[go: up one dir, main page]

RU2722729C2 - Bacterial strain lactobacillus delbrueckii subsp_ bulgaricus t-4809 used as starter of direct application for preparation of fermented milk products - Google Patents

Bacterial strain lactobacillus delbrueckii subsp_ bulgaricus t-4809 used as starter of direct application for preparation of fermented milk products Download PDF

Info

Publication number
RU2722729C2
RU2722729C2 RU2018139351A RU2018139351A RU2722729C2 RU 2722729 C2 RU2722729 C2 RU 2722729C2 RU 2018139351 A RU2018139351 A RU 2018139351A RU 2018139351 A RU2018139351 A RU 2018139351A RU 2722729 C2 RU2722729 C2 RU 2722729C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
fermented milk
bulgaricus
lactobacillus delbrueckii
delbrueckii subsp
Prior art date
Application number
RU2018139351A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2018139351A3 (en
RU2018139351A (en
Inventor
Андрей Германович Ланских
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Инновационные биотехнологии"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Инновационные биотехнологии" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Инновационные биотехнологии"
Priority to RU2018139351A priority Critical patent/RU2722729C2/en
Publication of RU2018139351A3 publication Critical patent/RU2018139351A3/ru
Publication of RU2018139351A publication Critical patent/RU2018139351A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2722729C2 publication Critical patent/RU2722729C2/en

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225Lactobacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Dairy Products (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology.
SUBSTANCE: invention relates to biotechnology, in particular to strains of microorganisms used for preparation of fermented milk products. Disclosed is a strain of Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809, having high growth activity and used as a starter of direct introduction for preparing a fermented milk product. Strain Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 is deposited in the State collection of microorganisms of normal microflora (SCNM) of the Federal Budgetary Institution of Science of G. N. Gabrichevskiy’s Moscow Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Federal Supervisory Natural Resources Management Service under collection number No.1262.
EFFECT: strain has a fast set of biomass during culturing, and fermented milk products based on it have low acidity (80–90 °T), which is maintained during three days of storage.
1 cl, 3 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к биотехнологии и молочной промышленности и представляет собой новый штамм Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809, обладающий высокой ростовой активностью и используемый в качестве закваски прямого внесения для приготовления кисломолочных продуктов.The invention relates to biotechnology and the dairy industry and is a new strain of Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809, which has high growth activity and is used as a direct starter culture for the preparation of fermented milk products.

Обеспечение продуктами питания, имеющими высокую биологическую ценность и способными оказывать лечебно-профилактическое действие, выполняющими роль продуктов функционального питания, является важным аспектом пищевой промышленности. Особое место среди продуктов функционального питания занимают кисломолочные продукты.The provision of food products of high biological value and capable of exerting a therapeutic effect, playing the role of functional nutrition products, is an important aspect of the food industry. Sour milk products occupy a special place among functional nutrition products.

Производство ферментированных продуктов питания основано на использовании стартовых культур. Например, для производства продуктов молочнокислого брожения применяют стартовые культуры молочнокислых бактерий. В последнее время разрабатываются новые стартовые культуры молочнокислых бактерий с промышленно важными свойствами: обеспечение микробиологической безопасности и органолептические, технологические, питательные и/или медицинские преимущества. Примерами являются молочнокислые бактерии, которые продуцируют противомикробные вещества, полисахариды, ароматические соединения, витамины, полезные ферменты и обладают пробиотическими свойствами.The production of fermented foods is based on the use of starter crops. For example, for the production of lactic acid fermentation products, starter cultures of lactic acid bacteria are used. Recently, new starter cultures of lactic acid bacteria with industrially important properties have been developed: ensuring microbiological safety and organoleptic, technological, nutritional and / or medical advantages. Examples are lactic acid bacteria that produce antimicrobials, polysaccharides, aromatics, vitamins, beneficial enzymes and possess probiotic properties.

