RU2112040C1 - Nutrient medium for isolation of escherichia exhibiting persistent property - Google Patents
Nutrient medium for isolation of escherichia exhibiting persistent property Download PDFInfo
- Publication number
- RU2112040C1 RU2112040C1 RU94023373A RU94023373A RU2112040C1 RU 2112040 C1 RU2112040 C1 RU 2112040C1 RU 94023373 A RU94023373 A RU 94023373A RU 94023373 A RU94023373 A RU 94023373A RU 2112040 C1 RU2112040 C1 RU 2112040C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- escherichia
- medium
- interferon
- nutrient medium
- isolation
- Prior art date
Links
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 title claims abstract description 36
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 14
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 title claims abstract description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 title abstract 2
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 claims abstract description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 8
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims 1
- 230000001064 anti-interferon Effects 0.000 abstract description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 5
- 238000010227 cup method (microbiological evaluation) Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- 206010037596 Pyelonephritis Diseases 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000012984 antibiotic solution Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- JUQPZRLQQYSMEQ-UHFFFAOYSA-N CI Basic red 9 Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC=C1C(C=1C=CC(N)=CC=1)=C1C=CC(=[NH2+])C=C1 JUQPZRLQQYSMEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 1
- 206010037601 Pyelonephritis chronic Diseases 0.000 description 1
- 244000241525 Streptococcus cremoris Species 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940052223 basic fuchsin Drugs 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 201000006368 chronic pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицинской микробиологии, гигиене и санитарии, в частности к питательным средам для выделения эшерихий. The invention relates to medical microbiology, hygiene and sanitation, in particular to nutrient media for the allocation of Escherichia.
Феномен персистенции эшерихий используется в клинике для решения вопросов диагностики и дифференциальной диагностики заболеваний, вызываемых патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, а также с целью прогнозирования течения и рациональной терапии заболеваний (Бухарин О.В. Персистенция бактерий. Актовая речь. Оренбург. 1992). Персистентные свойства эшерихий используются для характеристики санитарно-бактериологического состояния водоемов (Гриценко В.А., Бухарин О.В. Характеристика микробиоценоза и оценка биопрофиля эшерихий как элементы микробиологического мониторинга гидросферы. /Тез. докл. международной конф. "Загрязнение окружающей среды. Проблемы токсикологии и эпидемиологии". /Пермь, 1993, с. 38 - 39) в связи с тем, что в условиях повышенного антропогенного и техногенного загрязнения окружающей среды уменьшается биоиндикационная значимость санитарно-показательных микроорганизмов. Происходит снижение количественного содержания кишечной палочки за счет ее гибели под воздействием токсикантов (Виноградова Л.А., Пархомчук Т. К. Комплексные санитарно-гигиенические критерии оценки качества водных объектов в условиях возрастающей антропогенной нагрузки. Гиг. и сан., 1991, N1, с. 24 - 26) на фоне повышения у нее персистентных характеристик (Бухарин О. В. , Дерябин Д.Г., Гриценко В.А. Анализ персистентных характеристик бактериальных популяций как основа микробиологического мониторинга природных экосистем. Тез. докл. Всесоюзного симпозиума "Микробиология охраны биосферы в регионах Урала и Северного Прикаспия". Оренбург, 1991, с. 17 - 18). The phenomenon of persistence of Escherichia is used in the clinic to solve the problems of diagnosis and differential diagnosis of diseases caused by pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms, as well as to predict the course and rational treatment of diseases (Bukharin O.V. Bacteria persistence. Act speech. Orenburg. 1992). The persistent properties of Escherichia are used to characterize the sanitary-bacteriological state of water bodies (Gritsenko V.A., Bukharin O.V. Characterization of the microbiocenosis and assessment of the bioprofile of Escherichia as elements of microbiological monitoring of the hydrosphere. Abstract of international conference. Environmental pollution. Problems of toxicology and epidemiology ". / Perm, 1993, pp. 38 - 39) due to the fact that in conditions of increased anthropogenic and technogenic pollution of the environment, the bioindication value of sanitary indicators decreases tree microorganisms. There is a decrease in the quantitative content of E. coli due to its death under the influence of toxicants (Vinogradova L.A., Parkhomchuk T.K. Comprehensive sanitary-hygienic criteria for assessing the quality of water bodies under conditions of increasing anthropogenic load. Gig. And San., 1991, N1, pp. 24 - 26) against the background of an increase in her persistent characteristics (Bukharin O. V., Deryabin D. G., Gritsenko V. A. Analysis of persistent characteristics of bacterial populations as the basis for microbiological monitoring of natural ecosystems. Abstract of the report of the All-Union Sym Ozium "Microbiology of the protection of the biosphere in the regions of the Urals and the Northern Caspian." Orenburg, 1991, pp. 17-18).
