RU2366448C2 - Method for making preparation used for treatment of radiation injuries in animals and treatment method of radiation injuries in animals - Google Patents
Method for making preparation used for treatment of radiation injuries in animals and treatment method of radiation injuries in animals Download PDFInfo
- Publication number
- RU2366448C2 RU2366448C2 RU2007110768/13A RU2007110768A RU2366448C2 RU 2366448 C2 RU2366448 C2 RU 2366448C2 RU 2007110768/13 A RU2007110768/13 A RU 2007110768/13A RU 2007110768 A RU2007110768 A RU 2007110768A RU 2366448 C2 RU2366448 C2 RU 2366448C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- zeolite
- animals
- hydrolyzate
- fraction
- bacillus subtilis
- Prior art date
Links
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 208000019155 Radiation injury Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 57
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 37
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 claims abstract description 36
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 claims abstract description 36
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims abstract description 15
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 10
- GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N dialuminum;dioxosilane;oxygen(2-);hydrate Chemical compound O.[O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3].O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229910052901 montmorillonite Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 239000010453 quartz Substances 0.000 claims abstract description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 55
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 claims 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 abstract description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 abstract description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 abstract description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 abstract description 2
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 42
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 42
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 37
- 230000004223 radioprotective effect Effects 0.000 description 31
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 25
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 9
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 7
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 5
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 5
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 4
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 3
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 3
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 3
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 3
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 3
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 3
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 2
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 2
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 2
- 230000002248 lipoperoxidative effect Effects 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- -1 monosubstituted potassium phosphate Chemical class 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 235000006180 nutrition needs Nutrition 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000718 radiation-protective agent Substances 0.000 description 2
- 231100001258 radiotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N D-Ornithine Chemical compound NCCC[C@@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- 150000008557 D-aspartic acids Chemical class 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 229930182847 D-glutamic acid Natural products 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 1
- 108010016899 bacitracin A Proteins 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001847 bifidogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- RKLXDNHNLPUQRB-TVJUEJKUSA-N chembl564271 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]2C(C)SC[C@H](N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NC(=O)[C@@H](NC2=O)CSC1C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C(=C\C)/NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]2NC(=O)CNC(=O)[C@@H]3CCCN3C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]3N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NC(=O)C(=C)NC(=O)CC[C@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(O)=O)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)C1=CC=CC=C1 RKLXDNHNLPUQRB-TVJUEJKUSA-N 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 229940040461 lipase Drugs 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007269 microbial metabolism Effects 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 230000002633 protecting effect Effects 0.000 description 1
- 108010027350 protosubtilin Proteins 0.000 description 1
- 230000000191 radiation effect Effects 0.000 description 1
- 230000001950 radioprotection Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 244000000000 soil microbiome Species 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 108010082567 subtilin Proteins 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000036967 uncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к радиационной биологии, в частности к получению и применению радиозащитных препаратов микробного происхождения.The invention relates to radiation biology, in particular to the production and use of radiation protective preparations of microbial origin.
Известны способы получения веществ микробного происхождения (белково-полисахаридного комплекса, декстранов, пептидогликана почвенных бактерий, экстрактов туберкулезных микобактерий, эндотоксинов кишечной палочки) и применения их для профилактики и лечения радиационных поражений организма (см. статью В.Н.Андрущенко и др. Противолучевое действие веществ микробного происхождения // Радиац. биол. радиоэкол. - 1996. - Т.38. - В.3. - С.416-425).Known methods for producing substances of microbial origin (protein-polysaccharide complex, dextrans, peptidoglycan of soil bacteria, extracts of tuberculous mycobacteria, endotoxins of Escherichia coli) and their use for the prevention and treatment of radiation injuries of the body (see article V.N. Andrushenko and other radiation effect substances of microbial origin // Radiation biol. radioecol. - 1996. - T.38. - B.3. - S.416-425).
К недостаткам данных способов следует отнести низкую радиозащитную эффективность (30-40%) препаратов при поражении организма в летальных (ЛД80-90) дозах облучения.The disadvantages of these methods include low radioprotective efficacy (30-40%) of drugs in case of damage to the body in lethal (LD 80-90 ) radiation doses.
Известно также применение пробиотического препарата «Биоспорин» для лечения радиационных поражений организма путем трехкратного внутрибрюшинного введения пробиотика облученным в дозе ЛД70/30 лабораторным животным (см. статью А.В.Степанова и др. Исследования радиомодифицирующих свойств препарата «Биоспорин» // Сб. материалов научно-практ. конф. - Екатеринбург, 1977. - С.42-45).It is also known the use of the biosporin probiotic preparation for the treatment of radiation injuries of the body by triple intraperitoneal administration of the probiotic to the laboratory animals irradiated with a dose of LD 70/30 (see article by A. Stepanov and others. Studies of the radio-modifying properties of the Biosporin drug // Sat. materials of scientific and practical conf. - Ekaterinburg, 1977. - P.42-45).
Недостатками способа являются низкая радиозащитная эффективность препарата, необходимость многократного применения и ограничение места введения (внутрибрюшинное, что исключает возможность применения препарата на крупных животных). При облучении животных в летальных дозах (ЛД90-100) эффективность препарата также резко снижается.The disadvantages of the method are the low radioprotective efficacy of the drug, the need for repeated use and limitation of the injection site (intraperitoneal, which excludes the possibility of using the drug in large animals). When animals are irradiated in lethal doses (LD 90-100 ), the effectiveness of the drug also decreases sharply.
Известен способ приготовления и применения бактериального препарата на основе продуктов метаболизма Bacillus subtitlis и адсорбента токсинов - цеолита, связывающего и выводящего из организма низкомолекулярные токсины, тяжелые металлы и радионуклиды (см. статью Е.И. Ткаченко и др. Эрадикационная терапия, включающая пробиотики: консенсус эффективности и безопасности // Клиническое питание. - 2005. №1. - С.14-20).A known method for the preparation and use of a bacterial preparation based on metabolic products of Bacillus subtitlis and an adsorbent of toxins - zeolite that binds and removes low molecular weight toxins, heavy metals and radionuclides from the body (see article by E.I. Tkachenko and others. Eradication therapy, including probiotics: consensus efficiency and safety // Clinical nutrition. - 2005. No. 1. - S.14-20).
К недостаткам данного способа следует отнести использование в его составе неочищенного цеолита, содержащего значительное количество нерастворимых солей и кварца, не участвующих в процессе адсорбции токсинов и, будучи неактивными компонентами адсорбента, выводящихся из организма в качестве балласта, создавая при этом необоснованную излишнюю нагрузку на желудочно-кишечный тракт пациента. При этом следует отметить, что препарат оказывает положительный эффект только при длительном (прием 2 раза в день в течение 2-3 недель) пероральном (внутреннее - через рот) применении и предназначен для лечения людей. Применение на животных этого препарата не предусмотрено, и в той форме производства (таблетки) использование его неэкономично и нецелесообразно.The disadvantages of this method include the use in its composition of crude zeolite containing a significant amount of insoluble salts and quartz that are not involved in the adsorption of toxins and, being inactive components of the adsorbent, excreted from the body as ballast, creating an unreasonable excessive load on the gastrointestinal tract intestinal tract of the patient. It should be noted that the drug has a positive effect only with prolonged (intake 2 times a day for 2-3 weeks) oral (internal - by mouth) use and is intended for the treatment of people. The use of this drug in animals is not provided, and in that form of production (tablets) its use is uneconomical and impractical.
