ES2970386T3 - Moduladores de receptor alfa relacionado con estrógeno (ERR-alfa) - Google Patents

Abstract

La presente invención se dirige a compuestos según la Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables. Los compuestos pueden usarse como moduladores del receptor alfa relacionado con estrógenos (ERRα) y tienen utilidad en el tratamiento de enfermedades o afecciones mediadas por ERRα. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Moduladores de receptor alfa relacionado con estrógeno (ERR-alfa)

Antecedentes de la invención

<El receptor relacionado con estrógeno alfa (ERR>a<) es una proteína de 45,5 kilodalton (kDa) de 423 residuos de>aminoácido que pertenece a la superfamilia de receptor nuclear (NR). Esta familia de receptor nuclear comprende 48 genes, que codifican para factores de transcripción de unión a ADN que están implicados en la regulación de diversas funciones incluyendo, entre otras cosas, homeostasia, reproducción, desarrollo y metabolismo. La familia de<ERR (el subgrupo NR3B) consiste en ERR>a<, ERR->p<y ERR->y<: hasta ahora, no se ha identificado ningún ligando>endógeno para ninguna de las isoformas de y, por tanto, se consideran receptores huérfanos.

En el documento de Bookoutet al. Anatomical profiling of nuclear receptor expression reveals a hierarchical transcriptional network,Cell. 126:789-99 (2006), una determinación de perfil de expresión en todo el organismo de las<tres isoformas de ERR determinó que ERR>a<está ampliamente distribuido, con una expresión de proteína significativa>en la mayoría de los tejidos adultos. Estudios de desactivación de miembros de la familia de ERR han revelado que cada receptor tiene fenotipos metabólicos específicos de tejido y de función que son importantes para la adaptación a estrés energético a nivel de todo el cuerpo. Estudios de desactivación también han indicado una compensaciónin vivolimitada entre los miembros de la familia de ERR. La divulgación, entre otros, del documento de Tremblayet al. The NR3B subgroup: an overview, Nuclear Receptor Signaling,5:e009 (2007), puede mencionarse en este contexto.

<Estudios genómicos han indicado que ERR>a<regula grandes números de genes. Las siguientes referencias son>instructivas a este respecto: Puigserveret al. A cold-inducible coactivator of nuclear receptors linked to adaptive thermogenesis,Cell. 92(6): 829-839 (1998); Yoonet al. Control o f hepatic gluconeogenesis through the transcriptional coactivator PGC-1,Nature 413(6852): 131-138 (2001); Husset al. Estrogen-related receptor alpha directs peroxisome proliferator-activated receptor at signaling en the transcriptional control of energy metabolism in cardiac and skeletal muscle,Mol. Cell Biol. 24(20): 9079-9091 (2004); y Moothaet al. ERRa and Gabpa/b specify PGC-1alpha-dependent oxidative phosphorylation gene expression that is alteredin diabetic muscle,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(17):6570-6575 (2004).

<Estas referencias respaldan un modelo fisiológico de la función de ERR>a<en la regulación del metabolismo energético>y, en particular, en la regulación transcripcional de genes requeridos para la biogénesis mitocondrial, el ciclo del ácido<tricarboxílico, fosforilación oxidativa, oxidación de ácidos grasos y metabolismo de lípidos. En particular, ERR>a<induce la expresión de factor respiratorio nuclear 1 (NRF1), proteína de unión a GA alfa (GABP>a<) y receptor activado por proliferador del peroxisoma alfa (PPAR>a<). Los coactivadores de receptor nuclear coactivador 1 -alfa de receptor activado por proliferador del peroxisoma gamma (PGC-1>a<), PGC-1>p<y proteína 1 relacionada con coactivador de>receptor activado por proliferador del peroxisoma gamma (PPRC-1) están implicados en la regulación de estos genes<y en la autorregulación de la expresión de ERR>a<. PGC-1>a<se expresa a bajos niveles basales pero se induce mediante ayuno y otros estreses metabólicos. PGC-1>p<, un coactivador relacionado, tiene funciones similares, pero su expresión>puede no regularse tan agudamente mediante variaciones de demanda de energía. A la inversa, los correpresores que se unen a ERR, tales como el correpresor proteína de interacción con receptor nuclear 140 (RIP140), compiten con los coactivadores de ERR para regular negativamente la expresión génica dependiente de ERR.

<El efecto pleiotrópico de la actividad de ERR>a<sobre el metabolismo energético ha interesado a los presentes>inventores en cuanto a la posibilidad de que deba ser una diana para el descubrimiento de nuevas terapias para enfermedades en las que perturbaciones o modificaciones metabólicas desempeñan un papel central, tales como<diabetes tipo 2, insuficiencia cardíaca progresiva, osteoporosis y cáncer. Resulta de particular interés ERR>a<como>diana novedosa para terapia tumoral, mediante efectos sobre la regulación del metabolismo energético de células<tumorales asociado con estrés energético dentro de microentornos tumorales. Y resulta de interés específico ERR>acomo diana novedosa para el tratamiento terapéutico de cánceres con propiedades similares a células madre (células madre cancerosas (CSC), células iniciadoras de tumor (TIC) y células tumorales circulantes (CTC)) que se basan en la respiración mitocondrial para sus requisitos energéticos.

Se sabe que el inicio y el desarrollo del cáncer, en particular, están asociados con alteraciones metabólicas principales y las mitocondrias desempeñan un papel en la tumorigénesis. Una anomalía habitual observada en muchos tipos de cáncer (denominado efecto de Warburg) es un desplazamiento en el metabolismo de la glucosa de fosforilación oxidativa a glicólisis aerobia y está caracterizado por un aumento drástico en el consumo de glucosa acompañado por una tasa elevada de excreción de lactato independientemente de la abundancia de oxígeno: la glicólisis aerobia cumple las necesidades metabólicas de células altamente proliferativas, incluyendo proporcionar suficiente energía y proporcionar la acumulación de precursores para reacciones anabólicas. LeBleuet al. PGC-1alpha mediates mitochondrial biogenesis and oxidative phosphorylation in cancer cells to promote metastasis,Nat. Cell Biol.

16(10):992-1 (2014), demostraron que las células tumorales muestran plasticidad metabólica para participar o bien en glicólisis o bien en fosforilación oxidativa dependiendo del entorno tumoral y su fenotipo proliferativo o metastatizante durante la progresión del cáncer. Por tanto, resulta evidente que la selección como diana de progenitores metastásicos y células tumorales resistentes no debe realizarse únicamente mediante la ruta glicolítica sino también mediante la fosforilación oxidativa mitocondrial.

<ERR>a<, junto con PGC1>a</>p<, controla la regulación de genes que codifican para enzimas en el ciclo de ácido>tricarboxílico (TCA) y la fosforilación oxidativa. Tal como se comenta en el documento de Ariaziet al. Estrogen-related receptor alpha and estrogen-related receptor gamma associate with unfavorable and favorable biomarkers, respectively, in human breast cancer,<Cancer Res. 62(22): 6510-8 (2002), ERR>a<se expresa en una gama de células>cancerosas (incluyendo células cancerosas de mama y de próstata) y está asociado con una enfermedad más invasiva y un mayor riesgo de recidivas en ambos de estos tipos de cáncer.

El documento de Changet al. The metabolic regulator ERRa, a downstream target of HER2/lGF-1R, as a therapeutic target in breast cancer,Cancer Cell, 500-510 (2011) y el documento de Fujimotoet al. Clinical implication of estrogenrelated receptor (ERR) expression in ovarian cancers,J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 104, 301-304 (2007), documentan<que ERR>a<se expresa en la mayoría de los cánceres y que una actividad aumentada de este receptor está asociada>con un desenlace negativo en cánceres tanto de mama como de ovarios. En la primera de estas referencias, se confirma que el factor de transcripción está implicado en la biogénesis mitocondrial y también en la regulación de fosforilación oxidativa. Se considera que este último punto es importante ya que la resistencia a la inhibición de la ruta de KRAS en cáncer pancreático, inhibidores de BRAF en melanoma y oxaliplatino y 5-fluorouracilo en cáncer de colon también están asociados con un desplazamiento hacia metabolismo oxidativo.

<Por tanto, los presentes inventores han opinado que la inhibición de la actividad de ERR>a<permitirá una perturbación>selectiva de la función mitocondrial en cáncer, en particular en cánceres de los tipos anteriormente mencionados. Con<este fin, pero también para utilidad en el tratamiento de otras enfermedades y estados mediados por ERR>a<, han desarrollado agonistas inversos de ERR>a<no esteroideos y no covalentes.>

<El documento WO 2008/109727 describe fenoxi-tiazolidindionas sustituidas como moduladores de ERR>a<.>

Sumario de la invención

Según un primer aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto según la fórmula I

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la que

Y es un enlace sencillo carbono-carbono o un enlace doble carbono-carbono, con la condición de que, cuando Y es un enlace doble carbono-carbono, R'<15>y R<16>no están presentes;

una de las tres posiciones A<1>-A<3>es o bien S o bien NRa, las dos posiciones restantes A<1>-A<3>son N o CR<1>, CR<2>, CR<3>, respectivamente;

Ra es H o metilo;

R<1>-R<3>son independientemente H, metilo, amino o halógeno;

A<4>-A<7>son CR<4>, CR<5>, CRa y CR<7>, respectivamente;

A<8>-A<12>son N o CR8, CR<9>, CR<10>, CR<11>y CR<12>, respectivamente, con la condición de que no más de dos de las cinco posiciones A<8>-A<12>pueden ser simultáneamente N;

R<4>- R<7>son independientemente H, halógeno, alcoxilo C(1-3), alquilo C(1-3);

R<8>-R<12>son independientemente H, halógeno, alcoxilo C(1-3), alquilo C(1-4), ciano, nitro, -C(=O)OR<17>, hidroxilo, cicloalquilo C(3-6), bencilo, fenilo, -SF<5>, biciclo[1.1.1]pentano;

o R<9>y o bien R8 o bien R<10>están condensados y forman un anillo de cinco a siete miembros aromático o no aromático que contiene de dos a siete átomos de carbono y de cero a tres heteroátomos; estando todos los átomos de carbono opcionalmente sustituidos con uno o más metilo, halógeno o hidroxilo;

R<13>es H o metilo;

R<14>es NH, O o S;

R'<15>es H, halógeno, alquilo C(1-4), -C(=O)OR17 o -C(=O)OR^R<17>;

R<15>es H, halógeno o alquilo C(1-4);

R<16>es H; y

R<17>es H, metilo o etilo.

