ES2587137B1

ES2587137B1 - Uso de los compuestos derivados de 3-alquil-4-aril-1,4,6,7,8,9-hexahidropirazolo [4',3':5,6]pirano[2,3-b]quinolin-5-amina como inhibidores duales de GSK3B - AChE e inductores de Nrf2 para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas

Info

Publication number: ES2587137B1
Application number: ES201500274A
Authority: ES
Inventors: Sheila ABRIL COMESAÑA; Manuela García López; Maria Teresa RAMOS GARCÍA; José Carlos MENÉNDEZ RAMOS; Antonio Garcia Garcia; Rafael LEÓN MARTÍNEZ; Isabel GAMEIRO ROS; Giammarco TENTI; Patrycja MICHALSKA; Izaskun BUENDÍA ABAITUA
Original assignee: Universidad Complutense de Madrid; Universidad Autonoma de Madrid; Fundacion para la Investigacion Biomedica del Hospital Universitario de la Princesa
Current assignee: Universidad Complutense de Madrid; Universidad Autonoma de Madrid; Fundacion para la Investigacion Biomedica del Hospital Universitario de la Princesa
Priority date: 2015-04-20
Filing date: 2015-04-20
Publication date: 2018-03-16
Anticipated expiration: 2035-04-20
Also published as: ES2587137R1; ES2587137A2

Abstract

La presente invención se refiere al uso de derivados de 3-alquil-4-aril-1,4,6,7,8,9-hexahidropirazolo[4',3':5,6]pirano[2,3-b]quinolin-5-amina con actividad inhibidora dual de las enzimas glucógeno-sintasa-quinasa 3{be} y acetilcolinesterasa, capacidad inductora del factor de transcripción Nrf2, y capacidad neuroprotectora. Otro aspecto de la invención se refiere al uso de los derivados objeto de esta invención para el tratamiento de enfermedades en cuya patogénesis interviene la actividad anormal de estas enzimas en conjunto y/o el estrés oxidativo y/o enfermedades que cursen con desregulación de la actividad de genes de fase II activados por el factor Nrf2, como las enfermedades neurodegenerativas.

Description

USO DE LOS COMPUESTOS DERIVADOS DE 3-ALOUIL-4-ARIL-I,4,6,7,8,9HEXAHIDROPIRAZOL014',3':S,61PIRAN0!2,3-B10UINOLIN-S-AMINA COMO INHlBIDORES DUALES DE GSK36 -AChE E INDUCTORES DE Nrtl PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES NEURODEGENERATIVAS

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se encuadra principalmente en el sector farmacéutico con aplicaciones dirigidas a la prevención y/o tratamiento de enfennedades y cualquier tipo de afección O daño que implique una actividad anonnal de la enzima glucógeno-sintasa-quinasa 3~ (GSK3~) y la enzima acetilcolinesterasa (AChE) o que curse con altos niveles de estrés oxidativo y, en concreto, en la identificación de compuestos químicos útiles en el tratamiento preventivo y/o terapéutico de enfermedades neurodegenerativas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno neurodegenerativo caracterizado por un deterioro progresivo de la función colinérgica, producción y agregación de j3-amiloide y formación de ovillos neurofibrilares, y representa la forma más común de demencia en personas adultas. Debido al progresivo envejecimiento de la población mundial, se estima que en el año 2050 esta enfermedad afectará a 115 millones de personas. Por tanto, la búsqueda de estrategias terapéuticas que prevengan

o detengan el proceso de neurodegeneración es prioritaria.

Los principales signos clínicos de la EA son la pérdida gradual de memoria y un notable deterioro de las capacidades cognitivas, debido a la disminución progresiva del número de neuronas, sobre todo del sistema colinérgico (Francis y col., 1999, J NeuroJ Neurosurg Psychiatry, 66: 137-47). Las características de la enfermedad a nivel histopatológico son: la formación de placas extracelulares del péptido p-amiloide (PA) (Vinters, 1987, Stroke, 18: 311-24) y de ovillos neurofibrilares intracelulares (NFTs), constituidos por acúmulos de la proteína tau hiperfosforilada (Lee y col.,

2001 , Al/l/u Rev Neurosci, 24: 1121-59). Otras alteraciones caracteristicas son la disfunción mitocondrial. el aumento de los niveles de estrés oxidativo (Pratieo. 2008. Trends Pharmacol Sci. 29: 609-15), y la neuroinflamación.

Se ha descrito que los ovillos neurofibrilares están formados por filamentos apareados en forma helicoidaI (PHF) de proteína tau hiperfosforilada. En los enfermos de EA, el grado de fosforilación de Tau es mayor que en condiciones nonnales y parece existir una correlación clara entre la hiperfosforilación de esta proteína y la pérdida de capacidades cognitivas de estos pacientes (Grundke-Iqbal y col., 1986, Proc. Nal/. Acad. Sci. U. S. A., 83: 4913-7, Greenberg y colo, 1992, J. Bio/. Chem.,

267: 564-9). Como consecuencia de la hiperfosforilación de tau se produce la despolimerización de los microtúbulos (Moreno y co!., 1995, FEBS Lelt. , 372: 65-8), que lleva a la degeneración neurona!. Las principales quinasas en la hiperfosforilación de Tau son la GSK3~ y la quinasa dependiente de ciclina-5 (CDK5). Por tanto los inhibidores de la quinasa GSK3~ se presentan como nuevos agentes terapéuticos para la EA, capaces de evitar la fonnación de ovillos neurofibrilares y así evitar el daí'io neuronal que producen. Los ovillos neurofibrilares aparecen en las denominadas Taupatias que cursan con hiperfosforilación de Tau, tales como la EA, la esclerosis lateral amiotrófica, el parkinsonismo postencefálico, la parálisis supranuclear progresiva, la enfennedad de Gerstmann-Str!iussler-Scheinker, la enfennedad de Hallervorden-Spatz, la enfennedad Creutzfeldt-Jacob, el síndrome de Down, la enfennedad de Niemann-Pick y la enfermedad de Pick.

Por otro lado, la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS), o de radicales libres en general, aumenta progresivamente con la edad, siendo éste el mayor factor de riesgo en estas patologías. Las neuronas tienen diversos mecanismos que actúan como sensores redox para identificar e iniciar la respuesta antioxidante con objeto de evitar la acumulación o liberación excesiva de especies pro-oxidantes. El elemento de respuesta antioxidante (ARE) es una secuencia reguladora que se encuentra en la región adyacente a 5'-del ADN y precede a regiones que codifican un gran número de enzimas citoprotectoras, regulando la expresión de éstas en respuesta a la presencia de estrés oxidativo (Rushmore y col., 1991 , J Biol Chem, 266: 11632-9, Joshi y col., 2012, Recen! Pat CNS Drug Discov, 7: 21 8-29). En presencia de un estímulo tóxico, o por activación química, el factor de transcripción Nrf2 (del inglés "nuclear factor (erythroid 2 related)-like 2") se libera del co-represor Keapl, y se transloca al núcleo donde dimeriza con pequeñas proteínas Mar, para formar el complejo de activación-trans que se une a la secuencia ARE (Nguyen y col., 2004, Free Radie Biol Med, 37: 433-41). En consecuencia, la activación-trans de ARE inducida por Nrf2 coordina la expresión de una gran cantidad de genes que combaten el estrés oxidativo y su toxicidad en un gran número de tejidos y tipos celulares (Ramos-Gomez y col., 2001 , Proc Nall Acad Se; U S A, 98: 3410-5, Eoomoto y col., 2001 , Toxieol Sci, 59: 169-77, 0.0 Y col., 2004, Proc Nall Aead Sei U S A, 101 : 10446-51, Lee y col., 2003, J Biol Chem, 278: 37948-56).

La desregulación y/o la disfunción de la ruta Nrf2-ARE se ha correlacionado con la aparición y/o desarrollo de diversas patologías neurodegenerativas, entre las que se encuentran la EA, la enfennedad de Parkinson (EP) y la esclerosis lateral amiotrófica (ELA), o aquellas que cursan con pérdida neurona) como el ictus. Por tanto, la vía Nrf2-ARE se ha convertido en una importante diana terapéutica para el tratamiento de éstas (Joshi y coL, 2012, Recen! Pa! CNS Drug Discov, 7: 218-29) y otras enfennedades.

La localización predominantemente citosólica de Nrf2 en neuronas en la EA depende, entre otros factores, de la acción de GSK3p. De hecho, se ha demostrado que su inhibición con litio favorece )a acumulación nuclear y el aumento de la actividad transcripcional de Nrf2 (Rojo y col., 2008, Mol Cell Nel/rosei, 39: 125-32). Esta enzima es capaz de modular la actividad de Nrf2 a través de dos mecanismos, promoviendo en ambos casos su localización citosólica: 1) GSK3p fosforila a Nrf2 (Rojo y coL, 2008, J Neurochem, 105: 192-202) para ser después degradado por el proteasoma; 2) GSK3p promueve la exclusión de Nrf2 del núcleo a través de la tirosina quinasa Fyn (Jain y col., 2007, J Biol Chem, 282: 16502-10) y en consecuencia Nrf2 es secretado de nuevo al citosol para ser degradado por el proteasoma. De esta fonna, GSK3p regula negativamente a Nrf2, favoreciendo la acumulación de ROS y, por tanto, incrementando los niveles de estrés oxidativo y muerte neuronal.

