RU2460774C1 - Питательная среда для выращивания легионелл - Google Patents
Питательная среда для выращивания легионелл Download PDFInfo
- Publication number
- RU2460774C1 RU2460774C1 RU2011127448/10A RU2011127448A RU2460774C1 RU 2460774 C1 RU2460774 C1 RU 2460774C1 RU 2011127448/10 A RU2011127448/10 A RU 2011127448/10A RU 2011127448 A RU2011127448 A RU 2011127448A RU 2460774 C1 RU2460774 C1 RU 2460774C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- potassium phosphate
- substituted
- legionella
- aqueous
- nutrient medium
- Prior art date
Links
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 23
- 241000589248 Legionella Species 0.000 title claims abstract description 11
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 11
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical class [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 45
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 22
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 17
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 241001486863 Sprattus sprattus Species 0.000 claims abstract description 12
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- VLSOAXRVHARBEQ-UHFFFAOYSA-N [4-fluoro-2-(hydroxymethyl)phenyl]methanol Chemical compound OCC1=CC=C(F)C=C1CO VLSOAXRVHARBEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 22
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 14
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 10
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 abstract 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 22
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 19
- 241000555825 Clupeidae Species 0.000 description 7
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 208000004023 Legionellosis Diseases 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589242 Legionella pneumophila Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229940115932 legionella pneumophila Drugs 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N phenolphthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2C(=O)O1 KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N L-cysteine hydrochloride Chemical compound Cl.SC[C@H](N)C(O)=O IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 206010024179 Legionella infections Diseases 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229940064302 folacin Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 239000003324 growth hormone secretagogue Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 iron ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению питательных сред, которые создают оптимальные условия для жизнедеятельности легионелл. Питательная среда содержит ферментативный гидролизат кильки с содержанием аминного азота 0,10-0,14%, калий фосфорнокислый 1-замещенный, калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный, железо сернокислое закисное 7-водное, активированный уголь, L-цистеина гидрохлорид, агар микробиологический и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить выход биомассы и сократить сроки выращивания легионелл. 3 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению питательных сред для выращивания легионелл.
Известна питательная среда для выращивания легионелл, основой которой является мясная вода до 1000,0 мл; пептон ферментативный 10,0 г; натрия хлорид 5,0 г; кровь 10,0 г; агар-агар 15,0-20,0 г рН 7,3±0,2. Среду автоклавируют 30 мин при температуре 121°C (М.С.Поляк; В.И.Сухаревич; М.Э.Сухаревич. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб.: ЭЛБИ-СПб. - 2008. - С. 64-65; С. - 269).
Недостатком данной среды является недостаточная эффективность.
Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде является среда, содержащая г/л: ферментативный гидролизат легкого свиньи 260,0; калий фосфорнокислый 1-замещенный 0,9; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный 2,2; активированный уголь 2,0; L-цистеина гидрохлорид 0,4; эмбриональный стимулятор роста микроорганизмов 2,5; агар микробиологический 8,5; дистиллированная вода до 1 л (Патент РФ №2412240. Опубл. 20.02.2011 г. Бюл. №5).
По питательной ценности предлагаемая среда равноценна аналогу, а по ростовым качествам несколько превосходит аналог.
Целью настоящего изобретения является конструирование качественной питательной среды животного происхождения, которая обеспечивает ростовые свойства легионелл.
