CN114341135B

CN114341135B - 雌激素相关受体α(ERRα)调节剂

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Publication number: CN114341135B
Application number: CN202080062286.XA
Authority: CN
Inventors: J·G·H·莱默斯; E·德雷蒂; J·P·G·克罗朴; J·M·G·B·卡尔斯; A·奥布里
Original assignee: Lead Pharma Holding BV
Current assignee: Lead Pharma Holding BV
Priority date: 2019-07-04
Filing date: 2020-07-01
Publication date: 2025-03-18
Anticipated expiration: 2040-07-01
Also published as: ZA202200591B; US20220387401A1; CO2021017619A2; IL289510A; WO2021001453A1; MX2022000165A; IL289510B1; EP3994138A1; EP3994138C0; EP3994138B1; IL289510B2; PH12021553204A1; CA3144891A1; JP2022538363A; US20250268872A2; MA56444A; KR20220029719A; AU2020298779A1; JP7606479B2; CN114341135A

Abstract

本发明涉及根据式I的化合物及其药学上可接受的盐。该化合物可以用作雌激素相关受体α(ERRα)的调节剂并且用于治疗ERRα‑介导的疾病或状况。

Description

雌激素相关受体α(ERRα)调节剂

发明背景

雌激素相关受体α(ERRα)是45.5千道尔顿(kDa)、423个氨基酸残基的蛋白质，其属于核受体(NR)超家族。该核受体家族包含48种基因，编码参与调节尤其包括稳态、繁殖、发育和代谢的不同功能的DNA结合转录因子。ERR家族(NR3B亚组)由ERRα、ERR-β和ERR-γ组成：迄今为止，对于任何ERR亚型都没有鉴定出内源配体，因此它们被认为是孤儿受体。

在Bookout et al.Anatomical profiling of nuclear receptor expressionreveals a hierarchical transcriptional network,Cell.126:789–99(2006)中，三种ERR亚型的全有机体范围(organism-wide)的表达谱确定了ERRα是广泛分布的，在大多数成人组织中有显著的蛋白质表达。对ERR家族成员的敲除研究已经表明，每种受体具有在整个身体水平上对适应于能量应激(energy stress)而言很重要的组织特异性和功能特异性代谢表型。敲除研究还表明了ERR家族成员之间有限的体内补偿。在此上下文中可以注意尤其是Tremblay et al.The NR3B subgroup:an overview,Nuclear receptor signaling,5:e009(2007)的公开内容。

基因组研究已经表明，ERRα调节大量基因。以下参考文献在这方面是有指导作用的：Puigserver et al.A cold-inducible coactivator of nuclear receptors linkedto adaptive thermogenesis,Cell.92(6):829–839(1998)；Yoon et al.Control ofhepatic gluconeogenesis through the transcriptional coactivator PGC-1,Nature413(6852):131–138(2001)；Huss et al.Estrogen-related receptorαdirectsperoxisome proliferator-activated receptor at signaling in thetranscriptional control of energy metabolism in cardiac and skeletal muscle,Mol.Cell Biol.24(20):9079–9091(2004)；和Mootha et al.ERRαand Gabpa/b specifyPGC-1alpha-dependent oxidative phosphorylation gene expression that isaltered in diabetic muscle,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,101(17):6570–6575(2004)。

这些参考文献支持ERRα在调节能量代谢中并且特别是在线粒体生物发生所需的基因的转录调节、三羧酸循环、氧化磷酸化、脂肪酸氧化和脂质代谢中的功能的生理模型。特别地，ERRα诱导核呼吸因子1(NRF1)、GA结合蛋白α(GABPα)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的表达。核受体共激活因子(过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1-α(PGC-1α)、PGC-1β和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子相关蛋白1(PPRC-1))参与这些基因的调节和ERRα的表达的自调节。PGC-1α以低基础水平表达，但通过禁食和其他代谢应激来诱导。PGC-1β是一种相关的共激活因子，其具有类似的功能，但其表达可能不像通过能量需求的变化所调节那样灵敏。相反，与ERR结合的共抑制因子，例如共抑制因子核受体相互作用蛋白140(RIP140)，与ERR共激活因子竞争以负调节ERR依赖性基因表达。

ERRα活性对能量代谢的多效性作用已经引起了本发明人对于它应该是发现用于疾病的新疗法的靶点的可能性的兴趣，在所述疾病中代谢紊乱或修饰起中心作用，例如2型糖尿病、渐进性心力衰竭、骨质疏松症和癌症。特别感兴趣的是ERRα通过对与肿瘤微环境内的能量应激相关联的肿瘤细胞能量代谢的调节的作用而作为肿瘤疗法的新靶点。并且具体感兴趣的是ERRα作为用于治疗性治疗癌症的新靶点，所述癌症具有干细胞样性质(癌症干细胞(CSC)、肿瘤起始细胞(TIC)和循环肿瘤细胞(CTC))，其依赖于用于满足它们的能量需求的线粒体呼吸。

特别已知的是癌症的起始和发展与主要代谢改变相关联，并且线粒体在肿瘤发生中起关键作用。在许多癌症类型中观察到的共同异常(被称为Warburg效应)是葡萄糖代谢从氧化磷酸化到有氧糖酵解的转变，并且其特征在于葡萄糖消耗的急剧增加伴随乳酸分泌速率升高，而不管氧气丰度如何：有氧糖酵解满足高增殖性细胞的代谢需求，包括提供足够的能量和提供用于合成代谢反应的前体的积累。LeBleu et al.PGC-1alpha mediatesmitochondrial biogenesis and oxidative phosphorylation in cancer cells topromote metastasis.Nat.Cell Biol.16(10):992-1(2014)证明了肿瘤细胞显示代谢可塑性，以根据肿瘤环境以及它们在癌症进展期间的增殖或转移表型而参与糖酵解或氧化磷酸化。因此很显然，转移性祖细胞和抗性肿瘤细胞的靶向应当不仅经由糖酵解途径而发生，而且经由线粒体氧化磷酸化而发生。

ERRα与PGC1α/β一起控制编码三羧酸(TCA)循环和氧化磷酸化中的酶的基因的调节。如在Ariazi et al.Estrogen-related receptor alpha and estrogen-relatedreceptor gamma associate with unfavorable and favorable biomarkers,respectively,in human breast cancer,Cancer Res.62(22):6510-8(2002)中所讨论的，ERRα在包括乳腺癌细胞和前列腺癌细胞的多种癌细胞中表达，并且与更多的侵袭性疾病和在这两种癌症类型中更高的复发风险相关联。

Chang et al.The metabolic regulator ERRa,a downstream target of HER2/IGF-1R,as a therapeutic target in breast cancer,Cancer Cell 20,500-510(2011)和Fujimoto et al.Clinical implication of estrogen-related receptor(ERR)expression in ovarian cancers,J.Steroid Biochem.Mol.Biol.104,301-304(2007)记载了ERRa在大多数癌症中表达，并且该受体的活性增加与乳腺癌和卵巢癌中的阴性结果相关联。在这些参考文献中的第一个中，确认了该转录因子参与线粒体生物发生并且还参与氧化磷酸化的调节。后一点被认为是重要的，因为对胰腺癌中Kras途径的抑制、黑色素瘤中的BRAF抑制剂和结肠癌中的奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的抗性也与向氧化代谢的转变相关联。

因此，本发明人认为，对ERRα活性的抑制将使得能够选择性地破坏癌症中的线粒体功能，特别是在前述类型的癌症中。为此目的，但同样为了用于治疗其他ERRα介导的疾病和状况，他们已经开发了非共价的、非甾族的ERRα反向激动剂。

发明内容

根据本发明的第一方面，提供了根据式I的化合物

或其药学上可接受的盐，其中：

Z是–OCH₂–或–CH₂O–；

Y是碳-碳单键或碳-碳双键，条件是当Y是碳-碳双键时，R’₁₅和R₁₆不存在；

A₁–A₃三个位置中的一个是S或NR_A，A₁–A₃其余两个位置分别是N或CR₁、CR₂、CR₃；

R_A是H或甲基；

R₁–R₃独立地是H、甲基或卤素；

A₄–A₇分别是N或CR₄、CR₅、CR₆和CR₇，条件是A₄–A₇四个位置中的不多于两个能够同时是N；

A₈–A₁₂分别是N或CR₈、CR₉、CR₁₀、CR₁₁和CR₁₂，条件是A₈–A₁₂五个位置中的不多于两个能够同时是N；

R₄–R₇独立地是H、卤素、C(1-6)烷基、氨基、(二)C(1-3)烷基氨基、C(1-3)烷氧基、C(1-3)烷氧基C(1-3)烷氧基、-C(O)OR₁₇、–C(O)NR₁₇R₁₇或硝基，其中所有基团任选地被一个或多个卤素或羟基取代；

R₈–R₁₂独立地是H、卤素、C(1-3)烷氧基、C(1-6)烷基、氰基、氰基C(1-3)烷基、氨基、硝基、氨基C(1-3)烷基、–C(O)OR₁₅、–CH₂C(O)OR₁₇、-C(O)NR₁₇R₁₇、–NHC(O)R₁₇、乙酰基、羟基、C(3-6)环烷基、C(2-3)炔基、C(2-3)烯基、羧基C(1-3)烷基、C(1-3)烷基磺酰基、氨基磺酰基、(二)C(1-3)烷基氨基、苄基、SF₅或CH(＝O)，其中所有基团任选地被一个或多个卤素或羟基取代；

或者R₉与R₈或R₁₀稠合并形成含有二至七个碳原子和零至三个杂原子的芳族或非芳族五至七元环；其中所有基团任选地被一个或多个甲基、卤素或羟基取代；

R₁₃是H或甲基；

R₁₄是NH、O或S；

R₁₅和R’₁₅独立地是H、卤素、C(1-4)烷基、氰基、羧酸、-C(O)OR₁₇、-C(O)NR₁₇R₁₇；

R₁₆是H；且

R₁₇是H、C(1-4)烷基、氨基C(1-3)烷基、C(1-5)杂芳基或苯基，其中所有基团任选地被一个或多个卤素或羟基取代。

在一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中A₁是N，A₂是NR_A，且A₃是CR₃。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中A₁是N，A₂是NH，且A₃是CH。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中A₄、A₅、A₆和A₇位置分别是CR₄、CR₅、CR₆和CR₇。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中R₅是C(1-3)烷氧基，且R₄、R₆和R₇是H。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中R₅是甲氧基，且R₄、R₆和R₇是H。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中A₈、A₉、A₁₀、A₁₁和A₁₂位置分别是CR₈、CR₉、CR₁₀、CR₁₁和CR₁₂。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中R₈-R₁₂独立地是H、C(1-6)烷基、卤素、羟基、NH₂、乙酰基、C(1-3)烷氧基或SF₅。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中R₈-R₁₂独立地是H、C(1-6)烷基或卤素。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中R₈和R₁₀是C(1-6)烷基，且R₉、R₁₁和R₁₂是H。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中R₈和R₁₀是CF₃，且R₉、R₁₁和R₁₂是H。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中R₁₃是H。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中R₁₄是O。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中R₁₅和R’₁₅是H。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中Z是-CH₂O-，其中CH₂与含有A₄-A₇的芳族环连接。

在另一个实施方案中，本发明涉及根据式I的化合物，其中Y是碳-碳单键。

当以上实施方案涉及式(I)的不同取代基的优选形式时，它们并不旨在相互排斥。相反，这些实施方案的所有组合都设想在本发明的范围内，并且在某些情况下，这样的组合代表式I化合物的优选结构。在这方面，可以尤其提及根据式I的化合物，其中：R₁₄是O；Z是-CH₂O-，其CH₂与含有A₄-A₇的芳族环连接；并且Y是碳-碳单键。还可以提及根据式I的化合物，其中：R₈和R₁₀是CF₃且R₉、R₁₁和R₁₂是H；R₁₃是H；R₁₄是O；Z是-CH₂O-，其中CH₂与含有A₄-A₇的芳族环连接；并且Y是碳-碳单键。

定义

本文所用的单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数指示物，除非上下文另外明确指明。

本文所用的术语“包含”(“comprising”、“comprises”和“comprised of”)同义于“包括”(“including”、“includes”)、“含有”(“containing”或“contains”)，并且是包含性的或开放式的，并且不排除另外的、未记载的构件、元件或方法步骤。如果使用的话，短语“由……组成”是封闭式的且排除所有另外的元件。此外，短语“基本上由……组成”排除了额外的实质性元件，但是允许包括不显著改变本发明的性质的非实质性元件。

当以范围、优选的范围、上限值、下限值或优选的上和限值的形式表达量、浓度、尺寸和其他参数时，应当理解，还具体公开了通过将任何上限或优选值与任何下限或优选值组合可获得的任何范围，而不论所获得的范围是否在上下文中清楚地提及。

在某些情况下，词语“优选的”、“优选地”、“期望地”和“特别地”或其同义词可以在本文中经常用来指本公开的可以提供特定益处的实施方案。然而，对一个或多个可优选的、优选的、期望的或特别的实施方案的叙述并不暗示其他实施方案是不可用的，并且不旨在从本公开的范围中排除那些其他实施方案。

贯穿本申请所使用的词语“可以”是以允许选择(permissive)的意义使用(这意味着具有可能性)，而不以强制的意义使用。

本文所用的“室温”是23℃±2℃。

除非另有说明，否则本文所用的术语“卤代”或“卤素”或“卤化物”本身或作为另一个取代基的一部分是指氟、氯、溴或碘原子。注意优选氟、氯或溴。

本文所用的术语“杂原子”表示氮、氧或硫。

本文中术语“基(radical)”的使用与IUPAC.Compendium of ChemicalTerminology,2nd ed.(the"Gold Book").由A.D.McNaught和A.Wilkinson编写,BlackwellScientific Publications,Oxford(1997)中对所述分子本体的定义一致。

