RU2192265C2 - Method for obtaining the complex of phospholipids - Google Patents
Method for obtaining the complex of phospholipids Download PDFInfo
- Publication number
- RU2192265C2 RU2192265C2 RU2000109191A RU2000109191A RU2192265C2 RU 2192265 C2 RU2192265 C2 RU 2192265C2 RU 2000109191 A RU2000109191 A RU 2000109191A RU 2000109191 A RU2000109191 A RU 2000109191A RU 2192265 C2 RU2192265 C2 RU 2192265C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- phospholipids
- acetone
- extraction
- chloroform
- precipitate
- Prior art date
Links
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 50
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 11
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims abstract description 10
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 12
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 claims 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 abstract description 28
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 18
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 3
- UXTMROKLAAOEQO-UHFFFAOYSA-N chloroform;ethanol Chemical compound CCO.ClC(Cl)Cl UXTMROKLAAOEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 10
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 7
- 244000309464 bull Species 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 5
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical group CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 241000238366 Cephalopoda Species 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 229930183167 cerebroside Natural products 0.000 description 1
- 150000001784 cerebrosides Chemical class 0.000 description 1
- -1 cerebrosin Natural products 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000403 immunocorrecting effect Effects 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- GSWAOPJLTADLTN-UHFFFAOYSA-N oxidanimine Chemical compound [O-][NH3+] GSWAOPJLTADLTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно лекарственным препаратам, содержащим материалы головного мозга млекопитающих животных, и может быть использовано в технологии получения исходного материала для липосомальных форм лекарственных препаратов. The invention relates to medicine, namely to medicines containing materials of the brain of mammalian animals, and can be used in the technology of obtaining the starting material for liposomal forms of drugs.
Основным условием терапевтической эффективности липосомальных препаратов является сродство состава мембран липосом к клеточной структуре различных органов макроорганизма, что обеспечивается сбалансированным эквимолярным соотношением всех типов фосфолипидов с максимальным использованием их функциональной активности по отношению к различным органам макроорганизма. The main condition for the therapeutic efficacy of liposomal preparations is the affinity of the composition of the liposome membranes for the cellular structure of various organs of the macroorganism, which is ensured by a balanced equimolar ratio of all types of phospholipids with the maximum use of their functional activity in relation to various organs of the macroorganism.
Наибольший интерес в этом соотношении представляет комплекс фосфолипидов, выделенных из животной ткани. Известно, что в смеси липидов, выделенных из белого вещества мозга быков, содержится 50% холестерина, цереброзина, фосфатидилэтаноламина, остальное - фосфатидилхолин (лецитин), фосфатидилинозит, фосфатидилсерин, что обеспечивает высокую степень сродства к органам макроорганизма, а липиды растительного происхождения, например сои, содержат почти 87% фосфатидилхолина. Of greatest interest in this ratio is the complex of phospholipids isolated from animal tissue. It is known that a mixture of lipids isolated from white matter of the brain of bulls contains 50% cholesterol, cerebrosin, phosphatidylethanolamine, the rest is phosphatidylcholine (lecithin), phosphatidylinositol, phosphatidylserine, which provides a high degree of affinity for the organs of a macroorganism, and plant-derived lipids, such as soy contain almost 87% phosphatidylcholine.
[В. И. Ефременко. Липосомы (получение, свойства, аспекты применения в биологии и медицине). 263 с. Деп. в ВИНИПИ, 3733 -В98, 18.12.98]. [IN. I. Efremenko. Liposomes (production, properties, aspects of application in biology and medicine). 263 p. Dep. in VINIPI, 3733-B98, 12/18/98].
Известен способ получения комплекса фосфолипидов из отходов головоногих моллюсков, включающий экстракцию общих липидов смесью хлороформа с этанолом, промывку экстракта от нелипидных примесей раствором хлористого натрия, перерастворение общих липидов петролейным эфиром, диэтиловым эфиром, хлороформом или этиловым спиртом и осаждение фосфолипидов ацетоном при соотношении экстракта и ацетона 1:5 - 1:10. A known method for producing a complex of phospholipids from waste of cephalopods, including extraction of total lipids with a mixture of chloroform and ethanol, washing the extract from non-lipid impurities with a solution of sodium chloride, re-dissolving the total lipids with petroleum ether, diethyl ether, chloroform or ethyl alcohol, and precipitating phospholipid acetone with acetolide 1: 5 - 1:10.
