RS55630B1

RS55630B1 - Triazolopiridazini kao modulatori tirozin kinaze

Info

Publication number: RS55630B1
Application number: RS20170077A
Authority: RS
Inventors: Tianbao Lu; Richard Alexander; Richard W Connors; Maxwell D Cummings; Robert A Galemmo; Heather Rae Hufnagel; Dana L Johnson; Ehab Khalil; Kristi A Leonard; Thomas P Markotan; Anna C Maroney; Jan L Sechler; Jeremy M Travins; Robert W Tuman
Original assignee: Janssen Pharmaceutica Nv
Priority date: 2005-12-21
Filing date: 2006-12-18
Publication date: 2017-06-30
Also published as: PE20110008A1; AR058703A1; ZA200806277B; HRP20170103T1; AU2006331912B2; MA30084B1; CR10170A; ECSP088573A; CN101374843B; NI200800179A; US8173654B2; CA2634721C; NO340958B1; BRPI0620292B1; EA015754B1; JP2009525263A; EP1966214B1; US20070203136A1; AP3433A; NO20083013L

Description

REFERENCE SA SRODNIM PRIJAVAMA

[0001]Ova prijava traži prioritet od US provizorne prijave za patent br. 60/752,634, koja je podneta 21. decembra, 2005.

OBLAST PRONALASKA

[0002]Pronalazak se odnosi na nova jedinjenja koja funkcionišu kao modulatori proteina tirozin kinaze. Preciznije, pronalazak se odnosi na nova jedinjenja koja funkcionišu kao inhibitori c-Met.

POZADINA PRONALASKA

[0003]Predmetni pronalazak se odnosi na triazolopiridazine kao inhibitore tirozin kinaza, uključujući c-Met. Triazolopiridazini su prijavljeni sa korisnim terapeutskim karakteristikama: US 5278161 i US 2003181455 izveštavaju o triazolopiridazinima kao inhibitorima renina; SAD 6355798 prijavljuje triazolopiridazin kao odgovarajuće GABA inhibitore i GABA ligande receptora; WO 2005002590 i US 2005096322 prijavljuju triazolopiridazin kao agense za posredovanje povećanja koštane mase; US 2004192696 prijavljuju triazolopiridazin kao korisne za lečenje ili ublažavanje težine bolesti ili stanja. Akademski laboratoriji su prijavili eksperimente sa triazolopiridazinima u sledećim dokumentima:Science of Synthesis( 2002), 12, 15- 225, Heterocycles ( 2003), 61, 105- 112,

Heterocycles ( 2002), 57( 11), 2045- 2064, Journal of Heterocyclic Chemistry ( 1998), 35( 6), 1

281- 1284, and Tetrahedron ( 1999), 55( 1), 271- 278.

[0004]Takođe treba spomenuti dokumente US 4810705; DE 2222834 (ekvivalent US 3823137); DE 2147013 (ekvivalent, US 3919200); DE 2113438; DE 2030581 (ekvivalent US 3823137); DE 1670160 (US 3506656); DE 1545598 (ekvivalent US 3483193); DE 2161587; DE 4309285; WO 2004021984; US 2004147568; JP 63199347; WO 1999037303; US 6297235; US 6444666; WO 2001034603; WO 2004017950; CA 2132489; WO 2004058769; US 2004192696 WO 2003074525; WO 2003032916; Japanska patentna prijava broj 62-147775; US 4260755; WO 2002012236; EP 464572; EP 404190; EP 156734; WO 200501005; WO 2005004607; WO 2005004808; WO 2003074525; JP 63310891 iEl

Massry, Abdel Moneim; Amer, Adel, " Synthesis of new s- triazolo[ 4, 3- b] pyridazines,"

Heterocycles ( 1989), 29( 10), 1907- 14; Amer, Adel; El Massry, Abdel Moneim; Badawi,

Mohamed; Abdel- Rahman, Mohamed, M. ; El Sayed, Safaa A. F., " Synthetic reactions and

structural studies of heterocycles containing nitrogen. Part 14. Dehydration of 2-( 2-

arylethyl)- 2- hydroxy- 4- oxopentanoic acids and their hvdrazones to form heterocycles,"

Journal fuer Praktische Chemie/ Chemiker- Zeitung ( 1997), 339( 1), 20- 25; Legraverend,

Michel; Bisagni, Emile; Lhoste, Jean Mare, " Svnthesis of s- triazolo[ 4, 3- b] pyridazine C-nucleosides ( 1)," Journal of Heterocyclic Chemistry ( 1981), 18( 5), 893- 8; Albright, J. D. ;

Moran, D. B. ; JVrighi, W. B., Jr. ; Collins, J. B. ; Beer, B. ; Lippa, A. S. ; Greenblatt, E. K,

" Synthesis and anxiolytic activity of 6-( substituted- phenyl)- l, 2, 4- triazolo[ 4, 3- b] pyridazines,"

Journal of Medicinal Chemistry ( 1981), 24( 5), 592- 600; How, Pow- Yui; Parrick, John,

" Thermal cyclization of pyridazinylhydrazones to give s- triazolo[ 4, 3- b] pyridazines and

pyridazino[ 2, 3- a] benzimidazole," Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1: Organic and Bio- Organic Chemistry ( 1972- 1999) ( 1976), ( 13), 1363- 6; Lundina, I. B. ;

Frolova, N. N. ; Postovskii, I. Ya. ; Bedrin, A. V. ; Vereshchagina, N. N., " Svnthesis and study

of the antitubercular activity of 2-( 5- nitro- 2- furyl) vinyl derivatives of pyridazine and s-triazolo[ 4, 3- b] pyridazine," Khimiko- Farmatsevticheskii Zhurnal ( 1972), 6( 4), 13- 17; Sircar,

Ila, " Synthesis of new l, 2, 4- triazolo[ 4, 3- b] pyridazines and related compounds," Journal of

Heterocyclic Chemistry ( 1985), 22( 4), 1045- 8; Bratusek, Urska et ah, " The synthesis ofN-

phthaloyl- azatryptophan derivatives," Acta Chimica Slovenica ( 1996), 43( 2), 105- 117; Sala,

Martin et ah, " Synthesis of 3-( a- and b- D- arabinofuranosyl)- 6- chloro- l, 2, 4- triazolo[ 4, 3-b] pyridazine," Carbohydrate Research ( 2003), 338( 20), 2057- 2066; Cucek, Karmen et ah,

" Synthesis of novel [ 1, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] pyridazines," ARK1VOC ( Gainesville, FL, United

States) [ online computer file] ( 2001), ( 5), 79- 86, URL: http:// www. arkat-

usa. org/ ark/ journal/ Volume2/ Part3/ Tisler/ MT- 161/ MT- 161. pdf; Svete, Jurij et ah, " A simple

onepot synthesis of l-( s- triazolo[ 4, 3- x] azinyl- 3)- substitutedpolyols, " Journal of Heterocvclic

Chemistry ( 1997), 34( 4), 1115- 1121; Kosary, Judit et ah, " Preparation of new

[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] pyridazines. Part 12: Studies in the field of pyridazine

compounds, " Pharmazie ( 1983), 38( 6), 369- 71; Kosary, J. et ah, " Studies in the field of

pyridazine compounds. II. Derivatives of [ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] pyridazine- 3- carboxylic

acid"Acta Chimica Academiae Scientiarum Hangaricae ( 1980), 103( 4), 405- 13; Stanovnik,

B. et al, " Product class 1: pyrazoles," Science of Svnthesis ( 2002), 12, 15- 225; Vranicar,

Lidija et al, " Transformation of N-( 5- acetyl- 6- methyl- 2- oxo- 2H- pyran- 3- yl) benzamide with

hydrazines in the presence of an acidic catalyst, " Heterocycles ( 2003), 61, 105- 112;

Bratusek, Urska et al., " Synthesis and reactivity of ( Z)- 3- benzoylamino- 4- dimethylamino- 2-oxo- 3- butene. Preparation of l- aryl- and l- heteroaryl- substituted 4- benzoylamino- 5- methyl-

lH- pyrazoles, " Heterocycles ( 2002), 57( 11), 2045- 2064; Bratusek, Urska et al,

" Transformation of 4-[ l-( dimethylamino) ethyliden]- 2- phenyl- 5( 4H)- oxazolone into methvl 2-( benzoylamino)- 3- oxobutanoate. The synthesis of 1- substituted 4-( benzoylamino)- 3- methyl-5( 2H)- pyrazolones, " Journal of Heterocyclic Chemistry ( 1998), 35( 6), 1281- 1284; Vranicar,

Lidija et al, " 2H- Pyran- 2- ones as synthons for ( E)- a, B- didehydroamino acid derivatives,

" Tetrahedron ( 1999), 55( 1), 271- 278.

