RU2195296C2 - Method of preparing gangliosides - Google Patents
Method of preparing gangliosidesInfo
- Publication number
- RU2195296C2 RU2195296C2 RU2000109192A RU2000109192A RU2195296C2 RU 2195296 C2 RU2195296 C2 RU 2195296C2 RU 2000109192 A RU2000109192 A RU 2000109192A RU 2000109192 A RU2000109192 A RU 2000109192A RU 2195296 C2 RU2195296 C2 RU 2195296C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- acetone
- gangliosides
- supernatant
- mixture
- chloroform
- Prior art date
Links
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 10
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims abstract 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims abstract 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 9
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 3
- OAIVIYSBZFEOIU-UHFFFAOYSA-N chloroform;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.ClC(Cl)Cl OAIVIYSBZFEOIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 6
- UXTMROKLAAOEQO-UHFFFAOYSA-N chloroform;ethanol Chemical compound CCO.ClC(Cl)Cl UXTMROKLAAOEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно лекарственным препаратам, содержащим материалы головного мозга млекопитающих животных, и может быть использовано при получении свободных от фосфолипидных примесей ганглиозидов, являющихся тканевыми рецепторами ряда биологически активных веществ и токсинов. The invention relates to medicine, namely to medicines containing materials of the brain of mammalian animals, and can be used to obtain phospholipid-free impurities of gangliosides, which are tissue receptors of a number of biologically active substances and toxins.
Актуальность задачи по очистке ганглиозидов от фосфолипидных примесей обусловлена тем, что в последнее время активно развиваются исследования терапевтического действия и антиинфекционной активности ганглиозидов [Ефременко В. И. Ганглиозиды - клеточные рецепторы для бактериальных энтеротоксинов. ЖМЭИ, 4, 1985, с. 96-100; Швец В.И., Краснопольский Ю.М. Липиды в лекарственных препаратах. Вест. акад. мед. наук СССР, 6, 1990, с. 22-24]. The urgency of the task of cleaning gangliosides from phospholipid impurities is due to the fact that recently studies of the therapeutic effect and anti-infective activity of gangliosides are actively developing [Efremenko V. I. Gangliosides - cell receptors for bacterial enterotoxins. ZhMEI, 4, 1985, p. 96-100; Shvets V.I., Krasnopolsky Yu.M. Lipids in drugs. West. Acad. honey. Sciences of the USSR, 6, 1990, p. 22-24].
Известные способы выделения ганглиозидов из общего хлороформметанольного экстракта липидов методом диализа или гель-фильтрации не исключают попадания в ганглиозидную фракцию нелипидных и фосфолипидных примесей [А.с. СССР 1022357, А 61 К 9/10, А 61 К 35/12, oп. 30.12.83, бюл. 48; Препаративная биохимия липидов. М.: Наука, 1981, с.259]. Known methods for the isolation of gangliosides from a common chloroform methanol extract of lipids by dialysis or gel filtration do not exclude non-lipid and phospholipid impurities from entering the ganglioside fraction [A.S. USSR 1022357, A 61 K 9/10, A 61 K 35/12, op. 12/30/83, bull. 48; Preparative biochemistry of lipids. M .: Nauka, 1981, p. 259].
Наиболее близким к заявляемому является способ получения ганглиозидов из мозговой ткани млекопитающих животных [А.с. СССР 1113743, G 01 N 33/48, оп. 15.09.84, Бюл. 34]. Closest to the claimed is a method for producing gangliosides from the brain tissue of mammalian animals [A.S. USSR 1113743, G 01 N 33/48, op. 09/15/84, Bull. 34].
Способ осуществляется следующим образом. Отделяют серое вещество головного мозга от белого. Серое вещество гомогенизируют с ацетоном из расчета 4 мл на 1 г водной ткани. Затем непрерывно перемешивают в течение 30 мин и фильтруют суспензию на воронке Бюхнера. The method is as follows. Separate the gray matter of the brain from white. The gray matter is homogenized with acetone at the rate of 4 ml per 1 g of aqueous tissue. Then it is continuously stirred for 30 minutes and the suspension is filtered on a Buchner funnel.
Полученный осадок дважды экстрагируют смесью хлороформ-этанол (1:1) из расчета 2 мл на 1 г исходной ткани. В течение 1 ч встряхивают на шуттеле и центрифугируют. Супернатанты собирают, а осадок вновь экстрагируют смесью хлороформ-этанол (1:1) из расчета 1 мл на 1 г исходной ткани. Эту суспензию нагревают на водяной бане 30 мин. при 50oС и центрифугируют в горячем виде. Супернатанты объединяют.The resulting precipitate was extracted twice with a mixture of chloroform-ethanol (1: 1) at the rate of 2 ml per 1 g of the original tissue. Shake for 1 hour on a shunt and centrifuge. Supernatants are collected and the pellet is again extracted with a mixture of chloroform-ethanol (1: 1) at the rate of 1 ml per 1 g of the starting tissue. This suspension is heated in a water bath for 30 minutes. at 50 o C and centrifuged hot. Supernatants combine.
