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WO2016059269A1 - Compuestos derivados de acrilato de 3-alouilamino-1h- indolilo y su uso en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas - Google Patents

Compuestos derivados de acrilato de 3-alouilamino-1h- indolilo y su uso en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas Download PDF

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WO2016059269A1
WO2016059269A1 PCT/ES2015/000139 ES2015000139W WO2016059269A1 WO 2016059269 A1 WO2016059269 A1 WO 2016059269A1 ES 2015000139 W ES2015000139 W ES 2015000139W WO 2016059269 A1 WO2016059269 A1 WO 2016059269A1
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WO
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group
alkyl
cycloalkyl
optionally substituted
fluorine
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PCT/ES2015/000139
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English (en)
French (fr)
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WO2016059269A8 (es
Inventor
Rafael Leon Martinez
Izaskun Buendia Abaitua
Ellsa NAVARRO GONZALEZ DE MESA
Patrycja MICHALSKA
Isabel GAMEIROS ROS
Javier Egea Maiquez
Manuela Garcia Lopez
Antonio Garcia Garcia
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dns Neuroscience
Universidad Autonoma de Madrid
Fundacion para la Investigacion Biomedica del Hospital Universitario de la Princesa
Original Assignee
Dns Neuroscience
Universidad Autonoma de Madrid
Fundacion para la Investigacion Biomedica del Hospital Universitario de la Princesa
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Priority to EP15851060.2A priority patent/EP3208262A4/en
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Definitions

  • Neurodegenerative diseases will be the most important health challenge of this generation; if a drug is not found that slows the progression of these diseases, the socioeconomic situation could be unsustainable in the next 30 years.
  • the world health organization has warned about the progress of this type of diseases and places them as an absolute priority worldwide.
  • the number of patients suffering from a neurodegenerative disease worldwide reaches 35.6 million; this number will double in 2030 and will be more than triple, 1 15.4 million, in 2050 (Organization, 2012: 1 12).
  • There are characteristics common to all neurodegenerative diseases such as the presence of a high level of oxidative stress and chronic neuroinflammation. In most of these diseases aberrant protein aggregates appear, evidence of lipid peroxidation, protein nitration and DNA oxidation (Di Cario et al.,
  • the antioxidant response element is a regulatory element that is located in the region adjacent to 5'- of the DNA and precedes regions that encode a large number of cytoprotective enzymes and regulates their expression in response to the presence of stress oxidative (Rushmore et al., 1991, JBiol Chem, 266: 1 1632-9, Joshi et al., 2012, Recent Pat CNS Drug Discov, 7: 218-29).
  • Nrf2 from the English “nuclear factor (erythroid-derived 2) -like 2"
  • Nrf2 is released from the Keapl co-repressor and translocated to the nucleus where it dimerizes with small Maf proteins, to form the activation-trans complex that binds to the ARE sequence (Nguyen et al., 2004, Free Radie Biol Med, 37: 433-41).
  • Nrf2-dependent antioxidant enzyme systems include redox regulation [superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), sulforedoxin (Srx), thioredoxin (Trx), peroxiredoxin (Prdx)], synthesis and metabolism of glutathione [glutathione peroxidase (Gpx ), glutathione reductase (GR), ⁇ -glutamine cysteine ligase (GCL) and synthase (GCS)], recycled quinones [NAD (P) H quinone oxidoreductase (NQOl)] and iron homeostasis [heme-oxygenase-1 (HO - 1), ferritin].
  • SOD superoxide dismutase
  • CAT catalase
  • Trx thioredoxin
  • Trx peroxiredoxin
  • Gpx glutathione peroxidase
  • GR glutathione
  • Nrf2-ARE route in PD, it is worth highlighting the high level of oxidative stress that occurs in this disease, as well as a marked astrogliosis and microgliosis.
  • the location of the Nrf2 factor is predominantly nuclear, overexpression of the phase II genes is not observed (Alam et al., 1997, J Neurochem, 69: 1 196-203, Clements et al., 2006, Proc Nati Acad Sci USA, 103: 15091-6).
  • Nrf2 factor exerts neuroprotective effects against toxins that produce parkinsonism
  • transgenic models of PD Choen et al., 2009, Proc Nati Acad Sci USA, 106: 2933-8, Innamorato et al., 2010, PLoS One, 5: 1838, Burton et al., 2006, Neurotoxicology, 27: 1094-100, Red et al., 2010, Glia, 58: 588 -98, Lastres-Becker et al., 2012, Hum Mol Genet, 21: 3173-92).
  • inducers of the Nrf2-ARE pathway reduce inflammation in MS (Schimrigk et al., 2006, Eur J Neurol, 13: 604-10, Lee et al., 2012, Int J Mol Sci, 13: 1 1783-803), and decrease astrocyte activation both in vitro and in vivo (Scannevin et al., 2012, J Pharmacol Exp Ther, 341: 274-84). These compounds also reduce the production of pro-inflammatory cytokines (Lin et al., 2011, ASNNeuro, 3) and the pro-inflammatory signal secondary to the activation of astrocytes with lipopolysaccharide (LPS).
  • the treatment of this disease with inductors of the Nrf2-ARE route is a viable strategy, as evidenced by the approval in 2013 of dimethyl fumarate (Tecfidera®) for the treatment of MS by the FDA (Food and Drug Administration).
  • WO201 1/156889, WO2012 / 1 16362, WO2012 / 145420, WO2012 / 149478, WO2013 / 067036, WO2013 / 132124, P2013 / 00667 propose different treatment options for neurodegenerative diseases based on one or more chemical compounds and / or natural products whose therapeutic target is the induction and / or modulation of the Nrf2-ARE route as a neuroprotective and immunomodulatory strategy.
  • the invention includes a pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I), or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug or solvate thereof.
  • the invention relates to a pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I), or a salt, a prodrug or a solvate thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the invention describes a process for preparing a compound of formula (I), or a salt or solvate thereof.
  • the invention protects the use of said compound of formula (I), or its pharmaceutically acceptable salts, prodrugs or solvates, in the preparation of a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of neurodegenerative diseases or autoimmune diseases that occur with inflammation, or in ischemic-cerebral diseases.
  • R groups such as R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 or R 7 or X groups or variables such as "n"
  • the groups may be identical or different, or where appropriate when specified.
  • aryl refers to an aromatic group having between 6 and 18, preferably between 6 and 10 carbon atoms, comprising 1, 2 or 3 aromatic nuclei, linked by means of a carbon-carbon bond or condensates, including for example and in a non-limiting sense phenyl, naphthyl, diphenyl, indenyl, phenanthryl, etc.
  • heterocycles include, but are not limited to, pyrrolidine, piperidine, piperazine, morpholine, tetrahydrofuran, benzimidazole, benzothiazole, fiiran, pyrrole, pyridine, pyrimidine, isothiazole, imidazole, indole, purine, quinoline, thiadizol.
  • X is selected from an oxygen atom, a nitrogen atom or a sulfur atom, -SO- or SO 2,
  • said salts of the compound of formula (I) are pharmaceutically acceptable salts, that is, salts that can be administered to a subject and provide a compound of formula (I) in a biological compartment of said individual.
  • Such pharmaceutically acceptable salts include acid addition salts, for example, salts formed from organic and inorganic acids, such as hydrobromic, hydrochloric, phosphoric, nitric, sulfuric, acetic, adipic, aspartic, benzenesulfonic, benzoic, citric, ethanesulfonic, formic, fumaric, glutamic, lactic, maleic, malic, malonic, mandelic, methanesulfonic, 1,5-naphthalene-disulfonic, oxalic, pivotal, propionic, /?
  • said salts of the compound of formula (I) are pharmaceutically acceptable salts, which may be useful in the preparation of pharmaceutically acceptable salts of the compound of formula (I), or of its prodrugs or solvates.
  • suitable organic for example, with a pharmaceutically acceptable organic acid such as acetic, adipic, aspartic, benzenesulfonic, benzoic, citric, ethanesulfonic, formic, fumaric, glutamic, lactic, maleic, malic, malonic, Mandelic, methanesulfonic, 1,5-naphthalen-disulfonic, oxalic, pivotal, propionic, p-toluenesulfonic, succinic, tartaric and the like.
  • a pharmaceutically acceptable organic acid such as acetic, adipic, aspartic, benzenesulfonic, benzoic, citric, ethanesulfonic, formic, fumaric, glutamic, lactic, maleic, malic, malonic, Mandelic, methanesulfonic, 1,5-naphthalen-disulfonic, oxalic, pivotal, propionic, p-toluene
  • the invention relates to compounds of formula (I) in which:
  • R is selected from the group comprising a phenyl aromatic ring optionally substituted by one or two groups independently selected from fluorine, chlorine, (C 1-6 ) alkyl, optionally substituted by one, two, or three halogen atoms selected from fluorine, chlorine and bromine; (C 1-6 ) alkoxy and nitro; or a heterocycle optionally substituted by one or two groups independently selected from fluorine, chlorine, (C 1-6 ) alkyl, alkoxy and nitro.
  • R 1 is hydrogen
  • R 6 is hydrogen
  • R 7 is acyl (C2)
  • R 8 is hydrogen
  • the invention relates to compounds of formula (I) in which: R is phenyl optionally substituted by a group selected from fluorine; (C 1-6 ) alkyl optionally substituted by one, two, or three halogen atoms selected from fluorine, chlorine and bromine; (C 1-6 ) alkoxy and nitro;
  • R 7 is acyl
  • R 8 is hydrogen
  • Particularly preferred compounds of formula (I) of the present invention are the following:
  • the compounds of formula (I) of the present invention can be obtained by a process comprising reacting an ⁇ , ⁇ -unsaturated carboxylic acid of formula (II)
  • R 3 , R 4 , R 5 , R 6 and R 7 , R 8 X and n have the meaning already indicated.
  • Said reaction is carried out in an appropriate inert solvent, at the appropriate temperature in the presence of a catalyst.
  • said reaction is carried out at room temperature, approximately.
  • said reaction is carried out in the presence of l- [b (s (dimethylamino) methylene) -lH-1,2,3-triazolo [4,5-6] pyridinium-3-oxidhexafluoro-phosphate (HATU), as catalyst and promoter.
  • said reaction is carried out in the presence of ⁇ , ⁇ '-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), as a catalyst or promoter.
  • DCC ⁇ , ⁇ '-dicyclohexylcarbodiimide
  • the present invention describes a process for obtaining a compound of formula (I) comprising reacting said compound of formula (II) with a compound of formula (III).
  • the compounds of formula (III) are also known and can be obtained commercially or can be prepared by conventional methods (see, for example, section 1.1).
  • the compounds of formula (I) obtained by the above procedure can be purified by conventional methods, such as crystallization or chromatography.
  • the compounds of formula (I) of the present invention have both Nrf2 factor inducing activity and free radical scavenging capacity, and potential immunomodulatory effect, these derivatives can therefore be used in the prevention or therapy of neurodegenerative diseases, e.g., AD, PD, ALS and HD, as well as the loss of neurons secondary to autoimmune diseases such as MS and / or in the treatment of other neurodegenerative diseases in which it causes loss of neurons, such as stroke (stroke), among others.
  • neurodegenerative diseases e.g., AD, PD, ALS and HD
  • autoimmune diseases such as MS and /
  • other neurodegenerative diseases in which it causes loss of neurons, such as stroke (stroke), among others.
  • stroke stroke
  • the compounds of formula (I) of the present invention are conveniently administered formulated with the excipients suitable for administration by any appropriate route, by for example, orally, parenterally, subcutaneously, intramuscularly or rectally, preferably orally.
  • the invention includes a pharmaceutical composition, hereinafter pharmaceutical composition of the invention, comprising a compound of formula (I), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, together with one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • the pharmaceutical composition of the invention is presented in a pharmaceutical form of oral administration, either in solid or liquid form.
  • a pharmaceutical form of oral administration include tablets, capsules, granules, solutions, suspensions, etc., for which they will include appropriate pharmaceutically acceptable excipients, such as binders, diluents, disintegrants, lubricants, humectants, etc., and They can be prepared by conventional methods.
  • the pharmaceutical composition of the invention can also be adapted for parenteral administration (eg, intramuscularly, intravenously, etc.), in the form of, for example, sterile lyophilized solutions, suspensions or products, in the appropriate dosage form; in this case, said pharmaceutical compositions will include suitable excipients, such as buffers, surfactants, etc.
  • parenteral administration eg, intramuscularly, intravenously, etc.
  • said pharmaceutical compositions will include suitable excipients, such as buffers, surfactants, etc.
  • the pharmaceutical composition of the invention can also be adapted for subcutaneous administration in the form of, for example, sterile solutions or suspensions, in the appropriate dosage form; in this case, said pharmaceutical compositions will include suitable excipients, such as buffers, surfactants, etc.
  • the pharmaceutical composition of the invention can be adapted for rectal administration for which it will include suitable excipients compatible with the compounds of formula (I) of the invention.
  • the formulations can be prepared according to conventional methods such as those described in the Spanish, European or United States pharmacopoeias, or in similar reference texts, for example "Galenic Pharmacy Treaty", by C. Faul ⁇ and Trillo, 10 Edition, 1993, Luzán 5, SA of Editions.
  • the compound of formula (I) of the invention will be administered in a therapeutically effective amount that will generally depend on the efficacy of the compound of formula (I) chosen, on the severity of the pathology to be treated, etc. However, typically it will be administered at daily doses comprised between 0.1 and 100 mg of compound of formula (I) per kg body weight, more preferably the daily doses will be comprised between 2 and 5 mg / kg body weight.
  • the invention protects the use of a compound of formula (I), its pharmaceutically acceptable salts, prodrugs or solvates, in the preparation of a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of a neurodegenerative disease, such as a disease neurodegenerative course with a deficit of acetylcholine or dopamine, and / or an ischemic-cerebral disease (stroke).
  • a neurodegenerative disease such as a disease neurodegenerative course with a deficit of acetylcholine or dopamine, and / or an ischemic-cerebral disease (stroke).
  • Neurodegenerative diseases are those, often of unknown cause, in which progressive degeneration of the nervous system takes place in some of its parts or in its entirety.
  • Neurodegenerative diseases are those, often of unknown cause, in which progressive degeneration of the nervous system takes place in some of its parts or in its entirety.
  • the monograph "Neurodegenerative Diseases” Coordinators Jose M a Segovia de Arana and Francisco Mora Teruel, edited by the Farmaindustria Scientific Series, Madrid, July 2002.
  • Ischemic-cerebral diseases constitute an acute pathology that occurs as a result of the interruption of the blood supply to a part of the brain or when the rupture of a blood vessel occurs with the consequent cerebral hemorrhage. Although these diseases are not included in the group of neurodegenerative diseases, it must be taken into account that, secondary to an ischemic-cerebral accident, neurodegeneration also occurs in those affected areas. Hence the usefulness of treating these diseases with the compounds of the invention.
  • the administration of the compounds of formula (I) of the invention, their pharmaceutically acceptable salts, prodrugs or solvates, can be carried out alone or in combination with additional drugs, such as drugs useful for the treatment of a neurodegenerative disease or of an ischemic-cerebral disease, to provide a combination therapy; said additional drugs may be part of the same pharmaceutical composition of the invention comprising the compound of formula (I) and / or its pharmaceutically acceptable salts, prodrugs or solvates, or not, in which case, they will be administered simultaneously or sequentially to the administration of the pharmaceutical composition of the invention.
  • additional drugs such as drugs useful for the treatment of a neurodegenerative disease or of an ischemic-cerebral disease
  • additional drugs that They can be employed to provide a combination therapy including agents such as memantine (an NMDA type glutamate receptor blocker approved for use in the advanced stages of Alzheimer's disease), vitamins, anti-inflammatories or antidepressants.
  • agents such as memantine (an NMDA type glutamate receptor blocker approved for use in the advanced stages of Alzheimer's disease), vitamins, anti-inflammatories or antidepressants.
  • Step I To a suspension of 5-hydroxy-3- (2-aminoethyl) -lH-indole hydrochloride (5 g, 23.56 mmol) in dry dichloromethane (CH 2 C1 2 ) (40 mL), under an atmosphere of Argon, at 0 ° C, Et 3 N (4.77 g, 47, 13 mmol) and acetic anhydride (4.84 g, 47, 13 mmol) were added. The resulting mixture was stirred at 0 ° C for 4 h and subsequently stirred at room temperature for 10 h. After completion of the reaction, 10% NH 4 C1 was added and extracted 3 times with CH 2 C1 2 . The organic phase was washed with brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and the solvent evaporated to isolate the intermediate as an oil. This compound was used in the next step without intermediate purification.
  • the transcription factor NrO is encoded by the NFEL2 gene.
  • the Nrf2 factor is sequestered in the cytoplasm by the Keapl protein.
  • Keapl acts as a substrate protein for ubiquitination based on the binding of ubiquitin ligase cullin-3 (CuI3), which results in the degradation of Nrf2 by the proteasome.
  • Oxidative stress or electrophilic compounds modify certain cysteine residues present in Keapl and, as a result, the Keapl-Cul3 ubiquitination system is stopped and the Nrf2 factor is released in the cytoplasm.
  • Nrf2 factor translocates to the nucleus where it heterodimerizes with Maf proteins and binds to the antioxidant response element (ARE) located in the promoter region of genes encoding various enzymes cytoprotectors, inducing overexpression thereof.