Por otra parte, los casos de EA familiar se deben a mutaciones, entre otras, en la proteína precursora de amiloide (APP), presenilina-I y 2 (PS-l, PS-2), que afectan negativamente al procesamiento de la proteína APP, incrementado la producción de placas de beta amiloide (jJA) (Haass y col., 2012, Cold Spring Harb Perspect Med, 2: a006270). En particular, PS·) está relacionada con GSK3p. pues se ha demostrado que PS-I inactiva GSK3P a través de la vía de supervivencia PI3K1Akt (Baki y col., 2004, Embo J, 23: 2586-96). Por tanto, las mutaciones en PS-l inhiben la señalización PI3K1Akt dependiente de PS-l, favoreciendo la actividad de GSK3p y, con ello, la hiperfosforilación de tau y la regulación negativa de Nra.

Por otro lado, como ya se ha mencionado, una de las principales características de la EA y la responsable de sus síntomas más notables, es la disminución de la actividad colinérgica. En este sentido, se ha observado que la actividad de la enzima acetilcolinesterasa CAChE), responsable de la degradación de acetilcolina (ACh), está aumentada en el cerebro de pacientes de EA (Francis y col., 1999, J Neurol Neurosurg Psychiatry, 66: 137-47), y que además co-Iocaliza con las placas de pA (Moran y col., 1993, Acta Neuropathol, 85: 362-9). En 1996, lnestrosa y colaboradores demostraron que la AChE es capaz de acelerar la agregación de PA, favoreciendo la fonnación de oligómeros y de placas seniles, en un proceso que implica el sitio periférico, conocido como sitio aniónico periférico (PAS) (lnestrosa y col., 1996, Neuron, 16: 881-91). Por tanto, la inhibición de AChE en su sitio periférico se ha postulado como diana para evitar la agregación de los péptidos de PA, evitando así su toxicidad. Este mecanismo de acción se ha demostrado para donepezilo (Banolini y col., 2003, Biochem Pharmucol, 65: 407-16), uno de los fármacos que actualmente constituyen la primera linea para el tratamiento de la EA. Este fármaco es capaz de interaccionar a la vez con el sitio catalítico y el periférico de AChE, evitando la agregación de PA catalizada por esta enzima.

Además de las interrelaciones ya mencionadas, han sido descritas numerosas interrelaciones entre los distintos procesos fisiopatológicos que tienen lugar en la EA. En este sentido, pA y el estrés oxidalivo están estrechamente relacionados. Se ha demostTado que los compuestos derivados de la peroxidación lipídica (4hidroxinonenal) causada por estrés oxidativo aumentan la expresión de jl-secretasa en neuronas (Tamagno y col., 2002, Neurohiof Dis, 10: 279-88), aumentando así la concentración de pA. En la misma linea, se ha descrito que el estrés oxidativo produce un aumento de los niveles de pA en células de neuroblastoma humano (Misonou y col., 2000, Biochemistry, 39: 6951-9). Por otro lado, estudios in vUro han demostrado que el pA es capaz de coordinar FeH y Cu2+ y generar ROS vía química de Fenton (Huang y coL, 1999, Biochemistry, 38: 7609-16). Además, se ha visto que la sobreexpresión de Nrf2 in vi/ro protege frente a la neurotoxicidad inducida por pA (Frautschy y col., 2001, Neurobiol Aging, 22: 993-1005). Estos hechos ponen de manifiesto la existencia de un bucle etiopatogenico entre pA y el estrés oxidativo en la EA.

Por otro lado, se ha demostrado que el tratamiento de neuronas corticales con pA induce hiperfosforilación de tan y que ésta es revertida por litio, implicando a GSK3p en la toxicidad inducida por pA (Alvarez y col., 1999, FEBS Lett, 453: 260-4). Posteriormente, se demostró que los oligómeros de pA inhiben la vía de supervivencia P13K/Akt, y por tanto incrementan la actividad de GSK3p y la hiperfosforilación de tau (Jimenez y col., 2011, J Biol Chem, 286: 18414-25). Estas evidencias conectan directamente la hiperfosforilación de tau con la neurotoxicidad inducida por {lA. Además, Ryder y colaboradores demostraron que la hiperactividad de GSK3p daña el procesamiento de la proteína APP, incrementando la producción de {JA, aunque el mecanismo concreto aún no ha sido elucidado (Ryder y col., 2003, Biochem Biophys Res Commun, 312: 922-9).

En los docwnentos de patente W02014059383, W02012050517, EP232 1 295, W02009156859, US2015031897, W02011124712, W00007600(AI), W020111156889, W02012IJ 16362, W02012/145420, W02012/149478, W02013/067036, W02013/132124, P2013/00667 se proponen distintas opciones de tratamiento de enfermedades neurodegenerativas basadas en uno o varios compuestos químicos y/o productos naturales cuya diana terapéutica es la inhibición de la enzima GSK3~ o la inhibición de la enzima AChE, o la inducción y/o modulación de la ruta Nrf2-ARE como estrategia neuroprotectora.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere al uso de compuestos con estructura 4-aril-I,4,6,7,8,9hexahidropirazolo[4',3':5,6]pirano[2,3-b ]quinolin-5-amina con capacidad inhibidora

dual de las enzimas GSIOj3 y AChE, y/o con capacidad inductora de la ruta Nrfl

ARE con los efectos antioxidantes, anti-inflamatorios y neuroprotectores que esto

conlleva. En la presente invención se describe, por primera vez, la inclusión de la

capacidad inhibidora dual de las enzimas GSK3j3 y AChE en una única molécula,

S: además de incluir la capacidad inductora del factor de transcripción Nrf2 gracias a las

modificaciones estructurales realizadas, para dar lugar a un nuevo compuesto que

incluye estas actividades. Los compuestos objeto de la presente invención poseen

capacidad inductora de Nrfl, por lo que pueden ser potencialmente útiles en el

tratamiento preventivo y/o terapéutico de enfermedades neurodegenerativas. Más

10: específicamente, el objeto de la presente invención consiste en proporcionar nuevos

compuestos útiles como ingredientes activos de un medicamento, que pennitan la

prevención y/o tratamiento de enfennedades tales como la EA.

Por lo tanto, en un aspecto, la invención se refiere a lIn compuesto de fónnula

(1) (definido más adelante), sus sales, profánnacos o solvatos. Dicho compuesto de

15: fónnula (1) puede ser utilizado en el tratamiento de enfennedades neurodegenerativas

y/o enfennedades que estén relacionadas con una disfunción de la proteína tau

causando su agregación como es el caso de las denominadas taupatías tales como la

EA, la esclerosis lateral amiotrófica, el parkinsonismo postencefálico, la parálisis

supranuclear progresiva, la enfermedad de Gerstmann-Straussler-Scheinker, la

20: enfennedad de Hallervorden-Spatz, la enfennedad Creutzfeldt-Jacob, el síndrome de

Down, la enfennedad de Niemann-Pick y la enfennedad de Pick.

En un aspecto, la invención incluye una composición fannacéutica que

comprende un compuesto de fónnula (1), o una sal, un profármaco O un solvato

fannacéuticamente aceptable del mismo.

25: En otro aspecto, la invención se refiere a una composición fannacéutica que

comprende un compuesto de fónnula (1), o una sal, un profánnaco o un solvato del

mismo, y un vehículo fannacéuticamente aceptable.

En otro aspecto, la invención protege el uso de dicho compuesto de fónnula

(1), o sus sales, profármacos O solvatos, fannacéuticamente aceptables, en la

30: elaboración de una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de

enfermedades neurodegenerativas, o en enfennedades isquémico-cerebraJes.

En el contexto de la presente invención, los siguientes términos tienen el significado detallado a continuación: Cuando se usa el término "seleccionados independientemente". los sustituyentes a los que se refiere (e.j. grupos R, como los grupos RI. R2. R1, R.., R~. ~

o X o Y o Z o variables como "o") los grupos pueden ser idénticos o diferentes, o en su caso cuando sea especificado.

El término "alquilo" se refiere a un radical de cadena hidrocarbonada lineal o ramificado consistente solamente en átomos de carbono e hidrógeno que no contienen ¡nsaturaciones, teniendo de uno a ocho átomos de carbono y que está unido al resto de la molécula por un enlace sencillo. Preferiblemente, se refiere a un radical de cadena alifática lineal o ramificada que tiene entre 1 y 6, preferiblemente entre l y 3 ("alquiloC1.)") átomos de carbono, y que está unido al resto de la molécula mediante un enlace sencillo. Este ténnino incluye. por ejemplo y en un sentido no limitativo, metilo, etilo, n-propilo, ¡-propilo, n-butiJo, t-butito, n-penlilo, etc. Los radicales alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno O más sustituyentes independientemente seleccionados del grupo consistente en halógenos, hidroxilo, alcóxidos, carboxi, ciano, carbonil, acil, alcoxicarbonil, amino, nitro, mercapto y alquiltio.

El ténnino "alcoxilo" se refiere a un grupo -O-alquilo, donde alquilo es como se ha definido previamente. Preferiblemente alcoxilo es metoxilo. Ellénnino "halógeno" se refiere a bromo, cloro, yodo O flúor. Preferiblemente, halógeno es flúor o cloro o bromo.

El ténnino "haloalquil" se refiere a un radical alquilo, como ha sido definido previamente, que está sustituido por uno o más halógenos, como también han sido definidos previamente, incluyendo por ejemplo, y en un sentido no limitativo, trifluorometil, triclorometil, 2,2,2,-trifluoroetil, l-fluorometil-2-fluoroetil, etc.

El ténnino "alcoxicarbonil" se refiere a un radical de fonnula -C(O)OR donde R es un radical alquilo como se ha descrito previamente. Los radicales aleoxicarbonil pueden incluir por ejemplo, y en un sentido no limitativo, metoxi, eloxi, propoxi, etc.

