CZ306388B6

CZ306388B6 - Kompozice s trvalým uvolňováním a způsob její výroby

Info

Publication number: CZ306388B6
Application number: CZ2003-3492A
Authority: CZ
Inventors: Kazumichi Yamamoto; Akiko Yamada; Yoshio Hata
Original assignee: Takeda Pharmaceutical Company Limited
Priority date: 2001-06-29
Filing date: 2002-06-28
Publication date: 2017-01-04
Also published as: HK1061802A1; CN1535141B; KR20090096755A; WO2003002091A2; EP2108363A1; PL212531B1; TWI225416B; CA2451718A1; RU2297240C2; US20080108778A1; SK15612003A3; BR0210572A; MXPA03011440A; WO2003002091A3; PL367491A1; CO5540368A2; JP5931147B2; NZ529968A; SI1399133T2; DK1399133T4

Abstract

Předkládaný vynález se týká kompozice s trvalým uvolňováním, která obsahuje peptid ve vysoké koncentraci i v nepřítomnosti želatiny, a potlačuje jeho nadměrné počáteční uvolňování, čímž může dosáhnout stabilní rychlosti uvolňování po dobu více než jednoho měsíce. Tato kompozice s trvalým uvolňováním obsahuje polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové (PLGA), který má poměr váženého k číselnému průměru molekulové hmotnosti od 1,40 do 1,90, nebo jeho sůl a peptid, například Leuprorelin.

Description

Kompozice s trvalým uvolňováním a způsob její výroby

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká přípravku s trvalým uvolňováním peptidu a způsobu jeho výroby.

Dosavadní stav techniky

V patentu JP-A 60-100516 je popsána mikrokapsule s trvalým uvolňováním vodorozpustného léčiva, představovaná částicí o středním průměru 2 až 200 pm obsahující vodorozpustné léčivo rozptýlené v matrici obsahující kopolymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, který má vážený průměr molekulové hmotnosti asi 5000 až 200 000, a obsahující asi 100 až 50 hmotn. % kyseliny mléčné a asi 0 až 50 hmotn. % kyseliny glykolové a který se připravuje způsobem sušení ve vodě.

V patentu JP-A 62-201816 je popsána mikrokapsule s trvalým uvolňováním, charakterizovaná tím, že viskozita emulze typu v/o pro přípravu emulze typu v/o/v je nastavena na hodnotu asi 150 až 10 000 cP, a způsob její přípravy.

V patentu JP-A 62-54760 je popsán biologicky degradovatelný polyoxykarboxylový ester, což je kopolymer nebo polymer, v němž obsah vodorozpustné oxykarboxylové kyseliny je - v přepočtu na jednosytnou kyselinu - nižší než 0,01 mol/100 g, a jehož vážený průměr molekulové hmotnosti je asi 2000 až 50 000, a dále je v něm popsána injekční mikrokapsule s trvalým ^Λ uvolňováním, která tento polymer obsahuje.

V patentu JP-A 61-28521 je popsán kopolymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, který má vážený průměr molekulové hmotnosti 5000 až 30 000, neobsahuje katalyzátor, má polydisperzitu (podle gelové permeační chromatografie) asi 1,5 až 2, obsahuje asi 50 až 95 hmotnO. % kyseliny mléčné a 50 až 5 hmotn. % kyseliny glykolové, a léčivo obsahující tento polymer jako základ.

V patentu JP-A 6-192068 je popsán způsob přípravy mikrokapsule s trvalým uvolňováním, který zahrnuje zahřívání mikrokapsule na teplotu vyšší než je teplota skelného přechodu polymeru, při které jednotlivé částice mikrokapsule k sobě vzájemně nepřilnou.

V patentu JP-A 4-218528 je popsán způsob čištění biologicky degradovatelného alifatického polyesteru, který zahrnuje rozpuštění biologicky degradovatelného alifatického polyesteru, který obsahuje polymer s nízkou molekulovou hmotností mající molekulovou hmotnost 1000 nebo nižší, v organickém rozpouštědle, následné přidání vody pro vysrážení polymemí látky a odstranění polymeru s nízkou molekulovou hmotností mající molekulovou hmotnost 1000, a dále je uvedeno, že voda se přidává v objemovém poměru 50 až 150 dílů na 100 dílů organického rozpouštědla.

EP 1 048 300 se týká kompozice s trvalým uvolňováním obsahující sůl hydroxynaftové kyseliny biologicky aktivní látky a biologicky degradovatelný polymer, způsobu její výroby a farmaceutické kompozice obsahující uvedenou kompozici s trvalým uvolňováním.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález se týká přípravku s trvalým uvolňováním, který neobsahuje želatinu a obsahuje fyziologicky aktivní látku ve velkém množství, a který umožňuje dosáhnout stabilní 20 rychlosti uvolňování v rozmezí asi jednoho měsíce tím, že potlačí jakékoliv nadměrné počáteční uvolňování fyziologicky aktivní látky.

- 1 CZ 306388 B6

Souhrn vynálezu

Aby bylo možno vyřešit shora uvedený problém, původci tohoto vynálezu intenzivně studovali a nakonec objevili přípravek s trvalým uvolňováním, vybraný ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, který obsahuje peptid ve velkém množství, aniž by obsahoval želatinu, a který dokáže potlačit jakékoliv nadměrné počáteční uvolňování peptidu tak, aby se dosáhlo stabilní rychlosti uvolňování po dobu asi jednoho měsíce tím, že jako základ připraví polymer PLGA mající poměr váženého průměru molekulové hmotnosti k číselnému průměru molekulové hmotnosti 1,4 až 1,9 nebo použitím polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové mající vážený průměr molekulové hmotnosti 11 600 až 140 000 nebo jeho sůl, což vedlo k dokončení předkládaného vynálezu.

To znamená, že předkládaný vynález zahrnuje:

1. kompozici s protrahovaným uvolňováním, vybranou ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, obsahující polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho sůl, přičemž 1) polymer má poměr váženého průměru molekulové hmotnosti k číselnému průměru molekulové hmotnosti 1,40 až 1,90, má vážený průměr molekulové hmotnosti od 8000 do 15 000 a má molámí poměr kyseliny mléčné ke kyselině glykolové od 70:30 do 80:20,

2) polymer nebo jeho sůl je vyroben způsobem, kteiý zahrnuje přidání vody k organickému rozpouštědlu obsahujícímu polymer kyseliny mléčné s kyselinou giykolovou mající vážený průměr molekulové hmotnosti od 5000 do 1 5000 při poměru 24 až 40 dílů (objemový poměr) vztaženo na 100 dílů organického rozpouštědla, a 3) kompozice také obsahuje fyziologicky aktivní látku, kterou je peptid reprezentovaný vzorcem:

5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C₂H5 nebo jeho acetát, přičemž kompozice neobsahuje želatinu,

2. kompozici s protrahovaným uvolňováním podle bodu 1, přičemž podíl frakce s nízkou molekulovou hmotností molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové s hodnotou 3000 nebo nižší je 9 % nebo méně,

3. kompozici s protrahovaným uvolňováním podle bodu 2, přičemž podíl frakce s nízkou molekulovou hmotností molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové s hodnotou 3000 nebo nižší je 3 až 9 %,

4. kompozici s protrahovaným uvolňováním podle bodu 1, přičemž peptid nebo jeho sůl je v kompozici s protrahovaným uvolňováním obsažen v množství 5 až 24 % (hmotn./hmotn.),

5. kompozici s protrahovaným uvolňováním podle bodu 1 pro použití ve formě injekce,

6. kompozici s protrahovaným uvolňováním podle bodu 1, přičemž peptid nebo jeho sůl je uvolňován po dobu alespoň dvou týdnů,