本文所用的“C(1-n)烷基”基团是指含有1至n个碳原子的一价基团，其是烷烃的基并且包括直链和支链的有机基团。因此，“C₁-C₃₀烷基”基团是指含有1至30个碳原子的一价基团，其是烷烃的基并且包括直链和支链的有机基团。在本发明中，这样的烷基基团可以是未取代的或者可以被本文下面提到的基团取代。烃基的卤代衍生物尤其可以被提及为合适的取代的烷基基团的实例。

本文所用的术语“C(1-6)烷基”是指具有1-6个碳原子的支链或直链的烷基基团，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、正戊基和正己基。所有碳原子都可以任选地被一个或多个卤素或羟基取代。

本文所用的术语“C(1-4)烷基”是指具有1-4个碳原子的烷基基团，即甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。所有碳原子都可以任选地被一个或多个卤素或羟基取代。

本文所用的术语“C(1-3)烷基”是指具有1-3个碳原子的烷基基团，即甲基、乙基、丙基或异丙基。所有碳原子都可以任选地被一个或多个卤素或羟基取代。

本文所用的术语“C(1-2)烷基”是指具有1-2个碳原子的烷基基团，即甲基或乙基。所有碳原子都可以任选地被一个或多个卤素或羟基取代。

本文所用的术语“C(3-6)环烷基”是指具有3-6个碳原子的饱和环状烃，即环丙基、环丁基、环戊基或环己基。所有碳原子都可以任选地被一个或多个卤素或甲基取代。

本文所用的术语“C(2-3)炔基”是指具有2-3个碳原子的炔基基团，即乙炔基、1-丙炔基或2-丙炔基。所有碳原子都可以任选地被一个或多个羟基取代。

本文所用的术语“C(2-3)烯基”是指具有2-3个碳原子的烯基基团，即乙烯、1-丙烯或2-丙烯。

术语“C(1-3)烷氧基”是指具有1-3个碳原子的烷氧基基团，其中烷基部分是支链或直链的。所有碳原子都任选地被一个或多个F或羟基取代。

术语“C(1-3)烷氧基C(1-3)烷基”是指连接至C(1-3)烷基的C(1-3)烷氧基，二者都具有与先前所定义的相同的含义。

本文所用的术语“C(1-3)烷氧基C(1-3)烷氧基”是指连接至C(1-3)烷氧基的C(1-3)烷氧基，其中术语C(1-3)烷氧基具有与先前所定义的相同的含义。

本文所用的术语“C(1-5)杂芳基”是指具有1-5个碳原子和1-4个杂原子的芳族基团，其可以通过氮原子(如果可行的话)或碳原子连接。实例包括吡咯基、吡唑基、咪唑基、异噁唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基和三嗪基。所有碳原子都可以任选地被一个或多个卤素或甲基取代。

本文所用的术语“氰基”表示式-CN的基团。

术语“氰基C(1-3)烷基”是指在任何位置连接至C(1-3)烷基基团的氰基基团，其中术语“氰基”和“C(1-3)烷基”具有与先前定义的相同的含义。

本文所用的“硝基基团”或“硝基”是指-NO₂。

本文所用的术语“氨基基团”是指式-NH₂的取代基。旨在该术语涵盖其质子化的形式(–NH₃ ⁺)。

术语“氨基C(1-3)烷基”是指在任何位置连接至C(1-3)烷基基团的氨基基团，所述部分“C(1-3)烷基”具有与先前定义的相同的含义。

本文所用的术语“(二)C(1-3)烷基氨基”是指独立地被具有与先前定义的相同的含义的C(1-3)烷基基团单取代或二取代的氨基基团。

术语“C(1-3)烷基磺酰基”表示基团-S(O)₂R，其中R是C(1-3)烷基基团，其中术语“C(1-3)烷基”具有与先前定义的相同的含义。

术语“氨基磺酰基”表示基团-S(O)₂-NH₂，其中氨基基团连接至磺酰基部分。

术语“羧基C(1-3)烷基”表示连接至C(1-3)烷基的基团-C(O)OH。术语“C(1-3)烷基”具有与先前定义的相同的含义。

术语“取代的”是指指定原子上的一个或多个氢被选自所指示的基团的基团替代，条件是：不超过指定原子在现有情况下的正常化合价；并且取代导致稳定的化合物。只有当取代基的组合导致稳定的化合物时，这些组合才也是可允许的。术语“稳定的化合物”或“稳定的结构”是指这样的化合物或结构，其足够稳健，以能够承受从反应混合物分离到有用程度的纯度以及配制成有效的治疗剂。

术语“任选取代的”是指被指定的基团、基或部分的任选的取代。

本文所用的“保护基团”是指连接至官能团以防止不希望的反应的部分。优选地，在不再需要对官能团进行保护之后，可以容易地去除保护基团。

式I化合物可以形成盐，该盐也在本发明的范围内。除非另有说明，否则本文中对式I化合物的提及应被理解为包括对其盐的提及。

术语“药学上可接受的盐”根据其在本领域中的标准定义来使用，以表示在医学判断范围内适用于与人和低等动物的组织接触地使用而特别没有不适当的毒性、刺激性和/或过敏反应的那些盐：该使用必须与合理的益处与风险比相称。药学上可接受的盐是本领域公知的。它们可以在本发明的化合物的最终分离和纯化期间获得，或者它们可以通过使游离碱官能团与以下物质反应而单独获得：合适的无机酸，包括但不限于盐酸、磷酸或硫酸；或者有机酸，包括但不限于抗坏血酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、马来酸、丙二酸、富马酸、乙醇酸、琥珀酸、丙酸、乙酸或甲磺酸。本发明化合物的酸官能团可以与矿物碱如氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂或者与有机碱反应。为了完整起见，有机碱包括常见的烃基或杂环胺盐，例如二乙基氨基、吗啉和哌啶盐。

式I化合物可以含有不对称或手性中心，因此以不同的立体异构形式存在。意图式I化合物的所有立体异构形式及其混合物，包括外消旋混合物，形成本发明的一部分。特别地，遵循Cahn-Ingold-Prelog命名法系统在紧邻吡唑环的手性中心上为S构型的式I化合物的立体异构形式确定地形成本发明的一部分。

本领域技术人员将理解，对映异构体可以通过以下方式分离：通过与适当的光学活性化合物(例如手性助剂，例如手性醇或Mosher酰氯)反应，将对映异构体混合物转化为非对映异构体混合物；分离非对映异构体；以及例如通过水解将单独的非对映异构体转化为相应的纯对映异构体。也可以通过使用手性HPLC柱来分离对映异构体。

还应当认识到，式I化合物的各种互变异构体可以是可能的：因此意图式I化合物的所有互变异构形式形成本发明的一部分。为了完整起见，本文所用的术语“互变异构体”是指质子在相邻的单键和双键之间的迁移。互变异构化过程是可逆的：互变异构体通常将达到平衡状态，其中双键在两个键长之间共振共享。

本发明还涉及药物组合物，其包含与药学上可接受的赋形剂混合的具有通式I的化合物或其药学上可接受的盐以及任选的其他治疗活性剂。在与组合物的其他成分相容且对其接受者无害的意义上，所述赋形剂必须是“可接受的”。

本发明还包括与一种或多种其他药物组合的式I化合物。

组合物包括但不限于适于口服、舌下、皮下、静脉内、肌内、鼻、局部或直肠给药的那些，其均以单位剂型给药。对于口服给药，活性成分可以呈现为离散单位，例如片剂、胶囊、粉末剂、颗粒剂、溶液、悬浮液等。

对于肠胃外给药，本发明的药物组合物可以在单位剂量或多剂量容器中呈现，例如以预定量在例如密封小瓶和安瓿中呈现的注射液体。药物组合物还可以储存在冷冻干燥(冻干)条件下，其仅需要在使用前添加无菌液体载体例如水。

与此类药学上可接受的助剂混合，活性剂可以被压缩成固体剂量单位，例如丸剂、片剂，或被加工成胶囊或栓剂。通过药学上可接受的液体，活性剂可以作为流体组合物例如以溶液、悬浮液或乳剂的形式施用，其可以被包括在注射制剂中或喷雾剂中，例如鼻喷雾剂中。

为了制造固体剂量单位，考虑使用常规添加剂如填料、着色剂、聚合物粘合剂等。通常，可以使用不干扰活性化合物的功能的任何药学上可接受的添加剂。当以合适的量使用时，可以与本发明的活性剂以固体组合物的形式给药的合适载体包括乳糖、淀粉、纤维素衍生物等或它们的混合物。对于肠胃外施用，可以使用水性悬浮液、等渗盐水溶液和无菌可注射溶液，该悬浮液或溶液可以含有药学上可接受的分散剂和/或润湿剂，例如丙二醇或丁二醇。

本发明还包括如前文所述的药物组合物与适用于所述组合物的包装材料的组合，所述包装材料包括用于使用所述组合物用于如前文所述的目的的说明。

活性成分或其药物组合物的确切剂量和给药方案可以随特定化合物、给药途径以及药物所施用的个体受试者的年龄和状况而变化。

一般，肠胃外给药需要比更依赖于吸收的其他给药方法更低的剂量。除此之外，用于人的剂量优选含有0.0001至100mg/kg体重。期望的剂量可以作为一个剂量或作为在整个一天内以适当的间隔给药的多个子剂量来呈现。

根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以作为药物用于疗法中。

本发明的另一方面在于具有通式I的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗性和/或预防性治疗ERRα介导的疾病或ERRα介导的状况的用途。特别地，本发明提供具有通式I的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗ERRα介导的癌症的用途。

具有通式I的化合物或其药学上可接受的盐可以用于治疗选自以下的至少一种状况的疗法中：肺癌；黑色素瘤；子宫内膜癌；和急性骨髓性白血病。不意图限制本发明的这个方面，具有通式I的化合物或其药学上可接受的盐可以特别用于治疗以下的疗法中：浅层扩散性黑色素瘤(superficial spreading melanoma)；恶性雀斑样痣(lentigo maligna)；肢端雀斑性黑色素瘤(acral lentiginous melanoma)；结节性黑色素瘤(nodularmelanoma)；无黑色素性黑色素瘤(amelanotic melanoma)；眼黑色素瘤；外阴的黑色素瘤；或阴道黑素瘤。

另一方面，具有通式I的化合物或其药学上可接受的盐可以用于治疗选自以下的至少一种状况的疗法中：乳腺癌；膀胱癌；前列腺癌；胰腺癌；结直肠癌；和卵巢癌。

另一方面，具有通式I的化合物或其药学上可接受的盐可以用于治疗II型糖尿病。

本文还提供了一种治疗选自以下的至少一种状况的方法：肺癌；黑色素瘤；子宫内膜癌；和急性骨髓性白血病，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据式I的化合物或其药学上可接受的盐。

还提供了一种治疗选自以下的至少一种状况的方法：浅层扩散性黑色素瘤；恶性雀斑样痣；肢端雀斑性黑色素瘤；结节性黑色素瘤；无黑色素性黑色素瘤；眼黑色素瘤；外阴的黑色素瘤；和阴道黑素瘤，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据式I的化合物或其药学上可接受的盐。

还提供了一种治疗选自以下的至少一种状况的方法：乳腺癌；膀胱癌；前列腺癌；胰腺癌；结直肠癌；和卵巢癌，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据式I的化合物或其药学上可接受的盐。

还提供了一种治疗II型糖尿病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据式I的化合物或其药学上可接受的盐。

本文所用的短语“治疗有效量”是指有效产生期望的治疗效果的主题化合物或组合物的量。

发明详述

如在以下实施例中所示，在某些示例性实施方案中，根据以下一般程序制备化合物。应当理解，虽然一般方法描绘了本发明的某些化合物的合成，但是以下一般方法和本领域技术人员已知的其他方法可以应用于如本文所述的所有化合物和这些化合物中的每一个的子类和物质。

一般性制备方法

本文中描述的化合物，包括通式I的化合物、构件I和构件II，由下面描述的反应方案制备。此外，在以下方案中，在提及具体的酸、碱、试剂、偶联剂、催化剂、溶剂等时，应当理解，可以使用其他合适的酸、碱、试剂、偶联剂、催化剂、溶剂等，并且它们包括在本发明的范围内。对反应条件(例如温度、反应的持续时间或其组合)的修改被设想为本发明的一部分。

通过使用一般性反应顺序得到的化合物可能纯度不足。化合物可以通过使用用于纯化有机化合物的方法中的任一种来纯化，例如结晶或以合适比例使用不同溶剂进行的硅胶或氧化铝柱色谱法。所有可能的立体异构体都被设想在本发明的范围内。

反应方案和实施例中所用材料的缩写如下：

AcOH：乙酸；ACN：乙腈；AIBN：偶氮二异丁腈；BH₃·THF：硼烷-四氢呋喃；Boc₂O：二碳酸二叔丁酯；DAST：(二乙基氨基)三氟化硫；DBU：1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯；DCM：二氯甲烷；DDQ：2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌；DIAD：偶氮二甲酸二异丙酯；DiBAl-H：二异丁基氢化铝；DMAP：4-二甲基氨基吡啶；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；EDC：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺；Et₂O：二乙醚；EtOAc：乙酸乙酯；HATU：1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐；HOBt：羟基苯并三唑；KOAc：乙酸钾；MeMgBr：甲基溴化镁；MeOH：甲醇；Me₂S·BH₃：硼烷二甲基硫醚；NBS：N-溴代琥珀酰亚胺；NMO：4-甲基吗啉N-氧化物；PdCl₂(PPh₃)₂：双(三苯基膦)二氯化钯(II)；Pd(dppf)Cl₂：[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)；Pd(PPh₃)₄：四(三苯基膦)钯(0)；PhSCu(I)：苯基硫基铜；PPh₃：三苯基膦；p-TsOH：对甲苯磺酸；tBuOK：叔丁醇钾；tBuONO：亚硝酸叔丁酯；TEA：三乙胺；TEMPO：2,2,6,6-四甲基哌啶基氧基；THF：四氢呋喃；TMS-Cl：三甲基氯硅烷；TOSMIC：对甲苯磺酰基甲基异腈。