En una realización, la invención se refiere a un compuesto según la fórmula I en la que A<1>es N, A<2>es NR<a>y A<3>es

CR3.

En otra realización, la invención se refiere a un compuesto según la fórmula I en la que A<1>es N, A<2>es NH y A<3>es CH.

En otra realización, la invención se refiere a un compuesto según la fórmula I en la que R<5>es alcoxilo C(1-3) y R<4>, R6 y R<7>son H.

En otra realización, la invención se refiere a un compuesto según la fórmula I en la que R<5>es metoxilo y R<4>, R6 y R<7>son H.

En otra realización, la invención se refiere a un compuesto según la fórmula I en la que A<8>-A<12>son CR8, CR<9>, CR<10>,

CR<11>y CR<12>, respectivamente.

En otra realización, la invención se refiere a un compuesto según la fórmula I en la que R<8>-R<12>son independientemente

H, alquilo C(1-4), halógeno, hidroxilo o alcoxilo C(1-3). Por ejemplo, R<8>-R<12>pueden ser independientemente H, alquilo

C(1-4) o halógeno. Se han obtenido buenos resultados cuando R<9>y R<11>son independientemente alquilo C(1-4), halógeno, hidroxilo o alcoxilo C(1-3) y R8, R<10>y R<12>son H. Y, particularmente, R<9>y R<11>son independientemente alquilo

C(1-4) y R8, R<10>y R<12>son H.

En otra realización, la invención se refiere a un compuesto según la fórmula I en la que R<9>y R<11>son CF<3>y R8, R<10>y

R<12>son H.

En otra realización, la invención se refiere a un compuesto según la fórmula I en la que R<13>es H. En otra realización, la invención se refiere a un compuesto según la fórmula I en la que R<14>es O. En otra realización, la invención se refiere a un compuesto según la fórmula I en la que R<15>y R'<15>son H. En otra realización, la invención se refiere a un compuesto según la fórmula I en la que Y es un enlace sencillo carbonocarbono.

No se pretende que las realizaciones anteriores, cuando se refieren a una forma preferida de diferentes sustituyentes de la fórmula (I), sean mutuamente excluyentes unas de otras. En vez de eso, se prevén combinaciones de estas realizaciones dentro del alcance de la presente invención y, en determinadas circunstancias, tales combinaciones representan estructuras preferidas para compuestos de fórmula I. Con respecto a eso, pueden mencionarse particularmente compuestos según la fórmula I en la que: A<1>es N, A<2>es NH y A<3>es CH; A<4>-A<7>son CR<4>, CR<5>, CR6 y

CR<7>respectivamente, en los que R<5>es alcoxilo C(1-3) y R<4>, R6 y R<7>son H; A<8>-A<12>son CR8, CR<9>, CR<10>, CR<11>y CR<12>, respectivamente, en los que R<9>y R<11>son independientemente alquilo C(1-4), halógeno, hidroxilo o alcoxilo C(1-3) y

R8, R<10>y R<12>son H; R<13>es H; R<14>es O; R<15>y R'<15>son ambos H; Y es un enlace sencillo carbono-carbono; y R<16>es H.

También pueden mencionarse compuestos según la fórmula I en la que: Ai es N, A<2>es NH y A<3>es CH; A<4>-A<7>son CR<4>, CR<5>, CRa y CR<7>respectivamente, en los que R<5>es alcoxilo C(1-3) y R<4>, R6 y R<7>son H; A<8>-A<12>son CR8, CRg, CR<10>, CR<11>y CR<12>, respectivamente, en los que Rg y R<11>son independientemente alquilo C(1-4) y R8, R<10>y R<12>son H; R<13>es H; R<14>es O; R<15>y R'<15>son ambos H; Y es un enlace sencillo carbono-carbono; y Ri6 es H.

Definiciones

Tal como se usan en el presente documento, las formas en singular “un”, “una” y “el/la” incluyen referentes en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

Los términos “que comprende”, “comprende” y “compuesto por”, tal como se usan en el presente documento, son sinónimos de “que incluye”, “ incluye”, “que contiene” o “contiene”, y son inclusivos o abiertos y no excluyen miembros, elementos o etapas de método adicionales no mencionados. Si se usa, la expresión “que consiste en” es cerrada y excluye todos los elementos adicionales. Además, la expresión “que consiste esencialmente en” excluye elementos materiales adicionales pero permite la inclusión de elementos no materiales que no cambian sustancialmente la naturaleza de la invención.

Cuando se expresan cantidades, concentraciones, dimensiones y otros parámetros en forma de un intervalo, un intervalo preferible, un valor de límite superior, un valor de límite inferior o valores de límite superior e inferior preferibles, debe entenderse que cualquier intervalo que pueda obtenerse combinando cualquier límite superior o valor preferible con cualquier límite inferior o valor preferible también se da a conocer específicamente, independientemente de si los intervalos mencionados se mencionan claramente en el contexto.

Los términos “preferido”, “preferiblemente”, “de manera deseable” y “particularmente” o sinónimos de los mismos pueden usarse con frecuencia en el presente documento para referirse a realizaciones de la divulgación que pueden proporcionar beneficios particulares, en determinadas circunstancias. Sin embargo, la mención de una o más realizaciones preferibles, preferidas, deseables o particulares no implica que otras realizaciones no sean útiles y no se pretende excluir esas otras realizaciones del alcance de la divulgación.

Tal como se usa a lo largo de la totalidad de esta solicitud, el término “puede” se usa en un sentido permisivo (es decir, que significa que tiene el potencial de) en lugar de en el sentido obligatorio.

Tal como se usa en el presente documento, la “temperatura ambiente” es de 23°C ± 2°C.

A menos que se mencione lo contrario, los términos “halo” o “halógeno” o “haluro”, tal como se usan en el presente documento en sí mismos o como parte de otro sustituyente, significan un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Se indica una preferencia por flúor, cloro o bromo.

El término “heteroátomo” tal como se usa en el presente documento representa nitrógeno, oxígeno o azufre.

Tal como se usa en el presente documento, grupo “alquilo C(1-n)” se refiere a un grupo monovalente que contiene desde 1 hasta n átomos de carbono, es decir un radical de un alcano e incluye grupos orgánicos de cadena lineal y ramificados. Como tal, un grupo “alquilo C<1>-C<30>” se referirá a un grupo monovalente que contiene desde 1 hasta 30 átomos de carbono, que es un radical de un alcano e incluye grupos orgánicos de cadena lineal y ramificados. En la presente invención, tales grupos alquilo pueden no estar sustituidos o pueden estar sustituidos con los grupos mencionados a continuación en el presente documento. Los derivados halogenados de radicales hidrocarbonados pueden mencionarse, en particular, como ejemplos de grupos alquilo sustituidos adecuados.

El término “alquilo C(1-4)” tal como se usa en el presente documento significa un grupo alquilo que tiene 1-4 átomos de carbono, es decir metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo o tere-butilo. Todos los átomos de carbono pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más halógenos o hidroxilos.

El término “alquilo C(1-3)” tal como se usa en el presente documento significa un grupo alquilo que tiene 1-3 átomos de carbono, es decir metilo, etilo, propilo o isopropilo. Todos los átomos de carbono pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más halógenos o hidroxilos.

El término “cicloalquilo C(3-6)” tal como se usa en el presente documento significa un hidrocarburo cíclico saturado que tiene 3-6 átomos de carbono, es decir ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo. Todos los átomos de carbono pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más halógenos o metilos.

El término “alcoxilo C(1-3)” significa un grupo alcoxilo que tiene 1-3 átomos de carbono, estando el resto alquilo ramificado o no ramificado. Todos los átomos de carbono están opcionalmente sustituidos con uno o más F o hidroxilos.

El término “ciano” tal como se usa en el presente documento representa un grupo de fórmula -CN.

Tal como se usa en el presente documento “grupo nitro” o “nitro” se refiere a -NO<2>.

El término “sustituido” significa que uno o más hidrógenos en el/los átomo(s) designado(s) está(n) sustituido(s) por una selección del grupo indicado, siempre que: no se supere la valencia normal del átomo designado en las circunstancias existentes; y la sustitución de como resultado un compuesto estable. También son permisibles combinaciones de sustituyentes únicamente si tales combinaciones dan como resultado compuestos estables. Los términos “compuesto estable” o “estructura estable” se refieren a un compuesto o estructura que es suficientemente robusto como para sobrevivir tanto al aislamiento hasta un grado de pureza útil a partir de una mezcla de reacción como a la formulación para dar un agente terapéutico eficaz.

El término “opcionalmente sustituido” significa una sustitución opcional con los grupos, radicales o restos especificados.

Tal como se usa en el presente documento, “grupo protector” se refiere a un resto unido a un grupo funcional para prevenir una reacción no deseada. Preferiblemente, el grupo protector puede retirarse fácilmente después de que ya no se requiera la protección del grupo funcional.

Los compuestos de fórmula I pueden formar sales, que también están dentro del alcance de esta invención. Se entiende que la referencia a un compuesto de fórmula I en el presente documento incluye la referencia a sales del mismo, a menos que se indique lo contrario.