  • ARE antioxidant response element
  • These enzymes include NAD (P) H quinone oxidoreductase, glutamate-cysteine ligase, hemo-oxygenase-1 and the family of glutathione S-transferase (GST) enzymes, among others.
  • NAD NAD
  • GST glutathione S-transferase
  • An Nrf2 inducer increases the levels of Nrf2, or its activity, or its translocation to the nucleus, consequently, increases the expression of the genes susceptible to activation by Nrf2.
  • the AREc32 cell line was used, which is stably transfected with the luciferase reporter gene linked to the ARE sequence.
  • the Nrf2 factor translocates to the nucleus and binds to the ARE sequences, activating the expression of luciferase, forming a proportional amount thereof.
  • AREc32 cells were cultured in DMEM medium with glutamax, supplemented with 10% fetal bovine serum (SBF), 1% penicillin-streptomycin and 1.6% geneticin (G418) (reagents from GIBCO, Madrid, Spain).
  • the cells were grown in 75 cm bottles with 1 1 mL of the specific medium, incubated at 37 ° C and 5% CO 2 and 1: 4 passes were made every 4-6 days when the cells reached 80% confluence.
  • the cells were grown in 96-well plates with a transparent bottom, at a density of 60x10 4 cells / well with 100 ⁇ L, / ⁇ cill ⁇ .
  • the cells were treated with the compounds object of the invention at the desired concentrations (1, 10, 30 and 60 ⁇ ) for 24 h at 37 ° C and 5% CO 2
  • a baseline variable was included in each plate , a variable with tert-butyl hydroquinone (TBHQ), 10 ⁇ (positive control) and the problem variables, in a final volume of 100 ⁇ L.
  • TBHQ tert-butyl hydroquinone
  • 10 ⁇ positive control
  • the problem variables in a final volume of 100 ⁇ L.
  • luciferase activity was measured by a bioluminescence assay, for which the "Luciferase assay system” kit (Promega 500) was used.
  • the treatments were removed and the cells were washed with 100 ⁇ L of 0.1 M PBS. Once the wash was removed, 20 ⁇ L- of the "lysis buffer” reagent was added to each well. After 10 min, the plate was introduced in a multi-well luminescence reader, Optimum FluoStar (B
  • the measure of luminescence in arbitrary units is directly proportional to the amount of luciferase in each of the wells and this one, directly proportional to the induction of the Nrf2 factor for each of the products under study at the established concentration.
  • the measurements were made in duplicate and the values were normalized with respect to the luminescence of the basal taking its expression value of luciferase as 1.
  • the compounds object of this invention have been designed as hybrids of melatonin, a natural compound that has a potent free radical scavenging effect, as well as an indirect antioxidant effect by modulating different routes (Tan et al., 2002, Curr Top Med Chem, 2: 181-97).
  • Both melatonin and the series of intermediate metabolites that it generates, for example N-acetyl-N-formyl-5- methoxynuramine or 3-hydroxymelatonin, are capable of detoxifying free radicals in what has been called the antioxidant cascade of melatonin (Burkhardt et al., 2001, Int J Biochem Cell Biol, 33: 775-83, Seegar et al., 1997, Br J Clin Pharmacol, 44: 283-4, Tan et al., 2000, Free Radie Biol Med, 29: 1 177-85).
  • the free radical scavenger study method measures the degree of peroxide radical inhibition. It is measured as equivalents of trolox and includes the extinction of radicals over time and the reduction of oxidative damage produced at the end of the experiment.
  • the protocol used is based on that developed by Ou et al. (Ou et al., 2001, J Agrie Food Chem, 49: 4619-26) partially modified by Dávalos et al. (Davalos et al., 2004, J Agrie Food Chem, 52: 48-54). The reaction was carried out in a 75 mM phosphate buffer (pH 7.4), with a final volume of 200 ⁇ L.
  • 150 fluorescein final concentration of 70 nM was mixed with 25 of the compound to be studied at the desired concentration in triplicate, in a black 96-well plate with transparent bottom for fluorescence measurements.
  • the mixture was pre-incubated for 15 min at 37 ° C and then 25 ⁇ L, a solution of 2,2-Azobis (amidopropane) dichloride (AAPH) (final concentration; 12 mM), was quickly added.
  • AAPH 2,2-Azobis (amidopropane) dichloride
  • the plate was immediately inserted into an optimal fluostar fluorescence reader with excitation and emission filters of 485 and 520 nM respectively. Fluorescence intensity was measured for 90 min. Each compound was measured at 6 different concentrations.
  • a blank (fluorescein + AAPH in phosphate buffer) and a compound calibration curve were included in the test reference, Trolox (1-8 ⁇ ). All variables were prepared in duplicate, in at least 3 independent trials for each compound.
  • the curves of each of the compounds were normalized with respect to the curve corresponding to the target of each of the experiments, and the area under the curve (AUC) of fluorescence decay was calculated.
  • the net AUC value corresponding to each of the compounds was calculated by subtracting the corresponding AUC value from the blank. Regression curves were performed between the AUC and the concentration of the compound for each of the samples.
  • the ORAC values were expressed as trolox equivalents with respect to the calibration curve of each test, where the trolox value was taken as 1.
  • the cells were cultured in 24-well plates at a density of 2x10 5 cells / well, or in 96-well plates at a density of 8x10 4 cells / well.
  • the cells were treated with the drugs before reaching confluence, in DMEM with 1% fetal bovine serum.
  • the parameter that was used to measure cell viability was the metabolic reduction of 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazole (MTT) bromide.
  • the MTT technique consists of an indirect measure of cell viability. This colorimetric assay is based on the reduction of 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazole (MTT) bromide.
  • This process is performed by the mitochondrial enzyme succinate dehydrogenase of metabolically active cells, which transforms the MTT from a yellow hydrophilic compound (tetrazolium salt) to a violet, hydrophobic compound (formazan salt).
  • the amount of living cells is proportional to the amount of formazan formed (Mosmann, 1983, J Immunol Methods, 65: 55-63). Apoptotic cells have their mitochondria damaged and will not perform the process. Therefore, this method allows measuring cell survival and proliferation, as well as determining the cytotoxicity of potential therapeutic agents.
  • To determine cell viability in SH-SY5Y cells 30 ⁇ L / well of MTT (5 mg / mL) is added and after 2 h, the medium is removed without losing the formazan crystals that are diluted in 300 DMSO. Subsequently, the samples are transferred to a 96-well plate to measure the absorbance of the samples at 570 nm. All MTT tests were performed in triplicate.
  • Neuroprotection exerted by the compounds object of this invention 1-16 The activation of the Nrf2-ARE pathway by the compounds exerts a neuroprotective effect against oxidative stress models, due to the expression of various cytoprotective genes. Therefore, we study the neuroprotective capacity of the compounds object of this patent in in vitro models of cytotoxicity induced by oxidative stress.
  • the neuroprotective effect of the compounds in human neuroblastoma cells was evaluated, specifically the neuroprotective potential of these compounds against 1) the oxidative stress produced by rotenone and oligomycin A, blockers of the mitochondria respiratory chain as described in (Halliwell, 1992, J Neurochem, 59: 1609-23, Newhouse et al., 2004, Toxicol Sci, 79: 137-46), respectively, with two differentiated protocols, and (2) the toxicity induced by the Menadione compound, which induces toxicity due to its electrophilic capacity.
  • This compound generates oxidative stress in the cell when it is metabolized by microsomal enzymes producing hydroxyl and ROS radicals.
  • This design is designed to study in detail the potential inducing effect of Nrf2 of the compounds during the pre-incubation period, so that, not being present together with the toxic we eliminate the potential free radical sequestering effect that presumably also have the compounds.
  • the cells are pre-incubated with each of the derivatives studied at a concentration of 1 ⁇ for 24 h. After the pre-incubation period, the medium was removed and replaced by culture with the toxic mixture Rotenone / oligomycin-A, at the concentrations of 30 ⁇ and 10 ⁇ respectively.
  • This design is proposed to study in detail the potential inducing effect of Nrf2 of the compounds during the pre-incubation period.
  • menadione In order to determine the neuroprotective capacity in another model of oxidative stress, we select as menadione toxic.
  • This compound is a polycyclic aromatic ketone (1,4-naphthoquinone) that has the ability to generate intracellular free radicals at multiple sites through chain redox radical reactions via NADPH / quinone oxidase activation. It is also capable of inducing DNA fragmentation and rapidly depleting the cell of the natural antioxidant glutathione. Menadione induces apoptosis through the negative regulation of ERK and JNK, followed by activation of caspase 3 and the breakdown of ADP-ribose polymerase (PARP).
  • PARP ADP-ribose polymerase
  • the HepG2 cell line shows most of the genotypic and phenotypic characteristics of normal liver cells, and possess the typical functions of human liver cells. In addition, these cells have been defined by the EMA (European Medicines Agency) as a model of hepatoxicity by measuring the induction of apoptosis and / or cell survival. Therefore, the safety profile of the compounds object of the present invention in the HepG2 hepatocarcinoma cell line was evaluated. HepG2 cells were cultured in T75 flask using as EMEM culture medium supplemented with non-essential amino acids, 10% fetal bovine serum, 50 units / mL penicillin and 50 ⁇ g / mL streptomycin (reagents from GIBCO, Madrid, Spain).
  • LD 50 of the compounds of the invention measured as a reduction in cell viability in the HepG2 hepatocarcinoma line and in the SH-SY5Y neuronal line.
  • the data are expressed as the mean ⁇ SE of at least 3 triplicate experiments, performed with 3 different batches of cells.

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Abstract

La presente invención se refiere a los métodos de obtención de derivados de acrilato de 3-aIquilamino- 1H-indolilo (I) con actividad inductora del factor de transcripción Nrf2, actividad secuestradora de radicales libres y capacidad neuroprotectora. Otro aspecto de la invención se refiere al uso de los derivados objeto de esta invención para el tratamiento de enfermedades en cuya patogénesis interviene el de estrés oxidativo o enfermedades que cursen con desregulación de la actividad de genes de fase dos activados por el factor Nrf2, como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, la esclerosis múltiple, el ictus o la esclerosis lateral amiotrófica.

Description

COMPUESTOS DERIVADOS DE ACRILATO DE 3-ALOUILAMINO-1H- INDOLILO Y SU USO EN EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES NEURODEGENERATIVAS SECTOR DE LA TÉCNICA
La presente invención se encuadra principalmente en el sector farmacéutico con aplicaciones dirigidas a la prevención y/o tratamiento de enfermedades y cualquier tipo de afección o daño que implique un proceso oxidativo y, en concreto, en la identificación de compuestos químicos útiles en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas que cursan con un declive de la capacidad cognitiva o motora secundarias a degeneración neuronal, tales como la enfermedad de Alzheimer (EA), enfermedad de Parkinson (EP), esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y enfermedad de Huntington (EH) o el ictus, así como para la pérdida de neuronas secundaria a enfermedades autoinmunes como la esclerosis múltiple (EM).
ESTADO DE LA TÉCNICA
Las enfermedades neurodegenerativas serán el desafío más importante para la salud de esta generación; de no encontrarse un medicamento que frene el avance de estas enfermedades, la situación socioeconómica podría ser insostenible en los próximos 30 años. La organización mundial de la salud ha alertado sobre el avance de este tipo de enfermedades y las sitúa como una prioridad absoluta a nivel mundial. Actualmente, se estima que el número de pacientes que sufre una enfermedad neurodegenerativa a nivel mundial alcanza los 35,6 millones; este número se duplicará en 2030 y será más del triple, 1 15,4 millones, en 2050 (Organization, 2012: 1 12). Existen características comunes a todas las enfermedades neurodegenerativas, como son la presencia de un alto nivel de estrés oxidativo y la neuroinflamación crónica. En la mayoría de estas enfermedades aparecen agregados proteicos aberrantes, evidencia de peroxidación lipídica, nitración proteica y oxidación del ADN (Di Cario y col.,
2012, Free Radie Res, 46: 1327-38). En base a estas observaciones, actualmente se cree que el estrés oxidativo, la disfunción mitocondrial y la neuroinflamación juegan un papel primordial en el desarrollo de estas patologías.
La producción de especies reactivas de oxigeno (ROS), o de radicales libres en general, aumenta progresivamente con la edad, siendo éste el mayor factor de riesgo en estas patologías. Por tanto, la producción de radicales libres y su eliminación han de estar estrechamente reguladas, evitando la acumulación masiva de éstos. Las neuronas tienen diversos mecanismos que actúan como sensores redox para identificar e iniciar la respuesta antioxidante con objeto de evitar la acumulación o liberación excesiva de especies pro-oxidantes. El elemento de respuesta antioxidante (ARE) es un elemento regulador que se encuentra en la región adyacente a 5'- del ADN y precede a regiones que codifican un gran número de enzimas citoprotectoras y regula la expresión de éstas en respuesta a la presencia de estrés oxidativo (Rushmore y col., 1991, JBiol Chem, 266: 1 1632-9, Joshi y col., 2012, Recent Pat CNS Drug Discov, 7: 218-29). En presencia de un estímulo tóxico, o por activación química, el factor de transcripción Nrf2 (del inglés "nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2") se libera del co-represor Keapl y se transloca al núcleo donde dimeriza con pequeñas proteínas Maf, para formar el complejo de activación-trans que se une a la secuencia ARE (Nguyen y col., 2004, Free Radie Biol Med, 37: 433-41). En consecuencia, la activación-trans de ARE inducida por Nrf2 coordina la expresión de una gran cantidad de genes que combaten el estrés oxidativo y su toxicidad en un gran número de tejidos y tipos celulares (Ramos-Gomez y col., 2001, Proc Nati Acad Sci U S A, 98: 3410-5, Enomoto y col., 2001, Toxicol Sci, 59: 169-77, Gao y col., 2004, Proc Nati Acad Sci USA, 101 : 10446-51 , Lee y col., 2003, JBiol Chem, 278: 37948-56). Los sistemas de enzimas antioxidantes dependientes de Nrf2 incluyen la regulación redox [superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT), sulforedoxín (Srx), tioredoxín (Trx), peroxiredoxín (Prdx)], síntesis y metabolismo de glutatión [glutatión peroxidasa (Gpx), glutatión reductasa (GR), γ-glutamina cisteína ligasa (GCL) y sintasa (GCS)], reciclado de quinonas [NAD(P)H quinona oxidoreductasa (NQOl)] y homeostasis del hierro [hemo-oxigenasa-1 (HO- 1), ferritina].
Además de proteger frente a la toxicidad inducida por agentes químicos, carcinogénesis y envejecimiento (Thimmulappa y col., 2002, Cáncer Res, 62: 5196- 203, Suh y col., 2004, Proc Nati Acad Sci U S A, 101 : 3381-6, Zhang y col., 2004, Mol Cáncer Ther, 3: 885-93), el factor Nrf2 inhibe directamente la apoptosis mediada por FAS (un sustrato para las proteasas Caspasa-3) y al efector de la supervivencia celular mediado por P-ERK (Ohtsubo y col., 1999, Cell Death Differ, 6: 865-72, Kotlo y col., 2003, Oncogene, 22: 797-806, Cullinan y col., 2004, J Biol Chem, 279: 20108- 17). Algunos genes antioxidantes tienen efectos más importantes que otros en el cerebro dependiendo de la enfermedad, el entorno celular o el subtipo celular. En condiciones normales, la expresión de genes dependientes de la ruta Nrf2-ARE está menos activada en las neuronas que en los astrocitos (Lee y col., 2003, J Biol Chem, 278: 12029-38, Kraft y col., 2004, J Neurosci, 24: 1 101- 12); por ello, las neuronas dependen de los astrocitos para protegerse frente al estrés oxidativo (Tanaka y col.,
1999, Glia, 28: 85-96).
La desregulación y/o la disfunción de la ruta Nrf2-ARE se ha correlacionado con la aparición y/o desarrollo de diversas patologías neurodegenerativas, entre las que se encuentran la EA, la EP, la EH y la ELA, o aquellas que cursan con pérdida neuronal como el ictus o autoinmunes como la esclerosis múltiple. Por tanto, la vía Nrf2-ARE se ha convertido en una importante diana terapéutica para el tratamiento de éstas (Joshi y col., 2012, Recent Pat CNS Drug Discov, 7: 218-29) y otras enfermedades.
Respecto al papel de la ruta Nrf2-ARE en la EA, en cerebros post-mortem de estos pacientes se ha observado una alta expresión de HO- 1 en córtex temporal e hipocampo, en comparación con sujetos control (Schipper y col., 2006, Neurobiol Aging, 27: 252-61). Además, se observa una alta actividad de la enzima NQOl en astrocitos y neuronas, lo que demuestra un alto nivel de estrés oxidativo (Wang y col.,
2000, Neurobiol Aging, 21 : 525-31 , Raina y col., 1999, Redox Rep, 4: 23-7). También se ha demostrado que en neuronas hipocampales de estos pacientes, la localización del factor Nrf2 es predominantemente citoplasmática (Raina y col., 1999, Redox Rep, 4: 23-7, Ramsey y col., 2007, J Neuropathol Exp Neurol, 66: 75-85), a pesar del alto nivel de estrés oxidativo que se produce en esta enfermedad. Asimismo se ha demostrado que la manipulación de las rutas antioxidantes celulares endógenas se traduce en protección frente a la toxicidad neuronal inducida por el péptido /?-amiloide (Αβ) (Kanninen y col., 2008, Mol Cell Neurosci, 39: 302-13, Wruck y col., 2008, Mol Pharmacol, 73: 1785-95). Estos y otros resultados in vitro e in vivo indican que la ruta Nrf2-ARE es una diana terapéutica con gran potencial para el tratamiento de la EA.
