RS58726B1

RS58726B1 - Kompozicije insulina sa brzim dejstvom

Info

Publication number: RS58726B1
Application number: RS20190582A
Authority: RS
Inventors: Michael Edward Christe; Thomas Andrew Hardy
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 2014-05-08
Filing date: 2015-05-04
Publication date: 2019-06-28
Also published as: EP3536380B8; WO2015171484A1; CN106456717B; TN2016000443A1; MX367521B; SG11201608424WA; HUE055742T2; EP3536380B1; IL248350B; US9439952B2; CL2016002772A1; DK3140008T3; HRP20211415T1; SI3536380T1; MX2016014643A; ES2733639T3; LT3140008T; PE20161408A1; US20160367640A1; PL3536380T3

Description

Opis

[0001] Predmetni pronalazak je farmaceutska kompozicija insulina za upotrebu u tretmanu dijabetesa da bi se neutralisao post-prandijalni porast nivoa glukoze u krvi i za akutni tretman hiperglikemije. Kompozicija uključuje humani insulin ili analog insulina i treprostinil. Kompozicija ima brže preuzimanje insulina sa mesta injekcije od postojećih komercijalnih kompozicija insulina, i dovoljno je stabilna za dugotrajno skladištenje. Kompozicija je korisna za obezbeđivanje aktivnosti insulina za vreme jela ili akutni tretman hiperglikemije kada je potreban insulin.

[0002] Profil dejstva insulina tokom vremena je važan za kontrolu post-prandijalnih nivoa glukoze u krvi. Kod zdravih individua, pankreas naglo izlučuje insulin kao odgovor na usvojenu hranu, što rezultuje u povećanim nivoima insulina u okviru nekoliko minuta. Kod individua sa dijabetesom tipa 1 i kod određenih individua sa tipom 2 dijabetesa, insulin se mora primeniti. Međutim, primenjeni insulin ulazi sporo u krv. Prespor početak i neadekvatno oslobađanje insulina na početku obroka dovodi do hiperglikemije nakon jela. Predugo trajanje dejstva i višak insulina između obroka izaziva postprandijalnu hipoglikemiju i može doprineti dobitku težine.

[0003] Prethodno je pokušavano da se smanji vreme dejstva insulinskih proizvoda. Rani napori da se razviju takvi proizvodi uključivali su razvoj novih analoga insulina koji "brzo deluju", kao što je insulin lizpro (HUMALOG®) i insulin aspart (NOVOLOG®), koji postižu brzo dejstvo preko promena u aminokiselinskim sekvencama u odnosu na sekvence aminokiselinskih lanaca u humanom insulinu. Drugi analog, insulin glulizin (APIDRA®), nema cink i ne formira stabilizujuće heksamere. APIDRA® stoga zahteva dodatno stabilizujuće sredstvo, polisorbat 20. Analozi insulina sa brzim dejstvom postaju dostupni 1990-tih i ranih 2000-tih. Čak i sa takozvanim analozima insulina sa brzim dejstvom, maksimalni nivo insulina nije postignut do 50-90 minuta nakon injekcije. Ovo je sporije nego kada se insulin oslobađa iz pankreasa koji normalno funkcioniše i ne odgovara uvek profilima apsorpcije ugljenih hidrata.

[0004] Drugi pristup koji je istražen da se postigne brzo dejstvo je traženje sastojaka koji poboljšavaju vremenski profil dejstva insulina kada su obezbeđeni u kombinaciji sa insulinom. Na primer, 1980-tih je tvrđeno da prostaglandin E1 ubrzava apsorpciju insulina kada je primenjen u kombinaciji sa insulinom. Williams, et al., 1 Diabetic Med. 109-13 (1984). Prostaglandin E1, međutim, je hemijski nestabilan, minimalno rastvorljiv u vodi, i brzo se katabolizuje, što nisu poželjne osobine za upotrebu u kompozicijama insulina. Drugo sredstvo za koje je tvrđeno da ubrzava apsorpciju insulina je aprotinin inhibitor proteaze, ali je aprotinin nepogodan za ponovljenu primenu usled njegiovog potencijala da indukuje imunološke reakcije. D.R. Owens, et al., 25 BR. J. CLIN. PHARMAC. 453-456 (1988). Nedavno, tvrđeno je da brži početak dejstva u poređenju sa postojećim insulin terapijama može se postići dodavanjem nikotinskog jedinjenja, kao što je nikotinamid, i aminokiselina arginin, i izborno glutaminska kiselina. Videti U.S. Patent No.8,324,157.

[0005] Međutim, ostaje potreba za kompozicijama insulina, namenjenim za upotrebu u vreme obroka, koje: imaju brže usvajanje insulina sa mesta injekcije i brži početak dejstva od postojećih insulinskih proizvoda; hemijski i fizički su stabilni tokom produženog skladištenja da bi se minimizovali bezbednosni rizici i osigurala preciznost i efikasnost doze; ne rezultuju u neprihvatljivim nivoima bola na mestu injekcije; i/ili zahtevaju minimalni broj sastojaka i/ili ekscipijenata da bi se postigla poboljšanja u vremenu-aktivnosti uz održavanje dovoljne stabilnosti.

[0006] Predmetni pronalazak teži obezbeđivanju formulacija koje ispunjavaju ove potrebe. Naročito, predmetni pronalazak obezbeđuje formulacije insulina i treprostinila koji imaju brže usvajanje insulina u krv. Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje brži početak dejstva i/ili apsorpciju od postojećih komercijalnih insulinskih proizvoda. Dodatno, formulacije prema predmetnom pronalasku su dovoljno stabilne. Dodatno, primena formulacija prema predmetnom pronalasku ne rezultuje u neprihvatljivom bolu na mestu injekcije. Formulacije prema predmetnom pronalasku postižu ove efekte uz istovremeno korišćenje minimalnog broja dodatnih komponenti.

[0007] Prema prvom aspektu predmetnog pronalaska, obezbeđena je kompozicija koja sadrži insulin i treprostinil.

[0008] U jednom primeru izvođenja, insulin je izabran iz grupe koja se sastoji od humanog insulina, ili strukturne varijante sa brzim dejstvom, mutanta, ili analoga humanog insulina, kao što je insulin lizpro, insulin aspart i insulin glulizin. U poželjnom primeru izvođenja, insulin je insulin lizpro. U jednom primeru izvođenja, koncentracija insulin lizpro je od oko 40 do oko 500 IU/mL. Poželjno, koncentracija insulin lizpro je ili 100 IU/mL ili 200 IU/mL.

[0009] Količina treprostinil u kompoziciji mora biti dovoljna da bi rezultovala u početku dejstva i/ili apsorpciji koja je brža od one insulinske formulacije bez treprostinila.

