[go: up one dir, main page]

RS56826B1 - Novi soj bifidobacterium animalis subsp. lactis cect 8145 i njegova upotreba u lečenju i/ili prevenciji prekomerne težine i gojaznosti i povezanih bolesti - Google Patents

Novi soj bifidobacterium animalis subsp. lactis cect 8145 i njegova upotreba u lečenju i/ili prevenciji prekomerne težine i gojaznosti i povezanih bolesti

Info

Publication number
RS56826B1
RS56826B1 RS20180027A RSP20180027A RS56826B1 RS 56826 B1 RS56826 B1 RS 56826B1 RS 20180027 A RS20180027 A RS 20180027A RS P20180027 A RSP20180027 A RS P20180027A RS 56826 B1 RS56826 B1 RS 56826B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
strain
formulation
bif
elegans
obesity
Prior art date
Application number
RS20180027A
Other languages
English (en)
Inventor
Guerola Patricia Martorell
CUADROS Mª EMPAR CHENOLL
Vidal Daniel Ramón
Serrano Pepa Ortiz
Pla Silvia Llopis
Martínez Núria Gonzalez
Martínez Salvador Genovés
Ramo Beatriz Casinos
Angulo Ángela Silva
Amaya Aleixandre
Original Assignee
Biopolis SL
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biopolis SL filed Critical Biopolis SL
Publication of RS56826B1 publication Critical patent/RS56826B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C11/00—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions
    • A23C11/02—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins
    • A23C11/10—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins containing or not lactose but no other milk components as source of fats, carbohydrates or proteins
    • A23C11/103—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins containing or not lactose but no other milk components as source of fats, carbohydrates or proteins containing only proteins from pulses, oilseeds or nuts, e.g. nut milk
    • A23C11/106—Addition of, or treatment with, microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L11/00—Pulses, i.e. fruits of leguminous plants, for production of food; Products from legumes; Preparation or treatment thereof
    • A23L11/60—Drinks from legumes, e.g. lupine drinks
    • A23L11/65—Soy drinks
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Preparation or treatment thereof
    • A23L2/02—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Preparation or treatment thereof containing fruit or vegetable juices
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Preparation or treatment thereof
    • A23L2/38—Other non-alcoholic beverages
    • A23L2/382—Other non-alcoholic beverages fermented
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Preparation or treatment thereof
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/515—Animalis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
    • A61K2035/115—Probiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis
TEHNIČKA OBLAST PRONALASKA
[0001] Predmetni pronalazak pripada oblasti prehrambene i farmaceutske industrije. Odnosi se naročito na novi soj vrste Bifidobacterium animalis subsp. lactis CECT 8145, supernatante i/ili kulturu, kao i na ekstrakte i/ili biološki aktivna jedinjenja koja sadrže soj koji, dodat hrani i/ili farmaceutskim formulacijama, izaziva sitost, smanjuje apetit i smanjuje telesnu masnoću, smanjuje kardiovaskularni rizik, prouzrokuje gubitak težine, ima antioksidativnu i antiinflamatornu aktivnost i, zbog toga, ima primenu u lečenju i/ili prevenciji prekomerne težine i/ili gojaznosti i/ili povezanih bolesti/poremećaja.
OSNOVA PRONALASKA
[0002] Gojaznost i prekomerna težina su metabolički i nutritivni poremećaji koji imaju ozbiljne zdravstvene posledice, a prekomerna težina predstavlja stepen gojaznosti. Uprkos boljem kliničkom i epidemiološkom poznavanju ovog problema, prevalencija gojaznosti i prekomerne težine se značajno povećala u industrijalizovanim i zemljama u razvoju. Gojaznost je prepoznat faktor visokog rizika u pojavi različitih hroničnih bolesti/poremećaja kao što su hipertenzija, ishemijska bolest srca, moždani udar, dijabetes tipa 2 i određeni oblici raka, koji su važni uzroci morbiditeta i mortaliteta u zemljama u razvoju u Zapadnom svetu.
[0003] U borbi protiv prekomerne težine i gojaznosti, prehrambena industrija je uvela nove sastojke kako bi pomogla potrošačima da održe odgovarajuću težinu. U oblasti istraživanja i razvoja novih proizvoda, jedna od opcija je dodavanje određenih sastojaka koji deluju tako što inhibiraju akumulaciju energije u obliku masti, ili smanjenjem apsorpcije ili formiranja masti, ili stimulisanjem mobilizacije masti s povećanom lipolizom ili poboljšanjem brzine oksidacije lipida.
[0004] Druga strategija koja pozitivno deluje na prevenciju ili lečenje prekomerne težine i gojaznosti je kontrolisanje i/ili smanjivanje apetita indukcijom sitosti, aktiviranjem metaboličke regulacije apetita.
[0005] Slično tome, neke studije sugerišu da je gojaznost praćena stanjem hroničnog oksidativnog stresa, koji je predložen kao veza između gojaznosti i nekih komorbiditeta, kao što su insulinska rezistencija i kardiovaskularna bolest. (Molnar D, Decsi T, Koletzko B. "Reduced antioxidant status in obese Children with multimetabolic syndrome" Int J. Obes Relat Metab Disord 2004; 28:1197-202). Zbog toga, poslednjih godina istraživana je mogućnost korišćenja dijetarnih suplemenata sa antioksidansima u cilju korigovanja i sprečavanja prekomerne težine i gojaznosti.
[0006] Osim toga, crevna mikroflora i probiotici imaju pozitivno dejstvo na zdravlje regulisanjem imunoloških funkcija i zaštitom pojedinca od infekcija i hroničnih inflamatornih stanja. Studije pokazuju da je crevna mikroflora faktor koji može da igra ulogu u regulisanju telesne težine i bolesti/poremećaja povezanih sa gojaznošću. Zbog toga je manipulacija crevnom mikroflorom putem ishrane predložena kao potencijalno novo sredstvo za sprečavanje ili promenu rizika od gojaznosti, a naročito povezanih metaboličkih bolesti/poremećaja.
[0007] U tom pogledu, brojna korisna dejstva se pripisuju sojevima koji pripadaju vrsti Bifidobacterium animalis subsp. lactis u vezi sa lečenjem ili prevencijom prekomerne težine i gojaznosti i pratećih bolesti/poremećaja. SAD patentni dokument US2011027348 opisuje mikroorganizam Bifidobacterium animalis subsp. lactis (specifičan soj nije naznačen), sa aktivnošću protiv zapaljenja, metaboličkog sindroma, gojaznosti i hipertenzije.
[0008] Pored toga, drugi specifični primeri u tom smislu su sojevi Bifidobacterium animalis subsp. lactis B420 i Bb12.
[0009] Na taj način, u dokumentu pod nazivom "Study of Danisco probiotics shows positive impact on metabolic syndrome (MetS)", Food Engineering & Ingredients, 2010, tom 35, br.2, str. 9, DuPont, opisuje soj Bifidobacterium animalis subsp. lactis B420 i njegovu aktivnost protiv metaboličkog sindroma, zapaljenja, metaboličke endotoksemije, itd.
[0010] Slično, SAD patentni dokument US20120107291 opisuje soj Bifidobacterium animalis subsp. lactis B420 sa aktivnošću protiv dijabetesa, metaboličkog sindroma, gojaznosti, zapaljenja tkiva, itd.
[0011] Prema informacijama iz pomenute patentne prijave, soj B420 deluje pozitivnim uticajem na imuni sistem preko limfoidnog tkiva povezanog sa gastrointestinalnim sistemom i ispoljava sposobnost poboljšanja tolerancije na glukozu, smanjenja mezenteričnog masnog tkiva, smanjenja indikatora zapaljenja itd. Međutim, informacija dostupna o ovom soju ne govori ništa u vezi sa njegovom mogućom sposobnošću da indukuje smanjenje apetita ili poveća sitost, niti da li se traži zaštita za antioksidativni kapacitet pomenutog soja.
[0012] Nepatentni referentni dokument, pod naslovom "Bifidobacterium lactis Bb12 enhances intestinal antibody response in formula-fed infants: a randomized, double-blind, controlled trial", autora Holscher et al., opisuje soj Bifidobacterium lactis Bb12 i njegovu ulogu u pojačavanju imunološke funkcije.
[0013] SAD patentni dokument US2008267933 opisuje soj Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bb12 koji ispoljava delovanje protiv gojaznosti i na kontrolu težine izazivanjem sitosti, poboljšanjem energetskog metabolizma, korigovanjem osetljivosti na insulin i metaboličkog sindroma, itd. Dejstva ovog soja mogu da budu rezultat prekomerne ekspresije određenih gena, kao što su Scd1, Acrp30, Adn, Thrsp, Car3 i Apoa-4, povezanih sa energijom, masnoćom, metabolizmom insulina i glukoze, pored sitosti. Međutim, u informaciji o pomenutom soju koja je dostupna, ne pominje se ništa o njegovom mogućem antioksidativnom kapacitetu.
[0014] U pogledu antioksidativnog kapaciteta bakterija, patentna prijava WO2011083353 opisuje postupak koji koristi Caenorhabditis elegans za skrining bakterija koje imaju zaštitno dejstvo protiv oksidativnog stresa. Međutim, u ovom dokumentu ispitivani sojevi Bifidobacterium nisu doprineli otpornosti na oksidativni stres. Samo veoma malo sojeva Streptococcus i Lactobacillus su bili sposobni da doprinesu otpornosti na oksidativni stres.
[0015] S obzirom na gore navedeno, predmet tehničkog problema ovog pronalaska odnosi se na obezbeđivanje novih mikroorganizama koji se mogu koristiti kao sastojci u hrani i farmaceutskim formulacijama kako bi se obezbedila poboljšana terapijska i/ili preventivna aktivnost protiv prekomerne težine i gojaznosti i pratećih bolesti/poremećaja.
[0016] Gore opisani tehnički problem rešen je obezbeđivanjem soja Bifidobacterium animalis subsp. lactis deponovanog dana 14.05.2012. pod pristupnim brojem: CECT8145 u Colección Española de Cultivos Tipo (Španskoj kolekciji kulture sojeva - CECT), smeštenoj u Parc Cientific Universitat de Valencia, c/ Catedrático Agustín Escardino, 9, 46980 Paterna -Valensija, Španija, prema odredbama Budimpeštanskog ugovora, kao i hrana i farmaceutske formulacije koje sadrže pomenuti soj.
