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WO2019230957A1 - 筋修復促進用組成物 - Google Patents

筋修復促進用組成物 Download PDF

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Publication number
WO2019230957A1
WO2019230957A1 PCT/JP2019/021752 JP2019021752W WO2019230957A1 WO 2019230957 A1 WO2019230957 A1 WO 2019230957A1 JP 2019021752 W JP2019021752 W JP 2019021752W WO 2019230957 A1 WO2019230957 A1 WO 2019230957A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
lactobacillus
lactic acid
composition
cells
muscle repair
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2019/021752
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
忠昭 宮崎
久子 中川
敬弘 關
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Megmilk Snow Brand Co Ltd
Original Assignee
Megmilk Snow Brand Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Megmilk Snow Brand Co Ltd filed Critical Megmilk Snow Brand Co Ltd
Priority to JP2020522633A priority Critical patent/JP7488182B2/ja
Publication of WO2019230957A1 publication Critical patent/WO2019230957A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Definitions

  • the present invention relates to a composition for promoting muscle repair.
  • Skeletal muscle is the largest organ that occupies about 40% of human body weight, and its functions range from general body movement to posture maintenance, energy metabolism, and protection of internal organs.
  • Skeletal muscle has a repair function. When physical or chemical damage occurs, muscle satellite cells located around muscle fibers work to repair the damaged site. Muscle satellite cells are normally stationary, but are activated when skeletal muscle is damaged and differentiate into myoblasts. After the myoblasts proliferate, they differentiate into myotubes and fuse to the damaged site to repair skeletal muscle.
  • Granulocyte colony-stimulating factor (Patent Document 1), ⁇ -hydroxy- ⁇ -methylbutyrate (Patent Document 2), and retinoic acid receptor ⁇ (RAR ⁇ ) agonist (Patent Document 3) are compounds that promote skeletal muscle repair. It has been reported.
  • Lactic acid bacteria are bacteria that produce lactic acid in the process of metabolism and have been used for various fermented foods since ancient times. In recent years, the functionality of lactic acid bacteria has attracted attention as probiotics (providing beneficial effects to the host by reaching the intestines alive).
  • An object of the present invention is to provide a novel composition for promoting muscle repair containing lactic acid bacteria as an active ingredient.
  • the present inventors have intensively studied. As a result, they found a lactic acid bacterium having a muscle repair promoting action and completed the present invention. That is, the present invention provides a novel composition for promoting muscle repair containing lactic acid bacteria as an active ingredient. Moreover, this invention provides the novel lactic acid strain which can be utilized industrially. Accordingly, the present invention has the following configuration. (1) A composition for promoting muscle repair, comprising as an active ingredient a bacterial cell belonging to Lactobacillus and / or a culture thereof.
  • Lactobacillus (Lactobacillus), Lactobacillus gasseri (Lactobacillus gastros), Lactobacillus delbacillus (Lactobacillus gasseri)
  • Lactobacillus belonging to Lactobacillus is Lactobacillus gasseri SBT2055 (FERM BP-10953), Lactobacillus delbruxi subspices delbrucky SBT0413 (NITE P-02642), Lactobacillus reuteri SBT02-STE26 PBT
  • Novel lactic acid bacterium Lactobacillus delbruecki subspecies delbruecki SBT0413 Novel lactic acid bacterium Lactobacillus delbruecki subspecies delbruecki SBT0413.
  • New lactic acid bacterium Lactobacillus reuteri SBT1926 Novel lactic acid bacterium Lactobacillus helveticus SBT11380.
  • composition for promoting muscle repair which comprises a bacterial cell belonging to Lactobacillus and / or a culture thereof as an active ingredient.
  • novel lactic acid strain which can be utilized industrially can be provided.
  • Lactobacillus Any lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus can be used as long as they belong to the genus Lactobacillus. Specific examples include Lactobacillus gasseri, Lactobacillus delbrucky sub-species delbrucky, etc. It is not limited to these.
  • the lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus of the present invention are Lactobacillus belonging to Lactobacillus, Lactobacillus gasseri SBT2055 (FERM BP-10953), Lactobacillus delbrucky Subspecies delbrucky SBT0402 (NTE P0402) Lactobacillus reuteri SBT1926 (NITE P-02643) and Lactobacillus helveticus SBT11380 (NITE P-02644).
  • Lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus may be cultured according to a conventional method for lactic acid bacteria culture to prepare a desired amount.
  • Lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus are cultured using an MRS (DIFCO) medium, and the resulting culture is collected by centrifugation to obtain bacterial cells.
  • the obtained microbial cells may be used as they are, or microbial cells subjected to concentration, drying, and lyophilization treatment may be used. Cells that have been killed by heat drying or the like can also be used.
  • Insoluble fraction of lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus (sediment) One embodiment of the method for preparing an insoluble fraction (sediment) of lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus of the present invention is shown below.
  • the lyophilized powder of Lactobacillus cells is suspended in a buffer and heated at 80 ° C. for about 30 minutes to obtain heated cells.
  • the heated cells are crushed with a French press.
  • the disrupted solution is centrifuged to remove the supernatant to obtain a sediment of lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus.
  • the active ingredient can be an insoluble fraction of crushed cells, and more specifically, an insoluble fraction of the crushed cells in a buffer solution (for example, phosphate buffer). Can be minutes.
  • a soluble fraction of the microbial cell disruption product may or may not be included additionally.
  • Lactobacillus strains include Lactobacillus delbruecki subspices delbruecki (Lactobacillus delbrueckii subsp. Delbrueckii) SBT0413 (NITE P-02642), Lactobacillus reuteri (Lactobils Reuteri Lactobacillus helveticus SBT11380 (NITE P-02644).