Respecto al papel de la ruta Nrf2-ARE en la EP, cabe destacar el alto nivel de estrés oxidativo que se produce en esta enfermedad, así como una marcada astrogliosis y microgliosis. En este caso, a pesar de que la localización del factor Nrf2 es predominantemente nuclear, no se observa sobreexpresión de los genes de fase II (Alam y col., 1997, J Neurochem, 69: 1 196-203, Clements y col., 2006, Proc Nati Acad Sci U S A, 103: 15091-6). Por otro lado, existen diversos estudios in vitro e in vivo que demuestran que la inducción del factor Nrf2 ejerce efectos neuroprotectores frente a tóxicos que producen parkinsonismo, así como en modelos transgénicos de la EP (Chen y col., 2009, Proc Nati Acad Sci U S A, 106: 2933-8, Innamorato y col., 2010, PLoS One, 5: el 1838, Burton y col., 2006, Neurotoxicology, 27: 1094-100, Rojo y col., 2010, Glia, 58: 588-98, Lastres-Becker y col., 2012, Hum Mol Genet, 21 : 3173-92).
Respecto al papel de la ruta Nrf2-ARE en la EH, esta enfermedad se caracteriza por la presencia de estrés oxidativo y disfunción mitocondrial debido a defectos en los complejos de la cadena respiratoria II, III y IV. Ciertos modelos transgénicos de EH mostraron mejoría en los síntomas motores y mayor supervivencia tras ser tratados con inductores de Nrf2 (triterpenoides sintéticos) suministrados en la dieta. También se redujeron los marcadores de estrés oxidativo y la atrofia estriatal, característicos de esta enfermedad. Estos resultados sugieren que el uso de moléculas que modulan la ruta Nrf2-ARE sería una estrategia terapéutica prometedora para el tratamiento de la EH.
Respecto al papel de la ruta Nrf2-ARE en la ELA, el estrés oxidativo se ha señalado como uno de los mecanismos que más afecta a la evolución de la enfermedad. Cabe destacar los estudios que demuestran que la sobre-expresión del factor Nrf2 en astrocitos mutantes hSODlG93A es capaz de revertir completamente la toxicidad en neuronas motoras en un sistema de co-cultivo. Estas observaciones se demostraron también in vivo, ya que el cruce de ratones GFAP-Nrf2 (ratones que sobre-expresan este factor) con distintos modelos de ELA produjo un enlentecimiento en la aparición de la enfermedad y un aumento de la esperanza de vida. Asimismo, el tratamiento con compuestos inductores de Nr£2, una vez iniciados los síntomas de la enfermedad, también mostró una neuroprotección altamente significativa y una ralentización de la progresión de la enfermedad. Por tanto, la activación del factor Nrf2 es una estrategia terapéutica viable para la ELA.
Respecto al papel de la ruta Nrf2-ARE en la EM, ésta se caracteriza por inflamación crónica de ciertos núcleos del sistema nervioso central, pérdida de la mielina que recubre los axones neuronales (desmielinización), pérdida axonal y la muerte de neuronas, oligodendrocitos y células gliales (O'Gorman y col., 2012, Int J Mol Sci, 13: 1 1718-52). Se ha demostrado que los inductores de la ruta Nrf2-ARE reducen la inflamación en la EM (Schimrigk y col., 2006, Eur J Neurol, 13: 604-10, Lee y col., 2012, Int J Mol Sci, 13: 1 1783-803), y disminuyen la activación de astrocitos tanto in vitro como in vivo (Scannevin y col., 2012, J Pharmacol Exp Ther, 341 : 274-84). Estos compuestos también reducen la producción de citocinas pro- inflamatorias (Lin y col., 2011, ASNNeuro, 3) y la señal pro-inflamatoria secundaria a la activación de los astrocitos con lipopolisacárido (LPS). El tratamiento de esta enfermedad con inductores de la ruta Nrf2-ARE es una estrategia viable, como así lo demuestra la aprobación en 2013 del dimetil fumarato (Tecfidera®) para el tratamiento de la EM por la FDA (Food and Drug Administration).
En los documentos de patente WO2008/136838, WO2008/108825, WO2009/036204, WO2009/146216, WO2010/126605, WO2010/107733, WO2010/03671 1 , WO2010/126605, WO2010/046710, WO201 1/0250300,
WO201 1/156889, WO2012/1 16362, WO2012/145420, WO2012/149478, WO2013/067036, WO2013/132124, P2013/00667 se proponen distintas opciones de tratamiento de enfermedades neurodegenerativas basadas en uno o varios compuestos químicos y/o productos naturales cuya diana terapéutica es la inducción y/o modulación de la ruta Nrf2-ARE como estrategia neuroprotectora e inmunomoduladora.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a compuestos con estructura acrilato de 3-alquilamino- lH-indolilo con capacidad inductora de la ruta Nrfi-ARE mediante la liberación del factor de transcripción Nrf2 de la proteína Keapl y posterior translocación al núcleo con los efectos antioxidantes, anti-inflamatorios y neuroprotectores que esto conlleva. Estos compuestos presentan nueva sustitución que incluye nuevas actividades y además, la actividad inductora de Nrf2 depende de estas nuevas sustituciones. En la presente invención se describe por primera vez la inclusión de capacidad inductora del factor Nrf2 en combinación con capacidad antioxidante gracias a las modificaciones estructurales realizadas para dar lugar a un nuevo compuesto que incluye estas actividades. Además, los compuestos objeto de la presente invención poseen capacidad secuestradora de radicales libres y capacidad neuroprotectora, por lo que pueden ser potencialmente útiles en la prevención y/o el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas. Más concretamente, pueden ser útiles en la prevención y/o tratamiento de enfermedades neurodegenerativas que cursan con elevación de estrés oxidativo y/o disfunción mitocondrial. Por otro lado, también pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades autoinmunes que cursen con un cuadro inflamatorio crónico o en la enfermedad isquémica cerebral.
Estos nuevos derivados presentan, entre otras, las siguientes características: i) capacidad de inducir la liberación del factor de transcripción Nr£2, ii) capacidad secuestradora de radicales libres,
iii) capacidad neuroprotectora frente a distintos estímulos tóxicos relacionados con el incremento del estrés oxidativo
Por lo tanto, en un aspecto, la invención se refiere con un compuesto de fórmula (I) (definido más adelante), sus sales, profármacos o solvatos. Dicho compuesto de fórmula (I) puede ser utilizado en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas o enfermedades autoinmunes que cursen con inflamación o en enfermedades isquémico-cerebrales.
En otro aspecto, la invención describe un procedimiento para la obtención de dicho compuesto de fórmula (I), sus sales, profármacos o solvatos.
En otro aspecto, la invención incluye una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal, un profármaco o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. En otro aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal, un profármaco o un solvato del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, la invención describe un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato del mismo.
En otro aspecto, la invención protege el uso de dicho compuesto de fórmula (I), o sus sales, profármacos o solvatos, farmacéuticamente aceptables, en la elaboración de una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas o enfermedades autoinmunes que cursen con inflamación, o en enfermedades isquémico-cerebrales.
En el contexto de la presente invención, los siguientes términos tienen el significado detallado a continuación:
Cuando se usa el término "seleccionados independientemente", los sustituyentes a los que se refiere (e.j. grupos R, como los grupos R1, R2, R3, R4, R5, R6 o R7 o X o variables como "n") los grupos pueden ser idénticos o diferentes, o en su caso cuando sea especificado.
El término "alquilo C1-6" se refiere a un radical de cadena alifática lineal o ramificada que tiene entre 1 y 6, preferiblemente entre 1 y 3 ("alquilo C1-3"), átomos de carbono y que está unido al resto de la molécula mediante un enlace sencillo. Este término incluye, por ejemplo y en un sentido no limitativo, metilo, etilo, n-propilo, i- propilo, n-butilo, t-butilo, n-pentilo, etc.
El término "haloalquilo Q-6" se refiere a un radical alquilo tal y como se ha definido previamente donde al menos un átomo de hidrógeno ha sido reemplazado por un átomo de halógeno. Este término incluye, por ejemplo, y en un sentido no limitativo, fiuorometilo, bromometilo, yodometilo, difluorometilo, trifiuorometilo, 2- fluoroetilo, 2-cloroetilo, 1-fluoroetilo, pentafluoroetilo, 1-fluoropropilo, 2- cloropropilo, 3-fluoropropilo, 3-cloropropilo, 1-fluorobutilo, 1-clorobutilo, 4- fluorobutilo. Preferiblemente, haloalquilo es CF3.
El término "alcoxilo C1-6" se refiere a un grupo -O-alquilo, donde alquilo es como se ha definido previamente. Preferiblemente alcoxilo es metoxilo.
El término "halógeno" se refiere a bromo, cloro, yodo o flúor. Preferiblemente, halógeno es flúor o cloro o bromo. El término "cicloalquilo" se refiere a un grupo alifático mono o policíclico saturado o parcialmente saturado que tiene entre 3 y 10, preferiblemente entre 3 y 6 átomos de carbono que está unido al resto de la molécula por medio de un enlace sencillo, incluyendo por ejemplo, y en un sentido no limitativo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo, ciclopentilo, etc.
El término "arilo" se refiere a un grupo aromático que tiene entre 6 y 18, preferiblemente entre 6 y 10 átomos de carbono, que comprende 1 , 2 ó 3 núcleos aromáticos, unidos por medio de un enlace carbono-carbono o condensados, incluyendo por ejemplo y en un sentido no limitativo fenilo, naftilo, difenilo, indenilo, fenantrilo, etc.
El término "heterociclo" se refiere a un radical de anillo de 3 a 10 miembros estable, preferiblemente un anillo de 5 ó 6 miembros, que consiste en átomos de carbono y desde uno hasta cinco heteroátomos seleccionados del grupo formado por nitrógeno, oxígeno y azufre y que puede estar parcial o totalmente saturado o puede ser aromático ("heteroarilo"). Para los fines de esta invención, el heterociclo puede ser un sistema de anillo monocíclico, bicíclico o tricíclico, que puede incluir sistemas de anillos condensados. Los ejemplos de tales heterociclos incluyen, pero no se limitan a, pirrolidina, piperidina, piperazina, morfolina, tetrahidrofurano, bencimidazol, benzotiazol, fiirano, pirrol, piridina, pirimidina, isotiazol, imidazol, indol, purina, quinolina, tiadizol.
Tal como se entiende en esta área técnica, puede haber un cierto grado de sustitución en los radicales definidos anteriormente. Las referencias del presente documento con respecto a los grupos sustituidos indican que el radical especificado puede estar sustituido en una o más posiciones disponibles con uno o más sustituyentes. Dichos sustituyentes incluyen, por ejemplo y en un sentido no limitativo, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cicloalquilo, arilo, heterocíclico, halógeno, CN, N02, CF3, -N(Ra)(Rb), -ORc, -SRd, -C(0)Re -C(0)ORf, - C(0)N(Rg)(Rh), -OC(0)R1; en los que Ra, Rb, Re, Rd, Re, Rf, Rg, Rh y R¡ se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo, C1-6 , arilo, heterocíclico y trifluorometilo.
Un aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000010_0001
R se selecciona del grupo consistente en:
alquilo( C1-6 ) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; cicloalquilo(C3- C6); alcoxilo(C1-6 ); cicloalcoxilo(C3-C6); ciano y nitro; o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)mO-, -(CH2)P-, o - CH=CH-CH=CH-; o
- fenilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor; cloro; bromo; alquilo( C1-6 ) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; cicloalquilo(C3-C6); alcoxilo( C1- C6); cicloalcoxilo(C3-C6); ciano y nitro; o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)mO-, -(CH2)P-, o -CH=CH-CH=CH-; y/o un grupo heteroarilo seleccionado entre 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 3- piridazinilo, 4-piridazinilo, 2-pirimidinilo, 4-pirimidinilo, 5-pirimidinilo, 2- pirazinilo, 3-pirazinilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5- tiazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 3-isotiazolilo, 4- isotiazolilo, 5-isotiazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, 3-pirazolilo, 4- pirazolilo, 1,2,3-oxadiazol-4-ilo, 1,2,3-oxadiazol-5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3- ilo, 1,2,4-oxadiazol-5-ilo, 1,2,5-oxadiazol-3-ilo, 1,3,4-oxadiazol-2-ilo, 1,2,3-tiadiazol-4-ilo, 1,2,3-tiadiazol-5-ilo, 1,2,4-tiadiazol-3-ilo, 1,2,4- tiadiazol-5-ilo, 1 ,2,5-tiadiazol-3-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2-ilo, 1,2,3-triazol-4- ilo, 1,2,4-triazol-3-ilo y 5-tetrazolilo, estando el grupo heteroarilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro; R1 y R2 se seleccionan del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), alcoxilo(C1-Gs), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano, nitro y carboxilato o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)qO-, -(CH2)r-, o - CH=CH-CH=CH-;
R3, R4 y R5 se seleccionan del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano, nitro y carboxilato o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)qO-, -(CH2)r-, o - CH=CH-CH=CH-;
R6 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro;
R7 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), acetilo o fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), alcoxilo(C1-6 ), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -(CH2)S-, o -CH=CH-CH=CH-
R8 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), acetilo o fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), alcoxilo( C1-6 ), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -(CH2)S-, o -CH=CH-CH=CH- o R7 = R8 de formula =C=S;
X se selecciona entre un átomo de oxígeno, un átomo de nitrógeno o un átomo de azufre, -SO- o SO2,
n es un número entero seleccionado entre 0, 1, 2, 3, 4 o 5; y sus sales, preferiblemente sales farmacéuticamente aceptables, profármacos o solvatos.
El término "farmacéuticamente aceptable" se refiere, preferiblemente, a composiciones y entidades moleculares que son fisiológicamente tolerables y no producen, normalmente, una reacción alérgica o una reacción no favorable similar, tal como trastornos gástricos, mareo y similares, cuando se administra a un ser humano o animal. La expresión "farmacéuticamente aceptable" significa que está aprobado por una agencia reguladora como la agencia europea del medicamento o la agencia reguladora de EEUU, o que está incluido en la Farmacopea Estadounidense u otra farmacopea reconocida de modo general para su uso en animales y, de manera más particular, en seres humanos.
El término "sales" tal como aquí se utiliza se refiere a cualquier sal del compuesto de fórmula (I) que, cuando se administra a un sujeto, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) dicho compuesto de fórmula (I). El término "sujeto" incluye a cualquier animal, por ejemplo, un mamífero, incluyendo a los seres humanos. La preparación de dichas sales puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los técnicos en la materia. A modo ilustrativo, una sal de un compuesto de fórmula (I) puede sintetizarse mediante métodos convencionales a partir de un compuesto de fórmula (I) que contiene un resto básico. Generalmente, tales sales se preparan, por ejemplo, haciendo reaccionar las formas de base libre de los compuestos de fórmula (1) con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico o en una mezcla de agua y un disolvente orgánico. En general, se prefieren medios no acuosos tales como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo.
En una realización particular, dichas sales del compuesto de fórmula (I) son sales farmacéuticamente aceptables, es decir, sales que pueden ser administradas a un sujeto y proporcionan un compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico de dicho individuo. Entre dichas sales farmacéuticamente aceptables se incluyen las sales de adición de ácido, por ejemplo, las sales formadas a partir de ácidos orgánicos e inorgánicos, tales como bromhídrico, clorhídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, acético, adípico, aspártico, bencenosulfónico, benzoico, cítrico, etanosulfónico, fórmico, fumárico, glutámico, láctico, maleico, málico, malónico, mandélico, metansulfónico, 1,5-naftalen-disulfónico, oxálico, piválico, propiónico, /?-toluensulfónico, succínico, tartárico y similares, así como las sales metálicas, estando seleccionado el metal entre sodio, potasio, litio, calcio, magnesio, zinc, aluminio y similares, o las sales amónicas, o una sal formada a partir de bases orgánicas, como 2-amino-l-butanol, 2-amino-2- etil-1,3-propanodiol, 2-amino-2-metil-l ,3-propanodiol, benzatina, bencildimetilamina, cloroprocaína, colina, dibencilmetüamina, dietanolamina, diisopropanolamina, etilendiamina, dimetilestearamina, meglumina, 2-metil-2-amino-l -propanol, un monoamino-glicol, monoetanol amina, monoisopropanolamina, morfolina, N,N- dibenciletilendiamina, N,N-dimetil-2-amino-2-metil-l-propanol, N,N-d¡metilanilina, procaína, piridina, quinolina, t-butil-dimeti lamina, trietanolamina, trietilamina, trihidroximetilaminometano, triisopropanolamina, trimetilamina y similares, y sales con aminoácidos tales como glicina, Usina, arginina, taurina, histidina, alanina, valina, cisteína y similares.