El término “sal farmacéuticamente aceptable” se usa según su definición convencional en la técnica para representar las sales que, dentro del alcance del criterio médico, son adecuadas para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales inferiores, en particular, sin toxicidad, irritación y/o respuesta alérgica excesiva: ese uso debe ser compatible con una razón de beneficio con respecto a riesgo razonable. En la técnica se conocen bien sales farmacéuticamente aceptables. Pueden o bien obtenerse durante el aislamiento y la purificación finales de los compuestos de la invención, o bien pueden obtenerse por separado haciendo reaccionar una función de base libre con: un ácido mineral adecuado, incluyendo, pero sin limitarse a, ácido clorhídrico, ácido fosfórico o ácido sulfúrico; o un ácido orgánico, incluyendo, pero sin limitarse a, ácido ascórbico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido maleico, ácido malónico, ácido fumárico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido propiónico, ácido acético o ácido metanosulfónico. Una función de ácido de compuestos de la invención puede hacerse reaccionar con una base orgánica o mineral, tal como hidróxido de sodio, hidróxido de potasio o hidróxido de litio. Por completitud, las bases orgánicas incluyen las sales comunes de hidrocarbilo y amina heterocíclica, tales como sales de dietilamino, morfolina y piperidina, por ejemplo.

Los compuestos de fórmula I pueden contener centros asimétricos o quirales y, por tanto, existir en diferentes formas estereoisoméricas. Se pretende que todas las formas estereoisoméricas de los compuestos de fórmula I, así como mezclas de las mismas, incluyendo mezclas racémicas, formen parte de la presente invención. En particular, las formas estereoisoméricas de los compuestos de fórmula I que, siguiendo el sistema de nomenclatura de Cahn-lngold-Prelog, están en la configuración S en el centro quiral junto al anillo heterocíclico de cinco miembros, forman definitivamente parte de la presente invención.

Tal como entenderá el experto en la técnica, los enantiómeros pueden separarse: convirtiendo la mezcla enantiomérica en una mezcla diastereomérica mediante reacción con un compuesto ópticamente activo apropiado, por ejemplo un agente auxiliar quiral tal como un alcohol quiral o cloruro de ácido de Mosher; separando los diastereómeros; y convirtiendo (mediante hidrólisis, por ejemplo) los diastereómeros individuales en los enantiómeros puros correspondientes. También pueden separarse enantiómeros mediante uso de columna de HPLC quiral.

Se reconocerá que pueden ser posibles diversos tautómeros de compuestos de fórmula I: por tanto, se pretende que todas las formas tautoméricas de compuestos de fórmula I formen parte de la invención. Por completitud, tal como se usa en el presente documento, el término “tautómero” se refiere a la migración de protones entre enlaces sencillos y dobles adyacentes. El proceso de tautomerización es reversible: los tautómeros alcanzarán generalmente un estado de equilibrio en el que el doble enlace se comparte de manera resonante entre dos longitudes de enlace.

La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende compuestos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos que tienen la fórmula I general en mezcla con excipientes farmacéuticamente aceptables y opcionalmente otros agentes terapéuticamente activos. Los excipientes deben ser “aceptables” en el sentido de ser compatibles con los demás componentes de la composición y no perjudiciales para los receptores de la misma.

La invención incluye además un compuesto de fórmula I en combinación con uno o más de otros fármacos.

Las composiciones incluyen, pero no se limitan a, las adecuadas para administración oral, sublingual, subcutánea, intravenosa, intramuscular, nasal, local o rectal, todas en formas de dosificación unitarias para su administración. Para la administración oral, el principio activo puede presentarse como unidades diferenciadas, tales como comprimidos, cápsulas, polvos, materiales granulados, disoluciones, suspensiones y similares.

Para la administración parenteral, la composición farmacéutica de la invención puede presentarse en recipientes de dosis unitaria o de múltiples dosis, tales como líquidos para inyección en cantidades predeterminadas, presentadas, por ejemplo en viales sellados y ampollas. La composición farmacéutica también puede almacenarse en un estado secado por congelación (liofilizado) que sólo requiere la adición de portador líquido estéril (tal como agua) antes de su uso.

Mezclado con tales agentes auxiliares farmacéuticamente aceptable, el agente activo puede comprimirse para dar unidades de dosificación sólidas, tales como pastillas, comprimidos o procesarse para dar cápsulas o supositorios. Por medio de líquidos farmacéuticamente aceptables, el agente activo puede aplicarse como una composición fluida (en forma de una disolución, suspensión o emulsión, por ejemplo, que puede incluirse en una preparación para inyección o en una pulverización, tal como una pulverización nasal.

Para producir unidades de dosificación sólidas, se contempla el uso de aditivos convencionales tales como cargas, colorantes, aglutinantes poliméricos y similares. En general, puede usarse cualquier aditivo farmacéuticamente aceptable que no interfiera con la función de los compuestos activos. Los portadores adecuados con los que puede administrarse el agente activo de la invención como composiciones sólidas incluyen lactosa, almidón, derivados de celulosa y similares, o mezclas de los mismos, cuando se usan en cantidades adecuadas. Para la administración parenteral, pueden usarse suspensiones acuosas, soluciones salinas isotónicas y disoluciones inyectables estériles, suspensiones o disoluciones que pueden contener agentes dispersantes y/o agentes humectantes farmacéuticamente aceptables, tales como propilenglicol o butilenglicol.

La invención incluye además una composición farmacéutica, tal como se describió anteriormente en el presente documento, en combinación con material de acondicionamiento adecuado para dicha composición, incluyendo dicho material de acondicionamiento instrucciones para el uso de la composición con los fines descritos anteriormente en el presente documento.

La dosis exacta y el régimen de administración del principio activo, o una composición farmacéutica del mismo, pueden variar con el compuesto particular, la vía de administración y la edad y estado del sujeto individual al que se le tiene que administrar el medicamento.

En general parenteral administración requiere dosificaciones inferiores a otros métodos de administración que dependen más de la absorción. Aparte de eso, una dosificación para seres humanos contiene preferiblemente desde 0,0001 hasta 100 mg por kg de peso corporal. La dosis deseada puede presentarse como una dosis o múltiples subdosis administradas a intervalos apropiados a lo largo de todo el día.

Los compuestos según la invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos pueden usarse como medicamento en terapia.

Otro aspecto de la invención se encuentra en el uso de compuestos que tienen la fórmula I general o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de enfermedades<mediadas por ERR>a<o estados mediados por ERR>a<. En particular, la invención proporciona el uso de compuestos que>tienen la fórmula I general o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos para el tratamiento de cáncer<mediado por ERR>a<.>

Los compuestos que tienen la fórmula I general o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos pueden usarse en terapias para tratar al menos un estado seleccionado de: cáncer de pulmón; melanoma; cáncer endometrial; y leucemia mieloide aguda. Sin intención de limitar este aspecto de la presente invención, los compuestos que tienen la fórmula I general o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos pueden usarse en particular en terapias para tratar: melanoma de dispersión superficial; lentigo maligno; melanoma lentiginoso acro; melanoma nodular; melanoma amelánico; melanoma ocular; melanoma de la vulva; o melanoma vaginal.

En otro aspecto, los compuestos que tienen la fórmula I general o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos pueden usarse en terapias para tratar al menos un estado seleccionado de: cáncer de mama; cáncer de vejiga; cáncer de próstata; cáncer pancreático; cáncer colorrectal; y cáncer de ovarios.

En otro aspecto, los compuestos que tienen la fórmula I general o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos pueden usarse para tratar diabetes mellitus tipo II.

Descripción detallada de la invención

Tal como se representa en los ejemplos a continuación, en determinadas realizaciones a modo de ejemplo se preparan compuestos según los siguientes procedimientos generales. Se apreciará que, aunque los métodos generales representan la síntesis de determinados compuestos de la invención, los siguientes métodos generales y otros métodos conocidos por un experto en la técnica pueden aplicarse a todos los compuestos y subclases y especies de cada uno de estos compuestos, tal como se describe en el presente documento.

Métodos generales de preparación

Los compuestos descritos en el presente documento, incluyendo compuestos de fórmula I general, elemento estructural I y elemento estructural II, se preparan mediante los esquemas de reacción representados a continuación. Además, en los siguientes esquemas, cuando se mencionan ácidos, bases, reactivos, agentes de acoplamiento, catalizadores, disolventes y similares específicos, se entiende que pueden usarse otros ácidos, bases, reactivos, agentes de acoplamiento, catalizadores, disolventes, etc. adecuados y se incluyen dentro del alcance de la presente invención. Se prevén modificaciones de las condiciones de reacción (por ejemplo, temperatura, duración de la reacción o combinaciones de las mismas) como parte de la presente invención.

Los compuestos obtenidos usando las secuencias de reacción generales pueden tener una pureza insuficiente. Los compuestos pueden purificarse usando cualquiera de los métodos para la purificación de compuestos orgánicos, por ejemplo, cristalización o cromatografía en columna de gel de sílice o alúmina usando diferentes disolventes en razones adecuadas. Todos los estereoisómeros posibles están previstos dentro del alcance de la invención.

Abreviaturas para los materiales empleados en los esquemas de reacción y los ejemplos son las siguientes:

AcOH: ácido acético; ACN: acetonitrilo; DAST: trifluoruro de (dietilamino)azufre; DCM: diclorometano; DDQ: 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona; DIAD: azodicarboxilato de diisopropilo; DiBAl-H: hidruro de diisobutilaluminio; DMAP: 4-dimetilaminopiridina; DMF: W,A/-dimet¡lformamida; DMSO: dimetilsulfóxido; EDC: 1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; Et<2>O: di-etil éter; EtOAc: acetato de etilo; EtOH: etanol; HPLC: cromatografía de líquidos de alta resolución; MeOH: metanol; PhSCu(I): fenilsulfanil-cobre; PPh<3>: trifenilfosfina; SFC: cromatografía de fluido supercrítico; tBuOK: ferc-butóxido de potasio; tBuONO: ferc-butil-nitrito; TEMPO: 2,2,6,6-tetrametilpiperidiniloxilo; TFA: ácido trifluoroacético; THF: tetrahidrofurano; TOSMIC: tosilmetilisocianuro.

