[go: up one dir, main page]

RU2460774C1 - Nutrient medium for legionella cultivation - Google Patents

Nutrient medium for legionella cultivation Download PDF

Info

Publication number
RU2460774C1
RU2460774C1 RU2011127448/10A RU2011127448A RU2460774C1 RU 2460774 C1 RU2460774 C1 RU 2460774C1 RU 2011127448/10 A RU2011127448/10 A RU 2011127448/10A RU 2011127448 A RU2011127448 A RU 2011127448A RU 2460774 C1 RU2460774 C1 RU 2460774C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
potassium phosphate
substituted
legionella
aqueous
nutrient medium
Prior art date
Application number
RU2011127448/10A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Людмила Семёновна Катунина (RU)
Людмила Семёновна Катунина
Надежда Дмитриевна Темежникова (RU)
Надежда Дмитриевна Темежникова
Александр Николаевич Куличенко (RU)
Александр Николаевич Куличенко
Татьяна Викторовна Таран (RU)
Татьяна Викторовна Таран
Юрий Сергеевич Ковтун (RU)
Юрий Сергеевич Ковтун
Ольга Леонидовна Старцева (RU)
Ольга Леонидовна Старцева
Анна Алексеевна Курилова (RU)
Анна Алексеевна Курилова
Анастасия Анатольевна Зуенко (RU)
Анастасия Анатольевна Зуенко
Original Assignee
Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека filed Critical Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Priority to RU2011127448/10A priority Critical patent/RU2460774C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2460774C1 publication Critical patent/RU2460774C1/en

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: nutrient medium contains enzyme sprat hydrolyzate containing 0.10-0.14% of amine nitrogen, potassium monophosphate, 3-aqueous disubstituted potassium phosphate, 7-aqueous ferrous sulphate, activated carbon, L-cysteine hydrochloride, microbiological agar and distilled water in the preset proportions.
EFFECT: invention provides higher biomass yield and reduced time of legionella cultivation.
3 ex

Description

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению питательных сред для выращивания легионелл.The invention relates to biotechnology, namely, to obtain culture media for growing legionella.

Известна питательная среда для выращивания легионелл, основой которой является мясная вода до 1000,0 мл; пептон ферментативный 10,0 г; натрия хлорид 5,0 г; кровь 10,0 г; агар-агар 15,0-20,0 г рН 7,3±0,2. Среду автоклавируют 30 мин при температуре 121°C (М.С.Поляк; В.И.Сухаревич; М.Э.Сухаревич. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб.: ЭЛБИ-СПб. - 2008. - С. 64-65; С. - 269).Known nutrient medium for growing Legionella, the basis of which is meat water up to 1000.0 ml; peptone enzymatic 10.0 g; sodium chloride 5.0 g; blood 10.0 g; agar-agar 15.0-20.0 g pH 7.3 ± 0.2. The medium is autoclaved for 30 min at a temperature of 121 ° C (M.S. Polyak; V.I. Sukharevich; M.E. Sukharevich. Nutrient media for medical and sanitary microbiology. St. Petersburg: ELBI-St. Petersburg. - 2008. - P. 64 -65; S. - 269).

Недостатком данной среды является недостаточная эффективность.The disadvantage of this environment is the lack of effectiveness.

Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде является среда, содержащая г/л: ферментативный гидролизат легкого свиньи 260,0; калий фосфорнокислый 1-замещенный 0,9; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный 2,2; активированный уголь 2,0; L-цистеина гидрохлорид 0,4; эмбриональный стимулятор роста микроорганизмов 2,5; агар микробиологический 8,5; дистиллированная вода до 1 л (Патент РФ №2412240. Опубл. 20.02.2011 г. Бюл. №5).Closest to the proposed nutrient medium is a medium containing g / l: enzymatic hydrolyzate of pig lung 260,0; potassium phosphate 1-substituted 0.9; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous 2.2; activated carbon 2.0; L-cysteine hydrochloride 0.4; embryonic growth stimulator of microorganisms 2.5; microbiological agar 8.5; distilled water up to 1 liter (RF Patent No. 2412240. Publish. February 20, 2011 Bull. No. 5).