Для использования биопрепаратов с лечебной целью наиболее экономичным, эффективным и целесообразным является парентеральное (подкожное, внутривенное, внутрибрюшинное) применение их, при котором эффект достигается за более короткие сроки и с меньшими расходами препаратов с одновременной более точной дозировкой. Однако парентеральное применение «Бактистатина» невозможно, поскольку при переводе препарата в жидкую (инъекционную) форму один из основных действующих компонентов препарата - цеолит выпадает в осадок и не попадает в организм, что ведет к резкому снижению лечебного эффекта. Кроме того, известная питательная среда (мясо-пептонный бульон - МПБ), используемая для культивирования Bacillus subtitlis ВКПМ № В-2335 (3), готовится из высокоценного пищевого продукта - говяжьего мяса высокого качества и дорогостоящего дефицитного компонента - пептона, вместе с тем не обеспечивает оптимального синтеза пробиотических веществ (лизоцима, бактериоцинов, ферментов, аминокислот), способствующих увеличению численности и метаболической активности бифидо- и лактобактерий (бифидогенных факторов), обладающих радиозащитными свойствами (см. автореф. диссертации Хафизова А.Ш. Изыскание радиозащитных средств из класса веществ микробного происхождения. - Казань, 2007, 19 с). Способ предполагает, кроме того, использование в «Бактистатине» труднодоступного и неполноценного по аминокислотному составу дорогостоящего пищевого продукта - гидролизата соевой муки, содержащей в своем составе только 2 незаменимые аминокислоты: лизин и метионин, причем в весьма незначительных количествах (0,2 и 0,096% против 8,85 и 1,4% в предлагаемом - гидролизате лактоальбумина) (см. справочник: Кормление сельскохозяйственных животных. - М.: Росагропромиздат, 1988, с.363, приложение 6).For the use of biological products for therapeutic purposes, the most economical, effective and appropriate is the parenteral (subcutaneous, intravenous, intraperitoneal) use of them, in which the effect is achieved in a shorter time and with lower costs of the drugs at the same time more accurate dosage. However, the parenteral use of "Bactistatin" is impossible, because when the drug is transferred into a liquid (injection) form, one of the main active components of the drug - zeolite precipitates and does not enter the body, which leads to a sharp decrease in the therapeutic effect. In addition, the well-known nutrient medium (meat-peptone broth - BCH) used for the cultivation of Bacillus subtitlis VKPM No. В-2335 (3) is prepared from a high-value food product - high-quality beef meat and an expensive scarce component - peptone, but at the same time not provides the optimal synthesis of probiotic substances (lysozyme, bacteriocins, enzymes, amino acids) that increase the number and metabolic activity of bifidobacteria and lactobacilli (bifidogenic factors), which have radioprotective properties (see abstract of the dissertation by A.Sh. Khafizov. Search for radioprotective agents from the class of substances of microbial origin. - Kazan, 2007, 19 p.). The method involves, in addition, the use in Baktistatin of an inaccessible and defective amino acid composition of an expensive food product - a soy flour hydrolyzate containing only 2 essential amino acids: lysine and methionine, and in very small quantities (0.2 and 0.096%) against 8.85 and 1.4% in the proposed hydrolyzate of lactoalbumin) (see reference: Feeding of farm animals. - M .: Rosagropromizdat, 1988, p.363, appendix 6).
Задачей предлагаемого изобретения является повышение эффективности способа защиты организма от радиационного поражения и сокращение сроков его применения.The objective of the invention is to increase the efficiency of the method of protecting the body from radiation damage and reduce the time of its use.
Поставленная задача решается тем, что в способ получения препарата, включающий получение культуральной жидкости Bacillus subtilis 3, добавление цеолита, согласно изобретению в качестве питательной среды используют гидролизат плацентарный эмбрионально-маточный тканей и органов животных (ГПЭМ), содержащий 90 мг % аминного азота, полученный из белоксодержащих отходов мясокомбинатов, - плаценты, эмбрионов и матки убойных животных, в качестве адсорбента токсических веществ - суспензиеобразующую монтмориллонитовую фракцию цеолита, а в качестве источника незаменимых аминокислот - гидролизат лактоальбумина (ГЛА), полученного из отходов молококомбинатов ферментативным путем, которые смешивают в соотношениях 1:1:0,5 соответственно, определяют количество сухого вещества в суспензии, стерилизуют, затем разливают во флаконы емкостью 100 или 200 см3, герметично закрывают и хранят в холодильнике при температуре 4-6°С. Кроме того, цеолит предварительно подвергают обработке соляной кислотой с последующим удалением растворимых солей и кварца дистиллированной водой, а из оставшихся частиц цеолита отмучивают частицы монтмориллонита величиной 0,0006-0,0009 мм, полученную фракцию высушивают. При этом полученный радиозащитный препарат вводят облученным животным однократно подкожно в дозах 7-10 см3 (мелким) и 15-20 см3 (крупным) из расчета 6,5-7,5 мг сухого вещества на 1 кг живой массы в первые 10 суток после облучения.The problem is solved in that in a method for producing a preparation, comprising obtaining a culture fluid of Bacillus subtilis 3, adding a zeolite, according to the invention, a placental embryonic uterine tissue and animal organs (GPEM) hydrolyzate containing 90 mg% of amine nitrogen obtained from protein-containing wastes of meat processing plants, - the placenta, embryos and uterus of slaughtered animals, as an adsorbent of toxic substances - suspension-forming montmorillonite fraction of zeolite, and as a source ika essential amino acids - lactalbumin hydrolyzate (GLA), obtained from waste by fermentation molokokombinatov which are mixed in ratios of 1: 1: 0.5, respectively, determine the amount of dry matter in the suspension is sterilized and then bottled in vials of 100 or 200 cm 3, tightly closed and stored in the refrigerator at a temperature of 4-6 ° C. In addition, the zeolite is preliminarily subjected to treatment with hydrochloric acid followed by removal of soluble salts and quartz with distilled water, and montmorillonite particles of 0.0006-0.0009 mm in size are elutriated from the remaining zeolite particles, and the obtained fraction is dried. In this case, the obtained radioprotective drug is administered to the irradiated animals once subcutaneously in doses of 7-10 cm 3 (small) and 15-20 cm 3 (large) at the rate of 6.5-7.5 mg of dry matter per 1 kg of live weight in the first 10 days after irradiation.
Существенным отличием способа получения и применения пробиотического препарата для лечения радиационных поражений организма животных является то, что вместо дорогостоящей питательной среды для культивирования продуцента пробиотиков Bacillus subtilis 3 используют более дешевую и общедоступную, но более полноценную питательную среду - гидролизат плацентарный эмбрионально-маточный (ГПЭМ), обеспечивающий максимальный направленный биосинтез пробиотических факторов штамма - продуцента, т.е. эта среда позволяет повысить скорость и количество образования пробиотических факторов за счет повышения концентрации биомассы в культивируемой среде и конкурентного ингибирования лимитирующих рост и биосинтез продуктов метаболизма штамма - продуцента. Использование гидролизата лактоальбумина вместо гидролизата соевой муки в предлагаемом способе обеспечивает максимальные благоприятные условия для бесконкурентного роста микрофлоры и восстановления нормального микробного пейзажа облученного организма.A significant difference between the method of preparation and use of a probiotic preparation for the treatment of radiation injuries in animals is that instead of an expensive nutrient medium, a cheaper and more accessible, but more complete nutrient medium, a placental fetal uterine hydrolyzate (GPEM), is used to cultivate the producer of probiotics Bacillus subtilis 3, providing maximum directed biosynthesis of probiotic factors of the producer strain, i.e. this medium makes it possible to increase the rate and amount of the formation of probiotic factors by increasing the concentration of biomass in the cultivated medium and by competitively inhibiting the growth and biosynthesis of metabolic products of the producer strain. The use of a lactoalbumin hydrolyzate instead of a soy flour hydrolyzate in the proposed method provides maximum favorable conditions for the uncompetitive growth of microflora and restoration of the normal microbial landscape of the irradiated organism.
