RS64986B1 - Modulatori receptora alfa (err-alfa) povezanog sa estrogenom - Google Patents

Description

Opis

POZADINA OVOG PRONALASKA

[0001] Receptor alfa povezan sa estrogenom (ERRα) je protein od 45.5 kilodaltona (kDa), 423 aminokiselinska ostatka koji pripada superporodici nuklearnih receptora (NR). Ova porodica nuklearnih receptora obuhvata 48 gena, koji kodiraju za DNK-vezujuće transkripcione faktore koji su uključeni u regulaciju različite funkcije uključujući između ostalih homeostazu, reprodukciju, razvoj i metabolizam. ERR porodica - NR3B podgrupa – se sastoji od ERRα, ERR-β, i ERR-γ: do sada, nisu identifikovani endogeni ligandi za bilo koji od ERR izoforma i samim tim se smatraju receptorima siročićima.

[0002] U Bookout et al. Anatomical profiling of nuclear receptor expression reveals a hierarchical transcriptional network, Cell.126:789-99 (2006), profilisanjem ekspresije u celom organizmu tri ERR izoforma je utvrdilo da je ERRα u širokoj distribuciji, sa značajnom ekspresijom proteina u najvećem delu tkiva kod odraslih. Nokaut ispitivanja ERR članova porodice su otkrila da svaki receptor ima metaboličke fenotipe specifične za tkiva i funkciju koji su važni za adaptaciju na energetsko naprezanje na nivou celog tela. Nokaut ispitivanja su takođe označavala ograničenu in vivo naknadu među članovima ERR porodice. Otkrivanje inter alia Tremblay et al. The NR3B subgroup: an overview, Nuclear Receptor Signaling, 5:e009 (2007) takođe može da se ima u vidu u ovom kontekstu.

[0003] Genomska ispitivanja su ukazivala da ERRα reguliše veliki broj gena. Sledeće reference predstavljaju instrukcije za ovo pitanje: Puigserver et al. A cold-inducible coactivator of nuclear receptors linked to adaptive thermogenesis, Cell.92(6):829-839 (1998); Yoon et al. Control of hepatic gluconeogenesis through the transcriptional coactivator PGC-1, Nature 413(6852):131-138 (2001); Huss et al. Estrogen-related receptor alpha directs peroxisome proliferatoractivated receptor at signaling in the transcriptional control of energy metabolism in cardiac and skeletal muscle, Mol. Cell Biol.

24(20):9079-9091 (2004); i, Mootha et al. ERRα and Gabpa/b specify PGC-1alpha-dependent oxidative phosphorylation gene expression that is altered in diabetic muscle, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101 (17):6570-6575 (2004).

[0004] Ove reference idu u prilog fiziološkom modelu ERRα funkcije u regulisanju energetskog metabolizma, određenije, u transkrpcionom regulisanju gena potrebnih za biogenezu mitohondrija, ciklus trikarboksilne kiseline, oksidativnu fosforilaciju, oksidaciju masnih kiselina i metabolizam masti. Određenije, ERRα indukuje eksprimiranje nuklearnog respiratornog faktora 1 (NRF1), GA-vezujućeg proteina alfa (GABPα), i alfa receptora aktivirani proliferatorom peroksizoma (PPARα). Koaktivatori nuklearnih receptora, koaktivator 1-alfa (PGC-1α) gama receptora aktiviranog proliferatorom peroksizoma, PGC-1 β i protein 1 povezan sa koaktivatorom gama receptora aktiviranog proliferatorom peroksizoma (PPRC-1) su uključeni u regulaciju ovih gena i u auto-regulaciju ekspresije ERRα. PGC-1α se eksprimira na niskim bazalnim nivoima, ali ga indukuje gladovanje i drugi metabolički stresovi. PGC-1β, srodni koaktivator, ima slične funkcije, ali njegovo eksprimiranje ne može da se reguliše akutno varijacijama kod potrebe za energijom. Nasuprot tome, korepresori koji se vezuju za ERR-ove, kao što je protein 140 koji stupa u interakciju sa nuklearnim receptorom korepresora 140 (RIP140), ulaze u kompeticiju sa koaktivatorima ERR kako bi se negativno regulisala ekspresija gena u zavisnosti od ERR.

[0005] Pleiotropni efekat dejstva ERRα na energetski metabolizam zainteresovao je pronalazače ovog pronalaska kao mogućnost da bi trebalo da bude cilj za otkrivanje novih terapija za bolesti u kojima metabolički poremećaji ili modifikacije igraju središnju ulogu, kao što je dijabetes tipa 2, progresivni srčani zastoj, osteoporoza i kancer. Od posebnog je značaja ERRα kao novi cilj za terapiju tumora, kroz efekte na regulaciju energetskog metabolizma tumorskih ćelija povezanih sa energetskim naprezanjem unutar tumorskih mikrookruženja. A od posebnog značaja je ERRα kao novi cilj za terapijsko lečenje kancera sa svojstvima sličnim matičnim – matičnim ćelijama kancera (CSC), ćelijama koje pokreću tumore (TIC) i cirkulišućim tumorskim ćelijama (CTC) - koje se oslanjaju na mitohondrijsko disanje za svoje energetske zahteve.

[0006] Posebno je poznato da je početak i razvoj kancera povezan sa velikim metaboličkim promenama, a mitohondrije igraju ključnu ulogu u nastanku tumora. Uobičajena abnormalnost uočena u mnogim vrstama kancera - nazvana Warburg-ov efekat - je pomak u metabolizmu glukoze sa oksidativne fosforilacije na aerobnu glikolizu i karakteriše je drastično povećanje potrošnje glukoze što je praćeno povišenom stopom izlučivanja laktata bez obzira na obilje kiseonika: aerobna glikoliza zadovoljava metaboličke potrebe visokoproliferativnih ćelija, uključujući obezbeđivanje dovoljno energije i obezbeđivanje akumulacije prekursora za anaboličke reakcije. LeBleu et al. PGC-1alfa posreduje u mitohondrijskoj biogenezi i oksidativnoj fosforilaciji u ćelijama kancera za promovisanje metastaza, Nat. Cell Biol.16(10):992-1 (2014) pokazalo je da tumorske ćelije pokazuju metaboličku plastičnost da uključe ili glikolizu ili oksidativnu fosforilaciju, u zavisnosti od okruženja tumora i njihovog proliferativnog ili metastazirajućeg fenotipa tokom napredovanja kancera. Stoga je evidentno da se ciljanje metastatskih progenitora i rezistentnih tumorskih ćelija ne bi trebalo da se javi samo preko glikolitičkog puta, već i putem mitohondrijske oksidativne fosforilacije.

[0007] ERRα, zajedno sa PGC1α/β, kontroliše regulaciju gena koji kodiraju enzime u ciklusu trikarboksilne kiseline (TCA) i oksidativnu fosforilaciju. Kao što je objašnjeno u Ariazi et al. Receptor alfa povezan sa estrogenom i receptor gama povezan sa estrogenom povezani su s nepovoljnim i povoljnim biomarkerima, redom, kod kancera dojke kod ljudi, Cancer Res.62(22):6510-8 (2002), ERRα se eksprimira u nizu kancerogenih ćelija - uključujući kancerogene ćelije dojke i prostate - i povezuje se sa invazivnijom bolešću i većim rizikom od recidiva kod ove obe vrste kancera.

[0008] Chang et al. The metabolic regulator ERRa, a downstream target of HER2/IGF-1R, as a therapeutic target in breast cancer, Cancer Cell 20, 500-510 (2011) and Fujimoto et al. Clinical implication of estrogen-related receptor (ERR) expression in ovarian cancers, J. Steroid Biochem. Mol. Biol.104, 301304 (2007) dokumentuju da se ERRα eksprimira u većini kancera i da je povećana aktivnost ovog receptora povezana sa negativnim ishodom i kod kancera dojke i jajnika. U prvoj od ovih referenci, potvrđeno je da je transkripcioni faktor uključen u mitohodrijalnu biogenezu i takođe u regulaciji oksidativne fosforilacije. Ova druga tačka se smatra važnom kao otpornost na inhibiciju KRAS puta kod kancera pankreasa, BRAF inhibitora kod melanoma i oksaliplatina i 5-fluorouracila kod kancera debelog creva su takođe povezani sa pomakom na oksidativni metabolizam.

[0009] Pronalazači ovog pronalaska su samim tim smatrali da bi inhibicija aktivnosti ERRα omogućila selektivan prekid mitohondrijalne funkcije kod kancera gorepomenutih tipova. U ovu svrhu, ali jednako radi iskoristivosti u lečenju drugih bolesti i stanja posredovanih ERRα, razvili su nekovalentne, nesteroidne ERRα inverzne agoniste.

[0010] WO 2008/109727 opisuje supstituisani fenoksi tiazolidinedione kao ERRα modulatore.

KRATAK SADRŽAJ PRONALASKA

[0011] Prema prvom aspektu ovog pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje prema formuli I

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu

Y predstavlja pojedinačnu ugljenik-ugljenik vezu ili dvostruka ugljenik-ugljenik vezu, pod uslovom da kada Y predstavlja dvostruku ugljenik-ugljenik veza, R'15i R16nisu prisutni;

jedan od tri položaja A1-A3predstavlja ili S ili NRA, preostala dva položaja A1-A3predstavljaju N ili CR1, CR2, CR3, tim redom;

RApredstavlja H ili metil;

R1-R3nezavisno predstavljaju H, metil, amino ili halogen;

A4-A7predstavljaju CR4, CR5, CR6i CR7, tim redom;

A8-A12predstavljaju N ili CR8, CR9, CR10, CR11i CR12, tim redom, pod uslovom da najviše dva od pet položaja A8- A12mogu istovremeno biti N;

R4- R7nezavisno predstavljaju H, halogen, C(1-3)alkoksi, C(1-3)alkil;

R8- R12nezavisno predstavljaju H, halogen, C(1-3)alkoksi, C(1-4)alkil, cijano, nitro, -C(=O)OR17, hidroksil, C(3-6)cikloalkil, benzil, fenil, -SF5, biciklo[1.1.1]pentan;

ili R9i ili R8ili R10su spojeni i obrazuju aromatični ili nearomatični petočlani do sedmočlani prsten koji sadrži dva do sedam atoma ugljenika i nula do tri hetero atoma; sa svim grupama opciono supstituisanim jednim ili više metila, halogena ili hidroksila;

R13predstavlja H ili metil;

R14predstavlja NH, O ili S;

R'15predstavlja H, halogen, C(1-4)alkil, -C(=O)OR17ili -C(=O)NR17R17;

R15H, halogen, ili C(1-4)alkil;

R16predstavlja H; i,

R17predstavlja H, metil ili etil.

