[go: up one dir, main page]

RS62781B1 - Policiklični amidni derivati kao inhibitori cdk9 - Google Patents

Policiklični amidni derivati kao inhibitori cdk9

Info

Publication number
RS62781B1
RS62781B1 RS20220005A RSP20220005A RS62781B1 RS 62781 B1 RS62781 B1 RS 62781B1 RS 20220005 A RS20220005 A RS 20220005A RS P20220005 A RSP20220005 A RS P20220005A RS 62781 B1 RS62781 B1 RS 62781B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
pyridin
mmol
chloro
dihydro
compound
Prior art date
Application number
RS20220005A
Other languages
English (en)
Inventor
Kurt Gordon Pike
Bernard Christophe Barlaam
Janet Hawkins
Savi Christopher De
Melissa Marie Vasbinder
Alexander Hird
Michelle Lamb
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of RS62781B1 publication Critical patent/RS62781B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/444—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring heteroatom, e.g. amrinone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)

Description

Opis
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na određene piridinske ili pirimidinske derivate za upotrebu u lečenju određenih oblika raka.
[0002] Ciklin zavisne protein kinaze (CDK) predstavljaju porodicu serinskih/treoninskih protein kinaza koje se aktiviraju po vezivanju za ciklinskog regulatornog partnera. Kompleksi CDK/ciklin su prvobitno identifikovani kao regulatori progresije ćelijskog ciklusa. Međutim, nedavno je otkrivena uloga kompleksa CDK/ciklin u transkripciji i obradi iRNK. CDK9/PTEFb (pozitivni faktor elongacije transkripcije b) fosforiluje karboksi-terminalni domen (CTD) velike podjedinice RNK polimeraze II (RNKP II), prevashodno Ser-2, regulišući elongaciju transkripcije. Inhibicija CDK9 i suzbijanje transkripcije dovode do brzog iscrpljivanja kratkoročnih transkripta iRNK i povezanih proteina, uključujući Mcl1 i c-myc, što dovodi do indukcije apoptoze u tumorskim ćelijama koje su hiperzavisne od ovih proteina preživljavanja. Ciljne transkripcione CDK, uključujući CDK9, stoga predstavljaju terapeutsku strategiju za lečenje tipova tumora koji su hiperzavisni od ovih labilnih proteina preživljavanja, uključujući, bez ograničenja, hematološke malignitete kao što su akutna mijeloidna leukemija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni B-krupnoćelijski limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom, i čvrste tumore kao što su rak dojke, rak pluća, neuroblastom i rak debelog creva. Inhibitori CDK9 takođe mogu imati terapeutsku primenu kod drugih indikacija bolesti, uključujući kardiološke, virusne, inflamatorne i bol.
[0003] Ovde su otkriveni nizovi novih piridinskih ili pirimidinskih derivata koji inhibiraju CDK9 i mogu biti korisni za lečenje hiperproliferativnih bolesti. Naročito, jedinjenja su za upotrebu u lečenju proliferativne bolesti kao što je rak, uključujući hematološke malignitete kao što su akutna mijeloidna leukemija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni B-krupnoćelijski limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom, i čvrste tumore kao što su rak dojke, rak pluća, neuroblastom i rak debelog creva.
Slika 1 prikazuje rendgenski difraktogram praha oblika A (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (primer 14).
Slika 2 prikazuje DSC/TGA termogram oblika A (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (primer 14).
Slika 3 prikazuje rendgenski difraktogram praha oblika A (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (primer 25).
Slika 4 prikazuje DSC/TGA termogram oblika A (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (primer 25).
Slika 5 prikazuje rendgenski difraktogram praha oblika B (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida (primer 86).
Slika 6 prikazuje DSC/TGA termogram oblika B (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida (primer 86).
Slika 7 prikazuje rendgenski difraktogram praha oblika B (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (primer 2).
Slika 8 prikazuje DSC/TGA termogram oblika B (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (primer 2).
OPIS PRONALASKA
[0004] U skladu sa predmetnim pronalaskom, obezbeđena su jedinjenja formule I:
Naznačeno time što:
A je C(R<5>) ili N;
R<5>je H, C1-3alkil, CN ili halogen;
R<2>je 3-7-člani heterocikloalkil ili 3-7-člani cikloalkil; opciono nezavisno supstituisan sa jednim do tri supstituenta
izabrana iz grupe koja se sastoji od R<10>, OR<10>, SR<10>, S(O)R<10>, S(O)2R<10>, C(O)R<10>, C(O)O R<10>, OC(O) R<10>, OC(O)OR<10>, NH2, NH R<10>, N(R<10>)2, NHC(O)H, NHC(O) R<10>, NR<10>C(O)H, N R<10>C(O)R<10>, NHS(O)2R<10>, NR<10>S(O)2R<10>, NHC(O)OR<10>, NR<10>C(O)OR<10>, NHC(O)NH2, NHC(O)NHR<10>, NHC(O)N(R<10>)2, N R<10>C(O)NH2, N R<10>C(O)NH R<10>, N R<10>C(O)N(R<10>)2, C(O)NH2, C(O)NH R<10>, C(O)N(R<10>)2, C(O)NHOH, C(O)NHOR<10>, C(O)NHS(O)2R<10>, C(O)N R<10>S(O)2R<10>, S(O)2NH2, S(O)2NHR<10>, S(O)2N(R<10>)2, S(O)2NHC(O)OR<10>, S(O)2NR<10>C(O)O R<10>, C(O)H, C(O)OH, OH, CN, NO2, F, Cl, Br i I; naznačeno time što jedna ili više CH2grupa prstena može biti opciono zamenjena odgovarajućim brojem -C(O) grupa, jedan ili više atoma sumpora ili azota prstena može biti opciono oksidisano da grade S-okside ili N-okside;
R<10>, svaki put kada se javlja, nezavisno je izabran iz grupe koja se sastoji od 3 do 6-člane cikloalkil ili heterocikloalkil grupe, C1-6alkil, -O- C1-6alkil, C1-6alkil-O- C1-6alkil, NH2, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, OH, CN, NO2, F, Cl, Br i I; naznačeno time što dve R<10>grupe zajedno sa atomima za koje su vezane mogu da grade 3 do 6-članu cikloalkil ili heterocikloalkil grupu; i svaka prethodno navedena R<10>alkil, cikloalkil i heterocikloalkil grupa može biti dalje supstituisana sa jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana od CN, OH, halogena, C1-3alkila, -O-C1-3alkila, NH2, NH- C1-3alkila i NHC(O)-C1-3alkila.
R<4>je
naznačeno time što X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 5 do 7-člani heterocikloalkil prsten koji, pored azota mosta, može da sadrži jedan ili dva heteroatoma izabrana od N, O i S, i taj prsten može biti zasićen ili delimično zasićen; naznačeno time što jedna ili dve CH2grupe prstena mogu opciono biti zamenjene odgovarajućim brojem -C(O) grupa, jedan ili više atoma sumpora ili azota prstena može biti opciono oksidisano dajući S-okside ili N-okside, i naznačeno time što prsten može biti supstituisan na ugljeniku prstena sa jednim ili dva R<10>supstituenta ili na azotu prstena R<12>supstituentom;
J je N ili CR<11>;
R<11>je H, C1-3alkil; i
R<12>je svaki put kad se javlja nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od 3 do 6-člane cikloalkil ili heterocikloalkil grupe, C1-6alkil, C1-6alkil-O-C1-6alkil, C(O)NH2, C(O)H; naznačeno time što R<12>alkil, cikloalkil i heterocikloalkil grupa mogu biti dalje supstituisane sa jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana od CN, OH i halogena, C1-3alkila, NH2i NH-C1-3alkila, NHC(O)-C1-3alkila ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli;
za upotrebu u lečenju hematološkog maligniteta izabranog od akutne mijeloidne leukemije, multiplog mijeloma, hronične limfocitne leukemije, difuznog B-krupnoćelijskog limfoma, Burkitovog limfoma, folikularnog limfoma, ili čvrstog tumora izabranog od raka dojke, raka pluća, neuroblastoma i raka debelog creva.
[0005] Jedinjenja formule (I) su korisna zbog svoje sposobnosti da inhibiraju aktivnost CDK9, i shodno tome su korisna u lečenju bolesti ili medicinskih stanja koja su u potpunosti ili delimično posredovana sa CDK9.
[0006] Jedinjenja formule (I) mogu biti korisna u lečenju hiperproliferativnih bolesti. Naročito, jedinjenja su za upotrebu u lečenju proliferativne bolesti kao što je rak, uključujući hematološke malignitete kao što su, bez ograničenja, akutna mijeloidna leukemija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni B-krupnoćelijski limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom, i čvrste tumore kao što su, bez ograničenja, rak dojke, rak pluća (uključujući, bez ograničenja, nemikrocelularni karcinom pluća (NSCLC)) uključujući neskvamozne i skvamozne podvrste, neuroblastom i rak debelog creva.
[0007] Takođe su otkriveni postupci za proizvodnju navedenih jedinjenja, farmaceutskih kompozicija koje ih sadrže, njihova upotreba u proizvodnji lekova za upotrebu u proizvodnji antiproliferativnog dejstva na toplokrvnim životinjama kao što je čovek, i postupci za upotrebu navedenih jedinjenja ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli u lečenju raka.
[0008] Kako bi se predmetni pronalazak lakše razumeo, prvo će biti definisani neki pojmovi. Dodatne definicije su date tokom detaljnog opisa.
[0009] Smatra se da je prethodna pisana specifikacija dovoljna da stručnjaku za ovu oblast omogući da primeni otelotvorenja. Prethodni opis i primeri detaljnije opisuju određena otelotvorenja, i opisuju najbolji režim koji su pronalazači razmatrali. Međutim, biće jasno da, bez obzira na to koliko prethodno može delovati detaljno u tekstu, otelotvorenja mogu da se primenjuju na puno načina, i zahtevi uključuju sve njihove ekvivalente.
[0010] Osim toga, „i/ili“, kada se ovde koristi, treba razumeti kao specifično objavljivanje svake od dve naznačene karakteristike ili komponente sa onom drugom ili bez nje. Tako, termin „i/ili“, kako se koristi u frazi poput „A i/ili B“, ovde treba da uključuje „A i B“, „A ili B“, (samo) „A“ i (samo) „B“. Slično tome, termin „i/ili“ kako se koristi u frazi poput „A, B i/ili C“ treba da obuhvati svaki od sledećih aspekata: A, B i C; A, B, ili C; A ili C; A ili B; B ili C; A i C; A i B; B i C; (samo) A; (samo) B; i (samo) C.
[0011] Ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini koji se ovde koriste imaju isto značenje kao što je poznato osobi sa uobičajenim znanjem u oblasti na koju se otkriće odnosi. Na primer, the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2. izd., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3. izd., 1999, Academic Press; i the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press, pružaju osobi sa veštinama opšti rečnik mnogih termina koji se koriste u ovom otkriću.
Jedinice, prefiksi i simboli su naznačeni u svom obliku prihvaćenom prema Međunarodnom sistemu jedinica (SI). Numerički rasponi uključuju brojeve koji definišu raspon.
[0012] Podrazumeva se da uvek kada su aspekti ovde opisani izrazom „obuhvata“, analogni aspekti opisani terminima „sastoji se od“ i/ili „suštinski se sastoji od“ takođe su obezbeđeni.
[0013] Pojmovi „inhibirati“, „blokirati“ i „suzbiti“ ovde se koriste naizmenično, i označavaju bilo koje statistički značajno smanjenje biološke aktivnosti, uključujući potpuno blokiranje aktivnosti. Na primer, „inhibicija“ može da se odnosi na smanjenje biološke aktivnosti od oko 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100%.
[0014] Ćelijska proliferacija može da se testira koristeći tehnike prepoznate u struci koje mere brzinu ćelijske deobe, i/ili frakciju ćelija u ćelijskoj populaciji koje podležu ćelijskoj deobi, i/ili brzinu gubitka ćelija iz ćelijske populacije usled terminalne diferencijacije ili ćelijske smrti (npr. inkorporacija timidina).
[0015] Termin „ispitanik“ odnosi se na bilo koju životinju (npr. sisara), uključujući, bez ograničenja, ljude, primate koji nisu ljudi, glodare i slično, koja će primiti određeno lečenje. Termini „ispitanik“ i „pacijent“ ovde se uobičajeno koriste naizmenično da se označi humani ispitanik.
[0016] Termin „farmaceutska kompozicija“ odnosi se na preparat koji je u takvom obliku da dozvoljava biološku aktivnost aktivnog sastojka, i koji ne sadrži dodatne komponente koje su neprihvatljivo toksične za ispitanika na kome će kompozicija biti primenjena. Takva kompozicija može biti sterilna.
[0017] Termini kao što su „lečenje“ ili „lečiti“ ili „ublažavanje“ ili „ublažiti“ odnose se istovremeno na (1) terapeutske mere koje leče, usporavaju, umanjuju simptome i/ili zaustavljaju progresiju dijagnostikovanog patološkog stanja ili poremećaja, i (2) profilaktičke ili preventivne mere koje sprečavaju i/ili usporavaju razvoj ciljnog patološkog stanja ili poremećaja. Dakle, oni kojima je potrebno lečenje obuhvataju pacijente koji već imaju poremećaj; one koji su skloni tome da imaju poremećaj; i one kod kojih taj poremećaj treba sprečiti. U određenim aspektima, ispitanik je uspešno „lečen“ od raka u skladu sa postupcima iz predmetnog otkrića ako pacijent pokazuje, npr. potpunu, delimičnu ili prolaznu remisiju određene vrste raka.
[0018] Termini „rak“, „tumor“, „karcinom“ i „maligni“ označavaju ili opisuju fiziološko stanje kod sisara koje je uobičajeno okarakterisano neregulisanim ćelijskim rastom. Primeri za rak uključuju, bez ograničenja, hematološke malignitete kao što su akutna mijeloidna leukemija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni B-krupnoćelijski limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom, i čvrste tumore kao što su rak dojke, rak pluća, neuroblastom i rak debelog creva.
[0019] Termin „citotoksični agens“, kako se ovde koristi, široko je definisan i odnosi se na supstancu koja inhibira ili sprečava funkciju ćelija i/ili uzrokuje uništavanje ćelija (ćelijska smrt) i/ili vrši antineoplastično/antiproliferativno dejstvo. Na primer, citotoksični agens neposredno ili posredno sprečava razvoj, sazrevanje ili širenje neoplastičnih ćelija tumora. Pojam uključuje i one agense koji uzrokuju samo citostatičko dejstvo, a ne prosto citotoksično dejstvo. Termin uključuje hemioterapeutske agense kako su u nastavku navedeni, kao i druge antagoniste HER2, antiangiogene agense, inhibitore tirozinske kinaze, inhibitore proteinske kinaze A, članove familije citokina, radioaktivne izotope i toksine, kao što su enzimski aktivni toksini bakterijskog, gljivičnog, biljnog ili životinjskog porekla.
Termin „hemioterapeutski agens“ je podskup termina „citotoksični agens“ koji obuhvata prirodna ili sintetička hemijska jedinjenja.
[0020] U skladu sa postupcima iz predmetnog otkrića, jedinjenja iz predmetnog otkrića mogu da se primene na pacijentu da bi se promovisao pozitivni terapeutski odgovor u pogledu raka. Termin „pozitivan terapeutski odgovor“, kada se odnosi na lečenje raka, označava poboljšanje simptoma povezanih sa bolešću.
[0021] Na primer, poboljšanje bolesti može da se okarakteriše kao potpuni odgovor. Termin „potpuni odgovor“ označava odsustvo bolesti koja klinički može da se detektuje uz normalizaciju rezultata bilo kojih prethodnih testova. Alternativno, poboljšanje bolesti može da se okarakteriše kao parcijalni odgovor. „Pozitivan terapeutski odgovor“ obuhvata smanjenje ili inhibiciju progresije i/ili trajanja raka, smanjenje ili ublažavanje težine raka i/ili ublažavanje jednog ili više njegovih simptoma usled primene jedinjenja iz predmetnog otkrića.
[0022] U specifičnim aspektima, takvi termini se odnose na jedan, dva ili tri ili više rezultata nakon primene jedinjenja iz predmetnog otkrića:
(1) stabilizacija, smanjenje ili eliminacija populacije ćelija raka;
(2) stabilizacija ili smanjenje rasta raka;
(3) ometanje nastanka raka;
(4) istrebljenje, uklanjanje ili kontrola primarnog, regionalnog i/ili metastatskog raka;
(5) smanjenje mortaliteta;
(6) povećanje preživljavanja bez bolesti, bez relapsa, bez progresije i/ili ukupnog preživljavanja, trajanja ili stope;
(7) povećanje stope odgovora, trajanja odgovora ili broja pacijenata koji imaju odgovor ili su u remisiji;
(8) smanjenje stope hospitalizacije;
(9) smanjeno trajanje hospitalizacije;
10. (10) veličina malignog tumora se održava i ne povećava se, ili se povećava za manje od 10%, poželjno manje od 5%, poželjno manje od 4%, poželjno manje od 2%, i (11) povećanje broja pacijenata u remisiji;
(12) smanjenje broja adjuvantnih terapija (npr. hemioterapija ili hormonska terapija) koje bi inače bile potrebne za lečenje raka.
Klinički odgovor može da se ispita koristeći tehnike skrininga kao što je PET, snimanje magnetnom rezonancom (MR), rendgensko radiografsko snimanje, snimanje kompjuterizovanom tomografijom (CT), protočna citometrija ili fluorescentno aktivirano ćelijsko sortiranje (FACS), histologija, makroskopska patologija i biohemijsko ispitivanje krvi, uključujući, bez ograničenja, promene koje mogu da se detektuju putem ELISA, RIA, hromatografije, i slično. Pored ovih pozitivnih terapeutskih odgovora, ispitanik koji je podvrgnut terapiji može iskusiti korisno dejstvo poboljšanja simptoma koji su povezani sa bolešću.
[0023] U ovoj specifikaciji, prefiks Cx-y, kako se koristi u terminima poput Cx-yalkil i slično (gde su x i y celi brojevi), označava numerički raspon atoma ugljenika koji su prisutni u grupi; na primer, C1-4alkil uključuje C1alkil (metil), C2alkil (etil), C3alkil (propil i izopropil) i C4alkil (butil, 1-metilpropil, 2-metilpropil i t-butil).
[0024] Ako nije izričito navedeno, vezujući atom grupe može biti bilo koji odgovarajući atom te grupe; na primer, propil uključuje prop-1-il i prop-2-il.
[0025] Kako se ovde koristi, fraza „opciono supstituisan“ pokazuje da je supstitucija opciona, te je stoga moguće da naznačena grupa bude supstituisana ili nesupstituisana. U slučaju da je supstitucija poželjna, bilo koji broj vodonika iz naznačene grupe može biti zamenjen odabirom od naznačenih supstituenata, pod uslovom da uobičajena valenca atoma na konkretnom supstituentu nije prekoračena, i da supstitucija dovodi do stabilnog jedinjenja.
[0026] U jednom aspektu, kada je konkretna grupa označena kao opciono supstituisana sa „jednim ili više“ supstituenata, konkretna grupa može biti nesupstituisana. U drugom aspektu, konkretna grupa može imati jedan supstituent. U drugom aspektu, konkretni supstituent može imati dva supstituenta. U još jednom aspektu, konkretna grupa može imati tri supstituenta. U još jednom aspektu, konkretna grupa može imati četiri supstituenta. U daljem aspektu,
1
konkretna grupa može imati jedan ili dva supstituenta. U još daljem aspektu, konkretna grupa može biti nesupstituisana, ili može imati jedan ili dva supstituenta.
[0027] Kako se ovde koristi, termin „alkil“ označava zasićene radikale ugljovodonika sa ravnim i razgranatim lancem koji imaju naznačeni broj atoma ugljenika. Reference na pojedinačne alkil grupe, kao što je „propil“, specifične su za verziju sa ravnim lancem, a reference na pojedinačne alkil grupe sa razgranatim lancem, kao što je „izopropil“, specifične su samo za verziju sa razgranatim lancem. U jednom aspektu, „alkil“ može biti „C1-4alkil“. U drugom aspektu, „alkil“ i „C1-4alkil“ može biti „C1-3alkil“. U drugom aspektu, „alkil“, „C1-
4alkil“ i „C1-3alkil“ može biti metil. Analogni dogovor važi za druge uopštene termine, na primer, „alkenil“ i „alkinil“.
[0028] „Cikloalkil“ je monociklični, zasićeni ili delimično nezasićeni alkil prsten koji sadrži 3 do 7 atoma ugljenika. Ilustrativni primeri za cikloalkil uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil i cikloheptil.
[0029] „Heterocikloalkil“ je zasićeni ili delimično zasićeni monociklični prsten sa 3 do 7 atoma prstena, pri čemu je 1, 2, 3 ili 4 atoma prstena izabrano od azota, sumpora ili kiseonika, i taj prsten može biti povezan sa ugljenikom ili azotom, naznačeno time što -CH2- grupa može biti opciono zamenjena sa -C(O)-; naznačeno time što je atom azota ili sumpora prstena opciono oksidisan dajući N-oksid ili S-oksid(e) (tj. sulfoksid i sulfon); naznačeno time što je -NH prstena opciono supstituisan acetil, formil, metil ili mezil grupom; i naznačeno time što je prsten opciono supstituisan sa jednim ili više halo. Ilustrativni primeri za „5- ili 6-člani heterocikloalkil“ uključuju imidazolinil, pirazolidinil, piperazinil, piperidinil, pirolidinil, oksazinil, morfolinil, heksahidropirimidinil i tiomorfolinil.
[0030] Odgovarajuće vrednosti za bilo koju R grupu (R<1>do R<12>) ili bilo koji deo ili supstituent za takve grupe uključuju:
Treba imati u vidu da primeri koji su dati za termine koji se koriste u opisu nisu ograničavajući.
[0031] Kako se ovde koristi, fraza „delotvorna količina“ označava količinu jedinjenja ili kompozicije koja je dovoljna da značajno i pozitivno izmeni simptome i/ili stanja koja se leče (npr. obezbeđuje pozitivan klinički odgovor). Delotvorna količina aktivnog sastojka za upotrebu u farmaceutskoj kompoziciji će se razlikovati u zavisnosti od konkretnog stanja koje se leči, težine stanja, trajanja lečenja, prirode istovremene terapije, konkretnih aktivnih sastojaka koji se koriste, konkretnih farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa/nosača koji se koriste, i sličnih faktora koji su poznati nadležnom lekaru.
[0032] Naročito, delotvorna količina jedinjenja formule (I) za upotrebu u lečenju raka je količina koja je dovoljna da kod toplokrvne životinje kao što je čovek simptomatski ublaži simptome raka i mijeloproliferativnih bolesti, da uspori progresiju raka i mijeloproliferativnih bolesti, ili da kod pacijenata sa simptomima raka i mijeloproliferativnih bolesti smanji rizik od pogoršanja.
[0033] Kako se ovde koristi, fraza „odlazeća grupa“ odnosi se na grupe koje lako mogu da se zamene nukleofilom kao što je aminski nukleofil, i alkoholni nukleofil, ili tiolni nukleofil. Primeri za odgovarajuće odlazeće grupe uključuju halo, kao što su hlor i brom, i sulfoniloksi grupu, kao što je metansulfoniloksi i toluen-4-sulfoniloksi.
[0034] Kako se ovde koristi, termin „farmaceutski prihvatljiv“ odnosi se na ona jedinjenja, supstance, kompozicije i/ili dozne oblike koji su, u okviru zdravog medicinskog rasuđivanja, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudskih bića i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugog problema ili komplikacije, u skladu sa odgovarajućim odnosom koristi i rizika.
[0035] Kako se ovde koristi, termin „zaštitna grupa“ odnosi se na one grupe koje se koriste da se spreči da odabrane reaktivne grupe (kao što je karboksi, amino, hidroksi i merkapto grupa) podležu neželjenim reakcijama.
[0036] Ilustrativni primeri za odgovarajuće zaštitne grupe za hidroksi grupu uključuju, bez ograničenja, acil grupe; alkanoil grupe, kao što je acetil; aroil grupe, kao što je benzoil; silil grupe, kao što je trimetilsilil, i arilmetil grupe, kao što je benzil. Uslovi deprotekcije za prethodne hidroksi zaštitne grupe će nužno zavisiti od odabira zaštitne grupe. Tako, na primer, acil grupa, kao što je alkanoil ili aroil grupa, može da se ukloni, na primer, hidrolizom sa odgovarajućom bazom kao što je hidroksid alkalnog metala, na primer, litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, silil grupa, kao što je trimetilsilil, može da se ukloni, na primer, pomoću fluorida ili vodene kiseline; ili arilmetil grupa, kao što je benzil grupa, može da se ukloni, na primer, hidrogenovanjem u prisustvu katalizatora kao što je paladijum na ugljeniku.
[0037] Ilustrativni primeri odgovarajućih zaštitnih grupa za amino grupu uključuju, bez ograničenja, toacil grupe; alkanoil grupe kao što je acetil; alkoksikarbonil grupe kao što je metoksikarbonil, etoksikarbonil i t-butoksikarbonil; arilmetoksikarbonil grupe kao što je benziloksikarbonil; i aroil grupe kao što je benzoil. Uslovi deprotekcije za prethodne amino zaštitne grupe nužno zavise od odabira zaštitne grupe. Tako, na primer, acil grupa kao što je alkanoil ili alkoksikarbonil grupa ili aroil grupa može da se ukloni, na primer, hidrolizom sa odgovarajućom bazom kao što je hidroksid alkalnog metala, na primer, litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, acil grupa kao što je t-butoksikarbonil grupa može da se ukloni, na primer, tretiranjem odgovarajućom kiselinom kao što je hlorovodonična, sumporna, fosforna kiselina ili trifluorsirćetna kiselina, a arilmetoksikarbonil grupa, kao što je benziloksikarbonil grupa, može da se ukloni, na primer, hidrogenovanjem preko katalizatora kao što je paladijum na ugljeniku, ili tretiranjem Luisovom kiselinom, na primer, bor trihloridom. Odgovarajuća alternativna zaštitna grupa za primarnu amino grupu je, na primer, ftaloil grupa, koja može da se ukloni tretiranjem alkilaminom, na primer, dimetilaminopropilaminom ili 2-hidroksietilaminom, ili hidrazinom.
Zaštitne grupe mogu da se uklone u bilo kojoj pogodnoj fazi sinteze koristeći uobičajene tehnike dobro poznate u oblasti hemije, ili mogu da se uklone u kasnijem koraku reakcije ili obradi.
1
[0038] Kada se pominje supstituent „R“ u ilustrativne svrhe, sledeće definicije supstituenta se odnose na naznačenu strukturu:
[0039] U okviru predmetnog pronalaska biće jasno da jedinjenje formule (I) ili njegova so mogu da ispoljavaju pojavu tautomerizacije, i da crteži formula u ovoj specifikaciji mogu da predstavljaju samo jedan od mogućih tautomernih oblika. Biće jasno da pronalazak obuhvata svaki tautomerni oblik koji ima inhibitorsku aktivnost CDK9, i nije ograničen na bilo koji pojedinačni tautomerni oblik koji se koristi na crtežima formula.
[0040] Takođe se podrazumeva da određena jedinjenja formule (I) i njihove soli mogu da postoje u solvatisanom kao i u nesolvatisanom obliku, kao što je, na primer, hidratisani oblik. Jasno je da pronalazak obuhvata sve takve solvatisane oblike koji imaju inhibitorsku aktivnost CDK9.
[0041] Jedinjenja formule (I) takođe mogu biti obezbeđena kao estri koji mogu da se hidrolizuju in vivo. Estar jedinjenja formule (I) koji može da se hidrolizuje in vivo, koji sadrži karboksi ili hidroksi grupu je, na primer, farmaceutski prihvatljiv estar koji se cepa u organizmu čoveka ili životinje kako bi se proizvela matična kiselina ili alkohol. Takvi estri mogu da se identifikuju primenom na test životinji, na primer, intravenski, jedinjenja koje se testira, i zatim ispitivanjem telesnih tečnosti test životinje.
[0042] Odgovarajući farmaceutski prihvatljivi estri za karboksi uključuju C1-6alkoksimetil estre, na primer, metoksimetil, C1-6alkanoiloksimetil estre, na primer, pivaloiloksimetil, ftalidil estre, C3-8cikloalkkarboniloksiC1-6alkil estre, na primer, 1-cikloheksilkarboniloksietil, (1,3-dioksolen-2-on)ilmetil estre, na primer, (5-metil-1,3-dioksolen-2-on)ilmetil i C1-6alkoksikarboniloksietil estre, na primer, 1-metoksikarboniloksietil; i mogu da nastanu na bilo kojoj karboksi grupi u jedinjenjima iz ovog pronalaska.
[0043] Odgovarajući farmaceutski prihvatljivi estri za hidroksi uključuju neorganske estre kao što su fosfatni estri (uključujući fosforamidne ciklične estre) i α-aciloksialkil etre i srodna jedinjenja koja se, usled in vivo hidrolize estra, razgrađuju, dajući matične hidroksi grupe. Primeri za α-aciloksialkil etar uključuju acetoksimetoksi i 2,2-dimetilpropioniloksimetoksi. Odabir grupa koje grade estar koji može da se hidrolizuje in vivo za hidroksi uključuje C1-
10alkanoil, na primer, acetil, benzoil, fenilacetil, supstituisani benzoil i fenilacetil; C1-
10alkoksikarbonil (za dobijanje alkil karbonatnih estara), na primer, etoksikarbonil; di-C1-
4alkilkarbamoil i N-(di-C1-4alkilaminoetil)-N-C1-4alkilkarbamoil (za dobijanje karbamata); di-C1-4alkilaminoacetil i karboksiacetil. Primeri supstituenata prstena na fenilacetil i benzoil grupi uključuju aminometil, C1-4alkilaminometil i di-(C1-4alkil)aminometil, i morfolino ili piperazino povezan sa atomom azota prstena putem metilen vezujuće grupe sa 3- ili 4-pozicijom benzoil prstena. Drugi estri od interesa koji mogu da se hidrolizuju in vivo uključuju, na primer, R<A>C(O)OC1-6alkil-CO-, naznačeno time što je R<A>, na primer, benziloksi-C1-4alkil ili fenil. Odgovarajući supstituenti na fenil grupi takvih estara uključuju, na primer, 4-C1-
4alkilpiperazino-C1-4alkil, piperazino-C1-4alkil i morfolino-C1-4alkil.
[0044] Jedinjenja formule (I) mogu da grade stabilne farmaceutski prihvatljive kisele ili bazne soli, i u takvim slučajevima može biti pogodna primena jedinjenja u vidu soli. Primeri za kisele adicione soli uključuju acetat, adipat, askorbat, benzoat, benzensulfonat, bikarbonat, bisulfat, butirat, kamforat, kamforsulfonat, holin, citrat, cikloheksil sulfamat, dietilendiamin, etansulfonat, fumarat, glutamat, glikolat, hemisulfat, 2-hidroksietil-sulfonat, heptanoat, heksanoat, hidrohlorid, hidrobromid, hidrojodid, hidroksimaleat, laktat, malat, maleat, metansulfonat, meglumin, 2-naftalensulfonat, nitrat, oksalat, pamoat, persulfat, fenilacetat, fosfat, difosfat, pikrat, pivalat, propionat, hinat, salicilat, stearat, sukcinat, sulfamat, sulfanilat, sulfat, tartarat, tozilat (p-toluensulfonat), trifluoracetat i undekanoat. Primeri za bazne soli uključuju amonijumove soli; soli alkalnih metala, kao što su soli natrijuma, litijuma i kalijuma; soli zemnoalkalnih metala, kao što su soli aluminijuma, kalcijuma i magnezijuma; soli sa organskim bazama, kao što su soli dicikloheksilamina i N-metil-D-glukamin; i soli sa aminokiselinama kao što su arginin, lizin, ornitin, i tako dalje. Takođe, bazne grupe koje sadrže azot mogu biti kvaternizovane sa agensima kao što su: niži alkil halidi, kao što su metil, etil, propil i butil halidi; dialkil sulfati, kao što su dimetil, dietil, dibutil; diamil sulfati; halidi dugog
1
lanca, kao što su decil, lauril, miristil i stearil halidi; arilalkil halidi, kao što su benzil bromid, i drugi. Poželjne su netoksične fiziološki prihvatljive soli, mada mogu biti korisne i druge soli, recimo za izolovanje ili prečišćavanje proizvoda.
[0045] Soli mogu da se dobiju na uobičajeni način, recimo reakcijom proizvoda u obliku slobodne baze sa jednim ili više ekvivalenata odgovarajuće kiseline u rastvaraču ili medijumu u kome je so nerastvorljiva, ili u rastvaraču kao što je voda, koji se uklanja pod vakuumom ili liofilizacijom ili zamenom anjona postojeće soli drugim anjonom na odgovarajućoj jonoizmenjivačkoj smoli.
[0046] Jedinjenja formule (I) imaju hiralne centre, te tako postoje kao stereoizomeri. Jasno je da pronalazak obuhvata sve takve stereoizomere, uključujući enantiomere i dijastereoizomere. U meri u kojoj jedinjenja formule (I) mogu da postoje u optički aktivnim ili racemskim oblicima, pronalazak u svojoj definiciji obuhvata svaki taj optički aktivan ili racemski oblik koji ima prethodno pomenutu aktivnost. Predmetni pronalazak obuhvata sve takve stereoizomere koji imaju aktivnost kako je ovde definisana.
[0047] Sinteza optički aktivnih oblika može da se sprovede standardnim tehnikama organske hemije koje su dobro poznate u struci, na primer, sintezom iz optički aktivnih polaznih supstanci, ili razdvajanjem racemskog oblika. Racemati mogu da se razdvoje na pojedinačne enantiomere koristeći poznate procedure (vidite, na primer, Advanced Organic Chemistry: 3. izdanje: autor J March, str. 104–107). Odgovarajuća procedura obuhvata dobijanje dijastereomernih derivata putem reakcije racemske supstance sa hiralnim pomoćnim agensom, a zatim razdvajanje dijastereomera, na primer, pomoću hromatografije, i zatim cepanjem pomoćne vrste. Slično tome, prethodno navedena aktivnost može da se proceni koristeći standardne laboratorijske tehnike koje se ovde navode u nastavku.
[0048] Tako, u celoj ovoj specifikaciji, kada se upućuje na jedinjenje formule (I), treba razumeti da termin jedinjenje obuhvata stereoizomere, smeše stereoizomera, i polimorfe koji inhibiraju aktivnost CDK9 kod čoveka ili životinje.
[0049] Stereoizomeri mogu da se razdvoje koristeći konvencionalne tehnike, npr. hromatografiju ili frakcionu kristalizaciju. Enantiomeri mogu da se izoluju putem razdvajanja racemata, na primer, frakcionom kristalizacijom, rezolucijom ili pomoću HPLC.
1
Dijastereoizomeri mogu da se izoluju pomoću razdvajanja na osnovu različitih fizičkih svojstava dijastereomera, na primer, pomoću frakcione kristalizacije, HPLC ili fleš hromatografije. Alternativno, konkretni izomeri mogu da se dobiju pomoću hiralne sinteze od hiralnih polaznih supstanci u uslovima koji neće uzrokovati racemizaciju niti epimerizaciju, ili derivatizacijom sa hiralnim reagensom.
[0050] Kada je obezbeđen specifičan stereoizomer (bilo da je obezbeđen pomoću razdvajanja, hiralne sinteze ili drugih postupaka), poželjno je obezbeđen suštinski izolovan od ostalih stereoizomera istog jedinjenja. U jednom aspektu, smeša koja sadrži konkretni stereoizomer jedinjenja formule (I) može da sadrži manje od 30%, konkretno manje od 20%, i konkretnije manje od 10% masenih, drugih stereoizomera istog jedinjenja. U drugom aspektu, smeša koja sadrži konkretni stereoizomer jedinjenja formule (I) može da sadrži manje od 6%, konkretno manje od 3%, i konkretnije manje od 2% masenih, drugih stereoizomera jedinjenja. U drugom aspektu, smeša koja sadrži konkretni stereoizomer jedinjenja formule (I) može da sadrži manje od 1%, konkretno manje od 0,5%, i konkretnije manje od 0,3%, a još konkretnije manje od 0,1% masenih, drugih stereoizomera jedinjenja. Kada apsolutna konfiguracija izolovanih stereoizomera nije određena, stereoizomeri mogu da se razlikuju na osnovu postupka pripreme ili razdvajanja. Na primer, izolovani stereoizomeri mogu da se razlikuju na osnovu svog vremena elucije i da se označe, na primer, kao izomer 1, izomer 2, itd.
[0051] U skladu sa predmetnim pronalaskom, jedinjenja iz pronalaska se javljaju u brojnim strukturno različitim oblicima. Cilj predmetnog pronalaska je da se obezbede suštinski čisti kristalni oblici u nekim aspektima pronalaska.
[0052] Neki strukturni oblici pronalaska mogu da pruže prednosti. Na primer, neki oblici jedinjenja iz pronalaska mogu biti lakši za rukovanje i skladištenje. Drugi oblici jedinjenja iz pronalaska mogu lakše da se okarakterišu pošto postoje u dobro definisanom stanju. Pored toga, jedinjenje iz pronalaska može lakše da se sintetiše na reproduktivan način, te se tako njime lakše rukuje prilikom proizvodnje u punom obimu.
[0053] Kada je obezbeđen specifični polimorfni oblik, on je pogodno obezbeđen suštinski izolovan od drugih polimorfnih oblika istog jedinjenja. U jednom aspektu, smeša koja sadrži konkretni polimorfni oblik jedinjenja formule (I) može da sadrži manje od 30%, konkretno manje od 20%, i konkretnije manje od 10% masenih, drugih polimorfnih oblika istog jedinjenja.
1
U drugom aspektu, smeša koja sadrži konkretni polimorfni oblik jedinjenja formule (I) može da sadrži manje od 6%, konkretno manje od 3%, i konkretnije manje od 2% masenih, drugih polimorfnih oblika jedinjenja. U drugom aspektu, smeša koja sadrži konkretni polimorfni oblik jedinjenja formule (I) može da sadrži manje od 1%, konkretno manje od 0,5%, i konkretnije manje od 0,3%, a još konkretnije manje od 0,1% masenih drugih polimorfnih oblika jedinjenja.
[0054] Jedinjenja iz pronalaska mogu da se okarakterišu na osnovu pozicija i intenziteta glavnih pikova rendgenskog difraktograma praha, ali takođe mogu da se okarakterišu konvencionalnom FT-IR spektroskopijom. To može da se koristi za razlikovanje jednog kristalnog oblika od drugih kristalnih oblika jedinjenja. Jedinjenja iz pronalaska karakteriše to što su veoma kristalna, tj. imaju veću kristaliničnost od drugih oblika. Pod izrazom „bilo koji drugi oblik“ misli se na anhidrate, hidrate, solvate i polimorfe ili njihove amorfne oblike koji su otkriveni u prethodnom stanju struke. Primeri za bilo koje druge oblike jedinjenja uključuju, bez ograničenja, anhidrate, monohidrate, dihidrate, seskvihidrate, trihidrate, alkoholate, kao što su metanolati i etanolati, i polimorfe ili njihove amorfne oblike.
[0055] Jedinjenje iz pronalaska može takođe biti okarakterisano svojom jediničnom ćelijom. Jedinjenje iz pronalaska može da se analizira pomoću XRPD, što je tehnika koja je poznata sama po sebi.
[0056] Količina vode u jedinjenju može da se odredi pomoću termogravimetrijske analize, što je tehnika koja je poznata sama po sebi.
[0057] Dodatna otelotvorenja su sledeća. Ova dodatna otelotvorenja se odnose na jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli. Takvi specifični supstituenti mogu da se koriste, gde je to pogodno, sa bilo kojom definicijom, zahtevima ili otelotvorenjima koja su definisana u prethodnom delu ili u nastavku ovog teksta.
A
[0058] U jednom aspektu, A je C(R<5>).
R<5>
1
[0059] U jednom aspektu predmetnog pronalaska, R<5>je halogen.
[0060] U jednom aspektu predmetnog pronalaska, R<5>je hlor.
[0061] U jednom aspektu predmetnog pronalaska, R<5>je fluor.
[0062] U jednom aspektu predmetnog pronalaska, R<5>je cijano.
R<2>
[0063] U jednom aspektu, R<2>je 3-7-člani cikloalkil.
[0064] U drugom aspektu, R<2>je 3-7-člani cikloalkil supstituisan sa NHCOR<10>ili R<10>. U drugom aspektu, R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHCOR<10>.
U drugom aspektu, R<2>je ciklopropil supstituisan sa R<10>.
[0065] U drugom aspektu, R<2>je 3-7-člani heterocikloalkil.
U drugom aspektu, R<2>je 3-7-člani heterocikloalkil supstituisan sa NHCOR<10>.
[0066] U drugom aspektu, R<2>je piperidinil.
[0067] U drugom aspektu, R<2>je ciklobutil.
[0068] U drugom aspektu, R<2>je ciklobutil supstituisan sa R<10>.
R<4>
[0069] U jednom aspektu, R<4>je
1
[0070] U drugom aspektu, R<4>je
J
[0071] U jednom aspektu, J je C(R<11>) i R<11>je H.
X i Y
[0072] U jednom aspektu, X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani grade 6-člani heterocikloalkil prsten.
[0073] U jednom aspektu, X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani grade 6-člani heterocikloalkil prsten koji sadrži dodatni heteroatom, a to je vodonik.
[0074] U jednom aspektu, X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani grade 6-člani heterocikloalkil prsten koji sadrži dodatni heteroatom, a to je azot.
[0075] U jednom aspektu, X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani grade 6-člani heterocikloalkil prsten u kome je jedan CH2supstituisan sa dve metil grupe.
[0076] U jednom aspektu, X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani grade 5-člani heterocikloalkil prsten.
[0077] U jednom aspektu, X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani grade 5-člani heterocikloalkil prsten u kome je jedan CH2supstituisan sa dve metil grupe.
2
[0078] U jednom aspektu, X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani grade 7-člani heterocikloalkil prsten.
[0079] U jednom aspektu, X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani grade 7-člani heterocikloalkil prsten u kome je jedan CH2supstituisan sa dve metil grupe.
[0080] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 6-člani heterocikloalkil prsten.
[0081] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je halogen;
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 6-člani heterocikloalkil prsten.
[0082] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 6-člani heterocikloalkil prsten.
[0083] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 6-člani heterocikloalkil prsten.
[0084] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 6-člani heterocikloalkil prsten.
[0085] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
2
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R<11>) i R<11>je H;
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 6-člani heterocikloalkil prsten.
[0086] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 5-člani heterocikloalkil prsten.
A je C(R<5>);
R<5>je halogen;
R<2>je cikloheksil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 5-člani heterocikloalkil prsten.
[0087] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 5-člani heterocikloalkil prsten.
[0088] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
2
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 5-člani heterocikloalkil prsten.
[0089] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R<11>) i R<11>je H;
i
2
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 5-člani heterocikloalkil prsten.
[0090] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R<11>) i R<11>je H
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade piperidinil prsten.
[0091] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
2
R<4>je
J je C(R<11>) i R<11>je H
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade piperidinil prsten u kome jedan ugljenik prstena može biti supstituisan sa jednim ili dva R<10>supstituenta.
[0092] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R5) i R5je H
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade piperazinil prsten.
2
[0093] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R5) i R5je H
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade morfolinil prsten.
[0094] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
2
J je C(R5) i R5je H
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani grade pirolidinil u kome je jedan CH2supstituisan sa dve metil grupe.
A je C(R<5>);
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 7-člani heterocikloalkil prsten.
[0095] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je halogen;
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 7-člani heterocikloalkil prsten.
[0096] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 7-člani heterocikloalkil prsten.
[0097] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil;
1
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 7-člani heterocikloalkil prsten.
[0098] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 7-člani heterocikloalkil prsten.
[0099] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hlor;
2
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R<11>) i R<11>je H;
i
X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 7-člani heterocikloalkil prsten.
[0100] U drugom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje izabrano od:
(R)-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidrolmidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
cis-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida;
(R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamida;
cis-3-hidroksi-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida; (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridm-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamida;
4
N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida;
N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida;
(S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
cis-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida;
cis-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksan karboksamida;
trans-3-hidroksi-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(2-cijanoacetamido)cikloheksan karboksamida;
terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata;
(1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamida;
(R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida;
N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)-3-metiloksetan-3-karboksamida;
(S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida;
(R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksan karboksamida;
(S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-cijano-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida;
(R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-hidroksipropanamido)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(cis-3-hidroksiciklobutankarboksamido)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazo1-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida;
(1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamida;
N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida;
cis-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida;
Izomera 1 trans-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 2 trans-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 1 trans-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 2 trans-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida; Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)-3-(2-hidroksiacetamido)cikloheksan karboksamida;
N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(7-hidroksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-(4-hidroksibutil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
4
(1R,3S)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-(3-hidroksi-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida;
(1R,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida; i
(1S,3S)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida.
[0101] Jedinjenja formule (I) su korisna zbog sposobnosti da inhibiraju aktivnost CDK9. Jedinjenja su takođe korisna za lečenje raka kod pacijenta. Shodno tome, jedinjenja formule I ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da se primene na pacijentu koji boluje od raka, kao što su hematološki maligniteti, uključujući akutnu mijeloidnu leukemiju, multipli mijelom, hroničnu limfocitnu leukemiju, difuzni B-krupnoćelijski limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom i čvrste tumore, kao što su rak dojke, rak pluća, neuroblastom i rak debelog creva.
[0102] Pokazalo se da jedinjenja formule (I) inhibiraju aktivnost CDK9, kako je pokazano testom na osnovu opisa testa u nastavku. Iako farmakološka svojstva jedinjenja formule (I) mogu da variraju sa promenom strukture, tipična jedinjenja formule (I) imaju inhibitorsku aktivnost CDK9 pri koncentracijama IC50(koncentracije za postizanje 50% inhibicije) ili dozama na nivou manjem od 10 µM.
Test CDK9 kinaze
Koncentracija ATP pri Km
[0103] Aktivnost CDK9 je određena in vitro koristeći test pomeranja mobilnosti na čitaču Caliper LC3000 (Caliper/PerkinElmer), kojim se meri fluorescencija fosforilovanog i nefosforilovanog fluorescentnog peptidnog supstrata i izračunava radiometrijska vrednost radi određivanja procenta izmena. Određena je fosforilacija peptida u prisustvu ili odsustvu jedinjenja od interesa. Smeša enzima/supstrata/adenozin trifosfata (ATP) (3 nM CDK9/CycT1, 6 µM ATP, 1,5 µM CDK9 peptidni supstrat (FITC-X-GSRTPMY-NH2(X: epsilon aminokaproinska kiselina)), 50 mM HEPES (pH 7,2), 1 mM ditiotreitol, 0,01% tween 20, 50 µg/ml albumina goveđeg seruma, (finalna test koncentracija)) (5 µl) prethodno je inkubirana sa 2 µl jedinjenja tokom 15 minuta na 25 °C. Reakcije su započete sa 5 µl 24 mM MgCl2(10 mM finalna test koncentracija) u puferu (50 mM HEPES (pH 7,2), 1 mM ditiotreitol, 0,01% tween 20, 50 µg/ml albumina goveđeg seruma, (finalna test koncentracija) i inkubirane na 25 °C tokom 90 minuta, i reakcije su prekinute dodatkom 5 µl zaustavne smeše od 65 mM HEPES (pH 7,2), 35,5 mM EDTA, 0,227% reagensa za oblaganje 3 (Caliper/PerkinElmer) i 0,003% Tween. Fosforilovani i nefosforilovani supstrat je detektovan pomoću čitača Caliper LC3000 (Caliper/PerkinElmer) u prisustvu pufera za razdvajanje od 100 mM HEPES (pH 7,2), 15,8 mM EDTA, 0,1% reagensa za oblaganje 3 (Caliper/PerkinElmer), 0,015% Brij-35, 5% DMSO i 5,6 mM MgCl2. CDK9 enzim je nabavljen od Carna Biosciences (kataloški broj 04-110), CDK9 peptidni supstrat je nabavljen od Intonation (Boston, MA; napravljen po porudžbini).
[0104] Vrednosti IC50su izračunate koristeći standardne postupke za postavljanje kriva, gde je maksimalni signal definisan kao izmena kod inhibirane reakcije pri 83,3 mM EDTA, a minimalni signal je definisan kao izmena kod reakcije pri 0,83% DMSO.
Velika koncentracija ATP
[0105] Testovi sa visokom koncentracijom ATP su obavljeni na isti način uz sledeće izmene: finalna test koncentracija CDK9 je bila 1,5 nM i finalna test koncentracija ATP je bila 5 mM.
MCF7 pSer2 RNKPII MOA test
[0106] Ovo je test imunofluorescencije za određivanje dejstva inhibitora CDK9 na fosforilaciju RNK polimeraze II (RNKPII) na Ser2 mestu u ćelijskoj liniji raka dojke, MCF7. Prvog dana, 2500 MCF7 ćelija/bunarčiću je zasejano u 30 µl medijuma za rast (RPMI+10%FBS+1%L-Glu+P/S) na pločama sa crnim zidovima i providnim dnom sa 384 bunarčića, ploče su inkubirane preko noći u inkubatoru na 37 °C. Drugog dana, ćelije su tretirane inhibitorima CDK9 (7 tačaka doznog odgovora u rasponu od 3 µM do 0,004 µM) koristeći ECHO uređaj za tretiranje tečnosti (Labcyte). Nakon 6 sati tretiranja u inkubatoru na 37 °C, ćelije su fiksirane sa 30 µl/bunarčiću 7,4% paraformaldehida tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi; ćelije su dva puta isprane PBS-om, zatim permeabilisane sa 0,3% Triton X/PBS tokom 5 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon ispiranja ćelija PBS-om, ćelije su inkubirane sa 1:2000 razblaženim Anti-Ser2 Phospho-RNK pol II antitelom (Covance MMS-129R) u 3%FBS/0,1%PBST preko noći na 4 °C. Sledećeg dana, ćelije su dva puta isprane pomoću 0,1%PBST, zatim inkubirane sa 1:1000 razblaženim Alexa Fluor 488 kozjim antimišjim antitelom (Life Technologies A-11001) i sa 1:4000 razblaženim DAPI na sobnoj temperaturi u mraku. Nakon sat vremena inkubacije, ćelije su dva puta isprane pomoću 0,1% PBST i jednom pomoću PBS. Ploče su zatim zaptivene i očitane na Acumen eX3 citometru za mikroploče (TTP Labtech) kako bi se procenio nivo fosforilacije u svakom bunarčiću. Vrednosti IC50su izračunate koristeći GeneData softver za analizu (DMSO kontrola kao maksimum i kontrola sa 11 µM dinaciklibom kao minimum).
Test aktivnosti MV411 kaspaze
[0107] Ovo je ćelijski test za merenje indukcije aktivnosti kaspaze u ćelijskoj linije akutne mijeloidne leukemije, MV411, nakon 6-časovnog tretiranja inhibitorima CDK9. Prvog dana, 3000 MV411 ćelija/bunarčiću je zasejano u 50 µl medijuma za rast (IMDM+10%FBS+2%L-Glu+P/S) na belim pločama sa 384 bunarčića, ploče su inkubirane preko noći u inkubatoru na 37 °C. Drugog dana, ćelije su tretirane inhibitorima CDK9 koristeći ECHO (10 tačaka doznog odgovora u rasponu od 31,5 µM do 0,001 µM). Nakon 6 sati inkubacije u inkubatoru na 37 °C, 25 µl kaspaza-Glo 3/7 reagensa (Promega) po bunarčiću dodato je u svaki bunarčić, i ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta u mraku. Ploče su očitane na čitaču za mikroploče M200 (Tecan) uz vreme integracije od 100 ms. Vrednosti EC50su izračunate koristeći GeneData softver za analizu (DMSO kontrola kao min i kontrola sa 11 µM dinaciklibom kao maks).
[0108] Tabela I pruža podatke za testove.
4
Tabela I
,
4
4
[0109] U jednom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu kao lek.
[0110] U drugom aspektu, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji leka za lečenje ili profilaksu najmanje jednog od: hematoloških maligniteta kao što su akutna mijeloidna leukemija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni B-krupnoćelijski limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom, i čvrstih tumora kao što su rak dojke, rak pluća, neuroblastom i rak debelog creva.
4
[0111] U drugom aspektu, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za lečenje raka.
[0112] U drugom aspektu, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za proizvodnju antiproliferativnog i/ili proapoptotskog dejstva kod toplokrvne životinje kao što je čovek.
[0113] U drugom aspektu, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za proizvodnju inhibitorskog dejstva CDK9 kod toplokrvne životinje kao što je čovek.
[0114] U drugom aspektu, obezbeđen je postupak za lečenje ili profilaksu najmanje jednog od hematoloških maligniteta kao što je akutna mijeloidna leukemija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni B-krupnoćelijski limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom, i čvrstih tumora kao što su rak dojke, rak pluća, neuroblastom i rak debelog creva.
[0115] U drugom aspektu, obezbeđen je postupak za proizvodnju antiproliferativnog i/ili proapoptotskog dejstva kod toplokrvne životinje kao što je čovek, pri čemu navedeni postupak obuhvata primenu na navedenoj životinji delotvorne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0116] U drugom aspektu, obezbeđen je postupak za proizvodnju inhibitorskog dejstva CDK9 kod toplokrvne životinje kao što je čovek, pri čemu navedeni postupak obuhvata primenu na navedenoj životinji delotvorne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0117] U drugom aspektu, obezbeđen je postupak za lečenje raka kod toplokrvne životinje kao što je čovek, pri čemu navedeni postupak obuhvata primenu na navedenoj životinji delotvorne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0118] Posebno, pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u lečenju najmanje jednog od: hematoloških maligniteta izabranih od akutne mijeloidne leukemije, multiplog mijeloma, hronične limfocitne leukemije, difuznog
4
B-krupnoćelijskog limfoma, Burkitovog limfoma, folikularnog limfoma, i čvrstih tumora izabranih od raka dojke, raka pluća, neuroblastoma i raka debelog creva.