Гидролизат плацентарный эмбрионально-маточный (ГПЭМ), используемый в качестве питательной среды для культивирования Вас. subtilis, получают из белоксодержащих отходов мясо-молочной промышленности согласно разработанной сотрудниками ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Казань) технологии (см. Новые бактериологические питательные среды для культивирования микроорганизмов: Методические рекомендации. - Казань, 1981; ст. С.Х.Хаертынова и др. «Бактериальные питательные среды из гидролизатов белоксодержащих отходов мясокомбинатов. - Ж-л «Ветеринария», 1991, №4, с.63-65). В качестве белоксодержащих отходов используют органы и ткани: плаценту, эмбрионы, матку лошадей, коров, овец и свиней, вместе взятые, количество которых в течение года только на одном (Казанском) мясокомбинате составляет не менее 100 т. Отходы измельчают по Хоттингеру при 45°С в течение 4-5 дней, затем проводят ферментативный гидролиз с помощью трипсина согласно общепринятой в микробиологии методике (см. кн. Дж. Мейнелл, Э.Мейнелл. Экспериментальная микробиология. - М.: Мир, 1967, с.59-61). Полученный по вышеописанной технологии препарат, названный «Гидролизат плацентарный эмбрионально-маточный (ГПЭМ)», по общему и аминному азоту, аминокислотному составу и содержанию липидов практически не отличается от МПБ, однако среда из ГПЭМ обеспечивает более активный рост бактерий, сохраняя генетическую стабильность микробной популяции, культивированной на среде из ГПЭМ. Существенным преимуществом использования ГПЭМ является то, что при этом ценнейший и дорогой пищевой продукт - говяжье мясо можно заменить непищевыми белоксодержащими отходами мясокомбинатов.The placental fetal uterine hydrolyzate (GPEM), used as a nutrient medium for cultivating you. subtilis, obtained from protein-containing wastes of the meat and dairy industry according to the technology developed by employees of the Federal State Institution FTsTRB-VNIVI (Kazan) (see New bacteriological nutrient media for the cultivation of microorganisms: Methodological recommendations. - Kazan, 1981; article S.Kh. Khaertinova and other. "Bacterial nutrient media from hydrolysates of protein-containing waste from meat processing plants. - Journal of Veterinary Medicine, 1991, No. 4, pp. 63-65). As protein-containing wastes, organs and tissues are used: placenta, embryos, uterus of horses, cows, sheep and pigs, taken together, the amount of which for a year at only one (Kazan) meat processing plant is at least 100 tons. Wastes are crushed according to Hottinger at 45 ° C for 4-5 days, then enzymatic hydrolysis is carried out using trypsin according to the generally accepted methodology in microbiology (see Prince J. Meinell, E. Meinell. Experimental Microbiology. - M.: Mir, 1967, pp. 59-61) . Obtained according to the above technology, the drug, called “placental embryonic uterine hydrolyzate (GPEM),” in terms of total and amine nitrogen, amino acid composition and lipid content practically does not differ from MPB, however, the medium from GPEM provides more active bacterial growth, while maintaining the genetic stability of the microbial population cultivated on medium from GPEM. A significant advantage of using GPEM is that at the same time, the most valuable and expensive food product - beef meat can be replaced with non-food protein-containing waste from meat processing plants.
Гидролизат лактоальбулина (ГЛА) коммерческий, используемый в способе получения и применения пробиотического препарата для лечения радиационных поражений организма животных, в качестве активатора кишечной нормофлоры и источника незаменимых аминокислот для обеспечения питательной потребности бифидо-, лактобактерий и клеток облученного макроорганизма, в отличие от предлагаемого (гидролизата соевой муки), согласно данным производителей питательной среды (фирмы «Ferak Berlin», «Serva», Германия; ТОО «Армед», Санкт-Петербург, ООО «Спектроскопия», Казань) содержит все незаменимые аминокислоты, %: валин (5,68), лейцин (7,05), изолейцин (4,16), треонин (5,87), лизин (1,12), триптофан - 1,18, фенилоланин (0,2), метионин (1,4), аминый азот (52,3), натрий (0,098), фосфаты (0,31). В отличие от предлагаемого известный (гидролизат соевой муки) содержит только 2 незаменимые аминокислоты: лизин (0,2%) и метионин (0,096%), что в 56 и 146 раз меньше соответственно, чем в гидролизате лактоальбулина (см. Справочник: Кормление с.-х. животных. - М.: Росагропромиздат, 1988, с.363, приложение 6).Lactoalbulin hydrolyzate (GLA) is a commercial hydrolyzate used in the method of producing and using a probiotic preparation for the treatment of radiation injuries of animals, as an activator of intestinal normoflora and a source of essential amino acids to ensure the nutritional needs of bifidobacteria, lactobacilli and irradiated macroorganism cells, in contrast to the proposed hydrolyzate soy flour), according to the data of the manufacturers of the nutrient medium (firms Ferak Berlin, Serva, Germany; Armed LLP, St. Petersburg, Spectroscopy LLC, Kazan) contains all the essential amino acids,%: valine (5.68), leucine (7.05), isoleucine (4.16), threonine (5.87), lysine (1.12), tryptophan - 1.18, phenylolanine (0.2), methionine (1.4), amine nitrogen (52.3), sodium (0.098), phosphates (0.31). In contrast to the proposed one, the known (soy flour hydrolyzate) contains only 2 essential amino acids: lysine (0.2%) and methionine (0.096%), which are 56 and 146 times less than in the lactoalbulin hydrolyzate (see Reference: Feeding with .-x. animals. - M .: Rosagropromizdat, 1988, p. 363, appendix 6).
Отечественная промышленность изготавливает для медицины коммерческий ферментативный гидролизат лактоглобулина, содержащий полноценный набор аминокислот согласно требованиям фармакопийной статьи ФС 42-630-72. Технология изготовления препарата, общепринятая в микробиологии, - это ферментативный гидролиз белков молока (альбумина, казеина) с использованием пепсина, панкреатина, трипсина или папаина (см. кн. Дж. Мейнелл, Э.Мейнелл. Экспериментальная микробиология. - М.: Мир, 1967, С.59-61).The domestic industry produces for medicine a commercial enzymatic hydrolyzate of lactoglobulin containing a complete set of amino acids according to the requirements of pharmacopoeial article FS 42-630-72. The manufacturing technology of the drug, generally accepted in microbiology, is the enzymatic hydrolysis of milk proteins (albumin, casein) using pepsin, pancreatin, trypsin or papain (see Prince J. Meinell, E. Meinell. Experimental Microbiology. - M.: Mir, 1967, S. 59-61).
В качестве антитоксического адсорбента и антиоксиданта, обеспечивающего связывание и выведение низкомолекулярных токсинов (хиноидного и липидного радиотоксинов), супероксидных радикалов (Н, ОН, Н2О2 и т.д.), тяжелых металлов и радионуклидов, в предлагаемом способе применяют высокоактивную, очищенную от кварца и растворимых солей, легкую фракцию цеолита, которая в смеси образует не выпадающую в осадок стабильную суспензию микрочастиц цеолита - адсорбента, обеспечивающего постепенное высвобождение иммобилизованных на нем компонентов биологически активной добавки (БАД), что позволяет длительное время (до 10 сут) поддерживать уровень активности препарата, являясь дополнительным источником микроэлементов, оказывающих, в совокупности с витаминами, ферментами и другими биологически активными компонентами культуральной жидкости, антиоксидантный радиозащитный эффект.As an antitoxic adsorbent and antioxidant that provides the binding and elimination of low molecular weight toxins (quinoid and lipid radiotoxins), superoxide radicals (H, OH, H 2 O 2 , etc.), heavy metals and radionuclides, the proposed method uses highly active, purified from quartz and soluble salts, a light fraction of zeolite, which in the mixture forms a stable suspension of microparticles of zeolite which does not precipitate, an adsorbent that provides for the gradual release of bi components immobilized on it of an active dietary supplement (BAA), which allows for a long time (up to 10 days) to maintain the level of activity of the drug, being an additional source of trace elements, which, together with vitamins, enzymes and other biologically active components of the culture fluid, have an antioxidant radioprotective effect.
Способ получения препарата для лечения радиационных поражений организма животных и способ лечения осуществляются следующим образом.A method of obtaining a drug for the treatment of radiation injuries of an animal organism and a treatment method are as follows.
На первом этапе в стерильные стеклянные колбы емкостью 1 (3,5) л наливают 666,6 см3 дистиллированной воды (например, при приготовлении 1 л питательной среды), в которую вносят 333,4 см3 основного раствора гидролизата плацентарного эмбрионально-маточного (ГПЭМ), содержащего 90 мг % аминного азота, калия фосфорнокислого однозамещенного - 0,543 г, натрия фосфорнокислого двухзамещенного - 5,450 г и натрия хлористого - 5,450 г, рН доводят до 7,2-7,4, полученную среду подвергают стерилизации автоклавированием и используют для выращивания штамма - продуцента.At the first stage, 666.6 cm 3 of distilled water is poured into sterile glass flasks with a capacity of 1 (3.5) l (for example, when preparing 1 l of culture medium), into which 333.4 cm 3 of the main solution of the placental fetal uterine hydrolyzate ( GPEM) containing 90 mg% of amine nitrogen, monosubstituted potassium phosphate - 0.543 g, disubstituted sodium phosphate - 5.450 g and sodium chloride - 5.450 g, the pH was adjusted to 7.2-7.4, the resulting medium was sterilized by autoclaving and used for growing producer strain.