[Авт. св. СССР 1080825, А 61 К 37/22, оп. 23.03.84, Бюл. 11]. [Auth. St. USSR 1080825, A 61 K 37/22, op. 03/23/84, bull. eleven].
Этот способ модифицирован с целью упрощения технологии тем, что используют лиофильно высушенное сырье, экстракцию проводят этиловым спиртом, перерастворение - гексаном и выделение фосфолипидов - отгонкой гексана. [Авт. св. СССР 1175486, А 61 К 37/22, оп. 30.08.85, Бюл. 32]. This method is modified in order to simplify the technology by using freeze-dried raw materials, extraction is carried out with ethanol, re-dissolution is carried out with hexane and phospholipids are isolated by distillation of hexane. [Auth. St. USSR 1175486, A 61 K 37/22, op. 08.30.85, Bull. 32].
При достаточно высоком выходе целевого продукта (7,5-10%) состав липидов содержит большое количество фосфатидилхолина (60-75%) при недостаточном содержании других фосфолипидов. With a sufficiently high yield of the target product (7.5-10%), the lipid composition contains a large amount of phosphatidylcholine (60-75%) with an insufficient content of other phospholipids.
Известен способ поэтапного выделения фосфолипидов из спинного и головного мозга крупного рогатого скота (КРС) и свиней. A known method of phased isolation of phospholipids from the spinal cord and brain of cattle (cattle) and pigs.
[Авт. св. СССР 957908, А 61 К 35/50, оп.15.09.82, Бюл. 34]. [Auth. St. USSR 957908, A 61 K 35/50, op.15.09.82, Bull. 34].
Целью изобретения является повышение выхода фосфатидилхолина. Способ включает измельчение исходного сырья, его обезвоживание методом лиофильного высушивания, поэтапную многократную экстракцию ацетоном и этанолом, очистку экстрактов поэтапной кристаллизацией холестерина, сфинголипидов, фосфатидилэтаноламина с последующей хроматографией целевого продукта на колонке с окисью аммония. При такой технологии достигаются высокий выход и чистота целевого продукта, однако, способ длителен и сложен. The aim of the invention is to increase the yield of phosphatidylcholine. The method includes grinding the feedstock, dehydrating it by freeze drying, multiple stages of extraction with acetone and ethanol, purification of the extracts by stage crystallization of cholesterol, sphingolipids, phosphatidylethanolamine, followed by chromatography of the target product on a column of ammonium oxide. With this technology, a high yield and purity of the target product are achieved, however, the method is long and complicated.
Известен способ получения холестерина из головного и спинного мозга млекопитающих, в частности КРС, путем 5-6-кратного экстрагирования сырья ацетоном при соотношении 1:2, отгонки растворителя после каждой экстракции при атмосферном давлении, выделение целевого продукта перекристаллизацией из этанола. При этом первую экстракцию проводят избытком ацетона, а последующие экстракции ведут смесью ацетона и воды, смесь получают при отгонке растворителя из предыдущего экстракта. A known method of producing cholesterol from the brain and spinal cord of mammals, in particular cattle, by 5-6-fold extraction of raw materials with acetone at a ratio of 1: 2, distillation of the solvent after each extraction at atmospheric pressure, the selection of the target product by recrystallization from ethanol. In this case, the first extraction is carried out with an excess of acetone, and the subsequent extraction is carried out with a mixture of acetone and water, the mixture is obtained by distilling off the solvent from the previous extract.
[Патент РФ 2034552, А 61 К 35/30, оп.10.05.95, Бюл. 13]. [RF patent 2034552, A 61 K 35/30, op.10.05.95, Bull. thirteen].
По этому способу не экстрагируются фосфолипиды, способ длителен и сложен. According to this method, phospholipids are not extracted, the method is long and complicated.
Известен способ получения комплекса липидов из вилочковой железы КРС. A known method of obtaining a complex of lipids from the thymus gland of cattle.
[Патент РФ 1836092, А 61 К 31/685, оп. 23.08.93, Бюл. 31]. [RF patent 1836092, A 61 K 31/685, op. 08/23/93, Bull. 31].
