MX2007016403A

MX2007016403A - Composicion inmunogenica.

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Publication number: MX2007016403A
Application number: MX2007016403A
Authority: MX
Inventors: Philippe Denoel; Jan Poolman; Ralph Leon Biemans; Dominique Boutriau; Carine Capiau; Pierre Duvivier
Original assignee: Glaxosmithkline Biolog Sa
Priority date: 2005-06-27
Filing date: 2006-06-23
Publication date: 2008-03-07
Also published as: SI1896061T1; PE20070499A1; KR20080018226A; AP2436A; BE2012C042I2; AU2006263936A1; EA200702576A1; MY147490A; MA29993B1; EP1896064A2; ATE462444T1; US8398983B2; TWI422386B; EA013374B1; KR101351870B1; EP2351578A1; EP2283857B1; CN102526723A; EP1896065B2; EA200702577A1

Abstract

La presente solicitud da a conocer una composicion inmunogenica, al cual comprende cuando menos 2 sacaridos capsulares diferentes de N. meningitidis, en donde uno o mas se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA, MenC, MenY, MenW, los cuales se conjugan con una proteina portadora, en donde la proporcion de sacarido:proteina (peso/peso) es de entre 1:2 y 1:5, y uno o mas sacaridos diferentes se seleccionan a partir de un segundo grupo que consiste en MenA, MenC, MenY, y MenW, los cuales se conjugan con una proteina portadora, en donde la proporcion de sacarido:proteina (peso/peso) es de entre 5:1 y 1:1.99.

Description

COM POSICIÓN INMUNOGENICA La presente invención se refiere a composiciones inmunogénicas que comprenden sacáridos capsulares bacterianos conjugados con una proteína portadora, en particular los sacáridos de N. meningitidis. Adicionalmente se refiere a vacunas y a kits de vacunas que comprenden estos conjugados de sacáridos, a procesos para elaborar las composiciones inmunogénicas y las vacunas, y al uso de las vacunas y de las composiciones ¡nmunogénicas de la invención en terapia. También se refiere a métodos para inmunizar contra la infección utilizando los conjugados de sacáridos, y al uso de los conjugados de sacárídos en la fabricación de un medicamento.

Neisseria meningitidis es un patógeno humano gram-negativo que provoca meningitis bacteriana. Basándose en el polísacárido bacterial del organismo, se han identificado doce serogrupos de Neisseria meningitidis (A, B, C, H , I, K, L, 29E, W1 35, X, Y, y Z). El serogrupo A (MenA) es la causa más común de la enfermedad epidémica en el África del sub-Sahara. Los serogrupos B y C son responsables de la mayoría de los casos en los países en desarrollo, siendo los casos restantes causados por W135 e Y. En la técnica se conocen composiciones inmunogénícas que comprenden sacáridos de N. meningitidis conjugados con proteínas portadoras; teniendo la proteína portadora el efecto conocido de convertir el antígeno de polisacárido independiente de T en un antígeno dependiente de T capaz de desencadenar una respuesta de memoria inmune. Por ejemplo, la Publicación Internacional Número WO 02/58737 da a conocer una vacuna que comprende polisacáridos capsulares purificados a partir de N. meningitidis, serogrupos A, C, W1 35, e Y, conjugados con una proteína portadora. Sin embargo, esta solicitud enseña que todos los polisacáridos deben conjugarse esencialmente de la misma manera (a través del mismo enlazador con la misma proteína portadora) . Sigue existiendo una necesidad de desarrollar mejores vacunas conjugadas contra meningitis por Neisserial. La presente invención se refiere a la provisión de una vacuna conjugada de polisacárido meningocócico, en donde la conjugación de cada polisacárido se hace a la medida (en lugar de ser uniforme), para lograr una vacuna de conjugación eficaz. En particular, es conveniente combinar ciertos sacáridos meningocócícos conjugados con sus proteínas portadoras en una alta proporción de sacárido:proteína, con otros en una baja proporción. De conformidad con lo anterior, en un aspecto de la presente invención, proporciona una composición ¡nmunogénica, la cual comprende cuando menos dos sacáridos capsulares diferentes de N. meningitidis, en donde uno o más se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA, MenC, MenY, y MenW, los cuales se conjugan con una proteína portadora, en donde la proporción del sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 1 :2 y 1 :5, y uno o más sacáridos diferentes se seleccionan a partir de un segundo grupo que consiste en MenA, MenC, MenY y MenW, los cuales se conjugan con una proteína portadora, en donde la proporción del sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 5:1 y 1:1.99. En una vacuna de MenW, la proporción del sacárido MenW a la proteína portadora puede ser de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1:1 y 1:1.7, de entre 1:1.2 y 1:1.6, o de entre 1:1.4 y 1:1.5 (peso/peso). En una vacuna de MenY, la proporción del sacárido MenY a la proteína portadora puede ser de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.9, de entre 1:1 y 1:1.8, de entre 1:1.1 y 1:1.6, o de entre 1:1.3 y 1:1.4 (peso/peso). En una vacuna de MenA, la proporción del sacárido MénA a la proteína portadora puede ser de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.4 y 1:4, de entre 1:2.7 y 1:3.5, o de entre 1:2.9 y 1:3.1 (peso/peso). En una vacuna de MenC, la proporción del sacárido MenC a la proteína portadora puede ser de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1.3:1 y 1:1.6, de entre 1.2:1 y 1:1.4, o de entre 1.1:1 y 1:1.2 (peso/peso), o de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.5 y 1:4.5, de entre 1:2.7 y 1:4.3, de entre 1:3 y 1:4, o de entre 1:3.3 y 1:3.5 (peso/peso). La proporción del sacárido a la proteína portadora (peso/peso) en un conjugado, se puede determinar utilizando el conjugado esterilizado. La cantidad de proteína se determina empleando un ensayo de Lowry (por ejemplo, Lowry y colaboradores, (1951) J. Biol. Chem. 193, 265-275, o Peterson y colaboradores, Analytical Biochemistry 100, 201-220 (1979)), y la cantidad de sacárido se determina utilizando ICP-OES (espectroscopia de emisión óptica de plasma inductivamente acoplada) para MenA, el ensayo de DMAP para MenC, y el ensayo de Resorcinol para MenW y MenY (Monsigny y colaboradores, (1988) Anal . Biochem. 175, 525-530) . Con frecuencia, los sacáridos conjugados a través de un enlazador tienen una incorporación más alta de proteína portadora que cuando se enlazan directamente con la proteína portadora. En una vacuna de MenAC de la invención, por ejemplo, el sacárido MenA se puede conjugar con una proteína portadora a través de un enlazador y MenC directamente. En una vacuna de MenCY, MenC se puede conjugar a través de un enlazador y MenY directamente. En una vacuna de MenACWY, MenA Se puede conjugar a través de un enlazador y MenCWY directamente, o MenAC se puede conjugar a través de un enlazador y MenWY directamente. En un aspecto adicional de la invención, se proporciona una composición inmunogéníca que comprende cuando menos 2 sacárídos diferentes conjugados por separado con el mismo tipo de proteína portadora (por ejemplo, DT, CRM 197, Proteína D, o TT), en donde uno o más sacáridos se conjugan con la proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 1 :2 y 1 :5, y uno o más sacárídos diferentes se conjugan con la proteína portadora, en donde la proporción de sacárido: proteína (peso/peso) es de entre 5: 1 y 1 : 1 .99. Por ejemplo, en una vacuna de MenAC, MenA se puede conjugar con la proteína portadora con una proporción de sacárido:proteína (peso/peso) de entre 1 :2 y 1 :5, y MenC se puede conjugar con la proteína portadora con una proporción de sacárido:proteína (peso/peso) de entre 5:1 y 1 :1 .99. En una vacuna de MenCY, MenC se puede conjugar con la proteína portadora con una proporción de sacárido:prote ína (peso/peso) de entre 1 :2 y 1 :5 , y MenY se puede conjugar con la proteína portadora con una proporción de sacárido:proteína (peso/peso) de entre 5: 1 y 1 : 1 .99. En una vacuna de MenACWY, MenAC se puede conjugar con la proteína portadora con una proporción de sacárido:proteína (peso/peso) de entre 1 :2 y 1 :5, y MenWY se puede conjugar con la proteína portadora con una proporción de sacárido:proteína (peso/peso) de entre 5: 1 y 1 : 1 .99. , o MenA se puede conjugar con la proteína portadora con una proporción de sacárído:proteína (peso/peso) de entre 1 :2 y 1 :5, y MenCWY se puede conjugar con la proteína portadora con una proporción de sacárido:proteína (peso/peso) de entre 5: 1 y 1 : 1 .99. De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un método para inmunizar a un huésped humano contra una enfermedad causada por Neisseria meningitidis, el cual comprende administrar al huésped una dosis ¡nmunoprotectora de la composición inmunogéníca o vacuna de la invención. De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona una composición i nmunogéníca de la invención para utilizarse en el tratamiento o e n la prevención de una enfermedad causada por Neisseria meningitidis.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona el uso de la composición inmunogénica o vacuna de la invención , en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de enfermedades causadas por Neisseria meningitidis. Descripción de las Figuras Figura 1 -A - Diagrama de barras que muestra las respuestas de GMC en un ELISA anti-MenY. ENYTT012 es un conjugado de MenY-TT preparado a partir del polisacárido nativo MenY. ENYTT014 es un conjugado de MenY-TT preparado a partir de un polisacárido de MenY microfluidizado, que se ha sometido a 40 ciclos de microfluídización. ENYTT015bis es un conjugado de MenY-TT preparado a partir del polisacárido MenY microfluidizado, que se ha sometido a 20 cíelos de mícrofluidízación. Figura 1 -B - Diagrama de barras que muestra las respuestas de GMT en un ensayo SBA anti-MenY. ENYTT012 es un conjugado de MenY-TT preparado a partir del polísacárido MenY nativo. ENYTT014 es un conjugado de MenY-TT preparado a partir del polisacárido MenY microfluidizado, que se ha sometido a 40 ciclos de microfluidización. ENYTT015bis es un conjugado de MenY-TT preparado a partir de un polisacárido MenY microfluidizado, que se ha sometido a 20 ciclos de microfluidización. Descripción Detallada En un aspecto de la presente invención, se proporciona una composición inmunogénica que comprende cuando menos dos sacáridos capsulares diferentes de N. meningitidis, en donde uno o más se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA (sacárido capsular del serogrupo A de N. meningitidis), MenC (sacárido capsular del serogrupo C de N. meningitidis) , MenY (sacárido capsular del serogrupo Y de N. meningitidis) y MenW (sacárido capsular del serogrupo W135 de N. meningitidis) , los cuales se conjugan con una proteína portadora, en donde la proporción del sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 1 :2 y 1 :5, y uno o más sacáridos diferentes se seleccionan a partir de un segundo grupo que consiste en MenA, MenC, MenY y MenW, los cuales se conjugan con una proteína portadora, en donde la proporción del sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 5:1 y 1 : 1 .99. De una manera más específica, la composición comprende cuando menos 2 sacáridos capsulares diferentes de N. meningitidis, en donde uno o más se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA y MenC, los cuales se conjugan con una proteína portadora, en donde la proporción del sacárido:proteína (peso/peso) es de entre ' 1 :2 y 1 :5, y uno o más sacáridos diferentes se seleccionan a partir de un segundo grupo que consiste en MenC, MenY y MenW, los cuales se conjugan con una proteína portadora, en donde la proporción del sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 5: 1 y 1 : 1 .99. En un aspecto, la composición inmunogénica tiene el sacando MenW, en donde la proporción del sacárido MenW a la proteína portadora es de entre 5: 1 y 1 : 1 .99, de entre 2: 1 -1 : 1 .99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1:1 y 1:1.7, de entre 1:1.2 y 1:1.6, o de entre 1:1.4 y 1:1.5 (peso/peso). En un aspecto adicional, la composición ¡nmunogénica tiene el sacárido MenY, en donde la proporción del sacárido MenY a la proteína portadora es de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.9, de entre 1:1 y 1:1.8, de entre 1:1.1 y 1:1.6, o de entre 1:1.3 y 1:1.4 (peso/peso). En un aspecto adicional, la composición inmunogéníca comprende el sacárido MenA, en donde la proporción del sacárido MenA a la proteína portadora es de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.4 y 1:4, de entre 1:2.7 y 1:3.5, o de entre 1:2.9 y 1:3.1 (peso/peso) o de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1.3:1 y 1:1.6, de entre 1.2:1 y 1:1.4, o de entre 1.1:1 y 1:1.2 (peso/peso). En un aspecto adicional, la composición ¡nmunogénica comprende el sacárido MenC, en donde la proporción del sacárido MenC a la proteína portadora es de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1.3:1 y 1:1.6, de entre 1.2:1 y 1:1.4, o de entre 1.1:1 y 1:1.2 (peso/peso), o de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.5 y 1:4.5, de entre 1:2.7 y 1:4.3, de entre 1:3 y 1:4, o de entre 1:3.3 y 1:3.5 (peso/peso). De una manera más específica, el primer grupo puede consistir en MenA y MenC, y el segundo grupo consiste en MenC, MenY y MenW. Las modalidades particulares de la invención son composiciones inmunogénicas que comprenden: el sacárido capsular MenA, en donde la proporción del sacárido MenA a la proteína portadora es de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.4 y 1:4, de entre 1:2.7 y 1:3.5, o de entre 1:2.9 y 1:3.1 (peso/peso) [el cual se puede conjugar a través de un enlazador con la proteína portadora] y el sacárido capsular MenC, en donde la proporción del sacárido MenC a la proteína portadora es de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1.3:1 y 1:1.6, de entre 1.2:1 y 1:1.4, o de entre 1.1:1 y 1:1.2 (peso/peso) [el cual opcíonalmente se puede conjugar directamente con la proteína portadora]; el sacárido capsular MenC, en donde la proporción del sacárído MenC a la proteína portadora es de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.4 y 1:4, de entre 1:2.7 y 1:3.5, o de entre 1:2.9 y 1:3.1 (peso/peso) [el cual se puede conjugar' a través de un enlazador con la proteína portadora], y el sacárído capsular MenY, en donde la proporción del sacárido MenY a la proteína portadora es de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1.3:1 y 1:1.6, de entre 1.2:1 y 1:1.4, o de entre 1.1:1 y 1:1.2 (peso/peso) [el cual opcionalmente se puede conjugar directamente con la proteína portadora]; los sacáridos capsulares MenA y MenC, en donde la proporción de los sacáridos Men A y C a las proteínas portadoras es de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.4 y 1:4, de entre 1:2.7 y 1:3.5, o de entre 1:2.9 y 1:3.1 (peso/peso) [y los cuales se pueden conjugar a través de un enlazador con las proteína portadoras], y los sacáridos capsulares MenY y Men W,' en donde la proporción de los sacáridos Men Y y W a las proteínas [ portadoras es de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1.3:1 y 1:1.6, de entre 1.2:1 y 1:1.4, o de entre 1.1:1 y 1:1.2 (peso/peso) [y los cuales opcionalmente se pueden conjugar directamente con las proteínas portadoras]; el sacárido capsular MenA, en donde la proporción del sacárido MenA a la proteína portadora es de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.4 y 1:4, de entre 1:2.7 y 1:3.5, o de entre 1:2.9 y 1:3.1 (peso/peso) [el cual se puede conjugar a través de un enlazador con la proteína portadora], y los sacáridos capsulares MenC, MenY y MenW, en donde la proporción de los sacáridos Men Y y W y C, a las proteínas portadoras es de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1.3:1 y 1:1.6, de entre 1.2:1 y 1:1.4, o de entre 1.1:1 y 1:1.2 (peso/peso) [y los cuales opcionalmente se pueden conjugar directamente con las proteínas portadoras]. En cualquiera de estas modalidades, también se puede incluir un conjugado de Hib, el cual se enlaza con una proteína portadora (véase la lista de portadoras anteriormente y más adelante, por ejemplo TT, y para las proporciones de sacárido:proteína), directamente o a través de un enlazador. El término "sacárido", a través de toda esta memoria descriptiva, puede indicar polisacárido u oligosacárído, e ¡ncluye ambos. Los polisacáridos se aislan a partir de bacterias, o se aislan a partir de bacterias y se dimensionan hasta algún grado mediante métodos conocidos (véase, por ejemplo, las Patentes Europeas Números EP497525), y opcionalmente mediante mícrofluidización. Los polisacáridos se pueden dimensionar con el objeto de reducir la viscosidad en las muestras de polisacáridos, y/o para mejorar la posibilidad de filtración para los productos conjugados. Los oligosacáridos tienen un bajo número de unidades de repetición (típicamente de 5 a 30 unidades de repetición) , y típicamente son polisacáridos hid rol izados . Cada sacárido capsular de N. meningitidis (y/o Hib) se puede conjugar con una proteína portadora independientemente seleccionada a partir del grupo que consiste en TT, DT, CRM 1 97, fragmento C de TT, y prote ína D . Más adelante se presenta una lista más completa de las proteínas portadoras que se pueden utilizar en los conjugados de la invención . Aunque uno o más sacáridos capsulares de N. meningitidis (y/o Hib) se pueden conjugar con diferentes proteínas portadoras unos de otros, en una modalidad , todos se conj ugan con la misma prote ína portadora. Por ejemplo, se pueden conjugar todos con la misma proteína portadora seleccionada a partir del grupo que consiste en TT, DT, CRM1 97, fragmento C de TT, y proteína D. En este contexto, se puede considerar que CRM 1 97 y DT son la misma proteína portadora, debido a que difieren solamente por un aminoácido. En una modalidad , todos los sacáridos capsulares de N. meningitidis (y/o Hib) presentes se conjugan con TT. Si la proteína portadora es la misma para dos o más sacáridos en la composición , el sacárido se podría conjugar con la misma molécula de la proteína portadora (moléculas portadoras que tienen dos sacáridos dife rentes más conjugados con ellas) [véase, por ejemplo, la Publicación Internacional Número WO 04/083251 ; por ejemplo, una sola proteína portadora se podría conj ugar con MenA y MenC; MenA y MenW; MenA y MenY; MenC y MenW; MenC y MenY; MenW y MenY; MenA, MenC y MenW; MenA, MenC y MenY; MenA, MenW y MenY; MenC, MenW y MenY; MenA, MenC, MenW y MenY; Hib y MenA; Hib y MenC; Hib y MenW; o Hib y MenY]. De una manera alternativa, cada uno de los sacáridos se puede conjugar por separado con diferentes moléculas de la proteína portadora (teniendo cada molécula de la proteína portadora solamente un tipo de sacárido conjugado con ella). Las composiciones inmunogénicas del primer aspecto de la invención también pueden tener cualquiera o todas las características adicionales del segundo aspecto de la invención, y viceversa. En un segundo aspecto de la invención, se presenta una composición inmunogénica que comprende cuando menos dos conjugados de sacáridos diferentes, conjugados por separado con el mismo tipo de proteína portadora, en donde uno o más sacáridos se conjugan con la proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 1 :2 y 1 :5 [una alta proporción], y uno o más sacáridos diferentes se conjugan con la proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 5: 1 y 1 : 1 .99 [una baja proporción]. "Se conjugan por separado con el mismo tipo de proteína portadora", significa que los sacáridos se conjugan con la misma portadora individualmente (es deci r, no se conjugan diferentes sacáridos con la misma molécula de la misma proteína portadora).

