[go: up one dir, main page]

TR201900852T4 - Nöronal tümörler ve beyin tümörleri dahil olmak üzere çeşitli tümörlere karşı yeni immünoterapi. - Google Patents

Nöronal tümörler ve beyin tümörleri dahil olmak üzere çeşitli tümörlere karşı yeni immünoterapi. Download PDF

Info

Publication number
TR201900852T4
TR201900852T4 TR2019/00852T TR201900852T TR201900852T4 TR 201900852 T4 TR201900852 T4 TR 201900852T4 TR 2019/00852 T TR2019/00852 T TR 2019/00852T TR 201900852 T TR201900852 T TR 201900852T TR 201900852 T4 TR201900852 T4 TR 201900852T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
cells
cell
tumor
peptide
expression
Prior art date
Application number
TR2019/00852T
Other languages
English (en)
Inventor
Schoor Oliver
Hilf Norbert
Weinschenk Toni
Trautwein Claudia
Singh Harpreet
Walter Steffen
Original Assignee
Immatics Biotechnologies Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immatics Biotechnologies Gmbh filed Critical Immatics Biotechnologies Gmbh
Publication of TR201900852T4 publication Critical patent/TR201900852T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/20—Cellular immunotherapy characterised by the effect or the function of the cells
    • A61K40/24—Antigen-presenting cells [APC]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/30—Cellular immunotherapy characterised by the recombinant expression of specific molecules in the cells of the immune system
    • A61K40/34—Antigenic peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M5/00—Devices for bringing media into the body in a subcutaneous, intra-vascular or intramuscular way; Accessories therefor, e.g. filling or cleaning devices, arm-rests
    • A61M5/002—Packages specially adapted therefor, e.g. for syringes or needles, kits for diabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/605—MHC molecules or ligands thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6081—Albumin; Keyhole limpet haemocyanin [KLH]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6093—Synthetic polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG], Polymers or copolymers of (D) glutamate and (D) lysine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)