По питательной ценности предлагаемая среда равноценна аналогу, а по ростовым качествам несколько превосходит аналог.In terms of nutritional value, the proposed environment is equivalent to an analogue, and in terms of growth qualities it slightly exceeds the analogue.

Целью настоящего изобретения является конструирование качественной питательной среды животного происхождения, которая обеспечивает ростовые свойства легионелл.The aim of the present invention is the construction of a high-quality nutrient medium of animal origin, which provides the growth properties of legionella.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат кильки; 0,01 М калий фосфатный буфер (состав калий фосфатного буфера: калий фосфорнокислый 1-замещенный; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный), а также активированный уголь; L-цистеин гидрохлорид; агар микробиологический; дистиллированную воду с добавлением в среду в качестве стимулирующей добавки железа сернокислого закисного 7-водного при следующем соотношении ингредиентов, г/л:The goal is achieved in that the nutrient medium as a nutrient base contains an enzymatic sprat hydrolyzate; 0.01 M potassium phosphate buffer (composition of potassium phosphate buffer: 1-substituted potassium phosphate; 2-substituted 3-aqueous potassium phosphate), as well as activated carbon; L-cysteine hydrochloride; microbiological agar; distilled water with the addition of ferrous sulfate 7-aqueous as a stimulating additive to the medium in the following ratio of ingredients, g / l:

Ферментативный гидролизат килькиSprat enzymatic hydrolyzate (с содержанием аминного азота 0,10-0,14%)(with an amine nitrogen content of 0.10-0.14%) 280,0-320,0280.0-320.0 Калий фосфорнокислый 1-замещенныйPotassium phosphate 1-substituted 0,63-1,030.63-1.03 Калий фосфорнокислый 2-замещенныйPotassium phosphate 2-substituted 3-водный3-water 0,96-1,360.96-1.36 Железо сернокислое закисное 7-водноеFerrous sulfate ferrous 7-water 0,18-0,220.18-0.22 Активированный угольActivated carbon 1,0-3,01.0-3.0 L-цистеин гидрохлоридL-cysteine hydrochloride 0,2-0,60.2-0.6 Агар микробиологическийMicrobiological agar 8,0-12,08.0-12.0 Дистиллированная водаDistilled water до 1 л.up to 1 liter

Килька ТУ-8-5344-113607. Биологическая ценность кильки состоит в следующем - содержание влаги 67%, белка 13,4%; минеральные вещества кильки: зола 1,6%, состоящая из солей мг на 100 г: калия 206; кальция 25; магния 23; фосфора 311; из микроэлементов наибольшее количество в мкг: железа 1400; кобальта 30; марганца 116; меди 240; никеля 8. В кильке содержатся также витамины: А - 0,06; С - 1,1; В6 - 0,50; В2 - 0,12; ниоцина - 3,70; B1 - 0,02; фолацина - 13,0. Из белковых веществ в кильке при ферментативном гидролизе образуются следующие аминокислоты мг на 100 г продукта: незаменимые: лизин 1090; метионин 410; триптофан 160; валин 660; лейцин 1300; изолейцин 570; треонин 610; фенилаланин 560; заменимые аминокислоты: пролин 480; аланин 790; аргинин 830; аспарагиновая кислота 1200; глицин 710; тирозин 500; гистидин 330; глютаминовая кислота 1260; цистин 170; серин 570 (М.Ф.Нестерин, И.М.Скурихин. Химический состав пищевых продуктов. Москва. Пищевая промышленность». 1979. С. - 133-145).Sprat TU-8-5344-113607. The biological value of sprats is as follows - moisture content of 67%, protein 13.4%; sprat minerals: 1.6% ash, consisting of mg salts per 100 g: potassium 206; calcium 25; magnesium 23; phosphorus 311; of trace elements the largest amount in micrograms: iron 1400; cobalt 30; Manganese 116; copper 240; nickel 8. The sprat also contains vitamins: A - 0.06; C is 1.1; B 6 - 0.50; B 2 - 0.12; niacin - 3.70; B 1 - 0.02; folacin - 13.0. The following amino acids of mg per 100 g of product are formed from protein substances in sprats during enzymatic hydrolysis: essential: lysine 1090; methionine 410; tryptophan 160; valine 660; leucine 1300; isoleucine 570; threonine 610; phenylalanine 560; essential amino acids: proline 480; alanine 790; arginine 830; aspartic acid 1200; glycine 710; tyrosine 500; histidine 330; glutamic acid 1260; cystine 170; serine 570 (M.F. Nesterin, I.M. Skurikhin. Chemical composition of food products. Moscow. Food industry. "1979. S. - 133-145).