Одним из факторов, обеспечивающих персистирование микробной клетки, является антиинтерфероновый признак, характеризующий способность эшерихий инактивировать бактерицидную фракцию системы человеческого лейкоцитарного интерферона. Экспериментально-клинические материалы свидетельствуют, что антиинтерфероновая активность (АИА) определяет вирулентные и иммуно-супрессивные свойства микроорганизмов, обусловливает более длительное и тяжелое течение заболеваний с присоединением осложнений, характерных для иммунодефицитных состояний. Определение антиинтерферонового признака у эшерихий нашло широкое применение в клинико-лабораторной практике для оценки степени тяжести инфекционного процесса (а.с. N 1644911. Способ прогнозирования осложнений пиелонефрита. Бухарин О.В., Зыкова Л.С., Соколов В.Ю., Челпаченко О.Е. Открытия, 1992, N 16). Преимущественное обнаружение микроорганизмов, обладающих антиинтерфероновой активностью при различных патологических состояниях (Соколов В. Ю. Антиинтерфероновая активность микроорганизмов. Персистенция бактерий. Сб. научн. трудов. Куйбышев, 1990, с. 83 - 92), определяет интерес клиницистов и эпидемиологов к поиску антиинтерферонактивных эшерихий как в организме человека, так и во внешней среде. One of the factors ensuring the persistence of a microbial cell is the anti-interferon trait characterizing the ability of Escherichia to inactivate the bactericidal fraction of the human leukocyte interferon system. Experimental and clinical materials indicate that anti-interferon activity (AIA) determines the virulent and immunosuppressive properties of microorganisms, causes a longer and more severe course of diseases with the addition of complications characteristic of immunodeficiency states. Determination of the anti-interferon trait in Escherichia has found wide application in clinical and laboratory practice to assess the severity of the infectious process (a.s. N 1644911. A method for predicting complications of pyelonephritis. Bukharin OV, Zykova LS, Sokolov V.Yu., Chelpachenko O.E. Discovery, 1992, N 16). The predominant detection of microorganisms with anti-interferon activity in various pathological conditions (Sokolov V. Yu. Anti-interferon activity of microorganisms. The persistence of bacteria. Collection of scientific works. Kuibyshev, 1990, pp. 83 - 92) determines the interest of clinicians and epidemiologists in the search for anti-interferon-active Escherichia both in the human body and in the external environment.
На сегодняшний день бактериологический метод является единственным используемым для выделения эшерихий из исследуемого материала и осуществляется в соответствии с общепринятой методикой (Энтеробактерии. Руководство для врачей. Под руководством В.И. Покровского. М., 1985). Определение АИА осуществляется чашечным методом на основе феномена "отсроченного антагонизма" (а.с. N 156491. Способ определения антиинтерфероновой активности микроорганизмов. Бухарин О.В., Соколов В.Ю. Открытия, 1990, N 18), а также ускоренным методом (Соколов В. Ю. , Тарасевич А.В. Ускоренный метод определения антиинтерфероновой активности бактерий. ЖМЭИ, 1992, N 11 - 12, с. 10 - 11). Изучение АИА у эшерихий достаточно трудоемко, длительно по времени (от 3 до 5 сут.), требует большого количества питательных сред, лабораторной посуды, специальных ингредиентов, тест-штамма, что затрудняет определение этого признака у культур при массовых исследованиях. Это связано с отсутствием специальной питательной среды для селекции эшерихий с указанным признаком. To date, the bacteriological method is the only one used to isolate Escherichia from the studied material and is carried out in accordance with the generally accepted methodology (Enterobacteria. A guide for doctors. Under the guidance of V.I. Pokrovsky. M., 1985). The determination of AIA is carried out by the cup method based on the phenomenon of "delayed antagonism" (AS No. 156491. A method for determining the anti-interferon activity of microorganisms. Bukharin OV, Sokolov V.Yu. Discovery, 1990, No. 18), as well as by the accelerated method ( Sokolov V. Yu., Tarasevich A.V. Accelerated method for determining the anti-interferon activity of bacteria (ZhMEI, 1992, N 11 - 12, p. 10 - 11). The study of AIA in Escherichia is quite time-consuming, time-consuming (from 3 to 5 days), requires a large number of nutrient media, laboratory glassware, special ingredients, a test strain, which makes it difficult to determine this trait in cultures during mass studies. This is due to the lack of a special nutrient medium for the selection of Escherichia with the indicated trait.