Koncentracija treprostinil korišćena u kompozicijama prema predmetnom pronalasku je u opsegu od oko 0.01 do oko 30 mM, naročito od oko 0.05 do oko 26 mM, oko 0.05 do 0.3 mM, oko 0.1 do 0.5 mM, oko 0.3 do 1.5 mM, oko 0.5 do 5.1 mM, oko 1.5 do 5.9 mM, oko 5.1 do 12.8 mM, oko 5.9 do 20 mM, oko 12.8 do 24 mM, oko 20 do 26 mM, ili oko 26 do 30 mM, particularly either oko 0.05, 0.1, 0.3, 0.5, 1.5, 5.1, 5.9, 12.8, 20, 24 ili 26 mM. Insulin i treprostinil su prisutni u kombinaciji sa fiksnom dozom.

[0010] U primeru izvođenja predmetnog pronalaska, kompozicija sadrži jedan ili više konzervansa. U poželjnom primeru izvođenja, jedan ili više konzervansa je izabrano iz grupe koja se sastoji od fenola, meta-krezola, i benzil alkohola. Poželjno, konzervans je meta-krezol. U jednom primeru izvođenja, koncentracija meta-krezola je od oko 2.5 mg/mL do oko 3.8 mg/mL. Poželjno, koncentracija meta-krezola je oko 3.15 mg/mL.

[0011] U primeru izvođenja predmetnog pronalaska, kompozicija sadrži tonično sredstvo. U primeru izvođenja, tonično sredstvo je izabrano iz grupe koja se sastoji od glicerola i natrijum hlorida. U poželjnom primeru izvođenja, tonično sredstvo je glicerol. U drugom poželjnom primeru izvođenja, koncentracija glicerola je od oko 5 do oko 20 mg/mL. Poželjno, koncentracija glicerola je oko 16 mg/mL.

[0012] U jednom primeru izvođenja, kompoziocija može dodatno sadržati jedno ili više stabilizacionih sredstava. U poželjnom primeru izvođenja, jedno ili više stabilizacionih sredstava je izabrano iz grupe koja se sastoji od cinka, natrijum hlorida, kalcijum hlorida, i arginina. Poželjno, stabilizacionio sredstvo je cink. U kompozicijama se može obezbediti cink oksid u količini dovoljnoj da se obezbedi željeni broj atoma cinka. Kompozicije prema određenim primerima izvođenja predmetnog pronalaska uključuju cink u odnosu od oko 2-4 atoma cinka na šest molekula insulina. Određene poželjne kompozicije će imati oko 2.5-3.5 atoma cinka po šest molekula insulina. U određenim primerima izvođenja, koncentracija cinka je od oko 0.00525 mg/mL do oko 0.131 mg/mL. Poželjno, kada je koncentracija insulina oko 100 IU/mL, koncentracija cinka je oko 0.0197 mg/mL.

[0013] U primeru izvođenja, kompozicija može dodatno sadržati puferujuće sredstvo. U određenim primerima izvođenja, puferujuće sredstvo je izabrano iz grupe koja se sastoji od fosfatnih pufera, kao što je dinatrijum fosfat, TRIS (2-amino-2-hidroksimetil-propan-1,3-diol; trometamin) ili natrijum acetat. U određenim poželjnim primerima izvođenja, puferujuće sredstvo je fosfat ili TRIS.

[0014] U određenim primerima izvođenja pronalaska, pH kompozicija je oko 7.0 do oko 7.8. Poželjno, pH je oko 7.4.

[0015] U jednom primeru izvođenja, kompozicija sadrži insulin lizpro u koncentraciji od oko 40 do oko 500 IU/mL, treprostinil u koncentraciji od oko 0.01 do oko 30 mM, meta-krezol u koncentraciji od oko 2.5 do oko 3.8 mg/mL, glicerol u koncentraciji od oko 5 do oko 20 mg/mL, cink u koncentraciji od oko 0.00525 do oko 0.131 mg/mL, i pH kompozicije od oko 7.0 do oko 7.8. U poželjnom primeru izvođenja, koncentracija insulina je oko 100 IU/mL, koncentracija treprostinila je od oko 0.05 do oko 26 mM, koncentracija cinka je oko 0.0197 mg/mL, koncentracija meta-krezola je oko 3.15 mg/mL, koncentracija glicerola je oko 16 mg/mL, i pH kompozicije je oko 7.4.

[0016] Otkriven je postupak za tretiranje dijabetesa koji sadrži primenu na čoveka kome je to potrebno efikasne doze bilo koje od prethodno pomenutih kompozicija.

[0017] Prema drugom aspektu predmetnog pronalaska, obezbeđena je bilo koja od prethodno pomenutih kompozicija za upotrebu kao medikament. U primeru izvođenja, upotreba kompozicije je za upotrebu u tretmanu dijabetesa. Takođe je otkrivena upotreba bilo koje od prethodno pomenutih kompozicija za proizvodnju medikamenta za tretiranje dijabetesa.

[0018] Prema trećem aspektu predmetnog pronalaska, obezbeđen je proizvodni artikl koji sadrži bilo koju od prethodno pomenutih kompozicija. U jednom primeru izvođenja, proizvodni artikl je vijalica za višestruko korišćenje. U drugom primeru izvođenja, proizvodni artikl je injektor u obliku olovke za višestruku upotrebu. U drugom primeru izvođenja, proizvodni artikl je pumpni uređaj za neprekidnu potkožnu infuziju insulina.

[0019] Ovde je otkriven insulin za upotrebu u kombinaciji sa treprostinilom. Ovde je dodatno otkriven treprostinil za upotrebu u kombinaciji sa insulinom.

[0020] Početak dejstva i/ili profil apsorpcije za insulinski proizvod može se meriti na više načina. Na primer, koncentracije insulina u serumu mogu se meriti da bi se izračunali farmakokinetički parametri releventni za vreme dejstva, kao što je vreme do maksimalne koncentracije insulina (Tmax), kao i maksimalna koncentracija insulina (Cmax), i vreme da bi se dostiglo ukupno izlaganje insulinu, koje se meri kao ukupna površina pod krivom koncentracije insulina od 0 do beskonačnosti (AUCinf). Slično tome, stopa infuzije glukoze (GIR) neophodna da se održe normalne koncentracije glukoze u serumu nakon primene insulina obezbeđuju direktnu meru farmakodinamskog dejstva insulina. Predmetni pronalazak obezbeđuje brže preuzimanje insulina u krv i/ili brži početak dejstva od postojećih komercijalnih insulinskih proizvoda kao što se ogleda, na primer, u kraćem Tmax, kraćem vremenu da se dostigne 50% Cmax(rano 50% Tmax), kraće vreme za izbacivanje 50% Cmax(kasno 50% Tmax), kraće vreme da se postigne 10%, 20% ili 50% AUCinf, kraće vreme do maksimalne GIR ili 50% maksimalne GIR, i/ili drugih farmakokinetičkih i/ili farmakodinamskih parametara koji bi odražavali bržu apsorpciju ili dejstvo insulina.