[0012] U jednom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje prema formuli I u kojoj A1predstavlja N, A2predstavlja NRAi A3predstavlja CR3.

[0013] U drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje prema formuli I u kojoj A1predstavlja N, A2predstavlja NH i A3predstavlja CH.

[0014] U drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje prema formuli I u kojoj R5predstavlja C(1-3)alkoksi, a R4, R6i R7predstavljaju H.

[0015] U drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje prema formuli I u kojoj R5predstavlja metoksi, a R4, R6i R7predstavljaju H.

[0016] U drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje prema formuli I u kojoj A8-A12predstavljaju CR8, CR9, CR10, CR11i CR12, tim redom.

[0017] U drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje prema formuli I u kojoj R8-R12nezavisno predstavljaju H, C(1-4)alkil, halogen, hidroksil ili C(1-3)alkoksi. Na primer, R8-R12mogu biti nezavisno H, C(1-4)alkil ili halogen. Dobri rezultati su dobijeni gde R9i R11nezavisno predstavljaju C(1-4)alkil, halogen, hidroksil ili C(1-3)alkoksi i R8, R10i R12predstavljaju H. A posebno je bitno da R9i R11nezavisno predstavljaju C(1-4)alkil, a R8, R10i R12predstavljaju H.

[0018] U drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje prema formuli I u kojoj R9i R11predstavljaju CF3, a R8, R10i R12predstavljaju H.

[0019] U drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje prema formuli I u kojoj R13predstavlja H.

[0020] U drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje prema formuli I u kojoj R14is O.

[0021] U drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje prema formuli I u kojoj R15i R'15predstavljaju H.

[0022] U drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje prema formuli I u kojoj Y predstavlja pojedinačnu ugljenik-ugljenik vezu.

[0023] Gornji načini ostvarivanja, tamo gde se odnose na poželjan oblik različitih supstituenata formule (I), nisu predviđeni da se međusobno isključuju. Umesto toga, kombinacije ovih načina ostvarivanja su predviđene unutar obima ovog pronalaska i, u određenim okolnostima, takve kombinacije predstavljaju poželjne strukture za jedinjenja formule I. U tom pogledu, posebno se mogu spomenuti jedinjenja prema formuli I u kojima: A1predstavlja N, A2predstavlja NH i A3predstavlja CH; A4-A7predstavljaju CR4, CR5, CR6i CR7tim redom, pri čemu R5predstavlja C(1-3)alkoksi i R4, R6i R7su H; A8-A12predstavljaju CR8, CR9, CR10, CR11i CR12, tim redom, pri čemu R9i R11nezavisno predstavljaju C(1-4)alkil, halogen, hidroksil ili C(1-3)alkoksi i R8, R10i R12su H; R13predstavlja H; R14predstavlja O; R15i R'15oba predstavljaju H; Y predstavlja pojedinačnu ugljenik-ugljenik vezu; i, R16predstavlja H.

[0024] Takođe se mogu spomenuti jedinjenja prema formuli I u kojoj: A1predstavlja N, A2predstavlja NH i A3predstavlja CH; A4-A7predstavljaju CR4, CR5, CR6i CR7tim redom, pri čemu R5predstavlja C(1-3)alkoksi i R4, R6i R7predstavljaju H; A8-A12predstavljaju CR8, CR9, CR10, CR11i CR12, tim redom, pri čemu R9i R11nezavisno predstavljaju C(1-4)alkil i R8, R10i R12predstavljaju H; R13predstavlja H; R14predstavlja O; R15i R'15oba predstavljaju H; Y predstavlja pojedinačnu ugljenik-ugljenik vezu; i, R16predstavlja H.

DEFINICIJE

[0025] Kako se ovde upotrebljava, oblici jednine "jedan", "neki" i "taj" uključuju referente množine ukoliko kontekst jasno ne nalaže drugačije.

[0026] Pojmovi "koji obuhvata, "obuhvata" i "koji se sastoji od" kako se ovde upotrebljavaju predstavljaju sinonime sa "koji uključuje, "uključuje", "sadrže" ili "sadrži", i inkluzivni su ili otvoreni i ne isključuju dodatne, nenavedene članove, elemente ili faze postupka. Ako se koristi, izraz "koji se sastoji od" je zatvoren i isključuje sve dodatne elemente. Dodatno, izraz "koji se u suštini sastoji isključuje dodatne materijalne elemente, ali dopušta uključivanje nematerijalnih elemenata koji suštinski ne menjaju prirodu pronalaska.

[0027] Kada su količine, koncentracije, dimenzije i drugi parametri izraženi u vidu opsega, poželjnog opsega, gornje granične vrednosti, donje granične vrednosti ili poželjnih gornjih i donjih graničnih vrednosti, trebalo bi da se ima u vidu da svi opsezi koji mogu da se dobiju kombinovanjem bilo koje gornje granice ili poželjne vrednosti sa bilo kojim nižom granicom ili poželjnom vrednoću su takođe konkretno otkriveni nevezano od toga da li se dobijeni opsezi jasno pominju u tom kontekstu.

[0028] Reči "poželjan", "poželjno", "željeno" i "određeno" ili njihovi sinonimi ovde mogu često da se koriste kako bi se označili načini ostvarivanja otkrivanja koji mogu da obezbede određene benefite, u određenim okolnostima. Ipak, navođenje jednog ili više poželjnih, poželjnih, poželjnih, željenih ili određenih načina ostvarivanja ne znači da drugi načini ostvarivanja nisu korisni i nije predviđeno da isključuju druge načine ostvarivanja iz obima ovog otkrivanja.

[0029] Kao što se kroz ovu prijavu koristi, reč "može" se koristi u dozvoljenom smislu – odnosno značenju koje ima potencijal da – pre nego u smislu obaveze.

[0030] Kako se ovde upotrebljava "sobna temperatura" je 23°C ± 2°C.

[0031] Ukoliko nije drugačije navedeno, pojmovi "halo" ili "halogen" ili "halid", kako se ovde upotrebljavaju sami ili kao deo drugog supstituenta, označavaju atom fluora, hlora, broma, ili joda. Primećeno je da su poželjni fluor, hlor ili brom.

[0032] Pojam "heteroatom" kako se ovde upotrebljava predstavlja azot, kiseonik ili sumpor.

[0033] Kako se ovde upotrebljava, "C(1-n)alkil" grupa se odnosi na monovalentnu grupu koja sadrži od 1 do n atoma ugljenika, koja predstavlja radikal alkana i uključuje pravi lanac i razgranate organske grupe. Kao takva, "C1-C30alkilna" grupa će označavati monovalentnu grupu koja sadrži od 1-30 atoma ugljenika, koja je radikal alkena i uključuje pravi lanac i razgranate organske grupe. U ovom pronalasku, takve alkilne grupe mogu biti nesupstituisane ili mogu biti supstituisane grupama koje se pominju u nastavku. Halogenisani derivati ugljovodničnih radikala mogu, određenije, biti spomenuti kao primeri pogodnih supstituisanih alkilnih grupa.

[0034] Pojam "C(1-4)alkil" kako se ovde upotrebljava označava alkilnu grupu koja ima 1-4 atoma ugljenika, tj. metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, sec-butil ili terc-butil. Svi atomi ugljenika mogu opciono biti supstituisani jednim ili više halogena ili hidroksila.

[0035] Pojam "C(1-3)alkil" kako se ovde upotrebljava označava alkilnu grupu sa 1-3 atoma ugljenika, tj. metil, etil, propil ili izopropil. Svi atomi ugljenika mogu opciono biti supstituisani jednim ili više halogena ili hidroksila.

[0036] Pojam "C(3-6)cikloalkiP' kako se ovde upotrebljava označava zasićeni ugljovodonik sa 3-6 atoma ugljenika, tj. ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil. Svi atomi ugljenika opciono mogu biti supstituisani jednim ili više halogena ili metila.

[0037] Pojam "C(1-3)alkoksi" označava neku alkoksi grupu sa 1-3 atoma ugljenika, pir čemu je alkilna grupa razgranata ili nije razgranata. Svi atomi ugljenika su opciono supstituisani jendim ili više F ili hidroksila.

[0038] Pojam "cijano" kako se ovde upotrebljava, predstavlja grupu formule -CN.

[0039] Kako se ovde upotrebljava "nitro grupa" ili "nitro" se odnosi na -NO2.

[0040] Pojam "supstituisani' znači da je jedan ili više vodonika na označenom atomu(ima) zamenjen odabirom iz naznačene grupe, pod uslovom da: normalna valenca označenog atoma u postojećim okolnostima nije premašena; i supstitucija dovodi do stabilnog jedinjenja. Kombinacije supstituenata su takođe dopuštene samo ako takve kombinacije dovode do stabilnih jedinjenja. Pojmovi "stabilno jedinjenje" ili "stabilna struktura" se odnose na jedinjenje ili strukturu koja je dovoljno robusna da preživi i izolaciju do korisnog stepena čistoće iz reakcione mešavine i formulacije u efikasan terapijski agens.

[0041] Pojam "opciono supstituisani' označava opcionu supstituciju sa naznačenim grupama, radikalima ili grupama.

