[go: up one dir, main page]

UA128326C2 - Химерний рецептор до flt3 та спосіб його застосування - Google Patents

Химерний рецептор до flt3 та спосіб його застосування Download PDF

Info

Publication number
UA128326C2
UA128326C2 UAA201810056A UAA201810056A UA128326C2 UA 128326 C2 UA128326 C2 UA 128326C2 UA A201810056 A UAA201810056 A UA A201810056A UA A201810056 A UAA201810056 A UA A201810056A UA 128326 C2 UA128326 C2 UA 128326C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
rgo
age
tug
mai
cells
Prior art date
Application number
UAA201810056A
Other languages
English (en)
Inventor
Еліс Баккер
Элис Баккер
Лоурен Ву
Тара Арведсон
Джед. Дж. Вільцюс
Джед. Дж. Вильцюс
Рубен Альварез Родрігез
Рубен Альварез Родригез
Original Assignee
Амджен Інк.
Амджен Инк
Кайт Фарма, Інк.
Кайт Фарма, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Амджен Інк., Амджен Инк, Кайт Фарма, Інк., Кайт Фарма, Инк. filed Critical Амджен Інк.
Publication of UA128326C2 publication Critical patent/UA128326C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/30—Cellular immunotherapy characterised by the recombinant expression of specific molecules in the cells of the immune system
    • A61K40/31—Chimeric antigen receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K40/421—Immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/10—Protein-tyrosine kinases (2.7.10)
    • C12Y207/10001—Receptor protein-tyrosine kinase (2.7.10.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Mycology (AREA)

Abstract

Винахід стосується химерного рецептора, імунної клітини до FLT3, вектора, композиції та способу лікування із застосуванням антигензв'язувальних молекул до FLT3 та розробленої імунної клітини.