En otra realización particular, algunos grupos sustituyentes pueden añadirse a los compuestos objeto de la invención, para hacerlos susceptibles de formación de sales. Por ejemplo, los grupos funcionales ácidos pueden formar sales estables con cationes y grupos funcionales básicos que forman sales estables con ácidos. Generalmente, debe existir una diferencia de al menos tres unidades en los valores de pKa del compuesto que se usa como fármaco y el contraión. Para compuestos derivados que son bases muy débiles, la elección para formar sales es preferiblemente un ácido fuerte, como el ácido clorhídrico (pKa = -6, 1), sulfúrico (pKa1 = -3,0, pKa2 = - 1,96), o metanosulfónico (pKa= -1 ,2) para asegurar la protonación del compuesto. Los compuestos que son más básicos pueden formar sales con ácidos débiles, como el ácido fosfórico (pKa1 = 2, 15, pKa2 = 7,2, pKa3 = 12,38), tartárico (pKa = 2,93), acético (pKa = 4,76), y benzoico (pKa = 4,2). Para compuestos que sean ácidos muy débiles, se prefieren cationes fuertemente básicos, como sodio (pKa = 14,8), potasio (pKa = 16,0) o calcio (pKa = 12,9), para asegurar la desprotonación del compuesto. Compuestos que son más ácidos pueden formar sales con cationes más débiles, como zinc (pKa = 8,96), colina (pKa = 18,9) y ditanolamina (pKa = 9,65). Grupos funcionales representativos para la formación de sales estables listadas en función del valor relativo de su fuerza ácido/base incluyen, pero no limitan, ácido sulfónico (pKa1 = -1,2, pKa2 = -0,7), acido carboxílico (pKa = -4,7) e imida (pKa = 8,2). En otra realización particular, dichas sales del compuesto de fórmula (I) son sales farmacéuticamente no aceptables, las cuales pueden ser útiles en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula (I), o de sus profármacos o solvatos.
El término "profármaco" se emplea, en esta descripción, en el sentido más amplio, e incluye a cualquier compuesto derivado de un compuesto de fórmula (I) que, cuando se administra a un sujeto es capaz de proporcionar, directa o indirectamente, un compuesto de fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en dicho sujeto. Ventajosamente, dicho derivado es un compuesto que aumenta la biodisponibilidad del compuesto de fórmula (I) cuando se administra a un sujeto (por ejemplo, haciendo que un compuesto de fórmula (I) administrado por vía oral se absorba más fácilmente por la sangre), o que potencia la liberación de un compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico (por ejemplo, el cerebro o el sistema linfático) con relación al compuesto original (sin derivatizar). La naturaleza de dicho derivado no es crítica siempre y cuando pueda ser administrado a un sujeto y proporcione un compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico de dicho sujeto. Tales derivados serán evidentes para los técnicos en la materia, e incluyen, dependiendo de los grupos funcionales presentes en la molécula y sin limitación, los siguientes derivados de los compuestos presentes: ésteres, ésteres de aminoácido, ésteres de fosfato, ésteres de sulfonato de sales metálicas, carbamatos y amidas.
La preparación de dichos profármacos puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los técnicos en la materia. Dichos métodos se elegirán en función de la derivatización a introducir en el compuesto de fórmula (I). Ejemplos ilustrativos de algunos métodos para producir profármacos de compuestos activos pueden encontrarse, por ejemplo, en Krogsgaard-Larsen et al. "Textbook of Drug design and Discovery" Taylor & Francis (April 2002). En una realización particular, dicho profármaco es una amida y su obtención se lleva a cabo por métodos convencionales de formación de amidas, por ejemplo, haciendo reaccionar el compuesto de fórmula (I) como base libre con un ácido orgánico o con un derivado de ácido orgánico apropiado, por ejemplo, con un ácido orgánico farmacéuticamente aceptable tal como acético, adípico, aspártico, bencenosulfónico, benzoico, cítrico, etanosulfónico, fórmico, fumárico, glutámico, láctico, maleico, málico, malónico, mandélico, metansulfónico, 1,5-naftalen-disulfónico, oxálico, piválico, propiónico, p- toluensulfónico, succínico, tartárico y similares.
Los compuestos de fórmula (I), o sus sales, pueden estar en forma cristalina bien como compuestos libres o bien como solvatos, estando ambas formas incluidas dentro del ámbito de la presente invención. El término "solvato" tal como aquí se utiliza incluye cualquier compuesto formado por combinación de moléculas de un disolvente con moléculas o iones de un compuesto de fórmula (I) o de una sal del mismo; dicho disolvente puede ser un disolvente orgánico, por ejemplo, un alcohol, o un disolvente acuoso, por ejemplo, agua, en cuyo caso el solvato se denomina "hidrato".
En una realización particular, dicho solvato es un solvato farmacéuticamente aceptable, es decir, que puede ser administrado a un sujeto y proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo. En otra realización particular, dicho solvato no es farmacéuticamente aceptable pero puede utilizarse en la preparación de solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula (I) o de sus sales.
La preparación de dichos solvatos puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los técnicos en la materia, poniendo en contacto el compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo con el disolvente apropiado.
En una realización particular, los compuestos de fórmula (I) o sus sales, profármacos o solvatos, estarán, preferentemente, en una forma pura o farmacéuticamente aceptable. Una forma farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo materiales considerados tóxicos a los niveles normales de dosificación. El nivel de pureza de los compuestos será preferentemente superior al 50%, más preferentemente igual o superior al 70%, aún más preferentemente igual o superior al 90%. En una realización preferida, la pureza del compuesto de fórmula (I), o sus sales, profármacos o solvatos, será superior al 95%.
Los compuestos de la presente invención representados por la fórmula (I) descrita anteriormente pueden incluir enantiómeros dependiendo de la presencia de centros quirales o isómeros geométricos, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples (por ejemplo Z, E). Los isómeros geométricos, enantiómeros o diastereoisómeros de los compuestos de fórmula (I) y mezclas de los mismos se encuentran dentro del alcance de la presente invención.
En otra realización particular, los compuestos sujetos a esta invención dan composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden los compuestos de fórmula I con un portador farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de fórmula I, solos o en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales como una mezcla con excipientes farmacéuticamente aceptables.
El término "excipiente farmacéuticamente aceptable" significa uno o más sólidos, o líquidos compatibles, diluyentes o sustancias de encapsulación que sean susceptibles de ser administradas a un sujeto.
En una realización particular preferida, la invención se refiere a compuestos de fórmula (I) en los que:
R se selecciona del grupo comprende un anillo aromático fenilo opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, alquilo(C1-6 ), opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; alcoxilo(C1-6 ) y nitro; o un heterociclo opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, alquilo( C1-6 ), alcoxilo y nitro.
R1 es hidrógeno;
R2 es hidrógeno;
R3 es hidrógeno;
R4 es hidrógeno;
R5 es hidrógeno;
R6 es hidrógeno;
R7 es acilo (C2)
R8 es hidrógeno; y
n es un entero seleccionado entre 0, 1 y 2; y
sus sales, profármacos o solvatos, preferentemente, sus sales farmacéuticamente aceptables.
En otra realización particular preferida, la invención se refiere a compuestos de fórmula (I) en los que: R es fenilo opcionalmente sustituido por un grupo seleccionado entre flúor; alquilo(C1-6 ) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; alcoxilo( C1-6 ) y nitro;
R7 es acilo
R8 es hidrógeno; y
n es 1 ; y
sus sales, profármacos o solvatos, preferentemente, sus sales farmacéuticamente aceptables.
En otra realización particular preferida, la invención se refiere a compuestos de fórmula (I) en los que:
R es fenilo opcionalmente sustituido por un grupo seleccionado entre flúor; alquilo(C1-6 ) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; alcoxilo(C1-6 ) y nitro;
R7 = R8 es =C=S; y
n es 1 ; y
sus sales, profármacos o solvatos, preferentemente, sus sales farmacéuticamente aceptables.
Compuestos de fórmula (I) particularmente preferidos de la presente invención son los siguientes:
• Cinamato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(3-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(4-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(2-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(4-clorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(4-bromofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(4-fluorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(3-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(4-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(2-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(4-metilfenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(3,4-diclorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo • (E)-3-(4-nitrofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-2-butenoato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indoI-5-iIo
• (,E)-3-(4-hidroxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
• (E)-3-(4-hidroxi-3-metoxyfenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5- ilo
Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención se pueden obtener mediante un procedimiento que comprende hacer reaccionar un ácido carboxílico α,β- insaturado de fórmula (II)
Figure imgf000018_0001
donde R, R1 y R2 tienen el significado ya indicado,
con un alquilamido-5-Χ indol de fórmula (III):
Figure imgf000018_0002
donde R3, R4, R5, R6 y R7, R8 X y n tienen el significado ya indicado.
Dicha reacción se lleva a cabo en un disolvente inerte apropiado, a la temperatura adecuada en presencia de un catalizador. En una realización particular, dicha reacción se lleva a cabo a temperatura ambiente, aproximadamente. En otra realización particular, dicha reacción se lleva a cabo en presencia de l-[b¡s(dimetilamino)metilen]-lH-1,2,3-triazolo[4,5-6]piridinio-3-oxidhexafluoro- fosfato (HATU), como catalizador y promotor. En otra realización particular, dicha reacción se lleva a cabo en presencia de Ν,Ν'-diciclohexilcarbodiimida (DCC), como catalizador o promotor. En otra realización particular, dicha reacción se lleva a cabo en presencia de l -etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI) como catalizador y promotor. En otra realización particular, la reacción se lleva a cabo en un medio disolvente inerte, tal como el constituido por un hidrocarburo alifático halogenado tal como: diclorometano, 1,2-dicloroetano, cloroformo, etc., o sus mezclas, resultando especialmente adecuado el diclorometano. Si se desea, el compuesto de fórmula (I) puede convertirse en una sal, profármaco o solvato del mismo por métodos convencionales como los mencionados previamente.
Por tanto, en otro aspecto, la presente invención describe un procedimiento para la obtención de un compuesto de fórmula (I) que comprende hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula (II) con un compuesto de fórmula (III).
Los compuestos de fórmula (II) son compuestos conocidos y pueden obtenerse comercialmente o bien se pueden preparar por métodos convencionales.
Los compuestos de fórmula (III) son también conocidos y pueden obtenerse comercialmente o bien pueden ser preparados por métodos convencionales (véase, por ejemplo, el apartado 1.1).
Los compuestos de fórmula (I) obtenidos por el procedimiento anterior, si se desea, pueden ser purificados por métodos convencionales, tales como cristalización o cromatografía.
Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención presentan tanto actividad inductora del factor Nrf2 como capacidad secuestradora de radicales libres, y potencial efecto inmunomodulador , estos derivados por lo que pueden ser utilizados en la prevención o terapia de enfermedades neurodegenerativas, ej., la EA, la EP, la ELA y la EH, así como la pérdida de neuronas secundaria a enfermedades autoinmunes como la EM y/o en el tratamiento de otras enfermedades neurodegenerativas en las que produce pérdida de neuronas, como es el caso del accidente cerebrovascular (ictus), entre otras.
Para su administración a un sujeto en necesidad de tratamiento, los compuestos de fórmula (I) de la presente invención se administran convenientemente formulados con los excipientes adecuados para su administración por cualquier vía apropiada, por ejemplo, por vía oral, parenteral, subcutánea, intramuscular o rectal, preferentemente por vía oral.
Por tanto, en otros aspectos, la invención incluye una composición farmacéutica, en adelante composición farmacéutica de la invención, que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables..
En una realización particular, la composición farmacéutica de la invención se presenta en una forma farmacéutica de administración por vía oral, bien en forma sólida o líquida. Ejemplos ilustrativos de formas farmacéuticas de administración por vía oral incluyen comprimidos, cápsulas, granulados, soluciones, suspensiones, etc., para lo cual incluirán los excipientes farmacéuticamente aceptables apropiados, tales como aglutinantes, diluyentes, desintegrantes, lubrificantes, humectantes, etc., y pueden ser preparadas por métodos convencionales. La composición farmacéutica de la invención también puede ser adaptada para su administración parenteral (ej., vía intramuscular, intravenosa, etc.), en forma de, por ejemplo, soluciones, suspensiones o productos liofilizados, estériles, en la forma de dosificación apropiada; en este caso, dichas composiciones farmacéuticas incluirán los excipientes adecuados, tales como tampones, tensioactivos, etc. La composición farmacéutica de la invención también puede ser adaptada para su administración subcutánea en forma de, por ejemplo, soluciones o suspensiones estériles, en la forma de dosificación apropiada; en este caso, dichas composiciones farmacéuticas incluirán los excipientes adecuados, tales como tampones, tensioactivos, etc. Asimismo, la composición farmacéutica de la invención puede ser adaptada para su administración por vía rectal para lo cual incluirá los excipientes adecuados compatibles con los compuestos de fórmula (I) de la invención. Las formulaciones se pueden preparar según métodos convencionales tales como los que se describen en las farmacopeas Española, Europea o de Estados Unidos de América, o en textos de referencia similares, por ejemplo "Tratado de Farmacia Galénica", de C. Faulí i Trillo, 10 Edición, 1993, Luzán 5, S.A. de Ediciones.
El compuesto de fórmula (I) de la invención se administrará en una cantidad terapéuticamente efectiva que generalmente dependerá de la eficacia del compuesto de fórmula (I) elegido, de la gravedad de la patología a tratar, etc. No obstante, típicamente se administrará a dosis diarias comprendidas entre 0, 1 y 100 mg de compuesto de fórmula (I) por kg de peso corporal, más preferentemente las dosis diarias estarán comprendidas entre 2 y 5 mg/kg peso corporal.
En otro aspecto, la invención protege el uso de un compuesto de fórmula (I), sus sales, profármacos o solvatos, farmacéuticamente aceptables, en la elaboración de una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa, tal como una enfermedad neurodegenerativa que cursa con un déficit de acetilcolina o dopamina, y/o de una enfermedad isquémico-cerebral (ictus).
Las enfermedades neurodegenerativas son aquellas, a menudo de causa desconocida, en las que tiene lugar la degeneración progresiva del sistema nervioso en alguna de sus partes o en su totalidad. Para una descripción detallada de las mismas véase, por ejemplo, la monografía "Enfermedades Neurodegenerativas" Coordinadores José Ma Segovia de Arana y Francisco Mora Teruel, editada por Serie Científica Farmaindustria, Madrid, Julio 2002.
Las enfermedades isquémico-cerebrales constituyen una patología aguda que tiene lugar como consecuencia de la interrupción del suministro de sangre a una parte del cerebro o cuando sucede la rotura de un vaso sanguíneo con la consiguiente hemorragia cerebral. Aunque estas enfermedades no están incluidas en el grupo de enfermedades neurodegenerativas hay que tener en cuenta que, secundariamente a un accidente isquémico-cerebral, también se produce la neurodegeneración en aquellas áreas afectadas. De aquí la utilidad del tratamiento de éstas enfermedades con los compuestos de la invención.
La administración de los compuestos de fórmula (I) de la invención, sus sales, profármacos o solvatos, farmacéuticamente aceptables, se puede llevar a cabo en solitario o en combinación con fármacos adicionales, tales como fármacos útiles para el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa o de una enfermedad isquémico- cerebral, para proporcionar una terapia combinada; dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición farmacéutica de la invención que comprende el compuesto de fórmula (I) y/o sus sales, profármacos o solvatos farmacéuticamente aceptables, o no, en cuyo caso, se administrarán de forma simultánea o secuencial a la administración de la composición farmacéutica de la invención. Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de dichos fármacos adicionales que pueden emplearse para proporcionar una terapia de combinación incluyen agentes tales como la memantina (un bloqueante del receptor de glutamato tipo NMDA aprobado para su uso en las fases avanzadas de la enfermedad de Alzheimer), vitaminas, antiinflamatorios o antidepresivos.
MODO DE REALIZACIÓN DE LA INVENCIÓN
La presente invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos, los cuales no pretenden ser limitativos de su alcance.
1. OBTENCIÓN DE LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN
Los compuestos cuya actividad biológica es objeto de la presente invención se sintetizaron siguiendo los siguientes procedimientos en síntesis orgánica
1.1 ) Preparación de N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3-il)etiDacetamida (compuesto 17).
Paso I: A una suspensión de hidrocloruro de 5-hidroxi-3-(2-aminoetil)- lH-indol (5 g, 23,56 mmol) en diclorometano ( CH2C12) seco (40 mL), bajo atmósfera de argón, a 0°C, se añadieron Et3N (4,77 g, 47, 13 mmol) y anhídrido acético (4,84 g, 47, 13 mmol). La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 4 h y posteriormente se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. Una vez completada la reacción se añadió NH4C1 10% y se extrajo 3 veces con CH2C12. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato magnésico anhidro, se filtró y evaporó el disolvente para aislar el compuesto intermedio como un aceite. Este compuesto se usó en el siguiente paso sin purificación intermedia.
Paso II: A una solución del obtenido en el paso anterior en MeOH (40 mL) se le añadió K2CO3 (3,26 gr, 23,56 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 1,6 h. Una vez finalizada la reacción, se añadió agua y se extrajo tres veces con AcOEt. La fase orgánica se secó sobre sulfato magnésico anhidro, se concentró a vacío y el producto resultante fue purificado por cromatografía flash sobre sílica gel usando mezclas de CH2Cl2/MeOH (0 - 5 %) como eluyente para proporcionar el compuesto 17 como un sólido (3,37 gr, 65 %). Los datos experimentales de caracterización estructural estuvieron de acuerdo con los publicados anteriormente (Macfarlane y col., 1990, J Chromaíogr, 532: 13-25).