[0042] Kako se ovde upotrebljava "zaštitna grupa" se odnosi na grupu pričvršćenu za funkcionalnu grupu kako bi se sprečila neželjena reakcija. Poželjno zaštitna grupa može lako da se ukloni nakon što zaštite funkcionalne grupe nije više potrebna.

[0043] Jedinjenja formule I mogu da obrazuju soli, koje su takođe u sklopu ovog pronalaska. Pozivanje na jedinjenje formule I ovde podrazumeva da uključuje na pozivanje na njegove soli, osim ukoliko nije drugačije naznačeno.

[0044] Pojam "farmaceutski prihvatljiva so' se koristi u skladu sa svojom standardnom definicijom u tehnici za predstavljanje onih soli koje su, u okviru medicinske procene, prikladne za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i nižih životinja bez, naročito, nepotrebne toksičnosti, iritacije i/ili alergijskog odgovora: ta upotreba mora odgovarati razumnom odnosu koristi i rizika. Farmaceutski prihvatljive soli su dobro poznate u tehnici. Mogu se ili dobiti tokom konačne izolacije i prečišćavanje jedinjenja ovog pronalaska, ili se mogu dobiti odvojeno reakcijom slobodne bazne funkcije sa: prikladnom mineralnom kiselinom, uključujući ali ne ograničavajući se na hlorovodoničnu kiselinu, fosfornu kiselinu ili sumpornu kiselinu ; ili, organskom kiselinom, uključujući ali ne ograničavajući se na askorbinsku kiselinu, limunsku kiselinu, vinsku kiselinu, mlečnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, fumarnu kiselinu, glikolnu kiselinu, ćilibarnu kiselinu, propionsku kiselinu, sirćetnu kiselinu ili metansulfonsku kiselinu. Kiselinska funkcija jedinjenja ovog pronalaska može da reaguje sa organskom ili mineralnom bazom, poput natrijum-hidroksida, kalijum-hidroksida ili litijum-hidroksida. Za potpunost, organske baze uključuju uobičajene hidrokarbilne i heterocikličke aminske soli, kao što su soli dietilaminske, morfolinske i piperidinske soli, na primer.

[0045] Jedinjenja formule I mogu da sadrže asimetrične ili hiralne centre i stoga postoje u različitim stereoizomernim oblicima. Predviđeno je da svi stereoizomerni oblici jedinjenja formule I kao i njihove mešavine, uključujući racemske mešavine, čine deo ovog pronalaska. Konkretno, stereoizomerni oblici jedinjenja formule I koji su, prema Cahn-Ingold-Prelogovom sistemu nomenklature, u S konfiguraciji na hiralnom centru pored petočlanog heterocikličkog prstena definitivno čine deo ovog pronalaska.

[0046] Kao što će stručnjaku iz oblasti biti jasno, enantiomeri mogu da se razdvoje: pretvaranjem enantiomerne mešavine u dijastereomernu mešavinu reakcijom sa odgovarajućim optički aktivnim jedinjenjem, na primer hiralnim pomoćnim sredstvom kao što je hiralni alkohol ili hlorid Mošerove kiseline; odvajanjem dijastereomera; i pretvaranjem – primera radi hidrolizom - pojedinačnih dijastereomera u odgovarajuće čiste enantiomere. Enantiomeri takođe mogu da se odvoje upotrebom hiralne HPLC kolone.

[0047] Dodatno će biti primećeno da različiti tautomeri jedinjenja formule I mogu biti mogući: stoga je predviđeno da svi tautomerni oblici jedinjenja formule I čine deo ovog pronalaska. Radi potpunosti, kako se ovde koristi, pojam "tautomer" odnosi se na migraciju protona između susednih jednostrukih i dvostrukih veza. Proces tautomerizacije je reverzibilan: tautomeri će generalno postići stanje ravnoteže u kojem se dvostruka veza rezonantno deli između dve dužine veze.

[0048] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata jedinjenja ili njihove farmaceutski prihvatljive soli opšte formule I u mešavini sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima i opciono drugim terapijski aktivnim agensima. Ekscipijensi moraju biti "prihvatljivi" u smislu kompatibilnosti sa drugim sastojcima kompozicije i da nisu štetni za njihove primaoce.

[0049] Ovaj pronalazak dodatno uključuje jedinjenje formule I u kombinaciji sa jednim ili više lekova.

[0050] Kompozicije uključuju, ali bez ograničenja na, one koje su pogodne za oralnu, sublingvalnu, subkutanu, intravensku, intramuskularnu, nazalnu, lokalnu, ili rektalnu primenu, sve u jediničnim doznim oblicima za primenu. Za oralnu primenu, aktivni sastojak može biti upakovan u male subjedinice, kao što su tablete, kapsule, praškovi, granulati, rastvori, suspenzije i njima slične.

[0051] Za parenteralnu primenu, farmaceutska kompozicija ovog pronalaska može biti u jediničnodoznom ili višedoznim kontejnerima, kao što su tečnosti za ubrizgavanje u prethodno određenim količinama, koje su upakovane na primer u zaptivenim bočicama i ampulama. Farmaceutska kompozicija takođe može da se čuva u suvo smrznutom (liofilizovanom) stanju što zahteva samo dodavanje nosača sterilne tečnosti – kao što je voda – pre upotrebe.

[0052] Pomešano sa takvim farmaceutski prihvatljivim pomoćnim agensima, aktivni agens može da se komprimuje u čvrste dozne jedinice, kao što su pilule, tablete, ili se može da se preradi u kapsule ili supozitorije. Pomoću farmaceutski prihvatljivih tečnosti, aktivi agens može da se nanese u obliku tečne kompozicije – u obliku rastvora, suspenzije ili emulzije na primer - koji može biti uključen u injekcioni preparat ili u sprej, kao što je nazalni sprej.

[0053] Za pravljenje čvrstih doznih jedinica, u razmatranje se uzima upotreba uobičajenih aditiva kao što su punioci, agensi za bojenje, polimerna vezivna sredstva i njima slični. Generalno, može da se koristi bilo koji farmaceutski prihvatljiv aditiv koji ne ometa funkciju aktivnih jedinjenja. Prikladni nosači sa kojima aktivni agens ovog pronalaska može da se primenjuje u obliku čvrstih kompozicija uključuju laktozu, skrob, derivate celuloze i njima slične, ili njihove mešavine, kada se koriste u odgovarajućim količinama. Za parenteralnu primenu mogu da se koriste vodene suspenzije, izotonični slani rastvori i sterilni rastvori za injekcije, pri čemu suspenzije ili rastvori mogu da sadrže farmaceutski prihvatljiva sredstva za raspršivanje i/ili ovlaživače, kao što su propilen glikol ili butilen glikol.

[0054] Ovaj pronalazak dodatno uključuje farmaceutsku kompoziciju, kao što je ovde prethodno opisano, u kombinaciji sa pakovnim materijalom pogodnim za pomenutu kompoziciju, pri čemu pakovni materijal uključuje sva uputstva za upotrebu kompozicije u prethodno opisane svrhe.

[0055] Tačna doza i režim primene aktivnog sastojka, ili njegove farmaceutske kompozicije, mogu da variraju sa određenim jedinjenjem, putem primene, i uzrastom i stanjem pojedinačnog subjekta kojem se ovaj lek daje.

[0056] Generalno, parenteralna primena zahteva niže doze nego drugi postupci primene koji više zavise od apsorpcije. Osim toga, poželjno je da doza za ljude sadrži od 0,0001 do 100 mg po kg telesne mase. Željena doza može da se predstavi kao jedna doza ili kao višestruke pod-doze primenjene u odgovarajućim intervalima tokom dana.

[0057] Jedinjenja prema ovom pronalasku ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se koriste kao lek u terapiji.

[0058] Drugi aspekt ovog pronalaska se naslanja na upotrebu jedinjenja opšte formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za terapijsko i / ili profilaktičko lečenje bolesti posredovanih ERRa ili ERRα posredovanih stanja. Određenije, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja opšte formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za lečenje ERRα-posredovanog kancera.

[0059] Jedinjenja opšte formule I ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se koriste u terapijama za lečenje barem stanja izabranog iz grupe koju čine: kancer pluća; melanom; endometrijalni kancer; i, akutna mijeloidna leukemija. Bez namere da se ograniči aspekt ovog pronalaska, jedinjenja opšte formule I ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu naročito da se koriste u terapijama za lečenje: melanoma koji se površinski širi; lentigo maligna; akralni lentiginozni melanom; nodularni melanom; amelanotični melanom; okularni melanom; melanom vulve; ili, vaginalni melanom.

[0060] U drugom aspektu, jedinjenja opšte formule I ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se koriste za lečenje najmanje jednog stanja izabranog iz grupe koju čine: kancer dojke; kancer bešike; kancer prostate; kancer pankreasa; kolorektalni kancer; i, kancer jajnika.

[0061] U drugom aspektu, jedinjenja opšte formule I ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se koriste za lečenje dijabetesa melitusa tipa II.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0062] Kao što je prikazano u primerima u nastavku, u određenim primernim načinima ostvarivanja jedinjenja se pripremaju u skladu sa sledećim opštim postupcima. Trebalo bi da se prihvati da, dok opšti postupci uključuju sintezu određenih jedinjenja pronalaska, sledeći opšti postupci i drugi postupci poznati stručnjaku u ovom području tehnike mogu da se primene na sva jedinjenja i podklase i vrste svakog od ovih jedinjenja , kao što je ovde opisano.

OPŠTI POSTUPCI PRIPREME

[0063] Ovde opisana jedinjenja, uključujući jedinjenja opšte formule I, gradivni blok I i gradivni blok II, su pripremljeni su po reakcionim šemama prikazanim u nastavku. Dodatno, u šemama u nastavku, gde se spominju specifične kiseline, baze, reagensi, sredstva za spajanje, katalizatori, rastvarači i njima slični, podrazumeva se da mogu biti druge odgovarajuće kiseline, baze, reagensi, sredstva za spajanje, katalizatori, rastvarači itd. koji se koriste i uključeni su u opseg ovog izuma. Modifikacije uslova reakcije -na primer, temperatura, trajanje reakcije ili njihove kombinacije - predviđene su kao deo ovog pronalaska.

