ES2929667T3 - Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicación vírica de dengue - Google Patents
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Abstract
La presente invención se refiere a derivados de indolina sustituidos, métodos para prevenir o tratar infecciones virales del dengue usando dichos compuestos y también se refiere a dichos compuestos para uso como medicamento, más preferiblemente para uso como medicamento para tratar o prevenir infecciones virales del dengue. La presente invención además se refiere a composiciones farmacéuticas o preparaciones combinadas de los compuestos, a las composiciones o preparaciones para usar como medicina, más preferiblemente para la prevención o tratamiento de infecciones virales del dengue. La invención también se refiere a procesos para la preparación de los compuestos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
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DESCRIPCIÓN
Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicación vírica de dengue
La presente invención se refiere a derivados de indolina sustituidos y también se refiere a dichos compuestos para su uso como medicamento, más preferentemente, para su uso como medicamento para tratar o prevenir infecciones virales por dengue. La presente invención se refiere además a composiciones farmacéuticas o preparados combinados de los compuestos, a las composiciones o preparados para su uso como un medicamento, más preferentemente para la prevención o el tratamiento de infecciones virales por dengue. En el presente documento también se divulgan procesos para la preparación de los compuestos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Los flavivirus, los cuales son transmitidos por mosquitos o garrapatas, provocan infecciones potencialmente letales para el hombre, tales como la encefalitis y la fiebre hemorrágica. Se conocen cuatro serotipos distintos, pero estrechamente relacionados, del flavivirus dengue, denominados DENV-1, -2, -3 y -4. El dengue es endémico en la mayoría de las regiones tropicales y subtropicales en todo el mundo, predominantemente en áreas urbanas y semiurbanas. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), 2500 millones de personas, de las cuales mil millones son niños, corren el riesgo de sufrir una infección por VDEN (OMS, 2002). Se estima que en todo el mundo se producen cada año de 50 a 100 millones de casos de fiebre por dengue [FD], medio millón de casos de enfermedad por dengue grave (es decir, fiebre hemorrágica por dengue [FHD] y síndrome de choque por dengue [SCD]) y más de 20,000 muertes. La FHD se ha convertido en una de las principales causas de hospitalización y fallecimiento entre los niños en regiones endémicas. Por todo ello, el dengue representa la causa más común de enfermedad arbovírica. Debido a grandes brotes recientes en países situados en América Latina, sudeste asiático y Pacífico Occidental que incluye Brasil, Puerto Rico, Venezuela, Camboya, Indonesia, Vietnam, Tailandia), el número de casos de dengue ha aumentado drásticamente en los últimos años. No es solo el hecho de que el número de casos de dengue aumente a medida que la enfermedad se propaga a nuevas áreas, sino que los brotes tienden a ser más graves.
Después de la infección con otro serotipo, los anticuerpos heterólogos preexistentes forman complejos con el serotipo de virus del dengue que provoca la nueva infección pero no neutralizan el patógeno. En su lugar, se cree que se facilita la entrada del virus en las células, lo cual da como resultado una replicación incontrolada del virus y títulos virales máximos mayores. Tanto en infecciones primarias como secundarias, unos títulos virales mayores están asociados con una enfermedad del dengue más grave. Puesto que los anticuerpos maternos pueden transmitirse fácilmente a los niños por la lactancia materna, esta podría ser una de las razones por las que los niños se ven más afectados que los adultos por la enfermedad grave por dengue.
En lugares en los que circulan simultáneamente dos o más serotipos, que también se denominan regiones hiperendémicas, el riesgo de enfermedad severa por dengue es significativamente superior debido a que existe un riesgo mayor de experimentar una infección secundaria más grave. Además, en una situación de hiperendemia, la probabilidad de que emerjan cepas más virulentas aumenta, lo cual a su vez aumenta la probabilidad de fiebre hemorrágica por dengue (FHD) o síndrome de choque por dengue.
Los mosquitos portadores del dengue, que incluyen Aedes aegypti y Aedes albopictus (mosquito tigre), se están desplazando hacia el norte del globo. Según los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CCPE) de los Estados Unidos (EE. UU.), en la actualidad ambos mosquitos son omnipresentes en el sur de Texas. La propagación hacia el norte de los mosquitos portadores del dengue no está confinada a los EE. UU., sino que también se ha observado en Europa.
Dengvaxia®, la vacuna para el dengue producida por Sanofi Pasteur se aprobó en primer lugar en México y mientras tanto, ha sido aprobada en más países. Sin embargo, la vacuna se puede mejorar considerablemente debido a que presenta una eficacia limitada, especialmente contra VDEN-1 y -2, una eficacia baja en sujetos no expuestos previamente al flavivirus y una pauta posológica prolongada.
Pese a estas limitaciones, la vacuna supone un punto de inflexión en las zonas endémicas puesto que ofrecerá protección a gran parte de la población, aunque probablemente no a bebés muy pequeños, quienes se ven muy afectados por el dengue. Además, la pauta posológica y la eficacia muy limitada en sujetos no expuestos previamente al flavivirus hacen que sea inadecuada y que probablemente no merezca la pena/no sea rentable para personas que viajen de zonas no endémicas a zonas endémicas de dengue. Las limitaciones mencionadas anteriormente de las vacunas contra el dengue son la razón por la que se necesita un agente antiviral contra el dengue que sea profiláctico y se pueda aplicar previamente a la exposición.
Además, a día de hoy, no se dispone de fármacos antivirales específicos para el tratamiento o la prevención de una infección por el virus de la fiebre del dengue. Claramente, todavía existe una gran demanda médica no satisfecha de sustancias terapéuticas para la prevención o tratamiento de infecciones víricas en animales, más particular en humanos y especialmente para infecciones víricas provocadas por flavovirus, más en particular virus de Dengue. Es indispensable
disponer de compuestos con una potencia antiviral satisfactoria, niveles bajos o nulos de efectos secundarios, una actividad de amplio espectro contra múltiples serotipos del virus del Dengue, una baja toxicidad y/o unas propiedades farmacocinéticas o farmacodinámicas satisfactorias.
El documento WO-2010/021878 divulga derivados de 2-fenilpi rrolidina e indolina como antagonistas del receptor de mentol frío para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y centrales. El documento WO-2013/045516 divulga derivados de indol e indolina para su uso en el tratamiento de infecciones virales por dengue.
A continuación, la presente invención proporciona compuestos, derivados de indolina sustituidos, que muestran una elevada y potente actividad contra los cuatro (4) serotipos del virus del dengue.
La invención se expone en el juego de reivindicaciones adjunto. Además, cualquier referencia a métodos de tratamiento en los párrafos posteriores de esta descripción debe interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.
COMPENDIO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se basa en el descubrimiento inesperado de que al menos uno de los problemas mencionados anteriormente se puede resolver mediante los compuestos actuales de la invención.
La presente invención proporciona compuestos que se ha observado que poseen una potente actividad antiviral contra los cuatro (4) serotipos conocidos actualmente. La presente invención demuestra además que estos compuestos inhiben eficazmente la proliferación del virus del Dengue (VDEN). Por lo tanto, estos compuestos constituyen una clase útil de compuestos potentes que se pueden utilizar en el tratamiento y/o la prevención de infecciones virales en animales, mamíferos y seres humanos, más específicamente para el tratamiento y/o la prevención de infecciones con virus del Dengue.
La presente invención se refiere además al uso de tales compuestos como medicamentos y a su uso para la elaboración de medicamentos para tratar y/o prevenir infecciones virales, en particular con virus que pertenecen a la familia de los virus del Dengue en animales o mamíferos, más en particular en seres humanos. La invención también se refiere a métodos para preparar todos estos compuestos y a composiciones farmacéuticas que los comprenden en una cantidad eficaz. La presente invención también se refiere a un método para el tratamiento o la prevención de infecciones virales por dengue en seres humanos mediante la administración de una cantidad eficaz de uno o más de tales compuestos, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, opcionalmente combinado con uno o más medicamentos diferentes, como otro agente antiviral, a un paciente que lo necesite.
Un aspecto de la invención es la provisión de compuestos de fórmula (I), incluyendo cualquier forma estereoquímicamente isómera de los mismos:
donde
R1 es trifluorometilo, trifluorometoxi, o cloro;
R2 es hidrógeno, flúor, o metoxi;
R3 es hidrógeno, o metoxi;
A representa-(CH2)n-, donde n es 3 o 4;
-O-(CH2)n-, donde n es 2 o 4;
-O-(CH2)n-, donde n es 3 y uno o dos CH2 están sustituidos con uno o dos CH3;
-CH2-O-(CH2)n-, donde n es 2; o
-X-Y-, donde X es -O-, -OCH2-, o -NH-; y
Y es cicloalquilo C3-4 opcionalmente sustituido con flúor, o
Y es biciclo[1.1.1 ]pentanilo;
o una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Los compuestos anteriormente específicamente mencionados están seleccionados del grupo que comprende:
Un primer grupo de compuestos son compuestos de fórmula (I) donde A representa -(CH2)n-, donde n es 3 o 4.
Un segundo grupo de compuestos son compuestos de fórmula (I) donde A representa -O-(CH2)n-, donde n es 2 o 4. Un tercer grupo de compuestos son compuestos de fórmula (I) donde A representa -O-(CH2)n-, donde n es 3 y uno o dos CH2 están sustituidos con uno o dos CH3; o.r A representa
Un cuarto grupo de compuestos son compuestos de fórmula (I) donde A representa -CH2-O-(CH2)n-, donde n es 2. Un quinto grupo de compuestos son compuestos de fórmula (I) donde A representa -X-Y- donde X es -O-, -OCH2-, o -NH-; e Y es cicloalquilo C3-4 opcionalmente sustituido con flúor.
Un sexto grupo de compuestos son compuestos de fórmula (I) donde A representa -X-Y- donde X es -O-, -OCH2-, o -NH-; e Y es biciclo[1.1.1]pentanilo.
Un séptimo grupo de compuestos son compuestos de fórmula (I) donde R1 es trifluorometoxi, R2 es hidrógeno, y R3 es hidrógeno.
Un octavo grupo de compuestos son compuestos de fórmula (I) donde R1 es trifluorometoxi, R2 es hidrógeno, y R3 es metoxi.
Un noveno grupo de compuestos son compuestos de fórmula (I) donde R1 es trifluorometilo, R2 es metoxi, y R3 es hidrógeno.
Un décimo grupo de compuestos son compuestos de fórmula (I) donde R1 es trifluorometoxi, R2 es flúor, y R3 es hidrógeno. Un decimoprimer grupo de compuestos son compuestos de fórmula (I) donde R1 es cloro, R2 es metoxi, y R3 es hidrógeno. Parte de la invención actual es también una composición farmacéutica que comprende un compuesto mencionado anteriormente o una forma estereoisomérica, una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más excipientes, diluyentes o portadores farmacéuticamente aceptables.
Las sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos incluyen las sales de adición de ácidos y de bases de los mismos. Las sales de adición de ácido adecuadas se forman a partir de ácidos que forman sales atóxicas. Las sales de
adición de base adecuadas se forman a partir de bases que forman sales atóxicas.
Se entiende que las sales de ácido farmacéuticamente aceptables mencionadas anteriormente comprenden las formas activas de sal de adición de ácido no tóxica que los compuestos de fórmula (I) son capaces de formar. Estas sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables se pueden obtener de manera conveniente tratando la forma de base con un ácido adecuado de este tipo. Los ácidos apropiados comprenden, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como ácido hidrohálico, por ejemplo, clorhídrico o bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico y similares; o ácidos orgánicos tales como, por ejemplo, acético, propanoico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (es decir, etanodioico), malónico, succínico (es decir, ácido butano-dioico), maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico, p-toluensulfónico, ciclámico, salicílico, p-amino-salicílico, ácido pamoico y ácidos similares.
Los compuestos de la invención también pueden existir en formas sin solvatar y solvatadas. El término "solvato" se utiliza en la presente para describir un complejo molecular que comprende el compuesto de la invención y una o más moléculas de un disolvente farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, etanol.
El término "polimorfo" se refiere a la capacidad del compuesto de la invención de existir en más de una forma o estructura cristalina.
Los compuestos de la presente invención se pueden administrar como productos amorfos o cristalinos. Se pueden obtener, por ejemplo, como masas compactas sólidas, polvos o películas mediante métodos tales como la precipitación, cristalización, liofilización, secado por pulverización o secado por evaporación. Se pueden administrar solos o combinados con uno o más compuestos de la invención diferentes o combinados con uno o más fármacos diferentes. En general, se administrarán como una formulación asociados con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. El término "excipiente" se utiliza en la presente para describir cualquier ingrediente que no sea el o los compuestos de la invención. La selección del excipiente depende en gran medida de factores tales como el modo particular de administración, el efecto del excipiente sobre la solubilidad y estabilidad, y la naturaleza de la forma farmacéutica.
Los compuestos de la presente invención o cualquiera de sus subgrupos se pueden formular en varias formas farmacéuticas con el fin de poderlos administrar. Como composiciones adecuadas, se pueden citar todas las composiciones empleadas normalmente para administrar fármacos por vía sistémica. Para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención, se combina una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma de sal de adición, como principio activo, en mezcla íntima con un portador farmacéuticamente aceptable, pudiendo adoptar dicho portador una gran variedad de formas dependiendo de la forma del preparado que se desee para la administración. Estas composiciones farmacéuticas se encuentran deseablemente en una forma farmacéutica unitaria adecuada, por ejemplo, para administración oral o rectal. Por ejemplo, en la preparación de las composiciones en una forma farmacéutica oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmacéuticos habituales tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparados líquidos orales tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y soluciones; o portadores sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, diluyentes, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de polvos, pastillas, cápsulas y comprimidos. Debido a su fácil administración, los comprimidos y las cápsulas representan las formas farmacéuticas unitarias orales más convenientes, en cuyo caso se emplean obviamente portadores farmacéuticos sólidos. También se incluyen los preparados en forma sólida que se pueden convertir, poco antes de su uso, en formas líquidas.
Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente en forma farmacéutica unitaria por su facilidad de administración y uniformidad de dosificación. La expresión "forma farmacéutica unitaria", tal como se utiliza en la presente, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias, donde cada unidad contiene una cantidad predeterminada de principio activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado asociado con el portador farmacéutico requerido. Ejemplos de formas de dosificación unitaria de este tipo son comprimidos (incluyendo comprimidos con muesca o revestidos), cápsulas, píldoras, paquetes de polvos, obleas, supositorios, disoluciones o suspensiones inyectables y similares, y múltiples segregados de las mismas.
Los expertos en el tratamiento de enfermedades infecciosas serán capaces de determinar la cantidad eficaz a partir de los resultados de las pruebas que se presentan posteriormente en la presente. En general, se considera que una cantidad diaria eficaz sería de 0.01 mg/kg a 50 mg/kg de peso corporal, más preferentemente de 0.1 mg/kg a 10 mg/kg de peso corporal. Puede resultar apropiado administrar la dosis requerida como dos, tres, cuatro o más subdosis en intervalos adecuados a lo largo del día. Dichas subdosis se pueden formular como formas farmacéuticas unitarias, por ejemplo, que contengan de 1 a 1000 mg y, en particular, de 5 a 200 mg de principio activo por forma farmacéutica unitaria.
La dosis exacta y la frecuencia de administración dependen del compuesto particular de la invención utilizado, la afección particular que se esté tratando, la gravedad de la afección que se esté tratando, la edad, el peso y el estado físico general del paciente particular, así como también de otra medicación que pueda estar tomando el individuo, como bien sabrán los expertos en la técnica. Además, es obvio que la cantidad eficaz se puede reducir o incrementar dependiendo de la respuesta del sujeto tratado y/o dependiendo de la evaluación del médico que prescriba los compuestos de la presente invención. Por consiguiente, los intervalos de la cantidad eficaz que se han mencionado anteriormente son solamente orientativos y no se pretende que limiten el alcance ni el uso de la invención de ningún modo.
También se pretende que la presente exposición incluya cualquiera de los isótopos de los átomos presentes en los compuestos de la invención. Por ejemplo, los isótopos de hidrógeno incluyen tritio y deuterio, y los isótopos de carbono incluyen C-13 y C-14.
Como se utiliza en el presente documento, cualquier fórmula química con enlaces mostrados sólo como líneas continuas y no como enlaces en cuña o en cuña con trazo discontinuo, o indicado de otra manera como que tienen una configuración particular (por ejemplo R, S) alrededor de uno o más átomos, contempla cada estereoisómeros posible, o mezcla de dos o más estereoisómeros.
Se pretende que las expresiones "compuesto de fórmula (I)" e "intermedios de síntesis de fórmula (I)", anteriormente y a continuación en la presente, incluyan sus estereoisómeros y sus formas tautoméricas.
Los términos y expresiones “estereoisómeros”, “formas estereoisoméricas” o “formas estereoquímicamente isoméricas” en lo que antecede y en lo que sigue en esta memoria se utilizan de manera indistinta.
La invención incluye todos los estereoisómeros de los compuestos de la invención, ya sea como un estereoisómero puro o como una mezcla de dos o más estereoisómeros. Los enantiómeros son estereoisómeros que imágenes especulares no superponibles entre sí. Una mezcla 1:1 de un par de enantiómeros es un racemato o mezcla racémica. Los diastereómeros (o diastereoisómeros) son estereoisómeros que no son enantiómeros, es decir, que no están relacionados como imágenes especulares. Sustituyentes en radicales cíclicos bivalentes (parcialmente) saturados pueden tener la configuración cis o trans; por ejemplo, si un compuesto contiene un grupo cicloalquilo disustituido, los sustituyentes pueden estar en la configuración cis o trans.
El término "estereoisómeros" también incluye cualquier rotámero, también denominados isómeros conformacionales, que pueden formar los compuestos de fórmula (I).
Por tanto, la invención incluye enantiómeros, diastereómeros, racematos, isómeros E, isómeros Z, isómeros cis, isómeros trans, rotámeros, y cualquier mezcla de los mismos, siempre que sean químicamente posibles.
El experto conoce el significado de todos estos términos, es decir enantiómeros, diastereómeros, racematos, isómeros cis, isómeros trans, rotámeros y mezclas de los mismos.
La configuración absoluta se especifica de acuerdo con el sistema de Cahn-Ingold-Prelog. Se especifica la configuración en un átomo asimétrico con R o S. Los estereoisómeros resueltos cuya configuración absoluta no se conoce se pueden designar con (+) o (-), dependiendo de la dirección en la que hagan rotar la luz polarizada en un plano. Por ejemplo, los enantiómeros resueltos cuya configuración absoluta se desconozca se pueden designar como (+) o (-) dependiendo de la dirección en la que hagan rotar el plano de la luz polarizada.
Cuando se identifica un estereoisómero específico, esto quiere decir que dicho estereoisómero está sustancialmente exento, es decir, asociado con menos de un 50%, preferiblemente menos de un 20%, más preferiblemente menos de un 10%, aún más preferiblemente menos de un 5%, en particular menos de un 2% y aún más preferiblemente menos de un 1%, de los otros estereoisómeros. Por lo tanto, cuando un compuesto de fórmula (I) se especifica, por ejemplo, como (R), esto significa que el compuesto está sustancialmente libre del isómero (S); cuando un compuesto de fórmula (I) se especifica, por ejemplo, como E, esto significa que el compuesto está sustancialmente libre del isómero Z; cuando un compuesto de fórmula (I) se especifica, por ejemplo, como cis, esto significa que el compuesto está sustancialmente libre del isómero trans.
Algunos de los compuestos de acuerdo con la fórmula (I) también pueden existir en su forma tautomérica. Se pretende que tales formas, en la medida en que puedan existir, aunque no se indique explícitamente en la fórmula (I) anterior, se incluyan dentro del alcance de la presente invención.
Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención tienen todos al menos un átomo de carbono asimétrico como se indica en la figura a continuación por el átomo de carbono marcado con *:
Debido a la presencia de dicho centro quiral, un "compuesto de fórmula (I)" puede ser el enantiómero (R), el enantiómero (S), la forma racémica, o cualquier combinación posible de los dos enantiómeros individuales en cualquier proporción.
Cuando no se conocía la configuración absoluta de un átomo de carbono asimétrico, se usó un descriptor estereoquímico relativo: *R o *S (o R* y S*) para indicar la estereoquímica pura pero desconocida del centro quiral.
Dado que el radical A permite los sustituyentes que introducen átomos de carbono asimétricos adicionales, los compuestos de fórmula (I) pueden tener más de un átomo de carbono asimétrico. Cuando no se determinó la estereoquímica absoluta de más de un átomo de carbono asimétrico, se indicó la estereoquímica relativa usando los descriptores estereoquímicos relativos *R y *S, y cuando sea posible en combinación con cis y trans cuando el radical A contiene un resto cíclico. En un aspecto, la presente invención se refiere a un primer grupo de un compuesto de fórmula (I) donde los compuestos de fórmula (I) tienen la rotación específica (-).
En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un segundo grupo de compuestos de fórmula (I) donde los compuestos de fórmula (I) tienen la rotación específica (+).
En una realización, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) que tiene la rotación específica (+) en la que dicho compuesto se selecciona del grupo que consiste en los compuestos (1C), (1D), (2A), (4C), (4D), (5A), (6A b ), (6BB), (7B), (8B), (9B), (10B), (11B), (12B), (13B), (14A), (15B), (17C), (17D), (18B), (19AB), (19BB), (20C), (20D), (21B), (22AB), (22BB), (23B), (24B), (25B), (27B), (28AB), (28BB), (29AB), (29BB), (30A), (31A), (32B), (33C), y (33D).
Ejemplos
Métodos de LC/MS
La medición por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) se realizó utilizando una bomba de LC, un haz de diodos (DAD) o un detector de UV y una columna, según se especifique en los métodos respectivos. Cuando fue necesario, se incluyeron detectores adicionales (véase la tabla de métodos más adelante).
El flujo procedente de la columna se introdujo en un espectrómetro de masas (MS), el cual se configuró con una fuente de iones a presión atmosférica. Es parte del conocimiento de un experto en la materia ajustar los parámetros ajustables (por ejemplo, intervalo de barrido, tiempo de permanencia, etc.) con el fin de obtener iones que permitan la identificación del peso molecular (PM) monoisotópico nominal del compuesto. La adquisición de datos se realizó con el software adecuado. Los compuestos se describen según sus tiempos de retención (Tr) experimentales e iones. Si no se especifica de otro modo en la tabla de datos, el ion molecular descrito corresponde a [M+H]+ (molécula protonada) y/o [M-H]-(molécula desprotonada). En caso de que el compuesto no se pueda ionizar directamente, se especifica el tipo de aducto (es decir, [M+NH4]+, [M+HCOO]-, etc.). Para moléculas con patrones isotópicos múltiples (Br, Cl), el valor indicado es el obtenido para la masa isotópica más baja. Todos los resultados se obtuvieron con incertidumbres experimentales que están habitualmente asociadas al método usado.
En lo sucesivo en la presente, "SQD" significa detector de cuadrupolo único, "MSD" detector selectivo de masas, "TA" temperatura ambiente, "BEH" híbrido con puente de etilsiloxano/sílice, "DAD" detector de haz de diodos, "HSS" sílice de alta resistencia.
Códigos del método LC/MS (Flujo expresado en ml/min; temperatura de columna (T) en °C; tiempo de análisis en minutos).
Métodos de SFC/MS
La medición de SFC se realizó usando un sistema de cromatografía analítica de fluidos supercrtíticos (SFC) compuesto de una bomba binaria para suministrar dióxido de carbono (CO2) y un modificador, un automuestreador, un horno de columna, un detector de haz de diodos equipado con una celda de flujo de alta presión que resiste una presión de hasta 400 bar. Si se configura con un espectrómetro de masas (MS) el flujo desde la columna se lleva al (MS). Es parte del conocimiento de un experto en la materia ajustar los parámetros ajustables (por ejemplo, intervalo de barrido, tiempo de permanencia, etc.) con el fin de obtener iones que permitan la identificación del peso molecular (PM) monoisotópico nominal del compuesto. La adquisición de datos se realizó con el software adecuado.
Métodos analíticos de SFC/MS (flujo expresado en ml/min; temperatura de la columna (T) en °C; tiempo de análisis en minutos, contrapresión (BPR) en bar).
Puntos de fusión
Los valores son valores máximos o rangos de fusión, y se obtienen con incertidumbres experimentales que están normalmente asociadas con este método analítico.
DSC823e (indicado como DSC)
Para varios compuestos, los puntos de fusión se determinaron con un DSC823e (Mettler-Toledo). Se midieron los puntos de fusión con un gradiente de temperatura de 10 °C/minuto. La temperatura máxima fue 300 °C.
Rotaciones ópticas:
Las rotaciones ópticas se midieron en un polarímetro Perkin-Elmer 341 con una lámpara de sodio y se expresaron tal como se indica a continuación: [a]° (A, c g/100 ml, disolvente, T°C).
[a]AT = (100a) / (l x c): donde l es la longitud del recorrido en dm y c es la concentración en g/100 ml para una muestra a una temperatura T (°C) y una longitud de onda A (en nm). Si la longitud de onda de la luz utilizada es de 589 nm (la línea D del sodio), entonces podría utilizarse el símbolo D en su lugar. El signo de la rotación (+ o -) debería proporcionarse siempre. Cuando se utiliza esta ecuación, la concentración y el disolvente siempre se proporcionan entre paréntesis después de la rotación. La rotación se indica utilizando grados y no se proporcionan unidades de concentración (se asume que son g/100 ml).
Nota de estereoquímica: En los ejemplos a continuación, las indicaciones estereoquímicas *R y *S se refieren a una estereoquímica pura pero desconocida de los centros quirales.
Abreviaturas usadas en la parte experimental
Ejemplo 1: Síntesis de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoico (Compuesto 1) y separación en los Estereoisómeros 1A, 1B, 1C y 1D
A una solución agitada de 4-bromo-2-metilbutanoato de ferc-butilo [CAS 1210410-44-8] (1.0 g, 4.22 mmol) en DMF (15 mL) se le añadieron 3-amino-5-metoxifenol [CAS 162155-27-3] (587 mg, 4.22 mmol) y Cs2CO3 (2.75 g, 8.43 mmol). La reacción se agitó a 60 °C durante 65 h y se dejó que alcanzara temperatura ambiente. La mezcla se vertió en H2O (100 mL). El producto se extrajo con CH2Cl2 (2 veces). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron, y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (50 g) usando un gradiente de heptano/EtOAc de 100/0 a 50/50. Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se co-evaporaron con CH3CN, produciendo 4-(3-amino-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoato de ferc-butilo 1a (440 mg).
Síntesis del intermedio 1b:
Una mezcla de 6-(trifluorometoxi)indolina [CAS 959235-95-1] (5 g, 24.6 mmol), ácido 2-(4-clorofenil)acético [CAS 1878 66-6] (4.2 g, 24.6 mmol), HATU (14.3 g, 36.9 mmol) y diisopropiletilamina (12.2 mL, 73.8 mmol) en DMF (60 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 20 h. La mezcla se vertió lentamente en H2O en agitación (275 mL) y la suspensión resultante se agitó durante 50 minutos. Los sólidos se eliminaron por filtración y se lavaron (4x) con H2O. El residuo sólido se recogió en tolueno (125 mL), se filtró sobre un filtro de papel, y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo sólido se agitó en Et2O/heptano 2/1 (30 mL), se eliminó por filtración, se lavó (3x) con 1/1 de Et2O/heptano, y se secó al vacío a 50 °C para proporcionar 2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1b (7.33 g).