Los nombres químicos son nombres de la IUPAC preferidos, generados usando Marvin Sketch 17.24.1. Si se hace referencia a un compuesto químico usando tanto una estructura química como un nombre químico, y existe ambigüedad entre la estructura y el nombre, predomina la estructura.

Esquema 1

Condiciones:

i) ácido de Meldrum, MeOH

En el esquema 1 se representa la síntesis general de derivados de la invención que tienen la fórmula I, en la que R<14>es oxígeno, R<15>, R’<15>y R<16>son H e Y es un enlace sencillo carbono-carbono. Los derivados pueden prepararse mediante métodos conocidos en la técnica de química orgánica. Pueden obtenerse compuestos de la invención mediante una reacción entre un derivado de benzaldehído del elemento estructural I, en el que A<4>, A<5>, A6, A<7>, A8, Ag, A<10>, A<11>y A<12>tienen el significado anteriormente descrito, y un derivado del elemento estructural II, en el que R<13>, A<1>, A<2>y A<3>tienen el significado anteriormente descrito, y ácido de Meldrum.

Para obtener derivados de fórmula I en la que R<14>es azufre, pueden hacerse reaccionar los derivados de fórmula I en la que R<14>es oxígeno, por ejemplo, con reactivo de Lawesson.

Para obtener derivados de fórmula I en la que R<14>es nitrógeno, pueden hacerse reaccionar los derivados de fórmula I en la que R<14>es azufre, por ejemplo, con amoniaco en MeOH.

Esquema 1b

El esquema 1b representa una ruta general para la preparación de análogos de fórmula I en la que Y es un enlace doble carbono-carbono, R<15>es H y R<13>, R<14>, A<1>, A<2>, A<3>, A<4>, A<5>, Ae, A<7>, As, Ag, A<10>, A<11>y A<12>tienen el significado anteriormente descrito.

Los derivados de fórmula I, en la que Y es un enlace sencillo carbono-carbono y R<15>, R'<15>y R<16>son H, pueden oxidarse, usando por ejemplo DDQ en un disolvente apropiado, para obtener derivados de fórmula I, en la que Y es un enlace doble carbono-carbono.

Condiciones:

i) K<2>CO<3>, DMF

El esquema 2 representa un método general para preparar derivados de benzaldehído del elemento estructural I en los que A<4>, A<5>, Ae, A<7>, As, A<9>, A<10>, A<11>y A<12>tienen el significado anteriormente descrito.

La sustitución aromática de 4-fluorobenzaldehído 1 con fenol 2, usando K<2>CO<3>en DMF a 110°C, proporciona los derivados del elemento estructural I. Para algunas sustituciones en A<4>a A<12>, puede resultar beneficioso usar un derivado de 4-hidroxibenzaldehído con un derivado de fluorobenceno para realizar la sustitución aromática.

Esquema 2b

Condiciones:

i) K<2>CO<3>, DMF;

ii) DAST, DCM;

iii) DiBAl-H, tolueno.

El esquema 2b representa un método general para preparar derivados de benzaldehído del elemento estructural I, en los que As es C-CF<2>, y A<4>, A<5>, Ae, A<7>, A<9>, A<10>, A<11>y A<12>tienen el sign aromática de fluorobenzaldehído 4 con 4-hidroxibenzonitrilo 3 en condición básica, usando por ejemplo K<2>CO<3>, proporciona el benzonitrilo correspondiente 5. El resto aldehido puede convertirse en un grupo CF<2>usando un agente de fluoración, por ejemplo DAST. Mediante reducción posterior del nitrilo usando, por ejemplo DiBAI-H en tolueno, pueden prepararse derivados de benzaldehído del elemento estructural I. En el esquema 2b esto se muestra a modo de ejemplo para Rs, esta conversión también puede aplicarse para un resto aldehido en cualquiera de las posiciones

R<4>a R<12>. Para algunas sustituciones en A<4>a A<12>, puede resultar beneficioso usar un derivado de 4-fluorobenzonitrilo con un derivado de hidroxibenzaldehído para realizar la sustitución aromática.

Condiciones:

i) Ácido de Meldrum, MeOH;

ii) ROH, DIAD, PPh<3>, THF; y

iii) R<2>NH, EDC, DMAP, DCM.

El esquema 3 representa una ruta general para la preparación de análogos de fórmula I en la que Y es un enlace sencillo carbono-carbono, R<14>es oxígeno, R<15>es COOH y cada uno de R'<15>y R<16>es H. Pueden obtenerse compuestos de la invención mediante una reacción entre un derivado del elemento estructural I, en el que A<4>, A<5>, A6, A<7>, A8, Ag, A<10>, A<11>y A<12>tienen el significado anteriormente descrito, un derivado del elemento estructural II, en el que R<13>, A<1>, A<2>, A<3>tienen el significado anteriormente descrito, y ácido de Meldrum a temperatura ambiente.

Cuando R<15>es COOH, este resto ácido carboxílico puede funcionalizarse hacia un éster, usando por ejemplo un alcohol, DIAD y PPh<3>en THF. O puede funcionalizarse hacia una amida, usando por ejemplo una amina primaria o secundaria, EDC y DMAP en Dc M.

i) CHaCH<2>OCOCH<2>P(Ph)aBr, tBuOK, Et<2>O;

ii) CH<2>CHMgBr, PhSCu(I), THF;

iii) TEMPO, tBuONO, 1,4-dioxano;

iv) TOSMIC, tBuOK, THF; y

v) Zn, AOH.

El esquema 4 ilustra una ruta general para la formación de análogos de fórmula I en la que A<1>y A<3>son CH, A<2>es NH, Y es un enlace sencillo carbono-carbono, R<14>es oxígeno, R<13>es H, cada uno de R<15>, R’<15>y R<16>es H y A<4>, A<5>, A6, A<7>, A8, A<9>, A<10>, A<11>y A<12>tienen el significado anteriormente descrito.

El producto intermedio 6 puede obtenerse mediante una reacción de Wittig del elemento estructural I, usando por ejemplo CH<3>CH<2>OCOCH<2>P(Ph)<3>Br y tBuOK en Et<2>O, seguido por una reacción, por ejemplo, con bromuro de vinilmagnesio y PhSCu(I) en THF. La introducción posterior del grupo nitro en la conformación E puede lograrse usando, por ejemplo, TEMPO y tBuONO en 1,4-dioxano. El producto intermedio de pirrol 8 se obtuvo mediante una cicloadición [3+2] del producto intermedio 7, usando por ejemplo TOSMIC y tBuOK en THF. La reducción del nitro, seguida por el cierre de anillo para obtener el análogo de fórmula I, se realizó en una única etapa usando, por ejemplo, polvo de cinc en AcOH.

Ejemplos

Todos los elementos estructurales usados están comercialmente disponibles, se conocen o se preparan según métodos conocidos por los expertos en la técnica.

Ejemplos 1-86

1: 4-[3-metoxi-4-(3-metilfenoxi)fenil]-2H,4H,5H,6H, 7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

i) A una disolución de meta-cresol (44 pl) en DMF (4 ml) se le añadieron K<2>CO<3>(175) y 4-fluoro-3-metoxibenzaldehído (65 mg). Se calentó la mezcla de reacción hasta 110°C y se agitó durante la noche. Después de enfriar hasta temperatura ambiente se retiró el disolvente a presión reducida. Se repartió el aceite resultante entre DCM y agua. Se extrajo la fase de agua dos veces más con DCM y se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSO<4>, se filtraron y se concentraron. Después de cromatografía ultrarrápida en fase inversa, usando un gradiente de desde el 10% hasta el 100% de ACN en agua, se obtuvo 3-metoxi-4-(3-metilfenoxi)benzaldehído<( 6 6>mg).

ii) Se disolvió el producto obtenido en la etapa anterior<( 6 6>mg) en 4 ml de MeOH. Se añadieron ácido de Meldrum (39 mg) y 3-aminopirazol (23 mg) y se agitó la reacción<6>horas a 65°C. Se enfrió la reacción hasta temperatura ambiente, se añadió Celite y se evaporó el disolvente. Después de cromatografía en fase inversa, usando carga de sólidos, se obtuvo 4-[3-metoxi-4-(3-metilfenoxi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona (25 mg). EM(ES+) m/z 350,2 (M+H)+.

Tras un procedimiento análogo al descrito para el ejemplo 1, usando materiales de partida apropiados, se prepararon los siguientes compuestos.