Поставленная цель достигается тем, что питательная среда в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат кильки; 0,01 М калий фосфатный буфер (состав калий фосфатного буфера: калий фосфорнокислый 1-замещенный; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный), а также активированный уголь; L-цистеин гидрохлорид; агар микробиологический; дистиллированную воду с добавлением в среду в качестве стимулирующей добавки железа сернокислого закисного 7-водного при следующем соотношении ингредиентов, г/л:
| Ферментативный гидролизат кильки | |
| (с содержанием аминного азота 0,10-0,14%) | 280,0-320,0 |
| Калий фосфорнокислый 1-замещенный | 0,63-1,03 |
| Калий фосфорнокислый 2-замещенный | |
| 3-водный | 0,96-1,36 |
| Железо сернокислое закисное 7-водное | 0,18-0,22 |
| Активированный уголь | 1,0-3,0 |
| L-цистеин гидрохлорид | 0,2-0,6 |
| Агар микробиологический | 8,0-12,0 |
| Дистиллированная вода | до 1 л. |
Килька ТУ-8-5344-113607. Биологическая ценность кильки состоит в следующем - содержание влаги 67%, белка 13,4%; минеральные вещества кильки: зола 1,6%, состоящая из солей мг на 100 г: калия 206; кальция 25; магния 23; фосфора 311; из микроэлементов наибольшее количество в мкг: железа 1400; кобальта 30; марганца 116; меди 240; никеля 8. В кильке содержатся также витамины: А - 0,06; С - 1,1; В6 - 0,50; В2 - 0,12; ниоцина - 3,70; B1 - 0,02; фолацина - 13,0. Из белковых веществ в кильке при ферментативном гидролизе образуются следующие аминокислоты мг на 100 г продукта: незаменимые: лизин 1090; метионин 410; триптофан 160; валин 660; лейцин 1300; изолейцин 570; треонин 610; фенилаланин 560; заменимые аминокислоты: пролин 480; аланин 790; аргинин 830; аспарагиновая кислота 1200; глицин 710; тирозин 500; гистидин 330; глютаминовая кислота 1260; цистин 170; серин 570 (М.Ф.Нестерин, И.М.Скурихин. Химический состав пищевых продуктов. Москва. Пищевая промышленность». 1979. С. - 133-145).
Железо сернокислое закисное 7-водное ГОСТ 4148-78. Железо (II) сульфат. Показатели качества: хч, чда, ч. Массовая доля основного вещества ≥99,0% (Химические реактивы и высокочистые вещества. Каталог. / О.А.Гольдина, Ю.С.Кузнецова, Т.Г.Иванова и др. - 3-е изд., перераб. и доп. М.: Химия, 1990. С. - 212). В ходе многочисленных экспериментов первых исследователей по культивированию легионелл было обнаружено, что важнейшими факторами роста легионелл являются как аминокислоты, так и ионы железа (Легионеллезная инфекция / Н.Д.Темежникова, И.С.Тартаковский. Москва. «Медицина», 2007. - С.42; 120).
Включение в состав среды 0,01 М калий фосфатного буфера (состав калий фосфатного буфера: калий фосфорнокислый 1-замещенный; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный) обосновано широким использованием фосфатов при приготовлении питательных сред, т.к. это единственные неорганические соединения, обладающие буферным действием в физиологически важном диапазоне рН, они малотоксичны. Кроме того, HPO4 компонент нуклеиновых кислот, фосфолипидов, нуклеотидов (Методические рекомендации по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирусов, - М., 1989).
Ферментативный гидролизат кильки является качественной основой питательной среды ввиду присутствия в нем 13,4% белка, а это значит, что основа содержит большое количество аминокислот, железа, макро- и микроэлементов, которые играют огромную роль в жизнедеятельности любых микроорганизмов.
При приготовлении питательной среды используют только дистиллированную воду, без применения растворов, содержащих ионы натрия, в виду их губительного действия на легионеллы.
Сочетанное применение указанных компонентов обеспечивает получение чистых культур достаточного количества колоний через 24 ч при посеве 100 м.к.
В отличие от прототипа, предлагаемая среда экономична, выгодна и обеспечивает оптимальные условия для размножения легионелл за 24 ч.