Síntesis del intermedio 1c:
A -70 °C, en un flujo de N2 , se añadió gota a gota LiHMDS 1 M en THF (41.2 mL, 41.2 mmol) a una solución de 2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1b (7.33 g, 20.6 mmol) en 2-Me-THF (300 mL). La mezcla se agitó durante 50 min a -70 °C y se añadió lentamente cloruro de trimetilsililo (4.21 mL, 33.0 mmol). La agitación continuó a -70 °C durante 35 min y se añadió gota a gota una solución de W-bromosuccinimida (4.03 g, 22.7 mmol) en THF (40 mL) y 2-Me-THF (60 mL). Después de la agitación durante 3.5 h a -70 °C, la reacción se interrumpió con una solución saturada de NH4Cl (300 mL). La mezcla se dejó que alcanzara la temperatura ambiente. Se añadieron agua (50 mL) y salmuera (50 mL). La mezcla se extrajo con éter diisopropílico (150 mL). La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró, el disolvente se evaporó a presión reducida y se co-evaporó con CH3CN para dar 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (7.87 g).
Síntesis del intermedio 1d:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (850 mg, 1.96 mmol), 4-(3-amino-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoato de íerc-butilo 1a (620 mg, 2.10 mmol) y diisopropiletilamina (506 gL, 2.93 mmol) en CH3CN (30 mL) se agitó a 60 °C durante 18 h. La mezcla se dejó que alcanzara la temperatura ambiente, y se vertió en agua (125 mL). El producto se extrajo (2x) con Et2Ü. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSÜ4, se eliminaron por filtración, y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice (12 g) utilizando un gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15. Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y se co-evaporaron con dioxano para proporcionar 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoato de íerc-butilo 1d (1.27 g).
Síntesis del Compuesto 1 y separación en los Estereoisómeros 1A, 1B, 1C y 1D:
Una solución enfriada (baño de hielo) de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoato de íerc-butilo 1d (1.27 g, 1.96 mmol) en HCl 4 M en dioxano (9 mL) se agitó a 0 °C durante 20 min y a temperatura ambiente durante 2 h. El precipitado se eliminó por filtración, se lavó (3x) con dioxano y el sólido se secó al aire para proporcionar ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoico en forma de una sal de HCl (Compuesto 1,900 mg).
Los 4 estereoisómeros del Compuesto 1 (900 mg) se separaron a través de SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® Diacel AS 20 x 250 mm, fase móvil: CO2 , iPrOH 0.4 % de iPrNH2). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida. Los estereoisómeros en las fracciones de producto de los primeros dos picos eluidos no se separaron por completo y necesitaron separación adicional a través de SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® Diacel AS 20 x 250 mm, fase móvil: CO2 , EtOH 0.4% de iPrNH2). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida.
El primer estereoisómero eluido se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (12 g) con gradiente de 100/0/0/0 a 40/45/14.7/0.3 de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc. Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y co-evaporaron con CH3CN. El producto se liofilizó en una mezcla de disolvente de CH3CN (2 mL) y H2O (1.2 mL) para proporcionar el Estereoisómero 1A (63 mg).
El segundo estereoisómero eluido se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (12 g) con gradiente de 100/0/0/0 a 40/45/14.7/0.3 de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc. Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron, y se co-evaporaron con CH3CN. El producto se liofilizó en una mezcla de disolvente de CH3CN (2 mL) y H2O (1.2 mL) para proporcionar el Estereoisómero 1B (79 mg).
El tercer estereoisómero eluido se purificó a través de HPLC preparativa (Fase estacionaria: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 gm, 30 x 150 mm, fase móvil: solución de NH4HCO3 al 0.25% en agua, CH3CN). Las fracciones deseadas se combinaron y los productos volátiles orgánicos se evaporaron a presión reducida. El residuo se mezcló con EtOAc (25 mL) y HCl 1 N (0.5 mL). Después de la agitación durante 10 min, las capas se separaron. La capa orgánica se aisló, se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró, se evaporó a presión reducida, y se co-evaporó con CH3CN. El residuo se liofilizó en una mezcla de disolvente de CH3CN (1.5 mL) y H2O (0.75 mL) para proporcionar el Estereoisómero 1C (62 mg). El cuarto estereoisómero eluido se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (12 g) con gradiente de 100/0/0/0 a 40/45/14.7/0.3 de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc. Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y co-evaporaron con CH3CN. El producto se liofilizó en una mezcla de disolvente de CH3CN (2 mL) y H2O (1.2 mL) para proporcionar el Estereoisómero 1D (105 mg)
Compuesto 1:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.10 (dd, J=7.0, 1.3 Hz, 3 H) 1.69 (dq, J=13.6, 6.7 Hz, 1 H) 1.91 - 2.01 (m, 1 H) 2.43 - 2.48 (m, 1 H) 3.07 - 3.26 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.85 (t a, J=6.5 Hz, 2 H) 4.04 (td, J=10.3, 7.2 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.2, 6.4 Hz, 1 H) 5.56 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.75 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.89 - 5.98 (m, 2 H) 6.43 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.3, 1.4 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.40 - 7.47 (m, 2 H) 7.51 - 7.58 (m, 2 H) 8.03 (s, 1 h ) 12.16 (s a, 1 H) LC/MS (método LC-A): TR 1.14 min, MH+ 593
Estereoisómero 1A:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.10 (d, J=7.0 Hz, 3 H) 1.69 (dq, J=13.5, 6.6 Hz, 1 H) 1.91 - 2.01 (m, 1 H) 2.46 - 2.48 (m, 1 H) 3.08 - 3.27 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.85 (t, J=6.6 Hz, 2 H) 4.04 (td, J=10.3, 6.9 Hz, 1 H) 4.45 - 4.57 (m, 1 H) 5.55 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.75 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 - 5.96 (m, 2 H) 6.43 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.3, 1.7 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.40 - 7.46 (m, 2 H) 7.55 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.16 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-A): TR 1.15 min, MH+ 593
[a]D20: -37.6° (c 0.415, DMF)
SFC quiral (método SFC-A): TR 3.52 min, MH+ 593 pureza quiral 100%.
Estereoisómero 1B:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-da) 8 ppm 1.09 (d, J=7.0 Hz, 3 H) 1.69 (dq, J=13.6, 6.6 Hz, 1 H) 1.91 - 2.01 (m, 1 H) 2.44 - 2.48 (m, 1 H) 3.08 - 3.27 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.79 - 3.90 (m, 2 H) 4.04 (td, J=10.4, 7.2 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.2, 6.6 Hz, 1 H) 5.55 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.75 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 - 5.97 (m, 2 H) 6.43 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=7.8 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=7.2 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.16 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-A): TR 1.15 min, MH+ 593
[a]D20: -65.3° (c 0.455, DMF)
SFC quiral (método SFC-A): TR 4.15 min, MH+ 593 pureza quiral 97.1%.
Estereoisómero 1C:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-da) 8 ppm 1.11 (d, J=7.0 Hz, 3 H) 1.70 (dq, J=13.5, 6.5 Hz, 1 H) 1.90 - 2.03 (m, 1 H) 2.44 - 2.49 (m, 1 H) 3.07 - 3.25 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.86 (t, J=6.6 Hz, 2 H) 3.98 - 4.11 (m, 1 H) 4.46 - 4.57 (m, 1 H) 5.56 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 5.76 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.90 - 5.99 (m, 2 H) 6.44 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=7.9, 1.8 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=7.8 Hz, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 12.18 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-A): TR 1.15 min, MH+ 593
[a]D20: 35.2° (c 0.455, DMF)
SFC quiral (método SFC-A): TR 2.84 min, MH+ 593 pureza quiral 99.3%.
Estereoisómero 1D:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-da) 8 ppm 1.10 (d, J=7.0 Hz, 3 H) 1.70 (dq, J=13.5, 6.6 Hz, 1 H) 1.92 - 2.02 (m, 1 H) 2.46 - 2.49 (m, 1 H) 3.09 - 3.29 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.80 - 3.92 (m, 2 H) 4.05 (td, J=10.5, 7.0 Hz, 1 H) 4.53 (td, J=10.4, 6.5 Hz, 1 H) 5.56 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.76 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 - 5.97 (m, 2 H) 6.44 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.40 - 7.47 (m, 2 H) 7.56 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 12.17 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-A): TR 1.15 min, MH+ 593
[a]D20: 64.3° (c 0.42, DMF)
SFC quiral (método SFC-A): TR 2.65 min, MH+ 593 pureza quiral 98.1%.
Ejemplo 2 : Síntesis de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoico (Compuesto 2) y separación quiral en los Enantiómeros 2A y 2B
A una solución agitada de 4-bromo-2,2-dimetilbutanoato de metilo [CAS 4833-99-2] (2.5 g, 12 mmol) en DMF (35 mL) se le añadieron 3-amino-5-metoxifenol [CAS 162155-27-3] (1.66 g, 12 mmol) y Cs2CO3 (7.79 g, 23.9 mmol). La reacción se agitó a 60 °C durante 65 h y se dejó que alcanzara temperatura ambiente. La mezcla se vertió en H2O (150 mL). El producto
se extrajo con CH2CI2. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró, y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (25 g) usando un gradiente de 100/0/0 a 0/100/0 a 0/99/1 de heptano/CH2Cl2/MeOH. Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y se co evaporaron con tolueno. Los sólidos se secaron al vacío a 50 °C para proporcionar 4-(3-amino-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoato de metilo 2a (440 mg).
Síntesis del intermedio 2b:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (1.57 g, 3.61 mmol), 4-(3-amino-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoato de metilo 2a (970 mg, 3.63 mmol) y diisopropiletilamina (961 pL, 5.58 mmol) en CH3CN (25 mL) se agitó a 55 °C durante 18 h. La mezcla se dejó que alcanzara la temperatura ambiente, y se vertió en agua (125 mL). El producto se extrajo (2x) con Et2O. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice (40 g) utilizando un gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15. Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y se co-evaporaron con dioxano para proporcionar 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoato de metilo 2b (2.24 g).
Síntesis del Compuesto 2 y separación en los Enantiómeros 2A y 2B:
Se añadió NaOH 1 M en agua (9 mL, 9 mmol) a una solución en agitación de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoato de metilo 2b (2.24 g, 3.61 mmol) en dioxano (15 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 días. Se añadió lentamente HCl 1 N (10 mL). Después de la agitación durante 20 min, el producto se extrajo con Et2O. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo (2.9 g) se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (80 g) con gradiente de 100/0/0/0 a 40/45/14.7/0.3 de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc. Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y se co-evaporaron con éter diisopropílico. El residuo (1.6 g) se purificó adicionalmente a través de HPLC preparativa (Fase estacionaria: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 pm, 50 x 150 mm, fase móvil: solución al 0.5% de NH4Ac en agua 10% de CH3CN, MeOH). Las fracciones de producto se combinaron, y los productos volátiles orgánicos se evaporaron a presión reducida. El residuo se repartió entre 2-Me-THF (300 mL) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó adicionalmente por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (12 g) con gradiente de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc de 100/0/0/0 a 0/75/24.5/0.5 a 40/45/14.7/0.3. Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El sólido espumoso se secó al vacío a 45 °C para proporcionar ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoico (Compuesto 2, 0.97 g) en forma de una mezcla racémica.
Los enantiómeros del Compuesto 2 (800 mg) se separaron a través de SFC quiral preparativa (Fase estacionaria: Chiralpak® Diacel AS 20 x 250 mm, fase móvil: CO2 , EtOH 0.4% de iPrNH2). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El primer producto eluido se mezcló con EtOAc (15 mL), agua (5 mL) y HCl 1 N (1 mL). Después de la agitación durante 15 minutos, las capas se separaron. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró, se evaporó a presión reducida, y se co-evaporaron con MeOH. El residuo se trituró con agua (4 mL) y MeOH (1.5 mL) mientras se enfriaba en un baño de hielo. Los sólidos se eliminaron por filtración, se lavaron (4x) con 4/1 de H2O/MeOH, y se secaron al vacío a 45 °C para proporcionar el Enantiómero 2A (292 mg). El segundo producto eluido se mezcló con EtOAc (15 mL), agua (5 mL) y HCl 1 N (1 mL). Después de la agitación durante 30 minutos, las capas se separaron. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró, se evaporó a presión reducida, y se co-evaporaron con MeOH. El residuo se trituró con agua (4 mL) y MeOH (1.5 mL) mientras se enfriaba en un baño de hielo. Los sólidos se eliminaron por filtración, se lavaron (4x) con 2/1 de H2O/MeOH, y se secaron al vacío a 45 °C para proporcionar el Enantiómero 2B (342 mg).
Compuesto 2:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.13 (d, J=2.6 Hz, 6 H) 1.87 (t, J=7.2 Hz, 2 H) 3.08 - 3.27 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.85 (t, J=7.2 Hz, 2 H) 4.04 (td, J=10.4, 7.2 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.2, 6.2 Hz, 1 H) 5.54 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.74 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.90 - 5.96 (m, 2 H) 6.43 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.3, 1.4 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.39 - 7.48 (m, 2 H) 7.50 - 7.60 (m, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.19 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-A): TR 1.22 min, MH+ 607
Enantiómero 2A:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.13 (d, J=2.6 Hz, 6 H) 1.87 (t, J=7.3 Hz, 2 H) 3.08 - 3.27 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.85 (t, J=7.2 Hz, 2 H) 3.97 - 4.12 (m, 1 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.5 Hz, 1 h ) 5.54 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 5.74 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.90 -5.96 (m, 2 H) 6.43 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.39 - 7.49 (m, 2 H) 7.55 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.20 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-A): TR 1.23 min, MH+ 607
[a]D20: 49.6° (c 0.56, DMF)
SFC quiral (método SFC-B): TR 6.47 min, MH+ 607 pureza quiral 100%.
Enantiómero 2B:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-de) 6 ppm 1.13 (d, J=2.6 Hz, 6 H) 1.87 (t, J=7.2 Hz, 2 H) 3.08 - 3.28 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.85 (t, J=7.2 Hz, 2 H) 4.04 (td, J=10.3, 7.3 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.5 Hz, 1 H) 5.54 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.74 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.90 - 5.96 (m, 2 H) 6.43 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.41 - 7.46 (m, 2 H) 7.55 (m, J=8.6 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H)
12.20 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-A): TR 1.23 min, MH+ 607
[a]D20: -49.2° (c 0.445, DMF)
SFC quiral (método SFC-B): TR 7.18 min, MH+ 607 pureza quiral 98.8%.
Ejemplo 3 : Síntesis de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoico (Compuesto 3)
Se mezcló 5-oxaespiro[2.4]heptan-4-ona (930 mg, 8.29 mmol) con una solución de HBr al 33% en AcOH (8 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 h, y se vertió en hielo-agua (50 mL). Después de la agitación durante 10 min, el producto se eliminó por filtración, se lavó (5x) con agua y se secó al vacío a 45 °C para proporcionar ácido 1-(2-bromoetil)ciclopropano-1-carboxílico 3a (753 mg).
Síntesis del intermedio 3b:
Una solución de ácido 1-(2-bromoetil)ciclopropano-1-carboxílico 3a (540 mg, 2.8 mmol) en MeOH (11 mL) se agitó en una atmósfera de N2 mientras se enfriaba en un baño de hielo. Se añadió gota a gota cloruro de tionilo (304 pL, 4.2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 40 h. Los disolventes se evaporaron a presión reducida, y se co-evaporaron con CH3CN para proporcionar 1-(2-bromoetil)ciclopropano-1-carboxilato de metilo 3b (380 mg).
Síntesis del intermedio 3c:
A una solución agitada de 1-(2-bromoetil)ciclopropano-1-carboxilato de metilo 3b (380 mg, 1.84 mmol) en DMF (10 mL) se le añadieron 3-amino-5-metoxifenol [CAS 162155-27-3] (250 mg, 1.80 mmol) y Cs2CO3 (1.17 g, 3.59 mmol). La reacción se agitó a 60 °C durante 18 h y se dejó que alcanzara temperatura ambiente. La mezcla se vertió en H2O (60 mL). El
producto se extrajo (2x) con Et2Ü. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron, y el disolvente se evaporó a presión reducida y se co-evaporó con tolueno. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (12 g) usando un gradiente de 100/0/0 a 0/100/0 a 0/99/1 de heptano/CH2Cl2/MeOH. Las fracciones de producto se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se co-evaporaron con CH3CN para proporcionar 1-(2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etil)ciclopropano-1-carboxilato de metilo 3c (220 mg).
Síntesis del intermedio 3d:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (320 mg, 0.736 mmol), 1-(2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etil)ciclopropano-1-carboxilato de metilo 3c (220 mg, 0.829 mmol) y diisopropiletilamina (254 pL, 1.47 mmol) en 2-butanol (7.5 mL) se agitó a 55 °C durante 16 h. La mezcla se dejó que alcanzara la temperatura ambiente, y se vertió en agua (25 mL). El producto se extrajo (2x) con Et2O. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice (12 g) utilizando un gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 60/30/10. Las fracciones de producto se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y se co-evaporaron con dioxano para proporcionar 1-(2-(3-((1 -(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)etil)ciclopropano-1 -carboxilato de metilo 3d (456 mg).
Síntesis del Compuesto 3:
Se añadió NaOH 1 M en agua (1.84 mL, 1.84 mmol) a una solución en agitación de 1 -(2-(3-((1 -(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)etil)ciclopropano-1 -carboxilato de metilo 3d (0.456 mg, 0.737 mmol) en dioxano (3 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de N2 durante 42 h. Se añadieron agua (15 mL) y HCl 1 N (2 mL). Después de la agitación durante 10 min, el producto se eliminó por filtración, se lavó (3x) con agua y se secó al vacío a 45 °C. El residuo se purificó a través de HPLC preparativa (Fase estacionaria: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 pm, 30 x 150 mm, fase móvil: solución de NH4HCO3 al 0.25% en agua, CH3CN). Las fracciones de producto se combinaron y los disolventes orgánicos se evaporaron. La solución acuosa restante se extrajo (2x) con Et2O. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron, se evaporaron a presión reducida, y se co-evaporaron con MeOH. La espuma resultante se agitó en 3/1 de H2O/MeOH (4 mL), se eliminó por filtración, se lavó (3x) con 3/1 de H2O/MeOH, y se secó al vacío a 45 °C para proporcionar ácido 1-(2-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)etil)ciclopropano-1-carboxílico (Compuesto 3, 255 mg) en forma de una mezcla racémica.
Compuesto 3:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 0.73 - 0.84 (m, 2 H) 1.00 - 1.11 (m, 2 H) 1.81 - 1.91 (m, 2 H) 3.07 - 3.26 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.97 (t, J=7.3 Hz, 2 H) 4.05 (td, J=10.3, 7.3 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.2, 6.6 Hz, 1 H) 5.55 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 5.77 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.90 - 5.98 (m, 2 H) 6.42 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.00 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.39 - 7.49 (m, 2 H) 7.55 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.19 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-B): TR 2.19 min, MH+ 605
Ejemplo 4 : Síntesis de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-3-metilbutanoico (Compuesto 4) y separación en los Estereoisómeros 4A, 4B, 4C y 4D
A una solución agitada de 4-bromo-3-metilbutanoato de etilo [CAS 56703-10-7] (1.0 g, 4.78 mmol) en DMF (15 mL) se le añadieron 3-amino-5-metoxifenol [CAS 162155-27-3] (666 mg, 4.78 mmol) y Cs2CO3 (3.12 g, 9.57 mmol). La reacción se agitó a 70 °C durante 16 h y se dejó que alcanzara temperatura ambiente. La mezcla se vertió en H2O (75 mL). El producto se extrajo (2x) con Et2O. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron, y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (25 g) usando un gradiente de heptano/EtOAc de 100/0 a 50/50. Las fracciones de producto se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se co-evaporaron con CH3CN, produciendo 4-(3-amino-5-metoxifenoxi)-3-metilbutanoato de etilo 4a (430 mg).
Síntesis del intermedio 4b:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (430 mg, 1.15 mmol), 4-(3-amino-5-metoxifenoxi)-3-metilbutanoato de etilo 4a (430 mg, 1.61 mmol) y diisopropiletilamina (396 pL, 2.30 mmol) en CH3CN (15 mL) se agitó a 60 °C durante 18 h en una atmósfera de N2. La mezcla se dejó que alcanzara la temperatura ambiente, y se vertió en agua (75 mL). El producto se extrajo (2x) con Et2O. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice (12 g) utilizando un gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15. Las fracciones de producto se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y se co-evaporaron con EtOH para proporcionar 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-3-metilbutanoato de etilo 4b (714 mg). Síntesis del Compuesto 4 y separación en los Estereoisómeros 4A, 4B, 4C y 4D:
Se añadió NaOH 1 M en agua (2.9 mL, 2.9 mmol) a una solución en agitación de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-3-metilbutanoato de etilo 4b (714 mg, 1.15 mmol) en una mezcla de disolvente de dioxano (5 mL) y EtOH (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Se añadió lentamente HCl 1 N (3 mL). Después de la agitación durante 2 min, el producto se extrajo (2x) con Et2O. Las capas orgánicas combinadas se separaron, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (40 g) usando un gradiente de 100/0/0/0 a 40/45/14.7/0.3 de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc. Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se agitó en Et2O (5 mL). Los sólidos se eliminaron por filtración, se lavaron (3x) con Et2O, y se secaron al vacío a 50 °C para proporcionar ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-3-metilbutanoico (Compuesto 4 , 290 mg) en forma de una mezcla racémica.
Los 4 estereoisómeros del Compuesto 4 (274 mg) se separaron a través de SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® Diacel AS 20 x 250 mm, fase móvil: CO2 , iPrOH 0.4 % de iPrNH2). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida. Los estereoisómeros en las fracciones de producto del segundo y el tercer picos eluidos no se separaron por completo y necesitaron separación adicional a través de SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® Diacel AS 20 x 250 mm, fase móvil: CO2, EtOH 0.4% de iPrNH2). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida. Los 4 estereoisómeros se solidificaron por liofilización en una mezcla de disolvente de CH3CN y agua para proporcionar los Estereoisómeros 4A (72 mg), 4B (35 mg), 4C (35 mg) y 4D (67 mg).
Compuesto 4:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 0.96 (d, J=6.6 Hz, 3 H) 2.05 - 2.15 (m, 1 H) 2.16 - 2.28 (m, 1 H) 2.39 (dd, J=15.4, 5.5 Hz, 1 H) 3.08 - 3.27 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.65 - 3.75 (m, 2 H) 4.05 (td, J=10.4, 7.2 Hz, 1 H) 4.43 - 4.59 (m, 1 H) 5.56 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.76 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 5.97 (s, 1 H) 6.43 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=7.8 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 8.03 (s a, 1 H) 12.10 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-B): TR 2.07 min, MH+ 593
Estereoisómero 4A:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 0.96 (d, J=6.8 Hz, 3 H) 2.05 - 2.13 (m, 1 H) 2.22 (dq, J=13.1,6.6 Hz, 1 H) 2.33 - 2.40 (m, 1 H) 3.06 - 3.21 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.65 - 3.76 (m, 2 H) 4.05 (td, J=10.4, 7.2 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.1,6.4 Hz, 1 H) 5.56 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.76 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 5.97 (t, J=1.7 Hz, 1 H) 6.43 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.00 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.43 (m, J=8.6 Hz, 2 H) 7.55 (m, J=8.6 Hz, 2 H) 8.03 (s a, 1 H) 11.51 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-B): TR 2.04 min, MH+ 593
[a]D20: -59.6° (c 0.245, DMF)
SFC quiral (método SFC-C): TR 5.84 min, MH+ 593 pureza quiral 100%.
Estereoisómero 4B:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 0.96 (d, J=6.6 Hz, 3 H) 2.07 - 2.14 (m, 1 H) 2.22 (dq, J=13.2, 6.5 Hz, 1 H) 2.38 (dd, J=15.2, 5.5 Hz, 1 H) 3.02 - 3.23 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.65 - 3.76 (m, 2 H) 4.04 (td, J=10.3, 7.3 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.5, 6.2 Hz, 1 H) 5.56 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.76 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 5.97 (t, J=1.7 Hz, 1 H) 6.43 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.00 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.41 - 7.46 (m, 2 H) 7.55 (m, J=8.4 Hz, 2 H) 8.03 (s a, 1 H) 12.00 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-B): TR 2.04 min, MH+ 593
[a]D20: -47.5° (c 0.255, DMF)
SFC quiral (método SFC-C): TR 6.34 min, MH+ 593 pureza quiral 98.0%.
Estereoisómero 4C:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 0.96 (d, J=6.6 Hz, 3 H) 2.06 - 2.14 (m, 1 H) 2.22 (dq, J=13.3, 6.4 Hz, 1 H) 2.37 (dd, J=15.3, 5.6 Hz, 1 H) 3.08 - 3.22 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.66 - 3.74 (m, 2 H) 4.04 (td, J=10.5, 7.0 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.2, 6.6 Hz, 1 H) 5.56 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.76 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (t, J=1.7 Hz, 1 H) 5.97 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 6.44 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.44 (m, J=8.6 Hz, 2 H) 7.55 (m, J=8.6 Hz, 2 H) 8.03 (s a, 1 h ) 10.85 - 12.62 (m, 1 H)
LC/MS (método LC-B): TR 2.04 min, MH+ 593
[a]D20: 47.7° (c 0.26, DMF)
SFC quiral (método SFC-C): TR 6.31 min, MH+ 593 pureza quiral 100%.
Estereoisómero 4D:
1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 0.96 (d, J=7.0 Hz, 3 H) 2.06 - 2.15 (m, 1 H) 2.17 - 2.28 (m, 1 H) 2.38 (dd, J=15.4, 5.5 Hz, 1 H) 3.07 - 3.26 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.65 - 3.76 (m, 2 H) 4.05 (td, J=10.2, 7.3 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.4 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.76 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 (t, J=1.5 Hz, 1 H) 5.97 (t, J=1.5 Hz, 1 H) 6.46 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.44 (m, J=8.4 Hz, 2 H) 7.55 (m, J=8.4 Hz, 2 H) 8.03 (s a, 1 H) 11.95 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-B): TR 2.04 min, MH+ 593
[a]D20: 60.7° (c 0.285, DMF)
SFC quiral (método SFC-C): TR 7.58 min, MH+ 593 pureza quiral 100%.
Ejemplo 5 : Síntesis de ácido 2-(1-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluoro-metoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropil)acético (Compuesto 5) y separación quiral en los Enantiómeros 5A y 5B
Se añadió gota a gota 2-(1-(bromometil)ciclopropil)acetato de metilo [855473-50-6] (306 mg, 1.478 mmol) a una solución de 3-metoxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (250 mg, 1.478 mmol) y K2CO3 (306 mg, 2.217 mmol) en DMF (2.5 mL). La mezcla se agitó a 60 °C durante 16 h. La reacción se enfrió a 0 °C, y se diluyó con agua y hielo. La mezcla se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4 , se filtró y el disolvente se concentró a presión reducida para dar 2-(1-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)ciclopropil)acetato de metilo 5a. El rendimiento se consideró cuantitativo. El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 5b:
Una solución de 2-(1 -((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)ciclopropil)acetato de metilo 5a (520 mg, 1.761 mmol) en MeOH (8 mL), que contenía una cantidad catalítica de Pd al 10%/C (300 mg, 0.282 mmol) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 a temperatura ambiente durante 18 h. El catalizador se eliminó por filtración sobre un lecho corto de Celite® y la torta de filtro se aclaró varias veces con EtOAc. Los filtrados combinados se evaporaron para dar 2-(1-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropil)acetato de metilo 5b (390 mg), que se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 5c:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1 -(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etanona 1c (250 mg, 0.575 mmol), 2-(1-((3-amino-5-metoxi-fenoxi)metil)ciclopropil)acetato de metilo 5b (184 mg, 0.575 mmol) y diisopropiletilamina (200 pL, 1.15 mmol) en CH3CN (7.5 mL) se agitó a 60 °C durante 18 h. El disolvente se concentró a presión reducida. Se añadió hielo/agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (30 pm, 24 g, 75/25 de heptano/EtOAc). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se cristalizó en CH3CN/éter diisopropílico y se secó para dar 2-(1 -((3-((1 -(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluoro-metoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropil)acetato de metilo 5c (206 mg).