[0017] Za razliku od sojeva koji pripadaju istoj vrsti u stanju tehnike, pored smanjenja telesne masti, unošenje soja prema predmetnom pronalasku, i hrane i farmaceutskih formulacija koje sadrže pomenuti soj, može da izazove sitost i smanji apetit, kao i da poveća otpornost na oksidativni stres kod sisara. Pored toga, soj prema ovom pronalasku, kao i dijetetske i farmaceutske formulacije koje ga sadrže, smanjuje ukupne nivoe holesterola i triglicerida u krvi, pored smanjenja koncentracije glukoze i nekih inflamatornih markera. Sve ovo dovodi do zaključka da su dejstva soja prema ovom pronalasku, kao i prehrambenih i farmaceutskih formulacija koje sadrže pomenuti soj, efikasna u upravljanju prekomernom telesnom težinom, odnosno u lečenju i/ili prevenciji gojaznosti i pratećih bolesti/poremećaja i da je soj prema predmetnom pronalasku superiorniji od drugih sojeva iste vrste u stanju tehnike.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0018] Predmetni pronalazak se odnosi na novi soj vrste Bifidobacterium animalis subsp. lactis, deponovanog dana 14.05.2012. pod pristupnim brojem: CECT8145 u Colección Española de Cultivos Tipo (Španskoj kolekciji kulture sojeva - CECT), smeštenoj u Parc Cientific Universitat de Valencia, c/ Catedrático Agustín Escardino, 9, 46980 Paterna -Valensija, Španija, prema odredbama Budimpeštanskog ugovora, kao i na biološki aktivna jedinjenja, supernatante i kulture koje sadrže soj, ekstrakte koji sadrže biološki aktivna jedinjenja, supernatante i/ili kulture, i soj i formulaciju bilo čega od navedenog u hrani i farmaceutskim formulacijama.
[0019] Soj pronalaska i proizvodi koji ga sadrže, predmet ovog pronalaska, deluju modulacijom diferencijalne ekspresije određenih gena koji pozitivno utiču na smanjenje telesne masti, što čini soj ovog pronalaska posebno efikasnim u lečenju i/ili prevenciji prekomerne težine i/ili gojaznosti i pratećih bolesti/poremećaja, kao što su: metabolički sindrom, hipertenzija, hiperglikemija, zapaljenje, dijabetes tipa 2, kardiovaskularno oboljenje, povišeni holesterol, hormonalni poremećaji, neplodnost itd.
[0020] Nakon što sisari oralnim putem unesu soj ovog pronalaska, kod njih dolazi do smanjenja telesne masti i težine, ukupnih triglicerida, ukupnog holesterola, nivoa glukoze i faktora TNFα, i povećanja adiponektina. Dodatno, ovo vodi povećanju sitosti na šta ukazuje smanjenje nivoa grelina, kao i do povećanja otpornosti na oksidativni stres, na šta ukazuje smanjenje koncentracije malondialdehida kod sisara tretiranih sojem prema predmetnom pronalasku.
[0021] Transkriptomijska studija soja prema predmetnom pronalasku pokazuju da unos pomenutog soja ushodno reguliše metaboličke puteve i procese povezane sa metabolizmom ugljenih hidrata (uključujući oksidativnu fosforilaciju i sintezu ATP), metabolizmom glutationa (smanjenje nivoa oksidativnog stresa), biosintezom kofaktora i vitamina, metabolizmom lipida, metabolizmom nukleotida, glikozilacijom i membranskim metabolizmom.
[0022] Osim toga, kao što je potvrdjeno metabolomičnom studijom soja prema predmetnom pronalasku, čiji detalji su dati u eksperimentalnom delu patentne specifikacije, unošenje ovog soja indukuje niz metaboličkih promena povezanih sa antioksidativnim metabolizmom i sa metabolizmom ugljenih hidrata i nukleotida. Što se tiče smanjenja nivoa oksidativnog stresa, metabolizam glutationa je identifikovan kao mesto ciljnog delovanja predmetnog soja, a primetna je i ushodna regulacija pentozofosfatnog puta i glikozilacije, i očigledne su i različite promene u metabolizmu glikogena, nukleotida, lipida i kofaktora.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0023] Predmet ovog pronalaska je mikroorganizam, kao i hrana i farmaceutske formulacije koje ga sadrže, koji ima uspešnu primenu na lečenje i prevenciju prekomerne težine i gojaznosti kod sisara i pratećih bolesti/poremećaja.
[0024] Pomenuti mikroorganizam se odnosi, specifično, na novi soj vrste Bifidobacterium animalis subsp. lactis, deponovan dana 14.05.2012. pod pristupnim brojem: CECT8145 u Colección Española de Cultivos Tipo (Španskoj kolekciji kulture sojeva - CECT), smeštenoj u Parc Cientific Universitat de Valencia, c/ Catedrático Agustín Escardino, 9, 46980 Paterna -Valensija, Španija, prema odredbama Budimpeštanskog ugovora.
[0025] U ovoj patentnoj prijavi, soj prema pronalasku Bifidobacterium animalis subsp. lactis CECT8145 takođe se naziva BIF-1.
[0026] U svrhu predmetnog pronalaska, izrazi "povezane ili prateće bolesti/poremećaji" i "bolesti/poremećaji uzrokovane prekomernom težinom i/ili gojaznošću" obuhvataju: metabolički sindrom, hipertenziju, hiperglikemiju, zapaljenje, dijabetes tipa 2, kardiovaskularnu bolest, hiperholesterolemiju, hormonalne poremećaje, neplodnost, itd.
[0027] U svrhu predmetnog pronalaska, izraz biološki aktivni proizvodi koji sadrže soj prema ovom pronalasku, definisani su kao ćelijske komponente, i jedinjenja i molekuli koji čine deo soja, kao što su metaboliti i molekuli koje oni izlučuju, kao što su: intracelularne komponente (npr., DNK, peptidi, masne kiseline, itd.) komponente ćelijskog zida (proteini, peptidi, masne kiseline, itd.) koje dovode do željene preventivne ili terapeutske aktivnosti i koje dodatno sadrže soj prema pronalasku.
[0028] Termin formulacija hrane definisan je kao funkcionalna hrana, probiotici, sinbiotici, dijetarni suplementi i/ili standardizovani nutrijenti koji uključuju soj prema predmetnom pronalasku, biološki aktivni proizvodi, supernatant i/ili ekstrakt i/ili kultura koja ga sadrži.
[0029] U kontekstu predmetnog pronalaska, farmaceutske formulacije su definisane kao one koje uključuju soj prema predmetnom pronalasku, biološki aktivne proizvode, supernatant i/ili ekstrakt i/ili kulturu koja ga sadrži, u kombinaciji sa, bar jednim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom i/ili nosačem. Farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi i/ili nosači koji su korišćeni u predmetnom pronalasku su poznati u stanju tehnike stručnjacima u ovoj oblasti.
[0030] Pronalazači predmetnog pronalaska su identifikovali novi soj, nazvan CECT8145 koji pripada vrsti Bifidobacterium animalis subsp. lactis, koji ima nove biološke aktivnosti u poređenju sa drugim sojevima iste vrste prijavljenim u stanju tehnike, što ih čini posebno efikasnim u lečenju i/ili prevenciji prekomerne težine i/ili gojaznosti i bolesti/poremećaja prouzrokovanih i/ili povezanih sa prekomernom težinom i/ili gojaznošću.
[0031] Uporedna genomska ispitivanja soja prema predmetnom pronalasku i drugih sojeva koji pripadaju istoj vrsti u stanju tehnike, odnosno, sojeva B420 i Bb12, pokazuju da soj prema predmetnom pronalasku ima gene i regione genoma koji su jedinstveni i nemaju odgovarajuće homologe kod druga dva soja (B420 i Bb12). Specifično, sprovedena ispitivanja genoma pokazala su da soju prema predmetnom pronalasku, za razliku od sojeva B420 i Bb12, nedostaju geni koji odgovaraju molekularnoj funkciji vezivanja lipida.
[0032] Jedna od novih bioloških aktivnosti soja prema predmetnom pronalasku je njegova antioksidativna aktivnost i, kao posledica toga, njegova sposobnost da poveća otpornost na oksidativni stres.
[0033] Oksidativni stres je uzrokovan neravnotežom između proizvodnje slobodnih radikala i antioksidativne odbrane koja je odgovorna za detoksikaciju pomenutih radikala u organizmu. Kod gojaznih pacijenata, oksidativni stres nije stvoren pojedinačnim mehanizmom, već zajedničkim uticajem nekoliko faktora koji se mogu, u krajnjem slučaju, sumirati kao smanjenje antioksidanata zajedno sa povećanjem prooksidacionih elemenata. Nekoliko studija navodi direktnu vezu između gojaznosti i smanjene aktivnosti glavnih antioksidativnih enzima.
[0034] Otpornost na oksidativni stres izazvana biološkom aktivnošću soja prema predmetnom pronalasku pokazana je smanjenjem koncentracija malondialdehida kod sisara tretiranih sojem prema predmetnom pronalasku (slika 16).
[0035] Malondialdehid je marker koji ukazuje na brzine oksidacije u telu: nivo ovog markera povećava se uporedo sa povećanjem brzina oksidacije, sa smanjenom zaštitom od oksidativnog stresa; i obrnuto.
[0036] Slika 5 pokazuje da unošenje soja prema predmetnom pronalasku povećava zaštitu od oksidativnog stresa, što je pokazano preživljavanjem Caenorhabditis elegans.
[0037] Još jedna nova biološka aktivnost soja prema predmetnom pronalasku je njegova sposobnost da, nakon unošenja, poveća sitost, smanjujući nivoe grelina (slika 17).
[0038] Grelin je jedini poznati cirkulišući hormon koji može potencijalno da poveća ili stimuliše apetit i na taj način deluje kao regulator gladi i telesne težine. To je gastrointestinalni neuropeptid (endogeni ligand receptora sekretagoga hormona rasta) nedavno izolovan iz oksintične sluzokože koji se proizvodi uglavnom u želucu. Njegova koncentracija u krvi zavisi od ishrane, hiperglikemije, adipoziteta i leptina. Izučuje se 1-2 časa pre jela i njegova koncentracija dramatično opada nakon jela. Deluje u lateralnom hipotalamusu i, teoretski, inhibira lučenje proinflamatornih citokina i antagonizuje leptin. Grelin fiziološki povećava lučenje želudačne kiseline i ima druge hormonalne i kardiovaskularne funkcije.