Приготовление ферментативного гидролизата кильки
Кильку размороженную в количестве 0,6 кг пропускают дважды через мясорубку, затем помещают в 3-метровый л баллон, добавляют воду дистиллированную в количестве 1,8 л, доводят рН до 8,2±0,1 с помощью калия гидроокиси по фенолфталеину, затем добавляют коммерческий фермент панкреатин в количестве 12,0 г. активностью 45 ед, добавляют в качестве консерванта хлороформ в количестве 1% к объему. Баллон закрывают ватно-марлевой пробкой, тщательно перемешивают и помещают в термокамеру при температуре 37±1°C. Содержимое баллона в течение первых суток перемешивают через 20±1 мин по 5 мин, в последующие сутки через 1,5-2,0 ч по 5 мин. В течение первого часа через каждые 15 мин измеряют рН, при изменении рН в кислую сторону обязательно корректируют рН 40% раствором гидроокиси калия до значения 8,0-8,2. В последующие 2-е суток ведут перемешивание через 1,5-2,0 ч по 5 мин. Динамику процесса гидролиза контролируют путем определения аминного азота. Об окончании гидролиза судят по достижению аминного азота 0,3-0,4%. После этого гидролиз останавливают и гидролизат отстаивают в течение 2-х суток. Отстоявшийся верхний слой гидролизата декантируют с помощью резинового шланга и фильтруют через полотняный фильтр. Сбор фильтрата ведут в стеклянный баллон емкостью 3 л, для консервации добавляют хлороформ в количестве 1% к объему содержимого баллона, закрывают резиновой пробкой и транспортируют в холодовую камеру, где хранят при температуре от +2 до +8°С.
Питательную среду на ферментативной основе кильки для выращивания легионелл готовят следующим способом. Берут ферментативный гидролизат из кильки, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12% - 300,0 мл, другие ингредиенты в соотношении, г/л: калий фосфорнокислый 1-замещенный - 0,83; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 1,16; железо сернокислое закисное 7-водное - 0,2; активированный уголь - 2,0; агар микробиологический - 10,0; дистиллированную воду до 1 л. Смесь доводят до кипения и кипятят до полного расплавления агара в течение 2 мин, рН корректируют раствором соляной кислоты (1:1) в количестве 3 мл до рН 6,9±0,1. Приготовленную питательную среду разливают в градуированные флаконы по 200±0,5 мл, которые герметично укупоривают ватно-марлевыми пробками и бумагой крафт. Стерилизуют при 1 атм в течение 15 мин. В расплавленный в кипящей водяной бане и остуженный до 56°C агар добавляют простирилизованный в 10 мл дистиллированной воде L-цистеин гидрохлорид в количестве 0,4 г, затем разливают в стерильные чашки Петри. Просушивают в течение 30 минут и используют для посева.
Соляную кислоту ГОСТ-3118-77 (чда, хч) используют для установления рН. Массовая доля основного вещества, % 35-38.
Эффективность полученной питательной среды оценивали в соответствии с методическими указаниями «Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза», (Москва, 2007), с использованием в качестве тест-культур легионелл Legionella pneumophila АТСС 33155 Bloomington, Legionella pneumophila ATCC 33152 Philadelphia.
Испытуемые культуры выращивали на пластинках плотного агара контрольной среды СЭЛ рН 6,8 при температуре 37°C 24 ч. Из суточных культур готовили 1 млрд. взвесь м.т. тест-штаммов, равной 10 ед. по оптическому стандарту мутности ОСО ГИСК им. Л.А.Тарасевича, затем серийными десятикратными разведениями в 0,01 М буферном растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 1000 (10-6). Из данных разведении взвесей культур высевали по 0,1 мл на 3 чашки Петри разлитого подсушенного испытуемого агара, на среду СЭЛ и агар Хоттингера (отрицательный контроль). Посевы инкубировали при 35±0,5°C в течение 5 суток. Через 24-120 ч учитывали результаты путем подсчета выросших колоний.