Los sacáridos capsulares se pueden conjugar con el mismo tipo de proteína portadora independientemente seleccionada a partir del grupo que consiste en TT, DT, CRM 197, fragmento C de TT, y proteína D. Más adelante se presenta una lista más completa de las proteínas portadoras que se pueden utilizar en los conjugados de la invención. En este contexto, C RM 197 y DT se pueden considerar como la misma proteína portadora, debido a que solamente difieren por un aminoácido. En una modalidad, todos los sacáridos capsulares presentes se conjugan con TT. Los sacáridos de alta proporción (1 :2 a 1 :5) y de baja proporción (5:1 a 1 :1 .99) se pueden seleccionar a partir del grupo que consiste en: sacárido capsular del serogrupo A de N. meningitidis (MenA), sacárido capsular del serogrupo C de N. meningitidis (MenC); sacárido capsular del serogrupo Y de N. meningitidis (MenY), sacárido capsular del serogrupo W de N. meningitidis (MenW), sacárido capsular tipo b de H. influenzae (Hib), sacárido capsular del grupo I de Streptococcus grupo B, sacárido capsular del grupo I I de Streptococcus grupo B, sacárido capsular del grupo l l l de Streptococcus G rupo B, sacárido capsular del grupo IV de Streptococcus grupo B, sacárído capsular del grupo V de Streptococcus grupo B, sacárido capsular tipo 5 de Staphylococcus aureus, sacárido capsular tipo 8 de Staphylococcus aureus, sacárido Vi de Salmonella typhi, LPS de N. meningitidis (tal como L3 y/o L2), LPS de M. catarrhalis, LPS de H. influenzae, y de cualquiera de los sacáridos neumocócicos capsulares, tales como de los serotipos: 1 , 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 1 1 A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 1 9A, 1 9F, 20, 22F, 23F, ó 33F. En una modalidad, la composición inmunogénica de la invención consiste en , o comprende, dos o más sacáridos diferentes del mismo género de bacteria (por ejemplo, Neisseria, Streptococcus, Staphylococcus, o Haemophylus). En una modalidad, MenA es un sacárido de alta proporción; en otra, Men W es un sacárido de baja proporción; en otra, MenY es un sacárido de baja proporción; en otra, MenC es un sacárido de alta proporción; en otra, MenC es un sacárido de baja proporción; en otra, Hib es un sacárido de alta proporción. Las vacunas que comprenden MenA/C pueden ser de alta/baja proporción, respectívamente, las vacunas que comprenden MenC/Y pueden ser de alta/baja proporción, respectivamente, las vacunas que comprenden MenA/C/W/Y pueden ser de alta/alta/baja/baja proporción, respectivamente, y las vacunas que comprenden MenA/C/W/Y pueden ser de alta/baja/baja/baja proporción , respectivamente. Consideraciones Generales en los Aspectos de la Invención. Los sacáridos de la invención (en particular los sacáridos de N. meningitidis y/o el sacárido capsular de Hib) , incluidos en las composiciones farmacéuticas (inmunogénicas) de la invención, se conjugan con una proteína portadora, tal como toxoíde de tétanos (TT), fragmento C de toxoide de tétanos, mutantes no tóxicos de toxina de tétanos [observe que se considera que todas estas variantes de TT son el mismo tipo de proteína portadora para los propósitos de esta invención], toxoide de difteria (DT), CRM197, otros mutantes no tóxicos de toxina de difteria (tales como CRM 1 76, CRM 197, CRM228, CRM 45 (Uchida y colaboradores, J. Biol. Chem. 218:3838-3844, 1 973) ; CRM 9, CRM 45, CRM 1 02, CRM 103, y CRM 1 07, y otras mutaciones descritas por Nicholls y Youle en Genetically Engíneered Toxins, Editor: Frankel , Maecel Dekker Inc. , 1 992; supresión o mutación de Glu-148 a Asp, Gln , ó Ser, y/o Ala 1 58 a Gly, y otras mutaciones dadas a conocer en las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números US4709017 ó US 4950740; mutación de cuando menos uno o más residuos Lys 516, Lys 526, Phe 530, y/o Lys 534, y otras mutaciones dadas a conocer en las Patentes de los' Estados Unidos de Norteamérica Números US 591 7017 ó US 6455673; o fragmentos dados a conocer en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 584371 1 ] (observe que todas estas variantes de DT se consideran del mismo tipo de proteína portadora para los propósitos de esta invención) , neumolisina néumocócica (Kuo y colaboradores (1 995) Infect. Immun. 63; 2706-13), OM PC (proteína de membrana externa meníngocócica - usualmente extraída de N. meningitidis, serogrupo B - Patente Europea Número EP0372501 ) , péptidos sintéticos (Patentes Europeas Números EP0378881 , EP0427347), proteínas de choque por calor (Publicaciones Internacionales Números WO 93/17712, WO 94/03208) , proteínas de tosferina (Publicación Internacional Número WO98/58668, y Patente Europea Número EP0471 1 77) , citoquinas, linfocinas, factores de crecimiento u hormonas (Publicación I nternacional Número WO 91 /01 146), proteínas artificiales que comprenden múltiples epítopos de células-T CD4+ humanas a partir de diferentes antígenos derivados de patógenos (Falugi y colaboradores (2001 ) Eur. J. Immunol. 31 ; 381 6-3824), tales como proteína N1 9 (Baraldoi y colaboradores (2004), Infecí. Immun. 72; 4884-7), proteína superficial neumocócica PspA (Publicación Internacional Número WO 02/091998) , proteínas de absorción de hierro (Publicación Internacional Número WO 01 /72337), toxina A ó B de C. difficile (Publicación Internacional Número WO 00/61761 ) o proteína D (Patente Europea Número 59461 0 y Publicación I nternacional Número WO 00/56360). En una modalidad, la composición inmunogénica de la invención utiliza el mismo tipo de proteína portadora (independientemente) en cuando menos dos, tres, cuatro, o cada uno de los sacáridos (por ejemplo, los sacáridos capsulares de N. meningitidis, y/o Hib) contenidos en la misma. En una modalidad en donde están presentes los sacáridos capsulares de N. meningitidis y Hib, se puede conjugar Hib con la misma proteína portadora que los cuando menos 2, 3, ó 4, o cada uno de los sacáridos N. meningitidis. Por ejemplo, se conjugan independientemente dos, tres, o cuatro de los sacáridos de N. meningitidis (Men A, C, Y, W) con toxoide de tétanos para hacer 2, 3, ó 4 conj ugados, y opcionalmente también se conjuga Hib con TT. En una modalidad, la composición inmunogénica de la invención comprende un sacárido de N. meningitidis conjugado con una proteína portadora seleccionada a partir del grupo que consiste en TT, DT, CRM 197, fragmento C de TT, y proteína D. En una modalidad, la composición inmunogénica de la invención comprende un sacárido de Hib conjugado con una proteína portadora seleccionada a partir del grupo que consiste en TT, DT, CRM 1 97, fragmento C de TT, y proteína D. La composición ¡nmunogénica de la invención opcionalmente comprende cuando menos un conjugado de sacárido meningocócíco (por ejemplo, MenA; MenC; MenW; MenY; MenA y MenC; MenA y MenW; MenA y MenY; MenC y MenW; MenC y MenY; MenW y MenY; MenA, MenC y MenW; MenA, MenC, y MenY; MenA, MenW y MenY; MenC, MenW, y MenY, ó MenA, MenC, 'MenW y MenY) que tiene una proporción del sacárido Men a la proteína portadora de entre 1 :5 y 5:1 , de entre 1 :2 y 5:1 , de entre 1 :0.5 y 1 :2.5, o de entre 1 : 1 .25 y 1 :2.5 (peso)peso). La composición inmunogénica de la invención comprende opcionalmente un conjugado de sacárido de Hib que tiene una proporción de Hib a la proteína portadora de entre 1 :5 y 5: 1 , de entre 1 :2 y 2: 1 ; de entre 1 : 1 y 1 :4; de entre 1 :2 y 1 :3.5; o de alrededor o exactamente 1 :2.5 ó 1 :3 (peso/peso). En una modalidad de la composición inmunogénica de la invención , los sacáridos de N. meningitidis y/o el sacárido de Hib se conjugan con la proteína portadora por medio de un enlazador, por ejemplo un enlazador bifuncional . El enlazadores opcionalmente heterobifuncional y/u homobifuncional , teniendo, por ejemplo, un grupo amino reactivo y un grupo de ácido carboxílíco reactivo, dos grupos amino reactivos, o dos grupos de ácido carboxílico reactivos. El enlazador tiene, por ejemplo, entre 4 y 20, entre 4 y 12, entre 5 y 10 átomos de carbono. Un posible enlazador es ADH . Otros enlazadores incluyen B-propionamido (Publicación I nternacional Número WO 00/10599) , nitro-fenil-etil-amina (Gever y colaboradores (1979) Med. Microbiol. immunol. 165; 171 -288) , haluros de halo-alquilo (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US4057685) , enlaces glicosídicos (Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números US4673574 y US4808700), diamina de hexano y ácido 6-amino-caproico (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US4459286). Los conjugados de sacáridos presentes en las composiciones inmunogénicas de la invención se pueden preparar mediante cualquier técnica de acoplamiento conocida. El método de conjugación se puede apoyar en la activación del sacárido con tetrafluoro-borato de 1 -ciano-4-dimetil-amino-piridinio (CDAP), para formar un éster de cianato. Por lo tanto, el sacárido activado se puede acoplar directamente o por medio de un grupo espaciador (enlazador) con un grupo amino sobre la proteína portadora. Por ejemplo, el espaciador podría ser cistamina o cisteamina, para dar un polísacárido tiolado, el cual se podría acoplar con la portadora por medio de un enlace de tioéter obtenido después de la reacción con una proteína portadora activada por maleimida (por ejemplo, utilizando GMBS) , o una proteína portadora halo-acetilada (por ejemplo, utilizando yodo-acetimidina o bromoacetato de bromoacetato de N-succinimidilo) . Opcionalmente, el éster de cianato (opcionalmente hecho mediante química de CDAP) se acopla con hexan-diamina o ADH , y el sacárido amino-derivado se conjuga con la proteína portadora utilizando la química de carbodi-imida (por ejemplo, EDAC ó EDC) por medio de un grupo carboxilo sobre la proteína portadora. Estos conjugados se describen en la Solicitud Publicada del TCP Número WO 93/15760, Uniformed Services University, y en las Publicaciones Internacionales Números WO 95/08348 y WO 95/29094. Otras técnicas adecuadas utilizan carbiinidas, hidrazidas, esteres activos, norborano, ácido p-nitro-benzoico, N-hidroxi-succinimida, S-NHS, EDC, TSTU . Muchas se describen en la Publicación Internacional Número WO 98/42721 . La conjugación puede involucrar un enlazador de carbonílo, el cual se puede formar mediante la reacción de un grupo hídroxilo libre del sacárido con CDI (Bethell y colaboradores, J. Biol. Chem. 1979, 254; 2572-4; Hearn y colaboradores, J. Chromatogr. 1 981 , 218; 509-18) , seguida por la reacción con una proteína para formar un enlace de carbamato. Esto puede involucrar la reducción del término anomérico hasta un grupo hidroxílo primario, la protección/desprotección opcional de la reacción del grupo hidroxilo primario, la reacción del grupo hidroxilo primario con CDI para formar un intermediario de carbamato de CDI , y el acoplamiento del intermediario de carbamato de CDI con un grupo amino sobre una proteína.

Los conjugados también se pueden preparar mediante métodos de aminación reductiva directos, como se describen en las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números US 43651 70 (Jennings) y US 4673574 (Anderson). Otros métodos se describen en las Patentes Europeas Números EP-0-161 -1 88, EP-208375 y EP-0-477508. Un método adicional involucra el acoplamiento de un sacárido activado por bromuro de cianógeno (ó CDAP), derivado con hidrazida del ácido adípico (ADH), con la proteína portadora, mediante condensación de carbodi-imida (Chu C. y colaboradores, Infect. Immunity, 1983 245-256), por ejemplo, utilizando EDAC. En una modalidad, un grupo hidroxilo (opcionalmente un grupo hidroxilo activado, por ejemplo un grupo hidroxilo activado por un éster de cianato) sobre un sacárido, se enlaza con un grupo amino o carboxílíco sobre una proteína, ya sea directa o indirectamente (a través de un enlazador) . Cuando está presente un enlazador, un grupo hidroxilo sobre un sacárido opcionalmente se enlaza con un grupo amino sobre un enlazador, por ejemplo, utilizando conjugación de CDAP. Un grupo amino adicional del enlazador, por ejemplo ADH , se puede conjugar con un grupo de ácido carboxílíco sobre una proteína, por ejemplo utilizando química de carbodi-imida, por ejemplo utilizando EDAC. En una modalidad , los sacáridos capsulares de Hib ó N. meningitidis (o los sacáridos en general), se conjugan primero con el enlazador antes de que se conjugue el enlazador con la proteína portadora. De una manera alternativa, el enlazador se puede conjugar con la portadora antes de la conjugación con el sacárido. En general , se pueden uti l izar los siguientes tipos de grupos qu ímicos sobre una prote ína portadora para el acoplamiento/la conj ugación : A) Carboxilo (por ejemplo, por medio de ácido aspártico o ácido gl utámico) . En una modal idad, este grupo se enlaza con los grupos amino de los sacáridos di rectamente, o con un grupo amíno de un enlazador, con la química de carbodi-imida, por ejemplo con EDAC . B) G rupo amino (por ejemplo, por medio de lisina) . En una modalidad , este grupo se enlaza con los grupos carboxilo de los sacáridos di rectamente, o con un grupo carboxilo de un enlazador con la qu ímica de carbodi-imida, por ejemplo con EDAC . En otra modalidad , este grupo se enlaza con los grupos hidroxilo activados con C DAP ó CN Br de los sacáridos directamente, o con estos grupos de un enlazador; con los sacáridos o enlazadores que tengan un grupo aldehido ; con los sacáridos o enlazadores que tengan un grupo de éster de succínimida. C) Sulfhidrilo (por ejemplo, por medio de cisteína) . En una modalidad , este grupo se enlaza con un sacárido o enlazador bromo-o cloro-acetilado, con la qu ímica de maleimida. En una modalidad, este grupo se activa/se modifica con bis-diazobencidi na. D) Grupo hidroxilo (por ejemplo, por medio de ti rosi na) . En una modalidad; este grupo se activa/se modifica con bis-diazo- bencidina. E) Grupo imidazolilo (por ejemplo, por medio de histidina). En una modalidad, este grupo se activa/se modifica con bis-diazobencídina. F) Grupo guanidilo (por ejemplo, por medio de arginina). G) Grupo indolilo (por ejemplo, por medio de triptófano). Sobre un sacárido, en general se pueden utilizar los siguientes grupos para un acoplamiento: OH, COOH, ó NH2. Se pueden generar grupos aldehido después de diferentes tratamientos conocidos en la técnica, tales como: peryodato, hidrólisis de ácido, peróxido de hidrógeno, etc. Planteamientos de acoplamiento directo: Sacárido-OH + CNBr o CDAP ? éster de cíanato + NH2-Prot ? conjugado. Sacárido-aldehído + NH2-Prot ? base de Schiff + NaCNBH3 ? conjugado. Sacárído-COOH + NH2-Prot +EDAC ? conjugado. Sacárido-NH2+ COOH-Prot + EDAC ? conjugado. Planteamientos de acoplamiento indirecto por medio de un espaciador (enlazador): Sacárido-OH + CNBr o CDAP ? éster de cianato + NH2 — NH2 ? sacárido — NH2 + COOH-Prot + EDAC ? conjugado. Sacárido-OH + CNBr o CDAP ? éster de cianato + NH2 — SH ? sacárido — SH + SH-Prot (proteína nativa con una cisteína expuesta u obtenida después de la modificación de los grupos amino de la proteína mediante SPDP, por ejemplo) ? sacárido-S-S-Prot. Sacárido-OH + CNBr o CDAP ? éster de cianato + N H2 — SH ? sacárido — SH + maleimida-Prot (modificación de los grupos amino) ? conjugado. Sacárido-COOH + EDAC + NH2 — NH2 ? sacárido — NH2 + EDAC + COOH-Prot ? conjugado. Sacárido-COOH + EDAC + NH2 — SH ? sacárido — SH + SH-Prot (proteína nativa con una cisteína expuesta u obtenida después de la modificación de los grupos amino de la proteína medíante SPDP, por ejemplo) ? sacárido-S-S-Prot. Sacárido-COOH + EDAC + NH2 — SH ? sacárido — SH + maleimida-Prot (modificación de los grupos amino) ? conjugado. Sacárido-aldehído + N H2 — NH2 ? sacárido — N H2 + EDAC + COOH-Prot ? conjugado. Nota: En lugar de EDAC anteriormente, se puede utilizar cualquier carbodi-imída adecuada. En resumen , los tipos de grupos químicos de proteínas portadoras que se pueden utilizar en general para el acoplamiento con un sacárido son los grupos amino (por ejemplo, sobre los residuos de lisina), los grupos COOH (por ejemplo, sobre los residuos de ácido aspártico y ácido glutámico), y los grupos SH (si son accesibles) (por ejemplo, sobre los residuos de cisteína). En una modalidad, el sacárido de Hib, cuando está presente, se conjuga con la proteína portadora utilizando CNBr, o CDAP, o una combinación de CDAP y la qu ímica de carboxi-ímida (tal como EDAC), o una combinación de CNBr y la química de carbodi-imida (tal como EDAC). Opcionalmente, Hib se conjuga utilizando CNBr y la qu ímica de carbodi-imida, opcionalmente EDAC. Por ejemplo, se utiliza CNBr para unir el sacárido y el enlazador, y luego se utiliza la química de carbodi-imida para unir el enlazador con la proteína portadora. En una modalidad, cuando menos uno de los sacáridos capsulares de N. meningitidis ( o los sacáridos en general) se conjuga directamente con una proteína portadora; opcionalmente se conjugan los sacáridos MenW y/o MenY y/o MenC directamente con una proteína portadora. Por ejemplo, se enlazan directamente MenW; MenY; MenC; MenW y MenY; MenW y MenC; MenY y MenC; o MenW, MenY y MenC, con la proteína portadora. Opcionalmente, cuando menos uno de los sacáridos capsulares de N. meningitidis se conjuga directamente mediante CDAP. Por ejemplo, MenW; MenY; MenC; MenW y MenY; MenW y MenC; MenY y MenC; o MenW, MenY, y MenC, se enlazan directamente con la proteína portadora mediante CDAP (véanse las Publicaciones Internacionales Números WO 95/08348 y WO 96/29094). En una modalidad, todos los sacáridos capsulares de N. meningitidis se conjugan con el toxoide de tétanos.

Opcionalmente, la proporción del sacárido MenW y/o Y a la proteína portadora es de entre 1 :0.5 y 1 :2 (peso/peso) , y/o la proporción del sacárido MenC a la proteína portadora es de entre 1 :0.5 y 1 :4, o de entre 1 :0.5 y 1 : 1 .5 (peso/peso), en especial en donde estos sacárídos se enlazan directamente con la proteína, utilizando opcionalmente CDAP. En una modalidad, cuando menos uno de los sacáridos capsulares de N. meningitidis (o los sacáridos en general) se conjuga con la proteína portadora por medio de un enlazador, por ejemplo un enlazador bifuncional . El enlazador opcionalmente es heterobifuncional u homobifuncional, teniendo, por ejemplo, un grupo amina reactivo y un grupo de ácido carboxílico reactivo, dos grupos amina reactivos o dos grupos de ácido carboxílico reactivos. El enlazador, por ejemplo, tiene entre 4 y 20, entre 4 y 12, entre 5 y 10 átomos de carbono. Un posible enlazador es ADH. En una modalidad, se conjuga MenA; MenC; o MenA y MenC, con una proteína portadora (por ejemplo, toxoíde de tétanos) por medio de un enlazador. En una modalidad, se conjuga cuando menos un sacárido de N. meningitidis con una proteína portadora por medio de un enlazador, utilizando CDAP y EDAC. Por ejemplo, MenA; MenC; o MenA y MenC se conjugan con una proteína por medio de un enlazador (por ejemplo, aquéllos con dos grupos hidrazino en sus extremos, tales como ADH), utilizando CDAP y EDAC, como se describe anteriormente. Por ejemplo, se utiliza CDAP para conjugar el sacárido con un enlazador, y se utiliza EDAC para conjugar el enlazador con una proteína. Opcionalmente, la conjugación por medio de un enlazador da como resultado una proporción del sacárido a la proteína portadora de entre 1 :0.5 y 1 :6; de entre 1 : 1 y 1 :5, o de entre 1 :2 y 1 :4, para MenA; MenC; o MenA y MenC. Una consideración adicional en una vacuna de combinación que comprende diferentes sacáridos conjugados con la misma portadora es la cuestión de la supresión inmune de la portadora: se puede utilizar demasiada portadora y se puede obstaculizar la respuesta inmune. Con un planteamiento uniforme para la conjugación, la portadora presentará una mezcla similar de epítopos de células-B y de células-T ante el sistema inmune. Sin embargo, «si la conjugación tiene lugar en diferentes grupos químicos dentro de la proteína portadora para un sacárido contra otro, las proteínas portadoras probablemente serán diferentes hasta algún grado en la manera en 'que se presenten ellas mismas ante el sistema inmune. De conformidad con lo anterior, para todos los aspectos de la presente invención, también se proporciona una composición inmunogénica que comprende cuando menos 2 sacáridos diferentes conjugados por separado con el mismo tipo de proteína portadora (por ejemplo, toxoide de tétanos), en donde uno o más sacáridos se conjugan con la proteína portadora por medio de un primer tipo de grupo químico sobre la proteína portadora, y uno o más sacáridos se conjugan con la proteína portadora por medio de un segundo tipo (diferente) de grupo químico sobre la proteína portadora. Los primero y segundo tipos de grupo químico pueden estar presentes en la proteína portadora sobre un primero y un segundo conjuntos de aminoácidos mutuamente exclusivos sobre la proteína portadora (por ejemplo, ciertos residuos de ácido aspártico/ácido glutámico en un conjunto, y ciertos residuos de lísina/arginina en el segundo). Un sacárido se puede conjugar con un grupo carboxilo sobre la portadora, y otro sobre un grupo amino, por ejemplo. Esta conjugación puede involucrar la conjugación sobre epítopos separados de células-B y/o de células-T para cada conjugado diferente. Por ejemplo, en la vacuna de MenAC, MenA se puede enlazar con un primer tipo de grupo qu ímico (tal como carboxilo) sobre la proteína portadora y MenC se enlaza con un segundo tipo (tal como amino). En una vacuna de MenCY, MenC se puede enlazar con un primer tipo de grupo químico (tal como carboxilo) sobre la proteína portadora y MenY se enlaza con un segundo tipo (tal como amino). En una vacuna de MenACWY, MenAC se puede enlazar con un primer tipo de grupo químico (tal como carboxilo) sobre la proteína portadora y MenWY se enlaza con un segundo tipo (tal como amino), o MenA se puede enlazar con un primer tipo de grupo químico (tal como carboxilo) sobre la proteína portadora y MenCWY se enlaza con un segundo tipo (tal como amino). En una modalidad los 2 conjugados pueden involucrar el mismo tipo de sacárido enlazado con el mismo tipo de portadora, pero mediante diferentes químicas de conjugación. En una modalidad alternativa, se conjugan 2 sacáridos diferentes con grupos diferentes sobre la proteína portadora. "Conjugados por separado con el mismo tipo de proteína portadora" significa que los sacáridos se conjugan con la misma portadora individualmente (es decir, no se utilizan el primero y segundo grupos químicos sobre la misma molécula de la proteína portadora para conjugar las fracciones de sacárido, y en su lugar se utiliza el primer grupo químico sobre una primera al ícuota de prote ína portadora con respecto a la conjugación de un primer sacárído, y se utiliza un segundo grupo químico sobre una segunda alícuota de la proteína portadora con respecto a la conjugación de un segundo sacárido). En una modalidad, los primero y segundo tipos de grupos qu ímicos sobre la proteína portadora están presentes sobre epítopos separados de células-B y/o células-T sobre la proteína portadora. Es decir, están presentes sobre un conjunto diferente de epítopos de células-B y/o de células-T uno del otro. Con el objeto de predecir los epítopos de células-B para una portadora, se pueden emplear los métodos conocidos, tales como cualquiera o ambos de los siguientes dos métodos: predicción de estructura bidimensional y/o predicción de índice antigénico. La predicción de la estructura bidimensional se puede hacer utilizando el programa PS I P R ED (de David Jones, Brunel Bioinformatics Group, Dept. Biological Sciences, Brunel University, Uxbridge UB8 3PH , Reino Unido). El índice antigénico se puede calcular con base en el método descrito por Jameson y Wolf (CABIOS 4: 181 -1 86