化学名称是使用Marvin Sketch 17.24.1产生的优选的IUPAC名称。如果使用化学结构和化学名称两者来指代化学化合物，并且结构与名称之间存在歧义，则结构占主导。

方案1

条件：i)Meldrum氏酸，MeOH

如方案1所示，可以通过有机化学领域中已知的方法制备本发明的具有式I的衍生物，其中R₁₄是氧，R₁₅、R’₁₅和R₁₆中的每一个是H，且Y是碳-碳单键。本发明的化合物可以通过构件I的衍生物(其中Z、A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₀、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义)、构件II的衍生物(其中R₁₃、A₁、A₂和A₃具有如前所述的含义)和Meldrum氏酸之间的反应获得。

为了获得其中R₁₄是硫的式I的衍生物，可以使其中R₁₄是氧的式I的衍生物与例如Lawesson氏试剂反应。

为了获得其中R₁₄是氮的式I的衍生物，可以使其中R₁₄是硫的式I的衍生物与例如氨的MeOH溶液反应。

如果构件I在R₄-R₁₂中含有胺或醛部分，则该部分应当在与构件II衍生物和Meldrum氏酸反应之前用适当的保护基团保护，并且应当在之后使用公知的方法进行脱保护，以获得期望的式I类似物。通过该路线，可以获得胺，可以使用公知的方法使其进一步衍生化，得到仲胺或叔胺或酰胺。

如果式I类似物中的R₄-R₇之一是硝基，则可以使用例如铁和氯化铵在水/THF/MeOH混合物中将硝基还原，以获得在R₄-R₇上含有胺的式I类似物。

如果式I类似物中的R₄-R₇之一是甲基酯，则可以在碱性条件下使该酯皂化以获得相应的羧酸。当使用本领域已知的方法使该酸与醇和胺反应时，可以形成酯和酰胺。

方案1b

条件：i)DDQ，1,4-二氧六环

方案1b描绘了用于制备式I类似物的一般路线，其中Y是碳-碳双键，R₁₅是H，且Z、R₁₃、R₁₄、A₁、A₂、A₃、A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₀、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义。

可以在适当的溶剂中使用例如DDQ将其中Y是碳-碳单键的式I的衍生物氧化，以获得其中Y是碳-碳双键的式I的衍生物。

方案1c

条件：i)TMS-Cl，KI，ACN；

ii)K₂CO₃，ACN；

iii)双(频哪醇合)二硼，Pd(DPPF)Cl₂·DCM，KOAc，1,4-二氧六环；和

iv)Pd(PPh₃)₄，K₂CO₃，1,4-二氧六环/水。

方案1c示出了制备式I类似物的另一方式，其中Y是碳-碳双键，Z是-OCH₂，A₁是NH，A₂和A₃是CH，R₁₃和R₁₅是H，且R₁₄＝O。A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₀、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义。可以使用例如TMS-Cl和KI在ACN中使溴吡咯并吡啶1去甲基化。当应用这些条件时，溴被碘取代，得到碘吡咯并吡啶2。通过使用例如K₂CO₃使苄基溴3与苯酚4偶联，然后使用例如双(频哪醇合)二硼、Pd(dppf)Cl₂·DCM和KOAc在1,4-二氧六环中引入硼酸酯而获得硼酸酯构件5。当使用例如Pd(PPh₃)₄和K₂CO₃在1,4-二氧六环/水中使构件2和5通过钯催化的反应偶联时，获得相应的式I类似物。

方案1d

条件：i)LiOH，THF/水；

ii)LiOH，THF/水，然后是Me₂S·BH₃，THF；

iii)DiBAl-H，THF；

iv)RNH₂，EDC，DMAP，DCM；和

v)ROH，EDC，DMAP，DMF

方案1d描绘了使式I类似物官能化的若干选项，其中A₁₀是CR₁₀，其中R₁₀是CO₂Me，Y是碳-碳单键，且R₁₅、R’₁₅和R₁₆中的每一个是H。Z、R₁₃、R₁₄、A₁、A₂、A₃、A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义。当式I在R₁₀中含有酯部分时，这可以使用例如LiOH在THF/水进行皂化，以获得式I的羧酸类似物。可以使用公知的方法例如通过与胺或醇反应而将羧酸类似物转化成相应的酰胺和酯。在另一种情况下，可以将酯部分还原以获得–CH₂OH或–CHO类似物。在方案1d中，这以R₁₀来例示，这些转化也可以应用于R₄至R₁₂位置中任一个中的酯部分。

方案1e

条件：i)氨的MeOH溶液，Raney镍，MeOH。

方案1e描绘了用于制备式I类似物的一般路线，其中Y是碳-碳单键，且R₁₅、R’₁₅和R₁₆中的每一个是H。Z、R₁₃、R₁₄、A₁、A₂、A₃、A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义。当式I在R₁₀中含有腈部分时，这可以使用例如氨的MeOH溶液和Raney镍作为催化剂来还原，以获得式I的饱和烷基类似物。在方案1e中，这以R₁₀来例示，但这些转化也可以应用于R₄至R₁₂位置中任一个中的腈部分。

方案1f

条件：i)氢气，Pd/C，MeOH。

方案1f描绘了用于制备式I类似物的一般路线，其中Y是碳-碳单键，且R₁₅、R’₁₅和R₁₆中的每一个是H。Z、R₁₃、R₁₄、A₁、A₂、A₃、A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义。当式I在R₁₀中含有三键时，这可以使用例如氢气与Pd/C在MeOH中来还原，以获得式I的饱和烷基类似物。尽管在方案1f中，这以R₁₀来例示，但这些转化也可以应用于R₄至R₁₂位置中任一个中的三键部分。

方案1g

条件：i)烯丙基三正丁基锡，Pd(PPh₃)₂Cl，PPh₃，DMF；和

ii)OsO₄，NMO，丙酮/水

方案1g描绘了用于使式I类似物官能化的一般路线，其中Y是碳-碳单键，A₁₀是C-Br，R₁₅、R’₁₅和R₁₆中的每一个是H，且Z、R₁₃、R₁₄、A₁、A₂、A₃ A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义。含溴的类似物可以在Stille条件下与烯丙基三正丁基锡反应。所获得的式I的含烯丙基的类似物可以通过Upjohn二羟基化进一步反应，以获得式I的含有二羟基的类似物。尽管在方案1g中，这以R₁₀来例示，但这些转化也可以应用于R₄至R₁₂位置中任一个中的溴部分。

方案1h

条件：i)Meldrum氏酸，MeOH；

ii)ROH，DIAD，PPh₃，THF；和

iii)R₂NH，EDC，DMAP，DCM。

方案1h描绘了制备式I类似物的一般路线，其中Y是碳-碳单键，R₁₄是氧，R₁₅是COOH，且R’₁₅和R₁₆中的每一个是H。本发明的化合物可以通过使构件I的衍生物(其中Z、A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₀、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义)、构件II的衍生物(其中R₁₃、A₁、A₂、A₃具有如前所述的含义)和Meldrum氏酸之间在室温下的反应来获得。

当R₁₅是COOH时，可以使用例如醇、DIAD和PPh₃在THF中将该羧酸部分官能化成酯。或者可以使用例如伯胺或仲胺、EDC和DMAP在DCM中将其官能化成酰胺。

方案1i

条件：i)CH₃CH₂OCOCH₂P(Ph)₃Br，tBuOK，Et₂O；

ii)CH₂CHMgBr，PhSCu(I)，THF；

iii)TEMPO，tBuONO，1,4-二氧六环；

iv)TOSMIC，tBuOK，THF；和

v)Zn，AcOH。

方案1i说明了形成式I类似物的一般路线，其中A₁和A₃是CH，A₂是NH，Y是碳-碳单键，R₁₄是氧，R₁₃是H，R₁₅、R’₁₅和R₁₆中的每一个是H，且Z、A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₀、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义。

中间体7可以通过使用例如CH₃CH₂OCOCH₂P(Ph)₃Br和tBuOK在Et₂O中使构件I进行Wittig反应然后与例如乙烯基溴化镁和PhSCu(I)在THF中反应来获得。随后可以通过使用例如TEMPO和tBuONO在1,4-二氧六环中以E-构象引入硝基基团。通过使用例如TOSMIC和tBuOK在THF中通过中间体8的[3+2]环加成获得吡咯中间体9。通过使用例如锌粉在AcOH中在单个步骤中进行硝基的还原，随后进行环闭合以获得式I类似物。

方案2

条件：i)K₂CO₃，ACN

方案2描述了制备苯甲醛构件I衍生物的一般方法，其中Z是–OCH₂–，且A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₀、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义。

使用例如K₂CO₃在碱性条件下用苄基卤化物3对对羟基苯甲醛10进行烷基化，得到相应的构件I的苯甲醛衍生物。期望的苄基卤化物3也可以通过本领域公知的溴化反应从相应的甲苯或苯甲醇获得。

可以在醛的缩醛保护之后，使用钯催化的偶联，使在R₈-R₁₂中含有一个溴的构件I衍生物进一步衍生化。偶联之后，再次对醛进行脱保护，以获得构件Ⅰ类似物。当在钯催化的偶联之后获得酯部分时，该酯部分可以在醛的脱保护之前被还原，以获得R₈-R₁₂中的羟基化的烷基部分。然后，对醛进行脱保护，以获得期望的构件I类似物。在另一个实施方案中，当在钯催化的反应之后获得酯部分时，该酯可以与Grignard氏试剂反应以获得叔醇。

可以通过首先用缩醛保护醛，从相应的构件I的溴类似物获得在R₁₀含有羟基的构件I类似物。然后通过钯催化的偶联将溴转化为硼酸酯，然后与过氧化氢反应以引入羟基部分。在醛的脱保护后，获得构件I类似物。

通过使用例如溴化铜(II)和碳酸钾，构件I的R₈-R₁₂中的溴也可以被乙二醇取代。

在另一个实施方案中，当构件I中的R₄-R₇是氟时，可以在碱性条件下(例如K₂CO₃在DMF中在110℃下)使用适当的胺取代该氟，以获得相应的构件I的烷基胺类似物。

方案2b

条件：(X＝F；当A₅＝A₆＝N时，X＝Cl)

i)NaH，DMF

方案2b描绘了制备苯甲醛构件I衍生物的替代方法，其中Z是–OCH₂–，且A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₀、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义。

可以在碱性条件下通过使用例如氢化钠在DMF中使苯甲醛11与苯甲醇12反应以获得构件I类似物。

苯甲醇12可以通过使用例如BH₃·THF络合物通过相应的苯甲醛的还原来获得。

方案3

条件：i)NBS，AIBN，ACN；和

ii)DiBAl-H，甲苯

方案3描述了制备苯甲醛15衍生物的一般方法，其中A₄、A₅、A₆和A₇具有如前所述的含义。

使用例如NBS和AIBN在ACN中对苯甲腈13进行溴化，得到苯甲腈14。使用例如DiBAl-H在甲苯中将腈还原之后，可以制备苯甲醛15衍生物。

方案3b

条件：i)K₂CO₃，DMF

方案3b描述了制备苯甲醛构件I衍生物的一般方法，其中Z是-CH₂O-，且A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₀、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义。

在碱性条件下使用例如K₂CO₃用苯甲醛15对苯酚16进行烷基化，得到相应的构件I的苯甲醛衍生物。

当所获得的构件I在R₁₀上含有溴时，可以使用钯催化的反应，例如用Pd(PPh₃)₄、CuI、DBU和炔丙醇，对该位置进行官能化。

方案3c

条件：i)K₂CO₃，ACN；

ii)DAST，DCM；和

iii)DiBAl-H，甲苯。

方案3c描述了制备苯甲醛构件I衍生物的一般方法，其中A₁₀是CF₂，Z是–CH2O–，且A₄、A₅、A₆、A₇、A₈、A₉、A₁₁和A₁₂具有如前所述的含义。在碱性条件下使用例如K₂CO₃，用苯甲腈14对苯酚17进行烷基化，得到相应的醛18。可以使用氟化剂例如DAST将醛转化为CF₂基团。通过使用例如DiBAl-H在甲苯中将腈还原，可以制备苯甲醛构件I衍生物。在方案3c中，这以R₁₀例示，这些转化也可以应用于R₄至R₁₂位置中任一个中的醛部分。

以下实施例是对本发明的说明，并不旨在以任何方式限制本发明的范围。

实施例

所使用的所有构件都是可商购的、已知的或根据本领域技术人员已知的方法制备的。

实施例1-220

1：4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)向2-(三氟甲基)苄基溴化物(0.93g)在ACN(60mL)中的溶液中添加K₂CO₃(2.53g)和香草醛(1.46g)。将反应混合物加热至70℃并搅拌过夜。在冷却至室温后，在减压下浓缩反应混合物，并将所得的粗产物在水和DCM之间分配。将水层用DCM再萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到1.76g 3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲醛。在下一步骤中使用该产物而无需进一步纯化。

ii)将在前一步骤中获得的产物(377mg)、Meldrum氏酸(175mg)和3-氨基吡唑(101mg)溶解在MeOH中。将反应混合物加热至65℃并搅拌过夜。在冷却至室温后，产物沉淀。将固体过滤出来，并用MeOH洗涤，以获得4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(289mg)，其为米白色固体。MS(ES⁺)m/z418.2(M+H)⁺。

