуре холодовой адаптации -26÷-30oС в качестве жидкого хладагента используют раствор этилового спирта 42-45 об.%, при этом объем упаковки составляет 10% объема хладагента в морозильной камере.This goal is achieved in that in the above method, when freezing packages filled by 10-20% and a cold adaptation temperature of -22 ÷ -25 ° C, ethanol solution 38-40 vol.% Is used as a liquid refrigerant, and when freezing packages filled with 25-33.3% and a cold adaptation temperature of -26 ÷ -30 o C, a solution of ethyl alcohol 42-45 vol.% is used as the liquid refrigerant, while the packaging volume is 10% of the volume of refrigerant in the freezer.
Сущность предлагаемого способа заключается в следующем. The essence of the proposed method is as follows.
Суспензию клеток в растворе криопротектора при 18-20oС расфасовывают в упаковку из 1-4 эластичных полимерных контейнеров вместимостью 300 или 500 мл до заполнения на 10-33,3% и контейнера-спутника, после чего упаковку помещают в морозильную камеру с предварительно охлажденным хладагентом - раствором этилового спирта. В зависимости от количества суспензии в контейнере и биологических особенностей на первом этапе упаковку, заполненную на 10-20%, помещают в раствор этилового спирта 38-40 об.%, охлажденный до -22÷-25oС, и выдерживают в нем 23-25 мин, упаковку, заполненную на 25-33,3%, помещают в раствор этилового спирта 42-45 об.%, охлажденный до -26÷-30oС, и выдерживают в нем 25-30 мин. При этом объем упаковки составляет 10% объема хладагента в морозильной камере. После завершения холодовой адаптации клеток на втором этапе упаковку помещают в морозильник и замораживают до -40÷-80oС.The cell suspension in a solution of cryoprotectant at 18-20 o With packaged in a package of 1-4 elastic polymer containers with a capacity of 300 or 500 ml to fill at 10-33.3% and a satellite container, after which the package is placed in a freezer with pre-cooled the refrigerant is a solution of ethyl alcohol. Depending on the amount of suspension in the container and biological features, at the first stage, the packaging, filled by 10-20%, is placed in a solution of ethyl alcohol 38-40 vol.%, Cooled to -22 ÷ -25 o C, and kept in it 23- 25 minutes, a package filled with 25-33.3% is placed in a solution of ethyl alcohol 42-45 vol.%, Cooled to -26 ÷ -30 o C, and incubated in it for 25-30 minutes. Moreover, the packaging volume is 10% of the volume of refrigerant in the freezer. After completion of the cold adaptation of cells in the second stage, the packaging is placed in the freezer and frozen to -40 ÷ -80 o C.
Как показывают исследования термограмм, в течение 2-4-й мин первого этапа происходит охлаждение клеток до -2÷-9oС, которые реагируют выбросом тепла на 4-5-й мин. В последующее время идет процесс кристаллизации и переохлаждения клеток консервируемой открытой биологической системы. Охлажденные через 22-24 мин до -22÷-25oС или через 25-30 мин до -26÷-30oС, клетки переходят в фазу холодовой термодинамической стабилизации, после чего (во время второго этапа) происходит окончательное замораживание клеток до - 40÷-80oС, Продолжительность второго этапа составляет 30-60 мин. Замороженные клеточные суспензии пригодны к использованию до 2,5 лет (срок наблюдения). Предлагаемый способ обеспечивает прогнозируемые показатели сохранности жизнеспособности клеток после замораживания-оттаивания на 80-93% и экономию до 2450 мл этилового спирта 96 об.% высокой очистки на каждой операции криоконсервирования клеточных суспензий.As studies of thermograms show, within 2-4 minutes of the first stage, the cells cool down to -2 ÷ -9 o С, which react with heat emission for 4-5 minutes. Subsequently, there is a process of crystallization and hypothermia of the cells of a conserved open biological system. Cooled after 22-24 min to -22 ÷ -25 o С or after 25-30 min to -26 ÷ -30 o С, the cells pass into the phase of cold thermodynamic stabilization, after which (during the second stage) the cells finally freeze to - 40 ÷ -80 o C, the duration of the second stage is 30-60 minutes Frozen cell suspensions are suitable for use up to 2.5 years (observation period). The proposed method provides predicted indicators of preservation of cell viability after freezing and thawing by 80-93% and saving up to 2450 ml of ethanol 96 vol.% High purification for each operation of cryopreservation of cell suspensions.
