ES2570452B1

ES2570452B1 - Compuestos derivados de acrilato de 3-Alquilamino-1H-Indolilo y su uso en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas

Info

Publication number: ES2570452B1
Application number: ES201400810A
Authority: ES
Inventors: Rafael Leon Martinez; Izaskun BUENDÍA ABAITUA; Elisa NAVARRO GONZALEZ DE MESA; Patrycja MICHALSKA; Isabel GAMEIRO ROS; Alicia LOPEZ VIVO; Javier Egea Maíquez; Manuela García López; Antonio Garcia Garcia
Original assignee: Dns Neuroscience; Universidad Autonoma de Madrid; Fundacion para la Investigacion Biomedica del Hospital Universitario de la Princesa
Current assignee: Dns Neuroscience; Universidad Autonoma de Madrid; Fundacion para la Investigacion Biomedica del Hospital Universitario de la Princesa
Priority date: 2014-10-15
Filing date: 2014-10-15
Publication date: 2017-04-19
Anticipated expiration: 2034-10-15
Also published as: CA2964309A1; EP3208262A4; WO2016059269A8; WO2016059269A1; US20180105492A1; ES2570452A1; EP3208262A1

Abstract

La presente invención se refiere a los métodos de obtención de derivados de acrilato de 3-alquilamino-1H-indolilo con actividad inductora del factor de transcripción Nrf2, actividad secuestradora de radicales libres y capacidad neuroprotectora. Otro aspecto de la invención se refiere al uso de los derivados objeto de esta invención para el tratamiento de enfermedades en cuya patogénesis interviene el de estrés oxidativo o enfermedades que cursen con desregulación de la actividad de genes de fase dos activados por el factor Nrf2, como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, la esclerosis múltiple, el ictus o la esclerosis lateral amiotrófica.

Description

COMPUESTOS DERIVADOS DE ACRILATO DE 3-ALO UILAMINO-IH INDOLlLO y SU USO EN EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES NEURODEGENERATIVAS

5 SECTOR DE LA TÉCNICA

La presente invención se encuadra principalmente en el sector fannacéutico

con aplicaciones dirigidas a la prevención y/o tratamiento de enfermedades y

cualquier tipo de afección o daño que implique un proceso oxidativo y, en concreto,

lOen la identificación de compuestos químicos útiles en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas que cursan con un declive de la capacidad cognitiva o motora secundarias a degeneración neuronal, tal es como la enfermedad de Alzheimer (EA), enfermedad de Parkinson (EP), esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y enfermedad de Huntington (EH) o el ictus, así como para la pérdida de neuronas secundaria a

15 enfermedades autoinmunes como la esclerosis múltiple (EM).

ESTADO DE LA TÉCNICA

Las enfennedades neurodegenerativas serán el desafio más importante para la

20 salud de esta generación; de no encontrarse un medicamento que frene el avance de estas enfennedades, la situación socioeconómica podría ser insostenible en los próximos 30 años. La organización mundial de la salud ha alertado sobre el avance de este tipo de enfennedades y las sitúa como una prioridad absoluta a nivel mundial. Actualmente, se estima que el número de pacientes que sufre una enfermedad

25 neurodegenerativa a nivel mundial alcanza los 35,6 millones; este número se duplicará en 2030 y será más del triple, 115,4 millones, en 2050 (Organization, 2012: 112). Ex isten características comunes a todas las enfennedades neurodegenerativas, como son la presencia de un alto nivel de estrés oxidativo y la neuroinflamación crónica. En la mayoría de estas enfermedades aparecen agregados proteicos aberrantes, evidencia

30 de peroxidación lipídica, nitración proteica y oxidación del ADN (Di Cario y coL, 2012, Free Radie Res, 46: 1327-38). En base a estas observaciones, actualmente se

cree que el estrés oxidativo, la disfunción mitocondrial y la neuroinflamación juegan un papel primordial en e l desarrollo de estas patologías.

La producción de especies reactivas de oxigeno (ROS), o de radicales libres en general, aumenta progresivamente con la edad, siendo éste el mayor factor de riesgo en estas patologías. Por tanto, la producción de radicales libres y su eliminación han de estar estrechamente reguladas, evitando la acumulación masiva de éstos. Las neuronas tienen diversos mecanismos que actúan como sensores redox para identificar e iniciar la respuesta antioxidante con objeto de evitar la acumulación o liberación excesiva de especies pro-oxidantes. El elemento de respuesta antioxidante (ARE) es un elemento regulador que se encuentra en la región adyacente a 5'-del AON y precede a regiones que codifican un gran número de enzimas citoprotectoras y regula la expresión de éstas en respuesta a la presencia de estrés oxidativo (Rushmore y col., 1991 , J 8iol Chem, 266: 11632-9, Joshi y col., 2012, Recen! Po! CNS Drug Discov, 7: 218-29). En presencia de un estímulo tóxico, o por activación química, el factor de transcripción Nrf2 (del inglés "nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2") se libera del co-represor Keap 1 y se transloca al núcleo donde dimeriza con pequeñas proteínas Maf, para formar el complejo de activación-trans que se une a la secuencia ARE (Nguyen y col., 2004, Free Radie Biol Med, 37: 433-41). En consecuencia, la activación-trans de ARE inducida por Nrf2 coordina la expresión de una gran cantidad de genes que combaten el estrés oxidativo y su toxicidad en un gran número de tejidos y tipos celulares (Ramos-Gomez y col., 2001, Proc Natl Acad Se; U S A, 98: 3410-5, Enomoto y col., 2001, Toxicol Sci, 59: 169-77, Gao y col., 2004, Proe Natl Aead Sei U S A, 101: 1 0446-5 t , Lee y col., 2003, J 8iol Chem, 278: 37948-56). Los sistemas de enzimas antioxidantes dependientes de Nrf2 incluyen la regulación redox [superóxido dismutasa (SOO), catalasa (CAT), sulforedoxín (Srx), tioredoxín (Trx), peroxiredoxín (Prdx)], síntesis y metabolismo de glutatión [glutatión peroxidasa (Gpx), glutatión reductasa (GR), y-glutamina cisteína liga~ (GCL) y sintasa (GCS)], recicladu de quinonas [NAD(P)H quinona oxidoreductasa (NQOI)] y homeostasis del hierro [herno-oxigenasa-] (HO-I), ferritina].

Además de proteger frente a la toxicidad inducida por agentes químicos, carcinogénesis y envejecimiento (Thimmulappa y col., 2002, Caneer Res, 62: 5196203, Suh y col., 2004, Proc Natl Acad Sei U S A, 101: 3381-6, Zhang y col., 2004, Mol Caneer Ther, 3: 885·93), el factor Nrf2 inhibe directamente la apoptosis mediada por FAS (un sustrato para las proteasas Caspasa-3) y al efector de la supervivencia celular mediado por P-ERK (Ohtsubo y col., 1999, Ce" Dealh Differ, 6: 865-72, Kotlo y col., 2003, Oncogene, 22: 797-806, Cullinan y col., 2004, J Biol Chem, 279: 20108-17). Algunos genes antioxidantes tienen efectos más imponantes que otros en el cerebro dependiendo de la enfermedad, el entorno celular o el subtipo celular. En condiciones normales, la expresión de genes dependientes de la ruta Nrf2-ARE está menos activada en las neuronas que en los astrocitos (Lee y col., 2003, J Biol Chem,

278: 12029-38, Kraft y col., 2004, J Neurosci, 24: 1101-12); por ello, las neuronas dependen de los astrocilos para protegerse frente al estrés oxidativo (Tanaka y col., 1999, Glia, 28: 85-96).

La desregulación y/o la disfunción de la ruta Nrf2-ARE se ha correlacionado con la aparición y/o desarrollo de diversas patologías neurodegenerativas, entre las que se encuentran la EA, la EP, la EH y la EL A, o aquellas que cursan con pérdida neuronal como el ictus o autoinmunes como la esclerosis múltiple. Por tanto, la vía Nrf2-ARE se ha convertido en una importante diana terapéutica para el tratamiento de éstas (Joshi y col., 2012, Recenl Pal CNS Drug Discov, 7: ' 218-29) Y otras enfermedades.

Respecto al papel de la ruta Nrf2-ARE en la EA, en cerebros post-mortem de estos pacientes se ha observado una alta expresión de HO-1 en córtex temporal e hipocampo, en comparación con sujetos control (Schipper y col., 2006, Neurobiol Aging, 27: 252-61). Además, se observa una alta actividad de la enzima NQO I en astrocitos y neuronas, lo que demuestra un alto nivel de estrés oxidativo (Wang y col., 2000, Neurobiol Aging, 21: 525-3 1, Raina y col., 1999, Redox Rep, 4: 23-7). También se ha demostrado que en neuronas hipocampales de estos pacientes, la localización del factor Nrf2 es predominantemente cito plasmática (Raina y col., 1999, Redox Rep, 4: 23-7, Ramsey y col., 2007, J Neuropofhol Exp Neurol, 66: 75-85), a pesar del alto nivel de estrés oxidativo que se produce en esta enfermedad. Asimismo se ha demostrado que la manipulación de las rutas antioxidantes celulares endógenas se traduce en protección frente a la toxicidad neuronal inducida por el péptido p-amiloide

(A~) (Kanninen y col., 2008, Mol Cell Neurosci, 39: 302-13, Wruck y col. , 2008, Mol

Pharmacol, 73: 1785-95). Esws y otros resultados in vi/ro e in vivo indican que la ruta Nrt2-ARE es una diana terapéutica con gran potencial para el tratamiento de la EA.

RespeclO al papel de la ruta Nrt2-ARE en la EP, cabe destacar el alto nivel de estrés ox idativo que se produce en esta enfermedad, así como una marcada astrogliosis y microgliosis. En este caso, a pesar de que la localización del factor Nr(2 es predominantemente nuclear, no se observa sobreexpresión de los genes de fase 11 (Alam y col., 1997, J Nellrochem, 69: 1196-203, Clements y col., 2006, Proc Natl Acad Sci U S A, 103: 15091-6). Por otro lado, existen diversos estudios in vitro e in vivo que demuestran que la inducción del factor Nrt2 ejerce efectos neuroprotectores freme a tóxicos que producen parkinsonismo, así corno en modelos transgénicos de la EP (Chen y col., 2009, Proc Natl Aead Sei U S A, 106: 2933-8, Innamorato y col., 2010, !'LoS One, 5: el 1838, Burton y col., 2006, Neur%xieology, 27: 1094-100, Rojo y col., 2010, Glia, 58: 588-98, Lastres-Becker y col., 2012, Hum Mol Gene/, 21: 3173-92),

Respecto al papel de la ruta Nr12-ARE en la EH, esta enfermedad se caracteriza por la presencia de estrés oxidativo y disfunción mitocondrial debido a defeclOs en los complejos de la cadena respiratoria 11, III Y IV. Ciertos modelos transgénicos de EH mostraron mejoría en los síntomas motores y mayor supervivencia tras ser tratados con inductores de Nrf2 (triterpenoides sintéticos) suministrados en la dieta. También se redujeron los marcadores de estrés oxidativo y la atrofia estriatal, característicos de esta enfermedad. Estos resultados sugieren que el uso de moléculas que modulan la ruta Nr:f2-ARE sería una estrategia terapéutica prometedora para el tratamiento de la EH.

RespeclO al papel de la ruta Nrf2-ARE en la ELA, el estrés oxidativo se ha señalado como uno de los mecanismos que más afecta a la evolución de la enfermedad. Cabe destacar los estudios que demuestran que la sobre-expresión del factor Nrf2 en astrocitos mutantes hSOD I G93A es capaz de revertir completamente la toxicidad en neurOnas motoras en un sistema de co-cultivo. Estas observaciones se demostraron también in vivo, ya que el cruce de ratOnes GFAP-Nrf2 (ratones que sobre-expresan este factor) con distintos modelos de ELA produjo un enlentecimiento en la aparición de la enfermedad y un aumento de la esperanza de vida. Asimismo, el tratamiento con compuestos inductores de Nrf2, una vez iniciados los síntomas de la enfermedad, también mostró una neuroprotección altamente significativa y una ralenlización de la progresión de la enfermedad. Por tanto, la activación del [actor Nrf2 es una estrategia terapéutica viable para la ELA.

Respecto al papel de la rula Nrf2-ARE en la EM, ésta se caracteriza por inflamación crónica de ciertos núcleos del sistema nervioso central, pérdida de la mielina que recubre los axones neuronales (desmielinización), pérdida axonal y la muerte de neuronas, oligodendrocitos y células gliales (O'Gorrnan y col., 2012, InI J Mol Sei, 13: 11718-52). Se ha demostrado que los inductores de la ruta Nrf2-ARE reducen la inflamación en la EM (Schirnrigk y col., 2006, Eur J Neurol, 13: 604-10, Lee y col., 2012, Inl J Mol Sei, 13: 11783-803), y disminuyen la activación de astrocitos tanto in vilro como in vivo (Scannevin y col., 2012, J Pharmacol Exp Ther,

341: 274-84). Estos compuestos también reducen la producción de citocinas proinflamatorias (Un y col., 2011 , ASN Neuro, 3) y la señal pro-inflamatoria secundaria a la activación de los astrocitos con lipopolisacárido (LPS). El tratamiento de esta enfermedad con inductores de la ruta Nrf2-ARE es una estrategia viable, como así lo demuestra la aprobación en 2013 del dimetil fumarato Cfecfidera®) para el tratamiento de la EM por la FDA (Food and Drug Administration).

En los documentos de patente W02008/136838, W02008/108825, W02009/036204, W0200911462 I 6, W02010/126605, W02010/107733, W02010/03671 1, W020101126605, W020 I 0/0467 1 O, W02011/0250300, W020111156889, W02012/116362, W020121145420, W020121149478, W02013/067036, W02013/132124, P2013/00667 se proponen distintas opciones de tratamiento de enfennedades neurodcgcncrativas basadas en uno O varios compuestos químicos y/o productos naturales cuya diana terapéutica es la inducción y/o modulación de la ruta Nrf2-ARE como estrategia neuroprotcctora e inmunomoduladora.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a compuestos con estructura acrilato de 3-alquilaminolH-indolilo con capacidad inductora de la ruta Nrf2-ARE mediante la liberación del factor de transcripción Nrf2 de la proteína Keapl y posterior translocación al núcleo con los efectos antioxidantes, anti-ínOamatorios y neuroprotectores que esto conlleva. Estos compuestos presentan nueva sustitución que incluye nuevas actividades y además, la actividad inductora de Nrf2 depende de estas nuevas sustituciones. En la presente invención se describe por primera vez la inclusión de capacidad inductora del factor Nrf2 en combinación con capacidad antioxidante gracias a las modificaciones estructurales realizadas para dar lugar a un nuevo compuesto que incluye estas actividades. Ademá'i, los compuestos objeto de la presente invención poseen capacidad secuestradora de radicales libres y capacidad neuroprOlcclOra, por lo que pueden ser potencialmente útiles en la prevención y/o el tratamiento de enfennedades neurodegenerativas. Más concretamente, pueden ser útiles en la prevención y/o tratamiento de enfennedades neurodegenerativas que cursan con elevación de estrés oxidativo y/o disfunción mitocondrial. Por otrO lado, también pueden ser útiles en el tratamiento de enfennedades autoinrnunes que cursen con un cuadro inflamatorio crónico o en la enfennedad isquémica cerebral.

Estos nuevos derivados presentan, entre otras, las siguientes características:

i): capacidad de inducir la liberación del factor de transcripción Nrt2,

ii): capacidad secuestradora de radicales libres,

¡ii): capacidad neuroprotectora frente a distintos estímulos tóxicos relacionados

con el incremento del estrés oxidativo

Por lo tanto, en un a<>pecto, la invención se refiere con un compuesto de fónnula (1) (definido más adelante), sus sales, profármacos O solvatos. Dicho compuesto de fónnula (1) puede ser utilizado en el tratamiento de enfennedades neurodegenerativas o enfennedades autoinmunes que cursen con inflamación o en enfennedades isquémico-cerebrales.

En otro aspecto, la invención describe un procedimiento para la obtención de dicho compuesto de fónnula (1), sus sales, profánnacos o solvatos.

En otro aspecto, la invención incluye una composición fannacéutica que comprende un compuesto de fórmula (1), o una sal, un profánnaco O un solvato fannacéuticamente aceptable del mismo.

En otro aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (1), O una sal, un profármaco o un solvato del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto, la invención describe un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (1), o una salo solvato del mismo.

En otro aspecto, la invención protege el uso de dicho compuesto de fórmula (1), o sus sales, pro fármacos o solvatos, farmacéuticamente aceptables, en la elaboración de una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas o enfermedades autoinmunes que cursen con inflamación, o en enfennedades isquémico-cerebrales.

En el contexto de la presente invención, los siguientes términos tienen el significado detallado a continuación: Cuando se usa el término '''seleccionados independientemente", los sustituyentes a los que se refiere (e.j. grupos R, como los grupos R 1, R2, R),~, Rs, ~

o R7 o X O variables como IOn") los grupos pueden ser idénticos o diferentes, o en su caso cuando sea especificado.