[0064] Jedinjenja dobijena pomoću opštih reakcionih sekvenci mogu biti nedovoljne čistoće. Jedinjenja mogu da se prečiste pomoću bilo kog postupka za prečišćavanje organskih jedinjenja, na primer, kristalizacijom ili hromatografijom na koloni sa silicijumdioksidom ili aluminijum-oksida upotrebom

1

različitih rastvarača u odgovarajućim omjerima. Svi mogući stereoizomeri su predviđeni opsegom pronalaska.

[0065] Skraćenice materijala koji se koriste u reakcionim šemama i primerima su sledeće:

AcOH: sirćetna kiselina; ACN: acetonitril; D AST: (Dietilamino)sumpor

trifluorid; DCM: dihlorometan; DDQ: 2,3-Dihloro-5,6-dicijano-1,4-benzokvinon; DIAD: Diizopropil azodikarboksilat; DiBAI-H: Diizobutilaluminijum hidrid; DMAP: 4-dimetilaminopiridin; DMF: N,N-dimetilformamid; DMSO: Dimetil sulfoksid; EDC: 1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodi-imid; Et2O: dietil etar; EtOAc: etil-acetat; EtOH: Etanol; HPLC: tečna hromatografija visokih

performansi MeOH: Metanol; PhSCu(l): fenilsulfanil-bakar; PPh3: Tripenilfosfin; SFC: hromatografija superkritične tečnosti; tBuOK: kalijum terc-butoksid; tBuONO: terc-Butil nitrit; TEMPO: 2,2,6,6-tetrametilpiperidiniloksil; TFA: trifluorosirćetna

kiselina; THF: tetrahidrofuran; TOSMIC: tozilmetilisocijanid.

[0066] Hemijski nazivi su poželjni IUPAC nazivi, koje generišu Marvin Sketch 17.24.1. Ako je hemijsko jedinjenje označeno da koristi i hemijsku strukturu i hemijski naziv, i dvosmislenost postoji između strukture i naziva, struktura ima prioritet.

Uslovi: i) Meldrumska kiselina, MeOH

[0067] Na šemi 1 je prikazana opšta sinteza derivata ovog pronalaska formule I, pri čemu R14predstavlja kiseonik, R15, R'15i R16predstavljaju H, a Y predstavlja pojedinačnu ugljenik-ugljenik vezu. Derivati mogu biti pripremljeni postupcima poznatim u organskoj hemiji. Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti dobijena reakcijom između benzaldehida gradivnog bloka I, pri čemu A4, A5, A6, A7, A8, A9, A10, A11i A12, imaju značenje kao što je prethodno opisano, i derivata gradivnog bloka II, pri čemu R13, A1, A2i A3imaju prethodno opisana značenja, i meldrumske kiseline.

[0068] Da bi se dobili derivati formule I pri čemu R14predstavlja sumpor, derivati formule I pri čemu R14predstavlja kiseonik može da reaguje sa, na primer, Lavesonovim reagensom.

[0069] Da bi se dobili derivati formule I pri čemu R14predstavlja azot, pri čemu ti derivati formule I u kojima R14predstavlja sumpor mogu da reaguju sa, na primer, amonijakom u MeOH.

Uslovi: i) DDQ, 1,4-dioksan

[0070] Šema 1b prikazuje opšti način for pripreme analoga formule I pri čemu Y predstavlja dvostruku ugljenik-ugljenik vezu, R15predstavlja H, a R13, R14, A1, A2, A3, A4, A5, A6, A7, A8, A9, A10, A11iA12imaju značenje kao što je prethodno opisano.

[0071] Derivati formule I, u kojima Y predstavlja pojedinačnu ugljenik-ugljenik vezu, a R15, R'15i R16predstavljaju H, mogu da budu oksidovani, pomoću na primer DDQ u odgovarajućem rastvaraču, kako bi se dobili derivati formule I, pri čemu Y predstavlja dvostruku ugljenik-ugljenik vezu.

Uslovi: i) K2CO3, DMF

[0072] Šema 2 prikazuje opšti postupak za pripremu benzaldehidnog derivata gradivnog bloka I pri čemu A4, A5, A6, A7, A8, A9, A10, A11i A12imaju značenje kao što je prethodno opisano.

[0073] Aromatična supstitucija 4-fluorobenzaldehida 1 sa fenolom 2, pomoću K2CO3u DMF na 110 °C, obezbeđuje derivate gradivnog bloka I. Za neke supstitucije na A4do A12, može biti korisno da se koristi derivat 4-hidroksibenzaldehida sa derivatom fluorobenzena kako bi se izvela aromatična supstitucija.

[0074] Uslovi:

i) K2CO3, DMF;

ii) DAST, DCM;

iii) DiBAI-H, toluen.

[0075] Šema 2b prikazuje opšti postupak za pripremu derivata gradivnog bloka I benzaldehida, pri čemu A8predstavlja C-CF2, a A4, A5, A6, A7, A9, A10, A11i A12imaju značenje kao što je prethodno opisano. Aromatična supstitucija fluorobenzaldehida 4 sa 4-hidroksibenzonitrilom 3 pod osnovnim uslovom, pomoću na primer K2CO3, daje odgovarajući benzonitril 5. Aldehidna grupa može da se pretvori u CF2grupu pomoću fluorovanog agensa, na primer DAST. Naknadnom redukcijom nitrila pomoću, na primer DiBAI-H u toluenu, derivati gradivnog bloka I benzaldehida mogu biti pripremljeni. U šemi 2b za ovo je dat primer za R8, ova pretvaranja takođe mogu da se primenjuju za aldehidnu grupu na bilo kom od položaja R4do R12. Za neke supstitucije na A4do A12, može biti korisno da se koristi derivat 4-

1

fluorobenzonitrila sa hidroksibenzaldehidnim derivatom radi izvođenja aromatične supstitucije.

[0076] Uslovi:

i) Meldrumska kiselina, MeOH;

ii) ROH, DIAD, PPh3, THF; i,

iii) R2NH, EDC, DMAP, DCM.

[0077] Šema 3 prikazuje opšti način za pripremu analoga formule I pri čemu Y predstavlja pojedinačnu ugljenik-ugljenik vezu, R14predstavlja kiseonik, R15predstavlja COOH i svaki od R'15i R16predstavlja H. Jedinjenja ovog pronalaska može da se dobije reakcijom između derivata gradivnog bloka I, pri čemu A4, A5, A6, A7, A8, A9, A10, A11i A12imaju značenje kao što je prethodno opisano, derivat gradivnog bloka II, pri čemu R13, A1, A2, A3imaju značenje kao što je prethodno opisano, i meldrumska kiselina na sobnoj temperaturi.

[0078] Kada R15predstavlja COOH, ova grupa karboksilne kiseline može da bude funkcionalizovana prema estru, pomoću primera alkohola, DIAD i PPh3u THF. Ili može biti funkcionalizovana prema amidu, pomoću primera primarnom ili sekundarnog amina, EDC i DMAP u DCM.

[0079] Uslovi:

i) CH3CH2OCOCH2P(Ph)3Br, tBuOK, Et2O;

ii) CH2CHMgBr, PhSCu(I), THF;

iii) TEMPO, tBuONO, 1,4-dioksan;

iv) TOSMIC, tBuOK, THF; i,

v) Zn, AcOH.

[0080] Šema 4 ilustruje opšti način za obrazovanje analoga formule I pri čemu A1i A3predstavljaju CH, A2predstavlja NH, Y predstavlja pojedinačnu ugljenik-ugljenik vezu, R14predstavlja kiseonik,

R13predstavlja H, pri čemu svaki od R15, R'15i R16predstavlja H, a A4, A5, A6, A7, A8, A9, A10, A11i A12imaju značenje kao što je prethodno opisano.

[0081] Intermedijer 6 može da se dobije Vitigovom reakcijom gradivnog bloka I, pomoću na primer CH3CH2OCOCH2P(Ph)3Br i tBuOK u Et2O, što je praćeno reakcijom sa, na primer, vinilmagnezijum bromidom i PhSCu(I) u THF. Naknadno uvođenje nitro grupe u E-konfirmaciju može da se postigne upotrebom, na primer, TEMPO i tBuONO u 1,4-dioksanu. Pirolni intermedijer 8 se dobija [3+2]ciklo dodavanjem intermedijera 7, pomoću na primer TOSMIC i tBuOK u THF. Redukcija nitro, praćena zatvaranjem prstena da bi se dobio analog formule I, je izvedena u jednoj fazi pomoću, na primer, cinkove prašine u AcOH.

1

Primeri

[0082] Svi gradivni blokovi koji se koriste su komercijalno dostupni, poznati ili pripremljeni prema postupcima poznatim stručnjacima iz oblasti.

Primeri 1-86

1: 4-[3-metoksi-4-(3-metilfenoksi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

[0083]

i) Rastvoru meta-kresola (44 µL) u DMF (4 mL) se dodaju K2CO3(175) i 4-fluoro-3-metoksibenzaldehid (65 mg). Reakciona mešavina se zagreva do 110 °C i umešava preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature rastvarač se uklanja pod smanjenim pritiskom. Dobijeno ulje je izdeljeno između DCM i vode. Vodeni sloj je ekstrahovan dva puta više sa DCM-om i kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Nakon fleš hromatografije obrnute faze, pomoću gradijenta od 10% do 100% ACN u vodi, dobijen je 3-metoksi-4-(3-metvlfenoksv)benzaldehvd (66 mg).

ii) Proizvod dobijen u prethodnoj fazi (66 mg) je rastvoren u 4 mL MeOH. Meldrumska kiselina (39 mg) i 3-aminopirazol (23 mg) se dodaju i reakcija se umešava 6 sati na 65 °C. Reakcija se ohladi do sobne temperature, dodaje se celit i rastvarač se uparava. Posle hromatografije obrnute faze, pomoću punjenja čvrstih materija, dobijen je 4-[3-metoksi-4-(3-metilfenoksi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on (25 mg). MS(ES+) m/z 350.2 (M+H)+

[0084] Nakon postupka analognog sa onim opisanim u primeru 1, korišćenjem odgovarajućih polaznih materijala, pripremljena su sledeća jedinjenja.