  • the lactic acid strain may be referred to as “the lactic acid bacterium of the present invention”, “the lactic acid strain of the present invention”, or simply SBT0413, SBT1926, and SBT11380.
  • lactic acid strains were transferred to SBT0413 in the Patent Evaluation Microorganism Depositary Center of the National Institute of Technology and Evaluation (Postal 292-0818, 2-5-8 122, Kazusa-Kamashita, Kisarazu City, Chiba Prefecture).
  • NITE P-02642, SBT1926 is deposited with NITE P-02643, and SBT11380 is deposited with NITE P-02644.
  • the lactic acid bacteria of the present invention are not limited to the above lactic acid strains, and may be lactic acid strains substantially equivalent to these deposited lactic acid strains.
  • Substantially equivalent lactic acid strains are lactic acid strains belonging to Lactobacillus delbruecki subspecies delbrucky, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus helveticus, and have the same level of muscle repair promoting activity as deposited lactic acid strains Say.
  • the substantially equivalent lactic acid strain further has a base sequence of the 16S rRNA gene of 98% or more, preferably 99% or more, more preferably 100% of the base sequence of the 16S rRNA gene of the deposited lactic acid strain. It has homology and preferably has the same mycological properties as the deposited lactic acid strain.
  • the lactic acid bacteria of the present invention were bred from the deposited lactic acid strain or a substantially equivalent lactic acid strain by mutation treatment, genetic recombination, selection of natural mutant strains, etc., as long as the effects of the present invention were not impaired. It may be a lactic acid strain.
  • the composition of the present invention can also contain microbial cells subjected to concentration, drying, freeze-drying treatment, dead microbial cells obtained by heat drying, etc., it can be used as an active ingredient. Can be widely used.
  • the administration target of the composition of the present invention is not particularly limited and can be administered to a human, but the administration target may be an animal other than a human (for example, a dog, a cat, a horse or a rabbit).
  • the administration subject is a human, it can be administered to a minor, an adult, an elderly person 65 years or older, or the like under 20 years old.
  • the intake of the composition of the present invention is individually determined in consideration of the symptoms, age, etc. of the subject of administration, but it is usually 0.5-5000 mg for an adult, 0.5-500 mg 0.5-50 mg is most desirable. (Evaluation method of muscle repair promotion effect) Evaluation can be performed by the method described in Examples. That is, evaluation can be performed by the following method.
  • Lactobacillus gasseri SBT2055 heated cells are crushed three times at 1,200 psiG with a French press (Aminco). After crushing, centrifugation (4 ° C., 7000 rpm, 15 minutes) is performed to obtain a supernatant and a sediment. Furthermore, the supernatant was filtered through a 0.22 ⁇ m filter. For the sediment, add PBS (-) in an amount equal to the removed supernatant, vortex and then centrifuge (4 ° C, 7000 rpm, 15 minutes) to remove the supernatant. This is repeated three times, and a supernatant added with an equal volume of PBS ( ⁇ ) is used as the sediment.
  • the concentration of the crushed supernatant and sediment obtained from 10 mg / ml Lactobacillus gasseri SBT2055 heated cells subjected to a French press is set to an equivalent amount of 10 mg / ml, respectively.
  • C2C12 mouse myoblasts were seeded in collagen-coated 96-well plates at 5,000 cells / well, cultured at 37 ° C.
  • bupivacaine hydrochloride (Wako Pure Chemical Industries) was used. Let react for hours. Thereafter, bupivacaine is removed, and unbroken heated cells, crushed supernatant or crushed sediment is added, and myoblasts are cultured for 48 hours. After culturing, washing with sterile PBS ( ⁇ ) is performed twice, and then cell counting kit-8 (Dojindo Laboratories) is added and reacted at 37 ° C. for 2 hours, and the absorbance at 450 nm is measured.
  • the obtained absorbance value is applied to the formula of (heated cell-blank) / (heat cell not added-blank) ⁇ 100 to calculate the growth rate. If the growth promotion effect of myoblasts by lactic acid bacteria is increased compared to the case of non-heated cells added, it can be determined that the proliferation of myoblasts after injury was promoted.
  • Example product 1 Heated cells of lactic acid bacteria Each test bacterium of the following (1) was inoculated into MRS medium (DIFCO), and static culture was performed at 37 ° C for 16 hours. The culture was centrifuged (4 ° C., 7000 rpm, 15 minutes), and then washed with sterilized water and centrifuged three times to obtain washed cells. The washed cells were freeze-dried to obtain cell powder. The bacterial cell powder was diluted with sterile PBS ( ⁇ ) to 10 mg / ml and heated at 80 ° C. for 30 minutes to obtain heated bacterial cells.
  • MRS medium DIFCO
  • Lactobacillus gasseri (Lactobacillus gasseri) SBT2055 (FERM BP-10953), Lactobacillus del Burukki subsp. Bulgaricus (Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus) SBT2115, Lactobacillus del Burukki subsp del Burukki (Lactobacillus delbrueckii subsp.
  • C2C12 mouse myoblasts were cultured in DMEM (SIGMA) containing 10% FBS (GIBCO) and 1% penicillin-streptomycin (SIGMA).
  • C2C12 mouse myoblasts were seeded in collagen-coated 96-well plates at 5,000 cells / well, cultured at 37 ° C. for 24 hours in a 5% CO 2 incubator, and then 0.5 ⁇ M bupivacaine hydrochloride (Wako Pure Chemical Industries) was used. Reacted for hours. Thereafter, bupivacaine was removed, each heated cell was added, and myoblasts were cultured for 48 hours.