Контрольная среда СЭЛ (Питательная среда для культивирования и выделения возбудителя легионеллеза элективная) - состав г/л: питательная основа животного происхождения - ферментолизат селезенки жидкий крупного рогатого скота в расчете на сухое вещество - 7,0; активированный уголь ОУ-А 4,0; агар микробиологический 17,0; калий фосфорнокислый однозамещенный 1,6; калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный 3,4; рН среды 7,1 (Производитель ФГУЗ Рост НИПЧИ Роспотребнадзора. 344002, Ростов-на-Дону, ул. М.Горького, 117).
Контрольный агар Хоттингера. Промышленный регламент №1707-05 на производство питательного агара для культивирования микроорганизмов, готового к применению (агара Хоттингера). Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05571 от 20 августа 2009 г. Срок действия не ограничен.
Пример 1. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат из кильки, разбавленного дистиллированной водой до показания аминного азота 0,10% - 280,0 мл; калий фосфорнокислый 1-замещенный - 0,63; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 0,96; железо сернокислое закисное 7-водное - 0,18; активированный уголь - 1,0; L-цистеин гидрохлорид - 0,2; агар микробиологический - 8,0; дистиллированная вода - до 1 л.
При таком соотношении ингредиентов вырастало в среднем 100 плоско-выпуклых, синевато-сероватых колоний диаметром 1,5 мм через 24 ч для обоих штаммов, взятых в опыт, тогда как на контрольной среде СЭЛ рост наблюдался только через 72 ч в количестве 45 колоний диаметром 1,0-1,3 мм соответственно, а на агаре Хоттингера рост отсутствовал.
Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде содержащей, г/л: ферментативный гидролизат из кильки, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12% - 300,0 мл; калий фосфорнокислый 1-замещенный - 0,83; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 1,16; железо сернокислое закисное 7-водное - 0,2; активированный уголь - 2,0; L-цистеин гидрохлорид - 0,4; агар микробиологический - 10,0; дистиллированная вода - до 1 л.
При таком соотношении ингредиентов вырастало 300 плоско-выпуклых, синевато-сероватых колоний диаметром 1,0-1,5 мм через 24 ч для обоих тест-штаммов, взятых в опыт, тогда как на контрольной среде СЭЛ рост наблюдался только через 72 ч в количестве 80 колоний диаметром 1,0-1,3 мм соответственно, а на агаре Хоттингера рост отсутствовал.
Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат из кильки, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,14% - 320,0 мл; калий фосфорнокислый 1-замещенный - 1,03; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 1,36; железо сернокислое закисное 7-водное - 0,22; активированный уголь - 3,0; L-цистеин гидрохлорид - 0,6; агар микробиологический - 12,0; дистиллированная вода до 1 л.
При таком соотношении ингредиентов вырастало 89 плоско-выпуклых, синевато-сероватых колоний диаметром 1,0-1,5 мм через 24 ч для обоих тест-штаммов, взятых в опыт, тогда как на контрольной среде СЭЛ рост наблюдался только через 72 ч в количестве 42 колонии диаметром 1,2 мм, а на агаре Хоттингера рост отсутствовал.
Полученные результаты позволили определить оптимальный вариант питательной среды на основе ферментативного гидролизата кильки (пример 2).