El término «alquilo CI -6" se refiere a un radical de cadena alifática lineal o ramificada que tiene entre l y 6, preferiblemente entre 1 y 3 (""alquilo Cl .]") , átomos de carbono y que está unido al resto de la molécula mediante un enlace sencillo. Este término incluye, por ejemplo y en un sentido no limitativo, metilo, etilo, n-propilo, ipropilo, n-butilo, t-butilo, n-pentilo, etc.

El término "'haloalquilo CI -6" se refiere a un radical alquilo tal y como se ha definido previamente donde al menos un átomo de hidrógeno ha sido reemplazado por un átomo de halógeno. Este término incluye, por ejemplo, y en un sentido no limitativo, fluorometilo, bromometilo, yodometilo, difluorometilo, trifluorometilo, 2

fluoroetilo,: 2-cloroetilo, I-fluoroetilo, pentafluoroetilo, l-fluoropropilo, 2

doropropilo,: 3-fl uoropropilo, 3-cloropropilo, l-fluorobutilo, l-clorobutilo, 4

fluorobutilo. Preferiblemente, haloalquilo es CF3.

El término "'alcoxilo Cl-6" se refiere a un grupo -O-alquilo, donde alquilo es como se ha definido previanlente. Preferiblemente alcoxilo es metoxilo.

El término "'halógeno" se refiere a bromo, cloro, yodo o flúor. Preferiblemente, halógeno es flúor o cloro o bromo.

El término "cicloalquilo" se refiere a un grupo alifático mono o poli cíclico saturado o parcialmente saturado que tiene entre 3 y 10, preferiblemente entre 3 y 6 átomos de carbono que está unido al resto de la molécula por medio de un enlace sencillo, incluyendo por ejemplo, y en un sentido no limitativo, ciclopropilo, ciclohutilo, ciclohexilo, ciclopentilo, etc.

El término "aTilo" se refiere a un grupo aromático que tiene entre 6 y 18, preferiblemente entre 6 y 10 átomos de carhono, que comprende 1, 2 Ó 3 núcleos aromáticos, unidos por medio de un enlace carbono-carbono o condensados, incluyendo por ejemplo y en un sentido no limitativo fenilo, naftilo, difenilo, indenilo, fenantrilo, etc.

El término "heterociclo" se refiere a un radical de anillo de 3 a 10 miembros estable, preferiblemente un anillo de 5 ó 6 miembros, que consiste en átomos de carbono y desde uno hasta cinco heteroátomos seleccionados del grupo formado por nitrógeno, oxígeno y azufre y que puede estar parcial o totalmente saturado o puede ser aromático ("heteroarilo"). Para los fines de esta invención, el heterociclo puede ser un sistema de anillo monocíclico, bicíclico o tri cíclico, que puede incluir sistemas de anillos condensados. Los ejemplos de tales heterociclos incluyen, pero no se limitan a, pirrolidina, piperidina, piperazina, morfolina, tetrahidrofurano, bencimidazol, benzotiazol, furano, pirrol, piridina, pirimidina, isotiazol, imidazol, indol, purina, quinolina, tiadizol.

Tal como se entiende en esta área técnica, puede haber un cierto grado de sustitución en los radicales definidos anteriormente. Las referencias del presente documento con respecto a los grupos sustituidos indican que el radical especificado puede estar sustituido en una o más posiciones disponibles con uno o más sustituyentes. Dichos sustituyentes incluyen, por ejemplo y en un sentido no limitativo, alquilo C].(j, alquenilo Cz.(j, alquinilo C2_6, cicloalquilo, arilo, heterocíclico, halógeno, CN, NO" CF" -N(R,)(Rb), -ORe, -SR" -C(O)R, -C(O)OR" C(O)N(Rg)(Rh), -OC(O)R¡; en los que R" Rb, R" R" R" Rr, Rg, Rh Y R¡ se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo, CI-C6. arilo, heterocíclico y trifluorometilo.

Un aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (1):

, .--,: , R,wRe

'-R1'RyYX R, O R,: R, '" h ~n', " Re' N H

Re

(1)

donde

5: R se selecciona del grupo consistente en:

alquilo(C1-Có): opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de

halógeno seleccionado: entre flúor, cloro y bromo; cicloalqui lo(C)-Có);

alcoxilo(CI-C6); cicloalcoxil o(C)-Có) ;: ciano y nitro; o bien dos grupos

pueden: formar conjuntamente un grupo -O(CHÚmO-, -(Cl-b)p-, o -

10: CH~CH-CH~CH-; o

fenilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados

independientemente: entre flúor; cloro; bromo; alquilo(C1-Có)

opcionalmente: sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno

seleccionado entre flúor, cloro y bromo~ cicloalquilo(C)-C6); alcoxilo(C I

15: Có); cicloalcoxilo(C)-Có); ciano y nitro; o bien dos grupos pueden formar

conjuntamente un grupo -O(CH' )mO-, -(CH,),-, o -CH~CH-CH~CH-; y/o

un grupo heteroarilo seleccionado entre 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 3

piridazinilo, 4-piridazi nilo, 2-pirimidinilo, 4-pirimidinilo, 5-pirimidinilo, 2

pirazinil o, 3-pirazinilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo,

20: 3-tienilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tíazolilo, 5

tiazolilo,: 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 3-isotiazolilo, 4

isotiazolilo,: 5-isotiazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, 3-pirazolilo, 4

pirazolilo, 1,2,3-oxadiazol-4-i1o,: 1,2,3-oxadiazol-5-il o, 1,2,4-oxadiazol-3

¡lo,: 1,2,4-oxadiazol-5-il o, 1,2,5-oxadiazol-3-ilo, 1,3,4-oxadiazol-2-ilo,

25: 1,2,3-tiadiazol-4-ilo, 1,2,3-tiadiazol-5-ilo, 1 ,2,4-tiadiazol-3-ilo, 1,2,4

tiadiazol-5-ilo,: 1,2,5-tiadiazol-3-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2-ilo, 1,2,3-triazol-4

ilo,: 1,2,4-triazol-3-ilo y 5-tetrazolilo, estando el grupo heteroarilo

opcionalmente: sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados

independientemente entre flúor, cloro, bromo. alquilo(C 1-C6) ,

cicloalquilo(C)-C6), alcoxilo(C 1-C6), cicloalcoxilo(C)-C6), ciano y nitro;

RI y R2 se seleccionan del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C 1-C6), cicloalquilo(Cy C6) y [enilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C I-C6), alcoxilo(C,-C,), eicloalquilo(C, -C,), eieloaleoxilo(C,-C,), ciano, nitro y carboxi lato o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)qO-, -(CHür-, o CH~CH-CH~CH-;

R3. ~y Rs se seleccionan del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C 1-C6) , cic1oalquilo(C)-Có) y [enilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(Cl-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C)-C6), cicloalcoxilo(C)-C6), ciano, nitro y carboxilato o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CHÜqO-, -(CH2)r-, o CH~nl-CH~CH-;

R6 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C 1-C6), cicloalquilo(C)-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno. dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(Cl-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C)-C6), cicloalcoxilo(C)-C6), ciano y nitro;

R7 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C 1-C6), cicloalquilo(C)-C6), acetilo o fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C] -C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C)-C6), cicloalcoxilo(C)-C6), ciano y nitro o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -(CHÜs-, o -CH=CH-CH=CH-

Rg se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C 1-C6), cicloalquilo(C)-C6), acetilo o fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C]-C6), alcoxilo(C j -C6), cicloalquilo(C)-C6), cicloalcoxilo(CJ-C6), ciano y nitro o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -(CH2)s-, o -CH=CH-CH=CH

o R, ~ R, de formula ~C~S; X se selecciona entre un átomo de oxígeno, un átomo de nitrógeno o un átomo

de azufre, -SO-o S02, n es un número entero seleccionado entre O, 1, 2, 3, 4 o 5;

y sus sales, preferiblemente sales fannacéuticamente aceptables, profánnacos o solvatos.

El término "fannacéuticamente aceptable" se refiere, preferiblemente, a composiciones y entidades moleculares que son fisiológicamente tolerables y no producen, normalmente, una reacción alérgica o una reacción no favorable similar, tal como trastornos gástricos, mareo y similares, cuando se administra a un ser humano o animal. La expresión "fannacéuticamente aceptable" significa que está aprobado por una agencia reguladora como la agencia europea del medicamento o la agencia reguladora de EEUU, o que está incluido en la Fannacopea Estadounidense u otra farmacopea reconocida de modo general para su uso en animales y, de manera más particular, en seres humanos.

El ténnino "sales" tal como aquí se utiliza se refiere a cualquier sal del compuesto de fónnula (1) que, cuando se administra a un sujeto, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) dicho compuesto de fónnula (I). El ténnino "sujeto" incluye a cualquier animal, por ejemplo, un mamífero, incluyendo a los seres humanos. La preparación de dichas sales puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los técnicos en la materia. A modo ilustrativo, una sal de un compuesto de fónnula (1) puede sintetizarse mediante métodos convencionales a partir de un compuesto de fónnula (1) que contiene un resto básico. Generalmente, tales sales se preparan, por ejemplo, haciendo reaccionar las fonnas de base libre de los compuestos de fónnula (I) con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico o en una mezcla de agua y un disolvente orgánico. En general, se prefieren medios no acuosos tales como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo.

En una realización particular, dichas sales del compuesto de fónnula (1) son sales fannacéuticamente aceptables, es decir, sales que pueden ser administradas a un sujeto y proporcionan un compuesto dc fónnula (1) en un compartimcnto biológico de dicho individuo. Entre dichas sales fannacéuticamente aceptables se incluyen las sales de adición de ácido, por ejemplo, las sales fonnadas a partir de ácidos orgánicos e inorgánicos, tales como bromhídrico, clorhídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, acético, adípico, aspártico, bencenosulfónico, benzoico, cítrico, etanosulfónico, fónnico, fumárico, glutámico, láctico, maleico. málico, malónico, mandélico, metansulfónico, 1,S-naftalen-disulfónico, oxálico, piválico, propiónico, p-toluensulfónico, succínico, tartárico y similares, así como las sales metálicas, estando seleccionado el metal entre sodio, potasio, litio, calcio, magnesio, zinc, aluminio y similares, o las sales amónicas,

o una sal formada a partir de bases orgánicas, como 2-amino-l-butanol, 2-amino-2etil-I ,3-propanodiol, 2-amino-2-meti l-1 ,3-propanodiol, benzatina, bencildirnetilamina, c1oroprocaína, colina, dibencilmetilamina, dietanolamina, diisopropanolamina, etilendiamina, dimetilestearamina, meglumina, 2-metil-2-amino-l-propanol, un monoamino-glicol, monoetanolamina, monoisopropanolamina, morfolina, N,Ndibencileti lendiamina, N ,N-dimetil-2 -amino-2-meti I-l-propanol, N,N-d imetilanilina, procaína, piridina, quinolina, t-butil-dimetilamina, trietanolamina, trietilamina, trihidroximetilaminometano, triisopropanolamina, trimetilamina y similares, y sales con aminoácidos tales corno glicina, lisina, arginina, taurina, histidina, alanina, valina, cisteína y similares.

En otra realización particular, algunos grupos sustituyentes pueden añadirse a los compuestos objeto de la invención, para hacerlos susceptibles de formación de sales. Por ejemplo, los grupos funcionales ácidos pueden formar sales estables con cationes y grupos funcionales básicos que forman sales estables con ácidos. Generalmente, debe existir una diferencia de al menos tres unidades en los valores de pKa del compuesto que se usa como fármaco y el contraión. Para compuestos derivados que son bases muy débiles, la elección para formar sales es preferiblemente un ácido fuerte, como el ácido clorhídrico (pKa = -6, 1), sulfúrico (pKal = -3,0, pKa2 = 1,96), o metanosulfónico (pKa = -1,2) para asegurar la protonación del compuesto. Los compuestos que son más básicos pueden formar sales con ácidos débiles, como el ácido fosfórico (pI<" = 2,15, pK", = 7,2, pK" = 12,38), tartárico (pI<, = 2,93), acético (pKa = 4,76), Y benzoico (pKa = 4,2). Para compuestos que sean ácidos muy débiles, se prefieren cationes fuertemente básicos, como sodio (pKa = 14,8), potasio (PKa = 16,0) o calcio (PKa = 12,9), para asegurar la desprotonación del compuesto. Compuestos que son más ácidos pueden formar sales con cationes más débiles, como zinc (pK, = 8,96), colina (pK, = 18,9) Y ditanolamina (pK, = 9,65). Grupos funcionales representativos para la fonnación de sales estables listadas en función del valor relativo de su fuerza ácido/base incluyen, pero no limitan, ácido sulfónico (pKal = -1 ,2, pK", = -0,7), acido carboxilico (pK, = -4,7) e imida (pK, = 8,2).

En otra realización particular, dichas sales del compuesto de fórmula (1) son sales fannacéuticamente no aceptables, las cuales pueden ser útiles en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula (l), o de sus profármacos o solvatos.

5 El término "profármaco" se emplea, en esta descripción, en el sentido más amplio, e incluye a cualquier compuesto derivado de un compuesto de fórmula (1) que, cuando se administra a un sujeto es capaz de proporcionar, directa O indirectamente, un compuesto de fórmula (1), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en dicho sujeto. Ventajosamente, dicho derivado es un compues to que

10 aumenta la biodisponibilidad del compuesto de fórmula (1) cuando se administra a un sujeto (por ejemplo, haciendo que un compuesto de fórmula (1) administrado por vía oral se absorba más fácilmente por la sangre), o que potencia la liberación de un compuesto de fórmula (1) en un compartimento biológico (por ejemplo, el cerebro o el sistema linfático) con relación al compuesto original (sin derivatizar). La naturaleza de

15 dicho derivado nO es crítica siempre y cuando pueda ser administrado a un sujeto y proporcione un compuesto de formula (1) en un compartimento biológico de dicho sujeto. Tales derivados serán evidentes para los técnicos en la materia, e incluyen, dependiendo de los grupos funcionales presentes en la molécula y sin limitación, los siguientes derivados de los compuestos presentes: ésteres, ésteres de aminoácido,

20 ésteres de fosfato, ésteres de sulfonato de sales metálicas, carbamatos y amidas. La preparación de dichos profárrnacos puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los técnicos en la materia. Dichos métodos se elegirán en función de la derivatización a introducir en el compuesto de fórmula (l). Ejemplos ilustrativos de algunos métodos para producir profármacos de compuestos activos

25 pueden encontrarse, por ejemplo, en Krogsgaard-Larsen el al. "Textbook of Drug design and Discovery" Taylor & Francis (April 2002). En una reaJización particular, dicho profármaco es una amida y su obtención se lleva a cabo por métodos convencionales de formación de amidas, por ejemplo, haciendo reaccionar el compuesto de fórmula (1 ) como base libre con un ácido orgánico o con un derivado de

30 ácido orgánico apropiado, por ejemplo, con un ácido orgánico farmacéuticamente aceptable tal como acético, adípico, aspártico, bencenosulfónico, benzoico, cítrico, etanosulfónico, fórmico, fumárico, glutámico, láctico, maleico, málico, malónico,

mandélico, metansulfónico, 1,5-naftalen-disulfónico, oxálico, piválico, propiónico, ptoluensulfónico, succínico, tartárico y similares.

Los compuestos de fórmula (I), o sus sales, pueden estar en forma cristalina bien como compuestos libres o bien como solvatos, estando ambas formas incluidas dentro del ámbito de la presente invención. El ténnino "solvato" tal como aquí se utiliza incluye cualquier compuesto formado por combinación de moléculas de un disolvente con moléculas o iones de un compuesto de fórmula (1) o de una sal del mismo; dicho disolvente puede ser un disolvente orgánico, por ejemplo, un alcohol, o un disolvente acuoso, por ejemplo, agua, en cuyo caso el solvato se denomina "hid rato",

En una realización particular, dicho solvato es un solvato fannacéuticamente aceptable, es decir, que puede ser administrado a un sujeto y proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de fórmula (1) o una sal del mismo. En otra realización particular, dicho solvato no es farmacéuticamente aceptable pero puede utilizarse en la preparación de solvatos fannacéuticamente aceptables del compuesto de fónnula (1) o de sus sales.

La preparación de dichos solvatos puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los técnicos en la materia, poniendo en contacto el compuesto de fórmula (1) o una sal del mismo con el disolvente apropiado.

En una realización particular, los compuestos de fórmula (1) o sus sales, profánnacos o solvatos, estarán, preferentemente, en una fonna pura o fannacéuticamente aceptable. Una forma fannacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos fannacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo materiales considerados tóxicos a los niveles normales de dosificación. El nivel de pureza de los compuestos será preferentemente superior al 50%, más preferentemente igualo superior al 70%, aún más preferentemente igualo superior al 90%. En una n.:alizadón preferida, la pureza del compuesto de fómlula (1), o sus sales, profámlacos

o solvatos, será superior al 95%.