Добавляют к полученному экстракту 5 объемов ацетона. Смесь ганглиозидов выпадает в осадок. После полного формирования осадка (через 15-20 мин) супернатант отсасывают сифоном, а смесь ганглиозидов собирают. 5 volumes of acetone are added to the obtained extract. A mixture of gangliosides precipitates. After the complete formation of the precipitate (after 15-20 minutes), the supernatant is sucked off by a siphon, and the ganglioside mixture is collected.
Недостатком прототипа является наличие в осадке ганглиозидов примесей фосфолипидов, что снижает их удельную биологическую активность. The disadvantage of the prototype is the presence in the sediment of gangliosides of impurities of phospholipids, which reduces their specific biological activity.
Задачей изобретения является очистка целевого продукта от примеси фосфолипидов. Технический результат изобретения проявляется в снижении выхода целевого продукта за счет его очистки от фосфолипидов и сохранения достаточной удельной биологической активности ганглиозидов. The objective of the invention is the purification of the target product from impurities of phospholipids. The technical result of the invention is manifested in a decrease in the yield of the target product due to its purification from phospholipids and the preservation of a sufficient specific biological activity of gangliosides.
Указанный технический результат достигается тем, что способ получения ганглиозидов осуществляется путем гомогенизации серого вещества мозговой ткани и обезвоживания ее ацетоном, экстрагирования смесью хлороформ с этанолом, отделения экстракта с последующей очисткой его добавлением ацетона сначала в соотношении 1,5-2,0:1 с отделением супернатанта, а затем в соотношении 5:1. The specified technical result is achieved by the fact that the method of producing gangliosides is carried out by homogenizing the gray matter of the brain tissue and dehydrating it with acetone, extracting it with a mixture of chloroform and ethanol, separating the extract, followed by purification with acetone, first in a ratio of 1.5-2.0: 1 with separation supernatant, and then in a 5: 1 ratio.
По отношению к прототипу заявляемый способ отличается тем, что перед осаждением целевого продукта проводится дополнительная очистка экстракта ацетоном в соотношении 1,5-2,0:1. In relation to the prototype of the claimed method is characterized in that before the precipitation of the target product is an additional purification of the extract with acetone in a ratio of 1.5-2.0: 1.
В процессе дополнительной очистки осаждаются фосфолипидные фракции и в супернатанте остаются очищенные ганглиозиды, при этом снижается выход целевого продукта и повышается его удельная биологическая активность, что подтверждается примерами его конкретного выполнения. In the process of additional purification, phospholipid fractions precipitate and purified gangliosides remain in the supernatant, while the yield of the target product decreases and its specific biological activity increases, which is confirmed by examples of its specific implementation.
Пример 1. Example 1
В качестве источника получения ганглиозидов используют головной мозг крупного рогатого скота. Отделяют серое вещество головного мозга от белого. Серое вещество в количестве 1000 г гомогенизируют в 4000 мл ацетона, затем непрерывно перемешивают в течение 12 ч при 20oС и суспензию фильтруют на воронке Бюхнера.A cattle brain is used as a source of ganglioside production. Separate the gray matter of the brain from white. The gray matter in an amount of 1000 g is homogenized in 4000 ml of acetone, then continuously stirred for 12 hours at 20 o C and the suspension is filtered on a Buchner funnel.
Полученный осадок экстрагируют 2000 мл смеси хлороформ-этанол (1:1) путем встряхивания на шуттеле в течение 1 ч при 20oС. Супернатант собирают, а осадок вновь экстрагируют 1000 мл смеси хлороформ-этанол (1:1) при 50oС в течение 30 мин и центрифугируют при данной температуре.The resulting precipitate was extracted with 2000 ml of a mixture of chloroform-ethanol (1: 1) by shaking on the shutter for 1 h at 20 o C. the Supernatant is collected, and the precipitate is again extracted with 1000 ml of a mixture of chloroform-ethanol (1: 1) at 50 o C for 30 minutes and centrifuged at this temperature.
Полученные супернатанты объединяют и добавляют 1,5 объема (4500 мл) охлажденного ацетона. После формирования осадка (через 15-20 мин) его отделяют фильтрацией, а к надосадочной жидкости добавляют до 5 объемов (15000 мл) охлажденного ацетона и опять формируют осадок, представляющий собой смесь ганглиозидов, который окончательно освобождают от супернатанта центрифугированием. The resulting supernatants are combined and 1.5 volumes (4500 ml) of chilled acetone are added. After the formation of a precipitate (after 15-20 minutes), it is separated by filtration, and up to 5 volumes (15000 ml) of cooled acetone are added to the supernatant and a precipitate is formed again, which is a mixture of gangliosides, which are finally freed from the supernatant by centrifugation.