El ténnino "cicloalquilo" se refiere a un grupo a(jfático mono o policíclico saturado o parcialmente saturado, que tiene entre 3 y 10, preferiblemente entre 3 y 6 átomos de carbono que está unido al resto de la molécula por medio de un enlace

•

sencillo, incluyendo por ejemplo, y en un sentido no limitativo, cic1opropilo,

ciclobutilo. ciclohexilo. ciclopentilo. etc.

El término "amino" se refiere a un radical de fórmula -NH2.

El término "ariJo" se refiere a un grupo aromático que tiene entre 6 y 18,

S: preferiblemente entre 6 y 10 átomos de carbono, que comprende 1, 2 Ó 3 núcleos

aromáticos, unidos por medio de un enlace carbono-carbono o condensados,

incluyendo por ejemplo y en un sentido no limitativo fenilo, naftito, difenilo, indeniJo,

fenantrilo, etc.

El término "heterociclo" se refiere a un radical de anillo de 3 a 10 miembros

10: estable, preferiblemente un anillo de 5 Ó 6 miembros, que consiste en átomos de

carbono y desde uno hasta cinco heteroátomos seleccionados del grupo formado por

nitrógeno, oxigeno y azufre, y que puede estar parcial o totalmente saturado, o puede

ser aromático ("heteroarilo"). Para los fines de esta invención, el heterociclo puede ser

un sistema de anillo monociclico, biciclico o triciclico, que puede incluir sistemas de

15: anillos condensados. Los ejemplos de tales heterociclos incluyen, pero no se limitan a,

pirrolidina, piperidina, piperazina, morfolina, tetrahidrofurano, bencimidazol,

benzotiazol, furano, pirrol, piridina, pirimidina, isotiazol, imidazol, indol, puTina,

quinolina, tiadizol.

Tal como se entiende en esta área técnica. puede haber un cierto grado de

20: sustitución en los radicales definidos anteriormente. Las referencias del presente

documento con respeclo a los grupos sustituidos, indican que el radical especificado

puede estar sustituido en una o más posiciones disponibles con uno o más

sustituyentes. Dichos sustituyentes incluyen, por ejemplo, y en un sentido no

limitativo, alquilo Cl.6, alquenilo C2_6, alquinilo C2_6, cicloalquilo, arilo, heterociclo,

2S: halógeno, eN, NO" CF3, -N(R.,)(R¡,), -O~, -SR", -C(O)R., -C(O)OR" -

C(O)N(Rg)(Rh), -OC(O)R;; en los que R.. R¡" ~,R", R., R" Rg, R¡, y R; se seleccionan

independientemente de hidrógeno, alquilo, C1-C6, arilo, heterociclo y trifluorometilo.

Un aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (1):

30

(1)

donde R Y Rr se seleccionan del grupo consistente en: Un átomo de hidrógeno; Alquilo opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; cic\oalquilo(C3-Có); alcoxilo(C]C6); cicloalcoxilo(C3-C6); ciano y nitro; o bien dos grupos pueden ronnar conjuntamente un grupo -O(CH2)mO-, -(CH2)p·, o -CH=CH-CH=CH-; y/o feoilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre fluor; cloro; bromo; alquilo opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; cicloalquilo(C)-Có); alcoxilo(CI-C6); cicloalcoxilo(C)-C6); ciano y nitro; o bien dos grupos pueden fonnar conjuntamente un grupo

O(CH')mO-, -{CH,)p-, o -CH-CH-CH-CH-; o

un grupo heteroarilo seleccionado t::ntre 2-piridilo, 3-piridito, 4-piridil0, 3piridazinilo, 4-piridazinilo, 2-pirimidinilo, 4-pirimidinilo, 5-pirimidinilo. 2pirazinilo, 3-pirazinito, 2-pirrolito, 3-pirrolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazoJilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolil0, 5tiazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 3-isotiazolilo, 4isotiazolilo, 5-isotiazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, 3-pirazolilo, 4pirazolilo, 1,2,3-oxadiazol-4-ilo, 1,2,3-oxadiazol-5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3¡lo, 1,2,4-oxadiazol-5-ilo, 1,2,5-oxadiazol-3-ilo, 1.3,4-oxadiazol-2-ilo, 1,2,3-tiadiazol-4-ilo, 1,2,3-tiadiazol-5-ilo, 1,2,4-tiadiazol-3-ilo, 1,2,4tiadiazol-S-ilo, 1,2,S-tiadiazol-3-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2-ilo, 1,2,3-triazol-4ilo, 1,2,4-triazol-3-ilo y 5-tetrazolilo, estando el grupo heteroarilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados

independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo, cicloalquilo(C).-C6), a!coxilo(CI-CIi), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro; R2 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo

o heteroarilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo, alcoxilo, cicloalquilo(Cr C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano, nitro y carboxilato o bien dos grupos pueden fonnar conjuntamente un grupo -Q(CH2l,p-, -(CH2)r-, o -CH=CH-CH=CH-;

R3 y R.t se seleccionan del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(CI-C6), cicloalquilo(C3-C6) y fenilc, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C)·Có), alcoxilo(C)·Có), cicloalquilo(Cr Có), cicloalcoxilo(C)·Có), ciano, nitro y carboxilato;

Rs y ~ se seleccionan del grupo consistente en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo(C3·Có), acetilo, fenilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C)·Có) , alcoxilo(C)·Có) , cicloalquilo(Cr C6) , cicloalcoxilo(C)-Có) , ciano y nitro o bien dos grupos pueden fonnar conjuntamente un grupo cicloalquilo(C)·Có) o -(CH,),-, o -CH~CH-CH~CH-;

X se selecciona entre un átomo de carbono o un átomo de nitrógeno;

y se selecciona entre un átomo de oxígeno, un átomo de nitrógeno o un átomo de azufre, ·50-o 502; Z se selecciona entre un átomo de carbono o un átomo de nitrógeno, n es un número entero seleccionado entre O, 1,2, 3, 4 o 5;

y sus sales, preferiblemente sales fannacéuticamente aceptables, profánnacos o solvatos.

El ténnino "farmacéuticamente aceptable" se refiere, preferiblemente, a composiciones y entidades moleculares que son fisiológicamente tolerables y no producen, nonnalmente, una reacción alérgica o una reacción no favorable similar, tal como trastornos gástricos, mareo y similares, cuando se administra a un ser humano o animal. La expresión "fannacéuticamente aceptable" significa que está aprobado por

una agencia reguladora como la agencia europea del medicamento o la agencia reguladora de EEUU, o que está incluido en la Fannacopea Estadounidense u otra fannacopea reconocida de modo general para su uso en animales y, de manera más particular, en seres hwnanos.

El término "sales" tal como aquí se utiliza se refiere a cualquier sal del compuesto de fórmula (1) que, cuando se administra a un sujeto, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) dicho compuesto de fórmula (1). El término "sujeto" incluye a cualquier animal, por ejemplo, un mamífero, incluyendo a los seres humanos. La preparación de dichas sales puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los técnicos en la materia. A modo ilustrativo, una sal de un compuesto de fórmula (1) puede sintetizarse mediante métodos convencionales a partir de un compuesto de fórmula (1) que contiene un resto básico. Generalmente, tales sales se preparan, por ejemplo, haciendo reaccionar las fonnas de base libre de los compuestos de fórmula (1) con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico o en una mezcla de agua y un disolvente orgánico. En general, se prefieren medios no acuosos tales como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo.

En una realización particular, dichas sales del compuesto de fónnula (1) son sales farmacéuticamente aceptables, es decir, sales que pueden ser administradas a un sujeto y proporcionan un compuesto de fórmula (1) en un compartimento biológico de dicho individuo. Entre dichas sales fannacéuticamente aceptables se incluyen las sales de adición de ácido, por ejemplo, las sales fonnadas a partir de ácidos orgánicos e inorgánicos, tales como brornhídrico, clorhídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, acético, adípico, aspártico, bencenosulfónico, benzoico, cítrico, etanosulf6nico, fónnico, fumárico, glutámico, láctico, maleico, málico, malónico, mandélico, metanosulfónico, 1,5-naftalenodisulfónico, oxálico, piválico, propiónico, p-toluenosulfónico, succinico, tartárico y similares, así como las sales metálicas, estando seleccionado el metal entre sodio, potasio, litio, calcio, magnesio, zinc, aluminio y similares, o las sales amónicas,

o una sal fonnada a partir de bases orgánicas, como 2-amino-l-butanol, 2-amino-2etil-l,3-propanodiol, 2-amino-2-metil-l ,3-propanodiol, benzatina, bencildimetilamina, cloroprocaína, colina, dibencilmetilamina, dietanolamina, diisopropanolamina,

etilenodiamma, dimetilestearamina, meglumina, 2-metil-2-amino-l-propanol, un monoamino-glicol, monoetanolamina, monoisopropanolamina, morfolina, N,Ndibenciletilenodiamina, N,N-dimetil-2-amino-2-metil-l-propanol, N,N-dimetilanilina, procaína, piridina, quinolina, t-butil-dimetilamina, trietanolamina, trietilamina, trihidroximetilaminometano, triisopropanolamina, trimetilamina y similares. y sales con aminoácidos tales como glicina, !isina, arginina, taurina, histidina, alanina, valina, cisteÍna y similares.