Los compuestos de la presente invención representados por la fórmula (1) descrita anterionnente pueden incluir enantiómeros dependiendo de la presencia de centros quirales o isómeros geométricos, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples (por ejemplo Z, E). Los isómeros geométricos, enantiómeros o diastereoisómeros de los compuestos de fónnula (1) y mezclas de los mismos se encuentran dentro del alcance de la presente invención.

En otra realización particular. los compuestos sujetos a esta invención dan composiciones fannacéuticamente aceptables que comprenden los compuestos de fónnula r con un portador fannacéuticamente aceptable, por ejemplo, composición fannacéutica que incluye uno o más compuestos de fónnula 1, solos o en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales como una mezcla con excipientes fannacéuticamente aceptables.

El ténnino "excipiente farmacéuticamente aceptable" significa uno o más sólidos, o líquidos compatibles, diluyentes o sustancias de encapsulación que sean susceptibles de ser administradas a un sujeto.

En una realización particular preferida, la invención se refiere a compuestos de

fórmula (1) en los que: R se selecciona del grupo comprende un anillo aromático fenilo opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, alquilo(C 1-C6), opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; alcoxilo(C1-C6) y nitro; o un heterociclo opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, alquilo(C I-C6), alcoxilo y nitro. Rl es hidrógeno; R2 es hidrógeno; R3 es hidrógeno; ~es hidrógeno; Rs es hidrógeno; ~es hidrógeno; R, es acilo (e2) Rg es hidrógeno; y n es un entero seleccionado entre O, I Y 2; Y

!-iUS sales, profánnacos o solvatos, preferentemente, sus sales fannacéuticamente aceptables. En otra realización particular preferida, la invención se refiere a compuestos de fónnula (1) en los que:

R es fenilo opcionalmente sustituido por un grupo seleccionado entre flúor; alquilo(CI-Có) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; alcoxilo(C1-Có) y nitro;

R7 es acilo

Rs es hidrógeno; y

nesl;y sus sales, profármacos o solvatos, preferentemente, sus sales farmacéuticamente aceptables. En otra realización particular preferida, la invención se refiere a compuestos de fónnula (1) en los que;

R es fenilo opcionalmente sustituido por un grupo seleccionado entre flúor; alquilo(C1-Có) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; alcoxilo(C1-Có) y nitro;

R) ~ R, es ~C~S; y

n es 1; y sus sales, profármacos o solvatos, preferentemente, sus sales fannacéuticamente aceptables.

Compuestos de fónnula (1) particulannente preferidos de la presente invención son los siguientes:

•: Cinamato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•: (/:..)-3-(3-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•: (/:..)-3-(4-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•: (E)-3-(2-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•: (E)-3-(4-clorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•: (E)-3-(4-bromofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•: (E)-3-(4-fluorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•: (E)-3-(3-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•: (Ej-3-(4-( trifluorometil)feni I)-acrilato de 3-(2-acetamidoctil)-1 H-indol-5-ilo

•: (E)-3-(2-( trifluorometil )fenil)-acrilato de 3-(2 -acctamidoetil)-I H-indol-5-ilo

•: (E)-3-(4-metilfenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-IH-indol-5-ilo

•: (E)-3-(3,4-diclorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•: (6)-3-(4-nitrofeniJ)-acriJato de 3-(2-acetamidoetiJ)-J H-indoJ-5-iJo

•: (E)-2-butenoato de 3-(2-acetarnidoetil)-IH-indol-S-ilo

•: (E)-3-(4-hidroxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-S-ilo

• (E)-3-(4-hidroxi-3-metoxyfenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-55 ¡lo

Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención se pueden obtener

mediante un procedimiento que comprende hacer reaccionar un ácido carboxílico a ,~

¡nsaturado de fónnula (n)

(11)

donde R. R1 Y R2 tienen el significado ya indicado, con un alquilamido-S-X indol de fónnula (III): 15

R,

N-Rs

R,

~"-

X

:

R.

R,

R.

(111)

donde R), R.,¡, Rs, Ró y R7. Rg X Y n tienen el significado ya indicado.

20 Dicha reacción se lleva a cabo en un disolvente inerte apropiado, a la temperatura adecuada en presencia de un catalizador. En una realización particular, dicha reacción se lleva a cabo a temperatura ambiente, aproximadamente. En otra realización particular, dicha reacción se lleva a cabo en presencia de I-[bis(dimetiJamino )metiJen]-J H-I ,2,3-triazoJo[ 4,5-b ]piridinio-3-oxidhexafl uoro

25 fosfato (HATU), como catalizador y promotor. En otra realización particular, dicha reacción se ll eva a cabo en presencia de N,N' -diciclohexilcarbodiimida (DCe), como catalizador o promotor. En otra realización particular. dicha reacción se lleva a cabo en presencia de l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI) como catalizador y promotor. En otra realización particular, la reacción se lleva a cabo en un medio disolvente inerte, tal como el constituido por un hidrocarburo alifático halogenado tal como: diclorometano, 1,2-dic1oroelano, cloroformo, elC., o sus mezclas, resultando especialmente adecuado el diclorometano. Si se desea, el compuesto de fónnula (1) puede convertirse en una sal, pro fármaco o solvalo del mismo por métodos convencio nales como los mencionados previamente.

Por tanto, en olro aspecto, la presente invención describe un procedimiento para la obtención de un compuesto de fórmula (f) que comprende hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula (11) con un compuesto de fónnula (1 U).

Los compuestos de fórmula (11) son compuestos conocidos y pueden obtenerse comercialmente o bien se pueden preparar por métodos convencionales.

Los compuestos de fórmula (111) son también conocidos y pueden obtenerse comercialmente o bien pueden ser preparados por métodos convencionales (véase, por ejemplo, el apartado 1.1).

Los compuestos de fórmula (1) obtenidos por el procedimiento anterior, si se desea, pueden ser purificados por métodos convencionales, tales como cristalización o cromatografia.

Los compuestos de fórmula (1) de la presente invención presentan tanlo actividad inductora del factor Nrf2 como capacidad secuestradora de radicales libres, y potencial efecto inmunomodulador , estos derivados por lo que pueden ser utilizados en la prevención o terapia de enfermedades neurodegenerativas, ej., la EA, la EP, la ELA Y la EH, así como la pérdida de neuronas secundaria a enfermedades autoinmunes como la EM y/o en el tratamiento de otras enfermedades neurodegenerativas en las que produce pérdida de neuronas, como es el caso del accidente cerebrovascular (iClus), entre otras.

Para su administración a un sujeto en necesidad de tratamiento, los compuestos de fórmula (1) de la presente invención se administran convenientemente fonnulados con los excipientes adecuados para su administración por cualquier vía apropiada, por

ejemplo, por vía oral, parenteral, subcutánea, intramuscular o rectal, preferentemente por vía oral.

Por tanto, en otros aspectos, la invención incluye una composición farmacéutica, en adelante composición fannacéutica de la invención, que comprende un compuesto de fórmula (1), o una sal fannacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

En una realización particular, la composición farmacéutica de la invención se presenta en una forma farmacéutica de administración por vía oral, bien en forma sólida o líquida. Ejemplos ilustrativos de formas fannacéuticas de administración por vía oral incluyen comprimidos, cápsulas, granulados, soluciones, suspensiones, etc., para lo cual incluirán los excipientes farmacéuticamente aceptables apropiados, tales como aglutinantes, diluyentes, desintegrantes, lubrificantes, humectantes, etc., y pueden ser preparadas por métodos convencionales. La composición farmacéutica de la invención también puede ser adaptada para su administración parenteral (ej., vía intramuscular, intravenosa, etc.), en fonna de, por ejemplo, soluciones, suspensiones o productos liofilizados, estériles, en la fonna de dosificación apropiada; en este caso, dichas composiciones farmacéuticas incluirán los excipientes adecuados, tales como tampones, tensioactivos, etc. La composición farmacéutica de la invención también puede ser adaptada para su administración subcutánea en forma de, por ejemplo, soluciones o suspensiones estériles, en la fonna de dosificación apropiada; en este caso, dichas composiciones farmacéuticas incluirán los excipientes adecuados, tales como tampones, tensioactivos, etc. Asimismo, la composición farmacéutica de la invención puede ser adaptada para su administración por vía rectal para lo cual incluirá los excipientes adecuados compatibles con los compuestos de fórmula (1) de la invención. Las formulaciones se pueden preparar según métodos convencionales tales como los que se describen en las farmacopeas Espafíola, Europea o de Estados Unidos de América, o en textos de referencia similares, por ejemplo "Tratado de Farmacia Galénica", de C. Faulí ¡Trillo, 10 Edición, 1993, Luzán 5, S.A. de Ediciones,

El compuesto de fórmula (1) de la invención se administrará en una cantidad terapéuticamente efectiva que generalmente dependerá de la eficacia del compuesto de fórmula (1) elegido, de la gravedad de la patología a tratar, etc. No obstante, típicamente se administrará a dosis diarias comprendidas entre 0,1 y 100 mg de

compuesto de fórmula (1) por kg de peso corporal, más preferentemente las dosis

diarias estarán comprendidas entre 2 y 5 mglkg peso corporal.

En otro aspecto, la invención protege el uso de un compuesto de fórmula (1),

5 sus sales, pro fármacos o solvatos, farmacéuticamente aceptables, en la elaboración de una composición farmacéutica para la prevención O el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa, tal como una enfermedad neurodegenerativa que cursa con un déficit de acetilcolina o dopamina, y/o de una enfermedad isquémico-cerebral (ictus).

Las enfermedades neurodegenerativas son aquellas, a menudo de causa

10 desconocida, en las que tiene lugar la degeneración progresiva del sistema nervioso en alguna de sus partes o en su totalidad. Para una descripción detallada de las mismas véase, por ejemplo, la monografia "Enfermedades Neurodegenerativas" Coordinadores José Ma Segovia de Arana y Francisco Mora Teruel, editada por Serie Científica Farmaindustria, Madrid, Julio 2002.

15 Las enfennedades isquémico-cerebrales constituyen una patología aguda que tiene lugar como consecuencia de la interrupción del suministro de sangre a una parte del cerebro O cuando sucede la rotura de un vaso sanguíneo con la consiguiente hemorragia cerebral. Aunque estas enfermedades no están incluidas en el grupo de enfennedades neurodegenerativas hay que tener en cuenta que, secundariamente a un

20 accidente isquémico-cerebral, también se produce la neurodegeneración en aquellas áreas afectadas. De aquí la utilidad del tratamiento de éstas enfennedades con los compuestos de la invención.

La administración de los compuestos de fónnula (1) de la invención, sus sales, profármacos o solvatos, fannacéuticamente aceptables, se puede llevar a cabo en 25 solitario o en combinación con fánnacos adicionales, tales como fármacos útiles para el tratamiento de una enfennedad neurodegenerativa o de una enfennedad isquémicocerebral, para proporcionar una lerapia combinada; dichos fármacos adicionales pueden fonnar parte de la misma composición fannacéutica de la invención que comprende el compuesto de fónnula (1) y/o sus sales, profármacos O solvatos 30 fannacéuticamente aceptables, o no, en cuyo caso, se administrarán de fonna simultánea o secuencial a la administración de la composición fannacéutica de la invención. Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de dichos fármacos adicionales que

pueden emplearse para proporcionar una terapia de combinación incluyen agentes tales como la memantina (un bloqueante del receptor de glutarnato tipo NMDA aprobado para su uso en las fases avanzadas de la enfermedad de Alzheimer), vitaminas, antiinflamatorios o antidepresivos.

MODO DE REALIZACIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos, los cuales no pretenden ser Limitativos de su alcance.

1. OBTENCIÓN DE LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN

Los compuestos cuya actividad biológica es objeto de la presente invención se sintetizaron siguiendo los siguientes procedimientos en síntesis orgánica

l.l) Preparación de N·(2-(S-hidroxi-lH-indol-3-jl)etil)acetamida (compuesto 17),

Paso 1: A una suspensión de hidrocloruro de 5-hidroxi-3-(2-aminoetil)IN-indol (5 g, 23,56 mmol) en didorometano (CH2Cb) seco (40 ml), bajo atmósfera de argón, a O°C, se añadieron EtJN (4,77 g, 47,13 mmo)) y anhídrido acético (4,84 g, 47,13 mmol). La mezcla resultante se agitó a O oC durante 4 h Y posterionnente se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. Una vez completada la reacción se añadió NH4CI 10% y se extrajo 3 veces con CH2Ch. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato magnésico anhidro, se filtró y evaporó el disolvente para aislar el compuesto intermedio como un aceite. Este compuesto se usó en el siguiente paso sin purificación intennedia.

Paso 11: A una solución del obtenido en el paso anterior en MeOH (40 ml) se le afiadió K2CO) (3,26 gr, 23,56 mmo!) y se agitó a temperatura ambiente durante 1,6

h. Una vez finalizada la reacción, se añadió agua y se extrajo tres veces con AcOEt. La fase orgánica se secó sobre sulfato magnésico anhidro, se concentró a vado y el producto resultante fue purificado por cromatografia flash sobre sílica gel usando mezclas de CH2ChIMeOH (O -5 %) como e1uyente para proporcionar el compuesto 17 como un sólido (3,37 gr, 65 %). Los datos experimentales de caracterización

estructural estuvieron de acuerdo con los publicados anteriormente (Macfarlane y col.,

1990, JChromalogr, 532: 13-25).

1.2 Procedimiento general A, para la o btención de los ésteres pertenecientes a la 5 familia 1

A una solución de N-(2-(5-hidroxi-IH-indol-3-il)etil)acetamida (1 eq) y Et,N (1,5 eq) en CH,Cl, seco (0,057 M) bajo argón, se añadió, gota a gota, una solución del

ácido acrílico sustituido correspondiente (1,2 eq) mezclado con HA TU (1,5 eq) en CI-hCb seco (0,057 M). La mezcla resultante se mantuvo con agitación a temperatura 10 ambiente. Una vez completada la reacción (análisis por cromatografía en capa fina (CCF» , se añadió agua y la mezcla se agitó durante 15 min a temperatura ambiente. Posteriormente, la mezcla se extrajo con CH2Ch (3 x 20 mL), la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Mg2S04, se filtró y se evaporó el disolvente a vacío. El sólido resultante se puri ficó por cromatografia flash en sílica gel usando mezclas de

15 diclorometano/metanol como eluyente. Ejemplo 1: Preparación del (E)-2-butenoato de 3-(2-acctamidoetil)-1 H-indol-S-ilo

(Compuesto 1).

HN-40

'0"j(0'CÓ"

O I h

N H

Sig uiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-l H-indol-3

20 il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et,N (95,8 ~L, 0,68 mmol) en CH,Cl, (5 mL). Ácido (é')-2-butenoico (47,3 mg, 0,55 mmol) y HATU (261,2 mg, 0.69 mmol) en CH,Cl, (5 mL). Tiempo de reacción: 1,5 h. Cromatografia flash DCM/MeOH (0 1,5 %). Para obtener el compuesto 1 como un aceite amarillo claro (98 mg, 76 %). IR (KBr) v 3378, 3278, 2926, 2853,1730, 1653,1545,1314, 1170, 97Icm· l. RMN de IH

25 (DMSO-d6, 300 MHz) O" 10,91 (IH, Sb" NH), 7,91 (IH, Sb" NH), 7.33 (IH, d, J ~ 8,6 Hz, 7-H), 7,24 (IH, d,J~ 2,2 Hz, 4-H), 7,21 (IH, d,J~ 2,3 Hz, 2-H ), 7,11 (IH, dq, J = 15,6 Hz,J = 6,8 Hz, 3' -H), 6,81 (IH, dd,J= 8,6 Hz, J= 2,2 Hz, 6-H), 6,14 (lH, dd, J= 15,6 Hz, J= 1,77 Hz, 2'-H), 3,30-3,25 (2H, m, CH,CH,NHCOCH, ), 2,78 (2H, t, J

~ 7,37 Hz, CH,CH,NHCOCH,), 1,95 (31-1, dd, J ~ 6,8 1-17" J ~ 1,77 H7" 4'-H), 1,79 (3H, s, CH,CH,NHCOCHJ), RMN de "c DMSO-d" 75 MHz) Oc 168,9, 164,9, 146,8, 143,1, 133,9, 127,3, 124,1, 121,9, 115,2, 112,2, 111,6, 110,3, 39,4, 25,0, 22,6, 17,8, EM (API-ES+) miz: [(M+Ht J 287,1381 ; [(M+Nat] 309,1213; [(2M+Nan 595,2549, 5 Pureza: Anal. calc. para C1óH18N10): C: 67,12 %; H: 6,34 %; N: 9,78 %; Encontrado:

C: 67,30 %; H: 6,29 %; N: 9,54 %.