Síntesis del Compuesto 5 y separación en los Enantiómeros 5A y 5B:
Se añadió gota a gota LiOH monohidrato (63 mg, 1.502 mmol) en agua (1.63 mL) a una solución de 2-(1-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)-indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropil)acetato de metilo 5c (186 mg, 0.3 mmol) en THF (3.7 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 h. Se añadió HCl 3 N para acidificar la mezcla de reacción, y la solución acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se cristalizó en CH3CN/éter diisopropílico y se secó para dar ácido 2-(1 -((3-((1 -(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropil)acético (Compuesto 5, 115 mg).
La separación de los enantiómeros del Compuesto 5 (71 mg) se realizó a través de SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® Diacel AS 20 x 250 mm, fase móvil: CO2 , EtOH 0.4% de iPrNH2). Para ambos enantiómeros, las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida. Los residuos se repartieron entre agua y
Et2O. Las mezclas se acidificaron a pH 1-2 mediante la adición de HCl 1 N y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo de nuevo con Et2O. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. Los residuos se secaron al vacío a 50 °C para proporcionar el Enantiómero 5A (22 mg) y el Enantiómero 5B (23 mg) en forma de polvos de color blanquecino.
Compuesto 5:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-de) ó ppm 0.49 - 0.55 (m, 4 H) 2.33 (s, 2 H) 2.99 - 3.25 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.73 (s, 2 H) 4.05 (td, J=10.40, 7.25 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.25, 6.31 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=9.14 Hz, 1 H) 5.74 (s, 1 H) 5.92 (s, 1 H) 5.95 (s, 1 H) 6.45 (d, J=9.14 Hz, 1 H) 7.02 (d a, J=9.14 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.20 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.20 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.51 Hz, 3 H) 8.03 (s, 1 H) 12.01 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.18 min, MH+ 605
PF = 111°C
Enantiómero 5A:
1H RMN (360 Mhz, DMSO-cfe) ó ppm 0.46 - 0.58 (m, 4 H) 2.33 (s, 2 H) 3.04 - 3.27 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.72 (s, 2 H) 4.05 (td, J=10.2, 7.3 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.2, 6.6 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=9.1 Hz, 1 H) 5.74 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (t, J=1.6 Hz, 1 H) 5.94 - 5.97 (m, 1 H) 6.45 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.51 - 7.59 (m, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.12 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-A): TR 1.15 min, MH+ 605
[a]D20: 37.0° (c 0.135, DMF)
SFC quiral (método SFC-E): TR 5.84 min, MH+ 605 pureza quiral 100%.
Enantiómero 5B:
1H RMN (360 Mhz, DMSO-de) ó ppm 0.46 - 0.57 (m, 4 H) 2.33 (s, 2 H) 3.05 - 3.26 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.72 (s, 2 H) 4.05 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.4 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.74 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 5.94 - 5.97 (m, 1 H) 6.45 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.50 - 7.61 (m, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.11 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-A): TR 1.15 min, MH+ 605
[a]D20: -48.8° (c 0.16, DMF)
SFC quiral (método SFC-E): TR 6.53 min, MH+ 605 pureza quiral 100%.
Ejemplo 6A: Síntesis de ácido (1 fí*,2fí^)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Compuesto 6A) y separación en los Estereoisómeros 6AA y 6AB
Síntesis del intermedio 6a:
A una solución de 2-formilciclopropanocarboxilato de etilo [20417-61-2] (9 mL, 67.996 mmol) en MeOH (200 mL) se le añadió en porciones NaBH4 (5.15 g, 133.993 mmol) a 0 °C y la mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h. Se añadieron CH2Cl2 y agua. Las capas se separaron; la capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar 2-(hidroximetil)ciclopropanocarboxilato de etilo 6a (9.15 g). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 6b:
Se añadió en porciones azodicarboxilato de di-terc-butilo (4.8 g, 20.809 mmol) a una solución de 3-metoxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (3.2 g, 18.917 mmol), 2-(hidroximetil)ciclopropanocarboxilato de etilo 6a (3 g, 20.809 mmol), y PPh3 (5.46 g, 20.809 mmol) en THF (150 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de N2 durante 18 h. La solución se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por LC preparativa (SiOH irregular 20-45 pm, 220 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25). Las fracciones puras se combinaron y se concentraron a presión reducida para dar 2-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)ciclopropanocarboxilato de metilo 6b (1.4 g).
Síntesis del intermedio 6c y separación quiral en los enantiómeros 6d y 6e:
Una solución de 2-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)ciclopropanocarboxilato de metilo 6b (1.3 g, 4.402 mmol) en EtOH (65 mL) que contenía una cantidad catalítica de Pd al 10%/C (750 mg, 0.704 mmol) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 a temperatura ambiente durante 4 h. El catalizador se eliminó por filtración sobre un lecho corto de Celite® y la torta de filtro se aclaró varias veces con EtOAc. Los filtrados combinados se evaporaron. El residuo en bruto se purificó por LC preparativa (SiOH Irregular 20-45 pm, 40 g, 80/20 de heptano/EtOAc). Las fracciones puras se combinaron y el disolvente se evaporó a sequedad para dar 2-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropanocarboxilato de metilo 6c (780 mg). Los enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® AD-H 5 pm 250 x 30 mm, fase móvil: 80% de CO2 , 20% de EtOH) para dar el primer enantiómero eluido 6d (trans R*,R*, 344 mg, [a]D20: -78.6° (c 0.257, DMF)) y el segundo enantiómero eluido 6e (trans S*,S*, 371 mg, [a]D20: 74.5° (c 0.251, DMF)).
Síntesis del intermedio 6f:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (376 mg, 0.864 mmol), 2-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropanocarboxilatometoxifenoxi)metil)ciclopropil)acetato de (1 R*,2R*)-metilo 6d (344 mg, 1.297 mmol) y diisopropiletilamina (298 pL, 1.729 mmol) en CH3CN (12 mL) se agitó a 80 °C durante 5 días. Se concentró el disolvente a presión reducida. Se añadió hielo/agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4 , se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (25-30 pm, 40 g, 80/20 de heptano/EtOAc). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar 2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxilato de (1 R*,2R*)-metilo 6f (500 mg).
Síntesis del Compuesto 6A y separación quiral en los Estereoisómeros 6AA y 6AB:
Se añadió LiOH monohidrato (169 mg, 4.039 mmol) en agua (10 mL) a una solución de 2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclo-propanocarboxilato de (1 R*,2R*)-metilo 6f (500 mg, 0.808 mmol) en THF (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h y a 45 °C durante 5 h. Se añadió HCl 3 N para acidificar la solución, y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (20-45 pm, 40 g, 80/20 de heptano/EtOAc). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar ácido (1R*,2R*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropanocarboxílico (Compuesto 6A, 780 mg). Los dos estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® Od -H 5 pm 250 x 30 mm, fase móvil: 55% de CO2, 45% de iPrOH) para dar, después de la solidificación a partir de heptano/éter diisopropílico, el primer Estereoisómero eluido 6AA (123 mg) y el segundo Estereoisómero eluido 6AB (125 mg).
Estereoisómero 6AA:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 0.75 - 0.96 (m, 1 H) 1.00 - 1.07 (m, 1 H) 1.44 - 1.57 (m, 1 H) 1.57 - 1.70 (m, 1 H) 3.09 - 3.27 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.69 (d ad, J=10.25, 7.72 Hz, 1 H) 3.80 - 3.95 (m, 1 H) 4.00 - 4.09 (m, 1 H) 4.39 - 4.65 (m, 1 H) 5.57 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 5.76 (s, 1 H) 5.95 (s, 1 H) 5.97 (s, 1 H) 6.46 (d a, J=8.83 Hz, 1 H) 7.02 (d a, J=8.20 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.20 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 7.55 (d a, J=8.20 Hz, 2 H) 8.04 (s a, 1 H) 12.02 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.95 min, MH+ 591
[a]D20: -78.0° (c 0.282, DMF)
SFC quiral (método SFC-G): TR 1.08 min, MH+ 591 pureza quiral 99.82%.
Estereoisómero 6AB:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-de) 5 ppm 0.79 - 0.90 (m, 1 H) 1.00 - 1.08 (m, 1 H) 1.43 - 1.57 (m, 1 H) 1.57 - 1.72 (m, 1 H) 2.95 - 3.27 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.63 - 3.78 (m, 1 H) 3.78 - 3.98 (m, 1 H) 4.00 - 4.09 (m, 1 H) 4.29 - 4.65 (m, 1 H) 5.57 (d a, J=8.83 Hz, 1 H) 5.76 (s a, 1 H) 5.95 (s, 1 H) 5.96 (s, 1H) 6.46 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=7.57 Hz, 1 H) 7.34 (d a, J=7.88 Hz, 1 H) 7.44 (d a, J=7.88 Hz, 2 H) 7.55 (d a, J=7.88 Hz, 2 H) 8.04 (s a, 1 H) 11.88 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.95 min, MH+ 591
[a]D20: 12.9° (c 0.272, DMF)
SFC quiral (método SFC-G): TR 1.87 min, MH+ 591 pureza quiral 99.55%.
Ejemplo 6B: Síntesis de ácido ((1S*,2S’')-2-((3-((1-(4-dorofeml)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxnico (Compuesto 6B) y separación en los Estereoisómeros 6BA y 6BB
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (405 mg, 0.932 mmol), 2-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropanocarboxilatometoxifenoxi)metil)ciclopropil)acetato de (1 S*,2S*)-metilo 6e (371 mg, 1.398 mmol) y diisopropiletilamina (321 pL, 1.864 mmol) en CH3CN (12 mL) se agitó a 80 °C durante 48 h. El disolvente se concentró a presión reducida. Se añadió hielo/agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (25-30 pm, 40 g, 80/20 de heptano/EtOAc). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar 2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxilato de (1 S*,2S”)-metilo 6g (580 mg).
Síntesis del Compuesto 6B y separación quiral en los Estereoisómeros 6BA y 6BB:
Se añadió gota a gota LiOH monohidrato (203 mg, 4.846 mmol) en agua (10 mL) a una solución de 2-((3-((1 -(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropanocarboxilato de (1 S*,2S*)-metilo 6g (600 mg, 0.969 mmol) en THF (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 7 h. Se añadió HCl 3 N para acidificar la solución, y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (20-45 pm, 40 g, 80/20 de heptano/EtOAc). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar ácido (1S*,2S’l)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropanocarboxílico (Compuesto 6B, 348 mg). Los dos estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 pm 250 x 30 mm, fase móvil: 55% de CO2 , 45% de iPrOH) para dar, después de la solidificación a partir de heptano/éter diisopropílico, el primer Estereoisómero eluido 6BA (109 mg) y el segundo Estereoisómero eluido 6BB (102 mg).
Estereoisómero 6BA:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-a6) 5 ppm 0.73 - 0.98 (m, 1 H) 0.98 - 1.08 (m, 1 H) 1.49 - 1.58 (m, 1 H) 1.58 - 1.71 (m, 1 H) 3.00 - 3.27 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.68 (dd, J=10.40, 7.57 Hz, 1 H) 3.84 (dd, J=10.56, 6.15 Hz, 1 H) 4.00 - 4.08 (m, 1 H) 4.50 -4.57 (m, 1 H) 5.57 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.95 (s, 1 H) 5.96 (s, 1H) 6.46 (d a, J=8.83 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=7.25 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=7.88 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.26 (s a, 1H) LC/MS (método LC-D): TR 2.82 min, MH+ 591
[a]D20: -12.5° (c 0.28, DMF)
SFC quiral (método SFC-G): TR 1.10 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 6BB:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-rá) 5 ppm 0.78 - 0.95 (m, 1 H) 1.00 -1.08 (m, 1H) 1.48 - 1.59 (m, 1 H) 1.59 - 1.68 (m, 1 H) 2.91 - 3.25 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.68 (d ad, J=10.40, 7.57 Hz, 1 H) 3.84 (dd, J=10.56, 6.15 Hz, 1 H) 4.00- 4.09 (m, 1 H) 4.30 -4.58 (m, 1 H) 5.57 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.95 (s, 1 H), 5.96 (s, 1H) 6.45 (d a, J=8.83 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=7.88
Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.20 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.20 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.20 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.11 (s a, 1 H) LC/MS (método LC-D): TR 2.81 min, MH+ 591
[a]D20: 81.4° (c 0.28, DMF)
SFC quiral (método SFC-G): TR 1.87 min, no MH+, pureza quiral 99.02%.
Ejemplo 7 : Síntesis de ácido (1r,3/)-3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)ciclobuteno-carboxílico (Compuesto 7) y separación en los Enantiómeros 7A y 7B
En un flujo de N2, a una solución de 3-hidroxciclobutanocarboxilato de etilo [17205-02-6] (1 g, 6.936 mmol) en CH2Cl2 (30 mL) se le añadieron piridina (0.838 mL) y anhídrido de tosilo (2.49 g, 7.63 mmol). La mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla se concentró al vacío, se suspendió en éter dietílico (200 mL) y se lavó con ácido clorhídrico 0.5 M (2 x 60 mL), una solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (2 x 60 mL), agua (60 mL) y salmuera (50 mL). La solución se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida para producir 3-(tosiloxi)ciclobutanocarboxilato de etilo 7a (2.0 g).
Síntesis del intermedio 7b:
Se añadió gota a gota 3-(tosiloxi)ciclobutanocarboxilato de etilo 7a (1.94 g, 6.504 mmol) a una mezcla de 3-metoxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (1.0 g, 5.912 mmol) y K2CO3 (981 mg, 7.095 mmol) en DMF (10 mL). La mezcla se agitó a 80 °C durante 16 h. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación se llevó a cabo mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (15-40 ^m, 80 g, heptano/EtOAc de 95/5 a 85/15). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar 3-(3-metoxi-5-nitrofenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-etilo 7b (1.1 g).
Síntesis del intermedio 7c:
Una solución de 3-(3-metoxi-5-nitrofenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1 r,3r)-etilo 7b (1.1 g, 3.725 mmol) en EtOH (20 mL) que contenía una cantidad catalítica de Pd al 10%/C (396 mg, 0.373 mmol) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 a temperatura ambiente durante 4 h. El catalizador se eliminó por filtración sobre un lecho corto de Celite® y la torta de
filtro se aclaró varias veces con MeOH. Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida para dar 3-(3-amino-5-metoxifenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1 r,3/)-etilo 7c (920 mg). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 7d:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (1.072 g, 2.467 mmol), 3-(3-amino-5-metoxi-fenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1 r,3í)-etilo 7c (720 mg, 2.714 mmol) y diisopropiletilamina (850 pL, 4.934 mmol) en CH3CN (32 mL) se agitó a 60 °C durante 4 días. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con HCl 1 N y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó al vacío para dar 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1 r,3r)-etilo 7d (1.6 g), que se usó tal cual en la siguiente etapa.
Síntesis del Compuesto 7 y separación quiral en los Enantiómeros 7A y 7B:
A 0 °C, se añadió en porciones LiOH monohidrato (325 mg, 7.75 mmol) a una solución de 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-etilo 7d (1.6 g, 2.585 mmol) en THF/agua/MeOH (1/1/1) (30 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con agua y se añadió HCl 3 N para acidificar la solución. La mezcla se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 pm, 80 g, CH2Cl2/MeOH de 100/0 a 98/2). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar ácido (1r,3r)-3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)ciclobuteno-carboxílico (Compuesto 7, 1.16 g). Los dos enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 pm 250 x 30 mm, fase móvil: 55% de CO2, 45% de MeOH) para dar, después de la solidificación a partir de heptano/éter diisopropílico, el primer Enantiómero eluido 7A (358 mg) y el segundo Enantiómero eluido 7B (388 mg).
Compuesto 7:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 2.19 - 2.30 (m, 2 H) 2.57 (qd, J=6.8, 3.6 Hz, 2 H) 2.95 - 3.05 (m, 1 H) 3.08 - 3.27 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 4.03 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.53 (td, J=10.4, 6.3 Hz, 1 H) 4.68 (quin, J=6.7 Hz, 1 H) 5.54 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.62 (s, 1 H) 5.85 (s, 1 H) 5.92 (s, 1 H) 6.53 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=7.9 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.45 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 12.34 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.95 min, MH+ 591
Enantiómero 7A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 2.20 - 2.28 (m, 2 H) 2.53 - 2.60 (m, 2 H) 2.95 - 3.04 (m, 1 H) 3.07 - 3.26 (m, 2 H) 3.60 (s, 3 H) 4.03 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.2, 6.3 Hz, 1 H) 4.67 (t, J=6.8 Hz, 1 H) 5.53 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.61 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.84 (s, 1 H) 5.91 (s, 1 H) 6.52 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.24 - 12.40 (m, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.96 min, MH+ 591
[a]D20: -41.6° (c 0.298, DMF)
SFC quiral (método SFC-H): TR 1.25 min, MH+ 591, pureza quiral 100%.
Enantiómero 7B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 2.19 - 2.28 (m, 2 H) 2.57 (qd, J=6.8, 3.9 Hz, 2 H) 2.95 - 3.04 (m, 1 H) 3.08 - 3.25 (m, 2 H) 3.60 (s, 3 H) 4.03 (td, J=10.5, 7.1 Hz, 1 H) 4.53 (td, J=10.4, 6.3 Hz, 1 H) 4.67 (quin, J=6.7 Hz, 1 H) 5.53 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.61 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.84 (s, 1 H) 5.91 (s, 1 H) 6.52 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.32 (s a, 1 h )
LC/MS (método LC-C): TR 2.95 min, MH+ 591
[a]D20: 43.7° (c 0.332, DMF)
SFC quiral (método SFC-H): TR 2.05 min, MH+ 591, pureza quiral 100%.
Ejemplo 8 : Síntesis de ácido (1s,3s)-3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)ciclobuteno-carboxílico (Compuesto 8) y separación en los Enantiómeros 8A y 8B
En un flujo de N2, a una solución de 3-hidroxiciclobutanocarboxilato de (1r,3/)-etilo [160351-88-2] (1.86 g, 12.901 mmol) en CH2CÍ2 (50 mL) se le añadieron piridina (1.56 mL) y anhídrido de tosilo (4.63 g, 14.192 mmol). La mezcla se agitó durante 6 h a temperatura ambiente. La mezcla se concentró al vacío, se suspendió en éter dietílico (200 mL) y se lavó con ácido clorhídrico 0.5 M (2 x 60 mL), una solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (2 x 60 mL), agua (60 mL) y salmuera (50 mL), y después se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida para producir 3-(tosiloxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3í)-etilo 8a (3.97 g). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 8b:
Se añadió gota a gota 3-(tosiloxi)ciclobutanocarboxilato de (1 r,3r)-etilo 8a (3.85 g, 12.904 mmol) a una mezcla de 3-metoxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (1.98 g, 11.73 mmol) y K2CO3 (1.95 g, 14.07 mmol) en DMF (20 mL). La mezcla se agitó a 80 °C durante 16 h. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 |um, 120 g, heptano/EtOAc de 95/5 a 85/15). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar 3-(3-metoxi-5-nitrofenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etilo 8b (2.04 g).
Síntesis del intermedio 8c:
Una solución de 3-(3-metoxi-5-nitrofenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etilo 8b (2.04 g, 6.908 mmol) en EtOH (50 mL) que contenía una cantidad catalítica de Pd al 10%/C (735 mg, 0.691 mmol) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 a temperatura ambiente durante 4 h. El catalizador se eliminó por filtración sobre un lecho corto de Celite® y la torta de filtro se aclaró varias veces con EtOH. Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida para dar 3-(3-amino-5-metoxifenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etilo 8c (1.8 g). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa. Síntesis del intermedio 8d:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (1.5 g, 3.462 mmol), 3-(3-amino-5-metoxifenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etilo 8c (870 mg, 3.462 mmol) y diisopropiletilamina (1.19 mL, 6.924 mmol) en CH3CN (30 mL) se agitó a 80 °C durante 16 h. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica
se lavó con HCl 1 N y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó al vacío. El compuesto se cristalizó en CH3CN/Et2O para dar el intermedio 8 (fracción 1, 820 mg). El filtrado se concentró a presión reducida para dar otro lote del intermedio en bruto 8 (fracción 2, 1 g).
La reacción se duplicó partiendo de 692 mg (1.592 mmol) de 1c (usando las mismas condiciones de reacción que se han descrito anteriormente). El producto de reacción se cristalizó en Et2O para dar el intermedio 8 (fracción 3, 400 mg). El filtrado se concentró a presión reducida para dar otro lote del intermedio 8 (fracción 4, 600 mg). Las fracciones 2 y 4 se combinaron y se purificaron por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 pm, 80 g, heptano/EtOAc de 90/10 a 70/30). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar la fracción 5 (250 mg). Las fracciones 1, 3 y 5 se combinaron y se secaron para dar 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etilo 8d (1.53 g).
Síntesis del Compuesto 8 y separación quiral en los Enantiómeros 8A y 8B:
A 0 °C, se añadió en porciones LiOH monohidrato (318 mg, 7.58 mmol) a una solución de 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etilo 8d (1.53 g, 2.529 mmol) en THF/agua/MeOH (1/1/1) (30 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con agua y se añadió HCl 3 N para acidificar la solución. La mezcla se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 pm, 40 g, CH2Cl2/MeOH de 100/0 a 98.5/1.5). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar ácido (1s,3s)-3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)ciclobutanocarboxílico (Compuesto 8, 1.26 g). Los dos enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 pm 250 x 20 mm, fase móvil: 55% de CO2 , 45% de EtOH) para dar, después de la solidificación de éter/éter diisopropílico, el primer Enantiómero eluido 8A (442 mg) y el segundo Enantiómero eluido 8B (433 mg).
Compuesto 8:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 2.03 - 2.13 (m, 2 H) 2.57 - 2.66 (m, 2 H) 2.66 - 2.76 (m, 1 H) 3.08 - 3.26 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 4.04 (td, J=10.2, 7.3 Hz, 1 H) 4.44 - 4.58 (m, 2 H) 5.54 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.66 (s, 1 H) 5.87 (s, 1 H) 5.94 (s, 1 H) 6.49 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.02 (d a, J=8.2 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.45 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.2 Hz, 2 h ) 8.04 (s, 1 H) 12.27 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.90 min, MH+ 591
Enantiómero 8A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 2.01 - 2.14 (m, 2 H) 2.55 - 2.72 (m, 3 H) 3.08 - 3.24 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 4.04 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.41 - 4.57 (m, 2 H) 5.54 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.66 (s, 1 H) 5.86 (s, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 6.48 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=8.2 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) LC/MS (método LC-C): TR 2.90 min, MH+ 591
[a]D20: -47.1° (c 0.274, DMF)
SFC quiral (método SFC-I): TR 1.18 min, MH+ 591, pureza quiral 100%.
Enantiómero 8B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 2.02 - 2.13 (m, 2 H) 2.55 - 2.70 (m, 3 H) 3.06 - 3.25 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 4.04 (td, J=10.2, 7.3 Hz, 1 H) 4.39 - 4.57 (m, 2 H) 5.54 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.66 (s, 1 H) 5.86 (s, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 6.48 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=7.9 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) LC/MS (método LC-C): TR 2.91 min, MH+ 591
[a]D20: 40.0° (c 0.25, DMF)
SFC quiral (método SFC-I): TR 2.16 min, MH+ 591, pureza quiral 100%.
Ejemplo 9 : Síntesis de ácido 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico (Compuesto 9) y separación quiral en los Enantiómeros 9A y 9B
Síntesis del intermedio 9a:
Se disolvieron 3-metoxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (1.1 g, 6.4 mmol), azodicarboxilato de di-ferc-butilo (TBAD, 1.65 g, 7.04 mmol) y trifenilfosfina (2.35 g, 8.96 mmol) en THF seco (25 mL) a temperatura ambiente en una atmósfera de N2. Una solución de 3-(hidroxilmetil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo [180464-87-3] (1.0 g, 6.4 mmol) en THF seco (5 mL) se añadió en porciones (exotermia). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El disolvente se evaporó a presión reducida y el aceite de color amarillo residual se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (100 g) usando un gradiente EtOAc:EtOH(3:1)/heptano de 0/100 a 50/50. Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se trituró con una pequeña cantidad de Et2O. El sólido se eliminó por filtración, se lavó con una pequeña cantidad de Et2O y se secó al vacío a 50 °C para dar 3-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 9a (1.06 g).
Síntesis del intermedio 9b:
Una solución de 3-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 9a (1.06 g, 3.44 mmol) en MeOH (150 mL) que contenía una cantidad catalítica de Pd al 10%/C (366 mg, 0.34 mmol) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 a temperatura ambiente durante 10 min. El catalizador se eliminó por filtración sobre un lecho corto de Celite® en una atmósfera de N2 y la torta de filtro se aclaró varias veces con MeOH. Los filtrados combinados se evaporaron para dar 3-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 9b (961 mg) en forma de un aceite de color negro que se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 9c:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (1.16 g, 2.67 mmol), 3-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 9b (961 mg, 3.47 mmol) y diisopropiletilamina (689 |iL, 4.0 mmol) en CH3CN (50 mL) se agitó a 80 °C durante una noche. El disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo se disolvió en CH2O 2. La solución orgánica se lavó con HCl 1 N y agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (100 g) usando un gradiente de EtOAc:EtOH (3:1)/heptano, 0/100 a 50/50. Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se suspendió en una pequeña cantidad de 10/1 de heptano/EtOAc, y el sólido se eliminó por filtración y se lavó con una pequeña cantidad de heptano. Los sólidos se secaron al vacío a 50 °C para dar 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 9c (1.21 g) en forma de un polvo de color blanco.
Síntesis del Compuesto 9 y separación en los Enantiómeros 9A y 9B:
Se añadió LiOH (92 mg, 3.84 mmol) a una solución de 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 9c (1.21 g, 1.92 mmol) en una mezcla de disolvente de MeOH (20 mL), THF (40 mL) y agua (20 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante
4 h. Se añadió HCl 1 N (1 mL) y los productos volátiles orgánicos se evaporaron a presión reducida. La mezcla acuosa residual se diluyó con agua, se acidificó con HCl 1 N a pH 2, y se extrajo dos veces con Et2O. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se secó al vacío a 50 °C para dar ácido 3-((3-((1 -(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluoro-metoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico (Compuesto 9, 1.06 g) en forma de un sólido de color amarillo pálido. Los enantiómeros del Compuesto 9 (994 mg) se separaron a por SFC quiral preparativa (Fase estacionaria: Chiralcel® Diacel OD 20 x 250 mm, fase móvil: CO2 , EtOH 0.4% de iPrNH2). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El primer producto eluido se repartió entre EtOAc y agua. Se añadió HCl 1 N y las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron, se evaporaron a presión reducida y se secaron al vacío a 50 °C para dar el Enantiómero 9A (353 mg). El segundo producto eluido se repartió entre EtOAc y agua. Se añadió HCl 1 N y las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron, se evaporaron a presión reducida y se secaron al vacío a 50 °C para dar el Enantiómero 9B (193 mg).
Compuesto 9:
1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.92 (s, 6 H) 3.06 - 3.27 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.87 (s, 2 H) 4.06 (td, J=10.3, 7.1 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.2, 6.6 Hz, 1 H) 5.58 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.75 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 - 5.97 (m, 2 H) 6.46 (d, J=9.1 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.41 - 7.47 (m, 2 H) 7.51 - 7.58 (m, 2 H) 8.03 (s a, 1 H) 12.37 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-A): TR 1.09 min, MH+ 617
Enantiómero 9A:
1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.92 (s, 6 H) 3.07 - 3.25 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.87 (s, 2 H) 3.98 - 4.11 (m, 1 H) 4.51 (td, J=10.2, 6.4 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.75 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 - 5.96 (m, 2 H) 6.46 (d, J=9.1 Hz, 1 h ) 7.01 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.50 - 7.59 (m, 2 H) 8.03 (s a, 1 H) 12.37 (s a, 1 H) LC/MS (método LC-B): TR 1.91 min, MH+ 617
[a]D20: -43.6° (c 0.5, DMF)
SFC quiral (método SFC-D): TR 5.26 min, MH+ 617 pureza quiral 98.6%.