[0005] Protein kinaze su enzimske komponente puteva prenosa signala koji katalizuju prenos terminalnog fosfata sa ATP na hidroksi grupu ostataka proteina od tirozina, serina i/ili treonina. Tako su, jedinjenja koja inhibiraju funkcije protein kinaza korisni alati za procenu fizioloških posledica aktivacije protein kinaze. Prekomerna ekspresija ili neprikladna ekspresija normalnih ili mutiranih proteinskih kinaza kod sisara je tema obimnih studija i pokazano je da igra značajnu ulogu u razvoju mnogih bolesti, uključujući dijabetes, angiogenezu, psorijazu, restenozu, očne bolesti, šizofreniju, reumatoidni artritis, aterosklerozu, kardiovaskularne bolesti i kancer. Kardiotonična korist inhibicije kinaze je takođe proučavana. Ukratko, inhibitori protein kinaza imaju posebnu primenu u lečenju bolesti ljudi i životinja.

[0006] Faktor rasta hepatocita (HGF) (takođe poznat kao faktor rasejanja) receptora, c-Met, je receptor tirozin kinaza koji reguliše proliferaciju ćelija, morfogenezu i pokretljivost. c-Met gen se prevodi u 170 kD protein koji se prerađuje u površinski ćelijski receptor sastavljen od 140 kD transmembranske podjedinice P i 50 kD glikozilovane ekstra ćelijske podjedinice a.

[0007] Mutacije u c-Met, prekomerna ekspresija c-Met i/ili HGF/SF, ekspresija c-Met i HGF/SF od strane iste ćelije, te prekomerna ekspresija i/ili nenormalna c-Met signalizacija je prisutna u nizu humanih solidnih tumora i veruje se da učestvuje u angiogenezi, razvoju tumora, invaziji i metastaziranju.

[0008]Ćelijske linije sa nekontrolisanom c-Met aktivacijom su, na primer, i visoko invazivne i metastatske. Značajna razlika između normalnih i transformisanih ćelija koje eksprimiraju c-Met receptor je daje fosforilacija domena tirozin kinaze u ćelijama tumora često nezavisna od prisustva Uganda.

[0009] C-Met mutacije/promene su zapažene kod većeg broja humanih bolesti, uključujući tumore i kancere - na primer, nasledni i sporadični papilarni renalni karcinom, kancer dojke, kolorektalni kancer, karcinom želuca, gliom, kancer jajnika, hepatocelularni karcinom, karcinome skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinom testisa, karcinom bazalnih ćelija, karcinom jetre, sarkom, maligni pleuralni mezoteliom, melanom, multipli mijelom, osteosarkom, kancer pankreasa, kancer prostate, sinovijalni sarkom, kancer štitaste žlezde, nemikrocelularni kancer pluća (NSCLC) i mikrocelularni kancer pluća, tranzicioni ćelijski karcinom mokraćne bešike, karcinom testisa, karcinom bazalnih ćelija, karcinom jetre - i leukemije, limfome i mijelome - na primer, akutna limfocitna leukemija (ALL), akutna mijeloidna leukemija (AML), akutna promijelocitna leukemija (APL), hronična limfocitna leukemija (CLL), hronična mijeloidna leukemija (CML), hronična neutrofilna leukemija (CNL), akutna neizdiferencirana leukemija (AUL), anaplastični krupnoćelijski limfom (ALCL), prolimfocitna leukemija (PML), juvenilna mijelomonocitna leukemija (JMML), ALL T-ćelija kod odraslih, AML sa trilinearnom mijelodisplazijom (AML/TMDS), mešovita leukemija (MLL), sindromi mijelodisplazije (MDS), mijeloproliferativni poremećaji (MPD), multipli mijelom (MM), mijeloidni sarkom, ne-Hodžkinov limfom i Hodžkinova bolest (poznata i kao Hodžkinov limfom).

[0010]Pogledajte literaturu Maulik G, Shrikhande A, Kijima T, Ma PC, Morrison PT, Salgia

R., Role of the hepatocyte growth factor receptor, c- Met, in oncogenesis and potential for

therapeutic inhibition. Cytokine Growth Factor Rev. 2002 Feb;13( l) :41- 59, i navedene

reference: Bieche, M. H. Champeme i R. Lidereau, Infrequent mutations of the MET gene in

sporadic breast tumours ( letter). Int. J. Cancer 82 ( 1999), pp. 908- 910; R. L. Camp, E. B.

Rimm i D. L. Rimm, Met expression is associated with poor outcome in patients with axillary

lymph node negative breast carcinoma. Cancer 86 ( 1999), pp. 2259- 2265; L. Nakopoulou, H.

Gakiopoulou, A. Keramopoulos et al., c- met tyrosine kinase receptor expression is associated

with abnormal beta- catenin expression and favourable prognostic factors in invasive breast

carcinoma. Histopathology 36 ( 2000), pp. 313- 325; C. Lia, M. Park i M. S. Tsao, Over-

expression of c- met proto- oncogene but not epidermal growth factor receptor or c- erbB- 2 in

primarv human colorectal carcinomas. Oncogene. 7 ( 1992), pp. 181- 185; K. Umeki, G.

Shiota i H. Kawasaki, Clinical significance of c- met oncogene alterations in human

colorectal cancer. Oncology 56 ( 1999), pp. 314- 321; H. Kuniyasu, W. Yasui, Y. Kitadai et al.,

Frequent amplification of the c- met gene in scirrhous type stomach cancer. Biochem.

Biophys. Res. Commun. 189 ( 1992), pp. 227- 232; H. Kuniyasu, W. Yasui, H. Yokozaki et al.,

Aberrant expression of c- met mRNA in human gastric carcinomas. Int. J. Cancer 55 ( 1993),

pp. 72- 75; R. L. Park, R. R. Oh, Y. S. Kim et al, Absence of mutations in the kinase domain of

the Met gene and frequent expression of Met and HGF/ SF protein in primary gastric

carcinomas. Apmis 108 ( 2000), pp. 195- 200; J. H. Lee, S. U. Han, H. Cho et al, A nove! germ

Une juxtamembrane Met mutation in human gastric cancer. Oncogene 19 ( 2000), pp. 4947-4953; T. Moriyama, H. Kataoka, H. Tsubouchi et al, Concomitant expression of hepatocyte

growth factor ( HGF), HGF activator and c- met genes in human glioma cells in vitro. FEBS

Lett. 372 ( 1995), pp. 78- 82; Y. W. Moon, RJ. Weil, S. D. Packet al, Missense mutation of the

MET gene detected in human glioma. Mod. Pathol 13 ( 2000), pp. 973- 977; M. Di Renzo, M.

Olivero, T. Martone et al, Somatic mutations of the met oncogene are selected during

metastatic spread of human HNSC carcinomas. Oncogene 19 ( 2000), pp. 1547- 1555; K.

Suzuki, N. Hayashi, Y. Yamada et al, Expression of the c- met proto- oncogene in human

hepatocellular carcinoma. Hepatology 20 ( 1994), pp. 1231- 1236; W. S. Park, S. M. Dong, S. Y.

Kim et al, Somatic mutations in the kinase domain of the Met/ hepatocyte growth factor

receptor gene in childhood hepatocellular carcinomas. Cancer Res. 59 ( 1999), pp. 307- 310;

L. Schmidt, K. Junker, G. JVeirich et al, Two North American families with hereditary

papillary renal carcinoma and identical novel mutations in the MET proto- oncogene. Cancer

Res. 58 ( 1998), pp. 1719- 1722; J. Fischer, G. Palmedo, R. von Knobloch et al, Duplication

and over- expression of the mutant allele of the MET proto- oncogene in multiple hereditary

papillary renal cell tumours. Oncogene. 17 ( 1998), pp. 733- 739; Z. Zhuang, W. S. Park, S.

Pack et al, Trisomy 7- harbouring non- random duplication of the mutant MET allele in

hereditary papillarv renal carcinomas. Nat Genet 20 ( 1998), pp. 66- 69; M. Olivero, G.

Valente, A. Bardelli et al, Novel mutation in the ATP- binding site of the MET oncogene

tyrosine kinase in a HPRCC family. Int. J. Cancer 82 ( 1999), pp. 640- 643; L. Schmidt, K.

Junker, N. Nakaigawa et al, Novel mutations of the MET proto- oncogene in papillary renal

carcinomas. Oncogene 18 ( 1999), pp. 2343- 2350; M. Jucker, A. Gunther, G. Gradi et al, The

Met/ hepatocyte growth factor receptor ( HGFR) gene is over- expressed in some cases ofhuman leukemia and lymphoma. Leuk. Res. 18 ( 1994), pp. 7- 16; E. Tolnay, C. Kuhnen, T.