7. způsob výroby kompozice s protrahovaným uvolňováním podle bodu 1, přičemž se rozpouštědlo odstraní ze směsi obsahující peptid nebo jeho sůl a polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho sůl, přičemž polymer má poměr váženého průměru molekulové hmotnosti k číselnému průměru molekulové hmotnosti 1,40 až 1,90, má vážený průměr molekulové hmotnosti od 8000 do 15 000 a má molámí poměr kyseliny mléčné ke kyselině glykolové od 70:30 do 80:20, přičemž uvedený polymer nebo jeho sůl se vyrábějí způsobem, při kterém se voda přidá k organickému rozpouštědlu obsahujícímu polymer kyseliny mléčné s kyselinou giykolovou mající vážený průměr molekulové hmotnosti od 5000 do 15 000 při poměru 24 až 40 dílů (objemový poměr) vztaženo na 100 dílů organického rozpouštědla,

-2CZ 306388 B6

8. způsob podle bodu 7, přičemž se peptid nebo jeho sůl míchá a disperguje v roztoku organického rozpouštědla obsahujícího polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho sůl a organické rozpouštědlo se odstraní,

9. způsob podle bodu 8, přičemž se peptid nebo jeho sůl používá jako jejich vodný roztok,

10. farmaceutický přípravek obsahující kompozici s protrahovaným uvolňováním podle bodu 1,

11. farmaceutický přípravek podle bodu 10 pro prevenci nebo léčení rakoviny prostaty, prostatomegalie, endometriosy, hysteromyomu, metrofibromu, předčasné puberty a dysmenorey nebo antikoncepční přípravek,

12. farmaceutický přípravek podle bodu 10 pro prevenci relapsu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu,

13. použití kompozice s protrahovaným uvolňováním podle bodu 1 pro výrobu farmaceutického přípravku pro prevenci nebo léčbu rakoviny prostaty, prostatomegalie, endometriosy, hysteromyomu, metrofibromu, předčasné puberty a dysmenorhey, nebo antikoncepčního prostředku,

14. použití kompozice s protrahovaným uvolňováním podle bodu 1 pro výrobu farmaceutického přípravku pro prevenci relapsu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu.

Podrobný popis vynálezu

Peptid použitý v předkládaném vynálezu může znamenat peptid samotný nebo může znamenat jeho farmakologickou sůl.

Jestliže peptid má bazickou skupinu, jako je aminoskupina, pak příklady takových solí zahrnují soli s anorganickými kyselinami (také označovanými jako anorganické volné kyseliny) (například kyselina uhličitá, kyselina hydrogenuhličitá, kyselina chlorovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná, kyselina boritá apod.) a organickými kyselinami (také označovanými jako organické volné kyseliny) (například kyselina jantarová, kyselina octová, kyselina propionová, kyselina trifluoroctová apod.). Jestliže peptid má kyselou skupinu, jako je karboxylová skupina apod., příklady takové soli zahrnují soli s anorganickými bázemi (také označovanými jako anorganické volné báze) (například alkalické kovy, jako je sodík, draslík apod., kovy alkalických zemin, jako je vápník, hořčík apod.) a organickými bázemi (také označovanými jako organické volné báze) (například organické aminy, jako je triethylamin apod., bazické aminokyseliny, jako je arginin apod.). Vedle toho může peptid tvořit komplexní sloučeninu s kovem (například komplex s mědí, komplex se zinkem apod.).

Příklady peptidu zahrnují deriváty LH-RH nebo jejich soli, které jsou účinné při hormonálně závislých onemocněních, zvláště rakovin závislých na pohlavních hormonech (například rakovině prostaty, rakovině dělohy, rakovině prsu, nádoru hypoíyzy apod.), chorobách závislých na pohlavních hormonech, jako je prostatomegalie, endometriosa, hysteromyom, předčasná puberta, dysmenorhea, amenorhea, premenstruační syndrom, multilokulámí ovariální syndrom apod., při antikoncepci (nebo, pokud se využije opačného efektu po vysazení antikoncepce, při neplodnosti), prevenci relapsu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu. Dále tyto příklady zahrnují deriváty LH-RH nebo jejich soli, které jsou účinné při nezhoubných nebo zhoubných nádorech, nezávislých na pohlavních hormonech, ale citlivých na LH-RH.

Konkrétní příklady derivátů LH-RH nebo jejich solí zahrnují peptidy popsané v Treatment -with GnRH analogs: Controversies and perspectives (The Parthenon Publishing Group Ltd., publiko

-3 CZ 306388 B6 váné v roce 1996), a v patentech JP-A 3-503165, JP-A 3-101695, JP—A 7-97334 a JP-A 8259460.

Fyziologicky aktivní peptid je reprezentován obecným vzorcem II

5-oxo-Pro-H i s-T rp-Ser-Ty r-Y-Leu-Arg-Pro-Z

[kde Y označuje zbytek vybraný z DLeu, DAla, DTrp, DSer(tBu), D2Nal a DHis(ImBzl), a Z označuje NH-C₂H₅ nebo Gly-NH₂] nebo se používá jeho sůl. Vhodný je zejména peptid, v němž Y je DLeu a Z je NH-C2H5 (tj. peptid A, znázorněný jako 5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C₂H5, Leuprore10 lin) nebo jeho sůl (například acetát).

Tyto peptidy mohou být připraveny způsoby popsanými ve výše zmíněných publikacích nebo patentových publikacích, nebo způsoby podobnými.

Zkratky používané v předkládaném popisu mají následující významy:

Zkratka	Název
N(4H₂-furoyl)Gly	V-tetrahydrofuroylglycinový zbytek
NAc	V-acetylová skupina
N2Nal	D-3-(2-naftyl)alaninový zbytek
D4ClPhe	D-3-(4-chlor)fenylalaninový zbytek
D3Pal	D-3-(3-pyridyl)alaninový zbytek
NMeTyr	ÍV-methyltyrosinový zbytek
Aph(Atz)	N-[5 ’ -(3 ’-amino-1 Ή- Γ ,2’ ,4’-triazolyl)]fenylalaninový zbytek
NMeAph(Atz)	A-methyl-[5’-(3 ’-amino-1 Ή-l ’,2’,4’-triazolyl)]fenylalaninový zbytek
DLys(Nic)	D-(e-V-nikotinoyl)lysinový zbytek
Dcit	D-citrulinový zbytek
DLys(AzaglyNic)	D-(azaglycylnikotinoyl)lysinový zbytek
DLys(AzaglyFur)	D-(azagIycylfuranyl)lysinový zbytek
DhArg(Et2)	DTALV-diethyljhomoargininový zbytek
DAph(Atz)	D-W-[5’-(3’-amino-l’H-l ’,2’,4’-triazolyl)]fenylalaninový zbytek
DhCi	D-homocitrulinový zbytek
Lys(Nisp)	(e-7V-isopropyl)lysinový zbytek
hArg(Et₂)	(AJY-diethyljhomoargininový zbytek)

Pokud se týká ostatních kyselin, jsou zde použity zkratky podle doporučení Komise pro bioche20 mickou nomenklaturu při IUPAC-IUB [viz Eur. J. Biochem. 138, 9-37 (1984)] nebo zkratky běžné v tomto oboru. Pokud aminokyselina může mít optický isomer, jde vždy o L-aminokyselinu, pokud není uvedeno jinak.

Jako polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové v předkládaném vynálezu se používá poly25 mer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, který má poměr váženého průměru molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové k číselnému průměru molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové 1,40 až 1,90.

-4CZ 306388 B6

Polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové může být sůl. Příklady této soli zahrnují soli s anorganickými bázemi (například s alkalickými kovy, jako je sodík, draslík apod., a kovy alkalických zemin, jako je vápník, hořčík apod.) nebo organickými bázemi (například organickými aminy, jako je triethylamin apod. a bazickými aminokyselinami, jako je arginin apod.), soli 15 s přechodovými kovy (například zinkem, železem, mědí apod.) a komplexní soli.

Molámí poměr složek polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové je 100/0 až 40/60, s výhodou 70/30 až 80/20.