[1988]). Los parámetros utilizados en este programa son el índice antigénico y la longitud m ínima para el péptido antigénico. Se puede util izar un índice antigénico de 0.9 para un mínimo de 5 aminoácidos consecutivos como los umbrales en el programa. Los epítopos de células auxiliares-T son péptidos enlazados con moléculas H LA clase I I y reconocidos por las células auxiliares-T. La predicción de los epítopos de células auxiliares-T se puede basar en las técnicas conocidas, tales como el método TEPITOPE descrito por Stu rniolo y colaboradores, (Natu re Biotech . 1 7: 555-561 [1 999]) . Los primero y segundo grupos qu ímicos presentes sobre la prote ína portadora son opcionalmente diferentes uno del otro, y son idealmente grupos qu ímicos natu rales que se pueden utilizar fácilmente para propósitos de conjugación . Éstos se pueden seleccionar independientemente del grupo que consiste en: grupos carboxi lo, grupos ami no, g rupos sulfhidrilo , grupos hidroxilo, grupos imidazolilo, grupos guanidilo, y g rupos indolilo. En una modalidad, el primer grupo químico es carboxilo, y el segundo es amino, o viceversa. Estos grupos se explican con mayor detalle anteriormente. En una modalidad específica, la composición inm unogéníca comp rende cuando menos 2 sacáridos capsulares de N. meningitidis diferentes, en donde uno o más se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA y MenC , los cuales se conjugan con la prote ína portadora por medio del primer tipo de grupo qu ímico sobre la proteína portadora (por ejempl o, carboxilo) , y uno o más sacáridos diferentes se seleccionan a parti r de un segundo grupo que consiste en MenC, MenY, y MenW, los cuales se conjugan con la proteína portadora por medio del segundo tipo de grupo qu ímico sobre la prote ína portadora (por ejemplo, amino) . En una modalidad adicional , la composición inmunogénica de la invención comprende MenA conjugado por medio del primer tipo de grupo químico (por ejemplo, carboxilo), y MenC conjugado por medio del segundo tipo de grupo qu ímico (por ejemplo, amino) . En otra modalidad, la composición inmunogénica comprende MenC conjugado por medio del primer grupo químico (por ejemplo, carboxilo), y MenY conjugado por medio del segundo tipo de grupo qu ímico (por ejemplo, amino). En otra modalidad, la composición inmunogénica comprende MenA conjugado por medio del primer grupo químico (por ejemplo, carboxilo), y MenC, MenY, y MenW conjugados por medio del segundo tipo de grupo químico (por ejemplo, amino) . En otra modalidad, la composición inmunogénica comprende MenA y MenC conjugados por medio del primer grupo químico (por ejemplo, carboxilo), y MenY y MenW conjugados por medio del segundo tipo de grupo químico (por ejemplo, amino). En cualquiera de las modalidades anteriores, Hib también puede estar presente, también conjugado con el mismo tipo de proteína portadora. Hib se puede conjugar con la portadora por medio del primero o el segundo tipo de grupo químico. En una modalidad, se conjuga por medio de un grupo carboxilo. En una modalidad, el sacárido capsular MenA, cuando está presente, está cuando menos parcialmente O-acetilado, de tal manera que cuando menos el 50 por ciento, el 60 por ciento, el 70 por ciento, el 80 por ciento, el 90 por ciento, el 95 por ciento, o el 98 por ciento de las unidades de repetición están O-acetiladas cuando menos en una posición. La O-acetilación, por ejemplo, está presente cuando menos en la posición O-3 de cuando menos el 50 por ciento, el 60 por ciento, el 70 por ciento, el 80 por ciento, el 90 por ciento, el 95 por ciento, o el 98 por ciento de las unidades de repetición. En una modalidad, el sacárido capsular MenC, cuando está presente, está cuando menos parcialmente O-acetilado, de tal manera que cuando menos el 30 por ciento, el 40 por ciento, el 50 por ciento, el 60 por ciento, el 70 por ciento, el 80 por ciento, el 90 por ciento, el 95 por ciento, o el 98 por ciento de las unidades de repetición NeuNAc enlazadas con (a2-9)? están O-acetiladas en cuando menos una o dos posiciones. La O-acetilación está presente, por ejemplo, en la posición 0-7 y/u O-8 de cuando menos el 30 por ciento, el 40 por ciento, el 50 por ciento, el 60 por ciento, el 70 por ciento, el 80 por ciento, el 90 por ciento, el 95 por ciento, o el 98 por ciento de las unidades de repetición. En una modalidad, el sacárido capsular MenW, cuando está presente, está cuando menos parcialmente O-acetilado, de tal manera que cuando menos el 30 por ciento, el 40 por ciento, el 50 por ciento, el 60 por ciento, el 70 por ciento, el 80 por ciento, el 90 por ciento, el 95 por ciento, o el 98 por ciento de las unidades de repetición están O-acetiladas en cuando menos una o dos posiciones. La O-acetilación está presente, por ejemplo, en la posición O-7 y/u O-9 de cuando menos el 30 por ciento, el 40 por ciento, el 50 por ciento, el 60 por ciento, el 70 por ciento, el 80 por ciento, el 90 por ciento, el 95 por ciento, o el 98 por ciento de las unidades de repetición. En una modalidad, el sacárido capsular MenY, cuando está presente, está cuando menos parcialmente O-acetilado, de tal manera que cuando menos el 20 por ciento, el 30 por ciento, el 40 por ciento, el 50 por ciento, el 60 por ciento, el 70 por ciento, el 80 por ciento, el 90 por ciento, el 95 por ciento, o el 98 por ciento de las unidades de repetición están O-acetiladas en cuando menos una o dos posiciones. La O-acetilación está presente en la posición 7 y/o 9 de cuando menos el 20 por ciento, el 30 por ciento, el 40 por ciento, el 50 por ciento, el 60 por ciento, el 70 por ciento, el 80 por ciento, el 90 por ciento, el 95 por ciento, o el 98 por ciento de las unidades de repetición. El porcentaje de O-acetilación se refiere al porcentaje de las unidades de repetición que contienen O-acetílación. Esto se puede medir en el sacárido antes de conjugarse , y/o después de la conjugación. En una modalidad de la invención, la composición inmunogénica es tal que el sacárido presente, o cada sacárido capsular de N. meningitidis presente, se conjuga con TT. En una modalidad adicional, cada sacárido capsular de N. meningitidis se conjuga por separado con una proteína portadora separada. En una modalidad adicional, cada conj ugado de sacárido capsular de N. meningitidis tiene una proporción del sacárido:portadora de 1 :5 a 5: 1 , o de 1 : 1 a 1 :4 (peso/peso) . En una modalidad adicional , cuando menos uno, dos, o tres conjugados de sacáridos capsulares de N. meningitidis se conjugan directamente con una proteína portadora. En una modalidad adicional , MenW y/o MenY, MenW y/o MenC, MenY y/o MenC, o MenW y MenC y MenY , se conjugan directamente con una proteína portadora. En una modalidad adicional, cuando menos u no, dos, o tres conjugados de sacáridos de N. meningitidis se conjugan directamente mediante la química de CDAP. En una modalidad adicional , la proporción del sacárido MenW y/o MenY a la proteína portadora es de entre 1 :0.5 y 1 :2 (peso/peso). En una modalidad adicional, la proporción del sacárido MenC a la proteína portadora es de entre 1 :0.5 y 1 :2 (peso/peso). En una modalidad adicional , cuando menos uno, dos, o tres sacáridos capsulares de N. meningitidis se conjugan con la proteína portadora por medio de un enlazador (el cual puede ser bifuncional , tal como teniendo dos grupos amino reactivos (tales como ADH), o dos grupos carboxilo reactivos, o un grupo amino reactivo en un extremo y un grupo carboxilo reactivo en el otro). El enlazador puede tener entre 4 y 12 átomos de carbono. En una modalidad adicional, el o cada sacárido capsular de N. meningitidis conjugado por medio de un enlazador se conjuga con el enlazador con la química de CDAP. En una modalidad adicional , la proteína portadora se conjuga con el enlazador utilizando la química de carbodi-imida, utilizando opcionalmente EDAC. En una modalidad adicional , el o cada sacárido capsular de N. meningitidis? se conjuga con el enlazador antes de que se conjugue la proteína portadora con el enlazador. En una modalidad adicional , se conjuga MenA con una proteína portadora por medio de un enlazador (la proporción del sacárido MenA a la proteína portadora puede ser de entre 1 :2 y 1 :5 (peso/peso)). En una modalidad adicional, se conjuga MenC con una proteína portadora por medio de un enlazador (la proporción del sacárido MenC a la proteína portadora puede ser de entre 1 :2 y 1 :5 (peso/peso)) . La composición inmunogénica de la invención, por lo tanto, puede comprender uno o más conjugados de sacáridos, en donde el tamaño promedio de cada sacárido antes de la conjugación es mayor de 50 kDa, de 75 kDa, de 1 00 kDa, de 1 10 kDa, de 120 kDa, o de 130 kDa. En una modalidad, el conjugado después de la conjugación debe ser fácilmente filtrable a través de un filtro de 0.2 mieras, de tal manera que se obtenga un rendimiento de más del 50, del 60, del 70, del 80, del 90, o del 95 por ciento después de la filtración, comparándose con la muestra antes de la filtración. En particular, la composición inmunogénica de la invención comprende sacáridos capsulares de N. meningitidis a partir de cuando menos uno, dos, tres, o cuatro de los serogrupos A, C, W, e Y, conjugados con una proteína portadora, en donde el tamaño promedio (peso molecular promedio en peso; Mw) de cuando menos uno, dos, tres, o cuatro de cada sacárido de N. meningitidis es mayor de 50 kDa, 60 kDa, 75 kDa, 100 kDa, 1 10 kDa, 120 kDa, ó 130 kDa.

La composición inmunogénica puede comprender sacáridos capsulares de N. meningitidis a partir de cuando menos uno, dos, tres, o cuatro de los serogrupos A, C, W, e Y, conjugados con una proteína portadora, en donde cuando menos uno, dos, tres, o cuatro o cada uno de los sacáridos de N. meningitidis, es un sacárido nativo o está dimensionado por un factor de hasta x1 .5, x2, x3, x4, x5, x6, x7, x8, x9, o x10 en relación con el peso molecular promedio en peso del polisacárido nativo. Para los propósitos de la invención, "polisacárido nativo" se refiere a un sacárido que no se ha sometido a un proceso, cuyo propósito sea reducir el tamaño del sacárido. Un polisacárido se puede llevar a reducir ligeramente en su tamaño durante los procedimientos de purificación normales. Este sacárido todavía es nativo. Solamente si el polisacárido se ha sometido a técnicas de dimensionamiento, entonces el polisacárido no se consideraría nativo. Para los propósitos de la invención, "dimensionado por un factor de hasta x2" significa que el sacárido se somete a un proceso pretendido para reducir el tamaño del sacárido, pero para retener un tamaño mayor de la mitad del tamaño del polisacárido nativo. x3, x4, etc. se deben interpretar de la misma manera, es decir, el sacárido se somete a un proceso pretendido para reducir el tamaño del polisacárido, pero para retener un tamaño mayor de una tercera parte, una cuarta parte, etc. , del tamaño del polisacárido nativo. En un aspecto de la invención, la composición inmunogénica comprende sacáridos capsulares de N. meningitidis a partir de cuando menos uno, dos, tres, o cuatro de los serogrupos A, C, W, e Y conjugados con una proteína portadora, en donde cuando menos uno, dos, tres, o cuatro o cada sacárido de N. meningitidis es un polisacárido nativo. En un aspecto de la invención, la composición inmunogénica comprende sacáridos capsulares de N. meningitidis a partir de cuando menos uno, dos, tres, o cuatro de los serogrupos A, C, W, e Y, conjugados con una proteína portadora, en donde cuando menos uno, dos, tres, o cuatro o cada sacárido de N. meningitidis se dimensiona por un factor de hasta x2, x3, x4, x5, x6, x7, x8, x9, ó x1 0. Las composiciones inmunogénicas de la invención comprenden opcionalmente conjugados de: sacárido capsular del serogrupo C de N. meningitidis (MenC), sacárido capsular del serogrupo A (MenA), sacárido capsular del serogrupo W135 (MenW), sacárido capsular del serogrupo Y (MenY) , sacáridos capsulares de los serogrupos C e Y (MenCY) , sacáridos capsulares de los serogrupos C y A (MenAC) , sacáridos capsulares de los serogrupos C y W (MenCW), sacáridos capsulares de los serogrupos A e Y (MenAY), sacáridos capsulares de los serogrupos A y W (MenAW), sacáridos capsulares de los serogrupos W e Y (MenWY), sacáridos capsulares de los serogrupos A, C, y W (MenACW), sacáridos capsulares de los serogrupos AC, C, e Y (MenACY); sacáridos capsulares de los serogrupos A, W135 e Y (MenAWY), sacáridos capsulares de los serogrupos C, W135, e Y (MenCWY) ; o sacáridos capsulares de los serogrupos A, C, W1 35, e Y (MenACWY). Ésta es la definición de "uno, dos, tres, o cuatro", o "cuando menos uno de" de los serogrupos A, C, W, e Y, o de cada sacárido de N. meningitidis, cuando se mencionan en la presente.

