[go: up one dir, main page]

UA126652C2 - Біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину та спосіб його застосування - Google Patents

Біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину та спосіб його застосування Download PDF

Info

Publication number
UA126652C2
UA126652C2 UAA201804775A UAA201804775A UA126652C2 UA 126652 C2 UA126652 C2 UA 126652C2 UA A201804775 A UAA201804775 A UA A201804775A UA A201804775 A UAA201804775 A UA A201804775A UA 126652 C2 UA126652 C2 UA 126652C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
mai
zeg
rgo
antibody
guz
Prior art date
Application number
UAA201804775A
Other languages
English (en)
Inventor
Харальд ДЮРР
Себастьян ФЕНН
Ульріх Гьопферт
Ульрих ГЁПФЕРТ
Забіне Імхоф-Юнг
Забине ИМХОФ-ЮНГ
Крістіан Кляйн
Кристиан КЛЯЙН
Лоран Ларів'є
Лоран Ларивье
Міхель Мольхой
Михель Мольхой
Йорг Тома Регула
Петра РЮГЕР
Вольфганг Шефер
Вольфганг ШЭФЕР
Original Assignee
Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг filed Critical Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Publication of UA126652C2 publication Critical patent/UA126652C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2881—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD71
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Винахід стосується біспецифічного антитіла для зв'язування людського бета-амілоїду та людського рецептора трансферину. Винахід також стосується фармацевтичної композиції, що містить таке антитіло, застосування антитіла у виготовленні лікарського засобу для лікування хвороби Альцгеймера та способу лікування індивідуума, що має хворобу Альцгеймера.