Качество и биологическая ценность кисломолочных продуктов напрямую зависят от применяемых стартовых культур. Культуры должны обеспечивать воспроизводимость технологического процесса, стабильное качество готовой продукции, кроме того, культуры должны быть устойчивы к бактериофагам, иметь высокую выживаемость, обеспечивать ферментируемый молочный продукт необходимыми свойствами, а также позволять проявлять больше гибкости на производстве (использовать разные штаммы с разными свойствами и/или комбинировать их в зависимости от качества сырья).The quality and biological value of fermented milk products directly depend on the starting crops used. Crops must ensure reproducibility of the process, stable quality of the finished product, in addition, cultures must be resistant to bacteriophages, have high survival rate, provide the fermented milk product with the necessary properties, and also allow more flexibility in production (use different strains with different properties and / or combine them depending on the quality of the raw materials).

Для удовлетворения данных требований применяют закваски прямого внесения (Direct Vat Set (DVS) / Direct Vat Inoculation (DVI)), которые производятся в виде замороженных гранул или в лиофилизированной форме. Для обеспечения высокого качества заквасок прямого внесения, штаммы культур должны обладать высокой выживаемостью в процессе изготовления заквасок прямого внесения.Основными компаниями-правообладателями в исследуемой области являются Chr. Hansen (Дания), Bright Dairy & Food Co. (Китай), Meiji Holdings Co (Япония), DuPont Nutrition & Biosciences (Дания), Gervais Danone (Франция), NESTEC (Швейцария).To meet these requirements, direct starter cultures (Direct Vat Set (DVS) / Direct Vat Inoculation (DVI)) are used, which are produced in the form of frozen granules or in lyophilized form. To ensure the high quality of direct starter cultures, culture strains should have high survival during the manufacturing process of direct starter cultures. The main companies in the study area are Chr. Hansen (Denmark), Bright Dairy & Food Co. (China), Meiji Holdings Co (Japan), DuPont Nutrition & Biosciences (Denmark), Gervais Danone (France), NESTEC (Switzerland).

За рубежом в составе заквасок прямого внесения часто используют мутированные штаммы болгарской палочки с целью устранения эффекта «вторичного скисания» в результате ферментации лактозы (патент РФ №2232816, патент РФ №2446209).Abroad, mutated strains of Bulgarian bacillus are often used in direct starter cultures to eliminate the effect of “secondary souring” as a result of lactose fermentation (RF patent No. 2232816, RF patent No. 2446209).

Использование мутированных штаммов как компонентов заквасок прямого внесения имеет некоторые недостатки: неспецифический мутагенез ведет как к приобретению штаммом необходимого свойства, так и к появлению неспецифических мутаций, что приводит к нестабильности генома и постепенному вырождению данного штамма, что, в свою очередь, сильно ограничивает время его применения.The use of mutated strains as components of direct starter cultures has some drawbacks: nonspecific mutagenesis leads to both the acquisition of the desired property by the strain and the appearance of nonspecific mutations, which leads to instability of the genome and the gradual degeneration of this strain, which, in turn, greatly limits its time application.

Задачей изобретения является получение нового штамма, не являющегося генетически модифицированной культурой, обеспечивающего получение кисломолочных продуктов питания, а также обладающего высокой эффективностью в процессе получения сухой лиофилизированной микробной массы для изготовления заквасок прямого внесения.The objective of the invention is to obtain a new strain, which is not a genetically modified culture, providing fermented milk products, as well as having high efficiency in the process of obtaining dry lyophilized microbial mass for the manufacture of direct starter cultures.

Задача изобретения решается посредством селекции нового штамма Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 (регистрационный номер ГКНМ №1262), отвечающего современным требованиям, предъявляемым к компонентам кисломолочных продуктов, и обладающего высокой биохимической активностью.The objective of the invention is solved by selection of a new strain of Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 (registration number GKNM No. 1262), which meets modern requirements for components of fermented milk products and has high biochemical activity.

Настоящее изобретение относится к культуре штамма молочнокислых бактерий Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809, которая по ряду полезных качеств может быть использована в качестве компонента комплексной закваски прямого внесения для производства кисломолочных лечебно-профилактических продуктов питания.The present invention relates to a culture of a strain of lactic acid bacteria Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809, which, for a number of useful qualities, can be used as a component of a complex ferment of direct application for the production of fermented milk therapeutic and prophylactic food products.