При использовании фондов научно-технической литературы эквивалентных решений не обнаружено, что подтверждает новизну предлагаемого способа консервирования клеточных суспензий. When using funds of scientific and technical literature, equivalent solutions were not found, which confirms the novelty of the proposed method for preserving cell suspensions.
Использование простых приемов и доступного оборудования подтверждает промышленную применимость. The use of simple techniques and available equipment confirms industrial applicability.
Неочевидность и оригинальный подход к решению проблемы подтверждает изобретательский уровень. The non-obviousness and original approach to solving the problem confirms the inventive step.
Способ осуществляют следующим образом. The method is as follows.
Суспензию клеток в растворе криопротектора при 18-20oС расфасовывают по 50, 75 или 100 мл в полимерные контейнеры "Гемакон" 300, "Гемакон" 500 или "Компопласт" 300 вместимостью, соответственно, 300 или 500 мл, до заполнения на 10-33,3%. Упаковку из 1-4 таких контейнеров и контейнера-спутника помещают на 23-30 мин в морозильную камеру с предварительно охлажденным до -22÷-30oС раствором этилового спирта 38-45 об.%. При этом объем упаковки составляет 10% объема хладагента в морозильной камере. Охлажденную до -22÷-30oС и выдержанную при температуре холодовой адаптации упаковку с замороженной клеточной суспензией затем помещают в морозильник с температурой -40÷-80oС, которую они достигают за 30-60 мин.A suspension of cells in a cryoprotectant solution at 18-20 ° C is packaged in 50, 75 or 100 ml in Gemakon 300, Gemakon 500 or Compoplast 300 plastic containers with a capacity of 300 or 500 ml, respectively, until 10- 33.3%. A package of 1-4 such containers and a satellite container is placed for 23-30 minutes in a freezer with pre-cooled to -22 ÷ -30 o With a solution of ethyl alcohol 38-45 vol.%. Moreover, the packaging volume is 10% of the volume of refrigerant in the freezer. Cooled to -22 ÷ -30 o C and kept at the temperature of cold adaptation, the package with the frozen cell suspension is then placed in a freezer with a temperature of -40 ÷ -80 o C, which they reach in 30-60 minutes.
Замороженную суспензию клеток при данных условиях хранят от нескольких суток до 2,5 лет. Under these conditions, a frozen suspension of cells is stored from several days to 2.5 years.
Размораживание клеток производят путем погружения упаковки в водяную баню и покачивания в ручном или автоматическом режиме при температуре 38-42oС до согревания суспензии клеток до 2-4oС (костный мозг, лейкоциты) и 37oС (тромбоциты).Cells are thawed by immersing the package in a water bath and shaking it manually or automatically at a temperature of 38-42 o C until the cell suspension is warmed up to 2-4 o C (bone marrow, white blood cells) and 37 o C (platelets).
Показатели сохранности морфологических и функциональных свойств замороженных-оттаянных клеток по различным методам оценки свидетельствуют о высокой эффективности предлагаемого способа консервирования клеток при умеренно низких температурах:
- количество жизнеспособных миелокариоцитов, лейкоцитов и тромбоцитов по различным методам оценки составляет 77-91%;
- экономия этилового спирта (в пересчете на 96 об.% высокой очистки) на каждой операции составляет 550-2030 мл.Indicators of the preservation of the morphological and functional properties of frozen-thawed cells by various assessment methods indicate the high efficiency of the proposed method of preserving cells at moderately low temperatures:
- the number of viable myelocaryocytes, leukocytes and platelets by various assessment methods is 77-91%;
- the saving of ethyl alcohol (in terms of 96% vol. high purification) for each operation is 550-2030 ml.
В качестве подтверждения осуществимости способа проведены следующие исследования. To confirm the feasibility of the method, the following studies were carried out.