[0021] Kada je korišćeno ovde, termin "kompozicija" se odnosi na kombinaciju fiksne doze insulina i treprostinila, naznačeno time da su insulin, treprostinil, i bilo koji drugi sastojci ili ekscipijenti, kombinovani u jednoj kombinovanoj formulaciji.

[0022] Kada je korišćeno ovde, "insulin" označava humani insulin ili strukturnu varijantu sa brzim dejstvom, mutant, ili analog humanog insulina koji ima funkcionalnu aktivnost ali brži početak dejstva od humanog insulina. Određeni analozi humanog insulina sa brzim dejstvom su insulin lizpro, insulin aspart, i insulin glulizin. Insulin za komercijalne proizvode može se proizvesti korišćenjem postupaka rekombinantne DNK ili hemijskom sintezom. Rekombinantni postupci su dobro poznati i veoma su poželjni. Molekul humanog insulina (CAS No.11061-68-0) sastoji se od dva aminokiselinska lanca, A i B, čije su sekvence dobro poznate.

[0023] A-lanac humanog insulina ima sledeću sekvencu aminokiselina: Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Asn (SEQ ID NO: 1).

[0024] B-lanac humanog insulina ima sledeću sekvencu aminokiselina: Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr (SEQ ID NO: 2). Lanci su povezani sa dve disulfidne veze: CysA7-CysB7 i CysA20-CysB19. A-lanac ima intra-lančanu disulfidnu vezu na CysA6-CysA11. Humani insulin ima empirijsku formulu C257H383N65O77S6i molekulsku težinu od 5808.

[0025] Insulin lizpro (nekada označen kao KPB), supstanca leka u HUMALOG®, je identičan humanom insulinu u odnosu na njegovu primarnu aminokiselinsku sekvencu izuzev inverzije prirodne prolin-lizin sekvence na B lancu na pozicijama 28 i 29 (28B-L-Lizin-29B-L-prolin humani insulin). Pokazano je da je insulin lizpro (CAS No. 133107-64-9) ekvipotentan sa humanim insulinom na molarnoj osnovi ali je njegov efekat nakon potkožne injekcije brži i kraćeg trajanja nego onaj od rastvorljivog humanog insulina. HUMALOG® sadrži m-krezol kao konzervans i stabilizujuće sredstvo, modifikator toničnosti (glicerin), puferujuće sredstvo (dinatrijum fosfat), stabilizator (cink oksid) i pH podešavanje za vehikulum.

[0026] Molekul insulin lizpro sastoji se od A-lanca humanog insulina (SEQ ID NO. 1) unakrsno vezanog sa B-lancem insulin lizpro, čije su aminokiselinske sekvence date sa SEQ ID NO: 3, u nastavku:

Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Lys Pro Thr (SEQ ID NO: 3).

Hemijska formula insulin lizpro je C257H383N65O77S6i njegova molekulska težina je oko 5808. Jedna jedinica insulin lizpro je ekvivalentna sa 0.0347 mg insulin lizpro.

[0027] Insulin aspart (CAS No. 116094-23-6), supstanca leka u NOVOLOG®, je drugi insulin analog sa brzim početkom dejstva. Njegova struktura se sastoji od A-lanca humanog insulina (SEQ ID NO: 1) i B-lanca u kome je Pro na B28 zamenjen sa Asp (Pro-B28-Asp humanog insulina), što se odražava u sledećoj aminokiselinskoj sekvenci:

Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Asp Lys Thr (SEQ ID NO: 4).

Insulin aspart (28B asparaginska kiselina-humani insulin) ima empirijsku formulu C256H381N65O79S6i molekulsku težinu od oko 5826. Jedna jedinica insulin aspart odgovara 6 nmol, što odgovara 0.035 mg anhidrovanog insulin asparata bez soli.

[0028] Insulin glulizin (CAS No. 207748-29-6), supstanca leka u APIDRA®, je još jedan insulin analog sa brzim početkom dejstva. Molekul insulin glulizina sastoji se od A-lanca humanog insulina (SEQ ID NO.1) i modifikovanog B-lanca (Asn-B3-Lys, Lys-B29-Glu) u poređenju sa humanim insulinom, što se odražava u sledećoj aminokiselinskoj sekvenci: Phe Val Lys Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Glu Thr (SEQ ID NO: 5).

[0029] Insulin glulizin (3B-lizin-29B-glutaminska kiselina-humani insulin) ima empirijsku formulu C258H384N64O78S6i molekulsku težinu od 5823. Jedna jedinica insulin glulizina približno odgovara 0.0349 mg insulin glulizina.

[0030] Sledeća šema prikazuje aminokiselinske sekvence i disulfidne veze humanog insulina i supstanci leka u insulinskim proizvodima sa brzim dejstvom koji su trenutno odobreni za upotrebu u tretiranju povećanja glukoze u krvi nakon obroka:

[0031] Kompozicije predmetnog pronalaska imaju koncentracije insulina između 0.24 i 3 mM (40 – 500 IU/mL; 1.4 mg/mL - 17.5 mg/mL). Kompozicije predmetnog pronalaska najčešće imaju specifične koncentracije od 40, 100, 200, 300, 400, i 500 IU/mL (1.4, 3.5, 7, 10.5, 14, i 17.5 mg/mL). Poželjne kompozicije imaju koncentracije od 100 IU/mL ili 200 IU/mL.

[0032] Poboljšanja u profilu vremena dejstva prethodno pomenutih analoga insulina demonstrirana u predmetnom pronalasku su postignuta upotrebom malih količina prostaciklin analoga treprostinila (CAS No.81846-19-7). Hemijski naziv treprostinila je (1R,2R,3aS,9aS)-[[2,3,3a,4,9,9a-heksahidro-2-hidroksi-1-[(3S)-3-hidroksioktil]-1H-benz[f]inden-5-il]oksi]sirćetna kiselina. Ona ima molekulsku težinu od 390.52 i molekulsku formulu C23H34O5. Treprostinil je aktivni sastojak u komercijalnim proizvodima lekovima koji se prodaju pod trgovačkim nazivima Remodulin®, Tyvaso® i Orenitran™, koji su indikovani za tretman plućne arterijske hipertenzije da bi se smanjili simptomi povezani sa vežbanjem (Remodulin®) i da bi se poboljšala sposobnost vežbanja (Tyvaso® i Orenitran™). Tyvaso® i Orenitran™ su, respektivno, inhalacioni i oralni dozni oblici, i Remodulin® je indikovan za potkožnu ili intravensku upotrebu kao neprekidna infuzija. Remodulin® je trenutno dostupan u 1, 2.5, 5 i 10 mg/mL doznoj snazi, i svaki mL takođe sadrži 3 mg metakrezola, 6.3 mg natrijum citrata, ili 5.3 mg (1, 2.5 i 5 mg/mL snage) ili 4.0 mg (10 mg/mL snage) natrijum hlorida, i vode za injekciju.