В приготовленную вышеописанным способом питательную среду засевают 7-суточную споровую агаровую культуру Bacillus subtilis 3 и термостатируют в течение 24 часов при температуре 37°С, затем после определения концентрации микробов среду культивирования подвергают центрифугированию при 5000 об/мин в течение 15 мин, полученный супернатант декантируют, в ней определяют сухое вещество, которое составляет в пределах 29-31 мг на 1 мл. Полученную культуральную жидкость в дальнейшем используют в качестве основного компонента в предлагаемом препарате.A 7-day spore agar culture of Bacillus subtilis 3 is seeded in the culture medium prepared as described above and incubated for 24 hours at 37 ° C, then after determining the concentration of microbes, the culture medium is centrifuged at 5000 rpm for 15 minutes, the resulting supernatant is decanted , it determines the dry matter, which is in the range of 29-31 mg per 1 ml. The resulting culture fluid is subsequently used as the main component in the proposed drug.
Микробные клетки штамма-продукта пробнотических веществ - Bacillus subtilis 3 являются строгими аэробами, поэтому на жидких питательных средах растут в виде клеток. Микроскопически представляются в виде одиночных клеток стрептобацилл. Клетки подвижны, движения цепочек ундулирующего типа. На питательных средах легко спорулируют. Споры эллипсоидные или цилиндрические (0,6-0,9×1,0-1,5 мкм).Microbial cells of the strain of the product of probonic substances - Bacillus subtilis 3 are strict aerobes, therefore, they grow in the form of cells on liquid nutrient media. Microscopically presented as single streptobacilli cells. Cells are mobile, the movement of chains undulating type. On nutrient media easily sporulate. Spores are ellipsoidal or cylindrical (0.6-0.9 × 1.0-1.5 microns).
Вас.subtilis умеренно гидролизует желатин, крахмал, редуцирует нитраты, молоко не свертывает, в анаэробных условиях сбраживает углеводы. В процессе роста на жидких питательных средах Вас. subtilis вырабатывает антибактериальные субстанции (бактериоцины, лизоцим, каталаза). Наиболее высокой биологической активностью обладают продуцируемые микроорганизмом антибиотики бацитрацин - 10,-20, -30, субтилин, амилосубтилин, протосубтилин. Наиболее высокой антибактериальной активностью обладают А, В, С, D, Е, F1-F3 из - бацитрацины. Бацитрацин А, содержащий 10 аминокислот (L-изолейцин, L-лейцин, D-фенилаланин, L-цистеин, L- и D-аспарагиновые кислоты, D-глутаминовую кислоту, L-гистидин, L-лизин и D-орнитин), губительно действует на аэробные и анаэробные грамположительные микроорганизмы (см. кн. Н.П.Блинов. Общие закономерности строения и развития микробов - продуцентов биологически активных веществ. - П.: Медицина, 1977, с.184-184).Vas.subtilis moderately hydrolyzes gelatin, starch, reduces nitrates, milk does not clot, under anaerobic conditions it ferments carbohydrates. In the process of growing on liquid nutrient media you. subtilis produces antibacterial substances (bacteriocins, lysozyme, catalase). The antibiotics produced by the microorganism bacitracin - 10, -20, -30, subtilin, amylosubtilin, protosubtilin possess the highest biological activity. The highest antibacterial activity is possessed by A, B, C, D, E, F 1 -F 3 from - bacitracins. Bacitracin A containing 10 amino acids (L-isoleucine, L-leucine, D-phenylalanine, L-cysteine, L- and D-aspartic acids, D-glutamic acid, L-histidine, L-lysine and D-ornithine) is harmful acts on aerobic and anaerobic gram-positive microorganisms (see book. NP Blinov. General laws of the structure and development of microbes - producers of biologically active substances. - P .: Medicine, 1977, p.184-184).
Ферменты, вырабатываемые Вас. subtilis, представлены каталазой, амилазой, целлюлазой, липазой, лизоцимом, протеазой (см. статью Е.И.Ткаченко и др. Эрадикационная терапия, включающая пробиотики: консенсус эффективности и безопасности // Клиническое питание, 2005, №1, с.14-20; Методические рекомендации «Коррекция нарушений кишечного микробиоценоза пробиотиками на основе природного адсорбента». СПб., 2005, 11 с.; Рекламный проспект «Бактистатин»).Enzymes produced by you. subtilis are represented by catalase, amylase, cellulase, lipase, lysozyme, protease (see article by E.I. Tkachenko et al. Eradication therapy, including probiotics: consensus of efficacy and safety // Clinical Nutrition, 2005, No. 1, p.14- 20; Methodological recommendations “Correction of intestinal microbiocenosis disorders with probiotics based on a natural adsorbent.” St. Petersburg, 2005, 11 pp .; Bactistatin advertising brochure).
На втором этапе проводят активирование природного сорбента - цеолита путем выделения из него наиболее активной и высокосорбционной фракции. Для этого цеолит подвергают специальной обработке. Для разрушения карбонатов глину обрабатывают 1 н. соляной кислотой, а затем 0,1 н. Образовавшиеся растворимые соли и кварц удаляют путем отмывания дистиллированной водой. Для этого глину с помощью воды переносят в вегетационные стаканы (20×12 см). На каждый стакан наносят метки: первая - на высоте 3 см от дна, вторая - на 7 см выше, третья - на 7 см выше второй. Дистиллированную воду доливают до третьей метки, взмучивают в ней цеолит и оставляют на 12 ч для отстаивания. Когда твердая часть глины оседает, а над ней остается прозрачная жидкость, то последнюю удаляют сифоном и вновь наливают дистиллированной воды до верхней метки. Когда суспензия остается во взвешенном состоянии, приступают к отмучиванию частиц величиной 0,0006-0,0009 мм. Для этого в стакан наливают дистиллированную воду до верхней метки, содержимое перемешивают, через 24 ч погружают сифон на глубину 7 см и с его помощью суспензию переливают в стакан приемник. Отмучивание продолжают до просветления суспензии. В стаканы-приемники к каждой новой порции суспензии добавляют 3-4 капли концентрированной соляной кислоты для коагуляции и осаждения суспензии. Фракцию отмывают дистиллированной водой, а затем высушивают в водяной бане и используют в качестве сорбционного компонента в иммунопробиотическом препарате.At the second stage, the natural sorbent, zeolite, is activated by isolating the most active and highly sorption fraction from it. For this, the zeolite is subjected to special treatment. To destroy carbonates, clay is treated with 1 N. hydrochloric acid, and then 0.1 N. The resulting soluble salts and quartz are removed by washing with distilled water. To do this, clay with water is transferred into vegetation glasses (20 × 12 cm). Labels are applied to each glass: the first is at a height of 3 cm from the bottom, the second is 7 cm higher, the third is 7 cm higher than the second. Distilled water is added to the third mark, zeolite is stirred up in it and left for 12 hours to settle. When the solid part of the clay settles, and a clear liquid remains above it, the latter is removed by a siphon and distilled water is poured again to the top mark. When the suspension remains in suspension, proceed to the elutriation of particles with a size of 0.0006-0.0009 mm To do this, distilled water is poured into the glass to the top mark, the contents are mixed, after 24 hours the siphon is immersed to a depth of 7 cm and with its help the suspension is poured into the receiver glass. Elutriation is continued until the suspension is clarified. For each new portion of the suspension, 3-4 drops of concentrated hydrochloric acid are added to the receiver glasses to coagulate and precipitate the suspension. The fraction is washed with distilled water, and then dried in a water bath and used as a sorption component in an immunoprobiotic preparation.