[0119] U drugom aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0120] Kompozicije mogu da budu u obliku koji je prikladan za oralnu primenu (na primer, kao tablete, lozenge, tvrde ili meke kapsule, vodene ili uljane suspenzije, emulzije, praškovi ili granule za disperziju, sirupi ili eliksiri), za topikalnu primenu (na primer, kao kremovi, masti, gelovi, ili vodeni ili uljani rastvori ili suspenzije), za primenu putem inhalacije (na primer, kao fino raspodeljeni prašak ili tečni aerosol), za primenu putem insuflacije (na primer, kao fino raspodeljeni prašak) ili za parenteralnu primenu (na primer, kao sterilni vodeni ili uljani rastvor za intravensko, supkutano, intramuskularno ili intramuskularno doziranje, ili kao supozitorija za rektalno doziranje).
[0121] Kompozicije mogu da se dobiju uz pomoć konvencionalnih procedura koristeći konvencionalne farmaceutske ekscipijense dobro poznate u struci. Tako, kompozicije namenjene za oralnu upotrebu mogu da sadrže, na primer, jedan ili više agenasa za bojenje, zaslađivanje, davanje ukusa i/ili konzervisanje.
[0122] Pogodni farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi za formulaciju tableta uključuju, na primer, inertne razblaživače poput laktoze, natrijum karbonata, kalcijum fosfata ili kalcijum karbonata; agense za granulaciju i dezintegraciju kao što su kukuruzni skrob ili algininska kiselina; veziva kao što je skrob; lubrikanse kao što su magnezijum stearat, stearinska kiselina ili talk; konzervanse kao što su etil ili propil p-hidroksibenzoat; i antioksidanse kao što je askorbinska kiselina. Formulacije u vidu tableta mogu biti neobložene ili obložene kako bi se izmenila njihova dezintegracija i zatim apsorpcija aktivnog sastojka u gastrointestinalnom traktu, ili da bi se poboljšala njihova stabilnost i/ili izgled, u svakom slučaju, koristeći konvencionalne agense za oblaganje i procedure koje su dobro poznate u struci.
[0123] Kompozicije za oralnu primenu mogu biti u obliku tvrdih želatinskih kapsula u kojima je aktivni sastojak pomešan sa inertnim čvrstim razblaživačem, na primer, kalcijum karbonatom, kalcijum fosfatom ili kaolinom, ili mekih želatinskih kapsula u kojima je aktivni
4
sastojak pomešan sa vodom ili uljem kao što je ulje od kikirikija, tečni parafin ili maslinovo ulje.
[0124] Vodene suspenzije obično sadrže aktivni sastojak u obliku finog praška ili u obliku nano ili mikronizovanih čestica zajedno sa jednim ili više suspendujućih agenasa, kao što su natrijum karboksimetilceluloza, metilceluloza, hidroksipropilmetilceluloza, natrijum alginat, polivinil pirolidon, tragakant guma i akacija guma; agenasa za disperziju ili kvašenje kao što su lecitin ili proizvodi kondenzacije alkilen oksida sa masnim kiselinama (na primer, polioksetilen stearat), ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa alifatičnim alkoholima dugog niza, na primer, heptadekaetilen oksicetanol, ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa parcijalnim estrima dobijenim od masnih kiselina i heksitola kao što je polioksietilen sorbitol monooleat, ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa alifatičnim alkoholima dugog niza, na primer, heptadekaetilen oksicetanol, ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa parcijalnim estrima dobijenim od masnih kiselina i heksitola kao što je polioksietilen sorbitol monooleat, ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa parcijalnim estrima dobijenim od masnih kiselina i heksitol anhidrida, na primer, polietilen sorbitan monooleat. Vodene suspenzije takođe mogu da sadrže jedan ili više konzervanasa kao što su etil ili propil p-hidroksibenzoat; antioksidanasa kao što je askorbinska kiselina; boja; aroma; i/ili zaslađivača kao što su saharoza, saharin ili aspartam.
[0125] Uljane suspenzije mogu da se formulišu suspendovanjem aktivnog sastojka u biljnom ulju kao što je ulje od kikirikija, maslinovo ulje, susamovo ulje ili kokosovo ulje, ili u mineralnom ulju kao što je tečni parafin. Uljane suspenzije mogu takođe da sadrže agens za zgušnjavanje kao što je pčelinji vosak, tvrdi parafin ili cetil alkohol. Zaslađivači, poput onih koji su prethodno dati, i arome mogu da se dodaju da bi se dobio ukusan oralni preparat. Ove kompozicije mogu da se očuvaju dodavanjem antioksidansa kao što je askorbinska kiselina.
[0126] Praškovi ili granule za disperziju pogodni za pripremu vodene suspenzije dodavanjem vode obično sadrže aktivni sastojak zajedno sa agensom za disperziju ili kvašenje, suspendujućim agensom i jednim ili više konzervanasa. Primeri za odgovarajuće agense za disperziju ili kvašenje i suspendujućih agenasa su oni koji su prethodno već pomenuti. Mogu biti prisutni i dodatni ekscipijensi kao što su zaslađivači, arome ili boje.
[0127] Farmaceutske kompozicije mogu takođe biti u obliku emulzija ulja u vodi. Uljana faza može biti biljno ulje, kao što je maslinovo ulje ili ulje kikirikija, ili mineralno ulje, kao što je, na primer, tečni parafin ili smeša bilo čega od prethodnog. Prikladni emulgatori mogu biti, na primer, prirodne gume kao što su akacija guma ili tragakant guma, prirodni fosfatidi kao što su soja, lecitin i estri ili parcijalni estri dobijeni od masnih kiselina i anhidrida heksitola (na primer, sorbitan monooleat) i proizvodi kondenzacije navedenih parcijalnih estara sa etilen oksidom, kao što je polioksietilen sorbitan monooleat. Emulzija takođe može da sadrži zaslađivače, arome i konzervanse.
[0128] Sirupi i eliksiri mogu da se formulišu sa zaslađivačima kao što su glicerol, propilen glikol, sorbitol, aspartam ili saharoza, i takođe mogu da sadrže demulcent, konzervans, aromu i/ili boju.
[0129] Farmaceutske kompozicije mogu takođe biti u obliku sterilne injektabilne vodene ili uljane suspenzije, koja može da se formuliše u skladu sa poznatim procedurama koristeći jedan ili više od prikladnih agenasa za disperziju ili kvašenje i suspendujućih agenasa, koji su prethodno pomenuti. Sterilni injektabilni preparat može takođe da bude sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer, kao rastvor u 1,3-butandiolu.
[0130] Kompozicije za primenu putem inhalacije mogu biti u obliku konvencionalnog aerosola pod pritiskom podešenog da dozira aktivni sastojak, bilo kao aerosol koji sadrži fino raspodeljenu čvrstu supstancu ili kapljice tečnosti. Mogu da se koriste konvencionalni aerosolni propelanti, kao što su isparljivi fluorovani ugljovodonici ili ugljovodonici, i aerosolni uređaj je pogodno podešen da dozira odmerenu količinu aktivnog sastojka.
[0131] Za više informacija o formulaciji, upućujemo čitaoca na poglavlje 25.2 sveske 5 publikacije Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.
[0132] Količina aktivnog sastojka koja se kombinuje sa jednim ili više ekscipijenasa za proizvodnju jednog doznog oblika nužno će zavisiti od domaćina koji se leči i konkretnog puta primene. Na primer, formulacija koja je namenjena za oralnu primenu na ljudima obično će sadržati, na primer, od 0,5 mg do 4 g aktivnog agensa u smeši sa prikladnom i pogodnom
1
količinom ekscipijensa koja može da varira od oko 5 do oko 98 masenih procenata ukupne kompozicije. Jedinični dozni oblici će obično sadržati oko 1 mg do oko 500 mg aktivnog sastojka. Za više informacija o načinu primene i doznim režimima, upućujemo čitaoca na poglavlje 25.3 sveske 5 publikacije Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.
[0133] Kao što je prethodno navedeno, veličina doze koja je potrebna za terapeutsko ili profilaktičko lečenje konkretne bolesti nužno će se menjati u zavisnosti od domaćina koji se leči, načina primene i težine bolesti koja se leči. Može da se koristi dnevna doza u rasponu od 0,1–50 mg/kg. Shodno tome, optimalnu dozu može da odredi lekar koji leči konkretnog pacijenta.
[0134] Jedinjenja iz pronalaska dalje mogu da se primene u kombinaciji sa terapeutski delotvornom količinom jednog ili više agenasa za lečenje raka, gde primeri za agense uključuju radijaciju, alkilujuće agense, inhibitore angiogeneze, antitela, antimetabolite, antimitotike, antiproliferativne agense, antivirusne agense, inhibitore aurora kinaze, aktivatore ćelijske smrti (na primer, inhibitore Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w, Bfl-1, ili Mcl-1), aktivatore puta receptora smrti, inhibitore Bcr-Abl kinaze, inhibitore BET (bromdomen), BiTE (bispecifični T-ćelijski aktivator) antitela, konjugate antitelo lek, modifikatore biološkog odgovora, inhibitore kinaze zavisne od ciklina, inhibitore ćelijskog ciklusa, inhibitore ciklooksigenaze-2, DVD (antitela sa dvojnim varijabilnim domenom), inhibitore receptora onkogenog homologa virusa leukemije (ErbB2), inhibitore faktora rasta, inhibitore proteina toplotnog šoka (HSP)-90, inhibitore histon deacetilaze (HDAC), hormonske terapije, imunološke agense, inhibitore inhibitora proteina apoptoze (IAP), interkalirajuće antibiotike, inhibitore kinaze, inhibitore kinezina, inhibitore Jak2, ciljeve sisara za inhibitore rapamicina, mikroRNK, inhibitore kinaze aktivirane mitogenom koji su regulisani ekstracelularnim signalom, polivalentne vezujuće proteine, nesteroidne antiinflamatorne lekove (NSAID), inhibitore poli ADP (adenozin difosfat)-riboza polimeraze (PARP), hemioterapeutska sredstva na bazi platine, inhibitore kinaze nalik na polo (Plk), inhibitore fosfoinozitid-3 kinaze, inhibitore proteozoma, purinske analoge, pirimidinske analoge, inhibitore receptorske tirozin kinaze, etinoidne/deltoidne biljne alkaloide, male inhibitorne ribonukleinske kiseline (siRNK), inhibitore topoizomeraze, inhibitore ubikvitin ligaze, i slično, i u kombinaciji sa jednim ili više od ovih agenasa.
2
[0135] Alkilujući agensi uključuju altretamin, AMD-473, AP-5280, apazikvon, bendamustin, brostalicin, busulfan, cisplatin, karboplatin, karbokvon, karmustin (BCNU), hlorambucil, CLORETAZINE® (laromustin, VNP 40101M), ciklofosfamid, dekarbazin, estramustin, fotemustin, glufosfamid, ifosfamid, KW-2170, lomustin (CCNU), mafosfamid, melfalan, mitobronitol, mitolaktol, nimustin, N-oksid azotnog iperita, nitrozouree, oksaliplatin, ranimustin, temozolomid, tiotepa, TREANDA® (bendamustin), treosulfan, rofosfamid, i slično.
[0136] Inhibitori angiogeneze uključuju endotelno specifični receptor, (Tie-2) inhibitore, inhibitore receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), inhibitore receptora insulinskog faktora rasta 2 (IGFR-2), inhibitore matrične metaloproteinaze 2 (MMP-2), inhibitore matrične metaloproteinaze 9 (MMP-9), inhibitore receptora faktora rasta dobijenog od trombocita (PDGFR), analoge trombospondina, inhibitore receptorske tirozin kinaze vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGFR), ALK inhibitore, i slično.
[0137] Antimetaboliti uključuju ALIMTA® (pemetreksovani dinatrijum, LY231514, MTA), 5-azacitidin, XELODA® (kapecitabin), karmofur, LEUSTAT® (kladribin), klofarabin, citarabin, citarabin okfosfat, citozin arabinozid, decitabin, deferoksamin, doksifluridin, eflornitin, EICAR (5-etinil-1-β-D-ribofuranozilimidazol-4-karboksamid), enocitabin, etnilcitidin, fludarabin, 5-fluorouracil samostalno ili u kombinaciji sa leukovorinom, GEMZAR® (gemcitabin), hidroksiureu, ALKERAN® (melfalan), merkaptopurin, 6-merkaptopurin ribozid, metotreksat, mikofenolnu kiselinu, nelarabin, nolatreksed, okfosfat, pelitreksol, pentostatin, pemekstred, raltitreksed, ribavirin, triapin, trimetreksat, S-1, tiazofurin, tegafur, TS-1, vidarabin, UFT, i slično.
[0138] Bcl-2 proteinski inhibitori uključuju ABT-199, AT-101 ((-)gosipol), GENASENSE® (G3139 ili oblimersen (Bcl-2-ciljajući antisens oligonukleotid)), IPI-194, IPI-565, N-(4-(4-((4'-hlor(,,1'-bifenil)-2-il)metil)piperazin-1-il)benzoil)-4-(((1R)-3-(dimetilamino)-1-((fenilsulfanil)metil)propil)amino)-3-nitrobenzen sulfonamid)(ABT-737), N-(4-(4-((2-(4-hlorfenil)-5,5-dimetil-1-cikloheks-1-en-1-il)metil)piperazin-1-il)benzoil)-4-(((1R)-3-(morfolin-4-il)-1-((fenilsulfanil)metil)propil)amino)-3-((trifluormetil)sulfonil)benzensulfonamid (ABT-263), GX-070 (obatoklaks), i slično.
[0139] Inhibitori bromdomena uključuju I-BET 762, OTX-015, CPI-203, LY294002, i slično.
[0140] Inhibitori CDK uključuju BMI-1040, BMS-032, BMS-387, CVT-2584, flavopiridol, GPC-286199, MCS-5A, PD0332991, PHA-690509, seliciklib (CYC-202, R-roskovitin), ZK-304709, i slično.
[0141] Inhibitori EGFR uključuju EGFR antitela, ABX-EGF, anti-EGFR imunolipozome, EGF-vakcinu, EMD-7200, ERBITUX® (cetuksimab), HR3, IgA antitela, IRESSA® (gefitinib), TARCEVA® (erlotinib ili OSI-774), TP-38, EGFR fuzioni protein, TYKERB® (lapatinib), AZD9291, i slično.
[0142] Inhibitori ALK uključuju krizotinib, ceritinib, i slično.
[0143] Inhibitori ErbB2 receptora uključuju CP-724-714, CI-1033 (kanertinib), HERCEPTIN® (trastuzumab), TYKERB® (lapatinib), OMNITARG® (2C4, petuzumab), TAK-165, GW-572016 (jonafarnib), GW-282974, EKB-569, PI-166, dHER2 (HER2 vakcinu), APC-8024 (HER-2 vakcinu), anti-HER/2neu bispecifično antitelo, B7.her2IgG3, kao HER2 bifunkcionalna bispecifična antitela, mAB AR-209, mAB 2B-1, i slično.
[0144] Konjugati antitelo-lek uključuju anti-CD22-MC-MMAF, anti-CD22-MC-MMAE, anti-CD22-MCC-DM1, CR-011-vcMMAE, PSMA-ADC, MEDI-547, SGN-19Am SGN-35, SGN-75, i slično.
[0145] Inhibitori kinezina uključuju inhibitore Eg5 kao što su AZD4877, ARRY-520; CENPE inhibitore kao što su GSK923295A, i slično.
[0146] MEK inhibitori uključuju ARRY-142886, ARRY-438162, PD-325901, PD-98059, selumitinib, i slično.
[0147] Hemioterapeutski agensi na bazi platine uključuju cisplatin, ELOXATIN® (oksaliplatin) eptaplatin, lobaplatin, nedaplatin, PARAPLATIN® (karboplatin), satraplatin, pikoplatin, i slično.
[0148] VEGFR inhibitori uključuju AVASTIN (bevacizumab), ABT-869, AEE-788, ANGIOZYME™ (ribozim koji inhibira angiogenezu (Ribozyme Pharmaceuticals (Boulder,
4
Colo.) i Chiron, (Emeryville, Calif.)), aksitinib (AG-13736), AZD-2171, CP-547,632, IM-862, MACUGEN (pegaptamib), NEXAVAR® (sorafenib, BAY43-9006), pazopanib (GW-786034), vatalanib (PTK-787, ZK-222584), SUTENT® (sunitinib, SU-11248), VEGF zamku, ZACTIMA™ (vandetanib, ZD-6474), GA101, ofatumumab, ABT-806 (mAb-806), ErbB3 specifična antitela, BSG2 specifična antitela, DLL4 specifična antitela i C-met specifična antitela, i slično.
[0149] Antitumorski antibiotici uključuju interkalirajuće antibiotike aklarubicin, aktinomicin D, amrubicin, anamicin, adriamicin, BLENOXANE® (bleomicin), daunorubicin, CAELYX® ili MYOCET® (lipozomski doksorubicin), elsamitrucin, epirbucin, glarbuicin, ZAVEDOS® (idarubicin), mitomicin C, nemorubicin, neokarzinostatin, peplomicin, pirarubicin, rebekamicin, stimalamer, streptozocin, VALSTAR® (valrubicin), zinostatin, i slično.
[0150] Inhibitori mehanizama popravke DNK kao što je CHK kinaza; inhibitori proteinske kinaze zavisne od DNK; inhibitori poli (ADP-riboza) polimeraze (PARP inhibitori) uključujući ABT-888 (veliparib), olaparib, KU-59436, AZD-2281, AG-014699, BSI-201, BGP-15, INO-1001, ONO-2231 i slično; i inhibitori Hsp90 kao što su tanespimicin i retaspimicin.
[0151] Inhibitori proteazoma uključuju VELCADE® (bortezomib), karfilzomib, MG132, NPI-0052, PR-171, i slično.
[0152] Primeri za imunološke agense uključuju interferone i druge agense za pojačavanje imunskog odgovora. Interferoni uključuju interferon alfa, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, interferon beta, interferon gama-1a, ACTIMMUNE® (interferon gama-lb) ili interferon gamanl, njihove kombinacije, i slično. Drugi agensi uključuju ALFAFERONE®, (IFN-α), BAM-002 (oksidisani glutation), BEROMUN® (tasonermin), BEXXAR® (tozitumomab), CAMPATH® (alemtuzumab), CTLA4 (citotoksični limfocitni antigen 4), dekarbazin, denileukin, epratuzumab, GRANOCYTE® (lenograstim), lentinan, leukocitni alfa interferon, imikvimod, MDX-010 (anti-CTLA-4), melanomsku vakcinu, mitumomab, molgramostim, MYLOTARG™ (gemtuzumab ozogamicin), NEUPOGEN® (filgrastim), Onko VAC-CL, OVAREX® (oregovomab), pemtumomab (Y-muHMFG1), PROVENGE® (sipuleucel-T), sargaramostim, sizofilan, teceleukin, THERACYS® (Bacillus Calmette-Guerin), ubenimeks, VIRULIZIN® (imunoterapeutsko sredstvo, Lorus Pharmaceuticals), Z-100 (specifična supstanca kompanije Maruyama (SSM)), WF-10 (tetrahlordekaoksid (TCDO)), PROLEUKIN® (aldesleukin), ZADAXIN® (timalfasin), ZENAPAX® (daklizumab), ZEVALIN® (90Y-ibritumomab tiuksetan) i slično.
[0153] Pirimidinski analozi uključuju citarabin (ara C ili arabinozid C), citozin arabinozid, doksifluridin, FLUDARA® (fludarabin), 5-FU (5-fluorouracil), floksuridin, GEMZAR® (gemcitabin), TOMUDEX® (ratitreksed), TROXATYL™ (triacetiluridin troksacitabin), i slično.
[0154] Antimitotski agensi uključuju batabulin, epotilon D (KOS-862), N-(2-((4-hidroksifenil)amino)piridin-3-il)-4-metoksibenzen sulfonamid, iksabepilon (BMS 247550), paklitaksel, TAXOTERE® (docetaksel), PNU100940 (109881), patupilon, XRP-9881 (larotaksel), vinflunin, ZK-EPO (sintetički epotilon), i slično.
[0155] Pored toga, jedinjenja formule (I) mogu da se kombinuju sa drugim hemioterapeutskim agensima, kao što su ABRAXANE™ (ABI-007), ABT-100 (inhibitor farnezil transferaze), ADVEXIN® (Ad5CMV-p53 vakcina), ALTOCOR® ili MEVACOR® (lovastatin), AMPLIGEN® (poli I:poli C12U, sintetička RNK), APTOSYN® (eksisulind), AREDIA® (pamidronska kiselina), arglabin, L-asparaginaza, atamestan (1-metil-3,17-dion-androst-1,4-dien), AVAGE® (tazaroten), AVE-8062 (derivat kombreastatina) BEC2 (mitumomab), kahektin ili kaheksin (faktor nekroze tumora), kanvaksin (vakcina), CEAVAC® (vakcina protiv raka), CELEUK® (celmoleukin), CEPLENE® (histamin dihidrohlorid), CERVARIX® (vakcina za humani papilomavirus), CHOP® (C: CYTOXAN® (ciklofosfamid); H: ADRIAMYCIN® (hidroksidoksorubicin); O: vinkristin (ONCOVIN®); P: prednizon), CYPAT™ (ciproteron acetat), kombrestatin A4P, DAB(389)EGF (katalitički i translokacioni domeni toksina difterije fuzionisani preko His-Ala linkera sa humanim epidermalnim faktorom rasta) ili TransMID-107R™ (toksini difterije), dakarbazin, daktinomicin, 5,6-dimetilksantenon-4-sirćetna kiselina (DMXAA), eniluracil, EVIZON™ (skvalamin laktat), DIMERICINE® (T4N5 lipozomski losion), diskodermolid, DX-8951f (egzatekan mezilat), enzastaurin, EPO906 (epitilon B), GARDASIL® (rekombinantna vakcina za četvorovalentni humani papilomavirus (vrste 6, 11, 16, 18)), GASTRIMMUNE®, GENASENSE®, GMK (vaakcina sa gangliozidnim konjugatom), GVAX® (vakcina za rak prostate), halofuginon, histerelin, hidroksikarbamid, ibandronska kiselina, IGN-101, IL-13-PE38, IL-13-PE38QQR (cintredekin besudotoks), IL-13-pseudomonas egzotoksin, interferon-a, interferon-γ, JUNOVAN™ ili MEPACT™ (mifamurtid), lonafarnib, 5,10-metilentetrahidrofolat, miltefozin (heksadecil fosfoholin), NEOVASTAT® (AE-941), NEUTREXIN® (trimetreksat glukuronat), NIPENT® (pentostatin), ONCONASE® (enzim ribonukleaze), ONCOPHAGE® (lečenje vakcinom za melanom), ONCOVAX® (IL-2 vakcina), ORATHECIN™ (rubitekan), OSIDEM® (ćelijski lek na bazi antitela), OVAREX® MAb (mišje monoklonsko antitelo), paklitaksel, PANDIMEX™ (aglikonski saponini iz ginsenga koji sadrži 20(S)protopanaksadiol (aPPD) i 20(S)protopanaksatriol (aPPT)), panitumumab, PANVAC®-VF (ispitivana vakcina za rak), pegaspargaza, PEG interferon A, fenoksodiol, prokarbazin, rebimastat, REMOVAB® (katumaksomab), REVLIMID® (lenalidomid), RSR13 (efaproksiral), SOMATULINE® LA (lanreotid), SORIATANE® (acitretin), staurosporin (Streptomyces staurospores), talabostat (PT100), TARGRETIN® (beksaroten), TAXOPREXIN® (DHA-paklitaksel), TELCYTA® (kanfosfamid, TLK286), temilifen, TEMODAR® (temozolomid), tesmilifen, talidomid, THERATOPE® (STn-KLH), timitak (2-amino-3,4-dihidro-6-metil-4-okso-5-(4-piridiltio)hinazolin dihidrohlorid), TNFERADE™ (adenovektor: DNK nosač koji sadrži gen za faktor nekroze tumora a), TRACLEER® ili ZAVESCA® (bosentan), tretinoin (Retin-A), tetrandrin, TRISENOX® (arsen trioksid), VIRULIZIN®, ukrain (derivat alkaloida iz lastine trave), vitaksin (anti-alfavbeta3 antitelo), XCYTRIN® (moteksafin gadolinijum), XINLAY™ (atrasentan), XYOTAX™ (paklitaksel poliglumeks), YONDELIS® (trabektedin), ZD-6126, ZINECARD® (deksrazoksan), ZOMETA® (zolendronska kiselina), zorubicin, i slično.
[0156] U ovom tekstu, kada se koristi termin „kombinacija“, podrazumeva se da se to odnosi na istovremenu, odvojenu ili rednu primenu. U jednom otelotvorenju, „kombinacija“ se odnosi na istovremenu primenu. U drugom otelotvorenju, „kombinacija“ se odnosi na odvojenu primenu. U daljem otelotvorenju, „kombinacija“ se odnosi na rednu primenu. Kada je primena redna ili odvojena, odlaganje do primene druge komponente ne treba da bude takvo da se izgubi korisno dejstvo kombinacije. U takvim kombinovanim proizvodima se koriste jedinjenja iz ovog pronalaska ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, u doznom rasponu koji je prethodno opisan u ovom tekstu, i drugi farmaceutski prihvatljiv aktivni agens u svom odobrenom doznom rasponu. Kombinovana terapija može da obezbedi „sinergiju“ i da se pokaže „sinergijskom“, tj. dejstvo ostvareno kada se aktivni sastojci koriste zajedno je veće nego zbir dejstava nastalih kada se jedinjenja koriste odvojeno. Sinergijsko dejstvo može da se ostvari kada su aktivni sastojci: (1) zajedno formulisani i primenjeni ili isporučeni istovremeno u kombinovanoj jediničnoj doznoj formulaciji; (2) isporučeni naizmenično ili u paralelnim odvojenim formulacijama; ili (3) nekim drugim režimom. Kada se isporučuju u naizmeničnoj terapiji, sinergijsko dejstvo može da se ostvari kada se jedinjenja primenjuju ili isporučuju sekvencijalno, npr. različitim injekcijama u posebnim špricevima. Uopšteno, prilikom naizmenične terapije, delotvorna doza svakog aktivnog sastojka se primenjuje sekvencijalno, tj. redno, pri čemu se, u kombinovanoj terapiji, delotvorne doze dva ili više aktivnih sastojaka primenjuju zajedno.
[0157] Kod bilo koje prethodno navedene farmaceutske kompozicije, procesa, postupka, upotrebe, leka i svojstava proizvodnje, takođe važe i bilo koja alternativna otelotvorenja jedinjenja iz pronalaska koja su ovde opisana.
[0158] Jedinjenja formule (I) se pripremaju u skladu sa sledećim opštim pristupima.
Pristup A
[0159] Neka jedinjenja formule (I) mogu da se dobiju od drugog jedinjenja formule (I); na primer, ako sadrži amino grupu, acilovanjem (uslovi su dobro poznati u struci), gde su A, R<2>i R<4>kao što je definisano u formuli (I).
[0160] Imajte u vidu da prikladne zaštitne grupe mogu da se koriste u bilo kojim pristupima poput onih koji su dobro poznati u struci: na primer, za amino: t-butoksikarbonil ili (trimetilsilil)etoksimetil (SEM); za hidroksi: terc-butildimetilsilil ili tetrahidropiran-2-il. Uslovi deprotekcije su dobro poznati u struci.
Pristup B
[0161] Druga jedinjenja formule (I) mogu da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (II):
gde je L atom halogena (na primer, hlor) ili triflatna grupa sa jedinjenjem formule (III):
[0162] Reakcija može da se izvede u standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjaku, na primer, u prisustvu izvora paladijuma (na primer, tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) ili paladijum(II) acetata), opciono fosfinskog liganda (na primer, ksantfos) i prikladne baze (na primer, cezijum karbonat).
[0163] Jedinjenje formule (II) može da se pripremi reakcijom jedinjenja formule (IV)
i jedinjenja formule (V) R<4>-L
Y je boronska kiselina, estar boronske kiseline ili kalijum trifluorboratna grupa (na primer, boronska kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluorborat) i L je atom halogena (na primer, hlor ili brom) ili triflatna grupa. Reakcija može da se izvede u standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjaku, na primer, u prisustvu izvora paladijuma i fosfinskog liganda (na primer, tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijum(II), poznat i kao Pd(dppf)Cl2, i odgovarajuća baza (na primer, cezijum karbonat ili kalijum fosfat)).
[0164] Alternativno, jedinjenje formule (II) može da se pripremi reakcijom jedinjenja formule (XIV)
i jedinjenja formule (IX): R<4>-Y
Y je boronska kiselina, estar boronske kiseline ili kalijum trifluorboratna grupa (na primer, boronska kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluorborat), L<1>i L<2>su atom halogena ili triflatna grupa, gde je L<1>manje reaktivan od L<2>tokom reakcije kuplovanja, na primer, gde je L<1>hlor i L<2>je jod. Reakcija može da se izvede u standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjaku, na primer, u prisustvu izvora paladijuma i fosfinskog liganda (na primer, XPhos pretkatalizator 2. generacije, i odgovarajuća baza, na primer, kalijum fosfat).
[0165] Alternativno, jedinjenje formule (II) može da se pripremi reakcijom jedinjenja formule (XIV) i jedinjenja formule (XII): R<4>-H, gde su L<1>i L<2>atom halogena ili triflatna grupa, gde je L<1>manje reaktivan od L<2>tokom reakcije kuplovanja, na primer, gde je L<1>hlor i L<2>je jod, putem reakcije „C-H aktivacije“, na primer, kako je opisano u primeru za intermedijer 50.
Pristup C
[0166] Neka jedinjenja formule (I) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (VI)
sa jedinjenjem formule (VII):
[0167] Prikladni agensi za kuplovanje za ovu reakciju uključuju, na primer, 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin, O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorfosfat poznat i kao HATU, TBTU (2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijum tetrafluorborat), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid jon ili anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (T3P), poželjno 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin ili anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (T3P).
[0168] Reakcija se pogodno izvodi u prisustvu prikladne baze. Prikladna baza je, na primer, organska aminska baza kao što je, na primer, piridin, 2,6-lutidin, kolidin, 4-dimetilaminopiridin, trietilamin, N-metilmorfolin, diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, diizopropiletil amin, ili, na primer, karbonat ili hidroksid alkalnog ili zemnoalkalnog metala, na primer, natrijum karbonat, kalijum karbonat, kalcijum karbonat, natrijum hidroksid ili kalijum hidroksid;
[0169] Jedinjenje formule (VI) može da se pripremi reakcijom jedinjenja formule (VIII)
i jedinjenja formule (IX): R<4>-Y
L je atom halogena (na primer, jod ili brom) ili triflatna grupa.
[0170] Y je boronska kiselina, estar boronske kiseline ili kalijum trifluorboratna grupa (na primer, boronska kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluorborat).
Reakcija može da se izvede u standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjaku, na primer, u prisustvu izvora paladijuma i fosfinskog liganda (na primer, tetrakis (trifenilfosfin)paladijum(0), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) poznat i kao Pd(dppf)Cl2), i prikladne baze (na primer, cezijum karbonat ili kalijum karbonat).
[0171] Jedinjenje formule (VIII) može da se pripremi reakcijom jedinjenja formule (X) pomoću reakcije sa amonijakom (kao što je opisano u primerima 2 i 86)
1
L je atom halogena (na primer, jod ili brom) ili triflatna grupa.
[0172] Jasno je da jedinjenje formule (VIII) može da se prevede u drugo jedinjenje formule (VIII), na primer, kako je ilustrovano u primeru 39 (priprema 6-amin-4-hlornikotinonitrila).
Pristup D
[0173] Druga jedinjenja formule (I) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (XI) sa jedinjenjem formule (IX) R<4>-Y:
L je atom halogena (na primer, jod, brom ili hlor) ili triflatna grupa.
[0174] Y je boronska kiselina, estar boronske kiseline ili kalijum trifluorboratna grupa (na primer, boronska kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluorborat).
Reakcija može da se izvede u standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjaku, na primer, u prisustvu izvora paladijuma i fosfinskog liganda (na primer: XPhos pretkatalizator 2. generacije poznat i kao hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II), ili [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijum(II)) i prikladne baze (na primer, kalijum fosfat ili cezijum karbonat).
2
[0175] Alternativno, jedinjenja formule (I) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (XI) sa jedinjenjem formule (XII) R<4>-H, putem reakcije „C-H aktivacije“, kako je opisano u primeru 7 ili 22.
[0176] Jedinjenje formule (XI) može da se pripremi reakcijom jedinjenja formule (VIII)
L je atom halogena (na primer, jod, brom ili hlor) ili triflatna grupa.
sa jedinjenjem formule (VII):
[0177] Prikladni agensi za kuplovanje za ovu reakciju uključuju, na primer, O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorfosfat, HATU, TBTU (2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijum tetrafluorborat) ili 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid jon, poželjno 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin i anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (T3P).
[0178] Reakcija se pogodno izvodi u prisustvu prikladne baze. Prikladna baza je, na primer, organska aminska baza kao što je, na primer, piridin, 2,6-lutidin, kolidin, 4-dimetilaminopiridin, trietilamin, N-metilmorfolin, diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, diizopropiletil amin, ili, na primer, karbonat ili hidroksid alkalnog ili zemnoalkalnog metala, na primer, natrijum karbonat, kalijum karbonat, kalcijum karbonat, natrijum hidroksid ili kalijum hidroksid. Jasno je da bilo koja jedinjenja formule (XI) mogu da se transformišu u drugo jedinjenje formule (XI), na primer, acilovanjem amino grupe kao u primeru 39 ili 75.
Pristup E
[0179] Neka jedinjenja formule (I) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (XIII) sa jedinjenjem formule (V) R<4>-L:
Y je boronska kiselina, estar boronske kiseline ili kalijum trifluorboratna grupa (na primer, boronska kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluorborat).
L je atom halogena (na primer, jod ili brom) ili triflatna grupa.
[0180] Reakcija može da se izvede u standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjaku, na primer, u prisustvu izvora paladijuma i fosfinskog liganda (na primer, tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijum(II), poznat i kao Pd(dppf)Cl2, i odgovarajuća baza (na primer, cezijum karbonat ili kalijum fosfat).
[0181] Jedinjenje formule (XIII) može, na primer, da se pripremi reakcijom jedinjenja formule (XI), kako je opisano u primeru 16.
Pristup F
[0182] Neka jedinjenja formule (I) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom „ciklizacije“ jedinjenja formule (XV):
gde je R<40>
4
naznačeno time što X<1>i Y<1>su definisani tako da je (XV) prekursor u reakciji ciklizacije, pod uslovom da X<1>i Y<1>zajedno sa atomima za koje su vezani ne grade prsten. Na primer, X<1>ili Y<1>može biti vodonik.
[0183] Reakcija „ciklizacije“ može da se izvodi u standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjaku. Kao ilustracija, primeri 78 i 82 opisuju konkretan primer takve reakcije „ciklizacije“.
[0184] Jedinjenja formule (XV) mogu da se dobiju pristupima koji su analogni pristupima A do E koji su opisani za pravljenje jedinjenja formule (I). Na primer, analogno pristupu D, jedinjenja formule (XV) mogu da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (XI) sa jedinjenjem formule (XVI): R<40>-Y:
L je atom halogena (na primer, jod, brom ili hlor) ili triflatna grupa.
[0185] Y je boronska kiselina, estar boronske kiseline ili kalijum trifluorboratna grupa (na primer, boronska kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluorborat).
Alternativno, jedinjenja formule (XV) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (XI) sa jedinjenjem formule (XVII) R<40>-H, putem reakcije „C-H aktivacije“.
[0186] Reakcija može da se izvodi u standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjaku, kako je opisano u pristupu D.
[0187] Jedinjenja formule (IX) R4-Y, gde je Y boronska kiselina, estar boronske kiseline ili kalijum trifluorboratna grupa (na primer, boronska kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluorborat), ključni su intermedijeri u nekim sintetičkim pristupima za jedinjenja formule (I).
[0188] Postupci za sintezu jedinjenja formule (IX) iz jedinjenja (V) R4-L, gde je L atom halogena (na primer, jod, brom ili hlor) ili triflatna grupa, obuhvataju reakcije metalizacije/borilovanja, kako je ilustrovano primerom 23 i 85, i borilovanja katalizovana paladijumom, kako je ilustrovano primerom 14.
[0189] Jedinjenje formule (V) R4-L se tipično dobija od jedinjenja (XII) R4-H, reakcijom halogenovanja.
[0190] Jedinjenja formule (IX) R4-Y, gde je Y boronska kiselina, estar boronske kiseline ili kalijum trifluorboratna grupa (na primer, boronska kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluorborat), mogu takođe da se dobiju direktno od jedinjenja formule (XII) R4-H, reakcijom „C-H aktivacije“, kako je ilustrovano u primeru 49. Uobičajeno se koristi iridijumski katalizator (obično metoksi(ciklooktadien)iridijum(I) dimer) i ligand (obično 4,4'-di-terc-butil-2,2'-dipiridil ili 3,4,7,8-tetrametil-1,10-fenantrolin) sa izvorom bora (obično 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan) u inertnom rastvaraču (obično THF ili dioksan) na oko 50 °C do 90 °C.
[0191] Podrazumeva se da neki od različitih supstituenata prstena u jedinjenjima iz predmetnog pronalaska mogu da se uvedu standardnim reakcijama aromatične supstitucije, ili mogu da nastanu modifikacijom konvencionalnih funkcionalnih grupa, bilo pre ili odmah nakon procesa koji su ovde pomenuti, a kao takvi su uključeni u otkriveni proces. Takve reakcije i modifikacije uključuju, na primer, uvođenje supstituenta pomoću neke reakcije aromatične supstitucije, redukcije supstituenta, alkilovanja supstituenta i oksidacije supstituenta. Pomenuti reagensi i reakcioni uslovi za takve procedure su dobro poznati u oblasti hemije. Posebni primeri za reakcije aromatične supstitucije uključuju uvođenje nitro grupe koristeći koncentrovanu azotnu kiselinu, uvođenje acil grupe koristeći, na primer, acil halid i Luisovu kiselinu (poput aluminijum trihlorida) u uslovima po Fridel Kraftsu; uvođenje alkil grupe koristeći alkil halid i Luisovu kiselinu (poput aluminijum trihlorida) u uslovima po Fridel Kraftsu; i uvođenje halogene grupe. Posebni primeri za modifikacije uključuju redukciju nitro grupe u amino grupu, na primer, pomoću katalitičkog hidrogenovanja sa nikl katalizatorom ili pomoću tretmana gvožđem u prisustvu hlorovodonične kiseline uz zagrevanje; oksidaciju alkiltio u alkilsulfinil ili alkilsulfonil.
[0192] Takođe se podrazumeva da u nekim ovde pomenutim reakcijama može da bude neophodno/poželjno da se zaštiti bilo koja od osetljivih grupa u jedinjenjima. Slučajevi kada je zaštita neophodna ili poželjna i odgovarajući postupci za zaštitu su poznati stručnjacima za ovu oblast. Konvencionalne zaštitne grupe mogu da se koriste u skladu sa standardnom praksom (za ilustraciju vidite T.W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1991). Tako, ukoliko reaktanti uključuju grupe poput amino, karboksi ili hidroksi, može biti poželjno da se grupa zaštiti u nekim reakcijama koje su ovde navedene.
[0193] Prikladna zaštitna grupa za amino ili alkilamino grupu je, na primer, acil grupa, na primer, alkanoil grupa kao što je acetil, alkoksikarbonil grupa, na primer, metoksikarbonil, etoksikarbonil ili terc-butoksikarbonil grupa, arilmetoksikarbonil grupa, na primer, benziloksikarbonil, ili aroil grupa, na primer, benzoil. Uslovi deprotekcije za prethodne zaštitne grupe nužno zavise od odabira zaštitne grupe. Tako, na primer, acil grupa kao što je alkanoil ili alkoksikarbonil grupa ili aroil grupa može da se ukloni, na primer, hidrolizom sa odgovarajućom bazom kao što je hidroksid alkalnog metala, na primer, litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, acil grupa kao što je terc-butoksikarbonil grupa može da se ukloni, na primer, tretiranjem odgovarajućom kiselinom kao što je hlorovodonična, sumporna ili fosforna kiselina ili trifluorsirćetna kiselina, a arilmetoksikarbonil grupa kao što je benziloksikarbonil grupa može da se ukloni, na primer, hidrogenovanjem preko katalizatora kao što je paladijum na ugljeniku ili tretiranjem Luisovom kiselinom, na primer bor tris(trifluoracetatom). Odgovarajuća alternativna zaštitna grupa za primarnu amino grupu je, na primer, ftaloil grupa, koja može da se ukloni tretiranjem alkilaminom, na primer, dimetilaminopropilaminom, ili hidrazinom.
[0194] Prikladna zaštitna grupa za hidroksi grupu je, na primer, acil grupa, na primer, alkanoil grupa kao što je acetil, aroil grupa, na primer, benzoil, ili arilmetil grupa, na primer, benzil. Uslovi deprotekcije za prethodne zaštitne grupe će nužno zavisiti od odabira zaštitne grupe. Tako, na primer, acil grupa, kao što je alkanoil ili aroil grupa, može da se ukloni, na primer, hidrolizom sa odgovarajućom bazom kao što je hidroksid alkalnog metala, na primer, litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, arilmetil grupa kao što je benzil grupa može da se ukloni, na primer, hidrogenovanjem iznad katalizatora kao što je paladijum na ugljeniku.
[0195] Prikladna zaštitna grupa za karboksi grupu je, na primer, esterifikujuća grupa, na primer, metil ili etil grupa koja može da se ukloni, na primer, hidrolizom sa bazom kao što je natrijum hidroksid, ili na primer, terc-butil grupa koja može da se ukloni, na primer, tretiranjem kiselinom, na primer, organskom kiselinom kao što je trifluorsirćetna kiselina, ili, na primer, benzil grupa koja može da se ukloni, na primer, hidrogenovanjem iznad katalizatora kao što je paladijum na ugljeniku.
[0196] Zaštitne grupe mogu da se uklone u bilo kojoj pogodnoj fazi sinteze koristeći uobičajene tehnike koje su dobro poznate u oblasti hemije.
[0197] Nadalje, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kako je ovde definisano u vezi sa farmaceutski prihvatljivim razblaživačem ili nosačem.
[0198] Jasno je da jedinjenje formule (I) može da se dobije separacijom (npr. hiralnom separacijom) iz smeše jedinjenja formule (I); za primere 9 i 2, 41 i 42, 43 i 14, 59 i 60, 61 i 62, 64 i 65, 68 i 69, 70 i 71, 72 i 73, 79 i 80, 83 i 84.
[0199] Neka jedinjenja formule (II), (V), (VI), (IX), (XI), (XII), (XIII), (XV), (XVI) i (XVII) su nova.
[0200] (1S,3R)-3-(acetamino)cikloheksankarboksilna kiselina je ključni intermedijer za sintezu nekih jedinjenja formule (I). Sledeći put sinteze (šema u nastavku, opisan u primeru 85), koji daje pristup ovom ključnom intermedijeru u enantiomerno čistom obliku, nov je i koristan.
[0201] Ovaj pristup se zasniva na enzimskom enantioselektivnom acilovanju izopropil 3-aminocikloheksilkarboksilata (koristeći Novozym 435) kako je ilustrovano u nastavku:
PRIMERI
[0202] Aspekti predmetnog otkrića mogu biti dalje definisani putem upućivanja na sledeće neograničavajuće primere, koji detaljno opisuju pripremu određenih jedinjenja i intermedijera iz predmetnog otkrića, i postupaka za korišćenje jedinjenja iz predmetnog otkrića. Biće očigledno stručnjacima da mnoge modifikacije, i materijala i metoda, mogu biti izvedene bez odstupanja od opsega predmetnog pronalaska.
Osim ako nije drugačije navedeno:
(i) operacije su izvođene na temperaturi okoline, tj. u rasponu od 17 do 25 °C, i u atmosferi inertnog gasa kao što je azot, ako nije drugačije navedeno;
(ii) uparavanja su obavljena pomoću rotacionog uparivača ili koristeći Genevac opremu ili Biotage v10 uparivač pod vakuumom, i postupci obrade su obavljeni nakon uklanjanja čvrstih ostataka pomoću filtracije;
(iii) prečišćavanja fleš hromatografijom su obavljena na automatizovanom Teledyne Isco CombiFlash® Rf ili Teledyne Isco CombiFlash® Companion® koristeći prethodno spakovane RediSep Rf Gold™ kolone silika gela (20–40 µm, sferne čestice), GraceResolv™ uloške (Davisil® silika gel) ili Silicycle uloške (40–63 µm);
(iv) preparativna hromatografija je obavljena na Gilson prep HPLC instrumentu sa UV prikupljanjem; alternativno, preparativna hromatografija je obavljena na Waters AutoPurification HPLC-MS instrumentu sa prikupljanjem aktiviranim putem MS i UV;
(v) hiralna preparativna hromatografija je izvedena na instrumentu Gilson sa UV prikupljanjem (233 injektor / frakcioni kolektor, 333 i 334 pumpe, 155 UV detektor) ili na instrumentu Varian Prep Star (2 x SD1 pumpe, 325 UV detektor, 701 frakcioni kolektor) pumpa radi sa Gilson 305 injektorom; alternativno, hiralna preparativna hromatografija je izvedena na instrumentu Waters Prep 100 SFC-MS sa prikupljanjem aktiviranim putem MS i UV, ili na instrumentu Thar MultiGram III SFC sa UV prikupljanjem;
(vi) prinosi, kada postoje, ne moraju biti maksimalni mogući;
(vii) generalno, strukture krajnjih proizvoda formule I potvrđene su pomoću nuklearne magnetne rezonance (NMR); vrednosti hemijskog NMR pomeranja izmerene su na delta skali [protonski spektri magnetne rezonance su određeni pomoću instrumenta Bruker Avance 500 (500 MHz) ili Bruker Avance 400 (400 MHz)]; merenja su obavljena na temperaturi okoline, ako nije drugačije naznačeno; korišćene su sledeće skraćenice: s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; dd, dublet dubleta; ddd, dublet dubleta dubleta; dq, dublet kvarteta; dt, dublet tripleta; tt, triplet tripleta; p, pentet; br, široki signal;
(viii) generalno, krajnji proizvodi formule I takođe su okarakterisani masenom spektrometrijom nakon tečne hromatografije (LCMS ili UPLC); UPLC je izveden pomoću UPLC uređaja Waters opremljenog masenim spektrometrom Waters SQ (temp. kolone 40, UV = 220–300 nm, mas. spek. = ESI sa prebacivanjem pozitivno/negativno) pri protoku od 1 ml/min koristeći sistem rastvarača od 97% A 3% B do 3% A do 97% B tokom 1,50 min (ukupno vreme ciklusa sa ekvilibracijom na početne uslove itd. 1,70 min), gde A = 0,1% mravlja kiselina u vodi (za rad sa kiselinom) ili 0,1% amonijak u vodi (za rad sa bazom) B = acetonitril. Za kiselu analizu, korišćena je kolona Waters Acquity HSS T31,8 µm 2,1 x 50 mm, za baznu analizu korišćena je kolona Waters Acquity BEH 1,7 µm 2,1 x 50 mm. Alternativno, UPLC je izveden pomoću UPLC uređaja Waters opremljenog masenim spektrometrom Waters SQ (temp. kolone 30, UV = 210–400 nm, mas. spek. = ESI sa prebacivanjem pozitivno/negativno) pri protoku od 1 ml/min koristeći gradijent rastvarača od 2 do 98% B tokom 1,5 min (ukupno vreme ciklusa sa ekvilibracijom na početne uslove: 2 min), gde A = 0,1% mravlja kiselina u vodi i B = 0,1% mravlja kiselina u acetonitrilu (za rad sa kiselinom) ili A = 0,1% amonijum hidroksid u vodi i B = acetonitril (za rad sa bazom). Za kiselu analizu, korišćena je kolona Waters Acquity HSS T31,8 µm 2,1 x30 mm, za baznu analizu korišćena je kolona Waters Acquity BEH C18 1,7 µm 2,1x30 mm; LCMS je izveden pomoću Waters Alliance HT (2795) opremljenog ESCi masenim spektrometrom Waters ZQ i kolonom Phenomenex Gemini -NX (5 µm x 2,1 mm) pri protoku od 1,1 ml/min 95% A do 95% B tokom 4 min sa zadrškom od 0,5 min. Modifikator je konstantno držan na 5% C (50:50 acetonitril:voda 0,1% mravlja kiselina) ili D (50:50 acetonitril:voda 0,1% amonijum hidroksid, u zavisnosti od toga da li se radi o kiseloj ili baznoj metodi. Podrazumeva se da je, ako nije drugačije naznačeno, prijavljen samo najkarakterističniji maseni pik, zaokružen na nižu jedinicu. Tipično, kada postoji nekoliko izotopa jednog atoma, prijavljen je samo niži najčešći izotop (npr.<35>Cl,<79>Br,<12>C...);
(ix) prečišćavanje jonskom izmenom je obično obavljano koristeći SCX-2 (Biotage) uložak;
(x) čistoća intermedijera je procenjena pomoću tankoslojne hromatografije, masenog spektra, HPLC (tečna hromatografija visokih performansi) i/ili NMR analize;
(xi) optička rotacija je merena u stepenima;
(xii) XRPD analiza je obavljena koristeći Bruker D4 difraktometar, koji je komercijalno dostupan od kompanije Bruker AXS Inc.™ (Madison, Wisconsin). XRPD spektri su dobijeni nanošenjem uzorka supstance koja se analizira (oko 20 mg) na nosač od pločice jednog kristala silicijum dioksida (npr. Bruker nosač uzorka od silicijum dioksida sa nultom rendgenskom difrakcijom) i rasprostiranjem uzorka u tankom sloju pomoću mikroskopske pločice. Uzorak je centrifugiran na 30 obrtaja u minuti (radi poboljšanja statistike brojanja) i ozračen rendgenskim zracima dobijenim pomoću bakarne duge cevi sa finim fokusom koja radi na 40 kV i 40 mA sa talasnom dužinom od 1,5406 angstrema (tj., oko 1,54 angstrema). Uzorak je tokom 1 sekunde izložen inkrementu 2-teta od 0,02 stepena (režim kontinualnog skeniranja) u
1
opsegu od 2 stepena do 40 stepeni 2-teta u režimu teta-teta. Vreme ciklusa je bilo 31 min, 41 s. Stručnjak je svestan da XRPD 2θ vrednosti mogu da variraju u razumnom opsegu, npr., u opsegu od ± 0,1°2θ. Stručnjak je svestan da intenzitet XRPD može da varira kada se meri za suštinski isti kristalni oblik iz raznih razloga, uključujući, na primer, poželjnu orijentaciju. Principi XRPD su opisani u publikacijama, kao što je, na primer, Giacovazzo, C. et al. (1995), Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins, R. and Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Rav Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York; i Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New York. Pošto su relativni intenziteti manje pouzdani, i umesto numeričkih vrednosti, koriste se sledeće definicije.
Neki dodatni veoma slabi pikovi nađeni na difraktogramu su izostavljeni;
(xiii) DSC je obavljen koristeći TA Instruments model Q1000. Uzorak (približno 2 mg) izmeren je u aluminijumskoj posudi za uzorke i prenet je u DSC. Instrument je pročišćen azotom sa 50 ml/min, i podaci su prikupljeni između 25 °C i 300 °C, koristeći dinamičku brzinu zagrevanja od 10 °C/min. DSC analiza je obavljena na uzorcima koji su pripremljeni u skladu sa standardnim postupcima koristeći Q SERIES™ Q1000 DSC kalorimetar dostupan od kompanije TA INSTRUMENTS® (New Castle, Delaware). Instrument je pročišćen azotom pri 50 ml/min, i podaci su prikupljeni između 25 °C i 300 °C, koristeći dinamičku brzinu zagrevanja od 10 °C/minutu. Termički podaci su analizirani koristeći standardni softver, npr. Universal v.4.5A kompanije TA INSTRUMENTS®;
(xiv) termogravimetrijska analiza (TGA): TGA je obavljena koristeći TA Instruments model Q5000. Uzorak (približno 5 mg) stavljen je u aluminijumsku posudu za uzorke i ubačen u pećnicu za TGA. Instrument je pročišćen azotom sa 50 ml/min, i podaci su prikupljeni između 25 °C i 300 °C, koristeći dinamičku brzinu zagrevanja od 10 °C/min. Termički podaci su
2
analizirani koristeći standardni softver, npr. Universal v.4.5A kompanije TA INSTRUMENTS®;
(xv) korišćene su sledeće skraćenice:
XPhos (ili X-Phos) pretkatalizator 2. generacije hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II)
RuPhos pretkatalizator 3. generacije (2-dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksi-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II) metansulfonat
vod.
vodeni
atm
atmosfera
BuLi
n-butil litijum
CDCl3
deuterisani hloroform
CD3OD
deuterisani metanol
CDI
karbonil diimidazol
Konc.
koncentrovano
DCM
dihlormetan
DIPEA
N,N-diizopropiletilamin DMA
N,N-dimetilacetamid
DMF
N,N-dimetilformamid DMSO
dimetil sulfoksid
DMSO-d6
deuterisani dimetil sulfoksid dppf
1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen DSC
4 diferencijalna skenirajuća kalorimetrija
EtOH
etanol
EtOAc
etil acetat
HATU
1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfat
h
sat(i)
IPA/iPrOH
izopropil alkohol
MeCN
acetonitril
MeOH
metanol
MTBE
metil-terc-butil etar
NBS
N-bromsukcinimid
NIS
N-jodsukcinimid
NMP
N-metilpirolidin
PdCl2(dppf)
[1,1'-bis(difenilfosfinio)ferocen]-dihlorpaladijum(II) Pd(P(Cy)3)2Cl2
Bis(tricikloheksilfosfin)dihlorpaladijum(II)
r.t.
sobna temperatura
SCX/SCX-2
snažna katjonsko izmenjivačka hromatografija SEM-Cl
2-(trimetilsilil)etoksimetil hlorid
SFC
superkritična tečna hromatografija T3P®
anhidrid propan fosfonske kiseline TBS/TBDMS
terc-butildimetilsilil
TBS-Cl
terc-butildimetilsilil hlorid
TEA
trietilamin
TFA
trifluorsirćetna kiselina
TGA
termogravimetrijska analiza THF
tetrahidrofuran
TMEDA
tetrametil etilendiamin
Ksantfos
4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksanten
XRPD
rendgenska difrakcija praha
Primer 1: (R)-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamid
[0203]
[0204] TFA (2 ml, 26,0 mmol) ukapavanjem je dodata u (R)-terc-butil 3-((5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilat (0,40 g, 0,52 mmol) u DCM-u (5 ml). Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 1 h pre nego što je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µm, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluente smeše opadajuće polarnosti vode (sa 0,1% amonijum karbonata) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane do suva, dajući (R)-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamid (22,0 mg, 11,7%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, 22 °C) 1.41 - 1.52 (1H, m), 1.57 - 1.68 (2H, m), 1.85 - 1.94 (5H, m), 2.48 - 2.57 (2H, m), 2.68 - 2.76 (1H, m), 2.80 - 2.89 (3H, m), 2.97 - 3.03 (1H, m), 3.78 - 3.84 (2H, m), 7.04 (1H, s), 8.10 (1H, s), 8.29 (1H, s), amid i NH piperidina nisu uočeni. m/z: ES+ [M+H]+ 360.