Железо сернокислое закисное 7-водное ГОСТ 4148-78. Железо (II) сульфат. Показатели качества: хч, чда, ч. Массовая доля основного вещества ≥99,0% (Химические реактивы и высокочистые вещества. Каталог. / О.А.Гольдина, Ю.С.Кузнецова, Т.Г.Иванова и др. - 3-е изд., перераб. и доп. М.: Химия, 1990. С. - 212). В ходе многочисленных экспериментов первых исследователей по культивированию легионелл было обнаружено, что важнейшими факторами роста легионелл являются как аминокислоты, так и ионы железа (Легионеллезная инфекция / Н.Д.Темежникова, И.С.Тартаковский. Москва. «Медицина», 2007. - С.42; 120).Ferrous sulfate ferrous 7-water GOST 4148-78. Iron (II) sulfate. Quality indicators: hch, chda, h. Mass fraction of the main substance ≥99.0% (Chemical reagents and high-purity substances. Catalog. / O.A. Goldina, Yu.S. Kuznetsova, T.G. Ivanova, etc. - 3 -th ed., revised and revised M .: Chemistry, 1990.S. - 212). In the course of numerous experiments by the first researchers on the cultivation of legionella, it was found that the most important factors for the growth of legionella are both amino acids and iron ions (Legionella infection / ND Temezhnikova, I. Tartakovsky. Moscow. "Medicine", 2007. - S.42; 120).

Включение в состав среды 0,01 М калий фосфатного буфера (состав калий фосфатного буфера: калий фосфорнокислый 1-замещенный; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный) обосновано широким использованием фосфатов при приготовлении питательных сред, т.к. это единственные неорганические соединения, обладающие буферным действием в физиологически важном диапазоне рН, они малотоксичны. Кроме того, HPO4 компонент нуклеиновых кислот, фосфолипидов, нуклеотидов (Методические рекомендации по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирусов, - М., 1989).The inclusion of 0.01 M potassium phosphate buffer (the composition of potassium phosphate buffer: potassium phosphate 1-substituted; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous) is justified by the widespread use of phosphates in the preparation of nutrient media, as these are the only inorganic compounds that have a buffering effect in the physiologically important pH range, they are low toxic. In addition, HPO 4 component of nucleic acids, phospholipids, nucleotides (Guidelines for the manufacture and use of culture media and solutions for microbiological purposes, the cultivation of cells and viruses, - M., 1989).

Ферментативный гидролизат кильки является качественной основой питательной среды ввиду присутствия в нем 13,4% белка, а это значит, что основа содержит большое количество аминокислот, железа, макро- и микроэлементов, которые играют огромную роль в жизнедеятельности любых микроорганизмов.Sprat enzymatic hydrolyzate is a qualitative basis for the nutrient medium due to the presence of 13.4% protein in it, which means that the base contains a large number of amino acids, iron, macro- and microelements, which play a huge role in the life of any microorganisms.

При приготовлении питательной среды используют только дистиллированную воду, без применения растворов, содержащих ионы натрия, в виду их губительного действия на легионеллы.When preparing the nutrient medium, only distilled water is used, without the use of solutions containing sodium ions, in view of their destructive effect on legionella.