JViethege et al, Hepatocvte growth factor/ scatter factor and its receptor c- Met are overexpressed and associated with an increased microvessel density in malignant pleural

mesothelioma. J. Cancer Res. Clin. Oncol. 124 ( 1998), pp. 291- 296; J. Klominek, B. Baskin,

Z. Liu et al, Hepatocyte growth factor/ scatter factor stimulates chemotaxis and growth of

malignant mesothelioma cells through c- met receptor. Int. J. Cancer 76 ( 1998), pp. 240- 249;

Thirkettle, P. Harvey, P. S. Hasleton et al, Immunoreactivity for cadherins, HGF/ SF, met,

and erbB- 2 in pleural malignant mesotheliomas. Histopathology 36 ( 2000), pp. 522- 528;

P. G. Natali, M. R. Nicotra, M. F. Di Renzo et al, Expression of the c- Met/ HGF receptor in

human melanocytic neoplasms: demonstration of the relationship to malignant melanoma

tumour progression. Br. J. Cancer 68 ( 1993), pp. 746- 750; O. Hjertner, M. L. Torgersen, C.

Seidel et al, Hepatocyte growth factor ( HGF) induces interleukin- 11 secretion from

osteoblasts: a possible role for HGF in myeloma- associated osteolytic bone disease. Blood

94 ( 1999), pp. 3883- 3888; C. Liu and M. S. Tsao , In vitro and in vivo expression of

transforming growth factor- alpha and tyrosine kinase receptors in human non- small- cell

lung carcinomas. Am. J. Pathol. 142 ( 1993), pp. 1155- 1162; M. Olivero, M. Rizzo, R.

Madeddu et al, Over- expression and activation of hepatocvte growth factor/ scatter factor in

human non- small- cell lung carcinomas. Br J. Cancer 74 ( 1996), pp. 1862- 1868; E. Ichimura,

A. Maeshima, T. Nakajima et al, Expression of c- met/ HGF receptor in human non- small cell

lung carcinomas in vitro and in vivo and its prognostic significance. Jpn. J. Cancer Res. 87

( 1996), pp. 1063- 1069; Takanami, F. Tanana, T. Hashizume et al, Hepatocyte growth factor

and c- Met/ hepatocyte growth factor receptor in pulmonaty adenocarcinomas: an evaluation

of their expression as prognostic markers. Oncology 53 ( 1996), pp. 392- 397; J. M. Siegfried, L. A. JVeissfeld, J. D. Luketich et al, The clinical significance of hepatocyte growth factor for

non- small cell lung cancer. Ann Thorac. Surg. 66 ( 1998), pp. 1915- 1918; M. Tokunou, T.

Niki, K. Eguchi et al, c- MET expression in myofibroblasts: role in autocrine activation and

prognostic significance in lung adenocarcinoma. Am J. Pathol. 158 ( 2001), pp. 1451- 1463;

R. Ferracini, M. F. Di Renzo, K. Scotlandi et al, The Met/ HGF receptor is over- expressed in

human osteosarcomas and is activated by either a paracrine or an autocrine circuit.

Oncogene 10 ( 1995), pp. 739- 749; M. F. Di Renzo, M. Olivero, D. Katsaros et al, Overexpression of the Met/ HGF receptor in ovarian cancer. Int. J. Cancer 58 ( 1994), pp. 658-662; R. L. Sowter, A. N. Corps i S. K. Smith, Hepatocyte growth factor ( HGF) in ovarian

epithelial tumour fluids stimulates the migration of ovarian carcinoma cells. Int. J. Cancer 83

( 1999), pp. 476- 480; M. Ebert, M. Yokoyama, H. Friess et al, Co- expression of the c- met

proto- oncogene and hepatocyte growth factor in human pancreatic cancer. Cancer Res. 54

( 1994) , pp. 5775- 5778; L. L. Pisters, P. Troncoso, H. E. Zhau et al, c- met proto- oncogene

expression in benign and malignant human prostate tissues. J. Urol. 154 ( 1995), pp. 293-298; P. A. Humphrey, X. Zhu, R. Zarnegar et al, Hepatocyte growth factor and its receptor

( c- MET) in prostatic carcinoma. Am J. Pathol. 147 ( 1995), pp. 386- 396; K. Rygaard, T.

Nakamura, M. Spang- Thomsen et al, Expression of the proto- oncogenes c- met and c- kit and

their ligands, hepatocyte growth factor/ scatter factor and stem cell factor, in SCLC cell lines

and xenografts. Br J. Cancer 67 ( 1993), pp. 37- 46; Y. Oda, A. Sakamoto, T. Saito et al,

Expression of hepatocyte growth factor ( HGF) Zscatter factor and its receptor c- MET

correlates with poor prognosis in synovial sarcoma. Hum. Pathol. 31 ( 2000), pp. 185- 192;

M. F. Di Renzo, M. Olivero, G. Serini et al, Over- expression of the c- MET/ HGF receptor in

human thyroid carcinomas derived from the follicular epithelium. J. Endocrinol. lnvest 18

( 1995) , pp. 134- 139; K. Gohji, M. Nomi, Y. Niitani et al, Independent prognostic value of

serum hepatocyte growth factor in bladder cancer. J. Clin. Oncol. 18 ( 2000), pp. 2963- 2971.

[0011]Zbog uloge aberantne HGF/SF- Met signalizacije u patogenezi različitih vrsta humanih kancera, inhibitori c-Met receptora tirozin kinaze imaju široku primenu u lečenju kancera kod kojih Met aktivnost doprinosi invazivnom / metastatskom fenotipu, uključujući one kod kojih c-Met nije prekomerno eksprimiran ili na drugi način izmenjen. Inhibitori c-Met takođe inhibiraju angiogenezu, i stoga se veruje da mogu da se primene u lečenju bolesti vezanih za nastajanje nove vaskulature, kao što je retinopatija kod reumatoidnog artritisa. Pogledajte literaturuMichieli P, Mazzone M, Basilico C, Cavassa S, Sottile A, Naldini L,

Comoglio PM. Targeting the tumor and its microenvironment by a dual- function decoy Met

receptor. Cancer Cell. 2004 Jul;6( l) :61- 73.

[0012]Takođe, veruje se da prekomerna ekspresija c-Met može biti potencijalno koristan prediktor za prognozu određenih bolesti, kao što je, na primer, kancer dojke, nemikrocelularni karcinom pluća, endokrine neoplazme pankreasa, kancer prostate, ezofagealni adenokarcinom, kolorektalni kancer, karcinom pljuvačne žlezde, difuzni krupnoćelijski B limfom i karcinom endometrijuma.

[0013]PogledajteliteraturuHerrera LJ, El- Hefnawy T, Queiroz de Oliveira PE, Raja S,

Finkelstein S, Gooding W, Luketich JD, Godfrey TE, Hughes SJ., The HGF Receptor c- Met Is

Overexpressed in Esophageal Adenocarcinoma. Neoplasia. 2005 Jan;7( l) :75- 84; Zeng Z,

Weiser MR, DAlessio M, Grace A, Shia J, Paty PB., Immunoblot analysis of c- Met

expression in human colorectal cancer: overexpression is associated with advanced stage

cancer. Clin Exp Metastasis. 2004;21( 5) :409- 17; He Y, PengZ, Pan X, WangH Ouyang Y.

[ Expression and correlation of c- Met and estrogen receptor in endometrial carcinomas]

Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2003 Jan;34( l) :78- 9, 88 ( English Abstract Only) ;

Tsukinoki K Yasuda M, Mori Y, Asano S, Naito H Ota Y, Osamura RY, Watanabe Y.

Hepatocyte growth factor and c- Met immunoreactivity are associated with metastasis in high

grade salivary gland carcinoma. Oncol Rep. 2004 Nov; 12( 5) : 1017- 21; Kawano R, Ohshima

K Karube K, Yamaguchi T, Kohno S, Suzumiya J, Kikuchi M, Tamura K. Prognostic

significance of hepatocvte growth factor and c- MET expression in patients with diffuse large

B- cell lymphoma. Br JHaematol. 2004 Nov;127( 3) :305- 7; Lengyel E, Prechtel D, Resau JH,

Gauger K, Welk A, Lindemann K, Salanti G, Richter T, Knudsen B, Vande JVoude GF,

Harbeck N. C- Met overexpression in node- positive breast cancer identifies patients with poor

clinical outcome independent ofHer2/ neu. Int J Cancer. 2005 Feb 10;113( 4) :678- 82; Hansel

DE, Rahman A, House M, Ashfaq R, Berg K, Yeo CJ, Maitra A. Met proto- oncogene and

insulin- like growth factor binding protein 3 overexpression correlates with metastatic ability

in well- differentiated pancreatic endocrine neoplasms. Clin Cancer Res. 2004 Sep 15; 10( 18

Pt l) :6152- 8; Knudsen BS, Edlund M. Prostate cancer and the met hepatocyte growth factor

receptor. Adv Cancer Res. 2004;91:31- 67; D Masuya, C Huang, D Liu, T Nakashima, et al.,

The tumour- stromal interaction between intratumoral c- Met and stromal hepatocyte growth

factor associated with tumour growth and prognosis in non- small- cell lung cancer patients.