[0205] Postupci za pripremu polazne supstance (R)-terc-butil 3-((5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo [1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilata opisani su u nastavku:
Priprema 3-(2,5-dihlorpiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridina
[0206]
[0207] Cezijum karbonat (3,24 g, 9,95 mmol) dodat je u 3-brom-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin (500 mg, 2,49 mmol), (2,5-dihlorpiridin-4-il)boronsku kiselinu (3,34 g, 17,4 mmol) Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(203 mg, 0,25 mmol), dioksan (10 ml) i vodu (1 ml) u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 90 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva i ponovo rastvorena u EtOAc (50 ml), pre nego što je redom isprana vodom (2 x 20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 25% EtOAc u petrol etru. Čiste frakcije su koncentrovane do suva, dajući 3-(2,5-dihlorpiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin (500 mg, 75,0%) kao smeđu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 268.
Priprema (R)-terc-butil 3-((5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilata
[0208]
[0209] 3-(2,5-dihlorpiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin (460 mg, 1,72 mmol) dodat je u (R)-terc-butil 3-karbamoilpiperidin-1-karboksilat (470 mg, 2,06 mmol), Pd(PPh3)4(198 mg, 0,17 mmol), cezijum karbonat (1,68 g, 5,15 mmol), ksantfos (199 mg, 0,34 mmol) i dioksan (8 ml) u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 120 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana, i dobijeni filtrat je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 50% EtOAc u petrol etru. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (R)-terc-butil-3-((5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilat (400 mg, 50,7%) kao žuto ulje. m/z: ES+ [M+H]+ 460.
Primer 2: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0210]
[0211] Acetil hlorid (1,0 ml, 14,5 mmol) ukapavanjem je dodat u smešu (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (2,46 g, 6,59 mmol) i piridina (6,40 ml, 79,1 mmol) u DCM-u (58,5 ml) na 0 °C. Nakon 45 min, smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, a zatim je osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeno žutosmeđe ulje je prečišćeno pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% metanola u DCM-u. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (2,6 g, prinos 93% u tri koraka) kao čvrstu penastu supstancu svetlo bež boje.
[0212] Analiza (1 S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida koristeći uslove analitičke SFC (vidite u nastavku), utvrdila je da ova supstanca sadrži 98% (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (Rt = 1,42 min) i 2% (1R, 3S)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (Rt = 2,42 min). Ova supstanca je prečišćena koristeći uslove preparativne SFC (kolona Chiralpak IA, 5 µm, prečnik 30 mm, dužina 250 mm, temperatura kolone 40 °C, izlazni pritisak 100 bar, protok 120 ml/min), uz eluciju 40% metanolom sa 0,1% dimetiletilamina u CO2, radi uklanjanja (1R, 3S) enantiomera. Frakcije enantiomera sa bržom elucijom su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući 2,3 g oker-ružičaste čvrste supstance. Ova čvrsta supstanca je ponovo prečišćena fleš hromatografijom na silika gelu (čep), elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u etil acetatu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (2,25 g) kao belu penastu čvrstu supstancu. Proizvod je tretiran sa 20 ml acetonitrila, i dobijena smeša je zagrevana do refluksa, pa je ostavljena da se ohladi na r.t. Dodato je još acetonitrila (∼5 ml), i postupak je ponavljan sve do rastvaranja svih čvrstih supstanci. Dobijeni bledožuti rastvor je ohlađen na r.t., i nastao je talog. Nakon 1 h, talog je filtriran i ispran acetonitrilom, pa je osušen pod vakuumom na 65 °C tokom 1 h. Čvrsta supstanca je ohlađena na r.t., dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (1,76 g).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.97 - 1.17 (1H, m), 1.20 - 1.38 (3H, m), 1.68 - 1.94 (9H, m), 1.96 - 2.07 (2H, m), 2.54 - 2.68 (1H, m), 2.80 (2H, t), 3.46 - 3.65 (1H, m), 4.14 (2H, t), 7.73 (1H, d), 7.76 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.38 (1H, s), 10.57 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 416.
Uslovi analitičke SFC:
1
Optička rotacija:
[0213]
[0214] Kristali iz primera 2 su analizirani pomoću XRPD, i rezultati su dati u tabeli u nastavku i prikazani su na slici 7. XRPD čvrste supstance potvrđuje da čvrsta supstanca sadrži oblik B iz primera 2.
[0215] Glavni pikovi oblika B iz primera 2 su prikazani u tabeli 1 u nastavku:
2
[0216] Shodno tome, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa specifičnim pikovima na oko 2-teta = 5,5, 6,8, 13,6, 16,1, 20,5, 21,2, 21,6, 22,8, 26,7, 27,4°.
[0217] Kristali koji su dobijeni u primeru 2 (oblik B) analizirani su termalnim tehnikama. DSC analiza je pokazala da oblik B ima nekoliko termalnih događaja, uključujući egzotermni događaj sa tačkom javljanja na 150 °C i pikom na 153 °C, zatim topljenje sa početnom tačkom na 201 °C i pikom na 202 °C. TGA pokazuje da oblik B ispoljava gubitak mase od oko 4,5% nakon zagrevanja sa 22 °C na 150 °C. Reprezentativni DSC/TGA termogram je prikazan na slici 8. Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida su opisane u nastavku:
Priprema 5-hlor-4-jodpiridin-2-amina
[0218]
[0219] Reakcija je podeljena u 4 zasebne zaptivene reakcione posude za mikrotalasnu pećnicu, pri čemu svaka sadrži 750 mg (2,95 mmol) 5-hlor-2-fluor-4-jodpiridina, 8,4 ml koncentrovanog vodenog rastvora amonijum hidroksida i 7,5 ml NMP. Svaka reakciona posuda je zagrevana na 100 °C tokom 17 h. Kombinovane šarže su zatim razblažene vodom (50 ml) i ekstrahovane pomoću EtOAc (3 x 120 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući bledožuto ulje. Ulje je naneto na SCX-2 kolonu od 20 g i redom eluirano pomoću DCM, MeOH i 1% NH3u MeOH. Bazne frakcije su koncentrovane, dajući željeni proizvod kao bezbojnu čvrstu supstancu (2,9 g, 99%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 6.21 (2H, s), 7.05 (1H, s), 7.93 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 255.
Priprema 5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridm-3-il)piridin-2-amina
[0220]
[0221] Cezijum karbonat (13,4 g, 41,2 mmol) i PdCl2(dppf) · CH2Cl2(0,94 g, 1,2 mmol) redom su dodati u degasiranu smešu 5-hlor-4-jodpiridin-2-amina (4,19 g, 16,5 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo-[1,5-a]piridina (5,72 g, 23,1 mmol), 1,4-dioksana (141 ml) i vode (23,5 ml). Dobijena crvena smeša je zagrejana na 95 °C i postala je bistra. Uz žustro mešanje nastala je mala količina taloga koji se postepeno uglavnom ponovo rastvorio. Nakon 4 h, dodato je još 800 mg estra boronske kiseline; nakon još 40 min, reakcija je ohlađena na r.t. i mešana u tim uslovima tokom 18 h. Smeša je zatim razblažena etil acetatom, i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeno ulje je prečišćeno pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% metanola u etil acetatu. Frakcije proizvoda su kombinovane, koncentrovane pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je žustro mešan u 1:1 DCM:heksanu tokom 20 minuta. Smeša je zatim razblažena heksanom i filtrirana uz ispiranje heksanom. Dobijena čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom, dajući 5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amin (2,79 g, 68,1%) kao svetlonarandžasto-bež iglice.<1>H NMR (300
4
MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.74 - 1.88 (2H, m), 1.96 - 2.06 (2H, m), 2.76 (2H, t), 4.12 (2H, t), 6.03 (2H, br. s), 6.43 (1H, s), 7.63 (1H, s), 7.94 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 249.
Priprema cis-3-terc-butoksikarbonilamino)cikloheksankarboksilne kiseline
[0222]
[0223] Učvršćena posuda od 5 litara napunjena je cis-3-aminocikloheksankarboksilnom kiselinom (100 g, 698 mmol; kupljena od TCI), vodom (900 ml), 1,4-dioksanom (900 ml) i N-etil-N-izopropilpropan-2-aminom (487 ml, 2793 mmol). Nakon mešanja na r.t. tokom 5 min, smeša je ohlađena na 0 °C. Di-terc-butil dikarbonat (168 g, 768 mmol) zatim je dodat u porcijama u reakcionu smešu, koja je ostavljena da se zagreje na r.t. nakon što je dodata finalna porcija. Reakciona smeša je zatim ponovo ohlađena na 0 °C i dodat je 2 M vodeni rastvor HCl radi podešavanja pH na 2. Primećen je mali (<5 °C) porast temperature između dodavanja svake porcije od 50 ml 2 M vodenog rastvora HCl. Reakciona smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc (2 x 500 ml), i kombinovani organski slojevi su isprani vodom (400 ml) i osušeni iznad natrijum sulfata. Smeša je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući, nakon sušenja preko noći, cis-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilnu kiselinu (170 g, 100%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.95 - 1.33 (4H, m), 1.37 (9H, s), 1.64 - 1.75 (2H, m), 1.79 (1H, d), 1.94 (1H, d), 2.22 (1H, tt), 3.13 - 3.26 (1H, m), 6.72 (1H, d), 12.01 (1H, s). m/z: ES+ [M+Na]+ 266.
Priprema (S)-1-feniletanaminijum (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata
[0224]
[0225] Koristeći proceduru koja je slična onoj opisanoj u WO2011/1106112, cis-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilna kiselina (49,9 g, 166 mmol) dodata je u balon sa okruglim dnom od 1 l i rastvorena u etanolu (400 ml). Smeša je mešana na r.t. sve do potpunog rastvaranja polazne supstance. Dodat je (S)-1-feniletanamin (23,6 ml, 183 mmol); smeša je mešana na r.t. dok postepeno nije nastao beli talog. Reakciona smeša je zatim zagrevana na 80 °C sve dok nije dobijen bistar rastvor. Reakcioni grejač je zatim isključen, i reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na r.t. Nakon mešanja na r.t. tokom još 16 h, dobijena smeša je filtrirana, dajući belu čvrstu supstancu. Ova čvrsta supstanca je ponovo rastvorena u etanolu (150 ml) i zagrevana na 80 °C dok nije dobijen bistar rastvor. Reakcioni grejač je zatim isključen, i reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na r.t. Filtracijom je dobijena bela čvrsta supstanca (14,6 g) koja je ponovo prekristalisana iz etanola (100 ml) koristeći istu proceduru, dajući (S)-1-feniletanaminijum (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat (12,5 g, 20,7%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.98 - 1.23 (4H, m), 1.26 (3H, d), 1.38 (9H, s), 1.66 - 1.84 (3H, m), 1.95 (1H, m), 2.21 (1H, m), 3.21 (1H, m), 4.00 (1H, q), 6.72 (1H, m), 7.16 - 7.23 (1H, m), 7.30 (2H, m), 7.34 - 7.4 (2H, m), NH3<+>nije uočen.
Priprema (1S,3R)-3-(terc-butoksikarbonilamino)cikloheksankarboksilne kiseline
[0226]
[0227] (S)-1-feniletanaminijum (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat (9,85 g, 27,0 mmol) suspendovan je u 250 ml EtOAc, i organski sloj je ispran pomoću 0,5 M HCl (2 x 125 ml). Organski sloj je sakupljen, i kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani pomoću EtOAc (300 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 x 500 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (500 ml), pa su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je zatim osušena pod vakuumom, dajući (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilnu kiselinu (5,5 g, 84%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.99 -1.35 (4H, m), 1.38 (9H, s), 1.68 - 1.85 (3H, m), 1.96 (1H, d), 2.23 (1H, tt), 3.15 - 3.30 (1H, m, delimično zaklonjen vodenim pikom), 6.72 (1H, d), 12.01 (1H, s).
Reprezentativno određivanje enantiomerne čistoće:
[0228] HATU (0,413 g, 1,09 mmol) dodat je u rastvor (4-metoksifenil)metanamina (0,142 ml, 1,09 mmol), (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (0,240 g, 0,99 mmol), DIPEA (0,345 ml, 1,97 mmol) i DMF-a (1,980 ml). Svetložuti rastvor je postao smeša tokom 30 min, i zatim je razblažen etil acetatom i redom ispran vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je zatim osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiranjem izokratskim 5% metanolom u DCM-u, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-metoksibenzil)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,30 g, 84%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.97 - 1.14 (1H, m), 1.15 - 1.32 (3H, m), 1.38 (9H, s), 1.56 - 1.84 (4H, m), 2.12 - 2.29 (1H, m), 3.14 - 3.28 (1H, m), 3.73 (3H, s), 4.17 (2H, br. d), 6.70 -6.77 (1H, m), 6.87 (2H, d), 7.14 (2H, d), 8.16 (1H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 363.
[0229] Uzorci pripremljeni na ovaj način su zatim analizirani koristeći sledeće uslove analitičke SFC:
Retenciona vremena:
[0230] 3,33 min, terc-butil ((1R,3S)-3-((4-metoksibenzil)karbamoil)cikloheksil)karbamat 5,21 min, terc-butil ((1S,3R)-3-((4-metoksibenzil)karbamoil)cikloheksil)karbamat
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (poznat i kao primer 31a)
[0231]
[0232] 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin (1,12 ml, 8,44 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (2,01 g, 8,24 mmol) u DCM-u (50 ml) na 0 °C. Reakcija je održavana u ovim uslovima tokom 100 minuta. Tokom tog vremena, 5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amin (1,64 g, 6,59 mmol), piridin (2,1 ml, 26,4 mmol) i DCM (20 ml) spojeni su u zasebnom balonu. Reakciona smeša je pažljivo zagrevana (∼40 °C) dok sve čvrste supstance nisu rastvorene. Dobijeni rastvor je zatim ohlađen na 0 °C, nakon čega je nastala homogena svetložuta smeša. Ova smeša je zatim putem kanile brzo dodata u prethodno pripremljeni rastvor (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline i 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amina, što daje tamniji žuti rastvor. Reakcija je ostavljena da se zagreva na r.t. preko noći i zatim je uparena do suva. Siva smeša je zatim preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+ [M+H]+ 474.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (poznat i kao primer 31b)
[0233]
[0234] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 10 ml, 40 mmol) dodata je u smešu sirovog terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (3,12 g, 6,59 mmol) u DCM-u (5 ml) i metanolu (5 ml) na 0 °C. Smeša je postala žutosmeđi rastvor. Nakon 1 h, žutosmeđi rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je osušen pod vakuumom do bež/sive penaste čvrste supstance. Ova supstanca je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+ [M+H]+ 374.
Primer 3: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0235]
[0236] Anhidrid sirćetne kiseline (0,016 ml, 0,17 mmol) dodat je u (1S,3R)-3-amino-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (47 mg, 0,14 mmol) i trietilamin (0,023 ml, 0,17 mmol) u DCM-u (1 ml) na 21 °C u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan u ovim uslovima tokom 60 h. Reakciona smeša je naneta direktno na silika gel i prečišćena pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 1 do 10% MeOH u DCM-u. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (43 mg, 81%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.07 - 1.23 (1H, m), 1.37 - 1.53 (3H, m), 1.87 - 2.03 (8H, m), 2.03 - 2.11 (2H, m), 2.25 (1H, d), 2.39 - 2.51 (1H, m), 3.06 (2H, t), 3.88 (1H, dtq), 4.20 (2H, t), 5.40 (1H, d), 7.10 (1H, dd), 7.80 (1H, s), 8.17 (1H, dd), 8.32 (1H, s), 8.35 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 382.
[0237] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida su opisane u nastavku:
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((4-brompiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0238]
[0239] 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin (0,574 ml, 4,33 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (1,01 g, 4,16 mmol; pripremljena prema primeru 2) u DCM-u (40 ml) na 0 °C. Nakon 1,5 h, smeša 4-brompiridin-2-amina (0,6 g, 3,47 mmol) i piridina (1,12 ml, 13,9 mmol) u DCM-u (33,0 ml) dodata je putem kanile. Dobijena žuta smeša je ostavljena da se zagreje na r.t. i mešana je u tim uslovima tokom 72 h. Smeša koja je pobelela je filtrirana, isprana hladnim DCM-om, i beli talog je osušen pod vakuumom na 70 °C tokom 30 min, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-brompiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,38 g, 100%) 95% čistoće kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.99 - 1.35 (4H, m) 1.38 (9H, s) 1.68 - 1.80 (3H, m) 1.88 (1H, d) 2.53 - 2.64 (1H, m) 3.15 - 3.35 (1H, m) 6.76 (1H, d) 7.34 (1H, dd) 8.21 (1H, d) 8.33 (1H, d) 10.63 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 398.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0240]
[0241] XPhos pretkatalizator 2. generacije (9,88 mg, 0,01 mmol) u jednoj porciji je dodat u degasiranu smešu terc-butil ((1R,3S)-3-((4-brompiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (100 mg, 0,25 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (93 mg, 0,38 mmol), kalijum fosfata (160 mg, 0,75 mmol), 1,4-dioksana (2 ml) i vode (0,2 ml) na 21 °C u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 100 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena pomoću EtOAc (10 ml) i zatim isprana zasićenim NaHCO3(10 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (2 x 10 ml), i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 20 do 80% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (70,0 mg, 63,4%) kao beli prašak.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.12 (1H, d), 1.21 - 1.33 (3H, m), 1.39 (9H, s), 1.76 (3H, s), 1.82 - 1.95 (3H, m), 2.00 (2H, d), 2.59 (1H, s), 2.97 (2H, t), 3.89 (1H, s), 4.12 (2H, t), 6.75 (1H, s), 7.19 (1H, dd), 7.85 (1H, s), 8.22 (2H, d), 10.32 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 440.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0242]
[0243] HCl u dioksanu (4 M; 0,199 ml, 0,80 mmol) ukapavanjem je dodat u terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-
1
il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (70 mg, 0,16 mmol) u DCM-u (2 ml) na 21 °C u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 21 °C tokom 16 h. Dodat je MeOH (1 ml), i smeša je neposredno prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom, koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (47 mg, 87%) kao belu čvrstu kristalnu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, 30°C) 0.95 - 1.08 (1H, m), 1.2 - 1.4 (3H, m), 1.76 - 1.91 (5H, m), 1.99 (3H, dtt), 2.44 (1H, ddd), 2.61 (1H, tt), 2.95 (2H, t), 3.25 (1H, s), 4.07 (2H, t), 7.11 (1H, dd), 7.74 (1H, s), 8.07 - 8.16 (2H, m), NH2pik nije uočen. m/z: ES+ [M+H]+ 340.
Primer 4: Cis-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutan karboksamid
[0244]
[0245] HCl u dioksanu (4 M; 0,388 ml, 1,55 mmol) dodat je u cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamid (143 mg, 0,31 mmol) u DCM-u (3 ml) na 21 °C u atmosferi azota. Dobijena suspenzija je mešana na 21 °C tokom 30 minuta. Dodat je MeOH (1 ml) i smeša je mešana na 21 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana i zatim razblažena pomoću EtOAc (25 ml) i zasićenog vodenog rastvora NaHCO3(25 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (25 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 50 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući cis-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutan karboksamid (24,0 mg, 22,3%) kao bledožutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.88 - 1.94 (2H, m), 2.05 - 2.15 (3H, m), 2.2 -
2
2.31 (2H, m), 2.62 - 2.73 (3H, m), 2.93 (2H, t), 4.18 - 4.31 (3H, m), 7.81 (1H, s), 7.88 (1H, s), 8.23 (1H, s), 8.26 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 347.
[0246] Procedure za pripremu polazne supstance cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamida su opisane u nastavku:
Priprema cis-terc-butildimetilsilil 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutan karboksilata
[0247]
[0248] Cis-3-hidroksiciklobutankarboksilna kiselina (300 mg, 2,58 mmol) rastvorena je u DCM-u (17,2 ml). Redom su dodati terc-butilhlordimetilsilan (818 mg, 5,43 mmol) i 1H-imidazol (369 mg, 5,43 mmol), i rastvor je stavljen u atmosferu azota. Reakcija je ostavljena da se meša tokom 16 h na r.t. Smeša je razblažena etil acetatom (100 ml) i isprana 1 N vodenim rastvorom HCl (30 ml), vodom (30 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (40 ml), pre nego što je osušena iznad magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući cis-terc-butildimetilsilil 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutan karboksilat (802 mg, 90%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 0.03 (6H, s), 0.26 (6H, s), 0.88 (9H, s), 0.94 (9H, d), 2.11 - 2.21 (2H, m), 2.43 - 2.63 (3H, m), 4.07 - 4.17 (1H, m).
Priprema cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilne kiseline
[0249]
[0250] Kalijum karbonat (644 mg, 4,66 mmol) dodat je u rastvor cis-terc-butildimetilsilil 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutan karboksilata (803 mg, 2,33 mmol) u THF-u (15 ml) i vodi (3 ml). Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 20 h. Reakciona smeša je razblažena vodom i isprana pomoću EtOAc. Vodeni sloj je zakiseljen 0,1 N vodenim rastvorom HCl i ekstrahovan pomoću EtOAc (x2). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući sirovi proizvod koji je korišćen bez prečišćavanja u sledećem koraku.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 0.00 (6H, s), 0.84 (9H, s), 2.09 - 2.29 (2H, m), 2.36 - 2.66 (3H, m), 3.97 - 4.23 (1H, m), CO2H nije uočen.
Priprema 3-(5-hlor-2-fluorpiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0251]
[0252] 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (500 mg, 2,02 mmol), 5-hlor-2-fluor-4-jodpiridin (432 mg, 1,68 mmol), XPhos pretkatalizator 2. generacije (132 mg, 0,17 mmol) i kalijum fosfat (1069 mg, 5,03 mmol) suspendovani su u dioksanu (5 ml) i vodi (0,50 ml). Reakcija je degasirana barbotiranjem azota kroz reakcionu smešu tokom 5 minuta, pa je zagrejana na 90 °C. Reakcija je održavana u tim uslovima tokom 20 h i zatim je razblažena dodatkom vode (20 ml) i EtOAc (20 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (3 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml), osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 20 do 80% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući 3-(5-hlor-2-fluorpiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (440 mg, 104%) kao kristalnu čvrstu supstancu krem boje. Ova supstanca je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.87 - 1.96 (2H, m), 2.08 - 2.16 (2H, m), 2.83 (2H, t), 4.23 (2H, t), 6.82 (1H, d), 7.80 (1H, s), 8.23 (1H, s). m/z: ES<+>[M+H]<+>252.
4
Priprema 5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amina
[0253]
[0254] 3-(5-hlor-2-fluorpiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (440 mg, 1,49 mmol) i amonijum hidroksid (2,0 ml, 51 mmol) spojeni su i zaptiveni u epruveti za mikrotalasnu pećnicu. Reakcija je zagrevana na 150 °C tokom 2 h u mikrotalasnom reaktoru i ohlađena na r.t. Reakciona smeša je razblažena dodatkom EtOAc (25 ml) i vode (25 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (3 x 25 ml). Organski slojevi su spojeni i isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 ml), osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluent 50% EtOAc u heptanu, zatim 10% MeOH u DCM-u. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući 5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amin (80 mg, 22%) kao belu čvrstu supstancu, koja je prethodno okarakterisana (vidite primer 3, intermedijere)
Priprema cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamida
[0255]
[0256] N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,167 ml, 0,94 mmol) dodat je u cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilnu kiselinu (79 mg, 0,34 mmol) i 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijum heksafluorfosfat(V) (179 mg, 0,47 mmol) u DMF-u (1 ml) na 21 °C u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na 21 °C tokom 10 minuta. Dodat je rastvor 5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amina (78 mg, 0,31 mmol) u DMF-u (1 ml) i dobijena smeša je mešana na 21 °C tokom 16 h. Mešanje je nastavljeno tokom 72 h i dodato je još cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilne kiseline (79 mg, 0,34 mmol), 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijum heksafluorfosfata(V) (179 mg, 0,47 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (0,167 ml, 0,94 mmol). Smeša je mešana još 24 h, pa su dodati EtOAc (20 ml) i zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (20 ml). Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je ispran vodom (20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml), osušeni iznad Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je smesta prenet u sledeći korak, uz pretpostavku da je izolovanje kvantitativno. m/z: ES+ [M+H]+ 461.
Primer 5: (R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamid
[0257]
[0258] TFA (1 ml, 13 mmol) dodata je u (R)-terc-butil 3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilat (90 mg, 0,20 mmol) u DCM-u (2 ml) na 20 °C. Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 1 h i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µm, prečnik 19 mm, dužina 150 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 0,05% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su uparene do suva, dajući (R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamid (18,0 mg, 25,6%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6, 23 °C) 1.30 - 1.47 (1H, m), 1.52 -1.62 (2H, m),1.76 - 1.90 (3H, m), 1.97 - 2.07 (2H, m), 2.52 - 2.62 (2H, m), 2.69 (1H, t), 2.75 -2.87 (3H, m), 2.91 - 3.01 (1H, m), 4.14 (2H, t), 7.77 (1H, s), 8.15 (1H, s), 8.37 (1H, s), 10.84 (1H, s), piperidin NH nije uočen. m/z: ES+ [M+H]+ 360.
[0259] Procedure za pripremu polazne supstance (R)-terc-butil 3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilata opisane su u nastavku:
Priprema terc-butil 3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il) piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilata
[0260]
[0261] Piridin (0,10 ml, 1,3 mmol) dodat je u 1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-3-karboksilnu kiselinu (74 mg, 0,32 mmol) i 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin (0,050 ml, 0,64 mmol) u DCM-u (2 ml) na 20 °C. Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 20 minuta. Zatim je u smešu dodat 5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amin (80 mg, 0,32 mmol; pripremljen prema primeru 4). Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i razblažena DCM-om (100 ml), pa je redom isprana sa 0,1 M HCl (2 x 25 ml), zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (25 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 x 25 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne TLC (petrol etar: EtOAc = 10:1), dajući terc-butil 3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilat (100 mg, 67,6%) kao žutu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 460.
Primer 6: cis-3-hidroksi-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamid
[0262]
[0263] HCl u dioksanu (4 M; 0,388 ml, 1,55 mmol) dodata je u cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamid (132 mg, 0,31 mmol) u DCM-u (3 ml) i MeOH (1 ml) na 21 °C u atmosferi azota. Dobijena suspenzija je mešana na 21 °C tokom 3 h, pa je smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen dodatkom EtOAc (25 ml) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (25 ml). Slojevi su zatim razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (25 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena sirova čvrsta supstanca je triturirana sa Et2O i osušena pod vakuumom, dajući cis-3-hidroksi-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamid (35,0 mg, 36,1%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.89 - 2.01 (2H, m), 2.08 (3H, ddd), 2.28 (2H, ddd), 2.67 (3H, tq), 3.08 (2H, t), 4.23 (3H, dt), 7.10 (1H, dd), 7.81 (1H, s), 7.83 (1H, s), 8.19 (1H, dd), 8.33 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 313.
[0264] Procedure za pripremu polazne supstance cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamida su opisane u nastavku:
Priprema cis-N-(4-brompiridin-2-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutan karboksamida
[0265]
[0266] N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,461 ml, 2,60 mmol) dodat je u cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilnu kiselinu (220 mg, 0,95 mmol; pripremljena kao u primeru 4) i 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijum heksafluorfosfat(V) (494 mg, 1,30 mmol) u DMF-u (3 ml) na 21 °C u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na 21 °C tokom 10 minuta, pa je dodat 4-brompiridin-2-amin (150 mg, 0,87 mmol), i dobijena smeša je mešana na 21 °C tokom 16 h. Mešanje je nastavljeno tokom 72 h, i dodato je još cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilne kiseline (79 mg, 0,34 mmol), 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijum heksafluorfosfata(V) (179 mg, 0,47 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (0,167 ml, 0,94 mmol). Smeša je mešana još 24 h i zatim su dodati EtOAc (25 ml) i zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (25 ml). Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je ispran vodom (2 x 25 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 x 25 ml), osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući cis-N-(4-brompiridin-2-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutan karboksamid (96 mg, 29%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 0.06 (6H, s), 0.89 (9H, s), 1.11 - 1.18 (1H, m), 2.23 - 2.31 (2H, m), 2.54 - 2.58 (2H, m), 4.15 - 4.26 (1H, m), 7.18 (1H, dd), 7.82 (1H, s), 8.06 (1H, dd), 8.49 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 385 (<79>Br izotop), 387 (<81>Br izotop).
Priprema cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamida
[0267]
[0268] XPhos pretkatalizator 2. generacije (19,40 mg, 0,02 mmol) dodat je u degasiranu smešu cis-N-(4-brompiridin-2-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutan karboksamida (95 mg, 0,25 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (73,4 mg, 0,30 mmol) i kalijum fosfata (157 mg, 0,74 mmol) u dioksanu (2 ml) i vodi (0,2 ml) na 21 °C u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 100 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena dodatkom EtOAc (25 ml) i redom isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (10 ml), vodom (10 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 ml). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 30 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamid (60,0 mg, 57,1%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 0.05 (6H, s), 0.89 (9H, s), 1.9 - 2.01 (2H, m), 2.02 - 2.12 (2H, m), 2.25 - 2.33 (2H, m), 2.5 - 2.62 (3H, m), 3.08 (2H, t), 4.21 (3H, t), 7.09 (1H, dd), 7.76 (1H, s), 7.80 (1H, s), 8.18 (1H, dd), 8.33 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 427.
Primer 7: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0269]
[0270] (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-brom-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,20 g, 0,53 mmol), 5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin (47 mg, 0,38 mmol), cezijum karbonat (0,14 g, 0,42 mmol), trietilamin (0,11 ml, 0,76 mmol), trifenilfosfin (0,02 g, 0,06 mmol) i diacetoksipaladijum (6,85 mg, 0,0300 mmol) suspendovani su u 1,4-dioksanu (5 ml) i zaptiveni u epruveti za mikrotalasnu pećnicu. Reakcija je zagrevana na 100 °C tokom 16 h u mikrotalasnom reaktoru, i zatim ohlađena na r.t. Reakcija je koncentrovana pod sniženim
1
pritiskom, i sirovi proizvod je prečišćen pomoću jonoizmenjivačke hromatografije koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su uparene do suva. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 50 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,069 g, 44%) kao žutu gumu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) 0.95 - 1.16 (1H, m), 1.19 - 1.39 (3H, m), 1.78 (3H, s), 1.83 - 1.97 (2H, m), 2.55 - 2.68 (1H, m), 2.84 (2H, s), 3.18 (2H, dd), 3.31 (3H, s), 3.57 (1H, dt), 3.83 (2H, s), 4.08 (1H, q), 7.13 (1H, s), 7.75 (1H, d), 8.16 (1H, s), 8.47 (1H, s), 10.70 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 417 (<13>C,<35>Cl sekundarni pik izotopa).
[0271] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-brom-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida su opisane u nastavku:
Priprema 4-brom-3-hlorpiridin-2-amina
[0272]
[0273] N-hlor-sukcinimid (3,70 g, 27,7 mmol) rastvoren u DMF-u (20 ml) ukapavanjem je dodat u 4-brompiridin-2-amin (4,40 g, 25,4 mmol) u DMF-u (50 ml) na -78 °C u periodu od 30 minuta u atmosferi azota. Dobijena suspenzija je ostavljena da se zagreje na r.t. Nakon mešanja u tim uslovima tokom 24 h, reakciona smeša je razblažena dodatkom Et2O (50 ml) i redom isprana 1 M vodenim rastvorom NaOH (2 x 50 ml), vodom (50 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 25% EtOAc u DCM-u. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući 4-brom-5-hlorpiridin-2-amin (2,30 g, 43,7%) kao čvrstu supstancu krem boje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 6.35 (2H, s), 6.82 (1H, s), 8.01 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 209 (<35>Cl<81>Br i<37>Cl<79>Br izotopi).
1 1
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((4-brom-5-hlorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0274]
[0275] Rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (1,50 g, 6,15 mmol; pripremljena prema primeru 2) rastvoren u DCM-u (20 ml) na 0 °C tretiran je 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-aminom (0,976 ml, 7,38 mmol). Smeša je mešana na r.t. tokom 1,5 h, pa su redom dodati 4-brom-5-hlorpiridin-2-amin (1,02 g, 4,92 mmol) i piridin (0,594 ml, 7,38 mmol). Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena pomoću DCM-a (25 ml) i redom isprana vodom (2 x 25 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću jonoizmenjivačke hromatografije, koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći metanol, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-brom-5-hlorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (2,34 g, 110%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.12 (1H, dd), 1.22 - 1.32 (3H, m), 1.38 (9H, s), 1.72 (3H, dd), 1.83 - 1.94 (2H, m), 2.11 (1H, dt), 8.48 (1H, s), 8.50 (1H, s), 10.77 (1H, s), jedan proton nije uočen. m/z: ES- [M-H]- 430.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(4-brom-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida
[0276]
1 2
[0277] HCl u dioksanu (4 M; 5,89 ml, 23,6 mmol) dodata je u terc-butil ((1R,3S)-3-((4-brom-5-hlorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,20 g, 2,77 mmol) u MeOH (7,01 ml) u atmosferi vazduha. Dobijeni rastvor je mešan na temperaturi okoline tokom 16 h. Reakciona smeša je uparena, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(4-brom-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorid kao belu čvrstu supstancu. Ona je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+ [M+H]+ 332 (<35>Cl<79>Br izotop), 334 (<35>Cl<81>Br i<37>Cl<79>Br izotopi).
Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-brom-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0278]
[0279] Anhidrid sirćetne kiseline (0,259 ml, 2,74 mmol) ukapavanjem je dodat u (1S,3R)-3-amino-N-(4-brom-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,760 g, 2,28 mmol), 4-dimetilaminopiridin (0,014 g, 0,11 mmol) i trietilamin (0,987 ml, 7,08 mmol) u DCM-u (8,44 ml) na r.t. u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. preko noći, pa je deaktiviran zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (50 ml) i ekstrahovan pomoću DCM-a (2 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-brom-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,96 g, 95%) kao belu čvrstu supstancu. Proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.23 - 1.41 (4H, m), 1.67 - 1.85 (4H, m), 2.39 (3H, tt), 2.75 - 2.92 (1H, m), 3.53 (1H, dtd), 7.59 - 7.83 (1H, m), 8.50 (2H, dd), 10.80 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 374 (<35>Cl<79>Br izotop), 376 (<35>Cl<81>Br i<37>Cl<79>Br izotopi).
Primer 8: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0280]
1
[0281] (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-brom-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,100 g, 0,27 mmol; pripremljen kao u primeru 7) dodat je u jednoj porciji u degasiranu smešu 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazina (0,067 g, 0,27 mmol), X-Phos pretkatalizatora 2. generacije (0,021 g, 0,03 mmol), kalijum fosfata (0,170 g, 0,80 mmol), 1,4-dioksana (2,270 ml) i vode (0,454 ml) na r.t. Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 16 h i zatim uparena do suva, pa je prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom na SCX-2 ulošku. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su uparene do suva, dajući sirovi (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid kao žutu gumu. Polučisti proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,017 g, 16%) kao belu gumu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.21 - 1.32 (1H, m), 1.4 - 1.53 (3H, m), 1.95 (1H, s), 1.96 (3H, s), 2.06 (1H, d), 2.39 - 2.48 (2H, m), 2.7 - 2.85 (3H, m), 3.74 (1H, dt), 4.34 (2H, t), 4.53 - 4.68 (2H, m), 7.93 (1H, d), 8.05 (1H, s), 8.48 (1H, d), 8.58 (1H, s), 10.62 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 418 (<12>C,<35>Cl izotop), 419 (<13>C,<35>Cl sekundarni pik izotopa).
[0282] Procedure za pripremu polazne supstance 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazina su opisane u nastavku:
Priprema 1,2-dihidropirazol-3-ona
[0283]
1 4
[0284] U rastvor metil prop-2-inoata (150 g, 1785,7 mmol) u MeOH (1500 ml) dodat je hidrazin hidrat (89,2 g, 1784,0 mmol) ukapavanjem na 0 °C. Reakcija je mešana na r.t. tokom 30 min. Dodat je zasićeni vodeni rastvor natrijum hlorida (400 ml), a zatim je metanol uklonjen pod vakuumom. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (3 x 500 ml) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući 1,2-dihidropirazol-3-on (99,5 g, 66%) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 85.
Priprema 6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazina
[0285]
[0286] U rastvor 1,2-dihidropirazol-3-ona (99,5 g, 1184 mmol) u DMF-u (4000 ml) dodat je K2CO3(560,0 g, 4057 mmol), i smeša je zagrevana na 130 °C tokom 1 h. Zatim je dodat 1,3-dibrompropan (143,4 ml, 1421 mmol) i smeša je mešana na 130 °C tokom 2 h i zatim koncentrovana. Dobijeni ostatak je podeljen između DCM-a (2000 ml) i vode (2000 ml). Organski sloj je razdvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM-a (3 x 1000 ml). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani, dajući 6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin (83,0 g, 56,8%) kao žuto ulje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 30 °C) 2.18 - 2.11 (2H, m), 4.13 - 4.05 (2H, m), 4.19 - 4.16 (2H, m), 5.37 - 5.37 (1H, m), 7.21 - 7.20 (1H, m).
Priprema 3-jod-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazina
[0287]
1
[0288] U rastvor 6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazina (83,0 g, 669,3 mmol) u CH3CN (1500 ml) dodat je N-jodsukcinimid (155,0 g, 688,8 mmol). Smeša je mešana na r.t. tokom 1 h, pa je uz snažno mešanje polako sipana u vodu (1000 ml). Dodat je zasićeni vodeni rastvor natrijum tiosulfata (500 ml), i dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 x 800 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, osušeni iznad Na2SO4, i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela (petrol etar: EtOAc = 1: 1), dajući 3-jod-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin (105,0 g, 62,2%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 2.19 - 2.12 (2H, m), 4.10 - 3.98 (2H, m), 4.34 - 4.31 (2H, m), 7.28 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 251.
Priprema 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazina
[0289]
[0290] U rastvor 3-jod-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazina (105 g, 420 mmol) u THF-u (1000 ml) dodat je 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (126 ml, 630 mmol). Smeša je ohlađena na 5 °C. Zatim je dodat izopropil magnezijum litijum hlorid (410 ml, 420 mmol) i smeša je mešana na 5 °C tokom 3 h. Reakcija je prekinuta dodatkom MeOH (500 ml) i zatim koncentrovana. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran 50% izokratskim etil acetatom u petrol etru, dajući bledožuto ulje. Prekristalizacijom iz heptana (100 ml) dobijen je 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin (38,6 g, 36,7%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.21 (12H, s), 2.15 - 2.12 (2H, m), 4.06 - 4.03 (2H, m), 4.31 - 4.29 (2H, m), 7.32 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 251.
Primer 9: (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid i
1
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (primer 2)
[0291]
[0292] Acetil hlorid (0,280 ml, 3,93 mmol) dodat je u rastvor cis-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,639 g, 1,71 mmol; odnos enantiomera nepoznat, pripremljen kao u primeru 2 od 5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amina i cis-3-(tercbutoksikarbonilamino)cikloheksankarboksilne kiseline, odnos enantiomera nepoznat) u DCM-u (14,1 ml) i piridinu (2,77 ml, 34,2 mmol) na 0 °C. Nakon 30 min, svetložuta reakcija je sipana u DCM i zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 20% metanola u EtOAc. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući polučisti proizvod kao belu čvrstu supstancu. Ta supstanca je dalje prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18, 5 µm, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), elucija 60 do 80% metanolom u vodi (sa 0,2% amonijum hidroksida na pH 10) kao eluentom. Frakcije proizvoda su koncentrovane do suva pod sniženim pritiskom, dajući cis-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid, odnos enantiomera nepoznat, kao belu čvrstu supstancu (403 mg).
[0293] Ova supstanca je preneta u balon sa okruglim dnom koristeći DCM, i koncentrovana pod sniženim pritiskom do bele čvrste supstance. Čvrsta supstanca je preneta u približno 10 ml MeCN i zagrevana do refluksa. Rastvor je ohlađen, i talog je ubrzano počeo da se formira. Nakon 10 min, smeša je ubačena u zamrzivač. Nakon 2 h, smeša je zagrejana na r.t. i snažno
1
mešana preko noći. Bela smeša je zatim filtrirana, isprana prvo sa MeCN, a zatim heksanom. Dobijeni talog je osušen pod vakuumom na 60 °C tokom 30 min, dajući 159 mg kristalne čvrste supstance (pahulje).
[0294] Analizom ove čvrste supstance pod uslovima analitičke SFC (vidite uslove u primeru 2), određeno je da ima 60,5% e.e. (glavna komponenta = primer 2). Deo ove supstance (112 mg) prečišćen je koristeći uslove preparativne SFC (kolona Chiralpak IA, 5 µm, prečnik 21,2 mm, dužina 250 mm, temperatura kolone 40 °C, izlazni pritisak 100 bar, protok 75 ml/min), eluent 40% metanol sa 0,1% dimetiletilamina u CO2, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (70 mg, 67%, primer 2) kao belu penastu čvrstu supstancu, i (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (13,2 mg, 11,8%, primer 9) kao belu penastu čvrstu supstancu.
(1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid:
[0295]<1>H NMR(300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.99 - 1.17 (1H, m), 1.19 - 1.37 (3H, m), 1.70 -1.90 (9H, m), 1.96 - 2.08 (2H, m), 2.54 - 2.68 (1H, m), 2.80 (2H, t), 3.46 - 3.68 (1H, m), 4.14 (2H, t), 7.73 (1H, d), 7.76 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.38 (1H, s), 10.57 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 416.
Uslovi analitičke SFC:
[0296]
1
Optička rotacija:
[0297]
Primer 10: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0298]
[0299] (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,093 g, 0,26 mmol) u DCM-u (2 ml) tretiran je trietilaminom (0,079 ml, 0,57 mmol), pa zatim anhidridom sirćetne kiseline (0,029 ml, 0,31 mmol).
1
Reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 0,5 h i zatim isprana vodom. Organski sloj je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,075 g, 72%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.09 - 1.22 (1H, m), 1.38 - 1.58 (2H, m), 1.88 - 2.03 (6H, m), 2.26 (1H, d), 2.43 - 2.56 (1H, m), 2.69 (2H, p), 3.14 - 3.21 (2H, m), 3.49 (1H, s), 3.87 (1H, dtt), 4.21 (2H, t), 5.59 (1H, d), 8.14 (1H, s), 8.22 (1H, s), 8.33 (1H, s), 8.43 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 402.
[0300] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida su opisane u nastavku:
Priprema 3-jod-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0301]
[0302] 5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-karboksilna kiselina (0,75 g, 4,93 mmol) rastvorena u DMF-u (4 ml) tretirana je N-jodsukcinimidom (1,331 g, 5,92 mmol) i natrijum bikarbonatom (0,497 g, 5,92 mmol) na r.t. Smeša je mešana na r.t. tokom 15 h. Reakcija je mešana na 60 °C još 16 h i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u EtOAc (50 ml) i ispran vodom (2 x 50 ml). Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući 3-jod-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,88 g, 76%) kao čvrstu supstancu bež boje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 2.53 - 2.6 (2H, m), 2.69 - 2.79 (2H, m), 4.04 - 4.19 (2H, m), 7.46 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 235.
Priprema 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
11
[0304] 3-jod-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,800 g, 3,42 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0,954 g, 5,13 mmol) rastvoreni su u THF-u (8 ml) na 4 °C i zatim ukapavanjem tretirani kompleksom izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 2,63 ml, 3,42 mmol). Smeša je mešana na 4 °C tokom 2 h, i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,67 g, 84%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.29 (12H, s), 2.60 (2H, p), 2.91 - 3.02 (2H, m), 4.05 - 4.19 (2H, m), 7.77 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 235.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0305]
[0306] 1-hlor-N,N,2-trimetilpropenilamin (1,149 ml, 8,68 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (1,41 g, 5,79 mmol; pripremljena prema primeru 2) u DCM-u (25 ml) ohlađen u ledenom kupatilu u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 1 h. Dodati su 5-hlor-4-jodpiridin-2-amin (1,47 g, 5,79 mmol; pripremljen prema primeru 2) i piridin (0,702 ml, 8,68 mmol), i dobijena smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 16 h. Reakcija je prekinuta dodatkom zasićenog vodenog rastvora NH4Cl (50 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana pomoću DCM-a (3 x 75 ml), i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena bledožuta čvrsta supstanca je suspendovana sa Et2O (10 ml) i filtrirana, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,79 g, 3,73 mmol, 64,4%) kao čvrstu supstancu krem boje.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.04 - 1.18 (1H, m), 1.24 - 1.41 (2H, m), 1.44 (9H, s), 1.92 (2H, dq), 2.00 (1H, d), 2.28 (1H, d), 2.31 - 2.41 (1H, m), 3.27 - 3.62 (2H, m), 4.44 (1H, s), 7.80 (1H, s), 8.19 (1H, s), 8.81 (1H, s). m/z: ES- [M-H]- 478.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0307]
[0308] 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,14 g, 0,58 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,18 g, 0,38 mmol), X-Phos pretkatalizator 2. generacije (0,03 g, 0,04 mmol) i kalijum fosfat, dvobazni (0,200 g, 1,15 mmol) rastvoreni su u 1,4-dioksanu (4 ml) i vodi (0,8 ml) na 21 °C. Smeša je mešana na 21 °C tokom 18 h. Smeša je zatim zagrevana na 40 °C tokom 17 h, zatim na 50 °C tokom 2 h. Smeša je razblažena dodatkom EtOAc (30 ml) i zatim isprana vodom (10 ml). Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,119 g, 67,5%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.04 - 1.17 (1H, m), 1.34 - 1.41 (2H, m), 1.44 (9H, s), 1.89 - 2.03 (4H, m), 2.29 (1H, d), 2.33 - 2.44 (1H, m), 2.69 (2H, p), 3.14 - 3.21 (2H, m), 3.45 - 3.59 (1H, m), 4.17 - 4.24 (2H, m), 4.44 (1H, s), 7.93 (1H, s), 8.15 (1H, s), 8.23 (1H, s), 8.33 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 460.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,6-dihidro-4H-virolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida
[0309]
[0310] U rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0,12 g, 0,26 mmol) rastvoren u DCM-u (3 ml) dodata je HCl (4 M u dioksanu; 1,294 ml, 5,17 mmol). Smeša je mešana na r.t. tokom 30 minuta, pa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je neposredno korišćen u sledećem koraku. m/z: ES+ [M+H]+ 360.
Primer 11: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0311]
[0312] U smešu terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0,072 g, 0,15 mmol) suspendovanu u DCM-u (3 ml) na r.t. dodata je HCl (4 M u dioksanu; 0,756 ml, 3,03 mmol). Smeša je postala rastvor koji je mešan na r.t. tokom 30 minuta. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorid kao čvrstu supstancu. Sirovi proizvod je rastvoren u DCM-u (2 ml) i dobijeni rastvor je redom tretiran trietilaminom (0,047 ml, 0,33
11
mmol) i anhidridom sirćetne kiseline (0,017 ml, 0,18 mmol) na r.t. Reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 30 minuta i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu, elucioni gradijent 50 do 100% EtOAc u heptanu, zatim 0 do 10% MeOH u DCM-u. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,056 g, 88%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.08 (1H, d), 1.29 (4H, q), 1.78 (1H, s), 1.91 (3H, s), 2.61 (2H, s), 3.57 (1H, dt), 4.08 - 4.27 (4H, m), 4.89 (2H, s), 7.74 (1H, d), 7.88 (1H, s), 8.01 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.59 (1H, s), 11.90 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 418.
[0313] Procedure za pripremu polazne supstance terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata opisane su u nastavku:
Priprema 3-jod-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazina
[0314]
[0315] 6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-karboksilna kiselina (0,750 g, 4,46 mmol) rastvorena u DMF-u (4 ml) tretirana je N-jodsukcinimidom (1,204 g, 5,35 mmol) i natrijum bikarbonatom (0,450 g, 5,35 mmol) na r.t. Smeša je mešana na 70 °C tokom 4 h, a zatim ohlađena na r.t. Nakon 60 h, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je rastvoren u EtOAc (70 ml) i ispran vodom (2 x 70 ml). Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući 3-jod-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin (0,90 g, 81%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 3.98 - 4.06 (2H, m), 4.07 - 4.15 (2H, m), 4.65 (2H, s), 7.53 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 251.
Priprema 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazina
[0316]
[0317] 3-jod-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin (0,850 g, 3,40 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0,949 g, 5,10 mmol) rastvoreni su u THF-u (8 ml) na 4 °C. Dobijeni rastvor je ukapavanjem tretiran kompleksom izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 2,61 ml, 3,40 mmol). Reakciona smeša je mešana na 4 °C tokom 5 h, pa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin (0,80 g, 95%) kao bezbojnu gumu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.29 (12H, s), 4.08 (2H, dd), 4.17 - 4.23 (2H, m), 4.96 (2H, s), 7.74 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 251.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0318]
[0319] 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin (0,094 g, 0,38 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,120 g, 0,25 mmol; kao što je pripremljen u primeru 10), X-Phos pretkatalizator 2. generacije (0,020 g, 0,03 mmol) i dvobazni kalijum fosfat (0,131 g,
11
0,75 mmol) rastvoreni su u 1,4-dioksanu (4 ml) i vodi (0,800 ml) na 50 °C. Smeša je mešana na 50 °C tokom 1 h i zatim razblažena dodatkom EtOAc (30 ml). Dobijena smeša je isprana vodom (10 ml), i organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,081 g, 68%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.22 - 1.35 (4H, m), 1.38 (9H, s), 1.75 (3H, s), 1.90 (1H, d), 2.54 - 2.63 (1H, m), 4.12 - 4.26 (4H, m), 4.90 (2H, s), 5.75 (1H, s), 6.76 (1H, d), 7.89 (1H, s), 8.01 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.58 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 476.
Primer 12: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0320]
[0321] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (130 mg, 0,31 mmol), (6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)boronska kiselina hidrohlorid (145 mg, 0,77 mmol), barijum hidroksid (211 mg, 1,23 mmol) i PdCl2(dppf) (22 mg, 0,030 mmol) suspendovani su u dioksanu (2 ml) i vodi (0,4 ml) i zaptiveni u epruveti za mikrotalasnu pećnicu. Reakcija je zagrevana na 75 °C u mikrotalasnom reaktoru i održavana u tim uslovima tokom 2 h, pa je ohlađena na r.t. Reakciona smeša je filtrirana uz ispiranje metanolom i filtrat je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µm, prečnik 19 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sadrži 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (21,3 mg, 17,2%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.09 (1H, d), 1.30 (3H, q), 1.78 (5H, s), 1.91 (1H, d), 2.57 - 2.73 (4H, m), 2.85 (2H, t), 3.58
11
(1H, dd), 4.16 (2H, t), 7.55 (1H, s), 7.75 (1H, d), 8.35 (1H, s), 8.42 (1H, s), 10.67 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 402.
[0322] Procedure za pripremu polaznih supstanci (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida i (6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)boronske kiseline hidrohlorida opisane su u nastavku:
Priprema 5-metoksi-3,4-dihidro-2H-pirola
[0323]
[0324] Pirolidin-2-on (85 g, 1000 mmol) i Me2SO4(126 g, 1000 mmol) mešani su na r.t. tokom 30 minuta, i smeša je zatim mešana na 60 °C tokom 6 h. Smeša je polako sipana u rastvor trietilamina (140 ml) u DCM-u na 0 °C i mešana u tim uslovima tokom 15 min. Dodata je voda, i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je osušen iznad MgSO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom na r.t., dajući 5-metoksi-3,4-dihidro-2H-pirol, koji je korišćen neposredno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 2.03 - 1.95 (2H, m), 2.43 - 2.39 (2H, m), 3.64 - 3.60 (2H, m), 3.76 (3H, s).