[0039] Soj prema predmetnom pronalasku ima sposobnost da smanji nivoe grelina, povećavajući tako sitost.
[0040] Dodatno, soj prema predmetnom pronalasku izaziva smanjenje nivoa ukupnih triglicerida, holesterola, glukoze, TNFα faktora, i povećanje nivoa adiponektina (slike 12, 9, 13, 14 i 15, redom).
[0041] Pokazano je da smanjenje nivoa telesne masti koje rezultuje iz unošenja soja prema predmetnom pronalasku iznenađujuće veće od nivoa koji odgovaraju drugim sojevima roda Bifidobacterium i, naročito, u poređenju sa komercijalnim sojem Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bb12, koji pripada istoj vrsti (slika 2).
[0042] Rezultati prikazani u primeru 1 koji je ovde dat potvrđuju da unošenje soja prema predmetnom pronalasku smanjuje telesnu masnoću kod nematode Caenorhabditis elegans za najmanje 40%, u poređenju sa kontrolnim uslovima hranjenja. U poređenju sa smanjenjem telesne masti dobijenim pomoću drugih sojeva iste vrste prema stanju tehnike i, naročito, u poređenju sa sojem Bb12, soj prema predmetnom pronalasku je sposoban da izazove smanjenje nivoa telesne masti za 28.5% više nego soj Bb12; što pokazuje da je soj BIF-1 prema predmetnom pronalasku efikasniji od drugih sojeva iste vrste.
[0043] Slično, kada je soj prema predmetnom pronalasku uključen u prehrambeni proizvod, kao što je jogurt, fermentisana soja ili sok, njegovo dejstvo na smanjenje telesne masti je preko 11% veće od dejstva do koga dovode uobičajeni proizvodi: jogurt, fermentisana soja ili sok (slike 20, 21 i 22).
[0044] Kao što je detaljno izloženo u eksperimentalnom delu koji služi kao primer, transkriptomijska studija pokazuje da unošenje soja prema predmetnom pronalasku ushodno reguliše metaboličke puteve i procese povezane sa metabolizmom ugljenih hidrata (uključujući, oksidativnu fosforilaciju i sintezu ATP) metabolizmom glutationa (smanjuje nivoe oksidativnog stresa), biosintezom kofaktora i vitamina, metabolizmom lipida, metabolizmom nukleotida, glikozilacijom i membranskim metabolizmom.
[0045] Pored toga, kako je potvrdjeno u metabolomičnoj studiji, čiji su detalji navedeni u eksperimentalnom delu specifikacije patenta, unošenje ovog soja indukuje niz metaboličkih promena povezanih sa antioksidativnim metabolizmom i metabolizmom ugljenih hidrata i nukleotida. Metabolizam glutationa je identifikovan kao mesto ciljnog delovanja ovog soja za smanjenje nivoa oksidativnog stresa, a primetna je i ushodna regulacija pentozofosfatnog puta i glikozilacije, i očigledne su i različite promene u metabolizmu glikogena, nukleotida, lipida i kofaktora. Ove metabolomske promene potvrđuju biološke aktivnosti koje se odnose na smanjenje telesne masti i zaštitu od oksidativnog stresa izazvanog sojem prema predmetnom pronalasku.
[0046] Ovi rezultati su potvrđeni ispitivanjem na mutantima nematode C. elegans kao što je detaljno objašnjeno u primeru 8, koje je identifikovalo nekoliko gena koji se različito eksprimiraju nakon unošenja soja BIF-1 prema predmetnom pronalasku, i objašnjava biološke aktivnosti koje ispoljava ovaj soj i njegovo efikasnije delovanje protiv prekomerne težine i gojaznosti.
[0047] Specifično, identifikovali smo sledeće diferencijalno eksprimirane gene: Acox-1, Acs-5, Daf-22, Fat-7, Daf-16, Sod-4, Trxr-2, Asg-2 i Tph-1.
[0048] Geni Acox-1, Acs-5 i Daf-22 kodiraju enzime beta-oksidacije masnih kiselina u peroksizomu; geni Fat-7 i Daf-16 kodiraju enzime uključene u proces desaturacije masnih kiselina; geni Sod-4, Trxr-2 i Asg-2 kodiraju enzime uključene u održavanje ćelijske redoks ravnoteže i uklanjanje ROS; gen Asg-2, samostalno kodira enzim uključen u procese
1
oksidativne fosforilacije; i gen Tph-1 kodira enzim uključen u metabolizam triprofana i time u sintezu serotonina.
[0049] Soj prema predmetnom pronalasku i biološki aktivni proizvodi koji ga sadrže, kao i supernatanti, kultura i/ili ekstrakti koji sadrže pomenuti soj, mogu da budu formulisani, pojedinačno, ili u kombinaciji sa drugim mikroorganizmima i/ili funkcionalnim sastojcima, i uključeni u hranu ili farmaceutske formulacije za upotrebu prema predmetnom pronalasku.
[0050] Kada je soj prema predmetnom pronalasku uključen u hranu ili farmaceutske formulacije u kombinaciji sa drugim mikroorganizmima, ovi drugi bi poželjno trebalo da pripadaju rodovima Lactobacillus, Streptococcus, Bifidobacterium, Saccharomyces i/ili Kluyveromyces, kao što su na primer: L. rhamnosus, L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. kefir, L. parakefir, L. brevis, L. casei, L. plantarum, L. fermentum, L. paracasei, L. acidophilus, L. paraplantarum, L. reuteri, St. thermophilus, B. longum, B. breve, B. bifidum, B. catenulatum, B. adolescentis, B. pseudocatenulatum, S. cerevisiae, S. boulardii, K. lactis,ili K. marxianus.
[0051] Predmetni pronalazak se takođe odnosi na formulaciju koja uključuje biološki aktivna jedinjenja koja sadrže soj prema predmetnom pronalasku, supernatante i/ili kulture koje sadrže soj, kao i ekstrakte koji sadrže soj prema pronalasku.
[0052] Formulacije sa predmetnim pronalaskom, koje uključuju soj prema predmetnom pronalasku i/ili biološki aktivne proizvode i/ili supernatante i/ili kulture i/ili ekstrakte koje sadrže soj mogu da budu hrana ili farmaceutske formulacije.
[0053] Pomenuta hrana ili farmaceutske formulacije mogu da budu tečne ili čvrste, uključujući, ali bez ograničenja, kapsule i/ili pilule.
[0054] Hrana i/ili farmaceutske formulacije predmetnog pronalaska uključuju soj prema predmetnom pronalasku u količini između 10<5>CFU i 10<12>CFU po gramu ili mililitru formulacije, i poželjno između 10<7>i 10<11>CFU/g ili CFU/ml.
[0055] Kada hrana i/ili farmaceutske formulacije predmetnog pronalaska uključuju biološki aktivna jedinjenja koja sadrže soj prema predmetnom pronalasku, kao što su supernatanti, ekstrakti, peptidi, itd., ona su uključena u formulaciju u procentu između 0.01 i 99% po težini ukupne formulacije i poželjno u procentu između 0.01 i 40%. Nutritivne formulacije koje uključuju soj prema predmetnom pronalasku, kao i biološki aktivna jedinjenja, supernatanti, ekstrakti kulture i/ili kultura koja sadrži soj, bi poželjno trebalo da budu jedno od sledećeg: soka od voća ili povrća, sladoleda, formule za bebe, mleka, jogurta, sira, fermentisanog mleka, mleka u prahu, cerealija, pekarskih proizvoda, mlečnih proizvoda i/ili proizvoda na bazi žitarica, prehrambenih suplemenata, bezalkoholnih pića i/ili dijetarnih suplemenata.
[0056] Mlečni prehrambeni proizvodi na koje se ovaj pronalazak odnosi, kao što je fermentisano mleko, svež sir ili jogurt, ili njihovi ekvivalenti, osušeni ili osušeni zamrzavanjem, su poželjni pogodni nosači u koje treba uključiti soj prema predmetnom pronalasku i/ili biološki aktivna jedinjenja i/ili supernatante i/ili ekstrakte i/ili kulturu koja sadrži soj.
[0057] Soj prema predmetnom pronalasku i/ili biološki aktivna jedinjenja i/ili supernatanti i/ili ekstrakti i/ili kultura koja sadrži soj mogu, ako je neophodno, da budu upakovani u želatinske ili celulozne kapsule ili, gel kapsule ili pilule, između ostalih oblika, kao hrana ili farmaceutici.
[0058] Soj prema pronalasku i formulacije koje ga sadrže, posebno su dizajnirane za upotrebu kod sisara, tj., životinja i ljudi, za lečenje prekomerne težine i gojaznosti i povezanih bolesti/poremećaja.
[0059] Prema tome, predmeti ovog pronalaska su soj Bifidobacterium animalis subsp. lactis CECT8145, hrana i farmaceutske formulacije koje sadrže pomenuti soj, u obliku koji može da se gaji i/ili ne može da se gaji i/ili koji nije vijabilan, i izborno, u kombinaciji sa drugim mikroorganizmima. Predmetni pronalazak se takođe odnosi na postupak za lečenje i/ili prevenciju prekomerne težine i/ili gojaznosti kod sisara i pratećih bolesti/poremećaja, kao što su: metabolički sindrom, hipertenzija, hiperglikemija, zapaljenje, dijabetes tipa 2, kardiovaskularna bolest, hiperholesterolemija, hormonalni poremećaji i neplodnost, koji se karakteriše time što obuhvata primenu efikasne količine soja prema pronalasku, Bifidobacterium animalis subsp. lactis CECT8145, kao i hrane i farmaceutskih formulacija koje ga sadrže u skladu sa predmetnim pronalaskom.