En una modalidad, tamaño promedio de cuando menos uno, dos, tres, o cuatro o cada sacárido de N. meningitidis es de entre 50 kDa y 1,500 kDa, de entre 50 kDa y 500 kDa, de entre 50 kDa y 300 kDa, de entre 101 kDa y 1,500 kDa, de entre 101 kDa y 500 kDa, de entre 101 kDa y 300 kDa, como se determine mediante MALLS. En una modalidad, el sacárido MenA, cuando está presente, tiene un peso molecular de 50 a 500 kDa, de 50 a 100 kDa, de 100 a 500 kDa, de 55 a 90 kDa, de 60 a 70 kDa, o de 70 a 80 kDa o de 60 a 80 kDa, como se determine mediante MALLS. En una modalidad, el sacárido MenC, cuando está presente, tiene un peso molecular de 100 a 200 kDa, de 50 a 100 kDa, de 100 ' a 150 kDa, de 110 a 130 kDa, de 150 a 210 kDa, o de 180 a 210 kDa, como se determine mediante MALLS. En una modalidad, el sacárido MenY, cuando está presente, tiene un peso molecular de 60 a 190 kDa, de 70 a 180 kDa, de 80 a 170 kDa, de 90 a 160 kDa, de 100 a 150 kDa, o de 110 a 140 kDa, de 50 a 100 kDa, de 100 a 140 kDa, de 140 a 170 kDa, o de 150 a 160 kDa, como se determine mediante MALLS. En una modalidad, el sacárido MenW, cuando está presente, tiene un peso molecular de 60 a 190 kDa, de 70 a 180 kDa, de 80 a 170 kDa, de 90 a 160 kDa,, de 100 a 150 kDa, de 110 a 140 kDa, de 50 a 100 kDa, o de 120 a 140 kDa, como se determine mediante MALLS. El peso molecular, o el peso molecular promedio de un sacárido, se refiere en la presente al peso molecular promedio en peso (Mw) del sacárido, medido antes de la conjugación, y se mide mediante MALLS. La técnica MALLS es bien conocida en este campo, y típicamente se lleva a cabo como se describe en el Ejemplo 2. Para el análisis MALLS de los sacáridos meningocócicos, se pueden utilizar dos columnas (TSKG6000 y 5000PWxl , TOSOH Bioscience) en combinación , y los sacáridos se eluyen en agua. Los sacáridos se detectan utilizando un detector de dispersión de luz (por ejemplo, Wyatt Dawn DSP equipado con un dispositivo de láser de argón de 10 mW a 488 nanómetros), y un refractómetro inferométrico (por ejemplo, Wyatt Otilab DSP, equipado con una celda P100, y un filtro rojo a 498 nanómetros). En una modalidad, los sacáridos de N. meningitidis son polisacáridos nativos, o polisacáridos nativos que se han reducido en su tamaño durante un proceso de extracción normal. En una modalidad, los sacáridos de N. meningitidis se dimensionan mediante disociación mecánica, por ejemplo mediante microfluidización o sonicacíón. La microfluidización y sonicación tienen la ventaja de disminuir el tamaño de los polisacáridos nativos más grandes suficientemente para proporcionar un conjugado filtrable. El dimensionamiento es por un factor no mayor de x20, x1 0 , x8, x6, x5, x4, x3, ó x2. En una modalidad, la composición inmunogénica comprende conjugados de N. meningitidis que se hacen a partir de una mezcla de polisacáridos nativos y sacáridos que se dimensionan por un factor de no más de x20. Por ejemplo, los sacáridos a partir de MenC y/o MenA son nativos. Por ejemplo, los sacáridos de MenY y/o MenW se dimensionan por un factor no mayor de x20, x10, x8, x6, x5, x4, x3, ó x2. Por ejemplo, una composición ¡nmunogénica comprende un conjugado hecho de MenY y/o MenW y/o MenC y/o MenA, que se dimensíona por un factor no mayor de x10, y/o se microfluidiza. Por ejemplo, una composición ¡nmunogénica contiene un conjugado hecho de MenA y/o MenC y/o MenW y/o MenY nativos. Por ejemplo, una composición inmunogénica comprende un conjugado hecho de MenC nativo. Por ejemplo, una composición ¡nmunogénica comprende un conjugado hecho de MenC nativo y MenA que se dimensiona por un factor no mayor de x10, y/o se microfluidiza. Por ejemplo, una composición inmunogénica comprende un conjugado hecho de MenC nativo y MenY que se dimensiona por un factor no mayor de x10 y/o se microfluidiza. En una modalidad, la polidispersidad del sacárido es de 1 a 1.5, de 1 a 1.3,:de 1 as 1.2, de 1 a 1.1 , o de 1 a 1.05, y después de la conjugación , con una proteína portadora, la polidispersídad del conjugado es de 1.0 a 2.5, de 1.0 a 2.0, de 1.0 a 1.5, de 1.0 a 1.2, de 1.5 a 2.5, de 1.7 a 2.2, o de 1.5 a 2.0. Todas las mediciones de polidispersidad son mediante MALLS. Los sacáridos opcionalmente se dimensionan hasta 1.5, 2,4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, ó 20 veces desde el tamaño del polisacárído aislado de la bacteria. En una modalidad, cada sacárido de N. meningitidis es un polisacárido nativo, o bien se dimensiona por un factor no mayor de x1 0. En una modalidad adicional, cada sacárido capsular de N. meningitidis es un polisacárído nativo. En una modalidad adicional, cuando menos uno, dos, tres, o cuatro sacáridos capsulares de N. meningitidis se dimensionan mediante microfluidización . En una modalidad adicional, cada sacárido capsular de N. meningitidis se dimensiona por un factor no mayor de x1 0. En una modalidad adicional, los conjugados de N. meningitidis se hacen a partir de una mezcla de polisacáridos nativos y sacáridos que se dimensionan por un factor no mayor de x1 0. En una modalidad adicional , el sacárido capsular del serogrupo Y se dimensiona por un factor no mayor de x10. En una modalidad adicional , los sacáridos capsulares de los serogrupos A y C son polisacáridos nativos, y los sacáridos de los serogrupos W1 35 e Y se dimensionan por un factor no mayor de x1 0. En una modalidad adicional, el tamaño promedio de cada sacárido capsular de N. meningitidis es de entre 50 kDa y 300 kDa, o de entre 50 kDa y 200 kDa. En una modalidad adicional, la composición inmunogénica comprende un sacárido capsular MenA que tiene un tamaño promedio mayor de 50 kDa, de 75 kDa, de 1 00 kDa, o un tamaño promedio de entre 50 y 100 kDa, o de entre 55 y 90 kDa, o de entre 60 y 80 kDa. En una modalidad adicional, la composición inmunogénica comprende un sacárido capsular MenC que tiene un tamaño promedio mayor de 50 kDa, de 75 kDa, de 1 00 kDa, o de entre 1 00 y 200 kDa, de entre 1 00 y 1 50 kDa, de entre 80 a 120 kDa, de entre 90 y 1 1 0 kDa, de entre 1 50 y 200 kDa, de entre 120 y 240 kDa, de entre 140 y 220 kDa, de entre 160 y 200 kDa, o de entre 190 y 200 kDa. En una modalidad adicional, la composición inmunogénica comprende un sacárido capsular MenY que tiene un tamaño promedio mayor de 50 kDa, de 75 kDa, de 100 kDa, o de entre 60 y 190 kDa, o de entre 70 y 180 kDa, o de entre 80 y 170 kDa, o de entre 90 y 160 kDa, o de entre 100 y 150 kDa, o de entre 110 y 145 kDa, o de entre 120 y 140 kDa. En una modalidad adicional, la composición inmunogénica comprende un sacárido capsular MenW que tiene un tamaño promedio mayor de 50 kDa, de 75 kDa, o de entre 60 y 190 kDa, de entre 70 y 180 kDa, de entre 80 y 170 kDa, o de entre 90 y 160 kDa, o de entre 100 y 150 kDa, o de entre 140 y 180 kDa, de entre 150 y 1 0 kDa, o de entre 110 y 140 kDa. La composición inmunogénica de la invención puede comprender un sacárido capsular de H. influenzae b (Hib) conjugado con una proteína portadora. Éste se puede conjugar con una proteína portadora seleccionada a partir del grupo que consiste en TT, DT, CRM197, fragmento C de TT, y proteína D, por ejemplo TT. El sacárido de Hib se puede conjugar con la misma proteína portadora que cuando menos uno, dos, tres, o todos los conjugados de sacáridos capsulares de N. meningitidis, por ejemplo TT. La proporción de Hib a la proteína portadora en el conjugado de sacárido capsular de Hib, puede ser de entre 1:5 y 5:1 (peso/peso), por ejemplo de entre 1:1 y 1:4, de entre 1:2 y 1:3.5, o de alrededor de1:3 (peso/peso). El sacárido capsular de Hib se puede conjugar con la proteína portadora por medio de un enlazador (véase anteriormente). El enlazador puede ser bifuncional (con dos grupos amino reactivos, tales como ADH , o dos grupos de ácido carboxílico reactivos, o un grupo amino reactivo en un extremo, y un grupo de ácido carboxílico reactivo en el otro extremo). Puede tener entre 4 y 12 átomos de carbono. El sacárido de Hib se puede conjugar con la proteína portadora o con el enlazador utilizando CNBr ó CDAP. La proteína portadora se puede conjugar con el sacárído de Hib por medio del enlazador, empleando un método que comprenda la química de carbodi-imida, opcionalmente la qu ímica de EDAC (y por lo tanto, utilizando el grupo químico de carboxilo sobre la portadora). La dosis del conjugado de sacárido de Hib puede ser de entre 0.1 y 9 microgramos, de entre 1 y 5 microgramos, o de entre 2 y 3 microgramos del sacárido. En una modalidad adicional , la composición inmunogénica de la invención comprende un conjugado de sacárido de Hib, y cuando menos dos conjugados de sacáridos de N. meningitidis, en donde el conjugado de Hib está presente en una dosis de sacárido más baja que la dosis de sacárido promedio de los cuando menos dos conjugados de sacáridos de N. meningitidis. De una manera alternativa, el conjugado de Hib está presente en una dosis de sacárido más baja que la dosis de sacárido de cada uno de los cuando menos dos conjugados de sacáridos de N. meningitidis. Por ejemplo, la dosis del conjugado de Hib puede ser cuando menos el 10 por ciento, el 20 por ciento, el 30 por ciento, el 40 por ciento, el 50 por ciento, el 60 por ciento, el 70 por ciento, o el 80 por ciento más baja que la dosis de sacárido promedio o más baja de los cuando menos dos conjugados de sacáridos de N. meningitidis adicionales. La dosis promedio se determina sumando las dosis de todos los sacáridos adicionales, y dividiendo entre el número de sacáridos adicionales. Los sacáridos adicionales son todos los sacáridos dentro de la composición inmunogénica, aparte del Hib, y pueden incluir los sacáridos capsulares de N. meningitidis. La "dosis" es la cantidad de composición inmunogénica o vacuna que se administra a un ser humano. Un sacárido de Hib es el polisacárido capsular de poli-fosfato de ribosilo de Haemophylus influenzae tipo b, o un oligosacárido derivado del mismo. Cuando menos dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales significan dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales, en adición a un conjugado de Hib. Los dos conjugados bacterianos adicionales pueden incluir los conjugados de sacáridos capsulares de N. meningitidis. Las composiciones inmunogénicas de la invención pueden comprender conjugados de sacáridos adicionales derivados a partir de uno o más de Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Estreptococos Grupo A, Estreptococos Grupo B, S. typhi, Staphylococcus aureus ó Staphylococcus epidermis. En una modalidad, la composición inmunogénica comprende sacáridos capsulares derivados a partir de uno o más de los serogrupos A, C, W135, e Y de Neisseria meningitidis. Una modalidad adicional comprende sacáridos capsulares derivados a partir de Streptococcus pneumoniae. Los antígenos de sacáridos capsulares neumocócicos se seleccionan opcionalmente a partir de los serotipos 1 , 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 1 1 A , 12F, 14, 15B, 1 7F, 1 8C, 1 9A, 19F, 20, 22F, 23F, y 33F (opcionalmente a partir de los serotipos 1 , 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 1 8C, 19F, y 23F). Una modalidad adicional comprende los sacáridos capsulares Tipo 5, Tipo 8, o 336, de Staphylococcus aureus. Una modalidad adicional comprende los sacáridos capsulares Tipo I , Tipo II , o Tipo l ll de Staphylococcus epidermidis. Una modalidad adicional comprende el sacárído Vi de S. typhi. Una modalidad adicional comprende los sacáridos capsulares Tipo la, Tipo le, Tipo I I , Tipo l l l , o Tipo V de estreptococos del Grupo B. Una modalidad adicional comprende los sacáridos capsulares de estreptococos del Grupo A, opcíonalmente comprendiendo además cuando menos una proteína M, y opcionalmente múltiples tipos de proteína M. Las composiciones inmunogénicas de la invención también pueden comprender una vacuna de DTPa ó DTPw (por ejemplo, una que contenga DT, TT, y ya sea una vacuna de tosferina de células enteras (Pw), o bien una vacuna de tosferina acelular (Pa) (comprendiendo, por ejemplo, toxoide de tosferina, FHA, pertactina, y opcionalmente aglutinóginas 2 y 3). Estas combinaciones también pueden comprender una vacuna contra hepatitis B (por ejemplo, pueden comprender antígeno superficial de hepatitis B [HepB], opcionalmente adsorbido sobre fosfato de aluminio) . En una modalidad, la composición inmunogénica de la invención comprende una vacuna de DTPwHepBHíbMenAC, en donde el componente MenAC es como se describe en la presente. En una modalidad, la composición inmunogénica de la invención comprende además un antígeno de N. meningitidis serogrupo B. El antígeno es opcionalmente un polisacárido capsular de N. meningitidis serogrupo B (MenB), o un polisacárido dimensionado u oligosacárido derivado del mismo, el cual se puede conjugar con una proteína portadora. El antígeno es opcionalmente una preparación de vesícula de membrana externa de N. meningitidis serogrupo B, como se describe en las Patentes Números EP301 992, WO 01 /09350, WO 04/14417, WO 04/14418, y WO 04/14419. En general, la composición inmunogénica de la invención puede comprender una dosis de cada conjugado de sacárido, de entre 2 y 20 microgramos, de entre 3 y 1 0 microgramos, o de entre 4 y 7 microgramos de sacárido. En una modalidad, la composición inmunogénica de la invención contiene cada sacárido capsular de N. meningitidis en una dosis de entre 0.1 y 20 microgramos; de entre 1 y 10 microgramos; de entre 2 y 10 microgramos; de entre 2.5 y 5 microgramos; de al rededor o exactamente 5 microgramos; o de alrededor o exactamente 2.5 microgramos. En una modalidad, la composición inmunogénica de la invención , por ejemplo, contiene al conjugado de sacárido de Hib en una dosis de sacárido de entre 0.1 y 9 microgramos; de entre 1 y 5 microgramos, ó de entre 2 y 3 microgramos, o en alrededor o exactamente 2.5 microgramos. En una modalidad adicional, la composición ¡nmunogénica de la invención contiene, por ejemplo, al conjugado de sacárido de Hib en una dosis de sacárido de entre 0.1 y 9 microgramos; de entre 1 y 5 microgramos, o de entre 2 y 3 microgramos, o de alrededor o exactamente 2.5 microgramos, y cada uno de los conjugados de polisacáridos de N. meningitidis en una dosis de sacárido de entre y 20 microgramos, de entre 3 y 10 microgramos, o de entre 4 y 7microgramos, o de alrededor o exactamente 5 microgramos. "Alrededor" o "aproximadamente" se definen como dentro del 10 por ciento más o menos de la cifra dada para los propósitos de la invención. En una modalidad, la composición inmunogéníca de la invención puede contener una dosis de sacárido del conjugado de sacárido de Hib que sea, por ejemplo, menor del 90 por ciento, del 80 por ciento, del 75 por ciento, del 70 por ciento, del 60 por ciento, del 50 por ciento, del 40 por ciento, del 30 por ciento, del 20 por ciento, o del 10 por ciento de la dosis de sacárido promedio de cuando menos dos, tres, cuatro, o cada uno de los conjugados de sacáridos de N. meningitidis. La dosis de sacárido del sacárido de Hib es, por ejemplo, de entre el 20 por ciento y el 60 por ciento, de entre el 30 por ciento y el 60 por ciento, de entre el 40 y el 60 por ciento, o de alrededor o exactamente del 50 por ciento del sacárido promedio de cuando menos dos, tres, cuatro, o cada uno de los conjugados de sacáridos de N. meningitidis. En una modalidad, la composición inmunogénica de la invención contiene una dosis de sacárido del conjugado de sacárido de Hib que es, por ejemplo, menor del 90 por ciento, del 80 por ciento, del 75 por ciento, del 70 por ciento, del 60 por ciento, del 50 por ciento, del 40 por ciento, del 30 por ciento, del 20 por ciento, o del 10 por ciento de la dosis de sacárido más baja de los cuando menos dos, tres, cuatro, o cada uno de los conjugados de sacáridos de N. meningitidis. La dosis de sacárido del sacárido de Hib es, por ejemplo, de entre el 20 por ciento y el 60 por ciento, de entre el 30 por ciento y el 60 por ciento, de entre el 40 por ciento y el 60 por ciento, o de alrededor o exactamente el 50 por ciento de la dosis de sacárido más baja de los cuando menos dos, tres, cuatro, o cada uno de los conjugados de sacáridos de N. meningitidis. En una modalidad de la invención, la dosis de sacárido de cada uno de los cuándo menos dos, tres, cuatro, o cada uno de los conjugados de sacáridos de N. meningitidis es opcíonalmente igual, o aproximadamente igual. Los ejemplos de las composiciones inmunogénicas de la invención, son las composiciones que consisten en, o que comprenden: Un conjugado de Hib y un conjugado de MenA y un conjugado de MenC, opcíonalmente en proporciones de dosis de sacáridos de 1:2:2, 1:2:1, 1:4:2, 1:6:3, 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (peso/peso).

Opcionalmente, la dosis de sacárido de MenA es mayor que la dosis de sacárido de MenC. Un conjugado de Hib y un conjugado de MenC y un conjugado de MenY, opcionalmente en proporciones de dosis de sacáridos de 1:2:2, 1:2:1, 1:4:2, 1:4:1, 1:8;4, 1:6:3, 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (peso/peso). Opcionalmente, la dosis de sacárido de MenC es mayor que la dosis de sacárido de MenY. Un conjugado de Hib y un conjugado de MenC y un conjugado de MenW, opcionalmente en proporciones de dosis de sacáridos de 1:2:2, 1:2:1, 1:4:2, 1:4:1, 1:8;4, 1:6:3, 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (peso/peso). Opcionalmente la dosis de sacárido de MenC es mayor que la dosis de sacárido de MenW. Un conjugado de Hib y un conjugado de MenA y un conjugado de MenW, opcionalmente en proporciones de dosis de sacáridos de 1:2:2, 1:2:1, 1:4:2, 1:4:1, 1:8;4, 1:6:3, 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (peso/peso). Opcionalmente, la dosis de sacárido de MenA es mayor que la dosis de sacárido de MenW. Un conjugado de Hib y un conjugado de MenA y un conjugado de MenY, opcionalmente en proporciones de dosis de sacáridos de 1:2:2, 1:2:1, 1:4:2, 1:4:1, 1:8:4, 1:6:3, 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (peso/peso). Opcionalmente la dosis de sacárido de MenA es mayor que la dosis de sacárido de MenY. Un conjugado de Hib y un conjugado de MenW y un conjugado de MenY, opcionalmente en proporciones de dosis de sacáridos de 1:2:2, 1:2:1, 1:1:2, 1:4:2, 1:2:4, 1:4:1, 1:1:4, 1:3;6, 1:1:3, 1:6:3, 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (peso/peso). Opcionalmente la dosis de sacárido de MenY es mayor que la dosis de sacárido de MenW. MenA, MenC, MenW, y MenY, en proporciones de dosis de sacáridos de 1:1:1:1 o de 2:1:1:1 o de 1:2:1:1 o de 2:2:1:1 o de 1:3:1:1 o de 1:4:1:1 (peso/peso). Un aspecto adicional de la invención es una vacuna que comprende la composición inmunogénica de la invención, y un excipiente farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, la composición inmunogénica de la invención se regula o se ajusta hasta entre un pH de 7.0 y 8.0, un pH de 7.2 y 7.6, o alrededor o exactamente un pH de 7.4. La composición inmunogénica o las vacunas de la invención opcionalmente se liofilizan en la presencia de un agente estabilizante, por ejemplo un poliol, tal como sacarosa o trehalosa. Opcionalmente, la composición inmunogénica o vacuna de la invención contiene una cantidad de un adyuvante suficiente para mejorar la respuesta inmune al inmunógeno. Los adyuvantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, sales de aluminio (fosfato de aluminio o hidróxido de aluminio), mezclas de escualeno (SAF-1), péptido de muramilo, derivados de saponina, preparaciones de pared celular de micobacterias, monofosforil-lípido A, derivados de ácido micólico, tensoactivos de copolímeros de bloques no iónicos, Quil A, subunidad B de toxina de cólera, polifosfaceno y derivados, y complejos inmunoestimulantes (ISCOMs), tales como los descritos por Takah'ashi y colaboradores (1990) Nature 344:873-875.

Para las combinaciones de N. meningitidis o HibMen discutidas anteriormente, puede ser conveniente no utilizar ningún adyuvante de sal de aluminio, o ningún adyuvante en general. Como con todas las composiciones inmunogénicas o vacunas, las cantidades inmunológicamente efectivas de los inmunógenos se deben determinar empíricamente. Los factores que se deben considerar incluyen la inmunogenicidad, ya sea o no que el ¡nmunógeno vaya a formar complejo con, o se vaya a unir covalentemente a, un adyuvante o a una proteína portadora o a otro portador, las vías de administración, y el número de dosificaciones inmunizantes que se vayan a administrar. El agente activo puede estar presente en diferentes concentraciones en la composición farmacéutica o en la vacuna de la invención. Típicamente, la concentración mínima de la sustancia es una cantidad necesaria para log rar su uso pretendido, mientras que la concentración máxima es la cantidad máxima que permanecerá en solución u homogéneamente suspendida dentro de la mezcla inicial . Por ejemplo, la cantidad míni ma de un agente terapéutico, es opcionalmente una que proporcione una sola dosificación terapéuticamente efectiva. Para las sustancias bioactivas, la concentración mínima es una cantidad necesaria para la bioactividad después de la reconstitución, y la concentración máxima está en el punto en donde no se puede mantener una suspensión homogénea. En el caso de las unidades de una sola dosis, la cantidad es aquélla de una sola aplicación terapéutica. En términos generales, se espera que cada dosis comprenderá de 1 a 1 00 microgramos de antígeno de proteína, por ejemplo de 5 a 50 microgramos, o de 5 a 25 microgramos. Por ejemplo, las dosis de los sacáridos bacterianos son de 10 a 20 microgramos, de 5 a 10 microgramos, de 2.5 a 5 microgramos, o de 1 a 2.5 microgramos de sacárido en el conjugado.