按照与实施例1中所述类似的程序，使用适当的起始物质，制备了以下化合物。

2：4-{4-[(2-氯苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 384.2(M+H)⁺。

3：4-{4-[(4-氯苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 384.2(M+H)⁺。

4：4-{4-[(2-溴苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 350.2(M+H)⁺。

5：4-[4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基]-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 428.2(M+H)⁺。

6：2-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)苯甲腈

MS(ES⁺)m/z 375.2(M+H)⁺。

7：4-(3-甲氧基-4-{[4-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 418.2(M+H)⁺。

8：4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 486.2(M+H)⁺。

9：4-(4-{[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 436.2(M+H)⁺。

10：4-(3-甲氧基-4-{[3-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 418.2(M+H)⁺。

11：4-{4-[(3-溴苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 428.2(M+H)⁺。

12：4-{4-[(3-氯苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 384.2(M+H)⁺。

13：4-{4-[(2,1,3-苯并噁唑-4-基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 392.1(M+H)⁺

14：4-(4-{[2,5-双(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 486.2(M+H)⁺。

15：4-(4-{[4-氯-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 452.2(M+H)⁺。

16：4-{4-[(2-氟苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 368.2(M+H)⁺。

17：4-(4-{[2-(二氟甲氧基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 416.2(M+H)⁺。

18：4-{3-甲氧基-4-[(2-硝基苯基)甲氧基]苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 395.2(M+H)⁺。

19：4-(3-甲氧基-4-{[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 448.2(M+H)⁺。

20：4-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)-3-(三氟甲基)苯甲腈

MS(ES⁺)m/z 443.2(M+H)⁺。

21：4-(4-{[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 436.2(M+H)⁺。

22：4-{4-[(2,3-二氯苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 418.2(M+H)⁺。

23：4-{4-[(2-碘苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 476.2(M+H)⁺。

24：4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲氧基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 434.2(M+H)⁺。

25：4-{3-甲氧基-4-[(2-甲氧基-5-硝基苯基)甲氧基]苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 425.2(M+H)⁺。

26：2-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)苯甲酸甲酯

MS(ES⁺)m/z 408.2(M+H)⁺。

27：4-(4-{[3,5-双(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 486.2(M+H)⁺。

28：4-(4-{[2-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 436.2(M+H)⁺。

29：4-{4-[(2,5-二氯苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 418.2(M+H)⁺。

30：4-{3-甲氧基-4-[(2-甲氧基苯基)甲氧基]苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 380.2(M+H)⁺。

31：4-{3-甲氧基-4-[(2,3,5-三氯苯基)甲氧基]苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 452.2(M+H)⁺。

32：4-(3-甲氧基-4-{[5-甲基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 432.2(M+H)⁺。

33：4-(4-{[4-溴-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 496.2(M+H)⁺。

34：4-(3-甲氧基-4-{[4-硝基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 463.2(M+H)⁺

35：4-(3-甲氧基-4-{[5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 448.2(M+H)⁺

36：4-(3-甲氧基-4-{[3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 448.2(M+H)⁺

37：4-(4-{[4-甲磺酰基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 496.2(M+H)⁺

38：4-{4-[(2-氯-4-甲磺酰基苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 462.2(M+H)⁺

39：4-{4-[(2,3-二甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 410.2(M+H)⁺

40：4-{4-[(2-叔丁基苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 406.2(M+H)⁺

41：4-(4-{[4-乙酰基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 460.1(M+H)⁺

42：4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯

MS(ES⁺)m/z 476.1(M+H)⁺

43：4-{4-[(6-溴-2H-1,3-苯并二氧戊环-5-基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 472.0(M+H)⁺

44：4-{4-[(2-乙炔基苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 374.1(M+H)⁺

45：4-{4-[(1-苯并噻吩-7-基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 406.1(M+H)⁺

46：4-{4-[(2,2-二甲基-2,3-二氢-1-苯并呋喃-7-基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 420.2(M+H)⁺

47：4-{3-甲氧基-4-[(喹啉-8-基)甲氧基]苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 401.2(M+H)⁺

48：2-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]苯甲酸乙酯

MS(ES⁺)m/z 422.2(M+H)⁺

49：4-(4-{[2-(二氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 400.1(M+H)⁺

50：4-(3-甲氧基-4-{[3-(三氟甲基)吡啶-4-基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 419.1(M+H)⁺

51：4-{4-[(3,4-二氢-2H-1,5-苯并二氧杂环庚烷-6-基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 422.2(M+H)⁺

52：4-{3-甲氧基-4-[(2-甲基苯基)甲氧基]苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 364.2(M+H)⁺

53：4-{4-[(异喹啉-5-基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 401.2(M+H)⁺

54：4-{4-[(2-溴-4,5-二甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 488.1(M+H)⁺

55：4-{4-[(2,1,3-苯并噻二唑-4-基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 408.1(M+H)⁺

56：4-(3-甲氧基-4-{[3-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 419.1(M+H)⁺

57：4-{3-甲氧基-4-[(吡啶-2-基)甲氧基]苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 351.1(M+H)⁺

58：4-{4-[(2-溴苯基)甲氧基]苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 398.2(M+H)⁺

59：4-(4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 388.2(M+H)⁺

60：4-{4-[(2-氯苯基)甲氧基]苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 354.2(M+H)⁺

61：4-(3,5-二甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 448.2(M+H)⁺

62：4-(3-乙氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 432.2(M+H)⁺

63：4-(5-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}吡啶-2-基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 389.2(M+H)⁺

64：4-(2-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 418.2(M+H)⁺

65：5-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}-2-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲酸甲酯

MS(ES⁺)m/z 446.2(M+H)⁺

66：4-(2-氟-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 406.2(M+H)⁺

67：4-(3-硝基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 433.2(M+H)⁺

68：4-[3-(二氟甲氧基)-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基]-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 454.1(M+H)⁺

69：4-[3-(三氟甲氧基)-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基]-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 472.1(M+H)⁺

70：4-(3-溴-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 466.0(M+H)⁺

71：4-(3-乙基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 416.2(M+H)⁺

72：4-(3-氯-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 422.1(M+H)⁺

73：4-(3-甲基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 402.1(M+H)⁺

74：4-(3-氟-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 406.1(M+H)⁺

75：4-(2-氟-5-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 436.1(M+H)⁺

76：4-[3-(三氟甲基)-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基]-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 456.1(M+H)⁺

77：4-(2-氟-4-{[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-5-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 454.1(M+H)⁺

78：4-(3-氟-5-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 436.1(M+H)⁺

79：7-{4-[(2-氯苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-4H,5H,6H,7H-噻吩并[3,2-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 400.2(M+H)⁺

80：4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2-甲基-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 432.2(M+H)⁺

81：4-(3-甲氧基-4-{[3-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-3-甲基-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 432.2(M+H)⁺

82：4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-3-甲基-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 432.2(M+H)⁺

83：4-{4-[(2-溴苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-1-甲基-1H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 442.2(M+H)⁺

84：4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-1-甲基-1H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 432.2(M+H)⁺

85：7-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-4H,5H,6H,7H-噻吩并[3,2-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 434.2(M+H)⁺

86：4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-7-甲基-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 432.2(M+H)⁺

87：7-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 418.2(M+H)⁺

88：7-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-4H,5H,6H,7H-[1,3]噻唑并[4,5-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 435.2(M+H)⁺

89：7-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-3H,4H,5H,6H,7H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 418.2(M+H)⁺

90：7-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-3H,4H,5H,6H,7H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 419.2(M+H)⁺

91：7-(3-甲氧基-4-{[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-3H,4H,5H,6H,7H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 449.2(M+H)⁺

92：7-(3-甲氧基-4-{[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 448.2(M+H)⁺

93：7-(4-{[4-乙酰基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 461.1(M+H)⁺

94：7-(4-{[4-乙酰基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 460.1(M+H)⁺

95：3-氟-4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 436.1(M+H)⁺

96：4-(4-{[4-溴-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)向3-甲氧基-4-甲基-苯甲腈(11.55g)和NBS(16.76g)在ACN(550mL)中的溶液中添加AIBN(1.29g)。将反应混合物加热至85℃并搅拌4.5小时。在冷却至室温后，在减压下浓缩反应混合物，并将所得的粗产物在水和EtOAc之间分配。将水层用EtOAc萃取两次，将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。然后将化合物在硅胶柱上纯化，使用EtOAc/庚烷0/100至18/82的梯度作为洗脱液，得到4-(溴甲基)-3-甲氧基苯甲腈(15.3g)。

ii)在氮气气氛下将上一步所得产物(15.3g)溶解在无水甲苯中并冷却至0℃。在30分钟的期间内滴加DiBAl-H(1.2M甲苯溶液，85mL)，并在0℃下搅拌1小时。通过滴加6NHCl水溶液(46mL)使反应淬灭。将反应用水稀释，并将产物用EtOAc萃取3次。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物在硅胶柱上纯化，使用甲苯和EtOAc 100/0至80/20的梯度，然后进行反相快速色谱法，使用ACN/H₂O45/55至60/40的梯度作为洗脱液，得到4-(溴甲基)-3-甲氧基苯甲醛(7.35g)。

iii)将上一步所得产物(2.85g)、4-溴-2-(三氟甲基)苯酚(3.00g)和K₂CO₃(5.16g)装载到250mL烧瓶中，并添加ACN(50mL)。将反应混合物加热至70℃并搅拌1小时。将乙腈蒸发并将粗产物在水和EtOAc之间分配。将有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥并浓缩。将产物悬浮于甲醇中，滤出固体，用甲醇洗涤，并在真空烘箱中干燥，得到4-{[4-溴-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯甲醛(4.10g)。

iv)与实施例1步骤ii中所述的程序类似，将上一步所得化合物转化成4-(4-{[4-溴-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(3.03g)。MS(ES⁺)m/z 496.0(M+H)⁺。

按照类似于实施例96步骤i)至iv)中所述的程序，使用适当的起始物质，制备了以下化合物。

97：4-(4-{[4-(2-羟基乙基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 462.2(M+H)⁺

98：4-(3-甲氧基-4-{[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 448.1(M+H)⁺

99：4-(4-{[4-氯-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 452.1(M+H)⁺

100：4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 486.1(M+H)⁺

101：4-(3-甲氧基-4-{[2-(五氟-λ⁶-硫基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 476.1(M+H)⁺

102：4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 418.1(M+H)⁺

103：4-(4-{[4-乙酰基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 460.1(M+H)⁺

104：4-(4-{[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 436.1(M+H)⁺

105：4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯基)甲氧基]-3-(三氟甲基)苯甲腈

MS(ES⁺)m/z 443.1(M+H)⁺

106：4-(4-{[4-溴-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-(三氟甲氧基)苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 550.0(M+H)⁺

107：4-(4-{[2-(五氟-λ⁶-硫基)苯氧基]甲基}-3-(三氟甲氧基)苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 530.1(M+H)⁺

108：4-[3-(三氟甲氧基)-4-{[2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基]-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 472.1(M+H)⁺

109：4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-(三氟甲氧基)苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 540.1(M+H)⁺

110：4-(4-{[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-(三氟甲氧基)苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 490.1(M+H)⁺

111：4-{4-[(2,4-二甲基苯氧基)甲基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 378.4(M+H)⁺

112：4-(3-甲氧基-4-{[2-甲基-4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 432.4(M+H)⁺

113：4-{4-[(3,5-二甲基苯氧基)甲基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 378.4(M+H)⁺

114：4-(3-甲氧基-4-{[3-甲基-5-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 432.4(M+H)⁺

115：4-(4-{[4-(二氟甲基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)将实施例96步骤i中获得的产物(14.13g)、4-羟基-3-(三氟甲基)苯甲醛(11.88g)和K₂CO₃(17.28g)悬浮在ACN(400mL)中并加热至70℃2.5小时。在旋转蒸发器上蒸发溶剂，将粗产物悬浮在水中，过滤出固体。将固体用EtOAc洗涤两次，并在40℃真空烘箱中干燥，得到4-[[4-甲酰基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基]-3-甲氧基-苯甲腈(19.49g)。

ii)在氮气气氛下将上一步所得产物(19.49g)悬浮在DCM(400mL)中。滴加DAST(23mL)，并将反应在室温下搅拌5天。在这些天期间，反应变成溶液。将反应放在水浴上并小心地添加饱和NaHCO₃水溶液，直到不再有气体放出。将产物用DCM萃取三次，将合并的有机层用MgSO₄干燥并浓缩。将产物加载在硅藻土上并在硅胶柱上纯化，使用DCM/庚烷40/60至70/30的梯度，得到4-[[4-(二氟甲基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基]-3-甲氧基-苯甲腈(19.4g)。

iii)在氮气气氛下将上一步所得产物(19.40g，51.6mmol，1当量)悬浮在甲苯(427.5mL)中。将反应冷却至0℃，并在35分钟的期间内滴加DiBAl-H(64mL，1.2M甲苯溶液)。在添加DiBAl-H期间，反应变得透明且呈浅黄色。添加后，将反应在0℃下搅拌1.5小时。滴加6M HCl水溶液(36mL)，然后添加水。将产物用EtOAc萃取3次，将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥并浓缩得到4-[[4-(二氟甲基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基]-3-甲氧基-苯甲醛(19.23g)。

iv)与实施例1步骤ii中所述的程序类似，将上一步所得的化合物转化为4-(4-{[4-(二氟甲基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(9.7g)。MS(ES⁺)m/z 468.4(M+H)⁺。

按照类似于实施例115中所述的程序，使用适当的起始物质，制备了以下化合物。

116：4-(4-{[2,4-双(二氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 450.4(M+H)⁺

117：4-(4-{[2-(二氟甲基)-4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 468.4(M+H)⁺

118：4-(4-{[3-(二氟甲基)-5-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 468.4(M+H)⁺