Abstract

Mevcut buluş immünoterapötik yöntemlerde kullanılan peptitler, nükleik asitler ve hücrelerle ilgilidir. Mevcut buluş özellikle, kanser immünoterapisi ile ilgilidir. Buluş ayrıca, diğer tümör bağlantılı peptitlerle birlikte veya tek başına anti-tümör immün yanıtlarını teşvik eden aşı kompozisyonlarının aktif farmasötik muhteviyatları şeklinde kullanılan, tümör ilişkili sitotoksik T hücresi (STL) peptit epitopları ile de ilgilidir. Mevcut buluş anti tümör immün yanıtları oluşturmak için aşı kompozisyonlarında kullanılabilen, insan tümör hücrelerinin HLA klas I ve klas II moleküllerinden türetilmiş 30 adet peptit dizini ve bunların varyantları ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME Nöronal Tümörler Ve Beyin Tümörleri Dahil Olmak Üzere Çesitli Tümörlere Karsi Yeni Immünoterapi Mevcut bulus immünoterapötik yöntemlerde kullanilan peptitler, nükleik asitler ve hücrelerle ilgilidir. Mevcut bulus özellikle, kanser immünoterapisi ile ilgilidir. Bulus ayrica, diger tümör baglantili peptitlerle birlikte veya tek basina anti-tümör immün yanitlarini tesvik eden asi kompozisyonlarinin aktif farmasötik muhteviyatlari seklinde kullanilan, tümör iliskili sitotoksik T hücresi (STL) peptit epitoplari ile de ilgilidir. Mevcut bulus anti tümör immün yanitlari olusturmak için asi kompozisyonlarinda kullanilabilen, insan tümör hücrelerinin HLA klas I ve klas II moleküllerinden türetilmis 30 adet peptit dizini ve bunlarin varyantlari ile ilgilidir. Bulusun geçmisi Gliomalar sinir sisteminde glial hücrelerden gelisen beyin tümörleridir. Genel adiyla nöroglia ya da kisaca glia olarak adlandirilan glial hücreler nöronal olmayan, sinir sisteminde destek, beslenme ve hemostaz saglama gibi görevler üstlenen ve sinyal iletiminde rol oynayan hücrelerdir. Glioinalarin en önemli iki alt grubu, köken aldiklari normal glial hücre tipine (astrositler ve oligodendrositler) atfen adlandirilan astrositomlar ve oligodendrogliomalardir. Astrositomlar alt grubuna dahil olan glioblastoma multiforme (bundan böyle glioblastoma olarak anilacaktir) eriskinlerde en yaygin malign beyin tümörü olup tüm malign beyin tümörlerinin yaklasik yüzde 40'indan ve gliomalarin yaklasik yüzde 50'sinden sorumludur. Merkezi sinir sistemini agresif biçimde istila eder ve tüm gliomalar arasinda en yüksek malignite derecesiyle (derece IV) birinci sirada yer alirlar. Nörogörüntüleme, mikrosirürji, temozolomid tedavisi veya radyoterapi gibi alanlarda yasanan gelismelere ve bunlarin tedavi yöntemlerine sagladigi sürekli katkilara ragmen hastaligin tedavisi henüz mümkün degildir. Bu beyin tümörünün letalitesi son derece yüksektir: Ilk tani konduktan sonra beklenen yasam yüzde 8,0 olmustur. Halihazirda, büyük çapli tümör rezeksiyonlari da dahil olmak üzere, uygulanan agresif tedavi prosedürlerine ragmen 5 yillik yasam süresi hala yüzde 10'un altinda kalmaktadir. Dolayisiyla, alternatif ve etkili terapötik yöntemlere büyük ihtiyaç vardir. Glioblastoma tümör hücreleri beyin tümörleri arasinda en az farklilasmis hücreler olup bu nedenle yüksek yayilma ve çogalma potansiyeline sahip, yüksek ölçüde invaziv ve çok kötü prognoz gösteren hücrelerdir. Glioblastomalar beyinde hizli, agresif ve infiltratif bir büyüme göstererek ölüme neden olurlar. Infiltratif büyüme özelligi bu tümörlerin cerrahi girisimle çikartilamasinin baslica nedenidir. Glioblastomalar ayrica radyasyon ve kemoterapiye karsi oldukça dirençli oldugundan tedavi sonrasi yineleme oranlari yüksektir. Bunun yani sira, neoplastik hücrelerin iinmün yaniti da rezeksiyon veya radyoterapi sonrasinda tüm neoplastik hücrelerin imha olmasini saglayacak düzeyde degildir. Glioblastoma, farklilasmamis astrosit veya glial öncül hücrelerin malign transformasyonu sirasinda etkili olan genetik mekanizmalarin farkliliklarina göre primer (de n0v0) ve sekonder glioblastoma olmak üzere, iki sinifa ayrilir. Sekonder glioblastomalar 45 yas altindaki genç popülasyonda görülür. Sekonder glioblastoma düsük dereceli astrositomdan baslayarak ortalama 4 ilâ 5 yil içerisinde farklilasmamis astrositom üzerinden gelisir. Buna karsilik, primer glioblastoma agirlikli olarak yas ortalamasi 55 olan daha yasli kesimi tutmaktadir. Primer glioblastom genel olarak ani gelisen, yani klinik veya patolojik anormallikler gözlenmeyen evreden 3 ay içerisinde tümör progresyonuna geçen bir hastalik olarak karakterizedir (Pathology and Genetics of the Nervous Systems. 29-39 (IARC Press, Lyon, France, 2000)). Glioblastoma miyelinli sinirler boyunca göç ederek merkezi sinir sistemini yaygin biçimde istila eder. Çogu vakalarda cerrahi tedavi yalnizca sinirli ölçüde sürdürülebilir bir terapötik etki göstermektedir. Malign glioma hücreleri T hücresi proliferasyonunu ve immunostimülan sitokin IL-2 üretimini etkileyen immünosüpresif maddeler üreterek konagin immün sistemi tarafindan tespit edilmekten kaçarlar. Intrakraniyal neoplazmlar, beyin, meninges, hipofiz bezi, kafatasi ve hatta rezidüel embriyonik doku dahil olmak üzere, merkezi sinir sisteminde yer alan her türlü doku ve yapidan gelisebilir. Amerika Birlesik Devletlerinde primer beyin tümörlerinin genel yillik insidansi 100.000 kiside 14 vakadir. Primer beyin tümörlerinin en yaygin türü, tüm primer beyin tümörlerinin yüzde 27'sini olusturan meningiomlardir. Bunlari yine tüm primer beyin tümörlerinin yüzde 23'ünü olusturan glioblastomlar izler (ancak glioblastomlar eriskinlerde malign beyin tümörlerinin yüzde 40'indan sorumludur). Bu tümörlerin çogu agresif ve yüksek derecelidir. Primer beyin tümörleri çocuklarda en yaygin solid tümör türü olup çocuklarda kanser ölümlerinde lösemiden sonra ikinci sirada yer alirlar. Günümüzde glioblastomali hastalarin tedavisine yönelik etkin tedavi yöntemleriyle ilgili arastirmalar hizla sürmektedir. Immünoterapi, ya da diger bir deyisle immün sistemi devreye sokarak bu hücrelerle mücadele etme yöntemleri arastirilmistir. Northwest Therapeutics tarafindan glioblastoinali hastalarda, hastadan elde edilen, otolog tümör hücre lizatlari yüklenmis denritik hücrelerin kullanildigi bir hücre bazli asi yaklasimi olan "DCVaX Brain" ve bir EGFRVIII peptidi ile antijen spesifik STL yaniti uyarilmasina dayanan Celldex yöntemlerinin uygulandigi immünoterapötik yaklasimlarda ilk umut verici sonuçlar elde edilmis ve standart tedaviye kiyasla daha uzun ortalama sagkalim süreleri saptanmistir (Heimberger et al., 2006). Kolorektal Karsinom Amerikan Kanser Dernegine göre kolorektal kanser (KRK) ABD'de en yaygin üçüncü kanser türüdür ve her yil 175.000`i askin yeni vakadan sorumludur. ABD, Japonya, Fransa, Almanya, Italya, Ispanya ve Ingiltere'de bu rakam 480.000'in üzerinde hastaya ulasmaktadir. Gelismis ülkelerde kanser mortalitesinin en yaygin etkenlerinden biridir. Kolorektal kanserli hastalarda 1 ve 5 yillik göreceli sagkalim oranlari sirasiyla yüzde 84 ve yüzde 64'tür. 5 yilin ötesinde sagkalim orani daha da düserek, tani konduktan 10 yil sonra, yüzde 57'ye ulasmaktadir. Kolorektal kanserler erken ve lokalize bir evrede tespit edildiginde 5 yillik sagkalim süresi yüzde 90 oranindadir; ancak bu evrede, genellikle tarama oranlarinin düsük olmasi nedeniyle, tespit edilen kolorektal kanser orani yalnizca yüzde 39'dur. Kanser, yöresine yayilarak komsu organlara veya lenf dügümlerine siçradiginda 5 yillik sagkalim orani yüzde 68'e düsmektedir. Uzak organ metastazli kisilerde 5 yillik sagkalim süresi yüzde 10'dur. Arastirmalar, kolorektal kanserin baslangicinda kalitsal ve çevresel faktörler arasindaki etkilesimin etkili oldugunu düsündürmektedir. Çogu vakalarda adenomatöz polipler kolorektal tümörlerin öncülü gibi görünmektedir; ancak geçis süreci yillar sürebilir. Kolorektal kanserde birincil risk faktörü yastir; vakalarin yüzde 901 50 yasin üzerinde tespit edilmektedir. Amerikan Kanser Dernegine göre, kolorektal kanserle iliskili diger risk faktörleri arasinda alkol tüketimi, yag ve/veya kirmizi et bakimindan zengin bir beslenme, yetersiz meyve ve sebze tüketimi yer almaktadir. Basta Japonya gibi bölgeler olmak üzere, insidans sürekli olarak artmakta ve artis oraninin yüksek oldugu yörelerde bundan bati ülkelerindeki asiri yag ve et tüketimine dayali beslenme aliskanliklarinin benimsenmesinin sorumlu oldugu düsünülmektedir. Ancak insidans oranlarindaki artis hizi gerilemektedir, bunun da artan tarama ve polip çikarma, yani poliplerin kansere dönüsmesini önleme faaliyetleriyle iliskili oldugu düsünülmektedir. Solid tümörlerin çogunda oldugu gibi, burada da birinci basamak tedavi cerrahidir, ancak bunun basarisi erken evre hastalarla sinirli kalmaktadir, oysa hastalarin önemli bir bölümünün tanisi hastaligin ileri evrelerinde konmaktadir. Ilerlemis kolorektal kansere yönelik kemoterapi rejimlerinde standart tedavi yöntemi Ilorourasil bazli rejimlerdir. Bu rejimler genel olarak FOLFOX (inûizyonla S-FU/leucovorin arti oksaliplatin) ve FOLFIRI (irinotekan, leucovorin, bolus sürekli infüzyonla 5-FU) adi verilen protokollere göre gerçeklestirilir. Irinotekan ve oksaliplatin gibi üçüncü nesil sitotoksik ajanlarin piyasaya sunulmasi etkinligin anlamli biçimde artirilacagi yönünde umutlar uyandirdiysa da, prognozlarda önemli bir iyilesme olmamis, metastatik vakalarda sagkalim orani genel olarak 20 ay civarinda kalmis ve dolayisiyla gereksinimler hala karsilanamamistir. Bir süre önce, Avastin® (bevacizumab) ve Erbitux® (cetuximab) gibi moleküler hedefli ajanlardan olusan yeni nesil ilaçlar gelistirilmistir. Halen bu kapsamda yaklasik 40 madde kolorektal kanserin çesitli evrelerine karsi ileri asama klinik testlerde incelenmektedir. Bu maddelerin bazilarindan olusturulan kombinasyonlarin gelecekte potansiyel tedavi seçeneklerini artiracagi beklenmektedir. Bu maddelerin büyük çogunlugu faz 2 asamasinda olup yine bunlarin çogunlugu EGFR'yi hedef almaktadir. Bunun nedeni kolorektal kanserli hastalarin ~%80'ninde EGFR ifadesinin yukari regüle olmasidir. Evre II hastalarda kemoterapinin yakin zamanda ruhsatlandirilan monoklonal antikorlarla (mAbs) kombinasyonun incelendigi (cetuximab + irinotekan veya FOLFOX4; tek basina veya FOLFOX4 ile bevacizumab) klinik çalismalar halihazirda yürümektedir. Bu çalismalardan istatistiksel açidan anlamli sonuçlar elde edilmesi için üç ilâ dört yillik izleme sürelerinin geçmesi beklenmektedir. Su anda genel olarak onkolojide kullanilan monoklonal antikorlarin (mAbs) aktiv immünoterapi ile etkilesimde bulunma olasiligi mükemmel denecek derecede düsüktür. Gerçekten de, klinik öncesi (GABRILOVICH 1999) ve klinik kanitlar VEGF deplesyonunun (bevacizumab tarafindan) dendritik hücre (DC) aracili T hücresi aktivasyonunu olumlu etkiledigini düsündürmektedir (Osada T, Chong G, Tansik R, Hong T, Spector N, Kumar R, Hurwitz HI, Dev I, Nixon AB, Lyerly HK, Clay T, Morse MA. The effect of anti-VEGF therapy on immature myeloid cell and dendritic cells in cancer patients. Cancer Immunol lmmunother. 2008 Jan 10.). Prostat karsinomu ve diger tümörler 2007 yilinda tahmini olarak 27.050 ölüme neden olan prostat kanseri erkeklerde önde gelen ölüm nedenlerinden biridir. Beyaz ve Afrika kökenli Amerikali erkekler arasinda ölüm oranlari 1990 yilindan bu yana gerileme egiliminde olsa da, Afrika kökenli Amerikali erkeklerde bu oran beyaz erkelere kiyasla iki kattan fazladir. Prostat kanseri erkeklerde en sik tespit edilen kanser türüdür. Insidans oranlarinin hangi nedenlerden dolayi Afrika kökenli Amerikali erkeklerde beyaz erkeklere kiyasla daha yüksek oldugu henüz açikliga kavusturulamamistir. Prostat kanserinin insidans oranlarinda son 20 yilda önemli degisiklikler izlemistir. 1995 yilindan bu yana ise yine ilimli bir artis gözlenmektedir. Bu trendler büyük ölçüde kanda ölçülen prostat spesifik antijen (PSA) araciligiyla gerçeklestirilen prostat kanseri taramasindaki artisi yansitmaktadir. Son onyildaki ilimli artis ise büyük olasilikla PSA testinin 65 yasin altindaki erkeklerde giderek yayginlasmasiyla açiklanabilir. 65 yas ve üstü erkeklerde prostat kanseri insidans orani yatay bir seyir izlemektedir. Oranlar beyaz Prostat kanseri tedavisi aktif izlem, cerrahi, radyoterapi, çok yogun odakli ultrason (HIFU), kemoterapi, kriyocerrahi, hormonal tedavi ve bunlarin bazi koinbinasyonlarini kapsainaktadir. En iyi seçenegin hangisi oldugu hastaligin evresine, Gleason skoruna ve PSA düzeyine baglidir. Diger önemli faktörler, erkegin yasi, genel saglik durumu ve potansiyel tedavi yöntemlerine ve bunlarin yan etkilerine karsi tutumudur. Tüm tedavi seçeneklerinin, örnegin erektil disfonksiyon, üriner inkontinans gibi ciddi potansiyel yan etkileri oldugundan tedavi görüsmeleri çogu kez tedavinin hedefleriyle yasam tarzina yönelik olumsuz etkilerin bagdastirilmasina odaklanmaktadir. Eger kanser prostatin disina yayilmissa, tedavi seçenekleri ciddi sekilde degismektedir, bu nedenle prostat kanserini tedavi eden doktorlarin çogu yayilma olasiligini kestirmek için çesitli nomogramlar kullanir. Aktif izlem, HIFU, radyoterapi, kriyocerrahi ve cerrahi tedavileri genellikle kanserleri prostatin içinde kalan erkeklere önerilir. Hormonal tedavi ile kemoterapi ise çogunlukla hastaligin prostat disina yayildigi durumlara mahsustur. Ancak bunun istisnalari mevcuttur: Radyoterapi bazi ileri evre tümörlere karsi kullanilir, hormonal tedavi ise bazi erken evre tümörlere yöneliktir. Kriyoterapi, hormonal tedavi ve kemoterapi ilk tedavi girisiinlerinin basarisiz oldugu ve kanserin ilerledigi durumlarda da önerilebilir. Klinik olarak hastaligin organla sinirli oldugu süphesi nedeniyle radikal prostatektomi uygulanan hastalarin önemli bir bölümünde cerrahi preparasyonun kesin histolojik tetkikinde organin sinirlarini asmis, yerel ölçekte yayilmis tümörler tespit edilmektedir. Bu hastalar yüksek bir erken lokal rekürans riskiyle karsi karsiyadir. Bu, PSA düzeyinde artis, yani biyokimyasal anlamda bir relaps araciligiyla tespit edilir. Bu durumda tedavi seçenekleri disaridan radyoterapi ve hormon ablasyonudur, ancak bu terapötik yaklasimlarin, özellikle hastanin yasamini uzun süreli olarak uzatmak açisindan yarar saglayacaginm kanitlanmis oldugu söylenemez. Ayrica, tedaviyle iliskili, üretral striktür (radyoterapi), libido kaybi ve impotans, iskelet sisteminde kalsiyum tuzlarinin kaybi nedeniyle 0steoporoz riski ve belirgin derecede artmis patolojik kemik kirilmasi riski (horinon ablasyonu) gibi olasi komplikasyonlar da göz ardi edilmemelidir. Prostat kanserlerinin yüzde 90'dan fazlasi lokal ve bölgesel asamada tespit edilmektedir; tümörleri bu evrede tespit edilen hastalarin 5 yillik sagkalim orani yüzde yüze yakindir. Son yil içerisinde tüm asamalarin kombinasyonunda 5 yillik sagkalim orani yüzde 69'dan neredeyse yüzde 90'a çikmistir. En son verilere göre göreceli 10 yillik sagkalim orani yüzde 93, 15 yillik sagkalim orani ise yüzde 77'dir. Basta 5 yillik olmak üzere, sagkalim oranlarinda kaydedilen bu dramatik artis kismen daha erken tani konmasina ve tedavi yöntemlerinde gerçeklesen ilerleinelere baglanmaktadir. Yine de, hastaligin diger dokulara ve organlara yayilmasiyla sagkalim orani önemli ölçüde düsmektedir. Akciger kanseri yüzde 15'idir. Erkeklerde insidans orani önemli ölçüde gerileme egilimi göstererek 1984 Kadinlarda ise bu oran uzun bir yükselis döneminin ardindan yatay bir seyir izlemeye yaklasmis bulunmaktadir. Akciger kanseri, tedavi gereksinimlerine göre klinik olarak küçük hücreli (%13) ve küçük hücreli olmayan (%87) olmak üzere iki sinifa ayrilir. Akciger kanseri hem erkeklerde, hem kadinlarda kanser iliskili ölümlerin birinci ölümlerinin yaklasik yüzde 29'unu olusturacagi beklenmektedir. 1987 yilindan bu yana akciger kanserinden ölen kadinlarin sayisi meme kanserinden ölen kadinlarin sayisini geçmektedir. Ölüm oranlari erkeklerde 1991-2003 yillari arasinda yilda yaklasik yüzde 1,9 azalarak önemli ölçüde düsmeye devam etmistir. Kadinlarda ise, akciger kanseri kökenli ölüm oranlari birkaç onyildir sürekli artis gösterdikten sonra yatay bir seyir izlemeye dogru yaklasmaktadir. Akciger kanseri mortalitesindeki bu gelismeler, son 30 yil içerisinde sigara tüketiminde gerçeklesen azalmanin bir yansimasidir. Tedavi seçenekleri kanserin tipi (küçük hücreli veya küçük hücreli olmayan) ve evresi tarafindan belirlenir. Bunlar arasinda cerrahi, radyoterapi, kemoterapi ve bevacizumab (Avastin®) ve erlotinib (Tarceva®) gibi ajanlarla gerçeklestirilen hedefli biyolojik terapiler sayilabilir. Lokalize kanserlerde genellikle cerrahi tercih edilir. Son zamanlarda yapilan çalismalar cerrahi ve sonrasinda uygulanan kemoterapinin erken evre küçük hücreli olmayan akciger kanserinde sagkaliini iyilestirdigine isaret etmektedir. Hastalik tespit edildiginde genellikle yayilmis oldugundan, bazen cerrahi ile birlikte olmak üzere, çogunlukla radyoterapi ve kemoterapi uygulanmaktadir. Küçük hücreli akciger kanserinde ise tedavi yöntemi olarak tek basina veya radyoterapiyle birlikte kemoterapi tercih edilmekte ve bu rejiinle tedavi edilen hastalarda büyük oranda, bazi vakalarda uzun süren, remisyon elde edilmektedir. Cerrahi tekniklerinde ve kombine tedavilerde kaydedilen ilerlemeler sayesinde 1975-1979 döneminde yüzde 37 olan 1 yillik göreceli sagkalim orani hafif bir artisla 2002 yilinda yüzde 42'ye yükselmistir. Ancak tüm evrelerin kombine 5 yillik sagkalim süresi yalnizca yüzde 16'dir. Hastalik henüz lokalize oldugu dönemde tespit edildiginde sagkalim orani yüzde 49 olmaktadir, ancak akciger kanserlerinin yalnizca yüzde 16'sina bu evrede tani konmaktadir. Dolayisiyla, glioblastoma, prostat tümörü, meme kanseri, özofagus kanseri, kolorektal kanser, berrak hücreli böbrek hücresi kanseri, akciger kanseri, MSS, over, melanom, pankreas kanseri, skuamöz hücre kanseri, lösemi ve medulloblastomun ve survivini ve/veya mevcut bulusa ait diger proteinleri asiri ifade eden diger tümörlerin tedavisine yönelik, kemoterapi ajanlari veya agir yan etkilere yol açan maddeler içermeyen, hastanin esenligini artiran yeni, etkin ve güvenli tedavi seçeneklerine hala ihtiyaç bulunmaktadir. içeren bir tümör iliskili antijen ifsa etmektedir. Buna ek olarak, WO 02/074237 bu proteini içeren farmasötik bilesenler/asi bilesenleri ve kanser tedavisi için bu proteine karsi immün yanit uyarmaya yönelik yöntemler ifsa etmektedir. Bulusun özeti Mevcut bulus birinci yönüyle SEQ ID NO: lO'a uygun bir amino asit dizinine sahip olan bir peptit ile ilgilidir. Mevcut bulus ikinci yönüyle, mevcut bulusa uygun bir peptidi kodlayan bir nükleik asitle veya söz konusu nükleik asidi ifade etme yetenegine sahip bir ifade vektörüyle ilgilidir. Mevcut bulus üçüncü yönüyle, mevcut bulusa uygun nükleik asidi veya ifade vektörünü içeren bir konak hücreyle ilgili olup, özelligi söz konusu hücrenin tercihen antijen sunan bir hücre, özellikle de bir dendritik hücre veya antijen sunan hücre olmasidir. Mevcut bulus dördüncü yönüyle, aktiflestirilmis sitotoksik T-lenfositlerin (STL) üretilmesine yönelik bir in vitro yöntemle ilgili olup, özelligi STL'lerin in vitro kosullarda, uygun bir antijen sunucu hücrenin veya antijen sunan hücreyi taklit eden yapay bir yapinin yüzeyi üzerinde ifade edilen antijen yüklü insan klas I MHC molekülleri ile söz konusu STL'leri antijen spesifik olarak aktiflestirmek için yeterli bir süre boyunca temas ettirilmesi ve söz konusu antijenin mevcut bulusa uygun bir peptit olmasidir. Mevcut bulus besinci yönüyle, mevcut bulusa ait bir peptidin, mevcut bulusa ait nükleik asit veya ifade vektörünün, mevcut bulusa ait hücrenin veya mevcut bulusa uygun bir sekilde üretilmis bir aktiflestirilmis sitotoksik T-lenfositin kanser tedavisi için veya kansere karsi bir ilacin imalati için, ki burada söz konusu ilaç tercihen bir asidir, kullanilmasi ile ilgilidir. Tercihen, söz konusu kanser astrositom, pilositik astrositom, disembriyoplastik nöroepitelyal tümör, oligodendrogliomalar, ependiinoina, glioblastoma inultiforme, karisik glioinalar, oligoastrositomlar, medulloblastoma, retinoblastoma nöroblastoma, germinoma, teratoma, gangliogliomalar, gangliositoma, santral gangliositoma, primitif nöroektodermal tümörler (PNET, örn. medulloblastoma, medulloepitelyoma, nöroblastoma, retinoblastoma, ependimoblastoma), pineal parankim tümörleri (eg. pineositoma, pineoblastoma), ependimal hücre tümörleri, koroid pleksus tümörleri, kaynagi belirsiz nöroepitelyal tümörler (örn. gliomatozis cerebri, astroblastoma), glioblastoma, prostat tümörü, meme kanseri, özofagus kanseri, kolon kanseri, kolorektal kanser, renal hücre karsinomu, berrak hücreli renal hücre karsinomu, akciger kanseri, MSS, over, melanom, pankreas kanseri, skuamöz hücre karsinomu, lösemi ve medulloblastoma ve survivin asiri ifadesi gösteren ve/veya mevcut bulusa ait diger proteinleri asiri ifade eden diger tümörler ve kanserler arasindan seçilir. Mevcut bulus altinci yönüyle, asagidakilerden olusan bir kit ile ilgilidir: (a) mevcut bulusa ait bir peptidi, mevcut bulusa ait nükleik asidi veya ifade vektörünü, mevcut bulusa ait bir hücreyi veya mevcut bulusa ait bir aktiflestirilmis sitotoksik T-lenfositi içeren bir farmasötik bilesimi çözelti ya da liyofilize edilmis sekilde içeren bir kap; ve (b) söz konusu liyofilize edilmis formülasyon için bir seyreltici veya sulandirma çözeltisi içeren ikinci bir kap. Tercih edilen somut bir uygulamada peptit SEQ ID NO: 10 grubundan seçilmistir. Bir HLA kisitli antijen ile kompleks olusturmus bir klas I veya 11 insan majör histokompatibilite kompleksine (MHC) spesifik olarak baglanan bir rekombinant antikorun üretilmesine yönelik bir yöntem ifsa edilmekte olup, yöntem: genetik mühendislik isleminden geçirilmis, insan olmayan ve söz konusu klas 1 veya 11 insan majör histokompatibilite kompleksini (MHC) ifade eden hücreler içeren bir memelinin söz konusu HLA kisitli antijen ile kompleks olusturmus MHC klas I veya II molekülünün çözünür bir sekli ile asilanmasindan; SÖZ konusu insan olmayan memelinin antikor üreten hücrelerinden mRNA molekülleri izole edilmesinden; söz konusu protein molekülü tarafindan kodlanan protein moleküllerini görüntüleyen bir faj gösterim kitapligi olusturulmasindan ve söz konusu faj gösterim kitapligindan en az bir fajin, yani söz konusu HLA kisitli antijen ile kompleks olusturmus söz konusu klas 1 veya ll insan majör histokompatibilite kompleksine (MHC) spesifik olarak baglanabilen söz konusu antikoru gösteren en az bir fajin izole edilmesinden olusmaktadir. Mevcut bulus, bulusa uygun bir HLA kisitli antijen ile kompleks olusturmus bir klas II insan majör histokompatibilite kompleksine (MHC) spesifik olarak baglanan bir antikor ile ilgili olup, antikor burada tercihen bir poliklonal antikor, monoklonal antikor ve/veya bir kimerik antikordur. Bulusun özeti Çizimlerin kisa açiklamasi Sekil 1 MHC klas I kisitli bir sekilde sunulan, GB6010 no'lu glioblastoma numunesinden elde edilmis lGF2BP tanimlandigi ESl-sivi kromatogratisi kütle spektrumunu göstermektedir. Sekil 2 glioblastoma numunelerinde yüksek düzeyde ifade edilen ifsa edildigi sekliyle hedef genlerin RNA ifade profillerini canlandirmaktadir. Bu genler normal dokularda ifade edilmez ya da çok düsük düzeylerde ifade edilirken glioblastoma numunelerinde ifadeleri güçlü bir biçimde artmaktadir. Çesitli normal doku ve bireysel glioblastoma multiforme (GBM) numunelerinde Gene Chip analiziyle belirlenmis göreceli RNA ifade profilleri gösterilmektedir. Degerler normal böbrek ifade düzeylerine göredir (deger daima istege göre 1.0'a ayarlanmistir). Normal doku degerleri piyasada satilan mRNA havuzlari kullanilarak olusturulmustur. Parantez içindeki harfler analiz yazilimi tarafindan olusturulan "tespit göstergeleridir". "Tespit göstergesi" bir nuinunede bir transkriptin spesifik olarak tespit edildigini ya da anlamli bir tespit yapilamadigini belirtir. Gösterge "P" (present=meveut), "A" (absent=bulunmuyor), veya "M" (marjinal düzeyde tespit) degerlerine sahip olabilir. Sekil 3 Saglikli donörlerin periferik kanindan elde edilmis, CSP-OOI ve NLGN4X-001 Spesifik CD8+ lenfositlerin mikrokürecik güdümlü proliferasyonunun tetramer analizini göstermektedir. KuyLIcuk basina CD8+ zenginlestirilmis 1 x 106 PBMC haitada bir anti-CD28 arti yüksek yogunluklu tümör antijeni A* ya da anti-CD28 arti yüksek yogunluklu tümör antijeni A* mikroküreciklerle stimüle edildi. Üç in vitro stimülasyonun ardindan tüm hücreler CD8 FlTC boyandi. Hücreler CD8+ lenfositlerin üzerine geçitlendirildi; sayilar CD8+ lenfositler arasinda gösterilen kadrandaki hücre yüzdesini temsil etmektedir. Sekil 4 Ifsa edildigi sekliyle HLA klas I peptitlerinin HLA-A*0201 aleli tarafindan kodlanan MHC molekülüne karsi afinitesini göstermektedir. Ifsa edildigi sekliyle HLA klas I TUMAPlarin ve HBV-OOI kontrol peptidinin (güçlü A*02 baglayici) ayrisma sabitleri (KD) ELISA bazli MHC dogallasim deneyiyle ölçülmüstür. Bulusun ayrintili açiklamasi Baska türlü belirtilmedikçe, burada kullanilan tüm terimler asagidaki sekilde tanimlanmistir. Burada "peptit" kavrami, bitisik amino asitlerin alfa-amino ve karbonil gruplari arasinda olusan tipik peptit baglariyla birbirlerine baglanmis bir dizi amino asit kalintisini tanimlamak için kullanilmaktadir. Peptitler tipik olarak 9 amino asit uzunlugundadir, ancak daha kisa, uzunlugunda da olabilirler. Burada "oligopeptit" kavrami, bitisik amino asitlerin alfa-amino ve karbonil gruplari arasinda olusan tipik peptit baglariyla birbirlerine baglanmis bir dizi amino asit kalintisini tanimlamak için kullanilmaktadir. Dogru epitopu ya da epitoplari içerdigi sürece oligopeptidin uzunlugu bulus açisindan kritik degildir. Oligopeptitler tipik olarak yaklasik 30 amino asidin altinda ve yaklasik 14 amino asidin üzerinde bir uzunluga sahiptir. Burada "polipeptit" kavrami, bitisik amino asitlerin alfa-amino ve karbonil gruplari arasinda olusan tipik peptit baglariyla birbirlerine baglanmis olan bir dizi amino asit kalintisini tanimlamak için kullanilmaktadir. Dogru epitopu ya da epitoplari içerdigi sürece polipeptidin uzunlugu bulus açisindan kritik degildir. Peptit veya oligopeptit kavramlarinin tersine, polipeptit kavrami ile yaklasik 30'un üzerinde amino asit kalintisi içeren moleküller kastedilmektedir. Eger bir peptit, oligopeptit, protein, ya da bu tür bir molekülü kodlayan bir polinükleotid bir immün yanit indükleme yetenegine sahipse, o zaman "immünojeniktir" (yani mevcut bulus kapsaminda bir "immünojendir"). Mevcut bulus kapsaminda immünojenisite daha spesifik bir anlamda, T hücresi aracili bir yanit indükleine yetenegi seklinde tanimlanmaktadir. Yani bir kapsaminda ise bir T hücresi yaniti indükleyen bir moleküldür. Bir T hücresi "epitopunun", bir klas 1 veya klas II MHC reseptörüne baglanarak üçül bir kompleks olusturan kisa bir peptide (MHC klas I alfa zinciri, beta-2-mikr0globülin ve peptit) ihtiyaci vardir. Bu MHC/peptit kompleksine karsi uygun egilimli ve uyumlu bir T hücre reseptörü içeren bir T hücre bu kompleksi taniyabilir. MHC klas l moleküllerine baglanan peptitler tipik olarak 8-14 amino asit uzunlugunda, en tipik sekliyle de 9 amino asit uzunlugundadir. MHC klas II moleküllerine baglanan T-hücre epitoplari ise tipik olarak 12-30 amino asit uzunlugundadir. MHC klas II moleküllerine baglanan peptitlerde ayni peptit ile karsilik gelen T hücresi epitopu ortak bir çekirdek segment paylasabilir, ancak bunun yanlarindaki, yukari yönde amino ucuna, asagi yönde karboksi ucuna uzanan, farkli uzunluktaki dizinler nedeniyle farklilik gösterebilirler. MHC klas ll reseptörleri daha açik bir üç boyutlu yapiya sahip oldugundan MHC klas ll reseptörlerine baglanan peptitler MHC klas ll molekülünün peptit baglayan oluguna, MHC klas l molekülünün peptit baglayan olugunda oldugu gibi, tamamen gömülmez. Bu durum sasirtici bir sekilde SEQ ID NO: 1 peptidi için geçerli degildir, çünkü peptidin uzunlugundaki küçük farkliliklar olaganüstü aktivite kayiplarina yol açmaktadir (bkz. asagida). Insanda MHC klas l moleküllerini kodlayan üç farkli genetik lokus bulunmaktadir (insan MHC molekülleri ayni zamanda insan lökosit antijenleri (HLA) olarak da belirlenmistir): HLA-A, HLA-B ve HLA-C. HLA-A*Ol, HLA-A*02 ve HLA-A*11 bu lokuslardan ifade edilebilen degisik MHC klas l alellerine örnektir. Insan genomunda MHC klas II genleri için üç degisik lokus bulunmaktadir: HLA-DR, HLA- DQ ve HLA-DP. MHC klas II reseptörleri, her ikisi de bir transmembran segment araciligiyla hücre membranina sabitlenmis bir alfa ve bir beta zincirden olusan bir heterodimerdir. HLA- DRB1*04 ve HLA-DRB1*07 bu lokuslarda ifade edildigi bilinen degisik MHC klas ll beta alellerine iki örnektir. Klas II aleller çok polimorfiktir, örnegin birkaç yüz degisik HLA- DRB] aleli tarif edilmistir. Bu nedenle, terapötik ve tanisal amaçlar dogrultusunda uygun bir egilimle birçok farkli HLA klas II reseptörüne baglanabilen bir peptide büyük talep vardir. Birden fazla farkli HLA klas II molekülüne baglanan bir peptide seçici olmayan (promiscuous binder) denir. Burada kullanilan sekliyle, bir DNA dizinine yapilan atif hem tek zincirli hem de çift zincirli DNA'yi kapsar. Yani, baglamda baska türlü belirtilmedikçe, spesifik dizin terimiyle bu dizini olusturan tek zincirli DNA, bu dizinin tümleci terimiyle ise olusturdugu dubleks (çiû zincirli DNA) ve bu dizinin tümleci kastedilmektedir. "Kodlama bölgesi" terimi bir genin dogal genom ortaminda ifadesi sonucunda ortaya çikan ürünü ya dogal ya da normal olarak Kodlama bölgesi, normal, mutasyonlu veya degistirilmis bir genden ve hatta DNA sentezi konusunda deneyimli kisiler tarafindan bilinen yöntemler uygulanarak tamamen laboratuvarda sentezlenmis bir DNA dizini veya genden olusabilir. kastedilmektedir. Belli bir peptidi, oligopeptidi veya polipeptidi kodlayan nükleotid dizini dogal kökenli ya da sentetik olarak yapilandirilmis olabilir. Bu bulusun peptitlerini, polipeptitlerini ve proteinlerini kodlayan DNA segmentleri genel olarak, mikrobiyal veya viral bir operondan elde edilen düzenleyici unsurlar içeren bir rekombinant transkripsiyon ünitesinde ifade edilme yetenegine sahip sentetik bir gen saglamak üzere cDNA parçalari ve kisa oligonükleotid baglayicilarindan veya bir dizi oligonükletidden olusur. ayni amino asit(ler)i kodlayan, herhangi bir nükleik asit dizininin dogal translasyon ürünü olan polipeptitleri veya proteinleri tanimlar. Kodlayici dizin baglaminda kullanilan "fragman" kavrami, kodlama bölgesinin bütününden daha küçük bir parçadan olusan ve ifade ürünü kodlama bölgesinin bütününün ifade ürünüyle temelde ayni biyolojik fonksiyona veya etkinlige sahip olan bir DNA parçasini tanimlar. edilmis, yani kirleten endojen materyal içermeyen ve segmentin ve onun nükleotid dizinlerinden olusan bilesenlerinin standart biyokimyasal yöntemlerle, örnegin bir klonlama vektörü kullanilarak, tanimlanmasina, manipülasyonuna ve geri kazanilmasina olanak verecek miktar veya konsantrasyonlarda elde edilmis DNA'dan türemis daha büyük bir DNA yapisinin bileseni seklindeki bir DNA polimerini tanimlar. Bu tür segmentler, çevrilmeyen dizinler veya tipik olarak ökaryotik genlerde bulunan intronlar tarafindan kesilmeyen açik okuma iskeletleri seklinde saglanir. Çevrilmeyen DNA dizinleri, kodlama bölgelerinin ifadesiyle veya manipülasyonuyla etkilesime gitmeyecek sekilde açik okuma iskeletinin akis asagi yönünde bulunabilir. zinciri sentezi baslatabilecegi bir serbest 3`OH ucu saglayan kisa nükleik asit dizinini tanimlar. oynayan bir DNA bölgesini tanimlar. içermeyen ve dizini (potansiyel olarak) proteine çevrilebilen bir amino asit kodlayici tripletler dizisi kastedilir. ortamindan) çikarildigini belirtir. Örnegin, yasayan bir hayvanin içindeki dogal kökenli polinükleotid veya polipeptit izole degildir, ancak ayni polinükleotid veya polipeptit dogal sistemde ayni ortami paylastigi materyallerin bazilarindan veya tümünden ayrilirsa, izole olmus olur. Bu tür polinükleotidler bir vektörün parçasi olabilir ve/veya bu tür polinükleotidler veya polipeptitler bir bilesimin parçasi olabilir, ancak bu vektör veya bilesim dogal ortamlarinin bir parçasi olmadigindan buna ragmen izole olmus olarak tanimlanirlar. Mevcut bulusa göre ifsa edilen polinükleotidler ve rekoinbinant veya immünojenik polipeptitler "saflastirilmis" durumda da olabilirler. "Satlastirilmis" kavrami mutlak saflik kriteri içermez; amaç daha çok göreceli bir tanimlama olup ilgili teknolojide deneyimli kisilerin anladigi sekilde, yüksek ölçüde saflastirilmis ya da yalnizca kismen saflastirilmis preparasyonlar kastedilir. Örnegin bir CDNA kütüphanesinden izole edilen bireysel klonlar konvansiyel yöntemlerle elektroforetik homojenite düzeyine saflastirilmistir. Baslangiç materyalinin veya dogal materyalin en az bir büyüklük sirasi, tercihen iki veya üç büyüklük sirasi, daha da tercihli olarak dört veya bes büyüklük sirasi saflastirilmasi özellikle arzu edildigi gibi %99 safliginda istem konusu bir polipeptit özellikle öngörülmektedir. Mevcut bulusa göre ifsa edilen nükleik asitler ve polipeptit ifade ürünleri ile bu tür nükleik asitleri ve/veya bu tür polipeptitleri içeren ifade vektörleri "zenginlestirilmis sekilde" olabilir. Burada kullanilan sekliyle "zenginlestirilmis" kavrami, materyalin konsantrasyonunun dogal bulusu olusturan dizinler, yapilar, vektörler, klonlar ve diger materyaller avantajli olarak zenginlestirilmis veya izole edilmis sekilde olabilirler. hayvana, örnegin bir memeliye, örnegin bir tavsana veya bir fareye, veya örnegin bir insana uygulandiginda, alici hayvanda ya da insanda bir T hücresi yaniti uyarilmasi seklinde bir immün yanit (yani bir iinmünojenik aktivite) olusturan bir fragman anlamina gelir. "Aktif fragman" alternatif olarak in vitro kosullarda T hücresi yaniti indüklemek için de kullanilabilir. Polipeptitlerle iliskili olarak kullanildiklarinda burada kullanilan "bölüm, segment," ve dizini, örnegin amino asit kalintisi dizini, kastedilmektedir. Örnegin, bir polipeptit, tripsin veya kimotripsin gibi yaygin olarak kullanilan herhangi bir endopeptidaz ile isleme tabi tutuldugunda, bu islemin sonucunda meydana gelen oligopeptitler bastaki polipeptidin bölümlerini, segmentlerini veya fragmanlarini olusturur. Bu demektir ki, bu fragmanlardan her biri zorunlu olarak amino asit dizinlerinin bir bölümünde SEQ ID NO: 1 ilâ 30 numarali dizinlerle büyük ölçüde ya da tam olarak özdes olan ve SEQ ID NO: 1 ilâ 30,un dogal kaynagini olusturan veya "ebeveyni" olan proteinlere tekabül eden bir segment, bir fragman ya da bir bölüm içerecektir. Bu kavramlar polinükleotidlerle iliskili olarak kullanildiginda, söz konusu polinükleotidin yaygin olarak kullanilan herhangi bir endonükleaz ile isleme tabi tutulmasi durumunda meydana gelen ürünler kastedilmektedir. Mevcut bulusa göre, bir dizine atfen kullanilan "yüzde özdeslik" veya "yüzde özdes" kavramlari, bir dizinin istem konusu olan veya tarif edilmis bir dizinle karsilastirildigi ve bunun için karsilastirilacak olan dizinin ("Karsilastirilan Dizin") tarif edilmis ya da istem konusu olan dizinle ("Referans Dizini") hizalandigi anlamina gelmektedir. Bu durumda Yüzde Özdeslik asagidaki formüle göre belirlenir: Yüzde Özdeslik = ] Formülde yer alan C, Referans Dizini ile Karsilastirilan Dizin arasindaki hizalama boyunca Referans Dizini ve Karsilastirilan Dizin arasindaki farkliliklarin sayisidir, burada (i) Karsilastirilan Dizinde uyumlu baz veya amino asit karsiligi bulunmayan Referans Dizinindeki her baz veya amino asit ve (ii) Karsilastirilan Dizinde bulunan her aralik ve (i) Karsilastirilan Dizinde hizasindaki baz veya amino asitten farkli olan Referans Dizinindeki hizalanmis her baz veya amino asit, bir farklilik olusturmaktadir; R ise Referans Dizini ile Karsilastirilan Dizin arasindaki hizalama boyunca Referans dizininde bulunan baz veya amino asitlerin sayisidir. Burada Referans dizininde olusmus tüm bosluklar da baz veya amino asit olarak sayilir. Eger bir Karsilastirilan Dizin ile Referans Dizini arasinda, yukaridaki yöntemle hesaplanmis ve belirlenmis asgari bir Yüzde Özdesligine esit veya onun üzerinde yüzde özdesligi olan bir hizalama mevcutsa, o zaman, hesaplanmis yüzde özdesligin belirlenmis yüzde özdeslikten daha düsük oldugu hizalamalar mevcut olsa dahi Karsilastirilan Dizin ile Referans Dizini arasinda asgari bir özdeslik yüzdesi mevcuttur. Burada ifsa edilen orijinal peptitler, baska türlü belirtilmedigi sürece, bir veya birden fazla kalintinin peptit zinciri içerisinde farkli, olasilikla seçili noktalarda sübstitüsyonu yoluyla degistirilebilir. Bu sübstitüsyonlar konservatif tarzda olabilir, yani bir amino asit, benzer yapiya ve özelliklere sahip bir amino asit ile, örnegin hidrofobik bir amino asit baska bir hidrofobik amino asitle degistirilebilir. Boyutlari ve kimyasal dogalari ayni veya benzer olan amino asitlerin, örnegin lösinin izolösin ile degistirilmesi, daha da konservatif bir uygulama olacaktir. Dogada bulunan homolog protein aileleri üzerinde yapilan dizin varyasyonu arastirmalarinda belli amino asit sübstitüsyonlari digerlerine kiyasla daha fazla tolere edilmektedir. Bunlar çogu kez orijinal amino asit ile onun yerini alan amino asit arasinda boyut, elektrik yükü, polarite ve hidrofobisite açisindan benzerlik gösteren iliskiler sergilemektedir ve "konservatif sübstitüsyonlar" tanimi bu temele dayanarak yapilmaktadir. Burada, konservatif sübstitüsyonlar asagidaki bes gruptan biri içerisinde gerçeklestirilen degisimler olarak tanimlanmaktadir: Grup l-küçük alifatik, polar olmayan veya hafif polar kalintilar (Ala, Ser, Thr, Pro, Gly); Grup 2-polar, negatif yüklü kalintilar ve bunlarin amidleri (Asp, Asn, Glu, Gln); Grup 3-polar, pozitif yüklü kalintilar (His, Arg, Lys); Grup 4-büyük, alifatik, polar olmayan kalintilar (Met, Leu, Ile, Val, Cys); ve Grup 5-büyük, aromatik kalintilar (Phe, Tyr, Trp). Daha az konservatif sübstitüsyonlar, bir amino asidin benzer karakteristige