2: 4-(2-metoxi-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrilo

3: 4-[3-metoxi-4-(2-nitrofenoxi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

4: 4-{3-metoxi-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

8: 4-[3-metox¡-4-(2-met¡lfenox¡)fen¡l]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona

EM(ES+) m/z 420,2 (M+H)+

13: 4-[3-metoxi-4-(2-metoxifenoxi)feml]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

14: 4-[4-(3-bromofenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

15: 4-[4-(3-ferc-butNfenoxi)-3-metoxifeml]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

17: 4-{3-metoxi-4-[3-(trifluorometoxi)fenoxi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

22: 4-[3-metoxi-4-(2-propilfenoxi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

27: 4-[4-(2-ferc-butN-4-metoxifenoxi)-3-metoxifernl]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

28: 4-[4-(2-ddopropNfenoxi)-3-metoxifernl]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]pindm-6-ona

29: 4-[4-(3-ferc-butN-4-hidroxifenoxi)-3-metoxifernl]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

30: 4-{3-metoxi-4-[3-(propan-2-il)fenoxi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

31: 4-[4-(3-cidopropilfenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

32: 4-[4-(2-ferc-butN-4-etilfenoxi)-3-iTietoxifeml]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

33: 4-[4-(4-bromo-2-ferc-butNfenoxi)-3-irietoxifeml]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

EM(ES+) m/z 450,2 (M+H)+

36: 4-(2-metoxi-4-(6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]pindin-4-N}fenoxi)naftalen-1-carboxNato de metilo

40: 4-{3-metoxi-4-[2-(pentafluoro-A6-sulfanN)fenoxi]feml}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

42: 4-{4-[3-bromo-5-(trifluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡feml}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid¡n-6-ona

44: 4-[4-(3,5-d¡-ferc-but¡lfenox¡)-3-metox¡feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid¡n-6-ona

48: 4-{4-[(2,2-d¡met¡l-2,3-d¡h¡dro-1-benzofuran-7-¡l)ox¡]-3-metox¡fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n- 6-ona

EM(ES+) m/z 482,0 (M+H)+

53: 3-terc-but\\-4-(4-(6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p\razo\o[3,4-b]p\rid\n-4-\\}fenox\)benzomtn\o

57: 4-{3-fluoro-4-[3-metox¡-5-(trifluoromet¡l)fenox¡]feml}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid¡n-6-ona

61: ác¡do 3-terc-but¡l-4-(2-metox¡-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]pmd¡n-4-¡l}fenox¡)benzo¡co

65: 4-{3-metox¡-4-[2-met¡l-4-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona

¡) Se d¡solv¡ó el ejemplo 32 (32 mg) en 1,5 ml de 1,4-d¡oxano y se añad¡ó DDQ (17 mg). Se calentó la reacc¡ón hasta 50°C y se ag¡tó durante 1 hora. Se evaporó el d¡solvente y se añad¡ó NaHCO<3>ac. sat. para dar una suspens¡ón. Se somet¡ó la suspens¡ón a son¡cac¡ón y se separaron los sól¡dos por f¡ltrac¡ón y se lavaron con agua tres veces. Se secaron los sól¡dos en el horno de vacío para proporc¡onar 4-[4-(2-ferc-but¡l-4-et¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona (23 mg). EM(ES+) m/z 418,2 (M+H)+.

Tras un proced¡m¡ento análogo al descr¡to para el ejemplo 67, usando mater¡ales de part¡da aprop¡ados, se prepararon los s¡gu¡entes compuestos.

68: 4-[4-(2-terc-but¡l-4-metox¡fenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona

EM(ES+) m/z 420,2 (M+H)+

69: 4-[4-(2-ferc-but¡l-4-met¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona

¡) Tras un proced¡m¡ento análogo al descr¡to en el ejemplo 1, etapa ¡), usando mater¡ales de part¡da aprop¡ados, se obtuvo 4-[3,5-b¡s(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡benzaldehído.

¡¡) Se d¡solv¡eron el producto obten¡do en la etapa anter¡or (211 mg), ác¡do de Meldrum (85 mg) y 3-am¡nop¡razol (48 mg) en MeOH (5 ml). Se ag¡tó la mezcla de reacc¡ón durante 3,5 horas a temperatura amb¡ente y se evaporó el disolvente mediante un flujo de nitrógeno. Esto dio como resultado ácido 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-carboxílico (200 mg).

iv) Se añadió DIAD (23 |il) gota a gota bajo una atmósfera de nitrógeno a una disolución de PPh<3>(31,4 mg), MeOH (40 |il) y el producto obtenido en la etapa anterior (50 mg) en THF anhidro (1 ml). Se agitó la reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se añadió agua y se extrajo el producto con DCM tres veces. Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSO<4>y se concentraron. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, usando un gradiente del 40 al 75% de ACN en agua (que contenía TFA al 0,1%), para obtener 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoxi]-3metoxifenil}-6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-carboxilato de metilo (16,6 mg). EM(ES+) m/z 530,4 (M+H)+.

Tras un procedimiento análogo al descrito para el ejemplo 72, usando materiales de partida apropiados, se preparó el siguiente compuesto.

73: 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-carboxilato de etilo

74: 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-W,W-dimetil-6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-carboxamida

i) Se disolvieron el producto obtenido en el ejemplo 72, etapa ii) (50 mg), DMAP (20 mg) y dimetilamina HCl (12 mg) en DCM (1 ml). Se añadió EDC (30 mg) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió agua y se extrajo el producto con DCM tres veces. Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSO<4>y se concentraron. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, usando un gradiente del 40 al 75% de ACN en agua (que contenía TFA al 0,1%), para obtener 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-W,W-dimetil-6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-carboxamida (9,3 mg). EM(ES+) m/z 543,4 (M+H)+.

Tras un procedimiento análogo al descrito para el ejemplo 74, usando materiales de partida apropiados, se preparó el siguiente compuesto.

75: 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-W,W-dietil-6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-carboxamida

i) Tras un proced¡m¡ento análogo al descrito en el ejemplo 1, etapa ¡), usando mater¡ales de part¡da aprop¡ados, se obtuvo 4-[3,5-b¡s(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡benzaldehído.

¡¡) Se añad¡ó bromuro de etox¡carbon¡lmet¡l-tr¡fen¡lfosfon¡o (3,54 g) a una suspens¡ón detBuOK (1,03 g) en Et<2>O (30 ml). Se ag¡tó la mezcla resultante a 50°C durante 30 m¡nutos y después se enfr¡ó hasta temperatura amb¡ente. Se añad¡ó el compuesto obten¡do en la etapa anter¡or (1,50 g) d¡suelto en Et<2>O (10 ml) a la mezcla de reacc¡ón. Se ag¡tó la reacc¡ón durante la noche, después se ext¡ngu¡ó con agua y se extrajo la fase acuosa con Et<2>O tres veces. Se secaron las fases orgán¡cas comb¡nadas sobre MgSO<4>y se concentraron a pres¡ón reduc¡da. Se pur¡f¡có el producto en bruto sobre columna de síl¡ce, usando un grad¡ente del 0 al 20% de EtOAc en heptano, para obtener (E)-3-{4-[3,5-b¡s(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}prop-2-enoato de et¡lo (1,42 g).

¡¡¡) Se añad¡ó bromuro de v¡n¡lmagnes¡o (1,0 M en THF, 9,67 ml) gota a gota a una suspens¡ón de fen¡lsulfan¡l-cobre (558 mg) en THF anh¡dro (15 ml) a -40°C bajo una atmósfera de n¡trógeno. Se dejó que la reacc¡ón alcanzara -25°C y se enfr¡ó de nuevo hasta -40°C. Se añad¡ó el compuesto obten¡do en la etapa anter¡or(1,4 g) en THF anh¡dro (15 ml) gota a gota y se ag¡tó la reacc¡ón durante 30 m¡nutos a -40°C. Se ext¡ngu¡ó la reacc¡ón vert¡endo la mezcla en NH<4>O ac. sat. Se separaron los sól¡dos obten¡dos por f¡ltrac¡ón y se extrajo el f¡ltrado con EtOAc dos veces. Se secaron las fases orgán¡cas comb¡nadas sobre MgSO<4>y se concentraron a pres¡ón reduc¡da. Se purificó el producto en bruto sobre columna de síl¡ce, usando un grad¡ente del 0 al 30% de EtOAc en heptano, para obtener 3-{4-[3,5-b¡s(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}pent-4-enoato de et¡lo (279 mg).

¡v) Se d¡solv¡eron el producto obten¡do en la etapa anter¡or (275 mg), TEMPO (38 mg) y tBuONO (157 |il) en 1,4-d¡oxano (5 ml), se calentaron hasta 80°C y se ag¡taron durante la noche. Se añad¡ó agua a la reacc¡ón y se extrajo la fase acuosa con DCM tres veces. Se secaron las fases orgán¡cas comb¡nadas sobre MgSO<4>y se concentraron a pres¡ón reduc¡da. Se pur¡f¡có el producto en bruto sobre columna de síl¡ce, usando un grad¡ente del 0 al 30% de EtOAc en heptano, para obtener (E)-3-{4-[3,5-b¡s(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-5-n¡tropent-4-enoato de et¡lo (95 mg).

v) Se añad¡ó TOSMIC (37 mg) a una d¡soluc¡ón de tBuOK (42 mg) en THF anh¡dro (1 ml) a -78°C y se ag¡tó durante 10 m¡nutos. Se d¡solv¡ó el compuesto obten¡do a part¡r de la etapa anter¡or (95 mg) en THF anh¡dro (4 ml) y se añad¡ó gota a gota a la mezcla de reacc¡ón. Después de 10 m¡nutos de ag¡tac¡ón a -78°C, se vert¡ó la reacc¡ón en NH<4>Cl ac. sat. y se extrajo la fase acuosa con EtOAc tres veces. Se secaron las fases orgán¡cas comb¡nadas sobre MgSO<4>y se concentraron a pres¡ón reduc¡da. Se pur¡f¡có el producto en bruto sobre columna de síl¡ce, usando un grad¡ente del 0 al 70% de EtOAc en heptano, para obtener 3-{4-[3,5-b¡s(trifluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-3-(4-n¡tro-7H-p¡rrol-3-¡l)propanoato de et¡lo (48 mg).

v¡) A una d¡soluc¡ón del compuesto obten¡do en la etapa anter¡or (45 mg) en AcOH (1,5 ml) se le añad¡ó polvo de c¡nc (54 mg). Se calentó la reacc¡ón hasta 50°C y se ag¡tó durante 30 m¡nutos. Se f¡ltró la mezcla de reacc¡ón sobre Cel¡te y se aclaró la torta de f¡ltro con EtOAc. Se lavó el f¡ltrado con NaHCO<3>ac. sat. y agua y después se secó sobre MgSO<4>y se concentraron a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, usando un gradiente del 40 al 90% de ACN en agua, para obtener 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-1H,2H,3H,4H,6H-pirrolo[3,4-b]piridin-2-ona (8,7 mg). EM(ES+) m/z 471,4 (M+H)+.