[0060] U kontekstu predmetnog opisa, predmet opisa je i postupak za smanjenje težine, nivoa ukupnog holesterola, triglicerida i glukoze u krvi, nivoa TNFα faktora, malondialdehida i grelina, kao i povećanje adiponektina kod sisara, koji se karakteriše time što obuhvata primenu efikasne količine soja prema pronalasku, Bifidobacterium animalis subsp. lactis CECT8145, kao i hrane i farmaceutskih formulacija koje ga sadrže u skladu sa predmetnim pronalaskom.
[0061] U tom pogledu, treba zapaziti da predmetni pronalazak obuhvata upotrebu soja prema pronalasku, Bifidobacterium animalis subsp. lactis CECT 8145, i u obliku koji može da se gaji i/ili ne može da se gaji i/ili oblicima nevijabilnih ćelija (slika 4).
[0062] Ćelije koje ne mogu da se gaje i/ili nevijabilne ćelije prema pronalasku, inaktivirane različitim postupcima (zamrzavanje, toplota, zračenje, itd.) mogu da se koriste u skladu sa predmetnim pronalaskom, i čine deo predmetnog pronalaska, budući da se željena dejstva postižu, bar delimično, pomoću strukturnih komponenti (kao što su DNK, komponente ćelijskog zida, itd.). Ovo znači da soj prema predmetnom pronalasku zadržava neka od svojih svojstava protiv metaboličkog sindroma i pratećih bolesti/poremećaja, a da nije neophodno da može da se gaji/da bude vijabilan. Tako, kao što je prikazano u primeru 4, inaktivirana kultura soja prema predmetnom pronalasku smanjuje telesnu masnoću u životinjskom modelu C. elegans, što sugeriše da funkcionalno dejstvo nije samo posledica metabolizma soja, već i prisustva određenih jedinjenja ćelijskog zida.
[0063] Sledeće slike i primeri su obezbeđeni u nastavku da bi ilustrovali predmetni pronalazak i nisu ni na koji način namenjeni ograničavanju predmetnog pronalaska.
OPIS SLIKA
[0064]
Slika 1: Skrining 23 soja roda Lactobacillus za redukciju telesne masti u C. elegans.
Slika 2: Skrining 15 sojeva roda Bifidobacterium za redukciju telesne masti u C. elegans. Slika 3: Kvantitativno određivanje triglicerida u C. elegans divljem tipu N2 hranjenom na soju CECT8145 (BIF-1) ili kome je data kontrolna ishrana (medijum za rast nematoda, u daljem tekstu označen kao NG medijum).
Slika 4: Efekat kulture soja CECT8145 (BIF-1) inaktiviranog na 70°C preko noći na redukciju telesne masti kod C. elegans.
1
Slika 5: Antioksidativna aktivnost soja CECT8145 (BIF-1) procenjena posle podvrgavanja C. elegans (divljeg tipa N2) oksidativnom stresu primenom vodonik peroksida.
Slika 6: Redukcija u telesnoj masti u odnosu na C. elegans (divlji tip N2) i mutante.
Slika 7: Određivanje telesne težine kod gojaznih Zucker pacova tretiranih sa 10<10>CFU/dan (■) soja CECT8145 (BIF-1) u toku ispitivanja od 17 nedelja. Kontrolna grupa gojaznih Zücker pacova (●) i grupa mršavih Zücker pacova (○) su uključene u ispitivanje.
Slika 8: Unos čvrste hrane zabeležen kod gojaznih Zucker pacova tretiranih sa 10<10>CFU/dan (■) soja CECT8145 (BIF-1). Kontrolna grupa gojaznih Zücker pacova (●) i grupa mršavih Zücker pacova (○) su uključene u ispitivanje.
Slika 9: Ukupan holesterol kod gojaznih Zucker pacova tretiranih sa 10<10>CFU/dan soja CECT (BIF-1) (sivi stub), u poređenju sa kontrolnim Zücker pacovima (crni stub). Kontrolna grupa mršavih Zücker pacova (beli stub) je uključena u ispitivanje.
Slika 10: HDL holesterol kod gojaznih Zucker pacova tretiranih sa 10<10>CFU/dan soja CECT8145 (BIF-1) (sivi stub), u poređenju sa kontrolnim Zücker pacovima (crni stub). Kontrolna grupa mršavih Zücker pacova (beli stub) je uključena u ispitivanje.
Slika 11: Odnos ukupnog holesterola:HDL holesterola (indeks kardiovaskularnog rizika) određen kod gojaznih Zucker pacova tretiranih sa 10<10>CFU/dan soja CECT8145 (BIF-1) (sivi stub), u poređenju sa kontrolnim Zücker pacovima (crni stub). Kontrolna grupa mršavih Zücker pacova (beli stub) je uključena u ispitivanje.
Slika 12: Koncentracija triglicerida određena kod gojaznih Zucker pacova tretiranih sa 10<10>CFU/dan soja CECT8145 (BIF-1) (sivi stub), u poređenju sa kontrolnim Zücker pacovima (crni stub). Kontrolna grupa mršavih Zücker pacova (beli stub) je uključena u ispitivanje.
Slika 13: Koncentracija glukoze određena kod gojaznih Zucker pacova tretiranih sa 10<10>CFU/dan soja CECT8145 (BIF-1) (sivi stub), u poređenju sa kontrolnim Zücker pacovima (crni stub). Kontrolna grupa mršavih Zücker pacova (beo stub) je uključena u ispitivanje.
Slika 14: Nivoi TNFα (marker inflamacije) kod gojaznih Zücker pacova tretiranih sa 10<10>CFU/san soja CECT8145 (BIF-1) (sivi stub), u poređenju sa kontrolnim Zücker pacovima (crni stub). Kontrolna grupa mršavih Zücker pacova (beo stub) je uključena u ispitivanje.
Slika 15: Nivoi adiponektina kod gojaznih Zucker pacova tretiranih sa 10<10>CFU/dan soja CECT8145 (BIF-1) (sivi stub), u poređenju sa kontrolnim Zücker pacovima (crni stub). Kontrolna grupa mršavih Zücker pacova (beo stub) je uključena u ispitivanje.
Slika 16: Koncentracija malondialdehida (marker oksidacije) određena kod gojaznih Zucker pacova tretiranih sa 10<10>CFU/dan soja CECT8145 (BIF-1) (sivi stub), u poređenju sa kontrolnim Zücker pacovima (crni stub). Kontrolna grupa mršavih Zücker pacova (beo stub) je uključena u ispitivanje.
Slika 17: Nivoi grelina (marker apetita) određivani su kod gojaznih Zucker pacova tretiranih sa 10<10>CFU/dan soja CECT8145 (BIF-1) (sivi stub), u poređenju sa kontrolnim Zücker pacovima (crni stub). Kontrolna grupa mršavih Zücker pacova (beo stub) je uključena u ispitivanje.
Slika 18: Rezistencija soja BIF-1 na kisele nivoe pH.
Slika 19: Rezistencija soja BIF-1 na žučne soli.
Slika 20: Jogurt fermentisan sa sojem BIF-1 proizvodi veću redukciju telesne masti kod C. elegans (11.4%) od konvencionalnog komercijalnog jogurta.
Slika 21: Efekat sojinog mleka fermentisanog sa sojem BIF-1 na redukciju masti kod C. elegans.
Slika 22: Efekat na redukciju masti soka sa sojem BIF-1, živim i inaktiviranim ćelijama, u C. elegans.
PRIMERI
PRIMER 1
Skrining bakterija za redukciju telesne masti u Caenorhabditis elegans.
[0065] Dvadeset i tri soja roda Lactobacillus i 15 sojeva roda Bifidobacterium su ispitivana radi analize njihovog efekta na redukciju telesne masti posle unošenja od strane nematode Caenorhabditis elegans. Dva komercijalna soja su uključena u studiju, LGG (Lactobacillus rhamnosus) i Bb12 (B. animalis subsp. lactis).
[0066] Caenorhabditis elegans akumulira mast u obliku kapi koje mogu biti vizualizovane bojenjem sa „Nile“ crvenom (fluorescentna). Fluorescencija emitovana iz navedene boje može biti kvantitativno određena fluorimetrijom. Prema tome, različiti mikroorganizmi su procenjivani za njihov efekat na akumulaciju i/ili redukciju telesne masti u nematodi analizom redukcije u fluorescenciji kod crva hranjenih različitim sojevima, u poređenjima sa crvima hranjenim pod kontrolnim uslovima (NG medijum Escherichia coli).
1
[0067] Eksperimenti su se sastojali od ishrane C. elegans sa različitim mikroorganizmima, tokom perioda koji traje od jajeta do mladog adultnog stadijuma (starost 3 dana). Standardna ishrana bila je NG medijum zasejan bakterijom Escherichia coli.
[0068] Kapi masti su obojene direktnim dodavanjem boje „Nile“ crvena u ploče NG medijuma. Nematode su inkubirane na 20°C pod različitim uslovima ishrane u toku test perioda. Posle perioda ishrane, uzorci za svaki od uslova su uzeti i kvantitativno je određivana fluorescencija emitovana u svakom slučaju. Kontrolni uslovi ishrane (NG medijum Escherichia coli) su uzeti kao referenca za kvantitativno određivanje i poređenje fluorescencije pod eksperimentalnim uslovima.
[0069] Slika 1 prikazuje rezultate dobijene sa Lactobacillus sojevima za redukciju telesne masti u C. elegans (izraženi kao procenat redukcije fluorescencije kvantitativno određene u crvima obojenim sa bojom „Nile“ crvena.) Najviši procenat redukcije masti odgovarao je LAC-1 soju (32.4% u poređenju sa kontrolnim uslovima ishrane).
[0070] Slika 2 prikazuje skrining Bifidobacterium sojeva. Najefikasniji soj za redukciju telesne masti bio je BIF-1 (40.5% u poređenju sa kontrolnim uslovima ishrane).
[0071] Na osnovu rezultata dobijenih od 38 testiranih sojeva, soj Bifidobacterium BIF-1 je izabran kao najefikasniji protiv redukcije masti. Prema tome temeljnije smo ispitivali funkcionalne i tehnološke osobine ovog soja.
PRIMER 2
Taksonomska identifikacija i sekvenciranje genoma
2.1. Identifikacija
[0072] Soj BIF-1 je identifikovan nedvosmisleno na nivou roda i vrste sekvenciranjem ribozomalne DNK (rDNK) 16S. Sekvenca je identifikovana poređenjem sekvence BIF-1 soja sa kompletnim genskim sekvencama deponovanim u javnim bazama podataka upotrebom
1
BLAST online (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi), najviša homologija (99%) je dobijena sa javnim sekvencama koje pripadaju vrsti B. animalis subsp. lactis.