Priprema 6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazola
[0325]
[0326] U rastvor 5-metoksi-3,4-dihidro-2H-pirola (sirov) u DCM-u (200 ml) dodat je MeOH (800 ml) i aminoacetaldehid dimetil acetal (105 g, 1000 mmol). Smeša je mešana na 60 °C tokom 6 h, pa je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući N-(2,2-dimetoksietil)-3,4-dihidro-2H-pirol-5-amin (82 g, 48%). Sirovi proizvod je rastvoren u mravljoj kiselini (400 ml) i mešan uz refluks tokom 17 h, pa je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 6,7-dihidro-
11
5H-pirolo[1,2-a]imidazol (46 g, 90%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 2.51 - 2.44 (2H, m), 2.69 - 2.65 (2H, m), 3.91 - 3.88 (2H, m), 6.84 (1H, s), 7.02 (1H, s).
Priprema (6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)boronske kiseline hidrohlorida
[0327]
[0328] U rastvor 6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazola (60 g, 560 mmol) u anhidrovanom THF-u (700 ml) na -78 °C uz mešanje je dodat n-BuLi (250 ml, 625 mmol), i smeša je mešana tokom 1 h na toj temperaturi. Triizopropil borat (115 g, 610 mmol) dodat je na -78 °C, i zatim je smeša ostavljena da se zagreje na r.t. preko noći. Reakcija je ohlađena na 0 °C i dodat je vodeni rastvor HCl (1 M, 1000 ml). Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom radi uklanjanja tetrahidrofurana. pH preostalog vodenog sloja je podešen na 2 pažljivim dodatkom koncentrovane HCl, i talog je sakupljen i osušen, dajući (6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)boronsku kiselinu hidrohlorid (42 g, 40%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 2.64 - 2.49 (2H, m), 3.08 (2H, t), 4.19 (2H, t), 7.92 (1H, s), 8.84 (2H, s), 14.34 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 153.
Priprema 3-amino-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0329]
[0330] Terc-butil (3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1 g, 2,08 mmol; kako je pripremljen u primeru 10) suspendovan je u DCM-u (15 ml) na temperaturi okoline. Dodata je HCl (4 M) u dioksanu (2,61 ml, 10,42 mmol) i dobijena smeša je mešana tokom 16 h. Reakciona smeša je zatim naneta na SCX kolonu od 50 g i redom eluirana pomoću
11
DCM-a, MeOH i 1% NH3u MeOH. Bazne frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući 3-amino-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid kao bezbojnu amorfnu čvrstu supstancu (782 mg, 99%). m/z: ES+ [M+H]+ 380.
Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0331]
[0332] Anhidrid sirćetne kiseline (0,214 ml, 2,27 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (782 mg, 2,06 mmol) i trietilamina (0,632 ml, 4,53 mmol) u DCM-u (10 ml) na temperaturi okoline. Reakciona smeša je mešana tokom 5 dana, pa je filtrirana i isprana DCM-om, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (480 mg, 55%) kao bezbojnu čvrstu supstancu. Tečnosti su koncentrovane i prečišćene pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 20 do 60% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući još (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (193 mg, 22%) kao bezbojnu kristalnu čvrstu supstancu (kombinovani prinos: 77%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.01 - 1.17 (1H, m), 1.18 - 1.39 (3H, m), 1.68 - 1.84 (2H, m), 1.78 (3H, s), 1.89 (1H, m), 2.51 (2H, m), 3.48 - 3.65 (1H, m), 7.74 (1H, d), 8.38 (1H, s), 8.71 (1H, s), 10.66 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 422.
Primer 13: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0333]
11
[0334] U rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0,042 g, 0,090 mmol) rastvoren u DCM-u (2 ml) dodata je HCl (4 M u dioksanu; 0,429 ml, 1,72 mmol). Smeša je mešana na r.t. tokom 2 h, pa je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovu čvrstu supstancu (33 mg). Ta čvrsta supstanca je rastvorena u DCM-u (2 ml) i trietilaminu (0,026 ml, 0,19 mmol). Zatim je dodat anhidrid sirćetne kiseline (9,6 µl, 0,10 mmol). Smeša je mešana na r.t. tokom 30 min i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u (10% MeOH u DCM-u). Čiste frakcije su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,027 g, 74%) kao bezbojni suvi film.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.09 - 1.24 (1H, m), 1.41 - 1.56 (3H, m), 1.87 - 2.04 (6H, m), 2.25 (1H, d), 2.51 (4H, s), 2.9 - 2.98 (2H, m), 3.73 (2H, s), 3.87 (1H, dtd), 4.26 (2H, t), 5.60 (1H, d), 7.84 (1H, s), 8.11 (1H, s), 8.25 (1H, d), 8.30 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 431.
[0335] Procedure za pripremu polazne supstance terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata opisane su u nastavku:
Priprema 3-brom-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina
[0336]
[0337] HCl (4 M u dioksanu; 3,31 ml, 13,24 mmol) dodata je u jednoj porciji u terc-butil 3-brom-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-karboksilat (0,400 g, 1,32 mmol) u DCM-u (6
12
ml) na 20 °C. Dobijena smeša je mešana na 20 °C tokom 60 minuta. Nastala je bela čvrsta supstanca. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u mravljoj kiselini (12,7 ml, 331 mmol) i tretiran formaldehidom (0,64 ml, 8,6 mmol). Ova nova smeša je zagrevana na 100 °C tokom 8 h, pa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u EtOAc (25 ml) i zatim ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2 x 25 ml); kombinovani vodeni slojevi su zatim ekstrahovani pomoću EtOAc (2 x 25 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, i dobijeni sirovi ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući 3-brom-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin (0,185 g, 64,7%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 2.45 (3H, s), 2.75 - 2.85 (2H, m), 3.48 (2H, s), 4.05 - 4.15 (2H, m), 7.35 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 218 (<81>Br izotop).
Priprema 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a]pirazina
[0338]
[0339] 3-brom-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin (0,185 g, 0,860 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (0,435 g, 1,71 mmol), kalijum acetat (0,294 g, 3,00 mmol) i Pd(P(Cy)3)2Cl2(0,063 g, 0,090 mmol) suspendovani su u DMA (3 ml). Reakcija je zagrevana na 80 °C tokom 5 h, zatim na 90 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je ohlađena na r.t. i zatim razblažena vodom (20 ml) i ekstrahovana pomoću EtOAc (20 ml). Kombinovane organske faze su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% DCM u heptanu, zatim 0 do 10% MeOH u DCM-u. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin (0,20 g, 89%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.29 (12H, s), 2.52 (3H, s), 2.88 - 2.92 (2H, m), 3.80 (2H, s), 4.22 (2H, t), 7.72 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 264.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0340]
[0341] Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,200 g, 0,42 mmol; kao što je pripremljen u primeru 10), 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin (0,197 g, 0,750 mmol), X-Phos pretkatalizator 2. generacije (0,033 g, 0,040 mmol) i dvobazni kalijum fosfat (0,218 g, 1,25 mmol) rastvoreni su u 1,4-dioksanu (4 ml) i vodi (0,800 ml) na 45 °C. Smeša je mešana na 45 °C tokom 18 h. Dodato je još X-Phos pretkatalizatora 2. generacije (0,033 g, 0,04 mmol), i temperatura je podignuta na 60 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je ohlađena i propuštena kroz SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu, zatim 0 do 10% MeOH u DCM-u. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,054 g, 27%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.04 -1.19 (1H, m), 1.44 (12H, s), 1.87 - 2.02 (3H, m), 2.29 (1H, d), 2.33 - 2.46 (1H, m), 2.53 (3H, s), 2.95 - 3 (2H, m), 3.50 (1H, s), 3.76 (2H, s), 4.28 (2H, t), 4.52 (1H, s), 7.85 (1H, s), 8.12 (2H, s), 8.26 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 489.
Primer 14: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0343] U rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (111 mg, 0,290 mmol), trietilamina (0,084 ml, 0,60 mmol) i N,N-dimetilpiridin-4-amina (1,748 mg, 0,01 mmol) u DCM-u (10 ml) uz mešanje je dodat anhidrid sirćetne kiseline (0,032 ml, 0,34 mmol). Reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 4 h, i zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (86 mg, 70%) kao belu čvrstu supstancu (oblik A).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.09 (1H, d), 1.28 (9H, s), 1.78 (6H, s), 1.90 (1H, d), 2.62 (1H, s), 2.89 (2H, s), 3.57 (1H, dt), 3.95 (2H, s), 7.73 (1H, d), 7.99 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.33 - 8.36 (1H, m), 10.53 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 430.
Optička rotacija
[0344]
12
[0345] Postupak 1: Naslovna supstanca (10 mg) rastvorena je u 1 ml acetonitrila, i bistri rastvor je polako uparen na r.t. tokom 3 dana. Dobijena čvrsta supstanca je nađena u primeru 14 u kristalnom obliku A.
[0346] Postupak 2: Naslovna supstanca (10 mg) dodata je u 0,1 ml acetonitrila, i dobijena suspenzija je mešana na temperaturi okoline tokom 18 h i zatim osušena na vazduhu tokom 3 dana. Dobijena čvrsta supstanca je nađena u primeru 14 u kristalnom obliku A.
[0347] Kristali oblika A su analizirani pomoću XRPD, i rezultati su dati u tabeli u nastavku i prikazani na slici 1. XRPD čvrste supstance potvrđuje da čvrsta supstanca sadrži isključivo oblik A koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa specifičnim pikovima na oko 2-teta = 5,9, 7,0, 9,4, 10,5, 11,5, 11,7, 17,6, 18,0, 20,2 i 21,0°.
Glavni pikovi oblika A primera 14
[0348]
[0349] Kristali (oblik A) dobijeni prema primeru 14 analizirani su koristeći termalne tehnike. DSC analiza pokazuje da se oblik A topi sa početnom tačkom na 191° i pikom na 193°. TGA pokazuje da oblik A ispoljava gubitak mase od oko 1,6% nakon zagrevanja od 22 do 200 °C. Reprezentativni DSC/TGA termogram je prikazan na slici 2.
[0350] Alternativna procedura za pravljenje primera 14 je opisana u primeru 85.
[0351] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema etil 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-1-l)propanoata
[0352]
[0353] 1H-pirazol (20 g, 293,78 mmol), etil 3-brom-2,2-dimetilpropanoat (61,4 g, 293,78 mmol) i cezijum karbonat (144 g, 440,68 mmol) u DMA (200 ml) mešani su na 80 °C tokom 16 h. Smeša je zatim sipana u vodu (400 ml) i ekstrahovana pomoću etil acetata (150 ml). Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući bezbojno ulje. Ovo ulje je prečišćeno pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 10 do 40% etil acetat u heptanu). Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući etil 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-1-il)propanoat (46,0 g, 80,0%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 0.97 (6H, s), 1.02 (3H, t), 3.93 (2H, q), 4.10 (2H, s), 6.00 (1H, t), 7.16 (1H, d), 7.26 (1H, d). m/z: (ES+) [M+H]+ = 197.
Priprema 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-1-il)propanske kiseline
[0354]
12
[0355] Vodeni rastvor natrijum hidroksida (5 M; 94 ml, 46 mmol) u porcijama je uz mešanje dodat u rastvor etil 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-1-il)propanoata (46 g, 234 mmol) rastvoren u metanolu (250 ml) na r.t. Tokom dodavanja, dozvoljeno je da se smeša zagreva do 37 °C. Dobijeni rastvor je mešan u tim uslovima tokom 30 minuta, i zatim ohlađen na r.t., pa je koncentrovan pod sniženim pritiskom na 1/3 zapremine. Ovaj novi rastvor je zakiseljen do ∼pH 3 pomoću koncentrovane HCl. Bezbojno ulje je razdvojeno od smeše. Balon je rotiran u ledenom kupatilu, i bezbojna čvrsta supstanca je kristalisala. Smeša je ostavljena da stoji preko noći na r.t., i čvrsta supstanca je izolovana filtracijom i osušena pod sniženim pritiskom, dajući 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-1-il)propansku kiselinu (30,0 g, 76%) kao bezbojnu kristalnu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 (6H, s), 4.23 (2H, s), 6.21 (1H, t), 7.35 - 7.44 (1H, m), 7.54 - 7.67 (1H, m), 12.41 (1H, br s). m/z: (ES+) [M+H]+ = 169.
Priprema 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-ona
[0356]
[0357] n-BuLi u heksanu (9,03 ml, 24,38 mmol) ukapavanjem je dodat u 2,2-dimetil-3-(1H-pirazo1-1-il)propansku kiselinu (2 g, 11,89 mmol) u 2-metil tetrahidrofuranu (40 ml) na -78 °C u periodu od 20 minuta u atmosferi azota. Dobijena suspenzija je mešana na -78 °C tokom 15 minuta, i zatim je reakcija mešana na oko -45 °C tokom 1 h, zatim ostavljena da se zagreje na 15 °C, pa je reakcija polako prekinuta na ledeno hladnom zasićenom amonijum hloridu (100 ml). Reakciona smeša je razblažena pomoću EtOAc (100 ml), i sloj amonijum hlorida je razdvojen i ekstrahovan još jednom pomoću EtOAc (50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i uparen, dajući 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-on (0,970
12
g, 54,3%) kao bledožuto ulje koje se kristalisalo tokom stajanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.29 (6H, s), 4.36 (2H, s), 6.77 (1H, d), 7.89 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 151.
Priprema 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0358]
[0359] Hidrazin hidrat (4,13 ml, 85,23 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-ona (2,56 g, 17,1 mmol) rastvoren u 2,2'-oksidietanolu (48,5 ml, 511 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na 180 °C tokom 1 h. Kalijum hidroksid (3,35 ml, 59,7 mmol) pažljivo je dodat u smešu, i dobijena suspenzija je mešana na 150 °C tokom 2 h. Nakon hlađenja na r.t., reakciona smeša je razblažena vodom (50 ml) i pH je podešen na 4,5 razblaženim vodenim rastvorom HCl (2 N). Nakon ekstrakcije pomoću Et2O (5 x 50 ml), kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 x 20 ml) i zatim zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml). Organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,922 g, 39,7%) kao bistro žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.21 (6H, s), 2.61 (2H, s), 3.80 (2H, s), 5.82 - 5.93 (1H, m), 7.41 (1H, d).
Priprema 3-brom-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0360]
[0361] N-bromsukcinimid (1166 mg, 6,55 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (892 mg, 6,55 mmol) rastvorenog u DCM-u (10 ml) na 23 °C. Dobijena smeša je mešana na 23 °C tokom 16 h pre nego što je razblažena DCM-om
12
(20 ml) i redom isprana vodom (2 x 20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 3-brom-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (1394 mg, 99%) kao žuto ulje.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.23 (6H, s), 2.58 (2H, s), 3.83 (2H, s), 7.35 (1H, s).
Priprema 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0362]
[0363] Pd(P(Cy)3)2Cl2(0,247 g, 0,33 mmol) dodat je u 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (1,70 g, 6,69 mmol), 3-brom-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,720 g, 3,35 mmol) i kalijum acetat (1,150 g, 11,72 mmol) u DMA (7 ml). Dobijena suspenzija je degasirana i mešana na 85 °C tokom 5 h. U reakcionu smešu je zatim dodat adukt dihlor[1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]paladijum DCM (0,273 g, 0,33 mmol), i mešanje je nastavljeno u tim uslovima tokom 18 h pre nego što je reakciona smeša ohlađena na r.t. Reakciona smeša je razblažena dodatkom EtOAc (20 ml) i redom je isprana vodom (2 x 15 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (15 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,458 g, 52,2%) kao čvrstu supstancu krem boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.24 (6H, s), 1.27 (12H, s), 2.79 (2H, s), 3.87 (2H, s), 7.76 (1H, s).
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0364]
12
[0365] 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (433 mg, 0,83 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (360 mg, 0,75 mmol; kao što je pripremljen u primeru 10), X-Phos pretkatalizator 2. generacije (59,0 mg, 0,08 mmol) i dvobazni kalijum fosfat (392 mg, 2,25 mmol) rastvoreni su u 1,4-dioksanu (4 ml) i vodi (0,8 ml) i mešani na 50 °C tokom 5 h. Reakciona smeša je ohlađena na r.t. i zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (188 mg, 51,3%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 23 °C) 1.25 (12H, d), 1.37 (7H, s), 1.74 (3H, s), 1.87 (1H, d), 2.52 - 2.62 (1H, m), 2.88 (2H, s), 3.18 - 3.29 (1H, m), 3.93 (2H, s), 6.80 (1H, d), 7.99 (1H, s), 8.24 (1H, s), 8.32 - 8.35 (1H, m), 10.56 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 488.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0366]
[0367] Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (186 mg, 0,380 mmol) rastvoren je u HCl u
12
dioksanu (4 M; 0,810 ml, 3,24 mmol) i MeOH (5 ml) i mešan na r.t. tokom 18 h. Reakciona smeša je prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (114 mg, 77%) kao belu čvrstu supstancu koja je neposredno korišćena u sledećem koraku. m/z: ES+ [M+H]+ 388.
Primer 15: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0368]
[0369] Anhidrid sirćetne kiseline (0,021 ml, 0,22 mmol) ukapavanjem je dodat u (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,066 g, 0,18 mmol), 4-dimetilaminopiridin (1,141 mg, 9,34 µmol) i trietilamin (0,081 ml, 0,58 mmol) u DCM-u (1 ml) na r.t. u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 2 h, pa je deaktiviran zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana pomoću DCM-a (2 x 10 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena bela čvrsta supstanca je prečišćena pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu. Frakcije su uparene do suva, dajući polučisti proizvod koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µm, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sadrži 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (9,80 mg, 12,6%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.13 (1H, dd), 1.31 - 1.52 (4H, m), 1.87 - 1.95 (2H, m), 1.96 (4H, s), 2.20 (3H, dd), 2.39 - 2.5 (1H, m),
1
3.39 - 3.45 (2H, m), 4.16 (2H, t), 4.81 (1H, s), 5.49 (1H, d), 7.79 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.19 (1H, s), 8.30 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 417.
[0370] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema 3-jod-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina
[0371]
[0372] N-jodsukcinimid (0,581 g, 2,58 mmol) dodat je u 4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin (0,265 g, 2,15 mmol) u acetonitrilu (5 ml) na r.t. u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 1 h, pa je dodata voda (20 ml). Mešanje je nastavljeno tokom 1,5 h, i reakciona smeša je zatim ekstrahovana pomoću MTBE (3 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su redom isprani 2 M vodenim rastvorom NaOH (20 ml), rastvorom Na2S2O3(20 ml, 10% m/V) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml), pa su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući 3-jod-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin (0,155 g, 28,9%) kao belu čvrstu kristalnu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 2.16 (2H, q), 3.32 - 3.44 (2H, m), 3.98 (1H, s), 4.12 (2H, t), 7.24 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 250.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0373]
1 1
[0374] 3-jod-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin (0,150 g, 0,600 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0,184 ml, 0,9 mmol) rastvoreni su u THF-u (4 ml) na 4 °C. Zatim je ukapavanjem dodat kompleks izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 2,78 ml, 3,61 mmol). Dobijena smeša je mešana na 4 °C tokom 16 h, zatim je dodato još kompleksa izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 2,78 ml, 3,61 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (0,184 ml, 0,90 mmol). Reakcija je mešana u tim uslovima tokom 1 h, i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc (20 ml) i redom ispran zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (25 ml), vodom (20 ml) i zasićenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml). Kombinovani vodeni slojevi su isprani pomoću DCM (2 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin koji je dodat u terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,160 g, 0,33 mmol; kao što je pripremljen u primeru 10), X-Phos pretkatalizator 2. generacije (0,026 g, 0,03 mmol) i trobazni kalijum fosfat (0,175 g, 1,00 mmol) rastvorene u 1,4-dioksanu (4 ml) i vodi (0,8 ml) na 50 °C. Dobijena smeša je mešana na 50 °C tokom 2 h i zatim na 80 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u DCM-u (20 ml) i ispran vodom (20 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 30% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,082 g, 52%) kao žutu gumu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.44 (12H, s), 1.82 - 2.46 (8H, m), 3.27 - 3.36 (3H, m), 4.12 (3H, t), 5.33 (1H, d), 7.80 (1H, s), 8.13 (1H, s), 8.19 (1H, s), 8.20 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 475.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid trihidrohlorida
1 2
[0376] Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,086 g, 0,18 mmol) i HCl u dioksanu (4 M; 0,362 ml, 1,45 mmol) rastvoreni su u metanolu (2 ml) na r.t. u atmosferi vazduha. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 3 h pre nego što je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijena supstanca (66 mg) neposredno je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+ [M+H]+ 375.
Primer 16: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0377]
[0378] U rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (65 mg, 0,18 mmol), trietilamina (0,054 ml, 0,39 mmol) i N,N-dimetilpiridin-4-amina (1,123 mg, 9,19 mmol) u DCM-u (5 ml) uz mešanje je dodat anhidrid sirćetne kiseline (0,021 ml, 0,22 mmol). Reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 1 h. Sirovi proizvod je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i frakcije su uparene, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (60,0 mg, 82,0%) kao bezbojno ulje koje je
1
prekristalisano iz smeše etar/heptan, dajući belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.10 (1H, t), 1.29 (9H, s), 1.79 (6H, s), 1.85 - 1.94 (1H, m), 2.57 - 2.66 (1H, m), 2.93 (2H, s), 3.58 (1H, dt), 3.90 (2H, s), 7.21 (1H, dd), 7.74 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.18 - 8.24 (2H, m), 10.32 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 396.
[0379] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0380]
[0381] Terc-butil ((1R,3S)-3-((4-brompiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,50 g, 3,77 mmol; kao što je pripremljen u primeru 3), kalijum acetat (1,11 g, 11,3 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (1,44 g, 5,65 mmol) i PdCl2(dppf) (0,276 g, 0,380 mmol) dodati su u balon. Dodat je 1,4-dioksan (30 ml) i smeša je zagrevana na 90 °C u atmosferi azota tokom 3 h. Smeša je ostavljena da se ohladi, i čvrste supstance su uklonjene filtracijom. Dodati su etil acetat (100 ml) i voda (50 ml), i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (2 x 50 ml) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod, tercbutil ((1R,3S)-3-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (2,76 g), kao tamnosmeđe ulje. Ovo ulje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+ [M+H]+ 446.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
1 4
[0383] Dihlor[1,1'-bis(di-t-butilfosfino)ferocen]paladijum(II) (45,5 mg, 0,07 mmol) dodat je u degasirani rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (518 mg, 0,70 mmol), 3-brom-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (150 mg, 0,70 mmol; kao što je pripremljen u primeru 14) i trobaznog kalijum fosfata (444 mg, 2,09 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml) i vodi (0,5 ml). Dobijena smeša je mešana na 90 °C tokom 18 h i zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod kao smeđe ulje. Ovo ulje je prečišćeno pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (100 mg, 31,6%) kao belu čvrstu supstancu, m/z: ES+ [M+H]+ 454.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0384]
[0385] Terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (93 mg, 0,21 mmol) rastvoren je u HCl u dioksanu (4 M;
1
0,436 ml, 1,74 mmol) i MeOH (5 ml), i reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 18 h. Reakciona smeša je zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je dalje prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% (7 N amonijak u metanolu) u DCM-u. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (68,0 mg, 94%) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 354.
Primer 17: (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamid
[0386]
[0387] HATU (108 mg, 0,28 mmol) dodat je u rastvor 1-hidroksiciklopropankarboksilne kiseline (35 mg, 0,34 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (100 mg, 0,28 mmol; pripremljen prema primeru 16), i trietilamina (0,12 ml, 0,85 mmol) u DMF-u (1 ml). Reakciona smeša je zagrevana na 50 °C tokom 4 h, a zatim ohlađena na r.t. Reakciona smeša je direktno prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 19 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamid (92 mg, 74%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.74 (2H, m), 0.85 - 1.01 (2H, m), 1.15 -1.27 (9H, m), 1.44 (1H, q), 1.61 - 1.77 (3H, m), 1.79 - 1.87 (1H, br. d), 2.52 - 2.59 (1H, m), 2.86 (2H, s), 3.54 - 3.63 (1H, m), 3.83 (2H, s), 6.10 (1H, s), 7.12 - 7.16 (1H, m), 7.57 (1H, d), 7.90 (1H, s), 8.13 - 8.16 (2H, m), 10.27 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 438.
1
Primer 18: N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksi)oksetan-3-karboksamid
[0388]
[0389] HATU (77 mg, 0,20 mmol) dodat je u rastvor oksetan-3-karboksilne kiseline (25 mg, 0,24 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (72 mg, 0,20 mmol; pripremljen prema primeru 16), i trietilamina (0,085 ml, 0,61 mmol) u DMF-u (1 ml). Smeša je mešana na r.t. tokom 4 h i zatim direktno prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 19 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje koncentrovane su pod sniženim pritiskom, dajući N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (17 mg, 19%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.06 - 1.17 (1H, m), 1.26 - 1.39 (9H, m), 1.77 - 1.86 (3H, m), 1.91 - 1.94 (1H, br d), 2.57 - 2.7 (1H, m), 2.93 (2H, s), 3.54 - 3.76 (2H, m), 3.90 (2H, s), 4.4 - 4.71 (4H, m), 7.21 (1H, dd), 7.82 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.21 - 8.24 (2H, m), 10.33 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 438.
Primer 19: N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid
[0390]
1
[0391] HATU (118 mg, 0,31 mmol) dodat je u rastvor oksetan-3-karboksilne kiseline (32 mg, 0,31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (100 mg, 0,26 mmol; pripremljen prema primeru 14), i trietilamina (0,11 ml, 0,77 mmol) u DMA (2 ml). Smeša je mešana na r.t. tokom 16 h, pa je deaktivirana vodom (20 ml). Smeša je zatim ekstrahovana pomoću DCM-a (50 ml), i organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 ml), pa je propušten kroz uložak za razdvajanje faza. Kombinovane organske supstance su osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (39 mg, 32%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.06 - 1.14 (1H, m), 1.62 - 1.75 (9H, m), 1.72 - 1.81 (3H, m), 1.92 (1H, br. d), 2.59 - 2.7 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.56 - 3.73 (2H, m), 3.95 (2H, s), 4.53 - 4.66 (4H, m), 7.80 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.56 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Primer 20: (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksan karboksamid
[0392]
1
[0393] HATU (78 mg, 0,21 mmol) dodat je u rastvor (S)-2-hidroksipropanske kiseline (19 mg, 0,21 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (80 mg, 0,21 mmol; pripremljen prema primeru 14), i trietilamina (0,086 ml, 0,62 mmol) u DMF-u (1 ml). Smeša je mešana na r.t. tokom 1 h i zatim direktno prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 19 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksan karboksamid (56 mg, 59%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.14 - 1.21 (3H, m), 1.23 -1.54(10H, m), 1.66 - 1.91 (4H, m), 2.56 - 2.70 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.53 - 3.72 (1H, m), 3.87 - 3.97 (3H, m), 5.37 (1H, d), 7.49 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.55 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 460.
Primer 21: (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamid
[0394]
[0395] HATU (78 mg, 0,21 mmol) dodat je u rastvor 1-hidroksiciklopropankarboksilne kiseline (25 mg, 0,25 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (80 mg, 0,21 mmol; pripremljen prema primeru 14), i trietilamina (0,086 ml, 0,62 mmol) u DMF-u (1 ml). Smeša je zagrevana na 50 °C tokom 3 h, zatim ohlađena na r.t. Reakciona smeša je direktno prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-
1
3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamid (25 mg, 26%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.72 - 0.85 (2H, m), 0.94 - 1.08 (2H, m), 1.23 - 1.49 (9H, m), 1.47 - 1.58 (1H, m), 1.67 - 1.84 (3H, m), 1.87 (1H, br. d), 2.57 - 2.66 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.60 - 3.71 (1H, m), 3.95 (2H, s), 6.16 (1H, s), 7.62 (1H, d), 8.01 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.55 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Primer 22: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0396]
[0397] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (800 mg, 1,90 mmol; pripremljen prema primeru 12), 6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (825 mg, 5,69 mmol), paladijum acetat (171 mg, 0,76 mmol) i kalijum acetat (372 mg, 3,79 mmol) suspendovani su u DMA (15 ml) i zaptiveni u epruveti za mikrotalasnu pećnicu. Epruveta je degasirana i produvana azotom (3x). Reakcija je zatim podvrgnuta mikrotalasnim uslovima (150 °C, 16 h) i ohlađena na r.t. Reakciona smeša je prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijena svetlosmeđa čvrsta supstanca je prekristalisana koristeći EtOAc/heptan i osušena pod vakuumom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (180 mg, 22%) kao belu čvrstu supstancu. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući drugu šaržu (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (118 mg, 14%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.03 - 1.16 (1H, m), 1.19 - 1.41 (9H, m), 1.72 - 1.81 (6H, m), 1.91 (1H, br. d), 2.57 - 2.68 (1H, m), 2.71 (2H, s), 3.50 - 3.62 (1H, m),
14
3.91 (2H, s), 7.51 (1H, s), 7.75 (1H, d), 8.28 (1H, s), 8.42 (1H, s), 10.66 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 430.
Priprema 4,4-dimetilpirolidin-2-tiona
[0398]
[0399] Losonov reagens (9,83 g, 24,30 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 4,4-dimetilpirolidin-2-ona (5,0 g, 44,19 mmol) u toluenu (100 ml). Dobijena smeša je zagrevana uz refluks u atmosferi azota tokom 4,5 h. Smeša je zatim ohlađena na r.t. i održavana u tim uslovima tokom 18 h, pa je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući žutu čvrstu supstancu. Čvrsta supstanca je rastvorena u DCM-u, dodat je silika gel i smeša je filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući žuto ulje. Ovo ulje je prečišćeno pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluirano DCM-om, dajući 4,4-dimetilpirolidin-2-tion (2,8 g, 48%) kao bezbojnu kristalnu čvrstu supstancu. Nečiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući drugu šaržu 4,4-dimetilpirolidin-2-tiona kao krem/bledožute kristale (3,1 g, 55%). Uprkos malo manjoj čistoći, ova druga šarža supstance je takođe pogodna za upotrebu u sledećim koracima.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.19 (6H, s), 2.70 (2H, s), 3.36 (2H, s), 7.75 (1H, br. s).
Priprema 3,3-dimetil-5-(metiltio)-3,4-dihidro-2H-pirol hidrojodida
[0400]
[0401] Jodmetan u MTBE (2 M; 42,7 ml, 85,4 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 4,4-dimetilpirolidin-2-tiona (2,76 g, 21,3 mmol) u iPrOH (45 ml) na r.t. Beli talog je nastao tokom vremena. Reakcija je mešana na r.t. tokom 18 h i zatim filtrirana. Sakupljene čvrste supstance su isprane pomoću Et2O i zatim osušene, dajući 3,3-dimetil-5-(metiltio)-3,4-dihidro-2H-pirol kao hidrojodidnu so (4,3 g, 75%). Ova supstanca je preneta u sledeću fazu bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.17 (6H, s), 2.74 (3H, s), 3.10 (2H, s), 3.72 (2H, s), 12.3 (1H, br. s).
Priprema N-(2,2-dimetoksietil)-3,3-dimetil-3,4-dihidro-2H-pirol-5-amin hidrojodida
[0402]
[0403] 2,2-dimetoksietanamin (1,82 ml, 16,7 mmol) uz mešanje je dodat u suspenziju 3,3-dimetil-5-(metiltio)-3,4-dihidro-2H-pirol hidrojodida (4,32 g, 15,9 mmol) u etanolu (40 ml) na r.t. Hidrojodid je rastvoren nakon dodatka amina. Dobijena smeša je zagrevana uz refluks (koristeći izbeljivač) tokom 4,5 h, i zatim uklonjena sa toplote. Nakon 18 h, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi N-(2,2-dimetoksietil)-3,3-dimetil-3,4-dihidro-2H-pirol-5-amin hidrojodid (5,35 g, 102%) kao bezbojnu kristalnu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.12 (6H, s), 2.58 - 2.7 (2H, m), 3.34 (8H, s), 3.37 (2H, d), 4.51 (1H, m), 9.35 (2H, br. s).
Priprema 6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazola
[0404]
[0405] Hlorovodonična kiselina (4 M; 5 ml, 20 mmol) uz mešanje je dodata u rastvor N-(2,2-dimetoksietil)-3,3-dimetil-3,4-dihidro-2H-pirol-5-amin hidrojodida (5,35 g, 16,3 mmol) u 1,4-dioksanu (50 ml) na r.t. Dobijena smeša je zagrevana na 90 °C tokom 3 h. Smeša je zatim ohlađena na r.t. i održavana u tim uslovima tokom 2,5 dana, pa je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući tamnosmeđi katran. Ova smeša je rastvorena u DCM-u i razblažena dodatkom Et2O. Vodeni rastvor amonijaka (28-30%, 2,8 ml) uz mešanje je dodat u smešu. Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (2,32 g, 100%) kao smeđe ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 21 °C) 1.28 (6H, s), 2.70 (2H, s), 3.69 (2H, s), 6.84 (1H, d), 7.03 (1H, d).
Primer 23: (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid
[0406]
[0407] (R)-tetrahidrofuran-3-karboksilna kiselina (0,036 g, 0,31 mmol), HATU (0,118 g, 0,31 mmol) i trietilamin (0,11 ml, 0,77 mmol) mešani su zajedno u DMF-u (2 ml) u atmosferi azota tokom 20 minuta. Zatim je dodat (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,100 g, 0,26 mmol; pripremljen prema primeru 14 koristeći 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol pripremljen kako je opisano u nastavku) u DMF-u (1 ml), i smeša je mešana još 30 minuta. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i smeša je prečišćena fleš hromatografijom na koloni C18, elucioni gradijent 20 do 60% MeCN u vodi sa 1% vodenim rastvorom NH4OH. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid (0,113 g, 90%)
14
kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 - 1.2 (1H, m), 1.20 -1.38 (9H, sm), 1.79 (3H, br. d), 1.86 - 2.03 (3H, m), 2.56 - 2.63 (1H, m), 2.81 - 2.91 (3H, m), 3.52 - 3.78 (4H, m), 3.83 (1H, t), 3.95 (2H, s), 7.83 (1H, d), 7.99 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.34 (1H, s), 10.53 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 486.
[0408] Alternativna procedura koja je korišćena za pripremu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (već opisan u primeru 14, intermedijeri) opisana je u nastavku:
Priprema 3-jod-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0409]
[0410] NIS (1,646 g, 7,32 mmol) u porcijama je dodat u 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,906 g, 6,65 mmol; pripremljen prema primeru 14) u acetonitrilu (40 ml) na r.t. u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 23 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je razblažena dodatkom EtOAc (50 ml) i redom isprana vodom (40 ml), vodenim rastvorom natrijum tiosulfata (10 g u 30 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod (1,59 g, 91%) kao narandžasto ulje. Ovo ulje je prečišćeno destilacijom pod sniženim pritiskom (0,12 mbar), uz prikupljanje na temperaturi u nastavku od 140 °C. Destilat koji je na taj način sakupljen dao je 3-jod-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (1,38 g, 79%) kao bezbojnu tečnost. Alternativno, jodid je prenet u sledeći korak bez destilacije.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.30 (6H, s), 2.63 (2H, s), 3.94 (2H, s), 7.47 (1H, s).
Priprema 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0411]
[0412] Kompleks izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 1,69 ml, 2,20 mmol) ukapavanjem je dodat tokom 10 minuta u 3-jod-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,444 g, 1,69 mmol) u THF-u (5 ml) na -78 °C u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 45 minuta. Zatim je 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0,473 g, 2,54 mmol) ukapavanjem dodat u reakcionu smešu, uz održavanje interne temperature na -78 °C. Nakon što je dodavanje završeno, reakciona smeša je ostavljena da se zagreva na r.t. tokom 18 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom i razblažena dodatkom EtOAc (40 ml). Dobijena smeša je redom isprana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (20 ml), vodom (20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,41 g, 93%) kao voskastu čvrstu supstancu, kontaminiran sa ∼13 mol% des-jod polazne supstance na osnovu NMR analize. Trituracija heptanom je dala čisti 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,24 g, 55%) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 24: (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid
[0413]
[0414] Rastvor (S)-tetrahidrofuran-3-karboksilne kiseline (0,036 g, 0,31 mmol), HATU (0,12 g, 0,31 mmol) i trietilamina (0,11 ml, 0,77 mmol) u DMF-u (2 ml) mešan je u atmosferi azota
14
tokom 20 minuta. Zatim je dodat (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,10 g, 0,26 mmol; pripremljen prema primeru 14 koristeći 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol pripremljen kako je opisano u primeru 23) u DMF-u (1 ml), i dobijena smeša je mešana u tim uslovima tokom 30 minuta. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni C18, elucioni gradijent 20 do 60% MeCN u vodi sa 1% NH4OH. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid (0,10 g, 81%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 - 1.16 (1H, m), 1.21 - 1.41 (9H, m), 1.72 - 1.83 (3H, m), 1.87 - 2.04 (3H, m), 2.57 - 2.66 (1H, m), 2.82 - 2.91 (3H, m), 3.54 - 3.77 (4H, m), 3.83 (1H, t), 3.95 (2H, s), 7.83 (1H, d), 7.99 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.54 (1H, s). m/z: ES+ [M+H+] 486.
Primer 25: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0415]
[0416] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0,13 g, 0,12 mmol) i ksantfos (0,13 g, 0,23 mmol) zajedno su dodati u jednoj porciji u degasiranu smešu terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamata (0,670 g, 2,76 mmol), 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (0,61 g, 2,3 mmol), cezijum karbonata (1,88 g, 5,76 mmol) i 1,4-dioksana (26 ml). Dobijena svetložuta smeša je održavana pod refluksom pomoću potapanja u uljano kupatilo prethodno zagrejano na 120 °C. Nakon 20 h, reakcija je ohlađena, razblažena 50% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i ekstrahovana etil acetatom (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-
14
dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat kao svetložutu čvrstu supstancu. Dodati su hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 10 ml, 40 mmol) i DCM (5 ml), dajući bistri narandžasti rastvor koji se ubrzo zamutio i požuteo. Metanol (∼3 ml) dodavan je titracijom u reakciju sve dok smeša nije postala pretežno bistra. Nakon 15 min, narandžasta smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući narandžastu čvrstu supstancu. U tu čvrstu supstancu je dodat piridin (3,7 ml, 46 mmol), zajedno sa DCM-om (19 ml). Uočen je blagi porast temperature, i reakcija je potopljena u vodeno kupatilo. Zatim je ukapavanjem dodat anhidrid sirćetne kiseline (0,43 ml, 4,6 mmol). Nakon još 10 min, dodato je još 200 µl anhidrida sirćetne kiseline. Nakon još 30 min, dodato je još 600 µl anhidrida i 6 ml piridina. Reakcija je održavana u tim uslovima još 45 min i zatim je sipana u zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata i etil acetat. Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni narandžasti ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 50 do 100% EtOAc u heksanu, zatim 0 do 20% metanola u etil acetatu, i čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-ol)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,89 g, 94%) kao bledožutu penastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C): 1.00 - 1.16 (1H, m), 1.22 - 1.40 (9H, m), 1.74 - 1.81 (6H, m), 1.83 - 1.94 (1H, m), 2.55 - 2.68 (1H, m), 2.93 (2H, s), 3.49 - 3.65 (1H, m), 3.94 (s, 2H), 7.75 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.28 (1H, d), 8.30 (1H, d), 10.46 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 414.
[0417] Postupak 1: Suspenzija iz primera 25 (381 mg) u EtOAc mešana je na r.t. tokom 18 h, zatim je filtrirana i isprana hladnim EtOAc, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (149 mg) kao kristalnu belu čvrstu supstancu poznatu kao oblik A iz primera 25.
[0418] Postupak 2: Oko 5 g primera 25 je preneto u smešu heksan:DCM:aceton 1:1:1 (∼20 ml) i zatim koncentrovano pod sniženim pritiskom, dajući delimično providan gel. Ovaj gel je zatim tretiran malom količinom istog rastvarača (∼5 ml) i snažno je mešan tokom 10 min dok nije nastala homogena smeša i gel više nije bio uočljiv. Ova smeša je filtrirana uz ispiranje 30% acetonom u heksanu, i talog je osušen pod vakuumom na 50 °C dajući oblik A iz primera 25 kao belu čvrstu supstancu.
14
[0419] Kristali iz primera 25 (oblik A) analizirani su pomoću XRPD i rezultati su dati u tabeli u nastavku i prikazani na slici 3. XRPD čvrste supstance potvrđuje da čvrsta supstanca sadrži oblik A.
[0420] Glavni pikovi oblika A iz primera 25 prikazani su u tabeli 2 u nastavku:
[0421] Shodno tome, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa specifičnim pikovima na oko 2-teta = 8,8, 10,1, 11,5, 18,9, 20,0, 20,5, 21,8, 22,8, 23,9 i 25,2°.
[0422] Kristali koji su dobijeni prema postupcima 1 i 2 (oblik A) analizirani su pomoću termalnih tehnika. DSC analiza pokazuje da se oblik A topi sa početnom tačkom na 194° i pikom na 197°. TGA pokazuje da oblik A ispoljava gubitak mase od oko 1,4% nakon zagrevanja od 22 do 100 °C. Reprezentativni DSC/TGA termogram je prikazan na slici 4.
[0423] Alternativna procedura za pravljenje (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida je opisana u
14
Primer 86
[0424] Procedure za pripremu polaznih supstanci terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamata i 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola opisane su u nastavku:
Priprema 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0425]
[0426] 2-hlor-5-fluor-4-jodpiridin (1,00 g, 3,88 mmol), 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (1,53 g, 5,83 mmol; pripremljen prema primeru 23), XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,31 g, 0,39 mmol) i dvobazni kalijum fosfat (2,03 g, 11,65 mmol) rastvoreni su u degasiranom dioksanu (10 ml) i vodi (2 ml) na 21 °C. Reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 3 h, i smeša je zatim ohlađena, razblažena dodatkom EtOAc (30 ml) i isprana vodom (10 ml). Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (1,00 g, 97%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.36 (6H, s), 2.95 (2H, d), 3.97 (2H, s), 7.31 (1H, d), 7.94 (1H, d), 8.20 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 266.
Priprema (cis)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan karboksilata
[0427]
14
[0428] Benzil bromid (12,4 ml, 104 mmol) dodat je ukapavanjem kao rastvor u DMF-u (10 ml) u degasiranu smešu cis-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (19,5 g, 80,0 mmol, pripremljena prema primeru 2 intermedijeri), cezijum karbonata (33,9 g, 104 mmol) i DMF-a (80 ml) na 0 °C. Ledeno kupatilo je uklonjeno, i reakcija je mešana u tim uslovima tokom 18 h. Smeša je zatim razblažena istom zapreminom etil acetata, i filtrirana uz ispiranje etil acetatom. Organski sloj je ispran 50% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (3x) i zatim zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je zatim osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeno svetložuto ulje je prečišćeno pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 30% etil acetat u heksanu, dajući cis-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan karboksilat (25,4 g, 95%) kao bistro bezbojno ulje koje se nakon stajanja stvrdnulo u belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.98 - 1.34 (4H, m), 1.38 (9H, s), 1.67 - 1.78 (2H, m), 1.84 (1H, d), 1.99 (1H, d), 2.35 - 2.49 (1H, m), 3.17 - 3.31 (1H, s), 5.09 (2H, s), 6.76 (1H, d), 7.30 - 7.42 (5H, m). m/z: ES+ [M+Na]+ 356.
Priprema (1S,3R)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan karboksilata i (1R,3S)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan karboksilata
[0429]
[0430] Cis-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan karboksilat (25,4 g, 76,2 mmol) razdvojen je koristeći uslove preparativne SFC (kolona: Lux Amylose-2, 5 µm, prečnik 21,2 mm, dužina 250 mm, temperatura kolone 40 °C, protok 80 ml/min), elucija 10% izopropanolom u CO2, dajući (1S,3R)-benzil 3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat (11,5 g, 45%) kao belu čvrstu supstancu i (1R,3S)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat (11,5 g, 45%) kao belu čvrstu supstancu.
(1S,3R)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat
1
[0431]<1>H NMR (DMSO- d6, 27 °C) 0.96 - 1.34 (4H, m), 1.37 (9H, s), 1.68 - 1.88 (3H, m), 1.98 (1H, d), 2.37 - 2.48 (1H, m), 3.16 - 3.32 (1H, m), 5.09 (2H, s), 6.59 - 6.84 (1H, m), 7.26 -7.50 (5H, m). m/z: ES+ [M+Na]+ 356.
Optička rotacija:
[0432]
(1R,3S)-benzil 3-((terc-butonkarbonil)amino)cikloheksan karboksilat
[0433]<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.95 - 1.34 (4H, m), 1.37 (9H, s), 1.68 - 1.78 (2H, m), 1.84 (1H, d), 1.98 (1H, d), 2.36 - 2.48 (1H, m), 3.17 - 3.34 (1H, m), 5.09 (2H, s), 6.76 (1H, d), 7.30 - 7.41 (5H, m). m/z: ES+ [M+Na]+ 356.
Optička rotacija:
[0434]
1 1
Uslovi analitičke SFC:
[0435]
Retenciono vreme:
[0436]
0,66 min, (1S,3R)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan karboksilat
0,96 min, (1R,3S)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan karboksilat e.e.
>98%, (1 S,3R)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan karboksilat
97,5%, (1R,3S)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan karboksilat
Alternativna procedura za pripremu (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (već opisana u primeru 2, intermedijeri) opisana je u nastavku:
1 2
[0438] Degasirana smeša (1S,3R)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan karboksilata (11,5 g, 34,6 mmol), paladijuma na ugljeniku (10 mas.%; 3,68 g, 34,5 mmol) i metanola (86 ml) podvrgnuta je atmosferi vodonika (1 atm, balon). Nakon 18 h, smeša je filtrirana uz ispiranje metanolom. Filtrat je koncentrovan do blago zamućenog bledosivog ulja. To ulje je preneto u etil acetat, osušeno iznad natrijum sulfata, filtrirano i koncentrovano pod sniženim pritiskom. Dobijena bela uljana čvrsta supstanca je zagrevana pod vakuumom do prestanka pojave mehurova od uparavanja rastvarača. Hlađenje na r.t. je dalo (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilnu kiselinu (8,4 g, 99%) kao belu čvrstu supstancu (za karakterizaciju vidite primer 2, intermedijeri).
Optička rotacija:
[0439]
1
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamata
[0440]
[0441] Karbonil diimidazol (6,44 g, 39,74 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (3,22 g, 13,3 mmol) u DMF-u (30 ml) na 40 °C. Dobijena smeša je mešana na 40 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena na 0 °C, i dodat je amonijum acetat (7,15 g, 92,7 mmol) u jednoj porciji uz snažno mešanje. To je praćeno razvijanjem gasa i nastankom pene. Mala količina (∼2 ml) DCM-a dodata je niz zidove balona kako bi se pena razbila, i sprečilo da dođe do otvora balona. Ta pena je postepeno ponovo apsorbovana u reakcionu smešu, koja je ostavljena da se zagreje na r.t. preko noći. Nakon ukupno 18 h u tim uslovima, reakciona smeša je sipana u ledenu vodu, i dobijena smeša je mešana u tim uslovima tokom 5 min, pa je filtrirana uz ispiranje vodom. Dobijeni talog je osušen pod vakuumom na 80 °C tokom 2 h, a zatim ohlađen na r.t. Vakuum sušenje je zatim nastavljeno tokom 18 h, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamat (2,76 g, 86%) kao belu paperjastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.99 - 1.31 (4H, m), 1.38 (9H, s), 1.58 - 1.85 (4H, m), 2.06 - 2.19 (1H, m), 3.14 - 3.26 (1H, m), 6.63 (1H, br s), 6.73 (1H, d), 7.17 (1H, br s). m/z: ES+ [M+Na]+ 265.
Optička rotacija:
[0442]
1 4
Primer 26: cis-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutan karboksamid
[0443]
[0444] Tetrabutilamonijum fluorid u THF-u (1 M; 0,154 ml, 0,15 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamida (68 mg, 0,15 mmol) u THF-u (3 ml) na r.t. u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana u tim uslovima tokom 2 h i zatim je prečišćena koristeći SCX kolonu, eluirana redom pomoću DCM, MeOH i 1% NH3u MeOH. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN, dajući cis-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutan karboksamid (43 mg, 85%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.30 (6H, s), 2.05 (2H, qd), 2.28 - 2.43 (2H, m), 2.71 - 2.85 (1H, m), 2.95 (2H, s), 3.91 (2H, s), 3.98 (1H, q), 5.13 (1H, d), 7.17 - 7.26 (1H, m), 7.98 (1H, s), 8.21 (1H, dd), 8.25 (1H, s), 10.30 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 327.
[0445] Procedure koje su korišćene za pripremu polazne supstance cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamida opisane su u nastavku:
1
Priprema cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamida
[0446]
[0447] Cis-N-(4-brompiridin-2-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutan karboksamid (365 mg, 0,800 mmol; pripremljen prema primeru 6), 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (185 mg, 0,700 mmol; pripremljen prema primeru 23), kalijum fosfat (446 mg, 2,10 mmol) i XPhos pretkatalizator 2. generacije (55 mg, 0,070 mmol) suspendovani su u 1,4-dioksanu (4 ml) i vodi (0,80 ml) na r.t. Dobijena smeša je degasirana, produvana azotom i zatim zagrevana na 85 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je ohlađena na r.t. i raspodeljena na EtOAc (50 ml) i vodu (25 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (2 x 50 ml) i DCM-a (50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena narandžasta guma je prečišćena pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluirana sa 0 do 40% EtOAc u heptanu. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamid (68 mg, 22%) kao bezbojnu kristalnu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 22 °C) 0.06 (6H, s), 0.89 (9H, s), 1.36 (6H, s), 2.22 - 2.38 (2H, m), 2.49 - 2.67 (3H, m), 3.02 (2H, s), 3.93 (2H, s), 4.15 - 4.35 (1H, m), 7.11 (1H, dd), 7.82 (1H, s), 7.92 (1H, s), 8.17 (1H, d), 8.30 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 441.
Primer 27: cis-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutan karboksamid
[0448]
1
[0449] Tetrabutilamonijum fluorid u THF-u (1 M; 0,21 ml, 0,21 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamida (101 mg, 0,210 mmol) u THF-u (3 ml) na r.t. u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan u tim uslovima tokom 18 h. Reakciona smeša je prečišćena koristeći SCX kolonu, eluirana redom pomoću DCM, MeOH i 1% NH3u MeOH. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters SunFire, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 0,1% mravlje kiseline) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući cis-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutan karboksamid (35 mg, 45%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.29 (6H, s), 2.04 (2H, qd), 2.37 (2H, qd), 2.77 (1H, ddd), 2.92 (2H, s), 3.96 (2H, s), 3.96 - 4.02 (1H, m), 5.14 (1H, d), 8.02 (1H, s), 8.29 (1H, s), 8.34 (1H, d), 10.51 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 361.
[0450] Procedure za pripremu polazne supstance cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamida opisane su u nastavku.
Priprema cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)ciklobutan karboksamida
[0451]
1
[0452] T3P u etil acetatu (50 mas.%; 2,85 ml, 4,79 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 5-hlor-4-jodpiridin-2-amina (610 mg, 2,40 mmol; pripremljen prema primeru 2), cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilne kiseline (552 mg, 2,40 mmol; pripremljena prema primeru 4) i piridina (0,78 ml, 9,6 mmol) u EtOAc (10 ml) na r.t. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 18 h. Reakcija je prekinuta dodatkom zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (30 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (3 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)ciklobutan karboksamid (1,07 g, 96%) kao kristalnu čvrstu supstancu krem boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 21 °C) 0.06 (6H, s), 0.89 (9H, s), 2.23 - 2.35 (2H, m), 2.47 - 2.64 (3H, m), 4.17 - 4.32 (1H, m), 7.95 (1H, bs), 8.18 (1H, s), 8.86 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 467.
Priprema cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamida
[0453]
[0454] Cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)ciklobutan karboksamid (461 mg, 0,840 mmol), 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (200 mg, 0,76 mmol; pripremljen prema primeru 23), kalijum fosfat (486 mg, 2,29 mmol) i XPhos pretkatalizator 2. generacije (60,0 mg, 0,08 mmol) suspendovani su u 1,4-dioksanu i vodi na r.t. Dobijena smeša je degasirana, produvana azotom i zagrevana na 85 °C preko noći. Reakcija je ohlađena na r.t. i raspodeljena između EtOAc (50 ml) i vode (25 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (3 x 50
1
ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena narandžasta guma je prečišćena pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluirana sa 0 do 40% EtOAc u heptanu. Frakcije proizvoda su uparene do suva, dajući cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutan karboksamid (101 mg, 28%) kao bezbojnu kristalnu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 21 °C) 0.06 (6H, s), 0.89 (9H, s), 1.35 (6H, s), 2.24 - 2.45 (2H, m), 2.5 - 2.74 (3H, m), 2.98 (2H, s), 3.96 (2H, s), 4.18 - 4.24 (1H, m), 7.77 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.23 (1H, s), 8.29 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 475.
Primer 28: (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksan karboksamid
[0455]
[0456] Balon napunjen (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-hlorpirimidin-4-il)cikloheksan karboksamidom (100 mg, 0,34 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridinom (84 mg, 0,34 mmol), dihlor[1,1'-bis(ditercbutilfosfino)ferocen]paladijumom(II) (11 mg, 0,020 mmol) i kalijum fosfatom (215 mg, 1,01 mmol) evakuisan je i ponovo napunjen azotom (3x). Dodati su degasirani 1,4-dioksan (1 ml), zatim voda (0,2 ml), i smeša je zagrevana na 90 °C i održavana u tim uslovima tokom 18 h. Reakcija je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je raspodeljen između zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (20 ml) i etil acetata (20 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni na baznom aluminijumu, elucioni gradijent 0 do 100% (10% MeOH u EtOAc) u heptanu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksan karboksamid (55 mg, 43%)
1
kao mrku čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.01 - 1.38 (4H, m), 1.76 -2.02 (11H, m), 2.62 - 2.69 (1H, m), 3.10 (2H, t), 3.52 - 3.61 (1H, m), 4.13 (2H, t), 7.74 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.21 (1H, d), 8.75 (1H, d), 10.72 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 383.
