[go: up one dir, main page]

UA123995C2 - Хіральні реагенти для одержання гомогенних олігомерів - Google Patents

Хіральні реагенти для одержання гомогенних олігомерів Download PDF

Info

Publication number
UA123995C2
UA123995C2 UAA201802109A UAA201802109A UA123995C2 UA 123995 C2 UA123995 C2 UA 123995C2 UA A201802109 A UAA201802109 A UA A201802109A UA A201802109 A UAA201802109 A UA A201802109A UA 123995 C2 UA123995 C2 UA 123995C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
compounds
diastereomers
formula
essentially
pure
Prior art date
Application number
UAA201802109A
Other languages
English (en)
Inventor
Ацусі Ендо
Ацуси ЭНДО
Роберт Т. Ю
Френсіс Фан
Фрэнсис ФАН
Хієонг Воок Чоі
Хиеонг Воок Чои
Мінде Шань
Миндэ ШАНЬ
Original Assignee
ЕЙСАЙ Ар ЕНД Ді МЕНЕДЖМЕНТ КО., ЛТД.
Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ЕЙСАЙ Ар ЕНД Ді МЕНЕДЖМЕНТ КО., ЛТД., Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. filed Critical ЕЙСАЙ Ар ЕНД Ді МЕНЕДЖМЕНТ КО., ЛТД.
Publication of UA123995C2 publication Critical patent/UA123995C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
    • C07F9/65583—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system each of the hetero rings containing nitrogen as ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C07F9/65616—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings containing the ring system having three or more than three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members, e.g. purine or analogs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/07—Optical isomers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Compounds That Contain Two Or More Ring Oxygen Atoms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
І0О001| Дана заявка претендує на пріоритет за попередньою заявкою на патент СІЛА Мо 62/201510, поданою 5 серпня 2015 р. Ця заявка включена в даний опис через посилання.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
І0002| Галузь техніки
І0003) Варіанти здійснення можуть належати до одержання по суті діастереомерно чистих активованих мономерів, які являють собою морфоліно-фосфорамідохлоридатні субодиниці.
Варіанти здійснення можуть також належати до застосування по суті діастереомерно чистих активованих фосфорильованих морфолінових мономерів для одержання молекул шляхом стереоспецифічних реакцій сполучення.
І0004| Рівень техніки
ІЇО00О5| Синтез діастереомерно чистих фосфородіамідатних олігонуклеотидів суттєво ускладнюється наявністю хіральних фосфорних зв'язків. Це контрастує, наприклад, з фосфодіефірними зв'язками, які не мають хірального фосфору. Приклади наведені на фіг. 1, на якій порівнюються фосфодіефір, фосфоротіоат (який також включає в себе хіральний фосфор) і фосфородіамідат. 0006) Присутність хірального фосфору являє значні труднощі при синтезі, який включає сполуку серії фосфородіамідатних нуклеотидів. Відсутність стереохімічно чистих реагентів (матриць, субодиниць, структурних ланок), які дозволяють стереоспецифічне утворення фосфородіамідатних зв'язків, призводить до реакції на стереоцентрі, коли неможливо контролювати хіральність фосфору одержуваної сполуки.
І0007| Як показано графічно на фіг. 2, використання діастереомерних сумішей нуклеотидів для стереохімічно неконтрольованої реакції сполучення, щоб одержати олігонуклеотид якої- небудь значної довжини і послідовності, дає гетерогенну суміш множини діастереомерів.
Кількість діастереомерів теоретично становить 277), де п являє собою число нуклеотидів, які з'єднуються 3 утворенням олігонуклеотиду. Як показано на фіг.2, одержання навіть найпростішого чотирьохнуклеотидного олігонуклеотиду (тетрануклеотиду) може призвести до утворення суміші з восьми окремих діастереомерів. (0008) Утворення значної кількості діастереомерів може створити необхідність у чутливих
Зо методах розділення після синтезу. Вихід цільового продукту може негативно позначитися на використанні сировини внаслідок одержання множини діастереомерів, які не є цільовими. 00091 Було 6 корисно мати можливість вибрати конкретний діастереомер перед синтезом, а потім синтезувати вибраний діастереомер у стереохімічно чистій або по суті чистій формі.
КОРОТКИЙ ВИКЛАД СУТІ ВИНАХОДУ
00101 У варіантах здійснення запропоновано один або декілька стереохімічно чистих або по суті стереохімічно чистих сполук, зазначених у таблиці 1. У додаткових варіантах здійснення також пропонуються енантіомери сполук із таблиці 1. Як правило, стереохімія цих енантіомерів відрізняється від такої для сполук із таблиці 1, шляхом зміни стереохімії морфолінового кільця.
ІО0О11І
ТАБЛИЦЯ 1
Мо о
Ак, "во 1 20 ее с о щи чи: в
( юн орто і
ЗМ
С. а. А мк ти? чив, ск6б вк,
МК ч
Ї Ще зв а 22
С в у М зов, га "н.е
НК. ка
Ї що і Я о 23
С ее А м
Ов» бр й 1 М 24 оз
Се : . в си й В
КЕ В.М. шо
МУК єї їй ї Ле 25
С. в ; що ши В, пе и.
Сх ван "ВЕ з га З
С. ве чо. «РК -к вх с МВА»
Фе сю
Я й 27
МН: гос ; ! со зро ин к в. со чн І
А
В худ. ЧИ ї ні
Ме «кр
І 28 ей т г зд сирі,
ФО знва Й
З
Мо. в
Її "щн "вв 29
Со є. А м
СК МВ ши шия во
Оз
Сай т - й В щи ов 3 о мВ,
ГТ
Як ше ще. 7 я ЦЗ.
ГК мне 31
ОО
А: з ї 3 й зр ох м я їх МВВ» й 00121 В; ї В2 можуть бути однаковими або різними, і можуть являти собою -Н, необов'язково заміщений С1-СЗ-алкіл, необов'язково заміщений феніл, необов'язково заміщений нафтил, або ж з атомом азоту, до якого вони приєднані, вони утворюють необов'язково заміщений гетероцикл, який може являти собою, наприклад, піролідин, піперазин або морфолін. 0013) Необов'язково заміщені групи можуть бути заміщені одним або декількома з метилу, етилу, галогену, нітро-групи, метокси-групи або ціано-групи. 00141 Аз може являти собою тритил (ТТ), який може бути заміщеним тритилом, включаючи, але не обмежуючись цим, наприклад, ММТ" (п-метоксифенілдифенілметил), необов'язково заміщений бензил, 4-метоксибензил (РМВ, МРМ), 3,4-диметоксибензил, дифенілметил (Орт) або сульфоніл, який може бути сульфонілом, який розщеплюється. У деяких варіантах здійснення винаходу сульфоніл являє собою 2-нітробензолсульфоніл, 4-нітробензолсульфоніл або 2,4-динітробензолсульфоніл. 00151 Ва, В», Ве можуть являти собою -Н, -С(О)А; або -С(О)ОВ;, де ІВ; являє собою алкіл (метил, етил, ізопропіл або інший С1-Сб-алкіл)у, бензил, 2,2,2-трихлоретил або арил
(включаючи, але не обмежуючись ними, феніл, 4-метоксифеніл, 4-бромфеніл і 4-нітрофеніл). Во може бути, необов'язково, заміщеним алкілом, ціаноетилом, ацилом, карбонатом, карбаматом, необов'язково заміщеним бензилом, 4-півалоїлоксибензилом і силілом. 0016) У додаткових варіантах здійснення винаходу морфолінові нуклеозиди на додаток до наведених у таблиці 1 можуть бути отримані в діастереомерно чистій або по суті діастереомерно чистій формі.
ІЇ0017| У варіантах здійснення можуть також бути запропоновані способи розділення діастереомерних сумішей розкритих вище сполук на стереохімічно чисті або по суті стереохімічно чисті сполуки. У додаткових варіантах здійснення можуть бути запропоновані фармацевтичні композиції, що включають стереохімічно чисті або по суті стереохімічно чисті сполуки, як описані в даному документі В інших варіантах здійснення можуть бути запропоновані фармацевтичні композиції що включають фармацевтично прийнятні солі стереохімічно чистих або по суті стереохімічно чистих сполук, як описані в даному документі.
Фармацевтичні композиції можуть бути введені в ефективній кількості пацієнтам, що потребують лікування. Фармацевтичні композиції можуть додатково включати фармацевтично прийнятні носії. 0018) У деяких варіантах здійснення наступна група в кожній із сполук із таблиці 1 може бути заміщена в положеннях а, Б і е однією або двома метильними групами, і може бути заміщена в положеннях с і й однією метильною групою. У кожному випадку метильна група може перебувати на будь-якій стороні від площини морфолінового кільця. В інших варіантах здійснення винаходу додатковий метилен, необов'язково заміщений однією або декількома метильними групами, може бути вставлений поруч із атомом азоту в морфоліновій групі, щоб забезпечити можливість розширення до семичленного кільця.
І0019) У варіантах здійснення винаходу додатково запропоноване одержання стереохімічно чистих олігонуклеотидів шляхом стереоспецифічного сполучення активованих мономерів.
Додаткові варіанти здійснення належать до по суті діастереомерно чистого олігомеру, виготовленому стереоспецифічним сполученням активованих мономерів. Інші варіанти здійснення належать до по суті діастереомерно чистої композиції, що включає по суті діастереомерно чисті сполуки, описані в даному документі.
Коо) ОПИС КРЕСЛЕНЬ
І0020| На фіг.1 показані фосфодіефірний, фосфоротіоатний і фосфородіамідатний олігонуклеотидний зв'язки.
І0021| На фіг. 2 показані В- і 5-фосфорні зв'язки у фосфородіамідатному морфоліно- олігомері (РМО). На фіг. 2 також показане збільшення кількості діастереомерів, яке, як правило, виникає, коли діастереомерні суміші попередників фосфородіамідатного олігомера використовуються для синтезу динуклеотидів (2-членних), тринуклеотидів (З-членних), тетрануклеотидів (4-членних) і М-членних олігомерів.
І0022| На фіг. З показане одержання діастереомерно чистих динуклеотидів як за допомогою діастереомерно чистих фосфорамідохлоридатів, так і з використанням діастереомерної суміші фосфорамідохлоридатів.
І0023| На фіг. 4А ії фіг. 4В показані загальні діастереомерні суміші фосфорамідохлоридатів, які можуть бути корисними для одержання діастереомерно чистих або по суті діастереомерно чистих діастереомерних субодиниць.
І0024| На фіг. 5 показане одержання діастереомерно чистих (гомогенних) олігонуклеотидів з використанням діастереомерно чистих фосфорамідохлоридатів, описаних у даному документі.
І0025| На фіг.б показана схема стереоспецифічного синтезу 16б-членного РМО (« диференціація стереоізомерів за допомогою біофізичного аналізу. 0026) На фіг. 7 показані температури плавлення для стереоізомерів 1 і 2 із прикладу, що показує стереоспецифічний синтез 16б-членного РМО і диференціацію стереоізомерів за допомогою біофізичного аналізу, як описано нижче.
І0027| На фіг. 8 показані ОВТЕР-діаграми кристалічної сполуки 100, описаної нижче. 0028) На фіг. 9А і фіг. 98 показані ОКТЕР-діаграми двох фрагментів сполуки 100, описаної нижче.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС
І0029| Автори винаходу виявили, що два діастереомери активованих морфолінових субодиниць можуть бути розділені за своїми фізичними властивостями, що дозволяє одержання діастереомерно чистих ізомерів. Це дозволяє одержання стереохімічно чистих або по суті стереохімічно чистих РМО при контрольованих умовах реакції, які потім можуть бути використані для селективного одержання олігонуклеотидів з бажаною стереохімією.
І0О30| Варіанти здійснення можуть також належати до способів розділення діастереомерних сумішей розкритих вище сполук на стереохімічно чисті або по суті стереохімічно чисті сполуки.
Після розділення чисті діастереомери з попередньої діастереомерної суміші можуть бути використані для одержання діастереомерно чистих сполук за допомогою стереоспецифічних реакцій сполучення.
І0031) Діастереомерно чисті сполуки і по суті діастереомерно чисті сполуки, отримані, як описано в даному документі, можуть являти собою діастереомерно чисті фосфородіамідатні олігонуклеотиди. Ці діастереомерно чисті і по суті діастереомерно чисті фосфородіамідатні олігонуклеотиди можуть мати широкий спектр варіантів застосування. Наприклад, вони можуть бути корисними як лікарські засоби. Вони можуть бути вибрані через властивості, які потенційно перевершують такі в гетерогенних (стереовипадкових) сумішах діастереомерів фосфородіамідатних олігонуклеотидів. Наприклад, вони можуть бути вибрані завдяки відмінностям у реакційноздатності, ефективності, стабільності, безпеці і специфічності.
Діастереомерно чисті і по суті діастереомерно чисті олігомери можуть мати фізичні, хімічні і біологічні властивості, які відрізняються від таких у стереохімічно гетерогенних сумішах олігомерів. (0032) "Стереоізомери" належать до ізомерів, які відрізняються тільки розташуванням атомів у просторі. 0033) "Діастереомери" належать до стереоізомерів, які не є дзеркальними відображеннями один одного. (0034) "Енантіомери" належать до стереоізомерів, які є такими, що не співпадають при накладенні дзеркальними зображеннями один одного. Енантіомери включають "енантіомерно чисті ізомери", які включають по суті єдиний енантіомер, наприклад, більш ніж або 90 95, 92 Об, 95 95, 98 95 або 99 95, або 100 95 одного енантіомера. 0035) "Активований мономер" належить до 5'-О-фосфорильованих морфоліно-субодиниць, які мають реакційноздатний фосфор, який має групи, що відходять, включаючи, але не обмежуючись ними, хлоридні та галогенідні групи, що відходять, які зазнають реакції заміщення нуклеофілами, включаючи, але не обмежуючись ними, аміни та спирти.
І0ОЗ6| "А" ої "З" як терміни, що описують ізомери, являють собою ідентифікатори
Зо стереохімічної конфігурації при асиметрично заміщених атомах, включаючи, але не обмежуючись ними: вуглець, сірку, фосфор і азот в амонієвій групі. Позначення асиметрично заміщених атомів як "В" або "5" здійснюється за допомогою застосування правил пріоритету
Кана-Інгольда-Пребалки, як добре відомо фахівцям у даній галузі техніки і описано в Правилах
Міжнародного союзу теоретичної і прикладної хімії (РАС) для номенклатури органічної хімії.