Сочетанное применение указанных компонентов обеспечивает получение чистых культур достаточного количества колоний через 24 ч при посеве 100 м.к.The combined use of these components provides pure cultures of a sufficient number of colonies after 24 hours with sowing of 100 MK

В отличие от прототипа, предлагаемая среда экономична, выгодна и обеспечивает оптимальные условия для размножения легионелл за 24 ч.Unlike the prototype, the proposed environment is economical, profitable and provides optimal conditions for the reproduction of legionella in 24 hours.

Приготовление ферментативного гидролизата килькиPreparation of sprat enzymatic hydrolyzate

Кильку размороженную в количестве 0,6 кг пропускают дважды через мясорубку, затем помещают в 3-метровый л баллон, добавляют воду дистиллированную в количестве 1,8 л, доводят рН до 8,2±0,1 с помощью калия гидроокиси по фенолфталеину, затем добавляют коммерческий фермент панкреатин в количестве 12,0 г. активностью 45 ед, добавляют в качестве консерванта хлороформ в количестве 1% к объему. Баллон закрывают ватно-марлевой пробкой, тщательно перемешивают и помещают в термокамеру при температуре 37±1°C. Содержимое баллона в течение первых суток перемешивают через 20±1 мин по 5 мин, в последующие сутки через 1,5-2,0 ч по 5 мин. В течение первого часа через каждые 15 мин измеряют рН, при изменении рН в кислую сторону обязательно корректируют рН 40% раствором гидроокиси калия до значения 8,0-8,2. В последующие 2-е суток ведут перемешивание через 1,5-2,0 ч по 5 мин. Динамику процесса гидролиза контролируют путем определения аминного азота. Об окончании гидролиза судят по достижению аминного азота 0,3-0,4%. После этого гидролиз останавливают и гидролизат отстаивают в течение 2-х суток. Отстоявшийся верхний слой гидролизата декантируют с помощью резинового шланга и фильтруют через полотняный фильтр. Сбор фильтрата ведут в стеклянный баллон емкостью 3 л, для консервации добавляют хлороформ в количестве 1% к объему содержимого баллона, закрывают резиновой пробкой и транспортируют в холодовую камеру, где хранят при температуре от +2 до +8°С.Sprats thawed in an amount of 0.6 kg are passed twice through a meat grinder, then they are placed in a 3-meter liter balloon, distilled water in an amount of 1.8 liters is added, the pH is adjusted to 8.2 ± 0.1 with potassium hydroxide using phenolphthalein, then commercial pancreatin enzyme is added in an amount of 12.0 g with an activity of 45 units; chloroform is added as a preservative in an amount of 1% by volume. The cylinder is closed with a cotton-gauze plug, mixed thoroughly and placed in a heat chamber at a temperature of 37 ± 1 ° C. The contents of the balloon during the first day are mixed after 20 ± 1 min for 5 minutes, the next day after 1.5-2.0 hours for 5 minutes. During the first hour, the pH is measured every 15 minutes; when the pH changes to the acidic side, the pH is necessarily adjusted with a 40% potassium hydroxide solution to a value of 8.0-8.2. In the next 2 days, they are mixed after 1.5-2.0 hours for 5 minutes. The dynamics of the hydrolysis process is controlled by determining amine nitrogen. The end of hydrolysis is judged by the achievement of amino nitrogen of 0.3-0.4%. After this, the hydrolysis is stopped and the hydrolyzate is defended for 2 days. The settled upper layer of the hydrolyzate is decanted with a rubber hose and filtered through a linen filter. The filtrate is collected in a glass container with a capacity of 3 l, chloroform is added in an amount of 1% to the volume of the contents of the container for preservation, closed with a rubber stopper and transported to a cold chamber where it is stored at a temperature of +2 to + 8 ° С.