Известен ряд питательных сред, которые используются в бактериологической практике для выделения и дифференциации эшерихий - Эндо, Левина и др. (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под редакцией М. О. Биргера. М., 1982). Однако ни одна из них не дает возможности избирательно выделять эшерихии, обладающие АИА. A number of nutrient media are known that are used in bacteriological practice to isolate and differentiate Escherichia - Endo, Levin, and others (Handbook of microbiological and virological research methods. Edited by M.O. Birger. M., 1982). However, none of them makes it possible to selectively isolate Escherichia possessing AIA.
Наиболее близкой по технической сущности и достигаемому эффекту к заявляемому изобретению является выбранная в качестве прототипа питательная среда Эндо для выделения и дифференциальной диагностики эшерихий, содержащая обычный питательный агар, чистую лактозу, спиртовой раствор основного фуксина и водный раствор сульфита натрия, выпускаемая в сухом виде в качестве официнального препарата (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под редакцией М.О. Биргера. М., 1973). Недостатком этой среды является невозможность избирательного выделения только эшерихий с АИА. The closest in technical essence and the achieved effect to the claimed invention is Endo culture medium selected as a prototype for isolation and differential diagnosis of Escherichia, containing conventional nutrient agar, pure lactose, an alcoholic solution of basic fuchsin and an aqueous solution of sodium sulfite, produced in dry form as official drug (Handbook of microbiological and virological research methods. Edited by M.O. Birger. M., 1973). The disadvantage of this environment is the inability to selectively isolate only Escherichia with AIA.
Характеристика среды-прототипа с указанием причины, препятствующей получению требуемого технического результата, дает основание сделать вывод о том, что заявляемое изобретение не известно из уровня техники, т.е. является новым. The characteristics of the prototype environment, indicating the reason that impedes the receipt of the required technical result, gives reason to conclude that the claimed invention is not known from the prior art, i.e. is new.
Существенные отличия заключаются в том, что заявляемая питательная среда содержит одним из компонентов антибиотик класса полусинтетических пенициллинов, позволяющий селекционировать эшерихии, обладающие АИА. Существенное отличие является новым и дает возможность осуществлять в более короткие сроки выделение антиинтерферонактивных эшерихий. Заявляемая среда может быть использована для массовых скрининг-исследований в клинике и при проведении санитарно-бактериологических обследований воды. Significant differences are that the claimed nutrient medium contains one of the components of the antibiotic class of semisynthetic penicillins, which allows you to select Escherichia with AI. A significant difference is new and makes it possible to more quickly isolate anti-interferon-active Escherichia. The inventive medium can be used for mass screening studies in the clinic and when conducting sanitary-bacteriological examinations of water.
Предлагаемая среда конструируется на основе известной питательной среды Эндо, в которую согласно формуле изобретения дополнительно вводят в качестве селективного агента раствор антибиотика карбенициллина на изотоническом растворе хлорида натрия в концентрации 1•10-2 - 1•10-3 г/мл в количестве 10 - 12 мас.%.The proposed medium is constructed on the basis of the well-known Endo nutrient medium, into which, according to the claims, a solution of the antibiotic carbenicillin in an isotonic sodium chloride solution is added in a concentration of 1 • 10 -2 - 1 • 10 -3 g / ml in an amount of 10 - 12 as a selective agent wt.%.