Технический результат заключается в том, что предлагаемый к использованию штамм обладает быстрым набором биомассы при культивировании, высокой антагонистической активностью и укороченной лаг-фазой при сквашивании молока по сравнению с аналогичными штаммами данного вида, а кисломолочные продукты на его основе обладают низкой кислотностью (80-100°Т), которая сохраняется на протяжении 3 суток хранения, а также плотным сгустком. При хранении кисломолочных продуктов с использованием данного штамма не образуется сыворотка.The technical result consists in the fact that the strain proposed for use has a fast set of biomass during cultivation, high antagonistic activity and a shortened lag phase when fermenting milk in comparison with similar strains of this type, and dairy products based on it have low acidity (80-100 ° T), which persists for 3 days of storage, as well as a dense clot. When storing fermented milk products using this strain, no serum is formed.

Предлагаемый штамм Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 новый, в научной и патентной литературе не описан.The proposed strain of Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 is new, not described in the scientific and patent literature.

Штамм Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 выделен из домашнего кисломолочного продукта. Штамм Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры (ГКНМ) Федерального бюджетного учреждения науки Московского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора под коллекционным номером №1262.The strain Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 isolated from domestic fermented milk product. The strain Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 was deposited in the State collection of microorganisms of normal microflora (SCNM) of the Federal budget institution of science of the Moscow research institute of epidemiology and microbiology named after G.N. Gabrichevsky Rospotrebnadzor under collection number 1262.

1. Изучение анатомо-морфологических свойств штамма.1. The study of the anatomical and morphological properties of the strain.

Изучение колоний в полужидкой среде проводили на протяжении 12 пересевов суточных культур. В полужидкой БС питательной среде форма единичных колоний - рыхлая комета-елочка, длиной 5-7 мм, растет по всему объему среды, включая зону аэробиоза, на поверхности плотной питательной среды вырастают прозрачные апигментированные шероховатые колонии (R-форма), сметаноподобной консистенции. Грамположительные, неподвижные, неспорообразующие, прямые длинные тонкие палочки с закругленными концами, образующие цепочки из 4-8 клеток.The study of colonies in a semi-liquid medium was carried out over 12 passages of diurnal cultures. In a semi-liquid BS nutrient medium, the form of single colonies - a loose herringbone-tree comet, 5-7 mm long, grows throughout the entire volume of the medium, including the aerobiosis zone, on the surface of a dense nutrient medium transparent apigmented rough colonies (R-form), sour cream-like consistency grow. Gram-positive, motionless, non-spore forming, long straight thin sticks with rounded ends, forming chains of 4-8 cells.

2. Идентификация изучаемого штамма.2. Identification of the studied strain.

Для идентификации изучаемого штамма по белкам клеточной стенки использовали Bruker Daltonik MALDI Biotyper. Для этого брали единичные колонии 24 часовых культур третьей генерации, выращенных на поверхности МРС-4 в анаэробных условияхBruker Daltonik MALDI Biotyper was used to identify the studied strain by cell wall proteins. For this, single colonies of 24 hour-old cultures of the third generation were taken, grown on the surface of MPC-4 under anaerobic conditions

По данным MALDI штамм Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 определен как Lactobacillus delbrueckii с высокой долей достоверности (Score 2,433).According to MALDI, the strain of Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 was identified as Lactobacillus delbrueckii with a high degree of confidence (Score 2,433).

Генетическая идентификация штамма также подтверждена с помощью анализа 16SpPHK.Genetic identification of the strain is also confirmed by analysis of 16SpPHK.

3. Изучение технологических свойств штамма.3. The study of the technological properties of the strain.

Для определения особенностей штамма проводили культивирование при максимальной температуре 50°С.(Оптимальная температура развития для штамма 40-45°С, максимальная 45-50°С).To determine the characteristics of the strain, cultivation was carried out at a maximum temperature of 50 ° C. (The optimum development temperature for the strain is 40-45 ° C, maximum 45-50 ° C).