Питательную среду на ферментативной основе кильки для выращивания легионелл готовят следующим способом. Берут ферментативный гидролизат из кильки, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12% - 300,0 мл, другие ингредиенты в соотношении, г/л: калий фосфорнокислый 1-замещенный - 0,83; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 1,16; железо сернокислое закисное 7-водное - 0,2; активированный уголь - 2,0; агар микробиологический - 10,0; дистиллированную воду до 1 л. Смесь доводят до кипения и кипятят до полного расплавления агара в течение 2 мин, рН корректируют раствором соляной кислоты (1:1) в количестве 3 мл до рН 6,9±0,1. Приготовленную питательную среду разливают в градуированные флаконы по 200±0,5 мл, которые герметично укупоривают ватно-марлевыми пробками и бумагой крафт. Стерилизуют при 1 атм в течение 15 мин. В расплавленный в кипящей водяной бане и остуженный до 56°C агар добавляют простирилизованный в 10 мл дистиллированной воде L-цистеин гидрохлорид в количестве 0,4 г, затем разливают в стерильные чашки Петри. Просушивают в течение 30 минут и используют для посева.An enzymatic-based nutrient medium for sprats for growing Legionella is prepared in the following way. Take an enzymatic hydrolyzate from sprats, diluted with distilled water to an amine nitrogen reading of 0.12% - 300.0 ml, other ingredients in the ratio, g / l: potassium phosphate 1-substituted - 0.83; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous 1.16; ferrous sulfate ferrous 7-aqueous - 0.2; activated carbon - 2.0; microbiological agar - 10.0; distilled water up to 1 liter. The mixture is brought to a boil and boiled until the agar is completely melted for 2 minutes, the pH is adjusted with a solution of hydrochloric acid (1: 1) in an amount of 3 ml to a pH of 6.9 ± 0.1. The prepared nutrient medium is poured into graduated bottles of 200 ± 0.5 ml, which are hermetically sealed with cotton gauze plugs and Kraft paper. Sterilized at 1 atm for 15 minutes. In agar melted in a boiling water bath and cooled to 56 ° C, 0.4 g of L-cysteine hydrochloride sterilized in 10 ml of distilled water is added, then it is poured into sterile Petri dishes. Dry for 30 minutes and use for sowing.

Соляную кислоту ГОСТ-3118-77 (чда, хч) используют для установления рН. Массовая доля основного вещества, % 35-38.GOST-3118-77 hydrochloric acid (chda, hch) is used to establish pH. Mass fraction of the main substance,% 35-38.

Эффективность полученной питательной среды оценивали в соответствии с методическими указаниями «Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза», (Москва, 2007), с использованием в качестве тест-культур легионелл Legionella pneumophila АТСС 33155 Bloomington, Legionella pneumophila ATCC 33152 Philadelphia.The effectiveness of the obtained nutrient medium was evaluated in accordance with the guidelines “Control of diagnostic nutrient media according to biological indicators for plague, cholera, anthrax, tularemia, brucellosis, legionellosis”, (Moscow, 2007), using Legionella pneumophila ATCC as test cultures 33155 Bloomington, Legionella pneumophila ATCC 33152 Philadelphia.

Испытуемые культуры выращивали на пластинках плотного агара контрольной среды СЭЛ рН 6,8 при температуре 37°C 24 ч. Из суточных культур готовили 1 млрд. взвесь м.т. тест-штаммов, равной 10 ед. по оптическому стандарту мутности ОСО ГИСК им. Л.А.Тарасевича, затем серийными десятикратными разведениями в 0,01 М буферном растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 1000 (10-6). Из данных разведении взвесей культур высевали по 0,1 мл на 3 чашки Петри разлитого подсушенного испытуемого агара, на среду СЭЛ и агар Хоттингера (отрицательный контроль). Посевы инкубировали при 35±0,5°C в течение 5 суток. Через 24-120 ч учитывали результаты путем подсчета выросших колоний.The test cultures were grown on plates of solid agar of a control environment of SEL pH 6.8 at a temperature of 37 ° C for 24 hours. Of the daily cultures, 1 billion m.t. test strains equal to 10 units according to the optical turbidity standard OSO GISK im. L.A. Tarasevich, then serial ten-fold dilutions in a 0.01 M buffer solution in a volume of 4.5 ml were adjusted to a content of 1000 ml in 1 ml (10 -6 ). From the dilution of culture suspensions, 0.1 ml was sown in 3 Petri dishes of the spilled dried test agar, on SEL medium and Hottinger agar (negative control). Crops were incubated at 35 ± 0.5 ° C for 5 days. After 24-120 hours, the results were taken into account by counting the grown colonies.