Пример 1. Был взят объем замораживаемой ОБС - суспензии донорских тромбоцитов на растворе криопротектора 60 мл. В эластичный контейнер "Гемакон" 500 (освобожденный от гемоконсерванта) ввели 50 мл суспензии, в результате чего объем контейнера заполнили на 10%, и 10 мл суспензии ввели в контейнер-спутник, контейнеры герметизировали, затем маркировали, вложили в пакет, при этом объем упаковки составил 91 мл. При исходной температуре 18-20oС после 15-20 мин выдержки при комнатной температуре упаковку поместили в морозильную камеру, заполненную 910 мл раствора этилового спирта 38-40 об. %, охлажденного до температуры холодовой адаптации -22÷-25oС, при этом объем упаковки составил 10% объема хладагента. Через 3-4 мин температура суспензии достигала -3,2oС, после 23-25 мин выдержки ОБС охладилась до -24÷-25oС. Эти показатели были стабильными.Example 1. The volume of frozen OBS was taken - a suspension of donor platelets in a solution of 60 ml cryoprotectant. 50 ml of the suspension were introduced into the Gemacon 500 elastic container (freed from the blood preservative), as a result of which the volume of the container was filled by 10%, and 10 ml of the suspension was introduced into the satellite container, the containers were sealed, then marked, put into the bag, while the volume packaging amounted to 91 ml. At an initial temperature of 18-20 o C after 15-20 minutes at room temperature, the package was placed in a freezer filled with 910 ml of ethanol 38-40 vol. %, cooled to a temperature of cold adaptation of -22 ÷ -25 o C, while the packaging volume was 10% of the volume of refrigerant. After 3-4 minutes, the temperature of the suspension reached -3.2 o C, after 23-25 min of exposure the OBS cooled to -24 ÷ -25 o C. These indicators were stable.
На втором этапе упаковку перенесли в морозильник-биохранилище с температурой -40-80oС.At the second stage, the packaging was transferred to a bio-storage freezer with a temperature of -40-80 o C.
Через 20 суток хранения провели размораживание взвеси в спутнике, затем в полимерном контейнере в водяной бане при 37-38oС в течение 25-30 с для исследования качества замороженной-оттаянной ОБС:
- количество тромбоцитов составило 87%;
- адгезия тромбоцитов к стеклу - от 12 до 25%;
- агрегация тромбоцитов (с АДФ) - 25,3%;
- экономия расхода раствора этилового спирта (в пересчете на 96 об.% высокой очистки) за проведенную операцию, в сравнении с традиционной технологией, составила 550 мл.After 20 days of storage, the suspension was thawed in the satellite, then in a polymer container in a water bath at 37-38 o C for 25-30 s to study the quality of the frozen-thawed OBS:
- the platelet count was 87%;
- platelet adhesion to glass - from 12 to 25%;
- platelet aggregation (with ADP) - 25.3%;
- saving the consumption of ethyl alcohol solution (in terms of 96% vol. high purification) for the operation, in comparison with traditional technology, amounted to 550 ml.
Пример 2. 85 мл суспензии лейкоцитов донорской крови на растворе криопротектора расфасовали в эластичный контейнер "Компопласт" 300 75 мл до заполнения на 25% и 10 мл - в контейнер-спутник, контейнеры герметизировали, затем маркировали согласно паспортных данных консервируемого биопродукта, вложили в пакет, при этом объем упаковки составил 108 мл. При исходной температуре 18-20oС после 15-20 мин выдержки при комнатной температуре упаковку поместили в морозильную камеру, заполненную 1080 мл раствора этилового спирта 45 об. %, охлажденного до температуры холодовой адаптации -26÷-30oС. Через 3-4 мин температура суспензии достигала -2,9oС, после 25-30 мин выдержки ОБС охладилась до -26÷-28oС. Эти показатели были устойчиво стабильными.Example 2. 85 ml of a suspension of leukocytes of donated blood in a solution of cryoprotectant was packaged in an elastic container “Compoplast” 300 75 ml until filling by 25% and 10 ml in a satellite container, the containers were sealed, then labeled according to the passport data of the preserved biological product, put into a bag while the packaging volume was 108 ml. At an initial temperature of 18-20 o C after 15-20 minutes at room temperature, the package was placed in a freezer filled with 1080 ml of a solution of ethyl alcohol of 45 vol. %, cooled to a temperature of cold adaptation of -26 ÷ -30 o C. After 3-4 minutes, the temperature of the suspension reached -2.9 o C, after 25-30 minutes of exposure the OBS cooled to -26 ÷ -28 o C. These indicators were steadily stable.
На втором этапе в течение 10 с упаковку перенесли в морозильник-биохранилище с температурой -60-80oС.In the second stage, within 10 s the packaging was transferred to a bio-storage freezer with a temperature of -60-80 o C.