Наблюдали выраженный рост по всей толще среды, включая зону аэробиоза, - в полужидкой БС среде при высоких температурах. Данная культура растет в толще полужидких питательных сред и на поверхности плотных сред в присутствии кислорода, т.е. штамм относится к аэротолерантным микроорганизмам (микроаэрофилам).A pronounced growth was observed throughout the entire thickness of the medium, including the aerobiosis zone, in a semi-liquid BS medium at high temperatures. This culture grows in the thickness of semi-liquid nutrient media and on the surface of dense media in the presence of oxygen, i.e. the strain refers to aerotolerant microorganisms (microaerophiles).

4. Изучение протеолитической активности культуры. Изучение протеолитических свойств, накопление титруемой кислотности в молоке проводили на стерильном 12% сухом обезжиренном молоке, приготовленном в лаборатории питательных сред ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского. (СОМ по ГОСТ 33629-2015 "КОНСЕРВЫ МОЛОЧНЫЕ. МОЛОКО СУХОЕ. ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ", поставщик -Агропромышленный Союз «Алев»).4. The study of the proteolytic activity of the culture. The study of proteolytic properties, the accumulation of titratable acidity in milk was carried out on sterile 12% skimmed milk powder, prepared in the nutrient medium laboratory of FBUN MNIIEM them. G.N. Gabrichevsky. (COM in accordance with GOST 33629-2015 "CANNED MILK. DRY MILK. TECHNICAL CONDITIONS", the supplier is the Agro-Industrial Union "Alev").

Кислотность кисломолочных продуктов определяли в условных единицах - градусах Тернера (Т) (ГОСТ 3624-67).The acidity of fermented milk products was determined in arbitrary units — Turner degrees (T) (GOST 3624-67).

Ход определения: В колбу или стакан на 100-150 мл отмеряют пипеткой 10 мл исследуемого продукта. Остатки продукта на стенках пипетки смывают 20 мл дистиллированной воды, добавляют 3 капли 1% раствора фенолфталеина и титруют 0,1 Н раствором NaOH до появления бледно-розового цвета, не исчезающего в течение 1 минуты. Количество щелочи, израсходованное на титрование, умножают на 10 в пересчете на 100 мл продукта.Definition: In a flask or glass, 100-150 ml measure with a pipette 10 ml of the test product. The product residues on the walls of the pipette are washed off with 20 ml of distilled water, 3 drops of a 1% solution of phenolphthalein are added and titrated with 0.1 N NaOH solution until a pale pink color appears, which does not disappear for 1 minute. The amount of alkali spent on titration is multiplied by 10 in terms of 100 ml of the product.

Штамм к 16 часам сквашивает молоко с образованием равномерного сметанообразного сгустка приятного вкуса без синерезиса. В 1 мл сквашенного стерильного молока к 12 часам культивирования накапливается 108 микробных клеток. Каталазу не образует. Данные накопления титруемой кислотности представлены в таблице 1.The strain at 16 hours fermented milk with the formation of a uniform creamy clot of a pleasant taste without syneresis. In 1 ml of fermented sterile milk, 10 8 microbial cells accumulate by 12 hours of cultivation. Catalase does not form. The accumulation of titratable acidity are presented in table 1.

Figure 00000001
Figure 00000001

Figure 00000002
Figure 00000002

Как видно из данных, представленных в таблице, заявляемый штамм лактобацилл проявляет стабильные протеолитические свойства.As can be seen from the data presented in the table, the inventive strain of lactobacilli exhibits stable proteolytic properties.

5. Изучение антибиотикочувствительности штамма.5. The study of the antibiotic sensitivity of the strain.

Чувствительность к антибиотикам штамма изучали на модели 15 антимикробных препаратов, применяемых в медицинской практике. Изучение проводили диско - диффузионным методом в интерпретации Назыровой Н.Р. с соавт., 2008 г., рекомендованной МУ 2.3.2.2789-10. В работе использованы диски производства HiMedia для определения чувствительности к антимикробным препаратам. Полученные данные представлены в таблице 2.Sensitivity to the antibiotic strain was studied on a model of 15 antimicrobial agents used in medical practice. The study was conducted by the disco - diffusion method in the interpretation of Nazyrova N.R. et al., 2008, recommended by MU 2.3.2.2789-10. HiMedia discs were used in the work to determine the sensitivity to antimicrobial agents. The data obtained are presented in table 2.