Las preparaciones de vacuna de la presente invención se pueden utilizar para proteger o tratar a un mam ífero (por ejemplo, a un paciente humano) susceptible a la infección, por medio de la administración de la vacuna mediante la vía sistémica o mucosa. Un paciente humano es opcionalmente un bebé (de menos de 12 meses de edad) , un niño que empieza a andar (de 12 a 24, o de 12 a 16, o de 12 a 14 meses de edad), un niño (de 2 a 1 0, de 3 a 8, o de 3 a 5 años de edad), un adolescente (de 12 a 21 , de 14 a 20, o de 15 a 19 años de edad), o un adulto. Estas administraciones pueden incluir inyección mediante las vías intramuscular, intraperitoneal, intradérmica, o subcutánea; o mediante administración mucosa a los tractos oral/alimentario, respiratorio, genitourinario. Se prefiere la administración intranasal de las vacunas para el tratamiento de neumon ía u otitis media (debido a que se puede prevenir más efectivamente la portación nasofaríngea de neumococos, atenuando de esta manera la infección en su etapa más temprana). Aunque la vacuna de la invención se puede administrar como una sola dosis, los componentes de la misma también se pueden co-administrar juntos al mismo tiempo o en diferentes tiempos (por ejemplo, si hay sacáridos presentes en una vacuna, éstos se podrían administrar por separado al mismo tiempo, o de una a dos semanas después de la administración de una vacuna de proteína bacteriana para coordinación ópti ma de las respuestas inmunes una con respecto a la otra) . E n adición a una sola vía de admi nistración , se pueden emplear dos vías de admi nistración diferentes. Por ejemplo, los antígenos vi rales se pueden administrar I D (intradérmicamente) , mientras q ue las proteínas bacterianas se pueden administrar I M (intramuscularmente) o I N (intranasalmente) . Si hay sacáridos presentes, se pueden administrar intramuscularmente (o intradérmicamente) , y las proteínas bacterianas se pueden administrar intranasalmente (o i ntradérmicamente) . En adición , las vacunas de lá invención se pueden administrar intramuscularmente para las dosis de preparación , e intranasal mente para las dosis de refuerzo. La preparación de la vacuna en general se describe en Vaccine Desígn ("The subunit and adjuvant approach" (editores: Powell M . F. & Newman M . J .) ( 1 995) Plenum Press, Nueva York) . La encapsulación dentro de liposomas es descrita por Ful lerton , Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 4,235, 877. Un aspecto adicional de la invención es un kit de vacuna para su admi nistración concomitante o en secuencia, el cual comprende dos composiciones inmunogénicas multivalentes para conferir protección en un huésped contra la enfermedad causada por Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae, y Neisseria meningitidis, y opcionalmente Haemophilus influenzae. Por ejemplo, el kit opcionalmente comprende un primer recipiente que comprende uno o más de: toxoide de tétanos (TT), toxoide de difteria (DT), y componentes de tosferina de células enteras o acelulares, y un segundo recipiente que comprende: una composición inmunogénica de la invención como se describe anteriormente (por ejemplo, aquéllas que comprenden las combinaciones de conjugados de sacáridos Men o HibMen) . Un aspecto adicional de la invención es un kit de vacuna para su administración concomitante o en secuencia, el cual comprende dos composiciones inmunogénicas multivalentes' para conferir protección en un huésped contra las enfermedades causadas por Streptococcus pneumoniae, y Neisseria meningitidis, y opcionalmente Haemophilus influenzae. Por ejemplo, el kit comprende opcionalmente un primer recipiente que comprende : uno o más conjugados de una proteína portadora, y un sacárído capsular a partir de Streptococcus pneumoniae [en donde el sacárido capsular es opcionalmente a partir de un serotipo neumocócico seleccionado a partir del grupo que consiste en 1 , 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N , 9V, 1 0A, 1 1 A, 12F, 14, 15B, 17F, 1 8C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F y 33F], y un segundo recipiente que comprende: una composición inmunogénica de la invención como se describe anteriormente (por ejemplo, aquéllas que comprenden las combinaciones de conjugados de sacáridos Men o HibMen). Los ejemplos del conjugado de Hib y los conjugados de polisacáridos de N. meningitidis son como se describen anteriormente. Típicamente, la vacuna de Streptococcus pneumoniae en el kit de vacuna de la presente invención (o en cualquiera de las composiciones inmunogénicas de la invención descritas anteriormente) comprenderá antígenos de sacáridos (opcionalmente conjugados), en donde los sacáridos se derivan a partir de cuando menos cuatro serotipos de neumococo seleccionados a partir del grupo que consiste en 1 , 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N , 9V, 10A, 1 1 A, 12 F, 14, 15B, 17F, 1 8C, 1 9A, 1 9F, 20, 22F, 23F y 33F. Opcionalmente, los cuatro serotipos incluyen 6B, 14, 19F, y 23F. Más opcionalmente, se incluyen cuando menos siete serotipos en la composición, por ejemplo aquéllos derivados a partir de los serotipos 4, 6B, 9V, 14, 1 8C, 19F, y 23F. Opcionalmente se incluyen más de siete serotipos en la composición, por ejemplo cuando menos 10, 1 1 , 12 , 1 3, ó 14 serotipos. Por ejemplo, la composición en una modalidad incluye 10 u 1 1 sacáridos capsulares derivados a partir de los serotipos 1 , 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 1 8C, 19F y 23F, y opcionalmente 3 (todos opcionalmente conjugados). En una modalidad de la invención, se incluyen cuando menos 1 3 antígenos de sacáridos (opcionalmente conjugados), aunque la invención también contempla antígenos de sacáridos adicionales, por ejemplo, 23-valentes (tales como los serotipos 1 , 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11 A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F y 33F). Los sacáridos neumocócicos se conjugan independientemente con cualquier proteína portadora conocida, por ejemplo CRM197, toxoide de tétanos, toxoide de difteria, proteína D, o cualesquiera otras proteínas portadoras, como se menciona anteriormente. Opcionalmente, los kits de vacunas de la invención comprenden un tercer componente. Por ejemplo, el kit comprende opcionalmente un primer recipiente que comprende uno o más de: toxoide de tétanos (TT), toxoide de difteria (DT), y componentes de tosferina de células enteras o acelulares, y uh segundo recipiente que comprende: uno o más conjugados de una proteína portadora y un sacárido capsular a partir de Streptococcus pneumoniae [en donde el sacárido capsular es opcionalmente a partir de un serotipo neumocócico seleccionado a partir del grupo que consiste en 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F y 33F], y un tercer recipiente, el cual comprende: una composición inmunogénica de la invención, como se describe anteriormente (por ejemplo aquéllas que comprenden las combinaciones de conjugados de sacáridos Men o HibMen). Un aspecto adicional de la invención es un proceso para la fabricación de la composición inmunogénica o vacuna de la invención, el cual comprende el paso de mezclar los sacáridos de la invención , por ejemplo mezclar los sacáridos capsulares de N. meningitidis, a parti r de cuando menos uno, dos, tres, o los cuatro serogrupos A, C , W, e Y, conjugados con una prote ína portadora, con u n excipiente farmacéuticamente aceptable . Un aspecto adicional de la invención es un método para inmunizar a un huésped humano contra una enfermedad causada por N. meningitidis, y opcionalmente infección por Haemophylus influenzae, el cual comprende administrar al huésped una dosis inmunoprotectora de la composición inmunogénica o vacuna o kit de la invención , opcionalmente utilizando una sola dosis. Un aspecto independiente de la invención es un método para inmunizar a un huésped humano con una composición inmunogénica que comprende cuando menos dos conjugados de sacáridos capsulares diferentes de N. meningitidis seleccionados a parti r del grupo que consiste en los serogrupos A, C , W e Y (opcionalmente MenA, C, W, e Y) , en donde la admi nistración de una sola dosis (opcionalmente a adolescentes, adultos, o niños) da como resultado una prueba de sangre tomada u n mes después de la administración que da más del 50 por ciento, del 60 por ciento, del 70 por ciento, del 80 por ciento, del 90 por ciento, o del 95 por ciento de respondentes en un ensayo de SBA que mida los niveles de respuesta contra MenA, MenC, MenW , y/o MenY. Opcionalmente, el ensayo de SBÁ es como se describe en el Ejemplo 9 , con el respondente evaluado como se describe en el Ejemplo 9. Un aspecto independiente adicional de la invención es una composición inmunogénica q ue comprende los conjugados de MenA, MenC, MenW, y/o MenY, la cual es capaz de provocar una respuesta inmune después de una sola dosis, de tal manera que más del 50 por ciento, del 60 por ciento, del 70 por ciento, del 80 por ciento, del 90 por ciento, o del 95 por ciento de los sujetos humanos (niños , adolescentes, o adultos) i noculados, se clasifican como respondentes en un ensayo de SBA sobre sangre extraída un mes después de la inoculación (opcionalmente empleando los criterios descritos en el Ejemplo 9) . Esta composición inmunogénica opcionalmente tiene las características estructu rales adicionales descritas en la presente . Un aspecto adicional de la invención es una composición ¡nmunogénica de la invención para utilizarse en el tratamiento o en la prevención de una enfermedad causada por N. meningitidis, y opcionalmente una infección por Haemophylus influenzae. Un aspecto adicional de la i nvención es el uso de la composición ¡nmunogénica o vacuna o kit de la invención , en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de las enfermedades causadas por N. meningitidis, y opcionalmente i nfección por Haemophylus influenzae. Los términos "comprendiendo", "comprenden", y "comprende" , son pretendidos en la presente por los inventores como opcionalmente sustituibles con los términos "consistiendo en", "que consisten en", y "que consiste en", respectivamente , en cada caso. Todas las referencias o solicitudes de patente citadas dentro de esta memoria descriptiva de patente se incorporan a la presente como referencia. La invención se ilustra en los ejemplos acompañantes. Los siguientes Ejemplos se llevan a cabo empleando técnicas convencionales, las cuales son bien conocidas y de rutina para los expertos en la materia, excepto en donde se describa de otra manera con detalle. Los ejemplos son ilustrativos, pero no limitan la invención . Eiemplos Ejemplo 1 - Preparación de con jugados de polisacáridos Se llevó a cabo el enlace covalente del polisacárido PRP de Haemophilus influenzae (Hib) con TT mediante la química de acoplamiento desarrollada por Chu y colaboradores (Infection and I mmunity 1983, 40 (1 ); 245-256) . El polisacárido PRP de Hib se activó mediante la adición de CNBr, e incubando a un pH de 10.5 durante 6 minutos. El pH se redujo hasta un pH de 8.75, y se agregó dihidrazida de ácido adípico (ADH) , y se continuó la incubación durante 90 minutos adicionales. El PRP activado se acopló con toxoide de tétanos purificado por medio de condensación de carbodi-imida, utilizando 1 -etil-3-(3-dimetil-amino-propil)-carbodi-imída (EDAC). La EDAC se agregó al PRP activado para alcanzar una proporción final de 0.6 miligramos de EDAC/miligramo de PRP activado. El pH se ajustó a 5.0 , y se agregó el toxoide de tétanos purificado para alcanzar 2 mi ligramos de TT/miligramo de PRP activado. La solución resultante se dejó durante 3 días con agitación leve. Después de la filtración a través de una membrana de 0.45 mieras, el conjugado se purificó en una columna Sephacryl S500HR (Pharmacia, Suecia) equilibrada en NaCI 0.2M. Se produjeron conjugados de MenC-TT utilizando polisacáridos nativos (de más de 150 kDa, medidos mediante MALLS), o se microfluidizaron ligeramente. Se produjeron conjugados de MenA-TT utilizando polisacáridos nativos, o bien el polisacárido ligeramente microfluidizado de más de 60 kDa, medidos mediante el método MALLS del Ejemplo 2. Se produjeron los conjugados MenW y MenY-TT utilizando polisacáridos dimensionados de alrededor de 100 a 200 kDa, medidos mediante MALLS (ver el Ejemplo 2). El dimensionamiento se hizo mediante microfluidización utilizando un aparato homogeneizador Emulsiflex C-50. Entonces los polisacáridos se filtraron a través de un filtro de 0.2 mieras. La activación y el acoplamiento se llevaron a cabo como se describe en las Publicaciones Internacionales Números WO96/29094 y WO 00/56360. Dicho de una manera breve, el polisacárido en una concentración de 10 a 20 miligramos/mililitro en NaCI 2M, pH de 5.5 a 6.0, se mezcló con la solución de CDAP (100 miligramos/mililitro recién preparada en acetonitrilo/WFI, 50/50), hasta una proporción final de CDAP/polisacárido de 0.75/1 ó de 1.5/1. Después de 1.5 minutos, el pH se elevó con hidróxido de sodio hasta un pH de 10.0. Después de 3 minutos, se agregó el toxoide de tétanos para alcanzar una proporción de la proteína/polisacárido de 1.5/1 para MenW, de 1.2/1 para MenY, de 1.5/1 para MenA, o de 1.5/1 para MenC. La reacción se continuó durante 1 a 2 horas. Después del paso de acoplamiento, se agregó lisina hasta una proporción final de glicina/PS (peso/peso) de 7.5/1, y el pH se ajustó a un pH de 9.0. La mezcla se dejó durante 30 minutos. El conjugado se aclaró utilizando un filtro Kleenpak de 10 mieras, y luego se cargó en una columna Sephacryl S400HR, utilizando un regulador de elución de NaCI 150 mM, Tris 10 mM ó 5 mM, pH de 7.5. Los lotes clínicos se filtraron sobre una membrana esterilizante Opticap 4. Los conjugados resultantes tuvieron una proporción promedio del polisacárido:proteína de 1:1-1:5 (peso/peso). Ejemplo 1a - Preparación de conjugados de polisacáridos MenA y MenC de la invención Se produjeron conjugados de MenC-TT utilizando polisacáridos nativos (de más de 150 kDa, medidos mediante MALLS), o se microfluidizaron ligeramente. Los conjugados de MenA-TT se produjeron utilizando el polisacárido nativo, el polisacárido ligeramente microfluidizado de más de 60 kDa, medido mediante el método de MALLS del Ejemplo 2. El dimensionamiento se hizo mediante microfluidización, utilizando un aparato homogeneizador Emulsiflex C-50. Entonces los polisacáridos se filtraron a través de un filtro de 0.2 mieras. Con el objeto de conjugar el polisacárido capsular MenA con toxoide de tétanos por medio de un espaciador, se empleó el siguiente método. El enlace covalente del polisacárido y el espaciador (ADH) se lleva a cabo mediante una química de acoplamiento, mediante la cual se activa el polisacárido bajo condiciones controladas mediante un agente cianilante, tetrafluoroborato de 1-ciano-4-dimetil-amino-piridinio (CDAP). El espaciador reacciona con el PS cianilado a través de sus grupos hidrazino, para formar un enlace de isourea estable entre el espaciador y el polisacárido. Una solución de 10 miligramos/mililitro de MenA (pH de 6.0) [3.5 gramos] se trató con una solución recién preparada de 100 miligramos/mililitro de CDAP en acetonitrilo/agua (50/50) (volumen/volumen)), para obtener una proporción de CDAP/MenA de 0.75 (peso/peso). Después de 1.5 minutos, el pH se elevó hasta un pH de 10.0. Tres minutos después, se agregó ADH para obtener una proporción de ADH/MenA de 8.9. El pH de la solución se disminuyó hasta 8.75, y la reacción procedió durante 2 horas, manteniendo este pH (con la temperatura mantenida a 25°C). La solución de PSAAH se concentró hasta una cuarta parte de su volumen inicial, y luego se diafiltró con 30 volúmenes de NaCI 0.2M, utilizando una membrana Filtron Omega con un corte de 10 kDa, y se filtró él reténtate Antes de la reacción de conjugación (condensación de carbodiimida), la solución de TT purificada y la solución de PSAAH se diluyeron para alcanzar una concentración de 10 miligramos/mililitro para PSAAH, y de 10 miligramos/mililitro para TT. Se agregó EDAC (1-etil-3-(3-dimetil-amino-propil)-carbodi-imida) a la solución de PSAAH (2 gramos de sacárido) con el objeto de alcanzar una proporción final de 0.9 miligramos de EDAC/miligramo de PSAAH. El pH se ajustó a 5.0. El toxoide de tétanos purificado se agregó con una bomba peristáltica (en 60 minutos) hasta alcanzar 2 miligramos de TT/miligramo de PSAAH. La solución resultante se dejó durante 60 minutos a +25°C con agitación, para obtener un tiempo de acoplamiento final de 120 minutos. La solución se neutralizó mediante la adición de Tris-HCl 1 M , pH de 7.5 (1 /10 del volumen final), y se dejó durante 30 minutos a +25°C, y luego durante la noche de +2°C a +8°C. El conjugado se aclaró utilizando un filtro de 10 mieras, y se purificó utilizando una columna Sephacryl S400H R (Pharmacia, Suecia). La columna sé equilibró en Tris-HCl 1 0 mM (pH de 7.0) , NaCI 0.075 M, y se cargó el conjugado (aproximadamente 660 mililitros) sobre la columna (de +2°C a +8°C) . La reserva de la elución se seleccionó como una función de la densidad óptica a 280 nanómetros. La recolección empezó cuando la absorbencia se incrementó hasta 0.05. La cosecha continuó hasta que la kDa alcanzó 0.30. El conjugado se esterilizó por filtro a +20°C, luego se almacenó de +2°C a +8°C. El conjugado resultante tuvo una proporción de polisacárído:proteína de 1 :2 a 1 :4 (peso/peso). Con el objeto de conjugar el polisacárido capsular MenC con toxoide de tétanos por medio de un espaciador, se empleó el siguiente método. El enlace covalente del polisacárido y el espaciador (ADH) se lleva a cabo mediante una química de acoplamiento, mediante la cual se activa el polisacárido bajo condiciones controladas, mediante un agente cianilante, tetrafluoroborato de l-ciano-4-dimetil-amino-piridinio (CDAP). El espaciador reacciona con el PS cianilado a través de sus grupos hidrazino, para formar un enlace de isourea estable entre el espaciador y el polisacárido. Una solución de 20 miligramos/mililitro (pH de 6.0 (3.5 gramos) se trató con una solución recién preparada de 10 miligramos/mililitro de CDAP en acetonitrilo/agua (50/50) (volumen/volumen), para obtener una proporción de CDAP de 1.5 (peso/peso). Después de 1.5 minutos, el pH se elevó a un pH de 10.0. A la activación, se agregó NaCI 5M para alcanzar una concentración final de NaCI 2M. Tres minutos después, se agregó ADH para obtener una proporción de ADH/MenC de 8.9. El pH de la solución se disminuyó hasta 8.75, y la reacción procedió durante 2 horas (mantenida a 25°C). La solución de PSAAH se concentró hasta un mínimo de 150 mililitros, y luego se diafiltró con 30 volúmenes de NaCI 0.2M, utilizando una membrana Filtron Omega con un corte de 10 kDa, y se filtró el retentato. Antes de la reacción de conjugación, la solución purificada de TT y la solución de PSAAH (escala de 2 gramos) se diluyeron en NaCI 0.2M para alcanzar una concentración de 15 miligramos/mililitro para PSCAH, y de 20 miligramos/mililitro para TT. El toxoide de tétanos purificado se agregó a la solución de PSCAH con el objeto de alcanzar 2 miligramos de TT/miligramo de PSCAH. El pH se ajustó a 5.0. Se agregó EDAC (16.7 miligramos/mililitro en Tris 0.1 M, pH de 7.5) con una bomba peristáltica (en 1 0 minutos) , para alcanzar una proporción final de 0.5 miligramos de EDAC/miligramo de PSCAH . La solución resultante se dejó durante 1 1 0 minutos a +25°C con agitación, y con regulación del pH , para obtener un tiempo de acoplamiento final de 120 minutos. Luego la solución se neutralizó mediante la adición de Tris-HCl 1 M , pH de 9.0 ( 1 /1 0 del volumen final) , y se dejó durante 30 minutos a +25°C, y luego durante la noche de +2°C a +8°C. El conjugado se aclaró uti lizando un filtro de 1 0 mieras, y se purificó utilizando una columna Sephacryl S400H R (Pharmacia, Suecia). La columna se equilibró en Tris-HCl 10 mM (pH de 7.0) , NaCI 0.075M , y se cargó el conjugado (aproximadamente 460 mililitros) sobre la columna (de +2°C a +8°C). La reserva de la elución se seleccionó como una función de la densidad óptica a 280 nanómetros. La recolección se inició cuando la absorbencia aumentó hasta 0.05. La cosecha se continuó hasta que la Kd alcanzó 0.20. El conjugado se esterilizó por filtro a +20°C, y luego se almacenó de +2°C a +8°C. El conjugado resultante tuvo una proporción de polisacárido:proteína de 1 :2 a 1 :4 (peso/peso) . Ejemplo 2 - Determinación del peso molecular utilizando MALLS Los detectores se acoplaron a una columna de exclusión de tamaños de HPLC, de donde se eluyeron las muestras. Por una parte, el detector de dispersión de luz de láser midió las intensidades de luz dispersadas en 16 ángulos por la solución macromolecular, y por otra parte, un refractómetro interferométrico colocado en l ínea permitió hacer la determinación de la cantidad de muestra eluida. A parti r de estas intensidades , se pueden determinar el tamaño y la forma de las macromoléculas en solución . El peso molecular promedio en peso (Mw) se define como la suma de los pesos de todas las especies, multiplicada por su peso molecular respectivo, y dividida entre la suma de los pesos de todas las especies, a) Peso molecular promedio en peso: -Mw- b) Peso molecular promedio en número: -Mn- ? N M, m. M = - S". m* c) Radio de raíz cuadrada promedio: - Rw- y R2w es el radio 15 cuad rado definido por: R2w ó (r2)w = ' ' ' ?m, (-m,- es la masa del centro de dispersión i , y -r¡- es la distancia entre el centro de dispersión i y el centro de gravedad de la 20 macromolécula) . d) La polidispersidad se define como la proporción -Mw/M n-. Los polisacáridos meningocócicos se analizaron mediante MALLS cargándose sobre dos columnas de H PLC (TSKG6000 y 5000PWxl) utilizadas en combinación . Se cargaron 25 microlitros del pe polisacárido sobre la columna, y se eluyó con 0.75 mililitros de agua filtrada. Los polisacáridos se detectan utilizando un detector de dispersión de luz (Wyatt Dawn DSP equipado con un dispositivo de láser de argón de 10 mW a 488m nanómetros), y un refractómetro inferométrico (Waytt Otilab DSP, equipado con una celda P100, y un filtro rojo a 498 nanómetros). El peso molecular, las polidispersidades, y las recuperaciones de todas las muestras, se calcularon mediante el método de Debye, utilizando un orden de ajuste polinómico de 1 en el software Astra 4.72. Ejemplo 3 - Estudio clínico que compara la inmunización con Meningitec o un conjugado de MenC-TT de tamaño más grande Se llevó a cabo un estudio controlado abierto en fase II para comparar la vacuna conjugada del serogrupo meningocócico C de GSK Biologicals (MenC), con la vacuna conjugada del serogrupo meningocócico C de Haemophylus influenzae b de GSK Biologicals (Hib-MenC), o Meningitec®. Cada dosis de Meningitec® contiene 10 microgramos del oligosacárido del serogrupo meningocócico C conjugado con 15 microgramos de CRM197, y es producido por Wyeth. los conjugados MenC GSK contenían los polisacáridos nativos de aproximadamente 200 kDa conjugados con el toxoide de tétanos (TT). El estudio consistió en cinco grupos, cada uno planeado para contener 100 sujetos, asignados a dos conjuntos paralelos como sigue: En el presente estudio, todos los sujetos de ambos conjuntos recibieron una quinta parte (1/5) de una dosis de Mencevax® ACWY, y una dosis concomitante de Infanrix® hexa a los 12-15 meses de edad (Mes de Estudio 0). Se recolectaron dos muestras de sangre de todos los sujetos (Mes de Estudio 0 y Mes de Estudio 1). El conjunto 1 consistió en cuatro grupos de un estudio de vacunación primaria que fueron vacunados a la edad de 3, 4, y 5 meses con las siguientes vacunas. • Grupo K: MenC (10 microgramos), no adsorbido a sales de aluminio (no ads), conjugado de toxoide de tétanos (TT) e lnfanrixMR hexa (MenC10-TT + lnfanrixMR hexa). • Grupo L: Hib (IOmicrogramos)-MenC (10 microgramos), no adsorbido, conjugado de tT e lnfanrixMR penta (Hb10-MenC10-TT + lnfanrixMR penta). • Grupo M: Hib (5 microgramos)-MenC (5 microgramos), no adsorbido, conjugado de TT e lnfanrixMR penta (Hib5-MenC5-TT + lnfanrixMR penta). • Grupo N: MeningitecMR e lnfanrixMR hexa (MeningitecMR + lnfanrixMR hexa). Los dos grupos de vacunas de Hib-MenC-TT (Grupos L y M) se mantuvieron ciegos en el estudio de refuerzo con respecto a la formulación exacta de la vacuna candidata. El conjunto 2 -(Grupo O) consistió en sujetos de edades emparejadas no vacunados previamente con una vacuna del serogrupo meningocócico C (limpios), pero que habían recibido vacunas pediátricas de rutina de acuerdo con la Germán Permanent Commission on I mmunization (Comisión Permanente Alemana sobre Inmunización). Criterios para la eval uación : Inmunogenicidad: Determinación de las titulaciones de anticuerpos bactericidas contra el meningococo C (SBA-MenC) mediante una prueba bacteriana (corte: una dilución de 1 :8), y medición ELISA de los anticuerpos contra el serogrupo meningocócico C (corte del ensayo: 0.3 microgramos/mililitro), el polisacárido PRP de Hib (corte del ensayo: 0.1 5 microgramos/mililitro), y el toxoide de tétanos (corte del ensayo: 0.1 Unidades Internacionales/mililitro), en muestras de sangre obtenidas antes de la vacunación y aproximadamente un mes después de la vacunación en todos los sujetos. Métodos estadísticos: Demografía: Determinación de la edad promedio en meses (con promedio, intervalo, y desviación estándar [SD]), y composición racial y de género de las cohortes vacunadas con ATP y totales. Inmunogenicidad: Se llevaron a cabo dos análisis de inmunogenicidad basándose en la cohorte de ATP para la in munogenicidad (para los análisis de la memoria inmune y la respuesta al refuerzo) o la cohorte de ATP para la seguridad (para el análisis de la persistencia). Éstos incluyeron: Evaluación de la memoria inmune para MenC y la respuesta al refuerzo para Hib y tétanos (antes y un mes después de la administración de 1 /5 de la dosis de la vacuna del pol isacárido llano) : • Determi nación de las titulaciones medias geom étricas y de las concentraciones (G MTs y G MCs) con intervalos de confianza del 95 por ciento (95% Cl ) . • Determinación del porcentaje de sujetos con titulación/concentración de anticuerpos arriba de los cortes propuestos con un intervalo de confianza exacto del 95 por ciento (índices de seropositividad/seroprotección). • I nvestigación de titulaciones/concentración de anticuerpos después de la vacunación utilizando curvas acumulativas i nversas. • Cálculo del intervalo de confianza del 95 por ciento asintótico estandarizado para la diferencia en el índice de seropositividad/seroprotección. • Entre el grupo vacunado (grupos K, L, M , y N) y el grupo no vacunado (grupo O) . • Determinación de la media geométrica de la proporción individual de la titulación de SBA-MenC sobre la concentración de anti-PSC , con un intervalo de confianza del 95 por ciento. • Determinación del intervalo de confianza del 95 por ciento para la proporción de G MT/C después de la vacunación entre los grupos K, L, M , y el grupo de control N , para anti-P R P y anti-tétanos , y entre cada grupo vacunado (grupos K, L, M , y N) , y el grupo no vacunado (grupo O) para SBA-M enC y anti-PSC utilizando un modelo ANOVA.