Розділ Е, Стереохімія.
І0037| Енантіомер може бути охарактеризований напрямком, у якому він обертає площину плоскополяризованого світла, як добре відомо фахівцям в галузі хімії. Якщо він повертає світло за годинниковою стрілкою (як видно спостерігачеві, до якого рухається світло), то енантіомер позначають (ж) і називають правообертальним. Його дзеркальне зображення буде обертати плоскополяризоване світло проти годинникової стрілки, і буде позначатися як (-) або лівообертальне. Напрямок обертання плоскополяризованого світла енантіомерно чистою сполукою, називане знаком оптичного обертання, може бути легко виміряне в стандартному обладнанні, відомому як поляриметр. 0038) "Рацемічний" належить до суміші, що включає рівні частини окремих енантіомерів.
І0039| "Нерацемічний" належить до суміші, що включає нерівні частини окремих енантіомерів. Нерацемічна суміш може бути збагачена за В- або А-конфігурацією, включаючи, без обмеження, суміші в співвідношенні приблизно 50/50, приблизно 60/40 і приблизно 70/30 В- відносно 5-енантіомера або 5-відносно В-енантіомера. 0040) Терміни "по суті стереохімічно чистий" і "значна стереохімічна чистота" належать до енантіомерів або діастереомерів, які перебувають в енантіомерному надлишку або діастереомерному надлишку, відповідно, таокму, що дорівнює або більше 80 95. У деяких варіантах здійснення "по суті стереохімічно чистий" і "значна стереохімічна чистота" належать до енантіомерів або діастереомерів, які перебувають в енантіомерному надлишку або діастереомерному надлишку, відповідно, такому, що дорівнює або більше 87 95, дорівнює або більше 90 95, дорівнює або більше 95 95, дорівнює або більше 96 95, дорівнює або більше 97 95, дорівнює або більше 9895 або дорівнює або більше 99 95. "По суті діастереомерно чисті" належить до діастереомерів, які перебувають у діастереомерному надлишкові, такому, що дорівнює або більше 87 95, дорівнює або більше 90 95, дорівнює або більше 95 95, дорівнює або більше 96 95, дорівнює або більше 97 95, дорівнює або більше 98 95 або дорівнює або більше (510) 99 б.
(0041) "Енантіомерний надлишок" (ЕН) енантіомера являє собою |((мольна частка основного енантіомера) мінус (мольна частка мінорного енантіомера)|х100. Діастереомерний надлишок (ДН) діастереомера в суміші двох діастереомерів визначається аналогічно. (0042) Термін "фармацевтично прийнятна сіль", використовуваний у даному описі, належить до солей приєднання кислот або солей приєднання основ для сполук у даному описі.
Фармацевтично прийнятна сіль являє собою будь-яку сіль, яка зберігає активність вихідної сполуки і не виявляє надмірно шкідливого або небажаного ефекту на суб'єкта, якому її вводять, і в тому контексті, у якому її вводять. Фармацевтично прийнятні солі включають, але не обмежуються ними, комплекси металів і солі як неорганічних, так і карбонових кислот.
Фармацевтично прийнятні солі також включають солі металів, такі як алюмінієві, кальцієві, залізні, магнієві, марганцеві і комплексні солі. Крім того, фармацевтично прийнятні солі включають, але не обмежуються ними, солі кислот, таких як оцтова, аспарагінова, алкілсоульфонова, арилсульфонова, аксетильна, бензолсульфонова, бензойна, бікарбонова, бісульфітна, бітартаринова, масляна, едетат кальцію, камзилова, карбонова, хлорбензойна, лимонна, етилендіамінтетраоцтова, едисилова, естолова, езилова, езилова, мурашина, фумарова, глюцептинова, глюконова, глутамінова, гліколева, гліколіларсанілова, гексамічна, гексилрезорцинова, гідрабамова, бромоводень, хлористоводнева, йодоводень, гідроксинафтоєва, ізетіонова, молочна, лактобіонова, малеїнова, яблучна, малонова, мигдальна, метансульфонова, метилазотна, метилсірчана, муцинова, муконова, напсилова, азотна, щавлева, п-нітрометансульфонова, памова, пантотенова, фосфорна, моногідрофосфорна, дигідрофосфорна, фталева, полігалактуронова, пропіонова, саліцилова, стеаринова, бурштинова, сульфамінова, сульфанілова, сульфонова, сірчана, дубильна, винна, теоклінова, толуолсульфонова і т.п.
І0043| "Ефективна кількість" комбінації терапевтичних агентів (наприклад, сполуки 1 і інгібітору СОКА4А/б) являє собою кількість, достатню, щоб забезпечити спостережуваний терапевтичний ефект у порівнянні з НСС або ІНСС, що не піддаються лікуванню в суб'єкта або пацієнта. (0044) Діючі агенти, описані в даному документі, можуть бути об'єднані з фармацевтично прийнятним носієм, щоб одержати їх фармацевтичні склади. Конкретний вибір носія та складу
Зо буде залежати від конкретного способу введення, для якого призначена композиція. (0045) Термін "фФармацевтично прийнятний носій", використовуваний у даному документі, належить до нетоксичного носія, ад'юванту або засобу доставки, які не порушують фармакологічну активність сполуки, з якою їх поєднують у складі. Фармацевтично прийнятні носії, ад'юванти або засоби доставки, які можуть бути використані в композиціях за даним винаходом, включають, але не обмежуються ними, сорбінову кислоту, сорбат калію, суміші неповних гліцеридів насичених рослинних жирних кислот, воду, солі або електроліти, гідрофосфат динатрію, гідрофосфат калію, хлорид натрію, солі цинку, колоїдний діоксид кремнію, трисилікат магнію, полівінілліролідон, речовини на основі целюлози, поліеєтиленгліколь, натрієву карбоксиметилцелюлозу, поліакрилати, воски, поліетиленгліколь і ланолін.
ІЇ0046| Композиції за даним винаходом можуть бути придатні для парентерального, перорального, інгаляційно-розпилювального, місцевого, ректального, назального, букального, вагінального введення або введення за допомогою імплантованого резервуара і т.д. У деяких варіантах здійснення винаходу склад включає інгредієнти, які мають природне і неприродне походження. У деяких варіантах здійснення склад або носій можуть бути запропоновані в стерильній формі. Необмежувальні приклади стерильного носія включають вільну від ендотоксинів воду або апірогенну воду.
І0047| Термін "парентеральний", використовуваний у даному документі, включає методики підшкірної, внутрішньовенної, внутрішньом'язової, внутрішньосуглобної, внутрішньоартеріальної, інтрасиновіальної, інтрастернальної, інтратекальної, внутрішньопечінкової, інтралезіональної і внутрішньочерепної ін'єкції або інфузії. У конкретних варіантах здійснення сполуки вводять внутрішньовенно, перорально, підшкірно або шляхом внутрішньом'язового введення. Стерильні ін'єкційні форми композицій за даним винаходом можуть являти собою водну або масляну суспензії. Ці суспензії можуть бути виготовлені відповідно до методик, відомих у даній галузі техніки, з використанням підходящих диспергуючих або змочувальних агентів і суспендуючих агентів. Стерильний ін'єкційний препарат може також являти собою стерильний ін'єкційний розчин або суспензію в нетоксичному парентерально прийнятному розріджувачі або розчиннику. Із прийнятних носіїв і розчинників, які можуть бути використані, можна згадати воду, розчин Рінгера та ізотонічний розчин хлориду натрію. Крім того, як розчинник або суспендуюче середовище зазвичай використовують стерильні нелеткі олії. (0048) Варіанти здійснення даного винаходу належать до одержання стереохімічно чистих ізомерів або по суті стереохімічно чистих ізомерів з наступним використанням чистих ізомерів для стереоспецифічного одержання діастереомерно чистих фосфородіамідатних морфолінових олігомерів (РМО). Одержання може бути виконане шляхом розділення діастереомерної суміші фосфорамідохлоридатних нуклеотидів. Розділення може бути виконане, наприклад, за допомогою хроматографії, наприклад, високоефективної рідинної хроматографії або "ВЕРХ".
Розділення також може бути здійснене через кристалізацію.
І0049| Розділені мономери можуть бути зазначені як "активні" мономери. "Активний" означає, що мономери включають фосфорамідохлоридатну групу, яка є реакційноздатною щодо різних нуклеофілів, які включають, але не обмежуються ними: аміни, спирти/алкоксиди, тіол/гіолят, алкіллітій і реактиви Гриньяра.
І00О50) І. Одержання діастереомерних ізомерів
І0051| В одному варіанті здійснення винаходу стереохімічно чисті або по суті стереохімічно чисті активовані мономери можуть бути отримані розділенням діастереомерної суміші мономерів. Розділення може бути здійснене способами, які дозволяють розрізнити стереоїзомери з використанням фізичних властивостей. Наприклад, розділення може бути виконане за допомогою хроматографії або кристалізації. Підходящі типи хроматографії, наприклад, включають, але не обмежуються ними, високоефективну рідинну хроматографію (ВЕРХ), хроматографію в псевдорухомому шарі, хроматографію в протитечії та інші типи розділювальної хроматографії. Наприклад, діастереомерна суміш може бути піддана ВЕРХ із елюцією фракції, що швидко рухається, і фракції, що повільно рухається. Кожна із цих фракцій є окремою стереохімічно чистою або по суті стереохімічно чистою кількістю мономера. Як описано нижче, ці мономери можуть бути використані для одержання олігомерів з бажаною стереохімією шляхом стереоспецифічного сполучення з використанням контрольованих умов реакції.
І0052| Автори винаходу додатково встановили, що після розділення стереохімічно чисті активовані мономери мають достатню стабільність для використання в подальших хімічних
Зо реакціях. Крім того, автори винаходу дійшли висновку, що стереохімічно чисті активовані мономери можуть брати участь у стереоспецифічних хімічних реакціях. Таким чином, як описано більш докладно нижче, ці стереохімічно чисті активовані мономери можуть бути використані для стереоспецифічних реакцій сполучення для одержання стереохімічно чистих продуктів. 0053) Як зазначено вище, варіанти здійснення винаходу можуть належати до однієї або декількох стереохімічно чистих або по суті стереохімічно чистих сполук з таблиці 1, які можуть бути отримані з використанням різних фізичних властивостей стереоізомерів. Інші варіанти здійснення можуть також належати до енантіомерів сполук із таблиці 1. Як правило, стереохімія цих енантіомерів відрізняється від такої для сполук із таблиці 17 шляхом зміни стереохімії морфолінового кільця.
І0Оо541
ТАБЛИЦЯ 1 сома Ірормуди
Сполука формули с
Гоан "во 1 20 ее с о щи чи в
ТАБЛИЦЯ 1
Мо г
Ї зн мо 21
А г
С. Її Кк й і хви х в з ник й
Ї "м
СД
Во
А 22
ЛИ
С і х рив,
Ом
НК
Кк ще св я 23 г . Ні , ї 7 зр ов,
ОМ.
АК
В пер 24 о
С з Б б З ж Ве о Мен, ни с ун
ЕХ ак ге 25 о Ше
С. і ;
Й КЗ -а тоні ве з Б В. о мн. Й о ще шо Ь А
К ї :
І кум «НЕ. 1 м МНК, 26
С. з - юк «Ре й зи й ві со мк,
ТАБЛИЦЯ 1 с Мо полука формули ко ше меш
МОЖ твнв, ех "в ж щ- М ш ве .
Уч к в сома,
ЕВ
Ц
: он ши "МН
З р і 28
Ше ; Є
Є зря а бод я
О вв. й
В. я
Ме ї У "во
ЕЇ 29
СК ву Е м с ва. Й
Ох - сВ'снив,
КО зо
НЕ з 0 є м св і
Гея
Мой м о р вн х.
І М ня, 34 ше
С Кк
І трисий т М Е-
С МАВ»
І0055)| Де ВАЗ являє собою необов'язково заміщений трифенілметил (також вказується як "тритил"), необов'язково заміщений бензил або сульфоніл. Н4, В5 і Вб можуть являти собою -
С(О)В7 або -Ф(Ф)ОНВ, де В7 являє собою метил, етил або феніл, а Н8 являє собою бензил або 2,2,2--рихлоретил. Но може являти собою необов'язково заміщений алкіл, ціаноетил (для використання як захисної групи див., наприклад, публікацію заявки на патент США Мо
ОИ52013/0197220), ацил, сульфоніл, ацеталь/кеталь, карбонат, карбамат, необов'язково заміщений бензил, 4-півалоїлоксибензил і силіл.
ІЇ0056| У деяких варіантах здійснення винаходу необов'язково заміщений бензил являє собою 4-метоксибензил (РМВ, МРМ). У деяких варіантах здійснення винаходу сульфоніл являє собою сульфоніл, що розщеплюється. У деяких варіантах здійснення винаходу сульфоніл являє собою 2-нітробензолсульфоніл, 4-нітробензолсульфоніл або 2,4-динітробензолсульфоніл. 0057 В1 і В2 можуть бути однаковими або різними і можуть являти собою -Н, необов'язково заміщений С1-СЗ3-алкіл, необов'язково заміщений феніл, необов'язково заміщений нафтил, або ж з атомом азоту, до якого вони приєднані, вони утворюють необов'язково заміщений гетероцикл, який може являти собою, наприклад, піролідин, піперазин або морфолін. 0058) Необов'язково заміщені групи можуть бути заміщені одним або декількома з метилу, етилу, галогену, нітро-групи або ціано-групи.
Ї00О59| ВАЗ може являти собою тритил (Ттг), який може бути заміщеним тритилом, включаючи, але не обмежуючись цим, наприклад, ММТу (п-метоксифенілдифенілметил), бензил, 4- метоксибензил (РМВ, МРМ) і 3,4-диметоксибензил, дифенілметил (Орт). 0060 84, 85, Вб можуть являти собою -Н, -С(О)Н7 або -КС(О)ОНВ7, де В7 являє собою алкіл (метил, етил, ізопропіл або інший С1-Сб-алкіл) або арил (включаючи, але не обмежуючись ними, феніл, 4-метоксифеніл, 4-бромфеніл і 4-нітрофеніл). 0061) ІЇ. Стереоспецифічне сполучення 0062) На додаток до визначення того, що технологія розділення може бути використана для одержання по суті стереохімічно чистих кількостей активованого мономера, автори винаходу встановили, що ці активовані мономери можуть за певних умов реакції використовуватися для виконання стереоспецифічного сполучення для одержання стереохімічно чистих динуклеотидів, стереохімічно чистих тринуклеотидів і більш довгихстереохімічно чистих олігомерів. З використанням способів, описаних у даному документі, хіральність новоутвореного РМО-зв'язку може спеціально кодуватися хіральністю стереохімічно чистих активних мономерів, використовуваних для утворення олігомера.