sahip ancak boyut açisindan oldukça farkli olan baska bir amino asitle, örnegin alaninin bir izolösin kalintisiyla, degistirilmesini kapsayabilir. Yüksek ölçüde konservatif olmayan degisimler ise asidik bir amino asidin polar ve hatta bazik karakterli biriyle degistirilmesini içerebilir. Ancak bu tür birakilmamalidir, çünkü kimyasal efektleri tam olarak öngörmek mümkün degildir. Köklü sübstitüsyonlar pekala, sans eseri kesfedilen ve basit kimyasal ilkelerden hareket edilerek baska türlü öngörülmesi mümkün olmayan efektler ortaya çikarabilir. Bu sübstitüsyonlar elbette olagan L-amino asitler disinda baska yapilari da içerebilir. Yani, D- amino asitler de bulusa ait antijenik peptitlerde yaygin bir sekilde bulunan L-amino asitlerle yer degistirebilir ve buna ragmen buradaki ifsaatin kapsamina girerler. Bunlara ek olarak, mevcut bulusa göre immünojen ve immünojenik polipeptit üretimi için standart olmayan R gruplarina (yani dogal proteinlerin yapisinda yer alan 20 amino asitte bulunanlardan farkli R gruplarina) sahip olan amino asitler de sübstitüsyon amaciyla kullanilabilir. Eger bir veya birden fazla pozisyonda yapilan sübstitüsyonlar sonucunda, asagidaki tanima uygun olarak, büyük ölçüde esit ya da daha yüksek bir antijenik etkinlige sahip bir peptit ortaya çikarsa, bu sübstitüsyonlarin kombinasyonlari denenecek ve bu kombine sübstitüsyonlarin peptidin antijenesitesi üzerinde aditif veya sinerjistik bir etkisi olup olmadigi incelenecektir. Peptidin içerisinde ayni anda azami 4 pozisyondan fazla sübstitüsyon uygulanmayacaktir. efektör fonksiyonlari aktivasyonunun bir peptit tarafindan indüklenmesi anlamina gelir. MHC klas I kisitli STL'lerde efektör fonksiyonlari peptit pulslu, peptit prekürsörü pulslu veya dogal peptit sunan hedef hücrelerin lizisi, peptit tarafindan indüklenen sitokin, tercihen Interferon- gamma, TNF-alfa veya lL-2 salinimi, peptit tarafindan indüklenen efektör moleküllerinin, tercihen granzim veya perforinlerin salinimi veya degranülasyon olabilir. MHC klas Il kisitli T yardimci hücreleri için efektör fonksiyonlari peptit tarafindan indüklenen sitokin, tercihen degranülasyon olabilir. STL'lerin ve T yardimci hücrelerinin olasi efektör fonksiyonlari bu listeyle sinirli degildir. Tercihen, SEQ ID NO: 10 dizinlerinden bir peptit için spesifik olan STL"ler sübstitüsyon yapilmis peptitlere karsi test edildiginde, sübstitüsyon yapilmis peptit tarafindan artalana göre azami lizis artisinin yarisinin gerçeklestirildigi peptit konsantrasyonu yaklasik 1 mM3dan daha fazla, tercihen yaklasik 1 uMsdan daha fazla, daha da tercihli olarak yaklasik 1 nMgdan daha fazla, yine daha tercihli olarak yaklasik 100 pM°dan daha fazla ve en çok tercih edilen sekliyle yaklasik 10 pM7dan daha fazla degildir. Ayrica, sübstitüsyon yapilmis peptidin, en az iki, daha da tercih edilen sekliyle üç olmak üzere, birden fazla bireyin STLileri tarafindan Bir immün yanitin tesviki konagin immün sistemi tarafindan yabanci olarak algilanan antijen mevcudiyetine baglidir. Tümör iliskili antijenlerin varliginin kesfedilmesi, bir konagin immün sistemini kullanarak tümör hücrelerin yüzeyinde ifade edilen hedef antijenlere karsi spesifik olan ve bu etki mekanizmasi araciligiyla tümörde regresyon, durma veya büyüme yavaslamasi indükleyen bir immün yanit tesvik etmenin yolunu açmis bulunmaktadir. Immün sisteminin hem salgisal hem de hücresel kollarinin çesitli kosum mekanizmalari bugün kanser immünoterapisi açisindan arastirilmaktadir. Hücresel immün yanitin spesifik unsurlari spesifik olarak tümör hücrelerini tanima ve yok etmeye gücüne sahiptir. Sitotoksik T hücrelerinin (STL) tümör infiltre eden hücre popülasyonlarindan veya periferik kandan izole edilmesi bu tip hücrelerin kansere karsi dogal iinmün savunmada önemli bir rol oynadigini düsündürmektedir (Cheever et al., 1993; Zeh, III et al., 1999). Galon ve ark., kolorektal kanserli hastalardan alinan 415 numuneyle gerçeklestirilen analizlere dayanarak, tümör dokusundaki immün hücrelerin tipi, yogunlugu ve yerlesiminin aslinda hastanin sagkalimi için yaygin biçimde kullanilan TNM evrelemesine kiyasla daha iyi bir öngördürücü oldugunu göstennislerdir (Galon et al., 2006). MHC klas I, agirlikli olarak endojen proteinlerin, DRIP'lerin ve büyükçe peptitlerin proteolitik yarilinasi sonucunda ortaya çikan peptitleri sunar. MHC klas Il-molekülleri ise agirlikli olarak profesyonel antijen sunan hücrelerde (APC'ler) bulunur ve öncelikle endositoz süreci içerisinde APC'ler tarafindan içeri alinarak islenen hücre disi veya transmembran proteinlerin peptitlerini sunarlar (Cresswell, l994). Peptit ve MHC klas I moleküllerinden olusan kompleksler, uygun TCR (T hücresi reseptörü) içeren CD8-pozitif Sitotoksik T- lenfositler tarafindan, peptit ve MHC moleküllerinden olusan kompleksler ise uygun TCR içeren CD4-pozitif yardimci T hücreleri tarafindan taninir. Burada TCR, peptit ve MHC'nin 1:1:1 stokiyometrik oraninda yer aldigi iyi bilinmektedir. CD4-pozitif yardimci T hücreleri, CD8-pozitif Sitotoksik T hücrelerinin olusturdugu etkin yanitlarinin indüklenmesinde ve sürdürülmesinde önemli bir rol oynamaktadir (Wang and lenf dügümlerinde hazirlanmasi (priming) ve yayginlasmasi CD4+ T hücreleri tarafindan desteklenir. (Schoenberger et al., 1998). Burada, naif CD8+ hücrelerinin fonksiyonel CD4+ T hücresi - APC etkilesiminin mahalline yönlendirilmesi olasi bir mekanizma olabilir (Castellino et al., 2006). Sonuç olarak, fonksiyonel CD8+ bellek hücrelerinin olusinasi için çogunluklu olarak CD4+ T hücrelerinin yardimina ihtiyaç vardir (Sun and Bevan, 2003; Janssen et al., 2003). Bu nedenle, tümör iliskili antijenlerden türetilen CD4-pozitif T hücresi epitoplarinin tanimlanmasi, anti-tümör immün yanit tetikleyen farmasötik ürünlerin gelistirilmesi açisindan büyük önem tasimaktadir (Kobayashi et al., 2002; Qin et al., 2003; anatic et al., 2003). T yardimci hücreler tümör mahallinde STL dostu bir sitokinli ortami destekleyerek (Qin and Blankenstein, 2000; Mortara et al., 2006) efektör hücreleri, örnegin CTLS, NK hücreleri, makrofajlar ve granülositleri oraya çekerler (Marzo et al., 2000; Hwang Inflamasyon yoklugunda MHC klas II moleküllerin ifadesi esas olarak immün sistem hücreleri, özellikle de profesyonel antijen sunan hücreler (APC) örnegin monositler, monosit türevli hücreler, makrofajlar ve dendritik hücreler ile sinirlidir. Kanser hastalarinda sasirtici bir sekilde tümör hücrelerinin MHC klas II molekülleri ifade ettigi tespit edilinistir (Dengjel STL efektör hücrelerinin (örn. CD8-pozitif T-lenfositlerin) bulunmadigi durumlarda dahi CD4-pozitif T hücrelerinin, Interferon-gamma (IFNy) salgilayarak anjiyogenezi baskilamak yoluyla tümör manifestasyonunu baskilamaya yeterli oldugu memeli hayvan modellerinde, örnegin farelerde gösterilmistir (Qin and Blankenstein, 2000). Tümör hücrelerinin lenfotoksin ve granzim B araciligiyla dogrudan sitotoksik CD4+ T hücreleri tarafindan öldürüldügü de ortaya atilmistir (Penna et al., 1992; Littaua et al., 1992). Ayrica, tümör iliskili antijenlerden kaynaklanan ve HLA klas II molekülleri tarafindan sunulan peptitleri taniyan CD4-pozitif T hücrelerinin antikor (Ak) yaniti tetikleyerek tümör pro gresyonuna karsi koydugu da ortaya konmustur (Kennedy et al., 2003). Su ana kadar, HLA klas l moleküllerine baglanan tümör iliskili peptitlerin aksine, yalnizca az sayida tümör iliskili antijen (TIA) klas II ligandi, tarif edilmistir. HLA klas II moleküllerinin yapisal ifadesi normal olarak immün sistemin hücreleriyle sinirli oldugundan (Mach et al., 1996`), klas II peptitleri dogrudan primer tümörlerden izole etmek olanak disi kabul edilmistir. Oysa, Dengjel ve ark. bir süre önce dogrudan tümörlerden (WO basarinislardir; (Dengjel et al., 2006). Tümör spesifik sitotoksik T-lenfositler tarafindan taninan antijenler yani bunlarin epitoplari, ilgili tümörde ifade edilen ve ayni kökenden gelen degisime ugramamis hücrelere kiyasla yukari regüle edilmis her siniitan protein molekülleri, örnegin enzimler, reseptörler, transkripsiyon faktörleri vs. olabilir. Su anda kullanilan siniflandirmaya göre tümör iliskili antijenler (TIA'lar) baslica su gruplardan olusmaktadir (Novellino et al., 2005): 1. Kanser testis antijenleri: T hücreleri tarafindan tanindigi kesfedilen ilk TIA'lar (van der Bruggen et al., 1991), ilk basta kanser testis (CT) antijenleri adi verilen bu sinifa dahildir. Bu adin verilmesinin nedeni, bu sinifin üyelerinin histolojik açidan farkli insan tümörlerinde ifade edilmesi, norinal dokularda ise yalnizca testiste, spermatosit/spermatogoniada ve ara sira plasentada ifade edilmesidir. Testis hücreleri klas I ve II HLA molekülü üretmediginden bu antijenlerin normal dokulardaki T hücreleri tarafindan taninmasi mümkün degildir, bundan dolayi immünolojik açidan tümör spesifik olarak kabul edilmektedirler. CT antijenlerinin taninmis örnekleri MAGE ailesinin üyeleri veya NY-ESO-l'dir. 2. Diferansiyasyon antijenleri: Bu TIA'lar tümör ile tümörün köken aldigi normal doku tarafindan paylasilir; en sik olarak melanomlarda ve normal inelanositlerde görülürler. Melanosit kökenli bu proteinlerin çogu inelanin biyosentezinde rol oynamaktadir, dolayisiyla tümör spesifik degillerdir, ancak buna ragmen kanser immünoterapisinde yaygin biçimde kullanilmaktadirlar. Örnekler, yalnizca bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, melanom için tirozinaz ve Melan-A/MART-l veya prostat kanseri için PSA'dir. 3. Asiri ifade edilen TIA'lar: Histolojik açidan farkli tümör tiplerinde genis çapli olarak, bir çok normal dokuda ise daha düsük düzeylerde ifade edilen TIA'lari kodlayan genler bulunmustur. Normal dokular tarafindan islenen ve potansiyel olarak sunulan epitoplarin çogunun T hücresi tarafindan taninma esiginin altinda olmasi, ancak tümör hücrelerinde gerçeklesen asiri ifadenin daha önce olusmus toleransi yikarak bir anti-kanser yanit tetiklemesi mümkündür. Bu TIA sinifinin taninmis örnekleri Her-Z/neu, Survivin, Telomeraz veya WT] 'dir.10 4. Tümör spesifik antijenler: Bu benzersiz TIA'lar normal genlerin (örnegin ß-katenin, CDK4 vs.) mutasyonu sonucunda meydana gelir. Bu moleküler degisimlerin bazilari neoplastik transformasyon ve/veya progresyonla iliskilidir. Tümör spesifik antijenler genellikle normal dokulara karsi otoimmün reaksiyon riskine yol açmadan güçlü immün reaksiyonlar indüklemektedir. Öte yandan, bu TlA'lar çogu kez kesinlikle yalnizca tanimlandiklari tümörle iliskili olup normal olarak birçok bireysel tümör tarafindan paylasilmamaktadir. . Anormal posttranslasyonel modifikasyonlardan kaynaklanan TIA'lar: Bu TIA'lar ne tümörler için spesifik olan ne de tümörlerde asiri ifade edilen, ancak öncelikle tümörlerde aktif olan posttranslasyonel süreçler nedeniyle tümör iliskili hale gelen proteinlerden olusabilir. Bu sinifa ait örnekler, glikolizasyon paternlerindeki degisimler nedeniyle tümörlerde MUCI gibi yeni epitoplarin olusmasi ya da bozunum sirasinda protein uçbirlestirmesi gibi, tümör spesifik olabilen ya da olmayan olgulardir (Hanada et al., 2004; Vigneron et al., 2004). 6. Onkoviral proteinler: Bu TIA'lar, olasilikla onkojenik süreçte kritik rol oynamis viral proteinler olup yabanci kökenli olduklarindan (insan kökenli degil) bir T hücresi yaniti olusturabilirler. Bu proteinlerin bazi örnekleri, servikal karsinomda ifade edilen insan papilloina tip 16 virüsü proteinleri E6 ve E7'dir. Proteinlerin sitotoksik T-lenfositler tarafindan tümör spesifik veya iliskili antijen olarak taninmasi ve bir tedavide kullanilabilmesi için özel ön kosullarin yerine getirilmesi gerekmektedir. Antijen esas olarak tümör hücrelerinde ifade edilmeli, normal, saglikli dokuda ise ifade edilmemeli ya da nispeten düsük oranlarda ifade edilmelidir. Ayrica, ilgili antijenin bir tümör tipinde yalnizca bulunmasi degil, konsantrasyonunun da (örnegin ilgili peptidin hücre basina kopya sayisi) yüksek olmasi arzu edilir. Tümör spesifik ve tümör iliskili antijenler çogu kez, sahip oldugu, örnegin hücre döngüsü kontrolü veya apoptoz baskilama gibi bir fonksiyon nedeniyle normal bir hücrenin tüinör hücresine dönüsmesinde dogrudan etkili olan proteinlerden olusur. Buna ek olarak, transformasyonla dogrudan nedensel iliskisi olan proteinlerin asagi yöndeki hedefleri de yukari regüle edilerek dolayli yoldan tümör iliskili hale gelebilirler. Bu tür dolayli tümör iliskili antijenler de asi yaklasimin hedefi olabilir (Singh-Jasuja et al., 2004). Her iki durumda da antijenin amino asit dizinine sahip olan epitoplarin bulunmasi zorunludur, çünkü bir tümör iliskili antijenden türeyen bu tür bir peptidin ("immünojenik peptit") bir in vitro veya in Vivo T hücresi yanitina yol açmasi gereklidir. Ilke olarak, bir MHC molekülüne baglanabilen her peptit bir T hücresi epitopu olarak görev yapabilir. Bir in vitro veya in vivo T hücresi yanitinin indüklenmesi için gereken ön sartlar karsilik gelen TCR'ye sahip bir T hücresinin bulunmasi ve bu özel epitopa karsi immünolojik tolerans olmamasidir. Dolayisiyla, bir tümör asisi gelistirmek için çikis noktasi TIA'lardir. TIA'larin tanimlanmasina ve karakterizasyonuna yönelik yöntemler, hastalardan veya saglikli bireylerden izole edilen STL'lerin kullanimini esas alir, ya da tümörler ve normal dokular arasinda diferansiyel transkripsiyon profilleri veya diferansiyel peptit ifade örnekleri olusturulmasina dayanir (Lemmel et al., 2004; Weinschenk et al., 2002). Ancak, tümör dokularinda veya insan tümör hücre çizgilerinde asiri ifade edilen ya da bu tür dokularda veya hücre çizgilerinde seçili olarak ifade edilen genlerin tanimlanmasi, bu genlerin transkripsiyonundan kaynaklanan antijenlerin bir immünoterapide kullanilmasiyla ilgili kesin bilgi saglamaz. Bunun nedeni, bu antijenler içinde yalnizca bireysel bir epitop alt popülasyonunun böyle bir uygulama için uygun olacagidir, çünkü bunun için karsilik gelen TCR'ye sahip bir T hücresinin bulunmasi ve bu özel epitopa yönelik immünolojik tolerans olmamasi ya da asgari düzeyde olmasi gerekmektedir. Dolayisiyla, MHC molekülleriyle baglantili olarak sunulan asiri ifade edilmis veya seçili ifade edilmis proteinlerin içinden yalnizca T hücreleri arasinda fonksiyonel karsiligi olanlarin seçilmesi önemlidir. Böyle bir T hücresi, spesifik antijenle uyarildiktan sonra klonal olarak çogaltilabilen ve efektör islevleri yerine getiren ("efektör T hücresi") bir T hücresi olarak tanimlanir. T yardimci hücreleri anti-tümör iinmünitesinde STL'lerin efektör islevini yönetmede önemli bir rol oynar. THi tipinde bir T yardimci hücresi yanitini tetikleyen T yardimci hücre epitoplari, hücre yüzeyleri üzerinde tümör iliskili peptit/MHC kompleksleri sergileyen tümör hücrelerine karsi yönlendirilmis sitotoksik fonksiyonlar içeren CD8-pozitif katil T hücrelerinin efektör fonksiyonlarini destekler. Böylelikle, tümör iliskili T yardimci hücre peptit epitoplari, tek baslarina ya da tümör baglantili peptitler ile birlestirilerek anti-tümör iinmün yanitlarini tesvik eden asi kompozisyonlarinin aktif farmasötik bilesenleri olarak kullanilabilirler. Gerek CD8, gerek CD4 baglantili olmak üzere her iki yanit tipi birlikte ve sinerjik olarak anti- tümör etkiye katki sagladigindan, hem CD8+ STL'ler tarafindan (ligand: MHC klas I molekülü + peptit epitopu), hem de CD4-pozitif T yardimci hücreleri tarafindan (ligand: MHC klas II molekülü + peptit epitopu) taninan tümör iliskili antijenlerin tanimlanmasi ve karakterizasyonu tümör asilarinin gelistirilmesi açisindan önemlidir. Kanser tedavisiyle iliskili agir yan etkiler ve maliyetler göz önünde bulunduruldugunda, prognoza ve taniya yönelik yöntemlerin gelistirilmesine acilen ihtiyaç oldugu görülmektedir. Bu nedenle, genel olarak kanser ve özel olarak glioblastoma için biyobelirteç görevi yapacak baska faktörlerin tanimlanmasina gerek duyulmaktadir. Ayrica, genel olarak kanser ve özel olarak glioblastoma tedavisinde kullanilacak faktörlerin tanimlanmasina gerek duyulmaktadir, Ayrica, radikal prostatektomi sonrasinda, ilerlemis lokal tümör büyümesi nedeniyle in-situ tümör kalintisi bulunan ve bu nedenle biyokimyasal relapsa maruz kalan prostat kanseri hastalari için yerlesmis bir tedavi tasarimi yoktur. Mevcut terapötik yaklasimlara göre karsilastirilabilir bir terapötik etkinlikle daha düsük bir morbiditeyi birlestiren yeni terapötik Mevcut bulus, glioblastomanin, prostat kanserinin ve diger tümörlerin tedavisinde yararli olan bir peptit saglamaktadir. lfsa edildigi sekliyle peptitlerin dogal olarak primer insan glioblastoma numunelerinin üzerinde l-lLA molekülleri tarafindan sunuldugu kismen dogrudan kütle spektrometrisi araciligiyla gösterilmis (bkz. örnek 1 ve Sekil 1), ya da SEQ ID NO: 26'da oldugu gibi, SYFPEITHI tahmin algoritmasina göre (Rammensee et al., 1995) olmadan (promiscuous) baglanacaklari tahmin edilmistir. Bu veriye ve yaygin bir alel olan DRBl'in sikligina bakilarak, A*02-pozitif Kafkas popülasyonunun yüzde 92'sinin SEQ lD NO: 26'y1 baglayacak en az bir DRBl aleli ifade edecegi varsayilabilir. SEQ ID NO: 26 ilâ 30`un türetildigi kaynak genin - survivin - glioblastoma, prostat tümörü, meme kanseri, özofagus kanseri, kolorektal kanser, berrak hücreli böbrek hücresi kanseri, akciger kanseri, MSS, over, melanom (Tamm ve ark. 1998) pankreas kanseri, skuamöz hücre kanseri, lösemi ve inedulloblastomda normal dokuya kiyasla yüksek düzeyde asiri ifade edildigi gösterilmis (bkz. örnek 2 ve Sekil 2), dolayisiyla peptidin yüksek ölçüde tüinör iliskili oldugu, yani bu peptitlerin tümör dokusunda güçlü bir sekilde sunuldugu, normal dokularda elde edilmis MHC klas I kisitli peptitler tarif etmektedir, bunlar yüksek bir afiniteyle klas I HLA mo leküllerine baglanma yetenegine sahiptir.10 HLA'ya baglanan peptitler, basta T lenfositler/T hücreleri olmak üzere, immün sistem tarafindan taninirlar. T hücreleri, taninan HLA/peptit kompleksini sunan hücreleri, yani örnegin türetilmis peptitleri sunan glioblastoma tüinör hücrelerini tahrip edebilir. Survivin kökenli peptitler tarafindan aktiflestirilen T yardimci hücreleri tümör vaskülarizasyonunu baskilayabilir, immün sistemin efektör hücrelerini çekebilir ve STL'lerin hazirlanmasini ve proliferasyonunu ve sürdürülebilir bir CD8+ T hücresi yanitini gerçeklestirebilir. Ifsa edildigi sekliyle tüm peptitlerin T hücresi yanitlari uyarma yetenegine sahip oldugu gösterilmistir (bkz. Örnek 3 ve Sekil 3). Yani, peptitler bir hastada tümör hücrelerini tahrip edebilecek bir immün yanit olusturmak için kullanislidir. Bir hastada bir iminün yanit, tarif edilen peptitlerin veya uygun Öncü] maddelerin (örnegin uzatilmis peptitler, proteinler veya bu peptitleri kodlayan nükleik asitler), ideal olarak immünojenisiteyi güçlendiren bir ajanla (örnegin bir adjüvanla) birlestirilerek, dogrudan hastaya uygulanmasi yoluyla indüklenebilir. Böyle terapötik amaçli bir asi uygulamasindan kaynaklanan immün yanitin tümör hücrelerine karsi yüksek ölçüde spesifik olacagi beklenebilir, çünkü mevcut bulusun hedef peptitleri normal dokularda kayda deger kopya sayilarinda sunulmamakta, bu da hastanin normal hücrelerine yönelik arzu edilmeyen bir otoimmün reaksiyon riskini önlemektedir. Farmasötik bilesim, peptidi ya serbest sekliyle ya da farinasötik açidan kabul edilebilir bir tuzu seklinde içerir. Burada kullanilan "farmasötik açidan kabul edilebilir bir tuz", açiklanan peptitlerin, peptidin asit veya baz tuzu olusturularak modifiye edildigi türevleri anlamina gelmektedir. Örnegin, asit tuzlari serbest bazdan (tipik hallerde, ilacin nötr seklinin nötr bir -NH2 grubuna sahip oldugu durumlarda) uygun bir asitle tepkimeye tabi tutularak olusturulur. Asit tuzlarini olusturmak için uygun asitler, gerek örn. asetik asit, propiyonik asit, glikolik asit, pirüvik asit, oksalik asit, malik asit, malonik asit, süksinik asit, maleik asit, fumarik asit, tartarik asit, sitrik asit, benzoik asit, sinnamik asit, mandelik asit, metanosülfonik asit, etanosülfonik asit, p- toluenosülfonik asit, salisilik asit ve benzerleri gibi organik asitleri, gerekse de öm. hidroklorik asit, hidrobromik asit, sülfürik asit, nitrik asit, fosforik asit ve benzerleri gibi inorganik asitleri kapsamaktadir. Diger yandan, muhtemelen bir peptidin üzerinde yer alan asit gruplarin bazik tuzlari ise sodyum hidroksit, potasyum hidroksit, amonyum hidroksit, kalsiyum hidroksit, trimetilamin veya benzerleri gibi farmasötik açidan kabul edilebilir bazlar kullanilarak gerçeklestirilir. Özellikle tercih edilen somut bir uygulamada, farinasötik bilesim, peptitleri asetik asitin tuzlari (asetatlar) veya hidroklorik asitin tuzlari(klorür1er) seklinde içerir. Tablo 1'de peptitler ifsa edildigi sekliyle gösterilmektedir, ilgili SEQ ID NO'lari, ilgili peptitlerin baglandigi HLA alelleri ve bu peptitlerin kökenini olusturan kaynak proteinler gösterilmistir. Ilgi çekici bir özellik, SEQ ID NO: l'ye uygun peptidin hem HLA-DR'ye hem de HLA-A*02'ye baglanmasi, yani iki farkli yanit olusturmasidir. Tablo 1: Ifsa edildigi sekliyle peptitler; SEQ ID NO: 10 mevcut bulusa aittir. SEQ ID NO: Peptit Kodu Dizin HLA alelleri Protein(ler) 1 NLGN4X-001 NLDTLMTYV HLA-A*02 NLGN4X 2 SLCOl C 1 -001 YLIAGIISL HLA-A*02 SLCO] C 1 3 ACS-OOI KIMERIQEV HLA-A*02 ACSBGI 4 BCA-001 FLGDPPEKL HLA-A*O2 BCAN ECA-002 ALWAWPSEL HLA-A*02 BCAN 6 CHI3Ll-010 TLYGMLNTL HLA-A*02 CHI3L1 7 CLIP2-001 SLNELRVLL HLA-A*02 CLIP2 8 DTNA-001 KLQDEAYQV HLA-A*02 DTNA 9 EGFR-007 ALAVLSNYDA HLA-A*02 EGFR FABP7-001 LTFGDVVAV HLA-A*02 FABP7 l 1 GFAP-OOl NLAQDLATV HLA-A*02 GFAP 13 GRI-001 NILEQIVSV HLA-A*02 GRIA4 l 5 MLC-OOl SVVEVIAGI HLA-A*02 MLCl 16 NES-001 GLQSQIAQV HLA-A*02 NES 18 NES-003 FLFPGTENQEL HLA-A*02 NES 21 NRCAM-001 GLWHHQTEV HLA-A*02 NRCAM 22 PDPN-001 TLVGllVGV HLA-A*02 PDPN 23 TNC-001 AMTQLLAGV HLA-A*02 TNC 24 TNC-002 QLLAGVFLA HLA-A*02 TNC CSP-001 TMLARLASA HLA-A*02 CSPG4 HLA-DR ve BIRCS/Survivin 26 BIR-002 TLGEFLKLDRERAKN HLA-A*02 27 BIR-002a TLGEFLKLDRERAKD HLA-DR BIRCS/Survivin 28 BIR-002b FTELTLGEF HLA-Al BIRCS/Survivin 29 BIR-002c LMLGEFLKL HLA-A2 BlRC5/SurViVin BIR-002d EPDLAQCF Y HLA-B35 BIRCS/Survivin Kondroitin sülfat proteoglîkan 4 (CSPG4) CSPG4 (kondroitin sülfat proteoglikan), olusinakta olan perisitlerin üzerinde bulunan ve neovaskülarizasyonda islevsel bir rol oynayan bir bütünlesik membran kondroitin sülfat proteoglikan örnegidir (Ozerdem, 2006). CSPG4 embriyogenez sirasinda immatür kapiler damarlarda ifade edilir, ancak damarlar matür hale gelince, bu ifade ortadan kaybolur. Tümör hücresi proliferasyOnunu, göçünü ve istilasini kapsayan bir erken hücre yüzeyi melanom ilerleme belirteci oldugu bilinmektedir. CSPG4 insan melanoin lezyonlarinin %90°inda güçlü bir sekilde ifade edilir. Her ne kadar CSPG4 kati bir biçimde tümör spesifik degilse de, melanom hastalarinda ve saglikli bireylerde tüinör reaktif CD4+ T-hücre yanitlari, otoimmünite yoklugunda HLA-DRll ifade eden melanom hücrelerinin üzerinde CSPG4693-709 bölgesini tanimaktadir (Erfurt et al., 2007). CSPG4'ün ifadesi integrin aracili hücre yayilimini, FAK (fokal adezyon kinaz) fosforilasyonunu ve ERK1/2 (ekstrasellüler sinyal regüle kinaz) aktivasyonunu artirir (Yang et al., 2004). Ayrica, CSPG4'ün tüinör anjiyogenezinde Önemli bir rol oynadigina dair kanitlar giderek artmaktadir. Buna göre, CSPG4 pozitif tümörlerde neovaskülarizasyon oranlarinin ve vasküler hacimlerin arttigi tespit edilmis ve CSPG4'ün, normal olarak endotelyal hücre proliferasyonunu ve anjiyogenezi baskilayan angiostatini bagladigi gösterilmistir. CSPG4- pozitif perisitlerin immatür kan damarlarinda da bulunmasi, bu hücre popülasyonunun damar gelisimi sirasinda angiostatinin baskilayici etkilerini bloke ederek endotelyal hücre proliferasyonunu modüle edici bir rol oynadigini düsündürmektedir (Chekenya et al., 2002b). Aktitlestirilmis perisitlerin yani sira, endotelyal hücreler, kondrositler, düz kas hücreleri, epidermis kapsamindaki bazi bazal keratinositler ve kil folliküllerinin içerdigi hücreler gibi bazi normal dokularda da CSPG4 ifadesi gerçeklestigi rapor edilinistir (Campoli et al., 2004). Yüksek ölçüde hareketli CSPG4 hücreleri anjiyogenez sirasinda ve MSS patolojilerine yanit olarak hizli morfolojik degisimlere ugrar ve damar büyümesi ve onarimi gerçeklesen bölgelere gönderilirler. CSPG4, malignant beyin tümörlerinde gerek tümör hücrelerinde, gerekse de kan damarlari üzerindeki perisitlerde asiri ifade edilmektedir (Chekenya and Pilkington, 2002). Bir CSPG4-pozitif insan glioma hücre çizgisine ait hücreler immün yetmezligi olan çiplak farelerin beynine implante edildiginde, bu tümörlerde kontrollere kiyasla daha yüksek bir mikrovasküler yogunluk olustugu gösterilmis ve bunun, CSPG4 ifadesinin konaktan türeyen tüinör vaskülatürünü gerek fonksiyon, gerek yapi açisindan düzenledigi anlamina gelebilecegi düsünülinüstür (Brekke et al., 2006). Çiplak farelere GBM biyopsi sferoidleri uygulanarak gerçeklestirilen bir ksenogrefr deneyinde, CSPG4 ile tümör vaskülatürünün gerek perisit, gerek bazal membran bilesenleri üzerindeki kan damarlari arasinda esasli bir iliski oldugu belirlenmis ve ifade ayrica hücre proliferasyonu yüksek olan bölgelerle iliskilendirilmistir (Chekenya et al., 2002a). Bunun ötesinde, bir glioma implantasyonu modelinde CSPG4 ifadesi tümörün ilerlemesine paralel bir gidis göstermistir (Wiranowska et al., 2006). Malign progresyon tümör ile stromasi arasinda olusturulan bir iletisim köprüsü araciligiyla ayakta tutulur. Burada, aktiflestirilmis stroma proliferatif ve invaziv neoplastik hücrelere neovaskülatür, hücre disi matris bilesenleri ve stimüle edici büyüme faktörleri saglayarak onlari besler. CSPG4 bu baglamda hücresel adezyon, göç, proliferasyon ve vasküler morfogenezde degisiklikler olusturma yoluyla tümör-stroma aktivasyonunda basat bir rol oynainaktadir (Chekenya and linmervoll, 2007). CSPG4 insan gliomalarinda, yüksek dereceli gliomalarda yüksek, düsük derecelilerde ise düsük düzeyde ifade edilmek üzere, farkli bir ifade sekli sergiler (Chekenya et al., 1999). Yüksek düzeyli CSPG4 ifadesi, 0L3ß1 integrin/PI3K sinyalizasyonun ve bunlarin asagi yönde artirilan aktivasyonunun aracilik ettigi çoklu ilaç direnci ile baglantilidir ve hücre sagkalimini destekler (Chekenya et al., 2008). CSP-OOl su organlarda/dokularda ve kanserlerde bulunmustur: Beyin: - glioblastoma; - sekonder glioblastoma (astrositom kökenli) Kolon: - adenokarsinom (müsinöz tip disinda), primer; Rektum: - adenokarsinom, metastaz Mide: - adenokarsinoin (tasli yüzük hücreli tip disinda), primer Böbrek: - renal hücre karsinomu, hücre hatti; - renal hücre karsinomu, berrak hücre tipi, metastazis, tüm sekonder noktalar; - renal hücre karsinomu, berrak hücre tipi, primer; - renal hücre karsinomu, primer Akciger: - adenokarsinom, primer; - adenoskuamöz karsinom, primer; - primer kanser; - küçük hücreli karsinom, primer; - skuamöz hücre karsinomu, primer; Pankreas: - adenokarsinom, primer; - adacik hücre tümörü, malignant, metastaz Prostat: - adenokarsinom, primer Deri: - metastatik malignant melanom, lenf nodu metastazi Dolayisiyla, SEQ ID NO: l'e uygun bir peptit içeren bir farinasötik bilesim özellikle su kanser türlerinin tedavisi için tercih edilmektedir: Beyin: - glioblastoma; - sekonder glioblastoma (astrositom kökenli) Kolon: - adenokarsinom (müsinöz tip disinda), primer; Rektum: - adenokarsinom, metastaz Mide: - adenokarsinom (tasli yüzük hücreli tip disinda), primer Böbrek: - renal hücre karsinomu, hücre hatti; - renal hücre karsinomu, berrak hücre tipi, metastazis, tüm sekonder noktalar; - renal hücre karsinomu, berrak hücre tipi, primer; renal hücre karsinomu, primer Akciger: - adenokarsinom, primer; evre l, - adenoskuamöz karsinom, primer; - primer kanser; - küçük hücreli karsinom, primer; - skuamöz hücre karsinomu, primer; Pankreas: - adenokarsinom, primer; - adacik hücre tümörü, malignant, metastaz Prostat: - adenokarsinom, primer Deri: - inetastatik malignant melanom, lenf nodu metastazi Açil-CoA sentetaz bubblegum ailesi üye 1 (ACSBGI) Bu gen tarafindan kodlanan protein, uzun Zincir açil-CoA sentetaz aktivitesine sahiptir. Beyinde çok uzun Zincirli yag asit metabolizmasinin aktivasyonunda ve miyelinogenezde merkezi bir rol oynadigi düsünülmektedir. Yag asitlerinin tiyoesterifikasyon yoluyla Asetil- CoA seklinde aktivasyonu bu tür moleküllerin katildigi reaksiyonlarin çogu için ön kosuldur. Literatürde henüz kanser spesifik bir islevleri veya asiri ifadeleri rapor edilmemistir. ACSBGl'in beyindeki, adrenal bezlerdeki, testislerdeki ve overlerdeki ifade paterni ve islevi bu proteinin X bagimli adrenolökodistrofinin (XALD) biyokimyasal patolojisinde rol oynadigini düsündürmektedir. XALD çok uzun Zincirli, doymus yag asitlerinin plazma ve doku düzeylerinin yükselmesiyle karakterize, agir, çogu kez ölümcül bir nörodejeneratif hastaliktir (Asheuer et al., 2005; Pei et al., 2003). Brevican (BCAN) Brevican dogum sirasinda yüksek düzeyde ifade edilen bir ekstrasellüler matri'ks proteini olup dogumdan itibaren 8 yasina kadar yüksek düzeyde ifade edilir, 20 yasinda asagi regüle edilerek düsük bir düzeye iner ve bu düzey normal eriskin korteksinde korunur. Bir GPI izoformu gelisim süreci boyunca esit biçimde düsük düzeylerde ifade edilir (Gary et al., 2000). Malignant gliomalar çevrelerindeki normal beyin dokusunu saldirganca istila ederler, bu sürece doku veya tümör spesifik ekstrasellüler proteinlerin aracilik ettigi düsünülmektedir. Dolayisiyla, ekstrasellüler matriks dokunun hücre geçirgenligini bir ölçüde modüle edebilir. Bu dogrultuda, gliomalarin MSS'nin ESM'ni modifiye etme yetenegi bu hücrelerin istilaciligina aracilik edebilir. Gliomalarda dramatik biçimde yukari regüle edilen bir ESM molekülü beyin spesifik bir kondroitin sülfat proteoglikan olan BCAN'dir. BCAN ifadesi, glial hücre motilitesinin gelismeye veya beyin yaralanmalarina bagli olarak arttigi dönemlerde de yukari regüle edilmektedir. Gliomalarda ifade düzeyinin normale göre yaklasik yedi kat arttigi tespit edilmistir (Gary et al., 2000; Gary et al., 1998). BCAN'nin gliomalarda yukari regülasyonuna ek olarak, tam uzunluktaki proteinin proteolitik isleme maruz kalmasi da istilaya katkida bulunabilir (Gary et al., 1998; Nutt et al., 2001). BCAN'nin ADAMTS ailesine ait metalloproteazlarla proteolitik islemden geçirilmesinin, onun gliomadaki pro- invaziv etkisine aracilik eden gerekli bir adim oldugu gösterilmistir. BCAN'nin "yarilamayan" mutant sekli in vitro kosullarda glioma hücre istilasini ve in Vivo kosullarda tümör progresyonunu arttirma yetenegine sahip degildir (Viapiano et al., 2008). Normal eriskin insan korteksinde veya non-glioma tümörlerde BCAN mRNA'si tespit edilmemektedir, bu yüzden BCAN glioma için benzersiz ve seçici bir belirteç addedilmektedir (Jaworski et al., 1996). Ayrica, protein analizleri gliomada yalnizca tam uzunluktaki BCAN'in degil, onunla birlikte benzersiz izoformlarinin da ifadesinin arttigini ortaya koymustur. Nitekim B/bAg, BCAN mRNA'nin tam uzunlukta bir ürünü olup çekirdek proteinin eksik ya da azalmis glikolizasyonu sonucunda meydana gelmektedir. B/bAg normal eriskin beyninde bulunmamakta, ancak yüksek dereceli glioma numunelerinde tespit edilmektedir. (Viapiano BCAN'nin glioblastomadan köken alan kök hücresi benzeri bir tümör hücresinde seçili olarak asiri ifade edildigi tarif edilmistir (Gunther et al., 2008). Bu kök hücre benzeri hücre alt tipi i'ri vi'vo kosullarda en yüksek pluripotansiyeli ve tümörijenisiteyi göstermistir. Kitinaz 3 benzeri l (kikirdak glikoproteini-39) (CHI3L1) ifade edilmekte ve salgilanmaktadir. Kanser hücreleri ve tümör iliskili makrofajlar tarafindan üretilmekte, doku yeniden biçimleme süreçlerine katilan hücreler üzerinde büyüme faktörü etkisi göstermekte ve kanser hücresi proliferasyonunda, diferansiyasyonunda, sagkaliminda, istilaciliginda, metastazlarinda, anjiogenezde ve inflamasyonda ve tümörü çevreleyen ekstrasellüler matriksin yeniden biçimlenmesinde rol oynadigi düsünülmektedir (Johansen et artritte bir otoantijen adayidir. Saglikli donörlerden elde edilmis ve CHI3L1'e karsi güdümlenmis CD4 T hücresi hatlari CD25, glukokortikoid indüklü tümör nekröz faktör reseptörü ve Foxp3 molekülleri ifade etinis ve antijen spesifik T hücresi yanitlarini baskilama özelligi göstermistir. Romatoid artritli hastalarin yüzde 50'sinde yanitlar proinflamatuar T yardiinci 1 fenotip yönünde polarize olup antijen spesifik animsaina yanitlarini baskilama açisindan belirgin bir biçimde zayif kalmaktadir (van Bilsen et al., 2004). CHISLI, sinir sisteminde hücre stresi sonucunda indüklendigi bilinen onkostatin M tarafindan yukari regüle edilir, çogu insan beyin tümöründe ifade edilir ve JAK/STAT sinyalizasyon yolagini etkinlestirir (Krona et al., 2007). CHI3L1 ifadesi ayni zamanda glioblastomada p- MAPK, p-mTOR ve p-p7OS6K ifadesiyle iliskilendirilmistir (Pelloski et al., 2006). Bir dizi gen ifadesi çalismasinda CHl3L1'in glioblastomada beyne göre daha yüksek düzeyde ifade edildigi gösterilmis ve normal beyne kiyasla 3 ilâ 62 kat arasinda artislar izlenmistir Immünohistokimyasal incelemeler çekirdekleri isler durumda olan tüm hücrelerin sitoplazmalarinda CHI3L1 ifade etme yetenegine sahip oldugunu göstermistir, ancak CHISLI ifadesinin yogunlugunun hücre aktivitesine bagli oldugu tespit edilmistir. Nitekim, metabolik etkinligi yüksek olan hücrelerde daha yogun bir sitoplazma boyanmasi gözlenmektedir (Ringsholt et al., 2007). Ayrica, immünohistokimya yöntemleriyle CHI3Ll'in glioblastomalarda anaplastik oligodendrogliomalara kiyasla çarpici derecede daha fazla ifade edildigi de belirlenmistir (Nutt et al., 2005). Glioma numunelerinde CHI3L1 protein10 düzeylerinin Western blot analizleri GBM'lerde yüzde 65 oraninda ciddi artislar göstermis, buna karsilik düsük evre (derece 11 ve III) gliomalarda veya normal beyin dokusunda düzeyler tespit sinirinin altinda kalinistir. (Tanwar et al., 2002) Yayilinaci olmayan ve cerrahiyle tedavi edilebilen pilositik astrositomun aksine, yalnizca glioblastomlarda CHI3L1 ifade edilmektedir (Colin et al., 2006). Çesitli malignansilerde CHI3L1 serum düzeyleri artmakta ve bu en kötü sagkalimla iliskilendirilmektedir. En yüksek CHI3L1 serum düzeyleri, en kisa nükssüz araliklarin ve en kisa genel sagkalimin gözlendigi metastazli kanser hastalarinda bulunmustur. CHISL] ifadesi özellikle glioblastoma hastalarinin serumunda artinaktadir (Kim et al., 2007; Johansen et al., hastalarinda CHI3L1 düzeyi radyografik bulgu vermeyen hastalara göre belirgin sekilde yüksektir. Ayrica, GBM'de CHI3L1 ile sagkalim arasinda ters bir oranti mevcuttur (Hormigo Bunun ötesinde, meme kanserinde de yüksek CHI3L1 ifadesi gözlenmekte ve burada da büyük tüinör boyutu, zayif tümör diferansiyasyonu ve en kötü hastaliksiz sagkalim oranlariyla iliskilendirilmektedir (Kim et al., 2007; Coskun et al., 2007). Ayni sekilde, bas ve boyun skuamöz hücre karsinomunda da olgularin yüzde 53'ünde yüksek CHI3L1 serum düzeyleri tespit edilmistir. CHI3L1 serum düzeyi yüksek hastalarda sagkalim süreleri CHI3L1 serum düzeyi normal hastalara kiyasla daha kisa (33 aya karsi 84 ay) bulunmustur (Roslind et al., 2008). Prostat kanserli hastalarda CHI3Ll serum düzeyleri BPH'li hastalara veya saglikli kisilere göre anlamli sekilde yüksektir (Kucur et al., 2008). CAP-GLY domain içeren linker protein 2 (CLIP2) CLIP2 tarafindan kodlanan protein sitoplazmik linker proteinler ailesine dahildir, bunlarin spesifik zarimsi organeller ile mikrotübüller arasindaki etkilesimlerde aracilik ettigi öne sürülinüstür. CLIP2'nin hem mikrotübüllerle, hem de dendritik lameller cisim adi verilen bir organel ile birlestigi tespit edilmistir (NCBI web sayfasindan genel bilgi). CLIP2 tirozinleninis mikrotübül uçlarinda lokalize olmakta, tirozini ayrilmis uçlarda ise olmamaktadir. Tübülin tirozinasyonu döngüsünde alfa tübüline bir C-terminal tirozin kalintisi ekleyen tübülin tirozin ligaz (TTL) enzimi tümör progresyonuna katilir ve nöronal organizasyonda çok önemli bir rol oynar (Peris et al., 2006). 