119：4-(4-{[4-(3-羟基丙-1-炔-1-基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)将实施例96步骤iii中获得的中间体(1.00g)与CuI(0.05g)和DBU(0.46mL)一起溶解在THF(10mL)中。通过在其中用氮气鼓泡使反应混合物脱气15分钟。然后添加Pd(PPh₃)₄(0.30g)和炔丙醇(0.18mL)并将小瓶密封。在微波中在60℃下搅拌反应16小时。将反应混合物用EtOAc稀释并通过硅藻土过滤。将滤液浓缩，将残留物溶于EtOAc中，并依次用H₂O/盐水和盐水洗涤。有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物溶解在DCM中，加载到硅藻土上，经快速色谱法纯化，使用EtOAc/庚烷20/80至80/20的梯度作为洗脱液，得到4-{[4-(3-羟基丙-1-炔-1-基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯甲醛，为米黄色粉末(0.81g)。

ii)与实施例1步骤ii)中描述的程序类似，将上一步所得化合物转化为4-(4-{[4-(3-羟基丙-1-炔-1-基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(8mg)。MS(ES⁺)m/z 472.4(M+H)⁺

120：4-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸

i)将实施例42(3.0g)悬浮在THF(30mL)中，并添加LiOH(0.45g)在水(15mL)中的溶液。将得到的黄色溶液在室温下搅拌过夜。将THF蒸发，这导致产物的沉淀。将水性悬浮液过滤，并将固体依次用水、ACN两次和Et₂O洗涤。将残余物在真空烘箱中干燥，得到4-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸锂(2.32g)，其为白色粉末。

ii)将上一步所得化合物(50mg)悬浮在水(10mL)中，并添加2M HCl水溶液(2mL)。将所得悬浮液剧烈搅拌30分钟，然后过滤。将残留物用水、ACN(2x)和Et₂O洗涤，然后在真空下干燥，得到4-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸(34mg)，其为白色粉末。MS(ES⁺)m/z 462.2(M+H)⁺

121：4-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺

i)将实施例120步骤i)中获得的产物(50mg)与NH₄Cl(12mg)、EDC(25mg)、TEA(45μL)和HOBt(20mg)一起溶解在DMF(0.5mL)中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc和水稀释并剧烈搅拌。获得悬浮液，将其过滤。将残余物依次用水、ACN两次和Et₂O洗涤，然后真空干燥，得到4-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(25mg)，其为白色粉末。MS(ES⁺)m/z461.2(M+H)⁺

按照与实施例121中所述类似的程序，使用适当的起始物质和溶剂，制备了以下化合物。

122：4-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)-N-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酰胺

MS(ES⁺)m/z 475.2(M+H)⁺

123：4-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)-N,N-二甲基-3-(三氟甲基)苯甲酰胺

MS(ES⁺)m/z 489.2(M+H)⁺

124：4-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)-N-(1H-吡唑-3-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺

MS(ES⁺)m/z 527.2(M+H)⁺

125：2-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)苯甲酸丙酯

MS(ES⁺)m/z 436.2(M+H)⁺

126：2-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)苯甲酸丁酯

MS(ES⁺)m/z 450.2(M+H)⁺

127：2-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)苯甲酸丙-2-基酯

MS(ES⁺)m/z 436.2(M+H)⁺

按照与实施例120和121中所述类似的程序，使用实施例65作为起始物质和适当的试剂和溶剂，制备了以下化合物。

128：5-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}-2-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲酸乙酯

MS(ES⁺)m/z 460.2(M+H)⁺

129：N,N-二甲基-5-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}-2-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲酰胺

MS(ES⁺)m/z 459.2(M+H)⁺

130：5-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}-2-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲酰胺

MS(ES⁺)m/z 431.2(M+H)⁺

131：5-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}-N-(4H-1,2,4-三唑-3-基)-2-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲酰胺

MS(ES⁺)m/z 498.2(M+H)⁺

132：5-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}-2-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲酸2-羟基乙基酯

MS(ES⁺)m/z 476.2(M+H)⁺

133：N-甲基-5-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}-2-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲酰胺

MS(ES⁺)m/z 445.2(M+H)⁺

134：N-(1H-咪唑-4-基)-5-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}-2-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲酰胺

MS(ES⁺)m/z 497.2(M+H)⁺

135：4-(4-{[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)将4-甲基-3-(三氟甲基)-苯胺(4.88g)溶解在1,4-二氧六环(15mL)中并添加饱和K₂CO₃水溶液(15mL)。然后添加Boc₂O(7.40g)，并将反应在室温下搅拌过夜。将产物用EtOAc萃取三次，将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到8.89g N-[4-甲基-3-(三氟甲基)苯基]氨基甲酸叔丁酯。

ii)类似于实施例96步骤i)中所述的程序，将上一步所得产物转化为N-[4-(溴甲基)-3-(三氟甲基)苯基]氨基甲酸叔丁酯(9.01g)。

iii)类似于实施例1步骤i)中所述的程序，将上一步所得产物转化为N-{4-[(4-甲酰基-2-甲氧基苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}氨基甲酸叔丁酯。

iv)类似于实施例1步骤ii)中所述的程序，将上一步所得产物转化为N-{4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}氨基甲酸叔丁酯。

v)将上一步所得产物(93mg)溶解在DCM(1mL)中，并在其中用HCl气体鼓泡，直至产物沉淀。将反应混合物再搅拌20分钟，然后减压浓缩。将所得残余物悬浮在NaHCO₃水溶液中，搅拌5分钟，然后过滤出固体，并用水洗涤。将粗产物溶解在ACN/MeOH中，并通过制备型HPLC纯化，得到4-(4-{[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮，其为白色粉末(21mg)。MS(ES⁺)m/z 433.4(M+H)⁺

按照与实施例135中所述类似的程序，使用适当的起始物质和溶剂，制备了以下化合物。

136：7-(4-{[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 434.2(M+H)⁺

137：7-(4-{[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 433.2(M+H)⁺

138：4-(4-{[4-(二甲基氨基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)向实施例135(25mg)在乙酸(1mL)中的溶液中添加43μL甲醛溶液(37％水溶液)，然后分批添加氰基硼氢化钠(11mg)。40分钟后，将反应混合物浓缩，并将得到的油用K₂CO₃水溶液碱化，导致白色沉淀。将悬浮液用DCM萃取两次，将合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物用制备型HPLC纯化(等度梯度40％ACN/H₂O)，得到3mg 4-(4-{[4-(二甲基氨基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮。MS(ES⁺)m/z 461.2(M+H)⁺

139：N-{4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}乙酰胺

i)将DIPEA(121μL)添加到实施例135(50mg)、HATU(44mg)和AcOH(7μL)在DMF(1mL)中的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物用NaHCO₃水溶液稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到白色固体。将粗产物用制备型HPLC纯化，得到N-{4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}乙酰胺(10mg)，其为白色粉末。MS(ES⁺)m/z 475.4(M+H)⁺

140：2-氨基-N-{4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}乙酰胺

i)类似于实施例139中所述的程序，使用实施例135(100mg)作为起始物质，获得N-[({4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}氨基甲酰基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(102mg)，其为白色粉末。

ii)类似于实施例135步骤v)中所述的程序，将上一步所得化合物(102mg)转化为2-氨基-N-{4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}乙酰胺(40mg，白色粉末)。MS(ES⁺)m/z 490.2(M+H)⁺

141：4-(3-甲氧基-4-{[4-(甲基氨基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)在氮气气氛下，将在实施例135步骤iii)中获得的构件(500mg)在3mL无水THF中的溶液添加到NaH(94mg，60wt％)在2mL无水THF中的冷却的(0℃)悬浮液中。将反应加温至室温并搅拌20分钟，然后添加MeI(2.9mL，2M叔丁基甲基醚溶液)，并将反应搅拌过夜。将反应混合物用H₂O稀释，用EtOAc萃取两次，并用盐水洗涤。将有机层合并，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到黄色油。将其溶解在DCM中，加载在二氧化硅粉末上并通过硅胶色谱法纯化，使用15％EtOAc的庚烷溶液等度梯度，得到N-{4-[(4-甲酰基-2-甲氧基苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(107mg)，其为无色油。

ii)类似于实施例1步骤ii)中所述的程序，将上一步所得化合物(107mg)转化为N-{4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(88mg，米黄色固体)。

iii)类似于实施例135步骤v)中所述的程序，将上一步所得化合物(88mg)转化为4-(3-甲氧基-4-{[4-(甲基氨基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(4mg，白色粉末)。MS(ES⁺)m/z447.2(M+H)⁺

142：4-(3-甲氧基-4-{[4-(丙-2-烯-1-基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)将无水DMF(2.5mL)和烯丙基三正丁基锡(375μL)添加到含有实施例33(500mg)、Pd(PPh₃)₂Cl₂和PPh₃的小瓶中。将小瓶盖上盖子，并在微波中在150℃下搅拌20分钟。将反应混合物用EtOAc稀释并用盐水洗涤。将有机层用MgSO₄干燥，过滤，浓缩，并通过反相快速色谱法纯化，使用20％至60％ACN的H₂O溶液梯度作为洗脱液，得到4-(3-甲氧基-4-{[4-(丙-2-烯-1-基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(316mg，白色粉末)。MS(ES⁺)m/z 458.2(M+H)⁺

143：4-(4-{[4-(2,3-二羟基丙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)向实施例142(100mg)在丙酮(1mL)和H₂O(0.1mL)中的溶液中依次添加NMO(51mg)和OsO₄(催化量)。将反应混合物在室温下搅拌三小时。添加亚硫酸钠在4ml H₂O中的溶液，并将反应混合物再搅拌20分钟。将产物用EtOAc萃取，将有机相用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到油。将粗产物通过反相快速色谱法纯化，使用10％至100％ACN的H₂O溶液梯度作为洗脱液，获得4-(4-{[4-(2,3-二羟基丙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(12mg，白色粉末)。MS(ES⁺)m/z492.2(M+H)⁺

144：4-(4-{[4-乙基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)类似于实施例1步骤i)中所述的程序，从4-溴-1-(溴甲基)-2-(三氟甲基)苯开始，获得4-{[4-溴-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯甲醛。

ii)在Dean-Stark条件下，将上一步所得化合物(5.91g)、乙二醇(8.49mL)和p-TsOH一水合物(0.29g)在甲苯(50mL)中的溶液回流7小时。将反应冷却至室温，并添加NaHCO₃。添加甲苯，将有机层依次用饱和NaHCO₃水溶液、H₂O和盐水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到2-(4-{[4-溴-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-1,3-二氧戊环(6.29g，米黄色粉末)。

iii)向小瓶中加载上一步所得化合物(100mg)、K₃PO₄(147mg)和乙基硼酸(51mg)。添加1,4-二氧六环(1mL)，并通过在其中用氮气鼓泡30分钟使所得混合物脱气。添加Pd(PPh₃)₂Cl₂，将小瓶盖上盖子并在微波中在90℃下搅拌90分钟。将反应混合物用EtOAc稀释并依次用H₂O、2N HCl水溶液、H₂O和盐水洗涤。将有机相用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到2-(4-{[4-乙基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-1,3-二氧戊环(48mg，黄色油)。

iv)向上一步所得化合物(48mg)在THF(1mL)中的溶液中添加0.41ml6M HCl水溶液。将所得溶液在室温下搅拌过夜。将THF蒸发，并将得到的水性混合物用饱和K₂CO₃水溶液碱化。然后将混合物用EtOAc萃取，并依次用饱和K₂CO₃水溶液和盐水洗涤。将有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到黄色油，将其溶解在庚烷中。滤出黄色粉末，将滤液浓缩，得到4-{[4-乙基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯甲醛，为白色粉末。

v)类似于实施例1步骤ii)中所述的程序，将上一步所得化合物(57mg)转化为4-(4-{[4-乙基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(17mg，白色粉末)。MS(ES⁺)m/z446.2(M+H)⁺

按照与实施例144中所述类似的程序，使用适当的起始物质和溶剂，制备了以下化合物。

145：4-(4-{[4-环丙基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 458.2(M+H)⁺

146：4-(4-{[4-(3-羟基丙-1-炔-1-基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 472.2(M+H)⁺

147：2-[4-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)-3-(三氟甲基)苯基]乙腈

MS(ES⁺)m/z 457.2(M+H)⁺

148：2-[4-(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基甲基)-3-(三氟甲基)苯基]乙酸甲酯

MS(ES⁺)m/z 490.2(M+H)⁺

149：4-(4-{[4-(3-羟基丙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)通过在其中用氮气鼓泡10分钟，使实施例146(116mg)在MeOH(10mL)中的溶液脱气。添加10％Pd/C(52mg，含有50％H₂O)并将反应用氢气鼓泡3小时。将反应通过硅藻土过滤，并将滤液浓缩。将粗产物在制备型HPLC上纯化，得到4-(4-{[4-(3-羟基丙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(48mg，白色粉末)。MS(ES⁺)m/z 476.5(M+H)⁺

按照与实施例149中所述类似的程序，使用实施例147作为起始物质以及适当的试剂和溶剂，制备了以下化合物。

150：4-(4-{[4-(2-氨基乙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 461.2(M+H)⁺

151：2-{4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}乙酸

i)使用类似于实施例120步骤i)和ii)的程序，将66mg实施例148转化为2-{4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}乙酸(21mg，白色粉末)。MS(ES⁺)m/z 461.2(M+H)⁺