Description

Гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ) являє собою гетерогенну гематологічну злоякісну пухлину, яка є найбільш поширеним типом гострого лейкозу, діаагностованим у дорослих пацієнтів. ГМЛ становить близько третини усіх випадків лейкозу, враховуючи очікувані 14500 нових випадків, про які повідомляється у 2013 році тільки в США, та низькі загальні показники виживання.
Спостерігалося незначне покращення у стандарті лікування пацієнтів із ГМЛ протягом останніх тридцяти років. Проте, останні досягнення в молекулярній та клітинній біології радикально змінили наші уявлення про гемопоез людини як у нормальному стані, так і у стані хвороби.
Були ідентифіковані декілька ключових гравців, які беруть участь у патогенезі захворювання, та вони можуть бути детально досліджені як цільові завдання. Одним з таких активуючих "драйверних" генів, які найчастіше є мутованими приблизно у 30 95 ГМЛ, є РІ Т3.
Етв-подібна тирозинкіназа З (РІ Т3), також відома як зародкова печінкова кіназа 2 (РІ К-2), кіназа людських стовбурових клітин 1 (ЗСК-1) або антиген кластера диференціювання (СО135), являє собою пов'язану із кровотворенням рецепторну тирозинкіназу, яку у 1990-х клонували дві незалежні групи. Ген ЕГТЗ3, розташований у хромосомі 13д12 у людей, кодує рецепторний тирозинкіназний білок рецепторної тирозинкінази класу І, який розділяє гомологію з іншими членами сімейства класу ПШ, в тому числі рецептором фактора стовбурових клітин (с-КІТ), рецептором макрофагального колонієсєтимулюючого фактора (ЕМ5) та рецептором фактора росту тромбоцитів (РОСЕК).
При зв'язуванні з лігандом РГТЗ3 рецептор РІТЗ3 піддається гомогенізації, забезпечуючи таким чином автофосфорилювання специфічних залишків тирозину в коломембранному домені та подальшу активацію шляхом маршрутів РІЗК/АКЇ МАРК та 5ТАТ5. Таким чином, ЕТЗ3 відіграє вирішальну роль у контролі проліферації, виживанні та диференціації нормальних гемопоетичних клітин.
Людський РІТЗ3 експресується у СЮО34-С038- гемопоетичних стовбурових клітинах (НЗС), а також у субпопуляції дендритних клітин-попередників. Експресія РІТ3 також може бути знайдена у мультипотентних клітинах-попередниках, наприклад, звичайних мієлоїдних клітинах - попередниках (СМР) СО34а-С038и:0045ВАСО123», клітинах попередниках гранулоцитів та моноцитів (СМР)СОЗ4иСО038иС2045ААСО1239», та загальних лімфоїдних клітинах- попередниках (СІ Р) СО34-2038и0010иС2019-. Примітно, що експресія РІ ТЗ практично відсутня
Зо у клітинах-попередниках мегакаріоцитів та еритроцитів (МЕР) СО34-2038СрА45ВАСО123.
Таким чином, експресія РІ.ТЗ3 переважно полягає у ранніх мієлоїдних та лімфоїдних клітинах- попередниках із деякою експресією в більш зрілих клітинах ряду моноцитів. Даний обмежений профіль експресії РІТЗ3 разюче контрастує з профілем експресії ліганда Б Т3, який експресується у більшості гемопоетичних тканин та у передміхуровій залозі, нирці, легені, товстому кишечнику та серці. Дані різні профілі експресії, наприклад, експресія РІ.ТЗ3, являють собою стадію, яка обмежує швидкість реакції, у визначенні тканинної специфічності сигнальних шляхів ЕГ-Т3.
Найбільш поширена мутація РІТЗ3 у ГМЛ являє собою внутрішню тандемну дуплікацію БІТЗ3 (ЕСТ3-ІТО), яка знайдена у 20-38 95 пацієнтів із цитогенетично нормальним ГМЛ. ЕСТ3-ІТО утворюються, коли частина коломембранного домену, який кодує послідовність, дублюється та вставляється в орієнтації "голова-до-хвоста". Мутації РІТЗ3 не були ідентифіковані у пацієнтів з хронічним лімфоїдним лейкозом (ХЛЛ), неходжкінською лімфомою та множинною мієломою, з чого можна зробити висновок про сильну специфічність захворювання для ГМЛ. Мутантна активація РІ ТЗ зазвичай спостерігається в усіх підтипах ЕАВ, проте, вона значно підвищується у пацієнтів, що мають ГМЛ, із ЕАВ М5 (моноцитарний лейкоз), тоді як підтипи М2 та Мб ЕАВ (гранулоцитарний або еритроїдний лейкоз) значно рідше пов'язані з активацією РІ Т3, у лінії з нормальними профілями експресії ЕІТ3. У невеликого відсотка пацієнтів з ГМЛ (5-7 95) присутні одиночні амінокислотні мутації у тирозинкіназному домені РІТЗ3 (РІ ТЗ ТКО), найбільш часто у рез5 або, у деяких випадках, у Т842 або І836, тоді як ще менша кількість пацієнтів (41 У) мають приховану мутацію в коломембранному домені РІ ТЗ за участю залишків 579, 590, 591 та 594.
Пацієнти з омутованим ЕГТ3-ІТО0 ГМЛ мають агресивну форму захворювання, яка характеризується раннім рецидивом та низьким виживанням, тоді як загальне виживання та безподієве виживання значно не піддаються впливу наявності мутацій РЕ Т3-ТКО. Окрім того, пацієнти з ГМЛ, які мають мутацію ЕР Т3-ІТО, із одночасними мутаціями ТЕТ2 або ОММТЗА, мають небажаний загальний профіль ризику порівняно з пацієнтами, що мають мутований
ЕГТ3-ІТО ГМЛ, з ТЕТ2 або ОММТЗА дикого типу, що підкреслює клінічну та біологічну гетерогенність ГМЛ.
Як мутації ЕТ3-1Т0О, так і мутації Е-ТЗ ТКО включають ліганд-залежну активацію РІ ТЗ, яка призводить до подальшої активації маршруту Каз/МАРК та маршрутів РІЗК/АКЇ. Проте, 60 подальші сигналізуючі маршрути, пов'язані з будь-якою мутацією, відрізняються, насамперед,
тим, що переважна активація 5ТАТО шляхом ЕГСТ3-ІТО, що призводить, таким чином, до підвищення потенціалу проліферації та неправильної регуляції маршрутів відновлення ДНК.
Незалежно від статусу мутації ЕСТЗ3, фосфорилювання Р ТЗ проявляється у більш ніж двох третин пацієнтів з ГМЛ, та РІ ТЗ експресується у більше 80 95 бластах ГМЛ та у близько 90 95 усіх пацієнтів з ГМЛ, що робить його привабливою терапевтичною мішенню, пов'язаною з патогенезом захворювання у вибірці більшого розміру.
Декілька інгібіторів малих молекул виникли як привабливі можливі способи лікування для пацієнтів з ГМЛ із мутаціями ЕІГТ3. Перше покоління інгібіторів тірозинкінази РІ ТЗ (ТКІ) характеризувалося відсутністю селективності, сили та небажаними фармакокінетичними властивостями. Для боротьби з цим питанням ніколи не були розроблені нові та більш селективні засоби; проте, їхня ефективність була обмежена виникненням вторинної резистентності.
Декілька ранніх РІ ТЗ ТКІ крім інших включали мідостаурин (РКС412), лестауртиніб (СЕР- 701), сунитиніб (5011248) та сорафиніб (ВАМ 43-9006). Швидкості відповіді у фазі І та фазі І! з даними засобами, націленими на декілька кіназ, у пацієнтів з рецидивуючим або резистентним
ГМЛ обмежені, імовірно, у зв'язку з їхньою неспроможністю досягати ефективного інгібування
Е-ТЗ3 без токсичностей, що обмежують дозу. Квізартиніб (АС220) був розроблений як друге покоління ЕІТЗ ТКІ з високою селективністю до БІТЗ3 дикого типу та РІ Т3-ІТО, та продемонстрував перевагу, зокрема, при встановленні перитрансплантата у більш молодшої групи пацієнтів. Проте, вторинні мутації в ЕІ ТЗ3, знайдені у пацієнтів з рецидивом, які одержували квізартиніб, підкреслюють необхідність розробки кращих терапевтичних стратегій для пацієнтів з ГМЛ, підкреслюючи при цьому обгрунтованість РІ ТЗ як терапевтичної мішені.
Деякі націлені засоби були протестовані у пацієнтів з ГМЛ або з первинним, рецидивуючим/резистентним, або з вторинним захворюванням. Епігенетичний сайленсінг генів, що пригнічують пухлину, відіграю важливу роль у патогенезі захворювання ГМЛ, та інгібітори метилтрансферази ДНК (ОММТ), а саме азацитадин та децитабін, досягли деякого клінічного успіху. Окрім того, останнє виявлення мутацій, які негативно впливають на посттрансляційні модифікації гістона (наприклад, мутації Е2Н2 та АБХІТ) або метилювання ДНК (наприклад,
ОММТЗА, ТЕТ2, ІОНІ/2) у субпопуляції пацієнтів з ГМЛ, забезпечили розвиток різноманітних можливих способів лікування, у тому числі інгібіторів Е2Н2, ОТ, ІОНІ/2 разом з НОАС та інгібіторами протеази. Проте, доклінічні дослідження більшості даних компонентів в клітинах
ГМЛ припускають, що дані інгібітори можуть змінювати характеристики фенотипічної та генної експресії гемопоетичної диференціації, аніж викликати безпосередню цитотоксичність бластів
ГМЛ. Отже, залишається сильна незадоволена медична потреба у ідентифікації нових мішеней/способів для боротьби з ГМЛ та викликання націленого лізису клітин-бластів ГМЛ. Інші терапевтичні кандидати для ГМЛ включають інгібітори кінази Аєйгога, у тому числі АМО 900, та інгібітори для РоіІо-подібних кіназ, які відіграють важливу роль у прогресуванні клітинного циклу.
Стандарт лікування для пацієнтів з ГМЛ як і раніше являв собою хіміотерапію із трансплантацією стовбурових клітин по можливості. Проте, виникнення випадків рецидиву/резистентності у значної більшості пацієнтів, що лікувалися, гарантує додаткові терапевтичні способи. Ідентифікація та опис декількох специфічних до лейкозу антигенів разом із більш ясним розумінням імуноопосередкованих ефектів "трансплантат проти лейкозу" проклали шлях для розвитку імуномодуляторних стратегій для боротьби з гематологічними злоякісними новоутвореннями, розглянутими у декількох статтях.
Було показано, що розроблені імунні клітини мають необхідні якості у терапевтичних способах лікування, зокрема, в онкології Два основних типи розроблених імунних клітин являють собою клітини, які містять химерні антигенні рецептори (що називаються "САК" або "САК-Т") та Т-клітинні рецептори ("ТС"). Дані розроблені клітини розроблені для забезпечення антигенспецифічности для них, підтримуючи або посилюючи їхню здатність розпізнавати та знищувати клітину-мішень. Химерні антигенні рецептори можуть містити, наприклад, (Її) антиген-специфічний компонент ("антигензв'язувальну молекулу"), (ії) один або декілька костимулюючих доменів та (ії) один або декілька активуючих доменів. Кожен домен може бути гетерогенним, тобто, складатися з послідовностей, утворених з різних білкових ланцюгів. Імунні клітини, що експресують химерний антигенний рецептор, (наприклад, Т-клітини) можуть застосовуватися у різних варіантах терапії, у тому числі, варіантах терапії раку. Слід розуміти, що костимулюючі поліпептиди, як зазначено в даному документі, можна застосовувати для посилення активації САК-експресуючих клітин проти антигенів-мішеней та, отже, підвищувати силу адоптивної імунотерапії.
Т-клітини можуть бути розроблені для наявності специфічності до одного або декількох 60 необхідних мішеней. Наприклад, Т-клітини можуть бути трансфіковані за допомогою ДНК або іншого генетичного матеріалу, який кодує антигензв'язувальну молекулу, наприклад, одного або декількох варіабельних фрагментів антитіла з одним ланцюгом ("5сЕм"), разом з однією або декількома сигналізувальними молекулами, та/або одного або декількох активуючих доменів, наприклад, СОЗ дзета.
Окрім здатності САК-Т-клітин розпізнавати та руйнувати клітини-мішені, успішна Т-клітинна терапія підвищує здатність САК-Т-клітин зберігатися та підтримувати здатність до проліферації у відповідь на антиген.
Рецептори Т-клітин (ТОК) являють собою молекули, виявлені на поверхні Т-клітин, які відповідають за розпізнавання фрагментів антигену як пептидів, пов'язаних з основними молекулами комплексу гістосумісності (МНС). ТС складається з двох різних білкових ланцюгів - приблизно у 95 96 людських ТСК, ТОК складається з альфа (с) та бета (р) ланцюга.
Приблизно у 5 95 людських Т-клітин ТОК складається з гамма та дельта (у/б) ланцюгів. Кожен ланцюг складений з двох позаклітинних доменів: варіабельної області (М) та постійної області (С), обидві з надсімейства імуноглобулінів. Як і в інших імуноглобулінах, кожен з варіабельних доменів а-ланцюга та Рр-ланцюга ТСК (або гамма та дельта (у/б) ланцюга) мають три гіперваріабельні області або області, що визначають комплементарність (СОК). Якщо ТОК взаємодіє з антигенним пептидом та МНС (пептид/МНС), то Т-клітина стає активованою, забезпечуючи її ураження та знищення клітини-мішені.
Проте, наявні на даний момент варіанти терапії показали змінні рівні ефективності з небажаними побічними ефектами. Отже, існує потреба в ідентифікації нових та покращених варіантів терапії для лікування пов'язаних з ЕІ ТЗ3 захворювань та порушень.
Викладення суті винаходу
Даний винахід стосується розроблених імунних клітин (наприклад, САК або ТСК), антигензв'язувальних молекул (в тому числі без обмеження антитіл, 5сЕм, важких та/або легких ланцюгів та СОК даних антигензв'язувальних молекул) зі специфічністю до РІ Т3.
Даний винахід також стосується нової послідовності СО28, придатної як костимулюючі домени у даних клітинах.
Химерні антигенні рецептори за даним винаходом зазвичай включають наступне: (і) ЕТ3- специфічну антигензв'язувальну молекулу, (ії) один або декілька костимулюючих доменів та (її) один або декілька активуючих доменів. Слід розуміти, що кожен домен може бути гетерогенним, таким чином, складатися з послідовностей, утворених з різних білкових ланцюгів.
У деяких варіантах здійснення даний винахід стосується химерного антигенного рецептора, що включає антигензв'язувальну молекулу, яка специфічно зв'язується з ЕІГТЗ3, при цьому антигензв'язувальна молекула містить щонайменше одне з наступного: (а) варіабельна область
СОКІ важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від послідовності у 5ЕО ІЮ МО: 17 не більше ніж на 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків; (Б) варіабельна область СОК2 важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від послідовності у з«ЕО ІЮ МО:18 або ЗЕО ІЮ МО:26 не більше ніж на 3, 2,1 або 0 амінокислотних залишків; (с) варіабельна область СОКЗ важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність яка відрізняється від послідовності у зЗЕО ІЮ МО 5ЕО ІО МО: 19 або 5ЗЕО ІО МО:27 не більше ніж на 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків; (4) варіабельна область
СОКІ легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від послідовності у БЕО ІЮ МО:22 або 5ЕО ІЮО МО:30 не більше ніж на 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків; (е) варіабельна область СОК2 легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від послідовності у ХЕО ІЮ МО:23 або 31 не більше ніж на 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків; () варіабельна область СОКЗ легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від послідовності у зЗЕО 10:24 або 5ЕО ІЮО МО:32 не більше ніж на 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків.
В інших варіантах здійснення химерний антигенний рецептор додатково містить щонайменше один костимулюючий домен. У наступних варіантах здійснення химерний антигенний рецептор додатково містить щонайменше один активуючий домен.
У деяких варіантах здійснення костимулюючий домен являє собою сигнальну область СО28,
Сргвт, ох-40, 4-188/С00137, С0р2, 007, 0027, СО030, 0040, Ргодгаттей ЮОвєаїн-1 (РО-1), індукований костимулятор Т-клітин (ІСО5), пов'язаний із функцією лімфоцитів антиген-1 (І ЕА-1,
СОІ-їа/«СО18), СОЗ гамма, СОЗ дельта, СОЗ епсилон, СО247, СО276 (В7-НЗ), ПаНТ, (ТМЕ5Е14),
МКОо2с, Ід альфа (СО79а), ОАР-10, Ес гамма рецептор, молекулу МНС класу 1, ТМЕ рецепторні білки, білок імуноглобулін, рецептор до цитокінів, інтегрін, сигнальні молекули активації лімфоцитів (білки 5ІАМ), активуючі рецептори МК-клітин, ВТІ А, рецептор до Толл-лігандів,
ІСАМ-1, В7-НЗ, СО5, ІСАМ-1, СІТА, ВАЕРРВЕ, Па,ант, НУЕМ (ПСНТЕ), КІНОБ2, 5І АМЕ7, МКр8во бо (КАРЕ), МКр44, МКр3О, МКр4б, СО19, 204, СО8 альфа, СОВ8 бета, ІІ -2К бета, ІІ -2К гамма, ІІ -
7К альфа, ІТСА4, МІ А1, Сра49а, ІТСАЯ4, ІА4, СО490, ІТСАб, МІ А-6, СО491, ІТИОАЮ, СО а, ІТОАЕ,
СО103, ІТОАЇ,, СОЇ а, І ЄА-1, ІТОАМ, СОІ ІБ, ІТОАХ, СО Іс, ІТОВІ, СО029, ІТОВ2, СО18, І БА-1,
Ітав7, МКОа2о, ТМЕВН2г, ТВАМСЕ/ВАМКІ, ОМАМІ (С0О226), 5І АМЕ4 (С0244, 284), 6084, С0р96 (Тасійє), СЕАСАМІ, СВТ АМ, Гуз (Сб0229), СО160 (8М55), РБОІ 1, 20100 (5ЕМА40), СОб69,
ЗІ АМЕб (МТВ-А, Гу08), БІ АМ (БІ АМЕТ, 20150, ІРО-3), В АМЕ (5 АМЕ8), ЗЕ! РІГ а (С0162),
ІТВЕ, ГАТ, САЮОБ5, 5І Р-76, РАСУСЬр, СО19а, ліганд, який специфічно зв'язується з СО83, або будь-які їх комбінації.
У деяких варіантах здійснення костимулюючий домен одержаний з 4-188. В інших варіантах здійснення костимулюючий домен одержаний з ОХ40. Див. також Нотрасі зі співавт., Опсоіттипоіоду. 2012 Ум. 1; 1(4): 458-466. У наступних варіантах здійснення костимулюючий домен містить ІСО5, як описано у Сцедап зі співавт., Аидиві 14, 2014; Віоса: 124 (7) та ЗНеп зі співавт., доигпаї! ої Нетайюіоду « Опсоіоду (2013) 6:33. У наступних варіантах здійснення костимулюючий домен містить СО27, як описано у опа зі співавт., Опсоіттипоіоду. 2012 ди. 171(4): 547-549.
У деяких варіантах здійснення костимулюючий домен СО28 містить 5ЕО ІО МО: 2, 5ЕО ІЮ
МО: 4, 5ЕО ІО МО: 6, або ЗЕО ІЮО МО: 8. У додаткових варіантах здійснення костимулюючий домен СО8 містить ЗЕО ІО МО: 14. У наступних варіантах здійснення активуючий домен містить
СО3, СО3 дзета або СОЗ дзета з послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО: 10.
В інших варіантах здійснення даний винахід стосується химерного антигенного рецептора, де костимулюючий домен містить ЗЕО ІО МО: 2, а активуючий домен містить ЗЕО ІЮО МО: 10.
Даний винахід також стосується полінуклеотидів, які кодують химерні антигенні рецептори, та векторів, які містять полінуклеотиди. Вектор може являти собою, наприклад, ретровірусний вектор, вектор ДНК, плазміду, вектор РНК, аденовірусний вектор, пов'язаний із аденовірусом вектор, лентивірусний вектор або будь-які їх комбінації. Даний винахід також стосується імунних клітин, які містять вектори. У деяких варіантах здійснення лентивірусний вектор являє собою вектор роАК.
Ілюстративні імунні клітини включають без обмеження Т-клітини, лімфоцити, що проникають у пухлину (ТІ), МК-клітини, ТОК-експресуючі клітини, дендритні клітини або МК-Т-клітини. Т- клітини можуть бути автологічними, аллогенними або гетерологічними. В інших варіантах здійснення даний винахід стосується фармацевтичних композицій, які містять імунні клітини, як описано у даному документі.
У деяких варіантах здійснення даний винахід стосується антигензв'язувальних молекул (та химерних антигенних рецепторів, які містять данні молекули), які містять щонайменше одне з наступного: (а) область МН, яка відрізняється від амінокислотної послідовності області МН в 10ЕЗ не більше ніж на 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків та область МІ, яка відрізняється від амінокислотної послідовності області МІ в 10ЕЗ не більше ніж на 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків; (Б) область МН, яка відрізняється від амінокислотної послідовності області МН в 2Е7 не більше ніж на 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків та область МІ, яка відрізняється від амінокислотної послідовності області МІ. в 2Е7 не більше ніж на 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 або О амінокислотних залишків; (с) область УН, яка відрізняється від амінокислотної послідовності області МН в 885 не більше ніж на 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків та область МІ, яка відрізняється від амінокислотної послідовності області МІ. в 885 не більше ніж на 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 або О амінокислотних залишків; (4) область МН, яка відрізняється від амінокислотної послідовності області МН в 4Е9 не більше ніж на 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків та область МІ, яка відрізняється від амінокислотної послідовності області МІ. в 4Е9 не більше ніж на 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 або О амінокислотних залишків; (є) область УН, яка відрізняється від амінокислотної послідовності області МН в 11Е11 не більше ніж на 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків та область МІ, яка відрізняється від амінокислотної послідовності області МІ в 10ЕЗ не більше ніж на 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 або 0 амінокислотних залишків; та де область МН та Мі або області зв'язані шляхом щонайменше одного лінкера.
В інших варіантах здійснення даний винахід стосується антигензв'язувальних молекул (та химерних антигенних рецепторів, які містять дані молекули), де лінкер містить щонайменше один з лінкера зсЕм 545 та лінкера зсЕм М/пЙому.
В інших варіантах здійснення даний винахід стосується векторів, які кодують поліпептиди за 60 даним винаходом, та до імунних клітин, які містять данні поліпептиди. Переважні імунні клітини включають Т-клітини, лімфоцити, що проникають у пухлину (ТІ), МК-клітини, ТСК-експресуючі клітини, дендритні клітини або МК-Т-клітини. Т-клітини можуть бути автологічними, аллогенними або гетерологічними.
В інших варіантах здійснення даний винахід стосується виділених полінуклеотидів, які кодують химерний антигенний рецептор (САК) або Т-клітинний рецептор (ТСК), які містять антигензв'язувальну молекулу, яка специфічно зв'язується з РІ Т3, де антигензв'язувальна молекула містить варіабельну область СОКЗ важкого ланцюга (Мн), яка містить амінокислотну послідовність із БЕО ІЮ МО: 19 або 5ЕО ІЮО МО:27. Полінуклеотиди можуть додатково містити активуючий домен. У переважних варіантах здійснення активуючий домен являє собою СОЗ, більш переважно СОЗ дзета, більш переважно амінокислотну послідовність, представлену в
ЗЕО ІЮО МО: 9.
В інших варіантах здійснення даний винахід включає костимулюючий домен, наприклад,
Срагв, Срагвт, ох40, 4-1488/С0137, С02, СО3 (альфа, бета, дельта, епсилон, гамма, дзета), бра, 205, 607, 6р9, Ср16, 6022, 6027, 26030, СО 33, 6037, С040, СО 45, б064, 2080, 2086,
Сбр134, 20137, С0154, РО-1, ІСО5, пов'язаний із функцією лімфоцитів антиген-1 (І ЕА-1 (СО
Ііа/СО18), 00247, 00276 (8В7-НЗ), ПОНТ (член надсімейства факторів некрозу пухлини 14;
ТМЕБЕ14), МКО2С, Ід альфа (СО079а), ОАР-10, Ес гамма рецептор, молекула МНС класу І, ТМЕ,
ТМЕг, інтегрін, сигнальна молекула активації лімфоцитів, ВТ А, рецептор до Толл-лігандів,
ІСАМ-1, В7-НЗ, СО5, ІСАМ-1, СІТА, ВАЕРРВЕ, Па,ант, НУЕМ (ПСНТЕ), КІНОБ2, 5І АМЕ7, МКр8во (КЕР), МКр44, МКрзіо, МКр46, СО19, С04, Совальфа, СОвньега, ІІ -2К бета, ІІ -2К гамма, 1-78 альфа, ІТОА4, МІ АТ, СО49а, ІТСАЯ4, ІАЯ4, СО490, ІТСАб, МІ А-6, 20491, ІТОАО, СОІ-іа, ІТОАЕ,
СО103, ІТСОА, СОІ-іа, І БА-1, ІТЕОАМ, СОІ-І6, ІТОАХ, СОІ-Іс, ІТОВІ, СО029, ІТОВ2, СО18, І ГА-1,
Ітав7, МКОа2о, ТМЕВН2г, ТВАМСЕ/ВАМКІ, ОЮОМАМІ (00226), 5І АМЕ4 (С0О244, 284), 6084, 2096 (Тасійє), СЕАСАМІ, СВТ АМ, Гуз (00229), 20160 (8У55), РОСІЇ 1, СО100 (5ЕМА40), СО69,
ЗІ АМЕб (МТВ-А, Гу08), БІ АМ (БІ АМЕТ, 20150, ІРО-3), В АМЕ (5 АМЕ8), ЗЕ! РІГ а (С0162),
І ТВА, ГАТ, САОБ, 5І Р-76, РАС/СЬр, СО19а, СО83 ліганд, або їхні фрагменти або комбінації.
Переважні костимулюючі домени представлені нижче у даному документі.
У наступних варіантах здійснення даний винахід стосується виділених полінуклеотидів, які кодують химерний антигенний рецептор (САК) або Т-клітинний рецептор (ТОК), де указаний
САК або ТСК містить антигензв'язувальну молекулу, яка специфічно зв'язується з РІ ТЗ, та де антигензв'язувальна молекула містить варіабельну область СОКЗ легкого ланцюга (Мі), яка містить амінокислотну послідовність, вибрану з ЗЕО ІЮ МО:24 та 5ЕО ІЮО МО:32. Полінуклеотид може додатково містити активуючий домен. Полінуклеотид може додатково містити костимулюючий домен.
В інших варіантах здійснення даний винахід стосується виділених полінуклеотидів, які кодують химерний антигенний рецептор (САК), або Т-клітинного рецептора (ТОК), який містить антигензв'язувальну молекулу, яка специфічно зв'язується з БІ/ТЗ3, де важкий ланцюг антигензв'язувальної молекули містить СОКІ1 (ЗЕО І МО: 17), СОК2 (5ЕО ІО МО: 18), та СОКЗ (ЗЕО ІО МО: 19) та легкий ланцюг антигензв'язувальної молекули містить СОКІ (ЗЕО ІЮО МО: 22), СОК2 (ЗЕО ІО МО: 23), та СОКЗ (5ЕО ІО МО: 24).
В інших варіантах здійснення даний винахід стосується виділених полінуклеотидів, які кодують химерний антигенний рецептор (САК), або Т-клітинного рецептора (ТОК), який містить антигензв'язувальну молекулу, яка специфічно зв'язується з Б!/Т3, де важкий ланцюг антигензв'язувальної молекули містить СОКІ1 (ЗЕО І МО: 17), СОК2 (5ЕО ІО МО: 26), та СОКЗ (ЗЕО ІЮ МО:27) та легкий ланцюг антигензв'язувальної молекули містить СОК1 (ЗЕО ІЮО МО: 30),
СОМ2 (5ЕО ІО МО:31), та СОКЗ (ЗЕО ІЮ МО:32).
Даний винахід додатково стосується антигензв'язувальних молекул, що зв'язуються с РІ ТЗ, які містять щонайменше одну послідовність варіабельної області СОКЗ важкого ланцюга або послідовності варіабельної області СОКЗ легкого ланцюга, як зазначено в даному документі.
Даний винахід додатково стосується антигензв'язувальних молекул, що зв'язуються с РІ Т3, які містять щонайменше одну послідовність варіабельної області СОКІ, СОК2 та СОКЗ важкого ланцюга відповідно до опису у даному документі. Даний винахід додатково стосується антигензв'язувальних молекул, що зв'язуються с БГІТ3, які містять щонайменше одну послідовність варіабельної області СОКІ, СОК2 та СОКЗ легкого ланцюга, як описано у даному документі. Даний винахід додатково стосується антигензв'язувальних молекул, що зв'язуються с ЕТ3, які містять як послідовності варіабельних областей СОКІ, СОК2, СОКЗ важкого ланцюга, так і послідовності варіабельних областей СОКІ, СОК2 та СОКЗ легкого ланцюга, як описано у даному документі.
Додаткові варіабельні домени важкого та легкого ланцюгів, полінуклеотид СОК та 60 амінокислотні послідовності, придатні для застосування в РІ ТЗ-зв'язувальних молекулах відповідно до даного винаходу, знайдені у Попередній заявці на патент Мо 62/199944, поданій 31 липня 2015 року.
Даний винахід додатково стосується способів лікування захворювання або порушення у суб'єкта, який цього потребує, які включають уведення суб'єкту антигензв'язувальних молекул,
САК, ТСК, полінуклеотидів, векторів, клітин або композицій за даним винаходом. Придатні для лікування захворювання включають без обмеження гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлогений лейкоз (СМІ), хронічний мієломоноцитарний лейкоз (СММІ), ювенільний мієломоноцитарний лейкоз, атиповий хронічний мієлоїдний лейкоз, гострий промієлоцитний лейкоз (АРІ), гострий монобластний лейкоз, гострий еритроїдний лейкоз, гострий мегакаріобластний лейкоз, мієлодиспластичний синдром (МОБ), мієлопроліферативне порушення, мієлоїдне новоутворення, мієлоїдна саркома) або їх комбінації. Додаткові захворювання включають запальні та/або автоїмунні захворювання, наприклад, ревматоїдний артрит, псоріаз, види алергії, астму, хворобу Крона, ІВО, ІВ5, фіброміалгію, мастоцитоз та глютенову ентеропатію.
Короткий опис графічних матеріалів
На фіг. 1 показана проточна цитометрія експресії поверхні клітин РІТЗ3 на людських клітинних лініях.
На фіг. 2 показана експресія САК у первинних людських Т-клітинах, електропорованих з
МРНК, що кодує різні САК.
На фіг. З показана цитолітична активність електропорованих Т-клітин САК порівняно з декількома клітинними лініями після 16 годин спільного культивування.
На фіг. 4, яка включає фіг. ЗА та ЗВ, показано одержання ІЄМу, Ї/-2 та ТМЕБа шляхом електропорованих Т-клітин САК після 16 годин спільного культивування с указаними цільовими клітинними лініями.
На фіг. 5 показана експресія САК в трансфікованих лентивірусом первинних людських Т- клітинах від двох здорових донорів.
На фіг. 6 показана середня цитолітична активність із часом від двох здорових донорів, які експресують указані САК, спільно культивовані з різними цільовими клітинними лініями.
На фіг. 7, яка включає фіг. 7А, 7В та 7С, показано одержання ІЕМу, ТМЕс та ІС-2 шляхом трансфікованих лентивірусом людських Т-клітин САК від двох здорових донорів після 16 годин спільного культивування с указаними цільовими клітинними лініями.
На фіг. 8 показана проліферація СЕ5Е-мічених трансфікованих лентивірусом Т-клітин САК від двох здорових донорів після 5 днів спільного культивування с гранулами СО3-С028 або указаними цільовими клітинними лініями.
На фіг. 9 показана експресія САК в трансфікованих лентивірусом первинних людських Т- клітинах, придатних для досліджень іп мімо.
На фіг. 10 показана біолюмінесцентна візуалізація мічених клітин гострого мієлоїдного лейкозу після внутрівенної ін'єкції Т-клітин САК в ксеногенної моделі.
На фіг. 11 показані криві виживання мишей, яким ін'єкували Т-клітини САК.
На фіг. 12 показана векторна діаграма роАК.
Детальний опис винаходу
Слід розуміти, що химерні антигенні рецептори (САК або САВ-Т) та Т-клітинні рецептори (ТОК) є створеними методами генетичної інженерії рецепторами. Дані розроблені рецептори можуть бути легко уведені всередину та експресовані імунними клітинами, в тому числі Т- клітинами, відповідно до методик, відомих у даній галузі. За допомогою САК один рецептор може бути запрограмований як на розпізнавання специфічного антигена, так і, при зв'язуванні з даним антигеном, на активацію імунної клітини для ураження та руйнування клітини, яка несе даний антиген. Якщо дані антигени існують на клітинах пухлини, то імунна клітина, яка експресує САК, може націлюватися та знищувати клітину пухлини.
САК можуть бути розроблені для зв'язування з антигеном (наприклад, антиген клітинної поверхні) шляхом уведення антигензв'язувальної молекули, яка взаємодіє з даним цільовим антигеном. Переважно, антигензв'язувальна молекула являє собою її фрагмент антитіла та, більш переважно, один або декілька одноланцюгових фрагментів антитіла ("5сЕм"). зсЕм являє собою одноланцюговий фрагмент антитіла, що має варіабельні області важких та легких ланцюгів антитіла, зв'язаних разом. Див. Патенти США МоМо 7741465 та 6319494, а також
ЕзПпПаг зі співавт., Сапсег Іттипо! Іттипоїпегару (1997) 45: 131-136. зсЕм зберігає здатність вихідного антитіла до специфічної взаємодії з цільовим антигеном. 5сЕм є переважними для застосування у химерних антигенних рецепторах, оскільки вони можуть бути розроблені з можливістю експресуватися як частини одного ланцюга разом з іншими компонентами САК. а. 60 Див. також Кгаийзе зі співавт., У. Ехр. Мед., вид. 188, Мо. 4, 1998 (619-626); Ріппеу зі співавт.,
УЧоштаї ої Іттипоіоду, 1998, 161: 2791-2797. Слід розуміти, що антигензв'язувальна молекула зазвичай міститься всередині позаклітинної частини САК, так що вона здатна розпізнавати та зв'язуватися з антигеном, що становить інтерес. Біспецифічні та мультиспецифічні САК розглядаються в об'ємі даного винаходу, зі специфічністю до більш ніж однієї цілі, що становить інтерес.
Костимулюючі домени. Химерні антигенні рецептори можуть вводити костимулюючі (сигналізуючі) домени для підвищення їхньої сили. Див. Патенти США МоМо 7741465 та 6319494, а також Кгашзе зі співавт. та Ріппеу зі співавт. (вище), опа зі співавт., Віоса 119:696-706 (2012);
Каїоз зі співавт., сі Тгапві. Мед. 3:95 (2011); Ропег зі співавт., М. Епаї. У. Мед. 365:725-33 (2011), та Ого55 зі співавт., Аппи. Нем. РПаптасої. ТохісоЇ. 56:59-83 (2016). Наприклад, СО28 являє собою костимулюючий білок, що в природних умовах знаходиться на Т-клітинах. Повна вихідна амінокислотна послідовність СО28 описана в ілюстративній послідовності МСВІ: МР 006130.1.
Повна вихідна послідовність нуклеїнової кислоти СО28 описана в МСВІ Кеїегепсе Зедпйепсе:
ММ 006139.1.
Певні домени СО28 застосовувались у химерних антигенних рецепторах. Відповідно до даного винаходу, у даний час було виявлено, що новий позаклітинний домен СО28, що називається "С028т", несподівано забезпечує певні переваги при застосуванні в конструкції
САВ.
Нуклеотидна послідовність молекули СО28Т, в тому числі позаклітинний домен СО28Тт, та трансмембранний та внутрішньоклітинний домени СО28 наведені у 5ЕО І МО: 1:
СТТаАТААТОААААИаТСАААСацпСААСААТСАТТСАСИаИТОААсСОсаСААасСАСсСсттИТатосито
АсСсСТТИтосСтТастТоСАТССААДОаССАТТОТОСООТа т тОоСТоСсСТА,атовсатпвАа,тТоСстСастТ татАСТоттТастосТсАСсСаТаасСТ т АТААТСТТСТааОСТТАВАТСОСААДААСААаССОСсТ аСТоСАТАВСОаАТТАСАТОААТАТОАСТОоСАСОССавСССтТаВССССАСААДаСпСААДАСАСТАССАСЄ
ССТТАСасСАССАССТАСАСАТтТТСИЯСТасСсСтТАТСОСОСАдОС
Відповідна амінокислотна послідовність наведена у 5ЕО ІЮО МО: 2:
ГОМЕКОЗМОа ПІНУКОКНІ СРУОРІ ЕРОРЗБКРЕМ/МІ УММаСМІ АСУБИЇ МТМАРІЕМУВЗК
В5АГГНЗОУМ ММТРАВАВРОРТ АВКНУОРМАРР ПОЕГАДАУНО
Нуклеотидна послідовність позаклітинної частини СО28Т наведена у 5ЕО ІЮО МО: 3:
СТТаАТААТОААААИаТСАААСацпСААСААТСАТТСАСИаИТОААсСОсаСААасСАСсСсттИТатосито
АСССТТаТТоССТасТоСАТССАДИаССА
Відповідна амінокислотна послідовність позаклітинного домену СО28Т наведена у 5ЕО ІЮ
МО: 4: І ОМЕК5ОМИТІ ІНУКОКНІ СР 5РІ ЕРОРБКР
Нуклеотидна послідовність трансмембранного домену СО28 наведена у 5ЕО ІЮО МО: 5: пестеасататсватосвтАастасатавАастостастаттТАСстотта|астоатсАСсСссТвас
ТТТАТААТСТТСТОССОСТТ
Амінокислотна послідовність трансмембранного домену СО28 наведена у
ЗЕО ІО МО: 6: РМ/М МУУМаСМ ГАСУЗИ МТМ АБІТЕМ/У
Нуклеотидна послідовність внутрішньоклітинного сигналізуючого домену СО28 наведена у
БЕОІЮО МО: 7:
АПБАТССААААпААда,асоасстас СсСАТАаСаАТТАСАТОААТАТАСТОоСАСОвССасСосСтТОос
ССССАСААСОАААСАСТАССАаССТ ТАС САССАССТАСАаСАТТ ТСИСТОССТАТСОЯСАСО
Амінокислотна послідовність внутрішньоклітинного сигналізуючого домену СО28 наведена у
ЗЕОІОМО:8: А5КА5ЗА ЇЇ НЗОУМММТРАеЕВРОРТАКНУОРМАРРАРЕААУНЬ
Додаткові послідовності СО28, придатні для застосування у даному винаході, включають нуклеотидну послідовність СО28, наведену у 5ЕО ІЮ МО: 11:
АТТОАватОАТаТАТССАССаССТТАССТаСаАТААСИВААДААСАСТААСИ,аТАССАТСАТТСАС аТаАААСатАААСАССТа ТИ ТОоСттотоСоСстоттосоСавпОаССАТСАААСаССС
Відповідна амінокислотна послідовність наведена у 5ЕО ІО МО: 12:
ІЕУМУРРРМІ ОМЕКОМО ПІНУКОКНІ СРУОРІ ЕРАРБОКР
Інші придатні позаклітинні або трансмембранні послідовності можуть бути утворені з СОВ8.
Нуклеотидна послідовність придатного позаклітинного та трансмембранного домену СО8 наведена у 5ЕО ІЮ МО: 13: ,аСсТаСАаСАТТОАаСААСТСААТААТаТАТТ ТТАаТСАСТТ ТатТАССАСТОТТСТОТОаССОСИ,СТ
ААОССТАСТАССАСАСССОСТОСАС,ВаССАССТАССССАаСТОСТАССАТСИ,СТТСАСАСОСТО татосстасасССАсАсастта,ассаАасс,вассоСАс,воавасСасТаТ т САТАССАСАаС,сАСТОас
АТтсоа!ВоСсТаСаАТАТСТАТАТСТвВОСЮСАСОСССТООССОСпААСсСТаСсСЯваСсатАстоСстаСстатс
СсСсТОаТСАТСАСОСТСТАТТОТААТСАСАСИААС
Відповідна амінокислотна послідовність наведена у 5ЕО ІЮО МО: 14: бо АААЇ 5МОІМУЕЗНЕУРУБІ РАКРТТТРАРАРРТРАРТІАБОРІ 5І АВРЕАСАРАДИСАМНТАИІ ОСОБА
СОІМІМ/АРІГ АСТСОаМИІ БІ МТ МОМНАМ
Придатні костимулюючі домени, що входять в об'єм даного винаходу, можуть бути одержані, окрім інших джерел, з СО28, С028тТ, ОХ40, 4-188/С0137, С02, СО3 (альфа, бета, дельта, епсилон, гамма, дзета), СО4, СО5, 207, 209, С0р16, 6022, 2027, С030, СО 33, 6037, 2040, СО 45,0064, Сб0р80, 2086, б0134, 260137, 20154, РО-1, ІСО5, пов'язаний із функцією лімфоцитів антиген-1ї (ГЕА-1 (СО Іа/СО18), С0247, 00276 (87-НЗ), ПІОНТ (член надсімейства факторів некрозу пухлини 14; ТМЕ5Е14), МКО2С, Ід альфа (СО79а), ЮАР-10, Ес гамма рецептор, молекула МНС класу І, ТМЕ, ТМЕтг, інтегрін, сигнальна молекула активації лімфоцитів, ВТ А, рецептор до Толл-лігандів, ІСАМ-1, В7-НЗ, СО5, ІСАМ-1, СІТА, ВАРЕВ, ПОНТ, НУЕМ (ПСНТВ),
КІКО5З2, БІ АМЕ7, МКрво (КІ КЕ), МКр44, МКр3о, МКр46, СО19, 204, Совальфа, СОаренча, 1! - 2К бета, ІІ -2К гамма, ІІ -7К альфа, ІТСА4, МІ АТ, СО49а, ІТСА4, ІА4, СО490, ІТСАб, МІ А-6,
СО49, ІТОАЮ, СОІ-Іа, ІТаАЄЕ, 20103, ІТОАЇ, СОІ-Іа, І ЕА-1, ІТаАМ, СОІ-ІЮ, ІТЕАХ, СОІ-Іс, ІТОВІ,
СОг29, ІТаВ2, СО18, І ГА-1, ІТОВ7, МКа2Оо, ТМЕВ2, ТВАМСЕ/ВАМКІ, ОМАМІ (00226), БІ АМЕ4 (00244, 284), С084, 2096 (Тасіше), СЕАСАМІ, СВТ АМ, Гуз (00229), С0160 (8У55), РБОІ 1,
СОр100 (5ЕМА40О), СО69, 5 АМЕб (МТВ-А, Гу08), БІАМ (5ІАМЕ1, 20150, ІРО-3), ВІ АМЕ (БІ АМЕ8), 5ЕГ РІ а (С0162), І ТВА, ГАТ, САЮО5Б, 5І Р-76, РАС/Сьр, СО19а, СО83 ліганд, або їхні фрагменти або комбінації.
Активуючі домени.
СО3 є елементом Т-клітинного рецептора на вихідній Т-клітини, та, як було показано, являє собою важливий внутрішньоклітинний активуючий елемент у САК. У переважному варіанті здійснення СОЗ являє собою СОЗ дзета, нуклеотидна послідовність якого наведена у 5ЕО ІЮ
МО: 9:
АвдааТаААСТПТОСАСАТСТОСАСАТаСАССАССОТАТСсАИ,ВСАа,ВсаССАпААССААСТатА тТААСОАДаСТСААССТОСОВАСсаСАдСацвААдпАатТАТОАСОСТтттТапАСсААд,аСасСАа,сАа,ааАСаасА
СоСстТАвАтТавсТайСАААССААвАССААААААСССССА,СаАа,аа ТО СТАТААТИАДаСтТаСАС
ААСОСАТААЧАтТаасСстТаААасСсСТАТТСТОАААТАаССАТОАААСпАпАсСа,апАпААс,ааААААс ваСАСОСАСсаТтТатАССАСапАСТСАаСАСТаСТАСОААССАТАСТТАТаАСаТстоТССАСАТ вСАДИАСССТаССАССТАЦО
Відповідна амінокислота внутрішньоклітинного СОЗ дзета наведена у 5ЕО ІО МО: 10:
ВУКЕЗАЗАВАРАМООСОМОЇ УМЕЇ М 3А!АВЕЕМ ОМ ОКАВОВОРЕМОСКРА
АКМРОЕСІ УМЕГ ОКОКМАЕАУЗЕІСМКИаЕнАНИаКИаНнраї Мові ЗТАТКОТМОАІЇ НМОАГ РРА
Орієнтація домена
Слід розуміти, що структурно дані домени відповідають локаціям, що відповідають імунним клітинам. Таким чином, дані домени можуть являти собою частину (ї) "шарнірного" або позаклітинного (ЕС) домену (ЕС), (ії) трансмембранного (ТМ) домену та/або (ії) внутрішньоклітинного (цитоплазматичного) домену (ІС). Внутрішньоклітинний компонент найчастіше містить частину члена сімейства СОЗ, переважно СОЗ дзета, яка здатна активувати
Т-клітину при зв'язуванні антигензв'язувальної молекули з її мішенню. В одному варіанті здійснення шарнірний домен зазвичай складається щонайменше з одного костимулюючого домену, як зазначено в даному документі.
Слід також розуміти, що шарнірна область також може містити декілька або всі члени сімейства імуноглобулінів, наприклад, Їдс1, Ідс2, ІдСЗ3З, Ідс4, ІдА, 90, ЗЕ, І9М або їхні фрагменти.
Ілюстративні конструкції САК відповідно до даного винаходу наведені у таблиці 1.
Таблиця 1
Домени, що відносяться до клітини
Слід розуміти, що відносно клітини, що несе рецептор, розроблені Т-клітини за даним винаходом містять антигензв'язувальну молекулу (наприклад, 5сЕм), позаклітинний домен (який може містити "шарнірний" домен), трансмембранний домен та внутрішньоклітинний домен.
Внутрішньоклітинний домен містить щонайменше в частині активуючого домену, переважно складається з членів сімейства СОЗ, наприклад, СОЗ дзета, СОЗ епсилон, СОЗ гамма або їхніх частин. Слід також розуміти, що антигензв'язувальна молекула (наприклад, один або декілька 5сСЕм) розроблена таким чином, що вона розташована у позаклітинній частині молекули/конструкції, так що вона здатна розпізнавати та зв'язуватися з її мішенню або мішенями.
Позаклітинний домен. Позаклітинний домен є позитивним для сигналізування та для ефективної відповіді лімфоцитів на антиген. Позаклітинні домени для конкретного застосування відповідно до даного винаходу можуть бути утворені з (тобто, складатися з) С028, Сра28т, ОХ- 40, 4-188/С00137, Сб02, 007, 0027, СО30, С040, ргодгаттей авеаї-1 (РО-1), індукованого костимулятора Т-клітин (ІСО5), зв'язаного з функцією лімфоцитів антигена-ії (ІЕА-1, СОІ-
Іа/СО18), СОЗ гамма, СОЗ дельта, СОЗ епсилон, СО247, Ср276 (В7-НЗ), ПОНТ, (ТМЕ5Е14),
МКОо2С, Ід альфа (СО07З9Ча), ЮАР-10, Ес гамма рецептора, молекули МНС класу 1, ТМЕ рецепторних білків, білка імуноглобуліна, рецептора к цитокінам, інтегрінів, сигнальних молекул активації лімфоцитів (білків БІ АМ), активуючих рецепторів МК-клітин, ВТ А, рецептора до Толл- лігандів, ІСАМ-1, В7-НЗ, СО5, ІСАМ-1, СІТА, ВАРЕВ, ГПІСНТ, НУЕМ (ПОНТРЕ), КІНОБ52, 5І АМЕ7,
МКрво (КІ КЕТ), МКр44, МКр30, МКр4б6, СО19, 204, СО8 альфа, СО8 бета, ІІ -2Е бета, І 28 гамма, ІГ-7К альфа, ІТСА4, МІ А1, СОа4З9а, ІТСА4, ІАЯ4, С0р490, ІТОАб, МІ А-6, СО49т, ІТаАб, СІ
Іа, ІТОАЕ, СО103, ІТОАЇ,, СОЇ іа, І ЕА-1, ІТаАМ, СО І, ІТОАХ, СОБІ Іс, ІТаві, браго9, ІТавг, СО18,
ГРА-1, ІТаВ7, МКОа20, ТМЕН2, ТВАМСЕ/ВАМКІ, ОМАМІ (С0226), 5І АМЕ4 (00244, 284), СО84,
С09б (Тасіїє) СЕАСАМІ, СВТ АМ, Гу9 (00229), 20160 (В8У55), РБОЇ1, СО100 (5ЕМА40),
СО69, 5БІАМЕб6 (МТВ-А, Гу08), ЗАМ (БІАМЕТ1, 20150, ІРО-3), ВГАМЕ (БІ АМЕ8), 5ЕЇ РІ С (С0162), І ТВЕ, г АТ, САЮО5, 5І Р-76, РАС/Сьр, СО19а, ліганда, який специфічно зв'язується з
СО83, або будь-яких їхніх комбінацій. Позаклітинний домен може бути утворений або з природного, або з синтетичного джерела.
Як описано у даному документі, позаклітинні домени найчастіше містять шарнірну область.
Вона являє собою частину позаклітинного домену, що іноді називається "спейсерною" областю.
Відповідно до даного винаходу може застосовуватися різноманіття шарнірів, в тому числі костимулюючі молекули, як обговорювалося вище, а також послідовності імуноглобуліна (Ід) або інші придатні молекули, для досягнення необхідної просторової відстані від клітини-мішені.
У деяких варіантах здійснення вся позаклітинна область містить шарнірну область. У деяких варіантах здійснення шарнірна область містить СО28Т або домен ЕС СО28.
Трансмембранний домен. САК може бути сконструйований з можливістю включення у себе трансмембранного домену, який конденсований до позаклітинного домену САК. Він може подібним чином бути конденсований до внутрішньоклітинного домену САК. В одному варіанті здійснення застосовують трансмембранний домен, який в природних умовах зв'язаний с одним з доменів в САК. У деяких випадках трансмембранний домен може бути вибраний з або модифікований шляхом амінокислотного заміщення, щоб уникнути зв'язування таких доменів з їх трансмембранними доменами або різними білками поверхневої мембрани для зведення до мінімуму взаємодій з іншими членами комплекса рецепторів. Трансмембранний домен може бути одержаний або з природного, або з синтетичного джерела. Якщо джерело є природним, то домен може бути утворений з будь-якого зв'язаного з мембраною або трансмембранного білка.
Трансмембранні області для конкретного застосування відповідно до даного винаходу можуть бути утворені з (тобто, складатися з) СО28, СО28тТ, ОХх-40, 4-188/С0137, С02, 007, 0027,
СО30, С040, ргодгаттей аеаШш-! (РО-1), індукованого костимулятора Т-клітин (ІСО5), зв'язаного з функцією лімфоцитів антигена-1 (І ЕА-1, СОІ-Іа/СО18), СОЗ гамма, СОЗ дельта, СОЗ епсилон, СО247, 20276 (В7-НЗ), ПІОНТ, (ТМЕЗЕ14), МКО2с, Ід альфа (С079а), ОАР-10, Ес гамма рецептора, молекули МНС класу 1, ТМЕ рецепторних білків, білка імуноглобуліна, рецептора до цитокінів, інтегрінів, сигнальних молекул активації лімфоцитів (білків 5ІАМ), активуючих рецепторів МК-клітин, ВТ А, рецептора к Толл-лігандам, ІСАМ-1, В7-НЗ, СО5,
ІСАМ-1, СІТАВ, ВАРЕН, ПІСНТ, НМЕМ (ПОНТРЕ), КІВО52, 5ІАМЕ7, МКрво (КІ ВЕ), МКра4,
МКрзо, МКр46, СО19, С0р4, СО8 альфа, СОВ8 бета, ІІ -2К бета, 1І-2К гамма, 1І-7К альфа, ІТОАХ4,
МІ АТ, СраЗа, ІТОАЯ4, ІА4, С0490, ІТОАб, МІ А-6, 20491, ІТаАСО, СІ а, ІТаАЕ, СО103, ІТСАЇ,
СОЇ Іа, ІГЕА-1, ІТОАМ, СО ІБ, ІТОАХ, СІ Іс, ІТОВІ, СО029, ІТОеВ2, СО18, І ЕА-1, ІТаВ7, МКО2О, 60 0 ТМЕВ2, ТВАМСЕ/ВАМКІ, ОМАМІ (00226), 5 АМЕ4 (00244, 284), 0084, 0096 (Тасіе),
СЕАСАМІ, СВТ АМ, Гуз (00229), СО160 (8М55), РОСІЇ 1, СО100 (5ЕМА40), 2069, 5І АМЕб6 (МТВ-А, ГУ08), БІ АМ (БІ АМЕ1, СО150, ІРО-3), ВІ АМЕ (5І АМЕ8), 5ЕЇГ РІ С (С0162), І ТВА, ТАТ,
САОБ, 5І Р-76, РАС/Сьр, СО19а, ліганда, який специфічно зв'язується з СО83, або будь-яких їхніх комбінацій.
Необов'язково, короткі лінкери можуть утворювати зв'язки між будь-якими або деякими позаклітинними, трансмембранними та внутрішньоклітинними доменами САК.
В одному варіанті здійснення трансмембранний домен в САК за даним винаходом являє собою трансмембранний домен СО8. В одному варіанті здійснення трансмембранний домен
СО8 містить трансмембранну частину послідовності нуклеїнової кислоти у 5ЕО ІЮО МО: 13. В іншому варіанті здійснення трансмембранний домен СО8 містить послідовність нуклеїнової кислоти, яка кодує трансмембранну амінокислотну послідовність, яка міститься в 5ЕО 10 МО: 14.
В деяких варіантах здійснення трансмембранний домен в САК за даним винаходом являє собою трансмембранний домен СО28. В одному варіанті здійснення трансмембранний домен
С028 містить послідовність нуклеїнової кислоти у БЕО ІО МО: 5. В одному варіанті здійснення трансмембранний домен СО028 містить послідовність нуклеїнової кислоти, яка кодує амінокислотну послідовність в ЗЕО ІЮ МО: 6. В іншому варіанті здійснення трансмембранний домен СО28 містить амінокислотну послідовність в ХЕО ІЮ МО: 6.
Внутрішньоклітинний (цитоплазматичний) домен. Внутрішньоклітинний (цитоплазматичний) домен розроблених Т-клітин за даним винаходом може забезпечувати активацію щонайменше одної з нормальних ефекторних функцій імунної клітини. Ефекторна функція Т-клітини, наприклад, може являти собою цитолітичну активність або хелперну активність, в тому числі секрецію цитокінів.
Слід розуміти, що придатні внутрішньоклітинні молекули включають (тобто, містять) без обмеження СОр2гв, Сбрагвт, ох-40, 4-188/С00137, 002, 6007, 0027, 6030, С040, ргодгаттеєа деаїн-1 (РО-1), індукованого костимулятора Т-клітин (ІСО5), зв'язаного з функцією лімфоцитів антигена-ї (ГЕА-1, СОІ-Іа/СО18), СОЗ гамма, СОЗ дельта, СОЗ епсилон, СО247, СО276 (В7-НЗ),
ПОНТ, (ТМЕ5Е14), МКО2сС, Ід альфа (СО079а), ОАР-10, Ес гамма рецептора, молекули МНС класу 1, ТМЕ рецепторних білків, білка імуноглобуліна, рецептора до цитокінів, інтегрінів, сигнальних молекул активації лімфоцитів (білків ЗІ АМ), активуючих рецепторів МК-клітин,
ВТА, рецептора к Толл-лігандам, ІСАМ-1, В7-НЗ, СО5, ІСАМ-1, СІТА, ВАРЕВ, ПОНТ, НМЕМ (ПеНнТте), КІКО52, БІ АМЕ7, МКрво (КІ КЕ), МКр44, МКр3Оо, МКр46, СО19, 204, СО8 альфа,
СО8 бета, ІІ -2К бета, І/-2К гамма, І/-/К альфа, ІТОА4, МАТ, Ср49а, ІТСА4, ІА4, СО490,
ІТОАб, МІ А-6, СО49І, ІТОАЮ, СО а, ІТаАЕ, СО103, ІТОАЇ, СО Іа, І ГА-1, ІТаАМ, СОЇ ІБ, ІТОАХ,
СОЇ Іс, ІТОВІ, С029, ІТаВв2, СО18, І ГА-1, ІТаВ7У, МКа2О, ТМЕВ2, ТВАМСЕ/ВАМКІ, ОМАМ'І1 (00226), БІ АМЕ4 (С0244, 284), 2084, 2096 (Тасшйе), СЕАСАМІ, СВТ АМ, ГуЗ (00229), 20160 (8У55), РБОІ 1, СО100 (БЕМА4О), СОб69, 5І АМЕЄ (МТВ-А, ГГ у08), І АМ (5ІАМЕ1, СО150, ІРО- 3), ВГАМЕ (5ІАМЕ8), ЗЕ! РІ а (С0162), І ТВА, Г АТ, САЮБ5, 5І Р-76, РАС/Сьр, СО19а, ліганда, який специфічно зв'язується з СО83, або будь-яких їхніх комбінацій.
У переважному варіанті здійснення цитоплазматичний домен САК може бути сконструйований з можливістю включення в себе сигналізуючого домену СОЗ дзета, самого по собі або з'єднаного з будь-яким іншим необхідним цитоплазматичним доменом(доменами), придатним у контексті САК за даним винаходом. Наприклад, цитоплазматичний домен САК може містити частину ланцюга СОЗ дзета та костимулюючу сигналізуючу область.
Цитоплазматичні сигналізуючі послідовності у цитоплазматичній сигналізуючій частині САК за даним винаходом можуть бути зв'язані між собою у довільному або визначеному порядку.
В одному переважному варіанті здійснення цитоплазматичний домен призначений для включення в себе сигналізуючого домену СОЗ дзета та сигналізуючого домену СО28. В іншому варіанті здійснення цитоплазматичний домен призначений для включення в себе сигналізуючого домену СОЗ дзета та сигналізуючого домену 4-188. В іншому варіанті здійснення цитоплазматичний домен в САК за даним винаходом призначений для включення в себе частини СО28 та СОЗ дзета, при цьому цитоплазматична СО28 містить послідовність нуклеїнової кислоти, наведену в 5ЕО ІО МО: 7 та амінокислотну послідовність, наведену в ЗЕО
І МО: 8. Послідовність нуклеїнової кислоти СОЗ дзета наведена у 5ЕБЕО ІО МО: 9, та амінокислотна послідовність наведена у ЗЕО ІЮО МО: 8.
Слід розуміти, що одна переважна орієнтація САК відповідно до даного винаходу містить антигензв'язувальний домен (наприклад, 5сЕм) спільно з костимулюючим доменом та активуючим доменом. Костимулюючий домен може містити одну або декілька позаклітинних частин, трансмембранну частину та внутрішньоклітинну частину. Слід також розуміти, що 60 декілька костимулюючих доменів можуть застосовуватися спільно.
У деяких варіантах здійснення представлені нуклеїнові кислоти, які містять промотор, функціонально пов'язаний із першим полінуклеотидом, які кодують антигензв'язувальну молекулу, щонайменше одну костимулюючую молекулу та активуючий домен.
У деяких варіантах здійснення конструкція нуклеїнової кислоти міститься всередині вірусного вектора. У деяких варіантах здійснення вірусний вектор вибраний з групи, яка включає ретровірусні вектори, вектори вірусу лейкозу мишей, вектори 5ЕС, аденовірусні вектори, лентивірусні вектори, вектори аденоасоційованого вірусу (ААМ), вектори вірусу герпесу та вектор вірусу осповакцини. У деяких варіантах здійснення нуклеїнова кислота міститься всередині плазміди.
Даний винахід додатково стосується виділених полінуклеотидів, які кодують химерні антигенні рецептори, та векторам, які містять полінуклеотиди. Будь-який вектор, відомий у даній галузі, може бути придатний для даного винаходу. У деяких варіантах здійснення вектор являє собою вірусний вектор. У деяких варіантах здійснення вектор являє собою ретровірусний вектор (наприклад, РМ5МСТ1), вектор ДНК, вектор вірусу лейкозу мишей, вектор 5Е0, плазміду, вектор РНК, аденовірусний вектор, бакуловірусний вектор, вектор вірусу Епштейна-Барр, вектор паповавірусу, вектор вірусу осповакцини, вектор вірусу простого герпесу, вектор аденоасоційованого вірусу (ААМ), лентивірусний вектор (наприклад, рРОАК) або будь-які їх комбінації. Карта вектора рсАК показана на фіг. 12. Послідовність роАК є наступною: стадса,асооосстатласвеСасСАТТААССОЯСОЯСсСооататастоаттАсасасАаСсатаА састТАСАСТТИССАССОСССТАаСсасосестостттса7асттстсоостосттсотсассАса тсасссвасттоСССатСААаСТСТАААТСОССООСаСТоССтТТтТАсСсаттоСаАТтттТАСТасттт
АСОСОаСАССТОоВАССССААААААСТТОАТТАСССТОАтТааттоАСсатааставасССАТасосстаА тдадссатттсасссттаАСсаттааАаТсСАССОСТТСТТТААтТАатТаСАСТСТТатТоСААДАСТ аОААСААСАСТСААСССТАТСТОСОТ СТАТ СТ ТТОАТТТАТААСОаССАТТ ТТОССОаАТТТСсВСИаСС
ТАТТаСТТААДАДААТИАДаСТаАТТТААСААДАААТТТААСаСаААТТТТААСААААТАТТААСО,СТТА
СААТТТаССАТТСИаССАТТСАСОСсТаСасСААСТО пТТасаААас,саСаАтосатасовасстотто асСтТАТТАСОССАсСсТаасСсАААла,аассовАта7атастаСААсасСсцпАТТААХатта,асаТААсассАцаа
ТТ ТТоССАСТСАСОАСОСТТИТААААСОАСОсаССАсСТаААТТИТААТАСВАСТОСАСТАТАССО СО
Адосс,7савАтТа,сСа,асасСАаТтААТСААТТАССЯСааОсТСАТТАСТТСАТАИСССАТАТАТОСАСТТ сао ТтТАСАТААСТТАСОСТАААТОСССоСсСЯвсостаастадсСасССсСААСаАССсоССасссСАТТа
АСИТСААТААТаАСОТАТаТТОССАТАИТААСОССААТАСОСАСТ ТТ СОСАТТОАСатСААТОСИТ вОаАСТАТТТАСОаСТАААСТаСССАСТТОССАСТАСАТСААИТаТАТСАТАТаССААДС,ТАСИЯСССС
СТАТТОАСОСТСААТОАдСОаатТАААТОВСССсаССтТОасСАТТАТАСССАСТАСАТОАССТТАТОСИАС
ТТОСТАСТТО,ССАСТАСАТСТАССТАТТАСТСАТСО,СТАТТАССАТОСТОаАТОСОССЯТТТааСАС
ТтТАСАТСААТОСОаСОатТапАТАаСООаТТТаАСТоАСсСаапАТТТОСААДИТСТОСАССССАТТОАСО
ТСААТОСОаАСТ Тата аСАССААААТСААСИИавАСТТТОСААААТаТатсИатТААСААСТоСсасс
ССАТТОАСаСАААТОСЯСООСТАсСаса,ататАса,аставвАваТСстТАТАТАДаСАСАасСтТОсСсТт ТАС таААССОСОСОСТОоТототТааТТАСАССАвАТСТОА,аСсСТаСОСАсСстототавСтТААСстТАа,асААС
ССАСТаСТТААаССТСААТАААХАССТТаССТТаАСТастТтСААдатАататата7асссстотттатТО тТадгстстстТААСТАВАаАТОССТСАСАСССТТ ТТАсСТоАатТаТаспААААТСТОТАаСАаТассСс
СССОААСАпапАСТТОАААССпАААдпацвАААССАСАсСОсАаСтототовАСса,аСАа,аАСТовастТ тастаддаса,асаСсАСасСААла,аАаа,васвАасодаСавовАСстаатаАаТАСасСАААААТТТТОаАС тааСсасАсастТАаАдАда,асАс,сАаасАааАатТасотасвАсАа,аСатСАаТтТАТТААХСССОСОСЯаааАСААТТАС
АТСИаСОаАТСОСААААААТТоааТТАА,васСсАцвацвопАААСААААААтТАТАААТТААААСАТАТАС тТАТОСаСАДаСА,СавАасСтТАСААСИаАТТСаСАСаСТТААТСОСТИаСССТатТАПАААСАТСАСПСААСсС
СсТаОТАВАСАААТАСТАСОСАСАССТАСААССАТОССТТСАСАСАпОПАТСАПААСААСТТАСАТСАТ
ТАТАТААТАСАСТАИСААСССТСТАТТататаСАТСАААСОАТАВАСАТААААпАСАССААаСсАА аСТТТААСААСАТАСАСОААСАССААААСААААаТААСАССАССаСАСА,СААСССО,ССасСтТа
АТСТТСсАСАсСстТавАсСОАапАСАТАТаАдасОАСААТТапАСпАдаТОААТТАТАТАААТАТАААСТ
АаТАДАААТТОААССАТТАССАСТАаСАСССАССААдпасСАААСАсСАА,аАа Та ТЕСАСАСАСАА
АААдаАдасАатТаапААтТАсаАа,асттаеагпосттаевае7спогосада,аСАаа,аСАваААаСАСТАТОаС абаСАсСаТСсААтТаАсастАСааТАСАааССАСАСААТТАТТОТСТОСТАТАСТИСА,ВСАаСА
СААСААТТТаОСТОАдсСв,астТАТТОАСОаСОаСААСсАаСАтТотТаттасСААСТСАСсА,астотаааОаСАТС
ААССАССТоСАпасСААваААТоСТаОСТатапАААСАТАССТАААССАТСААСАсСТоСтТасааА 5Б птосвеатастотапААААСТоАТТТаСАССАСТОСТО ТаССТтТОпААТаСТАСТТОСпСАСТААТ
АААТСТСТОСААСАСАТТТОСААТСАСАСОСАССТааАТОпАаТасОпАСАСАСАААТТААСААТТА
САСААДОСТТААТАСАСТОСТТААТТОААСААТСИСААААССАпСААСААААСААТОААСААСААТТ
АТТОСААТТАСАТАААТОСОЯСААДС,ТТТОТасААТТас ТТ ТААСАТААСАААТТОССТОаТастАТАТ
ААААТТАТТСАТААТИОАТАИТАсСОАХсвСасттааТАвИа ТТ тТААВААТАа ТТ ТТастатАСТТТСТАТА бо аТОААТАСАСТТАсасАаасвАТАТТСАССАТТАТССТТТСАСАСССАССТОССААССССсОвАдацОо
САССССАСАСОаСССОААдОпААТАСААвААСААСа Тас;сАсАСАСАаАСАаАСАСАСАТССАТТС
САТТАСТаААСасАТСТоаАСасатТАТСОСИаТтТААСТТТТААААаААААласвас;свАтаававастА
СсАаТаСАССапАААСААТАСТАаАСАТААТАВСААСАаАСАТАСАААСТАААСААТТАСАААААС
АААТТАСААААТТСААААТТТТАТСОСОАТСОаСОаААТИАААСАССССАССТатТАааТтттассСАА аСстТАОСТТААСТААСаССАТТТТОСААСОаСАТОаСААААТАСАТААСТИаАХСААТАВАСААаИТттсАс
АТСААИСТТАССААСАВАСАСАСАаСАаААТАТОЧИССАААСАССАТАТСТО ТЕС ТААОСАСТТ сстассссваСстоАаСасССААСААСАвАтТаСТоСССАсАтТасоотосоассстСАаСАсаТТТо
ТАСАССААССАТСАаАТа ТТ ТоСАасСОааИатасссСААаОАССТОААААТОАСССТатасстТАТТТОаА
АСТААССААТСАСТТСОСТІСТООСТІсТОТттоссасасттстастосССОАССТСААТААДААСА 1 ОСССАСААССССтТоАСТОСОССЯСОаССАСТОСТТСОААСТАСАТСТТ ТЕТООАТСОСТАССАТОСА
СсТоОАСАСАСССОССАССОСЯССсаСтТаССААаСТТоСОАаСТоТоаААТТААТТСАСОСТАСССА
ССАТОСССТАСаСАВАСТАСТСаААТСОАТАТСААССТСТОаАТТАСААААТТТИТОАААСАТТИ
АСТОаТАТТСТТААСТАТОТТаСТОСТТТТАСаСТАТИАТОСАТАСОСТастТТ ТААТаССТТТОаТАТС
АТаСсСТАТТаСтТТСССаТтАТОССТТТСАТ ТСОТОСТОСТТатТАТАААТСОСТОСТТаСтТатстотТТтТА тТОоАссАсТИатоассСсттетТАвСасСАаасатасоатстаТаСАСТаТаТтТаСТОАСОСААСС
СсосСАСТОСТТОСООСАТТаССАССАССТОТСсАССТОСТІ ТоСОаОбАСТТТСОСТТТоССоССстТоС
СстТАТТОССАССССОСААСТСАТСОССОССТОССТеССсСОСТОСтТавАСАСССОССТОСОСТОаТ таваСАСТОАСААТТОССТОСО ТО ТТатТОоСОСааААЛДОСТОАСаТтоСтТттсАТОССТОСТОСоСТО татОасСсСсАССТавАТТСТаСОСОССОАСОСТОСТТСТаСтТАСОСТОССТТоООаСССТСААТССАОСО сАССТІОСТТОССОССсСсОесстастеасссоестотасаваостотосесаетотсаосттоооосто
АвАССАДСТоОСАТСТОССТІ ТОСОСсС,оСстТоСоСасстасТтТААТТАААСТАССТТ ТААВАССАА
ТОАСТТАСАДСССАОСТОТАСАТСТТАОССАСТТТТТАААААДАААлсС,асвацвАСсТавААдвавсса
ААТТСАСТОССААСОААСАСААСАТСТОСТ П"ТОСТТатТАСТООС,ТоТоТоТасТТАСАССАСАТ стадасСстасаАасСтТоТСТаОСтТААСТАВООААСССАСТастТААасСсСтСААТАААОаСТТасСстТтТ
БАСТОСТТСААСТАСТОТОТОСССОСтТотТаттаТатОАСТОТОСТААСТАВАСАТОССТСАСАССС
ТТТАСТСАСТатапААААТСТСТАасСАаЙССАТОССАСАСАТаАТтТААаАТАСАТТаАТОАСТТТО
САСАААССАСААСТАЧААТаСАСТаАААААААТаСТ ТТАТТТатаАААТТТатаАтТастАТТастт
ТАТТТаТААССАТТАТАДОСТасСААТАААСААСТТААСААСААСААТТасСАТТСАТТТТАТИатТТсСА сегтсАасасесАасаттооАасаттттаавооСаССАТтоСсТтовАсСеТооСсттАатТОАласО
ТТААТТаСсОДасттаСаТААТСАТОСТСАТА,СТат тт осСтТатаТаАААТТОТТАТССИаСТтТСАСА
АТТОСАСАСААСАТАСЯАСССО,СААаСАТАААСТаТАААасСсТвасатассТтААтТадатавАаст
ААСТСАСАТТААТТОСОСТТасасСстТоАСТОСССОСТТ ТОСАатоаадпААдАССТОТоСТассАССТ
ССАТТААТОААТССЯСССААСсОаСсоео,саеоАсАсеСссоетеаСсстТАТТОСОССОСТоТТоСОастто
СстТоОаСтТосАСТОАСТСОСОСТОСОСТОСОТОСТоССОСсТаСсасоОАССОасСтТАТСАССТСАСТСААА з35 аваСпатААТАСОатТТАТССАСАСААТСА,сасАТтТААСасСсАааАААаААСАТаталдасСААААцОС
САССААДААдаасСссАсаААССОТАААААсаосасстастасотттоСАТАСОЯСТОСОСССоо