  • the cells were washed twice with sterile PBS ( ⁇ ), cell counting kit-8 (Dojindo Laboratories) was added, and the mixture was reacted at 37 ° C. for 2 hours, and the absorbance at 450 nm was measured. The obtained absorbance value was applied to the formula of (heated cell added-blank) / (heated cell non-added-blank) ⁇ 100 to calculate the growth rate. If the growth promotion effect of myoblasts by lactic acid bacteria is increased compared to the case of non-heated cells added, it can be determined that the proliferation of myoblasts after injury was promoted.
  • Example 2 Concentration-dependent effect of Lactobacillus gasseri SBT2055 heated cells (preparation of lactic acid bacteria) Regarding Example Product 1, the concentration-dependent muscle repair promoting effect of bacterial cells was examined.
  • SIGMA DMEM
  • FBS FBS
  • SIGMA penicillin-streptomycin
  • Lactobacillus gasseri SBT2055 myoblast proliferation rate for each heated cell concentration is shown in FIG.
  • an increase in the proliferation rate of myoblasts was observed depending on the concentration of Lactobacillus gasseri SBT2055 heated cells. Therefore, the concentration dependency of Lactobacillus gasseri SBT2055 heated cells was observed in the effect of promoting the proliferation of myoblasts after injury.
  • Example 3 Search for effective components of Lactobacillus gasseri SBT2055 heated cells (preparation of lactic acid bacteria) For Example Product 1, the effect of promoting the muscle repair of the soluble fraction (supernatant) and the insoluble fraction (sediment) of the crushed cells was examined.
  • Test method 10 mg / ml Lactobacillus gasseri SBT2055 heated cells were crushed three times at 1,200 psiG with a French press (Aminco). After crushing, centrifugation (4 ° C., 7000 rpm, 15 minutes) was performed to obtain a supernatant and a sediment. Furthermore, the supernatant was filtered through a 0.22 ⁇ m filter.
  • the precipitate was added with an equal amount of PBS (-) to the removed supernatant, vortexed and centrifuged (4 ° C, 7000 rpm, 15 minutes) to remove the supernatant. This was repeated 3 times, and a supernatant added with an equal amount of PBS ( ⁇ ) was used as the sediment.
  • Concentrations of the crushed supernatant and sediment obtained from 10 mg / ml Lactobacillus gasseri SBT2055 heated cells subjected to a French press were each equivalent to 10 mg / ml. Dilute with DMEM (SIGMA) containing 10% FBS (GIBCO) and 1% penicillin-streptomycin (SIGMA) to an amount equivalent to 100 ⁇ g / ml.
  • C2C12 mouse myoblasts were seeded in collagen-coated 96-well plates at 5,000 cells / well, cultured at 37 ° C. for 24 hours in a 5% CO 2 incubator, and then 0.5 ⁇ M bupivacaine hydrochloride (Wako Pure Chemical Industries) was used. Reacted for hours. Thereafter, bupivacaine was removed, and unbroken heated cells, crushed supernatant, or crushed sediment was added, and myoblasts were cultured for 48 hours. After culturing, the cells were washed twice with sterile PBS ( ⁇ ), cell counting kit-8 (Dojindo Laboratories) was added, and the mixture was reacted at 37 ° C.
  • sterile PBS ⁇
  • cell counting kit-8 Dojindo Laboratories
  • Example product 2 Preparation of lactic acid bacteria culture Lactobacillus gasseri SBT2055 was cultured in MRS liquid medium (DIFCO). Each culture solution in the logarithmic growth phase was inoculated with 1% in 10% reduced skim milk (115 ° C., sterilized for 20 minutes) supplemented with 0.3% yeast extract to prepare mother cultures. 10% reduced skim milk was added thereto, and 2.5% was added to the yogurt mix heated at 100 ° C. for 10 minutes. Fermentation was performed at 37 ° C., and when the lactic acid acidity reached 0.85, the mixture was cooled to terminate the fermentation. The obtained fermented milk was freeze-dried to obtain a powder of Lactobacillus gasseri SBT2055 cell culture. The obtained cell culture was resuspended in phosphate buffer and adjusted to 1 ⁇ 10 9 cells / ml.
  • DIFCO MRS liquid medium
  • Example product 3 Preparation of lactic acid bacterial cells Lactobacillus gasseri SBT2055 was inoculated into MRS liquid medium (DIFCO), and static culture was performed at 37 ° C for 16 hours. The culture was centrifuged at 4 ° C. and 7000 rpm for 15 minutes, and then washed with sterilized water and centrifuged three times to obtain washed cells. The washed cells were freeze-dried to obtain cell powder.
  • DIFCO MRS liquid medium
  • Example Product 4 Manufacture of Tablets 1 part of the bacterial cell powder prepared in Example Product 3 was mixed with 4 parts of skim milk powder, and this mixed powder was tableted 1 g by a conventional method using a tableting machine. Tablets containing 200 mg of cells of Lactobacillus gasseri SBT2055 of the invention were prepared.
  • Example product 5 Manufacture of powder After intake of Lactobacillus gasseri SBT2055 in 5 L of MRS liquid medium (DIFCO), static culture was performed at 37 ° C for 18 hours. After completion of the culture, centrifugation was performed at 7000 rpm for 15 minutes to obtain 1/50 amount of concentrated bacterial cells of the culture solution. Next, the concentrated cells were mixed with the same amount of a dispersion medium containing 10% by weight of skim milk powder and 1% by weight of sodium glutamate, adjusted to pH 7, and then freeze-dried. The obtained freeze-dried product was sized with a 60-mesh sieve to produce freeze-dried bacterial powder.