Figure 00000003
Figure 00000003

Figure 00000004
Figure 00000004

* антибиотики, содержание которых контролируется в продуктах питания, наиболее важные для контроля за распространением антибиотикорезистентности.* antibiotics, the content of which is controlled in food, the most important for controlling the spread of antibiotic resistance.

Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 чувствителен к стрептомицину, ампициллину, цефалотину, гентамицину, линкомицину, полимиксину, пенициллину-G, тетрациклину, эритромицину, налидиксовой кислоте, ванкомицину, имипенему, промежуточно-устойчив к канамицину, устойчив к хлорамфениколу (левомицетину) и ципрофлоксацину.Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 is susceptible to streptomycin, ampicillin, cephalotin, gentamicin, lincomycin, polymyxin, penicillin-G, tetracycline, erythromycin, nalidixic acid, vancomycin, imipenimenucinomene, intermediate, chloriphenicene, chloripenicene, intermediate ciprofloxacin.

6. Изучение ферментативной активности штамма6. The study of the enzymatic activity of the strain

При изучении ферментативных свойств штамма сравнивали данные двух тест-систем API-50 CHL и АНАЭРОТЕСТ - 23. По результатам изучения ферментативных свойств штамма лактобацилл с применением двух тест-систем было обнаружено, что заявляемый штамм ферментирует глюкозу, фруктозу, лактозу, мочевину, замедленно ферментирует рамнозу, целлобиозу, ксилозу, D-арабинозу.When studying the enzymatic properties of the strain, the data of two test systems API-50 CHL and ANAEROTEST 23 were compared. Based on the results of a study of the enzymatic properties of the lactobacilli strain using two test systems, it was found that the inventive strain ferments glucose, fructose, lactose, urea, and it slows down rhamnose, cellobiose, xylose, D-arabinose.

Оптимальная температура культивирования 40-45°С. В качестве сред для культивирования штамма использовали обезжиренное молоко, среду Блаурокка, ГМ -среду, МРС, МРС-2, МРС-4 и другие. Штамм хранится в виде лиофильно высушенной культуры в защитной сахарозо-желатиновой среде при температуре 4±2°С не менее 12 месяцев.The optimum cultivation temperature is 40-45 ° C. Skim milk, Blaurock medium, GM medium, MPC, MPC-2, MPC-4 and others were used as media for culturing the strain. The strain is stored as a freeze-dried culture in a protective sucrose-gelatin medium at a temperature of 4 ± 2 ° C for at least 12 months.

Штамм не является генетически модифицированным, относится к микроорганизмам, непатогенным для человека, согласно классификации микроорганизмов, приведенных в санитарных правилах СП 1.3.2322-08 и СП 1.3.2518-09. Работа со штаммом не требует специальных мер предосторожности.The strain is not genetically modified, refers to microorganisms that are not pathogenic for humans, according to the classification of microorganisms given in the sanitary rules of SP 1.3.2322-08 and SP 1.3.2518-09. Work with the strain does not require special precautions.

7. Изучение антагонистической активности штамма.7. The study of the antagonistic activity of the strain.

Изучение антагонистической активности штамма проводили согласно МУ 2.3.2.2789-10 Методические указания по санитарно-эпидемиологической оценке безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, используемых для производства пищевых продуктов. В качестве штамма-прототипа использовался штамм Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus ВКПМ В 3141, депонированный во Всеросийской коллекекции промышленных микроорганизмов. Результаты представлены в таблице 3.The study of the antagonistic activity of the strain was carried out according to MU 2.3.2.2789-10 Guidelines for the sanitary-epidemiological assessment of the safety and functional potential of probiotic microorganisms used for food production. As the strain of the prototype was used the strain Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus VKPM B 3141, deposited in the All-Russian collection of industrial microorganisms. The results are presented in table 3.

Figure 00000005
Figure 00000005

Из данных, представленных в таблице 3, видно, что заявляемый штамм проявляет более высокую антагонистическую активность в отношении основных патогенных микроорганизмов, вызывающих пищевые отравления.From the data presented in table 3, it is seen that the inventive strain exhibits a higher antagonistic activity against major pathogenic microorganisms that cause food poisoning.