2: 4-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)-3-(trifluorometil)benzonitril

[0085]

MS(ES+) m/z 429.2 (M+H)+

1

3: 4-[3-metoksi-4-(2-nitrofenoksi)fenil]-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0086]

MS(ES<+>) m/z 404.2 (M+H)<+>

1

7: 4-[4-(2-bromofenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0090]

MS(ES+) m/z 392.2 (M+H)+

1

11: 4-[4-(2-hlorofenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0094]

MS(ES<+>) m/z 414.2 (M+H)<+>

1

15: 4-[4-(3-terc-butilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0098]

MS(ES+) m/z 366.2 (M+H)<+>

2

19: metil 3-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)benzoat [0102]

MS(ES+) m/z 378.2 (M+H)<+>

23: 4-{3-metoksi-4-[2-(propan-2-il)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0106]

MS(ES<+>) m/z 378.2 (M+H)<+>

24: 4-[3-metoksi-4-(2-fenilfenoksi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0107]

MS(ES+) m/z 412.2 (M+H)<+>

25: 4-[4-(2-ciklopentilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0108]

MS(ES<+>) m/z 404.2 (M+H)<+>

26: 4-[4-(2-benzilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0109]

MS(ES<+>) m/z 426.2 (M+H)<+>

27: 4-[4-(2-terc-butil-4-metoksifenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0110]

MS(ES<+>) m/z 378.2 (M+H)<+>

2

31: 4-[4-(3-ciklopropilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0114]

MS(ES+) m/z 470.1 (M+H)<+>

34: 4-[4-(2-terc-butil-4-metilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

[0117]

MS(ES<+>) m/z 406.2 (M+H)<+>

35: metil3-terc-butil-4-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)benzoat

[0118]

MS(ES+) m/z 450.2 (M+H)<+>

36: metil 4-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)naftalen-1-karboksilat

[0119]

MS(ES<+>) m/z 444.1 (M+H)<+>

37: 4-[4-(2,4-di-terc-butilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0120]

2

MS(ES<+>) m/z 417.2 (M+H)<+>

40: 4-{3-metoksi-4-[2-(pentafluoro-λ<6>-sulfanil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

[0123]

2

MS(ES<+>) m/z 482.0 (M+H)<+>

43: 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0126]

2

MS(ES<+>) m/z 402.2 (M+H)<+>

46: 4-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)naftalen-1-karbonitril [0129]

2

MS(ES<+>) m/z 376.2 (M+H)<+>

2

50: metil 8-(2- metoksi-4-{6-okso- 2H, 4H, 5H, 6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)kvinolin-5-karboksilat

[0133]

MS(ES<+>) m/z 482.0 (M+H)<+>

53: 3-terc-butil-4-(4-16-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)benzonitril

[0136]

MS(ES<+>) m/z 400.2 (M+H)<+>

56: 4-14-[3-metoksi-5-(trifluorometil)fenoksi]-3-metilfenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

[0139]

1

MS(ES<+>) m/z 432.1 (M+H)<+>

2

60: 4-[3-(trifluorometoksi)-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

[0143]

MS(ES<+>) m/z 448.1 (M+H)<+>

63: 4-{3-metoksi-4-[3-metil-5-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

MS(ES<+>) m/z 418.4 (M+H)<+>

66: 4-[4-(2,4-dimetilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

[0149]

4

i) Primer 32 (32 mg) je rastvoren u 1.5 mL 1,4-dioksana i dodat je DDQ (17 mg). Reakcija se zagreva do 50 °C i umešava tokom 1 sata. Rastvarač se uparava i dodaje se zasićeni vodeni NaHCOs kako bi se dobila suspenzija. Suspenzija je sonikovana i čvrste materije su filtrirane i oprane vodom tri puta. Čvrste materije su osušene u vakuumskoj peći da bi se dobio 4-[4-(2-terc-butil-4-etilfenoksi)-3-metoksifeni]-2H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on (23 mg). MS(ES+) m/z 418.2 (M+H)<+>

[0151] U skladu sa postupkom koji je analogan onom koji je opisan na primer 67, korišćenjem adekvatnih polaznih materijala, pripremljena su sledeća jedinjenja.

68: 4-[4-(2-terc-butil-4-metoksifenoksi)-3-metoksifenil]-2H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

MS(ES+) m/z 420.2 (M+H)<+>

69: 4-[4-(2-terc-butil-4-metilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,6H, 7H pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

[0153]

MS(ES<+>) m/z 427.1 (M+H)<+>

72: metil 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin -5-karboksilat

[0156]

i) Nakon postupka koji je analogan onom opisanom u primeru 1, faza i), korišćenjem odgovarajućih polaznih materijala, dobijen je 4-13,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksibenzaldehid.

ii) Proizvod dobijen u prethodnoj fazi (211 mg), meldrumska kiselina (85 mg) i 3-aminopirazol (48 mg) se rastvore u MeOH (5 mL). Reakciona mešavina se umešava tokom 3.5 sata na sobnoj temperaturi i rastvarač se uparava protokom azota. Ovo je dovelo do 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-karboksilne kiseline (200 mg).

iv) DIAD (23 µL) se dodaje u kapima u atmosferi azota rastvoru PPh3(31.4 mg), MeOH (40 µL) i proizvod dobijen u prethodnoj fazi (50 mg) u bezvodnom THF (1 mL). Reakcija se umešava tokom noći na sobnoj temperaturi. Dodaje se voda i proizvod se ekstrahuje sa DCM tri puta. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4i koncentrovani. Sirov proizvod se prečisti hromatografijom obrnute faze, pomoću gradijenta od 40 do 75% ACN u vodi (koji sadrži 0.1% TFA), kako bi se dobio metil 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi1-3-metoksifenil}-6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-karboksilat (16.6 mg). MS(ES+) m/z 530.4 (M+H)+

[0157] Prema postupku koji je analogan onom opisanom u primeru 72, upotrebom polaznih materijala, pripremljeno je sledeće jedinjenje.

73: etil 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin -5-karboksilat

[0158]

MS(ES+) m/z 544.4 (M+H)<+>

74: 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-N,N-dimetil-6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-karboksamid

[0159]

i) Proizvod dobijen u primeru 72, faza ii) (50 mg), DMAP (20 mg) i dimetilamin HCl (12 mg) su rastvoreni u DCM (1 mL). EDC (30 mg) se dodaje i reakcija se umešava na sobnoj temperaturi tokom noći. Dodaje se voda i proizvod se ekstrahuje sa DCM tri puta. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4i koncentruju se. Sirov proizvod se prečisti hromatografijom obrnute faze, pomoću gradijenta od 40 do 75% ACN u vodi (koji sadrži 0.1% TFA), da bi se dobio 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksil-3-metoksifenil]-N,N-dimetil-6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pvrazolo[3,4-b]piridin-5-karboksamid (9.3 mg).

MS(ES+) m/z 543.4 (M+H)<+>

[0160] Prema postupku koji je analogan onom opisanom u primeru 74, korišćenjem odgovarajućih polaznih materijala, pripremljeno je sledeće jedinjenje.

75: 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-N,N-dietil-6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-karboksamid

[0161]

MS(ES<+>) m/z 571.5 (M+H)<+>

76: 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-1H,2H,3H,4H,6H-pirolo[3,4-b]piridin-2-on [0162]

i) Prema postupku koji je analogan onom opisanom u primeru 1, faza i), korišćenjem odgovarajućih polaznih materijala, dobijen je 4-[3,5-bis(trifluorometvl)fenoksil-3-metoksvbenzaldehid was obtained. ii) Etoksikarbonilmetil)trifenilfosfonijum bromid (3.54 g) se dodaje suspenziji tBuOK (1.03 g) u Et2O (30 mL). Dobijena mešavina se umešava na 50 °C tokom 30 minuta a zatim se hladi do sobne temperature. U prethodnoj fazi dobijeno jedinjenje (1.50 g) rastvoreno u Et2O (10 mL) se dodaje reakcionoj mešavini. Reakciona mešavina se umešava tokom noći, zatim se gasi vodom i vodeni sloj se ekstrahuje sa Et2O tri puta. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4i koncentruju se pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod se prečisti na koloni sa silicijumdioksidom, pomoću gradijenta od 0 do 20% EtOAc u heptanu, da bi se dobio etil (E)-3-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi1-3-metoksifenil}prop-2-enoat (1.42 g).

iii) Vinilmagnezijum bromid (1.0 M u THF, 9.67 mL) se u kapima dodaje suspenziji fenilsulfanilbakra (558 mg) u bezvodnom THF (15 mL) na -40 °C u atmosferi azota. Reakcija se ostavi da dostigne -25 °C i ponovo se ohladi do -40 °C. U prethodnoj fazi dobijeno jedinjenje (1.4 g) u bezvodnom THF (15 mL) se u kapima dodaje i reakcija se umešava tokom 30 minuta na -40 °C. Reakcija se gasi nalivanjem mešavine u zasićeni vodeni NH4Cl. Dobijene čvrste materije se filtriraju i filtrat se ekstrahuje dva puta sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4i koncentruju pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod se prečisti na koloni sa silicijumdioksidom, pomoću gradijenta od 0 do 30% EtOAc u heptanu, da bi se dobio etil 3-{4-[3,5-bis(trifluorometil) fenoksi]-3-metoksifenil}pent-4-enoat (279 mg).