[0033] Put primene za kompozicije predmetnog pronalaska će tipično biti samoprimenljivom potkožnom injekcijom, npr., upotrebom šprica ili injektor u obliku olovke, ili neprekidnom potkožnom infuzionom terapijom insulinom sa pumpnim uređajem za insulin, preko intravenskog, intradermalnog, ili intraperitonealnog puta mogu se takođe koristiti. Poželjno, put primene je samo-primenjiva potkožna injekcija. Doza injektiranog aktivnog sredstva biće određena od strane pacijenta u konsultaciji sa pacijentovim lekarom.

[0034] Kompozicije su sterilne kada su prvi put proizvedene. Kada je kompozicija obezbeđena u vijalici za višestruku upotrebu ili kertridžu, anti-mikrobno jedinjenje konzervans ili smeša jedinjenja koja je kompatibilna sa drugim komponentama formulacije je tipično dodata sa dovoljnom jačinom da bi se ispunili regulatorni i farmakopejski zahtevi za anti-mikrobni konzervans. Videti U.S. Pharmacopeia Monographs. Insulin lizpro injection. USP29-NF24; British Pharmacopeia Monographs 2008 Volume III: Insulin aspart injection; U.S. Pharmacopeia Monographs. Insulin assays; and U.S. Pharmacopeia general chapters. USP29-NF24. Rockville, MD: U.S. Pharmacopeial Convention; 2005. Antimicrobial effectiveness testing; pp.2499-2500. Poželjni konzervansi su aril kiseline i fenolna jedinjenja, ili smeše takvih jedinjenja. Efikasne koncentracije mogu se lako utvrditi korišćenjem prethodno pomenutih postupaka. Konzervansi najčešće korišćeni u insulinskim proizvodima su fenol, m-krezol, i benzil alkohol. Sadašnje komercijalne kompozicije, na primer, sadrže 3.15 mg/mL m-krezola (HUMALOG® i APIDRA®), 1.72 mg/mL m-krezola i 1.50 mg/mL fenola (NOVOLOG®), i 2.5 mg/mL m-krezola (HUMULIN® R U-500).

[0035] Poželjno je približno pogoditi toničnost (tj., osmolalnost) telesnih tečnosti na mestu injekcije koliko je god bliže moguće kada se primenjuju kompozicije jer rastvori koji nisu približno izotonični sa telesnim tečnostima mogu proizvesti osećaj bolnog uboda po primeni. Stoga, poželjno je da kompozicije budu približno izotonične sa telesnim tečnostima na mestima injekcije. Ukoliko je osmolalnost kompozicije u odsusutvu sredstva za toničnost dovoljno manja od osmolalnosti tkiva (za krv, oko 300 mOsmol/kg; Evropski farmakopejski zahtev za osmolalnost je > 240 mOsmol/kg), onda se sredstvo za toničnost generalno treba dodati da bi se povećala toničnost kompozicije do oko 300 mOsmol/kg. Tipična sredstva za toničnost su glicerol (glicerin) i natrijum hlorid. Količina toničnog sredstva za dodavanje se lako određuje korišćenjem standardnih tehnika. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, David B. Troy and Paul Beringer, eds., Lippincott Williams & Wilkins, 2006, pp.

257-259; Remington: Essentials of Pharmaceutics, Linda Ed Felton, Pharmaceutical Press, 2013, pp.277-300.

[0036] Ukoliko je neophodno, kompozcija može dodatno sadržati jedan ili više stabilizujućih sredstava, kao što su cink, natrijum hlorid, kalcijum hlorid, i arginin. Cink je obično korišćeno stabilizaciono sredstvo, i može se dodati cink oksid da bi se obezbedio željeni broj atoma cinka. Neke komercijalne insulinske kompozicije imaju oko 2.4 atoma cinka po šest molekula insulina (HUMULIN® R U-500), i neke imaju oko 3.0 atoma cinka po šest molekula insulina (HUMALOG®, NOVOLOG®).

[0037] Ukoliko je neophodno, puferujuće jedinjenje se može uključiti. Primeri takvih puferujućih jedinjenja su fosfatni puferi, kao što je dinatrijum fosfat, TRIS ili natrijum acetat. Fosfat ili TRIS puferi su poželjni.

[0038] pH za komercijalne insulinske formulacije je obično u opsegu od 7.2 do 7.6, sa 7.4 6 0.1 kao uobičajenom ciljnom pH. pH predmetnog pronalaska je tipično 7.0 do 7.8 i podešena je korišćenjem fiziološki odgovarajućih kiselina i baza, tipično hlorovodonične kiseline 10% natrijum hidroksida 10%. Poželjno, pH je oko 7.4.

[0039] U primeru izvođenja, početak dejstva i/ili profili apsorpcije kompozicija prema predmetnom pronalasku su najmanje oko 20% brži od kompozicija koje sadrže isti insulin ali koje ne sadrže treprostinil, kao što je mereno, na primer, sa: farmakokinetičkim parametrima, uključujući ali se ne ograničavajući na Tmax, rano 50% Tmax, kasno 50% Tmax, Cmax, i/ili vreme da se postigne 10%, 20% ili 50% ukupnog AUCinf; i/ili farmakodinamski parametri, kao što je vreme za postizanje maksimalne GIR ili vreme da se dostigne 50% maksimalne GIR. U sledećem primeru izvođenja, početak dejstva i/ili apsorpcioni profili kompozicija prema predmetnom pronalasku su najmanje oko 25% brži od kompozicija koje sadrže isti insulin ali koje ne sadrže treprostinil, kao što je mereno, na primer sa farmakokinetičkim i/ili farmakodinamskim parametrima, uključujući one pomenute prethodno. U sledećem primeru izvođenja, početak dejstva i/ili profili apsorpcije kompozicija prema predmetnom pronalasku su najmanje oko 30% brži od kompozicija koje sadrže isti insulin ali koje ne sadrže treprostinil, kao što je mereno, na primer farmakokinetičkim i/ili farmakodinamskim parametrima, uključujući one prethodno pomenute.

[0040] Predmetni pronalazak takođe predviđa sledeći neograničavajući spisak primera izvođenja, koji su dodatno opisani ovde na drugim mestima:

Farmaceutska kompozicija koja sadrži insulin, treprostinil, jedan ili više konzervansa, sredstvo za toničnost, jedan ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, puferujuće sredstvo.

1

[0041] Farmaceutska kompozicija koja sadrži insulin, treprostinil, jedan ili više konzervanasa, sredstvo za toničnost, jedno ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, pufersko sredstvo, naznačeno time da je insulin izabran iz grupe koja se sastoji od humanog insulina, insulin lizpro, insulin aspart i insulin glulizine, jedan ili više konzervansa je izabrano iz grupe koja se sastoji od fenola, meta-krezola, i benzil alkohola, sredstvo za toničnost je izbarano iz grupe koja se sastoji od glicerola i natrijum hloridaa, jedno ili više stabilizujućih sredstava izabrano je iz grupe koja se sastoji od cinka, natrijum hlorida, kalcijum hlorida, i arginina i puferujuće sredstvo je izabrano iz grupe koja se sastoji od fosfata, TRIS ili natrijum acetata.