2.2. Sekvenciranje genoma
[0073] U cilju karakterizacije genomskog nivoa i bezbednosti i funkcionalnosti soja BIF-1 izveli smo sekvenciranje celog genoma soja BIF-1 pomoću pirosekvenciranja na Life Science-Roche 454 platformi. Dobijeno je ukupno 434,581 sirovih sekvenci. Pored toga de novo sklapanje sekvenci organizovalo je sekvence na pet osnova, pri čemu je najveća 1,923,368 nukleotida. Veličina genoma soja BIF-1 je procenjena na 2.1 Mb. Geni koji kodiraju faktore virulencije nisu detektovani niti su geni za rezistenciju na antibiotike locirani u oblastima pod rizikom od horizontalnog transfera.
PRIMER 3
Kvantitativno određivanje redukcije triglicerida u C. Elegans tretiranim sa BIF-1
[0074] Efekat unošenja soja BIF-1 na redukciju triglicerida je analiziran u C. elegans divljem tipu N2.
[0075] Trigliceridi su određeni iz sinhronizovanih mladih adultnih C. elegans populacija. Nematode iz svakih od uslova su isprane u PBS puferu i ultrazvučno obrađene za lizat. Lizirani uzorci su korišćeni za određivanje ukupnih triglicerida upotrebom komercijalnog kompleta na bazi fluorimetrijskog određivanja. Svi uzorci su normalizovani za koncentraciju proteina.
[0076] Slika 3 prikazuje kvantitativno određivanje triglicerida za nematode pod kontrolnim uslovima ishrane (NG medijum) ili hranjene sojem BIF-1. Redukcija je zabeležena u ukupnim trigliceridima kod nematoda hranjenih sa BIF-1.
PRIMER 4
Redukcija telesne masti u C. elegans tretiranim sa inaktiviranom kulturom BIF-1
1
[0077] Funkcionalni efekat redukcije masti inaktiviranih BIF-1 ćelija je analiziran u C. elegans. Ćelije su inaktivirane toplotnim tretmanom na 70°C u trajanju od 18 časova.
[0078] Testovi su se sastojali u ishrani C. elegans sa aktiviranim ili neaktiviranim BIF-1 iz jaja do adultnog stadijuma (3 dana). U kontrolnim uslovima, nematode su hranjene NG medijumom, koji sadrži Escherichia coli.
[0079] Kapi masti su obojene direktnim dodavanjem crvene „Nile“ boje u ploče sa NG medijumom. Nematode su inkubirane na 20°C pod različitim uslovima u toku test perioda. Posle perioda ishrane, uzeti su uzorci za svaki od uslova i kvantitativno je određivana fluorescencija emitovana u svakom slučaju. Kontrolni uslovi ishrane (NG medijum Escherichia coli) su uzeti kao referenca za kvantitativno određivanje fluorescencije drugih eksperimentalnih uslova.
[0080] Rezultati (Slika 4) pokazuju da su ćelije BIF-1 inaktivirane na 70°C održale svoj efekat redukcije masti kod nematoda, jer je zabeležen isti procenat fluorescencije kao u živoj BIF-1 kulturi.
PRIMER 5
Antioksidativna aktivnost soja BIF-1 u C. elegans
[0081] Analizirali smo da li je unošenje soja BIF-1 povećalo rezistenciju na akutni oksidativni stres kod C. elegans (divlji tip N2).
[0082] Testovi su izvedeni praćenjem metodologije koju su opisali Martorell et al. (2011). Korišćen je C. elegans divlji tip N2. Ispitivanja su obuhvatala kontrolu (NG medijum E. coli soj OP50) i BIF-1 soj. Ispitivanja su započeta sa populacijama nematoda sinhronizovane starosti, koje su kultivisane u NG pločama pod različitim uslovima ishrane. Ploče su inkubirane na 20°C u trajanju od 7 dana. Posle ovog perioda, oksidativni stres je primenjen sa H2O2(2 mM), i vijabilnost nematoda je određivana posle 5 časova inkubacije. Slika 5 prikazuje rezultate dobijene u preživljavanju nematoda posle primene stresa sa vodonik peroksidom. Nematode hranjene u trajanju od 7 dana sa BIF-1 bile su mnogo
1
otpornije na oksidativni stres, sa povećanim preživljavanjem u poređenju sa populacijom pod kontrolnim uslovima ishrane.
PRIMER 6
Transkriptomijska studija kod C. elegans sa sojem Bifidobacterium animalis subsp. lactis BIF-1
[0083] Ispitivali smo efekat unošenja B. animalis subsp. lactis BIF-1 na C. elegans transkriptom. Tehnologija "čipova" je korišćena za ispitivanje promena u ekspresiji gena, u metaboličkim putevima i biološkim procesima u nematodama hranjenim sa BIF-1 u poređenju sa nematodama pod kontrolnim uslovima ishrane. Nivo značajnosti P ≤ 0.05 je korišćen u statističkoj analizi.
6.1. Diferencijalna ekspresija gena u nematodama tretiranim sa BIF-1
[0084] Nematode hranjene sojem BIF-1 pokazale su različit profil ekspresije gena u poređenju sa nematodama pod kontrolom uslova ishrane. Na taj način, one su predstavljale 296 prekomerno eksprimiranih gena i 26 premalo eksprimiranih gena u poređenju sa kontrolnim nematodama (Tabela 1).
Tabela 1. Diferencijalna ekspresija gena zabeležena u C. elegans hranjenim sa BIF-1 sojem.
[0085] Skrining 296 gena koji su prekomerno eksprimirani u nematodama tretiranim sa BIF otkrio je različite funkcionalne grupe. Gore navedeni geni su povezani sa proteolizom, reprodukcijom, embrionalnim razvićem, metabolizmom ugljenih hidrata, ciklusom presvlačenja, morfogenezom tela, kretanjem, redoks procesima, metabolizmom proteina,
1
transportom, metabolizmom glutationa, metabolizmom aromatične aminokiseline, odgovorom na gama zračenje, metabolizom masnih kiselina i neuropeptidnim signalnim putevima.
[0086] 26 premalo eksprimiranih gena u C. elegans tretiranim sa BIF-1 uglavnom su vezani za ushodnu regulaciju rasta.
6.2. Metabolički putevi
[0087] U vezi sa metaboličkim putevima, utvrđeno je da su nematode hranjene sa BIF-1 ispoljile 23 ushodno regulisana i 20 nishodno regulisana metabolička puta u poređenju sa kontrolnim nematodama (Tabela 2).
[0088] Tabele 3 i 4 navode ushodno regulisane i nishodno regulisane metaboličke puteve posle tretmana sa BIF-1 sojem bifidobakterija.
Tabela 2. Broj metaboličkih puteva diferencijalno eksprimiranih u C. elegans hranjenih sa sojem BIF-1.
Tabela 3. Spisak ushodno regulisanih metaboličkih puteva u C. elegans posle tretmana sa BIF-1 u poređenju sa kontrolom. ID: identifikacija prema KEGG bazi podataka.
2
Tabela 4. Spisak nishodno regulisanih metaboličkih puteva kod BIF-1-tretiranih C. elegans u poređenju sa kontrolom. ID: identifikacija prema KEGG bazi podataka.
6.3. Biološki procesi
[0089] U nematodama hranjenim sojem BIF-1, ukupno 26 bioloških procesa je prekomerno eksprimirano dok je 76 procesa bilo manje eksprimirano u poređenju sa kontrolom (Tabela 5).
Tabela 5. Broj bioloških procesa diferencijalno eksprimiranih u C. elegans hranjenim sojem BIF-1 u poređenju sa kontrolom.
[0090] Tabele 6 i 7 detaljno navode prekomerno eksprimirane i manje eksprimirane procese u nematodama tretiranim sa BIF-1.
Tabela 6. Spisak 26 bioloških procesa prekomerno eksprimiranih u C. elegans. tretiranim sa BIF-1. GO: Ontologija gena (baza podataka).
2
Tabela 7. Spisak 76 biološka procesa koji su manje ekspirmirani kod C. elegans tretiranih sa BIF-1 u poređenju sa kontrolom. GO: ontologija gena (baza podataka).
2
2
[0091] Ukratko, rezultati transkriptomijske studije pokazuju da je kod nematoda hranjenih sojem BIF-1 postojala ushodna regulacija metaboličkih puteva i procesa povezanih sa metabolizmom ugljenih hidrata (oksidativna fosforilacija, sinteza ATP-a, itd.), metabolizmom glutationa (smanjeni nivoi oksidativnog stresa), biosintezom kofaktora i vitamina, metabolizmom lipida, metabolizmom nukleotida, glikozilacijom i metabolizmom membrane.
PRIMER 7
2
Metabolomična studija kod C. elegans na soju BIF-1
[0092] Analizirali smo promene u metaboličkom profilu C. elegans posle unošenja soja BIF-1 u poređenju sa profilom kontrolnih nematoda (hranjene NG medijumom E. coli OP50).
[0093] Ispitivanja su uključivala hranjenje C. elegans sa sojem BIF-1 iz jaja do mladog adultnog stadijuma (starosti 3 dana). Uslovi kontrolne ishrane predstavljali su NG medijum zasejan bakterijom Escherichia coli.
[0094] Nakon ovog vremena, nematode su podvrgnute metabolomičnoj analizi, primenom analitičkih tehnika, LC-MS/MS (ESI ) (-ESI) i GC-MS, i kasnijoj bioinformatičkoj obradi podataka.
[0095] Rezultati su pokazali značajne promene, kao što su navedene u daljem tekstu:
• Metabolizam glutationa (GSH) i oksidativni stres: U studiji, nivoi γ-glutamilleucina i γ-glutamil-metionina bili su viši kod nematoda hranjenih sa BIF-1 u poređenju sa kontrolom, što bi bilo u skladu sa mogućim povećanjem aktivnosti y-glutamil-transferaze (GGT) i na taj način, reciklažom glutationa (GSH) kao odgovor na BIF-1. Pored toga, oftalmat, metabolit korišćen za sintezu GSH, značajno je smanjen u grupi hranjenoj sa BIF-1, što je u skladu sa smanjenjem biosinteze GSH. Ovo je verovatno posledica niže potrebe za glutationom proizvedenim nižim nivoom oksidativnog stresa. Ovo je podržano zapažanjem nižih nivoa GSSG (oksidovani GSH) i cistein-glutation disulfida, biomarkera oksidativnog stresa u grupi hranjenoj sa BIF-1 sojem.