1.2 Procedimiento general A, para la obtención de los ésteres pertenecientes a la familia I
A una solución de N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3-il)etil)acetamida (1 eq) y Et3N (1 ,5 eq) en CH2C12 seco (0,057 M) bajo argón, se añadió, gota a gota, una solución del ácido acrílico sustituido correspondiente (1,2 eq) mezclado con HATU (1,5 eq) en CH2C12 seco (0,057 M). La mezcla resultante se mantuvo con agitación a temperatura ambiente. Una vez completada la reacción (análisis por cromatografía en capa fina (CCF)), se añadió agua y la mezcla se agitó durante 15 min a temperatura ambiente. Posteriormente, la mezcla se extrajo con CH2C12 (3 x 20 mL), la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Mg2SO4, se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. El sólido resultante se purificó por cromatografía flash en sílica gel usando mezclas de diclorometano/metanol como eluyente.
Ejemplo 1: Preparación del (E)-2-butenoato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (Compuesto 1).
Figure imgf000023_0001
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et3N (95,8 μL, 0,68 mmol) en CH2C12 (5 mL). Ácido (E)-2-butenoico (47,3 mg, 0,55 mmol) y HATU (261,2 mg, 0.69 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 1 ,5 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 1 ,5 %). Para obtener el compuesto 1 como un aceite amarillo claro (98 mg, 76 %). IR (KBr) v 3378, 3278, 2926, 2853, 1730, 1653, 1545, 1314, 1 170, 971 cm"1. RMN de 1H (DMSO-d6, 300 MHz) δΗ 10,91 (1H, sbr, NH), 7,91 ( 1 H, sbr, NH), 7.33 ( 1 H, d, J = 8,6
Hz, 7-H), 7,24 ( 1 H, d, J= 2,2 Hz, 4-H), 7,21 (1H, d, J = 2,3 Hz, 2-H), 7, 1 1 (1H, dq, J = 15,6 Hz, J= 6,8 Hz, 3 '-H), 6,81 (1 H, dd, J= 8,6 Hz, J= 2,2 Hz, 6-H), 6, 14 (1H, dd, J= 15,6 Hz, J= 1,77 Hz, 2'-H), 3,30-3,25 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,78 (2H, t, J = 7,37 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1 ,95 (3H, dd, J = 6,8 Hz, J = 1,77 Hz, 4'-H), 1 ,79 (3H, s, CH2CH2NHCOCH3). RMN de 13C DMSO-d6, 75 MHz) 5C 168,9, 164,9, 146,8, 143, 1, 133,9, 127,3, 124,1 , 121,9, 1 15,2, 1 12,2, 1 1 1,6, 1 10,3, 39,4, 25,0, 22,6, 17,8. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 287, 1381 ; [(M+Na)+] 309, 1213; [(2M+Na)+] 595,2549. Pureza: Anal. cale, para C16H18N2O3: C: 67, 12 %; H: 6,34 %; N: 9,78 %; Encontrado:
C: 67,30 %; H: 6,29 %; N: 9,54 %.
Ejemplo 2: Preparación del cinamato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (Compuesto 2).
Figure imgf000024_0001
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3-
¡l)etil)acetamida (50.0 mg, 0,23 mmol), Et3N (48 μL, 0,34 mmol) en CH2Cl2 (5 mL), ácido trans-cinámico (40,6 mg, 0,27 mmol) y HATU (125,5 mg, 0,34 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 1,5 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2,5%). Para obtener el compuesto 2 como un sólido blanco (55 mg, 72 %). Punto de fusión (P.f.): 150-153 °C. IR (KBr) v 3371 , 3176, 2922, 1720, 1664, 1565, 1309,
1 154, 981 , 766 crn '. RMN de 1H (CDC13, 300 MHz) ¾ 8,35 (1H, sbr, NH), 7,82 (1H, d, J = 16,0 Hz, 3'-H), 7,54-7,51 (2H, m, Ph), 7,36-7,34 (3H, m, Ph), 7,27 (1H, d, J = 8,6 Hz, 7-H), 7,26 (1H, d, J = 2,3 Hz, 4-H), 6,94 (1H, s, 2-H), 6,90 (1H, dd, J = 8,6 Hz, J = 2,3 Hz, 6-H), 6,60 (1H, d, j = 16,0, 2 -H), 6,02 (1H, sbr, NH), 3,49-3,43 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,84 (2H, t, J = 6,7 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1,86 (3H, s,
CH2CH2NHCOCH3 . RMN de 13C CDC13, 75 MHz) 5c 170,7, 166,6, 146,3, 144,2, 134,3, 134,3, 130,6, 129,0, 128,3, 127,7, 123,6, 1 17,6, 1 16,2, 1 13,0, 1 1 1 ,9, 1 10,8, 40,0, 25, 1 , 23,0. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 349, 1548; [(M+Na)+] 371, 1395. Pureza: Anal. Cale, para C2,H20N2O3: C: 72,40 %; H: 5,79 %; N: 8,04 %; Encontrado: C: 71,99 %; H: 5,93 %; N: 7,89 %.
Ejemplo 3: Preparación del (E)-3-(4-metilfenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-ilo (Compuesto 3).
Figure imgf000025_0001
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et3N (95,8 μL, 0,68 mmol) en CH2C12 (5 mL). Ácido (E)-3-(p-toluil)-acrílico (89,2 mg, 0,55 mmol) y HATU (261 ,2 mg, 0,69 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 2.5 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2 %). Para obtener el compuesto 3 como un sólido blanco (124,0 mg, 75 %). Punto de fusión (P.f.): 170-172 °C. IR (KBr) v 3344, 3252, 2932, 1703, 1628, 1554, 1483, 1326, 1 170, 810 era"1. RMN de Ή (CDC13, 300 MHz) ¾ 8,35 (1H, sbr, NH), 7,79 ( 1H, d, J = 16,0, 3 '-H), 7,42 (2H, d, J = 8,0 Hz, 2"-H), 7,27 (1H, d, J = 2,5 Hz, 4-H), 7,25 ( 1H, d, J = 8,9 Hz, 7-H), 7, 16 (2H, d, J = 8,0 Hz, 3 "-H), 6,93 (1H, s, 2-H), 6,90 (1H, dd, J = 8,9 Hz, J = 2,5 Hz; 6-H), 6,55 (1H, d, J = 16,0 Hz, 2'-H), 5,90 (1H, sbr, NH), 3,48-343 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,83 (2H, t, J = 7,37 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 2,33 (3H, s, CH3-Ph), 1,85 (3Η, s, CH2CH2NHCOCH3). RMN de 13C CDC13, 75 MHz) 5C 170,7, 166,8, 146,3, 144,2, 141, 1, 134,3, 131,5, 129,7, 128,3, 127,7, 123,6, 1 16,5, 1 16,2, 1 12,9, 1 1 1,8, 1 10,8, 39,9, 25, 1, 23,0, 21,5. EM (API-E S+) m/z: [(M+H)+] 363,1713; [(M+Na)+] 385, 1517. Pureza: Anal. Cale, para C22H22N2O3: C: 72,91 %; H: 6, 12 %; N: 7,73 %; Encontrado: C: 72,76 %; H: 6,29 %; N: 7,68 %.
Ejemplo 4: Preparación del (E)-3-(2-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-ilo (Compu
Figure imgf000025_0002
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (50,0 mg, 0,23 mmol), Et3N (48 0,34 mmol) en CH2C12 (5 mL). Ácido (E)-3-(2-metoxifenil)-acrílico (48,9 mg, 0,27 mmol) y HATU (130,7 mg, 0,34 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 3 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2,5 %). Para obtener el compuesto 4 como un sólido blanco (59 mg, 71 %). Punto de fusión (P.f.): 163-165°C. IR (KBr) v 3366, 2961, 2924, 1715, 1634, 1487, 1294, 1252, 1 158, 765 cm"1. RMN de Ή (DMSO-d6, 300 MHz) δΗ 10,93 (1H, sbr, NH), 8,07 (1H, d, J = 16,2, 3 '-H), 7,91 ( 1H, sbr, NH), 7,81 (1H, dd, J6-.s- = 7,5 Hz, J6-^- = 1,6 Hz, 6"-H), 7,46 (1H, ddd, J4-.3- = 8,5 Hz, J4-.y = 7,5 Hz, J4-.6- = 1 ,6 Hz, 4"-H), 7,36 (1H, d, J = 8,6 Hz, 7-H), 7,31 (1H, d, J = 2,2, 4-H), 7,23 (1H, d, J = 2,2 Hz, 2- H), 7, 13 ( 1H, d, J3-.4- = 8,5 Hz, 3 "-H), 7,03 (1H, dd, J5-.4- = Jy.6- 7,5 Hz, Hz, 5"- H), 6,93-6,83 (2H, m, 2'-H, 6-H), 3,90 (3H, s, <X¾), 3,37-3,23 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,79 (2H, t, J = 7,3 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1,80 (3H, s, CH2CH2NHCOCH0. RMN de 13C DMSO-d6, 75 MHz) 5c 168,9, 166,0, 158,0, 143,2,
140.5, 133,9, 132,3, 128,9, 127,3, 124, 1, 122,1, 120,7, 1 17,7, 1 15,3, 1 12,2, 1 1 1,8,
1 1 1.6, 1 10,4, 55,7, 39,4, 25, 1, 22,6. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 379,1669; [(M+Na)+] 401, 1483; [(2M+Na)+] 779,3040. Anal. Cale, para C22H22N204: C: 69,83 %; H: 5,86 %; N: 7,40 %. Encontrado: C: 69,78 %; H: 5,86 %; N: 7,25 %.
Ejemplo 5: Preparación del (E)-3-(3-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-ilo (Compuesto 5).
Figure imgf000026_0001
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (50,0 mg, 0,23 mmol), Et3N (48 μL,, 0,34 mmol) en CH2C12 (5 mL).
Ácido (E)-3-(3-metoxifenil)-acrílico (48,8 mg, 0,27 mmol) y HATU (125,5 mg, 0,33 mmol) en CH2Cl2 (5 mL). Tiempo de reacción: 1.5 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2,5%). Para obtener el compuesto 5 como un sólido blanco (77 mg, 93 %). Punto de fusión (P.f.): 124-125 °C. IR (KBr) v 3381, 3317, 3183, 2928, 1723, 1636, 1488, 1231, 1 177, 984, 786 cm-1. RMN de Ή (CDC13, 300 MHz) ¾ 8,68 (1H,
Sbr, NH), 7,77 (1H, d, J = 16,0 Hz, 3 '-H), 7,29-7, 18 (3H, m, Ph), 7, 1 1-7,08 (1H, m, Ph), 7,03-7,02 (1H, m, Ph), 6,91 -6,83 (3H, m, Ph), 6,57 (1H, d, J = 16,0 Hz, 2'-H), 6,0 (1H, sbr, NH), 3,76 (3H, s, OCHj), 3,42-3,36 (2Η, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,77 (2H, t, J = 6,7 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1,81 (3H, s, CH2CH2NHCOCH3). RMN de 13C CDCI3, 75 MHz) 5C 170,8, 166,6, 159,9, 146,3, 144,1 , 135,6, 134,4, 130,0, 127,7, 123,7, 121 ,0, 1 17,9, 1 16, 1, 1 13, 1, 1 12,9, 1 1 1,9, 1 10,7, 55,4, 40,0, 25, 1, 23,0. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 379, 1659; [(M+Na)+] 401 ,1479; [(2M+Na)+] 779,3040. Pureza: Anal. Calc. para C22H22N204: C: 69,83 %; H: 5,86 %; N: 7,40 %. Encontrado:
C: 69,59 %; H: 5,93 %; N: 7,21 %.
Ejemplo 6: Preparación del (E)-3-(4-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-ilo (Compuesto 6).
Figure imgf000027_0001
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (50,0 mg, 0,23 mmol), Et3N (48 μ_ϋ, 0,34 mmol) en CH2C12 (5 mL). (E)-3-(4-metoxifenil)-acrílico (48,9 mg, 0,27 mmol) y HATU (130,7 mg, 0,34 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 2 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2,5 %). Para obtener el compuesto 6 como un sólido blanco (92 mg, 96 %). Punto de fusión (P.f.): 165-167 °C. IR (KBr) v 3380, 3258, 2935, 1709, 1602, 1427, 1291,
1258, 1 152, 868 cm"1. RMN de Ή (DMSO-d6, 300 MHz) ¾ 10,94 (1 H, sbr, NH), 7,93 ( 1H, Sbr, NH), 7,83 (1H, d, J = 16, 1 Hz, 3 '-H), 7,77 (2H, d, J = 8,8 Hz, 2"-H), 7,37 (1H, d, J = 8,8 Hz, 7-H), 7,30 (1 H, d, J = 2,2 Hz, 4-H), 7,23 (1H, s, 2-H), 7,02 (2H, d, J = 8,8 Hz, 3 "-H), 6,88 (1H, dd, J = 8,8 Hz, J = 2,2 Hz, 6-H), 6,75 (1H, d, J = 16, 1 Hz, 2'-H), 3,83 (3H, s, OC%), 3,34-3,27 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,80 (2H, t, J
= 7,4 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1,80 (3H, s, CH2CH2NHCOCH3). RMN de 13C DMSO-de, 75 MHz) 5c 169,0, 166,0, 161,3, 145,6, 143,3, 133,9, 130,4, 127,4, 126,6, 124, 1, 1 15,4, 1 14,9, 114,4, 1 12,2, 1 1 1,6, 1 10,4, 55,3, 39,5, 25,1 , 22,6. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 379, 1670; [M + Naf 401 , 1489; [(2M+Na)+] 779,3049. Pureza: Anal. Calc. para C22H22N204: C: 69,83 %; H: 5,86 %; N: 7,40 %. Encontrado: C: 69,48 %;
H: 5,58 %; N: 7,59 %.
Ejemplo 7: Preparación del (E)-3-(4-hidroxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-iIo (Compuesto 7).
Figure imgf000028_0001
1) Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (248,0 mg, 0,90 mmol), Et3N (188 μL, 1,35 mmol) en CH2C12 (10 mL). Ácido (E)-3-(4-((tórí-butildimetilsilil)oxi)fenil) acrílico (300 mg, 1,08 mmol) y HATU (513,3 g, 1,35 mmol) en CH2C12 (10 mL). Tiempo de reacción: 3 h. Una vez finalizado el primer paso de reacción, se llevó a cabo el segundo paso sin purificación del producto intermedio (E)-3-(4-((tórt-butyldimethylsilyl)-oxi)fenil)acrilato de 3-(2- acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo.
2) A una solución de (E)-3-(4-((tórí-butyldimethylsilyl)oxi)fenil)acrilato de 3- (2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (290 mg, 0,60 mmol) en DMF (8 mL) y H20 (0,8 mL), se añadió Cs2CO3 (99 mg, 0,3 mmol). La suspensión resultante fue agitada a temperatura ambiente durante 15 h. La mezcla de reacción fue diluida con 20 mL de Et20 y se lavó con una solución saturada de NaCl. La solución resultante se extrajo con AcOEt (3 x 15 mL) y se secó sobre MgSO4. La fase orgánica se concentró a vacío y se purificó el producto resultante mediante cromatografía flash en sílica gel (CH2Cl2-MeOH 0 - 4%) para obtener el compuesto 7 como un sólido blanco (290 mg, 61 %); Punto de fusión (P.f.): 136-139°C. IR (KBr) v 3562, 3499, 3364, 2932, 1690, 1597, 1548, 1456, 1327, 1 182, 834 cm"1. RMN de Ή (DMSO-d6, 300 MHz) ¾ 10,93 (1H, sbr, NH), 10,09 (1H, sbr, OH), 7,93 (1H, sbr, NH), 7,76 (1H, d, J = 16,0 Hz, 3'- H), 7,68 (2H, d, J = 8,6, 3"-H), 7,35 (1H, d, J = 8,6, 7-H), 7,28 (1H, d, J = 2,2 Hz, 4- H), 7,22 (1H, d, J = 2,2 Hz, 2-H), 6,88-6,82 (3H, m, 2"-H, 6-H), 6,65 (1H, d, J = 16,0 Hz, 2'-H), 3,32-3,26 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,78 (2H, t, J = 7,4 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1,79 (3H, s, CH2CH2NHCOCH5). RMN de 13C DMSO-d6, 75 MHz) 5c 168,9, 166, 1, 160, 1 , 145,9, 143,3, 133,9, 130,5, 127,3, 125,0, 124, 1, 1 15,8, 1 15,4, 1 13,6, 1 12,2, 1 1 1,6, 1 10,4, 39,4, 25, 1, 22,6. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 365,1515; [(M+Na)+] 387,1325; [(2M+Na)+] 751 ,2731. Pureza: Anal. Cale, para C21H20N2O4: C: 69,22 %; H: 5,53 %; N: 7,69 %; Encontrado: C: 69,33 %; H: 5,75 %; N: 7,94 %.
Ejemplo 8: Preparación del (E)-3-(4-hidroxi-3-metoxyfenil)-acrilato de 3-(2- acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (Compuesto 8).
Figure imgf000029_0001
1) Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (542 mg , 2,48 mmol), Et3N (520 μL, 3,72 mmol) en CH2C12 (10 mL). Ácido (JE)-3-(4-((tert-butildimetilsilil)oxy)-3-metoxifenil acrílico (919,2 g, 2,98 mmol) y HATU (1,414 g, 3,72 mmol) en CH2C12 (10 mL). Tiempo de reacción: 4 h. Una vez finalizado el primer paso de reacción, se llevó a cabo el segundo paso sin purificación del producto intermedio (E)-3-(4-((tert-butyldimethylsilyl)oxi)-3- metoxifenil)acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo.