  • DIFCO MRS liquid medium
  • Example Product 6 Production of Capsule After mixing the raw materials according to the formulation shown in Table 1 and granulating by granulation, 10 mg each was filled into empty capsules to produce a capsule.
  • Example product 7 Production of stick-like health food To 30 g of the powder of Example product 1, 40 g of an equal mixture of vitamin C and citric acid, 100 g of granulated sugar, and 60 g of an equal mixture of corn starch and lactose were added and mixed. The mixture was packed in stick bags to produce stick health food.
  • Example product 8 Manufacture of beverages After mixing the raw materials according to the formulation shown in Table 2 and filling the containers, heat sterilization was performed to produce fruit juice beverages.
  • a muscle repair promoter comprising a lactic acid bacterial cell belonging to Lactobacillus and / or a lactic acid bacterial culture as an active ingredient.
  • Lactobacillus gasseri SBT2055 (I) Name and address of the depository institution that deposited the biological material, Patent Evaluation Facility, National Institute of Technology and Evaluation 2-5-8, Kazusa Kamashi, Kisarazu, Chiba, Japan Room 120 (zip code 292-0818) Date of deposit of biological materials at the depository in Loi March 27, 1996 February 26, 2008 (the date of transfer to the deposit under the Budapest Treaty by the original deposit) Deposit number FERM BP-10953 assigned to the depositary by the high depository (2) Lactobacillus delbruecki subspecies delbruecki SBT0413 (I) Name and address of the depositary institution that deposited the biological material, Patent Evaluation Microorganism Deposit Center, National Institute of Technology and Evaluation 2-5-8, Kazusa Kamashi, Kisarazu, Chiba, Japan Room 122 (zip code 292-0818) Date of deposit of biological materials at the depository in Loi February 21, 2018 Deposit number N
  • the receipt number is NITE ABP-02642.
  • Lactobacillus reuteri SBT1926 I) Name and address of the depositary institution that deposited the biological material, Patent Evaluation Microorganism Deposit Center, National Institute of Technology and Evaluation 2-5-8, Kazusa Kamashi, Kisarazu, Chiba, Japan Room 122 (zip code 292-0818) Date of deposit of biological materials at the depository in Loi February 21, 2018 Deposit number NITE P-02643 attached to the deposit by the depository in Hai (deposited under the Budapest Treaty based on the original deposit after the original deposit date) (The application was transferred on May 27, 2019, and after completion of the survival confirmation test, we received a letter notifying the receipt number.
  • the receipt number is NITE ABP-02643.
  • Lactobacillus helveticus SBT11380 I) Name and address of the depositary institution that deposited the biological material, Patent Evaluation Microorganism Deposit Center, National Institute of Technology and Evaluation 2-5-8, Kazusa Kamashi, Kisarazu, Chiba, Japan Room 122 (zip code 292-0818) Date of deposit of biological materials at the depository in Loi February 21, 2018 Deposit number NITE P-02644 given by the depository in the high (deposited under the Budapest Treaty based on the original deposit after the original deposit date) (The application was transferred on May 27, 2019, and after completion of the survival confirmation test, we received a letter notifying the receipt number.
  • the receipt number is NITE ABP-02644.

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Abstract

新規な筋修復促進用組成物を提供することを課題とする。　ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する菌の菌体及び／又はその培養物を有効成分とすることにより、筋修復促進作用を有する飲食品および飼料を提供することが可能となる。

Description

筋修復促進用組成物
　本発明は筋修復促進用組成物に関する。
　骨格筋はヒトの体重の４０％程度を占める最大の器官であり、その機能は全身運動以外にも姿勢の維持やエネルギー代謝、内臓器官の保護と多岐にわたる。
　骨格筋は修復機能を有しており、物理的、化学的な損傷を受けると、筋繊維周囲に位置する筋衛星細胞が働くことで損傷部位が修復される。筋衛星細胞は通常静止した状態であるが、骨格筋に損傷が起きると活性化し、筋芽細胞に分化する。筋芽細胞は増殖後、筋管に分化し、損傷部位に融合することで骨格筋が修復される。