Description

(57) Реферат:
Винахід стосується біспецифічного антитіла для зв'язування людського бета-амілоїду та людського рецептора трансферину. Винахід також стосується фармацевтичної композиції, що містить таке антитіло, застосування антитіла у виготовленні лікарського засобу для лікування хвороби Альцгеймера та способу лікування індивідуума, що має хворобу Альцгеймера.
ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ
Даний винахід належить до біспецифічних антитіл до людського бета-амілоїду та людського рецептора трансферину, способів їх одержання, фармацевтичних композицій, що містять зазначені антитіла та їх застосування.
ПОПЕРЕДНІЙ РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Приблизно 70 95 всіх випадків деменції є наслідком хвороби Альцгеймера, пов'язаної з вибірковим пошкодженням ділянок мозку і нейронних ланцюгів, які відіграють ключову роль у когнітивному процесі. Хвороба Альцгеймера характеризується появою нейрофібрилярних клубків, зокрема, в пірамідальних нейронах гіпокампа, а також численних амілоїдних бляшок, які мають щільне ядро, що складається з відкладень амілоїду, оточене блідим ореолом.
Позаклітинні сенільні бляшки містять велику кількість переважно фібрилярного пептиду, що позначається "амілоїд ВД", "Сета-амілоїд", "Ар4", "В-А4" або "АВ"; див. 5еїЇКое, Апп. Кему. Сеї! Віої. 10 (1994) 373-403; Коо РМАБ 96 (1999) 9989-9990; 05 4,666,829; Сієппег ВВАС 12 (1984) 1131).
Даний амілоїд утворюється з "білка-попередника бета-амілоїду" АРР (від англ. АЇІгпеїтег ргесигзог ргоївіп або В-атуїйоід ргесигзог ргоївіп). АРР являють собою інтегральні мембранні глікопротеїни (див. Зізодіа РМАБ 89 (1992) 6075) і піддаються ендопротеолітичному розщепленню всередині послідовності АР а-секретазою, протеазою, зв'язаною з плазматичною мембраною (див. 5Зізодіа (1992), доеє. сії.). Крім того, завдяки активності інших секретаз, зокрема, рВ-секретази та у-секретази, відбувається позаклітинне вивільнення амілоїду-Вр (АВ), який містить 39 амінокислот (АВЗ9), 40 амінокислот (АВ 40), 42 амінокислоти (АВ 42) або 43 амінокислоти (АВ 43) (див. Зіппа РМАЗ 96 (1999) 11094-1053; Ргісе, 5сіеєпсе 282 (1998) 1078-1083; МО 00/72880 або Нагау, ТІМ5 20 (1997) 154).
Потрібно зазначити, що бета-амілоїд має декілька форм природного походження, при цьому людські форми позначаються, як вказано вище: АВ39, АВ40, АВ4А1, АВ42 та АВ43. Найбільш поширена форма, АВ42, має амінокислотну послідовність (починаючи з М-кінця): рАЕРКНОЗОМЕМННОКІ МЕЕАЕОМОБМКОАПОІЇ ММОСУМІА (ЗЕО ІЮ МО: 05). У АДВ41, АД4О,
АВЗ9 відсутні С-кінцеві амінокислоти А, ІА та МІА, відповідно. У форми АВ4З на С-кінці наведеної вище послідовності знаходиться додатковий залишок треоніну.
Показано, що час, необхідний для утворення ядра з фібрил АВ40 істотно більше, ніж для
Зо утворення ядра з фібрил АВ42 (див., наприклад, І ап5бигу, 9г., Р. Т. апа Нагрег, у. О., Апп. Кем.
Віоспет. 66 (1997) 385-407). Як вказано в огляді Умадпег (9. Сіїп. Іпмеві. 104 (1999) 1239-1332),
АВД42 найчастіше виявляється асоційованим з сенільними бляшками і має більшу схильність до утворення фібрил іп мійго. Крім того, передбачають, що АрВ42 служить "затравкою" під час полімеризації впорядкованих некристалічних пептидів АВ, зв'язаною з утворенням ядра (див., наприклад, чаїтей, Сеї! 93 (1993) 1055-1058). Процесинг модифікованого АРР і/або утворення позаклітинних бляшок, які містять білкові відкладення, відомі не тільки при хворобі
Альцгеймера, але також і у суб'єктів, які страждають на інші неврологічні і/або нейродегенеративні розлади. Такі розлади включають в тому числу синдром Дауна, спадкову церебральну геморагію з амілоїдозом голландського типу, хворобу Паркінсона, БАС (боковий аміотрофічний склероз), хворобу Крейцфельда-Якоба, ВІЛ-асоційовану деменцію та моторну нейропатію.
На даний момент відома лише обмежена кількість схем лікування захворювань, пов'язаних з відкладенням амілоїду. Наприклад, обговорювалося, що інгібітори холінестераз, такі як галантамін, ривастигмін або донезепіл впливали благотворно тільки на пацієнтів із хворобою
Альцгеймера легкого або помірного ступеня тяжкості. При цьому також були зареєстровані небажані явища, зв'язані з холінергічною дією вказаних препаратів. Оскільки вказані холінергічні препарати приносять лише деяке симптоматичне полегшення, відповідь на терапію у більшості пацієнтів є незадовільним. Згідно з оцінками, істотне когнітивне покращення спостерігається тільки у 5 95 пацієнтів, які одержали терапію, та існує мало доказів, що терапія істотним чином впливає на протікання даного прогресуючого захворювання.
Отже, як і раніше існує величезна потреба в більш ефективних препаратах і, зокрема, в таких, які можуть зупиняти або сповільнювати прогресування захворювання. Нещодавно почали також застосовувати антагоністи рецепторів ММА, такі як мемантін.
Однак, були зареєстровані побічні ефекти, зв'язані з їх фармакологічною активністю. Крім того, таке лікування вказаними антагоністами рецепторів ММОА можна вважати всього лише симптоматичним, але не таким, що змінює протікання захворювання.
Також були запропоновані імуномодулюючі методи лікування розладів, зв'язаних з відкладенням амілоїду. МО 99/27944 описує кон'югати, які містять частини бета-амілоїду і молекули-носії, де вказана молекула-носій повинна посилювати імунну відповідь. Інший підхід з активною імунізацією згадується в УМО 00/72880, де фрагменти бета-амілоїду застосовують для індукції імунної відповіді.
У МО 99/27944 або УМО 01/62801 запропоновані способи пасивної імунізації антитілами до цілого бета-амілоїду, а в МО 02/46237, УМО 02/088306 та УМО 02/08830 описані специфічні гуманізовані антитіла, направлені проти частин бета-амілоїду. МО 00/77178 описує антитіла, що зв'язують рВ-амілоїд в перехідному стані, якого він набуває в процесі гідролізу. МО 03/070760 описує молекули антитіл, що розпізнають дві переривчасті амінокислотні послідовності бета- амілоїду.
МО 2014/033074 належить до човників, що проходять через гематоенцефалічний бар'єр, які зв'язуються з рецепторами гематоенцефалічного бар'єра, та способів їх застосування. Доставка лікарських засобів через гематоенцефалічний бар'єр за допомогою білків, злитих з доменом
І9б, що являє собою моноклональне антитіло до рецептора трансферину, описана Рагагіаде,
МУ. (Ехр. Оріп. Огид Овїїм. 12 (2015) 207-222). Ми, У.у. еї а. (сі. Тгапвіаї. Мед. 6 (2014) 261га154- 261га154) описує терапевтичні біспецифічні антитіла, що перетинають гематоенцефалічний бар'єр у приматів, які не є людиною. Дезагрегація амілоїдної бляшки в головному мозку трансгенних мишей з хворобою Альцгеймера при щоденному підшкірному введенні чотирьохвалентного біспецифічного антитіла, направленого проти рецептора трансферину і бета-амілоїдного пептиду, описано ЗийтБбгіа, К.К., еї аІ. (Мої. Рпапт. 10 (2013) 3507-3513).
Міежоеппе", 9., еї аі. (Мештоп 81 (2014) 49-609 описує покращене проникнення в мозок та ефективність терапевтичного антитіла, яке працює за принципом одновалентного молекулярного човника.
СУТЬ ВИНАХОДУ
Запропоноване біспецифічне антитіло, яке містить: а) одне (повнорозмірне) антитіло, яке містить по дві пари легких (повнорозмірних) ланцюгів антитіла і важких (повнорозмірних) ланцюгів антитіла, де сайти зв'язування, утворені кожною парою важкого (повнорозмірного) ланцюга антитіла і легкого (повнорозмірного) ланцюга антитіла специфічно зв'язуються з першим антигеном, і б) один додатковий Раб фрагмент, де додатковий Бар фрагмент злитий з С-кінцем одного з важких ланцюгів (повнорозмірного) антитіла, де сайт зв'язування додаткового Бар фрагмента
Зо специфічно зв'язується з другим антигеном, де кожний з (повнорозмірних) легких ланцюгів антитіла містить в константному домені легкого ланцюга (СІ) в положенні 123 амінокислотний залишок аргінін (замість залишку дикого типу - глутамінової кислоти; мутація Е123К) і в положенні 124 амінокислотний залишок лізин (замість залишку дикого типу - глутаміну; мутація О124К) (нумерація згідно з Каба), де кожний з (повнорозмірних) важких ланцюгів антитіла містить в першому константному домені важкого ланцюга (СНІ) в положенні 147 залишок глутамінової кислоти (замість залишку дикого типу - лізину; мутація К147Е) і в положенні 213 залишок глутамінової кислоти (замість залишку дикого типу - лізину; мутація К213Е) (нумерація згідно із системою ЕО-індекс, запропонованою Каба), де додатковий Раб фрагмент, який специфічно зв'язується з другим антигеном, містить кросовер доменів, так що константний домен легкого ланцюга (СІ) і 1 константний домен важкого ланцюга (СНІ) замінені один на одного, і де перший антиген являє собою людський білок бета-амілоїд, і другий антиген являє собою людський рецептор трансферину.
В одному втіленні додатковий Бар фрагмент злитий з С-кінцем важкого ланцюга за допомогою пептидного лінкера.
В одному втіленні М-кінець варіабельного домену важкого ланцюга Бар фрагмента злитий з
С-кінцем повнорозмірного важкого ланцюга або з С-кінцем пептидного лінкера.
В одному втіленні а) повнорозмірний важкий ланцюг, який злитий з додатковими Бабр-фрагментами має як С- кінцеві амінокислотні залишки важкого ланцюга трипептид І 5Р, пролін якого безпосередньо злитий з першим амінокислотним залишком додаткового Раб-фрагмента або пептидного лінкера за допомогою пептидного зв'язку, і б) повнорозмірний важкий ланцюг, який не злитий з додатковими Габ-фрагментами, має як
С-кінцеві амінокислотні залишки важкого ланцюга трипептид І 5Р або 5РО або РОК.
В одному втіленні (повнорозмірне) антитіло являє собою а) повнорозмірне людське антитіло підкласу ІдС1, б) повнорозмірне людське антитіло підкласу дося, в) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс1 з мутаціями І 234А, І 235А і РЗ3290, бо г) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс4 з мутаціями 5228Р, І 235Е і РЗ296,
д) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс1 з мутаціями І 234А, І235А і РЗ29О в обох важких ланцюгах і мутаціями Т366УМ ії 5354С в одному важкому ланцюзі і мутаціями 73665,
І 368А, у407М і 7349С в іншому важкому ланцюзі, відповідно, е) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс4 з мутаціями 5228Р, 1235Е і РЗ3290О в обох важких ланцюгах і мутаціями Т36б6УМ і 5354С в одному важкому ланцюзі і мутаціями 73665,
І 368А, у407М і 7349С в іншому важкому ланцюзі, відповідно, ж) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс1 з мутаціями І 234А, І 235А, РЗ29О, І253А,
НЗ1ТОА ї Н4З5А в обох важких ланцюгах і мутаціями Т366УУ і 5354С в одному важкому ланцюзі і мутаціями 73665, І З368А, у407М і У349С в іншому важкому ланцюзі, відповідно, або 3) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс1 з мутаціями І 234А, І 235А, РЗ290, М252У, 52541 і Т256Е в обох важких ланцюгах і мутаціями Т366МУ і 5354С в одному важкому ланцюзі і мутаціями 73665, І З368А, 407 і 7349С в іншому важкому ланцюзі, відповідно.
В одному втіленні (повнорозмірне) антитіло являє собою а) повнорозмірне людське антитіло підкласу ІдС1, б) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідсаі, в) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс1 з мутаціями І 234А, І 235А і РЗ3290, г) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс4 з мутаціями 5228Р, 1235Е і РЗ296, д) повнорозмірне людське антитіло підкласу ІДдс1 з мутаціями 1 234А, І1235А і РЗ29О в обох важких ланцюгах і мутаціями ї) Т36бУМ та ії) 5354С або у349С в одному важкому ланцюзі і мутаціями ії) 73665, 1І368А та м407М та ії) М349С або 5354С в іншому важкому ланцюзі, відповідно, е) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс4 з мутаціями 5228Р, І1235Е і РЗ29О в обох важких ланцюгах і мутаціями ї) Т36бУМ та ії) 5354С або у349С в одному важкому ланцюзі і мутаціями ії) 73665, 1368А і У407М та її) м349С або 5354С в іншому важкому ланцюзі, відповідно, ж) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс1 з мутаціями І 234А, І 235А, РЗ3290, 1253А,
НЗ1ТОА ї Н4З5А в обох важких ланцюгах і мутаціями Її) ТЗ36бУУ та її) 5354С або у349С в одному важкому ланцюзі і мутаціями ї) 73665, І З368А і У407М та ії) У349С або 5354С в іншому важкому ланцюзі, відповідно,
Зо 3) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс1 з мутаціями І 234А, І 235А, РЗ3290, М252У, 52541 і Т256Е в обох важких ланцюгах і мутаціями ї) ТЗ366МУ та ії) 5354С або уУ349С в одному важкому ланцюзі і мутаціями ї) 73665, І З68А і у407М та її) У349С або 5354С в іншому важкому ланцюзі, відповідно, або ї) повнорозмірне людське антитіло підкласу Ідс1 з мутаціями І 234А, І 235А, РЗ3290, НЗ1ТОА,
Н4ІЗЗА їі У436А в обох важких ланцюгах і мутаціями ї) Т366УУ та її) 5354С або у349С в одному важкому ланцюзі і мутаціями ї) 73665, І З368А і У407М та ії) У349С або 5354С в іншому важкому ланцюзі, відповідно.
В одному втіленні додатковий Бар фрагмент злитий з С-кінцем важкого ланцюга, який містить мутацію ТЗ36бМУУ, або з С-кінцем важкого ланцюга, який містить мутації 73665, І З684А і
У407У.
В одному втіленні повнорозмірне антитіло належить до підкласу (31 людини з мутаціями І234А, 1235А і
РЗ290 в обох важких ланцюгах і мутаціями Т36бУМ і 5354С в одному важкому ланцюзі і мутаціями 73665, І 368А, 407 і 7349С в іншому важкому ланцюзі, відповідно, і додатковий Бар фрагмент злитий з С-кінцем важкого ланцюга, який містить мутацію ТЗ36бУУ, або з С-кінцем важкого ланцюга, який містить мутації 73665, І З68А і 407.
В одному втіленні усіх аспектів сайт зв'язування людського бета-амілоїду містить послідовність УН, наведену в ЗЕО ІЮО МО: 18, включаючи посттрансляційні модифікації вказаної послідовності, і послідовність МІ, наведену в 5ЕО ІЮ МО: 19, включаючи посттрансляційні модифікації вказаної послідовності.
В одному втіленні усіх аспектів сайт зв'язування людського рецептора трансферину містить послідовність УН, наведену в ЗЕО ІЮО МО: 20, включаючи посттрансляційні модифікації вказаної послідовності, і послідовність МІ, наведену в 5ЕО ІЮ МО: 21, включаючи посттрансляційні модифікації вказаної послідовності.
В одному втіленні біспецифічне антитіло містить ї) легкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, ідентичною послідовності зЕО ІЮ МО: 01 на 70 95 або більше, і) важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, ідентичною послідовності зЕО ІЮ МО: 02 на 70 95 або більше,
ії) легкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, ідентичною послідовності 5Е0 ІЮ МО: 03 на 70 95 або більше, ім) Бар фрагмент важкого ланцюга з амінокислотною послідовністю, ідентичною послідовності 5ЕО ІЮ МО: 04 на 70 95 або більше, де
ЗЕО ІО МО: 01 має амінокислотну послідовність
РІМГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАБОБУББЗОМІ АМУООКРИООАРАЦП ІМЕАБОВАТОМРАВЕЗИаБО
ЗОаТОЕТІ ТІЗ5І ЕРЕОРАТУМСІЇ ОСПМММРІТРЯ ОС ТКМЕІКАТМААРЗМРІЕРРБЗОВКІ КЗИатАБМУМС І.
ММЕМРАВЕАКМОМКМОМАГ ОБаМ5ОЕЗМТЕООБКОБТМУБІ 55ТІ ТІ БКАОМЕКНКУУАСЕМТНОСІ 5
ЗРУТКО5ЕМВИЕС,
ЗЕО ІО МО: 02 має амінокислотну послідовність
ОМЕЇ МЕЗОСИЇ МОРІ ВІ БСААБаєТе55УАМОУМУВОАРИОаКаїЇ ЕМ М5АІМАЗИатТАТУМАОБУК
САЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМУУСАВакаМТНКкРУУМАВУ ЕОМ СОСТІ МТМ55АВЗТКОИ
РОМЕРІ АРОЗ5КОТЗОаСТААІ аСІ МЕОМЕРЕРУТУБУМУМ5ЗИалйаіІ Т5амМНТЕРАМІ 05501 М5І 55ММТУР
З55І ЕТОТМІСМУМНКРОМТКМОЕКМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕЇ ЇЇ ССО РБОУМГБЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАВТР
ЕМТСУММОМ5НЕОРЕМКЕМУ УМО МЕМНМАКТКРАЕЄОММОТ МАУМБМІ ТМІ НОМУ МЕОКЕУКСК
М5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСООРАЕРОМСТІ РРОВОЄЇТКМОМ5І БСАМКИагмРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММ
УКТТРРМ'ОБразЕРІ УЗКІ ТМОКЗАМОССаММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКОІ 5І ЗРО,
ЗЕО ІО МО: 03 має амінокислотну послідовність
АОЇ ТОБРБОБІ БАБМООВМТІТСВАБОБІЗОМУ АММООКРОКАРКИІЇ ІМВАБТІ АБСМРОВЕБОБИаБаИ
ТОЕТІ ТІББІ ОРЕОБАТУУСООММАБОММОМТгасаТткМЕІК55АЗТКОаРБОМЕРІ АРІЗКОТЗИаСТАА гасі мМкКОМЕРЕРУТУБМ/МЗСИАЇ ТИ МНТЕРАМІ 05501 М5І 55 УРБББІ СТО ТМІСМММНКРОМ
ТКМОККМЕРКЗС і
ЗЕО ІО МО: 04 має амінокислотну послідовність
ОБМОЕБаИРОЇ МКРБООТІ БІ ТСТУБаг5І 55МАМ5УМАОНРИаКаТї ЕММамім БИаСЗТОМАБУАКВАМ
ТІБКТОТТУБІ КІ ББМТААОЮОТАУУМСАВАУаТ5УРОМарАБОБОРМСОСТІ МГМОЗАЗМААРОЗМРІЕР
РБОЕОЇ КЗХатАБУМСТ І ММЕМР ВЕАКМОМКУОМА! ОБаМ5ОЕВМТЕОО5КОБТУБІ 55 ТІ КА
МЕКНКМУАСЕМТНОІ 55РУТК5ОЕМНСОЕС.
Одним аспектом за даним описом є біспецифічне антитіло, яке містить (повнорозмірний)
Зо легкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 01, (повнорозмірний) важкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 02, (повнорозмірний) легкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 03, і Бар фрагмент антитіла, який містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 04.
В одному втіленні біспецифічне антитіло є моноклональним.
Одним аспектом за даним описом є виділена нуклеїнова кислота, що кодує біспецифічне антитіло за даним описом.
Одним аспектом за даним описом є клітина-хазяїн, яка містить нуклеїнову кислоту за даним описом, що кодує біспецифічне антитіло за даним описом.
Один аспект згідно з даним описом являє собою спосіб одержання біспецифічного антитіла за даним описом, що включає наступні стадії: а) культивування клітини-хазяїна за даним описом з продукуванням біспецифічного антитіла і б) виділення біспецифічного антитіла з клітини або середовища культивування і, таким чином, одержання біспецифічного антитіла за даним описом.
Одним аспектом за даним описом є імунокон'югат, який містить біспецифічне антитіло за даним описом та цитотоксичний агент.
Одним аспектом за даним описом є фармацевтична композиція, яка містить біспецифічне антитіло за даним описом та фармацевтично прийнятний носій.
Одним аспектом за даним описом є антитіло за даним описом для застосування як лікарського засобу.
Одним аспектом за даним описом є біспецифічне антитіло за даним описом для застосування в лікуванні хворобі Альцгеймера.
Одним аспектом за даним описом є біспецифічне антитіло за даним описом для застосування в інгібуванні/уповільненні утворення бляшок в головному мозку.
Одним аспектом за даним описом є біспецифічне антитіло за даним описом для застосування в дезінтеграції В-амілоїдних бляшок.
Одним аспектом за даним описом є застосування біспецифічного антитіла за даним описом для виготовлення лікарського засобу.
В одному втіленні лікарський засіб призначений для лікування амілоїдозів.
В одному втіленні лікарський засіб призначений для попередження і/або лікування захворювання, асоційованого з амілоїдогенезом і/або утворенням амілоїдних бляшок. В одному втіленні захворювання вибране з групи, яка складається з деменції, хвороби Альцгеймера, моторної нейропатії, синдрому Дауна, хвороби Крейтцфельдта-Якоба, спадкової церебральної геморагії з амілоїдозом голландського типу, хвороби Паркінсона, ВІЛ-асоційованої деменції,
БАС або нейрональних розладів, зв'язаних зі старінням. В одному переважному втіленні лікарський засіб призначений для лікування хвороби Альцгеймера.
В одному втіленні лікарський засіб призначений для інгібування/уповільнення утворення бляшок в головному мозку. В одному втіленні лікарський засіб являє собою лікарський засіб для дезінтеграції ВД-амілоїдних бляшок.
Один аспект згідно з даним описом являє собою спосіб лікування індивідуума, що страждає на захворювання, асоційоване з амілоїдогенезом і/або утворенням амілоїдних бляшок, який включає введення індивідууму ефективної кількості біспецифічного антитіла за даним описом.
Один аспект згідно з даним описом являє собою спосіб лікування індивідуума, що страждає на хворобу Альцгеймера, який включає введення індивідууму ефективної кількості біспецифічного антитіла за даним описом.
Один аспект згідно з даним описом являє собою спосіб дезінтеграції В-амілоїдних бляшок в головному мозку індивідуума, що включає введення індивідууму ефективної кількості біспецифічного антитіла за даним описом для дезінтеграції В-амілоїдних бляшок в головному мозку.
Один аспект згідно з даним описом являє собою спосіб інгібування/уповільнення утворення бляшок в головному мозку індивідуума, який включає введення індивідууму ефективної кількості біспецифічного антитіла за даним описом для інгібування/уповільнення утворення бляшок в головному мозку.
ВІДОМОСТІ, ЩО ПІДТВЕРДЖУЮТЬ МОЖЛИВІСТЬ ЗДІЙСНЕННЯ ВИНАХОДУ
Димеризовані модулі виступи-у-западини та їх застосування в інженерії антитіл описано
Сапег Р.; Віддулау 9.В.В.; Ргевіа І.С.: Іттипоїесппоіоду, Моїите 2, Митбег 1, Рергчагу 1996, рр. 73-13. Утворення додаткових дисульфідних містків у СНЗ3 домені описано Мегспапі, А.М., еї аї.,
Маї. Віоїесппої. 16 (1998) 677-681.
Зо Загальна інформація, що належить до нуклеотидних послідовностей легких і важких ланцюгів імуноглобулінів людини, наведена Кабраї, Е.А., еї аЇ., Зедиепсе5 ої Ргоїеїп5 ої
Іттипоіодіса! Іпіегеві, Бій єд., Рибіїс Неайй 5егуісе, Маїйопаї! Іпвійшев ої Неапйй, ВешШезаа, МО (1991).
В даному описі положення амінокислот усіх константних ділянок і доменів важкого і легкого ланцюгів пронумеровані відповідно до системи нумерації КабБраї, описаної Кабаї, єї аї., зЗедиеєпсез ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві, Бій ей., Рибіїс Неайй Зегмісе, Маїййопаї Іпвійшев ої
Неакй, ВеШезаа, МО (1991), яка позначається в даному описі "системою нумерації Кабаї".
Зокрема, систему нумерації Кабаї (див. стор. 647-660) КаБбаї, єї аІ., Зеднепсевз ої Ргоївіп5 ої
Іттипоіодіса! Іпіегеві, Бій єд., Рибіїс Неайй 5егуісе, Маїйопаї! Іпвійшев ої Неапйй, ВешШезаа, МО (1991) використовують для константного домену легкого ланцюга Сі ізотипів каппа і лямбда, а систему нумерації ЕО-індекс, запропоновану КаБбаї (див. стор. 661-723), яка з метою розуміння позначається в даному описі "системою нумерації ЕО-індекс, запропонованою КаБбаї", використовують для константних доменів важкого ланцюга (СНІ, шарнірна ділянка, СН2 та
СНЗ).
І. ТЕРМІНОЛОГІЯ "Гематоенцефалічний бар'єр"'ї або ГЕБ належить до фізіологічного бар'єру між периферичною системою кровообігу та головним і спинним мозком, утвореного щільними контактами в плазматичній мембрані ендотелію капілярів мозку, що утворюють щільний бар'єр, який обмежує транспортування в мозок молекул, навіть таких невеликих, як сечовина (60
Дальтон) ГЕБ в головному мозку, гематоспінальний бар'єр в спинному мозку і гематоретинальний бар'єр в рогівці являють собою безперервний бар'єр між капілярною кров'ю і ЦНС і в даному описі разом позначаються гематоенцефалічним бар'єром, або ГЕБ. ГЕБ також охоплює гематолікворний бар'єр (хороїдні сплетіння), де бар'єр швидше складається з епендимоцитів, ніж з ендотеліальних клітин капілярів.
Терміни "антитіло до людського бета-амілоїду" і "антитіло, яке специфічно зв'язується з людським бета-амілоїдом" належить до антитіла, яке здатне зв'язуватися з людським пептидом бета-амілоїдом з достатньою афінністю, так що антитіло може застосовуватися як діагностичний і/або терапевтичний агент, мішенню якого є пептид бета-амілоїд.
Потрібно зазначити, що людський бета-амілоїд існує у вигляді декількох форм, що бо зустрічаються в природному стані, при цьому форми, що зустрічаються в організмі людини,
позначають АВЗ39, Ар40, АВ41, Ар42 та АВ43. Найбільш поширена форма, АВ42, має амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 05. У АрВ41, Ар40, АВДЗ9 відсутні С-кінцеві амінокислоти
А, ІА ї МІА, відповідно. У форми АВ4З є додатковий залишок треоніну на С-кінці послідовності
ЗЕО ІО МО: 05. В одному втіленні людський білок бета-амілоїд має амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 05.
Таким чином, термін також охоплює антитіла, які зв'язуються з укороченим фрагментом людського поліпептиду бета-амілоїду. "Центральна нервова система" або "ЦНС" належить до комплексу нервових тканин, контролюючих функції організму, і охоплює головний мозок і спинний мозок. "Рецептор гематоенцефалічного бар'єра" (скорочено "РГЕБ") являє собою позаклітинний мембрано-зв'язаний білок-рецептор, експресований ендотеліальними клітинами головного мозку, здатний переносити молекули через ГЕБ або використовуватися для перенесення введених екзогенних молекул. Приклади РГЕБ в даному описі включають: рецептор трансферину (ТІК), рецептор інсуліну, рецептор інсуліноподібного фактора росту (ІСЕ-В), рецептори ліпопротеїнів низької щільності, включаючи, без обмеження, споріднений рецептору ліпопротеїнів низької щільності білок 1 (І КРІ) і споріднений рецептору ліпопротеїнів низької щільності білок 8 (І КРВ), а також гепарин-зв'язуючий фактор росту, подібний до епідермального фактора росту (НВ-ЕСЕ). Одним з переважних РГЕБ є рецептор трансферину (ТІК). "Рецептор трансферину" (ТІК) являє собою трансмембранний глікопротеїн (з молекулярною масою приблизно 180 000 Да), що складається з двох субодиниць, зв'язаних дисульфідними зв'язками (кожний має уявну молекулярну масу приблизно 90 000 Да), задіяний у поглинанні заліза у хребетних. В одному втіленні вказаний ТІ являє собою людський ТІК, який містить амінокислотну послідовність, вказану, наприклад, Зсппеїйдег еї аїЇ (Маїиге 311 (1984) 675-678). В одному втіленні людський рецептор трансферину має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 22. "Мультиспецифічне антитіло" означає антитіло, що специфічно зв'язується щонайменше з двома різними епітопами одного і того самого антигену або двох різних антигенів. Приклади мультиспецифічних антитіл можуть зв'язуватися як РГЕБ, так ії з антигеном головного мозку.
Мультиспецифічні антитіла можна одержувати у вигляді повнорозмірних антитіл або у вигляді
Зо фрагментів антитіл (наприклад, біспецифічні антитіла Е(аб)2) або їх комбінацій (наприклад, повнорозмірне антитіло плюс додаткові 5сЕм або Бар фрагменти). Також описані модифіковані антитіла з двома, трьома або більше (наприклад, чотирма) функціональними антигензв'язуючими сайтами (див., наприклад, 05 2002/0004587 АТ). "Акцепторні каркасні ділянки людського походження" з метою даного опису являють собою каркасні ділянки, які містять амінокислотну послідовність каркасних ділянок варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) або каркасних ділянок варіабельного домену важкого ланцюга (МН), що походять з каркасної послідовності імуноглобуліну людини або консенсусної каркасної послідовності людського походження, згідно з описом, наведеним нижче. Акцепторні каркасні ділянки "що походять з" каркасних ділянок імуноглобуліну людини або консенсусних каркасних ділянок людського походження можуть містити таку саму амінокислотну послідовність або можуть мати заміни амінокислотної послідовності. У деяких втіленнях кількість амінокислотних замін становить 10 або менше, 9 або менше, 8 або менше, 7 або менше, 6 або менше, 5 або менше, 4 або менше, З або менше, або 2 або менше. У деяких втіленнях послідовність акцепторної каркасної послідовності МІ людського походження ідентична послідовності каркасних ділянок МІ. імуноглобуліну людини або консенсусної послідовності каркасних ділянок людського походження. "Афінність" належить до міцності суми усіх нековалентних взаємодій між одним сайтом зв'язування молекули (наприклад, антитіла) і його партнера із зв'язування (наприклад, антигену). Якщо не вказано інше, в даному описі "афінність зв'язування" означає власну афінність зв'язування, яка відображає взаємодію 1:1 між членами пари, що зв'язується (наприклад, антитілом та антигеном). Афінність молекули Х до її партнера У можна в цілому охарактеризувати константою дисоціації (Ка). Афінність можна визначити стандартними способами, відомими в галузі техніки, включаючи описані в даному документі.
Антитіло "зрілої афінності" належить до антитіла з одною або декількома модифікаціями в одній або більше ніж одній гіперваріабельній ділянці (НУК, від англ. пурегмагіаріє гедіопв5), у порівнянні з батьківським антитілом, яке не має таких модифікацій, вказані модифікації призводять до покращення афінності антитіла або антигену.
Термін "антитіло" в даному документі використовується в найширшому значенні та охоплює різні структури антитіл, включаючи моноклональні антитіла, поліклональні антитіла і мультиспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла), за умови, що вони виявляють бажану антигензв'язуючу активність, але не обмежується ними.
Термін "антитіло-залежна клітинна цитотоксичність" (АОСС, від англ. апібоду-дерепаепі сеїЇшіаг суїоїохісйу) означає функцію, що опосередковується зв'язуванням Ес-рецептора, і належить до лізису клітин-мішеней, викликаному антитілом за даним описом в присутності ефекторних клітин. В одному втіленні АОСС визначають при впливі на препарат експресуючих
СО19 клітин еритроїдного ряду (наприклад, клітин К5б2, експресуючих рекомбінантний людський СО19) антитіла за даним описом в присутності ефекторних клітин, таких як свіжовиділені МКПК (мононуклеарні клітини периферичної крові) або ефекторні клітини, виділені з лейкоконцентрату, такі як моноцити або природні кілерні (МК, від англ. паїига! КіПег) клітини.
Клітини-мішені мітять 51Сг і потім інкубують з антитілом. Мічені клітини інкубують з ефекторними клітинами та аналізують вивільнення 51Сг в надосадову рідину. Контролі включають інкубацію ендотелеальних клітин-мішеней з ефекторними клітинами, але за відсутності антитіла. Здатність антитіла запускати початкові стадії, що опосередковують АЮСС, досліджують, визначаючи їх зв'язування з клітинами, що експресують рецептори Есу, такими як клітини з рекомбінантною експресією Есукі і/або ЕсукІПА або МК клітини (що експресують в основному ЕсуУКПА). В одному переважному втіленні визначають зв'язування з ЕсукК на МК клітинах. "Фрагмент антитіла" належить до молекули, відмінної від інтактного антитіла, яка містить частину інтактного антитіла, яка зв'язується з антигеном, з яким зв'язується інтактне антитіло.
Приклади фрагментів антитіл включають Ем, Раб, Бар", Рар'-5ЗН, ЕК(ар)2, діатіла, лінійні антитіла, одноланцюжкові молекули антитіл (наприклад, 5сЕм) і мультиспецифічні антитіла, утворені фрагментами антитіл, але не обмежуються ними.
Термін "химерне антитіло" належить до антитіла, в якому частина важкого і/або легкого ланцюга походить з визначеного джерела або біологічного виду, тоді як інша частина важкого іл або легкого ланцюга походить з іншого джерела або біологічного виду. "Клас" антитіла означає тип константного домену або константної ділянки його важкого ланцюга. Існує п'ять основних класів антитіл: ДА, ДО, ІДЕ, дс і ДМ, ії деякі з них далі поділяються на підкласи (ізотипи), наприклад, Ідс1, Ідс2, ІдЗ, Ідс4, ІДА1 ії ІдДА2. Константні домени важкого ланцюга, що відповідають різним класам імуноглобулінів, позначають а, б, є, у та н, відповідно.
Термін "цитотоксичний агент", що використовується в даному описі, належить до речовини, яка інгібує або перешкоджає клітинній функції і/або викликає клітинну загибель або деструкцію.
Цитотоксичні агенти включають, без обмеження, радіоактивні ізотопи (наприклад, Аг211, 1131, 25, М90, Ке186, Ке188, Зт153, Ві212, РЗ2, РБЬр212 та радіоактивні ізотопи и); хіміотерапевтичні агенти або ліки (наприклад, метотрексат, адріаміцин, алкалоїди барвінку (вінкристин, вінбластин, етопозид), доксорубіцин, мелфалан, мітоміцин С, хлорамбуцил, даунорубіцин або інші інтеркалюючі агенти); агенти, що пригнічують ріст; ферменти та їх фрагменти, такі як нуклеолітичні ферменти; антибіотики; токсини, такі як низькомолекулярні токсини або такі, що мають ферментативну активність токсини бактерій, грибів, рослин або тварин, включаючи їх фрагменти і/або варіанти, і різні протипухлинні або протиракові агенти, описані нижче.
Термін "комплемент-залежна цитотоксичність" (СОС, від англ. сотріетепі-дерепаепі суїоїохісйу) належить до лізису клітин, викликаному антитілом за даним описом в присутності комплементу. В одному втіленні СОС визначають при впливі антитіла за даним описом на експресуючі СО19 ендотеліальні людські клітини в присутності комплементу. В одному втіленні клітини помічені кальцеїном. Про наявність СОС свідчить лізис 20 95 або більше клітин-мішеней при концентрації 30 мкг/мл. Зв'язування з компонентом комплементу С1д можна визначити за допомогою ІФА (імуноферментного аналізу). У такому досліджені на поверхні планшета для ІФА іммобілізують антитіло в діапазоні концентрацій і додають очищений людський С14 або людську сироватку. Зв'язування С1д визначають за допомогою антитіла, направленого проти С14, з наступним додаванням міченого пероксидазою кон'югата. Зв'язування (максимальне зв'язування Вітах) визначають, як оптичну щільність при 405 нм (00405) для субстрату пероксидази АВТ5? (2,2'-азино-ди-(З-етилбензтіазолін-б-сульфонат (6)|). "Ефекторні функції" належать до такої біологічної активності, властивої Ес ділянці антитіла, яка варіюється залежно від класу антитіла. Приклади ефекторних функцій антитіла включають:
Зв'язування С1д і комплемент-залежну цитотоксичність (СОС), зв'язування Ес-рецепторів, антитіло-залежну клітинно-опосередковану цитотоксичність (АЮСС), фагоцитоз, зниження експресії рецепторів клітинної поверхні (наприклад, В-клітинних рецепторів) та активацію В бо клітин.
Ефекторні функції, які залежать від зв'язування Ес-рецепторів, можуть бути опосередковані взаємодією Ес-ділянки антитіла з Ес-рецепторами (БСК), які являють собою спеціалізовані рецептори клітинної поверхні гемопоетичних клітин. Ес-рецептори належать до суперсімейства імуноглобулінів, і показано, що вони опосередковують як елімінацію покритих антитілом патогенів внаслідок фагоцитозу імунних комплексів, так і лізис еритроцитів та багатьох інших клітин-мішеней (наприклад, пухлинних клітин), покритих відповідним антитілом, завдяки антитіло-залежній клітинній цитотоксичності (АОСС) (див., наприклад, Мап де УміпКеї, 9.6. апа
Апаегзоп, С... у). ГеиКос. Віої. 49 (1991) 511-524). БСК класифікує за їх специфічністю у відношенні ізотипів імуноглобулінів: Ес рецептори до антитіл ЇдО позначають Есук. Зв'язування
Ес рецепторів описане, наприклад, Камеїсі, ..М. апа Кіпеї, 9У.Р., Аппи. Кем. Іттипої. 9 (1991) 457-492; Сареї, Р.У., вії а. Іттипотеїйнодз 4 (1994) 25-34; де Наав, М., еї аї., 9. І ар. Сіїп. Мед. 126 (1995) 330-341; апа Сезвзпет, у.Е., веї а|., Апп. Нетаїййо)!. 76 (1998) 231-248.
Перехресне зв'язування рецепторів з Ес-ділянками дО антитіл (Есук) запускає велику різноманітність ефекторних функцій, включаючи фагоцитоз, антитіло-залежну клітинну цитотоксичність і вивільнення запальних медіаторів, а також видалення імунних комплексів і регуляцію вироблення антитіл. У людини описано три класи Есук, а саме: - ЕсуУКІ (СО64) зв'язують мономерний дб з високою афінністю та експресується на макрофагах, моноцитах, нейтрофілах та еозинофілах. Модифікації Ес-ділянки ЇД46 щонайменше за одним амінокислотним залишком з Е233-5236, Р238, 0265, М297, АЗ27 та РЗ329 (нумерація згідно із системою ЕО-індекс, запропонованою Кара) зменшують зв'язування з ЕсукКіІ. Залишки в положеннях 233-236 Ід02, вбудовані в ЇдДОС1 та Ідс4, зменшували зв'язування з ЕсСуКіІ в 103 разів та усували відповідь моноцитів людини на сенсибілізовані антитілом червоні кров'яні клітини (Агтоитг, К.Г.., еї а!., Єиг. у. Іттипої!. 29 (1999) 2613-2624). - ЕсукКІ! (СО032) зв'язують комплекси дос з афінністю від помірної до середньої і широко експресується. Даний рецептор можна поділити на два підтипи, ЕСуУКІПА та ЕсукІІВ. ЕсукПА виявляється на багатьох клітинах, задіяних в кілінгу (наприклад, макрофагах, моноцитах, нейтрофілах) і мабуть, здатний активувати процес кілінгу. ЕСукКІІВ мабуть відіграє роль у процесі інгібування і виявляється на В-клітинах, макрофагах, а також на тучних клітинах та еозинофілах. На В-клітинах його функція, мабуть, полягає у пригніченні подальшого утворення
Зо імуноглобулінів і переключенні ізотипів, наприклад, на клас ІДЕ. ЕсукіІІВ, що знаходиться на макрофагах, інгібує фагоцитоз, що опосередковується ЕсуКПА. В-форма, що знаходиться на еозинофілах і тучних клітинах, може сприяти пригніченню активації вказаних клітин, опосередкованої зв'язуванням ІДЕ з його окремим рецептором. Знижене зв'язування з ЕСуУКкПА виявляється, наприклад, у антитіл, які містять Ес-ділянку (ДО з мутаціями щонайменше одного амінокислотного залишку з Е233-5236, Р238, 0265, М297, АЗ27, РЗ329, 0270, 0295, АЗ27, К292 і
К414 (нумерація згідно із системою ЕО-індекс, запропонованою Каба)д. - ЕсуАнІ (СО16) зв'язує дО з афінністю від помірної до середньої та існує в двох формах.
ЕСуУКША виявляється на МК клітинах, макрофагах, еозинофілах і деяких моноцитах і Т клітинах та опосередковує АОСС. ЕсСуУКПІВ експресується на високому рівні на нейтрофілах. Знижене зв'язування з ЕсукППША виявляється, наприклад, у антитіл, які містять Ес-ділянку до з мутаціями щонайменше одного амінокислотного залишку з Е233-С4236, Р238, 0265, М297, АЗ27, РЗ29, 0270, 0295, АЗ27, 5239, 269, Е293, 296, М303, АЗ27, К338 ї 0376 (нумерація згідно із системою ЕО-індекс, запропонованою Кабай.
Картування сайтів зв'язування Ідсе1 людини з Ес-рецепторами, вказані вище сайти мутацій та способи визначення зв'язування з ЕсуКІ і ЕсукІПА описані Зпієїа5, К.Г., еї аї. 9. ВіоЇ. Спет. 276 (2001) 6591-6604. "Ефективна кількість" агента, наприклад, фармацевтичної композиції, означає кількість, ефективну для досягнення бажаного терапевтичного або профілактичного результату при необхідних дозуваннях і протягом необхідного періоду часу.
Термін "с рецептор", що використовується в даному описі, належить до активуючих рецепторів, які відрізняються наявністю цитоплазматичної послідовності ІТАМ, асоційованої з рецептором (див., наприклад, Камеїсп, У.М. апа ВоПапа, 5., Аппи. Кеум. Іттипої. 19 (2001) 275- 290). Такими рецепторами є ЕсукКіІ, ЕсуУкКПА ї ЕсукПА. Термін "відсутність зв'язування з Есук" означає, що при концентрації антитіла 10 мкг/мл зв'язування антитіла, описаного в даному документі, 3 МК клітинами становить 10 95 або менше від зв'язування, зареєстрованого для анти-ОХ401. антитіла І С.001, згідно з описом в УМО 2006/029879.
Тоді як Іде4 демонструє знижене зв'язування з ЕсК, антитіла других підкласів дО демонструє виражене зв'язування. Однак, Рго238, Азр265, Азр270, Азп297 (втрата вуглеводу
Ес), Рго329 і 234, 235, 236 і 237, Пе253, Зег254, І уз288, Тпг307, СІп311, Азп434 і Ніз435 являють бо собою залишки, модифікація яких також знижує зв'язування з ЕСЕ (ЗпієЇа5, Е.Ї., еї аї. 9. Віої.
Спет. 276 (2001) 6591-6604; І па, 9., еї аі., ЕАБЕВ 4). 9 (1995) 115-119; Могдап, А., еї аї.,
Іттипоїоду 86 (1995) 319-324; ії ЕР 0 307 434). В одному втіленні антитіло за даним описом належить до підкласу Їдс1 або Ідс2 і містить мутацію РМА236, СІ РЗ5331 і/або І 234А/ 235А. В одному втіленні антитіло за даним описом належить до підкласу Ідзе4 і містить мутацію І 235Е. В одному втіленні антитіло додатково містить мутацію 5228Р.
Термін "Бс ділянка" в даному документі означає С-кінцеву ділянку важкого ланцюга імуноглобуліну, який містить щонайменше частину константної ділянки. Термін охоплює послідовності нативних Ес ділянок і варіантів Ес ділянок. В одному втіленні Ес ділянка важкого ланцюга дс людини розташовується між Су5з226 або Рго230 і карбокси-кінцем важкого ланцюга. При цьому С-кінцевий лізин (І уз447) Ес ділянки може бути присутнім або відсутнім.
Якщо не вказано інше, нумерація амінокислотних залишків Ес ділянки або константної ділянки відповідає системі нумерації ЄЮ, яка також позначається ЕО-індекс, описаною Кабаї еї аї.,
Зедиеєпсез ої Ргоївіпв ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, Бій Ей. Рибіїс Неайй Зегуісе, Маїйопаї! Іпвійшев ої
Неай, ВеїШезаа, МО (1991), МІН Рибіїсайноп 91-3242.
Антитіла за даним описом містять Ес-ділянку, у одному втіленні Ес-ділянка має людське походження. В одному втіленні Ес-ділянку містить всі частини константної ділянки людського походження. Ес-ділянка антитіла безпосередньо залучена в активацію комплементу, зв'язування С14, активацію СЗ і зв'язування Ес-рецепторів. При тому, що вплив антитіла на систему комплементу залежить від деяких умов, зв'язування з С1д обумовлене визначеними сайтами зв'язування в Ес-ділянці. Такі сайти зв'язування відомі в галузі техніки та описані, наприклад, І иКав, Т.., еї аї., У. Іттипої. 127 (1981) 2555-2560; Вгиппоизе, В., апа Себга, 9.).,
Мої. Іттипої. 16 (1979) 907-917; Випоп, О.Н., єї аї., Майте 288 (1980) 338-344; Тпоттезеп, у.Е., еї аї., Мої. Іттипої. 37 (2000) 995-1004; Ідиводіє, Е.Е., єї аї., У. Іттипої. 164 (2000) 4178-4184;
Негаген, М., еї аї., 9. Мігої. 75 (2001) 12161-12168; Могаап, А., єї а!., Іттипоіоду 86 (1995) 319- 324; апа ЕР 0 307 434. Такими сайтами зв'язування є, наприклад, І 234, 1235, 0270, М297, ЕЗ318,
КЗ20, КЗ322, РЗ331 і РЗ329 (нумерація згідно із системою ЕО-індекс, запропонованою Кабаг якщо не вказане інше, нумерація амінокислотних залишків у Ес-ділянці або константній ділянці здійснюється згідно їз системою нумерації ЄЮ, яка також позначається ЕО-індекс, описаною
Кабаї, Е.А. еї аї., хХедоепсез ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, Бій єд., Рибіїс Неайй Зегісе,
Маїйопаї! Інзійшев ої Неанй, ВеїШезаа, МО (1991), МІН Рибіїсайоп 91-3242). Антитіла підкласів
ІЧО1, ІдС2 і їд053 звичайно демонструє здатність активувати комплемент, зв'язувати С14 і активувати С3, тоді як ІД4 не активує систему комплементу, не зв'язують С14 і не активує С3.
Термін "ЕРс-ділянка антитіла" добре відома фахівцям в ділянці техніки і базується на розщепленні антитіл папаїном. В одному втіленні Ес-ділянка являє собою Ес-ділянку людського походження. В одному втіленні Ес-ділянка належить до підкласу Ідс4, містить мутації 5228Р і/або І 235Е (нумерація згідно із системою ЕО-індекс, запропонованою Кабаї). В одному втіленні
Ес-ділянка належить до підкласу Ідс1, містить мутації І 234А і/або І 235А (нумерація згідно із системою ЕО-індекс, запропонованою Кабай. "Каркасні ділянки" або "ЕК" (від англ. їатеулгк гедіоп5) означають залишки у складі варіабельного домену, відмінні від залишків гіперваріабельних ділянок (НМ, від англ. пурегмагіаріє гедіоп). ЕК варіабельного домену звичайно складається з чотирьох доменів ЕЕ:
ЕК, ЕК2, ЕКЗ і ЕК4. Відповідно, послідовності НУЄ. і ЕК звичайно розташовуються в УН (або
МУ) в наступному порядку: ЕК1-Н1(11)-ЕН2-На (І 2)-ЕНЗ-НЗ(І. 3)-ЕНА.
Термін "повнорозмірне антитіло", "інтактне антитіло" і "ціле антитіло" в даному описі використовують взаємозамінно для позначення антитіла, що має структуру, по суті аналогічну структурі нативного антитіла, або що має важкі ланцюги, які містять Ес ділянку, описану в даному документі. "Повнорозмірне антитіло" являє собою антитіло, яке містить варіабельні ділянки легкого ланцюга і важкого ланцюга (МІ, МН), а також константний домен легкого ланцюга (СІ) і константні домени важкого ланцюга, СНІ, СН2 ї СНЗ. Константні домени можуть представляти собою константні домени з нативною послідовністю (наприклад, константні домени з нативною послідовністю людського походження) або варіанти амінокислотної послідовності. Більш конкретно, повнорозмірне антитіло містить два легких ланцюга антитіла (кожний містить варіабельний домен легкого ланцюга і константний домен легкого ланцюга) і два важких ланцюга антитіла (кожний містить варіабельний домен важкого ланцюга, шарнірну ділянку і константні домени важкого ланцюга СНІ, СН2 і СНЗ). С-кінцеві амінокислотні залишки
К або СК в двох важких ланцюгах повнорозмірного антитіла можуть бути присутніми або відсутніми, незалежно один від одного. Крім того, повнорозмірне антитіло може мати у складі доменів вставки, мутації та делеції амінокислот, але не делеції цілого домену.
Терміни "клітина-хазяїн", "лінія клітин-хазяїв" і "культура клітин-хазяїв" використовуються 60 взаємозамінно і належать до клітин, в які була впроваджена екзогенна нуклеїнова кислота,
включаючи нащадків цих клітин. Клітини-хазяї включають "трансформанти" і ""трансформовані клітини", які включають первинні трансформовані клітини та їх нащадків, незалежно від числа пасажів. Потомство може не бути абсолютно ідентичним батьківській клітині за вмістом нуклеїнових кислот, але може мати мутації. Терміни також охоплюють нащадків з мутаціями, які мають таку саму функцію або біологічну активність, як і початково трансформовані клітини, що пройшли скринінг або відбір. "Консенсусна каркасна ділянка людського походження" означає каркасну ділянку, яка являє собою амінокислотні залишки, які найчастіше зустрічаються, у вибірці каркасних послідовностей
МІ. або УН імуноглобуліну людини. Як правило, послідовності МІ. або УН імуноглобуліну людини вибирають з підгрупи послідовностей варіабельних доменів. Як правило, підгрупа послідовностей являє собою підгрупу, як в описі Кабаї, Е.А. єї аЇ., Зедоепсе5 ої Ргоїеїп5 ої
Іттипо!одісаї! Іпіегеві, Бій єд., ВеШезаа МО (1991), МІН Рибіїсайноп 91-3242, Мо!ів. 1-3. В одному втіленні, застосовно до МІ, підгрупа являє собою підгрупу каппа І, як в описі Кабаї еї аї., див. вище. В одному втіленні, застосовно до МН, підгрупа являє собою підгрупу ІЇЇ, як в описі Кабаї єї аІ., див. вище. "Гуманізоване" антитіло належить до химерного антитіла, яке містить амінокислотні залишки
НМЕ, які не є людськими, і амінокислотні залишки ЕК людського походження. У деяких втіленнях гуманізоване антитіло буде містити по суті всі 3 щонайменше одного, а звичайно, двох варіабельних доменів, в яких всі або по суті всі з НМК (наприклад, СОК) відповідають таким з імуноглобулінів, які не є людськими, і всі або по суті всі ЕК відповідають таким людського антитіла. Гуманізоване антитіло необов'язково може містити щонайменше частину константної ділянки антитіла, що походить з людського антитіла. "Гуманізована форма" антитіла, наприклад, антитіла, що не є людським, належить до антитіло, яке пройшло гуманізацію.
Термін "гиперваріабельна ділянка", або "НМ" (від англ. пурегмагіабіе гедіоп) в даному документі означає кожну з ділянок варіабельних доменів антитіла, які містять гиперваріабельні амінокислотні залишки ("ділянки, що визначають комплементарність", або СОК (від англ. сотріетепіагйу аеїегтіпіпуд гедіопе)) ійабо формують петлі визначеної структури ("гиперваріабельні петлі") (або які містять залишки, контактуючі з антигеном ("контакти з
Зо антигеном"). Як правило, антитіла містять шість НМК: три у складі МН (НІ, Н2, НУ) і три у складі
МІ (І1, 12,1 3).
НМК включають: (а) гиперваріабельні петлі, утворені амінокислотними залишками 26-32 (11), 50-52 (12), 91- 96 (13), 26-32 (НІ), 53-55 (Н2) і 96-101 (НЗ) (Споїніа, С. апа І е5К, А.М., 9. Мої. Віої. 196 (1987) 901-917); (6) СОЕ, утворені амінокислотними залишками 24-34 (І 1), 50-56 (І 2), 89-97 (І 3), 31-35Б5 (НІ), 50-65 (Н2) ії 95-102 (НЗ) (КаБбаї сеї а!., Зедиепсевз ої Ргоївіп5 ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, Бій Ей.
Рибіїс Неацй 5егуісе, Маїйопаї Іпзійшез ої Неайй, Веїйезаа, МО (1991), МІН Рибіїсайоп 91-3242.); (в) контакти з антигеном, утворені амінокислотними залишками 27с-36 (І 1), 46-55 (І 2), 89-96 (13), 30-35Б (НІ), 47-58 (Н2) і 93-101 (НЗ) (МассСаїшт еї аї. У). Мої. Віо!. 262: 732-745 (1996)); і (г) комбінації (а), (6) і/або (в), включаючи амінокислотні залишки 46-56 (І 2), 47-56 (І 2), 48-56 (12), 49-56 (І 2), 26-35 (НІ), 26-356 (НІ), 49-65 (Нг), 93-102 (НЗ) і 94-102 (НЗ).
Якщо не вказано інше, залишки НМК та інші залишки у складі варіабельного домену (наприклад, залишки ЕК) пронумеровані згідно з Кабаї еї аї!., див. вище. "Імунокон'югат" являє собою антитіло, кон'юговане з однією або більше ніж однією гетерологічною молекулою, включаючи цитотоксичний агент, але не обмежуючись ним. "Індивідуум" або "суб'єкт" в даному описі є ссавцем. Ссавці включають свійських тварин (наприклад, корів, овець, кішок, собак і коней), приматів (наприклад, людей і приматів, які не є людиною, таких як мавпи), кроликів і гризунів (наприклад, мишей і щурів), але не обмежуються ними. У деяких втіленнях індивідуумом або суб'єктом є людина. "Виділене" антитіло означає антитіло, ізольоване від компонентів його природного оточення.
У деяких втіленнях антитіло очищене до ступеня чистоти більше ніж 95 95 або 99 95 за даними, наприклад, електрофоретичного (наприклад, за допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі у присутності додецил-сульфату натрію (ДСН-ПААГ), ізоелектричного фокусування (ІЕФ), капілярного електрофорезу) або хроматографічного визначення (наприклад, за допомогою іонообмінної або обернено-фазової високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ)). Огляд способів оцінки чистоти антитіл представлений, наприклад, Еіайтап еї аї., ..
Спготагодг. В 848 (2007) 79-87. "Виділена" нуклеїнова кислота означає молекулу нуклеїнової кислоти, ізольовану від 60 компонентів її природного оточення. Виділена нуклеїнова кислота охоплює молекулу нуклеїнової кислоти, яка міститься в клітинах, які як правило містять молекулу нуклеїнової кислоти, при цьому молекула нуклеїнової кислоти знаходиться позахромосомно або в ділянці хромосоми, яка відрізняється від її природного положення на хромосомі. "Виділена нуклеїнова кислота, що кодує антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину" належить до однієї або більше ніж однієї молекули, яка кодує важкі і легкі ланцюги антитіла (або їх фрагменти), включаючи такі молекули нуклеїнових кислот у складі одного вектора або в окремих векторах, і такі молекули нуклеїнових кислот присутні в клітині-хазяїні в одному або більше ніж одному місцеположенні.
Термін "моноклональне антитіло" (птАбБ) в даному документі означає антитіло, одержане з популяції по суті гомогенних антитіл, тобто окремі антитіла, які складають популяцію, ідентичні і/або зв'язуються з тим самим епітопом, за винятком можливих варіантів антитіл, наприклад, які містять природні мутації або утворюються під час одержання препарату моноклональних антитіл, вказані варіанти звичайно присутні у незначній кількості. На відміну від препаратів поліклональних антитіл, які, як правило, включають різні антитіла, направлені проти різних детермінант (епітопів), кожне моноклональне антитіло в препараті моноклональних антитіл направлено проти єдиної детермінанти антигену. Так, прикметник "моноклональне" вказує на характер антитіла, одержаного з по суті гомогенної популяції антитіл, і не повинний розглядатися як необхідність одержання антитіла будь-яким конкретним способом. Наприклад, моноклональні антитіла для застосування відповідно до даного винаходу, можуть бути одержані множиною способів, включаючи гібридомну технологію, способи ДНК-рекомбінації, способи фагового дисплея та способи, в яких застосовують трансгенних тварин, які містять всі або частину імуноглобулінових локусів людини, але не обмежуючись ними, такі способи та інші наведені як приклад способи одержання моноклональних антитіл описані в даному документі. "Голе антитіло" належить до антитіла, не кон'югованого з гетерологічним групуванням (наприклад, цитотоксичним групуванням) або радіоактивною міткою. Голе антитіло може бути присутнім у фармацевтичній композиції. "Нативні антитіла" належать до молекул імуноглобулінів природного походження, які мають різні структури. Наприклад, нативні антитіла Їду являють собою гетеротетрамерні глікопротеїни розміром приблизно 150 000 дальтон, які складаються з двох ідентичних легких ланцюгів і двох ідентичних важких ланцюгів, зв'язаних дисульфідними зв'язками. У напрямку від М-кінця до С- кінця кожний важкий ланцюг має варіабельну ділянку (МН), яка також позначається варіабельним доменом важкого ланцюга, за яким йдуть три константних домени (СНІ, СНЗ2 та