Выход препарата ганглиозидов составил 3,8 г (0,38% от веса исходного сырья). Препарат содержит 5433400±42300 токсиннейтрализующих единиц, выявленных в тесте нейтрализации биологического действия холерогена в кожной пробе по методу Graig. The output of the ganglioside preparation was 3.8 g (0.38% of the weight of the feedstock). The preparation contains 5433400 ± 42300 toxin-neutralizing units identified in the neutralization test of the biological effect of cholerogen in the skin sample according to the Graig method.
Пример 2. Example 2
Выполняется аналогично примеру 1, за исключением того, что при предварительной очистке экстракта добавляют 1 объем (3000 мл) охлажденного ацетона. It is carried out analogously to example 1, except that during the preliminary purification of the extract add 1 volume (3000 ml) of chilled acetone.
Выход препарата ганглиозидов составил 4,6 г (0,46% от веса исходного сырья). Препарат содержит 5866700±32400 токсиннейтрализующих единиц, выявленных в тесте нейтрализации биологического действия холерогена в кожной пробе по методу Graig. The output of the ganglioside preparation was 4.6 g (0.46% of the weight of the feedstock). The preparation contains 5866700 ± 32400 toxin-neutralizing units identified in the neutralization test of the biological effect of cholerogen in the skin sample according to the Graig method.
Пример 3. Example 3
Выполняется аналогично примеру 1, за исключением того, что при предварительной очистке экстракта добавляют 2 объема (6000 мл) охлажденного ацетона. It is carried out analogously to example 1, except that when pre-cleaning the extract add 2 volumes (6000 ml) of chilled acetone.
Выход препарата ганглиозидов составил 1,5 г (0,15% от веса исходного сырья). Препарат содержит 5011500±52200 токсиннейтрализующих единиц, выявленных в тесте нейтрализации биологического действия холерогена в кожной пробе по методу Graig. The output of the ganglioside preparation was 1.5 g (0.15% of the weight of the feedstock). The preparation contains 5011500 ± 52200 toxin-neutralizing units detected in the neutralization test of the biological effect of cholerogen in the skin sample according to the Graig method.
Пример 4. Example 4
Выполняется аналогично примеру 1, исключая дополнительную очистку 1,5 объемами охлажденного ацетона. It is carried out analogously to example 1, excluding additional purification of 1.5 volumes of chilled acetone.
Выход препарата ганглиозидов составил 16 г (1,6% от веса исходного сырья). Препарат содержит 6122500±51500 токсиннейтрализующих единиц, выявленных в тесте нейтрализации биологического действия холерогена в кожной пробе по методу Graig. The output of the ganglioside preparation was 16 g (1.6% of the weight of the feedstock). The preparation contains 6122500 ± 51500 toxin-neutralizing units identified in the neutralization test of the biological effect of cholerogen in the skin sample according to the Graig method.
Как показывают результаты экспериментов, оптимальным решением задачи по очистке целевого продукта является дополнительная очистка экстракта 1,5-2,0 объемами охлажденного ацетона, так как при использовании 1 объема охлажденного ацетона (пример 2) фосфолипидные примеси удаляются не полностью, о чем свидетельствует отсутствие изменения выхода продукта по сравнению с прототипом и снижение удельной биологической активности по сравнению с примером 1. Увеличение же количества ацетона до 2-х объемов (пример 3) практически не изменяет результатов примера 1. As the experimental results show, the optimal solution to the task of cleaning the target product is additional purification of the extract with 1.5-2.0 volumes of chilled acetone, since when using 1 volume of chilled acetone (example 2) phospholipidic impurities are not completely removed, as evidenced by the absence of changes the yield of the product compared to the prototype and the decrease in specific biological activity compared to example 1. An increase in the amount of acetone to 2 volumes (example 3) practically does not change the results Reamer 1.