Enantiómero 9B:
1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.93 (s, 6 H) 3.08 - 3.25 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.88 (s, 2 H) 4.00 - 4.11 (m, 1 H) 4.52 (td, J=10.2, 6.6 Hz, 1 H) 5.58 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.76 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 5.92 - 5.98 (m, 2 H) 6.47 (d, J=8.8 Hz, 1 h ) 7.01 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.4 Hz, 2 H) 7.51 - 7.60 (m, 2 H) 8.04 (s a, 1 H) 12.38 (s a, 1 H) LC/MS (método LC-B): TR 1.91 min, MH+ 617
[a]D20: 42.2° (c 0.41, DMF)
SFC quiral (método SFC-D): TR 6.47 min, MH+ 617 pureza quiral 99.5%.
Ejemplo 10: Síntesis de ácido (1s,3s)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluoro-metoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclobutenocarboxílico (Compuesto 10) y separación quiral en los Enantiómeros 10A y 10B
En un flujo de N2 , a una solución de 3-(hidroximetil)ciclobutanocarboxilato de metilo [89941-55-9] (1.4 g, 9.71 mmol) en CH2CI2 (20 mL) se le añadieron piridina (1.17 mL) y anhídrido de tosilo (3.49 g, 10.682 mmol). La mezcla se agitó durante 16 h a temperatura ambiente. La mezcla se concentró al vacío, se suspendió en éter dietílico (200 mL) y se lavó con ácido clorhídrico 0.5 M (2 x 50 mL), una solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (2 x 50 mL), y salmuera (50 mL). La mezcla se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida para producir 3-((tosiloxi)metil)ciclobutanocarboxilato de metilo 10a (2.15 g). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis de los intermedios 10b y 10c:
Se añadió gota a gota 3-((tosiloxi)metil)ciclobutanocarboxilato 10a (2.15 g, 7.206 mmol) a una mezcla de 3-metoxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (1.22 g, 7.206 mmol) y K2CO3 (1.5 g, 10.809 mmol) en DMF (14 mL). La mezcla se agitó a 60°C durante 16 h. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4 , se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación se llevó a cabo mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (15-40 ^m, 80 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 80/20). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad. Los estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralpack® AD-H 5 ^m 250 x 30 mm, fase móvil: 55% de CO2 , 45% de MeOH) para dar 3-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-metilo 10b (541 mg) y 3-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1r,3/)-metilo 10c (428 mg).
Síntesis del intermedio 10d:
Una solución de 3-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)ciclobuteno-carboxilato de (1s,3s)-metilo 10b (530 mg, 1.795 mmol) en MeOH (10 mL) que contenía una cantidad catalítica de Pd al 10%/C (191 mg, 0.179 mmol) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 a temperatura ambiente durante 4 h. El catalizador se eliminó por filtración sobre un lecho corto de Celite® y la torta de filtro se aclaró varias veces con MeOH. Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida para dar 3-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-metilo 10d (480 mg). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 10e:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (580 mg, 1.334 mmol), 3-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1 s,3s)-metilo 10d (460 mg, 1.734 mmol) y diisopropiletilamina (460 |iL, 2.667 mmol) en CH3CN (10 mL) se agitó a 60 °C durante 48 h. La mezcla se concentró a presión reducida y se recogió con EtOAc. La capa orgánica se lavó con HCl 1 N y agua, se secó sobre MgSO4 , se filtró y el disolvente se evaporó al vacío
para dar, después de la cristalización en Et2Ü/éter diisopropílico 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclobuteno-carboxilato de (1s,3s)-metilo 10e (625 mg).
Síntesis del Compuesto 10 y separación quiral en los Enantiómeros 10A y 10B:
A 0 °C, se añadió en porciones LiOH monohidrato (127 mg, 3.029 mmol) a una solución de 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2- (6-(trifluorometoxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-metilo 10e (625 mg, 1.01 mmol) en THF/agua/MeOH (1/1/1) (15 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 h. La mezcla se enfrió a 0 °C y se diluyó con agua. Se añadió HCl 3 N para acidificar la solución y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se cristalizó en Et2O/éter diisopropílico para dar ácido (1s,3s)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclobuteno-carboxílico (Compuesto 10, 440 mg). Los dos enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Whelk® O1 (S,S) 5 pm 250 x 21.1 mm, fase móvil: 58% de CO2, 42% de MeOH) para dar, después de la solidificación en heptano/éter diisopropílico/éter, el primer Enantiómero eluido 10A (116 mg) y el segundo Enantiómero eluido 10B (119 mg).
Compuesto 10:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.87 - 1.99 (m, 2 H) 2.18 - 2.30 (m, 2 H) 2.53 - 2.61 (m, 1 H) 2.97 (quin, J=8.9 Hz, 1 H) 3.08 - 3.27 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.78 (d a, J=6.3 Hz, 2 H) 4.05 (td, J=10.4, 7.2 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.5 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=8.8 Hz, 1 h ) 5.72 - 5.78 (m, 1 H) 5.94 (s, 2 H) 6.45 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 6.95 - 7.06 (m, 1 H) 7.34 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 12.08 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.94 min, MH+ 605
PF = 128°C
Enantiómero 10A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.84 - 1.97 (m, 2 H) 2.15 - 2.30 (m, 2 H) 2.53 - 2.61 (m, 1 H) 2.94 (quin, J=8.9 Hz, 1 H) 3.07 - 3.25 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.77 (d a, J=6.3 Hz, 2 H) 4.05 (td, J=10.4, 6.9 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.1 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.74 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 5.93 (s, 2 H) 6.44 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.08 min, MH+ 605
[a]D20: -44.0 (c 0.314, DMF)
SFC quiral (método SFC-J): TR 1.63 min, MH+ 605, pureza quiral 100%.
Enantiómero 10B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.85 - 1.97 (m, 2 H) 2.17 - 2.28 (m, 2 H) 2.53 - 2.58 (m, 1 H) 2.94 (quint, J=8.8 Hz, 1 H) 3.07 - 3.24 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.72 - 3.82 (m, 2 H) 4.05 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.4, 6.9 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.72 - 5.77 (m, 1 H) 5.93 (s, 2 H) 6.44 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.08 min, MH+ 605
[a]D20: 45.5° (c 0.308, DMF)
SFC quiral (método SFC-J): TR 2.14 min, MH+ 605, pureza quiral 99.57%.
Ejemplo 11: Síntesis de ácido (1r,3í)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclobuteno-carboxílico (Compuesto 11) y separación quiral en los Enantiómeros 11A y 11B
Una solución de 3-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)ciclobuteno-carboxilato de (1r,3í)-metilo 10c (410 mg, 1.388 mmol) en MeOH (10 mL) que contenía una cantidad catalítica de Pd al 10%/C (148 mg, 0.139 mmol) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 a temperatura ambiente durante 4 h. El catalizador se eliminó por filtración sobre un lecho corto de Celite® y la torta de filtro se aclaró varias veces con MeOH. Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida para dar 3-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1r,3í)-metilo 11a (370 mg). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 11b:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (460 mg, 1.058 mmol), 3-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1 r,3í)-metilo 11a (365 mg, 1.376 mmol) y diisopropiletilamina (365 gL, 2.117 mmol) en CH3CN (8 mL) se agitó a 60 °C durante 48 h. La mezcla se concentró a presión reducida y se recogió con EtOAc. La capa orgánica se lavó con HCl 1 N y agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó al vacío para dar, después de la cristalización en Et2O/éter diisopropílico 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1 r,3f)-metilo 11b (515 mg).
Síntesis del Compuesto 11 y separación quiral en los Enantiómeros 11A y 11B:
A 0 °C, se añadió en porciones LiOH monohidrato (105 mg, 2.496 mmol) a una solución de 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclobutanocarboxilato de ((1r,3í)-metilo 11b (515 mg, 0.832 mmol) en THF/agua/MeOH (1/1/1) (15 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 h. La mezcla se enfrió a 0 °C y se diluyó con agua. Se añadió HCl 3 N para acidificar la solución y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 24 g, CH2Cl2/CH3OH de 100/0 a 98/2). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar ácido (1 r,3r)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclobutanocarboxílico (Compuesto 11, 460 mg). Los dos enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Whelk® O1 (S,S) 5 gm 250 x 21.1 mm, fase móvil: 58% de CO2 , 42% de MeOH) para dar, después de la cristalización en éter/éter diisopropílico, el primer Enantiómero eluido 11A (121 mg) y el segundo Enantiómero eluido 11B (120 mg).
Compuesto 11:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.92 - 2.04 (m, 2 H) 2.21 - 2.31 (m, 2 H) 2.57 - 2.62 (m, 1 H) 3.04 - 3.26 (m, 3 H) 3.63 (s, 3 H) 3.88 (d a, J=6.9 Hz, 2 H) 4.00 - 4.11 (m, 1 H) 4.47 - 4.58 (m, 1 H) 5.57 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.78 (s, 1 H) 5.96 (d a, J=9.7 Hz, 2 H) 6.45 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.02 (d a, J=8.2 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.45 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 12.12 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.95 min, MH+ 605
Enantiómero 11A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.94 - 2.03 (m, 2 H) 2.21 - 2.31 (m, 2 H) 2.55 - 2.62 (m, 1 H) 3.04 - 3.25 (m, 3 H) 3.62
(s, 3 H) 3.87 (d, J=7.3 Hz, 2 H) 4.04 (td, J=10.4, 6.9 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.2, 6.3 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.78 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 5.94 (s, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 6.45 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.12 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.08 min, MH+ 605
[a]D20: -43.3° (c 0.319, DMF)
SFC quiral (método SFC-J): TR 1.73 min, MH+ 605, pureza quiral 100%.
Enantiómero 11B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.92 - 2.02 (m, 2 H) 2.21 - 2.32 (m, 2 H) 2.55 - 2.62 (m, 1 H) 3.04 - 3.25 (m, 3 H) 3.62 (s, 3 H) 3.87 (d, J=6.9 Hz, 2 H) 4.05 (td, J=10.3, 7.1 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.5 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.78 (t , J=1.9 Hz, 1 H) 5.94 (s, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 6.45 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=8.2 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.16 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.08 min, MH+ 605
[a]D20: 45.5° (c 0.323, DMF)
SFC quiral (método SFC-J): TR 2.36 min, MH+ 605, pureza quiral 99.61%.
Ejemplo 12: Síntesis de ácido 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)propanoico (Compuesto 12) y separación quiral en los Enantiómeros 12A y 12B
Se añadió 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (66 mg, 0.591 mmol) a una solución de 3-metoxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (2.0 g, 11.825 mmol), acetilencarboxilato de etilo (1.2 mL, 11.825 mmol) en CH2Cl2 (20 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se vertió en agua y las capas se decantaron. La capa orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre MgSO4 , se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida para dar 3-(3-metoxi-5-nitrofenoxi)acrilato de etilo 12a (3.22 g, mezcla E/Z).
Síntesis del intermedio 12b:
Una mezcla de 3-(3-metoxi-5-nitrofenoxi)acrilato de etilo 12a (3.2 g, 11.97 mmol) y Pd/C (10%) (2.5 g, 2.395 mmol) en CH3OH (100 mL) se hidrogenó a una presión de 3 bar durante 3 h. El catalizador se eliminó por filtración a través de un lecho de Celite®. La torta de filtro se aclaró con CH3OH y los filtrados combinados se concentraron a presión reducida. La purificación se llevó a cabo mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (15-40 ^m, 80 g, 75/25 de heptano/EtOAc). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar 3-(3-amino-5-metoxifenoxi)propanoato de etilo 12b (1.8 g).
Síntesis del intermedio 12c:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (1.0 g, 2.301 mmol), 3-(3-amino-5metoxifenoxi)-propanoato de etilo 12b (716 mg, 2.991 mmol) y diisopropiletilamina (793 pL, 4.602 mmol) en CH3CN (29 mL) se agitó a 60 °C durante 16 h. La mezcla se concentró a presión reducida y se recogió con EtOAc. La capa orgánica se lavó con HCl 1 N y agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó al vacío. La purificación se llevó a cabo mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (15-40 pm, 80 g, 75/25 de heptano/EtOAc). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar ácido 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)propanoico 12c (660 mg).
Síntesis del Compuesto 12 y separación quiral en los Enantiómeros 12A y 12B:
A 0 °C, se añadió en porciones LiOH monohidrato (79 mg, 1.889 mmol) a una solución de ácido 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)propanoico 12c (560 mg, 0.944 mmol) en THF/agua/MeOH (1/1/1) (15 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se enfrió a 0 °C y se diluyó con agua. Se añadió HCl 3 N para acidificar la solución. La mezcla se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante una fase inversa (Fase estacionaria: YMC-DispoPack AT ODS-25: 120 g, fase móvil: Gradiente del 75% de NH4HCO3 al 0.2%, 25% de CH3CN al 35% de NH4HCO3 al 0.2%, 65% de CH3CN). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar ácido 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)propanoico (Compuesto 12, 126 mg). Los dos enantiómeros se separaron en un lote de 70 mg a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 pm 250 x 20 mm, fase móvil: 65% de CO2 , 35% de iPrOH (+0.3% de iPrNH2) para dar, después de la liofilización en una mezcla de CH3CN (2 mL)/agua (8 mL), el primer Enantiómero eluido 12A (30 mg) y el segundo Enantiómero eluido 12B (35 mg).
Compuesto 12:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 2.56 (t, J=6.1 Hz, 2 H) 3.04 - 3.26 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.95 - 4.11 (m, 3 H) 4.43 -4.61 (m, 1 H) 5.56 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 5.74 (s, 1 H) 5.94 (d a, J=7.1 Hz, 2 H) 6.46 (d, J=9.1 Hz, 1 H) 7.00 (d a, J=8.1 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=8.1 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.84 min, MH+ 565
Enantiómero 12A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 2.62 (t a, J=6.0 Hz, 2 H) 3.09 - 3.24 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 4.00 - 4.10 (m, 3 H) 4.47 -4.57 (m, 1 H) 5.58 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.95 (d a, J=6.6 Hz, 2 H) 6.49 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.02 (d a, J=8.2 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 12.04 - 12.63 (m, 1 H) LC/MS (método LC-C): TR 2.83 min, MH+ 565
[a]D20: -47.3° (c 0.275, DMF)
SFC quiral (método SFC-K): TR 2.50 min, MH+ 565, pureza quiral 100%.
Enantiómero 12B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 2.58 - 2.67 (m, 2 H) 3.08 - 3.25 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.99 - 4.12 (m, 3 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.1 Hz, 1 H) 5.58 (s, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.95 (d a, J=6.6 Hz, 2 H) 6.50 (s a, 1 H) 7.02 (d a, J=7.9 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 12.35 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.83 min, MH+ 565
[a]D20: 41.8° (c 0.297, DMF)
SFC quiral (método SFC-K): TR 4.34 min, MH+ 565, pureza quiral 99.1%.
Ejemplo 13: Síntesis de ácido 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)pentanoico (Compuesto 13) y separación quiral en los Enantiómeros 13A y 13B
A una solución agitada de 5-bromo-valerato de metilo [CAS 5454-83-1] (1.06 mL, 7.19 mmol) en DMF (25 mL) se le añadieron 3-amino-5-metoxifenol [CAS 162155-27-3] (1.0 g, 7.19 mmol) y Cs2CO3 (4.68 g, 14.4 mmol). La reacción se agitó a 60 °C durante 18 h y se dejó que alcanzara temperatura ambiente. La mezcla se vertió en H2O (125 mL). El producto se extrajo (2x) con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron, y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice (25 g) utilizando un gradiente de heptano/EtOAc de 100/0 a 50/50. Las fracciones de producto se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se co-evaporaron con CH3CN. Los productos se secaron al vacío a 45 °C para proporcionar 5-(3-amino-5-metoxifenoxi)pentanoato de metilo 13a (200 mg).
Síntesis del intermedio 13b:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (340 mg, 0.78 mmol), 5-(3-amino-5-metoxifenoxi)pentanoato de metilo 13a (198 mg, 0.78 mmol) y diisopropiletilamina (270 pL, 1.56 mmol) en CH3CN (30 mL) se agitó a 60 °C durante 18 h. La mezcla se dejó que alcanzara la temperatura ambiente, y se vertió en agua (150 mL). El producto se extrajo (2x) con Et2O. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice (40 g) utilizando un gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15. Las fracciones de producto se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y se co-evaporaron con dioxano para proporcionar 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)pentanoato de metilo 13b (475 mg).
Síntesis del Compuesto 13 y separación en los Enantiómeros 13A y 13B:
Se añadió NaOH 1 M en agua (1.96 mL, 1.96 mmol) a una solución en agitación de 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)pentanoato de metilo 13b (475 mg, 0.78 mmol) en dioxano (5 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (20 mL) y HCl 1 N (2.1 mL). Después de la agitación durante 10 min, el producto se extrajo con 2-Me-THF. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (40 g) con un gradiente de 100/0/0/0 a 40/45/14.7/0.3 de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc. Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar un volumen residual de ~7.5 mL, permitiendo la precipitación del producto de reacción. Los sólidos se eliminaron por filtración, se lavaron (3x) con 1/3 de EtOAc/heptano y se secaron al vacío a 45 °C para proporcionar ácido 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)pentanoico (Compuesto 13, 139 mg) en forma de una mezcla racémica.
Los enantiómeros del Compuesto 13 (112 mg) se separaron a través de SFC quiral preparativa (Fase estacionaria: Chiralpak® Diacel OD 20 x 250 mm, fase móvil: CO2 , EtOH 0.4% de iPrNH2). Las fracciones que contenían el primer producto eluido se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y se co-evaporaron con CH3CN. El residuo se liofilizó en una mezcla de disolvente de CH3CN (1.5 mL) y agua (1 mL) para proporcionar el Enantiómero 13A (39 mg). Las fracciones que contenían el segundo producto eluido se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y se evaporaron con CH3CN. El residuo se liofilizó en CH3CN (1.75 mL) y agua (1.25 mL) para proporcionar el Enantiómero 13B (33 mg).
Compuesto 13
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.55 - 1.69 (m, 4 H) 2.25 (t, J=7.0 Hz, 2 H) 3.07 - 3.26 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.83 (t, J=5.9 Hz, 2 H) 4.05 (td, J=10.4, 7.2 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.4 Hz, 1 H) 5.56 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.75 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.91 - 5.97 (m, 2 H) 6.42 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.3, 1.7 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.38 - 7.48 (m, 2 H) 7.55 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 8.03 (s a, 1 H) 12.01 (s, 1 H)
LC/MS (método LC-A): TR 1.13 min, MH+ 593
Enantiómero 13A:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.55 - 1.69 (m, 4 H) 2.24 (t, J=7.0 Hz, 2 H) 3.07 - 3.26 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.83 (t, J=5.9 Hz, 2 H) 4.05 (td, J=10.5, 7.3 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.4 Hz, 1 H) 5.56 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.75 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.92 - 5.96 (m, 2 H) 6.42 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.39 - 7.48 (m, 2 H) 7.55 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 8.03 (s a, 1 H) 12.02 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-B): TR 2.08 min, MH+ 593
[a]D20: -48.6° (c 0.43, DMF)
SFC quiral (método SFC-D): TR 5.27 min, MH+ 593 pureza quiral 100%.
Enantiómero 13B:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.55 - 1.69 (m, 4 H) 2.24 (t, J=7.2 Hz, 2 H) 3.04 - 3.25 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.83 (t, J=5.9 Hz, 2 H) 4.05 (td, J=10.4, 7.2 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.2 Hz, 1 H) 5.56 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.75 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 - 5.96 (m, 2 H) 6.42 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.42 - 7.46 (m, 2 H) 7.55 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 8.03 (s a, 1 H) 12.00 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-B): TR 2.08 min, MH+ 593
[a]D20: 48.3° (c 0.42, DMF)
SFC quiral (método SFC-D): TR 6.94 min, MH+ 593 pureza quiral 100%.
Ejemplo 14: Síntesis de ácido 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluoro-metoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)pentanoico (Compuesto 14) y separación quiral en los Enantiómeros 14A y 14B
Síntesis del intermedio 14a:
En un tubo cerrado herméticamente en una atmósfera de N2 , se añadió PdCl2(PPh3)2 (1.5 g, 2.2 mmol) a una solución desgasificada de 1-bromo-3-metoxi-5-nitrobenceno [CAS 16618-67-0] (5.0 g, 22 mmol), acrilato de metilo (6.0 mL, 67 mmol) en CH3CN (45 ml) y trietilamina (12 mL). La reacción se agitó a 70 °C durante 18 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 gm, 120 g, gradiente de heptano/EtOAc de 90/10 a 75/25) para dar 3-(3-metoxi-5-nitrofenil)acrilato de (Ej-metilo 14a (2.0 g).
Síntesis del intermedio 14b:
En una atmósfera de N2 a 0 °C, se añadió gota a gota hidruro de diisobutilo y aluminio (1 M en CH2Cl2) (20 mL, 20 mmol) a una solución de 3-(3-metoxi-5-nitrofenil)acrilato de (E>metilo 14a (2.4 g, 10.12 mmol) en CH2Cl2 (65 ml). La reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. La mezcla se inactivó con HCl (3 N) y se extrajo con CH2Cl2. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida para dar f£/-3-(3-metoxi-5-nitrofenil)prop-2-en-1-ol 14b (2.1 g). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 14c:
En una atmósfera de N2 a 0 °C, se añadió lentamente peryodinano de Dess-Martin (24 mL, 11.04 mmol) a una solución de (E/-3-(3-metoxi-5-nitrofenil)prop-2-en-1-ol 14b (2.1 g, 10.04 mmol) en CH2Cl2 (64 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 h. Se añadió agua y la mezcla se filtró. El filtrado se extrajo con CH2Cl2 , se secó sobre MgSO4 y se evaporó a sequedad para dar (E>3-(3-metoxi-5-nitrofenil)acrilaldehído 14c (2.5 g). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 14d:
En una atmósfera de N2 , se añadió en una porción (carbetoximetileno)trifenilfosforano (5.0 g, 14.48 mmol) a una mezcla de (E>3-(3-metoxi-5-nitrofenil)acrilaldehído 14c (2.5 g, 9.65 mmol, 80% de pureza) en CH2Cl2 (62 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 gm, 80 g, gradiente de heptano/EtOAc de 85/15 a 60/30) para dar 5-(3-metoxi-5-nitrofenil)penta-2,4-dienoato de (2£,4£)-etilo 14d (2.1 g). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 14e:
Una mezcla de 5-(3-metoxi-5-nitrofenil)penta-2,4-dienoato de (2E,4E)-etilo 14d (1.9 g, 6.85 mmol) en EtOH (40 mL) y EtOAc (6.7 mL) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 durante 18 h con Pd/C (10%) (0.73 g, 0.69 mmol) como catalizador. El catalizador se eliminó por filtración a través de un lecho de Celite®. El Celite® se lavó con EtOAc y los filtrados combinados se concentraron al vacío. El residuo se hidrogenó de nuevo en EtOH (40 mL) y EtOAc (6.7 mL) a una presión atmosférica de H2 durante 72 h con Pd/C (10%) (0.73 g, 0.69 mmol) como catalizador. El catalizador se eliminó por filtración a través de un lecho de Celite®. El Celite® se lavó con EtOAc y los filtrados combinados se concentraron al vacío para dar 5-(3-amino-5-metoxifenil)pentanoato de etilo 14e (1.4 g). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 14f:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (1.6 g, 3.71 mmol), 5-(3-amino-5-metoxifenil)pentanoato de etilo 14e (1.4 g, 5.57 mmol) y diisopropiletilamina (1.3 mL, 7.43 mmol) en CH3CN (19 mL) se agitó a 80 °C durante 18 h. La mezcla se recogió con EtOAc, y se lavó con HCl 0.5 N (dos veces) y agua. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó al vacío. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 gm, 40 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25) para dar 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)pentanoato de etilo 14f (1.8 g). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del Compuesto 14 y separación quiral en los Enantiómeros 14A y 14B:
Una solución de LiOH monohidrato (0.62 g, 15 mmol) en agua (16 mL) se añadió a una solución de 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)pentanoato de etilo 14f (1.8 g, 2.98 mmol) en THF (36 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Se añadió de nuevo LiOH monohidrato (0.62 g, 15 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 h. La solución se acidificó con HCl (3 N) y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó con MgSO4 , se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 gm, 40 g, CH2Cl2/MeOH de 100/0 a 98/2) para dar ácido 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)pentanoico (compuesto 14, 920 mg). Los enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® a D-H 5 gm 250 x 30 mm, fase móvil: 55% de CO2 , 45% de EtOH) para dar, después de la solidificación en pentano/Et2O, el primer Enantiómero eluido 14A (248 mg) y el segundo Enantiómero eluido 14B (263 mg).
Compuesto 14:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.47 (s a, 4 H) 2.15 - 2.22 (m, 2 H) 2.34 - 2.43 (m, 2 H) 3.07 - 3.26 (m, 2 H) 3.62 (s,
3 H) 3.92 - 4.14 (m, 1 H) 4.40 - 4.64 (m, 1 H) 5.56 (d a, J=8.83 Hz, 1 H) 6.00 (s, 1 H) 6.13 (s a, 1 H) 6.20 (s, 1 H) 6.37 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=7.88 Hz, 1 H) 7.33 (d a, J=7.88 Hz, 1 H) 7.44 (d a, J=8.20 Hz, 2 H) 7.56 (d a, J=8.20 Hz, 2 h ) 8.04 (s a, 1 H) 12.01 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.18 min, MH+ 577
Enantiómero 14A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 1.40 - 1.61 (m, 4 H) 2.14 - 2.24 (m, 2 H) 2.33 - 2.42 (m, 2 H) 3.06 - 3.23 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.92 - 4.18 (m, 1 H) 4.40 - 4.59 (m, 1 H) 5.40 - 5.69 (m, 1 H) 6.00 (s, 1 H) 6.13 (s, 1 H) 6.20 (s, 1 H) 6.30 - 6.47 (m, 1 H) 6.91 - 7.12 (m, 1 H) 7.28 - 7.38 (m, 1 H) 7.44 (d, J=8.20 Hz, 2 H) 7.56 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 7.95 - 8.29 (m, 1 H) 11.99 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.21 min, MH+ 577
[a]D20: 55.8° (c 0.312, DMF)
SFC quiral (método SFC-L): TR 1.32 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Enantiómero 14B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 1.40 - 1.53 (m, 4 H) 2.15 - 2.25 (m, 2 H) 2.32 - 2.44 (m, 2 H) 3.00 - 3.27 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.95 - 4.18 (m, 1 H) 4.44 - 4.79 (m, 1 H) 5.57 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 6.00 (s, 1 H) 6.13 (s, 1 H) 6.20 (s, 1 h ) 6.37 (d a, J=8.83 Hz, 1 H) 7.02 (d a, J=7.25 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.20 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.20 Hz, 2 H) 7.56 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 8.04 (s, 1 H) 12.00 (m, 1 h )
LC/MS (método LC-C): TR 3.20 min, MH+ 577
[a]D20: -53.7° (c 0.326, DMF)
SFC quiral (método SFC-L): TR 1.74 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Ejemplo 15: Síntesis de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenN)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indoNn-1-N)etN)amino)-5-metoxifenil)butanoico (Compuesto 15) y separación quiral en los Enantiómeros 15A y 15B
Se añadieron bromuro de 4-etoxi-4-oxobutilcinc (5.2 mL, 2.6 mmol) y Pd2(dba)3 (0.20 g, 0.22 mmol) a una solución desgasificada de 1-bromo-3-metoxi-5-nitrobenceno [CAS 16618-67-0] (0.5 g, 2.2 mmol), tri-íerc-butilfosfina (87 mg, 0.43 mmol) y Cs2CO3 (1.4 g, 4.3 mmol) en THF (8.8 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h en una atmósfera de N2. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 gm, 80 g, heptano/EtOAc de 95/5 a 80/20) para dar 4-(3-metoxi-5-nitrofenil)butanoato de etilo 15a (370 mg).