СТОАСаАаСАТСАСАААААТоССАСаТстоААдатСАаА,аатааСсаАААСССОАСАСОаАСТАТАААС
АТАССАССССТТТОССсСсСсТОвААаСсТооСсТоТтаса7астотостаттоСОАСССТаССОасСтТТАСС вОАТАССТОТОСОССТІ ТоТоССсттовавААлаСсстоаСОСТТоТсАТАССТСоАСООСТОатТАОаИТтТ 440 АТСТСсАСТТІоССсСТеатТАсстТосттсастоСАластТеасастатаТасСАСВААСССсСсСсСссттоАасСс свАССаСсТаСОаСсСТТАТССОСТААСТАТСОСТСТТОАСТОСААСССОСТААСАСАСОАСТТАТОСС
СсСАСТаОСАССАаССАСТаСТААСАасСАТТАССАСАХаСсоАаТАтТатТАаооостТасСтТАСАСАС тот аААХатаатвассТтААСТАСОвастАСАСТАСААаААСАСТАТТТИСТАТСТОСОСТОТОаСстТ
СААДаССАСТТАССТТСОаАААААсАаТттастТАасСтсТаАТССООаСАААСАААССАССОСТОСсТ дасСссстаст ат ТаСААДасСАаСАВАТТАСасСсасСАВАААААААаОаАТСТСААаААСАТОС тТаАТСТТТТСТАСОСОасТСсТОАСастосАаТавпААСОААААСТСАСССТТААСасАТТТТас,тсСА
ТОАСАТТАТСААДАААОаАТСТТСАССТАСАТОСТТТТАААТТАААААТОААСТТТТАААТСААТСТА
ААСТАТАТАТаАСТАААСТТОИТСТаАСАСТТАССААТОСТТААТСАИТадаасСАССТАТСТСАСОС
САТСТаТСТАТТТСатТТСсСАТССАТАСТТИССТадстосССатоаТаТАСАТААСТАСОАТАСОССИ
АаСасСТТАССАТСТОИССССАСТаСТаСААТОАТАССОСОАВАСССАСОСТСАССОасСтТоСАС
АТТТАТСАССААТААДАССАЛСССАССССОСаААссеСсСвАсасСАвААаТаСТоСтТаСААСТТТАТО
СсаССТоСАТССАССТСТАТТААТТИиТтТТаОССОСООААдасСтТАаАатТААаТатАатСассСАСТТААТАСТТ таСаСААСстаеТТаССАТТОСТАСАСССАТСЯТОСТОтТСАСсОСТОСТОСТТТааТАТОССТТСА тс?АастоСасТТСсССААССАТСААлаССОАСТТАСАТОАТОССССАТОТТОТаСААААААССОСИТ 5Б тАааСсТосттоватостТоСаАТССТТаТСАСААСТААСТТааССО,САСтТаТтТТАТСАСТСАТОСТТА тавсСАаСАСТасСАТААТТСТСТТАСТОТСАТаССАТССОТААСАТОАСТТ ТОоТаТОАСстТастаАа
ТАСТСААССААОСТСАТТСТОАСААТАОС ТИТА ТОСОСОСССАССОСАСТТОСтТотТаСССпаСсСтТСААТ
Ас,аОпаАТААТАССаСаТасСссСАСАТАВСАСААСТТТААААаИТтастоАТСАТТОСААААСИаИТттсттас вОаСОпААДААСТСТСААСаАТСТТАССОастаттОАСАТССАСТТОСАТОТААСССАСТОСТаСАСОС 60 ААСТОАТСТТСАасСАТСТТТТАСТТТСАССАСТССЯТ ОТИТ аАСаСАААААСАвадАваТсСАААА тТассСсоСАААДАДААСаОапААТААССаСпАСАСапАААТОТТОААТАСТСАТАСТСОТТОСТТТТТСААТ
АТТАТТОААССАТТ ТАТСАСОССТТАТТатТСТтСАТОАССасСАТАСАТАТТТОААТИаТАТТТАСАААДА
ТАДАСАААТАССОСССТттоСасСасСАСАТТТОСССОВААААСсТаТассАС (5ЕО ІЮ МО: 95)
Додаткові придатні ілюстративні вектори включають, наприклад, РВАВЕ-ригто, рРВАВЕ-пео
І(агдеТтсОМА, рРВАВЕ-пудго-НТЕВТ, рРМКО.1 СЕР, М5СУ-ІВЕ5-СЕР, РМ5СМ РІ (Риго ІВЕ5 СЕР порожню плазміду), РМЗСМ-Іохр-а5Веа-Іохр-есЕР-Риго-МЖРКЕ, М5СМ ІКЕ5 люциферазу, рМІС,
МОНІ-РОК-СЕР 2.0, ТІАВМРМІВ, рМ5СМ-ІВЕ5-тСету ЕР, рАВенгохХ СЕР Т2А Сте, рАХТтТМ, рі псЕХР, та рІХІМ-Ї ис.
У деяких варіантах здійснення розроблена імунна клітина являє собою Т-клітину, лімфоцит, що поникає у клітину (ТІ), МК-клітину, ТСК-експресуючу клітину, дендритну клітину або МК-Т- клітину. У деяких варіантах здійснення клітину одержують або виготовляють з периферійної крові. У деяких варіантах здійснення клітину одержують або виготовляють з мононуклеарних клітин (РВМСОС) периферійної крові. У деяких варіантах здійснення клітину одержують або виготовляють з кісткового мозку. У деяких варіантах здійснення клітину одержують або виготовляють з пуповинної крові. У деяких варіантах здійснення клітина являє собою людську клітину. У деяких варіантах здійснення трансфікована або перетворена вектором нуклеїнової кислоти із застосуванням способу, вибраного з групи, яка включає електропорацію, сонопорацію, біолістику (наприклад, генетичну пушку), ліпідну трансфекцію, полімернутрансфекцию, наночастки або поліплекси.
У деяких варіантах здійснення химерні антигенні рецептори експресуються у розроблених імунних клітинах, які містять нуклеїнові кислоти за даною заявкою. Данні химерні антигенні рецептори за даною заявкою у деяких варіантах здійснення можуть містити (Її) антигензв'язувальну молекулу (наприклад, 5сЕм), (ії) трансмембранну область та (ії) Т-клітинну активуючу молекулу або область.
Антигензв'язувальні молекули
Антигензв'язувальні молекули входять до об'єму даного винаходу.
Застосована у даному документі "антигензв'язувальна молекула" означає будь-який білок, який зв'язується з указаним цільовим антигеном. У даній заявці вказаний цільовий антиген являє собою білок РЇТЗ3 або його фрагмент. Антигензв'язувальні молекули включають без обмеження антитіла та його зв'язувальні частини, наприклад, імунологічні функціональні фрагменти. Пептидні антитіла (тобто, Ес конденсовані молекули, які містять домени, що зв'язуються з пептидами) являють собою інші приклади придатних антигензв'язувальних молекул.
У деяких варіантах здійснення антигензв'язувальна молекула зв'язується з антигеном на клітині пухлини. У деяких варіантах здійснення антигензв'язувальна молекула зв'язується з антигеном на клітині, залученої до гіперпроліферативного захворювання, або з вірусним або бактеріальним антигеном. У деяких варіантах здійснення антигензв'язувальна молекула зв'язується з РІТ3. У наступних варіантах здійснення антигензв'язувальна молекула являє собою антитіло або його фрагмент, в тому числі одну або декілька його областей, що визначають комплементарність (СОК). У наступних варіантах здійснення антигензв'язувальна молекула являє собою варіабельний фрагмент з одним ланцюгом (5сЕм).
Термін "імунологічно функціональний фрагмент" (або "фрагмент") антигензв'язувальної молекули являє собою вид антигензв'язувальної молекули, яка містить частину (незалежно від того, яким чином дана частина одержана або синтезована) антитіла, у якій відсутні щонайменше декілька амінокислот, які присутні у повнорозмірному ланцюзі, але які все ще здатні до специфічного зв'язування з антигеном. Такі фрагменти біологічно активні в тому, що вони зв'язуються З антигеном-мішенню та можуть завершуватися іншими антигензв'язувальними молекулами, в тому числі інтактних антитіл, для зв'язування зі вказаним епітопом. У деяких варіантах здійснення фрагменти являють собою нейтралізуючі фрагменти. У деяких варіантах здійснення фрагменти можуть блокувати або знижувати активність РІ/Т3. В одному аспекті такий фрагмент буде зберігати щонайменше одну СОК, яка присутня у повнорозмірному легкому або важкому ланцюзі, та у деяких варіантах здійснення буде містити один важкий та/або легкий ланцюг або його частину. Дані фрагменти можуть бути одержані шляхом методик рекомбінантної ДНК або можуть бути одержані шляхом ферментативного або хімічного відщеплення антигензв'язувальних молекул, в тому числі інтактних антитіл.
Імунологічно функціональні фрагменти включають без обмеження фрагменти 5сгЕм, фрагменти Рар (Раб Е(ар)г тощо), одну або декілька СОК, діатіла (варіабельний домен важкого ланцюга на тому ж поліпептиді, що й варіабельний домен легкого ланцюга, з'єднані шляхом короткого пептидного лінкера, який надто короткий для забезпечення об'єднання між 60 двома доменами того ж ланцюга), доменні антитіла та антитіла з одним ланцюгом. Дані фрагменти можуть бути одержані з будь-якого джерела, що відноситься до ссавців, в тому числі без обмеження людини, миші, щура, верблюжих або кролика. Як буде зрозуміло спеціалісту в даній галузі, антигензв'язувальна молекула може включати компоненти, які не є білковими.
Варіанти антигензв'язувальних молекул також входять в об'єм даного винаходу, наприклад, варіабельна область легкого ланцюга та/або варіабельна область важкого ланцюга, кожна з яких щонайменше на 70-80 95, на 80-85 95, на 85-90 95, на 90-95 95, на 95-97 95, на 97-99 У5 або більше ніж на 99 95 ідентична амінокислотним послідовностям послідовностей, описаних у даному документі. У деяких випадках такі молекули включають щонайменше один важкий ланцюг та один легкий ланцюг, тоді як в інших випадках варіантні форми містять два ідентичні легких ланцюга та два ідентичні важких ланцюга (або їхні підчастини). Спеціаліст в даній галузі легко визначить придатні варіанти антигензв'язувальних молекул та застосування добре відомих методик, як зазначено в даному документі. У деяких варіантах здійснення спеціаліст в даній галузі зможе визначити придатні області молекули, які можуть бути змінені без порушення активності шляхом націлених областей, які не вважаються важливими для активності.
У деяких варіантах здійснення поліпептидна структура антигензв'язувальних молекул основана на антитілах, в тому числі без обмеження моноклональних антитілах, біспецифічних антитілах, мініантитілах, доменних антитілах, синтетичних антитілах (що іноді називаються у даному документі "міметиками антитіл"), химерних антитілах, гуманізованих антитілах, людських антитілах, злиттях антитіл (що іноді називаються у даному документі "кон'югатами антитіл"), та їхніх фрагментах, відповідно. У деяких варіантах здійснення антигензв'язувальна молекула містить або складається з авімерів.
У деяких варіантах здійснення антигензв'язувальну молекулу для РІ ТЗ вводять окремо. В інших варіантах здійснення антигензв'язувальну молекулу для РІ ТЗ вводять у вигляді частини
САК, ТСК або іншої імунної клітини. У таких імунних клітинах антигензв'язувальна молекула для
Е/ТЗ3 може бути під контролем тієї ж промоторної області або окремого промотора. У деяких варіантах здійснення білкові засоби, що кодують білки, та/або антигензв'язувальна молекула для РІ ТЗ можуть бути в окремих векторах.
У даному винаході додатково представлені фармацевтичні композиції, які містять антигензв'язувальну молекулу для РІ ТЗ разом з фармацевтично прийнятним розріджувачем, носієм, розчинником, емульгатором, консервантом та/або допоміжним засобом. У деяких варіантах здійснення фармацевтичні композиції будуть включати більше одної відмітної антигензв'язувальної молекули для РІТ3. У деяких варіантах здійснення фармацевтичні композиції будуть включати більше однієї антигензв'язувальної молекули для Р1Т3, де антигензв'язувальні молекули для РІ ТЗ зв'язуються більше ніж з одним епітопом. У деяких варіантах здійснення різні антигензв'язувальні молекули не будуть конкурувати одна з одною за зв'язування з РІ Т3.
В інших варіантах здійснення фармацевтична композиція може бути вибрана для парентеральної доставки, для інгаляції або для доставки через шлунково-кишковий тракт, наприклад перорально. Одержання таких фармацевтично прийнятних композицій входить до компетенції спеціаліста у даній галузі У деяких варіантах здійснення для підтримки фізіологічного рН або дещо більш низького рН композиції застосовують буфери, зазвичай всередині діапазона рН від приблизно 5 до приблизно 8. У деяких варіантах здійснення, якщо розглядається парентеральне введення, то терапевтична композиція може бути у формі апірогенного, парентерально-прийнятного водного розчину, який містить необхідну антигензв'язувальну молекулу для РІ ТЗ, із додатковими терапевтичними засобами або без них, у фармацевтично прийнятному середовищі. У деяких варіантах здійснення середовище для парентеральної ін'єкції являє собою стерильну дистильовану воду, у якій антигензв'язувальна молекула для РІ Т3, щонайменше з одним додатковим терапевтичним засобом або без нього, складена у вигляді стерильного ізотонічного розчину, збереженого належним чином. У деяких варіантах здійснення одержання може включати складання необхідної молекули з полімерними сполуками (такими як полімолочна кислота або полігліколєва кислота), гранулами або ліпосомами, які можуть забезпечувати контрольоване або уповільнене вивільнення продукту, який потім може бути доставлений шляхом ін'єкції речовини уповільненого всмоктування. У деяких варіантах здійснення для введення необхідної молекули можуть застосовуватися імплантовані пристрої для доставки лікарських засобів.
У деяких варіантах здійснення антигензв'язувальна молекула застосовується як діагностичний інструмент або інструмент для підтвердження. Антигензв'язувальна молекула може застосовуватися для дослідження кількості РІ ТЗ, присутнього у зразку та/або у суб'єкта. У деяких варіантах здійснення діагностична антигензв'язувальна молекула не є такою, що 60 нейтралізує. У деяких варіантах здійснення антигензв'язувальні молекули, розкриті у даному документі, застосовуються або представлені у наборі для дослідження та/або способі визначення РІ ТЗ у тканинах або клітинах ссавця з метою контролю/діагностики захворювання або порушення, пов'язаних зі змінами рівнів РІ Т3. Набір може включати антигензв'язувальну молекулу, яка зв'язується з РІ/Т3, разом із засобами для визначення зв'язування антигензв'язувальної молекули з РІ ТЗ, за наявності, та необов'язково білкових рівнів РІ Т3.
Антигензв'язувальна молекула буде додатково зрозуміла з урахуванням визначень та описів нижче.
Область "Ес" містить два фрагмента з важким ланцюгом, які містять домени СНІ та СН2 антитіла. Два фрагмента з важким ланцюгом утримуються разом шляхом двох або більше дисульфідних зв'язків та шляхом гідрофобних взаємодій доменів СНЗ. "Фрагмент Рар" містить один легкий ланцюг, СНІ та варіабельні області одного важкого ланцюга. Один важкий ланцюг молекули Бар не може утворювати дисульфідний зв'язок з іншою молекулою з важким ланцюгом. "Фрагмент Рабр" містить один легкий ланцюг та частину одного важкого ланцюга, яка містить домен УН та домен СНІ, а також область між доменами
СНІ та СН2, так що дисульфідний зв'язок між ланцюгами може бути утворений між двома важкими ланцюгами двох фрагментів Рар'із утворенням молекули Е(аб)». "Фрагмент Е(аб)г2" містить два легкі ланцюги та два важкі ланцюги, які містять частину постійної області між доменами СНІ та СН2, отже дисульфідний зв'язок між ланцюгами утворений між двома важкими ланцюгами. Фрагмент К(аб)г2, складений, таким чином, з двох фрагментів Раб, які утримуються разом шляхом дисульфідного зв'язку між двома важкими ланцюгами. "Область Ру" містить варіабельні області як з важкого, так і з легкого ланцюгів, але не містить постійних областей. "Варіабельний фрагмент одного ланцюга" ("зсЕм", що також називається "антитілом з одним ланцюгом") стосується молекул Ру, у яких варіабельні області важкого та легкого ланцюгів були з'єднані шляхом гнучкого лінкера з утворенням одного поліпептидного ланцюга, який утворює антигензв'язувальну область. Див. Заявку РСТ УМО88/01649 та Патенти США МоМо 4946778 та 5260203, розкриття яких включено шляхом посилання в усій своїй повноті. "Двохвалентна антигензв'язувальна молекула" містить дві антигензв'язувальні області. У деяких випадках дві зв'язувальні області мають ті самі антигені специфічності. Двохвалентні антигензв'язувальні молекули можуть бути біспецифічними. "Мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула" являє собою молекулу, яка націлюється більш ніж на один антиген або епітоп. "Біспецифічна", "із подвійною специфічністю" або "біфункціональна" антигензв'язувальна молекула являє собою гібридну антигензв'язувальну молекулу або антитіло, відповідно, з двома різними антигензв'язувальними областями. Дві зв'язувальні області біспецифічної антигензв'язувальної молекули будуть зв'язуватися з двома різними епітопами, які можуть знаходитися на одних й тих самих або різних мішенях білка.
Як повідомляється, антигензв'язувальна молекула "специфічно зв'язує" її антиген-мішень, якщо константа дисоціації (Ка) становить х1х10-7 М. Антигензв'язувальна молекула специфічно зв'язується з антигеном, що має "високу афінність", якщо Ка становить 1-5х109 М, та щ має "вкрай високу афінність", якщо Ка становить 1-5х1079 М. В одному варіанті здійснення антигензв'язувальна молекула характеризується Ка, рівною 107 М. В одному варіанті здійснення швидкість дисоціації становить «1х107. В інших варіантах здійснення антигензв'язувальні молекули будуть зв'язуватися із людським РІ ТЗ при Ка від приблизно 107 М до 10-33 М, та у ще одному варіанті здійснення антигензв'язувальні молекули будуть зв'язуватися при Ка 1,0-5х1079,
Як повідомляється, антигензв'язувальна молекула є "селективною", якщо вона зв'язується з однією мішенню більш міцно, ніж вона зв'язується із другою мішенню.
Термін "антитіло" стосується інтактного імуноглобуліна будь-якого ізотипу або його фрагменту, який може конкурувати з інтактним антитілом за специфічне зв'язування з антигеном-мішенню, та включає, наприклад, химерні, гуманізовані, повністю людські та біспецифічні антитіла. "Антитіло" являє собою вид антигензв'язувальної молекули, описаної у даному документі. Інтактне антитіло, як правило, буде містити щонайменше два повнорозмірні важкі ланцюги та два повнорозмірні легкі ланцюги, але у деяких випадках може включати меншу кількість ланцюгів, наприклад, антитіла, які у природних умовах зустрічаються у верблюжих, які можуть містити тільки важкі ланцюги. Антитіла можуть бути утворені виключно з одного джерела, або можуть бути химерними, тобто, різні частини антитіла можуть бути утворені з двох різних антитіл, як додатково описано нижче. Антигензв'язувальні молекули, антитіла або зв'язувальні фрагменти можуть бути одержані в гібридомах, шляхом методик рекомбінантної
ДНК, або шляхом ферментативного або хімічного відщеплення інтактних антитіл. Якщо не вказано інше, термін "антитіло" включає, окрім антитіл, які містять два повнорозмірні важкі 60 ланцюги та два повнорозмірні легкі ланцюги, його похідні, варіанти, фрагменти та мутеїни,
приклади яких описані нижче. Більше того, якщо явно не виключено, антитіла включають моноклональні антитіла, біспецифічні антитіла, мініантитіла, доменні антитіла, синтетичні антитіла (що іноді називаються у даному документі "міметиками антитіл"), химерні антитіла, гуманізовані антитіла, людські антитіла, злиття антитіл (що іноді називаються у даному документі "кон'югатами антитіл") та їхні фрагменти, відповідно.
Варіабельні області, як правило, демонструють ту саму загальну структуру областей відносно консервативного каркаса (ЕК), з'єднаних шляхом З гіперваріабельних областей (тобто, "СОК"). СОК з двох ланцюгів кожної пари зазвичай вирівнюються шляхом областей каркаса, які можуть забезпечувати зв'язування із конкретним епітопом. Від М-кінця до С-кінця варіабельні області як легкого ланцюга, так і важкого ланцюга зазвичай містять домени ЕКІ, СОКІ1, ЕКЗ,
СОрВА2, ЕКЗ, СОКЗ та ЕК4. Умовно вважається, що області СОК в важкому ланцюзі зазвичай називаються НС СОКІ1, СОК2 та СОКУ. Області СОК в легкого ланцюга зазвичай називаються
ГО СОК, СОК2 та СОКЗ. Призначення амінокислот для кожного домену зазвичай відповідає визначенням КаБбаї (5едз ої Ргоїеіп5 ої Іттипоїодісаї Іпіегеві (МІН, Веїпезаа, МО (1987 та 1991)) або Споїйіа (3). Мої. Віо!І., 196:901-917 (1987); Спофіа зі співавт., Майиге, 342:878-883 (1989)).
Для ідентифікації або приблизного визначення областей СОК можуть застосовуватися різні способи, в тому числі не лише Кабаї або Споїйіа, але також визначення АБМ.
Термін "легкий ланцюг" включає повнорозмірний легкий ланцюг та його фрагменти із достатньою послідовністю варіабельної області для забезпечення специфічності зв'язування.
Повнорозмірний легкий ланцюг включає домен варіабельної області, Мі, та домен постійної області, Сі. Домен варіабельної області легкого ланцюга являє собою аміно-кінець поліпептиду. Легкі ланцюги включають каппа-ланцюги та лямбда-ланцюги.
Термін "важкий ланцюг" включає повнорозмірний важкий ланцюг та її фрагменти із достатньою послідовністю варіабельної області для забезпечення специфічності зв'язування.
Повнорозмірний важкий ланцюг включає домен варіабельної області, Мн та три домену постійної області, СНІ, СН2 та СНЗ. Домен Мн розташований близько аміно-кінця поліпептиду, а домени Сн розташовані близько карбоксильного кінця, при цьому СНЗ найбільш близько розташований до карбоксильного кінця поліпептиду. Важкі ланцюги можуть являти собою будь- який ізотип, в тому числі ЇдДо (включаючи підтипи ІдС1, Ідо2, ІдОЗ та Ідс4), ІДА (включаючи підтипи ІДА! та ІдАг2), І9М та І9ЗЕ.
Термін "варіабельна область" або "варіабельний домен" стосується частини легкого та/або важкого ланцюгів антитіла, зазвичай включаючи приблизно аміно-кінець від 120 до 130 амінокислот у важкому ланцюзі та приблизно від 100 до 110 амінокінцевих амінокислот у легкому ланцюзі. Варіабельна область антитіла зазвичай визначає специфічність конкретного антитіла відносно його мішені.
Варіабельність не розподіляється рівномірно по всім варіабельним доменам антитіл; вона зосереджена в піддоменах кожної з варіабельних областей важкого і легкого ланцюгів. Такі домени називаються "гіперваріабельні області" або "областями, що визначають комплементарність" (СОК). Більш консервативні (тобто, негіперваріабельні) частини варіабельних доменів називаються "каркасними" областями (РКМ або ЕК) і забезпечують каркас для утворення антигензв'язуючої поверхні з шести СОК в тривимірному просторі.
Варіабельні домени важких і легких ланцюгів, що зустрічаються в природі, містять чотири ЕКМ- області (ЕК!Т, ЕК2, ЕКЗ і ЕК4), в основному з використанням конфігурації р-листа, з'єднану трьома гіперваріабельними областями, які утворюють петлі, що з'єднують структуру Д-листа, а в деяких випадках утворюють частину його структури. Гіперваріабельні області в кожному ланцюзі утримуються разом в безпосередній близькості від ЕРКМ і разом з гіперваріабельні областями іншого ланцюга сприяють утворенню антигензв'язуючого сайту (див. Кабраї зі співавт., І ос. Сії.).
Термін "СОК" в однині та множині стосується, області, що визначає компліментарність. Три такі області надають зв'язуючий характер варіабельній області легкого ланцюга (СОК-І1, СОВ- 2 ії СОК-І3), а ще три надають зв'язуючий характер варіабельній області важкого ланцюга (СОВНІ, СОВ8-Н2 ї СОК-НЗ) СОК містять велику частину залишків, відповідальних за специфічні взаємодії антитіла з антигеном і, отже, сприяють функціональній активності молекули антитіла: вони є основними детермінантами антигенної специфічності.
Конкретні визначення меж і довжин СОМ прив'язані до різних систем класифікації та нумерації. Тому СОК можуть визначатися за Кабаї, Споїйіа, визначенням контактних або будь- яких інших меж, включаючи описану в цьому документі систему нумерації. Незважаючи на різні межі, кожна з таких систем має певний рівень перекривання в тому, що складає так звані "г?іперваріабельні області" в варіабельних послідовності. Таким чином, визначення СОК 60 відповідно до цих систем можуть відрізнятися за довжиною і межами областей стосовно суміжної каркасної області. Див., наприклад, Караї (підхід, заснований на міжвидовій варіабельності послідовностей), СПоїпіа (підхід, заснований на кристалографічних дослідженнях комплексів антиген-антитіло) і/або МасСаїїшт (КаБбаї зі співавт., ос. Сі .; Споїпіа зі співавт. , У. Мої. Віої, 1987 р., 196: 901-917; та МасСайПт зі співавт., У. Мої. Віої, 1996 р., 262: 732). Ще одним стандартом для визначення характеристик сайту зв'язування антигену є визначення АБМ, що використовується програмним забезпеченням для моделювання антитіл
АРМ Охтога Моїесшіаг. Див., наприклад, Ргоївіп бедиепсе апа Бігисішге Апаїузів ої Апіїроду
Магпаріеє Юотаїіп5. В: Апіїбоду Епдіпеегіпд бар Мапиа! (Еа.: Юцебеї, 5. апіа Копіегтапп, К.,
Зргіпдег-Мепад, НеїдеЇбегд). Тією мірою, якою два способи ідентифікації залишків визначають поверхні областей, що перекриваються, але не ідентичні, їх можна об'єднати для визначення гіоридного СОК. Однак нумерація відповідно до так званої системи Кабаї є кращою.
Як правило, СОК утворюють петлеву структуру, яка може бути класифікована як канонічна структура. Термін "канонічна структура" стосується конформації основного ланцюга, яка визначається петлями зв'язування антигену (СОК). В результаті порівняльних структурних досліджень було встановлено, що п'ять з шести антигензв'язуючих петель мають тільки обмежений репертуар доступних конформацій. Кожна канонічна структура може бути охарактеризована кутами закручування поліпептидного остова. Таким чином, відповідні петлі між антитілами можуть мати досить схожі тривимірні структури, незважаючи на високу варіабельність амінокислотної послідовності в більшості частин петель (Споївпіа апа І евкК, ..
МОЇ. Віої., 1987 р., 196: 901; Споїпіа зі співавт., Маїиге, 1989 р., 342: 877; Мапіп апа Потоп, у.
МОЇ. Віої, 1996 р., 263: 800). Крім того, існує взаємозв'язок між прийнятою структури петель і оточуючими її амінокислотними послідовностями. Конформація конкретного канонічного класу визначається довжиною петлі і амінокислотними залишками, що знаходяться в ключових положеннях всередині петлі, а також в межах консервативного каркасу (тобто, поза петлею).
Таким чином, призначення конкретного канонічного класу може бути засноване на наявності цих ключових амінокислотних залишків.
Термін "канонічна структура" може також включати в себе міркування щодо лінійної послідовності антитіла, наприклад, відповідно до каталогізації за Кабаї (КаБбаї зі співавт., ос. сії). Схема (система) нумерації Караї є широко прийнятим стандартом для нумерації амінокислотних залишків варіабельного домену антитіла узгодженим чином і є переважною схемою, яка застосовується в даному винаході, як також згадувалось в іншій частині даного документа. Додаткові міркування щодо структури також можуть бути використані для визначення канонічної структури антитіла. Наприклад, подібні відмінності, не в повному обсязі відображені нумерацією Кабаї, можуть бути описані системою нумерації Споїіа зі співавт. і/або розкриті іншими методиками, наприклад, за допомогою кристалографії і дво- або тривимірного комп'ютерного моделювання. Відповідно, така послідовність антитіл може бути віднесена до канонічного класу, який дозволяє, серед іншого, ідентифікувати відповідні каркасні послідовності (наприклад, виходячи з бажання включити в бібліотеку безліч канонічних структур). Нумерація амінокислотних послідовностей антитіл за Кабраї і міркування щодо структури відповідно до опису у СПоїпПіа зі співавт., Іос. сії., а також їх значення для інтерпретації канонічних аспектів структури антитіл описані у відповідній літературі. Структури субодиниць і тривимірні конфігурації різних класів імуноглобулінів добре відомі в цій області. Для ознайомлення з оглядом структури антитіл див. Апіїродіев: А І арогаїогу Мапиаї, Соїй 5ргіпд
Нарог І арогаюгу, ед5. Напоми зі співавт., 1988 р.
СОКЗ легкого ланцюга і, зокрема, СОКЗ важкого ланцюга можуть являти собою найбільш важливі детермінанти зв'язування антигену в варіабельних областях легкого і важкого ланцюга.
У деяких конструкціях антитіл СОКЗ важкого ланцюга, очевидно, є основною областю контакту між антигеном і антитілом. Схеми відбору іп міїто, в яких змінюється тільки СОКЗ, можуть бути використані для зміни зв'язуючих властивостей антитіла або визначення того, які залишки вносять вклад в зв'язування антигену. Отже, СОКЗ, як правило, є найбільшим джерелом молекулярної різноманітності в сайті, що зв'язує антитіло. НЗ3, наприклад, може становити в довжину всього два амінокислотні залишки або перевищувати 26 амінокислот.
Термін "нейтралізуючий" стосується антигензв'язувальної молекули, 5сЕм або антитіла, відповідно, які зв'язуються з лігандом та попереджають або знижують біологічний ефект даного ліганда. Це може бути здійснене, наприклад, шляхом безпосереднього блокування області зв'язування на ліганді або шляхом зв'язування з лігандом та зміни здатності ліганда до зв'язування шляхом непрямих засобів (таких як структурні або енергетичні зміни в ліганді). У деяких варіантах здійснення термін може також позначати антигензв'язувальну молекулу, яка попереджає здійснення біологічної функції білком, з яким вона зв'язується. 60 Термін "мішень" або "антиген" стосується молекули або частини молекули, які здатні зв'язуватися з антигензв'язувальною молекулою. У деяких варіантах здійснення мішень може мати один або декілька епітопів.
Термін "конкурувати", при застосуванні в контексті антигензв'язувальних молекул, які конкурують за той самий епітоп, означає конкуренцію між антигензв'язувальними молекулами, як визначено в аналізі, у якому тестована антигензв'язувальна молекула (наприклад, антитіло або її імунологічно функціональний фрагмент) попереджає або інгібує (наприклад, знижує) специфічне зв'язування зазначеної антигензв'язувальної молекули з антигеном. Можуть застосовуватися різні типи аналізів конкурентного зв'язування для визначення того, чи конкурує антигензв'язувальна молекула з іншою молекулою, наприклад: прямий або непрямий радіоїмунологічний аналіз твердої фази (КІА), прямий або непрямий ферментний імунологічний аналіз твердої фази (ЕЇІА), аналіз багатошарової конкуренції (егапії зі співавт., 1983, Меїподвз іп
Епгутоіоду 9:242-253); прямий біотин-авідиновий ЕЇА твердої фази (Кігткіапа зі співавт., 1986, У.
Іттипої. 137:3614-3619), прямий аналіз із міткою твердої фази, прямий багатошаровий аналіз із міткою твердої фази (Нагісух апа І апе, 1988, Апііродієз, А І арогаїогу Мапиаї, Соїа бргіпу Нагрог
Ргез5); прямий КІА твердої фази із міткою із застосуванням 1-125 міток (Могеї зі співавт., 1988,
Моїес. Іттипої. 25:7-15); прямий біотин-авідиновий ЕЇА твердої фази (Спеиппо, зі співавт., 1990,
Мігоїоду 176:546-552); та прямий КІА з міткою (МоІдепнанег зі співавт., 1990, Зсапа. 9. Іттипої.
З32:7 7-82). Термін "епітоп" включає будь-яку детермінанту, здатну зв'язуватися з антигензв'язувальною молекулою, наприклад, 5сЕм, антитіло або імунна клітина за даним винаходом. Епітоп являє собою область антигена, яка зв'язується з антигензв'язувальною молекулою, націленою на даний антиген, та антиген являє собою білок, що включає певні амінокислоти, які безпосередньо контактують з антигензв'язувальною молекулою.
Застосовані у даному документі терміни "мітка" або "мічений" стосуються введення детектованого маркера, наприклад, шляхом уведення міченої радіоїізотопами амінокислоти або прикріплення до поліпептиду біотинових фрагментів, які можуть бути виявлені за допомогою відміченого авідину (наприклад, стрептавідину, який містить флюоресцентний маркер, або ферментативної активності, яка може бути виявлена шляхом оптичних або колориметричних способів). У деяких варіантах здійснення мітка або маркер також можуть бути терапевтичними.
Різні способи нанесення міток на поліпептиди та глікопротеїни відомі в даній галузі та можуть бути застосовані.
Відповідно до даного винаходу тип "увімкнено-вимкнено" або інші типи методики контрольного перемикання можуть бути включені в даний документ. Данні методики можуть передбачати застосування доменів димеризації та необов'язкових активаторів такої димеризації доменів. Данні методики включають, наприклад, методики, описанні УМи зі співавт., 5сівєпсе 2014 350 (6258) із застосуванням систем димеризації ЕКВР/Караїод у певних клітинах, при цьому зміст статті включено в даний документ шляхом посилання у свій своїй повноті. Додаткова технологія димеризації описана, наприклад, у Редап зі співавт. Спет. Неу. 2010, 110, 3315- 3336, а також у Патентах США МоМо 5830462; 5834266; 5869337 та 6165787, вміст яких також включено в даний документ шляхом посилання у всій своїй повноті. Додаткові пари димеризації можуть включати циклоспорин-А/циклофілін, рецептор, естроген/естрогеновий рецептор (необов'язково із застосуванням тамоксифену), глюкокортикоїд/глюкокортикоїдний рецептор, тетрациклін/тетрацикліновий рецептор, вітамін Ю/рецептор вітаміну ОО. Наступні приклади технології димеризації можна знайти, наприклад, у МО 2014/127261, УМО 2015/090229, 5 2014/0286987, 05 2015/0266973, 05 2016/0046700, Патенті США Мо 8486693, 05 2014/0171649 та 05 2012/0130076, вміст яких також включено в даний документ шляхом посилання у всій своїй повноті.
Способи лікування
Із застосуванням адоптивної імунотерапії вихідні Т-клітини можуть бути (ї) видалені у пацієнта, (ії) створені методами генної інженерії для експресії химерного антигенного рецептора (САК), який зв'язується щонайменше з одним антигеном пухлини або (ії) розширені ех мімо у більшу популяцію розроблених Т-клітин, та (м) повторно уведені пацієнту. Див., наприклад,
Патенти США МоМо 7741465 та 6319494, ЕвННаг зі співавт. (Сапсег Іттипої, вказано вище);
Кгашзе зі співавт. (вказано вище); Ріппеу зі співавт. (вказано вище). Після того, як розроблені Т- клітини повторно уводять пацієнту, вони опосередковують імунну відповідь по відношенню до клітин, які експресують антиген пухлини. Див., наприклад, Кгашйзе зі співавт., У). Ехр. Мед., Том 188, Мо. 4, 1998 (619-626). Дана імунна відповідь включає секрецію 1-2 та інших цитокінів Т- клітинами, клональну експансію Т-клітин, які розпізнають антиген пухлини та опосередковане Т- клітинами специфічне знищення мішень-позитивних клітин. Див. Нотрбасі зі співавт., дошиттаї ої
Ітітип. 167: 6123-6131 (2001). бо Отже, у деяких аспектах даний винахід включає спосіб лікування або попередження стану,
зв'язаного з небажаними та/або підвищеними рівнями РІ ТЗ у пацієнта, який включає уведення пацієнту, який цього потребує, ефективної кількості щонайменше одної виділеної антигензв'язувальної молекули, САК або ТСК, розкритих у даному документі.
Представлені способи для лікування захворювань або порушень, в тому числі раку. У деяких варіантах здійснення даний винахід стосується створення опосередкованої Т-клітинами імунної відповіді у суб'єкта, яке включає уведення суб'єкту ефективної кількості розроблених імунних клітин за даною заявкою. У деяких варіантах здійснення опосередкована Т-клітинами імунна відповідь спрямована проти клітин-мішеней або клітин. У деяких варіантах здійснення розроблена імунна клітина містить химерний антигенний рецептор (САК) або Т-клітинний рецептор (ТСК). У деяких варіантах здійснення клітина-мішень являє собою клітину пухлини. У деяких аспектах даний винахід включає спосіб лікування або попередження утворення злоякісної пухлини, при цьому указаний спосіб включає уведення суб'єкту, що потребує цього, ефективної кількості щонайменше однієї виділеної антигензв'язувальної молекули, описаної у даному документі. У деяких аспектах даний винахід містить спосіб лікування або попередження утворення злоякісної пухлини, при цьому указаний спосіб включає уведення суб'єкту, що потребує цього, ефективної кількості щонайменше однієї імунної клітини, де імунна клітина містить щонайменше один химерний антигенний рецептор, Т-клітинний рецептор та/або виділеної антигензв'язувальної молекули, як описано у даному документі.
У деяких аспектах даний винахід включає фармацевтичну композицію, яка містить щонайменше одну антигензв'язувальну молекулу, як описано в даному документі, та фармацевтично прийнятний допоміжний засіб. У деяких варіантах здійснення фармацевтична композиція додатково містить додатковий активний засіб.
Антигензв'язувальні молекули, САК, ТОК, імунні клітини тощо за даним винаходом можуть застосовуватися для лікування мієлоїдних захворювань, в тому числі без обмеження гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлогений лейкоз (СМ), хронічний мієломоноцитарний лейкоз (СММІУ), ювенільний мієломоноцитарний лейкоз, атиповий хронічний мієлоїдний лейкоз, гострий промієлоцитний лейкоз (АРІ), гострий монобластний лейкоз, гострий еритроїдний лейкоз, гострий мегакаріобластний лейкоз, мієлодиспластичний синдром (МОБ), мієлопролиферативне порушення, мієлоїдне новоутворення, мієлоїднусаркому, або їх комбінацій. Додаткові захворювання включають запальні та/або автоїмунні захворювання, наприклад, ревматоїдний артрит, псоріаз, види алергії, астму, хворобу Крона, ІВО, ІВ5, фіброміалгію, мастоцитоз та глютенову ентеропатію.
Слід розуміти, що цільові дози для САК:/ САВ-1:/ ТСВ:-клітин можуть варіювати в діапазоні 1х106 - 2х1019 клітин/кг, переважно 2х105 клітин/кг, більш переважно. Слід розуміти, що дози вище та нижче даного діапазону можуть бути придатні для певних суб'єктів, та придатні рівні дози за необхідності можуть бути визначені лікарем. Крім того, можуть бути представлені декілька доз клітин відповідно до даного винаходу.
Також представлені способи зменшення розміру пухлини у суб'єкта що включають уведення суб'єкту розробленої клітини за даним винаходом, де клітина включає химерний антигенний рецептор, Т-клітинний рецептор або Т-клітинний рецептор на основі химерного антигенного рецептора, який містить антигензв'язувальну молекулу, що зв'язується з антигеном пухлини. У деяких варіантах здійснення у суб'єкта спостерігається солідна пухлина або злоякісна пухлина крові, наприклад, лімфома або лейкоз. У деяких варіантах здійснення розроблена клітина доставляється в ложе пухлини. У деяких варіантах здійснення рак присутній у кістковому мозку суб'єкта.
У деяких варіантах здійснення розроблені клітини являють собою автологічні Т-клітини. У деяких варіантах здійснення розроблені клітини являють собою аллогенні Т-клітини. У деяких варіантах здійснення розроблені клітини являють собою гетерологічні Т-клітини. У деяких варіантах здійснення розроблені клітини за даною заявкою трансфіковані або перетворені іп мімо. У деяких варіантах здійснення розроблені клітини за даною заявкою трансфіковані або перетворені ех мімо.
Способи можуть додатково включати введення одного або декількох хіміотерапевтичних засобів. У деяких варіантах здійснення хіміотерапевтичний засіб являє собою хіміотерапевтичні засоби, що знижують функцію лімфоцитів (що попередньо адаптують). Переважні схеми попереднього лікування, разом з відповідними перевагами біомаркерами, описані у Попередніх заявках на патент 62/262143 та 62/167750, які включені в даний документ шляхом посилання у всій своїй повноті. В них описані, наприклад, способи адаптації пацієнта, що потребує Т- клітинної терапії, які включають уведення пацієнту певних переважних доз циклофосфаміду (від 200 мг/мг/доба до 2000 мг/ме/доба) та певних доз флударабіну (від 20 мг/мг/доба до 900 60 мг/мг/доба). Переважна схема дозування включає лікування пацієнта, що передбачає щоденне введення пацієнту приблизно 500 мг/м2 на добу циклофосфаміду та приблизно 60 мг/м на добу флударабіну протягом трьох днів перед уведенням пацієнту терапевтично ефективної кількості розроблених Т-клітин.
В інших варіантах здійснення кожне з антигензв'язувальної молекули, перетворених (або інакше розроблених) клітин (наприклад, САК або ТСК) та хіміотерапевтичного засобу вводять у кількості, ефективній для лікування захворювання або стану у суб'єкта.
У деяких варіантах здійснення композиції, які містять САК-експресуючі імунні ефекторні клітини, розкриті в даному документі можна уводити разом з будь-яким числом хіміотерапевтичних засобів. Приклади хіміотерапевтичних засобів включають алкілюючі засоби, такі як тіотепа та циклофосфамід (СУТОХАМ"М); алкілсульфонати, такі як бусульфан, імпросульфан та піпосульфан; азаридини, такі як бензодопа, карбоквон, метуредопа та уредопа; етиленіміни та метиламеламіни, в тому числі альтретамін, триетиленмеламін, триетиленфосфорамід, триетилентіофосфаорамід та триметилоломеламін; азотисті іприти, такі як хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамід, естрамуцин, іфосфамід, мехлоретамін, мехлоретамін оксид гідрохлорид, мелфалан, новембіхін, фенестерин, преднімустин, трофосфамід, урамустин; нітрозосечовини, такі як кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, німустин, ранімустин; антибіотики, такі як аклациноміцини, активноміцин, аутраміцин, азасерин, блеоміцини, кактиноміцин, каліхіміцин, карабіцин, карміноміцин, карцинофілін, хромоміцини, дактиноміцини, даунорубіцин, деторубіцин, б-діазо-5-оксо-І -сорлейцин, доксорубіцин, епірубіцин, есорубіцин, ідарубіцин, марцеломіцин, мітоміцини, мікофенолова кислота, ногаламіцин, оливоміцини, пепломіцини, потфіроміцин, пуроміцин, квеламіцин, родорубіцин, стрептонігрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, циностатин, зорубіцин; інгібітори обміну речовин, такі як метотрексат та 5-фторурацил (5-3); аналоги фолієвої кислоти, такі як деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурину, такі як флударабін, б-меркаптопурин, тіамипрін, тіогуанін; аналоги піримідину, такі як анцитабін, азацитидін, б-азауридин, кармофур, цитарабін, дидеоксиуридин, доксифлуридин, еноцитабін, флоксуридин, 5-ЕО; андрогени, такі як калустерон, пропіонат дромостанолону, епітіостанол, мепітіостан, тестолактон; засоби, що пригнічують функції наднирників, такі як аміноглутетимід, мітотан, трилостан; компенсатор фолієвої кислоти, такий як фролінова кислота; ацеглатон; альдофосфамід глікозид; амінолевулінова кислота; амсакрин; бестрабуцил; бісантрен; едатраксат; дефофамін; демеколцин; діазиквон; елформітин; елліптинію ацетат; етоглуцид; нітрат галлію; гідроксисечовина; лентинан; лонідамін; мітогуазон; мітоксантрон; мопідамол; нітракрин; пентосатин; фенамет; пірарубицин; подофіллінова кислота; 2-етилгідразин; прокарбазин; РОКУ; разоксан; сизофіран; спірогерманій; тенуазонова кислота; триазиквон; 2,2 2"-трихлортриєетиламін; уретан; віндезин; дакарбазин; манномустин; мітобронітол; мітолактол; піпоброман; гацитозин; арабінозид ("Ага-С"); циклофосфамід; тіотепа; таксани, наприклад, паклітаксел (ТАХОЇ "М, ВгівіоІ-Муєг5 бацірр) та дексетаксел (ТАХОТЕКЕ?, АНопе-
Рошепс Когег); хлорамбуцил; гемцитабін; б-тіогуанін; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платини, такі як цисплатін та карбоплатін; вінбластін; платина; етопозид (МР-16); іфосфамід; мітоміцин С; мітоксантрон; вінкристин; вінорелбін; навелбін; новатрон; теніпозид; дауноміцин; аміноптерин; кселода; ібандронат; СРТ-11; інгібітор топоіїзомерази КЕЗ2000; дифторметилорнітин (ОМЕО); похідні ретиноєвої кислоти, такі як Тагоугейп'"М (бексаротен),
Рапгеїйп'"М, (алітретиноїн); ОМТАКТ"М (денілейкін дифтитокс); еспераміцини; капецитабін; та фармацевтично прийнятні солі, кислоти або похідні будь-якого з наведеного вище. Також у дане визначення включені протигормональні засоби, що діють для регулювання або інгібування дії гормонів відносно пухлини, наприклад, антиестрогени, в тому числі, наприклад, тамоксифен, ралоксифен, 4(5)-імідазоли, що інгібують ароматазу, 4-гідрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, І У117018, онапристон та тореміфен (Фарестон); та антіандрогени, такі як флутамід, нілутамід, бікалутамід, лейпролід та госерелін; та фармацевтично прийнятні солі, кислоти або похідні будь-якого з наведеного вище. За необхідності також вводять комбінації хіміотерапевтичних засобів, в тому числі без обмеження СНОР, тобто, циклофосфамід (Цитоксанг), доксорубіцин (гідроксидоксорбіцин), вінкристин (Онковин?) та преднізон.
У деяких варіантах здійснення хіміотерапевтичий засіб уводять одночасно або протягом тижня після уведення розробленої клітини або нуклеїнової кислоти. В інших варіантах здійснення хіміотерапевтичний засіб уводять від 1 до 4 тижнів або від 1 тижня до 1 місяця, від 1 тижня до 2 місяців, від 1 тижня до З місяців, від 1 тижня до 6 місяців, від 1 тижня до 9 місяців або від 1 тижня до 12 місяців після уведення розробленої клітини або нуклеїнової кислоти. В інших варіантах здійснення хіміотерапевтичний засіб уводять щонайменше за 1 місяць до уведення клітини або нуклеїнової кислоти. У деяких варіантах здійснення способи додатково 60 включають уведення двох або більше хіміотерапевтичних засобів.
Велику кількість додаткових терапевтичних засобів можна застосовувати разом із композиціями, описаними у даному документі. Наприклад, потенційно придатні додаткові терапевтичні засоби включають інгібітори РО-1, такі як ніволумаб (Ораїмо-), пембролізумаб (Кеуїгодає), пембролізумаб, підилізумаб та атезолізумаб.
Додаткові терапевтичні засоби, придатні для застосування в комбінації із даним винаходом, включають без обмеження ібрутиніб (Ітргимісає), оратумумаб (Агетагє), ритуксимаб (Ейихап?), бевацизумаб (Амазвіїпе), трастузумаб (Негсеріїп"У), трастузумаб емастатин (КАОСТУІ АС), іматиніб (Сіеємес?), цетуксимаб (Егріїшх?У), панітумумаб (Месііріх"У), катумаксомаб, ібритумомаб, офатумумаб, тозитумомаб, брентуксимаб, алемтузумаб, гемтузумаб, ерлотиніб, гефітиніб, вандетаніб, афатиніб, лапатиніб, нератиніб, акситиніб, маситиніб, пазопаніб, сунитиніб, сорафеніб, тоцераніб, лестауртиніб, акситиніб, цедираніб, ленватиніб, нинтенданіб, пазопаніб, регорафеніб, семаксаніб, сорафеніб, сунитиніб, тивозаніб, тоцераніб, вандетаніб, ентректиніб, кабозантиніб, іматиніб, дасатиніб, нілотиніб, понатиніб, радотиніб, босутиніб, лестауртиніб, руксолітиніб, пакритиніб, кобиметиніб, селуметиніб, траметиніб, біниметиніб, алектиніб, церитиніб, кризотиніб, афліберцепт, адипотид, денілейкін дифтитокс, тТОВ-інгібітори, такі як
Еверолімус та Темсиролімус, інгібітори сигнального шляху Неддейпод, такі як сонідегіб та вісмодегіб, інгібітори СОК, такі як інгібітор СОК (палбоцикліб).
У додаткових варіантах здійснення композицію, яка містить імунну клітину, що містить САК, можна уводити з протизапальним засобом. Протизапальні засоби або лікарські засоби включають без обмеження стероїди та глюкокортикоїди (в тому числі бетаметазон, будесонід, дексаметазон, гідрокортизону ацетат, гідрокортизон, гідрокортизон, метилпреднізолон, преднізолон, преднізон, триамцинолон), нестероїдні протизапальні лікарські засоби (М5АЇЮ), в тому числі аспірин, ібупрофен, напроксен, метотрексат, сульфасалазин, лефлуномід, лікарські засоби проти ТМЕ, циклофосфамід та мікофенолат. Ілюстративні М5АІО включають ібупрофен, напроксен, напроксен натрію, інгібітори Сох-2 та сіалілати. Ілюстративні знеболюючі засоби включають ацетамінофен, оксикодон, трамадол або пропоксифен гідрохлорид. Ілюстративні глюкокортикоїди включають кортизон, дексаметазон, гідрокортизон, метилпреднізолон, преднізолон або преднізон. Ілюстративні модифікатори біологічної відповіді включають молекули, направленні проти маркерів поверхні клітини (наприклад, СО4, СО5 тощо), інгібіторів цитокіну, наприклад, антагоністів ТМЕ (наприклад, етанерцепт (ЕМВРЕЇЄ), адалімумаб (НОМІВАЗХ) та інфліксимаб (ЕРЕМІСАСЕЗ,, інгібітори хемокіну та інгібітори адгезійної молекули.
Модифікатори біологічної відповіді включають моноклональні антитіла, рекомбінантні форми молекул. Ілюстративні ЮОМАКО включають азатіоприн, циклофосфамід, циклоспорин, метотрексат, пеніцилламін, лефлуномід, сульфасалазин, гідроксихлорохін, золото (для перорального (ауранофін) та внутрішньом'язового уведення) та міноциклін.
У деяких варіантах здійснення композиції, описані в даному документі, уводять разом з цитокіном. Застосований у даному документі "цитокін" призначений для позначення білків, які вивільняються однією популяцією клітин, що діють на іншу клітину як міжклітинні медіатори.
Прикладами цитокінів є лімфокіни, монокіни та звичайні поліпептидні гормони. Окрім цитокінів включені гормони росту, такі як гормон росту людини, М-метіоніловий гормон росту людини та бичачий гормон росту; паратіреоїдний гормон; тіроксин; інсулін; проінсулін; релаксин; прорелаксин; глікопротеїнові гормони, такі як фолікулостимулюючий гормон (ЕЗН), тіреотропний гормон (Т5Н) та лютеїнізуючий гормон (ІН); фактор росту печінки (НОЕ); фактор росту фібробластів (ЕСЕ); пролактин; плацентарний лактоген; мюллерівська інгібувальна субстанція; пептид, пов'язаний із гонадотропіном миші; інгібін; активін; фактор росту ендотелію судин; інтегрін; тромбопоетин (ТРО); фактори росту нервів (МОРЕ), такі як МОЕ-бета; фактор росту тромбоцитів; трансформуючі фактори росту (ТОРГ), такі як ТОЕБ-альфа та ТОБ-бета; інсуліноподібний фактор росту-І та -ІЇ; еритропоєтин (ЕРО); остеіндуктивні фактори; інтерферони, такі як інтерферон-альфа, бета та -гамма; колонієстимулюючі фактори (С5БЕ), такі як макрофаг-С5Е (М-С5Е); гранулоцит-макрофаг-С5Е (С0М-С5Е); та гранулоцит-С5Е ((-С5БЕ); інтерлейкіни (І), такі як 1-1, 11 -1-альфа, ІІ -2, 1-3, 1-4, 11 -5, 11 -6, 11 -7, 1-8, 11 -9, 1-10, 11-11, 1 - 12; 11-15, фактор некрозу пухлини, такий як ТМЕ-альфа або ТМЕ-бета; та інші поліпептидні фактори, в тому числі ІЕЕ та комплектний ліганд «КІ). Застосований у даному документі термін цитокін включає білки з природних джерел або з рекомбінантної клітинної культури, та біологічно активні еквіваленти цитокінів вихідної послідовності.
У деяких аспектах даний винахід включає антигензв'язувальну молекулу, яка зв'язується з
ЕСТЗ при Ка менше 100 пМ. У деяких варіантах здійснення антигензв'язувальна молекула зв'язується при Ка менше 10 пМ. В інших варіантах здійснення антигензв'язувальна молекула зв'язується при Ка менше 5 пМ. 60 Способи одержання
Для одержання полінуклеотидів може застосовуватися безліч методик, поліпептидів, векторів, антигензв'язувальних молекул, імунних клітин, композицій тощо за даним винаходом.
Перед керуванням або генетичною модифікацією іп міго імунних клітин, описаних у даному документі, клітини можуть бути одержані у суб'єкта. У деяких варіантах здійснення імунні клітини включають Т-клітини. Т-клітини можуть бути одержані з низки джерел, в тому числі мононуклеарних клітин периферійної крові (РВМО), кісткового мозку, тканини лімфатичних вузлів, пуповинної крові, тканини вилочкової залози, тканини області інфекції, асцитів, плеврального випоту, тканини селезінки та пухлин. У деяких варіантах здійснення Т-клітини можуть бути одержані з одиниці крові, зібраної у суб'єкта із застосуванням низки методик, відомих спеціалісту у даній галузі, наприклад, відокремленням РІСОГ ІМ, Клітини можуть бути переважно одержані з циркулюючої крові індивіда шляхом аферезу. Продукт аферезу зазвичай містить лімфоцити, в тому числі Т-клітини, моноцити, гранулоцити, В-клітини, інші утворені ядром білі клітини крові, еритроцити та тромбоцити. У деяких варіантах здійснення клітини, зібрані шляхом аферезу, можуть бути промиті для видалення фракції плазми та поміщені у відповідний буфер або середовище для подальшої обробки. Клітини можуть бути промиті за допомогою РВ5. Як буде зрозуміло, можна застосовувати стадію промивки, наприклад, із застосуванням напівавтоматичної проточної центрифуги, наприклад, клітинного процесора
Соре"М 2991, Вахієг СуїоМаїе"М або подібних. Після промивання клітини можуть бути повторно суспендовані у різних біопорівняних буферах або іншому сольовому розчині з буфером або без нього. У деяких варіантах здійснення небажані компоненти зразка для аферезу можуть бути видалені.
У деяких варіантах здійснення Т-клітини виділяють з РВМС шляхом руйнування еритроцитів та зниження функції моноцитів, наприклад, із застосуванням центрифугування через градієнт
РЕВСОЇ ЇМ. Конкретна субпопуляція Т-клітин, наприклад, СО28:, СА, СО8:, СО45ВА: та
Сра45ноО--Т-клітини можуть бути додатково виділені шляхом методик позитивної або негативної селекції, відомих у даній галузі. Наприклад, збагачення популяції Т-клітин шляхом негативної селекції може бути досягнуто із комбінацією антитіл, направлених на поверхневі маркери, унікальні для негативно вибраних клітин. Один спосіб для застосування у даному документі являє собою сортування та/або селекцію клітин шляхом негативної магнітної імуноадгезії або проточної цитометрії, у яких застосовують суміш моноклональних антитіл, направлених на маркери поверхні клітини, присутні на негативно вибраних клітинах. Наприклад, для збагачення клітин СО4- шляхом негативної селекції, суміш моноклональних антитіл зазвичай включає антитіла до СО14, СО20, СО116, С016, НГ А-ОК та СО8. Проточну цитометрію та сортування клітин також можна застосовувати для виділення популяції клітин, що представляють інтерес для застосування за даним винаходом.
РВМС можуть застосовуватися безпосередньо для генетичної модифікації з імунними клітинами (наприклад, САК або ТСК) із застосуванням способів, описаних у даному документі.
У деяких варіантах здійснення після виділення РВМОС Т-лімфоцити можуть бути додатково виділені, та як цитотоксичні, так і хелперні Т-лімфоцити можуть бути розсортовані на первинні, запам'ятовувальні та ефекторні субпопуляції Т-клітин, або до, або після генетичної модифікації та/або експансії.
У деяких варіантах здійснення клітини СО8" додатково розсортовані на первинні, центральні запам'ятовувальні та ефекторні клітини шляхом ідентифікації антигенів клітинної поверхні, які зв'язані з кожним з даних типів клітин СО8:. У деяких варіантах здійснення експресія фенотипічних маркерів центральних запам'ятовувальних Т-клітин включає СО45КО, СОб621І, ссСКк7, с0р28, СО3, та СО127 та негативна для гранзиму В. У деяких варіантах здійснення центральні запам'ятовувальні Т-клітини являють собою СО45КО:, СОб217, С2О8:-Т-клітини.. У деяких варіантах здійснення ефекторні Т-клітини негативні для СО62І, ССК7, С0р28 та СО127, та позитивні для гранзиму В та перфоріну. У деяких варіантах здійснення СО4--Т-клітини додатково розсортовані на субпопуляції. Наприклад, хелперні СО4:-Т-клітини можуть бути розсортовані на первинні, центральні запам'ятовувальні та ефекторні клітини шляхом ідентификації популяцій клітин, які мають антигени клітинної поверхні.
Імунні клітини, такі як Т-клітини, можуть бути генетично модифіковані після виділення із застосуванням відомих способів, або імунні клітини можуть бути активовані та розширені (або диференційовані у випадку попередників) іп міго перед генетичною модифікацією. В іншому варіанті здійснення імунні клітини, такі як Т-клітини, генетично модифіковані химерними антигенними рецепторами, описаними у даному документі (наприклад, перетвореними вірусним вектором, які містять одну або декілька нуклеотидних послідовностей, що кодують САК), а потім активовані та/або розширені іп міго. Способи активації та розширення Т-клітин відомі у даній 60 галузі та описані, наприклад, у Патенті США Мо 6905874; Патенті США Мо 6867041; Патенті США
Мо 6797514; та РСТ УМО 2012/079000, зміст яких включено в даний документ шляхом посилання у всій своїй повноті. Як правило, такі способи включають приведення у контакт РВМС або виділених Т-клітин зі стимулюючим засобом та костимулюючим засобом, наприклад, антитілами к СО3 та СОра28, як правило, прикріпленим до гранули або іншої поверхні, в культуральному середовищі з відповідними цитокінами, таким як 1-2. Антитіла до СОЗ та СО28, прикріплені до тієї самої гранули, виступають як клітини, що представляють "сурогатний" антиген (АРС). Одним прикладом є система Тпе ЮОупареаайв5?, система стимулятора/активатора СО3/С028 для фізіологічної активації людських Т-клітин.
В інших варіантах здійснення Т-клітини можуть бути активовані та стимульовані для проліферації з живильними клітинами та відповідними антитілами та цитокінами із застосуванням таких способів, як описані в Патенті США Мо 6040177; Патенті США Мо 5827642; та УМО 2012129514, зміст яких включено в даний документ шляхом посилання у всій своїй повноті.
Деякі способи одержання конструкцій та розроблених імунних клітин за даним винаходом описані в Заявці РСТ РСТ/О515/14520, зміст якої включено в даний документ шляхом посилання у всій своїй повноті. Додаткові способи одержання конструкцій та клітин можуть бути знайдені у Попередній заявці на патент США Мо 62/244036, зміст якої включено в даний документ шляхом посилання у всій своїй повноті.