Питательную среду готовят следующим образом: первоначально готовят среду Эндо согласно инструкции. Приготовленную среду охлаждают до 50 - 60oC. В это время стерильно готовят разведение антибиотика карбенициллина в концентрации 1•10-2 - 1•10-3 г/мл на изотоническом растворе хлорида натрия. Карбенициллин выпускается официнально во флаконах по 1 г сухого вещества. К 100 мас. ч. приготовленной и охлажденной среды Эндо добавляют 11 - 13 мас. ч. приготовленного раствора антибиотика и перемешивают. Готовую среду разливают в стерильные чашки Петри и оставляют до полного застывания. Чашки со средой используются сразу же в опыте или могут храниться в условиях холодильника не более 24 ч. При проведении исследования на поверхность полученной питательной среды засевают пятачками суточные агаровые культуры выделенных эшерихий либо производят посев исследуемого материала согласно общепринятым методикам. Результаты учитывают через 24 ч инкубации в термостате при 37oC. Исследованиями установлено, что введение в состав питательной среды Эндо карбенициллина способствует избирательному росту антиинтерферонактивных эшерихий. Таким образом, выросшие на предлагаемой среде эшерихии считаются антиинтерферонактивными.The nutrient medium is prepared as follows: initially prepare the Endo medium according to the instructions. The prepared medium is cooled to 50 - 60 o C. At this time, dilution of the antibiotic carbenicillin in a concentration of 1 • 10 -2 - 1 • 10 -3 g / ml in an isotonic sodium chloride solution is sterilized. Carbenicillin is produced officially in bottles of 1 g of dry matter. To 100 wt. including cooked and chilled Endo medium add 11 to 13 wt. including prepared antibiotic solution and mix. The finished medium is poured into sterile Petri dishes and left until completely solidified. Cups with the medium are used immediately in the experiment or can be stored in the refrigerator for no more than 24 hours. During the study, daily agar cultures of the isolated Escherichia are sown on the surface of the obtained nutrient medium or the seeds of the test material are inoculated according to generally accepted methods. The results are taken into account after 24 h of incubation in a thermostat at 37 o C. Studies have shown that the introduction of endo carbenicillin into the nutrient medium promotes the selective growth of anti-interferon escherichia. Thus, Escherichia grown on the proposed environment are considered anti-interferon-active.
Теоретической предпосылкой для разработки предлагаемой среды послужили обнаруженные нами различия в действии антибиотиков на эшерихии, обладающие и не обладающие антиинтерфероновой активностью. Данные представлены в табл. 1. The theoretical prerequisite for the development of the proposed environment was the differences we discovered in the effect of antibiotics on Escherichia, which have and do not have anti-interferon activity. The data are presented in table. one.
Как видно из табл. 1, карбенициллин - антибиотик широкого спектра действия, относящийся к классу полусинтетических пенициллинов, подавляет рост практически всех эшерихий, не обладающих исследуемым признаком (98,5%), в то время как антиинтерферонактивные штаммы резистентны к данному антибиотику не менее чем в 76% случаев. Это явление, по всей вероятности, объясняется следствием детерминирования АИА и резистентности к карбенициллину единой или конъюгативной плазмидой. Подтверждением данного предположения может служить установленная способность карбенициллина стимулировать АИА у эшерихий, устойчивых к этому препарату (Челпаченко О.Е. Экспериментальное обоснование рациональной терапии пиелонефрита у детей под контролем маркеров персистенции возбудителя. Автореф. канд. дисс. Челябинск, 1993). Достаточно большое число штаммов антиинтерферонактивных эшерихий растет в присутствии тетрациклина и стрептомицина, тем не менее наличие определенного процента культур, не активных по исследуемому признаку и устойчивых к этим препаратам, делает неприемлемым их использование с целью селективного выделения антиинтерферонактивных эшерихий. Представленные в табл. 1 данные по действию на исследуемые штаммы полимиксина, эритромицина, левомицетина, ампициллина и канамицина также свидетельствуют о невозможности их использования с указанной целью. Таким образом, карбенициллин предлагается нами в качестве селективного компонента в заявляемой среде, позволяющей при ее использовании выделять не менее 76% антиинтерферонактивных эшерихий от общего количества активных штаммов, содержащихся в исследуемом материале. As can be seen from the table. 1, carbenicillin is a broad-spectrum antibiotic belonging to the class of semisynthetic penicillins that suppresses the growth of almost all Escherichia not having the studied trait (98.5%), while anti-interferon-active strains are resistant to this antibiotic in at least 76% of cases. This phenomenon, most likely, is explained by the determination of AIA and resistance to carbenicillin by a single or conjugative plasmid. This assumption can be confirmed by the established ability of carbenicillin to stimulate AI in Escherichia resistant to this drug (Chelpachenko O.E. Experimental substantiation of rational therapy of pyelonephritis in children under the control of pathogen persistence markers. Author. Cand. Diss. Chelyabinsk, 1993). A sufficiently large number of strains of anti-interferon-active Escherichia grows in the presence of tetracycline and streptomycin, nevertheless, the presence of a certain percentage of cultures that are not active by the studied trait and resistant to these drugs makes their use unacceptable for the selective isolation of anti-interferon-active Escherichia. Presented in the table. 1 data on the effect on the studied strains of polymyxin, erythromycin, chloramphenicol, ampicillin and kanamycin also indicate the impossibility of their use for this purpose. Thus, we propose carbenicillin as a selective component in the inventive medium, which allows using it to isolate at least 76% of anti-interferon active Escherichia from the total number of active strains contained in the test material.