[0042] Farmaceutska kompozicija koja sadrži insulin, treprostinil, jedan ili više konzervanasa, sredstvo za toničnost, jedno ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, pufersko sredstvo, naznačeno time da insulin je insulin lizpro, konzervans je meta-krezol, sredstvo za toničnost je glicerol, stabilizaciono sredstvo je cink, i puferujuće sredstvo je TRIS.

[0043] Farmaceutska kompozicija koja sadrži insulin, treprostinil, jedan ili više konzervanasa, sredstvo za toničnost, jedno ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, pufersko sredstvo, naznačeno time da insulin je insulin lizpro, konzervans je meta-krezol, sredstvo za toničnost je glicerol, stabilizaciono sredstvo je cink, i puferujuće sredstvo je fosfat.

[0044] Farmaceutska kompozicija koja sadrži insulin, treprostinil, jedan ili više konzervanasa, sredstvo za toničnost, jedno ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, pufersko sredstvo, naznačeno time da insulin je insulin lizpro, konzervans je meta-krezol, sredstvo za toničnost je natrijum hlorid, stabilizaciono sredstvo je cink, i puferujuće sredstvo je TRIS.

[0045] Farmaceutska kompozicija koja sadrži insulin, treprostinil, jedan ili više konzervanasa, sredstvo za toničnost, jedno ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, pufersko sredstvo, naznačeno time da insulin je insulin lizpro, konzervans je meta-krezol, sredstvo za toničnost je glicerol, stabilizaciono sredstvo je cink, i puferujuće sredstvo je fosfat.

[0046] Farmaceutska kompozicija koja sadrži insulin, treprostinil, jedan ili više konzervanasa, sredstvo za toničnost, jedno ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, pufersko sredstvo, naznačeno time da insulin je insulin lizpro, konzervans je meta-krezol, sredstvo za toničnost je natrijum hlorid, stabilizaciono sredstvo je cink, i puferujuće sredstvo je fosfat, i naznačeno time da je koncentracija insulin lizpro od oko 40 do oko 500 IU/mL, koncentracija treprostinila je od oko 0.01 do oko 30 mM, koncentracija cinka od oko 0.00525 mg/mL do oko 0.131 mg/mL, koncentracija meta-krezola je od oko 2.5 mg/mL do oko 3.8 mg/mL, i koncentracija glicerola je od oko 5 do oko 20 mg/mL.

[0047] Famraceutska kompozicija koja sadrži insulin, treprostinil, jedan ili više konzervanasa, sredstvo za podešavanje toničnosti, jedan ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, puferujuće sredstvo, pri čemu insulin je insulin lizpro, konzervans je meta-krezol, sredstvo za podešavanje toničnosti je natrijum hlorid, stabilizujuće sredstvo je cink, i puferujuće sredstvo je fosfat, i pri čemu je koncentracija insulina lizpro oko 100 IU/mL, koncentracija treprostinila je od oko 0.05 do oko 26 mM, koncentracija cinka je oko 0.0197 mg/mL, koncentracija meta-krezola je oko 3.15 mg/mL i koncentracija glicerola je oko 16 mg/mL.

[0048] Farmaceutska kompozicija koja sadrži insulin, treprostinil jedan ili više konzervanasa, sredstvo za podešavanje toničnosti, jedan ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, puferujuće sredstvo, pri čemu insulin je insulin lizpro, konzervans je meta-krezol, sredstvo za podešavanje toničnosti je natrijum hlorid, stabilizujuće sredstvo je cink, i puferujuće sredstvo je TRIS, i pri čemu je koncentracija insulina lizpro oko 100 IU/mL, koncentracija treprostinila je od oko 0.05 do oko 26 mM, koncentracija cinka je oko 0.0197 mg/mL, koncentracija metakrezola je oko 3.15 mg/mL i koncentracija glicerola je oko 16 mg/mL, i pri čemu je pH kompozicije oko 7.4.

[0049] Farmaceutska kompozicija koja sadrži bilo koju od gore navedenih kompozicija, pri čemu je početak delovanja i/ili profil apsorpcije kompozicije najmanje oko 20% brži od kompozicija koje sadrže isti insulin, ali koje ne sadrže treprostinil, kao što je mereno, na primer, preko sledećih: Tmax, rani 50% Tmax, kasni 50% Tmax, Cmax, vreme da se dostigne 10%, 20% ili 50% ukupne AUCinf, vreme da se dostigne maksimalna GIR, i/ili vreme da se postigne 50% maksimalne GIR. Farmaceutska kompozicija koja sadrži bilo koju od gore navedenih kompozicija, pri čemu je početak delovanja i/ili profil apsorpcije kompozicije najmanje oko 25% brži od kompozicija koje sadrže isti insulin, ali koje ne sadrže treprostinil, kao što je mereno, na primer, preko sledećih: Tmax, rani 50% Tmax, kasni 50% Tmax, Cmax, vreme da se dostigne 10%, 20% ili 50% ukupne AUCinf, vreme da se dostigne maksimalna GIR, i/ili vreme da se dostigne 50% maksimalne GIR. Farmaceutska kompozicija koja sadrži bilo koju od gore navedenih kompozicija, pri čemu je početak delovanja i/ili profil apsorpcije kompozicije najmanje oko 30% brži od kompozicija koje sadrže isti insulin, ali ne sadrže treprostinil, kao što je mereno, na primer, preko sledećih: Tmax, rani 50% Tmax, kasni 50% Tmax, Cmax, vreme da se dostigne 10%, 20% ili 50% ukupne AUCinf, vreme da se dostigne maksimalna GIR, i/ili vreme da se dostigne 50% maksimalne GIR.

[0050] Farmaceutska kompozicija koja sadrži bilo koju od gore navedenih kompozicija, pri čemu se kompozicija primenjuje putem subkutane injekcije.