Слід розуміти, що РВМС можуть додатково включати інші цитотоксичні лімфоцити, такі як
МК-клітини або МКтТ-клітини. Вектор експресії що несе кодуючу послідовність химерного рецептора, розкритого в даному документі, може бути введений у популяцію Т-клітин, МК-клітин або МКТ-клітин донора-людини. Успішно перетворені Т-клітини, що несуть вектор експресії, можуть бути відсортовані із застосуванням проточної цитометрії для виділення СЮОЗ-позитивних
Т-клітин, а потім додатково розмножені для підвищення числа даних Т-клітин, які експресують
САК, окрім активації клітин із застосуванням антитіл до СОЗ та ІІ -2 або інших способів, відомих у даній галузі, як описано в будь-якому іншому місці даного документа. Для кріоконсервування
Т-клітин, які експресують САК, для зберігання талабо одержання з метою застосування по відношенню до суб'єктга-лоюодини можуть застосовуватися стандартні процедури. В одному варіанті здійснення перетворення іп міїго, культивування та/або експансію Т-клітин здійснюють за відсутності утвореними з тваринних джерел продуктів, що не є людськими, таких як ембріональна теляча сироватка та фетальна бичача сироватка.
Для клонування полінуклеотидів вектор можна вводити у клітину-хазяїна (виділену клітину- хазяїна) для забезпечення реплікації вектора самого по собі та, таким чином, ампліфікації копій полінуклеотиду, який міститься в ньому. Клонуючі вектори можуть містити компоненти послідовності, які зазвичай включають без обмеження джерело реплікації, промоторні послідовності, промотори ініціації транскрипції, енхансерні послідовності та селектовні маркери.
Данні елементи можуть бути вибрані відповідним чином спеціалістом у даній галузі. Наприклад, джерело реплікації може бути вибраний для сприяння автономній реплікації вектора в клітині- хазяїні.
У деяких варіантах здійснення в даному розкритті представлені виділені клітини-хазяїни, які містять вектор, представлений у даному документі. Клітини-хазяїни, які містять вектор, можуть бути придатні в експресії або клонуванні полінуклеотиду, який міститься у векторі. Придатні клітини-хазяїни можуть включати без обмеження прокаріотичні клітини, грибкові клітини, дріжджові клітини або вищі еукаріотичні клітини, наприклад, клітини ссавця. Придатні покаріотичні клітини для даної мети включають без обмеження еубактерії, такі як грамнегативні або грампозитивні бактерії організми, наприклад, Епіегорасіепасеає, такі як ЕзсПегіснпіа, наприклад, Е. соїї, Епіегобасіег, Егміпіа, КІерзівеІІа, Ргоїеи5, ЗаІтопеїІа, наприклад, ЗаІтопеїйа турпітигішт, Зеїтайа, наприклад, бетаца тагсезсапв, та ЗпідеїПа, а також Васіїййї, такі як В. виб та В. Ііспепіїгтів, Рзейдотопахв, такі як Р. аегидіпоза, та 5ігеріотусев.
Вектор можна вводити в клітину-хазяїна із застосуванням будь-яких придатних способів, відомих у даній галузі, в тому числі без обмеження ОЕАЕ-декстран-опосередкована доставка, спосіб осадження фосфату кальцію, опосередкована катіонними ліпідами доставка, опосередкована ліпосомами трансфекція, електропорація, бомбардування мікрочастками, рецептор-опосередкована генна доставка, доставка, опосередкована полілізином, гістоном, хітозаном та пептидами. Стандартні способи трансфекції та трансформації клітин для експресії вектора, що представляє інтерес, добре відомі у даній галузі. У наступному варіанті здійснення суміш різних векторів експресії для генетичної модифікації донорної популяції імунних ефекторних клітин, де кожен вектор кодує різний САК, розкритий у даному документі. Одержані в результаті перетворені імунні ефекторні клітини 60 утворюють змішану популяцію розроблених клітин, з часткою розроблених клітин, які експресують більше одного різного САК.
В одному варіанті здійснення в даному винаході представлений спосіб зберігання створених методами генної інженерії клітин, які експресують САК або ТСК, що націлені на білок РІ Т3. Він передбачає кріоконсервацію імунних клітин, так що клітини залишаються життєздатними після відтавання. Доля імунних клітин, які експресують САК, може бути кріоконсервована шляхом способів, відомих у даній галузі, для забезпечення постійного джерела таких клітин для майбутнього лікування пацієнтів, що страждають на злоякісне новоутворення. За необхідності кріоконсервовані трансформовані імунні клітини можуть бути відтануті, вирощені та розширені для більшої кількості таких клітин.
Застосовані у даному документі термін "кріоконсервувати" стосується консервації клітин шляхом охолодження до температур нижче нуля, наприклад, (як правило) 77 К або -196 "С (температура кипіння рідкого азоту). За температурах нижче нуля найчастіше застосовують кріозахисні засоби для попередження пошкодження консервованих клітин внаслідок заморозки при низьких температурах або нагрівання до кімнатної температури. Кріоконсервувальні засоби та оптимальні швидкості охолодження можуть захистити клітини від пошкодження. Кріозахисні засоби, які можна застосовувати відповідно до даного винаходу, включають без обмеження диметил сульфоксид (ОМ5О) (І омеЇоск 4. Візпор, Майшиге (1959); 183: 1394-1395; Азпжмоса-5тій,
Маїшиге (1961); 190: 1204-1205), гліцерин, полівінілпірролідин (Кіпітеї, Апп. М.У. Асад. 5сі. (1960); 85: 576) та поліетиленгліколь (5іомЦег 5 Камаїп, Маїиге (1962); 196: 48). Переважна швидкість охолодження становить 1-3 "С/хвилина.
Термін "по суті чистий" застосовують для зазначення, що приведений компонент присутній при високому рівні. Компонент переважно являє собою головний компонент, присутній в композиції. Переважно він присутній на рівні більше 30 95, більше 50 95, більше 75 95, більше 90 95 або навіть більше 95 95, при цьому вказаний рівень визначений у перерахуванні на суху вагу/суху вагу відносно загальної ваги розглянутої композиції. Занадто високих рівнів (наприклад, при рівнях більше 9095, більше 95595 або більше 99595) компонент може розглядатися як той, що знаходиться у "чистій формі". Біологічно активні речовини за даним винаходом (в тому числі поліпептиди, молекули нуклеїнових кислот, антигензв'язувальні молекули, фрагменти) можуть бути представлені у формі, яка по суті не містить один або декілька забруднювачів, з якими речовина може бути зв'язана в інших випадках. Якщо композиція по суті не містить даний забруднювач, то забруднювач буде на низькому рівні (наприклад, на рівні менше 10 95, менше 5 95 або менше 1 95 у перерахуванні на суху вагу/суху вагу, як вказано вище).
У деяких варіантах здійснення клітини складені шляхом першого їх збору з їхнього культурального середовища, а потім промивання та концентрації клітин в середовищі та системі зберігання, придатній для уведення ("фармацевтично прийнятний" носій) в ефективній для лікування кількості. Придатне середовище для інфузій може являти собою будь-який ізотонічний розчин середовища, як правило, фізіологічний розчин, Могтово!"М В (Аррою) або
Ріазта-Гуїе"М А (Вахіег), але також можуть застосовуватися 5 95 декстрози у воді або лактат
Рінгера. Середовище для інфузій може бути доповнено людським сироватковим альбуміном.
Необхідні для лікування кількості клітин в композиції зазвичай становлять щонайменше 2 клітини (наприклад, щонайменше 1 СО8: центральна запам'ятовувальна Т-клітина та щонайменше 1 СО4- Т-клітина хелперної субпопуляції), або більш типово становлять більше 102 клітин, та не більше 1092, не більше 108 або 109 клітин включно та можуть становити більше 1019 клітин. Кількість клітин буде залежати від необхідного застосування, для якого призначена композиція, та типу клітин, включених в даний документ. Щільність необхідних клітин зазвичай перевищує 105 клітин/мл та, як правило, перевищує 107 клітин/мл, як правило, 1089 клітин/мл або більше. Клінічно придатна кількість імунних клітин може бути розділена на декілька інфузій, які сумарно дорівнюють або перевищують 10», 109, 107, 108, 109, 1019, 1011 або 1072 клітин. В деяких аспектах даного винаходу, зокрема оскільки всі введені клітини будуть перенаправлені до конкретного антигену-мішені (ЕЇТ3), можуть бути уведені більш низькі кількості клітин, в діапазоні 109/кг (106 -10!! на пацієнта). Терапевтичні засоби САКЕ можуть бути введені декілька разів при дозуваннях в межах даних діапазонів. Клітини можуть бути автологічними, аллогенними або гетерологічними для пацієнта, що піддається лікуванню.
Популяції клітин, що екпресують САК, за даним винаходом можна вводити або окремо, або у вигляді фармацевтичної композиції в комбінації з розріджувачем та/або з іншими компонентами, наприклад, ІІ -2 або іншими цитокінами, або популяціями клітин. Фармацевтичні композиції за даним винаходом можуть містити популяцію клітин, що експресує САК або ТСН, наприклад, Т-клітин, як описано у даному документі, в комбінації з одним або декількома 60 фармацевтично або прийнятними носіями, розріджувачами або допоміжними засобами. Такі композиції можуть містити буфери, наприклад, нейтральний буферний розчин, фосфатно- буферний розчин тощо; вуглеводні, такі як глюкоза, манноза, сахароза або декстрани, манніт; білки; поліпептиди або амінокислоти, такі як гліцин; антіоксиданти; хелатні засоби, такі як ЕОТА або глутатіон; допоміжні засоби (наприклад, гідроксид алюмінію); та консерванти. Композиції за даним винаходом переважно складені для внутрішньовенного введення.
Фармацевтичні композиції (розчини, суспензії тощо) можуть включати одне або декілька з наступного: стерильні розріджувачі, такі як вода для ін'єкцій, сольовий розчин, переважно, фізіологічний розчин, розчин Рінгера, ізотонічний розчин хлориду натрію, нелеткі масла, такі як синтетичні моно- або дигліцериди, які можуть виступати як розчинники або суспендувальні середовища, поліетиленгліколі, гліцерин, пропіленгліколь або інші розчинники; антибактеріальні засоби, такі як бензиловий спирт або метилпарабен; антиоксиданти, такі як аскорбінова кислота або бісульфіт натрію; хелатні засоби, такі як етилендіамінтетраоцтова кислота; буфери, такі як ацетати, цитрати або фосфати, та засоби для регулювання тонічності, такі як хлорид натрію або декстроза. Препарат для парентерального застосування може бути укладений в ампули, одноразові шприці або посудини для декількох доз зі скла або пластмаси. Ін'єкована фармацевтична композиція переважно є стерильною.
Слід розуміти, що небажані явища можуть бути зведені до мінімуму шляхом перетворення імунних клітин (що містять один або декілька САК або ТОК) з "суїцидальним" геном. Також може бути необхідним уводити в імунні клітини індукований перемикач "увімкнення" або "акселератор". Придатні методики включають застосування індукованої каспази-9 (Заявка на патент США 2011/0286980) або тимідинкінази до, після або одночасно з перетворенням клітин за допомогою конструкції САК за даним винаходом. Додаткові способи уведення "суїцидальних" генів та/або перемикачів "увімкнення" включають ТАЇ ЕМ5, застосування доменів "цинкові пальці", РНК-інтерференцію, міРНК, кшеРНК, антисенсову технологію та інші методики, відомі у даній галузі.
Слід розуміти, що описи в даному документі є виключно ілюстративними та пояснювальними та не обмежують даний винахід, як заявлено у формулі винаходу. В даній заявці застосування форм однини включає множину, якщо явно не вказано інше.
Назви розділів, застосовані в даному документі, призначені виключно для цілей організації та не призначені для обмеження описаного об'єкта винаходу. Усі документи або частини документів, приведені в даній заявці, в тому числі без обмеження патенти, заявки на патент, статті, книги та наукові труди, включені в даний документ шляхом посилання у всій своїй повноті для будь-якої мети. Застосовані відповідно до даного розкриття наступні терміні, якщо не вказано інше, слід розуміти як такі, що мають наступне значення: в даній заявці застосування "або" означає "та/"або", якщо не вказано інше. Крім того, застосування терміну "в тому числі", а також інших форм, наприклад, "включає" та "включно", є необмежувальним. Крім того, такі терміни, як "елемент" або "компонент" охоплюють як елементи, так і компоненти, які містять одну одиницю та елементи та компоненти, які містять більше однієї субодиниці, якщо конкретно не вказано інше.
Термін "активність РІ Т3" включає будь-який біологічний ефект РІ Т3. У деяких варіантах здійснення активність РІ ТЗ включає здатність РІ ТЗ взаємодіяти або зв'язуватися з субстратом або рецептором.
Термін "полінуклеотид", "нуклеотид" або "нуклеїнова кислота" включає як одноланцюгові, так і дволанцюгові нуклеотидні полімери. Нуклеотиди, що складають полінуклеотид, можуть являти собою рибонуклеотиди або дезоксирибонуклеотиди або модифіковану форму будь- якого типу нуклеотидів. Указані модифікації включають базові модифікації, такі як похідні бромуридину та інозину, модифікації рибози, такі як 2,3'-дідеоксирибоза, та модифікації міжнуклеотидних зв'язків, такі як фосфотіосат, фосфодитіосат, фосфоселеноат, фосфодиселеноат, фосфоанілотіоат, фосфоаніладат та фосфоамідат.
Термін "олігонуклеотид" стосується полінуклеотиду, що включає 200 або меншу кількість нуклеотидів. Олігонуклеотиди можуть бути одноланцюговими або дволанцюговими, наприклад, для застосування в конструкції мутантного гена. Олігонуклеотиди можуть являти собою змістові або антизмістові олігонуклеотиди. Олігонуклеотид може включати мітку, в тому числі радіоїзотопну мітку, флюоресцентну мітку, гаптенову або антигенну мітку, для аналізу виявлення. Олігонуклеотиди можуть застосовуватися, наприклад, як праймери ПЦР, клонуючих праймерів або гібридизаційних зондів.
Термін "контрольна послідовність" стосується полінуклеотидної послідовності, яка впливає на експресію та обробку кодуючої послідовності, з якою вона зв'язується шляхом ліганду.
Природа такої контрольної послідовності може залежати від організму-хазяїна. У конкретних 60 варіантах здійснення контрольні послідовності для прокаріот можуть включати промотор,
рибосомну область зв'язування та послідовність термінації транскрипції. Наприклад, контрольні послідовності для еукаріот можуть включати промотори, які включають одну або багато областей розпізнавання для факторів транскрипції, енхансерних послідовностей транскрипції та послідовності термінації транскрипції. "Контрольні послідовності" можуть включати лідерні послідовності (сигнальні пептиди) та/або послідовності клітин, що зливаються.
Застосований у даному документі термін "функціонально зв'язаний" означає, що компоненти, до якого застосовується даний термін, знаходяться у зв'язку, яка дозволяє їм здійснювати властиві їм функції в придатних умовах.
Термін "вектор" означає будь-яку молекулу або частку (наприклад, нуклеїнову кислоту, плазміду, бактеріофаг або вірус), застосовану для переносу інформації, що кодує білок, в клітину-хазяїна. Термін "вектор експресії" або "конструкція експресії" стосується вектора, який придатний для трансформації клітини-хазяїна та містить послідовності нуклеїнових кислот, які спрямовують та/або керують (разом з клітиною-хазяїном) експресією одного або декількох гетерологічних кодуючих областей, функціонально зв'язаних с ними. Конструкції експресії можуть включать без обмеження послідовності, які впливають або керують транскрипцією, трансляцією та, якщо присутні інтрони, впливом на сплайсинг РНК кодуючої області, функціонально зв'язаної з ними.
Термін "клітина-хазяїн" стосується клітини, яка була трансформована або здатна до трансформації, за допомогою послідовності нуклеїнової кислоти та таким чином експресує ген, що представляє інтерес. Термін включає потомство вихідної клітини, незалежно від того, чи є потомство ідентичним з точки зору морфології або генетичної конструкції оригінальної вихідної клітині або ні, оскільки присутній ген, що представляє інтерес.
Термін "трансформація" стосується зміни генетичних характеристик клітини, та клітина була трансформована, якщо вона була модифікована з можливістю вмісту нових ДНК або РНК.
Наприклад, клітина трансформована, якщо вона генетично модифікована від її вихідного стану шляхом уведення нового генетичного матеріалу шляхом трансфекції, перетворення або інших методик. Після трансфекції або перетворення трансформувальна ДНК може рекомбінуватися з
ДНК клітини шляхом фізичної інтеграції в хромосому клітини, або може підтримуватися тимчасово як епісомальний елемент без реплікації, або може піддаватися реплікації незалежно у вигляді плазміди. Клітина вважається "стабільно трансформованою", якщо трансформувальна
ДНК піддається реплікації з розділенням клітини.
Термін "трансфекція" стосується поглинання клітиною чужорідної або екзогенної ДНК. Ряд методик трансфекції добре відомий в даній галузі та розкритий у даному документі. Див., наприклад, Сгапат зі співавт., 1973, Мігоїюду 52:456; бБатрбгооК зі співавт., 2001, МоїІесшаг
СіІопіпд: А Гарогаїогу Мапиаї, вказано вище; Оамів зі співавт., 1986, Вазіс Методз іп МоіІесшаг
Віоіоду, ЕІвемієг; Спи зі співавт., 1981, бСепе 13:197.
Термін "перетворення" стосується процесу, у якому чужорідна ДНК уводиться в клітину шляхом вірусного вектора. Див. допез зі співавт., (1998). Сепеїісв: ргіпсіріез апа апаїувзів. Вовіоп:
Уопез « Вапей Рибі.
Терміни "поліпептид" або "білок' стосуються макромолекули з амінокислотною послідовністю білка, в тому числі делеції, додавання та/або заміщення однієї або декількох амінокислот вихідної послідовності. Терміни "поліпептид" та "білок" конкретно охоплюють антигензв'язувальні молекули до РБІТ3, антитіла або послідовності, що мають делеції, додавання та/або заміщення однієї або декількох амінокислот антигензв'язувального білка. Термін "фрагмент поліпептиду" стосується поліпептиду, який має амінокінцеву делецію, карбоксильну кінцеву делецію та/або внутрішню делецію порівняно з повнорозмірним вихідним білком. Такі фрагменти також можуть містити модифіковані амінокислоти порівняно з вихідним білком. Придатні фрагменти поліпептидів включають імунологічно функціональні фрагменти антигензв'язувальних молекул. Придатні фрагменти включають без обмеження одну або декілька областей СОК, варіабельні домени важкого та/або легкого ланцюга, частину інших частин ланцюга антитіла тощо.
Термін "виділений" означає (ї) той, що не містить щонайменше декілька інших білків, з якими він може зустрічатися в звичайних умовах, (ії) по суті не містить інших білків з того самого джерела, наприклад, від інших видів, (ії) відокремлений щонайменше від приблизно 50 95 полінуклеотидів, ліпідів, вуглеводнів або інших матеріалів, з якими він зв'язаний в природних умовах, (ім) функціонально зв'язаний (шляхом ковалентної або нековалентної взаємодії) з поліпептидом, з яким він не зв'язаний в природних умовах, або (у) не зустрічається в природних умовах. "Варіант" поліпептиду (наприклад, антигензв'язувальна молекула або антитіло) містить 60 амінокислотну послідовність, у якій один або декілька амінокислотних залишків уведені всередину, видалені з та/або заміщені в амінокислотній послідовності відносно іншої поліпептидної послідовності. Варіанти включають злиті білки.
Термін "ідентичність" стосується відношення між послідовностями двох або більше молекул поліпептидів або двох або більше молекул нуклеїнової кислоти, визначеного шляхом вирівнювання та порівняння послідовностей. "Відсоток ідентичності"? означає відсоток ідентичних залишків між амінокислотами або нуклеотидами у порівнюваних молекулах та розраховується на основі розміру найменшої з порівнюваних молекул. Для даних розрахунків проміжки у вирівнюваннях (за наявності) переважно регулюються шляхом конкретної математичної моделі або комп'ютерної програми (тобто, "алгоритму").
Для розрахунку відсотка ідентичності порівнювані послідовності зазвичай вирівнюють за допомогою способу, який забезпечує найбільший збіг між послідовностями. Одним прикладом комп'ютерної програми, яку можна застосовувати для визначення відсотка ідентичності, є програмний пакет СО, який включає САР (Оемегеих зі співавт., 1984, Мисі. Асіа Кев. 12:387;
Сепеїйсз Сотршиїег сгоир, Опімегейу ої УМізсопзіп, Мадізоп, М/із.). Комп'ютерний алгоритм САР застосовується для вирівнювання двох поліпептидів або полінуклеотидів, для яких необхідно визначити відсоток ідентичності послідовності. Послідовності вирівнюються для оптимального збігу їх відповідної амінокислоти або нуклеотиду ("сукупність, що збіглася", визначена алгоритмом). У деяких варіантах здійснення стандартна матриця порівняння (див., бауйої зі співавт., 1978, Айа5 ої Ргоївіп Зедцепсе апа бігисіиге 5:345-352 тої Ше РАМ 250 сотрагізоп тайіх; Непікой зі співавт., 1992, Ргос. Май. Асай. Зсі. 0.5.А. 89:10915-10919 для матриці порівняння ВІ ОБиИМ 62) також застосовується в алгоритмі.
Як застосовується у даному документі, 20 звичайних (наприклад, таких, що зустрічаються в природних умовах) амінокислот та їхніх скорочень слідують звичайному застосуванню. див.
Іттипоіоаду - А Зупіпевзів (2-е видання, СоїЇцб апа Сгеп, Еав5., Зіпацег Авз5ос., зЗипаепапа, Маз55. (1991)), включену в даний документ шляхом посилання для будь-яких цілей. Стереоізомери (наприклад, ЮО-амінокислоти) 20 звичайних амінокислот, амінокислоти неприродного походження, такі як альфа-, альфа-дизаміщені амінокислоти, М-алкільні амінокислоти, молочна кислота та інші нетипові амінокислоти також можуть бути придатними компонентами для поліпептидів за даним винаходом. Приклади нетипових амінокислот включають наступні: 4- гідроксипролін, -гамма.-карбоксиглутамат, епсилон-М,М,М-триметиллізин, е-М-ацетиллізин, О- фосфосерин, М-ацетилсерин, М-формілметіонін, З-метилгістидин, 5-гідроксилізин, .сигма.-М- метиларгінін та інші подібні амінокислоти та імінокислоти (наприклад, 4-гідроксипролін).. У позначенні поліпептиду, що застосовується в даному документі, лівобічному напрямку являє собою аміно кінцевий напрямок, а правобічний напрямок являє собою карбоксильний кінцевий напрямок, відповідно стандартного застосування та умовностей.
Консервативні амінокислотні заміщення можуть охоплювати амінокислотні залишки, що не зустрічаються в природних умовах, які зазвичай вводять шляхом хімічного пептидного синтезу, аніж шляхом синтезу в біологічних системах. Вони включають пептидоміметики та інші перетворені або інвертовані форми фрагментів амінокислот. Залишки, що природним чином зустрічаються в природі, можливо розділити на класи, засновані на загальних властивостях бічного ланцюга: а) Гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, Маї, І ей, Пе; р) нейтральні гідрофільні: Сувз, Зег, ТНг, Авзп, Сп; с) кислотні: Азр, СІМ; а) основні: Нів, Гуз, Агд; е) залишки, які впливають на орієнтацію ланцюга: Су, Рго; та
У ароматичні: Тгр, Туг, Ре.
Наприклад, неконсервативні заміщення можуть передбачати заміну члена одного з даних класів на член іншого класу. Такі заміщені залишки можуть бути введені, наприклад, в області людського антитіла, гомологічні з антитілами, які не є людськими, або в негомологічні області молекули.
В здійсненні змін антигензв'язувальної молекули костимулюючий або активуючий домени розробленої Т-клітини, відповідно до деяких варіантів здійснення, може розглядатися індекс гідрофобності. Кожній амінокислоті було присвоєно індекс гідрофобності на основі її гідрофобності та характеристик зміни. Вони являють собою наступні: ізолейцин (14,5); валін (14,2); лейцин (43,8); фенілаланін (12,8); цистеїн/цистин (12,5); метіонін (41,9); аланін (41,8); гліцин (-0,4); треонін (-0,7); серин (-0,8); триптофан (-0,9); тірозин (-1,3); пролін (-1,6); гістидин (- 3,2); глутамат (-3,5); глутамін (-3,5); аспартат (-3,5); аспарагін (-3,5); лізин (-3,9) та аргінін (-4,5).
Див. Куїе зі співавт., У). Мої. Віої!., 157:105-131 (1982). Відомо, що деякі амінокислоти можуть бути 60 заміщені іншими амінокислотами з подібним індексом гідрофобності або балом та все ще зберігають подібну біологічну активність. Також в даній області слід розуміти, що заміщення подібних амінокислот може ефективно здійснюватися на основі гідрофільності, зокрема, якщо біологічно функціональний білок або пептид, створений таким чином, призначений для застосування в імунологічних варіантах здійснення, як в даному випадку. Ілюстративні заміщення амінокислот представлені в таблиці 2.
Таблиця 2
Ше 77777711 |Сеш Ма, МевАга,Рре норлейцині Мей 7777771
Ще 77777111 |Норлейцин, Пе,Ма, МебА, Рпе Ме -::/ б г 11111110 ФАсійст,.АВИ/ Її пи 11111111 фАіввнорлейцин//://///СС/З(О|Ї777777гггИИИССИС2ш
Термін "похідне" стосується молекули, яка включає хімічну модифікацію, відмітну від вставки, делеції або заміщення амінокислот (або нуклеїнових кислот). У деяких варіантах здійснення похідні містять ковалентні модифікації, в тому числі без обмеження хімічне зв'язування з полімерами, ліпідами або іншими органічними або неорганічними фрагментами. У деяких варіантах здійснення хімічно модифікована антигензв'язувальна молекула може мати більший період напівиведення з кровотоку, ніж антигензв'язувальна молекула, яка хімічно не модифікована. У деяких варіантах здійснення похідна антигензв'язувальна молекула ковалентно модифікована для включення в себе одного або декількох розчинних у воді полімерних прикріплень, в тому числі без обмеження поліетиленгліколь, поліоксиетиленгліколь або поліпропіленгліколь.
Пептидні аналоги широко застосовуються у фармацевтичній промисловості як непептидні лікарські засоби з властивостями, аналогічними лікарським засобам з пептидом матриці. Дані типи непептидного з'єднання називаються "пептидні міметики" або "пептидоміметики".
Еаийснеге, 9., Адм. Огид Нез., 15:29 (1986); Мебег « Егеїдіпдег, ТІМ, р. 392 (1985); та Емапз зі співавт., У. Мед. Спет., 30:1229 (1987), яка включена в даний документ шляхом посилання для будь-який цілей.
Термін "терапевтично ефективна кількість" стосується кількості антигензв'язувальної молекули до БІ ТЗ, яка, як визначено, забезпечує терапевтичну відповідь у ссавця. Такі терапевтично ефективні кількості легко встановлюються спеціалістом у даній галузі.
Терміни "пацієнт" та "суб'єкт" застосовуються взаємозамінно та включають суб'єктів-людей та тварин-суб'єктів, що не є людьми, а також суб'єктів з раніше діагностованими порушеннями, без раніше діагностованих порушень, що одержують медичну допомогу, із ризиком розвитку порушень тощо.
Термін "лікувати" та "лікування" включає терапевтичні способи лікування, профілактичні способи лікування та варіанти застосування, у яких знижується ризик розвитку у суб'єкта порушення або інший фактор ризику. Лікування не потребує повного вилікування порушення та охоплює варіанти здійснення, в яких знижуються симптоми або основні фактори ризику. Термін "попереджувати" не потребує 100 95 ліквідації можливості явища. Скоріше він визначає, що вірогідність виникнення явища була знижена в присутності сполуки або способу.
Стандартні методики можуть застосовуватися для рекомбінантної ДНК, синтезу олігонуклеотидів та тканинної культури та трансформації (наприклад, електропорація, ліпофекція). Методики ферментативних реакцій та очищення можуть здійснюватися відповідно до вказівок виробника або як зазвичай застосовується у даній галузі, або як описано у даному документі. Приведені вище методики та процедури можуть зазвичай здійснюватися відповідно до звичайних способів, добре відомих у даній галузі, та як описано у різноманітних загальних та більш конкретних довідкових матеріалах, які вказані та обговорені в даному описі. Див., наприклад, ЗатьгоокК зі співавт., МоіІесшаг Сіопіпд: А І арогаїогу Мапиаї! (2а єда., Соїй 5рііпд
Нагбог Гарогаїогу Ргез5, Соїй Зргіпд Нагрог, М.М. (1989)), яка включена в даний документ шляхом посилання для будь-яких цілей.
Наступні послідовності будуть додатково ілюструвати даний винахід.
С028т ДНК позаклітинна, трансмембранна, внутрішньоклітинна
СТТаАТААТОАААдИаТО
АААСасААСААТСАТТСАСООЯТаАдАдсСааСАдасСАССсттТаТтоСаТСАСССста,атооСстасТосСАТ
СсСААдаСсСсАТТОТаСОТаттОосСсТоИ,атТАатТаасатовАатостса7асттаттАстотстастсатсАСс са,атаасТтТТАТААТСТТоТавОаТтТАСАТССААААпАдАаССасстсТССАТАССОАТТАСАТИаА
АТАТВАСТОСАСОЯССОЯАСССТапОСССАСААдСИаАААСАСТАССАИССТТАСаСАССАССТАСВАСА тптсастасстТАТСОааАаС (5ЕО ПО МО: 1)
С028Т позаклітинна, трансмембранна, внутрішньоклітинна АА:
ГОМЕКОМОТІ ІНУКОКНІСР 5РІЕГРОРБОЗКР ЕММІ МУМаСУ ГАСУ МТМ АРІЕМЖМУВЗК
В5АГГНЗОУМ ММТРЕВРОРТ АВКНУОРМАРР АРЕААМНА5 (5ЕО ІО МО: 2) с0р28т ДНК - позаклітинна
СТТаАТААТОААААИаТСАААСацпСААСААТСАТТСАСИаИТОААсСОсаСААасСАСсСсттИТатосито
АСССТТатТтоССтТастоСАТОССАДаССА (5ЕО ІО МО: 3)
СО28Т АА - позаклітинна
ГОМЕК5МИТтТІ ІНУКОКНІ СР 5РІ ЕРОРБКР (5ЕО ІО МО: 4) с028 ДНК трансмембранний домен пестеасататсватосвтАастасатавАастостастаттТАСстотта|астоатсАСсСссТвас
ТТТТАТААТСТТСТОССОТТ (5ЕО ІО МО: 5)
С028 АА трансмембранний домен:
ЕММІ МУМО СМ ГАСУ МТМ АРІТЕМУМ (5ЕО ІО МО: 6)
С028 ДНК внутрішньоклітинний домен:
АПБАТССААААпААда,асоасстас СсСАТАаСаАТТАСАТОААТАТАСТОоСАСОвССасСосСтТОос
ССССАСААСОАААСАСТАССАаССТ ТАС САССАССТАСАСАТТ ТСИСТОаССТАТСОЯСАСО (ЗЕО ІО МО: 7)
С0р28 АА внутрішньоклітинний домен
ВА5КАЗА І НЗОММММТРЕВЕРОРТАКНУОРМАРРАОЕГААМНЗ5 (5ЕО ІО МО: 8)
СОЗ дзета ДНК
АвдааТаААсСТ п ТоСАСАТСТОСАСАТаСАССАССаТАТСАССАСОаССАпСААССААСТатА тТААСОАДаСТСААССТОСОВАСсаСАдСацвААдпАатТАТОАСОСТтттТапАСсААд,аСасСАа,сАа,ааАСаасА
СоСстТАвАтТавсТайСАААССААвАССААААААСССССА,СаАа,аа ТО СТАТААТИАДаСтТаСАС
ААСпАТААпАТааСсТаААаССТАТТСТОАААТАаССАТИОАААСОСАСАсССа,апАпААс,аапААААс ваСАСОСАСссаТтТатАССАСапАСТСАаСАСТаСТАСОААаСАТАСТТАТаАСаТстоТоСАСАТ вСАДИСССТаССАССТАСИ (5ЕО ІЮ МО: 9)
СОЗ дзета АА
ВУКЕЗАЗАВАРАМООСОМОЇ УМЕЇ М 2А!АВЕЕМ ОМ ОКАВОВОРЕМОСКРАВКМРОЕСІ УМЕЇ.
ОКОКМАЕАУЗЕІЯМКОаєЕнАНИаКИаТнораї Мосс 5ТАТКОТМБАЇ НМОАГРРА (5ЕО ІО МО: 10) сор28 ДНК
АТТОАватОАТаТАТССАССаССТТАССТаСаАТААСИВААДААСАСТААСИ,аТАССАТСАТТСАС
СТОАААвОсТАААСАССТОТатостотоооСсТСсТоСоСапОаССАТСААДАДаСОСС (БО ІО МО: 11)
С028 АА
ІЕУМУРРРМІ ОМЕКЗМСИТІЇ НУКОКНІ СРБ РІ ЕРОРБКР (5ЕО ІЮ МО: 12)
СО8 ДНК позаклітинний та трансмембранний домен ,аСсТаСАаСАТТОАаСААСТСААТААТаТАТТ ТТАаТСАСТТ ТатТАССАСТОТТСТОТОаССОСИ,СТ
ААСССТАСТАССАСАСССОСТоСАСВаССАССТАССССА,СТОСТАССАТСИСТТСАСАСОСТО во татосстасассСАсАасаст,еоСсоАссасоСоСАдс,сосасвоаа,астаттСсАТАССАСАаОАСТОаС
АТттсаСсСстТасСсоОАТАТСТАТАТСТвОВССсСАСсСССТОИСС,авААССТОСООСССтТАСТОСТОСТИТО
ССсТОаТСАТСАСОСТСТАТТОТААТСАСАСОИААС (ЗЕО І МО: 13)
СО8 АА позаклітинний та трансмембранний домен
АААЇ 5МОІМУЕЗНЕУРУБІ РАКРТТТРАРАРРТРАРТІАБОРІ 5І АВРЕАСАРАДИСАМНТАИІ ОСОБА
СОІМІМ/АРІГ АСТСОаМИІ БІ МТ МОМНАМ (ЗЕО ІО МО: 14)
Клон 10ЕЗ НС ДНК
СсАаватСАССТТОААсСОсАстотастостатастасТаАААСССАСАВАЧАСССТСАСастаА
ССстТСАССОЯСТотТотТаваТтСсТоАСТСАТСААТОСТАВААТОСОО Та тОАда,аСсТпАтоСатсАсасс соСАСОаСААХ,ааооСставаАда тс ТаСАСАСАТ ТТ СОаААТаССОАААААТСИТАСАССАСА 13 тТеотТСТаАдаАдаСАваСТСАССАТСТОССААСОАСАССТОСАААдаССАв,атаа ТОСТТАССАТИаА
ССААСАТОСАСССТОТаСАСАСА,ССАСАТАТТАСТА ТОСАСОССАТАССАССЯСТАСОЯИТО,аТАА
СссавдпАСТАССАСТАСТАСОСТАТаСЬССТОТаСсС,ВеаССАдасаАССАСссаТтСАсСаТтстосто
А (5ЕО ІО МО: 15)
Клон 10ЕЗ НС АА - СОК підкреслені
ОМТІКЕБОРМІ УКРТЕТІ ТІ ТСТУЗОЕ5І ІМАВМОУЗУМВОРРОКАЇГ ЕМ АНІЕЄЗЄМАЕКЗУВТОІ К
ЗВІ ТІЗКОТЗ5К5ОУМІ ТМІТІММОРМОТАТУУСАВІРИаУсССЕОоМНУУМаМОоУМСОС,СТТУТУ55 (5ЕО
ІО МО: 16)
Клон 10ЕЗ НС АА СОКТ: МААМИаМУ5 (5ЕО І МО: 17)
Клон 10ЕЗ НС АА СОК2: НІЕЗМАЕКОУВТ5І КБ (5ЕО І МО: 18)
Клон 10ЕЗ НС АА СОКЗ: ІРОУсСОаМарУнУмМаМоМ (5ЕО І МО: 19)
Клон 10ЕЗ І С ДНК вАСАТССАВАТОАСССАаТСТоСАТССТОССТатстасСАТСТСТАСПАСАСАСАСсСТСАССАТ сАСТТаСсСОаВаССААсСТСАвааСАТТАСАААТОАТТТАвасСстастТАТСАССАПАААССАСОаСААА аоСССтТААХсСассСстТаАТСТАТаСТТСАТССАСТТТасСААдАСстТасасТоССАТСААДОаСсСТТСАс,Са асла,атааАтотаасАСАвАаТТСАСТСТСАСААТСАССАСОоСТаСАасССстТААвАТТТТасАдСс
ТТАТТАСТаТСТтТАСАССАТААТААТТ ТСССОЯТОСАСОСТТоСатсАСапААСсААа,сТаапАААТСА
ААССОА (5ЕО І МО: 20)
Клон 10ЕЗ І С АА (СОК підкреслені)
РІОМТО5РББІ БАБІ СОВМТІТСВАБОСІВМОЇ СУУМООКРОаКАРКАІ ІМАЗЗТ ОБаУРЗАЕЗОа5 а5атТЕРЕТІТІЗ5І ОРЕОБАТУМСЇ ОНММЕРУТЕРСОСТКМЕЇКА (5ЕО ІО МО: 21)
Клон 10ЕЗ ІС СОКІ АА: ВАБОСІВМОЇ С (5ЕО І МО: 22)
Клон 10ЕЗ ІС СОК2 АА: АЗОТ О5 (5ЕО ІЮ МО: 23)
Клон 10ЕЗ ІС СОКЗ АА: ГОНММЕРУУТ (5ЕО ІЮ МО: 24)
Клон 2Е7 НС ДНК
СсАаватСАССТТОААсСОсАстотастостатастасТаАААСССАСАВАЧАСССТСАСастаА сстТСсАСсСсОатототасоттСсТСАСтТоАаапААТаСТАвААТтТасатаТатААл,асСстаАтоСатоАасс тосС,сопААдс,асоСставАсТастТасСАСАСАТТТТТТОСААТОАСОСААААААССТАСАССАСАТ
СсТотТаАдвдасСсАаасТсАССАТСТОСАСапАСАССТОСАААСаССАсСО,а Та, ТоСТТАССАТОАС
САДЧАТаСпАСССТатасАСАСАаССАСАТАТТАСТИА ТОСАСОССАТАСССТАСТАТОС ТТ ТОСССС,ОСС
АаТтТсСАТААСТАСОЯССТАТаСАСОТСОТОСааСсСААааОпАССАСОаТСАССаТтстТосСтТСА (5ЕО І
МО:25)
Клон 2Е7 НС АА (СОК підкреслені)
ОМТІКЕБОРМІ УКРТЕТІ ТІ ТСТУБОаЕ51І ВМАВМОУ5ЗУЛАОРРОКАЇ ЕУМІ АНІЕЗЄМОЕКТУ5Т5І
К5АГТІЗВОТЗКООУМІ ТМІТІКМОРМОТАТУУСАВІРУХаЗСОЗНММОаМОУМСОСТТУТУ55 (5ЕО І
МО:26)
Клон 2Е7 НС АА СОКІ: МАНМИУЗ5 (5ЕО ІЮ МО:17)
Клон 2Е7 НС АА СОК2: НІЕЗМОЕКТУ5Т5І КБ (5ЕО І МО 26)
Клон 2Е7 НС АА СОКЗ: ІРУМАаБИаЗНММОМОМ (5ЕО І МО:27)
Клон 2Е7 І С ДНК 5О0 вАСАТССАВАТОАСССАаТСТоСАТСОСТОССТаТтСтТаСАТСТатТАаспСАСАСАпАаТСАССАТ сАСТТаСсСОаВаССААсСТСАпОаАСАТТАВАААТОАТТосСОСТастТАТСААСАСАААССАСпапАдДА сосостсАасасстастоТАТасСтТаСАТССАСТТТасААдАд,атТавОааТОССАТСААДОСТТСАОСа асла,атааАтотавсАСАСвААТТСАСТСТСАСААТСсАаСАаСсСсТаСАаССтТаААСАТТТТОСААСТ
ТАТТАСТОаТСТАСАСТАТААТАСТТАССЬССЯ ТОСАСОСТПТОоОСОСТСАа,апААСаААваИтацпАААТСАА
АСОА (5ЕО ІЮ МО: 28)
Клон 2Е7 І С АА (СОК підкреслені)
РІОМТО5РБОБІ БАБМОО ВМТ СВАБОВІВМОГСУУМООКРОКАРОВІ І МААЗТ О5БОУРЗАЕЗОа
БабзатТЕНТІТІЗ5І ОРЕОБАТУМСЇ ОММТМРМ/ТЕСОСТКМЕЇІКА (5ЕО ІЮ МО: 29)
Клон 2Е7 І С АА СОКІТ: ВАБОВІВМО Ра (5ЕО І МО: 30) 60 Клон 2Е7 І С АА СОК2: ААБ5ТІ О5 (5ЕО ІЮО МО: 31)
Зо
Клон 2Е7 І НС АА СОКЗ: ГОММТМРМ/Т (5ЕО ІЮ МО: 32)
Клон 885 НС ДНК
САСАТАСААСТОСТООСАСТОТОСсСОВсаАсеасатаостосА,аосстассАаатоССстТаАаАСТОСТ сстататааСсаТстТасАТТСАССТТСААДаААСТАТИССАТаСсАСТООСТоСсассА,ваСстоСАца
СААдссосастасвАаатвсатааСАаТТАТТТасСтТАТОАТавААаСТААТаААТАСТАТОСАСАСССС атТаААспасСсСсаАТТСАССАТСТОСАВАпАСААСТОСААСААСАТаИТтТатАТСТаСАААТОААСАС сбтаАдсдаССаАТаАСсАСсОСО!СсТататАТТАСТОТаСсОасСатоасаААтТАаасСАаастоастацосо
СсттаАСТАСТаасасСсАваспААСССтТааТСАССИаТтстТосСтсА (5ЕО І МО: 33)
Клон 885 НС АА (СОК підкреслені)
ОТОЇ МЕС СУМОРОВБІ ВІ БСМАБСЕТЕКМУаМНУУВОАРОКаГ ЕУУМАУ М УразмМмЕХУСО
РУКОВЕТІЗАОМ5КММІ МІ ОММ5І ВАВОТАУУМСАВЗСІАМАСАЕОУМСОСТІ МТУ55 (5ЕО Ір
МО: 34)
Клон 885 НС АА СОКІ1: МУСМН (5ЕО ІЮ МО: 34)
Клон 885 НС АА СОК2: МІМУМОСЗМЕМУСОРУКО (5ЕО ІЮ МО: 35)
Клон 885 НС АА СОКЗ: БСІАМАСАРОМ (5ЕО ІЮ МО: 36)
Клон 885 1 С ДНК вАААТТИаТИТттТаАСОеСАатстоСАаАСАСССТОа тот Тата, ОАААААассСАСССТ стостСсАвоаССАсТСАсАаататтАасАсСАаастста,ааосТайаТАССАаСАСАААССТОСА
САСИаСТОССАСТСТОСТСАТСТАТИТТаСАТССАСААСОЯСССаСстТааСАТОССТаАСАСаИаттсСА го атеассдатасатставйцАСАВАСТТСАСТСТСАССАТСАССАвАСтТасАасСсСтТаААСАТТТТас
ААТИаТтТТАСТОТСААСАСТАТОАСТАСОАСАССАТТСАСТТ ТСЯаСОССтТаасАССААдАС,ТасАТА
ТСААДАСИаА (5ЕО ОО МО: 37)
Клон 885 І С АА (СОК підкреслені)
ЕІММГТО5РОТІ 5І 5РОЕКАТІ БСВАБОЗУЗЗЗЕЇ АМ/МООКРООСАРБІ ПУМАЗАВААСІРОВЕ5О5 а5БОаТОРТІТІЗВ ЕРЕОРЄОСМЕМСОНУСаеВТРЕТЕРСРОТКМПІКА (5ЕО І МО:41)
Клон 885 І С АА СОКІТ: КАБОЗМУ555ЗРЕЇ А (5ЕО І МО: 38)
Клон 885 І С АА СОК2: МАЗАВАА (5БЕО ІО МО: 39)
Клон 885 | С АА СОКЗ: ОНУМОаВТРЕТ (5ЕО ІО МО: 40)
Клон 4Е9 НС ДНК
Зо САсСОатасаластастасАаатстаавсастадсатаААдсААасставасостоАаатаААаатос тостТасСсААДОССТТСТаСАТАСАССТТСАССаОСТАСТАТАТАСАСТОСО ТОСОаАСАаИСасСссоссСта
ААСААдсСасоттоАастТапвАТаваАТавАТСААСССТААСАа Та, ТОаСАСАААСТАТОСАСАСАА сттсдасаСсАдасааТСАССАТааССАсадпАСАСаТССАТСАаСАСАСТТТАСАТОааАССстТаАаС дасостТаАдаАТСсТаАСОАСАСсс,аСС,аТатАТТАСТОТаСаАвААтТАСаСастасатААстоаатст з5 ттаАд4стТАСсТавааССАСааААСССТааТСАССОТСТОСТСА (5ЕО І МО: 41)
Клон 4Е9 НС АА (СОК підкреслені)
ОМОЇ МОБСОАЕУККРОАБУКУЗСКАБЗОМУТЕТахмМІНМУУВОАРЕОСТ ЕМ МОУЛМРМЗОСТММАО
КЕОоСаеУТМАНВОТ5ІЗТУММОІ 5ВІ В5ООТАУМУУСАВІВНССМЗУЕОМММ ОСТІ МТУ55 (5ЕО І МО: 42)
Клон 4Е9 НС АА СОК1: СУМІН (5ЕО ІО МО: 43)
Клон 4Е9 НС АА СОК2: УММІМРМЗОСТМУАОКРОСс (5ЕО ІЮ МО: 44)
Клон 4Е9 НС АА СОКЗ: ІНСОМОМУБОМ (5ЕО І МО: 45)
Клон 4Е9 І С ДНК вАСАТСИТаАТаАСССАаТтсТоСАсАСсТоСсСсТОаЇИаИстататстотасасвАасАаавассСАССА
ТСААСтТасСАДИТССАСССАСвАСТАТТТТАТАСАССТОСААСААТААСААСТТСТТАа,аСсттааТатАСс дасСсАФАААССсАаавасСАаССТоСТАААСТастоАТТТоСсТааСвСАТСТАТСССИСААТОССИСаИт
СоСстТОАССОАТТсАстТассаассвса,атставОАСАаАТТТсасСТоТСАССАТСАаСАсоСстТасАа асСТОААвАТаИтаасСАСТТАТТАСТОИТСААСААТАТТТТАИТАСТАТОТТСсАСТ ІТсааССАсСаас
АССААДССТОаСпСАСАТСААДАССИА (5ЕО ІЮ МО: 46)
Клон 4Е9 І С АА (СОК підкреслені)
РІММТО5РОБІ АУБІ ЕВАТІМСКОТОБІЇ М ТЗММКМЕСАМУООКРИООРРКИ ІЗУУАЗІВЕЗБИМРО
АВЕБОаБОБОТОГАЇ ТІЗБІ ОХЕОМАУУМСОСМЕЗТМЕЗЕСОСТКІ ЕІКА (5ЕО ІО МО: 47)
Клон 4Е9 І С АА СОКТ: КЗ5ТОБІІ УТЗММКМЕ ГА (5ЕО ІЮ МО: 48)
Клон 4Е9 І С АА СОК2: М/АБІВЕ5 (5ЕО ІО МО: 49)
Клон 4Е9 І.С АА СОКУ: ОСМЕЗТМЕ5 (5ЕО ІО МО: 50)
Клон 11211 НС ДНК
САССТаСАСсСТаСАсСаАатсоссассоСбАаавАСсТааТаААаСсСТСАСАЧАСССтТатоссСтоСА сстасАстатототаастасСстоСАТСсАатТАатТасТасСАТАСТАСТаСАСТТОаАТССОаССАССА сосдаваАдласасстсАастТа|авАттасаТтАСАТССАТТАСАСТОаСОАасСАССТАСТОСААСОС во атоССТСААВАатТоОсААТТАССАТАТСИТТАВАСАСатСсТААСААССАИ,аТТоТоССтТаААасСтТаА
АстотатаоАдстассасоаАСсАСссассататАТТАСТатТасСсаАпАСААСАсаАсСтТАСаваТ тат сттадгстТАстасвасСсАаасААСССтТайТСАССОТТТОСТтТСА (5ЕО ІО МО: 51)
Клон 11Е11 НС дАА (СОК підкреслені)
ОМОГОЕБОРОЇ МКРБООТІ ІІ ТСТУБО5ІЗБИАУМУМ ГМІВОНРОКОИЇ ЕУЛЛОМІНУЗОЗІТУЗМРО
ГК5ЗВІТІБІ ОТ5КМОНЕ5І КІ МЕБУТААЮОТАУУУСАВОЕВУССОИГ ЕОМ СОСТІ МТУ55 (5ЕО ІЮО МО: 52)
Клон 11211 НС АА СОКТ: БСАМУУМТ (5ЕО ІО МО: 53)
Клон 111 НС АА СОК2: МІНУЗОЗТУЗМРБІ КБ (5ЕО І МО: 54)
Клон 111 НС АА СОКЗ: ОБОМОаІ ЕОМ (5ЕО І МО: 55)
Клон 112111 С ДНК
САААТАатаАтТаАаСасАаа тотоСАасСсАссстаТаттататстоСАвасцпАААСААТСАСССТ стостСсАвааССАсТоАпАататтТАССАССОАСстТА,аССстаТАССАаСАпАтТасСстасАСАа естТосоСоастосСтТСАТСТАТОАТаСТТССАССАаа,асассАСстТааттоСсСАасССАсАТТодатиоа сслатасатставОАСАаАСТТСАСОаСТСАССАТСАаСсАсоСстТасАааОеСсТААаАттасАатТ
ТТАТТАСТаТСААСАТТАТААААССТОСССТотТоАСТІ ТсССаСОасАСОапАСТААС,СТааАСАТСА
ААСОА (5ЕО І МО: 56)
Клон 11Е11 С АА (СОК підкреслені)
ЕІММТО5РАТІ 5БМ5РОЕВІТІ БСВАБОЗМ ГО АМ/УООМРООСАРВІ ПИВАЗТВАТОЕРАВЕ5О5 азатореТТІЗ5І ОАЛЕОБРАУУУСОНУКТМ/РІ ТРЕОСОИТтТКМЄЇїКА (5ЕО І МО: 57)
Клон 11211 І С АА СОКІ1: КАЗОБМТТОГ А (5ЕО ІО МО: 58)
Клон 1121 С АА СОК2: САБЗТВАТ (5ЕО ІЮ МО: 59)
Клон 11Е1 С АА СОКЗ: ОНУКТМ/РІ Т (5ЕО ІО МО: 60)
Конструкція Л0ЕЗ СО28 ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
АТОССсСАСТОСССОЯТААСТОСТСОТОСТОСТОССЯаТТОбСсСАТТаСТОСТОСАСОЯаСсСсасАСсасс сасдаспТтаАСССТСАААвАатотавсАссСатТасСстоаТААААССТАСОпАвАСССТОАСАСТСАС
СстТаСАСАСТСОТоС,аасСТТсСАаСсСТоАТСААТОССАасСАТтаавАа т тоСстТааАтТсАаасСААСсСа
СоСОпААдвассєттвААтТааСТСаСАСАТАТТТТСАСТААСасСтТОААААААастАТСВ,ИаАСТТо
ТСТОААААатТов,астоАССАТТАИТААаСАСАСАТССААпАаССААс ТааТастТАСОАТаАСТА
АСАТОСАСССТОТасСАТАСТаСААССТАТТАСТОТаСТоОСААТСОССТОСТТАТСО,ССасАААТОС ваАСТАССАСТАСТАСЯСТАТИаСАТО ТО ТОСОСССАА,СасАССАСааТТАСТаТ ТТ СААасСОоавА зо авосасвдасавдатсасатасоваАтстассавАаа,асАааСАасСОАТАТССАСАтОодСсаТасАато
СсоСстТАСТТСАСТІ ТОСасСАТСОССТОСОСОаАТСОСаОТТАССАТТАСАТОССОЯСаСОаТСАСАЦСИСТ
АтТоСсавААТОАТСТОСсСОАТОсСтТАСсСсАДасСсАаАлаССа,аавАААаВСТоСтТАлаСаТсстоСАТСТАСа
СсСАаСТоСАСССТОаСАаАлстовсАстассстосссатттсаа,ааСАстастоСссатАСс,оАат
ТТАСТСТТАСААТТАССАССССТаСАаССАСААСАТТТТаСААСТТАСТАСТИАТТТаСАССАТААТА з5 АТтПтоеСссстазаосттсоатодаваСАССААДааТацпАаАТСсААААсАа,соАассасСАТоСААИТт
ААТаТАТССССССССОаТтАССТТОАСААТОАСААИСТСАААТИСААССАТТАТССАТИТТААДСаасСА
ААСАССТСОТОАСССТТСТоСАСТОТТОССТООСССтТАСТААлосСсстттасатастоатаатТАСсТо сатассатеастоасттаттТАСстотстстсатаАсСсатсасст ТАТААТСТ ТІтасатСАаАТС
СААДААДСАдАСССасстастоСАТАаСОАТТАСАТЯААТАТОАСТОСАСОССОСССтТааССССАСА
АапАААСАСТАССАаТасСссСтТТАСасСАССАССТАВАвАттоасСстасстТАтТоасАаССаАаТаАААТ
ТТСТАСАТСАаСТОАТастосСасСсСтТАТСАаСАвОСАСАСААТСААСТТТАСААТаАлаСТОаААС ставатооСАаАвААсАатТАСаАСаТтттапАСАААСсасса,аавваССсАвАтоСстадаАдтасас вапААдаССпАпААСОсААпААТоСТСААаААдаасССТаТАСААСПАаСТТСАААААСАСАДААТОаС стадсасатАСТСТОАвАТоааСАТаААа,асаСсАаСа,цАаАСссАааСААдаваТСАСаАтасст тТатТАТСАДОСОаССтТадДатАСАаССАСААДасАСАССТАТОАСОСССТоСАСАТаАСАСаСАСТОСС
СССАСОСТАС (5ЕО ІО МО: 61)
Конструкція 1Т0ЕЗ С0О28 АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом; СОК підкреслені)
МАГ РМТАГІ І РІ АГ І НААВРОМТІ КЕЗОРМІ МКРТЕТІ ТІ ТСТУБавЕ5І ІМАВМОУВУМВОРРОа
КА ЕМ АНІЕЗМАЕКОМВТ5І КОВІ ТІЗКОТЗКБОУМІ ТМТММОРМОТАТУУСАВІРСУСССМООМНУУ ссмоумсостт"утуззасваза,васзасасйезрІОМТО5РББІ БАБІ ЧОВМТІТСВАБОСІВМОЇ С
М УООКРОКАРКАІМА5ЗОТ ОБОУРЗАЕЗОЗОЗаИТЕНТІ ТІЗ5І ОРЕОБРАТУМСЇ ОНММЕРУТЕСОС
ТКУЕІКВАААІЕУММУРРРМІ ОМЕКОМИ ПІНУКОКНІ СРОРІ ЕРОРБКРЕМ/МІ МУУМаСМІ АСУБИ МТМ
АРІРМ УВЗ5КАЗА НЗОУМММТРААРОРТАКНУОРМАРРАВСЕРААМУАЗАУКЕЗАЗАВАРАМООСОМ
ОЇ УМЕЇ М САВЕЕМОМ ОКАВЕВОРЕМОСКРАВКМРОЕСІ УМЕЇ ОКОКМАЕАУЗЕСМКОаЕВНАНО канраїгмоавІ ТАТКОТМУрАЇ НМОАЇ РРА (5ЕО І МО: 62)
Конструкція Л0ЕЗ СО28Т ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
АТОССсСАСТОСССОЯТААСТОСТСОТОСТОСТОССЯаТТОбСсСАТТаСТОСТОСАСОЯаСсСсасАСсасс сасАдОТТАСТТТаААсСсСАстотасАССтТатАСтТастаААасСссСААССОаАОАСАСТОАСАСТСАС во ататАСсадатсдатас тост аАТСААСсасСАдасАатТасИасСа!тсАаастааАТСАсасСААССС сстасСААСаСТоТапААТаасСтТСастСАСАТАТТСАССААТаССпААААААастАССОаасАСАА
СССТаАААТСССОССТаАСТАТТ ТССААДОСАСАСТТСТААОСОТСоТоАОСИТастасСтТаАССАТОаАСС
ААСАТОСАаСсСсСОваТапйАСАССассАССТАТТАСТаСОСААвААТОоССТОаОИатТАтТаатТасаААТОа стТОАСТАССАТТАТТАТОСОАТОаОСАТО ТО ТСаСсСсСайСААааСАСААССОаТААСааТтсТСААасСась тасвавадсастодссвасассвАасастосавсАаастаасаасСТоСпАСАТТСАЧАТаАСССААДА сссс,атосАд,асстатоСсасСсАа,аоСстасаАвАТАВАаТОАСААТсАСататАаАасСТСсССАДа вОАТААСАААТОАТоТосоатасТАТСАССАСАдаСССайСАААаСССССААААвастТАТАТА тастТАатТАатТАСАСТаСсАатотТавАаТ ост оССОАТТТсАвоатТАа,аСссастоСсаатАСАаАИтТ
ТСАСССТСАСОАТААДаСТСАСТОСАИаССтТалОсАТТ ТСИСААСОТАСТАСТаАССТОСАССАСААС 1 ААТтттОоСсСстТааАСТІ ТсССОсССсСАа,СОааСАССААд,ОТасхХлаАгтТСАдаАлсасосастаССсСтТТаАТА
АТВААДААСТСАААСОСААСААТСАТТСАСОСТаААд,СааСААдасСАССТОТИатТоСОаТСАСССсТТаТтто сстТаатТосСАТССАДОССАТТСТОСОаТаттастостаатасатавАаатостса,асттатТАСТОСТоТ есстсатсАсСатоасСТТТАТААТСТТСТаваттТАСАТССААДААдадАд,осасстастоСАТАССа
АТТАСАТОААТАТаАСТОСАСОССОСССтТОаССССАСААСОАААСАСТАССА,ССТТАСОСАСС
АССТАСАаАТтттоаСстТасстТАТооОдасСсСаАаТОАААТТТТСТАаАТСАОССТаАТасСстооСасст
АТСсАаСАпасАСАСпААТСААСТТТАСААТаАаСтТаААСсСсТОВСатоаСАСАпААдаАаТАСОСАСОТ ттацаАСАддСсасСсассвасСсаАвАТОСТаАсАтТааасав,саААдаССоАпААапААСаААТССТСА
АВААСИССТатАСААССАасСТТСААДАААаАСААААтТассТтаАааСаТАСтТоТаАаАТССОаСАТО
АдасассХаСавАвАСссХааСАдасатСАСаАтаасСтатАТСАсСвасстТаАаТАСАОаССАСА
ААдаОАСАССТАТаАСасСссстТоСАСАТаСАааСАСТасСссСсССАСОСТАС (5ЕО ІО МО: 63)
Конструкція 10ЕЗ СО28Т АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом; СОК підкреслені)
МАГ РМТАГІ І РІ АГ І. НААВРОМТІ КЕЗОРМІ МКРТЕТІ ТІ ТСТУБавЕ5І ІМАВМОУВУМВОРРОа
КА ЕМ АНІЕЗМАЕКОМВТ5І КОВІ ТІЗКОТЗКБОУМІ ТМТММОРМОТАТУУСАВІРСУСССМООМНУУ 285 амрумусоаттуУтуззасвозассаавИаСеОЮМтТО5РББІ БАБІ аОрАМТІТСВАБЗОСІВМОЇ С
М УООКРОКАРКАІМА5ЗОТ ОБОУРЗАЕЗОЗОЗаИТЕНТІ ТІЗ5І ОРЕОБРАТУМСЇ ОНММЕРУТЕСОС
ТКУЕІКВАААГ ОМЕКОМО ПІНУКОКНІ СРУОРІ ЕРОРБЗКРЕМ/МІ ММУМОСМІ АСУБИЇ МТМАРІТЕМУВЗК
ВЗА НЗОУМММТРААВРОРТАКНУМОРМАРРАОЕРААМАЗАУКЕЗАЗАВАРАМООСОМОЇ УМЕЇ МІ С
АВЕЕМОМІ ОКАВЕР!ОРЕМСИССКРАВКМРОЕСІ УМЕГ ОКОКМАЕАМЗЕІЄМКОєЕВАевСсКИнратімо зо а 5ТАТКОТМОАЇ НМОАЇ РРА (5ЕО І МО: 64)
Конструкція Л0ЕЗ СО8 ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
АТОССсСАСТОСССОЯТААСТОСТСОТОСТОСТОССЯаТТОбСсСАТТаСТОСТОСАСОЯаСсСсасАСсасс сасдаспТтаАСАСТСАдавААТСАСсСЯаСССаТАСТастаАААССтТАСТОаАаАСССТОАСАСТадс тОесАССОСОТОТоТОСОаТТоТоТотТОаАТТААСаСтТоаААТОСОсСТОатаАааттасАТАСОССАасстТ з5 сСАсааААдсастотаавАд,атааТаСССАСАТТТТСТОСААСсасСсСсоаАаАдАаАасСтТАСАС,ОСАСТА аТСсТаААаТССАСАСТТАССАТТТОСААДАСАСАСААДИСТАААТСАСАСИаИТтаатаСтТаАСААТИаАСА
ААСАТОСАСССОваТтОАТАСТастТАССТАТТАТТаТОСССЯСАТТОССОСОЯСТАСОСаСО,асСААТа ссаАСТАТСАСТАТТАТОСТАТОСАТОТСТОСОССаСАвасаАСсСАСТОатТАсСсОостТа|атосАаСас сваатоатасСсада,аСосвАасатааАасасАа,ассосатаатовсававАатТаАТАТТСАСАТаАСССАСА ассстТАеСстТоттсосастсттавасоАтТАвАатСАССАТСАССТОССОСасстТоТСАДОСС
САТССОСААСОАтТоттасАтааТтАТСАаСАвААаСсСсСааСААСасСАССАААААСаТастаатстАС вСАТСААДаСАСССТаСААТСОТОСОСООСТОССОТоОССсСОват о стат стастааставоАССОАатТ
ТТАСТСТОАСТАТТ ТТ ТОССТаСАаССТОАОпАСТТТасСтТАССТАСТАТТатТСТаСАССАТААСА
АСстТтоссСстТасАасатсавсасСАсааТАСОАААаТтавАААТТААИ,аСОоСсасСса,асСасссСстТатосСА
АСТОСАТТАТаТАТТТСТСТСАТТТТатТоССАСТаттосТасСсССасСстАААСССАСААСТАСТОСОСЯ
СаССССпАССасССААСТоССасСАССТАССАТСОЯСААаССАСССАттОАасСстТоСадсстаАас
СсАТОТАаАССАаСсАОссСсоаооатаССаТаСАСАСААлДСЯосАстТасаттасстТассаАСАТАТ
АТАТТТаОСОССССТОТаССТОаААССТО ТвОССОЯтпОотТаТастастотстстСаттТАТТАСАСТатАТ тТасСААТСАТСИСААТАСАТССААААСААДа,асоасстас ССАТАаСаАТТАСАТОААТАТОАСТОС
Бо АсассассстасСсссСАСААдапАААСАСТАССАасстТТАСасСАССАССТАаАсАТТоОаСсТасСо тТАТССОСАХ,аСсСаАаТОАААТТ ТСТАСАТСАССТаАТИАСТОССОаССТАТСсАДа,аСА,СасАСАСААТСА
АСТТТАСААТаОДИСТОААССтТасСатСасСАСАСААВАСТАСИАСОТТТТОпАСААдАдСс,ссавасо
СсвАвАТОСТаАОАТОСсСаа,СааААОССОпАвпАДасААваААТСОСТСААСаААаасстаТАСААСадо
СТТСАДДАДАаАСААААтТааставаЧвасиаТАСТоТОАаАтоаСАтТаАдл,ас,вСосаСО,пАпАСИА 5 авСсАдаватсАСаАтТасстаТАТСАСвСасстаАаТтАСАаССАСАААавАСАССТАТОАСИаСС
СТоСАСАТаСАаССАСТасСсСсСССАСОаСтТАС (5ЕО ІО МО: 65)
Конструкція ТО0ЕЗ СО8 АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом; СОК підкреслені)
МАГ РМТАГІ І РІ АГ І. НААВРОМТІ КЕЗОРМІ МКРТЕТІ ТІ ТСТУБавЕ5І ІМАВМОУВУМВОРРОа бо КА ЕМ АНІЕЗМАЕКОМВТ5І КОВІ ТІЗКОТЗКБОУМІ ТМТММОРМОТАТУУСАВІРСУСССМООМНУУ ссмоумсостт"утуззасваза,васзасасєезрІОМТО5РББІ БАБІ ЧОВМТІТСВАБОСІВМОЇ С
М УООКРОКАРКАІМА5ЗОТ ОБОУРЗАЕЗОЗОЗаИТЕНТІ ТІЗ5І ОРЕОБРАТУМСЇ ОНММЕРУТЕСОС
ТКУЕІКВААДАЇ ЗМ5ЗІМУЕЗНЕМРУЄ РАКРТТТРАРАРРТРАРТІАБОРІ БІ АРЕАСАРААДССАУНТНО
ГОРАСОІМІМАРІ АСТСОаМИ І БІ МТ МОМНАМАЗКАЗАВІ НЗОУМУММТРААВРОРТАКНМОРМАРРА
РЕААУВЗАУКЕЗАЗАВАРАМООСОМОЇ УМЕЇ М ФА ВЕЕМОМІ ОКАВОВОРЕМИССКРАВКМРОЕ,І.
МУМЕГОКОКМАЕАУЗЕМКОаЕНАНИКаИТнораі мові зТАТКОТМОАСНМОАЇ РРА (5ЕО ІО МО: 66)
Конструкція 885 С028 ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
АТОССсСАСТОСССОЯТААСТОСТСОТОСТОСТОССЯаТТОбСсСАТТаСТОСТОСАСОЯаСсСсасАСсасс сасАаАТССАСсТТастТавААТСАОСЯСОСОЯСсОЯТатастасасоСсасатА,асАасСсСсТАвАСТат 11 сСАТаОСОТОЗСОТСТааСтТТСАСАТТСААСААСТАСОСасСАтТасСАСстава тасаАдСАааоосоСО вАААСССТТТасАатасиатассатадтстаатАСаАСацАТСТААТаАСТАТТАСЯсАСаАТОС татаАддасасААасГСАССАТСТОССОСОпАСААТАССАААААТАТаСТОТАССТОаСАААТОААСТ
СсАСТСАСОСССсасАТОАТАССЯССЯСЯатсТАСТАТТОСЯСТСОСТоАСсОасАТТОаСТО ТОИССсССО,аСса
САТТССАТТАСТОЯСОСАСАСсСатАсоСстастаАСАаТАТСААО,ССЯСАасассассастотаовсс асосасосаАдтотассасвассеавААдатаАвАТТаТаТТаАСАСАаТтсТоССОАТАСССТОаТСАС тТатТсАссСссаСпАаААдаасСААС,астаАааттасСАвАаСАдасСАатСАаТатстсттстТтттст васстаТАТСАИСААДАААССАваТСАпаСАССАТСТСТОСТОАТТТАСОИаттТассСАаСАСАСОаИ ссасстаасСсАТТоССаАСсАааатсототТасадласааАтТоТаваАССОАТТТТАСССТОаАСААТТА сссеасттасдассСспААдаАсттаатАТат тТАСТаТассАаСАСТАСО,СпААДаспАСАССТТТСАС
АТтттасосС,апасСАССАААСТоОсАТАТААААСЯаСсаСАаССаТссСАТТаААСТААТОТАСССАССА
ССТТАТТТОСАСААТОААААИаТССААТОСТАССАТТАТТСАСОСТСААпИапАААССАТСТСТОТОСА дасостотаттосоСсааССССТоСАААССАТТСТаСЯТОаСТОСТОИатстовасцвалиаттста асстастАТТСТоТаСстТоатОАСТаТаттаСАТТСАТСАТТТТСоТаОасСТаАаАТСОСААДААСААаССо
ССстТасСстТоСАТАЯСОАТТАСАТаААТАТаАСТОСАСОЯССЯаССоСТОаССССАСАДасАААСАСТАС сСАПБВССТТАСаСАССАССТАВАСАтттсастаСсСтТАТССЯСОАаССОАатТадААТТ ТТСТАСАТСАСС тТОАТаСтТоССОасСсСтТАТСАаСАцИасАсСАаААТСААСТТТАСААтТадастОААсСстаастоасСАаА вААСАСТАСОАСа ТТ авпАСАААсСассвоавассвАаАТоСстаАвАто,соапавААдаССОАаА
АСОААПААТССТСААПААСасстатТАСААССАаСТСАААААпАСААААтТасотТалааосаТАСТ стадвАдтовасАТаААа,асаСсАа,аСсавАаАассвАаеСААдасатСАСсаАтТасстаТАТСАССасСс тТОАатАСАДасССАСААДааАСАССТАТОАСаСССтТоСАСАТаСАаСвСАСТаСССССАСОСТАС (ЗЕО ІЮ МО: 67)
Конструкція 885 С028 АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
МАГ РУТА І РІ АГ НААВРОІОЇ МЕЗО УМОРОВБІ ВІ ЗСМАБИЕТЕКММаМНУУВОАРС
КОГЕМУАМІМУуУразмМмЕУУсрРУКОаВЕТІЗАОМОЗКММІ М ОММ5І ВАООТАУМУСАВЗИІАМАСАБО з5 УмсОостіуту5засаазасвсоБасвиааеЕМІ ТОЗРОТІ ЗІ ЗРОЕКАТІ БСВАБЗОЗУЗЗЗЕЇ АМ/МО
ОКРООАРБІ ПИУМАЗАВААСІРОВЕЗИаЗаЗаИтОвЕТІ ТІЗВІ ЕРЕСЕЄСМЕМСОНУСЕТРЕТЕРОРОТКМУЮ
ІКВАААІЕММУРРРМІ ОМЕКОМО ПІНУКОКНІ СРУРІ ЕРОРБЗ5КРЕММІ УММОСМІ АСУБІ І МТМАРІЕ
МУВАЗКАЗВИ НЗОУМММТРААВРОРТАКНУОРМАРРАВОРААУАЗАУКЕЗАЗАВАРАМООСОМОЇ УМ
ЕМ САВЕЕМОМІ ОКАВаЕВОРЕМОССКРЕАЕВКМРОЕСІ УМЕЇ ОКОКМАЕАУЗЕІЯМКОЕНННОКИНО агмМосбІ5ТАТКОТМОВАЇ НМОАГРРА (5ЕО ІО МО: 68)
Конструкція 885 С028Т ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
АТОССсСАСТОСССОЯТААСТОСТСОТОСТОСТОССЯаТТОбСсСАТТаСТОСТОСАСОЯаСсСсасАСсасс сасАаАТТсАаСсТостТааАд,атсАасатастаасатасттсадасссавАса,астооСстТасаоАСТОТ сттататааСАдаСавдпАТТТАССТТТААСААСТАТааСАТасСАСТОООаТада,ассАаасосостоа
ААААСОЕаАСстТавАаатасатта7астатоаАтстааТАСсаАСсавТССААСаААТАТТАТаСССаАТОСТ атТаАдАсСапАСасТТТАСААТСТСАСаСаАТтТААСТСАААСААСАТаСТаИтАССТасСАААТОаААСТО тотасаСсасСстаАТаАСАСТаССОсТаТАТТАТТаСОЯСТСООСОСАатастатс,ассатосаСдасхаасА ттад4дтТтАтТасавасСААсасвАСсстстТадсАаатаХатоСс,асАасоссевАааатсотастасА сассастотастосасоАваСАасСОАаАТСаТтСсТАСССАСТСТОСТОАСАСАСТатсСАСТа тосбоСтапТААААдааСсСАСАСсТатоттатТАсАааСатосСАсАаСсатттосАааттостосттас
АТаатТАТСААСАААААСССовсасАааасСТССААласта,астаатотАсатасосаассассввис с,аСАдааСАТСССТаАТАССОСТТ ТАасСсатотасоХаС,савАСапАСТТСАССТТаАСААТАТСА сасотапААСССОаААпАСТТСОСОААТОТГПТАТттТаСсСАаСАСТАСаспААаААСТОСАТТСАССТТ тваассСсаваААСОдАастТАаАСАТСААсСАаавдасСАаСАассстоаАСААСОАаАААТССААТОоа
ААССАТТАТССАТИаТаААлаСасОАААСАТСТСТаСССТТСАССАТТОТТОоСсСтТОааАСССАасАдас стттаеасатпстоатосатоатассовсасатстаасттаТТАСстооСстоСстоатТАСАСТСаСс
СТТСАТААТСТТ ТПТОСИТтТАСАТССААДААСААаССассттаст ССАТАССОАТТАСАТОААТАТИаАС тосАс,асса,ассстасССССАСААСИАААСАСТАССАасстТАСаТсСсАССАССТАаАсАТТтаст
ЄоСстТАТССсСОАаССОАаТалААТТТТСТАЧАтТоАаастадтастоосасстАТсАаСАа,аацАСАаА 60 АТСААСТТТАСААТОАДаСТаААсСстасатоаСАпАпААпАаТАСаАС,а т ТТасАСАААСаССо свасСбаАвАТОСТОАсаАтТасасаааААаССОАаААаспААаААТоСТСААаААаасстТатАСАА
СОАаСТТсСААДАдААвАСААААТаасСстаасвасСиаТАСТтотаАХаАтсавСсАтаддасассаасцадо
АсОАвасСсААвастСАСсаАтаасттатАтТсАаавасстаАаТАСАасССАСАААаСАСАССТАТаАС
ССССТоСАСАТИАСАЧОаСАСТаСССССАСОаСтТАС (5ЕО ІО МО: 69)
Конструкція 885 С0281 АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
МАГ РУТА І РІ АГ НААВРОІОЇ МЕЗО УМОРОВБІ ВІ ЗСМАБИЕТЕКММаМНУУВОАРС
КОГЕМУАМІМУуУразмМмЕУУсрРУКОаВЕТІЗАОМОЗКММІ М ОММ5І ВАООТАУМУСАВЗИІАМАСАБО умаості мтибвасаосзаасавациосйоЕ ІМ ТО5РОТІ БІ 5РЕЕКАТІ БСВАБЗОБЗУ5ЗЗЕЇ АМ/МО
ОКРООАРБІ ПИУМАЗАВААСІРОВЕЗИаЗаЗаИтОвЕТІ ТІЗВІ ЕРЕСЕЄСМЕМСОНУСЕТРЕТЕРОРОТКМУЮ
ІКВАААІ ОМЕКЗМО ТПІНУКОКНІ СРОРІ ЕРАРЗКРЕМ/МІ МУУМаСМІ АСУ ЇЇ МТМАРПЕУУВЗКАЗА
ГЕН5ОУМММТРААВРОРТАКНУОРМАРРАОЕРААМАЗАУКЕЗАЗАВАРАМООСОМОЇ УМЕЇІ МІ а АВЕ
ЕМОМ ОКАВО ВОРЕМОССКРЕАВКМРОЕСІ УМЕ ОКОКМАЕАУЗЕІСМКОЕНАННСКИаНнОИІ ОСІ 5Т
АТКОТМУОАЇ НМОАЇГ РРА (5ЕО ІО МО: 70)
Конструкція 885 СО8 ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
АТОССсСАСТОСССОЯТААСТОСТСОТОСТОСТОССЯаТТОбСсСАТТаСТОСТОСАСОЯаСсСсасАСсасс сасАпАТАСАеСсттаТатссААтосвотасосососавостатасАаа,асстасасаСАа,аосстасциастт стаессестааоСсдасроаАТТТАССТТСААВААСТАСОСавАтТасАТтТасатСасСАвасСАсосСо вСАдАсСассттваатасаата7САаатАтТтапТАСаАСааСАСТААСОАаТТАТТАТОаСОАСССо сатаААсапААспа ТТ тТАСТАТТТСААСАСАТААТАИТААВААСАТИ ТТатАТСТОаСАААТОААСАС тостТОАвдасааАСЧАСАСТаСТССОЯТатАСТАСТОТаОСТСОСТОСОЯООСАТСЯСТОТОССАаОССОвИС
СсттаАсСстТАСТасОоатсАассаосАасастоатоассаттаатссосососсоатоатоСсацдАса длассестоссассассаСоааАТСАВАААТСОТТСТТАСТСАсСАатТоССаАатТАСсаТстатостта тотос,вацдАаАААААаССАСАСстаАд,СстасСсвАасССсТСАСАИТСАаТААаТтТсСТТСАТТОСТОС сстТаатТАССАССАААААСсСассвсасАасвассссєтюсєстастТАТСТАСОЯТОИ,оСстотТАаасАаАас сассаатАТтоСстТаАсссаттсАааСсапААстТаттоСсаваАСсТаАТТТТАСасСстТСАСВАТСТОС
СсаАТТаСАССССОАсСаАТтовасАТИаТТСсСТАСТИТСАССАТТАТОСААСААСОаСССТТТАССТТ сеастоса,аайпААСТААХаСТТОАТАТТААХСССОЬСЯСТаСТасссттТАаСААСТОСАТСАТОИТАТТТТТ стоАСсТоатТассАатТАТТоСТассАасСссАААССОаАССАСААССССАаСАССТАЧАССТОСТАСТ соСасСстТоССАССАТАаСТТСАСАс,СсСсастадатттоХдавоСАвАвасстатовасстТастТОсСА зо авеСсавАаСсАСТТСсАСАССАсСасасАСТТаАСТТОСАТаТОАСАТСТАТАТТТОСОСТОСАСТОС
СсаппААсстасас,сааТсСТоСстТтатсАСТСИСТТАТСАСАСТОТАТТаСААТСАТАВСААТАСА
ТОоСАДААДадДАаИ,ССасстаСТоСАТАаСаАТТАСАТОААТАТОАСТОСАСОЯСССсоСстТаасСсСсСсСА
СААДСаАААСАСТАССАаССТТАСОаСАССАССТАВАСАТт т ТОСОЯСТаССтТАТСЯСАлаССаАСаТОАА
АТ ТСТАВАТСАССТаАТастоССасстАТСАССАСаспАСАСпААТСААСТТТАСААТОАОаСТаА з5 АСсСсТасСсатТоасСАСАаААСАаТАСаАСаТтттаспсАСАААСсасссасвсасСссАаАтТоСтТалаАТась ссосваддасСаАпААпапААСААТОСТСААСААааССТаТатАСААСИ,АаСТТСААДАААСпАСААААТ састадсасаТАСТотТаАвАтТоавСсАтТадАа,асассАааСоспАвАСсаАааСААдаватСАСИАТа
ЄСстТатТАТСАССасСстТОАатТАСАасССАСАААаСАСАССТАТОАСасСсССТоСАСАТаСАасССАСТ
ВСсССССАСастАа (5ЕО І МО: 71) 40 Конструкція 885 СО8 АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
МАГ РУТА І РІ АГ НААВРОІОЇ МЕЗО УМОРОВБІ ВІ ЗСМАБИЕТЕКММаМНУУВОАРС
КОГЕМУАМІМУуУразмМмЕУУсрРУКОаВЕТІЗАОМОЗКММІ М ОММ5І ВАООТАУМУСАВЗИІАМАСАБО умаості мтибвасаосзаасавациосйоЕ ІМ ТО5РОТІ БІ 5РЕЕКАТІ БСВАБЗОЗМУ55ЗЕЇ АМ/МО
ОКРООАРБІ ПИУМАЗАВААСІРОВЕЗИаЗаЗаИтОвЕТІ ТІЗВІ ЕРЕСЕЄСМЕМСОНУСЕТРЕТЕРОРОТКМУЮ 45 ІКВАААІ ЗМ5ІММЕЗНЕУРУБ РАКРТТТРАРАРРТРАРТІАБОРІ БІ АВРЕАСАРААДИСАМУНТАСІ ОСОБА
СОІМІМ/АРІГ АСТСОаМИ БІ МТ МОМНАМАЗКАЗА І НЗОУМММТРААВРОРТАКНМОРМАРРАОЕАА
УАЗАУКЕЗАЗАВАРАУОСОСОМОЇ УМЕЇ МФВВЕЕМОМІ ОКА ВОРЕМОСКРАВКМРОЕСІ ММЕЇ.
ОКОКМАЕАУЗЕІЯМКОаєЕнАНИаКИТнораї Мосс 5ТАТКОТУрАЇ НМОАЇ РРА (5ЕО І МО: 72)
Конструкція 4Е9 СО028 ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом) 5О0 АТОССсСАСТОСССОЯТААСТОСТСОТОСТОСТОССЯаТТОбСсСАТТаСТОСТОСАСОЯаСсСсасАСсасс сасласта,асадастоатасАавАаатасавСАваААаТАААдаАдА,аосстаатасстстатСАААаИТттА вТТасСААдасСАТСТасаТАТАСТТТСАССООаТТАСТАТАТССАТТОССЯ т ТоСсОСАИВааоСССОсА ссАдасадстасалатавАатавасТдпАТСААСССАААТТСАсСасцвасСАСТААСТАТаСТСААААДО
ГП сСсАсавСАсОааТСАСААтТа,СоССО,паАТАСТТСААТТАасСАССатсСТАТАТааАТСТТАИатТСа 5 астасасСАдаТаАСаАТтТАССсасТатстТАСТАТТаСаСАдавАТСАсССвСааСассСААТТСТаТтттт вАСТАТТаСЬСЯССАасСпААсСАСТОСТОАСсСОТотТоСстТотТаставассосятаатаставадаиас сватосвадсаАХссасастоСОАТАТАатТадАтТаАСТСАААаТоССаАтАаставасАсатТАТСТО тавОпААСаСОаССАСТАТТААСТОТАААТССАСССАСТОСАТТСТОТАТАССТСТААСААСААС
ААТТТОоСТСОСатасТтТАТСАССАААААССсСсацвасСАасССАССТАААСТасСтТТАТАТОСТОСЯССА во асСсАТСАССОМХатососеСатосостАтосаттсаассвоатАстаСАсСавпАСАсАСсТтасто
ТОАССАТСАЛДИТАОССТоСАаааСсТААдаАдтТатоасСАататТАТТАТТОССАасАатАСТТСАаСАСО
АТаТттТАаСсТОосаваСАаОСпААССАдаСтТапАААТАААвАапСАаа,аСстТа7асСсАаСААТовАа,сТаАТИаТ
АСССАССТОСАТАТСТОСАСААТОААААаТССААТОССАСТАТСАТАСАССЯТОААСОпаСАДАСАС стататосСАТСТоСАСТІТТОСССОЯаОсаСсССатстТАААССТІ ТОСТаСИатастастаатаставОсСа алапПстТассСтТаТТАТТСАСТаАСТОСТоАССаТаасСтТ ТсСАТСАТТТТТТОас!ОсТААСАТССААДАА вААДСССИасСстТастоСАТАаССОАТТАСАТаААТАТОАСТоСАСОССОСССтТаВССССАСААОСаАА