77: 4-{4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

i) Se suspendieron 4-fluoro-3-metoxi-benzonitrilo (250 mg), 3-hidroxi-5-(trifluorometil)benzaldehído (0,23 ml) y K<2>CO<3>(457 mg) en DMF (10 ml). Se calentó la reacción hasta 90°C y se agitó durante la noche. Se enfrió la reacción hasta temperatura ambiente y se repartió entre agua y EtOAc. Se extrajo la fase de agua dos veces más con EtOAc y se lavaron las fases orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre MgSO<4>y se concentraron. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, usando un gradiente del 10 al 100% de ACN en agua, para obtener 4-[3-formil-5(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxi-benzonitrilo (46 mg).

ii) Se disolvió el producto obtenido en la etapa anterior (96 mg) en DCM<( 6>ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se añadió DAST (0,14 ml) gota a gota y se agitó la reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se colocó la reacción en un baño de agua y se añadió NaHCO<3>ac. sat. (15 ml). Se agitó vigorosamente la mezcla durante 10 min. Se extrajo la fase acuosa con DCM dos veces. Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSO<4>y se concentraron para proporcionar 4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxi-benzonitrilo (102 mg).

iii) Se disolvió el compuesto obtenido en la etapa anterior (101 mg) en tolueno (4,5 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno y se enfrió hasta 0°. Se añadió una disolución de DiBAl-H 1,2 M en tolueno (0,37 ml) gota a gota y se agitó la reacción durante 1,5 horas. Se añadió HCl acuoso<6>N (1,5 ml) y se agitó la mezcla hasta que se detuvo el burbujeo. Se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente y se repartió entre EtOAc y NaHCO<3>ac. semi-sat. Se extrajo la fase acuosa dos veces más con EtOAc y se lavaron las fases orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre MgSO<4>y se concentraron. Se purificó el producto en bruto sobre columna de sílice, usando un gradiente del<0>al 25% de EtOAc en heptano, para obtener 4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxi-benzaldehído (71 mg).

iv) De manera análoga al procedimiento descrito en el ejemplo 1, etapa ii), se convirtió el compuesto obtenido en la etapa anterior en 4-{4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-<6>-ona (28 mg). EM(ES+) m/z 454,4 (M+H)+.

78: 4-{4-[2-(difluorometil)-4-(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

i) Se suspendieron 4-hidroxi-3-metoxibenzonitrilo (250 mg), 2-fluoro-5-(trifluorometil)benzaldehído (322 mg) y K<2>CO<3>(463 mg) en DMF<( 8>ml) y se agitaron a 90°C durante 2,5 horas. Se enfrió la reacción hasta temperatura ambiente y se repartió entre agua y EtOAc. Se extrajo la fase de agua dos veces más con EtOAc y se lavaron las fases orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre MgSO<4>y se concentraron. Se purificó el producto en bruto sobre columna de sílice, usando un gradiente del 0 al 30% de EtOAc en heptano, para obtener 4-[2-formil-4-(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxi-benzonitrilo (402 mg).

ii) De manera análoga a los procedimientos descritos en el ejemplo 77, etapa ii) a etapa iv), se convirtió el compuesto obtenido en la etapa anterior en 4-{4-[2-(difluorometil)-4-(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona (78 mg). EM(<e>S+) m/z 454,4 (M+H)+.

Los enantiómeros individuales del ejemplo 43 pueden obtenerse mediante separación quiral. Se disolvieron 2 g del ejemplo 43 racémico en EtOH (50 mg/ml). Se inyectó la disolución numerosas veces en la SFC quiral usando unacolumna IG preparativa (disponible de Daicel, fase estacionaria quiral de tris(3-cloro-5-metilfenilcarbamato) de amilosa) y un gradiente isocrático del 30% de EtOH y el 70% de CO<2>líquido, para obtener: 0,9 g del enantiómero (+) (ejemplo 79) con un exceso enantiomérico del 99,6%; y 0,9 g del enantiómero (-) (ejemplo 80) con un exceso enantiomérico del 99,0%. La pureza óptica de los enantiómeros se determinó mediante HPLC quiral.

No se conoce la configuración absoluta de los compuestos de los ejemplos 79 a 86. Se disolvieron estos compuestos en DMSO (10 mg/ml) y se caracterizaron mediante su rotación óptica, usando un polarímetro Jasco P-2000 que tenía la siguiente configuración: fuente de luz de tungsteno-halógeno (WI); polarizador de prisma de Glan-Taylor; celda de Faraday de cuarzo; y una longitud de onda de monitorización de 589 nm.

79: (+)-4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

80: (-)-4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

Tras un procedimiento análogo al descrito para los ejemplos 79 y 80, usando materiales de partida apropiados y método de HPLC, se prepararon los siguientes compuestos.

81: (+)-4-[4-(3,5-dimetilfenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

82: (-)-4-[4-(3,5-dimetilfenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

83: (+)-4-{3-metoxi-4-[3-metil-5-(trifluorometil)fenoxi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

84: (-)-4-{3-metoxi-4-[3-metil-5-(trifluorometil)fenoxi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona

85: (+)-4-{4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona 86: (-)-4-{4-[3-(difluorometil)-5-(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona Ejemplo 87

Ensayo AlphaScreen de ERR<a>

Este ensayo se basó en el conocimiento de que los receptores nucleares interaccionan con cofactores de una manera dependiente del ligando. Los sitios de interacción se han mapeado a motivos de LXXLL que están presentes en las secuencias de coactivador. Secuencias peptídicas cortas que contienen el motivo de LXXLL imitan el comportamiento de coactivadores de longitud completa.

El ensayo AlphaScreen de ERR<a>descrito en este caso se basa en la interacción del péptido coactivador con dominio de unión a ligando de ERR<a>expresado por bacterias purificado (ERR<a>-LBD); tras la unión de ligando, la proteína ERR<a>puede experimentar un cambio conformacional que da como resultado una pérdida de unión de coactivador. Se sometieron a prueba compuestos de la presente invención para determinar su capacidad para perturbar la unión de proteína ERR<a>-LBD a péptido coactivador usando tecnología AlphaScreen<®>(Perkin Elmer). Se expresó proteína ERR<a>-LBD enE. colicomo una fusión con modificador de tipo ubiquitina pequeño (SUMO) con 6xHis. Se purificó la proteína 6His-SUMO-ERR<a>-LBD expresada por bacterias usando cromatografía de afinidad. Todos los experimentos se realizaron a temperatura ambiente en placas sin unión blancas de 384 pocillos (Greiner) usando Tris-HCl 50 mM pH 7,5, NaCl 100 mM, o Pluronic F-127 al 0,1%, BSA al 0,05% y TCEP 5 mM como tampón. La concentración final de DMSO era del 1% en el ensayo. Se sometieron los compuestos a ensayo por triplicado y se incubaron con proteína ERR<a>-LBD 0,81 nM y perlas donadoras de estreptavidina 10 |<i>g/ml y perlas aceptoras de quelato de Ni 10 |<i>g/ml durante 1 hora a temperatura ambiente; seguido por una incubación de 2 horas con péptido biotina-PGC1<a>-3 (QRRPCSELLKYLTTNDDPP) 15 nM correspondiente a los aminoácidos 202 a 220.

Se midió la señal de AlphaScreen usando un lector de placas Envision Xcite (Perkin Elmer). Se normalizaron los datos y se realizó un análisis de ajuste de la curva en GraphPad Prism 7 usando un ajuste de respuesta a la dosis de cuatro parámetros.

Se encontró que todos los compuestos de fórmula I mostrados a modo de ejemplo (ejemplos 1 - 86) tenían valores de pCl<50>medios superiores o iguales a 5.

Se encontró que los ejemplos 1, 2, 4, 5, 6, 7, 14, 17, 20, 21, 22, 24, 25, 26, 49, 59, 60, 65, 66, 71, 72, 79, 81, 83 y 85 tenían valores de pCl<50>medios superiores o iguales a 6 pero inferiores a 7.

Se encontró que los ejemplos 10, 12, 15, 23, 28, 30, 31, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 61, 64, 76, 77, 78 y 82 tenían valores de pCl<50>medios superiores o iguales a 7 pero inferiores a 8.

Se encontró que los ejemplos 27, 29, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 63, 67, 68, 69, 70, 80, 84 y 86 tenían valores de PCI<50>medios superiores o iguales a 8.

Ejemplo 88

Ensayo de gen indicador de ERRa de longitud completa

Se sometieron a prueba inhibidores de los ejemplos 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 y 86 para determinar su capacidad para inhibir la actividad de ERRa en ensayo de gen indicador de ERRa de longitud completa.

Se estableció un método para examinar cuantitativamente la potencia de compuestos con actividad agonista inversa sobre el receptor nuclear ERRa de la especie humana. El ensayo permite un examine intracelular de agonistas inversos de ERRa en células SK-BR-3 usando un constructo de sobreexpresión que codifica para ERRa de longitud completa y un constructo indicador que contiene elemento de respuesta (RE) de ERRa y un gen de luciferasa para la lectura. La actividad se expresa en valores de logCl<50>y puede usarse para determinar SAR de familias de compuestos o para deseleccionar compuestos.