ІЇ0063| Типові умови реакції для стереоспецифічного сполучення включають реакцію в апротонних розчинниках. Цими розчинниками можуть, наприклад, бути, але не обмежуються ними, ацетонітрил, тетрагідрофуран (ТНЕ), 1,3-диметилімідазолідинон (ОМІ), диметилформамід (ОМЕ), М-метил-2-піролідон (ММР), диметилацетамід (ОМАс), дихлорметан (ОСМ), 1,2- дихлоретан (ОСЕ), хлороформ, 1,4-діоксан, етилацетат, 2-метилтетрагідрофуран і ізопропілацетат. Реакції сполучення можуть проводитися в присутності ненуклеофільних основ третинних амінів і ароматичних основ. Підходящі основи включають, але не обмежуються ними, діізопропілетиламін, триетиламін, 2,6-лутидин, триметилпіридини (колідини) і М-етилморфолін.
Температура реакції може перебувати в діапазоні від кімнатної температури (близько 20 "С) до
Б50"С. У деяких випадках може використовуватися обробка ультразвуком для розчинення субстрату(ів).
І0064| Для того, щоб продемонструвати можливість стереоспецифічного сполучення, по суті множина стереохімічно чистих РМО-динуклеотидів були отримані шляхом стереоспецифічного
РМО-сполучення по суті стереохімічно чистих активних мономерів (фосфорамідохлоридатів), що повільно і що швидко елююються. У таблиці 2 нижче наведені ВЕРХ-профілі утримання цих по суті стереохімічно чистих РМО-динуклеотидів. У таблиці порівнюються часи утримання для динуклеотидів, які були отримані з поєднань 5'-кінцевих мономерів, перерахованих у лівій частині таблиці, з обома ізомерами, що швидко елююються і що повільніше елююються, 3'- кінцевих мономерів, перерахованих у верхній частині таблиці. У таблиці продемонстровано, що стереоспецифічне сполучення по суті стереохімічно чистих активних мономерів дає різні діастереомерно чисті динуклеотиди, які мають різні фізичні властивості.
ТАБЛИЦЯ 2
Сеноя ау
Со Мт, т І: СИ Й
Активні мономери (3'-кінець; електрофіли о нка; 1110111 А ЇЇ т
МЕ інкордТ
Іі 2 Сі С» | А: Аг Се | Ті То 5'-кінцеві пеоти мономери у би» | Осіб» | ОАгОд» | ев» | ОтеОт» |у (нуклеофіли) 9 «27 9156,5 |126510,9| 12,5 «18,8 8,4 «27 утгрим (хв)
ТАБЛИЦЯ 2 шу динук- ер |се| СугбОг |) ССібб» | САГСА» 0 Сбіббе | СТ Ст» та
ТВО ем ЯМ 5,6 « 6,6 6,7 » 5,7 8» 7,4 10,4 «13,3 5661 утрим. (хв) динук- да АША» | АСТАС» | ААРАА? | АСіАС» | АТРАТ» о 3,5 « 3,6 3,6 - 3,6 42541 7,6 «8,5 3,5 « 3,6 утрим. (хв) динук- сьо бугб05 ) СОС» | бАТОА» | 0бібб» 0 стіст» о 76-81 те-7,е2 9,7 » 8,9 14,2 511,3 747,5 утрим. (хв) динук- т) тт» | тсетб» | ТАЄТА» | тет» | тт» | ар 9,7 «23,9 8,955, |135,25114| 1325200 9 «24 утрим. (хв) а Незахищені нуклеотидні основи ь Аміногрупа гуаніну захищена ізобутирильною групою с Аміногрупа цитозину захищена: (1) ацетильною групою при поєднанні з ШО, С, А ї С, (2) бензоїльною групою при поєднанні з Т а Аміногрупа аденіну захищена бензоїльною групою (0065) Умови аналітичної ВЕРХ для одержання профілів по суті стереохімічно чистих РМО- динуклеотидів з таблиці 2 наведені нижче:
ВЕРХ-колонка СпіпхаІрак ІС, 4,6х250 мм, 5 мкм
Температура 10 95 н-гептану, 80 95 ЕХОАс і 10 96 МеОнН-ЕТОН 1:13 0,1 95
Рухома фаза . й діетиламіну
Об'єм зразка, що вводиться 1-2 мкл (0,2 мг/мл, в дихлорметані)
УФ, 260 нм
І0066| ПРИКЛАДИ 0067) ІП. Приклади діастереомерного розділення активованих мономерів
І0068| У нижченаведених прикладах показано діастереомерне розділення активованих мономерів відповідно до деяких варіантів здійснення, запропонованими в даному документі.
І0069| А. О-мономери й ; ; те (0 в. ве й І ; В Я ж Ж но Зв йо ї ГІ
А припаратився БЕЖ ре нак с ? З ли с ших фі р г шк А й зони рити тт ж а
ОО ще 0 мМме, Обюкб о мма, дізстезрвомаерня см ізомер, муз шБеИиДКО ялиюКтТЬУщІ ЗЕ
Ще ізонер. ща пічне Злююєтьтя: за
І0070| Умови аналітичної ВЕРХ для активованих мономерів 0:
ВЕРХ-колонка СпіхаІрак ІС, 4,6х250 мм, 5 мкм
Температура
Об'єм зразка, що вводиться 10 мкл (5 мг/мл, в їЇтилацетатв)
Час утримання
Що 0071) Умови препаративної ВЕРХ для активованих мономерів 0: 0072) СпігаІрак ІС, 21 х 250 мм, 5 мкм; елюція з колонки при 11 мл/хв етилацетатом при кімнатній температурі; детекція при 260 нм. 0073) Н-ЯМР дані для ||.)
І0074| "Н-ЯМР (400 МГц, СОС») б 8,18 (шир., 1Н), 7,45 (м,бН), 7,15-7,32 (м, 10ОН), 6,12 (дд, 1ТН, а-2,0 їі 9,6 Гц), 5,62 (д.1Н, а-8,0 Гу), 4,39 (м, 1Н), 4,11 (м, 2Н), 3,39 (д, 1Н, 9У-11Гцу), 3,15 (д, 1ТН,шЧ-11 ГП, 2,65 (с, ЗН), 2,62 (с, ЗН), 1,49 (т, 1Н, 9У-11Гц), 1,39 (т, 1Н, д9-11Гц). 0075) Г Н-ЯМР дані для Ог
І0076| "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІ») 6 8,07 (шир., ІН), 7,44 (м, 6Н), 7,14-7,34 (м, 10 Н), 6,12 (дд, 1Н,ШЧШ-219 Гу), 5,61 (д, ІН, 8,0 Гу), 4,39 (м, 1Н), 4,08 (м, 2Н), 3,39 (д, ІН, 9У-12 Гц), 3,15 (д, 1Н, уУ12 Гу), 2,66 (с, ЗН), 2,62 (с, ЗН), 1,46 (т, 1Н, 9-11 Гц), 1,38 (т, ІН, 9-11 Гц).
І0077| В.А-мономери
Ки : вна: МНах НАХ здикін ; їв. -к й в а» р ка «4 З «Л
А, прапзратнивна ВЕЖ Х. о о « пххля как Ж в Я о . кВ ге: НД че
Св и т шана: зи сов
О "юме; с мех с ме, діастерновмерна сумі ізсвве», о шило слююютеся: й
А І ізомор, що пізна люється: В, 0078) Умови аналітичної ВЕРХ для активованих мономерів А:
ВЕРХ-колонка СпіхаІрак ІС, 4,6х250 мм, 5 мкм
Температура
Об'єм зразка, що 10 мкл (5 мг/мл, в етилацетаті) вводиться
Час утримання
ШИ
І0079| Умови препаративної ВЕРХ для активованих мономерів А:
І0О80| СпПігаїрак ІС, 21 х 250 мм, 5 мкм; елюція з колонки при 11 мл/хв 100 95-м етилацетатом при кімнатній температурі; Уф-детекція при 260 нм. 00811 ГН-ЯМР дані для А)
І0082| "Н-ЯМР (400 МГц, СОС») б 9,01 (шир., 1Н), 8,79 (с, 1Н), 8,00 (м, ЗН), 7,58 (м, 1Н), 7,4- 7,6 (м, 8Н), 7,2-7 4 (м, 10ОН), 6,42 (д, 1Н, 9У-8,4 Гу), 4,51 (м, 1Н), 4,12 (м, ЗН), 3,54 (д, 1Н, 9-12 Гу), 3,25 (д, 1Н, 9-12 Гу), 2,62 (с, ЗН), 2,59 (с, ЗН), 1,81 (т, 1Н, 9-11 Гу), 1,62 (т, 1ТН, 9-11 Гц).
І0083)| "Н-ЯМР дані для Аг) (0084) "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІз) б 9,04 (шир., 1Н), 8,79 (с, 1Н), 8,00 (м, ЗН), 7,56 (м, 1Н), 7,4- 7,6 (м, 8Н), 7,2-7,4 (м, ТОН), 6,41 (д, 1Н, 9-8,4 Гу), 4,51 (м, 1Н), 4,12 (м, ЗН), 3,54 (д, 1Н, 9-12 Гу), 3,25 (д, 1Н, 9-12 Гу), 2,64 (с, ЗН), 2,61 (с, ЗН), 1,82 (т, 1Н, 9-11 Гу), 1,63 (т, 1Н, 9-11 Гц). (0085) С. С-мономери внАг МНАС МА читожих ї см рах щ в на їх ще ота оте ота сх А припзративна ВЕВЕ ще о Я. . шк панни Я М; (в о б дай -« Ж СЯ. , я в. ва щі і
В. ще. зи "ж КІ соди Се її і веЗ койри - є 0 мМе; сб ММе». о Ме, діастересмерня сумі іме, цих ювидкоа снююетьшні М
Сі Явовієзтх, Що: Бізео ерокнтувосмі о (0086) Умови аналітичної ВЕРХ для активованих мономерів С:
ВЕРХ-колонка Спіга!Ірак ІС, 4,6 х 250 мм, 5 мкм
Температура 90 95 етилацетату, 10 95 н-гептану
Об'єм зразка, що 10 мкл (5 мг/мл, в дихлорметані) вводиться
Час утримання йо
І0087| Умови препаративної ВЕРХ для активованих мономерів С:
І0088| Колонку СПігагїрак ІС елююють при 15 мл/хв 75 95-м етилацетатом і 25 95-м н- гептаном. Температура кімнатна і УФ-детекція при 260 нм. 0089) Г Н-ЯМР дані для Сі) 0090) "Н ЯМР (400 МГц, СОС») б 7,66 (д, 1Н, У-7,8 Гц), 7:43 (м, 6Н), 7:33 (д, 1Н, 9У-7,4 Гц), 7:15 до 7:32 (м, 9Н), 6,18 (дд, 1Н, У-2,219,2 Гу), 4,42 (м, 1Н), 4,08 до 4,16 (м, 2Н), 3:54 (д, 1Н, 9-11 Гу), 3,14 (д, 1Н, 9-12 Гу), 2,64 (с, ЗН), 2,60 (с, ЗН), 2,23 (с, ЗН), 1,51 (т, 1Н, 9-11 Гу), 1,25 (м, 1Н). 00911) ГН-ЯМР дані для Сг) (00921) "Н ЯМР (400 МГц, СОС») б 7,64 (д, 1Н, 9У-7,8 Гц), 7:43 (м, 6Н), 7:32 (д, 1Н, 9У-7,4 Гц), 7:15 до 7:32 (м, 9Н), 6,19 (дд, 1Н, 9-2,119,2 Гц), 4,41 (м, 1Н), 4,06 до 4,15 (м, 2Н), 3:54 (д, 1Н, -11 Гу), 3,15 (д, 1Н, 9-12 Гу), 2,64 (с, ЗН), 2,61 (с, ЗН), 2,22 (с, ЗН), 1:49 (т, 1Н, 9-11 Гу), 1,25 (м, 1Н). р. б-мономери (монозахищений гуанін)
о Ко г: гуанів я А д о я я й г вн ех
Їх її. «АЛ и ше м вну ! сш ки м а М ай ша 1 тпрепаративна ВЕРХ воно ро ж туту пені втекти сннтяожн Й У ши й па й ї М Е ер Ї й; що в понят хр кв кїя стр Зп ой пе ям, Я Кк СО киМяє дувотевреомерна суміш їзонер, що «видко елююється:
Зк їзомеюр, ще пізно елююєетвся: З
І0094| Умови аналітичної ВЕРХ для активованих мономерів (с:
ВЕРХ-колонка СпНіха!Ірак ІС, 4,6 х 250 мм, 5 мкм
Температура
Об'єм зразка, що вводиться 10 мкл (5 мг/мл, в етилацетаті) йо (0095) Умови препаративної ВЕРХ для активованих мономерів С:
І0096| Колонку Спігаїрак ІС елююють при 15 мл/хв 100 95-м етилацетатом. Температура кімнатна і УФ-детекція при 260 нм.
І0097| Е. Т-мономери
Її о ЕФ а і Ме. Ж КІ з й Я ; ЇЇ. пиши ЩІ чн І рон ме рон і ; жд А м Є я К лік,
А | препаративна ВЕРХ 3 КГ о " ів; 2 Ів о
ОВ джина С ри Ск ий М вот й а Ви
Об вм 2 ВМех с ММех діастереомаєрна Ума щ їзомер, що жщейдкОо елююєюьсях Те ій а Завсмет, да зізано влюєвоя Таз 0098) Умови аналітичної ВЕРХ для активованих мономерів Т:
ВЕРХ-колонка Спіга!Ірак ІС, 4,6 х 250 мм, 5 мкм
Температура
Об'єм зразка, що вводиться 10 мкл (5 мг/мл, в етилацетаті)
Те
І0099| Умови препаративної ВЕРХ для активованих мономерів Т:
СпігаІрак ІС, 50х500 мм, 20 мкм. Елюція колонки при 60 мл/хв етилацетатом, при кімнатній температурі, детекція при 260 нм. Час утримання 25 і 40 хвилин.