СНЗ), при цьому між першим і другим константними доменами розташована шарнірна ділянка.
Аналогічно, в напрямку від М-кінця до С-кінця кожний легкий ланцюг має варіабельну ділянку (Му), яка також позначається варіабельним доменом легкого ланцюга, за яким йде константний домен (СІ). Залежно від амінокислотної послідовності її константного домену легкий ланцюг антитіла може належати до одного з двох типів, які позначаються каппа (к) і лямбда (Х).
Термін "листівка-вкладиш" використовується для позначення інструкцій із застосування, які звичайно вкладаються у комерційні упаковки терапевтичних продуктів, які містять інформацію про показання до застосування, застосування, дозування, введення, комбіновану терапію, протипоказання і/або попередження, що стосуються застосування цих терапевтичних продуктів. "Відсоток (95) ідентичності амінокислотної послідовності" відносно референтної поліпептидної послідовності визначають як відсоток амінокислотних залишків у кандидатній послідовності, які ідентичні амінокислотним залишком в референтній поліпептидній послідовності після вирівнювання послідовностей і розставляння пропусків (гепів), якщо це необхідно для досягнення найбільшого відсотка ідентичності послідовностей, і без прийняття будь-яких консервативних замін за частину ідентичної послідовності. Вирівнювання з метою визначення відсотка ідентичності амінокислотної послідовності може виконуватися різними способами, відомими в даній галузі техніки, наприклад, за допомогою загальнодоступних комп'ютерних програм, таких як ВІ А5Т, ВГ А5ЗТ-2, АГІСМ або Медаїдп (ОМАЗТАК). Фахівці в даній галузі можуть визначити належні параметри для вирівнювання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині порівнюваних послідовностей. Для цілей даного опису, значення 9о ідентичності амінокислотних послідовностей одержані за допомогою комп'ютерної програми для порівняння послідовностей АЇ Ї-М-2. Комп'ютерна програма для порівняння послідовностей А ЇОМ-2 була розроблена в компанії Ссепепіесі, Іпс., вихідний код був представлений разом з користувацькою документацією в бюро із захисту авторських прав США, М/ах5піпдіоп О.С., 20559, де було зареєстроване авторське право під номером ТХО510087. Доступ до програми АСІСМ-2 можна одержати в компанії сСепепіесії, Іпс., Південний Сан Франциско, Каліфорнія, або код програми бо може бути скомпільований на основі вихідного коду. Програма АГІОМ-2 повинна бути скомпільована для роботи на платформі ОМІХ, включаючи платформу аідйа! ОМІХ М4.00. Всі параметри для порівняння послідовностей задані програмою АГІОЗМ-2 і залишаються незмінними.
У випадках, коли для порівняння амінокислотних послідовностей використовують АГІСМ-2, відсоток ідентичності заданої амінокислотної послідовності А з послідовністю В, відносно послідовності В або у порівнянні із заданою амінокислотною послідовністю В (що можна також сформулювати як задана амінокислотна послідовність А, яка має або яка містить визначений відсоток ідентичної амінокислотної послідовності з послідовністю В, відносно послідовності В або у порівнянні із заданою амінокислотною послідовністю В) розраховують за формулою:
Х/їх100, де Х це кількість амінокислотних залишків, які були розцінені програмою для вирівнювання послідовностей АЇ Ї5М-2 як абсолютні співпадіння при вирівнюванні А і В у рамках цієї програми, і де ХУ це загальна кількість амінокислотних залишків у В. Потрібно брати до уваги, що коли довжина амінокислотної послідовності А не дорівнює довжині амінокислотної послідовності В, відсоток ідентичності амінокислотної послідовності А з послідовністю В не буде дорівнювати відсотку ідентичності амінокислотної послідовності В з послідовністю А. Якщо не вказано інше, всі значення 95 ідентичності амінокислотних послідовностей, наведені тут, одержані згідно з описом у попередньому параграфі про застосування комп'ютерної програми АСГІСМ-2.
Термін "фармацевтична композиція" належить до препарату, який знаходиться в такій формі, яка забезпечує ефективний прояв біологічної активності активного інгредієнта, що міститься в ньому, і який не містить додаткових компонентів, які являються неприйнятно токсичними для суб'єкта, якому будуть вводити композицію. "Фармацевтично прийнятний носій" належить до інгредієнта в фармацевтичній композиції, відмінному від активного інгредієнта, який є нетоксичним для суб'єкта. Фармацевтично прийнятний носій включає буфер, ексципієнт, стабілізатор або консервант, але не обмежується ними.
Термін "лікування" (та його граматичні похідні, такі як "лікувати" або "здійснювати лікування"), що використовується в даному документі, означає клінічне втручання у спробі змінити природній хід захворювання у індивідуума, що одержує лікування, і може здійснюватися
Зо як для профілактики, так і за наявності патологічного стану. Бажані ефекти лікування включають попередження виникнення або повторного прояву захворювання, пом'якшення симптомів, зменшення будь-яких прямих або непрямих патологічних наслідків захворювання, попередження метастазування, зниження швидкості прогресування захворювання, покращення або тимчасове полегшення стану, а також ремісію або покращення прогнозу, але не обмежуються ними. У деяких втіленнях антитіла за винаходом застосовують, щоб відтермінувати розвиток захворювання або щоб уповільнити прогресування захворювання.
Термін "варіабельна ділянка" або "варіабельний домен" означає домен важкого або легкого ланцюга антитіла, який залучений в зв'язування антитіла з антигеном. Варіабельні домени важкого ланцюга і легкого ланцюга (МН і МІ, відповідно) нативного антитіла звичайно мають подібну структуру, кожний домен містить чотири консервативних каркасних ділянки (ЕК) і три гіперваріабельних ділянки (НМК). (див., наприклад, Кіпаї, Т.). еї аІ. Кибу Іттипоіоду, бій еа.,
М.Н. Ргеетап апа Со., М.У. (2007), раде 91). Для забезпечення антигензв'язуючої специфічності може бути достатньо одного домену МН або Мі. Крім того, антитіла, що зв'язуються з конкретним антигеном, можна виділяти, використовуючи МН або Мі домен антитіла, яке зв'язується з антигеном, для скринінгу бібліотеки комплементарних Мі або МН доменів, відповідно. Див., наприклад, Рогіоїапо, 5. еї аї., У. Іттипої. 150 (1993) 880-887; Сіасквоп, Т. єї а!., Майте 352 (1991) 624-628).
Термін "вектор", що використовується в даному документі, належить до молекули нуклеїнової кислоти, здатної передавати іншу нуклеїнову кислоту, з якою вона зв'язана. Термін охоплює вектор як нуклеїновокислотну структуру, що самореплікується, а також вектор, включений в геном клітини-хазяїна, в яку він був введений. Деякі вектори здатні направляти експресію нуклеїнових кислот, з якими вони функціонально зв'язані. Такі вектори в даному документі позначають "експресуючими векторами".
І. КОМПОЗИЦІЇ ТА СПОСОБИ
В одному аспекті винахід оснований на тому, що, з одного боку біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину за даним описом має покращені властивості. У деяких втіленнях запропоновані біспецифічні антитіла до людського бета- амілоїду/людського рецептора трансферину. Запропоновані в даному винаході антитіла можуть знайти застосування, наприклад, в діагностиці або лікуванні хворобі Альцгеймера.
А. Приклади биспецифічних антитіл до людського бета-амілоїду/улюдського рецептора трансферину
В одному аспекті винаходу запропоновані виділені біспецифічні антитіла, які зв'язуються з людським бета-амілоїдом і людським рецептором трансферину. Антитіла являють собою біспецифічні антитіла, які складаються з повнорозмірного основного антитіла і злитого Еар- фрагмента з перехресною заміною деяких доменів. Таким чином, одержане біспецифічне антитіло є асиметричним. Таким чином, біспецифічне антитіло одержують за допомогою технології гетеродимеризації, що називається виступи-у-западини, використовуючи перший важкий ланцюг з так званими мутаціями типу "виступ" (НСКпоб) і другий важкий ланцюг з так званими мутаціями типу "западина" (НСпої!е).
Антитіло 0012, яке також являє собою аспект даного винаходу, складається з чотирьох поліпептидів, які мають амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 06-09.
Антитіло 0012 являє собою біспецифічне антитіло, яке містить а) одне повнорозмірне антитіло, яке містить по дві пари повнорозмірних легких ланцюгів антитіла і повнорозмірних важких ланцюгів антитіла, де сайти зв'язування, утворені кожною парою повнорозмірного важкого ланцюга і повнорозмірного легкого ланцюга специфічно зв'язуються з першим антигеном, і б) один додатковий баб фрагмент, де додатковий Бар фрагмент злитий з С-кінцем одного з важких ланцюгів повнорозмірного антитіла, де сайт зв'язування додаткового Бар фрагмента специфічно зв'язується з другим антигеном, де кожний з повнорозмірних легких ланцюгів антитіла містить в константному домені легкого ланцюга (СІ) в положенні 123 амінокислотний залишок аргінін (замість залишку дикого типу - глутамінової кислоти; мутація Е123ЗК) і в положенні 124 амінокислотний залишок лізин (замість залишку дикого типу - глутаміну; мутація 0124К) (нумерація згідно з Кабаї), де кожний з повнорозмірних важких ланцюгів антитіла містить в константному домені важкого ланцюга (СНІ) в положенні 147 залишок глутамінової кислоти (замість залишку дикого типу - лізину; мутація К147Е) і в положенні 213 залишок глутамінової кислоти (замість залишку дикого типу - лізину; мутація К213ЗЕ) (нумерація згідно із системою ЕО-індекс, запропонованою
Кабай,
Зо де додатковий Раб фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном, містить кросовер доменів, так що варіабельний домен легкого ланцюга (МІ) і варіабельний домен важкого ланцюга (УН) замінені один на одного, і де перший антиген являє собою людський білок бета-амілоїд, і другий антиген являє собою людський рецептор трансферину.
Антитіло 0015, яке також являє собою аспект даного винаходу, складається з чотирьох поліпептидів, які мають амінокислотну послідовність 562 ІЮ МО: 01-03 і послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 10.
Антитіло 0015 являє собою біспецифічне антитіло, яке містить а) одне повнорозмірне антитіло, яке містить по дві пари повнорозмірних легких ланцюгів антитіла і повнорозмірних важких ланцюгів антитіла, де сайти зв'язування, утворені кожною парою повнорозмірного важкого ланцюга і повнорозмірного легкого ланцюга специфічно зв'язуються з першим антигеном, і б) один додатковий баб фрагмент, де додатковий Рар фрагмент злитий з С-кінцем одного з важких ланцюгів повнорозмірного антитіла, де сайт зв'язування додаткового Бар фрагмента специфічно зв'язується з другим антигеном, де кожний з повнорозмірних легких ланцюгів антитіла містить в константному домені легкого ланцюга (СІ) в положенні 123 амінокислотний залишок аргінін (замість залишку дикого типу - глутамінової кислоти; мутація Е123ЗК) і в положенні 124 амінокислотний залишок лізин (замість залишку дикого типу - глутаміну; мутація 0124К) (нумерація згідно з Кара), де кожний з повнорозмірних важких ланцюгів антитіла містить в константному домені важкого ланцюга (СНІ) в положенні 147 залишок глутамінової кислоти (замість залишку дикого типу - лізину; мутація К147Е) і в положенні 213 залишок глутамінової кислоти (замість залишку дикого типу - лізину; мутація К213ЗЕ) (нумерація згідно із системою ЕО-індекс, запропонованою
Кабай, де додатковий Раб фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном, містить кросовер доменів, так що константний домен легкого ланцюга (СІ) і 1 константний домен важкого ланцюга (СНІ) замінені один на одного, і де перший антиген являє собою людський білок бета-амілоїд, і другий антиген являє собою людський рецептор трансферину.
Антитіло 0020, яке також являє собою аспект даного винаходу, складається з трьох поліпептидів, які мають амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 11-13.
Антитіло 0020 являє собою біспецифічне антитіло, яке містить а) одне повнорозмірне антитіло, яке містить по дві пари повнорозмірних легких ланцюгів антитіла і повнорозмірних важких ланцюгів антитіла, де сайти зв'язування, утворені кожною парою повнорозмірного важкого ланцюга і повнорозмірного легкого ланцюга специфічно зв'язуються з першим антигеном, і б) один додатковий Раб фрагмент, де додатковий Бар фрагмент злитий з С-кінцем одного з важких ланцюгів повнорозмірного антитіла, де сайт зв'язування додаткового Бар фрагмента специфічно зв'язується з другим антигеном, де кожний з повнорозмірних легких ланцюгів антитіла містить в константному домені легкого ланцюга (СІ) в положенні 123 амінокислотний залишок аргінін (замість залишку дикого типу - глутамінової кислоти; мутація Е123ЗК) і в положенні 124 амінокислотний залишок лізин (замість залишку дикого типу - глутаміну; мутація 0124К) (нумерація згідно з Кара), де кожний з повнорозмірних важких ланцюгів антитіла містить в константному домені важкого ланцюга (СНІ) в положенні 147 залишок глутамінової кислоти (замість залишку дикого типу - лізину; мутація К147Е) і в положенні 213 залишок глутамінової кислоти (замість залишку дикого типу - лізину; мутація К213ЗЕ) (нумерація згідно із системою ЕО-індекс, запропонованою
Кабай, де додатковий Габ-фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном, являє собою одноланцюжковий Рар-фрагмент і де перший антиген являє собою людський білок бета-амілоїд, і другий антиген являє собою людський рецептор трансферину.
Антитіло 0024, яке також являє собою аспект даного винаходу, складається з чотирьох поліпептидів, які мають амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 14-17.
Антитіло 0024 являє собою біспецифічне антитіло, яке містить а) одне повнорозмірне антитіло, яке містить по дві пари повнорозмірних легких ланцюгів антитіла і повнорозмірних важких ланцюгів антитіла, де сайти зв'язування, утворені кожною парою повнорозмірного важкого ланцюга і повнорозмірного легкого ланцюга специфічно
Зо зв'язуються з першим антигеном, і б) один додатковий Раб фрагмент, де додатковий Бар фрагмент злитий з С-кінцем одного з важких ланцюгів повнорозмірного антитіла, де сайт зв'язування додаткового Гаю фрагмента специфічно зв'язується з другим антигеном, де додатковий Бар фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном, містить кросовер доменів, так що константний домен легкого ланцюга (СІ) ії 1 константний домен важкого ланцюга (СНІ) замінені один на одного, і де перший антиген являє собою людський білок бета-амілоїд, і другий антиген являє собою людський рецептор трансферину.
Для рекомбінантного одержання біспецифічних антитіл застосовували різні розташування/комбінації відповідних поліпептидів у різних експресуючих плазмідах і різні співвідношення одержаних плазмід. Результати представлені в таблиці, наведеній нижче. відносна площа піку (95| («КЕ-ДСН; невідновлювані умови) антитіло співвідношення плазмід У димер з
ІС 2 тАБ |ланцюгами мономер западина | западина- | антитіла западина 0012 ((НСпоен-СуЗ(НСКпоряїСстовв)ї | | 12 | 9 | 78 0012 (С) (НСпоен-С)З(НСкпоряї Сстовв)Ї 1 | 9 | 9 79 0012 (СнНСпоє)уЗ(Нскпор С) (і Сстовв)| 6 | 9 | 9 | 75 / 0015 ((НСпоен-СуЗ(НСКпобяїСстовв)ї | | 7 | 23 | 62 0015 (С) (НСпоен-С)З(НСкпоряї Сстовв)! | 4 | 17 | 75 0015 ((СнНСпоє)рЗ(Нскпор С) (і Сстовв)| | 4 | 20 Дю 66 (002о |(НСпоен-Суа(НСКпоряї Сстовв)ї | | 16 | 11 | 72
Біспецифічні антитіла одержували у невеликій кількості та аналізували спектр побічних продуктів після першої стадії очищення за допомогою афінної хроматографії з білком А і після другої стадії очищення за допомогою ексклюзійної хроматографії. Результати представлені в таблиці, наведеній нижче.
спектр побічних продуктів (КЕ-ДСН . невіднов.) вихід мономерного продукту при имерз антитіло співвідношення культивуванні в З л після пан Ми плазмід препаративного очищення з білком ІС У тАБ запа ина-
А (КЕ-ДСН невіднов./вихід) западина д западина ях 3/4 тАр 4. 65 96 о о о 4. 70 9 о о о 4. 85 96 о о о б мг вихід мономерного продукту при спектр пон (КЕ-ДоН с. культивуванні в З л після д - . співвідношення димер антитіло плазмід препаративного очищення з У тА | западина- білком А і препаративної ЕХ (КЕ- ІС 7
ДСН невіднов./вихід) западина)| западина
І 3/4 тАр 0012 113 230 З 59 396 2,595 2,8 мг
МГ
0015 15:38 "35 195 | 05 19 5,8 мг 00го 14 68 ть 1395 | 1095.| 8695 0,8 мг з З л після даними ЕХ (90 . - даними ЕХ (о с. кінцевий . співвідношення Іпрепаративного антитіло плазмід очищення з продукт за білком А за НМ даними ЕХ НМ даними ЕХ 0рот2 | їз | 7895. | 0 1 22 | 97595 | 0 | 25 0024 | 13 | 8095 | 0 | 20 | 9695 | 0 | 4 0015 | їз | 8795 | 0 | 13 | 9795 | 0 | з рого | та | 5зя | 7 | 40 | 9795 | 0 | з
Сайт зв'язування бета-амілоїду містить додатковий сайт глікозилювання. Тому досліджували глікозилювання. Результати представлені в таблиці, наведеній нижче.
НеСпоїе НСКпор антитіло співвідношення плазмід КЕ-ДСН; віднов.; відн. площ. піка (9о 0012. |1(НСпоїе-і С):З3(НСКпоб- Ссго55 10114180 1718 0012 10 С)(НСпоіе-! С)З(НСКпобяї Сстовв)! 09113182 0012. | (СбНСпоїє):З(НеКпоб-ні С) 1 (І Ссго55 0015. /1(НСпоїе-і С):З3(НСКпоб- Ссго55 0015 (1 С)(НСпоіе-! С)З(НСКпобяї Сстовв)| 60101165. Ї..29. 0015 (1 С-НСпоїє)З(Нскпор С)Л(Ссговв) | 01700115 16126 0020 |1(НСпоїве-н С) 4(НОкКпоб-і Ссго55 91181712
Відсоткова частка неглікозильованого Раб при культивуванні в об'ємі З л після очищення із застосуванням білка А антитіло співвідношення плазмід 0012 (С) (НСпоен- С) З(НСкпоряї Сстовв)| 23 | 77 | 70 | 90 / 0015 (С) (НСпоен- С) З(НСКкпориїСстовв)| 16 | 84 | 8 | 92
Відсоткова частка неглікозильованого Раб при культивуванні в об'ємі З л після очищення із застосуванням білка А і ексклюзійної хроматографії антитіло співвідношення плазмід 0012 (С) (НСпоіеі С) (НСКпорі Сстовв)| 8 | 92 | 6 | 94 0015 (С) (НСпоіеі С) (НСКпорї Сстовв)| 10 | 90 | 45 | 955 (0024 |(С)л(НСпоіені С)З(НСКпорі Сстовв)| 8 | 92 | 45 | 955
Стабільність біспецифічних антитіл досліджували при інкубації протягом 14 діб у буферному розчині з визначеними значеннями рн. Результати представлені в таблиці, наведеній нижче. антитіло антитіло | антитіло відносне зв'язування з |14 діб, рН 6,0, 40 "С, ніз/масі о о о даними ВіІАсоге відносне зв'язування з 14 діб, рН 6,0, 40 "С, Ніз/масі о о о
Ви соге
Температура агрегації антитіл 0015 і 0024 складала приблизно 53-55 С, а для антитіла 0012 приблизно 54-56 "С.
Швидкість дисоціації (Ка в (1/мс|) при зв'язуванні людського рецептора трансферину за результатом визначення на біоаналізаторі ВіАсоге була порівняною для антитіл 0015 і 0024, а також для батьківського антитіла до людського рецептору трансферину при 25 "С, 37 "Сі 40 с: від 1,86Е-02 до 1,97Е-02, від 1,98Е-2 до 2,03Е-2 і 1,44Е-02, відповідно.
Бета-амілоїд-специфічна ефекторна функція усіх антитіл була порівняна з батьківським моноспецифічним антитілом до бета-амілоїду при дослідженні з використанням клітин 0937.
Результати представлені в таблиці, наведеній нижче. дантитіло-б015 11111115 іантитіло-0024 --/777711111111111111111178111111111111111111152СсС
Жодне одне з біспецифічних антитіл не демонструвало активації нейтрофілів іп міго.
Таким чином, антитіло 0015 демонструвало придатні властивості і, відповідно, є переважним аспектом винаходу. Крім того, дане антитіло має покращені властивості, які, серед інших, включають покращений профіль побічних продуктів.
В одному аспекті даного винаходу запропоноване біспецифічне антитіло, яке містить: а) одне повнорозмірне антитіло, яке містить по дві пари повнорозмірних легких ланцюгів антитіла і повнорозмірних важких ланцюгів антитіла, де сайти зв'язування, утворені кожною парою повнорозмірного важкого ланцюга і повнорозмірного легкого ланцюга специфічно
Зо зв'язуються з першим антигеном, і б) один додатковий Раб фрагмент, де додатковий Бар фрагмент злитий з С-кінцем одного з важких ланцюгів повнорозмірного антитіла, де сайт зв'язування додаткового Бар фрагмента специфічно зв'язується з другим антигеном, де кожний з повнорозмірних легких ланцюгів антитіла містить в константному домені легкого ланцюга (СІ) в положенні 123 амінокислотний залишок аргінін (замість залишку дикого типу - глутамінової кислоти; мутація Е123К) і в положенні 124 амінокислотний залишок лізин (замість залишку дикого типу - глутаміну; мутація 0124К) (нумерація згідно з Кабрай, де кожний з повнорозмірних важких ланцюгів антитіла містить в першому константному домені важкого ланцюга (СНІ) в положенні 147 залишок глутамінової кислоти (замість залишку дикого типу - лізину; мутація К147Е) і в положенні 213 залишок глутамінової кислоти (замість амінокислотного залишку дикого типу - лізину; мутація К213ЗЕ) (нумерація згідно із системою ЕО- індекс, запропонованою Кабаї), де додатковий Бар фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном, містить кросовер доменів, так що константний домен легкого ланцюга (СІ) і 1 константний домен важкого ланцюга (СНІ) замінені один на одного, і де перший антиген являє собою людський білок бета-амілоїд, і другий антиген являє собою людський рецептор трансферину.
Другим аспектом, описаним в даному документі, є біспецифічне антитіло, яке містить а) одне повнорозмірне антитіло, яке містить по дві пари повнорозмірних легких ланцюгів антитіла і повнорозмірних важких ланцюгів антитіла, де сайти зв'язування, утворені кожною парою повнорозмірного важкого ланцюга і повнорозмірного легкого ланцюга специфічно зв'язуються з першим антигеном, і б) один додатковий Раб фрагмент, де додатковий Бар фрагмент злитий з С-кінцем одного з важких ланцюгів повнорозмірного антитіла, де сайт зв'язування додаткового Бар фрагмента специфічно зв'язується з другим антигеном, де кожний з повнорозмірних легких ланцюгів антитіла містить в константному домені легкого ланцюга (СІ) в положенні 123 амінокислотний залишок аргінін (замість залишку дикого типу - глутамінової кислоти; мутація Е123ЗК) і в положенні 124 амінокислотний залишок лізин (замість залишку дикого типу - глутаміну; мутація 0124К) (нумерація згідно з Кабрай,
Зо де кожний з повнорозмірних важких ланцюгів антитіла містить в першому константному домені важкого ланцюга (СНІ) в положенні 147 залишок глутамінової кислоти (замість залишку дикого типу - лізину; мутація К147Е) і в положенні 213 залишок глутамінової кислоти (замість амінокислотного залишку дикого типу - лізину; мутація К213ЗЕ) (нумерація згідно із системою ЕО- індекс, запропонованою Кабаї), де додатковий Раб фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном, містить кросовер доменів, так що константний домен легкого ланцюга (СІ) ії 1 константний домен важкого ланцюга (СНІ) замінені один на одного, і де перший антиген являє собою людський білок бета-амілоїд і другий антиген являє собою людський рецептор трансферину, де сайт зв'язування людського бета-амілоїду містить послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (МН), щонайменше на 90 95, 91 95, 92 Уо, 93 Фо, 94 95, 95 95, 96 Фо, 97 90, 98 90, 9995 або 10095 ідентичну 5ЕО ІЮ МО: 18, і послідовність варіабельного домену легкого ланцюга (МІ), щонайменше на 90 95, 91 9», 92 9о, 93 ФУ, 94 9, 95 У, 96 У, 97 Уо, 98 9», 99 95 або 100 95 ідентичну БЕО ІЮО МО: 19 і де сайт зв'язування людського рецептора трансферину містить послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (УН), щонайменше на 90 95, 91 95, 92 Фо, 93 Уо, 94 95, 95 Фо, 96 95, 97 Фо, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичну ЗЕО ІЮО МО: 20, і послідовність варіабельного домену легкого ланцюга (МІ), щонайменше на 90 95, 91 9», 92 9о, 93 ФУ, 94 9, 95 У, 96 У, 97 Уо, 98 9», 99 95 або 100 95 ідентичну БЕО ІЮО МО: 21.
У деяких втіленнях послідовність МН, ідентична щонайменше на 90 95, 91 Фо, 92 9о, 93 9бо, 94 95, 9595, 96 95, 97 У, 9895 або 99 95, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), вставки або делеції відносно референтної послідовності, але при цьому сайт зв'язування, який містить вказану послідовність, зберігає здатність зв'язуватися зі своїм антигеном. У деяких втіленнях здійснена заміна, вставка і/або делеція всього від 1 до 10 амінокислот в 5ХЕО ІЮ МО: 18 або 20. У деяких втіленнях заміни, вставки або делеції виникають в ділянках за межами НУК (тобто в ЕК).
У деяких втіленнях послідовність МІ, ідентична щонайменше на 90 95, 91 95, 92 95, 93 9бо, 94 95, 9595, 96 95, 97 У, 9895 або 99 95, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), вставки або делеції відносно референтної послідовності, але при цьому сайт зв'язування, який 60 містить вказану послідовність, зберігає здатність зв'язуватися зі своїм антигеном. У деяких втіленнях здійснена заміна, вставка і/або делеція всього від 1 до 10 амінокислот в 5ХЕО ІЮ МО: 19 або 21. У деяких втіленнях заміни, вставки або делеції виникають в ділянках за межами НУЄ (тобто в ЕК).
В одному втіленні сайт зв'язування людського бета-амілоїду містить послідовність МН, наведену в ЗЕО ІЮ МО: 18, включаючи посттрансляційні модифікації вказаної послідовності, і послідовність МІ, наведену в ЗЕО ІЮ МО: 19, включаючи посттрансляційні модифікації вказаної послідовності.
В одному втіленні сайт зв'язування людського рецептора трансферину містить послідовність
МН, наведену в ЗЕО ІЮ МО: 20, включаючи посттрансляційні модифікації вказаної послідовності, і послідовність МІ, наведену в 5ЕО ІЮ МО: 21, включаючи посттрансляційні модифікації вказаної послідовності.
В одному втіленні біспецифічне антитіло містить ї) легкий ланцюг, послідовність якого ідентична ЗЕО ІО МО: 01 на 70-100 95, щонайменше на 70 96, щонайменше на 80 95, щонайменше на 90 95 або 95 95 або більше, і) важкий ланцюг, послідовність якого ідентична 5ЕО ІЮО МО: 02 на 70-100 96, щонайменше на 70 95, щонайменше на 80 95, щонайменше на 90 95 або 95 95 або більше, ії) легкий ланцюг, послідовність якого ідентична 5ЕО ІЮО МО: 03 на 70-100 96, щонайменше на 70 95, щонайменше на 80 95, щонайменше на 90 95 або 95 95 або більше, і ім) гар фрагмент важкого ланцюга, послідовність якого ідентична послідовності «БО ІЮ МО: 04 на 70-100 95, щонайменше на 70 95, щонайменше на 80 95, щонайменше на 90 95 або 95 95 або більше, де
ЗЕО ІО МО: 01 має амінокислотну послідовність
РІМГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАБОБУББЗОМІ АМУООКРИООАРАЦП ІМЕАБОВАТОМРАВЕЗИаБО
ЗОаТОЕТІ ТІЗ5І ЕРЕОРАТУМСІЇ ОСПМММРІТРЯ ОС ТКМЕІКАТМААРЗМРІЕРРБЗОВКІ КЗИатАБМУМС І.
ММЕМРАВЕАКМОМ/КМОМАГ ОБИМ5ОЕЗМТЕООБКОБТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУУАСЕМТНОСІ 5
ЗРУТКО5ЕМВИЕС,
ЗЕО ІО МО: 02 має амінокислотну послідовність
ОМЕЇ МЕЗОСИЇ МОРІ ВІ БСААБаєТе55УАМОУМУВОАРИОаКаїЇ ЕМ М5АІМАЗИатТАТУМАОБУК
Зо САЕТІЗАОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМУУСАВакаМТНКкРУУМАВУ ЕОМ СОСТІ МТМ55АВЗТКОИ
РОМЕРІГ АРОБКОТЗИаСсТАА аСІ МЕОМЕРЕРУТУБММ5ЗИалйаіІ Т5аМНТЕРАМІ 05501 М5І 55ММТУР
З55І ЕТОТМІСМУМНКРОМТКМОЕКМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕЇ ЇЇ ССО РБОУМГБЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАВТР
ЕМТСУММОМ5НЕОРЕМКЕМУ УМО МЕМНМАКТКРАЕЄОММОТ МАУМБМІ ТМІ НОМУ МЕОКЕУКСК
М5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСООРАЕРОМСТІ РРОВОЄТКМОМ5І БСАМКагмРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММ
УКТТРРМ'ОБразЕРІ УК ТМОКЗАМОССаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5І ЗРО,
ЗЕО ІО МО: 03 має амінокислотну послідовність
АОЇ ТОБРБОБІ БАБМООВМТІТСВАБОБІЗОМУ АММООКРОКАРКИІЇ ІМВАБТІ АБСМРОВЕБОБИаБаИ
ТОЕТІ ТІББІ ОРЕОБАТУУСООММАБОММОМТгасаТткМЕІК55АЗТКОаРБОМЕРІ АРІЗКОТЗИаСТАА гасі мМкКОМЕРЕРУТУБМ/МЗСИАЇ ТИ МНТЕРАМІ 05501 М5І 55 УРБББІ СТО ТМІСМММНКРОМ
ТКМОККМЕРКЗС і
ЗЕО ІО МО: 04 має амінокислотну послідовність
ОБМОЕБаИРОЇ МКРБООТІ БІ ТСТУБаг5І 55МАМ5УМАОНРИаКаТї ЕММамім БИаСЗТОМАБУАКВАМ
ТІБКТОТТУБІ КІ ББМТААОЮОТАУУМСАВАУаТ5УРОМарАБОБОРМСОСТІ МГМОЗАЗМААРОЗМРІЕР
РБОЕОЇ КЗХатАБУМСТ І ММЕМР ВЕАКМОМКУОМА! ОБаМ5ОЕВМТЕОО5КОБТУБІ 55 ТІ КА
МЕКНКМУАСЕМТНОІ 55РУТК5ОЕМНСОЕС.
Іншим аспектом, описаним в даному документі, є біспецифічне антитіло, яке містить а) одне повнорозмірне антитіло, яке містить по дві пари повнорозмірних легких ланцюгів антитіла і повнорозмірних важких ланцюгів антитіла, де сайти зв'язування, утворені кожною парою повнорозмірного важкого ланцюга і повнорозмірного легкого ланцюга специфічно зв'язуються з першим антигеном, і б) один додатковий Раб фрагмент, де додатковий Бар фрагмент злитий з С-кінцем одного з важких ланцюгів повнорозмірного антитіла, де сайт зв'язування додаткового Бар фрагмента специфічно зв'язується з другим антигеном, де кожний з повнорозмірних легких ланцюгів антитіла містить в константному домені легкого ланцюга (СІ) в положенні 123 амінокислотний залишок аргінін (замість залишку дикого типу - глутамінової кислоти; мутація Е123ЗК) і в положенні 124 амінокислотний залишок лізин (замість залишку дикого типу - глутаміну; мутація 0124К) (нумерація згідно з Кабрай, де кожний з повнорозмірних важких ланцюгів антитіла містить в першому константному домені важкого ланцюга (СНІ) в положенні 147 залишок глутамінової кислоти (замість залишку бо дикого типу - лізину; мутація К147Е) і в положенні 213 залишок глутамінової кислоти (замість амінокислотного залишку дикого типу - лізину; мутація К213ЗЕ) (нумерація згідно із системою ЕО- індекс, запропонованою Кабаї), де додатковий Бар фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном, містить кросовер доменів, так що константний домен легкого ланцюга (СІ) і 1 константний домен важкого ланцюга (СНІ) замінені один на одного, і де перший антиген являє собою людський білок бета-амілоїд і другий антиген являє собою людський рецептор трансферину, де сайт зв'язування людського бета-амілоїду містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), який має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 18, і варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 19 і де сайт зв'язування людського рецептора трансферину містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), який має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 20, і варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 21.
Іншим аспектом, описаним в даному документі, є біспецифічне антитіло, яке містить а) одне повнорозмірне антитіло, яке містить по дві пари повнорозмірних легких ланцюгів антитіла і повнорозмірних важких ланцюгів антитіла, де сайти зв'язування, утворені кожною парою повнорозмірного важкого ланцюга і повнорозмірного легкого ланцюга, специфічно зв'язуються з першим антигеном, і де повнорозмірне антитіло містить Ес-ділянку, утворену поліпептидами Ес-ділянки, кожна з яких містить домени СНІ, СН2 ї СНЗ, двох повнорозмірних важких ланцюгів і б) один додатковий Раб фрагмент, де додатковий Бар фрагмент злитий з С-кінцем одного з важких ланцюгів повнорозмірного антитіла, де сайт зв'язування додаткового Бар фрагмента специфічно зв'язується з другим антигеном, де кожний з повнорозмірних легких ланцюгів антитіла містить в константному домені легкого ланцюга (СІ) в положенні 123 амінокислотний залишок аргінін (замість залишку дикого типу - глутамінової кислоти; мутація Е123ЗК) і в положенні 124 амінокислотний залишок лізин (замість залишку дикого типу - глутаміну; мутація 0124К) (нумерація згідно з Кабрай, де кожний з повнорозмірних важких ланцюгів антитіла містить в першому константному домені важкого ланцюга (СНІ) в положенні 147 залишок глутамінової кислоти (замість залишку
Зо дикого типу - лізину; мутація К147Е) і в положенні 213 залишок глутамінової кислоти (замість амінокислотного залишку дикого типу - лізину; мутація К213ЗЕ) (нумерація згідно із системою ЕО- індекс, запропонованою Кабаї), де додатковий Бар фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном, містить кросовер доменів, так що константний домен легкого ланцюга (СІ) і 1 константний домен важкого ланцюга (СНІ) замінені один на одного, і де перший антиген являє собою людський білок бета-амілоїд і другий антиген являє собою людський рецептор трансферину, де сайт зв'язування людського бета-амілоїду містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), який має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 18, і варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який має амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 19, де сайт зв'язування людського рецептора трансферину містить варіабельний домен важкого ланцюга (МН), який має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 20, і варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який має амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 21, і де поліпептиди Ес-ділянки належать а) до підкласу ІЇДС1 людини, б) до підкласу ЇД4 людини, в) до підкласу Їд91 людини з мутаціями І 2344А, І 235А і РЗ329О, г) до підкласу ІДО4 людини з мутаціями 5228Р, 1235Е і РЗ3290, д) до підкласу (901 людини з мутаціями І234А, 1235А і РЗ3290 в обох поліпептидах Ес- ділянки і мутаціями Т366бУМ і 5354С в одному поліпептиді Ес-ділянки і мутаціями 73665, І З68А,
У407М і у349С в іншому поліпептиді Ес-ділянки, відповідно, е) до підкласу ІдД054 людини з мутаціями 5228Р і РЗ3290 в обох поліпептидах Ес-ділянки і мутаціями ТЗ36бУМ ї 5354 в одному поліпептиді Ес-ділянки і мутаціями 73665, І 368А, У407М і
У349С в іншому поліпептиді Ес-ділянки, відповідно,
Ж) до підкласу ЇДС1 людини з мутаціями І 234А, І 235А, РЗ3290, І253А, НЗ1ТОА і Н4З5А в обох поліпептидах Ес-ділянки і мутаціями Т366МУУ і 5354С в одному поліпептиді Ес-ділянки і мутаціями 73665, І З368А, 407 і 7349С в іншому поліпептиді Ес-ділянки, відповідно, 3) до підкласу ЇДС1 людини з мутаціями І 234А, І 235А, РЗ290, М252У, 52541 і Т256Е в обох поліпептидах Ес-ділянки і мутаціями Т366МУУ і 5354С в одному поліпептиді Ес-ділянки і 60 мутаціями 73665, І З368А, у407М і у349С в іншому поліпептиді Ес-ділянки, відповідно, або ї) до повнорозмірного людського антитіла підкласу ІДдс1 з мутаціями І 234А, І1235А, РЗ290,
НЗІОА, Н4ІЗЗА їі У436А в обох важких ланцюгах і мутаціями ї) Т366МУ та ії) 5354С або у349С в одному важкому ланцюзі і мутаціями ї) 73665, І З368А і У407М та ії) У349С або 5354С в іншому важкому ланцюзі, відповідно.
У наступному аспекті біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину згідно з будь-яким з вищевказаних втілень може мати будь-яку з ознак, описаних в розділах 1-3 нижче, окремо або в комбінації. 1. Химерні та гуманізовані антитіла
У деяких втіленнях запропоноване антитіло являє собою химерне антитіло. Деякі химерні антитіла описані, наприклад, в патенті О5 4,816,567, а також Могтізоп, 5.1. еї аї., Ргос. Май).
Асад. 5сі. ОБА 81 (1984) 6851-6855). В одному прикладі химерне антитіло містить варіабельну ділянку, що не є людською (наприклад, варіабельну ділянку, що походить з організму миші, щура, хом'яка, кролика або примата, що не є людиною, такого як мавпа), і константну ділянку людського походження. У наступному прикладі химерне антитіло являє собою антитіло "з переключеним класом", у якого клас або підклас були змінені у порівнянні з батьківським антитілом. Химерні антитіла включають також їх антигензв'язуючі фрагменти.
У деяких втіленнях химерне антитіло являє собою гуманізоване антитіло. Як правило, антитіло, що не є людським, піддають гуманізації, щоб знизити імуногенність для людини, при цьому зберігаючи специфічність та афінність батьківського антитіла, що не є людським. Як правило, гуманізоване антитіло містить один або більше ніж один варіабельний домен, в якому
НМК, наприклад, СОК (або їх частини) походять з антитіла, що не є людським, а каркасні ділянки ЕК (або їх частини) походять з послідовностей антитіла людини. Гуманізоване антитіло необов'язково може також містити щонайменше частину константної ділянки людського антитіла. У деяких втіленнях деякі залишки ЕК в гуманізованому антитілі замінені відповідними залишками антитіла, що не є людським (наприклад, антитіла з якого одержані амінокислотні залишки НМУК), наприклад, для відновлення або покращення специфічності або афінності антитіла.
Гуманізовані антитіла і способи їх одержання описані, наприклад, АїЇІтадго, .С. апа
Екапв55оп, у., Егопі. Віовсі. 13 (2008) 1619-1633, і додатково описані, наприклад, Кіесптапнп, І. еї
Зо а!І., Маште 332 (1988) 323-329; Ойееп, б. єї аї!., Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 86 (1989) 10029-10033; 5 5, 821,337, 05 7,527,791, 05 6,982,321, апа 005 7,087,409; КазПтігі, 5.У. єї а!., Меїйодз» 36 (2005) 25-34 (опис пересадження ділянок, які визначають специфічність (5ОК)); Рааап, Б.А.,
МОЇ. Іттипої. 28 (1991) 489-498 (опис "зміни поверхні"); БаігАсдча, УМ.Р., еї аІ., Мештоаз 36 (2005) 43-60 (опис "перетасовування ЕК"); О5Броигп, 9., еї аІ., Меїпоаз 36 (2005) 61-68; апа
КіїткКа, А., єї аї., Вг. ). Сапсег 83 (2000) 252-260 (опис підходу "направленого відбору" при перетасовуванні ЕК).
Каркасні ділянки людського походження, які можна використовувати для гуманізації, включають: каркасні ділянки, вибрані за допомогою методу "найкращої відповідності" (див., наприклад, 5ітв5, М..., еї аї., У. Іттипої. 151 (1993) 2296-2308; каркасні ділянки, що походять з консенсусної послідовності людських антитіл з варіабельними ділянками легких або важких ланцюгів визначеної підгрупи (див., наприклад, Сагіег, Р., еї аїЇ.,, Ргос. Май). Асай. Зсі. ОБА 89 (1992) 4285-4289; апа Ргезіа, І.С, єї а)ї., У. Іттипої. 151 (1993) 2623-2632); зрілі каркасні ділянки людського походження (із соматичними мутаціями) або каркасні ділянки первинних антитіл (див., наприклад, АІтадго, 9У.С. апа Егап5зоп, 4)., Егопі. Віобсі. 13 (2008) 1619-1633) і каркасні ділянки, одержані при скринінгу бібліотек ЕК (див., наприклад, Васа, М., еї аї., 9. Віої. Спет. 272 (1997) 10678-10684; апа РозокК, М.., єї аї., У. Віої. Спет. 271 (19969 22611-22618), але не обмежуються ними. 2. Людські антитіла
У деяких втіленнях запропоноване антитіло являє собою людське антитіло. Людські антитіла можна одержувати різними способами, відомими в галузі техніки. Людські антитіла описані мап ОК, М.А. апа мап де М/пкеї, 9У.., Смиіт. Оріп. Рпагтасої. 5 (2001) 368-374 апа
Гопрего, М., Си. Оріп. Іттипої. 20 (2008) 450-459.
Людські антитіла можуть бути одержані шляхом введення імуногена трансгенній тварині, модифікованій, щоб продукувати інтактні людські антитіла або інтактні антитіла з варіабельними ділянками людського походження у відповідь на введення антигену. Такі тварини звичайно мають усі або частину локусів імуноглобулінів людини, що замінюють локуси ендогенних імуноглобулінів, що знаходяться поза хромосом або випадковим чином інтегровані в хромосоми тварин. У таких трансгенних мишей локуси ендогенних імуноглобулінів звичайно бувають інактивовані. Огляд способів одержання людських антитіл у трансгенних тварин представлений 60 Гопрего, М., Маї. Віоїесп. 23 (2005) 1117-1125. див. також, наприклад, О5 6,075,181 та 05
6,150,584, де описана технологія ХЕМОМОИОБЕТМ; 05 5,770,429 де описана технологія
Нимаре; 05 7,041,870 де описана технологія К-М МОШБ5БЕЄ, ії 005 2007/0061900, де описана технологія МеІосімоизе?). Варіабельні ділянки людського походження інтактних антитіл, одержаних у таких тварин, можуть бути далі модифіковані, наприклад, шляхом комбінації з різними константними ділянками людського походження.
Антитіла людини можуть також бути одержані за допомогою гібридомної технології. Описані клітинні лінії мієломи людини і гетеромієломи миша-людина для продукції моноклональних людських антитіл. (див., наприклад, Ког2брог, О., у. Іттипої. 133 (1984) 3001-3005; Вгодеиг", В.В. еї аІ.,, Мопосіопа! Апііроду Ргодисіюп Тесппідцез апа Арріїсайоп5, Магсе! ОекКег, Іпс., Мем/ Моїк (1987), рр. 51-63; апа Воегпег", Р. еї аї., 9У. Іттипої. 147 (1991) 86-95). Також описані людські антитіла, одержані із застосуванням гібридомної технології з використанням В-клітин людини Гі,
У. еї аї., Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА 103 (2006) 3557-3562. Додаткові способи включають те, що описані, наприклад, в патенті 05 7,189,826 (опис одержання моноклональних антитіл людини класу ІЗ9М з гібридомних клітинних ліній) і Мі, уУ., Хіапдаії Міапуїхне 26 (2006) 265-268 (опис гібридом людина-людина). Технологія людських гібридом (технологія тріом) також описана
Мо|Ітегв, Н.Р. апа Вгапаїеїп, 5., Нівіоіоду апа Нівіораїйоіоду 20 (2005) 927-937 і МоїПтегв, Н.Р. апа Вгапаїеїп, 5., Меїйодз апа Ріпаіпов іп Ехрегітепіа! апа Сіїіпіса! Рнаппасоіоду 27 (2005) 185- 191.
Людські антитіла можуть бути одержані шляхом виділення послідовностей варіабельних доменів Ем клонів, відібраних з бібліотек фагового дисплея, утворених на основі генів людини.
Такі послідовності варіабельних доменів потім можуть бути об'єднані з необхідним константним доменом людини. Технології для відбору людських антитіл з бібліотек антитіл описані нижче. 3. Варіанти антитіл
У деяких втіленнях розглядаються варіанти амінокислотних послідовностей запропонованих в даному документі антитіл. Наприклад, може потребуватися покращення афінності зв'язування мМабо інших біологічних властивостей антитіла. Варіанти амінокислотних послідовностей антитіла можуть бути одержані шляхом введення відповідних модифікацій в нуклеотидну послідовність, яка кодує антитіло, або шляхом пептидного синтезу. Такі модифікації включають, наприклад, делеції і/або вставки і/або заміни залишків у складі амінокислотної послідовності
Зо антитіла. Для одержання кінцевої конструкції можна здійснювати будь-які комбінації делецій, вставок і замін, за умови, що кінцева конструкція буде мати бажані характеристики, наприклад, зв'язування антигену. а) Варіанти із замінами, вставками і делеціями
У деяких втіленнях запропоновані варіанти антитіла, які мають одну або більше амінокислотних замін. Сайти, що представляють інтерес для проведення заміщуючого мутагенезу включають НУК і ЕК. Консервативні заміни представлені в Таблиці 1 під заголовком "переважні заміни". Більш значні заміни представлені в Таблиці 1 під заголовком "приклади замін" їі детальніше описані нижче, із зазначенням класів бокових ланцюгів амінокислот.
Амінокислотні заміни можна вводити в антитіло, що представляє інтерес, і здійснює скринінг одержаних продуктів на предмет бажаної активності, наприклад, зберігання/покращення зв'язування антигену або зниження імуногенності або покращення АОСС або СОС.
Таблиця е() 1 |СешоМа;МекАюі;Рпеснорлейцин.//-/ Пе їец() 0 |норлейцин;йе Ма МесАвіРЛє.ї//-:/ Пе 77/77/7777
Таблиця
Амінокислоти можна розбити на групи із загальними властивостями бокових ланцюгів: (1) гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, Маї, Гей, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: Суб, Зег, ТАг, Азп, СіІп; (3) негативно заряджені: Ар, Си; (4) позитивно заряджені: Нів, Г ув, Агу; (5) ті, що впливають на орієнтацію ланцюга: Су, Рго; (6) ароматичні: Тгр, Туг, Ріє.
Неконсервативні заміни тягнуть за собою заміщення представника одного з цих класів представником іншого класу.
Один вид замін включає заміну одного або декількох залишків гіперваріабельної ділянки батьківського антитіла (наприклад, гуманізованого або людського антитіла). Як правило, одержаний(і) варіант(и), відібраний(ї) для подальшого вивчення, буде(уть) мати модифікації (наприклад, покращення) визначених біологічних властивостей (наприклад, підвищену афінність, знижену імуногенність) у порівнянні з батьківським антитілом і/або будуть по суті зберігати визначені біологічні властивості батьківського антитіла. Прикладом варіанта із замінами є антитіло, яке пройшло афінне дозрівання, яке може бути одержане стандартним способом, наприклад, технології афінного дозрівання на основі фагового дисплея, описаної в даному документі. Стисло, здійснюють мутації одного або більше ніж одного залишку НМК і здійснюють скринінг варіантів антитіла, що експресуються фагом, за визначеною біологічною активністю (наприклад, афінності зв'язування).
Зміни (наприклад, заміни) можуть здійснюватися всередині НМК, наприклад, для покращення афінності антитіла. Такі зміни можна здійснювати в "гарячих точках" НМК, тобто в залишках, кодованих кодонами, які в процесі соматичного дозрівання з високою частотою піддаються мутаціям (див., наприклад, Спомапигу, Р.5., Мешоаз Мої. Віої. 207 (2008) 179-196), і або залишках, контактуючих з антигеном, а у одержаних варіантів МН або Мі досліджувати афінність зв'язування. Збільшення афінності шляхом конструювання і повторного відбору з вторинних бібліотек було описане, наприклад, Ноодепроот, Н.К. еї аї. іп МеїШйоаз іп МоІесшіаг
Віоіоду 178 (2002) 1-37. У деяких втіленнях для підвищення афінності збільшують різноманіття
Зо варіабельних генів, вибраних для афінного дозрівання, будь-яким з існуючих способів (наприклад, ПЦР зниженої точності, комбінування варіабельних доменів легкого і важкого ланцюгів або олігонуклеотид-направленого мутагенезу). Після цього утворюють вторинну бібліотеку. Потім здійснюють скринінг бібліотеки для виявлення будь-яких варіантів антитіл з необхідною афінністю. Інший спосіб підвищення мінливості включає методи, націлені на зміну
НУК, в яких рандомізують декілька залишків НУК (наприклад, одночасно 4-6 залишків). НУК залишки, задіяні у зв'язуванні антигену, можна спеціально ідентифікувати, наприклад, за допомогою аланін-скануючого мутагенезу або моделювання. Зокрема, змінам часто піддаються
СОов-НЗ їі СОК-І 3.
У деяких втіленнях заміни, вставки або делеції можуть виникати у складі одного або декількох НМК, за умови, що такі зміни суттєвим чином не знижують здатність антитіла зв'язувати антиген. Наприклад, можуть бути виконані консервативні заміни в НУК (наприклад, консервативні заміни, представлені в даному документі), які істотним чином не знижують афінність зв'язування. Такі заміни, наприклад, можуть не зачіпати залишки НМК, контактуючі з антигеном. У деяких втіленнях кожний НУЄ. або залишається без змін, або містить не більше однієї двох або трьох амінокислотних замін у складі варіантів послідовностей МН і Мі, наведених вище.
Ефективним способом виявлення залишків або ділянок антитіла, які можуть бути мішенями направленого мутагенезу, є так званий "аланін-скануючий мутагенез", описаний Сиппіпойат,
В.С. апа УУеїв, У.А., Зсієпсе 244 (1989) 1081-1085. В цьому способі виявляють амінокислотний залишок або групу таргетних залишків (наприклад, заряджені залишки, такі як Агоу, А5р, Нів, І ув і
СІ) ії заміщують нейтральною або негативно зарядженою амінокислотою (наприклад, аланіном або поліаланіном), щоб з'ясувати, чи зміниться взаємодія антитіла з антигеном. Якщо при первинній заміні амінокислот відбуваються зміни функціональних властивостей молекули, в цих положеннях можна здійснювати подальші заміни. В альтернативному варіанті або як доповнення можна провести аналіз кристалічної структури комплексу антиген-антитіло для виявлення точок контакту між антитілом і антигеном. Такі залишки, задіяні в контактах, а також сусідні з ними залишки можуть бути вибрані або не вибрані як кандидати для замін. Можна здійснювати скринінг варіантів, щоб виявити у них наявність бажаних властивостей.
Вставки амінокислотних послідовностей включають злиття по аміно- і/або карбокси-кінцю, що варіюють за довжиною від одного залишку до поліпептидів, які містять сотні або більше залишків, а також вставки одного або декількох амінокислотних залишків всередині послідовності. Приклади кінцевих вставок включають антитіло з М-кінцевим залишком метіонілу.
Інші варіанти молекули антитіла із вставками включають злиття М- або С-кінця антитіла з ферментом (наприклад, АЮЕРТ) або поліпептидом, що збільшує час півжиття антитіла в сироватці. б) Варіанти із зміненим глікозилюванням
У деяких втіленнях запропоноване антитіло модифіковане для підвищення або зниження ступеня глікозилювання антитіла. Додавання або видалення сайтів глікозилювання антитіла можна здійснювати стандартним способом, змінюючи амінокислотну послідовність таким чином, щоб створити або видалити один або декілька сайтів глікозилювання.
У випадку, коли антитіло містить Ес ділянку, можна змінювати приєднані до неї вуглеводи.
Нативні антитіла, що продукуються в клітинах ссавців, звичайно містять розгалужені двохантенні олігосахариди, які, як правило, приєднані за допомогою М-глікозидного зв'язку до
А5зп297 СН2 домену Ес ділянки. Див., наприклад, М/гідні, А. апа Могтізоп, 5.Ї., ТІВТЕСН 15 (1997) 26-32. Олігосахариди можуть включати різні вуглеводи, наприклад, манозу, М- ацетилглюкозамін (СІСМАс), галактозу і сіалову кислоту, а також фукозу, приєднану до СіІСМАс в "стовбурі" двохантенної олігосахаридної структури. У деяких втіленнях для створення варіантів антитіла з деякими покращеними властивостями можна модифікувати олігосахариди у складі антитіла, запропонованого в даному описі.
В одному втіленні запропоновані варіанти антитіл, які мають вуглеводну структуру, приєднану (напряму або опосередковано) до Ес ділянки, в якій відсутня фукоза. Наприклад, вміст фукози у такому антитілі може становити від 1 95 до 80 95, від 1 95 до 65 95, від 5 95 до 65 95 або від 20 95 до 40 95. Кількість фукози визначають шляхом розрахунку середнього вмісту фукози у складі вуглеводного ланцюга, приєднаного до Ав5п297, відносно суми усіх глікоструктур, приєднаних до Авп 297 (наприклад, комплексних, гібридних структур і структур з високим вмістом манози), при мас-спектрометричному визначенні МАСОІ-ТОЕ, наприклад, згідно з описом УМО 2008/077546. А5п297 означає залишок аспарагіну, що знаходиться приблизно в положенні 297 в ділянці Ес (нумерація залишків у ділянці Ес наведена відповідно до системи ЕМ); однак, внаслідок незначних варіацій в послідовності антитіл А5п297 може також знаходиться на відстані х З амінокислот від положення 297 по ходу або проти ходу транскрипції, тобто, між положеннями 294 та 300. Такі варіанти з модифікованим фукозилюванням можуть проявляти підвищену АЮСС. Див., наприклад, 5 2003/0157108; 005 2004/0093621. Приклади публікацій, що належать до "дефукозильованих" або "позбавлених фукози" варіантів антитіл, включають: 5 2003/0157108; МО 2000/61739; МО 2001/29246; 05 2003/0115614; 05 2002/0164328; 05 2004/0093621; 05 2004/0132140; 005 2004/0110704; 05 2004/0110282; 5 2004/0109865; МО 2003/085119; МО 2003/084570; МО 2005/035586; МО 2005/035778; МО 2005/053742; МО 2002/031140; ОКа?акі, А. єї аї., У. Мої. Віо!. 336 (2004) 1239-1249; Матапе-