На следующем этапе приготавливают радиозащитную композицию на основе культуральной жидкости Bacillus subtilis, монтмориллонитовой фракции цеолита и гидролизата лактоальбумина. Для составления пробиотической композиции берут определенное количество (например, 100 см3) культуральной жидкости Bacillus subtilis 3, содержащей 29-31 мг сухого вещества в 1 см3 препарата, в нее вносят порошок растворимой (суспензиеобразующей) фракции цеолита в количестве 29-31 мг на 1 см3 среды и порошок гидролизата лактоальбумина в количестве 14,5-15,5 мг на 1 см3 культуральной жидкости, смесь тщательно перемешивают, определяют в ней содержание биологически активных веществ (сухого вещества), которое колеблется в пределах 73,5-77,5 мг на 1 см3 среды, затем композицию подвергают стерилизации общепринятыми в микробиологии методами.At the next stage, a radioprotective composition is prepared on the basis of Bacillus subtilis culture liquid, montmorillonite fraction of zeolite and lactoalbumin hydrolyzate. To compose a probiotic composition, a certain amount (for example, 100 cm 3 ) of Bacillus subtilis 3 culture liquid containing 29-31 mg of dry matter in 1 cm 3 of the preparation is taken, a powder of a soluble (suspension-forming) fraction of zeolite in an amount of 29-31 mg 1 cm 3 of medium and lactoalbumin hydrolyzate powder in an amount of 14.5-15.5 mg per 1 cm 3 of culture liquid, the mixture is thoroughly mixed, the content of biologically active substances (dry matter) is determined in it, which ranges from 73.5-77 5 mg per 1 cm 3 medium, then com the position is sterilized by methods generally accepted in microbiology.
Для определения ареактогенности и безвредности полученного препарата последний в различных дозах (1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0 и 10,0 мг/кг живой массы) перорально, внутримышечно, внутривенно и внутрибрюшинно, одно-, двух- и трехкратно с интервалом 30, 45, 60, 120 мин вводят белым мышам, используя по 6 животных на каждый вариант опыта, учитывая наличие или отсутствие адекватной или неадекватной реакции на препарат. Установлено, что использование препарата при всех вариантах опыта побочных реакций не вызывало: животные были активны, охотно принимали корм и воду, адекватно реагировали на естественные раздражители, что свидетельствует об ареактогенности препарата и переносимости ими использованного диапазона доз, путей и кратности введения.To determine the areactogenicity and harmlessness of the resulting drug, the latter in various doses (1.0; 2.0; 3.0; 4.0; 5.0; 6.0; 7.0; 8.0; 9.0 and 10, 0 mg / kg live weight) is administered orally, intramuscularly, intravenously and intraperitoneally, once, twice and three times with an interval of 30, 45, 60, 120 minutes to white mice, using 6 animals for each experiment, given the presence or absence of adequate or inadequate reaction to the drug. It was established that the use of the drug in all variants of the experience of adverse reactions did not cause: the animals were active, willingly took food and water, adequately responded to natural stimuli, which indicates the arereactogenicity of the drug and their tolerance to the used range of doses, routes and frequency of administration.
Полученный по вышеописанному способу пробиотический комплекс на основе активной фракции цеолита, продуктов микробного метаболизма и гидролизата лактоальбумина используют в качестве радиозащитного (лечебного) средства на облученных в летальных дозах лабораторных и сельскохозяйственных животных.Obtained by the above method, a probiotic complex based on the active fraction of zeolite, products of microbial metabolism and lactoalbumin hydrolyzate is used as a radioprotective (therapeutic) agent in laboratory and farm animals irradiated in lethal doses.
Радиозащитное действие предлагаемого трехкомпонентного пробиотического препарата осуществляется путем иммуномодулирующего действия синтезируемых Bacillus subtilis биологически активных веществ (различных ферментов и коферментов, аминокислот, полипептидов, пробиотических компонентов), способствующих улучшению микроэкологических условий в кишечнике, оказывает бактериостатическое и бактерицидное действие по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре, антиаллергическое действие, обеспечивает питательные потребности нормальной микрофлоры кишечника и клеток макроорганизма благодаря входящему в его состав гидролизату лактоальбумина, являющемуся источником аминокислот, оказывает антитоксическое действие за счет высокоактивной фракции цеолита, связывающего и выводящего низкомолекулярные токсины (метан, сероводород, аммиак), радиотоксины (супероксидные радикалы, эпоксиды, о-фенолы, о-хиноны, малоновый диальдегид, продукты липопероксидации липидов, белков и т.д.), тяжелые металлы и радионуклиды, нормализации процессов липопероксидации, пополнения резервов антиоксидантной системы и усиления антиоксидантной активности крови.The radioprotective effect of the proposed three-component probiotic preparation is carried out by the immunomodulatory effect of biologically active substances synthesized by Bacillus subtilis (various enzymes and coenzymes, amino acids, polypeptides, probiotic components) that contribute to the improvement of microecological conditions in the intestine, has a bacteriostatic and bactericidal effect against opportunistic and pathogenic microflora, anti-allergic effect, provides nutritional needs normal due to the hydrolyzate of lactoalbumin, which is a source of amino acids, its microflora of the intestine and macroorganism cells have an antitoxic effect due to the highly active fraction of zeolite that binds and removes low molecular weight toxins (methane, hydrogen sulfide, ammonia), radiotoxins (superoxide radicals, epoxides, o-phenols , o-quinones, malondialdehyde, lipoperoxidation products of lipids, proteins, etc.), heavy metals and radionuclides, normalization of lipoperoxidation processes, replenishment of reserves ioksidantnoy system and enhance the antioxidant activity of the blood.
Способ получения препарата для лечения радиационных поражений организма животных и способ лечения радиационных поражений организма животных иллюстрируется следующими примерами.A method for producing a preparation for treating radiation injuries of an animal organism and a method for treating radiation injuries of an animal organism is illustrated by the following examples.
Пример 1. Изучение возможности замены питательной среды для выращивания Bacillus subtilis в пробиотическом препарате. Для получения культуральной среды штамм-продуцент высевали на предлагаемую среду, приготовленную вышеописанным способом на основе гидролизата плацентарного эмбрионально-маточного (ГПЭМ), и на обычную (мясо-пептонный бульон - МПБ), посевы с тест-микробом термостатировали в течение 24 ч при температуре 37°С, по истечении указанной экспозиции в культуральных средах определяли концентрацию микробных клеток. Установлено, что концентрация микробов в культуральной среде с ГПЭМ составляла в пределах 2,3·10±0,359 м.к./мл, в то время как при использовании известной питательной среды (МПБ) концентрация их не превышала 1,1·10±0,419 м.к./мл клеток. Поскольку количество синтезируемых пробиотических факторов (ферментов, витаминов, антибиотиков и т.д.) прямо пропорционально концентрации микробных клеток в культуральной среде (см. кн. С. Дж. Перт. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. - М.: Мир, 1978, с.299), справедливо было допустить, что пробиотический препарат, изготовленный на основе культуральной жидкости, полученной путем выращивания штамма-продуцента на предлагаемой питательной среде (ГПЭМ), должен был обладать более высокой радиозащитной эффективностью.Example 1. The study of the possibility of replacing the nutrient medium for growing Bacillus subtilis in a probiotic preparation. To obtain a culture medium, the producer strain was seeded on the proposed medium, prepared as described above on the basis of the placental embryonic uterine hydrolyzate (GPEM), and on the usual (meat-peptone broth - MPB), the crops with the test microbe were incubated for 24 hours at a temperature 37 ° C, after the specified exposure in culture media, the concentration of microbial cells was determined. It was found that the concentration of microbes in the culture medium with GPEM was in the range 2.3 · 10 ± 0.35 9 m.k./ ml, while when using a known nutrient medium (MPB), their concentration did not exceed 1.1 · 10 ± 0.41 9 mk./ ml of cells. Since the amount of synthesized probiotic factors (enzymes, vitamins, antibiotics, etc.) is directly proportional to the concentration of microbial cells in the culture medium (see Prince S. J. Perth. Fundamentals of the cultivation of microorganisms and cells. - M .: Mir, 1978, p.299), it was fair to admit that a probiotic preparation made on the basis of culture fluid obtained by growing a producer strain on the proposed nutrient medium (GPEM) should have a higher radioprotective efficacy.