30 primer glioblastoma olgusunun dondurulmus kesitleri ile GenoSensor Array 300 kullanilarak yürütülen bir çalismada gen amplifikasyonlari, gen delesyonlari ve tüm genomun kromozomal bilgi içerigi karakterize edilmistir. Yaygin olarak amplifiye edilen edilen genler arasinda CLIPZ (%63,3), EGFR (% genlerinin oldugu tespit edilmistir (Suzuki et al., 2004). Çözünmüs madde tasiyan organik anyon tasiyici aile, üye SLCOICl seçili olarak kan-beyin bariyerinde ifade edilir (Chu et al., 2008). Seçici substrat tercihi olan SLCOlCI 'in beyinde ve testiste tiroit hormonlarinin düzenlenmesinde Önemli bir rol oynadigi düsünülmektedir (Pizzagalli et al., 2002). SLCOlCl immünofloresans ile spesifik olarak tespit edilemez. SLCOIA2 ve SLCOZBI kan-beyin bariyeri ile kan tümör bariyerini olusturan endotelyal hücrelerin lüminal zarinda immünfloresan mikroskopi ile tespit edilmekte ancak glioma hücrelerinde bulunmamaktadir (Bronger et al., 2005). Distrobrevin, alfa (DTNA) Alfa distrobrevin önce iskelet kas hücrelerinde distrofin-glikoprotein kompleksinin bir sitoplazmik bileseni olarak tanimlanmistir. DTNA'nin izoformlari hücrelerde ve dokularda, epitelyal hücrelerin bazolateral zarlarinda olmak üzere farkli konumlarda lokalizedir; distrobrevin ekstrasellüler matriks, periferik ve transmembran proteinler ve filamentöz aktin sitoskeletonu arasindaki temaslarda aracilik eder. DTNA'larin yapisal rollerinin yani sira hücre sinyalizasyonunda ve hücre diferansiyasyonunda da önemli bir rol oynadiklari ve reorganizasyon sirasinda siki bag dokusu ile birlestikleri düsünülmektedir (Sjo et al., 2005). DTNA'nin sinaps olusumu ve stabilizasyonuna ve nikotinik asetilkolin reseptörlerinin kümelenmesine de katki sagladigi sanilmaktadir. Epidermal büyüme faktörü reseptörü (eritroblastik lösemi viral (v-erb-b) onkogen homologu, avian) (EGF R) Son zamanlarda ilgi odagina yerlesen diger bir molekül de epidermal büyüme faktörü reseptörüdür (EGFR), çünkü bununla iliskili anormallikler glioblastomada görülen en yaygin sapmalar arasinda yer almaktadir. Özellikle, EGFR'nin bir onkojenik, yapisal aktif mutanti olan EGFvall (epidermal büyüme faktörü reseptör varianti III) glioblastomada yaygin bir biçimde ifade edilmektedir (Zawrocki and Biernat, 2005). EGFR, progenitör hücrelerin fenotipini düzenleyen bir dizi yolagin aktivasyonuna katilir. Etkinlestirilmis EGFR tirozin kinaz aktivitesi nöral kök hücre göçünü, proliferasyonunu ve sagkalimini artirmaktadir. EGFR sinyalizasyonunun glioblastoinada da rol oynadigi bilinmektedir, dolayisiyla bundan glioblastomanin bir kanser kök hücresinden köken aldigi ve bu öncül hücrelerde EGFR sinyallerinin genellikle degisime ugradigi sonucu çikarilabilir (Yuso-Sacido et al., 2006). De novo primer glioblastoma olgulari yasli hastalarda görülmekte ve çogu kez EFGR asiri ifade etmektedir. EGFR asiri ifadesi artmis anjiogenez, ödem ve istila ile iliskilidir (Aghi et al., 2005). Ayrica, EGFR-ampliûye glioblastomalar radyasyona karsi dirençlidir (Barker et al., 2001) ve tedavi sonrasinda çok daha çabuk nükseder (Schlegel et al., 1994). GBM, asiri EGFR aktivasyonunun tümör büyümesi ve hasta sagkalimi ile iliskilendirildigi yegane non-epitelyal insan tümörüdür ve EGFR aktivasyonu in vitro kosullarda GBM infiltrasyonunu desteklemektedir (Penar et al., 1997). EGFR erbB'nin proto-onkogenidir. EGFR asiri ifadesi, aktif ligand reseptör kompleks olusumunun artmasina bagli olarak hücre büyümesini artirir. EGF reseptörünün GBM tümörlerinde asiri ifade edilmesinin altinda yatan mekanizma gen amplifikasyonudur (Thompson and Gill, 1985). Kromozom 7 üzerinde bulunan EGFR geninin kopya sayisinin yüksek dereceli gliomalarda sik sik arttigi bilinmektedir (Okada et al., 2007). EGFR'nin kisa interferans RNA'si araciligiyla yok edilmesi glioblastoma hücrelerinin tümörigenezini ortadan kaldirmaktadir (Huang et al., 2007). EGFR asiri ifadesi GBM'lerin yüzde 40 - 70`inde tespit edilmekte, buna karsilik pilositik, düsük dereceli veya anaplastik astrositomlarda her zaman negatif olmaktadir (Agosti et al., Kupelnick, 2000; Liu et al., 2006a). Yüksek EGFR serum düzeyleri düsük sagkalimi isaret eder (Quaranta et al., 2007). Ayrica, yüksek dereceli astrositomlu hastalar arasinda sagkalim süreleri uzun olanlarin EGFRVIII negatif oldugu tespit edilmistir (Liang et al., 2008). Notch-l EGF R ifadesini yukari regüle etmekte ve yüksek dereceli primer insan gliomalarinda EGFR ile Notch-l mRNA düzeyleri arasinda iliski görülmektedir (Purow et al., 2008). Öte yandan, EGFR c-Jun NHZ-terminal kinazin (JNK) yapisal aktivasyonunda kendini göstermekte ve bu yolla, gliomalar da dahil olmak üzere, bazi tümörlerde proliferasyona, sagkalima ve tümörigeneze katki saglamaktadir (Li et al., 2008a). EGFRVlII'ün glioma hücrelerinin yalnizca küçük bir yüzdesinde ifade edilmesine karsin hücrelerin çogu transforme bir fenotip sergilemektedir. EGFRVIII ifadesinin faal olmayan glioma hücrelerinde lipid-ratt iliskili, EGFRVIII içeren mikroveziküllerin olusumunu uyardigi ve bunlarin hücrenin çevresine salindigi ve EGFRVIII içermeyen kanser hücrelerinin plazma zarlariyla birleserek onkojenik aktivitenin iletilmesine neden oldugu gösterilmistir (Al- Nedawi et al., 2008). Yag asidi baglayici protein 7, beyin (FABP7) Yag asidi baglayici proteinler (fatty acid-binding proteins - FABPWer), yag asidi (YA) emilimi, tasinmasi ve hedeflenmesinde rol oynadigi düsünülen 14-15 kDa,lik sitozol proteinleridir. YA konsantrasyonlarini modüle edebilir ve bu yolla enzimlerin, zarlarin, iyon kanallarinin ve reseptörlerin islevini, gen ifadesini ve hücre büyümesi ile diferansiyasyonunu etkileyebilirler. Spesifik doku dagilimi gösteren dokuz FABP tipi ayirt edilmektedir. Dizinlerinde yüzde 30-70 amino asit özdesliginin yani sira, yag asidinin baglandigi üçüncül, beta-clam (istridye tipi) benzesik bir yapiya sahiptirler. Sinir dokusu, belirgin bir uzaysal- zamansal dagilimla dört FABP tipi içerir (Veerkamp and Zimmerman, 2001). FABP7 gelisen beyinde ve retinada yüksek ölçüde ifade edilir ve ifade düzeyi eriskin MSS'sinde belirgin bir biçimde düser (Godbout et al., 1998). In vitro sonuçlar bazinda FABP7'nin gelisen beynin radyal glial sistemini olusturmak için gerekli oldugu ileri sürülmüstür (Mita et al., 2007). FABP7 proteini normal beyinde tespit sinirindadir, buna karsilik çesitli GBM'lerde orta ilâ ileri derecede nükleer ve sitoplazmik ifadesi gözlemlenmektedir. FABP7 ile transfekte edilen hücrelerde göç etkinligi kontrol hücrelerine göre 5 kat fazladir. Dolayisiyla, özellikle glioblastomada olmak üzere, asiri FABP7 ifadesi ile kisalan genel sagkalim arasinda görülen iliski, tümör hücrelerinin çevredeki beyin parankimine daha hizli göç etmesine ve yayilmasina bagli olabilir (Liang et al., 2005). FABP7'nin nükleer translokasyonu spesifik olarak EGFR amplifikasyonu ve daha yüksek tümör istilaciligi ile iliskilidir (Kaloshi et al., 2007). Dolayisiyla, nükleer FABP7 EGFR aktivasyonu tarafindan indüklenerek GBM tümör hücrelerinin göçünü destekleyebilir (Liang et al., 2006). FABP7 ifadesinin renal hücre karsinomu için de bir belirteç oldugu gösterilmistir. FABP7 ifadesi yalnizca karsinom dokularinda tespit edilmekte, buna karsilik kanseröz olmayan böbrek numunelerinde bulunmamaktadir (Teratani et al., 2007). Renal hücre karsinomunda FABP7 ifadesinin tümörde normal böbrek dokusuna göre 20 kat yüksek oldugu gösterilmistir (Domoto et al., 2007; Buchner et al., 2007). FABP7 melanoinda da yaygin olarak ifade edilmekte olup burada hücre proliferasyonu ve istilasi ile iliskili oldugu düsünülmektedir (Goto et al., 2006). Glial Iîbriler asidik protein (GFAP) GFAP matür astrositlerin önemli bir orta düzey filament proteinini kodlar. Gelisme sirasinda astrositleri diger glial hücrelerden ayirt etmek için belirteç olarak kullanilir. Bu genin mutasyonu merkezi sinir sisteminde nadir görülen bir astrosit bozuklugu olan Alexander hastaligina yol açar. ilaveten bir transkript varyanti tanimlanmis olup tam dizini henüz açikliga kavusturulmamistir. Otistik beyinlerde düzeyinin yükseldigi gösterilmistir, buna karsilik agir depresyonlu kisilerin beyinlerinde GFAP düzeyi düsmektedir. Primatlarin beyinleri, tam beyin radyasyon analizinden on yil sonra de novo tümörler gelistirmistir. Tümör öncüllerinde hücresel atipi ve mitozlar görülmüs ve tümör iliskili belirteçler GFAP, EGFR ve p53 negatif çikmistir (Lubensky et al., 2006). Astrositik neoplazmlarda GFAP pozitif hücre sayisi ile boyanma yogunlugu malignansiyle dogrudan orantilidir. Her 3 oligodendrogliom olgusu GFAP'ye olumsuz tepki vermistir (Reyaz et al., 2005). Saf Oligodendrogliomlar immünohistolojik olarak GFAP negatiftir (Mokhtari et al., 2005). Yüksek dereceli glioma hastalarinda GFAP serum düzeyleri tümör hacmiyle dogrusal orantilidir (Brommeland et al., 2007). Hatta GB hastalari arasinda da tümör hacmi, tümör nekröz hacmi, nekrotik GF AP pozitif hücre sayisi ve GFAP serum düzeyi arasinda anlamli bir iliski tespit etmek mümkündür (lung et al., 2007). Glioblastoma hücre hatlarinin histon deasetilaz inhibitörü 4-fenil butirat ile islemden geçirilmesinin ardindan artan konsantrasyonlarda fosforlanmamis GFAP görülmüs, fosforlanmis izoformlar ise bozulmamistir (Asklund et al., 2004). TGF-alfa ile islemden geçirilen bir glioblastoma hücre hattinda GFAP gen transkripsiyonu, mRNA düzeyi ve spesifik protein sentezi yaklasik yüzde 50 oraninda azalmaktadir (Zhou and GFAP promotörü teknik açidan yaygin bir biçimde fare modellerinde, özellikle sinir sisteminde, arzu edilen proteinlerin ifadesini indüklemek için kullanilan bir araçtir. Pankreatik Langerhans adaciklari, GFAP ifade eden peri-islet Schwann hücreleri (pSC) tarafindan olusturulan bir kilifin içindedir. Görüldügü kadariyla, pankreas sinir sistemi dokusuna ait ögelerin otoimmün saldiriya maruz kalmasi tip-1 diyabetin tümlenik, erken bir bölümünü olusturmaktadir (Winer et al., 2003). Pankreastaki bu ifade immatics'in bulgulari ya da dis merkezlerde dokularin büyük kisminda elde edilmis ifade verileri tarafindan yansitilmamaktadir. GFAP-001'in tip-1 diyabet hastalarinin ve bunlarin diyabetik olmayan, ancak diyabet otoantijenlerine antikor yaniti veren (artmis diyabet riski) yakinlarinin saglikli donörlere kiyasla artmis granziin B salgilayan STL (eks Vivo ELISPOT) reaktivitesi gösterdigi bir epitop oldugu rapor edilmistir (Standifer et al., 2006). Ilginçtir ki, göründügü kadariyla otoimmün hastaliklarin, özellikle diyabetin manifestasyonu ile glioma gelistirme riski arasinda ters orantili bir iliski bulunmaktadir (Aronson and Schwartzbaum et al., 2005). G-protein ile birlesmis reseptör 56 (GPR56) GPR56, müsin benzeri bir sap olusturan, Ser/Thr bakimindan zengin uzun bir bölge içeren olagan disi uzun bir N-terminal ekstrasellüler bölüme sahip, atipik G-protein kuplajli bir reseptördür (GPCR), GPR56'n1n bu özelligi dolayisiyla hücre-hücre ya da hücre-matriks etkilesimlerinde rol oynadigi düsünülmektedir. Yüksek mRNA ifade düzeyi ve yaygin bir protein olmasi nedeniyle bu reseptörün hücre-hücre etkilesim süreçlerinde rol oynayabilecegi ileri sürülmüstür (Liu et al., 1999). GPR56, nöral progenitör hücrelerin gelismesinde rol oynayan sekretin ailesi GPCR'lerine aittir ve insan beyninin gelisimsel malformasyonlariyla iliskilendirilmektedir. GPR56 ifadesinin çesitli kanser dokularinin hücresel transformasyon fenotiplerinde normal doku karsiliklarina göre artmis olmasi, potansiyel onkojenik bir islev düsündürmektedir. GPR56'nin RNA interferansi araciligiyla susturulmasi apoptoz indüksiyonuna ve kanser hücrelerinin ankrajdan bagimsiz büyümesinin anoiksi artisina bagli olarak azalmasina yol açmaktadir. GPR56'nin susturulmasi ekstrasellüler matrikse hücre adezyonunu da azaltmaktadir (Ke et al., 2007). Islevsel genomik yönteiniyle GPR56'n1n multiform glioblastomada yukari regüle edildigi gösterilmistir. Immünohistokimyasal incelemeler glioblastoma/astrositom tümör numunelerinin çogunlugunda GPR56 ifadesini kanitlamis, buna karsilik normal eriskin beyninde ifade düzeyleri tespit sinirinin altinda kalmistir (Shashidhar et al., 2005). Pankreas kanseri hücrelerinde GPR56 mRNA yüksek düzeyde ifade edilmekle birlikte GPR56 proteini bu hücrelerde ihmal edilebilir ya da tespit edilemez düzeydedir, bu da GPR56 protein ifadesinin insan pankreas kanseri hücrelerinde baskilandigini düsündürmektedir (Huang et al., 2008). Metastazis üzerinde daha önce yürütülmüs olan çalismalarda insan melanom hücre hatlarinin yüksek metastatik varyantlarinda GPR56'nin belirgin biçimde asagi regüle edildigi gösterilmis ve bundan GPR56 asiri ifadesinin tümörün büyümesini ve metastazisi baskilayabilecegi sonucu çikarilmistir. Bu büyüme baskisinda GPR56'nin, doku ve stromanin yaygin bir bileseni olan ve kendisi de tümör progresyonunu baskilayici özelliklere sahip olan doku transglutaminazi (TGZ) ile etkilesiminin aracilik ettigi düsünülmektedir (Xu et al., 2006; Xu and Hynes, 2007). GPR56'nin diger bir baskilayici etkisinin nöral progenitör hücrelerin (NPCler) göçünü hedef aldigi rapor edilmistir. GPR56 NPC'lerde yüksek düzeyde ifade edilmekte ve olasilikla G alfa (12/ 13) ve Rho sinyalizasyon yolagi üzerinden NPC hareketinin regülasyonuna katilmaktadir, bu da GPR56'nin merkezi sinir sisteminin gelismesinde önemli bir rol oynadigini düsündürmektedir (Iguchi et al., 2008). Glutamat reseptörü, iyonotroiîk, AMPA 4 (GRIA4) cx-amino-3-hidroksi-5-metil-4-izoksazo] propiyonat (AMPA) tipi glutamat reseptörleri (AMPARlar) merkezi sinir sisteminde uyarici sinapslarda hizli nörotransmisyona aracilik eder ve, GluRl ilâ GluR4 (GRIA4) olmak üzere, dört proteinli bir sette yer alan alt birimlerden olusurlar. GRIA4 alt birimleri insan glioblastoma hücrelerinde yaygin bir sekilde ifade edilmekte ve Ca2+geçirgen AMPARlar olarak islev görmektedir. Ca2+ geçirgen olmayan reseptörlere dönüsmeleri durumunda hücrenin hareket yetenegi baskilanir ve apoptoz indüklenir, buna karsilik Ca2+ geçirgen AMPA reseptörlerinin asiri ifadesi tümör hücrelerinin göçünü ve proliferasyonunu kolaylastirmaktadir. Bundan dolayi, Ca2+ geçirgen AMPA reseptörlerinin glioblastoma gelisiminde kritik bir rol oynadigi düsünülmektedir (Ishiuchi et al., 2002). Insulin benzeri büyüme faktörü 2 mRNA baglayici protein 3 (IGFZBP3) mRNA'mn lokalizasyonu, döngüsü ve translasyonel denetiminde rol alir. Kodlanan protein birden çok KH domain içerir. Bunlar RNA baglama açisindan önemlidir ve RNA senteziyle ve metabolizmasiyla iliskili olduklari bilinmektedir. Esas olarak embriyonik gelisim sürecinde ve bazi tümörlerde ifade edilir. Dolayisiyla, IGF2BP3iün bir onkofetal protein oldugu düsünülmektedir (Liao et al., 2005). lGF2BP3'ün glioblastomada ifade edildigine iliskin özel bir bilgi buluninainakla birlikte, diger bir çok malignanside asiri IGF2BP3 ifadesi tespit edilmistir. Örnegin, analiz edilen 716 berrak hücreli renal hücre karsinomu numunesinin yüzde 30'unda IGF2BP3 ifade edilmistir. Bu çalismada molekülün ifadesinin ileri tümör evresi ve derecesi ile birlikte, koagülatif tümör nekrozu ve sarkomatoid diferansiyasyon gibi diger bazi advers özelliklerle de iliskili oldugu bulunmustur. Bunun ötesinde, pozitif oraninda bir artis ifade etmektedir; bu da, lGF2BP3 ifadesinin berrak hücreli renal hücre karsinomu tümörlerinin saldirgan davranisi için bagimsiz bir öngördürücü oldugunu ifadesi malign melanomda tespit edilmesine karsin benign nevüslerde, displastik özelliklerin mevcut oldugu durumlarda dahi ifade tespit edilmemistir (Pryor et al., 2008). Endometrial kanserde IGF2BP3 ifadesi, tip II endoinetrial kanser ile ve endometrial neoplastik lezyonlar arasinda saldirgan histolojik bir fenotip ile yakindan iliskilidir (Zheng et al., 2008). Özofagal skuainöz hücre karsinoinlu 20 hastada yapilan bir çalismada toplam vakalarin %40'inda, tümör infiltre eden lenfositlerde (TlL'ler), bölgesel lenf nodu lenfositlerinde ve periferik kan lenfositlerinde IGF2BP3 kökenli bir HLA-A2402-kisitli epitop peptidine karsi spesifik T hücresi yanit indüksiyonu gözlenmistir (Mizukami et al., 2008). IGF2BP3 pankreas karsinomlarinda da yüksek düzeyde ifade edilir. Yapilan 2 çalismada, pankreatik tümör dokusu örneklerinin %90°i immün boyama sonrasinda IGF2BP3 ifadesi göstermis, neoplastik olmayan pankreas dokulari ise IGF2BP3 negatif bulunmustur. Bunun ötesinde, pankreas karsinomlarinda lGF2BP3 mRNA da neoplastik olmayan pankreas dokularina göre asiri ifade edilmekte ve ifade düzeyi tümör evresine paralel olarak artmaktadir (Yantiss et al., 2005; Yantiss et al., 2008). lGFZBP3 ifadesinin yüksek dereceli ürotelyal tümörlerde de anlamli bir sekilde arttigi, ancak benign ürotelyumlarda veya düsük dereceli ürotelyal tümörlerde genellikle görülmedigi tespit edilmistir. Ayrica, IGF2BP3-pozitif tümörlü hastalarin progresyonsuz sagkalim ve hastaliksiz sagkalim oranlari IGF2BP3-negatif tümörlü hastalara kiyasla çok daha düsük bulunmustur. Ilk tani sirasinda IGF2BP3 pozitif olan yüzeysel invaziv ürotelyal karsinomlu hastalar ilerde metastaz gelistirmis, buna karsilik lGF2BP3 negatif hastalarda metastazis görülmemistir. Buna ek olarak, bu çalismalarda elde edilen bulgular IGF2BP3'ün ürotelyal tümörlerin gerek papiller, gerek düz lezyonlarda düsük dereceden yüksek dereceye ilerlemesinde rol oynadigini düsündürmektedir (Li et al., 2008b; Sitnikova et al., 2008). Subkortikal kistler 1 ile birlikte megalensefalik lökoensefalopati (MLCl) Subkortikal kistler ile birlikte megalensefalik lökoensefalopati (MLC) çocuklarda göiülen, resesif geçisli bir otozomal serebral beyaz madde bozuklugudur. MLC, MLCl geninde meydana gelen mutasyonlardan kaynaklanir (Ilja Boor et al., 2006). Bulusu yapanlarin bildigi kadariyla literatürde MLCl ile beyin tümörleri arasinda herhangi bir iliski gösteren bir çalisma bulunmamaktadir. Bir makalede MLCI'nin fare beynindeki hücresel ve bölgesel dagilimi incelenmistir (Schmitt et al., 2003). En yüksek MLCl ifadesi prenatal ve perinatal dönemlerde mültipotent nöral öncül hücrelerde tespit edilmistir. Eriskin fare beyninde MLCl mRNA yalnizca glial hücrelerde bulunmaktadir. Gelisen ve matür astrositlerin aksine, oligodendrositlerde MLCl ifadesi yoktur. Nestin (NES) Orta düzey fîlament nestin gelisim sirasinda, post konsepsiyonel 11 haftada MSS'nin tüm bölümlerinde ventriküler katmanin nöroepitelyal hücrelerinde yogun bir biçimde ifade edilir, buna karsilik ikinci ve üçüncü trimesterde nestin immünoreaktivitesi ortadan kalkar. (Takano mitotik nöronlarin proliferatif ventriküler katmandan göçü sirasinda ve sonrasinda nestin ifadesi sert bir sekilde asagi regüle edilir (Arnold and Trojanowski, 1996). Neoplastik olmayan eriskin insan beyninde nestin boyamasi, yalnizca çok az sayida endotelyal hücrede olmak üzere, zayif bir boyanina göstermistir (Dahlstrand et al., 1992). Nestin neoplastik transformasyon sirasinda yeniden ifade edilebilir (Veselska et al., 2006). Glioma dokularinda nestin immünoreaktivitesi yalnizca tümör hücrelerinde görülmekte ve glioma malignant hale gelerek glioblastoma yönünde ilerledikçe üretilen nestin miktari artmaktadir. Nestin pozitif hücrelerin en yüksek insidansi ve genellikle en yüksek nestin boyanma düzeyleri glioblastomalarda (malignansi derecesi IV) görülmektedir. Nestin ifadesi, nöroektodermal kökenli çesitli primer MSS tümör tiplerinin tümör hücrelerinde bulunmakla birlikte, metastaz atan karsinom hücrelerinde görülmemektedir (Dahlstrand et al., 1992; Tohyama et al., 1992). Nestin diflüz astrositomlarda neredeyse hiç ifade edilmemekte, anaplastik astrositomlarda degisken düzeylerde ifade edilmekte ve glioblastomalarda güçlü ve düzensiz biçiinde ifade edilmektedir; burada, dagilimi GFAP ve vimentin ile tamamlayici bir degiskenlik göstermektedir (Schiffer et al., 2006). Klinik açidan bakildiginda, nestin negatif germ hücrelerinden olusan tümörlerde saçilma görülmezken, saçilma gösteren tüm tümörler güçlü bir nestin protein ifadesi göstermektedir (Sakurada et al., 2007). Güçlü bir sekilde nestin ifade eden tümör hücreleri genellikle kan damarlarinin yakininda yer al., 1994; Strojnik et al., 2007) ve etkinlestirilmis endotelyum tarafindan gerçeklestirilen nestin ifadesinin bir anjiogenez belirteci oldugu düsünülmektedir (Teranishi et al., 2007; GBM, tümör olusturma kapasitesi de dahil olmak üzere, kök hücrelerden beklenen tüm islevsel özellikleri kapsayan transforme öncüller içerir. Bu hücreler seri transplantasyon durumunda dahi GBM olusturma yetenegine sahip oldugundan tümör nöral kök hücre olarak taniinlaninaktadir (Galli et al., 2004). Bu hücreler insan beyin tümörlerinin CDl33+ hücre alt grubuna dahil olup digerleriyle birlikte NSC belirteci nestini ifade etmekte, ancak farklilasmis nöral soy belirteçlerini ifade etmemektedir (Singh et al., 2004b; Singh et al., 2003; Singh et gliomalarin normal nöral kök hücrelerinden köken aldigini düsündürmektedir (Shiras et al., 2007). Notch sinyalizasyonu beyin tümöründe ve kök hücrelerde etkindir, nestin promotörünün Notch aktivitesi tarafindan etkinlestirildigi kültürde gösterilmistir (Shih and Holland, 2006). Siçan astrositom C6 hücre hatti nestin siRNA dubleksi ile transfekte edildiginde, nestin siRNA kültive astrositom hücreleri üzerinde güçlü bir doz bagimli baskilayici etki göstermistir (Wei et al., 2008). melanomda da (Klein et al., 2007) nestin ifadesi bildirilmistir. Nestin ayrica su tümörlerde de ifade edilmektedir: GIST (Tsujimura et al., 2001; Sarlomo-Rikala et al., 2002), melanomlar pankreas tümörleri (Ohike et al., 2007; Kleeberger et al., 2007). Nestin ifadesi çesitli normal dokularda da bulunmaktadir: Normal eriskin insan böbregi glomerüllerindeki podositlerde nestin ifade edilir. Nestin normal kosullarda gelisimin erken asamalarinda çesitli glomerüler hücre tiplerinde ifade edilir, ancak matür glomerüllerde ifade podositlerle sinirli kalir (lshizaki et al., 2006), bu bulgu nestinin podositlerin bazi islevleri açisindan kritik bir rol oynadigini düsündürmektedir. Eriskin glomeiülleri, podosit morfolojisine sahip olan ve vimentin ifade eden hücrelerde nestin immünoreaktivitesi göstermektedir (Bertelli et al., 2007). Nestinin vimentin ile etkileserek glomerüler filtrasyon sirasinda yüksek çekme gerilimine maruz kalan podositlerin mekanik saglamligini güçlendirdigi sanilmaktadir (Perry et al., 2007). Dolayisiyla, nestin insan böbreginde glomerül olusumunun ilk asamalarinda podositlerde ve mezangial ve endotelyal hücrelerde ifade edilmektedir. Matür glomerüllerde ise bu ifade podositlerle sinirli kalmakta ve eriskin insan böbreginin diger yapilarinda tespit edilmemektedir (Su et al., 2007). Immünohistokimya yöntemleriyle normal insan adrenal bezlerinin korteksinde sabit bir nestin ifadesi oldugu gösterilmistir. Nestin ifade eden hücreler agirlikli olarak zona reticularis'te yer alirken adrenal karsinomlarda çesitli sayilarda nestin immünoreaktif hücre görülmektedir (Toti et al., 2005). Normal gastrointestinal sistemin interstisyel cajal hücrelerinde de (ICC) nestin ifadesi bildirilmistir. Nitekim antrumdaki intramüsküler ICC'lerin çogu ve bagirsaktaki myenterik Sirküler kaslarindaki çogu ICC için de geçerlidir (Vanderwinden et al., 2002). Pankreasta nestin immünoreaktif hücreler adaciklarda ve ekzokrin bölümde yer alir. Büyük pankreatik kanallarin bulundugu bölgede nestin pozitif hücreler kanal epitelyumunu saran bag dokunun içinde yayilinis küçük kapilerler seklinde göze çarpar. Sonuç olarak, nestin insan pankreasinin vasküler endotelyal hücreleri tarafindan ifade edilmektedir (Klein et al., 2003). Adaciklarda nestin ifade eden adacik progenitör hücreleri tespit edilmistir. Adacik kökenli bu nestin pozitif progenitör hücrelerin pankreas adaciklarinda yerlesik, bagimsiz bir hücre popülasyonu olusturdugu ve adacik endokrin hücrelerin neogenezinde rol oynadigi seklinde bir hipotez ileri sürülmüstür (Zulewski et al., 2001). Eriskin insan karacigerinden vimentin ve nestin pozitif bir insan karaciger kök hücre popülasyonu izole edilebilir (Herrera et al., 2006). Hücre kültürü deneylerinde sitoskeletonun ve matriks bilesiminin immün boyama yöntemiyle analizi, fetal akciger ve eriskin ilik kökenli hücrelerin orta düzey filamentlerde vimentin ve nestin proteinleri ifade ettigini göstermektedir (Sabatini et al., 2005). Genç kalici dislerde nestin islevsel odontoblastlarda bulunmaktadir. Yasli kalici dislerde ifadesi asagi regüle edilmekte ve nestin yok olmakta, ancak çürük ve yaralanmis dislerde tekrar yukari regüle edilmektedir (About et al., 2000). Nestin ifade eden eriskin kök hücreler matür anterior hipofizin perilümenal bölgesinde de bulunmus olup genetik indüklenebilir fate mapping yöntemiyle bunlarin hipofiz bezindeki son farklilasma asamasina ulasmis alti endokrin hücre tipinin tümünde alt küme olusturma islevi gördügü gösterilmistir. Bu kök hücreler organogenezde önemli bir rol oynamamakla birlikte, dogum sonrasinda ekspansiyon göstererek farklilasmis kusaklar olusturmakta, bunlar da daha önce tamamen embriyonik öncüllerden türemis ve farklilasmis hücrelerden olusan organi kolonilestirmektedir (Gleiberman et al., 2008). Nükleer reseptör alt ailesi 2, grup E, üye 1 (NR2E1) NR, nöral kök hücrelerin proliferasyonu ve kendini yenilemesi için elzem olan bir transkripsiyon faktörüdür; bunun için, histon deasetilazlarini (HDACleri) akis asagi hedef genlere yönlendirir ve onlarin transkripsiyonunu baskilar ve böylelikle nöral kök hücrelerin proliferasyonunu düzenler. HDAClerin yönlendirilmesiyle TLX hedef genleri, siklin bagimli kinaz inhibitörü, p21(CIPl/WAF1)(p2l) ve tümör baskilayici gen PTEN'nin transkripsiyonu baskilanir (Sun et al., 2007). Divergent homeotik genlerin TLX/HOXH alt ailesi embriyogenezin çesitli asamalarinda rol oynar; bunlardan TLXl/HOXll ve TLX3/HOX11L2 insan T hücresi akut lenfoblastik lösemide onkogen olarak belirgin bir sekilde göze çarpmaktadir (Dixon et al., 2007). NR2E1 köklü bir retinal organizasyon programinin temelini olusturmakta ve uzun süreli retinogenez süreci esnasinda uygun sayida retina] kusaklarin olusmasini ve glial hücrelerin gelismesini kontrol etmektedir (Miyawaki et al., 2004). Glioblastomaya iliskin bilgi bulunmamistir. Nöronal hücre adezyonu molekülü (NRCAM) Insan NRCAM'i (Nöroglia iliskili Hücre Adezyon Molekülü) glioblastoma multiforme dokusunda (GMT) normal beyin dokusuna (NBT) kiyasla asiri ifade edilir. NRCAM, ankirin ile etkilesen bir tek geçisli tip-1 transmembran proteini olarak tanimlanmaktadir. Antisens hNRCAM natif hNRCAM ifadesinin zayiflamasina, hücre morfolojisinde degisimlere, hücre proliferasyon hizinin azalmasina hücre döngüsünün uzamasina neden olmaktadir. Ayrica, bu hücrelerde antisens hNRCAM asiri ifadesi in vitro kosullarda yumusak agar koloni sayisinin büyük ölçüde azalmasina ve ekstrasellüler matriks (ECM) jeli üzerinden istilalara yol açmaktadir. Çiplak farelere subkutan antisens hNRCAM asiri ifade eden glioblastoma hücreleri enjekte edildiginde tümör olusumu yalnizca transfekte hücrelerden olusan vektöre kiyasla tamamen engellenmektedir. Çiplak farelerde antisens hNRCAM ifade eden plazmidin in vivo intratümöral enjeksiyonu da yavas tümör büyümesine neden olmaktadir (Sehgal et al., 1999). Gen spesifik RT-PCR analizleri, hNRCAM'nin yüksek dereceli astrositom, glioma ve glioblastoma tümör dokularinda normal beyin dokusuna kiyasla asiri ifade edildigini ortaya koymustur (Sehgal et al., 1998). Immünoglobülin benzeri hücre adezyonu ailesine ait bir hücre-hücre adezyon molekülü olan ve nöronal büyüme ve yönlendirmeye iliskin islevi bilinen NRCAM, kisa bir süre önce insan melanom ve kolon karsinomu hücrelerinde ve dokularinda beta-katenin sinyalizasyonunun hedef geni olarak tanimlanmistir. Fibroblastlara retroviral aracili NRCAM aktarilmasi, hücre motilitesi ve tümörigenez indüklemektedir (Conacci-Sorrell et al., 2005). NRCAM transkripsiyonunun beta-katenin veya plakoglobin ile indüklenmesi, olasilikla hücre büyümesini ve motilitesini desteklemek suretiyle, melanom ve kolon kanseri tümörigenezinde rol oynamaktadir (Conacci-Sorrell et al., 2002). Ayni sekilde, beta-katenin sinyalizasyonunda yer alan örnegin MYC gibi diger hedefler de yukari regüle edilmektedir (Liu et al., 2008). NrCAM insan papiller tiroit karsinomlarinda tüm evrelerde mRNA ve protein düzeyinde asiri ifade edilir (Gorka et al., 2007). Ependimoinalarda NRCAM mRNA'nin tümörde asiri ifadesi yüksek proliferasyon indeksleri ve kötü sonuçlarla iliskilidir (Zangeii et al., 2007). Podoplanin (PDPN) PDPN insan dokularinda kapsamli dagilim gösteren, müsin benzeri bir tip-I integral membran glikoproteinidir. Kanser hücresi göçüne, istilasina, metastazisine ve malignant progresyona katki sagladigi gibi trombosit agregasyonunda da rol oynar. CLEC-2 podoplaninin tanimlanan ilk patofizyolojik reseptörüdür (Kato et al., 2008). 115 glioblastoma, anti-PDPN antikoru kullanilarak immünohistokimya yöntemiyle incelenmistir. Glioblastomalarin yüzde 47'sinde, özellikle nekrotik bölgelerin ve çogalan endotelyal hücrelerin çevresinde olmak üzere, hücre yüzeyinde PDPN ifade edilmistir. Ayrica, glioblastomada PDPN mRNA ve protein ifadesi de anaplastik astrositomlara kiyasla belirgin biçimde yüksektir, bu da PDPN ifadesinin astrositik malignansiyle iliskili olabilecegini düsündürinektedir (Mishima et al., 2006). Diger analizlerde de PDPN'nin glioblastomalarin yüzde 82,9'unda (29/35) ifade edildigi gösterilmistir (Shibahara et al., 2006). Glioblastoma hücre hatlarinda PDPN ifadesi ve trombosit agregasyonu etkinliginin incelendigi bir çalismada LN319 yüksek düzeyde PDPN ifade etmis ve trombosit agregasyonu indüklemistir. Yüksek düzeyde reaktif bir anti-PDPN antikoru olan NZ-l LN319 hattinda trombosit agregasyonunu nötrlestirmis ve (Kato et al., 2006) tarafindan indüklenen trombosit agregasyonunun temel nedeninin PDPN oldugu kanisini güçlendirmistir. Iminünohistokimya ile kanitlandigi üzere, glioblastomalarda PDPN gen ifadesi düzeyleri neoplastik olmayan beyaz maddeye göre belirgin ölçüde yüksektir (Scrideli et al., 2008). PDPN kültürde ve tümör iliskili lenfanjiogenezde lenfatik endotelyal hücreler tarafindan spesifik olarak ifade edilmekte, kan vasküler endotelyal hücreler tarafindan ise edilmemektedir. Normal insan epidermisinde aslinda PDPN bulunmamasina karsin 28 skuamöz hücre karsinomunun 22'sinde ifadesinin güçlü bir sekilde indüklendigi görülmüs ve PDPN'nin tümör progresyonunda rol oynadigi düsünülmüstür (Schacht et al., 2005). PDPN bir dizi insan karsinomunun istila cephesinde yukari regüledir. PDPN ifadesinin kültive insan meme kanseri hücrelerinde, pankreatik beta hücre karsinogenezine yönelik bir fare modelinde ve insan kanser biyopsilerinde incelendigi çalismalar PDPN'nin in vitro ve in Vivo kosullarda tümör hücresi istilasini destekledigini göstermektedir. PDPN küçük Rho ailesi GTPazlarinin etkinligini asagi regüle ederek filopodi yoluyla kollektif hücre göçünü indüklemektedir. Sonuçta, PDPN epitelyal-mezenkimal geçisin yoklugunda tümör hücresi istilasi için alternatif bir yolak indüklemektedir (Wicki et al., 2006) kolorektal tümör hastalarinin çogunda PDPN ifade düzeyi yüksektir (Kato et al., 2003) TGF-beta'nin tüinör hücrelerinde PDPN'nin fizyolojik düzenleyicisi oldugu düsünülmektedir (Suzuki et al., 2008) PDPN özofagus, akciger, karaciger, kolon ve memeden türetilen kanser hücrelerinde ve lenfatik endotelyal hücrelerde ifade edilmektedir (Kono et al., 2007). Tenascin C (hexabrachion) (TNC) Ekstrasellüler matriks (ESM) glikoproteini TNC'nin normal beyin dokusunun aksine glioblastomada ifade edilmesi ve glioblastoma proliferatif endotelyum bazal membranla iliskili olmasi daha 1983'te TNC'nin gliomalar için yararli bir belirteç olabilecegini düsündürmüstür (Bourdon et al., 1983). Tümör progresyonu sirasinda tümör dokusunun ESM'si yeniden biçimlendirilir ve artik tümör progresyonu için daha geçirgen bir ortam saglanir, burada kritik asama anjiogenezdir (Carnemolla et al., 1999). TNC yüksek proliferatif indekse sahip tümör damarlarinda asiri düzeyde ifade edilir, bu da TNCSnin neoplastik anjiyogenezle baglantili olduguna isaret etmektedir (Kim et al., 2000). Tümörlerde TNC ifadesi hipoksi tarafindan indüklenir (Lal et al., 2001). TNC indüksiyonuna TGF-betal aracilik eder, böylece yüksek dereceli gliomalarin saglikli parankimi istilasi için bir mekanizma saglanir (Hau et al., 2006). Asiri TNC ifadesi ayni zamanda tenascin-C gen promotörünün, insan glioblastoina hücrelerinin göçünü önemli ölçüde modüle ettigi bilinen gastrin tarafindan spesifik olarak etkinlestirilmesinin bir sonucudur (Kucharczak et al., 2001). TNC tropomiyosin-lî asagi regüle eder ve dolayisiyla aktin stres fiberlerinin destabilizasyonuna yol açar. Buna ek olarak Dickkopfl Wnt inhibitörünün asagi regülasyonuna neden olur. Azalmis tropomiyosin-l ifadesi ile artmis Wnt sinyallemesi transformasyon ve tümörigenez ile yakindan baglantili oldugundan, TNC bu sinyalizasyon yollarini spesifik olarak modüle ederek glioma hücrelerinin proliferasyonunu artirmaktadir (Ruiz et al., 2004). Glioblastoma dokularinda tümörü besleyen kan damarlarinin çevresinde perivasküler TNC boyanmasi gözlenmektedir, oysa WHOII ve [II gliomalarda perivasküler TNC boyanmasi daha seyrek görülür, dolayisiyla TNC boyama yogunlugunun tümör derecesiyle iliskili oldugu ve boyanmanin çok güçlü olmasinin kötü bir prognoza isaret ettigi düsünülmektedir (Herold- Mende et al., 2002; Zukiel et al., 2006). En yüksek TNC ifadesi tümörleri çevreleyen bag dokuda gözlenmistir (Chiquet-Ehrismann and Tucker, 2004). TNC ayni zamanda subventriküler bölgede (SVZ) bir kök hücre nisinin olusumuna katki saglayarak nöral kök hücre gelisimini hizlandirmak amaciyla büyüme faktörü sinyalizasyonunu düzenleyici bir etkinlik göstermektedir. TNC nöral kök hücrelerde EGFR ifadesinin zamaninda gerçeklesmesi için elzem olup FGF2 sinyalizasyonunu güçlendirir. TNCsnin SVZ'deki hücreler üzerindeki predominant etkisi, gelisimsel progresyonun regülasyonudur (Garcion et al., en güçlü indükleyicisidir. Dolayisiyla, tümör tarafindan üretilen ECM, NSC°nin saçilmis tümör hücrelerine yönelimi için permisif bir ortam hazirlar (Ziu et al., 2006). TNC yolagi meme tümörünün büyümesi ve metastazisinde de önemli bir rol oynar. Nitekim, MDA-MB-435 hücrelerinde TNC'nin bloke edilmesi veya çöktürülmesi hücre göçünde ve ankrajdan bagimsiz hücre proliferasyonunda önemli bozulmalara yol açmaktadir. TNC ifadesi düsük klonal MDA-MB-435 hücreleri enjekte edilen farelerde primer tümörün büyümesi anlamli biçimde yavaslamis, primer tümörün cerrahiyle çikarilmasi sonrasinda tümör relapsinda ve akciger metastazi insidansinda azalma gözlenmistir (Calvo et al., 2008). Survivin (BIRCS) Apoptozis proteini inhibitörü (IAP) familyasinin bir üyesi olan BlRCS'in (surViVin) ifadesi fetal dokularda ve insanda gelisen çesitli kanserlerde artmakta, normal farklilasmis eriskin hücrelerinde ise, hele proliferasyon indeksi düsükse, büyük ölçüde azalmaktadir. Survivin görünüse göre gerek hücre proliferasyonunu, gerek apoptotik hücre ölümünü düzenleme yetenegine sahiptir. Her ne kadar survivin normal olarak hücrenin sitoplazmik bölgesinde lokalize edilmekte ve kanserde kötü bir prognozla iliskilendirilmekteyse de, olumlu bir prognozu isaret eden nükleer lokalizasyonlar da bildirilmistir (O'Driscoll et al., 2003). Survivinin düzenlenmesi ve survivin araciligiyla düzenleme birkaç mekanizmayla açiklanmistir. Görünüse göre, survivin moleküler saperon Hsp60 ile iliskilidir, In vivo kosullarda, Hsp60 primer insan tümörlerinde karsilik gelen normal dokulara kiyasla çok daha fazla ifade edilmektedir. Hsp60'in küçük engelleyici RNA ile akut ablasyonu mitokondrialardaki survivin havuzunu destabilize etmekte, mitokondrial fonksiyonun bozulmasina yol açmakta ve kaspaz bagimli apoptozisi aktiflestirmektedir. (Ghosh et al., 2008) Bunun ötesinde, survivinin apoptozis üzerindeki "frenleyici" etkisinin kalkmasi ve mitokondrial apoptotik yolagm aktiflestirilmesiyle, Ras inhibisyonu meydana gelmektedir. Özellikle glioblastomda apoptozis direnci, survivini hedef alan bir Ras inhibitörü tarafindan ortadan kaldirilmaktadir. (Blum et al., 2006). Ayrica, görünüse göre, gliomalarda NF-kappaB hiperaktivitesi ile NF-kappaB hedef genlerinden birisini olusturan survivinin hiperekspresyonu arasinda bir iliski bulunmaktadir. Yani, NF-kappaB tarafindan aktiflestirilen anti-apoptotik genler tümör numunelerinde asiri ifade edilmektedir. Özellikle glioblastoinda çok yüksek survivin ifade düzeyleri tespit edilmistir (Angileri et al., 2008). Beyin gliomalarindaki asiri survivin ifadelerinin malign proliferasyonda, anti-apoptoziste ve anjiyogenezde önemli bir rol oynayabilecegi öne sürülinüstür (Zhen et al., 2005; Liu et al., 2006b). Survivin ifadesini ve onun glioblastomda sagkalim üzerindeki etkisini incelemek için çok sayida analiz gerçeklestirilmistir. Özetle, survivin ifadesi, özellikle astrositik tümörlerde hücre çekirdeginde ve sitoplazmada es zamanli olarak izlenen ifade, anlamli bir biçimde malignite derecesiyle (en yüksek survivin ifadesi glioblastomda olmak üzere) ve genel sagkalim sürelerinin survivin negatif tümörlü hastalara kiyasla daha kisa olmasiyla Asiri survivin ifadesi diger tümör olusumlari için de bildirilmistir. Meme kanserinde survivin ifadesi daha yüksek hastalik derecesi ve daha kisa hastaliksiz sagkalim süresiyle Özofagus kanser hücresi çizgilerinde survivinin promotör aktivitesinin normal dokulara kiyasla 28,5 kat arttigi gösterilmistir (Sato et al., 2006). Kolorektal kanserde de patolojik derece ve lenf dügümü metastazlari survivin ifadesiyle baglantilidir (Tan et al., 2005). Berrak hücreli böbrek hücresi kanserinin agresiflik derecesinin survivin ifadesi ile iliskili oldugu gösterilmistir. Ayrica, survivin ifadesi kanser spesifik sagkalimla ters orantilidir (Kosari et al., 2005). Survivin ifadesi bir keratinositik neoplazma grubunda ve hiperproliferatif deri lezyonlarinda tespit edilmekte, ancak normal deride görülmemektedir (Bowen et al., 2004). Pankreas kanseri hücre hatlarinda survivin incelenen hücre hatlarinin %58'inde yüksek bulunmustur. (Mahlamaki et al., 2002). Skuamöz hücre kanserinde survivin ifadesi daha agresif ve invaziv klinik fenotipleri tanimlamaya yardimci olabilir (Lo et al., 2001). Survivinin kanser tedavisinde bu derece umut verici bir hedef olmasi nedeniyle survivinden türetilmis peptitlerle çalismalar yapilinis ve survivinin tüinör hastalarinda immünojenik oldugu ve CD8+ T hücresi aracili yanitlar olusturdugu gösterilinistir. Survivin bunun yani sira, ayni hastalardan alinan kan numunelerinde CD4+ T hücresi reaktifligini de spesifik olarak uyarmistir (Casati et al., 2003; Piesche et al., 2007). Survivin (SVN, BIRC) pek çok kanser olgusunda asiri ifade edilmektedir. Dolayisiyla, survivin asiri ifadesinin daha kisa genel sagkalim süreleri ve daha yüksek malignite ile iliskili oldugu düsünülmektedir. Mevcut bulusa ait antikorlar poliklonal antikorlar, monoklonal antikorlar ve/veya kimerik antikorlar olabilir. Mevcut bulusa ait bir monoklonal antikoru üreten ölümsüz hücre hatlari da Bulusun diger bir yönü bulusa ait bir HLA kisitli antijen ile kompleks olusturmus bir klas I insan majör histokompatibilite kompleksine (MHC) spesifik olarak baglanan bir antikor ile (bundan böyle "kompleks spesifik antikor" olarak da anilacaktir) ilgilidir. Bir HLA kisitli antijen ile kompleks olusturmus bir klas 1 veya 11 insan majör histokompatibilite kompleksine (MHC) spesifik olarak baglanan söz konusu antikorun üretilmesine yönelik bir yöntem ifsa edilmekte olup, yöntem: genetik mühendislik isleminden geçirilmis, insan olmayan ve söz konusu klas 1 veya II insan majör