Для подтверждения высокой активности сквашивания заявляемого штамма по сравнению со штаммом-прототипом, в качестве которого использовали штамм Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus ВКПМ B-3141, депонированный во Всеросийской коллекции промышленных микроорганизмов, лиофилизаты каждого штамма в объеме 0,1% вносили в восстановленное сухое молоко. При этом наблюдаемый период лаг-фазы у заявляемого штамма был значительно короче (1,5 часа), чем у штамма-прототипа (4,5-5 часов), что является важным условием для промышленного производства кисломолочной продукции.To confirm the high activity of fermentation of the claimed strain in comparison with the prototype strain, which used the strain Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus VKPM B-3141, deposited in the All-Russian collection of industrial microorganisms, lyophilisates of each strain in a volume of 0.1% were added to reconstituted milk powder . Moreover, the observed period of the lag phase of the claimed strain was significantly shorter (1.5 hours) than that of the prototype strain (4.5-5 hours), which is an important condition for the industrial production of dairy products.

Аналогичным образом изучали скорость накопления биомассы у заявляемого штамма и штамма-прототипа, которая также показала, что оптическая плотность роста культуры заявляемого штамма через 12 часов культивирования в питательной среде на основе СОМ достигала 18 OD, в то время как у штамма-прототипа она составляла 9 OD., т.е. была выше в два раза.Similarly studied the biomass accumulation rate of the claimed strain and the prototype strain, which also showed that the optical growth density of the culture of the claimed strain after 12 hours of cultivation in a nutrient medium based on COM reached 18 OD, while in the prototype strain it was 9 OD., I.e. was twice as high.

Использование штамма иллюстрируется следующими примерами.The use of the strain is illustrated by the following examples.

Пример 1. Для приготовления производственной закваски прямого внесения на первом этапе получали посевной материал для засева в ферментер, для этого ресуспендировали флакон лиофилизированной культуры штамма, а полученную суспензию вносили в среду Блаурокка и инкубировали при температуре 37°С 18-24 часа.Example 1. For the preparation of industrial direct starter culture, at the first stage, seed was obtained for inoculation into the fermenter, for this a vial of the lyophilized strain culture was resuspended, and the resulting suspension was introduced into Blaurock medium and incubated at 37 ° C for 18-24 hours.

Полученную культуру использовали в качестве посевного материала для получения культуры 2-ой генерации. Среда культивирования - СОМ. Время инкубации: 12-18 ч.The resulting culture was used as seed for obtaining the culture of the 2nd generation. The cultivation medium is COM. Incubation time: 12-18 hours.

Для получения жидкой биомассы посевной материал 2-ой генерации вносили в биореактор в количестве 5% от объема среды культивирования. Среда культивирования - СОМ. Время инкубации до 12 ч.To obtain liquid biomass, seed of the second generation was introduced into the bioreactor in an amount of 5% of the volume of the cultivation medium. The cultivation medium is COM. Incubation time up to 12 hours.

Для получения сухой лиофилизированной микробной массы жидкую биомассу концентрировали методом центрифугирования, смешивали со средой высушивания на основе сахарозы и желатины и проводили лиофильное высушивание.To obtain a dry lyophilized microbial mass, the liquid biomass was concentrated by centrifugation, mixed with a drying medium based on sucrose and gelatin, and freeze drying was carried out.

Полученный лиофилизат может быть использован в качестве компонента комплексной закваски прямого внесения для производства кисломолочной продукции.The obtained lyophilizate can be used as a component of complex fermentation of direct application for the production of dairy products.

Пример 2. Использование штамма в составе сухой комплексной закваски прямого внесения для приготовления йогурта.Example 2. The use of the strain in the composition of dry complex starter culture direct application for the preparation of yogurt.