Экспериментальным обоснованием дозы антибиотика, используемой в заявляемой среде, явились результаты серии опытов, в которых показано, что из расчета на 100 мл готовой среды Эндо 11 - 13 мл раствора антибиотика на изотоническом растворе хлорида натрия концентрации 1•10-2 - 1•10-3 г/мл является оптимальным количеством, необходимым для селективного роста антиинтерферонактивных эшерихий. При этом введение в среду раствора карбенициллина в концентрациях, больших чем 1•10-2 г/мл, и в количестве более 13 мл подавляет рост всех изучаемых штаммов, а в концентрации, меньшей чем 1•10-3 г/мл, и в количестве менее 11 мл не препятствует росту дифференцируемых штаммов. Результаты опытов приведены в табл. 2.The experimental justification for the dose of the antibiotic used in the claimed medium was the results of a series of experiments in which it is shown that, based on 100 ml of the finished medium, Endo 11 - 13 ml of the antibiotic solution on an isotonic solution of sodium chloride concentration of 1 • 10 -2 - 1 • 10 - 3 g / ml is the optimal amount necessary for the selective growth of anti-interferon active Escherichia. In this case, the introduction into the medium of a solution of carbenicillin in concentrations greater than 1 • 10 -2 g / ml, and in an amount of more than 13 ml inhibits the growth of all studied strains, and in a concentration of less than 1 • 10 -3 g / ml, and less than 11 ml does not prevent the growth of differentiable strains. The results of the experiments are given in table. 2.
Были проведены клинико-лабораторные исследования заявляемой среды. Clinical and laboratory studies of the claimed environment were carried out.
Пример 1. Example 1
Были приготовлены две питательные среды: одна согласно прототипу, вторая согласно формуле изобретения. На поверхность обеих сред были засеяны пятачками суточные агаровые культуры /30/ эшерихий, выделенных из исследуемого материала от больных с различной патологией и из воды поверхностных водоемов, с целью обнаружения у них антиинтерферонового признака. Результаты учитывали через 24 ч инкубации в термостате при 37oC. Наличие у исследуемых культур АИА подтверждалось в дальнейшем результатами чашечного метода определения АИА. Данные опыта представлены в табл. 3.Two nutrient media were prepared: one according to the prototype, the second according to the claims. Daily agar cultures / 30 / Escherichia, isolated from the studied material from patients with various pathologies and from the water of surface reservoirs, were seeded on the surface of both media with spots in order to detect an anti-interferon trait in them. The results were taken into account after 24 h of incubation in a thermostat at 37 o C. The presence of the AIA in the studied cultures was further confirmed by the results of the cup method for the determination of AIA. The experimental data are presented in table. 3.
Как видно из табл. 3, на среде-прототипе выросло почти в три раза больше культур, чем на заявляемой среде, из которых лишь у 40% штаммов антиинтерфероновая активность была подтверждена чашечным методом, в то время как на предлагаемой среде из 12 выросших культур все 12 /100%/ были антиинтерферонактивными. As can be seen from the table. 3, on the prototype medium, almost three times more cultures grew than on the claimed medium, of which only 40% of the strains showed anti-interferon activity by the cup method, while on the proposed medium of 12 grown cultures all 12/100% / were anti-interferonactive.