En otra realización particular, algunos grupos sustituyentes pueden añadirse a los compuestos objeto de la invención, para hacerlos susceptibles de formación de sales. Por ejemplo, grupos funcionales ácidos que pueden formar sales estables con cationes y grupos funcionales básicos que forman sales estables con ácidos. Generalmente. debe existir una di ferencia de al menos tres unidades en los valores de pKa. del compuesto que se usa como fármaco y el contraión. Para compuestos derivados que son bases muy débiles, la elección para formar sales es preferiblemente un ácido fuerte, como el ácido clorhídrico (pI<.... <= -6, 1), sulfúrico (pKaI = -3,0, pKa2 "" 1,96), o metanosulfóruco (PI<.... = -1,2) para asegurar la protonación del compuesto. Los compuestos que son más básicos pueden formar sales con ácidos débiles, como el acido fosfórico (pK" ~ 2,15, pK.2 ~ 7,2, pK., ~ 12,38), tartlírico (pK. ~ 2,93), acético (PKa "" 4,76), Y benzoico (pKa = 4,2). Para compuestos que sean ácidos muy débiles, se prefieren cationes fuertemente básicos, como sodio (pKa = 14,8), potasio (PI<.... <= 16,0) o caleio (pI(¡ = 12,9), para asegurar la desprotonación del compuesto. Compuestos que son más ácidos pueden formar sales con cationes más débiles, como zinc (pKa = 8,96), colina (pI(,¡ = 18,9) Y dietanolamina (pKa = 9,65). Grupos funcionales representativos para la formación de sales estables listadas en función del valor relativo de su fuerza ácidolbase incluyen, pero no limitan, ácido sulfónico (PKal =-1.2, pK" =-0,7), acido carboxilico (pK. =-4,7) e imida (pK. =8,2).

En otra realización particular, dichas sales del compuesto de fórmula (1) son sales farmacéuticamente no aceptables, las cuales pueden ser útiles en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables del compuesto de fónnula (1), o de sus profármacos o solvatos.

El término "profármaco" se emplea, en esta descripción, en el sentido más amplio, e incluye a cualquier compuesto derivado de un compuesto de fórmula (1) Que, cuando se administra a un sujeto, es capaz de proporcionar, directa O indirectamente, un compuesto de fórmula (1), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en dicho sujeto. Ventajosamente, dicho derivado es un compuesto que

aumenta la biodisponibilidad del compuesto de fórmula (1) cuando se administra a un

sujeto (por ejemplo, haciendo que un compuesto de fórmula (1) administrado por vía

oral se absorba más fácilmente por la sangre), o que potencia la liberación de un

compuesto de fórmula (1) en un compartimento biológico (por ejemplo, el cerebro o el

5: sistema linfático) con relación al compuesto original (sin derivatizar). La naturaleza de

dicho derivado no es critica, siempre y cuando pueda ser administrado a un sujeto y

proporcione un compuesto de fórmula (1) en un compartimento biológico de dicho

sujeto. Tales derivados serán evidentes para los técnicos en la materia, e incluyen,

dependiendo de los grupos funcionales presentes en la molécula y sin limitación, los

lO: siguientes derivados de los compuestos presentes: ésteres, ésteres de aminoácido,

ésteres de fosfato, ésteres de sulfonato de sales metálicas, carbamatos y amidas.

La preparación de dichos profármacos puede llevarse a cabo mediante métodos

convencionales conocidos por los técnicos en la materia. Dichos métodos se elegirán

en función de la derivatización a introducir en el compuesto de fórmula (l). Ejemplos

15: ilustrativos de algunos métodos para producir profánnacos de compuestos activos

pueden encontrarse, por ejemplo, en Krogsgaard-Larsen el al. "Textbook of Drug

design and Discovery" Taylor & Francis (April 2002). En una realización particular,

dicho profármaco es una amida y su obtención se lleva a cabo por métodos

convencionales de formación de amidas, por ejemplo, haciendo reaccionar el

20: compuesto de fórmula (1) como base libre con un ácido orgánico o con un derivado de

ácido orgánico apropiado, por ejemplo, con un ácido orgánico farmacéuticamente

aceptable tal como acético, adípico, aspártico, bencenosulfónico. benzoico, cítrico,

etanosulfónico, fórmico, fumárico, glutámico, láctico, maleico, málico, malónico,

mandélico, metanosulfónico, 1,5-naftalenodisulfónico, oxálico, piválico, propiónico,

25: p-toluenosulfónico, succínico, tartárico y similares.

Los compuestos de fórmula (1), o sus sales, pueden estar en forma cristalina

bien como compuestos libres o bien como solvatos, estando ambas formas incluidas

dentro del ámbito de la presente invención. El término "solvato" tal como aquí se

utiliza incluye cualquier compuesto formado por combinación de moléculas de un

30: disolvente con moléculas o iones de un compuesto de fórmula (1) o de una sal del

mismo; dicho disolvente puede ser un disolvente orgánico, por ejemplo, un alcohol, o

un disolvente acuoso, por ejemplo, agua, en cuyo caso el solvato se denomina "hidrato".

En una realización particular, dicho solvato es un solvato fannacéuticamente aceptable, es decir, que puede ser administrado a un sujeto y proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de fórmula (1) o una sal del mismo. En otra realización particular, dicho solvato no es fannacéuticamente aceptable pero puede utilizarse en la preparación de solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula (1) o de sus sales.

La preparación de dichos solvatos puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los técnicos en la materia, poniendo en contacto el compuesto de fórmula (1) o una sal del mismo con el disolvente apropiado.

En una realización particular, los compuestos de fórmula (1) o sus sales, profármacos o solvatos. estarán, preferentemente, en una forma pura o farmacéuticarnente aceptable. Una forma farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo materiales considerados tóxicos a los niveles normales de dosificación. El nivel de pureza de los compuestos será preferentemente superior al 50%, más preferentemente igualo superior al 70%, aún más preferentemente igualo superior al 90%. En una realización preferida, la pureza del compuesto de fórmula (1), o sus sales, profármacos

o solvatos, será superior al 95%.

Los compuestos de la presente invención representados por la fórmula (1) descrita anteriormente pueden incluir enantiómeros dependiendo de la presencia de centros quirales o isómeros geométricos, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples (por ejemplo Z, E). Los iSómeros geométricos, enantiómeros o diastereoisómeros de los compuestos de fórmula (1) y mezclas de los mismos se encuentran dentro del alcance de la presente invención.

En otra realización particular, los compuestos sujetos a esta invención dan composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden los compuestos de fórmula I con un portador farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de fórmula 1, solos o en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales como una mezcla con excipientes farmacéuticamente aceptables.

El término "excipiente fannaceuticamente aceptable" significa uno o más sólidos, o líquidos compatibles, diluyentes o sustancias de encapsulación que sean susceptibles de ser administradas a un sujeto.

En una realización particular preferida, la invención se refiere a compuestos de

fónnula (1) en los que: R es hidrógeno; R1 se selecciona del grupo que comprende un alquilo opcionalmente sustituido por uno o dos grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, y bromo; alcoxilo(C1-C6), nitro y amiDo. Preferentemente R es metilo; R2 se selecciona del grupo que comprende un anillo aromático fenilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, alquilo(C1-C6), opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor, cloro y bromo; alcoxilo(C1-C6-), ciano y nitro; o un heterociclo opcionalmente sustituido por uno, dos O tres grupos seleccionados independientemente entre 1160r, cloro, alquilo(C l-C6), alcoxilo y nitro; R3 es hidrógeno; ~es hidrógeno; R!i y 14 fonnan conjuntamente un grupo-(CH2k; n es un entero seleccionado entre 1, 2, 3, 4, 5 Y 6, preferentemente n = 4; X es nitrógeno; y es oxígeno; Z es nitrógeno;

y sus sales, profánnacos o solvatos, preferentemente, sus sales fannacéuticamente aceptables. Compuestos de fónnula (1) particulannente preferidos de la presente invención son los siguientes:

•: 3-metil-4-fenil-IA,6,7 ,8,9-hexahidropirazolo[4' ,3':5,6]pirano[2,3-b ]quinolin -5amina.

•: 3-metil-4-(4-metoxifenil)-1 ,4,6,7 ,8,9-hexahidropirazolo[4',3' :5,6]pirano[2,3b]quinolin-5-amina.

•: 3-metil-4-(2-metoxifenil)-1 ,4,6,7 ,8,9-hexahidropirazolo[4',3' :5,6]pirano[2,3b]quinolin-5-amina.

•: 3-meti1-4-(4-nitrofem 1)-1 ,4,6,7,8,9-hexahidropirazo10[4',3 ' : 5 ,6]pirano[2,3b]quinolin-5-amina.

•: 3 -meti1-4-(2-ni tro fem 1)-1 ,4,6,7,8, 9-hexahidropirazo 10[4' ,3 • : 5,61pirano[2,3b]quinolin-5-amina.

Los compuestos de fórmula (1) de la presente invención presentan actividad inhibidora de la enzima GSK3~, a la vez que actividad inhibidora selectiva de AChE y actividad inductora del factor Nrf2, por lo que pueden ser utilizados en la prevención

o terapia de enfermedades neurodegenerativas, ej ., la EA, la esclerosis lateral amiotrófica, el parkinsonismo postencefálico, la parálisis supranuclear progresiva, la enfermedad de Gerstmann-Strfiussler-Scheinker, la enfermedad de HallervordenSpatz, la enfermedad Creutzfeldt-Jacob, el índrome de Down, la enfermedad de Niemann-Pick y la enfermedad de Pick y/o en el tratamiento de otras enfermedades neurodegenerativas en las que se produce pérdida de neuronas, como es el caso del accidente cerebrovascular (icros).