Для приготовления йогурта использовали нормализованное молоко жирностью 3,2%, подогретое до температуры 42°С. Вносили лиофилизат штамма Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 в количестве 0,1% вместе с лиофилизатом штамма Streptococcus thermophillus Т-5367 (депонирован в ГКНМ ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского под коллекционным номером 1266) также в количестве 0,1%. После внесения молоко тщательно перемешивали и инкубировали 5-6 часов при температуре 42°С до достижения значения рН кисломолочного продукта равного 4,5. После окончания инкубирования кисломолочный продукт охлаждали до температуры 2-8°С. Срок годности получаемого продукта составляет не менее 14 дней.For the preparation of yogurt used normalized milk fat content of 3.2%, heated to a temperature of 42 ° C. A lyophilizate of the Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809 strain was introduced in an amount of 0.1% together with a lyophilisate of the Streptococcus thermophillus T-5367 strain (deposited in the GKNM FGUN MNIIEM named after G.N.Gabrichevsky under collector number 1266) also in the amount of 0.1 % After application, the milk was thoroughly mixed and incubated for 5-6 hours at a temperature of 42 ° C until the pH of the fermented milk product is 4.5. After incubation, the fermented milk product was cooled to a temperature of 2-8 ° C. The shelf life of the product is at least 14 days.

Таким образом, свойства заявляемого штамма свидетельствуют о целесообразности его использования в качестве компонента закваски прямого внесения.Thus, the properties of the claimed strain indicate the feasibility of its use as a component of the yeast direct introduction.

Claims (1)

Штамм бактерий Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809, депонированный в ГКНМ ФБУН «МНИИЭМ им. Т.Н. Габричевского Роспотребнадзора» под коллекционным номером №1262, и используемый в качестве закваски прямого внесения для приготовления кисломолочных продуктов.The bacterial strain Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus T-4809, deposited in GKNM FBUN "MIIII them. T.N. Gabrichevsky Rospotrebnadzor "under collection number No. 1262, and used as a starter culture of direct application for the preparation of fermented milk products.
RU2018139351A 2018-11-08 2018-11-08 Bacterial strain lactobacillus delbrueckii subsp_ bulgaricus t-4809 used as starter of direct application for preparation of fermented milk products RU2722729C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018139351A RU2722729C2 (en) 2018-11-08 2018-11-08 Bacterial strain lactobacillus delbrueckii subsp_ bulgaricus t-4809 used as starter of direct application for preparation of fermented milk products

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018139351A RU2722729C2 (en) 2018-11-08 2018-11-08 Bacterial strain lactobacillus delbrueckii subsp_ bulgaricus t-4809 used as starter of direct application for preparation of fermented milk products

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2018139351A3 RU2018139351A3 (en) 2020-05-12
RU2018139351A RU2018139351A (en) 2020-05-12
RU2722729C2 true RU2722729C2 (en) 2020-06-03

Family

ID=70734957

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018139351A RU2722729C2 (en) 2018-11-08 2018-11-08 Bacterial strain lactobacillus delbrueckii subsp_ bulgaricus t-4809 used as starter of direct application for preparation of fermented milk products

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2722729C2 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2123045C1 (en) * 1997-09-26 1998-12-10 Башкирский институт патентоведения и сертификации Consortium of microorganisms lactobacillus acidophilus, lactobacillus delbruockii subspecies bulgaricus, saccharomyces for kumiss production
RU2391393C1 (en) * 2008-11-19 2010-06-10 Галина Геннадиевна Алехина Lactobacillus delbrueckii TS1-06 STRAIN USED FOR MAKING BACTERIAL PREPARATIONS AND PRODUCTION OF LIQUID SOUR MILK BROTH AS FOOD PRODUCT FOR MEDICAL AND PREVENTIVE PURPOSES
RU2446209C2 (en) * 2006-06-23 2012-03-27 Кр. Хансен А/С METHOD FOR PRODUCTION OF Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus STRAIN WITH LOW LACTIC ACID POSTPRODUCTION DEGREE, TEXTURISING STRAINS PRODUCED (VERSIONS), DAIRY PRODUCT AND METHOD OF ITS PRODUCTION USING TEXTURISING STRAINS