ІОТО0) ГН-ЯМР дані для ТІ 0101) "Н ЯМР (400 МГц, СОС») б 7,4-7,5 (м, 5Н), 7,26-7,33 (м, 6Н), 7,16-7,22 (м, ЗН), 7,04 (д, 1Н, 7-1 Гу), 6,12 (дд, 1Н, У-2110 Гу), 4,39 (м, 1Н), 4,12 (м, 2Н), 3,37 (д, 1Н, 9-12 Гц), 3,15 (д, 1Н, у-12 Гц), 2,66 (с, ЗН), 2,63 (с, ЗН), 1,83 (д, 1Н, 4-1 Гц), 1,49 (т, 1Н, У-11 Гц), 1,41 (т, 1Н, 9-11 Гу).
ІО102) ГН-ЯМР дані для ТТ) 0103) "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІз) б 7,4-7,5 (м, 6Н), 7,24-7,35 (м, 6Н), 7,14-7,22 (м, ЗН), 7,03 (с, 1Н), 6,12 (дд, 1Н, У-2 11 10 Гц), 4,39 (м, 1Н), 4,09 (м, 2Н), 3,37 (д, 1Н, 9-11 Гц), 3,15 (д, 1Н, 9У-11
Гц), 2,66 (с, ЗН), 2,62 (с, ЗН), 1,82 (с, ЗН), 1,48 (т, 1Н, У-11 Гу), 1,40 (т, ІН, 9-11 Гу). 01041 РЕ. С-мономери (МВ2) мо чн мнвх МНіВе пити ТЯ ою сть бор з Со | За ча я
А. орепаративна ВЕРХ І АЖ с є о. М нин | С їв) о т го ще в о й -в ту св ше Що ше и їх
О ме; о Мме; 0 о кме; діастевреомерна сумізі івомеур, що швидко елеююстюєня Сі
Си їчомбрв, ще міжне айююється: Су 0105) Умови аналітичної ВЕРХ для активованих мономерів С (МВ2):
ВЕРХ-колонка СпігаІрак ІВ, 4,6 х 150 мм, 5 мкм
Температура 100 зе-й ацетонітрил
Об'єм зразка, що вводиться 10 мкл (5 мг/мл, в ацетонітрилі)
Час утримання
ТР
(0106) Умови препаративної ВЕРХ для активованих мономерів С (МВ2):
Колонку СпПігаїрак ІВ 20 х 250 мм елююють при 9 мл/хв 100 95-м ацетонітрилом.
Температура кімнатна і УФ-детекція при 260 нм. Час утримання 13 і 16 хвилин. 6. с-мономери (гуанін із двома захисними групами)
ФО дуття гу ме з й а їу и і нн Я ск сей ще о си й ! океан а
Фо ние ба КР "Му пізстарвиоюеена суму фзлкю, лох МВИДКО елмЕт ТИ: їх ба Асжинкатуи, ЗМОВ ШЛИЕЖМЄСТЮИМІ ре (0108) Умови аналітичної ВЕРХ для активованих мономерів С (гуанін із двома захисними групами):
ВЕРХ-колонка СпігаІрак ІВ, 4,6 х 250 мм, 5 мкм
Температура
70 95 етилацетату/30 95 метиленхлориду
Об'єм зразка, що вводиться 10 мкл (5 мг/мл, в етилацетаті)
Час утримання
Шо
І0109)| Умови препаративної ВЕРХ для активованих мономерів С (гуанін із двома захисними групами):
ІО110| Колонку СпПігаірак ІА 50 х 500 мм елюювали при 60 мл/хв 100 95-м етилацетатом.
Температура кімнатна і УФ-детекція при 260 нм. Час утримання 20 і 24 хвилини. 0111 ГН-ЯМР дані для Сі (гуанін із двома захисними групами) (01121 "Н ЯМР (400 МГц, СОС») б 7,76 (с, 2Н), 7,50 (д, 2Н, 3-9 Гц), 7,4-7,5 (м, 6Н), 7,26-7,32 (м, 6Н), 7,16-7,22 (м, ЗН), 7,02 (д, 2Н, 9-9 Гц), 6,24 (дд, 1Н, 9-2 і 10 Гу), 5,61 (д, 1Н, 9-12 Гу), 5,56 (д, 1Н, 9-12 Гу), 4,48 (м, 1Н), 4,1 (м, 2Н), 3,47 (д, 1Н, У-11 Гу), 3,23 (д, 1Н, 9-12 Гу), 3,2 (м, 1Н), 2,62 (с, ЗН), 2,59 (с, ЗН), 1,75 (т, 1ТН, У-11 Гу), 1,57 (т, 1Н, У-12 Гу), 1,33 (с, 9Н), 1,33 (т, 6Н, 9-1 Гу). 0113) "Н-ЯМР дані для Сг (гуанін із двома захисними групами) (01141 "Н ЯМР (400 МГц, СОС») б 7,78 (с, 1Н), 7,77 (с, 1Н), 7,50 (д, 2Н, 3-9 Гц), 7,4-7,5 (м, 6Н), 7,26-7,33 (м, 6Н), 7,15-7,22 (м, ЗН), 7,02 (д, 2Н, 9-9 Гу), 6,23 (дд, 1Н, 9-2 і 10 Гу), 5,61 (д, 1ТН, уУЧ-12 Гу), 5,56 (д, 1Н, 9-12 Гу), 4,47 (м, 1Н), 4,1 (м, 2Н), 3,47 (д, 1Н, У-11 Гу), 3,22 (д, 1Н, 9-12 Гу), 3,2 (м, 1Н), 2,64 (с, ЗН), 2,60 (с, ЗН), 1,75 (т, 1Н, У-11 Гц), 1,58 (т, 1Н, 9-11 Гу), 1,33 (с,
ОН), 1,33 (т, 6Н, 9-1 Гу).
ІЇО115| ІМ. Приклади стереоспецифічного РМО-сполучення з діастереомерно чистими активованими мономерами. (0116) У наступних прикладах описане використання стереоспецифічного сполучення для одержання стереохімічно гомогенних продуктів.
ІО0117| А. Активовані О-мономери (ШО: 2 О2)-О-морфолін-МН (1) о ї о
С се сх "но ря за з шо о, о 97, 97. т ! з й (в сінво сабо ре п: еф яви ан о "МЧме у АХ ОО ММе, оо ї г ї. А
Се ТВОРБО. ик, АМН С ( «МН ) : 1 ; ра р но о ши ши От о 1 ЕЕ З сіро сив ТВОРБО. и и ро и ит її Ме» гу ММех ізомер, Що ШВИДКО еЛІЮВИТЬСЯ у тп оттнттнннтнттттетесттсотстотостесссснносдв КЖХМОЮ, ЩО НІВИДКЄ СПЕНИЄТЬСЯ 2
ЗОМ ПО Піно АКНТВЯ З) оенннннякюнанннннкевосюосесюсеюю опа чкосасевсвосевговсесннюсносярю ВКУМКЮУ МО ТІЗВО ВИКЖЄТЬСЯ: З
ІО118) 0: (11 мг, 0,018 ммоль, 1 екв., 99,0 906 ДН (діастереоіїзомерний надлишок)) розчиняли в ацетонітрилі (0,11 мл) і змішували з діїзопропілетиламіном (8 мкл, 0,05 ммоль, 2,5 екв.).
Додавали М-морфолін-МН (14 мг, 0,030 ммоль, 1,6 екв.) і використовували обробку ультразвуком для полегшення розчинення. Через 0,5 год. перемішування невелику аліквоту реакційної суміші розбавляли СОСІіз і аналізували за допомогою "Н-ЯМР. Усю іншу реакційну суміш розбавляли ацетонітрилом (8 мл) для ВЕРХ-аналізу і зберігали в морозильній камері.
Зо Стереоспецифічне утворення сполуки 2 було підтверджене ВЕРХ-аналізом (99,4 95 ДН).
Вищевказаний протокол також використовували для реакції сполучення О2г (95,6 95 ДН) для стереоспецифічного одержання сполуки З (96,0 90 ДН).
І0119| Умови аналітичної ВЕРХ Ш0/О-сполучення:
Час утримання о Нуклеофіл / активований О-мономер | | Продукт(ОО-динуклеотид)
МО-морфолін-МН (1) в дн) (ЗА у дн) 01201) ГН-ЯМР дані для сполуки 21 (0121) "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІз) б 7,6 (м, 4Н), 7,2-7,5 (м, 20ОН), 7,1-7,2 (м, ЗН), 6,15 (д, 1Н, 9У-8,0 Гу), 5,73 (д, 1Н, У-8,0 Гу), 5,66 (д, 1Н, 9У-8,0 Гц), 5,54 (д, 1Н, 9-8,0 Гц), 4,40 (м, 1Н), 3,93 (м, 2Н), 3,81 (м, 1Н), 3,70 (м, 2Н), 3,41 (м, 2Н), 3,40 (м, ЗН), 3,11 (д, 1Н, 9-12 Гу), 2,78 (м, 1Н), 2,56 (с, ЗН, Ме), 2,54 (с, ЗН, ММе), 2,48 (м, 1Н), 1,47 (т, 1Н, 9-11 Гу), 1,35 (т, 1ТН, 9-11 Гу), 1,04 (с, 9Н). (01221 ГН -ЯМР дані для сполуки З) (0123) "Н -ЯМР (400 МГц, СОС») б 7,6 (м, 4Н), 7,3-7,5 (м, 1 1Н), 7,2-7,3 (м, 9Н), 71 (м, ЗН), 6,12 (дд, 1Н, 9У-2,019,6 Гц), 5,71 (д, 1Н, 9У-8,4 Гц), 5,70 (д, 1Н, 9У-8,0 Гц), 5,47 (дд, 1Н, 9У-2,011 10,4
Гц), 4,31 (м, 1Н), 3,97 (м, 1Н), 3,85 (м, 1Н), 3,73 (м, 2Н), 3,65 (м, 1Н), 3,31 (м, 2Н), 3,24 (м, 1Н), 3,07 (д, 1Н, 9-12 Гу), 2,68 (м, 1Н), 2,65 (с, ЗН, ММе), 2,62 (с, ЗН, ММе), 2,26 (м, 1Н), 1,45 (т, 1Н,
У-12 Гу), 1,29 (т, 1Н, 9-11 Гу), 1,04 (с, 9Н). (01241 В. Активовані С-мономери (С: 45 С2)-б-морфолін-МН (4)
НА М чНАЄ
А бе КА, я З нина пи М я є іх ак юн о "Я в) ММ Ф: що як роси в ТВОРБО. ик ро
ФМ Ї А мм
М
МНАЄ ак ж ЗНАЄ с по о ген ген с с, ро ; ЕХ Й чо т оч и М о - о в ож М. Чезй ! і жан ТВОРОМ ко ту о ме б мм ізамев. що півидкОо екс С УЧ КУ что з зомет шо пізно «люється: б ізомер, ще віз елюжеться: Су ККУ УА А УК У АК У ххх кумкккхнхкнюкнннкхкефні ІМ, ЦИ ПІВНДКО СЗКНОЄТЬСЯ: З 0125) Сі (20 мг, 0,031 ммоль, 1 екв., 93,5 95 ДН) розчиняли/суспендували в ТНЕ (0,40 мл) і змішували з діізопропілетиламіном (12 мкл, 0,069 ммоль, 2,3 екв.). Додавали морфоліно- цитозин (4; 16 мг, 0,035 ммоль, 1,1 екв.) в ТНЕ (0,20 мл). Після перемішування протягом 1,0-2,0 год. невелику аліквоту реакційної суміші розбавляли в ацетонітрилі і аналізували за допомогою
РХ/МС. Аліквоту (30-50 мкл) реакційної суміші розбавляли дихлорметаном (0,6 мл) для ВЕРХ- аналізу. Стереоспецифічне утворення сполуки б було підтверджене за допомогою ВЕРХ- аналізу (94,3 96 ДН). Реакційну суміш прямо наносили на колонку із силікагелем і елюювали градієнтом рухомої фази 0-15905 метанолу в етилацетаті. Вищевказаний протокол також використовували для С/С-сполучення Сг (90,2 95 ДН), щоб стереоспецифічно одержати сполуку 5 (90,0 Фо ДН). (0126) Умови аналітичної ВЕРХ для С/С-сполучення:
ВЕРХ-колонка СпНіпхаІрак ІС, 4,6 х 250 мм, 5 мкм
Температура
Розчинник В 1:11 етанол.-метанол в 0,1 95-м діетиламіні (ОЕА) нн п У ЗИ о т: ПИ нших ИН По пи
Об'єм зразка, що вводиться 10 мкл (З мг/мл, в дихлорметані)
Час утримання ннншшши нн п ЕН о Нуклеофіл | оактивованийС-мономер. | | Продукт (СС-динуклеотид)
С-морфолін- щі -е б р (93,5 95 ДН) (94,3 95 ДН)
Со 5
Ш (4
(0127) |Н-ЯМРЕ дані для сполуки 5) (О0128ГН-ЯМР (400 МГц, СОС13з) б 10,9 (шир., 1Н), 7,69 (д, 1Н, 9У-1,А Гц), 7,62 (м, 5Н), 7,35- 7,44 (м, 13Н), 7,21-7,35 (м, 6Н), 7,15 (м, 4Н), 6,14 (шир.д, 1Н, 9У-7,8 Гц), 5,58 (дд, 1Н, 9-24 9,4
Гу), 5,53 (шир., 1Н), 4,51 (дд, 1Н, У-8,6110 Гу), 4,09 (м, 1Н), 3,70-3,80 (м, 4Н), 3,60 (дд, 1Н, 9У-6,3 і 10 Гу), 3,56 (д, 1Н, У-11 Гу), 3,28 (м, 1Н), 2,96 (д, 1Н, 9-11 Гу), 2,69 (с, ЗН, ММе), 2,67 (с, ЗН,
ММе), 2,65 (м, 1Н), 2,25 (м, 1Н), 2,07 (с, ЗН), 1,31 (т, 1Н, 9-11 Гу), 1,13 (т, 1Н, 9-11 Гу), 1,04 (с, 9Н). 01291) Н-ЯМР дані для сполуки 6) (01301) "Н-ЯМР (400 МГц, СОС») б 9,57 (шир., 1Н), 7,62-7,70 (м, 7Н), 7,35-7,50 (м, 14Н), 7,23- 7,35 (м, 4Н), 7,12 (м, 4Н), 6,31 (м, 1Н), 5,79 (м, 1Н), 5,70 (м, 1Н), 4,61 (м, 1Н), 4,03 (м, 1Н), 3,680- 3,90 (м, 2Н), 3,72 (м, 2Н), 3,58 (м, 1Н), 3,48 (м, 1Н), 3,09 (м, 1Н), 2,75 (м, 1Н), 2,58 (с, ЗН, ММеб), 2,55 (с, ЗН, ММе), 2,53 (м, 1Н), 2,38 (м, 1Н), 2,21 (с, ЗН), 1,47 (т, 1Н, 9-10 Гц), 1,22 (т, 1Н, У-10
Гу), 1,06 (с, 9Н). 0131) С. Активовані А-мономери (Ат: 4 Аг) -О-морфолін-МН (1) ківі а мно
Мои Ж АХ р. ті хв ї Мн Д- ная х шк, - я п ж с Її Ї ою донкутечнитюкутд то іттокох с Ма Му ів 07» | жк їв в й і о езтктуих ї ей
Я вро т, В п ВО чий ви ит о мме; рон ФММ;
Ге я З 4 07 З
МНАг о тТВрРЗО. ИН ї МН: моз ваша ми шк Мо ще 7 ШЕ І. "но вин ай
А птн ння ци А. а У ле
М рео. ня ТВО, М во. ря шини
Ту МмМме» у ме,
А; 7
Гязмеп, ще піввико НОЮ ється ЇХ; иа бдумеру цк піни слкносться: Я о ізомепоще піна елювнавсях ою С ТТ та баамор, панни зко соми яься? З
ІО132| Аї (5,9 мг, 0,008 ммоль) ресуспендували в ацетонітрилі (118 мкл). Додавали діізопропілетиламін (5 мкл, 0,03 ммоль), після чого додавали морфоліно-урацил (1; 4,6 мг, 0,01 ммоль). Ультразвук використовували протягом 1 хв і отриману гомогенну суміш перемішували при кімнатній температурі. Після перемішування протягом ночі суміш (густу білу пасту) розбавляли сумішшю ацетонітрилу (5,0 мл) і метанолу (0,30 мл), одержуючи гомогенний прозорий розчин. Невелику аліквоту прямо аналізували за допомогою ВЕРХ без подальшого розведення.