АСАСТАССАСССТТАСаСАССАССТАСАХаАт т ТосСсТасстТАТССКАааССВАСТОаАААТТТТСТА вАТСАССТаАТастооСасстТАТСАаСАСапАСАСААТСААСТТТАСААТадДастадАсстаса тоасСАСАСААСАаТАСИАСОТТТТОпАСААдАдса,асс,аспасСаАвАТоСТАвАтТасвавацАА 13 асСспАпАдапААпААТССТСААпААсСассСстТатАСААСИ,АаСТТСАААААпАСААААтТассТаАа ссатАСстотТаАдаАтТОасСАТаААХОсСвеСсвАаСс,аоАЧвАСсАсасСАлацаИаТСАСсАтаастТатАТ
САСОСОСССТаАаТАСАСССАСААДАВОАСАССТАТОДСЯСССТоСАСАТаСАСасСАСТаСССССА
СОасСтТАС (5ЕО ІО МО: 73)
Конструкція 4Е9 СО28 АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
МАГ РУТА І РІ АГ І НААВРОМОЇ МО5БСАЄЕУККРОАБУКУЗСКАБИаМУТЕТОаММІНМУВОАРЕО
СГЕММОСУМРМЗОСТММАОКЕРОСАМТМАВОТ5ІЗТУММОІ ВІ А5ООТАУУМСАВІВНСИМЗУБОУ жмсоатутузБасаосзавасазацвасйеоММтТО5РОБІ АМ5І аЕВАТІМСКЗТОБІІ МТ ЗММКМЕ ГА
М УООКРООРРКИ ІЗМУАБІВЕЗИУРОВЕЗОБОаЗОТОГБАЇ ТІЗ5І ОАЛЕОМАУУМСООМЕЗТМЕБЕСО
СТКГЕІКВАААІЕММУРРРМІ ОМЕКЗМОа ПІНУКОКНІ СРУОРІ ЕРОРБКРЕМ/МІ МУММаСМІ АСУЗИ МТ
МАНІЕМУВЗКАЗАВІ І НЗОУМММТРААВРОРТАКНУОРМАРРАСЕРААУАЗАУКЕЗАЗАВВАРАМООСО
МОЇ УМЕГ М йаАвВЕЕМОМІ ОКАВЕВОРЕМОаСКРЕВКМРОЕСІ УМЕЇ ОКОКМАЕАМЗЕІСМКОЕВВНН еканорасі моді 5ТАТКОТУрАЇ НМОАЇ РРА (5ЕО І МО: 74)
Конструкція 4Е9 СО28Т ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
АТОССсСАСТОСССОЯТААСТОСТСОТОСТОСТОССЯаТТОбСсСАТТаСТОСТОСАСОЯаСсСсасАСсасс сеаСАсатАсАластоатасасАаасвавассцвАааТСАААААл,асоСсавастСАСТТААСаИаттА вСстТаСАдвасСТсСаОасСтТАСАССТТТАССОатТтТАСТАТАТТСАСТОСИа ГТ тТАпАСсАСасСАССтТада
СААССЯАСТОСАаСТасатас,састТавАТТААССССААТАСаСЯИСТаСаАССААСТАСасСссСсСАСААДа
ТТ САДОСССОАатаАСААТаССАСОАСАСАССТОСАТТТОСАСТИаТОаТАСАТИаСАСТТОСАаСС воСсТосАвааТСАвАСОАСАССа,САс,татАстАСсТатасасцААтосасваСааАААСсАсСсаТатат зо ттаА-4стТАСТаваастоАсаасАссаттастаадсса,ататтсоСсавАаосасавасАтотасТвасо саасстоссасосавАа,аоеСааТАсТаАТАТтТаТатаАТаАСТСАаТСАСсСсацвА;СсАаатстта|астаттто
АСТТВаТОАСАдОспаССАССАТАААТТаТтТААААДаСАСССАСПСАССАТТСТСТАСАСАТСТААСААСА
ААААТТТОСТОСССТЯДИаТтТАССАаСАаААдаСССОапАСАСССАСССАААТТаСтТаАтАаСстТавис
САаСАТТСОАСААТСТОСССЯТТОСООСАССОСТІ ІОоОСВОоатТотасототааОАССаАСТТСаТстТ
ТТаАССАТААИАСТСТСТТСАпасСссСсаААпАСаТтоаСАСТАТАСТАТТаТтТСААСАСТАТТ ТТТСТАСС
АТаОТТ ПОСТ ТоООаССАСаСпСААСТАА,аттТапАпАТСААд,аАда,сАаа,аСАаСсТСАТТацСАТААТаАСаАА
СТоОСААТОССАСТАТТАТССАСИТОААДастТАААСАССТО Та ТоССтТоАсосСстТатттосАдасАс
СстТАСТАААССАТТСТОССОСТОТТОСТТатТАСсТоСОоавассТтттОаСАТаТтТАТТОССТТСТТатТО
АСАСТСаССТТТАТСАТТ ТТоТаСОаТтОАСАТССААААдаАдАа,асСасстастССАТАаСОАТТАСАТ пААТАТОАСТОСАСОССЯаСССТаасССССАСААДССАААСАСТАССАасСсСтТТАСаСАССАССТАСА вАТТТСИаСТаССТАТСОССАСССОАаТОАААТТТТСоТАВАТСАОССТаАтТастооСасстАТСАасА вабпАСАСААТСААСТТТАСААТаАлаСТаААсСстасостса,асСАааАапААпАаТАСспАсатттта,апАС
ААдсассасавасСаАвАТОСТаАаАТаасааспаААдаССпАпААдацпААаААТОСТСААаААОс
ССТатАСААСИАасСстТТСААДААДАСАСААААтТаастаааасиа ТАСТСТОАсАтоасаСАтТадАдавсас ,авАаСбапАаАдСсАсаасСААласаТСАСсаАта,асттатАтсАаасвасстаАаТАСАаССАСАААаСАС
АССТАТОАСОСССТоСАСАТаАСАСасАСТаСССССАСастАа (5ЕО І МО: 75)
Конструкція 4Е9 СО28Т АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
МАГ РУТА І РІ АГ І НААВРОМОЇ МО5БСАЄЕУККРОАБУКУЗСКАБИаМУТЕТОаММІНМУВОАРЕО
СГЕММОСУМРМЗОСТММАОКЕРОСАМТМАВОТ5ІЗТУММОІ ВІ А5ООТАУУМСАВІВНСИМЗУБОУ мсоаті уУтиззасасЗасва5ааИасОММТО5РОБІ АМ5І СЕВАТІМСКЗТОБІИ МТЗММКМ А
М УООКРООРРКИ ІЗМУАБІВЕЗИУРОВЕЗОБОаЗОТОГБАЇ ТІЗ5І ОАЛЕОМАУУМСООМЕЗТМЕБЕСО
СТКІ ЕІКВАААГОМЕКОМОИ ПІНУКОКНІ СРОРІ ЕРОРЗОКРЕМ/МІ МММОСМІ АСУБІ І МТ МАРІІЕУМ УЗ
КАЗАГНЗОММММТРАЕВРОРТАКНУОРМАРРАОСРААУАЗАУКЕЗАЗАВАРАМООСОМОЇ ММЕЇ МІ.
САВЕЕМОМ ОКАВОВОРЕМОСКРАВКМРОЕСІ УМЕ ОКОКМАЕАУЗЕСМКОаЕнАНИКИНнОраИї м да 5ТАТКОТМОАЇ НМОАЇ РРА (5ЕО ІО МО: 76)
Конструкція 4Е9 СО8 ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
АТОССсСАСТОСССОЯТААСТОСТСОТОСТОСТОССЯаТТОбСсСАТТаСТОСТОСАСОЯаСсСсасАСсасс сасАдстсАаасттатасасвАаасваластадастТаААААААССАаа,асасстосаттААластато
ТТ ОСАдДДаССАаСОаспАТтТАСАСАТТТАССОЯСсаИатАСТАТАТТСАСТОСЮЯ ТаОДОССАСасССоСтТОАА во сАдапСеаССсТТаААТОасСАтТасаатацсАТСсААТССАААТТоСассасаААССААТТАТОСТСАСАААТ г сАсааСАаАаТаАСААТааССАвпавАСАССТСААТСАаСАСАСТСТАСАТОСАССТОАЛИаССа сСстаАдСатстТаАТаАСАСсАХасСсаТсТАСТАСТИаТОСССОаСпАТСАаСАссасаААдАсАа|ататстто вАСТАТТаССХОСОССАасаААсСсСсТОатадста,;атотстосвавсавсАасасИ,вссатАасс,восаацАас ссасла,асосасссасатасТСстТаАСАТТаттТАТОАСССААТССССАСсСАСТОТОТОСОССсСОаТтада бстапваТтОАпАвАаССАССАТСААТТаСААСТоСАСССАпСАаСАТАСТСТАТАСИТСААДАСААТА
АвААТТТОСТОССОТОааТтТАТСАССАААддасСсасиИТСААССАСССААИатТаТТаАттА,аСставас
АТСААТТСВАСААТоТОССОТОССтТаАтТАсСИтттАасС,асоАа,аСсаатТА,атааААССаАСстОосСа
СсТОАССАТТТСАТСССТТСАсСасСАсСАсСаАСсатавастатаТАТТАСТатТСААСАаТАСТТСАС,САС вАТОТ тот" сасвоСАассадпАСОААдаСсТааАсАТАААла,аСасвассасСАаСАСТСАаСААСАС 1) СсСАТСАТОаТАСТТТТСТСАТТТСОаТСССАСТ ТТ ТСТоСССассСАААСССАССАСТАССОССТОСТОоС
ТтТАССССТОССАСТОССОаСАСССАССАТТаСТТСССААССТОТаТтСАТТа А ОСОССССаААдОасСсТас дадостасса,асХдаваасоастатасСсАСАССсСсасСсастстсАттта|асттатаАТАТСТАСАТТТ саассостттоасСсоаААсстТасосслатататастадассСстТаТТАТСАСОСТТатАСТатАА
ТСАСАСАААСАВАТССААААСААаССасстастоСАТАССОАТТАСАТОААТАТОАСТОСАСаСс асостасСссССАСАДасАААСАСТАССАаССТТАСасСАССАССТАСАСАТТТоасСтТасстАТСО а,вдасспАсТаАААТТТТСТАСАТСАаСтТОАтТа,астосСасстАТСАССАСОСпСАСАСААТСААСТТТ
АСААТОДАСТОААССТООСОСТСасСАпАпАдАдаАдаТАСаАСа ТТ ТТапАСАААСсасСсасвавссовАс
АТоСстТаодаАТОСВсасСа,аосААдасСаАаААааААСААТоСТСААвААсасстатАСААСаАастТТо
ААДАДААСАСААААтТаастаааасСаТТтАСТоТОАваАтоааСАтТадласи7аСссвсАасСоспАсАСадаасА 2го АдасватсАдСсадтаастатТАТСАсваССстТОАатАСАаССАСААДасАСАССТАТОАСассстТоСА
САТОСАЧСасСАСТаСССССАСИасСтТАс (5ЕО І МО: 77)
Конструкція 4Е9 СО8 АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
МАГ РМУТАГІ І РІ АГ І НААВРОМОЇ МО5БСАЄЕУККРОАБУКУЗСКАБИаМУТЕТОаММІНМУВОАРЕО
СГЕММОСУМРМЗОСТММАОКЕРОСАМТМАВОТ5ІЗТУММОІ ВІ А5ООТАУУМСАВІВНСИМЗУБОУ жмсоатіутузза,сасзасва5ааасОММТО5РОБІ АМ5І СЕВАТІМСКОЗТОБІЇ МТЗММКМЕЇ А
М УООКРООРРКИ ІЗМУАБІВЕЗИУРОВЕЗОБОаЗОТОГБАЇ ТІЗ5І ОАЛЕОМАУУМСООМЕЗТМЕБЕИ,О
СТКІ ЕІКВАААЇ ЗМ5ЗІМУМЕЗНЕМРУБІ РАКРТТТРАРЕРРТРАРТІАБОРІ БІ АРЕАСАРААССАМУНТА
СГОРАСОІМІМАРІ АСТСО,МИІ БІ МІТІ МСМНеМАЗКАЗНАІ І НЗОММУММТРААВРЕРТАКНУОРМАРР
ВОРгААУАЗАУКЕЗАЗАВАРАМООСОМОЇ УМЕЇ М ФАВЕЕМОМІ ОКАВЕВОРЕМИССКРАВКМРОЕ з30 аг ММЕГ ОКОКМАЕАМЗЕІЄМКОЕВнАвИаКаИТнораї МОосі БТАТКОТУРАІЇ НМОАЇ РРА (5ЕО ІО МО: 78)
Конструкція 1111 С028 ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
АТОССсСАСТОСССОЯТААСТОСТСОТОСТОСТОССЯаТТОбСсСАТТаСТОСТОСАСОЯаСсСсасАСсасс сасдасТасАаСТоСААвАатсАапАССАсааАСТТаТСсАААССАдасСсАаАСССтТСАасСсСтТТАС з5 стасСАСсССсСОЯтТоАаасСсовадаСТоСАТСАОСТОТООвасттТАСТАСТОСАСАТаСАТАСОАСАасСАТ соСОпТАААсатотавАатТапАТааОсТАСАТАСАСТАТАСТаИТТОСАСАТАТТСТААТОСАТС
ТСТТААВАаТСОААТТАСААТТТСАСТОСАТАСТТСААДАСААТСАСТТСАССТ ТО АААСТОААСТО са,атадссосСавСсТАСАссасСсаета,атАСстТАСсТатасАСаССААа,аАдасАТТАтТааСапвАСТОИТТ
СсОАТАТТОСОСвеСАсасцААастотсатадсАааталастоссасососассасА,асаватасоа атавбАдАдатастосАаоссасасАдаСаАвАТСаТаАТаАсСсСсАсАатостассСАСсАСстТатодатаА стоставОвпАОСпААТСАСАСТТІТОСТОТоСАаСсатотАастоСсатаАСсСАСасАасставасит сатТАссдасАааАдтасСсАасасСсАЧвасасССААвАСТОСТОАТСТАСОДСОаСстТТотТАСссСасастА стасатттосоСасСссСАвАТСоТоСсОсаАдАсСсасатСоадвАСОаАТТТТАСАСТТАССАТСТСТТСА тОеСсАс,астадавАТТТаССаТатТАСТАСТатТСсАОаСАТТАСААДААССТааССССТСАСТТТОСвО аваСОпААСАдДАдатавпАААТТАААСоссасАаа,асСсАастАттадааТаАТатАСССАССССССТАС
СстТаспАСААСОАаАААТССААТааСАССАТСАТССАСОТТААдасатАдасАСТИТтатосстСАСС
АСсСТоТтТоОССТОасССтТАасСААХасСсСАТТСТОСОЯТОоСТОСТООСТоСсТтеаасАсвосатастависстОо
СТАТТОССТОоСТОСТТАССИ,ТТасСсСтТТТАТСАТАТ ТТОСОСТСАСАТССААДААпАДаСС,сСстТаТст
ССАТАССаАТТАСАТаААТАТаАСТОоСАСЯССОСССтТааССССАСААСаАААСАСТАССАСССТ тТАСаСАССАССТАСАааАатттоаСсТассСстТАТССВСОоДассаАаТаАААТТТТоТАаАтТодастОАТас тоССаССтТАТСАССАСОапйАСАСААТСААСТТТАСААТаЛдОеСстТОААсСстТасатаСАаАСпААсАс тТАСЯАСОаТТТТОпАСАААСОССОСвоаСсСссАаАтТоСстадаАдтТасавс,вавАдаССОпАвпААаадАс
ААТССТСААПСААСаТсста ТГАСААССАССТТСАДАААпАСААААТасСсталасоа, ТАСТО ТаАсаАТ
СсосасСсАТаААцвСОсоаАсоавАвАСоАааСАА,а,аТСАСсаАтаасттаТтАтАа,ацсасстаАаТтАС
АдасССАСАААааАСАССТАТаАСОаСССТоСАСАТИАСАСсИСАСТаСССССАСаТстАа (5ЕО І МО: 79)
Конструкція 11211 С028 АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
МАГ РУТА І РІ АГ І НААВРОМОЇ ОЕБОРОЇ УКРБОЗОТІ БІ ТСТУБО5ІЗЗСАМУМ ТУМІВОНнР скагєеУамінузавтмМРБІ КВІТІВ ОТ5КМОЕ5І КІ М5БМТААОТАУУУСАВОЕОМаСсІ ЕОМ СО во ост УутуУ5Засосаза,саа,а5асаисоЕІММТО5РАТІ 5У5РОЕВІТІ ЗСВАБОБМТТОЇ АМ/МООМРа
ОАРАПІМОАЗТВАТОЕРАНЕЗОЗИаБаТОЕТІ ТІЗБІ ОАЕОРАУУУСОНУКТУ РІ ТЕССОТКМУБІКВА
ААІЕУМУРРРМІ ОМЕКЗМО ТПІІНУКОКНІ СРУОРІ ЕРАРЗКРЕММІ УУМОСМІ АСУ МТУМАРТЕМУВ
ЗКАЗВІ І НЗОУМММТРААРОРТАКНУМОРМАРРАВСЕРААУАВЗАУКЕЗАЗАВАРАМОСОСОМОЇ МУМЕЇ М
ГЯаввгЕЕМОМІ ОКА ВОРЕМОаСКРАВКМРОЕСІ УМЕГ ОКОКМАЕАУЗЕСМКОЕВАННОКИНОСІ. хОаІ5ТАТКОТМУВАЇІ НМОАЇ РРА (5ЕО І МО: 80)
Конструкція 11211 СО028тТ ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
АТОССсСАСТОСССОЯТААСТОСТСОТОСТОСТОССЯаТТОбСсСАТТаСТОСТОСАСОЯаСсСсасАСсасс сасдластасадстасСсАасадсХасеавассАавасстаатаААасСССАасССАААСАСтТадасстосА сстатастататосастаатТАасСАТ ТоСсАда,аС,своасСОТАТТАТТаСАСАТаСвАТАСОаССААСА 1 сбобСтТавАААдваставсАаТавАТТаСАТАСАТССАТТАТТСОТВИСТОСАССТАТАИТААСССТТ
СТСТСААаТСТСасСАТТАСТАТТАСТТТасСАТАССТСТААСААТСАСТТТАСТСТОААССТОаААСА стТатТААССОЯССОаССОАСАСсСоСасвТстТАСТАСТОТаОСТАасССсАасСОАаОАТтТАСОсасасАста,ат тТоваАТАСТОСОСсСССАсСаваАСАТТатТСАССаТтсАдасс,сооавосаваСсоаАтотааС,асАа свавАТотТавАаса,аса,ацзвАааастотаАаАТСИаТААТЯаАСТСАсАаСсССАасССАСоСстаТосаТтст стос ООпСОААСасСАТСАСТСОТЯАаСстТатТАсаасСАТСАСАаТтсСтТатТАССАСАаАТСТОвастта
СТАТСААСАААТОССТОСОаСсАсСОеоссСоСсалста,аттаАТТТАТаАСОССТотТАСсаСапОаССАСА садттостассссапстосвастстатсТааСАССОАТТТТАССТТОАСААТСАСТАаСТТ вСАпОаСАСААаАТТТСОСТатаТтТАТТАСТаССААСАТТАТААСАСАТОИ,ССТТТОАСАТТОСОаСО садапААСсСАААдатапАвАТСАААсСаСсассасАаоСсСтТавАСААТАЧААатсСтТААТааОАССА
ТСАТТСАСОТСАААСаСАААСАССТатТассостстєтстаТтоССАааССсСТСстТААаСосстТТо тоесстсотостоатастасоссоататставеостастАТтоСсСстттатаАСАСаСТаасСсСтТТтТА
ТесАТІТТТаСОсТОАСАТССААААдаАдАаСсСасстасТССАТАаСОАТТАСАТОААТАТОАСТОСА сеасс,асоСсТаССССАСААваАААСАСТАССАВССТТАСОСАССАССТАСАСАТтТТОИаСТасСстТ
АтсапвАдаССОпАсСТаАААТТТТСТАВАТСАаСТОАтТастосСассСтТАТСАССАСОпСАСАСААТСА
АСТТТАСААТОДаСТОААССстТОаавосТоаСАаАсААаАаТАСаАСосТТТапАСААдАдсассавасо
СсвАвАТОСТаАОАТОСсСаа,СааААОССОпАвпАДасААваААТСОСТСААСаААаасстаТАСААСадо
СТТСААДДААаАСААААтТааставаЧвасиатТАСТоТОАаАТоаСАтТаАдАл,ссаСоАаСсаАаАСаА васСсААдСасТСАСоАтоасттатАТсА,вОоаССстТаАатТАСАаССАСАААаСАСАССТАТаАСаСс
СТоСАСАТаСАаССсСАСТасССсСССАСОаСтТАС (5ЕО ІО МО: 81)
Конструкція 11211 С0281 АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
МАГ РУТА І РІ АГ І НААВРОМОЇ ОЕБОРОЇ УКРБОЗОТІ БІ ТСТУБО5ІЗЗСАМУМ ТУМІВОНнР скагєеУамінуизавтвмМРБІ КАТІВ ОТ5КМОЕ5І КІ МБМТААОТАУУУСАНВОЕОМааІ ЕрУУМус ості УутУ55асоазасаваБасцосоЕІММТО5РАТІ 5У5РОЕВІТІ БСВАБОБМТТОЇ АМ/МООМРО
ОАРАПІМОАЗТВАТОЕРАНЕЗОЗИаБаТОЕТІ ТІЗБІ ОАЕОРАУУУСОНУКТУ РІ ТЕССОТКМУБІКВА
ААГОМЕКОЗМОТІНУКОаКНІ СРОРІ ЕРОРЗКРЕМУУМІ МУМаСМІ АСУБИ УТМАРІЕМУВЗКАЗНВІ ІНЬ
ВУМММТРААВРОРТАКНУОРМАРРАОРААМАЗАУКЕЗАЗАВАРАМООСОМОЇ УМЕЇ М АВЕЕМОМ
ГгОокКАВаВОРЕМИаСКРАВКМРОЕСІ УМЕГ ОКОКМАЕАМЗЕІЄМКОєЕвАвИаКИаИТнораї мові ТАТКО
ТМВАІ НМОАЇ РРА (5ЕО ІО МО: 82)
Конструкція 1111 СО8 ДНК (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
АТтТааСсСАСТОСССЯаТтТААСТОСТСТОСТОСТОССаТтТаасСАТТаСТСОСТОСАСОосССсасСАСсасСс сасдайпйтТАСсАасттаСАаавААдАла,аСсаассСсааССТОТААААССААДаССАвАСТСТСАСТТТОаАС т еСсАССОСТотТсАасаАасСААаСАТТтоСсАатТасаОсСТТАТТАТТаСАСТТасАТттоОСасАССАТС ставпААдАдвааТТапААТОСАТОСОТТАТАТТСАТТАТАаСО,ИаТАССАССТАТТОСААТОССТСТ
ТТОАДАААаСАСААТСАСТАТТТСАСТОСАСАССТСТААВААССАСТ ТСАИТСТСАААСТаААСТОС атаАСсАсСайССаАСАсАаастататАСТАСТатасСАСаОаСААваААаАТТАТОСТЯВСОСТаТтТо вАТТАТТаСО ССААСасСАСАСТОСТОаАСАСТАТСААДОСОЯИВТтТасАасвосАсвастсвавоа,СавА савддатавдассасавасаАаСОАААТтТатаАТаАСССАаТтстоСАассСАсастатсАататст сСа,апОАвпААСаСАТААСССТОТОСТОССОСсСасСсА,атоАатоСатТСАСсаАсСсвАттас,стоат
АТСААСАСАТаССТОСОЯСАсС,асососСастасСстТаАТСТАТОАСасСссСстТоСАССАСАССААСТОС
Бо тпсососассссаттсХдасСсоаАТСТавААдаСОсаТАСАСАТТТТАСАСТТАССАТСТСАТСАТТОС
АдастаодавАТТТТассататАСТАСТаССАСаСАСТАСААСАчССТОСССТ ТаАСаттовасвО
СапААСААААаТтацпАСпАТТААААпАасСастасттсАСаТтТААСТОААТСАТОТАСТТТА,ТСАСТ тпатасстаТатат ст сССАаСАААасСсСААСААССАСАССАВСАССССаСССТоСААСаССсТас
СоСААССАТСЯССТОССАССоСТОТаАсСТТОАасСассталва7сттатса,асосаХастастацАсцс тТеаСстТатТаСАТАСАСОСАДОааАСТОвпАТТТоОеССтТасСсоАТАТСТАТАТСТаСОЯСАССАСТТИИССастА статеататтТастаСсТсТсАСТОСТСАТСАСаСТатТАСТОТААССАТАСОСААТАСАТССАДА
АвАДаССаССсТасСтТоСАТАаСаАТТАСАТОААТАТОАСТОСАСОССЯССсСстТааССССАСАДасА
ААСАСТАССАИССТТАСасСАССАССТАСАСАТТТСИаСТаССсСтТАТССОСА,СССаАС,ТОаАААТТТТСТ
АвАТСсАДИСТОАтТаСТоССасСсСтТАТСАССАаСсаАСАСААТСААСТТТАСААТОДасталдАсстась во атбаСсдадодАаАдаТАСаАСаТтттавАСАААСЯСССВСавоасосАаАтоСстадсАтаасвасаА аССпАпААСпААСААТОСТСААСААааССТаТАСААСаАаСТТСАААААСАСААААТааЙсСтТаА сесатТАстотаАаАтТосаСАТаАдлд,савасвАсо,пАпАСспсАадвасСААд,асватТСАСсСсАТвастТатА тоАда,саССсТаАаТАСАаССАСААДАСпАСАССТАТОАСаСССТоОСАСАТОСАСОаСАСТаСССССА
СастАс (5ЕО ІО МО: 83)
Конструкція 1111 СО08 АА (сигнальна послідовність виділена жирним шрифтом)
МАГ РУТА І РІ АГ І НААВРОМОЇ ОЕБОРОЇ УКРБОЗОТІ БІ ТСТУБО5ІЗЗСАМУМ ТУМІВОНнР скагєеУамінузавтмМРБІ КВІТІВ ОТ5КМОЕ5І КІ М5БМТААОТАУУУСАВОЕОМаСсІ ЕОМ СО ості УутУ55асоазасаваБасассоЕІММТО5РАТІ 5У5РОЕВІТІ БЗСВАБОЗМУТТОЇ АМ/МООМРа
ОАРАПІМОАЗТВАТОЕРАНЕЗОЗИаБаТОЕТІ ТІЗБІ ОАЕОРАУУУСОНУКТУ РІ ТЕССОТКМУБІКВА
ААЇ 5ЗМ5ІМУЕЗНЕМРУБІ РАКРТІТТРАРЕРРТРАРТІАБОРІ 5І АРЕАСАРАДИСАМУНТВИЇ ОБАСОМ
ІМАРІГАСТСаМИ БІ МІТТ МОМНАМАЗКАЗАВІ НЗОММММТРААВРЕРТАКНУМОРМАРРАСЕААУВО
ВУКЕЗАЗАВАРАМООСОМОЇ УМЕЇ М 2 А!АВЕЕМОМІ ОКАВЕВОРЕМОаСКРЕВКМРОЕСІ УМЕГ ОКО
КМАЕАУЗЕІСМКОаЕНАНИаКаИТнраї мо 5ТАТКОТМОБАЇІ НМОАГРРА (5ЕО І МО: 84)
Людська ЕГТЗ ММ 004119 АА
МРАГАВРраИасСОЇї РІ ЇММЕЗАМІРОС ТТ МОЇ РМІКСОМ' ІМНКММОЗЗУОаКОЗЗУРМУЗЕЗРЕО І ИСА
ГАРОБЗБЗОТУУЕАААМЕМОМУЗАБІТІ ОМІ МОАРОЕМІЗСІ М МЕКНЗЗІ МСОРНЕОГ ОМАСУМЗММІІ КМТ
ЕТОАСЕМИЇ РІОБЕАТМУТІ ЕТУ5ІВМТИІ МТ ААРМЕАКМЕМОВАЇ МСІЗЕБУРЕРІМЕММІ СОБОСЕ
ЗСКЕЕЗРАМУККЕЕКМІ НЕ ЕСТОІАССАВМЕЇГ СРЕСТВІ ЕТІСІ МОТРОТТІ РОЇ РІ КМаЕРІ М/ЛАСК
АУНУМНОаРаі ТМЕГЕМКАГЕЕСМУРЕМЗТУИЗТМАТМІВІ ЕАЕРМ55МАВМО Та ТОЗЗЗКНРБОБА
ГМПІМЕКОРІМАТМ55ЕОУЕІСОМЕЕРСЕЗУВЕКАМРОІВСТУМТЕЗАКЗЕРСЕОКИЇ ОМОУ5ІЗКЕСМН
КНОРОЕМІЕНАЕМОВСАОЕТКМЕТІ МІВВКРОМІ АЕАБАБОАЗСЕБОСУРІ РОМ/ ГМУККООКОРМСТ
ЕЕІТЕСБУМ/МАКАМАКУМЕ,ОМУЗЗ5ОТІ ММЗЕАІКО РІ УКССАМУМ5І СТЗСЕТІ І МЗРОРЕРЕІЮЮМІВЕ
ХАТІВУСІ ГРІМУСТ ГПІСНКУККОРАМЕЗОЇ ОМУОУТОа55ОМЕМЕМУМОЕВЕМЕМОЇ КМЕРРАВЕМІ ЕЕ акмМ а5ЕАРОКУММАТАМСИІЗКТОаУБІОМАМУКМІ КЕКАОЗБЗЕВЕАІ М5ЕЇ КММТОЇ аЗНЕМІУМ Ся
АСТІ БОРІМ'ІРЕМССМООГ І ММ АЕЗКВЕКЕНАТУУ/ТЕІЕКЕНМЕЗЕУРТЕО5НРМЗЗМРОаЗАЕМОЇНР
РБОРОЇІБОЇ НаМЗЕНЗЕОБІЕМЕМОКВАВЇ ЕЕЕЕОІ ММ ТЕЕОІ І. СЕАМОМАКОМЕРІ ЕЕКЗСУНАОІ ААВ
ММ УТНаКУУКІСОРаГ АВрРІМ5ОЗМУУУВаМАВІ РУКМУМАРЕБІ ЕЕСІМТІКОУМ/ МС МУ БЕБІ.
СУММРУРОІРМОАМЕМКТОМОаЕКМООРЕМАТЕЕІМІМОЗСУАБОЗАКАРЗЕРМІ ТЕГ аСОЇ АБАЕЕ
АМУОМУравУзЕСРНТУОМАВРЕЗРЕЕМОГ СГ 5РОАОМЕОЗ5 (5ЕО ІЮ МО: 85)
ДНК з сигнальним пептидом САК
АТОССАСТОСССаТтТААСТОСТСОТОСТОСТОССОЯаттТаССАТТОСТОСТаСАСООССасСсАСаСсо ба (5ЕО ІЮ МО: 86)
Сигнальний пептид САК: МА! РИТА РЕ АП І НААРВР (5ЕО І МО: 87) 5сЕм с45-лінкерна ДНК оессатовАавастососвАа,асасоссвастотасо,авАв,вавоастТоС (5ЕО І МО: 88) 5сЕм 645 лінкер: ВбООСОс5БОСОсОСОо5ОСОО5 (5ЕОІЮ МО: 89) лінкер зсЕм М/пйШОом ДНК аоатстТАСАТССССЬЯСТоОСОСвААд,асоСа,авАда,атТаСпААваТАаТАСАААдСвИасфе (5ЕО І
МО: 90) лінкер зсЕм М/пШому: автзаБакКРОаБИаБавзткКа (5ЕО ІЮ МО: 91) 4-188 послідовність нуклеїнової кислоти (внутрішньоклітинний домен)
АдсСба,ас,аа,абАа,апААпААаСТоСТоТАСАТТТТТАдаСсАасстТттТАТтТала,ааСССаТАСАСАС
ААСАСАСОаАХасААХдаАтТасотатааСста|асСсАаАТТоСсСпсАсаАд,саАас!ссАХдс,сатааатасавАаст
Са (ЗЕО ІЮ МО: 92) 4-188 АА (внутрішньоклітинний домен)
КВОаВАККІ І МЕКОРЕМАРМОТТОЕЕрасСЗСВеЕРЕЕЕЕСОССЕЇ (5ЕО ІЮ МО: 93)
ОХ40 АА
АВРОВІ РРОАНКРРИСОЗЕНТРІОЕЄЕОАВАНЗТІ АКІ (5ЕО ІО МО: 94)
Включення шляхом посилання
Усі публікації патенти та заявки на патент, згадані у даному описі, включені в даний документ шляхом посилання в тій самій мірі, як якщо б кожна окрема публікація, патент або заявка на патент були конкретно та окремо вказані для включення шляхом посилання. Проте, цитування посилання у даному документі не має розглядатися як підтвердження того, що таке посилання є попереднім рівнем техніки для даного винаходу. Тією ж мірою, у якій будь-яке з визначень або термінів, представлених у посиланнях, включених шляхом посилання, відрізняється від умов та обговорень, представлених в даному документі, дані правила та визначення мають переважну силу.
Еквіваленти
Наведений вище письмовий опис вважається достатнім для забезпечення здійснення на 60 практиці даного винаходу спеціалістом у даній галузі. Наведений вище опис та приклади конкретизують певні переважні варіанти здійснення даного винаходу та описують найкращий режим, розглянутий авторами даного винаходу. Проте, слід розуміти, що незалежно від того, як детально викладено наведене вище в тексті, даний винахід може здійснюватися на практиці багатьма способами, та даний винахід слід тлумачити відповідно до формули винаходу, що додається, та будь-якими її еквівалентами.
Наступні приклади, в тому числі проведені експерименти, досягнуті результати, представлені виключно в ілюстративних цілях та не призначені для обмеження даного винаходу.
Приклад 1
Клітини Матаїма, ММ4;11 та НІ 60 (АТСС) та клітини Ео/1 (5ідта-Аїагісп) культивували у середовищі КРМІ1640 (опа) ї- 10 95 ЕВ5 (Согпіпд) ї- 1Х пеніцилін стрептоміцин І! -глутамін (Согіпа) (А10) та підтримували при щільності клітин від 0,5-2,0 х 106 клітин/мл. Для дослідження експресії ЕГТЗ3 поверхнею клітин клітини інкубували з антитілом до БІ ТЗ (ВО
РПпагтіпдеп) або антитілом до ізотипового контролю ДС! (ВО РІагтіпдеп) у забарвленому буфері (ВО РІНагтіпдеп) протягом 30 хвилин при 4 "С. Потім клітини промивали та повторно суспендували у забарвленому буфері з пропідіум йодидом (ВО РНаптіпдеп) перед накопиченням даних. Експресію РІ ТЗ на клітини-мішені показано на фіг. 1.
Приклад 2
Плазміди, що кодують промотор 17, конструкцію САК та послідовність, що стабілізує бета- глобін, лінеаризували шляхом ферментації 10 мкг ДНК с ЕсокКіІ та Ватні (МЕВ) протягом ночі.
Потім ДНК ферментували протягом 2 годин при 50 "С з протеїназою К (ТПепто Різпег, 600 од./гмл) очищували за допомогою фенолу/хлороформу та осаджували шляхом додавання ацетату натрію та двох об'ємів етанолу. Потім пелети висушували, повторно суспендували у воді, що не містить РНКази/ДНКази, та виражали кількісно із застосуванням МапоЮОгор. Потім застосовували один мкг лінійної ДНК для транскрипції іп міго із застосуванням тпМЕБЗАСЕ тМАСНІМЕ 77 Ойга (Тпегто Різпег), дотримуючись інструкцій виробника. РНК додатково очищували із застосуванням набору МЕСАСієаг (Тепто РізПпег), дотримуючись інструкцій виробника, та підраховували за допомогою МапоЮОгор. Цілісність мРНК оцінювали із застосуванням рухливості на агарозному гелі. РВМС виділяли з лейкопаків здорового донора (Нетасаге) із застосуванням центрифугування для підвищення щільності фіколл-пак відповідно до інструкцій виробника. РВМС стимулювали із застосуванням ОКТЗ (50 нг/мл, Мінепуї Віоїес) у середовищі К1ТО я І/-2 (300 МЕ/мл, РгоІеиКкіп?, РготеїйеизУ ТНегареціїсв апа Оіадповіїс5).
Через 7 днів після стимуляції Т-клітини двічі промивали у середовищі Орії-МЕМ (Тнепто РізНег
Зсіепійс) та повторно суспендували за кінцевої концентрації 2,5х107 клітин/мл у середовищі
Оріі-МЕМ. При електропорації застосовували 10 мкг мРНК. Електропорацію клітин здійснювали із застосуванням системи Септіпі Х2 (Нагуага Аррагаси:5 ВТХ) для доставки єдиного імпульсу 400
В протягом 0,5 мс в 2 мм кюветах (Наг/агі Аррагайше ВТХ). Клітини одразу ж переносили в середовище К10 - 1-2 та залишали для відновлення протягом 6 годин. Для оцінки експресії
САВ Т-клітини забарвлювали за допомогою РІ Т--3-НІЗ5 (Зіпо ВіоІодіса! пс.) або біотинільованого білка І (Тпепто 5сіепійс) у забарвленому буфері (ВО РІНаптіпдеп) протягом 30 хвилин при 4 "С. Потім клітини промивали та забарвлювали за допомогою апіі-НІЗ-РЕ (Мінкепуї Віоїес) або РЕ 5бігеріамідіп (ВО Рпагтіпдеп) у забарвленому буфері протягом 30 хвилин при 4 "С. Потім клітини промивали та повторно суспендували у забарвленому буфері за допомогою пропідіум йодиду (ВО РПпагтіпдеп) перед накопиченням даних. Експресію РІТЗ3 САК в електропорованих Т-клітинах показана на фіг. 2.
Приклад З
Для оцінки цитолітичної активності в електропорованих РІТЗ3 САК Т-клітинах ефекторні клітини культивували з клітинами-мішенями при співвідношенні Е:Т 1:1 у середовищі К10. Через 16 годин після спільного культивування надосадкові рідини аналізували шляхом І итіпех (ЕМО
МіШіроге) та життєздатність клітин-мішеней оцінювали шляхом проточного цитометричного аналізу поглинання пропідіум йодиду (РІ) СОЗ-негативними клітинами. Цитолітична активність електропорованих САК Т-клітин показана на фіг. З, а утворення цитокінів показано на фіг. 4.
Приклад 4
Вектор переносу лентивірусу третього покоління, який містить різні конструкції САК, застосовували разом з МігаРоуег І епіїмігаї РасКадіпуд Міх (Ше ТесПппоЇодіе5) з утворенням лентивірусних надосадкових рідин. Коротко, перетворювальна суміш була утворена шляхом змішування 15 мкг ДНК та 22,5 мкл поліетиленіміну (Роїузсіепсе5, 1 мг/мл) у 600 мкл середовища ОрімМЕМ. Суміш інкубували протягом 5 хвилин за кімнатної температури.
Одночасно 293 Т-клітин (АТСС) трипсинізували, підраховували та усього 10х106 клітин 60 висіювали у посудину 175 разом з перетворювальною сумішшю. Через З дні після перетворення надосадкові рідини збирали та фільтрували через 0,45 мкм фільтр, та зберігали при -80 "С до застосування. РВМС виділяли з лейкопаків здорового донора (Нетасаге) із застосуванням центрифугування для підвищення щільності фіколл-пак відповідно до інструкцій виробника.
РВМС стимулювали із застосуванням ОКТЗ (50 нг/мл, МіпМепуї Віоїес) у середовищі К10 « 1-2 (300 МЕ/мл, РгоїІеиКіпФ, РготеїШйеив5Ф ТПпегарецшіїйс5 апа Оіадповіїс5). Через 48 годин після стимуляції клітини трансфікували із застосуванням лентивірусу при МОЇ - 10. Клітини витримували при 0,5-2,0 х 106 клітин/мл перед застосуванням аналізів активності. Для оцінки експресії САК Т-клітини забарвлювали за допомогою Б Т-3-НІЗ (біпо ВіоіІодіса! Іпс.) або біотинільованого білка ЇЇ (Тпепто бсіепіййс) у забарвленому буфері (ВО РІагтіпдеп) протягом 30 хвилин при 4 "С. Потім клітини промивали та забарвлювали за допомогою апіі-НІЗ-РЕ (Мінкепуї Віоїес) або РЕ 5бігеріамідіп (ВО Рпагтіпдеп) у забарвленому буфері протягом 30 хвилин при 4 "С. Потім клітини промивали та повторно суспендували у забарвленому буфері за допомогою пропідіум йодиду (ВО РПпагтіпдеп) перед накопиченням даних. Експресію ЕТЗ САК в Т-клітинах від двох здорових донорів показано на фіг. 5.
Приклад 5
Для оцінки цитолітичної активності у трансфікованих лентивірусом РГТЗ3 САК Т-клітинах ефекторні клітини культивували з клітинами-мішенями при співвідношенні Е:Т 1:1 у середовищі
К10. Через 16 годин після спільного культивування надосадкові рідини аналізували шляхом
Гитіпех (ЕМО МіПіроге) та життєздатність клітин-мішеней оцінювали шляхом проточного цитометричного аналізу поглинання пропідіум йодиду (РІ) СОЗ-негативними клітинами. Середня цитолітична активність трансфікованих лентивірусом САК Т-клітин від двох здорових донорів показана на фіг. 6, та утворення цитокінів шляхом САК Т-клітин від кожного здорового донора показано на фіг. 7.
Приклад 6
Для оцінки проліферації САВ Т-клітини у відповідь на експресуючі РІ ТЗ клітини-мішені, Т- клітини відмічали за допомогою СЕБЕ перед спільним культивуванням з клітинами-мішенями у співвідношенні ЕТ 1:11 у середовищі КТО. Через 5 днів проліферацію Т-клітин оцінювали шляхом проточного цитометричного аналізу розведення СЕБЕ. Проліферація РІ ТЗ САК Тт- клітин показана на фіг. 8.
Приклад 7
Для оцінки активності проти лейкозу іп мімо ЕРІТЗ3 САК Т-клітини генерували для застосування в ксеногенній моделі ГМЛ людини. Експресія САК різних ефекторних ліній, застосована у ксеногенній моделі ГМЛ людини, показана на фіг. 9. Мічені люциферазою клітини
ММУ4;11 (2х106б/тварина) внутрішньовенно вводили самицям мишей МО 5-б-тижневого віку.
Через 6 днів бх106 Т-клітин (75095 САК»х) в 200 мкл РВ5 уводили внутрішньовенно та пухлинне навантаження тварин вимірювали щотижня із застосуванням біолюмінесцентної візуалізації. Як показано на фіг. 10, ін'єкція Т-клітин, які експресують 10Е3-С028Т та 885-С028Т САК, значно знижувала пухлинне навантаження у всі оцінювані моменти часу. Як показано на фіг. 11, це додатково підтверджувалося аналізом виживання, коли ін'єкція Т-клітин, які експресують 10Е3-
СО028Т або 885-С028Т САК, забезпечувала значну перевагу виживання серед тварин, які одержувати клітини з імітованою трансфекцією або САК Т-клітини, які експресують конструкції 103-СО028 або 10Е3-СО8. Значних відмінностей між конструкціями 10Е3-СО028т та 885-С0281 з точки зору ефективності не спостерігали.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105» Атвреп Іпс.
ВАККЕБВ, АїЇісе
ХИМЕРНІ РЕЦЕПТОРИ До ЕІТЗ ТА СПОСОБИ ЇХ ЗАСТОСУВАННЯ «130» А-2065-М/0О-РСТ
«1405 РСТ/0517/25613 «141» 31.03.2017 «150» 15 62/317 219 «1515 01.04.2016 «160» 98 «170» РагепіНп версія 3.5
21051 «211» 294 «212» ДНК «213» Ното зарієпь
«4005 1 сивасгаасге аааарісааа сераасааїс айсасвіва аревесаавса ссісівіссе 6о0 їсасссиц вт Ісссіврісс аїссаавсса СІРІ рРІсСріавівввіввавіс 120 сІсвсСун ви асісісірсі свісассвів всі щагаасисіверіїараїссааа 180 аваавссесс івсіссаїав свацасаїр аагаївасіс сасвссевсссіввссссаса 240 агврааасасі ассавссма сесассассї ававаніся сівссіаїсе вас 294 «2105 2 «211» 98 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «4005» 2
Гецй Ар Азп Си Гуз бег Азп Оу ТНг Пе Пе Ні Маї Гу Оу Гу 1 5 10 15
Ніз Гей Су» Рго 5ег Рго Гей РНе Рго Су Рго 5ег Гу Рго Ре Тгтр 20 25 зо ма! Геи Маї Маї Ма! су Су Маї Гей Аа Су Туг зегГец Геи Маї 35 до 45
ТНг Маї Аа РнНе Пе Пе Рне Тгр Маї Аге 5ег Гу Аге 5ег Агев Гей 50 55 6о0
Гец Нів бег Азр Туг Меї Азп Меї ТНг Рго Аге Аге Рго Су Рго ТНг 65 70 75 80
Агев Гуз Ні Туг Сп Рго Туг Аа Рго Рго Аге Азр РНе АїЇа Аа Туг 85 90 95
Аге 5ег «210» З «211» 90 «212» ДНК «213» Ното зарієпь
«4005» З сивасгаасге аааарісааа сераасааїс айгсасвіва авевсаавса ссісівіссе 6о0 їсассси рії Їсссіврісс аїссаавсса 90 «2105» 4 211» 30 «2125» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 4
Гей Ар Азп Сн Гух 5ег Азп Су ТАг Пе Пе Ні Маї Гуз Оу Гу 1 5 10 15
Ніз Гей Су» Рго 5ег Рго Геи Рне Рго Су Рго 5ег Гуз Рго 20 25 зо «2105 5 «2115» 81 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «4005» 5
НСІРЕРІВІ ЇРРІСРІарі геРІвРаріС СІСЕСИ ВІЇ асісісівсі срісассвів 6о0 всішщаїаа синсівев ії 1
«2105 6 «211» 27 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 6
Ре Тгр Маї Геи Маї Маї Ма! су су Ма! Ге Аа Су Туг бег Гей 1 5 10 15
Гец Маї Тниг Маї Аа Рне Пе Пе РнНе Тгр Маї 20 25 2105 7 «211» 123 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «4005 7 аваїссаааа вгаавссессі всіссаїтавс гвацасаїра агаївасісс асессесссї 6о0 вЕСсссасаа грааасасіа ссарсснас всассассіа варайцісесівссіаїсвя 120 авс 123 2105» 8 «211» 41 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь
«400» 8
Аге 5ег Гу Аге 5ег Агр Гец Геи Ні бег Азр Туг Меї Азп Меї Тиг 1 5 10 15
Рго Аге Аге Рго Су Рго ТНг Аге Гуз Нів Туг Сп Рго Туг Аа Рго 20 25 зо
Рго Аге Азр Ріє АїЇа Аа Туг Аге 5ег 35 4о «2105 9 «211» 336 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «4005» 9 авгевівааві Чіссаваїс їесавраївса ссавсвіаїс авсавревсса ваассаасів 6о0
Таїаасвавс Ісаассірее асесареваа гавгіаїрасе це Расаа всесаварва 120 свевасссів араїгеріве сааассаара сгаааааасс сссарвавев ісісіаїааї 180 вавсівсава агврагааваї весіраавссайсірааааврсаїраааввававсвв 240 аваагрвеваа ааревсасва сер ріас сарерасіса всасірсіасвааврватасі 300
Зо
Іагївасесіс Іссасаївса арсссірсса ссіаве 336
«210» 10 «211» 112 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 10
Аге Маї Гуз РНе 5ег Аге 5ег Аа Азр Аа Рго Аа Туг СІп Сп су 1 5 10 15 біІп Азп Сп Ге Туг Азп бІц Гей Азп Геи бу Аге Аге бін ОЇ Туг 20 25 зо
Азр Маї Геим Ар Гуз Аге Аге Оу Аге Ар Рго Си Меї су су Гу 35 до 45
Рго Аге Аге Гуз Азп Рго біп см Оу Гей Туг Азп сш Гей Сіп Гуз 50 55 6о0
Ар Гу Меї Аа Си АїЇа Туг бег сш Пе су Ме Гуз СіІу си Аге 65 70 75 80
Аге Аге Су Гуз Су Ні Азр бу Гец Туг СбіІп су Гей бег ТНг Аа 85 90 95
ТАг Гуз Азр Тнг Туг Азр Аа Геи Ні Меї сСіІп Аа Геи Рго Рго Аге 100 105 110
«2105» 11 «211» 117 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 11 акеваввіва г8іаїссасс вссіассія раїаасрааа аваріаасев тассаїсай 6о0 сасрівааає гіааасассії вірвіссіїсї ссссіс(сс ссерессаїс аааврссс 117 «210» 12 «211» 39 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 12
Пе Сім Маї Меї Туг Рго Рго Рго Туг Геи Азр Азп Сім Гуз бег Азп 1 5 10 15
Су Тиг Пе Пе Нів Маї Гуз Оу Гуз Ні Геи Су» Рго 5ег Рго Гей 20 25 зо
Ре Рго Сіу Рго 5ег Гуз Рго «210» 13
«211» 288 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 13 всівсавсаї гЇгаврсаасіс аагаагвтагНавісасі Кріассаві ВСЦ сс 6о0 всіаавссіа стассасасс сесіссасее ссасстассс савсісстас саїсвситса 120 савссісіві сссівсессс ававвсіевс свассеесся сагеевесесівиИсаїасс 180 ававвасівв ацісессів сваїаїсіаї аїсірресас сссірессвр аассідсввс 240 віасіссівсІгрісссіррії саїсасесісїайріаагс асареаас 288 «210» 14 «211» 96 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 14
Аа Аа Аа Геи 5ег Азп 5ег Ме Меї Туг Рпе 5ег Ні РНе Маї Рго 1 5 10 15
Уа! РНе Геиц Рго Аа Гуз Рго ТНг Тнг ТАг Рго АїЇа Рго Аге Рго Рго 20 25 зо
Зо
ТАг Рго Аа Рго Тпг Пе Аїа 5ег Сп Рго Геи 5егГеи Аге Рго бій 4о 45
Аа Суз Аге Рго Аа АїЇа сіІу Оу Аа Маї Ні Тиг Аге су Гей Азр 50 55 60
Ре Аїа Сух Азр Пе Туг Пе Тгр Аа Рго Гей Аа Су Тиг Су ОЇу 65 70 75 8о0
Уа! Гец Гец Геи 5ег Гей Ма! Пе Тиг Геи Туг Сув Азп Ні Аге Азп 85 90 95 «2105» 15 «211» 381 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 15 саврісассі Їгаавргавіс іеріссівів сіррірааас ссасававас ссісасесів 6о0 ассівсассв ІсІсіревії сісасісаїс ааївсіарваа еервірівравсірваїссві 120 савсссссав веаавесссії гргарівесії вєсасасаці Нісвааївссраааааїсв 180
Іасаррасаї сісівааває саресісасс аїсіссааве асассіссаа аавссавнія 240 вісснНасса грассаасаї грасссірір васасаврсса саїайцасівівсасеваїа 300
Зо ссавесіасе ріввіаасее гвасіассасіасіасеріа г ррасвісівє грвссааряв 360 ассасевіса ссрісіссіса зв1
«210» 16 «211» 127 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 16
Сп Ма! Тиг Гей Гух Сім 5ег Су Рго Маї Геш Маї Гуз Рго Тнг би 1 5 10 15
Тигеи Тиг Ге ТНг Су Тнг Маї бег Су Рпе 5егГеи Пе Азп АїЇа зо
Аге Меї сІу Маї 5ег Тгр Пе Аге Сп Рго Рго ОСіу Гух АІа Гей біЇш 35 до 45 20
Тгр Ге Аїа Ні Пе РНе 5ег Азп Аа Сни Гуз 5ег Туг Аге ТАг 5ег 50 55 6о0 25
ІГец Гуз б5ег Аге Геи ТНг Пе 5ег Гуз Азр ТНг 5ег Гуз 5ег біп Маї 65 70 75 80 ма! Гец Тиг Меї Тнг Азп Меї Ар Рго Маї Азр ТАг Аа Тиг Туг Туг 85 90 95
Суз Аа Аге Іе Рго Су Туг Су су Азп Су Ар Туг Ні Туг Туг 100 105 110
Су Меї Азр Маї Тгр Су СіІп Су Тиг Тнг Ма! ТАг Маї 5ег 5ег 115 120 125 «210» 17 «2115» 7 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 17
Азп Аа Аге Меї СІу Маї бег 1 5 2105» 18 «211» 16 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 18
Ніз Пе РНе 5ег Азп Аа Сім Гу» 5ег Туг Аге ТНг бег Гец Гуз бег 1 5 10 15 «210» 19 «211» 17 «212» БІЛОК
«213» Ното зарієпь «400» 19
Ме Рго Су Туг Оу су Азп Су Азр Туг Ні Туг Туг су Меї Азр 1 5 10 15
Маї «210» 20 «211» 324 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 20 васаїссава Ірасссавіс їссаїссісс сівісівсаї сістарвава сававісасс 6о0 агсаснесс веесаавіса гєвесайавра ааїгайцав всіввіагса гсарааасса 120 веЕРааавссс сіаавсессі ваїсіаївсі Їсаїссасії гесааавіве ввісссаїса 180 аввисаєвсе всавівраїгс іверасавав Нсасісіса сааїсавсав ссівсавссї 240 вааваєшще сааснакна сівісіасав саїааїаацісссріввас віїсевісав 300 веЕаасеааве Іргаааїсаа асва 324
Зо «2105» 21 «211» 108
«212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 21
Азр Пе СіІп Меї ТНг СіІп 5ег Рго 5ег 5ег Геи 5ег Аа бег Гей су 1 5 10 15
Азр Аге Маї ТНг Пе Тиг Сух Аге Аа 5ег СіІп Оу Пе Аге Азп Азр 20 25 зо
Гец су Тер Туг бІп біІп Гуз Рго Су Гуз Аа Рго Гуз Аге Ге Пе 35 до 45
Туг Аа 5ег 5ег ТигГеи Сп 5ег Су Маї Рго 5ег Аге Рпе 5ег Оу 50 55 6о0 5ег Сбіу бег Су ТНг СІ Ре ТНг Геи ТНг Пе 5ег бег Гей Сп Рго 65 70 75 80
СІ Ар Ріє Аа ТНг Туг Туг Суз Гей Сп Нів Азп Азп РНе Рго Тгр 85 90 95
ТАг Ре ОСІу Сп Су Тиг Гуз Маї См Пе Гуз Аге 100 105
«210» 22 «211» 11 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 22
Аге Аа 5ег СІп су Пе Аге Азп Ар Гей су 1 5 10 «210» 23 «2115» 7 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 23
АДіІа 5ег 5ег ТигІГеи сп 5ег 1 5 «210» 24 «2115 9 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 24
Ге Сп Ні Азп Азп Ре Рго Тгр ТАг 1 5
«210» 25 «211» 375 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 25 саврісассі Їгаавргавіс іеріссівів сіррірааас ссасававас ссісасесів 6о0 ассівсассев Ісісіве вії сісасісаве аагесіараа (ее вірвіаав сівваїссвї 120 савссісссе реаавресссії реарівесії всасасаці нпісрааїра сваааааасс 180
Іасарсасаї сісігаавав саресісасс аїсіссарер асассіссааавессаввія 240 вісснасса грассаавраї вграсссірів гасасавсса саїацасівівсасеваїа 300 сссіасіаїв ВИсеревав їсаїаасіас рріаїврасв сіре ессаавввассасвя 360 вісассвісї ссіса 375 «210» 26 «211» 125 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 26 біІп Ма! ТигГеи Гуз Січ 5ег Су Рго Маї Геи Маї Гу Рго Тиг СЇц 1 5 10 15
Тигеи ТНиг Ге ТНг Су Тнг Маї бег СІу Рпе 5егеи Аге Азп АїЇа
20 25 зо
Аге Меї сІу Маї 5ег Тгр Пе Аге Сп Рго Рго ОСіу Гух АІа Гей біЇш 35 до 45
Тгр Ге Аїа Ні Пе Рпе 5ег Азп Ар Си Гуз ТНг Туг 5ег ТНг 5ег 50 55 6о0
ІГец Гуз 5ег Аге Геи ТНг Пе 5ег Аге Ар ТНг 5ег Гуз Оу Сп Маї 65 70 75 80
Уа! Гец Тиг Меї ТНиг Гу Меї Ар Рго Маї Азр ТНг АЇа ТНг Туг Туг 85 90 95
Суз АІа Аге Пе Рго Туг Туг Су бег Оу 5ег Ні Азп Туг оЇу Меї 100 105 110
Азр Маї Тгр су СІп су ТНг Тнг Маї Тнг Маї бег 5ег 115 120 125 «2105» 27 «211» 15 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 27
Пе Рго Туг Туг СІу бег Су бег Ні Азп Туг сСІу Меї Ар Маї 1 5 10 15 «210» 28 «211» 324 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 28 васаїссава Ірасссавіс іссаїссісс сірРісівсаї сіртарвава сававісасс 6о0 агсаснесс гресаавіса грасацава ааївганцісе всірвіагса асагааасса 120 веЕРааавссс сісавсессі всісіаївсії всаїссаси ївсааавріве вгрісссаїса 180 аввисавсе всавівраїс ірерасаваа Ксасісіса сааїсавсав ссірсавссї 240 вааваєція сааснана сірістасав гагаасасі:асссвіввасвисевісан. 300 веЕаасеааве Іргаааїсаа асва 324 «2105» 29 «211» 108 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 29
Азр Пе СІп Меї Тнг сСіІп 5ег Рго 5ег 5ег Геи 5ег Аа 5ег Ма! су 1 5 10 15
Азр Аге Маї ТНг Пе ТНг Сух Аге Аа 5ег Сп Азр Пе Аге Ап Азр 20 25 зо
Ре Сіу Тгр Туг Сп Сп Гуз Рго Су Гуз Аа Рго Сп Аге Гей Гей 35 до 45
Туг Аа Аа 5ег Тиг Геи СіІп 5ег Су Маї Рго 5ег Аге РНе 5ег Оу 50 55 6о0 5ег Оу бег Су Тнг СІ Рне ТАиг Геи ТАг Пе 5ег бегГеи біп Рго 65 70 75 80
Сім Ар Ріє Аа ТНг Туг Туг Суз Гей Сп Туг Азп ТНг Туг Рго Тгтр 85 90 95
ТНг Рве су СіІп Оу ТНг Гуз Маї си Пе Гуз Аге 100 105 «210» зо «211» 11 «212» БІЛОК «213» Ното заріеп5 «400» зо
Аге Аа 5ег Сп Ар Пе Аге Азп Азр Рпе бу 1 5 10 «210» 31 «2115» 7 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 31
Аа Аа 5ег Тиг Геи сп 5ег 1 5 «2105» 32 «2115 9 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 32
Гей Сп Туг Азп ТАг Туг Рго Тгр ТНг 1 5 «210» 33 «211» 360 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 33 саватасаас їгРієравріс ее евавяс вівріссавс сівеваввіс ссігавасіс 6о0 бо
Іссірівтав свісіррай сассисаав аасіаїреса їесасівврі ссвссаввсії 120 ссавесааве єесіврвавів вєріввесавії айівріагв аїреаавіаараатасіаї 180 веЕавассссе Їгааревссяе айсассаїс Іссарараса асіссааваа саївйеіаї 240 сівсаааїра асавссівав арссваївасасеесірівіайцасірівсваввісввта 300 асавсавіве сігвевесси їрасіасіве вессавреваа сссіврісас свісіссіса 360 «210» з4 «211» 120 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» з4
Сп Пе Сп Геи Маї Сім 5ег су Су Су Маї Маї Сп Рго Су Аге 1 5 10 15 5егІеи Аге Геи 5ег Сух Маї Аа 5ег Су Рне Тиг РНе Гуз Азп Туг 20 25 зо
Су меї Ні Тгр Маї Аге СіІп Аа Рго су Гуз Су Геи См Тгр Маї 4о 45
Зо
Аа Ма! Пе Тгр Туг Ар Су 5ег Азп Сім Туг Туг Су Ар Рго Маї 60
Гуз су Аге Ріе ТНг Іе 5ег Аге Ар Азп 5ег Гуз Азп Меї Геи Туг 65 70 75 80
Гец СсІп Меї Азп 5егГеи Аге Аа Азр Ар ТНг АїЇа Маї Туг Туг Су 85 90 95
Аа Аге 5ег Су Іе АїЇа Маї Аа Су Аа Рне Ар Туг Тгр су сп 100 105 110
Су Тиг Геи Маї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120 «210» 35 «2115» 17 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 35 ма! Ме Тгр Туг Азр бу 5ег Азп би Туг Туг бу Ар Рго Маї Гу 1 5 10 15 су в2
«210» 36 «211» 11 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 36 5ег Су Пе Аа Маї Аа сСіІу АІа Ре Азр Туг 1 5 10 «210» 37 «211» 327 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 37 вааайеїві Їгасесавіс Іссавасасс сівісніві сіссаррерва аааавссасс 6о0 сІсіссірса гєвессаріса гарівНавс авсавсинсі Їгессівва ссарсарааа 120 ссірвасаве сісссарісі ссісаїсіаї віесаїсса вааврессесіввсаїсссї 180 васаввіса вірвсавіве вісірераса васісасісісассаїсав савасіввав 240 ссіваавайї Нераагвії МНасірісаа сасіагеріа гєрасассай сасіцісввс /зО00 ссіревасса аарірраїаї сааасва 327
Зо «210» з8 «211» 12 «212» БІЛОК
«213» Ното зарієпь «400» 38
Аге Аа 5ег СіІп 5ег Маї 5ег 5ег 5ег Рпе Геи АїЇа 1 5 10 «210» 39 «2115» 7 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 39 ма! Айва 5ег Аге Аге АїЇа Аа 1 5 210» 40 «2115 9 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 40 біІп Ні Туг Оу Аге ТНг Рго Рне ТНг 1 5 «210» 41 «211» 109 «212» БІЛОК
«213» Ното зарієпь «400» 41
Сн Пе Маї Геш ТНг Сп 5ег Рго Азр ТигГеи 5ег Гей 5ег Рго бу 1 5 10 15 сш Гуз Аа ТНг Геи 5ег Сух Аге Аа 5ег біп 5ег Маї 5ег 5ег 5ег 20 25 зо
Рпе Геш Аа Тгр Туг Сп Сп Гух Рго Су біІп Аа Рго 5ег Гей Гей 35 до 45
Пе Туг Маї Аа 5ег Аге Аге Аа Аа Су Пе Рго Ар Аге Ре 5ег 50 55 6о0
Су 5ег Оу 5ег Су ТНг Азр Ре Тпиг Геи Тнг Пе 5ег Агер Гей Си 65 70 75 80
Рго Сім Азр Рпе Су Меї Ре Туг Суз СІп Нів Туг Су Аге ТАпг Рго 85 90 95
Рпе Тиг Ріе су Рго су ТАг Гуз Маї Ар Пе Гуз Аге 100 105 «210» 42
«211» 119 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 42 біІп Маї біІп Ге Маї Сп 5ег Су Аа Си Маї Гуз Гуз Рго СіІу Аа 1 5 10 15 5ег Маї Гуз Маї бег Су Гух Аа 5ег су Туг Тиг Ріє Тнг су Туг 20 25 зо
Туг Ме Ні Тгр Маї Аге Сп Аа Рго Сім Сп су Гей ОЇ Тгр Меї 35 до 45
Су Тгр Пе Ап Рго Авзп 5ег Су СОІУ ТНг Азп Туг Аа біп Гу Ре 50 55 6о0 біІп су Аге Ма! Тнг Меї Аїа Аге Ар Тпг 5ег Пе 5ег ТНг Маї Туг 65 70 75 80
Меї Ар Ге 5ег Агр Геи Аге 5ег Ар Ар ТНг Аа Маї Туг Туг Суб 85 90 95
Аа Аге Пе Аге Су Су Азп 5ег Ма! Рпе Ар Туг Тгр бу СІп су 100 105 110
ТАгГеи Ма! Тиг Маї 5ег 5ег «210» 43 «2115 5 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «дО00» 43
Су Туг Туг Пе Ні 1 5 «210» 44 «211» 17 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 44
Тгр Пе Авзп Рго Авхп 5ег Сіу СбІу ТНг Азп Туг Аа Сп Гух РНе сп 1 5 10 15 су «210» 45 «211» 10
«212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 45
Пе Аге Су Су Азп 5ег Маї Рне Азр Туг 1 5 10 «210» 46 «211» 342 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 46 васаїсвіва Івасссавіс Іссавасісс сівесірірі сісівРесва гавевссасс 6о0 агсаасівса авіссассса вгавіайна гасассісса асааїаараа сисмНавсі 120 1гетассарс авааассаве всавссіссі ааасівсіса ПІссівресаїсіаїссвя 180 вааїссервев їсссірасся айсарівес авсеевісів врасавайції свсісісасс 240 агсавсавсс Івсаввсіва аваїріреса вітакнасі рісаасааїа ННавіасї 300 агвинсавн Неессавве вассаарсія гарагсааас ва 342 «210» 47 «211» 114 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь
«400» 47
Азр Пе Ма! Меї ТНг Сп 5ег Рго Ар 5ег Геи Аа Маї бег Гей су 1 5 10 15
Сім Аге Аа ТНг Пе Азп Сух Гуз 5ег ТНг Сп 5ег Пе Ге Туг ТАг 20 25 зо 5ег Азп Ап Гуз Азп Рпе Геи Аа Тгр Туг Сп Сп Гу Рго Су сп 35 до 45
Рго Рго Гуз Геи Геи Пе 5ег Тгр Аа 5ег Пе Аге Сім 5ег Су Маї 50 55 6о0
Рго Ар Аге РНе 5ег Су 5ег Су 5ег су ТНг Азр Рнеє Аа Гей ТНг 65 70 75 80
Пе бег бегГеи СбіІп Аа Сім Ар Маї Аа Маї Туг Туг Су СбІп сп 85 90 95
Туг Рпе 5ег Тнг Меї Ре 5ег РНе бу Сп су Тиг Гуз Гей Си Пе 100 105 110
Гуз Аге
«210» 48 «211» 17 «212» БІЛОК «213» Ното заріеп5 «дО00» 48
Гуз 5ег ТНг Сп 5ег Іе Геи Туг ТАг 5ег Азп Азп Гу Азп Рпе Гей 1 5 10 15
Аа «210» 49 «2115 7 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 49
Тгр АЇа 5ег Пе Аге Си 5ег 1 5 «210» 50 «2115 9 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 50 біІп СіІп Туг Рпе 5ег ТНг Меї РНе 5ег 1 5 «2105» 51 «211» 360 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 51 савгвівсавс Їгсарвавіс гєевесссарва сівріваарс сіїсасавас ссірвісссіс 6о0 ассівсасів гсісіверіве сіссаїсаві арірвівсатасіасіррас ераїссяс 120 савсасссавр єваавеессі ггаврірвай реріасаїссайцасавіве вавсассіас 180 їссаасссві сссісаарар Ісеаацасс аїаїсвНар асасвісіаа ваассавійс 240
Ісссіраавс Іваасісірі васівєссесе гасасевссе ївіацасівівсвавасаа 300 ваввасіасе вівві ви Ірасіасіре рессавераа сссіррісассевнНіссіса 360 «2105 52 «211» 120 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «4005 52 біІп Маї біІп Геи Сп Сі 5ег Су Рго су Геи Маї Гуз Рго бег сп 1 5 10 15
ТигІеи 5егГеи ТНг Су ТНг Маї 5ег су Оу бег Пе 5ег 5ег Оу 20 25 зо
Аа Туг Туг Тгр ТНнг Тгр Іе Аге Сп Ні» Рго Су Гуз Су Геци ОїЇи 35 до 45
Тгр Пе су Туг Ме Ні Туг бег Су бег ТНиг Туг бег Азп Рго 5ег 50 55 6о0
ІГец Гуз 5ег Аге Пе ТНг Пе 5егГеий Азр Тнг 5ег Гу Азп біІп Рпе 65 70 75 80 5егІеи Гуз Гей Азп 5ег Маї ТНг Аа Аа Азр Тиг Аа Маї Туг Туг 85 90 95
Суз Аа Аге СіІп Си Ар Туг су Су Ге РНе Ар Туг Тгр бу Сп 100 105 110
Оу Тиг Ге Маї ТНг Маї 5ег 5ег 115 120
Зо «210» 53 211» 7 «212» БІЛОК
«213» Ното зарієпь «400» 53 5ег Оу АІа Туг Туг Тгр ТНг 1 5 «2105» 54 «2115» 16 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 54
Туг Ме Ні Туг бег бу бег ТНг Туг бег Азп Рго 5ег Геиц Гуз 5ег 1 5 10 15 «2105 55 «211» 10 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «4005» 55 біІп СіІш Ар Туг Су су Геи Рпе Ар Туг 1 5 10 «210» 56 «211» 324 «212» ДНК
«213» Ното зарієпь «400» 56 вааагавіва їгасесавіс Іссавссасс сівісіріві сіссарвева аагааїсасс 6о0 сісіссівса врессавіса вавівтасс ассвасцнав ссівріасса всаваївссї 120 веасаввсіс сссервсіссі саїсіаїраї всиссасса веессасірв ПІсссавсс 180 авайсавів всавівевіс іееРасавас Нсасесіса ссаїсавсав ссівсаввсі 240 вааваєше савіцнайна сірісаасаї агаааассі євссісісасійсевсвва 300 вЕвасіааве гррРараїсаа асва 324 «210» 57 «211» 108 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 57
СІш Пе Ма! Меї ТНг біп 5ег Рго Аа ТНг Геи 5ег Маї бег Рго су 1 5 10 15
Сім Аге Пе ТАиг Геи 5ег Су Аге Аа 5ег біІп 5ег Ма! Тнг ТАг Азр 20 25 зо
Зо
Гей Аа Тгр Туг СІп СІп Меї Рго бу Сп Аа Рго Аге Геи Ге Пе 4о 45
Туг Азр Аа 5ег ТНг Аге Аа ТНг Су Ре Рго АїЇа Аге РНе 5ег Су 50 55 6о0 5ег бу бег Су ТНг Азр Ріє ТигГеи ТНг Пе 5ег 5ег Геи Сп Аа 65 70 75 80
Сім Ар Ріє Аа Маї Туг Туг Су СІп Ні Туг Гуз ТАг Тгр Рго Гей 85 90 95
ТАг Ріе Су су Су Тнг Гуз Маї См Пе Гуз Аге 100 105 «210» 58 «2115 11 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 58
Аге Аа 5ег Сп 5ег Ма! Тиг ТНг Азр Гей АїЇа 1 5 10 «210» 59 211» 7 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь
«400» 59
Азр Аа 5ег ТНг Аге Аа ТНг 1 5 «210» 60 «2115 9 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 60
Сп Ні Туг Гу ТАг Тгр Рго Гей ТАг 1 5 «2105» 61 «211» 1482 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 61 агвесасісс ссріаасівс Ісівсівсів сс ееСсасівсіссівса сессесасес 6о0 ссевсаврріра сссісааава вісівєрассс вівсісріаа аассіасева вгасссіваса 120 сісассівса савісіссве сисарссіс аїсааївсса враїввваві Пссівваїс 180
Зо авесаассес ссевааавес ссіврааїгре сісесасаїта НЕсаріаа сесівааааа 240 авсіаїсева сисісівраа аарісеесіс асвайцаріа аррасасаїссааравссаа 300 віІввівсна сваїрасіаа саїерасссі вірратасівя саассіайца сівівсісва 360 агсссірвії аїеесерааа грервастас сасіасіасе віаїррафїрі сірвреиссаа 420
БеЕвассасев Насівніс аавсеварея ввавевавіяв веевівесевасіввсвва (480 веавесаєвсе аїаїссаваї васесавісс ссіавіїсас і йссевсаїсссірвврвеваї 540 сввевмасса Насатессе сесвісасав вріаїссева агїрассівевасввіассан 600 саваавссее вгааавесісс їаавсессіс аїсіасевсса всіссасссі всававірва 660 віІвсссісссС ви саре савіввсісс вріасвваві Насісцасаайавсавс 720 сівсавссавє аарайцівс аасцнасіас ів есавс аїааїаайці ссссірдрасс 780
Шев рІсСаве всассаавеї граваїсааа аварсавсся ссаїсваарвіааїрвіаїссс 840 сссссріасс Нрасаагра гаарісаааї веаассаца їссаївнНаа гевсааасас 900
СІСІвСсст сіссасівії сссіввсссі авіаавссві ПІРеРІівсівРІввТавіс 960
ВЕІВВВВІвсСІввсСИвНа сісіснцсіс вірассрісв ссінагаайснйцневвіс 1020 аваїссаааа гєаавссессі всіссаїавс райасаїра агаївасіссасессесссї 1080 вЕСсссасаа грааасасіа ссарсснас всассассіа гарайцісесівсстаїсввя 1140 авссвавіва ааййсіав агсаврсіваї всісссессі аїсарсавее асавааїсаа 1200 сішштасаате авсіваассії гєррісесара ваававіасе асвінірва сааасвссвя 1260 вЕССваваїс сіраваїере гевваавссе араарваава аїссісаава аввссіріас 1320 аасвавсис аааааврасаа аагресіврає есеіасісір араїсеесаї ваавввсвав 1380 севвавасває всааревіса сваївестте гаїсавресс Іраріасарс сасааарвас 1440 ассіаїрасе сссіссасаї всаресасів сссссасесі ад 1482 «2105» 62 «211» 493 «2125» БІЛОК «213» Ното зарієпь «4005» 62
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Геи Ге Геи Рго Гей АІа Геи Гец Гей 1 5 10 15
Ніх Аа Аа Аге Рго сСіІп Маї ТНг Ге Гу ОЇи 5ег Су Рго Маї Гей 20 25 зо ма! Гуз Рго Тнг См ТигГеи ТАг Гей Тнг Су ТНг Маї 5ег Оу Ре 35 4о 45 5егГеи Пе Азп Аа Аге Меї су Маї 5ег Тгр Пе Аге Сп Рго Рго 60
Су Гуз Аа Ге Си Тгр Ге Аа Ні» Пе РНе 5ег Азп АїЇа Си Гу
65 70 75 80 5ег Туг Аге ТАиг 5егГеи Гуз 5ег Аге Геи ТНАг Пе 5ег Гуз Азр ТАг 85 90 95 5ег Гуз бег біІп Маї Маї Геи Тнг Меї ТАг Азп Меї Ар Рго Маї Азр 100 105 110
ТАг Аа ТНг Туг Туг Сув АЇа Аге Іе Рго Су Туг сОЇу Су Азп су 115 120 125
Азр Туг Ні Туг Туг бІу Меї Азр Маї Тгр Су СІп су Тег ТНг Маї 130 135 140
ТАг Маї 5ег 5ег су Су Оу су бег Су Су Су Оу бег Су Су 145 150 155 160
Су су бег Азр Пе Сп Меї ТНг Сп 5ег Рго 5ег 5ег Геи 5ег Аа 165 170 175 5егІеи бу Азр Аге Маї Тиг Пе Тнг Су Аге Аа 5ег Сп Су Пе 180 185 190
Зо
Аге Азп Азр Гей су Тгр Туг Сп Сп Гу Рго су Гуз Аа Рго Гу 195 200 205
Аге Ге Іе Туг Аа 5ег 5ег ТАг Геи СіІп 5ег су Маї Рго 5ег Аге 210 215 220
РНе 5ег су бег Су бег су Тиг си Рпе ТНг Ге ТНг Пе 5ег 5ег 225 230 235 240
Гей Сп Рго Си Ар Ріє Аа Тнг Туг Туг Суз Гей біІп Ні» Азп Ап 245 250 255
Рпе Рго Тгр ТНг Ре су Сп Су ТАг Гуз Маї См Пе Гуз Аге Аа 260 265 270
Аа Аа МПе Си Ма! Меї Туг Рго Рго Рго Туг Геи Ар Азп Си Гу 275 280 285 5ег Азп Су ТАг Пе Іе Ніз Маї Гу Су Гуз Ні Геи Су» Рго 5ег 290 295 зоо0
Рго Гец РНе Рго сСіу Рго 5ег Гуз Рго РНе Тгр Маї Геи Маї Маї Маї 305 310 315 320
Зо
Су су Ма! Гей Аа Су Туг 5ег Ге Геи Маї ТНг Маї Аа Ре Пе 325 зз0 335
Пе Рве Тгр Маї Аге 5ег Гуз Аге бег Агр Гец Геи Ні» 5ег Ар Туг з40 345 350
Меї Азп Меї ТНг Рго Аге Аге Рго Су Рго ТНг Аге Гух Ні Туг сп 355 360 365
Рго Туг Аа Рго Рго Аге Азр Ре АїЇа Аа Туг Аге 5ег Аге Маї Гу 370 375 зво
Рне 5ег Аге 5ег Аа Азр Аа Рго АїЇа Туг Сп Сп Су біп Азп Сп 385 390 395 доо
Гец Туг Азп бІц Гей Азп Геи Су Аге Аге бін ОЇш Туг Ар Маї Гей 4до5 410 415
Азр Гуз Аге Аге Су Аге Ар Рго бій Меї су Су Гу Рго Аге Аге 420 425 430
Гуз Азп Рго біІп бін Оу Гей Туг Азп бі Геи біп Гуз Азр Гуз Меї 435 дао 445
Аа СЇш Аа Туг 5ег сЇш Пе су Меї Гуз СбІу см Аге Аге Аге Оу 450 455 460
Гуз Су Ні Азр су Гей Туг СбіІп Оу Ге 5ег ТАг Аа ТАг Гу Азр 465 470 475 480
ТАг Туг Азр Аа Геши Ні Меї Сіп Аа Геи Рго Рго Аге 485 490 210» 63 «211» 1455 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 63 агвесасісс ссріаасівс Ісівсівсів сс ееСсасівсіссівса сессесасес 6о0 ссесаавна сціраарвеа вісірвгассі ріасівріра арссаассва васасіваса 120 сісасвівіа савівавівв ЩІ НсСсСНе аїсаасесаа реваївеесві ссавсівваїс 180 авесаасссс сівєрсаарес Ісірваагве сісвсісаса тайсарсаа вссврааааа.Д 240 авсіассврва саавссіраа аїсссессів асіацісса арвасасисіаарвісїсар 300 віввівсіва ссаївассаа саїеврасссе віргвасассе ссассіаца сієсвсаава 360 агсссірерві аїррівераа герірасіас сацанцагр рраїрвагвірвіввввесаа 420 веЕсасаассе їаасерісіс аавсевірев враввсісав вевесевавв сіссввавні 480
Зо
ЕСВВеСІсСсе асайсавраї васссааавс ссріссавссіріссессав ссіввваваї 540 ававірасаа гїсасвіріав авсисссаа рераїааваа аїраїсісее віввіаїсав 600 в2 саваавсссе єсааарсссс сааааресії аїагаїесіа віарвіасасі всавісівва 660 виссиссс вайфсаве їавсеесісс рріасававіїсасссісас ваїаавсіса 720 сіссавссів авгацісес аасріасіасівссіссавсасаасаайціісссірвасі 780 гсевссаве всассаареї єравраїсаав аврессесів сссираїааїрааааріса 840 аасеваасаа їсайсасвї гаавревсаав сассісівіс свісасссії вИсссіввї 900 ссаїссаарс сайсірері вмерІСрІа віреріввавіссісвснве Насісісїів 960 сісвІісассев ггевесСіщцаї аагсцсіре вНараїгсса аааваавссе ссівсіссаї 1020 авсвайцаса Іграагаїрас Іссасессес ссіресссса саарваааса стассавссї 1080 їасвсассас стававайції сесівссіаї сегарссвав їгааайііїстараїсавсі 1140 ваївсісссе ссіаїсарса рерасавааї саасінаса агравсіваа ссіревісвс 1200 ававаававі асрасенії ррасааасес сЕреессвав аїссіравасееввввваав 1260 ссваваарва авааїссіса араавессів їТасаасвавс Нсааааавра сааааїрвсії 1320 вавгвсвтасі сігараїсее саїгааррвес гавсевавас варесааревісасваївяс 1380 нрвіагсаве вссіваріас арссасааає васассіаїв асесссісса саїесарвса 1440 сівсссссас встав 1455 «210» 64
«211» 484 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 64
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Геи Ге Геи Рго Гей АІа Геи Гец Гей 1 5 10 15
Ніх Аа Аа Аге Рго сСіІп Маї ТНг Ге Гу ОЇи 5ег Су Рго Маї Гей 20 25 зо ма! Гуз Рго Тнг См ТигГеи ТАг Гей Тнг Су ТНг Маї 5ег Оу Ре 35 до 45 5егГеи Пе Азп Аа Аге Меї су Маї 5ег Тгр Пе Аге Сп Рго Рго 50 55 6о0
Су Гуз Аа Ге Си Тгр Ге Аа Ні» Пе РНе 5ег Азп АїЇа Си Гу 65 70 75 80 5ег Туг Аге ТАиг 5егГеи Гуз 5ег Аге Геи ТАг Пе 5ег Гуз Ар ТНг 85 90 95 5ег Гуз бег біІп Маї Маї Геи Тнг Меї ТАг Азп Меї Ар Рго Маї Азр 100 105 110
ТАг Аа ТНг Туг Туг Сух Аа Аге Іе Рго Су Туг су Су Азп бу 115 120 125
Азр Туг Ні Туг Туг бІу Меї Азр Маї Тгр Су СІп су Тег ТНг Маї 130 135 140
ТАг Маї 5ег 5ег су Су Оу су бег Оу Су Су Су бег су Су 145 150 155 160
Су су бег Азр Пе Сп Меї ТНг Сп 5ег Рго 5ег 5ег Геи 5ег Аа 165 170 175 5егІеи бу Азр Аге Маї Тиг Пе Тнг Сух Аге Аа 5ег Сп су Пе 180 185 190
Аге Азп Азр Гей су Тгр Туг Сп Сп Гу Рго су Гуз Аа Рго Гу 195 200 205
Агев Ге Іе Туг Аа 5ег 5ег ТНг Геи Сп 5ег Оу Маї Рго 5ег Аге 210 215 220
Рпе 5ег бу 5ег Оу 5ег Су Тиг См Рне ТигГеи Тнг Пе 5ег 5ег 225 230 235 240
Гей Сп Рго Си Ар Ріе Аа Тнг Туг Туг Суз Геи біІп Ні Азп Ап 245 250 255
Рпе Рго Тгр ТНг Ре су Сп Су ТАг Гуз Маї См Пе Гуз Аге Аа 260 265 270
Аа Аа Гей Ар Азп Си Гу 5ег Азп Су ТАг Пе Пе Ні Маї Гу 275 280 285
Су Гуз Ніз Геи Сух Рго 5ег Рго Геи Ріє Рго ОСіу Рго 5ег Гуз Рго 290 295 зоо0
РНе Тгр Маї Геи Маї Маї Ма! су су Ма! Ге Аа Су Туг бег Гей 305 310 315 320
Гец Маї Тниг Маї Аа Рне Пе Пе РнНе Тгр Маї Аге 5ег Гуз Аге 5ег 325 зз0 335
Аге Ге Гей Ні бег Азр Туг Меї Азп Меї Тнг Рго Аге Аге Рго су з40 345 350
Рго ТАг Аге Гуз Ніх Туг Сп Рго Туг Аа Рго Рго Аге Азр РНеє АїЇа 355 360 365
Аа Туг Аге 5ег Аге Маї Гуз Рпе 5ег Аге 5ег Аа Азр Аїа Рго Аа
370 375 зво
Туг біп біІп бу Сіп Азп Сп Гей Туг Азп СЇш Гей Азп Гей бу Аге 385 390 395 доо
Аге Сн Он Туг Азр Маї Гей Ар Гуз Аге Аге Су Аге Ар Рго СЇц 4до5 410 415
Меї су Су Гуз Рго Аге Аге Гуз Азп Рго біп См Су Геи Туг Азп 420 425 430
СІ Ге Сп Гуз Азр Гу Меї АїЇа Сім Аа Туг 5ег си Пе СІу Меї 435 дао 445
Гуз бу сЇшм Аге Аге Аге Оу Гуз Оу Ні Азр бу Геи Туг сп Оу 450 455 460
Гец 5ег ТНг Аа ТНг Гуз Азр ТАг Туг Ар Аа Геи Ні Меї Сіп Аа 465 470 475 дво
Гей Рго Рго Аге «210» 65 «211» 1563
«212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 65 агвесасісс ссріаасівс ісіесівсів сс ееСсаї ївсіссірса сессесасес 6о0 ссесаврріра сасісаарга аїсаревссс віасівріва аассіасіва васссіваса 120 сівасітеса ссвівісіве вИсісісів айаасесіс гааїеервіві вавневаїта 180 сессавссіс сарррааврес ісівєварвіве Пресссаса сіссаа сессваваав 240 авсіасарва сіавісіраа ріссавасії ассацісса аарасасаавіаааїсасав 300 віввівсіва сааїрасааа саїевасссе вратасів стассіаца Нвівсссвс 360 ансссеесі асеесвесаа геесрасіаї сасіацаїв ріагрраїві сірвввисав 420 вЕвассасів Нассвіріс сагсееевеві ввівесавсе ваврівваве вавсевівві 480 вЕввЕвавів аїгайсавраї васссаравс ссіавсісіс НІссесисіІсівеЕСсваї 540 ававісасса їсассірссе вессісісаа гесаїссрра асваїсцерваїрвіаїсав 600 саваавсссе гсаавресасс ааааавесів аїсіасесаї саарсасссі всааїсіввв 660 вІВССсвІСССеВНИсСІве НСІврІарі єерассваві Пасісівасіаціснсс 720 сівсавссія арваситес гтасеіасіатірісірсарсагїаасаасі ссссірвася 780
Зо мсСеввСсаве ріасвааарі гєвгааайаав сесессессе сссіріссаа сіссацаїн 840 тїашеїсіс атицвіссс авівиссів сссесіааас ссасаасіасіссввсессс 900 свассессаа сісссвсасс їассаїсвса авссавссатіравссіссвассіваввса 960
Івтїавассав савссевсев іессвівсас асаавгвевасівванцісессівсвасаїа 1020
Іїатацівее ссссісівесірвЕаассіві вєеввисівсІвсісісісі свНанцаса 1080 сіртайцеса агсаїсесаа гараїссааа аваавссессірсіссатав свацасаїв 1140 ааїагїрасіс сасессессс їгессссаса аррааасасі ассарссцна сесассассї 1200 ававайцісе сівсстаїсе вавссвавів ааайцисіа раїсарсіра ївсісссвсс 1260
Іаїсавсаве васаваафєса асіцасааї вавсіваассіверісесавараававіас 1320 васвіцшщіее асааасессе веессраваї ссіраваїев гевевраавссваваарваав 1380 ааїссісаав аарессіріа саасварсії саааааваса аааївесіва весвіасісї 1440 ваваїсевеса гваавгвесва гсеЕвавасва гесаавевіс асваївесії віаїсавевс 1500 сіравіасар ссасааарва сассіаїрас всссіссаса ївсавесасі всссссасес 1560 їав 1563 2105» 66 «2115» 520 «2125 БІЛОК «213» Ното заріеп5 «400» 66
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Геи Ге Геи Рго Гей АІа Геи Гец Гей 1 5 10 15
Ні Аа Аа Аге Рго СіІп Ма! Тиг Гей Гуз см 5ег Оу Рго МаїЇ Гей 20 25 зо ма! Гу Рго ТНг бЇши ТНг Ге Тиг Ге ТНг Су Тнг Маї бег су Ре 35 до 45 5егГеи Пе Азп Аа Аге Меї су Маї 5ег Тгр Пе Аге Сп Рго Рго 50 55 6о0
Су Гуз Аа Ге Си Тгр Ге Аа Ні» Пе РНе 5ег Азп АїЇа Си Гу 65 70 75 80 5ег Туг Аге ТАиг 5егГеи Гуз 5ег Аге Геи ТАг Пе 5ег Гуз Ар ТНг 85 90 95 5ег Гуз 5ег біІп Маї Ма! Геи Тиг Меї Тиг Азп Меї Ахр Рго Маї Азр 100 105 110
ТАг Аа ТНг Туг Туг Сув АЇа Аге Іе Рго Су Туг су су Азп Оу 115 120 125
Азр Туг Ні Туг Туг бІу Меї Азр Маї Тгр Су СІп су Тег ТНг Маї
130 135 140
ТНг Маї бег бег су Су Су су бег Оу су Су су бег су сЇу 145 150 155 160
Су су бег Азр Пе Сп Меї ТНг Сп 5ег Рго 5ег 5ег Геи 5ег Аа 165 170 175 5егІеи бу Азр Аге Маї Тиг Пе Тнг Суз Аге Аа 5ег біп Су Пе 180 185 190