Poměr optických isomerů kyseliny mléčné, která tvoří jednu z nejmenších opakujících se jednotek „polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové“ je s výhodou v rozmezí D-isomer/Lisomer (mol./mol. %) 75/25 až 25/75. Zejména často se používá (mol./mol. %) D-isomer/Lisomer v rozmezí od 60/40 do 30/70.

Vážený průměr molekulové hmotnosti „polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové“ je 8000 až 15 000.

Podíl nízkomolekulámí frakce, která má molekulovou hmotnost 3000 nebo menší, „polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové“ je s výhodou 9 % nebo výhodněji 3 až 9 % 30 nebo méně.

Polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové v předloženém vynálezu má poměr váženého průměru molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové k číselnému průměru molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové od 1,40 do 1,90, s výhodou 1,45 až 1,80.

Dále může být použit polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové mající vážený 5 průměr molekulové hmotnosti od 11 600 do 14 000.

Průměrná molekulová hmotnost, vážený a číselný průměr molekulových hmotností v předloženém spisu znamenají molekulové hmotnosti v pojmech polystyrenu měřené gelovou permeační chromatografií (GPC) používající jako standardní látku deset druhů monodisperzních 10 polystyrenů majících (GPC1) vážené průměry molekulové hmotnosti 397 000, 189 000, 98 900, 37 200, 17 100, 9490, 5870, 2500,1050 a 495.

Dále, množství nízkomolekulámí frakce polymeru majícího molekulovou hmotnost 3000 nebo nižší znamená množství frakce, která má molekulovou hmotnost 3000 nebo nižší v rámci distribuce váženého průměru molekulové hmotnosti získané výše uvedeným měřením GPC. Konkrétněji - spočítá se plocha pod křivkou části odpovídající molekulové hmotnosti 3000 nebo nižší vzhledem k ploše pod křivkou vypočtené distribuce váženého průměru molekulové hmotnosti. Měření se provádí na sérii vysokorychlostního GPC přístroje (výrobce Toso, HLC-8120GPC, způsob detekce je diferenciální refraktometrický index) kolonou TSKguardcolumn Super H-L (vnitřní průměr 4,6 x 35 mm), TSKgel SuperH4000 (vnitřní průměr 6 x 150 mm)x2 a TSKgel SuperH2000 (vnitřní průměr 6x150 mm) (výrobcem všech kolon je TOSO) a s THF jako mobilní fází při průtoku 0,6 ml/min.

Jestliže reakce mezi polymerem kyseliny mléčné a kyseliny glykolové a peptidem je iontová interakce, hlavní interakce je mezi peptidem a koncovou karboxylovou skupinou polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové. Je-li nízkomolekulámí frakce přítomna ve velkém množství, pak peptid snadno reaguje s polymerem kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, který má nízkou molekulovou hmotnost a vysokou reaktivitu. V injekčním činidle s trvalým uvolňováním je peptid unikající při přípravě a počátečním uvolňování hlavně ten peptid, který interagoval s nízkomolekulámí frakcí polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové. Aby se zvýšil obsah peptidů a potlačilo se množství, které se uvolní na počátku, je nutné, aby se podíl tohoto polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové s nízkou molekulovou hmotností snížil pod určitou mez a aby se poměr váženého průměru molekulové hmotnosti k číselnému průměru molekulové hmotnosti

-5CZ 306388 B6 se snížil pod určitou mez. Abychom například získali polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové pro přípravek s jednoměsíčním trvalým uvolňováním, je proto výhodné použít polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové a shora uvedený vážený průměr molekulové hmotnosti je 8000 až 15 000, poměr váženého průměru molekulové hmotnosti k číselnému průměru molekulové hmotnosti je 1,40 až 1,90, s výhodou 1,45 až 1,80, a množství nízkomolekulární frakce, mající vážený průměr molekulové hmotnosti 3000 nebo nižší, je 9 % nebo méně, s výhodou 3 až 9%.

„Polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové“ může být připraven dehydratační polykondenzací bez katalyzátoru z kyseliny mléčné a kyseliny glykolové (podle patentu JP-A 61-28521) nebo polymerací s otevřením kruhu z laktidu a cyklické diesterové sloučeniny, jako je glykolid apod. (Encyclopedic Handbook of Biomaterials and Bioengineering, Part A: Materials, sv. 2, Marcel Dekker, Inc., 1995).

Polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, získaný dehydratační polykondenzací 15 bez katalyzátoru z kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, obsahuje obecně velké množství nízkomolekulámí frakce a má poměr váženého průměru molekulové hmotnosti k číselnému průměru molekulové hmotnosti dvě nebo vyšší. Vážený průměr molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, použitého v předkládaném spisuje 5000 až 15 000. Množství nízkomoiekulámí frakce mající molekulovou hmotnost 3000 nebo nižší se může měnit v závislosti na váženém průměru molekulové hmotnosti, a pokud je vážený průměr molekulové hmotnosti 10 000, množství nízkomolekulární frakce mající molekulovou hmotnost 3000 nebo nižší je 10 % nebo vyšší.

Výsledný polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové může být čištěn organickým rozpouštědlem za vzniku konečného polymeru.

Příklady organických rozpouštědel použitých v předkládaném vynálezu zahrnují s výhodou hydrofilní nebo snadno s vodou mísitelná organická rozpouštědla, jako například aceton, tetrahydrofuran, dioxan, dimethylformamid a dimethylsulfoxid, přičemž je s výhodou mezi jinými používán aceton.

Množství vody a organického rozpouštědla přidávaná v předkládaném vynálezu nejsou konkrétně omezena. Je-li však množství vody příliš velké, snížení obsahu nízkomolekulární frakce je nedostatečné, a tak je obtížné získat konečný polymer. Na druhé straně, je-li množství vody příliš malé, začne být obtížné polymer vysrážet. Isolace produktu se zhorší a isoluje se pouze polymer s vyšší než žádoucí molekulovou hmotností. Množství vody připadající na 100 objemových dílů organického rozpouštědla je 10 až 45, s výhodou 24 až 40, zvláště výhodně 40. Například 10 g polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové se rozpustí ve 100 ml acetonu jako organickém rozpouštědle, a ke vzniklému roztoku se po částech přidá za míchání vhodným způsobem 40 ml vyčištěné vody tak, aby se vysrážel konečný polymer, který pak může být vhodným způsobem vysušen. Jestliže konečný polymer nelze získat jedním rozpouštěcím a srážecím stupněm, může být tento postup opakován.

V přípravku s trvalým uvolňováním podle předkládaného vynálezu báze znamená polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové mající poměr váženého průměru molekulové hmotnosti k číselnému průměru molekulové hmotnosti 1,40 až 1,90, nebo jeho sůl, nebo polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, který má vážený průměr molekulové hmotnosti 11 600 až 14 000, nebo jeho sůl. Složení dané molámím poměrem kyseliny mléčné a kyseliny glykolové je s výhodou 100/0 až 40/60. Peptid je s výhodou reprezentován vzorcem

5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H₅ nebo jeho acetátem. Obsah peptidu nebo jeho soli je s výhodou 5 až 24 % (hmotn./hmotn.). Dále, výhodný je takový přípravek s trvalým uvolňováním, který neobsahuje želatinu a uvolňuje peptid nebo jeho sůl v průběhu nejméně dvou týdnů.

- 6 CZ 306388 B6

Způsob přípravy mikrokapsule

Takto získaný polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové může být použit jako báze pro výrobu přípravku s trvalým uvolňováním, vybraného ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice. Způsob přípravy kompozice s trvalým uvolňováním, například mikrokapsule obsahující peptid nebo jeho sůl a polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho sůl podle předkládaného vynálezu je popsán v příkladech.

(I) Způsob sušení ve vodě (i) Způsob olej/voda (O/V)

Při tomto způsobu se nejprve připraví roztok polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho soli v organickém rozpouštědle. Je výhodné, aby organické rozpouštědlo použité pro přípravu přípravku s trvalým uvolňováním, vybraného ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, podle předkládaného vynálezu mělo teplotu varu 120 °C nebo nižší.