histokompatibilite kompleksini (MHC) ifade eden hücreler içeren bir memelinin söz konusu HLA kisitli antijen ile kompleks olusturmus MHC klas 1 veya 11 molekülünün çözünür bir sekli ile asilanmasindan; söz konusu insan olinayan memelinin antikor üreten hücrelerinden mRNA molekülleri izole edilmesinden; söz konusu protein molekülü tarafindan kodlanan protein moleküllerini görüntüleyen bir faj gösterim kitapligi olusturulmasindan ve söz konusu faj gösterim kitapligindan en az bir fajin, yani söz konusu HLA kisitli antijen ile kompleks olusturmus söz konusu klas 1 veya II insan majör10 histokompatibilite kompleksine (MHC) spesifik olarak baglanabilen söz konusu antikoru gösteren en az bir fajin izole edilmesinden olusmaktadir. Bu tür antikorlarin ve tek zincirli klas l majör histokompatibilite komplekslerinin ve bu antikorlarin üretimiyle ilgili araçlarin 03/070752 ve Cohen CJ, Denkberg G, Lev A, Epel M, Reiter Y. Recombinant antibodies With MHC-restricted, peptide-specific, T-cell receptor-like specificity: new tools to study antigen 32.; Denkberg G, Lev A, Eisenbach L, Benhar I, Reiter Y. Selective targeting of melanoma and APCs using a recombinant antibody with TCR-like specificity directed toward a Sarig O, Yainano Y, Tomaru U, Jacobson S, Reiter Y. Direct phenotypic analysis of human MHC class l antigen presentation: visualization, quantitation, and in situ detection of human viral epitopes using peptide-specific, MHC-restricted human recombinant antibodies. J Antikor tercihen 20 nanomolar'in altinda, tercihen 10 nanomolar'in altinda bir baglanma afinitesiyle koinplekse baglanir, bu, mevcut bulus baglaminda "spesifik" olarak kabul edilir. monoklonal antikorlari kapsamaktadir. "Antikorlar" terimi saglam immünoglobulin moleküllerinin yani sira, burada tarif edilen gerekli niteliklerden (örn., yukaridaki gibi, kompleks spesifik bir antikor olina, bir toksini bir kanser, tercihen bir glioblastoma belirteç genini yükselmis düzeyde ifade eden bir kanser hücresine tasima ve/veya survivin gibi bir kanser belirteç polipeptidinin aktivitesini baskilama) herhangi birine sahip olmak kosuluyla, bu immünoglobulin moleküllerinin fragman veya polimerlerini ve iminünoglobulin moleküllerinin insanlastirilmis versiyonlarini da kapsamaktadir. Mevcut bulusa ait antikorlar mümkün oldugunca ticari kaynaklardan temin edilebilir. Bulusa ait antikorlari iyi bilinen yöntemleri kullanarak üretmek de mümkündür. Yetkin bir uzman, antikorlari ifsa edildigi sekliyle olusturmak için tam uzunlukta glioblastoma belirteç polipeptitlerinin mi yoksa onun fragmanlarinin mi kullanilmasi gerektigini bilir. Ifsa edildigi sekliyle bir antikoiu olusturmak için kullanilan bir polipeptit dogal bir kaynaktan kismen veya tamamen saflastirilmis olabilir ya da rekombinant DNA teknikleri kullanilarak üretilmis olabilir Örnegin, bir BCA, CLIP2, DTNA, NLGNAX, NR2E1, NRCAM veya PDPN polipeptidini veya onun bir fragmanini kodlayan bir cDNA prokaryotik hücrelerde (örn. bakteriler) veya ökaryotik hücrelerde (örn. maya, böcek veya memeli hücresi) ifade edilebilir, ardindan rekombinant protein saflastirilarak antikoru olusturmak için kullanilan glioblastoma belirteç polipeptidine spesifik olarak baglanan bir monoklonal veya poliklonal antikor preparasyonu elde edilir. Teknolojide deneyimli bir kisi iki veya daha fazla farkli monoklonal veya poliklonal antikor seti olusturulmasinin öngörülen kullanim amaci (örn. ELISA, immünohistokimya, in vivo görüntüleme, immünotoksin tedavisi) için gereken spesifiteye ve afiniteye sahip bir antikor elde etme olasiligini maksimum düzeye çikaracagini bilecektir. Antikorlar bilinen yöntemler araciligiyla, antikorlarin kullanilacagi amaç dogrultusunda (örn. ELISA, immünohistokimya, immünoterapi vs.; antikor olusturmaya ve test etmeye yönelik daha fazla yönlendirici bilgi için örn., bakiniz Harlow ve Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988) arzu edilen aktiviteleri bakimindan test edilir. Örnegin, antikorlar ELISA deneyleriyle, Western blot deneyleriyle, formalin ile fikse edilmis glioblastomalarin veya dondurulmus doku kesitlerinin immünohistokimyasal yöntemle boyanmasiyla test edilebilir. Ilk in vitro karakterizasyonun ardindan terapötik veya in vivo tanisal kullanim için öngörülen antikorlar bilinen klinik test yöntemlerine göre test Burada kullanilan "monoklonal antikor" terimi, büyük ölçüde homojen bir popülasyondan seçilmis bir antikoru tanimlar, yani popülasyonu olusturan bireysel antikorlar, küçük miktarlarda mevcut olan olasi dogal inutasyonlar disinda özdestir. Söz konusu monoklonal antikorlar burada spesifik olarak "kimerik" antikorlari ve arzu edilen antagonistik etkinligi göstermek kosuluyla, bunlarin fragmanlarini da kapsamaktadir; bunlarda agir ve/veya hafif zincirin bir bölümü belli bir türden türetilen veya belli bir antikor sinifina ya da alt sinifina ait olan bir antikorun karsilik gelen dizinleriyle özdes veya homolog, zincir(ler)in geriye kalan kismi ise baska bir türden türetilen veya baska bir antikor sinifina ya da alt sinifina ait olan bir antikorun karsilik gelen dizinleriyle özdes veya homologdur (A.B.D. Pat. No. 4,816,567). Bulusa ait antikorlari hibridoina yöntemleri kullanarak hazirlamak da mümkündür. Bir hibridoma yönteminde bir fare veya diger bir uygun konak hayvan immünize edici bir ajanla asilanir, bunun amaci, spesifik olarak immünize edici ajana baglanan antikorlari üretme yetenegine sahip lenfositler elde etmektir. Lenfositler alternatif olarak in vitro kosullarda da immünize edilebilir. Monoklonal antikorlar 4,816,567 no'lu ABD patentinde açiklanan rekoinbinant DNA yöntemleriyle de olusturulabilir. Bulusa ait monoklonal antikorlari kodlayan DNA konvansiyonel prosedürler araciligiyla (öm. murin antikorlarinin agir ve hafif Zincirlerini kodlayan genlere spesifik olarak baglanabilen oligonükleotid problari kullanilarak) kolayca izole edilebilir ve dizini belirlenebilir Monovalent antikorlari hazirlamak için in vitro yöntemler de uygundur. Antikorlarin fragmanlarini, özellikle Fab fragmanlarim olusturmak amaciyla sindirilmesi teknolojide bilinen rutin teknikler kullanilarak gerçeklestirilebilir. Örnegin, sindirme islemi papain kullanilarak yerine getirilebilir. Papain sindirimine iliskin örnekler 22.12.1994 tarihinde olarak, antikorlarin papain ile sindirilmesi Fag fragmanlari adi verilen ve her biri tek bir antijen baglama yeri ile bir rezidüel Fe fragmanina sahip olan iki özdes antijen baglayan fragman olusturur. Pepsinle yapilan islem iki antijen kombine yeri olan, yani antijenle çapraz bag olusturma yetenegini yitirmemis olan bir fragman saglar. Antikor fragmanlari, diger dizinlere baglanmis olsun veya olmasin, belli bölgelerde veya spesifik amino asit kalintilarinda, fragmanin aktivitesinin modifiye edilmemis antikora veya antikor fragmanina kiyasla önemli ölçüde degismemesi veya bozulmamasi kosuluyla, insersiyonlar, delesyonlar, sübstitüsyonlar veya seçili baska modifikasyonlar da içerebilir Bu modifikasyonlar ek özellikler saglayabilir, örnegin biyolojik ömrünü uzatmak veya salgisal özelliklerini degistirmek amaciyla disülfid bagi olusturma yetenegine sahip amino asitlerin çikarilmasi/eklenmesi gibi. Antikor fragmani her halükarda, örnegin baglanma aktivitesi, veya baglanma domaininde baglanmanin düzenlenmesi vs. gibi bir biyoaktif özellige sahip olmalidir. Proteinin spesifik bölgeleri mutageneze tabi tutularak antikorun islevsel veya aktif bölgeleri belirlenebilir ve ifade edildikten sonra ifade edilen polipeptit test edilir. Antikor fragmanini kodlayan nükleik asidin bölgeye özel mutagenezini de kapsayan bu yöntemler teknolojide yetkin bir pratisyen tarafindan kolayca anlasilir. Bulusa ait antikorlar ayrica insanlastirilmis antikorlar veya insan antikorlari da içerebilir. Insan kökenli olmayan (örn. murin) antikorlarin insanlastirilmis sekilleri, insan kökenli olmayan immünoglobülinden türetilmis asgari düzeyde bir dizin içeren kimerik immünoglobülinler, immünoglobülin zincirleri veya bunlarin fragmanlaridir (örnegin Fv, Fab, Fab' veya diger antijen baglayan antikor alt dizinleri). lnsansi özellikler kazandirilinis antikorlar, alicinin (alici antikoru) tainamlayicilik belirleine bölgelerinde (CDR) kalintilarin, fare, siçan veya tavsan gibi, insan kökenli olmayan (donör antikoru) ve arzu edilen spesifite, afinite ve kapasiteye sahip olan antikorlarin CDR bölgelerinden alinmis kalintilarla degistirildigi insan immünoglobülinleri içerir. Bazi durumlarda, insan immünoglobülininin FV çerçeve (FR) kalintilari karsilik gelen, insan kökenli olmayan kalintilarla degistirilmistir. Insansi özellikler kazandirilmis antikorlar hem alici antikorunda, hem de disaridan alinan CDR'de veya çerçeve dizininde bulunmayan kalintilar da içerebilir. Genellikle, insanlastirilmis antikor esas olarak hepsinden en az bir olmak üzere, tipik olarak iki degisken domain içerir, bunlardan birinde CDR bölgelerinin tümü ya da büyük ölçüde tümü insan kökenli olmayan immünoglobülinin, Fr bölgelerinin tümü ya da büyük ölçüde tümü ise insan immünoglobülininin konsensüs dizilerine karsilik gelir. En ideal olarak, insanlastirilmis antikor, tipik olarak insan immünoglobülininden olmak üzere, sabit immünoglobülin bölgesinden (Fc) en az bir bölüm içerir. Insan kökenli olmayan antikorlari insanlastirmaya yönelik yöntemler teknolojide iyi bilinmektedir. Genel olarak, insanlastirilmis bir antikor insan kökenli olmayan bir kaynaktan alinmis bir veya birden fazla amino asit kalintisi içerir. Insan kökenli olinayan bu amino asit kalintilari tipik olarak "disaridan gelen" bir degisken domainden alinir ve "disaridan gelen" kalintilar olarak adlandirilir. Insanlastirma özünde, rodent CDR'lerinin veya CDR dizinlerinin bir insan antikorunda karsilik gelen dizinlerin yerine geçirilmesi seklinde gerçeklestirilir. Buna göre, bu tür "insanlastirilmis" antikorlar kimerik antikorlar olup (ABD Pat. No.4,816,567), burada saglam bir insan degisken domaininden oldukça küçük bir parça insan Olmayan bir türden elde edilen karsilik gelen parçayla degistirilmistir. Insanlastirilmis antikorlar pratikte tipik insan antikorlari olup içerdikleri bazi CDR kalintilari ve olasilikla bazi FR kalintilari rodent antikorlarinin karsilik gelen bölgelerinden alinan kalintilarla degistirilmistir. Immünizasyon üzerine endojen immünoglobülin üretimi yapmadan insan antikorlarinin tüm repertuarini üretebilme yetenegine sahip transgenik hayvanlar (örn. fare) kullanilabilir. Örnegin, kimerik ve germline farelerde antikor agir zincirinin baglanti bölgesinin homozigot delesyonunun endojen antikor üretimini tamamen baskiladigi tarif edilmistir. Bu tür germline mutant farelere insan germline immünoglobülin gen dizilerinin aktarilmasi, antijen uyarimi üzerine insan antikorlarinin üretilmesini saglayacaktir. Insan antikorlari faj gösterim kitapliklarinda da üretilebilir. Bulusa ait antikorlar bir bireye tercihen farmasötik açidan kabul görmüs bir tasiyici araciligiyla verilir. Tipik olarak, formülasyonda uygun miktarda farmasötik açidan kabul görmüs bir tasiyici kullanilarak formülasyon izotonik hale getirilir. Farmasötik açidan kabul görmüs bir tasiyici için örnekler salin, Ringer solüsyonu ve dekstroz solüsyonudur. Solüsyonun pH degeri tercihen yaklasik 5 ilâ 8 arasinda, daha tercihli olarak yaklasik 7 ile yaklasik 7,5 arasindadir. Daha baska tasiyicilar arasinda sürekli salim preparasyonlari, örnegin antikoru içeren kati hidrofobik polimerlerden olusan yarigeçirgen matriksler bulunmakta olup, matriksler film, Iipozom veya mikropartiküller gibi sekillendirilmis nesnelerden olusur. Teknolojide deneyimli kisiler için bazi tasiyicilarin örnegin verilis yoluna ve verilen antikorun konsantrasyonuna bagli olarak daha tercihli olacagi asikardir. Antikorlar bireye, hastaya veya hücreye enjeksiyon (örn. intravenöz, intraperitoneal, subkutan, intramüsküler) veya maddenin etkin biçimde kan dolasiinina uygulanmasini saglayan inlîizyon gibi diger bir yöntem araciligiyla verilebilir. Antikorlar, hem lokal hem de sistemik tedavi yollarini kullanmak için intratümöral veya peritümöral olarak da uygulanabilirler. Lokal veya intravenöz enjeksiyon tercih edilmektedir. Antikorlarin verilmesine iliskin etkin dozajlar ve zaman çizelgeleri deneysel olarak belirlenebilir, bu belirlenimler teknoloji deneyiminin kapsamindadir. Teknolojide deneyimli kisiler uygulanmasi gereken antikor dozaj inin örnegin antikoru alacak olan birey, verilis yolu, kullanilan antikorun tipi ve verilen diger ilaçlar gibi faktörlere bagli olarak degisecegini bilir. Antibodies in Human Diagnosis and Therapy, Haber ve ark., eds. Raven Press, New York edilen faktörlere bagli olarak, günde yaklasik 1 tig/kg vücut agirligindan 100 mg/kg ve fazlasina kadar ulasabilir. Antikorun glioblastoma tedavisi amaciyla uygulanmasinin ardindan terapötik antikorun etkinligi yetkin bir pratisyen tarafindan bilinen çesitli yöntemlerle degerlendirilebilir. Örnegin, bir bireydeki glioblastoma büyüklügü, sayisi ve/veya dagilimi standart tümör görüntüleme teknikleri araciligiyla gözetimlenebilir. Terapötik amaçla uygulanan bir antikor, hastaligin antikor verilmeden izleyecegi seyre kiyasla tümör büyümesini durduruyor, tümörün büzülmesini sagliyor ve/Veya yeni tümörlerin gelismesini engelliyorsa, glioblastoma tedavisi için etkili bir antikordur. Antisens tedavisinin prensibi, genomik DNA veya mRNA ile tamamlayici bir antisens tür arasinda hücre içi hibridizasyon olusturarak gen ifadesini (transkripsiyon veya translasyon araciligiyla) dizine özgü bir biçimde baskilamanin mümkün oldugu hipotezine dayanmaktadir. Bu tür bir hibrit nükleik asit dubleksinin olusmasi hedef tümör antijenini kodlayan genomik DNA'nin transkripsiyonunu ya da hedef tümör antijen mRNA'sinin islenmesini/tas1nmas1n1/translasy0nunu ve/veya stabilitesini olumsuz etkiler. Antisens nükleik asitler çesitli yaklasimlarla uygulanabilir. Örnegin, antisens oligonükleotidler veya antisens RNA bir bireye tümör hücreleri tarafindan emilmesini saglayacak bir sekilde dogrudan verilebilir (öm. intravenöz enjeksiyonla). Alternatif olarak, antisens RNA'yi (veya RNA fragmanlarini) kodlayan viral veya plazmid vektörler in vivo kosullarda hücrelerin içine aktarilir. Antisens etkiler sens dizinler araciligiyla da indüklenebilir, ancak fenotipik degisikliklerin kapsami çok çesitlidir. Etkin bir antisens tedavisinin indükledigi fenotipik degisilikler, mRNA düzeyleri, hedef protein düzeyleri ve/Veya hedef protein aktivitesi düzeyleri gibi parametrelerde gerçeklesen degisikliklere göre degerlendirilir. Özel bir örnekte, glioblastoma belirteci islevinin baskilanmasi, bireye dogrudan antisens glioblastoma belirteci RNA'si verilerek antisens gen tedavisi yöntemiyle gerçeklestirilebilir. Antisens tümör belirteç RNA'si herhangi bir standart teknikle üretilebilir ve izole edilebilir, ancak en kolay üretim yolu antisens tümör belirteç cDNA'sinin yüksek verimli bir proinotör (örn. T7 promotörü) kontrolünde in vitro transkripsiyonudur. Antisens tümör belirteç RNA'sinin hücrelere verilmesi, asagidaki dogrudan nükleik asit uygulama yöntemlerinden herhangi biri kullanilarak gerçeklestirilebilir. Gen tedavisi kullanilarak BCA, CLIPZ, DTNA, NLGNAX, NR2E1, NRCAM ve/veya PDPN islevinin baskilaninasina yönelik diger bir strateji, bir anti- BCA, CLIP2, DTNA, NLGNAX, NR2E1, NRCAM veya PDPN antikorunun veya bir anti- BCA, CLIPZ, DTNA, NLGNAX, NR2E1, NRCAM veya PDPN antikorunun bir bölümünün hücre içinde ifade edilmesini içerir. Örnegin, bir BCA, CLIPZ, DTNA, NLGNAX, NRZEl, NRCAM veya PDPN polipeptidine spesifik olarak baglanan ve biyolojik etkinligini baskilayan bir inonoklonal antikoru kodlayan gen (veya gen fragmani), bir nükleik asit ifade vektörü kapsamindaki spesifik (örn. doku veya tümör spesifik) bir gen düzenleyici dizinin transkripsiyonel kontrolü altina verilir. Ardindan vektör, glioblastoma hücreleri veya diger hücreler tarafindan emilecek sekilde bireye uygulanir ve bunlar anti- BCA, CLIPZ, DTNA, NLGNAX, NR2E1, NRCAM veya PDPN antikorunu salgilamaya baslayarak BCA, CLIP2, DTNA, NLGNAX, NRZEI, NRCAM ve PDPN polipeptidinin biyolojik etkinligini bloke ederler. Tercihen, BCA, CLIP2, DTNA, NLGNAX, NR2E1, NRCAM ve PDPN polipeptitleri glioblastoma hücrelerinin ekstrasellüler yüzeyinde yer alir. Yukarida açiklanan ve eksojen DNA'nin bir bireye verilmesini ve hücrelerine girmesini kapsayan yöntemlerde (örn. transdüksiyon veya transfeksiyon) ifsa edildigi sekliyle nükleik asitler çiplak DNA seklinde olabilir veya nükleik asitler glioblastoma belirteç proteininin ifadesini baskilamak için nükleik asitleri hücrelere iletme amaçli bir vektörün içinde yer alabilir. Vektör piyasada satilan bir preparasyon, örnegin bir adenovirüs vektörü (Quantum Biotechnologies, Inc. (Laval, Quebec, Kanada) olabilir. Nükleik asitlerin veya vektörlerin hücrelere aktarimi çesitli mekanizmalar araciligiyla gerçeklestirilebilir. Bir örnekte aktarim, lipozom araciligiya, piyasada satilan LIPOFECTIN, LIPOFECTAMINE (GlBCO-25 BRL, TRANSFECTAM (Promega Biotec, Inc., Madison, Wis., ABD) gibi Iipozomlar ya da teknolojinin standart prosedürlerine göre hazirlanmis diger Iipozomlar kullanilarak gerçeklestirilebilir. Buna ek olarak, ifsa edildigi sekliyle nükleik asit veya vektör in vivo kosullarda, teknolojisi Genetronics, Inc. (San Diego, Calif., ABD) firmasindan temin edilebilen elektroporasyon yöntemi ya da SONOPORATION (ImaRx Pharmaceutical Corp., Tucson, Ariz., ABD) makinesiyle de aktarilabilir. Bir örnekte, vektör aktarimi bir viral sistein araciligiyla, örnegin bir rekombinant retroviral genomu kapsayabilen bir retroviral vektör sistemiyle gerçeklestirilebilir. Ardindan rekoinbinant retrovirüsle enfeksiyon gerçeklestirilerek enfekte olan hücreye BCA, CLIP2, DTNA, NLGNAX, NR2El, NRCAM veya PDPN'nin ifadesini baskilayan antisens nükleik asit aktarilir. Degistirilmis nükleik asidi memeli hücrelerine aktarmak amaciyla kullanilan kesin yöntem elbetteki yalnizca retroviral vektörlerin kullanimiyla kisitli degildir. Bu prosedür için yaygin sekilde kullanilan diger teknolojiler adenoviral vektörlerin, adeno iliskili viral (AAV) vektörlerin, lentiviral vektörlerin, psödotipli retroviral vektörlerin kullanimini da kapsar. Lipozomla aktarim ve reseptör aracili veya diger endositoz mekanizmalari gibi fiziksel transdüksiyon teknikleri de kullanilabilir.10 Mevcut bulus SEQ ID NO: 10'a uygun amino asit dizininden olusan bir peptit saglamaktadir. Mevcut bulusa ait peptit insan majör histokompatibilite kompleksi (MHC) klas 1'in bir molekülüne baglanma yetenegine sahiptir. Mevcut bulusta "homolog" terimi, iki amino asit dizininin, örnegin peptit veya polipeptit dizinlerinin, dizinler arasindaki özdeslik derecesini belirtir. Yukarida sözü geçen "homoloji", karsilastirilacak dizinler üzerine optimal kosullarda hizalanmis iki dizinin karsilastirilmasi yoluyla belirlenir. Burada, iki dizinin optimum biçimde hizalanmasiyla karsilastirilan dizinlerde bir eklenti veya eksilme (örnegin bir bosluk ve benzeri) olabilir. Bu tür dizin (1994) kullanilarak olusturulan hizalamalardan hesaplanabilir. Piyasadan temin edilebilen dizin analizi yazilimlari, daha spesifik olan Vector NTI, GENETYX veya kamuya açik veri tabanlari tarafindan saglanan analiz araçlari. Teknolojide deneyimli bir kisi, spesifik bir peptidin bir varyantiyla indüklenen T hücrelerinin peptidin kendisiyle çapraz reaksiyona girip girmeyecegini belirleyebilir. (Fong et al., 2001); Tablo 2: SEQ ID NO: 1 ilâ 25'e uygun peptitlerin varyantlari ve motifi CSP-OOl Peptit Kodu T M L A R L A S A SEQ 1D 25 Varyantlar L 1 A G 1 1 A E Konum l 2 3 4 5 6 7 8 9 ACS-OOl Peptit Kodu K 1 M E R 1 Q V SEQ 1D 3 Varyantlar M L P tit Kodu ALWAWPSEL TLYGMLNTL tit Kodu SLNELRVLL P tit Kodu P tit Kodu GF AP-OO l FLLSEPVAL P tit Kodu NLDTLMTYV it Kodu NR2E1-001 NRCAM-OOI TNC-002 P tit Kodu SE 1D 24 V ntlar MHC klas II sunumlu peptitlerle ilgili olarak ayrica, bu peptitlerin belli bir HLA-alel spesifik motifiyle uyumlu bir amino asit dizinine sahip olan bir "çekirdek dizinden" ve opsiyonel olarak, çekirdek dizinin fonksiyonuyla etkilesimi olmayan (yani peptit ile dogal karsiligini taniyan tüm veya bir alt gruba dahil T hücresi klonlari arasindaki etkilesimle ilgisi olmayan) N ve/veya C-terminal uzantilardan olustugu bilinmektedir. N ve/Veya C terminal uzantilari, örnegin, uzunluk olarak sirasiyla 1 ilâ 10 amino asit arasinda olabilir. Bu peptitler ya dogrudan MHC klas H moleküllerini yüklemek amaciyla kullanilabilir ya da dizin asagidaki tarife göre vektörlere klonlanabilir. Bu peptitler hücre içerisindeki daha büyük peptitlerin islenmesi sonucunda meydana gelen son ürünleri olusturdugundan daha uzun peptitlerin de kullanilmasi mümkündür. MHC klas ll kisitli peptitlerde ayni çekirdek dizinine sahip olan birkaç farkli peptit MHC molekülünde sunulabilir. Taniyan T (yardimci) hücresi ile gerçeklesen etkilesim 9 ilâ 11 amino asitten olusan bir çekirdek dizin tarafindan belirlendiginden, farkli uzunluklardaki varyantlar ayni T (yardimci) hücresi klonu tarafindan taninabilir. Dolayisiyla, N veya C- uçlarini daha fazla islemeye veya kirpmaya gerek olmadan çekirdek baglanma dizininin farkli uzunluktaki birçok varyanti, MHC klas II inoleküllerini yükleinek için kullanilabilir. Buna bagli olarak, ifsa edildigi sekliyle bir peptitle çapraz reaksiyona giren T hücrelerini indükleyen dogal kökenli veya yapay varyantlar çogunlukla uzunluk varyantlaridir. Yaklasik 12 ainino asit kalintisindan daha uzun peptitler bir MHC klas Il molekülüne dogrudan baglanmak üzere kullanilirsa, HLA baglayici çekirdek bölgenin yanlarinda yer alan kalintilarin, peptidin MHC klas II molekülünün baglanti oluguna spesifik olarak baglanma yetenegini veya peptidin T (yardimci) hücrelerine sunumunu önemli ölçüde etkilemeyen kalintilar olmasi tercih edilmektedir. Öte yandan, daha önce yukarida da belirtildigi gibi, örnegin polinükleotidler tarafindan kodlanan daha büyük peptitlerin kullanilmasi olumlu karsilanmaktadir, çünkü daha büyük olan bu peptitler uygun antijen sunucu hücreler tarafindan parçalara bölünebilmektedir. Ancak `rw hallerde, çekirdek dizinin yanlarindaki bölgelerin, ayni çekirdek dizine sahip bir referans peptitle yapilan karsilastirmalarda, peptidin MHC klas ll molekülüne baglanmasini ya da diinerik MHCzpeptit kompleksinin TCR ile her iki yönde etkilesmesini etkiledigi gösterilmistir. Peptidin içindeki üçüncül yapilar (örnegin döngüler) normal olarak MHC veya TCR'ye karsi egilimlerini azaltir. Yanlardaki bölgelerin, MHC veya TCR'nin peptidin baglandigi olugun disinda kalan bölümleriyle intermoleküler etkilesimde bulunmasi etkilesimi güçlendirebilir. Bu egilim degisiklikleri bir MHC klas II peptidinin T (yardimci) hücresi yaniti indükleme potansiyeli üzerinde çarpici etkileri olabilir. Ayrica, normal olarak 8-10 amino asit uzunlugunda olan MHC klas l epitoplarini gerçek epitopu içeren daha uzun peptitleri veya proteinleri islemek yoluyla da olusturmak mümkündür. Gerçek epitopun yanlarindaki kalintilarin prosedür sirasinda gerçek epitopun açiga çikarilmasi için gerekli olan proteolitik yarma islemini ciddi bir sekilde etkilememesi tercih edilmektedir. Elbetteki, mevcut bulusa uygun peptitler insan majör histokompatibilite kompleksi (MHC) klas I'in bir molekülüne baglanma yetenegine sahip olacaktir. Bir peptidin veya bir varyantin bir MHC kompleksine baglanmasi teknolojide bilinen, örnegin literatürde degisik MHC klas 1998)). Mevcut bulusun somut bir örneginde peptit NCBI, Gen Bankasi X00497 erisim numarasindan türetilen, örnegin HLA-DR antijen iliskili degisken olmayan zincirin 80 N-terminal amino asidini içeren bir üizyon proteinidir (p33, bundan böyle "Ii") (Strubin, M. ve ark. 1984). Peptit buna ek olarak, peptit bagi olmayan baglar içerebilir. Ters peptit baginda amino asit kalintilari birbirlerine (-CO-NH-) baglariyla bagli degildir, peptit bagi tersine döndürülmüstür. Bu tür retro-invers peptidomimetikler teknolojide bilinen 3237. Bu yaklasim, omurgayi ilgilendiren ancak yan zincirlerin yönelimini kapsamayan degisimler içeren psödopeptitlerin yapimiyla ilgilidir. Meziere ve arkadaslari (1997) bu psödopeptitlerin MHC'ye baglanmasi ve T yardimci hücre yanitlari açisindan yararli oldugunu göstermislerdir. CO-NH peptit bagi yerine NH-CO bagi içeren retro invers peptitler proteolize karsi çok daha dirençlidir. Peptit bagi olmayan bir bag, örnegin, -CHz-NH, -CH2$-, -CH2CH2-, -CH=CH-, -COCH2-, - CH(OH)CH2- ve -CHZSO- bagidir. Birlesik Amerika Patenti 4.897.445'te peptit zincirlerinde peptit bagi olmayan baglarin (-CH2-NH) kati faz sentezi için bir yöntem saglanmistir, buna göre, polipeptitlerin sentezi standart yöntemlere göre gerçeklestirilmekte, peptit bagi olmayan baglar ise bir ainino aldehit ile bir amino asidin NaCNBH3 varliginda tepkimesiyle sentezlenmektedir. Peptidin degistirilmis oldugu ya da peptit bagi olmayan baglar içerdigi bir peptit bulusun tercih edilen somut bir örnegidir. Genellikle, peptitler (en azindan amino asit kalintilari arasinda peptit baglantilari içerenler) Lu ve ark. (1981) ve burada atifta bulunulan referanslar tarafindan ifsa edildigi sekilde kati faz peptit sentezinin Fmoc-poliamid modunda sentezlenebilir. Geçici N-amino grup korumasi Iluorenyl-9-methoxycarbonyl (Fmoc) grubu tarafindan saglanir. Bu yüksek baz labil koruma grubunun tekrarli yarilmasi N, N- dimetilformamid içinde % 20 piperidin kullanilarak gerçeklestirilmektedir. Yan zincir islevsellikleri butil eterler (serin, treonin ve tirosin durumunda), butil esterler (glutamik asit ve aspartik asit durumunda), butiloksikarbonil türevleri (lisin ve histidin durumunda), tritil türevi (sistein durumunda) ve 4-met0ksi-2,3,6-trimetilbenzensülfonil türevi (arginin durumunda) seklinde korunabilir. Glutamin ya da asparaginin C terminal kalintilari olmasi durumunda yan zincir amido islevselliklerini korumak için 4.4'-dimetoksi benzidril grubu kullanilmaktadir. Kati faz destegi üç monomerden, dimetil akrilamid (omurga monomeri), bisakriloil etilen diamin (çapraz bag) ve akriloil sarkosin metil esterden (islevsel ajan), olusan bir polidimetil akrilamide dayanmaktadir. Kullanilan yarilabilir peptit reçine baglanti ajani, asit dayaniksiz 4 hidroksimetil fenoksiasetik asit türevidir. Tüm amino asit türevleri bir tersine çevrilmis N, N- disikloheksil karbodiimid/lhidroksibenzotriazol aracili kuplaj prosedürü kullanilarak eklenen asparagin ve glutamin haricinde önceden olusturulmus simetrik anhidrit türevleri seklinde ilave edilmislerdir. Tüm kenetleme ve koruyucu gruplari uzaklastirma reaksiyonlari ninhidrin, trinitrobenzen sülfonik asit ya da izotin test prosedürleri kullanilarak izlenmektedir. Sentezin tamamlanmasinin ardindan peptitler, %50'lik bir skavenger (çöpçü) karisimi içeren %95'lik trifloroasetik asit kullanilarak, yan zincir koruyucu gruplarinin ayni anda uzaklastirilmasi ile birlikte reçine desteginden ayrilmaktadir. Yaygin olarak kullanilan scavengerler etanditiol, fenol, anisol ve suyu kapsar; kesin seçim sentezlenen peptidi olusturan amino asitlerine göre yapilir. Peptitlerin sentezi için kati faz ile çözelti fazi yöntemlerinin bir kombinasyonu da kullanilabilir (bkz, örnegin, Bruckdorfer ve ark. 2004 ve burada atifta bulunulan referanslar). Trifloroasetik asit vakumda uçurulur, ardindan dietil eter ile tritürasyon uygulanarak ham peptit alinir. Mevcut skavengerlerin tümü basit bir ekstraksiyon islemi araciligiyla atilir, ardindan su fazindan yapilan liyofîlizasyonla skavengerlerden arinmis ham peptit elde edilir. Peptit sentezi için gereken reaktifler genel olarak öm. Calbiochem-Novabiochem (UK) Ltd, Nottingham NG7 2QJ, Ingiltere'den temin edilebilir. Saflastirma, rekristalizasyon, boyut dislama kromatografisi, iyon degistirme kromatografisi, hidrofobik etkilesim kromatografisi ve (genellikle) örn. asetonitril/su gradienti kullanilarak ayirma yapilan ters fazli yüksek performansli sivi kromatografisi gibi tekniklerden herhangi biri veya birden fazlasinin kombinasyonu yoluyla gerçeklestirilebilir. Peptitlerin analizi MALDI ve ESI-Q-TQF kütle spektrometresi analizlerinin yani sira ince katman kromatografisi, elektroforez, özellikle kapiller elektroforez, kati faz ekstraksiyonu (KFE), ters fazli yüksek performansli sivi kromatografisi, asit hidrolizini izleyen amino asit analizi ve hizli atom bombardimani (FAB) kütle spektrometresi analizi kullanilarak yürütülmektedir. Bulusun bir diger yaklasimi bulusa ait bir peptidi kodlayan bir nükleik asit (örnegin bir polinükleotid) saglamaktadir. Polinükleotid, örnegin, DNA, cDNA, RNA veya bunlarin kombinasyonlari olabilir, ya tek ve/veya çift Zincirli, ya da dogal veya stabilize edilmis polinükleotid, örnegin fosforotiyoat omurgali polinükleotid seklinde olabilir ve peptit için kodlama yaptigi sürece intronlar içerebilir veya içermeyebilir. Elbette ki yalnizca dogal olarak görülen amino asitleri içeren ve bunlarin dogal olarak görülen peptit baglariyla birlesmesiyle meydana gelen peptitlerin bir polinükleotid tarafindan kodlanabilmesi mümkündür. Bulusun yine diger bir yaklasimi, bulusa ait bir polipeptidi ifade eden bir ifade vektörü saglamaktadir. Polinükleotidlerin, özellikle DNA'nin, örnegin tamamlayici yapiskan uçlar yoluyla vektörlere baglanmasi için bir dizi yöntem gelistirilmistir. Örnegin, vektör DNA'ya eklenmek üzere DNA segmentine tamamlayici homopolimer yollar ilave edilebilir. Ardindan vektör ile DNA segmenti tamamlayici özellikli homopolimerik kuyruklar arasindaki hidrojen baglari araciligiyla birleserek rekombinant DNA molekülleri olustururlar. Bir veya daha fazla restriksiyon alani içeren sentetik baglayicilar DNA segmentlerini vektörlerle birlestirmek için alternatif bir yöntem saglamaktadir. Kesme enzimi bölgesi içeren bir dizi sentetik baglayicinin, International Biotechnologies Inc, New Haven, CN, ABD gibi çok sayida kaynaktan temin edilmesi mümkündür. Polipeptidi kodlayan DNA üzerinde degisiklik yapmak için arzu edilen bir yöntem, (Saiki ve ark. (1988)) tarafindan açiklanmis olan polimeraz zincir reaksiyonunu kullanmaktadir. Bu yöntem DNA'yi, örnegin uygun restriksiyon bölgelerinin mühendisligi araciligiyla, uygun bir vektör içerisine yerlestirmek, ya da DNA'yi teknolojide bilinen baska elverisli yollarla modifiye etmek için kullanilabilir. Viral vektörlerin kullanildigi durumlarda pox veya adenovirüs vektörleri tercih edilir. DNA (ya da retroviral vektör kullanilmasi durumunda RNA) daha sonra, bulusa ait peptidi içeren polipeptidi üretmek için uygun bir konagin içinde ifade edilebilir. Dolayisiyla, bulusa ait peptidi kodlayan DNA, uygun bir konak hücreye aktarilarak bulusa ait polipeptidin ifadesi ve üretimi için kullanilacak bir ifade vektörünü insa etmek üzere burada verilen ögretiler isiginda uygun sekilde modifiye edilmis bilinen teknikler dogrultusunda kullanilabilir. Bu Bulusa ait bilesigi olusturan polipeptidi kodlayan DNA (veya retroviral vektörler durumunda RNA), uygun bir konaga dahil edilmek üzere pek çok degisik DNA dizinine ilave edilebilir. Eslik eden DNA, konagin özelliklerine, DNA'nin konaga yerlestirilme sekline ve arzu edilen konumunun epizoinal mi, yoksa entegre rni olacagina baglidir. DNA genel olarak, ifade açisindan uygun bir yönelim ve dogru okuma çerçevesi gözetilerek örnegin plazmid gibi bir ifade vektörünün içine yerlestirilir. DNA gerekirse, her ne kadar bu tür kontroller genellikle ifade vektörlerinde mevcut olsa da, arzu edilen konak tarafindan taninan uygun transkripsiyonel ve translasyonel düzenleyici kontrol nükleotid dizinlerine baglanabilir. Vektör daha sonra standart teknikler araciligiyla konaga dahil edilir. Genelde, konaklarin tümü vektör tarafindan transforme olmamaktadir. Bu nedenle, transforme edilmis konak hücrelerinin seçilmesi gerekmektedir. Seçim tekniklerinden biri ifade vektörüne, transforme olmus hücrede bütün gerekli kontrol elemanlari ile birlikte seçilebilir bir özellik, örnegin antibiyotik direnci, kodlayan bir DNA dizisi yerlestirilmesini içerir. Alternatif olarak, bu seçilebilir özelligin geni, arzu edilen konak hücreyi birlikte transforme etmek üzere kullanilan baska bir vektörün üzerinde olabilir. Bulusa ait rekombinant DNA tarafindan transforme edilen konak hücreler daha sonra polipeptidin ifadesini saglamak üzere burada açiklanan ögretiler isiginda, yeterli bir süreyle, teknolojide deneyimli kisiler tarafindan bilinen uygun kosullar altinda kültive edilir ve Bakterileri (örnegin E. 0011' ve Baci'llus subtilis), mayalari (örnegin Saccharomyces cerevisi'ae), ipliksi mantarlari (örnegin Aspergi'llus spec.), bitkisel hücreleri, hayvansal hücreleri ve böcek hücrelerini kapsayan pek çok ifade sistemi bilinmektedir. Sistem tercihen memeli hücreleri, örnegin ATCC Hücre Biyolojisi Koleksiyonundan temin edilebilen CHO hücreleri olabilir. Yapisal ifade için tipik bir memeli hücre vektör plazmidi, uygun bir poli A kuyrugu ve bir direnç isareti, örnegin neomisin, içeren CMV veya SV4O promotöründen olusur. Bir örnegi, Pharmacia, Piscataway, NJ, USA firmasindan temin edilebilen pSVL'dir. Indüklenebilen memeli ifade vektörlerinin bir örnegi yine Pharmacia firmasindan temin edilebilen pMSG vektörüdür. Elverisli maya plazmid vektörleri genel olarak Stratagene Cloning Systems (Ylp'ler), bunlar seçilebilir maya belirteçleri HIS3, TRPl, LEU2 ve URA3'ü içerir. pRS413- 416 plazmidleri maya sentromer plazmidlerdir (Ycp'ler). CMV promotörü bazli vektörler (örnegin Sigma-Aldrich'ten) geçici veya kalici ifade veya salgilama ve FLAG, 3XFLAG, c- myc veya MAT etiketleriyle N-terminal veya C-terminal uçlari etiketleme olanagi saglar. Bu Iî'izyon proteinleri rekombinant proteinlerin tespitine, saflastirilmasina ve analizine olanak saglar. Çifte etiketli Iüzyonlar tespitte daha yüksek esneklik sunar. Güçlü insan sitomegalovirüs (CMV) promotörü düzenleyici bölgesi COS hücrelerinde yapisal protein ifadesini 1 mg/l düzeylerine kadar çikarmaktadir. Daha zayif hücre çizgilerinde tipik protein düzeyleri ~O,1 mg/l'dir. SV40 replikasyon (ikilesme) permisif COS hücrelerinde SV40 replikasyon orijinin varligi yüksek düzeyde DNA replikasyonuna neden olacaktir. Örnegin, CMV vektörleri, bakteri hücrelerinde replikasyon için pMBl (pBR322'nin türevi) orijinini, bakterilerde ampisilin direnci bazinda seleksiyon için b-laktamaz genini, hGH polyA, ve fl orijinini içerebilir. Preprotripsin (PPT) lider dizinini içeren vektörler FLAG iüzyon proteinlerinin besiyerine salinmasina öncü olarak bunlarin ANTI-FLAG antikorlari, rezinler ve plakalar araciligiyla saflastirilmasina olanak saglar. Genis bir konak hücre çesitliliginde kullanim açisindan baska vektörler ve ifade sistemleri de iyi bilinmektedir. Mevcut bulus ayni zamanda mevcut bulusa ait bir polinükleotid vektör insasi ile transforme edilmis bir konak hücre ile ilgilidir. Konak hücre prokaryotik ya da ökaryotik olabilir. Bazi durumlarda bakteriyel hücreler tercih edilen prokaryotik konak hücreler olabilir, bunlar tipik olarak örnegin Bethesda Research Laboratories Inc. firmasindan (Bethesda, MD, ABD) temin edilebilen DH5 ve American Type Culture Collection kurumundan (ATCC) temin edilebilen (Rockville, MD, ABD) RR] (ATCC no. 31343) E. coli suslari gibi bir E. coli susu olabilir. Tercih edilen ökaryotik konak hücreler maya, böcek ve memeli hücreleri, tercihen fare, siçan, maymun veya insan fibroblastik ve kolon hücre hatlarinin hücreleri gibi omurgali hücrelerini içermektedir. Maya konak hücreleri, genel olarak Stratagene Cloning Systems firmasindan temin edilebilen (La Jolla, CA YPH499, YPH500 ve YPH501 hücrelerini kapsar. Tercih edilen memeli konak hücreleri, ATCC'den CCL61 olarak temin edilebilen Çin hamster over (CHO) hücrelerini, ATCC'den CRL 1658 olarak temin edilebilen NIH Isviçre fare embriyo N1H/3T3 hücrelerini, ATCC'den CRL 1650 olarak temin edilebilen maymun böbregi türevli COS-l hücrelerini ve insan embriyonik böbrek hücreleri olan 293 hücreyi kapsamaktadir. Tercih edilen böcek hücreleri bakulovirüs ifade vektörleri ile transforme edilebilen Sf9 hücreleridir. Ifade için uygun konak hücre seçimiyle ilgili genel açiklamalar, örnegin Paulina Balbas ve Argelia Lorence'in "Methods in Molecular Biology Recoinbinant Gene Expression, Reviews and Protocols," Part One, Second Edition, ISBN 978-1-58829- 262-9, kitabinda ve deneyimli kisiler tarafindan bilinen diger literatürde bulunabilir. Uygun hücre konaklarinin mevcut bulusa ait bir DNA yapisi ile transformasyonu, tipik olarak kullanilan vektörün tipine bagli olarak iyi bilinen yöntemlerle saglanmaktadir. Prokaryotik konak hücrelerin transformasyonu baglaminda bkz. örnegin Cohen ve arkadaslari (1972) A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY. Maya hücrelerinin transformasyonu Sherman ve ark. (1986) Methods In Yeast Genetics, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY yayininda tarif edilmektedir. Beggs'in (1978) Nature 275,104-109 yönteini de yararlidir. Omurgali hücreler baglaminda hücreyi transfekte etmek açisindan kullanisli reaktitler, örnegin kalsiyum fosfat ve DEAE-dekstran veya lipozom formülasyonlari Stratagene Cloning Systems veya Life Technologies Inc. firmalarindan (Gaithersburg, MD temin edilebilir. Elektroporasyon yöntemi de hücreleri transforme ve/Veya transfekte etme açisindan kullanislidir ve maya hücrelerinin, bakteriyel hücrelerin, böcek hücrelerinin ve omurgali hücrelerinin transforme edilmesi tekniklerinde iyi bilinmektedir. Basariyla transforme edilmis olan, yani mevcut bulusa ait bir DNA yapisi içeren hücreler, iyi bilinen teknikler, örnegin PCR, araciligiyla tanimlanabilir. Alternatif olarak üst fazda (süpernatan) proteinin mevcudiyeti antikorlar kullanilarak saptanabilir. Bulusa ait bazi konak hücrelerin, örnegin bakteriyel, maya ve böcek hücrelerinin, bulusa ait peptitlerin preparasyonunda yararli olmasi olumlu karsilanacaktir. Öte