Аге Азп Азр Гей су Тгр Туг Сп Сп Гу Рго су Гуз Аа Рго Гу 195 200 205
Аге Ге Пе Туг Аа 5ег 5ег ТНг Геи біп 5ег Су Маї Рго 5ег Аге 210 215 220
РНе 5ег су бег Су бег су Тиг си Рпе ТНг Ге ТНг Пе 5ег 5ег 225 230 235 240
Гей Сп Рго Си Ар Ріе Аа ТНг Туг Туг Суз Гей Сп Ні Азп Ап 245 250 255
Зо
Ре Рго Тгр ТНг Ріє су Сп Су ТНг Гуз Маї Сім Пе Гуз Аге Аа 260 265 270
Аа Аа Геи 5ег Азп 5ег Пе Меї Туг РНе 5ег Ні РНе Маї Рго Маї 275 280 285
Рпе Геиш Рго Аа Гух Рго ТНг Тиг ТАг Рго АїЇа Рго Аге Рго Рго Тиг 290 295 зоо0
Рго Аа Рго ТНг Пе Аїа 5ег Сп Рго Геи 5ег Геи Аге Рго Сім Аа 305 310 315 320
Суз Аге Рго Аа Аа Су Су Аа Маї Ні Тиг Аге Су Геи Азр Рпе 325 зз0 335
Аа Суз Азр Пе Туг Пе Тгр Аа Рго Геи АїЇа су ТНг Сух Су Маї з40 345 350
ГецГецй Ге 5егеи Ма! Пе ТАг Ге Туг Сув Азп Ні Аге Азп Аге 355 360 365 5ег Гу Аге бег Аге Геи Геи Нів 5ег Азр Туг Меї Азп Меї ТНг Рго 370 375 зво
Аге Аге Рго Су Рго ТНг Аге Гуз Ні Туг СіІп Рго Туг Аа Рго Рго 385 390 395 доо
Аге Азр Ре Аа Аа Туг Аге 5ег Аге Маї Гу Рпе 5ег Аге 5ег Аа 4до5 410 415
Азр Аа Рго Аа Туг бІп Сп Оу біІп Азп Сп Гей Туг Азп Сн Гей 420 425 430
Азп Гей Оу Аге Аге Сім Си Туг Азр Ма! Геши Ар Гуз Аге Аге ОЇу 435 дао 445
Аге Ар Рго СЇи Меї су Су Гуз Рго Аге Аге Гуз Азп Рго біІп Си 450 455 460
Оу Гей Туг Азп бін Гей Сп Гуз Азр Гуз Меї АїЇа Сім Аа Туг 5ег 465 470 475 дво
СІ Пе су Ме Гух СіІу Сім Аге Аге Аге Су Гуз Оу Ні Азр Су 485 490 495
Гец Туг бІп су Ге 5ег ТНг Аа ТНг Гуз Ар ТНг Туг Ар Аа Гей 500 505 510
Ні5 Меї сп Аа Гей Рго Рго Аге 515 520
«210» 67 «211» 1464 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 67 агвесасісс ссвіаасівс ісівсівсів ссвІЇееЕСсатівсіссівса свссесасес 6о0 ссесаваїсс авітерівва аїсавРеевес евівіврівс авссееріав вавссірава 120 сірісаїеся Іевсвісіре Си сасайцс аараасіасе всаївсасів ввівсвасав 180 всссссвваа авевціврва ріврвісесс рівагсіврі асвасераїсіааїравіайї 240 їасеваваїс сіріваарее аарвисасс аїсісссесе асаатарсаа ааататвсіс 300 їассірвсааа Ігаасісасі сагеесераї ваїасеесевв ісіасіайце сесісвсіса 360 вЕвакнцесів ЇвевссевСсесС айсвацасівревасаве віасссіврі гвасавіаїса 420 авсввавеся всевсісіве СЕвСвЕСева ІсівесевеЕ вБЕвеаавіва вапвівця 480 асасавісіс ссваїасссі вісасіріса сссеесрава авесаасесі варійвсара 540 всаавссаві савісіссіс СЕНСІВ ессіреіаїсавсааааассаввісаввса 600 ссаїсісіссіІрацасві Їгссарсава сееесеесів всайсссва саввіїсісї 660 веаавсеваї сієевассва г асссір асаацавссесіеррвавсссваавасниі 720
Зо ввІагїєвни асівссаврса сіасерааре асассрціса сацівєессс гєресасвааа 780 вісваїагєаа аасесесавс сессацеаа віааївіасс сассассца фіврасааї 840 ваааавісса агеріассаї Тайсасвіс ааврвааавс агсісівіссаавсссісїв 900
МЕСсСссвесс ссіссааассакцсівевів сірріврвісвісвесевавіїсіввссірс 960 їансісівсісвівасіві Іесайцсаїс атиісірее їравраїссаа ааваавссяс 1020 сівсіссаїга єсрайцасаї раагаїврасі ссасессесс сівессссасаарвааасас 1080
Іассавссії асвсассасс тававайціс всівссіаїс вравссваві вааайниіісї 1140 аваїсавсів агесісссес сіаїсавсає рргасарааїс аасінасаа гвавсівраас 1200 сівевісвса вагаавравіа сгасвіцщіе расааасесс вревссваврассівраваїв 1260 вЕвввЕваавс сваваареаа вааїссісаа гаарессірі асаасвавсіїсааааавас 1320 ааааївесів аресеіасіс Іраваїсевс аїгааввесе авсеравасв арвсаавввї 1380 сасвагевесі Їріаїсавее ссівавіаса єссасаааре асассіаївра сесссіссас 1440 агвсавесас Івсссссасе став 1464 «210» 68 «211» 487 «2125» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 68
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Ге Геи Гей Рго Ге Аа Гец Гей Гей 1 5 10 15
Ніх Аа Аа Аге Рго сп Іе СіІп Геи Маї Си 5ег Су су су Маї 20 25 зо ма! сп Рго Су Аге бегГеи Аге Геи 5ег Су Маї Аа бег Су Ре 35 до 45
Тиг Рве Гух Азп Туг Су Меї Ні» Тгр Маї Аге СіІп АїЇа Рго су Гу 50 55 6о0
Су Гешим сш Тгр Маї Аа Ма! Пе Тгр Туг Азр Су 5ег Азп См Туг 65 70 75 80
Туг бу Азр Рго Маї Гуз Су Аге Рпе ТАг Пе 5ег Аге Ар Азп 5ег 85 90 95
Гуз Азп Меї Геи Туг Геи біп Меї Азп 5ег Геи Аге Аа Азр Азр Тиг 100 105 110
Аа Маї Туг Туг Суз Аа Аге 5ег Су Пе Аа Маї Аа Су Аа Рпе 115 120 125
Зо
Азр Туг Тгр бу Сп су ТНг Ге Маї ТАг Маї 5ег 5ег СбіІу су су 130 135 140
Су 5ег су Су Су Су бег су Су Су Оу бег СОЇ Пе Маї Гей 145 150 155 160
ТАг біп 5ег Рго Азр ТНг Геи 5ег Геи 5ег Рго Су ОЇши Гуз АІа Тиг 165 170 175
Ге 5ег Суз Аге Аа 5ег Сп 5ег Маї 5ег 5ег 5ег Ре Геи Аа Тгр 180 185 190
Туг біп біІп Гух Рго Су СіІп Аа Рго бегГеи Ге Пе Туг Маї Аа 195 200 205 5ег Аге Аге Аа Аа Су Пе Рго Ар Аге РНе 5ег Су 5ег Су бег 210 215 220
Су Тиг Азр РНе ТНг Ге ТАг Пе 5ег Аге Гей См Рго Сім Ар Ре 225 230 235 240
Су Меї Ре Туг Су» Сп Ні Туг ОІу Аге ТНг Рго Рне Тнг РНе Су 245 250 255
Рго Су Тиг Гуз Маї Ар Пе Гуз Аге Аа Аа Аа Іе Си Ма! Ме 260 265 270
Туг Рго Рго Рго Туг Гей Ар Азп Си Гу 5ег Азп су Тиг Пе Пе 275 280 285
Ні Маї Гу Су Гуз Ніз Геи Су Рго 5ег Рго Гей РНе Рго су Рго 290 295 зоо0 5ег Гуз Рго РІе Тгр Маї Геи Маї Маї Ма! су Су Ма! Ге Аа Су 305 310 315 320
Туг бегІец Ге Маї Тниг Маї АІа Ре Іе Пе Рне Тгр Маї Аге 5ег 325 зз0 335
Гуз Аге бег Аге Гец Геи Ні 5ег Азр Туг Меї Азп Меї Тнг Рго Аге з40 345 350
Аге Рго Су Рго ТНг Аге Гуз Ні Туг Сп Рго Туг Аа Рго Рго Аге 355 360 365
Азр Ріє Аїа Аа Туг Аге 5ег Аге Маї Гуз Рпе 5ег Аге 5ег Аа Азр 370 375 зво
Аа Рго Аа Туг Сп Сп су Сп Азп біп Геи Туг Азп бін Гей Азп 385 390 395 доо
ІГец су Аге Аге Си Ом Туг Азр Маї Гей Ар Гуз Аге Аге Сіу Аге
405 410 415
Ар Рго Сім Меї су Оу Гу Рго Аге Аге Гув Азп Рго Сп сЇми Су 420 425 430
Гей Туг Азп бІш Гец СіІп Гу Азр Гуз Меї АїЇа Сім Аа Туг бег СЇШ 435 440 445
Пе сІу Ме Гуз су сЇм Аге Аге Аге Су Гу Оу Ні Азр Су Гей 450 455 460
Туг біп бу Геи 5ег ТНг Аа ТАг Гуз Азр ТНг Туг Азр Аа Геиц Ні 465 470 475 480
Меї сп Аа Геи Рго Рго Аге 485 «210» 69 «211» 1437 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 69 агвесасісс ссріаасівс їсіесівсів ссвіееСсатівсіссівса сессесасес 6о0 ссесавайнцс авсісвівва вісарвівві єесвіввис авсссерасе вісссівсва 120 сІСсІСНВІв гесаавсвв аассні аараасіаєе всаїрсасів ввівравесав 180 вссссівваа аарвасівва вігевесії віраїсіррі асвасверіссаасвааїайї 240
Іагеесваїс сівівааррве асевіНаса агсісасесе аїаасісааа ваасатвсів 300 їассірсааа іІгаасісісї єсесесіваї васасівсся Івіїацакнце сесісвваві 360 вЕїасфсессв ЇсеЕсарвавс айівацатіррервесаав ввасссісві васавіваві 420
Іссввавеве ваввицсіве ірваресевсісівріввеРе гаресавсва ваїсвисія 480 асссавісіс сірасасасі вісасірісс ссіврірааа авессасасі вісі віара 540 всвісссава всвіцссав сс сс всасееіагс аасааааасс ссеввсаввсі 600 ссаавсіес Іраїстіасеї вессавссес севессесарв всагсссірааввицавс 660 веНсСіІввва єсвевасева сісасстр асаагаїсас евсірраасссваавасис 720 веааїнниц айрессавса сіасераава асіссайса ссіпіеесссврваасваар 780 віавасаїса агаравсавс авсссісвас аасвараааї ссааїрраас сайаїссаї 840 віваавревва аасасісівя сссисасса НеРисссів васссарсаа сс нів 900
ВИСІВРІСВ ВРІВЕВееВ сСвІСсіввсіївНасісссіссісвНасавісвссис 960 аєсаа:-сни врвараїс сааааваавс сессівсісс аїавсванца саїраатаї 1020
Зо асіссасесс есссірессс сасааррааа сасіассавс спасевсассассіававаї 1080
КсСеСсівссї аїсеравсся авірааайці Іставаїсав сіраївсісс сессіаїсав 1140 саррвасава аїсаасіна сааїгравсів аассіверіс всарараава віасвасвії 1200
МНевгасааас єссеевессе аваїссівав аїерререва авссрараар вааврааїссї 1260 саараавгесс Іртасаасва єсісааааа гасааааїве сіраресвіа сісіваваїс 1320 веЕсагвааве єсравсеває асвавесаав ерісасваїв всівіаїса вєевссіраві 1380 асавссасаа аррасассіа грасесссіс сасаїрсаве сасівссссс асесіад 1437 210» 70 «211» 478 «2125 БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 70
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Геи Ге Геи Рго Гей АІа Геи Гец Гей 1 5 10 15
Ніх Аа Аа Аге Рго сп Іе СіІп Геи Маї Си 5ег Су су су Маї 20 25 зо маї сп Рго Су Аге бег Геи Аге Геи 5ег Су Маї Аа 5ег Сіу Рпе 35 4о 45
Тиг Рве Гух Азп Туг Су Меї Ні» Тгр Маї Аге СіІп АїЇа Рго су Гу 60
Оу Геи См Тгр Маї Аа Ма! Пе Тгр Туг Азр Су 5ег Азп Сім Туг 65 70 75 80
Туг бу Азр Рго Маї Гуз Су Аге Ре ТАг Пе 5ег Аге Ар Авп 5ег 85 90 95
Гуз Азхп Меї Геи Туг Геи біп Меї Азп 5ег Геи Аге Аа Ар Ар Тиг 100 105 110
Аа Маї Туг Туг Су Аа Аге 5ег су Пе Аа Маї Аа Су АІа Ре 115 120 125
Азр Туг Тгр бу Сп су ТНг Ге Маї ТАг Маї 5ег 5ег СбіІу су су 130 135 140
Су 5ег су Оу Су Су бег су су су су бег Си Пе Ма! Гей 145 150 155 160
ТАг біп 5ег Рго Азр ТНг Геи 5ег Геи 5ег Рго Су ОЇши Гуз АІа Тиг 165 170 175
Зо
ІГец 5ег Сув Аге Аа 5ег Сп 5ег Маї бег 5ег 5ег Рне Геиц АїЇа Тгр 180 185 190
Туг біп біІп Гух Рго Су СіІп Аа Рго бегГеи Ге Пе Туг Маї Аа 195 200 205 5ег Аге Аге АїЇа Аа Су Пе Рго Ар Аге РНе 5ег су 5ег Оу бег 210 215 220
Су Тиг Азр РНе Тиг Гей Тнг Пе 5ег Ага Гей ОЇи Рго сш Ар Рпе 225 230 235 240
Су Меї Ре Туг Сух СіІп Ні Туг ОІу Аге ТНг Рго Рпє ТНг РНе Су 245 250 255
Рго су ТНг Гуз Маї Ар Пе Гуз Аге Аа Аа Аа Гей Азр Ап сш 260 265 270
Гуз бег Азп бу Тиг Пе Пе Ні Маї Гу Су Гуз Ні Гей Су Рго 275 280 285 5ег Рго Гей РНе Рго Су Рго 5ег Гуз Рго РІе Тгр Маї Ге Маї Маї 290 295 зоо0 ма! СіІу Су Ма! Геи Аа Су Туг бег Гей Геи Маї ТНг Маї АІа Рнпе 305 310 315 320
Пе Пе РНе Тгр Маї Аге 5ег Гух Аге 5ег Агр Геи Геи Ні бег А5р 325 зз0 335
Туг Меї Азп Меї Тнг Рго Аге Аге Рго Оу Рго ТНг Аге Гуз Ні Туг з40 345 350
Сп Рго Туг Аа Рго Рго Аге Азр РНе Аїа Аа Туг Аге 5ег Аге Маї 355 360 365
Гуз Рне 5ег Аге 5ег Аа Азр Аїа Рго Аа Туг Сп Сп Су СіІп Азп 370 375 зво біІп Геш Туг Азп бій Гей Ап Гей Су Аге Аге См Ом Туг Азр Маї 385 390 395 4оо
Гец Ар Гуз Аге Аге Су Аге Ар Рго СІ Меї су су Гуз Рго Аге 4до5 410 415
Аге Гуз Азп Рго Сп Сім су Гей Туг Азп би Гей Сп Гуз Ар Гуз 420 425 430
Меї Аїа Си Аа Туг 5ег Си Пе сІу Меї Гух су СОЇ Аге Аге Аге 435 дао 445
Су Гу Су Ні Азр бу Геи Туг бІп Су Геи 5ег ТНг Аа ТНг Гу
450 455 460
Ар ТНиг Туг Азр Аа Геиц Ні Меї сСіп Аа Геи Рго Рго Аге 465 470 475 «2105» 71 «211» 1545 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 71 агвесасісс ссвіаасівс ісівсівсів ССР еСсасівсіссівса сессесасес 6о0 ссесаваїас авсирісва аїссерівес ввів вівсавссірвасев савссівсвя 120 сшЕсСНнесе їеессавсве ашйіассицс аараасіасе враївсайе вріссвссар 180 всасссевса аагвссіїва вівєевіеса врівагсівві асвасевсавіаасвавіаї 240 їагеесвасс ссрігааввя ааввіцасі айісаарав аїааїавіаа ваасаївця 300 їагсірсааа ггаасавісї рварарсевас васасівссе Іріасіасів івсісвсісс 360 вЕсассесір Їгвсавввес спірасіасіреврісаве ввасевсівврі сасввцаві 420
ЇССЕРЕРеСсе БІвВИСсСев арравесеві ІССееСсеВСсСе всСераїсава ааїсвйсії 480 асісававіс ссраїтасесі віссцрісї ссревравааа аавссасасі вавсівссва 540 вссісасаві савіаавцс сайцссіс вссірріассавсааааассевевсавяисс 600 сснсссівс Чаїстасві вессісіавре ававссессе віайссіва ссввйсавс 660 веаавіввії ссервасіва цасесіс асвафсіссс вайрвавсссвавваціс 720 веЕвасисї асівісавса Маївраава асесссіца ссисевіссвераасіаав 780 виватаца авсеевсівсівсссцавс аасіссаїса гріайисісасисвія 840 ссавіайцсс Івссарссаа ассрассаса ассссавсас сіавассісстасісссвсі 900 сссассаїтав снсасавсс всівавіце арессавраве ссірісвессівсівсавеис 960 веавсавнцс асассаввев асивасні рсаївріваса ісіагайців ввсіссасія 1020 вСвЕваассі гсеРЕвІВСІ ССНИрІСса сісвеНаїса сасіріайце сааїсагаве 1080 аатаваїсса ааараавссе ссівсіссаї арсрайцаса іваагаївасіссасвссвс 1140 ссіресссса саарраааса сіассарвссі Тасесассас старваванії сесівссітаї 1200 севавссвав грааайніс гараїсавсі ваїесісссе ссіаїсарса єерасавааї 1260 саасіцаса аїгавсіраа ссірерісвс ававаававі асвасвінні ррасааасвс 1320
СсеРеЕСссвав агссівараї гЕвгереваав ссваваарва аваагссіса араарвссів 1380 їасаасварвс Нсааааара сааааїтервсі гаресвіасі сівараїсве саїгааввяс 1440 вавсевавас вавесааврев ісасваївес Кріаїсаве вссіравіасавссасааан 1500 васассіаїв асесссісса саїрсареса сірсссссас всіав 1545
«2105 72 «211» 514 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 72
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Геи Ге Геи Рго Ге Аа Геи Гей Гей 1 5 10 15
Ніх Аа Аа Аге Рго сп Іе СіІп Геи Маї Си 5ег Су су су Маї 20 25 зо ма! сіІп Рго Су Аге бегГеи Аге Геи 5ег Су Маї Аа бег Су Ре 35 до 45
ТАг Рпе Гуз Азп Туг Су Меї Ні Тгр Маї Аге Сп Аа Рго Оу Гуз 50 55 6о0
Оу Гей См Тгр Маї Аа Маї Пе Тгр Туг Азр Су бег Азп Сім Туг 65 70 75 80
Туг бу Азр Рго Маї Гуз Су Аге Рпе ТАг Пе 5ег Аге Ар Азп 5ег 85 90 95
Гуз Азхп Меї Геи ТугІеи біп Меї Азп 5ег Геи Аге Аа Азр Азр Тиг 100 105 110
Аа Маї Туг Туг Суз Аа Аге 5ег Су Пе Аа Маї Аа Су Аа Рпе 115 120 125
Азр Туг Тгр Оу СбіІп су ТАг Ге Маї ТАг Маї бег 5ег СбіІу су су 130 135 140
Су 5ег су Су Су Су бег су Су Су Оу бег СОЇ Пе Маї Гей 145 150 155 160
ТАг біІп 5ег Рго Азвр ТНгГеи 5егГеи 5ег Рго бу ОЇми Гуз АІа Тиг 165 170 175
ІГец 5ег Сув Аге Аа 5ег Сп 5ег Маї бег 5ег 5ег РНе Гей Аа Тгтр 180 185 190
Туг біп біІп Гух Рго Су СіІп Аа Рго бегГеи Ге Пе Туг Маї Аа 195 200 205 5ег Аге Аге Аа Аа Су Пе Рго Ар Аге РНе 5ег Су 5ег Су бег 210 215 220
Зо
Су Тиг Азр РНе ТНг Ге ТАг Пе 5ег Аге Гей См Рго Сім Ар Ре 225 230 235 240
Су Меї Ре Туг Су» Сп Ні Туг ОІу Аге ТНг Рго Рне Тнг РНе Су 245 250 255
Рго су ТНг Гуз Маї Ар Пе Гуз Аге АїЇа Аа Аа Геиц 5ег Ап 5ег 260 265 270
Ме Ме Туг Рне 5ег Ні Ре Маї Рго Ма! Ре Гей Рго АїЇа Гуз Рго 275 280 285
ТАиг Те ТАг Рго Аїа Рго Аге Рго Рго ТНг Рго АїЇа Рго Тиг Пе Аа 290 295 зоо0 5ег біп Рго Геи 5егІеи Аге Рго Сім АїЇа Сув Аге Рго АїЇа Аа Су 305 310 315 320
Су Аа Маї Ні ТНг Аге бу Геи Ар РНе Аа Сух Ар Іе Туг Пе 325 зз0 335
Тгр Аа Рго Геи Аа Су Тиг Сух СОІУ Ма! Гец Ге Ге 5егГеи Маї з40 345 350
Ме ТАг Геш Туг Суз Азп Ні Аге Азп Аге 5ег Гуз Аге 5ег Агр Гей 355 360 365
Гец Нів бег Азр Туг Меї Азп Меї ТНг Рго Аге Аге Рго Су Рго ТНг 370 375 зво
Аге Гуз Ні Туг СІп Рго Туг Аа Рго Рго Аге Ар Рне АїЇа Аа Туг 385 390 395 доо
Аге 5ег Аге Маї Гуз РНе 5ег Аге 5ег Аа Азр Аа Рго Аа Туг сп 4до5 410 415 біІп су Сп Авп біп Ге Туг Азп бЇш Гей Азп Гей Су Аге Аге ОЇи 420 425 430
См Туг Азр Маї Гей Ар Гуз Аге Аге Су Аге Ар Рго бі Меї су 435 дао 445
Су Гуз Рго Аге Аге Гух Азп Рго біп Сім су Гей Туг Азп бін Гей 450 455 460
Сп Гуз Азр Гуз Меї Аа Сім Аа Туг 5ег сЇи Пе су Ме Гуз ОЇу 465 470 475 дво
Сім Аге Аге Аге Оу Гуз Оу Ні Азр Оу Ге Туг Сп су Гей 5ег 485 490 495
ТАг Аа ТНг Гуз Азр Тиг Туг Азр Аа Геи Ніх Меї сп Аа Гей Рго
500 505 510
Рго Аге «2105» 73 «211» 1476 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 73 агвесасісс ссвіаасівс ісівсівсів ссвІЇееЕСсатівсіссівса свссесасес 6о0 ссесаввівс авсіврівса гарігвеввса гаавріааара авссіврівс сісірісааа 120 віНавняеса аавсафсіве віаїасціс ассевНасіагагїссаце ввіїсввсав 180 вссссевавс аревасівва вігвагревс іеваїсаасс сааайсавре сеесасіаас 240 їагесісааа авіссавее савррісаса аїеесссвре аїасисааттавсассвіс 300
Іагатеваїс Навісевсі всевсавівас вагассесів ісіасіаце свсааррваїс 360 авеевсевса айсівни грасіацер рессареваа сасірвіврас свісіссісї 420 ввІввавесе віавірвіве агесеевіссераввавеве всіссраїагавіваївасі 480 сааавісссе аїавсічевс аріафсісії гверраасесе ссасіацаа сіріаааїсс 540 асссавісса нсістагас сістаасаас аавааййссісесріввіаїсарсааааа 600 сссвееСсавс сассіааасі всцагагссіревссавса їсавевавіссевсвісссї 660 ваїсевса всеріавіве сагсерваса васисесісівассаїсавіавссіссав 720 всівааваге Їсесавівіа Пакцессав саріасиса всасваєвієїавсисввв 780 сарреаасса аврсівєваааї ааарававсі всавсааїгсев арвіраївіа сссассісса 840
Іагсірраса аїргаааавіс сааїересасі аїсагасасв ігаарресаа асассівівї 900 ссаїсіссас НЕСсссевЕ СССсвІСТааа ссіісівгеРівсіврівРІЕвівРЕСвРа 960 висІвессІ вНайсасі всірврісасс віввстіса сані не вгріаараїсс 1020 ааааваавсс вссівсісса тарсвамцас аграатаєвра сіссасевссе сссіввсссс 1080 асааррвааас астассавсс МКасесасса ссіававай ісвсірссіаїсевавссва 1140 віваааниї сіараїсавс граївсіссс вссіаїсарс аверасараа їсаасінас 1200 ааївавсіра ассірерісе сававаарав їасвасві Іррасааасе ссврввессва 1260 вагссірава Їгеееереаа єссварааре аавраассіс ааваарессі віасаасвав 1320 сисааааає асаааасгеес іІваресевіас ісіравраїсе всаїваарев свавсввава 1380 свавесааве вісасваїре си ріаїсав рессіваріа савссасааа ррасасстаї 1440 васесссісс асаївсавес асівссссса свсіав 1476
Зо «210» 74 «211» 491
«212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 74
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Геи Ге Геи Рго Гей АІа Геи Гец Гей 1 5 10 15
Ні Аа Аа Аге Рго СіІп Маї СІп Геи Маї сСіІп 5ег Су АІа СЇш Маї 20 25 зо
Гуз Гуз Рго Су Аа 5ег Маї Гух Маї бег Су Гуз Аа 5ег Су Туг 35 до 45
Тиг Ре Тиг Су Туг Туг Пе Ні Тгр Маї Аге Сп Аа Рго Си біп 50 55 6о0
Оу Гей См Тгтр Меї су Тгр Пе Авп Рго Азп 5ег Су бу Тиг Азп 65 70 75 80
Туг АІа СІп Гуз Рне Сіп Су Аге Маї Тиг Меї Аа Аге Азр ТНг 5ег 85 90 95
Ме бег Тнг Маї Туг Меї Азр Гей 5ег Аге Геи Аге 5ег Азр Ар ТНг 100 105 110
Аа Маї Туг Туг Суз Аа Аге Пе Аге Су Су Азп 5ег Ма! Рпе Азр 115 120 125
Туг Тгр Оу СІп су ТНгГеи Маї ТНг Маї 5ег 5ег Су бу Оу сЇу 130 135 140 5ег бу Су су су 5ег Су СіІу Су Су бег Азр Пе Ма! Меї ТНг 145 150 155 160
Сп 5ег Рго Ар 5ег Гей Аа Маї бег Ге Су См Аге Аа ТНг Пе 165 170 175
Азп Су Гуз 5ег Тиг Сп 5ег Пе Геи Туг ТНг 5ег Азп Азп Гуз Азп 180 185 190
Рпе Геш Аа Тгр Туг Сп Сп Гух Рго Су біп Рго Рго Гу Гей Гей 195 200 205
Ме бег Тгр Аа 5ег Пе Аге Си 5ег Оу Маї Рго Азр Аге РНе 5ег 210 215 220
Су бег Оу 5ег Су ТНг Азр Рпеє Аа Геи Тнг Пе 5ег бегГеи сп 225 230 235 240
Аа Сім Азр Маї Аа Маї Туг Туг Су біп СіІп Туг Рне 5ег Тиг Меї
245 250 255
Рпе 5ег Ре Су Сп су ТНг Гуз Гей Си Пе Гуз Аге Аа Аа Аа 260 265 270
Пе Сім Маї Меї Туг Рго Рго Рго Туг Геи Азр Азп Сім Гуз бег Азп 275 280 285
Су ТНг Пе Пе Ні» Маї Гу Су Гуз Ні Гей Сух Рго 5ег Рго Гей 290 295 зоо0
Ре Рго Су Рго 5ег Гуз Рго РНе Тгр Маї Геи Маї Маї Маї су су 305 310 315 320
Ма! Гец Аа Сузх Туг зегІец Геи Маї Тиг Маї АІа Ре Пе Пе Рпе 325 зз0 335
Тгр Маї Аге 5ег Гуз Аге бег Аге Гец Гей Ні 5ег Азр Туг Меї Азп з40 345 350
Меї Тнг Рго Аге Аге Рго Су Рго ТНг Аге Гуз Ні Туг Сп Рго Туг 355 360 365
Аа Рго Рго Аге Азр РНе Аїа Аа Туг Аге 5ег Аге Маї Гу РНе 5ег 370 375 зво
Аге 5ег Аа Ар АїЇа Рго Аа Туг СІп Сп су Сп Азп біІп Ге Туг 385 390 395 доо
Азп бій Геи Азп Геи Су Аге Аге Сн ОЇ Туг Ар Маї Гей Ар Гу 4до5 410 415
Аге Аге Су Аге Ар Рго бЇи Меї Су су Гуз Рго Аге Аге Гу Ап 420 425 430
Рго біІп ОЇш су Гей Туг Азп Сім Гей Сіп Гуз Ар Гуз Меї АїЇа сш 435 дао 445
Аа Туг бег сш Пе сІу Ме Гух СіІу Сім Аге Аге Аге Оу Гуз Су 450 455 460
Ні Азр Су Гец Туг біІп Оу Геи 5ег ТНиг Аа ТНг Гуз Азр Тиг Туг 465 470 475 дво
Ар Авіа Геш Ні Меї сп Аа Геи Рго Рго Аге 485 490
Зо «2105 75 «211» 1449 «212» ДНК
«213» Ното зарієпь «400» 75 агвесасісс ссвіаасівс ісівсівсів ссвІЇееЕСсатівсіссівса свссесасес 6о0 ссесаввіас авсіврівса вавсеевесс враврісаааа авсссеввесисавіцаав 120 віНавсівса авесиссев сіасасср ассевНастагайцсасів ввМНарасав 180 всассівавс ааргвасівва рігврасеевв вванаасс ссааїавсеввевассаас 240 їасвсссарва авцісааве ссвавіваса аїерсасвав асассіссай йссасівів 300
Іасагевасіїравссессі сарвісавас васассесав іріасіасів їесесвааїс 360 сеЕсееЕсСвраа асавсвівії їрасіасівр врісаввеса сеіерівассвівісйцсс 420
ББавЕВБееВЕ Бассіввіве СЕВевесісс весввавесе віавіватагівіватївасі 480 савісассве асавіснес ів сасії грівгававее ссассаїааа Цевіаааавс 540 асссававса псістасас аїсіаасаас аааааціссірессірвіа ссарсаваавн 600 сссврасавєс сасссааайї всівацавсіревссавса йсвавааїсівеввисся 660 вассвсіні ссрервісіве сісІревасс васісест ірассаїаав ссісіснсав 720 вссваавасе Ісесавіата стацвісаа савіаннн сіассаїв й КссисвесС 780 савгвеваасіа авіегавгаї саавгававса всівсацев аїааграраа віссааїввс 840 астамнаїсс асріраааре їааасассів грісссісас сссівіссаввассіарві 900 ааассакнсі вгевісцерві ївіарісеве есе в саївНацсссисивівя 960 асавісвссії Чаїсаци сірерівара Іссааааваа вссессівсі ссаїарсваї 1020 їасаїгаасга грасіссасе ссесссірес сссасаарва аасасіасса єссмасвеса 1080 ссассіавав ацшісесівс стаїсвравс свавіраааї Нсіаваїсавсіваївсї 1140 сссвссіаїс арсарераса гааїсааси гасааїравсіраассірерісвсараваа 1200 вавіасвасе Кн ерасаа асессеверес сваваїссір араїревеве ваарссвава 1260 авваавааїс сісаарааре ссівїасаас варсіїсааа аавасааааї вєесівавися 1320 їасіствара ІсеРеЕсаграа єеесвавсев авасвавеса арервісасва гввсівіаї 13850 саврвессіва ріасарссас аааргасасс їаграсессс іссасаїрса весасівссс 1440 ссасвсіає 1449 2105» 76 «211» 482 «2125» БІЛОК «213» Ното зарієпь «4005» 76
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Геи Ге Геи Рго Гей АІа Геи Гец Гей 1 5 10 15
Ніх Аа Аа Аге Рго СіІп Маї Сп Гей Маї Сп 5ег Оу АІа сЇши Маї
20 25 зо
Гуз Гуз Рго Су Аа 5ег Маї Гух Маї бег Су Гуз Аа 5ег Су Туг 35 до 5
Тиг Ре Тиг Су Туг Туг Пе Ніз Тгр Маї Аге Сп Аа Рго Си Сп 50 55 6о0
Оу Гей См Тгтр Меї су Тгр Пе Авп Рго Азп 5ег Су бу Тиг Азп 65 70 75 80
Туг АІа СІп Гуз Рне Сіп Су Аге Ма! ТНг Меї Аа Аге Азр ТНг 5ег 85 90 95
Ме бег Тнг Маї Туг Меї Азр Гей 5ег Аге Геи Аге 5ег Азр Ар ТНг 100 105 110
Аа Маї Туг Туг Суз Аа Аге Пе Аге Су Су Азп 5ег Ма! Рпе Азр 115 120 125
Туг Тгр су біІп су ТНг Ге Маї Тнг Маї 5ег 5ег Су СІу СІу су 130 135 140
Зо 5ег бу Су су су 5ег Су Су Су Су 5ег Азр Пе Ма! Меї ТАг 145 150 155 160
Сп 5ег Рго Ар 5ег Гей Аа Маї бег Ге Су См Аге Аа ТНг Пе 165 170 175
Азп Су Гуз 5ег Тиг Сп 5ег Пе Геи Туг ТНг 5ег Азп Азп Гуз Азп 180 185 190
Рпе Геш Аа Тгр Туг Сп Сп Гух Рго Су біп Рго Рго Гу Гей Гей 195 200 205
Ме бег Тгр Аа 5ег Пе Аге Си 5ег Оу Ма! Рго Азр Аге РНе 5ег 210 215 220
Су бег Оу 5ег Су ТНг Азр Рпеє Аа Геи Тнг Пе 5ег бегГеи сп 225 230 235 240
Аа Сім Азр Маї Аа Маї Туг Туг Сув СІп Сп Туг Рне 5ег Тиг Меї 245 250 255
Рпе 5ег Ре Су Сп су ТНг Гуз Гей Си Пе Гуз Аге Аа Аа Аа 260 265 270
Зо
Гецй Ар Азп Си Гуз бег Азп Су ТАг Пе Пе Ні Маї Гуз Су Гує 275 280 285
Ніз Гей Су» Рго 5ег Рго Гей РНе Рго Су Рго 5ег Гу Рго Ре Тгтр 290 295 зоо0
Уа! Геи Маї Маї Маї Су Су Маї Ге Аа Сух Туг бегІец Геи Маї 305 310 315 320
ТАг Маї Аа РНе Пе Пе Ре Тгр Маї Аге 5ег Гуз Аге 5ег Агр Гей 325 зз0 335
Гец Ні бег Азр Туг Меї Азп Меї ТНг Рго Аге Аге Рго Сіу Рго ТНг з40 345 350
Агев Гуз Ні Туг Сп Рго Туг Аа Рго Рго Аге Азр РНе АїЇа Аа Туг 355 360 365
Аге 5ег Аге Маї Гуз РНе 5ег Аге 5ег Аа Азр Аа Рго Аа Туг сп 370 375 зво біІп су Сп Авп біп Ге Туг Азп бЇш Гей Азп Гей Су Аге Аге ОЇи 385 390 395 4доо
Сн Туг Азр Маї Гей Ар Гуз Аге Аге біІу Аге Ар Рго сЇи Меї су 4до5 410 415
Су Гуз Рго Аге Аге Гух Азп Рго біп Сім су Гей Туг Азп бін Гей 420 425 430
Сп Гуз Азр Гуз Меї Аа Сім Аа Туг 5ег сЇш Пе су Меї Гуз Оу 435 440 445
Сім Аге Аге Аге Оу Гуз Оу Ні Азр Оу Ге Туг Сп су Гей 5ег 450 455 460
ТАг Аа ТНг Гуз Азр Тиг Туг Азр Аа Геи Ні Меї Сіп Аа Гей Рго 465 470 475 480
Рго Аге «2105 77 «211» 1557 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 77 агвесасісс ссвіаасівс ісівсівсів ссРіїреСсаївсіссівса сессесасес 6о0 ссесаавнцнс авсісрірса гавсеварсі гарвіраааа аассавесес сіссвіНаав 120
Зо віІВіІсСнеса аавссавсее аїасасаці ассревіасіагайсасів вріраввсав 180 вссссіваас агввсстіїва аїрраїееее ївраїгсааїс сааацссвр врраассааї 240 їагесісава аайісарее сававіваса аїеессавее асассісааї сарсасавіс 300
Іасаїевассіравссессі варвісіваї расасавссвісіасіасіріесссвваїс 360 авагвервеваа асавірісії свасіайцее гресареваа сссіввірасівісіссісс 420
БЕББеавеве віавсевеее авесеесавс вЕСЕВЕвВІВ вБИсСІвасаєівЦатвасс 480 саагссссав асісісівес срівавссів рріравравав ссассаїсаа Несаавісс 540 асссававса їасісіаїас рісазасааєаавраайціссівесвірріаїсарсаааає 600 ссверіІсаас сасссаавії в рацавсіреесаїсаа йсваваагїсіресвісссї 660 вагаввца гєсервавсев гарівваасс васітівсвсівассацісагїсссисав 720 всававєвасе ївесіріріа Насівісаа савіасиса всасваїві НсСЕИсвесС 780 савгвевасва арсіграваї ааарсевесс всавсасіса всаасавсає саївіаснї 840
Ісїсацшсв ісссаві ці Ісіссссесс ааасссасса сіассссірсісставессії 900 сссасісссев сасссассаєтівсисссаа ссісірісасіравесссраавссівсара 960 ссівссесав вареевсіві всасасссес ввісіввац Несиріраагстасай 1020
ІвВЕССССИН ІРессеваас сівсвравів НеИесіва вссп вена сасвнвіас 1080 ївтаагсаса гааасавагс саааарааврс сессівсісс аїавсваца саїваатаїв 1140 асіссасесс есссірессс сасааррааа сасіассавс спасесассассіававаї 1200
Ксесівссї аїсеравсся авірааайці Істараїсав сіраїесісс сессіаїсар 1260 саррвасава аїсаасіна сааїгравсів аассіверіс всарараава віасвасвії 1320
Невасааас єссеееессе авагссівравр аїгееееева арссраваав вааврааїссї 1380 саараавесс Іртасаасва вєсисааааа вгасааааїве сіраресвіа сісівараїс 1440 веЕсагвааве єсравсеває асвавесаав ерісасваїв всівіаїса вєевссіраві 1500 асавссасаа аггасассіа ггасесссіс сасаївсаре сасівссссс асвсіар 1557 2105» 78 «2115» 518 «2125» БІЛОК «213» Ното зарієпь «4005» 78
Меї Аа Геи Рго Маї Тиг Ага Геи Ге Геи Рго Гей Аіа Ге Геи Гей 1 5 10 15
Ні Аа Аа Аге Рго СіІп Маї СІп Геи Маї Сп 5ег Су Аа Си Маї 20 25 зо
Гуз Гуз Рго Су Аа 5ег Маї Гух Маї бег Су Гух Аа бег Су Туг 4о 45
Тиг Ре Тиг Су Туг Туг Пе Ніз Тгр Маї Аге Сп Аа Рго Си Сп
50 55 6о0
Оу Гей См Тгр Меї су Тгр Пе Азп Рго Азп 5ег су бу Тиг Азп 65 70 75 80
Туг АІа СІп Гуз Рне Сіп Су Аге Ма! ТНг Меї Аа Аге Азр ТНг 5ег 85 90 95
Пе бег ТНг Ма! Туг Меї Ар Геи 5ег Аге Геи Аге 5ег Азр Азр ТАг 100 105 110
Аа Маї Туг Туг Суз Аа Аге Пе Аге Су Су Азп 5ег Ма! Рпе Азр 115 120 125
Туг Тгр Оу СІп су ТНгГеи Маї ТНг Маї 5ег 5ег Су бу Оу сЇу 130 135 140 5ег бу Су су су 5ег Су СіІу Су Су бег Азр Пе Ма! Меї ТНг 145 150 155 160
Сп 5ег Рго Ар 5ег Гей Аа Маї бег Ге Су См Аге Аа ТНг Пе 165 170 175
Зо
Азп Су Гуз 5ег Тиг Сп 5ег Пе Геи Туг ТНг 5ег Азп Азп Гуз Азп 180 185 190
Рпе Геш Аа Тгр Туг Сп Сп Гух Рго Су біп Рго Рго Гу Гей Гей 195 200 205
Пе бег Тгр Аа 5ег Іе Аге См 5ег Оу Маї Рго Ар Аге РНе 5ег 210 215 220
Су бег Оу 5ег Су ТНг Азр Рпеє Аа Геи Тнг Пе 5ег бегГеи сп 225 230 235 240
Аа СЇш Азр Маї Аа Маї Туг Туг Суз біІп Сп Туг Рне 5ег Тпг Меї 245 250 255
Рпе 5ег Ре Су Сп су ТНг Гуз Гей Си Пе Гуз Аге Аа Аа Аа 260 265 270
ІГец 5ег Азп 5ег Пе Меї Туг Рпе 5ег Ні» РНе Маї Рго Ма! Рпе Гей 275 280 285
Рго Аа Гух Рго ТНг ТАг ТНг Рго Аїа Рго Аге Рго Рго ТНг Рго АїЇа 290 295 зоо0
Зо
Рго ТАг Пе Аїа 5ег Сп Рго Геи 5ег Гей Аге Рго Си Аа Сув Аге 305 310 315 320
Рго Аїа АїЇа су Су АїЇа Маї Ні Тиг Аге Су Гей Ар РНе АїЇа Су 325 зз0 335
Азр Пе Туг Пе Тгр Аа Рго Геи АїЇа Су ТНг Сух Оу МаЇ Гец Гей з40 345 350
Геи 5зег Гей Ма! Пе Тниг Геши Туг Сув Азп Ні Аге Азп Аге 5ег Гуз 355 360 365
Аге 5ег Агр Ге Ге Нів 5ег Азр Туг Меї Азп Меї ТНг Рго Аге Аге 370 375 зво
Рго СІу Рго ТНг Аге Гух Нів Туг Сп Рго Туг АЇа Рго Рго Аге Азр 385 390 395 доо
Ре Аїа Аа Туг Аге 5ег Аге Ма! Гу Рне 5ег Аге 5ег Аа Ар АїЇа 4до5 410 415
Рго Аа Туг СІп Сп су Сп Азп біп Геи Туг Азп бій Гей Азп Гей 420 425 430
Су Аге Аге Си Сн Туг Азр Ма! Гей Азр Гуз Аге Аге Оу Аге Азр 435 дао 445
Рго сЇшм Меї Су Оу Гу Рго Аге Аге Гуз Ап Рго біІп ОСЇши Оу Гей 450 455 460
Туг Азп сш Геи біІп Гуз Азр Гу Меї Аа Си Аа Туг 5ег ОЇи Пе 465 470 475 480
Су Ме Гуз су би Аге Аге Аге Оу Гуз Су Ні Ар бу Гей Туг 485 490 495 біІп су Ге 5ег ТНг Аа ТНг Гух Азр ТАг Туг Ар Аа Геш Ніх Меї 500 505 510 біІп Аа Ге Рго Рго Аге 515 «2105» 79 «211» 1461 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 79 агвесасісс ссвіаасівс ісівсівсів ССР еСсасівсіссівса сессесасес 6о0 ссесаввівс авсіссаава вісаврасса реасіївіса аассаавсса васссісарс 120
Зо спассівса ссвісарсее єевсіссаїс авсісівєеве спасіасів гасаївераїта 180 свасавсаїс ссеріаааве Ісівравіве аїсевріаса гасасіаїавіввіїссаса 240 їайсіаагс саїсіснаа варісраай асаайцісасісваїасисааарааїсав 300 нсавксинва аасівраасіс сгівассесе всірасассе ссріріасіа сірівсасяс 360 саававвайї аїгесевасі віїсвайцагіееревсаве ваасісісві васарвівавс 420
ІССБЕСЕБЕЕ ВСЕЕСавсев БЕ Тева авівєвіввав євеесавсва ваїсвіватєв 480 асссававіс сівссасасі вісавіваві ссігееравс вааїсасасі Нссівісва 540 всвісісаві ссрірассас єрассіресе греіассарсаваївссаве ссаресевсса 600 авасіссіва Істасвасес Нстасссес всіасіввігіссссевссавайсіссвва 660 авсвевіссе врасввації тасасцасс аїсісцсатірсавресівавваницесс 720 вівіасіасі врісарсаца саааассівве ссссісасн ісреревесев аасаааавія 780 вааайцааас вєеесавсавс їайрваввів агріасссас сссссіассі врасаасвав 840 ааагссааге всассаїсаї ссасвікаав вріаавсасіїгрірісссісассасіснс 900 ссіревсста всаавссай сіверіссів віврісвіре вавесвівсівессірстаї 960
Ісссіссівв Нассвічес січтагсата ее ріса ваїссаааараавссяссія 1020 сіссатавсе айасаїраа їаїрасісса сессесссів вссссасаав гааасасіас 1080 савсснНасе сассассіав авацісесії вссіагїсера єссравіваа аписіава 1140 їсавсіраїе сісссевссіа Ісавсарера сарааїсаас і асааїра всіраассія 1200 ввІсесаває аававіасва світе рас ааасессеев вссваваїссівараїрввя 1260 вЕваавссва рваареаавраа іІссісаараа рессівіаса асвавсіїса аааарасааа 1320 агвесіваве свіасісіра гаїсевсаїв аагресвавс гравасваве саавввісас 1380 вагеесцві аїсаврессії варіасавсс асааарваса ссіаїрасес ссіссасаїн 1440 саввсасівс ссссасесіа в 1461 2105» 80 «211» 486 «2125 БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 80
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Геи Ге Геи Рго Гей АІа Геи Гец Гей 1 5 10 15
Ніх Аа Аа Аге Рго Сп Маї Сп Гей Сп Ом 5ег Оу Рго біІу Гей 20 25 зо маї Гу Рго 5ег СіІп ТНгГеи 5ег Геи Тнг Су ТАг Ма! бег су Су 35 4о 45 5ег Пе 5ег 5ег Су Аа Туг Туг Тгр Тиг Тгр Пе Аге Сп Ні» Рго 60
Су Гуз Су Геи ОЇ Тер Пе су Туг Пе Ні Туг бег су бег ТНг 65 70 75 80
Туг бег Азп Рго 5ег Геиц Гуз 5ег Аге Пе ТНг Пе 5ег Гей Ар ТНг 85 90 95 5ег Гуз Азп біІп Рпе 5егГеи Гуз Гей Азп 5ег Ма! ТНг Аа Аа Азр 100 105 110
ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Аге біІп Си Азр Туг Оу Су Геи Рпе 115 120 125
Азр Туг Тгр бу Сп су ТНг Ге Маї ТАг Маї 5ег 5ег СбіІу су су 130 135 140
Су 5ег су Оу Су Су бег су Су су Су 5ег СІ Пе Ма! Меї 145 150 155 160
ТНг біп 5ег Рго Аа ТНг Геи 5ег Маї 5ег Рго Су Си Аге Пе ТНг 165 170 175
Ге 5ег Суз Аге Аа 5ег Сп 5ег Ма! ТНг Тиг Ар Гей Аїа Тгр Туг 180 185 190 біІп СіІп Меї Рго су Сп Аа Рго Аге Ге Ге Пе Туг Азр Аа 5ег 195 200 205
ТАг Аге Аа Тиг Су Ріе Рго Аа Аге РНе 5ег Су 5ег Оу 5ег СбІу 210 215 220
ТНг Азр Рне ТНгГеи ТНг Пе 5ег 5ег Геи Сп Аа Си Ар Ре АїЇа 225 230 235 240
Ма! Туг Туг Су Сп Ні Туг Гуз ТНг Тгр Рго Гец ТАг Ре су Оу 245 250 255
Су ТНг Гуз Маї Си Пе Гуз Аге Аа АїЇа Аа Пе ОЇши Маї Меї Туг 260 265 270
Рго Рго Рго Туг Гей Ар Азп Си Гуз бег Азп Су ТНг Пе Пе Ні 275 280 285 ма! Гуз су Гуз Ніз Геи Сузх Рго 5ег Рго Гей РНе Рго біу Рго 5ег 290 295 зоо0
Гуз Рго Ре Тгр Маї Геи Маї Маї Ма! су су Маї Ге Аа Су Туг 305 310 315 320 5егІеи Геи Маї ТНг Маї Аа Рне Пе Іе Рпе Тгр Маї Аге 5ег Гу
325 зз0 335
Аге 5ег Агр Ге Ге Нів 5ег Азр Туг Меї Азп Меї ТНг Рго Аге Аге з40 345 350
Рго СІу Рго ТНг Аге Гух Нів Туг СіІп Рго Туг Аа Рго Рго Аге Азр 355 360 365
Ре Аїа Аа Туг Аге 5ег Аге Ма! Гу Рне 5ег Аге 5ег Аа Азр Аа 370 375 зво
Рго Аа Туг СІп Сп су Сп Азп біп Геи Туг Азп бій Гей Азп Гей 385 390 395 доо
Су Аге Аге Си Сн Туг Азр Маї Гей Азр Гуз Аге Аге бу Аге Азр 4до5 410 415
Рго сЇм Меї сСіу Оу Гуз Рго Аге Аге Гуз Авп Рго біп ОЇ Оу Гей 420 425 430
Туг Азп Сн Гец Сп Гуз Азр Гух Меї АїЇа Сім Аа Туг 5ег Си Пе 435 дао 445 су Ме Гуз Оу би Аге Аге Аге Су Гуз Су Ні Ар бу Гей Туг 450 455 460 біІп су Ге 5ег ТНг Аа ТНг Гуз Азр ТАг Туг Ар Аа Ге Ніх Меї 465 470 475 480 біІп Аа Ге Рго Рго Аге 485 «210» 81 «211» 1434 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 81 агвесасісс ссвіаасівс ісівсівсів ссвІЇееЕСсатівсіссівса свссесасес 6о0 ссесаввівс авесарва вавсевевсса вессівріра арсссарсса аасасівавс 120 сісассівіа сівігіссее їгРІавсай їссавсевве сетацаняе васагегата 180 сессаасасс сієрааааре вісеваріве ацерагаса їссацайцсівврвіссасс 240 їасавіаасс сісісісаа вісісвсай астацавн іерагассістіаавааїсав 300
Шавісіва авсіраасав Ірїаассесс вссрасассе серісіасіа сірівсіарв 360 савваввай асеревевасі висвайцасівеввссавев врасацеві ссассвійса 420
Зо авсеевевсе вСЕвасіве сЕраревева ісірвавесе варесісіва враїсвіаайв 480 асісававєсс савссасссії віссвісісї сссресваас всаїсасісі вавсівіавт 540 всаїсасаві сівНассас арагсівесі гІрріаїсаас аааїессірв всавеисссся 600 свасівцвра Шаїрасес сісіасесев вссасаввасє іссівсссе ви сіссрвв 660
ІсевисіВ всассванці тассираса аїсавіавсііїрсаресава авацісвсі 720 вівіацасі ессаасаца гаарасаїве ссіцпірасайісеесеввеваассааавія 780 ваваїсааас всессесаврс ссіграсааї гараавіста аїгевассаї сайсасвіс 840 аааревааас ассірівссс сісіссісір Псссавесс сисіаавссстисівввії 900
СІСвІвРіІвв ІЕС вІрІ ссірессівсіацсссиствірасарівессінаїс 960 анфцшвевеїваваїгссаа аараавссес сівсіссаїа вєсвацасаї ваатаїнасі 1020 ссасессесс сіввссссас ааррааасас їассарссії асесассассіараваціс 1080 всівссіасс євавссваві вааанисї аваїсавсів абесісссес сіаїсавсар 1140 веасавааїс аасіцтасаа гравсіваас сірррісеса гараававіа свасвінія 1200 васааасесс гееессвава Ігссіраваїе герееваарс сваваарваа вааїссісаа 1260 ваавессівії асаасварсі Ісааааарас ааааїевсів аресвіасісіравраїсввс 1320 агваареесе арсервавасе аресаареві сасваїресі їріаїсавее ссірарвіаса 1380 вссасаааве асассіаїра сесссіссас агесаресас гесссссасе став 1434 «210» 82
211» 477 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 82
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Ге Геи Гей Рго Ге Аа Гец Гей Гей 1 5 10 15
Ніх Аа Аа Аге Рго Сп Маї Сп Гей Сп Ом 5ег Оу Рго біІу Гей 20 25 зо маї Гу Рго 5ег СбіІп ТНгГеи 5ег Гей ТАг Су Тиг Ма! бег Су су 35 до 45 5ег Пе 5ег 5ег Су Аа Туг Туг Тгр Тиг Тгр Пе Аге Сп Ні» Рго 50 55 6о0 су Гуз Су Геи См Тгр Пе су Туг Пе Ні Туг бег су бег ТНг 65 70 75 80
Туг бег Азп Рго 5ег Геиц Гуз 5ег Аге Пе ТНг Пе 5ег Гей Ар ТНг 85 90 95 5ег Гуз Азп Сп РНе 5егГец Гуз Геи Азп 5ег Ма! ТНг Аа Аа Азр 100 105 110
ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Аге біІп Си Азр Туг Оу Су Геи Рпе 115 120 125
Азр Туг Тгр бу Сп су ТНг Ге Маї ТАг Маї 5ег 5ег СбіІу су су 130 135 140
Су бег Оу су Су Су бег су Су су Су бег СЇш Пе МаЇ Ме 145 150 155 160
ТНг біп 5ег Рго Аа ТНг Геи 5ег Маї 5ег Рго Су Си Аге Пе ТНг 165 170 175
ІГец 5ег Сув Аге Аа 5ег Сп 5ег Ма! Тиг Тиг Ар Ге АїЇа Тгр Туг 180 185 190 біІп СіІп Меї Рго су Сп Аа Рго Аге Ге Ге Пе Туг Азр Аа 5ег 195 200 205
ТНиг Аге Аа Тиг Су Рне Рго Аа Аге Ре 5ег Су 5ег Су бег ОЇу 210 215 220
ТАг Авр Ріє Тиг Геи ТНг Пе 5ег 5егГеи СіІп Аа Сім Азр РПе АїЇа 225 230 235 240
Ма! Туг Туг Су Сп Ні Туг Гуз ТНг Тгр Рго Гец ТАг Ре су Оу 245 250 255
Су Тиг Гуз Маї сЇш Пе Гуз Аге АїЇа Аа Аа Гей Азр Азп Сім Гуз 260 265 270 5ег Азп Су ТАг Пе Іе Ніз Маї Гу Су Гуз Ні Геи Су» Рго 5ег 275 280 285
Рго Гец Ре Рго сСіу Рго 5ег Гуз Рго РНе Тгр Маї Геи Маї Маї Маї 290 295 зоо0
Су су Ма! Гей Аа Су Туг 5ег Ге Геи Маї ТНг Маї Аа Ре Пе 305 310 315 320
Пе Рве Тгр Маї Аге 5ег Гуз Аге бег Агр Гец Геи Ні» 5ег Ар Туг 325 зз0 335
Меї Азп Меї Тнг Рго Аге Аге Рго Су Рго ТНг Аге Гуз Ні Туг бІп з40 345 350
Рго Туг АЇа Рго Рго Аге Ар Рнеє АїЇа Аа Туг Аге 5ег Аге Маї Гу 355 360 365
Рне 5ег Аге 5ег Аа Азр Аа Рго АїЇа Туг Сп Сп Су біп Азп Сп
370 375 зво
Гец Туг Азп бІц Гей Азп Геи Су Аге Аге бін ОЇш Туг Ар Маї Гей 385 390 395 доо
Азр Гуз Аге Аге Су Аге Ар Рго бій Меї су Су Гу Рго Аге Аге 4до5 410 415
Гуз Азп Рго біІп бін Оу Гей Туг Азп бі Геи біп Гуз Азр Гуз Меї 420 425 430
Аа Сім Аа Туг 5ег Си Пе су Меї Гуз су См Аге Аге Аге Оу 435 дао 445
Гуз бу Ні Аор су Геи Туг СбіІп Су Геи 5ег ТНг Аа ТНг Гу Азр 450 455 460
ТАг Туг Ар Аа Геш Ні Меї Сіп Аа Геи Рго Рго Аге 465 470 475 210» 83 «211» 1542 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 83 агвесасісс ссвіаасівс ісівсівсів ссвІЇееЕСсатівсіссівса свссесасес 6о0 ссесаввіас авесаврва аавсеесссс вессиріаа аассаавсса васісісарві 120
Нваснвеса ссвісісаре аггаавсайц іссавівеве спацане васцвван 180 севсавсаїс сігераааве вітераатве аїсерНагта йсацагав севіавсасс 240 їанссааїс свісіщіраа аарсаваафс асіацісасісвасассісіаараассар 300
Ксавісіса аасіраасіс свірасавєсе вссвасасав сіріріасіа сірірсасвв 360 саараавай асїееевевесі висракпцагіврееессаав всасасівві васавіаїса 420 авсевіввав вавесіссев єБесевавеа авіввавеся вевевавсва аайвіваїв 480 асссавісіс сарссасесі рісарірісї ссрераваас всаїаасссі сіссівссвя 540 вссавісаві ссвісасвас свгацшіевесі Іеріаїсаасавраїгвссівв всависсссс 600 сеснесіва їсіаїрасес сіссассава всаасіввііссссесссв в савсвва 660
Істеваавсе віасавайці тасасцнасс аїсісаїсаєтвсаавсіва ввацтцвсс 720 вівїастасі вссавсасіа саавассівв ссівасві їсеесеесераасаааавів 780 вавайцаааа вгавссесівс ссісаріаас ісааїсаїртастцшавіса сіірівссії 840 вІВЦшІсСівс сарсааарсс аасаассаса ссавсасссс всссіссаас вссідсссса 900
Зо ассаїсессі сссавссісії гвавсівраве ссіваввсії вісвсссавсівсіввавві 960 всІвівсаїга сасгарвасі врайцісесс гвсваагсі агайсівєресассасцесс 1020 вЕїаснвів вірів ес всісісасів рісаїсасесіріасіріаа ссаїаврааї 1080 аваїссаааа гаавссессі всіссатавс вацасаїва агаграсіссасессвсссї 1140 вЕСсссасаа грааасасіа ссарсснас всассассіа варайісесівссіаїсвя 1200 авссвавіва аанисіав агсарсіраї всісссессі аїсарсавев асарааїсаа 1260 сіШщасаае авсіваассії гєерісесава ваавравіасе асвіцівра сааасессвв 1320 вЕССваваїс сіраваїере геЕвреаавссе араарваава аїссісаавра аввссівіас 1380 аасвавсис аааааврасаа аагресіває есеіасісір араїсвесаї ваарввсвав 1440 севавасває всаавевіса сваїрестіте їаїсарервсс івавіасавс сасааарвас 1500 ассіаїрасе сссіссасаї всаресасів сссссасесі ад 1542 «210» 84 «211» 513 «2125» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 84
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Геи Ге Геи Рго Гей АІа Геи Гец Гей 1 5 10 15
Ніх Аа Аа Аге Рго сСіІп Маї СІп Гей Сп Ом 5ег ОСІу Рго СіІу Гей 20 25 зо
Уа! Гу Рго 5ег СІп ТНг Геи 5егГеи ТНг Су ТНиг Маї бег Оу Оу 35 до 45 5ег Пе 5ег 5ег Су Аа Туг Туг Тгр Тиг Тгр Пе Аге Сп Ні» Рго 50 55 6о0
Су Гуз Су Геи ОЇ Тер Пе су Туг Пе Ні Туг бег су бег ТНг 65 70 75 80
Туг бег Азп Рго 5егГеи Гуз 5ег Аге Пе Тнг Пе 5егГеи Ар ТАг 85 90 95 5ег Гуз Азп Сп Рне 5егГец Гуз Гей Азп 5ег Ма! ТНг Аа Аа Азр 100 105 110
ТНг Аа Маї Туг Туг Суз Аа Аге біІп Си Азр Туг Оу Су Геи Рпе 115 120 125
Азр Туг Тгр бу Сп су ТНг Ге Маї ТАг Маї 5ег 5ег СбіІу су су 130 135 140
Зо
Су 5ег су Оу Су Су бег су Су су Су 5ег СІ Пе Ма! Меї 145 150 155 160
ТНг біп 5ег Рго Аа ТНг Геи 5ег Маї 5ег Рго Су Си Аге Пе ТНг 165 170 175
ІГец 5ег Сув Аге Аа 5ег Сп 5ег Ма! Тиг Тиг Ар Ге АїЇа Тгр Туг 180 185 190
Сп Сп Меї Рго Су СіІп Аа Рго Аге Геи Геи Пе Туг Азр АїЇа 5ег 195 200 205
ТНиг Аге Аа Тиг Су Рне Рго Аа Аге Ре 5ег Су 5ег Су бег ОЇу 210 215 220
ТАг Азр Рне ТНгГеи ТНг Пе 5ег 5егГеи СіІп Аа См Ар Ріе АїЇа 225 230 235 240
Ма! Туг Туг Су Сп Ні Туг Гуз ТНг Тгр Рго Гец ТАг Ре су Оу 245 250 255
Су ТНг Гуз Маї Си Пе Гуз Аге Аа Аа Аа Геи 5ег Азп 5ег Пе 260 265 270
Меї Туг Рпе 5ег Ні Ріє Маї Рго Маї Рпеє Геи Рго Аїа Гух Рго ТНг 275 280 285
ТАиг Тнг Рго Аїа Рго Аге Рго Рго ТНг Рго Аа Рго ТНг Іе Аа 5ег 290 295 зоо0
Сп Рго Геи 5ег Гей Аге Рго Сім АЇа Су Аге Рго Аа Аа СіІу су 305 310 315 320
Аа Маї Ні Тиг Аге Су Гей Азр Ре Аа Сух Азр Пе Туг Пе Тгтр 325 зз0 335
Аа Рго Гей Аа Су Тиг Сух Оу МаїЇ Геи Геи Ге 5ег Геи Ма! Пе з40 345 350
ТАигеи Туг Сув Азп Ні Аге Азп Аге 5ег Гуз Аге 5ег Аге Геи Гей 355 360 365
Ні бег Азр Туг Меї Азп Меї ТНг Рго Аге Аге Рго бу Рго ТНг Аге 370 375 зво
Гуз Ні Туг біІп Рго Туг Аа Рго Рго Аге Ар РНе АїЇа Аїа Туг Аге 385 390 395 доо 5ег Аге Маї Гух Ре 5ег Аге 5ег Аа Азр Аа Рго Аа Туг СІп біІп 405 410 415
Су СіІп Азп біп Ге Туг Азп бІц Гей Ап Геи бу Аге Аге См ОЇ
420 425 430
Туг Азр Маї Геи Ар Гуз Аге Аге Су Аге Ар Рго сш Меї Су бу 435 дао 445
Гуз Рго Аге Аге Гуз Азп Рго біп Си бу Гей Туг Азп Сн Геи сп 450 455 460
Гуз Азр Гу Меї АїЇа Си Аа Туг 5ег СІ Пе сІу Ме Гу СІу би 465 470 475 дво
Аге Аге Аге Сіу Гуз Оу Ні Азр Оу Геи Туг біІп бу Геи 5ег ТАг 485 490 495
Аа Тиг Гуз Азр ТАг Туг Азр Айва Геи Ні Меї сіп Аа Геи Рго Рго 500 505 510
Аге «210» 85 211» 993 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 85
Меї Рго Аа Гей Аа Аге Азр су су Сп Геи Рго Ге Геи Маї Маї 1 5 10 15
Рпе 5ег АІа Мей Пе Ріе су ТНг Пе ТНг Азп Сп Ар Геи Рго Маї 20 25 зо
Ме Гуз Су Маї Геи Пе Авп Ні Гуз Азп Азп Ар 5ег 5ег Ма! Су 35 до 45
Гуз 5ег 5ег 5ег Туг Рго Меї Маї 5ег Сім бег Рго бі Азр Гей су 50 55 6о0
Су Аіа Геи Аге Рго Сп 5ег 5ег Су ТАг Маї Туг сш Аа Аїа Аа 65 70 75 80 ма! см Маї Ар Маї 5ег Аа 5ег Пе ТНг Геи біп Маї Ге Маї Азр 85 90 95
Аа Рго Су Ап Іе 5ег Суз Гей Тгр Маї Рне Гух Ні» 5ег 5ег ей 100 105 110
Азп Суз Сп Рго Ні Рне Азр Геи Сіп Азп Аге Су Ма! Ма! бег Меї 115 120 125 ма! Пе Геи Гу Меї Тиг Ом ТАг Сп Аа Су Сім ТугІеи Гей Рпе 130 135 140
Ме Сп 5ег Сім Аа ТАиг Азп Туг Тпг Пе Гей Рпе Тпг Маї 5ег Пе 145 150 155 160
Агев Азп ТНгГеи Геи Туг Тиг Гей Аге Аге Рго Туг РНпе Аге Гуз Меї 165 170 175
Сім Ап Сп Ахр Аа Ге Маї Сух Ме 5ег Сім 5ег Маї Рго Сім Рго 180 185 190
Пе Маї см Тгр Маї Гей Су Азр 5ег СІп су Ом 5ег Сув Гуз Си 195 200 205
Сі 5ег Рго Аа Маї Маї Гуз Гуз См Си Гу Маї Геши Ні си Гей 210 215 220
Рпе су ТНг Азр Іе Аге Су Суз Аа Аге Азп Си Гей Су Аге бій 225 230 235 240
Су Тиг Аге Ге Ріе Тпг Пе Ар Гей Азп біІп Тнг Рго Сп Тиг ТНг 245 250 255
Гей Рго СІп Геш Ріє Геи Гуз Маї Су Сім Рго Гец Тгр Пе Аге Су
260 265 270
Гуз Аа Маї Ні Маї Азп Ні Су Рне Су Ге ТНг Тгр Сн Гей сш 275 280 285
Азп Гуз Аа Гей Си Си СІу Азп Туг Ре Си Меї 5ег ТНг Туг 5ег 290 295 зоо0
ТАг Азп Аге Тнг Меї Іе Аге Пе Геи Рне АїЇа РНе Маї 5ег 5ег Маї 305 310 315 320
Аа Аге Азп Ар Тнг су Туг Туг Тиг Су 5ег 5ег 5ег Гух Ні Рго 325 зз0 335 5ег біІп 5ег Аа Гей Маї Тпг Пе Маї Си Гу Су Рне Пе Азп АїЇа з40 345 350
ТАг Азп 5ег 5ег См Ар Туг Си Пе Азр СіІп Туг сЇш ОЇ Рпе Су 355 360 365
Рнпе 5ег Маї Аге РНе Гуз Аа Туг Рго Сп Пе Аге Сух ТНг Тгр ТНг 370 375 зво
Зо
Рне 5ег Аге Гуз 5ег Ре Рго Су Сім Сп Гуз Су Гецй Ар Азп су 385 390 395 доо
Туг 5бег Пе 5ег Гу Рпе Сух Авп Ні» Гу» Ні Сп Рго Су сЇши Туг 4до5 410 415
Пе Ре Ні» Аа си Азп Азр Ар Аа СіІп Ре ТНг Гу Меї Рне ТНг 420 425 430
Гец Азп Пе Аге Аге Гуз Рго біп Маї Геи АїЇа Сім Аа 5ег Аа 5ег 435 дао 445
Сп Аа 5ег Су Ре 5ег Азр Оу Туг Рго Геи Рго 5ег Тгр ТНг Тгтр 450 455 460
Гуз Гуз Суз бег Азр Гуз 5ег Рго Азп Суз ТНг Сім Сім Пе ТАг би 465 470 475 дво
Су Маї Тгр Азп Аге Гуз Аа Азп Аге Гух Маї Рпе су Сп Тгр Маї 485 490 495 5ег бег бег Тиг Гей Азп Меї 5ег Сім Аа Пе Гу СОІУ РНе Ге Маї 500 505 510
Зо
Гуз Су Сух АІа Туг Азп 5ег Геи су ТНг 5ег Суз Ом ТНг Пе Гей 515 520 525
Гец Азп 5ег Рго бу Рго РНе Рго Ре Іе Сп Азр Авп Пе 5ег Ре 530 535 540
Туг АІа ТНг Пе Су Ма! Суз Гец Геи РНе Іе Маї Маї Ге Тиг Ге 545 550 555 560
Геш Пе Суз Ніз Гу Туг Гуз Гуз біІп Ре Аге Туг си 5ег біп Гей 565 570 575 біІп Меї Маї СіІп Ма! Тнг су 5ег 5ег Азр Азп См Туг Рпе Туг Маї 580 585 590
Ар Ріє Аге Сім Туг сЇи Туг Авр Гей Гуз Тгр СбЇши Рне Рго Аге СЇи 595 600 605
Азп Гей Сім Рне Сіу Гуз Маї Геи Оу 5ег бу Аа Ре Су Гуз Маї 610 615 620
Меї Азп Аа ТНг Аа Туг Су Пе 5ег Гу ТНг су Маї бег Пе бІп 625 6з0 635 640 маї АЇа Маї Гуз Ме Геи Гуз Си Гуз Аа Ар 5ег 5ег бІм Аге би 645 650 655
Аа Геим Меї 5ег Си Ге Гуз Меї Меї Тнг Сп Ге су 5ег Ні СЇи 660 665 670
Азп Пе Маї Азп Ге Геи Сіу Аа Су Тиг Геи 5ег бу Рго Пе Туг 675 680 685
Гец Пе Ріє Си Туг Су Сух Туг бу Азр Гей Гей Азп Тугеи Аге 690 695 700 5ег Гуз Аге Сн Гух Ріе Ні Аге Тиг Тгр ТНг Си Ме Ре Гуз ОЇи 705 710 715 720
Ні Азп РНе 5ег Ре Туг Рго ТНг Рне Сіп 5ег Ні» Рго Авп 5ег 5ег 725 730 735
Меї Рго бу 5ег Аге Сім Маї Сп Пе Нів Рго Ар 5ег Азр Сп Пе 740 745 750 5ег ОЇу Геи Ні Оу Азп 5ег РНе Ні» 5ег біІши Азр сім Пе См Туг 755 760 765
См Ап сп Гуз Аге Гей Ом Си ОЇ ОЇ Ар Гей Азп Маї Гей Тиг 770 775 780
Рпе Сім Ар Геи Геи Сух Рпе Аа Туг Сп Маї Аа Гу су Меї сбіш
785 790 795 800
Рпе Геши Сім РНе Гуз 5ег Су Маї Ні Аге Ар Гей Аа Аа Аге Ап 805 810 815
Уа! Гец Маї ТАиг Ні Су Гуз Маї Маї Гуз Пе Су Азр РНе Оу Гей 820 825 830
Аа Аге Азр Пе Меї 5ег Ар 5ег Азп Туг Маї Маї Аге су Азп АїЇа 835 840 845
Агв Геи Рго Маї Гуз Тгр Меї АїЇа Рго Си 5бег Геим РНе Си су Пе 850 855 860
Туг Тиг Пе Гуз 5ег Азр Маї Тгр 5ег Туг су Пе Гец Геий Тгр сЇи 865 870 875 880
Пе Ре 5егГеи Сіу Маї Азп Рго Туг Рго Су Пе Рго Маї Азр Аа 885 890 895
Азп Ріє Туг Гуз Геи Пе СбІп Азп Су Рпе Гу Меї Ар Сп Рго Рпе 900 905 910
Зо
Туг АІа ТНг Сію Сію Пе Туг Пе Пе Ме біп 5ег Су Тгр АІа Рне 915 920 925
Азр 5ег Аге Гуз Аге Рго 5ег РНе Рго Азп Гей ТАг 5ег РНе Геим Су 930 935 940
Су сІп Геи Аа Азр Аа Си Си АІа Меї Туг Сп Азп Маї Азр су 945 950 955 960
Аге Маї 5ег См Су» Рго Ні ТНг Туг біІп Азп Аге Аге Рго РІе 5ег 965 970 975
Аге См Меї Азр Гей су Ге Гей 5ег Рго СіІп АїЇа СіІп Маї СОЇ Азр 980 985 990 5ег «210» 86 «211» 63 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 86 агвесасісс ссвіаасівс ісівсівсів ссвІЇееЕСсатівсіссівса свссесасес 6о0 ссе 63
«210» 87 «211» 21 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 87
Меї Аа Геи Рго Маї! Тиг АІа Геи Ге Геи Рго Гей АІа Геи Гец Гей 1 5 10 15
Ніх Аа Аа Аге Рго 20 «210» 88 «211» 45 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 88
БЕСВБІвав всіссвваве БББЕВЕСІСІ вЕсевавеве вСТсс 45 2105» 89 «211» 15 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 89
Су су Су Оу бег Су Су Су Су бег СОІУ СІу Су су 5ег 1 5 10 15
«210» 90 «211» 54 «212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 90 веРІСстасаї ссевсіссее ваавсссева арівесваав віаріасааа вве 54 «2105» 91 «211» 18 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 91
Су бег ТНиг 5ег Су бег Оу Гу Рго Су бег Су Си су бег ТНг 1 5 10 15
Гуз ОЇу «2105» 92 «211» 126 «212» БІЛОК «213» Ното заріеп5 «400» 92
Аа Аа Су Су Су Су ОсЇу су Суз Аа су Су Аа Аа Су Аа 1 5 10 15
Аа су Су ТНг Су Су Тиг Суз ТНг Аа Суз Аа ТАпг Тпг ТАпг ТАг 20 25 зо
ТАг Аа Аа Су Сух Аа Су Су Су Тиг ТНг Тиг ТНг Аа Тиг су 35 до 45
Аа Су су Су Су Су бу Тиг Аа Сух Аа Су АїЇа Суз АЇа Аа 50 55 60
Суз Аа Су Аа Су Сіу Аа су Су Аа Аа Су Аа ТНг Су су 65 70 75 80
Су Тиг су ТНг Аа Су Су Тиг Су Суз Аа Су Аа Тиг ТНг ТНг 85 90 95
Суз Суз Су Су АІа Су Су Аа Оу Су Аа Су Су Аа Аа Су 100 105 110
Су ТНг Оу Су Оу Тнг Оу Су Оу Аа су Су ТНг су 115 120 125 210» 93
«211» 42 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 93
Гуз Аге Су Аге Гуз Гуз Ге Геи Туг Пе Ре Гуз біІп Рго Ре Меї 1 5 10 15
Аге Рго Маї СіІп ТАиг ТНг Сп сш Сім Ар бу Су бег Су Аге Ре 20 25 зо
Рго Сім сЇши См См су Су Су оЇш Гей 35 до «210» 94 «211» 37 «212» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 94
Аге Аге Ар біІп Аге Геи Рго Рго Ар Аїа Ні Гух Рго Рго су су 1 5 10 15
Су бег Рне Аге ТНг Рго Ме Сп Сім см Сп Аа Азр Аїа Ні 5ег 20 25 зо
Тигтеш Аа Гуз Пе «2105» 95 «211» 6762 «212» ДНК «213» Искусственная последовательность «220» «223» Ріахтіа Местог «400» 95 сівасесесс сірїаєсевс всацаавсе сеесееРІВІ Рів Насе сесавсвіва 6о0 ссесіасасі ївссавсесс ставсесссе сісстцісес НІС ссстІссНісісв 120 ссасвнсес севсціссс свісаавсіс їаааїсееев всісссіаввевиссваї 180 цнавівси асеесассіс вассссаааа аасцрака вгевіваїввіїсасвіавів 240 вессагсесс сіваїтарвасв вісесс сп ірасвії вравіссасв ПсСіНааїа 300 віввасісиї виссааасі граасаасасісаасссіає сісввістайіснинван 360 їахааввваї ШесСсвацйц ісеесстайі рраааааа гравсівац іаасааааай 420
Наасесеаа ЕК цНаасааа аїайаасес Насааців ссайсесса йсавесівс 480 всаасівне веаавеесва їсерівсеве ссісСцсеЕстацасессав сіввсвааав 540 вЕввагрівсівсаавесва Наавнцеве їаасессаве віцісссавісасвасвії 600 віаааасвас вессаріраа Пріаагасе асісасіаєа єевсвасссев ввраївесес 660 вссавіаагс аайасеерве їсайавнос агавсссаїа їаїгвависсесвНасаї 720 ааснасері аааїеесссе ссівесівас свесссаасва сссссевссса Нрасвісаа 780 їааївасета Ївнсссага ріаасевссаа таревасі й ссайрасві сааїрерівв 840 авіацшасе віааасівсс сасцеесар їасаїсаарі віаїсагатев ссааріасес 900 сссстайцва свісааїрас гріаааїеес ссевссіреса Наїесссаріасаїрассі 960
Іїагеевасн ісстасцее савіасафсї асвіацаврі саїсесіай ассаївсіва 1020
ІвСсЕВІШЩе всавіасас ааїеевсвів васавсеви їрасісасев вваціссаа 1080 вісіссассс сацеасвіс ааїгервавн Івін ще еса ссааааїсаа сервасніс 1140 саааагрісе їаасаасісс вссссайва сесаааїевее серіавесві віасввірвв 1200 аввісіаїаї аавсававсії євіНавріра ассевеерісі сісіввНав ассаваїсія 1260 авссіревав сісісіресії аастарераа сссасівсії аарссісааєааавсцясс 1320 пвавівсії саавіавіві вівсссвісї вирі рівасісірвіаастававаїсссї 1380 савасссцн їавісавіві реаааасіс тарсавівес всссваасав ввасірааа 1440 всвааавева аассавравра всісісісва сесарвасіс вес есіра авсесесасв 1500 всаававєесе агевесеесе асівріраві асессааааа НЕрвасіав сввавестав 1560 ааграваває аїеврвірсва вгавсвісаві анйаавсеве єраваацаваїсесваївя 1620 ваааааайцс ре ааресс агррегааає, ааааааїтата аацааааса таїарвіаївв 1680 всаавсавеєе авсіаваасе айсесавії аагссівесс ІвНарааасаїсавааввс 1740
І1втавасааа гасіреваса всіасаасса Ісссісава сарваїсава аваасара 1800 їсанагсаса агасаріавс аасссісіаг грірірсаїс ааарратава ваїаааавас 1860 ассааргрваав сінаврасаа гатавгарраа гарсааааса ааавіаавас сассвсасар 1920 саавссессе сіваїсиса вассірваре аргаваїагв аррвасаай вваваавіга 1980 ацнагагааа гаїаааріав їааааайва ассацавра віавсассса ссааресааа 2040 ваваавгавів вівсаврарає аааааавравс авівєеваата євавсінвііссцевви 2100 сЧНеввеавса всаррааврса сіаїеевсес авсрісааїв асесірасвр їасарессав 2160 асаацакне (сіврРіагар гвесаврсавса ваасаайція сігареесіа Шравесвса 2220 асавсаїсів Несаасіса савісівреве саїсаарсав сіссаресаа вааїссіввс 2280
І1вівевааава гассіаааре аїсаасавсі ссігРеЕрац верес сірраааасі 2340 сашіесасс асівсівівс сп еРааївсіавневаві ааїааафсісівраасаваї 2400
Неегаасас асвассірра Їеварірева сараврааайі аасаайцаса саавсіцааї 2460 асасіссна апраавааї сесаааасса вєсаараааавє ааїгаасааваацайцева 2520 ацавагааа гересаавії Івірраайця ві Чаасата асааайцевсівірвіаїаї 2580 аааацакнс агааїратав тарваввсії вріаввца арааїавні Несівіїасі 2640 нсетагавів ааїававмна ресаврерата цсассаца їсвнисара сссассіссс 2700 аассссваве вгасссваса грсссрааве ааїаваавраа ваарвіввав авававасав 2760 авасаваїсс айсвамнав граасевагс ісвасеріаї севаасі Нааааврааа 2820 аввевввай вве евеіаса вірсаррерва аараатавіа васаїааїар саасавасаї 2880 асааасіааа рваайнасааа аасааанас аааайсааа айцагсесрваїсвсвваа 2940
Івааавассс сассіртаве ШІрРеСсаавсіавсцнаавіаасессаціївсааввсаї 3000 веаааатаса їаасігаваа тагараавії савраїсааре МПагрраасавававасавса 3060 вааїагревс сааасареаї аїсіріреіа авсавицссі вссссресісавввссаара 3120 асаваїрввїс сссаваїесе вісссесссї савсавнісарараасса саван 3180 ссавевівсс ссаарвассі гааааграсс сівівссна іраасіаа ссааїсавії 3240 сесисІсесС СІВ свс всесИсівс Іссссвавсі сааїаааава вєсссасаасс 3300 ссісасісве сесессавіс сисваавіа ваїсцнрвіс раїссіасса їссасісвас 3360 асасссесса єсрессесів ссаавсиїсс вавсісісва айаайсас врвіасссасс 3420 агвессіаре вавасіаріс ваагсраїаї саассісіре айасааааї їврівааава 3480
Нвасіввіа НСІНаасіа гЕнесІссі щасесіаг вірваїасесівсінааїв 3540 ссінеРіагс агесіацес КсссрІаїв всттсаці сіссісси рвіаїаааїсс 3600
Ів есівІ сСІСщаїра вргавняівв сссвиріса весаасвіре свіввівівс 3660 асівівціе сівасесаас ссссасіввіїгвресайце ссассассів їсавсіссї 3720
Іссвевасін ісвстссс ссісссіайцйц вссасеесев аасісаїсвс сессівсс 3780 вСССеСІВСЇ євасавеевс ісеесівИе ресасіраса айссріврі в рісввве 3840 аавсівасві ссіцсаїве всівсісесс рів есса ссіврансівсесеввасв 3900
ІсСсСцсІвсСІ асвісссицс весссісааї ссавсерасс йПссисссе сЕвСсСсІвСсІя 3960 ссевсісівс вессісисс всвІсСнцсес Си сесссіс аврасвавісе ваїсісссії 4020
ІввЕССеССІЇ ссссвссіве Наайнааав тассінаар ассааїрасіїасааресав 4080 сіртаваїсі Тарссасцї Наааарааа агревевасі грааввесва айсасіссс 4140 аасвааваса авафсівсі ШЩесцва сіверісісІ сів Навас саваїсівав 4200 ссіревавсі сісіресіаа сіавгрраасс сасівснаа вссісаабааавсіессії 4260 вавівсиса авіарірвірі вєсссрісірі грірірасісірріаасіараваїсссіса 4320 васссіша вісаріріре аааафсісіа всаресаїес сарасаїраї аараїасай 4380 ваївавіццяе вгасааассас аасіарааїв сарірааааа ааіївсітатнрірааац 4440
ІвІваїеста ПесСрчакн гріаассай агаавсівса аїааасаарі тїаасаасаас 4500 аацесайцс акта їсаввицсав веввавріві виваввіні й весеЕсСвссС 4560 агсрісваве сСссщав гвавввнаа КНесвавсії гесріаагсаерісаїавс 4620
Івшссівії вірааайівї гаїссесіса саайцссаса саасатасва вссврваавнса 4680 їааавівіаа авссіреевії вссіааїграв гвавсіаасі сасанаає всвісесесі 4740 сасівсссес 1 ссавісе ггааассірі срівссарсії всайааєра аїсеессаас 4800 вСЕСвеЕввав авесеЕвВнНВ свіайерес всісСцссес й ссіІсвсісасівасісвс 4860
ІЇвСеСІСеЕвІ СР сСевсСІВ сСееЕсвавсерв їагсарсіса сісааавесе ріааїасввї 4920
Іаїссасава аїсарерваї аасесареаа аваасаїрів арсааааврес сарсааааєт 4980 ссавеаассе їааааавесс всвесіве сві сса авресіссвссссссівасв 5040 авсаїсасаа аааїсвасес Ісаарісара рвіресвааа сссрасарва сіаїаааваї 5100 ассавесвй ісссссівра авсісссісе геЕсвсісіссівИссрасссівссвсна 5160 ссевастассі віссвссці сісссисев ваавсвівес всі сісатавсісасвсї 5220 віаввіасі савіїсерів таррісвицс всіссаавсі вевсірірів сасваасссс 5280 ссвисавсс свассесівс вссцассе віаасіаїсв сп вавіссаасссввіаа 5340 васасвасії аїсессасівя всаврсавсса сірріаасавє гайавсава всваввіаїв 5400 їавесевівсіасававис Кеааврівеї вессіаасіа сресіасасіараараасав 5460 їашервіаї сієсесісів сієаарссав Массисее ааааававісввіавсісн 5520 вагїссевесаа асааассасс всірвіався вів їв есаав савсаваца 5580 сеЕсесавааа аааарваїсі саарааваїс сіра исіасевввісівасвсіс 5640 авівваасва ааасісасві їаавевайці їерісаїрав ацагїсаааа авраїснса 5700 ссіаваїссї Шааанаа аааграавії Наааїсааї стааавіатайагвавіааа 5760 сЧНевісіва савассаа 1есмааса ріраресасс їагсісавсе айїсівістаї 5820 нсвисаїс саїтавнесс Івасіссссе Ісвіріаваг аасіасвата серевавввсі 5880
Іассаїсіве ссссарівсії всааїграїтас сесварвассс асвсісасся всіссавайц 5940
Іагсавсааї ааассавсса вссеваавевя ссравсесає аавірвіссі всаасінаї 6000 ссессіссаї ссавістай аацйекцесс веваавсіав авіааріавіїсевссавіца 6060 асавцшщіесе саасвцвії вссайцесіа савесассеі врірісасесісвісвів 6120 віаїееснс айсавсісс євИсссаас вгаїсаавесе авіасаїра їсссссаївї 6180 ївівсааааа аєсевНавс ісси сервіс сіссваїсві їрісаваавіаавіевсся 6240 савівнаїс асісагевії аїеесарсас ірсаїаацсіснНасівісаїгвссаїсся 6300
Іааваївсії НсСІрРІрасії гріваріасі саассаарісайсіраваа авірвіаївс 6360 вЕСВвассвав ЦесісСнес ссевсрІСаа тасревагаа тассвсесса саїарсараа 6420 сШщааааві всісаїсай граааасвії сисеересе аааасісісаавваїснас 6480 сесівНврав аїссавнся агріаассса сісвірсасс саасіраїстісавсаїсн 6540
МНасшсас сагсвНсї реріварсаа ааасареаавє всааааївсс всаааааавв 6600 вааїаавревс васасевааа Ів Нраатас ісаїтасісн сс фнсаатацайраа 6660 всашаїса єевцайвї сісагравсе ваїасагац граагріай аваааааїа 6720 аасааагтаве євіссесес асацісссс рааааврівсс ас 6762 «2105» 96 «2115» 15 «2125» БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 96
Пе Рго Туг Туг СІу бег Су бег Ні Азп Туг сСІу Меї Ар Маї 1 5 10 15 210» 97 «2115 5 «2125 БІЛОК «213» Ното зарієпь «400» 97
Азп Туг сЇу Меї Ні 1 5 2105» 98 «211» 357
«212» ДНК «213» Ното зарієпь «400» 98 савгвівсавсіврівсаріс Реве всівар ріраавраавс сірееессіс арірааввіс 6о0
Іссівсааве СИсіврага сассисасс весіасіагатасасівєвері єсвасавеисс 120 ссіраасаав євсівравів ваївгеваїгее аїсаассстіа асавірвіве сасааасіаї 180 всасавааві Нсавеесає врісассаїв вссареваса сріссаїсав сасавіас 240 агввассіва всавесірає аїсівасрасасевссвівіацасірівсвавааїасес 300 ввіІввіаасії севістціра стасівевес саррраассс гврісассяї сіссіса 357