ОПпикі, М. еї аї., Віоїесп. Віоєпу. 87 (2004) 614-622. Приклади клітинних ліній, здатних продукувати дефукозильовані антитіла, включають клітини Гес13 СНО з порушенням фукозилювання білків (КірКа, У. еї аїЇ.,, Агой. Віоспет. Віорпує5. 249 (1986) 533-545; 5 2003/0157108 ї УМО 2004/056312, зокрема, Приклад 11) і клітинні лінії з нокаутом, наприклад, гена а-1,6-фукозилтрансферази, ЕОТ8, клітини СНО з нокаутом (див., наприклад, Уатапе-
ОПпикі, М. еї аї., Віотесі. Віоєпо. 87 (2004) 614-622; Капаа, У. еї а!., ВіоїесНпої. Віоепод. 94 (2006) 680-688 ії УМО 2003/085107).
Також відомі варіанти антитіл з розділеними надвоє олігосахаридами, наприклад, в яких двохантенний олігосахарид, приєднаний до Ес ділянки антитіла, розділений надвоє СіІсСМАс. Такі варіанти антитіл можуть мати знижений вміст фукози і/або підвищену АОСС. Приклади таких варіантів антитіл описані, наприклад, в УМО 2003/011878; 05 6,602,684; ї 005 2005/0123546.
Також запропоновані варіанти антитіл щонайменше з одним залишком галактози у складі олігосахариду, приєднаного до Ес ділянки. Такі варіанти антитіл можуть мати покращену СОС функцію. Такі варіанти антитіл описані, наприклад, в УМО 1997/30087; УМО 1998/58964 і МО 60 1999/22764.
в) Варіанти з модифікаціями Ес ділянки
У деяких втіленнях в Ес ділянку антитіла, описаного в даному документі, можуть бути введені одна або більше амінокислотних модифікацій, і таким чином одержані варіанти Ес ділянки. Варіант з модифікацією Ес ділянки може містити послідовність Ес ділянки людського походження (наприклад, Ес ділянки /дс1, Ідс2, ІдСЗ або Ід54 людини), яка містить амінокислотну модифікацію (наприклад, заміну) в одному або декількох амінокислотних положеннях.
У деяких втіленнях винаходу розглядається варіант антитіла, який має деякі, але не всі ефекторні функції, які роблять його придатним кандидатом для застосувань, в яких важливе значення має час півжиття антитіла іп мімо, однак деякі ефекторні функції (наприклад, комплемент- і антитіло-залежна клітинна цитотоксичність) являються необов'язковими або небажаними. Для підтвердження зниження/усунення СОС і/або АЮСС активностей можна здійснювати дослідження цитотоксичності іп мійго і/або іп мімо. Наприклад, дослідження зв'язування з Ес рецепторами (ЕСК) можна здійснювати для підтвердження того, що антитіло не зв'язується з Есук (відповідно, цілком ймовірно, не має АЮСС активність), але зберігає здатність зв'язувати ЕсКп. Первинні клітини, що опосередковують АОСС, МК клітини, експресують тільки Ес(КІЇ, тоді як моноцити експресують ЕсСУКІ, ЕсСУКІ і ЕСуУКІ. Дані, що стосуються експресії ЕСК на гемопоетичних клітинах, стисло викладені в Таблиці З на стор. 464 в публікації Камеїсп, 9У.М. апа Кіпеї, У.Р., Аппи. Кем. Іттипої. 9 (1991) 457-492. Приклади досліджень іп міго, що не є вичерпними, які дозволяють оцінити АОСС активність молекули, яка представляє інтерес, описані в ОБ 5,500,362 (див., наприклад, НеїЇбігот, І. еї аїЇ., Ргос. Май.
Асад. 5сі. ОБА 83 (1986) 7059-7063 і НеїІбігоп, І. еї а!., Ргос. Маї)!. Асай. 5сі. О5А 82 (1985) 1499- 15023; 05 5,821,337 (див. Вгиддетапп, М. еї аїІ., У. Ехр. Меа. 166 (1987) 1351-1361). В альтернативному варіанті можна використовувати нерадіоактивні методи дослідження (див., наприклад, нерадіоактивний метод дослідження цитотоксичності для проточної цитометрії
АСТІМм (СеПТесппоІоду, Іпс. Моипіайп Міему, СА; і нерадіоактивний метод дослідження цитотоксичності СуїоТох 969 (Рготеда, Мадізоп, УМ). Придатні ефекторні клітини для таких досліджень включають мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК) і природні кілерні клітини (МК). В альтернативному варіанті або як доповнення АЮСС активність молекули, яка представляє інтерес, можна оцінювати іп мімо, наприклад, в моделі на тваринах, такій як описана Сіупе5, К. еї аї., Ргос. Май. Асай. зсі. ОБА 95 (1998) 652-656. Можна також досліджувати зв'язування С14 для підтвердження того, що антитіло не здатне зв'язувати С1ді, відповідно, не має СОС активність. Див., наприклад, визначення зв'язування Сід та Сзс методом ІФА в УМО 2006/029879 та УМО 2005/100402. Для оцінки активації комплементу можна виконувати дослідження СОС (див., наприклад, ба7апо-бапіого, Н., єї аї., У. Іттипої. Меїйосд5 202 (1996) 163-171; Стада, М.5., єї а!., Віоса 101 (2003) 1045-1052; і Стаду, М.5. апа М.3. СіІеппіеє,
Віоса 103 (2004) 2738-2743). Можна також досліджувати зв'язування ЕсоКп і кліренсу/часу півжиття іп мімо, використовуючи способи, відомі в галузі техніки (див., наприклад, Реїкома, 5.В. еї аї., пі. Іттипої. 18 (2006: 1759-1769).
Антитіла зі зниженою ефекторною функцією включають антитіла із заміною одного або декількох залишків у положеннях 238, 265, 269, 270, 297, 327 і 329 Ес ділянки (5 6,737,056).
Такі мутанти Ес ділянки включають мутанти Ес ділянки із замінами двох або більше амінокислот в положеннях 265, 269, 270, 297 і 327, включаючи так звані Ес мутанти "САМА" із заміною залишків у положеннях 265 і 297 на аланін (5 7,332,581).
Описані деякі варіанти антитіл з покращеним або ослабленим зв'язуванням з ЕсЕ. (див., наприклад, З 6,737,056; МО 2004/056312, апа бНівіа5, В.Г. еї аї., 9. Віої. Снет. 276 (2001) 6591-6604).
У деяких втіленнях варіант антитіла містить Ес ділянку з одною або декількома амінокислотними замінами, які покращують АОСС, наприклад, замінами в положеннях 298, 333 і/або 334 в Ес ділянці (нумерація залишків згідно з ЕМ).
У деяких втіленнях зміни зачіпають Ес ділянку і викликають зміну (тобто покращення або ослаблення) зв'язування С14 і/або комплемент-залежної цитотоксичності (СОС), наприклад, як описано в 05 6,194,551, УМО 99/51642 і Ідизодіє, Е.Б. еї аї., 9. Іттипої. 164 (2000) 4178-4184.
Антитіла зі збільшеним часом півжиття і покращеним зв'язуванням з неонатальним рецептором ЕсКп, що відповідає за транспорт материнських дО до плоду (Сиуег, К.Г.., еї аї., у.
Іттипої. 117 (1976) 587-593, апа Кіт, ..К. еї аї., уУ. Іттипої. 24 (1994) 2429-2434), описані в О5 2005/0014934. Ці антитіла містять Ес ділянку з однією або декількома замінами, які покращують зв'язування Ес ділянки з ЕсКп. Такі варіанти з модифікаціями Ес включають варіанти із замінами одного або декількох залишків Ес ділянки в положеннях: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307,
311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434, наприклад, із заміною залишку в положенні 434 в Ес ділянці (5 7,371,826).
Див. також Юипсап, А.К. апа М/іпіег, б., Маїшге 322 (1988) 738-740; 05 5,648,260; 05 5,624,821 ії УМО 94/29351, що стосуються інших прикладів варіантів з модифікаціями Ес ділянки. г) Модифіковані цистеїном варіанти антитіл
У деяких втіленнях може бути доцільним утворення модифікованих цистеїном антитіл, наприклад, "(піомМАбБ»", в яких один або декілька залишків антитіла замінені залишками цистеїну.
У конкретних втіленнях замінені залишки розташовуються в доступних сайтах антитіла. При заміні цих залишків на цистеїн реакційноздатні тіолові групи розташовуються в доступних сайтах антитіла і можуть використовуватися для кон'югування антитіла з іншими групуваннями, наприклад, лікарськими групуваннями або групуваннями лінкер-ліки, для утворення кон'югата антитіла, згідно з описом нижче. У деяких втіленнях цистеїном можуть бути замінені будь-який або будь-які з наступних залишків: М205 легкого ланцюга (нумерація за Кабат); А118 важкого ланцюга (нумерація ЕО) і 5400 важкого ланцюга (нумерація ЕО) Ес ділянки важкого ланцюга.
Модифіковані цистеїном антитіла можуть бути одержані, як описано, наприклад, в патенті О5 7,521,541. д) Похідні антитіл
У деяких втіленнях запропоноване антитіло може бути також модифіковане з метою введення додаткових небілкових групувань, відомих в даній галузі техніки і легко доступних.
Групування, придатні для одержання похідних антитіла, включають водорозчинні полімери, але не обмежуються ними. Приклади водорозчинних полімерів, що не є вичерпними, включають поліетиленгліколь (ПЕГ), співполімери етиленгліколю і пропіленгліколю, карбоксиметилцелюлозу, декстран, полівініловий спирт, полівінілпіролідон, полі-1, З-діоксолан, полі-1,3,6-триоксан, співполімер етилену і малеїнового ангідриду, поліамінокислоти (як гомополімери, так і випадкові співполімери) і декстран або полі(п-вініл піролідон)поліетиленгліколь, гомополімери пропропіленгліколю, співполімери проліпропіленоксиду і етиленоксиду, поліоксіетильовані поліоли (наприклад, гліцерол), полівініловий спирт та їх суміші, але не обмежуються ними. Пропіональдегід поліетиленгліколю може мати переваги при виробництві завдяки своїй стабільності у воді. Полімер може мати
Зо будь-яку молекулярну масу і може бути розгалуженим або нерозгалуженим. Кількість полімерів, приєднаних до антитіла, може варіювати і у випадку приєднання більше, ніж одного полімеру, їх молекули можуть бути ідентичними або різнитися. Як правило, кількість і/або тип полімерів, що застосовуються для одержання похідних, може визначатися виходячи з того, які конкретні властивості або функції антитіла потребують покращення, і того, чи буде похідне антитіла застосовуватися у терапії при визначених умовах тощо, але не обмежуватися даними міркуваннями.
В іншому втіленні запропоновані кон'югати антитіла і небілкові групування, які можуть вибірково нагрівається під впливом випромінювання. В одному втіленні, небілкове групування являє собою вуглецеву нанотрубку (Кат, М.М. еї аї!., Ргос. Май. Асай. сі. ОБА 102 (2005) 11600- 11605). Випромінювання може мати будь-яку довжину хвилі, включаючи, але не обмежуючись довжинами хвиль, що не пошкоджують звичайні клітини, але нагрівають небілковий компонент до температури, яка викликає загибель клітин, розташованих поблизу небілкового групування антитіла.
Б. Рекомбінантні способи та композиції
Антитіла можуть бути одержані із застосуванням рекомбінантних способів та композицій, наприклад, як описано в патенті 05 4,816,567. В одному втіленні запропонована виділена нуклеїнова кислота, яка кодує біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину, описане в даному документі. Така нуклеїнова кислота може кодувати амінокислотну послідовність, яка містить Мі, і/або амінокислотну послідовність, яка містить МН антитіла (наприклад, легкий і/або важкий ланцюг антитіла). В наступному втіленні запропоновані один або більше векторів (наприклад, експресуючі вектори), які містять таку нуклеїнову кислоту. В наступному втіленні запропонована клітина-хазяїн, яка містить таку нуклеїнову кислоту. В одному з таких втілень клітина-хазяїн містить (наприклад, в результаті трансформації): 1) вектор, який містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка містить Мі. антитіла, і амінокислотну послідовність, яка містить УН антитіла, або (2) перший вектор, який містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка містить Мі антитіла, і другий вектор, який містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка містить УН антитіла. В одному втіленні клітина-хазяїн являє собою еукаріотичну клітину, наприклад, клітину яєчника китайського хом'ячка (СНО, від англ. бо СВпіпезе Натвіег Омагу) або лімфоїдну клітину (наприклад, клітину МО, МО, Зр20). В одному втіленні запропонований спосіб одержання біспецифічного антитіла до людського бета- амілоїду/людського рецептора трансферину, де спосіб включає культивування клітини-хазяїна, яка містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антитіло, описане вище, за умов, придатних для експресії антитіла, і можливо, виділення антитіла з клітини-хазяїна (або середовища культивування клітини-хазяїна).
Для рекомбінантної продукції біспецифічного антитіла до людського бета- амілоїду/людського рецептора трансферину виділяють нуклеїнову кислоту, яка кодує антитіло, наприклад, як описано вище, і вбудовують в один або декілька векторів для наступного клонування і/або експресії в клітині-хазяїні. Вказану нуклеїнову кислоту можна легко виділити і секвенувати за допомогою стандартних методів (наприклад, з використанням олігонуклеотидних зондів, здатних специфічно зв'язуватися з генами, кодуючими важкий і легкий ланцюги антитіла).
Клітини-хазяї, придатні для клонування або експресії векторів, кодуючих антитіло, включають клітини прокаріот або еукаріот, описані в даному документі. Наприклад, антитіла можуть вироблятися в бактеріях, зокрема, коли глікозилювання та ефекторні функції Ес не є необхідними. Для експресії фрагментів антитіл і поліпептидів у бактеріях див., наприклад, О5 5,48,237, 05 5,789,199 ії 005 5,840,523. (див. також Спапшоп, К.А., Іп: Меїпоавз іп МоїІесшіаг
Віоіоду, Мої. 248, Го, В.К.С. (ей.), Нитапа Ргевзв5, Тоїожа, МУ (2003), рр. 245-254, що описують експресію фрагментів антитіл в Е. соїї). після експресії антитіло можна виділити з бактеріальної маси у вигляді розчинної фракції і потім очистити.
Крім прокаріот як хазяїв для клонування або експресії векторів, кодуючих антитіла, придатними є мікроорганізми-еукаріоти, такі як міцеліальні гриби або дріжджі, включаючи штами грибів і дріжджів, у яких шляхи глікозилювання були "гуманізовані" для забезпечення продукції антитіла з частково або повністю людським профілем глікозилювання. Див. Сегподго55, Т.0О., Маї.
Віотесн. 22 (2004) 1409-1414 і 1, Н. ег а., Маї. Віоїесп. 24 (2006) 210-215.
Клітини-хазяї, придатні для експресії глікозильованих антитіл, також одержують з многоклітинних організмів (безхребетних і хребетних). Приклади клітин безхребетних включають клітини рослин і комах. Також були знайдені багаточисленні штами бакуловірусів, які можуть використовуватися разом з клітинами комах, зокрема, для трансфекції клітин
Зродорієга ігидірегаа.
Як хазяї також можна використовувати культури клітин рослин. Див., наприклад, патенти 05 5,959,177, 05 6,040,498, 05 6,420,548, 05 7,125,978 ії 05 6,417,429 (що описують технологію
РІГАМТІВООІЕ5ТМ для одержання антитіл в трансгенних рослинах).
Як хазяї також можуть використовуватися клітини хребетних. Наприклад, можна використовувати лінії клітин ссавців, адаптовані для росту в суспензії. Іншими прикладами ліній клітин ссавців, що використовуються як хазяї, є лінія клітин нирки мавпи СМ1, трансформованих
ЗУ40 (СбО5-7); лінія людських ембріональних клітин нирки (293 або клітини 293, наприклад, згідно з описом сгапат, Р.Г.., еї аї., У. Зеп Мігої. 36 (1977) 59-74); клітин нирки новонародженого хом'яка (ВНК); мишиних клітин Сертолі (клітини ТМ4, наприклад, згідно з описом Маїнег, .).Р.,
ВіоІ. ВНергод. 23 (1980) 243-252); клітин нирки мавпи (СМІ); клітин нирки африканської зеленої мартишки (МЕКО-76); клітин карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітин нирки собаки (МОСК); клітин печінки щура буффало (ВКІ. ЗА); клітин легких людини (М/138); клітин печінки людини (Нер 02); клітин пухлини молочної залози миші (ММТ 060562); клітин ТКІ (наприклад, згідно з описом МаїНег, У.Р., еї аІ., АппаїЇ5 М.У. Асад. 5сі. 383 (1982) 44-68); клітин МКС 5 і клітин
Е54. Інші лінії клітин ссавців, що використовуються як хазяї, включають клітини яєчників китайського хом'ячка (СНО), включаючи клітини ОНЕК-СНО (паб, а., єї а!., Ргос. Маї). Асад.
Зсі. ОБА 77 (1980) 4216-4220) і лінії клітин мієломи, такі як МО, М5О їі Зр2/0. Огляд деяких ліній клітин ссавців, придатних як хазяї для одержання антитіл, представлений, наприклад, Уалакі, Р. апа Ми, А.М., Меїнодіз іп Моіесціаг Віоіоду, Мої. 248, Го, В.К.С. (єед.), Нитапа Ргез5, Тоїожма, М/ (2004), рр. 255-268.
В. Способи та композиції для діагностики і визначення
У деяких втіленнях будь-яке із запропонованих в даному документі біспецифічних антитіл до людського бета-амілоїду/улюдського рецептора трансферину можна застосовувати для визначення наявності бета-амілоїду в біологічному зразку. Термін "визначення" в даному описі охоплює кількісне та якісне визначення. У деяких втіленнях біологічний зразок включає клітину або тканину.
В одному втіленні запропоноване біспецифічне антитіло до людського бета- амілоїду/людського рецептора трансферину для застосування в способі діагностики або визначення. В наступному аспекті запропонований спосіб визначення наявності бета-амілоїду в бо біологічному зразку. У деяких втіленнях спосіб включає приведення в контакт біологічного зразка з біспецифічним антитілом до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину, описаним в даному документі, в умовах, придатних для зв'язування біспецифічного антитіла до людського бета-амілоїдуулюдського рецептора трансферину, і визначення, чи утворився комплекс між біспецифічним антитілом до людського бета- амілоїду/людського рецептора трансферину і бета-амілоїдом. Такий спосіб може представляти собою спосіб іп міго або спосіб іп мімо.
У деяких втіленнях запропоновані мічені біспецифічні антитіла до людського бета- амілоїду/людського рецептора трансферину. Мітки охоплюють детектовані напряму мітки або групування (наприклад, флуоресцентні, хромофорні, електронно-щільні, хемілюмінесцентні і радіоактивні мітки), а також групування, наприклад, ферменти або ліганди, детектовані опосередковано, наприклад, за допомогою ферментативної реакції або молекулярної взаємодії, але не обмежуються ними. Приклади міток включають радіоізотопи З2Р, 14С, 125І, ЗН і 1311, флуорофори, наприклад, хелати рідкоземельних металів або флуоресцеїн та його похідні, родамін та його похідні, дансил, умбеліферон, люциферази, наприклад, люциферазу світляка і бактеріальну люциферазу (05 4,737,456), люциферин, 2,3-дигідрофталазиндіони, пероксидазу хріну (НЕР, від англ. погзегадіхп регохідазе), лужну фосфатазу, ВД-галактозидазу, глюкоамілазу, лізоцим, сахаридоксидази, наприклад, глюкозооксидазу, галактозооксидазу і глюкозо-6- фосфатдегідрогеназу, оксидази гетероциклічних сполук, такі як уриказа і ксантин-оксидаза, зв'язані з ферментом, що використовує пероксид водню для окислення хромогену, таким як пероксидаза хріну, лактопероксидаза або мікропероксидаза, біотин/авідин, спінові мітки, бактеріофагові мітки, стабільні вільні радикали, і їм подібні, але не обмежуються ними.
Г. Фармацевтичні композиції
Фармацевтичні композиції біспецифічного антитіла до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину, описані в даному документі, виготовляють в формі ліофілізованих композицій або водних розчинів шляхом змішування такого антитіла, що має необхідний ступінь чистоти, з одним або декількома можливими фармацевтично прийнятними носіями (Кептіпдіоп'є
РПпагтасешіса! Зсіепсе5 16їй ейййоп, О5оїЇ, А. Еа. (1980)). Фармацевтично прийнятні носії у використовуваних дозуваннях і концентраціях, як правило, являються нетоксичними для реципієнтів і включають: буфери, наприклад, фосфатний, цитратний і такі, які містять інші
Зо органічні кислоти; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту і метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламонію хлорид; гексаметонію хлорид; бензалконію хлорид; бензетонію хлорид; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкілпарабени, такі як метил- або пропілпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; З-пентанол; і м-крезол); низькомолекулярні (які містять менше 10 залишків) поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобулін; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші вуглеводи, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатуючі агенти, такі як еДТА; вуглеводи, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; солеутворюючі протиіїони, такі як натрій; комплекси з металами (наприклад, комплекси 2п-білок); і/або неіонні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (ПЕГ), але не обмежуються ними. Приклади фармацевтично прийнятних носіїв у даному документі також включають засоби диспергування лікарських засобів в інтерстиціальному просторі, такі як активні в нейтральних умовах розчинні глікопротетїни гіалуронідази (ЗНАБЕСР), наприклад, розчинні глікопротеїни гіалуронідази РН-20 людини, такі як ГНиИРН2гО (НМ ЕМЕХ-, Вахіег Іпіегпайопаї, Іпс.)о. Приклади деяких 57НАБЕСР»5 і способів їх застосування, включаючи гНиРН20О, описані в 05 2005/0260186 ії 005 2006/0104968. В одному аспекті ХЗНАБЕОР додатково комбінують з однією або більше ніж однією глікозаміногліканазою, такою як хондроїтиназа.
Приклади ліофілізованих композицій антитіл описані в патенті 05 6,267,958. Водні композиції антитіл включають описані в патентах 05 6,171,586 ії М/О 2006/044908, композиції в останньому включають гістидин-ацетатний буфер.
Композиції можуть також містити більше одного активного інгредієнта, необхідних при конкретних показаннях до терапії, переважно, які мають комплементарну активність і не впливають один на одного негативно. Такі активні інгредієнти відповідно знаходиться в комбінації в кількостях, ефективних для наміченого використання.
Активні інгредієнти можуть бути вміщені в мікрокапсули, приготовані, наприклад, за допомогою технології коацервації або полімеризації на межі розділу фаз, наприклад, в мікрокапсули гідроксиметилцелюлози або желатину і мікрокапсули полі-(метилметакрилату), відповідно, в колоїдні системи доставки лікарських препаратів (наприклад, ліпосоми, альбумінові мікросфери, мікроемульсії, наночастинки і нанокапсули) або в макроемульсії. Такі бо методики описані Кетіпдіоп'є Рпаппасеціїса! 5сіепсез 161п еййіоп, О5оЇї, А. (ей.) (1980).
Можна виготовляти препарати з пролонгованим вивільненням. Приклади придатних препаратів з пролонгованим вивільненням включають напівпроникні матриці твердих гідрофобних полімерів, які містять антитіло, в яких матриці знаходиться в формі профільованих виробів, наприклад, у вигляді плівок або мікрокапсул. Приклади матриць з пролонгованим вивільненням включають поліефіри, гідрогелі (наприклад, полі(2-гідроксіетил-метакрилат) або полі(вініловий спирт)), полілактиди (05 3,7 73,919), співполімери Г-глутамінової кислоти і у етил-
І -лутамату, недеградований етилен-вінілацетат, деградовані співполімери молочної кислоти і гліколевої кислоти, такі як ГОРКОМ ОЕРОТ "М (мікросфери, що ін'єктується, які складаються із співполімерів молочної кислоти і гліколевої кислоти і лейпроліду ацетату) і полі-О-(-)-3- гідроксибутирову кислоту.
Композиції, призначені для введення іп мімо, як правило, стерильні. Стерильність може бути досягнута, наприклад, шляхом фільтрації через стерильні фільтруючі мембрани. В одному втіленні композиція є ізотонічною.
Д. Терапевтичні способи та композиції
В терапевтичних способах може застосовуватися будь-яке біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину, запропоноване в даному винаході.
В одному аспекті запропоноване біспецифічне антитіло до людського бета- амілоїду/людського рецептора трансферину для застосування як лікарського засобу. В інших аспектах запропоноване біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину для застосування в попередженні і/або лікуванні захворювання, асоційованого з амілоїдогенезом і/або утворенням амілоїдних бляшок. У деяких втіленнях запропоноване біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину для застосування в способі лікування. У деяких втіленнях запропоноване біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїдуулюдського рецептора трансферину для застосування в способі лікування індивідуума, що має захворювання, асоційоване з амілоїдогенезом і/або утворенням амілоїдних бляшок, який включає введення індивідууму ефективної кількості біспецифічного антитіла до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину. В одному з таких втілень спосіб додатково включає введення індивідууму ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента, такого як
Зо перелічені нижче агенти, або антитіла до рТаи або альфа-синуклеїну. В наступних втіленнях запропоноване біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину для застосування в інгібуванні утворення бляшок і/або дезінтеграції В-амілоїдних бляшок. У деяких втіленнях запропоноване біспецифічне антитіло до людського бета- амілоїду/людського рецептора трансферину для застосування в способі інгібування утворення бляшок і/або дезінтеграції В-амілоїдних бляшок у індивідуума, який включає введення індивідууму ефективної кількості біспецифічного антитіла до людського бета- амілоїду/улюдського рецептора трансферину для інгібування утворення бляшок і/або дезінтеграції ВД-амілоїдних бляшок. "Індивідуум" згідно з будь-яким з вищеперелічених втілень переважно є людиною.
В наступному аспекті винаходу запропоноване застосування біспецифічного антитіла до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину у виготовленні лікарського засобу.
В одному втіленні лікарський засіб призначений для лікування захворювання, асоційованого з амілоїдогенезом і/або утворенням амілоїдних бляшок. В наступному втіленні лікарський засіб призначений для застосування в способі лікування захворювання, асоційованого з амілоїдогенезом і/або утворенням амілоїдних бляшок, який включає введення індивідууму, що має захворювання, асоційоване з амілоїдогенезом і/або утворенням амілоїдних бляшок, ефективної кількості лікарського засобу. В одному з таких втілень спосіб додатково включає введення індивідууму ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента, такого як перелічені нижче агенти, або антитіла до рТаш або альфа-синуклеїну. В наступному втіленні лікарський засіб призначений для інгібування утворення бляшок і/або дезінтеграції В-амілоїдних бляшок. В наступному втіленні лікарський засіб призначений для застосування в способі інгібування утворення бляшок і/або дезінтеграції В-амілоїдних бляшок у індивідуума, який включає введення індивідууму ефективної кількості лікарського засобу для інгібування утворення бляшок і/або дезінтеграції В-амілоїдних бляшок. "Індивідуум" згідно з будь-яким з вищеперелічених втілень може бути людиною.
В наступному аспекті винаходу запропонований спосіб лікування захворювання, асоційованого з амілоїдогенезом і/або утворенням амілоїдних бляшок. В одному втіленні спосіб включає введення індивідууму, який має захворювання, асоційоване з амілоїдогенезом і/або утворенням амілоїдних бляшок, ефективної кількості біспецифічного антитіла до людського бо бета-амілоїду/людського рецептора трансферину. В одному з таких втілень спосіб додатково включає введення індивідууму ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента, такого як перелічені нижче агенти, або антитіла до рТаи або альфа- синуклеїну. "Індивідуум" згідно з будь-яким з вищеперелічених втілень може бути людиною.
В наступному аспекті запропонований спосіб інгібування утворення бляшок і/або дезінтеграції В-амілоїдних бляшок у індивідуума. В одному втіленні спосіб включає введення індивідууму ефективної кількості біспецифічного антитіла до людського бета- амілоїду/улюдського рецептора трансферину для інгібування утворення бляшок і/або дезінтеграції ВД-амілоїдних бляшок. В одному втіленні "індивідуум" Є людиною.
В наступному аспекті запропоновані фармацевтичні композиції, що включають будь-яке з біспецифічних антитіл до людського бета-амілоїдуулюдського рецептора трансферину, запропонованих в даному винаході, наприклад, для застосування в будь-якому з описаних вище терапевтичних способів. В одному втіленні фармацевтична композиція містить будь-яке з біспецифічних антитіл до людського бета-амілоїдуулюдського рецептора трансферину, запропонованих в даному винаході, і фармацевтично прийнятний носій. В іншому втіленні фармацевтична композиція містить будь-яке з біспецифічних антитіл до людського бета- амілоїду/людського рецептора трансферину, запропонованих в даному винаході, і щонайменше один додатковий терапевтичний агент, наприклад, наведений нижче, або антитіло до рТаим або альфа-синуклеїну.
Антитіла, описані в даному документі, можуть застосовуватися або у вигляді монотерапії, або в комбінації з іншими агентами. Наприклад, антитіло, описане в даному документі, можна вводити разом щонайменше з одним додатковим терапевтичним агентом. У деяких втіленнях додатковий терапевтичний агент є ефективним для лікування того самого неврологічного порушення, для лікування якого застосовують біспецифічне антитіло, описане в даному документі, або іншого неврологічного порушення. Приклади додаткових терапевтичних агентів включають: різні неврологічні препарати, описані вище, інгібітори холінестерази (такі як донезепіл, галантамін, ровастигмін і такрин), антагоністи рецепторів М-метил-О-аспартату (ММОА) (такі як мемантин), інгібітори агрегації бета-амілоїду, антиоксиданти, модулятори у- секретази, міметикі фактору росту нервів (МОБ, від англ. пегме дгоуйй Тасіог) або генну терапію
МОРЕ, агоністи рецепторів, що активуються пероксисомними проліфераторами (РРАКУ, від англ.
Зо Регохізоте ргоїПегаюг-асіїмаєей гесеріог5), інгібітори 3-гідрокси-3-метилглутарил-кофермент А редуктази (статини), ампакіни, блокатори кальцієвих каналів, антагоністи рецептора гамма- аміномасляної кислоти, інгібітори кінази глікогенсинтази, внутрішньовенний імуноглобулін, агоністи мускаринових рецепторів, модулятори нікотинового рецептора, активну або пасивну імунізацію бета-амілоїдом, інгібітори фосфодіестерази, антагоністи серотонінових рецепторів і антитіла до бета-амілоїду, але не обмежуються ними. У деяких втіленнях щонайменше один додатковий терапевтичний агент вибирають за його здатністю пригнічувати один або більше ніж один побічний ефект неврологічного препарату.
Такі комбіновані терапії, зазначені вище, включають комбіноване введення (коли два або більше терапевтичних агентів включені до складу одного або декількох препаратів) і роздільне введення, коли введення антитіла за винаходом здійснюють до, одночасно і/або після введення додаткового терапевтичного агента або агентів. В одному втіленні введення біспецифічного антитіла до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину і введення додаткового терапевтичного агента відбувається протягом приблизно одного місяця або протягом приблизно одного, двох або трьох тижнів, або протягом приблизно одного, двох, трьох, чотирьох, п'яти або шести днів. Антитіла, описані в даному документі, також можна застосовувати в комбінації з іншими втручаннями, такими як променева терапія, психотерапія або інші види терапії, відомими в галузі техніки і придатними для лікування або попередження неврологічного порушення.
Антитіло, описане в даному документі (і будь-який додатковий терапевтичний агент), можна вводити будь-яким придатним способом, включаючи парентеральне, внутрішнолегеневе та інтраназальне, і, при необхідності місцевого лікування, внутрішньовогнищеве введення.
Парентеральні інфузії включають внутрішньом'язове, внутрішньовенне, внутрішньоартеріальне, внутрішньочеревинне або підшкірне введення. Дозування можна здійснювати будь-яким придатним способом, наприклад, за допомогою ін'єкцій, таких як внутрішньовенні або підшкірні ін'єкції, частково залежно від того, чи є введення короткостроковим або тривалим. У даному описі передбачаються різні режими дозування, які включають одноразове або багаторазове введення через різні проміжки часу, болюсне введення і пульсове введення, але необмеженими ними.
Антитіла, запропоновані в даному винаході, виготовляють, дозують і вводять відповідно до 60 вимог належної медичної практики. Фактори, які необхідно при цьому враховувати, включають конкретне захворювання, лікування якого здійснюють, конкретний ссавець, який одержує лікування, клінічний стан окремого пацієнта, причину порушення, місце введення агента, спосіб введення, схему введення та інші фактори, відомі медичному персоналу. Антитіло не обов'язково, але можливо знаходиться в комбінації з одним або більше ніж одним агентом, що використовується на даний момент для попередження або лікування обговорюваного порушення. Ефективна кількість цих інших агентів залежить від кількості антитіла, присутнього в композиції, типу порушення або лікування, а також інших факторів, які обговорювалися вище.
Як правило, їх застосовують в таких самих дозуваннях і вводять такими самими способами, як описані в даному документі, або як приблизно від 1 до 99 95 описаних тут дозувань, або в будь- якому дозуванні і будь-яким способом, який вважається придатним на основі емпіричних/клінічних даних.
Способи перенесення злитої конструкції або з'єднання через ГЕБ, основані на використанні ліпідів, включають інкапсулювання злитої конструкції або з'єднання в ліпосоми з приєднаним до них моновалентним зв'язуючим компонентом, який зв'язується з рецепторами на судинному ендотелії ГЕБ (див., наприклад, 5 2002/0025313), і вміщення моновалентного зв'язуючого компонента в частинки ліпопротеїну низької щільності (див., наприклад, 05 2004/0204354) або зв'язування з аполіпопротеїном Е (див., наприклад, 5 2004/0131692), але не обмежуються ними.
Відповідне дозування антитіла за винаходом (при використанні окремо або в комбінації з одним або декількома додатковими терапевтичними агентами) для попередження або лікування захворювання буде залежати від типу захворювання, яке підлягає лікуванню, типу антитіла, важкості і протікання захворювання, від того, чи вводять антитіло з метою профілактики або лікування, від попереднього лікування, історії хвороби пацієнта і відповіді на антитіло, а також від вибору лікуючого лікаря. Придатним є введення антитіла пацієнту одноразово або під час серії процедур. Залежно від типу і важкості захворювання можливе початкове дозування антитіла для введення пацієнту може становити від приблизно 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, 0,5 мг/кг - 10 мг/кг), наприклад, у вигляді одного або декількох окремих введень, або у вигляді безперервної інфузії. Типова добова доза може варіювати від приблизно 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше, залежно від зазначених вище факторів. При повторному введенні протягом декількох днів або більше, залежно від патологічного стану, лікування повинне тривати доти, доки не настане бажане пригнічення симптомів захворювання. Одним з прикладів дозування антитіла може бути діапазон від приблизно 0,05 мг/кг до приблизно 10 мг/кг. Таким чином, пацієнту можна вводити одну або декілька доз, які становлять приблизно 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг або 10 мг/кг (або будь-які їх комбінації). Ці дози можна вводити з перервами, наприклад, кожний тиждень або кожні три тижні (наприклад, таким чином, щоб пацієнт одержав від приблизно двох до приблизно двадцяти, або, наприклад, приблизно шість доз антитіла). Можна здійснювати введення первинної ударної дози з наступним введенням однієї або декількох більш низьких доз. Однак, можна застосовувати і інші режими дозування.
Успішність такої терапії легко відстежувати за допомогою відомих методик і тестів.
Очевидно, що в будь-якій з вищезазначених композицій або в будь-якому з вищезазначених терапевтичних способів як альтернатива або доповнення до біспецифічного антитіла до людського бета-амілоїдуулюдського рецептора трансферину можна застосовувати імунокон'югат, описаний в даному документі.
І. Вироби
В іншому аспекті винаходу запропонований виріб, який містить матеріали, які можуть знайти застосування в лікуванні, попередженні і/або діагностиці порушень, описаних вище. Вироби містять контейнер та етикетку або листівку-вкладиш, розміщену на контейнері або асоційовану з контейнером. Придатні контейнери включають, наприклад, пляшки, флакони, шприці, пакети з розчином для внутрішньовенного введення тощо. Контейнери можуть бути виготовлені з різних матеріалів, таких як скло або пластмаса. Контейнер містить композицію, яка самостійно або в комбінації з іншою композицією є ефективною при лікуванні, попередженні і/або діагностиці патологічних станів, і може мати отвір для стерильного доступу (наприклад, контейнер може представляти собою пакет з розчином для внутрішньовенного введення або флакон з пробкою, яку можна проткнути голкою для підшкірних ін'єкцій). Щонайменше один активний інгредієнт в композиції являє собою антитіло, запропоноване в даному документі. На етикетці або листівці- вкладиші вказано, що композицію застосовують для лікування відповідного патологічного стану.
Крім того, виріб може містити (а) перший контейнер з композицією, яка міститься в ньому, де композиція містить антитіло за винаходом і (б) другий контейнер з композицією, яка міститься в ньому, де композиція містить додатковий цитотоксичний або інший терапевтичний агент. Виріб 60 в даному втіленні може додатково містити листівку-вкладиш із вказівкою, що композиції можна
Зо застосовувати в лікуванні конкретного патологічного стану. Як альтернатива або доповнення виріб може також містити другий (або третій) контейнер, який містить фармацевтично прийнятний буфер, наприклад, бактеріостатичну воду для ін'єкцій (ВМ/УРІ), фосфатно-сольовий буфер, розчин Рингера і розчин декстрози. Він може також містити інші матеріали, привабливі з комерційної та з споживчої точки зору, включаючи інші буфери, розріджувачі, фільтри, голки та шприці.
Очевидно, що будь-який з вищезазначених виробів як альтернатива або доповнення до біспецифічного антитіла, описаного в даному документі, може включати в себе імунокон'югат, описаний в даному документі.
ІМ. ОПИС ПРИКЛАДІВ ЗДІЙСНЕННЯ ВИНАХОДУ
Нижче наведені приклади способів та композицій за винаходом. Потрібно розуміти, що можливі і інші варіанти втілень, відповідно до наведеного вище опису.
Матеріали і загальні методи
Загальна інформація, що належить до нуклеотидних послідовностей легких і важких ланцюгів імуноглобулінів людини, представлена КаБбаї, Е.А., еї аІ., Зедоепсе5 ої Ргоївїп5 ої
Іттипоіодіса! Іпіегеві, Бій єд., Рибіїс Неайй 5егуісе, Маїйопаї! Іпвійшев ої Неапйй, ВешШезаа, МО (1991). Нумерація амінокислот в ланцюгах антитіла вказана згідно з Кабаї (Кабаї, Е.А., єї аї., зЗедиеєпсез ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві, Бій ей., Рибіїс Неайй Зегмісе, Маїййопаї Іпвійшев ої
Неан, ВеїШйезаа, МО (1991)).
Методи рекомбінування ДНК
Для маніпуляцій з ДНК застосовували стандартні методи, описані ЗатбгоокК, У. еї аї.,
Моїесшіаг сіопіпд: А Іабогаюгу тапиа!; Со бргіпд Натог І арогаюгу Ргев55, Соїй брііпу Нагбог,
Мем ХогК, 1989. Реагенти для молекулярної біології використовували відповідно до інструкцій виробника.
Синтез генів
Необхідні генні сегменти одержували з олігонуклеотидів, одержаних за допомогою хімічного синтезу. Довгі генні сегменти, фланковані унікальними сайтами для розщеплення рестрикційними ендонуклеазами, збирали шляхом відпалювання і лігування олігонуклеотидів, включаючи ампліфікацію ПЦР, і потім клонували за вказаними сайтами рестрикції.
Зо Послідовності ДНК субклонованих фрагментів генів верифікували за допомогою секвенування
ДНК. Фрагменти синтезованих генів заказували відповідно до технічних умов Сепеаїй (Регенсбург, Германія).
Визначення послідовності ДНК
Послідовності ДНК визначали за допомогою секвенування двох ланцюгів у компаніях
Медісепотіх ОотрН (Мартинсрид, Германія) або Зедиібегме ОтрН (Фатерштеттен, Германія).
Аналіз послідовностей ДНК і білка та обробка даних секвенування
Для утворення, картування, аналізу, анотування та ілюстрації послідовностей використовували пакет програм 5Ссо'5 ((Зепейс5 Сотршег ОСгоир, Мадізоп, Умі5сопвіп) версії 10.2 і набор програмних інструментів Іпіотах 5 Месіог МТ1 Адмапсе версії 8.
Експресуючі вектори
Для експресії описаних біспецифічних антитіл можна застосовувати експресуючі плазміди для транзиторної експресії (наприклад, в клітинах НЕК293), використовуючи промотор СММ з інтроном А або без інтрону А при організації у вигляді КДНК або промотор СММ при організації у вигляді геномної ДНК.
Крім касети для експресії антитіла вектори містять: - оріджин реплікації, який дозволяє даній плазміді реплікуватися в Е. соїї, і - ген р-лактамази, який забезпечує резистентність Е. соїї до ампіциліну.
Транскрипційна одиниця гена антитіла складається з наступних елементів: - унікальний) сайт(и) рестрикції на 5" кінці, - негайний ранній енхансер і промотор цитомегаловірусу людини, - послідовність інтрону А у випадку організації у вигляді КДНК, - Б'-нетрансльована ділянка, що походить з гена антитіла людини, - сигнальна послідовність важкого ланцюга імуноглобуліну, - нуклеїнова кислота, що кодує відповідний ланцюг антитіла, або у вигляді кДНК, або має геномну екзон-інтронну організацію, - 3 нетрансльована ділянка з сигнальною послідовністю поліаденілювання і - унікальний) сайті) рестрикції на 3" кінці.
Злиті гени, що кодують ланцюги антитіла, одержують за допомогою ПЦЕР і/або синтезу генів і здійснюють їх складання відомими рекомбінантними способами і методами, з'єднуючи бо відповідні сегменти нуклеїнових кислот, наприклад, використовуючи унікальні рестрикційні сайти у відповідних векторах. Послідовності субклонованих нуклеїнових кислот верифікували за допомогою секвенування ДНК. Для транзиторної трансфекції плазміди одержували у великій кількості, виділяючи плазміди з культур трансформованих БЕ. соїї (Мисіеоропа АХ, Маспегеу-
Мадеїі).
Для усіх конструкцій застосовували технологію гетеродимеризації виступи-у-западини з типовою заміною Т366УУ, що призводить до утворення виступу в першому СНЗ домені і відповідними замінами 73665, І З368А і у407М, що призводять до утворення впадин у другому
СНЗ домені (а також додатково впроваджували два залишки цистеїну 5354С/У349'С) (що розташовуються у відповідних послідовностях важкого ланцюга (НС), наведених вище).
Методи культивування клітин
Використовували стандартні методи культивування клітин, описані в Сигтепі Ргоїосої5 іп СеїЇ
Віоіоду (2000), Вопітасіпо, У.5., Оаз5о, М., Напога, -.В., Ірріпсон-оспулатія, у). апа Матада, К.М. (єд5».), доп УМіІеу 4 бопв, Іпс.
Транзиторні трансфекції в системі НЕК293-Е
Біспецифічні антитіла одержували за допомогою транзиторної експресії. Для цього здійснювали трансфекцію відповідними плазмідами з використанням системи НЕК293-Е (Іпмігодеп) згідно з інструкціями виробника. Стисло, клітини НЕК293-Е (Іпмігодеп), культивовані в суспензії або у колбі що струшується, або в ферментері з перемішуванням в безсироватковому середовищі для експресії Егеебіуетм 293 (Іпмігодеп), трансфікували сумішшю відповідних експресуючих плазмід за допомогою реагенту 293Гесіїп"М або Тесііп (Іпмігодеп). Для 2 л колби, що струшується, (Согпіпд) клітини НЕК293-Е висаджували в щільності 1,05105 клітин/мл в 600 мл і інкубували при 120 об/хв, 895 СО». На наступну добу клітини трансфікували в щільності приблизно 1,57105 клітин/мл з використанням приблизно 42 мл суміші: А) 20 мл середовища Орії-МЕМ (Іпмігодеп), яке містить сумарно 600 мкг плазмідної
ДНК (Я мкг/мл) і В) 20 мл середовища Орії-МЕМ з додаванням 1,2 мл реагенту 293 Тесііп або
Тесііп (2 мкг/мл). Залежно від споживання глюкози в процесі ферментації додавали розчин глюкози. Надосадову рідину, яка містить секретоване антитіло, збирали через 5-10 діб і або виділяли антитіла безпосередньо з надосадової рідини, або надосадову рідину заморожували і зберігали.
Зо Визначення білка
Для очищених антитіл і похідних визначали концентрацію білка шляхом вимірювання оптичної щільності (ОЩ) при 280 нм, з використанням молярного коефіцієнта екстинкції, розрахованого на основі амінокислотної послідовності згідно з Расе, еї аї., Ргоївіп Зсіепсе 4 (1995) 2411-1423.
Визначення концентрації антитіл в надосадовій рідині
Концентрацію антитіл і похідних в культуральній надосадовій рідині оцінювали за допомогою імунопреципітації з використанням гранул агарози з білком А (Коспе Оіадповіїс5 стрн,
Мангейм, Германія). Так, 60 мкл гранул агарози з білком А триразово промивали ТВ5-МРАО (50
ММ Ттіз буфер, рН 7,5 з додаванням 150 мМ Масі і 195 Мопіаєї-Р40). Потім 1-15 мл культуральної надосадової рідини наносили на гранули агарози з білком А, попередньо зрівноважені ТВ5-МР40. Після інкубації протягом 1 години при кімнатній температурі гранули промивали одноразово на колонці Ойгатее-МО-йКег (Атісоп) 0,5 мл ТВ5-МР40, дворазово 0,5 мл 2х фосфатно-сольовим буфером (2хРВ5, Коспе Оіадповіїс5 зтрН, Мангейм, Германія) і швидко чотирикратно 0,5 мл 100 мМ Ма-цитратним буфером (рН 5,0). Зв'язане антитіло елюювали додаванням 35 мкл буфера для нанесення зразка МІИРАСЕ? 105 (Іпуийгодеп).
Половину зразка змішували з відновлювальним агентом для зразка МиИРАСЕ? або залишали невідновленим, відповідно, і нагрівали протягом 10 хв при 70 "С. Потім 5-30 мкл вносили в 4- 12 95 гель МИРАСЕ? Вів-Ттгі5 (Іпмігодеп) (з буфером МОР5 для електрофорезу в ДСН-ПААГ в невідновлюваних умовах і буфером МЕБ5 з додаванням реагенту МиРАСЕ? апійохідапі (Іпийгодеп) в електродний буфер для ДСН-ПААГ у відновлюваних умовах) і забарвлювали
Кумасі синім.
Кількісне визначення концентрації антитіл в культуральній надосадовій рідині здійснювали за допомогою афінної ВЕРХ. Стисло, культуральну надосадову рідину, яка містить антитіла, які зв'язувалися з білком А, наносили на колонку Арріїєа Віозузіет5 Рогов А/20 в 200 мМ КН2РОЯ4, 100 мМ цитрату натрію, рН 7,4 і елюювали 200 мМ Масі, 100 мм лимонної кислоти, рН 2,5 в системі Адіепі НРІС 1100. Кількісне визначення елюйованого антитіла здійснювали за поглинанням в УФ ділянці, вимірюючи площі піків. Як стандарт використовували очищене стандартне ІдО1 антитіло.
В альтернативному варіанті концентрацію антитіл і похідних в культуральній надосадовій 60 рідині визначали за допомогою сендвіч-Ід(3-ІФА. Стисло, на 96б-лункових планшетах для мікротитрування 5ігеріаумеїІ з високою зв'язуючою здатністю, покритих стрептавідином (Коспе
Біадпозіїсз СтьЬН, Мангейм, Германія), іммобілізували біотинільовані молекули Е(ар")2«п-Есу»
ВІ (Оіапома), що захоплюють людський Ідс, по 100 мкл/лунку в концентрації 0,1 мкг/мл протягом 1 години при кімнатній температурі або, в альтернативному варіанті, протягом ночі при 4 "С і потім промивали триразово 200 мкл/лунку РВ5, що містить 0,05 96 Тмееп (РВЗ5Т, Зідта). Потім в лунки додавали серійні розведення в РВ5 (5ідта) культуральної надосадової рідини, яка містить відповідне антитіло, по 100 мкл/лунку та інкубували протягом 1-2 годин на качалці при кімнатній температурі. Лунки триразово промивали РВ5Т в кількості по 200 мкл/лунку і для визначення зв'язаного антитіла додавали детектуюче антитіло Е(ар")2«пЕСсу»РОО (Оіапома) в кількості 100 мкл і концентрації 0,1 мкг/мл п! інкубували протягом 1-2 годин на качалці при кімнатній температурі. Незв'язане детектуюче антитіло видаляли за допомогою триразового промивання РВЗТ по 200 мкл/лунку. Зв'язане детектуюче антитіло визначали шляхом додавання АВТ5 по 100 мкл/лунку та наступної інкубації. Поглинання при довжині хвилі 405 нм визначали за допомогою спектрометра Тесап Рійог (референтна довжина хвилі 492 нм).
Препаративне очищення антитіла
Антитіла виділяли з профільтрованої культуральної надосадової рідині відповідно до стандартних протоколів. Стисло, антитіла наносили на колонку з сефарозою, кон'юговані з білком А (СЕ Ппеаййсаге), і промивали РВ5. Антитіла елюювали при рН 2,8 з наступною негайною нейтралізацією. Агрегований білок відділяли від мономерних антитіл за допомогою ексклюзійної хроматографії (Зирегаех 200, СЕ Неайпсаге) в РВ5 або в 20 мМ гістидиновому буфері, який містить 150 мМ Масі (рн 6,0). Фракції, які містять мономерне антитіло, об'єднували, концентрували (за необхідності), наприклад, використовуючи центрифужний концентратор МІП ІРОКЕ Атісоп ОКга (НОММ 30), заморожували і зберігала при -20 "С або - 80 "С. Частину зразків використовували для наступного визначення білка і аналітичного дослідження, наприклад, за допомогою ДСН-ПААГ, ексклюзійної хроматографії (ЕХ) або мас- спектрометрії.
ДСН-ПААГ
Готові системи гелів МиИРАСЕ? (Іпмігодеп) використовували відповідно до інструкцій виробника. Зокрема, використовували готові системи 10 95 або 4-12 95 гелів МИРАСЕ? Момех?
Зо Ві5-ТРІ5 (рН 6,4) та електродний буфер МИРАСЕ? МЕ5 (для електрофорезу у відновлюючих умовах, з додаванням в електродний буфер реагенту МИРАСЕ? апійохідап) або МОР5 (для електрофорезу у невідновлюючих умовах).
Капілярний електрофорез у присутності ДСН (КЕ-ДСН)
Чистоту та інтактність антитіла досліджували за допомогою КЕ-ДСН, використовуючи мікрофлюїдну технологію І арспір (РегкіпЕІтег, ОА). Так, 5 мкл розчину антитіла готували для аналізу КЕ-ДСН з використанням набору реагентів НТ Ргоївеіп Ехрге55 згідно з інструкціями виробника та аналізували з використанням системи І арспір СХІЇ і чіпа НТ Ргоїєїп Ехрге55. Для аналізу даних використовували програму Гарспір ОХ.
Аналітична ексклюзійна хроматографія
Для визначення агрегації та олігомерного стану антитіл виконували ВЕРХ у варіанті ексклюзійної хроматографії (ЕХ). Стисло, антитіла, очищені з використанням білка А, наносили на колонку То5хоп Т5Кде! С30005МУ в 300 мМ Масі, 50 мм КН2гРО4/К2НРОЯ буфері (рН 7,5) в системі біопех ОкКітаїе? (Тпегто Різспег Зсіепійіс) або на колонку Зирегдех 200 (СЕ Неаййсаге) в 2 х РВЗ в системі біопех НРІ С. Кількісне визначення елюйованого антитіла проводили за поглинанням в УФ ділянці, вимірюючи площі піків. Як стандарт використовували стандарт для гель-фільтрації ВіоКайа 151-1901.
Мас-спектрометрія
В даному розділі описане дослідження характеристик біспецифічних антитіл з наданням особливої уваги правильності їх збирання. Шукані первинні структури аналізували за допомогою мас-спектрометрії з електророзпилювальною іонізацією (ЕБІ-М5) деглікозильованого інтактного антитіла і в особливих випадках деглікозильованого антитіла, що піддалося обмеженому розщепленню ендопротеїназою ГІ ус.
Деглікозилювання антитіл здійснювали за допомогою М-глікозидази Е в фосфатному або
Тіз буфері при 37 "С протягом часу до 17 годин при концентрації білка 1 мг/мл. Здійснювали обмежене розщеплення 100 мкг деглікозильованого антитіла за допомогою Гу5С (Коспе
Ріадповіїс5 трон, Мангейм, Германія) в Ттгіз5 буфері (рН 8) при кімнатній температурі протягом 120 годин або при 37 "С протягом 40 хв, відповідно. Перед мас-спектрометичним аналізом зразки знесолювали за допомогою ВЕРХ на колонці Зерпадех 525 (СЕ Неайвсаге). Загальну масу визначали за допомогою Е5ЗІ-М5 з використанням системи тахіх 45 ОНВ-ОТОЕ М5 бо (Вгикег СайопікК), обладнаної джерелом іонів ТгімМегза МапоМаге (Адміоп).
Аналіз хімічного руйнування
Зразки ділили на три аліквоти і забуферювали 20 мМ Нів/Ннібз"НСІ, 140 мм Масі, рн 6,0 або
РВХ2, відповідно, і зберігали при 40 "С (Ніз/Ммасі) або 37 "С (РВ5). Контрольний зразок зберігали при -80 "С.