Jako organické rozpouštědlo se používají například halogenované uhlovodíky (např. dichlormethan, chloroform, dichlorethan, trichlorethan, tetrachlormethan apod.), ethery (např. diethylether, diisopropylether apod.), estery mastných kyselin (např. ethyl-acetát, butyl-acetát apod.), aromatické uhlovodíky (např. benzen, toluen, xylen apod.), alkoholy (například ethanol, methanol apod.) a acetonitril a jejich směsi. Jako organické rozpouštědlo polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho soli je mezi jinými výhodný dichlormethan.

Koncentrace polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové v roztoku v organickém rozpouštědle se může měnit v závislosti na molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové a na typu farmaceutického rozpouštědla. Je-li například jako organické rozpouštědlo použit dichlormethan, koncentrace se obecně volí 0,5 až 70 hmotn. %, s výhodou 1 až 60 hmotn. %, zvláště výhodně 2 až 50 hmotn. %.

K takto získanému roztoku polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové v organickém rozpouštědle se přidá peptid nebo jeho sůl, a rozpustí se či se v něm disperguje. Poté se výsledný roztok v organickém rozpouštědle, obsahující kompozici skládající se z peptidů nebo jeho soli a polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho soli, přidá k vodné fázi za vzniku emulze olej (0)/voda (V), rozpouštědlo v olejové fázi se nechá vytékat nebo nadifundovat do vodné fáze za vzniku mikrokapsulí. Přitom se objem vodné fáze obecně volí jako jedno- až desetitisícinásobek, výhodněji pěti- až padesátitisícinásobek, zvláště výhodně deseti- až dvoutisícinásobek objemu olejové fáze.

Vedle zmíněných složek se k vodné fázi může přidávat emulgační činidlo. Může být použito jakékoliv emulgační činidlo, pokud obecně může tvořit stabilní emulzi O/V. Konkrétně se například používají aniontová povrchově aktivní činidla (oleát sodný, stearát sodný, laurylsulfát sodný apod.) a neiontová povrchově aktivní činidla (polyoxyethylen-sorbitanové estery mastných kyselin (Tween 80, Tween 60, vyráběné Atlas Poder), derivát polyoxyethylen-ricinového oleje (HCO-60, HCO-50, vyráběný Nikko Chemical), polyvinylpyrrolidon, polyvinylalkohol, karboxymethylcelulosa, lecithin, želatina a kyselina hyaluronová. Mohou být použity samostatně nebo v jakékoliv kombinaci. Koncentrace při použití je s výhodou v rozsahu 0,0001 až 10 hmotn. %, výhodnější 0,001 až 5 hmotn. %.

Vedle zmíněných složek se k vodné fázi může přidat činidlo regulující osmotický tlak. Může být použito jakékoliv činidlo regulující osmotický tlak, pokud při formulaci do vodného roztoku vytváří osmotický tlak.

Příklady činidla regulujícího osmotický tlak zahrnují polyfunkční alkoholy, monofunkční alkoholy, monosacharidy, disacharidy, oligosacharidy a aminokyseliny nebo jejich deriváty.

-7 CZ 306388 B6

Z polyfunkčních alkoholů lze například použít troj funkční alkoholy, jako je glycerol apod., pentafunkční alkoholy, jako je arabitol, xylitol, adonitol apod., a hexafiinkční alkoholy, jako je mannitol, sorbitol, dulcitol apod. Mezi jinými jsou výhodné hexafiinkční alkoholy, zejména mannitol.

Příklady monofunkčních alkoholů zahrnují methanol, ethanol a isopropylalkohol, výhodný je mimo jiné ethanol.

Z monosacharidů se používají například pentosy, jako je arabinosa, xylosa, ribosa, 2-deoxyribosa apod., a hexózy, jako je glukóza, fruktóza, galaktóza, mannóza, sorbóza, rhamnóza, fukóza apod., z nich jsou výhodné hexózy.

Z oligosacharidů se používají například trisacharidy, jako je maltotrióza, rafinóza apod., a tetrasacharidy, jako je stachyóza apod., z nich jsou výhodné trisacharidy.

Z derivátů monosacharidů, disacharidů a oligosacharidů se používají například glukózamin, galaktózamin, kyselina glukuronová a kyselina galakturonová.

Z aminokyselin může být použita jakákoliv L-aminokyselina, mezi jejich příklady patří glycin, leucin a arginin. Z nich je výhodný L-arginin.

Tato činidla regulující osmotický tlak mohou být použita samostatně nebo v kombinaci.

Tato činidla regulující osmotický tlak se používají v takové koncentraci, aby osmotický tlak vnější vodné fáze byl padesátinou až pětinásobkem, s výhodou pětadvacetinou až trojnásobkem osmotického tlaku fyziologického solného roztoku. Je-li jako činidlo regulující osmotický tlak použit mannitol, jeho koncentrace je s výhodou 0,5 až 1,5 %.

Pro odstranění organického rozpouštědla se používá způsob známý per se nebo nějaký podobný způsob. Příklady těchto způsobů zahrnují odpaření organického rozpouštědla za normálního tlaku nebo za postupně klesajícího tlaku na sníženou hodnotu při současném míchání míchadlem vrtulového tvaru, magnetickým míchadlem nebo přístrojem generujícím ultrazvuk, způsob odpaření organického rozpouštědla při regulaci stupně vakua rotačním odpařovákem, a způsob postupného odstraňování organického rozpouštědla dialyzační membránou.

Takto získané mikrokapsule se odstřeďují nebo zfiltrují, aby byl zpětně isolován volný peptid nebo jeho sůl. Léčivo zadržující látka a emulgační činidlo, které jsou adsorbovány na povrchu mikrokapsule, se opláchnou několikrát destilovanou vodou a mikrokapsule se znovu dispergují v destilované vodě, která je pak odstraněna lyofilizací.

Jelikož mikrokapsule podle předkládaného vynálezu používá jako bázi polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, mající poměr váženého průměru molekulové hmotnosti k číselnému průměru molekulové hmotnosti 1,40 až 1,90, nebo jeho sůl, nebo polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, mající vážený průměr molekulové hmotnosti 11 600 až 14 000, nebo jeho sůl, může mikrokapsule obsahovat léčivo ve vysoké koncentraci, takže není nezbytné, aby mikrokapsule obsahovala léčivo zadržující látku, jako je želatina, a zahušťující činidlo.

Tyto polymery mohou být s výhodou použity pro výrobu kompozice s trvalým uvolňováním, která uvolňuje léčivo v průběhu nejméně dvou týdnů.

Během stupně přípravy může být přidáno činidlo bránící agregaci, aby se zabránilo shlukování částic. Jako agregaci bránicí činidlo lze použít například vodorozpustný polysacharid, 30 jako je mannitol, laktóza, glukóza a škroby (například kukuřičný škrob apod.), aminokyselinu, jako je glycin, a protein, jako je fibrin a kolagen. Z nich je vhodný mannitol.

-8CZ 306388 B6

Je-li to nutné, po lyofilizaci lze vodu a organické rozpouštědlo v mikrokapsulích odstranit zahříváním za podmínek, za kterých se mikrokapsule nespojují. S výhodou se zahřívání provádí na teplotu, která je blízká nebo nepatrně vyšší než střední teplota skelného přechodu mikrokapsule, získané diferenciálním skenovacím kalorimetrem za podmínek zvyšování teploty rychlostí 10 až 20 °C/min. Výhodněji se zahřívání provádí na teplotu, která je kolem střední teploty skelného přechodu mikrokapsule, nebo v teplotním rozmezí od střední teploty skelného přechodu mikrokapsule do teploty o 30 °C vyšší než je její střední teplota skelného přechodu. S výhodou se zahřívání provádí v teplotním rozmezí od asi střední teploty skelného přechodu mikrokapsule do teploty o 10 °C vyšší než je její střední teplota skelného přechodu, nejvýhodněji v teplotním rozmezí od asi její střední teploty skelného přechodu do teploty o 5 °C vyšší než je její střední teplota skelného přechodu.