yandan, diger konak hücreler de bazi terapötik yöntemlerde yararli olabilir. Örnegin dendritik hücreler türünden antijen sunan hücreler, bulusa ait peptitlerin uygun MHC moleküllere yüklenmesini saglamak suretiyle ifade edilmelerinde yararli olabilir. Dolayisiyla, mevcut bulus, mevcut bulusa ait bir nükleik asit veya bir ifade vektöiü içeren bir konak hücre saglamaktadir. Tercih edilen somut bir Örnekte konak hücre, antijen sunan bir hücre, Özellikle bir dendritik hücre veya antijen sunan bir hücredir. Prostatik asit fosfataz (PAP) içeren bir rekombinant füzyon proteiniyle yüklenmis APC'ler halihazirda prostat kanserinin tedavisiyle iliskili olarak arastirilmaktadir (Sipuleucel-T) (Small E] ve ark. 2006; Rini ve ark. 2006). Bulusun diger bir yaklasimi bir peptidi üretineye yönelik bir yöntein saglamaktadir, yöntem bir konak hücrenin kültivasyonu ve peptidin konak hücreden veya onun besiyerinden izole edilmesinden olusur. Diger bir somut uygulamada, bulusa ait peptit, nükleik asit veya ifade vektörü tipta kullanilmaktadir. Örnegin peptit, intravenöz (Lv.) enjeksiyon, subkutan (s.c.) enjeksiyon, intraderinal (i.d.) enjeksiyon, intraperitoneal (ip.) enjeksiyon ve intramüsküler (i.m.) enjeksiyon için hazirlanabilir. Peptit enjeksiyonunun tercih edilen yöntemleri s.c., i.d., i.p., i.m. ve i.v.'yi içerir. DNA enjeksiyonunun tercih edilen yöntemleri i.d., i.m.. s.c., i.p. ve i.v.'yi içerir. Dozlar, ilgili peptide veya DNA'ya bagli olarak, örnegin 50 ug ile 1,5 mg arasinda, tercihen 125 tig ilâ 500 ug peptit veya DNA seklinde verilebilir. Bu araliktaki dozlar daha önce yapilan çalismalarda basariyla uygulanmistir (Brunsvig ve ark. 2006; Staehler ve ark. 2007) Mevcut bulusun diger bir yaklasimi, aktiflestirilmis T hücrelerinin üretilmesi için bir in vitro yöntem olup özelligi T hücrelerinin in vitro kosullarda, uygun bir antijen sunucu hücrenin yüzeyi üzerinde ifade edilen antijen yüklü insan klas I MHC molekülleri ile söz konusu T hücreleri antijen spesifik olarak aktiIlestirmek için yeterli bir süre boyunca temas ettirilmesi ve antijenin, bulusun konusu olan peptit olmasidir. Tercihen, antijen sunan bir hücreyle birlikte yeterli miktarda antijen kullanilir. Bir MHC klas Il epitopunun antijen olarak kullanildigi durumda T hücreleri, tercihen TH] tipi olmak üzere, CD4 pozitif yardimci hücrelerdir. MHC klas Il molekülleri uygun olan her hücrenin yüzeyinde ifade edilebilir. Tercihen, hücre dogal olarak MHC klas II molekülleri ifade etmemelidir (dolayisiyla hücrenin böyle bir molekülü ifade etmesi için transfekte edilmis olmasi gereklidir). Alternatif olarak, eger hücre dogal olarak MHC klas II molekülleri ifade ediyorsa, antijen isleyen veya antijen sunan yolaklarinin defekt olmasi tercih edilir. Bu sayede, MHC klas ll molekülü ifade eden hücrenin, T hücresini aktiflestirmeden önce, seçilen bir peptit antijen ile tamamen yüklenmesi mümkündür. Antijen sunan hücre (veya uyarici hücre) tipik olarak yüzeyinde MHC klas II moleküllere sahiptir ve tercihen kendisi söz konusu MHC klas II molekülünü seçilen antijen ile yükleme yeteneginden büyük ölçüde yoksundur. MHC klas 11 molekülü seçilen antijen ile in vitro kosullarda kolayca yüklenebilir. Memeli hücresi tercihen TAP peptit tasiyici sistemden yoksun olmali, yoksun degilse de, içerik veya fonksiyon düzeyi düsük olmalidir. TAP peptit tasiyici sistemden yoksun olan uygun hücreler T2, RMA-S ve Drosophila hücreleridir. TAP Antijen Isleme ile iliskili Tasiyicidir. Insan peptidi yükleyen noksanli T2 hücre hatti CRL 1992 katalog numarasiyla American ABD); Schneider-2 Drosophila hücre hatti CRL 19863 katalog numarasiyla yine ATCC'den temin edilebilir; fare RMA-S hücre hatti Karre ve ark. (1985) tarafindan tarif edilmistir. Konak hücre tercihen transfeksiyon öncesinde önemli ölçüde MHC sinif I molekülü ifade etmemelidir. Ayrica, uyarici hücrenin T hücreleri için es zamanli bir uyarim sinyali saglamak bakimindan önem tasiyan bir molekül, Örnegin B7.1, B7.2, lCAM-l ve LFA 3 ifade etmesi de tercih edilir. Çok sayida MHC sinif II molekülünün ve kostimülatör molekülünün nükleik asit dizinleri GenBank ve EMBL veri tabanlarinda kamuya açiktir. Benzer sekilde, bir MHC klas I epitopunun antijen olarak kullanilmasi durumunda, T hücreleri CD8-pozitif STL'lerdir. Eger antijen sunan hücre böyle bir epitopu ifade etmesi için transfekte edilirse, hücre tercihen SEQ 1D NO: lO'u içeren bir peptidi ifade etme yetenegine sahip bir ifade vektörü içerir. In vitro kosullarda STL olusturmak için bir dizi baska yöntem kullanilabilir. Örnegin Peoples ve ark. (1995) ve Kawakami ve ark. (1992) yayinlarinda tarif edilen yöntemlerde STL olusturmak için otolog tümör infiltre edici lenfositler kullanilmistir. Plebanski ve ark. (1995) STL preparasyonunda otolog periferik kan lenfositlerinden (PLB'ler) yararlanmaktadir. Jochmus ve ark. (1997) otolog STL'lerin peptit veya polipeptitle pulse edilmis dendritik hücreler ya da rekombinant Virüsle enfeksiyon yoluyla elde edildigini tarif etmislerdir. Hill ve ark. (1995) ve Jerome ve ark. (1993) çalismalarinda otolog STL'lerin üretiminde B-hücreler kullanilmistir. Bunlara ek olarak, otolog STL'lerin preparasyonunda peptit veya polipeptit ile pulse edilmis ya da rekombinant virüs ile enfekte edilmis makrofajlar da kullanilabilir. S. Walter ve ark. ( kullanilarak in vitro hazirlaninasini (priming) tarif etmektedir, bu yöntem seçilen peptide karsi T hücreleri olusturmak için de uygun bir yoldur. Bu çalismada aAPC'ler önceden olusturulmus MHC:peptit komplekslerinin biotinzstreptavidin biyokimyasal yöntemiyle polistiren partiküllerinin (mikro boncuklar) yüzeyine baglanmasiyla olusturulmustur. Bu sistem aAPC'lerde MHC yogunlugunun hassas bir sekilde kontrol edilmesini saglar, bu da kan numunelerinde yüksek veya düsük aviditeli antijen spesifik T hücresi yanitlarini seçici olarak belirlemeye izin verir. MHCzpeptit koinplekslerinin disinda aAPC'ler yüzeylerine baglanmis, örnegin anti-CD28 antikorlari gibi, es zamanli stimülasyon aktivitesine sahip olan baska proteinler tasimalidir. Ayrica, bu tür aAPC bazli sistemler çogu kez uygun çözünür faktörlerin, örnegin interleukin-12 gibi sitokinlerin eklenmesini gerektirmektedir. Allojeneik hücreler de T hücrelerinin preparasyonunda kullanilabilir, bu yöntem ayrintili bir sekilde WO 97/26328'de tarif edilmektedir. Örnegin, Drosophila hücrelerinin ve T2 hücrelerinin yani sira CHO hücreleri, bakulovirüs ile enfekte edilmis böcek hücreleri, bakteriler, mayalar, vaksiniya ile enfekte edilmis hedef hücreler gibi baska hücreler de antijen sunmak için kullanilabilir. Bunlarin disinda bitki virüsleri de kullanilabilir (örnegin bkz. Porta ve ark. (1994)), bu çalismada börülce mozaik virüsünün yabanci peptitlerin sunumunda yüksek verimli bir sistem olarak gelistirilmesi tarif edilmektedir). Bulusa ait peptitlere karsi yönlendirilen aktiflestirilmis T hücreleri tedavide yararlidir. Dolayisiyla, bulusun bir diger yaklasimi bulusun yukaridaki yöntemleri araciligiyla elde edilebilen aktiflestirilmis T hücreleri saglar. Yukaridaki yönteme göre üretilmis, aktiflestirilmis T hücreleri, SEQ ID NO: lO'un bir amino asit dizinini içeren bir polipeptidi anormal sekilde ifade eden bir hücreyi seçici olarak taniyacaktir. Tercihen, T hücresi TCR'si araciligiyla HLA/peptit kompleksi ile etkilesim kurarak (örnegin baglanma) hücreyi tanir. T hücreleri, bir hastadaki hedef hücrelerin bulusa ait bir amino asit dizininden olusan bir polipeptidi anormal sekilde ifade etmesi durumunda, bu hedef hücreleri öldürmeye yönelik bir yöntemde kullanilmaya uygundur, bu kapsamda hastaya etkin bir miktarda aktiflestirilmis T hücresi uygulanmaktadir. Hastaya uygulanan T hücreleri hastadan türetilebilir ve yukarida tarif edildigi sekilde aktiflestirilebilir (örnegin otolog T hücreleri olabilir). Alternatif sekilde, T hücreleri hastadan degil baska bir bireyden alinmis olabilir. Dogal olarak, bireyin saglikli bir kisi olmasi tercih edilmektedir. "Saglikli birey" ile bulus sahipleri, sagligi genel olarak düzgün olan, tercihen yetkin bir bagisiklik sistemine sahip olan ve daha tercih edilen sekliyle, kolayca test ve tespit edilen herhangi bir hastaligi olmayan bir bireyi kastetmektedir. hücreleri (bazen MHC klas ll de ifade eden) ve/veya tümörü (tüinör hücrelerini) çevreleyen stromal hücreler (bazen MHC klas [1 de ifade eden (Dengjel et al., 2006)) olabilir. Mevcut bulusa ait T hücreleri bir terapötik bilesim için aktif bilesen olarak kullanilabilir. Dolayisiyla bulus, bu bulusa ait bir amino asit dizininden olusan bir polipeptidi anormal sekilde ifade eden hedef hücrelere sahip bir hastada bu hedef hücreleri öldürmeye yönelik bir yöntem de ifsa etmekte, yöntem hastaya, yukarida açiklandigi gibi, etkin bir miktarda aktiflestirilmis T hücresi uygulamayi kapsamaktadir. Bulusu yapanlar, "anormal sekilde ifade edilen" kavramiyla, polipeptidin, normal ifade düzeyleri ile kiyaslandiginda asiri derecede ifade edildigi ya da, genin tümörün türedigi dokuda sessiz oldugu, ancak tümörde ifade edildigini de kastetmektedir. Bulusu yapanlar, kat , tercihen en az 2 kat ve daha da çok tercih edilen sekliyle normal dokudaki mevcut düzeye göre en az 5 kat ya da 10 kat bir düzeyde mevcut oldugunu kastetmektedir. T hücreleri teknolojide bilinen, örnegin yukarida tarif edilmis olan yöntemler araciligiyla elde edilebilir. T hücrelerinin adoptif transferi olarak adlandirilan bu prosedüre iliskin protokoller teknolojide (Morgan et al., 2006) çalismalarinda bulunabilir. Bulusa ait her molekül, örnegin peptit, nükleik asit, ifade vektörü, hücre, aktiIlestirilmis STL, T hücre reseptörü veya onu kodlayan nükleik asit, hücrelerin immün yanittan kaçmasiyla karakterize olan bozukluklarin tedavisi için yararlidir. Bu nedenle, mevcut bulusa ait her molekül ilaç olarak veya ilaç imalatinda kullanilabilir. Moleküller tek basina veya bulusa ait diger m01ekül(ler)le veya bilinen molekül( ler)1e birlestirilerek kullanilabilir. Mevcut bulusun ilaci tercihen bir asidir. Etkilenen organin içerisine veya sistemik olarak hastaya dogrudan i.d., i.m., s.c., i.p. ve i.v verilebilir, ya da hastadan elde edilmis hücrelere veya eks vivo kosullarda bir insan hücre çizgisine uygulanarak bunlar ardindan hastaya verilebilir, ya da hastadan elde edilmis iininün hücrelerin in vitro kosullarda bir alt kümesini seçerek tekrar hastaya vermek için kullanilabilir. Nükleik asit eger in vitro kosullarda hücrelere verilecekse, o zaman hücrelerin es zamanli olarak interleukin-2 gibi immün uyarici sitokinleri de ifade edecek sekilde transfekte edilmesi yararli olabilir. Peptit büyük ölçüde saf olabilir ya da immün uyarici bir adjüvanla (bakiniz asagida) kombine edilebilir ya da immün uyarici sitokinlerle birlikte kombineli olarak kullanilabilir ya da uygun bir uygulama sistemiyle, örnegin lipozomlarla, verilebilir. Peptit ayni zamanda anahtar deligi limpet hemosiyanin (KLH) veya inannan gibi uygun bir tasiyiciya konjüge edilmis olabilir (bkz. WO lüzyon proteini ya da bir hibrit molekül olabilir. Mevcut bulusta dizinleri verilmis olan peptitlerin CD8 T hücrelerini uyarmasi beklenmektedir. Ancak eger CD4 T yardimci hücreleri tarafindan destek saglanirsa, CD8 STL'ler daha etkin biçimde uyarilir. Dolayisiyla, CD8 STL'leri uyaran MHC klas I epitoplari için füzyon partnerinin veya hibrit molekülün bölümlerinin CD4 pozitif T hücreleri uyaran epitoplar içermesi uygun olacaktir. CD4 ve CD8 uyarici epitoplar teknolojide iyi bilinmektedir, bunlara ifsa edildigi sekliyle tanimlanmis olanlar da dahildir. Bir yaklasimda, asi SEQ ID NO: 10'da ortaya konan amino asit dizinine sahip en az bir peptit ile ek olarak en az bir peptit, tercihen iki ila 50, daha tercihli olarak iki ila 25, daha da tercih edilen haliyle iki ilâ 15 ve en çok tercih edilen haliyle iki, üç, dört, bes, alti, yedi, sekiz, dokuz, on, on bir, on iki veya on üç peptit içerir. Peptit(ler) bir veya birden fazla spesifik TIA'dan türemis olabilir ve MHC klas I ve/veya klas II moleküllerine baglanabilir. Polinükleotid büyük Ölçüde saf olabilir ya da uygun bir vektöre yahut uygulama sistemine dahil olabilir. Nükleik asit, DNA, cDNA, RNA veya bunlarin bir kombinasyonu olabilir. Bu tür bir nükleik asidi tasarlamaya ve yerlestirmeye iliskin yöntemler teknolojide iyi tarafindan saglanmistir. Polinükleotid asilarinin hazirlanmasi kolaydir, ancak bu vektörlerin immün yaniti nasil bir etki mekanizmasiyla indükledigi tam olarak açikliga kavustuiulamamistir. Uygun vektörler ve uygulama sistemleri adenovirüs, vaccinia virüs, retrovirüsler, herpes virüsü, adeno iliskili virüs ya da birden fazla virüs unsuru içeren hibritlere dayanan sistemler gibi viral DNA ve/veya RNA sistemleri içerir. Viral olmayan uygulama sistemleri katyonik lipitler ve katyonik polimerler içerir ve DNA uygulama teknolojisinde iyi bilinir. Örnegin, bir "gen tabancasi" yoluyla tiziksel verme de uygulanabilir. Nükleik asit tarafindan kodlanan peptit veya peptitler, örnegin yukarida belirtildigi gibi, ilgili karsiti CDR için T hücrelerini uyaran bir epitopu olan bir füzyon proteini olabilir. Bulusa ait ilaç bir veya birden fazla adjüvan da içerebilir. Adjüvanlar, hücrelerin bir antijene karsi immün yanitini (örn. STL"1er ve yardimci-T (TH) aracili immün yanitlar) spesifik olmayan bir sekilde artiran veya güçlendiren ve bu nedenle mevcut bulusa ait ilaçta yer almalari yararli görülen maddelerdir. Uygun adjüvanlar, yalnizca bunlarla sinirli olmamak dSLlM, flagellin veya flagellinden türetilmis TLR5 ligandlari, FLT3 ligandi, GM-CSF, 1C30, Interlökinler, Interferon-alpha veya -beta veya bunlarin pegli türevleri, IS Patch, ISS, içinde su ve su içinde yag emülsiyonlari, OK-432, OM-l74, OM-197-MP-EC, ONTAK, OspA, PepTe1® vektör sistemi, PLG ve dextran mikropartikülleri, resiquimod, SRL172, Virosomlar ve diger virüs benzeri partiküller, YF-l7D, VEGF tuzagi, R848, beta-glukan, Pam3Cys, saponinden türetilmis Aquila's QSZI stimulon, mikobakteriyel ekstreler ve sentetik bakteriyel hücre duvari taklitleri ve Ribi's Detox, Quil veya Superfos gibi diger özel adjüvanlari kapsar. Freund's veya GM-CSF gibi adjüvanlar tercih edilmektedir. Daha önce, dendritik hücrelere ve bunlarin preparasyonlarina karsi spesifik çesitli immünolojik kullanilabilir. Çesitli Sitokinler lenfoid dokulara dendritik hücre göçünün etkilenmesi (örn. TNF-(x), dendritik hücrelerin olgunlasmasinin hizlandirilarak T-lenfositler etkin antijen sunucu haline getirilmesi (örn., GM-CSF, IL-l ve IL-4) (A.B.D. Pat. No. 5,849,589) ve immünoadjüvan etkinligi (örn., lL-l2, IL-15, IL-23, IL-7, IFN-alfa, IFN-beta) ile dogrudan baglantilidir (Gabrilovich ve ark. 1996). Iminün sistemi uyarici CpG oligonükleotidlerinin de asi bilesenlerindeki adjüvanlarin etkisini artirdigi bildirilmistir. Teoriye baglanmaksizin, CpG oligonükleotidleri Toll-like reseptörler (TLR), özellikle de TLR9 araciligiyla içsel (adaptif olmayan) immün sistemi aktiflestirerek etkili olmaktadir. CpG tarafindan tetiklenen TLR9 aktivasyonu, gerek profilaktik, gerekse de terapötik amaçli asilarda peptit veya protein antijenleri, canli veya ölü virüsler, dendritik hücre asilari, otolog hücre asilari ve polisakkarit konjügeleri gibi genis bir antijen yelpazesine karsi antijen spesifik humoral ve hücresel yanitlari güçlendirmektedir. Daha da önemlisi, dendritik hücrelerin olgunlasmasini ve farklilasmasini hizlandirarak TH] hücre aktivasyonunu güçlendirmekte ve CD4 T hücresi destegi olmadan da yüksek düzeyde toksik T-lenfosit (STL) olusmasini saglamaktadir. TLR9 uyarisiyla indüklenen TH] yönelimi, alum ve normal olarak TH2 yönelimini destekleyen tamamlanmamis Freund adjüvani (incomplete Freund,s adjuvant - adjüvanlarla birlikte veya mikropartikül, nanopartikül, lipid emülsiyonu formülasyonlarinda ya da buna benzer, özellikle antijenin zayif oldugu durumlarda güçlü bir yanit indüklemek için gerekli olan formülasyonlarda formüle edildikleri veya bunlarla birlikte uygulandiklarmda, daha güçlü bir adjüvan etkisi gösterirler. Bunlar ayrica, immün yaniti hizlandirarak bazi deneylerde CpG olmadan tam dozlu asiya verilen antikor yanitiyla karsilastirilabilir bir etkiyi, yaklasik iki büyüklük kertesi düsürülmüs antijen dozuyla elde oligonükleotidlerinin nükleik asit olmayan adjüvanlarla birlikte kullanimini ve antijen spesifik immün yanit indükleme amaçli bir antijeni tarif etmektedir. CpG TLR9 antagonistlerinden biri de mevcut bulusun farmasötik bilesiminin tercih edilen bilesenlerinden biri olan ve Mologen (Berlin, Almanya) firmasi tarafindan üretilen dSLIM,dir (double Stem Loop ve/veya TLR 9 da kullanilabilir. Elverisli adjüvanlar için diger örnekler, yalnizca bunlarla sinirli olmainak üzere, kimyasal modifikasyona tabi tutulmus CpG,ler (örn. CpR, ldera), Poli(I:C) ve AmpliGen gibi dsRNA analoglari, CpG olmayan bakteriyel DNA veya RNA, ayrica siklofosfamid, sunitinib, Bevacizumab, celebrex, NCX-4016, sildenafil, tadalafil, vardenafil, sorafenib, temozolomide, ve SC58175 gibi terapötik amaçlarla ve/Veya adjüvan olarak kullanilan immünoaktif küçük moleküller ve antikorlardir. Mevcut bulus açisindan elverisli olan adjüvan ve aditiflerin miktar ve konsantrasyonlari yetkin bir uzman tarafindan gereksiz deneylere basvurmadan kolayca belirlenebilir. Tercih edilen adjüvanlar dSLIM, Interferon-alfa, -beta, CpG7909, lC3 l, imiquimod, resiquimod, PeViTer, RNA, tadalafil, temozolomide, ve Juvlmmuneidür. Tercih edilen adjüvanlar dSLIM, BCG, OK432, imiquimod, resiquimod, GMCSF, interferon- alfa, PeviTer ve Juvamune veya bunlarin kombinasyonlaridir. Tercih edilen somut bir örnekte, ifsa edildigi sekliyle farmasötik bilesimde adjüvan, Granülosit Makrofaj Koloni Uyarici Faktör (GM-CSF, sargramostim), imiquimod, resiquimod, ve interferon-alfa gibi koloni uyarici faktörlerden olusan bir gruptan seçilmistir. Ifsa edildigi sekliyle farmasötik bilesimin yine tercih edilen diger bir somut uygulamasinda adjüvan imiquimod veya resiquimod,dur. Ifsa edildigi sekliyle farmasötik bilesimin daha da tercih edilen diger bir somut uygulamasinda adjüvan GM-CSF ile imiquimod'un kombinasyonudur. Bu bilesim subkutan, intradermal, intramüsküler ya da oral uygulama gibi parenteral uygulamalar için kullanilmaktadir. Bu amaçla, peptitler ve opsiyonel olarak baska moleküller farmasötik açidan kabul edilebilir, tercihen su esasli, bir tasiyici içerisinde çözündürülür veya askiya alinir. Bilesim buna ek olarak tamponlar, baglayici ajanlar, patlayici ajanlar, seyrelticiler, aromalar, kayganlastiricilar vs. gibi yardimci maddeler içerebilir. Peptitler ayni zamanda sitokin türünden immün uyarici maddelerle birlikte de uygulanabilir. Bu tür bilesimlerde kullanilma olanagi olan yardimci maddelerin genis bir listesi örnegin A. Kibbe, Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3. Ed. 2000, American Pharmaceutical Association and Pharmaceutical Press kaynagindan alinabilir. Bilesim adenomatöz veya kanseröz hastaliklarin prevansiyonu, profilaksisi ve/veya tedavisi amaciyla kullanilabilir. Mevcut bulus kanser tedavisinde, özellikle glioma ve beyin kanseri, meme kanseri, prostat kanseri, özofagus kanseri, kolorektal kanser, renal kanser, pankreas kanseri, cildin skuamöz hücre karsinomlari ve keratinositik neoplazmalari, lösemi, akciger kanseri, over kanseri ve melanom tedavisinde yararli olan bir ilaç saglamaktadir. Mevcut bulus asagidakilerden olusan bir kit içermektedir: (a) yukarda açiklanan sekilde bir farmasötik bilesimi çözelti veya liyofilizat halinde içeren bir kap; ve (b) liyofilize edilmis formülasyon için bir seyreltici veya sulandirina çözeltisi içeren ikinci bir kap. Kit ayrica bir veya birden fazla (iii) tampon, (iv) seyreltici, (v) filtre, (vi) igne, veya (vii) enjektör içerebilir. Kap tercihen bir sise, bir flakon, bir enjektör veya test tüpü olabilir ve çok amaçli bir kap olabilir. Farmasötik bilesim tercihen liyofilize edilmistir. Mevcut bulusa ait kitler tercihen uygun bir kap içerisinde mevcut bulusa ait bir liyotilize formülasyon ve bunun sulandirilmasi ve/veya kullanilmasi için talimatlar içerir. Uygun kaplar arasinda örnegin sise, flakon (örnegin iki bölmeli flakonlar), enjektör (örn. iki bölmeli enjektörler) ve test tüpleri sayilabilir. Kap, plastik veya cam gibi çesitli materyallerden yapilmis olabilir. Tercihen, kit ve/veya kap sulandirmayla ve/veya kullanimla ilgili talimatlar içerir, bunlar kabin üzerinde belirtilmis veya kapla birlikte verilmis olabilir. Örnegin, liyofilize edilmis formülasyonun yukarida belirtilen peptit konsantrasyonlarini olusturacak sekilde sulandirilmasi gerektigi etikette belirtilebilir. Etiket ayrica formülasyonun subkutan uygulama için elverisli oldugunu veya öngörüldügünü gösterebilir. Formülasyonu içeren kap, sulandirilmis formülasyonun tekrar tekrar uygulanmasina (örn. 2 ilâ 6 uygulama) olanak saglayan birden fazla kullanimli bir flakon olabilir. Kit ayrica uygun bir seyreltici (örn. sodyum bikarbonat çözeltisi) içeren ikinci bir kap kapsayabilir. Seyreltici ile liyofilize formülasyon karistirildiktan sonra, sulandirilmis formülasyonda olusan nihai peptit konsantrasyonu tercihen en az 0,15 mg/ml/peptit (:75 ug) ve tercihen en fazla 3 mg/ml/peptit (:1500 ug) olacaktir. Kit ayrica ticari açidan ya da kullanici açisindan arzu edilen, örnegin baska tamponlar, seyrelticiler, filtreler, igneler, enjektörler ve kullanim talimati içeren ambalaj prospektüsleri gibi baska materyalleri de kapsayabilir. Mevcut bulusa ait kitler, mevcut bulusa ait farmasötik bilesimlerin formülasyonlarini baska bilesenlerle birlikte (örn. baska maddeler veya bu baska maddelerin farmasötik bilesimleri) ya da tek basina içeren tek bir kaptan ya da her bileseni ayri ayri içeren degisik kaplardan olusabilir. Tercihen, bulusa ait kitler, ekte verilen ikinci bir maddeyle (örnegin adjüvanlar (öm. GM- CSF), bir kemoterapötik ajan, dogal bir ürün, bir hormon, veya antagonist, bir anti anjiyogenez ajani veya inhibitörü, apoptoz indükleyici bir ajan veya bir selatör) ya da ondan olusan bir farmasötik bilesimle kombineli olarak kullanilacak sekilde ambalajlanmis, bulusa ait bir formülasyon içerir . Kitin bilesenleri Önceden kompleks haline getirilmis ya da her bilesen hastaya uygulanmadan önce ayri kaplara konmus olabilir. Kitin bilesenleri tercihen sulu çözelti ve daha da tercih edilen sekliyle steril bir sulu çözelti olmak üzere, bir veya birden fazla sivi çözelti içerisinde temin edilebilir. Kitin bilesenleri kati madde olarak da temin edilebilir. Bunlar, tercihen ayri bir kapta sunulan, uygun çözücüler katilarak sivi hale getirilebilir. Terapötik kitin kabi bir flakon, test tüpü, küçük sise, sise, enjektör veya herhangi bir kati madde veya sivi kabi olabilir. Normal olarak, birden fazla bilesenin mevcut oldugu durumlarda, ayri ayri dozlamaya olanak saglamak amaciyla kit ikinci bir Ilakon veya baska bir kap içerecektir. Kit ayrica farmasötik açidan kabul edilir bir sivi için baska bir kap içerebilir. Tercihen, bir terapötik kit, mevcut kitin bilesenlerini olusturan mevcut bulusa ait maddelerin uygulanmasini saglayan bir alet içerir (örn. bir veya birden fazla igne, enjektörler, Mevcut formülasyon, peptitlerin herhangi bir kabul edilir yoldan, örnegin oral (enteral), nazal, oftal, subkutan, intradermal, intramüsküler, intravenöz veya transdermal uygulanmasi için uygun olan formülasyondur. Uygulama tercihen 5.0., ve en çok tercih edilen sekliyle i.d.`dir. Uygulama infüzyon pompasiyla yapilabilir. Simdi mevcut bulus asagida, onun tercih edilen somut uygulamalarini tasvir eden, ancak bunlarla sinirli olmayan, örneklerle ve sekillerle açiklanacaktir. örnek niteliginde kütle spektrumu. NanoESI-LCMS, GB6010 no'lu GBM numunesinden elue kütle spektrumu 49.89 dk alikonma süresinde bir peptit piki gösterdi. B) Kütle olusturdu. C) Seçilen m/z 536,3239 prekürsörüyle gerçeklestirilen ve verilen alikoyma zamaninda nanoESI-LCMS deneyinde kaydedilen bir çarpismayla indüklenen parçalanmali kütle spektrumu GB Sentetik amaciyla, C'de gösterilen, dogal TUMAP'in parçalanmasiyla olusturulmus örnek ile karsilastirildi. Sekil 2a normal dokuda ve 19 glioblastoma numunesinde seçili proteinlerin mRNA'larinin ifade profillerini göstermektedir Sekil 2b normal dokuda ve 19 glioblastoma numunesinde seçili proteinlerin mRNA'larinin ifade profillerini göstermektedir Sekil 3 örnek niteliginde, IMA950 klas l TUMAP'larin in vitro immünojenesitesini göstermektedir Sekil 4 örnek niteliginde, ifsa edildigi sekliyle HLA klas I peptitlerinin A*02'ye karsi afinitesini göstermektedir. SEQ ID NO: 1 ilâ 24 arasindaki dizinler ifsa edildigi sekliyle tercih edilen tümör iliskili peptitlerin dizinlerini göstermektedir. ÖRNEKLER FTELTLGEF (HLA-Al; PolyPeptide Laboratories, Wolfenbüttel, Almanya), LMLGEFLKL (HLA-A2; Clinalfa, Sissach, Isviçre) ve EPDLAQCFY (HLA-B35; PolyPeptide Laboratories) peptitlerinin tümü farmasötik kalitede tedarik edilmistir. Hücre yüzeyinde sunulan tümör iliskili peptitlerin tanimlanmasi Doku numuneleri' Hastalardan alinan tümör dokulari Höpital Cantonal Universitaire de Geneve/Cenevre Kantonal Üniversite Hastanesi (Medical Oncology Laboratory of Tumor lmmunology/Tümör Immünolojisi Tibbi Onkoloji Laboratuvari) ve Neurochirurgische Universitâts-Klinik Heidelberg/Heidelberg Nörosirürji Üniversite Klinigi (Molekularbiologisches Labor/Moleküler Biyoloji Laboratuvari) tarafindan saglandi. Tüm hastalardan ameliyat öncesinde yazili aydinlatilmis onam alindi. Dokular ameliyatin hemen ardindan sivi nitrojenle sok donduruldu ve TUMAPlar izole edilinceye kadar -80°C'de saklandi. HLA peptitlerinin doku numunelerinden izole edilmesi HLA peptit havuzlari sok dondunilmus doku numunelerinden küçük çapta degistirilmis bir spesifik antikor BB7.2 veya HLA-A, -B, -C-spesifik antikor W6/32 kullanilarak kati dokudan immün çökertme, CNBr ile aktive edilmis sefaroz, asit islemi ve ultrafiltrasyon yöntemleriyle Yöntemler.' Elde edilen HLA peptit havuzlari ters faz kromatografi (Acquity UPLC system, Waters) kullanilarak hidrofobisitelerine göre ayrildi ve elüe olan peptitler ESI kaynagiyla donatilmis bir LTQ- Orbitrap hibrit kütle spektrometresinde (ThermoElectron) analiz edildi. Peptit havuzlari dogrudan, 1,7 um C18 ters faz materyaliyle (Waters) doldurulmus, analitik, kaynasmis silika mikro kapiller kolona (75 am iç çap x 250 mm) yüklendi ve dakikada 400 nl akis hizi uygulandi. Ardindan peptitler %10 ila %33 B arasinda, iki kademeli 180 dakikalik ikili gradient ile dakikada 300 nl akis hiziyla ayristirildi. Gradient, Solvent A (su içinde %0,l formik asit) ve Solvent B'den (asetonitril içinde %0.] formik asit) olusuyordu. Numunelerin Mikro-E81 kaynagina uygulanmasi altin kaplamali bir cam kapiller (PicoTip, New Objective) ile gerçeklestirildi. LTQ-Orbitrap kütle spektrometresi veri bagimli modda, TOP5 stratejisi uygulanarak çalistirildi. Kisaca, orbitrap'ta (R = 30 000) yüksek kütle hassasliginda tam taramali bir tarama döngüsü baslatildi, bunu, önceden seçilen iyonlarin dinamik olarak dislandigi, yine orbitrapta (R = 7500) gerçeklestirilen, en bol 5 prekursör iyonuna yönelik bir MS/MS taramasi izledi. Tandem kitle spektrumlari SEQUEST ile yorumlandi ve manuel olarak kontrol edildi. Tanimlanan peptit dizini, olusturulan dogal peptit parçalanma paterni ile es dizinli sentetik peptidin parçalanma paterni karsilastirilarak dogrulandi. Sekil 1'de örnek niteliginde MHC klas I iliskili IGF2BP3-001 peptidi için tümör dokusundan elde edilen bir spektrum ve peptidin UPLC sistemindeki elüsyon profili gösterilmektedir. Ifsa edildigi sekliyle peptitleri kodlayan genlerin ifade profilinin çikarilmasi MHC molekülleri tarafindan tüinör hücrelerinin yüzeyinde sunuldugu tespit edilen her peptit immünoterapi için uygun degildir, çünkü bu peptitlerin çogunlugu birçok hücre tipi tarafindan ifade edilen normal hücre proteinlerinden kaynaklanmaktadir. Bu peptitlerin yalnizca birkaçi tümör iliskilidir ve olasilikla türedikleri tümörü yüksek ölçüde spesifik olarak taniyacak T hücrelerini indükleme yetenegine sahiptir. Bulusu yapanlar, bu tür peptitleri tespit etmek ve asidan kaynaklanabilecek otoimmünite riskini en aza indirgemek için normal dokularin çogunlugunun aksine tümör hücrelerinde asiri ifade edilen proteinlerden elde edilen peptitlere odaklanmislardir. Ideal peptit, tümöre mahsus olan ve baska dokularda bulunmayan bir proteinden elde edilen bir peptit olacaktir. Ifade profilleri ideal peptidinkine benzer genlerden kaynaklanan peptitleri tespit etmek için, tanimlanan peptitler proteinlere ve bunlarin kaynaklandigi genlere ataninis ve bu genlerin ifade profilleri çikartilmistir. RNA kaynaklari ve preparasyon Her hastadan yazili aydinlatilmis onam alindiktan sonra cerrahiyle çikarilan doku numuneleri iki ayri klinik merkezden (bkz. Örnek 1) saglandi. Tümör dokusu nurnuneleri ameliyatin hemen ardindan sivi nitrojenle sok donduruldu ve daha sonra sivi nitrojen altinda havanda homojenize edildi. Total RNA bu nuinunelerden TRIzol (lnvitrogen, Karlsruhe, Almanya) kullanilarak hazirlandi, bunu RNeasy (QIAGEN, Hilden, Almanya) ile bir saflastirma adimi izledi; her iki islem üreticilerin protokolüne göre gerçeklestirildi. Saglikli insan dokusundan total RNA piyasadan temin edildi (Ambion, Huntingdon, Ingiltere; Clontech, Heidelberg, Almanya; Stratagene, Amsterdam, Hollanda; BioChain, Hayward, CA, ABD). Degisik bireylerin (2 ilâ 123 arasinda birey) RNA'lari her bireyin RNA'si esit agirlikli olacak sekilde karistirildi. Lökositler 4 saglikli gönüllü denegin kan numunelerinden izole Tüm RNA numunelerinin kalite ve miktari, RNA 6000 Pico LabChip Kit (Agilent) kullanilarak bir Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent, Waldbronn, Germany) analizörüyle onaylandi. Mikrodizi deneyleri Tüm tümör ve normal doku RNA numunelerinin gen ifadesi analizleri Affymetrix Human Genome (HG) Ul33A veya HG-Ul33 Plus 2.0 oligonükleotid mikrodizileriyle (Affymetrix, Santa Clara, CA, ABD) gerçeklestirildi. Tüin adimlar Affymetrix el kitabi dogrultusunda uygulandi. Kisaca, çift Zincirli CDNA, ve oligo-dT-T7 primer (MWG Biotech, Ebersberg, Almanya) kullanilarak kilavuzda tarif edildigi gibi sentezlendi. ln vitro transkripsiyon Ul33A dizilerinde BioArray High Yield RNA Transcript Labelling Kit (ENZO Diagnostics, Inc., Farmingdale, NY, ABD) veya Ul33 Plus kullanilarak gerçeklestirildi, bunu cRNA fragmentasyonu, hibridizasyon, streptavidin-fikoeritrin ve biotinlenmis anti- streptavidin antikoru (Molecular Probes, Leiden, Hollanda) ile boyama islemleri izledi. Görüntüler Agilent 2500A GeneArray Scanner (Ul33A) veya Affymetrix Gene-Chip Scanner ile, tüm parametreler varsayilan degerlere ayarlanarak analiz edildi. Normalizasyon için Affymetrix tarafindan tedarik edilen 100 referans gen kullanildi. Göreli ifade degerleri yazilimin sagladigi sinyal günlügü oranlarindan hesaplandi ve normal böbrek numunesi istege göre 1.0 degerine ayarlandi. Ifsa edildigi sekliyle glioblastomada yüksek düzeyde asiri ifade edilen kaynak genlerin ifade profilleri Sekil 2'de gösterilmistir. Ifsa edildigi sekliyle TUMAP'lariri immünojenesitesi hakkinda bilgi edinmek için asagidaki kaynakta daha önce tanimlanmis yerlesik bir in vitro stimülasyon platformunu kullandik (Walter, S, Herrgen, L, Schoor, O, Jung, G, Wernet, D, Buhring, HJ, Rammensee, HG, and Stevanovic, S; 2003, Cutting edge: predetermined avidity of human CD8 T cells expanded on ifsa edildigi sekliyle 13 adet HLA-A*0201 kisitli TUMAP'ta oldukça yüksek immünojenesite (test edilen donörlerin = %50'sinde TUMAP spesifik STLler tespit edildi) oldugunu ortaya koyduk ve bu peptitlerin insanda kendilerine karsi CD8+ öncül T hücreleri bulunan T hücre epitoplari oldugunu gösterdik (Tablo 3). CD8+ T hücrelerinin in vitro kosullarda hazirlanmasi (priming) Peptit-MHC kompleksi (pMHC) ve anti-CD28 antikoruyla yüklü yapay antijeni sunan hücrelerle (aAPC'ler) in vitro stimülasyon gerçeklestirmek için önce standart gradient ayirma ortami (PAA, Cölbe, Almanya) kullanarak taze HLA-A*02+ "buffy coat"'lardan PBMC (periferik kan mononükleer hücreleri) izole ettik. Buffy coat'lar Tübingen Kan Bankasindan veya Stuttgart Katharinenhospital hastanesinden temin edildi. Izole edilen PBMC'ler, %10, isiyla inaktive edilmis, insan AB serumu (PAA, Cölbe, Almanya), 100 U/ml penisilin / 100 tig/ml streptomisin (Cambrex, Verviers, Belgium), l inM sodyum piruvat (CC Pro, Neustadt, Almanya) ve 20 tig/ml gentamisin (Cainbrex) katkili RPMI-Glutamax'tan (Invitrogen, Karlsruhe, Germany) olusan insan T hücresi in vitro hazirlama ortaminda (TCM) gece boyunca inkübe edildi. CD8+ lenfositler, CD8+ MACS pozitif seçim kiti (Miltenyi, Bergisch Gladbach, Almanya) ile üreticinin kullanma talimatlari dogrultusunda kullanilarak izole edildi. Elde edilen CD8+ T hücreleri kullanima kadar, 2,5 ng/ml IL-7 (PromoCell, Heidelberg, Almanya) ve 10 U/ml IL-2 (Chiron, Münih, Almanya) katkili TCM içerisinde inkübe edildi. pMHC/anti-CD28 kapli boncuklarin olusturulmasi, T hücresi stimülasyonlari ve disa okuma küçük degisikliklerle daha önce (Walter et al., 2003) tarif edildigi sekilde gerçeklestirildi. Kisaca, transmembran domainleri olmayan, agir zincirlerin karboksil ucu biotinlenmis, biotinli rekombinant HLA-A*0201 molekülleri (Altman et al., 1996) kaynaginda tarif edilen bir yönteme göre üretildi. Satlastirilmis es uyarici fare IgG2a anti insan CD28 Ab Sulfo-N-hydroxysuccinimidobiotin kullanilarak üretici tarafindan (Perbio, Bonn, Germany) önerildigi sekilde kimyasal olarak biotinlendi. Boncuk olarak 5,60 um büyüklügünde, streptavidin kapli polistren parçaciklar kullanildi (Bangs Laboratories, lllinois, ABD). Pozitif ve negatif kontrol olarak A*0201/MLA-001 (modifiye edilmis Melan-A/MART-l'den elde edilmis ELAGIGILTV peptidi) ve A*0201/DDX pMHC'leri kullanildi. biotin-pMHC ile (yüksek yogunluklu boncuklar) ya da 2 ng etkili arti 200 ng etkisiz (pMHC kütüphanesi) MHC (düsük etkili boncuklar) ile kaplandi. Stimülasyonlar, 96 kuyucuklu 2X105 yikanmis kapli boncukla birlikte 37°C'de 3-4 gün inkübe edilmesiyle baslatildi. Ardindan, ortamin yarisi, 80 U/ml IL-2 katkili taze TCM ile degistirildi ve inkübasyona 37°C'de 3-4 gün devam edildi. Uyarim döngüsü toplam olarak üç kez uygulandi. Son olarak, Iloresan MHC tetramerleriyle ( (Altman et al., 1996)) tarafindan tarif edildigi sekliyle arti CD8-FITC klonu SKl (BD, Heidelberg, Almanya) kullanilarak bir dört renkli FACSCalibur (BD) kolonunda üretildi) tetramer analizleri gerçeklestirildi. Peptit spesifik hücreler toplam CD8+ T hücrelerinin yüzdesi olarak hesaplandi. Tetramer analizleri FCS Express (De Novo Software) yazilimi kullanilarak degerlendirildi. Spesifik tetramer+ CD8+ lenfositlerin in vitro hazirlanmasi (priming) uygun bir geçitleme ve negatif kontrol uyarimlariyla karsilastirma yoluyla belirlendi. Belli bir antijenle ilgili olarak immünojenesiteden bahsetmek için in vitro stimülasyonun ardindan, degerlendirilebilir bir in vitro stimülasyon görülen, saglikli bir donöre ait en az bir kuyucukta spesifik bir CD8+ T hücre hatti bulunmasi (yani bu kuyucugun CD8+ T hücreleri arasinda en az %1 spesifik tetramer+ hücre bulunmasi ve spesitik tetramer+ hücre yüzdesinin negatif kontrol stimülasyonlarinin ortalamasinin en az 10 kati olmasi) gerekiyordu. Incelenen HLA klas I peptitlerde in vitro immünojenesite peptit spesitik T hücre hatlari olusturularak gösterildi. Ifsa edildigi sekliyle iki peptit için TUMAP spesifik tetramer boyama sonrasi akis sitometrisi sonuçlari Sekil 3'te gösterilmistir. Ifsa edildigi sekliyle 13 peptidinin sonuçlari Tablo 3'te özetlenmistir. Tablo 3: Ifsa edildigi sekliyle yüksek ölçüde immünojenik HLA klas I peptitlerinin in vitro immünojenesitesi Antijen Pozitif donörler / Pozitif kuyucuklar / test edilen donörler test edilen kuyucuklar NRCAM-OOI 86% 39% Saglikli kan donörlerinde elde edilen bu sonuçlara ilaveten ECA-002, CHI3L1-001 ve NLGN4X-OO] az sayida glioblastoma hastasinda da test edildi. Tüm peptitlerin saglikli donörlerinkiler ile benzer düzeyde immünojenik oldugu kanitlandi ve böylece asi için öneinli bir hedef popülasyonda öncül T hücreleri oldugu gösterildi. Ifsa edildigi sekliyle HLA klas I kisitli peptitlerin HLA-A*0201'e baglanmasi Amaç ve Özel Bu analizin ainaci HLA klas l peptitlerin, HLA-A*0201 alelleri tarafindan kodlanan MHC moleküllerine karsi afinitesini degerlendirmektir, çünkü bu, kanser immünoterapilerinin bir parçasi olan peptitlerin etki mekanizmasi için önemli bir parametredir. ifsa edildigi sekliyle, test edilen tüm HLA klas I kisitli peptitlerin 0 HLA-A*O20l'e karsi afinitesi orta ilâ yüksek düzeyde bulundu, ayrisma sabitleri ise, Hepatit B virüsünün çekirdek antijeninden türetilmis güçlü bir A*O2 baglayici oldugu bilinen pozitif kontrol peptidi HBV-OOl'in düzeyindeydi. Bu sonuçlar, test edilen bulusa ait tüm HLA klas I peptitlerinin güçlü bir baglanma afinitesi oldugunu onaylamaktadir. Test ilkeleri Kararli HLA/peptit kompleksleri üç molekülden olusur: HLA agir zinciri, beta-2 mikroglobülin (b2m) ve peptidik ligand. Denatüre rekombinant HLA-A*0201 agir zincir molekülleri "bos HLA-A*0201 moleküllerinin" islevsel muadili haline getirilerek tek baslarina muhafaza edilebilir. Bu moleküller b2m ve uygun bir peptit içeren bir su tamponunda seyreltildiklerinde, tamamen peptide bagimli bir tarzda hizli ve etkin bir sekilde katlanir. Bu moleküllerin mevcudiyeti ELISA bazli bir deneyde peptit ile HLA klas l molekülü arasindaki etkilesim afinitesini ölçmek amaciyla kullanilmaktadir (Sylvester-Hvid Sailastirilmis rekombinant HLA-A*0201 molekülleri b2m ve ilgi konusu peptidin dereceli dozlariyla inkübe edildi. Yeniden katlanan HLA/peptit koinpleksinin miktari kantitatif ELISA testiyle belirlendi. Ayrisma sabitleri (KD degerleri) bir kalibrant HLA/peptit kompleksinin seyreltileriyle elde edilen bir kalibrasyon egrisi kullanilarak hesaplandi. TR TR TR TR TR TR TR TR TR