[0051] Ovde su takođe otkriveni:

Postupak za lečenje dijabetesa koji sadrži primenu na čoveka kod koga postoji potreba za tim efikasne doze farmaceutske kompozicije koja sadrži insulin, treprostinil, jedan ili više konzervanasa, sredstvo za podešavanje toničnosti, jedan ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, puferujuće sredstvo, pri čemu insulin je insulin lizpro, konzervans je meta-krezol, sredstvo za podešavanje toničnosti je glicerol ili natrijum hlorid, stabilizujuće sredstvo je cink, i puferujuće sredstvo je fosfat ili TRIS, i pri čemu je početak delovanja i/ili profil apsorpcije kompozicije najmanje oko 20% brži od kompozicija koje sadrže isti insulin, ali koje ne sadrže treprostinil, kao što je mereno, na primer, pomoću sledećih: Tmax, rani 50% Tmax, kasni 50% Tmax, Cmax, vreme da se dostigne 10%, 20% ili 50% od ukupne AUCinf, vreme da se dostigne maksimalna GIR i/ili vreme da se dostigne 50% maksimalne GIR. Postupak za lečenje dijabetesa koji sadrži primenu na čoveka kod koga postoji potreba za tim efikasne doze farmaceutske kompozicije koja sadrži insulin, treprostinil, jedan ili više konzervanasa, sredstvo za podešavanje toničnosti, jedan ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, puferujuće sredstvo, pri čemu insulin je insulin lizpro, konzervans je meta-krezol, sredstvo za podešavanje toničnosti je glicerol ili natrijum hlorid, stabilizujuće sredstvo je cink, i puferujuće sredstvo je fosfat ili TRIS, i pri čemu je početak delovanja i/ili profil apsorpcije kompozicije najmanje oko 25% brži od kompozicija koje sadrže isti insulin, ali koje ne sadrže treprostinil, kao što je mereno, na primer, pomoću sledećih: Tmax, rani 50% Tmax, kasni 50% Tmax, Cmax, vreme da se dostigne 10%, 20% ili 50% od ukupne AUCinf, vreme da se dostigne maksimalna GIR i/ili vreme da se dostigne 50% maksimalne GIR. Postupak za lečenje dijabetesa koji sadrži primenu na čoveka kod koga postoji potreba za tim efikasne doze farmaceutske kompozicije koja sadrži insulin, treprostinil, jedan ili više konzervanasa, sredstvo za podešavanje toničnosti, jedan ili više stabilizujućih sredstava, i izborno, puferujuće sredstvo, pri čemu insulin je insulin lizpro, konzervans je meta-krezol, sredstvo za podešavanje toničnosti je glicerol ili natrijum hlorid, stabilizujuće sredstvo je cink, i puferujuće sredstvo je fosfat ili TRIS, i pri čemu je početak delovanja i/ili profil apsorpcije kompozicije najmanje oko 30% brži od kompozicija koje sadrže isti insulin, ali koje ne sadrže treprostinil, kao što je mereno, na primer, pomoću sledećih: Tmax, rani 50% Tmax, kasni 50% Tmax, Cmax, vreme da se dostigne 10%, 20% ili 50% od ukupne AUCinf, vreme da se dostigne maksimalna GIR i/ili vreme da se dostigne 50% maksimalne GIR.

[0052] Pronalazak je dalje ilustrovan sledećim primerima, koje ne bi trebalo tumačiti kao ograničavanje.

Studija stabilnosti

1

[0053] Studija stabilnosti je izvedena za procenu stabilnosti insulina lizpro kada je koformulisan sa treprostinilom. Uzorci za procenu stabilnosti su pripremljeni kombinovanjem formulacije insulina lizpro (Lilly Material # QA415Q) i Remodulin® (United Therapeutics, serija 922017), komercijalno dostupnog proizvoda koji sadrži 1 mg/mL treprostinila, 3 mg/mL m-krezola, 6.3 mg natrijum citrata, 5.3 mg/mL natrijum hlorida, i vodu za injekciju. Svaki mililitar formulacije testirane za stabilnost sadrži insulin lizpro 100 jedinica, 16 mg glicerina, 2.13 mg svobaznog natrijum fosfata, 3.18 mg m-krezola, 0.0197 mg jona cinka, 0.01 mg treprostinila, 0.063 mg natrijum citrata, 0.053 mg natrijum hlorida, 0.0024 mg natrijum hidroksida, i Milli-Q vode. pH je podešena do finalne pH od 7.4 dodavanjem vodenih rastvora hlorovodonične kiseline 1 N i/ili natrijum hidroksida 1 N.

[0054] Rastvor je filtriran upotrebom 50 ml Steriflip Vacuum filtera sa 0.22 mm PES membranom (kat#: SCGP00525, EMD Millipore, Billerica, MD) i podeljen u 7 mL scintilacione bočice sa white urea closure zatvaračem sa zavrtanjem sa ojačanim graničnicima od aluminijumske folije (bočice i poklopci: kat#:03-340-4A, Kimble Chase, Rockwood, TN), inkubirane na 5°C, 25°C, 30°C i 37°C respektivno, i izvučeni za analizu na početku, vremenskim tačkama 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje i 36 dana. Uzorci su takođe izvučeni za analizu na vremenskim tačkama 44, 54 i 66 dana za rastvore inkubirane na 5°C, 25°C i 30°C.

[0055] Ekskluziona hromatografija pod visokim pritiskom (HP-SEC) je korišćena za procenu stabilnosti proteina i kvantitativno određivanje vrsta visoke molekulske težine u svakoj formulaciji upotrebom Agilent 1200 sistema sa UV detekcijom na 214 nm (Agilent Technologies, Santa Clara, CA). Svaki uzorak (5 mL) je injektiran na Tosoh TSKgel G2000SWxl kolonu (Tosoh Bioscience LLC, King of Prussia, PA; 3000 mm x 7.8 mm) i odvojen na stopi protoka od 0.5 mL/min upotrebom pokretne faze koja sadrži 10 mM natrijum fosfat, 10% acetonitril (ACN), i 300 mM NaCl na pH 7.4. Procenat visoke molekusle mase (%HMW) je izračunat deljenjem površina hromatografskog HMW pika na 214 nm pomoću ukupne površine pika.

[0056] SEC rezultati (% HMW) su dati u tabeli u daljem tekstu.

HMW formulacija je manje od 1 % za sve uzorke do 36 dana na 37°C i 66 dana na 30°C, što ukazuje na nizak rizik od nestabilnosti.

[0057] Analiza reverzno-faznom tečnom hromatografijom visokog učinka (RP-HPLC) izvedena je radi procene čistoće proteina na vremenskim tačkama stabilnosti upotrebom Agilent 1200 sistema sa UV detekcijom na 214 nm (Agilent Technologies, Santa Clara, CA). Svaki uzorak (5 mL) je odvojen na 60°C upotrebom 4.6 x 100 mm (3.5 mm) Symmetry Shield RP18 (Waters, Huntingdon Valley, PA) na stopi protoka od 0.9 mL/min sa pokretnom fazom A (0.1% trifluorosirćetna kiselina (TFA) u vodi) i pokretna faza B (0.1% TFA u acetonitrilu). Gradijent pokretne faze B na 0, 3, 5, 20, 25, 27 i 30 min je 10, 10, 20, 45, 90, 10 i 10%, respektivno.

[0058] Koncentracije insulina su izračunate putem integracijom površine pika insulina i poređenjem sa standardom insulina lizpro. Rezultati, prikazani u IU/mL, dati su u daljem tekstu.