Ejemplo 2: Preparación del cinamato de 3-(2-acctamidoctil)-lH-indol-5-ilo

(Compuesto 2),

HN-40

~O l~(

O

U~

H

10 Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3il)etil)aeetarnida (50.0 mg, 0,23 mmol), Et,N (48 fll, 0,34 mmol) en CH,C!, (5 ml), ácido trans-cinámico (40,6 rng, 0,27 mmo!) y HATU (125,5 rng, 0,34 mmol) en CH,C!, (5 ml). Tiempo de reacción: 1,5 h. Cromatografia flash DCMlMeOH (O

2,5%). Para obtener el compuesto 2 como un sólido blanco (55 rng, 72 %). Punto de

15 fusión (p,r): 150-153 oc. IR (KBr) v 337 1, 3 I 76, 2922, 1720, 1664, 1565, 1309, 1154, 981, 766 cm". RMN de 'H (CDCI" 300 MHz) OH 8,35 (1 H, s,,, NH), 7,82 (1 H, d,J ~ 16,0 Hz, 3'-H), 7,54-7,5 1 (2H, m, Ph), 7,36-7,34 (3H, m, Ph), 7,27 (lH, d, J ~ 8,6 Hz, 7-H), 7,26 (1 H, d, J ~ 2,3 Hz, 4-H), 6,94 (IH, s, 2-H), 6,90 (1 H, dd, J ~ 8,6 Hz, J ~ 2,3 Hz, 6-H), 6,60 (IH, d, J ~ 16,0, 2 '-H), 6,02 (1 H, s,,, NH), 3,49-3,43 (2H,

20 m, CH,CH,NHCOCH,), 2,84 (2H, t, J ~ 6,7 Hz, CH,cH,NHCOCH,), 1,86 (3H, s, CH,CH,NHCOCH3). RMN de "c CDCh, 75 MHz) Oc 170,7, 166,6, 146,3, 144,2, 134,3, 134,3, 130,6, 129,0, 128,3, 127,7, 123,6, 117,6, 116,2, 113,0, 111,9, 110,8, 40,0,25,1,23,0, EM (API-ES+) miz: [(M+Ht J 349,1548; [(M+Na)' J 371 ,1395. Purc7.a: Anal. Calc. para C211-boN20J: C: 72,40 %; H; 5,79 %; N: 8,04 %; Encontrado:

25 C: 71,99 %; H: 5,93 %; N: 7,89 %.

Ejemplo 3: Preparación del (E)-3-(4-metilfenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)

IH-indol-5-ilo (Compuesto 3),

HNJ.O

Me~O I~ (

o lX~

H

Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3

il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), EtJN (95,8 ~L, 0,68 mmol) en CH2CI, (5 mL). Ácido (E)-3-(p-toluil)-acrílico (89,2 mg, 0,55 mmol) y HATU (261 ,2 mg, 0,69

5 mmol) en CHzCb (5 mL). Tiempo de reacción: 2.5 h. Cromatografia flash

DCMlMeOH (O -2 %). Para obtener el compuesto 3 como un sólido blanco (124,0 mg, 75 %). Punto de fusión (P. f.): 170-172 oc. IR (KBr) v 3344, 3252, 2932, 1703, 1628, 1554, 1483,1326, 1170,810 cm". RMN de 'H (CDCb, 300 MHz) 0,,8,35 (IH, Sb" NH), 7,79 (1 H, d, J ~ 16,0, 3 '-H), 7,42 (2H, d, J ~ 8,0 Hz, 2" ·H), 7,27 (IH, d, J ~

lO 2,5 Hz, 4-H), 7,25 (1 H, d, J ~ 8,9 Hz, 7-H), 7,16 (2H, d, J ~ 8,0 Hz, r -H), 6,93 (1 H, s, 2-H), 6,90 (1 H, dd, J ~ 8,9 Hz, J ~ 2,5 Hz; 6-H), 6,55 (1 H, d, J ~ 16,0 Hz, 2'-H), 5,90 (IH, Sb" NH), 3,48-343 (2H, m, CH,CH,NHCOCHJ), 2,83 (2H, t, J ~ 7,37 Hz, CH,cH,NHCOCH,), 2,33 (3H, s, CH3-Ph), 1,85 (3H, s, CH,CH,NHCOCH3). RMN de "C CDCJ" 75 MHz) Oc 170,7, 166,8, 146,3, 144,2, 141,1, 134,3, 131,5, 129,7,

15 128,3, 127,7, 123,6, 116,5, 116,2, 112,9, 111,8, 110,8, 39,9, 25,1,23,0,21,5. EM (API-ES+) miz: [(M+Htl 363,1713; [(M+Nat] 385,1517. Pureza: Anal. Cale. para C"H"N,OJ: C: 72,91 %; H: 6,12 %; N: 7,73 %; Encontrado: C: 72,76 %; H: 6,29 %;

N: 7,68 %.

Ejemplo 4: Preparación del (E)-3-(2-mctoxifcoil)-acrilato de 3-(2-acctamidoctil)20 t H-indol-S-ilo (Compuesto 4).

HN-4 OMe O

'>-. I --'" O~I '" '::

O '" N H

Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3

iI)etil)acetamida (50,0 mg, 0,23 mmol), Et,N (48 ~L, 0,34 mmol) en CH,Cl2 (5 mL). Ácido (E)-3-(2-metoxifenil)-acrílico (48,9 mg, 0,27 mmol) y HA TU (130,7 mg, 0,34

mmol) en CH,CI, (5 mL). Tiempo de reacción: 3 h. Cromalografia flash DCM/MeOH (O -2,5 %). Para obtener el compuesto 4 comO un sólido blanco (59 mg. 71 %). Punto de fusión (P.f.): 163-165'C: IR (KBr) v 3366, 2961, 2924, 1715, 1634, 1487, 1294, 1252, 11 58,765 cm-' . RMN de 'H (DMSO-d6, 300 MHz) 6" 10,93 (11-1, Sbe, NH), 8,07 5 (1 H, d, J ~ 16,2, 3'-H), 7,91 (1 H, Sb" NH), 7,81 (1 H, dd, J,. _" ~ 7,5 I-Iz, Jo-'-r ~ 1,6 Hz, 6"-H), 7,46 (1 H, ddd, Jr_3-~ 8,5 Hz, Jr _" ~ 7,5 Hz, Jr..·-~ 1,6 Hz, 4"-H), 7,36 (I H, d, J = 8,6 Hz, 7-H), 7,3 1 (i H, d, J ~ 2,2, 4-H), 7,23 (1 H, d, J ~ 2,2 Hz, 2H), 7,13 (1 H, d, Jr _r ~ 8,5 Hz, 3"-H), 7,03 (1 H, dd, J,.-~--~ J,.-_,-7,5 Hz, Hz, 5" H), 6,93-6,83 (2H, m, 2'-H, 6-1-1), 3,90 (31-1, s, 0 0 13), 3,37-3,23 (m, m, 10 CH,CI-!,N HCOCHJl, 2,79 (2H, 1, J ~ 7,3 Hz, CI-I"cH,NHCOCI-I,), 1 ,80 (31-1, s, CH,CI-I,N HCOCI-!,). RMN de "c DMSO-do, 75 MHz) Oc 168,9, 166,0, 158,0, 143,2, 140,5, 133,9, 132,3, 128,9, 127,3, 124,1, 122,1, 120,7, 117,7, 115,3, 112,2, 111,8, 111,6, 110,4, 55,7, 39,4, 25,1, 22,6_ EM (API-ES+) miz: [(M+H)'] 379, 1669; [(M+Na)'] 401,1483; [(2M+Nall 779,3040, Anal. Caic, para C"H"N,O,: c: 69,83

15 %; H: 5,86 %; N: 7,40 %. Encontrado: C: 69,78 %; H: 5,86 %; N: 7,25 %. Ejemplo 5: Preparación del (E)-3-(3-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)IH-indol-5-ilo (Compuesto S),

OM. ~

~O l~ ¿N

'o

O

'Ce>

H

Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3

20 il)etil)acetamida (50,0 mg, 0,23 mmol), EI,N (48 fiL, 0,34 mmol) en CH,CI, (5 ml), Ácido (E)-3-(3-meloxifenil)-acrílico (48,8 mg, 0,27 mmol) y HATU (125,5 mg, 0,33 rumol) en CH2Cb (5 rnl). Tiempo de reacción: 1.5 h. Cromatografia flash DCM/MeOH (O -2,5%). Para obtener el compuesto S como un sólido blanco (77 rug, 93 %), Punto de fusión (p,r,): 124-125 'C: IR (KBr) v 3381, 3317, 3183, 2928, 1723,

25 1636, 1488, 1231, 1177, 984, 786 cm-'_ RMN de 'H (CDCi], 300 MHz) OH 8,68 (lH, s,,, NH), 7,77 (IH, d, J ~ 16,0 Hz, 3'-H), 7,29-7,18 (3H, m, Ph), 7,11-7,08 (IH, m, Ph), 7,03-7,02 (lH, m, I'h), 6,91-6,83 (3H, m, Ph), 6,57 (lH, d, J ~ 16,0 Hz, 2'-H), 6,0 (lH, Sb" NH), 3,76 (3H, s, OC/fJ), 3,42-3,36 (21-1, m, CH,CI-I,NHCOCHll, 2,77

(2H, t, J ~ 6,7 Hz, CH,CH,NHCOCH, ), 1,81 (3H, s, CH,CH,NHCOCH3)' RMN de I3C COCI" 75 MHz) líe 170,8, 166,6, 159,9, 146,3, 144,1, 135,6, 134,4, 130,0, 127,7, 123,7, 121,0, 117,9, 116,1, 113,1, 112,9, 111,9, 110,7, 55,4, 40,0, 25,1, 23,0, EM (API-ES+) miz: [(M+H)J 379,1659; [(M+ a)'J 401 ,1479; [(2M+Na)J 779,3040,

5 Pureza: Anal. Cale. para Cn l-b2Nz0 4: C: 69,83 %; l-I: 5,86 %; N: 7,40 %. Encontrado:

C: 69,59 %; H: 5,93 %; N: 7,2 1 %.

Ejemplo 6: Preparación del (E)-3-(4-rnetoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)

lH-indol-S-ilo (Compuesto 6),

HN --4 Meo~

O

~ ó O -...::::

I "

O '" N

H

10 Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3il)etil)acetamida (50,0 mg, 0,23 mmol), Et,N (48 ~L, 0,34 mmol) en CH,C\, (5 mL), (E)-3-(4-metoxifenil)-acrilico (48,9 mg, 0,27 mmol) y HATU (\30,7 mg, 0,34 mmol) en CH,C12 (5 mL). Tiempo de reacción: 2 h. Cromatografia nash DCMlMeOH (O

2,5 %). )lara obtener el compuesto 6 como un sólido blanco (92 mg, 96 %). Punto de

15 fusión (P.r.): 165-167 'C. IR (KBr) v 3380, 3258, 2935, 1709, 1602, 1427, 1291, 1258, 1152, 868 cm". RMN de 1H (DMSO-d6, 300 MHz) O" 10,94 (1 H, Sb" NH), 7,93 (IH, s~, NH), 7,83 (IH, d, J ~ 16,1 Hz, 3'-H), 7,77 (2H, d, J ~ 8,8 Hz, 2"-H), 7,37 (1 H. d. J ~ 8,8 Hz, 7-H), 7,30 (1 H, d, J ~ 2,2 Hz, 4-H), 7,23 (1 H, s, 2-H), 7,02 (2H, d, J ~ 8,8 I-Iz, 3"-1-1), 6,88 (11-1, dd, J -8,8 Hz, J ~ 2,2 Hz, 6-H), 6,75 (1 H, d, J ~ 16, I

20 Hz, 2'-H), 3,83 (3 H, s, OCH3), 3,34-3,27 (2H, m, G¡'CH,NI'ICOCI'I,), 2,80 (2H, t, J ~ 7,4 Hz, CfI,CI-l,NHCOCH,), 1,80 (3H, s, CH,G I,NHCOCfl3). RMN de 13C DMSO-d6, 75 MHz) líe 169,0, 166,0, 161,3, 145,6, 143,3, 133,9, 130,4, 127,4, 126,6, 124,1, 115.4, 114,9, 114,4, 112,2, 111,6, 110,4, 55,3, 39,5, 25, 1, 22,6. EM (API-ES+) miz: [(M+J'I)J 379,1670; [M + Na)' 401 ,1489; [(2M+Nan 779,3049, Pureza: Anal.

25 Calc. para C" H" N,O,: C: 69,83 %; H: 5,86 %; N: 7,40 %. Encontrado: C: 69,48 %;

H: 5,58 %; N: 7,59 %.

Ejemplo 7: Preparación del (E)-3-(4-hidroxifenil)-acrilato de 3-(2-acetarnidoetil)

1 H-indol-5-ilo (Compuesto 7),

HO HN-{ HN-4

~O HO~Ic{ O

~ r O '<:::

~..N ~ + I I ~

O /.C N

H

1) Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-IH-indol-3

il)etil)acetamida (248,0 mg, 0,90 mmol), Et,N (188 ~L, 1,35 mmol) en CH,CI¡ (lO mL). Ácido (E)-3-(4-«tert-butildimetilsilil)oxi)fenil) acrílico (300 mg, 1,08 mmol) y HATU (513,3 g, 1,35 mmol) en CH,Cl, (lO mL). Tiempo de reacción: 3 h. Una vez

finalizado el primer paso de reacción, se llevó a cabo el segundo paso sin purificación

del producto intennedio (E)-3-(4-«tert-butyldimethylsilyl)-oxi)fenil)acrilato de 3-(2

acetamidoetil)-l H-indol-5-ilo.

2) A una solución de (E)-3-(4-«tert-butyldimethylsilyl)oxi)fenil)acrilato de 3(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo (290 mg, 0,60 mmol) en DMF (8 mL) y H,O (0,8 rnL), se añadió CS2C03 (99 rug, 0.3 rnmol). La suspensión resultante fue agitada a temperatura ambiente durante 15 h. La mezcla de reacción fue diluida con 20 rnL de El20 Y se lavó con una solución saturada de NaC!. La solución resultante se extrajo con AcOEt (3 x 15 rnL) y se secó sobre MgS04. La fase orgánica se concentró a vacío y se purificó el producto resultante mediante cromatografía flash en sílica gel (CH2Ch-MeOH 0-4%) para obtener el compuesto 7 como un sólido blanco (290 rng,

61 %); Punto de fusión (P.f.): 136-1 39°C. IR (K8r) v 3562, 3499, 3364, 2932, 1690, 1597, 1548, 1456, 1327, 1182,834 cm·'. RMN de 'H (DMSO-d6, 300 MHz) OH 10,93 (1 H, Sb" NH), 10,09 (1 H, Sb" OH), 7,93 (1 H, Sb" NH), 7,76 (1 H, d, J ~ 16,0 Hz, 3·H), 7,68 (2H, d, J ~ 8,6, r -H), 7,35 ( 1 H, d J ~ 8,6, 7-H), 7,28 (1 H, d, J ~ 2,2 Hz, 4H), 7,22 (1 H, d, J ~ 2,2 Hz, 2-H), 6,88-6,82 (3H, m, r -H, 6-H), 6,65 (1 H, d, J ~ 16,0 Hz, 2'-H), 3,32-3,26 (2H, m, CH,C¡'¡'NHCOCH,), 2,78 (2H, t, J ~ 7,4 Hz, CH,CH,NHCOCH,), 1,79 (3H, s, CH,CH,NHCOCH3). RMN de 13C DMSO-d6, 75 MHz) Oc 168,9, 166,1, 160,1, 145,9, 143,3, 133,9, 130,5, 1273, 125,0, 124,1, 11 5,8, 115,4, 113,6, 112,2, 111,6, 110,4, 39,4,25,1, 22,6. EM (API-ES+) miz: [(M+Hn 365,1515; [(M+Nan 387,1325; [(2M+Nan 751,273 1. Pureza: AnaL Cale. para

C" H20N,04: C: 69,22 %; H: 5,53 %; N: 7,69 %; Encontrado: C: 69,33 %; H: 5,75 %;

N: 7.94%. Ejemplo 8: Preparación del (E)-3-(4-hidroxi-3-metoxyfenil)-acrilato de 3-(2acetamidoetil)-I H-¡ndol-S-ilo (Compuesto 8).

HO HN / ~HO~HN~

COOH OM.

~ 1) HATU, EtJN '/'

d. o

r__ ~ O + I '" --;:,-C-,C'O-_' _ ~ I ~ o

~ :;-H'-:-" "'_~

'O:J

2) CsC03 , I ~

~ MeO .& CH2CI¡I H20 ; r.1. O h N

OTBDMS H

1) Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(S-hidroxi-1H-indol-3il)etil)acetamida (542 mg , 2,48 mmol), Et,N (520 flL, 3,72 mmol) en CH,Cl, (10 mL), Ácido (E)-3-(4-«tcrt-butildimctilsilil)oxy)-3-metoxifenil acrilico (919,2 g, 2,98 mmol) y HATU (1,414 g, 3,72 mmol) en CH,Cl, ( 10 mL), Tiempo de reacción: 4 h, Una vez finalizado el primer paso de reacción, se llevó a cabo el segundo paso sin purificación del producto intermedio (E)-3-( 4-«tert-butyldimethylsilyl)oxi)-3metoxifenil)acrilato de 3-(2-acetamidoeti 1)-1H-indol-5-i lo.