Para su administración a un sujeto en necesidad de tratamiento, los compuestos de fórmula (1) de la presente invención se administran convenientemente formulados con los excipientes adecuados para su administración por cualquier vía apropiada, por ejemplo, por vía oral, parenteral, subcutánea, intramuscular, intravascular o rectal, preferentemente por vía oral.

Por tanto, en otros aspectos, la invención incluye una composición farmacéutica, en adelante composición farmacéutica de la invención, que comprende un compuesto de fórmula (1), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

En una realización particular, la composición farmacéutica de la invención se presenta en una forma farmacéutica de administración por vía oral, bien en forma sólida o líquida. Ejemplos ilustrativos de formas fannacéuticas de administración por vía oral incluyen comprimidos, cápsulas, granulados, soluciones, suspensiones, etc., para lo cual incluirán los excipientes fannacéuticamente aceptables apropiados, tales

como aglutinantes, diluyentes, desintegrantes, lubrificantes, humectantes, etc., y

pueden ser preparadas por métodos convencionales. La composición fannacéutica de

la invención también puede ser adaptada para su administración parenteral (ej., vía

intramuscular, intravenosa, etc.), en fonna de, por ejemplo, soluciones, suspensiones o

5: productos liofilizados, estériles, en la fonna de dosificación apropiada; en este caso,

dichas composiciones fannacéuticas incluirán los excipientes adecuados, tales como

tampones, tensioactivos, etc. La composición fannacéutica de la invención también

puede ser adaptada para su administración subcutánea en forma de, por ejemplo,

soluciones o suspensiones estériles, en la fonna de dosificación apropiada; en este

lO: caso, dichas composiciones farmacéuticas incluirán los excipientes adecuados, tales

como tampones, tensioactivos, etc. Asimismo, la composición farmacéutica de la

invención puede ser adaptada para su administración por vía rectal para lo cual

incluirá los excipientes adecuados compatibles con los compuestos de fórmula (1) de

la invención. Las formulaciones se pueden preparar según métodos convencionales

15: tales como los que se describen en las fannacopeas Española, Europea o de Estados

Unidos de América, o en textos de referencia similares, por ejemplo "Tratado de

Farmacia Galénica", de C. Faulí ¡Trillo, 10 Edición, 1993, Luzán 5, S.A. de

Ediciones.

El compuesto de fórmula (1) de la invención se administrará en una cantidad

20: terapéuticamente efectiva que generalmente dependerá de la eficacia del compuesto de

fórmula (l) elegido, de la gravedad de la patología a tratar, etc. No obstante,

típicamente se administrará a dosis diarias comprendidas entre 0,1 y 100 mg de

compuesto de fórmula (l) por kg de peso corporal, más preferentemente las dosis

diarias estarán comprendidas entre 2 y 5 mglkg peso corporaL

2S: En otro aspecto, la invención protege el uso de un compuesto de fórmula (l),

sus sales, profánnacos o solvatos, farmacéuticamente aceptables, en la elaboración de

una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de una enfermedad

neurodegenerativa, tal como la EA, y/o de una enfermedad isquémico-cerebral (ictus).

Las enfermedades neurodegenerativas son aquellas, a menudo de causa

30: desconocida, en las que tiene lugar la degeneración progresiva del sistema nervioso en

alguna de sus partes o en su totalidad. Para una descripción detallada de las mismas

véase, por ejemplo, la monografia "Enfermedades Neurodegenerativas"

,.

Coordinadores José Ma Segovia de Arana y Francisco Mora Temel, editada por Serie Científica Fannaindustria, Madrid, Julio 2002.

Las enfermedades isquémico-cerebrales constituyen WIa patología aguda, que tiene lugar como consecuencia de la interrupción del suministro de sangre a una parte del cerebro, o cuando sucede la rotura de un vaso sanguíneo con la consiguiente hemorragia cerebral. Aunque estas enfermedades no están incluidas en el grupo de enfermedades neurodegenerativas, hay que tener en cuenta que, secundariamente a un accidente isquémico-cerebral, también se produce la neurodegeneración en aquellas áreas afectadas. De aquí la utilidad del tratamiento de estas enfermedades con los compuestos de la invención.

La administración de los compuestos de fórmula (1) de la invención, Sus sales, profánnacos O solvatos, fannacéuticamente aceptables, se puede llevar a cabo en solitario O en combinación con fánnacos adicionales, tales como fármacos útiles para el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa o de una enfennedad isquémicocerebral, para proporcionar una terapia combinada; dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición fannacéutica de la invención que comprende el compuesto de fórmula (1) y/o sus sales, profánnacos o solvatos fannacéuticamente aceptables, o no, en cuyo caso, se administrarán de forma simultánea O secuencial a la administración de la composición fannacéutica de la invención. Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de dichos fármacos adicionales que pueden emplearse para proporcionar una terapia de combinación incluyen agentes tales como la memantina (un bloqueante del receptor de glutamato tipo NMOA aprobado para su uso en las fases avanzadas de la enfermedad de Alzheimer), vitaminas, antiinflamatorios o antidepresivos.

MODO DE REALIZACIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos, los cuales no pretenden ser limitativos de su alcance.

Los compuestos cuya actividad biológica es objeto de la presente invención se sintetizaron siguiendo los siguientes procedimientos en síntesis orgánica (Khoobi y col., 2015, Eur J Med Chem, 89: 296-303). Ejemplo 1: 3-rnetil-4-fenil-1 ,4,6,7 ,8,9-hexahidropirazolo(4',3' :5,6)piranoI2,3

5 b)quinolin-S-amina (Compuesto t)

6 7

,

Siguiendo el procedimiento descrito, 6-amino-3-metil-4-fenil-I,4dihidropirano[2,3-c]pirazol-5-carbonitrilo (106 mg, 0,42 romol), AICh (55,5 rng, 0,42 romol), ciclohexanona (52,6 mg, 0,53 mmol) en 1,2-DCE (10 mL). Tiempo de 10 reacción: 24 h. Cromatografia flash DCM/MeOH (0-4 %). para obtener el compuesto 1 como un sólido blanco (\39,5 mg, 94,2 %). Rf: 0,23 (DCM-MeOH 10 %). IR (KBr) v 3493, 3416,3209,3 165,3132,3096,3056,2939,2862, 1622, 1593, 1582, 1499, 1438,1421,1302,1224,1102,851,768,729,702 cm-'. RMN de 'H (DMSO-d" 300 MHz) bH 11,83 (IH, Sb" NH), 7,26-7,09 (5H, m, Ph), 5,30 (2H, Sb" NH,), 5,17 (lH, s, 15 4-H), 2,62-2,53 (2H, m, 6-H ó 9-H), 2,35-2,13 (2H, m, 6-H ó 9-H), 1,98 (3H, s, CH,), 1,77-1,63 (4H, m, 7-H, 8-H). RMN de 13C (DMSO-d" 75 MHz) 156,4, 155,7, 152,3, 152,0, 145,0, 134,7, 128,3, 127,3, 126,2, 111,9, 99,8, 98,4, 34,2, 32,0,22,9, 22,3, 22,1,9,8. EM (AP1-ES+) miz: cal. para C20H20N.O: 332,1637; encontrada:[(M+Ht] 333,1725. Anal. Cal. para C20H2oN40: C; 72,27 %; H: 6,06 %; N: 16,86 %;

20 encontrado: C: 72,35 %; H: 6,2 1%; N: 16,80 %. Ejemplo 2: 4-{4-metoxifenil)-3-metil-I,4,6,7,8,9hexahidropirazolol4',3':5,6)piranoI2,3-b)quinolin-S-amina (Compuesto 2)

OCH3

'" "

l b'·NH,

,

Siguiendo el procedimiento descrito, 6-amino-4-(4-metoxifenil)-3-metil-I,4dihidropirano[2,3-c]pirazol-S-carbonitrilo (lOO mg, 0,35 mmol), AICI) (56,9 mg, 0,43 mmol), ciclohexanona (52,5 rug, 0,53 mmol) en 1,2-DCE (10 mL). Tiempo de reacción: 24 h. Cromatografia flash DCMlMeOH (0-4,5 %), para obtener el compuesto 2 como un sólido blanco (74,0 rug, 57,7 %). Rf: 0,41 (DCM-MeOH 10 %) (Khoobi y col., 2015, Eur J Med Chem, 89: 296-303). Anal. Cal. para C21 H22N40 2: c: 69,59 %; H: 6,12 %; N: 15,46 %; encontrado: C: 69,46 %; H: 5,91 %; N: 15,12 %. Ejemplo 3: 4-(2-metoxifenil)-3-metil-l ,4,6,7,8,9hexa h idropirazolo 14',3':5,6) pirano(2,3-b Iquinolin-S-amioa (Compuesto 3)

,

Siguiendo el procedimiento descrito, 6-amino-4-(2-metoxifenil)-3-metil-I,4dihidropirano[2,3-c]pirazol-5-carbonitrilo (100 mg, 0,35 mmo!), AICI) ( 56,9 rng, 0,43 mmol), ciclohexanona (52,5 mg, 0,53 mmol) en 1,2-DCE (10 mL). Tiempo de reacción: 24 h. Cromatografía flash DCMlMeOH (0-4,5 %), para obtener el

15 compuesto 3 como un sólido blanco (71,3 mg, 55,6 %) (Khoobi y col., 2015, EurJ Med Chem, 89: 296-303). Anal. Cal. para C2IH22N4Ü:!: C: 69,59 %; H: 6, 12 %; N: 15,46 %; encontrado: C: 69,50 %; H: 6,16 %; N: 15,29 %. Ejemplo 4: 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1,4,6,7,8,9hexahidropirazolo(4' ,3':S,6Ipirano(2.3-b)quinolin-S-amina (Compuesto 4)