Resultados Tabla 1. Titulaciones de SBA-MenC y concentración de anticuerpo anti-PSC después de la vacunación de refuerzo.

Grupo K: Sujetos vacunados con MenC-TT + Infanrix hexa; Grupo L: Sujetos vacunados con Hib10-MenC10-TT + Infanrix, penta; Grupo M: Sujetos vacunados con Hib5-MenC5-TT + Infanrix, penta; Grupo N: Sujetos vacunados con Meningitec + Infanrix, hexa; Grupo O: Sujetos de control (es decir, sujetos no vacunados con la vacuna conjugada de MenC). N: Número de sujetos con resultados disponibles. Se lograron titulaciones más altas de anticuerpos contra MenC y titulaciones más altas de SBA vacunando con las vacunas conjugadas de polisacárido MenC de tamaño más grande (grupos K, L, y M), comparándose con la vacuna conjugada de oligosacárido Meningitec.

Tabla 2. Proporción media geométrica para titulación de MenC SB A/con cent ración de anti-PSC En los cuatro grupos vacunados (grupos K, L, M, y N), GMR aumentó de una manera significativa desde antes hasta después de la vacunación de refuerzo, indicando la presencia de la maduración del anticuerpo y su funcionalidad. GMR en el grupo M (vacunado con Hib5-MenC5-TT) fue más alta que en el grupo N (vacunado con MeningitecMR).

Tabla 3. Persistencia a los 12-15 meses de edad, iusto antes de la administración de las vacunas de refuerzo Grupo K: Sujetos vacunados con MenC10-TT + lnfanrixMR hexa; Grupo L: sujetos vacunados con Hib10-MenC-TT + lnfanrixMR penta; Grupo M: Sujetos vacunados con Hib5-MenC5-TT + lnfanrixMR penta; Grupo N: Sujetos vacunados con MeningitecMR+ lnfanrixMR hexa; N: Número de sujetos con resultados disponibles. Se lograron titulaciones más altas de SBA contra MenC al vacunar con el tamaño más grande de MenC (grupos K, L, M, y N) comparándose con la vacunación con el conjugado de oligosacárido MenC MeningitecMR. Memoria inmune (cohorte de ATP para la inmunogenicidad). La administración de 1/5 de la dosis de la vacuna del polisacárido llano ACWY provocó una titulación muy alta de SBAMenC en los cuatro grupos vacunados, exhibiendo del 98.7 al 100 por ciento y del 97.5 al 100 por ciento de los sujetos vacunados con el régimen de vacunación candidato titulaciones >1:8 y >1:128, respectivamente. En el grupo vacunado con el régimen de MeningitecMR, hubo una tendencia a un porcentaje más bajo de sujetos con titulaciones >1:128 (91.8 por ciento). En comparación, el 17.6 por ciento de los sujetos no vacunados tuvieron titulaciones de SBA MenC >1:8 y >1:128. Ejemplo 4 - Estudio clínico en fase II sobre la vacuna de conjugado de HibMenAC-TT mezclada con DTTw-HepB Diseño del estudio: estudio de un solo centro, abierto, de selección aleatoria (1:1:1:1:1) con cinco grupos. Los cinco grupos recibieron el siguiente régimen de vacunación, respectivamente, a las 6, 10, y 14 semanas de edad. Tritanrix R-HepB/Hib-MenAC 2.5/2.5/2.5: y por consiguiente, referido como 2.5/2.5/2.5. • TritanrixMR-HepB/Hib-MenAC 2.5/5/5: y por consiguiente, referido como 2.5/5/5. • TritanrixMR-HepB/Hib-MenAC 5/5/5: y por consiguiente, referido como 5/5/5. • TritanrixMR-HepB + HiberixMR: y por consiguiente, referido como Hiberix. TritanrixMR-HepB/Hiberix R + MeningitecMR: y por consiguiente, referido como Meningitec. Se tomaron muestras de sangre en el momento de la primera dosis de vacuna (Pre), y un mes después de la tercera dosis de vacuna (posterior a la dosis 3). Tritanrix es una vacuna de DTPw comerciada por GlaxoSmithKIine Biologicals S.A. Se utilizaron 105 sujetos en cada uno de los cinco grupos, dando un total de 525 sujetos en el estudio.

Tabla 4. Contenido de Formulaciones de Vacuna de GSK *La vacuna 2.5/2.5/2.5 fue una dilución de la dosis de la vacuna Hib-MenAC 5/5/5 de GSK Biologicals conteniendo 2.5 microgramos de cada uno de PR'P-TT, MenA-TT, y MenC-TT. Las formulaciones de vacuna de Hib-MenAC se mezclaron extemporáneamente con Tritanrix-HepB. La vacuna combinada de Bordetella Pertussis de células enteras de difteria-tétanos - hepatitis B (DTPw-HB) (Tritanrix-HepB) contiene no menos de 30 Unidades Internacionales (IU) de toxoide de difteria, no menos de 60 Unidades Internacionales de toxoide de tétanos, nos menos de 4 Unidades Internacionales Bordetella pertussis muertas, y 10 microgramos de antígeno superficial de hepatitis B recombinante.

Terapia de referencia, dosis, modo de administración, número de lote: Programa/sitio de vacunación: Un grupo recibió la vacuna TritanrixMR-HepB intramuscularmente en el muslo izquierdo, y HiberixMR intramuscularmente en el muslo derecho a las 6, 10, y 14 semanas de edad. Otro grupo recibió la vacuna TritanrixMR-HepB/HiberixMR intramuscularmente en el muslo izquierdo, y la vacuna Meningitec intramuscularmente en el muslo derecho a las 6, 10, y 14 semanas de edad. Vacuna/composición/dosis/número de lote: La vacuna TritanrixMR-HepB utilizada fue como se describe anteriormente. Una dosis (0.5 mililitros) de vacuna conjugada de Haemophilus influenzae tipo b de GSK Biologicals: Hiberix R contuvo 10 microgramos de PRP conjugado con toxoide de tétanos. En el grupo de HiberixMR, se mezcló con diluyente estéril, y en el grupo de MeningitecMR se mezcló con TritanrixMR-HepB. Una dosis (0.5 mililitros) de vacuna MENINGITEC R de Wyeth Lederle contuvo: 10 microgramos de polisacárido capsular del grupo meníngocócico C conjugado con 15 microgramos de proteína CRM 197 de Corynebacterium diphtheria, y aluminio como sales.

Resultados - Respuestas inmunes generadas contra Hib. MenA, y MenC Tabla 5a. Anti-PRP (microgramos/mililitro) Tabla 5b. SBA-MenC Tabla 5c. SBA-MenA Tabla 5d. Anti-PSC (microgramos/mililitro) Tabla 5e. Anti-PSA (microgramos/mililitro) Conclusión Una comparación de los resultados de inmunogenicidad logrados utilizando la vacuna conjugada de oligosacárido MenC-CRM197 y las tres formulaciones de GSK que contienen los conjugados de polisacáridos MenA-TT y MenC-TT mostró que los conjugados del polisacárido Men fueron capaces de provocar una buena respuesta inmunogénica, similar a la lograda utilizando la vacuna conjugada de oligosacárido Meningitec. Todas las formulaciones probadas dieron una respuesta a MenC en el 100 por ciento de los pacientes.

Ejemplo 5 - Estudio clínico en fase II administrando HibMenCY de una manera concomitante con lnfanrixMR penta de acuerdo con un programa de 2.3. v 4 meses Diseño del estudio: Un estudio de múltiples centros controlado, en fase II, abierto (parcialmente doble-ciego*), de selección aleatoria, con cinco grupos recibiendo un programa primario de tres dosis con vacunas como sigue: Grupo Hib-MenCY 2.5/5/5: Hib-MenCY (2.5/5/5 ) + lnfanrixMR penta.

Grupo Hib-MenCY 5/10/10: Hib-MenCY (5/10/10) + lnfanrixMR penta. Grupo Hib-MenCY 5/5/5: Hib-MenCY (5/5/5) + lnfanrixMR penta. Grupo Hib-MenC: Hib-MenC (5/5) + lnfanrix R penta. Grupo Menjugate: Menjugate R** + lnfanrixMR hexa (control). *Hib-MenCY 2.5/5/5, Hib-MenCY 5/10/10 y Hib-MenC se administraron de una manera doble-ciega, mientras que el grupo HibMenCY 5/5/5 y el grupo de Menjugate fueron abiertos. Las formulaciones de 2.5/5/5, 5/10/10 y 5/5/5 de Hib-MenCY contienen polisacáridos nativos MenC y polisacáridos MenY que se microfluidizan. **MenjugateMR contiene 10 microgramos de los oligosacáridos MenC conjugados con 12.5 a 25 microgramos de CRM197 por dosis, y es producido por Chíron. Vacunación a los +/- 2, 3, 4 meses de edad (mes del estudio 0, mes 1, y mes 2), y las muestras de sangre (3.5 mililitros) de todos los sujetos antes de, y un mes de, la vacunación primaria (mes del estudio 0, y mes 3).

Vacuna de estudio, dosis, modo de administración, número de lote: Tres dosis inyectadas intramuscularmente a intervalos de un mes, a aproximadamente los 2, 3, y 4 meses de edad, como sigue: Tabla 6. Vacunas administradas (estudio y control), grupo, programa/sitio, y dosis Inmunogenicidad: Medición de titulaciones/concentraciones de anticuerpos contra cada antígeno de vacuna: Antes de la primera dosis (mes 0), y aproximadamente un mes después de la tercera dosis (mes 3) en todos los sujetos para: SBAMenC y SBA-MenY, anti-PSC y anti-PSY, anti-PRP, anti-T, anti-FHA, anti-PRN y anti-PT. Utilizando la actividad bactericida en suero contra los serogrupos C y Y de N. meningitidis (SBA-MenC y SBA-MenY, corte: 1:8 y 1:128); ensayos ELISA con cortes: >0.3 microgramos/mililitro y >2 microgramos/mililitro para los polisacáridos anti-? meningitidis serogrupos C e Y (anti-PSC IgG y anti-PSY IgG); =0.15 microgramos/mililitro y =1.0 microgramos/mililitro para el polisacárido de poli-ribosil-ribitil-fosfato de Hib (anti-PRP IgG); 5EL. U/mililitro para anti-FHA, anti-PRN, anti-PT; >0.1 Unidades Internacionales/mililitro de anti-toxoide de tétanos (anti-TT). Solamente un mes después de la tercera dosis (mes 3) en todos los sujetos para: anti-D, anti-HBs, y anti-polio 1, 2, y 3. Utilizando ensayos ELISA con cortes: 0.1 Unidades Internacionales/mililitro para anti-dífteria (anti-D); >/IO miliunidades internacionales/mililitro para anti-hepatitis B (anti-HBs); y corte de prueba de microneutralización: 1:8 para anti-polio tipo 1, 2, y 3 (antí-polio 1 , 2, y 3). Métodos estadísticos: Se calcularon los índices de seroprotección/seropositividad y las concentraciones/titulaciones medias geométricas (GMCs/GMTs) con intervalos de confianza del 95 por ciento (95% Cl) por grupo, para SBAS-MenC, anti-PSC, SBA-MenY, anti-PSY, anti-PRP, anti-Tétanos, antí-PT, anti-FHA, y anti-PRN, antes de, y un mes después de, la vacunación; para anti-dífteria, anti-HBs, anti-Polio 1 , anti-Polio 2, y anti-Polio 3 un mes después de la vacunación. También se calculó la respuesta de la vacuna (aparición de anticuerpos en sujetos inicialmente seronegativos, o cuando menos mantenimiento de las concentraciones de anticuerpos en los sujetos inicialmente seropositivos) con un intervalo de confianza del 95 por ciento para anti-PT, anti-PRN, y anti-FHA, un mes después de la vacunación. También se presentan las curvas acumulativas inversas para cada anticuerpo en el mes 3. Se evaluaron las diferencias entre los grupos de HibMenCY y HibMenC, comparándose con el grupo de control de MenjugateMR, de una manera exploratoria para cada anticuerpo, con la excepción de SBAMenY y anti-PSY, en términos de: (1 ) la diferencia entre el grupo de MenjugateM R (menos) los grupos de HibMenCY y HibMenC, para el porcentaje de sujetos arriba de los cortes especificados, o con una respuesta de vacuna con su intervalo de confianza del 95 por ciento asintótico estandarizado, (2) las proporciones de GMC ó GMT del grupo de MenjugateMR sobre los grupos de HibMenCY y HibMenC con su intervalo de confianza del 95 por ciento. Se hicieron las mismas comparaciones para evaluar la diferencia entre cada par de formulaciones de Hib-MenCY para los anticuerpos anti-PRP, SBA-MenC, anti-PSC, SBA-MenY, anti-PSY, y anti-TT. Se calcularon las incidencias globales de los síntomas locales y generales solicitados por grupo de acuerdo con el tipo de síntoma, su intensidad, y su relación con la vacunación (como porcentajes de los sujetos que reportaron síntomas generales, locales, y cualesquiera síntomas solicitados dentro de los 8 días en seguida de la vacunación, y su intervalo de confianza del 95 por ciento exacto) . Se calcularon las incidencias de síntomas no solicitados por grupo. Para los síntomas de Grado 3, se proporcionaron establecimiento <48 horas, atención médica, duración, relación con la vacunación, y resultados. Se describieron completamente los Eventos Adversos Severos. índices de seroprotección/seropositividad y GMC/Ts (cohorte de ATP para la inmunogenicidad).