• Metabolizam ugljenih hidrata: Grupa hranjena sa BIF-1 ispoljila je promene u mnogim od metabolita uključenih u metabolizam ugljenih hidrata. Nivoi maltotetraoze i maltopentaoze su bili visoki, dok su nivoi trehaloza-6-fosfata i glukoze bili niži u grupi hranjenoj sa BIF-1 u poređenju sa kontrolom. Drugi putevi na koje je izvršen uticaj bili su metabolizam glikogena i puta pentoza fosfata. Na taj način, 6-fosfoglukonat je pokazao značajno povećanje u BIF-1 grupi. Ova činjenica zajedno sa visokim nivoima riboze i niskim nivoima riboza-5-fosfata su u skladu sa mogućom ushodnom regulacijom puta pentoza fosfata u prisustvu BIF-1.
• Metabolizam nukleotida: Promene u metabolizmu nukleotida su posledica promena zabeleženih u aktivnosti puta pentoza fosfata. Nematode hranjene sa BIF-1 pokazale su više
2
nivoe N-karbamoil-aspartata i orotata, dva intermedijera u sintezi pirimidina. Slične promene su zabeležene u metabolizmu purina. Na taj način, nematode tretirane sa BIF-1 pokazale su niže nivoe alantoina (proizvoda razlaganja purina). Pored toga, grupa tretirana sa BIF-1 imala je više nivoe purinskih nukleozida (adenozina i guanozina), baza (adenina i hipoksantina) i nukleotida [adenozin 5'-mobofosfata (AMP) i guanozin 5'-monofosfata (GMP)]. Ovi rezultati zajedno sa zabeleženim povećanjem u prekursorskim aminokiselinama (glutamatu i glutaminu), i mogućom ushodnom regulacijom puta pentoza fosfata, podržavaju moguće povećanje u biosintezi purina, praćeno smanjenjem u razlaganju purina.
• Metabolizam membrane i holesterola: Kod nematoda hranjenih sa BIF-1, zabeležili smo povećane nivoe holina i acetilholina, koji su uključeni ne samo u procese glikozilacije, već takođe u metabolizam membrane. Pored toga, nivoi 7-dihidroholesterola, intermedijera u biosintezi holesterola, su bili povećani kod nematoda hranjenih sa BIF-1, što je u skladu sa efektom ovog probiotika na modulaciju biosinteze holesterola. Promene u sadržaju holesterola u membrani mogu da utiči na okolnu sredinu receptora, jonske kanale i druge membranske proteine, i na taj način menjaju njihovu funkciju. Pored toga, metabolizam holesterola utiče na procese povezane sa lipidima i hormonima.
• Dodatna zapažanja: Kod C. elegans BIF-1 je povećao nivoe fosfopanteteina, 3'-defosfo-koenzima-a, i koenzima A (CoA). Pored toga BIF-1 je doveo do povećanja u flavin mononukleotidu (FMN) i flavin adenin dinukleotidu (FAD), što je u skladu sa ushodnom regulacijom biosinteze FAD. CoA i FAD su uključeni u metabolizam ugljenih hidrata, lipida i aminokiselina.
[0096] Ukratko, hranljivi soj BIF-1 proizvodi seriju metaboličkih promena C. elegans povezanih sa antioksidativnim metabolizom, metabolizmom ugljenih hidrata i nukleotida. Metabolizam glutationa izgleda da je ciljno mesto probiotika BIF-1 za redukciju nivoa oksidativnog stresa. Pored toga, ishrana sa BIF-1 dovodi do ushodne regulacije puta pentoza fosfata i glikozilacionog puta. Dodatno, promene su zabeležene u metabolizmu glikogena, nukleotida, lipida i kofaktora.
[0097] Ovi rezultati su u skladu sa onima zabeleženim u transkriptomijskoj studiji (Primer 6).
PRIMER 8
Identifikacija diferencijalno eksprimiranih gena
2
[0098] U cilju objašnjavanja mehanizma delovanja iz rezultata transkriptomike opisanih u Primeru 6, izvršili smo ispitivanje za procenu redukcije telesne masti u C. elegans hranjenim sojem BIF-1. U ovom eksperimentu, koristili smo C. elegans divlji tip N2 i različite C. elegans mutante u ključnim genima istaknute pomoću transkriptomijske studije. Gen je esencijalan za mehanizam delovanja određenog sastojka kada funkcionalni efekat zabeležen u C. elegans divljem tipu N2 potpuno ili delimično nestaje u mutantu tog gena. Rezultati prikazani u Tabeli 8 (u daljem tekstu), i na Slici 6 identifikuju neke od ciljnih gena mutiranih u C. elegans, koji su diferencijalno eksprimirani posle unošenja BIF-1 (transkriptomijska studija). Ovi rezultati objašnjavaju biološke aktivnosti na koje utiče unošenje soja prema predmetnom pronalasku.
Tabela 8: Spisak ciljnih mutiranih gena u C. elegans.
[0099] Slika 6 kvantitativno ilustruje procenat redukcije telesne masti u C. elegans divljem tipu N2 i mutantnim sojevima sa diferencijalnom ekspresijom gena navedenih u Tabeli 8.
PRIMER 9
Pre-kliničko ispitivanje u mišjem modelu
[0100] Ispitivanje je izvedeno u modelu gojaznog Zucker pacova hranjenog sa tri različite doze soja probiotika BIF-1 (10<8>, 10<9>i 10<10>CFU/dan), i uključene su dve grupe mršavih Zucker pacova kao kontrola. Ispitivanje je trajalo 12 nedelja, određena je telesna težina, i beležen je unos čvrste hrane i tečnosti u toku perioda testa. Pored toga, na kraju ispitivanja određeni su biohemijski podaci: ukupni holesterol, HDL holesterol, trigliceridi, TNFα faktor (marker inflamacije), malondialdehid (marker oksidativnog stresa), adiponektin i grelin (markeri sitosti).
[0101] Rezultati su prikazani na Slikama 7 do 17.
[0102] Ukratko, rezultati pre-kliničke studije u mišjem modelu pokazali su pozitivan efekat na redukciju težine kod gojaznih Zucker pacova hranjenih sa BIF-1 u dozama od 10<10>CFU / dan (redukcija u dobitku telesne težine od 6.42% za tretiranu grupu naspram kontrolne grupe). Pored toga, životinje hranjene sa BIF-1 imale su niži unos čvrste hrane. Pored toga, određivanje biohemijskih parametara pokazalo je smanjenje u ukupnom holesterolu, praćeno povećanjem u HDL holesterolu kod pacova hranjenih sa BIF-1, kao i neznatnim padom u nivoima triglicerida i glukoza. Konačno, tretman sa BIF-1 rezultovao je u redukciji nivoa TNFα faktora, malondialdehida i grelina, dok je nivo adiponektina porastao.
PRIMER 10
Studija bezbednosti
[0103] Bezbednost soja BIF-1 je izvedena praćenjem FAO /WHO vodiča (FAO/WHO, 2002). Specifično, procenjena je proizvodnja neželjenih metabolita: proizvodnja izomera mlečne kiseline (Tabela 9), dekonjugacija žučne soli (Tabela 10) i proizvodnja biogenog amina (Tabela 11), i profil rezistencije na antibiotik (Tabela 12).
1
Tabela 9. Proizvodnja izomera mlečne kiseline pomoću soja BIF-1
Tabela 10. Aktivnost hidrolize žučne soli od strane soja BIF-1 (ND: nije detektovano).
Tabela 11. Proizvodnja biogenog amina od strane soja BIF-1 (ND: nije detektovano).
Tabela 12. Minimalna inhibitorna koncentracija antibiotika za soj BIF-1.
2
PRIMER 11
Probiotičke osobine soja BIF-1
[0104] Jedan od glavnih uslova da bi se soj smatrao probiotikom je taj da on može da preživi prolazak kroz gastrointestinalni trakt. Prema tome, soj BIF-1 je testiran za njegovu rezistenciju na digestivne uslove. Prema tome, izvedena su dva testa: jedan za rezistenciju niskih nivoa pH i drugi za rezistenciju na žučne soli. U prvom, soj je postavljen u kontakt sa fiziološkim rastvorom (0.09% NaCl) na opadajućim nivoima pH u trajanju od 15 minuta i brojane su žive ćelije (Slika 18). U drugom, soj BIF-1 je postavljen u kontakt sa fiziološkim rastvorom sa žučnim solima (Oxgall) u rastućim količinama (Slika 19) u trajanju od 15 min. Rezultati ovih testova nisu otkrili značajne razlike u stopama preživljavanja, osim uza inkubaciju na pH 4, gde je detektovan neznatni gubitak vijabilnosti.
PRIEMER 12
Funkcionalni jogurt fermentisan sa sojem BIF-1 (Bifidobacterium animalis subps. lactis CECT 8145)
[0105] Prvo, fermentativni kapacitet BIF-1 je analiziran u mlečnom matriksu. Da bi se to izvelo, zapremina komercijalnog obranom mleka je inokulisana sa različitim dozama bakterija (10<6>, 10<7>i 10<8>CFU/mL) i inkubirana u trajanju od 24 časa na 37°C. Rezultati su pokazali pozitivnu fermentaciju probiotika inokulisanog u 10<7>i 10<8>CFU/mL.
[0106] Zatim, funkcionalni jogurt je pripremljen dodavanjem 10<8>CFU / mL BIF-1 i smeša komercijalnog jogurta Bifidobacteria ferments na komercijalno obrano mleko i mleko u prahu (0.6%). U studiju je uključena kontrolna fermentacija koja sadrži samo sojeve komercijanog jogurta (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus i Streptococcus thermophilus). Prisustvo soja BIF-1 je provereno na kraju fermentacije selektivnim brojanjem na ploči Bifidobacterium-a.