Brutish Journal of Cancer. 2004; 90:1552- 1562; Ernst Lengyel, Dieter Prechtel, James H.

Resau, Katja Gauger, et al. C- Met overexpression in node- positive breast cancer identifies

patients with poor clinical outcome independent of Her2/ neu. Int. J. Cancer 2005; 113: 678-682.

[0014]Razvijene su mnoge strategije za umanjivanje aberantne Met signalizacije kod humanih tumora. Neke od ovih strategija uključuju upotrebu HGF antagonista i malih molekula inhibitora. Na primer, trenutno postoji veći broj HGF/SF antagonista ili inhibitora u kliničkom razvoju, kao što suAbbott ( ABT- 510), EntreMed ( angiostatin), Kosan Biosciences

( 17- AAG), Amgen ( AMG- 102), Exelixis ( XL- 880 iXL- 184), Pfizer ( PNU- 145156E), i ArQule

( ARQ 197).

KRATAK PREGLED PRONALASKA

[0015]Predmetni pronalazak se odnosi na nove triazolopiridazine (jedinjenja sa formulom I) kao modulatore protein tirozin kinaze, naročito inhibitore c-Met, i primenu takvih jedinjenja za sniženje ili inhibiranje aktivnosti c-Met u ćeliji ili ispitaniku, i modulaciju ekspresije c-Met u ćeliji ili ispitaniku, i upotrebu takvih jedinjenja za prevenciju ili lečenje poremećaja ćelijske proliferacije i/ili poremećaja vezanih za c-Met kod ispitanika.

[0016]Ilustraciju pronalaska predstavlja farmaceutska smeša koja sadrži jedinjenje formule I i farmaceutski prihvatljiv nosač. Drugu ilustraciju predmetnog pronalaska predstavlja farmaceutska smeša dobijena mešanjem bilo kog jedinjenja formule 1 i farmaceutski prihvatljivog nosača.

[0017]Druge osobine i prednosti predmetnog pronalaska postaće jasne iz sledećih detaljnih opisa pronalaska i iz patentnih zahteva.

OPIS SLIKA

[0018]Slika 1 prikazuje efekat oralne primene jedinjenja iz predmetnog pronalaska (referentni primer je jedinjenje br. 1) na inhibiranje rasta tumora (TGI) kod U87MG tumora glioblastoma kod atimičnih miševa. Svi tretmani su počeli 1. dana kod miševa kod kojih je potvrđeno postojanje subkutanih U87MG tumora. Rast tumora je na dijagramu predstavljen kao medijana zapremine tumora (mm<3>) u odnosu na vreme (dani), za svaku studijsku grupu. Na kraju 21-dnevne studije, konačni % TGI je izračunat iz razlike između medijane zapremine tumora kod miševa lečenih nosačem i miševa lečenih lekom, izražen kao procenat medijane zapremine tumora kontrolne grupe lečene nosačem. (<*>=p<0,05,<**>=p<0,01,<***>=p<0,001)

Slika 2 prikazuje efekte oralne primene jedinjenja iz predmetnog pronalaska (primer je jedinjenje br. 61) na inhibiranje rasta tumora (TGI) kod U87MG tumora glioblastoma kod atimičnih miševa. Svi tretmani su počeli 1. dana kod miševa kod kojih je potvrđeno postojanje subkutanih U87MG tumora. Rast tumora je na dijagramu predstavljen kao medijana zapremine tumora (mm<3>) u odnosu na vreme (dani), za svaku studijsku grupu. Na kraju 12-dnevne studije, konačni % TGI je izračunat iz razlike između medijane zapremine tumora kod miševa lečenih nosačem i miševa lečenih lekom, izražen kao procenat medijane zapremine tumora kontrolne grupe lečene nosačem. (<*>=p<0,05,<**>=p<0,01,<***>=p<0,001)

Slika 3 prikazuje efekat oralne primene jedinjenja iz predmetnog pronalaska (primer je jedinjenje br. 61) na inhibiranje rasta tumora (TGI) kod U87MG tumora glioblastoma kod atimičnih miševa. Svi tretmani su počeli 1. dana kod miševa kod kojih je potvrđeno postojanje subkutanih U87MG tumora. Na kraju 12-dnevne studije, konačni % TGI je izračunat iz razlike između medijane zapremine tumora kod miševa lečenih nosačem i miševa lečenih lekom, izražen kao procenat medijane zapremine tumora kontrolne grupe lečene nosačem. (<*=>p<0,05,<**=>p<0,01,<***=>p<0,001) Slika 4 prikazuje efekat oralne primene jedinjenja iz predmetnog pronalaska (primer je jedinjenje br. 61) na rast SI 14 tumora. Ženke atimičnih miševa su subkutano inokulirane u levu ingvinalnu butnu oblast, sa 5 x IO<6>S114 ćelija u distribucionoj zapremini od 0,1 ml. Tumori su ostavljeni da rastu 5 dana. Miševi su oralno dobij ali dozu od 100 mg/kg jedinjenja u 20% HPBCD ili nosač (20% HPBCD, kontrolna grupa). Doziranje je nastavljeno 4 uzastopna dana. Na dan završetka studije, tumori su odmah isečeni u netaknutom stanju i izmereni, gde je krajnja težina vlažnog tumora (u gramima) služila kao primarna krajnja tačka efikasnosti.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

DEFINICIJE

[0019] Kao što su ovde upotrebljeni, sledeći termini treba da imaju sledeća značenja (dodatne definicije su u Specifikaciji date tamo gde je potrebno): Termin „alkenil", bilo daje upotrebljen samostalno ili kao deo grupe supstituenta, na primer, ,,Ci-4alkenil(aril)", odnosi se na delimično nezasićeni jednovalentni ugljovodonični radikal račvastog ili ravnog niza koji ima najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik, pri čemu je dvostruka veza dobijena uklanjanjem jednog atoma vodonika sa svakog od dva susedna ugljenikova atoma matičnog alkil molekula, i radikal je dobijen uklanjanjem jednog atoma vodonika sa jednog atoma ugljenika. Atomi oko dvostruke veze mogu biti orijentisani tako da imajucis(Z) ilitrans(E) konformaciju. Tipični alkenil radikali uključuju, ali nisu ograničeni na etenil, propenil, alil (2-propenil), butenil i slično. Primeri uključuju C2-salkenil ili C2-4alkenil grupe.

[0020]Termin,,Ca-*"(gde suaibceli brojevi koji se odnose na naznačeni broj ugljeničnih atoma) odnosi se na alkil, alkenil, alkinil, alkoksi ili cikloalkil radikal ili na alkil deo radikala u kome se alkil pojavljuje kao koren prefiksa i sadrži odadobugljeničnih atoma, uključujućiaib.Na primer,Ci-4označava radikal koji sadrži 1, 2, 3 ili 4 atoma ugljenika.

[0021]Termin„alkil",bilo da je upotrebljen samostalno ili kao deo grupe supstituenta, odnosi se na zasićeni jednovalentni ugljovodonični radikal račvastog ili ravnog niza dobijen uklanjanjem jednog atoma vodonika sa jednog atoma ugljenika. Osim ako nije posebno naznačeno (npr. upotrebom ograničavajućeg termina kao što je „terminalni atom ugljenika"), varijabilni supstituenti mogu biti postavljeni na bilo koji atom ugljenika u nizu. Tipični alkil radikali uključuju, ali nisu ograničeni na, metil, etil, propil, izopropil i slično. Primeri uključuju Ci-8alkil, Ci-6alkil i Ci-4alkil grupe.

[0022]Termin„alkilami no"odnosi se na radikal nastao uklanjanjem jednog atoma vodonika sa atoma azota u alkilaminu, kao što je butilamin, a termin „dialkilamino" odnosi se na radikal nastao uklanjanjem jednog atoma vodonika sa atoma azota u sekundarnom aminu, kao što je dibutilamin. U oba slučaja se očekuje da je tačka vezivanja za ostatak molekula atom azota.

[0023]Termin„alkinil",bilo da je upotrebljen samostalno ili kao deo grupe supstituenta, odnosi se na delimično nezasićeni jednovalentni ugljovodonični radikal račvastog ili ravnog niza koji ima najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik, pri čemu je trostruka veza dobijena uklanjanjem dva atoma vodonika sa svakog od dva susedna ugljenikova atoma matičnog alkil molekula, i radikal je dobijen uklanjanjem jednog atoma vodonika sa jednog atoma ugljenika. Primeri alkinil radikala obuhvataju etinil, propinil, butinil i slično. Primeri uključuju C2-8alkinil ili C2-4alkinil grupe.