NO,

'" J'

Siguiendo el procedimiento descrito, 6-amino-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1,4dihidropirano(2,3-c]pirazol-5-carbonitrilo (100 mg, 0,34 rnmol), AICl) (54,0 mg, 0,41 mmol), ciclohexanona (49,8 mg, 0,51 mmol) en 1,2-DCE (10 rnL). Tiempo de

reacción: 24 h. Cromatografia flash DCM/MeOH (0-4,5 %), para obtener el compuesto 4 como un sólido amarillo pálido (114,0 rng, 89,9 %). Rf: 0,2 1 (DCM

MeOH 10 %). IR (KBr) v 3504, 3413, 3212, 3166, 3135, 3101, 3008, 2937, 2836, 1624, 1594, 1583, 1519, 1499, 1441, 1433, 1434, 1417, 1377, 1346, 1301, 1227, 5 1102, 837,829,732 cm·'. RMN de 'H (DMSO-dfu 300 MHz) b" 11,94 (IH, s"" NH), 8,13-8,11 (2H, d, J~ 8,6 Hz, 3'-H, 5'-H), 7,50 (2H, d, J~ 8,6 Hz, 2'-H, 6'-H), 5,48 (2H, s"" NH,), 5,44 (lH, s, 4-H), 2,61-2,53 (2H, m, 6-H Ó 9-H), 2,38-2,10 (2H, m, 6H Ó 9-H), 2,00 (3H, s, eH,), 1,74-1 ,63 (4H, m, 7-H, 8-H). RMN de 13e (DMSO-d" 75 MHz) 156,3, 155,5, 152,7, 152,6, 152,1, 145,9, 135,0, 128,5, 123,7, 112,6,98,6,97,5, 10 33,8,32,0,22,9,22,3,22,0,9,7. EM (API-ES+) miz: cal. para C,oH"N,O,: 377,1488;

encontrada: [(M+H)J 378,1578. Anal. Cal. para C2oH19N.'i03: C: 63,65 %; H: 5,07 %;

N: 18,56 %; encontrado: C: 63,50 %; H: 5,16 %; N: 18,29 %. Ejemplo 5: 3-metil-4-(2-nitrofenil)-l,4,6,7,8,9hexahidropirazolo(4' ,3':5,6]piranoI2,3-b)quinolin-5-amina (Compuesto 5)

,.

Siguiendo el procedimiento descrito, 6-amino-3-metil-4-(2-nitrofenil)-1,4

dihidropirano[2,3-e]pirazol-5-earbonitril0 (200 mg, 0,67 mmol), Ale!, (108 mg, 0,81

rnmol), ciclohexanona (99,4 rng, 1,0 1 mmol) en 1,2-DCE (12 roL). Tiempo de reacción: 24 h. Cromatografia flash DCM/MeOH (0-4,5 %), para obtener el 20 compuesto 5 como un sólido amarillo pálido (175,9 mg, 69,3 %). Rf: 0,31 (DCM

MeOH 10 %). IR (KBr) v 3474, 3387, 3251, 3212, 3168, 3099, 2931 , 2862, 1643, 1592, 1578, 1524, 1500, 1444, 1380, 1303, 1228, 1105, 864, 785, 731 em~l. RMN de '11 (DMSO-d" 300 Mllz) bH 11,97 (lH, s~, Nll), 7,88 (111, d,J = 8,1 Hz, 3'-H), 7,57 (lH, t, J~ 7,6 Hz, 5'-H), 7,43 (IH, t,J~ 7,7 Hz, 4'-H), 7,12 (IH, d, J= 7,9 Hz, 6'-H), 25 5,59 (IH, s, 4-H), 5,52 (2H, s"" NH,), 2,63-2,57 (2H, m, 6-H Ó 9-H), 2,39-2,15 (2H, m, 6-H Ó 9-H), 1,82 (3H, s, eH,), 1,75-1,66 (4H, m, 7-H, 8-H). RMN de 13e (DMSOd" 75 MHz) 155,9, 155,7, 153,1, 152,1, 148,4, 138,1, 135,1, 134,2, 130,7, 128,1,

123,7, 112,2,98,4, 96,7, 32,0, 29,6, 22,8, 22,2, 22,0, 9,2. EM (API-ES+) miz: cal.

para C2oHI"Ns0 3: 377,1488; encontrada: [(M+H)l 378,1522. Anal. Cal. para

C2oH19Ns0 3: C; 63,65 %; H: 5,07 %; N: 18,56 %; encontrado: C: 63,28 %; H: 4,99 %;

N: 18, 13 %. 5

1. ACTIVIDADES BIOLÓGICAS ESTUDIADAS EN LOS COMPUESTOS DE LA INVENCiÓN. Ejemplo 6 Medida de la actividad inhibitoria de la enzima GSK3!3 10

La capacidad inhibidora de GSK3p de los compuestos se detenninó con el método de luminiscencia ADP~GloTM. Los compuestos se estudiaron a cuatro concentraciones (0,1, 1,3 Y 10 IlM) para obtener curvas de inhibición y calcular sus valores de Clso. Como compuesto de referencia se empleó el inhibidor de GSK3p

15 S8216763. Los productos se disolvieron en tampón Tris (40 mM, pH 7,5) suplementado con MgCI, (20 mM), BSA (0,1 mg/mL) y ditiotreitol (DIT, 50 ~M). En cada placa se incluyó un blanco y un control, correspondiente a la actividad de la enzima en ausencia de inhibidor.

Tabla I 20 Inhibición de la enzima GSK3Jl por los compuestos de la invención, y el compuesto de referencia 88216763. Los datos se muestran como la media ± E.E. de al menos tres experimentos por duplicado a cuatro concentraciones distintas.

Compuesto: R, CJ50 bl.M)

S8216763: - 0,09 ± 0,01

I: Ph 2,49 ± 0,2

2: p-OMc-Ph 7,72 ± 0,3

3: o-OMc-Ph 6,35 ± 0,2

4: p -NOr Ph 5,65 ± 0,3

5: Q-NOr Ph 4,84 ± O,4

En cada pocillo se añadieron 10 ~L de GSK3p ( 1,25 ng/~L) y 5 ~L de compuesto a la concentración deseada. Transcurridos 30 min, se adicionaron 5 IlL del sustrato peptidico de GSK3p (1 ng/~L), y 5 ~L de ATP (125 ~M). Tras I hora, se midió la cantidad de ADP producido siguiendo las instrucciones del kit de medida. La

actividad enzimática se calculó refiriendo la luminiscencia medida a la detectada en ausencia de inhibidor. La concentración de compuesto que produce el 50 % de inhibición de la actividad GSK3p (CI5o) fue calculada por extrapolación de la curva de actividad. Los resultados de la inhibición de GSK3p (CIso, ~) se muestran en la tabla l.

Ejemplo 7

Medida de la actividad inbibitoria de la enzima acetilcolinesterasa (AChE y BuChE)

Para estudiar la capacidad inhibidora de las enzimas AChE y BuChE de los compuestos objeto de la invención se empleó el método de Ellman (Ellman y col., 1961, Biochem Pharmacol, 7: 88·95). Los compuestos fueron estudiados a seis (0,1, 0,3, 1,3, 10 Y 30 ~M) Y cinco (3, 10, 30, 100300 ....M) concentraciones para AChE y BuChE, respectivamente, para obtener curvas de inhibición que pennitieran calcular sus valores de Clso. Los ensayos se realizaron a temperatura ambiente, con los compuestos disueltos en tampón PBS (0,1 M, pH 8). En cada placa se incluyó un blanco y una variable control positivo (tacrina). los compuestos fueron incubados a cada una de las concentraciones deseadas con la enzima correspondiente (0,09 UlrnL) y con el ácido 5,5'-ditiobis-(2-nitrobenzoico) (OTNB, 0,35 mM) durante 10 mino Transcurrido ese tiempo, se añadió el sustrato correspondiente de la enzima, yoduro de acetiltiocolina (A ThChI, 0,35 mM) o yoduro de butiriltiocolina (BuThChI, 0,35 mM), con un volumen final de l ml, y se incubó durante 15 mino La absorbancia fue medida mediante el lector multipocillo FluoStar Optima (BMG labtech) a 420 nM. A partir de las actividades enzimáticas encontradas para cada una de las concentraciones de compuesto, se calcularon sus valores de Clso para AChE y BuChE, mediante un ajuste no lineal. los resultados de inhibición de ambas enzimas se muestran en la tabla 2.

Tabla 2

Inhibición de las enzimas AChE y BuChE por los compuestos de la invención, y el compuesto de referencia tacrina. Los datos se muestran como la media ± E.E. de al menos tres experimentos por triplicado a seis (AChE) y cinco (BuChE) concentraciones distintas.

Compuesto: R, AChE, Clso (tlM) BuChE, Cl50 (J.lM) BuChE/AChE

Tacrina: - 0,18 0,04 0,20

I: Ph 0,7 ± 0,1 80,4 ± 23,2 20

2: p-OMe-Ph 0,5 ± 0,1 >300 >600

J • S: o-OMe-Ph p-N02-Ph o-NOrPh 8,1 ±O,9 1,2±0,1 1,5±O, 1 >300 60,0 ± 10,2 68,7 ± 14,6 >37 50,8 45,2

Ejemplo 8

10 Medida de la inducción de la via Nrf2-ARE mediante la medida de la actividad Luciferasa en células MCf7 transfectadas de fonna estable con el plásmido ARELUC (AREc32).