152：4-(4-{[4-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)按照与实施例144步骤iii)中所述类似的程序，使用获自实施例144步骤ii)的化合物(200mg)和1-甲氧基-1-(三甲基甲硅烷氧基)-2-甲基-1-丙烯(121mg)，得到2-{4-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-甲氧基苯氧基甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-2-甲基丙酸甲酯(58mg)。

ii)在氮气气氛下向上一步所得产物(58mg)在无水THF(1mL)中的冷却的(0℃)溶液中添加LiAlH₄(0.51mL，1M Et₂O溶液)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后通过在冷却下滴加EtOAc而淬灭。将混合物依次用饱和酒石酸钾钠水溶液两次、饱和NaHCO₃水溶液和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到无色油。将其溶解在DCM中，用硅胶色谱法纯化，使用0％至50％EtOAc的庚烷溶液梯度作为洗脱液，得到15mg 2-(4-{[4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-甲氧基苯氧基]甲基}-3-(三氟甲基)苯基)-2-甲基丙-1-醇，其为无色油。

iii)按照与实施例144步骤iv)中所述类似的程序，然后按照与实施例1步骤ii)中所述类似的程序，将上一步所得化合物(15mg)转化为4-(4-{[4-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(4mg，白色粉末)。MS(ES⁺)m/z490.2(M+H)⁺

153：4-(4-{[4-(2-羟基-2-甲基丙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)按照与实施例144步骤iii)中所述类似的程序，使用从实施例144步骤ii)得到的化合物(589mg)和1-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-1-甲氧基乙烯(512mg)，得到2-(4-{[4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-甲氧基苯氧基]甲基}-3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(421mg)。

ii)在氮气气氛下将上一步所得化合物(421mg)溶解在10mL无水THF中。将反应混合物冷却至10℃，缓慢添加MeMgBr(1mL，3M Et₂O溶液)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后回流2小时。将反应冷却至室温，添加2mL饱和NH₄Cl水溶液，然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加2mL 2M HCl水溶液，并将混合物搅拌1h。将产物用EtOAc萃取三次，并将合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到1-(4-{[4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-甲氧基苯氧基]甲基}-3-(三氟甲基)苯基)-2-甲基丙-2-醇，其为黄色油(387mg)。将产物在下一步中使用而无需进一步纯化。

iii)按照与实施例1步骤ii)中所述类似的程序，将上一步所得化合物(387mg)转化为4-(4-{[4-(2-羟基-2-甲基丙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(75mg，白色粉末)。MS(ES⁺)m/z 490.2(M+H)⁺

154：4-(4-{[4-羟基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 434.1(M+H)⁺

i)将实施例144步骤ii)中所得化合物(100mg)、双(频哪醇合)二硼(88mg)和KOAc(68mg)在1,4-二氧六环(1mL)中的溶液用氮气脱气20分钟。添加Pd(dppf)Cl₂(19mg)，将小瓶盖上盖子并在微波中在80℃下搅拌16小时。将反应混合物用Et₂O稀释并通过硅藻土过滤。将滤液浓缩，得到棕色油。将粗产物在硅胶柱上纯化，使用0％至50％EtOAc的庚烷溶液梯度作为洗脱液，得到2-{4-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-甲氧基苯氧基甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(75mg)，其为无色油。

ii)向上一步所得化合物(75mg)在甲醇(4mL)中的溶液中添加30wt％过氧化氢水溶液(425μL)。将所得溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物用亚硫酸钠(粉末)淬灭，并在真空下蒸发有机溶剂。将所得的水性悬浮液用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层依次用饱和NaHCO₃水溶液和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到4-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-甲氧基苯氧基甲基]-3-(三氟甲基)苯酚(60mg)，其为淡黄色油。将产物在下一步中使用而无需进一步纯化。

iii)按照与实施例144步骤iv)中所述类似的程序，然后按照与实施例1步骤ii中所述类似的程序，将上一步所得化合物(60mg)转化为4-(4-{[4-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(23mg)。MS(ES⁺)m/z 434.2(M+H)⁺

155：4-(4-{[4-(2-羟基乙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)在氮气气氛下向实施例151步骤i)中所得化合物(93mg)在无水THF(1mL)中的0℃溶液中添加LiAlH₄(0.86mL，1M Et₂O溶液)。将反应混合物在0℃下搅拌90分钟，然后在冷却下通过滴加EtOAc而淬灭。将混合物依次用饱和酒石酸钾钠水溶液两次、饱和NaHCO₃水溶液和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到2-{4-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-甲氧基苯氧基甲基]-3-(三氟甲基)苯基}乙-1-醇(60mg)，其为无色油。将产物在下一步中使用而无需进一步纯化。

ii)按照与实施例144步骤iv)中所述类似的程序，然后按照与实施例1步骤ii)中所述类似的程序，将上一步所得化合物(60mg)转化为4-(4-{[4-(2-羟基乙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(5mg)。MS(ES⁺)m/z 462.2(M+H)⁺

按照与实施例155中所述类似的程序，使用适当的起始物质，制备了以下化合物。

156：7-(4-{[4-(2-羟基乙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 462.2(M+H)⁺

157：7-(4-{[4-(2-羟基乙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-5-酮

MS(ES⁺)m/z 463.2(M+H)⁺

158：4-(4-{[4-(羟基甲基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)将实施例120步骤i)所得化合物(200mg)悬浮在无水THF(4mL)中并滴加BH₃-Me₂S(321μL，2M THF溶液)。在室温下搅拌2小时后，滴加另外321μL BH₃-Me₂S(2M THF溶液)，并将反应混合物搅拌1小时。添加0.5M HCl水溶液，并将产物用DCM萃取两次以及用EtOAc萃取。将合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物用制备型HPLC纯化，用35％ACN的H₂O溶液等度梯度作为洗脱液，得到4-(4-{[4-(羟基甲基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(6mg)，其为白色粉末。MS(ES⁺)m/z448.2(M+H)⁺

159：4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯甲醛

i)在氮气气氛下将实施例42(146mg)溶解在无水THF(5mL)中。将溶液冷却至-78℃，并添加DiBAl-H(921μL，1M甲苯溶液)。将反应在-78℃搅拌4小时，然后用1M HCl水溶液淬灭。将反应加温至室温，并将产物用EtOAc萃取三次，将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到176mg粗产物。将粗产物悬浮在ACN中，将固体过滤出并用ACN洗涤。将滤液蒸发，并将粗产物用反相快速色谱法纯化两次，得到4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯甲醛(14mg，白色粉末)。MS(ES⁺)m/z 446.2(M+H)⁺

160：4-(4-{[3-(2-羟基乙氧基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)类似于实施例1步骤i)中所述的程序，由1-溴-3-(溴甲基)-2-(三氟甲基)苯开始，获得4-{[3-溴-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯甲醛。

ii)类似于实施例144步骤ii)中所述的程序，将上一步所得化合物(4.53g)转化为2-(4-{[3-溴-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-1,3-二氧戊环(4.5g，白色固体)。

iii)将上一步所得化合物(100mg)、溴化铜(II)(16mg)和K₂CO₃(96mg)在无水乙二醇(0.5mL)中混合物在130℃搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc稀释并依次用H₂O、饱和NaHCO₃水溶液和盐水洗涤。然后将有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到黄色固体。将其溶解在ACN中并通过反相快速色谱法纯化，得到2-(3-{[4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-甲氧基苯氧基]甲基}-2-(三氟甲基)苯氧基)乙-1-醇(28mg，米黄色固体)。

iv)类似于实施例144步骤iv)中所述的程序，然后按照实施例1步骤ii)中所述的程序，将上一步所得化合物(28mg)转化为4-(4-{[3-(2-羟基乙氧基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(12mg，白色粉末)。MS(ES⁺)m/z 478.2(M+H)⁺

161：4-(3-氨基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)将NH₄Cl(14mg)在水(1mL)中的溶液添加到实施例67(30mg)在THF/MeOH(0.5mL/0.5mL)中的溶液中，然后添加铁粉(15mg)。将反应混合物在70℃下搅拌4小时。然后将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，在硅藻土上过滤并浓缩，得到无色油。将油在制备型HPLC上纯化，得到4-(3-氨基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(14mg)。MS(ES⁺)m/z 403.2(M+H)⁺

162：4-[2-(二甲基氨基)-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基]-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)按照与实施例1步骤i)中所述类似的程序，将2-氟-4-羟基苯甲醛(2g)转化为2-氟-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲醛(4.1g)。

ii)将上一步所得化合物(100mg)溶解在DMF(2mL)中，并添加二甲基胺HCl(32mg)和K₂CO₃(109mg)。将反应混合物加热至110℃并搅拌5天。将反应混合物冷却至室温，并添加10mL水。将产物用EtOAc萃取三次，将合并的有机层用盐水洗涤三次，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到2-(二甲基氨基)-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲醛(107mg)。将产物在下一步中使用而无需进一步纯化。

iii)按照与实施例1步骤ii)中所述类似的程序，将上一步所得化合物(107mg)转化为4-[2-(二甲基氨基)-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基]-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(9mg)。MS(ES⁺)m/z 431.2(M+H)⁺

163：4-[3-(3-甲氧基丙氧基)-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基]-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)将4-氟-3-羟基苯甲醛(300mg)和1-溴-3-甲氧基丙烷(327mg)溶解在ACN(10mL)中，添加K₂CO₃(647mg)，并将反应混合物加热到70℃过夜。将反应混合物冷却至室温，然后在EtOAc与水之间分配。将水层用EtOAc再萃取两次，将合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物在硅胶柱上纯化，使用0％至30％EtOAc的庚烷溶液梯度作为洗脱液，得到4-氟-3-(3-甲氧基丙氧基)苯甲醛(198mg)。

ii)在氮气气氛下向[2-(三氟甲基)苯基]甲醇(193mg)在无水DMF(5mL)中的冷却的(0℃)溶液中添加NaH(14mg)。将反应混合物在0℃下搅拌15分钟，然后添加上一步所得化合物(109mg)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在EtOAc与水之间分配。将水层用EtOAc再萃取两次，将合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物在硅胶柱上纯化，使用0％至30％EtOAc的庚烷溶液梯度作为洗脱液，得到3-(3-甲氧基丙氧基)-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯甲醛(96mg)。

iii)按照与实施例1步骤ii)中所述类似的程序，将上一步所得化合物(96mg)转化为4-[3-(3-甲氧基丙氧基)-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基]-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(11mg)。MS(ES⁺)m/z 476.2(M+H)⁺

按照与实施例163中所述类似的程序，使用适当的起始物质，制备了以下化合物。

164：4-[3-(2-甲氧基乙氧基)-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基]-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 462.2(M+H)⁺

165：4-(2-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}嘧啶-5-基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)将2-氯嘧啶-5-甲醛(200mg)和Cs₂CO₃(914mg)加载到烧瓶中，添加15mL ACN。然后添加2-(三氟甲基)苯甲醇(186μL)，并将反应在室温下搅拌4天。将溶剂蒸发，将粗产物在EtOAc与水之间分配。将水层用EtOAc再萃取两次，将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过反相快速色谱法纯化，得到32mg 2-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}嘧啶-5-甲醛。

ii)按照与实施例1步骤ii)中所述类似的程序，将上一步所得化合物(32mg)转化为4-(2-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}嘧啶-5-基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(18mg)。MS(ES⁺)m/z 390.1(M+H)⁺

166：4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-硫酮

i)在氮气气氛下将实施例1(80mg)悬浮在无水DCM(10mL)中。添加Lawesson氏试剂(39mg)，并将反应加热至30℃并搅拌过夜。将溶剂蒸发，将粗产物通过反相快速色谱法纯化，采用固体加载，得到4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-硫酮(48mg)。MS(ES⁺)m/z 434.1(M+H)⁺

167：4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-亚胺

i)在氮气气氛下将实施例166(18mg)溶解在7N氨的MeOH溶液(1.5mL)中。将反应搅拌4小时。将溶剂蒸发，并将粗产物通过制备型HPLC纯化，得到4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-亚胺(17mg)。MS(ES⁺)m/z417.1(M+H)⁺

168：4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-1H,6H,7H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-酮

i)按照与实施例1步骤i)中所述类似的程序，将4-溴-2-甲氧基苯酚(2.6g)和2-(三氟甲基)苄溴(3.06g)转化为4-溴-2-甲氧基-1-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯(4.64g)。

ii)按照与实施例154步骤i)中所述类似的程序，将上一步所得化合物(2.32g)转化为2-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(2.32g)。

iii)将4-溴-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(243mg)、碘化钾(355mg)和TMS-Cl(272μL)溶解在15mL ACN中，加热至80℃并搅拌3.5小时。将溶剂蒸发，并将粗产物在水和EtOAc之间分配。将水层用EtOAc再萃取两次，将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥并浓缩。将粗产物悬浮在ACN/水中。将固体滤出并用ACN洗涤，得到4-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-醇(46mg)。

iv)在微波小瓶中，将4-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-醇(实施例168步骤iii)(46mg)、2-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(实施例168步骤ii)(108mg)和K₂CO₃(49mg)溶解在2mL 1,4-二氧六环/水(3/1)中。将混合物用氮气脱气15分钟，添加Pd(PPh₃)₄(20mg)并将小瓶盖上盖子。将反应在微波中在100℃下搅拌6小时。将反应用EtOAc稀释，并通过硅藻土过滤。将滤液蒸发，将粗产物悬浮在含少量水的ACN中。将固体滤出，并用ACN洗涤，得到4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-1H,6H,7H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-酮(4mg)。MS(ES⁺)m/z 415.1(M+H)⁺

169：4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)将实施例1(40mg)和DDQ(131mg)在1,4-二氧六环(1mL)中的溶液在70℃下搅拌1小时。将溶剂蒸发，并向粗产物中添加饱和K₂CO₃水溶液。将水层用DCM萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将产物溶解在少量ACN、THF和水中。将THF蒸发，然后产物沉淀。将固体滤出并在真空烘箱中干燥，得到4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(3mg)，其为淡棕色固体。MS(ES⁺)m/z 416.2(M+H)⁺