[0024]Termin „alkoksi" odnosi se na zasićeni ili delimično nezasićeni jednovalentni radikal ugljovodoničnog alkohola račvastog ili ravnog niza, dobijen uklanjanjem vodoničnog atoma sa kiseonikovog atoma supstituenta, hidroksilne grupe, na matičnom alkanu, alkenu ili alkinu. Tamo gde se misli na specifični nivo zasićenja, koristi se nomenklatura „alkoksi", „alkeniloksi" i „alkiniloksi" u skladu sa definicijama za alkil, alkenil i alkinil. Primeri uključuju Ci-8alkoksi ili Ci-4alkoksi grupe.

[0025] Termin „aromatičan" odnosi se na ciklični sistem ugljovodoničnog prstena koji ima nezasićeni, konjugovaninsistem elektrona.

[0026] Termin „heterociklil spojen sa benzenom" odnosi se na radikal bicikličnog spojenog sistema prstenova, naznačen time što je jedan od prstenova benzen, a drugi je heterociklil prsten. Tipični heterociklil radikali spojeni sa benzenom uključuju 1,3-benzodioksolil (poznat i kao 1,3-metilendioksifenil), 2,3-dihidro-l,4-benzodioksinil (takođe poznat kao 1,4-etilendioksifenil), benzo-dihidro-furil, benzo-tetrahidro-piranil, benzo-dihidro-tienil i slično.

[0027] Termin „cikloalkil" odnosi se na radikal zasićenog monocikličnog ili bicikličnog ugljovodoničnog prstena dobijen uklanjanjem jednog atoma vodonika sa jednog atoma ugljenika u prstenu. Tipični cikloalkil radikali obuhvataju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil i ciklooktil. Dodatni primeri obuhvataju Cvscikloalkil, Cs-scikloalkil, C3-i2cikloalkil, C3-2ocikloalkil.

[0028] Termin „sistem spojenih prstenova" odnosi se na biciklični molekul, kod koga su dva susedna atoma uključena u svaki od dva ciklična dela. Heteroatomi mogu biti prisutni po izboru. Primeri obuhvataju benzotiazol, 1,3-benzodioksol i dekahidronaftalen.

[0029] Termin „hetero" upotrebljen kao prefiks za prstenasti sistem odnosi se na zamenu najmanje jednog ugljenikovog atoma iz prstena jednim ili sa više atoma nezavisno odabranih od N, S, O ili P. Primeri uključuju prstenove naznačene time što su članovi prstena 1,2,3 ili 4 atoma azota; ili, 0, 1, 2 ili 3 člana prstena su atomi azota a 1 član je atom kiseonika ili sumpora.

[0030] Termin „heteroaril" odnosi se na radikal dobijen uklanjanjem jednog atoma vodonika sa ugljeničnog atoma iz prstena, u sistemu heteroaromatičnog prstena. Tipični heteroaril radikali uključuju furil, tienil, pirolil, oksazolil, tiazolil, imidazolil, pirazolil, izoksazolil, izotiazolil, oksadiazolil, triazolil, tiadiazolil, piridinil, piridazinil, pirimidinil, pirazinil, indolizinil, indolil, izoindolil, benzo[Z>]furil, benzo[Z>]tienil, indazolil, benzimidazolil, benztiazolil, purinil, 4if-hinolizinil, hinolinil, izohinolinil, kinolinil, ftalzinil, hinazolinil, hinoksalinil, 1,8-naftiridinil, pteridinil i slično.

[0031] Termin „heterociklil" odnosi se na radikal zasićenog ili delimično nezasićenog monocikličnog ugljovodoničnog prstena dobijen uklanjanjem jednog atoma vodonika sa jednog atoma ugljenika ili azota u prstenu. Tipični heterociklični radikali uključuju 2if-pirol, 2-pirolinil ili 3-pirolinil), pirolidinil, 1,3-dioksolanil, 2-imidazolinil (takođe poznat kao 4,5-dihidro-lif-imidazolil), imidazolidinil, 2-pirazolinil, pirazolidinil, tetrazolil, piperidinil, 1,4-dioksanil, morfolinil, 1,4-ditianil, tiomorfolinil, piperazinil, azepanil, heksadihidro-1,4-diazepinil i slično.

[0032] Termin „supstituisan" odnosi se na molekul jezgra, na kome su jedan ili više vodonikovih atoma zamenjeni jednim ili sa više radikala funkcionalnih grupa. Supstitucija nije ograničena na molekul jezgra, već može da se desi i na supstituisanom radikalu, pri čemu supstituisani radikal postaje vezujuća grupa.

[0033] Termin „nezavisno odabran" odnosi se na jedan ili više supstituenata odabranih iz grupe supstituenata, naznačenih time što supstituenti mogu biti isti ili različiti.

[0034] Nomenklatura supstituenata korišćena u objavljivanju predmetnog pronalaska dobijena je tako što se prvo označi atom na kome je mesto vezivanja, a zatim atomi vezujućih grupa prema terminalnom atomu u nizu, sleva nadesno, suštinski kao u:

ili tako što se prvo označi terminalni atom niza, nakon čega slede atomi vezujućih grupa prema atomu koji ima mesto vezivanja, suštinski kao u: pri čemu se obe varijante odnose na radikal formule:

[0035] Linije povučene od supstituenata ka sistemima prstena ukazuju da veza može biti povezana sa bilo kojim od pogodnih atoma prstena.

[0036] Kada se bilo koja promenljiva (npr. R4) ponavlja više od jednog puta u bilo kom otelotvorenju formule I, predviđeno je da svaka definicija bude nezavisna.

[0037] Termini „ koji obuhvata", „ koji uključuje" i „ koji sadrži" ovde se koriste u otvorenom, neograničavajućem smislu.

NOMENKLATURA

[0038] Osim tamo gde je naznačeno, nazivi jedinjenja su dobijeni primenom pravila nomenklature koja su dobro poznata stručnjacima u ovoj oblasti, ili putem referenci standardne IUPAC nomenklature, kao što je Nomenklatura organske hernije, odeljci A, B, C, D, E, F i H (Pergamon Press, Oxford, 1979, Copvright 1979 IUPAC) i Vodič za IUPAC nomenklaturu organskih jedinjenja (preporuke iz 1993), (Blackwell Scientific Publications, 1993, Copvright 1993 IUPAC), ili komercijalno dostupni paketi softvera, kao što je Autonom (brend softvera za nomenklaturu koji se na tržištu nalazi u paketu ChemDraw Ultra<®>office suite, a prodaje ga CambridgeSoft.com) i ACD/Index Name™ (brend softvera za nomenklaturu koji prodaje kompanija Advanced Chemistrv Development, Inc., Toronto, Ontario). Dobro je poznato u struci da oblik radikala pojedinih heterocikala, kao što su piridin i hinolin, može da se nazove prema različitim konvencijama, a da ne ukazuje na različite radikale. Na primer: i piridil i piridinil se odnose na radikal piridina, kao što se i hinolil i hinolil odnose na radikal hinolina.

SKRAĆENICE

[0039] Kao što su ovde upotrebljene, sledeće skraćenice treba da imaju sledeće značenje (dodatne skraćenice su u specifikaciji date tamo gde je potrebno):

'H NMR Protonska nuklearna magnetna rezonanca

AcOH Sirćetna kiselina

Aq vodeno

CD3OD deuterisani metanol

CDCb deuterisani hloroform

CH2CI2metilen hlorid

CH3CN acetonitril

CS2CO3cezijum karbonat

DAST (Dimetilamino)sumpor trifiuorid

DCM dihlormetan

DIEA diizopropiletil amin

DMAP 4-dimetilaminopiridin

DMSO dimetilsulfoksid

EDC N-(3 -dimetilaminopropil)-N'-etil-karbodiimid

ESI-MS masena spektroskopija jonizacija elektrosprejom

Et20 dietil etar

Et3N trietilamin

EtOAc etil acetat

EtOH etanol

g grami

h čas

H2O voda

HATU 0-(7-azabenzotriazol-1 -il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum

heksafiuorfosfat

HBTU O-benzotriazo l-l-il-N,N,N',N'-tetrametiluronijum HC1 hlorovodonična kiselina

Heks heksan heksafiuorfosfat

HOBT 1-Hidroksibenzotriazol hidrat

HPLC tečna hromatografija pod visokim pritiskom

K2CO3kalijum karbonat

KOtBu kalijum tert-butoksid

LCMS tečna hromatografija - masena spektrometrija MeOH metanol

Mg miligrami

MgS04magnezijum sulfat

Min minuta

mL mililitri

mmol milimol

mol mol

MW molekularna težina

Na2C03natrijum karbonat

Na2S04natrijum sulfit

NaHC03natrijum hidrogen karbonat NaOH natrijum hidroksid

NaOH natrijum hidroksid

NBS n-bromsukcinimid

NH4CI amonijum hlorid

Pd(PPh3)4tetrakistrifenilfosfin paladijum (0) Peppsi-iPr Piridinom-poboljšana prekatalitička pripremna stabilizacija i iniciranje