　骨格筋の修復を促進する化合物として顆粒球コロニー刺激因子（特許文献１）やβ－ヒドロキシ－β－メチルブチレート（特許文献２）、レチノイン酸受容体γ（ＲＡＲγ）アゴニスト（特許文献３）が報告されている。
　乳酸菌は代謝の過程で乳酸を産生する細菌であり、古くから様々な発酵食品に利用されている。近年は、プロバイオティクス（生きて腸まで届くことで宿主に有益な効果をもたらす）として、乳酸菌の機能性が注目されている。
　これまでに、乳酸菌を有効成分とする筋修復促進用組成物はいずれの文献にも開示も示唆もされていない。
国際公開２０１０／１３１３８２号 特表２０１６－５２００５０号 特表２０１３－５３６８５５号
　本発明は、乳酸菌を有効成分とする新規の筋修復促進用組成物を提供することを課題とする。
　上記課題を解決するために、本発明者らは鋭意検討した結果、筋修復促進作用を有する乳酸菌を見出し、本発明を完成させた。
　すなわち、本発明は乳酸菌を有効成分とする新規の筋修復促進用組成物を提供するものである。また、本発明は産業上利用可能な新規の乳酸菌株を提供するものである。
　したがって、本発明は以下の構成を有する。
（１）ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する菌の菌体及び／又はその培養物を有効成分とする筋修復促進用組成物。
（２）ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する菌が、ラクトバチルス　ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキー　（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス　ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス　ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする（１）に記載の筋修復促進用組成物。
（３）ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する乳酸菌が、ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０９５３）、ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキー　ＳＢＴ０４１３（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４２）、ラクトバチルス　ロイテリ　ＳＢＴ１９２６（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４３）、ラクトバチルス　ヘルベティカス　ＳＢＴ１１３８０（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４４）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする（１）に記載の筋修復促進用組成物。
（４）前記菌体及び／又はその培養物が、死菌体である、（１）～（３）のいずれか一項に記載の筋修復促進用組成物。
（５）前記死菌体が、菌体破砕物の不溶性画分である、（４）に記載の筋修復促進用組成物。
（６）新規乳酸菌ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキー　ＳＢＴ０４１３。
（７）新規乳酸菌ラクトバチルス　ロイテリ　ＳＢＴ１９２６。
（８）新規乳酸菌ラクトバチルス　ヘルベティカス　ＳＢＴ１１３８０。
　本発明によれば、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する菌の菌体及び／又はその培養物を有効成分とする筋修復促進用組成物を提供することができる。また、本発明によれば、産業上利用可能な新規の乳酸菌株を提供することができる。
筋損傷剤反応後（２４時間）のマウス筋芽細胞から筋損傷剤を除去し、様々な乳酸菌加熱菌体を添加して、４８時間培養後に筋芽細胞の増殖率を比較したグラフである。 筋損傷剤反応後（２４時間）のマウス筋芽細胞から筋損傷剤を除去し、乳酸菌加熱菌体（ラクトバチルス　ガセリ）を異なる濃度で添加して、４８時間培養後に筋芽細胞の増殖率を比較したグラフである。 筋損傷剤反応後（２４時間）のマウス筋芽細胞から筋損傷剤を除去し、乳酸菌加熱菌体（ラクトバチルス　ガセリ）の破砕物の画分を添加して、４８時間培養後に筋芽細胞の増殖率を比較したグラフである。
（ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌）
　本発明のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に分類される乳酸菌であればどのようなものでも用いることができる。
　具体的には、ラクトバチルス　ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキー　（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス　ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス　ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）等を例示できるが、これらに限定されるものではない。
　本発明のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する乳酸菌が、ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０９５３）、ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキー　ＳＢＴ０４１３（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４２）、ラクトバチルス　ロイテリ　ＳＢＴ１９２６（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４３）、ラクトバチルス　ヘルベティカス　ＳＢＴ１１３８０（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４４）であることが好ましい。
（ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌の調製）
　ラクトバチルス属に属する乳酸菌は、乳酸菌培養の常法に従って培養し、所望の量を調製すればよい。調製の一態様を以下に示す。ＭＲＳ（ＤＩＦＣＯ）培地を用いてラクトバチルス属に属する乳酸菌を培養し、得られた培養物を遠心分離により集菌することにより菌体を得る。得られた菌体をそのまま用いてもよいし、濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供した菌体を用いることもできる。菌体は加熱乾燥などにより死菌体にしたものを用いることもできる。
（ラクトバチルス属に属する乳酸菌の不溶性画分（沈渣））
　本発明のラクトバチルス属に属する乳酸菌の不溶性画分（沈渣）の調製法の一態様を以下に示す。ラクトバチルス属の菌体の凍結乾燥末を緩衝液に懸濁し、８０℃、３０分間程度加熱して加熱菌体を得る。この加熱菌体をフレンチプレスにより破砕する。破砕液を遠心分離して上清を除き、ラクトバチルス属に属する乳酸菌の沈渣を得る。
　本発明の筋修復促進用組成物では、有効成分は菌体破砕物の不溶性画分であることができ、詳細には菌体破砕物の緩衝液（例えば、リン酸緩衝液）への不溶性画分であることができる。菌体破砕物の可溶性画分を追加で含んでもよく、含まなくともよい。
（新規乳酸菌株）
　本発明は、新規乳酸菌株に関するものである。これらの乳酸菌株とはラクトバチルスに属するラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＳＢＴ０４１３（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４２）、ラクトバチルス　ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１９２６（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４３）、ラクトバチルス　ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ１１３８０（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４４）である。以下、同乳酸菌株を「本発明の乳酸菌」、「本発明の乳酸菌株」、又は単にＳＢＴ０４１３、ＳＢＴ１９２６、ＳＢＴ１１３８０株と記載することがある。