Пример 2. Example 2
Больная К., 8 лет. Диагноз: Хронический пиелонефрит в стадии обострения. Было проведено исследование мочи с целью обнаружения антиинтерфероновых эшерихий. Равные количества мочи в разведении 1•10-4 были засеяны на поверхность среды-прототипа и предлагаемой среды. Результаты учитывали через 24 ч инкубации при 37oC. Наличие у выросших колоний эшерихий антиинтерфероновой активности подтверждалось в дальнейшем результатами чашечного метода. Данные исследования представлены в табл. 4.Patient K., 8 years old. Diagnosis: Chronic pyelonephritis in the acute stage. A urine test was performed to detect anti-interferon Escherichia. Equal amounts of urine at a dilution of 1 • 10 -4 were seeded on the surface of the prototype medium and the proposed medium. The results were taken into account after 24 h of incubation at 37 o C. The presence of anti-interferon activity in the grown colonies of Escherichia was confirmed further by the results of the cup method. The research data are presented in table. 4.
Как видно из табл. 4, предлагаемая среда позволяет с большей эффективностью вести поиск антиинтерфероновых эшерихий в исследуемом материале. As can be seen from the table. 4, the proposed environment allows with greater efficiency to search for anti-interferon Escherichia in the studied material.
Пример 3. Example 3
Были проведены исследования пробы речной воды с целью выявления в ней антиинтерферонактивных эшерихий. После фильтрования 1 л воды мембранные фильтры были помещены на чашки Петри со средой-прототипом и предлагаемой средой. Результаты учитывались после 24 ч инкубации в термостате при 37oC. Данные проведенного исследования представлены в табл. 5.Research was conducted on a sample of river water in order to identify anti-interferon-active Escherichia in it. After filtering 1 liter of water, membrane filters were placed on Petri dishes with the prototype medium and the proposed medium. The results were taken into account after 24 hours of incubation in a thermostat at 37 o C. The data of the study are presented in table. 5.
Как видно из результатов, представленных в табл. 5, эффективность выделения антиинтерферонактивных эшерихий из воды значительно выше при использовании предлагаемой среды. As can be seen from the results presented in table. 5, the efficiency of the allocation of anti-interferon-active Escherichia from water is significantly higher when using the proposed environment.
Таким образом, применение предлагаемой питательной среды дает возможность избирательно выделять эшерихии, обладающие антиинтерфероновой активностью. При этом сокращаются сроки проведения микробиологических исследований, что обосновывает практическую ценность и экономическую эффективность ее использования при массовых скрининг-обследованиях как в клинической, так и в санитарно-гигиенической практике. Thus, the use of the proposed nutrient medium makes it possible to selectively isolate Escherichia with anti-interferon activity. At the same time, the time for conducting microbiological studies is reduced, which justifies the practical value and economic efficiency of its use in mass screening examinations in both clinical and sanitary-hygienic practice.
Компоненты питательной среды доступны, предлагаемая питательная среда легко может быть приготовлена в любой микробиологической лаборатории. The components of the culture medium are available, the proposed culture medium can easily be prepared in any microbiological laboratory.