(zaštitni znak od Sigma-Aldrich)

Ppt talog

RP-HPLC tečna hromatografija visokog pritiska reverzne faze Rt sobna temperatura

Si02silicijum-dioksid

TFA trifluorosirćetna kiselina

THF tetrahidrofuran

TLC tankoslojna hromatografija

uL mikrolitri

FORMULAI

[0040]Opisana su jedinjenja sa Formulom I:

i N-oksidi, farmaceutski prihvatljive soli, solvati, te njihovi stereohemijski izomeri, pri čemu:R<1>je mono ili biciklični heteroaril (poželjno piridil, tiofenil, tiazolil, pirazolil, furanil, imidazolil, oksazolil, pirolil, indolil, izotiazolil, triazolil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoimidazolil, benzoksazolil, hinolil, benzofuranil, hinazolinil, ili hinoksalinil), ili piridin-2-on-il (poželjno piridin-2-on-5-il), pri čemu je pomenuti heteroaril po izboru supstituisan sa jednim, dva ili tri Rasupstituenata; pri čemu Raje -NH2, halogen (poželjno F, Cl ili Br), alkoksi (poželjno C1-6alkoksi), alkiletar (poželjno -C(i-6)alkil-0-C(i-6)alkil), alkiltio (poželjno C1-6alkiltio), alkilsulfonil (poželjno Ci-6alkilsulfonil), fenilsulfonil, heteroarilsulfonil (pri čemu je heteroarilni deo pomenutog heteroarilsulfonila poželjno piridil, tiofenil, tiazolil, pirazolil, furanil, imidazolil, oksazolil, pirolil, indolil, izotiazolil, triazolil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoimidazolil, benzoksazolil, hinolil, benzofuranil, hinazolinil, ili hinoksalinil), heterociklilsulfonil (pri čemu heterociklilni deo pomenutog heterociklilsulfonila je poželjno pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, imidazolidinil, tiazolidinil, oksazolidinil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidinil, tiomorfolinil, tiomorfolinil 1,1-dioksid, morfolinil, ili piperazinil), -SO2NH2, alkilsulfonamid (poželjno C1-6alkilsulfonamid), alkil (poželjno C1-6alkil), aminoalkil (poželjno metilamin), alkilamino (poželjno C1-6alkilamino), fenil, heteroaril (poželjno piridil, tiofenil, tiazolil, pirazolil, furanil, imidazolil, oksazolil, pirolil, indolil, izotiazolil, triazolil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoimidazolil, benzoksazolil, hinolil, benzofuranil, hinazolinil, ili hinoksalinil), cijano, alkenil (poželjno Ci-6alkenil), alkinil (poželjno G-6 alkinil), cikloalkil (poželjno ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil ili cikloheptil), heterociklil (poželjno pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, imidazolidinil, tiazolidinil, oksazolidinil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidinil, tiomorfolinil, tiomorfolinil 1,1-dioksid, morfolinil, ili piperazinil), -CCValkil (požeijno-C02-CH2CH3), -C(0)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, - C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRa; pri čemuRbje heterociklil (poželjno pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, imidazolidinil, tiazolidinil, oksazolidinil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidinil, tiomorfolinil, tiomorfolinil 1,1-dioksid, morfolinil, ili piperazinil), alkilsulfonil (poželjno Ci-6alkilsulfonil), -SO2NH2, alkilsulfonamid (poželjno C1-6alkilsulfonamid), -OH, -Oalkil (poželjno -OC1-6alkil), -NH2, -NHalkil (poželjno -NHC1-6alkil), ili -N(alkil)2(poželjno - N(Ci-6alkil)2); Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili Ci-6alkila, pri čemu pomenuti Ci-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH02, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila (poželjno Ci-6alkilsulfonila), -SO2NH2, alkilsulfonamida (poželjno C1-6alkilsulfonamida), hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten, koji po izboru sadrži drugi hetero ostatak odabran od O, NH, N(alkil), SO, SO2, ili S, (pomenuti Rc-Rdheterociklični prsten koji je poželjno izabran iz grupe koju čine: pri čemu je pomenuti Rc-Rdheterociklični prsten po izboru supstituisan sa alkilom (poželjno -C(i-6)alkilom), -SChalkilom (poželjno -S02C(i-6)alkilom), ili -C(0)alkilom (poželjno - C(0)C(i-6)alkilom);

A je prsten odabran iz grupe koju čine: fenil, mono ili biciklični heteroaril (poželjno piridil, benzooksazolil, benzotiazolil, hinolinil, hinolin-6-il-N-oksid, hinazolinil, hinoksalinil, benzimidazolil, benzotiofenil, benzofuranil, ili [l,2,4]triazolo[l,5-a]piridinil), hinazolin-4-on-6-il, ili 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il), i benzo-fuzionisan heterociklil (poželjno benzo[l,3]dioksolil, ili 2,3-dihidro-benzofuranil); pri čemu pomenuti fenil, heteroaril, ili benzo-fuzionisan heterociklil su po izboru supstituisani sa jednim, dva ili tri supstituenata koji su nezavisno odabrani iz grupe koju čine: -OH, alkil, fenil, heteroaril, alkoksi, -CN, halogen, nitro, -NH2, -N(CH3)2, -NHC(0)NHCi-6alkil, i -NHC(0)Ci-6alkil;

R<5>i R<6>su nezavisno izabrani od: H, F, Ci-6alkila, -OH, -OCi-6alkila, -NHCi-6alkila, ili - N(Ci-6alkil)2;

ili R<5>i R<6>mogu zajedno da grade C3-5cikloalkilni prsten, aziridinil prsten, ili, epoksidil prsten; i

R<7>i R<8>su H, halogen ili Ci-6alkil.

[0041]Predmetni pronalazak obuhvata jedinjenja formule I:

i N-okside, farmaceutski prihvatljive soli, solvati, te njihove stereohemijske izomere, pri čemu:R<1>je mono ili biciklični heteroaril (poželjno piridil, tiofenil, tiazolil, pirazolil, furanil, imidazolil, oksazolil, pirolil, indolil, izotiazolil, triazolil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoimidazolil, benzoksazolil, hinolil, benzofuranil, hinazolinil, ili hinoksalinil), ili piridin-2-on-il (poželjno piridin-2-on-5-il), pri čemu je pomenuti heteroaril po izboru supstituisan sa jednim, dva ili tri Rasupstituenata;

pri čemu Raje -NH2, halogen (poželjno F, Cl ili Br), alkoksi (poželjno Ci-6alkoksi), alkiletar (poželjno -(Ci-6)alkil-0-C(i-6)alkil), alkiltio (poželjno Ci-6alkiltio), alkilsulfonil (poželjno Ci-6alkilsulfonil), fenilsulfonil, heteroarilsulfonil (pri čemu je heteroarilni deo pomenutog heteroarilsulfonila poželjno piridil, tiofenil, tiazolil, pirazolil, furanil, imidazolil, oksazolil, pirolil, indolil, izotiazolil, triazolil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoimidazolil, benzoksazolil, hinolil, benzofuranil, hinazolinil, ili hinoksalinil), heterociklilsulfonil (pri čemu je heterociklilni deo pomenutog heterociklilsulfonila poželjno pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, imidazolidinil, tiazolidinil, oksazolidinil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidinil, tiomorfolinil, tiomorfolinil 1,1-dioksid, morfolinil, ili piperazinil), -SO2NH2, alkilsulfonamid (poželjno Ci-6alkilsulfonamid), alkil (poželjno Ci-6alkil), aminoalkil (poželjno metilamin), alkilamino (poželjno Ci-6alkilamino), fenil, heteroaril (poželjno piridil, tiofenil, tiazolil, pirazolil, furanil, imidazolil, oksazolil, pirolil, indolil, izotiazolil, triazolil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoimidazolil, benzoksazolil, hinolil, benzofuranil, hinazolinil, ili hinoksalinil), cijano, alkenil (poželjno Ci-6alkenil), alkinil (poželjno G-6 alkinil), cikloalkil (poželjno ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil ili cikloheptil), heterociklil (poželjno pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, imidazolidinil, tiazolidinil, oksazolidinil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidinil, tiomorfolinil, tiomorfolinil 1,1-dioksid, morfolinil, ili piperazinil), -CCValkil (poželjno-C02-CH2CH3), -C(0)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rt>, - C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd;

pri čemuRbje heterociklil (poželjno pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, imidazolidinil, tiazolidinil, oksazolidinil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidinil,

tiomorfolinil, tiomorfolinil 1,1-dioksid, morfolinil, ili piperazinil), alkilsulfonil (poželjno Ci-6alkilsulfonil), -SO2NH2, alkilsulfonamid (poželjno Ci-6alkilsulfonamid), -OH, -Oalkil (poželjno -OC1-6alkil), -NH2, -NHalkil (poželjno -NHC1-6alkil), ili -N(alkil)2(poželjno - N(Ci-6alkil)2);

Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili Ci-6alkila, pri čemu pomenuti G-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila (poželjno G-6 alkilsulfonila), -SO2NH2, alkilsulfonamida (poželjno G-6 alkilsulfonamida), hidroksila, i alkoksi;

ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten, koji po izboru sadrži drugi hetero ostatak odabran od O, NH, N(alkil), SO, S02, ili S, (pomenuti Rc-Rdheterociklični prsten koji je poželjno izabran iz grupe koju čine:

pri čemu pomenuti Rc-Rdheterociklični prstenje po izboru supstituisan sa alkilom (poželjno -C(i-6)alkilom), -S02alkilom (poželjno -S02C(i-6)alkilom), ili -C(0)alkilom (poželjno - C(0)C(i-6)alkilom);

A je prsten odabran iz grupe koju čine: fenil, mono ili biciklični heteroaril (poželjno piridil, benzooksazolil, benzotiazolil, hinolinil, hinolin-6-il-N-oksid, hinazolinil, hinoksalinil, benzimidazolil, benzotiofenil, benzofuranil, ili [l,2,4]triazolo[l,5-a]piridinil), hinazolin-4-on-6-il, ili 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il), i benzo-fuzionisan heterociklil (poželjno benzo[l,3]dioksolil, ili 2,3-dihidro-benzofuranil); pri čemu pomenuti fenil, heteroaril, ili benzo-fuzionisan heterociklil su po izboru supstituisani sa jednim, dva ili tri supstituenata koji su nezavisno odabrani iz grupe koju čine: -OH, alkil, fenil, heteroaril, alkoksi, -CN, halogen, nitro, -NH2, -N(CH3)2, -NHC(0)NHG-6alkil, i -NHC(0)G-6alkil;

R5 i R6 su F; i

R<7>i R<8>su H, halogen ili G-6 alkil.

[0042]Kao što se koristi u daljem tekstu, termini "jedinjenje Formule I" i "jedinjenja Formule I" takođe trebaju da uključuju farmaceutski prihvatljive soli, N-okside, solvate i njihove stereohemijske izomere.

REALIZACIJE FORMULEI

[0043]Poželjne realizacije pronalaska su jedinjenja sa Formulom I pri čemu je prisutno jedno ili više od sledećih ograničenja: R<1>je mono ili biciklični heteroaril, ili piridin-2-on-5-il, pri čemu je pomenuti heteroaril po izboru supstituisan sa jednim, dva ili tri Rasupstituenata; pri čemu Raje -NFh, halogen, alkoksi, alkiletar, alkiltio, alkilsulfonil, fenilsulfonil, heteroarilsulfonil, heterociklilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, alkil, aminoalkil, alkilamino, fenil, heteroaril, cijano, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterociklil, -C02-alkil, -C(O)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd; pri čemu Rbje heterociklil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, -OH, -Oalkil, -NH2, - NHalkil, ili -N(alkil)2; Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili Ci-6alkil, pri čemu pomenuti Ci oalkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila, -SO2NH2, alkilsulfonamida, hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten, koji po izboru sadrži drugi hetero ostatak odabran od O, NH, N(alkil), SO, SO2, ili S, pri čemu je pomenutiRc-Rdheterociklični prsten po izboru supstituisan sa alkilom, -S02alkilom, ili -C(0)alkilom; A je prsten odabran iz grupe koju čine: fenil, mono ili biciklični heteroaril, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, i benzo-fuzionisan heterociklil; pri čemu pomenuti fenil, heteroaril, ili benzo-fuzionisan heterociklil su po izboru supstituisani sa jednim do tri supstituenata koji su nezavisno odabrani iz grupe koju čine: -OH, alkil, fenil, heteroaril, alkoksi, -CN, halogen, nitro, -NH2, -N(CH3)2, -NHC(0)NHCi-6alkil, i -NHC(0)G-6alkil;

R<5>iR<6>su F; i

R<7>iR<8>su H.

[0044]Druge poželjne realizacije pronalaska su jedinjenja sa Formulom I pri čemu je prisutno jedno ili više od sledećih ograničenja: R<1>je mono ili biciklični heteroaril, ili piridin-2-on-5-il, pri čemu pomenuti heteroaril je po izboru supstituisan sa jednim, dva ili tri Rasupstituenata; pri čemu Raje -NH2, halogen, alkoksi, alkiletar, alkiltio, alkilsulfonil, fenilsulfonil, heteroarilsulfonil, heterociklilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, alkil, aminoalkil, alkilamino, fenil, heteroaril, cijano, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterociklil, -CCh-alkil, -C(O)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd; pri čemu Rbje heterociklil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, -OH, -Oalkil, -NH2, - NHalkil, ili -N(alkil)2; Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili G-6 alkila, pri čemu pomenuti G-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila, -SO2NH2, alkilsulfonamida, hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten koji je izabran iz grupe koju čine: piperidinil, morfolinil, i piperazinil, pri čemu je pomenuti piperazinil po izboru supstituisan sa alkilom, -S02alkilom, ili -C(0)alkilom; A je prsten odabran iz grupe koju čine: fenil, mono ili biciklični heteroaril, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, i benzo-fuzionisan heterociklil; pri čemu su pomenuti fenil, heteroaril, ili benzo-fuzionisan heterociklil po izboru supstituisani sa jednim do tri supstituenata koji su nezavisno odabrani iz grupe koju čine: -OH, alkil, fenil, heteroaril, alkoksi, -CN, halogen, nitro, -NH2, -N(CH3)2, -NHC(0)NHG-6alkil, i -NHC(0)G-6alkil;

R<5>i R<6>su F; i

R<7>i R<8>su H.

[0045] Druge poželjne realizacije pronalaska su jedinjenja sa Formulom I pri čemu je prisutno jedno ili više od sledećih ograničenja: R<1>je mono ili biciklični heteroaril, ili piridin-2-on-5-il, pri čemu pomenuti heteroaril je po izboru supstituisan sa jednim, dva ili tri Rasupstituenata; pri čemu Raje -NH2, halogen, alkoksi, alkiletar, alkiltio, alkilsulfonil, fenilsulfonil, heteroarilsulfonil, heterociklilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, alkil, aminoalkil, alkilamino, fenil, heteroaril, cijano, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterociklil, -C02-alkil, -C(O)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd; pri čemu Rbje heterociklil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, -OH, -Oalkil, -NH2, - NHalkil, ili -N(alkil)2; Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenil, heteroaril, ili Ci-6alkil, pri čemu pomenuti Ci-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila, -SO2NH2, alkilsulfonamida, hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten koji je izabran iz grupe koju čine: piperidinil, morfolinil, i piperazinil, pri čemu pomenuti piperazinil je po izboru supstituisan sa alkilom, -S02alkilom, ili -C(0)alkilom; A je prsten odabran iz grupe koju čine: fenil, mono ili biciklični heteroaril, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, i benzo-fuzionisan heterociklil; pri čemu su pomenuti fenil, heteroaril, ili benzo-fuzionisan heterociklil po izboru supstituisani sa jednim do tri supstituenata koji su nezavisno odabrani iz grupe koju čine: -OH, alkil, fenil, heteroaril, alkoksi, -CN, halogen, nitro, -NH2, -N(CH3)2, -NHC(0)NHCi-6alkil, i -NHC(0)G-6alkil;

R<5>i R<6>su F; i

R<7>i R<8>su H.

[0046] Druge poželjne realizacije pronalaska su jedinjenja sa Formulom I pri čemu je prisutno jedno ili više od sledećih ograničenja: R<1>je mono ili biciklični heteroaril, ili piridin-2-on-5-il, pri čemu pomenuti heteroaril je po izboru supstituisan sa jednim, dva ili tri Rasupstituenata; pri čemu Raje -NH2, halogen, alkoksi, alkiletar, alkiltio, alkilsulfonil, fenilsulfonil, heteroarilsulfonil, heterociklilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, alkil, aminoalkil, alkilamino, fenil, heteroaril, cijano, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterociklil, -C02-alkil, -C(O)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRci; pri čemu Rbje heterociklil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, -OH, -Oalkil, -NH2, - NHalkil, ili -N(alkil)2; Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili Ci-6alkila, pri čemu pomenuti G-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila, -SO2NH2, alkilsulfonamida, hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten koji je izabran iz grupe koju čine: piperidinil, morfolinil, i piperazinil, pri čemu pomenuti piperazinil je po izboru supstituisan sa alkil, -SChalkil, ili -C(0)alkil; A je prsten odabran iz grupe koju čine: fenil, mono ili biciklični heteroaril, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, i benzo-fuzionisan heterociklil; pri čemu pomenuti fenil, heteroaril, ili benzo-fuzionisan heterociklil su po izboru supstituisani sa jednim supstituentom nezavisno odabranim iz grupe koju čine: -OH, alkil, fenil, heteroaril, alkoksi, -CN, halogen, nitro, -NH2, -N(CH3)2, -NHC(0)NHCi.6alkil, i -NHC(0)G-6a1ki1;

R<5>i R<6>su F; i

R<7>i R<8>su H.