Tabla 7a. Anti-PRP (microgramos/mililitro) Grupo N °/?0.15 LL UL >1 LL UL GMC LL UL Hib MenCY 2.5/5/5 67 100.0 94.6 100.0 98.5 92.0 100.0 9.01 7.25 11.21 Hib MenCY 5/10/10 67 100.0 94.6 100.0 98.5 92.0 100.0 9.49 7.72 11.65 Hib MenCY 5/5/5 70 100.0 94.9 100.0 98.6 92.3 100.0 8.08 6.53 9.98 Hib MenC 74 100.0 95.1 100.0 98.6 92.7 100.0 10.44 8.49 12.83 MenjugateMR 71 100.0 94.9 100.0 80.3 69.1 88.8 2.60 1.97 3.43 Tabla 7b. SBA-MenC (Titulación) Grupo N °/<=\:8 LL UL =1:128 LL UL GMT LL UL Hb MenCY 2.35/5 70 100.0 94.9 100.0 95.7 88.0 99.1 1005.8 773.5 1308.0 Hb MenCY 5 1 CY10 67 100.0 94.6 100.0 94.0 85.4 98.3 1029.8 799.7 1326.0 Hb MenCY 5/56 71 100.0 94.9 100.0 94.4 862 98.4 906.9 691.3 1189.8 HfoMenC 74 100.0 95.1 100.0 95.9 88.6 992 871.0 677.3 1120.0 Me?jugateM R 71 100.0 94.9 10O.O 100.0 94.9 100.0 3557.6 2978.8 4248.8 Tabla 7c. Anti-PSC (m icrogramos/mi lilitro) Grupo N °/<=0J3 LL UL =2 LL UL GMC LL UL Hib MenCY 2.5/5/5 69 100.0 94.8 100.O 100.0 94.8 100.0 21.70 18.36 25.65 Hib MenCY 5 10/10 66 100.0 94.6 100.0 100.0 94.6 100.0 2726 2326 31.95 Hib MenCY 56/5 70 100.0 94.9 100.0 100.0 94.9 100.0 19.02 16.49 21.93 HibMenC 74 100.0 95.1 100.0 100.0 95.1 100.0 21.08 1824 24.35 Menjugate R 71 100.0 94.9 100.0 100.0 94.9 100.0 38.49 33.64 44.05 Tabla 7d. SBA-MenY (Titu lación) Grupo N °/=V.8 LL UL =1:128 LL UL GMT LL UL Hib MenCY 2.566 69 97.1 89.9 99.6 92.8 83.9 97.6 470.7 351.1 6312 Hb MenCY 5/1 (VIO 66 97.0 89.5 99.6 86.4 75.7 93.6 437.1 3220 593.4.8 Hb MenCY 566 71 98.6 924 100.0 95.8 88.1 99.1 635.3 501.5 804.8 Hib MenC 74 21.6 12.9 32.7 13.5 6.7 23.5 9.3 6.3 13.7 Me?jugate MR 71 19.7 112 30.9 9.9 4.1 19.3 7.5 5.4 10.4 Tabla 7e. Anti-PSY (microgramos/mililitro) Grupo N °/<=03 LL UL =2 LL UL GMC LL UL Hib MenCY 2.566 69 100.0 94.8100.0 100.0 94.8 100.0 26.86 2286 31.56 Hib MenCY 5/10/10 66 100.0 94.6100.0 100.0 94.6 100.0 37.02 31.84 43.04 Hib MenCY 566 70 100.0 94.9100.0 100.0 94.9 100.0 23.57 19.94 27.86 HibMenC 74 8.1 3.0 16.8 4.1 0.8 11.4 0.19 0.15 025 Menjugate R 71 5.6 1.6 13.8 1.4 0.0 7.6 0.17 0.15 0.19 Tabla 7f. Anti-tétanos (lU/ml) Grupo N %>0.1 LL UL GMC LL UL Hib MenCY 2.5/5/5 68 100.0 94.7 100.0 3.06 2.63 3.55 Hib MenCY 5/10/10 67 100.0 94.6 100.0 3.25 2.88 3.68 Hib MenCY 5/5/5 70 100.0 94.9 100.0 2.97 2.59 3.41 Hib MenC 74 100.0 95.1 100.0 3.15 2.73 3.64 MenjugateMR 71 .100.0 94.9 100.0 1.66 1.39 1.97 Grupo Hib-MenCY 2.5/5/5: Hib-MenCY (2.5/5/5) + lnfanrixMR penta. Grupo Hib-MenCY 5/10/10: Hib-MenCY (5/10/10) + lnfanrixMR penta. Grupo Hib-MenCY 5/5/5: Hib-MenCY (5/5/5) +lnfanrixMR penta. Grupo Hib-MenC: Hib-Men (5/5)+ lnfanrix MMRH hexa.

Grupo Menjugate: MenjugateM R + lnfanrixM R penta. N = Número de sujetos con resultados disponibles. % = porcentaje de sujetos con concentración/titulación dentro del intervalo especificado. GMC/T: Concentración/titulación media geométrica; 95% Cl = intervalo de confianza del 95 por ciento; LL = límite inferior; UL = l ímite superior. Concl usión Los conjugados de polisacáridos MenC e Y produjeron una buena respuesta inmune en todos los sujetos, produciendo el 1 00 por ciento de los sujetos respuestas de más de 0.3 microgramos/mililitro contra MenC y MénY. Ejemplo 6 - Estudio clínico en fase II gue compara tres formulaciones de MenACWY-TT con la vacuna conjugada del oliqosacárido MenC-CRM197 Meningitec Este ejemplo reporta un estudio controlado de intervalo de dosis, en fase I I, abierto (parcialmente ciego), de selección aleatoria, para evaluar la iinmunogenicidad de tres formulaciones diferentes de los serogrupos meningocócicos A, C, W-135, Y, vacuna conjugada de toxoide de tétanos (MenACWY-TT), de GlaxoSmithKIine Biologicals, en comparación con una vacuna conjugada de oligosacárido MenC- CRM 197 (Meningitec R) , cuando se da como una dosis a niños de 12 a 14 meses de edad. El estudio clínico fue un estudio de múltiples centros, controlado, abierto (parcialmente doble-ciego*), en donde los sujetos elegibles de 12 a 14 meses de edad se seleccionaron aleatoriamente (1 : 1 : 1 : 1 ) para uno de cuatro grupos paralelos de 50 sujetos, para recibir una sola dosis primaria en la Cita 1 como sigue: Forma 1 T: MenACWY-TT en una dosis de 2.5 microgramos del polisacárido MenA conjugado con el toxoide de tétanos (TT) , 2.5 microgramos del polisacárido MenC conjugado con el toxoide de tétanos, 2.5 microgramos del polisacárido MenW conjugado con el toxoide de tétanos, y 2.5 microgramos del polisacárido MenY conjugado con el toxoide de tétanos. Forma 2T: MenACWY-TT en una dosis de 5 microgramos del polisacárido MenA conjugado con el toxoide de tétanos, 5 microgramos del polisacárido MenC conjugado con el toxoide de tétanos, 5 microgramos del polisacárido MenW conjugado con el toxoide de tétanos, y 5 microgramos del polisacárido MenY conjugado con el toxoide de tétanos. Forma 3T: MenACWY-TT en una dosis de 2.5 microgramos del polisacárido MenA conjugado con el toxoide de tétanos, 10 microgramos del polisacárido MenC conjugado con el toxoide de tétanos, 2.5 microgramos del polisacárido MenW conjugado con el toxoide de tétanos, y 2.5 microgramos del polisacárido MenY conjugado con el toxoide de tétanos. Ctrl T: 10 microgramos del oligosacárido MenC conjugado con 12.5 a 25 microgramos de CRM 1 97 (Meningitec). *Las tres diferentes formulaciones de MenACWY-TT se administraron de una manera doble-ciega.

Programa/sitio de vacunación: Se administró una sola dosis de vacuna intramuscularmente en el deltoide izquierdo en la Cita 1 (Mes de Estudio 0) de acuerdo con la asignación aleatoria. Todas las vacunas candidatas fueron suministradas como un granulo liofilizado en un frasco de una sola dosis (0.5 mililitros después de la reconstitución con el diluyente de suero suministrado). Inmunogenicidad: Medición de las titulaciones/ concentraciones de anticuerpos contra los componentes del antígeno de la vacuna meningocócica en las muestras de sangre obtenidas antes de la dosis de la vacuna en estudio (mes 0), y aproximadamente 1 mes después de la dosis de la vacuna en estudio (mes 1 ) en todos los sujetos. Determinación de las titulaciones de anticuerpos bactericidas contra N. meningitidis serogrupos A, C, W-135, e Y (SBA-MenA, SBA-MenC, SBA-MenW, y SBA-MenY) mediante una prueba bactericida (cortes de ensayo: una dilución de 1 :8 y 1 : 128), y medición ELI SA de los anticuerpos contra N. meningitidis serogrupos A, C, W-135, e Y (anti-PSA, anti-PSC, anti-PSW, y anti-PSY, cortes de ensayo >0.3 mícrogramos/mililitro y >2 microgramos/mililitro), y toxoide de tétanos (anti-tétanos, corte de ensayo de 0.1 Unidades Internacionales/mililitro). Resultados Respuesta de anticuerpos en términos del porcentaje de respondentes a SBA-MenA, SBA-MenC, SBA-MenW, y SBA-MenY, un mes después de la vacunación (el punto final primario), como se muestra en la Tabla 8. Una respuesta se define como mayor que , o igual a, un aumento de cuatro veces para los sujetos seropositivos, o seroconversión para los sujetos seronegativos antes de la vacunación .

Tabla 8. Respuestas a la vacuna para el anticuerpo SBA un mes después de la vacunación La Tabla 9 muestra los números de sujetos que alcanzaron titulaciones de SBA sobre los puntos de corte de 1:8 y 1:128, así como GMTs.

Tabla 9. índices de seropositividad y GMTs para los anticuerpos SBA un mes después de la vacunación La vacunación con las tres formulaciones del conjugado de polisacárido ACWY-TT condujo a buenas respuestas de SBA contra MenA, MenC, MenW, y MenY, teniendo del 95 al 100 por ciento de los sujetos titulaciones mayores de 1:8. En particular, las formulaciones 5/5/5/5 y 2.5/10/2.5/2.5 de los conjugados de polisacáridos produjeron una respuesta más alta contra MenC que la vacuna de oligosacárido MeningitecMR, como se ve por una proporción más alta de los sujetos que tuvieron una titulación mayor de 1:128 y las lecturas de GMT.

Tabla 10. índices de seropositividad y GMCs para los anticuerpos anti-polisacárido un mes después de la vacunación Las tres formulaciones de la vacuna conjugada de polisacárido ACWY-TT produjeron buenas respuestas inmunes contra MenA, MenC, MenW, y MenY, alcanzando entre el 93 por ciento y el 1 00 por ciento de los sujetos titulaciones mayores de 0.3 microgramos/mililitro. Se lograron lecturas más altas de GMC utilizando las formulaciones 5/5/5/5 y 2/5/10/2.5/2.5 de la vacuna conjugada de polisacárido ACWY-TT en comparación con Meningitec. Ejemplo 7 - Comparación de la inmunogenicidad de los conjugados de polisacáridos MenY nativo v dimensionado Los ratones (DBA hembras/2 de 6 a 8 semanas) recibieron dos inyecciones , con dos semanas de separación, de PSY-TT, por la vía subcutánea. Se tomaron muestras de sangre 14 días después de la segunda inyección, con el objeto de llevar a cabo el ELI SA anti-SPY y el SBA utilizando la cepa MenY S1 975. Por inyección, los ratones recibieron 1 microgramo de PSY-TT (formulación no adsorbida lyo).

Se utilizaron los conjugados descritos en la Tabla 1 1 .

Tabla 11 Resultados Los resultados (Figura 1) muestran una tendencia hacia una inmunogenicidad más alta para los conjugados preparados utilizando el PSY dimensionado. La Figura 1A muestra los resultados de GMC obtenidos en un ELISA para los antisueros reproducidos contra los conjugados preparados a partir del MenY nativo (ENYTT012), el MenY microfluidizado - 40 ciclos (ENYTT014), y el MenY microfluidizado - 20 ciclos (ENYTT015). Las GMCs más altas se obtuvieron cuando se preparó MenY-TT a partir de MenY microfluidizado. Se obtuvieron resultados similares cuando se evaluaron los antisueros mediante el ensayo de SBA (Figura 1B). Nuevamente, se alcanzaron valores más altos de GMT utilizando los conjugados preparados a partir de MenY microfluidizado. Ejemplo 8 - Estudio clínico gue evalúa el efecto de un enlazador en MenA en una vacuna conjugada de MenACWY Se administró una sola dosis de diferentes formulaciones de la vacuna de MenACWY a adolescentes de 15 a 19 años de edad en cinco grupos de 25 sujetos, en un estudio de selección aleatoria de 1 :1 :1 : 1 :1 . Las formulaciones probadas fueron: F1 - MenACWY conjugado con toxoide de tétanos, conteniendo el conjugado de MenA un espaciador de AH-5/5/5/5 microgramos. F2 - MenACWY conjugado con toxoide de tétanos, conteniendo el conjugado de MenA un espaciador de AH-2.5/5/2.5/2.5 microgramos. F3 - MenACWY conjugado con toxoide de tétanos, conteniendo el conjugado de MenA un espaciador de AH-5/5/2.5/2.5 microgramos. F4 - MenACWY conjugado con toxoide de tétanos, sin espaciador en ningún conjugado - 5/5/5/5 microgramos. Grupo de control - Mencevax ACWY. En el día 30 después de la inoculación, se tomó una muestra de sangre de los pacientes. Las muestras de sangre se utilizaron para evaluar el porcentaje de los respondentes SBA-MenA, SBA-MenC, SBA-MenW135 y SBA-MenY un mes después de la dosis de vacuna. Una respuesta a la vacuna se definió como 1 ) para los sujetos inicialmente seronegativos - una titulación de anticuerpo después de la vacuna de >1 /32 en un mes, ó 2) para los sujetos inicialmente seropositivos -una titulación de anticuerpo >4 veces la titulación de anticuerpo antes de la vacunación. Resultados Como se muestra en la Tabla 13, el uso de un espaciador en el conjugado de MenA condujo a una mayor respuesta inmune contra MenA. El porcentaje de respondente se elevó desde el 66 por ciento hasta el 90-95 por ciento cuando se agregó el espaciador de AH. Esto se reflejó en un aumento en SBA GMT desde 4,335 hasta 10,000, y un aumento en GMC desde 5 hasta 20-40. De una manera sorprendente, el uso de un espaciador de AH también condujo a una mayor respuesta inmune contra MenC, como se ve por un aumento en el porcentaje de respondentes y un aumento en SBA GMT. También se pudo ver un aumento en SBA GMT contra MenY (6742-7122 y contra MenW (4621-5418) cuando se introdujo un espaciador.

Tabla 12 Ejemplo 9 - Estudio clínico gue evalúa el efecto de un enlazador en conjugados de MenA y MenC en una vacuna conjugada de MenACWY Se administró una sola dosis de diferentes formulaciones de vacuna MenACWY a adolescentes de 15 a 19 años de edad en cinco grupos de 24 sujetos, en un estudio de selección aleatoria de 1 : 1 :1 :1 :1 . Las formulaciones probadas fueron: F1 - MenACWY conjugado con toxoide de tétanos, conteniendo los conjugados de MenA y MenC un espaciador de AH-2.5/2.5/2.5/2.5 microgramos. F2 - MenACWY conjugado con toxoide de tétanos, conteniendo los conjugados de MenA y MenC un espaciador de AH-5/5/2.5/2.5 microgramos. F3 - MenACWY conjugado con toxoide de tétanos, conteniendo los conjugados de MenA y MenC un espaciador de AH-5/5/5/5 microgramos. F4 - MenACWY conjugado con toxoide de tétanos , conteniendo el conjugado MenA un espaciado r de AH-5/5/5/5 microg ramos. G rupo de control - MencevaxM R ACWY . En el día 30 después de la inoculación , se tomó una muestra de sangre de los pacientes. Las muestras de sangre se utilizaron para evaluar el porcentaje de respondentes a SBA-MenA, SBA-MenC , SBA-MenW1 35 , y SBA-MenY , un mes después de la dosis de vacuna. Una respuesta a la vacuna se definió como 1 ) para los sujetos inicial mente seronegativos - una titulación de anticuerpo después de la vacunación de > 1 /32 en un mes, ó 2) para los sujetos inicialmente seropositivos - una titulación de anticuerpo de >4 veces la titulación de anticuerpo antes de la vacunación .

Resu ltados La introducción de un espaciador de AH en el conjugado de MenC condujo a un aumento en la respuesta inmune contra MenC, como se muestra en la Tabla 14. Esto se demuestra por un aumento en SBA GMT desde 1 943 hasta 4329, y un aumento en anti-PSC GMC desde 7.65 hasta 1 3.1 3. Se mantuvieron buenas respuestas inmunes contra MenA, MenW, y MenY .