Claims (1)
- Питательная среда для выращивания легионелл, включающая питательную основу, калий фосфорнокислый 1-замещенный, калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный, активированный уголь, L-цистеин гидрохлорид, агар микробиологический и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве основы содержит ферментативный гидролизат кильки с добавлением в среду в качестве стимулирующей добавки железа сернокислого закисного 7-водного при следующем соотношении ингредиентов, г/л:
ферментативный гидролизат кильки (0,10-0,14% аминного азота) 280,0-320,0 калий фосфорнокислый 1-замещенный 0,63-1,03 калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный 0,96-1,36 железо сернокислое закисное 7-водное 0,18-0,22 активированный уголь 1,0-3,0 L-цистеин гидрохлорид 0,2-0,6 агар микробиологический 8,0-12,0 дистиллированная вода до 1 л
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011127448/10A RU2460774C1 (ru) | 2011-07-04 | 2011-07-04 | Питательная среда для выращивания легионелл |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011127448/10A RU2460774C1 (ru) | 2011-07-04 | 2011-07-04 | Питательная среда для выращивания легионелл |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2460774C1 true RU2460774C1 (ru) | 2012-09-10 |
Family
ID=46938923
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011127448/10A RU2460774C1 (ru) | 2011-07-04 | 2011-07-04 | Питательная среда для выращивания легионелл |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2460774C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2510828C1 (ru) * | 2013-01-09 | 2014-04-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для выращивания легионелл |
| RU2580227C1 (ru) * | 2015-04-22 | 2016-04-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для выделения legionella pneumophila |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1359297A1 (ru) * | 1986-07-15 | 1987-12-15 | Научно-Исследовательский Институт Эпидемиологии И Микробиологии Имени Почетного Академика.Н.Ф.Гамалеи | Питательна среда дл культивировани LeGIoNeLLa рNеUморнILа |
| RU2412240C1 (ru) * | 2009-12-01 | 2011-02-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для выращивания легионелл |
-
2011
- 2011-07-04 RU RU2011127448/10A patent/RU2460774C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1359297A1 (ru) * | 1986-07-15 | 1987-12-15 | Научно-Исследовательский Институт Эпидемиологии И Микробиологии Имени Почетного Академика.Н.Ф.Гамалеи | Питательна среда дл культивировани LeGIoNeLLa рNеUморнILа |
| RU2412240C1 (ru) * | 2009-12-01 | 2011-02-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для выращивания легионелл |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Под ред. ЛАБИНСКОЙ А.С. и др. Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований. - М.: Медицина, 2005, с.563-565. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2510828C1 (ru) * | 2013-01-09 | 2014-04-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для выращивания легионелл |
| RU2580227C1 (ru) * | 2015-04-22 | 2016-04-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для выделения legionella pneumophila |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2433170C1 (ru) | Питательная среда жидкая для культивирования чумного микроба вакцинного штамма ев | |
| RU2412240C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| RU2460774C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| RU2580028C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования бруцелл | |
| RU2626568C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования и сбора биомассы чумного микроба вакцинного штамма Y.pestis EV | |
| RU2415923C1 (ru) | Способ получения ферментативного гидролизата из свежей белокочанной капусты и питательная среда для культивирования лактобактерий на его основе | |
| RU2681285C1 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БРУЦЕЛЛ ВИДА Brucella neotomae | |
| RU2460768C1 (ru) | Питательная среда плотная для выращивания легионелл | |
| RU2425871C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| RU2460775C1 (ru) | Обогащенная питательная среда для выращивания легионелл | |
| RU2394905C1 (ru) | Питательная среда для культивирования чумного микроба | |
| RU2415922C1 (ru) | Питательная среда для культивирования лактобактерий | |
| RU2702174C1 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И СБОРА БИОМАССЫ ВАКЦИННОГО ШТАММА ЧУМНОГО МИКРОБА Y.pestis EV | |
| RU2348686C2 (ru) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов | |
| RU2435842C1 (ru) | Питательная среда транспортная (жидкая) для культивирования бруцеллезного микроба | |
| RU2366448C2 (ru) | Способ получения препарата для лечения радиационных поражений организма животных и способ лечения радиационных поражений организма животных | |
| RU2528101C2 (ru) | Питательная среда для культивирования легионелл | |
| RU2510828C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| US8911962B2 (en) | Method for neutralization of antibiotics in a culture medium | |
| RU2410424C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов | |
| RU2748492C1 (ru) | Питательная среда плотная для контроля количества живых микробных клеток вакцинного штамма чумного микроба y. pestis ev | |
| RU2748808C1 (ru) | Универсальная питательная среда плотная для выращивания биомассы бруцелл | |
| RU2193061C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза (мбт-бульон) | |
| RU2380409C1 (ru) | Питательная среда для культивирования чумного микроба | |
| RU2688335C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150705 |