iv) Proizvod dobijen u prethodnoj fazi (275 mg), TEMPO (38 mg) i tBuONO (157 uL) su rastvoreni u 1,4-dioksanu (5 mL), zagrejani do 80 °C i umešavaju se preko noći. Voda se dodaje reakciji i vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM tri puta. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4i koncentruju se pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod se prečisti na koloni sa silicijumdioksidom, pomoću gradijenta od 0 do 30% EtOAc u heptanu, da bi se dobio etil (E)-3-(4-[3,5-bis(trifluorometvl)fenoksi1-3-metoksifenil}-5-nitropent-4-enoat (95 mg).

v) TOSMIC (37 mg) se dodaje rastvoru tBuOK (42 mg) u bezvodnom THF (1 mL) na -78 °C i umešava se 10 minuta. Jedinjenje dobijeno iz prethodne faze (95 mg) je rastvoreno u bezvodnom THF (4 mL) i u kapima se dodaje reakcionoj mešavini. Posle 10 minuta umešavanje na -78 °C reakcija se naliva u zasićeni vodeni NH4Cl i vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc tri puta. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4i koncentruju pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod se prečisti na koloni sa silicijumdioksidom, pomoću gradijenta od 0 do 70% EtOAc u heptanu, da bi se dobio etil 3-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-3-(4-nitro-1H-pirol-3-il)propanoat (48 mg).

vi) Rastvoru jedinjenja dobijenog iz prethodne faze (45 mg) u AcOH (1.5 mL) se dodaje cinkova prašina (54 mg). Reakcija se zagreva do 50 °C i umešava tokom 30 minuta. Reakciona mešavina se filtrira preko celita i filter kolač se ispere sa EtOAc. Filtrat se opere zasićenim vodenim NaHCOs i vodom a zatim osuši preko MgSO4i koncentruju pod smanjenim pritiskom. Sirov proizvod se prečisti hromatografijom obrnute faze, pomoću gradijenta od 40 do 90% ACN u vodi, da bi se dobio 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksil-3-metoksifenil}-1H,2H,3H,4H,6H-pirolo[3,4-b]piridin-2-on (8.7 mg).

MS(ES+) m/z 471.4 (M+H)<+>

77: 4-{4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

[0163]

i) 4-Fluoro-3-metoksi-benzonitril (250 mg), 3-hidroksi-5-(trifluorometil)benzaldehid (0.23 mL) i K2CO3(457 mg) su suspendovani u DMF (10mL). Reakcija se zagreva do 90°C i umešava preko noći. Reakcija se ohladi do sobne temperature i razdeli se između vode i EtOAc. Vodeni sloj se ekstrahuje dva puta više sa EtOAc i kombinovani organski slojevi se operu sa slanim rastvorom, osuše preko MgSO4i

4

koncentruju. Sirov proizvod se prečisti hromatografijom obrnute faze, pomoću gradijenta od 10 do 100% ACN u vodi, da bi se dobio 4-[3-formil-5-(trifluorometil)fenoksi1-3-metoksi-benzonitril (46 mg).

ii) Proizvod dobijen u prethodnoj fazi (96 mg) se rastvori u DCM (6 mL) u atmosferi azota. DAST (0.14 mL) se dodaje u kapima i reakciona mešavina se umešava tokom noći na sobnoj temperaturi. Reakcija se postavi u vodeno kupatilo i dodaje se zasićeni vodeni NaHCOs (15 mL). Mešavina se snažno umešava tokom 10 min. Vodeni sloj se dva puta ekstrahuje sa DCM. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4i koncentruju se kako bi se dobio 4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoksil-3-metoksibenzonitril (102 mg).

iii) U prethodnoj fazi dobijeno jedinjenje (101 mg) se rastvori u toluenu (4.5 mL) u atmosferi azota i ohladi se do 0 °C. A DiBAI-H rastvor 1.2M u toluenu (0.37 mL) se u kapima dodaje i reakcija se umešava tokom 1.5 sata. Vodena HCl 6N (1.5 mL) se dodaje i mešavina se umešava do prestanka penušanja. Mešavina se zagreva do sobne temperature i izdeli se između EtOAc i polovine zasićene vodene NaHCOs. Vodeni sloj se ekstrahuje dva puta više sa EtOAc i kombinovani organski slojevi se operu sa slanim rastvorom, osuše preko MgSO4i koncentruju. Sirovi proizvod se prečisti na koloni sa silicijumdioksidom, pomoću gradijenta od 0 do 25% EtOAc u heptanu, da bi se dobio 4-f3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoksil-3-metoksi-benzaldehid (71 mg).

iv) Analogno postupkom opisanim u primeru 1, faza ii), jedinjenje dobijeno u prethodnoj fazi se pretvori u 4-{4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on (28 mg). MS(ES+) m/z 454.4 (M+H)<+>

78: 4-{4-[2-(difluorometil)-4-(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

[0164]

i) 4-Hidroksi-3-metoksibenzonitril (250 mg), 2-fluoro-5-(trifluorometil)benzaldehid (322 mg) i K2CO3(463 mg) se suspenduju u DMF (8mL) i umešavaju na 90°C tokom 2,5 sata. Reakcija se ohladi do sobne temperature i razdeli se između vode i EtOAc. Vodeni sloj se ekstrahuje dva puta više sa EtOAc i kombinovani organski slojevi se operu sa slanim rastvorom, osuše preko MgSO4i koncentruju. Sirovi proizvod se prečisti na koloni sa silicijumdioksidom, pomoću gradijenta od 0 do 30% EtOAc u heptanu, da bi se dobio 4-[2-formil-4-(trifluorometil)fenoksil-3-metoksi-benzonitril (402 mg).

ii) Analogno postupcima opisanim u primeru 77, faza ii) do faze iv), jedinjenje dobijeno u prethodnoj fazi se pretvara u 4-{4-[2-(difluorometil)-4-(trifluorometil)fenoksil-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]pvridin-6-on (78 mg). MS(ES+) m/z 454.4 (M+H)<+>

[0165] Pojedinačni enantiomeri iz primera 43 mogu da se dobiju hiralnim razdvajanjem.2 g racemskog primera 43 je rastvoren u EtOH (50 mg/mL). Rastvor se više puta ubrizgava na hiralnoj SFC pomoću preparativne IG kolone (koja je dostupna iz Daicel, amiloza tris(3-hloro-5-metilfenilkarbamat) hiralna stacionarna faza) i izokratski gradijent 30% EtOH i 70% tečnog CO2, da bi se dobilo: 0.9 g (+)enantiomera (primer 79) pri enantiomernom višku 99.6%; i, 0.9 g (-)enantiomera (Primer 80) pri enantiomernom višku 99.0%. Optička čistoća enantiomera se određuje hiralnom HPLC.

[0166] Apsolutna konfiguracija jedinjenja primera 79 do 86 nije poznata. Ova jedinjenja su rastvorena u DMSO (10mg/mL) i karakteriše ih optička rotacija, pomoću Jasco P-2000 Polarimeter-a sledeće klonfiguracije: Tungsten-Halogen (WI) light source; Glan-Taylor Prism Polarizer; Quartz Faraday Cell; i, talasna dužina na monitoru od 589 nm.

79: (+)-4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on 80: (-)-4-14-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenill-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on [0167] Prema postupku analognom sa onim opisanim u primerima 79 i 80, korišćenjem odgovarajućih polaznih materijala i HPLC postupka, pripremljena su sledeća jedinjenja.

81: (+)-4-[4-(3,5-dimetilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

82: (-)-4-[4-(3,5-dimetilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

83: (+)-4-{3-metoksi-4-[3-metil-5-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

84: (-)-4-{3-metoksi-4-[3-metil-5-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

85: (+)-4-14-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenill-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

86: (-)-4-14-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenill-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on

Primer 87

Ispitivanje ERRα AlfaScreen

[0168] Ovo ispitivanje se zasniva na znanju da nuklearni receptori stupaju u interakciju sa kofaktorima u zavisnosti od liganda. Mesta interakcije su mapirana na LXXLL motivima koji su prisutni u koaktivatorskim sekvencama. Kratke peptidne sekvence koje sadrže LXXLL motiv oponašaju ponašanje koaktivatora pune dužine.

[0169] Ovde opisano ispitivanje ERRα AlfaScreen se oslanja na interakciju koaktivatorskog peptida sa vezujućim domenom prečišćenog bakterijski eksprimiranog ERRα liganda (ERRα-LBD); nakon vezivanja liganda, ERRα protein može da bude podvrgnut konformacionoj promeni koja dovodi do gubitka koaktivatorskog vezivanja.

[0170] Jedinjenja ovog pronalaska su ispitivana zbog svoje mogućnosti prekida vezivanja ERRα-LBD proteina za koaktivatorski peptid pomoću AlfaScreen<®>Technology (Perkin Elmer). ERRα-LBD protein se eksprimira u E. coli kao spajanje 6xHis Small Ubiquitin-like Modifier (SUMO). Bakterijski eksprimirani 6His-SUMO-ERRα-LBD protein je pročišćen pomoću afinitetne kromatografije. Svi eksperimenti su izvedeni na sobnoj temperaturi u belim nevezujućim pločama sa 384 bunarčića (Greiner) koristeći 50 mM Tris-HCl pH 7,5, 100 mM NaCl, 0,1% Pluronic F-127, 0,05% BSA i 5 mM TCEP kao pufer. Konačna koncentracija DMSO je bila 1% u ispitivanju. Jedinjenja su ispitana u triplikatu i: inkubirani sa 0,81 nM ERRα-LBD proteina i 10 µg/mL streptavidinskih donorskih kuglica i 10 µg/mL Ni-helatnih kuglica primaoca tokom 1 sata na sobnoj temperaturi; nakon čega sledi 2-satna inkubacija sa 15 nM biotin-PGC1α-3 peptidom (QRRPCSELLKYLTTNDPP) koji odgovara aminokiselinama 202 do 220.