2) A una solución de (E)-3-(4-«tert-butyldimethylsilyl)oxi)-3metoxifenil)acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-IH-indol-5-ilo (600,0 mg, 1,18 mmol) en DMF (8 rnL) y H,O (0,8 mL), se añadió Cs,CO, (192,2 mg, 0.589 mmo l), La suspensión resultante fue agitada a temperatura ambiente durante 6 h. La mezcla de reacción fue diluida con 20 mL de Et20 y se lavó con una solución saturada de NaC!. La solución resultante se extrajo con AcOEt (3 x 15 mL) y se secó sobre MgS04, La fase orgánica se concentró a vacío y se purificó el producto resultante mediante cromatografia flash en sílica gel (CH2Cb·MeOH O -4%) para obtener el compuesto 8 como un sólido blanco (296 mg, 64 %); Punto de fusiÓn (P,r.): 193-195°C, IR (KBr) v 3377,3265,3105,2933,1704, 1631, 1583, 1514,1275, 1242, 979, 815 cm" , RMN de

'H (DMSO-d6, 300 MHz) OH 10,93 (IH, s,,,, NH), 9,69 (IH, s,,,, OH), 7,94 (IH, s"" NH), 7,75 (IH, d, J ~ 16,0 Hz, 3'-H), 7,46 (IH, d, J ~ 1,9, 2" -H), 7,36 (IH, d, J ~ 8,6, 7-H), 7,29 (IH, d, J ~ 2,2 Hz, 4-H), 7,22-7,19 (2H, m, 2-H, 5"-H), 6,89-6,82 (2H, m, 6"-H, 6-H), 6,74 (IH, d, J ~ 16,0 Hz, 2'-H), 3,85 (IH, s, OCHJ) 3,33-3,26 (2H, m, CH,CH,NHCOCH,), 2.79 (2H, t, .1 ~ 7,4 Hz, CH,CH,NHCOCH,), 1,79 (3H,

s. CH,CH,NHCOCH,). RMN de "C f)MSO-d,;, 75 MHz) Oc 168,9, 166,1, 149,6, 147,9, 146,3, 143,3, 133,9, 127,3, 125,5. 124,1, 123,4, 11 5,5, 115,3, 113,9, 112,2, 111,6, 111,4, 110,3, 55,71,39,4, 25,1, 22,6. EM (API-ES+) miz: [(M+H)+J 395,1622;

5 [(M+Na)'J 417.1436; [(2M+H)+J 789,3022. Anal. Cale. para C"H"N,O,: C: 66,99 %;

H: 5,62 %; N: 7,10 %; Encontrado: C: 67,15 %; H: 5,99 %; N: 6,76 %. Ejemplo 9: Preparación del (E)-3-(4-nuorofenil)-aerilato de 3-(2-aeetamidoetil) IH-indol-5-i1o (Compuesto 9).

HN..4,O

F~O I~(

O

1;C~

H

10 Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-IH-indol-3il)etil)acelamida (100 mg, 0,458 mmol), Et,N (95,8 ¡tL, 0,68 mmol) en CH,C1, (5 mL). Ácido (E)-3-(4-fluorofenil)-acrilico (91,4 g, 0,549 mmol) y HATU (26 1,2 mg, 0,69 rumo!) en CH2Cb (5 mL). Tiempo de reacción: 2 h. Cromatografia flash DCMlMeOH (O -2.5%). Para obtener el compuesto 9 como un sólido blanco (15\ ,O

15 mg, 90 %). Punto de fusión (P.r.): 173-176 'C. IR (KBr) v 3358, 3217, 2932, 1718, 1636, 1556, 1509, 1314_ 1229, 1170, 1103,982, 830 cm". RMN de 'H (CDCI" 300 MHz) 3" 8,34 (1 H, s". NH), 7,77 (1 H, d, J~ 16,0 Hz, 3'-H), 7,56-1,44 (2H, m, 2" -H), 7,32-7,22 (2H, m, 7-H, 4-H), 7, 10-6.98 (2H, m, r -H), 6,95 (IH, s, 2-H), 6,89 (IH, dd, .1 = 8,8 Hz,.J = 2,2 Hz, 6-H), 6,51 ( IH, d,J= 16,0 Hz, 2'-H), 6,12 ( IH, Sbr. IH),

20 3,48-3,42 (2H, m, CH,CH,NHCOCH,), 2,84 (2H, t, J ~ 6,7 Hz, CH,cH,NHCOCH,), 1,87 (3H, s, CH,CH,NHCOCH,). RMN de "C CDCI" 75 MHz) Oc 171 ,1, 166,4. [1 65,80, 162,46, .IC.F ~ 251,4, C4"], 145,0, 144,2, 134,3, 130,5, [130,28, 130,16, .!e.F

~ 8,57. C2"J, 127,7, 123,7, [11 7,36, 1 17,32, .IC.F ~ 2,23, C 1"]. [116,34, 116,05, .Ic.F ~ 21,7, CJ"j, 113.0, 11 1,9, 110,8, 40,2, 25,0, 22,7. EM (AP I-ES+) miz: [(M+Hn

25 367.1479; [(M+Nat] 389,1270; [(2M+Nat] 755,2638. Pureza; Anal. Cale. para C2IHI9FN,O,; C; 68,84 %; H: 5,23 %; N: 7,65 %; Encontrado: C: 68,63 %; H: 5,39 %; N: 7,58 %.

Ejemplo 10: Preparación del (E)-3-(4-bromofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)

IH-indol-S-ilo (Compuesto lO). HN.4o

Br~O I~ (

01;0

H

Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3

5 il)etil)acetamida (50 mg, 0,23 mmol), Et,N (48 ~L, 0,34 mmol) en CH, CI, (8 mL). Ácido (E)-3-(4-bromorofenil)-acrilico (62,4 g, 0,27 mmol) y HATU (130,7 mg, 0,34 mmol) en CH,Ch (5 mL). Tiempo de reacción: 1 h. Cromatografia flash DCM/MeOH (O -2,5%). Para obtener el compuesto 10 como un sólido blanco (96 mg, 97 %). Punlo de fusión (P.f.): 196-198 oC. IR (KB r) v 3365, 2928, 2856, 1710, 1637, 1483,

10 1309, 1070, 827 cm" . RMN de 'H (DMSO-d,;, 300 MHz) OH 10,95 (1 H, Sb" NH), 7,93 (IH, S", NH), 7,84 (I H, d, J ~ 16,0 Hz, ),-H), 7,78 (2H, d, J ~ 8,5 Hz, 2"-H), 7,67 (2H, d, J -8,5 Hz, 3"-H), 7,37 (1 H, d, J ~ 8,6 Hz, 7-H), 7,3 1 (1 H, d, J ~ 2,3 Hz, 4H), 7,23 (1 H, d, J ~ 2,3 Hz, 2-H), 6,95 (1 H, d, J ~ 16,0 Hz, 2' -H), 6,89 (1 H, dd, J ~ 8,6 Hz, .J ~ 2,3 Hz, 6-H), 3,31-3,26 (2H, m, CH,CH,NHCOCH,), 2,79 (2H, t,.J ~ 7,4

15 Hz, CH,CH,NHCOCH, ), 1,79 (3H, s, CH,CH,NHCOCHJ). RMN de "c DMSO-d6, 75 MHz) líe 168,9, 165,5, 144,4, 143,1, 134,0, 133,3, 131,9, 130,4, 127,3, 124,2, 124,1, 118,6,1 15,2, 112,2, 11 1,7,110,3, 39,4, 25,1,22,6. EM (API-ES+) miz: [(M+Hn 427,0655; [(M+Nan 449,0478. Pureza: Anal. Cale. para C21 H" B,N,O,: C:

59,03 %; H: 4,48 %; N: 6,56 %; Encontrado: C: 58,78 %; H: 4,65%; N: 6,39 %.

20 Ejemplo 11 : Preparación del (E)-3-(4-clorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)IH-indol-S-ilo (Compuesto 11).

e. HN.40

~O' I~(

O

U~

H

Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-IH-indol-3il)ctil)acetamida (50 mg, 0,23 mmol), Et,N (48 ~L, 0,34 mmol) en CH, CI, (5 mL).

Ácido (E)-3-(4-c\orofenil)-acrílico (50,2 g, 0,27 mmol) y HATU (130,7 mg, 0,34

mmol) en CH2Cb (5 rnL). Tiempo de reacción: J h. Cromalografia flash DCMlMeOH (O -2,5%). Para obtener el compuesto 11 como un sólido blanco (83 mg, 98 %).

Punto de fusión (P.r.): 185-187'C. IR (KBr) v 3363, 2928, 1710, 1655, 1550, 1325, 5 1173. 828 cm". RMN de 'H (DMSO-d6, 300 MHz) 5" 10,95 (1 H, Sbe, NH), 7,93 (1 H, Sbe, NH), 7,88-7,83 (3H, m, 3'-H, 2"-H), 7,52 (2H, d, J ~ 8,5 Hz, 3"-H), 7,36 (1 H, d, J ~ 8,67 Hz, 7-H), 7,30 (1 H, d, J ~ 2,2, 4-H), 7,23 (1 H, d, J ~ 2,3 Hz, 2-H), 6,96-6,89 (2H, m, 2'-H, 6-H), 3,32-3,26 (2H, m, nr,CH,NHCOnl,), 2,78 (2 H, t, J~ 7,4 Hz, CH,CH,NHCOCH)), 1,79 (3H, s, CH,n l,NHCOCH3). RMN de "C DMSO-d,;, 75 10 MHz) 1ic 168,9, 165,6, 144,3. 143,2, 135,2, 133,9, 132,9, 130,2, 128,9, 127,3, 124,2, 118.5, 115,2, 112,2, 111 ,7, 110,3,39,7,25,1,22,6. EM (AP1-ES+) miz: [(M+H)l 383,1174; [(M+Nan 405,0989. Pureza: Anal. Cale. para C2IHI9CIN,O): c: 65,88 %;

H: 5,00 %; N: 7,32 %; Encontrado: C: 65,78 %; H: 5,33 %; N: 6.99 %.

Ejemplo 12: Preparación del (E)-3-(3,4-diclorofenil)-acrilato de 3-(2

15 acetamidoetil)·t H-indol-5-ilo (Compuesto 12).

CI -4

CI~o¿" ~O

HN

O I h

N

H

Siguiendo el procedimienlo general A, N-(2-(5-hidroxi-1 H-indol-3

il)eli1)acelamida (100 mg, 0,458 mmol), Et)N (95,8 ~L, 0,68 mmol) en CH,CI, (5

mL), Ácido (E)-3-(3,4-diciorofeni1)-acrílico (119,4 g, 0,55 mmo1) y HATU (261,2

20 mg, 0,69 mmol) en CH2Cl2 (5 mL). Tiempo de reacción: 1,5 h. Cromatografia flash DCMlMeOH (O -2%). Para obtener el compuesto 12 como un sólido blanco (169 mg, 88 %), Punto de fusión (P.f,): 167-169 oc. IR (KBr) v 3298, 2943, 1721, 1630, 1540, 1471, 1260. 1238, 1201,979,816 cm". RMN de 'H (DMSO-d6, 300 MHz) 5" 10,95 (1 H, Sbe, NH), 8,17 (1 H, d, J~ 1,9, 2"-H), 7,93 (1 H, Sbe, NH), 7,88-7,82 (2H, m, 6"-H,

25 3'-H), 7,72(IH,d,J~8,3Hz,5"-H), 7,37(1H, d,J~8,6Hz, 7-H), 7,32(IH, d,J~ 2,2 Hz, 4-H), 7,24 (1 H, d, J ~ 2,2, 2-H), 7,04 (1 H, d, J ~ 16,0,2'-H), 6,89 (lH, dd, J -8,6 Hz, J ~ 2,2 Hz, 6-H), 3,34-3,27 (21-1, m, CH,CH,NHCOCH,), 2,80 (2H, t, J ~ 7,3 Hz, CfF,CH,NHCOCH)), 1,80 (3H, S, C~hC~hNHCOCH3), RMN de "C DMSOd" 75 MHz) líe 168,9, 165,4, 143,1. 143.0. 134,8. 134.0, 132.9. 131,8, 131,0, 130.3.

128.4. 127,3. 124.2, 120,0, 115,2, 112,3, 111,7. 110,3, 39.5, 25,1. 22,6. EM (APIES+) miz: [(M+H)'¡ 417,0722; [(M+Na¡+] 439,0612; [(2M+Na)'] 855,1218. Pureza:

Anal. Cale. para C2¡l-IISCbN20): C: 60.44 %; 1-1: 4,35 %; N: 6,71 %; Encontrado: C:

5 60,07 %; H: 4.56 %; N: 6,46 %. Ejemplo 13: Preparación del (E)-3-(2-(trinuoromctil)fenil)-acrilato de 3-(2aceta midoetil)-IH-indol-S-i1o (Compuesto 13).

HNJ,

(Ir:' ov{

O

~1'" ~

O h N H

Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(S-hidroxi-1H-indol-3

10 il)et il)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et,N (95.8 ~L. 0,68 mmol) en CH,CJ, (5

mL). Ácido (E)-3-(2-(lrifluorometil)fenil)-acrílico (118,9 mg. 0,55 mmol) y HATU

(26 1.2 mg, 0,69 mmol) en CI-hCh (5 ml). Tiempo de reacción: 3.5 h. Cromatografia flash DCMlMeOI-l (O -2%). Para obtener el compuesto t3 como un sólido marrón

claro (184 mg, 97 %). Punto de fusión (PJ.): 145-147 oc. IR (KBr) v 3373, 3174, 15 1717, 1657, 1577, 1485, 1315, 1244, 1165, 1061, 960, 768 cm" . RMN de 'H (CDCh, 300 MHz) OH 8,40 (IH, Sb', NH), 8.26 (1 H, dd, J ~ 16.0 Hz; J ~ 2,2 Hz, 3'-H), 7,81

7.73 (2H. m, 4" -H, 5"-H), 7.62 ( IH, t, J ~ 7.6 Hz, r -H), 7,52 (IH, t, J ~ 7,6 Hz, 6"-H), 7,36 (1 H, s. 4-H), 7,34 (IH, d, J ~ 5,8 Hz, 7-H), 7,02 (1 H, s, 2-H), 6,98 (IH, dd . J ~ 8.8 Hz J ~ 2,2 H7, 6-H), 6,64 (1 H, d, J ~ 16,0 Hz, 2'-H), 6,06 (1 H, So" NH), 20 3.57-3.51 (2H, m, ClI,CH,NHCOClI,), 2.91 (2H, t, J -6,7 Hz. CH,ClI,NHCOCH,), 1,94 (3H. s. CH,ClI,NHCOCH,). RMN de "C (CDCh, 75 MHz) líe 170,8, 165,7, 144,0, 141,7, 136,3, 133,1, 132.2, 129.9. [129,53, 129,13, 128.72, 128,32, Ju ~ 30,4, C2"], 128,0, 127,7, (126,31, 126,24, 126,17, 126,09, Je.F ~ 5,7. crJ, (129,30, 125,70, 122,07, 118,50, Ju= 273,9,CF,], 123,7, 121,9, 116.0, 112,9, 11 1,79, 110,7,

25 40,0, 25,1 , 23 ,0. EM (API-ES+) miz: [(M+H)'] 439,1228 [(M+Nan 439,1228. Pureza: Anal. Cale. para C"HI9F,N,O,: C: 63,46 %; H: 4,60 %; N: 6,73 %; Encontrado: C: 63,16 %; H: 4,64 %; N: 6,37 %.

Ejemplo 14: Preparación del (E)-3-(3-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2acctamidoctil)-IH-indol-S-ilo (Compuesto 14).