1

Minimalan, ukoliko postoji, gubitak insulina je zabeležen za sve uzorke do 36 dana na 37°C i 66 dana na 30°C.

[0059] Procenat uzorka izvan glavnog pika je izračunat deljem hromatografske površine glavnog pika sa ukupnom površinom pika. Rezultati (% izvan glavnog pika) su dati u daljem tekstu.

[0060] Procenat izvan površine glavnog pika je manji od 3% za sve uzorke na 37°C u trajanju od 36 dana i manje od 3.5% za sve uzorke na 30°C u trajanju od 66 dana, što je prihvatljivo za formulacije insulina.

Farmakokinetičke i farmakodinamske studije

[0061] Korišćeno je petnaest dijabetičkih (indukovanih aloksanom), kastriranih, mužjaka Yucatan minijaturne svinje (prosečne starosti 20 meseci i prosečne telesne težine od 42 kg) sa prethodno podešenim vaskularnim pristupnim portovima. Dijabetičke životinje su smeštene pojedinačno i imaju slobodan pristup svežoj vodi u sva vremena. One su hranjene sa dva obroka na dan kućne ishrane S-9 i primale su odgovarajuće održavanje bazalnog i prandijalnog insulina dva puta na dan za upravljanje njihovim dijabetičkim stanjem.

[0062] Test aritkli (formulacije A, B i C u donjoj tabeli) su formulisani i isporučeni preko noći na hladna pakovanja do mesta testa. Humalog insulinska kontrola je 100 IU/mL komercijalni materijal čuvan na mestu testa.

1

[0063] Test artikli su čuvani u frižideru do vremena doziranja i zatim vraćeni u frižider pošto je završeno doziranje svih životinja. U toku perioda doziranja test artikli ostaju u izolovanoj kutiji kada nisu izvučeni iz nje.

[0064] Studija je četvorostrukog unakrsnog dizajna. Ovaj dizajn omogućava da svaka pojedinačna životinja prima svaki od tri test artikala i kontrolni insulin doziranjem jednog test artikla svakog dana studije (4 datuma svaki sa razmakom od 7 dana).

[0065] Dan pre studije, životinje su hranjene sa polovinom nihovog dnevne porcije i primale su 0.2 U/kg Humalog Mix 75/25 Insulina kao njihovu jutarnju održavajuću primenu. Sve ispitivane životinje su gladovale preko noći i nisu primale svoj večernji insulin ili obrok pre primene leka na dan studije.

[0066] Na jutro studije, sve životinje su postavlejen u omče za zadržavanje i pristupljeno je njihovim vaskularnim pristupnim portovima (opremljeni za uzorkovanje krvi) i izvršena je provera prohodnosti. Životinje su po slučajnom izboru postavljene u grupe za tretman (4 grupe n=3-4 po grupi proizvodi n=15 po tretmanu pre bilo kakvih isključenja). Pošto su sakupljena dva polazna uzorka krvi (-30 i -20 min), životinje su vraćene u svoje obore i hranjene su sa ~300 g S-9 hranom. Dve životinje su isključene iz grupe za tretman sa insulin lizpro treprostinil 10 ng zbog neuspeha u ispunjavanju kriterijuma uključenja u studiju polaznog nioa glukoze u krvi iznad 200 mg/dL, i jedna životinja je isključena iz analize rezultata te grupe zbog vrednosti insulina pre doziranja >10,000 pM, proizvodeći n=12 za tu grupu tretmana. Jedna životinja je isključena iz grupe za tretman sa insulin lizpro treprostinil 1 ng zbog neuspeha da ispuni kriterijume za uključenje u studiju polaznog nivoa glukoze u krvi iznad 200 mg/dL, proizvodeći n=14 za tu grupu za tretman.

[0067] Dvadeset minuta posle prikaza potpuno konzumiranog obroka, životinjama je injektiran test artikal 0.2 U/kg (na bazi koncentracije insulina, u proseku od 9 jedinica/svinji) subkutano u bok (0 min) sa Terumo insulin špricem (0.5 ml 1/2" igla). Sve ispitivane životinje imaju slobodan pristup čistoj, svežoj vodi tokom preostalog perioda sakupljanja krvi.

[0068] Krvni pritisak je procenjivan pomoću Cardell Monitor (upotrebom veterinarske manžentne na repu) na -30 i 0 (pre doziranja) minuta za početnu vrednost i zatim 30 i 60 minuta posle doze. Tri uzastopna merenja su izvedena na svakoj vremenskoj tački /- 5 minuta. Prikazani rezultati su srednje vrednosti za tri očitavanja po pojedinačnoj svinji.

[0069] Serijski uzorci krvi (po 2.0 mL) su sakupljani iz svake životinje u sledećim vremenskim tačkama: -30, -20 (zatim su odmah hranjene), 0 (neposredno pre doze), 5, 10, 15, 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120, 150, 180, 240 i 360 minuta posle subkutanog (sc) doziranja.

1

[0070] Nisu zabeleženi štetni događaji tokom trajanja eksperimenta. Glukoza u krvi je praćena u realnom vremenu sa ručnim glukometrima i sve životinje su rutinski posmatrane za kliničke znake hipoglikemije. Krvni pritisak je beležen na -30 i 0 minuta za početne vrednosti i zatim praćen 30 i 60 minuta posle doze za procenu hipotenzije indukovane bilo kojom incidencom. Ne javljaju se nikakve značajne promene. Nisu zabeležene lokalne reakcije mesta injekcije.

[0071] Uzorci krvi (antikoagulant: nijedan [serum]) su održavani na temperaturi sredine u trajanju od najmanje 30 minuta, ali ne više od 2 časa da bi se omogućilo zgrušavanje. Serum je zatim odvojen centrifugiranjem i podeljen u dve alikvote i čuvan zamrznut na približno -70°C.

[0072] Koncentracije glukoze u serumu su određene upotrebom automatskog Cobas c311 Clinical Chemistry Analyzer (Roche Diagnostics, Indianapolis, Indiana). Jednofaktorska analiza varijanse praćena Dunnett-ovim testom poređenja srednje vrednosti grupe izvedena je preko JMP 9 Statistical Discovery pomoću SAS na glukozi u poređenju sa Humalog kontrolom sa značajnošću na p≤0.05. Koncentracije glukoze u serumu (mg/dL) posle tretmana sa kontrolom i test formulacijama (0.2 U/kg u vreme 0) su date u donjoj tabeli.