[0107] Konačno, da bi se analizirao efekat dobijenog jogurta na redukciju telesne masti, izvedena je funkcionalna studija u pre-kliničkom modelu C. elegans. Rezultati pokazuju da je u C. elegans, jogurt fermentisan sa sojem BIF-1 proizveo redukciju u telesnoj masti višu (11.4%) od konvencionalnog komercijalnog jogurta (Slika 20).
[0108] Takođe, isti stepen redukcije telesne masti je određen u C. elegans hranjenim sojinim mlekom fermentisanim sa sojem BIF-1 (Slika 21).
PRIMER 13
Sok suplmenetiran sa sojem BIF-1 (Bifidobacterium animalis subps. lactis CECT 8145).
[0109] Komercijalni sok od narandže je suplementiran sa različitim dozama (10<6>, 10<7>i 10<8>CFU/mL) aktivnih i neaktivnih ćelija BIF-1 soja (Bifidobacterium animalis subps. lactis CECT 8145). U poslednjim navedenim (inaktiviranim ćelijama), kultura je inaktivirana tretmanom autoklavom na 121°C u trajanju od 30 min. Za funkcionalnu analizu, sok suplementiran sa sojem BIF-1 na OD: 30 dodat je na površinu medijuma kulture C. elegans (NG medijum). Ispitivali smo efekat soka koji sadrži termalno inaktivirane bakterije i žive bakterije na redukciju telesne masti kod C. elegans.
[0110] Rezultati (Slika 22) pokazuju da su nematode hranjene sokom suplementiranim sa 10<7>CFU /mL živih ćelija soja BIF-1 imale redukciju telesne masti od 10.3% u odnosu na kontrolne uslove (NG medijum). Pored toga, redukcija zabeležena kod nematoda hranjenih sokom sa 10<7>CFU / mL inaktiviranih ćelija soja BIF-1 bila je veoma slična, pokazujući 7.2% redukciju u masti u poređenju sa kontrolom.
4

Claims (14)

Patentni zahtevi
1. Soj koji pripada vrsti Bifidobacterium animalis subsp. lactis, registrovan dana 14.05.2012. pod pristupnim brojem CECT8145 u Colección Española de Cultivos Tipo (Španska kolekcija kulture sojeva - CECT).
2. Soj prema patentnom zahtevu 1 u obliku vijabilnih ćelija.
3. Soj prema patentnom zahtevu 1 u obliku nevijabilnih ćelija.
4. Supernatant i/ili kultura i/ili ekstrakt i/ili bioaktivno jedinjenje koji sadrži soj prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3.
5. Formulacija koja sadrži soj prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3.
6. Formulacija prema patentnom zahtevu 5, naznačena time što je soj prisutan u količini između 10<5>CFU i 10<12>CFU po gramu ili mililitru formulacije.
7. Formulacija koja sadrži supernatant i/ili kulturu i/ili ekstrakt i/ili bioaktivna jedinjenja prema patentnom zahtevu 4.
8. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 5 do 7 naznačena time što navedena formulacija je farmaceutska formulacija.
9. Formulacija prema patentnom zahtevu 8, naznačena time što dalje sadrži najmanje jedan nosač i/ili farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
10. Formulacija prema patentnim zahtevima 5 do 7 naznačena time što navedena formulacija je formulacija hrane.
11. Formulacija prema patentom zahtevu 10 naznačena time što formulacija hrane je izabrana iz grupe koja sadrži sokove od voća ili povrća, sladoled, formulu za bebe, mleko, jogurt, sir, fermentisano mleko, mleko u prahu, žitarice, pekarske proizvode, proizvode na bazi mleka i/ili žitarica, hranljive suplemente, bezalkoholna pića i/ili dijetarne suplemente.
12. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 5 do 11 naznačena time što sadrži najmanje jedan drugi mikroorganizam izabran iz grupe koja sadrži rod Lactobacillus, Streptococcus, Bifidobacterium, Saccharomyces i/ ili Kluyveromyces L. rhamnosus, L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. kefir, L. parakefir, L. brevis, L. casei, L. plantarum, L. fermentum, L. paracasei, L. acidophilus, L. paraplantarum, L. reuteri, S. thermophilus, B. longum, B. breve, B. bifidum, B. catenulatum, B. adolescentis, B. pseudocatenulatum, S. cerevisiae, S. boulardii, K. Lactis i K. marxianus.
13. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 5 do 12 za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji prekomerne težine i/ili gojaznosti i/ili srodnih bolesti.
14. Formulacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, naznačena time što su srodne bolesti izabrane iz grupe koja sadrži: metabolički sindrom, hipertenziju, glikemiju, inflamaciju, dijabetes tipa 2, kardiovaskularnu bolest, hiperholesterolemiju, hormonalne poremećaje i/ili neplodnost.
RS20180027A 2013-07-18 2014-07-17 Novi soj bifidobacterium animalis subsp. lactis cect 8145 i njegova upotreba u lečenju i/ili prevenciji prekomerne težine i gojaznosti i povezanih bolesti RS56826B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES201331088A ES2526986B1 (es) 2013-07-18 2013-07-18 Nueva cepa de Bifidobacterium animalis subsp. lactis CECT 8145 y su uso para el tratamiento y/o prevención de sobrepeso y obesidad y enfermedades asociadas
PCT/ES2014/070579 WO2015007941A1 (es) 2013-07-18 2014-07-17 Nueva cepa de bifidobacterium animalis subsp. lactis cect 8145 y su uso para el tratamiento y/o prevención de sobrepeso y obesidad y enfermedades asociadas
EP14755102.2A EP3048165B1 (en) 2013-07-18 2014-07-17 Novel strain of bifidobacterium animalis subsp. lactis cect 8145 and use thereof for the treatment and/or prevention of excess weight and obesity and associated diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS56826B1 true RS56826B1 (sr) 2018-04-30

Family

ID=51392276

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20180027A RS56826B1 (sr) 2013-07-18 2014-07-17 Novi soj bifidobacterium animalis subsp. lactis cect 8145 i njegova upotreba u lečenju i/ili prevenciji prekomerne težine i gojaznosti i povezanih bolesti

Country Status (19)

Country Link
US (1) US10946051B2 (sr)
EP (1) EP3048165B1 (sr)
CN (1) CN105849248B (sr)
AU (1) AU2014291922B2 (sr)
CA (1) CA2918430C (sr)
CY (1) CY1119770T1 (sr)
DK (1) DK3048165T3 (sr)
ES (2) ES2526986B1 (sr)
HR (1) HRP20180053T1 (sr)
HU (1) HUE035501T2 (sr)
LT (1) LT3048165T (sr)
MX (1) MX367132B (sr)
NO (1) NO3048165T3 (sr)
PL (1) PL3048165T3 (sr)
PT (1) PT3048165T (sr)
RS (1) RS56826B1 (sr)
SI (1) SI3048165T1 (sr)
SM (1) SMT201800072T1 (sr)
WO (1) WO2015007941A1 (sr)

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105002130A (zh) * 2015-07-30 2015-10-28 江南大学 一种产胆盐水解酶的基因工程菌及其构建方法与应用
EP3222282A1 (en) * 2016-03-21 2017-09-27 Bionou Research, S.L. Use of probiotics in the treatment and/or prevention of psoriasis
CN105918460A (zh) * 2016-04-11 2016-09-07 西南民族大学 一种益生菌谷物酸奶及其制备方法
KR20180129944A (ko) * 2016-04-14 2018-12-05 듀폰 뉴트리션 바이오사이언시즈 에이피에스 식품, 에너지 및/또는 지방 섭취 감소를 위한 비피더스균
EP3272396A1 (en) * 2016-07-18 2018-01-24 Bionou Research, S.L. Use of probiotics in the treatment and/or prevention of atopic dermatitis
IT201600091033A1 (it) * 2016-09-08 2018-03-08 Bioimmunizer Sagl Ceppi di batteri probiotici appartenenti al genere Bifidobacterium e loro estratti di cellule probiotiche (ECP) aventi proprietà immunostimolanti.