Контрольная среда СЭЛ (Питательная среда для культивирования и выделения возбудителя легионеллеза элективная) - состав г/л: питательная основа животного происхождения - ферментолизат селезенки жидкий крупного рогатого скота в расчете на сухое вещество - 7,0; активированный уголь ОУ-А 4,0; агар микробиологический 17,0; калий фосфорнокислый однозамещенный 1,6; калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный 3,4; рН среды 7,1 (Производитель ФГУЗ Рост НИПЧИ Роспотребнадзора. 344002, Ростов-на-Дону, ул. М.Горького, 117).SEL control medium (Nutrient medium for cultivation and isolation of the causative agent of Legionellosis selective) - g / l composition: nutrient base of animal origin - liquid spleen fermentolizate of cattle per dry matter - 7.0; activated carbon OU-A 4.0; microbiological agar 17.0; potassium phosphate monosubstituted 1.6; potassium phosphate disubstituted three-water 3.4; pH of 7.1 (Manufacturer FGUZ NIPSCH Growth Rospotrebnadzor. 344002, Rostov-on-Don, 117 M. Gorky St.).

Контрольный агар Хоттингера. Промышленный регламент №1707-05 на производство питательного агара для культивирования микроорганизмов, готового к применению (агара Хоттингера). Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05571 от 20 августа 2009 г. Срок действия не ограничен.Hottinger control agar. Industrial regulation No. 1707-05 for the production of nutrient agar for the cultivation of microorganisms, ready for use (Hottinger agar). Registration certificate No. ФСР 2009/05571 dated August 20, 2009. The validity period is unlimited.

Пример 1. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат из кильки, разбавленного дистиллированной водой до показания аминного азота 0,10% - 280,0 мл; калий фосфорнокислый 1-замещенный - 0,63; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 0,96; железо сернокислое закисное 7-водное - 0,18; активированный уголь - 1,0; L-цистеин гидрохлорид - 0,2; агар микробиологический - 8,0; дистиллированная вода - до 1 л.Example 1. Test strains were grown on a nutrient medium containing, g / l: enzymatic hydrolyzate of sprats diluted with distilled water to an amine nitrogen reading of 0.10% - 280.0 ml; potassium phosphate 1-substituted - 0.63; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous - 0.96; ferrous sulfate ferrous 7-aqueous - 0.18; activated carbon - 1.0; L-cysteine hydrochloride 0.2; microbiological agar - 8.0; distilled water - up to 1 liter.

При таком соотношении ингредиентов вырастало в среднем 100 плоско-выпуклых, синевато-сероватых колоний диаметром 1,5 мм через 24 ч для обоих штаммов, взятых в опыт, тогда как на контрольной среде СЭЛ рост наблюдался только через 72 ч в количестве 45 колоний диаметром 1,0-1,3 мм соответственно, а на агаре Хоттингера рост отсутствовал.With this ratio of ingredients, an average of 100 flat-convex, bluish-grayish colonies with a diameter of 1.5 mm grew after 24 hours for both strains taken in the experiment, while growth on the SEL control medium was observed only after 72 hours in the amount of 45 colonies with a diameter of 1 , 0-1.3 mm, respectively, and there was no growth on the Hottinger agar.

Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде содержащей, г/л: ферментативный гидролизат из кильки, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12% - 300,0 мл; калий фосфорнокислый 1-замещенный - 0,83; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 1,16; железо сернокислое закисное 7-водное - 0,2; активированный уголь - 2,0; L-цистеин гидрохлорид - 0,4; агар микробиологический - 10,0; дистиллированная вода - до 1 л.Example 2. Test strains were grown on a nutrient medium containing, g / l: enzymatic hydrolyzate of sprats, diluted with distilled water to an amine nitrogen reading of 0.12% - 300.0 ml; potassium phosphate 1-substituted - 0.83; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous 1.16; ferrous sulfate ferrous 7-aqueous - 0.2; activated carbon - 2.0; L-cysteine hydrochloride - 0.4; microbiological agar - 10.0; distilled water - up to 1 liter.