Síntesis del intermedio 15b:
Una mezcla de 4-(3-metoxi-5-nitrofenil)butanoato de etilo 15a (0.37 g, 1.38 mmol) en EtOH (8.1 mL) se hidrogenó a una
presión atmosférica de H2 durante 18 h con Pd/C (10%) (0.15 g, 0.14 mmol) como catalizador. El catalizador se eliminó por filtración a través de un lecho de Celite®. El Celite® se lavó con EtOAc y el filtrado se concentró al vacío para dar 4-(3-amino-5-metoxifenil)butanoato de etilo 15b (350 mg). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 15c:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (0.43 g, 0.98 mmol), 4-(3-amino-5-metoxifenil)butanoato de etilo 15b (0.35 g, 1.48 mmol) y diisopropiletilamina (0.34 mL, 2.0 mmol) en CH3CN (5.1 mL) se agitó a 80 °C durante 18 h. La mezcla se recogió con EtOAc, y se lavó con HCl 0.5 N (dos veces) y agua. La capa orgánica se secó sobre MgSO4 , se filtró y el disolvente se evaporó al vacío. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 gm, 40 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25) para dar 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)butanoato de etilo 15c (340 mg).
Síntesis del Compuesto 15 y separación quiral en los Enantiómeros 15A y 15B:
En una atmósfera de N2, se añadió una solución de LiOH monohidrato (0.12 g, 2.9 mmol) en agua (3.1 mL) a una solución de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)butanoato de etilo 15c (0.34 g, 0.58 mmol) en THF (7 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 h. La solución se acidificó con HCl (3 N) y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó con MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 gm, 24 g, CH2Cl2/MeOH de 100/0 a 98/2) para dar, después de la solidificación en Et2O, ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)butanoico (compuesto 15, 285 mg). Los enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 gm 250 x 30 mm, fase móvil: 65% de CO2 , 35% de MeOH) para dar, después de la solidificación en Et2O, el primer Enantiómero eluido 15A (75 mg) y el segundo Enantiómero eluido 15B (85 mg).
Compuesto 15:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.66 - 1.86 (m, 2 H) 2.11 - 2.26 (m, 2 H) 2.32 - 2.44 (m, 2 H) 3.03 - 3.26 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 4.04 (td, J=10.32, 7.09 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.32, 6.15 Hz, 1 H) 5.56 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 6.00 (s, 1 H) 6.14 (s, 1 H) 6.21 (s, 1 H) 6.38 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.20, 1.26 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.20 Hz, 1 H) 7.38 - 7.50 (m, 2 H) 7.56 (d, J=8.20 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.01 (s, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.96 min, MH+ 563
Enantiómero 15A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.56 - 1.87 (m, 2 H) 2.11 - 2.21 (m, 2 H) 2.35 - 2.42 (m, 2 H) 3.02 - 3.22 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.97 - 4.18 (m, 1 H) 4.39 - 4.61 (m, 1 H) 5.56 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 5.99 (s, 1 H) 6.13 (s, 1 H) 6.20 (s, 1 H) 6.37 (d a, J=9.09 Hz, 1 H) 7.00 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 11.99 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.08 min, MH+ 563
[a]D20: -59.0° (c 0.293, DMF)
SFC quiral (método SFC-M): TR 2.19 min, no MH+, pureza quiral 99.31%.
Enantiómero 15B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.60 - 1.86 (m, 2 H) 2.10 - 2.21 (m, 2 H) 2.35 - 2.42 (m, 2 H) 3.02 - 3.23 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.82 - 4.26 (m, 1 H) 4.36 - 4.71 (m, 1 H) 5.56 (d, J=9.09 Hz, 1 H) 5.99 (s, 1 H) 6.13 (s, 1 H) 6.20 (s, 1 H) 6.37 (d, J=9.09 Hz, 1 H) 7.00 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 11.97 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.08 min, MH+ 563
[a]D20: 48.0° (c 0.225, DMF)
SFC quiral (método SFC-M): TR 3.73 min, no MH+, pureza quiral 99.61%.
Ejemplo 16: Síntesis de ácido 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxibencil)oxi)propanoico (Compuesto 16)
Se añadió cloruro de íerc-butildimetilsililo (6.1 g, 40.48 mmol) a una solución de (3-amino-5-metoxifenil)metanol [1261566 52-2] (3.1 g, 20.24 mmol) e imidazol (4.13 g, 60.71 mmol) en CH2Cl2 (130 mL) a temperatura ambiente. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h, se interrumpió con agua y se extrajo con CH2Cl2. La capa orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO4 , se filtró y se evaporó a sequedad. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 |um, 120 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 65/35). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar 3-(((íerc-butoldimetilsilil)oxi)metil)-5-metoxianilina 16a (3.4 g). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 16b:
Una mezcla de bromuro de bencilo (3.8 mL, 31.8 mmol), 3-(((íerc-butildimetilsilil)oxi)-metil)-5-metoxianilina 16a (3.4 g, 12.71 mmol), K2CO3 (5.27 g, 38,14 mmol) y DMAP (155 mg, 1.27 mmol) en CH3CN (66 mL) se agitó a 60 °C durante 18 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 |um, 120 g, heptano/EtOAc de 100/0 a 90/10). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar A/,A/-dibencil-3-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)-5-metoxianilina 16b (6 g).
Síntesis del intermedio 16c:
Se añadió TBAF (1 M en THF) (15.3 mL, 15.3 mmol) a una solución de W,W-dibencil-3-(((íerc-butildimetilsilil)oxi)metil)-5-metoxianilina 16b (5.69 g, 12.71 mmol) en Me-THF (64 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó 3 veces con salmuera y con una solución acuosa saturada de NaHCO3, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 |um, 120 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar (3-(dibencilamino)-5-metoxifenil)metanol 16 c (4.1 g).
Síntesis del intermedio 16d:
Se añadió gota a gota 3-bromopropionato de etilo (0.126 mL, 0.99 mmol) a una solución de (3-(dibencilamino)-5-metoxifenil)metanol 16c (300 mg, 0.90 mmol), NaH (dispersión al 60 % en aceite mineral) (40 mg, 0.99 mmol) en DMF (7.0 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Después de la dilución con EtOAc, el material en bruto se lavó con salmuera (5x). La fase orgánica se secó con MgSO4 y se evaporó a sequedad. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 pm, 24 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar 3-((3-(dibencilamino)-5-metoxibencil)oxi)propanoato de etilo 16d (97 mg).
Síntesis del intermedio 16e:
Una mezcla de 3-((3-(dibencilamino)-5-metoxibencil)oxi)propanoato de etilo 16d (97 mg, 0.22 mmol) en EtOH (1.3 mL) y EtOAc (0.66 mL) se hidrogenó a una presión de 7 bar de H2 a temperatura ambiente durante 18 h con Pd/C (10%) (24 mg, 0.022 mmol) como catalizador. El catalizador se eliminó por filtración a través de un lecho de Celite®. El Celite® se lavó con EtOAc y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 3-((3-amino-5-metoxibencil)oxi)-propanoato de etilo 16e (52 mg).
Síntesis del intermedio 16f:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (74 mg, 0.17 mmol), 3-((3-amino-5-metoxibencil)oxi)-propanoato de etilo 16e (52 mg, 0.21 mmol) y diisopropiletilamina (59 pL, 0.34 mmol) en CH3CN (0.89 mL) se agitó a 80 °C durante 18 h. La mezcla se concentró a presión reducida. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 pm, 12 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxibencil)oxi)propanoato de etilo 16f (48 mg).
Síntesis del Compuesto 16:
Una solución de LiOH monohidrato (33 mg, 0.79 mmol) en agua (0.43 mL) se añadió a una solución de 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxibencil)oxi)propanoato de etilo 16f (48 mg, 0.079 mmol) en THF (0.97 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 h. La solución se acidificó con HCl (3 N) y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó con MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 pm, 12 g, CH2Cl2/MeOH de 100/0 a 98/2). Se llevó a cabo una segunda purificación por medio de cromatografía de fase inversa (Fase estacionaria: YMC-actus Triart-C18 10 pm 30 x 150 mm, fase móvil: Gradiente del 65% de NH4HCO3 al 0.2%, 35% de CH3CN al 25% de NH4HCO3 al 0.2%, 75% de CH3CN). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar, después de la liofilización en CH3CN/agua, ácido 3-((3-((1 -(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxibencil)oxi)propanoico (compuesto 16, 5 mg).
Compuesto 16:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 2.34 - 2.42 (m, 2 H) 3.03 - 3.23 (m, 2 H) 3.49 - 3.59 (m, 2 H) 3.63 (s, 3 H) 3.97 - 4.21 (m, 2 H) 4.27 (s, 2 H) 4.49 - 4.57 (m, 1 H) 5.58 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 6.11 (s, 1 H) 6.21 (s, 1 H) 6.33 (s, 1 H) 6.48 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 7.00 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 7.56 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) LC/MS (método LC-C): TR 2.84 min, MH+ 579
Ejemplo 17: Síntesis de ácido 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoico (Compuesto 17) y separación en los Estereoisómeros 17A, 17B, 17C y 17D.
Se añadió gota a gota 4-bromo-2-metilbutanoato de íerc-butilo [CAS 1210410-44-8 (3.9 g, 16.446 mmol) a una mezcla de 3-metoxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (2.78 g, 16.446 mmol) y K2CO3 (3.409 g, 24.669 mmol) en DMF (25 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 7 h y a 60 °C durante 16 h. después del enfriamiento a 0 °C, la mezcla se diluyó con agua y hielo y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a sequedad. El residuo en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (20-45 pm, 80 g, fase móvil: 75/25 de heptano/EtOAc). Las fracciones puras se combinaron y el disolvente se evaporó a presión reducida para dar 4-(3-metoxi-5-nitrofenoxi)-2-metilbutanoato de íerc-butilo 17a (2.59 g).
Síntesis del intermedio 17b:
Una mezcla de 4-(3-metoxi-5-nitrofenoxi)-2-metilbutanoato de íerc-butilo 17a (2.9 g, 8.913 mmol) en MeOH (50 mL) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 durante 4 h con Pd/C (10%) (1.52 g, 1.426 mmol) como catalizador. El catalizador se eliminó por filtración a través de un lecho de Celite®. El Celite® se lavó con EtOAc y el filtrado se concentró a presión reducida. La mezcla se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (20-45 pm, 40 g, fase móvil: 85/15 de heptano/EtOAc). Las fracciones puras se combinaron y el disolvente se evaporó a sequedad para dar 4-(3-amino-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoato de íerc-butilo 17b (2.29 g).
Síntesis del intermedio 17c:
Una mezcla de 6-(trifluorometoxi)indolina [CAS 959235-95-1] (2.5 g, 12.3 mmol), ácido 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acético [CAS 170737-95-8] (2.47 g, 12.3 mmol), HATU (7 g, 18.5 mmol) y diisopropiletilamina (6.1 mL, 36.9 mmol) en DMF (40 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Se añadieron agua y EtOAc. La fase orgánica se separó, se lavó con agua, se secó sobre MgSO4 , se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (15-40 pm, 80 g, 85/15 de heptano/EtOAc). Las fracciones puras se combinaron y el disolvente se concentró a presión reducida para dar, después de cristalización en CHaClN/heptano, 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 17c (4.3 g).
Síntesis del intermedio 17d:
A -78 °C, en un flujo de N2, se añadió gota a gota LiHMDS 1 M en THF (19.7 mL, 19.7 mmol) a una mezcla de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 17c (3.8 g, 9.8 mmol) en THF (50 mL). Se añadió gota a gota TMSCl
(1.5 mL, 11.8 mmol). La mezcla se agitó durante 15 min a -78 °C y se añadió gota a gota una solución de N-bromosuccinimida (1.9 g, 10.8 mmol) en THF (35 mL). Después de agitar durante 2 h a -78 °C, la reacción se interrumpió con una solución saturada de NH4CL La mezcla se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida para dar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 17d (4.5 g). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del intermedio 17e y separación en los Estereoisómeros 17f, 17g, 17h y 17i:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 17d (2 g, 4.304 mmol), 4-(3-amino-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoato de íerc-butilo 17b (763 mg, 2.583 mmol) y diisopropiletilamina (1.5 mL, 8.608 mmol) en CH3CN (70 mL) se agitó a 60 °C durante 6 h. La mezcla se enfrió a 0 °C, se diluyó con agua y hielo, y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación se llevó a cabo mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (25-30 |um, 40 g, 80/20 de heptano/EtOAc). Una segunda purificación se realizo mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (25-30 |um, 40 g, 85/15 de heptano/EtOAc). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoato de íerc-butilo 17e (787 mg). Los estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® AD-H 5 |um 250 x 30 mm, fase móvil: 83% de CO2, 17% de EtOH) para dar una mezcla de 17f y 17g (348 mg), y 17h (164 mg) y 17i puros (184 mg). 17f y 17g se separaron adicionalmente a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® AD-H 5 |um 250 x 30 mm, fase móvil: 88% de CO2, 12% de EtOH) para dar 17f (145 mg) y 17g (140 mg).
Síntesis del Compuesto 17:
Una mezcla de 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoato de íerc-butilo 17e (180 mg, 0.265 mmol) en HCl (4 M en dioxano) (3 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla se concentró a presión reducida. Se añadieron 5 mL de trietilamina y la solución se evaporó al vacío. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 |um, 12 g, CH2Cl2/MeOH de 99/1 a 96/4). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad (m = 115 mg). El residuo se solidificó en pentano/éter diisopropílico y algunas gotas de CH3CN para dar ácido 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etií)amino)-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoico (Compuesto 17, 75 mg).
Síntesis del Estereoisómero 17A:
Una mezcla de 17f (145 mg, 0.214 mmol) en HCl (4 M en dioxano) (5 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. La mezcla se concentró a presión reducida. Se añadieron 5 mL de Et3N y la solución se evaporó al vacío. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 |um, 12 g, CH2Cl2/MeOH de 99.5/0.5 a 95/5). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad (m = 93 mg). El residuo se solidificó en pentano/éter diisopropílico y algunas gotas de CH3CN para dar el Estereoisómero 17A (64 mg).
Síntesis del Estereoisómero 17B:
Una mezcla de 17g (135 mg, 0.199 mmol) en HCl (4 M en dioxano) (5 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla se concentró a presión reducida. Se añadieron 5 mL de Et3N y la solución se evaporó al vacío. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 |um, 12 g, CH2Cl2/MeOH de 99.5/0.5 a 95/5). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad (m = 65 mg). El residuo se solidificó en pentano/éter diisopropílico y algunas gotas de CH3CN para dar el Estereoisómero 17B (38 mg).
Síntesis del Estereoisómero 17C:
Una mezcla de 17h (162 mg, 0.239 mmol) en HCl (4 M en dioxano) (5 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. La mezcla se concentró a presión reducida. Se añadieron 5 mL de Et3N y la solución se evaporó al vacío. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 |um, 12 g, CH2Cl2/MeOH de 99.5/0.5 a 95/5). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad (m = 85 mg). El residuo se solidificó en pentano/éter diisopropílico y algunas gotas de CH3CN para dar el Estereoisómero 17C (68 mg).
Síntesis del Estereoisómero 17D:
Una mezcla de 17i (179 mg, 0.264 mmol) en HCl (4 M en dioxano) (5 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. La mezcla se concentró a presión reducida. Se añadieron 5 mL de Et3N y la solución se evaporó al vacío. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 |um, 24 g, CH2Cl2/MeOH de 99.5/0.5 a 95/5). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad (m = 98 mg). El residuo se solidificó en pentano/éter diisopropílico y algunas gotas de CH3CN para dar el Estereoisómero 17D (54 mg).
Compuesto 17:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.11 (d a, J=6.62 Hz, 3 H) 1.54 - 1.82 (m, 1 H) 1.82 - 2.07 (m, 1 H) 3.10 - 3.22 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.77 - 3.87 (m, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 3.96 - 4.18 (m, 1 H) 4.30 - 4.43 (m, 1 H) 5.60 (d a, J=8.20 Hz, 1 H) 5.76 (s a, 1 H) 5.87 (s 1 H) 5.88 (s, 1H) 6.46 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 6.98 - 7.6 (m, 2 H) 7.15 (s a, 1 H) 7.28 - 7.44 (m, 2 h) 8.03
(s a, 1 H) 12.20 (s a, 1 H) (1H faltante en CH CO2H en DMSO)
LC/MS (método LC-C): TR 3.16 min, MH+ 623
Estereoisómero 17A:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 8 ppm 1.10 (d a, J=7.07 Hz, 3 H) 1.59 - 1.82 (m, 1 H) 1.82 - 2.04 (m, 1 H) 3.04 - 3.24 (m, 2
H) 3.61 (s, 3 H) 3.71 - 3.87 (m, 2 H) 3.90 (s, 3 H) 3.96 - 4.21 (m, 1 H) 4.32 - 4.56 (m, 1 H) 5.59 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 5.75
(s, 1 H) 5.85 (s, 1 H) 5.87 (s, 1H) 6.44 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 6.98 - 7.05 (m, 2 H) 7.14 (s, 1 H) 7.22 - 7.53 (m, 2 H) 8.02 a, 1 H) 12.19 (s a, 1 H) (1H faltante en CH CO2H en DMSO)
LC/MS (método LC-D): TR 3.07 min, MH+ 623
[a]D20: -18.4° (c 0.305, DMF)
SFC quiral (método SFC-N): TR 4.75 min, MH+ 623, pureza quiral 99.3%.
Estereoisómero 17B:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 8 ppm 1.09 (d a, J=6.57 Hz, 3 H) 1.64 - 1.83 (m, 1 H) 1.83 - 2.09 (m, 1 H) 3.00 - 3.23 (m, 2
H) 3.61 (s, 3 H) 3.68 - 3.86 (m, 2 H) 3.90 (m, 3 H) 3.96 - 4.21 (m, 1 H) 4.26 - 4.56 (m, 1 H) 5.59 (d a, J=8.08 Hz, 1 H) 5.75
(s a, 1 H) 5.86 (s, 1H) 5.87 (s, 1 H) 6.44 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 6.97 - 7.06 (m, 2 H) 7.14 (s, 1 H) 7.26 - 7.34 (m, 2 h ) 8.02
(s a, 1 h ) 12.20 (s a, 1 H) (1H faltante en CH CO2H en DMSO)
LC/MS (método LC-D): TR 3.03 min, MH+ 623
[a]D20: -51.0° (c 0.298, DMF)
SFC quiral (método SFC-N): TR 5.90 min, MH+ 623, pureza quiral 97.94%.
Estereoisómero 17C:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 8 ppm 1.09 (d, J=6.57 Hz, 3 H) 1.61 - 1.84 (m, 1 H) 1.88 - 2.02 (m, 1 H) 3.07 - 3.26 (m, 2 H)
3.61 (s, 3 H) 3.76 - 3.88 (m, 2 h ) 3.90 (s, 3 H) 3.97 - 4.18 (m, 1 H) 4.27 - 4.45 (m, 1 H) 5.59 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 5.75 (s,
1 H) 5.86 (s a, 1 H) 5.87 (s a, 1 H) 6.39 - 6.49 (m, 1 H) 6.97 - 7.02 (m, 1 H) 7.02 - 7.05 (m, 1 H) 7.14 (d, J=2.02 Hz, 1 h ) 7.29 - 7.32 (m, 1 H) 7.32 - 7.37 (m, 1 H) 8.02 (s, 1 H) 12.19 (s a, 1 H) (1H faltante en CH CO2H en DMSO)
LC/MS (método LC-C): TR 3.16 min, MH+ 623
[a]D20: 41.6° (c 0.257, DMF)
SFC quiral (método SFC-N): TR 6.86 min, MH+ 623, pureza quiral 98.89%.
Estereoisómero 17D:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 8 ppm 1.11 (d, J=6.94 Hz, 3 H) 1.70 (dq, J=13.44, 6.55 Hz, 1 H) 1.97 (dq, J=13.64, 6.80 Hz,
1 H) 3.09 -3.26 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.85 (t a, J=6.31 Hz, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 3.97 - 4.09 (m, 1 H) 4.31 - 4.47 (m, 1 H) 5.60 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 5.76 (s, 1 H) 5.86 (s a, 1 H) 5.88 (s a, 1 H) 6.45 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 7.00 - 7.08 (m, 2 H) 7.15 (d, J=1.26 Hz, 1 H) 7.32 (d, J=8.20 Hz, 1 H) 7.34 (d a, J=8.20 Hz, 1 H) 8.03 (s a, 1 H) 12.18 (s a, 1 H) (1H faltante en CH
CO2H en DMSO)
LC/MS (método LC-C): TR 3.15 min, MH+ 623
[a]D20: 15.8° (c 0.297, DMF)
SFC quiral (método SFC-N): TR 8.14 min, MH+ 623, pureza quiral 98.6%.
Ejemplo 18: Síntesis de ácido 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetil-butanoico (Compuesto 18) y separación quiral en los Enantiómeros 18A y 18B.
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 17d (800 mg, 1.291 mmol), 4-(3-amino-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoato de metilo 2a (518 mg, 1.937 mmol) y diisopropiletilamina (445 gL, 2.583 mmol) en CH3CN (6 mL) se agitó a 80 °C durante 48 h. La mezcla se concentró a sequedad. El residuo se recogió con EtOAc, se lavó con HCl 1 N (dos veces), y con agua. La capa orgánica se secó sobre MgSÜ4, se filtró y el disolvente se evaporó al vacío para dar 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoato de metilo 18a (950 mg). El compuesto se usó como tal en la siguiente etapa.
Síntesis del Compuesto 18 y separación quiral en los Enantiómeros 18A y 18B:
A 0 °C, se añadió en porciones LiOH monohidrato (184 mg, 4.38 mmol) a una solución de 4-(3-((1 -(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluoro-metoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoato de metilo 18a (950 mg, 1.459 mmol) en THF/MeOH/agua (1/1/1) (30 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h, y después a 60 °C durante 16 h. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa acuosa se acidificó lentamente a pH 5-6 con HCl 3 N y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se evaporó al vacío. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 40 g, CH2Cl2/CH3OH, de 100/0 a 99/1). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad (m = 350 mg). Una pequeña porción del residuo se cristalizó en Et2O/éter diisopropílico. El precipitado se eliminó por filtración y se secó para dar ácido 4-(3-((1 -(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoico (Compuesto 18, 25 mg). La cantidad restante (290 mg) se usó para la separación quiral. Los enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 gm 250 x 30 mm, fase móvil: 75% de CO2 , 25% de MeOH) para dar, después de la solidificación a partir de heptano/éter diisopropílico, el primer Enantiómero eluido 18A (68 mg) y el segundo Enantiómero eluido 18B (70 mg).
Compuesto 18:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.14 (d, J=2.2 Hz, 6 H) 1.87 (t, J=7.1 Hz, 2 H) 3.09 - 3.26 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.80 - 3.88 (m, 2 H) 3.90 (s, 3 H) 3.98 - 4.07 (m, 1 H) 4.33 - 4.42 (m, 1 H) 5.60 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.74 (s, 1 H) 5.85 (s, 1 H) 5.87 (s, 1 H) 6.44 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.98 - 7.06 (m, 2 H) 7.15 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 7.33 (dd, J=11.7, 8.2 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.23 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.40 min, MH+ 637
PF = 138°C
Enantiómero 18A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.14 (d, J=2.2 Hz, 6 H) 1.87 (t a, J=7.1 Hz, 2 H) 3.09 - 3.25 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.81 - 3.87 (m, 2 H) 3.90 (s, 3 H) 3.98 - 4.07 (m, 1 H) 4.33 - 4.42 (m, 1 H) 5.59 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.74 (s, 1 H) 5.84 (s, 1 H) 5.87 (s, 1 H) 6.44 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 6.98 - 7.06 (m, 2 H) 7.14 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.33 (dd, J=10.7, 8.5 Hz, 2 H) 8.02 (s, 1 H) 11.94 - 12.35 (m, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.40 min, MH+ 637
[a]D20: -30.2° (c 0.315, DMF)
SFC quiral (método SFC-O): TR 1.31 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Enantiómero 18B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.13 (d, J=2.5 Hz, 6 H) 1.87 (t, J=7.3 Hz, 2 H) 3.10 - 3.25 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.80 - 3.87 (m, 2 H) 3.90 (s, 3 H) 4.02 (td, J=10.2, 7.1 Hz, 1 H) 4.33 - 4.41 (m, 1 H) 5.59 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.73 - 5.76 (m, 1 H) 5.84 (s, 1 H) 5.87 (s, 1 H) 6.44 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 6.97 - 7.08 (m, 2 H) 7.14 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.33 (dd, J=11.2, 8.4 Hz, 2 H) 8.02 (s, 1 H) 11.92 - 12.44 (m, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.40 min, MH+ 637
[a]D20: 28.0° (c 0.354, DMF)
SFC quiral (método SFC-O): TR 1.60 min, no MH+, pureza quiral 99.45%.
Ejemplo 19A: Síntesis de ácido (1R*2R*)-2-((3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Compuesto 19A) y separación en los Estereoisómeros 19AA y 19AB.
Síntesis del intermedio 19a:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 17d (0.37 g, 0.796 mmol), 2-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)cidopropanocarboxiiatometoxifenoxi)metil)ciclopropil)acetato de (1 R*,2R*)-metilo 6d (0.317 g, 1.194 mmol) y diisopropiletilamina (0.274 mL, 1.593 mmol) en CH3CN (10 mL) se agitó a 80 °C durante 6 h. La reacción se enfrió a 0 °C y se diluyó con agua y hielo. La mezcla se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a sequedad. El compuesto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (25-30 pm, 24 g, 80/20 de heptano/EtOAc). Las fracciones puras se combinaron y el disolvente se eliminó a presión reducida para dar 2-((3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxilato de (1 R*,2R*)-metilo 19a (306 mg).
Síntesis del Compuesto 19A y separación en los Estereoisómeros 19AA y 19AB:
Una solución de LiOH monohidrato (77 mg, 1.826 mmol) en agua (5 mL) se añadió a una solución de 2-((3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxilato de (1 R*,2R*)-metilo 19a (237 mg, 0.365 mmol) en THF (5 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h y se concentró al vacío. El compuesto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (20-45 pm, 24 g, CH2Cl2/MeOH de 99.5/0.5 a 98/2). Las fracciones puras se combinaron y se concentraron a presión reducida para dar ácido (1R*,2R*)-2-((3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropanocarboxílico (Compuesto 19A, 170 mg). Los estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 pm 250 x 30 mm, fase móvil: 65% de CO2 , 35% de MeOH) para dar, después de la solidificación en CH3CN/éter diisopropílico/heptano, el primer Estereoisómero eluido 19AA (67 mg) y el segundo Estereoisómero eluido 19AB (59 mg).
Estereoisómero 19AA:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 0.85 -0.95 (m, 1 H) 0.99 - 1.08 (m, 1 H) 1.55 (dt, J=8.12, 4.30 Hz, 1 H) 1.57 - 1.67
(m, 1 H) 3.10 - 3.25 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 - 3.73 (m, 1 H) 3.83 (d ad, J=10.40, 6.31 Hz, 1 H) 3.90 (s, 3 H) 3.98 -4.08 (m, 1 H) 4.29 - 4.44 (m, 1 H) 5.60 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 5.76 (s, 1 H) 5.87 (s, 2 H) 6.45 (d a, J=8.83 Hz, 1 H) 6.96 - 7.07 (m, 2 H) 7.14 (d, J=1.26 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=8.51 Hz, 1 H) 7.32 - 7.38 (m, 1 H) 8.02 (s a, 1 H) 12.23 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.84 min, MH+ 621
[a]D20: -65.6° (c 0.25, DMF)
SFC quiral (método SFC-P): TR 1.44 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 19AB:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-dfe) 5 ppm 0.87 - 0.95 (m, 1 H) 0.99 - 1.07 (m, 1 H) 1.50 - 1.57 (m, 1 H) 1.59 - 1.70 (m, 1 H) 3.09 - 3.24 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.63 - 3.72 (m, 1 H) 3.85 (d ad, J=10.40, 6.31 Hz, 1 H) 3.90 (s, 3 H) 3.99 - 4.09 (m, 1 H) 4.30 - 4.44 (m, 1 H) 5.60 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 5.76 (s, 1 H) 5.87 (s, 2 H) 6.45 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 7.00 - 7.09 (m, 2 H) 7.14 (d, J=1.26 Hz, 1 H) 7.30 (d, J=8.51 Hz, 1 H) 7.34 (d a, J=8.20 Hz, 1 H) 8.02 (s a, 1 H) 12.26 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.85 min, MH+ 621
[a]D20: 37.1° (c 0.28, DMF)
SFC quiral (método SFC-P): TR 2.20 min, no MH+, pureza quiral 99.84%.