Після закінчення інкубації визначали відносну активну концентрацію (ВіАсоге), агрегацію (ЕХ) і фрагментацію (капілярний електрофорез або ДСН-ПААГ) і порівнювали з контролем, який не піддавався впливу.
Термостабільність
Готували зразки з концентрацією 1 мг/мл в 20 мМ розчині гістидин/гістидину хлорид, 140 мМ масі, рн 6,0, переносили в оптично прозорий 384-лунковий планшет шляхом центрифугування через 0,4 мкм фільтрувальний планшет і покривали парафіновим маслом. Гідродинамічний радіус визначали за динамічним світлорозсіюванням за допомогою зчитуючого пристрою для планшетів ОупаРго (Уууаю) при нагріванні зразків від 25 "С до 80 "С зі швидкістю 0,05 "С/хв.
В альтернативному варіанті зразки переносили у 10 мкл мікрокювети і реєстрували статичне світлорозсіювання і флуоресценцію при збудженні лазерним випромінюванням з довжиною хвилі 266 нм за допомогою інструменту Орійт1000 (Амасіа Іпс.) при нагріванні від 25 "С до 907 зі швидкістю 0,1 "С/хв.
Температуру початку агрегації визначали, як температуру, при якій гідродинамічний радіус (0/5) або інтенсивність розсіяного світлового випромінювання (Орійт1000) починали збільшуватися.
В альтернативному варіанті зразки переносили в 9 мкл комірки мультикювети.
Мультикювети, вміщені в інструмент Орійт1000 (Амасіа Апаїуїіса! Іпс.), нагрівали від 35 "С до 90 з постійною швидкістю 0,1 "С/хвилину. Прилад безперервно реєструє інтенсивність розсіяного лазерного випромінювання з довжиною хвилі 266 нм приблизно через кожні 0,5 "С.
На графіку відкладали залежність інтенсивності розсіяного світлового випромінювання від температури. Температуру початку агрегації (ТТ адо) визначали, як температуру, при якій інтенсивність розсіяного світлового випромінювання (Орійт1000) починала збільшуватися.
Температуру плавлення визначали, як точку перегину графіка залежності інтенсивності флуоресценції від довжини хвилі.
Приклад 1
Експресія та очищення
Біспецифічні антитіла одержували, як описано вище в розділі "Матеріали і методи".
Біспецифічні антитіла виділяли з надосадової рідині за допомогою афінної хроматографії з білком А та ексклюзійної хроматографії. Одержані продукти ідентифікували за допомогою мас- спектрометрії, аналітичні характеристики, такі як чистота, визначали за допомогою КЕ-ДСН, а також визначали вміст мономерів і стабільність.
Шукані первинні структури аналізували за допомогою мас-спектрометрії з електророзпилювальною іонізацією (Е5БІ-М5) деглікозильованого інтактного антитіла і деглікозильованого антитіла, що піддане розщепленню плазміном, або в альтернативному варіанті деглікозильованого антитіла, підданого обмеженому розщепленню ендопротеїназою
ГузсС, як описано в розділі "Загальні методи".
Додаткові аналітичні методи (наприклад, дослідження термостабільності, мас- спектрометричний аналіз і дослідження функціональної активності) застосовували тільки після очищення з використанням білка А та ексклюзійної хроматографії.
Приклад 2.
Визначення зв'язування з фібрилами АВ1-40 іп міго за допомогою ІФА
Зв'язування біспецифічних антитіл з фібрилярним АВ визначали за допомогою ІФА. Стисло,
АВ(1-40) в концентрації 7 мкг/мл в РВ5 іммобілізували на планшетах Махізогр протягом З діб при 37 "С для одержання фібрилярного А-бета і потім висушували протягом З годин при кімнатній температурі. Планшет блокували 195 розчином СтгоївеіпС і 0,195 КЗА в РВ5З (блокуючий буфер) протягом 1 години при кімнатній температурі і потім одноразово промивали відмивальним буфером. Біспецифічні антитіла або контролі додавали в концентрації до 100 нм в блокуючому буфері та інкубували при 4 "С протягом ночі. Після 4 стадій відмивання конструкції визначали за допомогою додавання антитіла до дО людини, кон'югованого з пероксидазою хріну (даскзоп Іттипогезеагсі), в розведенні 1:10 000 в блокуючому буфері (1 час при кімнатній температурі), після чого здійснювали б-кратне відмивання та інкубували з тетраметилбензидином (ТМВ) (бЗідта). Розвиток забарвлення зупиняли додаванням 1 М НСІЇї визначали поглинання при 450 нм.
Приклад 3. бо Визначення зв'язування з рецептором трансферину іп міго
Зв'язування біспецифічних антитіл з мишиним рецептором трансферину визначали за допомогою проточної цитометрії (ГАС5) з використанням клітин мієломи миші Х63.АС8-563.
Якщо антитіло до АД демонструє деяку тенденцію до неспецифічного зв'язування з клітинами
Адв, специфічне зв'язування можна визначити при спільній інкубації з 20-кратним надлишком антитіла до ТІК миші. Клітини збирали за допомогою центрифугування, одноразово відмивали
РВ5 і 5х107 клітин інкубували з серією розведень від 1,5 пМ до 10 нМ злитого поліпептиду з додаванням або без додавання 200 нМ антитіла до ТІЖ миші в 100 мкл ЕРМІЛО 95 ембріональної телячої сироватки (ЕС5) протягом 1,5 години на льоду. Після 2 відмивань
ВРМІ/1О 95 ЕС клітини інкубували з козиним антитілом до дсС людини, кон'югованим з фікоеритрином (даскзоп Іттипогезеагс!) в розведенні 1:600 в КРМІ/19 дю РС5 протягом 1,5 години на льоду. Потім клітини знову промивали, ресуспендували в КРМІ/1О 95 ЕС5 і визначали флуоресценцію фікоеритрину на приладі ЕАС5-Аттау (Весіоп-ОісКіпзоп).
Приклад 4.
Дослідження взаємодії з людським ТІК методом поверхневого плазмонного резонансу
Дослідження зв'язування проводили на біоаналізаторі ВіІАсоге В 4000 (СЕ Неаксаге) з сенсор-чіпом С1 (ЗЕ Неайпсаге, кат. номер ВК1005-35), попередньо обробленим для захоплення Бар фрагментів антитіла людини (СЕ Неайсаге, кат. номер 28-9583-25) з використанням стандартної процедури зв'язування за аміногрупою згідно з інструкціям виробника.
Для вимірювання кінетики зразки антитіла іммобілізували протягом 60 секунд при швидкості потоку 10 мкл/хв у фосфатно-сольовому буфері рН 7,4, 0,0595 Тмееп 20 при 2576.
Рекомбінантний людський рецептор трансферину з гексагістидиновою міткою (КУО 5узіетв, кат. номер 2474-Т8-050) використовували в концентраціях, що збільшуються, і реєстрували сигнал з плином часу. У середньому інтервал часу, протягом якого реєстрували асоціацію, становив 150 секунд, а інтервал часу, протягом якого реєстрували дисоціацію, становив 600 секунд, швидкість потоку становила 30 мкл/хв. Дані апроксимували з використанням моделі зв'язування 1:1 (ізотерма Ленгмюра).
Приклад 5.
Зо Непряме імунофлуоресцентне забарвлення нативних В-амілоїдних бляшок людини на зрізах головного мозку пацієнтів з хворобою Альцгеймера з використанням біспецифічного антитіла, запропонованого у винаході
Біспецифічні антитіла також можна досліджувати за здатністю забарвлювати нативні Д- амілоїдні бляшки людини в імуногістохімічному дослідженні з використанням методу непрямої імунофлуоресценції. Таким чином можна продемонструвати специфічне і чутливе забарвлення природних людських рВ-амілоїдних бляшок. Кріостатні зрізи нефіксованої тканини скроневих часток кори, одержаної посмертно у пацієнтів з позитивним діагнозом хворобі Альцгеймера, забарвлювали методом непрямої імунофлуоресценції. Для визначення зв'язування біспецифічного антитіла проводили двохстадійну інкубацію, для детекції використовували афінно очищене козине антитіло (ЗАН555) до Ід (НІ) людини, кон'юговане з барвником АїЇеха 555 (МоїІесціаг Ргобе5). Контролі можуть включати сторонні ІДс1 антитіла людини (5ідта), а також тільки вторинне антитіло, і повинні давати негативні результати.
Приклад 6.
Забарвлення В-амілоїдних бляшок іп ммо за допомогою біспецифічного антитіла, запропонованого в даному винаході, на моделі хворобі Альцгеймера у мишей
Біспецифічне антитіло можна досліджувати на мишах, трансгенних за АРР/РБ52, мишачій моделі амілоїдозу, асоційованого з БА (Кіспагаз, У. Меиго5сіепсе, 23 (2003) 8989-9003), за здатністю до імунного забарвлення р-амілоїдних бляшок іп мімо. Це дозволяє оцінювати ступінь проникнення в головний мозок і зв'язування з В-амілоїдними бляшками. Злитий поліпептид можна вводити в різних дозуваннях у порівнянні з голим моноклональним антитілом до АВ, через б діб вводити тварині фосфатно-сольовий буферний розчин, заморожувати головний мозок на сухому льоду і готувати для виготовлення зрізів.
Наявність антитіл, зв'язаних з В-амілоїдними бляшками, можна оцінювати методом непрямої флуоресценції з одним маркером, інкубуючи нефіксовані кріостатні зрізи з козиним антитілом до
Ід (Не) людини, кон'югованим з барвником АїЇеха555 (ЗАН555) (МоїІесцшіаг Ргобе5), в концентрації 15 мкг/мл протягом 1 години при кімнатній температурі. Контр-забарвлення амілоїдних бляшок можна здійснювати шляхом інкубації з ВАР-2, мишиним моноклональним антитілом до АД, кон'югованим з АЇІеха 488 в концентрації 0,5 мкг/мл протягом 1 години при кімнатній температурі. Слайди вміщують у заливальне середовище (53023 БВако) і візуалізують бо за допомогою конфокальної лазерної мікроскопії.
Не дивлячись на те, що даний винахід був описаний в деяких деталях за допомогою ілюстрацій і прикладів з метою виключення двозначного тлумачення, описи і приклади не повинні розглядатися як вичерпні. Описи усіх патентів і наукових публікацій, процитованих в даному документі, явним чином включені у всій повноті шляхом посилань.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 РЕ. Нойтапп-і а Косне АС «120» БІСПЕЦИФІЧНІ АНТИТІЛА ДО ЛЮДСЬКОГО БЕТА-АМІЛОЇДУ/ЛЮДСЬКОГО РЕЦЕПТОРА
ТРАНСФЕРИНУ ТА СПОСОБИ ЇХ ЗАСТОСУВАННЯ
«1305 РЗЗ3106-ЖО «1505 ЕР 15188064.8 -1515 2015-10-02 -1605» 22 «170» РаїепіНп мегвзіоп 3.5 -2105 1 «2115 215 «2125» ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0015-ІС1 -4005 1
Азр Іе Маї І єи Тниг Сп Зег Рго Аа ТНг І єи 5ег Гей Зег Рго Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тиг ГГ еи Зег Суз Агу Аїа 5ег Сіп Зег Ма! 5ег Зег Зег 20 25 Зо
ТугГеи Аа Тгр Туг Сп Сіп Гуз Рго Сну Сп Аа Рго Аго І еи Гей 35 40 45
Пе Туг Спу Аа 5ег Зег Агу Аа Тниг Сіпу Маї Рго Аа Агу Рпе 5ег 50 55 бо ау бег Спу Зег Спу ТНг Азр Рне ТНг І єи Ти Пе 5ег 5ег І єи Спи 65 70 75 80
Рго Си Авр Ріє Аа Тнг Туг Туг Суз І ви Сп Пе Туг Авп Меї Рго 85 90 95
Пе Тиг Рпе Стпу Сип Спу ТАг Гуз Ма! Спи Пе Гуз Агу Тиг Маї Аа 100 105 110
Аа Рго 5ег Маї РНе Іе РНе Рго Рго 5ег Азр Аг Гуз І еи Гуз 5ег 115 120 125
Сіу ТНг Аа 5ег Маї Ма! Суз І еи І еи Авп Авп РНе Туг Рго Ага Си 130 135 140
Аа І уз Ма! Сіп Тгр Гуз Маї Азр Авп Аа І еи Сп бег Сіу Авп 5ег 145 150 155 160
Сп Сім бег Ма! Тиг Спи Сп Авр 5ег Гуз Авр 5ег ТНиг Туг 5ег І єи 165 170 175 зег Зег ТАг І еи ТНг Геи Зег І уз Аіа Азр Туг Сім Гуз Ніз ГІ уз Маї 180 185 190
Туг Аіа Суз Спи Маї Тниг Ні Сп Сіу Геи 5ег Зег Рго Ма! Тнг Гуз 195 200 205
Зег Рпє Азп Аг Сіу Сіи Суз 210 215 -2105 2 «2115» 455 «2125» ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0015-НС1 «4005 2
Сп Маї Сім І єи Маї Спи Зег Сіу Спу Спу Гей Маї Сій Рго Спіу Спу 1 5 10 15 зег І ви Аго І єи 5ег Суз Аїа Аа 5ег Спіу Рпе ТНг Рне Зег Зег Туг бо 20 25 Зо
Зб
Аа Меї 5ег Тгр Маї Ага Сп Айа Рго Сіу Гуз С1пу І еи Сім Тр Маї 35 40 45 зЗег Аа Пе Авп Аа 5ег Спу Тнг Ага Тнг Туг Туг АІа Ар 5ег Маї 50 55 60
Гуз Спу Ага Ре ТНг Пе 5ег Ага Авр Авп з5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп з5ег І еи Аг Аїа Спи Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суб 85 90 95
Аа Аго Су Гуз СПу Авп ТНг Нів Гуз Рго Туг Спу Туг Маї Аг Туг 100 105 110
Рпе Азр Маї Ттр Спу СіІп СПУ ТНг ГГ еи Маї Тнг Маї Зег 5ег Аа Зег 115 120 125
ТАг Гуз Сіу Ро 5ег Маї РНе Рго І єи Аа Рго 5ег 5ег І уз 5ег ТНг 130 135 140
Зег Спу Счіу Тниг Айїа Аа ГІ ви Стпу Суз І еи Маї Спи Авр Туг РНе Рго 145 150 155 160
Сім Рго Маї Тнг Маї 5ег Ттр Азп 5ег Сіу Аа ГГ еи Тнг Зег Спу Маї 165 170 175
Ні Тнг Рне Рго Аїа Маї І єи Сп бег Зег Су І єи Туг Зег І ей Бег 180 185 190 зег Маї Маї Тниг Маї Рго Зег Зег Зег І еи СПу Тиг Сп Тиг Тут Пе 195 200 205
Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Авр Си І уз Маї 210 215 220
Спи Рго Гуз Зег Суз Авр І уз ТНиг Ні Тниг Сув Рго Рго Суз Рго Аїа 225 230 235 240
Рго Си І еи Ї єи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи РНе Рго Рго Гуз Рго 245 250 255
Гуз А5р ТАг ГГ еи Ме! Пе 5ег Ага ТАг Рго Сім Ма! Тнг Суз Маї Маї 260 265 270
Маї Авр Маї 5ег Ні Сім Авр Рго Сім Маї Гуз РНе Авп Тгр Туг Маї 275 280 285
Азр Стпу Ма! Спи Маї Ніз Авп Аа Гуз Тнг Гуз Рго Агу Си См Сп 290 295 00 /Туг Авп бег ТАг Туг Ага Маї Маї Зег Ма! І еи Тнг Маї І єи Нів Сип 305 з10 315 з20
Азр Тр Геи Авп сту Гуз Спи Туг Гуз Суз Гуз Ма! Зег Авп Гуз Аа 325 330 335
І еи Рго Айїа Рго Пе Спи Гув Тнг Пе 5ег Гуз Аа Гуз СПу Сіп Рго 340 345 350
Аг Си Рго Сп Маї Сув ТНг І еи Рго Рго Зег Агу Авр Сім Геи ТНг 355 360 365
Гуз Азп СіІп Маї бег І єи бег Суз Аа Ма! Гуз Спу РНе Туг Ро 5ег 370 375 380
Ав5р ІІе Аа Маї Сім Ттр Спи Зег Авп Спу Сіп Рго Спи Авп Авп Туг 385 390 395 400
Гуз Тнг ТАг Рго Рго Маї І еи Авр 5ег Авр Сіу Зег РНе РнНе І єи Маї 405 до 415 зЗег Гуз І еи Тниг Маї Авр Гуз Зег Ага Тгр Сп Сіп Спу Авзп Маї Рне 420 425 430 зЗег Суз Зег Ма! Меї Ні Сім Аа Геи Нів Авп Ні Туг Тиг Сп Гув 435 440 445 зегі ви 5ег І еи 5ег Рго Спу 450 455 «2105» З «2115 215 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» 60 «223» 0015-І 02
«4005 З
Аа Іе Сп Ї єи ТНг Сп бег Рго 5ег 5ег І ви 5ег Аіа бег Ма! СПУ 1 5 10 15
Азр Аго Ма! Тит Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп бег Пе бег 5ег Туг 20 25 Зо
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гув Рго Стпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Стпу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60 зЗег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе Зег 5ег І и Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Авп Туг Аа 5ег Зег Авп 85 90 95 маї Азр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАиг Гуз Ма! Спи Пе Гу Зег Зег 100 105 110
Аа 5ег Тиг Гуз СПУ Рго 5ег Ма! Рне Рго Г еи Аа Рго 5ег Зег Гуз 115 120 125 зЗег Тпг Зег Сіу Сіу Тнг Аа Аа І єи Сіпу Суз І єи Маї Гуз Авр Туг 130 135 140
Рпє Рго Си Рго Маї Тнг Маї Зег Тгтр Азп Зег Спу Аа Геи ТНг Зег 145 150 155 160
Стпу Маї Ні5 Тнг РНе Рго Аїа Маї І єи Сп бег бег СПУ І єи Туг Зег 165 170 175
Ї еи Зег Зег Маї Ма! Тниг Маї Рго Зег Зег Зег І еи Спу Тиг Сп ТНг 180 185 190
Туг Пе Суз Авп Маї Авп Нів Гуз Рго 5ег Авп ТНг Гуз Маї Авр ГГ ув 195 200 205
Гуз МаїЇ Спи Рго Гуз Зег Суб 210 215
Зо «210» 4 «2115 229 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» 0«223» 0015-Бар «400» 4
Сіп Зег Меї Сіп Спи Зег Спу Рго Сту Геи Маї Гуз Рго Зег Сп ТНг 1 5 10 15
Ї еи Зег І єи Тиг Суз ТАг Маї Зег Спу Рпе Зег ГГ еи 5ег Зег Туг Аа 20 25 Зо
Меї Зег Тр Іе Аго Сп Нів Рго Спу Гуз Спу Геи Спи Ттр Пе Спу 35 40 45
Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тгр Аа Гуз 5ег 50 55 60
Агу Маї Тиг Пе Зег Гуз ТНг Зег ТНг Тниг Маї 5ег І еи Гуз І еи 5ег 65 70 75 80 зЗег Ма! Тниг Аа Ага Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аго Аг9 Туг 85 90 95
Сіу Тнг Зег Туг Рго Ар Туг Спу Авр Аа 5ег Сіу РНе Азвр Ріо Ттр 100 105 110
Спу Сип Счпу ТАг Гей Маї Тнг Ма! бЗег 5ег Аа 5ег Маї Аа Аа Рго 115 120 125 зЗег Ма! Ріє ЇІе Рпє Рго Рго 5ег Авр Си Сп І еи Гув 5ег СПУ ТНг 130 135 140
Аа бег Маї МаїЇ Суз І еи І еи Авп Авзп РНе Туг Рго Ага Сти Аїа ГГ ув 145 150 155 160 маї Сіп Тер Гуз Маї Авр Авзп Аа І єи Сп Зег Спіу Авп 5ег Сп Спи 165 170 175 зЗег Ма! Тиг Спи Сп Авр 5ег Гуз Авр 5ег Тпг Туг Зег І ви Зег Зег бо 180 185 190
Зв
ТигГеи Тит ем 5ег Гуз Аа Авр Туг Сім Гуз Ніз Гуз Маї Туг Аа 195 200 205
Суз Сіи Маї Тниг Ні Сип Спу І еи Зег 5ег Рго Ма! Тниг Гуз Зег Рпе 210 215 220
Ав5п Агу Сіу Сім Сувз 225 «2105» 5 «2115 42 «2125 ПРТ «213» Ното зарієп5 «4005» 5
Азр Аа Спи Рнє Ага Ні Авр 5ег Сіпу Туг Сім Маї Нів Ні Сіп ГГ ув 1 5 10 15
Ї еи Маї Рне Рпе Аїа Си Авр Маї Спу 5ег Авп Гуз Су Аїйа Іе Пе зо
СУ Г єи Меї Маї Спу Спу Маї Ма! Пе Аа 35 40 «210» 6 «2115 215 20 «2125» ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0012-ІС1 «-4005» 6 25 А5р Іе Ма! І єи Тиг Сп 5ег Рго Аа ТНг І єи 5ег І еи Зег Рго Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тиг ГГ еи Зег Суз Агу Аїа 5ег Сіп Зег Ма! Зег Зег Зег 20 25 Зо
ТугГеи Аа Тгр Туг Сп Сіп Гуз Рго Спу Сп Аа Рго Аго Геи І еи
Пе Туг Спу Аа 5ег Зег Агу Аа Тниг Сіпу Маї Рго Аа Агу Рпе 5ег 60
Сіу Зег Сіу Зег Су Тиг Авр Рне Тнг ГГ єи Тнг Пе Зег 5ег Гей Си 65 70 75 80 35 Рго Си Авр Ріє Аа Тнг Туг Туг Суз І ви Сп Пе Туг Авп Меї Рго 85 90 95
Пе Тиг Ре Стпу Сип Спу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гуз Агу Тнг Маї Аіа 100 105 110
Аа Рго 5ег Маї РНе Іе РНе Рго Рго 5ег Азр Аг Гуз І еи Гуз 5ег 40 115 120 125
Сіу ТНг Аа 5ег Маї Ма! Суз І ви Г еи Авп Авзп РНе Туг Рго Ага Сі 130 135 140
Аа Гуз Маї Сіп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І єи Сп Зег СПу Авп 5ег 145 150 155 160 45 ап Спи Бег Ма! Тиг Спи Сп Авр Зег Гуз Азр Бег ТНиг Туг Зег Гей 165 170 175 зег Зег ТАг І еи ТНг Геи Зег І уз Аіа Азр Туг Сім Гуз Ніз ГІ уз Маї 180 185 190
Туг Аіа Суз Спи Маї ТНиг Нів СПп Спу Геи Зег Зег Рго Маї Тнг Гуз 50 195 200 205
Зег Рпє Азп Аг Сіу Сіи Суз 210 215 -2105 7 «2115 455 55 «2125» ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0012-НС1 «4005 7 60
Сіп Ма! Спи Г еи Ма! Спи Зег Сіу Сіу Спу Геи Маї Сп Рго СпПу Спу 1 5 10 15 зег І ви Аго І єи 5ег Суз Аїа Аа 5ег Спіу Рпе ТНг Рне Зег Зег Туг 20 25 Зо
Аа Меї 5ег Тгр Маї Ага Сп Аїа Рго Спу Гуз Спу Геи Спи Тер Маї 35 40 45 зЗег Аа Пе Авп Аа 5ег Спу Тнг Ага Тнг Туг Туг АІа Ар 5ег Маї 50 55 60
Гуз Спіу Ага Ре Тнг Пе 5ег Ага Авр Авп з5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг (65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп з5ег І еи Аг Аїа Спи Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суб 85 90 95
Аа Аго Су Гуз СПу Авп ТНг Нів Гуз Рго Туг Спу Туг Маї Аг Туг 100 105 110
РНе Азр Маї Ттр Сіпу Сіп СПУ ТНг І єи Маї Тнг Маї Зег 5ег Аа 5ег 115 120 125
ТАг Гуз Сіу Ро 5ег Маї РНе Рго І єи Аа Рго 5ег 5ег І уз 5ег ТНг 130 135 140 зЗег Сіу Сіу ТНг Аа Аїа І єи Стпу Суз І єи Маї Спи Авр Туг Ріє Рго (145 150 155 160
Сім Рго Маї Тнг Маї 5ег Ттр Азп 5ег Сіу Аа ГГ еи Тнг Зег Спу Маї 165 170 175
Ні Тнг Рне Рго Аїа Маї І єи Сп бег Зег Су І єи Туг Зег І ей Бег 180 185 190
Зеї Маї Ма! Тниг Маї Рго 5ег Зег 5ег Гей Спіту Тиг Сп Тк Туг Пе 195 200 205
Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Авр Си І уз Маї 210 215 220
Сім Рго Гуз Зег Суз Авр І уз ТНиг Ні Тнг Сув Рго Рго Суз Рго АїІа 225 230 235 240
Рго Си І еи Ї єи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи РНе Рго Рго Гуз Рго 245 250 255
Гуз А5р ТАг ГГ еи Ме! Пе 5ег Ага ТАг Рго Сім Маї Тнг Суз Маї Маї 260 265 270
Маї Азр Маї 5ег Ні Спи Авр Рго Си Ма! Гуз РНе Авзп Тр Туг Маї 275 280 285
Азр Стпу Ма! Спи Маї Ніз Авп Аа Гуз Тниг Гуз Рго Агу Сім Си Сп 290 295 00
Туг Авп 5ег ТНиг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! Геи Тиг Ма! І еи Нів Сип 305 з10 315 320
Азр Тр Геи Авп сту Гуз Спи Туг Гуз Суз Гуз Ма! Зег Авзп Гуз Аїа 325 330 335
І еи Рго Айїа Рго Пе Спи Гув Тнг Пе 5ег Гуз Аа Гуз СПу Сіп Рго 340 345 350
Агу Си Рго Сіп Ма! Суз ТНг І єи Рго Рго Зег Агу Авр Си Геи ТНг 355 360 365
Гуз Азп СіІп Маї бег І єи бег Суз Аа Ма! Гуз Спу РНе Туг Ро 5ег 370 375 380
Азр Іе Аїа Маї Сіи Тгтр СіПм Зег Азп Спу Сп Рго Спи Авп Авп Туг 385 390 395 400
Гуз Тнг ТАг Рго Рго Маї І еи Авр 5ег Авр Сіу Зег РНе РнНе І єи Маї 405 до 415 зЗег Гуз І еи Тниг Маї Авр Гуз Зег Ага Ттр Сп Сіп Сіу Азп Маї Рпе 420 425 430
Зег Сув 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аїйа І єм Ні Авп Нів Туг Тнг ап Гув 435 440 445 зегі ви 5ег І еи 5ег Рго Спу 450 455 «210» 8 60 0о«211» 229
«2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0012-І02 «-4005» 8
Сіп Зег Меї Сіп Спи Зег Спу Рго Сту Геи Маї Гуз Рго Бег Сіп ТНг 1 5 10 15
Ї еи Зег І єи Тиг Суз ТАг Маї Зег Спу Рпе Зег ГГ еи 5ег Зег Туг Аа 20 25 Зо
Меї Зег Тр Іе Аго Сп Нів Рго Спу Гуз Спу Геи Сім Тгр Пе Спу 35 40 45
Туг Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тгр Аа Гуз 5ег 50 55 60
Аг Маї Тпг Пе Зег Гуз Тиг Зег Тиг Тнг Маї Зег І еи Гуз Геи Зег 065 70 75 80 зЗег Ма! Тниг Аа Ага Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аго Аг9 Туг 85 90 95
Сіу Тнг Зег Туг Рго Ар Туг Спу Азр Аа бег Сіу Ре Азвр Рго Ттр 100 105 110
Спу Сип Счпу ТАг Гей Маї Тнг Ма! бЗег 5ег Аа 5ег Маї Аа Аа Рго 115 120 125 зЗег Ма! Ріє ЇІе Рпє Рго Рго 5ег Авр Сім Спіп Ге Гуз Зег СПУ ТНг 130 135 140
Аа 5ег Маї Ма! Суз І єи І еи Азп Азп РнНе Туг Рго Агу Спи Аїа І ув (145 150 155 160 маї Сіп Тер Гуз Маї Авр Авзп Аа І єи Сп Зег Спу Авп 5ег Сп Спи 165 170 175 зЗег Ма! Тиг Спи Сп Авр 5ег Гуз Авр 5ег Тпг Туг Зег І ви Зег Зег 180 185 190
ТАгГеи Тнг ГГ еи Зег Гуз Аа Авр Туг Сім Гуз Ніз Гуз Маї Туг Аіа 195 200 205
Сувз Спи Маї Тнк Ні Сіп Спу І єи бег Зег Рго Ма! ТНг Гуз Зег Рпе 210 215 220
Азп Аг спу Спи Сув 225 «210» 9 -2115 688 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0012-НС2 «4005» 9
Сп Маї Сім І єи Маї Спи Зег Сіу Спу Спу Гей Маї Сій Рго Спіу Спу 1 5 10 15
Зегеи Ага Геи Зег Суз Аа Аа 5Зег Сіу Рпе Тниг Ре 5ег Зег Туг 20 25 Зо
Аа Меї 5ег Тгтр Маї Ага Сіп Аа Рго Су І уз С1пу І єи СП Тер Маї 35 40 45 зЗег Аа Пе Авп Аа бег Спу Тнг Ага Тнг Туг Туг АІа Ар 5ег Маї 50 55 60
Гуз Спіу Ага Ре Тнг Пе 5ег Ага Авр Авп з5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп 5ег І ви Агу Аа Сіи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95
Аа Аг Сіу Гуз Спіу Авп ТНг Нів Гуз Рго Туг Спу Туг Маї Аг Туг 100 105 110
Рпе Азр Маї Ттр Спу СіІп СПУ ТНг ГГ еи Маї Тнг Маї Зег 5ег Аа Зег 115 120 125
Тиг Гуз Сіпу Рго 5ег Маї Рне Рго Геи Аїа Рго 5ег Зег Гуз Зег ТИг бо 130 135 140 ді зЗег Сіу Сіу ТНг Аа Аа І єи Стпу Суз І єи Маї Спи Авр Туг Ріє Рго 145 150 155 160
Сім Рго Маї Тнг Маї 5ег Ттр Азп 5ег Сіу Аа ГГ еи Тнг Зег Спу Маї 165 170 175
Ні5 Тнг РНе Рго Аїа Маї І єи Сіп бег бег Су І єи Туг 5ег І єи Бег 180 185 190 зег Маї Маї Тниг Маї Рго Зег Зег Зег І еи СПу Тиг Сп Тиг Тут Пе 195 200 205
Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Авр Си І уз Маї 210 215 220
Сім Рго Гуз Зег Суз Авр І уз ТНиг Ні Тнг Сув Рго Рго Суз Рго АїІа 225 230 235 240
Рго Си І еи Ї єи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи РНе Рго Рго Гуз Рго 245 250 255
Гуз А5р ТАг ГГ еи Ме! Пе 5ег Ага ТАг Рго Сім Маї Тнг Суз Маї Маї 260 265 270
Маї Авр Маї 5ег Ні Сім Авр Рго Сім Маї Гуз РНе Авп Тгр Туг Маї 275 280 285
Азр Стпу Ма! Спи Маї Ніз Авп Аа Гуз Тниг Гуз Рго Агу Сім Си Сп 290 295 00
Туг Авп 5ег ТНиг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! Геи Тиг Ма! І еи Нів Сип 305 з10 315 з20
Азр Тр Геи Авп сту Гуз Спи Туг Гуз Суз Гуз Ма! Зег Авзп Гуз Аїа 325 330 335
І еи Рго Айїа Рго Пе Спи Гув Тнг Пе 5ег Гуз Аа Гуз СПу Сіп Рго 340 345 350
Аг Си Рго СіІп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Суз Агу Авр Сім Геи ТНг 355 360 365
Гуз Авп ап Маї Зег І єи Тр Суз ГІ єи Ма! Гуз Сіу Рне Туг Рго Зег 370 375 380
Азр Іе Аїа Маї Сіи Тгтр СіПм Зег Азп Спу Сп Рго Спи Авп Авп Туг 385 390 395 400
Гуз Тиг Тнг Рго Рго Маї І еи Авр Зег Авр Сіпу бег Рне РнНе Геи Туг 405 до 415
ЗБегГуві єи ТАг Маї Авр Гуз 5ег Аго Тр Сп Сп Спу Авп Маї Рпе 420 425 430 зЗег Суз Зег Ма! Меї Ні Сім Аа Геи Нів Авп Ні Туг Тиг Сп Гув 435 440 445 зегі ви БегІ еи 5ег Рго Спу СПу Сіу Зег Сіу Спу Спу Спу Бег Спу 450 455 460
Спіу Спу Спу Зег Сіу Спу Спу Спу Зег Аа Пе Сп ей ТАг Сп Бег 465 470 475 480
Рго Бег Зег І ви 5ег Аа 5ег Ма! Спу Ар Аго Маї Тит Пе Тиг Сувз 485 490 495
Агу Ада бег Сп 5ег Пе 5бег Зег Туг І єи Аа Тгр Туг Сип Сп Гув 500 505 510
Рго Су Гуз Аїа Рго І уз І єи І еи Пе Туг Агу Аа 5ег ТНг І еи Аа 515 520 525 зЗег Спіу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу Зег Спу Зег Спу Тиг Авр Рпе 530 535 540
ТигГеи Ти Пе Зег Зег І єи Сп Рго Сім Ар РНе Аа Тиг Туг Туг 545 550 555 560
Сув Сп Сп Авп Туг Аа 5ег Зег Авп Маї А5р Авп ТАиг Рпе Спу Спу 565 570 575
Спу ТА Гуз Маї Спи Пе Гуз Зег 5ег Аа 5ег ТНиг І уз Сіу Рго 5ег 580 585 590
Маї Рне Рго Гей Аїа Рго 5ег Зег Гуз Зег ТАг Зег Сіу Спу ТНг Аа 595 600 605
Аа І єи Спу Суз І еи Ма! Гуз Азр Туг Рнє Рго Сім Рго Маї Тниг Маї бо 610 615 620 зЗег Тр Азп 5ег Су Аа І и Тнг бег Стпу Маї Ні Тнг Рне Рго Аїа 625 630 635 640 маї Геи СіІп Зег Зег Спу І еи Туг Зег І еи 5ег Зег Маї Ма! Тнг Маї 645 650 655
Рго бег Зег ЗегІ еи Спу Тиг Сип Тк Тут Пе Суз Авп Маї Авп Нів 660 665 670
Гуз Ро 5ег Азп ТНг Гуз Маї Азр І уз Гуз Ма! Сім Рго І уз бег Суб 675 680 685 2105» 10 «2115 702 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0015-НС2 «4005» 10
Сіп Ма! Спи Г еи Ма! Спи Зег Сіу Сіу Спу Геи Маї Сп Рго СпПу Спу 1 5 10 15 зег І ви Аго І єи 5ег Суз Аїа Аа 5ег Спіу Рпе ТНг Рне Зег Зег Туг
Зо 20 Аа Меї 5ег Тгр Маї Агу Сіп Аїа Рго Сіу Гуз Спу І еи Спи Тр Маї зЗег Аа Пе Авп Аа 5ег Спу Тнг Ага Тнг Туг Туг АІа Ар 5ег Маї 60
Гуз Спіу Ага Ре Тнг Пе 5ег Ага Авр Авп з5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг 25 (65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп з5ег І еи Аг Аїа Спи Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суб 85 90 95
Аа Аго Су Гуз СПу Авп ТНг Нів Гуз Рго Туг Спу Туг Маї Аг Туг 100 105 110
Зо РНе Азр Маї Ттр Сіпу Сіп СПУ ТНг І єи Маї Тнг Маї Зег 5ег Аа 5ег 115 120 125
ТАг Гуз Сіу Ро 5ег Маї РНе Рго І єи Аа Рго 5ег 5ег І уз 5ег ТНг 130 135 140 зЗег Сіу Сіу ТНг Аа Аїа І єи Стпу Суз І єи Маї Спи Авр Туг Ріє Рго 35 145 150 155 160
Сім Рго Маї Тнг Маї 5ег Ттр Азп 5ег Сіу Аа ГГ еи Тнг Зег Спу Маї 165 170 175
Ні Тнг Рне Рго Аїа Маї І єи Сп бег Зег Су І єи Туг Зег І ей Бег 180 185 190 40 зе Маї Ма! Тниг Маї Рго 5ег Зег 5ег Гей Спіту Тиг Сп Тк Туг Пе 195 200 205
Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Авр Си І уз Маї 210 215 220
Сім Рго Гуз Зег Суз Авр І уз ТНиг Ні Тнг Сув Рго Рго Суз Рго АїІа 45 ДЦ225 230 235 240
Рго Си І еи Ї єи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи РНе Рго Рго Гуз Рго 245 250 255
Гуз А5р ТАг ГГ еи Ме! Пе 5ег Ага ТАг Рго Сім Маї Тнг Суз Маї Маї 260 265 270 50 Маї Азр Маї 5ег Ні Спи Авр Рго Спи Ма! Гуз РНе Авзп Тр Туг Маї 275 280 285
Азр Стпу Ма! Спи Маї Ніз Авп Аа Гуз Тниг Гуз Рго Агу Сім С1и Сп 290 295 00
Туг Авп 5ег ТНиг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! Геи Тиг Ма! І еи Нів Сип 55 305 з10 315 з20
Азр Тр Геи Авп сту Гуз Спи Туг Гуз Суз ГГ уз Ма! Зег Авп Гуз Аа 325 330 335
І еи Рго Айїа Рго Пе Спи Гув Тнг Пе 5ег Гуз Аа Гуз СПу Сіп Рго 340 345 350 60
Аг Си Рго СіІп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Суз Агу Авр Си Гей ТНг 355 360 365
Гуз Авп ап Маї Зег І єи Тр Суз ГІ єи Ма! Гуз Сіу Рне Туг Рго Зег 370 375 380
А5р ІІе Аа Ма! Сім Ттр Спи бег Авп Сіпу Сп Рго Спи Авп Авп Туг 385 390 395 400
Гуз Тиг Тнг Рго Рго Маї І еи Авр Зег Авр Сіпу бег Рне РнНе Геи Туг 405 до 415 зЗег Гуз І еи Тниг Маї Авр Гуз Зег Ага Ттр Сп Сіп Спу Авп Маї Рне 420 425 430 зЗег Суз Зег Ма! Меї Ні Сім Аа Геи Нів Авп Ні Туг Тиг Сп Гув 435 440 445 зегі ви БегІ еи 5ег Рго Спу СПу Сіу Зег Сіу Спу Спу Спу бег Спу 450 455 460 су Спу Спу Зег Сіу Спу Спу Спу бег Сп бег Меї СіІп СпПи бег Спу 465 470 475 480
Рго Сіу Гей Ма! І ув Рго бег Сп Тнг І єи Зег І ей ТНг Сувз Тнг Ма! 485 490 495 зЗег Сіу Рпе зЗег І єи Зег Зег Туг Аіа Меї 5ег Тр Іе Агу Сп Нів 500 505 510
Рго Спу Гуз Спу Геи Си Тер Пе Спу Туг Пе Тгтр Зег Спу Спу Бег 515 520 525
Тпиг Авр Туг Айа 5ег Тгр Аа Гуз 5ег Ага Ма! ТАг Пе Зег Гу ТНг 530 535 540 зе! ТП ТНг Маї Зег І єи Гуз І еи Зег Зег Маї Тнг Аа Аа Авр ТНг 545 550 555 560
Аа Ма! Туг Туг Сув Аїа Ага Аго Туг Спу ТАг Зег Туг Рго Азр Туг 565 570 575
Сіу Авр Аа бег СПу Рпе Азвр Рго Тгр Сіпу Сип Спу ТНг І еи Маї ТНг 580 585 590 маї Зег 5ег Аа 5ег Маї Аа Аа Рго 5ег Маї Рне Іе РнНе Рго Рго 595 600 605 зЗег Авр Си Сп І еи Гув Зег Спу ТНг Аїа 5Зег Маї Ма! Суз І еи ГГ еи 610 615 620
Азп Авп Ре Туг Рго Аг9 Сім Айа Гуз Маї Сип Тр Гуз Ма! Авр Авп 625 630 635 640
Аа Гей СіІп Зег Спу Авп Бег Сп Спи Бег Ма! Тиг Сім СІп Авр Бег 645 650 655
Гуз А5р 5ег Тиг Туг ЗегІ єи бег Зег ТНиг Гей ТНг Ге 5ег Гуз Аа 660 665 670
Азр Туг Сім Гуз Нів Гуз Маї Туг Аіа Суз СПи Маї ТАг Нів Спи Спу 675 680 685
Ї еи бег Зег Рго Маї ТНг Гуз бЗег Рпєе Азп Агу Сіу Спи Сув 690 695 700 «2105 11 «2115 215 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0020-ІС1 «4005 11
Азр Іе Маї І єи Тниг Сп Зег Рго Аа ТНг І єи 5ег Гей Зег Рго Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тиг ГГ еи Зег Суз Агу Аїа 5ег Сіп Зег Ма! Зег Зег Зег 20 25 Зо
ТугГеи Аа Тгр Туг Сп Сіп Гуз Рго Сну Сп Аа Рго Аго І еи Гей 35 40 45
Пе Туг Спу Аа 5ег Зег Агу Аа Тниг Сіпу Маї Рго Аа Аг Рне 5ег 50 55 60 60
Сіу Зег Сіу Зег Су Тиг А5р Ріе Тнпг ГГ єи Тнг Пе Зег 5ег І еи Си 65 70 75 80
Рго Си Авр Ріє Аа Тнг Туг Туг Суз І ви Сип Пе Туг Азп Меї Рго 85 90 95
Пе Тиг Рпе Стпу Сип Спу ТАг Гуз Ма! Спи Пе Гуз Агу Тиг Маї Аа 100 105 110
Аа Рго 5ег Маї РНе Іе РнНе Рго Рго 5ег Азр Аг І уз І єи І уз 5ег 115 120 125
Сіу ТНг Аа 5ег Маї Ма! Суз І еи І еи Авп Авп РНе Туг Рго Ага Си 130 135 140
Аа Гуз Маї Сіп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І еи Сп бЗег Сіу Авп Зег 145 150 155 160
Сп Сім бег Ма! Тиг Спи Сп Авр 5ег Гуз Авр 5ег ТНиг Туг 5ег І єи 165 170 175
Зег Бе ТНгГеи ТНг І єи Зег Гуз Аа Азвр Туг Сім Гуз Ніз Гуз Маї 180 185 190
Туг Аіа Суз Спи Маї Тниг Ні Сп Сіу Геи 5ег Зег Рго Ма! Тнг Гуз 195 200 205
Зег Рпє Азп Аг Сіу Сіи Суз 210 215 -2105 12 «2115» 457 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0020-НС1 «4005 12
Сп Маї Сім І єи Маї Спи Зег Сіу Спу Спу Гей Маї Сій Рго Спіу Спу 1 5 10 15 зЗег І ви Ага І еи 5ег Суз Аїа Аа 5ег Спіу Ре ТНиг Рне Зег Зег Туг 20 25 Зо
Аа Меї 5ег Тгтр Маї Ага Сіп Аа Рго Су І уз С1пу І єи СП Тер Маї 35 Бе Аа Пе Авп Аа 5ег СПу Тиг Аго Тиг Туг Туг Авіа Авр 5ег Маї 60
Гуз Спіу Ага Ре Тнг Пе 5ег Ага Авр Авп з5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп 5ег І ви Агу Аа Сіи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 40 85 90 95
Аа Аго Су Гуз СПу Авп ТНг Нів Гуз Рго Туг Спу Туг Маї Аг Туг 100 105 110
Рпе Азр Маї Ттр Спу СіІп СПУ ТНг ГГ еи Маї Тнг Маї Зег 5ег Аа Зег 115 120 125 45 ТАг Гуз Сіу Ро 5ег Маї РНе Рго І єи Аа Рго 5ег 5ег І уз 5ег ТНг 130 135 140 зЗег Сіу Сіу ТНг Аа Аїа І єи Стпу Суз І єи Маї Спи Авр Туг Ріє Рго 145 150 155 160
Сім Рго Маї Тнг Маї 5ег Ттр Азп 5ег Сіу Аа ГГ еи Тнг Зег Спу Маї 50 165 170 175
Ні Тнг Рне Рго Аїа Маї І єи Сп бег Зег Су І єи Туг Зег І ей Бег 180 185 190 зег Маї Маї Тниг Маї Рго Зег Зег Зег І еи СПу Тиг Сп Тиг Тут Пе 195 200 205 55 Сув Авп Маї Авп Нів Гуз Рго 5ег Авп ТНг Гуз Маї Ар Си Гуз Маї 210 215 220
Сі Рго Гуз Зег Суз Авр Гуз ТАг Ні Тиг Суз Рго Рго Суз Рго Аіа 225 230 235 240
Рго Сі І еи Геи Спіу Спу Рго Зег Ма! Ріє Геи РНе Рго Рго Гуз Рго бо 245 250 255
Гуз А5р ТАг ГГ еи Ме! Пе 5ег Ага ТАг Рго Сім Маї Тнг Суз Маї Маї 260 265 270
Маї Авр Маї 5ег Ні Сім Авр Рго Сім Маї Гуз РНе Авп Тгр Туг Маї 275 280 285
Авр Су Маї Си Маї Ні Авп Аа Гуз ТНг Гуз Рго Ага Спи СПи Сп 290 295 оо
Туг Авп 5ег ТНиг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! Геи Тиг Ма! І еи Нів Сип 305 з10 315 320
Азр Тр Геи Авп сту Гуз Спи Туг Гуз Суз Гуз Ма! Зег Авзп Гуз Аїа 325 330 335
І еи Рго Айїа Рго Пе Спи Гув Тнг Пе 5ег Гуз Аа Гуз СПу Сіп Рго 340 345 350
Аг Си Рго Сп Маї Сув ТНг І еи Рго Рго Зег Агу Авр Си І єи ТНг 355 360 365
Гуз Авп ап Маї Зег І єи 5ег Суз Аа Ма! Гуз Спу Ре Туг Рго Зег 370 375 380
Азр Іе Аїа Маї Сіи Тгтр СіПм Зег Азп Спу Сп Рго Спи Авп Авп Туг 385 390 395 400
Гуз Тнг ТАг Рго Рго Маї І еи Авр 5ег Авр Сіу Зег РНе РнНе І єи Маї 405 до 415 зЗег Гуз І еи Тниг Маї Авр Гуз Зег Ага Ттр Сп Сіп Сіу Азп Маї Рпе 420 425 430 зЗег Суз Зег Ма! Меї Ні Сім Аа Геи Нів Авп Ні Туг Тиг Сп Гув 435 440 445
Зегієизегіеи вег Рго Сіу Гуз Спу 450 455 «2105 13 «2115» 947 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0020-НС2 «4005 13
Сіп Ма! Спи Г еи Ма! Спи Зег Сіу Сіу Спу Геи Маї Сп Рго СпПу Спу (1 5 10 15 зег І ви Аго І єи 5ег Суз Аїа Аа 5ег Сіу Рпе Тнг Ріє 5ег Зег Туг 20 25 Зо
Аа Меї 5ег Тгр Маї Ага Сп Айа Рго Сіу Гуз С1пу І еи Сім Тр Маї 35 40 45
Зег Аа Іе Авп Аа 5ег СПу Тиг Аг Тиг Туг Туг Аіа Ар 5ег Маї 50 55 60
Гуз Спіу Ага Ре Тнг Пе 5ег Ага Авр Авп з5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп з5ег І еи Аг Аїа Спи Ар ТАг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Аа Аго Су Гуз СПу Авп ТНг Нів Гуз Рго Туг Спу Туг Маї Аг Туг 100 105 110
Рпе Азр Маї Ттр Спу СіІп Спу ТНг Геи Маї Тниг Ма! Зег Зег Аа 5ег 115 120 125
ТАг Гуз Сіу Ро 5ег Маї РНе Рго І єи Аа Рго 5ег 5ег І уз 5ег ТНг 130 135 140 зЗег Сіу Сіу ТНг Аа Аа І єи Сіу Суз І єи Маї Спи Авр Туг Рпе Рго 145 150 155 160
Сім Рго Маї Тнг Маї 5ег Ттр Азп 5ег Сіу Аа ГГ еи Тнг Зег Спу Маї 165 170 175
Ні Тнг Рне Рго Аїа Маї І ви Сп бег Зег Су І єи Туг Зег І єи 5ег 180 185 190 зег Маї Маї Тниг Маї Рго Зег Зег Зег І еи СПу Тиг Сп Тиг Тут Пе 195 200 205 60
Сув Авп Маї Авп Нізв Гуз Рго 5ег Авп ТНг Гуз Маї Азр Си І уз Маї 210 215 220
Сім Рго Гуз Зег Суз Авр І уз ТНиг Ні Тнг Сув Рго Рго Суз Рго АїІа 225 230 235 240
Рго Си І єи Ї еи Спу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи РНе Рго Рго ГІ уз Рго 245 250 255
Гуз А5р ТАг ГГ еи Ме! Пе 5ег Ага ТАг Рго Сім Маї Тнг Суз Маї Маї 260 265 270
Маї Авр Маї 5ег Ні Сім Авр Рго Сім Маї Гуз РНе Авп Тгр Туг Маї 275 280 285
Азр Стпу Ма! Спи Маї Ніз Авп Аа Гуз Тниг Гуз Рго Агу Сім Си Сп 290 295 00
Туг Авп 5ег ТНиг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! Геи Тиг Ма! І еи Нів Сип 305 з10 315 320
Авр Пр ви Авп Су Гуз Сім Туг Гуз Суз ГГ ув Маї Зег Авп Гуз Аа 325 330 335
І еи Рго Айїа Рго Пе Спи Гув Тнг Пе 5ег Гуз Аа Гуз СПу Сіп Рго 340 345 350
Аг Си Рго СіІп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Суз Агу Авр Сім Геи ТНг 355 360 365
Гуз Авп ап Маї Зег І єи Тр Суз ГІ єи Ма! Гуз Сіу Рне Туг Рго Зег 370 375 380
Азр Іе Аїа Маї Сіи Тгтр СіПм Зег Азп Спу Сп Рго Спи Авп Авп Туг 385 390 395 400
Гуз Тиг ТАг Рго Рго Маї І еи Авр 5ег Авр Сіу Зег РНе РнНе І єи Туг 405 до 415 зЗег Гуз І еи Тниг Маї Авр Гуз Зег Ага Ттр Сп Сіп Сіу Азп Маї Рпе 420 425 430 зЗег Суз Зег Ма! Меї Ні Сім Аа Геи Нів Авп Ні Туг Тиг Сп Гув 435 440 445 зегі ви БегІ еи 5ег Рго Спу СПу Сіу Зег Сіу Спу Спу Спу Бег Спу 450 455 460
Спіу Спу Спу Зег Сіу Спу Спу Спу Зег Аа Пе Сп ей ТАг Сп Бег 465 470 475 480
Рго Бег ЗегіІ єи 5ег Аа бег Ма! Спу А5р Ага Маї Ти Пе Тиг Сув 485 490 495
Аг Аа 5ег Сп 5ег Пе Зег 5ег Туг І ви Аа Тгтр Туг Сп Сіп Гуз 500 505 510
Рго Сту Гуз Аїа Рго Гуз І еи І еи Пе Туг Агу Аїа 5ег ТНг Гей Аа 515 520 525 зЗег Спіу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу Зег Спу Зег Спу Тиг Авр Рпе 530 535 540
ТигГеи Ти Пе Зег Зег І єи Сп Рго Сім Ар РНе Аа Тиг Туг Туг 545 550 555 560
Сув Суп Сп Авп Туг Авіа 5ег Зег Азп Маї Авр Азп Тиг Рпе Спу Спу 565 570 575
Сіу Тит Гуз Маї Сім Пе Гуз Агу Тнг Маї Аа Аїа Рго 5ег Ма! Ре 580 585 590
Пе РНе Рго Рго 5Зег Авр Сім Сп Геи Гув 5ег Спу ТАг Аа 5ег Маї 595 600 605 маї Суз І еи І еи Авп Авп Рпє Туг Рго Аго Си Аїа Гуз Маї Сіп Тгтр 610 615 620
І уз Ма! Азр Авп Аа І еи Сп бег Спу Азп бег Сп Спи бег Ма! ТНг 625 630 635 640
Сім Сп Авр 5ег І уз Азр 5ег ТНиг Туг Зег І єи Зег 5ег ТНг І ви ТНг 645 650 655
Ї еи Зег Гуз Аа Азр Туг Сім Гуз Нів Гуз Маї Туг АІа Суз Спи Маї 660 665 670
Тиг Ніз СіІп Спу Гей Зег 5ег Рго Маї Тиг Гуз 5ег РНе Авп Аг Сіу бо 675 680 685
Сіи Суз СПу Су Счу Счу Зег Сіу Чу Спу Спу Зег Сіу Спу Спу Спу 690 695 700
Зег Сіу Сіу Сіу Спу Зег Сіу Спу Сіу Спу Зег Сіу Спу Спу Счу Бег 705 710 715 720 ау сапу Сіп бег Меї СіІп Спи Зег Спу Рго Су І еи Маї Гуз Рго 5ег 725 730 735
Сіп ТигІ єи Зег ГГ еи ТАг Суз Тнг Маї Зег Спу РНе 5ег І єи Бег Зег 740 745 750
Туг Аіа Меї зег Тр Іе Ага ап Ні Рго Сіу Гуз Спу Геи Сім Ттр 755 760 765
Пе Спу Туг Пе Тгтр Зег Сіу Спу 5ег Тнг Авр Туг Аа 5ег Ттр Аіа 770 775 780
Гуз Зег Агу Ма! ТАг Пе Зег Гуз ТАг Зег Тит Тнг Маї Зег І еи Гуз 785 790 795 800
Ї еи Зег Зег Маї Тнг Аа Ага Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аг9 805 810 815
Аго Туг сапу Тиг 5ег Туг Рго Авр Туг Сіу Авр Аа 5ег СПу Рпе Ар 820 825 830
Рго Ттр Стпу Сп Спу ТНг ГГ еи Маї ТАг мМаї Бег Зег Аа 5ег ТАг Гув 835 840 845
Стпу Рго Зег Маї Рнеє Рго Гей Аа Рго 5ег 5ег І уз Зег ТНиг Зег Су 850 855 860
Сіу ТНг Аа Айа І єи Стпу Суз І єи Ма! Гуз Авр Туг Ріє Рго Сім Рго 865 870 875 880
Маї Тиг Маї Бег Ттр Авп 5ег Су Аа І єи Тиг Зег Спу Маї Ні ТНг 885 890 895
РНе Ро Аїа Маї І єи Сп бег Зег Су І єи Туг Зег І еи бег бег Маї 900 905 910 маї Тнг Маї Ро 5ег 5ег Зег І ви Спу Тнг Сп ТАг Туг Пе Сувз Авп 915 920 925 маї Авп Нів ГІ уз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз І уз Маї Спи Рго 930 935 940
Гуз Зег Сув 945 «2105» 14 «2115 215 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0024-ІС1 «4005» 14
Азр Іе Маї І єи Тниг Сп Зег Рго Аа ТНг І єи 5ег Гей Зег Рго Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тиг ГГ еи Зег Суз Агу Аїа 5ег Сіп Зег Ма! Зег Зег Зег 20 25 Зо
ТугГеи Аа Тгр Туг Сп Сіп Гуз Рго Сну Сп Аа Рго Ага І ви І ви 35 40 45
Пе Туг Спу Аа 5ег Зег Агу Аа Тниг Сіпу Маї Рго Аа Агу Рпе 5ег 60 50 ау бЗег Спу Зег Спіу Тиг Азр Рне ТНг І єи Ти Пе 5ег 5ег І еи Си 65 70 75 80
Рго Си Авр Ріє Аа Тнг Туг Туг Суз І ви Сп Пе Туг Авп Меї Рго 85 90 95
Пе Тиг Ре Стпу Сип Спу ТАг Гуз Ма! Спи Пе Гуз Агу Тнг Маї Аіа 55 100 105 110
Аа Рго 5ег Маї РНе Іе РНе Рго Рго 5ег Азр Си Сіп І ей Гуз бег 115 120 125
Сіу ТНг Аа 5ег Маї Ма! Суз ГІ еи І еи Авп Авп РНе Туг Рго Агу Сі 130 135 140 60
Аа Гуз Маї Сіп Ттр Гуз Маї Авр Авп Аа І єи Сп Зег СПу Авп 5ег 145 150 155 160
Сп Сім бег Ма! Тиг Спи Сп Авр 5ег Гуз Авр 5ег ТНг Туг 5ег І єи 165 170 175 зегЗеї ТгГеи ТНгІ єи Зег Гуз Аа Авр Туг Спи Гуз Ні Гуз Маї 180 185 190
Туг Аіа Суз Спи Маї Тниг Ні Сип Сіу Геи Зег Зег Рго Маї Тнг Гуз 195 200 205
Зег Рпє Азп Аг Сіу Сіи Суз 210 215 «2105 15 «2115 455 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0024-НС1 «4005 15
Сп Маї Сім Ї єи Маї Спи Зег Сіу Спу Спу Гей Маї Сіп Рго Спіу Спу 1 5 10 15 зЗегІ еи Ага Геи бЗег Суз Аа Аа 5ег Сіу Рне Тнг Рпе 5ег Зег Туг 20 25 Зо
Аа Меї 5ег Тр Маї Ага Сіп Аа Рго Су І уз С1пу І єи СП Тер Маї 35 40 45 зЗег Аа Пе Авп Аа 5ег Спу Тнг Ага Тнг Туг Туг АІа Ар 5ег Маї 50 55 60
Гуз Спіу Ага Ре Тнг Пе 5ег Ага Авр Авп 5ег ГГ ув Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп 5ег І ви Агу Аа Сіи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95
Аа Ага Сіу Гуз Спіу Авп ТНг Нів Гуз Рго Туг Спу Туг Маї Аг Туг 100 105 110
Рпе Азр Маї Ттр Спу СіІп СПУ ТНг ГГ еи Маї Тнг Маї Зег 5ег Аа Зег 115 120 125
Тиг Гуз Сіпу Рго 5ег Маї Рне Рго Геи Аїа Рго 5ег Зег Гуз Зег ТИг 130 135 140 зЗег Сіу Сіу ТНг Аа Айа І єи Стпу Суз І єи Маї Гуз Авр Туг Рпє Рго 145 150 155 160
Сім Рго Маї Тнг Маї 5ег Ттр Азп 5ег Сіу Аа ГГ еи Тнг Зег Спу Маї 165 170 175
Ні5 ТАг РНе Рго Аїа Маї І ви Сп Зег Зег Сіу Г еи Туг Зег І єи Зег 180 185 190 зег Маї Маї Тниг Маї Рго Зег Зег Зег І еи СПу Тиг Сп Тиг Тут Пе 195 200 205
Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз ГІ уз Маї 210 215 220
Сі Рго Гуз Зег Суз Авр Гуз ТАг Ні Тиг Суз Рго Рго Суз Рго Аіа 225 230 235 240
Рго Сі І еи Геи Спіу Спу Рго Зег Ма! Ріє Геи РНе Рго Рго Гуз Рго 245 250 255
Гуз А5р ТАг ГГ еи Ме! Пе 5ег Ага ТАг Рго Сім Маї Тнг Суз Маї Маї 260 265 270 маї Авр Маї 5ег Ніз Сім Авр Рго Спи Маї Гуз Рне Авп Тр Туг Ма! 275 280 285
Азр Стпу Ма! Спи Маї Ніз Авп Аа Гуз Тниг Гуз Рго Агу Сім Си Сп 290 295 00
Туг Авп 5ег ТНиг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! Геи Тиг Ма! І еи Нів Сип 305 з10 315 320
Азр Тр Геи Авп сту Гуз Спи Туг Гуз Суз Гуз Ма! Зег Авзп Гуз Аїа 325 330 335 60
І еи Рго Айїа Рго Пе Спи Гув Тнг Пе 5ег Гуз Аа Гуз СПу Сіп Рго 340 345 350
Аг Си Рго Сп Маї Сув ТНг І еи Рго Рго Зег Агу Авр Си І єи ТНг 355 360 365
Гув Авп Сп Маї 5ег І єи 5ег Суз Аа Маї! Гуз Спу Ре Туг Рго Зег 370 375 380
Азр Іе Аїа Маї Сіи Тгтр СіПм Зег Азп Спу Сп Рго Спи Авп Авп Туг 385 390 395 400
Гуз Тнг ТАг Рго Рго Маї І еи Авр 5ег Авр Сіу Зег РНе РнНе І єи Маї 405 410 415 зЗег Гуз І еи Тниг Маї Авр Гуз Зег Ага Ттр Сп Сіп Сіу Азп Маї Рпе 420 425 430 зЗег Суз Зег Ма! Меї Ні Сім Аа Геи Нів Авп Ні Туг Тиг Сп Гув 435 440 445
Зегеи Зег І ви Зег Рго Спу 450 455 -2105» 16 «2115 215 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0024-62 «4005» 16
Аа Пе Сіп Гей Тиг Сп Зег Рго Зег 5ег І еи Зег Аа Зег Маї Спу 11 5 10 15
Азр Аг Маї Тнг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 20 25 Зо
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гув Рго Стпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45 /Туг Ага Аа 5ег ТНг Ге Аа Зег Спу Маї Рго 5ег Агу Рне Бег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу ТНг Азр Ре ТнНг І єи Тнг Пе Зег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Авп Туг Аа 5ег Зег Авп 85 90 95 маї Авзр Авп Тпг Ре Сту Спу Спу ТАг Гуз Ма! Спи Пе Гув 5ег Зег 100 105 110
Аа 5ег Тиг Гуз СПУ Рго 5ег Ма! Рне Рго Г еи Аа Рго 5ег Зег Гуз 115 120 125
Бег Тиг Зег СПу Су ТАг Аа Аа І єи Стпу Суз ГІ еи Маї Гуз Авр Туг 130 135 140
Рпє Рго Си Рго Маї Тнг Маї Зег Тгтр Азп Зег Спу Аа Геи ТНг Зег 145 150 155 160
Стпу Маї Ні5 Тнг РНе Рго Аїа Маї І єи Сп бег Зег Спу І ей Туг Зег 165 170 175
Ї еи Зег Зег Маї Ма! Тниг Маї Рго Зег Зег Зег І еи Спу Тиг Сп ТНг 180 185 190
Туг Пе Суз Авп Маї Авп Нів Гуз Рго 5ег Авзп ТНг Гуз Маї Авр Гуз 195 200 205
Гуз МаїЇ Спи Рго Гуз Зег Суб 210 215 -2105 17 «2115 702 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 0024-НОС2 «4005» 17
Сіп Ма! Спи Г еи Маї Спи Зег Сіу Сіу Спу Геи Маї Сип Рго СПу Спу 601 5 10 15 зег І ви Аго І єи 5ег Суз Аїа Аа 5ег Спіу Рпе ТНг Рне Зег Зег Туг 20 25 Зо
Аа Меї 5ег Тгр Маї Ага Сп Аїйа Рго Сіу Гуз С1пу І еи Сім Тр Маї 35 40 45 зег Аа Пе Авп Аа 5ег Спу ТНг Аго Тиг Туг Туг Аіа Авр 5ег Маї 50 55 60
Гуз Спіу Агу Ре ТНг Пе 5ег Ага Авр Авп 5ег ГГ ув Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп з5ег І еи Аг Аїа Спи Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суб 85 90 95
Аа Аго Су Гуз СПу Авп ТНг Нів Гуз Рго Туг Спу Туг Маї Аг Туг 100 105 110
Рпе Азр Маї Ттр Спу СіІп СПУ ТНг ГГ еи Маї Тнг Маї Зег 5ег Аа Зег 115 120 125
ТАг Гуз Сіу Ро 5ег Маї РНе Рго І єи Аа Рго 5ег 5ег І уз 5ег ТНг 130 135 140 зЗег Сіу Сіу ТНг Аа Айа І єи Стпу Суз І єи Маї Гуз Авр Туг Рпє Рго 145 150 155 160
Сім Рго Маї Тнг Маї 5ег Ттр Азп 5ег Сіу Аа ГГ еи Тнг Зег Спу Маї 165 170 175
Ні Тнг Рне Рго Аїа Маї І єи Сп бег Зег Су І єи Туг Зег І ей Бег 180 185 190 зег Маї Маї Тниг Маї Рго Зег Зег Зег І еи СПу Тиг Сп Тиг Тут Пе 195 200 205
Сув Авп Маї Авп Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Азр Гуз ГІ уз Маї 210 215 220
Сім Рго Гуз Зег Суз Авр І уз ТНиг Ні Тнг Сув Рго Рго Суз Рго АїІа 225 230 235 240
Рго Си І еи Ї єи Спіу Спу Рго Зег Маї Рнеє І єи РНе Рго Рго Гуз Рго 245 250 255
Гуз А5р ТАг ГГ еи Ме! Пе 5ег Ага ТАг Рго Сім Маї Тнг Суз Маї Маї 260 265 270
Маї Авр Маї 5ег Ні Сім Авр Рго Сім Маї Гуз РНе Авп Тгр Туг Маї 275 280 285
А5р аїу Маї Сіи Маї Ні Авп Аїа Гуз ТНг Гуз Рго Ага Спи СПи Сп 290 295 00
Туг Авп 5ег ТНиг Туг Агу Маї Маї Зег Ма! Геи Тиг Ма! І еи Нів Сип 305 з10 315 320
Азр Тр Геи Авп сту Гуз Спи Туг Гуз Суз Гуз Ма! Зег Авзп Гуз Аїа 325 330 335
І еи Рго Айїа Рго Пе Спи Гув Тнг Пе 5ег Гуз Аа Гуз СПу Сіп Рго 340 345 350
Аг Си Рго СіІп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго Суз Агу Авр Сім Геи ТНг 355 360 365
Гуз Авп ап Маї Зег І єи Тр Суз ГІ єи Ма! Гуз Сіу Рне Туг Рго Зег 370 375 380
Азр Іе Аїа Маї Сіи Тгтр СіПм Зег Азп Спу Сп Рго Спи Авп Авп Туг 385 390 395 400
Гуз Тиг Тнг Рго Рго Маї І еи Авр Зег Авр Сіпу бег Рне РнНе Геи Туг 4о5 410 415 зЗег Гуз І еи Тниг Маї Авр Гуз Зег Ага Ттр Сп Сіп Сіу Азп Маї Рпе 420 425 430 зЗег Суз Зег Ма! Меї Ні Сім Аа Геи Нів Авп Ні Туг Тиг Сп Гув 435 440 445
Зегеи Зегі ви Зег Рго Сіу Спчу СПу Зег Сіу Спу пу Спу Зег СПУ 450 455 460
Спіу Сіу Спу Зег Сіу Спу Спу Спіу Зег Сіп Зег Меї СІп Спи Зег Спу 465 470 475 480
Рго Сіу Геи Ма! І ув Рго бег Сп ТНг І єи 5ег І єи Тнг Сувз ТНг Маї бо 485 490 495 зЗег Сіу Рпе зЗег І єи Зег Зег Туг Аіа Меї 5ег Тр Іе Агу Сп Нів 500 505 510
Рго Спу Гуз Спу Геи Си Тер Пе Сіу Тук Пе Тер Зег Сіу Сіу Зег 515 520 525
ТАгАвр Тут Аа 5ег Тр Аа Гуз Зег Агу Маї Тниг Пе 5ег Гув ТНг 530 535 540 зег Тпг Тнг Маї 5ег Геи Гуз І єи Зег 5ег Маї ТНг Ага Аа Ар ТНг 545 550 555 560
Аа Ма! Туг Туг Сув Аїа Ага Аго Туг Спу ТАг Зег Туг Рго Азр Туг 565 570 575
Сіу Авр Аа бег СПу Рпе Авр Рго Ттр Спу Сип Спу Тиг Геи Маї Тниг 580 585 590 маї Зег 5ег Аа 5ег Маї Аа Аа Рго 5ег Маї Рне Іе РнНе Рго Рго 595 600 605
Бег Авр Си Сп Ї ей ГГ ув бег Спу ТНг Ада 5ег Маї Ма! Сувз І ей І єи 610 615 620
Азп Авп Ре Туг Рго Аг9 Сім Айа Гуз Маї Сип Тр Гуз Ма! Авр Авп 625 630 635 640
Аа Гей СіІп Зег Сіу Авп Бег Сп Спи Бег Ма! Тиг Спи СПІп Авр Бег 645 650 655
Гуз А5р 5ег Тиг Туг ЗегІ єи бег Зег ТНигГеи ТНг Геи 5ег Гуз Аа 660 665 670
Азр Туг Сім Гуз Нів Гуз Маї Туг Аіа Суз СПи Маї ТАг Нів Сп Спу 675 680 685
Ї еи бег Зег Рго Маї ТНг Гуз бЗег Рпєе Азп Агу Сіу Спи Сув 690 695 700 -2105» 18 «2115» 126 «2125 ПРТ 00 «213» Ното 5арієпо «4005» 18
Сп Маї Сім І єи Маї Спи Зег Сіу Спу Спу Гей Маї Сій Рго Спіу Спу 1 5 10 15 зЗег І ви Ага І еи 5ег Суз Аїа Аа 5ег Спіу Ре ТНиг Рне Зег Зег Туг 20 25 Зо
Аа Меї 5ег Тгтр Маї Ага Сіп Аа Рго Су І уз С1пу І єи СП Тер Маї 35 40 45 зЗег Аа Пе Авп Аа 5ег Спу Тнг Ага Тнг Туг Туг АІа Ар 5ег Маї 50 55 60
Гуз Спіу Ага Ре Тнг Пе 5ег Ага Авр Авп з5ег І уз Азп ТНг ГГ еи Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп 5ег І ви Агу Аа Сіи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95
Аа Аго Су Гуз СПу Авп ТНг Нів Гуз Рго Туг Спу Туг Маї Аг Туг 100 105 110
Рпе Азр Маї Ттр Спу СіІп СПУ ТНг ГГ еи Маї Тниг Маї 5ег Зег 115 120 125 2105» 19 -2115 108 0«2125» ПРТ «213» Ното зарієп5 «4005» 19
Азр Іе Маї І єи Тниг Сп Зег Рго Аа ТНг І єи 5ег Гей Зег Рго Спу 1 5 10 15
Сім Агу Аа ТНг І єи бег Суз Агу Аа 5ег Сп 5ег Ма! бег Зег 5ег 20 25 Зо
ТугГеи Аа Тгр Туг Сп Сіп Гуз Рго Сну Сп Аа Рго Аго І еи Гей 35 40 45
Пе Туг Спу Аа 5ег Зег Агу Аа Тниг Сіпу Маї Рго Аа Агу Рпе 5ег бо 50 55 60
Сіу Зег Сіу Зег Су Тиг А5р Ріе Тнпг ГГ єи Тнг Пе Зег 5ег І еи Си 65 70 75 80
Рго Си Авр Ріє Аа Тнг Туг Туг Суз І ви Сп Пе Туг Авп Меї Рго 85 90 95
Пе Тиг Рпе Стпу Сип Спу ТАг Гуз Ма! Спи Пе Гув 100 105 «-2105» 20 «2115 122 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» «223» 299-023 УН гуманізованого варіанту ОАБОа «4005» 20
Сіп Зег Меї Сіп Спи Зег Спу Рго Сту Геи Маї Гуз Рго Зег Сп ТНг 15. 1 5 10 15
Ї еи Зег І єи Тиг Суз ТАг Маї Зег Спу Рпе Зег ГГ еи 5ег Зег Туг Аа
Зо
Меї Зег Тр Іе Аго Сп Нів Рго Спу Гуз Спу Геи Спи Ттр Пе Спу 20 ТупПе Ттр Зег Сіу Спу Зег ТНг Авр Туг Аа 5ег Тр Аа Гуз Зег 60
Аго Маї Тпиг Пе Зег Гуз Тиг Зег Тиг Тнг Маї 5ег І еи Гуз І еи Зег 65 70 75 80 зЗег Ма! Тниг Аа Ага Ар Тнг Аїа Маї Туг Туг Суз Аа Аго Аг9 Туг 25 85 90 95
Сіу Тнг Зег Туг Рго Ар Туг Спу Авр Аа 5ег Сіу РНе Азвр Ріо Ттр 100 105 110
Спу Сип Спу ТАг Гей Маї Тнг Ма! Зег 5ег 115 120
Зо «2105» 21 «2115» 110 «2125 ПРТ 213» Штучна послідовність «220» 35 «223» 299-009 МІ гуманізованого варіанту ММА «4005» 21
Аа Іе Сп Ї єи ТНг Сп бег Рго 5ег 5ег І ви 5ег Аіа бег Ма! СПУ 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тнг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сп Зег Пе 5ег 5ег Туг 40 20 25 Зо
Ї еи Ага Тр Туг Сп Сп Гуз Рго Спу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Агу Аа 5ег ТНАг І єи Аа 5ег Спу Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60 45 зЗег Сіу Зег Сіу ТНиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе Зег 5ег І и Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Авп Туг Аа 5ег Зег Авп 85 90 95 маї Авр Авп Тпг Ре Стпу Спу Спу ТАиг Гуз Ма! Спи Пе Гув 50 100 105 110 -2105 22 -2115 760 «2125 ПРТ «213» Ното зарієп5 55 «400» 22
Меї Меї Авр ап Айа Агу 5ег Аа Рне 5ег Авп ГГ еи Рпе Спу Спу Спи 1 5 10 15
Рго І єи 5ег Туг ТАг Агу РНе 5ег І ви Аа Ага Сіп Маї Азр Спу А5р 20 25 Зо 60
Авп Зег Ні Ма! Сіи Меї Гуз І еи Аа Ма! Авр Спи Спи Спи Авп Аа 35 40 45
Авр Азп Авп ТНг І уз Айва Авп Маї ТНг Гуз Рго Гуз Ага Суз Зег Спу 50 55 60 зЗег Пе Суз Туг Су ТНг Пе Аа Маї! Пе Маї Рне РнНе І ви Пе Спіу 65 70 75 80
Рпе Ме! Ше Спіу Туг ГГ еи Спу Туг Сувз Гуз СПу Ма! Сім Рго Гуз ТНг 85 90 95
Сім Суз Сім Агу І єи Аа Спу ТАг Спи бег Рго Маї Агу Спи Спи Ро 100 105 110 сСіу Спи Авр Ріє Рго Аїа Айа Агу Ага ГГ еи Туг Ттр Авр Авр Геи Г ув 115 120 125
Ага Гуз І єи Зег См Гуз І еи Авр бег Тиг Азр Рпе Тнг Спу Тнг Пе 130 135 140
Гуз Геци І ви Авп Сім Авп 5ег Туг Маї Рго Агу Сім Аа Спіу бег Сп 145 150 155 160
Гуз А5р Сім Авп І єи Аа Г єи Туг Ма! Си Авп Сп Рне Агу Сім Ріе 165 170 175
Гуз Геи Зег Гуз Маї Тгр Ага Авр ап Ні РНе Маї Гуз Пе Сп Маї 180 185 190
Гуз А5р 5ег Аа Сіп Авп 5ег Маї Іе Пе Маї Азр Гуз Авп Сіу Аг 195 200 205
Ї еи Ма! Туг Гей Маї Спи Авп Рго Спу Спіу Туг Маї Аа Туг 5ег І ув 210 215 220
Аа Аа Тпг Ма! Тниг Су Гуз І єи Маї Нів Аа Авп Ріє Стпу ТНг Г ув 225 230 235 240
Гуз А5р РНе Сім Авр ГГ еи Туг ТАг Рго Маї Авп Су 5ег Пе Маї Пе 245 250 255 маї Аг Аїа Сіу Гуз Пе Тнг РНе Аїа Сти Гуз Маї АІа Авп Аа Сіи 260 265 270 зег І ви Авп Аїа Іе Спу Маї Геи Пе Туг Меї Азр Сіп Тнг Гуз Ріе 275 280 285
Рго Іе Маї Авзп Аа Сі І еи б5ег РНне РНе Су Нів Айа Ні І еи Спу 290 295 00
ТА гаїу Авр Рго Туг ТНг Рго Су РНе Рго Зег РНе Авп Ні Тнг Сп 305 з10 315 з20
Ре Рго Рго бег Агу 5ег Зег Су ГГ еи Рго Авп Іе Рго Маї Сіп ТНг 325 330 335
Пе бег Ага Айа Аа Аа Сти І уз І ей Рне Спу Авзп Меї Сім Спіу А5р 340 345 350
Сув Рго 5ег Азр Тгр Гу ТНг Авр 5ег Тиг Суз Агу Меї Маї ТАг Зег 355 360 365
Сім Бег Гуз Азп Маї Гуз І еи Тниг Маї Зег Авп Маї І єи І ув Спи Пе 370 375 380
Гуз Пе Геи Авп Пе РНе Стпу Ма! Пе Гуз Спу Рне Маї Спи Рго Авр 385 390 395 400
Ні Туг Маї Маї Маї Сіу Аїа Сіп Агу Азр Аа Тгр Сіу Рго Сіу Аа 405 до 415
Аа Гуз 5ег Спу Ма! Спу Тнг Аа І єи Геи ГІ єи Гуз І єи Аа Сіп Меї 420 425 430
Ре бег Ар Меї Маї І єи Гуз Азр Сіу РНеє Сп Рго 5ег Агу 5ег Пе 435 440 445
Пе Ре Аїа 5ег Тр Зег Аа Спіу Азр РНе Су Зег Маї Спу Аа Тиг 450 455 460 ам Прі ей Си Спіу Тугі еи 5ег Зегі ей Ніз І еи ГГ ув Аіа Рне ТНг 465 470 475 480
Туг Пе Авп І єи Авр Гуз Аа Маї І еи Спу ТНг Зег Азп РнНе Гуз Маї 485 490 495 зЗег Аа 5ег Рго І єи ГГ еи Туг Тиг Геи Пе Спи Гуз Тит Меї Сп Авп бо 500 505 510 маї Гуз Ні Рго Маї Тнг Спу Сіп Рне Геи Туг Сп Авр 5ег Авп Тр 515 520 525
Аа 5ег Гуз Маї Спи Гуз Гей Тиг Гей Авр Авзп Аа Аа РНе Рго Рпе 530 535 540
ТГеи Аа Туг Зег Спу Пе Рго Аа Маї бЗег Рпе Суз Рне Суз Сіи Авр 545 550 555 560
Тпиг Авр Туг Рго Туг І еи Спу ТАг Те Меї Авр Тиг Туг Гуз Сім І еи 565 570 575
Пе См Ага Пе Рго Сім І єи Авп Гуз Маї Аа Ага Аїа Аїа Аа Стій 580 585 590 маї Аіа Суу Сип Ріє Маї Пе Гуз Гей Тнг Ні Авр Маї Сім І еи Авп 595 600 605
Ї еи Авр Туг Сім Агу Туг Азп бег Сп І єи І єи бег Рне Маї Агу А5р 610 615 620
Ї еи Авп Сп Туг Агу Аа Авр ІПе Гуз Спи Меї Су І еи 5ег І еи Сп 625 630 635 640
Тр Геи Туг Зег Аа Ага Сіу Азр РНе РНе Ага Аїйа Тнг 5ег Ага І єи 645 650 655
Тиг Тиг Авр Рне ау Авп Аїа Сім Гуз ТНг Авр Агу Рпе Маї Меї Г ув 6бо 665 670
Гуз Геи Авп Азр Аг Маї Меї Агу Маї Сім Туг Ні РНеє І єи Бег Рго 675 680 685
Туг Маї Зег Рго Гуз Сім 5ег Рго РНе Ага Ніз Ма! Ріє Тгтр Спу Зег 690 695 700
Саму Бег Ні ТАг І єм Рго Аа І єи І еи Сім Авп І єи Гуз ГГ еи Ага Гув 705 710 715 720
Сіп Авп Авп Су Аа Рпе Авп Си ТАг ГГ еи РНе Ага Авп ап Геи Аа 725 730 735
Ї еи Аа Тниг Ттр ТАг Пе Стп Спу Аа Аа Авзп Аа Гей Бег Спу А5р 740 745 750 маї Тр Авр Пе Авр Авп Си Рпе