При таком соотношении ингредиентов вырастало 300 плоско-выпуклых, синевато-сероватых колоний диаметром 1,0-1,5 мм через 24 ч для обоих тест-штаммов, взятых в опыт, тогда как на контрольной среде СЭЛ рост наблюдался только через 72 ч в количестве 80 колоний диаметром 1,0-1,3 мм соответственно, а на агаре Хоттингера рост отсутствовал.With this ratio of ingredients, 300 flat-convex, bluish-grayish colonies with a diameter of 1.0-1.5 mm grew in 24 hours for both test strains taken in the experiment, while growth on the SEL control medium was observed only after 72 hours in the amount of 80 colonies with a diameter of 1.0-1.3 mm, respectively, and there was no growth on the Hottinger agar.

Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат из кильки, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,14% - 320,0 мл; калий фосфорнокислый 1-замещенный - 1,03; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 1,36; железо сернокислое закисное 7-водное - 0,22; активированный уголь - 3,0; L-цистеин гидрохлорид - 0,6; агар микробиологический - 12,0; дистиллированная вода до 1 л.Example 3. Test strains were grown on a nutrient medium containing, g / l: sprat enzymatic hydrolyzate diluted with distilled water to an amine nitrogen reading of 0.14% - 320.0 ml; potassium phosphate 1-substituted - 1.03; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous - 1.36; ferrous sulfate ferrous 7-aqueous - 0.22; activated carbon - 3.0; L-cysteine hydrochloride - 0.6; microbiological agar - 12.0; distilled water up to 1 liter.

При таком соотношении ингредиентов вырастало 89 плоско-выпуклых, синевато-сероватых колоний диаметром 1,0-1,5 мм через 24 ч для обоих тест-штаммов, взятых в опыт, тогда как на контрольной среде СЭЛ рост наблюдался только через 72 ч в количестве 42 колонии диаметром 1,2 мм, а на агаре Хоттингера рост отсутствовал.With this ratio of ingredients, 89 flat-convex, bluish-grayish colonies with a diameter of 1.0-1.5 mm grew after 24 hours for both test strains taken in the experiment, while growth on the SEL control medium was observed only after 72 hours in the amount of 42 colonies with a diameter of 1.2 mm, and there was no growth on the Hottinger agar.

Полученные результаты позволили определить оптимальный вариант питательной среды на основе ферментативного гидролизата кильки (пример 2).The results obtained allowed us to determine the optimal variant of a nutrient medium based on an enzymatic sprat hydrolyzate (example 2).

Claims (1)

Питательная среда для выращивания легионелл, включающая питательную основу, калий фосфорнокислый 1-замещенный, калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный, активированный уголь, L-цистеин гидрохлорид, агар микробиологический и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве основы содержит ферментативный гидролизат кильки с добавлением в среду в качестве стимулирующей добавки железа сернокислого закисного 7-водного при следующем соотношении ингредиентов, г/л:
ферментативный гидролизат кильки (0,10-0,14% аминного азота) 280,0-320,0 калий фосфорнокислый 1-замещенный 0,63-1,03 калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный 0,96-1,36 железо сернокислое закисное 7-водное 0,18-0,22 активированный уголь 1,0-3,0 L-цистеин гидрохлорид 0,2-0,6 агар микробиологический 8,0-12,0 дистиллированная вода до 1 л
Nutrient medium for growing Legionella, including a nutrient base, potassium phosphate 1-substituted, potassium phosphate 2-substituted 3-water, activated carbon, L-cysteine hydrochloride, microbiological agar and distilled water, characterized in that the base contains an enzymatic sprat hydrolyzate with the addition of ferrous sulfate 7-aqueous as a stimulating additive to the medium in the following ratio of ingredients, g / l:
sprat enzymatic hydrolyzate (0.10-0.14% amine nitrogen) 280.0-320.0 1-substituted potassium phosphate 0.63-1.03 2-substituted potassium phosphate 3-water 0.96-1.36 ferrous sulfate ferrous 7-aqueous 0.18-0.22 Activated carbon 1.0-3.0 L-cysteine hydrochloride 0.2-0.6 microbiological agar 8.0-12.0 distilled water up to 1 l
RU2011127448/10A 2011-07-04 2011-07-04 Nutrient medium for legionella cultivation RU2460774C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011127448/10A RU2460774C1 (en) 2011-07-04 2011-07-04 Nutrient medium for legionella cultivation