Через 48 суток хранения провели размораживание взвеси в спутнике, затем в полимерных контейнерах в водяной бане при 38oС в течение 30 с для исследования качества замороженной-оттаянной ОБС:
- количество лейкоцитов составило 89%;
- жизнеспособность лейкоцитов 74%;
- фагоцитарная активность нейтрофилов 45%;
- экономия расхода раствора этилового спирта (в пересчете на 96 об.%) за проведенную операцию, в сравнении с традиционной технологией, составила 573,7 мл.After 48 days of storage, the suspension was thawed in the satellite, then in polymer containers in a water bath at 38 o C for 30 s to study the quality of the frozen-thawed OBS:
- the number of leukocytes was 89%;
- leukocyte viability of 74%;
- phagocytic activity of neutrophils 45%;
- the saving in consumption of a solution of ethyl alcohol (in terms of 96 vol.%) for the operation performed, in comparison with traditional technology, amounted to 573.7 ml.
Пример 3. 310 мл суспензии костномозговых клеток на растворе криопротектора расфасовали в три эластичных контейнера "Гемакон" 300 по 100 мл в каждый до заполнения на 33,3% и 10 мл суспензии - в контейнер-спутник, контейнеры герметизировали, затем маркировали согласно паспортных данных консервируемого биопродукта, вложили в пакет, при этом объем упаковки составил 391 мл. При исходной температуре 18-20oС после 15-20 мин выдержки при комнатной температуре упаковку поместили в морозильную камеру, заполненную 3910 мл раствора этилового спирта 42 об.%, охлажденного до температуры холодовой адаптации -26÷-30oС. Через 3-4 мин температура суспензии достигала -3,2oС, после 25-30 мин выдержки ОБС охладилась до -26÷-28oС. Эти показатели были устойчиво стабильными.Example 3. 310 ml of a suspension of bone marrow cells in a cryoprotectant solution were packaged in three elastic Gemakon 300 containers of 100 ml each until 33.3% filled and 10 ml of the suspension in a satellite container, the containers were sealed, then labeled according to the passport data canned biological product, put into the package, while the packaging volume was 391 ml. At an initial temperature of 18-20 o C after 15-20 minutes at room temperature, the package was placed in a freezer filled with 3910 ml of ethanol solution 42 vol.%, Cooled to a temperature of cold adaptation -26 ÷ -30 o C. After 3- 4 min, the temperature of the suspension reached -3.2 o C, after 25-30 min of exposure, the OBS cooled to -26 ÷ -28 o C. These indicators were stably stable.
На втором этапе в течение 10 с упаковку перенесли в морозильник-биохранилище с температурой -40÷-80oС.In the second stage, within 10 s the packaging was transferred to a bio-storage freezer with a temperature of -40 ÷ -80 o C.
Через 120 суток хранения провели размораживание взвеси в спутнике, затем в полимерных контейнерах в водяной бане при 39-42oС в течение 30 с для исследования качества замороженной-оттаянной ОБС:
- количество жизнеспособных миелокариоцитов составило 93%;
- количество коммитированных клеток-предшественников грануломоноцитопоэза составило 64,8%;
- экономия расхода раствора этилового спирта (в пересчете на 96 об.% высокой очистки) за проведенную операцию, в сравнении с традиционной технологией, составила 2030 мл.After 120 days of storage, the suspension was thawed in the satellite, then in polymer containers in a water bath at 39-42 o C for 30 s to study the quality of the frozen-thawed OBS:
- the number of viable myelocaryocytes was 93%;
- the number of committed granulomonocytopoiesis progenitor cells was 64.8%;
- saving the consumption of ethyl alcohol solution (in terms of 96% vol. high purification) for the operation, in comparison with traditional technology, amounted to 2030 ml.
Предлагаемый способ обеспечивает прогнозируемые показатели сохранности жизнеспособности клеток после замораживания-оттаивания на 80-93%, экономию 550-2030 мл этилового спирта (в пересчете на 96 об.% высокой очистки) на каждой операции, а также снижение профвредности технологии криоконсервирования клеточных суспензий. The proposed method provides predicted indicators of preservation of cell viability after freezing and thawing by 80-93%, saving 550-2030 ml of ethanol (in terms of 96% vol. High purification) for each operation, as well as reducing the occupational hazard of the technology of cryopreservation of cell suspensions.