Ejemplo 19B: Síntesis de ácido (1 S *2 S ’,)-2-((3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Compuesto 19B) y separación en los Estereoisómeros 19BA y 19BB.
Síntesis del intermedio 19b:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etanona 17d (0.39 g, 0.839 mmol), 2-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)ciclopropanocarboxilatometoxifenoxi)metil)ciclopropil)acetato de (1 S*,2S*)-metilo 6e (0.334 g, 1.259 mmol) y diisopropiletilamina (0.289 mL, 1.679 mmol) en CH3CN (10 mL) se agitó a 80 °C durante 7 h. La reacción se enfrió a 0 °C y se diluyó con agua y hielo. La mezcla se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a sequedad. El compuesto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (25-30 |jm, 24 g, 80/20 de heptano/EtOAc). Las fracciones puras se combinaron y el disolvente se eliminó a presión reducida para dar 2-((3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxilato de (1 S*,2S<)-metilo 19b (308 mg).
Síntesis del Compuesto 19B y separación en los Estereoisómeros 19BA y 19BB:
Una solución de LiOH monohidrato (98 mg, 2.334 mmol) en agua (5 mL) se añadió a una solución de 2-((3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxilato de (1 S*,2S*)-metilo 19b (303 mg, 0.467 mmol) en THF (5 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h y después se concentró al vacío. El compuesto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (20-45 |jm, 24 g, CH2Cl2/MeOH de 100/0 a 98/2). Las fracciones puras se combinaron y se concentraron a presión reducida para dar ácido (1 S*,2S*)-2-((3-((1 -(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1 -il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Compuesto 19B, 250 mg). Los estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase
estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 pm 250 x 30 mm, fase móvil: 65% de CO2, 35% de MeOH) para dar, después de la solidificación en CH3CN/éter diisopropílico/heptano, el primer Estereoisómero eluido 19BA (97 mg) y el segundo Estereoisómero eluido 19BB (103 mg).
Estereoisómero 19BA:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-a6) ó ppm 0.85 - 0.95 (m, 1 H) 0.95 - 1.09 (m, 1 H) 1.54 (dt, J=8.34, 4.42 Hz, 1 H) 1.55 - 1.66 (m, 1 H) 3.09 - 3.25 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.66 (dd, J=10.36, 7.33 Hz, 1 H) 3.85 (dd, J=10.61,6.06 Hz, 1 H) 3.89 (s, 3 H) 3.96 - 4.12 (m, 1 H) 4.26 - 4.43 (m, 1 H) 5.59 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 5.76 (s, 1 H) 5.87 (s, 1 H) 5.88 (s, 1H) 6.44 (d, J=9.09 Hz, 1 H) 6.93 - 7.06 (m, 2 H) 7.14 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 7.30 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 8.02 (s, 1 H) 12.20 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.84 min, MH+ 621
[a]D20: -47.6° (c 0.271, DMF)
SFC quiral (método SFC-P): TR 1.48 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 19BB:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 0.85 - 0.97 (m, 1 H) 0.98 - 1.07 (m, 1 H) 1.51 - 1.58 (m, 1 H) 1.55 -1.67 (m, 1 H) 3.07 - 3.25 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.65 - 3.74 (m, 1 H) 3.83 (d ad, J=10.36, 5.81 Hz, 1 H) 3.90 (s, 3 H) 3.97 - 4.14 (m, 1 h ) 4.30 - 4.42 (m, 1 H) 5.60 (d a, J=8.59 Hz, 1 h ) 5.76 (s, 1 H) 5.87 (s, 2 H) 6.44 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 6.98 - 7.07 (m, 2 H) 7.14 (d, J=1.52 Hz, 1 H) 7.30 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.33 (d a, J=8.08 Hz, 1 H) 8.02 (s, 1 H) 12.24 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.84 min, MH+ 621
[a]D20: 56.8° (c 0.264, DMF)
SFC quiral (método SFC-P): TR 2.12 min, no MH+, pureza quiral 99.59%.
Ejemplo 20: Síntesis de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metoxi-6-(trifluoro-metil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)-2-metilbutanoico (Compuesto 20) y separación en los Estereoisómeros 20A, 20B, 20C y 20D
Una mezcla de 1-metoxi-4-nitro-2-(trifluorometil)benceno [CAS 654-76-2] (24.5 g, 110.8 mmol) y 4-clorofenoxiacetonitrilo [CAS 3598-13-8] (20.4 g, 121.9 mmol) en DMF (100 mL) se añadió gota a gota durante 30 min a una solución agitada de
tBuOK (27.35 g, 243.7 mmol) en DMF (100 mL) a -10 °C. Después de la adición, la solución de color púrpura se mantuvo a -10 °C durante 1 h. Se añadieron 500 mL de hielo-agua y 500 mL de HCl 6 N y el precipitado se eliminó por filtración, se lavó con agua y se secó a presión reducida para proporcionar 40.4 g de 2-(5-metoxi-2-nitro-4-(trifluorometil)-fenil)acetonitrilo 20a (usado tal cual en la siguiente etapa).
Síntesis del intermedio 20b:
Una solución de 2-(5-metoxi-2-nitro-4-(trifluorometil)fenil)acetonitrilo 20a (26 g, 99.9 mmol) en etanol/agua (9/1) (500 mL) y AcOH (5.2 mL) se hidrogenó durante 1 h a una presión de 3.5 Bar con Pd al 10%/C (15.3 g) como el catalizador. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de Celite® y la torta de filtró se lavó con una mezcla de disolvente de CH2Cl2 y CH3OH. Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida. El residuo se filtró a través de un filtro de vidrio cargado con sílice 60-200 gm usando 80/20 de heptano/EtOAc como eluyente. Las fracciones que contenían el compuesto esperado se combinaron y el disolvente se concentró a presión reducida para dar 5-metoxi-6-(trifluorometil)-1H-indol 20b (15.6 g).
Síntesis del intermedio 20c:
A 0 °C, se añadió gota a gota BH3-Piridina (23.5 ml, 232.4 mmol) a una solución de 5-metoxi-6-(trifluorometil)-1 H-indol 20b (10 g, 46.5 mmol) en EtOH (60 ml). Se añadió lentamente HCl 6 N (140 ml) mientras se mantenía la temperatura por debajo de 10 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h. Se añadió agua (200 ml) y la mezcla se basificó a pH 8-9 con una solución acuosa concentrada de NaOH (la temperatura de reacción se mantuvo por debajo de 20 °C). El precipitado se retiró por filtración, se lavó con agua (dos veces) y se co-evaporó a presión reducida con tolueno para dar 5-metoxi-6-(trifluorometil)indolina 20c (9 g).
Síntesis del Compuesto 20 y separación en los Estereoisómeros 20A, 20B, 20C y 20D:
El Compuesto 20 (330 mg) se obtuvo siguiendo los procedimientos descritos para la síntesis del Compuesto 1 partiendo del intermedio 20c. Los 4 estereoisómeros 20A (50 mg), 20B (18 mg), 20C (68 mg) y 20D (32 mg) se obtuvieron, en este orden de elución, a través de dos separación por SFC quiral posteriores: (Fase estacionaria: Chiralpak® AD-H 5 gm 250 x 30 mm, fase móvil: 40% de CO2 , 60% de iPrOH) y (Fase estacionaria: Chiralcel® OJ-H 5 gm 250 x 20 mm, fase móvil: 60% de CO2 , 40% de MeOH); seguido de la purificación individual por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 12 g, CH2Cl2/MeOH de 99.5/0.5 a 90/10) y la solidificación posterior en CH3CN/éter diisopropílico/heptano.
Estereoisómero 20A:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.10 (d, J=7.07 Hz, 3 H) 1.60 - 1.72 (m, 1 H) 1.90 - 2.01 (m, 1 H) 3.20 - 3.32 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.79 - 3.90 (m, 5 H) 3.93 - 4.09 (m, 1 H) 4.42 - 4.53 (m, 1 H) 5.53 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 5.74 (s, 1 H) 5.93 (s a, 1 H) 5.95 (s a, 1 H) 6.38 (d a, J=9.09 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d a, J=8.08 Hz, 2 H) 7.55 (d a, J=8.08 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.16 (s a 1 H) (1H faltante en CH CO2H en DMSO)
LC/MS (método LC-C): TR 2.95 min, MH+ 607
[a]D20: -40.9° (c 0.257, DMF)
SFC quiral (método SFC-Q): TR 1.07 min, MH+ 607, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 20B:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.09 (d, J=6.94 Hz, 3 H) 1.69 (dq, J=13.52, 6.53 Hz, 1 H) 1.88 - 2.11 (m, 1 H) 3.08 -3.28 (m, 2 H) 3.53 - 3.66 (m, 3 h ) 3.79 - 3.90 (m, 5 H) 3.92 - 4.11 (m, 1 H) 3.92 - 4.11 (m, 1 H) 4.32 - 4.67 (m, 1 H) 5.54 (d, J=8.51 Hz, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 5.95 (s, 1H) 6.30 - 6.45 (m, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.20 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.20 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.05 (s a, 1 H) (1H faltante en CH CO2H en DMSO)
LC/MS (método LC-C): TR 2.95 min, MH+ 607
[a]D20: -50.0° (c 0.266, DMF)
SFC quiral (método SFC-Q): TR 1.07 min, MH+ 607, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 20C:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.09 (d a, J=6.94 Hz, 3 H) 1.52 - 1.83 (m, 1 H) 1.86 - 2.06 (m, 1 H) 3.07 - 3.28 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.73 - 3.91 (m, 5 H) 3.94 - 4.04 (m, 1 H) 4.37 - 4.58 (m, 1 h ) 5.54 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 5.95 (s, 1H) 6.39 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d a, J=8.20 Hz, 2 H) 7.55 (d a, J=8.20 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.13 (s a, 1 H) (1H faltante en CH CO2H en DMSO)
LC/MS (método LC-C): TR 2.95 min, MH+ 607
[a]D20: 26.0° (c 0.288, DMF)
SFC quiral (método SFC-Q): TR 1.56 min, MH+ 607, pureza quiral 99.68%.
Estereoisómero 20D:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-cfe) 6 ppm 1.09 (d, J=7.07 Hz, 3 H) 1.60 - 1.75 (m, 1 H) 1.85 - 1.99 (m, 1 H) 3.11 - 3.27 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.77 - 3.91 (m, 5 H) 3.93 - 4.05 (m, 1 H) 4.44 - 4.56 (m, 1 H) 5.54 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 5.74 (s, 1 H) 5.93 (s a, 1 H) 5.95 (s a, 1 H) 6.38 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 7.55 (d a, J=8.08 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.22 (s a, 1 H) (1H faltante en CH CO2H en DMSO)
LC/MS (método LC-C): TR 2.96 min, MH+ 607
[a]D20: 57.4° (c 0.27, DMF)
SFC quiral (método SFC-Q): TR 2.19 min, MH+ 607, pureza quiral 100%.
Ejemplo 21: Síntesis de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metoxi-6-(trifluoro-metil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoico (Compuesto 21) y separación quiral en los Enantiómeros 21A y 21B
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-dorofenil)-1-(5-metoxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)etanona 20e (904 mg, 2.014 mmol), 4-(3-amino-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoato de metilo 2a (700 mg, 2.619 mmol) y diisopropiletilamina (694 pL, 4.029 mmol) en CH3CN (10 mL) se agitó a 80 °C durante 16 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se recogió por completo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó para dar 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metoxi-6-(trifluorometil)indolin-1 -il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoato de metilo 21a (1.58 g), que se usó tal cual en la siguiente etapa.
Síntesis del Compuesto 21 y separación quiral en los Enantiómeros 21A y 21B:
A 0 °C, se añadió LiOH monohidrato (254 mg, 6.046 mmol) a una solución de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metoxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoato de metilo 21a (1.28 g, 2.015 mmol) en THF/MeOH/agua (15 mL). La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 48 h. La mezcla se enfrió a 0 °C y se añadió agua. La mezcla se acidificó a pH 4-5 con HCl 3 N y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se evaporó. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 pm, 40 g, CH2Cl2/CH3OH: 100/0 a 98/2). Las fracciones que contenían el compuesto esperado se combinaron y se evaporaron a sequedad. Se realizó una segunda purificación a través de fase inversa (Fase estacionaria: YMC-actus Triart-C18 10 pm 30 x 150 mm, fase móvil: Gradiente del 70% de NH4HCO3 acuoso al 0.2%, 30% de CH3CN al 0% de NH4HCO3 acuoso al 0.2%, 100% de CH3CN). Las fracciones puras se combinaron y se concentraron al vacío para dar ácido 4-(3-((1 -(4-clorofenil)-2-(5-metoxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)-2,2-dimetilbutanoico (Compuesto 21, 455 mg). Los enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 pm 250 x 30 mm, fase móvil: 55% de CO2, 45% de MeOH) para dar, después de la solidificación a partir de heptano/éter diisopropílico, el primer Enantiómero eluido 21A (106 mg) y el segundo Enantiómero eluido 21B (103 mg). Compuesto 21:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-cfe) 6 ppm 1.13 (d, J=3.8 Hz, 6 H) 1.87 (t, J=7.3 Hz, 2 H) 3.14 - 3.30 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.84
(m, 5 H) 3.98 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.51 (td, J=10.3, 6.1 Hz, 1 H) 5.52 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 5.92 (s, 1 H) 5.94 (s, 1 H) 6.39 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.23 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.19 min, MH+ 621
Enantiómero 21A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.08 - 1.15 (m, 6 H) 1.85 (t, J=7.3 Hz, 2 H) 3.13 - 3.30 (m, 2 H) 3.55 - 3.65 (m, 3 H) 3.80 - 3.89 (m, 5 H) 3.98 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.4, 6.3 Hz, 1 H) 5.54 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 5.92 (s, 1 H) 5.95 (s, 1 H) 6.38 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.56 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.34 (s, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.21 min, MH+ 621
[a]D20: -41.7° (c 0.254, DMF)
SFC quiral (método SFC-H): TR 1.23 min, MH+ 621, pureza quiral 100%.
Enantiómero 21B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.08 - 1.16 (m, 6 H) 1.86 (t, J=7.1 Hz, 2 H) 3.15 - 3.29 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.80 -3.90 (m, 5 H) 3.98 (td, J=10.2, 7.3 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.4, 6.3 Hz, 1 H) 5.53 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.70 - 5.75 (m, 1 H) 5.92 (s, 1 H) 5.95 (s, 1 H) 6.38 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.56 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.34 (s, 1 H) LC/MS (método LC-C): TR 3.21 min, MH+ 621
[a]D20: 44.0° (c 0.275, DMF)
SFC quiral (método SFC-H): TR 2.38 min, MH+ 621, pureza quiral 100%.
Ejemplo 22A: Síntesis de ácido (1 R*,2R*)-2-((3-((1 -(4-clorofenN)-2-(5-metoxi-6-(trifluorometN)indoNn-1-N)-2-oxoetN)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Compuesto 22A) y separación en los Estereoisómeros 22AA y 22AB
Síntesis del Compuesto 22A y separación en los Estereoisómeros 22AA y 22AB:
El Compuesto 22A (284 mg) se sintetizó a partir del intermedio 20e usando los procedimientos descritos para la síntesis del Compuesto 6A. Los dos estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 gm 250 x 30 mm, fase móvil: 50% de CO2, 50% de EtOH) para dar, después de la solidificación en pentano/éter diisopropílico, los primeros Estereoisómeros eluidos 22AA (79 mg) y los segundos Estereoisómeros eluidos 22AB (74 mg).
Estereoisómeros 22AA:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-Ó6) 5 ppm 0.85 - 0.93 (m, 1 H) 1.00 - 1.08 (m, 1 H) 1.54 (dt, J=8.12, 4.30 Hz, 1 H) 1.60 -1.68 (m, 1 H) 3.12 - 3.26 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.68 (dd, J=10.40, 7.57 Hz, 1 H) 3.79 - 3.90 (m, 4 H) 3.93 - 4.05 (m, 1 H) 4.50
(td, J=10.40, 6.31 Hz, 1 H) 5.55 (d, J=8.51 Hz, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.94 (s, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 6.39 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.23 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.80 min, MH+ 605
[a]D20: -75.0° (c 0.3, DMF)
SFC quiral (método SFC-R): TR 0.86 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómeros 22AB:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-rá) 5 ppm 0.88 (t a, J=9.30 Hz, 1 H) 1.02 (dt, J=8.43, 4.45 Hz, 1 H) 1.47 - 1.58 (m, 1 H) 1.59 -1.68 (m, 1 H) 3.13 - 3.28 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 - 3.72 (m, 1 H) 3.84 (s, 4 H) 3.92 - 4.06 (m, 1 H) 4.50 (td, J=10.32, 6.15 Hz, 1 H) 5.55 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.95 (s, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 6.39 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.08 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.69 min, MH+ 605
[a]D20: 10.0° (c 0.281, DMF)
SFC quiral (método SFC-R): TR 1.84 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Ejemplo 22B: Síntesis de ácido (1 S*,2S*)-2-((3-((1 -(4-clorofenil)-2-(5-metoxi-6-(trifluorometil)indolin-1 -il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Compuesto 22B) y separación en los Estereoisómeros 22BA y 22BB
El Compuesto 22B (257 mg) se sintetizó a partir del intermedio 20e usando el procedimiento descrito para la síntesis del Compuesto 6B. Los dos estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 |jm 250 x 30 mm, fase móvil: 50% de CO2, 50% de EtOH) para dar, después de la solidificación en pentano/éter diisopropílico, los primeros estereoisómeros eluidos 22BA (49 mg) y los segundos estereoisómeros eluidos 22BB (61 mg).
Estereoisómeros 22BA:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-ds) 5 ppm 0.83 - 1.00 (m, 1 H) 0.98 - 1.09 (m, 1 H) 1.54 (dt, J=8.35, 4.33 Hz, 1 H) 1.58 - 1.70 (m, 1 H) 3.13 - 3.28 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.68 (dd, J=10.09, 7.57 Hz, 1 H) 3.78 - 3.89 (m, 4 H) 3.95 - 4.05 (m, 1 H) 4.50 (td, J=10.25, 6.31 Hz, 1 H) 5.55 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.95 (s a, 1 H) 5.96 (s a, 1 H) 6.39 (d a, J=8.83 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.24 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.68 min, MH+ 605
[a]D20: -9.3° (c 0.291, DMF)
SFC quiral (método SFC-S): TR 1.48 min, MH+ 605, pureza quiral 100%.
Estereoisómeros 22BB:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-ds) 5 ppm 0.82 - 0.95 (m, 1 H) 1.04 - 1.06 (m, 1 H) 1.55 (dt, J=8.28, 4.22 Hz, 1 H) 1.58 - 1.68 (m, 1 H) 3.13 - 3.28 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.68 (dd, J=10.40, 7.25 Hz, 1 H) 3.81 - 3.88 (m, 4 H) 3.95 - 4.02 (m, 1 H) 4.46 4.55 (m, 1 H) 5.54 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.94 (s, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 6.39 (d, J=9.14 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.20 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.80 min, MH+ 605
[a]D20: 80.0° (c 0.275, DMF)
SFC quiral (método SFC-S): TR 3.12 min, MH+ 605, pureza quiral 99.55%.
Ejemplo 23: Síntesis de ácido (1s,3s)-3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metoxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)ciclobuteno-carboxílico (Compuesto 23) y separación quiral en los Enantiómeros 23A y 23B
El Compuesto 23A (280 mg) se sintetizó a partir del intermedio 20e usando los procedimientos descritos para la síntesis del Compuesto 8. Los dos enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 ^m 250 x 30 mm, fase móvil: 45% de CO2 , 55% de EtOH) para dar, después de la solidificación en heptano/éter diisopropílico, el primer Enantiómero eluido 23A (60 mg) y el segundo Enantiómero eluido 23B (71 mg).
Compuesto 23:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 2.02 - 2.15 (m, 2 H) 2.58 - 2.65 (m, 2 H) 2.66 - 2.75 (m, 1 H) 3.14 - 3.29 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.84 (s, 3 H) 3.98 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.42 - 4.57 (m, 2 H) 5.51 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.65 (t, J=1.9 Hz, 1 h ) 5.86 (s, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 6.42 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.34 (s, 1 H) 12.11 - 12.40 (m, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.76 min, MH+ 605
Enantiómero 23A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 2.02 - 2.15 (m, 2 H) 2.57 - 2.65 (m, 2 H) 2.66 - 2.75 (m, 1 H) 3.14 - 3.28 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.84 (s, 3 H) 3.98 (td, J=10.3, 7.1 Hz, 1 H) 4.42 - 4.56 (m, 2 H) 5.51 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.65 (t, J=2.0 Hz, 1 h ) 5.86 (s, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 6.42 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.34 (s, 1 H) 12.02 - 12.49 (m, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.75 min, MH+ 605
[a]D20: -38.1° (c 0.307, DMF)
SFC quiral (método SFC-R): TR 0.84 min, MH+ 605, pureza quiral 100%.
Enantiómero 23B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 2.02 - 2.15 (m, 2H) 2.56 - 2.75 (m, 3 H) 3.14 - 3.27 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.84 (s, 3 H) 3.93 - 4.04 (m, 1 H) 4.43 - 4.57 (m, 2 H) 5.51 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 5.65 (s, 1 H) 5.86 (s, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 6.42 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.44 (d a, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d a, J=8.5 Hz, 2 H) 8.34 (s, 1 H) 12.07 - 12.47 (m, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.76 min, MH+ 605
[a]D20: 36.9° (c 0.309, DMF)
SFC quiral (método SFC-R): TR 1.86 min, MH+ 605, pureza quiral 100%.
Ejemplo 24: Síntesis de ácido (1s,3s)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metoxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclobutanocarboxílico (Compuesto 24) y separación quiral en los Enantiómeros 24A y 24B
El Compuesto 24 (550 mg) se sintetizó a partir del intermedio 20e usando los procedimientos descritos para la síntesis del Compuesto 10. Los dos enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Whelk® O1 (S,S) 5 ^m 250 x 21.1 mm, fase móvil: 50% de CO2 , 50% de MeOH) para dar, después de la solidificación en Et2O, el primer Enantiómero eluido 24A (190 mg) y el segundo Enantiómero eluido 24B (177 mg).
Compuesto 24:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-dfe) 5 ppm 1.93 (c a, J=9.77 Hz, 2 H) 2.11 - 2.32 (m, 2 H) 2.53 - 2.60 (m, 1 H) 2.97 (quin, J=8.91 Hz, 1 H) 3.16 - 3.30 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.74 - 3.82 (m, 2 H) 3.85 (s, 3 H) 3.96 - 4.06 (m, 1 H) 4.51 (td, J=10.25, 5.99 Hz, 1 H) 5.55 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 5.74 (s, 1 H) 5.94 (s a, 2 H) 6.39 (d, J=8.51 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.44 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 8.34 (s, 1 H) 12.07 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.91 min, MH+ 619
Enantiómero 24A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-dfe) 5 ppm 1.87 - 2.02 (m, 2 H) 2.15 - 2.30 (m, 2 H) 2.52 - 2.59 (m, 1 H) 2.95 (qt J = 8.83 Hz, 1 H) 3.07 - 3.29 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.77 (d a, J=6.31 Hz, 2 H) 3.84 (s, 3 H) 3.95 - 4.07 (m, 1 H) 4.42 - 4.56 (m, 1 H) 5.54 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 5.74 (t, J=2.05 Hz, 1 H) 5.81 - 6.01 (m, 2 H) 6.38 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.11 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.89 min, MH+ 619
[a]D20: -41.5° (c 0.224, DMF)
SFC quiral (método SFC-T): TR 1.81 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Enantiómero 24B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.91 (q, J=9.35 Hz, 2 H) 2.17 - 2.26 (m, 2 H) 2.53 - 2.61 (m, 1 H) 2.94 (quin, J=8.91 Hz, 1 H) 3.13 - 3.27 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.72 - 3.79 (m, 2 H) 3.84 (s, 3 H) 3.90 - 4.06 (m, 1 H) 4.50 (td, J=10.32, 6.46 Hz, 1 H) 5.54 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 5.72 - 5.75 (m, 1 H) 5.91 - 5.95 (m, 2 H) 6.38 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.20 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.07 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.89 min, MH+ 619
[ajo20: 36.6° (c 0.232, DMF)
SFC quiral (método SFC-T): TR 2.26 min, no MH+, pureza quiral 98.71%.
Ejemplo 25 : Síntesis de ácido (1r,3r)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metoxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclobutanocarboxílico (Compuesto 25) y separación quiral en los Enantiómeros 25A y 25B
Síntesis del Compuesto 25 y separación quiral en los Enantiómeros 25A y 25B:
El Compuesto 25 (310 mg) se sintetizó a partir del intermedio 20e usando los procedimientos descritos para la síntesis del Compuesto 11. Los dos enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Whelk® O1 (S,S) 5 pm 250 x 21.1 mm, fase móvil: 50% de CO2 , 50% de MeOH) para dar, después de la solidificación en Et2O/pentano, el primer Enantiómero eluido 25A (94 mg) y el segundo Enantiómero eluido 25B (105 mg).
Compuesto 25:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.80 - 2.04 (m, 2 H) 2.22 - 2.31 (m, 2 H) 2.56 - 2.64 (m, 1 H) 3.09 (qt a, J=7.33 Hz, 1 H) 3.14 - 3.28 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.84 (s, 3 H) 3.87 (d, J=6.57 Hz, 2 H) 3.93 - 4.06 (m, 1 H) 4.45 - 4.56 (m, 1 H) 5.54 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 5.77 (s, 1 H) 5.94 (s, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 6.38 (d, J=9.09 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1H) 7.43 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H) 12.10 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.87 min, MH+ 619
Enantiómero 25A:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.91 - 2.03 (m, 2 H) 2.18 - 2.29 (m, 2 H) 2.55 - 2.62 (m, 1 H) 3.01 - 3.11 (m, 1 H) 3.14 - 3.28 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.84 (s, 3 H) 3.86 (d, J=7.07 Hz, 2 H) 3.93 - 4.05 (m, 1 H) 4.42 - 4.58 (m, 1 H) 5.54 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 5.77 (s, 1 H) 5.92 - 5.95 (m, 1 H) 5.95 - 5.98 (m, 1 H) 6.38 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.08 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.08 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.90 min, MH+ 619
[ajo20: -41.1° (c 0.28, DMF)
SFC quiral (método SFC-T): TR 1.91 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Enantiómero 25B:
1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.90 - 2.04 (m, 2 H) 2.19 - 2.29 (m, 2 H) 2.55 - 2.60 (m, 1 H) 3.00 - 3.30 (m, 3 H) 3.62 (s, 3 H) 3.84 (s, 3 H) 3.86 (d a, J=7.07 Hz, 2 H) 3.94 - 4.04 (m, 1 H) 4.45 - 4.55 (m, 1 H) 5.54 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 5.77 (s, 1 H) 5.88 - 5.95 (m, 1 H) 5.95 - 5.98 (m, 1 H) 6.38 (d a, J=8.59 Hz, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.43 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.08 Hz, 2 H) 8.33 (s, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.90 min, MH+ 619
[a]D20: 40.6° (c 0.32, DMF)
SFC quiral (método SFC-T): TR 2.48 min, no MH+, pureza quiral 98.68%.