Claims (6)

755 760 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Біспецифічне антитіло для зв'язування людського бета-амілоїду та людського рецептора трансферину, яке містить: одне антитіло, що містить по дві пари легких ланцюгів антитіла та важких ланцюгів антитіла, де сайти зв'язування, утворені кожною парою важкого ланцюга та легкого ланцюга, специфічно зв'язуються з людським бета-амілоїдом, та один додатковий фрагмент Бар, де сайт зв'язування додаткового фрагмента Еар специфічно зв'язується з людським рецептором трансферину, причому зазначене біспецифічне антитіло складається з 5ЕО ІЮ МО: 01-03 та 5ЕО ІЮО МО: 10.
2. Антитіло за п. 1, де антитіло є моноклональним.
3. Фармацевтична композиція, яка містить антитіло за будь-яким з пп. 1, 2 і фармацевтично прийнятний носій.
4. Антитіло за будь-яким з пп. 1, 2 для застосування як лікарського засобу для лікування хвороби Альцгеймера.
5. Застосування антитіла за будь-яким з пп. 1, 2 у виготовленні лікарського засобу для лікування хвороби Альцгеймера.
6. Спосіб лікування індивідуума, що має хворобу Альцгеймера, який включає введення індивідууму ефективної кількості антитіла за будь-яким з пп. 1, 2.
UAA201804775A 2015-10-02 2016-09-30 Біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину та спосіб його застосування UA126652C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15188064 2015-10-02
PCT/EP2016/073411 WO2017055540A1 (en) 2015-10-02 2016-09-30 Bispecific anti-human a-beta/human transferrin receptor antibodies and methods of use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA126652C2 true UA126652C2 (uk) 2023-01-11