Для проверки справедливости такого допущения готовили два варианта пробиотичного препарата на основе культуральной жидкости, полученной путем выращивания штамма-продуцента (Вас. subtilis) на известной (МПБ) и предлагаемой (ГПЭМ) питательных средах с сохранением состава остальных компонентов. Полученные варианты пробиотиков использовали на радиозащитную активность на облученных в летальной дозе (7,7 Гр) 30 белых мышах, разделенных на 3 группы по 10 животных в каждой. Животные 1-й группы через 24 ч после облучения перорально получали пробиотик, приготовленный по известному способу, 2-й группы - по предлагаемому и 3-й - препараты не получали (контроль облучения). Установлено, что выживаемость в 1-й группе составляла 20%, 2-й - 30% и 3-й - 0%. Следовательно, замена питательной среды МПБ в известном на предлагаемую (ГПЭМ) позволяет повышать радиозащитную эффективность препарата.To verify the validity of this assumption, two variants of a probiotic preparation were prepared on the basis of culture fluid obtained by growing the producer strain (Vas. Subtilis) on known (MPB) and proposed (GPEM) nutrient media with preserving the composition of the remaining components. The obtained probiotic variants were used for radioprotective activity on 30 white mice irradiated in a lethal dose (7.7 Gy), divided into 3 groups of 10 animals each. Animals of the 1st group 24 hours after irradiation orally received a probiotic prepared according to the known method, the 2nd group according to the proposed method and the 3rd group did not receive drugs (radiation control). It was found that the survival rate in the 1st group was 20%, the 2nd - 30% and the 3rd - 0%. Therefore, the replacement of the BCH nutrient medium in the known by the proposed (GPEM) allows you to increase the radioprotective effectiveness of the drug.
Пример 2. Изучение возможности замены соевой муки в известном на гидролизат лактоальбумина в предлагаемом пробиотике. Для этой цели готовили 3 варианта пробиотика: 1-й - с использованием известной технологии на основе культуральной жидкости Вас. subtilis, выделенной на среде МПБ, с добавлением соевой мукой и цеолита, 2-й - с использованием той же среды, с заменой соевой муки на гидролизат лактоальбумина и добавлением цеолита, 3-й - с использованием среды ГПЭМ, гидролизата лактоальбумина и цеолита. Полученные варианты пробиотиков использовали на радиозащитную готовность на облученных в летальной дозе (7,7 Гр) белых мышах, разделенных на 4 группы по 15 животных в каждой. Животные 1-й группы перорально получали пробиотик, приготовленный по известной технологии, 2-й группы - пробиотик, приготовленный по второму варианту с заменой соевой муки на гидролизат лактоальбумина, 3-й - пробиотик, приготовленный по третьему варианту с заменой МПБ на среду ГПЭМ; 4-я группа облученных животных не получала никакие препараты и служила контролем облучения. Установлено, что выживаемость в 1-й группе составила 26,6%, 2-й - 33,3%, в 3-й - 46,6% и в четвертой - 0%. Следовательно, замены известной среды МПБ на ГПЭМ и соевой муки на гидролизат лактоальбумина приводила к существенному увеличению радиозащитной активности пробиотика, которая составила 46,6% против 26,6% в известном.Example 2. The study of the possibility of replacing soy flour in the known hydrolyzate of lactoalbumin in the proposed probiotic. For this purpose, 3 versions of the probiotic were prepared: 1st — using known technology based on the culture fluid of you. subtilis, isolated on BCH medium, with the addition of soy flour and zeolite, the 2nd using the same medium, replacing soy flour with a lactoalbumin hydrolyzate and adding zeolite, the 3rd using GPEM medium, lactoalbumin hydrolyzate and zeolite. The obtained probiotic variants were used for radioprotective preparedness on white mice irradiated in a lethal dose (7.7 Gy), divided into 4 groups of 15 animals each. Animals of the 1st group orally received a probiotic prepared according to the known technology, the 2nd group received a probiotic prepared according to the second variant with the replacement of soy flour with lactoalbumin hydrolyzate, the 3rd group received the probiotic prepared according to the third variant with the replacement of MPB with GPEM medium; The 4th group of irradiated animals did not receive any preparations and served as radiation control. It was found that the survival rate in the 1st group was 26.6%, the 2nd - 33.3%, in the 3rd - 46.6% and in the fourth - 0%. Therefore, the replacement of the known medium of MPB with GPEM and soy flour with a lactoalbumin hydrolyzate led to a significant increase in the radioprotective activity of the probiotic, which amounted to 46.6% versus 26.6% in the known one.
Пример 3. Изучение возможности парентерального применения известного и предлагаемого пробиотика для радиозащиты организма.Example 3. The study of the possibility of parenteral use of the known and proposed probiotic for radioprotection of the body.
Для этой цели проводили опыты на 75 облученных в дозе 7,7 Гр белых мышах, разделенных на 5 групп по 15 животных в каждой. Через 24 ч после облучения животные 1-й группы в течение 3 дней перорально получали известный препарат в дозе по 1,0 мл на каждый прием; 2-й группы - в аналогичных условиях и дозах предлагаемый пробиотик, 3-й - известный пробиотик вводили подкожно по 0,33 мл трехкратно, 4-й - в аналогичных условиях и дозах - предлагаемый пробиотик также подкожно. Облученным животным 5-й группы препараты не вводили (контроль облучения).For this purpose, experiments were conducted on 75 white mice irradiated at a dose of 7.7 Gy, divided into 5 groups of 15 animals each. 24 hours after irradiation, animals of the 1st group received oral medication in a dose of 1.0 ml per dose for 3 days; Group 2 — under similar conditions and doses, the proposed probiotic; 3rd — known probiotic was administered subcutaneously in 0.33 ml three times; 4th — under similar conditions and doses — the proposed probiotic is also subcutaneous. Irradiated animals of the 5th group were not administered drugs (radiation control).
Установлено, что выживаемость в 1-й группе составила 40%, 2-й - 30%, 3-й - 45%, 4-й - 40% и 5-й - 0%. При этом перед подкожным введением раствора препаратов было отмечено, что цеолит, содержащийся в пробиотике, несмотря на тщательное перемешивание перед инъекцией выпадает в осадок, а на месте инъекции у животных образовывался нерассасывающийся горошек, состоящий из цеолита. Это свидетельствует о нецелесообразности и невозможности парентерального применения препарата, а при пероральном применении его радиозащитный эффект был неудовлетворительным (до 30% защиты).It was found that survival in the 1st group was 40%, the 2nd - 30%, the 3rd - 45%, the 4th - 40% and the 5th - 0%. At the same time, before subcutaneous injection of the drug solution, it was noted that the zeolite contained in the probiotic, despite careful mixing before injection, precipitated, and at the injection site, non-absorbable peas formed of zeolite formed in animals. This indicates the inappropriateness and impossibility of parenteral use of the drug, and when administered orally, its radioprotective effect was unsatisfactory (up to 30% protection).
Пример 4. Испытание радиозащитной эффективности пробиотического препарата на основе суспензиеобразующей фракции цеолита. Для этой цели предварительно цеолит подвергали специальной обработке соляной кислотой с последующим удалением дистиллированной водой растворимых солей кварца.Example 4. Testing the radioprotective efficacy of a probiotic preparation based on a suspension-forming fraction of zeolite. For this purpose, the zeolite was preliminarily subjected to special treatment with hydrochloric acid, followed by removal of soluble quartz salts with distilled water.
Из оставшихся после химической обработки цеолит подвергали селективному фракционированию с последующим отмучиванием микрочастиц величиной 0,0006-0,0009 мм. Выделенную легкую фракцию цеолита высушивали и использовали в качестве адсорбирующего компонента в предлагаемом пробиотике. Перед использованием полученной легкой фракции цеолита проверяли его суспензиеобразующую способность путем суспендирования на жидких средах (воде, сыворотке, лимфе, экстрактах). Установлено, что используемая фракция цеолита, в отличие от нативного, после суспендирования в жидкой фазе длительное время не выпадала в осадок, т.е. обладала суспензиеобразующей способностью.Of the remaining after chemical treatment, the zeolite was subjected to selective fractionation, followed by elutriation of microparticles of 0.0006-0.0009 mm. The isolated light fraction of zeolite was dried and used as an absorbent component in the proposed probiotic. Before using the obtained light fraction of zeolite, its suspension-forming ability was checked by suspending on liquid media (water, serum, lymph, extracts). It was established that the used zeolite fraction, in contrast to the native one, after suspension in the liquid phase did not precipitate for a long time, i.e. had a suspension-forming ability.