[0457] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-hlorpirimidin-4-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((6-hlorpirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0458]
[0459] 1-hlor-N,N,2-trimetilpropenilamin (3,26 ml, 24,7 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (5,00 g, 20,6 mmol; pripremljena kao u primeru 2) u DCM-u (50 ml) i dobijena smeša je mešana tokom 90 min na r.t. Zatim su dodati 6-hlorpirimidin-4-amin (2,66 g, 20,6 mmol) i piridin (2,0 ml, 25 mmol), i dobijena smeša je mešana u tim uslovima tokom 18 h. Reakcija je prekinuta zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 ml), i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM-a (2 x 50 ml) i kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 100% (10% metanola u etil acetatu) u heptanu. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((6-hlorpirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,0 g, 14%) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES- [M-H]- 353.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(6-hlorpirimidin-4-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida
[0460]
1
[0461] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 0,655 ml, 21,6 mmol) dodata je u rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((6-hlorpirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (900 mg, 2,54 mmol) u metanolu (5 ml), i dobijena smeša je mešana preko noći na r.t. Smeša je zatim razblažena toluenom (10 ml) i koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(6-hlorpirimidin-4-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorid (880 mg, 106%) kao belu čvrstu supstancu koja je direktno korišćena u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-hlorpirimidin-4-il)cikloheksan karboksamida
[0462]
[0463] Acetil hlorid (0,11 ml, 1,5 mmol) dodat je u smešu (1S,3R)-3-amino-N-(6-hlorpirimidin-4-il)cikloheksan karboksamida (0,217 g, 0,85 mmol), piridina (0,69 ml, 8,5 mmol) i DCM (7,7 ml) na 0 °C. Nakon 30 min, dodato je još 200 µl acetil hlorida. Ovo je još jednom ponovljeno poslednji put nakon još 30 min. Reakcija je zatim deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana etil acetatom (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 10 do 100% etil acetata u heksanu, zatim 0 do 15% metanola u etil acetatu), dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-hlorpirimidin-4-il)cikloheksan karboksamid (0,22 g, 87%) kao beličastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 0.99 - 1.16 (1H, m), 1.18 - 1.38 (3H, m), 1.72 - 1.84 (6H, m), 1.85 - 1.97 (m, 1 H), 2.58 - 2.73 (1H, m) 3.50 - 3.64 (1H, m) 7.76 (1H, d) 8.12 (1H, d) 8.74 (1H, d) 11.18 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 297.
1 1
Primer 29: trans-3-hidroksi-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutan karboksamid
[0464]
[0465] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 0,085 ml, 0,34 mmol) dodata je u rastvor trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutan karboksamida (29 mg, 0,070 mmol) u MeOH (1 ml), i dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 2 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 50 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sadrži 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje koncentrovane su pod sniženim pritiskom, dajući trans-3-hidroksi-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutan karboksamid (10 mg, 47%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, 30 °C) 1.93 - 2.05 (2H, m), 2.07 - 2.18 (2H, m), 2.26 (2H, m), 2.60 (2H, m), 3.17 - 3.28 (3H, m), 4.21 (2H, t), 4.49 (1H, p), 8.06 (1H, s), 8.33 (1H, d), 8.71 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 314.
[0466] Procedure za pripremu polazne supstance trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6-hlorpirimidin-4-il)ciklobutan karboksamida
[0467]
1 2
[0468] 1-hlor-N,N,2-trimetilpropenilamin (0,383 ml, 2,89 mmol) dodat je u rastvor trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilne kiseline (0,667 g, 2,89 mmol; pripremljena prema primeru 4, pri čemu trans-3-hidroksiciklobutankarboksilna kiselina zamenjuje cis-3-hidroksiciklobutankarboksilnu kiselinu) u DCM-u (10 ml) i dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 1,5 h. Zatim su dodati 6-hlorpirimidin-4-amin (0,25 g, 1,93 mmol) i piridin (0,23 ml, 2,9 mmol), i smeša je mešana na r.t. preko noći. Reakcija je prekinuta zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 ml), i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM-a (2 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% etil acetata u heptanu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane, koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući trans-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-N-(6-hlorpirimidin-4-il)ciklobutan karboksamid (0,230 g, 35%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.00 (6H, s), 0.84 (9H, s), 2.10 (2H, m), 2.38 - 2.45 (2H, m), 3.21 (1H, t), 4.44 (1H, p), 8.14 (1H, s), 8.71 (1H, s), 11.13 (1H, s br). m/z: ES+ [M+H]+ 342.
Priprema trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutan karboksamida
[0469]
[0470] Trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6-hlorpirimidin-4-il)ciklobutankarboksamid (100 mg, 0,29 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-
1
tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (73 mg, 0,29 mmol), dihlor-[1,1'-bis(ditercbutilfosfino)ferocen]paladijum(II) (9,5 mg, 0,01 mmol) i kalijum fosfat (186 mg, 0,88 mmol) dodati su u balon, i balon je evakuisan i ponovo napunjen azotom (3x). Dodat je degasirani 1,4-dioksan (1 ml) i smeša je zagrevana na 90 °C i održavana u tim uslovima tokom 2 h. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je raspodeljen između zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (20 ml) i etil acetata (20 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml), osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani, i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu, dajući trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutan karboksamid (29 mg, 23%) kao belu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 0.00 (6H, s), 0.89 (9H, s), 1.91 - 1.99 (2H, m), 2.08 (2H, m), 2.29 (2H, m), 2.63 (2H, m), 3.01 - 3.10 (1H, m), 3.23 (2H, t), 4.21 (2H, t), 4.52 - 4.63 (1H, m), 8.08 (1H, s), 8.31 (1H, d), 8.43 (1H, s br), 8.73 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 428.
Primer 30: (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksan karboksamid
[0471]
[0472] Anhidrid sirćetne kiseline (0,038 ml, 0,41 mmol) ukapavanjem je dodat u sirovi (1S,3R)-3-amino-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksan karboksamid hidrohlorid (0,120 g, 0,308 mmol), 4-dimetilaminopiridin (2,07 mg, 0,02 mmol) i trietilamin (0,15 ml, 1,1 mmol) u DCM-u (2 ml) na r.t. u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 4 h. Reakciona smeša je zatim deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (10 ml), ekstrahovana pomoću DCM-a (2 x 10 ml) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom.
1 4
Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksan karboksamid (0,066 g, 55%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.02 - 1.12 (1H, m), 1.25 - 1.37 (9H, m), 1.76 - 1.88 (6H, m), 1.90 - 1.96 (1H, m), 2.61 - 2.67 (1H, m), 2.95 (2H, s), 3.54 - 3.61 (1H, m), 3.92 (2H, s), 7.76 (1H, br d), 8.03 (1H, d), 8.15 (1H, d), 8.73 (1H, dd), 10.75 (1H, s br). m/z: ES+ [M+H]+ 397.
[0473] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksan karboksamid hidrohlorida su opisane u nastavku:
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((6-brompirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil) karbamata
[0474]
[0475] 1-hlor-N,N,2-trimetilpropenilamin (0,46 ml, 3,5 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (699 mg, 2,87 mmol; pripremljena prema primeru 2) u DCM-u (10 ml) na 0 °C u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na 0 °C tokom 1,5 h. Dodati su 6-brompirimidin-4-amin (400 mg, 2,30 mmol) i piridin (0,28 ml, 3,5 mmol), i reakciona smeša je mešana na r.t. preko noći. Sirova reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. U dobijenu čvrstu supstancu je zatim dodat DCM. Dobijena smeša je zatim filtrirana, i dobijeni talog je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 2% MeOH u DCM-u. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((6-brompirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (605 mg, 66%) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 399
1
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0476]
[0477] XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,039 g, 0,050 mmol) dodat je u degasiranu smešu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (0,18 g, 0,60 mmol; pripremljen prema primeru 23), terc-butil ((1R,3S)-3-((6-brompirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0,20 g, 0,50 mmol) i kalijum fosfata, trobazni, (0,262 g, 1,50 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml) i vodi (2 ml). Smeša je degasirana, i mešana je na 90 °C tokom 2 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je prenet u vodu (20 ml). Dobijena smeša je redom ekstrahovana pomoću EtOAc (2 x 20 ml) i DCM-a (20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil((1R,3S)-3-((6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,18 g, 79%) kao čvrstu supstancu krem boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.06 - 1.13 (1H, m), 1.35 (6H, s), 1.41 - 1.50 (12H, m), 1.87- 1.96 (3H, m), 2.26 - 2.37 (1H, d), 2.38 - 2.44 (1H, m), 3.04 (2H, s), 3.44 - 3.58 (1H, m) 3.93 (2H, s), 4.44 - 4.52 (1H, m), 8.00 (1H, br s), 8.13 (1H, s), 8.18 (1H, d), 8.72 (1H, dm/z: ES+ [M+H]+ 455.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksan karboksamid hidrohlorida
[0478]
1
[0479] Terc-butil ((1R,3S)-3-((6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin - 4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,160 g, 0,35 mmol) i hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 0,71 ml, 2,8 mmol) rastvoreni su u metanolu (2 ml) na r.t. u atmosferi vazduha. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 16 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni sirovi (1S,3R)-3-amino-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksan karboksamid hidrohlorid (0,120 g, 88%) prenet je u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+ [M+H]+ 355.
Primer 31: (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(2-cijanoacetamido)cikloheksan karboksamid
[0480]
[0481] HATU (140 mg, 0,37 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (150 mg, 0,34 mmol; pripremljen prema primeru 2), 2-cijanosirćetne kiseline (31,4 mg, 0,37 mmol), DIPEA (0,18 ml, 1,0 mmol) i DMF-a (1,2 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 3 h. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc i isprana zasićenim rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran sa 80 do 100% EtOAc u heksanu, dajući (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(2-
1
cijanoacetamido)cikloheksan karboksamid (51 mg, 35%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR(300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.04 - 1.19 (1H, m), 1.21 - 1.39 (3H, m), 1.73 - 1.88 (5H, m), 1.93 (1H, br d), 1.99-2.10 (2H, m), 2.56 - 2.68 (1H, m), 2.80 (2H, t), 3.52 - 3.64 (3H, m), 4.14 (2H, t), 7.76 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.19 (1H, d), 8.38 (1H, s), 10.59 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 441.
Optička rotacija:
[0482]
Primer 31a: terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat
[0483]
[0484] 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin (0,344 g, 2,57 mmol) uz mešanje je ukapavanjem dodat u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (0,611 g, 2,51 mmol; pripremljena prema primeru 2) u DCM-u (12 ml) na 0 °C.
1
Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 1,5 h. Zatim je ukapavanjem dodat rastvor 5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amina (0,50 g, 2,0 mmol; pripremljen prema primeru 2) i piridina (0,65 ml, 8,0 mmol) u DCM-u (18 ml). Bezbojna reakciona smeša je požutela. Ledeno kupatilo je uklonjeno, i reakcija je održavana u tim uslovima tokom 18 h. Ta ista reakcija je zatim ponovljena na sledeći način: 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin (1,032 g, 7,72 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodat u rastvor (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (1,8 g, 7,5 mmol) u DCM-u (30 ml) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 1,5 h. Zatim je ukapavanjem dodat rastvor 5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amina (1,5 g, 6,0 mmol) i piridina (2,0 ml, 24 mmol) u DCM-u (50 ml). Bezbojna reakciona smeša je požutela. Ledeno kupatilo je uklonjeno, i reakcija je održavana u tim uslovima tokom 18 h. Obe reakcije su zatim spojene i razblažene dodatkom MeOH (10 ml) radi rastvaranja taloga. Dobijeni rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, i organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom do minimalne zapremine. Dobijeni rastvor je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu, elucioni gradijent 50 do 80% etil acetata u heksanu, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (2,6 g, 68%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.04 - 1.21 (1H, m), 1.38 - 1.52 (12H, m), 1.87 - 2.19 (7H, m), 2.31 (1H, br d), 2.36 - 2.49 (m, 1H), 2.95 (2H, t), 3.45 - 3.61 (m, 1H), 4.24 (2H, t), 4.34 - 4.52 (1H, m), 7.92 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 474.
Primer 31b: (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0485]
[0486] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 3,2 ml, 13 mmol) uz mešanje je dodata u suspenziju terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-
1
il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (1 g, 2,11 mmol) u MeOH (4 ml) i DCM-u (4 ml). Reakciona suspenzija je postala bistar rastvor. Reakcija je mešana na r.t. tokom 2 h i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom do 1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida izolovanog u vidu dihidrohlorida (0,91 g, 97%) kao bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.12 - 1.39 (3H, m), 1.50 (1H, q), 1.77 - 1.90 (4H, m), 1.90 - 2.10 (4H, m), 2.57 - 2.69 (1H, m), 2.81 (2H, t), 2.95 - 3.09 (1H, m), 4.14 (2H, t), 7.77 (1H, s), 7.99 - 8.21 (4H, m), 8.39 (1H, s), 10.67 (1H, s). Dodatni protoni HCl pod širokim singletom na 5,61 ppm. m/z (ES+), [M+H]+ = 374.
Primer 32: (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamid
[0487]
[0488] HATU (140 mg, 0,37 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidorohlorida (150 mg, 0,34 mmol; pripremljen prema primeru 31b), 1-hidroksiciklopropankarboksilne kiseline (34 mg, 0,34 mmol), DIPEA (0,18 ml, 1,0 mmol) i DMF-a (1,2 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 3 h. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc i isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 80 do 100% EtOAc u heksanu, dajući (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamid (61 mg, 40%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.00 - 1.09 (m, 2H), 1.19 - 1.31 (1H, m), 1.34 - 1.40 (2H, m), 1.42 - 1.59 (3H, m), 1.88 - 2.17 (7H, m), 2.30 (1H, br d), 2.44 - 2.58 (1H,
1
m), 2.83 (1H, s), 2.90 - 2.99 (2H, m), 3.83 - 3.95 (1H, m), 4.24 (2H, t), 6.83 (1H, d), 7.94 (1H, s), 8.19 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.46 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 458.
Optička rotacija:
[0489]
Primer 33: (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid
[0490]
[0491] HATU (140 mg, 0,37 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (150 mg, 0,34 mmol; pripremljen prema primeru 31b), (R)-tetrahidrofuran-3-karboksilne kiseline (43 mg, 0,37 mmol), DIPEA (0,18 ml, 1,0 mmol) i DMF-a (1,2 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 3 h. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen
1 1
iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 80 do 100% EtOAc u heksanu, dajući (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid (77 mg, 49%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.10 - 1.29 (1H, m), 1.36 - 1.58 (3H, m), 1.84 - 2.04 (5H, m), 1.85 - 2.05 (5H, m), 2.06 - 2.21 (4H, m), 2.25 (1H, br d), 2.41-2.55 (1H, m), 2.82 - 2.97 (4H, m), 3.76 - 3.99 (4H, m), 4.23 (2H, t), 5.66 (1H, d), 7.92 (1H, s), 8.13 (1H, s), 8.21 - 8.33 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Optička rotacija:
[0492]
Primer 34: N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)-3-metiloksetan-3-karboksamid
[0493]
1 2
[0494] HATU (140 mg, 0,37 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (150 mg, 0,34 mmol; pripremljen prema primeru 31b), 3-metiloksetan-3-karboksilne kiseline (43 mg, 0,37 mmol), DIPEA (0,18 ml, 1,0 mmol) i DMF-a (1,2 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 3 h. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 80 do 100% EtOAc u heksanu, dajući N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)-3-metiloksetan-3-karboksamid (71 mg, 45%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.17 - 1.33 (1H, m), 1.42 - 1.62 (6H, m), 1.86 - 2.16 (7H, m), 2.21 - 2.34 (1H, m), 2.44 - 2.57 (1H, m), 2.90 - 2.99 (1H, m), 3.89 - 4.02 (1H, m), 4.24 (2H, t), 4.46 (2H, d), 4.84 - 4.89 (2H, m), 5.86 (1H, d), 7.91 (1H, s), 8.09 (1H, br s), 8.19 (1H, s), 8.28 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Optička rotacija:
[0495]
Primer 35: (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid
[0496]
1
[0497] HATU (140 mg, 0,37 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (150 mg, 0,34 mmol; pripremljen prema primeru 31b), (S)-tetrahidrofuran-2-karboksilne kiseline (43 mg, 0,37 mmol), DIPEA (0,18 ml, 1,0 mmol) i DMF-a (1,2 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 3 h. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc i isprana zasićenim rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 80 do 100% EtOAc u heksanu, dajući (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid (41 mg, 26%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.12 - 1.26 (1H, m), 1.35 - 1.57 (3H, m), 1.79 - 2.15 (10H, m), 2.20 - 2.35 (2H, m), 2.41 - 2.53 (1H, m), 2.94 (2H, t), 3.81 - 3.96 (3H, m), 4.23 (2H, t), 4.33 (1H, dd), 6.60 (1H, d), 7.92 (1H, s), 8.26 (2H, s), 8.36 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Optička rotacija:
[0498]
1 4
Primer 36: (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid
[0499]
[0500] HATU (140 mg, 0,37 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (150 mg, 0,34 mmol; pripremljen prema primeru 31b), (R)-tetrahidrofuran-2-karboksilne kiseline (43 mg, 0,37 mmol), DIPEA (0,18 ml, 1,0 mmol) i DMF-a (1,2 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 3 h. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 80 do 100% EtOAc u heksanu, dajući (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid (55 mg, 35%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.13 - 1.37 (1H, m), 1.37 - 1.58 (3H, m), 1.82 - 2.17 (11H, m), 2.20 - 2.36 (2H, m), 2.51 (1H, br s), 2.90 - 3.00 (1H, m), 3.81 - 3.98 (3H, m), 4.25 (2H, t), 4.33 (1H, dd), 6.62 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.27 - 8.31 (1H, s), 8.78 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Optička rotacija:
[0501]
1
Primer 37: (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksan karboksamid
[0502]
[0503] HATU (140 mg, 0,37 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (150 mg, 0,34 mmol; pripremljen prema primeru 31b), (S)-2-hidroksipropanske kiseline (0,033 g, 0,37 mmol), DIPEA (0,18 ml, 1,0 mmol) i DMF-a (1,2 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 3 h. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18, silika gel 5 µ, prečnik 19 mm, dužina 150 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 0,2%, amonijum hidroksida, pH 10) i MeCN. Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksan karboksamid (0,066 g, 44%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.15 - 1.31 (1H, m), 1.39 - 1.59 (6H, m), 1.87 - 2.17 (8H, m), 2.28 (1H, br d), 2.48 - 2.61 (1H, m), 2.96 (2H, t), 3.84 - 3.98 (1H, m), 4.20 -4.28 (3H, m), 6.43 (1H, d), 7.95 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.33 (1H, s), 8.96 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 446.
1
Optička rotacija:
[0504]
Primer 38: (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid
[0505]
[0506] HATU (140 mg, 0,37 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (150 mg, 0,34 mmol; pripremljen prema primeru 31b), (S)-tetrahidrofuran-3-karboksilne kiseline (43 mg, 0,37 mmol), DIPEA (0,18 ml, 1,0 mmol) i DMF-a (1,2 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 3 h. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 80 do 100% EtOAc u
1
heksanu, dajući (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid (70 mg, 44%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.09 - 1.26 (m, 1H), 1.38 - 1.59 (m, 3H), 1.87 - 2.05 (m, 5H), 2.07 -2.21 (m, 4H), 2.29 (1H, d), 2.38 - 2.58 (1H, m), 2.82 - 2.99 (4H, m), 3.78 - 4.00 (4H, m), 4.24 (2H, t), 5.63 (1H, d), 7.92 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.40 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Optička rotacija:
[0507]
Primer 39: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-cijano-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0508]
[0509] 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (195 mg, 0,57 mmol; pripremljen prema primeru 14), (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-
1
hlor-5-cijanopiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (184 mg, 0,57 mmol), cezijum karbonat (561 mg, 1,72 mmol), dioksan (4,3 ml) i voda (1,4 ml) spojeni su u balonu sa okruglim dnom od 100 ml, dajući bezbojni rastvor. Rastvor je produvan azotom tokom 15 min, i dodat je X-Phos pretkatalizator 2. generacije (33 mg, 0,04 mmol). Reakcija je zagrevana na 95 °C u atmosferi azota tokom 1 sata, zatim ohlađena i razblažena DCM-om (50 ml). Organski sloj je ispran vodom (2 x 25 ml), pa je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni, elucioni gradijent 0 do 10% metanola u DCM-u. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je ponovo prečišćen pomoću reverzno fazne HPLC (15 g RediSep Rf Gold(R) reverzno fazna HP C18 kolona kompanije Teledyne Isco, silika gel 10–40 µ), elucioni gradijent 0 do 80% acetonitrila u vodi. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-cijano-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (59 mg, 24%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.99 - 1.19 (1H, m), 1.21 - 1.40 (9H. m), 1.73 - 1.84 (6H, m), 1.90 (1H, br s), 2.60 - 2.73 (1H, m), 2.95 (2H, s), 3.49 - 3.67 (1H, m), 3.97 (2H, s), 7.74 (1H, d), 8.12 (1H, s), 8.31 (1H, s), 8.72 (1H, s), 10.90 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 421.
[0510] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-hlor-5-cijanopiridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema 6-amino-4-hlornikotinonitrila
[0511]
[0512] Degasirana smeša dicijanocinka (0,57 g, 4,8 mmol), 5-brom-4-hlorpiridin-2-amina (1,00 g, 4,82 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) (0,28 g, 0,24 mmol) i DMF-a (12 ml) podvrgnuta je uslovima mikrotalasne pećnice (170 °C, 2 min). Reakcija je ohlađena i neposredno prečišćena pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 70% etil acetata u heksanu. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeno žuto ulje je ponovo prečišćeno koristeći iste uslove koji su upravo opisani,
1
dajući 6-amino-4-hlornikotinonitril (0,47 g, 64%) kao beličastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 6.63 (1H, s), 7.34 (2H, br s), 8.38 (1H, s).<13>C NMR (75 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 95.59 (1C, s) 107.12 (1C, s) 116.17 (1C, s) 143.41 (1C, s) 154.87 (1C, s) 162.32 (1C, s). m/z: ES+ [M+H]+ 154.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((4-hlor-5-cijanopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0513]
[0514] 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin (0,23 ml, 1,7 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (310 mg, 1,27 mmol; pripremljena prema primeru 2) u DCM-u (5,5 ml) na r.t., dajući bezbojni rastvor. Reakcija je održavana u tim uslovima tokom 2 h, i ta reakcija je neposredno dodata u rastvor 6-amino-4-hlornikotinonitrila (178 mg, 1,16 mmol) i piridina (0,37 ml, 4,6 mmol) u DCM-u (11 ml) na 0 °C. Reakcija je ostavljena da se zagreva na r.t i održavana je u tim uslovima tokom 18 h. Reakcija je zatim razblažena DCM-om i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušena iznad magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% metanola u DCM-u. Dobijena supstanca je ponovo prečišćena fleš hromatografijom na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% etila acetata u heksanu, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-hlor-5-cijanopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (330 mg, 75%) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+Na<+>]+ 401.
Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-hlor-5-cijanopiridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0515]
1
[0516] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 1,5 ml, 44 mmol) dodata je u rastvor tercbutil ((1R,3S)-3-((4-hlor-5-cijanopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (330 mg, 0,87 mmol) u MeOH (2,9 ml) u atmosferi azota, dajući bezbojni rastvor. Nakon 2 h, reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući belu čvrstu supstancu (302 mg). Ta čvrsta supstanca je rastvorena u DCM-u (4,8 ml) i dodati su trietilamin (0,61 ml, 4,4 mmol) i anhidrid sirćetne kiseline (123 µl, 1,31 mmol). Reakcija je mešana na r.t. tokom 2 h i zatim razblažena DCM-om. Reakciona smeša je isprana vodom (30 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (30 ml), osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% metanola u DCM-u, zatim izokratski 10% metanol u etil acetatu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-hlor-5-cijanopiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (184 mg, 66%) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 321.
Primer 40: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0517]
[0518] Anhidrid sirćetne kiseline (0,20 ml, 2,2 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (670 mg, 1,79 mmol), trietilamina (0,52 ml, 3,8 mmol) i N,N-dimetilpiridin-4-amina (11 mg, 0,09 mmol) u DCM-u (10 ml). Reakciona smeša je mešana na
1 1
r.t. tokom 18 h. Smeša je prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu, i željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela, koristeći elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu, zatim izokratski 10% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1 S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (693 mg, 93%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 - 1.11 (1H, m), 1.23 (3H, d), 1.27 - 1.38 (3H, m), 1.72 -1.81 (6H, m), 1.89 (1H, br d), 2.52 - 2.63 (1H, m), 2.67 (1H, dd), 3.13 - 3.19 (1H, m), 3.20 -3.28 (1H, m), 3.50 - 3.63 (1H, m), 3.76 (1H, dd), 4.27 - 4.37 (1H, m), 7.75 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.55 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 416.
[0519] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema 5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-ona
[0520]
[0521] n-Butil litijum u heksanu (1,6 M; 49,9 ml, 79,8 mmol) ukapavanjem je dodat u smešu 2-metil-3-(1H-pirazol-1-il)propanske kiseline (4,92 g, 31,9 mmol) u THF-u (150 ml) na -78 °C u periodu od 20 minuta u atmosferi azota. Dobijena suspenzija je mešana na -78 °C tokom 15 minuta. Reakciona smeša je zatim zagrevana na -45 °C i održavana u tim uslovima tokom 30 min, pa je ostavljena da se zagreje na 15 °C. Reakcija je zatim polako sipana u ledeno hladni zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (100 ml). Smeša je razblažena dodatkom Et2O (100 ml), faze su razdvojene i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću Et2O (50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 ml), osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeno ulje je prečišćeno pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su
1 2
uparene do suva, dajući 5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-on (1,3 g, 30%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 21°C) 1.45 (3H, d), 3.27 - 3.38 (1H, m), 4.09 (1H, dd), 4.74 (1H, dd), 6.65 (1H, d), 7.79 (1H, d).
Priprema 5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0522]
[0523] Hidrazin hidrat (2,28 ml, 47,0 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-ona (1,28 g, 9,40 mmol) u dietilen glikolu (26,8 ml, 282 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na 180 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se malo ohladi. U smešu je pažljivo dodat kalijum hidroksid (1,85 g, 32,9 mmol), i dobijena suspenzija je mešana na 150 °C tokom 2 h. Smeša je zatim ostavljena da se ohladi, pa je razblažena vodom, zakiseljena razblaženom 2 M HCl do pH 4,5 i ekstrahovana pomoću Et2O (5 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (3 × 20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml), osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući 5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,98 g, 86%) kao bistro bezbojno ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.28 (3H, d), 2.39 - 2.54 (1H, m), 2.99 - 3.16 (2H, m), 3.66 - 3.76 (1H, m), 4.23 - 4.33 (1H, m), 5.92 (1H, d), 7.48 (1H, d).
Priprema 3-jod-5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0524]
[0525] NIS (1,81 g, 8,04 mmol) u porcijama je dodat u 5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,89 g, 7,31 mmol) u acetonitrilu (15 ml) na r.t. u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana na 23 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je razblažena dodatkom EtOAc (20 ml) i
1
redom isprana vodom (20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 3-jod-5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (1,8 g, 99%) kao narandžasto ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.28 (3H, d), 2.43 (1H, dd), 3.00 (1H, dd), 3.06 - 3.14 (1H, m), 3.79 (1H, dd), 4.36 (1H, dd), 7.46 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 249.
Priprema 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0526]
[0527] Kompleks izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 6,85 ml, 8,91 mmol) ukapavanjem je dodat u 3-jod-5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (1,7 g, 6,9 mmol) u THF-u (20 ml) na 0 °C u periodu od 5 minuta u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (2,10 ml, 10,3 mmol) zatim je ukapavanjem dodat u smešu uz održavanje interne temperature na 0 °C. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se zagreva na r.t. preko noći, pa je razblažena dodatkom EtOAc (50 ml) i redom isprana zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (50 ml), vodom (50 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i uparen, dajući 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (1,5 g, 87%) kao bledosmeđe ulje koje je iskristalisalo.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 22 °C) 1.26 (3H, d), 1.29 (12H, s), 2.57 (1H, dd), 3.01 - 3.22 (2H, m), 3.64 - 3.75 (1H, m), 4.27 (1H, ddd), 7.76 (1H, s).
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0528]
1 4
[0529] XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,25 g, 0,31 mmol) dodat je u degasiranu smešu 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (1,03 g, 3,75 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (1,5 g, 3,13 mmol; pripremljen prema primeru 10) i dvobaznog kalijum fosfata (1,63 g, 9,38 mmol) u 1,4-dioksanu (15 ml) i vodi (3 ml). Dobijena smeša je degasirana i mešana na 90 °C tokom 18 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se ohladi na r.t., razblažena dodatkom EtOAc (100 ml) i redom isprana vodom (100 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 ml). Organski ekstrakt je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,0 g, 69%) kao žutu penu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) 1.07 - 1.12 (1H, m), 1.70 -1.82 (3H, m), 1.85 - 1.93 (1H, m), 2.53 - 2.62 (1H, m), 2.66 (1H, dd), 3.11-3.18 (1H, m), 3.19-3.29 (1H, m), 3.76 (1H, dd), 4.32 (1H, dd), 6.76 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.34 (1H, s), 10.52 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 474.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0530]
1
[0531] Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,11 g, 2,34 mmol) rastvoren je u DCM-u (20 ml). Dodata je trifluorsirćetna kiselina (1,8 ml, 23 mmol) i reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 18 h. Reakcija je prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su uparene do suva, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,68 g, 77%) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 374.
Primeri 41 i 42: Izomer 1 i izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0532]
Čisti enantiomeri. Konfiguracija metila je nepoznata za primer 41 i 42, ali je suprotna u primeru 41 u odnosu na primer 42
[0533] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (670 mg, 1,79 mmol; primer 40) razdvojen je pomoću preparativne HPLC (kolona Chiral Technologies IA, silika gel 20 µm, prečnik 100 mm, dužina 250 mm), koristeći smešu heptan/EtOH/MeOH 70/15/15 kao eluent i protok od 450 ml/min, frakcije koje sadrže željena jedinjenja su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući brže eluirajući izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (356 mg, 48%) i sporije eluirajući izomer
1
2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (348 mg, 47%).
Primer 41: Izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida:
[0534]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 - 1.15 (1H, m), 1.25 (3H, d), 1.26-1.39 (3H, m), 1.72-1.83 (6H, m), 1.90 (1H, br d), 2.55 - 2.62 (1H, m), 2.67 (1H, dd), 3.11 - 3.19 (1H, m), 3.21 - 3.28 (1H, m), 3.51 - 3.62 (1H, m), 3.76 (1H, dd), 4.27 - 4.37 (1H, m), 7.75 (1H, dbr), 8.00 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.55 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 416.
Primer 42: Izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida:
[0535]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.08 - 1.13 (1H, m), 1.24 (3H, d), 1.25 - 1.36 (3H, m), 1.62-1.85 (6H, m), 1.91 (1H, br d), 2.52-2.61 (1H, m), 2.67 (1H, dd), 3.13-3.19 (1H, m), 3.21-3.29 (1H, m), 3.51-3.60 (1H, m), 3.76 (1H, dd), 4.32 (1H, dd), 7.74 (1H, d), 7.98 (1H, s), 8.28 (1H, s), 8.34 (1H, s), 10.54 (1H, s).
[0536] Analitički uslovi za reverznu hiralnu fazu:
1
Primer 43: (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid i
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (primer 14)
[0537]
[0538] XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,019 g, 0,02 mmol) i cezijum karbonat (0,464 g, 1,42 mmol) dodati su u degasirani rastvor 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (1,6 ml, 0,50 mmol, kao rastvor 0,106 g/ml u dioksanu; pripremljen prema primeru 14), cis-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,20 g, 0,47 mmol; pripremljen prema primerima 10 i 12, pri čemu cis-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilna kiselina (pripremljena u primeru 2, intermedijeri) zamenjuje (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilnu kiselinu, a acetil hlorid zamenjuje anhidrid sirćetne kiseline), 1,4-dioksana (2,6 ml) i vode (0,52 ml). Dobijena smeša je potopljena u prethodno zagrejano uljano kupatilo podešeno na 85 °C. Nakon 3 h, još 300 µl osnovnog rastvora 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (0,106 g/ml u dioksanu) dodato je u sada svetlonarandžastu reakcionu smešu. Reakcija je održavana na ovoj temperaturi još 45 min i zatim ohlađena na r.t. Reakcija je razblažena zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i ekstrahovana pomoću etil acetata (x2). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni žuti ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 10 do 100% etil acetata u heksanu, zatim 0 do 20% metanola u etil acetatu, dajući cis-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-
1
pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,147 g, 72%) kao beličastu čvrstu supstancu, kontaminiranu malom količinom pinakol diola.
[0539] Ova supstanca je razložena na enantiomere koristeći SFC uslove (kolona: (S,S) Whelk-O1, 5 µm, prečnik 21,2 mm, dužina 250 mm, temperatura kolone 40 °C, izlazni pritisak 100 bar, protok 75 ml/min), eluent 30% izopropanol u CO2, dajući primer 14, (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,053 g, 26%), kao belu penastu čvrstu supstancu i primer 43, (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,061 g, 30%), kao belu penastu čvrstu supstancu.
(1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (primer 43):
[0540]<1>H NMR(300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.05 (1H, d), 1.22 - 1.40 (9H, m), 1.78 (6H, s), 1.90 (1H, d), 2.56 - 2.69 (1H, m), 2.89 (2H, s), 3.47 - 3.65 (1H, m), 3.95 (2H, s), 7.74 (1H, br d), 7.99 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.54 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 430.
Uslovi analitičke SFC:
[0541]
1
Optička rotacija za (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (primer 43)
[0542]
Primer 44: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0543]
[0544] Anhidrid sirćetne kiseline (0,022 ml, 0,23 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (70 mg, 0,19 mmol), trietilamina (0,056 ml, 0,40 mmol), i N,N-dimetilpiridin-4-amina (1,2 mg, 9,5 µmol) u DCM-u (10 ml). Reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 4 h, i sirova reakcija je prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i frakcije koje
1
sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći smeše opadajuće polarnosti vode (sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (44 mg, 56%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.04 (6H, s), 1.06 - 1.15 (1H, m), 1.32 - 1.38 (3H, m), 1.66 - 1.82 (6H, m), 1.83 - 1.94 (3H, m), 2.58 - 2.64 (1H, m), 2.78 (2H, s), 3.54 - 3.62 (1H, m), 4.14 (2H, t), 7.16 (1H, dd), 7.76 (1H, d), 7.84 (1H, s), 8.18 (1H, s), 8.24 (1H, d), 10.34 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 410.
[0545] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema etil 1-(4-etoksi-4-oksobutil)-1H-pirazol-5-karboksilata
[0546]
[0547] Etil 4-brombutanoat (10 ml, 71 mmol) uz mešanje je dodat u smešu etil 1H-pirazol-5-karboksilata (9,9 g, 71 mmol) i kalijum karbonata (11,7 g, 84,8 mmol) u DMF-u (70 ml). Smeša je mešana na r.t. tokom 24 h. Dodata je voda, i smeša je ekstrahovana pomoću etil acetata (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2x), osušeni iznad MgSO4, i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran 20% etil acetatom u pentanu, dajući željeni etil 1-(4-etoksi-4-oksobutil)-1H-pirazol-5-karboksilat (9,0 g, 50%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.24 (3H, t), 1.38 (3H, t), 2.11 - 2.25 (2H, m), 2.25 - 2.38 (2H, m), 4.12 (2H, q), 4.34 (2H, q),
1 1
4.63 (2H, t), 6.83 (1H, d), 7.47 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 255. Takođe je izolovan etil 1-(4-etoksi-4-oksobutil)-1H-pirazol-3-karboksilat (8 g, 44,5%).
Priprema etil 4-okso-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-5-karboksilata
[0548]
[0549] Kalijum terc-butoksid (1,39 g, 12,4 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor etil 1-(4-etoksi-4-oksobutil)-1H-pirazol-5-karboksilata (2,1 g, 8,3 mmol) u toluenu (20 ml). Smeša je mešana na r.t. tokom 10 minuta i zatim je zagrejana na 110 °C, što je dovelo do nastanka gustog taloga. Smeša je zagrevana u ovim uslovima tokom 30 minuta i zatim je ohlađena na r.t. pa je zakiseljena dodatkom razblažene HCl i ekstrahovana etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući etil 4-okso-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-5-karboksilat (1,7 g, 99%) kao čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 209.
Priprema 6,7-dihidropirazolo[1,5-a]piridin-4(5H)-ona
[0550]
[0551] Litijum hlorid (0,458 g, 10,8 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor etil 4-okso-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-5-karboksilata (1,5 g, 7,2 mmol) u DMSO-u (15 ml). Smeša je zagrevana na 120 °C tokom 24 h, zatim ohlađena na r.t. Dodata je voda, i smeša je ekstrahovana etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran 50% etil acetatom u heptanu, dajući 6,7-dihidropirazolo[1,5-a]piridin-4(5H)-on (0,90
1 2
g, 92%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 2.26 - 2.45 (2H, m), 2.65 -2.75 (2H, m), 4.35 - 4.45 (2H, m), 6.87 (1H, d), 7.55 (1H, d).
Priprema 5,5-dimetil-6,7-dihidropirazo[1,5-a]piridin-4(5H)-ona
[0552]
[0553] Natrijum hidrid (60 mas.% u mineralnom ulju; 705 mg, 17,6 mmol) dodat je u rastvor 6,7-dihidropirazolo[1,5-a]piridin-4(5H)-ona (800 mg, 5,88 mmol) u DMF-u (5,0 ml) na 0 °C. Smeša je mešana tokom 10 minuta u ovim uslovima i zatim je dodat jodmetan (1,10 ml, 17,6 mmol). Ledeno kupatilo je uklonjeno, i reakcija je održavana u tim uslovima tokom 18 h. Dodata je voda, i smeša je zakiseljena razblaženim vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline na pH 7. Reakcija je zatim ekstrahovana etrom (3x) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran 30% etil acetatom u heptanu, dajući 5,5-dimetil-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]piridin-4(5H)-on (800 mg, 83%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.27 (6H, s), 2.06 - 2.26 (2H, m), 4.32 - 4.5 (2H, m), 6.86 (1H, d), 7.54 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 165.
Priprema 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0554]
[0555] Hidrazin hidrat (1,18 ml, 24,4 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 5,5-dimetil-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]piridin-4(5H)-ona (800 mg, 4,87 mmol) rastvorenog u dietilen glikolu (10 ml, 105 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na 180 °C tokom 1 sata. Reakcija je zatim sklonjena sa toplote, i u smešu je pažljivo dodat kalijum hidroksid (957 mg, 17,1 mmol).
1
Dobijena suspenzija je mešana na 170 °C tokom 2 h. Nakon hlađenja, reakciona smeša je razblažena vodom, zakiseljena do pH 5 pomoću razblaženog vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (2 N) i ekstrahovana pomoću Et2O (5 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 x 20 ml) i zatim osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (650 mg, 89%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.05 (6H, s), 1.66 - 1.97 (2H, m), 2.57 (2H, s), 4.15 (2H, t), 5.92 - 5.94 (1H, m), 7.44 (1H, d).
Priprema 3-jod-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0556]
[0557] NIS (1,07 g mg, 4,76 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (650 mg, 4,33 mmol) rastvorenog u acetonitrilu (10 ml) na 23 °C. Dobijena smeša je mešana na 23 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je zatim razblažena dodatkom EtOAc (20 ml) i redom isprana vodom (2 x 20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 3-jod-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (1,1 g, 92%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.07 (6H, s), 1.80 (2H, t), 2.43 (2H, s), 4.24 (2H, t), 7.48 (1H, s).
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0558]
1 4
[0559] Dihlor[1,1'-bis(di-t-butilfosfino)ferocen]paladijum(II) (44 mg, 0,070 mmol) dodat je u degasirani rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (300 mg, 0,67 mmol; pripremljen prema primeru 16), 3-jod-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (242 mg, 0,88 mmol) i trobaznog kalijum fosfata (429 mg, 2,02 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml) i vodi (1 ml). Dobijena smeša je mešana na 90 °C tokom 18 h. Sirova reakcija je ohlađena i prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod kao smeđe ulje. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (170 mg, 54%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.03 (6H, s), 1.04 - 1.15 (1H, m), 1.21 - 1.41 (12H, m), 1.72 - 1.81 (3H, m), 1.83 - 1.92 (3H, m), 2.53 - 2.62 (1H, m), 2.65 - 2.69 (2H, m), 4.16 (2H, t), 6.76 (1H, br d), 7.76 (1H, d), 8.19 (1H, d), 8.29 (1H, d), 10.43 (1H, s). Široki (1H) multiplet ispod baze HOD pika na 3,3 ppm. m/z: ES+ [M+H]+ 468.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0560]
[0561] Trifluorsirćetna kiselina (1 ml) dodata je u terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (170 mg, 0,36 mmol) u DCM-u (10 ml). Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 6 h. Reakcija je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je podvrgnut
1
jonoizmenjivačkoj hromatografiji koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 2 M NH3u MeOH. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu, eluiran sa 7% (1% amonijaka u metanolu) u DCM-u, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (70 mg, 52%) kao čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 368.
Primer 45: (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid
[0562]
[0563] HATU (118 mg, 0,31 mmol) dodat je u rastvor (S)-tetrahidrofuran-2-karboksilne kiseline (0,03 ml, 0,31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (100 mg, 0,26 mmol; pripremljen prema primeru 14) i trietilamina (0,11 ml, 0,77 mmol) u DMA (2 ml). Reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 16 h i zatim deaktivirana vodom (20 ml). Smeša je ekstrahovana pomoću DCM-a (50 ml), i organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod pritiskom, dajući (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid (59 mg, 47%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR(500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.19 - 1.36 (9H, s), 1.49 (1H, q), 1.70 (1H, d), 1.74 - 1.89 (6H, m), 2.02 - 2.16 (1H, m), 2.58 - 2.68 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.63 (1H, dd), 3.75 (1H, q), 3.89 (1H, q), 3.95 (2H, s), 4.17 (1H, dd), 7.60 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.31 - 8.38 (1H, m), 10.55 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 486.
1
Primer 46: (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid
[0564]
[0565] HATU (118 mg, 0,31 mmol) dodat je u rastvor (R)-tetrahidrofuran-2-karboksilne kiseline (0,03 ml, 0,31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (100 mg, 0,26 mmol; pripremljen prema primeru 14) i trietilamina (0,11 ml, 0,77 mmol) u DMA (2 ml). Reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 16 h i zatim deaktivirana vodom (20 ml). Smeša je ekstrahovana pomoću DCM-a (50 ml), i organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 ml), osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su uparene do suva, dajući (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid (61 mg, 49%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.20 - 1.37 (9H, s), 1.49 (1H, q), 1.70 (1H, d), 1.75 - 1.9 (6H, m), 2.04 - 2.16 (1H, m), 2.58 - 2.68 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.58 - 3.67 (1H, m), 3.75 (1H, q), 3.89 (1H, q), 3.95 (2H, s), 4.17 (1H, dd), 7.60 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.55 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 486.
Primer 47: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0566]
1
[0567] 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol (94 mg, 0,26 mmol; pripremljen prema primeru 23) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (100 mg, 0,25 mmol) u 1,4-dioksanu (2,1 ml) i vodi (0,4 ml), dajući bezbojni rastvor. Rastvor je produvan azotom tokom 10 min, i zatim su dodati cezijum karbonat (244 mg, 0,75 mmol) i XPhos pretkatalizator 2. generacije (19,6 mg, 0,02 mmol). Reakcija je zagrevana na 85 °C tokom 7 h, a zatim ohlađena na r.t. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc (50 ml) i zatim isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran sa 0 do 10% MeOH u DCM-u, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (37 mg, 36%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.00 - 1.16 (1H, m), 1.27 (9H, s), 1.78 (6H, s), 1.85 - 1.96 (1H, m), 2.33 (3H, s), 2.55 - 2.65 (1H, m), 2.86 (2H, s), 3.88 - 3.97 (2H, m), 7.75 (1H, d), 7.82 (1H, s), 7.98 (1H, s), 8.13 (1H, s), 10.45 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 410.
Optička rotacija:
[0568]
1
[0569] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema 4-jod-5-metilpiridin-2-amina
[0570]
[0571] Bela suspenzija 2-fluor-4-jod-5-metilpiridina (3,00 g, 12,7 mmol) i koncentrovanog vodenog rastvora amonijum hidroksida (3,5 ml, 90 mmol) u DMSO-u (17 ml) podvrgnuta je uslovima mikrotalasne pećnice (140 °C, 4 h) i zatim ohlađena. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc i vode, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (3 x 50 ml), i kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u, dajući 4-jod-5-metilpiridin-2-amin (800 mg, 27%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 2.13 (s, 3 H) 5.81 (s, 2 H) 6.99 (s, 1 H) 7.75 (s, 1 H). m/z: ES+ [M+H]+ 235.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((4-jod-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0572]
1
[0573] 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin (0,24 ml, 1,8 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (321 mg, 1,32 mmol; pripremljena prema primeru 2) u DCM-u (2,8 ml), dajući bezbojni rastvor. Rastvor je mešan na r.t. tokom 2 h, i zatim je dodat rastvor 4-jod-5-metilpiridin-2-amina (281 mg, 1,2 mmol) i piridina (0,24 ml, 3,0 mmol) u DCM-u (2,8 ml) na 0 °C. Reakcija je ostavljena da se zagreva na r.t. i mešana je pod tim uslovima tokom 3 h, pa je razblažena DCM-om i isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-jod-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (530 mg, 96%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.02 - 1.13 (1H, m), 1.44-1.53 (3H, m), 1.38 (9H, s), 1.65 - 1.80 (3H, m), 1.87 (1H, br d), 2.29 (3H, s), 2.52 - 2.61 (1H, m), 3.19 - 3.34 (1H, m), 6.78 (1H, br d), 8.16 (1H, s), 8.61 (1H, s), 10.43 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 460.
Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0574]
[0575] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 2,1 ml, 8,6 mmol) dodata je u terc-butil ((1R,3S)-3-((4-jod-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (393 mg, 0,86 mmol) u MeOH (4,3 ml), dajući bezbojni rastvor. Reakcija je mešana na r.t. tokom 4 h, što je dalo belu smešu. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući belu čvrstu supstancu. Dodati su TEA (0,60 ml, 4,3 mmol) i anhidrid sirćetne kiseline (0,16 ml, 1,7 mmol), i reakcija je mešana na r.t. tokom 1 sata. Smeša je zatim razblažena DCM-om i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (100 mg, 29%) kao bistro ulje.<1>H NMR (300 MHz,
2
DMSO-d6, 27 °C) 1.04 - 1.13 (1H, m), 1.19 - 1.39 (3H, m), 1.69 - 1.81 (6H, m), 1.86 (1H, br d), 2.29 (3H, s), 2.55 - 2.61 (1H, m), 3.41 - 3.62 (1H, m), 7.75 (1H, br d), 8.16 (1H, s), 8.61 (1H, s), 10.45 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 402.
Primer 48: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentan karboksamid
[0576]
[0577] Anhidrid sirćetne kiseline (0,25 ml, 2,67 mmol) dodat je u (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentan karboksamid (500 mg, 1,34 mmol) i TEA (0,64 ml, 4,6 mmol) u DCM-u (10 ml) i MeOH (2 ml) u atmosferi azota. Dobijena suspenzija je mešana na r.t. tokom 6 h. Reakciona smeša je zatim razblažena DCM-om, i redom isprana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida i vodom, pa je osušena iznad magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters SunFire, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 0,1% mravlje kiseline) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje koncentrovane su pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentan karboksamid (340 mg, 61%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 30°C) 1.28 (6H, s), 1.45 - 1.51 (1H, m), 1.62 (1H, dt), 1.79 (3H, s), 1.81 - 1.89 (3H, m), 2.15 (1H, dt), 2.90 (2H, s), 3.00 (1H, dq), 3.95 (2H, s), 4.04 (1H, dq), 7.90 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.28 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.58 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 416.
[0578] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentan karboksamida opisane su u nastavku:
2 1
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamata
[0579]
[0580] T3P (≥50 mas.% u etil acetatu; 2,60 ml, 4.36 mmol) dodat je u rastvor 5-hlor-4-jodpiridin-2-amina (694 mg, 2,18 mmol; pripremljen prema primeru 2), (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)ciklopentankarboksilne kiseline (500 mg, 2,18 mmol) i piridina (0,71 ml, 8,7 mmol) u EtOAc (10 ml). Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 24 h. Reakciona smeša je razblažena zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (25 ml) i ekstrahovana pomoću EtOAc (50 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamat (650 mg, 64%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.39 (9H, s), 1.46 - 1.63 (2H, m), 1.74 - 183 (3H, m), 2.04 - 2.17 (1H, m), 2.90 - 3.00 (1H, m), 3.70 - 3.84 (1H, m), 6.73 - 6.82 (1H, m), 8.39 (1H, s), 8.73 (1H, s), 10.68 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 466.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamata
[0581]
2 2
[0582] 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (665 mg, 1,95 mmol; pripremljen prema primeru 23) dodat je u terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamat (650 mg, 1,40 mmol), XPhos pretkatalizator 2. generacije (110 mg, 0,14 mmol) i kalijum fosfat, dvobazni (729 mg, 4,19 mmol) u 1,4-dioksanu (20 ml) i vodi (4 ml) u atmosferi azota. Dobijena suspenzija je mešana na 85 °C tokom 20 h. Reakciona smeša je razblažena pomoću EtOAc (50 ml) i redom isprana vodom (2 x 25 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiranjem sa 25 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamat (600 mg, 91%) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 474.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentan karboksamida
[0583]
[0584] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 1,6 ml, 6,3 mmol) polako je dodata u tercbutil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamat (600 mg, 1,27 mmol) u DCM-u (10 ml) u atmosferi azota. Dobijena suspenzija je mešana na r.t. tokom 4 h i zatim čuvana u frižideru tokom 72 sata. Reakciona smeša je zatim razblažena pomoću DCM (10 ml) i MeOH (2 ml), i dodata je hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 1,6 ml, 6,3 mmol) u atmosferi azota. Dobijena suspenzija je mešana na r.t. još 18 h i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću jonoizmenjivačke hromatografije koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-
2
dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentan karboksamid (473 mg, 99%) kao žuto ulje.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.28 (6H, s), 1.49 (1H, dd), 1.59 (1H, dd), 1.73 (1H, dd), 1.91 (2H, q), 2.04 (1H, td), 2.89 - 2.93 (3H, m), 3.78 - 3.83 (1H, m), 3.95 (2H, s), 8.00 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.34 (1H, s). Amidni NH nije uočen; pretpostavlja se da je NH2signal ispod širokog pika vode. m/z: ES+ [M+H]+ 374.
Primer 49: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0585]
[0586] Metoksi(ciklooktadien)iridijum(I) dimer (54 mg, 0,08 mmol) dodat je u 4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridin (100 mg, 0,81 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (312 mg, 2,44 mmol) i 4,4'-di-terc-butil-2,2'-dipiridil (44 mg, 0,16 mmol) u THF-u (2 ml) u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 90 °C tokom 3 h. Nakon hlađenja, oko 2,3 ml reakcione smeše koja sadrži sirovi 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridin dobijeno je u vidu suspenzije. m/z: ES+ [M+3H-(C(CH3)2)2]+ 168.
[0587] Sirovi 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridin (oko 0,3 ml prethodne reakcione suspenzije) dodat je u smešu (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (10 mg, 0,02 mmol; pripremljen prema primeru 12), Cs2CO3(15 mg, 0,05 mmol) i XPhos pretkatalizatora 2. generacije (1,9 mg, 2,4 µmol) u 1,4-dioksanu (2 ml) i vodi (0,5 ml) u atmosferi azota. Dobijena smeša je zagrejana na 60 °C i održavana u tim uslovima tokom 45 minuta. Ova reakcija je zatim ostavljena da se ohladi na r.t.
2 4
[0588] Preostala suspenziona smeša koja sadrži sirovi 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridin (oko 2,0 ml) u zasebnom balonu je dodata u smešu (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (70 mg, 0,17 mmol; pripremljen prema primeru 12), Cs2CO3(325 mg, 1,00 mmol) i XPhos pretkatalizatora 2. generacije (26 mg, 0,03 mmol) u 1,4-dioksanu (16 ml) i vodi (4 ml) u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 45 minuta. Ova reakcija je zatim ostavljena da se ohladi na r.t.
[0589] Obe ohlađene reakcione smeše su kombinovane i zatim razblažene zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (100 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 100 ml), i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela, koristeći elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u petrol etru, zatim elucioni gradijent 0 do 20% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 19 mm, dužina 150 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 0,8% NH4HCO3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje koncentrovane su pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (20 mg, 25%) kao belu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz, 21 °C) 1.00 - 1.14 (1H, m), 1.19 - 1.37 (3H, m), 1.68 - 1.81 (6H, m), 1.81 - 1.92 (3H, m), 1.99 - 2.10 (2H, m), 2.56 - 2.70 (1H, m), 2.82 (2H, t), 3.51 - 3.63 (1H, m), 4.42 (2H, t), 7.80 (1H, d), 8.26 (1H, s), 8.48 (1H, s), 10.73 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 417.