Таким образом, заявляемый способ имеет преимущества перед известными аналогичными решениями по простоте его осуществления и чистоте целевого продукта. Thus, the claimed method has advantages over known similar solutions in terms of ease of implementation and purity of the target product.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000109192A RU2195296C2 (en) | 2000-04-12 | 2000-04-12 | Method of preparing gangliosides |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000109192A RU2195296C2 (en) | 2000-04-12 | 2000-04-12 | Method of preparing gangliosides |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000109192A RU2000109192A (en) | 2002-01-10 |
| RU2195296C2 true RU2195296C2 (en) | 2002-12-27 |
Family
ID=20233263
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000109192A RU2195296C2 (en) | 2000-04-12 | 2000-04-12 | Method of preparing gangliosides |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2195296C2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2305548C1 (en) * | 2006-03-30 | 2007-09-10 | Тихоокеанский Институт Биоорганической Химии Дальневосточного Отделения Российской Академии Наук (Тибох Дво Ран) | Method for complex reprocessing of cake urchins |
| RU2483736C2 (en) * | 2007-06-18 | 2013-06-10 | Лаборатуар Медидом С.А. | Method for preparing pure monosialoganglioside gm1 for medical applications |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2320760A1 (en) * | 1975-08-13 | 1977-03-11 | Fidia Spa | Mixtures of mono-, di-, tri- and tetra-sialo-gangliosides - for treatment of disorders due to conduction of nervous stimuli of the central and peripheral nervous systems |
| US4710490A (en) * | 1985-10-01 | 1987-12-01 | Angio Medical Corporation | Compositions containing ganglioside molecules with enhanced angiogenic activity |
| EP0409473A3 (en) * | 1989-07-12 | 1992-04-29 | Carlos Mammarella | A process for obtaining the gangliosides from nervous tissue of mammalians and for the treatment of psychoorganic diseases with said material compositons |
-
2000
- 2000-04-12 RU RU2000109192A patent/RU2195296C2/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2320760A1 (en) * | 1975-08-13 | 1977-03-11 | Fidia Spa | Mixtures of mono-, di-, tri- and tetra-sialo-gangliosides - for treatment of disorders due to conduction of nervous stimuli of the central and peripheral nervous systems |
| US4710490A (en) * | 1985-10-01 | 1987-12-01 | Angio Medical Corporation | Compositions containing ganglioside molecules with enhanced angiogenic activity |
| US4710490B1 (en) * | 1985-10-01 | 1989-08-29 | ||
| EP0409473A3 (en) * | 1989-07-12 | 1992-04-29 | Carlos Mammarella | A process for obtaining the gangliosides from nervous tissue of mammalians and for the treatment of psychoorganic diseases with said material compositons |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2305548C1 (en) * | 2006-03-30 | 2007-09-10 | Тихоокеанский Институт Биоорганической Химии Дальневосточного Отделения Российской Академии Наук (Тибох Дво Ран) | Method for complex reprocessing of cake urchins |
| RU2483736C2 (en) * | 2007-06-18 | 2013-06-10 | Лаборатуар Медидом С.А. | Method for preparing pure monosialoganglioside gm1 for medical applications |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2195296C2 (en) | Method of preparing gangliosides | |
| KR920701225A (en) | Methods for the preparation and purification of glycotin cyclic feed mixtures uncontaminated by non-traditional viruses | |
| RU2305548C1 (en) | Method for complex reprocessing of cake urchins | |
| RU2017751C1 (en) | Method of hyaluronic acid preparing | |
| RU2089204C1 (en) | Method of preparing peptides recovering the prostate gland function | |
| SU1113743A1 (en) | Ganglyozide production method | |
| RU2192265C2 (en) | Method for obtaining the complex of phospholipids | |
| RU2649014C1 (en) | Method for obtaining the concentrate of unsaturated alkyl glycidyl ethers from sea lipides | |
| RU2274460C2 (en) | Cerebroside-cerebroside sulfate-containing lipid complex and method for its preparing | |
| WO2007123425A1 (en) | Process for separating lipid materials | |
| SU1657491A1 (en) | Method of producing taurin | |
| RU2054943C1 (en) | Method of hyaluronidase preparing | |
| FR2635533A1 (en) | PROCESS FOR PRODUCING THE MIXTURE OF RIBONUCLEOTIDES | |
| RU2435862C1 (en) | Method for producing high-polymer rna from used beer yeast | |
| RU2017496C1 (en) | Method of dna sodium salt isolation | |
| CN102190689A (en) | Purification method for ceramide in amorphophalms konjac | |
| KR100715206B1 (en) | How to prepare deculinol from Angelica gigas in high yield | |
| JP2757342B2 (en) | Isoindolinone derivative, cervical cancer cell killing agent containing the same as active ingredient, and method for producing the same | |
| RU2055079C1 (en) | Method for production of preparation of hyaluronic acid | |
| RU94012010A (en) | Method of nervone preparing | |
| RU2078345C1 (en) | Method of preparing serum protein preparations influencing activity of oxidative energetic exchange | |
| SU745478A1 (en) | Method of producing protein from egg albumin | |
| SU1128955A1 (en) | Strain astasia longa a-60,producer of biologically active complex of lipids and method of obtaining the same | |
| RU2099057C1 (en) | Method of cholesterol preparing | |
| JPH10158184A (en) | Cell adhesion inhibitor |