1

[0073] Insulin plus treprostinil rezultovali su u pomeranju odgovora snižavanja glukoze zavisnog od doze u poređenju sa samim Humalogom. Insulin plus treprostinil takođe su rezultovali u većem opsegu snižavanja glukoze od početne vrednosti nego samo Humalog. Srednja promena glukoze od početne vrednosti (početna vrednost= srednja vrednost -30 i -20 min uzoraka) na medijani Tmax Humalog-a (90 minuta) bio je -129 mg/dL za Humalog, -197 mg/dL za insulin lizpro 1 ng treprostinila, -234 mg/dL insulin lizpro 10 ng Treprostinila, i -237 mg/dL insulin lizpro 400 ng treprostinila. Poređenja srednje vrednosti glukoze upotrebom Dunnett-ove metode pokazuje statistički značajne razlike između uzorka insulin lizpro 400 ng treprostinila u poređenju sa Humalog kontrolom tako rano kao što je 45 min (p= 0.0148). Do 60 minuta i do 150 minuta smanjenja glukoze za insulin lizpro 400 ng treprostinila i insulin lizpro 10 ng treprostinila su statistički različita od Humalog kontrola. Nije bilo prepoznatljive ili statističke (Dunnett-ove) razlike u srednjem sistolnom ili dijastolnom krvnom pritisku na početku (-30 & 0 min) ili posle tretmana sa bilo kojom od tri doze insulin lizpro treprostinil u poređenju sa Humalog kontrolom.

[0074] U vezi sa farmakokinetikom, nivoi insulina za sve PK uzorke seruma su mereni upotrebom radioimunološke analize ukupnog insulina (RIA). Donje i gornje granice kvantitativnog određivanja za analizu su 20 pM i 5000 pM, respektivno. Pretpostavljeno je da su vrednosti ispod donje granice kvantitativnog određivanja 20 pM. Ne-kompartmentalne farmakokinetičke analize izvedene upotrebom Phoenix WinNonlin v6.3.

2

Skraćenice: Tmax– vreme do maksimalne koncentracije insulina, Cmax– maksimalne koncentracije insulina, AUCINF– površina ispod krive koncentracije insulina od 0 do beskonačnosti, CL/F - klirens/biodostupnost.

[0075] Kombinacija insulina lizpro sa treprostinilom proizvela je pomeranje u PK profilima insulina zavisno od doze, u poređenju samo sa Humalog-om. Medijane Tmaxvrednosti bile su 90 min, 60 min, 45 min i 30 min respektivno za samo Humalog, insulin lizpro treprostinil 1 ng, insulin lizpro treprostinil 10 ng i insulin lizpro treprostinil 400 ng. Dodavanje treprostinila takođe je dovelo do povećanja u Cmaxinsulina u poređenju samo sa Humalog-om. Ranija, viša Cmaxje u skladu sa onim šta bi se očekivalo za povećanu stopu apsorpcije. Ukupno izlaganje insulinu (AUCINF) bilo je približno 30% više za sve tri grupe koje sadrže treprostinil, u odnosu samo na Humalog.

[0076] Uzeti zajedno, pomeranja u PK profilima insulina i rezultujućim profilima glikoze kada je treprostinil primenjivan sa insulinom lizpro ukazuju na to da treprostinil olakšava bržu apsorpciju insulina, u odnosu na samo Humalog. Poboljšanja u vremenu delovanja su postignuta bez bilo kakvih prepoznatljivih efekata na krvni pritisak kod ovih životinja.

[0077] Studije opisane u prethodnom tekstu pokazuju da dodavanje malih količina treprostinila u formulacije koje sadrže insulin lizpro može da uzrokuje ranije Tmaxi višu Cmaxu farmakokinetičkom profilu insulina kao i ranije i veće efekte snižavanja glukoze, i da su takve formulacije dovoljno stabilne.

2

Claims

Patentni zahtevi

1. Farmaceutska kompozicija koja sadrži insulin i treprostinil, naznačena time što je koncentracija treprostinila od 0.01 do 30 mM.

2. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što insulin je izabran od humanog insulina, insulina lizpro, insulina aspart ili insulina glulizina.

3. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2, naznačena time što insulin je insulin lizpro.

4. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačena time što je koncentracija insulina od 40 do 500 IU/mL.

5. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, naznačena time što je koncentracija insulina oko 100 IU/mL.

6. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, naznačena time što je koncentracija treprostinila od 0.05 do 26 mM.

7. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, naznačena time što dodatno sadrži jedan ili više konzervanasa.

8. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 7, naznačena time što su jedan ili više konzervanasa izabrani od fenola, metakrezola ili benzil alkohola.

9. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 8, naznačena time što konzervans je meta-krezol.

10. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 9, naznačena time što je koncentracija meta-krezola od 2.5 mg/mL do 3.8 mg/mL.

11. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 10, naznačena time što je koncentracija meta-krezola oko 3.15 mg/mL.

2

12. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11, naznačena time što dodatno sadrži sredstvo za podešavanje toničnosti.

13. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 12, naznačena time što je srestvo za podešavanje toničnosti izabrano od glicerola ili natrijum hlorida.

14. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 13, naznačena time što je sredstvo za podešavanje toničnosti glicerol.

15. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 14, naznačena time što je koncentracija glicerola od 5 do 20 mg/mL.

16. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15, naznačena time što dodatno sadrži jedno ili više stabilizujućih sredstava.

17. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 16, naznačena time što su jedno ili više stabilizujućih sredstava izabrani od cinka, natrijum hlorida, kalcijum hlorida ili arginina.

18. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 17, naznačena time što stabilizujuće sredstvo je cink.

19. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 18, naznačena time što je koncentracija cinka od 0.00525 mg/mL do 0.131 mg/mL.

20. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-19, naznačena time što dodatno sadrži puferujuće sredstvo.

21. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-20, naznačena time što je pH kompozicije od 7.0 do 7.8.

22. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-21, naznačena time što je pH kompozicije oko 7.4.

23. Farmaceutska kompozicija koja sadrži:

a. insulin lizpro, u koncentraciji od 40 do 500 IU/mL,

b. treprostinil, u koncentraciji od 0.01 do 30 mM,

c. meta-krezol, u koncentraciji od 2.5 do 3.8 mg/mL,

d. glicerol, u koncentraciji od 5 do 20 mg/mL,

e. cink, u koncentraciji od 0.00525 do 0.131 mg/mL, i

f. pH kompozicije je od 7.0 do 7.8.

24. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 23, naznačena time što: koncentracija insulin lizpro je oko 100 IU/mL; koncentracija treprostinila je od 0.05 do 26 mM; koncentracija meta-krezola je oko 3.15 mg/mL; i pH kompozicije je oko 7.4.

25. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-24 za upotrebu u terapiji.

26. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-24 za upotrebu u lečenju dijabetesa.

27. Proizvodni artikl koji sadrži bilo koju od farmaceutskih kompozicija prema patentnim zahtevima 1-24.

28. Proizvodni artikl prema patentnom zahtevu 27 koji je bočica za višestruku upotrebu.

29. Proizvodni artikl prema patentnom zahtevu 27 koji je injektor u obliku olovke za višekratnu upotrebu.

30. Proizvodni artikl prema patentnom zahtevu 27 koji je pumpni uređaj za kontinuiranu subkutanu infuzionu terapiju insulinom.

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5

2