CF3 HN-4o

: I.ó o¿

~

1 ~

O "" N

H

Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-lH-indol-3

5 il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et,N (95,8 ~L, 0,68 mmol) en CH,C1, (5 mL). Ácido (E)-3-(3-(trifluorometil)fenil)-acrilico (1 18,9 mg, 0,55 mmol) y HATU (261,2 mg. 0,69 mmol) en CH,CI, (5 mL). Tiempo de reacción: 2 h. Cromatografia flash DCM/MeOl-l (O -2%). Para obtener el compuesto 14 como un sólido blanco

(143 mg, 75 %). Punto de fusión (P. f.): 137-139 oc. IR (KBr) v 3374, 3 154, 1658,

10 1641 , 1338. 1197, 809,695 cm". RMN de 'H (CDCI" 300 MHz) O" 8,57 (IH, s"" NH), 7,80 (1 H, d, J ~ 16,0 Hz; 3'-H). 7,75 (1 H, s, 2"-H), 7,67 (1 H, d, J ~ 7,7 Hz, 4"H), 7.59 ( 1 H, d, .J ~ 7,7 Hz, 6"-11), 7,47 (111, t,.J ~ 7,7 Hz, 5"-H), 7,26-7,23 (2H, m, 4-H, 7-H). 6,89-6.86 (2H, m, 2-H, 6-H), 6,65 (IH, d, J ~ 16,0 Hz, 2'-H), 5,97 (I H, S"" NH), 3,46-3.40 (2H, m, CH, UI,NHCOCH,), 2,80 (2H, t, J ~ 6,8 Hz,

15 CH,CH,NHCOCH,), 1,83 (31-1, s, CH,CI-I,NI-ICOCH,). RMN de "C CDCI" 75 MHz) Iic 170.7. 166.0, 144.4, 144,0, 135,1, 134,4, [132,20, 131,77. 131,34. 130,91, Je.,. ~ 32,6, C3"], 131,2, 129,6, [129,18, 125,57,121,96, 118,35, .Je.,. ~ 272,4, CF,], 127,7, [127,03, 126,98, 126,93, 126,89, Je.,. ~ 3,8, C2"], [1 24,90, 124,85, 124,80,124,75, Je.,. ~ 3,8, C4 "1, 123,7. 119,6, 116,0, 113,0, 111,9, 11 0,7,40,0, 25,1, 23,0. EM (API

20 ES+) miz: [(M+H)+1 417, 1411; [(M+Natl 439, 1234. Pureza: Anal. Calc. para C22H19F)N203: C: 63,46 %; H: 4,60 %; N: 6,73 %; Encontrado: C: 63,36 %; H: 4,77

%; N: 6,41 %.

Ejemplo 15: Preparación del (E)-3-(4-(trifluorometil)fcnil)-acrilato de 3-(2

25 acetamidoetil)-I H-indol-5-ilo (Compuesto 15).

HN-4

o

F3Cn

~O¿~

0 ",, '"

N H

Siguiendo el procedimiento general A, N~(2-(5-hidroxi-l H-indol-3il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et3N (95,8 ~L, 0,68 mmol) en CH,CI, (5 mL). Ácido (E)-3-(4-(trifluorometil)fenil)-acrilico (118,9 mg, 0,55 mmol) y HATU 5 (261,2 mg, 0,69 mmol) en CH,CI, (5 mL). Tiempo de reacción: 2 h. Cromatografia flash DCM/MeOH (O -2%). Para obtener el compuesto 15 como un sólido blanco (141 mg, 74 %). Punto de fusión (P.f.): 184-186 ·C. IR (KBr) v 3356, 3080, 1718, t655, t553, 1481, 1325, 1177, 1066,838 cm". RMN de 'H (CDCb, 300 MHz) OH 8,30 (1 H, Sb" NH), 7,82 (1 H, d, J ~ 16,0 Hz, 3'-H), 7,62 (4H, s, 2'"-H, 3'"-H), 7,3210 7,27 (2H, m, 4-H, 7-H), 6,98 (1 H, s, 2-H), 6,91 (1 H, dd, J ~ 8,7 Hz, J ~ 2,1 Hz, 6-H), 6,67 (1 H, d, J ~ 16,0 Hz, 2'-H), 6,06 (1 H, Sb" NH), 3,52-3,39 (2H, m, CH,CH,NHCOCHj), 2,86 (2H, t, J ~ 6,6 Hz, CH2CH,NHCOCHj), 1,88 (311, s, CH,CH2NHCOCH3). RMN de "c CDCb, 75 MHz) Ú(: 165,9, 144,3, 144,1, 137,6, 135,3, 134,3, [1 32,72, 132,30, 13 1,86, 131,46, Jc.F ~ 32,6, C4"], [1 29,22, 125,61,

15 122,00, 118,35, Ja ~ 272,5, CF3], 128,4, 127,7, [126,06, 126,00, 125,96, t 25,90, le. F ~ 3,82, C3"], 116,2, 113,2, 111,9, 110,8, 40,1, 25,0, 22,9. EM (API-ES+) miz: [(M+H)'j 417,1418; [(M+Na)'j 439,1238. Pureza: Anal. Cale. para C" H19F3N20j: C: 63,46 %; H: 4,60 %; N: 6,73 %; Encontrado: C: 63, 11 %; H: 4,66 %; N: 6,44 %.

Ejemplo 16: Preparación del (E)-3-(4-nitrofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)

20 lH-indol-S-ilo (Compuesto 16).

HN-4 02N~1¿

O

~ ¿ O '.::::

1 '"

O "" N H

Siguiendo el procedimiento general A, N-(2-(5-hidroxi-1H-indol-3

il)etil)acetamida (100 mg, 0,458 mmol), Et3N (95,8 fLL, 0,68 mmol) en CH2C1, (5 mL). (E)-3-(4-nitrofenil)-acrilico (105,9 mg, 0,55 mmol) y HATU (261,2 mg, 0,69

mmol) en CH,Ct, (5 mL). Tiempo de reacción: 1 h. Cromalogral1a flash DCMlMeOH (O -2%). Para obtener el compuesto 16 corno un sólido blanco (1 46 rug, 81 %). Punto de fusión (P.r.): 218·220 ·C. IR (KBr) v 3380, 3226, 3068, 2924, 1713, 1639, 1343, 11 77, 848 cm". RMN de 'H (DMSO-d" 300 MHz) 5" 10,96 ( IH, S", NH), 8,28 (2H, 5 d,) ~ 8,8 Hz, 2"-H), 8,10 (2H, d, ) = 8,8 Hz, 3"·H), 7,98 (IH, d, ) = 16,0, 3'-H), 7,92 (1 H, Sl», NH), 7,38 (1 H, d,.! = 8,6 Hz, 7-H), 7,34 (1 H, d,) = 2,2 Hz, 4-H), 7,24 (IH, d,.! = 2,2 Hz, 2-H), 7,13 (lH, d, ) = 16,0 Hz, 2'-H), 6,91 (IH, dd,.!= 8,6 Hz,) = 2,2. 6-H), 3,34-3,28 (2H, m, CH,CH,NHCOCH,), 2,80 (2H, 1, .! = 7,3 Hz, CH,CH,NHCOCH,), 1,80 (3H, s, CI·I,CH,NHCOCH, ). RMN de "C DMSO-d" 75

10 MHz) Ik 168,9, 165,2, 148,2, 143,1, 143,1, 140,4, 134,1. 129,6, 127,3, 124,2, 123,9, 122,0, 115,1, 112,2, 111,7, 110,3, 39,45, 25,1,22,6. EM (API-ES+) miz: [(M+H)' ] 394,1416; [(M+Naf] 416,1215; [(2M+Naf] 809,2430. Anal. Calc. para C2IH18N,O,:

C: 64,12 %; 1-1: 4.87 %; N: 10,68 %; Encontrado: C: 64,44 %; H: 5,04 %; N: 10,59%.

15 2. ACTIVIDADES BIOLÓGICAS ESTUDIADAS EN LOS COMPUESTOS DE LA INVENCiÓN.

Ejemplo 17 Medida de la inducción de la vía Nrf2-ARE mediante la med ida de la actividad 20 LuciJerasa en células MCF7 transfectada,> de Jonna estable con el plásmido ARELUC

En el ser humano, el factor de transcripción Nrf2 esta codificado por el gen

NFEL2. En condiciones nOffilales, el factor Nrf2 se encuentra secuestrado en el

citoplasma por la proteína Keapl. Kcapl actúa como una proteína sustrato para la

25 ubiquitinación ba5ada en la unión de la ubiquitina ligasa cullina-J (CuI3), que resulta en la degradación de Nrf2 por el proteasoma. El estrés oxidativo o compuestos electrófilos, modifican ciertos residuos cisteína presentes en Keapl y, como resultado, se detiene el sistema de ubiquitinación Keapl -Cu13 y se libera el factor Nrf2 en el citoplasma. Una vez liberado, el factor Nrf2 se transloca al núcleo donde

30 heterodimeriza con proteínas Mar y se une al elemento de respuesta antioxidante (ARE) situado en la región promotora de genes que codifican diversas enzimas

citoprotectoras, inducie ndo la sobreexpresión de las mismas. Estas enzimas incluyen

la NAD(l»H quinona oxidorrcductasa, glutamato-cisteína li gasa, hemo-oxigenasa-! y

la fami lia de enzimas glutatión S-tídnsferasa (GST), entre otras. Un inductor Nrt2

incrementa los niveles de Nrf2, o su actividad, o su translocación al núcleo,

S: consecuentemente, incrementa la expresión de los genes susceptibles de activación

por Nrf2.

Para el estudio de inducción del factor de isabtranscripción Nrf2 se utilizó la

línea celular AREc32 q ue está transfectada de forma estable con el gen reportero

luciferasa unido a la secuencia ARE. En presencia de electrófilos o estrés oxidativo, el

10: factor Nri2 se transloca al núcleo y se une a las secuencias ARE, activando la

expresión de luciferasa, fonnándose una cantidad proporcional de la misma. Las

células AREc32 se cultivaron en medio DMEM con glutamax, s uplementado con un

10% de suero bovino fetal (SBF), 1% de penicilina-estreptomicina y 1,6 % de

geneticina (0418) (reactivos de OIBCO, Madrid, España). Las células se cultivaron en

15: frascos de 75 cm con 11 mL del medio específico. incubadas a 37°C y 5% de CO, y Se

hicieron pases 1:4 cada 4-6 días cuando las células llegaron al ~O% de confluencia.

Para los experi mentos, las células se cultivaron en placas de 96 pocillos con fondo

transparente, a una densidad de 60x 104 células/pocillo con 100 IlL/pocillo. Tras 24 h

de culti vo, las células se trataron con los compuestos objeto de la invención a las

20: concentraciones deseadas (1, 10, 30 Y 60 ~M) durante 24 h a 37'C y 5% CO2. En cada

placa se incluyó una variable basal, una variable con tert-buti l hidroquinona (TBHQ),

10 ~M (control positivo) y las variables problema, en un volumen final de 100 ~L.

Tras 24 h de inc ubación con los compuestos objeto de estudio, se mid ió la ac tividad

de luciferasa mediante un ensayo de bioluminiscencia, para lo que se usó el kit

25: "Luciferase assay system" (Promega El 500). Tras el periodo de incubación, los

tratamientos fueron retirados y las células se lavaron con 100 J.lL de PBS 0,1 M. Una

vez ret irado el lavado, se añadieron 20 ~L del reactivo "Iysis buffer" a cada uno de los

pocillos. Tras 1 O min, la placa se introdujo en un lector multipocillo de luminiscencia,

FluoSt.r optim. (BMO labtech).

30

Tabla I

Inducción del factor de transcripción Nrf2 por los compuestos de la invención, y el compuesto de referencia TBHQ. Los datos se muestran como la media ± E.E. de al menos tres experimentos por cuadruplicado a cuatro concentraciones distintas.

Compuesto: R Actividad de Luciferasa relativa (respuesta respecto a basal)

Concentraciones: II'M 3 }lM 61'M 81'M

TBHQ: 2,19 ± O,I ** 3,83 ± 0,3*** 30}lM 6, 10 t 0,1*** IOO}lM

Concentraciones: 10I'M

MelatoRina: 1,40 ± 0, 1 1,64 ± 0,1 2,22 ± 0,1

Concentraciones: 10I'M 30l'M 60}lM

[til Cinamato: 1,46 ± O 1*** 2,34 ± 0,2** 140 ± OI*** 12,1 + 1,3*** 1,55±O,1*** 30,7 i l ,7·'"

1: Me 2,34±O,2**

2: Ph 1,63 ± 0,2* 1,63 ± 0,2* 1,78±O,I** 2,54 ± 0,.3***

3: p-Me-Ph 1,26 ± 0,1 1,26± O,1 2,O3 ± O,l *** 2,01 ±0,1 *** 1,63 ± 0,2** 3,40 ± 0,3*** 1,09i O,1 3,26 ± 0,3*** 2,53 ± 0,1 *** 2,09 ± 0,2*** 4,62 ± 0,4*** 1,57 ± 0,1***

4: o-MeO-Ph 1,67 ±0,1 ** t,67t O,I** 1,39± O,I *

5: m-OMe-Ph 1.39 ± O,I*

6: p-OMe-Ph 2,02 ± 0,2** 2,02 t O,2**

7: p-OH-Ph 0,95 ± 0,1 O,95 i O,I

8: m-MeO, p-OH-Ph 1, 11 ±O, I 1,II t O,I 1,83± 0,1*** 2,36±0,1***

9: p-F-Ph 1,92 ± 0,2* 1,92iO,2* 2,27 iO,2** 4,21 ± 0,6*** 13,3 ± 2,1 ***

\O: p-Br-Ph 1,53 i 0,2** 1,53 ± 0,2** 3,12 + 0,5***

11: p-C1-Ph 1,18± O,1 1, 18 i 0,1 1,59 i 0,2** 3,55 ± 0,9***

12: m,p-di-CI -Ph 1,16 ± O,1 1, 16±O,1 1,43±O,I * 2,12 ± 0,2***

13: o-CfrPh 1,38 ± O,I * 1,38±O,I * 1,79±O,I *** 2,55 ± 0,2**·

14: m-CFrPh 1,34± O,2· 1,34 + 0,2· 1,64 +0,2·· 2,13 ± 0,2***

15: p-CFJ-Ph 2,34 ± 0,2· 2,34 ± 0,2* 4,99 ± 0,5**· 28,9 ± 2,9**·

16: p-ND,-Ph 1,69±0,1*** 1,69 ± 0,1··· 2,41 ±O,I*** 3,19 ± 0,1***

La medida de luminiscencia en unidades arbitrarias es directamente proporcional a la cantidad de luciferasa en cada uno de los pocillos y ésta, directamente proporcional a la inducción del factor Nrf2 por cada uno de los productos objeto de estudio a la concentración establecida. Las medidas se realizaron por duplicado y los valores

fueron nonnalizados respecto a la luminiscencia de la basal tomando su valor de expresión de lucifcrasa como 1.

Los resultados de inducción del factor obtenidos para los compuestos objeto de la invención descritos como ejemplos 1 a 16 se muestran en la Tabla 1, expresados como inducción tomando como valor 1 los valores de las células no tratadas.

Ejemplo 18

Medida de la capacidad antioxidante de los compuestos: Captación de radicales

hidroxilo por los compuestos objeto de la invención

10 Para estudiar el potencial antioxidante de los compuestos objeto de la invención realizamos el estudio de la capacidad secuestradora de radicales libres mediante la medida de la capacidad de secuestrar radicales de oxígeno (ORAe). Los compuestos objeto de esta invención han sido disenados como híbridos de melatonina. compuesto natural que presenta un potente efecto secuestrador de radicales libres,

15 además de un efecto antioxidante indirecto por modulación de distintas rutas (Tan y col., 2002. Curr Top Med Chem, 2: 181-97). Tanto la melatonina como la serie de metabolitos intennedios que genera, por ejemplo N-acetil-N-fonnil-5metoxilnuramina o 3-hidroximelatonina, son capaces de detoxificar radicales libres en lo que se ha llamado la cascada antioxidante de la melatonina (Burkhardt y col., 2001,

201m J Biochem Cell Biol, 33: 775-83. Seegar y col., 1997. Br J Chn Pharmaeol, 44 : 283-4. Tan y col., 2000, Free Radie Biol Med, 29: 11 77-85). El hecho de que sus metabolitos imennedios también presenten capacidad antioxidante. confiere a esta molécula una eficiencia mayor respecto a otros antioxidantes. Debido a este mecanismo de protección, la rnelatonina se encuentra presente en altas cantidades en

25 los tejidos y órganos que están expuestos con frecuencia a las agresiones ambientales, como la piel, y en órganos que presentan un alto consumo de oxígeno, como el cerebro.

El método de estudio de secuestmdores de radicales libres mide el grado de inhibición del radical peróxido. Se mide como equivalentes de trolox e incluye la 30 extinción de radicales en el tiempo y la reducción del daf\o oxidativo producido al final del experimento. El protocolo usado se basa en el desarrollado por Ou y col. (Ou y col., 2001, J Agric Food Chem, 49: 4619-26) parcialmente modificado por Oávalos

y col. (Davalos y col., 2004, J Agric Food Chem, 52: 48-54). La reacción se llevó a cabo en un tampón fosfato 75 mM (pH 7,4), con un volumen final de 200 J.lL. Se mezclaron 150 flL de fluoresceína (concentración final de 70 nM) con 25 flL del compuesto a estudiar a la concentración deseada por triplicado, en una placa de 96 5 pocillos negra con fondo transparente para medidas de fluorescencia. Tabla 2 Medida de captación de radicales libres por los compuestos de la invención, y el compuesto de referencia melatuDina. Los datos se muestran como la media ± E.E. de al menos tres experimentos por duplicado. 10

Compuesto: R ORAC (Eq. de Trolo.)