Primer 50: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0590]
2
[0591] Anhidrid sirćetne kiseline (0,024 ml, 0,26 mmol) ukapavanjem je dodat u (1S,3R)-3-amino-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,080 g, 0,22 mmol), 4-dimetilaminopiridin (1 mg, 11 µmol) i trietilamin (0,093 ml, 0,67 mmol) u DCM-u (2 ml) na r.t. u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 4 h. Reakciona smeša je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (10 ml), ekstrahovana pomoću DCM-a (2 x 10 ml) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje koncentrovane su pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,070 g, 79%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.02 - 1.21 (1H, m), 1.22 - 1.38 (9H, m), 1.70 - 1.82 (6H, m), 1.91 (1H, br d), 2.54 - 2.65 (1H, m), 2.71 (2H, s), 3.58 (1H, dt), 4.00 (2H, s), 7.44 (1H, d), 7.76 (1H, d), 8.34 (1H, d), 8.38 (1H, d), 10.56 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 414.
[0592] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazola
[0593]
[0594] 6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (0,180 g, 1,32 mmol; pripremljen prema primeru 22), 2-hlor-5-fluor-4-jodpiridin (0,476 g, 1,85 mmol), cezijum karbonat (0,474 g, 1,45 mmol), trietilamin (0,368 ml, 2,64 mmol), trifenilfosfin (0,055 g, 0,21 mmol) i
2
diacetoksipaladijum (0,024 g, 0,11 mmol) suspendovani su u 1,4-dioksanu (5 ml) i zaptiveni u epruveti za mikrotalasnu pećnicu. Reakcija je podvrgnuta mikrotalasnim uslovima (100 °C, 16 h) i ohlađena na r.t. Reakciona smeša je razblažena DCM-om (20 ml) i isprana vodom (3 x 25 ml). Organski sloj je zatim osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (0,185 g, 53%) kao narandžastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.34 (6H, s), 2.80 (2H, s), 3.93 (2H, s), 7.32 (1H, d), 7.59 (1H, d), 8.26 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 266.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0595]
[0596] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (43 mg, 0,04 mmol) dodat je u 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (100 mg, 0,38 mmol), tercbutil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamat (109 mg, 0,45 mmol; pripremljen prema primeru 25), 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)ksanten (44 mg, 0,08 mmol) i cezijum karbonat (368 mg, 1,13 mmol) u 1,4-dioksanu (6 ml). Smeša je degasirana tokom 5 minuta u atmosferi azota, i dobijena suspenzija je podvrgnuta mikrotalasnim uslovima (120 °C, 3 h). Reakciona smeša je podeljena između vode (20 ml) i DCM-a (40 ml). Slojevi su razdvojeni koristeći uložak za razdvajanje faza, i organski sloj je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 60% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (142 mg, 80%). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
2
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0597]
[0598] Terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,100 g, 0,21 mmol) rastvoren je u DCM-u (5 ml) i dodata je trifluorsirćetna kiselina (0,16 ml, 2,1 mmol). Reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 30 min i zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući polučisti (1S,3R)-3-amino-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid kao bezbojnu gumu (100 mg). Ova guma je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+ [M+H]+ 372.
Primer 51: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0599]
[0600] Anhidrid sirćetne kiseline (0,088 ml, 0,93 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (300 mg, 0,78 mmol; opisan u primeru 51a), trietilamina (0,23
2
ml, 1,6 mmol) i DCM (10 ml). Reakciona smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 4 h. Dodat je silika gel, i isparljive supstance su uklonjene koncentrovanjem pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluent 0,5% metanol u etil acetatu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (300 mg, 90%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.03 (6H, s), 1.02 -1.14 (1H, m), 1.24 - 1.38 (3H, m), 1.72 - 1.81 (6H, m), 1.86 - 1.91 (3H, m), 2.55 - 2.64 (1H, m), 2.69 (2H, s), 3.52 - 3.64 (1H, m), 4.16 (2H, t), 7.64 - 7.81 (2H, m), 8.19 (1H, d), 8.29 (1H, d), 10.45 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 428.
Primer 51a: (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0601]
[0602] TFA (2 ml) dodat je u rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (1,1 g, 2,27 mmol) u DCM-u (20 ml). Dobijena smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 24 h, i reakcija je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću jonoizmenjivačke hromatografije koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 7 N NH3u MeOH. Čiste frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,87 g, 100%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 22 °C) 1.01 - 1.12 (7H, m), 1.31 - 1.49 (3H, m), 1.83 - 1.99 (5H, m), 2.14 (1H, d), 2.35 (1H, td), 2.66 - 2.85 (3H, m), 4.23 (2H, t), 7.85 (1H, d), 7.99 - 8.18 (2H, m), 8.29 (1H, d). Signal NH2nije uočen, i pretpostavlja se da je pod širokim pikom vode na 1,66 ppm. m/z: ES+ [M+H]+ 386.
2
[0603] Procedure za pripremu polazne supstance terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata opisane su u nastavku:
Priprema 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0604]
[0605] Kompleks izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 9,1 ml, 12 mmol) ukapavanjem je dodat u 3-jod-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (2,5 g, 9,1 mmol; pripremljen prema primeru 44) u THF-u (20 ml) u atmosferi azota na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Zatim je ukapavanjem dodat 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (2,8 ml, 14 mmol), i ledeno kupatilo je uklonjeno. Reakcija je održavana u tim uslovima tokom 18 h i zatim razblažena dodatkom Et2O (20 ml). Ova nova smeša je redom isprana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (20 ml), vodom (20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (2,5 g, 100%) kao ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.06 (6H, s), 1.29 (12H, s), 1.79 (2H, t), 2.74 (2H, s), 4.16 (2H, t), 7.72 (1H, s).
Priprema 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0606]
21
[0607] 2-hlor-5-fluor-4-jodpiridin (1,55 g, 6,03 mmol), 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (2,0 g, 7,2 mmol), XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,48 g, 0,60 mmol) i kalijum fosfat, dvobazni (3,15 g, 18,1 mmol) rastvoreni su u degasiranom dioksanu (20 ml) i vodi (1 ml) na 21 °C. Smeša je mešana na 90 °C tokom 24 h, i zatim je ostavljena da se ohladi na r.t. Smeša je razblažena dodatkom EtOAc (30 ml), isprana vodom (10 ml) i organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (1,3 g, 77%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.10 (6H, s), 1.89 (2H, m), 2.68 (2H, s), 4.26 (2H, t), 7.27 (1H, d), 7.80 (1H, d), 8.23 (1H, d). mlz: ES+ [M+H]+ 280.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0608]
[0609] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0,496 g, 0,43 mmol) dodat je u 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (1,2 g, 4,29 mmol), tercbutil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamat (1,04 g, 4,29 mmol; pripremljen prema primeru 25), 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)ksanten (0,496 g, 0,86 mmol) i cezijum karbonat (4,19 g, 12,9 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml). Dobijena smeša je degasirana tokom 5 min u atmosferi azota i zatim je podvrgnuta uslovima u mikrotalasnoj pećnici (120 °C; 17 h).
Reakciona smeša je razblažena vodom (20 ml) i etil acetatom (100 ml), pa je filtrirana. Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiranjem izokratskim 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,1 g, 53%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.03 (6H, s), 1.02 -1.14 (1H, m), 1.20 - 1.35 (3H, m), 1.39 (9H, s), 1.70 - 1.79 (3H, br m), 1.82 - 1.92 (3H, m), 2.54 - 2.63 (1H, m), 2.68 (2H, s), 4.16 (2H, t), 6.76 (1H, br d), 7.76 (1H, d), 8.19 (1H, d), 8.29 (1H, d), 10.43 (1H, s).<1>H multiplet ispod pika vode. mlz: ES+ [M+H]+ 486.
Primer 52: (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-hidroksipropanamido)cikloheksan karboksamid
[0610]
[0611] Trifluorsirćetna kiselina (6,5 µl, 0,080 mmol) dodata je u (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)propanamido)cikloheksan karboksamid (0,046 g, 0,080 mmol) u DCM-u (2 ml) nat r.t. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 1 sata. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću jonoizmenjivačke hromatografije, koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-hidroksipropanamido)cikloheksan karboksamid (0,032 g, 82%) kao bezbojnu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.08 - 1.21 (1H, m), 1.34 (6H, s), 1.35 - 1.49 (3H, m), 1.88 - 1.93 (3H, m), 2.10 - 2.37 (2H, m), 2.36 - 2.49 (2H, m), 2.48 - 2.57 (1H, m), 2.95 (2H, s), 3.79 - 3.92 (3H, m), 3.95 (2H, s), 6.56 (1H, br d), 8.09 (1H, s), 8.21 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.89 (1H, s).m/z: ES+ [M+H]+ 460.
[0612] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)propanamido)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema metil 3-hidroksipropanoata
[0613]
[0614] Oksetan-2-on (22 ml, 350 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodat u rastvor MeOH (300 ml) i sumporne kiseline (5,6 ml, 104 mmol) na 0 °C. Nakon 18 h, reakcija je ohlađena na 10 °C, i u porcijama je dodat natrijum bikarbonat (18,1 g, 215 mmol) (pH = 7 nakon dodavanja). Dobijena suspenzija je ostavljena da se meša na r.t. tokom 30 minuta. Smeša je zatim filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen DCM-om i drugi put filtriran. Novi filtrat je uparen do suva, dajući metil 3-hidroksipropanoat (35 g, 97%) kao bezbojnu tečnost.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 24 °C) 2.41 - 2.45 (1H, m), 2.58 (2H, t), 3.72 (3H, s), 3.89 (2H, t).
Priprema metil 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propanoata
[0615]
[0616] Piridin 4-metilbenzensulfonat (4,22 g, 16,8 mmol) dodat je u rastvor metil 3-hidroksipropanoata (35 g, 336 mmol) i 3,4-dihidro-2H-pirana (43 ml, 470 mmol) u DCM-u (500 ml) u atmosferi azota. Rastvor je mešan na r.t. tokom 2,5 dana. Smeša je zatim isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, i organski sloj je osušen iznad magnezijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeno ulje je prečišćeno pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiranje izokratskim 15% etil acetatom u heptanu,
21
dajući metil 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propanoat (26 g, 41%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 24 °C) 1.37 - 1.46 (4H, m), 1.54 - 1.59 (2H, m), 2.56 (2H, t), 3.39 - 3.42 (1H, m), 3.53 - 3.63 (4H, m), 3.68 - 3.75 (1H, m), 3.81 - 3.87 (1H, m), 4.57 (1H, t).
Priprema 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propanske kiseline
[0617]
[0618] Vodeni rastvor natrijum hidroksida (2 N; 134 ml, 268 mmol) dodat je u rastvor metil 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propanoata (26 g, 138 mmol) u THF-u (300 ml). Smeša je mešana na r.t. tokom 5 h i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dodat je etil acetat (100 ml), i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ohlađen na 0 °C, i pažljivo je ukapavanjem dodavan vodeni rastvor HCl (1 N) do pH 3,5. Vodeni sloj je zatim ekstrahovan etil acetatom (2 x 250 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propansku kiselinu (24 g, 98%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 24°C) 1.45 - 1.62 (4H, m), 1.63 - 1.85 (2H, m), 2.64 - 2.68 (2H, m), 3.52 - 3.56, (1H, m), 3.70 - 3.74, (1H, m), 3.85 -3.89 (1H, m), 3.99 - 4.03 (1H, m), 4.62 - 4.66 (1H, m), 11.2 (1H, br s).
Priprema (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)propanamido)cikloheksan
karboksamida
[0619]
[0620] HATU (118 mg, 0,31 mmol) dodat je u rastvor 3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)propanske kiseline (54 mg, 0,31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (100 mg, 0,26 mmol; pripremljen prema primeru 14) i trietilamina (0,11 ml, 0,77 mmol) u DMA (2 ml). Dobijena smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 16 h, pa je dodata HCl u dioksanu (4 M; 0,52 ml, 2,1 mmol). Ova nova smeša je mešana na r.t. tokom 2 h, pa je zalužena zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3. Dobijena smeša je razblažena vodom (20 ml) i ekstrahovana pomoću DCM-a (50 ml). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 ml), pa je propušten kroz uložak za razdvajanje faza. Organske frakcije su osušene iznad MgSO4i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)propanamido)cikloheksan karboksamid (46 mg, 33%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.05 - 1.2 (1H, m), 1.24 - 1.51 (13H, m), 1.52 - 1.63 (1H, m), 1.64 - 1.71 (1H, m), 1.72 - 1.83 (3H, m), 1.88 - 1.93 (1H, m), 2.25 -2.35 (2H, m), 2.57 - 2.7 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.38 - 3.44 (1H, m), 3.48 - 3.58 (1H, m), 3.59 -3.64 (1H, m), 3.74 (1H, ddd), 3.81 (1H, ddt), 3.95 (2H, s), 4.55 (1H, d), 7.78 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.36 (1H, s), 10.56 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 544.
Primer 53: (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(cis-3-hidroksiciklobutankarboksamido)cikloheksan karboksamid
[0621]
21
[0622] HATU (118 mg, 0,31 mmol) dodat je u rastvor cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilne kiseline (71 mg, 0,31 mmol; pripremljena prema primeru 4), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (100 mg, 0,26 mmol; pripremljen prema primeru 14), i trietilamina (0,11 ml, 0,77 mmol) u DMA (2 ml). Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 16 h, pa je dodat rastvor tetrabutilamonijum fluorida u THF-u (1 M; 1,0 ml, 1,0 mmol). Smeša je mešana na r.t. tokom 2 h, pa je deaktivirana vodom (20 ml). Smeša je ekstrahovana pomoću DCM-a (50 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 ml), pa je propuštena kroz uložak za razdvajanje faza. Organske frakcije su osušene iznad MgSO4i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je dalje prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-((cis)-3-hidroksiciklobutankarboksamido)cikloheksan karboksamid (0,037 g, 53%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.34 (6H, s), 1.47 - 1.49 (3H, m), 1.85 - 1.99 (5H, m), 2.10 - 2.30 (4H, m), 2.39 - 2.62 (4H, m), 2.96 (2H, s), 3.79 - 3.86 (1H, m), 3.95 (2H, s), 5.90 (1H, br d), 8.09 (1H, s), 8.22 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.69 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 486.
Primer 54: (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid
[0623]
[0624] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 3,2 ml, 13 mmol) dodata je u rastvor tercbutil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-
21
il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (600 mg, 1,27 mmol) u DCM-u (9,5 ml), dajući žutu suspenziju. Dodat je metanol (∼5 ml), što je dalo bistri žuti rastvor. Reakcija je mešana tokom 18 h na r.t. i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući (1 S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid kao dihidrohlorid (488 mg, 87%) i beličastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.23 - 1.36 (9H, m), 1.50 (1H, q), 1.77 - 1.89 (2H, m), 1.89 - 2.01 (1H, m), 2.01 - 2.09 (1H, m), 2.56 - 2.68 (1H, m), 2.94 (2H, s), 2.97 - 3.09 (1H, m), 3.95 (2H, s), 7.85 -7.93 (1H, m), 7.98 - 8.14 (3H, m), 8.26 - 8.32 (2H, m), 10.56 (1H, s). Pretpostavlja se da je 1 ekvivalent HCl inkorporisan u široki singlet na 5,4 ppm. mlz: ES+ [M+H]+ 372.
[0625] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata opisane su u nastavku:
Priprema 5-fluor-4-jodpiridin-2-amina
[0626]
[0627] Koncentrovani vodeni rastvor amonijum hidroksida (26 mas.%; 7,0 ml, 45 mmol) ukapavanjem je dodat (slabo egzotermna reakcija) u rastvor 2,5-difluor-4-jodpiridina (2,0 g, 8,30 mmol) u DMSO (2 ml), dajući belu suspenziju. Suspenzija je zagrevana u mikrotalasnoj pećnici na 140 °C tokom 4 h. Reakcija je raspodeljena između EtOAc i vode, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (3 x 50 ml). Kombinovane organske supstance su koncentrovane pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu, pa je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu (0 do 10% metanol u DCM-u), dajući 5-fluor-4-jodpiridin-2-amin (1,3 g, 66%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6,, 27 °C) 5.96 (1H, br s) 5.96 (1H, s) 6.92 (1H, d) 7.77 - 7.84 (1H, m). mlz: ES+ [M+H]+ 239.
Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat
21
[0629] 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin (0,62 ml, 4,7 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (843 mg, 3,47 mmol; pripremljena prema primeru 2) u DCM-u (15 ml). Bezbojni rastvor je mešan na r.t. tokom 1,5 h. Zatim je dodat rastvor 5-fluor-4-jodpiridin-2-amina (750 mg, 3,15 mmol) i piridina (0,51 ml, 6,3 mmol) u DCM-u (15 ml). Dobijena reakcija je mešana na r.t. tokom 18 h, pa je razblažena dodatkom DCM (200 ml) i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% metanola u DCM-u, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (827 mg, 57%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.01 - 1.19 (1H, m), 1.18 - 1.31 (3H, m), 1.38 (9H, s), 1.61 - 1.81 (m, 3H), 1.87 (1H, d), 2.53 - 2.62 (1H, m), 3.16 - 3.26 (1H, m), 6.78 (1H, br d), 8.26 (1H, s), 8.60 (1H, d), 10.61 (1H, s). mlz: ES+ [M+Na+]+ 486.
Priprema terc-butil((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0630]
[0631] Cezijum karbonat (2,81 g, 8,61 mmol) i XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,090 g, 0,11 mmol) dodati su u degasiranu smešu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-
21
dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (0,828 g, 3,16 mmol; pripremljen prema primeru 23), terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (1,33 g, 2,87 mmol), dioksana (24 ml) i vode (5 ml). Reakcija je zagrejana na 95 °C i održavana u tim uslovima tokom 18 h. Reakcija je zatim razblažena dodatkom EtOAc (250 ml) i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, pa je osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% etil acetata u heksanu, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (600 mg, 44%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.03 - 1.15 (1H, obsc. m), 1.22 - 1.32 (9H, m), 1.38 (9H, s), 1.69 -1.82 (3H, m), 1.89 (1H, br d) 2.53 - 2.64 (1H, m), 2.93 (2H, s), 3.21 - 3.32 (1H, m), 3.96 (2H, s), 6.78 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.27 (1H, d), 8.31 (1H, d), 10.45 (1H,s). mlz: ES+ [M+H]+ 472.
Primer 55: (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamid
[0632]
[0633] HATU (98 mg, 0,26 mmol) dodat je u rastvor 1-hidroksiciklopropankarboksilne kiseline (32 mg, 0,31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (96 mg, 0,22 mmol; pripremljen prema primeru 54) i trietilamina (0,11 ml, 0,77 mmol) u DMF-u (1,5 ml). Reakciona smeša je zagrevana na 50 °C tokom 1,75 h, a zatim ostavljena da se ohladi na r.t. Nakon 18 h, dobijena smeša je prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su uparene do suva, dajući (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-
21
5-fluorpiridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamid (33 mg, 33%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.76 - 0.84 (2H, m), 0.98 - 1.04 (2H, m), 1.29 (6H, s), 1.30 - 1.37 (3H, m), 1.52 (1H, q), 1.7 - 1.84 (3H, m), 1.88 (1H, d), 2.58 - 2.67 (1H, m), 2.94 (2H, s), 3.63 - 3.73 (1H, m), 3.95 (2H, s), 6.14 (1H, br s), 7.65 (1H, d), 7.89 (1H, d), 8.28 (1H, d), 8.32 (1H, d), 10.46 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 456.
Primer 56: (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamid
[0634]
[0635] HATU (118 mg, 0,31 mmol) dodat je u rastvor 1-hidroksiciklopropankarboksilne kiseline (31,6 mg, 0,31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (100 mg, 0,26 mmol) i trietilamina (0,11 ml, 0,77 mmol) u DMA (2 ml). Reakcija je mešana preko noći na r.t. i zatim je prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksan karboksamid (27 mg, 22%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.75 - 0.82 (2H, m), 0.93 -1.09 (2H, m), 1.25 (6H, s), 1.27 - 1.38 (3H, m), 1.52 (1H, q), 1.65 - 1.93 (4H, m), 2.53 - 2.70 (1H, m), 2.71 (2H, s), 3.60 - 3.71 (1H, m), 3.91 (2H, s), 6.15 (1H, s), 7.51 (1H, s), 7.65 (1H, d), 8.29 (1H, s), 8.42 (1H, s), 10.65 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
[0636] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
22
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0637]
[0638] Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,40 g, 0,83 mmol; pripremljen prema primeru 10), 6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (0,200 g, 1,25 mmol; pripremljen prema primeru 22), kalijum acetat (0,163 g, 1,66 mmol) i paladijum acetat (0,337 g, 0,33 mmol) suspendovani su u DMA (10 ml) i zaptiveni u epruveti za mikrotalasnu pećnicu. Epruveta je evakuisana i produvana azotom (3x) i zatim zagrevana na 150 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,20 g, 49%) kao narandžastu gumu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 21°C) 1.05 - 1.19 (1H, m), 1.33 (6H, s), 1.40 - 1.46 (12H, m), 1.9 - 2.05 (3H, m), 2.20 - 2.47 (2H, m), 2.78 (2H, s), 3.46 - 3.52 (1H, m), 3.93 (2H, s), 4.44 - 4.52 (1H, m), 7.67 (1H, s), 8.06 (1H, br s), 8.28 (1H, s), 8.29 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 488.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0639]
[0640] Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,25 g, 0,51 mmol) rastvoren je u DCM-u (5 ml). Dodata je trifluorsirćetna kiselina (0,39 ml, 5,1 mmol), i reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,19 g, 96%) kao narandžastu gumu. Ova guma je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+ [M+H]+ 388.
Primer 57: N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid
[0641]
[0642] HATU (118 mg, 0,31 mmol) dodat je u rastvor oksetan-3-karboksilne kiseline (32 mg, 0,31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (100 mg, 0,26 mmol; pripremljen prema primeru 56) i trietilamina (0,11 ml, 0,77 mmol) u DMA (2 ml). Reakciona smeša je prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje koncentrovane su pod sniženim pritiskom, dajući polučvrsti proizvod. Ova supstanca je dalje prečišćena pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (13 mg, 11%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.11 - 1.29 (1H, m), 1.32 (6H, s), 1.36 - 1.6 (3H, m), 1.9 - 2.02 (3H, m), 2.22 - 2.31 (1H, br d), 2.41 - 2.55 (1H, m), 2.78 (2H, s), 3.67 (1H, ddd), 3.82 - 3.96 (3H, m), 4.74 - 4.9 (4H, m), 5.75 (1H, d), 7.64 (1H, s), 8.27 (3H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Primer 58: cis-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutan karboksamid
[0643]
[0644] Cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)ciklobutan karboksamid (0,194 g, 0,42 mmol; pripremljen prema primeru 27), 6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (0,100 g, 0,62 mmol; pripremljen prema primeru 22), kalijum acetat (0,082 g, 0,83 mmol) i paladijum acetat (0,168 g, 0,17 mmol) suspendovani su u DMA (10 ml) i zaptiveni u epruveti za mikrotalasnu pećnicu. Epruveta je evakuisana i produvana azotom (3x) i zatim zagrevana na 150 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 ml) i isprana DCM-om (3 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 19 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je ponovo prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters SunFire, silika gel 5 µ, prečnik 19 mm, dužina 100 mm), koristeći smeše opadajuće polarnosti vode (sa 0,1% mravlje kiseline) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući cis-N-(5-hlor-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-
22
hidroksiciklobutan karboksamid (0,016 g, 11%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.26 (6H, s), 1.98 - 2.09 (2H, m), 2.30 - 2.40 (2H, m), 2.72 (2H, s), 2.74 -2.83 (1H, m), 3.93 (2H, s), 3.95 - 4.00 (1H, m), 5.15 (1H, s), 7.53 (1H, s), 8.32 (1H, s), 8.41 (1H, s), 10.61 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 361.
Primer 59 i 60: Izomer 1 i izomer 2 trans-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0645]
Primeri 59 i 60 su čisti enantiomeri sa relativnom trans konfiguracijom. Apsolutne konfiguracije primera 59 i 60 su nepoznate, ali su međusobno suprotne.
[0646] Anhidrid sirćetne kiseline (0,049 ml, 0,52 mmol) ukapavanjem je dodat u trans-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,167 g, 0,43 mmol), 4-dimetilaminopiridin (2,6 mg, 0,02 mmol) i trietilamin (0,19 ml, 1,3 mmol) u DCM-u (2 ml) na r.t. u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 4 h. Reakciona smeša je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (10 ml), ekstrahovana pomoću DCM-a (2 x 10 ml) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Chiral Technologies IE, silika gel 20 µm, prečnik 50 mm, dužina 250 mm), eluiranje izokratskim 30% heptanom u acetonu sa 120 ml/min uz detekciju na 210 nm. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući brže eluirajući izomer 1 trans-3-acetamido-N-(5-hlor-4-((5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,059 g, 32%) i sporije eluirajući izomer 2 trans-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,052 g, 28%) kao bele čvrste supstance.
Primer 59, izomer 1:
[0647]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.34 (6H, s), 1.56 - 2.00 (8H, m), 2.01 (3H, s), 2.48 - 2.56 (1H, m), 2.96 (2H, s), 3.95 (2H, s), 4.17 - 4.24 (1H, m), 5.42 - 5.49 (1H, m), 7.96 (1H, br s), 8.10 (1H, s), 8.24 (1H, s), 8.26 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 430.
Primer 60, izomer 2:
[0648]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.34 (6H, s), 1.48 - 1.55 (1H, m), 1.62 - 1.78 (4H, m), 1.82-1.90 (1H, m), 1.94 - 1.98 (2H, m), 2.01 (3H, s), 2.46 - 2.58 (1H, m), 2.96 (2H, s), 3.95 (2H, s), 4.17 - 4.26 (1H, m), 5.45 - 5.54 (1H, br d), 8.01 (1H, s), 8.10 (1H, s), 8.23 (1H, s), 8.26 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 430.
[0649] Analitički uslovi za reverznu hiralnu fazu:
[0650] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance trans-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
22
Priprema terc-butil trans-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0651]
[0652] 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin (1,1 ml, 8,2 mmol) dodat je u trans-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilnu kiselinu (1,34 g, 5,50 mmol) u DCM-u (20 ml) na 0 °C u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na 20 °C tokom 1,5 h i zatim su ukapavanjem dodati 5-hlor-4-jodpiridin-2-amin (1,40 g, 5,50 mmol; pripremljen prema primeru 2) i piridin (0,67 ml, 8,2 mmol) tokom 2 minuta. Dobijeni rastvor je mešan tokom 70 h. Reakciona smeša je zatim deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (300 ml), ekstrahovana pomoću DCM-a (3 x 30 ml), i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući čvrstu supstancu krem boje. Ta čvrsta supstanca je prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil (trans-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,99 g, 37%) kao ružičastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.46 (9H, s), 1.49 - 1.55 (1H, m), 1.61 - 1.72 (4H, m), 1.82 - 1.93 (3H, m), 2.47 -2.52 (1H, m), 3.89 - 3.99 (1H, br s), 4.55 - 4.59 (1H, br s), 7.84 (1H, br s), 8.19 (1H, s), 8.83 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 480.
Priprema terc-butil (trans-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0653]
22
[0654] XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,049 g, 0,06 mmol) dodat je u degasiranu smešu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (0,219 g, 0,75 mmol; pripremljen prema primeru 23), terc-butil (trans-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0,30 g, 0,63 mmol) i trobaznog kalijum fosfata, (0,327 g, 1,88 mmol) u 1,4-dioksanu (8 ml) i vodi (1,6 ml). Smeša je degasirana i mešana na 90 °C tokom 2 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom i preneta u vodu (20 ml). Dobijena smeša je redom ekstrahovana pomoću EtOAc (2 x 20 ml) i DCM-a (20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil (trans-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,26 g, 86%) kao čvrstu supstancu krem boje. mlz: ES+ [M+H]+ 488.
Priprema trans-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0655]
22
[0656] Terc-butil (trans-3-((5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,263 g, 0,54 mmol) rastvoren je u DCM-u (5 ml). Dodata je trifluorsirćetna kiselina (0,41 ml, 5,4 mmol) i reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 18 h. Reakcija je zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući trans-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1 ,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 388.
Primeri 61 i 62: Izomer 1 i izomer 2 trans-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0657]
Primeri 61 i 62 su čisti enantiomeri sa relativnom trans konfiguracijom. Apsolutne konfiguracije primera 61 i 62 su nepoznate, ali su međusobno suprotne.
[0658] Anhidrid sirćetne kiseline (0,036 ml, 0,38 mmol) ukapavanjem je dodat u trans-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,119 g, 0,32 mmol), 4-dimetilaminopiridin (1,9 mg, 0,02 mmol) i trietilamin (0,14 ml, 1,0 mmol) u DCM-u (2 ml) na r.t. u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 4 h. Reakciona smeša je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (10 ml), ekstrahovana pomoću DCM-a (2 x 10 ml), kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Chiral Technologies IE, silika gel 20 µm, prečnik 50 mm, dužina 250 mm), koristeći kao eluent smešu heptan/aceton 30/70, protok 120 ml/min, i
22
aktivaciju detekcije na 210 nm. Frakcije koje sadrže željena jedinjenja koncentrovane su pod sniženim pritiskom, dajući brže eluirajući izomer 1 trans-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo ,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,076 g, 57%) i sporije eluirajući izomer 2 trans-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,056 g, 42%).
Primer 61, izomer 1:
[0659]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 31 °C) 1.57 - 1.96 (7H, m), 2.01 (3H, s), 2.04 - 2.16 (2H, m), 2.49 - 2.56 (1H, m), 2.92 (2H, t), 4.16 - 4.23 (3H, m), 5.46 - 5.52 (1H, m), 7.87 (1H, s), 8.05 (1H, br s), 8.21 (1H, s), 8.27 (1H, s). 3H na 1,50 do 1,62 ppm zaklonjen signalom vode, mlz: ES+ [M+H]+ 416.
Primer 62, izomer 2:
[0660]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.45 - 1.96 (10H, m), 2.01 (3H, s), 2.04 - 2.13 (2H, m), 2.49 - 2.58 (1H, m), 2.92 (2H, t), 4.16 - 4.24 (3H, m), 5.52 - 5.57 (1H, m), 7.87 (1H, s), 8.12 (1H, br s), 8.21 (1H, s), 8.26 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 416.
[0661] Analitički uslovi za reverznu hiralnu fazu:
22
[0662] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance trans-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema terc-butil (trans-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0663]
XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,049 g, 0,06 mmol) dodat je u degasiranu smešu 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (0,186 g, 0,75 mmol), terc-butil (trans-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0,30 g, 0,63 mmol; pripremljen prema primerima 59 i 60, intermedijeri) i trobaznog kalijum fosfata (0,327 g, 1,88 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml) i vodi (2 ml). Reakciona smeša je degasirana i zatim mešana na 90 °C tokom 2 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i preneta u vodu (20 ml). Dobijena smeša je redom ekstrahovana pomoću EtOAc (2 x 20 ml) i DCM-a (20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil (trans-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,163 g, 55%) kao čvrstu supstancu krem boje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.46 (9H, s), 1.48 - 1.54 (1H, m), 1.61 - 1.74 (4H, m), 1.82 - 1.97 (5H, m), 2.05 - 2.13 (2H, m), 2.46 - 2.57 (1H, m), 2.92 (2H, t), 3.98 (1H, br s), 4.21 (2H, t), 4.60 (1H, br s), 7.87 (2H, s), 8.21 (1H, s), 8.27 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 474.
2
Priprema trans-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0664]
[0665] Terc-butil (trans-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,16 g, 0,34 mmol) rastvoren je u DCM-u (5 ml). Dodata je trifluorsirćetna kiselina (0,26 ml, 3,4 mmol), i reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 18 h. Reakciona smeša je zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom, koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući trans-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid kao žutu gumu. mlz: ES+ [M+H]+ 374.
Primer 63: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0666]
[0667] Anhidrid sirćetne kiseline (0,032 ml, 0,34 mmol) dodat je u (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
2 1
(0,10 g, 0,28 mmol), trietilamin (0,12 ml, 0,84 mmol) i N,N-dimetilpiridin-4-amin (2 mg, 0,01 mmol) u DCM-u (5 ml) na r.t. u atmosferi vazduha. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 2 h. Reakciona smeša je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (20 ml) i ekstrahovana pomoću DCM-a (2 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje koncentrovane su pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,047 g, 42%) kao gumu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.03 - 1.15 (1H, m), 1.23 - 1.37 (3H, m), 1.74-1.82 (6H, m), 1.83 - 1.94 (3H, m), 2.00-2.08 (2H, m), 2.56 - 2.68 (1H, m), 2.91 (2H, t), 3.58 - 3.61 (1H, m), 4.15 (2H, t), 7.73 - 7.78 (2H, m), 8.26 (1H, d), 8.30 (1H, d), 10.48 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 400.
[0668] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0669]
[0670] XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,092 g, 0,12 mmol) dodat je u degasiranu smešu 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (0,347 g, 1,40 mmol), 2-hlor-5-fluor-4-jodpiridina (0,300 g, 1,17 mmol) i trobaznog kalijum fosfata (0,609 g, 3,50 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml) i vodi (2 ml). Smeša je degasirana i mešana na 90 °C tokom 2 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je prenet u vodu (20 ml). Dobijena smeša je zatim ekstrahovana pomoću DCM-a (3 x 20 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan
2 2
pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 60% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (200 mg, 68%) kao žutu gumu. m/z: ES+ [M+H]+ 252.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0671]
[0672] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0,092 g, 0,080 mmol) dodat je u smešu 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (0,20 g, 0,79 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamata (0,231 g, 0,95 mmol; pripremljen prema primeru 25), 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)ksantena (0,092 g, 0,16 mmol) i cezijum karbonata (0,777 g, 2,38 mmol) u 1,4-dioksanu (6 ml). Smeša je degasirana (vakuum), ponovo napunjena azotom, i dobijena suspenzija je mešana na 120 °C tokom 2 h u mikrotalasnom reaktoru. Reakciona smeša je raspodeljena između vode (20 ml) i DCM-a (40 ml) i razdvojena koristeći uložak za razdvajanje faza. Organske supstance su adsorbovane na silika gelu i prečišćene pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 60% EtOAc u heptanu. Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (136 mg). Ova supstanca je neposredno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. mlz: ES+ [M+H]+ 458.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0673]
2
[0674] Trifluorsirćetna kiselina (0,17 ml, 2,2 mmol) dodata je u terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,10 g, 0,22 mmol) u DCM-u (5 ml). Dobijeni rastvor je mešan na r.t. tokom 1 h. Sirovi proizvod je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid kao žutu gumu. Ova supstanca je neposredno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. mlz: ES+ [M+H]+ 358.
Primer 64 i 65: Priprema izomera 1 i izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0675]
Čisti enantiomeri. Konfiguracija metila je nepoznata za primer 64 i 65, ali je suprotna u primeru 64 u odnosu na primer 65.
[0676] XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,056 g, 0,07 mmol) dodat je u smešu 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (0,56 g,
2 4
0,85 mmol), (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,30 g, 0,71 mmol; pripremljen prema primeru 12) i Cs2CO3(0,695 g, 2,13 mmol) u dioksanu (10 ml) i vodi (2,0 ml) u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 100 °C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je razblažen DCM-om (100 ml), pa je redom ispran vodom (100 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (100 ml). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 19 mm, dužina 150 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 0,1% NH4HCO3) i MeCN. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,120 g, 39%; smeša primera 64 i 65, nepoznat odnos) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 430.
[0677] Ova supstanca je razdvojena pomoću preparativne HPLC (kolona Chiralpak® IA-3, silika gel 5 µm, prečnik 20 mm, dužina 250 mm), koristeći izokratsku smešu 30% izopropanola u heksanu (sa 0,1% dietilamina) kao eluente tokom 23 min sa protokom od 20 ml/min. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući brže eluirajući izomer 1 (14,3 min) (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,045 g, 38%, primer 64) kao belu čvrstu supstancu i sporije eluirajući izomer 2 (18,8 min) (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,045 g, 38%, primer 65) kao belu čvrstu supstancu.
Primer 64, izomer 1:
[0678]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) 1.00 - 1.14 (4H, m), 1.19 - 1.36 (3H, m), 1.69 -1.84 (7H, m), 1.85 - 2.10 (3H, m), 2.37 - 2.49 (1H, m), 2.56 - 2.66 (1H, m), 2.79 - 2.90 (1H, m), 3.49 - 3.63 (1H, m), 4.01 - 4.13 (1H, m), 4.19 - 4.30 (1H, m), 7.75 (1H, s), 7.79 (1H, d), 8.12 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.61 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 430.
2
Primer 65, izomer 2:
[0679]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) 1.01 - 1.14 (4H, m), 1.21 - 1.35 (3H, m), 1.70 -1.83 (7H, m), 1.83 - 2.09 (3H, m), 2.37 - 2.49 (1H, m), 2.56 - 2.63 (1H, m), 2.79 - 2.89 (1H, m), 3.49 - 3.62 (1H, m), 4.01 - 4.14 (1H, m), 4.19 - 4.30 (1H, m), 7.74 (1H, s), 7.78 (1H, d), 8.12 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.61 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 430.
[0680] Analitički uslovi za reverznu hiralnu fazu:
[0681] Procedure za pripremu polazne supstance 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina opisane su u nastavku:
Priprema 5-metilpirazolo[1,5-a]piridina
[0682]
[0683] Paladijum(II) acetat (0,114 g, 0,51 mmol) dodat je u 5-brompirazolo[1,5-a]piridin (1,00 g, 5,08 mmol), 2,4,6-trimetil-1,3,5,2,4,6-trioksatriborinan (0,765 g, 6,09 mmol), kalijum karbonat (2,10 g, 15,2 mmol), 1,4-dioksan (10 ml) i vodu (1 ml) u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 80 °C tokom 1 sata. Ova reakcija je ponovljena u zasebnom balonu, i obe
2
reakcije su zatim kombinovane, razblažene dodatkom EtOAc (100 ml) i redom isprane vodom (75 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (75 ml). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 20% EtOAc u petrol etru. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući 5-metilpirazolo[1,5-a]piridin (1,1 g, 82%) kao smeđe ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 20 °C) 2.33 (3H, s), 6.45 (1H, d), 6.71 (1H, dd), 7.44 (1H, s), 7.92 (1H, d), 8.55 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 133.
Priprema 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0684]
[0685] 5-metilpirazolo[1,5-a]piridin (500 mg, 3,78 mmol), paladijum na ugljeniku (10 mas.%; 250 mg) i sirćetna kiselina (0,217 ml, 3,78 mmol) u MeOH (20 ml) mešani su u atmosferi vodonika na 20 atm i 80 °C tokom 50 h. Ova reakcija je zatim ponovljena u zasebnom balonu. Nakon hlađenja, obe reakcije su filtrirane kroz Celite®, i filtrati su kombinovano koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (1,05 g, 98%) kao smeđe ulje. Ovaj proizvod je neposredno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 20°C) 1.06 (3H, d), 1.57 -1.72(1H, m), 1.84 - 2.04 (2H, m), 2.24 - 2.36 (1H, mf), 2.81 - 2.93 (1H, m), 3.90 - 4.07 (1H, m), 4.11 - 4.19 (1H, m), 5.95 (1H, s), 7.33 (1H, s).
Priprema 3-jod-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0686]
2
[0687] NIS (1,98 g, 8,81 mmol) dodat je u 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (1,05 g, 7,34 mmol) u acetonitrilu (2 ml). Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 3 h pre nego što je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je zatim razblažen dodatkom EtOAc (100 ml) i redom ispran vodom (75 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 x 75 ml). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 30% EtOAc u petrol etru. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući 3-jod-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (1,0 g, 52%) kao smeđe ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 20 °C) 1.08 (3H, d), 1.58 - 1.72 (1H, m), 1.87 - 2.01 (2H, m), 2.07 - 2.22 (1H, m), 2.64 - 2.71 (1H, m), 3.93 - 4.06 (1H, m), 4.10 - 4.22 (1H, m), 7.47 (1H, s).
Priprema 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0688]
[0689] n-BuLi u heksanu (2,5 M; 0,916 ml, 2,29 mmol) ukapavanjem je dodat u 3-jod-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0,50 g, 1,91 mmol), 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0,532 g, 2,86 mmol), i TMEDA (0,40 ml, 2,7 mmol) u THF-u (20 ml) na -78 °C u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (5 ml) i ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 ml), osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0,60 g, 79%) kao žutu gumu, kontaminiran sa ∼23 mol% 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina na osnovu NMR analize. mlz: ES+ [M+CH3CN+H]+ 304.
2
Primer 66: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0690]
[0691] Anhidrid sirćetne kiseline (0,13 ml, 1,4 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (450 mg, 1,16 mmol), trietilamina (0,34 ml, 2,4 mmol) i DCM-a (10 ml). Reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 4 h. Dodat je silika gel, i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran 0,5% metanolom u etil acetatu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (260 mg, 52%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 - 1.12 (1H, m), 1.17 - 1.37 (3H, m), 1.57 - 1.66 (2H, m), 1.69 - 1.95 (11H, m), 2.56 - 2.65 (1H, m), 2.70 - 2.77 (2H, m), 3.50 - 3.61 (1H, m), 4.21 - 4.45 (2H, m), 7.48 (1H, s), 7.73 (1H, d), 8.05 (1H, s), 8.40 (1H, s), 10.58 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 430.
[0692] Procedure za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1 ,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema etil 1-(5-metoksi-5-oksopentil)-1H-pirazol-5-karboksilata
[0693]
2
[0694] Etil 1H-pirazol-5-karboksilat (9,9 g, 71 mmol) i kalijum karbonat (12 g, 85 mmol) mešani su u DMF-u (70 ml), i dodat je metil 5-brompentanoat (14 g, 71 mmol). Smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 24 h. Dodata je voda, i smeša je ekstrahovana etrom (3x). Kombinovani organski slojevi su kombinovani i isprani vodom (2x), osušeni iznad magnezijum sulfata, i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran 20% etil acetatom u pentanu, dajući etil 1-(5-metoksi-5-oksopentil)-1H-pirazol-5-karboksilat (9 g, 50,1%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.38 (3H, t), 1.54 - 1.75 (2H, m), 1.8 - 1.95 (2H, m), 2.34 (2H, t), 3.65 (3H, s), 4.34 (2H, q), 4.58 (2H, t), 6.83 (1H, d), 7.46 (1H, d). mlz: ES+ [M+H]+ 255. Takođe je izolovan etil 1-(5-metoksi-5-oksopentil)-1H-pirazol-3-karboksilat (7.70 g, 43%).
Priprema metil 4-okso-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-5-karboksilata
[0695]
[0696] Kalijum terc-butoksid (6,29 g, 56,0 mmol) dodat je u etil 1-(5-metoksi-5-oksopentil)-1H-pirazol-5-karboksilat (9,5 g, 37 mmol) u toluenu (200 ml). Smeša je mešana tokom 10 minuta i zatim je zagrevana na 110 °C, dajući gusti talog. Smeša je zagrevana tokom 30 minuta, a zatim ostavljena da se ohladi na r.t. Smeša je neutralisana do pH 7 pomoću razblaženog vodenog rastvora HCl (2 N) i ekstrahovana etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući metil 4-okso-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-5-karboksilat (8,00 g, 103%) kontaminiran analogom etil estra. Ova supstanca je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. mlz: ES+ [M+H]+ 209 (Me estar) i 223 (Et estar).
24
Priprema 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-4-ona
[0697]
[0698] Litijum hlorid (2,60 g, 61,2 mmol) dodat je u rastvor metil 4-okso-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-5-karboksilata (8,50 g, 40,8 mmol, kontaminiran analogom etil estra) u DMSO (50 ml). Smeša je zagrevana na 120 °C tokom 24 h, a zatim ohlađena na r.t. Dodata je voda, i smeša je ekstrahovana etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran 30% etil acetatom u heptanu, dajući 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-4-on (3,50 g, 57%) kao ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.91 - 2.08 (2H, m), 2.08 - 2.28 (2H, m), 2.76 - 2.93 (2H, m), 4.49 - 4.64 (2H, m), 6.86 (1H, d), 7.44 (1H, d).
Priprema 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina
[0699]
[0700] Hidrazin hidrat (5,65 ml, 117 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-4-ona (3,5 g, 23 mmol) rastvorenog u dietilen glikolu (66 ml). Dobijeni rastvor je mešan na 170 °C tokom 1 sata. Reakcija je zatim sklonjena sa toplote i kalijum hidroksid (4,58 g, 81,6 mmol) pažljivo je dodat u smešu. Dobijena suspenzija je mešana na 170 °C tokom 2 h, a zatim ohlađena na r.t. Reakciona smeša je zatim razblažena vodom, zakiseljena do pH 5 pomoću razblažene vodene hlorovodonične kiseline (2 N) i ekstrahovana pomoću Et2O (5 x 50 ml). Kombinovani etarski slojevi su isprani vodom (2 x 20 ml), osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin (2,10 g, 66%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.61 - 1.67 (2H, m), 1.71 - 1.79 (2H, m), 1.80 - 1.87 (2H, m), 2.62 - 2.83 (2H, m), 4.17 - 4.3 (2H, m), 5.98 (1H, d), 7.26 (1H, d).
Priprema 3-jod-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina
[0701]
[0702] NIS (3,47 g, 15,4 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina (2,10 g, 15,4 mmol) rastvoren u acetonitrilu (30 ml) na r.t. Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 16 h. Reakciona smeša je zatim razblažena etrom (50 ml) i redom isprana vodom (2 x 20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 3-jod-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin (3,3 g, 82%) kao narandžasto ulje koje se stvrdnulo nakon stajanja. Ova supstanca je neposredno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.6 - 1.72 (2H, m), 1.73 - 1.82 (2H, m), 1.82 - 1.92 (2H, m), 2.74 - 2.83 (2H, m), 4.25 - 4.35 (2H, m), 7.32 (1H, s).
Priprema 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina
[0703]
[0704] Kompleks izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 12,6 ml, 16,4 mmol) ukapavanjem je dodat tokom 5 minuta u 3-jod-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin (3,30 g, 12,6 mmol) u THF-u (20 ml) na 0 °C u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (3,85 ml, 18, 9 mmol) ukapavanjem je dodat na 0 °C, i reakciona smeša je zatim ostavljena da se zagreva na r.t. preko noći. Reakciona smeša je razblažena etrom (20 ml) i redom isprana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (20 ml), vodom (20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeno ulje je preneto u heptan, što je dovelo do nastanka bele smeše. Ova smeša je filtrirana, dajući 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin (2,00 g, 61%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.29 (12H, s), 1.63 - 1.72 (2H, m), 1.72 - 1.8 (2H, m), 1.80 -1.87 (2H, m), 2.88 - 3.09 (2H, m), 4.20 - 4.33 (2H, m), 7.56 (1H, s).
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0705]
[0706] XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,16 g, 0,21 mmol) dodat je u degasiranu smešu 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina (0,656 g, 2,50 mmol), terc-butil (1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-ilkarbamoil)cikloheksil)karbamata (1,00 g, 2,08 mmol; pripremljen prema primeru 10) i trobaznog kalijum fosfata (1,09 g, 6,25 mmol) u 1,4-dioksanu (20 ml) i vodi (2 ml). Smeša je ponovo degasirana, i mešana je na 85 °C tokom 24 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi, i dodat je silika gel. Ova nova smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran 50% etil acetatom u heptanu, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-
24
pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,70 g, 69%) kao čvrstu supstancu. Ova supstanca je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. mlz: ES+ [M+H]+ 488.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0707]
[0708] TFA (2 ml) uz mešanje je dodat u rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (700 mg, 1,43 mmol) u DCM-u (10 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 24 h, isparljive supstance su uklonjene pod vakuumom, i dobijeni ostatak je prečišćen pomoću jonoizmenjivačke hromatografije koristeći SCX kolonu, eluiranjem 7 N amonijakom u metanolu. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (550 mg, 99%) kao čvrstu supstancu. mlz: ES+ [M+H]+ 388.
Primer 67: N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid
[0709]
[0710] HATU (166 mg, 0,44 mmol) i DIPEA (0,18 ml, 1,0 mmol) redom su dodati u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (150 mg, 0,34 mmol; pripremljen prema primeru 31b) i oksetan-3-karboksilne kiseline (45 mg, 0,44 mmol) u DMF-u (1,2 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 3 h, pa je razblažena zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana pomoću EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena sirova guma je prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep Phenyl OBD, silika gel 5 µ, prečnik 19 mm, dužina 150 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 0,2% amonijum hidroksida, pH 10) i MeCN, dajući N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)-oksetan-3-karboksamid (20 mg).
[0711] Druga reakcija je pripremljena na sledeći način: HATU (140 mg, 0,37 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (150 mg, 0,34 mmol), oksetan-3-karboksilne kiseline (45 mg, 0,44 mmol), DIPEA (0,18 ml, 1.0 mmol) i DMF-a (1,2 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 3 h. Reakcija je razblažena dodatkom EtOAc i isprana zasićenim rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran gradijentom 80 do 100% EtOAc u heksanu, dajući N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (50 mg) kao belu čvrstu supstancu. Ovaj ostatak je kombinovan sa proizvodom iz prve reakcije i ponovo prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep Phenyl OBD, silika gel 5 µ, prečnik 19 mm, dužina 150 mm), dajući N-((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (54 mg, 17%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.10 - 1.26 (1H, m), 1.37 - 1.68 (3H, m), 2.17 - 1.84 (7H, m), 2.37 - 2.22 (1H, m), 2.57 - 2.43 (1H, m), 2.95 (2H, t), 3.67 (1H, tt), 3.85 - 4.00 (1H, m), 4.24 (2H, t), 4.89 - 4.78 (4H, m), 5.52 (1H, br d), 7.93 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.28 (1H, s), 8.60 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 458.
Primeri 68 i 69: Izomer 1 i izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
24
Čisti enantiomeri. Konfiguracija metila je nepoznata za primer 68 i 69, ali je suprotna u primeru 68 u odnosu na 69.
[0713] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (163 g, 0,379 mmol; smeša primera 68 i 69, nepoznat odnos) razdvojen je koristeći uslove SFC (kolona: Chiralpak AS, 5 µm, prečnik 21,2 mm, dužina 250 mm, protok 20 ml/min tokom 7 min), elucija sa 25% metanola u CO2, dajući izomer 1 (3,10 min) (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (65 mg, 28%, primer 68) i izomer 2 (4,09 min) (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (68, 29%, primer 69) kao bele čvrste supstance.
Primer 68, izomer 1:
[0714]<1>H NMR (300MHz, CDCl3, 27 °C) 1.05 - 1.25 (4H, m), 1.65 - 1.33 (4H, m), 1.85 - 2.09 (7H, m), 2.15 - 2.32 (2H, m), 2.38 - 2.53 (1H, m), 2.86 - 3.03 (2H, m), 3.70 (1H, dd), 3.82 -3.97 (1H, m), 4.33 (1H, dd), 5.47 (1H, br d), 7.89 (1H, s), 8.12 (1H, br s), 8.22 (1H, s), 8.27 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 430.
Primer 69, izomer 2:
[0715]<1>H NMR (300MHz, CDCl3, 27 °C) 1.09 - 1.24 (4H, d), 1.34 - 1.58 (4H, m), 1.86 - 2.08 (7H, m), 2.15 - 2.32 (1H, m), 2.41 - 2.51 (1H, m), 2.86 - 3.03 (1H, m), 3.64 - 3.75 (1H, m),
24
3.81 - 3.95 (1H, m), 4.33 (1H, dd), 5.52 (1H, br d), 7.88 (1H, s), 8.15 - 8.21 (2H, m), 8.27 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 430.
Uslovi analitičke SFC:
[0716]
[0717] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema 6-metilpirazolo[1,5-a]piridina
[0718]
[0719] Dioksan (32 ml) i voda (6,0 ml) dodati su u kalijum karbonat (1,82 g, 13,2 mmol), 2,4,6-trimetil-1,3,5,2,4,6-trioksatriborinan (1,9 ml, 13 mmol) i 6-brompirazolo[1,5-a]piridin (1,3 g, 6,60 mmol). Reakciona suspenzija je degasirana azotom. Dodat je RuPhos pretkatalizator 3.
24
generacije (0,27 g, 0,33 mmol), i reakciona smeša je potopljena u uljano kupatilo koje je prethodno zagrejano na 100 °C. Reakcija je održavana u tim uslovima tokom 4 h i zatim ohlađena na r.t. Dobijena smeša je filtrirana, i filtrat je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeno ulje je prečišćeno pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 5 do 40% etil acetata u heksanu, dajući 6-metilpirazolo[1,5-a]piridin (0,680 g, 78%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 2.29 (3H, s), 6.53 (1H, dd), 7.07 (1H, dd), 7.60 (1H, d), 7.90 (1H, d), 8.49 - 8.52 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 133.
Priprema 6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0720]
[0721] Metanol (45 ml) i sirćetna kiselina (0,5 ml) dodati su u balon napunjen 6-metilpirazolo[1,5-a]piridinom (0,71 g, 5,4 mmol) i platina(IV) oksidom (0,12 g, 0,54 mmol). Balon je produvan azotom, evakuisan i zatim izložen atmosferi vodonika (balon). Reakcija je mešana na 35 °C tokom 18 h i zatim filtrirana kroz sloj Celite®. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i zatim razblažen dietil etrom. Smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0,71 g, 97%) kao beličastu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.1 (3H, d), 1.50 (1H, dtd), 1.92 - 2.01 (1H, m), 2.08 - 2.27 (1H, m), 2.64 - 2.80 (1H, m), 2.87 - 2.96 (1H, m), 3.64 (1H, dd), 4.27 (1H, ddd), 5.99 (1H, s), 7.39 (1H, d). mlz: ES+ [M+H]+ 137.
Priprema 3-jod-6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0722]
24
[0723] NIS (1,16 g, 5,14 mmol) dodat je u rastvor 6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (0,70 g, 5,14 mmol) u acetonitrilu (12 ml) na r.t. Reakcija je mešana u tim uslovima tokom 18 h i zatim razblažena dodatkom EtOAc. Dobijena smeša je isprana vodom, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (4 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta guma je prečišćena pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 5 do 50% etil acetata u heksanu, dajući 3-jod-6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (1,10 g, 82%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.15 (3H, d), 1.42 - 1.61 (1H, m), 1.90 - 2.07 (1H, m), 2.08 - 2.22 (1H, m), 2.52 - 2.60 (1H, m), 2.75 - 2.86 (1H, m), 3.65 (1H, dd), 4.26 (1H, dd), 7.49 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 263.