2) A una solución de (E)-3-(4-((fórí-butyldimethylsilyl)oxi)-3- metoxifenü)acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (600,0 mg, 1,18 mmol) en DMF (8 mL) y H20 (0,8 mL), se añadió Cs2CO3 (192,2 mg, 0,589 mmol). La suspensión resultante fue agitada a temperatura ambiente durante 6 h. La mezcla de reacción fue diluida con 20 mL de Et20 y se lavó con una solución saturada de NaCl. La solución resultante se extrajo con AcOEt (3 x 15 mL) y se secó sobre MgSO4. La fase orgánica se concentró a vacío y se purificó el producto resultante mediante cromatografía flash en sílica gel (CH2Cl2-MeOH 0 - 4%) para obtener el compuesto 8 como un sólido blanco (296 mg, 64 %); Punto de fusión (P.f.): 193- 195°C. IR (KBr) v 3377, 3265, 3105, 2933, 1704, 1631 , 1583, 1514, 1275, 1242, 979, 815 cm'1. RMN de Ή (DMSO-d6, 300 MHz) ¾ 10,93 ( 1H, sbr, NH), 9,69 (1H, sbr, OH), 7,94 (1H, sbr, NH), 7,75 ( 1H, d, J = 16,0 Hz, 3'-H), 7,46 ( 1H, d, J = 1,9, 2"-H), 7,36 (1H, d, J = 8,6, 7-H), 7,29 (1H, d, J = 2,2 Hz, 4-H), 7,22-7, 19 (2H, m, 2-H, 5 "-H), 6,89-6,82 (2H, m, 6"-H, 6-H), 6,74 ( 1H, d, J = 16,0 Hz, 2'-H), 3,85 ( 1H, s, OCH?) 3,33-3,26 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,79 (2H, t, J = 7,4 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1,79 (3H, s, CH2CH2NHCOCH3). RMN de 13C DMSO-d6, 75 MHz) 5C 168,9, 166,1, 149,6, 147,9, 146,3, 143,3, 133,9, 127,3, 125,5, 124,1, 123,4, 115,5, 115,3, 113,9, 112,2, 111,6, 111,4, 110,3, 55,71, 39,4, 25,1, 22,6. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 395,1622; [(M+Na)+] 417,1436; [(2M+H)+] 789,3022. Anal. Cale, para C22H22N205: C: 66,99 %;
H: 5,62 %; N: 7,10 %; Encontrado: C: 67,15 %; H: 5,99 %; N: 6,76 %.
Ejemplo 9: Preparación del (E)-3-(4-fluorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-ilo (Compuesto 9).
Figure imgf000030_0001
Siguiendo el procedimiento general A, 7V-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et3N (95,8 , 0μ,L68 mmol) en CH2C12 (5 mL). Ácido (E)-3-(4-fluorofenil)-acrílico (91,4 g, 0,549 mmol) y HATU (261,2 mg, 0,69 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 2 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2,5%). Para obtener el compuesto 9 como un sólido blanco (151,0 mg, 90 %). Punto de fusión (P.f.): 173-176 °C. IR (KBr) v 3358, 3217, 2932, 1718,
1636, 1556, 1509, 1314, 1229, 1170, 1103, 982, 830 cm'1. RMN de *H (CDC13, 300 MHz) ¾ 8,34 (1H, sbr,NH), 7,77 (1H, d, J= 16,0 Hz, 3'-H), 7,56-1,44 (2H, m, 2"-H), 7,32-7,22 (2H, m, 7-H, 4-H), 7,10-6,98 (2H, m, 3"-H), 6,95 (1H, s, 2-H), 6,89 (1H, dd, J= 8,8 Hz, J= 2,2 Hz, 6-H), 6,51 (1H, d, J= 16,0 Hz, 2'-H), 6,12 (1H, sbr.1H), 3,48-3,42 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,84 (2H, t, J= 6,7 Hz, CH2CH2NHCOCH3),
1,87 (3H, s, CH2CH2NHCOCHi). RMN de 13C CDC13, 75 MHz) 5c 171,1, 166,4, [165,80, 162,46, JC-F = 251,4, C4"], 145,0, 144,2, 134,3, 130,5, [130,28, 130,16, JC-F = 8,57, C2"], 127,7, 123,7, [117,36, 117,32, JC-F = 2,23, Cl"], [116,34, 116,05, JC-F = 21,7, C3 "], 113,0, 111,9, 110,8, 40,2, 25,0, 22,7. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 367,1479; [(M+Na)+] 389,1270; [(2M+Na)+] 755,2638. Pureza: Anal. Cale, para
C2iHi9FN203: C: 68,84 %; H: 5,23 %; N: 7,65 %; Encontrado: C: 68,63 %; H: 5,39 %; N: 7,58 %. Ejemplo 10: Preparación del (2T)-3-(4-bromofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-ilo (Compuesto 10).
Figure imgf000031_0001
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (50 mg, 0,23 mmol), Et3N (48 μL., 0,34 mmol) en CH2C12 (8 mL). Ácido (JE)-3-(4-bromorofenil)-acrílico (62,4 g, 0,27 mmol) y HATU (130,7 mg, 0,34 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 1 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2,5%). Para obtener el compuesto 10 como un sólido blanco (96 mg, 97 %). Punto de fusión (P.f.): 196-198 °C. IR (KBr) v 3365, 2928, 2856, 1710, 1637, 1483, 1309, 1070, 827 cm"'. RMN de Ή (DMSO-d6, 300 MHz) ¾ 10,95 (1H, sbr, NH), 7,93 (1H, sbr, NH), 7,84 (1H, d, J = 16,0 Hz, 3 '-H), 7,78 (2H, d, J = 8,5 Hz, 2"-H), 7,67 (2H, d, J = 8,5 Hz, 3 "-H), 7,37 (1H, d, J = 8,6 Hz, 7-H), 7,31 (1H, d, J = 2,3 Hz, 4- H), 7,23 ( 1H, d, J = 2,3 Hz, 2-H), 6,95 (1H, d, J = 16,0 Hz, 2'-H), 6,89 (1H, dd, J = 8,6 Hz, J = 2,3 Hz, 6-H), 3,31-3,26 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,79 (2H, t, J= 7,4 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1,79 (3H, s, CH2CH2NHCOCH3). RMN de 13C DMSO-d6, 75 MHz) 5C 168,9, 165,5, 144,4, 143, 1 , 134,0, 133,3, 131,9, 130,4, 127,3, 124,2, 124, 1, 1 18,6, 1 15,2, 1 12,2, 1 1 1,7, 1 10,3, 39,4, 25, 1, 22,6. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 427,0655; [(M+Na)+] 449,0478. Pureza: Anal. Cale, para C2iHi9BrN203: C: 59,03 %; H: 4,48 %; N: 6,56 %; Encontrado: C: 58,78 %; H: 4,65%; N: 6,39 %.
Ejemplo 11: Preparación del (2T)-3-(4-clorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-ilo (Compuesto 11).
Figure imgf000031_0002
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (50 mg, 0,23 mmol), Et3N (48 μL, 0,34 mmol) en CH2C12 (5 mL). Ácido (E)-3-(4-clorofenil)-acrílico (50,2 g, 0,27 mmol) y HATU (130,7 mg, 0,34 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 3 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2,5%). Para obtener el compuesto 11 como un sólido blanco (83 mg, 98 %). Punto de fusión (P.f.): 185-187°C. IR (KBr) v 3363, 2928, 1710, 1655, 1550, 1325, 1 173, 828 cin ' . RMN de Ή (DMSO-d6, 300 MHz) ¾ 10,95 (1H, sbr, NH), 7,93 (1H, sbr, NH), 7,88-7,83 (3H, m, 3 '-H, 2"-H), 7,52 (2H, d, J = 8,5 Hz, 3 "-H), 7,36 (1H, d, J = 8,67 Hz, 7-H), 7,30 (1H, d, J = 2,2, 4-H), 7,23 (1H, d, J = 2,3 Hz, 2-H), 6,96-6,89 (2H, m, 2'-H, 6-H), 3,32-3,26 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,78 (2H, t, J = 7,4 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1,79 (3H, s, CH2CH2NHCOCHi). RMN de 13C DMSO-d6, 75 MHz) 6c 168,9, 165,6, 144,3, 143,2, 135,2, 133,9, 132,9, 130,2, 128,9, 127,3, 124,2, 1 18,5, 1 15,2, 1 12,2, 1 1 1 ,7, 1 10,3, 39,7, 25, 1 , 22,6. EM (API-E S+) m/z: [(M+H)+] 383, 1 174; [(M+Na)+] 405,0989. Pureza: Anal. Cale, para C2iHi9ClN203: C: 65,88 %; H: 5,00 %; N: 7,32 %; Encontrado: C: 65,78 %; H: 5,33 %; N: 6,99 %.
Ejemplo 12: Preparación del (E)-3-(3,4-diclorofenil)-acrilato de 3-(2- acetamidoetil)-lH-in
Figure imgf000032_0001
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et3N (95,8 , 0μ,L68 mmol) en CH2Cl2 (5 mL). Ácido (E)-3-(3,4-diclorofenil)-acrílico (1 19,4 g, 0,55 mmol) y HATU (261,2 mg, 0,69 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 1,5 h. Cromatografía flash
DCM/MeOH (0 - 2%). Para obtener el compuesto 12 como un sólido blanco (169 mg, 88 %). Punto de fusión (P.f): 167-169 °C. IR (KBr) v 3298, 2943, 1721, 1630, 1540, 1471, 1260, 1238, 1201, 979, 816 cm"1. RMN de Ή (DMSO-d6, 300 MHz) ¾ 10,95 (1 H, sbr, NH), 8, 17 (1H, d, J= 1 ,9, 2"-H), 7,93 (1H, sbr, NH), 7,88-7,82 (2H, m, 6"-H, 3'-H), 7,72 ( 1H, d, J = 8,3 Hz, 5 "-H), 7,37 (1H, d, J = 8,6 Hz, 7-H), 7,32 (1H, d, J =
2.2 Hz, 4-H), 7,24 (1H, d, J = 2,2, 2-H), 7,04 (1H, d, J = 16,0, 2'-H), 6,89 ( 1H, dd, J = 8,6 Hz, J = 2,2 Hz, 6-H), 3,34-3,27 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,80 (2H, t, J =
7.3 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1,80 (3H, s, CH2CH2NHCOCH3). RMN de 13C DMSO- d6, 75 MHz) 6C 168,9, 165,4, 143, 1, 143,0, 134,8, 134,0, 132,9, 131,8, 131,0, 130,3, 128,4, 127,3, 124,2, 120,0, 1 15,2, 1 12,3, 1 1 1,7, 1 10,3, 39,5, 25, 1, 22,6. EM (API- ES+) m/z: [(M+H)+] 417,0722; [(M+Na)+] 439,0612; [(2M+Na)+] 855,1218. Pureza: Anal. Cale, para C21Hi8Cl2N203: C: 60,44 %; H: 4,35 %; N: 6,71 %; Encontrado: C: 60,07 %; H: 4,56 %; N: 6,46 %.
Ejemplo 13: Preparación del (E)-3-(2-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2- acetamidoetil)-lH-ind -5-ilo (Compuesto 13).
Figure imgf000033_0001
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et3N (95,8 \iL, 0,68 mmol) en CH2C12 (5 mL). Ácido (E)-3-(2-(trifluorometil)fenil)-acrílico (1 18,9 mg, 0,55 mmol) y HATU (261,2 mg, 0,69 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 3,5 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2%). Para obtener el compuesto 13 como un sólido marrón claro (184 mg, 97 %). Punto de fiasión (P.f.): 145-147 °C. IR (KBr) v 3373, 3174, 1717, 1657, 1577, 1485, 1315, 1244, 1165, 1061, 960, 768 cm-1. RMN de Ή (CDC13,
300 MHz) ¾ 8,40 (1H, sbr, NH), 8,26 (1H, dd, J = 16,0 Hz; J = 2,2 Hz, 3 '-H), 7,81- 7,73 (2H, m, 4"-H, 5 "-H), 7,62 (1 H, t, J = 7,6 Hz, 3"-H), 7,52 (1H, t, J = 7,6 Hz, 6"-H), 7,36 (1H, s, 4-H), 7,34 (1H, d, J = 5,8 Hz, 7-H), 7,02 (1H, s, 2-H), 6,98 (1H, dd, J = 8,8 Hz J = 2,2 Hz, 6-H), 6,64 (1H, d, J = 16,0 Hz, 2'-H), 6,06 (1H, Sbr, NH), 3,57-3,51 (2H, m, CH2CH?NHCOCH3), 2,91 (2H, t, J = 6,7 Hz, CH2CH2NHCOCH3),
1 ,94 (3H, s, CH2CH2NHCOCHj). RMN de 13C (CDC13, 75 MHz) 6C 170,8, 165,7, 144,0, 141,7, 136,3, 133, 1, 132,2, 129,9, [ 129,53, 129,13, 128,72, 128,32, JC.F = 30,4, C2"], 128,0, 127,7, [ 126,31 , 126,24, 126, 17, 126,09, JC-F = 5,7, C3 "], [ 129,30, 125,70, 122,07, 1 18,50, JC,F = 273,9, CF3], 123,7, 121 ,9, 1 16,0, 1 12,9, 1 1 1,79, 1 10,7, 40,0, 25, 1 , 23,0. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 439,1228 [(M+Na)+] 439,1228.
Pureza: Anal. Cale, para C22H,9F3N203: C: 63,46 %; H: 4,60 %; N: 6,73 %; Encontrado: C: 63, 16 %; H: 4,64 %; N: 6,37 %. Ejemplo 14: Preparación del (E)-3-(3-(trifluorometiI)feniI)-acriIato de 3-(2- acetamidoetil)-lH-ind -5-ilo (Compuesto 14).
Figure imgf000034_0001
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi- lH-indol-3- il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et3N (95,8 μL, 0,68 mmol) en CH2C12 (5 mL). Ácido (E)-3-(3-(trifluorometil)fenil)-acrílico (1 18,9 mg, 0,55 mmol) y HATU (261,2 mg, 0,69 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 2 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2%). Para obtener el compuesto 14 como un sólido blanco ( 143 mg, 75 %). Punto de fusión (P.f.): 137-139 °C. IR (KBr) v 3374, 3154, 1658, 1641 , 1338, 1 197, 809, 695 cm'1. RMN de Ή (CDC13, 300 MHz) δΗ 8,57 (1H, sbr, NH), 7,80 (1H, d, J = 16,0 Hz; 3 '-H), 7,75 (1H, s, 2"-H), 7,67 (1H, d, J = 7,7 Hz, 4"- H), 7,59 (1H, d, J = 7,7 Hz, 6"-H), 7,47 (1H, t, J = 7,7 Hz, 5 "-H), 7,26-7,23 (2H, m, 4-H, 7-H), 6,89-6,86 (2H, m, 2-H, 6-H), 6,65 (1H, d, J = 16,0 Hz, 2'-H), 5,97 (1H, Sbr, NH), 3,46-3,40 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,80 (2H, t, J = 6,8 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1 ,83 (3H, s, CH2CH2NHCOC¾) . RMN de l 3C CDCI3, 75 MHz) 5c 170,7, 166,0, 144,4, 144,0, 135, 1 , 134,4, [132,20, 131 ,77, 131,34, 130,91, JC-F = 32,6, C3 "], 131,2, 129,6, [129,18, 125,57, 121,96, 1 18,35, JC-F = 272,4, CF3], 127,7, [ 127,03, 126,98, 126,93, 126,89, JC-F = 3,8, C2"], [ 124,90, 124,85, 124,80, 124,75, JC-F = 3,8, C4 '], 123,7, 1 19,6, 1 16,0, 1 13,0, 1 1 1,9, 1 10,7, 40,0, 25,1 , 23,0. EM (API- ES+) m/z: [(M+H)+] 417, 141 1 ; [(M+Na)+] 439,1234. Pureza: Anal. Cale, para C22Hi9F3N203: C: 63,46 %; H: 4,60 %; N: 6,73 %; Encontrado: C: 63,36 %; H: 4,77 %; N: 6,41 %.
Ejemplo 15: Preparación del (E)-3-(4-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2- acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (Compuesto 15).