Ejemplo 26A: Síntesis de ácido (1 f í * 2 f í ,‘)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro-6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Compuesto 26A)
Se enfrió una disolución de 4-bromo-2-fluoro-1-(trifluorometoxi)benceno [CAS 105529-58-6] (98.7 g, 381.1 mmol) en H2SO4 concentrado(98%, 200 ml), a 0 °C con un baño de hielo. Se añadió en porciones KNO3 (43.0 g, 425.3 mmol). Tras la adición, se retiró el baño de hielo y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 16 h. Se vertió la mezcla de reacción en agua-hielo (2 l) al tiempo que se agitaba. La mezcla se extrajo con CH2CL (3 x 500 ml). Se lavaron las fases orgánicas combinadas con una disolución acuosa saturada de NaHCO3 (2x 500 ml), salmuera (500 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida para permitir la obtención de 1-bromo-5-fluoro-2-nitro-4-(trifluorometoxi)benceno 26a (117.2 g), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Síntesis del intermedio 26b:
A una suspensión agitada de 1-bromo-5-fluoro-2-nitro-4-(trifluorometoxi)benceno 26a (70.0 g, 230 mmol) y NH4Cl (123.2 g, 2.30 mol) en iPrOH (1 l) y agua (330 ml) se añadió un polvo de hierro reductor (64.3 g, 1.15 mol) bajo atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (1 l) y se filtró sobre Celite®. El filtrado se concentró a presión reducida. Se separó el residuo entre EtOAc (1 l) y agua (800 ml). Las capas se separaron y la fase orgánica se lavó con salmuera (1 l), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo por medio de destilación a presión reducida (bomba de aceite, punto de ebullición 60~64 °C). Se obtuvo 2-bromo-4-fluoro-5-(trifluorometoxi)anilina 26b (47.3 g) en forma de aceite amarillo.
Síntesis del intermedio 26c:
A una mezcla de 2-bromo-4-fluoro-5-(trifluorometoxi)anilina 26b (18.4 g, 67.2 mmol) y etinil(trimetil)silano (19.9 g, 202.4 mmol, 28.00 ml) en Et3N (300 ml) se le añadieron Cul (1.28 g, 6.72 mmol) y Pd(PPh3)2Cl2 (2.40 g, 3.42 mmol). La mezcla
de reacción se calentó en una atmósfera de N2 a 90 °C durante 16 h. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con MTBE (300 ml) y se filtró a través de Celite®. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (columna ultrarrápida de sílice ISCO®, 220 g SepaFlash®, eluyente: gradiente del 0 al 5% de EtOAc en éter de petróleo a 100 ml/min). Se obtuvo 4-fluoro-5-(trifluorometoxi)-2-((trimetilsilil)etinil)anilina 26c (16.1 g, 90% de pureza) en forma de aceite marrón.
Síntesis del intermedio 26d:
Se calentó una mezcla de 4-fluoro-5-(trifluorometoxi)-2-((trimetilsilil)etinil)anilina 26c (16.1 g, 55.3 mmol) y tBuOK (18.6 g, 165.8 mmol) en NMP (220.00 ml) a 90 °C durante 16 horas bajo atmósfera de N2. Tras enfriar a temperatura ambiente, se vertió la mezcla de reacción en hielo-agua (1 l) y se sometió a extracción con MTBE (3 x 300 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (2 x 200 ml), salmuera (300 ml), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (ISCO®, columna ultrarrápida de sílice de 120 g SepaFlash®, eluyente: gradiente del 0 al 5% de EtOAc en éter de petróleo, caudal = 85 mL/min) para proporcionar un producto de 5-fluoro-6-(trifluorometoxi)-1 H-indol 26d (11 g) en forma de un aceite de color verde oscuro. Se combinó el residuo con otra fracción (cantidad total = 17.2 g) y se purificó de forma adicional por medio de destilación a presión reducida (bomba de aceite, punto de ebullición 60~64 °C) para proporcionar 5-fluoro-6-(trifluorometoxi)-1 H-indol 26d (14.7 g, 95% de pureza) en forma de aceite incoloro.
Síntesis del intermedio 26e:
A 0 °C, se añadió lentamente BH3-Piridina (1.2 mL, 11 mmol) a una solución de 5-fluoro-6-(trifluorometoxi)-1 H-indol 26d (500 mg, 2.3 mmol) en EtOH (3.2 mL). Se añadió lentamente HCl 6 N (7.6 mL) mientras se mantuvo la temperatura por debajo de 10 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h. Se añadió agua (100 mL), y la mezcla se basificó a pH 14 con NaOH concentrado (la temperatura se mantuvo por debajo de 20 °C). Se añadió CH2Cl2. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida para dar 5-fluoro-6-(trifluorometoxi)indolina 26e (550 mg). Se usó el compuesto en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Síntesis del intermedio 26f:
A una mezcla de ácido 2-bromo-2-(4-clorofenil)acético [CAS 3381-73-5] (0.61 g, 2.4 mmol), 5-fluoro-6-(trifluorometoxi)indolina 26e (0.55 g, 2.2 mmol, 89% de pureza) y DMAP (0.027 g, 0.22 mmol) en CH2Cl2 (14 mL) se le añadió EDCI (0.51 g, 2.7 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla se diluyó con una solución al 10% de K2CO3 en agua. Se decantaron las fases. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se concentró a presión reducida para dar 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(5-fluoro-6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 26f (1.1 g, aceite de color púrpura). Se usó el compuesto en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Síntesis del Compuesto 26A:
El Compuesto 26A (135 mg) se sintetizó a partir del intermedio 26f usando los procedimientos descritos para la síntesis del Compuesto 6A.
Compuesto 26A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) S ppm 0.87 - 0.94 (m, 1 H) 1.01 - 1.07 (m, 1 H) 1.55 (dq, J=8.55, 4.40 Hz, 1 H) 1.60 - 1.68 (m, 1 H) 3.12 - 3.30 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.68 (dd, J=10.40, 7.57 Hz, 1 H) 3.85 (dd, J=10.40, 6.31 Hz, 1 H) 4.01 - 4.08 (m, 1 H) 4.48 - 4.55 (m, 1 H) 5.57 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.94 (s a, 1 H) 5.95 (s a, 1 H) 6.46 (d a, J=8.83 Hz, 1 H) 7.40 - 7.48 (m, 3 H) 7.54 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 8.16 (d a, J=6.94 Hz, 1 H) 12.22 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.97 min, MH+ 609
P F = 120°C
Ejemplo 26B: Síntesis de ácido (1 S*,2S*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro-6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Compuesto 26B)
Síntesis del Compuesto 26B:
El Compuesto 26B (150 mg) se sintetizó a partir del intermedio 26f usando el procedimiento descrito para la síntesis del Compuesto 6B.
Compuesto 26B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-cfa) ó ppm 0.86 - 0.94 (m, 1 H) 1.04 (dq, J=8.20, 4.31 Hz, 1 H) 1.55 (dq, J=8.43, 4.33 Hz, 1 H) 1.58 - 1.67 (m, 1 H) 3.12 - 3.30 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.68 (dd, J=10.40, 7.57 Hz, 1 H) 3.85 (dd, J=10.25, 6.15 Hz, 1 H) 4.04 (q, J=8.72 Hz, 1 H) 4.47 - 4.55 (m, 1 H) 5.57 (d, J=8.83 Hz, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 5.94 (s a, 1 H) 5.95 (s a, 1 H) 6.46 (d a, J=8.51 Hz, 1 H) 7.40 - 7.48 (m, 3 H) 7.54 (d, J=8.51 Hz, 2 H) 8.16 (d a, J=6.94 Hz, 1 H) 12.21 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.97 min, MH+ 609
P F = 126°C
Ejemplo 27: Síntesis de ácido ((1s,3s)-3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro-6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)ciclobuteno-carboxí¡ico (Compuesto 27) y separación en los Enantiómeros 27a y 27B
El Compuesto 27 (175 mg) se sintetizó a partir del intermedio 26f usando el procedimiento descrito para la síntesis del Compuesto 8. Los dos enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 pm 250 x 20 mm, fase móvil: 55% de CO2, 45% de EtOH) para dar, después de la solidificación en heptano/éter diisopropílico, el primer Enantiómero eluido 27A (33 mg) y el segundo Enantiómero eluido 27B (35 mg).
Compuesto 27:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-cfa) ó ppm 2.01 - 2.17 (m, 2 H) 2.57 - 2.65 (m, 2 H) 2.66 - 2.77 (m, 1 H) 3.08 - 3.28 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.99 - 4.10 (m, 1 H) 4.43 - 4.57 (m, 2 H) 5.54 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.66 (s, 1 H) 5.86 (s, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 6.49 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 7.45 (d, J=8.5 Hz, 3 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.16 (d a, J=6.9 Hz, 1 H) 12.06 - 12.47 (m, 1 H) LC/MS (método LC-C): TR 2.88 min, MH+ 609
Enantiómero 27A:
1H RMN (500 Mhz, D M S O ^) ó ppm 2.00 - 2.12 (m, 2 H) 2.57 - 2.65 (m, 3 H) 3.11 - 3.25 (m, 2 H) 3.60 (s, 3 H) 4.04 (d a, J=7.3 Hz, 1 H) 4.40 - 4.48 (m, 1 H) 4.48 - 4.57 (m, 1 H) 5.53 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 5.65 (s, 1 H) 5.85 (s, 1 H) 5.92 (s, 1 H) 6.48 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 7.44 (d a, J=8.5 Hz, 3 H) 7.54 (d a, J=8.5 Hz, 2 H) 8.16 (d a, J=6.9 Hz, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.79 min, MH+ 609
[a]D20: -40.5° (c 0.252, DMF)
SFC quiral (método SFC-I): TR 1.18 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Enantiómero 27B:
1H RMN (500 Mhz, D M S O ^) ó ppm 2.00 - 2.13 (m, 2 H) 2.54 - 2.67 (m, 3 H) 3.10 - 3.27 (m, 2 H) 3.60 (s, 3 H) 3.99 - 4.10
(m, 1 H) 4.40 - 4.48 (m, 1 H) 4.48 - 4.56 (m, 1 H) 5.54 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 5.66 (s, 1 H) 5.86 (s, 1 H) 5.92 (s, 1 H) 6.48 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 7.44 (d a, J=8.5 Hz, 3 H) 7.54 (d a, J=8.5 Hz, 2 H) 8.16 (d a, J=6.9 Hz, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.79 min, MH+ 609
[a]D20: 37.5° (c 0.333, DMF)
SFC quiral (método SFC-I): TR 2.56 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Ejemplo 28: Síntesis de ácido (1fí*2S*)-2-((3-((1-(4-dorofeml)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxílico (Compuesto 28A) y separación en los Estereoisómeros 28AA y 28AB y síntesis de ácido (1 S *2 fí '‘)-2-((3-((1-(4-dorofeml)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxílico (Compuesto 28B) y separación en los Estereoisómeros 28BA y 28BB
Síntesis de los intermedios 28a y 28b:
Se añadió Rh2(OPiv)4.2H2O (2 mol%, 0.599 mmol, 387 mg) a una solución de 1-(((2-fluoroalil)oxi)metil)-4-metoxibenceno [CAS 1673563-84-2] (29.9 mmol) en CH2Cl2 anhidro (86 mL) en un matraz de fondo redondo de tres bocas equipado con un espacio para burbujas. Después de enfriar la solución a 0 °C, se añadió lentamente una solución del diazo etilacetato al 83% disponible en el mercado en diclorometano (3 equiv., 89.85 mmol) en CH2Cl2 anhidro (86 mL) usando una micro bomba con un caudal de 24 mL/h. La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta la finalización de la reacción (indicada por análisis TLC y 19F RMN) y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc, 9/1 a 7/3) para dar, con un rendimiento del 60%, una mezcla de diastereómeros (dr 53:47). Los diastereómeros se separaron por cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc, de 100/0 a 80/20) para dar 2-fluoro-2-(((4-metoxibencil)oxi)metil)ciclopropanocarboxilato de írans-etilo 28a y 2-fluoro-2-(((4-metoxibencil)oxi)metil)ciclopropanocarboxilato de cis-etilo 28b.
Síntesis del intermedio 28c:
Se añadió DDQ (1.5 equiv., 27.9 mmol, 6.33 g) a una solución de 2-fluoro-2-(((4-metoxibencil)oxi)metil)ciclopropanocarboxilato de írans-etilo 28a (1 equiv., 18.6 mmol, 5.25 g) en diclorometano (340 mL) y agua (30 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 20 h. Se añadió una solución de NaHCO3 acuoso saturado y la mezcla se agitó durante 30 minutos. La capa acuosa se extrajo tres veces con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución saturada de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se evaporó a presión reducida y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc, 9/1 a 6/4) para dar 2-fluoro-2-(hidroximetil)-ciclopropanocarboxilato de írans-etilo 28c (876 mg).
Síntesis del intermedio 28d:
Se añadió DDQ (1.5 equiv., 15.8 mmol, 3.6 g) a una solución de 2-fluoro-2-(((4-metoxibencil)oxi)metil)ciclopropanocarboxilato de cis-etilo 28b (1 equiv., 10.6 mmol, 2.98 g) en diclorometano (193 mL) y agua (17 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 20 h. Se añadió una solución de NaHCO3 acuoso saturado y la mezcla se agitó durante 30 minutos. La capa acuosa se extrajo tres veces con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución saturada de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se evaporó a presión reducida y el residuo en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (éter de petróleo/EtOAc, 9/1 a 6/4) para dar 2-fluoro-2-(hidroximetil)ciclopropano-carboxilato de cis-etilo (876 mg).
Síntesis del intermedio 28e:
En un flujo de N2 a 10 °C, se añadió en porciones azodicarboxilato de di-íerc-butilo (948 mg, 4.118 mmol) a una solución de 3-metoxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (633 mg, 3.743 mmol), 2-fluoro-2-(hidroximetil)ciclopropanocarboxilato de írans-etilo 28c (607 mg, 3.743 mmol), y PPh3 (1.08 g; 4.118 mmol) en THF (30 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de N2 durante 18 h. La solución se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 gm, 80 g, heptano/EtOAc de 95/5 a 80/20). Las fracciones puras se combinaron y se concentraron a presión reducida para dar 2-fluoro-2-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)ciclopropanocarboxilato de írans-metilo 28e (930 mg).
Síntesis del intermedio 28f:
Una solución de 2-fluoro-2-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)-ciclopropanocarboxilato de írans-metilo 28e (810 mg, 2.586 mmol) en EtOH (20 mL) y t Hf (10 mL) que contenía una cantidad catalítica de Pd al 10%/C (275 mg, 0.259 mmol) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 a temperatura ambiente durante 4 h. El catalizador se eliminó por filtración sobre un lecho corto de Celite® y la torta de filtro se aclaró varias veces con EtOH. Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida para dar 2-((3-amino-5-metoxifenoxi)-metil)-2-fluorociclopropanocarboxilato de írans-metilo 28f (710 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Síntesis del intermedio 28g y separación en los Estereoisómeros 28h, 28i, 28j y 28k:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (927 mg, 2.133 mmol), 2-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxilato de írans-metilo 28f (725 mg, 2.559 mmol) y diisopropiletilamina (735 gL, 4.265 mmol) en CH3CN (4 mL) se agitó a 80 °C durante 12 h. El disolvente se concentró a presión reducida. El residuo se recogió por completo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con HCl 1 N, agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 gm, 40 g, heptano/EtOAc de 95/5 a 80/20). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar 2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-írans-2-fluorociclopropanocarboxilato de metilo 28g (550 mg). Los cuatro estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 gm 250 x 20 mm, fase móvil: 70% de CO2 , 30% de EtOH) para dar 28h (118 mg), 28i (114 mg), 28j (158 mg) y 28k (165 mg).
Síntesis del Compuesto 28A y separación en los Estereoisómeros 28AA y 28AB:
Se añadió gota a gota LiOH monohidrato (23.3 mg, 0.556 mmol) a una solución del estereoisómero 28h (118 mg, 0.185
mmol) en THF/MeOH/agua (1/1/1) (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con agua y hielo, se acidificó lentamente con HCl 1 N y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar, después de la cristalización en heptano/éter diisopropílico, ácido (1 f í*2 S ,‘)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxílico 28A (110 mg) (durante esta reacción, se produjo una racemización completa en el centro quiral central).
Se obtuvo un segundo lote del Compuesto 28A (100 mg) de forma similar partiendo del estereoisómero 28i. Los dos lotes se combinaron. Los dos estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 gm 250 x 20 mm, fase móvil: 65% de CO2 , 35% de EtOH) para dar el primer estereoisómero eluido (94 mg) y el segundo estereoisómero eluido (80 mg). El primer estereoisómero eluido se solidificó en éter diisopropílico para dar el Estereoisómero 28AA (47 mg). El segundo estereoisómero eluido se solidificó en heptano para dar el Estereoisómero 28AB (37 mg).
Síntesis del Compuesto 28B y separación en los Estereoisómeros 28BA y 28BB:
Se añadió gota a gota LiOH monohidrato (31.2 mg, 0.744 mmol) a una solución del estereoisómero 28j (158 mg, 0.248 mmol) en THF/MeOH/agua (1/1/1) (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con agua y hielo, se acidificó lentamente con HCl 1 N y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre MgSO4, se filtraron, y se concentraron a presión reducida para dar, después de la cristalización en MeOH/agua, ácido (1S*,2fí*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-2-fluorociclopropano-carboxílico 28B (100 mg) (durante esta reacción, se produjo una racemización completa en el centro quiral central).
Un segundo lote de 28A (105 mg) se obtuvo de forma similar partiendo del estereoisómero 28k.
Los dos estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 gm 250 x 30 mm, fase móvil: 60% de CO2, 30% de MeOH) para dar el primer estereoisómero eluido (88 mg) y el segundo estereoisómero eluido (78 mg). El primer estereoisómero eluido se solidificó en heptano/éter diisopropílico para dar el Estereoisómero 28BA (54 mg). El segundo estereoisómero eluido se solidificó en heptano/éter diisopropílico para dar el Estereoisómero 28BB (60 mg).
Estereoisómero 28AA:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.37 (dt, J=11.7, 7.1 Hz, 1 H) 1.62 - 1.76 (m, 1 H) 2.18 - 2.31 (m, 1 H) 3.07 - 3.23 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.98 - 4.10 (m, 1 H) 4.15 - 4.29 (m, 1 H) 4.43 (dd, J=18.9, 12.0 Hz, 1 H) 4.48 - 4.57 (m, 1 H) 5.58 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.78 (s, 1 H) 5.97 (s, 1 H) 5.99 (s, 1 H) 6.49 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=7.9 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.71 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.83 min, MH+ 609
[a]D20: -43.3° (c 0.3, DMF)
SFC quiral (método SFC-F): TR 1.98 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 28AB:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.32 - 1.42 (m, 1 H) 1.62 - 1.75 (m, 1 H) 2.24 (dt, J=18.5, 9.2 Hz, 1 H) 3.08 - 3.25 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.99 - 4.08 (m, 1 H) 4.13 - 4.26 (m, 1 H) 4.39 - 4.57 (m, 2 H) 5.58 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 5.78 (s, 1 H) 5.96 (s a, 1 H) 5.99 (s a, 1 H) 6.49 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=7.6 Hz, 1 H) 7.33 (d a, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d a, J=8.2 Hz, 2 H) 7.55 (d a, J=8.2 Hz, 2 H) 8.03 (s a, 1 H) 12.71 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.84 min, MH+ 609
[a]D20: 52.5° (c 0.301, DMF)
SFC quiral (método SFC-F): TR 3.29 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 28BA:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.32 - 1.42 (m, 1 H) 1.62 - 1.72 (m, 1 H) 2.18 - 2.29 (m, 1 H) 3.08 - 3.23 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 4.04 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.15 - 4.26 (m, 1 H) 4.45 (dd, J=18.8, 11.8 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.5, 6.1 Hz, 1 H) 5.58 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.78 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 5.99 (s, 1 H) 6.49 (d, J=9.1 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.76 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.71 min, MH+ 609
[a]D20: -57.1° (c 0.31, DMF)
SFC quiral (método SFC-F): TR 2.26 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 28BB:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 1.35 (dt, J=11.7, 7.1 Hz, 1 H) 1.59 - 1.71 (m, 1 H) 2.17 - 2.28 (m, 1 H) 3.08 - 3.25 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 4.04 (td, J=10.5, 7.1 Hz, 1 H) 4.17 - 4.29 (m, 1 H) 4.43 (dd, J=19.5, 11.7 Hz, 1 H) 4.52 (td, J=10.4, 6.3 Hz, 1 H) 5.59 (d, J=9.1 Hz, 1 H) 5.78 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 5.99 (s, 1 H) 6.49 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.79 (s a, 1 H) LC/MS (método LC-D): TR 2.70 min, MH+ 609
[a]D20: 38.1° (c 0.289, DMF)
SFC quiral (método SFC-F): TR 3.68 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Ejemplo 29: Síntesis de ácido (1S *2S ,‘)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxílico (Compuesto 29A) y separación en los Estereoisómeros 29AA y 29AB y síntesis de ácido (1 f í*2 f í ’,)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxílico (Compuesto 29B) y separación en los Estereoisómeros 29Ba y 29BB
En un flujo de N2 a 10 °C, se añadió en porciones azodicarboxilato de di-íerc-butilo (750 mg, 3.256 mmol) a una solución de 3-metoxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (501 mg, 2.96 mmol), 2-fluoro-2-(hidroximetil)ciclopropanocarboxilato de cis-etilo 28d (480 mg, 2.96 mmol), y PPh3 (854 mg, 3.256 mmol) en THF (23 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de N2 durante 18 h. La solución se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 pm, 80 g, 70/30 de heptano/EtOAc). Las fracciones puras se combinaron y se concentraron a presión reducida para dar 2-fluoro-2-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)ciclopropanocarboxilato de cis-metilo 29a (660 mg).
Síntesis del intermedio 29b:
Una solución de 2-fluoro-2-((3-metoxi-5-nitrofenoxi)metil)-ciclopropanocarboxilato de c/s-metilo 29a (610 mg, 1.947 mmol) en EtOH (15 mL) y THF (7.5 mL) que contenía una cantidad catalítica de Pd al 10%/C (207 mg, 0.195 mmol) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 a temperatura ambiente durante 4 h. El catalizador se eliminó por filtración sobre un lecho corto de Celite® y la torta de filtro se aclaró varias veces con EtOH. Los filtrados combinados se evaporaron para dar 2-((3-amino-5-metoxifenoxi)metil)-2-fluorociclopropano-carboxilato de c/s-metilo 29b (560 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Síntesis del intermedio 29c y separación en los Estereoisómeros 29d, 29e, 29f y 29g:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (716 mg, 1.647 mmol), 2-((3-amino-5-metoxi-fenoxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxilato de c/s-metilo 29b (560 mg, 1.977 mmol) y diisopropiletilamina (568 pL, 3.295 mmol) en CH3CN (3.5 mL) se agitó a 80 °C durante 12 h. El disolvente se concentró a presión reducida. El residuo se recogió por completo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con HCl 1 N, agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 pm, 40 g, heptano/EtOAc de 95/5 a 80/20). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a presión reducida para dar 2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-c/s-2-fluorociclopropanocarboxilato de metilo 29c (500 mg). Los cuatro estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® AD-H 5 pm 250 x 30 mm, fase móvil: 65% de CO2, 35% de EtOH) para dar una mezcla de 29d+29e (250 mg), 29f (125 mg), y 29g (114 mg). La mezcla de 29d+29e se separó adicionalmente a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® A d -H 5 pm 250 x 30 mm, fase móvil: 75% de CO2 , 25% de EtOH) para dar 29d (88 mg) y 29e (66 mg).
Síntesis del Compuesto 29A y separación en los Estereoisómeros 29AA y 29AB:
Se añadió gota a gota LiOH monohidrato (17.4 mg, 0.414 mmol) a una solución de estereoisómeros 29d (88 mg, 0.138 mmol) en THF/MeOH/agua (1/1/1) (1 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con agua y hielo, se acidificó lentamente con HCl 1 N y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre MgSO4, se filtraron, y se concentraron a presión reducida para dar, ácido (1 S*,2S*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxílico 29A (80 mg) (durante esta reacción, se produjo una racemización completa en el centro quiral central).
Un segundo lote de 29A (90 mg) se obtuvo de forma similar partiendo del estereoisómero 29f. Los dos lotes se combinaron. Los dos estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 pm 250 x 20 mm, fase móvil: 65% de CO2 , 35% de MeOH) y se purificaron adicionalmente por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 pm, 4 g, 99/1 de CH2Cl2/MeOH) para dar el primer estereoisómero eluido (43 mg) y el segundo estereoisómero eluido (40 mg). El primer estereoisómero eluido se solidificó en heptano/éter diisopropílico para dar el estereoisómero 29AA (29 mg). El segundo estereoisómero eluido se solidificó en heptano/éter diisopropílico para dar el estereoisómero 29AB (27 mg).
Síntesis del Compuesto 29B y separación en los Estereoisómeros 29BA y 29BB:
Se añadió gota a gota LiOH monohidrato (13 mg, 0.311 mmol) a una solución del estereoisómero 29e (66 mg, 0.104 mmol) en THF/MeOH/agua (1/1/1) (1 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con agua y hielo, se acidificó lentamente con HCl 1 N y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar, después de la cristalización en MeOH/agua, ácido (1 fí*,2fí*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-2-fluorociclopropano-carboxílico 29B (60 mg) (durante esta reacción, se produjo una racemización completa en el centro quiral central).
Un segundo lote de 29A (100 mg) se obtuvo de forma similar partiendo del estereoisómero 29g. Los dos lotes se combinaron. Los dos estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 pm 250 x 20 mm, fase móvil: 70% de CO2, 30% de MeOH) y se purificaron adicionalmente por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 pm, 4 g, 99/1 de CH2Cl2/MeOH) para dar el primer estereoisómero eluido (38 mg) y el segundo estereoisómero eluido (31 mg). El primer estereoisómero eluido se solidificó en heptano/éter diisopropílico para dar el estereoisómero 29BA (24 mg). El segundo estereoisómero eluido se solidificó en heptano/éter diisopropílico para dar el estereoisómero 29BB (20 mg).
Estereoisómero 29AA:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 1.30 - 1.37 (m, 1 H) 1.69 (dt, J=19.7, 6.9 Hz, 1 H) 1.98 - 2.06 (m, 1 H) 3.08 - 3.24 (m, 2 H) 3.63 (s, 3 H) 4.01 - 4.09 (m, 1 H) 4.10 - 4.23 (m, 2 H) 4.48 - 4.57 (m, 1 H) 5.59 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.81 (s, 1 H) 5.99 (d a, J=5.7 Hz, 2 H) 6.49 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=7.9 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d,
J=8.2 Hz, 2 H) 8.03 (s a, 1 H) 12.58 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.67 min, MH+ 609
[a]D20: -15.7° (c 0.242, DMF)
SFC quiral (método SFC-P): TR 2.53 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 29AB:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-a6) 6 ppm 1.29 - 1.38 (m, 1 H) 1.69 (dt, J=19.5, 6.5 Hz, 1 H) 1.97 - 2.10 (m, 1 H) 3.08 - 3.25 (m, 2 H) 3.63 (s, 3 H) 4.00 - 4.10 (m, 1 H) 4.10 - 4.23 (m, 2 H) 4.52 (d a, J=6.0 Hz, 1 H) 5.60 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 5.82 (s a, 1 H) 6.00 (d a, J=6.6 Hz, 2 H) 6.50 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=7.6 Hz, 1 H) 7.34 (d a, J=7.9 Hz, 1 H) 7.44 (d a, J=8.2 Hz, 2 H) 7.55 (d a, J=8.2 Hz, 2 H) 8.04 (s a, 1 H) 12.58 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.67 min, MH+ 609
[a]D20: 77.4° (c 0.323, DMF)
SFC quiral (método SFC-P): TR 4.47 min, no MH+, pureza quiral 99.20%.