[0171] AlfaScreen signal je izmeren pomoću čitač ploče Envision Xcite (Perkin Elmer). Podaci su normalizovani, i analiza uklapanja krive je izvedena u GraphPad Prism 7 pomoću uklapanja doze i odgovora sa četiri parametra.

[0172] Za sve primere jedinjenja formule I (Primeri 1 - 86) se došlo do zaključka da imaju srednje pIC50vrednosti iznad ili jednake 5.

[0173] Za primere 1, 2, 4, 5, 6, 7, 14, 17, 20, 21, 22, 24, 25, 26, 49, 59, 60, 65, 66, 71, 72, 79, 81, 83 i 85 se došlo do zaključka da imaju srednje pIC50vrednosti iznad ili jednake 6 ali ispod 7.

[0174] Za primere 10, 12, 15, 23, 28, 30, 31, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 61, 64, 76, 77, 78 i 82 se došlo do zaključka da imaju srednje pIC50vrednosti iznad ili jednake 7 ali ispod 8.

[0175] Za primere 27, 29, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 63, 67, 68, 69, 70, 80, 84 i 86 se došlo do zaključka da imaju srednje pIC50vrednosti iznad ili jednake 8.

Primer 88

Ispitivanje reporterskog gena ERRα pune dužine

[0176] Inhibitori iz primera 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 i 86 su ispitani zbog mogućnosti inhibiranja ERRα aktivnosti kod ispitivanja reporterskog gena ERRα pune dužine.

[0177] Utvrđen je postupak za kvantitativno ispitivanje potentnosti jedinjenja sa inverznom agonističkom aktivnošću na nuklearni receptor ERRα ljudske vrste. Ispitivanje omogućava intracelularni pregled inverznih agonista ERRα u SK-BR-3 ćelijama pomoću konstrukta prekomerne ekspresije koji kodira ERRα pune dužine i reporterskog konstrukta koji sadrži odgovor elementa ERRα (RE) i gen

4

luciferaze za očitavanje. Aktivnost se izražava u vrednostima loglC50 i može se koristiti za određivanje SAR-a porodice jedinjenja ili za poništavanje odabira jedinjenja.

[0178] U ovom ispitivanju, reporterske ćelije su dobijene prolaznom kotransfekcijom dva konstrukta u SK-BR-3 ćelijama korišćenjem tehnika transfekcije. Prvi konstrukt sadrži element odgovora nuklearnog receptora ERRα (plazmid pLP2175, reporterski konstrukt ERRα-RE/Iuc2P, kloniranu varijantu ERRa_v2_synthRE, Switchgear Genomics, kataloški broj S900089). Ova sekvenca upravlja transkripcijom reporterskog gena luciferaze kao odgovor na vezivanje ERRα proteina koji kodira drugi konstrukt (plazmid pLP2124: ERRα ekspresioni konstrukt pune dužine koji koristi pcDNA3.1/Hygro(+) kao pozadinu, kataloški broj u Invitrogen V87020). Prekomerno eksprimiran ERRα pune dužine je konstitutivno aktivan, samim tim ekspresiju luciferaze smanjuju inverzni agonisti nuklearnog receptora ERRα.

[0179] Dan nakon transfekcije, ćelije su postavljene u ploču sa 96 bunarčića, dodato je ispitivano jedinjenje i ploče su inkubirane tokom noći. Posle toga, aktivnost luciferaze svica se kvantifikuje pomoću reagensa za detekciju luciferaze i očitavanjem luminiscencije.

Opis detaljnog ispitivanja

[0180] Transfekcija je izvedena na prethodno posejanim SK-BR-3 ćelijama u T175 sudu. Jedan transfektovani sud T175 je dovoljan za zasejavanje 3 do 4 MW96 ploča sledeći dan, u zavisnosti od konfluencije transfektovanih ćelija.

[0181] Dva različite podloge se koriste u ovom protokolu za tretiranje ćelija: 1) Podloga kulture, tj.

McCoy's 5a s fenol crvenim (BioWhittaker broj dobavljača 12-688F), 10% FBS i 1x Penstrep.; i, 2) Podloga za ispitivanje, tj. McCoy's 5a podloga bez fenola crvenog (HyClone šifra proizvoda SH30270.01) sa 2% FBS bez ugljenika i 1x Penstrep. Razblaženja jedinjenja se pripreme u podlozi za ispitivanje.

[0182] Ćelije se poseju najmanje 2 dana unapred kako bi se omogućilo dobro prijanjanje ćelija na sud pre transfekcije. Ćelije bi trebalo da budu 50-80% konfluentne na dan transfekcije.

[0183] SKBR3 ćelije su bile transfektovane transkripcionim reporterskim konstruktom pLP2175 i ERRα ekspresionim konstruktom pLP2124 (kao što je prethodno opisano).

[0184] 68 µL lipofektamina LTX reagensa za tranfekciju (Invitrogen Catalog Number 15338-100) se dodaje u kapima u 8.9 ml podloge Opti-MEM I Reduced Serum Medium (Gibco kataloški broj 51985-026) i inkubira se na sobnoj temperaturi 5 do 20 minuta.8.9 ml ove mešavine reagensa se dodaje u 22 µg pLP2175 22 µg pLP2124 (odnos 1:1 i ukupna zapremina 10 ml), i inkubira se na sobnoj temperaturi 25 minuta.

[0185] 10 minuta pre dodavanja transfekcione mešavine u SKBR3 ćelije u T175 sudu, podloga za kultivisanje se ponovo osveži sa 20 mL podloge za kultivisanje. Naknadno, 10 mL DNA-Opti-MEM-Lipofekataminska mešavina se nežno dodaje u ćelije, nakon čega sledi inkubacija tokom noći (16-24 hours) na 37°C i 5% CO2.

[0186] Da bi se prikupile SKBR3 ćelije iz T175 suda, prvo se ukloni podloga. Nakon toga, ćelije se operu fosfatom puferisanim slanim rastvorom (PBS) (Lonza), posle čega se uklanja PBS. Da bi se razdvojile ćelije, 2 ml TrypLE Express (Invitrogen) se dodaje u sud, posle čega sledi inkubacija na 37°C tokom 5 minuta. Sud se lupka dok se ćelije ne odvoje od dna. Ćelije se sakupe u podlozi za kultivisanje od 8 mL (McCoy's 5a, 10% FBS, penstrep), da bi se postigla suspenzija pojedinačne ćelije. Posle brojanja ćelija, ćelije se zavrte 5 minuta na 300 g. Sledeće ćelijske pelete se ponovo suspenduju do 25000 ćelija/80 µl podloge za ispitivanje (McCoy's 5a bez fenola crvenog, 2% očišćen od uglja FBS, penstrep).

[0187] Zbog pregleda jedinjenja, ćelije se sakupe (kao što je prethodno opisano).80 µL. ćelijske suspenzije (25,000 ćelija) se postavi u ploču sa 96 bunarčića, po bunarčiću u belu podlogu ravnog dna, tretiranu kulturom tkiva (Greiner).

[0188] Ispitivana jedinjenja se razblaže, počevši od 10 mM osnovnog rastvora dimetilsulfoksida (DMSO), u 3 faze razblaženja. Prva faza razblaženja je bilo serijsko razblaženje od 12 tačaka 4 puta u DMSO. Ova razblaženja su dalje razblažena 10 puta u podlozi za ispitivanje bez fenol crvenog koji je sadržavao 2% FBS očišćenog od ugljenika i penstrep. Poslednji korak bilo je još jedno 20-struko razblaženje u podlozi za ispitivanje kako bi se dobilo 5x koncentrovano razblaženje sa koncentracijom DMSO od 0,5%. Kao zadnja faza, razblaženja jedinjenja su razblažena 5x u ćelijskoj ploči.

[0189] Serije DMSO razblaženja se sastoje od 12 koncentracija, sa finalnom koncentracijom u ćelijskoj ploči koja je u opsegu od 10 µM do 2.4 fM.

[0190] Ploče su inkubirane tokom noći (16-24 sati) na 37°C i 5% CO2.

[0191] Za očitavanje luciferaze, reagens luciferaze (BriteLite Plus, Perkin Elmer) se dovodi do sobne temperature. U svaki ispitivani bunarčić ploča za ispitivanje, dodaje se 100 µL 2,5 puta razblaženog reagensa BriteLite Plus, nakon čega sledi inkubacija na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta. Signal luminescencije luciferaze je izmeren pomoću čitača mikropločica Wallac Victor (Perkin Elmer).

[0192] Vrednosti polovine maksimalne inhibitorne koncentracije (IC50) za ispitivana jedinjenja su izračunata iz signala luciferaze pomoću GraphPad Prism softvera (GraphPad Software).

[0193] Iz primera jedinjenja formule I, za primere 10, 29, 32, 33, 34, 35, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 63, 67, 68, 69, 70, 84 i 86 je pronađeno da su imali vrednosti plC50 iznad ili jednake 6.5.

Primer 89

Singenski mišji model B16F10 melanoma

[0194] Primer inhibitora 80 je ispitan zbog svoje mogućnosti da inhibira rast tumora kod singenskog mišjeg modela B16F10 melanoma.

[0195] Ćelijska linija i model tumora: modela alografta kod C57BL/6 miševa izveden iz ćelijske linije B16F10 melanoma.

[0196] Ćelije mišjeg B16F10 melanoma su dobijene iz američke kolekcije tipskih kultura (ATCC), SAD. Ćelije rastu u DMEM (Invitrogen, kataloški br.31600-034) sa dodatkom 10% FBS (Invitrogen, kataloški

4

br. 10438-026), i 1% penicilinskog streptomicina (Thermo Fisher Scientific, kataloški br.15140-122). Da bi se utvrdili alografti, ćelije se sakupljaju tripsinizacijom kada dostignu oko 70 do 80 % konfluencije i 0.1 miliona B16F10 ćelija je suspendovano u 50 µl podloge koja ne sadrži serum i mešaju se u odnosu 1:1 sa matrigelom pre supkutanog implantiranja u dorzalni desni bok miša pomoću 1 mL BD šprica pričvršćenog na iglu 24-kalibra.