Claims (5)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Химерний антигенний рецептор, що включає антигензв'язувальну молекулу, яка специфічно зв'язується з РІ Т3, костимулюючий домен, активуючий домен, який являє собою сигнальний домен СОЗ-дзета, де антигензв'язувальна молекула містить: а) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить ділянки, що визначають комплементарність (СОК) 1, 2 їі З із амінокислотними послідовностями ЗЕО ІЮО МО: 17, 5ЕО ІЮО МО: 181 5ЕО ІЮ МО: 19, відповідно, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОК 1, 2 ї З із амінокислотними послідовностями ЗЕО ІЮО МО: 22, ЗЕО ІО МО: 23 ії 5ЕО ІЮО МО: 24, відповідно; або р) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить ділянки, що визначають комплементарність (СОК) 1, 2 їі З із амінокислотними послідовностями ЗЕО ІЮ МО: 97, 5ЕО ІЮО МО: 351 5ЕО І МО: 36, відповідно, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОК 1, 2 і З із Зо амінокислотними послідовностями ЗЕО ІЮ МО: 38, 5ЕО ІЮО МО: 3911 5ЕО ІЮО МО: 40, відповідно; або с) ділянку МН із БЕО ІО МО: 16 і ділянку МІ. із БЕО ІО МО: 21; або ділянку МН із ЗЕО ІО МО: 34 і ділянку МІ із «ЕО ІЮО МО: 38; і костимулюючий домен являє собою костимулюючий домен СО28, який містить послідовності ЗЕО ІЮ МО: 2, ЗЕО ІЮ МО: 4 або 5ЕО ІО МО: 4 у комбінації з ЗЕО ІЮ МО: 6 або ЗЕО І МО: 8.
2. Химерний антигенний рецептор за п. 1, де активуючий домен включає СОЗ або СОЗ-дзета, де СОЗ-дзета включає послідовність, яка відрізняється не більше ніж на 10,9,8, 7,6,5,4, 3,2, 1 або 0 амінокислотних залишків від послідовності в «ЕО ІЮ МО: 10.
3. Полінуклеотид, що кодує химерний антигенний рецептор за п. 1.
4. Вектор, що містить полінуклеотид за п. 3, де вектор являє собою ретровірусний вектор, вектор ДНК, плазміду, вектор РНК, аденовірусний вектор, пов'язаний із аденовірусом вектор, лентивірусний вектор або будь-яку їхню комбінацію.
5. Імунна клітина, яка містить вектор за п. 4.
6. Імунна клітина за п. 5, де імунна клітина являє собою Т-клітину, лімфоцит, який інфільтрує пухлину (ТІ), МК-клітину, ТСК-експресуючу клітину, дендритну клітину або МК-Т-клітину.
7. Імунна клітина за п. 6, де клітина являє собою автологічну Т-клітину.
8. Імунна клітина за п. 6, де клітина являє собою алогенну Т-клітину.
9. Імунна клітина за п. б, де вектор уводять в клітину, яка виділена з організму пацієнта чи організму донора або яка вирощена зі зразка, узятого з організму пацієнта чи організму донора.
10. Фармацевтична композиція, яка містить імунну клітину за п. 5.
11. Виділений полінуклеотид, що кодує химерний антигенний рецептор (САК), що містить антигензв'язувальну молекулу, яка специфічно зв'язується з БІТ3, де антигензв'язувальна молекула включає: а) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить ділянки, що визначають комплементарність (СОК) 1, 2 їі З із амінокислотними послідовностями ЗЕО ІЮО МО: 17, ЗЕО ІЮО МО: 181 5ЕО ІЮО МО: 19, відповідно, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОК 1, 2 ї З із амінокислотними послідовностями ЗЕО ІЮО МО: 22, ЗЕО ІЮ МО: 231 5ЕО ІО МО: 24, відповідно; або р) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить ділянки, що визначають комплементарність (СОК) 1, 2 їі З із амінокислотними послідовностями ЗЕО ІЮ МО: 97, 5ЕО ІЮО МО: 351 5ЕО І МО: 36, відповідно, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОК 1, 2 і З із амінокислотними послідовностями ЗЕО ІЮО МО: 38, 5ЕО ІО МО: 39 і 5ЕО ІЮО МО: 40, відповідно; або с) ділянку МН із БЕО ІО МО: 16 і ділянку МІ. із БЕО ІО МО: 21; або а) ділянку МН із БЕО ІО МО: 34 і ділянку МІ із «ЕО ІЮО МО: 41.
12. Полінуклеотид за п. 11, що додатково включає кодування активуючого домену, де активуючий домен являє собою СОЗ або СОЗ-дзета.
13. Полінуклеотид за п. 12, де СЮОЗ-дзета містить амінокислотну послідовність, наведену в ЗЕО ІО МО: 10.
14. Полінуклеотид за п. 11, що додатково включає кодування костимулюючого домену, де костимулюючий домен являє собою костимулюючий домен СО28, який містить послідовності ЗЕО ІЮ МО: 2, ЗЕО ІЮ МО: 4 або 5ЕО ІО МО: 4 у комбінації з ЗЕО ІЮ МО: 6 або ЗЕО ІЮ МО: 8.
15. Спосіб лікування захворювання або порушення у суб'єкта, який цього потребує, що включає введення суб'єкту полінуклеотиду за п. 11 або введення суб'єкту химерного антигенного рецептора за п. 1, або введення суб'єкту клітини за п. 5, або введення суб'єкту фармацевтичної композиції за п. 10.
16. Спосіб за п. 15, де захворювання або порушення являє собою рак.
17. Спосіб за п. 16, де рак являє собою лейкоз, лімфому або мієлому.
18. Спосіб за п. 15, де захворювання або порушення являє собою щонайменше одне з наступного: гострий мієлоїдний лейкоз (АМІ), хронічний мієлогенний лейкоз (СМІ), хронічний мієломоноцитарний лейкоз (СММІ), ювенільний мієломоноцитарний лейкоз, атиповий хронічний мієлоїдний лейкоз, гострий промієлоцитний лейкоз (АРІ), гострий монобластний лейкоз, гострий еритроїдний лейкоз, гострий мегакаріобластний лейкоз, мієлодиспластичний синдром (МО5), мієлопроліферативне порушення та мієлоїдне новоутворення, мієлоїдна саркома.
19. Вектор за п. 4, де вектор являє собою лентивірусний вектор і де лентивірусний вектор являє собою вектор рОАК, що має 5ЕО ІО МО: 95. Мага: но МУК ЕМ ОК я 4 дя 34 0 ять) 3 До дять що гі и ї Пов: 1 во : ще ння З | й - 1 5 щи в ї і ЩЕ, ШЕ її у | 1 В т пі ї З я С но 5 Кк х Ш п хх й. Щщ | щі й І ВТ АААААААААКАМАМАКАМККААААААААНКАМААМААХАААК А ТАКА МААА А КАМАЛІЯ ЖЕ Ат ККАх ШЕ обіомресв СТАР
Фіг. 1
Я ЕЕ вик 18 САН в Ех ї Ух ше СОУ сСАК гу І : І ВК ї ЗЖооахічнляї Ко т, ся н їж ШК :
х В. І Вк : ск до щи. сх хх ск коки пк УКХ їх І КА з схе ву дн чех ТЕЗЕ ВМ щої НК ск жк ик я ЗК Ох їх І Мих чні хх с г рф ЕК т ке вия ХХ . Не :ї : Аа Мийки З щ я ї 7 ТЕ т НУ 3 : ри м В Ії В і КІ Ну 5 НК Ж УТ : КОХ І: КО й хо Ох ї 5 Хот 4 ЖК сонник ї я Ії Кк Жодні 00 Ж слткля Фо феннті В т Он ЯК рий Ов ЩІ 1 Зо її я РО щем ВК В Ж її з ик їх Ви 15 ЯКЕ Е я : ДК З м ЮК ЩЕ ТІ ЖІ В КЕ ЩО ЗК: : в 5 ток МЕЖ дО ВВЕ ІОВ, о КО : я 15. 15 й; ї до ї ВВЕ. КОВИХ Я т ВВЕ 15 он: "Доти : Ї; жу то ОВ зу нн Не НН й й МІЖ, х ГЕ т :. т З НУ Ж и КЗ х: го ОХ М кое іх г і . ї і ЯН А ЯН ВО ї 5 хо Я м: Я денс 0ОЕ У КАН СК : З о В се 5 Ж 5 панк 0 ЖЖомняї В. КЕ х х хо х х ї М скій Я хунок В 1 В Не ї Ж п му ЯК оохехниниї дурня ї т НУ ще НЕ Я ї у заннинихи т Я поси ї С 1 оз 8 щк 1 о ї дк ит ок т Я: і як :ї ще :ї з хе 1 В з ОВ 1 В 8 ВВ З КЕ І ж ВЕ по НК хх В А : КУ їх з ТЕ жк. ТЕ ех. ЗЕ 1Х со; З 7 ї Ст п Як Но Ст З рок. 1 ПІП І вв зитевеитні ї со т т І аЯВНх Я а ев; ї КОМ ік. екю их Щ х ве 2Е дв ІВ соски МВВ сту СМ - квнннни ТЕ в й х. оз І З до ЗО шо ї х 1 В ни БОосю 5 5 Ох З Жияею 300 дошк їх Я 1 ОО У Повх З Ж хни звана Б й ї ЖКосеениї МККККуУктинккй дах НУ жк тх о :4 до: су як ККЗ Я т р В Як Ок : вик Ж ро Її ж ІНШ ЕООЯК 3 Я БАК Я В ПОВЕ то В 5 ВК Я З ІЗ БО ПЕН. ОН Кай... ЗИ ї Я ТЕО ЕВ Сік. гетхоі ДНА юну В т дід тн ї : М ї Ії ї ; це З у т т х Ку : : Х ОХ Ко Я Дня 00 Жонетннк де ах : З» : т ї жк ї Зк ї за ї - зе : х. 000 Ж : Зх. : Я : що її З х КЗ т Я ще Вк І ОЙ ї З З не ї я ті т. ж ж ї ях, І а 1 З оно а док Ж Ди її ях ї о СК ооо сл я ее и їх НН ХВ, 13 сових пити Ж кеВ кто Кон Пітт, пе й х : : ї : Х сх ї п ї їх п Її й ну й З т : х ге . : т: Х Що ї й п ї х тк. ї Ж Ж кн їх Ж де Бе З це ге Ж ду З сети й г КЕ : жа вин Е 7 Ж г: 5 І ЗЕ : Я ї 7 Я Ж ОБ 100 її Ж її ж 8 ех. Кз х кт п ТІ т. х Мох І до у ок ВЕК с Зй по Ж о Ес В ї : і т, тА КОЛЕ. па ж 5 ан. К ВН ин Зою ї ВН ЩОДО т Тов. ЗХ еВ сс Кос ВМО пок ою . Я еВ онко кю бос пк еВ що и сок і.
С2 ПА кон хв в в
5. що . 55 Ко ще і. появ -з х ВЕ хе ще о ж М що с. . ії о. ! 5 . В ПЕ о 5. ох еще Ї ї | ЕЕ и я Вк пев й с З . в Кз ві о я ко хх Ва о . БЕ 5 ж, і ше . В і. ше її. о о й я в її в о. й - нак вк хх Ж ВЕ хе Що гу ах Б хх за СЯ Кк хх се щ Яке Б ще: Кк Б о . . | | . В ще що 0 я хе жк жу ик щу ху щ ШХ : Б «ЯНВ В: і. що ЗШ шо а я ї З ШК Ко ох ЩЕ В о. ві дк ЗК С Же шах З о ПИ - п ще З и З Ух роя ЯК БУ ЕЕ. Я х г т ЩЕ о З док ОК З Ж щш х і ох о ВЕ е и Ох ЩЕ і Я те ш од й ох М ЕК ще ПЕ ЗУ ВАХ вх Кк й зе Зх В щ во ОВО БУ с Ше Б З ох к о її . С 5 г Сх Кай яай БОКУ Сак х х ж ІВ щ ШИ дО о Я За» ї ке «й Кк ШО Е В 5 со о ПЕ У В е ОК Бе ще ш І сш я Яке | ШЕ З і . п ;х ці кою ВЗ ї | ОВ хе шх 8 ш х х І щ о дЕо Щі й я ; С: Ж у о в побу ях з У і 5 В ІЩЕ о і я 7 . я й ж кхЕ сх я Кк З ме ща КЕ ЗК Ко М г ї х бук у ще хв . ще Е . Е У й як пу ов як «я . . я ! о . я і ща . Ж ВО Ку де ЖЕ м с .
зе . ї КО й во М. Зх дія ще с З п Б ай 7 чо хв с о З 1 . І | | . ! ; с. п. х х з ие Ж ме і: зе; в . ща БО г. с ЩЕ ще п КЗ з й їх щі й В їі С не ке Ж ВЕ В що пе ЗХ 55 ї Її її. ї х Ж ж щ ЩЕ ї ях ах х оон ВК ІНВ Ж . ЩЕ : І ї і. і " . . о ен Ж пев 5 В і. . що Б і. те я се їх КЗ і НЕ в шва є. ї хх ШЕ | п Б. в я 7 Х З ле Во ния хх шо В ще їх ХЕ г хі ще я о 7 я ї і Е М ха КУ ще Яся ща В МЕ зе ВВ Я: КВ ; зе Ж ща з ках ТЕ і хг Я оби НЕ ї В . . Кн щу ЗЕ во . ї. рих М За ї ТЕ г х Я Ж же ха І В В, щ- і. Я х сяк ІЙВ о В х що 1 хи Яой вх СО вх що г | | І х х ІВ о ще 5 о 5 Ве З що Же ж, Ж с. І: З Ко Бо З | ! в х ЩО 5 п З КОХ п щу ОВ г: чо же КО Ь Б щ як ще . ШЕ ХО 5 хх ПІ . с : . : і щ "7 ще І о ЗКУ З МВ яння сб БЕ В | Ко СЕ а с в п и ! ! Її. і я: З ще з в щі в. . В З жо Кох дв ха " ї я Ся я Мах СС ще . В Ж й хи о КУ щЕ ж а і и ; | її. Ох 5 о. , ше Ек Б х -2 ще З ТОВ . - | ї и. я В В о Її | і о і . Я ї ж НЕ В ВК щк - х "ве В. і. с . 5 що жу щі Б - ій В . ща | о Т й Х ше хв ск З їх й я о зкемех -д скохех Ка яккихку Б хчаєсухх КІ Б ж Хо Х Ом Мох, Ас ох, Ж щ : якої Ж т. : Може: Мо - г кош Х ще : по хо Е Е хо х ох з Чу ЩІ її ї ші х Ж. Же як 000 В Мою ші: пе Її ЖЕ х ЖЕ ої З і т : Е ММК пит жи хе Вся пряжу ек АК 0 МО же Ж окоту ЕЕ : т. я Я МО Судно ОО МАК ОО ках ТО хін МК семеро их Ех ЛЕО З ВОВКОМ МО БЕК ОХ оо в вн в НН НН и ПЕОМ ККУ ОМА Ми У х З х і я я ї р: - В; поОООуКУВЕщУ ее хх з З У Х днем с кед -- пл се скхі ких о лу, сою тк Кл я г Кі Ек шок 8 шо ї МО й х що: - Х г Щі ш ї пух схожу З о и КК Х ск ї ї щі З. -ї Не х ТЕ х що ї ї що щої ПОКИ Ки РУ Ж ї: М и - ее ВОК: З ЗВОКОВІК. ж ТМ ж 5 шок в. Бак: ОО МОЛІ КПК КК ок. ХЕ Лек КЕ и Ж ПІК Ко ХО: т Б я ж ОО, ш пе о Е «Всю ТЗН вексеяо Х уза Вик око в МО КД Мои М ЗЕ ПО УВІ ВЕК АК КВ КВ МО ШОК ЗК МО ТК х т тю роз п Кт ч КОТ ОО МЕЖАХ іш «т пп х є т Ох в: п дочки зт яких Ух У ож, Що Кене слу пої шої Ххі ї по: мож шо ФО ХЕ Ж: лю лУМе ї ше Мох Х Шлях Ж Ще що їх ї дощі Ж х Ши х 1: ОЇ ЖЕ хо. ЩО дО 5 4 ОО М ходите сютюєтучюнтюти юю 0 пт Кент тетя о, Ж Кен. дж сек Ж.О Во Жов МО ден МО вн ОО ХК КА ТО хі МК устдюки у ек ШО ПКТ МК ЩО ЄЕК МОВЧКИ Мо жа ш ВАМИ ОО ММК ЕКО КЕ ше ОО 5 ЕМВ їх ЕЕ МУКУ х Ж КуИКУ ХК т КОМИ ТК я З й ОКОМ А ЗЕ ре ЗЕ - ХЕ х Дж ИМух ШКО Є хе 3 х Зх Е: ? т - х Ж мкюдкехки ї зяїжежу п «меч «ге «км хю док ке; ж Дом
У. п щої . ее Же 2 - шо ї кос шо ше В ше КЕ кв прі : Ж. Ш Хі х КЕ Х Же Жов дн : Ж жк ї МО ко ЩЕ, ої п ЧО Ж хіежоовея ую 0 Мен соду 00 МО хів ВІВ зднякутсеи ой ї ЕМ Мо хо чек її Мой и м Шо тоб мов ж нив КК ШО биту жи МК депииискитигитх ПОШИ ОО длуи и о х ков Кв Од КИ шо КИ Кн йо ВЖК йо жк аву КК х Жук и Ж кю ди Е я пив ЩОКУ Ми Ж - ШЕ х го З КУ ТЕ ше Шх М КВ Є Кі яхяккхик ох «их сх южхкх до хочет Ш жк А п доку о «Ох ОЗ с пос «У : ся пику їх Я Ка ее Ще: Е м х ї що ї ої її Тк Жх Мо: я х леї Ш Я пе її 5 : Ж шо хх Х Я її 5 м КЕ х х ЖЖ Ж Ж х Х М Ж ЩО хі Жах Желе Ж Е ОЗ МсКЕв І МІКУ Мої ках ПОМ ОМ ШВИ вв : СУ Ж 58 п МЕ й шах МЕ шик у ЕЕ Ж ЖЕ що ЕМВ 1 Ж ХІІІ Ки зн Я ОО ХВЕХМУ МЕМ КОХ Мо сбаюлнхкох х ик сю шо пив Хо пф веж БОМ ки ЩОКА кв Кх дО Кох Щ для ЩО ША в ях З нен оии ШОК тю ую ЩО я п т їх МЖК ШО Можу ююх М йа 7 КУ ї КТ Ж т є х х шию ж С її пт - х сг УЮ, ше жк ШЕ жита І ЖИЛУ си ху кому, пох» Мох тої що: ОХ ХЕ й ї Ж ля й Ед о: ДЕ ш Хо їх ЩЕ - п що шЕ «од КУ ЖЕО: х ож дом ї що х Моє 5 я хо що щем Хв М. «Ж Ж «бук жалю пами диких Оолому Ж дю сходу али Що ОМ дужку ж хх жи ж пошли Мо уми и хх поли т а р о КОДЕК ВОМУ ШО дим юки й фс ш ЖЕО КИ их п ПОКЮ КК КИ У ш МК Ки их ОО ду у х о « г: з - х М а п ши и їЕ З в Ж -ї шт сю Ж що й п 7- хх як.
Фіг. 4
І. є з че Люона п КЕНЕ 1 БК КЕ дк ашнов КАК ся к ім Гет, Діда нан ша : пої Бас : ро щі Єодлокюим Жук жін пев вер веКіх пев ух гтухВт Ук сих Кк Іа Мк І цОок фе дя нд ення ї : ТІ : ЛЕ : ї : : т . т : ї 1 її: Н пи ї ї ї : то :
ла. : ї : : ті : : Ех Меннннннфнннннняя нянні, Фев УК г ву ї ї НН ї п т Х МК г : Ії , т: : : І : : т І : п : БЕ ПСО С МОН ОСНО БАНЬ п нях ІБ й Х, ї ОХ ї ШО х ші Упудютеюьн юю жен єю Ко еденеюМ кю й : ІЕЕ 7 ва : КІ г : М : ТЕ : І Е ї 1 по 3. : х : не і. Х КМ дже Деллиладняаиі Кииии лами ее кими кт нн в ІЗ : Ї : : : т : БЕК : г : ТІЇ З щих : ї 14 Я ТЯ і : БУ : : шо БК ї : 17 ї її 3 : тоспожео, Оси РЕК о, СН С ЗННКЯЄ с ХОВЩЕННЯ. ХВ: з: НЕК. у по : ОТ ОПЛОТ І или Микита и КМ миттю Ми тики ШЕ и Ди че : О1щ ї оду : . т : С ї Б ї 2 т : ЯН: х т і ї : : ї : 1: : : : : ш 1 15 ї : : ї : 11 ї : ї : п : 17 Н : х 14 : мм з. : : : ЦІ У 1: ї о в ї : ТЕ ї 1 ІЗ 7 яка ї НН З т. 7 і ї фуд оз нннн урн еерннння У 2: Її ї її ї : З еся : Ц ї 1: МАК: і ї ї хї 1 : АВК 0 ш ї 14 і М повааавкх 1 Лиодонаави Коподвннвку ке. : у я Продажи. РОКшщяЮ сих тд ОК, Кісти ї пий МІД ТИМ по тик т тету фе кран МЕН УНК КУ
Фіг. 5 сотка Ул пи ж МОХ хе з п Ж ох пт ки ЩІ ОВ ме мое -- Ко КО оо КО мож Ж 3 ж : що ж ше В ОЖЕ шок ГО ЗНУ . МО их 8 І Х
У. щ ОО Ж БОЖИХ аю КО ЗЕ У сЕО КК Я рен дО т ЖЖ ОКО їх ложе ї- КО МОЖ БЕ МОЗКОВІ КЗ ОЗ КОЖУХ з Жука КО КЕ КЕ Б МЕ ЕОЖ МКК МОСжохих МОЖ ОЗ їх. о о ВАВ Ю БК КЕ ВКМ ВЕ КО вм Бо що МЖК їх Кая дн» ду жо БОБКІ КЕ ГУ ШЕ БЕ «ОО ХЕОЖІЖ у її і Кі Шо ох ЩІ БК В МКК ВЕК овех Що. ши ЩЕ БОЖЕ 00135 1 вами - до БМК ББІЖ ВЕ ОМеОЕ ВХ МЕ ВЕ хе ЩЕ І 1 хек 02 КО МК В КО ЗК ВО КЕ ВЕ КК ЕВ З Тит: З 35 З 0М. ХВ КОКО ЇЇ: Ба еОПИмя ха 1: МЕ БОКОМ БЕН ВВ КЕ КЕ ВЕ ЕК В " т 5 з и РЕК Ж Ж ОВ т Мощі ЩЕ ОМ КЕ ОВК ВЕЖ ОБ БЕ ОБ МЕ КОХ ШО ЩО ЩІ її: 4 ЩО 000 ОБЖ МБ МК ОКЯО БЖ ОМ ЖЕ ЗЕ БЕ БЕ ЕКО Ж - ЖЖ ББЖ Ж. Ж. Ж. Ж. КО КО -х ж БІ ни с ЕОЗИИК. Се ШИЮ ПИЩеС Є Ин ИЙК С ПИЛИ КУ Її що тот ДЖ Сале ще Де плюс и В щодо «ЛОЖЕ ж шк ик ж й ЖК ШО УК КОЖ ДЕ» и ДЛ ЕК од ДК т ШЕ ху М дО У дтп ШО можу дк ОДУ до дО ФО Ж Я од Ля ДЖ МОХ м м Щщ дл ї : : З ІЙ п : - Ех
38. сх що п3 В ща рОш сот М пд зо УЕІЖК ІДИ В. ТЕЙ - хх. Мо ПЕ щотся. ж 3 ПИМЕ пт то РЕ - Ж хмООСжх т Нове ще жи КОЛЕ СХ : шолими Хе попу лк пд щу ЩОСЕЕ 3 моти МО ЩО ІВ МОлУт» «ще ЩЕ ОБК ХО 3 ОВ 00 ЕК ОКЕ ЇВ с : що шк В ОМЕ ЖЕ Зх могих щи К: пр ЖЩОЛИЬ КЖ «Е с ит. ОО по ЕОМ ОКВ х: попит ОТ по ше ЖЕ ОКХ ГК ж ЕТ ЩО Ж дк МОМЕ ОКХ ї В ЩО Ж ОМ ОК ЕЕ БЕ а - о КЕ ОГЕ х : її х с ШМД ОМ ОК її К ОБ «К. ОМ о -: МОБ 1 РО ТЕ я ОО ОКО 2 ЩО ОКЖ Їж її У, МОБ Якоиею тво Ж ЛК ОКОНЕ їі: ОО ЕЖ МУ ОО ЗЕ КЕ ОБ Ж : ЩЕ: БО БЕХ еще ВОК З ЕХУ Б В шт БК. АХ ЩЕ ОМК ОК . Її 3 БОЇ БОБ БОЇ піни що ОБО БЕК МЕ БОБ як БО ВВ ОВЕБО ОБОВ ВОВК КОЮ Ж ще ох ОБККК а КІ ї ВК В І шопЕ ще ок БЖ ОБЕ ОК З КО І5 ОБ МКОБЕ ЕБОІХ шо це ОДУ - ЕВ І Ж кА БК. ЗО МК ОХ БЛЕНИ ЩО КОЗУ - ЖАОКОКЖОЖХ ЖЖ ОКЖКОМК ОБЖ ОБЖ ОККОККО ХХ о. КУ ехо Й ше ДИ. Й ий от ий ЛЕ ро У ЩІ мо ОО О.М ИЙ о «й ЦИ лок Му сжх МО Лк ЕТ ли Ци Й ІК ИЙ КМ У кр Кх ЩО ШО лк дути ВИ де ДМ и мо л Мои пох моли мох з КО о то с х МОЖ ех жа Ба В нка ян і ШО ЯМИ СУК ХХ як Ох КАК 5 я Ак,
фіг. о
Ес ху ІЗ кху Х Нучнн Меноре Чавес ЖЖ доськвитни КИДАТИ Ва пхукхе вки, фатою тк ДЕК а ШЕ сп линккх шу по ККУ кКХ Аа сейм м ТЕ Кі с ВОКЕР ФМ ЩО І са «МЕЖІ Кун Сов у : ОРЕ жо ок хх В : ко КЗ Хо р ш ї І ї Не : шо що їх х ОТ Е ї їх ї соовдхх Ха ЖК мої х -ЩЕ : ш х ї Е с ї ОХ МА ЖЖ х пох і : х Е Е ї х : 5. Ж ЖЖ ЖК їх :Я : ш ї Е х т : Ши ЖЖ ХМ БО Ж: «Жовкві Х Х х ї шо жеМм ЖЕО ЖК БОЖКО 5 Ж з п и, пе г: Жук ЖЕ 5 53 5 5 Боже 0. Б що В - Її 53 5 Е : ЗК 5. М 3 и Я В і : Ша ШІ Ж ЖЖ Жах х В І АЖ сн сн р те Ве,
КЕ. ї ПЕЖО ОО. ОК КЕ ВК и Ж Каси, 3 ут ххх х У -х Є а сх у я МО ддухучаккдкя інши ни нн нен й та я М мово ко щі АЖ. - о х " є сх. ніх Я А З М Бк г С х ЧІ ще ЩО КУ ку ох ї де Ш я ок о ШК НК Ко ОК од Ж ї пе ге и і-ї «Ж У хх ЕЕ с 5 х Ш БУ З У ХО Ах хх ХЕ КЗ З пк й КЕ : щі Кв к З ОХ Є В ех й да є зв как лю В ку і -к зе ФОЖМАЛІК Ви ха шК т Вжндя Се ЖЖ ТУ ФММ зло З -- " Н : ї ЖЖ ОМВК КО КК В в : ТЕН ї ММ т х : сома хЕ ут БЕ: НИ Ех ї по Ба ДВК дошку Я ин я Е х Е шо і 5 те ще їх т Е х лу ї - х «В КМ х Ж її ї дос й с МО х х Ко у х шо Еш Шо «ОК: : ї ШО ш Х. х : шоп ух ЖОВ у ї : кт Ж . х Мо ох хо ЩЕ шОшО Ж ОО Я ОО Ж хх - БОМ ще ШКО що ЖЖ ХМ ж ; ши ОЖ Ж ОМ Зк Же Х р і ЗО ЩО х ж М жа Зк ож ЩО ше ОО Хе Кей Ба ВО ко 5 МО ж Ко жа ї-- ' ШО ЖЖ в и АЖ В ЯКІВ ДЕ Ж ххх дня КК КК я КМХ я х х хх. ТО дію піка Кк ВВ нон У до Жих жо кое ее СЗШ НЕ МО Х ОКО аж Ох о т Я Фо шо М НН НН во КК оо я ока жа ш ЧЕ 7 т МО Я хе г й з ще с Ж У - 5 5 х "З о ЗА КЕ же у я ж я м Зі схеже ка пь В ху ЖоМЬО МК ЖК ДОВ шк лоу кох кож СКК М, ск ЕНН вне; ВВ У ума й КК НАХ ЕТ ЖИТА, я Н МОНУ КВ жо 1 ви в: пу Олю Ко : - ї Я я г 3 х : В Бо ФК ох В МК МО В я їй о - ї Ж. по : - По ї х п В: . де ї що Ж ї є х А Я ох ж Мох Ж їх . хх : Ж хх й ї ХЕ : Ж. Ж: х: ЖЕ. хх ї НА Її ї ї ш Е ї їх І шОошООх Ж: Кг ШО ОХ. СИ Я 15 т З СН. Хр А Вс кн Ко Вр Кос В нку х ї и ЩО ОТ Ж по се щ : пл СЕК КК ВТ Я ет Ух - ке ї В ЖЕО ЖОО Ж шо золот ШО друкує В стєннику х : - КК Е діесетессчеюсксско ВК Ж же Кт о неченнтвннв МО жо Кок Я ДЗ оеєєтєєютеюсіккК дкнк ок : : КЕ жк хв щ хо Ко НК НК КО 5 5 я КО Й а Ко. ва Ж БО ооо Ж у а хх У Ко Ко Ж їх А х КУ гЗ м ОЗ ш КУ сх 7х Я КЗ я р кЕ " Х ШЕ КЗ а я 2 З т Ж с 4 що «Е щк Ко " М Ж с ки щу К Я
Фіг. 7
Зона 7 хх ДО Ікеа ин Донов «КИ кВ Е АНІ ах Ух да зику МЕЖІ о с рану тн ще ВИ НК іруди Мета і УЖ НВ ж ПК Пп: ПО: Ж: тт зв жи: Тез г 0 НЖя БЖР Я: БЖ Я: Змова | І їщЕг. ПЕ т х ї ї : Е Ї ї іме. ОВ - що пииисиний : З нини І ко а бади БК: 8 ЯК я ї «кад КОКО тЕ веіатац ОКО ее Я Оса ши ше ШЕ ше ЕН: теіЗЕан КО ОО Мр У . х : ху НЯ КЕ Е : же З я Ж їх ТІ 5: ЖЖ ел ее инт олевнютю ноти еес ок Кох ;. ; МО ЩО Щи пек І НЕ ява жі жеролро в СЕ: ії Я НЯ ЗЕ ї ї : ї таза Ж с й т н : - ож. сЙ В ! ОВ . х З А: звук спуди 5 КООМУМ яка: В ОН сер сова З ку - ал К-Яе 7 ї СИ х х 7 ї жк укем - кВ ПТО тиетяя прийти пит. ЗЕ КВе, і ше і ро ІЕЕ ВТ с р Ен ї : ї. І т: Я ї ї ї в х : - : х З гри пд дю миши о щ ситет ик сини и тини М, те нити КК оон ОБ ЗВО ЖЕ ЗБЕ а же вар зр свя КОМЕТ Ух ки Ой нн: МТ. ою см кв Беж ОМ. Ж ща ЗЕ пох паж, че Прах поже з од Ж ТЯ СОЯ о ЗЕ ВА ВЕ 5 а сх. лов ПОЇ поле хв КА ТЕ С ЛИХ ПЕ Я ШИТИ ПОЛЯ і шшше щи щи. яю ВУ ся і хо: у : і год ВИЩ ан її роя ку З оп ВЕ В й Во: ї П зак ш пе паош пк Зк. теж І г Ідею З дшннотус тя Кона ЛЯ ЕВ НК жи Ма СКК ЖЖ: З КУ ЖД нд гитот ПІЖАМИ МИДКТШ ЖЕК лето то ПМД Пн п ї : і п В п Ю 5 о У ї шк а о оо ВО . й й же сія ва ства оБа р ер й ин Ж о веж шу Екех пк М Бе хх ПАК КН З ВВ ЕОМ ви ХМ МИЖЕ ий УжлЯ Фк ниві Х п ШІ ше в т. хх і З ! Амос жо І її ВВ па йжжою ре жк ско дою ей едою жк ЕЕ а і ща ШЕ нн я авіа КЕ МАНІ й Де МЕ ЕяЛ КАх ТІК с зо ПК сито Ж : ОО ВОК ОО жк на : Ох Хо вх ЩА хх З ЯН лин оно йо : коло ї по й , па и р ооо Же я Зоя: св ие тж ка Аж Іва з ЖАХ Уста 1ЮИтТМУЮ ДУМ МЕ РАХ ХА Вип ш певних і СЕ: КЕ Коло Ж і ай ; Х КЛЕЛЦЕ, жаоююююня юку» В пово ооо -- Мествмульовиві МО ооо. піздяіяі дер Бу ТУ ЩО блюптинись вказаний шлне Гклерннв я до лиш ечУМут тя же уд чує Шо УК НЕЛООВ МКС ЕКО ЗВО БЖ, ОР ОО. ФОРА Ще. ЩЕ 18 З | ВВ. Б ові й 1 ї її : і НІ її З її ! х 5 її Е хі 3 17 і її Н і 3 Кі ! хі ї 1 З тр оф т і і : ЕІ і 1: і Же ! 3 і 15 : 1 : я і ГЕ і 3 ох т г ї її 1 вк ща та 4, : 15 : її : г З М. ПЕВ КІ г - КИ Як і вАї г а ДЖ поді ЗА Кок: и ХО ОНЯНОНВО | сх МНН 243: КМУ НВВВВК я З М ЯКУ одне АХА ЗО ААКАчнукд ую КН! "АХА рю ух лек Ж Ел Єезвіп 1 х - ся .
Фіг. 9
Сех тЕр ЕІ ЕКіщ Ем ук ху ривх Я ох гово. іа вух жо ние одужати ву Серезне значення Св» стенлцУєне мееднена 3» из еркваютичьний Демо ЛОНА ве ; Іва З як Бнії» З жк Їщіт. дик Кі з 5 . я За. У У т а ОБ ОБеВ - х ски Кк ЗОБУ ОВО «Воив аж ЗВЕжОООВЕ со рожевою шко МД я МЕБСОВ кн як ЯВЕОПОЄТ ше ше ОА : ет ОО : же "в: зх З От сеї т у Я ї - й дя до й ж ов. : пе Еш В І «з т В и п Кн» шо ї ТожаяХ Я я ї З А я З що ї Ж ТУ Кей ж М з шЕ ЖК пІне ях Во Ко ДЕ у ї ШК ня м ов хо ї І си і он сикї і су який чата ще з як ШКО Ка 3 Ж ї і Е х ло т х 3 ї з --ї ; ЯК осссссесесссееесессососососовруестессвееводоовооодоотссороооодлювосоооссюссссюсову ЗД сососсссооооооддекккюссссоофоооодддоєскююк кс ооооовюккккК і осовюююккккнк
В. о я я я Ж я ща МВ дя ТЕЧЕ Я кАйень г берівн. у. ке і Бфоревн іх тя НЕВеркнах; міт; ї5 Кремінна є ся 0 Бісфевн. НКМЄ : ї ї 10 КжВОЖК ка : З ні х їжи а ж Я с з сх З дав хе ку ! СЗОЕВБСВЯБ їжею ЗОЗ СОК ЯБІЖОВНТ вес Я ру 1 : Е 3 х ок сс сок лік ас жльть нання полі ск лінь сис ї3 ОЖю ї ЕК МІЯ САН ША жККУ Е ї 5 Е ї їх - носи ух нору ен яння фе нова нн нання а КОМОЖЖЕ ТНК Е шк САН З мае і 8 реВКСо ЕНН КК КОХА і ол Е ї х ргсетеетессттех ев еоротегорегосотосоєеесоюо ооо одеса ооо есе оопоооо осот ото кет т ер тету ун тост коооооетке За КАЖМ БОКОВА АВ ОХ з щяа ! Я : ї 3 Е ! пеня Кун кут нн ри нення кун нн тт нннннннтнтнннннннн ; ох ах Е их Ком лоти я ї і ЕН ЕКЗ Олю БЕН З Оща і З ЕК Е х !
кфнлантанкнумнннякнн пр днина чех І Дннююююооопажюююонкня ї Й Е ї Ко Е 51 х ї Е ї х х. Е х т ї ет . ї Ка ху ФУ ї їх щі хі Ж і її Ж і КЕ НЕ: терту мої їх Б і ролях М Ци го г : є щі їх е ЖЖ ота о : ххжхжжх тв М щі х чек ка. т. и 2 пк й з ж тк гу к ж ї щи хх ж ї : т х ї їх ї мо. рр ВУ і ау В важ Її х с Кох ХЕ ї по, їоОчЧНХ Ж с Її ОВчЕ - Кох ож щ йо Кох іо м ре Ж їх Хоче ЗХ Кох ЗМОАЯМХ і се йо МЕУАЕНХ 5 ск Кок ЗВ ЄЮВ Е: ї ЯКО Кфдякоєскюєксююсктююєсккюссссюсоюреєсююсснккчнкккк ШКО кфроосеююєєккекхккк усю Как учникккккккккккккку де У іш х хх У БУ ж к БО ех х ія 2 ж т- мк щої я Ду А у - ЖК доааантотннннинклк тю КІ фимламктААККАКААНААКАЖАТЬ : Оз шо І ж : я "Жожоюсжекою хх - ї Яшжж них з
В. : її що : Хна ЗЕ ї ї ке М : ї ЕК ВІ : і щої і х м жі ї ї ж ож Зусесееттетсстесу У ї 2 ї і що і. т БОШ ї Ж ї з ж хо ї ек Мо вжи Я Міжн МО оваця Би коп воевежх ї ФО 1-х вевоу х Я літі інт стик Жрдннюккннжкюююннжккцкккккккжсєюєк яд ню жюююююкь Ж Зх ж Ка дк Ку КУ КЗ - - дух уко Ві у фіг. 11 ах Де» І секту Егу; їх вд май; еМЯЮ ОС Бе ее ен зе. у ілкоаинй І АК ча ВК й. В йо Сьп. й ж чл р Як я ві 5, и, о же Є шт що, Кк «ХУ с з , Я й ся р а В З 4 В й ьо бе в Зе « а
З. ве я я й З їз. ще . й с т в
5. Зі х Ки "ивь. чу мк вою ех ШО " ее» комх хе ой Б КОВО ; ве
UAA201810056A 2016-04-01 2017-03-31 Химерний рецептор до flt3 та спосіб його застосування UA128326C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662317219P 2016-04-01 2016-04-01
PCT/US2017/025613 WO2017173410A1 (en) 2016-04-01 2017-03-31 Chimeric receptors to flt3 and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA128326C2 true UA128326C2 (uk) 2024-06-12