Figure imgf000035_0001
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et3N (95,8 μL, 0,68 mmol) en CH2C12 (5 mL). Ácido (E)-3-(4-(trifluorometil)fenil)-acrílico (1 18,9 mg, 0,55 mmol) y HATU (261 ,2 mg, 0,69 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 2 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2%). Para obtener el compuesto 15 como un sólido blanco (141 mg, 74 %). Punto de fusión (P.f.): 184-186 °C. ÍR (KBr) v 3356, 3080, 1718, 1655, 1553, 1481, 1325, 1 177, 1066, 838 era-1. RMN de Ή (CDC13, 300 MHz)
Figure imgf000035_0003
8,30 ( 1 H, sbr, NH), 7,82 (1H, d, J = 16,0 Hz, 3 '-H), 7,62 (4H, s, 2" '-H, 3" '-H), 7,32- 7,27 (2H, m, 4-H, 7-H), 6,98 (1 H, s, 2-H), 6,91 (1H, dd, J = 8,7 Hz, J = 2, 1 Hz, 6-H), 6,67 (1 H, d, J = 16,0 Hz, 2'-H), 6,06 (1 H, sbr, NH), 3,52-3,39 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,86 (2H, t, J = 6,6 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1 ,88 (3H, s, CH2CH2NHCOCH5). RMN de 13C CDC13, 75 MHz) 5C 165,9, 144,3, 144,1, 137,6, 135,3, 134,3, [132,72, 132,30, 131,86, 131,46, JC-F = 32,6, C4"], [129,22, 125,61, 122,00, 1 18,35, Jc-F = 272,5, CF3], 128,4, 127,7, [126,06, 126,00, 125,96, 125,90, JC. F = 3,82, C3 "], 1 16,2, 1 13,2, 1 1 1,9, 1 10,8, 40, 1, 25,0, 22,9. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 417,1418; [(M+Na)+] 439, 1238. Pureza: Anal. Cale, para C22Hi9F3N203: C: 63,46 %; H: 4,60 %; N: 6,73 %; Encontrado: C: 63, 1 1 %; H: 4,66 %; N: 6,44 %. Ejemplo 16: Preparación del (E)-3-(4-nitrofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-ilo (Compuesto 16).
Figure imgf000035_0002
Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3- il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et3N (95,8 μL, 0,68 mmol) en CH2C12 (5 mL). (E)-3-(4-nitrofenil)-acrílico (105,9 mg, 0,55 mmol) y HATU (261,2 mg, 0,69 mmol) en CH2C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 1 h. Cromatografía flash DCM/MeOH (0 - 2%). Para obtener el compuesto 16 como un sólido blanco (146 mg, 81 %). Punto de fusión (P.f.): 218-220 °C. IR (KBr) v 3380, 3226, 3068, 2924, 1713, 1639, 1343, 1 177, 848 crn 1. RMN de Ή (DMSO-d6, 300 MHz) ¾ 10,96 (1H, sbr, NH), 8,28 (2H, d, J = 8,8 Hz, 2"-H), 8, 10 (2H, d, J = 8,8 Hz, 3"-H), 7,98 (1 H, d, J = 16,0, 3 '-H),
7,92 ( 1H, Sbr, NH), 7,38 (1H, d, J = 8,6 Hz, 7-H), 7,34 (1H, d, J = 2,2 Hz, 4-H), 7,24 (1H, d, J = 2,2 Hz, 2-H), 7, 13 ( 1H, d, J = 16,0 Hz, 2'-H), 6,91 (1H, dd, J= 8,6 Hz, J = 2,2, 6-H), 3,34-3,28 (2H, m, CH2CH2NHCOCH3), 2,80 (2H, t, J = 7,3 Hz, CH2CH2NHCOCH3), 1,80 (3H, s, CH2CH2NHCOCH3). RMN de 13C DMSO-d6, 75 MHz) 6c 168,9, 165,2, 148,2, 143, 1, 143,1 , 140,4, 134, 1, 129,6, 127,3, 124,2, 123,9,
122,0, 1 15, 1, 1 12,2, 1 1 1,7, 1 10,3, 39,45, 25, 1, 22,6. EM (API-ES+) m/z: [(M+H)+] 394,1416; [(M+Na)+] 416, 1215; [(2M+Na)+] 809,2430. Anal. Cale, para C21H,8N305: C: 64, 12 %; H: 4,87 %; N: 10,68 %; Encontrado: C: 64,44 %; H: 5,04 %; N: 10,59 %.
ACTIVIDADES BIOLÓGICAS ESTUDIADAS EN LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN.
Ejemplo 17
Medida de la inducción de la vía NrG-ARE mediante la medida de la actividad Luciferasa en células MCF7 transfectadas de forma estable con el plásmido ARE- LUC
En el ser humano, el factor de transcripción NrO esta codificado por el gen NFEL2. En condiciones normales, el factor Nrf2 se encuentra secuestrado en el citoplasma por la proteína Keapl . Keapl actúa como una proteína sustrato para la ubiquitinación basada en la unión de la ubiquitina ligasa cullina-3 (CuI3), que resulta en la degradación de Nrf2 por el proteasoma. El estrés oxidativo o compuestos electrófilos, modifican ciertos residuos cisteína presentes en Keapl y, como resultado, se detiene el sistema de ubiquitinación Keapl -Cul3 y se libera el factor Nrf2 en el citoplasma. Una vez liberado, el factor Nrf2 se transloca al núcleo donde heterodimeriza con proteínas Maf y se une al elemento de respuesta antioxidante (ARE) situado en la región promotora de genes que codifican diversas enzimas citoprotectoras, induciendo la sobreexpresión de las mismas. Estas enzimas incluyen la NAD(P)H quinona oxidorreductasa, glutamato-cisteína ligasa, hemo-oxigenasa-1 y la familia de enzimas glutatión S-transferasa (GST), entre otras. Un inductor Nrf2 incrementa los niveles de Nrf2, o su actividad, o su translocación al núcleo, consecuentemente, incrementa la expresión de los genes susceptibles de activación por Nrf2.
Para el estudio de inducción del factor de isabtranscripción Nrf2 se utilizó la línea celular AREc32 que está transfectada de forma estable con el gen reportero luciferasa unido a la secuencia ARE. En presencia de electrófilos o estrés oxidativo, el factor Nrf2 se transloca al núcleo y se une a las secuencias ARE, activando la expresión de luciferasa, formándose una cantidad proporcional de la misma. Las células AREc32 se cultivaron en medio DMEM con glutamax, suplementado con un 10% de suero bovino fetal (SBF), 1% de penicilina-estreptomicina y 1,6 % de geneticina (G418) (reactivos de GIBCO, Madrid, España). Las células se cultivaron en frascos de 75 cm con 1 1 mL del medio específico, incubadas a 37°C y 5% de CO2 y se hicieron pases 1 :4 cada 4-6 días cuando las células llegaron al 80% de confluencia. Para los experimentos, las células se cultivaron en placas de 96 pocilios con fondo transparente, a una densidad de 60x104 células/pocilio con 100 μL,/ροcillο. Tras 24 h de cultivo, las células se trataron con los compuestos objeto de la invención a las concentraciones deseadas (1, 10, 30 y 60 μΜ) durante 24 h a 37°C y 5% CO2 En cada placa se incluyó una variable basal, una variable con tert-butil hidroquinona (TBHQ), 10 μΜ (control positivo) y las variables problema, en un volumen final de 100 μL . Tras 24 h de incubación con los compuestos objeto de estudio, se midió la actividad de luciferasa mediante un ensayo de bioluminiscencia, para lo que se usó el kit "Luciferase assay system" (Promega El 500). Tras el periodo de incubación, los tratamientos fueron retirados y las células se lavaron con 100 μL de PBS 0,1 M. Una vez retirado el lavado, se añadieron 20 μL-, del reactivo "lysis buffer" a cada uno de los pocilios. Tras 10 min, la placa se introdujo en un lector multipocillo de luminiscencia, FluoStar óptima (BMG labtech). Tabla 1
Inducción del factor de transcripción Nrf2 por los compuestos de la invención, y el compuesto de referencia TBHQ. Los datos se muestran como la media ± EJE. de al menos tres experimentos por cuadruplicado a cuatro concentraciones distintas.
Figure imgf000038_0001
La medida de luminiscencia en unidades arbitrarias es directamente proporcional a la cantidad de luciferasa en cada uno de los pocilios y ésta, directamente proporcional a la inducción del factor Nrf2 por cada uno de los productos objeto de estudio a la concentración establecida. Las medidas se realizaron por duplicado y los valores fueron normalizados respecto a la luminiscencia de la basal tomando su valor de expresión de luciferasa como 1.
Los resultados de inducción del factor obtenidos para los compuestos objeto de la invención descritos como ejemplos 1 a 16 se muestran en la Tabla 1, expresados como inducción tomando como valor 1 los valores de las células no tratadas.
Ejemplo 18
Medida de la capacidad antioxidante de los compuestos: Captación de radicales hidroxilo por los compuestos objeto de la invención
Para estudiar el potencial antioxidante de los compuestos objeto de la invención realizamos el estudio de la capacidad secuestradora de radicales libres mediante la medida de la capacidad de secuestrar radicales de oxígeno (ORAC). Los compuestos objeto de esta invención han sido diseñados como híbridos de melatonina, compuesto natural que presenta un potente efecto secuestrador de radicales libres, además de un efecto antioxidante indirecto por modulación de distintas rutas (Tan y col., 2002, Curr Top Med Chem, 2: 181-97). Tanto la melatonina como la serie de metabolitos intermedios que genera, por ejemplo N-acetil-N-formil-5- metoxilnuramina o 3-hidroximelatonina, son capaces de detoxificar radicales libres en lo que se ha llamado la cascada antioxidante de la melatonina (Burkhardt y col., 2001, Int J Biochem Cell Biol, 33: 775-83, Seegar y col., 1997, Br J Clin Pharmacol, 44: 283-4, Tan y col., 2000, Free Radie Biol Med, 29: 1 177-85). El hecho de que sus metabolitos intermedios también presenten capacidad antioxidante, confiere a esta molécula una eficiencia mayor respecto a otros antioxidantes. Debido a este mecanismo de protección, la melatonina se encuentra presente en altas cantidades en los tejidos y órganos que están expuestos con frecuencia a las agresiones ambientales, como la piel, y en órganos que presentan un alto consumo de oxígeno, como el cerebro.
El método de estudio de secuestradores de radicales libres mide el grado de inhibición del radical peróxido. Se mide como equivalentes de trolox e incluye la extinción de radicales en el tiempo y la reducción del daño oxidativo producido al final del experimento. El protocolo usado se basa en el desarrollado por Ou y col. (Ou y col., 2001, J Agrie Food Chem, 49: 4619-26) parcialmente modificado por Dávalos y col. (Davalos y col., 2004, J Agrie Food Chem, 52: 48-54). La reacción se llevó a cabo en un tampón fosfato 75 mM (pH 7,4), con un volumen final de 200 μL. Se mezclaron 150 de fluoresceína (concentración final de 70 nM) con 25 del compuesto a estudiar a la concentración deseada por triplicado, en una placa de 96 pocilios negra con fondo transparente para medidas de fluorescencia.
Tabla 2
Medida de captación de radicales libres por los compuestos de la invención, y el compuesto de referencia melatonina. Los datos se muestran como la media ± E.E. de al menos tres experimentos por duplicado.
Figure imgf000040_0001
La mezcla se pre-incubó durante 15 min a 37°C y, a continuación, se añadieron rápidamente 25 μL, una solución de dicloruro de 2,2-Azobis(amidopropano) (AAPH) (concentración final; 12 mM). La placa se insertó inmediatamente en un lector de fluorescencia fluostar óptima con filtros de excitación y emisión de 485 y 520 nM respectivamente. Se midió la intensidad de fluorescencia durante 90 min. Cada compuesto se midió a 6 concentraciones diferentes. En el ensayo se incluyó un blanco (fluoresceína + AAPH en tampón fosfato) y una curva de calibración del compuesto de referencia, Trolox (1-8 μΜ). Todas las variables se prepararon por duplicado, en al menos 3 ensayos independientes para cada compuesto. Las curvas de cada uno de los compuestos (I.F. -tiempo) se normalizaron respecto a la curva correspondiente al blanco de cada uno de los experimentos, y se calculó el área bajo la curva (AUC) de decaimiento de fluorescencia. El valor de AUC neto correspondiente a cada uno de los compuestos se calculó substrayendo el valor correspondiente de AUC del blanco. Se realizaron curvas de regresión entre la AUC y la concentración del compuesto para cada una de las muestras. Los valores de ORAC se expresaron como equivalentes de trolox respecto a la curva de calibración de cada ensayo, donde el valor de trolox fue tomado como 1 .
Ejemplo 19
Estudio de la capacidad neuroprotectora de ios compuestos objeto de la invención frente a modelos de toxicidad inducida por estrés oxidativo
Cultivo de células de neuroblastoma SH-SY5Y
Las células SH-SY5Y [ECACC 94030304], procedentes de pases entre el 5 y el 16 tras su descongelación, se mantuvieron en un medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) conteniendo 15 aminoácidos no esenciales y suplementado con suero bovino fetal al 10%, glutamina 1 mM, 50 unidades/mL de penicilina y 50 μg/mL de estreptomicina (reactivos de GIBCO, Madrid, España). Las células se sembraron en recipientes que contenían medio suplementado y se mantuvieron en un incubador a 37°C en atmósfera húmeda con un 5% de CO2 haciendo pases 1 :4 dos veces por semana. Para los experimentos, las células se cultivaron en placas de 24 pocilios a una densidad de 2x105 células /pocilio, o en placas de 96 pocilios a una densidad de 8x104 células /pocilio. Para los experimentos de citotoxicidad las células se trataron con los fármacos antes de llegar a confluencia, en DMEM con 1% de suero fetal bovino.
Medida de la viabilidad celular: 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo -2.5-difeniltetrazo MTT
El parámetro de que se usó para medir la viabilidad celular fue la reducción metabólica del bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol (MTT). La técnica MTT consiste en una medida indirecta de la viabilidad celular. Este ensayo colorimétrico se basa en la reducción del Bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5- difeniltetrazol (MTT). Este proceso es realizado por la enzima mitocondrial succinato- deshidrogenasa de células metabólicamente activas, la cual transforma al MTT de un compuesto hidrofílico de color amarillo (sal de tetrazolio) a un compuesto violáceo, hidrofóbico (sal de formazán). La cantidad de células vivas es proporcional a la cantidad de formazán formada (Mosmann, 1983, J Immunol Methods, 65: 55-63). Las células apoptóticas tienen sus mitocondrias dañadas y no realizarán el proceso. Por lo cual, este método permite medir supervivencia y proliferación celular, así como determinar la citotoxicidad de potenciales agentes terapéuticos. Para determinar la viabilidad celular en células SH-SY5Y, se añaden 30 μL/pocillo de MTT (5 mg/mL) y tras 2 h, el medio es retirado sin perder los cristales de formazán que se diluyen en 300 de DMSO. Posteriormente, las muestras son transferidas a una placa de 96 pocilios para medir la absorbancia de las muestras a 570 nm. Todos los ensayos de MTT se realizaron por triplicado. Se cuantifica espectro fotométricamente con el lector de absorbancia/fluorescencia FluoStar óptima®. Los valores de absorbancia obtenidos con el tóxico solo y con cada compuesto en presencia del tóxico se restaron del valor de absorbancia obtenido en condiciones básales, sin tratamiento. El valor obtenido de la resta de los valores de absorbancia basal menos tóxico solo, se consideró el 100 % de muerte y los valores obtenidos con los compuestos en presencia de tóxico se normalizaron como porcentajes de dicho valor. Para calcular el porcentaje de supervivencia, se restaron estos valores de 100.
Neuroprotección ejercida por los compuestos objeto de esta invención 1-16: La activación de la vía Nrf2-ARE por los compuestos ejerce un efecto neuroprotector frente a modelos de estrés oxidativo, debido a la expresión de diversos genes citoprotectores. Por tanto, estudiamos la capacidad neuroprotectora de los compuestos objeto de eta patente en modelos in vitro de citotoxicidad inducida por estrés oxidativo. Se evaluó el efecto neuroprotector de los compuestos en células de neuroblastoma humano, concretamente el potencial neuroprotector de estos compuestos frente a 1) el estrés oxidativo producido por rotenona y oligomicina A, bloqueantes de la cadena respiratoria de la mitocondria según se describe en (Halliwell, 1992, J Neurochem, 59: 1609-23, Newhouse y col., 2004, Toxicol Sci, 79: 137-46), respectivamente, con dos protocolos diferenciados, y (2) la toxicidad inducida por el compuesto Menadiona, que induce toxicidad por su capacidad electrófila. Este compuesto genera estrés oxidativo en la célula al ser metabolizada por enzimas microsomales produciéndose radicales hidroxilo y ROS. Produce una despolarización del potencial de membrana mitocondrial, generando una liberación de factores apotóticos tales como el citocromo c, desencadenando sucesivamente la activación de una cascada de caspasas (Loor y col., 2010, Free Radie Biol Med, 49: 1925-36, Chuang y col., 2002, Cáncer Res, 62: 6246-54). La activación de la caspasa 3, puede causar la proteólisis de proteínas celulares clave, e inducir la fragmentación del ADN, conduciendo en última instancia a la apoptosis celular (Gerasimenko y col., 2002, J Cell Sci, 1 15: 485-97).
Neuroprotección frente a estrés oxidativo inducido por la combinación de rotenona (30 μΜ) y oligomicina (10 μΜ): a. Ejemplo 19a: Modelo de Pre-incubación:
Este diseño se plantea para estudiar en detalle el potencial efecto inductor de Nrf2 de los compuestos durante el periodo de pre-incubación, de forma que, al no estar presente conjuntamente con el tóxico eliminamos el potencial efecto secuestrador de radicales libres que presumiblemente también poseen los compuestos. Para este estudio planteamos un protocolo en el que las células son pre-incubadas con cada uno de los derivados estudiados a la concentración 1 μΜ durante 24 h. Tras el periodo de pre-incubación, el medio se retiró y fue sustituido por medio de cultivo con la mezcla de tóxicos rotenona/oligomicina-A, a las concentraciones de 30 μΜ y 10 μΜ respectivamente. Este diseño se plantea para estudiar en detalle el potencial efecto inductor de Nrf2 de los compuestos durante el periodo de pre-incubación.