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011127448/10A RU2460774C1 (en) 2011-07-04 2011-07-04 Nutrient medium for legionella cultivation

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2460774C1 true RU2460774C1 (en) 2012-09-10

Family

ID=46938923

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2011127448/10A RU2460774C1 (en) 2011-07-04 2011-07-04 Nutrient medium for legionella cultivation

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2460774C1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2510828C1 (en) * 2013-01-09 2014-04-10 Федеральное казенное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Nutrient medium for growing legionella
RU2580227C1 (en) * 2015-04-22 2016-04-10 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Medium for isolation of legionella pneumophila

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1359297A1 (en) * 1986-07-15 1987-12-15 Научно-Исследовательский Институт Эпидемиологии И Микробиологии Имени Почетного Академика.Н.Ф.Гамалеи Nutrient medium for growing legionella pneumophila
RU2412240C1 (en) * 2009-12-01 2011-02-20 Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Culture medium for growing legionella

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1359297A1 (en) * 1986-07-15 1987-12-15 Научно-Исследовательский Институт Эпидемиологии И Микробиологии Имени Почетного Академика.Н.Ф.Гамалеи Nutrient medium for growing legionella pneumophila
RU2412240C1 (en) * 2009-12-01 2011-02-20 Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Culture medium for growing legionella

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Под ред. ЛАБИНСКОЙ А.С. и др. Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований. - М.: Медицина, 2005, с.563-565. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2510828C1 (en) * 2013-01-09 2014-04-10 Федеральное казенное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Nutrient medium for growing legionella
RU2580227C1 (en) * 2015-04-22 2016-04-10 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Medium for isolation of legionella pneumophila

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2433170C1 (en) Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb
RU2412240C1 (en) Culture medium for growing legionella
RU2460774C1 (en) Nutrient medium for legionella cultivation
RU2580028C1 (en) Heavy nutrient medium for the cultivation of brucella
RU2626568C1 (en) Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of plague microbe of ypestis ev vaccine strain
RU2415923C1 (en) Method for production of fermentative hydrolysate of fresh white cabbage and nutritive medium for cultivation lactobacteria based thereon
RU2681285C1 (en) Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation
RU2460768C1 (en) Solid nutrient medium for legionella cultivation
RU2425871C1 (en) Nutrient medium for legionella cultivation
RU2460775C1 (en) Enriched nutrient medium for legionella cultivation
RU2394905C1 (en) Nutrient medium for cultivation of plague microbe
RU2415922C1 (en) Nutrient medium for lactic acid bacilli cultivation
RU2702174C1 (en) Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of vaccine strain of plague microbe yersinia pestis ev
RU2348686C2 (en) Nutrient medium for microorganism cultivation
RU2435842C1 (en) Transport nutrient medium (liquid) for cultivation of brucellous microbe
RU2366448C2 (en) Method for making preparation used for treatment of radiation injuries in animals and treatment method of radiation injuries in animals
RU2528101C2 (en) Nutrient medium for legionella culture
RU2510828C1 (en) Nutrient medium for growing legionella
US8911962B2 (en) Method for neutralization of antibiotics in a culture medium
RU2728379C1 (en) Nutrient medium dense for brucella cultivation
RU2410424C1 (en) Culture medium for growing microorganism
RU2748492C1 (en) Dense nutrient medium for monitoring the number of live microbial cells of the vaccine strain of the plague microbe y.pestis ev
RU2748808C1 (en) Dense universal nutrient medium for growing brucella biomass
RU2193061C1 (en) Nutrient medium for tuberculosis mycobacterium culturing (mbt-broth)
RU2380409C1 (en) Nutrient medium for pestilential microbe cultivation

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20150705