ІО133| Аг (Б2; 5,0 мг, 0,007 ммоль) ресуспендували в ацетонітрилі (100 мкл). Додавали діізопропілетиламін (4 мкл, 0,02 ммоль), після чого додавали морфоліно-урацил (4,1 мг, 0,009 ммоль). Ультразвук використовували протягом 1 хв і отриману густу суспензію перемішували при кімнатній температурі. Після перемішування протягом ночі додавали ацетонітрил (5,0 мл) і використовували обробку ультразвуком, одержуючи гомогенний прозорий розчин. Невелику аліквоту прямо аналізували за допомогою ВЕРХ без подальшого розведення.
І0134| Умови аналітичної ВЕРХ для Ш/А-сполучення:
Коо)
ВЕРХ-колонка СпігаІрак ІС, 4,6 х 250 мм, 5 мкм
Температура 11 Розчинникво | 17 втанолметанолв Ом Зему дієтиламіні
Ізократичний: 98 95 розчинника А, 2 95 розчинника В
Об'єм зразка, що 5 мкл (1 мг/мл, в суміші ацетонітрил-метанол) вводиться час утримання 7 (Б-ізомер)
Шй 8 (Асізомер) о Нуклеофіл | оактивованийА-мономер. | | Продукт (А-динуклеотид) не І НА -- 7,8 96 ДН В-ї 96,2 95 ДН
О-морфолін-МН (1) (З шле дн) | ие 2 6 ДН) 2 (98,4 Фо ДН) (5-ізомер, 98,3 95 ДН) (01351 0. Активовані Сс-мономери (Сі: 5 (22) -О-морфолін-МН (1) о 2 о в. аву у ки на бе «р ще й о КО яння я ск т- 9 шк
Ор оивбок ще ТВОБО й рий з
ЕЙ "Ме А нн о Не
СА, й З ї а | 1
М ! "ми о ТОР ВО. жін» ЕК г чн а
Ай ' ме « в ши ши ак в о сви аби ТВоеБо ий им. сли гамер, Мі) Вів ВІВІВЖЕЬВ о, пут ут у У У Ку хх уки у ізамер, ІЗ Ви дюЗ СВИСТ ЬоЯ: З номер. хо нізна елоюєть 0, пижектєюткютт же китеттюкюитеюттетккеюттют єкт ксск В іме, іа пізна одн чься: тв 0136) С (6,5 мг, 0,009 ммоль, 1 екв., 99,9 95 ДН) розчиняли/суспендували в ТНГ (0,13 мл) і змішували з діізопропілетиламіном (3,6 мкл, 0,02 ммоль, 2,2 екв.). Додавали морфоліно-урацил (1; 4,7 мг, 0,010 ммоль, 1,1 екв.), розчинений в ТНГ (0,07 мл). Після перемішування протягом 1,0-2,0 год. невелику аліквоту реакційної суміші розбавляли ацетонітрилом і аналізували за допомогою РХ/МС. Аліквоту (100 мкл) з реакційної суміші розбавляли дихлорметаном (0,4 мл) для ВЕРХ-аналізу. Стереоспецифічне утворення сполуки 9 було підтверджене за допомогою
ВЕРХ-аналізу (99,9 95 ДН).
І0137| умови аналітичної ВЕРХ для Ш/С-сполучення:
ВЕРХ-колонка СпНіха!Ірак ІС, 4,6 х 250 мм, 5 мкм
Температура
Рухома фаза : --
Розчинник С 171 етанол:метанол в 0,1 95-м діетиламіні (ОЕА)
ГА 580Ї1166 нн ЗИ ПО с ПО по
Об'єм зразка, Ге) . й щ 5 мкл (2 мг/мл, в дихлорметані) вводиться
Детекція
Час утримання нннши нн І ГЕ ПН
Нуклеофіл активований С-мономер щи Продукт (ПС-динуклеотид) у-морфолін-МН (1) і , З (99,9 до ДН) (99,9 Фо ДН) 0138) Діастереомерно по суті чисті сполуки, описані вище, можуть використовуватися для одержання стереохімічно чистих олігонуклеотидів і інших сполук. Приклади можливих олігонуклеотидів наведені, наприклад, в Зиттегіоп, у (1999). "Могрпоїїпо Апіізепзе Оїїдотегв:
Тне Сазе юг ап ВАМазе-Н
Іпдерепаепі 5ігисішга! Туре.". Віоспітіса еї Віорнузіса Асіа 1489 (1): 141-58; Зиттенпоп, У; МеїПег
О. (1997). "Могрпоїїпо Апіїзепзе Оіїдотеге: Оезідп, Ргерагайоп апа Ргорепіев". Аліїзепве й
Мисівїс Асій Огид РемеІортепі 1 (3): 187-95. Обидва ці документи включені в даний опис за допомогою посилання.
ІЇО139| М. Приклад стереоспецифічного синтезу 16б-членних РМО та розділення стереоізомерів біофізичним методом (0140) У цьому прикладі описаний синтез, метою якого є пара стереочистих 16-членних
РМО, шляхом стереоспецифічного сполучення з використанням активованих мономерів. Ці
РМО мають протилежні стереохімічні характеристики своїх фосфорних зв'язків.
Цільова послідовність:
ЕзО ел и еф п
Хан КЗ т жи ду Її. я 7
М. а ТА А ВТС -А А А А о ке (ЗЕО ІО МО: 2)
Стереочисті активні мономери (структурні ланки): «ен Мне: а Би
Г уе ї ! А їв й, ще х щи ще в и
А нич с нин а я р де Т МО
З г т Б доц в обои їв: и: й ки ще ШИ в; пок сонце У нм пом З кре ізмев. ін ківдаки с Неються іхомер. ян вилка влнається; Сі помер, пра нан лка еличеєккя: С мемер: вих чеилки вцимєтьсЯя
Номер: що тізнуЄТЮЮТсЯ АК 0 пемер; пюпизаєтеються о Є твер; Що Війо елюНУя обер, нка но елекнчься 15 й й Стереочисті активні мономери, що використовуються для реакції
Цільові РМО й ри, щ й У для реакц сполучення
Стереоізомер 1 А», С», Сх і Ті
Стереоізомер 2 Ач, Сі, Сг і Те
І0141| Схема стереоспецифічного синтезу 1б6--ленних РМО і розділення стереоізомерів біофізичним методом показана на фіг. 6. 16-членні РМО-стереоізомери 1 і 2 отримані вручну методом твердофазного синтезу на амінометилполістиролдисульфідній смолі (навантаження «-300 мкмоль/г, див. публікацію заявки на патент США Мо 20090131624А1, яка включена в даний опис за допомогою посилання) у масштабі 50 мг (початкова вага смоли). 01421) Вихідні розчини для твердофазного синтезу:
Коо)
4-ціанопіридинтрифторацетат (СУТЕА), 2 95 (вага/об.), і 0,9 95 етанолу (об./06.) в 20 95-м трифторетанолі в ОСМ (об./об.). (об./об.).
Свіжоприготовлений 55 мМ розчин в МЕМ-ЮОМІ" для кожного із
Сполучення стереочистих активних мономерів (Аг, Сг, Сі: і Ті для стереоізомеру 1;
А, Сі, Сг і Т» для стереоізомеру 2) 70,11 М М-етилморфолін в 1,3- диметилімідазолідиноні (ОМІ) (0143) Операційний цикл для кожного РМО-сполучення:
Стадія Об'єм (мл) Час (хв) ром 1-2 2-5
Детритилювання 1-2 5
Детритилювання 1-2 5
Детритилювання 1-2 5
Детритилювання 1-2 5
Детритилювання 1-2 5 ром 1-2 2-5
Нейтралізація 1-2 2-5
Нейтралізація 1-2 2-5
Нейтралізація 1-2 2-5
Нейтралізація 1-2 2-5 ром 1-2 2-5 ром 1-2 2-5 ром 1-2 2-5
Сполучення 1 »1807 ром 1-2 2-5
Нейтралізація 1-2 2-5
Нейтралізація 1-2 2-5 ром 1-2 2-5 ром 1-2 2-5 ром 1-2 2-5 ром 1-2 2-5 "40 "С протягом З годин або кімнатна температура протягом 12 годин. 0144) Зняття зі смоли і видалення захисту:
І0145| До зв'язаного зі смолою 16-членного олігонуклеотиду (після детритилювання) додавали 1:3 (0б./06.) 2895-го водного розчину аміаку в етанолі (-5 мл) . Суміш герметично закривали і нагрівали при температурі 45 "С протягом 20 годин. Після охолодження до кімнатної температури суміш фільтрували і промивали метанолом. Фільтрат концентрували і проводили діафільтрацію проти 15 мм триетиламонійного (ТЕАА) буфера, рН 7,0. Використовуваним обладнанням була комірка, що перемішується. Атісоп (50 мл) з Ше-мембраною ОКгасеї 1 кДа.
Зразки діафільтрували шляхом розведення/концентрації доти, поки концентрація вихідного розчинника не знижувалася до 195 від вихідної концентрації (приблизно за 5 циклів), а потім очищали за допомогою препаративної оборотно-фазової ВЕРХ. (0146) Спосіб очищення РМО шляхом оборотно-фазової препаративної ВЕРХ: 000 Початовий |0010185.1......5 вв 11111121
071777ю600117717791 106 1
Розчинник А: 15тпМ триетиламоній-ацетатний (ТЕАА) буфер,
Рухома фаза рн7-10 96 меон те | сном (0147) РХ/МСО-спосіб для оцінки якості РМО:
Градієнт
Розчинник А: 50 мМ ацетат амонію
Рухома фаза Розчинник В: ацетонітрил/метанол 1/1 об./0об. з 50 мМ ацетатом пика Кн о інн - 100 "С/ 4 еВ (низькоенергетичні) 40-70 еВ
Темп. джерела/ Енергії . Е 2. . використанням програми У/аїєг5 М5е Міежмег (0148) Матеріали і умови для виміру температури плавлення (Тт)
Комплементарна РНК (1645-П6ОШССООСАОСОО СИ АИ-9' (5ЕО О МО. 1) (ОТ Іпівдгаїва ОМА . 10 мМ фосфат натрію, 100 мМ Масі, 0,1 мМ ЕОТА, рН 7,0
Пристрій для виміру, Спектрофотометр Уф і видимого діапазону -ЗПітайдги 2700, концентратор 8-мікромолярні кожен зразок і комплементарна РНК в 250 мкл
Вихідні розчини буфера були приготовлені З використанням буфера для розрідження зі зразків, сконцентрованих і висушених вакуумним центрифугуванням
Кожен зразок потім змішували з рівним об'ємом 8-мікромолярної комплементарної РНК.
Суміші потім нагрівали до 95 "С, а потім охолоджували до 25 "С для віджиту перед виміром Тт.
Процедура Аналіз Тт (УФ 260 нм) проводили від 25 "С до 105 "С при 0,5 "С/хв (температуру повертали до вихідних умов після кожного прогону) і потім повторювали за тих же умов.
Для обчислення Тт використовували аналітичну програму (Зпітад2?и) з використанням "усереднювальної функції".
Ї0149| Результати термічного плавлення комплексів стереохімічно відмінних РМО з комплементарної РНК:
Чистота за РХ/МС (90 Тт СС) площини)
Стереоізомер 1
Стереоізомер 2 (0150) Температури плавлення для стереоізомерів 1 і 2 показані на фіг. 7. Виходячи з різних температур плавлення можна зробити висновок, що були отримані визначені кількості по суті чистих стереоізомерів. 0151 МІ. Приклад стереоспецифічного синтезу і абсолютного стереохімічного визначення стереочистого РМО-динуклеотидної сполуки 100 (5-ТАг2-3') т Мнвх | Її мВ: ме. Й "ще Ки в Ме "я й. я а зи | г не м г й Ме їжа Ї Я що» ж | ат снення 7 її ве
ТВОЮ нний ; Содом ду знетнігоня ТВО ий ри и и п ме її не
К ква ати й Аз о фбнкмср» ви пінні сах ув) 2 фонова жені В 0152) Активний мономер А, що пізно елююється, (Аг; 200 мг, 0,277 ммоль, 1 екв.) розчиняли в суміші ацетонітрилу (2,0 мл) і ОІРЕА (0,12 мол, 0,69 ммоль, 2,5 екв.). Потім додавали Т- морфолін-МН (1; 146 мг, 0,305 ммоль, 1,1 екв), і отриману суспензію обробляли ультразвуком протягом декількох хвилин до одержання прозорого розчину. Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Після завершення реакції за даними РХ/МС суміш концентрували і хроматографували на колонку (в З 9о-м метанолі в ОСМ, Віоїаде зпарикга 10 г
ЗО»). Чисті фракції, що включають продукт, поєднували та концентрували у вакуумі, одержуючи повністю захищений стереочистий 5'-ТА-3' динуклеотид 2 у вигляді білої твердої речовини (240 мг, 0,206 ммоль, вихід 74 95).