Doba zahřívání se může měnit v závislosti na množství mikrokapsule, a obvykle je 12 až 168 hodin, s výhodou 24 až 120 hodin, zvláště výhodně 48 až 96 hodin od doby, kdy teplota samotné mikrokapsule dosáhne požadované hodnoty.

Způsob zahřívání není konkrétně omezen, pokud agregace mikrokapsule je tímto způsobem stejnoměrně zahřívána.

Jako způsob zahřívání a sušení se používá například způsob zahřívání a sušení v termostatované komoře, ve fluidní komoře, v pohyblivé komoře nebo sušárně, a způsob zahřívání a sušení pomocí mikrovln. Z nich je výhodný způsob zahřívání a sušení v termostatované komoře.

(ii) Způsob V/O/V

Nejprve se připraví roztok polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho soli v organickém rozpouštědle, takto získaný roztok se označí jako olejová fáze. Způsob přípravy je tentýž, jako je popsáno shora v oddíle (I)(i). Koncentrace polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové v organickém rozpouštědle se může měnit v závislosti na molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové a na typu organického rozpouštědla. Je-li například jako organické rozpouštědlo použit dichlormethan, volí se koncentrace obecně 0,5 až 70 hmotn. %, výhodněji 1 až 60 hmotn. %, zvláště výhodně 2 až 50 hmotn. %.

V dalším kroku se připraví roztok nebo disperze peptidů nebo jeho soli [rozpouštědlem je voda nebo směs vody a alkoholu (například methanolu, ethanolu apod.)].

Koncentrace peptidů nebo jeho soli, která má být přidána, je obecně 0,001 mg/ml až 10 g/ml, výhodněji 0,1 mg/ml až 5 g/ml, výhodněji 10 mg/ml až 3 g/ml.

Jestliže výše uvedený peptid má bazickou skupinu, jako je aminová skupina, soli peptidů zahrnují sůl s anorganickou kyselinou (také označovanou jako anorganická volná kyselina) (například kyselina uhličitá, kyselina hydrogenuhličitá, kyselina chlorovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná, kyselina boritá apod.), organickou kyselinou (také označovanou jako organická volná kyselina) (například kyselina jantarová, kyselina octová, kyselina propionová, kyselina trifluoroctová atd.).

Jestliže peptid má kyselou skupinu, jako je karboxylová skupina, pak soli tohoto peptidů zahrnují sůl s anorganickou bází (také označovanou jako anorganická volná báze) (například alkalické kovy, jako je sodík, draslík, kovy alkalických zemin, jako je vápník, hořčík apod.) a organickou bází (také označovanou jako organická volná báze) (například organické aminy, jako je triethylamin, bazické aminokyseliny, jako je arginin atd.). Dále mohou peptidy tvořit komplexní sloučeninu s kovem (například komplex s mědí, komplex se zinkem atd.). Zvláště výhodně se přidává kyselina octová.

-9CZ 306388 B6

Jako solubilizační činidlo a stabilizační činidlo se mohou přidávat známá činidla. Pro rozpuštění nebo dispergování peptidu nebo aditiva lze použít zahřívání, třepání nebo míchání v takové míře, aby se neztratila aktivita, a takto získaný vodný roztok se označuje jako vnitřní vodná fáze.

Takto získaná vnitřní vodná fáze a olejová fáze se emulgují známými způsoby, jako je homogenizace a ultrazvuk, za vzniku emulze V/O.

Objem olejové fáze, určené ke smíšení, je jedno- až tisícinásobkem, s výhodou dvoj- až stonásobkem, výhodněji tri- až desetinásobkem objemu vnitřní vodné fáze.

Rozsah viskozity výsledné emulze V/O je obecně 10 až 1000 cP, s výhodou 100 až 5000 cP, zvláště výhodně 500 až 2000 cP při 12 až 25 °C, kdy 1 cP je 1 mPa s.

Poté se výsledná emulze V/O, obsahující peptid nebo jeho sůl a polymer kyseliny mléčné a kyse15 liny glykolové nebo jeho sůl, přidá k vodné fázi za vzniku V(vnitřní vodná fáze)/O(olejová fáze)/V(vnější vodná fáze), rozpouštědlo v olejové fázi vytéká nebo difunduje do vnější vodné fáze, takže vznikne mikrokapsule. Přitom se objem vnější vodné fáze obecně volí jako jedno- až desetitisícinásobek, výhodněji pěti- až padesátitisícinásobek, zvláště výhodně deseti- až dvoutisícinásobek objemu olejové fáze.

Emulgační činidlo a činidlo regulující osmotický tlak, které mohou být přidány k vodné fázi vedle shora vedených složek, a způsoby následného zpracování jsou tytéž, jako jsou popsány 10 shora v části (I)(i).

(II) Způsob dělení fází

Jestliže se mikrokapsule připravují tímto způsobem, pak se k roztoku v organickém rozpouštědle, obsahujícím peptid nebo jeho sůl a polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho sůl, jak je popsáno ve způsobu sušení ve vodě v části (I), přidá postupně za míchání koacervační čini30 dlo, čímž se mikrokapsule vysráží a ztuhne. Objem koacervačního činidla může být od setiny do tisícinásobku, s výhodou od pětisetiny do pětisetnásobku, zvláště výhodně od desetiny do dvousetnásobku objemu olejové fáze.

Koacervační činidlo není nijak zvláště omezeno, pokud je to sloučenina typu polymeru, minerál35 ního oleje nebo rostlinného oleje, která je slučitelná s organickým rozpouštědlem, a nerozpouští komplex peptidu nebo jeho soli a polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho soli. Konkrétně lze použít například silikonový olej, sezamový olej, sojový olej, kukuřičný olej, olej bavlníkových semen, kokosový olej, lněný olej, minerální olej, hexan nebo heptan. Tato se mohou používat smícháním 2 nebo více těchto činidel.

Takto získaná mikrokapsule se isoluje, opakovaně promyje heptanem nebo podobným rozpouštědlem, aby se z kompozice, obsahující peptid nebo jeho sůl a polymer kyseliny mléčné a 30 kyseliny glykolové nebo jeho sůl, odstranilo koacervační činidlo, a pak se suší za sníženého tlaku. Alternativně se sušení provádí tímtéž způsobem, jaký je popsán jako způsob sušení ve vodě v 45 oddíle (I)(i) shora, totiž lyofilizací a dalším zahříváním a sušením.

(III) Způsob sušení rozprašováním

Jestliže se mikrokapsule připravuje podle předloženého způsobu, pak se roztok v organickém 50 rozpouštědle, obsahující peptid nebo jeho sůl a polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho sůl, jak je popsáno ve způsobu sušení ve vodě v oddíle (I), rozprašuje v sušicí komoře rozprašovacího sušáku pomocí trysky, a organické rozpouštědlo v jemných kapičkách se v mimořádně krátké době vypaří za vzniku mikrokapsule. Příklady trysek zahrnují fluidní typ trysky, tlakový typ trysky a rotačně diskový typ trysky. Je-li to nezbytné, mohou být mikrokapsule ná

- 10CZ 306388 B6 sledně promyty, lyofilisovány a dále zahřívány a sušeny tímtéž způsobem, jaký je popsán u způsobu sušení ve vodě v oddíle (I).

Kromě shora uvedené mikrokapsule lze vytvořit i jinou dávkovači formu, kdy roztok v organickém rozpouštědle, obsahující peptid nebo jeho sůl a polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho sůl, jak je popsáno ve způsobu sušení ve vodě při způsobu přípravy mikrokapsule (1), je sušen odpařováním organického rozpouštědla a vody, přičemž stupeň vakua je regulován například rotačním odpařovákem, a odparek je poté rozemlet tryskovým mlýnem za vzniku jemného prášku (také označovaném jako mikročástice).