按照与实施例169中所述类似的程序，使用适当的起始物质，制备了以下化合物。

170：4-(3-甲氧基-4-{[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 446.2(M+H)⁺

171：4-{3-甲氧基-4-[(2-甲氧基苯基)甲氧基]苯基}-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 378.2(M+H)⁺

172：4-(3-甲氧基-4-{[3-(三氟甲基)吡啶-4-基]甲氧基}苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 417.2(M+H)⁺

173：4-(4-{[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 431.2(M+H)⁺

174：4-(4-{[4-乙酰基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 458.2(M+H)⁺

175：4-(4-{[4-乙基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 444.2(M+H)⁺

176：4-(4-{[4-(2-羟基乙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 460.2(M+H)⁺

177：4-(3-甲氧基-4-{[3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 446.1(M+H)⁺

178：4-(3-甲氧基-4-{[5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 446.1(M+H)⁺

179：4-(4-{[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 434.1(M+H)⁺

180：4-(4-{[2-(二氟甲氧基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 414.1(M+H)⁺

181：4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯氧基)甲基]-3-(三氟甲基)苯甲腈

MS(ES⁺)m/z 441.1(M+H)⁺

182：4-{3-甲氧基-4-[(2-甲氧基-5-硝基苯基)甲氧基]苯基}-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 423.1(M+H)⁺

183：4-[4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基]-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 348.1(M+H)⁺

184：4-{4-[(2-溴-4,5-二甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲氧基苯基}-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 486.1(M+H)⁺

185：4-{3-甲氧基-4-[(吡啶-2-基)甲氧基]苯基}-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 349.1(M+H)⁺

186：4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

MS(ES⁺)m/z 484.1(M+H)⁺

187：4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲酸甲酯

i)按照与实施例96步骤i)至iii)中所述类似的程序，使用适当的起始物质，得到4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯甲醛。

ii)将上一步所得产物(50mg)、Meldrum氏酸(19mg)和3-氨基吡唑(11mg)溶解在MeOH中。将反应混合物在室温下搅拌5小时，并通过氮气流蒸发溶剂。这导致得到4-[4-[[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基]-3-甲氧基-苯基]-6-氧代-2,4,5,7-四氢吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲酸(69mg)，其为黄色油。

iii)在氮气气氛下，将DIAD(33μL)滴加到PPh₃(44mg)在无水THF(1.5mL)中的冷却的(0℃)溶液中。在搅拌30分钟后，添加MeOH(53μL)，然后滴加溶解在无水THF(1mL)中的上一步所得产物(69mg)。将反应加温至室温，搅拌1小时。添加水，并将水层用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥并浓缩。将粗产物在硅胶柱上纯化，使用0至5％MeOH的DCM溶液梯度，然后进行反相快速色谱法，使用ACN/H₂O20/80至90/10的梯度作为洗脱液，得到4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲酸甲酯(18mg)。MS(ES⁺)m/z 544.4(M+H)⁺

188：4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-N,N-二甲基-6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲酰胺

i)在氮气气氛下将实施例187步骤ii)中所得产物(16mg)、DMAP(4.8mg)和二甲胺HCl(2.7mg)溶解在DCM(1mL)中。添加EDC(8.1mg)并将反应在室温下搅拌1小时。添加水并将水层用DCM萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，在相分离过滤器上干燥并浓缩。将产物通过反相制备型HPLC纯化，使用ACN/H₂O 10/90至100/0的梯度，得到4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-N,N-二甲基-6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲酰胺(6mg)。MS(ES⁺)m/z 557.5(M+H)⁺

189：4-(3-甲氧基-4-{[4-甲基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

i)类似于实施例144步骤ii)中所述的程序，由实施例96步骤iii)中所得的产物出发，得到2-[4-[[4-溴-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基]-3-甲氧基-苯基]-1,3-二氧戊环。

ii)将三甲基环三硼氧烷(0.38mL)和Pd(II)Cl₂(PPh₃)₂(30mg)添加到上一步所得产物(190mg)和K₃PO₄(280mg)在1,4-二氧六环(1mL)中的脱气的悬浮液中。将反应在微波中加热至100℃1小时。将反应用EtOAc稀释并用水、2N HCl水溶液、2N NaOH水溶液、水和盐水洗涤。将有机相经硅藻土过滤，用MgSO₄干燥并真空浓缩，得到3-甲氧基-4-[[4-甲基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基]苯基]-1,3-二氧戊环(164mg)。

iii)类似于实施例144步骤iv)中所述的程序，将上一步所得化合物(164mg)转化为3-甲氧基-4-[[4-甲基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基]苯甲醛(74mg)。

iv)类似于实施例1步骤ii)中所述的程序，将上一步所得化合物(73mg)转化为4-(3-甲氧基-4-{[4-甲基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(37mg)。MS(ES⁺)m/z 432.4(M+H)⁺

190：4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-1H,2H,3H,4H,6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-酮

i)按照与实施例96步骤i)至iii)中所述类似的程序，使用适当的起始物质，获得4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯甲醛。

ii)将乙氧基羰基甲基)三苯基溴化鏻(2.27g)添加到tBuOK(654mg)在Et₂O(20mL)中的悬浮液中。将所得混合物在50℃下搅拌30分钟，然后冷却至室温。将上一步所得化合物(1.01g)溶解在Et₂O(15mL)中，并添加到反应混合物中。将反应搅拌过夜，然后用水淬灭，将水层用Et₂O萃取三次。将合并的有机层用MgSO₄干燥，并减压浓缩。将粗产物在硅胶柱上纯化，使用0至20％EtOAc的庚烷溶液梯度，得到(E)-3-[4-[[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基]-3-甲氧基-苯基]丙-2-烯酸乙酯(932mg)。

iii)在氮气气氛下在-40℃下，将乙烯基溴化镁(1.0M THF溶液，6.25mL)滴加到苯基硫基铜(362mg)在无水THF(10mL)中的悬浮液中。使反应达到-25℃，并再次冷却至-40℃。滴加在无水THF(10mL)中的上一步所得化合物(930mg)，并将反应在-40℃下搅拌15分钟。通过将混合物倒入饱和NH₄Cl水溶液来淬灭反应。滤出所得固体并将滤液用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用MgSO₄干燥并减压浓缩。将粗产物在硅胶柱上纯化，使用0至30％EtOAc的庚烷溶液梯度，得到乙基3-[4-[[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基]-3-甲氧基-苯基]戊-4-烯酸乙酯(300mg)。

iv)将上一步所得产物(300mg)、TEMPO(40mg)和tBuONO(167uL)溶解在1,4-二氧六环(5mL)中，加热至80℃，搅拌2天。向反应中添加水，并将水层用DCM萃取三次。将合并的有机层用MgSO₄干燥，并减压浓缩。将粗产物在硅胶柱上纯化，使用0至30％EtOAc的庚烷溶液梯度，得到(E)-3-[4-[[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基]-3-甲氧基-苯基]-5-硝基-戊-4-烯酸乙酯(190mg)。

v)在-78℃下将TOSMIC(72mg)添加到tBuOK(83mg)在无水THF(1mL)中的溶液中并搅拌10分钟。将上一步所得化合物(190mg)溶解在无水THF(4mL)中并滴加到反应混合物中。在-78℃下搅拌10分钟后，将反应倒入饱和NH₄Cl水溶液中，并将水层用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用MgSO₄干燥并减压浓缩。将粗产物在硅胶柱上纯化，使用0至50％EtOAc的庚烷溶液梯度，得到3-[4-[[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基]-3-甲氧基-苯基]-3-(4-硝基-1H-吡咯-3-基)丙酸乙酯(70mg)。

vi)向上一步所得化合物(50mg)在AcOH(1.5mL)中的溶液中添加锌粉(59mg)。将反应加热至50℃并搅拌30分钟。将反应混合物通过硅藻土过滤，并将滤饼用EtOAc淋洗。将滤液用饱和NaHCO₃水溶液和水洗涤，然后用MgSO₄干燥并减压浓缩。将粗产物在硅胶柱上纯化，使用0至4％MeOH的DCM溶液梯度，接着进行反相快速色谱法，使用40至90％ACN的H₂O(含有0.1％TFA)溶液梯度，得到4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-1H,2H,3H,4H,6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-酮(11mg)。

MS(ES⁺)m/z 485.4(M+H)⁺

191：(4R)-4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

[(+)-4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮]

192：(4S)-4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

[(-)-4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮]

可以通过手性分离获得实施例100的单一对映体。将20mg外消旋的实施例100溶解在1mL IPA中。将溶液进样在使用AD柱和5％EtOH、12％IPA和83％庚烷的等度梯度的手性制备型HPLC上，获得7mg的(+)对映体(实施例191)和7mg的(-)对映体(实施例192)。

实施例193至220的化合物的绝对构型是未知的。使用旋光仪通过它们的光学旋转来表征这些化合物。

按照与实施例191和192中所述类似的程序，使用适当的起始物质和HPLC方法，制备了以下化合物。

193：(+)-4-(4-{[4-氯-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

194：(-)-4-(4-{[4-氯-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

195：(+)-4-(4-{[4-(二氟甲基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

196：(-)-4-(4-{[4-(二氟甲基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

197：(+)-4-(3-甲氧基-4-{[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

198：(-)-4-(3-甲氧基-4-{[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

199：(+)-4-(4-{[4-乙酰基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

200：(-)-4-(4-{[4-乙酰基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

201：(+)-7-(3-甲氧基-4-{[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-3H,4H,5H,6H,7H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-5-酮

202：(-)-7-(3-甲氧基-4-{[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基)-3H,4H,5H,6H,7H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-5-酮

203：(+)-4-(4-{[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

204：(-)-4-(4-{[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

205：(+)-7-(4-{[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-5-酮

206：(-)-7-(4-{[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-5-酮

207：(+)-4-(4-{[4-乙基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

208：(-)-4-(4-{[4-乙基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

209：(+)-4-(4-{[4-羟基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

210：(-)-4-(4-{[4-羟基-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

211：(+)-4-(4-{[4-(2-羟基乙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

212：(-)-4-(4-{[4-(2-羟基乙基)-2-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

213：(+)-4-(3-甲氧基-4-{[4-甲基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

214：(-)-4-(3-甲氧基-4-{[4-甲基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

215：(+)-4-(4-{[2-(二氟甲基)-4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

216：(-)-4-(4-{[2-(二氟甲基)-4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

217：(+)-4-(4-{[2,4-双(二氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

218：(-)-4-(4-{[2,4-双(二氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

219：(+)-4-{4-[(2,4-二甲基苯氧基)甲基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

220：(-)-4-{4-[(2,4-二甲基苯氧基)甲基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

实施例221

ERRαΑlphaScreen测定

该测定是基于核受体以配体依赖的方式与辅因子相互作用的知识。相互作用位点已被映射到存在于所述共激活因子序列中的LXXLL基序。含有LXXLL基序的短肽序列模拟全长共激活因子的行为

本文所述的ERRαΑlphaScreen测定依赖于共激活因子肽与纯化的细菌表达的ERRα配体结合结构域(ERRα-LBD)的相互作用；在配体结合时，ERRα蛋白可经历构象变化，导致共激活因子结合的损失。

使用技术(Perkin Elmer)对本发明的化合物测试其破坏ERRα-LBD蛋白与共激活因子肽的结合的能力。ERRα-LBD蛋白在大肠杆菌(E.coli)中表达为6xHis小泛素样修饰物(SUMO)融合。使用亲和色谱法纯化细菌表达的6His-SUMO-ERRα-LBD蛋白。在384孔白色非结合板(Greiner)中在室温下，使用50mM Tris-HCl pH 7.5、100mM NaCl、0.1％Pluronic F-127、0.05％BSA和5mM TCEP作为缓冲剂，进行所有实验。测定中的最终DMSO浓度为1％。将化合物以一式三份进行测定，并且在室温下与0.81nM ERRα-LBD蛋白和10μg/mL链霉亲和素供体珠和10μg/mL Ni螯合受体珠一起孵育1小时；然后与15nM对应于氨基酸202至220的生物素-PGC1α-3肽(QRRPCSELLKYLTTNDDPP)一起孵育2小时。

使用Envision Xcite酶标仪(Perkin Elmer)测量ΑlphaScreen信号。将数据归一化，并使用四参数剂量-响应拟合在GraphPad Prism 7中进行曲线拟合分析。

由于对同一化合物-蛋白对注释了多个IC₅₀值，所以对每个化合物确定了平均pIC₅₀。发现所有示例的式I化合物(实施例1–220)都具有高于或等于5的平均pIC₅₀值。

发现实施例11、18、21、22、25、28、29、30、31、37、39、46、47、48、49、50、51、58、60、63、66、67、76、77、78、79、80、82、86、88、94、95、110、113、114、118、120、121、125、126、127、130、131、132、137、140、147、148、150、151、160、161、162、165、167、168、172、183、184、187、188、191、199、215、217和219具有高于或等于6但低于7的平均pIC₅₀值。

发现实施例2、4、9、14、17、20、26、34、35、43、44、45、59、64、65、69、70、71、72、73、74、75、85、87、92、93、103、104、105、106、107、108、109、111、112、116、117、128、139、152、153、156、159、163、164、171、181、182、190、193、195、201、203、206、209、211、213和216具有高于或等于7但低于8的平均pIC₅₀值。

发现实施例1、8、15、19、23、24、32、33、36、40、41、42、62、68、89、90、91、96、97、98、99、100、101、102、115、119、135、136、138、141、142、143、144、145、146、149、154、155、157、166、169、170、173、174、175、176、177、178、179、180、186、189、192、194、196、197、198、200、202、204、205、207、208、210、212、214、218和220具有高于或等于8的平均pIC₅₀值。