Способ включает измельчение и гомогенизацию сырья в физиологическом растворе, отделение жидкой фазы, экстракцию жидкой фазы изопропанолом, отделение экстракта и осаждение комплекса липидов ацетоном в соотношении 1:2-10. The method includes grinding and homogenizing the raw material in physiological saline, separating the liquid phase, extracting the liquid phase with isopropanol, separating the extract and precipitating the lipid complex with acetone in a ratio of 1: 2-10.
Недостатком способа является то, что в выделяемом комплексе липидов недостаточна доля фосфолипидов (2-13%), остальное - глицериды, холестерин, жирные кислоты, плазмалогены. Комплекс эффективно используется как иммунокоррегирующий препарат. The disadvantage of this method is that in the secreted lipid complex there is an insufficient proportion of phospholipids (2-13%), the rest is glycerides, cholesterol, fatty acids, plasmalogens. The complex is effectively used as an immunocorrective drug.
Наиболее близким к заявляемому способу является метод экстракции животных тканей Фолча. Closest to the claimed method is a method of extraction of animal tissues of Folch.
[Препаративная биохимия липидов. Москва. - Наука. - 1981.- с. 10-15]. [Preparative biochemistry of lipids. Moscow. - The science. - 1981.- p. 10-15].
В основе способа предусмотрены следующие операции: гомогенизация, обезвоживание и экстракция исходного сырья смесью хлороформа и метанола с отделением экстракта фильтрованием или центрифугированием. Экстракция осадка хлороформом и отделение экстракта. Объединение экстрактов и расслоение липидной и нелипидной фаз добавлением 1% раствора хлористого калия. Отделение липидной фазы и выделение из нее липидов путем фильтрования, высушивания сульфатом натрия и упаривание в вакууме. The method is based on the following operations: homogenization, dehydration and extraction of the feedstock with a mixture of chloroform and methanol with separation of the extract by filtration or centrifugation. Extraction of the precipitate with chloroform and separation of the extract. Combination of extracts and separation of lipid and non-lipid phases by adding 1% potassium chloride solution. The separation of the lipid phase and the release of lipids from it by filtration, drying with sodium sulfate and evaporation in vacuum.
Недостатком метода является то, что в липидный экстракт переходят нелипидные примеси полярного характера. Это объясняется тем, что многие липиды в органических растворителях образуют мицеллы, захватывающие воду и низкомолекулярные вещества. The disadvantage of this method is that non-lipid impurities of a polar nature go into the lipid extract. This is because many lipids in organic solvents form micelles that trap water and low molecular weight substances.
При экстракции смесью растворителей, содержащих полярные компоненты, в экстракт переходят аминокислоты, полипептиды, сахара и др. Удаление нелипидных примесей осуществляется отмывкой экстракта раствором соли или фильтрацией. Кроме того, разделение водной и органической фаз затруднено тем, что экстракция липидов зачастую сопровождается образованием устойчивых эмульсий, так как липиды являются типичными поверхностно-активными веществами. Разрушение эмульсий достигается при небольших количествах центрифугированием, а при больших количествах экстракта - добавлением бензола, вакуумированием разделительной колонки или ее длительным вращением. Все эти операции усложняют процесс, снижают выход целевого продукта. When extraction with a mixture of solvents containing polar components, amino acids, polypeptides, sugars, etc. are transferred to the extract. Removing non-lipid impurities is carried out by washing the extract with a salt solution or by filtration. In addition, the separation of the aqueous and organic phases is complicated by the fact that the extraction of lipids is often accompanied by the formation of stable emulsions, since lipids are typical surfactants. The destruction of emulsions is achieved with small amounts by centrifugation, and with large quantities of the extract by adding benzene, evacuating the separation column or its long rotation. All these operations complicate the process, reduce the yield of the target product.
Техническим результатом заявляемого способа является упрощение способа, повышение выхода целевого продукта при достижении сбалансированного эквимолярного соотношения фосфолипидов, обладающих сродством со структурой клеток макроорганизма. The technical result of the proposed method is to simplify the method, increasing the yield of the target product when a balanced equimolar ratio of phospholipids is achieved, having an affinity for the structure of the cells of the macroorganism.