Claims (1)
Среда Эндо (порошок) - 3,0
Карбенициллин в изотоническом растворе хлорида натрия в концентрации 1• 10-2 и 1 • 10-3 - 10 - 12
Вода дистиллированная - ОстальноезNutrient medium for the isolation of Escherichia with persistent properties based on Endo, characterized in that it additionally contains a selective agent, an antibiotic from the class of semisynthetic penicillins carbenicillin in an isotonic solution of sodium chloride at a concentration of 1 • 10 -2 and 1 • 10 -3 g / ml at the following ratio of components, wt.%:
Endo medium (powder) - 3.0
Carbenicillin in an isotonic sodium chloride solution at a concentration of 1 • 10 -2 and 1 • 10 -3 - 10 - 12
Distilled water - Other
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94023373A RU2112040C1 (en) | 1994-06-20 | 1994-06-20 | Nutrient medium for isolation of escherichia exhibiting persistent property |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94023373A RU2112040C1 (en) | 1994-06-20 | 1994-06-20 | Nutrient medium for isolation of escherichia exhibiting persistent property |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94023373A RU94023373A (en) | 1996-12-20 |
| RU2112040C1 true RU2112040C1 (en) | 1998-05-27 |
Family
ID=20157464
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94023373A RU2112040C1 (en) | 1994-06-20 | 1994-06-20 | Nutrient medium for isolation of escherichia exhibiting persistent property |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2112040C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2136761C1 (en) * | 1998-09-28 | 1999-09-10 | Акционерное общество "Новолипецкий металлургический комбинат" | Method of flushing of blast-furnace hearth |
| RU2209977C2 (en) * | 2001-10-01 | 2003-08-10 | Игнатов Евгений Владимирович | Method of construction of spring support and device for method embodiment |
-
1994
- 1994-06-20 RU RU94023373A patent/RU2112040C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. / Под ред. М.О.Биргера М., 1973, с.231 - 232. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2136761C1 (en) * | 1998-09-28 | 1999-09-10 | Акционерное общество "Новолипецкий металлургический комбинат" | Method of flushing of blast-furnace hearth |
| RU2209977C2 (en) * | 2001-10-01 | 2003-08-10 | Игнатов Евгений Владимирович | Method of construction of spring support and device for method embodiment |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU94023373A (en) | 1996-12-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Qaiyumi | Macro-and microdilution methods of antimicrobial susceptibility testing | |
| WO2016110177A1 (en) | Alkaline antibacterial peptide and targeting design and use thereof | |
| Haley | Yeast infections of the lower urinary tract 1. in vitro studies of the tissue phase of Candida albicans | |
| Riley | Evaluation of a method for detecting and following urinary tract infection in females without catheterization | |
| CN104651473B (en) | The method for determining the sub-lethal dose staphylococcus aureus resistance to the action of a drug and drug resistance simultaneously | |
| Al-Dahmoshi | Genotypic and phenotypic investigation of alginate biofilm formation among Pseudomonas aeruginosa isolated from burn victims in Babylon, Iraq | |
| Kanakan et al. | Case report: Nocardia amamiensis infection leading to worsening of chronic obstructive pulmonary disease symptoms in an elderly man | |
| Anderson et al. | Role of bacterial growth rates in the epidemiology and pathogenesis of urinary infections in women | |
| US8524468B2 (en) | Method for detecting the presence or absence of methicillin resistant staphylococcus aureus (MRSA) in a test sample | |
| RU2112040C1 (en) | Nutrient medium for isolation of escherichia exhibiting persistent property | |
| RU2388827C1 (en) | Method for detection of microorganisms sensitivity with multiple medicinal resistance to combinations of antibacterial preparations | |
| AL-Jumaa et al. | Laboratory diagnosis of Mycoplasma spp. from the upper respiratory tract and conjunctival infections in shelter cats | |
| Neamah | Isolation and identification of some types of yeast Candida spp and study of their sensitivity to some antifungals | |
| EP4127207B1 (en) | A lyophilized test kit for determination of antimicrobial biological activity of phage preparations against the bacteria staphylococcus aureus | |
| RU2840800C1 (en) | Method for quantitative assessment of lytic activity of bacteriophages | |
| RU2238316C2 (en) | Method for determination of hemolytic activity and its type in bacillus anthracis | |
| RU2160781C1 (en) | Method for revealing plague microbe in fleas | |
| Al-Najar et al. | Effect of alcoholic extracts of Punica grantum and Trigonella foenum on E. coli isolated from UTI | |
| Lianou et al. | Increased adherence to human epithelial cells of resistant Pseudomonas aeruginosa strains | |
| Gibbon et al. | A comparative study of the levels of nalidixic acid in plasma and urine and its antibacterial activity in urinary infections of paraplegics | |
| RU2261903C1 (en) | NUTRIENT MEDIUM FOR DETECTION OF Mycoplasma hominis AND METHOD FOR DIAGNOSIS OF UROGENITAL MYCOPLASMOSIS | |
| RU2192642C2 (en) | Method for predicting clinical efficiency of antibacterial preparation | |
| RU2292398C2 (en) | Method for presentation of hospital staphylococcus strain staphylococcus aureus | |
| RU2266963C1 (en) | Assay of strain bacillus anthracis population resistivity to anthracic bacteriophage | |
| Palanivel et al. | Common microorganism in cleft patients and inhibtion using Antimicrobial peptide (AMP) |