Dále může být jemně rozemletý prášek promyt tímtéž způsobem, jaký je popsán pro způsob sušení ve vodě při způsobu přípravy mikrokapsule I), lyofílizován a dále zahříván a sušen.

Takto získaná mikrokapsule nebo jemný prášek mohou dosáhnout uvolňování léčiva odpovídající klesající rychlosti použitého polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové.

Kompozice s trvalým uvolňováním podle předkládaného vynálezu může znamenat mikrokuličku, mikrokapsuly nebo jemný prášek (mikročástice), z nichž vhodná je mikrokapsule.

Kompozice s trvalým uvolňováním, vybraná ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, podle předkládaného vynálezu může být použita sama o sobě, anebo tato kompozice může být použita jako surovina a formulována do rozmanitých dávkovačích forem, a může být podávána jako injekční činidlo nebo jako implantovatelné činidlo pro intravenózní, subkutánní a intraorgánová podávání, jako transmukózní činidlo, orální činidlo (například kapsule (například jako tvrdá nebo měkká kapsule apod.)), pevné přípravky, jako je granule, prášek apod., nebo kapalné činidlo, jako je sirupové činidlo, emulze, suspenze apod. pro nasální, rektální nebo děložní podávání.

Například pro formulaci přípravku s trvalým uvolňováním, vybraného ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, podle předkládaného vynálezu do injekčního činidla se formuluje do vodné suspenze spolu s dispergačním činidlem (například povrchově aktivním činidlem, jako je Tween 80, HCO-60 apod., polysacharidy, jako je hyaluronát sodný, karboxymethylcelulosa, arginát sodný apod.), ochranným činidlem (například methylparabenem a propylparabenem) a isotonickým činidlem (chloridem sodným, mannitolem, sorbitolem, glukózou a prolinem), anebo se disperguje do olejové suspenze spolu s rostlinným olejem, jako je sezamový olej nebo kukuřičný olej, za vzniku injekčního činidla s trvalým uvolňováním, které se může skutečně použit.

Jestliže se používá jako činidlo pro suspenzní injekci, mohou být průměry částic kompozice s trvalým uvolňováním, vybrané ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, podle předkládaného vynálezu v takovém rozmezí, aby byly splněny požadavky stupně disperze a propustnosti jehly. Střední průměr částice je například v rozmezí 0,1 až 300 pm, s výhodou 0,5 až 150 pm, výhodněji 1 až 100 pm.

Při formulaci kompozice s trvalým uvolňováním, vybrané ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, podle předkládaného vynálezu do aseptického přípravku se používají způsoby, které zahrnují, ale nejsou na ně omezeny, způsob aseptického provedení všech stupňů přípravy, způsob sterilizace gama zářením, způsob přidání antiseptického činidla apod.

Jelikož kompozice s trvalým uvolňováním, vybraná ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, podle předkládaného vynálezu má nízkou toxicitu, může být použita jako bezpečné léčivo pro savce (například člověka, krávu, prase, psa, kočku, myš, krysu, králíka apod.), dávka kompozice s trvalým uvolňováním, vybraná ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, podle předkládaného vynálezu se může měnit v závislosti na typu a obsahu peptidu, formě dávkování formě, době uvolňování peptidu, cílového onemocnění, druhu

- 11 CL 306388 B6 živočicha a účinného množství peptidu. Jednoduchá dávka peptidu může být s výhodou příslušně vybrána z rozsahu 0,01 až 10 mg/kg hmotnosti, výhodněji 0,05 až 5 mg/kg hmotnosti dospělého jedince, je-li například použita v přípravku s trvalým uvolňováním pro šestiměsíční přípravek.

Jednoduchá dávka kompozice s trvalým uvolňováním, vybrané ze skupiny sestávající 5 z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, může být s výhodou příslušně zvolena v rozmezí od 0,05 do 50 mg/kg hmotnosti, výhodněji 0,1 až 30 mg/kg hmotnosti dospělého jedince.

Doba podávání může být příslušně zvolena v závislosti na typu a obsahu peptidu jako báze, dáv10 kováči formě, době trvání uvolňování peptidu, cílové nemoci a druhu živočicha, jako je jednou za několik týdnů, jednou za měsíc, jednou za několik měsíců (například tři měsíce, čtyři měsíce, šest měsíců atd.) a podobně.

Kompozice s trvalým uvolňováním, vybraná ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule 15 a mikročástice, podle předkládaného vynálezu může být použita jako činidlo pro prevenci nebo léčbu rozmanitých chorob v závislosti na typu peptidu v ní obsažené, například se může použít pro prevenci nebo léčbu hormonálně závislých onemocnění, zejména rakovin závislých na pohlavním hormonu (například rakoviny prostaty, rakoviny dělohy, rakoviny prsu, nádoru hypofýzy apod.), nemocí závislých na pohlavním hormonu, jako je prostatomegalie, endometrióza, hyste20 romyom, předčasná puberta, dysmenorhea, amenorhea, premenstruační syndrom, mnohočetný ovariální syndrom apod., jako činidlo pro prevenci relapsu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu, jako činidlo pro prevenci nebo léčbu Alzheimerovy nemoci nebo autoimunitních chorob a jako antikoncepční činidlo (nebo jako činidlo pro prevenci nebo léčbu neplodnosti, kdy se využívá opačného účinku, který nastane po skončeném podávání). Může být 25 také použita jako činidlo pro prevenci nebo léčbu benigních nebo maligních nádorů, o nichž je známo, že jsou nezávislé na pohlavním hormonu, ale citlivé na tento peptid.

Lze tedy podáváním účinné dávky léčebného nebo preventivního činidla podle předkládaného vynálezu savci předcházet nebo léčit hormonálně závislá onemocnění, zejména rakoviny závislé 30 na pohlavním hormonu (například rakovinu prostaty, rakovinu dělohy, rakovinu prsu, nádor hypofyzy apod.), nemoci závislé na pohlavním hormonu, jako je prostatomegalie, endometrióza, hysteromyom, předčasná puberta, dysmenorhea, amenorhea, premenstruační syndrom, mnohočetný ovariální syndrom apod., lze zbránit těhotenství a také relapsu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu.

Příklady uskutečnění vynálezu

Předkládaný vynález bude konkrétněji vysvětlen pomocí příkladů, srovnávacích příkladů a expe40 rimentálních příkladů, jimiž však předkládaný vynález není omezen.

Příklad Al

10 g kopolymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, majícího vážený průměr molekulové hmotnosti 9700 a číselný průměr molekulové hmotnosti 5030, syntetizovaného dehydratační polykondenzací kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, bylo rozpuštěno ve 100 ml acetonu a po kapkách za míchání se přidá 40 ml vyčištěné vody, aby se vysrážel polymer. Roztok nad vysráženým slizovitým polymerem, podobným škrobovému sirupu, byl odstraněn dekantací a získaný 50 polymer se vysuší ve vakuu. Výtěžek polymeru po vysušení byl 8,37 g, vážený průměr molekulové hmotnosti 10 500 a číselný průměr molekulové hmotnosti 6700.

- 12CZ 306388 B6

Příklad A2

4,87 g polymeru získaného v příkladu Al bylo rozpuštěno v 8,03 g dichlormethanu za vzniku olejové fáze. Tato olejová fáze byla vmíchána do vodné fáze, vzniklé rozpuštěním 0,597 g acetátu peptidu A v 0,6 ml vyčištěné vody, a tato směs byla primárně emulgována při 25 000 ot/min přístrojem Polytron za vzniku emulze V/O. Tato emulze V/O byla při 15 °C přidána do 1000 ml desetinoprocentního vodného roztoku polyvinylalkoholu a homomixerem při 7000 ot/min převedena na emulzi V/O/V. Mikrokapsule byla ztužena odstraněním rozpouštědla vrtulovým míchadlem během tří hodin, pak byly mikrokapsule, které prošly sítem o hustotě ok 200 mesh, isolovány a po přidání 0,48 g mannitolu lyofilizovány. Po lyofilizaci byl výtěžek vzniklých mikrokapsulí 3,92 g a obsah peptidu A byl 10,18 %.