Использование в предлагаемом способе стандартных порций фасуемых консервируемых суспензий клеток в стандартные эластичные контейнеры, отношения объема замораживаемых упаковок с ОБС к объему хладагента, равным 10, и снижение об.% рабочего раствора этилового спирта (по отношению к этиловому спирту 96 об.% высокой степени очистки), в зависимости от температуры холодовой адаптации, позволяет значительно упростить криоконсервирование различных ОБС, прогнозировать высокий процент сохранных клеток, снизить затратность технологии и ее профвредность. The use in the proposed method of standard portions of packaged canned cell suspensions in standard elastic containers, the ratio of the volume of frozen packages with OBS to the refrigerant volume of 10, and a decrease in vol.% Of the working solution of ethanol (relative to ethyl alcohol, 96 vol.% Highly purified ), depending on the temperature of cold adaptation, can significantly simplify the cryopreservation of various OBS, predict a high percentage of preserved cells, reduce the cost of the technology and its profvre Nost.
Предлагаемая технология криоконсервирования клеток костного мозга и компонентов крови в установленных стандартах технологии предельно проста в реализации, дает стабильный положительный результат, экономию материальных средств и снижение профвредности и найдет широкое применение в медицинской практике. The proposed technology for the cryopreservation of bone marrow cells and blood components in the established technology standards is extremely simple to implement, gives a stable positive result, saves material resources and reduces occupational hazards and will be widely used in medical practice.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001113532A RU2195111C1 (en) | 2001-05-16 | 2001-05-16 | Method for cryogenic preservation of cellular suspensions |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001113532A RU2195111C1 (en) | 2001-05-16 | 2001-05-16 | Method for cryogenic preservation of cellular suspensions |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2195111C1 true RU2195111C1 (en) | 2002-12-27 |
Family
ID=20249733
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001113532A RU2195111C1 (en) | 2001-05-16 | 2001-05-16 | Method for cryogenic preservation of cellular suspensions |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2195111C1 (en) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2240000C2 (en) * | 2002-12-04 | 2004-11-20 | Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН | Cold-safety solution for freezing leukocytes at sub-moderate temperature |
| RU2261595C1 (en) * | 2004-01-19 | 2005-10-10 | Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской Академии Наук | Protective solution for preserving leukocyte at temperature -10°c |
| EP1908346A1 (en) * | 2006-09-27 | 2008-04-09 | Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe | Method for the production of frozen blood or frozen blood cells for biological assays |
| RU2326532C1 (en) * | 2006-08-29 | 2008-06-20 | Федеральное государственное учреждение "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" (ФГУ "КНИИГ и ПК Росмедтехнологий") | Method of thrombocyte cryopreservation |
| RU169578U1 (en) * | 2016-08-03 | 2017-03-23 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы "Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы" | DEVICE FOR Cryopreservation of platelets |
| RU2624214C1 (en) * | 2016-04-28 | 2017-07-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Method for cryopreservation of haemopoietic stem cells |
| RU2639892C1 (en) * | 2017-07-05 | 2017-12-25 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Method for human nucleated blood cells cryopreservation at temperature of minus 80°c |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU395054A1 (en) * | 1971-05-14 | 1973-08-28 | Украинский институт усовершенствовани врачей | METHOD OF CONSERVATION OF BONE MARROW |
| FR2276058A2 (en) * | 1974-06-28 | 1976-01-23 | Souron Yves | Medicaments contg bone marrow - isolated in the absence of air |
| SU645633A1 (en) * | 1977-01-03 | 1979-02-05 | Институт Проблем Криобиологии И Криомедицины Ан Украинской Сср | Method of preserving blood leukocytes |
| WO1984004870A1 (en) * | 1983-06-13 | 1984-12-20 | New England Medical Center Inc | Stabilization of neutrophils and platelets |
| EP0246824A2 (en) * | 1986-05-15 | 1987-11-25 | Cell Systems Ltd | Biological cryoprotection |
| US4994367A (en) * | 1988-10-07 | 1991-02-19 | East Carolina University | Extended shelf life platelet preparations and process for preparing the same |
| RU2144290C1 (en) * | 1998-08-26 | 2000-01-20 | Кировский НИИ гематологии и переливания крови | Method of bone marrow preservation |
-
2001