Технический результат изобретения достигается тем, что способ получения комплекса фосфолипидов из животного сырья включает гомогенизацию, обезвоживание и экстракцию исходного сырья ацетоном, экстракцию осадка смесью хлороформа с метанолом или этанолом, отделение липидной фазы и выделение из нее фосфолипидов добавлением ацетона в соотношении с экстрактом 1,5 - 2,0:1. The technical result of the invention is achieved in that a method for producing a complex of phospholipids from animal feedstock includes homogenizing, dehydrating and extracting the feedstock with acetone, extracting the precipitate with a mixture of chloroform and methanol or ethanol, separating the lipid phase and isolating phospholipids from it by adding acetone in proportion to the extract of 1.5 - 2.0: 1.
По отношению к прототипу заявляемый способ имеет следующие отличительные признаки. In relation to the prototype of the claimed method has the following distinctive features.
Гомогенизация, обезвоживание и экстракция исходного сырья в ацетоне обеспечивает экстрагирование нелипидных примесей, жирных кислот, а также возможность проведения однократной экстракции липидов. Homogenization, dehydration and extraction of the feedstock in acetone provides extraction of non-lipid impurities, fatty acids, as well as the possibility of a single extraction of lipids.
Экстракция осадка смесью хлороформа с метанолом или этанолом обеспечивает полную экстракцию липидов и повышение выхода целевого продукта, упрощает процесс отделения липидной фазы. The extraction of the precipitate with a mixture of chloroform with methanol or ethanol ensures complete extraction of lipids and an increase in the yield of the target product, simplifies the process of separation of the lipid phase.
Выделение фосфолипидов из липидного экстракта путем осаждения их ацетоном в соотношении с экстрактом 1,5 - 2,0:1 обеспечивает получение сбалансированного эквимолярного состава комплекса фосфолипидов при содержании следующих компонентов, %:
Холестерин - 16,6
Цереброзиды - 16,6
Фосфатидилэтаноламин - 16,6
Фосфатидилхолин - 8,3
Сфингомиелин - 8,3
Фосфатидилсерин - 6,25
Фосфатидилинозит - 6,25
При этом ганглиозиды и другие гликолипиды остаются в надосадочной жидкости.Isolation of phospholipids from the lipid extract by precipitation with acetone in a ratio of 1.5 to 2.0: 1 extract provides a balanced equimolar composition of the phospholipid complex with the following components,%:
Cholesterol - 16.6
Cerebrosides - 16.6
Phosphatidylethanolamine - 16.6
Phosphatidylcholine 8.3
Sphingomyelin - 8.3
Phosphatidylserine - 6.25
Phosphatidylinositol - 6.25
In this case, gangliosides and other glycolipids remain in the supernatant.
Способ осуществляется следующим образом. The method is as follows.
Мозг крупного рогатого скота гомогенизируют в охлажденном ацетоне, перемешивают на шуттеле, фильтруют суспензию. Осадок опять суспендируют в ацетоне, перемешивают, вновь фильтруют. Полученный осадок экстрагируют смесью органических растворителей. Встряхивают. Собирают супернатант путем двукратной фильтрации. Добавляют к полученному экстракту 1,5 объема ацетона. Смесь фосфолипидов выпадает в осадок. После полного формирования осадка его собирают фильтрованием. The cattle brain is homogenized in chilled acetone, stirred on a shunt, and the suspension is filtered. The precipitate was again suspended in acetone, stirred, filtered again. The resulting precipitate was extracted with a mixture of organic solvents. Shake. Collect the supernatant by double filtration. 1.5 volumes of acetone are added to the resulting extract. A mixture of phospholipids precipitates. After the complete formation of the precipitate, it is collected by filtration.
Пример 1. Example 1
В качестве источника получения фосфолипидов используют головной мозг крупного рогатого скота в количестве 1000 г. Гомогенизируют в 4000 мл охлажденного ацетона (-20oС), затем непрерывно перемешивают в течение 12 часов при 20oС и суспензию фильтруют на воронке Бюхнера. Осадок вновь суспендируют в 2000 мл охлажденного ацетона и перемешивают в течение 4 часов при 20oС, повторно фильтруют на воронке Бюхнера.The brain of cattle in an amount of 1000 g was used as a source of phospholipids. Homogenize in 4000 ml of chilled acetone (-20 o С), then mix continuously for 12 hours at 20 o С and filter the suspension on a Buchner funnel. The precipitate was resuspended in 2000 ml of chilled acetone and stirred for 4 hours at 20 o C, re-filtered on a Buchner funnel.