С использованием полученной фракции цеолита был приготовлен предлагаемый вариант пробиотика на основе культуральной жидкости Вас.subtilis на среде ГПЭМ и гидролизата лактоальбумина с последующей оценкой радиозащитной активности препарата.Using the obtained zeolite fraction, the proposed probiotic variant was prepared on the basis of Vas.subtilis culture liquid on GPEM and lactoalbumin hydrolyzate, followed by evaluation of the radioprotective activity of the drug.
Для оценки радиозащитной активности препарата опыты ставили на облученных в дозе 7,7 Гр белых мышах, разделенных на 3 группы (1-я, 2-я - опытные, 3-я - контроль облучения). Животным 1-й группы через 24 часа после облучения трехкратно (ежедневно в течение 3 дней) перорально (через зонд) вводили по 1 мл раствора препарата, 2-й группе - подкожно, одно-, двух- и трехкратно по 0,33 раствора препарата, 3-я группа препарат не получала и служила контролем облучения.To assess the radioprotective activity of the drug, experiments were performed on irradiated at a dose of 7.7 Gy white mice, divided into 3 groups (1st, 2nd — experimental, 3rd — radiation control). Animals of the 1st group, 24 hours after irradiation, were injected three times (daily for 3 days) with 1 ml of the drug solution orally (via the probe), and the second group was administered subcutaneously, once, twice and three times with 0.33 solution of the drug The 3rd group did not receive the drug and served as a radiation control.
Установлено, что трехкратное пероральное введение препарата и однократное подкожное введение раствора испытуемого препарата оказывали идентичное радиозащитное действие, обеспечивая 60%-ную защиту животных от радиационной гибели. Увеличение кратности подкожного (2-3-кратно) введения раствора препарата не приводило к увеличению радиозащитного эффекта, уменьшение кратности перорального введения приводило к снижению радиозащитного эффекта. Таким образом, замена нативного цеолита на суспензиеобразующую фракцию его приводила к значительному усилению радиозащитного эффекта (на 20% по сравнению с известным). При этом отмечено, что подкожное введение препарата имело преимущество перед пероральным, поскольку при этом расход препарата сокращался в 3 раза и высокий радиозащитный эффект достигался при однократном введении препарата, что гораздо более технологично, удобно, легко и точно дозируемо по сравнению с пероральным применением пробиотика.It was found that triple oral administration of the drug and single subcutaneous administration of the solution of the test drug had an identical radioprotective effect, providing 60% protection of animals from radiation death. An increase in the multiplicity of subcutaneous (2-3-fold) administration of the drug solution did not lead to an increase in the radioprotective effect; a decrease in the multiplicity of oral administration led to a decrease in the radioprotective effect. Thus, the replacement of the native zeolite with its suspension-forming fraction led to a significant increase in the radioprotective effect (by 20% compared to the known one). It was noted that subcutaneous administration of the drug had an advantage over oral administration, since the consumption of the drug was reduced by 3 times and a high radioprotective effect was achieved with a single administration of the drug, which is much more technologically advanced, convenient, easy and accurately dosed in comparison with oral administration of probiotic.
Пример 5. Определение оптимального соотношения компонентов в предлагаемом препарате. Перед постановкой опытов получали варианты препарата, содержащие различные соотношения компонентов: 1:1:1; 0,5:0,5:0,5; 1:0,5:0,5; 1:1:0,5; 1:0,5:1 сухого вещества культуральной жидкости Bacillus subtilis на основе среды ГПЭМ, легкой (растворимой, суспензиеобразующей) фракции цеолита и гидролизата лактоальбумина соответственно. Полученные варианты препарата испытывали на 60 облученных вExample 5. Determination of the optimal ratio of components in the proposed drug. Before setting up the experiments, drug variants containing various ratios of components were obtained: 1: 1: 1; 0.5: 0.5: 0.5; 1: 0.5: 0.5; 1: 1: 0.5; 1: 0.5: 1 dry matter of the Bacillus subtilis culture fluid based on GPEM medium, a light (soluble, suspension-forming) fraction of the zeolite and lactoalbumin hydrolyzate, respectively. The obtained drug variants were tested on 60 irradiated
ЛД100 белых мышах, разделенных на 6 групп по 10 животных соответственно. Животные 1-й группы через 24 ч после облучения получали подкожно однократно препарат с соотношением вышеуказанных компонентов 1:1:1; 2-й - 0,5:0,5:0,5; 3-й - 1:0,5:0,5; 4-й - 1:1:0,5; 5-й - 1:0,5:1. Шестая группа животных препараты не получала и служила контролем облучения. Установлено, что выживаемость животных в 1-й, 2-й, 3-й и 5-й группах составляла 50-60%, в 4-й - 80% при 100%-ной гибели животных в 6-й группе.LD 100 white mice, divided into 6 groups of 10 animals, respectively. Animals of the 1st group 24 hours after irradiation received a subcutaneous dose once with a ratio of the above components 1: 1: 1; 2nd - 0.5: 0.5: 0.5; 3rd - 1: 0.5: 0.5; 4th - 1: 1: 0.5; 5th - 1: 0.5: 1. The sixth group of animals did not receive drugs and served as radiation control. It was found that the survival rate of animals in the 1st, 2nd, 3rd and 5th groups was 50-60%, in the 4th - 80% with 100% death of animals in the 6th group.
Пример 6. Определение оптимальной лечебной дозы радиозащитного действия препарата при парентеральном (подкожном) введении.Example 6. Determination of the optimal therapeutic dose of the radioprotective effect of the drug with parenteral (subcutaneous) administration.
Для определения оптимальной лечебной дозы готовили различные концентрации препарата по содержанию биологически активных веществ (БАВ), т.е. по содержанию сухого вещества в нем. Для этого препарат подвергали лиофилизации и полученный сухой осадок растворяли в стерильной кипяченой воде в концентрациях 100,0; 50,0; 25,0; 12,5; 6,25; 3,12; 1,3; 1,25; 1,12; 0,6 мг/мл. Перечисленные концентрации препарата подкожно однократно вводили облученным в летальной дозе (7,7 Гр) 120 белым мышам (по 12 животных на каждую концентрацию препарата) в количестве по 0,1 мл на животное.To determine the optimal therapeutic dose, various concentrations of the drug were prepared according to the content of biologically active substances (BAS), i.e. by the dry matter content in it. For this, the preparation was lyophilized and the resulting dry precipitate was dissolved in sterile boiled water at concentrations of 100.0; 50.0; 25.0; 12.5; 6.25; 3.12; 1.3; 1.25; 1.12; 0.6 mg / ml. The listed concentrations of the drug were subcutaneously administered once to a white mouse irradiated in a lethal dose (7.7 Gy) to 120 white mice (12 animals per concentration of the drug) in an amount of 0.1 ml per animal.
Установлено, что при подкожном введении препарата в концентрациях 100,0-50,0 мг/мл выживаемость животных составляла 80%. При введении животным менее концентрированных растворов наблюдалось постепенное снижение радиозащитной активности препарата с 60 до 15% соответственно. Следовательно, оптимальной лечебной дозой препарата является содержание активно действующих веществ в концентрациях от 5,0 до 10,0 мг/кг живой массы, что в среднем составляет 7,5 мг/кг животного.It was found that with subcutaneous administration of the drug at concentrations of 100.0-50.0 mg / ml, the survival rate of animals was 80%. With the introduction of less concentrated solutions to animals, a gradual decrease in the radioprotective activity of the drug was observed from 60 to 15%, respectively. Therefore, the optimal therapeutic dose of the drug is the content of active substances in concentrations from 5.0 to 10.0 mg / kg body weight, which averages 7.5 mg / kg of animal.
Пример 7. Определение длительности радиозащитного действия препарата.Example 7. Determination of the duration of the radioprotective effect of the drug.