Family

ID=54252165

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201804775A UA126652C2 (uk) 2015-10-02 2016-09-30 Біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину та спосіб його застосування

Country Status (21)

Country Link
US (5) US10941205B2 (uk)
EP (1) EP3356400A1 (uk)
JP (4) JP7005487B2 (uk)
KR (2) KR20250020691A (uk)
CN (4) CN108137678B (uk)
AR (1) AR106189A1 (uk)
AU (2) AU2016333510B2 (uk)
CA (1) CA3000560A1 (uk)
CL (1) CL2018000729A1 (uk)
CO (1) CO2018002360A2 (uk)
CR (1) CR20180150A (uk)
IL (3) IL314744A (uk)
MA (1) MA43022A (uk)
MX (4) MX2018003450A (uk)
MY (1) MY194328A (uk)
PE (2) PE20211594A1 (uk)
PH (1) PH12018500709B1 (uk)
RU (1) RU2730682C1 (uk)
TW (3) TWI780680B (uk)
UA (1) UA126652C2 (uk)
WO (1) WO2017055540A1 (uk)

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9696312B2 (en) 2011-09-02 2017-07-04 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Diagnosis and treatment of cancer expressing ILT3 or ILT3 ligand
IL302486A (en) 2015-06-24 2023-06-01 Hoffmann La Roche Antibodies against the transnephrine receptor with adapted affinity
EP3325006A4 (en) 2015-07-17 2019-03-06 The Trustees of Columbia University in the City of New York METHOD FOR TREATING CD166-EXPRESSIVE CANCER
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
JP6657392B2 (ja) 2015-10-02 2020-03-04 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗ヒトｃｄ２０／ヒトトランスフェリン受容体抗体及び使用方法
PT3583120T (pt) 2017-02-17 2022-12-15 Denali Therapeutics Inc Polipeptídeos de ligação ao recetor de transferrina manipulados
SG11201908127WA (en) * 2017-03-10 2019-10-30 Hoffmann La Roche Method for producing multispecific antibodies
AU2018269498A1 (en) * 2017-05-18 2019-10-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Reduction of application-related side reaction of a therapeutic antibody
AU2018308088B2 (en) 2017-07-25 2025-05-29 Truebinding, Inc. Treating cancer by blocking the interaction of TIM-3 and its ligand
KR102826089B1 (ko) 2017-08-02 2025-06-30 스트레스마크 바이오사이언시즈 인코퍼레이티드 활성 알파 시누클레인에 결합하는 항체
JP2020530465A (ja) * 2017-08-10 2020-10-22 デナリ セラピューティクス インコーポレイテッドＤｅｎａｌｉ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ． トランスフェリン受容体結合タンパク質を使用するための、親和性に基づく方法
MX2020007389A (es) * 2018-01-10 2020-10-14 Denali Therapeutics Inc Polipéptidos de unión al receptor de transferrina y usos de estos.
KR20200118151A (ko) 2018-02-07 2020-10-14 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 치료 단백질 전달을 위한 방법 및 조성물
SG11202103334YA (en) * 2018-10-26 2021-05-28 Hoffmann La Roche Multispecific antibody screening method using recombinase mediated cassette exchange
US20230183379A1 (en) * 2018-11-20 2023-06-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Bispecific antibody targeting transferrin receptor 1 and soluble antigen
WO2020254351A1 (en) 2019-06-19 2020-12-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for the generation of a multivalent, multispecific antibody expressing cell by targeted integration of multiple expression cassettes in a defined organization
TW202128264A (zh) 2019-09-25 2021-08-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用經預測之溶離緩衝鹽濃度的陽離子層析法
CN112791078B (zh) 2019-11-13 2022-12-06 润佳（苏州）医药科技有限公司 同位素富集的3-氨基-1-丙磺酸及其衍生物的用途
IL293994A (en) 2019-12-23 2022-08-01 Denali Therapeutics Inc Progranulin variants, compositions comprising same and uses thereof
US11913945B2 (en) 2020-01-02 2024-02-27 Hoffmann-La Roche Inc. Method for determining the amount of a therapeutic antibody in the brain
US12281166B2 (en) 2020-05-26 2025-04-22 Truebinding, Inc. Methods of treating inflammatory diseases by blocking Galectin-3
CA3193479A1 (en) 2020-09-23 2022-03-31 Takashi Tsuda Adhesive composition, film-like adhesive, and multilayer film
KR20230109674A (ko) * 2020-11-16 2023-07-20 에프. 호프만-라 로슈 아게 Fab 고 만노스 당형
JP2024501662A (ja) 2020-12-22 2024-01-15 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｘｂｐ１を標的とするオリゴヌクレオチド
TW202345899A (zh) * 2022-03-11 2023-12-01 比利時商健生藥品公司 多特異性抗體及其用途(三)
US20250129144A1 (en) * 2022-03-11 2025-04-24 Janssen Pharmaceutica Nv Multispecific antibodies and uses thereof
KR20240159846A (ko) * 2022-03-11 2024-11-06 얀센 파마슈티카 엔브이 다중특이적 항체 및 이의 용도
US20250215077A1 (en) * 2022-03-28 2025-07-03 Denali Therapeutics Inc. Monovalent anti-trem2 binding molecules and methods of use thereof
KR20250048010A (ko) 2022-07-29 2025-04-07 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 변형된 트랜스페린 수용체 좌위를 포함하는 비-인간 동물
CN120865438A (zh) 2022-07-29 2025-10-31 瑞泽恩制药公司 重新靶向转铁蛋白受体1的病毒颗粒
US20240417451A1 (en) 2023-05-31 2024-12-19 Hoffmann-La Roche Inc. Therapeutic Use of Bispecific Anti-Abeta/TfR Antibodies
WO2025032070A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-a-beta protein antibodies, methods and uses thereof