ШУ Мне З мих і вок у дея веб ду» еорев ех сівш "я «Ки Є «Код Зв а Ж ша «й | я А Ме Я а дет й ще вк я хв в ща вони: ве о тарево, Ав ТНОвовжх, ща в: заєсветне нот Ж ме й Фнве Фе 7 іповністозакищений УТА, З ізвстново захищений 5-ТАУ стзаука МОЮ
МУ-ТА» Я Без закисних і руй вбослютна конфігурація фросфюову підтверджена вемтпенвруктувним аналізом монавристале
ІО153) До повністю захищеного динуклеотиду 2 (500 мг, 0,429 ммоль) в 25-мл колбі додали 2,2,2--рифторетанол (ТЕЕ, 4,0 мл) і оцтову кислоту (1,0 мл) при кімнатній температурі.
Отриману суміш перемішували при кімнатній температурі і проходження реакції контролювали за допомогою РХ/МС. Через 30 хвилин реакційну суміш гасили насиченим водним розчином
Мансо:з і ОСМ. Після розділення двох шарів водний шар повторно екстрагували. Усі органічні шари поєднували, промивали наполовину насиченим маточним розчином, висушували над безводним Ма»50О»5, фільтрували і концентрували з одержанням неочищеного продукту у вигляді білої піни. Неочищений продукт очищали за допомогою колонкової хроматографії (в 20 96 меон в ацетоні на картриджі Віоїаде Зпар Ота 25 г 502) з одержанням частково захищеного динуклеотиду З у вигляді склоподібної твердої речовини (300 мг, 0,325 ммоль, вихід 76 95).
І0154| Частково захищений динуклеотид З (250 мг, 0,271 ммоль) розчиняли в суміші метанолу (12,5 мл) і ТНГ (12,5 мл) і обробляли 1 М Масон (10,8 мл) при кімнатній температурі.
Після перемішування при кімнатній температурі протягом 22 год. (прогрес моніторили за допомогою РХ/МС), суміш нейтралізували 1 М НС (10,8 мл), щоб підвести рН до 8, а потім концентрували у вакуумі досуха. Залишок розчиняли у воді (5 мл) і промивали ЕІЮАсС (5 мл).
Водний шар концентрували у вакуумі досуха з одержанням неочищеного продукту у вигляді білої твердої речовини (480 мг). Неочищений продукт очищали за допомогою гель- хроматографії (на Зерпадехк ГН-20 у суміші метанол/вода 4:11) з одержанням сполуки 100 (динуклеотиду з повністю вилученими захисними групами) у вигляді білої твердої речовини (137 мг, 0,236 ммоль, вихід 87 95). 0155) Краплю водного розчину сполуки 100 (200 мг/мл) запечатували в лунці із чистою водою она один день для вирощування монокристалів. Рентгеноструктурний аналіз монокристала підтвердив абсолютну конфігурацію фосфорного зв'язку як 5. Ця рентгенівська структура показана у вигляді ОКТЕР-діаграми на фіг. 8. ОВТЕР-діаграми окремих фрагментів показані на фіг. 9А і фіг. 9В. Рентгеноструктурні дані були отримані, як описано нижче.
І0156)Ї Одержання рентгеноструктурних даних
І0157| Монокристал сполуки 100 (Сг2НззМ1і0О7Р) був установлений на скловолокні. Усі виміри проводилися на дифрактометрі з використанням монохроматичного випромінювання (Си-Ка, графітовий монохроматизатор).
ІО158| Параметри комірки і матриця орієнтації для даних були отримані з уточнення методом найменших квадратів з використанням настановних кутів 36473 добре центрованих відображень у діапазоні 7,75 «29 «147,10, і відповідали С-центрованому моноклінному гнізду з
Зо розмірами: а-33,3523(2) А р-13,80020 (11) А д-96,8075(6)? с-14,19956(10) А
У-6489,53(8) Аз
І0159| Для 2-4 і ЕМ/-580,54, розрахункова густина становить 0,594 г/см3. Виходячи з умов відображення:
ЯКІ: п-К-2п упакування, статистичного аналізу розподілу інтенсивності і успішного рішення і уточнення структури, просторова група була визначена як:
С2(Ж5)
ІО160) Дані були отримані при температурі 23:11 "С з використанням методу сканування 0-28 до максимального значення 28 147,77. Омега-сканування декількох інтенсивних відображень, зроблених до збору даних, мали середню ширину на напіввисоті 0,007 з кутом відображення 6,07. Скани (0,00-0,00 тангенс 8)" були зроблено зі швидкістю 0,0"/хв (в о).
ІО161| Скорочення кількості даних 01621) Було зібрано 50795 відображень, з яких 12008 були унікальними (ВНіп-0,0453). Дані були зібрані та оброблені з використанням СгузАЇїї5Рго (Бідаки Охіога Рійгасійоп). (СтузАїЇї5Рго: Баїа
СоїІесіїоп апа Ргосезвзіпд оїмаге, ВідаКи Согрогайоп (2015) Токуо 196-8666, дарап.). Корекція на розпад не застосовувалася. 0163) Коефіцієнт лінійного поглинання, |, для Си-Ка-випромінювання становить 6,011 см-!.
Застосовували емпіричну корекцію поглинання, що давало фактори в межах від 0,341 до 1,000.
Дані були скоректовані на ефекти Лоренца і поляризації. (0164) Рішення і уточнення структури 01651 Структура була вирішена прямими методами 5НЕЇ ХТ Мегвіоп 2014/5: Зпеїдгіск, с. М. (2014). Асіа Стузі. АТО, С1437) і розширеними з використанням Фур'є-методів. Неводневі атоми були уточнені анізотропно. Атоми водню були уточнені з використанням моделі наїзника.
Остаточний цикл уточнення повноматричним методом найменших квадратів (з використанням мінімізованої функції найменших квадратів: (ЗНЕЇ ХІ. Мегзіоп 2014/7) ; Ум Ео2-Есг)7, де вага найменших квадратів) 60 на ЕЕ? був оснований на 12008 спостережуваних відображеннях і 849 змінних параметрах і сходився (найбільше зрушення параметра становило 0,00 від його оціночного значення середньоквадратичного відхилення) з незваженими і зваженими факторами згоди:
К1-Х1ПЕОЇ - ІСІ /5ІБоІ-0,0522 м/в22 |У (м (Бог-Есг)2) /5му (Бог)21,2-0,1632 0166) Ступінь згоди становив 1,45. Ступінь згоди визначається в такий спосіб: |(|хм(Ео2-Есг) 2/ (Мо-Мм))|"2, де: Мо-число спостережень і Муи-число змінних.
І0167| Використовували питому вагу. Максимальні і мінімальні піки на кінцевій різницевій карті
Фур'є відповідали 1,79 і -0,69 е7/Аз, відповідно. Кінцевий параметр Флека дорівнював 0,029(7), що свідчить про те, що структура є двійником інверсії (Рагхоп5, 5. апа РіаскК, Н. (2004), Асіа
Стузі. АБО, 561; Ніаск, Н.О. апа Вегпагаїпеїїї (2000), У. Арр/. Стузі. 33, 114-1148).
ІО168| Фактори розсіювання нейтральних атомів були взяті з Міжнародних таблиць для кристалографії (ІТ), том С, таблиця 6.1.1.4. (Іпіегпайопаї! Таріез тог СтуєіаіІмодгарпу, Мої.С (1992).
ЕЯ. А.).С. Умібоп, Кіим/ег Асадетіс Рибіїзпетв, Богагесні, Меїпепапаз, Табіє 6.1.1.4, рр. 572).
Ефекти аномальної дисперсії були включені в Есаїс (Ібег5, У. А. 5 Натійоп, УМ. С.; Асіа
СтузіаНодг., 17, 781 (1964)); значення для Аї і АР були взяті з довідника Стеаді і МсАшеу. (Стеади, 0. С. б МесАшіеу, МУ/.9.; "Іпіегпаййопа! Тарієв тог СтувіаПйодгарпу", Мо! С, (А.С. М/іЇвоп, ей.), Кіимег Асадетіс Рибіїєпег5, Во5іоп, Таріє 4.2.6.86, раде5 219-222 (1992)) . Значення коефіцієнтів загасання мас були взяті з Сгтеадп і Нирреїї. (Сгтеади, 0. С. 8 Ниббеї, 9.И..; "Іптетаїйогаї! Табріев Тог СтузіаПйодгарпу", Мої С, (А.У.С УМізоп, еа.), Кіимег
Асадетіс Рибіїзпег5, Вовіоп, Табріє 4.2.4.3, раде5 200-206 (1992)). Усі розрахунки проводилися з використанням пакета кристалографічного програмного забезпечення СгузіаІЗігисіцйге, за винятком уточнення, яке було виконане з використанням 5НЕЇХІ Мегбіоп 2014/7. (Стувіа!5ігисіге 4.2: Стувіа! 5ігисійцге Апаїузіз РасКаде, Відаки Согрогайоп (2000-2015). Токуо 196-8666, дарап; ЗНЕЇГ ХГ. Мегвіоп 2014/7: Зпеїдгтіск, сх. М. (2008). Аста Стузі. Аб4, 112-122).
І0169| Кристалічні дані, вимірювання інтенсивності і вирішення і уточнення структури наведені нижче:
А. Кристалічні дані
Емпірична формула Сг22НззіМі0О7Р
Молекулярна маса 580,5
Колір і форма кристала Відсутні
Розміри кристала Не описані
Кристалічна система Моноклінна
Тип решітки С-центрована
Кількість відображень, що використовується для комірки
Визначення комірки (28 діапазон) 36473 (7,7-147,17)
Ширина піків при омега-скануванні на напіввисоті 0,00" а-33,3523(2) А р-13,80020(11) А
Параметри решітки с-14,19956(10) А в-96,8075 (6)"
М-6489,53(8)А3
Просторова група С2 (Ж) 7-значення 4
Юрозрах. 0,594 г/см3
Еооо 122400 щ(Сика) 6,011 см"
В. Виміри інтенсивності
Дифрактометр
СикКа (А-1,54187А)
Випромінювання графітовий монохроматизатор
Кут відображення 2,87
Апертура детектора 2,0-2,5 мм за горизонталлю 2 мм за вертикаллю
Відстань від кристала детектора до 21 мм
Температура 23,076
Тип сканування 0-28
Швидкість сканування 0,00"/хв (в о)) (до 0 сканувань)
Ширина сканування (0,00-0,00 тангенс 8)" 2Омакс. 147,77
Всього: 50795
Унікальних: 12008
Число виміряних відображень (Аіт-0,0453)
Коефіцієнти Парсона (х-параметр
Флека): 4813
Поляризація Лоренца
Корекції Поглинання (фактори пропускання: 0,341-1,000)
С. Вирішення і уточнення структури
Вирішення структури Прямі методи (ЗНЕЇ ХТ Мегвіоп 2014/5)
У Повноматричний метод найменших точнення - квадратів за гг
Мінімізована функція Ум (Бог-Еогд)2
Вага найменших квадратів м/-1/ (ог (Бог) -- (0, 1000-Р)2-0, 00 00-РІ де Р-(Мах(Рог, 0) я 2Ес2) /З 29тах відсічення 147,77
Аномальна дисперсія Всі неводневі атоми
Число спостережень (всі 12008 відображення)
Число змінних 849
Коефіцієнт 14,14 відображення/параметр
Кінцеві похибки: ВІ 0,0522 (122,00(7(1))
Кінцеві похибки: В (всі 0,0534 відображення)
Кінцеві похибки: м/ 82 (всі 0,1632 відображення)
Показник ступеня узгодження 1,450
Параметр Флека (коефіцієнти 0,029(7) Парсона-4813)
Максимальний зсув/похибка в 0,001 останньому циклі
Максимальний пік в кінцевій дифракційній карті 1,79 е7/Аз
Мінімальний пік в кінцевій дифракційній карті -0,69 е/Аз 0170) ГН-ЯМР дані для сполуки 100) 0171) "Н-ЯМР (400 МГц, 02О) 8 8,25 (с, 1Н), 8,15 (с, 1Н), 7,40 (с, 1Н), 5,85 (д, 1Н), 5,45 (д, 1Н), 4,25 (м, 2Н), 4,05 (м, 1Н), 3,85 (м, 1Н), 3,6 (м, 2Н), 3,4 (м, 4Н), 2,90 (м, 4Н), 2,60 (д, 6Н), 1,8 (с, ЗН). 0172) Усі документи, зазначені в даній заявці, включені в неї через посилання. Якщо є присутнім яка-небудь розбіжність між включеним документом і даним документом, то даний документ превалює.
сивоссзк послІдОоВвОстТЕМ
СНО, Муєсту Же К
ВМО, АСІНАВХ
НАМ, Ми т, Жовеке Х. «ей ХІРАЛЬНІ ВЕККЕНТМ ДЯ ОДЕРЖАННЯ ГОМОСЖННИМ ЗВЕГОВЕВУВ ківш й «їі ВаїбжасІй еежжісе 5 «ва її «кій жена деслеоВнісюь «ля плавлення зиосоцоаноа пива їб «вх «міх 16 «Мій» щеУучна песлідавність «і» тестова послідовність для синтевуУу, ЩО Включає неприродний зв'язок 5
Вест атн меюоліноеве кельще «Ой
МК КНННЕА ЯК ВфОМВВ я

Claims (9)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Спосіб одержання по суті діастереомерно чистого фосфородіамідатного морфоліно- олігомеру, що містить хіральні фосфорні зв'язки, який включає: вибір по суті стереохімічно чистих фосфорамідохлоридатних морфоліно-мономерів; і синтез по суті діастереомерно чистого фосфородіамідатного морфоліно-олігомеру шляхом стереоспецифічного поєднання вибраних по суті стереохімічно чистих фосфорамідохлоридатних морфоліно-мономерів, де по суті стереохімічно чисті фосфорамідохлоридатні морфоліно-мономери одержують шляхом розділення діастереомерної суміші фосфорамідохлоридатних морфоліно-мономерів на по суті стереохімічно чисті фосфорамідохлоридатні морфоліно-мономери, і де по суті стереохімічно чистий належить до енантіомерів або діастереомерів, які знаходяться у енантіомерному або діастереомерному надлишку, відповідно, який дорівнює або більше 87 95, і де по суті діастереохімічно чистий належить до діастереомерів, які знаходяться у діастереомерному надлишку, який дорівнює або більше 87 95.