Priprema 6-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0724]
[0725] Tetrahidrofuran (3 ml) dodat je u balon napunjen 3-jod-6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridinom (0,40 g, 1,53 mmol). Reakciona smesa je potopljena u ledeno kupatilo, i ukapavanjem je dodat kompleks izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 1,5 ml, 2,0 mmol). Reakcija je održavana između 0 i 3 °C tokom 30 min. Zatim je pomoću šprica dodat 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0,426 g, 2,29 mmol), i ledeno kupatilo je uklonjeno. Reakcija je održavana u tim uslovima tokom 18 h i zatim razblažena zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida. Smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc (3x), i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući 6-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-
24
dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0,186 g). Ova supstanca je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. mlz: ES+ [M+H]+ 263.
Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0726]
Smeša iz primera 68 i 69, nepoznat odnos
[0727] 1,4-dioksan (5 ml) i voda (0,63 ml) dodati su u balon napunjen (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamidom (0,23 g, 0,55 mmol; pripremljen prema primeru 12) i 6-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridinom (0,19 g, 0,71 mmol). Reakciona smeša je evakuisana i produvana azotom. Zatim su dodati cezijum karbonat (0,444 g, 1,36 mmol) i PdCl2(dppf) (0,040 g, 0,05 mmol). Reakcija je stavljena u uljano kupatilo prethodno zagrejano na 95 °C, i reakcija je održavana u tim uslovima tokom 2 h. Reakcija je zatim ohlađena na r.t. i filtrirana kroz Celite® koristeći ispiranje etil acetatom. Filtrat je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, i organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijena siva čvrsta supstanca je prečišćena pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 1 do 10% metanola u etil acetatu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,16 g, 69%).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.99-1.15 (4H, m), 1.20 -1.33 (3H, m), 1.37 - 1.48 (1H, m), 1.68 - 1.77 (6H, m), 1.81 - 1.92 (2H, m), 2.10 - 2.20 (1H, m), 2.54-2.62 (1H, m), 2.79 - 2.87 (2H, m), 3.48 - 3.61 (1H, m), 3.65 (1H, dd), 4.26 (1H, dd), 7.73 (1H, br d), 7.76 (1H, s), 8.15 (1H, s), 8.38 (1H, s), 10.58 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 430.
2
Primer 70 i primer 71: Priprema izomera 1 i izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0728]
Čisti enantiomeri. Konfiguracija metoksi je nepoznata za primere 70 i 71, ali je suprotna u primeru 70 u odnosu na primer 71.
[0729] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (100 mg, 0,22 mmol) razdvojen je pomoću preparativne HPLC (kolona Chiralpak IA, 5 µm, prečnik 20 mm, dužina 250 mm, temperatura kolone 25 °C, protok 15 ml/min), eluiran izokratskim 50% etanolom u heksanu tokom 22 min, dajući brže eluirajući (10,8 min) izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,030 g, 30%) i sporije eluirajući (17,9 min) izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,030 g, 30%) kao bele čvrste supstance.
Primer 70, izomer 1:
[0730]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 19 °C) 1.00 - 1.14 (1H, m), 1.20 - 1.34 (3H, m), 1.72 -1.80 (6H, m), 1.84 - 1.97 (2H, m), 2.07 - 2.19 (1H, m), 2.56 - 2.66 (1H, m), 2.70 - 2.92 (2H, m), 3.36 (3H, s), 3.48 - 3.63 (1H, m), 3.93 - 4.02 (1H, m), 4.23 (2H, d), 7.76 - 7.83 (2H, m), 8.15 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.64 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 446.
2 1
Primer 71, izomer 2:
[0731]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 19 °C) 1.00 - 1.17 (1H, m), 1.19 - 1.35 (3H, m), 1.72 -1.80 (6H, m), 1.85 - 1.97 (2H, m), 2.06 - 2.19 (1H, m), 2.55 - 2.63 (1H, m), 2.71 - 2.92 (2H, m), 3.36 (3H, s), 3.50 - 3.62 (1H, m), 3.93 - 4.02 (1H, m), 4.23 (2H, d), 7.76 - 7.83 (2H, m), 8.16 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.64 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 446.
Uslovi analitičke SFC:
[0732]
[0733] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan
karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema 6-metoksipirazolo[1,5-a]piridina
[0734]
2 2
[0735] Cezijum karbonat (3,31 g, 10,2 mmol) dodat je u 6-brompirazolo[1,5-a]piridin (1,00 g, 5,08 mmol), MeOH (0,41 ml, 10 mmol), paladijum acetat (0,057 g, 0,25 mmol) i 2-(di-1-adamantilfosfino)-3,6-dimetoksi-2',4'6'-triizopropil-1,1'-bifenil (AdBrettPhos; 0,14 g, 0,25 mmol) u toluenu (10 ml). Dobijena smeša je mešana na 90 °C tokom 2 h. Prethodna reakcija je ponovljena u zasebnoj reakciji. Nakon što su obe reakcije ohlađene, one su kombinovane, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 20% EtOAc u petrol etru. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući 6-metoksipirazolo[1,5-a]piridin (0,83 g, 55%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 3.82 (3 H, s), 6.54 (1 H, s), 7.01 (1 H, d), 7.61 (1 H, d), 7.87 (1 H, s), 8.38 (1 H, s).
Priprema 6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0736]
[0737] 6-metoksipirazolo[1,5-a]piridin (0,36 g, 2,4 mmol) i paladijum na ugljeniku (10 mas.%; 0,078 g, 0,73 mmol) u MeOH (50 ml) mešani su u atmosferi vodonika na 20 atm i 80 °C tokom 16 h. Smeša je filtrirana kroz sloj Celite®, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen dodatkom EtOAc (25 ml) i redom ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (25 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0,30 g, 81%) kao žutu voskastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20 °C) 1.85 - 1.94 (1H, m), 1.98 - 2.09 (1H, m), 2.71 - 2.78 (2H, m), 3.32 (3H, s), 3.89 (1H, m), 4.02 - 4.18 (2H, m), 5.97 (1H, d), 7.34 (1H, d).
Priprema 3-jod-5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
2
[0739] NIS (0,559 g, 2,48 mmol) dodat je u 5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0,27 g, 1,77 mmol) u acetonitrilu (10 ml). Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 30 minuta.
[0740] Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je razblažen dodatkom EtOAc (25 ml). Ova nova smeša je redom isprana vodom (25 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 30% EtOAc u petrol etru. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući 3-jod-5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0,40 g, 81%) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 21°C) 1.78 - 1.99 (1H, m), 2.02 - 2.23 (1H, m), 2.53 - 2.60 (2H, m), 3.34 (3H, s), 3.82 - 3.96 (1H, m), 4.07 - 4.26 (2H, m), 7.48 (1H, s).
Priprema 6-metoksi-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0741]
[0742] n-BuLi (0,805 ml, 2,01 mmol) dodat je u 3-jod-6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0,4 g, 1,44 mmol), 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0,401 g, 2,16 mmol), i TMEDA (0,30 ml, 2,0 mmol) u THF-u (20 ml) ohlađen na -78 °C u atmosferi azota. Dobijena smeša je održavana na -78 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je zatim deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (200 ml),
2 4
ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 150 ml), organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 6-metoksi-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0,400 g, 100%) kao bezbojnu gumu, kontaminiranu sa 14 mas.% des-jod polazne supstance (NMR analiza). Ova supstanca je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0743]
[0744] XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,049 g, 0,06 mmol) dodat je u 6-metoksi-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0,387 g, 1,25 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,3 g, 0,63 mmol; pripremljen prema primeru 10) i cezijum karbonat (0,611 g, 1,88 mmol) u dioksanu (10 ml) i vodi (1 ml) u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 100 °C tokom 1 sata, i reakciona smeša je zatim ohlađena i razblažena dodatkom EtOAc (200 ml). Dobijena smeša je redom isprana vodom (200 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (200 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 60% EtOAc u petrol etru. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,14 g, 44%) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 504.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
2
[0746] TFA (4 ml, 51,92 mmol) dodat je u terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,14 g, 0,28 mmol) u DCM-u (10 ml). Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 1 sata. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid kao so di-trifluorsirćetne kiseline (0,15 g, 98%) i žutu gumu. m/z: ES+ [M+H]+ 404.
Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0747]
Smeša primera 70 i 71, nepoznat odnos.
[0748] Anhidrid sirćetne kiseline (0,023 ml, 0,25 mmol) dodat je u (1S,3R)-3-amino-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (so di-trifluorsirćetne kiseline; 0,15 g, 0,25 mmol) i TEA (0,17 ml, 1,2 mmol) u DCM-u (5 ml). Dobijena smeša je mešana na r.t. tokom 16 h. Reakcija je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, i sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona XBridge Prep C18 OBD, prečnik 21,2 mm, dužina 250 mm), koristeći kao eluent smešu
2
opadajuće polarnosti vode (sa 0,1% NH4HCO3) i MeCN. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (0,100 g, 91%; smeša primera 70 i 71) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 446.
Primer 72 i primer 73: Priprema izomera 1 i izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0749]
Čisti enantiomeri. Konfiguracija metoksi je nepoznata za primere 72 i 73, ali je suprotna u primeru 72 u odnosu na primer 73
[0750] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (120 mg, 0,270 mmol; pripremljen prema procedurama iz primera 70 i 71, pri čemu 5-brompirazolo[1,5-a]piridin zamenjuje 6-brompirazolo[1,5-a]piridin), razdvojen je pomoću preparativne HPLC (kolona Chiralpak ID, 5 µm, prečnik 20 mm, dužina 250 mm, temperatura kolone 25 °C, protok 15 ml/min), eluiranje izokratskim 50% etanolom u heksanu tokom 31 min, dajući brže eluirajući (16,0 min) izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,040 g, 33,3%) i sporije eluirajući (24,8 min) izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (0,040 g, 33,3%) kao bele čvrste supstance.
2
Primer 72, izomer 1:
[0751]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 19 °C) δ 1.03 - 1.14 (1H, m), 1.19 - 1.35 (3H, m), 1.65 - 1.84 (6H, m), 1.84 - 1.94 (1H, m), 2.16 - 2.25 (2H, m), 2.56 - 2.66 (1H, m), 2.83 - 2.94 (1H, m), 2.97 - 3.08 (1H, m), 3.29 (3H, s), 3.50 - 3.63 (1H, m), 3.82 - 3.91 (1H, m), 4.06 - 4.24 (2H, m), 7.77 (1H, s), 7.80 (1H, d), 8.13 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.64 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 446.
Primer 73, izomer 2:
[0752]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 19 °C) δ 1.00 - 1.14 (1H, m), 1.19 - 1.35 (3H, m), 1.72 - 1.81 (6H, m), 1.84 - 1.92 (1H, m), 2.16 - 2.25 (2H, m), 2.56 - 2.66 (1H, m), 2.83 - 2.93 (1H, m), 3.03 (1H, m), 3.29 (3H, s), 3.48 - 3.62 (1H, m), 3.82 - 3.91 (1H, m), 4.06 - 4.24 (2H, m), 7.77 (1H, s), 7.80 (1H, d), 8.13 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.64 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 446.
Uslovi analitičke SFC:
[0753]
Primer 74: Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
2
[0755] Anhidrid sirćetne kiseline (0,11 ml, 1,1 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (350 mg, 0,94 mmol), trietilamina (0,28 ml, 2,0 mmol) i DCM-a (10 ml). Reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 4 h. Dodat je silika gel, i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni adsorbovani ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluent 0,5% metanol u etil acetatu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (200 mg, 51%) kao beličastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.03 - 1.07 (1H, m), 1.30 (3H, m), 1.57 - 1.96 (13H, m), 2.56 - 2.62 (1H, m), 2.68 -2.93(2H, m), 3.47 - 3.66 (1H, m), 4.19 - 4.4 (2H, m), 7.49 (1H, d), 7.73 (1H, d), 8.09 (1H, d), 8.32 (1H, d), 10.48 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 414.
[0756] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina
[0757]
2
[0758] 2-hlor-5-fluor-4-jodpiridin (1,064 g, 4,13 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin (1,30 g, 4,96 mmol; pripremljen prema primeru 66), XPhos pretkatalizator 2. generacije (0,325 g, 0,41 mmol) i dvobazni kalijum fosfat (2,16 g, 12,4 mmol) rastvoreni su u degasiranom dioksanu (20 ml) i vodi (1 ml) na 21 °C. Smeša je mešana na 90 °C tokom 24 h i zatim ohlađena. Smeša je razblažena dodatkom EtOAc (30 ml), isprana vodom (10 ml) i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 50% EtOAc u heptanu. Frakcije proizvoda su uparene do suva, dajući 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin (0,650 g, 59%) kao ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.62 - 1.94 (6H, m), 2.77 - 2.88 (2H, m), 4.29 - 4.4 (2H, m), 7.22 (1H, d), 7.50 (1H, d), 8.25 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 266.
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0759]
[0760] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0,30 g, 0,26 mmol) dodat je u degasiranu smešu 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina (0,700 g, 2,63 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamata (0,638 g, 2,63 mmol; pripremljen prema primeru 25), 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)ksantena (0,305 g, 0,53 mmol) i cezijum karbonata (2,58 g, 7,90 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml). Dobijena smeša je produvana tokom 5 min u atmosferi azota, i dobijena suspenzija je podvrgnuta zagrevanju mikrotalasima (120 °C, 17 h). Reakciona smeša je ohlađena i raspodeljena između vode (20 ml) i etil acetata (100 ml), pa je filtrirana. Slojevi su razdvojeni i organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom, adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiranje 50% EtOAc u heptanu. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući sirovi terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-
2
il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,90 g, 72%) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0761]
[0762] TFA (1 ml) dodata je u rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (600 mg, 1,27 mmol) u DCM-u (10 ml). Smeša je mešana na r.t. tokom 24 h, i reakcija je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću jonoizmenjivačke hromatografije koristeći SCX kolonu i eluiranje 7 N amonijakom u metanolu. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluor-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (350 mg, 74%) kao belu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 372.
Primer 75: Priprema (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)-3-(2-hidroksiacetamido)cikloheksan karboksamida
[0763]
2 1
[0764] Cezijum karbonat (436 mg, 1,34 mmol) i XPhos pretkatalizator 2. generacije (35 mg, 0,04 mmol) dodati su u degasiranu smešu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (168 mg, 0,470 mmol; pripremljen prema primeru 23) i (1S,3R)-3-(2-hidroksiacetamido)-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (186 mg, 0,45 mmol) u 1,4-dioksanu (3,7 ml) i vodi (0,7 ml), dajući bezbojni rastvor. Reakcija je mešana na 85 °C tokom 18 h i zatim ohlađena i razblažena dodatkom EtOAc (50 ml). Ova nova smeša je isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Vodeni slojevi su ekstrahovani pomoću EtOAc (2 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiranje 10% MeOH u DCM-u, dajući (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)-3-(2-hidroksiacetamido)cikloheksan karboksamid (78 mg, 41%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.18 - 1.38 (9H, m), 1.46 (1H, q), 1.65 - 1.92 (4H, m), 2.32 (3H, s), 2.57 - 2.67 (1H, m), 2.85 (2H, s), 3.58 - 3.72 (1H, m), 3.78 (1H, d), 3.93 (2H, s), 5.36 (1H, t), 7.54 (1H, d), 7.77 (1H, s), 8.07 (1H, s), 8.13 (1H, 2), 10.27 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 426.
Optička rotacija:
[0765]
[0766] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-(2-hidroksiacetamido)-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
2 2
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0767]
[0768] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 2 ml, 8 mmol) dodata je u terc-butil ((1R,3S)-3-((4-jod-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (530 mg, 1,15 mmol; pripremljen prema primeru 47) u MeOH (11 ml), dajući bezbojni rastvor. Reakcija je mešana tokom 2 h na r.t. i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (550 mg) u obliku dihidrohlorida, kao belu čvrstu supstancu. Ova čvrsta supstanca je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.11 - 1.36 (3H, m), 1.49 (1H, q), 1.76 - 1.88 (2H, m), 1.88 - 1.89 (1H, m) 2.04 (1H, d), 2.30 (3H, s), 2.54 - 2.67 (1H, m), 2.94 - 3.07 (1H, m), 8.03 (3H, br. s), 8.17 (1H, s), 8.61 (1H, s), 10.58 (1H, br. s). Detektovan je jedan ekvivalent HCl, pretpostavljeno je da je drugi sakriven ispod širokog pika HOD na 5,9 ppm. m/z: ES+ [M+H]+ 360.
Priprema (1S,3R)-3-(2-hidroksiacetamido)-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0769]
[0770] HATU (328 mg, 0,86 mmol) dodat je u smešu (1S,3R)-3-amino-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (228 mg, 0,53 mmol), 2-hidroksisirćetne kiseline (66 mg, 0,86 mmol), TEA (0,24 ml, 1,7 mmol), DMF (2,8 ml) i DCM (2,8 ml). Reakcija je mešana na r.t. u atmosferi azota tokom 5 h, i zatim koncentrovana pod
2
sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prenet u DCM i ispran vodom (4 x 25 ml) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiranje sa 0 do 10% metanola u DCM-u, dajući (1S,3R)-3-(2-hidroksiacetamido)-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (186 mg, 52%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.17 - 1.34 (3H, m) 1.43 (1H, q) 1.60 - 1.91 (4H, m) 2.28 (3H, s), 2.54 - 2.69 (1H, m), 3.56 - 3.72 (1H, m), 3.78 (2H, d), 5.36 (1H ,t) 7.55 (1H, d) 8.16 (1H, s) 8.61 (1H, s) 10.45 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 418.
Primer 76: Priprema N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida
[0771]
[0772] Cezijum karbonat (247 mg, 0,76 mmol) i XPhos pretkatalizator 2. generacije (20 mg, 0,03 mmol) dodati su u degasiranu smešu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (90 mg, 0,25 mmol; pripremljena prema primeru 23) i N-((1R,3S)-3-((4-jod-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida (112 mg, 0,25 mmol) u 1,4-dioksanu (2,1 ml) i vodi (0,4 ml). Reakcija je mešana na 85 °C tokom 18 h, ohlađena na r.t. i zatim razblažena dodatkom EtOAc (50 ml). Smeša je isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Kombinovani organski slojevi su ekstrahovani pomoću EtOAc (2 x 50 ml), i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiranje sa 10% MeOH u DCM-u, dajući beličastu čvrstu supstancu (72 mg). Ova supstanca je ponovo prečišćena pomoću fleš hromatografije na silika gelu, 0 do 10% metanola u DCM-u, dajući N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-
2 4
metilpiridin-2il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (50 mg, 44%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.00 - 1.17 (1H, m), 1.21 - 1.37 (9H, m) 1.68 - 1.84 (3H, m), 1.89 (1H, br d), 2.33 (3H, s), 2.55 - 2.67 (1H, m), 2.84 (2H, s), 3.53 - 3.74 (2H, m), 3.93 (2H, s), 4.54 - 4.65 (4H, m), 7.73 - 7.84 (2H, m), 8.07 (1H, s), 8.14 (1H, s), 10.28 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 452.
Optička rotacija:
[0773]
[0774] Procedure za pripremu polazne supstance N-((1R,3S)-3-((4-jod-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida su opisane u nastavku:
Priprema N-((1R,3S)-3-((4-jod-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida
[0775]
2
[0776] HATU (219 mg, 0,58 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(4-jod-5-metilpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid dihidrohlorida (228 mg, 0,53 mmol; pripremljen prema primeru 75), oksetan-3-karboksilne kiseline (59 mg, 0,58 mmol), TEA (0,24 ml, 1,7 mmol), DCM (2,8 ml) i DMF (2,8 ml), dajući bezbojni rastvor. Reakcija je vremenom požutela; nakon 4 h na r.t., reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom i zatim razblažena dodatkom DCM. Smeša je isprana vodom (3 x 50 ml), osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni, eluiranje sa 0 do 10% MeOH i DCM, dajući N-((1R,3S)-3-((4-jod-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (112 mg, 47%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.99 - 1.17 (1H, m), 1.20 - 1.37 (3H, m), 1.70 - 1.83 (3H, m), 1.84 - 1.94 (1H, m), 2.29 (3H, s), 2.54 - 2.64 (1H, m), 3.55 - 3.73 (2H, m), 4.54 - 4.64 (4H, m), 7.81 (1H, d), 8.16 (1H, s), 8.61 (1H, s), 10.45 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 444.
Primer 77: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0777]
[0778] U rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (150 mg, 0,42 mmol), trietilamina (0,12 ml, 0,89 mmol) u DCM-u (10 ml) uz mešanje je dodat anhidrid sirćetne kiseline (0,048 ml, 0,51 mmol). Reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 4 h. Dodat je silika gel, i isparljive supstance su uklonjene pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiran 0,5% metanolom u etil acetatu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (140 mg, 83%) kao beličastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.04 - 1.11 (1H, m), 1.22 -1.35 (3H, m), 1.7 - 1.94 (9H, m), 1.99 - 2.08 (2H, m), 2.23 (3H, s), 2.55 - 2.63 (1H, m), 2.75
2
(2H, t), 3.51 - 3.61 (1H, m), 4.13 (2H, t), 7.62 (1H, s), 7.72 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.16 (1H, s), 10.27 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 396.
[0779] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-amino-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema terc-butil ((1R,3S)-3-((5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0780]
[0781] XPhos pretkatalizator 2. generacije (86 g, 0,11 mmol) dodat je u degasiranu smešu 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (324 mg, 1,31 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-((4-jod-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (500 mg, 1,09 mmol, pripremljen prema primeru 47, intermedijer) i trobaznog kalijum fosfata (569 mg, 3,27 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml) i vodi (1 ml). Smeša je degasirana, i mešana je na 85 °C tokom 24 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je ohlađena, i dodat je silika gel. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, eluiranjem izokratskim 60% etil acetatom u heptanu, dajući tercbutil ((1R,3S)-3-((5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (220 mg, 45%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) 1.05-1.14 (1H, m), 1.21 - 1.31 (3H, m), 1.38 (9H, s), 1.69 - 1.94 (7H, m), 1.96 - 2.08 (2H, m), 2.23 (3H, s), 2.54 - 2.61 (1H, m), 2.75 (2H, t), 4.13 (2H, t), 6.75 (1H, br d), 7.62 (1H, s), 7.96 (1H, s), 8.16 (1H, s), 10.25 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 454.
Priprema (1S,3R)-3-amino-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
2
[0783] TFA (1 ml) dodat je u terc-butil ((1R,3S)-3-((5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (200 mg, 0,44 mmol) u DCM-u (10 ml). Smeša je mešana na r.t. tokom 24 h, i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću jonoizmenjivačke hromatografije koristeći SCX kolonu, eluiranjem 7 N amonijakom u metanolu. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-amino-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (150 mg, 96%) kao belu čvrstu supstancu. Ova supstanca je neposredno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+ [M+H]+ 354.
Primer 78: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(7-hidroksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0784]
Nepoznata smeša dijastereomera kao hidroksi konfiguracija je nepoznata.
[0785] Piridin sumpor trioksid (40 mg, 0,25 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-(4-hidroksibutil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida (100 mg,
2
0,23 mmol, pripremljen u primeru 78a) u DCM:DMSO 2:1 (4 ml) na 0 °C. Nakon 2 h na 0 °C, reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 15% MeOH u DCM-u sa 0,2% trietilamina, dajući belu čvrstu supstancu. Ova čvrsta supstanca je triturirana sa 10% DCM u heksanu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(7-hidroksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (74 mg, 74%) kao belu penastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.98 - 1.11 (1H, m), 1.18 - 1.41 (3H, m), 1.70 - 1.81 (6H, m), 1.85 - 2.18 (4H, m), 2.56 - 2.66 (1H, m), 2.67 - 2.91 (2H, m), 3.49 -3.67 (1H, m), 4.23 - 4.40 (1H, m), 5.54 - 5.73 (1H, m), 6.87 (1H, d), 7.75 (1H, d), 7.81 (1H, s), 8.15 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.59 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 432.
Primer 78a: Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-(4-hidroksibutil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0786]
[0787] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 2,2 ml, 8,8 mmol) dodata je u rastvor (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (300 mg, 0,44 mmol) u metanolu (3 ml). Reakcija je mešana tokom 2 h na r.t. i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen vodom (40 ml) i zalužen natrijum bikarbonatom. Smeša je zatim zasićena natrijum hloridom i ekstrahovana etil acetatom (5x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 30% metanola u DCM-u, dajući sirovi (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-(4-hidroksibutil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid (163 mg, 83%) kao gumu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.02 - 1.23 (1H, m), 1.24 - 1.47 (5H, m),
2
1.52 - 1.66 (2H, m), 1.75 - 1.88 (6H, m), 1.88 - 1.97 (1H, m), 2.59 - 2.76 (3H, m), 3.35 - 3.43 (2H, m), 3.54 - 3.68 (1H, m), 4.25 - 4.39 (1H, m), 7.66 (0.6H, s), 7.79 (1H, d), 7.92-8.02 (0.4H, m), 8.12-8.21 (1H, m), 8.43 (1H, s), 10.62 (1H, s), 12.91 (0.4H, br s), 12.98 (0.6H, br s) - 2:3 odnos pirazolnih tautomera. m/z: ES+ [M+H]+ 434.
[0788] (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksankarboksamid, koji je korišćen kao polazna supstanca, pripremljen je na sledeći način:
Priprema 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0789]
[0790] NaH (60% mas. u mineralnom ulju; 1,85 g, 46,3 mmol) u porcijama je dodat u 1H-pirazol (3,0 g, 44,1 mmol) u THF-u (30 ml) na 5 °C tokom 10 minuta u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na 5 °C tokom 30 minuta. Zatim je SEM-Cl (8,2 ml, 46 mmol) ukapavanjem dodat u reakciju. Dobijena smeša je mešana na 5 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je zatim razblažena vodom (50 ml) i zatim isprana sa Et2O (3 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (6,5 g, 78%) kao bledožuto ulje.
<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (s, 9 H), 0.79 - 0.95 (2H, m), 3.48 - 3.62 (2H, m), 5.45 (2H, s), 6.36 (1H, t), 7.56 (1H, d), 7.91 (1H, d).
Priprema 5-brom-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0791]
2
[0792] Litijum magnezijum 2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-id dihlorid (25,2 ml, 27,7 mmol) ukapavanjem je dodat u 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-prazol (5 g, 25 mmol) u THF-u (30 ml) na 21 °C u atmosferi azota. Dobijena suspenzija je mešana na 21 °C tokom 1 sata. Nakon 1,5 h, reakcija je ohlađena na 0 °C, i zatim je dodat 1,2-dibrom-1,1,2,2-tetrahloretan (8,21 g, 25,2 mmol). Ledeno kupatilo je uklonjeno, i smeša je ostavljena da se zagreva na r.t. Nakon 18 h, reakciona smeša je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i ekstrahovana etil acetatom (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 40% etil acetata u heksanu, dajući 5-brom-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (4,2 g, 60%) kao smeđe ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.88 - 0.96 (2H, m), 3.61 (2H, t), 5.49 (2H, s), 6.58 (1H, d), 7.67 (1H, d).
Priprema 5-(pent-4-en-1-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0793]
[0794] RuPhos pretkatalizator 3. generacije (0,247 g, 0,30 mmol) dodat je u degasiranu smešu 5-brom-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (4,1 g, 15 mmol), pent-4-en-1-ilboronske kiseline (2,19 g, 19,2 mmol) i cezijum karbonata (9,64 g, 29,6 mmol) u 1,4-dioksanu (120 ml), i reakcija je mešana na 90 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je ohlađena na r.t. i zatim razblažena vodom. Dodat je vodeni rastvor natrijum bikarbonata, i dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum
2 1
sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 50% etil acetata u heksanu, dajući 5-(pent-4-en-1-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (2,2 g, 55%) kao svetložuto ulje.
<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.75 - 0.93 (2H, m), 1.66 - 1.88 (2H, m), 2.15 (2H, q), 2.61 - 2.85 (2H, m), 3.44 - 3.61 (2H, m), 4.92 - 5.22 (2H, m), 5.43 (2H, s), 5.89 (1H, ddt), 6.18 (1H, d), 7.42 (1H, d).
Priprema 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)butanala
[0795]
[0796] 5-(pent-4-en-1-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (2,14 g, 8,03 mmol) rastvoren je u DCM-u (40 ml) i ohlađen na -78 °C. Ozon je produvan kroz rastvor tokom 12 minuta. Reakcija je zatim pročišćena od ozona koristeći mlaz azota, i dodat je trifenilfosfin (2,11 g, 8,03 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreva na r.t. i održavana je u tim uslovima tokom 18 h, pa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 50% etil acetata u heksanu, dajući 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)butanal (1,34 g, 62%) kao ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.76 - 0.94 (2H, m), 1.81 - 2.01 (2H, m), 2.57 - 2.60 (2H, m), 2.73 (2H, t), 3.42 - 3.64 (2H, m), 5.43 (2H, s), 6.20 (1H, d), 7.43 (1H, d), 9.74 (1H, t).
Priprema 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)butan-1-ola
[0797]
2 2
[0798] Natrijum borhidrid (0,372 g, 9,84 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)butanala (1,32 g, 4,92 mmol) u metanolu (20 ml) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana tokom 1 h u tim uslovima. Reakcija je zatim razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi ostatak je filtriran kroz čep silika gela uz eluciju etil acetatom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)butan-1-ol (1,1 g, 85%) kao svetlosmeđe ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.86 (2H, t), 1.43 - 1.59 (2H, m), 1.61 - 1.79 (2H, m), 2.72 (2H, t), 3.39 - 3.64 (4H, m), 4.43 (1H, t), 5.42 (2H, s), 6.16 (1H, d), 7.42 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 271.
Priprema 5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0799]
[0800] TBS-Cl (0,94 g, 6,2 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)butan-1-ola (1,1 g, 4,1 mmol) i imidazola (0,85 g, 12 mmol) u DCM-u (20 ml) na 0 °C, i reakcija je mešana na r.t. tokom 18 h. Reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 40% etil acetata u heksanu, dajući 5-(4-((tercbutildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (1,5 g, 96%)
2
kao ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.09 (6H, s), 0.81 - 0.89 (2H, m), 0.92 (9H, s), 1.49 - 1.62 (2H, m), 1.65 - 1.80 (2H, m), 2.73 (2H, t), 3.47 - 3.61 (2H, m), 3.67 (2H, t), 5.43 (2H, s), 6.15 (1H, d), 7.42 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 385.
Priprema 5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-4-jod-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0801]
[0802] NIS (0,89 g, 4,0 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 5-(4-((tercbutildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (1,5 g, 4,0 mmol) u DCM-u (25 ml) na 0 °C. Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakcija je mešana tokom 18 h u tim uslovima. Reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 50% etil acetata u heksanu, dajući 5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-4-jod-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (1,7 g, 85%) kao gumu.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.07 (6H, s), 0.82 - 0.88 (2H, m), 0.91 (9H, s), 1.45 - 1.74 (4H, m), 2.75 (2H, t), 3.48 - 3.60 (2H, m), 3.64 (2H, t), 5.48 (2H, s), 7.55 (1H, s).
Priprema 5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0803]
2 4
[0804] THF (16 ml) dodat je u 5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-4-jod-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (800 mg, 1,57 mmol). Reakcija je ohlađena na 0 °C, i ukapavanjem je dodat kompleks izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 1,57 ml, 2,04 mmol). Reakcija je održavana u tim uslovima tokom 30 minuta. Zatim je ukapavanjem dodat 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0,48 ml, 2,3 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreva na r.t. i zatim je mešana u tim uslovima tokom 18 h. Reakcija je razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prenet u sledeći korak bez prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 0.00 (9H, s), 0.05 (6H, s), 0.83 - 0.91 (11H, m), 1.30 (12H, s), 1.45 - 1.55 (2H, m), 1.55 - 1.69 (2H, m), 2.89 (2H, t), 3.48 - 3.69 (4H, m), 5.44 (2H, s), 7.54 (1H, s).
Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0805]
2
[0806] XPhos pretkatalizator 2. generacije (28 mg, 0,04 mmol) dodat je u degasiranu smešu (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (300 mg, 0,71 mmol; pripremljen prema primeru 12), 5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (472 mg, 0,92 mmol) i Cs2CO3(695 mg, 2,13 mmol) u 1,4-dioksanu (4 ml) i vodi (1 ml). Reakciona smeša je mešana na 90 °C tokom 3 h, i zatim ohlađena i razblažena zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Smeša je ekstrahovana etil acetatom (2x) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% metanola u DCM-u, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(4-((tercbutildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (423 mg, 88%) kao svetložutu gumu (HPLC čistoća: 91%).<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) -0.08 (6H, s), -0.05 - -0.02 (9H, m), 0.75 - 0.79 (9H, m), 0.80 - 0.88 (2H, m), 1.04-1.16 (1H, m), 1.20 - 1.40 (5H, m), 1.42 - 1.62 (2H, m), 1.76 (6H, s), 1.90 (1H, d), 2.54 - 2.67 (1H, m), 2.76 (2H, t), 3.40 - 3.48 (2H, m), 3.51 - 3.62 (3H, m), 5.48 (2H, s), 7.62 (1H, s), 7.74 (1H, d), 8.12 (1H, s), 8.40 (1H, s), 10.62 (1H, s). Multiplet na 1,04–1,16 ppm delimično je zaklonjen nečistoćama pinakola. m/z: ES+ [M+H]+ 678.
Primeri 79 i 80: Izomer 1 i izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0807]
Čisti enantiomeri. Konfiguracija hidroksi je nepoznata za primer 79 i 80, ali je suprotna u primeru 79 u odnosu na primer 80
2
[0808] (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (180 mg, 0,32 mmol) razdvojen je na dijastereomerne komponente koristeći uslove SCF (kolona: Chiralpak AS, 5 µm, prečnik 21,2 mm, dužina 250 mm, protok 75 ml/min tokom 8 min), elucija 20% izopropanolom u CO2, dajući brže eluirajući izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (49 mg, 27%) kao prozirni film, i sporije eluirajući izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (42 mg, 22%) kao prozirni film.
[0809] Svaki izomer je zatim deprotektovan na sledeći način: Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 0,500 ml, 14,40 mmol) ukapavanjem je dodata u rastvor izomera 1 (49 mg) ili izomera 2 (42 mg) (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida u THF-u (2 ml). Dobijeni bezbojni rastvor je mešan na r.t. tokom 18 h, i zatim razblažen pomoću EtOAc (10 ml). Dobijena smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana pomoću EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu, pa je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% metanola u DCM-u, dajući izomer 1 (26 mg, 67%) ili izomer 2 (16 mg, 48%) (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(4-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamida kao belu čvrstu supstancu.
Primer 79, izomer 1:
[0810]<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.01 - 1.20 (7H, m), 1.20 - 1.34 (3H, m), 1.67 -1.85 (6H, m), 1.90 (1H, d), 2.58 - 2.66 (1H, m), 3.51 - 3.63 (1H, m), 3.88 (1H, d), 4.00 (1H, d), 4.68 (1H, d), 5.53 (1H, d) 7.75 (1H, d), 7.93 (1H, s), 8.37 (2H, d), 10.52 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 446.
2
Primer 80, izomer 2:
[0811]<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 1.16 (7H, m), 1.22 - 1.38 (3H, m), 1.72 - 1.83 (6H, m), 1.89 (1H, br d), 2.56 - 2.68 (1H, m), 3.47 - 3.66 (1H, m), 3.88 (1H, d), 4.00 (1H, d), 4.68 (1H, d) 5.53 (1H, d) 7.75 (1H, br d), 7.93 (1H, s), 8.37 (2H, s), 10.52 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 446.
Uslovi analitičke SFC:
[0812]
[0813] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-ola
[0814]
2
[0815] NaBH4(202 mg, 5,33 mmol) dodat je u rastvor 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-ona (400 mg, 2,66 mmol; pripremljen prema primeru 14) u MeOH (12 ml), dajući belu smešu. Reakcija je mešana u tim uslovima tokom 1 sata, i zatim deaktivirana vodom. Dobijena smeša je ekstrahovana pomoću DCM-a (25 ml) i dalje ekstrahovana pomoću 25% IPA u hloroformu (50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani pod sniženim pritiskom (405 mg, kvantitativno), dajući bistro ulje.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.11 (6H, s), 3.75 (1H, d), 3.91 (1H, d), 4.48 (1H, d), 5.49 (1H, d), 6.11 (1H, d), 7.42 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 153.
Priprema 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0816]
[0817] TBS-Cl (501 mg, 3,33 mmol) dodat je u rastvor 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-ola (405 mg, 2,66 mmol), imidazola (362 mg, 5,32 mmol) i DCM-a (12 ml), dajući belu suspenziju. Reakcija je mešana na r.t. tokom 18 h i zatim razblažena DCM-om (100 ml) i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, pa je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u, dajući 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (391 mg, 55%) kao bistro ulje. m/z: ES+ [M+H]+ 267.
Priprema 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-jod-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0818]
2
[0819] NIS (330 mg, 1,47 mmol) dodat je u rastvor 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (391 mg, 1,47 mmol) u DCM-u (3 ml), dajući crveni rastvor. Reakcija je mešana na r.t. u atmosferi azota tokom 18 h. Reakcija je zatim razblažena DCM-om (50 ml) i isprana vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% metanola u DCM-u, dajući 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-jod-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (350 mg, 61%) kao crvenu penu<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.19 (3H, s), 0.23 (3H, s) 0.87 (9H, s) 1.03 (3H, s) 1.12 (3H, s) 3.81 (1H, d) 3.96 (1H, d) 4.52 - 4.63(1H, s) 7.47 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 393.
Priprema 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0820]
[0821] Kompleks izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 0,89 ml, 1,2 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-jod-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (350 mg, 0,89 mmol) u THF-u (2,2 ml) na 0 °C. Zatim je ukapavanjem dodat 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0,273 ml, 1,34 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreva na r.t. i održavana u tim uslovima tokom 18 h. Reakcija je zatim razblažena dodatkom EtOAc (25 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi 4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (290 mg, 83%) kao žutu penastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (3H, s), 0.19 (3H, s), 0.81 (9H, s), 0.92 (3H, s), 1.17 (3H, s), 1.22 (6H, s), 1.24 (6H, s), 3.70 (1H, d), 3.91 (1H, d), 4.47 (1H, s), 7.55 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 393.
2
Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0822]
[0823] Cezijum karbonat (641 mg, 1,97 mmol) i XPhos pretkatalizator 2. generacije (52 mg, 0,07 mmol) dodati su u degasiranu smešu 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (270 mg, 0,69 mmol) i (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida (276 mg, 0,66 mmol; pripremljen prema primeru 12) u 1,4-dioksanu (5,4 ml) i vodi (1,1 ml). Reakcija je zatim zagrejana na 85 °C i održavana u tim uslovima tokom 18 h, pa je razblažena dodatkom EtOAc, isprana vodom, zasićenim vodenim rastvorom soli, koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (180 mg, 49%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) -0.38 (3H, d), 0.00 (3H, s), 0.71 (9H, s), 1.03 - 1.47 (10H, m), 1.76 - 2.01 (7H, m), 2.61 - 2.75 (1H, m), 3.51-3.72 (1H, m), 3.96 (1H, d), 4.06 (1H, d), 4.87 (1H, s), 7.79 - 7.87 (2H, m), 8.32 (1H, s), 8.46 (1H, s), 10.67 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 560.
Primer 81: (1R,3S)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid
[0824]
2 1
[0827] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-fluor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema terc-butil ((1S,3R)-3-((5-fluor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0828]
[0829] 1-hlor-N,N,2-trimetilprop-1-en-1-amin (489 µl, 3,70 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor (1R,3S)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (660 mg, 2,7 mmol; pripremljena prema primeru 25, pri čemu (1R,3S)-benzil 3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat zamenjuje (1S,3R)-benzil 3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat) u DCM-u (6,3 ml). Nakon 1 sata, dodat je rastvor 5-fluor-4-jodpiridin-2-amina (587 mg, 2,47 mmol; pripremljen prema primeru 54) i piridina (400 µl, 4,9 mmol) u DCM-u (6 ml). Nakon 18 h, reakcija je razblažena DCM-om (200 ml) i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% metanola u DCM-u, dajući terc-butil ((1S,3R)-3-((5-fluor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,10 g, 96%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.02 - 1.18 (1H, m), 1.19 - 1.35 (3H, m), 1.38 (10H, s), 1.62 - 1.81 (3H, m), 1.82 - 1.94 (1H, m), 2.56 - 2.71 (1H, m), 3.48 - 3.59 (1H, m), 6.78 (1H, d), 8.25 (1H, s), 8.60 (1H, d), 10.59 (1H, s). m/z: ES+ [M+Na]+ 486.
Priprema (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-fluor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamida
[0830]
2
[0831] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 2,7 ml, 11 mmol) dodata je u rastvor tercbutil ((1S,3R)-3-((5-fluor-4-jodpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (500 mg, 1,08 mmol) u metanolu (8,97 ml) na r.t. Nakon mešanja u tim uslovima tokom 19 h, reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Trietilamin (750 µl, 5,4 mmol) i anhidrid sirćetne kiseline (200 µl, 2,2 mmol) dodati su u dobijeni ostatak. Reakcija je mešana u tim uslovima tokom 1 h i zatim razblažena DCM-om (100 ml). Dobijena smeša je isprana 1 N vodenim rastvorom HCl, vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je zatim osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% etil acetata u heksanu, zatim 0 do 10% metanola u etil acetatu, dajući (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-fluor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan karboksamid (200 mg, 46%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.00 - 1.17 (1H, m), 1.20 -1.40 (3H, m), 1.71 - 1.82 (6H, m), 1.83 - 1.92 (1H, m) 2.54 - 2.64 (1H, m) 3.48 - 3.58 (1H, m) 7.76 (1H, d) 8.25 (1H, s) 8.61 (1H, d) 10.61 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 406.
Primer 82a: Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-(3-hidroksi-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida
[0832]
[0833] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M, 0,27 ml, 1,09 mmol) dodata je u rastvor koji sadrži neidentifikovane pirazolne izomere (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(3-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-
2 4
il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida i (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida (0,75 g, 1,1 mmol) u metanolu (2 ml) u odnosu 7:3. Nakon 4 h, reakcija je čuvana u zamrzivaču tokom 6 dana i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je zalužen zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, i dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (x2). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 40% metanola u etil acetatu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-(3-hidroksi-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0,48 g, 98%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.49-0.66 (m, 6H), 0.97-1.13 (1H, m), 1.27 (3H, d), 1.71 - 1.83 (6H, m), 1.89 (1H, d), 2.54 - 2.70 (3H, m), 2.93-3.06 (2H, m), 3.45 - 3.66 (1H, m), 4.34 (0.3H, br s), 4.45 - 4.64 (0.7H, m), 7.54 (0.7H, br s), 7.74 (1H, d), 7.87 (0.3H, br s), 8.08 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.55 (1H, s), 12.77 (0.7H, br s), 12.89 (0.3H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 448.
Optička rotacija:
[0834]
[0835] Procedure za pripremu smeše polaznih supstanci (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(3-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida i (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(3-
2
((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida opisane su u nastavku:
Priprema etil 1-benzil-1H-pirazol-3-karboksilata
[0836]
[0837] Natrijum hidrid (60 mas.% u mineralnom ulju; 3,14 g, 78,5 mmol) u porcijama je dodat u rastvor etil 1H-pirazol-3-karboksilata (10 g, 71,4 mmol), benzil bromida (12,7 ml, 107 mmol) i DMF-a (100 ml) na 0 °C tokom 3 min uz snažno mešanje. Smeša je ostavljena da se zagreva na r.t. tokom 18 h, i zatim je razblažena etil acetatom. Dobijena smeša je isprana vodom (x3) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je zatim osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni, elucioni gradijent 0 do 50% etil acetata u heksanu, dajući etil 1-benzil-1H-pirazol-3-karboksilat (11,3 g, 69%) kao sporije eluirajuće žutomrko ulje. Takođe je izolovan etil 1-benzil-1H-pirazol-5-karboksilat (2,69 g, 16,4%) kao svetlo žutomrko ulje.
[0838] Etil 1-benzil-1H-pirazol-3-karboksilat:
<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 1.28 (3H, t), 4.25 (2H, q), 5.43 (2H, s), 6.77 (1H, d), 7.23 - 7.42 (5H, m), 7.97 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 231.
Priprema 1-benzil-1H-pirazol-3-karboksilne kiseline
[0839]
2
[0840] Litijum hidroksid (1,3 g, 56 mmol) dodat je u rastvor etil 1-benzil-1H-pirazol-3-karboksilata (11,3 g, 49,1 mmol) u tetrahidrofuranu (55 ml), vodi (19 ml) i metanolu (19 ml). Nakon mešanja u tim uslovima tokom 1,5 h, reakcija je sipana u etil acetat i deaktivirana vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (1 N; 57 ml, 57 mmol). Smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, i organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući uljanu belu čvrstu supstancu. Ta čvrsta supstanca je preneta u minimalnu količinu DCM-a i zatim razblažena dodatkom 50% etra u heksanu. Nakon žustrog mešanja tokom 15 min, smeša je filtrirana radi dobijanja 1-benzil-1H-pirazol-3-karboksilne kiseline (3,78 g, 38%) kao bele kristalne čvrste supstance.
[0841] Još hlorovodonične kiseline (1 N) dodato je u kombinovane vodene slojeve dok smeša nije dostigla pH 5. Kombinovani vodeni slojevi su zatim ekstrahovani pomoću etil acetata (x3), i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je preneta u heksan i snažno mešana tokom 10 min. Nakon filtracije, dobijena kristalna bela čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom, dajući još 1-benzil-1H-pirazol-3-karboksilne kiseline (5,3 g, 53%) kao belu kristalnu čvrstu supstancu.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 5.40 (2H, s), 6.69 (1H, d), 7.22 - 7.41 (5H, m), 7.92 (1H, d), 12.07 - 13.22 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 203.
Priprema 1-brom-3-metilbut-2-en litijum hlorida
[0842]
[0843] Prateći procedure autora Samann i Knochel (Synthesis, 2013, 45, 1870), litijum hlorid (1,78 g, 42,0 mmol) u balonu osušenom na plameniku sušen je pod vakuumom toplotnim pištoljem tokom 5 min. Nakon hlađenja, dodat je cink u prahu (5,0 g, 77 mmol), zatim THF (37 ml). Nakon snažnog mešanja tokom 5 min, dodati su 1,2-dibrometan (0,19 ml, 2,2 mmol) i zatim TMS-Cl (0,39 ml, 3,1 mmol). Dobijena smeša je ostavljena da se meša na r.t. tokom 2 min, i zatim je potopljena u ledeno kupatilo. Svetlosmeđi rastvor 1-brom-3-metilbut-2-ena (4 ml, 35 mmol) u THF-u (37 ml) ukapavanjem je dodat tokom 30 min, i vodeno kupatilo je uklonjeno. Crna smeša je održavana u tim uslovima tokom 1,5 h, i mešanje je zatim prekinuto.
2
Smeša je ostavljena da miruje tokom 18 h, i zatim neposredno korišćena bez daljeg prečišćavanja.
Priprema 1-benzil-1H-pirazol-3-karbonil hlorida
[0844]
[0845] Dve kapi DMF-a su dodate u smešu 1-benzil-1H-pirazol-3-karboksilne kiseline (5,26 g, 26,0 mmol) i oksalil hlorida (3,4 ml, 39 mmol) u DCM-u (100 ml). Nakon 4 h, svetložuti proziran rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeno žutonarandžasto ulje je osušeno pod vakuumom uz zagrevanje (toplotni pištolj) radi uklanjanja viška oksalil hlorida. Tamnonarandžasto/žutomrko ulje korišćeno je neposredno bez daljeg prečišćavanja.
Priprema 1-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilbut-3-en-1-ona
[0846]
[0847] (3-metilbut-2-en-1-il)cink(II) bromid litijum hlorid (77 ml, 32,5 mmol) u THF-u (kao što je prethodno opisano) ukapavanjem je dodat u žuti rastvor 1-benzil-1H-pirazol-3-karbonil hlorida (5,74 g, 26,0 mmol) u tetrahidrofuranu (53 ml) na -78 °C. Nakon 45 min, reakcija je prekinuta 50% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom, i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni, elucioni gradijent 0 do 50% etil acetata u heksanu, dajući 1-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilbut-3-en-1-on (5,2 g, 79%) kao prozirno blago žutomrko ulje. Nečiste frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom i ponovo prečišćene
2
koristeći iste uslove, dajući dodatni 1-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilbut-3-en-1-on (0,81 g, 12%) kao blago žutomrko ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 1.40 (6H, s), 5.02 (1H, dd), 5.07(1H, dd), 5.43 (2H, s), 6.44 (1H, dd), 6.71 (1H, d), 7.25 - 7.40 (5H, m), 7.89 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 255.
Priprema 1-benzil-3-(2,2-dimetilbut-3-en-1-il)-1H-pirazola
[0848]
[0849] Hidrazin monohidrat (5,1 ml, 67 mmol) dodat je u rastvor 1-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilbut-3-en-1-ona (3,42 g, 13,45 mmol) i 2,2'-oksibis(etan-1-ola) (35 ml, 369 mmol) na 120 °C. Reakcija je zatim zagrevana na 180 °C, i pažljivo je dodat vodeni rastvor kalijum hidroksida (3,8 ml, 67 mmol), zatim 8 granula KOH. Nakon 1 sata, dodato je još 4 granule KOH. Reakcija je održavana u tim uslovima tokom još 2 h, i zatim je ohlađena na r.t. i razblažena vodom. Smeša je ekstrahovana etrom (x3). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni, elucioni gradijent 0 do 30% etil acetata u heksanu, dajući 1-benzil-3-(2,2-dimetilbut-3-en-1-il)-1H-pirazol (2,72 g, 84%) kao bistro bezbojno ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.96 (6H, s), 4.85 (1H, s), 4.88 - 4.93 (1H, m), 5.26 (2H, s), 5.83 - 5.94 (1H, m), 6.02 (1H, d), 7.12 - 7.17 (2H, m), 7.22 - 7.35 (3H, m), 7.64 (1H, d). 2H multiplet je sakriven ispod signala DMSO. m/z: ES+ [M+H]+ 241.
Priprema 3-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilpropan-1-ola
[0850]
2
[0851] Ozon je produvan kroz rastvor 1-benzil-3-(2,2-dimetilbut-3-en-1-il)-1H-pirazola (2,7 g, 11 mmol) u metanolu (45 ml) na -78 °C tokom 30 min, što je dalo svetlo žutozeleni rastvor. Zatim je dodat natrijum borhidrid (1,1 g, 28 mmol), i reakcija je ostavljena da se zagreje na r.t. Nakon 15 min, dodato je još 200 mg natrijum borhidrida, i reakcija je održavana u tim uslovima još 20 min. Reakcija je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom i deaktivirana koncentrovanim vodenim rastvorom HCl (4,5 ml). Dobijena bela smeša je razblažena vodom i etil acetatom i zalužena kalijum karbonatom do pH 8. Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (x3). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prenet u DCM i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% etil acetata u heksanu, dajući 3-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilpropan-1-ol (2,14 g, 78%) kao bistro bezbojno ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.78 (6H, s), 2.42 (2H, s), 3.11 (2H, d), 4.44 (1H, t), 5.26 (2H, s), 6.04 (1H, d), 7.12 - 7.19 (2H, m), 7.23 - 7.36 (3H, m), 7.65 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 245.
Priprema 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-3-il)propan-1-ola
[0852]
[0853] Degasirana smeša 3-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilpropan-1-ola (2,10 g, 8,59 mmol), vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (1 N; 3,9 ml, 3,9 mmol) i 20 mas.% Pd(OH)2na ugljeniku (0,151 g, 0,21 mmol) podvrgnuta je atmosferi vodonika i zagrevana na 50 °C. Nakon 2 h, reakcija je filtrirana dok je još bila topla, uz ispiranje metanolom. Bistri bezbojni filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom do svetložutog ulja, koje je zatim ponovo koncentrovano iz toluena (x3). To je dalo svetložutu gumu (0,45 ekv. HCl so) koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.79 (6H, s), 2.55 (2H, s), 3.11 (2H, s), 6.18 (1H, d), 7.70 (1H, d), 9.63 (1H, br s). OH i HCl signali nisu uočeni. m/z: ES+ [M+H]+ 155.
Priprema 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazola
2
[0855] TBS-Cl (50 mas.% u toluenu; 4,5 ml, 13 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor sirovog 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-3-il)propan-1-ola (0,45 molarna HCl so; 1,47 g, 8,59 mmol) i imidazola (1,75 g, 25,8 mmol) u DCM-u (81 ml) na r.t. Nakon 15 min, dodat je još 1 ml TBS-Cl u toluenu. Bela smeša je održavana u tim uslovima tokom 1,5 h i zatim sipana u zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM-a (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeno bistro bezbojno ulje je prečišćeno pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 60% etil acetata u heksanu, dajući 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazol (2,13 g, 92%) kao bistro blagožuto ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (s, 6H), 0.75 (6H, s), 0.86 (9H, s), 3.22 (2H, s), 5.92 (1H, br s), 7.08 - 7.67 (1H, m), 12.35 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 269.