Para el estudio de inducción del factor de transcripción Nrf2 se utilizó la línea

15 celular AREc32 que está transfectada de forma estable con el gen reportero (uciferasa unido a la secuencia ARE. En presencia de electrófilos o estrés oxidativo, el factor Nrf2 se transloca al núcleo y se une a las secuencias ARE, activando la expresión de luciferasa, formándose una cantidad proporcional de la misma. Las células AREc32 se cultivaron en medio DMEM con glutamax, suplementado con un 10% de suero

20 bovino fetal (SBF), 1% de penicilina-estreptomicina y 1,6 % de geneticina (G418)

(reactivos de GIBCO, Madrid, Espail.a). Las células se cultivaron en frascos de 75 cm con 11 mL del medio específico, se incubaron a 37"C y 5% de CO2 y se hicieron pases

1:4 cada 4-6 días cuando las células llegaron al 80% de confluencia. Para los experimentos, las células se cultivaron en placas de 96 pocillos con fondo 25 transparente, a una densidad de 60x10· células/pocillo con 100 ~UpociUo. Tras 24 h de cultivo, las células se trataron con los compuestos objeto de la invención a las

concentraciones deseadas (1, 10,30 Y 60 ~M) durante 24 h Y se incubaron a 370C y 5% CO2• En cada placa se incluyó una variable basal, una variable con tert-butil hidroquinona (TBHQ, 10 ....M, control positivo) y las variables problema, en un volumen final de 100 ...,r.. Tras 24 h de incubación con los compuestos objeto de estudio, se midió la actividad de luciferasa mediante un ensayo de bioluminiscencia, para lo que se usó el kit "Luciferase assay system" (Promega El 500). Tras el periodo

5 de incubación, los tratamientos fueron retirados y las células se lavaron con 100 ¡,.tL de PBS O, I M. Una vez retirado el lavado, se añadieron 20 ~del reactivo " Iysis buffer" a cada uno de los pocillos. Tras 1 O min, la placa se introdujo en un lector multipocillo de luminiscencia, FluoStar optima (BMO Labtech).

10 Tabla 3

Inducción del factor de transcripción Nrfl por los compuestos de la invención, y el compuesto de referencia TBHQ. Los datos se muestran como la media ± E.E. de al menos tres experimentos por duplicado a cuatro concentraciones distintas.

La medida de luminiscencia en unidades arbitrarias es directamente

proporcional a la cantidad de luciferasa en cada uno de los pocillos y ésta,

directamente proporcional a la inducción del factor Nrf2 por cada uno de los

20 productos objeto de estudio a la concentración establecida. Las medidas se realizaron por duplicado y los valores fueron nonnalizados respecto a la luminiscencia de la basal tomando su valor de expresión de luciferasa como l. Los resultados de inducción del factor Nrf2 obtenidos para los compuestos objeto de la invención descritos como ejemplos 1 a 5 se muestran en la Tabla 3,

expresados como inducción, tomando como valor 1 los valores de las células no tratadas.

Ejemplo 9 Estudio de la capacidad neuroprotectora de los compuestos objeto de la invención frente a modelos de toxicidad inducida por estrés oxidativo

Cultivo de células de neuroblastoma SH-SY5Y

Las células SH-SY5Y [ECACC 94030304], procedentes de pases entre el 5 y el 16 tras su descongelación, se mantuvieron en un medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) conteniendo 15 aminoácidos no esenciales y suplementado con suero bovino fetal al 10%, glutamina 1 mM, 50 unidades/rnL de penicilina y 50 J.lg/rnL de estreptomicina (reactivos de GlBCO, Madrid, España). Las células se sembraron en recipientes que contenían medio suplementado y se mantuvieron en un incubador a 37°C en atmósfera húmeda con un 5% de CO2 haciendo pases 1:4 dos veces por semana. Para los experimentos, las células se cultivaron en placas de 48 pocillos a una densidad de IxlO5 células/pocillo. Para los experimentos de citotoxicidad las células se trataron con los fármacos antes de llegar a confluencia, en DMEM con 1% de suero fetal bovino.

Medida de la viabilidad celular: 3-(4.5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol. MIT

El parámetro que se usó para medir la viabilidad celular fue la reducción metabólica del bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il}-2,5-difeniltetrazol (MIT). La técnica MIT consiste en una medida indirecta de la viabilidad celular. Este proceso es realizado por la enzima mitocondrial succinato-deshidrogenasa de células metabólicamente activas, la cual transfonna al MIT de un compuesto hidrofilico de color amarillo (sal de tetrazolio) a un compuesto violáceo, hidrofóbico (sal de fonnazán). La cantidad de células vivas es proporcional a la cantidad de formazán fonnada (Mosmann, 1983, J Immunol Methods, 65: 55-63). Las células apoptóticas tienen sus mitocondrias dañadas y no realizarán el proceso. Por lo tanto, este método permite medir supervivencia y proliferación ce lular, así como determinar la citotoxicidad de potenciales agentes terapéuticos. Para detenninar la viabilidad celular

en células SH-SY5Y, se añaden 30 ~Upocillo de MTT (5 rnglmL) y, tras 2 h, el medio es retirado sin perder los cristales de fonnazán, que se disuelven en 300 J.lL de DMSO. Posterionnente, las muestras son transferidas a una placa de 96 pocillos para medir la absorhancia de las muestras a 570 run. Todos los ensayos de MTI se realizaron por triplicado. Se cuantifica espectro fotométricamente con el lector de absorbancia/fluorescencia FluoStar optima®, Los valores de absorbancia obtenidos con el tóxico solo y con cada compuesto en presencia del tóxico se restaron del valor de absorbancia obtenido en condiciones basales, sin tratamiento. El valor obtenido de la resta de los valores de absorbancia basal menos tóxico sólo, se consideró el 100 % de muerte y los valores obtenidos con los compuestos en presencia de tóxico se normalizaron como porcentajes de dicho valor. Para calcular el porcentaje de supervivencia, se restaron estos valores a 100.

Neuroprotección ejercida por los compuestos objeto de esta invención 1-5: La inhibición de la enzima GSK3fJ combinada con la inhibición de la enzima AChE y la activación de la vía Nrf2-ARE por los compuestos ejerce un efecto neuroprotector frente a modelos de estrés oxidativo, debido a la expresión de diversos genes citoprotectores. Por tanto, estudiamos la capacidad neuroprotectora de los compuestos objeto de esta patente en modelos in virro de citotoxicidad inducida por estrés oxidativo. Se evaluó el efecto neuroprotector de los compuestos en células de neuroblastoma humano, frente a estrés oxidativa producido por rotenOna y oligomicina A, bloqueantes de la cadena respiratoria de la mitocondria según se

describe en Halliwel y col. 1992 (Halliwell, 1992, J Neurochem, 59: 1609-23, Newhouse y col., 2004, Toxicol Sci, 79: 137-46), realizando dos protocolos diferenciados:

Neuroorotección frente a estrés oxi$tivo inducido por la combinación de rotenona (30 \AMl Y oligomicina A (10 IlMl:

2.

a. Ejemplo 9a: Protocolo de Pre-incubación: Este diseño se plantea para estudiar en detalle el potencial efecto inductor de Nrf2 de los compuestos durante el periodo de pre-incubación. En este protocolo. las

5 células fueron pre-incubadas con cada uno de los derivados estudiados a la concentración 1 11M durante 24 h. Tras el periodo de pre-incubación, el medio se retiró y fue sustituido por medio de cultivo con la mezcla de tóxicos rotenonaloligomicina-A. a las concentraciones de 30 J1M y 10 J1M respectivamente.

En todos los ensayos fannacológicos se utilizó un control positivo con fines

10 comparativos y para evaluar la bondad del método empleado. Para ello se utilizó melatonina (111M) que ha demostrado capacidad neuroprotectora en diversos modelos de estrés oxidativo, incluido el modelo de rotenonaloligomicina A.

Los resultados obtenidos para los compuestos descritos como compuestos 1 a S se muestran en la Tabla 4, y vienen expresados en porcentaje de supervivencia celular 15 y en porcentaje de la actividad neuroprotectora.

Tabla 4 Porcentaje de protección neuronal producido por los compuestos de la invención y melatonina, a la concentración de 111M. Los datos se expresan como la media ± 20 E.E. de al menos tres experimentos por triplicado, realizados con tres lotes distintos de células.

Compuesto: R, RotlOlig (30/10 ) Pre-incubación

% Supervivencia: % Protección

Basal: 100

Rote/Olig: 53 14±149

Melatonina: 64,23 ± 1,79 23,67 ± 2,73"

1: Ph 67,44 ± 1,89 21 ,70± 1,62"

2: p-MeO-Ph 68,33 ± 1,95 23,8 1 ± 1,99"

3: o-MeO-Ph 70,26 ± 2,66 29,74 ± 3,57'"

4: p-NO,-Ph 72,23 + 2,3 34,23 ± 3,12'"

5: o-N02 -Ph 68,48 ± 2,79 24,70 ± 4,39"

b. Ejemplo 9b: Protocolo de Pre-y Co-incubación: En este modelo, se realizó una pre-incubación de 24 h con los compuestos

sintetizados a una concentración de 1 IlM Y una co-incubación de 24 h de éstos en presencia rotenonaloligomicina A (30 IlMlIO ¡..1M). Transcurridas 24h, la viabilidad

5 celular fue evaluada por el método de la reducción de MIT. Con este protocolo se obtiene infonnación sobre todas las potenciales actividades biológicas presentes en la estructura objeto de estudio.

Tabla S 10 Porcentaje de protección neuronal producido por los compuestos de la invención y melatonina, a la concentración de ] flM. Los datos se expresan como la media ±

E.E. de al menos tres experimentos por triplicado, realizados con tres lotes distintos de células.