2. Спосіб за п. 1, де розділення діастереомерної суміші відбувається щонайменше за допомогою одного методу з групи, що складається з хроматографії і кристалізації.
3. Спосіб за п. 2, де хроматографію вибирають з групи, яка складається з високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ), хроматографії в псевдорухомому шарі і хроматографії в протитечії.
4. Спосіб за будь-яким з пп. 1-3, де по суті стереохімічно чисті фосфорамідохлоридатні морфоліно-мономери вибирають з групи, яка складається зі сполуки формули 20, сполуки формули 21, сполуки формули 22, сполуки формули 23, сполуки формули 24, сполуки формули 25, сполуки формули 26, сполуки формули 27, сполуки формули 28, сполуки формули 29, сполуки формули З0 і сполуки формули 31: Сполука Мо формули КО Ж : дк й а Є У не Ищи ке С ве» т Бо К ж ШК І 1 НКУ ту і Я дж в,
ОМ.
ня. -ц - та І ; С є ! Я і "ву 8 Я сн че ш . СОВА Не й ЩЕ Її ще ато І З Се в в'я ей нео сом АВ» Са ШИ щ ;
С. ве Х М І: чі тонн их М. У
Сполука Мо формули м. с шк Й - "м в ФО ї Е т м З й ях Х З свт» М ве Зою вв,
м. «екосюн ді в і кро Ку вне ЕВ з ет ц Н З БЗЯ тоди Ка о шк щі зах ка х яко в Ж є Я МК. де - щи хе У кі, Пежо ше ная сах яки Є -- с, Н в жк З ца Я. к де а се - с МА. г ц ме ЗАД ДИ чт ї : ї ї у се ШЕ зе мя ФО я сх 3 М во ЦКУ Ех з хе ай веди "В. Б Й дея п ї в В ї бод Зх Осо ще щі г з ЕНН щ- і Кд хо А У. се Мк ще" зве зх що Ж, й шк: як Ж зжк ж
ОМ. зак: і : З Бл МВ М Ся ї х Кей Ї ї АК сдеК. М, є ПК 80 Ко тк, Оз ях -к ї З ХК, Кс х у; З а ц а щей Ме КІ я що де Ві і В? можуть бути однаковими або різними та вибрані з групи, яка складається з -Н, заміщеного С1-Сз-алкілу, заміщеного фенілу, заміщеного нафтилу, або ж, з атомом азоту, до якого вони приєднані, вони утворюють заміщений гетероцикл, який може являти собою, наприклад, піролідин, піперазин і морфолін; де Аз вибраний із групи, що складається із тритилу (Ту), який може бути заміщеним тритилом, включаючи, але не обмежуючись цим, наприклад, ММТ"г (п-метоксифенілдифенілметил); заміщеного бензилу, 4-метоксибензилу (РМВ, МРМ), 3,4-диметоксибензилу, дифенілметилу (Орт) і сульфонілу; В», В5 і Нє вибрані із групи, що складається з -Н, -С(О)НА; і -С(О)ОНВ?, де В? являє собою С1-Св- алкіл, бензил, 2,2,2-трихлоретил і арил; Во вибраний з групи, яка складається з заміщеного алкілу, ціаноетилу, ацилу, карбонату, карбамату, заміщеного бензилу, 4-півалоїлоксибензилу і силілу, і їхніх енантіомерів.
5. Сполука за п. 4, де сульфоніл являє собою розщеплюваний сульфоніл, вибраний із групи, яка складається З 2-нітробензолсульфонілу, 4-нітробензолсульфонілу і 2,4- динітробензолсульфонілу.
6. Сполука за п. 4, де В», В5 і Нє вибирають з групи, яка складається з фенілу, 4-метоксифенілу, 4-бромфенілу і 4-нітрофенілу.
7. Стереохімічно чистий фосфородіамідатний морфоліно-олігомер, що містить хіральні фосфорні зв'язки, одержаний способом за будь-яким з пп. 1-6.
8. Фармацевтична композиція, що містить по суті діастереомерно чистий фосфородіамідатний морфоліно-олігомер, що містить хіральні фосфорні зв'язки, за п. 7 або його фармацевтично прийнятну сіль.
Терапевтичні слігонуклестиди Фосфодієфирні олігомери Фосфорстіоатні (Ро) / Фосфородіамідатні морфолінок, і (дНЕ ен тлі олкомери Е олігомери (МОЇ Ії а ові і Ж ї и ще беж аз Ж З і ! сс НН Ши а Е х Ж Ї ; Основа у Основа | Я Основа ко ; ктів кв ! ! рі в ові З | ! Її а. и Сснава ві х і Й Основа Ї чова. роб юн аа ШЕ шин ШИН я де и ШИ КЕ 2 ООН Кон ЕТ оз щу . Я З КЗ х ха у р шо ШЕ су У го: З ШИ о оо ре ей зо ке : м В ЩЕ бвби І ШЕ в я: я 1 оз а, Ці пе Ії 1 Ж б ц | - . Її і ще ни ш і ! і Основа ТЕ Основа бснева ї Е ее. Оснева 6 ги ще ї х о пов Що СЕ ШУ я в КВК х а т іЯЕ ; ее 7 ох яв, ск мон р Ї х с зи С ШЕ: о "ниех 1 : вхіральний фосфор | хіральний фосфор.
«те. 1 Проблеми при одержанні говегенних (сере очистк МО пт у тринувлестид | | терануклевтнд Ї бетеротенняй С Везвовери за зуволе | хни, ня сх ця в св ссАА І олігомередтт о Єполузення а сполузення и му сполучення альний повтор а ст шо ов, й Мам ТТ | обомерю ! «2 зморфолінеглікозида т ва "фр фімовномерн АС і т.п.) У шу 0000 А Я5рфосфорний зв'язок чем т ши п я Ееуділення практично севжливе А ЧК фосфорний зв'язок «Статистично низьний вихід ! прова грн цеова два ба, ба нання зи, ран ен щ щи я рий х Е дім ! Кк її й. ! х - в Ме: У .
Фіг. 2
Розділення дізстересмерів активованих меномерів і стереоспецифчна резкція сполучення ЕМО їх яв в е з зморфовін мн Ї ? 5 2 рЕзНИ Макао обов ни ох, й КИ Й «з ун ТВЕВОЮ жи МВ ОК ща ча Здчяенияни г я й г а з ся а -Бе нік. а сн з ет Мов я, сь Фей я, пня рн и ВИ ПН в ве о Ммв, Можонамер. зеткаованнія Мемонамер динуклестид ЯМЦІ стадій Гсю діасте знана гра їж ся щ й З в щн і ураднну (М куми сувінх Її» апзративна ВЕРХ пАктивовані мономери стабільні при ГУ а 2 стандартних операціях і ї вв фвв шок розділяються хівальнею ВЕРХ оре сполучення й че й че " Хіральність новоутвореного РМОЄ дю ик р и зак специфічне кОаджється ее і як ВВ с з й - ска й і г: Мральністю активованого мономера) 00000000 дтереостецнвкчни? с : в ї ее ; свв г зе бак й СчУщк Бе в су Ії Ї ах в сн в ЯЖ ой Мети учення «нм й Бе.
ет. 3 Десять ключових "реагентів" для створення гомогенних олігомерів У і-севрі чна «сві зе ДА-сері у з-сепя ру еенні Т б-серія те с-серія няно А-серія о бчерія 000000 тТ-серія що С й З Я са М ЕС хв ша в г Тк рвж -- ще щу щі в ШК 4. щ СІ - СИ: - от - С е - БК Мк ж В и чи но Єжи и, дюн зу Св, щи, о ну І Фо й ме сюда 5 шк дізстервомерна дістервомерни діастеревменна дівстеревмерна діастеревмерна сумйи сумна сумів сумна сумвн Дрснення ДП ненінения Д пенннння Дане» онніннння БУ вне Мак з Б г ув Доєтв ря мов Зо ху дек ве нк хода Ж А ШК До ї под, шику т тк ВошиоиВ у об оМ, Крій дит шана сб ню о же шВМе оС нмк ск ЩІ 5 Но Бош 8 хна ве КУ ВУ ГУ дин тя дев хх ее щч мк Би їв ху ие ще мене цк да ЖК 4 КО , и Кк ня я - т В ШЕ ж ме - я вина Є дай вив нення У ебоои М. у ння с вже ФУ ММ ЩО МК, о ре ся У т 5 я ії
ІК. 4
Десять ключових "реагентів" для створення гомогенних олітомерів 2 Шсерія Я С-серія за А-серія сво б-ерів 0Ж 00 Тсерія Ек ли я Я в й зу хв т я кн бо 3 «5 ву й зем К я ке» ха З м су дя Ж А. А ще Б: КСВ Ге Ше В Й ої Я би Сб вий, об и ру ен я меси їх Ка, 5 с нм «У МеВ, сок діастеревмерна діастервамерна діастергомерна діастераомерна дестеревмерня умів; сумна суміш суми сувжіні Трснноня іш Глен Фрненья Грооаінення ще п Ходак ди ши в с ї чо зок в кА ме чав р ке
А. А Кд А. А. оз В: От З : що а седан т Ф во бк. зи ТА КЗ дин и че її ях че: зу «с "вх рен осн о се, со нку «кг, о г ма т не Го те В БУ вв п Мік Яви мое їх Н І ОО: Сх : т ї АХ в А джу вити ОД ЧИ Зм Зк І о р ї ї г ї свв ї с І Ки й с о ат й й їси з Й ат в ше аби Я еВ Єжи вину и лай» В її ме» її зм сФоомую; ре й мм те ка г «о т жІгГ. 48 Нева епесіє звабезнечує пряме вдержання стервачистих емегенняху ЕМО Кен си а хантвлю соратника І і тринуюлентня: Гран укавекї Її гзикрютенний фУттетт єкт есокт тки їж сно: ЇХ Зіжя де : я . ї вухах КОМ і КЕН кри І ня Пов рК | а КК Ки АК ваку лан Ск хавеверу за зач мсланняй ПВОлунення СИ ООЛУчЕНЯ зо Б хНюлучення СВ Ж ПОБТОЮ З олісвмевиуи де ЕК Б нн ли й: екю охо ДАНА ши с БК й А | 7 і лов в 1 / ака НН У сб в й ВО Що - риття длилтитикх ч А В о Б Шк нокх. Й Ск ва маю ре : З поем. й ше сь о. КОВО ОЦЕ - їз : КО Е те ї еіерачнет зктнвовані ВимноМеви кевресмецнню ступеня Ферми фЕе пи у Щ Я МЖК савани грелученмя 0000 КВадеювнее о, 00 ВОЮ керу Ши Шен ши дев
ВЕК. 5 ден ї дж се. ї Кх Гак вк: В: ва нив шк др» ши нн шк в. т І ке детрителовання ЗОСТОВу ЕМО сполучення: ще ї стврессті аитевовані михнаври, використовувані: для синтезу стервом чвовані ра, аинорн жанЕ для снтеам Старої з кльов т Стереоізоверу би Та Ю й Я ех Я. дес че древа щі Кожне ук «і (дня КЕ ту грек лину Б Й ве ян Я Й Черкес севе турків ет стергоївомев детрителинкння, ; жо ю і ї зняття Ві смоли, Е Знатазакнсту! І . с. хх 5 зак ча пек очищення К зерні обо ши жо 5 а у. зе у» ше С Й п ен ве ек в РК - тк к їх окр А чу ї щі : й 4 ь я сок уже по. доб ой дов ножові пав, ке ча чу пе 5 : як жк зв з ко ях Як г Мод ж ле ак Х я Х, із К Є г ДЕ ДЕ ЗВ С у ї ко зак ша Ж т я ших з ще Со - я ї ж Ж кв о пр Коня яд що рез Ще З ІЗ «У ; що Зі може, Ми ша а рив КЕ ех й - й Як З на и п р ча Я с з Х мк ще ши Е 4 ї че еибор» тов з г Ка в с Що мч др чаннаний РМс-стреовомев І: й р ІЗ З туї не ие і стеревівовер хх аа жтт. 5 пен нн нн нин зи пн нин зни нн зи Н Н : : і : Я і і ще м. й й ін На, паза йаннеатеттвеееекя фев ння пе фоервта тої Чаянначчняф же жде етее р к ето встав я ант е. 3 Н Ж х й - Ж к й БІ й ща ща : ї : ' : Е : : 2 ря р кор в КН КН У з ча і. х х х осо о
5. М ї халви ? вна, нин онов вн нн нні нн дека няя У Е г . 2 х щи х ВЖИ ююжижкх хвиюючююкють яю х : з : ; Н Й о м. з т мс и и піни пово пойілввва палав мими шина опе тей і нь і лань я ок данккиккйнка і : : і ї І і Ді клнккааксвннкякккнккивихннадннихинючнр яна деженажььькках вана фк аа вжи оф вежею жніюьетеячя х і « 4 Ф х ї . , Ет, іч : З пови пи нн нн мовна попи по нн п нн нен і: Са Г- . І Щк Н Н г ГУ ; в ч Ж фіни єтетччфєтеєттях і х сеї : і 5 ; не Е Стереоізомер 7 зате юю ех ей є еюфеефеттевевноеняяння кі п Й и: 5 й В т в сш АННА АНА АНА ЕЕ Не ли с Ї ; Е ; ; ! : : : - пмжжжфежжжеек дю тінню тік тк Фу тні» ях жк тя чів ча обі зх ян: ож сяс вк ік : Й Ж з Кк І ж І х у нхххжкикинк Н ! ? їх Н ! 8 ля причини кивкнх знавяйнаянняня йти нтаяей дейветанааня анна у зззсфітієлттійевттттоия і у. з Н ІЗ : йо Ка з я УЛ Я 2 К: р ЗМ пи ОД ВІДО «МН: : ; ! ї те. 2 г: х жеееесееевевевеввваю о сю сю ок ск ск ор ою кож ак Вр кає феєю юю з зорю юс ие єна З : і | ; Я і : ї і. і те и по ЗА ЗА у дн до" : : ; : З і З ; денежжнння рн и Врнняк няних» ЩІ Е і : ї : А: Й : Й ВИ у ее вве вв ку вчена вв восдов'атва «Ух ак факс св, ас г ї з : з ат і н Чеея» зрххканнх жен ізн, М К х кжжжк ; ї х Н в х з ц ї Ж Ж х і сеї х Я В г у ни ни п Зо о п Стресізонері Ї з х ІЗ й К х В й Я х вен. : : Н Шен ї :ї Тева Не пенкаккдкинккккнкунику неси Така нкненкенкианКи нки АВНЮ тет ЕжЕЕ я ; щі Ї ШИН вн : : : ї І : і Оу асист я 5, т - посфреегйсту: і Н ув ними шими: ши у ших ту сш з шик сш. : й а й В. ! г : Уві Температура
ФІЖ. 7
Цій ее З. - їв 2 та су в вва ща и й до ж се з ся л мА Я со о ас ес Й ек:
и. те я "Ши я й кни 24 Кейс с То вра у Я їй й . М -к я й ак гої г че М с К 3 ї ЩІ ши 1 інн фі,
о. 5. о щ Я З с й ста
ФІГ. 8 Фрагмент і --тоо м рАщь В я ей ! ок І і ке М В ге: г ав І ще ШИ Може М Дн і щи" ц ле. ше і век и і ля шо. М ї си Шк й І ЗІ. За
Фрагмент й : -- ще ше» й Й кВ ей дк а Мох ч лов ; ЖК
9. т Р " я і: г пий, КВ я йо днк ве КЕ: З Я В. й В ше і М є ж
Бе . г ень. М А Во я де ло В, З КК сс й о о айк Й В. он ЗК. сх. ке сх: Зо ШИЯ й й "У ЗВ поко А ве се ся и ти ЕН я я зе БЕЗ ТЕ Й В Е о та в; Я їз Ж . ї фен М Ш С ше у ше ий М ;; З в. де че : В Боже й ФІЮК. ЗБ
UAA201802109A 2015-08-05 2016-08-05 Хіральні реагенти для одержання гомогенних олігомерів UA123995C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562201510P 2015-08-05 2015-08-05
PCT/US2016/045876 WO2017024264A2 (en) 2015-08-05 2016-08-05 Chiral reagents for preparation of homogeneous oligomers

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA123995C2 true UA123995C2 (uk) 2021-07-07

Family

ID=56943909

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201802109A UA123995C2 (uk) 2015-08-05 2016-08-05 Хіральні реагенти для одержання гомогенних олігомерів

Country Status (31)

Country Link
US (4) US10457698B2 (uk)
EP (2) EP3331891B1 (uk)
JP (4) JP6978406B2 (uk)
KR (2) KR20250005537A (uk)
CN (3) CN108350005B (uk)
AU (3) AU2016302009B2 (uk)
CA (1) CA2994842A1 (uk)
CL (1) CL2018000322A1 (uk)
CO (1) CO2018001615A2 (uk)
CY (1) CY1125552T1 (uk)
DK (1) DK3331891T3 (uk)
ES (2) ES2993126T3 (uk)
HR (1) HRP20220129T1 (uk)
HU (2) HUE057593T2 (uk)
IL (3) IL284611B2 (uk)
LT (1) LT3331891T (uk)
MA (1) MA44209B1 (uk)
MD (1) MD3331891T2 (uk)
MX (2) MX389022B (uk)
MY (1) MY196627A (uk)
NZ (2) NZ778828A (uk)
PE (2) PE20231843A1 (uk)
PH (1) PH12018500265A1 (uk)
PL (1) PL3331891T3 (uk)
PT (1) PT3331891T (uk)
RS (1) RS62930B1 (uk)
SI (1) SI3331891T1 (uk)
SM (1) SMT202200089T1 (uk)
UA (1) UA123995C2 (uk)
WO (1) WO2017024264A2 (uk)
ZA (3) ZA201801518B (uk)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MD3331891T2 (ro) 2015-08-05 2022-04-30 Eisai R&D Man Co Ltd Procedeu de obţinere a unui oligomer de fosforodiamidat substanțial diastereomeric pur, a unui oligomer de fosforodiamidat obţinut printr-un astfel de procedeu și a unei compoziții farmaceutice care conţine un astfel de oligomer de fosforodiamidat
WO2018057430A1 (en) 2016-09-20 2018-03-29 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Synthesis of backbone modified morpholino oligonucleotides and chimeras using phosphoramidite chemistry
CN118109469A (zh) 2019-12-26 2024-05-31 日本新药株式会社 诱导外显子50的跳读的反义核酸
PE20230237A1 (es) 2020-02-28 2023-02-07 Nippon Shinyaku Co Ltd Acidos nucleicos antisentido que inducen la omision del exon 51
US20220195437A1 (en) 2020-12-11 2022-06-23 Eisai R&D Management Co., Ltd. Tau-targeting oligonucleotide gapmers
IL303504A (en) 2020-12-11 2023-08-01 Eisai R&D Man Co Ltd Poly-morpholino oligonucleotide gapmers
BR112023022514A2 (pt) 2021-04-28 2024-01-23 Eisai R&D Man Co Ltd Oligonucleotídeos antissenso e seu uso para tratamento de distúrbios neurodegenerativos
CA3259881A1 (en) * 2022-07-07 2024-01-11 Eisai R&D Man Co Ltd CRYSTALLINE MONOMERS FOR THE PREPARATION OF ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES AND THEIR PROCESSES FOR PREPARATION AND USE
TW202432183A (zh) 2022-10-27 2024-08-16 日商衛材R&D企管股份有限公司 肽—反義寡核苷酸及其用於治療神經退行性障礙之用途
WO2024163762A2 (en) * 2023-02-01 2024-08-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Six membered ring containing oligomers

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5185444A (en) * 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US6117993A (en) * 1995-05-23 2000-09-12 Hybridon, Inc. Synthons for oligonucleotide synthesis
US5922695A (en) 1996-07-26 1999-07-13 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonomethyoxy nucleotide analogs having increased oral bioavarilability
US5874554A (en) * 1996-12-13 1999-02-23 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Methods and solvent vehicles for reagent delivery in oligonucleotide synthesis using automated pulse jetting devices
US6306599B1 (en) * 1999-07-16 2001-10-23 Agilent Technologies Inc. Biopolymer arrays and their fabrication
EP1176151B1 (en) * 2000-07-28 2014-08-20 Agilent Technologies, Inc. Synthesis of polynucleotides using combined oxidation/deprotection chemistry
AR036122A1 (es) 2001-07-03 2004-08-11 Avecia Biotechnology Inc Un complejo de sal que comprende un n-alquilimidazol y una 1,1-dioxo-1,2-dihidro-1l6-benzo [d]-isotiazol-3-ona y un metodo para sintetizar oligonucleotidos utilizando la quimica de fosforamidita
DK2207779T3 (da) * 2007-11-15 2014-07-14 Sarepta Therapeutics Inc Fremgangsmåde til syntese af morpholinooligomerer
US8076476B2 (en) 2007-11-15 2011-12-13 Avi Biopharma, Inc. Synthesis of morpholino oligomers using doubly protected guanine morpholino subunits
WO2011018798A2 (en) 2009-08-14 2011-02-17 Indian Association For The Cultivation Of Science Morpholino-based antisense agent
AU2011257980B2 (en) * 2010-05-28 2016-06-30 Sarepta Therapeutics, Inc. Oligonucleotide analogues having modified intersubunit linkages and/or terminal groups
CA2813183C (en) 2010-09-30 2017-09-19 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Morpholino nucleic acid derivatives
US9161948B2 (en) 2011-05-05 2015-10-20 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
JP6478632B2 (ja) * 2011-05-05 2019-03-06 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド ペプチドオリゴヌクレオチドコンジュゲート
HK1202111A1 (en) 2011-11-18 2015-09-18 Sarepta Therapeutics, Inc. Functionally-modified oligonucleotides and subunits thereof
ES2832531T3 (es) 2011-11-30 2021-06-10 Sarepta Therapeutics Inc Oligonucleótidos para el tratamiento de enfermedades por expansión de repeticiones
CN102702265A (zh) * 2012-05-14 2012-10-03 天津特安化学科技有限公司 一种固相合成磷酰二胺吗啉代寡核苷酸及方法
PT2764002T (pt) 2014-04-11 2018-05-16 Gilead Sciences Inc Métodos para a preparação de análogos de nucleótidos anti-virais
GB201513921D0 (en) 2015-08-05 2015-09-23 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against prostate cancer and other cancers
EP3331563B1 (en) 2015-08-05 2023-04-19 Janssen Biotech, Inc. Anti-cd154 antibodies and methods of using them
DE102015214943A1 (de) 2015-08-05 2017-02-09 Siemens Aktiengesellschaft Verfahren und Anlage für eine chemische Synthese
MD3331891T2 (ro) * 2015-08-05 2022-04-30 Eisai R&D Man Co Ltd Procedeu de obţinere a unui oligomer de fosforodiamidat substanțial diastereomeric pur, a unui oligomer de fosforodiamidat obţinut printr-un astfel de procedeu și a unei compoziții farmaceutice care conţine un astfel de oligomer de fosforodiamidat

Also Published As

Publication number Publication date
HUE067910T2 (hu) 2024-11-28
MA44209A (fr) 2021-04-28
US20210171555A1 (en) 2021-06-10
MY196627A (en) 2023-04-23
WO2017024264A8 (en) 2018-04-12
CY1125552T1 (el) 2024-02-16
MX389022B (es) 2025-03-20
RS62930B1 (sr) 2022-03-31
IL293066A (en) 2022-07-01
CL2018000322A1 (es) 2018-05-18
EP4039690C0 (en) 2024-07-17
IL257353B2 (en) 2023-02-01
JP2025090640A (ja) 2025-06-17
IL284611B1 (en) 2023-07-01
AU2016302009A1 (en) 2018-03-29
PE20231843A1 (es) 2023-11-21
PH12018500265A1 (en) 2018-08-13
HUE057593T2 (hu) 2022-05-28
IL284611A (en) 2021-08-31
WO2017024264A3 (en) 2017-03-30
ZA201801518B (en) 2020-10-28
US20200115405A1 (en) 2020-04-16
CN108350005A (zh) 2018-07-31
EP3331891B1 (en) 2021-12-15
JP7254869B2 (ja) 2023-04-10
EP4039690A1 (en) 2022-08-10
DK3331891T3 (da) 2022-02-28
SI3331891T1 (sl) 2022-04-29
KR102788397B1 (ko) 2025-04-01
NZ778825A (en) 2024-11-29
HRP20220129T1 (hr) 2022-04-15
IL257353A (en) 2018-04-30
AU2016302009B2 (en) 2021-09-30
JP2018525380A (ja) 2018-09-06
CN113461733A (zh) 2021-10-01
IL284611B2 (en) 2023-11-01
SMT202200089T1 (it) 2022-03-21
BR112018002430A2 (pt) 2018-09-18
IL257353B (en) 2022-10-01
MX2018001557A (es) 2018-05-02
RU2018107663A3 (uk) 2020-05-21
AU2023226763B2 (en) 2025-09-18
US20250171475A1 (en) 2025-05-29
WO2017024264A2 (en) 2017-02-09
ES2907629T3 (es) 2022-04-25
MA44209B1 (fr) 2022-03-31
KR20180044303A (ko) 2018-05-02
PL3331891T3 (pl) 2022-03-28
ZA202201010B (en) 2024-05-30
AU2021290235A1 (en) 2022-01-20
CN117924364A (zh) 2024-04-26
JP2023085402A (ja) 2023-06-20
EP3331891A2 (en) 2018-06-13
MD3331891T2 (ro) 2022-04-30
AU2023226763A1 (en) 2023-09-28
CA2994842A1 (en) 2017-02-09
ZA201905394B (en) 2022-07-27
JP7712975B2 (ja) 2025-07-24
JP6978406B2 (ja) 2021-12-08
CN108350005B (zh) 2024-02-06
ES2993126T3 (en) 2024-12-23
EP4039690B1 (en) 2024-07-17
US10457698B2 (en) 2019-10-29
HK1248708A1 (zh) 2018-10-19
RU2018107663A (ru) 2019-09-05
KR20250005537A (ko) 2025-01-09
US20180222932A1 (en) 2018-08-09
BR122023025447A2 (pt) 2024-01-16
CO2018001615A2 (es) 2018-07-19
NZ740490A (en) 2024-07-05
JP2022003067A (ja) 2022-01-11
AU2021290235B2 (en) 2023-06-08
PT3331891T (pt) 2022-02-28
US10836784B2 (en) 2020-11-17
PE20180687A1 (es) 2018-04-23
LT3331891T (lt) 2022-02-25
NZ778828A (en) 2024-11-29
MX2022000124A (es) 2022-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA123995C2 (uk) Хіральні реагенти для одержання гомогенних олігомерів
KR20130143045A (ko) 모르폴리노 핵산 유도체
JP7371829B2 (ja) 重合性化合物、化合物、及び、ボラノホスフェートオリゴマーの製造方法
RU2791532C2 (ru) Хиральные реагенты для получения гомогенных олигомеров
HK40069732B (en) A substantially diastereomerically pure phosphoramidochloridate, a method and a pharmaceutical composition
HK40059317A (en) Chiral reagents for preparation of homogeneous oligomers
BR112018002430B1 (pt) Método de preparação de oligômero morfolino de fosforodiamidato substancialmente diastereomericamente puro, oligômero morfolino de fosforodiamidato e composição farmacêutica contendo o mesmo
BR122023025447B1 (pt) Composto substancialmente diastereomericamente puro, método para preparar um oligonucleotídeo e composição substancialmente diastereomericamente pura
HK1248708B (en) A method for preparing a substantially diastereomerically pure phosphorodiamidate oligomer, a phosphorodiamidate oligomer made by such a method and a pharmaceutical composition comprising such a phosphorodiamidate oligomer
JP2025508514A (ja) ビス保護活性化グアニンモノマー
HK1197053B (en) Novel precursors of glutamate derivatives