Tabla 13

Claims

REIVINDICACIONES 1 . Una composición inmunogénica, la cual comprende cuando menos dos sacáridos capsulares diferentes de N. meningitidis, en donde uno o más se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA, MenC, MenY, y MenW, los cuales se conjugan con una proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 1 :2 y 1 :5, y uno o más sacáridos diferentes se seleccionan a partir de un segundo grupo que consiste en MenA, MenC, MenY, y MenW, los cuales se conjugan con una proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 5: 1 y 1 : 1 .99. 2. La composición inmunogénica de la reivindicación 1 , la cual comprende cuando menos dos sacáridos capsulares diferentes de N. meningitidis, en donde uno o más se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA y MenC, los cuales se conjugan con una proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 1 :2 y 1 :5, y uno o más sacáridos diferentes se seleccionan a partir de un segundo grupo que consiste en MenC, MenY, y MenW, los cuales se conjugan con una proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 5: 1 y 1 : 1 .99. 3. La composición inmunogénica de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2, en donde MenW está presente en la proporción del sacárido MenW a la proteína portadora de entre 5: 1 y 1 : 1 .99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1:1 y 1:1.7, de entre 1:1.2 y 1:1.6, o de entre 1:1.4 y 1:1.5 (peso/peso). 4. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde MenY está presente en la proporción del sacárido MenY a la proteína portadora de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.9, de entre 1:1 y 1:1.8, de entre 1:1.1 y 1:1.6, o de entre 1:1.3 y 1:1.4 (peso/peso). 5. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde MenA está presente en la proporción del sacárido MenA a la proteína portadora de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.4 y 1:4, de entre 1:2.7 y 1:3.5, o de entre 1:2.9 y 1 :3.1 (peso/peso). 6. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde MenC está presente en la proporción del sacárido MenC a la proteína portadora de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1.3:1 y 1:1.6, de entre 1.2:1 y 1:1.4, o de entre 1.1:1 y 1:1.2 (peso/peso). 7. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde MenC está presente en la proporción del sacárido MenC a la proteína portadora de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.5 y 1:4.5, de entre 1:2.7 y 1:4.3, de entre 1:3 y 1:4, o de entre 1:3.3 y 1:3.5 (peso/peso). 8. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, la cual comprende cuando menos dos sacáridos capsulares diferentes de N. meningitidis, en donde uno o más se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA, MenC, MenY, y MenW, los cuales se conjugan a través de un enlazador con una proteína portadora, y uno o más sacáridos diferentes se seleccionan a partir de un segundo grupo que consiste en MenA, MenC, MenY, y MenW, los cuales se conjugan directamente con una proteína portadora. 9. La composición inmunogénica de la reivindicación 8, la cual comprende cuando menos dos sacáridos capsulares diferentes de N. meningitidis, en donde uno o más se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA y MenC, los cuales se conjugan a través de un enlazador con una proteína portadora, y uno o más sacáridos diferentes se seleccionan a parti r de un segundo grupo que consiste en MenC, MenY y MenW, los cuales se conjugan directamente con una proteína portadora. 10. La composición inmunogénica de la reivindicación 9, la cual comprende el sacárido capsular MenA conjugado a través de un enlazador con una proteína portadora, y el sacárido capsular MenC directamente conjugado con una proteína portadora. 1 1 . La composición inmunogénica de la reivindicación 9, la cual comprende el sacárido capsular MenC conjugado a través de un enlazador con una proteína portadora, y el sacárido capsular MenY conjugado directamente con una proteína portadora. 12. La composición inmunogénica de la reivindicación 9, la cual comprende los sacáridos capsulares MenA y MenC conjugados a través de un enlazador con una proteína portadora, y los sacáridos capsulares MenY y MenW conjugados directamente con una proteína portadora. 13. La composición inmunogénica de la reivindicación 9, la cual comprende el sacárido capsular MenA conjugado a través de un enlazador con una proteína portadora, y los sacáridos capsulares MenC, MenY, y MenW conjugados directamente con una proteína portadora. 14. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde cada sacárido capsular de N. meningitidis se conjuga con una proteína portadora independientemente seleccionada a partir del grupo que consiste en TT, DT, CRM197, fragmento C de TT, y proteína D. 15. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde cada sacárido capsular de N. meningitidis se conjuga con la misma proteína portadora seleccionada a partir del grupo que consiste en TT, DT, CRM197, fragmento C de TT, y proteína D. 16. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde cada sacárido capsular de N. meningitidis se conjuga con TT. 17. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde cada sacárido capsular de N. meningitidis se conjuga por separado con una proteína portadora separada. 18. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde cuando menos uno, dos, o tres conjugados de sacáridos capsulares de N. meningitidis, se conjugan di rectamente con una prote ína portadora. 1 9. La composición i nmunogénica de la reivindicación 1 8 , en donde MenW y/o MenY, MenW y/o MenC , MenY y/o MenC, o MenW y/o MenY, se conjugan directamente con una prote ína portadora. 20. La composición inmunogénica de la reivindicación 1 8 ó 1 9 , en donde cuando menos uno, dos, o tres conjugados de sacárido de N. meningitidis se conj ugan di rectamente mediante la qu ímica de CDAP. 21 . La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 , en donde cuando menos uno, dos, o tres sacáridos capsulares de N. meningitidis, se conj ugan con la prote ína portadora por medio de un enlazador. 22. La composición inmunogénica de la reivi ndicación 21 , en donde el enlazador es bifuncional . 23. La composición i nmunogénica de la reivindicación 21 ó 22 , en donde el enlazador tiene dos grupos amino reactivos. 24. La composición inmunogénica de la reivindicación 21 ó 22 , en donde el enlazador tiene dos grupos de ácido carboxílico reactivos. 25. La composición i nmunogénica de la reivi ndicación 21 ó 22 , en donde el enlazador tiene un grupo amino reactivo en un extremo, y un grupo de ácido carboxílico reactivo en el otro extremo. 26. La composición i nmunogénica de las reivindicaciones 21 a 25, en donde el enlazador tiene entre 4 y 12 átomos de carbono. 27. La composición inmunogénica de la reivindicación 21 ó 22, en donde el enlazador es ADH . 28. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 21 a 27, en donde el o cada sacárido capsular de N. meningitidis conjugado por medio de un enlazador, se conjuga con el enlazador con la qu ímica de CDAP. 29. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 21 a 28, en donde la proteína portadora se conjuga con el enlazador utilizando la química de carbodi-imida, opcionalmente utilizando EDAC. 30. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 21 a 29, en donde el o cada sacárido capsular de ?/. - meningitidis se conjuga con el enlazador antes de que se conjugue la proteína portadora con el enlazador. 31 . La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 21 a 30, en donde MenA se conjuga con una proteína portadora por medio de un enlazador. 32. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 21 a 31 , en donde MenC se conjuga con una proteína portadora por medio de un enlazador. 33. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, la cual comprende sacáridos capsulares de N. meningitidis a partir de cuando menos dos de los serogrupos A, C, W135, e Y, conjugados con una proteína portadora, para producir un conjugado de sacárido capsular de N. meningitidis, en donde el tamaño promedio de cada sacárido de N. meningitidis es mayor de 50 kDa, 75 kDa, 100 kDa, 1 1 0 kDa, 120 kDa, ó 1 30 kDa. 34. La composición inmunogénica de la reivindicación 33, en donde cada sacárido de N. meningitidis es ya sea un polisacárido nativo, o bien se menciona por un factor no mayor de x10. 35. La composición inmunogénica de la reivindicación 33 ó 34, en donde cuando menos uno, dos, tres, o cuatro sacáridos capsulares de N. meningitidis se han dimensionado mediante microfluidización. 36. La composición inmunogénica de la reivindicación 33 ó 34, en donde cada sacárido capsular de N. meningitidis es un polisacárido nativo. 37. La composición inmunogénica de la reivindicación 33 ó 34, en donde cada sacárido capsular de N. meningitidis se dimensiona por un factor no mayor de x1 0. 38. La composición inmunogénica de la reivindicación 31 ó 32, en donde los conjugados de N. meningitidis se hacen de una mezcla de algunos polisacáridos nativos y otros sacáridos que se dimensionan por un factor no mayor de x10. 39. La composición inmunogénica de la reivindicación 38, en donde el sacárido capsular del serogrupo Y se dimensiona por un factor no mayor de x10. 40. La composición inmunogénica de la reivindicación 38 ó 39, en donde los sacáridos capsulares de los serogrupos A y C son polisacáridos nativos, y los sacáridos de los serogrupos W135 e Y se dimensionan por un factor no mayor de x10. 41. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 33 a 40, en donde el tamaño promedio de cada sacárido capsular de N. meningitidis es de entre 50 kDa y 300 kDa, o de entre 50 kDa y 200 kDa. 42. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 33 a 41, la cual comprende un sacárido capsular MenA que tiene un tamaño promedio mayor de 50 kDa, 75 kDa, 100 kDa, o un tamaño promedio de entre 50 y 100 kDa o de entre 55 y 90 kDa o de entre 60 y 80 kDa. 43. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 33 a 42, la cual comprende un sacárido capsular MenC que tiene un tamaño promedio mayor de 50 kDa, 75 kDa, 100 kDa, o de entre 100 y 200 kDa, de entre 100 y 150 kDa, de entre 80 y 120 kDa, de entre 90 y 110 kDa, de entre 150 y 200 kDa, de entre 120 y 240 kDa, de entre 140 y 200 kDa, de entre 160 y 200 kDa, o de entre 190 a 200 kDa. 44. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 33 a 43, la cual comprende un sacárido capsular MenY, que tiene un tamaño promedio mayor de 50 kDa, 75 kDa, 100 kDa, o de entre 60 y 190 kDa, o de entre 70 y 180 kDa, o de entre 80 y 170 kDa, o de entre 90 y 160 kDa, o de entre 100 y 150 kDa, o de entre 100 y 150 kDa, o de entre 120 y 40 kDa. 45. La composición inmunogénicá de las reivindicaciones 33 a 44, la cual comprende un sacárido capsular MenW que tiene un tamaño promedio mayor de 50 kDa, 75 kDa, 100 kDa, o de entre 60 y 190 kDa, o de entre 70 y 180 kDa, o de entre 80 y 170 kDa, o de entre 90 y 160 kDa, o de entre 100 y 150 kDa, o de entre 140 y 180 kDa, o de entre 150 y 170 kDa, o de entre 110 y 140 kDa. 46. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la dosis de cada conjugado de sacárido es de entre 2 y 20 microgramos, de entre 3 y 10 microgramos, de entre 4 y 7 microgramos, o alrededor de (o exactamente) 5 microgramos del sacárido. 47. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, la cual comprende además un sacárido capsular de H. influenzae b (Hib) conjugado con una proteína portadora. 48. La composición inmunogénica de la reivindicación 47, en donde el sacárido capsular de H. influenzae b se conjuga con una proteína portadora seleccionada a partir del grupo que consiste en TT, DT, CRM197, fragmento C de TT, y proteína D. 49. La composición inmunogénica de la reivindicación 47 ó 48, en donde el sacárido de Hib se conjuga con la misma proteína portadora que para cuando menos uno, dos, tres, o todos los conjugados de sacáridos capsulares de N. meningitidis. 50. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 47 a 49, en donde el sacárido de Hib se conjuga con TT. 51. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 47 a 50, en donde la proporción de Hib a la proteína portadora en el conjugado de sacárido capsular de Hib, es de entre 1 :5 y 5: 1 (peso/peso) . 52. La composición inmunogénica de la reivindicación 51 , en donde la proporción de Hib a la proteína portadora en el conjugado de sacárido capsular de Hib es de entre 1 : 1 y 1 :4, de entre 1 :2 y 1 :3.5, o de alrededor de 1 :3 (peso/peso). 53. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 47 a 52, en donde el sacárido capsular de Hib se conjuga con la proteína portadora por medio de un enlazador. 54. La composición inmunogénica de la reivindicación 53, en donde el enlazador es bifuncional . 55. La composición inmunogénica de la reivindicación 53 ó 54, en donde el enlazador tiene dos grupos amino reactivos. 56. La composición inmunogénica de la reivindicación 53 ó 54, en donde el enlazador tiene dos grupos de ácido carboxílico reactivos. 57. La composición inmunogénica de la reivindicación 53 ó 54, en donde el enlazador tiene un grupo amino reactivo en un extremo, y un grupo de ácido carboxílico reactivo en el otro extremo. 58. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 53 a 57, en donde el enlazador tiene entre 4 y 12 átomos de carbono. 59. La composición inmunogénica de la reivindicación 53 ó 54, en donde el enlazador es ADH . 60. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 47 a 59, en donde el sacárido de Hib se conjuga con la proteína portadora o el enlazador utilizando CNBr ó CDAP. 61 . La composición inmunogénica de las reivindicaciones 53 a 60, en donde la proteína portadora se conjuga con el sacárido de Hib por medio del enlazador, empleando un método que comprende la química de carbodi-imida, opcionalmente la qu ímica de E DAC. 62. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 47 a 61 , la cual comprende un conjugado de sacárido de Hib, y cuando menos dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales, en donde el conjugado de Hib está presente en una dosis más baja que la dosis promedio de los cuando menos dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales. 63. La composición inmunogénica de la reivindicación 62, en donde el conjugado de Hib está presente en una dosis más baja que la dosis de cada uno de los cuando menos dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales. 64. La composición inmunogénica de la reivindicación 62 ó 63, en donde los cuando menos dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales comprenden el conjugado de sacárido capsular del serogrupo C de N. meningitidis (MenC). 65. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 62 a 64, en donde los cuando menos dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales comprenden el conjugado de sacárido capsular del serogrupo Y de N. meningitidis (MenY). 66. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 62 a 65, en donde los cuando menos dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales comprenden el conjugado de sacárido capsular del serogrupo A de N. meningitidis (MenA). ^ 67. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 62 a 66, en donde los cuando menos dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales comprenden al conjugado de sacárido capsular del serogrupo W135 de N. meningitidis (MenW) . 68. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 62 a 67, en donde los cuando menos dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales comprenden un sacárido capsular de S. pneumoniae derivado a partir de una cepa seleccionada a partir del grupo que consiste en los serotipos 1 , 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 1 1 A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 1 9F, 20, 22 F, 23F, y 33F. 69. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 62 a 68, en donde los cuando menos dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales comprenden un sacárido capsular de Vi de S. typhi. 70. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 62 a 69, en donde la dosis del conjugado de sacárido de Hib es de entre 0.1 y 9 microgramos, de entre 1 y 5 microgramos, o de entre 2 y 3 microgramos del sacárido. 71 . La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 62 a 70, en donde la dosis de cada uno de los cuando menos dos conjugados de sacáridos adicionales es de entre 2 y 20 microgramos , de entre 3 y 1 0 microgramos, o de entre 4 y 7 microgramos de sacárido. 72. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 62 a 71 , en donde la dosis de sacárido del conjugado de sacárido de Hib es menor del 90 por ciento, del 75 por ciento, o del 60 por ciento, de entre el 20 por ciento y el 60 por ciento , o de al rededor del 50 por ciento de la dosis de sacárido promedio de los cuando menos dos conjugados de sacaridos adicionales . 73. La composición i nmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 62 a 72, en donde la dosis de sacárido del conj ugado de sacárido de Hib es menor del 90 por ciento, del 75 por ciento , o del 60 por ciento, o es de entre el 20 y el 60 por ciento, o es de al rededor del 50 por ciento de la dosis de sacárido de cada uno de los cuando menos dos conj ugados de sacáridos adicionales . 74. La composición i nmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 62 a 73, en donde se uti liza la misma proteína portadora en el conjugado de Hib y dos o más de los cuando menos dos conjugados de sacáridos bacterianos adicionales . 75. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 74, la cual comprende una preparación de vesícula de membrana externa o sacárido capsular del serogrupo B de N. meningitidis. 76. Una vacuna, la cual comprende la composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 75, y un excipiente farmacéuticamente aceptable. 77. Un kit de vacuna para su administración concomitante o en secuencia, el cual comprende dos composiciones inmunogénicas multivalentes para conferir protección en un huésped contra una enfermedad causada por Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae, Haemophilus influenzae, y Neisseria meningitidis, comprendiendo este kit un primer recipiente que comprende: toxoide de tétanos (TT) , toxoide de difteria (DT), y componentes de tosferina de células enteras o acelulares, y un segundo recipiente que comprende: la composición ¡nmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 75. 78. Un proceso para la elaboración de la vacuna de la reivindicación 76, el cual comprende el paso de mezclar la composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 75, con un excipiente farmacéuticamente aceptable. 79. Un método para inmunizar a un huésped humano contra una enfermedad causada por infección por Neisseria meningitidis, el cual comprende administrar al huésped una dosis inmunoprotectora de la composición inmunogénica o vacuna de las reivindicaciones 1 a 77. 80. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 1 a 75, para utilizarse en el tratamiento o en la prevención de una enfermedad causada por infección por Neisseria meningitidis. 81 . El uso de la composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 75, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de enfermedades causadas por infección por Neisseria meningitidis. 82. Una composición ¡nmunogénica, la cual comprende cuando menos dos sacáridos diferentes conjugados por separado con el mismo tipo de proteína portadora, en donde uno o más sacáridos se conjugan con la proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 1 :2 y 1 :5, y uno o más sacáridos diferentes se conjugan con la proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 5: 1 y 1 : 1 .99. 83. La composición inmunogénica de la reivindicación 82, en donde uno o más sacáridos se conjugan con la proteína portadora por medio de un primer tipo de grupo químico sobre la proteína portadora, y uno o más sacáridos se conjugan con la proteína portadora por medio de un segundo tipo de grupo químico sobre la proteína portadora. 84. La composición inmunogénica de la reivindicación 83, en donde el uno o más sacáridos conjugados con la proteína portadora por medio del primer tipo de grupo químico sobre la proteína portadora, son diferentes del uno o más sacáridos conjugados con la proteína portadora por medio del segundo tipo de grupo qu ímico sobre la proteína portadora. 85. Una composición inmunogénica de la reivindicación 83 u 84, en donde uno o más sacáridos se conjugan con la proteína portadora por medio de un grupo carboxilo sobre la proteína portadora, y uno o más sacáridos se conjugan con la proteína portadora por medio de un grupo amino sobre la proteína portadora. 86. Una composición inmunogénica de las reivindicaciones 83 a 85, en donde el primero y segundo tipos de grupos químicos sobre la proteína portadora, están presentes sobre epítopos separados de células-B y/o de células-T sobre la proteína portadora. 87. Una composición inmunogénica de las reivindicaciones 82 a 86, en donde los sacáridos se seleccionan a partir del grupo que consiste en: sacárido capsular del serogrupo A de N. meningitidis (MenA), sacárido capsular del serogrupo C de N. meningitidis (MenC); sacárido capsular del serogrupo Y de N. meningitidis (MenY), sacárido capsular del serogrupo W de N. meningitidis (MenW), sacárido capsular del grupo I de Streptococcus grupo B, sacárido capsular del grupo I I de Streptococcus grupo B, sacárido capsular del grupo l l l de Streptococcus Grupo B, sacárido capsular del grupo IV de Streptococcus grupo B, sacárido capsular del grupo V de Streptococcus grupo B, sacárido capsular tipo 5 de Staphylococcus aureus, sacárido capsular tipo 8 de Staphylococcus aureus, sacárido Vi de Salmonella typhi, LPS de N. meningitidis (tal como L3 y/o L2), LPS de M. catarrhalis, LPS de H. influenzae, y de cualquiera de los sacáridos neumocócicos capsulares, tales como de los serotipos: 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F, ó 33F. 88. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 82 a 87, en donde la proteína portadora se selecciona a partir del grupo que consiste en: TT, DT, CRM197, fragmento C de TT, y proteína D. 89. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 82 a 88, en donde la proteína portadora es TT. 90. Una composición inmunogénica de las reivindicaciones 82 a 89, la cual comprende cuando menos dos sacáridos capsulares diferentes de N. meningitidis, en donde uno o más se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA y MenC, los cuales se conjugan con la proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 1:2 y 1:5, y uno o más sacáridos diferentes se seleccionan a partir de un segundo grupo que consiste en MenC, MenY, y MenW, los cuales se conjugan con la proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 5:1 y 1:1.99. 91. La composición inmunogénica de la reivindicación 90, en donde la proporción del sacárido MenW a la proteína portadora es de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1:1 y 1:1.7, de entre 1:1.2 y 1:1.6, o de entre 1:1.4 y 1:1.5 (peso/peso). 92. La composición inmunogénica de la reivindicación 90 ó 91, en donde la proporción del sacárido MenY a la proteína portadora es de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.9, de entre 1:1 y 1:1.8, de entre 1:1.1 y 1:1.6, o de entre 1:1.3 y 1:1.4 (peso/peso). 93. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 90 a 92, en donde la proporción del sacárido MenA a la proteína portadora es de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.4 y 1:4, de entre 1:2.7 y 1:3.5, o de entre 1:2.9 y 1:3.1 (peso/peso). 94. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 90 a 93, en donde la proporción del sacárido MenC a la proteína portadora es de entre 5:1 y 1:1.99, de entre 2:1 y 1:1.99, de entre 1.5:1 y 1:1.8, de entre 1.3:1 y 1:1.6, de entre 1.2:1 y 1:1.4, o de entre 1.1:1 y 1:1.2 (peso/peso). 95. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 90 a 94, en donde la proporción del sacárido MenC a la proteína portadora es de entre 1:2 y 1:5, de entre 1:2.5 y 1:4.5, de entre 1:2.7 y 1:4.3, de entre 1:3 y 1:4, o de entre 1:3.3 y 1:3.5 (peso/peso). 96. Una composición inmunogénica de las reivindicaciones 90 a 95, la cual comprende cuando menos dos sacáridos capsulares diferentes de N, meningitidis, en donde uno o más se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA y MenC, los cuales se conjugan con la proteína portadora por medio del primer tipo de grupo químico sobre la proteína portadora, y uno o más sacáridos diferentes se seleccionan a partir de un segundo grupo que consiste en MenC, MenY y MenW, los cuales se conjugan con la proteína portadora por medio del segundo tipo de grupo químico sobre la proteína portadora. 97. Una composición inmunogénica de la reivindicación 96, en donde el primer tipo de grupo químico es un grupo carboxilo sobre la proteína portadora, y el segundo tipo de grupo químico es un grupo amino sobre la proteína portadora. 98. La composición inmunogénica de la reivindicación 96 ó 97, la cual comprende MenA conjugado por medio del primer tipo de grupo químico, y MenC conjugado por medio del segundo tipo de grupo químico. 99. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 96 a 98, la cual comprende MenC conjugado por medio del primer tipo de grupo químico, y MenY conjugado por medio del segundo tipo de grupo químico. 100. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 96 a 99, la cual comprende MenA conjugado por medio del primer tipo de grupo químico, y MenC, MenY, y MenW conjugados por medio del segundo tipo de grupo químico. 101. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 96 a 99, la cual comprende MenA y MenC conjugados por medio del primer tipo de grupo químico, y MenY y MenW conjugados por medio del segundo tipo de grupo químico. 102. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 90 a 101, la cual comprende además un sacárido capsular de H. influenzae tipo b (Hib) conjugado con una proteína portadora. 103. La composición inmunogénica de la reivindicación 102, en donde Hib se conjuga con el mismo tipo de proteína portadora que los sacáridos de N. meningitidis. 104. La composición inmunogénica de la reivindicación 103, en donde Hib se conjuga con la proteína portadora por medio del primero o del segundo tipo de grupo químico. 105. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 82 a 104, en donde uno o más sacáridos (por ejemplo, MenA y/o MenC) conjugados con la proteína portadora con una proporción de sacárido:proteína (peso/peso) de entre 1:2 y 1:5, se conjugan por medio de un enlazador. 106. La composición inmunogénica de la reivindicación 105, en donde el enlazador es bifuncional. 107. La composición inmunogénica de la reivindicación 105 ó 106, en donde el enlazador tiene entre 4 y 12 átomos de carbono. 108. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 105 a 107, en donde el enlazador tiene dos grupos amino reactivos. 109. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 105 a 107, en donde el enlazador tiene dos grupos de ácido carboxílico reactivos. 110. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 105 a 107, en donde el enlazador tiene un grupo amino reactivo en un extremo, y un grupo de ácido carboxílico en el otro extremo. 111. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 105 a 108, en donde el enlazador es ADH. 112. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 105 a 111, en donde el o cada sacárido capsular conjugado por medio de un enlazador se conjuga con el enlazador con la química de CDAP. 113. La composición ¡nmunogénica de las reivindicaciones 105 a 112, en donde la proteína portadora se conjuga con el enlazador utilizando la química de carbodi-imida, opcionalmente utilizando EDAC. 114. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 105 a 113, en donde el o cada sacárido capsular se conjuga con el enlazador antes de que se conjugue la proteína portadora con el enlazador, o el enlazador se conjuga con el sacárido antes de que se conjugue con la proteína portadora. 115. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 82 a 114, en donde uno o más sacáridos (por ejemplo, MenY, MenW, y/o MenC) conjugados con la proteína portadora con una proporción de sacárido:proteína (peso/peso) de entre 5:1 y 1:1.99, se conjugan directamente. 116. La composición inmunogénica de las reivindicaciones 82 a 115, la cual es una composición inmunogénica de las reivindicaciones 1 a 75. RESUM EN La presente solicitud da a conocer una composición inmunogénica, la cual comprende cuando menos 2 sacáridos capsulares diferentes de N. meningitidis, en donde uno o más se seleccionan a partir de un primer grupo que consiste en MenA, MenC, MenY, y MenW, los cuales se conjugan con una proteína portadora, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 1 :2 y 1 :5, y uno o más sacáridos diferentes se seleccionan a partir de un segundo grupo que consiste en MenA, MenC, MenY, y MenW, los cuales se conjugan con proteínas portadoras, en donde la proporción de sacárido:proteína (peso/peso) es de entre 5: 1 y 1 : 1 .99. * * * * *