Melatonina: 2,18 ± 0, 14

1: M. 8,64 ± 1,98

2: Ph 4,30 ± 0,50

3: p-Me-Ph 4,44 ± 051

4: o-MeO-Ph 3,02 ± 0,20

5: m·OMe-Ph 352 ± 0,27

•: p-OMe-Ph 3 51± 0,27

7: p-OH-Ph 9,21 ± 0,81

8: m-MeO,p-OH-Ph 8,04 ± 0,66

9: p-F-Ph 3,44 + 0,67

10: p-Br-Ph 2,53 ± 0,18

11: p·Cl-Ph 2,91 ± 0,32

12: m,p-di-CI-Ph 5,37± 0,38

13: o-CF,rPh 3,33 ± 0,28

14: m-CF.rPh 4,13 ± 0,39

15: p-CFj-Ph 3,97± 0.38

,.: p-NOrPh 4,12 ± 0,49

La mezcla se pre-incubó durante 15 min a 37°C y, a continuación, se añadieron rápidamente 25 flL una solución de dicloruro de 2.2-Azobis(amidopropano) (AAPH) 15 (concentración final; 12 mM). La placa se insertó inmediatamente en un lector de fluorescencia fluostar óptima con filtros de excitación y emisión de 485 y 520 nM respectivamente. Se midió la intensidad de fluorescencia durante 90 mino Cada compuesto se midió a 6 concentraciones diferentes. En el ensayo se incluyó un blanco (fluoresceína + AAPH en tampón fosfato) y una curva de calibración del compuesto

de referencia, Trolox (1-8 JlM). Todas las variables se prepararon por duplicado, en al menos 3 ensayos independientes pam cada compuesto. Las curvas de cada uno de los compuestos (LF.-tiempo) se normalizaron respecto a la curva correspondiente al blanco de cada uno de los experimentos, y se calculó el area bajo la curva (AVe) de decaimiento de fl uorescencia. El vaJor de AUe neto correspondiente a cada uno de los compuestos se calculó s ubstrayendo el valor correspondiente de AUe del blanco. Se realizaron curvas de regresión entre la Aue y la concentración del compuesto para cada una de las muestras. Los valores de ORAe se expresaron como equivalentes de trolox respecto a la curva de calibración de cada ensayo, donde el valor de trolox fue tomado como l.

Ejemplo 19 Estudio de la capacidad neuroprotectora de los compuestos objeto de la invención frente a modelos de toxicidad inducida por estrés oxidativo

Cultivo de células de neuroblastoma SH-SY5Y

Las células SH-SY5Y [ECACC 94030304], procedentes de pases entre el 5 y el 16 tras su descongelación, se mantuvieron en un medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) conteniendo 15 aminoácidos no esenciales y suplememado con suero bovino fetal al 10%, glutamina 1 mM, 50 unidades/mL de penicilina y 50 ¡..¡.glrnL de estreptomicina (reactivos de GIBCO, Madrid, España). Las células se sembraron en recipientes que contenían medio suplementado y se mantuvieron en un incubador a 3rC en atmósfera húmeda con un 5% de C02 haciendo pases 1:4 dos veces por semana Para los experimentos, las células se cultivaron en placas de 24 pocillos a una densidad de 2x lOS cél ulas Ipocillo. o en placas de 96 pocillos a una densidad de 8x 1 04 células Ipocillo. Pam los experimentos de cito toxicidad las células se trataron con los fármacos antes de llegar a confluencia, en DMEM con 1'% de suero fetal bovino.

Medida de la viabilidad celular: 3-C4.5-dimetihiazol-2-ilo)-2.5-difeniltetrazol. MIT El parámetro de que se usó para medir la viabilidad celular fue la reducción metabó lica del bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-diteniltetrazol (MIT). La

técnica MTT consiste en una medida indirecta de la viabilidad celular. Este ensayo colorimétrico se basa en la reducción del Bromuro de 3-(4.S-dimetiltiazol-2-ilo)-2.Sdifeniltetrazol (MTf). Este proceso es realizado por la enzima mitocondrial succinatodeshidrogenasa de células metabólicamente activas. la cual transforma al MIT de un 5 compuesto hidrofilico de color amarillo (sal de letrazolio) a un compuesto violáceo, hidrof6bico (sal de forruazán). La cantidad de células vivas es proporcional a la cantidad de formazán formada (Mosmann. 1983, J ¡mmllnol Methods, 65: 55-63). Las células apopl6ticas tienen sus mitocondrias dañadas y no realizarán el proceso. Por lo cual, este método permite medir supervivencia y proliferación celular, así como 10 determinar la citotoxicidad de potenciales agentes terapéuticos. Para determinar la viabilidad celular en células SH-SY5Y. se añaden 30 ~l/pocillo de MIT (5 mg/mL) y tras 2 h. el medio es retirado sin perder los cristales de formazán que se diluyen en 300 IJL de DMSO. Posteriormente. las muestras son transferidas a una placa de 96 pocillos para medir la absorbancia de las muestras a 570 nm. Todos los ensayos de MIT se 15 realizaron por triplicado. Se cuantifica espectro fotométricamente con el lector de absorbancia/fluorescencia FluoStar optima®. Los valores de absorbancia obtenidos con el tóxico solo y con cada compuesto en presencia del tóxico se restaron del valor de absorbancia obtenido en condiciones basales, sin tratamiento. El valor obtenido de la resta de los valores de absorbancia basal menos tóxico solo. se consideró el 100 %

20 de muerte y los valores obtenidos con los compuestos en presencia de tóxico se normalizaron como porcentajes de dicho valor. Para calcular el porcentaje de supervivencia. se restaron estos valores de 100.

Neuroorotección ejercida por los compuestos objeto de esta invención 1-16: La

25 activación de la vía Nrf2-ARE IXIr los compuestos ejerce un efecto neuroprotector frente a modelos de estrés oxidativo. debido a la expresión de diversos genes cilOprotectores. Por tanto, estudiamos la capacidad neuroprotectora de los compuestos objeto de eta patente en modelos in vitro de citotoxicidad inducida por estrés oxidativo. Se evaluó el efecto neuroprotector de los compuestos en células de

30 neuroblastoma humano, concretamente el pote ncial neuroproteclor de estos compuestos frente a 1) el estrés oxidativo producido por rotenona y oligomicina A, bloqueantes de la cadena respiratoria de la mitocondria según se describe en (Halliwcll, 1992,.J Neurochem, 59: 1609-23, Newhouse y col., 2004, Toxico! Sci, 79: 137-46), respectivamente, con dos protocolos diferenciados, y (2) la toxicidad inducida por el compuesto Mcnadiona, que induce toxicidad por su capacidad electrófila. Este compuesto genera estrés oxidativo en la célula al ser rnctabolizada por enzimas microsomalcs produciéndose radicales hidroxilo y ROS. Produce una despolarización del potencial de membrana mitocondrial, generando una liberación de factores apotóticos tales como el citocromo e, desencadenando sucesivamente la activación de una cascada de caspasas (Loor y col., 2010, Free Radie Bio! Med, 49: 1925-36, Chuang y col., 2002, Cancer Res, 62: 6246-54). La activación de la caspasa 3, puede causar la proteólisis de proteínas cel ulares clave, e inducir la fragmentación del ADN, conduciendo en última instancia a la apoptosis celular (Gerasimenko y col., 2002, J eeu Sci, 11 5: 485-97).

1) Neuroprotección frente a estrés oxidativo inducido por la combinación de rotenona (30 ~M) Y oligomicina (1 O ~M):

a. Ejemplo 19a: Modelo de Pre-incubación:

Este diseño se plantea para estudiar en deta lle el potencial efecto inductor de Nrf2 de los compuestos durante el periodo de pre-incubación, de forma que, al no estar presente conjuntamente con el tóxico eliminamos el potenciaJ efecto secuestrador de radicales libres que presumiblemente también poseen los compuestos. Para este estudio planteamos un protocolo en el que las células son pre-incubadas con cada uno de los derivados estudiados a la concentración I IlM durante 24 h. Tras el periodo de pre-incubación, el medio se retiró y fue sustituido por medio de cultivo con la mezcla de tóxicos rotenona/oligomicina-A, a las concent raciones de 30 IlM Y 10 IlM respectivamente. Este diseño se plantea para estudiar en detalle el potencial efecto inductor de Nrf2 de los compuestos durante el periodo de pre-incubación.

En todos los ensayos farmacológicos se utilizó un control positivo como comparación y para evaluar la bondad del método empleado. En el todos los experimentos se utilizó melatonina (l IlM) que ha demostrado capacidad

neuroprotectora en diversos modelos de estrés oxidativo, incluido el modelo de rotenona/oligomicina.

Los resultados obtenidos para los compuestos descritos como compuestos 1 a 16 que se muestran en la Tabla 3, vienen expresados en porcentaje de supervivencia 5 celular y en porcentaje de la actividad neuroprotectora.

Tabla 3 Porcentaje de protección neuronal producido por los compuestos de la invención y melatoDioa, a la concentración de 1 ",M. Los datos se expresan como la media ±

10 E.E. de al menos tres experimentos por triplicado, realizados con tres lotes distintos de células.

Compuesto: R RotlOlig (30/10) Pre-incubación

% Supervivencia: % Protección

Basal: 100

Rote/Olig: 58,09 ± 2,17

Melatonina: 71,76 + 2,81 31,58***

1: Me 70,38 ±4,03 28,48 **

2: Ph 72,65 ±3,59 34,66**

3: p-Me-Ph 67,03 ± 3,21 20,49***

4: o-MeO-Ph 67,07 ± 2,61 19,04**

5: m-OMe-Ph 70,17 ± 2,42 27,07***

•: p-OMe-Ph 69,97±3,04 29,79*"'"

7: p-OH-Ph 71,55 ± 4,92 32,47***

8: m-MeO, p-OH-Ph 73,95 ± 3,13 37,00***

9: p-F-Ph 67,41 ± 2,13 21,52***

10: p-Br-Ph 71,11 ± 2,61 30,20***

1\: p-CI-Ph 73,17 ± 3,12 33,53***

12: m,p-di-CJ-Ph 70,12 ±4,35 25,28**

\3: o-CFrPh 66,96 + 3,01 22,09**

14: m-CF3-Ph 72,45 ± 2,92 34,90***

15: p-CF,-Ph 73,36 ± 3,31 37,46***

l.: p-N02-Ph 68,45 ± 2,88 23,00**

b. Ejemplo 19b: Modelo de Pre-veo-incubación:

En este modelo, se realizó una pre-incubación de 24 h con los compuestos sintetizados a una concentración de I J.l.M Y una eo-incubación de 24 h de estos en

presencia rotenonaloligomicina A (30: ~M/I O ~M). Transcurridas 24h, la viabilidad

celular fue evaluada por el método de la reducción de MIT. Con este protocolo se

obtie ne infonnación sobre todas las potenciales actividades biológicas presentes en la

estructura objeto de estudio.

s

10: Tabla 4 Porcentaje de protección neuronal producido por los compuestos de la invención y melatonina, a la concentración de I J.1M. Los datos se expresan como la media ± E.E. de al menos tres experimentos por triplicado, realizados con tres lotes distintos de células.

Compuesto: R RotlOlig (30/10 ) Pre y coincubación % Su pervivencia % Protección

Basal: 100,00

ROlc/Olig: 48,6U2,54

Melatonina: 68,27± 4,27 31,08***

I: Me 76,98 ± 1,30 28,76***

2: Pb 73,69 ±4,65 47,99***

3: p-Me-Ph 76,40 ± 3,89 55,14 ***

4: o-MeO-Ph 69,90 ± 4,17 28,OSjo

5: m-OMe-Ph 78,70 ±4,37 57,58u jo

.: 6 p-OMe-Ph 71,57±3,94 44,08ujo

1: p-OH-Pb 79,67 ± 2,37 39,76jou

8: m-MeO, p-OH-Ph 81,09 ± 1,71 41,73u jo

9: p-F-Ph 69,62 ± 2,63 40,46ujo

10: p-Br-Pb 70,40 ± 2,21 40,75ujo

11: p-CI-Ph 70,15 ± 3,70 28,44u

12: m,p-di-CI-Ph 69,86 ± 3,47 27,82 u

13: o-CF.rPh 73,83 ± 4,55 50,21 joH

14: m-CFr Ph 72,56 ± 3,75 45,94H jo

15: p-CF,-Ph 72,96 ± 2,99 47,61***

16: p-N02-Ph 76,52 ± 2,18 29,53***

Al estar presente el farmaco durante las 24 horas previas a la incubación del tóxico, éste es capaz de mostrar su capacidad inductora del factor Nrf2 favoreciendo a<;í la supervivencia celular. Ademá~, también está presente a la vez que exponemos las células al estímulo tóxico, la mezcla de rotenona/oligomicina A que provoca la aparición de una gran cantidad de radicales libres en el interior celular. Estos radicales

dañan la célula e inducen la apoptosis celular. Cuando el compuesto está presente

durante esta etapa puede mostrar, además, su carácter secuestrador de radicales libres.

Los porcentajes de supervivencia y protección se resumen en la Tabla 4.

5: 2) Ejemplo 19c: Ne uroprotecci6n frente a estrés oxidalivo inducido por menadiona:

Con el fin de detenninar la capacidad neuroprOlectora en otro modelo de estrés

oxidativo~: seleccionamos como tóxico menadiona. Este compuesto es una cetona

aromática policíclica (1,4-naftoquinona) que tiene la capacidad de generar radicales

10: libres intracelulares en multiples sitios a través de reacciones radicálicas redox en

cadena vía activación de: NAOPI-I/quinona oxidasa. También es capaz de inducir

fragmentación de ADN y depletar a la célula del antiox idante natural glutatión de

fonna rápida. La menadiona induce apoptosis a través de la regulación negativa de

ERK y JNK, seguido por la activación de caspasa 3 y la ruptura de la ADP-ribosa

15: polimerasa (PARP).

Los estudios de neuroprotección frente a menadiona han sido diseñados, de

igual: fonna que en el caso anterior, con pre y co-incubación. Las células de

neuroblastoma: humano SU-SY5 y fueron pre-incubadas con cada uno de los

compuestos a la concentración de 1 ~Mdurante 24 h, transcurridas las cuales el medio

20: fue sustituido por medio fresco con menadiona a la concentración de 8 ~M Y cada uno

de los compuestos (1 ¡..tM) durante 24 h más.: Finalmente, la viabi lidad celular fue

medida mediante la técnica de reducción de MIT.

4.

Tabla 5 Porcentaje de protección neuronal producido por Jos compuestos de la invención y melalonina, a la concentración de J ",M. Los datos se expresan como la media ±

E.E. de al menos tres experimentos por triplicado, realizados con tres lotes distintos de células.

Compuesto: R MenadiOna (8 uM) pre y co SH-SY5Y

% Supen'ivencia: % Protección

Basal: 100

Menlldiona: 62,49 ± 2,65

Melatonina: 72,86 ± 5,24 37,35***

1: Me 87,65 ± 1,74 63,28***

2: Ph 73,99 ± 3,18 32,45***

3: p-Me-Ph 71,42 ± 2,43 25,01 '"

4: o-MeO-Ph 90,53 ± 1,97 67,12**·

5: m-OMe-Pb 75,96 ± 3,31 38,11 **·

6: p-OMe-Ph 74,67 ± 2,91 35,77***

7: p-OH-Ph 86,76 ± 3.24 61,75***

8: m-MeO, p-OH-Ph 89,88 ± 1,86 69,39***

9: p-F-Ph 71 ,62 ± 3,74 29,65*

10: p-Br-Ph 72,38 ± 3,75 27,62**

11: p-CI-Ph 85,65 ± 2,93 57,01***

12: m,p-di-CI-Ph 86,53 ± 3,04 59,33***

13: o-CFrPh 74,90 ± 2,19 36,22***

l': m-CFJ-Ph 78,46 ± 3,03 44,79**·

15: p-CFJ-Ph 73,23 ± 3,43 31 ,64**

16: p-NO,-Ph 84,31 ± 2,15 53,57***

Ejemplo 20

Propiedades toxicológicas de los compuestos objclo de esta invención En general, los compuestos con capacidad inductora del factor de transcripción Nrf2 podrían presentar efecto hepatotóxico, debido al carácter electrófilo que,

generalmente, los caracteriza. Los derivados objeto de esta invención fueron diseñados para evitar esta toxicidad y mejorar su perfil de segurid ad. El hígado juega un papel esencial en el metabolismo de compuestos endógenos y exógenos. Los hepatocitos captan estos compuestos y tras metabolizarlos. son eliminados por distintas vías. Los compuestos mctabolizados, suelen presentar menos actividad farmacológica y menor toxicidad que los correspondientes principios activos. Sin embargo, en determinados casos. los principios activos o sus correspondientes metabolitos pueden resultar tóxicos para los hepatocitos. La toxicidad hepática es una de las principales causas para la retirada de fármacos de los estudios preclínicos. La línea celular HepG2 muestra la mayoría de las características genotípicas y fenotípicas de las células hepáticas nonnales, y poseen las funciones tipicas de las células hepáticas humanas. Además, estas células han sido definidas por la EMA (European Medicines Agency) como modelo de hepatoxicidad por medida de la inducción de apoptosis y/o supervivencia celular. Por tanto, se evaluó el perfil de seguridad de los compuestos objeto de la presente invención en la línea celular de hepatocarcinoma HepG2. Las células HepG2 se cultivaron en flask T75 usando como medio de cultivo EMEM suplementado con aminoácidos no esenciales, 10 % de suero fetal bovino. 50 unidadeslmL de penicilina y 50 J.lg/mL de estreptomicina (reactivos de GIBCO, Madrid, España). Los cultivos se mantuvieron en un incubador con una mezcla de gases de 0 2/C0 2 (95/5 %) a 37°C con atmósfera húmeda haciendo pases 1:2 dos veces por semana cuando llegaban a confluencia del 90%. Todos los experimentos se realizaron en células que estaban entre los pases 5 y 15. Para los experimentos. las células se cultivaron en placas de 96 pocillos a una densidad de 4x I 04 células/pocillo en 200 J.lL de medio de cultivo. Tras 24 h en cultivo, el medio de mantenimiento se retiró y se sustituyó por 100 J.lL de la correspondiente disolución de los compuestos objeto de la invención en medio de culti vo a las concentraciones deseadas (1, 10, 30 Y 100 J.lM). Los compuestos fueron estudiados por triplicado, incluyendo en cada experimento 3 pocillos sin tratamiento, que fue considerado el 100 % de viabilidad (condiciones basales). Tras 24 h de incubación con los tratamientos. la supervivencia fue evaluada mediante el método de reducción de MIT. Con objeto de estudiar su perfil de seguridad más a fondo. también se evaluó su efecto sobre las células usadas

4.

para los experimentos de neuroprotección, la línea celular de neuroblastoma humano

SI-I-SYSY. Los métodos de mantenimiento y cultivo de esta lí nea celular han sido

descritos anteriormente.: Para los ex perimentos de tox icidad, las células SH-SY5Y

fueron cultivadas en placas de 96 pocillos a la densidad de 6x I 04 células/pocillo. Las

5: condic iones experimentales fueron las mismas que las utilizadas para el estudio de

toxicidad en las cé lulas HepG2.