Priprema jedinjenja 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola i 5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0856]
Izolovani kao neidentifikovani SEM-zaštićeni izomeri u odnosu 2:3
2 1
[0857] Natrijum hidrid (60 mas.% u mineralnom ulju; 0,381 g, 9,52 mmol) u jednoj porciji je dodat u rastvor 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazola (2,13 g, 7,93 mmol) u DMF-u (11 ml) na 0 °C. Nakon 5 min, ukapavanjem je dodat (2-(hlormetoksi)etil)trimetilsilan (SEM-Cl; 1,8 ml, 9,5 mmol). Nakon 10 min, dodato je još 100 µl SEM-Cl zajedno sa 20 mg NaH (60 mas.% suspenzija u mineralnom ulju). Nakon poslednjih 15 min, reakcija je prekinuta zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i razblažena etil acetatom. Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je ispran 50% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (x2) i zatim zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom do bistrog bezbojnog ulja. Ovo ulje je prečišćeno pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 20% etil acetata u heksanu, dajući nerazdvojenu smešu jedinjenja 3-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (2,58 g, 81,6%) kao smešu neidentifikovanih SEM-zaštićenih izomera u odnosu 2:3, i bistrog bezbojnog ulja.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) -0.09 - (-0.05) (9H, m), 0.02 - 0.07 (6H, m), 0.77-0.84 (8H, m), 0.89 (9H, s), 2.44 (1.2H, s), 2.65 (0.8H, s), 3.23 (0.8H, m), 3.27 (1.2H, m), 3.48 (2H, t), 5.31 (1.2H, s), 5.40 (0.8H, s), 6.05 (0.6H, d), 6.09 (0.4H, d), 7.40 (0.4H, d), 7.71 (0.6H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 399
Priprema jedinjenja 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jod-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola i 5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jod-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0858]
Izolovani kao neidentifikovani SEM-zaštićeni izomeri u odnosu 2:3
2 2
[0859] NIS (1,78 g, 7,91 mmol) dodat je u rastvor neidentifikovane smeše 2:3 jedinjenja 3-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (2,58 g, 6,48 mmol) u acetonitrilu (34 ml). Nakon 18 h, dodato je još 1,8 g NIS, i reakcija je zagrevana na 50 °C. Nakon 4 h, dodato je još 400 mg NIS. Nakon još 4 h, reakcija je ostavljena da se ohladi na r.t., i održavana je u tim uslovima tokom 18 h. Reakcija je zatim sipana u 50% zasićeni vodeni rastvor natrijum hlorida i titrisana natrijum tiosulfatom, sve dok tamnocrvena-žutomrka boja nije u potpunosti nestala. Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je zatim osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni, elucioni gradijent 0 do 15% etil acetata u heksanu, dajući jedinjenje 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jod-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jod-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (2,93 g, 86%) kao smešu 2:3 neidentifikovanih SEM-zaštićenih izomera i svetložutog ulja.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) -0.09 - (-0.05) (9H, m), 0.02 - 0.06 (6H, m), 0.76 - 0.92 (17H, m), 2.45 (1.2H, s), 2.71 (0.8H, s), 3.29 - 3.32 (0.8H, m), 3.34 - 3.37 (1.2H, m), 3.50 (2H, td), 5.33 (1.2H, s), 5.47 (0.8H, s), 7.56 (s, 0.4H), 7.96 (0.6H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 525.
Priprema jedinjenja 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0860]
Izolovani kao SEM-zaštićeni izomeri u odnosu 3:2, kao što je prikazano
2
[0861] Kompleks izopropilmagnezijum hlorid litijum hlorid u THF-u (1,3 M; 6,45 ml, 8,39 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor 2:3 neidentifikovane smeše jedinjenja 3-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jod-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jod-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (2,93 g, 5,59 mmol) u THF-u (40 ml) na -78 °C. Nakon 1 sata, ukapavanjem je dodat 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (1,8 ml, 8,9 mmol) i reakcija je ostavljena da se meša u tim uslovima tokom 2 h. Reakcija je zatim potopljena u ledeno kupatilo (0 °C). Nakon još 2 h, reakcija je sipana u zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida. Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3x), i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% etil acetata u heksanu tokom 20 min, dajući identifikovanu 3:2 smešu 3-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (2,37 g, 80%) kao bistro bezbojno ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) -0.09 - (-0.05) (9H, m), 0.01 - 0.06 (6H, m), 0.73 - 0.84 (8H, m), 0.87 - 0.92 (9H, m), 1.24 (12H, s), 2.63 (1.2H, s), 2.85 (0.6H, s), 3.26 (0.8H, s), 3.33 (1.2H, s), 3.50 (2H, t), 5.33 (1.2H, s), 5.43 (8H, s), 7.54 (4H, s), 7.91 (0.6H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 525.
Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida i (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida
[0862]
2 4
Izolovani kao SEM-zaštićeni izomeri u odnosu 3:7
[0863] PdCl2(dppf) (DCM adukt; 0,061 g, 0,07 mmol) i cezijum karbonat (1,45 g, 4,46 mmol) dodati su u degasiranu smešu (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-jodpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida (0,74 g, 1,49 mmol; pripremljen prema primeru 12), smeše 3:2 3-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola i 5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (0,813 g, 1,55 mmol), 1,4-dioksana (12 ml) i vode (2,5 ml). Smeša je zagrevana na 93 °C i održavana u tim uslovima tokom 18 h. Reakcija je zatim ohlađena, razblažena etil acetatom i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni crnozeleni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 50 do 100% etil acetata u heksanu, zatim 0 do 10% metanola u etil acetatu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid i (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hlorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0,75 g, 73%) u odnosu 3:7 kao neidentifikovane SEM-zaštićene izomere kao svetlo žutomrko staklo.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) -0.06 - 0.02 (15H, m), 0.61 (1.7H, s), 0.72 (4.3H, s), 0.81 (6.3H, s), 0.84 - 0.93 (4.7H, m), 1.04 - 1.22 (1H, m), 1.22 - 1.40 (3H, m), 1.71 - 1.87 (6H, m), 1.88 - 1.98 (1H, m), 2.58 - 2.73 (2.4H, m), 2.91 (0.6H, s), 3.12 (0.6H, s), 3.19 (1.4H, s), 3.55 - 3.67 (3H, m), 5.46 (1.3H, s), 5.57 (0.7H, s), 7.66 (0.3H, s), 7.78 (1H, d), 8.09 (0.7H, s), 8.12 - 8.15 (0.3H, s), 8.15-8.17 (0.7H, s), 8.42-8.44 (0.7H, s), 8.46 (0.3H, s), 10.64 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 692.
2
Primer 82: Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida
[0864]
Nepoznata smeša dijastereomera kao hidroksi konfiguracija je nepoznata
[0865] Piridin sumpor trioksid (0,30 g, 1,9 mmol) dodat je u rastvor (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5-(3-hidroksi-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida (0,48 g, 1.1 mmol, pripremljen u primeru 82a) u DCM-u (6,8 ml) i dimetilsulfoksida (3,4 ml) na 0 °C. Dobijeni rastvor je održavan u tim uslovima tokom 15 minuta i zatim je sipan u etil acetat i zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida. Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je ispran 50% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i zatim 100% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni zamućeni ostatak je prenet u DCM i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 40% metanola u etil acetatu, dajući belu penastu čvrstu supstancu (460 mg). Ta čvrsta supstanca je dalje prečišćena pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Phenyl Prep, silika gel 5 µ, prečnik 19 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 0,2% NH4OH, pH 10) i metanola. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(6-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (255 mg, 53%) kao belu penastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.99 - 1.16 (4H, m), 1.20 (3H, s), 1.23 - 1.40 (3H, m), 1.73 - 1.83 (6H, m), 1.89 (1H, d), 2.56 - 2.68 (1H, m), 2.75 (1H, d), 2.95 (1H, d), 3.50 - 3.63 (1H, m), 5.25 (1H, s), 6.92 (1H, br s), 7.75 (1H, d), 8.04 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.36 (1H, s), 10.56 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 446.
2
Primeri 83 i 84: Priprema (1R,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida i (1S,3S)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida
[0866]
Primeri 83 i 84 su čisti enantiomeri. Apsolutne konfiguracije za primere 83 i 84 su nepoznate, ali su međusobno suprotne. Relativna konfiguracija je trans za primere 83 i 84.
[0867] Trietilamin (0,29 ml, 2,1 mmol) i anhidrid sirćetne kiseline (0,066 ml, 0,70 mmol) dodati su u racemski trans-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0,24 g, 0,64 mmol) u DCM-u (4 ml). Nakon mešanja na r.t. tokom 1 sata, smeša je isprana vodom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u, dajući racemski trans-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0,270 g) kao bezbojno ulje. Racemska supstanca je razdvojena pomoću preparativne HPLC (kolona Phenomonex Lux C4, silika gel 20 µm, prečnik 50 mm, dužina 250 mm), koristeći smešu heptan/IPA 70/30 kao eluent pri 120 ml/min. Frakcije koje sadrže izomer 1 (brže eluirajući) i izomer 2 (sporije eluirajući) uparene su do suva. Izomer 1 (114 mg) ponovo je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18 OBD, silika gel 5 µ, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći kao eluent smešu opadajuće polarnosti vode (sa 1% NH3) i MeCN, dajući izomer 1 trans-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida (0,081 g, 31%).
2
[0868] Izomer 2 trans-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida (0,090 g, 34%) izolovan je iz prvog hiralnog preparativnog prečišćavanja.
Primer 83, izomer 1:
[0869]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.29 (6H, s), 1.45 - 1.83 (9H, m), 1.86 (3H, s), 2.71 - 2.84 (1H, m), 2.94 (2H, s), 3.94 (2H, s), 7.54 (1H, d), 7.89 (1H, d), 8.22 - 8.34 (2H, m), 10.30 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 414.
Primer 84, izomer 2:
[0870]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.35 (6H, s), 1.44 - 1.92 (7H, m), 1.95 - 2.04 (4H, m), 2.54 (1H, s), 3.02 (2H, s), 3.94 (2H, s), 4.17 - 4.35 (1H, m), 5.57 (1H, d), 8.01 (1H, d), 8.08 (2H, d), 8.34 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 414.
Analitički hiralni uslovi:
[0871]
[0872] Procedure korišćene za pripremu racemskog trans-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida opisane su u nastavku:
2
Priprema racemske trans-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan-1-karboksilne kiseline
[0873]
[0874] Rastvor hidrohlorida racemske trans-3-aminocikloheksankarboksilne kiseline (2,00 g, 11,1 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (7,9 ml, 44 mmol) u 1,4-dioksanu (16 ml) i vodi (16 ml) ohlađen je na 0 °C. Di-terc-butil dikarbonat (2,67 g, 12,25 mmol) zatim je u porcijama dodat u reakcionu smešu, koja je ostavljena da se zagreva na r.t. nakon što je dodata poslednja porcija. Reakciona smeša je zatim ohlađena na 0 °C i dodat je 2 M vodeni rastvor hlorovodonične kiseline radi podešavanja pH na 2. Reakciona smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc (2 x 200 ml) i kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml) i osušeni iznad Na2SO4. Dobijena smeša je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom tokom 18 h, dajući racemsku trans-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan-1-karboksilnu kiselinu (2,73 g, 101%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.25 - 1.33 (1H, m), 1.39 (9H, s), 1.45 - 1.61 (6H, m), 1.71 - 1.81 (1H, m), 2.58 - 2.69 (1H, m), 3.55 (1H, br s), 6.71 (1H, br s), 12.03 (1H, br s).
Priprema racemskog terc-butil trans-(-3-karbamoilcikloheksil)karbamata
[0875]
2
[0876] CDI (3,14 g, 19,39 mmol) dodat je u rastvor racemske trans-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (1,73 g, 7,11 mmol) u DMF-u (15 ml) na 40 °C. Dobijena smeša je održavana u tim uslovima tokom 4 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena na 0 °C, i dodata je amonijumova so sirćetne kiseline (3,49 g, 45,3 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na r.t., i mešana je još 60 h. Reakciona smeša je sipana u ledenu vodu i dobijena smeša je filtrirana. Sakupljeni talog je osušen pod vakuumom, dajući racemski terc-butil trans-(3-karbamoilcikloheksil)karbamat (0,95 g, 61%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.45 (9H, s), 1.48 - 1.56 (2H, m), 1.62 - 1.78 (4H, m), 1.79 - 1.92 (2H, m), 2.45 (1H, dt), 3.84 (1H, s), 4.57 (1H, s), 5.35 (1H, br s), 5.66 (1H, br s).
Priprema racemskog terc-butil (trans-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0877]
[0878] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0,094 g, 0,08 mmol) dodat je u racemski terc-butil (trans-3-karbamoilcikloheksil)karbamat (0,235 g, 0,97 mmol), 3-(2-hlor-5-fluorpiridin-4-il)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0,215 g, 0,81 mmol, pripremljen prema primeru 25), (9,9-dimetil-9H-ksanten-4,5-diil)bis(difenilfosfan) (0,094 g, 0,16 mmol) i cezijum karbonat (0,791 g, 2,43 mmol) u 1,4-dioksanu (6 ml) i vodi (1,2 ml). Dobijena suspenzija je degasirana tokom 10 minuta u atmosferi azota i zatim je mešana na 100 °C tokom 48 h. Smeša je ohlađena, razblažena vodom (40 ml) i ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 20 ml). Kombinovane organske supstance su uparene do sirove supstance. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 60% etil acetata u heptanu. Čiste frakcije su uparene do suva, dajući racemski terc-butil (trans-3-((4-(5,5-dimetil-5,6dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,322 g, 84%) kao belu penastu čvrstu supstancu. m/z: ES+ [M+H]+ 472.
Priprema racemskog trans-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida
[0879]
[0880] Trifluorsirćetna kiselina (2,3 g, 20 mmol) dodata je u rastvor racemskog terc-butil (trans-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0,322 g, 0,68 mmol) u DCM-u (10 ml). Nakon 15 min, reakcija je prečišćena pomoću jonoizmenjivačke hromatografije koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući racemski trans-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0,237 g, 93%) kao beli suvi film. m/z: ES+ [M+H]+ 372.
Primer 85: Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida
[0881]
1
[0882] 5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-amin (56,7 g, 215,7 mmol) i piridin (0,073 l, 863 mmol) dodati su u finu suspenziju (1S,3R)-3-acetamidocikloheksan-1-karboksilne kiseline (49,9 g, 84% m/m, 227 mmol) u EtOAc (1 l) u atmosferi azota. Zatim je anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (T3P, ≥50 mas.% u EtOAc; 206 g, 324 mmol) polako dodavan tokom 1 sata. Nakon još 20 h mešanja, dodata je voda (400 ml) i dvofazna smeša je mešana još 10 minuta. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (300 ml) i vodom (300 ml). Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i dobijena čvrsta supstanca je preneta u acetonitril (300 ml) i ponovo koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ponovo je dodat acetonitril (450 ml) i dobijena suspenzija je zagrevana na 70 °C. Dodati su pelc kristali, i gusta suspenzija je mešana na 50 °C tokom 3 h. Smeša je zatim ohlađena na 20 °C i održavana u tim uslovima tokom 3 dana. Suspenzija je filtrirana, i izolovani talog je ispran acetonitrilom (3 x 100 ml) i zatim osušen pod sniženim pritiskom na 45 °C. To je dalo (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid kao beličastu kristalnu čvrstu supstancu (83,2 g, 90%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 23 °C) 1.08 - 1.23 (1H, m), 1.33 (6H, s), 1.37 - 1.57 (3H, m), 1.86 - 2.04 (6H, m), 2.26 (1H, d), 2.38 - 2.52 (1H, m), 2.95 (2H, s), 3.79 - 3.92 (1H, m), 3.94 (2H, s), 5.51 (1H, d), 8.09 (1H, s), 8.12 (1H, s), 8.22 (1H, s), 8.24 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 430. Karakterizacija konzistentna sa primerom 14.
[0883] Kristali dobijeni u primeru 85 analizirani su pomoću XRPD, što potvrđuje da čvrsta supstanca sadrži isključivo oblik A, prethodno okarakterisan u primeru 14.
[0884] Procedure korišćene za pripremu polaznih supstanci 5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-amina i (1S,3R)-3-acetamidocikloheksan-1-karboksilne kiseline opisane su u nastavku:
Priprema cis-3-(izopropoksikarbonil)cikloheksan aminijum hlorida
[0885]
2
[0886] Hlorovodonična kiselina (5 do 6 M u 2-propanolu; 16 ml) dodata je u suspenziju 3-aminobenzojeve kiseline (10 g, 73 mmol) u 2-propanolu (100 ml). Zatim je dodat rodijum (5% na Al2O3; 0,75 g, 0,36 mmol), i smeša je izložena atmosferi vodonika (8 bar) na 100 °C tokom 3 dana. Dodato je još hlorovodonične kiseline (5 do 6 M u 2-propanolu; 5 ml), i smeša je mešana na 70 °C u zaptivenom sudu tokom još 2 dana. Smeša je zatim filtrirana kroz Celite® koristeći ispiranje 2-propanolom (2 x 10 ml) i vodom (2 x 20 ml). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući belu čvrstu supstancu. Ta čvrsta supstanca je tretirana 2-propanolom (50 ml) i ponovo koncentrovana pod sniženim pritiskom, pa je suspendovana u 100 ml vrućeg izopropil acetata (70 °C). Smeša je polako ohlađena na 20 °C i zatim je mešana još 15 minuta. Smeša je filtrirana, i sakupljena čvrsta supstanca je isprana izopropil acetatom (3 x 30 ml) i osušena pod sniženim pritiskom, dajući cis-3-(izopropoksikarbonil)cikloheksan aminijum hlorid (7,5 g, 46%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, D2O, 23 °C) 1.27 (6H, d), 1.30 - 1.57 (4H, m), 1.90 - 2.14 (3H, m), 2.28 (1H, d), 2.52 (1H, tt), 3.20 - 3.36 (1H, m), 5.01 (1H, hept).
Priprema cis-izopropil 3-aminocikloheksan karboksilata
[0887]
[0888] Rastvor natrijum hidroksida (2,72 g, 68,1 mmol) u vodi (20 ml) polako je dodavan u smešu cis-3-(izopropoksikarbonil)cikloheksan aminijum hlorida (14,0 g, 62 mmol) u vodi (50 ml) i i-Pr acetata (150 ml) na 20 °C, do pH 10,9. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću i-Pr acetata (2 x 50 ml), i objedinjeni organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo koncentrovan iz izopropil acetata (2 x 20 ml), dajući cis-izopropil 3-aminocikloheksankarboksilat kao bezbojno neviskozno ulje (11,86 g, prinos 100%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 0.83 - 0.97 (1H, m), 0.82 - 1.27 (5H, m), 1.11 (6H, d), 1.67 - 1.82 (3H, m), 1.93 - 2.02 (1H, m), 2.18 (1H, tt), 2.56 (1H, tt), 4.88 (1H, hept).
Priprema (1S,3R)-izopropil 3-acetamidocikloheksan karboksilata
[0889]
[0890] NOVOZYM 435 (3 g, kupljen od kompanije Novozymes A/S Danska (aktivnost 10.000 PLU/g)) dodat je u bistri rastvor cis-izopropil 3-aminocikloheksan karboksilata (59,4 g, 298 mmol) u izopropil acetatu (480 ml). Smeša je mešana na 20 °C tokom 12 h, i zatim filtrirana. Sakupljeni talog je ispran izopropil acetatom (150 ml), i filtrat je ispran vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (2 M; 200 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću izopropil acetata (3 x 150 ml) i kombinovani organski slojevi su ponovo filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom do bele čvrste supstance (43 g). Čvrsta supstanca je preneta u izopropil acetat (2 x 200 ml) i ponovo koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u izopropil acetatu (400 ml) i ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (50 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (100 ml), i kombinovani organski slojevi su isprani vodom (50 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom do bele čvrste supstance. Ta čvrsta supstanca je preneta u izopropil acetat (2 x 100 ml) i ponovo je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je tretiran ciklopentil metil etrom (70 ml) i cikloheksanom (140 ml). To je dalo suspenziju koja je zagrevana na 70 °C. Dobijen je homogeni rastvor koji je, nakon hlađenja na 20 °C, postao smeša. Pelc kristali su dodati na 50 °C. Dobijena suspenzija je mešana tokom 2 dana, nakon čega je filtrirana, i čvrsta supstanca je ispirana sa 33% ciklopentil metil etrom u cikloheksanu (2 x 30 ml). Nakon sušenja pod sniženim pritiskom, dobijen je (1S,3R)-izopropil 3-acetamidocikloheksankarboksilat (26,8 g, 40%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.01 - 1.13 (1H, m), 1.20 (6H, d), 1.22 - 1.45
4
(3H, m), 1.77 - 1.93 (3H, m), 1.94 (3H, s), 2.12 - 2.26 (1H, m), 2.37 (1H, tt), 3.70 - 3.91 (1H, m), 4.96 (1H, p), 5.67 (1H, d).
Uslovi analitičke SFC:
[0891]
Retenciono vreme:
[0892]
1,9 min, (1R,3S)-izopropil 3-acetamidocikloheksan karboksilat
2,7 min, (1S,3R)-izopropil 3-acetamidocikloheksan karboksilat e.e.
99,9%, (1S,3R)-izopropil 3-acetamidocikloheksan karboksilat
Priprema (1S,3R)-3-acetamidocikloheksankarboksilne kiseline
[0893]
[0894] Rastvor vodenog rastvora natrijum hidroksida (3,8 M; 3,9 ml, 14,8 mmol) dodat je u atmosferi azota u rastvor (1S,3R)-izopropil 3-acetamidocikloheksan karboksilata (1,71 g, 7,37 mmol) u MeOH (3 ml). Smeša je mešana na 20 °C tokom 1 sata, i zatim je u smešu dodavan vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (3,8 M; 4,5 ml) do pH 1. Dodat je etil acetat (10 ml), i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (4 x 10 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom na 40 °C. Dobijeni ostatak je ponovo koncentrovan iz etil acetata (2 x 10 ml), dajući (1S,3R)-3-acetamidocikloheksankarboksilnu kiselinu (1,4 g, 94%; 92 mas.%) kao belu čvrstu supstancu kontaminiranu natrijum hloridom.
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, 20 °C) 1.08 - 1.47 (4H, m), 1.78 - 1.99 (6H, m), 2.12 (1H, d), 2.3 - 2.45 (1H, m), 3.58 - 3.74 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 186.
3-brom-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol
[0895]
[0896] U reaktor je dodat 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (79,5 g, 525 mmol; pripremljen prema primeru 14) i CH2Cl2(800 ml) u atmosferi azota. U porcijama je dodat NBS (95,4 g, 533 mmol) tokom 15 minuta. Reakciona temperatura je održavana između 20 i 23 °C tokom adicije. Nakon 0,5 h mešanja na 20 °C, dodat je vodeni rastvor 8 mas.% Na2SO3(250 ml), i dvofazna smeša je mešana u tim uslovima tokom 45 minuta. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (1 x 250 ml, 1 x 200 ml) i vodom (100 ml). Organski sloj je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom na 30 °C i 400 mbar. Dobijeni ostatak je ponovo koncentrovan iz THF-a (3 x 100 ml), dajući 3-brom-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (138 g, 99%; 81 mas.% na osnovu NMR analize jačine) kao bledosmeđe ulje. Ova supstanca je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.29 (6H, s), 2.64 (2H, s), 3.89 (2H, s), 7.41 (1H, s).
Priprema 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0897]
[0898] Rastvor butillitijuma (2,5 M u heksanu; 0,309 l, 774 mmol) polako je dodat u rastvor 3-brom-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (137 g, 516 mmol; 81 mas.%) i triizopropil borata (0,21 l, 929 mmol) u THF-u (0,7 l) i toluenu (0,7 l) na -70 °C u atmosferi azota u 3-grlom balonu od 3 l sa termometrom. Reakciona temperatura je održavana između -65 i -70 °C tokom adicije. Nakon što je adicija završena, rastvor 2,3-dimetilbutan-2,3-diola (91 g, 774 mmol) u toluenu (0,5 l) dodat je tokom 10 minuta. Smeša je polako ostavljena da dostigne r.t. u ledenom kupatilu, i zatim je mešana još 18 h. Reakciona smeša je prebačena u reaktor od 5 l sa hladnim (10 °C) zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (2,5 l). Dvofazna smeša je mešana tokom 15 minuta na 20 °C, i organski sloj je ispran vodom (2 x 500 ml), a zatim je koncentrovan na 35 °C, dajući 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol kao svetložutu čvrstu supstancu (194 g, 92%; 64 mas.% na osnovu NMR analize snage). Ova supstanca je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.21 (6H, s), 1.26 (12H, s), 2.77 (2H, s), 3.84 (2H, s), 7.74 (1H, s). mlz: ES+ [M+H]+ 263.
Priprema 5-hlor-4-jodpiridin-2-amina
[0899]
[0900] 5-hlor-2-fluor-4-jodpiridin (90 g, 350 mmol) rastvoren u NMP (200 ml) dodat je u koncentrovani rastvor amonijum hidroksida na 10 °C (vod.26%; 298 g, 4,54 mol). Reakciona temperatura je održavana ispod 10 °C tokom dodavanja. Posuda je zaptivena i zatim zagrevana na 100 °C. Nakon 18 h, smeša je ohlađena na r.t., nakon čega je dobijena suspenzija. Sirova smeša je kombinovana sa smešom dobijenom u eksperimentu malih razmera koji je izvršen u identičnim uslovima polazeći od 8 g (31 mmol) 5-hlor-2-fluor-4-jodpiridina. Dodati su MTBE (500 ml) i voda (200 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću MTBE (2 x 250 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml) i zatim koncentrovani pod sniženim pritiskom do bež čvrste supstance. Ova čvrsta supstanca je ponovo koncentrovana pod sniženim pritiskom iz MTBE (2 x 200 ml) kako bi se uklonila preostala voda. Sirova smeša je zatim rastvorena u vrućem (65 °C) toluenu (400 ml) koristeći rotacioni uparivač. Smeša je zatim ostavljena da polako dostigne 45 °C, nakon čega su dodati pelc kristali. Dobijena suspenzija je ostavljena da se polako ohladi na 10 °C, i zatim je mešana još 18 h u tim uslovima. Suspenzija je filtrirana, i sakupljena čvrsta supstanca je isprana ledeno hladnim toluenom (2 x 70 ml). To je dalo 5-hlor-4-jodpiridin-2-amin (63,8 g, 65,9%) kao bezbojnu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 20 °C) 6.23 (2H, s), 7.04 (1H, s), 7.92 (1H, s).
Priprema 5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-amina
[0901]
[0902] Kalijum karbonat (81 g, 582,6 mmol) i Pd(dppf)Cl2(3,41 g, 4,66 mmol) redom su dodati u degasiranu smešu 5-hlor-4-jodpiridin-2-amina (59,9 g, 233 mmol) i 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (64 mas.%; 110 g, 268 mmol) u acetonitrilu (500 ml) i vodi (500 ml). Prozirna bledocrvena dvofazna smeša je zagrevana na 50 °C. Nakon snažnog mešanja tokom 2 h, dodato je još Pd(dppf)Cl2(1,0 g, 1,4 mmol) i smeša je mešana još 20 h u tim uslovima. Smeša je zatim ohlađena na 20 °C, i dodat je etil acetat (450 ml). Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je ispran vodom (200 ml). U organski sloj je zatim dodat Pd-čistač Silicycle (SilaMetS)-tiol (kat. br. R51030B; 20 g), i smeša je dalje mešana tokom 2 h na 20 °C. Smeša je zatim filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do smeđe čvrste supstance. Ova čvrsta supstanca je rastvorena u DCM-u (100 ml), i rastvor je zatim filtriran kroz tanak sloj silika gela, eluent 5% 2-propanol u CH2Cl2. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući smeđu čvrstu supstancu. Dodat je metilizobutilketon (MIBK, 250 ml), i dobijena suspenzija je zagrevana na 70 °C i zatim polako ohlađena na 20 °C. Dobijena suspenzija je mešana u tim uslovima tokom 18 h, i zatim je filtrirana i isprana metil izobutilketonom (5 x 30 ml), dajući 5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-amin kao bledoružičastu čvrstu supstancu (50,7 g, 193 mmol).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.28 (6H, s), 2.81 (2H, s), 3.91 (2H, s), 4.56 (2H, br s), 6.41 (1H, s), 7.83 (1H, s), 8.03 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 263.
Primer 86: Priprema (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il]-5-fluorpiridin-2-il]cikloheksan-1-karboksamida
[0903]
[0904] 4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-amin (31,8 g, 129 mmol) i piridin (43,9 ml, 517 mmol) dodati su u atmosferi azota na 20 °C u suspenziju (1S,3R)-3-acetamidocikloheksan-1-karboksilne kiseline (29,9 g, 136 mmol; 84 mas.%, pripremljena prema primeru 85) u EtOAc (800 ml). T3P (≥50 mas.% u EtOAc; 123 g, 194 mmol) dodavan je tokom 40 minuta, i dobijena smeša je mešana tokom 21 h u tim uslovima. Zatim je dodata voda (400 ml). Dvofazna smeša je mešana tokom 10 minuta, i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (300 ml) i vodom (300 ml), pa je filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući tamnosmeđu polučvrstu supstancu. Dodat je acetonitril (250 ml), i smeša je zagrevana na 70 °C, nakon čega je dobijen homogeni smeđi rastvor. Smeša je ostavljena da dostigne 60 °C, dodato je još acetonitrila (200 ml), i suspenzija je mešana još 2 h u tim uslovima, pa je polako ohlađena na 20 °C. Dobijena suspenzija je mešana tokom 3 dana, nakon čega je filtrirana, i čvrsta supstanca je isprana pomoću CH3CN (250 ml). Nakon sušenja pod sniženim pritiskom na 48 °C tokom 20 h, (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (49,2 g, 119 mmol) dobijen je kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.08 - 1.23 (1H, m), 1.33 (6H, s), 1.37 - 1.58 (3H, m), 1.88 - 1.94 (1H, m), 1.96 - 2.01 (5H, m), 2.26 (1H, d), 2.38 - 2.42 (1H, m), 3.00 (2H, s), 3.80 - 3.91 (1H, m), 3.93 (2H, s), 5.47 (1H, d), 8.00 (1H, d), 8.09 - 8.17 (2H, m), 8.31 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 414. Konzistentno sa karakterizacijom u primeru 25
[0905] Kristali (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida dobijeni procedurom opisanom u primeru 86 analizirani su pomoću XRPD. Rezultati su prikazani u tabeli u nastavku i na slici 5, i potvrđuju da čvrsta supstanca sadrži isključivo oblik B.
[0906] (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid, glavni pikovi oblika B su prikazani u tabeli 3 u nastavku:
1
[0907] U skladu sa predmetnim pronalaskom, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa specifičnim pikovima na oko 2-teta = 8,3, 11,0, 13,1, 16,6, 19,4, 20,4, 22,3, 27,0, 27,2 i 28,6°. DSC analiza je pokazala da se oblik B topi sa početnom tačkom na 191 °C i pikom na 193 °C. TGA pokazuje da oblik B ispoljava gubitak mase od oko 1,6% nakon zagrevanja sa 22 °C na 210 °C. Reprezentativni DSC/TGA termogram je prikazan na slici 6.
Konverzija oblika A u oblik B
[0908] 100 mg (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida, oblik A (izolovan iz primera 25), dodato je u bočicu od 20 ml. U bočicu je dodato 2,0 ml acetona, dajući suspenziju. Dobijena suspenzija je mešana na temperaturi okoline tokom vikenda i zatim osušena na vazduhu uparavanjem. Dobijena bela čvrsta supstanca je okarakterisana i identifikovana kao (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid, oblik B.
[0909] Procedure korišćene za pripremu polazne supstance 4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-amina su opisane u nastavku:
Priprema 5-fluor-4-jodpiridin-2-amina
[0910]
[0911] Čelična posuda za hidrogenovanje od 5 l napunjena je vodenim rastvorom amonijaka (26%; 777 g, 11,9 mol) i 2,5-difluor-4-jodpiridinom (220 g, 913 mmol). Smeša je ohlađena na 5 °C i polako je dodat NMP (500 ml) tokom nekoliko minuta (razvijanje gasa). Posuda je zaptivena, i reakciona smeša je zatim zagrevana na 100 °C. Nakon 36 h, temperatura reakcije je smanjena na 90 °C, i reakcija je održavana u tim uslovima tokom 3,5 dana. Smeša je zatim
11
ohlađena na 5 °C, i dodati su MTBE (1 l) i voda (500 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću MTBE (2 x 500 ml), i kombinovani organski slojevi su isprani vodom (200 ml), filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena bledožuta čvrsta supstanca je ponovo koncentrovana iz MTBE (2 x 500 ml) i zatim je dodat toluen (400 ml). Dobijena smeša je zagrevana na 70 °C, i dobijen je homogeni smeđi rastvor. Polako je dodat heptan (500 ml). Homogeni rastvor je zatim ostavljen da polako dostigne 18 °C u vodenom kupatilu, i pelc kristali su dodati kada je smeša dostigla 42 °C. Smeša je mešana preko noći u tim uslovima. Suspenzija je filtrirana, i prikupljena čvrsta supstanca je isprana sa 45% toluena u heptanu (200 ml), nakon čega je osušena pod sniženim pritiskom na 40 °C, dajući 5-fluor-4-jodpiridin-2-amin (111 g, 51%) kao bledosivu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 4.52 (2H, br s), 6.89 (1H, d), 7.79 (1H, s).
Priprema 4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-amina
[0912]
[0913] Kalijum karbonat (63,1 g, 457 mmol) i Pd(dppf)Cl2(2,67 g, 3,66 mmol) redom su dodati u atmosferi azota u degasiranu smešu 5-fluor-4-jodpiridin-2-amina (43,5 g, 182,8 mmol) i 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (86 g, 210 mmol; 64 mas.%, pripremljen prema primeru 85) u acetonitrilu (400 ml) i vodi (400 ml). Bledocrvena dvofazna smeša je zagrevana na 50 °C i snažno mešana tokom 5 h. Reakcija je ohlađena, i zatim je dodat etil acetat (400 ml). Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je ispran vodom (200 ml). Pd-čistač Silicycle (SilaMetS)-tiol, (kat. br. R51030B, 10 g) dodat je u organski sloj, i smeša je zatim mešana preko noći na 20 °C. Smeša je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući smeđu čvrstu supstancu. Dodat je izopropanol (200 ml), i smeša je zagrevana na 70 °C, što je dalo homogeni tamnosmeđi rastvor. Smeša je zatim ostavljena da se ohladi na 20 °C i zatim je mešana tokom 15 h. Dobijena suspenzija je filtrirana, i prikupljena čvrsta supstanca je isprana hladnim (4 °C) izopropanolom (3 x 30 ml), dajući 4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluorpiridin-2-amin (32 g,
12
71%) kao bledosmeđu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.34 (6H, s), 2.91 (2H, s), 3.95 (2H, s), 4.30 (2H, s), 6.51 (1H, d), 7.89 (1H, s), 7.93 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 247.
1

Claims (15)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule I za upotrebu u lečenju raka:
    naznačeno time što: A je C(R<5>) ili N; R<5>je H, C1-3alkil, CN ili halogen; R<2>je 3-7-člani heterocikloalkil ili 3-7-člani cikloalkil; opciono supstituisan sa jednim do tri supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koja se sastoji od R<10>, OR<10>, SR<10>, S(O)R<10>, S(O)2R<10>, C(O)R<10>, C(O)OR<10>, OC(O)R<10>, OC(O)OR<10>, NH2, NHR<10>, N(R<10>)2, NHC(O)H, NHC(O)R<10>, NR<10>C(O)H, N R<10>C(O)R<10>, NHS(O)2R<10>, NR<10>S(O)2R<10>, NHC(O)OR<10>, NR<10>C(O)OR<10>, NHC(O)NH2, NHC(O)NHR<10>, NHC(O)N(R<10>)2, NR<10>C(O)NH2, NR<10>C(O)NHR<10>, NR<10>C(O)N(R<10>)2, C(O)NH2, C(O)NHR<10>, C(O)N(R<10>)2, C(O)NHOH, C(O)NHOR<10>, C(O)NHS(O)2R<10>, C(O)N R<10>S(O)2R<10>, S(O)2NH2, S(O)2NHR<10>, S(O)2N(R<10>)2, S(O)2NHC(O)OR<10>, S(O)2NR<10>C(O)OR<10>, C(O)H, C(O)OH, OH, CN, NO2, F, Cl, Br i I; naznačeno time što jedna ili više CH2grupa prstena može biti opciono zamenjena odgovarajućim brojem -C(O) grupa, jedan ili više atoma sumpora ili azota prstena može biti opciono oksidisano da grade S-okside ili N-okside; R<10>, svaki put kada se javlja, nezavisno je izabran iz grupe koja se sastoji od 3 do 6-člane cikloalkil ili heterocikloalkil grupe, C1-6alkil, -O- C1-6alkil, C1-6alkil-O- C1-6alkil, NH2, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, OH, CN, NO2, F, Cl, Br i I; naznačeno time što dve R<10>grupe zajedno sa atomima za koje su vezane mogu da grade 3 do 6-članu cikloalkil ili heterocikloalkil grupu; i svaka prethodno navedena R<10>alkil, cikloalkil i heterocikloalkil grupa može biti dalje supstituisana sa jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana od CN, OH, halogena, C1-3alkila, -O-C1-3alkila, NH2, NH-C1-3alkila i NHC(O)-C1-3alkila; R<4>je
    naznačeno time što X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 5 do 7-člani heterocikloalkil prsten koji, pored azota iz mosta, može da sadrži jedan ili dva heteroatoma izabrana od N, O i S, i taj prsten može biti zasićen ili delimično zasićen; naznačeno time što jedna ili dve CH2grupe prstena mogu opciono biti zamenjene odgovarajućim brojem -C(O) grupa, jedan ili više atoma sumpora ili azota prstena može biti opciono oksidisano dajući S-okside ili N-okside, i naznačeno time što prsten može biti supstituisan na ugljeniku prstena sa jednim ili dva R<10>supstituenta ili na azotu prstena R<12>supstituentom; J je N ili CR<11>; i R<11>je H, C1-3alkil; R<12>je svaki put kad se javlja nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od 3 do 6-člane cikloalkil ili heterocikloalkil grupe, C1-6alkil, C1-6alkil-O-C1-6alkil, C(O)NH2, C(O)H; naznačeno time što R<12>alkil, cikloalkil i heterocikloalkil grupa mogu biti dalje supstituisane sa jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana od CN, OH i halogena, C1-3alkila, NH2i NH-C1-3alkila, NHC(O)-C1-3alkila ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli; nadalje naznačeno time što je rak hematološki malignitet izabran od akutne mijeloidne leukemije, multiplog mijeloma, hronične limfocitne leukemije, difuznog B-krupnoćelijskog limfoma, Burkitovog limfoma, folikularnog limfoma, ili čvrsti tumor izabran od raka dojke, raka pluća, neuroblastoma i raka debelog creva.
  2. 2. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 1, naznačeno time što je rak hematološki malignitet izabran od akutne mijeloidne leukemije, multiplog mijeloma, hronične limfocitne leukemije, difuznog B- krupnoćelijskog limfoma, Burkitovog limfoma i folikularnog limfoma.
  3. 3. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 1, naznačeno time što je rak akutna mijeloidna leukemija.
  4. 4. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 1, naznačeno time što je rak difuzni B- krupnoćelijski limfom. 1
  5. 5. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 1, naznačeno time što A je C(R<5>).
  6. 6. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 5, naznačeno time što R<5>je hlor ili fluor.
  7. 7. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 1, naznačeno time što R<2>je 3-7-člani cikloalkil, opciono supstituisan sa NHCOR<10>ili R<10>.
  8. 8. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 7, naznačeno time što R<2>je izabran od ciklopropila, ciklobutila, ciklopentila, cikloheksila i cikloheptila.
  9. 9. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 8, naznačeno time što R<2>je ciklopentil ili cikloheksil.
  10. 10. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 9, naznačeno time što R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHCOR<10>.
  11. 11. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 1, naznačeno time što R<2>je 3-7-člani heterocikloalkil, opciono naznačeno time što je R<2>supstituisan sa NHCOR<10>.
  12. 12. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 1, naznačeno time što X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 6-člani heterocikloalkil prsten, opciono naznačeno time što 6-člani heterocikloalkil prsten sadrži dodatni heteroatom, koji je kiseonik ili azot.
  13. 13. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 1, naznačeno time što X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 5-člani heterocikloalkil prsten, opciono naznačeno time što je jedan CH2u 5-članom heterocikloalkil prstenu supstituisan sa dve metil grupe.
  14. 14. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 1, naznačeno time što X i Y zajedno sa atomima za koji su vezani grade 7-člani heterocikloalkil prsten.
  15. 15. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 1 koje je (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hlor-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 1
RS20220005A 2015-06-29 2016-06-27 Policiklični amidni derivati kao inhibitori cdk9 RS62781B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562185852P 2015-06-29 2015-06-29
EP19165726.1A EP3539961B1 (en) 2015-06-29 2016-06-27 Polycyclic amide derivatives as cdk9 inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62781B1 true RS62781B1 (sr) 2022-01-31

Family

ID=56292699

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220005A RS62781B1 (sr) 2015-06-29 2016-06-27 Policiklični amidni derivati kao inhibitori cdk9
RS20190564A RS58712B1 (sr) 2015-06-29 2016-06-27 Derivati policikličnih amida kao cdk9 inhibitori

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190564A RS58712B1 (sr) 2015-06-29 2016-06-27 Derivati policikličnih amida kao cdk9 inhibitori

Country Status (38)

Country Link
US (4) US9845331B2 (sr)
EP (2) EP3313838B1 (sr)
JP (1) JP6997627B2 (sr)
KR (1) KR102663113B1 (sr)
CN (1) CN107873028B (sr)
AR (1) AR105179A1 (sr)
AU (1) AU2016286200B2 (sr)
BR (1) BR122019013677B1 (sr)
CA (1) CA2989499C (sr)
CL (1) CL2017003306A1 (sr)
CO (1) CO2017013713A2 (sr)
CR (2) CR20170596A (sr)
CY (2) CY1122111T1 (sr)
DK (2) DK3539961T3 (sr)
DO (2) DOP2017000295A (sr)
EA (1) EA035383B1 (sr)
ES (2) ES2902148T3 (sr)
HR (2) HRP20190748T1 (sr)
HU (2) HUE057343T2 (sr)
IL (1) IL256393B (sr)
LT (2) LT3539961T (sr)
ME (1) ME03404B (sr)
MX (1) MX371034B (sr)
MY (1) MY201673A (sr)
NI (1) NI201700174A (sr)
PE (1) PE20180530A1 (sr)
PH (1) PH12017502334B1 (sr)
PL (2) PL3313838T3 (sr)
PT (2) PT3313838T (sr)
RS (2) RS62781B1 (sr)
SI (2) SI3539961T1 (sr)
SM (2) SMT201900298T1 (sr)
SV (1) SV2017005598A (sr)
TN (1) TN2017000486A1 (sr)
TR (1) TR201909286T4 (sr)
TW (1) TWI723028B (sr)
WO (1) WO2017001354A1 (sr)
ZA (1) ZA201800563B (sr)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019058348A1 (en) 2017-09-25 2019-03-28 Astrazeneca Ab COMBINATION OF A BTK INHIBITOR AND A CDK9 INHIBITOR TO TREAT CANCER
WO2019074748A1 (en) * 2017-10-09 2019-04-18 Merck Sharp & Dohme Corp. NOVEL SUBSTITUTED PHENYL-OXETANE AND PHENYLTETRAHYDROFURAN COMPOUNDS AS INHIBITORS OF INDOLEAMINE 2,3-DIOXYGENASE (IDO)
CN108129288B (zh) * 2017-12-27 2021-01-22 上海毕得医药科技股份有限公司 一种反式-3-羟基环丁基甲酸的合成方法
TWI810397B (zh) 2018-11-14 2023-08-01 瑞典商阿斯特捷利康公司 治療癌症之方法
CN114008046B (zh) * 2019-06-27 2023-08-18 南京明德新药研发有限公司 作为cdk9抑制剂的氮杂吲哚连吡唑类化合物
WO2021050824A1 (en) 2019-09-11 2021-03-18 Prelude Therapeutics Incorporated Cdk inhibitors and their use as pharmaceuticals
EP4074699A4 (en) * 2019-12-09 2024-01-03 CSPC Zhongqi Pharmaceutical Technology (Shijiazhuang) Co., Ltd. COMPOUND USEFUL AS CYCLIN-DEPENDENT KINASE 9 INHIBITOR AND USE THEREOF
EP4140997A4 (en) * 2020-05-12 2023-09-06 Suzhou Alphama Biotechnology Co., Ltd. PYRIDINE ACETAMIDE DERIVATIVE AS CDK INHIBITOR, PREPARATION METHOD AND USE THEREOF
EP4141004A4 (en) * 2020-05-12 2023-08-23 Suzhou Alphama Biotechnology Co., Ltd. POLYCYCLIC AMIDE DERIVATIVE SERVING AS A CDK9 INHIBITOR, METHOD FOR PREPARING IT AND ITS USE
EP4171654A1 (en) 2020-06-24 2023-05-03 AstraZeneca UK Limited Combination of antibody-drug conjugate and cdk9 inhibitor
US20230271942A1 (en) 2020-08-07 2023-08-31 Pharmablock Sciences (Nanjing), Inc. Cdk9 inhibitor and use thereof
TWI809330B (zh) * 2020-11-20 2023-07-21 大陸商勁方醫藥科技(上海)有限公司 Cdk9抑制劑的多晶型物及其製法和用途
WO2022247785A1 (zh) * 2021-05-24 2022-12-01 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种周期蛋白依赖性激酶9抑制剂的用途
CN115381824B (zh) * 2021-05-24 2024-11-05 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 周期蛋白依赖性激酶9抑制剂的用途
CN117813289A (zh) * 2021-07-14 2024-04-02 上海海雁医药科技有限公司 吡唑衍生物及其中间体和制备方法
CN115703738B (zh) * 2021-08-16 2024-06-21 中国科学院上海药物研究所 含2-芳杂环取代的脲类化合物、其制备方法和用途
JP2025501773A (ja) * 2021-12-23 2025-01-23 ザ・カトリック・ユニヴェルシテイト・ルーバン Ｙａｐ／ｔａｚ－ｔｅａｄを阻害するためのテトラヒドロピラゾロピリミジン及び関連類似体
JP2025528223A (ja) 2022-08-17 2025-08-26 コリア リサーチ インスティテュート オブ ケミカル テクノロジー Ｃｄｋ２及び／又はｃｄｋ９の抑制又は分解用化合物及びこれらの医薬用途
CN117659022A (zh) * 2022-09-06 2024-03-08 苏州阿尔脉生物科技有限公司 脲基取代吡啶类化合物、包含其的药物组合物及其医药用途
US20240360075A1 (en) * 2023-04-19 2024-10-31 Alcon Inc. N-substituted c6 cyclyl carboxamide compounds and uses thereof
WO2025076115A1 (en) * 2023-10-02 2025-04-10 Prelude Therapeutics Incorporated Cdk inhibitors and their use as pharmaceuticals

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008133192A1 (ja) 2007-04-19 2008-11-06 Takeda Pharmaceutical Company Limited 縮合イミダゾール化合物およびその用途
JP5379787B2 (ja) 2007-04-24 2013-12-25 インゲニウム ファーマシューティカルズ ジーエムビーエイチ プロテインキナーゼの阻害剤
WO2008129069A1 (en) 2007-04-24 2008-10-30 Ingenium Pharmaceuticals Gmbh Inhibitors of protein kinases
EP2137166B1 (en) 2007-04-24 2012-05-30 Ingenium Pharmaceuticals GmbH 4, 6-disubstituted aminopyrimidine derivatives as inhibitors of protein kinases
ES2539518T3 (es) 2007-04-24 2015-07-01 Astrazeneca Ab Inhibidores de proteínas quinasas
WO2008132138A1 (en) 2007-04-25 2008-11-06 Ingenium Pharmaceuticals Gmbh Derivatives of 4,6-disubstituted aminopyrimidines
CN101889004B (zh) 2007-10-12 2014-09-10 阿斯利康公司 蛋白激酶抑制剂
EP2473502A1 (en) 2009-09-04 2012-07-11 Novartis AG Heteroaryl compounds as kinase inhibitors
US20110113038A1 (en) 2009-11-12 2011-05-12 International Business Machines Corporation Search term security
GB201002911D0 (en) 2010-02-19 2010-04-07 Medical Res Council Compound
KR20130016244A (ko) 2010-03-10 2013-02-14 인게니움 파르마코이티칼스 게엠베하 단백질 키나아제의 억제제
AR081810A1 (es) * 2010-04-07 2012-10-24 Bayer Cropscience Ag Piridinilpirazoles biciclicos
WO2012066065A1 (en) 2010-11-17 2012-05-24 Novartis Ag Phenyl-heteroaryl amine compounds and their uses
WO2012101062A1 (en) * 2011-01-28 2012-08-02 Novartis Ag Substituted bi-heteroaryl compounds as cdk9 inhibitors and their uses
WO2012101064A1 (en) 2011-01-28 2012-08-02 Novartis Ag N-acyl pyrimidine biaryl compounds as protein kinase inhibitors
WO2012101063A1 (en) 2011-01-28 2012-08-02 Novartis Ag N-acyl pyridine biaryl compounds and their uses
UA114410C2 (uk) 2011-10-06 2017-06-12 Байєр Інтеллектуал Проперті Гмбх Гетероциклілпіри(mi)динілпіразол
JP2016516710A (ja) * 2013-03-13 2016-06-09 アッヴィ・インコーポレイテッド ピリジン系ｃｄｋ９キナーゼ阻害薬
CA2901929A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Abbvie Inc. Cdk9 kinase inhibitors
TW201446763A (zh) 2013-03-14 2014-12-16 Abbvie Inc 吡咯并［２，３－ｂ］吡啶ｃｄｋ９激酶抑制劑
AU2014244194A1 (en) 2013-03-14 2015-09-10 Abbvie Inc. Pyrrolopyrimindine CDK9 kinase inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
ES2902148T3 (es) 2022-03-25
EP3539961B1 (en) 2021-10-06
PL3539961T3 (pl) 2022-02-14
TW201718573A (zh) 2017-06-01
AR105179A1 (es) 2017-09-13
LT3539961T (lt) 2021-12-27
DK3313838T3 (da) 2019-06-11
US20220340592A1 (en) 2022-10-27
PT3313838T (pt) 2019-06-24
US20160376287A1 (en) 2016-12-29
AU2016286200A1 (en) 2018-02-08
CR20170596A (es) 2018-07-04
PL3313838T3 (pl) 2019-08-30
NI201700174A (es) 2018-10-19
ES2728356T3 (es) 2019-10-23
BR112017027394A2 (pt) 2018-11-06
CO2017013713A2 (es) 2018-03-28
DOP2017000295A (es) 2017-12-31
WO2017001354A1 (en) 2017-01-05
CA2989499C (en) 2023-10-31
CA2989499A1 (en) 2017-01-05
PT3539961T (pt) 2021-12-20
ZA201800563B (en) 2022-08-31
RS58712B1 (sr) 2019-06-28
CN107873028B (zh) 2021-02-02
CR20210297A (es) 2021-09-29
JP6997627B2 (ja) 2022-01-17
SI3539961T1 (sl) 2022-02-28
HRP20211970T1 (hr) 2022-03-18
DK3539961T3 (da) 2022-01-03
SI3313838T1 (sl) 2019-06-28
SV2017005598A (es) 2018-02-23
CL2017003306A1 (es) 2018-06-29
AU2016286200B2 (en) 2018-10-04
US11352369B2 (en) 2022-06-07
TR201909286T4 (tr) 2019-07-22
MY201673A (en) 2024-03-12
LT3313838T (lt) 2019-06-10
CN107873028A (zh) 2018-04-03
TN2017000486A1 (en) 2019-04-12
KR20180021830A (ko) 2018-03-05
MX371034B (es) 2020-01-13
DOP2018000207A (es) 2018-10-15
US20210171541A1 (en) 2021-06-10
BR122019013677B1 (pt) 2024-01-02
US10717746B2 (en) 2020-07-21
SMT202200005T1 (it) 2022-03-21
IL256393A (en) 2018-02-28
CY1125066T1 (el) 2023-03-24
SMT201900298T1 (it) 2019-07-11
EP3539961A1 (en) 2019-09-18
HUE043440T2 (hu) 2019-08-28
ME03404B (me) 2020-01-20
KR102663113B1 (ko) 2024-05-02
MX2017016244A (es) 2018-04-20
HRP20190748T1 (hr) 2019-06-14
US20180093998A1 (en) 2018-04-05
PE20180530A1 (es) 2018-03-19
EP3313838B1 (en) 2019-04-03
US9845331B2 (en) 2017-12-19
EA035383B1 (ru) 2020-06-04
EP3313838A1 (en) 2018-05-02
IL256393B (en) 2021-12-01
HUE057343T2 (hu) 2022-05-28
CY1122111T1 (el) 2020-11-25
EA201890094A1 (ru) 2018-07-31
JP2018522869A (ja) 2018-08-16
PH12017502334A1 (en) 2018-06-25
TWI723028B (zh) 2021-04-01
PH12017502334B1 (en) 2023-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11352369B2 (en) Pyridine and pyrimidine derivatives
KR102388208B1 (ko) 암을 치료하기 위한 거대 환형 mcl1 억제제
US8796289B2 (en) Pyridazino[4,5-D]pyrimidin-5(6H)-one inhibitors of kinases
EP3288931B2 (en) Certain protein kinase inhibitor
JP2021102619A (ja) ブロモドメイン阻害剤
HK40014442B (en) Polycyclic amide derivatives as cdk9 inhibitors
HK40014442A (en) Polycyclic amide derivatives as cdk9 inhibitors
HK1250985A1 (en) Polycyclic amide derivatives as cdk9 inhibitors
HK1250985B (en) Polycyclic amide derivatives as cdk9 inhibitors
BR112017027394B1 (pt) Composto, forma cristalina, composição farmacêutica e uso do mesmo
CA3020378C (en) Macrocyclic mcl1 inhibitors for treating cancer