Srovnávací příklad Al

Mikrokapsule, získaná z kopolymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové z příkladu Al tímtéž způsobem jako v příkladu A2, poskytla výtěžek 3,97 g a obsah peptidu A byl 9,50 %.

Experimentální příklad Al

Mikrokapsule získané v příkladu A2 a srovnávacím příkladu Al byly dispergovány v 0,3 ml dispergačního média (destilovaná voda, ve které bylo rozpuštěno 0,25 mg karboxymethylcelulosy, 0,5 mg Polysorbátu 80 a 25 mg mannitolu) v takovém množství, které odpovídá 2,25 mg peptidu A, a subkutánně podány do hřbetu sedm týdnů starého krysího samce SD injekční jehlou 22G. V určeném čase po podání byly krysy usmrceny, mikrokapsule zůstávající v místě podání byly odstraněny, v nich byl stanoven obsah zbývajícího peptidu A a získaná hodnota vydělena příslušným počátečním obsahem, což poskytlo poměrné údaje uvedené v tabulce 1. V tabulce jsou dále uvedeny hodnoty M_w/M_n polymerů použitých v příkladu A2 a srovnávacím příkladu Al.

Tabulka 1

	Srovnávací příklad Al	Příklad A2
Mw/Mn	1,93	1,57
1 den	84,64 %	91,17 %
2 týdny	32,2 %	54,31 %
4 týdny	2,54 %	10,28%

Z tabulky 1 je zjevné, že je-li pro přípravu mikrokapsule použit polymer z příkladu A2, který má podíl M_w/M_n 1,90 nebo nižší, upravený působením acetonu, počáteční množství z mikrokapsule uvolněného peptidu A je potlačeno a je tak zajištěno trvalé uvolňování po dlouhé období čtyř týdnů.

Příklad A3

Ve 300,1 g dichlormethanu bylo rozpuštěno 185,7 g kopolymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, majícího vážený průměr molekulové hmotnosti 10 600 a číselný průměr molekulové hmotnosti 6600, a teplota roztoku byla nastavena na 29,5 °C. Z tohoto roztoku 25 v organickém rozpouštědle bylo odváženo 330,2 g a smíšeno s vodným roztokem, získaným rozpuštěním 15,62 g acetátu peptidu A v 15,31 g destilované vody zahřáté na 54,3 °C, a tato směs byla míchána 1 minutu za vzniku surové emulze, která byla v dalším kroku emulgována dvě minuty homogenizá

- 13 CZ 306388 B6 torem při 10 000 ot/min za vzniku emulze V/O. Pak byla tato V/O emulze ochlazena na 17,8 °C, během 1 minuty a 16 sekund vlita do 25 litrů vodného roztoku polyvinylalkoholu (EG-40, vyráběný Nihongoseikagaku) o koncentraci 0,1 % (hmotn./hmotn.), jehož teplota byla předem nastavena na 17,9 °C, a míchána při 7005 ot/min přístrojem Homomic Line Flow (vyrobeného Tokushukika) za vzniku emulze V/O/V. Tato emulze V/O/V byla míchána 3 h do odpaření dichlormethanu nebo oddifundování dichlormethanu do vnější vodné fáze, olejová fáze byla ztužena, přefiltrována přes síto s průměrem otvorů 75 pm, mikrokapsule byly ponechány usadit se kontinuálně při 2000 ot/min pomocí centrifugy (H-600S, vyrobené Kokusanenshinki) a isolovány. Isolované mikrokapsule byly znovu dispergovány v malém množství destilované vody, přefiltrovány sítem s otvory 90 pm, rozpuštěny přídavkem 17,2 g mannitolu a lyofilizovány za vzniku prášku. Výtěžek mikrokapsulí byl 76,4 % a obsah peptidu A v mikrokapsulích byl 8,79 %.

Experimentální příklad A2

Asi 26 mg mikrokapsulí popsaných v příkladu A3 bylo dispergováno v 0,3 ml dispergačního média (destilovaná voda, ve které bylo rozpuštěno 0,15 mg karboxymethylcelulosy, 0,3 mg Polysorbátu 80 a 15 mg mannitolu) a tato disperze byla injekční jehlou 22G subkutánně podána do hřbetu sedm týdnů starého krysího samce SD. Po určené době od aplikace byla krysa usmrcena, mikrokapsule zůstávající v místě podání odstraněny, v nich byl stanoven obsah zbývajícího peptidu A a získaná hodnota vydělena příslušným počátečním obsahem, což 20 poskytlo poměrné údaje uvedené v tabulce 2.

Tabulka 2

Doba	1 den	1 týden	2 týden	3 týden	4 týden	5 týden
Zbývající podíl	90,29%	68,06%	36,63 %	12,75 %	4,48 %	1,12%

Z tabulky 2 je zřejmé, že i když byl přípravek zvětšen a ačkoliv mikrokapsule popsané v příkladu A3 mají vysoký obsah fyziologicky aktivní látky, zbývající podíl fyziologicky aktivní látky jeden den po podání je pozoruhodně vysoký jako je 90 %. Z toho plyne, že při nízké hodnotě poměru MJM_n asi 1,6 je vykazován efekt značného potlačení počátečního nadměrného uvolňování fyziologicky aktivní látky. Tato mikrokapsule dosahuje konstantní rychlost uvolňování fyziologicky aktivní látky po dlouhou dobu.

Srovnávací příklad B1

Ve 320,1 g dichlormethanu bylo rozpuštěno 197,7 g kopolymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, majícího vážený průměr molekulové hmotnosti 12 600 a číselný průměr molekulové hmotnosti 6400, vzniklý roztok byl tlakově zfiltrován 0,2pm filtrem (EMFLOW, DFA 4201 FRP) a teplota byla nastavena na asi 30,0 °C. Z tohoto roztoku bylo odváženo 330,1 g a smíšeno svodným roztokem, ktefy byl připraven rozpuštěním 15,68 g acetátu peptidu A v 15,31 g destilované vody a zahřát na 56,0 °C, tato směs byla 1 minutu míchána za vzniku surové emulze, která byla pak emulgována dvě minuty při 10 000 ot/min za vzniku emulze V/O. Pak byla tato V/O emulze ochlazena na 18,2 °C, během 1 minuty a 16 sekund vlita do 25 litrů 0,1% (hmotn./hmotn.) polyvinylalkoholu (EG-40, vyrobeného firmou Nihongoseikagaku), jehož teplota byla předem nastavena na 18,4 °C, a míchána při 7007 ot/min přístrojem Homomic Line Flow (vyrobeného firmou Tokushukika) za vzniku emulze V/O/V. Tato emulze V/O/V byla míchána 3 h do odpaření dichlormethanu nebo oddifundování do vnější vodné fáze, olejová fáze byla potom ztužena, přefiltrována sítem s otvory 75 pm, mikrokapsule byly ponechány usadit při 2000 ot/min pomocí centrifugy (H-600S, vyrobené Kokusanenshinki) a isolovány. Isolované mikrokapsule byly znovu dispergovány v malém množství destilované vody, přefiltrovány sítem s otvory 90

-14CZ 306388 B6 μηι, potom byly rozpuštěny přidáním 17,2 g mannitolu a lyofilizovány za vzniku prášku. Výtěžek mikrokapsulí byl 73,47 % a obsah peptidů A v mikrokapsulích byl 8,43 %.