Family Cites Families (306)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4666829A (en) 1985-05-15 1987-05-19 University Of California Polypeptide marker for Alzheimer's disease and its use for diagnosis
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5811310A (en) 1986-09-30 1998-09-22 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva Univ. The Alz-50 monoclonal antibody and diagnostic assay for alzheimer's disease
US6893625B1 (en) 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US5231000A (en) 1987-10-08 1993-07-27 The Mclean Hospital Antibodies to A4 amyloid peptide
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US4892538A (en) 1987-11-17 1990-01-09 Brown University Research Foundation In vivo delivery of neurotransmitters by implanted, encapsulated cells
US5283187A (en) 1987-11-17 1994-02-01 Brown University Research Foundation Cell culture-containing tubular capsule produced by co-extrusion
HUT53672A (en) 1988-02-25 1990-11-28 Gen Hospital Corp Quick immunoselective cloning process
US5506126A (en) 1988-02-25 1996-04-09 The General Hospital Corporation Rapid immunoselection cloning method
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
US4861579A (en) 1988-03-17 1989-08-29 American Cyanamid Company Suppression of B-lymphocytes in mammals by administration of anti-B-lymphocyte antibodies
FI891226A7 (fi) 1988-04-28 1989-10-29 The Board Of Trustees Of The Leland Anti-T-solun reseptorideterminantit autoimmuunisairauden hoitoon
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
CA2046909A1 (en) 1989-03-21 1990-09-22 Mark D. Howell Vaccination and methods against diseases resulting from pathogenic responses by specific t cell populations
AU652540B2 (en) 1989-07-19 1994-09-01 Xoma Corporation T cell receptor peptides as therapeutics for autoimmune and malignant disease
US5154924A (en) 1989-09-07 1992-10-13 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical agent conjugates
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
NZ236819A (en) 1990-02-03 1993-07-27 Max Planck Gesellschaft Enzymatic cleavage of fusion proteins; fusion proteins; recombinant dna and pharmaceutical compositions
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
JP2780507B2 (ja) 1991-03-29 1998-07-30 松下電器産業株式会社 内燃機関用フィルタ再生装置
EP0590058B1 (en) 1991-06-14 2003-11-26 Genentech, Inc. HUMANIZED Heregulin ANTIBODy
WO1993006217A1 (en) 1991-09-19 1993-04-01 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab')2 ANTIBODIES
JPH07509444A (ja) 1991-11-26 1995-10-19 アルカーメス・インコーポレーテツド トランスフェリンセレプター特異的抗体−神経薬又は診断薬複合体の製造法
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
AU4528493A (en) 1992-06-04 1994-01-04 Regents Of The University Of California, The In vivo gene therapy with intron-free sequence of interest
ATE191853T1 (de) 1992-07-27 2000-05-15 Us Health Zielgerichte liposome zur blut-hirne schranke
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
ES2091684T3 (es) 1992-11-13 1996-11-01 Idec Pharma Corp Aplicacion terapeutica de anticuerpos quimericos y radiomarcados contra el antigeno de diferenciacion restringida de los linfocitos b humanos para el tratamiento del linfoma de las celulas b.
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5955317A (en) 1993-01-25 1999-09-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibodies to β-amyloids or their derivatives and use thereof
WO1994017197A1 (fr) 1993-01-25 1994-08-04 Takeda Chemical Industries, Ltd. ANTICORPS DIRIGE CONTRE LE β-AMYLOIDE OU UN DERIVE DE CE DERNIER ET SON UTILISATION
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
WO1994029351A2 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Celltech Limited Antibodies
US5417972A (en) 1993-08-02 1995-05-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of killing B-cells in a complement independent and an ADCC independent manner using antibodies which specifically bind CDIM
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
US6358727B1 (en) 1993-11-08 2002-03-19 Aventis Pasteur Limited Haemophilus transferrin receptor genes
US5443953A (en) 1993-12-08 1995-08-22 Immunomedics, Inc. Preparation and use of immunoconjugates
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5910486A (en) 1994-09-06 1999-06-08 Uab Research Foundation Methods for modulating protein function in cells using, intracellular antibody homologues
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5688651A (en) 1994-12-16 1997-11-18 Ramot University Authority For Applied Research And Development Ltd. Prevention of protein aggregation
US5586553A (en) 1995-02-16 1996-12-24 Minimed Inc. Transcutaneous sensor insertion set
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US6015555A (en) 1995-05-19 2000-01-18 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates
AU5976996A (en) 1995-06-06 1996-12-24 Stemcell Therapeutics L.L.C. Glycoprotein gp105 on bl3 hematopoietic stem cells
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
MX9800684A (es) 1995-07-27 1998-04-30 Genentech Inc Formulacion de proteinas liofilizadas isotonicas estables.
DE19528388A1 (de) 1995-08-02 1997-02-06 Hans Peter Prof Dr Med Zenner Verwendung von Adamantan-Derivaten zur Behandlung von Erkrankungen des Innenohrs
CA2229043C (en) 1995-08-18 2016-06-07 Morphosys Gesellschaft Fur Proteinoptimierung Mbh Protein/(poly)peptide libraries
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US20010056066A1 (en) 1996-07-26 2001-12-27 Smithkline Beecham Corporation Method of treating immune cell mediated systemic diseases
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
DK0999853T3 (da) 1997-06-13 2003-04-22 Genentech Inc Stabiliseret antostofformulering
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
EP0994903B1 (en) 1997-06-24 2005-05-25 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
WO1999002567A2 (en) 1997-07-08 1999-01-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for producing homoconjugates of antibodies which induce growth arrest or apoptosis of tumor cells
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
US7964192B1 (en) 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
JP4460155B2 (ja) 1997-12-05 2010-05-12 ザ・スクリプス・リサーチ・インステイチユート マウス抗体のヒト化
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DE69937291T2 (de) 1998-04-02 2008-07-10 Genentech, Inc., South San Francisco Antikörpervarianten und fragmente davon
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
JP4334141B2 (ja) 1998-04-20 2009-09-30 グリカート バイオテクノロジー アクチェンゲゼルシャフト 抗体依存性細胞傷害性を改善するための抗体のグリコシル化操作
JP2002522511A (ja) 1998-08-11 2002-07-23 アイデック ファーマスーティカルズ コーポレイション 抗ｃｄ２０抗体の投与を含むｂ細胞リンパ腫の併用療法
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
ES2265693T3 (es) 1998-10-16 2007-02-16 Biogen Idec Ma Inc. Proteinas de fusion con interferon-beta y usos.
ES2543819T3 (es) 1998-11-09 2015-08-24 Biogen Inc. Tratamiento de neoplasias hematológicas asociadas con células tumorales circulantes utilizando anticuerpo quimérico dirigido contra CD20
TR200101302T2 (tr) 1998-11-09 2001-10-22 Idec Pharmaceuticals Corporation BMT yada PBSC transplantı alan hastalarda in vitro ya da in vivo temizleyici madde olarak kimerik anti-CD20 antikorunun kullanımı.
BR0008758A (pt) 1999-01-15 2001-12-04 Genentech Inc Variantes de polipeptìdeos parentais com funçãoefetora alterada, polipeptìdeos, composição ácidonucleico isolado, vetor, célula hospedeira,método para produzir uma variante depolipeptìdeo, método para o tratamento de umadesordem em mamìferos e método para produziruma região fc variante
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6897044B1 (en) 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
EP1035172A3 (en) 1999-03-12 2002-11-27 Fuji Photo Film Co., Ltd. Azomethine compound and oily magenta ink
CA2369292C (en) 1999-04-09 2010-09-21 Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. Method of modulating the activity of functional immune molecules
IL129427A0 (en) 1999-04-13 2000-02-17 Yeda Res & Dev Preparation of biologically active molecules
SE9901428D0 (sv) 1999-04-21 1999-04-21 Karolinska Innovations Ab Amphibodies
KR20020027311A (ko) 1999-05-07 2002-04-13 제넨테크, 인크. Ｂ 세포 표면 마커에 결합하는 길항물질을 이용한자가면역 질환의 치료
WO2000074718A1 (en) 1999-06-09 2000-12-14 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target b-cells
ITMI991299A1 (it) 1999-06-11 2000-12-11 Consiglio Nazionale Ricerche Uso di anticorpi contro antigeni di superficie per il trattamento della malattia trapianto contro ospite
DK1409654T3 (da) 1999-06-16 2008-12-08 Boston Biomedical Res Inst Immunologisk styring af beta-amyloid-niveauer in vivo
DE19930748C2 (de) 1999-07-02 2001-05-17 Infineon Technologies Ag Verfahren zur Herstellung von EEPROM- und DRAM-Grabenspeicherzellbereichen auf einem Chip
HK1047702A1 (zh) 1999-07-12 2003-03-07 Genentech Inc. 用与cd20结合的拮抗剂阻断对外来抗原的免疫应答
US6451284B1 (en) 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
WO2001010462A1 (en) 1999-08-11 2001-02-15 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of patients having non-hodgkins lymphoma with bone marrow involvement with anti-cd20 antibodies
AU6929100A (en) 1999-08-23 2001-03-19 Biocrystal Limited Methods and compositions for immunotherapy of b cell involvement in promotion ofa disease condition comprising multiple sclerosis
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
JP2003512821A (ja) 1999-10-04 2003-04-08 メディカゴ インコーポレイテッド 外来性遺伝子の転写調節方法
WO2001029246A1 (fr) 1999-10-19 2001-04-26 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede de production d'un polypeptide
US20020006404A1 (en) 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
WO2002004021A1 (en) 2000-07-12 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of b cell malignancies using combination of b cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
IL149500A0 (en) 1999-11-08 2002-11-10 Idec Pharma Corp Treatment of b cell malignancies using anti-cd40l antibodies in combination with anti-cd20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
US20020094335A1 (en) 1999-11-29 2002-07-18 Robert Chalifour Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
AU784312B2 (en) 1999-11-29 2006-03-09 Bellus Health (International) Limited Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
CA2395660A1 (en) 1999-12-29 2001-07-12 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
US20020127652A1 (en) 2000-02-11 2002-09-12 Schambye Hans Thalsgard Follicle stimulating hormones
EP1125905A1 (en) 2000-02-16 2001-08-22 Pepscan Systems B.V. Segment synthesis
KR100767146B1 (ko) 2000-02-24 2007-10-15 워싱톤 유니버시티 Ａβ 펩티드를 격리시키는 인간화 항체
IL151906A0 (en) 2000-03-24 2003-04-10 Chiron Corp Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma using a combination of an antibody to cd20 and interleukin-2
US20030185796A1 (en) 2000-03-24 2003-10-02 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
EP1283722A1 (en) 2000-03-31 2003-02-19 Idec Pharmaceuticals Corporation Combined use of anti-cytokine antibodies or antagonists and anti-cd20 for the treatment of b cell lymphoma
DK1272647T3 (en) 2000-04-11 2014-12-15 Genentech Inc Multivalent antibodies and uses thereof
MXPA02010507A (es) 2000-04-25 2003-05-14 Idec Pharma Corp Administracion intratecal de rituximab para el tratamiento de linfomas del sistema nervioso central.
CA2411102A1 (en) 2000-06-20 2001-12-27 Idec Pharmaceutical Corporation Cold anti-cd20 antibody/radiolabeled anti-cd22 antibody combination
US7534772B2 (en) 2000-06-22 2009-05-19 University Of Iowa Research Foundation Methods for enhancing antibody-induced cell lysis and treating cancer
WO2002002597A2 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Maxygen Aps Peptide extended glycosylated polypeptides
US20030148404A1 (en) 2000-07-27 2003-08-07 Ramot University Authority For Applied Research & Industrial Development Ltd. Peptides and substances, methods and devices using same for diagnosing and treating neurodegenerative disorders
CA2313828A1 (en) 2000-08-01 2002-02-01 Institut De Recherches Cliniques De Montreal/Ircm Post-translational processing of .beta.-secretase (bace): the pro-and transmembrane/cytosolic domains affect its cellular activity and amyloid a.beta. production
CN1592645A (zh) 2000-09-18 2005-03-09 拜奥根Idec公司 使用b细胞耗尽/免疫调节抗体组合治疗自身免疫病的联合疗法
EA013563B1 (ru) 2000-10-06 2010-06-30 Киова Хакко Кирин Ко., Лтд. Трансгенное животное, продуцирующее антитела с измененными углеводными цепями, способ получения антител и содержащее антитела лекарственное средство
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
AU2002213357A1 (en) 2000-10-20 2002-05-06 Idec Pharmaceuticals Corporation Variant igg3 rituxan r and therapeutic use thereof
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
DK1354034T3 (da) 2000-11-30 2008-03-25 Medarex Inc Transgene transchromosomale gnavere til fremstilling af humane antistoffer
PE20020574A1 (es) 2000-12-06 2002-07-02 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta
CA2436789A1 (en) 2000-12-19 2002-08-22 Palatin Technologies, Inc. Identification of target-specific folding sites in peptides and proteins
KR20030074693A (ko) 2000-12-28 2003-09-19 알투스 바이올로직스 인코포레이티드 전항체 및 이의 단편의 결정과 이의 제조 및 사용 방법
WO2002096948A2 (en) 2001-01-29 2002-12-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Engineered tetravalent antibodies and methods of use
NZ545176A (en) 2001-01-29 2008-05-30 Biogen Idec Inc Modified antibodies reactive with CD20 and methods of use
US20030103971A1 (en) 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
WO2002078766A2 (en) 2001-04-02 2002-10-10 Genentech, Inc. Combination therapy
JP2005500018A (ja) 2001-04-02 2005-01-06 アイデック ファーマスーティカルズ コーポレイション ＧｎＴＩＩＩと同時発現する組換え抗体
ES2312569T3 (es) 2001-04-30 2009-03-01 Eli Lilly And Company Anticuerpos humanizados.
ATE420114T1 (de) 2001-04-30 2009-01-15 Lilly Co Eli Humanisierte antikörper die das beta-amyloid peptid erkennen& x9;
DE10121982B4 (de) 2001-05-05 2008-01-24 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Nanopartikel aus Protein mit gekoppeltem Apolipoprotein E zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke und Verfahren zu ihrer Herstellung
WO2003061694A1 (en) 2001-05-10 2003-07-31 Seattle Genetics, Inc. Immunosuppression of the humoral immune response by anti-cd20 antibodies
AU2002315168A1 (en) 2001-06-14 2003-01-02 Intermune, Inc. Combination therapy of gamma-interferon and b cell specific antibodies
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
ATE454137T1 (de) 2001-07-25 2010-01-15 Facet Biotech Corp Stabile lyophilisierte pharmazeutische formulierung des igg-antikörpers daclizumab
CA2455365C (en) 2001-08-03 2014-07-29 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
US20040192898A1 (en) 2001-08-17 2004-09-30 Jia Audrey Yunhua Anti-abeta antibodies
ES2391905T3 (es) 2001-08-17 2012-11-30 Washington University Método de ensayo para la enfermedad de alzheimer
US20030226155A1 (en) 2001-08-30 2003-12-04 Biorexis Pharmaceutical Corporation Modified transferrin-antibody fusion proteins
JP4424987B2 (ja) 2001-09-20 2010-03-03 ボード オブ リージェンツ， ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム Ｅｌｉｓａアッセイを用いた循環する治療抗体、抗原および抗原／抗体複合体の測定
ATE430580T1 (de) 2001-10-25 2009-05-15 Genentech Inc Glycoprotein-zusammensetzungen
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
CN100522999C (zh) 2002-02-14 2009-08-05 免疫医疗公司 抗cd20抗体及其融合蛋白和使用方法
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
MY139983A (en) 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US20030180292A1 (en) 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
CN1930288B (zh) 2002-04-09 2012-08-08 协和发酵麒麟株式会社 基因组被修饰的细胞
JPWO2003085118A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物の製造方法
WO2003085119A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcϜ RECEPTOR IIIa
ES2362419T3 (es) 2002-04-09 2011-07-05 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Células con depresión o deleción de la actividad de la proteína que participa en el transporte de gdp-fucosa.
WO2003084570A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. DRUG CONTAINING ANTIBODY COMPOSITION APPROPRIATE FOR PATIENT SUFFERING FROM FcϜRIIIa POLYMORPHISM
CA2481920A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Antibody composition-containing medicament
US20030219818A1 (en) 2002-05-10 2003-11-27 Bohen Sean P. Methods and compositions for determining neoplastic disease responsiveness to antibody therapy
CA2494104A1 (en) 2002-07-31 2004-04-22 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
AR040778A1 (es) 2002-08-06 2005-04-20 Glaxo Group Ltd Anticuerpos alterados o fragmentos funcionales que se unen a mag (glicoproteina asociada a mielina).
WO2004020454A2 (en) 2002-08-30 2004-03-11 Biorexis Pharmaceutical Corporation Modified transferrin fusion proteins comprising duplicate transferrin amino or carboxy terminal domains
MXPA05003621A (es) 2002-10-09 2005-10-19 Rinat Neuroscience Corp Metodos de tratamiento de la enfermedad de alzheimer usando anticuerpos dirigidos contra el peptido beta amiloide y composiciones de los mismos.
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
WO2004035607A2 (en) 2002-10-17 2004-04-29 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
KR101186210B1 (ko) 2002-12-03 2012-10-08 블랜체트 록펠러 뉴로사이언시즈 인스티튜트 혈뇌장벽을 통과하는 물질 수송용 인공 저밀도 지단백질 운반체
PT1572744E (pt) 2002-12-16 2010-09-07 Genentech Inc Variantes de imunoglobulina e utilizações destas
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
AU2004208962B2 (en) 2003-02-10 2010-07-15 To-Bbb Holding B.V. Differentially expressed nucleic acids in the blood-brain barrier under inflammatory conditions
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
DK1610820T4 (da) 2003-04-04 2013-11-04 Genentech Inc Høj-koncentration antistof- og proteinformuleringer
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
AU2004279742A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Fused protein composition
EP1705251A4 (en) 2003-10-09 2009-10-28 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd PROCESS FOR PRODUCING ANTIBODY COMPOSITION BY RNA INHIBITION OF FUNCTION OF $ G (A) 1,6-FUCOSYLTRANSFERASE
ME01775B (me) 2003-11-05 2011-02-28 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antitijela sa povećanim afinitetom vezivanja za fc receptor i efektornom funkcijom
NZ583292A (en) 2003-11-06 2012-03-30 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
EP1701979A2 (en) 2003-12-03 2006-09-20 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
JPWO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2007-06-28 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物を含有する医薬
AU2004297616B2 (en) 2003-12-04 2008-12-18 Xencor, Inc. Methods of generating variant proteins with increased host string content and compositions thereof
EP2053062A1 (en) 2004-03-24 2009-04-29 Xencor, Inc. Immunoglobin variants outside the Fc region
CA2561686C (en) 2004-03-31 2014-12-02 Genentech, Inc. Humanized anti-tgf-beta antibodies
BR122019012028B1 (pt) 2004-04-13 2023-09-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticorpos anti-p-selectina, molécula de ácido nucléico, vetor, e composição
GB0412186D0 (en) 2004-05-28 2004-06-30 Univ Cambridge Tech Production of recombinant protein
US7572895B2 (en) 2004-06-07 2009-08-11 Raven Biotechnologies, Inc. Transferrin receptor antibodies
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
US7563443B2 (en) 2004-09-17 2009-07-21 Domantis Limited Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof
ES2579805T3 (es) 2004-09-23 2016-08-16 Genentech, Inc. Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US7697967B2 (en) 2005-12-28 2010-04-13 Abbott Diabetes Care Inc. Method and apparatus for providing analyte sensor insertion
GT200600031A (es) 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
CA2595380A1 (en) 2005-01-28 2006-08-03 Wyeth Stabilized liquid polypeptide formulations
ES2424042T3 (es) 2005-06-07 2013-09-26 Esbatech - A Novartis Company Llc Anticuerpos estables y solubles que inhiben TNF±
US8142781B2 (en) 2005-10-07 2012-03-27 Armagen Technologies, Inc. Fusion proteins for blood-brain barrier delivery
US10155816B2 (en) 2005-11-28 2018-12-18 Genmab A/S Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof
BRPI0619605B8 (pt) 2005-12-12 2021-05-25 Hoffmann La Roche composições compreendendo moléculas de anticorpos contra amilóide beta4 com glicosilação na região variável, usos das mesmas, método de preparação de uma molécula de anticorpo, e kit
DE102006013531A1 (de) 2006-03-24 2007-09-27 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Polylactid-Nanopartikel
RU2008142359A (ru) 2006-03-28 2010-05-10 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг (Ch) Композиция человеческого моноклонального антитела к igf-1r
EP2029621A2 (en) 2006-06-07 2009-03-04 Wisconsin Alumni Research Foundation Blood-brain barrier targeting antibodies
US20080070251A1 (en) 2006-06-30 2008-03-20 Kaufman Randal J Method of Producing Factor VIII Proteins by Recombinant Methods
WO2008022349A2 (en) 2006-08-18 2008-02-21 Armagen Technologies, Inc. Agents for blood-brain barrier delivery
KR101106795B1 (ko) 2006-08-31 2012-01-18 에프. 호프만-라 로슈 아게 인슐린-유사 성장 인자-ｉ의 제조 방법
US9382327B2 (en) 2006-10-10 2016-07-05 Vaccinex, Inc. Anti-CD20 antibodies and methods of use
CN101553504A (zh) 2006-12-11 2009-10-07 豪夫迈·罗氏有限公司 Aβ抗体胃肠外制剂
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN101245107B (zh) 2007-02-14 2010-10-13 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 抗人转铁蛋白受体人源抗体及其应用
US9745367B2 (en) 2007-03-23 2017-08-29 Novelmed Theraputics, Inc. Alternative pathway specific antibodies for treating arthritis
WO2008135380A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for stabilizing a protein
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
WO2009018411A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to human cd20 and method of using thereof
ES2667729T3 (es) 2007-09-26 2018-05-14 Ucb Biopharma Sprl Fusiones de anticuerpos con doble especificidad
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
WO2009126616A2 (en) 2008-04-07 2009-10-15 Zymogenetics, Inc. Thrombin activator compostions and methods of making and using the same
US20090297439A1 (en) 2008-06-02 2009-12-03 Metheresis Translational Research Sa, Anti-met monoclonal antibody, fragments and derivatives thereof for use in tumor diagnosis, corresponding compositions and kits
CA2731435A1 (en) 2008-07-21 2010-01-28 Arstasis, Inc. Devices, methods, and kits for forming tracts in tissue
US20100077498A1 (en) * 2008-09-11 2010-03-25 Pardridge William M Compositions and methods for blood-brain barrier delivery in the mouse
TW201438738A (zh) 2008-09-16 2014-10-16 Genentech Inc 治療進展型多發性硬化症之方法
CN102164960A (zh) 2008-09-26 2011-08-24 罗氏格黎卡特股份公司 双特异性抗-egfr/抗-igf-1r抗体
US20100098693A1 (en) 2008-10-07 2010-04-22 Pardridge William M Compositions and methods for blood-brain barrier delivery of organophosphatases
US20130090457A1 (en) 2008-10-31 2013-04-11 Janssen Biotech, Inc. Toll-Like Receptor 3 Antagonists for the Treatment of Metabolic and Cardiovascular Diseases
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
PE20160653A1 (es) 2009-03-05 2016-07-24 Abbvie Inc Proteinas de union a il-17
BRPI1014089A2 (pt) 2009-04-02 2016-04-19 Roche Glycart Ag anticorpos multiespecíficos que compreendem anticorpos de comprimento completo e fragmentos fab de cadeia simples
MX2011010158A (es) 2009-04-07 2011-10-17 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos anti-erbb-2/anti-c-met.
US8703132B2 (en) 2009-06-18 2014-04-22 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific, tetravalent antigen binding proteins
WO2011066371A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antibodies to il-6 and use thereof
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
FR2953841B1 (fr) 2009-12-16 2011-12-30 Centre Nat Rech Scient Anticorps diriges contre le recepteur de la transferrine et leurs utilisations pour l'immunotherapie des tumeurs qui dependent du fer
WO2011116387A1 (en) 2010-03-19 2011-09-22 Tetragenetics, Inc. Production of aglycosylated monoclonal antibodies in ciliates
EP2558494B1 (en) * 2010-04-15 2018-05-23 AbbVie Inc. Amyloid-beta binding proteins
RU2439160C1 (ru) 2010-06-25 2012-01-10 Государственное общеобразовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО РГМУ Росздрава) Способ получения моноклональных антител к аблюминальному мембранному антигену церебральных эндотелиоцитов
TW201206473A (en) 2010-08-03 2012-02-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EA034333B1 (ru) 2010-11-30 2020-01-29 Дженентек, Инк. Варианты антитела для переноса соединения через гематоэнцефалический барьер
WO2012075340A2 (en) 2010-12-01 2012-06-07 Alderbio Holdings Llc Anti-ngf compositions and use thereof
WO2012087835A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Boston Biomedical Research Institute Compositions and methods for enhancing protein folding
WO2012088247A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Medimmune, Llc Anti-c5/c5a/c5adesr antibodies and fragments
MX2013007936A (es) 2011-01-06 2013-08-09 Glaxo Group Ltd Ligandos que se unen al receptor ii del factor de crecimiento transformante-beta.
JP2014506258A (ja) 2011-01-10 2014-03-13 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッド 新規使用
AU2012222833B2 (en) 2011-03-03 2017-03-16 Zymeworks Inc. Multivalent heteromultimer scaffold design and constructs
KR20160044598A (ko) 2011-03-29 2016-04-25 로슈 글리카트 아게 항체 Fc 변이체
BR112013026306A2 (pt) 2011-04-20 2017-09-05 Roche Glycart Ag MÉTODO E CONSTRUTOS PARA A PASSAGEM DE PENDENTE DO pH DA BARREIRA SANGUE-CÉREBRO
JP5980202B2 (ja) 2011-05-09 2016-08-31 株式会社ペルセウスプロテオミクス トランスフェリン受容体を特異的に認識できる抗体
WO2013006244A1 (en) 2011-06-08 2013-01-10 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona Acting For And On Behalf Of Arizona State University Bispecific monoclonal antibody therapeutics against west nile virus with improved cns penetration
WO2013012733A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Biogen Idec Ma Inc. Heterodimeric fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto
MX2014001766A (es) 2011-08-17 2014-05-01 Genentech Inc Anticuerpos de neuregulina y sus usos.
PT2748201T (pt) 2011-08-23 2018-02-08 Roche Glycart Ag Moléculas de ligação ao antigénio biespecíficas que ativam as células t
JP5925893B2 (ja) * 2011-08-23 2016-05-25 ロシュ グリクアート アーゲー 二重特異性抗原結合分子
CA2855955A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Janssen Biotech, Inc. Toll-like receptor 3 antagonists
WO2013038156A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Ucb Pharma S.A. Neutralising antibodies to the major exotoxins tcda and tcdb of clostridium difficile
US11851476B2 (en) 2011-10-31 2023-12-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule having regulated conjugation between heavy-chain and light-chain
EP2785375B1 (en) 2011-11-28 2020-07-22 Merck Patent GmbH Anti-pd-l1 antibodies and uses thereof
TW201333040A (zh) 2012-01-06 2013-08-16 Bioalliance Cv 抗－輸鐵蛋白受器之抗體及其使用方法
RU2693264C2 (ru) 2012-02-03 2019-07-01 Ф.Хоффман-Ля Рош Аг Молекулы биспецифических антител и т-клетки, трансфецированные антигеном, и их применение в медицине
JP2015508664A (ja) 2012-02-29 2015-03-23 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ カラムでの酵素的切断
NZ626955A (en) 2012-03-08 2016-01-29 Hoffmann La Roche Abeta antibody formulation
PE20142422A1 (es) 2012-04-05 2015-01-21 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos contra tweak humana e il 17 humana y usos de los mismos
EA201491920A1 (ru) 2012-05-21 2016-03-31 Дженентек, Инк. Способы повышения безопасности транспорта через гематоэнцефалический барьер
EP2668901A1 (en) 2012-05-31 2013-12-04 Roche Diagniostics GmbH Sensor insertion assembly, sensor cartridge, and inserter
US9382329B2 (en) 2012-08-14 2016-07-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells
CA2879496C (en) 2012-08-29 2024-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Blood brain barrier shuttle
MX2015002947A (es) 2012-09-07 2015-09-23 Genentech Inc Terapia de combinacion de un anticuerpo ant-cd20 tipo ii con un inhibidor blc-2 selectivo.
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
WO2014059442A2 (en) * 2012-10-12 2014-04-17 Arizona Board Agents, A Body Corporate Of The State Of Arizona, Acting For And On Behalf Of Arizona State University Antibody based reagents that specifically recognize toxic oligomeric forms of tau
UY35148A (es) 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
KR102545617B1 (ko) 2012-11-28 2023-06-20 자임워크스 비씨 인코포레이티드 가공된 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍 및 이들의 용도
CA2890455A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Abbvie, Inc. Blood-brain barrier (bbb) penetrating dual specific binding proteins
RU2015140915A (ru) 2013-02-26 2017-04-03 Роше Гликарт Аг Биспецифические антигенсвязывающие молекулы, активирующие т-клетки
WO2014131711A1 (en) 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
US9481725B2 (en) 2013-03-14 2016-11-01 Alderbio Holdings, Llc Antibodies to HGF and compositions containing
JP2016519081A (ja) 2013-03-14 2016-06-30 バイエル・ヘルスケア・エルエルシーＢａｙｅｒ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ ＬＬＣ ヘパリンと結合体化した抗トロンビンβに対するモノクローナル抗体
US9732150B2 (en) 2013-03-14 2017-08-15 Alderbio Holdings Llc Therapeutic use of antibodies to HGF
EP2970985A1 (en) 2013-03-14 2016-01-20 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods to modify cells for therapeutic objectives
DE102013208865A1 (de) 2013-05-14 2014-11-20 Beiersdorf Ag Stabilisierte Zubereitungen mit einem Gehalt an Ascorbinsäure und Phosphationen
EP4324480A3 (en) 2013-05-20 2024-05-08 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
PE20160720A1 (es) * 2013-08-02 2016-07-28 Hoffmann La Roche Proteina de fusion terapeutica
RU2016115866A (ru) 2013-10-11 2017-11-16 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифические антитела с обменянными доменами и одинаковыми вариабельными доменами легкой цепи
BR112016009919A2 (pt) 2013-11-04 2017-12-05 Glenmark Pharmaceuticals Sa imunoglobulina hetero-dimérica ou fragmento da mesma e método para produzir in vitro uma imunoglobulina hetero-dimérica ou fragmento da mesma
HK1222803A1 (zh) 2013-11-07 2017-07-14 豪夫迈．罗氏有限公司 抗cd20抗体与btk抑制剂的组合疗法
CA2924268C (en) 2013-11-21 2021-05-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use
KR102357961B1 (ko) 2013-12-17 2022-02-08 제넨테크, 인크. 항-cd3 항체 및 이의 사용 방법
US10370692B2 (en) 2013-12-20 2019-08-06 Hoffmann-La Roche Inc. Recombinant polypeptide production methods
BR112016015589A2 (pt) 2014-01-06 2017-10-31 Hoffmann La Roche módulos de trânsito monovalentes para a barreira hematoencefálica
US9629801B2 (en) * 2014-01-10 2017-04-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Blood-brain barrier targeting antibodies
UA117289C2 (uk) * 2014-04-02 2018-07-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифічне антитіло
KR102411972B1 (ko) 2014-08-04 2022-06-23 에프. 호프만-라 로슈 아게 이중특이적 t 세포 활성화 항원 결합 분자
CN116333153A (zh) 2014-11-26 2023-06-27 森科股份有限公司 结合cd3和肿瘤抗原的异二聚体抗体
WO2016160032A1 (en) 2015-04-03 2016-10-06 Entropic Communications, Inc. Low power adc with pulsed bias
US20160297581A1 (en) 2015-04-13 2016-10-13 Aplix Inc Closable container
EA039366B1 (ru) 2015-06-24 2022-01-19 Джей Си Ар ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ КО., ЛТД. Антитело к рецептору трансферрина человека, проникающее через гематоэнцефалический барьер
CN107531788B (zh) 2015-06-24 2022-06-21 豪夫迈·罗氏有限公司 对her2和血脑屏障受体特异性的三特异性抗体及使用方法
IL302486A (en) 2015-06-24 2023-06-01 Hoffmann La Roche Antibodies against the transnephrine receptor with adapted affinity
JP6657392B2 (ja) 2015-10-02 2020-03-04 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗ヒトｃｄ２０／ヒトトランスフェリン受容体抗体及び使用方法
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
JP2017187722A (ja) 2016-04-08 2017-10-12 株式会社リコー 画像濃度検出装置及び画像形成装置
SG11201908127WA (en) 2017-03-10 2019-10-30 Hoffmann La Roche Method for producing multispecific antibodies
US20240417451A1 (en) * 2023-05-31 2024-12-19 Hoffmann-La Roche Inc. Therapeutic Use of Bispecific Anti-Abeta/TfR Antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
CN108137678B (zh) 2021-10-15
MY194328A (en) 2022-11-28
KR20180054865A (ko) 2018-05-24
AU2022271490A1 (en) 2022-12-22
US20250297025A1 (en) 2025-09-25
BR112018004733A2 (pt) 2018-09-25
CN108137678A (zh) 2018-06-08
IL257772A (en) 2018-04-30
NZ779866A (en) 2024-08-30
IL305281A (en) 2023-10-01
KR20250020691A (ko) 2025-02-11
IL257772B2 (en) 2025-01-01
CR20180150A (es) 2018-04-05
MX2022014762A (es) 2023-01-11
AU2022271490B2 (en) 2025-11-06
MX2018003450A (es) 2018-06-06
CN113827719A (zh) 2021-12-24
CN114044829B (zh) 2024-08-30
HK1255464A1 (zh) 2019-08-16
JP2020158485A (ja) 2020-10-01
PH12018500709A1 (en) 2018-10-15
US20210301030A1 (en) 2021-09-30
CL2018000729A1 (es) 2019-04-26
NZ740980A (en) 2024-01-26
IL257772B1 (en) 2024-09-01
PH12018500709B1 (en) 2024-05-17
US12358997B1 (en) 2025-07-15
TWI780679B (zh) 2022-10-11
AU2016333510B2 (en) 2022-08-25
TW202130663A (zh) 2021-08-16
CN113846104A (zh) 2021-12-28
NZ779858A (en) 2024-08-30
CN114044829A (zh) 2022-02-15
JP2024160260A (ja) 2024-11-13
EP3356400A1 (en) 2018-08-08
JP7530935B2 (ja) 2024-08-08
TW202128750A (zh) 2021-08-01
PE20181005A1 (es) 2018-06-26
AU2016333510A1 (en) 2018-03-22
NZ779863A (en) 2024-09-27
US20180222992A1 (en) 2018-08-09
PE20211594A1 (es) 2021-08-18
CA3000560A1 (en) 2017-04-06
MX2022014764A (es) 2023-01-11
US10941205B2 (en) 2021-03-09
US11787868B2 (en) 2023-10-17
KR102760334B1 (ko) 2025-02-03
TW201718639A (zh) 2017-06-01
JP2022116158A (ja) 2022-08-09
WO2017055540A1 (en) 2017-04-06
US20230365702A1 (en) 2023-11-16
MA43022A (fr) 2018-08-08
MX2022014761A (es) 2023-01-11
RU2730682C1 (ru) 2020-08-24
TWI723050B (zh) 2021-04-01
CO2018002360A2 (es) 2018-05-10
TWI780680B (zh) 2022-10-11
AR106189A1 (es) 2017-12-20
JP2018535936A (ja) 2018-12-06
JP7005487B2 (ja) 2022-02-04
US20250223372A1 (en) 2025-07-10
US20220144963A9 (en) 2022-05-12
IL314744A (en) 2024-10-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA126652C2 (uk) Біспецифічне антитіло до людського бета-амілоїду/людського рецептора трансферину та спосіб його застосування
TWI545132B (zh) 人類化抗－ＴＡＵ（ｐＳ４２２）抗體及使用方法
UA127887C2 (uk) Біспецифічне антитіло до людського cd20/людського рецептора трансферину та способи його застосування
JP5179474B2 (ja) 拮抗性抗ヒトｃｄ４０モノクローナル抗体
UA128712C2 (uk) Антитіла проти c5 та способи застосування
UA125285C2 (uk) Гуманізоване антитіло до cd19 людини та спосіб його застосування для лікування в-клітинного раку
UA123323C2 (uk) Димерний злитий поліпептид
JP2022514290A (ja) 改変抗体ｆｃおよび使用方法
WO2020221451A1 (en) Antibodies binding to plasmodium circumsporozoite protein and uses thereof
HK40059970B (zh) 双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
BR112018004733B1 (pt) Anticorpo biespecífico que se liga especificamente à proteína a-beta humana e ao receptor de transferrina humana, seus usos e formulação farmacêutica