- 2001-05-16 RU RU2001113532A patent/RU2195111C1/en active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU395054A1 (en) * | 1971-05-14 | 1973-08-28 | Украинский институт усовершенствовани врачей | METHOD OF CONSERVATION OF BONE MARROW |
| FR2276058A2 (en) * | 1974-06-28 | 1976-01-23 | Souron Yves | Medicaments contg bone marrow - isolated in the absence of air |
| SU645633A1 (en) * | 1977-01-03 | 1979-02-05 | Институт Проблем Криобиологии И Криомедицины Ан Украинской Сср | Method of preserving blood leukocytes |
| WO1984004870A1 (en) * | 1983-06-13 | 1984-12-20 | New England Medical Center Inc | Stabilization of neutrophils and platelets |
| EP0246824A2 (en) * | 1986-05-15 | 1987-11-25 | Cell Systems Ltd | Biological cryoprotection |
| US4994367A (en) * | 1988-10-07 | 1991-02-19 | East Carolina University | Extended shelf life platelet preparations and process for preparing the same |
| RU2144290C1 (en) * | 1998-08-26 | 2000-01-20 | Кировский НИИ гематологии и переливания крови | Method of bone marrow preservation |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2240000C2 (en) * | 2002-12-04 | 2004-11-20 | Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН | Cold-safety solution for freezing leukocytes at sub-moderate temperature |
| RU2261595C1 (en) * | 2004-01-19 | 2005-10-10 | Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской Академии Наук | Protective solution for preserving leukocyte at temperature -10°c |
| RU2326532C1 (en) * | 2006-08-29 | 2008-06-20 | Федеральное государственное учреждение "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" (ФГУ "КНИИГ и ПК Росмедтехнологий") | Method of thrombocyte cryopreservation |
| EP1908346A1 (en) * | 2006-09-27 | 2008-04-09 | Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe | Method for the production of frozen blood or frozen blood cells for biological assays |
| WO2008037481A3 (en) * | 2006-09-27 | 2008-10-09 | Paul Ehrlich Inst Bundesamt Fu | Method for the production of frozen blood or frozen blood cells for biological assays |
| RU2624214C1 (en) * | 2016-04-28 | 2017-07-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Method for cryopreservation of haemopoietic stem cells |
| RU169578U1 (en) * | 2016-08-03 | 2017-03-23 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы "Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы" | DEVICE FOR Cryopreservation of platelets |
| RU2639892C1 (en) * | 2017-07-05 | 2017-12-25 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Method for human nucleated blood cells cryopreservation at temperature of minus 80°c |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS62114901A (en) | Methods of preserving and storing biological materials | |
| Ozkavukcu et al. | Cryopreservation: basic knowledge and biophysical effects | |
| WO1996021351A3 (en) | Bulk cryopreservation of biological materials and uses for cryopreserved and encapsulated biological materials | |
| EP2038402B1 (en) | Systems and methods for cryopreservation of cells | |
| US20080176326A1 (en) | Delivery of high cell mass in a syringe and related methods of cryopreserving cells | |
| ZA200209843B (en) | High temperature cryogenic preservation of biologically active material. | |
| AU2001268359A1 (en) | High temperature cryogenic preservation of biologically active material | |
| Thachil et al. | Preservation techniques for human semen | |
| RU2195111C1 (en) | Method for cryogenic preservation of cellular suspensions | |
| WO2013096659A1 (en) | Methods and compositions for storage of animal cells | |
| JP2023554658A (en) | Methods and devices for preserving biological materials | |
| RU2624214C1 (en) | Method for cryopreservation of haemopoietic stem cells | |
| CN112167243A (en) | Erythrocyte cryopreservation liquid and rapid cryopreservation method | |
| RU2144290C1 (en) | Method of bone marrow preservation | |
| RU2326532C1 (en) | Method of thrombocyte cryopreservation | |
| RU2639892C1 (en) | Method for human nucleated blood cells cryopreservation at temperature of minus 80°c | |
| Rowe | Cryopreservation of red cells by freezing and vitrification–some recollections and predictions | |
| RU1772911C (en) | Solution for preservation of bone marrow of mammals at low temperatures | |
| RU2051580C1 (en) | Method of erythrocyte conservation | |
| Fuller et al. | Cryopreservation for cell banking: current concepts at the turn of the 21st century | |
| Pavel et al. | A freezing protocol for hematopoietic stem cells | |
| Nannou et al. | Cryopreservation: Methods, equipment and critical concerns | |
| Jacob | Frozen Blood Products | |
| Rowe | Cryopreservation of Blood-an Historical Perspective | |
| CN107593686A (en) | A kind of cryopreservation methods of people's navel mescenchymal stem cell |