Для извлечения фосфолипидов полученный осадок экстрагируют 2000 мл смеси хлороформ-этанол (1: 1) путем встряхивания на шуттеле в течение 1 часа при 20oС. Полученный супернатант собирают и для осаждения фосфолипидов добавляют к нему 1,5 объема (3000 мл) охлажденного ацетона (-20oС). После полного формирования осадка (через 30 мин), представляющего собой смесь различных фосфолипидов, его собирают фильтрованием.To extract phospholipids, the resulting precipitate was extracted with 2000 ml of a mixture of chloroform-ethanol (1: 1) by shaking on a shuttle for 1 hour at 20 o C. The resulting supernatant was collected and 1.5 volumes (3000 ml) of cooled acetone were added to precipitate phospholipids (-20 o C). After the complete formation of the precipitate (after 30 min), which is a mixture of various phospholipids, it is collected by filtration.
Выход препарата фосфолипидов составил 10 г (1% от веса исходного сырья). The output of the phospholipid preparation was 10 g (1% of the weight of the feedstock).
Пример 2. Example 2
В качестве источника получения фосфолипидов используют головной мозг крупного рогатого скота. Конкретное осуществление способа проводят, как описано в примере 1, используя для осаждения фосфолипидов вместо 1,5 объемов (3000 мл) ацетона 2 объема (4000 мл). В надосадочной жидкости, полученной после осаждения препарата ацетоном, фосфолипиды не обнаруживаются. A cattle brain is used as a source of phospholipids. A specific implementation of the method is carried out as described in example 1, using for the precipitation of phospholipids instead of 1.5 volumes (3000 ml) of acetone 2 volumes (4000 ml). In the supernatant obtained after precipitation of the drug with acetone, phospholipids are not detected.
Выход препарата фосфолипидов составил 14 г (1,4% от веса исходного сырья). The output of the phospholipid preparation was 14 g (1.4% of the weight of the feedstock).
Пример 3 по прототипу. Example 3 of the prototype.
Мозг крупного рогатого скота гомогенизируют, экстрагируют в 10 объемах смеси хлороформа с метанолом (2:1). Суспензию фильтруют. Остаток гомогенизируют с 1200 мл хлороформа и вновь фильтруют. В объединенный фильтрат добавляют при встряхивании 1%-ный раствор хлористого калия. Верхнюю фазу и промежуточный слой сливают, а нижнюю фазу, содержащую липиды, фильтруют, после чего органическую фазу удаляют на роторном испарителе. The brain of cattle is homogenized, extracted in 10 volumes of a mixture of chloroform with methanol (2: 1). The suspension is filtered. The residue is homogenized with 1200 ml of chloroform and filtered again. A 1% potassium chloride solution is added to the combined filtrate with shaking. The upper phase and the intermediate layer are drained, and the lower phase containing lipids is filtered, after which the organic phase is removed on a rotary evaporator.
Выход препарата фосфолипидов составил 5,7 г (0,57% от веса исходного сырья). The output of the phospholipid preparation was 5.7 g (0.57% of the weight of the feedstock).
Как показали экспериментальные исследования, при осаждении фосфолипидов из экстракта ацетоном с соотношением менее чем 1,5:1 снижается выход целевого продукта, увеличение же объема ацетона более чем 2,0:1 нецелесообразно, так как выход целевого продукта не изменяется. As shown by experimental studies, the precipitation of phospholipids from the extract with acetone with a ratio of less than 1.5: 1 decreases the yield of the target product, an increase in the volume of acetone of more than 2.0: 1 is impractical, since the yield of the target product does not change.