CN109223833A (zh) * 2017-07-10 2019-01-18 上海立龙生物科技有限公司 一种预防和改善肥胖的益生菌组合物
CA3073615A1 (en) 2017-08-25 2019-02-28 University College Cork - National University Of Ireland Cork Bifidobacterium longum for treating obesity and weight management
CN107699517A (zh) * 2017-10-17 2018-02-16 无限极（中国）有限公司 一种青春双歧杆菌及其用途
EP3489350B1 (en) * 2017-11-27 2021-07-07 Ewelina Sosnowska-Turek Bifidobacterium animalis amt30 strain and composition containing the strain of bifidobacterium animalis amt30
EP3777868A4 (en) * 2018-03-23 2021-12-01 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. YOUNG CHILDREN'S COMPOSITION FOR THE PREVENTION OF HIGH BLOOD PRESSURE DISORDERS IN CHILDHOOD AND BEYOND
CN112236154B (zh) * 2018-05-31 2024-10-18 深圳华大生命科学研究院 一种组合物及其应用
EP3812452A4 (en) 2018-09-30 2021-11-03 Inner Mongolia Yili Industrial Group Co., Ltd. BIFIDOBACTERIUM LACTIS BL-99 AND ASSOCIATED APPLICATION
CN109182207B (zh) * 2018-10-10 2020-10-27 北京首佳利华科技有限公司 一株具有调节血糖和胆固醇水平等益生功能的嗜酸乳杆菌La-SJLH001及其应用
CN109749955B (zh) * 2018-12-29 2020-08-21 浙江工业大学 短乳杆菌zj401及其应用
CN109666615B (zh) * 2019-02-20 2021-03-19 无限极（中国）有限公司 一种益生菌组合物及其应用
US11045507B2 (en) 2019-02-21 2021-06-29 Ewelina Sosnowska-Turek Bifidobacterium animalis AMT30 strain and the composition containing the strain of Bifidobacterium animalis AMT30
AU2020412749A1 (en) 2019-12-27 2022-06-16 Biopolis, S.L. Uses of lipoteichoic acid from Bifidobacteria
EP3851115A1 (en) * 2020-01-15 2021-07-21 Biopolis, S.L. Probiotic composition for its use as an antioxidant
KR102136522B1 (ko) * 2020-03-04 2020-07-22 주식회사 락토메이슨 안전성 및 장부착능이 우수한 모유유래 락토바실러스 루테리 lm1071 균주, 및 상기 균주 또는 이의 배양물을 포함하는 조성물
CN111849836B (zh) * 2020-08-08 2023-09-22 洪德轩 一种具有抗氧化的鼠李糖乳杆菌及其应用
CN116076569B (zh) * 2020-08-31 2025-05-13 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 MN-Gup制备缓解肥胖或体重增加的乳制品中的用途
EP4001399A1 (en) * 2020-11-13 2022-05-25 "NEOPHARM BULGARIA" Ltd. Strain bifidobacterium animalis ssp. lactis dsm 33647 for modulating metabolism indicators
CN112618577B (zh) * 2020-12-15 2023-07-25 深圳君拓生物科技有限公司 动物双歧杆菌在提高肿瘤免疫治疗应答中的作用
EP4262833A4 (en) * 2020-12-18 2024-11-20 The General Hospital Corporation PROBIOTICS COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF TO IMPROVE GROWTH AND SOCIAL FUNCTION IN CHILDREN
CN112980719B (zh) * 2020-12-30 2022-11-29 上海理工大学 一株耐氧动物双歧杆菌
CN113005060B (zh) * 2021-03-15 2022-11-01 江南大学 青春双歧杆菌ccfm1173在制备功能性菌剂、食品和或药物中的应用
EP4387640A1 (en) * 2021-08-19 2024-06-26 Société des Produits Nestlé S.A. Postbiotic
JP2024530209A (ja) * 2021-08-19 2024-08-16 ソシエテ・デ・プロデュイ・ネスレ・エス・アー ポストバイオティクス
CN114200120A (zh) * 2021-12-02 2022-03-18 兰州大学 一种治疗肥胖症的药物筛选试剂盒及其使用方法
CN114028444A (zh) * 2021-12-03 2022-02-11 南京北极光生物科技有限公司 一种益生菌组合物及其在缓解抑郁症与减少脂堆积上的应用
WO2023118868A1 (en) * 2021-12-21 2023-06-29 Quadram Institute Bioscience Bifidobacterium and compositions thereof for breast cancer treatment
CN114317354B (zh) * 2021-12-30 2024-05-07 美益添生物医药(武汉)有限公司 一种动物双歧杆菌及其培养方法和其在促进骨细胞生长和成熟中的应用
CN114480229B (zh) * 2022-04-15 2022-08-09 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种动物双歧杆菌乳亚种菌株wkb148及其产品与应用
JP2025514761A (ja) 2022-04-21 2025-05-09 アボット・ラボラトリーズ 糖尿病の発症を遅らせる又は糖尿病のリスクを軽減するための方法及び組成物
CN114574407B (zh) * 2022-05-06 2022-11-01 微康益生菌(苏州)股份有限公司 动物双歧杆菌乳亚种wkb99及其在制备改善代谢综合征制品方面的应用和产品
CN114848683B (zh) * 2022-05-09 2023-10-24 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种长双歧杆菌在制备预防或治疗多囊卵巢所致不孕症药物中的应用
CN115181698B (zh) * 2022-06-28 2023-09-08 广东粤港澳大湾区国家纳米科技创新研究院 一种益生菌组合物及应用
CN116286551B (zh) * 2023-04-25 2023-08-11 天赋能(天津)功能食品研究发展有限公司 长双歧杆菌婴儿亚种在调节体内脂肪代谢、塑形减脂改善肥胖方面的应用
CN116622585A (zh) * 2023-06-20 2023-08-22 广东南芯医疗科技有限公司 动物双歧杆菌乳亚种bl03在制备抗氧化和抗衰老产品中的应用
WO2025008468A1 (en) * 2023-07-04 2025-01-09 Biopolis, S.L. Bifidobacterium animalis subsp lactis strain cect 8145 and lta thereof health uses
CN116590205B (zh) * 2023-07-14 2023-10-03 中国农业大学 一种动物双歧杆菌亚种组合菌剂在减肥制剂制备中的应用
CN117448198B (zh) * 2023-09-13 2025-03-11 杭州微致生物科技有限公司 一种动物双歧杆菌乳亚种vb301及其应用
CN117025489B (zh) * 2023-10-09 2024-03-19 杭州微致生物科技有限公司 一种动物双歧杆菌乳亚种vb315及其应用
WO2025112480A1 (zh) * 2023-11-30 2025-06-05 科郦有限公司 一种动物双歧杆菌乳亚种菌株、益生菌制剂及其制备方法和用途
CN118240724B (zh) * 2024-05-30 2024-08-16 内蒙古农业大学 一株动物双歧杆菌乳亚种ProSci-246及由其制备的产品和应用
CN118902102A (zh) * 2024-10-11 2024-11-08 浙江衡美健康科技股份有限公司 一种促进减脂的六重组合物及其制备方法和应用
CN119174784B (zh) * 2024-11-14 2025-03-04 华大精准营养（深圳）科技有限公司 动物双歧杆菌乳亚种或组合物在制备用于预防和/或治疗代谢性疾病的产品中的应用
CN119909105A (zh) * 2025-04-02 2025-05-02 合生元（广州）健康产品有限公司 一种用于降脂降糖的营养组合物及其应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007029773A1 (ja) * 2005-09-08 2007-03-15 Kabushiki Kaisha Yakult Honsha コレステロール吸収抑制剤
SE529185C2 (sv) * 2005-10-07 2007-05-22 Arla Foods Amba Användning av probiotiska bakterier för tillverkning av livsmedel eller läkemedel för förhindrande av övervikt
US20110027348A1 (en) 2007-08-27 2011-02-03 Janos Feher Composition and method inhibiting inflammation
EP3181134B1 (en) * 2009-06-19 2019-10-30 DuPont Nutrition Biosciences ApS Bifidobacteria for treating diabetes and related conditions
CN102858993B (zh) * 2010-01-08 2015-08-05 热尔韦·达诺尼公司 筛选具有抗氧化作用的细菌的方法
JP2011172506A (ja) * 2010-02-24 2011-09-08 Glico Dairy Products Co Ltd プロバイオティクス用のビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス菌株及びこれを用いたプロバイオティクス乳酸菌発酵食品又はその他のプロバイオティクス経口食品。
EP2685994B1 (en) * 2011-03-17 2015-12-30 Probiotical S.p.A. Probiotic bacteria having antioxidant activity and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
HK1226100B (en) 2017-09-22
CN105849248A (zh) 2016-08-10
EP3048165A1 (en) 2016-07-27
MX367132B (es) 2019-08-05
PT3048165T (pt) 2018-02-09
AU2014291922A1 (en) 2016-02-25
PL3048165T3 (pl) 2018-06-29
AU2014291922B2 (en) 2019-11-14
CA2918430A1 (en) 2015-01-22
SMT201800072T1 (it) 2018-03-08
ES2526986A1 (es) 2015-01-19
HRP20180053T1 (hr) 2018-03-23
CN105849248B (zh) 2020-05-05
US10946051B2 (en) 2021-03-16
NO3048165T3 (sr) 2018-03-10
EP3048165B1 (en) 2017-10-11
WO2015007941A1 (es) 2015-01-22
LT3048165T (lt) 2018-03-12
ES2526986B1 (es) 2015-11-02
HUE035501T2 (en) 2018-05-02
ES2655857T3 (es) 2018-02-21
MX2016000743A (es) 2016-07-14
CA2918430C (en) 2023-06-06
CY1119770T1 (el) 2018-06-27
DK3048165T3 (en) 2018-01-22
SI3048165T1 (en) 2018-04-30
US20160143963A1 (en) 2016-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK3048165T3 (en) Hitherto unknown strain of BIFIDOBACTERIUM ANIMALIS SUBSP. LACTIS CECT 8145 AND ITS APPLICATION FOR TREATMENT AND / OR PREVENTION OF OVERweight and obesity AND RELATED DISEASES
Abratt et al. Oxalate-degrading bacteria of the human gut as probiotics in the management of kidney stone disease
EP2615163B1 (en) Composition comprising probiotics having aryl hydrocarbon receptor activating potency for use as anti-inflammatory agents
JP7012377B2 (ja) 新規な細菌種
EP2270133B1 (en) Method for obtaining a novel strain of bifidobacterium bifidum with activity against infection by helicobacter pylori
CN102858948B (zh) 具有抗氧化作用的乳酸杆菌
EP4364583A1 (en) Composition comprising three lactobacillus sp. strains, and use thereof
US12370225B2 (en) Dysosmobacter, a novel bacterial genus of the gastrointestinal microbiota and uses thereof
US12350301B2 (en) Composition comprising three Lactobacillus sp. strains, and use thereof
CN117838737A (zh) 一种短双歧杆菌207-1及其在调节脂代谢方向的应用
US20220160797A1 (en) Probiotic bacteria capable of adaptive response to pomegranate extract and methods of production and use thereof
Zhang et al. Milk fat globule membrane protects Bifidobacterium longum ssp. infantis ATCC 15697 against bile stress by modifying global transcriptional responses
Zhang et al. Degradation effects and mechanisms of Limosilactobacillus fermentum on ethanol
JPWO2020203792A1 (ja) 骨格筋遅筋化用組成物
CN114667153A (zh) 产生gaba的可培养细菌和用于改善健康的用途
KR20240147957A (ko) 신규 비피도박테리움 및/또는 락토바실러스 속 균주 또는 이들의 조합 및 이의 용도
HK1226100A1 (en) Novel strain of bifidobacterium animalis subsp. lactis cect 8145 and use thereof for the treatment and/or prevention of excess weight and obesity and associated diseases
KR102807100B1 (ko) 히스타민 분해능을 가지는 락티플란티바실러스 플란타룸 균주
El Hage Ability of a propionate-producing synthetic microbial consortium to restore functionality in a dysbiosed human gut microbiome
HK40074611A (en) Gaba-producing culturable bacteria and use for improving health
Chegdani Effects of Streptococcus thermophilus bacteria on rat gene expression profiles
CN113795572A (zh) Holdemanella sp.细菌及其用途
Busi Studies on the selection of a strain of lactic acid bacteria to grow at optimal conditions for the production of probiotics
Ponto The influence of fermentation parameters and heat-shock treatment on the viability of Lactobacillus fermentum PC1 during stress conditions