实施例222

全长ERRα报道基因测定

在全长ERRα报道基因测定中对实施例抑制剂抑制剂1、4、5、8、9、13、14、15、17、18、19、20、23、24、26、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、51、54、57、59、62、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、82、84、85、86、87、88、89、90、91、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、115、116、117、119、128、130、132、135、136、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、149、150、152、153、155、156、157、159、160、161、163、164、165、166、167、168、169、170、171、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、186、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219和220测试了其抑制ERRα活性的能力。

建立了一种方法，以定量地筛选对人类物种的核受体ERRα具有反向激动活性的化合物的效力。该测定允许使用编码全长ERRα的过表达构建体和含有ERRα响应元件(RE)的报道构建体和用于读出的萤光素酶基因在SK-BR-3细胞中细胞内筛选ERRα反向激动剂。活性以logIC50值表示并且可以用于确定化合物家族的SAR或者取消选择化合物。

在该测定中，通过使用标准转染技术在SK-BR-3细胞中瞬时共转染两种构建体而获得报道细胞。第一构建体含有核受体ERRα的响应元件(质粒pLP2175，报道构建体ERRα-RE/luc2P，ERRa_v2_synthRE的克隆变体，Switchgear Genomics，目录号S900089)。该序列响应于由第二构建体(质粒pLP2124：使用pcDNA3.1/Hygro(+)作为背景的全长ERRα表达构建体，Invitrogen目录号V87020)编码的ERRα蛋白的结合而驱动荧光素酶报道基因的转录。过表达的全长ERRα有组成性活性，因此萤光素酶表达被核受体ERRα的反向激动剂降低。

转染后的当天，将细胞接种到96孔板中，添加测试化合物并将板孵育过夜。随后，使用萤光素酶检测试剂和发光读出对萤火虫荧光素酶活性进行定量。

详细的测定描述

在T175烧瓶中对预接种的SK-BR-3细胞进行转染。根据被转染细胞的融合，一个转染的T175烧瓶足以在下一天接种3至4个MW96板。

在该方案中使用两种不同的培养基进行细胞处理：1)培养培养基，即含有10％FBS和1x青链霉素(Penstrep.)的含酚红的McCoy’s 5a(BioWhittaker供应商号12-688F)；和2)测定培养基，即含2％活性炭处理FBS和1x青链霉素的不含酚红的McCoy’s 5a培养基(HyClone产品号SH30270.01)。在测定培养基中制备化合物稀释液。

至少提前两天将细胞接种，以允许细胞在转染之前良好地与烧瓶贴壁。在转染当天，细胞应为50-80％融合。

用转录报道构建体pLP2175和ERRα表达构建体pLP2124(如上所述)转染SKBR3细胞。

将68μL的Lipofectamine LTX转染试剂(Invitrogen目录号15338-100)滴加到8.9ml Opti-MEM I减血清培养基(Gibco目录号51985-026)中，并在室温下孵育5至20分钟。将8.9ml的该试剂混合物添加到22μg pLP2175+22μg pLP2124(比例1:1且总体积为10ml)中，并在室温下孵育25分钟。

在向T175烧瓶中的SKBR3细胞添加转染混合物之前10分钟，用20mL培养培养基更新培养培养基。随后，轻轻地向细胞中添加10mL DNA-Opti-MEM-Lipofectamine混合物，然后在37℃和5％CO₂下孵育过夜(16-24小时)。

为了从T175烧瓶中收获SKBR3细胞，首先去除培养基。随后，将细胞用磷酸盐缓冲盐水(PBS)(Lonza)洗涤，之后去除PBS。为了解离细胞，向烧瓶中添加2ml的TrypLE Express(Invitrogen)，然后在37℃下孵育5分钟。轻敲烧瓶，直到细胞从底部分离。将细胞收集在8mL培养培养基(McCoy’s 5a，10％FBS，青链霉素)中，以实现单细胞悬液。在细胞计数之后，将细胞在300g下离心(spun down)5分钟。然后将细胞团块重悬浮至25000个细胞/80μl测定培养基(不含酚红的McCoy’s 5a，2％活性炭处理FBS，青链霉素)。

对于化合物筛选，收获细胞(如上所述)。向白色、平底、组织培养物处理的96孔筛选板(Greiner)中每孔用80μL细胞悬浮液(25,000个细胞)铺板。

从10mM二甲基亚砜(DMSO)储备溶液出发，以3个稀释步骤将测试化合物稀释。第一稀释步骤是在DMSO中的4倍的12点连续稀释。将这些稀释液在含有2％活性炭处理FBS和青链霉素的不含酚红的测定培养基中进一步稀释10倍。最后一步是测定培养基中的另一20倍稀释，以获得具有0.5％的DMSO浓度的5x浓缩稀释液。作为最后一步，将化合物稀释液在细胞板中稀释5x。

DMSO稀释系列由12个浓度组成，其中细胞板中最终浓度在10μM至2.4fM范围内。

将板在37℃和5％CO₂下孵育过夜(16-24小时)。

对于萤光素酶读出，使萤光素酶试剂(BriteLite Plus，Perkin Elmer)达到室温。向筛选板的每个测试孔中添加100μL 2.5倍稀释的BriteLite Plus试剂，然后在室温下孵育5分钟。使用Wallac Victor酶标仪(Perkin Elmer)测量萤光素酶发光信号。

使用GraphPad Prism软件(GraphPad Software)从萤光素酶信号计算测试化合物的半数最大抑制浓度(IC50)值。为了完整性，针对同一化合物-细胞系对注释多个IC₅₀值，并确定每种化合物的平均pIC₅₀。

在例示的式I化合物中，发现实施例1、8、9、15、19、24、32、33、36、40、62、68、89、91、93、96、97、98、99、100、101、102、106、107、115、119、140、142、143、144、145、146、147、149、150、155、157、159、166、169、170、174、175、176、177、178、179、186、189、192、194、196、198、200、202、207、208、211、212和214具有高于或等于6.5的平均pIC50值。

实施例223

B16F10黑色素瘤同源小鼠模型

在B16F10黑色素瘤同源小鼠模型中对实施例抑制剂100、191、192、194和196测试了其抑制肿瘤生长的能力。

细胞系和肿瘤模型：C57BL/6小鼠中B16F10黑色素瘤细胞系来源的同种异体移植模型。

小鼠B16F10黑色素瘤细胞来源于美国的美国典型培养物保藏中心(ATCC)。在补充有10％FBS(Invitrogen，目录号10438-026)和1％青霉素链霉素(Thermo FisherScientific，目录号15140-122)的DMEM(Invitrogen，目录号31600-034)中使细胞生长。为了建立同种异体移植物，当细胞达到约70至80％融合时，通过胰蛋白酶化来收获细胞，并将十万B16F10细胞悬浮在50μl无血清培养基中，并以1:1的比例与基质胶混合，然后使用附接至24号计量针的1mL BD注射器皮下植入到小鼠的背部右侧。

细胞接种5天后，一旦B16F10肿瘤移植物变得可触知，就对其进行测量。当平均肿瘤体积达到约58mm³时，将动物随机化到不同的治疗组之后对其进行给药，不同的治疗组以使得每组的平均肿瘤体积在各组之间保持相同的方式保持肿瘤体积和动物数量。以每千克重量为基础，一天一次(quaque die，q.d)经口(per os，p.o.)进行给药。

在基于肿瘤体积对动物进行随机化那天(第1天)通过测径器测量肿瘤尺寸(长度(l)和宽度(b))并在此后每周测量三次，直至研究终止。使用式b²*l*0.52计算肿瘤体积，其中l＝长度，b＝宽度(Dusan Djokovic et al.,BMC Cancer,2010,10:641)。在以第1天的肿瘤体积为基准对给定天的肿瘤体积进行归一化后，计算肿瘤生长抑制。

当肿瘤体积达到58mm³的平均值时开始测试项目给药。

进行测试项目的给药，直到第14天，并进行肿瘤体积的测量，直到第13天，以计算肿瘤生长抑制百分比(TGI)。研究的结果列于本文的下表1中。

表1

参考前面的描述和实施例，对于本领域技术人员将显而易见的是，可以在不脱离权利要求的范围的情况下进行其等同修改。

Claims

1.根据式I的化合物

或其药学上可接受的盐，其中：

Z是–CH₂O–，其中CH₂与含有A₄-A₇的芳族环连接；

R_A是H或甲基；

R₁–R₃独立地是H、甲基或卤素；

R₈–R₁₂独立地是H、卤素、C(1-3)烷氧基、C(1-6)烷基、氰基、氰基C(1-3)烷基、氨基、硝基、氨基C(1-3)烷基、–C(O)OR₁₅、–CH₂C(O)OR₁₇、–C(O)NR₁₇R₁₇、–NHC(O)R₁₇、乙酰基、羟基、C(3-6)环烷基、C(2-3)炔基、C(2-3)烯基、羧基C(1-3)烷基、C(1-3)烷基磺酰基、氨基磺酰基、(二)C(1-3)烷基氨基、苄基、SF₅或CH(＝O)，其中所有基团任选地被一个或多个卤素或羟基取代；

R₁₃是H或甲基；

R₁₄是NH、O或S；

R₁₅是H或C(1-4)烷基；

R’₁₅是H、卤素、C(1-4)烷基、氰基、羧酸、-C(O)OR₁₇或-C(O)NR₁₇R₁₇；

R₁₆是H；且

2.根据权利要求1所述的化合物，其中A₁是N，A₂是NR_A，且A₃是CR₃。

3.根据权利要求2所述的化合物，其中A₁是N，A₂是NH，且A₃是CH。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中A₄-A₇是CR₄-CR₇。

5.根据权利要求4所述的化合物，其中R₅是C(1-3)烷氧基，且R₄、R₆和R₇是H。

6.根据权利要求5所述的化合物，其中R₅是甲氧基，且R₄、R₆和R₇是H。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中A₈-A₁₂是CR₈-CR₁₂。

8.根据权利要求7所述的化合物，其中R₈-R₁₂独立地是H、C(1-6)烷基、卤素、羟基、NH₂、乙酰基、C(1-3)烷氧基或SF₅，其中C(1-6)烷基和C(1-3)烷氧基的所有碳原子都任选地被一个或多个卤素或羟基取代。

9.根据权利要求8所述的化合物，其中R₈-R₁₂独立地是H、C(1-6)烷基或卤素，其中C(1-6)烷基的所有碳原子都任选地被一个或多个卤素或羟基取代。

10.根据权利要求9所述的化合物，其中R₈和R₁₀是C(1-6)烷基，且R₉、R₁₁和R₁₂是H，其中C(1-6)烷基的所有碳原子都任选地被一个或多个卤素或羟基取代。

11.根据权利要求10所述的化合物，其中R₈和R₁₀是CF₃，且R₉、R₁₁和R₁₂是H。

12.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R₁₃是H。

13.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R₁₄是O。

14.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R₁₅和R’₁₅是H。

15.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中Y是碳-碳单键。

16.根据权利要求1所述的化合物，其选自：

4-(4-{[4-溴-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[4-(2-羟基乙基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(3-甲氧基-4-{[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[4-氯-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(3-甲氧基-4-{[2-(五氟-λ6-硫基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(3-甲氧基-4-{[2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[4-乙酰基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-[(2-甲氧基-4-{6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基}苯基)甲氧基]-3-(三氟甲基)苯甲腈；

4-(4-{[4-溴-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-(三氟甲氧基)苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[2-(五氟-λ6-硫基)苯氧基]甲基}-3-(三氟甲氧基)苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-[3-(三氟甲氧基)-4-{[2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基]-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-(三氟甲氧基)苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-(三氟甲氧基)苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-{4-[(2,4-二甲基苯氧基)甲基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(3-甲氧基-4-{[2-甲基-4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-{4-[(3,5-二甲基苯氧基)甲基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(3-甲氧基-4-{[3-甲基-5-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[4-(二氟甲基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[2,4-双(二氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[2-(二氟甲基)-4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[3-(二氟甲基)-5-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[4-(3-羟基丙-1-炔-1-基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲酸甲酯；

4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-N,N-二甲基-6-氧代-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲酰胺；

4-(3-甲氧基-4-{[4-甲基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-1H,2H,3H,4H,6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-酮；

(+)-4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(-)-4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(+)-4-(4-{[4-氯-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(-)-4-(4-{[4-氯-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(+)-4-(4-{[4-(二氟甲基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(-)-4-(4-{[4-(二氟甲基)-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(+)-4-(3-甲氧基-4-{[4-甲基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(-)-4-(3-甲氧基-4-{[4-甲基-2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(+)-4-(4-{[2-(二氟甲基)-4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(-)-4-(4-{[2-(二氟甲基)-4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(+)-4-(4-{[2,4-双(二氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(-)-4-(4-{[2,4-双(二氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；

(+)-4-{4-[(2,4-二甲基苯氧基)甲基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮；和

(-)-4-{4-[(2,4-二甲基苯氧基)甲基]-3-甲氧基苯基}-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮。

17.根据权利要求1所述的化合物，其是：

(4R)-4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

或

(4S)-4-(4-{[2,4-双(三氟甲基)苯氧基]甲基}-3-甲氧基苯基)-2H,4H,5H,6H,7H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮

18.一种药物，其特征在于，其包含根据权利要求1至17中任一项所述的式I化合物或其药学上可接受的盐。

19.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗性和/或预防性治疗ERRα介导的疾病或状况的药物中的用途。

20.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗ERRα介导的癌症的药物中的用途。

21.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗选自以下的至少一种状况的药物中的用途：肺癌；黑色素瘤；子宫内膜癌；和急性骨髓性白血病。

22.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗选自以下的至少一种状况的药物中的用途：乳腺癌；膀胱癌；前列腺癌；胰腺癌；结直肠癌；和卵巢癌。

23.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗II型糖尿病的药物中的用途。

24.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至17中任一项所述的式I化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。