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2123045C1 (en) * 1997-09-26 1998-12-10 Башкирский институт патентоведения и сертификации Consortium of microorganisms lactobacillus acidophilus, lactobacillus delbruockii subspecies bulgaricus, saccharomyces for kumiss production
RU2446209C2 (en) * 2006-06-23 2012-03-27 Кр. Хансен А/С METHOD FOR PRODUCTION OF Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus STRAIN WITH LOW LACTIC ACID POSTPRODUCTION DEGREE, TEXTURISING STRAINS PRODUCED (VERSIONS), DAIRY PRODUCT AND METHOD OF ITS PRODUCTION USING TEXTURISING STRAINS
RU2391393C1 (en) * 2008-11-19 2010-06-10 Галина Геннадиевна Алехина Lactobacillus delbrueckii TS1-06 STRAIN USED FOR MAKING BACTERIAL PREPARATIONS AND PRODUCTION OF LIQUID SOUR MILK BROTH AS FOOD PRODUCT FOR MEDICAL AND PREVENTIVE PURPOSES

Also Published As

Publication number Publication date
RU2018139351A3 (en) 2020-05-12
RU2018139351A (en) 2020-05-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4772131B2 (en) Method for producing fermented milk using novel lactic acid bacteria
RU2109054C1 (en) Consortium of bifidobacterium bifidum 791, b longum b379m, b breve 79-119, b infantis 73-15, b adolescentis g7513 for preparing lactic acid nonfermented foodstuffs and bacterial preparations
JP4862053B2 (en) New lactic acid bacteria
CN104531587B (en) One lactobacillus plantarum and its application in active fermentation breast
CN113444664B (en) Lactobacillus brevis for producing gamma-aminobutyric acid and application thereof
CN110607255B (en) Preparation method and application of lactobacillus delbrueckii and direct vat set lactobacillus delbrueckii starter
EA024087B1 (en) Process for preparing a fermented milk product by synergistic fermentation of lactobacillus rhamnosus and lactobacillus paracasei subsp. paracasei
WO2019095274A1 (en) Lactobacillus plantarum with high butanedione yield and use thereof
RU2441910C1 (en) Streptococcus thermophilus strains used for fermented milk products preparation
RU2731738C1 (en) Bacterial strain lactobacillus delbrueckii subsp_ bulgaricus k 1903, used as starter of direct application for preparation of fermented milk products
CN109527088A (en) A kind of effervescent tablet leavening and preparation method thereof
JP4794592B2 (en) New lactic acid bacteria
RU2722729C2 (en) Bacterial strain lactobacillus delbrueckii subsp_ bulgaricus t-4809 used as starter of direct application for preparation of fermented milk products
RU2123045C1 (en) Consortium of microorganisms lactobacillus acidophilus, lactobacillus delbruockii subspecies bulgaricus, saccharomyces for kumiss production
RU2726113C2 (en) Strain of bacteria streptococcus thermophiles t-5367 used as starter of direct application for preparation of fermented milk products
RU2731731C1 (en) Bacterial strain lactobacillus acidophilus k 1901 used as starter of direct application for preparation of fermented milk products
RU2731718C1 (en) Bacterial strain lactobacillus acidophilus k 1902, used as starter of direct application for preparation of fermented milk products
RU2722700C2 (en) Bacterial strain lactobacillus delbrueckii subsp_ bulgaricus t-7817, used as starter of direct application for preparation of fermented milk products
RU2737198C2 (en) Strain of bacteria streptococcus thermophilus used as a component of a direct starter for preparation of fermented milk products
RU2728171C2 (en) Bacterial strain lactobacillus helveticus t-5068 used as direct starter for preparation of fermented milk products
CN101475918B (en) A kind of Lactobacillus casei with the ability to reduce the antigenicity of β-lactoglobulin in milk and its application
RU2724529C2 (en) Strain of bacteria streptococcus thermophilus t-3693 used as starter of direct application for preparation of fermented milk products
JP4794593B2 (en) Method for producing fermented milk using novel lactic acid bacteria
RU2786437C1 (en) Lactobacillus strain lacticaseibacillus paracasei 14-2020 vkpm - b-13841 used for the production of fermented milk products
RU2607023C1 (en) Dry bacterial starter for production of fermented milk products and production method thereof

Legal Events

Date Code Title Description
HC9A Changing information about inventors
HZ9A Changing address for correspondence with an applicant