Простота и эффективность заявляемого способа обуславливает перспективность использования изобретения в биотехнологии фосфолипидов. The simplicity and effectiveness of the proposed method determines the prospects of using the invention in biotechnology of phospholipids.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000109191A RU2192265C2 (en) | 2000-04-12 | 2000-04-12 | Method for obtaining the complex of phospholipids |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000109191A RU2192265C2 (en) | 2000-04-12 | 2000-04-12 | Method for obtaining the complex of phospholipids |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000109191A RU2000109191A (en) | 2002-01-10 |
| RU2192265C2 true RU2192265C2 (en) | 2002-11-10 |
Family
ID=20233262
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000109191A RU2192265C2 (en) | 2000-04-12 | 2000-04-12 | Method for obtaining the complex of phospholipids |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2192265C2 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2274460C2 (en) * | 2004-04-15 | 2006-04-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-производственное объединение" "ТЕХКОН" | Cerebroside-cerebroside sulfate-containing lipid complex and method for its preparing |
| MD130Z (en) * | 2009-10-22 | 2010-11-30 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Process for obtaining a phospholipid complex from Spirulina platensis biomass |
| RU2621145C2 (en) * | 2015-11-03 | 2017-05-31 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "ВГУ") | Method for liposomes obtaining |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2399251A1 (en) * | 1977-08-04 | 1979-03-02 | Aesculapius Lab Chim Farma | EXTRACTION PROCESS FOR THE PREPARATION OF PHOSPHOLIPIDS FOR THERAPEUTIC USE FROM ANIMAL ORGANS |
| RU2071337C1 (en) * | 1993-08-12 | 1997-01-10 | Сергей Александрович Любченко | Method of phospholipid complex preparing |
-
2000
- 2000-04-12 RU RU2000109191A patent/RU2192265C2/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2399251A1 (en) * | 1977-08-04 | 1979-03-02 | Aesculapius Lab Chim Farma | EXTRACTION PROCESS FOR THE PREPARATION OF PHOSPHOLIPIDS FOR THERAPEUTIC USE FROM ANIMAL ORGANS |
| RU2071337C1 (en) * | 1993-08-12 | 1997-01-10 | Сергей Александрович Любченко | Method of phospholipid complex preparing |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Препаративная биохимия липидов. - М.: Наука, 1981, с.10-15. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2274460C2 (en) * | 2004-04-15 | 2006-04-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-производственное объединение" "ТЕХКОН" | Cerebroside-cerebroside sulfate-containing lipid complex and method for its preparing |
| MD130Z (en) * | 2009-10-22 | 2010-11-30 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Process for obtaining a phospholipid complex from Spirulina platensis biomass |
| RU2621145C2 (en) * | 2015-11-03 | 2017-05-31 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "ВГУ") | Method for liposomes obtaining |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6740778B2 (en) | Method for the preparation of oleanolic acid and/or maslinic acid | |
| US5677472A (en) | Method for extracting sphingomyelin | |
| EP1098656B1 (en) | Low molecular weight components of shark cartilage, processes for their preparation and therapeutic uses thereof | |
| RU2192265C2 (en) | Method for obtaining the complex of phospholipids | |
| CN102924506A (en) | Preparation method of high-purity lecithin | |
| KR870001020B1 (en) | Method of Preparation Silybinin Derivative | |
| US3869482A (en) | Method of producing highly purified phosphatides | |
| RU2008906C1 (en) | Method of producing tonic of velvet antlers | |
| RU2305548C1 (en) | Method for complex reprocessing of cake urchins | |
| KR100519154B1 (en) | Antiageing and whitening cosmetics containing natural extracts | |
| RU2274460C2 (en) | Cerebroside-cerebroside sulfate-containing lipid complex and method for its preparing | |
| CN117210384A (en) | Paris polyphylla-derived extracellular vesicles, and separation and extraction method and application thereof | |
| SU1175486A1 (en) | Method of obtaining a complex of phospholipides | |
| RU2082422C1 (en) | Method of melon oil preparing | |
| RU2279885C2 (en) | Method for simultaneous production of lecithin, cholesterol, kephalin, and biological solvent cake | |
| RU2195296C2 (en) | Method of preparing gangliosides | |
| RU2066189C1 (en) | Method of preparing lipid complex and complex of amino acids and peptides | |
| JP2792010B2 (en) | Phthalide derivative and cell killer for cervical cancer cells containing the same as active ingredient | |
| DE2335334B2 (en) | PROCESS FOR THE RECOVERY OF HIGHLY PURIFIED PHOSPHATIDES FROM ANIMAL ORGANS | |
| JP2734136B2 (en) | Octadecenoic acid derivative and cell killer for cervical cancer cells containing the same as active ingredient | |
| RU2008895C1 (en) | Method of producing biologically active extract for confectionery articles | |
| RU2071337C1 (en) | Method of phospholipid complex preparing | |
| JP2757342B2 (en) | Isoindolinone derivative, cervical cancer cell killing agent containing the same as active ingredient, and method for producing the same | |
| RU2063242C1 (en) | Method of phosphatidyl choline preparing | |
| RU2698715C1 (en) | Method of producing unsaturated alkyl-glycerine esters of marine fats |