Tabla 6

DLso de los compuestos de la invención, medida: como reducción

ID: via bilidad celular en la línea de hepatocarcinoma HepG2 y en la

línea neuronal SH-SV5V. Los datos se expresan como la media ±

E.E. de al menos 3 experimentos por triplicado, realizados con 3

lotes distintos de células.

SH-SY5Y

HepG2

Compuesto

R

EC .. Ú1MJ

EC.. (I'M)

Melatonina

> 100

Me

> 100

Ph

>100

p-Me-Ph

> 100

o-MeO-Ph

> 100

m-OMe-Ph

> 100

p-OMe-Ph

> 100

p-OH-Ph

> 100

m-MeO, p-OH-Ph

p-F-Ph

> 100

p-Br-Ph

> JOO

> 100

p-CI-Ph

> 100

m,p-di-Cl-Pb

o-CF)-Ph

> 100

m-CF)-Ph

> 100

p-CFJ-Ph

> 100

>100

p-NOz-Ph

Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 6 expresados como la dosis letal 50 (OLso), o concentración necesaria para reducir un 50% la viabilidad de las condiciones basales (sin tratamiento) medida por el método de la reducción de MTT. En general, todos los compuestos mostraron baja toxicidad en la línea de

neuroblastoma humano SI-I-SY5Y. Por otra parte, ninguno de ellos mostró toxicidad en la línea de hepatocarcinoma HepG2, por lo que los compuestos objeto de esta invención, mostrarían una baja o nula hepatoxicidad.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (1) 1,2,3-tiadiazol-4-ilo, 1,2,3-tiadiazol-5-ilo, 1,2,4-tiadiazol-3-ilo, 1,2,4

5

(1)

donde

R se selecciona del grupo consistente en:

10

alquilo(C1 -Có} opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de

halógeno seleccionado entre flúor, clo ro y bromo; cicloalquilo(CJ-C,);

alcoxilo(CJ -Có}; cicloalcoxilo(Cr C6); ciano y nitro; o bien dos grupos

pueden fonnar conjuntamente un grupo -O(CH2)rnO-, -(CH2)p-, o -

CH~CH-CH~CH-; o

15

fenilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados

independientemente entre flúor; cloro; bromo; alquilo(C1-C6)

opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno

seleccionado entre flúor, cloro y bromo; cicloalquilo(C)-Có) ; alcoxilo(C 1

C6); cicloa!coxilo(CJ-C6) ; ciano y nitro; o bien dos grupos pueden fonnar

20

conjuntamente un grupo -O(CH' )mO-, -(CH,)p-, O -CH~CH-Cl-l~CH-; y/o

un grupo heteroarilo seleccionado entre 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 3

piridazinilo, 4-piridazinilo, 2-pirimidinilo, 4-pirimidinilo, 5-pirimidi nilo, 2

pi razinilo, 3-pirazinilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo,

3-tienilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5

25

tiazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 3-isotiazolilo, 4

isotiazolilo, 5-isotiazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, 3-pirazolilo, 4

pirazolilo, l ,2,3-oxadiazol-4-ilo, 1,2,3-oxadiazol-5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3

ilo, 1,2,4-oxadiazol-5-ilo, 1,2,5-oxadiazol-3-ilo, 1,3 ,4-oxadiazol-2-ilo,

tiadiazol-5-ilo, 1,2,5-tiadiazol-3-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2-ilo, 1,2,3-triazol-4

ilo, 1,2,4-triazol-3-ilo y 5-tetrazolilo, estando el grupo hcteroarilo

opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados

independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6),

cic1oalquilo(C3-C,), alcoxilo(C,-C,), cic1oalcoxilo(C3-C,), ciano y nitro;

Rl y R2 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-Có), cicloalquilo(C3-Có) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos O tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-Có), alcoxilo(C 1-C6) , cic1oalquilo(C)-C6), cicloalcoxilo(C)-Có), ciano, nitro y carboxilato O bien dos grupos pueden fonnar conjuntamente un grupo -O(CHz)qO-, -(CHz)r-, o

Ct-t ~Ct-t-CH~Ct-t -;

R). ~y Rs se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-C6), cicloalquilo(C)-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C)-C6), cicloalcoxilo(C)-Có), ciano, nitro y carboxilato o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH2)qO-, -(CHÚr-, o

CH~CH-CH~CH-,

~ se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C1-C6), cicloalquilo(C)-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos O tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C1-C6), alcoxilo(C1-Có), cicloalquilo(C)-Có), cicloalcox ilo(Cj-C6), ciano y nitro;

R7 se selecciona del grupo consiste nte en hidrógeno, alquilo(Cl-C6), cicloalquilo(Cy Có), acetilo o fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos O tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C 1-Có), alcoxilo(C[-C6), cicloalquilo(C)-Có), cicloalcox ilo(Cj-C6), ciano y nitro o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo ---{CHzk , o -CH=C H-CH=CI-I

R.g se selecc iona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C[-Có), cicloalquilo(C)-Có), acetilo o [enilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C]-Có), alcoxilo(C1-Có), cicloalquilo(C)-Có), cicloalcoxilo(C)-Có), ciano y nitro o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo ---{CHzk , o -CH=C H-CH=C H

o R, ~ R,de formula ~C~S; X se selecciona entre un atomo de oxígeno, un átomo de nitrógeno o un átomo de azufre, -SO-o SO,.

n es un número entero seleccionado entre 0, 1,2, 3, 4 o 5; sus sales, profánnacos o solvatos,
2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R se selecciona del grupo consistente en fe ni la opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados independientemente entre flúor; cloro; alquilo(C.9 Có) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; alcoxilo(C 1-C6) y nitro; o un heterociclo opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados independientemente entre flúor; cloro; alquilo(CI-C6); alcoxilo y nito. RI es hidrógeno; R2 es hidrógeno; R) es hidrógeno; ~es hidrógeno; Rs es hidrógeno; R6 es hidrógeno; R, es ac ilo (C2) Rg es hidrógeno; y n es un entero seleccionado entre O, I Y 2~ Y

sus sales, profármacos o solvatos, preferentemente, sus sales farmacéuticamente aceptables..
3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R es fenilo opcionalmente sustituido por un grupo seleccionado entre Ouor; alquilo(C 1-C6) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre núor, cloro y bromo; alcoxilo(C J-C6) y nitro;

R7 es aciJo Rg es hidrógeno; y n es 1; y

sus sales, profánnacos o solvatos, preferentemente, sus sales fannacéuticamente aceptables.
4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R es fcnilo opcionalmente sustituido por un grupo seleccionado entre flúor; alquilo(C1-Có) opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; a!coxilo(C1-C6) y nitro; R, ~ Rs es ~C~S; y

n es 1; y sus sales, profármacos o solvatos, preferentemente, sus sales fannacéuticamente aceptables.

S. Un compuesto según la reivindicación 3, seleccionado entre:

•

Cinamato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•

(E)-3-(3-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•

(E)-3-(4-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoelil)-1 H-indol-5-ilo

•

(E)-3-(2-metoxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•

(E)-3-(4-clorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-S-ilo

•

(E)-3-( 4-bromofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•

(E)-3-(4-fluorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-IH-indol-5-ilo

•

(E)-3-(3-(trifluorometil)fenil)-acrilalo de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-S-ilo

•

(E)-3-( 4-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-S-ilo

•

(E)-3-(2-(trifluorometil)fenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•

(E)-3-(4-metilfenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•

(E)-3-(3,4-diclorofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-5-ilo

•

(E)-3-(4-nitrofenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-IH-indol-5-ilo

•

(E)-2-butenoato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-S-ilo

•

(E)-3-(4-hidroxifenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-S-ilo

•

(E)-3-(4-hidroxi-3-metoxyfenil)-acrilato de 3-(2-acetamidoetil)-1 H-indol-S¡lo
6. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (1)

(1)

5

donde

R se selecciona del grupo consistente en:

alquilo(C]·C6) opcionalmente sustituido por uno, dos, O tres átomos de

halógeno se leccionado entre flúor, cloro y bromo; cicloalquilo(C)-C6);

10

alcoxilo(CI-C6) ; cicloalcoxilo(C3-Có); ciano y nitro~ O bien dos grupos

pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH')mO-, -(CH,),-, o -

CH~CH-CH~CH-; o

fenilo opc ionalmente sustituido por uno, dos O tres grupos se lecc ionados

independientemente entre flúor; cloro; bromo; alquilo(CI-C6)

15

opcionalmente sustituido por uno, dos, O tres átomos de halógeno

seleccionado cntre flúor, cloro y bromo; cicloalquilo(C)-C6); alcoxi lo(C I

C6); cicloalcoxi lo(C3-Có) ; ciano y nitro; o bi en dos grupos pueden formar

conjuntamente un grupo -O(CI1,)mO-, -(Cl1,),-, o -CH~CII-CII~CH-; y/o

un grupo hctcroarilo seleccionado entre 2-pi ridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 3

20

piridazinilo, 4-piridazinilo, 2-pirimidinilo, 4-pirimidinilo, 5-pirimidi nilo, 2

pirazinilo, 3-pirazinilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 2-furil o, 3-furilo, 2-ticnilo,

3-ti cni lo, 2-oxazoli lo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 2-tiazoli lo, 4-tiazolilo, 5

tiazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 3-isotiazolilo, 4

isoti azolilo, 5-i sotiazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazo lilo, 3-pirazolilo, 4

25

pirazoli lo, 1,2,3-oxadiazol-4-ilo, 1,2,3-oxadiazol-5-i 10, 1,2,4-oxadiazol-3

ílo, 1,2,4-oxadiazol-S-ilo, 1,2,S-oxadiazol-3-ilo, 1,3,4-oxadiazol-2-ilo,

1,2,3-tiadiazol-4-ilo, 1,2,3-tiadiazol-5-ilo, 1,2,4-tiadiazol-3-ilo, 1,2,4

tiadiazol-S-ilo, 1,2,5 -tiadiazol-3-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2-ilo, 1,2,3-triazol-4

ilo. 1.2,4-triazol-3-ilo y 5-tetrazolilo. estando el grupo heteroarilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C,-Có), cicloalquilo(Cr Có), alcoxilo(C, -C6), cicloalcoxilo(CJ-C6}, ciano y ni tro;

5 R, y R2 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C,-Có), cicloalquilo(C3-C6) y fenilo, opcionalmente sustiluido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C,-C6), alcox ilo(C,-C6), cicloalquilo(C)-C6), cicloalcoxilo(C)-C6), ciano, nitro y carboxilato o bien dos grupos pueden fonnar conjuntamente un grupo -O(CI-b)qO-, -(CI-h)..-, o

10 CH~CH-CH~CI I -;

R3. R. y R5 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C 1-C6), cicloalquilo(CJ-C6) y renilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C¡-C6), alcoxilo(C,-C6), cicloalquilo(CJ-C6), cicloalcoxiJo(CJ-C6), ciano, nitro y carboxilato o

15 bien dos grupos pueden fonnar conjuntamente un grupo -O(CI-I,),O-, -(CH,),-, o

CH~CH-CH~CH-;

R6 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno. alquilo(C¡-C6), cicloalquilo(C3-C6) y renilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C,-C6),

20 alcoxilo(C,-C6). cicloalquilo(CJ-C6), cicloalcoxilo(CJ-C6), ciano y nitro;

R7 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C¡-C6), cicloalquilo(CJ-C6), acetilo o fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(CI-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(CrC6), ciano y nitro o bien dos

25 grupos pueden formar conjuntamente un grupo -{Cr-hk , o -CH=CH-CI-l=CI-I-Rs se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C¡-C6), cic1oalquilo(C3-C6), acetilo o re ni lo, opcionalmente sustituidu por uno, dos ° tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C¡-C6), alcoxilo(C,-C6), eicloalquilo(C)-C6), eicloaleox ilo(C)-C6), eiano y nitro o bien dos

30 grupos pueden fonnar conjuntamente un grupo -(CH2)s·, o -CH=CH-CH=CH-;

o R7 = Rgde fonnula =C=S;

X se selecciona entre un átomo de oxígeno, un átomo de nitrógeno o un átomo

de azufre, -SO-o S02

n es un número entero seleccionado entre 0, 1,2,3, 4 o 5; sus sales, pro fármacos o solvatos, que comprende hacer reaccionar un ácido de fórmula (11):

(11) donde R, R] Y R2 tienen el significado indicado previamente;

con un compuesto de fó rmula (III): R,

N-Rs

R, ~n-,

~

X

10

R,

(1Il)

donde, R3, ~, Rs. Rt;, R7, R.g Y n tienen el significado indicado previamente.
7.

Procedimiento según la reivindicación 6, en el que la reacción entre el compuesto de

15

fórmula (n) y el compuesto de fórmula (III) se ll eva a cabo en presencia de un

catalizador seleccionado entre HATU, DCC o EDCI, en un

disol vente seleccionado

entre diclorometano, I ,2-dicloroetano, cloroformo y sus mezcl as.
8.

Una composición fannacéutica que comprende un compuesto de fórmula (1) según

20

cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal, profánnaco o solvato,

farmacéuticamente

aceptable del mismo, y un excipiente fannacéuticamente

aceptable.
9.

Uso de un compuesto de fónnula (1) según cualquiera de las reivindicaciones I a 5, O

25

de una sal, profánnaco o solvato. farrnacéut icamente aceptable del mismo, en la

elaboración de una composición fam18céutica con efecto inductor de N rf2 y/o antioxidante y/o ncuroprotector y/o inmunomodulador.
10.

Uso de un compuesto de fórmula (1) según cualquiera de las reivindicaciones I a 5, o de una sal, profárrnaoo o solvato, farmacéuticamente aceptable del mismo, en la elaboración de una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de Wla enfermedad neurodegenerativa central y/o periférica o de una enfermedad isquémico-cerebral (ictus).
11.

Uso según la reivindicación 9, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la enfermedad de Alzheimer.
12.

Uso según la reivindicación 9, en el que dicha enfermedad ncurodegenerativa sea la enfermedad de Parkinson.
13.

Uso según la reivindicación 9, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la enfermedad de Huntington.
14.

Uso según la reivindicación 9, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la esclerosis múltiple.
15.

Uso según la reivindicación 9, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea el ictus cerebral.
16..Uso según la reivindicación 16, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la esclerosis lateral amiotrófica.
17. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 8-16, en el que un compuesto de fórmula (1), o una sal, profármaco °solvato, farmacéuticamente aceptable del mismo se use para la fabricación de un medicamento para su administración por vía oral, parenteraL subcutánea, intramuscular, intravascular o rectal.
5.
18.

Uso según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 18, en el que dicho compuesto de fórmula (1), o una sal. profánnaco o solvate, farmacéuticamentc aceptable del mismo, se administra en una dosis diaria comprendida entre 0, 1 y 100 mglkg peso corporal.
19.

1Jso según la reivindicación 19, en el que dicho compuesto de fórmula (1), o una sal farmacéuticamentc aceptable del mismo, se administra en una dosis diaria comprendida entre 2 y 5 rnglkg peso corporal.