En este ensayo, se obtienen células indicadoras mediante cotransfección transitoria de dos constructos en células SK-BR-3 usando técnicas de transfección convencionales. El primer constructo contiene un elemento de respuesta del receptor nuclear ERRa (plásmido pLP2175, constructo indicador ERRa-RE/luc2P, variante clonada de ERRa_v2_synthRE, Switchgear Genomics, número de catálogo S900089). Esta secuencia impulsa la transcripción del gen indicador de luciferasa en respuesta a la unión de una proteína ERRa codificada por el segundo constructo (plásmido pLP2124: constructo de expresión de ERRa de longitud completa que usa pcDNA3.1/Hygro(+) como contexto, Invitrogen, número de catálogo V87020). La ERRa de longitud completa sobreexpresada es constitutivamente activa, por tanto la expresión de luciferasa se reduce mediante agonistas inversos del receptor nuclear ERRa.

El día después de la transfección, se sembraron células en placas de 96 pocillos, se añadió el compuesto de prueba y se incubaron las placas durante la noche. Posteriormente, se cuantificó la actividad de luciferasa de luciérnaga usando reactivo de detección de luciferasa y lectura de luminiscencia.

Descripción de ensayo detallada

Se realiza la transfección en células SK-BR-3 previamente sembradas en un frasco T175. Una vez transfectadas, el frasco T175 es suficiente para sembrar de 3 a 4 placas MW96 al día siguiente, dependiendo de la confluencia de las células transfectadas.

Se usan dos medios diferentes en este protocolo para el tratamiento celular: 1) medio de cultivo, es decir medio de McCoy 5a con rojo de fenol (BioWhittaker, número de proveedor 12-688F), FBS al 10% y 1x Penstrep.; y 2) medio de ensayo, es decir medio de McCoy 5a libre de rojo de fenol (HyClone, código de producto SH30270.01) con FBS tratada con carbón al 2% y 1x Penstrep. Se preparan diluciones de compuestos en medio de ensayo.

Se siembran células al menos 2 días antes para permitir que las células se adhieran bien al frasco antes de la transfección. Las células deben presentar una confluencia del 50-80% el día de la transfección.

Se transfectaron células SKBR3 con el constructo indicador transcripcional pLP2175 y el constructo de expresión de ERRa pLP2124 (tal como se describió anteriormente).

Se añadieron 68 |il de reactivo de transfección Lipofectamine LTX (Invitrogen, número de catálogo 15338-100) gota a gota a 8,9 ml de medio de suero reducido Opti-MEM I (Gibco, número de catálogo 51985-026) y se incubaron a temperatura ambiente durante de 5 a 20 minutos. Se añadieron 8,9 ml de esta mezcla de reactivos a 22 |ig de pLP2175 22 |ig de pLP2124 (razón de 1:1 y volumen total de 10 ml) y se incubaron a temperatura ambiente durante 25 minutos.

10 minutos antes de añadir la mezcla de transfección a células SKBR3 en un frasco T175, se renovó el medio de cultivo con 20 ml de medio de cultivo. Posteriormente, se añadieron suavemente los 10 ml de mezcla de ADN-Opti-MEM-Lipofectamine a las células, seguido por incubación durante la noche (16-24 horas) a 37°C y CO<2>al 5%.

Para recoger las células SKBR3 a partir de un frasco T175, en primer lugar se retiró el medio. Posteriormente, se lavaron las células con solución salina tamponada con fosfato (PBS) (Lonza), tras lo cual se retiró la PBS. Para disociar las células, se añadieron 2 ml de TrypLE Express (Invitrogen) al frasco, seguido por incubación a 37°C durante 5 minutos. Se dieron golpes al frasco hasta que se desprendieron las células del fondo. Se recogieron las células en 8 ml de medio de cultivo (medio de McCoy 5a, FBS al 10%, penstrep), para lograr una suspensión celular individual. Tras el recuento celular, se centrifugaron las células durante 5 minutos a 300 g. A continuación, se resuspendieron los sedimentos celulares hasta 25000 células/80 |il de medio de ensayo (medio de McCoy 5a libre de rojo de fenol, FBS tratada con carbón al 2%, penstrep).

Para el examen de compuestos, se recogieron las células (tal como se describió anteriormente). Se sembraron 80 |il de suspensión celular (25.000 células) por pocillo en una placa de examen de 96 pocillos blanca, de fondo plano, tratada de cultivo tisular (Greiner).

Se diluyeron los compuestos de prueba, empezando a partir de una disolución madre de dimetilsulfóxido (DMSO) 10 mM, en 3 etapas de dilución. La primera etapa de dilución fue una dilución en serie de 12 puntos de 4 veces en DMSO. Se diluyeron adicionalmente estas diluciones 10 veces en medio de ensayo libre de rojo de fenol que contenía FBS tratada con carbón al 2% y penstrep. La última etapa fue otra dilución de 20 veces en medio de ensayo para obtener una dilución concentrada 5x con una concentración de DMSO del 0,5%. Como última etapa, se diluyeron 5x las diluciones de compuesto en la placa celular.

La serie de dilución de DMSO consistió en 12 concentraciones, con una concentración final en la placa celular que oscilaba entre 10 |iM y 2,4 fM.

Se incubaron las placas durante la noche (16-24 horas) a 37°C y CO<2>al 5%.

Para la lectura de luciferasa, se llevó el reactivo de luciferasa (BriteLite Plus, Perkin Elmer) hasta temperatura ambiente. A cada pocillo de prueba de las placas de examen, se le añadieron 100 |il de reactivo BriteLite Plus diluido 2,5 veces, seguido por incubación a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se midió la señal de luminiscencia de luciferasa usando un lector de microplacas Wallac Victor (Perkin Elmer).

Se calcularon los valores de la mitad de la concentración inhibidora máxima (CI<50>) para los compuestos de prueba a partir de la señal de luciferasa usando el software GraphPad Prism (GraphPad Software).

A partir de los compuestos de fórmula I mostrados a modo de ejemplo, se encontró que los ejemplos 10, 29, 32, 33, 34, 35, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 63, 67, 68, 69, 70, 84 y 86 tenían valores de pCl<50>medios superiores o iguales a 6,5. Ejemplo 89

Modelo de ratón singénico de melanoma B16F10

Se sometió a prueba el inhibidor del ejemplo 80 para determinar su capacidad para inhibir el crecimiento tumoral en un modelo de ratón singénico de melanoma B16F10.

Línea celular y modelo tumoral: modelo de aloinjerto derivado de línea celular de melanoma B16F10 en ratones C57BL/6.

Se obtuvieron células de melanoma B16F10 de ratón a partir de la Colección americana de cultivos tipo (ATCC), EE.UU. Se hicieron crecer las células en DMEM (Invitrogen, n.° de catálogo 31600-034) complementado con FBS al 10% (Invitrogen, n.° de catálogo 10438-026) y penicilina-estreptomicina al 1% (Thermo Fisher Scientific, n.° de catálogo 15140-122). Para establecer aloinjertos, se recogieron las células mediante tripsinización cuando alcanzaron una confluencia de aproximadamente el 70 al 80% y se suspendieron 0,1 millones de células B16F10 en 50 |il de medio libre de suero y se mezclaron a una razón de 1:1 con Matrigel antes de implantarse por vía subcutánea en el costado derecho dorsal de ratones usando una jeringa de DB de 1 ml acoplada a una aguja de calibre 24.

Se midieron injertos de tumor B16F10 después de 5 días de inoculación celular una vez que pasaron a ser palpables. Cuando el volumen tumoral promedio alcanzó aproximadamente 58 mm3, se administraron dosis a los animales tras su aleatorización a diferentes grupos de tratamiento manteniendo el volumen tumoral y el número de animales de tal manera que el volumen tumoral promedio de cada grupo era el mismo a lo largo de los grupos. La administración de dosis se realizó basándose en el peso en kilogramos, por la boca (por vía oral, v.o.) una vez al día(quaque die,q.d). Se midieron las dimensiones tumorales (longitud (I) y anchura (b)) mediante un calibre el día de aleatorización de los animales basándose en el volumen tumoral (día 1) y tres veces por semana después de eso hasta la terminación del estudio. Se calcularon los volúmenes tumorales usando la fórmula b2 * l * 0,52, donde l = longitud, b = anchura (Dusan Djokovicet al.,BMC Cancer, 2010, 10:641). Se calculó la inhibición del crecimiento tumoral tras la aleatorización del volumen tumoral en un día dado con respecto a la del día 1.

Se inició la administración de elementos de prueba cuando el volumen tumoral alcanzó un promedio de 58 mm3. La administración de elementos de prueba se llevó a cabo hasta el día 14 y la medición del volumen tumoral se llevó a cabo hasta el día 13 para calcular el porcentaje de inhibición del crecimiento tumoral (TGI). Los resultados del estudio se indican en la tabla 1 a continuación en el presente documento.

Tabla 1

A la vista de la descripción y los ejemplos anteriores, resultará evidente para los expertos en la técnica que pueden realizarse modificaciones equivalentes a los mismos sin alejarse del alcance de las reivindicaciones.