[0197] Tumorski kalemi B16F10 se mere posle 5 dana od inokulacije ćelija kada postanu opipljive. Kada je prosečna zapremina dosegla oko 58 mm<3>, životinje su dozirane posle nasumičnog razvrstavanja u različite grupe lečenja čime se zapremina tumora i broj životinja drže tako da je prosečna zapremina tumora svake grupe ostala ista po grupama. Doziranje je izvedeno po kilogramu telesne mase, oralno (per os, p.o.) jednom dnevno (quaque die, q.d).

[0198] Tumorske dimenzije - dužina (I) i širina (b) – su izmerene kaliperom onog dana kada su životinje nasumično podeljene na osnovu zapremine tumora (dan 1) i tri puta nedeljno posle toga do završetka ispitivanja. Zapremine tumora su izračunate korišćenjem formule b<2>* l * 0.52 u kojoj je l=dužina, b=širina (Dusan Djokovic et al., BMC Cancer, 2010, 10:641). Inhibicija rasta tumora se izračunava nakon normalizovanja zapremine tumora datog dana do 1. dana.

[0199] Primena stavki iz ispitivanja je započeta kada je zapremina tumora dosegla u proseku oko 58 mm<3>.

[0200] Primena stavki iz ispitivanja je izvedena 14. dana i merenje zapremine tumora je izvedeno do 13. dana radi izračunavanja procenta inhibicije rasta tumora (TGI). Rezultati ispitivanje su navedeni u tabeli 1 u nastavku.

Tabela 1

[0201] U smislu prethodnog opisa i primera, stručnjacima iz ove oblasti će biti očigledno da njihove ekvivalentne modifikacije mogu biti napravljene bez odstupanja okvira patentnih zahteva.

4

Claims (15)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje prema formuli I

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so pri čemu Y predstavlja pojedinačnu ugljenik-ugljenik vezu ili dvostruku ugljenik-ugljenik vezu, pod uslovom da kada Y predstavlja dvostruku ugljenik-ugljenik vezu, R'15i R16nisu prisutni; jedan od tri položaja A1-A3predstavlja ili S ili NRA, preostala dva položaja A1-A3predstavljaju N ili CR1, CR2, CR3, tim redom; RApredstavlja H ili metil; R1-R3nezavisno predstavljaju H, metil, amino ili halogen; A4-A7predstavljaju CR4, CR5, CR6i CR7, tim redom; A8-A12predstavljaju N ili CR8, CR9, CR10, CR11i CR12, tim redom, pod uslovom da najviše dva od pet položaja A8- A12mogu istovremeno biti N; R4- R7nezavisno predstavljaju H, halogen, C(1-3)alkoksi, C(1-3)alkil; R8- R12nezavisno predstavljaju H, halogen, C(1-3)alkoksi, C(1-4)alkil, cijano, nitro, -C(=O)OR17, hidroksil, C(3-6)cikloalkil, benzil, fenil, -SF5, biciklo[1.1.1]pentan; ili R9i ili R8ili R10su spojeni i obrazuju aromatični ili nearomatični petočlani do sedmočlani prsten koji sadrži dva do sedam atoma ugljenika i nula do tri hetero atoma; pri čemu su svi atomi ugljenika opciono supstituisani jednim ili više metila, halogena ili hidroksila; R13predstavlja H ili metil; R14predstavlja NH, O ili S; R'15predstavlja H, halogen, C(1-4)alkil, -C(=O)OR17ili -C(=O)NR17R17; R15predstavlja H, halogen ili C(1-4)alkil; R16predstavlja H; i, 4 R17predstavlja H, metil ili etil.
2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu A1predstavlja N, A2predstavlja NRAi A3predstavlja CR3, naročito gde A1predstavlja N, A2predstavlja NH i A3predstavlja CH.
3. 3. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili 2, pri čemu R5predstavlja C(1-3)alkoksi, a R4, R6i R7predstavljaju H, naročito gde R5predstavlja metoksi, a R4, R6i R7predstavljaju H.
4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 3, pri čemu A8-A12predstavljaju CR8, CR9, CR10, CR11i CR12tim redom, naročito gde R8-R12nezavisno predstavljaju H, C(1-4)alkil, halogen, hidroksil ili C(1-3)alkoksi, određenije gde R9i R11predstavljaju C(1-4)alkil, a R8, R10i R12predstavljaju H, određenije gde R9i R11predstavljaju CF3, a R8, R10i R12predstavljaju H.
5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 4, pri čemu R13predstavlja H; i/ili pri čemu R14predstavlja O; i/ili pri čemu Y predstavlja pojedinačnu ugljenik-ugljenik vezu.
6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 5, pri čemu R15i R'15predstavljaju H.
7. 7. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje je izabrano iz grupe koju čine: 4-[3-metoksi-4-(3-metilfenoksi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)-3-(trifluorometil)benzonitril; 4-[3-metoksi-4-(2-nitrofenoksi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{3-metoksi-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{3-metoksi-4-[4-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{3-metoksi-4-[3-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-bromofenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[3-metoksi-4-(2-metilfenoksi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 2-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)benzonitril; 4-[4-(2-terc-butilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-hlorofenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{3-metoksi-4-[2-(trifluorometoksi)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[3-metoksi-4-(2-metoksifenoksi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(3-bromofenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(3-terc-butilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(3-hlorofenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{3-metoksi-4-[3-(trifluorometoksi)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4 4-[3-metoksi-4-(3-metoksifenoksi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; metil 3-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)benzoat; 4-[4-(2-etilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(3-etilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[3-metoksi-4-(2-propilfenoksi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{3-metoksi-4-[2-(propan-2-il)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[3-metoksi-4-(2-fenilfenoksi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-ciklopentilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-benzilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-terc-butil-4-metoksifenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-ciklopropilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(3-terc-butil-4-hidroksifenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{3-metoksi-4-[3-(propan-2-il)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(3-ciklopropilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-terc-butil-4-etilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(4-bromo-2-terc-butilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-terc-butil-4-metilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; metil 3-terc-butil-4-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)benzoat; metil 4-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)naftalen-1-karboksilat; 4-[4-(2,4-di-terc-butilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{3-metoksi-4-[3-metoksi-5-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 3-terc-butil-4-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)benzonitril; 4-{3-metoksi-4-[2-(pentafluoro-λ<6>-sulfanil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; metil 3-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)-5-(trifluorometil)benzoat; 4-{4-[3-bromo-5-(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(3,5-di-terc-butilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-{biciklo[1.1.1]pentan-1-il}fenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)naftalen-1-karbonitril; 4-[4-(2,3-dihidro-1H-inden-4-iloksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{4-[(2,2-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-7-il)oksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2,3-dihidro-1H-inden-5-iloksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; metil 8-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)kvinolin-5-karboksilat; 4-(3-metoksi-4-fenoksifenil)-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4 4-{3-bromo-4-[3-metoksi-5-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 3-terc-butil-4-(4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)benzonitril; 4-{4-[3-metoksi-5-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 3-terc-butil-4-(2-metil-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)benzonitril; 4-{4-[3-metoksi-5-(trifluorometil)fenoksi]-3-metilfenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{3-fluoro-4-[3-metoksi-5-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{4-[2-(pentafluoro-λ<6>-sulfanil)fenoksi]-3-(trifluorometoksi)fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{4-[2-(pentafluoro-λ<6>-sulfanil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[3-(trifluorometoksi)-4-[2-(trifluorometil)fenoksi]fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 3-terc-butil-4-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)benzojeva kiselina; 3-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)-5-(trifluorometil)benzojeva kiselina; 4-{3-metoksi-4-[3-metil-5-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(3,5-dimetilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{3-metoksi-4-[2-metil-4-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2,4-dimetilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-terc-butil-4-etilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-terc-butil-4-metoksifenoksi)-3-metoksifenil]-2H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(2-terc-butil-4-metilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-[4-(4-bromo-2-terc-butilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-(2-metoksi-4-{6-okso-2H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoksi)-3-(trifluorometil)benzonitril; metil 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-karboksilat; etil 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-karboksilat; 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-N,N-dimetil-6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-karboksamid; 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-N,N-dietil-6-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-karboksamid; 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-1H,2H,3H,4H,6H-pirolo[3,4-b]piridin-2-on; 4-{4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; 4-{4-[2-(difluorometil)-4-(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; (+)-4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; (-)-4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; (+)-4-[4-(3,5-dimetilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; (-)-4-[4-(3,5-dimetilfenoksi)-3-metoksifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; (+)-4-{3-metoksi-4-[3-metil-5-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; (-)-4-{3-metoksi-4-[3-metil-5-(trifluorometil)fenoksi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; (+)-4-{4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; i, (-)-4-{4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on.
8. 8. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje predstavlja (+)-4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on; ili, (-)-4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoksi]-3-metoksifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-on.
9. 9. Lek naznačen time, što obuhvata jedinjenje formule I prema bilo kom od zahteva 1 do 8 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 8 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u terapiji.
11. 11. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 8 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju ERRα-posredovanog kancera.
12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 8 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju najmanje jednog stanja izabranog iz grupe koju čine: kancer pluća; melanom; endometrijalni kancer; i, akutna mijeloidna leukemija.
13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 8 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju najmanje jednog stanja izabranog iz grupe koju čine: kancer dojke; kancer bešike; kancer prostate; kancer pankreasa; kolorektalni kancer; i, kancer jajnika.
14. 14. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 8 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju dijabetesa melitusa tipa II. 1
15. 15. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule I prema bilo kom od zahteva 1 do 8 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa, naročito gde farmaceutska kompozicija dodatno obuhvata najmanje jedan dodatni terapijski aktivan agens. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 2