En todos los ensayos farmacológicos se utilizó un control positivo como comparación y para evaluar la bondad del método empleado. En el todos los experimentos se utilizó melatonina (1 μΜ) que ha demostrado capacidad neuroprotectora en diversos modelos de estrés oxidativo, incluido el modelo de rotenona/oligomicina.
Los resultados obtenidos para los compuestos descritos como compuestos 1 a 16 que se muestran en la Tabla 3, vienen expresados en porcentaje de supervivencia celular y en porcentaje de la actividad neuroprotectora.
Tabla 3
Porcentaje de protección neuronal producido por los compuestos de la invención y melatonina, a la concentración de 1 μΜ. Los datos se expresan como la media ± E.E. de al menos tres experimentos por triplicado, realizados con tres lotes distintos de células.
Figure imgf000044_0001
b. Ejemplo 19b: Modelo de Pre- y co-incubación:
En este modelo, se realizó una pre-incubación de 24 h con los compuestos sintetizados a una concentración de 1 μΜ y una co-incubación de 24 h de estos en presencia rotenona/oligomicina A (30 μΜ/10 μΜ). Transcurridas 24h, la viabilidad celular fue evaluada por el método de la reducción de MTT. Con este protocolo se obtiene información sobre todas las potenciales actividades biológicas presentes en la estructura objeto de estudio.
Tabla 4
Porcentaje de protección neuronal producido por los compuestos de la invención y melatonina, a la concentración de 1 μΜ. Los datos se expresan como la media ± E.E. de al menos tres experimentos por triplicado, realizados con tres lotes distintos de células.
Figure imgf000045_0001
Al estar presente el fármaco durante las 24 horas previas a la incubación del tóxico, éste es capaz de mostrar su capacidad inductora del factor Nrf2 favoreciendo así la supervivencia celular. Además, también está presente a la vez que exponemos las células al estímulo tóxico, la mezcla de rotenona/oligomicina A que provoca la aparición de una gran cantidad de radicales libres en el interior celular. Estos radicales dañan la célula e inducen la apoptosis celular. Cuando el compuesto está presente durante esta etapa puede mostrar, además, su carácter secuestrador de radicales libres. Los porcentajes de supervivencia y protección se resumen en la Tabla 4. Ejemplo 19c: Neuroprotección frente a estrés oxidativo inducido por menadiona:
Con el fin de determinar la capacidad neuroprotectora en otro modelo de estrés oxidativo, seleccionamos como tóxico menadiona. Este compuesto es una cetona aromática policíclica ( 1 ,4-naftoquinona) que tiene la capacidad de generar radicales libres intracelulares en múltiples sitios a través de reacciones radicálicas redox en cadena vía activación de NADPH/quinona oxidasa. También es capaz de inducir fragmentación de ADN y depletar a la célula del antioxidante natural glutatión de forma rápida. La menadiona induce apoptosis a través de la regulación negativa de ERK y JNK, seguido por la activación de caspasa 3 y la ruptura de la ADP-ribosa polimerasa (PARP).
Los estudios de neuroprotección frente a menadiona han sido diseñados, de igual forma que en el caso anterior, con pre- y co-incubación. Las células de neuroblastoma humano SH-SY5Y fueron pre-incubadas con cada uno de los compuestos a la concentración de 1 μΜ durante 24 h, transcurridas las cuales el medio fue sustituido por medio fresco con menadiona a la concentración de 8 μΜ y cada uno de los compuestos (1 μΜ) durante 24 h más. Finalmente, la viabilidad celular fue medida mediante la técnica de reducción de MTT.
Tabla 5
Porcentaje de protección neuronal producido por los compuestos de la invención y melatonina, a la concentración de 1 μΜ. Los datos se expresan como la media ± E.E. de al menos tres experimentos por triplicado, realizados con tres lotes distintos de células.
Figure imgf000047_0001
Ejemplo 20
Propiedades toxicológicas de los compuestos objeto de esta invención
En general, los compuestos con capacidad inductora del factor de transcripción Nrf2 podrían presentar efecto hepatotóxico, debido al carácter electrófilo que, generalmente, los caracteriza. Los derivados objeto de esta invención fueron diseñados para evitar esta toxicidad y mejorar su perfil de seguridad. El hígado juega un papel esencial en el metabolismo de compuestos endógenos y exógenos. Los hepatocitos captan estos compuestos y tras metabol izarlos, son eliminados por distintas vías. Los compuestos metabolizados, suelen presentar menos actividad farmacológica y menor toxicidad que los correspondientes principios activos. Sin embargo, en determinados casos, los principios activos o sus correspondientes metabolitos pueden resultar tóxicos para los hepatocitos. La toxicidad hepática es una de las principales causas para la retirada de fármacos de los estudios preclínicos. La línea celular HepG2 muestra la mayoría de las características genotípicas y fenotípicas de las células hepáticas normales, y poseen las funciones típicas de las células hepáticas humanas. Además, estas células han sido definidas por la EMA (European Medicines Agency) como modelo de hepatoxicidad por medida de la inducción de apoptosis y/o supervivencia celular. Por tanto, se evaluó el perfil de seguridad de los compuestos objeto de la presente invención en la línea celular de hepatocarcinoma HepG2. Las células HepG2 se cultivaron en flask T75 usando como medio de cultivo EMEM suplementado con aminoácidos no esenciales, 10 % de suero fetal bovino, 50 unidades/mL de penicilina y 50 μg/mL de estreptomicina (reactivos de GIBCO, Madrid, España). Los cultivos se mantuvieron en un incubador con una mezcla de gases de O2/CO2 (95/5 %) a 37°C con atmósfera húmeda haciendo pases 1 :2 dos veces por semana cuando llegaban a confluencia del 90%. Todos los experimentos se realizaron en células que estaban entre los pases 5 y 15. Para los experimentos, las células se cultivaron en placas de 96 pocilios a una densidad de 4x104 células/pocilio en 200 de medio de cultivo. Tras 24 h en cultivo, el medio de mantenimiento se retiró y se sustituyó por 100 de la correspondiente disolución de los compuestos objeto de la invención en medio de cultivo a las concentraciones deseadas (1, 10, 30 y 100 μΜ). Los compuestos fueron estudiados por triplicado, incluyendo en cada experimento 3 pocilios sin tratamiento, que fue considerado el 100 % de viabilidad (condiciones básales). Tras 24 h de incubación con los tratamientos, la supervivencia fue evaluada mediante el método de reducción de MTT. Con objeto de estudiar su perfil de seguridad más a fondo, también se evaluó su efecto sobre las células usadas para los experimentos de neuroprotección, la línea celular de neuroblastoma humano SH-SY5Y. Los métodos de mantenimiento y cultivo de esta línea celular han sido descritos anteriormente. Para los experimentos de toxicidad, las células SH-SY5Y fueron cultivadas en placas de 96 pocilios a la densidad de 6x104 células/pocilio. Las condiciones experimentales fueron las mismas que las utilizadas para el estudio de toxicidad en las células HepG2.
Tabla 6
DL50 de los compuestos de la invención, medida como reducción viabilidad celular en la línea de hepatocarcinoma HepG2 y en la línea neuronal SH-SY5Y. Los datos se expresan como la media ± E.E. de al menos 3 experimentos por triplicado, realizados con 3 lotes distintos de células.
Figure imgf000049_0001
Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 6 expresados como la dosis letal 50 (DL5o), o concentración necesaria para reducir un 50% la viabilidad de las condiciones básales (sin tratamiento) medida por el método de la reducción de MTT. En general, todos los compuestos mostraron baja toxicidad en la línea de neuroblastoma humano SH-SY5Y. Por otra parte, ninguno de ellos mostró toxicidad en la línea de hepatocarcinoma HepG2, por lo que los compuestos objeto de esta invención, mostrarían una baja o nula hepatoxicidad.

Claims

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula (I)
Figure imgf000051_0001
donde
R se selecciona del grupo consistente en:
- alquilo(C1 -C6) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; cicloalquilo(C3-C6); alcoxilo(C1-6 ); cicloalcoxilo(C3-C6); ciano y nitro; o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)mO-, -(CH2)P-, o - CH=CH-CH=CH-; o
- fenilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor; cloro; bromo; alquilo(C1-6 ) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; cicloalquilo(C3-C6); alcoxilo(C1 - C6); cicloalcoxilo(C3-C6); ciano y nitro; o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)mO-, -(CH2)P-, o -CH=CH-CH=CH-; y/o un grupo heteroarilo seleccionado entre 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 3- piridazinilo, 4-piridazinilo, 2-pirimidinilo, 4-pirimidinilo, 5-pirimidinilo, 2- pirazinilo, 3-pirazinilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5- tiazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 3-isotiazolilo, 4- isotiazolilo, 5-isotiazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, 3-pirazolilo, 4- pirazolilo, l ,2,3-oxadiazol-4-ilo, 1,2,3-oxadiazol-5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3- ilo, 1,2,4-oxadiazol-5-ilo, 1,2,5-oxadiazol-3-ilo, 1,3,4-oxadiazol-2-ilo, 1,2,3-tiadiazol-4-ilo, 1,2,3-tiadiazol-5-ilo, 1,2,4-tiadiazol-3-ilo, 1,2,4- tiadiazol-5-ilo, 1,2,5-tiadiazol-3-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2-ilo, 1,2,3-triazol-4- ilo, 1,2,4-triazol-3-ilo y 5-tetrazolilo, estando el grupo heteroarilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro; R1 y R2 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1 -C6), cicloalquilo(C3-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1 -C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano, nitro y carboxilato o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)qO-, -(CH2)r-, o - CH=CH-CH=CH-;
R3; Ri y R5 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-6 ), cicloalquilo(C3-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano, nitro y carboxilato o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)qO-, -(CH2)r-, o - CH=CH-CH=CH-;
R6 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro;
R7 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1 -C6), cicloalquilo(C3-C6), acetilo o fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-6 ), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -(CH2)S-, o -CH=CH-CH=CH-
R8 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), acetilo o fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1 -C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -(CH2)S-, o -CH=CH-CH=CH- o R7 = R8 de formula =C=S;
X se selecciona entre un átomo de oxígeno, un átomo de nitrógeno o un átomo de azufre, -SO- o SO2,
n es un número entero seleccionado entre 0, 1 ,
2,
3,
4 o 5;
sus sales, profármacos o solvatos,
Compuesto según la reivindicación 1, en el que
R se selecciona del grupo consistente en fenilo opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados independientemente entre flúor; cloro; alquilo(C1-6 ) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; alcoxilo(C1-6 ) y nitro; o un heterociclo opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados independientemente entre flúor; cloro; alquilo(Cl-Có); alcoxilo y nito.
R1 es hidrógeno;
R2 es hidrógeno;
R3 es hidrógeno;
R4 es hidrógeno;
R5 es hidrógeno;
R6 es hidrógeno;
R7 es acilo (C2)
Rs es hidrógeno; y
n es un entero seleccionado entre 0, 1 y 2; y
sus sales, profármacos o solvatos, preferentemente, sus sales farmacéuticamente aceptables..
Un compuesto según la reivindicación 1 , en el que
R es fenilo opcionalmente sustituido por un grupo seleccionado entre flúor; alquilo(CrC6) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; alcoxilo(C1-C6) y nitro;
R7 es acilo
R8 es hidrógeno; y
n es l ; y sus sales, profármacos o solvatos, preferentemente, sus sales farmacéuticamente aceptables.
Un compuesto según la reivindicación 1, en el que
R es fenilo opcionalmente sustituido por un grupo seleccionado entre flúor; alquilo(C1-C6) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; alcoxilo(C1-6 ) y nitro;
R7 = R8 es =C=S; y
n es 1 ; y
sus sales, profármacos o solvatos, preferentemente, sus sales farmacéuticamente aceptables.
5. Un compuesto según la reivindicación 3, seleccionado entre:
Cinamato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
(E)-3-(3-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-ilo (E)-3-(4-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (E)-3-(2-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (£T)-3-(4-clorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
(E)-3-(4-bromofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (E)-3-(4-fluorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
(E)-3-(3-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (E)-3-(4-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-ilo (E)-3-(2-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (E)-3-(4-metilfenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
(E)-3-(3,4-diclorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (E)-3-(4-nitrofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)- lH-indol-5-ilo
(E)-2-butenoato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo
(E)-3-(4-hidroxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5-ilo (E)-3-(4-hidroxi-3-metoxyfenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-lH-indol-5- ilo
6. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I)
Figure imgf000055_0001
donde
R se selecciona del grupo consistente en:
- alquilo(C1 -C6) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; cicloalquilo(C3-C6); alcoxilo(C1-C6); cicloalcoxilo(C3-C6); ciano y nitro; o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)mO-, -(CH2)P-, o - CH=CH-CH=CH-; o
fenilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor; cloro; bromo; alquilo(C1-6 ) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; cicloalquilo(C3-C6); alcoxilo(C1 - C6); cicloalcoxilo(C3-C6); ciano y nitro; o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)mO-, -(CH2)P-, o -CH=CH-CH=CH-; y/o un grupo heteroarilo seleccionado entre 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 3- piridazinilo, 4-piridazinilo, 2-pirimidinilo, 4-pirimidinilo, 5-pirimidinilo, 2- pirazinilo, 3-pirazinilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5- tiazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 3-isotiazolilo, 4- isotiazolilo, 5-isotiazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, 3-pirazolilo, 4- pirazolilo, 1,2,3-oxadiazol-4-ilo, 1,2,3-oxadiazol-5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3- ilo, 1,2,4-oxadiazol-5-ilo, 1,2,5-oxadiazol-3-ilo, 1,3,4-oxadiazol-2-ilo, 1,2,3-tiadiazol-4-ilo, 1,2,3-tiadiazol-5-ilo, 1,2,4-tiadiazol-3-ilo, 1 ,2,4- tiadiazol-5-ilo, 1,2,5-tiadiazol-3-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2-ilo, 1,2,3-triazol-4- ilo, l ,2,4-triazol-3-ilo y 5-tetrazolilo, estando el grupo heteroarilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1 -C6), cicloalquilo(C3-C6), alcoxilo(C1-6 ), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro; R\ y R2 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-6 ), cicloalquilo(C3-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1 -C6), alcoxilo(C1-6 ), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano, nitro y carboxilato o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)qO-, -(CH2)r-, o - CH=CH-CH=CH-;
R3 R4 y Rs se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-6 ), cicloalquilo(C3-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-6 ), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano, nitro y carboxilato o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)qO-, -(CH2)r-, o - CH=CH-CH=CH-;
Ré se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1 -C6), cicloalquilo(C3-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-6 ), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro;
R7 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-6 ), cicloalquilo(C3-C6), acetilo o fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-6 ), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -(CH2)S-, o -CH=CH-CH=CH- R8 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-6 ), cicloalquilo(C3-C6), acetilo o fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -(CH2)S-, o -CH=CH-CH=:CH-;
o R7 = R8 de formula =C=S; X se selecciona entre un átomo de oxígeno, un átomo de nitrógeno o un átomo de azufre, -SO- o SO2
n es un número entero seleccionado entre 0, 1, 2, 3, 4 o 5;
sus sales, profármacos o solvatos,
que comprende hacer reaccionar un ácido de fórmula (II):
Figure imgf000057_0001
donde, R3, R4, R5, R6, R7, R8 y n tienen el significado indicado previamente.
7. Procedimiento según la reivindicación 6, en el que la reacción entre el compuesto de fórmula (II) y el compuesto de fórmula (III) se lleva a cabo en presencia de un catalizador seleccionado entre HATU, DCC o EDCI, en un disolvente seleccionado entre diclorometano, 1 ,2-dicloroetano, cloroformo y sus mezclas.
8. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal, profármaco o solvato, farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
9. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o de una sal, profármaco o solvato, farmacéuticamente aceptable del mismo, en la elaboración de una composición farmacéutica con efecto inductor de Nrf2 y/o antioxidante y/o neuroprotector y/o inmunomodulador.
10. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o de una sal, profármaco o solvato, farmacéuticamente aceptable del mismo, en la elaboración de una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa central y/o periférica o de una enfermedad isquémico-cerebral (ictus).
11. Uso según la reivindicación 9, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la enfermedad de Alzheimer.
12. Uso según la reivindicación 9, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la enfermedad de Parkinson.
13. Uso según la reivindicación 9, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la enfermedad de Huntington.
14. Uso según la reivindicación 9, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la esclerosis múltiple.
15. Uso según la reivindicación 9, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea el ictus cerebral.
16. .Uso según la reivindicación 16, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la esclerosis lateral amiotrófica.
17. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 8-16, en el que un compuesto de fórmula (I), o una sal, profármaco o solvato, farmacéuticamente aceptable del mismo se use para la fabricación de un medicamento para su administración por vía oral, parenteral, subcutánea, intramuscular, intravascular o rectal.
18. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 18, en el que dicho compuesto de fórmula (I), o una sal, profármaco o solvato, farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en una dosis diaria comprendida entre 0, 1 y 100 mg/kg peso corporal.
19. Uso según la reivindicación 19, en el que dicho compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en una dosis diaria comprendida entre 2 y 5 mg/kg peso corporal.
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