Claims (1)

1.
TR2019/00852T 2008-10-01 2009-09-28 Nöronal tümörler ve beyin tümörleri dahil olmak üzere çeşitli tümörlere karşı yeni immünoterapi. TR201900852T4 (tr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP20080017305 EP2172211B1 (en) 2008-10-01 2008-10-01 Composition of tumor-associated peptides and related anti-cancer vaccine for the treatment of glioblastoma (GBM) and other cancers
EP08017921.1A EP2172212B1 (en) 2008-10-01 2008-10-13 Novel immunotherapy against several tumors including neuronal and brain tumors
US10592808P 2008-10-16 2008-10-16

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201900852T4 true TR201900852T4 (tr) 2019-02-21

Family

ID=40342382

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2019/00852T TR201900852T4 (tr) 2008-10-01 2009-09-28 Nöronal tümörler ve beyin tümörleri dahil olmak üzere çeşitli tümörlere karşı yeni immünoterapi.
TR2019/00809T TR201900809T4 (tr) 2008-10-01 2009-09-28 Nöronal tümörler ve beyin tümörleri dahil olmak üzere çeşitli tümörlere karşi yeni immünoterapi.

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2019/00809T TR201900809T4 (tr) 2008-10-01 2009-09-28 Nöronal tümörler ve beyin tümörleri dahil olmak üzere çeşitli tümörlere karşi yeni immünoterapi.

Country Status (24)

Country Link
US (19) US8318677B2 (tr)
EP (12) EP2172211B1 (tr)
JP (10) JP5855940B2 (tr)
KR (6) KR101756488B1 (tr)
CN (3) CN102170900B (tr)
AU (2) AU2009300087B2 (tr)
BR (2) BRPI0920759A2 (tr)
CA (9) CA2936920C (tr)
CY (11) CY1116302T1 (tr)
DK (12) DK2172211T3 (tr)
EA (3) EA023378B1 (tr)
ES (12) ES2536465T3 (tr)
HR (12) HRP20201025T8 (tr)
HU (11) HUE031030T2 (tr)
LT (10) LT2172212T (tr)
MX (3) MX338294B (tr)
NZ (4) NZ624533A (tr)
PL (12) PL2172211T3 (tr)
PT (12) PT2172211E (tr)
RS (12) RS53782B1 (tr)
SI (12) SI2172211T1 (tr)
TR (2) TR201900852T4 (tr)
UA (3) UA110599C2 (tr)
WO (2) WO2010037514A2 (tr)