Для определения длительности (продолжительности) радиозащитного действия препарата опыты проводили на 100 облученных в дозе ЛД100 (7,7 Гр) белых мышах, разделенных на 10 групп по 10 животных в каждой. Животным соответствующих групп через 1 (1-я), 2 (2-я), 3 (3-я), 4 (4-я), 5 (5-я), 6 (6-я), 7 (7-я), 8 (8-я), 9 (9-я) и 10 сут (10-я) однократно подкожно вводили препарат в оптимальной лечебной дозе (по 0,1 мл, 7,0 мг/кг живой массы) и в течение 30 сут вели наблюдение, регистрируя павших и выживших животных. Установлено, что в первых 8 группах за весь период наблюдения гибели мышей не наблюдалось, только лишь в 9-й и 10-й группах пали по 1 животному. Следовательно, после однократного подкожного введения препарата облученным животным радиозащитный эффект сохраняется в течение 8-10 сут, составляя 90-100% защиты животных от радиационной гибели.To determine the duration (duration) of the radioprotective effect of the drug, experiments were performed on 100 white mice irradiated with a dose of LD 100 (7.7 Gy), divided into 10 groups of 10 animals each. Animals of the corresponding groups through 1 (1st), 2 (2nd), 3 (3rd), 4 (4th), 5 (5th), 6 (6th), 7 (7th i), 8 (8th), 9 (9th) and 10 days (10th), the drug was administered subcutaneously once in the optimal therapeutic dose (0.1 ml, 7.0 mg / kg body weight) and For 30 days, they observed by recording dead and surviving animals. It was found that in the first 8 groups for the entire period of observation the death of mice was not observed, only in the 9th and 10th groups 1 animal fell. Therefore, after a single subcutaneous administration of the drug to an irradiated animal, the radioprotective effect persists for 8-10 days, amounting to 90-100% of the protection of animals from radiation death.
Сравнительная характеристика способов получения и применения радиозащитных препаратов представлена в таблице. Как видно из ее данных, предлагаемый способ позволяет значительно повысить радиозащитный эффект известного за счет замены основных компонентов пробиотика на более экономичные, доступные и биологически активные компоненты и сократить сроки лечения более чем в 40 раз.Comparative characteristics of the methods for the preparation and use of radioprotective drugs are presented in the table. As can be seen from its data, the proposed method can significantly increase the radioprotective effect of the known by replacing the main components of the probiotic with more economical, affordable and biologically active components and reduce treatment time by more than 40 times.
Сравнительная характеристика способов приготовления и применения радиозащитных пробиотических препаратовTable
Comparative characteristics of the methods of preparation and use of radioprotective probiotic preparations
ния Вас. subtilisGrowing medium
niya you. subtilis
ких факторовActivator probiotic
of factors
пептонный бульонMeat-
peptone broth
эмбрионально-
маточныйThe placental hydrolyzate
fetal
uterine
Таким образом, полученный радиозащитный препарат позволяет увеличить эффективность защиты от радиационных поражений в 2 раза и сократить сроки лечения радиационных поражений более чем в 40 раз.Thus, the obtained radioprotective drug allows to increase the effectiveness of protection against radiation injuries by 2 times and reduce the treatment time for radiation injuries by more than 40 times.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007110768/13A RU2366448C2 (en) | 2007-03-13 | 2007-03-13 | Method for making preparation used for treatment of radiation injuries in animals and treatment method of radiation injuries in animals |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007110768/13A RU2366448C2 (en) | 2007-03-13 | 2007-03-13 | Method for making preparation used for treatment of radiation injuries in animals and treatment method of radiation injuries in animals |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007110768A RU2007110768A (en) | 2008-09-20 |
| RU2366448C2 true RU2366448C2 (en) | 2009-09-10 |
Family
ID=39867762
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007110768/13A RU2366448C2 (en) | 2007-03-13 | 2007-03-13 | Method for making preparation used for treatment of radiation injuries in animals and treatment method of radiation injuries in animals |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2366448C2 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2675598C1 (en) * | 2018-06-25 | 2018-12-20 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Method of treatment of radiation damages of body |
| RU2682712C1 (en) * | 2018-06-25 | 2019-03-21 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Method of treatment of radiation damages of body |
| RU2697828C1 (en) * | 2019-06-03 | 2019-08-21 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Method of producing a preparation for preventing and treating radiation damage of animals and a method for preventing and treating radiation damage of animals |
-
2007
- 2007-03-13 RU RU2007110768/13A patent/RU2366448C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ТКАЧЕНКО Е.И. и др. Эрадикационная терапия, включающая пробиотики: консенсус эффективности и безопастности. Клиническое питание, 2005, N1, с.14-20. АНДРУЩЕНКО В.Н. и др. Противолучевое действие веществ микробного происхождения. Радиац. биол. радиоэкол, 1996, т.38, В.3, с. 416-425. СТЕПАНОВА А.В. и др. Исследования радиомодифицирующих свойств препарата "Биоспорин". Сб. материалов научно-практ. конф.- Екатеринбург, 1977, с.42-45. См. Интернет http://www.sibpatent.ru/default.asp?khid=19064&code=68319&sort=2 (2002-2005 год). * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2675598C1 (en) * | 2018-06-25 | 2018-12-20 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Method of treatment of radiation damages of body |
| RU2682712C1 (en) * | 2018-06-25 | 2019-03-21 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Method of treatment of radiation damages of body |
| RU2697828C1 (en) * | 2019-06-03 | 2019-08-21 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Method of producing a preparation for preventing and treating radiation damage of animals and a method for preventing and treating radiation damage of animals |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2007110768A (en) | 2008-09-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5517215B2 (en) | Fermentation and culture method, plant fermented extract, plant fermented extract powder and blended plant fermented extract | |
| CN105358166B (en) | The prophylactic or therapeutic agent of mazoitis for ruminant | |
| US3369969A (en) | Colibacilli containing medicament and a method of preparing same | |
| RU2412612C1 (en) | Method for production of "ferm km" probiotic fodder additive for domestic animals and birds | |
| ES2404137T3 (en) | Bile-resistant Bacillus composition that secretes high levels of essential amino acids | |
| JPH02225419A (en) | Lactobacillus bifidus proliferation-promotive composition | |
| CN109561712A (en) | The microorganism being directly fed with | |
| RU2366448C2 (en) | Method for making preparation used for treatment of radiation injuries in animals and treatment method of radiation injuries in animals | |
| Aleksandrova et al. | Intestinal microbiocenosis and fodder digestibility in broiler chickens when using probiotics | |
| RU2441907C1 (en) | Method for preparation of therapeutic product out of living microbial strains of lactic bacteria and bifidus bacteria lb-complex l | |
| RU2646163C1 (en) | Method of preparing the nutrient medium for growing the probiotic crops | |
| RU2697828C1 (en) | Method of producing a preparation for preventing and treating radiation damage of animals and a method for preventing and treating radiation damage of animals | |
| US8414878B2 (en) | Irilis biopreparation based on bacillus-strain bacteria, bacillus subtilis and bacillus licheniformis contained therein | |
| CN114032200A (en) | Preparation method of bacillus subtilis feed additive for breeding animals | |
| ES2365615T3 (en) | USE OF BACTERIOCINES FOR THE IMPROVEMENT OF DIGESTIVE FUNCTIONALITY. | |
| RU2758880C1 (en) | Method for producing biological preparation for correcting metabolism in pre-nursery pigs | |
| JPH06247871A (en) | Growth promoter | |
| TWI299257B (en) | γ-POLYGLUTAMIC ACID (γ-PGA, H FORM), γ-POLYGLUTAMATES AND γ-POLYGLUTAMATE HYDROGEL FOR USE AS NUTRITION SUPPLEMENTS IN DIETARY PRODUCTS | |
| JP3180886B2 (en) | Animal growth promoter | |
| RU2757137C1 (en) | Method for producing a growth medium containing a nanofiltrate of curd whey intended for cultivation of probiotic cultures | |
| JPH0838044A (en) | Bifidobacteria growth-promoting and good-surviving yogurt | |
| RU2639569C1 (en) | Probiotic bacillus megaterium strain - producer of antibacterial substances, immunomodulators and proteolytic enzymes | |
| RU2517734C1 (en) | Method to prepare medicated product from live strains and microorganisms of lactobacilli and bifidobacteria "lb-complex plus" | |
| RU2301256C1 (en) | Liquid nutrient medium for culturing cholera vibrio | |
| RU2158302C2 (en) | Nutrient medium for bifidobacterium and lactobacterium culturing |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100314 |