Compuesto: R RotlOlig (30110) Pre y co-incubación

% Supervivencia: 01. Protección

Basal: 100

Rote/Olig: 5939 <1 ,33

Melatonina: 69,88. 1,75 27,41 . 3,21'"

1: Ph 72,39.2,26 34,81 .2,90'"

2: p-MeO-Ph 68,28.2,55 25,40 ± 2,57"

3: o-MeO-Ph 68,17 ± 1,99 24,33 ± 1,90"

4: p-NO,-Ph 69,49 ± 2,02 26,48 ± 3,49'"

S: o-N02 -Ph 71,98 ± 2,28 30,76.1,67'''

En este protocolo, al estar presente el compuesto durante las 24 horas previas a la incubación del tóxico, el compuesto es capaz de mostrar su capacidad inductora del factor Nrfl favoreciendo así la supervivencia celular. Además, también está presente a

20 la vez que exponemos las células al estímulo tóxico, la mezcla de rotenona/oligomicina A que provoca la aparición de una gran cantidad de radicales libres en el interior celular. Estos radicales dai"ian la célula e inducen la apoptosis celular. Los porcentajes de supervivencia y protección se resumen en la Tabla 5.

Claims

REIVINDICACIONES

l. Uso de un compuesto de fónnula (1) con los sustituyentes especificados como inhibidor dual de las enzimas GSK3j3 y AChE

(1)

donde

10

R Y RI se selecciona del grupo consistente en:

Un átomo de hidrógeno;

Alquilo opcionalmente sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno

seleccionado entre flúor, cloro y bromo; cicloalquilo(C3-C6); alcoxilo(C1

C6); cicloalcoxilo(CyC6); ciaDo y nitro; o bien dos grupos pueden fonnar

15

conjuntamente un grupo -O(CH2)mO-. -(CHúp·, o -CH=CH-CH=CH-; o

feDilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados

independientemenle entre flúor; cloro; bromo; alquilo opcionalmente

sustituido por uno, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre flúor,

cloro y bromo; cicloalquilo(C3-C6); alcoxilo(C I-C6); cicloalcoxilo(C3-C6);

20

ciano y nitro; o bien dos grupos pueden fonnar conjuntamente un grupo

O(CH')mO-, -(CH,),-, O -CH~CH-CH~CH-; y/o

un grupo heteroarilo seleccionado entre 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 3

piridazinilo, 4-piridazinilo, 2-pirimidinilo, 4-pirimidinilo, 5-pirimidinilo, 2

pirazinilo, 3-pirazinilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo,

25

3-tienilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5

tiazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxa7.olilo, 5-i~oxazolilo, 3-i ~otiazolilo, 4

isotiazolilo, 5-isotiazolilo. 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, 3-pirazolilo, 4

pirazolilo, 1,2,3-oxadiazol-4-ilo, 1,2,3-oxadiazol-5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3

¡lo, l,2,4-oxadiazol-5-ilo, l,2,5-oxadiazol-3-ilo, 1,3,4-oxadiazol-2-ilo, 1,2,3-tiadiazol-4-i1o. l,2.3-tiadiazol-5-ilo, 1,2,4-tiadiazol-3-ilo, 1,2,4tiadiazol-5-ilo. l,2,5-tiadiazol-3-ilo, l,3,4-tiadiazol-2-i lo, 1,2,3-triazol-4¡lo, l,2,4-triazol-3-ilo y 5-tetrazolilo, estando el grupo heteroarilo opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo, cicloalquilo(C3-C6), alcoxilo(CI-C6). cicloalcoxilo(C3-Có), ciaDo y nitro;

R2 se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo

o heteroarilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo, alcoxilo, cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano, nitro y carboxilato O bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo -O(CH,).,o-, -(CH,),-, o -CH=CH-CH=CH-;

R3 y Rt se seleccionan del grupo consistente en hidrógeno, alquilo(C.-C6), cicloalquilo(C3-C6) y fenilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C.-C6), alcoxilo(C.-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C)-C6), ciano, nitro y carboxilato;

Rs y ~ se selecciona del grupo consistente en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo(C3-C6), acetilo, fenilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo(C.-C6), alcoxilo(C1-C6), cicloalquilo(C3-C6), cicloalcoxilo(C3-C6), ciano y nitro o bien dos grupos pueden formar conjuntamente un grupo cicloalquilo(C3-C6) o

-

(CH,),-, o -CH=CH-CH=CH-;

X se selecciona entre un átomo de carbono o un átomo de nitrógeno; y se selecciona entre un átomo de oxígeno, un átomo de nitrógeno o un átomo

de azufre, -50-o So,; Z se selecciona entre un átomo de carbono o un átomo de nirrógeno; n es un número entero seleccionado entre O, 1, 2, 3, 4 o 5;

y sus sales, preferiblemente sales farmacéuticamente aceptables, profármacos o solvatos.
2. Uso de un compuesto según la reivindicación 1, en el que R es hidrógeno;

RI se selecciona del grupo que comprende un alquilo opcionalmente

sustituido por uno o dos grupos seleccionados independientemente

entre flúor, cloro, y bromo; alcoxilo(C1-C6), nitro y amiDo.

Preferentemente R1 es metilo;

R2 se selecciona del grupo que comprende un anillo aromático fenilo

opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados

independientemente entre flúor, cloro, alquilo(C.-C6), opcionalmente

sustituido por lUlO, dos, o tres átomos de halógeno seleccionado entre

flúor, cloro y bromo; alcoxilo(C 1-C6), ciaDo y nitro; o un heterociclo

opcionalmente sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados

independientemente entre flúor, cloro, alquilo(C I-C6), alcoxilo y nitro;

RJ es hidrógeno;

R.t es hidrógeno; R5 y Ró fonnan conjuntamente un grupo-{CHün-; n es un entero seleccionado entre 1, 2, 3, 4, 5 Y 6, preferentemente n = 4; X es nitrógeno; y es oxígeno; Z es nitrógeno;

y sus sales, profármacos o solvatos, preferentemente, sus sales farmacéuticamente aceptables.
3. Uso de un compuesto según la reivindicación 2 como inhibidor dual de GSK3p y AChE, seleccionado entre:

•

3-metil-4-fenil-1 ,4,6,7 ,8,9-hexahidropirazolo[4' ,3': 5,6]pirano[2,3-b] quinolin-5-amina.

•

3-metil-4-( 4-metoxifenil)-1 ,4,6,7 ,8,9-hexahidropirazolo[4',3' :5,6]pirano [2,3-b]quinolin-5-amina. 3-metil-4-(2-metoxifenil)-1 ,4,6,7 ,8,9-hexahidropirazolo[4',3':5,6]pirano [2 ,3-b]qui no lin-5-ami na.

3-rneti1-4-(4-nitrofenil)-I ,4.6,7 ,8,9-hexahidropirazolo[ 4',3':5,6]pirano[2,3h]quinolin-5-amina.

• 3-metil-4-(2-nitrofenil)-1 ,4,6,7 ,8,9-hexahidropirazolo[ 4',3':5,6]pirano[2,3bJquinolin-S-amina.
4.

Una composición fannacéutica que comprende un compuesto de fónnula (1) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal, profánnaco o solvato, fannacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente fannacéuticamente aceptable.
5.

Uso de un compuesto de fónnula (1) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o de una sal, profánnaco o solvato, fannacéuticamente aceptable del mismo, en la elaboración de una composición farmacéutica con efecto inhibidor dual de GSK3f3 y AChE, y/o efecto inductor de Nrf2 y/o neuroprotector.
6.

Uso de un compuesto de fórmula (1) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o de una sal, profánnaco o solvato, farmacéuticamente aceptable del mismo, en la elaboración de una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa central y/o periférica o de una enfermedad isquémico~cerebral (ictus).
7.

Uso según la reivindicación 6, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la enfermedad de Alzheimer.
8.

Uso según la reivindicación 6, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la esclerosis lateral amiotrófica.
9.

Uso según la reivindicación 6, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea el parkinsonismo postencefálico.
10.

Uso según la reivindicación 6, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la parálisis supranuclear progresiva.
11.

Uso según la reivindicación 6, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la enfermedad de Gerstmann-Stfiiussler-Scheinker.
12.

Uso según la reivindicación 6, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la enfermedad de Hallervorden-Spatz.
13.

Uso según la reivindicación 6, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la enfennedad de Creutzfeldt-Jacob.
14.

Uso según la reivindicación 6, en el que dicha enfennedad neurodegenerativa sea el Síndrome de Down.
15.

Uso según la reivindicación 6, en el que dicha enfermedad neurodegenerativa sea la enfermedad de Niemann-Pick.
16.

Uso según la reivindicación 6, en el que dicha enfennedad neurodegenerativa sea el enfennedad de Pick.
17.

Uso según la reivindicación 6, en el que dicha enfennedad neurodegenerativa sea el ictus cerebral.
18.

Uso según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 17, en el que un compuesto de fónnula (1), o una sal, profármaco o solvato, fannacéuticamente aceptable del mismo se use para la fabricación de un medicamento para su administración por via oral, parenteral, subcutánea, intramuscular, intravascular o rectal.
19.

Uso según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 17, en el que dicho compuesto de fónnula (1), o una sal, profánnaco o solvato, fannacéuticamente aceptable del mismo, se administra en una dosis diaria comprendida entre 0,1 y 100 mglkg peso corporaL
20. Uso según la reivindicación 19, en el que dicho compuesto de fórmula (1), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en una dosis diaria comprendida entre 2 y 5 rnglkg peso corporal.