Family

ID=58530714

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201810056A UA128326C2 (uk) 2016-04-01 2017-03-31 Химерний рецептор до flt3 та спосіб його застосування

Country Status (26)

Country Link
US (2) US20190183931A1 (uk)
EP (1) EP3436479A1 (uk)
JP (3) JP2019516352A (uk)
KR (2) KR102694879B1 (uk)
CN (1) CN109641956A (uk)
AR (2) AR109626A1 (uk)
AU (3) AU2017240801A1 (uk)
BR (1) BR112018070187A8 (uk)
CA (1) CA3019655A1 (uk)
CL (1) CL2018002792A1 (uk)
CO (1) CO2018011804A2 (uk)
CR (2) CR20180518A (uk)
EA (1) EA201892193A1 (uk)
IL (2) IL296966A (uk)
MA (1) MA44507A (uk)
MX (1) MX2023013729A (uk)
MY (2) MY201207A (uk)
NZ (1) NZ746925A (uk)
PE (2) PE20190201A1 (uk)
PH (1) PH12018502118B1 (uk)
SA (1) SA518400154B1 (uk)
SG (2) SG10201911963VA (uk)
TN (1) TN2018000337A1 (uk)
TW (2) TW202313669A (uk)
UA (1) UA128326C2 (uk)
WO (1) WO2017173410A1 (uk)

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201116559D0 (en) 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
US10704021B2 (en) 2012-03-15 2020-07-07 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic perfusion devices
CN105939767B (zh) 2014-01-08 2018-04-06 弗洛设计声能学公司 具有双声电泳腔的声电泳装置
US11377651B2 (en) 2016-10-19 2022-07-05 Flodesign Sonics, Inc. Cell therapy processes utilizing acoustophoresis
US11708572B2 (en) 2015-04-29 2023-07-25 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic cell separation techniques and processes
JOP20160086B1 (ar) 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
EA201892216A1 (ru) 2016-03-31 2019-03-29 Янссен Фармасьютикалз, Инк. Замещенные производные индолина в качестве ингибиторов репликации вирусов денге
US10646469B2 (en) 2016-03-31 2020-05-12 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
JOP20170069B1 (ar) 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
PE20190173A1 (es) * 2016-04-01 2019-02-01 Kite Pharma Inc Receptores de antigenos quimericos y celulas t y metodos de uso
CN109069482B (zh) 2016-04-01 2022-04-05 杨森制药公司 作为登革热病毒复制抑制剂的经取代的吲哚化合物衍生物
CN117903307A (zh) 2016-04-01 2024-04-19 凯德药业股份有限公司 Bcma结合分子及其使用方法
AU2017240788B2 (en) 2016-04-01 2020-04-09 Amgen Inc. Chimeric receptors and methods of use thereof
US11214789B2 (en) 2016-05-03 2022-01-04 Flodesign Sonics, Inc. Concentration and washing of particles with acoustics
CA3045902A1 (en) * 2016-12-21 2018-06-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies specific for flt3 and uses thereof
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180026A1 (ar) 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
AU2018274100B2 (en) 2017-05-22 2022-06-23 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors
TWI771420B (zh) 2017-05-22 2022-07-21 美商健生醫藥公司 作為登革熱病毒複製抑制劑之經取代之吲哚啉衍生物（一）
BR112019024604A2 (pt) * 2017-06-02 2020-06-23 Pfizer Inc. Receptores de antígenos quiméricos que alvejam flt3
TN2020000015A1 (en) 2017-08-03 2021-10-04 Amgen Inc Interleukin-21 muteins and methods of treatment
EP4403175A3 (en) 2017-09-08 2024-10-02 Amgen Inc. Inhibitors of kras g12c and methods of using the same
SG11202005605SA (en) 2018-01-12 2020-07-29 Amgen Inc Anti-pd-1 antibodies and methods of treatment
US20210347843A9 (en) * 2018-03-23 2021-11-11 Gavish-Galilee Bio Applications Ltd. Genetically reprogrammed tregs expressing membrane-bound il-10
TWI842703B (zh) * 2018-04-10 2024-05-21 美商安進公司 Dll3 的嵌合受體及其使用方法
AU2019250692A1 (en) * 2018-04-13 2020-11-05 Sangamo Therapeutics France Chimeric antigen receptor specific for Interleukin-23 receptor
SG11202104352XA (en) 2018-12-18 2021-05-28 Boehringer Ingelheim Io Canada Inc Flt3 agonist antibodies and uses thereof
US20220160771A1 (en) * 2019-04-10 2022-05-26 Iulia Diaconu Flt3-specific chimeric antigen receptors and methods of using the same
TW202110873A (zh) 2019-04-30 2021-03-16 美商聖堤生物科技股份有限公司 嵌合受體及其使用方法
CN115066248A (zh) * 2019-12-16 2022-09-16 华盛顿大学 嵌合抗原受体树突状细胞(car-dc)及其制备和使用方法
JP2023522330A (ja) * 2020-04-17 2023-05-30 シティ・オブ・ホープ Ｆｌｔ３陽性悪性腫瘍を処置するためのｆｌｔ３標的化キメラ抗原受容体改変細胞
CN111808821B (zh) * 2020-06-24 2022-06-14 南方医科大学珠江医院 Flt3-nkg2d双靶点car-t的构建与制备
EP4263590A1 (en) 2020-12-21 2023-10-25 Allogene Therapeutics, Inc. Protease-activating cd45-gate car
IL303847A (en) * 2021-01-28 2023-08-01 Allogene Therapeutics Inc Methods for transferring immune cells
JP2024505075A (ja) 2021-01-29 2024-02-02 アロジーン セラピューティクス，インコーポレイテッド 同種細胞産物のＴ細胞認識を軽減するための、ＴＡＰ２、ＮＬＲＣ５、β２ｍ、ＴＲＡＣ、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＰ及びＲＦＸＡＮＫのうち１つ以上のノックダウン又はノックアウト
CN116410315A (zh) * 2021-12-31 2023-07-11 博生吉医药科技(苏州)有限公司 一种新型靶向人flt3的嵌合抗原受体修饰的t细胞的构建及应用
US20240042030A1 (en) 2022-07-29 2024-02-08 Allogene Therapeutics, Inc. Engineered cells with reduced gene expression to mitigate immune cell recognition
WO2025096560A1 (en) 2023-10-30 2025-05-08 Allogene Therapeutics, Inc. Engineered cells
CN120157768A (zh) * 2023-12-15 2025-06-17 博生吉安科细胞技术有限公司 一种识别flt3-car分子的单克隆抗体及其应用

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
ATE87659T1 (de) 1986-09-02 1993-04-15 Enzon Lab Inc Bindungsmolekuele mit einzelpolypeptidkette.
US6319494B1 (en) 1990-12-14 2001-11-20 Cell Genesys, Inc. Chimeric chains for receptor-associated signal transduction pathways
IL104570A0 (en) 1992-03-18 1993-05-13 Yeda Res & Dev Chimeric genes and cells transformed therewith
US5830462A (en) 1993-02-12 1998-11-03 President & Fellows Of Harvard College Regulated transcription of targeted genes and other biological events
US5869337A (en) 1993-02-12 1999-02-09 President And Fellows Of Harvard College Regulated transcription of targeted genes and other biological events
US5834266A (en) 1993-02-12 1998-11-10 President & Fellows Of Harvard College Regulated apoptosis
US20030036654A1 (en) 1994-08-18 2003-02-20 Holt Dennis A. Synthetic multimerizing agents
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
HK1052372A1 (zh) 2000-02-24 2003-09-11 Xcyte Therapies, Inc. 细胞的同步刺激和富集
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US7446190B2 (en) * 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
WO2007031875A2 (en) * 2005-08-26 2007-03-22 Glycart Biotechnology Ag Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
US20100196336A1 (en) 2006-05-23 2010-08-05 Dongsu Park Modified dendritic cells having enhanced survival and immunogenicity and related compositions and methods
EP2516468B1 (en) * 2009-12-23 2016-03-02 Synimmune GmbH Anti-flt3 antibodies and methods of using the same
US9089520B2 (en) 2010-05-21 2015-07-28 Baylor College Of Medicine Methods for inducing selective apoptosis
PH12013501201A1 (en) 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
WO2012103279A2 (en) 2011-01-26 2012-08-02 Ariad Pharmaceuticals, Incorporated Methods and compositions for the synthesis of multimerizing agents
CN106074601A (zh) 2011-03-23 2016-11-09 弗雷德哈钦森癌症研究中心 用于细胞免疫治疗的方法和组合物
CA3209571A1 (en) * 2012-03-23 2013-09-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-mesothelin chimeric antigen receptors
KR102813881B1 (ko) 2013-02-15 2025-05-28 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 키메라 항원 수용체 및 이의 이용 방법
CN105209065B (zh) 2013-03-14 2020-07-31 贝里坤制药股份有限公司 控制t细胞增殖的方法
WO2015017214A1 (en) 2013-07-29 2015-02-05 Bluebird Bio, Inc. Multipartite signaling proteins and uses thereof
US10287354B2 (en) 2013-12-20 2019-05-14 Novartis Ag Regulatable chimeric antigen receptor
US10934346B2 (en) 2014-02-14 2021-03-02 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Modified T cell comprising a polynucleotide encoding an inducible stimulating molecule comprising MyD88, CD40 and FKBP12
US20170335281A1 (en) * 2014-03-15 2017-11-23 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
JP6749312B2 (ja) * 2014-07-31 2020-09-02 アムゲン リサーチ （ミュンヘン） ゲーエムベーハーＡＭＧＥＮ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｍｕｎｉｃｈ）ＧｍｂＨ 最適化された種間特異的二重特異性単鎖抗体コンストラクト
CA2961654A1 (en) * 2014-09-19 2016-03-24 City Of Hope Costimulatory chimeric antigen receptor t cells targeting il13r.alpha.2
TWI829617B (zh) * 2015-07-31 2024-01-21 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Ｆｌｔ３及ｃｄ３抗體構築體
PE20190173A1 (es) * 2016-04-01 2019-02-01 Kite Pharma Inc Receptores de antigenos quimericos y celulas t y metodos de uso

Also Published As

Publication number Publication date
PH12018502118A1 (en) 2019-07-08
PE20241061A1 (es) 2024-05-13
IL296966A (en) 2022-12-01
CR20240116A (es) 2024-04-12
MY210545A (en) 2025-09-30
AU2022200108B2 (en) 2024-09-19
BR112018070187A2 (pt) 2019-01-29
IL262061A (en) 2018-11-29
AR109626A1 (es) 2019-01-09
WO2017173410A9 (en) 2017-12-14
AU2024278538A1 (en) 2025-01-30
IL262061B2 (en) 2023-03-01
BR112018070187A8 (pt) 2019-11-05
SA518400154B1 (ar) 2022-11-09
EA201892193A1 (ru) 2019-06-28
PH12018502118B1 (en) 2024-02-23
MY201207A (en) 2024-02-09
SG10201911963VA (en) 2020-02-27
NZ746925A (en) 2023-06-30
SG11201808622SA (en) 2018-10-30
KR102389096B1 (ko) 2022-04-25
AU2017240801A8 (en) 2018-11-29
AU2022200108C1 (en) 2025-07-31
PE20190201A1 (es) 2019-02-05
CR20180518A (es) 2019-04-25
JP7561155B2 (ja) 2024-10-03
TN2018000337A1 (en) 2020-01-16
AU2022200108A1 (en) 2022-02-03
JP2024105337A (ja) 2024-08-06
TW202313669A (zh) 2023-04-01
IL262061B (en) 2022-11-01
MA44507A (fr) 2019-02-06
CO2018011804A2 (es) 2019-02-08
JP2019516352A (ja) 2019-06-20
MX2023013729A (es) 2023-11-28
WO2017173410A1 (en) 2017-10-05
CA3019655A1 (en) 2017-10-05
TWI776807B (zh) 2022-09-11
CN109641956A (zh) 2019-04-16
US20190183931A1 (en) 2019-06-20
KR102694879B1 (ko) 2024-08-16
KR20190021203A (ko) 2019-03-05
AR127371A2 (es) 2024-01-17
AU2017240801A1 (en) 2018-10-25
KR20220054453A (ko) 2022-05-02
EP3436479A1 (en) 2019-02-06
JP2022091793A (ja) 2022-06-21
TW201803897A (zh) 2018-02-01
CL2018002792A1 (es) 2019-04-26
US20230124464A1 (en) 2023-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA128326C2 (uk) Химерний рецептор до flt3 та спосіб його застосування
JP7673272B2 (ja) キメラ受容体及びその使用方法
JP7479290B2 (ja) Ｄｌｌ３に対するキメラ受容体及びその使用方法
TWI860294B (zh) 針對ｓｔｅａｐ１的嵌合受體及其使用方法
US12037604B2 (en) Modified B cells and methods of use thereof
WO2023060214A1 (en) Methods and compositions for enhancing activity of t cells with modified b cells
AU2021337680A1 (en) Modified b cells and methods of use thereof
WO2021108648A2 (en) Chimeric receptors to cea and methods of use thereof
EA047424B1 (ru) Химерные рецепторы к dll3 и способы их применения
EA048570B1 (ru) Химерные рецепторы к steap1 и способы их применения
EA044866B1 (ru) Химерные рецепторы к flt3 и способы их применения
HK1261573A1 (en) Chimeric receptors and methods of use thereof
HK1261573B (en) Chimeric receptors and methods of use thereof