Estereoisómero 29BA:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 1.33 (td, J=9.8, 6.6 Hz, 1 H) 1.69 (dt, J=19.9, 6.9 Hz, 1 H) 2.03 (ddd, J=9.5, 7.1,3.0 Hz, 1 H) 3.08 - 3.25 (m, 2 H) 3.63 (s, 3 H) 4.05 (td, J=10.3, 7.1 Hz, 1 H) 4.10 - 4.23 (m, 2 H) 4.52 (td, J=10.2, 6.3 Hz, 1 H) 5.59 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.80 - 5.84 (m, 1 H) 6.00 (d a, J=7.6 Hz, 2 H) 6.49 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1 h ) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.58 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.67 min, MH+ 609
[a]D20: -74.2° (c 0.302, DMF)
SFC quiral (método SFC-P): TR 2.37 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 29BB:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 1.34 (td, J=9.8, 6.6 Hz, 1 H) 1.69 (dt, J=19.9, 6.9 Hz, 1 H) 2.02 (ddd, J=9.5, 7.1,3.0 Hz, 1 H) 3.09 - 3.25 (m, 2 H) 3.63 (s, 3 H) 4.05 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.10 - 4.22 (m, 2 H) 4.52 (td, J=10.3, 6.5 Hz, 1 H) 5.59 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.81 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.96 - 6.03 (m, 2 H) 6.49 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.55 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H) 12.58 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.70 min, MH+ 609
[a]D20: 12.0° (c 0.3, DMF)
SFC quiral (método SFC-P): TR 3.73 min, no MH+, pureza quiral 99.14%.
Ejemplo 30: Síntesis de ácido (1s,3s)-3-((3-((1-(4-dorofenil)-2-(5-fluoro-6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)-ciclobutanocarboxílico (Compuesto 30) y separación quiral en los Enantiómeros 30A y 30B
Síntesis del Compuesto 30 y separación quiral en los Enantiómeros 30A y 30B:
El Compuesto 30 (105 mg) se sintetizó a partir del intermedio 26f usando los procedimientos descritos para la síntesis del Compuesto 10. Los dos enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OJ-H 5 gm 250 x 20 mm, fase móvil: 70% de CO2 , 30% de MeOH) para dar, después de la liofilización en CH3CN/agua, el primer Enantiómero eluido 30A (43 mg) y el segundo Enantiómero eluido 30B (47 mg).
Enantiómero 30A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-ds) 5 ppm 1.85 - 1.98 (m, 2 H) 2.17 - 2.28 (m, 2 H) 2.53 - 2.59 (m, 1 H) 2.96 (quin, J=8.9 Hz, 1 H) 3.09 - 3.23 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.72 - 3.81 (m, 2 H) 4.05 (td, J=10.3, 7.4 Hz, 1 H) 4.51 (td, J=10.2, 6.5 Hz, 1 H) 5.56 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.74 (s, 1 H) 5.93 (s, 2 H) 6.45 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 3 H) 7.54 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.16 (d a, J=6.9 Hz, 1 H) 11.24 - 13.06 (m, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.08 min, MH+ 623
[a]D20: 42.6° (c 0.298, DMF)
SFC quiral (método SFC-F): TR 2.91 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Enantiómero 30B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 1.87 - 1.99 (m, 2 H) 2.16 - 2.29 (m, 2 H) 2.53 - 2.59 (m, 1 H) 2.96 (t a, J=8.8 Hz, 1 H) 3.11 - 3.23 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.77 (d a, J=6.0 Hz, 2 H) 4.05 (td, J=10.2, 7.3 Hz, 1 H) 4.51 (td, J=10.3, 6.5 Hz, 1 H) 5.56 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.74 (s, 1 H) 5.93 (s, 2 H) 6.45 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.44 (d a, J=8.2 Hz, 3 H) 7.54 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.16 (d a, J=6.9 Hz, 1 H) 11.43 - 12.72 (m, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.07 min, MH+ 623
[a]D20: -44.2° (c 0.217, DMF)
SFC quiral (método SFC-F): TR 4.10 min, no MH+, pureza quiral 99.09%.
Ejemplo 31: Síntesis de ácido (1r,3r)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro-6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)metil)ciclobutanocarboxílico (Compuesto 31) y separación quiral en los Enantiómeros 31A y 31B
Síntesis del Compuesto 31 y separación quiral en los Enantiómeros 31A y 31B:
El Compuesto 31 (75 mg) se sintetizó a partir del intermedio 26f usando el procedimiento descrito para la síntesis del Compuesto 11. Los dos enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OJ-H 5 pm 250 x 20 mm, fase móvil: 70% de CO2, 30% de MeOH) para dar, después de la liofilización en CH3CN/agua, el primer Enantiómero eluido 31A (23 mg) y el segundo Enantiómero eluido 31B (24 mg).
Enantiómero 31A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-ds) 5 ppm 1.90 - 2.03 (m, 2 H) 2.20 - 2.30 (m, 2 H) 2.55 - 2.62 (m, 1 H) 3.07 (t a, J=7.7 Hz, 1 H) 3.12 - 3.24 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.87 (d a, J=6.9 Hz, 2 H) 4.05 (td, J=10.3, 7.1 Hz, 1 H) 4.51 (td, J=10.4, 6.6 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.78 (s, 1 H) 5.94 (s, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 6.45 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 3 H) 7.54 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.16 (d a, J=6.9 Hz, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.07 min, MH+ 623
[a]D20: 43.1° (c 0.255, DMF)
SFC quiral (método SFC-F): TR 3.25 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Enantiómero 31B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-ds) 5 ppm 1.90 - 2.03 (m, 2 H) 2.19 - 2.31 (m, 2 H) 2.55 - 2.62 (m, 1 H) 3.01 - 3.10 (m, 1 H) 3.12 - 3.23 (m, 2 H) 3.62 (s, 3 H) 3.86 (d a, J=6.9 Hz, 2 H) 4.05 (td, J=10.2, 7.3 Hz, 1 H) 4.51 (td, J=10.3, 6.5 Hz, 1 H) 5.57 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 5.78 (s, 1 H) 5.94 (s, 1 H) 5.95 (s, 1 H) 6.45 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 3 H) 7.54 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 8.15 (d a, J=6.6 Hz, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 3.07 min, MH+ 623
[a]D20: -43.4° (c 0.244, DMF)
SFC quiral (método SFC-F): TR 4.85 min, no MH+, pureza quiral 99.09%.
Ejemplo 32: Síntesis de ácido (1 s,3s)-3-(3-((2-(6-cloro-5-metoxiindolin-1-il)-1-(4-clorofenil)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenoxi)ciclobutanocarboxílico (Compuesto 32) y separación quiral en los Enantiómeros 32A y 32B.
Síntesis del intermedio 32a:
El Intermedio 32a (3.58 g) se sintetizó a partir de 6-cloro-5-metoxiindolina [CAS 1369041-89-3] usando el procedimiento descrito para la síntesis del intermedio 26f.
Síntesis del intermedio 32b:
El intermedio 32b (210 mg) se sintetizó a partir del intermedio 32a usando el procedimiento descrito para la síntesis del intermedio 8d.
Síntesis del Compuesto 32 y separación quiral en los Enantiómeros 32A y 32B:
El Compuesto 32 (165 mg) se sintetizó a partir del intermedio 32b usando el procedimiento descrito para la síntesis del Compuesto 28. Los dos enantiómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 gm 250 x 30 mm, fase móvil: 50% de CO2 , 50% de EtOH) para dar, después de la purificación a través de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm; 4 g, CH2Ch/CH3OH, 97/3) y la solidificación en heptano/éter diisopropílico, el primer Enantiómero eluido 32A (26 mg) y el segundo Enantiómero eluido 32B (31 mg).
Compuesto 32:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.03 - 2.15 (m, 2 H) 2.57 - 2.66 (m, 2 H) 2.66 - 2.75 (m, 1 H) 3.06 - 3.23 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.80 (s, 3 H) 3.95 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.43 - 4.52 (m, 2 H) 5.50 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.65 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 5.86 (s, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 6.40 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.10 (s, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.54 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.11 (s, 1 H) 12.26 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.66 min, MH+ 569
Enantiómero 32A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.03 - 2.15 (m, 2 H) 2.57 - 2.66 (m, 2 H) 2.66 - 2.76 (m, 1 H) 3.04 - 3.24 (m, 2 H) 3.57 - 3.64 (m, 3 H) 3.80 (s, 3 H) 3.89 - 4.00 (m, 1 H) 4.42 - 4.54 (m, 2 H) 5.50 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 5.65 (s, 1 H) 5.86 (s, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 6.40 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 7.10 (s, 1 H) 7.44 (d, J=8.2 Hz, 2 H) 7.54 (d a, J=8.2 Hz, 2 H) 8.11 (s, 1 H) 12.26 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.56 min, MH+ 569
[a]D20: -55.4° (c 0.332, DMF)
SFC quiral (método SFC-R): TR 1.73 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Enantiómero 32B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.02 - 2.14 (m, 2 H) 2.58 - 2.65 (m, 2 H) 2.66 - 2.74 (m, 1 H) 3.04 - 3.24 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.80 (s, 3 H) 3.95 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.42 - 4.53 (m, 2 H) 5.50 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.65 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.86 (s, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 6.40 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.10 (s, 1 H) 7.44 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.54 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.11 (s, 1 H) 12.26 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-D): TR 2.56 min, MH+ 569
[ajo20: 53.4° (c 0.35, DMF)
SFC quiral (método SFC-R): TR 3.16 min, no MH+, pureza quiral 99.59%.
Ejemplo 33: Síntesis de ácido 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)amino)-ciclobutanocarboxílico (Compuesto 33) y separación quiral en los Estereoisómeros 33A, 33B, 33C y 33D.
En una atmósfera de nitrógeno, una mezcla de 3-metoxi-5-nitroanilina [CAS 586-10-7] (0.50 g, 2.973 mmol), 3-oxociclobutanocarboxilato de etilo [CAS 87121 -89-9] (1.27 g, 8.92 mmol), y ácido acético (0.34 mL, 5.947 mmol) en EtOH seco (26 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadió NaBH3CN (0.374 g, 5.947 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Se añadió salmuera y la mezcla se extrajo dos veces con CH2Cl2. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 pm, 24 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25). Las fracciones puras se combinaron y se concentraron a presión reducida para dar 3-((3-metoxi-5-nitrofenil)amino)ciclobutano-carboxilato de etilo 33a (820 mg). Se usó el compuesto en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Síntesis del intermedio 33b:
Una solución de 3-((3-metoxi-5-nitrofenil)amino)ciclobutanocarboxilato de etilo 33a (820 mg, 2.8 mmol) en EtOH (16 mL) y EtOAc (14 mL) que contenía una cantidad catalítica de Pd al 10%/C (300 mg, 0.28 mmol) se hidrogenó a una presión atmosférica de H2 a temperatura ambiente durante 18 h. El catalizador se eliminó por filtración sobre un lecho corto de Celite® y la torta de filtro se aclaró varias veces con EtOAc. Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida para dar 3-((3-amino-5-metoxifenil)amino)ciclobutanocarboxilato de etilo 33b (800 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Síntesis del intermedio 33c:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etanona 1c (0.936 g, 2.154 mmol), 3-((3-amino-5-metoxifenil)amino)ciclobutanocarboxilato de etilo 33b (0.74 g, 2.8 mmol) y diisopropiletilamina (0.742 mL, 4.307 mmol) en CH3CN (11 mL) se agitó a 80 °C durante 18 h. La mezcla se concentró a presión reducida. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 pm, 40 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 70/30). Las fracciones puras se
combinaron y se evaporaron a sequedad para dar 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)amino)ciclobutanocarboxilato de etilo 33c (600 mg).
Síntesis del Compuesto 33 y separación quiral en los Estereoisómeros 33A, 33B, 33C y 33D:
Se añadió una solución de LiOH monohidrato (0.407 g, 9.71 mmol) en agua (5.3 mL) a una solución de 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)amino)ciclobutanocarboxilato de etilo 33c (600 mg, 0.971 mmol) en THF (12 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 h, se acidificó con AcOH, se concentró a presión reducida, y se co-evaporó dos veces con tolueno. La purificación se realizó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30 pm, 24 g, CH2Cl2/MeOH de 99/1 a 96/4). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad. Se realizó una segunda purificación por medio de cromatografía de fase inversa (Fase estacionaria: YMC-actus Triart-C18 10 pm 30 x 150 mm, fase móvil: Gradiente del 65% de NH4HCO3 acuoso al 0.2%, 35% de CH3CN al 25% de NH4HCO3 acuoso al 0.2%, 75% de CH3CN). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron a sequedad para dar ácido 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometoxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)amino)ciclobutanocarboxílico (Compuesto 33, 80 mg). Los estereoisómeros se separaron a través de SFC quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 pm 250 x 20 mm, fase móvil: 60% de CO2 , 40% de EtOH) para dar 4 fracciones que se liofilizaron en CH3CN/agua para dar el Estereoisómero 33A (19 mg), el Estereoisómero 33B (24 mg), el Estereoisómero 33C (19 mg) y el Estereoisómero 33D (26 mg).
Estereoisómero 33A:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 1.94 - 2.02 (m, 2 H) 2.43 (ddd, J=11.8, 7.7, 4.1 Hz, 2 H) 2.91 (dt, J=9.5, 4.7 Hz, 1 H) 3.07 - 3.21 (m, 2 H) 3.56 (s, 3 H) 3.78 - 3.88 (m, 1 H) 4.05 (td, J=10.4, 7.3 Hz, 1 H) 4.50 (td, J=10.3, 6.8 Hz, 1 H) 5.38 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 5.43 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 5.46 (s, 1 H) 5.60 (s, 1 H) 5.63 (d, J=6.3 Hz, 1 H) 6.19 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.00 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.54 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.86 min, MH+ 590
[a]D20: -26.2° (c 0.248, DMF)
SFC quiral (método SFC-I): TR 1.48 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 33B:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 1.82 - 1.95 (m, 2 H) 2.41 - 2.47 (m, 2 H) 2.68 (t a, J=8.5 Hz, 1 H) 3.08 - 3.21 (m, 2 H) 3.56 (s, 3 H) 3.62 (d ad, J=15.4, 8.2 Hz, 1 H) 4.06 (td, J=10.3, 7.1 Hz, 1 H) 4.46 - 4.56 (m, 1 H) 5.41 (s, 1 H) 5.43 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 5.50 (s, 1 H) 5.60 (s, 2 H) 6.14 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.01 (d a, J=8.2 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.54 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.84 min, MH+ 590
[a]D20: -27.9° (c 0.248, DMF)
SFC quiral (método SFC-I): TR 2.20 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 33C:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 1.93 - 2.03 (m, 2 H) 2.41-2.46 (m, 2 H) 2.82 - 2.95 (m, 1 H) 3.07 - 3.21 (m, 2 H) 3.56 (s, 3 H) 3.78 - 3.88 (m, 1 H) 4.00 - 4.11 (m, 1 H) 4.45 - 4.56 (m, 1 H) 5.37 (s, 1 H) 5.40 - 5.49 (m, 2 H) 5.58 - 5.66 (m, 2 H) 6.19 (d a, J=8.5 Hz, 1 H) 7.00 (d a, J=6.6 Hz, 1 H) 7.32 (d a, J=8.2 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.54 (d, J=8.2 Hz, 2 h ) 8.02 (s a, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.86 min, MH+ 590
[a]D20: 26.7° (c 0.221, DMF)
SFC quiral (método SFC-I): TR 2.91 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Estereoisómero 33D:
1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 1.78 - 1.96 (m, 2 H) 2.40 - 2.47 (m, 2 H) 2.65 - 2.71 (m, 1H) 3.08 - 3.21 (m, 2 H) 3.56 (s, 3 H) 3.58 - 3.67 (m, 1 H) 4.06 (td, J=10.2, 7.3 Hz, 1 H) 4.44 - 4.56 (m, 1 H) 5.38 - 5.46 (m, 2 H) 5.50 (s, 1 H) 5.60 (s, 2 H) 6.14 (d a, J=8.8 Hz, 1 H) 7.00 (d a, J=6.9 Hz, 1 H) 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 7.54 (d, J=8.5 Hz, 2 H) 8.03 (s, 1 H)
LC/MS (método LC-C): TR 2.84 min, MH+ 590
[a]D20: 23.4° (c 0.295, DMF)
SFC quiral (método SFC-I): TR 5.35 min, no MH+, pureza quiral 100%.
Tabla: compuestos preparados como se ha descrito anteriormente
ACTIVIDAD ANTIVIRAL DE LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN
Ensayo antiviral del VDEN-2
Se evaluó la actividad antiviral de todos los compuestos de la invención frente a la cepa 16681 del VDEN-2, la cual se marcó con la proteína fluorescente verde potenciada (eGPF). El medio de cultivo consiste en un medio esencial mínimo complementado con un 2% de suero bovino fetal inactivado térmicamente, un 0.04% de gentamicina (50 mg/ml) y L-glutamina 2 mM. Se suspendieron células Vero, obtenidas de ECACC, en el medio de cultivo y se añadieron 25 pL a placas de 384 pocillos (2500 células/pocillo), que ya contenían los compuestos antivirales. Habitualmente, estas placas contienen diluciones en serie con un factor de 5, de 9 etapas de dilución del compuesto de prueba con 200 veces la concentración final en DMSO al 100% (200 nl). Además, cada concentración del compuesto se evalúa por cuadruplicado (intervalo de concentración final: 25 pM - 0.000064 pM o 2.5 pM - 0.0000064 pM para los compuestos más activos). Finalmente, cada placa contiene pocillos que se han asignado como controles del virus (que contienen células y virus en ausencia del compuesto), controles de las células (que contienen células en ausencia de virus y compuesto) y controles del medio (que contiene medio en ausencia de células, virus y compuestos). A los pocillos asignados como control del medio, se añadieron 25 pL de medio de cultivo en lugar de células Vero. Una vez que se añadieron las células a las placas, las placas se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente para permitir que las células se distribuyeran de manera homogénea dentro de los pocillos. A continuación, las placas se incubaron en una incubadora totalmente humidificada (37 °C, 5% de CO2) hasta el día siguiente. Después, se añadió la cepa 16681 del VDEN-2, marcada con eGFP, con una multiplicidad de infección (MDI) de 0.5. Por lo tanto, se añadieron 15 pl de suspensión del virus a todos los pocillos que contenían compuesto de prueba y a los pocillos asignados como control del virus. En paralelo, se añadieron 15 pL de medio de cultivo a los controles del medio y de las células. A continuación, las placas se incubaron durante 3 días en una incubadora totalmente humidificada (37 °C, 5% de CO2). El día de la lectura, se midió la fluorescencia de eGFP utilizando un microscopio de fluorescencia automático a 488 nm (láser azul). Utilizando un sistema de LIMS propio, se calcularon las curvas de respuesta a la dosis de inhibición para cada compuesto y se determinó la concentración eficaz que produce la mitad del efecto máximo (CE50). Por lo tanto, la inhibición porcentual (I) para cada concentración de prueba se calcula utilizando la siguiente fórmula: I = 100*(St-Scc)/(Svc-Scc); St, Scc y Svc son las cantidades de señal de eGFP en los pocillos del compuesto de prueba, control de las células y control del virus, respectivamente. La CE50 representa la concentración de un compuesto con la que se inhibe la replicación del virus en un 50%, que se mide como una reducción del 50% de la intensidad de fluorescencia de eGFP en comparación con el control del virus. La CE50 se calcula utilizando una interpolación lineal (Tabla 1).
En paralelo, se evaluó la toxicidad de los compuestos en las mismas placas. Una vez que se realizó la lectura de la señal de eGFP, se añadieron 40 pL de ATPlite, un tinte de viabilidad celular, a todos los pocillos de las placas de 384 pocillos. El ATP está presente en todas las células metabólicamente activas y su concentración se reduce muy rápidamente cuando las células experimentan necrosis o apoptosis. El sistema de ensayo ATPLite se basa en la producción de luz provocada por la reacción de ATP con luciferasa y D-luciferina añadidas. Las placas se incubaron durante 10 minutos a temperatura ambiente. A continuación, las placas se midieron en un ViewLux. También se determinó la concentración que produce la mitad del efecto citotóxico máximo (CC50), definida como la concentración requerida para reducir la señal de luminiscencia en un 50% en comparación con la de los pocillos de control de las células. Finalmente, se determinó el índice de selectividad (IS) para los compuestos, que se calculó de la siguiente manera: IS = CC50/CE50.
Tabla 1: CE50, CC50 e IS para los compuestos de la invención en el ensayo antiviral del VDEN-2
Ensayo de PCR cuantitativa con retrotranscriptasa tetravalente (RT-qPCR)
Se evaluó la actividad antiviral de los compuestos de la invención frente a la cepa TC974#666 del VDEN-1 (NCPV), la cepa 16681 del VDEN-2, la cepa H87 del v De N-3 (NCPV) y la cepa H241 (NCPV) del VDEN-4 en un ensayo de RT-qPCR. Por lo tanto, se infectaron células Vero con el Vd En -1 o -2 o -3 o -4 en presencia o ausencia de compuestos de prueba. El día 3 después de la infección, las células se sometieron a lisis y los lisados celulares se utilizaron para preparar ADNc de tanto una diana viral (la 3 ’UTR del VDEN; Tabla 2) como un gen de referencia celular (P-actina, Tabla 2). Posteriormente, se realizó una PCR doble a tiempo real en un instrumento Lightcycler480. El valor de Cp generado es inversamente proporcional a la cantidad de expresión de ARN de estas dianas. La inhibición de la replicación del VDEN por un compuesto de prueba da como resultado un desplazamiento de Cp para el gen 3’UTR. Por otra parte, si un compuesto de prueba es tóxico para las células, se observará un efecto similar en la expresión de P-actina. El método de AACp comparativo se utiliza para calcular CE50, que se basa en la expresión génica relativa del gel diana (3’UTR) normalizada con el gen constitutivo celular (P-actina). Además, los valores de CC50 se determinan en base a los valores de Cp adquiridos para el gen constitutivo P-actina.
Tabla 2: Cebadores y sondas utilizados para la RT-PCR cuantitativa a tiempo real.
El medio de cultivo consistió en un medio esencial mínimo complementado con un 2% de suero bovino fetal inactivado térmicamente, un 0.04 % de gentamicina (50 mg/ml) y L-glutamina 2 mM. Se suspendieron células Vero, obtenidas de ECACC, en el medio de cultivo y se añadieron 75 pL/pocillo en placas de 96 pocillos (10 000 células/pocillo), que ya contenían los compuestos antivirales. Habitualmente, estas placas contienen una dilución en serie con un factor de 5, de 9 etapas de dilución del compuesto de prueba con 200 veces la concentración final en DMSO al 100% (500 nl; intervalo de concentración final: 25 pM - 0.000064 pM o 2.5 pM - 0.0000064 pM para los compuestos más activos). Además, cada placa contiene pocillos que se han asignado como controles del virus (que contienen células y virus en ausencia de compuesto) y controles de las células (que contienen células en ausencia de virus y compuesto). Una vez se añadieron las células a las placas, las placas se incubaron en una incubadora totalmente humidificada (37 °C, 5% de CO2) hasta el día siguiente. Se diluyeron los serotipos 1,2, 3 y 4 de los virus del dengue con el fin de obtener un Cp de ~22-24 en el ensayo. Por lo tanto, se añadieron 25 pL de suspensión de virus a todas las placas que contenían compuesto de ensayo y a los pocillos asignados como control de virus. En paralelo, se añadieron 25 pL de medio de cultivo a los controles de las células. A continuación, las placas se incubaron durante 3 días en una incubadora totalmente humidificada (37 °C, 5% de CO2). Después de 3 días, se retiró el sobrenadante de los pocillos y las células se lavaron dos veces con PBS enfriado con hielo (~100 pL). Los sedimentos de células dentro de las placas de 96 pocillos se almacenaron a -80 °C durante al menos 1 día. A continuación, se extrajo el ARN utilizando el kit de lisis Cells-to-CTTM, de acuerdo con las directrices del fabricante (Life Technologies). Los lisados celulares pueden almacenarse a -80 °C o utilizarse inmediatamente en la etapa de retrotranscripción.
En la preparación de la etapa de retrotranscripción, se preparó la mezcla A (tabla 3A) y se dispensaron 7.57 pl/pocillo en una placa de 96 pocillos. Después de la adición de 5 pL de los lisados celulares, se realizó una etapa de desnaturalización de cinco minutos a 75 °C (tabla 3B). Posteriormente, se añadieron 7.43 pl de mezcla B (tabla 3C) y se inició la etapa de retrotranscripción (tabla 3D) para generar ADNc.
Finalmente, se preparó una mezcla de RT-qPCR, mezcla C (tabla 4A), y se dispensaron 22.02 pL/pocillo en placas LightCycler qPCR de 96 pocillos en las que se añadieron 3 pL de ADNc y la qPCR se realizó de acuerdo con las condiciones de la tabla 4B en un LightCycler 480.
Utilizando el software LightCycler y un sistema LIMS propio, se calcularon las curvas de respuesta a la dosis para cada compuesto y se determinaron la concentración eficaz que produce la mitad del efecto máximo (CE50) y la concentración que produce la mitad del efecto citotóxico máximo (CC50) (Tablas 5-8).
Tabla 3: Síntesis de ADNc usando la Mezcla A, desnaturalización, la Mezcla B y retrotranscripción
Tabla 4: Protocolo y mezcla de qPCR
Tabla 5: CE50, CC50 e IS para los compuestos frente al serotipo 1 en los ensayos de RT-qPCR
Tabla 6: CEsn. CCsn e IS para los compuestos frente al serotipo 2 en los ensayos de RT-qPCR
Tabla 7:________CE50. CC50 e IS para los compuestos frente al serotipo 3 en los ensayos de RT-qPCR
Tabla 8:________CE50. CC50 e IS para los compuestos frente al serotipo 4 en los ensayos de RT-qPCR
Claims (15)
1. Un compuesto de fórmula (I), incluida cualquiera de sus formas estereoquímicamente isoméricas,
donde
R1 es trifluorometilo, trifluorometoxi, o cloro;
R2 es hidrógeno, flúor, o metoxi;
R3 es hidrógeno, o metoxi;
A representa-(CH2)n-, donde n es 3 o 4;
-O-(CH2)n-, donde n es 2 o 4;
-O-(CH2)n-, donde n es 3 y uno o dos CH2 están sustituidos con uno o dos CH3 ;
-CH2-O-(CH2)n-, donde n es 2; o
-X-Y-, donde X es -O-, -OCH2-, o -NH-; y
Y es cicloalquilo C3-4 opcionalmente sustituido con flúor, o
Y es biciclo[1.1.1 ]pentanilo;
o una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicho compuesto está seleccionado de entre
3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicho compuesto tiene la rotación específica (+) medida a 20° C utilizando una longitud de onda de 589 mn en DMF como disolvente.
4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, donde dicho compuesto se selecciona de entre:
5. El compuesto según la reivindicación 1, donde R1 es trifluorometoxi, R2 es hidrógeno, y R3 es hidrógeno.
6. El compuesto según la reivindicación 1, donde A representa -(CH2)n-, donde n es 3 o 4.
7. El compuesto según la reivindicación 1, donde A representa -O-(CH2)n-, donde n es 2 o 4.
8. El compuesto según la reivindicación 1, donde A representa -O-(CH2)n-, donde n es 3 y uno o dos CH2 están sustituidos con uno o dos CH3; o A representa
9. El compuesto según la reivindicación 1, donde A representa -X-Y-, donde X es -O-, -OCH2-, o -NH-; e Y es cicloalquilo C3-4 opcionalmente sustituido con flúor.
10. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, junto con uno o más excipientes, diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.
11. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10, que comprende un segundo principio activo o más.
12. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 11, donde el segundo principio activo o más es un agente anti-vírico.
13. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para su uso como medicamento.
14. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para su uso en el tratamiento de la infección del Dengue y para prevenir o tratar enfermedades asociadas a la infección del Dengue.
15. Un compuesto de fórmula (I) para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, donde la infección del Dengue es infección por los virus de las cepas DENV-1, DENV-2, DENV-3 o DENV-4.
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