　これらの乳酸菌株は、２０１８年３月１５日に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（郵便番号２９２－０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、ＳＢＴ０４１３はＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４２、ＳＢＴ１９２６はＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４３、ＳＢＴ１１３８０はＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４４の受託番号で寄託されている。
　本発明の乳酸菌は、上記乳酸菌株に制限されず、これらの寄託乳酸菌株と実質的に同等の乳酸菌株であってもよい。実質的に同等の乳酸菌株とは、ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキー、ラクトバチルス　ロイテリ、ラクトバチルス　ヘルベティカスに属する乳酸菌株であって、寄託乳酸菌株と同程度の高い筋修復促進作用を有する乳酸菌株を言う。
　また、実質的に同等の乳酸菌株は、さらに、その１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、上記寄託乳酸菌株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と９８％以上、好ましくは９９％以上、より好ましくは１００％の相同性を有し、且つ、好ましくは上記寄託乳酸菌株と同一の菌学的性質を有する。さらに、本発明の乳酸菌は、本発明の効果が損なわれない限り、寄託乳酸菌株、又はそれと実質的に同等の乳酸菌株から、変異処理、遺伝子組換え、自然変異株の選択等によって育種された乳酸菌株であってもよい。
（利用方法）
　上記の通り、本発明の組成物は濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供した菌体、加熱乾燥などにより得られる死菌体も有効成分とすることができることから、製剤、飲食品、飼料の原料として広く用いることができる。　
　本発明の組成物の投与対象は特に限定されず、ヒトに対して投与することができるが、投与対象はヒト以外の動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ又はウサギ等）であっても良い。投与対象がヒトである場合は、２０歳未満の未成年、成人、又は６５歳以上の高齢者などに投与することができる。
　本発明の組成物の摂取量は、投与対象者の症状、年齢などを考慮してそれぞれ個別に決定されるが、通常成人の場合、０．５－５０００ｍｇであればよく、０．５－５００ｍｇが望ましく、０．５－５０ｍｇが最も望ましい。
（筋修復促進効果の評価方法）
　実施例に記載の方法で評価が可能である。すなわち、以下の方法で評価が可能である。
　１０ｍｇ/ｍｌラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体をフレンチプレス（Ａｍｉｎｃｏ）で１,２００ｐｓｉＧで３回破砕する。破砕後に、遠心分離（４℃、７０００ｒｐｍ、１５分間）をして上清と沈渣を得る。さらに、上清を０．２２μｍフィルターで濾過した。沈渣は除去した上清と等量のＰＢＳ（－）を添加して、ボルテックス後に遠心分離（４℃、７０００ｒｐｍ、１５分間）し、上清を除去する。これを３回繰り返し、上清と等量のＰＢＳ（－）を添加したものを沈渣として使用する。フレンチプレスに供した１０ｍｇ／ｍｌラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体から得られた破砕物上清と沈渣の濃度を、それぞれ１０ｍｇ／ｍｌ相当量とする。１００μｇ/ｍｌ相当量になるように１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）、１％ペニシリンーストレプトマイシン（ＳＩＧＭＡ）を含有したＤＭＥＭ（ＳＩＧＭＡ）で希釈し、破砕物上清の懸濁液または沈渣の懸濁液を得る。Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞をコラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに５，０００ｃｅｌｌｓ/ｗｅｌｌずつ播種して、５％ＣＯ２インキュベーターにて３７℃、２４時間培養後に、０．５μＭブピバカイン塩酸塩（和光純薬）を２４時間反応させる。その後、ブピバカインを取り除き、未破砕の加熱菌体、破砕物上清、または破砕物沈渣を添加して筋芽細胞を４８時間培養する。培養後、滅菌ＰＢＳ（－）による洗浄を２回行ってから、ｃｅｌｌ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ　ｋｉｔ―８（同仁化学）を添加して３７℃、２時間反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する。得られた吸光度の値を（加熱菌体－ブランク）／（加熱菌体非添加－ブランク）×１００の計算式に当てはめて、増殖率を算出する。乳酸菌菌体による筋芽細胞の増殖促進効果は加熱菌体非添加と比べて、増殖率の増加が認められれば、損傷後の筋芽細胞の増殖を促進したと判断することができる。
　以下、本発明の実施例をもとにさらに詳細に説明するが、本発明は係る実施例に限定して解釈されるものではない。なお、特に説明のない限り、本明細書において％は重量％を示す。
＜実施例品１＞乳酸菌加熱菌体
　下記（１）の各供試菌をＭＲＳ培地（ＤＩＦＣＯ）に植菌し、３７℃にて１６時間静置培養を行った。培養物を、遠心分離（４℃、７０００ｒｐｍ、１５分間）した後、滅菌水による洗浄と遠心分離を３回繰り返して行い、洗浄菌体を得た。この洗浄菌体を凍結乾燥処理して菌体粉末を得た。菌体粉末を１０ｍｇ/ｍｌになるように滅菌ＰＢＳ（－）で希釈し、８０℃、３０分間加熱して加熱菌体を得た。加熱菌体は１００μｇ/ｍｌになるように１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）、１％ペニシリン－ストレプトマイシン（ＳＩＧＭＡ）を含有したＤＭＥＭ（ＳＩＧＭＡ）で希釈した。
（１）供試菌
　ラクトバチルス属の下記７株を供試菌とした。
　ラクトバチルス　ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ　ＢＰ―１０９５３）、ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１１５、ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキー　（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＳＢＴ０４１３（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４２）、ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　ラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ２０８０、ラクトバチルス　ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１９２６（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４３）、ラクトバチルス　ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ１１３８０（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４４）、ラクトバチルス　ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｂｒｅｖｉｓ）ＳＢＴ２０３５
　なお、ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０９５３は、独立行政法人産業技術総合研究所特許微生物寄託センターに寄託されている。
＜試験例１＞筋修復を促進する乳酸菌のスクリーニング
　実施例品１を以下の試験に供した。
（１）試験方法
　Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞を１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）、１％ペニシリン－ストレプトマイシン（ＳＩＧＭＡ）を含有したＤＭＥＭ（ＳＩＧＭＡ）で培養した。Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞をコラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに５，０００ｃｅｌｌｓ/ｗｅｌｌずつ播種して、５％ＣＯ２インキュベーターにて３７℃、２４時間培養後に、０．５μＭブピバカイン塩酸塩（和光純薬）を２４時間反応させた。
　その後、ブピバカインを取り除き、各加熱菌体を添加して筋芽細胞を４８時間培養した。培養後、滅菌ＰＢＳ（－）による洗浄を２回行ってから、ｃｅｌｌ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ　ｋｉｔ―８（同仁化学）を添加して３７℃、２時間反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定した。得られた吸光度の値を（加熱菌体添加－ブランク）／（加熱菌体非添加－ブランク）×１００の計算式に当てはめて、増殖率を算出した。乳酸菌菌体による筋芽細胞の増殖促進効果は加熱菌体非添加と比べて、増殖率の増加が認められれば、損傷後の筋芽細胞の増殖を促進したと判断することができる。
（２）試験結果
　乳酸菌株ごとの筋芽細胞の増殖率を図１に示した。吸光度を測定した結果、７菌株中４菌株の加熱菌体において、筋芽細胞の増殖率の増加が認められた。したがって、特定の株の乳酸菌加熱菌体に損傷後の筋芽細胞の増殖を促進する作用が認められた。
＜試験例２＞ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体の濃度依存的な効果
（乳酸菌菌体の調製）
　実施例品１について、菌体の濃度依存的な筋修復促進効果を調べた。
（１）試験方法
　１０ｍｇ/ｍｌラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体を１、１０、１００μｇ/ｍｌになるように１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）、１％ペニシリンーストレプトマイシン（ＳＩＧＭＡ）を含有したＤＭＥＭ（ＳＩＧＭＡ）で希釈した。Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞をコラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに５，０００ｃｅｌｌｓ/ｗｅｌｌずつ播種して、５％ＣＯ２インキュベーターに３７℃、２４時間培養後に、０．５μＭブピバカイン塩酸塩（和光純薬）を２４時間反応させた。その後、ブピバカインを取り除き、各濃度加熱菌体を添加して筋芽細胞を４８時間培養した。培養後、滅菌ＰＢＳ（－）による洗浄を２回行ってから、ｃｅｌｌ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ　ｋｉｔ―８（同仁化学）を添加して３７℃、２時間反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定した。得られた吸光度の値を（加熱菌体－ブランク）／（加熱菌体非添加－ブランク）×１００の計算式に当てはめて、増殖率を算出した。乳酸菌菌体による筋芽細胞の増殖促進効果は加熱菌体非添加と比べて、増殖率の増加が認められれば、損傷後の筋芽細胞の増殖を促進したと判断することができる。
（２）試験結果
　ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体濃度ごとの筋芽細胞の増殖率を図２に示した。吸光度を測定した結果、ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体の濃度依存的に、筋芽細胞の増殖率の増加が認められた。したがって、損傷後の筋芽細胞の増殖を促進する作用にはラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体の濃度依存性が認められた。
＜試験例３＞ ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体の有効成分の探索
（乳酸菌菌体の調製）
　実施例品１について、菌体破砕物の可溶性画分（上清）と不溶性画分（沈渣）の筋修復促進効果を調べた。
（１）試験方法
　１０ｍｇ/ｍｌラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体をフレンチプレス（Ａｍｉｎｃｏ）で１,２００ｐｓｉＧで３回破砕した。破砕後に、遠心分離（４℃、７０００ｒｐｍ、１５分間）をして上清と沈渣を得た。さらに、上清は０．２２μｍフィルターで濾過した。沈渣は除去した上清と等量のＰＢＳ（－）を添加して、ボルテックス後に遠心分離（４℃、７０００ｒｐｍ、１５分間）し、上清を除去した。これを３回繰り返し、上清と等量のＰＢＳ（－）を添加したものを沈渣として使用した。フレンチプレスに供した１０ｍｇ／ｍｌラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体から得られた破砕物上清と沈渣の濃度を、それぞれ１０ｍｇ／ｍｌ相当量とした。１００μｇ/ｍｌ相当量になるように１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）、１％ペニシリンーストレプトマイシン（ＳＩＧＭＡ）を含有したＤＭＥＭ（ＳＩＧＭＡ）で希釈し、破砕物上清の懸濁液または沈渣の懸濁液を得た。Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞をコラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに５，０００ｃｅｌｌｓ/ｗｅｌｌずつ播種して、５％ＣＯ２インキュベーターにて３７℃、２４時間培養後に、０．５μＭブピバカイン塩酸塩（和光純薬）を２４時間反応させた。その後、ブピバカインを取り除き、未破砕の加熱菌体、破砕物上清、または破砕物沈渣を添加して筋芽細胞を４８時間培養した。培養後、滅菌ＰＢＳ（－）による洗浄を２回行ってから、ｃｅｌｌ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ　ｋｉｔ―８（同仁化学）を添加して３７℃、２時間反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定した。得られた吸光度の値を（加熱菌体－ブランク）／（加熱菌体非添加－ブランク）×１００の計算式に当てはめて、増殖率を算出した。乳酸菌菌体による筋芽細胞の増殖促進効果は加熱菌体非添加と比べて、増殖率の増加が認められれば、損傷後の筋芽細胞の増殖を促進したと判断することができる。
（２）試験結果
　画分ごとの筋芽細胞の増殖率を図３に示した。吸光度を測定した結果、ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体の破砕物沈渣が未破砕の菌体と同様に、筋芽細胞の増殖率を増加させた。したがって、ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５加熱菌体の不溶性画分に、損傷後の筋芽細胞の増殖を促進する効果が認められた。
＜実施例品２＞乳酸菌培養物の調製
　ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５をＭＲＳ液体培地（ＤＩＦＣＯ）にて培養した。対数増殖期にある各培養液を、０．３％の酵母エキスを添加した１０％還元脱脂乳（１１５℃、２０分滅菌）に１％接種し、各々マザーカルチャーを作製した。これに１０％の還元脱脂乳を添加して、１００℃にて１０分間加熱したヨーグルトミックスに２．５％添加して調製した。３７℃で発酵を行い、乳酸酸度０．８５に到達した時点で冷却し、発酵を終了させた。得られた発酵乳を凍結乾燥してラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５菌体培養物の粉末を得た。得られた菌体培養物をリン酸緩衝液に再懸濁し、１×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調整した。
＜実施例品３＞乳酸菌菌体の調製
　ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５をＭＲＳ液体培地（ＤＩＦＣＯ）に植菌し、３７℃にて１６時間静置培養を行った。培養物を、４℃、７０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、滅菌水による洗浄と遠心分離を３回繰り返して行い、洗浄菌体を得た。この洗浄菌体を凍結乾燥処理して菌体粉末を得た。
＜実施例品４＞錠剤の製造
　実施例品３にて調製した菌体粉末１部に脱脂粉乳４部を混合し、この混合粉末を打錠機により１ｇずつ常法により打錠して、本発明のラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５の菌体２００ｍｇを含む錠剤をそれぞれ調製した。
＜実施例品５＞散剤の製造
　ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５をＭＲＳ液体培地（ＤＩＦＣＯ）５Ｌに摂取後、３７℃、１８時間静置培養を行った。培養終了後、７０００ｒｐｍで１５分間遠心分離を行い、培養液の１／５０量の濃縮菌体を得た。次いで、この濃縮菌体を、脱脂粉乳１０重量％、グルタミン酸ソーダ１重量％を含む分散媒と同量混合し、ｐＨ７に調整後、凍結乾燥を行った。得られた凍結乾燥物を６０メッシュのふるいで整粒化し、凍結乾燥菌末を製造した。第１３改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、この凍結乾燥菌末１ｇにラクトース（日局）４００ｇ、バレイショデンプン（日局）６００ｇを加えて均一に混合し、散剤を得た。
＜実施例品６＞カプセル剤の製造
　表１に示した配合により原料を混合し、造粒により顆粒状とした後、空カプセルに１０ｍｇずつ充填して、カプセル剤を製造した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
  
＜実施例品７＞スティック状健康食品の製造
　実施例品１の粉末３０ｇに、ビタミンＣとクエン酸の等量混合物４０ｇ、グラニュー糖１００ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物６０ｇを加えて混合した。混合物をスティック状袋に詰め、スティック健康食品を製造した。
＜実施例品８＞飲料の製造
　表２に示した配合により原料を混合し、容器に充填した後、加熱殺菌して、果汁飲料を製造した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　本発明によれば、ラクトバチルスに属する乳酸菌菌体及び／又は乳酸菌培養物を有効成分とする筋修復促進剤を提供することができる。
[規則91に基づく訂正 12.06.2019]　
＜寄託生物材料への言及＞
（１）ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５
イ　当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人　製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２０号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ　イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
１９９６年３月２７日
２００８年２月２６日（原寄託によりブダペスト条約に基づく寄託への移管日）
ハ　イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０９５３
（２）ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキーＳＢＴ０４１３
イ　当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人　製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ　イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年２月２１日
ハ　イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４２（なお、原寄託日後、原寄託に基づくブダペスト条約に基づく寄託への移管申請を２０１９年５月２７日に行い、生存確認試験の完了後に、受領番号を通知する書面を受領した。受領番号は、ＮＩＴＥ　ＡＢＰ－０２６４２である。）
（３）ラクトバチルス　ロイテリＳＢＴ１９２６
イ　当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人　製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ　イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年２月２１日
ハ　イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４３（なお、原寄託日後、原寄託に基づくブダペスト条約に基づく寄託への移管申請を２０１９年５月２７日に行い、生存確認試験の完了後に、受領番号を通知する書面を受領した。受領番号は、ＮＩＴＥ　ＡＢＰ－０２６４３である。）
（４）ラクトバチルス　ヘルベティカスＳＢＴ１１３８０
イ　当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人　製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ　イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年２月２１日
ハ　イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４４（なお、原寄託日後、原寄託に基づくブダペスト条約に基づく寄託への移管申請を２０１９年５月２７日に行い、生存確認試験の完了後に、受領番号を通知する書面を受領した。受領番号は、ＮＩＴＥ　ＡＢＰ－０２６４４である。） 

Claims (8)

  1. ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する菌の菌体及び／又はその培養物を有効成分とする筋修復促進用組成物。
  2. ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する菌が、ラクトバチルス　ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキー　（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス　ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス　ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする請求項１に記載の筋修復促進用組成物。
  3. ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する乳酸菌が、ラクトバチルス　ガセリＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０９５３）、ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキー　ＳＢＴ０４１３（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４２）、ラクトバチルス　ロイテリ　ＳＢＴ１９２６（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４３）、ラクトバチルス　ヘルベティカス　ＳＢＴ１１３８０（ＮＩＴＥ　Ｐ－０２６４４）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする請求項１に記載の筋修復促進用組成物。
  4. 　前記菌体及び／又はその培養物が、死菌体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の筋修復促進用組成物。
  5. 　前記死菌体が、菌体破砕物の不溶性画分である、請求項４に記載の筋修復促進用組成物。
  6. 新規乳酸菌ラクトバチルス　デルブルッキー　サブスピーシーズ　デルブルッキー　ＳＢＴ０４１３。
  7. 新規乳酸菌ラクトバチルス　ロイテリ　ＳＢＴ１９２６。
  8. 新規乳酸菌ラクトバチルス　ヘルベティカス　ＳＢＴ１１３８０。 
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