Srovnávací experimentální příklad Bl

Asi 26,7 mg mikrokapsulí popsaných ve srovnávacím příkladu Bl bylo dispergováno v 0,3 mg dispergačního média (destilovaná voda, ve které bylo rozpuštěno 0,15 mg karboxymethylcelulosy, 0,3 mg Polysorbátu 80 a 15 mg mannitolu) a injekční jehlou 22G subkutánně podáno do hřbetu sedm týdnů starého krysího samce SD. Po určené době od podání byla krysa usmrcena, mikrokapsule zůstávající v místě podání a obsah peptidů A v nich byl stanoven a podělen příslušným počátečním obsahem, což poskytlo zbývající podíl, jak je uvedeno v tabulce 3.

Tabulka 3

Doba	1 den	1 týden	2 týden	3 týden	4 týden	5 týden
Zbývající podíl	82,43 %	68,33 %	47,07 %	23,58 %	9,05 %	2,08 %

Z tabulky 3 je zjevné, že mikrokapsule popsané ve srovnávacím příkladu Bl mohly mít vysoký obsah fyziologicky aktivní látky i v nepřítomnosti želatiny a pozoruhodně potlačovaly počáteční uvolňování fyziologicky aktivní látky, a tato mikrokapsule uvolňovala fyziologicky aktivní látku během dlouhého období.

Srovnávací experimentální příklad B2

Asi 44,6 mg mikrokapsulí popsaných ve srovnávacím příkladu Bl bylo dispergováno v l,0ml dispergačního média (destilovaná voda, ve které bylo rozpuštěno 0,15 mg karboxymethylcelulosy, 0,3 mg Polysorbátu 80 a 15 mg mannitolu) a tato disperze byla injekční jehlou 23G subkutánně podána do hřbetu beagla vážícího 7 až 12 kg. Po určeném čase od podání byla odebírána krev z žíly na přední noze, stanoveny koncentrace peptidů A a testosteronu, a výsledky jsou uvedeny v tabulce 4.

Tabulka 4

Doba	1 den	1 týden	2 týdny	3 týdny	4 týdny	5 týdnů
Peptid A	2,21	0,398	0,525	0,433	0,603	0,358
Testosteron	2,79	0,57	0,35	0,35	0,30	0,39

Z tabulky 4 je zřejmé, že mikrokapsule popsané ve srovnávacím příkladu Bl uvolňují fyziologicky aktivní látku po dlouhou dobu a udržují koncentraci fyziologicky aktivní látky v krvi. Navíc, aktivita fyziologicky aktivní látky uvolněné do krve se neztrácí a účinnost léčiva 20 zůstává zachována.

Průmyslová využitelnost

Přípravek s trvalým uvolňováním, vybraný ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, podle předkládaného vynálezu, mající poměr váženého průměru molekulové hmotnosti k číselnému průměru molekulové hmotnosti PLGA coby báze od 1,40 do 1,90 nebo použí

- 15 CZ 306388 B6 vající jako bázi polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové s váženým průměrem molekulové hmotnosti 11 600 až 14 000 nebo jeho sůl, obsahuje peptid ve vysoké koncentraci i v nepřítomnosti želatiny a potlačuje počáteční nadměrné uvolňování peptidu a tím může dosáhnout stabilní rychlosti uvolňování po dobu asi jednoho měsíce.

To znamená, že přípravek, vybraný ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, podle předkládaného vynálezu má takové užitečné účinky, že náklady výroby a cena mohou být sníženy, protože není nutno použít léčivo zadržující látku, jako je želatina a zahušťovadlo, což vede ke snížení aditiv, a že přípravek může obsahovat léčivo ve vysoké koncentraci, aniž by bylo nutno použít látku zadržující léčivo a zahušťovadlo, a že lze tedy vyrobit kompozici s trvalým uvolňováním, vybranou ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, která uvolňuje léčivo alespoň dva týdny, a že lze vyrobit přípravek s vysokou stabilitou díky zvýšení teploty skelného přechodu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Kompozice s protrahovaným uvolňováním, vybraná ze skupiny sestávající z mikrokuličky, mikrokapsule a mikročástice, obsahující polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho sůl, vyznačující se tím, žel) polymer má poměr váženého průměru molekulové hmotnosti k číselnému průměru molekulové hmotnosti 1,40 až 1,90, má vážený průměr molekulové hmotnosti od 8000 do 15 000 a má molámí poměr kyseliny mléčné ke kyselině glykolové od 70:30 do 80:20,

2. Kompozice s protrahovaným uvolňováním podle nároku 1, vyznačující se tím, že podíl frakce s nízkou molekulovou hmotností molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové s hodnotou 3000 nebo nižší je 9 % nebo méně.

2) polymer nebo jeho sůl je vyroben způsobem, který zahrnuje přidání vody k organickému rozpouštědlu obsahujícímu polymer kyseliny mléčné s kyselinou glykolovou mající vážený průměr molekulové hmotnosti od 5000 do 15 000 při poměru 24 až 40 dílů (objemový poměr) vztaženo na 100 dílů organického rozpouštědla, a 3) kompozice také obsahuje fyziologicky aktivní látku, kterou je peptid reprezentovaný vzorcem:

S-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-CjHs nebo jeho acetát, která neobsahuje želatinu.

3. Kompozice s protrahovaným uvolňováním podle nároku 2, vyznačující se tím, že podíl frakce s nízkou molekulovou hmotností molekulové hmotnosti polymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové s hodnotou 3000 nebo nižší je 3 až 9 %.

4. Kompozice s protrahovaným uvolňováním podle nároku 1, vyznačující se tím, že peptid nebo jeho sůl je v kompozici s protrahovaným uvolňováním obsažen v množství 5 až 24 % (hmotn./hmotn.).

5. Kompozice s protrahovaným uvolňováním podle nároku 1 pro použití ve formě injekce.

6. Kompozice s protrahovaným uvolňováním podle nároku 1, vyznačující se tím, že peptid nebo jeho sůl je uvolňován po dobu alespoň dvou týdnů.

7. Způsob výroby kompozice s protrahovaným uvolňováním podle nároku l, vyznačující se tím, že se rozpouštědlo odstraní ze směsi obsahující peptid nebo jeho sůl a polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho sůl, přičemž polymer má poměr váženého prů

- 16CZ 306388 B6 měru molekulové hmotnosti k číselnému průměru molekulové hmotnosti 1,40 až 1,90, má vážený průměr molekulové hmotnosti od 8000 do 15 000 a má molární poměr kyseliny mléčné ke kyselině glykolové od 70:30 do 80:20, přičemž uvedený polymer nebo jeho sůl se vyrábějí způsobem, při kterém se voda přidá k organickému rozpouštědlu obsahujícímu polymer kyseliny mléčné s kyselinou glykolovou mající vážený průměr molekulové hmotnosti od 5000 do 15 000 při poměru 24 až 40 dílů (objemový poměr) vztaženo na 100 dílů organického rozpouštědla.

8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že se peptid nebo jeho sůl míchá a disperguje v roztoku organického rozpouštědla obsahujícího polymer kyseliny mléčné a kyseliny glykolové nebo jeho sůl a organické rozpouštědlo se odstraní.

9. Způsob podle nároku 8, vyznačující se tím, že se peptid nebo jeho sůl používá jako jejich vodný roztok.

10. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici s protrahovaným uvolňováním podle nároku 1. '

11. Farmaceutický přípravek podle nároku 10 pro prevenci nebo léčení rakoviny prostaty, prostatomegalie, endometriózy, hysteromyomu, metrofíbromu, předčasné puberty a dysmenorey nebo antikoncepční přípravek.

12. Farmaceutický přípravek podle nároku 10 pro prevenci relapsu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu.

13. Použití kompozice s protrahovaným uvolňováním podle nároku 1 pro výrobu farmaceutického přípravku pro prevenci nebo léčbu rakoviny prostaty, prostatomegalie, endometriózy, hysteromyomu, metrofibromu, předčasné puberty a dysmenorhey, nebo antikoncepčního prostředku.

14. Použití kompozice s protrahovaným uvolňováním podle nároku 1 pro výrobu farmaceutického přípravku pro prevenci relapsu rakoviny prsu po operaci premenopauzální rakoviny prsu.