Families Citing this family (119)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8435507B2 (en) 2004-08-19 2013-05-07 University Of Maryland Prostate-specific antigen-derived MHC class II restricted peptides and their use in vaccines to treat or prevent prostate cancer
WO2006034334A2 (en) 2004-09-21 2006-03-30 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Peptide analogs capable of enhancing stimulation of a glioma-specific ctl response
CN103911358B (zh) * 2007-07-27 2017-03-01 伊玛提克斯生物技术有限公司 神经元和脑肿瘤的新型免疫疗法
PL2113253T3 (pl) * 2008-04-30 2010-09-30 Immatics Biotechnologies Gmbh Nowa postać leku - preparat zawierający peptydy nowotworowe wiążące się z antygenami ludzkich leukocytów klasy I i II, zastosowany w szczepionce
HUE024541T2 (hu) * 2008-05-14 2016-01-28 Immatics Biotechnologies Gmbh Szurvivinbõl és neurocanból származó új és hatásos II-es osztályú MHC peptidek
PL2172211T3 (pl) 2008-10-01 2015-05-29 Immatics Biotechnologies Gmbh Kompozycja związanych z guzem peptydów i związana z tym szczepionka przeciwrakowa do leczenia glejaka (GBM) i innych rodzajów raka
TW201124530A (en) * 2009-12-01 2011-07-16 Oncotherapy Science Inc IMP-3 oligopeptides and vaccines including the same
SE535982C2 (sv) * 2009-12-15 2013-03-19 Theravac Pharmaceuticals Ab Ett nytt vaccin som angriper tumörkärl som ett effektivt redskap i tumörterapi
GB201004551D0 (en) 2010-03-19 2010-05-05 Immatics Biotechnologies Gmbh NOvel immunotherapy against several tumors including gastrointestinal and gastric cancer
AU2015200751B2 (en) * 2010-03-19 2016-11-10 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel immunotherapy against several tumors including gastrointestinal and gastric cancer
AU2011293522B2 (en) 2010-08-24 2015-03-19 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Interleukin-13 receptor alpha 2 peptide-based brain cancer vaccines
US20140017266A1 (en) * 2010-12-03 2014-01-16 The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of Hhs, Nih Anti-podoplanin antibodies and methods of use
JP6032853B2 (ja) * 2010-12-14 2016-11-30 イマティクス バイオテクノロジーズ ゲーエムベーハー 前立腺関連抗原分子由来ｈｌａ結合ペプチドおよびその使用方法
WO2013052158A2 (en) * 2011-04-26 2013-04-11 William Marsh Rice University Targeted nanovectors and their use for treatment of brain tumors
CN104023749B (zh) 2011-09-14 2019-12-17 西北大学 能穿过血脑屏障的纳米缀合物
GB201120779D0 (en) 2011-12-02 2012-01-11 Immodulon Therapeutics Ltd Cancer therapy
AU2013209394A1 (en) 2012-01-20 2014-08-28 Dennis Brown Use of substituted hexitols including dianhydrogalactitol and analogs to treat neoplastic disease and cancer stem cells including glioblastoma multforme and medulloblastoma
US10704021B2 (en) 2012-03-15 2020-07-07 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic perfusion devices
CN103372217B (zh) * 2012-04-28 2014-12-10 中国科学院深圳先进技术研究院 聚合物纳米载体制剂及其制备方法和应用
EP2849772A4 (en) 2012-05-16 2016-03-02 Stemline Therapeutics Inc TUMOR VACCINES TREATED AGAINST CANCER STEM CELLS
CN112587658A (zh) * 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
SI3456339T1 (sl) * 2013-08-05 2022-01-31 Immatics Biotechnologies Gmbh Nova imunoterapija proti več tumorjem, kot je pljučni rak, vključno z nedrobnoceličnim pljučnim rakom
TWI636065B (zh) * 2013-08-05 2018-09-21 伊瑪提克斯生物科技有限公司 新穎肽類，細胞及其用於治療多種腫瘤的用途，其製造方法及包含其等之醫藥組成物
GB201319446D0 (en) * 2013-11-04 2013-12-18 Immatics Biotechnologies Gmbh Personalized immunotherapy against several neuronal and brain tumors
MX2019013161A (es) * 2013-11-04 2020-02-03 Immatics Biotechnologies Gmbh Inmunoterapia personalizada contra diversos tumores cerebrales y neuronales.
CN104698059B (zh) * 2013-12-04 2017-07-21 苏州中赢医疗科技有限公司 一种脑胶质瘤肿瘤标志物及其应用
GB201322725D0 (en) 2013-12-20 2014-02-05 Immodulon Therapeutics Ltd Cancer therapy
US9725710B2 (en) 2014-01-08 2017-08-08 Flodesign Sonics, Inc. Acoustophoresis device with dual acoustophoretic chamber
KR101503341B1 (ko) * 2014-03-12 2015-03-18 국립암센터 자가암항원 특이적 cd8+ t 세포의 분리 및 증식방법
SMT202100700T1 (it) 2014-04-25 2022-01-10 2Seventy Bio Inc Recettori antigenici chimerici con promotore mnd
SG11201608744VA (en) 2014-04-25 2016-11-29 Bluebird Bio Inc Improved methods for manufacturing adoptive cell therapies
JP6613526B2 (ja) * 2014-05-28 2019-12-04 学校法人東京女子医科大学 膠芽腫の予測方法
JP2015227292A (ja) * 2014-05-30 2015-12-17 国立大学法人高知大学 膵がん細胞浸潤転移抑制ワクチン
EP3151672B1 (en) 2014-06-06 2020-11-04 Bluebird Bio, Inc. Improved t cell compositions
JP6366379B2 (ja) * 2014-06-20 2018-08-01 キヤノン株式会社 被検体情報取得装置
KR102523934B1 (ko) 2014-07-24 2023-04-20 2세븐티 바이오, 인코포레이티드 Bcma 키메릭 항원 수용체
KR102043725B1 (ko) * 2014-11-06 2019-11-13 오제 이뮈노테라프틱스 뇌 전이 치료를 위한 치료용 다중 펩타이드 t 특이적 면역 요법
CA2970466A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 Bluebird Bio, Inc. Bcma chimeric antigen receptors
GB201501017D0 (en) 2014-12-23 2015-03-04 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against hepatocellular carcinoma (HCC) and other cancers
MA49157A (fr) * 2014-12-23 2021-06-02 Immatics Biotechnologies Gmbh Nouveaux peptides et combinaison de peptides à utiliser dans l'immunothérapie contre le carcinome hépatocellulaire (hcc) et d'autres cancers
GB201423361D0 (en) * 2014-12-30 2015-02-11 Immatics Biotechnologies Gmbh Method for the absolute Quantification of naturally processed HLA-Restricted cancer peptides
TWI755158B (zh) 2015-03-17 2022-02-11 德商英麥提克生物技術股份有限公司 用於抗胰臟癌與其他癌症的免疫治療的新穎胜肽及胜肽的組合
GB201505585D0 (en) 2015-03-31 2015-05-13 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides and scaffolds for use in immunotherapy against renal cell carinoma (RCC) and other cancers
US11708572B2 (en) 2015-04-29 2023-07-25 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic cell separation techniques and processes
US11377651B2 (en) 2016-10-19 2022-07-05 Flodesign Sonics, Inc. Cell therapy processes utilizing acoustophoresis
GB201507719D0 (en) * 2015-05-06 2015-06-17 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides and scaffolds thereof for use in immunotherapy against colorectal carcinoma (CRC) and other cancers
KR20240161207A (ko) * 2015-05-06 2024-11-12 이매틱스 바이오테크놀로지스 게엠베하 결장직장 암종(crc) 및 기타 암에 대한 면역요법에서의 사용을 위한 펩티드 및 펩티드와 이의 골격의 조합
NL2014935B1 (en) 2015-06-08 2017-02-03 Applied Immune Tech Ltd T cell receptor like antibodies having fine specificity.
EP3307307A4 (en) 2015-06-09 2019-05-01 The Board of Regents of the University of Oklahoma COMPOSITIONS AND TREATMENTS FOR HAEMOPHILUS INFLUENZAE
CN107847598B (zh) 2015-06-24 2022-01-25 英摩杜伦治疗学公司 用于癌症治疗的检查点抑制剂和全细胞分枝杆菌
EP3919507A3 (en) 2015-07-01 2022-01-12 Immatics Biotechnologies GmbH Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against ovarian cancer and other cancers
GB201511546D0 (en) 2015-07-01 2015-08-12 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against ovarian cancer and other cancers
PT3319985T (pt) * 2015-07-06 2021-01-06 Immatics Biotechnologies Gmbh Novos péptidos e combinação de péptidos para uso em imunoterapia do cancro do esófago e outros cancros
GB201512369D0 (en) * 2015-07-15 2015-08-19 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against epithelial ovarian cancer and other cancers
GB201513921D0 (en) 2015-08-05 2015-09-23 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against prostate cancer and other cancers
GB201515321D0 (en) 2015-08-28 2015-10-14 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides, combination of peptides and scaffolds for use in immunotherapeutic treatment of various cancers
IL292864A (en) 2015-08-28 2022-07-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides, combination of peptides and scaffolds for use in immunotherapeutic treatment of various cancers
WO2017040885A1 (en) 2015-09-03 2017-03-09 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Peptide inhibitors of clostridium difficile tcdb toxin
JP7572700B2 (ja) 2015-10-19 2024-10-24 ユニバーシティ オブ メリーランド ボルチモア 改変ヒト初代血液樹状細胞株を生成するための方法
WO2017099712A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Bluebird Bio, Inc. Improved t cell compositions
GB201521746D0 (en) * 2015-12-10 2016-01-27 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against CLL and other cancers
HK1255541A1 (zh) * 2015-12-11 2019-08-23 Immatics Biotechnologies Gmbh 用於多种癌症免疫治疗的新型肽和肽组合物
CA3008641A1 (en) 2015-12-16 2017-06-22 Gritstone Oncology, Inc. Neoantigen identification, manufacture, and use
WO2017123996A1 (en) 2016-01-15 2017-07-20 City Of Hope Targeting glioblastoma stem cells through the tlx-tet3 axis
GB201603568D0 (en) * 2016-03-01 2016-04-13 Immatics Biotechnologies Gmbh Efficient treatment options including peptides and combination of peptide and cell based medicaments for use in immunotherapy against urinary bladder cancer
GB201603987D0 (en) * 2016-03-08 2016-04-20 Immatics Biotechnologies Gmbh Uterine cancer treatments
CN105664134B (zh) * 2016-03-13 2019-04-26 浙江药苑生物科技有限公司 一种用于治疗骨癌的药物组合物
GB201604494D0 (en) 2016-03-16 2016-04-27 Immatics Biotechnologies Gmbh Transfected T-Cells and T-Cell receptors for use in immunotherapy against cancers
RS63727B1 (sr) 2016-03-16 2022-12-30 Immatics Biotechnologies Gmbh Transficirane t ćelije i t-ćelijski receptori za upotrebu u imunoterapiji protiv malignih tumora
GB201604490D0 (en) 2016-03-16 2016-04-27 Immatics Biotechnologies Gmbh Peptides combination of peptides for use in immunotherapy against cancers
CN109071605A (zh) * 2016-04-06 2018-12-21 伊玛提克斯生物技术有限公司 用于aml和其他癌症免疫治疗的新型肽和肽组合物
US11214789B2 (en) 2016-05-03 2022-01-04 Flodesign Sonics, Inc. Concentration and washing of particles with acoustics
WO2017194170A1 (en) * 2016-05-13 2017-11-16 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Methods for predicting the usefulness of proteins or protein fragments for immunotherapy
KR101881300B1 (ko) 2016-06-30 2018-07-25 영남대학교 산학협력단 아조피라졸 화합물 및 은 촉매 반응을 이용한 이의 신규한 합성방법
ES2950435T3 (es) * 2016-10-03 2023-10-10 Ottawa Hospital Res Inst Composiciones y métodos para mejorar el crecimiento, la propagación y la eficacia oncolítica e inmunoterapéutica de virus oncolíticos de ARN
EP3534968A4 (en) 2016-11-04 2020-07-01 Bluebird Bio, Inc. ANTI-BCMA T CAR LYMPHOCYTE COMPOSITIONS
KR102379955B1 (ko) 2016-12-08 2022-03-29 이매틱스 바이오테크놀로지스 게엠베하 짝짓기가 향상된 t 세포 수용체
DE102016123893A1 (de) 2016-12-08 2018-06-14 Immatics Biotechnologies Gmbh T-Zellrezeptoren mit verbesserter Bindung
JP7250677B2 (ja) 2016-12-22 2023-04-03 キュー バイオファーマ， インコーポレイテッド Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド及びその使用方法
US10174122B2 (en) 2017-01-06 2019-01-08 Eutilex Co., Ltd. Anti-human 4-1BB antibodies and uses thereof
GB201702863D0 (en) * 2017-02-22 2017-04-05 Evox Therapeutics Ltd Improved loading of EVs with therapeutic proteins
WO2018160498A1 (en) * 2017-02-28 2018-09-07 Lyten, Inc. Mixed allotrope particulate carbon films and carbon fiber mats
JP2020518648A (ja) * 2017-05-08 2020-06-25 グリットストーン オンコロジー インコーポレイテッド アルファウイルス新生抗原ベクター
CN107058596A (zh) * 2017-06-19 2017-08-18 上海市第十人民医院 一种与恶性胶质瘤诊断相关的标志物及其应用
CN107034305A (zh) * 2017-06-19 2017-08-11 上海市第十人民医院 恶性胶质瘤的一种诊断标志物
WO2019075112A1 (en) 2017-10-10 2019-04-18 Gritstone Oncology, Inc. IDENTIFICATION OF NEO-ANTIGENS USING HOT POINTS
EP3714275A4 (en) 2017-11-22 2021-10-27 Gritstone bio, Inc. REDUCTION OF JUNCTION EPITOPIC PRESENTATION FOR NEOANTIGENS
US11766455B2 (en) * 2017-12-14 2023-09-26 Ezy Biotech Llc Subject-specific tumor inhibiting cells and the use thereof
US10785574B2 (en) 2017-12-14 2020-09-22 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic transducer driver and controller
FI3773689T3 (fi) * 2018-04-11 2023-01-31 Antigeenisiä peptidejä syövän ehkäisyyn ja hoitoon
CN108715832B (zh) * 2018-06-01 2020-11-10 段海峰 一种抑制肿瘤生长的间充质干细胞及制备方法和应用
CN112703198B (zh) 2018-07-11 2025-05-30 布里格姆妇女医院 用于跨血脑屏障递送试剂的方法和组合物
WO2020110154A1 (en) * 2018-11-30 2020-06-04 Bharat Biotech International Limited A chimeric therapeutic vaccine
RU2706554C1 (ru) * 2018-12-13 2019-11-19 Российская Федерация, от имени которой выступает ФОНД ПЕРСПЕКТИВНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Способ создания противоинфекционной иммунологической защиты к Salmonella typhimurium и Listeria monocytogenes с помощью трансгенеза Т-лимфоцитов
CN109796536B (zh) * 2019-02-22 2021-09-17 上海尚泰生物技术有限公司 一种靶向胶质母细胞瘤多种抗原表位的ctl的制备方法
JP7619957B2 (ja) 2019-03-29 2025-01-22 インターベット インターナショナル ベー． フェー． 液体組成物中の生モリクテス綱細菌の安定化
GB2599510B (en) * 2019-04-05 2023-08-30 Earli Inc Improved methods and compositions for synthetic biomarkers
CN114207675A (zh) 2019-05-28 2022-03-18 佩治人工智能公司 用于数字病理学的用于处理图像以针对所处理的图像制备载片的系统和方法
AU2020282369A1 (en) 2019-05-30 2022-01-20 Seattle Project Corp. Modified adenoviruses
CN110579457B (zh) * 2019-09-20 2021-11-02 郑州大学第一附属医院 波形蛋白特异响应性荧光探针及其制备方法和应用
CN112824427B (zh) * 2019-11-18 2022-06-24 杨小骏 一种抑制胶质瘤的短肽及其应用
CN115279400A (zh) * 2020-01-10 2022-11-01 布里格姆妇女医院 用于跨血脑屏障递送免疫治疗剂以治疗脑癌的方法和组合物
EP4110354A4 (en) * 2020-02-24 2024-11-13 The Regents of The University of California Use of brain-specific antigens to home, block and deliver cell-based treatments to the brain
CN113318225B (zh) * 2020-02-28 2024-01-19 无锡派列博生物医药科技有限公司 肿瘤免疫增强剂及其制法和应用
CN113621025A (zh) * 2020-03-18 2021-11-09 北京鼎成肽源生物技术有限公司 一种乳腺癌靶标抗原、乳腺癌靶标抗原刺激培养的ctl细胞及其应用
EP4127188A4 (en) 2020-03-31 2024-08-21 Walking Fish Therapeutics MODIFIED B CELLS AND METHODS OF USE THEREOF
CN115552017A (zh) * 2020-03-31 2022-12-30 步行鱼治疗学公司 经修饰的b细胞及其使用方法
CA3169949A1 (en) 2020-05-12 2021-11-18 Cue Biopharma, Inc. Multimeric t-cell modulatory polypeptides and methods of use thereof
WO2022032196A2 (en) 2020-08-06 2022-02-10 Gritstone Bio, Inc. Multiepitope vaccine cassettes
KR102711471B1 (ko) 2020-08-14 2024-09-30 서울대학교산학협력단 B형 간염 바이러스 유래 폴리펩티드를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2022047248A1 (en) * 2020-08-28 2022-03-03 Torigen Pharmaceuticals, Inc. Immune memory enhanced preparations and uses thereof
CN116710115A (zh) 2020-11-20 2023-09-05 思维疗法股份有限公司 用于优化的肽疫苗的组合物和方法
US11421015B2 (en) 2020-12-07 2022-08-23 Think Therapeutics, Inc. Method of compact peptide vaccines using residue optimization
US11058751B1 (en) 2020-11-20 2021-07-13 Think Therapeutics, Inc. Compositions for optimized RAS peptide vaccines
WO2022192457A1 (en) * 2021-03-09 2022-09-15 Bostongene Corporation Predicting response to treatments in patients with clear cell renal cell carcinoma
US11464842B1 (en) 2021-04-28 2022-10-11 Think Therapeutics, Inc. Compositions and method for optimized peptide vaccines using residue optimization
WO2023192820A2 (en) * 2022-03-30 2023-10-05 Iogenetics, Llc Tumor-associated antigens in brain tumors
PL441229A1 (pl) * 2022-05-19 2023-11-20 Instytut Biologii Doświadczalnej im. Marcelego Nenckiego Polska Akademia Nauk Zaprojektowane, syntetyczne peptydy, zawierające je kompozycje i sposoby ich zastosowania w leczeniu glejaków złośliwych
CN120272531B (zh) * 2025-06-10 2025-08-19 鼐济医药科技(杭州)有限公司 一种基于aav介导免疫微环境的脑胶质瘤动物模型构建方法

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4440859A (en) 1977-05-27 1984-04-03 The Regents Of The University Of California Method for producing recombinant bacterial plasmids containing the coding sequences of higher organisms
US4704362A (en) 1977-11-08 1987-11-03 Genentech, Inc. Recombinant cloning vehicle microbial polypeptide expression
NZ192465A (en) 1978-12-22 1983-09-30 Biogen Nv Recombinant dna molecule comprising gene coding for polypeptide displaying hbv (hepatitis b virus) antigenicity usesthereof
US4530901A (en) 1980-01-08 1985-07-23 Biogen N.V. Recombinant DNA molecules and their use in producing human interferon-like polypeptides
US4342566A (en) 1980-02-22 1982-08-03 Scripps Clinic & Research Foundation Solid phase anti-C3 assay for detection of immune complexes
US4678751A (en) 1981-09-25 1987-07-07 Genentech, Inc. Hybrid human leukocyte interferons
US4766075A (en) 1982-07-14 1988-08-23 Genentech, Inc. Human tissue plasminogen activator
US4582800A (en) 1982-07-12 1986-04-15 Hoffmann-La Roche Inc. Novel vectors and method for controlling interferon expression
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4757006A (en) 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US4677063A (en) 1985-05-02 1987-06-30 Cetus Corporation Human tumor necrosis factor
US4810648A (en) 1986-01-08 1989-03-07 Rhone Poulenc Agrochimie Haloarylnitrile degrading gene, its use, and cells containing the gene
US4897445A (en) 1986-06-27 1990-01-30 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Method for synthesizing a peptide containing a non-peptide bond
US5338839A (en) * 1988-04-12 1994-08-16 Massachusetts Institute Of Technology DNA encoding nestin protein
GB2267257A (en) 1992-05-14 1993-12-01 Ford Motor Co A vehicle load compartment liner.
KR100235089B1 (en) 1992-05-14 1999-12-15 Mitsui Chemicals Inc Ptp or blister packaging articles and packaging material therefor
CA2163032C (en) 1993-06-03 2001-02-06 John Landon Antibody fragments in therapy
AUPM322393A0 (en) 1993-12-24 1994-01-27 Austin Research Institute, The Mucin carbohydrate compounds and their use in immunotherapy
ATE244300T1 (de) 1996-01-17 2003-07-15 Imp College Innovations Ltd Immunotherapie mit verwendung von zytotoxischen t lymphozyten (ctl)
US5849589A (en) 1996-03-11 1998-12-15 Duke University Culturing monocytes with IL-4, TNF-α and GM-CSF TO induce differentiation to dendric cells
TW575583B (en) * 1996-04-24 2004-02-11 Akzo Nobel Nv Novel peptides suitable for use in antigen specific immunosuppressive therapy
JP2002513381A (ja) * 1996-07-22 2002-05-08 ザ ロックフェラー ユニバーシティー ＨＴＬＶ―Ｉ感染およびＨＴＬＶ―ＩＩ感染を予防するためのｅｎｖ―糖タンパク質ワクチン
AU6240798A (en) 1997-01-15 1998-08-07 Zymogenetics Inc. Zppar6, human tailless nuclear hormone receptor (tlx receptor)
EP0910641A1 (en) * 1997-02-13 1999-04-28 Smithkline Beecham Plc Neural cell adhesion molecule splicing variants
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
CA2311574A1 (en) * 1997-12-02 1999-06-10 Medarex, Inc. Cells expressing anti-fc receptor binding components
US7258860B2 (en) * 1998-03-18 2007-08-21 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer
CA2328992A1 (en) * 1998-04-27 1999-11-04 Northwest Hospital Nr-cam gene, nucleic acids and nucleic acid products for therapeutic and diagnostic uses for tumors
US6960651B2 (en) * 1999-06-29 2005-11-01 Millennium Pharmaceuticals, Inc. TANGO 332 polypeptides
US20020132753A1 (en) * 2000-01-31 2002-09-19 Rosen Craig A. Nucleic acids, proteins, and antibodies
CA2394039A1 (en) * 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
EP2316950A1 (en) 2000-03-27 2011-05-04 Technion Research and Development Foundation, Ltd. Single chain class I major histo-compatibility complexes, constructs encoding same and methods of generating same
US20040191260A1 (en) 2003-03-26 2004-09-30 Technion Research & Development Foundation Ltd. Compositions capable of specifically binding particular human antigen presenting molecule/pathogen-derived antigen complexes and uses thereof
EP1317275A1 (de) * 2000-09-06 2003-06-11 Müller, Friederike Arzneimittel mit einer für das rna-bindende koc-protein kodierenden dna-sequenz, einem koc-protein oder einer dna-sequenz des koc-promotors
WO2002046416A2 (en) * 2000-12-04 2002-06-13 Argonex Pharmaceuticals Cytotoxic t-lymphocyte-inducing immunogens for prevention, treatment, and diagnosis of cancer
US7919467B2 (en) * 2000-12-04 2011-04-05 Immunotope, Inc. Cytotoxic T-lymphocyte-inducing immunogens for prevention, treatment, and diagnosis of cancer
AU2002222108A1 (en) * 2000-12-08 2002-06-18 Oxford Glycosciences (Uk) Ltd. Diagnosis and treatment of alzheimer's disease
US20030109434A1 (en) * 2001-03-19 2003-06-12 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of kidney cancer
CA2364106A1 (fr) * 2001-11-30 2003-05-30 Christopher Gillberg Polynucleotide et proteine impliques dans la synaptogenese, variants de ceux-ci, et leurs applications therapeutiques et diagnostiques
US6589642B1 (en) 2001-12-21 2003-07-08 Kloeckner Pentaplast Of America, Inc. Three part high moisture barrier for packages
US7892559B2 (en) 2002-01-30 2011-02-22 Survac Aps Survivin-derived peptides and use thereof
US6992176B2 (en) * 2002-02-13 2006-01-31 Technion Research & Development Foundation Ltd. Antibody having a T-cell receptor-like specificity, yet higher affinity, and the use of same in the detection and treatment of cancer, viral infection and autoimmune disease
CA2476625A1 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Dyax Corp. Mhc-peptide complex binding ligands
WO2004015390A2 (en) * 2002-08-09 2004-02-19 Applera Corporation Lung cancer target proteins and use thereof
JP4721633B2 (ja) * 2002-10-11 2011-07-13 財団法人癌研究会 血小板凝集促進活性を有する物質
WO2004067029A1 (fr) * 2002-12-27 2004-08-12 Shenzhen Tsinghua Yuanxing Bio-Pharm Science & Technology Co., Ltd. Procede de preparation d'un vaccin et vaccins antitumoraux
AU2004228050A1 (en) 2003-04-04 2004-10-21 Board Of Regents, University Of Texas System Sapphyrins and uses thereof
US7273980B2 (en) 2004-01-13 2007-09-25 Wardle Scott A Position and velocity transducer using a phonograph disc and turntable
US7655751B2 (en) * 2004-01-23 2010-02-02 Green Peptide Co., Ltd. Epidermal growth factor receptor-derived peptides
DE102004026135A1 (de) 2004-05-25 2006-01-05 Immatics Biotechnologies Gmbh An MHC-Moleküle bindende Tumor-assoziierte Peptide
WO2006026569A2 (en) * 2004-08-27 2006-03-09 Northeastern University Comprehensive characterization of complex proteins at trace levels
ES2319286T3 (es) * 2004-10-02 2009-05-06 Immatics Biotechnologies Gmbh Epitopos inmunogenos de linfocitos t colaboradores de antigenos de tumor humanos y utilizacion de dichos epitopos en metodos inmunoterapeuticos.
CA2600898C (en) * 2004-12-07 2016-08-23 Toray Industries, Inc. Novel cancer antigen peptide and the use thereof
KR100809410B1 (ko) * 2005-07-06 2008-03-05 주식회사 브레인가드 줄기세포 분화 유도용 조성물 및 그의 용도
ES2330013T3 (es) * 2005-09-05 2009-12-03 Immatics Biotechnologies Gmbh Peptidos asociados a tumores unidos a moleculas del antigeno de leucocito humano (hla) de clase i o ii y vacunas contra el cancer relacionadas.
ATE461215T1 (de) 2005-09-05 2010-04-15 Immatics Biotechnologies Gmbh Tumor-assoziierte peptide, welche an unterschiedliche menschliche leukozytenantigene der klasse ii binden
US20070099251A1 (en) 2005-10-17 2007-05-03 Institute For Systems Biology Tissue-and serum-derived glycoproteins and methods of their use
US20070248628A1 (en) * 2005-12-06 2007-10-25 Keller Lorraine H Immunogens in cancer stem cells
WO2007072494A1 (en) 2005-12-23 2007-06-28 Naik Praful Ramchandra Metallized packaging blister container
CA2665816C (en) * 2006-09-21 2016-07-12 Vaxil Biotherapeutics Ltd. Antigen specific multi epitope vaccines
US8129184B2 (en) * 2006-09-26 2012-03-06 Cedars-Sinai Medical Center Cancer stem cell antigen vaccines and methods
CA2679743A1 (en) * 2007-03-06 2008-09-12 Barry G. Arnason Methods and compositions involving polymeric immunoglobulin fusion proteins
WO2009125394A1 (en) * 2008-04-09 2009-10-15 Technion Research & Development Foundation Ltd. Anti human immunodeficiency antibodies and uses thereof
KR101184869B1 (ko) * 2008-04-24 2012-09-20 이매틱스 바이오테크놀로지스 게엠베하 백신을 위한 인간 조직 적합성 항원(ｈｌａ) 종류 ｉ 또는 ｉｉ 분자에 결합하는 종양 관련 펩티드의 신규한 제형
PL2113253T3 (pl) * 2008-04-30 2010-09-30 Immatics Biotechnologies Gmbh Nowa postać leku - preparat zawierający peptydy nowotworowe wiążące się z antygenami ludzkich leukocytów klasy I i II, zastosowany w szczepionce
PL2172211T3 (pl) 2008-10-01 2015-05-29 Immatics Biotechnologies Gmbh Kompozycja związanych z guzem peptydów i związana z tym szczepionka przeciwrakowa do leczenia glejaka (GBM) i innych rodzajów raka
GB201004551D0 (en) 2010-03-19 2010-05-05 Immatics Biotechnologies Gmbh NOvel immunotherapy against several tumors including gastrointestinal and gastric cancer
GB201021289D0 (en) 2010-12-15 2011-01-26 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel biomarkers for a prediction of the outcome of an immunotherapy against cancer
US10206973B2 (en) * 2014-05-28 2019-02-19 Nono Inc. Chloride salt of TAT-NR2B9c
PE20181897A1 (es) 2016-04-21 2018-12-11 Immatics Biotechnologies Gmbh Inmunoterapia contra el melanoma y otros tipos de cancer
CN111315769A (zh) * 2017-09-06 2020-06-19 加州理工学院 信号传导和抗原呈递双功能受体(sabr)

Also Published As

Publication number Publication date
DK3120869T3 (da) 2020-08-10
DK2172211T3 (en) 2015-02-16
EP3120869B1 (en) 2020-07-22
HUE030296T2 (en) 2017-04-28
US20160376317A1 (en) 2016-12-29
BRPI0920759A2 (pt) 2016-03-08
AU2009300087A1 (en) 2010-04-08
LT3124043T (lt) 2020-07-10
US20160376312A1 (en) 2016-12-29
JP2016145210A (ja) 2016-08-12
EP2341927A2 (en) 2011-07-13
LT3106175T (lt) 2020-08-10
KR102133402B1 (ko) 2020-07-14
HRP20201015T8 (hr) 2022-01-21
CA2936870C (en) 2019-11-26
PT2331118T (pt) 2017-02-06
DK3132801T3 (da) 2020-02-10
EA201100586A1 (ru) 2011-10-31
CA2739384C (en) 2017-05-02
RS60385B1 (sr) 2020-07-31
KR20180088494A (ko) 2018-08-03
DK3069728T3 (en) 2019-02-25
DK3120868T3 (da) 2020-06-22
US20130004456A1 (en) 2013-01-03
TR201900809T4 (tr) 2019-02-21
ES2584245T3 (es) 2016-09-26
SI3069728T1 (sl) 2019-03-29
CA2936869A1 (en) 2010-04-08
SI3120868T1 (sl) 2020-08-31
US10919931B2 (en) 2021-02-16
LT3132801T (lt) 2020-02-10
US8895514B2 (en) 2014-11-25
PT3120870T (pt) 2020-07-01
HRP20170115T1 (hr) 2017-03-24
LT3120869T (lt) 2020-11-10
EP2172211A1 (en) 2010-04-07
US20160376313A1 (en) 2016-12-29
RS60338B1 (sr) 2020-07-31
JP6150859B2 (ja) 2017-06-21
US20160376316A1 (en) 2016-12-29
HRP20150223T1 (hr) 2015-06-05
RS60006B1 (sr) 2020-04-30
RS60656B1 (sr) 2020-09-30
DK3124043T3 (da) 2020-05-04
EP2331118B1 (en) 2016-10-26
CY1122913T1 (el) 2021-10-29
UA103202C2 (ru) 2013-09-25
HRP20161504T1 (hr) 2016-12-30
RS60381B1 (sr) 2020-07-31
HRP20182151T1 (hr) 2019-02-08
CN102170901B (zh) 2015-01-07
HUE031030T2 (en) 2017-06-28
SI3124043T1 (sl) 2020-07-31
UA110599C2 (uk) 2016-01-25
PL3106175T3 (pl) 2020-08-24
HRP20201228T1 (hr) 2021-02-05
HUE047365T2 (hu) 2020-04-28
JP2012504563A (ja) 2012-02-23
EP2331118A1 (en) 2011-06-15
HUE049364T2 (hu) 2020-09-28
PT2172211E (pt) 2015-03-09
PT3111952T (pt) 2019-02-05
US10047124B2 (en) 2018-08-14
EP3106175A1 (en) 2016-12-21
EP3120868A1 (en) 2017-01-25
JP2017029135A (ja) 2017-02-09
EA023378B1 (ru) 2016-05-31
EA201100587A1 (ru) 2011-10-31
US20160376314A1 (en) 2016-12-29
EP2172212A2 (en) 2010-04-07
PL3111952T3 (pl) 2019-04-30
EA023013B1 (ru) 2016-04-29
KR102392070B1 (ko) 2022-04-29
AU2009300088B2 (en) 2014-09-04
PL3120870T3 (pl) 2020-07-27
LT2331118T (lt) 2016-12-27
HRP20150223T8 (hr) 2015-07-03
JP2017018102A (ja) 2017-01-26
CA2936920C (en) 2019-12-03
RS60386B1 (sr) 2020-07-31
SI2172212T1 (sl) 2016-12-30
LT2172212T (lt) 2016-11-10
WO2010037514A2 (en) 2010-04-08
CA2936982C (en) 2019-12-03
EA201401104A1 (ru) 2015-05-29
SI3120870T1 (sl) 2020-08-31
CN102170900B (zh) 2016-10-26
US20210347822A1 (en) 2021-11-11
ES2770090T3 (es) 2020-06-30
PT3120869T (pt) 2020-09-22
ES2802227T3 (es) 2021-01-18
CN106986919A (zh) 2017-07-28
KR20220058655A (ko) 2022-05-09
US20210261614A1 (en) 2021-08-26
CY1123089T1 (el) 2021-10-29
LT3120870T (lt) 2020-08-10
SI2172211T1 (sl) 2015-03-31
MX2011003540A (es) 2011-06-20
BRPI0920791B8 (pt) 2022-02-15
HRP20201015T1 (hr) 2020-10-16
ES2607460T3 (es) 2017-03-31
US10227381B2 (en) 2019-03-12
CY1122677T1 (el) 2021-03-12
SI2331118T1 (sl) 2017-01-31
CY1119744T1 (el) 2018-06-27
HUE051030T2 (hu) 2021-01-28
MX2011003539A (es) 2011-06-20
PT2341927T (pt) 2016-08-02
US20150125478A1 (en) 2015-05-07
AU2009300088A1 (en) 2010-04-08
CY1121098T1 (el) 2019-12-11
CA2936869C (en) 2019-08-06
PT2172212T (pt) 2016-12-22
JP2017023136A (ja) 2017-02-02
SI3111952T1 (sl) 2019-01-31
LT3120868T (lt) 2020-08-10
PL2172212T3 (pl) 2017-04-28
SI2341927T1 (sl) 2016-08-31
KR101883426B1 (ko) 2018-07-31
HUE050428T2 (hu) 2020-12-28
HRP20190202T1 (hr) 2019-03-22
EP3111952B1 (en) 2018-10-31
EP3120869A1 (en) 2017-01-25
EP3132801B1 (en) 2019-10-30
KR20110082155A (ko) 2011-07-18
CA2936982A1 (en) 2010-04-08
PL3124043T3 (pl) 2020-07-27
WO2010037514A3 (en) 2010-06-03
HRP20200722T1 (hr) 2020-10-16
ES2612466T3 (es) 2017-05-17
US10047123B2 (en) 2018-08-14
DK3120870T3 (da) 2020-06-22
RS55543B1 (sr) 2017-05-31
HUE041446T2 (hu) 2019-05-28
US12234298B2 (en) 2025-02-25
NZ603016A (en) 2014-05-30
BRPI0920791B1 (pt) 2022-01-18
HRP20200988T1 (hr) 2020-10-16
RS58229B1 (sr) 2019-03-29
CA2936870A1 (en) 2010-04-08
US20130309193A1 (en) 2013-11-21
NZ591882A (en) 2012-12-21
CY1123113T1 (el) 2021-10-29
US20100158931A1 (en) 2010-06-24
ES2804723T3 (es) 2021-02-09
DK3106175T3 (da) 2020-06-22
US20210238227A1 (en) 2021-08-05
PT3132801T (pt) 2020-02-04
CA2936920A1 (en) 2010-04-08
CA2936868A1 (en) 2010-04-08
CA2936924A1 (en) 2010-04-08
PT3124043T (pt) 2020-05-12
US10100085B2 (en) 2018-10-16
US20110002963A1 (en) 2011-01-06
PL2341927T3 (pl) 2016-11-30
SI3120869T1 (sl) 2020-10-30
CY1123098T1 (el) 2021-10-29
JP5883476B2 (ja) 2016-03-15
EP3120870A1 (en) 2017-01-25
DK3111952T3 (en) 2019-01-28
US20210253637A1 (en) 2021-08-19
RS55043B1 (sr) 2016-12-30
KR20110074894A (ko) 2011-07-04
US8961985B2 (en) 2015-02-24
JP2016047825A (ja) 2016-04-07
EP3106175B1 (en) 2020-04-01
CA2936887A1 (en) 2010-04-08
CA2936924C (en) 2019-07-16
PL3132801T3 (pl) 2020-06-15
US8119139B2 (en) 2012-02-21
LT3069728T (lt) 2019-02-11
BRPI0920791A2 (pt) 2019-12-10
EP2172212A3 (en) 2010-04-14
KR20200085381A (ko) 2020-07-14
US10941181B2 (en) 2021-03-09
ES2819244T3 (es) 2021-04-15
ES2788129T8 (es) 2020-11-04
CN102170901A (zh) 2011-08-31
US20160355550A1 (en) 2016-12-08
KR101756488B1 (ko) 2017-07-11
JP2017000148A (ja) 2017-01-05
PL2172211T3 (pl) 2015-05-29
JP6367266B2 (ja) 2018-08-01
JP6297632B2 (ja) 2018-03-20
EP3069728B1 (en) 2018-11-14
CA2739387A1 (en) 2010-04-08
PT3120868T (pt) 2020-07-16
CY1118702T1 (el) 2017-07-12
DK2341927T3 (en) 2016-08-15
EA032437B1 (ru) 2019-05-31
AU2009300087B2 (en) 2014-09-04
CA2739384A1 (en) 2010-04-08
EP3120870B1 (en) 2020-04-01
US8318677B2 (en) 2012-11-27
CY1121258T1 (el) 2020-05-29
NZ624533A (en) 2015-09-25
PT3106175T (pt) 2020-07-01
ES2708654T3 (es) 2019-04-10
NZ591855A (en) 2012-11-30
JP2012504393A (ja) 2012-02-23
US8653035B2 (en) 2014-02-18
HUE029360T2 (en) 2017-02-28
JP2014239681A (ja) 2014-12-25
HRP20200110T1 (hr) 2020-05-15
ES2788129T3 (es) 2020-10-20
HRP20201025T1 (hr) 2020-12-25
HK1161106A1 (en) 2012-08-24
EP2341927B1 (en) 2016-05-04
ES2802226T3 (es) 2021-01-18
KR20160103558A (ko) 2016-09-01
EP2172211B1 (en) 2014-12-03
RS53782B1 (sr) 2015-06-30
MX338294B (es) 2016-04-11
US20170326217A1 (en) 2017-11-16
DK2331118T3 (da) 2017-01-09
CN102170900A (zh) 2011-08-31
PL3120868T3 (pl) 2020-08-24
KR101687840B1 (ko) 2016-12-19
SI3106175T1 (sl) 2020-08-31
US20190010190A1 (en) 2019-01-10
US9993540B2 (en) 2018-06-12
DK2172212T3 (da) 2016-12-19
EP3120868B1 (en) 2020-04-08
UA125277C2 (uk) 2022-02-16
ES2536465T3 (es) 2015-05-25
PL2331118T3 (pl) 2017-05-31
WO2010037513A1 (en) 2010-04-08
JP2017018101A (ja) 2017-01-26
HK1159526A1 (zh) 2012-08-03
RS58443B1 (sr) 2019-04-30
HRP20160915T1 (hr) 2016-10-07
US20160376315A1 (en) 2016-12-29
US11208434B2 (en) 2021-12-28
US12221493B2 (en) 2025-02-11
CY1123526T1 (el) 2022-03-24
US10046037B2 (en) 2018-08-14
CA2936887C (en) 2019-11-12
US10906936B2 (en) 2021-02-02
PL3069728T3 (pl) 2019-05-31
PL3120869T3 (pl) 2021-01-25
US20120141517A1 (en) 2012-06-07
EP3124043B1 (en) 2020-04-29
JP5753783B2 (ja) 2015-07-22
ES2710608T3 (es) 2019-04-26
RS55531B1 (sr) 2017-05-31
EP3124043A1 (en) 2017-02-01
JP5855940B2 (ja) 2016-02-09
LT3111952T (lt) 2018-12-27
HUE049366T2 (hu) 2020-09-28
CA2739387C (en) 2019-10-29
PT3069728T (pt) 2019-02-13
HUE049367T2 (hu) 2020-09-28
EP3111952A1 (en) 2017-01-04
HRP20201025T8 (hr) 2022-01-07
DK2331118T5 (en) 2017-06-19
CA2936868C (en) 2019-10-22
EP2172212B1 (en) 2016-10-05
JP6214066B2 (ja) 2017-10-18
HUE042115T2 (hu) 2019-06-28
EP3069728A1 (en) 2016-09-21
JP6294914B2 (ja) 2018-03-14
JP6294913B2 (ja) 2018-03-14
SI3132801T1 (sl) 2020-03-31
EP3132801A1 (en) 2017-02-22
CY1116302T1 (el) 2017-02-08
US11136352B2 (en) 2021-10-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TR201900852T4 (tr) Nöronal tümörler ve beyin tümörleri dahil olmak üzere çeşitli tümörlere karşı yeni immünoterapi.
TR201909021T4 (tr) Çeşitli nöronal tümörlere ve beyin tümörlerine karşı kişiselleştirilmiş immünoterapi.
AU2014271235A1 (en) Novel immunotherapy against several tumors including neuronal and brain tumors
AU2016204711B2 (en) Novel immunotherapy against several tumors including neuronal and brain tumors