Claims (15)

1. REIVINDICACIONES Un compuesto según la fórmula I

   (Fórmula I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la que Y es un enlace sencillo carbono-carbono o un enlace doble carbono-carbono, con la condición de que, cuando Y es un enlace doble carbono-carbono, R'<15>y R<16>no están presentes; una de las tres posiciones A<1>-A<3>es o bien S o bien NRa, las dos posiciones restantes A<1>-A<3>son N o CR<1>, CR<2>, CR<3>, respectivamente; Ra es H o metilo; R<1>-R<3>son independientemente H, metilo, amino o halógeno; A<4>-A<7>son CR<4>, CR<5>, CRa y CR<7>, respectivamente; A<8>-A<12>son N o CR8, CRg, CR<10>, CR<11>y CR<12>, respectivamente, con la condición de que no más de dos de las cinco posiciones A<8>-A<12>pueden ser simultáneamente N; R<4>- R<7>son independientemente H, halógeno, alcoxilo C(1-3), alquilo C(1-3); R<8>-R<12>son independientemente H, halógeno, alcoxilo C(1-3), alquilo C(1-4), ciano, nitro, -C(=O)OR<17>, hidroxilo, cicloalquilo C(3-6), bencilo, fenilo, -SF<5>, biciclo[1.1.1]pentano; o Rg y o bien R8 o bien R<10>están condensados y forman un anillo de cinco a siete miembros aromático o no aromático que contiene de dos a siete átomos de carbono y de cero a tres heteroátomos; estando todos los átomos de carbono opcionalmente sustituidos con uno o más metilo, halógeno o hidroxilo; R<13>es H o metilo; R<14>es NH, O o S; R'<15>es H, halógeno, alquilo C(1-4), -C(=O)OR17 o -C(=O)OR^R<17>; R<15>es H, halógeno o alquilo C(1-4); R<16>es H; y R<17>es H, metilo o etilo.
2. 2. El compuesto según la reivindicación 1, en el que Ai es N, A<2>es NRa y A<3>es CR<3>, en particular en el que Ai es N, A<2>es NH y A<3>es CH.
3. 3. El compuesto según la reivindicación 1 o 2, en el que R<5>es alcoxilo C(1-3) y R<4>, R<6>y R<7>son H, en particular en el que R<5>es metoxilo y R<4>, R<6>y R<7>son H.
4. 4. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que A<8>-A<12>son CR8, CRg, CR<10>, CR<11>y CR<12>respectivamente, en particular en el que R<8>-R<12>son independientemente H, alquilo C(1-4), halógeno, hidroxilo o alcoxilo C(1-3), más en particular en el que Rg y R<11>son alquilo C(1-4) y R8, R<10>y R<12>son H, más en particular en el que Rg y R<11>son CF<3>y R<8>, R<10>y R<12>son H.
5. 5. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que R<13>es H; y/o en el que R<14>es O; y/o en el que Y es un enlace sencillo carbono-carbono. <6>.
6. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R<15>y R<'15>son H.
7. 7. El compuesto según la reivindicación 1, que se selecciona del grupo que consiste en: 4-[3-metoxi-4-(3-metilfenoxi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-(2-metoxi-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoxi)-3-(trifluorometil)benzonitrilo; 4-[3-metoxi-4-(2-nitrofenoxi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-{3-metoxi-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-{3-metoxi-4-[4-(trifluorometil)fenoxi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-{3-metoxi-4-[3-(trifluorometil)fenoxi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[4-(2-bromofenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[3-metoxi-4-(2-metilfenoxi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 2- (2-metoxi-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoxi)benzonitrilo; 4-[4-(2-ferc-butilfenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[4-(2-clorofenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-{3-metoxi-4-[2-(trifluorometoxi)fenoxi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[3-metoxi-4-(2-metoxifenoxi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[4-(3-bromofenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[4-(3-ferc-butilfenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[4-(3-clorofenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-{3-metoxi-4-[3-(trifluorometoxi)fenoxi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[3-metoxi-4-(3-metoxifenoxi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 3- (2-metoxi-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il}fenoxi)benzoato de metilo; 4- [4-(2-etilfenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[4-(3-etilfenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[3-metoxi-4-(2-propilfenoxi)fenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-{3-metoxi-4-[2-(propan-2-il)fenoxi]fenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[3-metox¡-4-(2-femlfenox¡)feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡ndm-6-ona; 4-[4-(2-cidopentilfenoxi)-3-metoxifenil]-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; 4-[4-(2-benc¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(2-terc-but¡l-4-metox¡fenox¡)-3-metox¡feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid¡n-6-ona; 4-[4-(2-c¡cloprop¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(3-terc-but¡l-4-h¡drox¡fenox¡)-3-metox¡feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid¡n-6-ona; 4-{3-metox¡-4-[3-(propan-2-¡l)fenox¡]fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(3-c¡cloprop¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(2-terc-but¡l-4-et¡lfenox¡)-3-metox¡feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡ndm-6-ona; 4-[4-(4-bromo-2-terc-but¡lfenox¡)-3-metox¡feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid¡n-6-ona; 4-[4-(2-terc-but¡l-4-met¡lfenox¡)-3-metox¡feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid¡n-6-ona; 3- terc-but¡l-4-(2-metox¡-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]pmd¡n-4-¡l}fenox¡)benzoato de met¡lo; 4- (2-metox¡-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-4-¡l}fenox¡)naftalen-1-carbox¡lato de met¡lo; 4-[4-(2,4-d¡-terc-but¡lfenox¡)-3-metox¡feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-{3-metox¡-4-[3-metox¡-5-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 3- terc-but¡l-4-(2-metox¡-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡ndm-4-¡l}fenox¡)benzomtrilo; 4- {3-metox¡-4-[2-(pentafluoro-A6-sulfan¡l)fenox¡]feml}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid¡n-6-ona; 3- (2-metox¡-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-4-¡l}fenox¡)-5-(tr¡fluoromet¡l)benzoato de met¡lo; 4- {4-[3-bromo-5-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-{4-[3,5-b¡s(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(3,5-d¡-terc-but¡lfenox¡)-3-metox¡feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(2-{b¡c¡clo[1.1.1]pentan-1-¡l}fenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-(2-metox¡-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-4-¡l}fenox¡)naftalen-1-carbon¡tr¡lo; 4-[4-(2,3-d¡h¡dro-7H-¡nden-4-¡lox¡)-3-metox¡feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡ndm-6-ona; 4-{4-[(2,2-d¡met¡l-2,3-d¡h¡dro-1-benzofuran-7-¡l)ox¡]-3-metox¡fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(2,3-d¡h¡dro-7H-¡nden-5-¡lox¡)-3-metox¡feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡ndm-6-ona; 8-(2-metox¡-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-4-¡l}fenox¡)qu¡nol¡n-5-carbox¡lato de met¡lo; 4-(3-metox¡-4-fenox¡fen¡l)-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-{3-bromo-4-[3-metox¡-5-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 3- terc-but¡l-4-(4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid ¡n-4-¡l}fenox¡)benzon ¡tr¡lo; 4- {4-[3-metox¡-5-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 3- terc-but¡l-4-(2-met ¡l-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p ¡razolo[3,4-b]p ¡r¡d ¡n-4- ¡ l}fenox ¡)benzon ¡tr¡ lo; 4- {4-[3-metox ¡ -5-(tr¡ fluoromet ¡l)fenox ¡]-3-met ¡lfen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p ¡r¡d ¡n-6-ona; 4-{3-fluoro-4-[3-metox¡-5-(trifluoromet¡l)fenox¡]feml}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid¡n-6-ona; 4-{4-[2-(pentafluoro-A6-sulfan¡l)fenox¡]-3-(trifluorometox¡)feml}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid¡n-6-ona; 4-{4-[2-(pentafluoro-A6-sulfan¡l)fenox¡]feml}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡ndm-6-ona; 4-[3-(trifluorometox¡)-4-[2-(trifluoromet¡l)fenox¡]feml]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡rid¡n-6-ona; ác¡do 3-terc-but¡l-4-(2-metox¡-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-4-¡l}fenox¡)benzo¡co; ác¡do 3-(2-metox¡-4-{6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-4-¡l}fenox¡)-5-(tr¡fluoromet¡l)benzo¡co; 4-{3-metox¡-4-[3-met¡l-5-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(3,5-d¡met¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-{3-metox¡-4-[2-met¡l-4-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(2,4-d¡met¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(2-terc-but¡l-4-et¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(2-terc-but¡l-4-metox¡fenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(2-terc-but¡l-4-met¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-[4-(4-bromo-2-terc-but¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-(2-metox¡-4-{6-oxo-2H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-4-¡l}fenox¡)-3-(tr¡fluoromet¡l)benzon¡tr¡lo; 4-{4-[3,5-b¡s(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-5-carbox¡lato de met¡lo; 4-{4-[3,5-b¡s(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-5-carbox¡lato de et¡lo; 4-{4-[3,5-b¡s(trifluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡feml}-W,W-d¡met¡l-6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡nd¡n-5-carboxam¡da; 4-{4-[3,5-b¡s(trifluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡feml}-W,W-d¡et¡l-6-oxo-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡nd¡n-5-carboxam¡da; 4-{4-[3,5-b¡s(trifluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡feml}-7H,2H,3H,4H,6H-p¡rrolo[3,4-b]p¡rid¡n-2-ona; 4-{4-[3-(d¡fluoromet¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; 4-{4-[2-(d¡fluoromet¡l)-4-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; (+)-4-{4-[3,5-b¡s(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; (-)-4-{4-[3,5-b¡s(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; (+)-4-[4-(3,5-d¡met¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; (-)-4-[4-(3,5-d¡met¡lfenox¡)-3-metox¡fen¡l]-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; (+)-4-{3-metox¡-4-[3-met¡l-5-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; (-)-4-{3-metox¡-4-[3-met¡l-5-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; (+)-4-{4-[3-(d¡fluoromet¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona; y (-)-4-{4-[3-(d¡fluoromet¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)fenox¡]-3-metox¡fen¡l}-2H,4H,5H,6H,7H-p¡razolo[3,4-b]p¡r¡d¡n-6-ona.
8. 8. El compuesto según la reivindicación 1, que es (+)-4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona; o (-)-4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenoxi]-3-metoxifenil}-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ona.
9. 9. Medicamento caracterizado porque comprende un compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
10. 10. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en terapia.
11. 11. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de cáncer mediado por ERRa.
12. 12. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de al menos un estado seleccionado de: cáncer de pulmón; melanoma; cáncer endometrial; y leucemia mieloide aguda.
13. 13. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de al menos un estado seleccionado de: cáncer de mama; cáncer de vejiga; cáncer de próstata; cáncer pancreático; cáncer colorrectal; y cáncer de ovarios.
14. 14. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de diabetes mellitus tipo II.
15. 15. Composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, en particular composición farmacéutica que comprende además al menos un agente terapéuticamente activo adicional.