[0047] Druge poželjne realizacije pronalaska su jedinjenja sa Formulom I pri čemu je prisutno jedno ili više od sledećih ograničenja: R<1>je mono ili biciklični heteroaril, ili piridin-2-on-5-il, pri čemu pomenuti heteroaril je po izboru supstituisan sa jednim, dva ili tri Rasupstituenata; pri čemu Raje -NH2, halogen, alkoksi, alkiletar, alkiltio, alkilsulfonil, fenilsulfonil, heteroarilsulfonil, heterociklilsulfonil, -S02NH2, alkilsulfonamid, alkil, aminoalkil, alkilamino, fenil, heteroaril, cijano, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterociklil, -C02-alkil, -C(O)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd; pri čemu Rbje heterociklil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, -OH, -Oalkil, -NH2, - NHalkil, ili -N(alkil)2; Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili G-6 alkila, pri čemu pomenuti G-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila, -SO2NH2, alkilsulfonamida, hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten koji je izabran iz grupe koju čine: piperidinil, morfolinil, i piperazinil, pri čemu pomenuti piperazinil je po izboru supstituisan sa alkilom, -S02alkilom, ili -C(0)alkilom; A je prsten odabran iz grupe koju čine: 2,3 dihidrobenzofuran-5-il, hinolin-6-il, hinolin-6-il-N-oksid, 2-amino benzotiazol-6-il, 4-metoksifenil, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, 2-dimetilamino benzotiazol-6-il, i 4-hidroksi fenil;

R<5>i R<6>su F; i

R<7>i R<8>su H.

[0048]Druge poželjne realizacije pronalaska su jedinjenja sa Formulom I pri čemu je prisutno jedno ili više od sledećih ograničenja: R<1>je mono ili biciklični heteroaril, ili piridin-2-on-5-il, pri čemu pomenuti heteroaril je po izboru supstituisan sa jednim Rasupstituentom; pri čemu Raje -NH2, halogen, alkoksi, alkiletar, alkiltio, alkilsulfonil, fenilsulfonil, heteroarilsulfonil, heterociklilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, alkil, aminoalkil, alkilamino, fenil, heteroaril, cijano, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterociklil, -CCh-alkil, -C(O)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd; pri čemu Rbje heterociklil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, -OH, -Oalkil, -NH2, - NHalkil, ili -N(alkil)2; Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili Ci-6alkila, pri čemu pomenuti G-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila, -SO2NH2, alkilsulfonamid, hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten koji je izabran iz grupe koju čine: piperidinil, morfolinil, i piperazinil, pri čemu pomenuti piperazinil je po izboru supstituisan sa alkilom, -S02alkilom, ili -C(0)alkilom; A je prsten odabran iz grupe koju čine: 2,3 dihidrobenzofuran-5-il, hinolin-6-il, hinolin-6-il-N-oksid, 2-amino benzotiazol-6-il, 4-metoksifenil, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, 2-dimetilamino benzotiazol-6-il, i 4-hidroksi fenil;

R<5>i R<6>su F; i

R<7>i R<8>su H.

[0049]Druge poželjne realizacije pronalaska su jedinjenja sa Formulom I pri čemu je prisutno jedno ili više od sledećih ograničenja: R<1>je tiofen-2-il, tiazol-2-il, pirazolil, imidazolil, piridin-2-on-5-il, ili piridil, pri čemu pomenuti tiofen-2-il, tiazol-2-il, pirazolil, imidazolil, i piridil može biti po izboru supstituisan sa jednim Rasupstituentom; pri čemu Ra je -NH2, halogen, alkoksi, alkiletar, alkiltio, alkilsulfonil, fenilsulfonil, heteroarilsulfonil, heterociklilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, alkil, aminoalkil, alkilamino, fenil, heteroaril, cijano, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterociklil, -CCh-alkil, -C(O)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd; pri čemu Rbje heterociklil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, -OH, -Oalkil, -NH2, - NHalkil, ili -N(alkil)2; Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili Ci-6alkila, pri čemu pomenuti G-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila, -SO2NH2, alkilsulfonamida, hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten koji je izabran iz grupe koju čine: piperidinil, morfolinil, i piperazinil, pri čemu pomenuti piperazinil je po izboru supstituisan sa alkilom, -S02alkilom, ili -C(0)alkilom; A je prsten odabran iz grupe koju čine: 2,3 dihidrobenzofuran-5-il, hinolin-6-il, hinolin-6-il-N-oksid, 2-amino benzotiazol-6-il, 4-metoksifenil, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, 2-dimetilamino benzotiazol-6-il, i 4-hidroksi fenil;

R<5>i R<6>su F; i

R<7>i R<8>su H.

[0050] Druge poželjne realizacije pronalaska su jedinjenja sa Formulom I pri čemu je prisutno jedno ili više od sledećih ograničenja: R<1>je tiofen-2-il, tiazol-2-il, pirazolil, imidazolil, piridin-2-on-5-il,ili piridil, pri čemu pomenuti tiofen-2-il, tiazol-2-il, pirazolil, imidazolil, i piridil može biti po izboru supstituisan sa jednim Rasupstituentom; pri čemu Raje -NH2, halogen, alkoksi, alkiletar, alkiltio, alkilsulfonil, fenilsulfonil, heteroarilsulfonil, heterociklilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, alkil, aminoalkil, alkilamino, fenil, heteroaril, cijano, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterociklil, -C02-alkil, -C(O)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd; pri čemu Rbje heterociklil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, -OH, -Oalkil, -NH2, - NHalkil, ili -N(alkil)2; Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili Ci-6alkila, pri čemu pomenuti G-ealkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila, -SO2NH2, alkilsulfonamida, hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten koji je izabran iz grupe koju čine: piperidinil, morfolinil, i piperazinil, pri čemu pomenuti piperazinil je po izboru supstituisan sa alkilom, -S02alkilom, ili -C(0)alkilom; A je prsten odabran iz grupe koju čine: 2,3 dihidrobenzofuran-5-il, hinolin-6-il, hinolin-6-il-N-oksid, 2-amino benzotiazol-6-il, 4-metoksifenil, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, 2-dimetilamino benzotiazol-6-il, i 4-hidroksi fenil;

R<5>i R<6>su F; i

R<7>i R<8>su H.

[0051] Druga ostvarenja pronalaska su jedinjenja sa Formulom I pri čemu je prisutno jedno ili više od sledećih ograničenja: R<1>je mono ili biciklični heteroaril (poželjno piridil, tiofenil, tiazolil, pirazolil, furanil, imidazolil, oksazolil, pirolil, indolil, izotiazolil, triazolil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoimidazolil, benzoksazolil, hinolil, benzofuranil, hinazolinil, ili hinoksalinil), pri čemu je pomenuti heteroaril po izboru supstituisan sa jednim, dva ili tri Rasupstituenata; pri čemu Raje halogen (poželjno F, Cl ili Br), alkoksi (poželjno G-6 alkoksi), alkiletar (poželjno -C(i-6)alkil-0-C(i-6)alkil), alkiltio (poželjno G-6 alkiltio), alkilsulfonil (poželjno G-6alkilsulfonil), fenilsulfonil, heteroarilsulfonil (pri čemu je heteroarilni deo pomenutog heteroarilsulfonila poželjno piridil, tiofenil, tiazolil, pirazolil, furanil, imidazolil, oksazolil, pirolil, indolil, izotiazolil, triazolil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoimidazolil, benzoksazolil, hinolil, benzofuranil, hinazolinil, ili hinoksalinil), heterociklilsulfonil (pri čemu je heterociklilni deo pomenutog heterociklilsulfonila poželjno pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, imidazolidinil, tiazolidinil, oksazolidinil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidinil, tiomorfolinil, tiomorfolinil 1,1-dioksid, morfolinil, ili piperazinil), -SO2NH2, alkilsulfonamid (poželjno G-6 alkilsulfonamid), alkil (poželjno G-6 alkil), aminoalkil (poželjno metilamin), alkilamino (poželjno G-6 alkilamino), fenil, heteroaril (poželjno piridil, tiofenil, tiazolil, pirazolil, furanil, imidazolil, oksazolil, pirolil, indolil, izotiazolil, triazolil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoimidazolil, benzoksazolil, hinolil, benzofuranil, hinazolinil, ili hinoksalinil), cijano, alkenil (poželjno Ci-6alkenil), alkinil (poželjno G-6 alkinil), cikloalkil (poželjno ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil ili cikloheptil), heterociklil (poželjno pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, imidazolidinil, tiazolidinil, oksazolidinil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidinil, tiomorfolinil, tiomorfolinil 1,1-dioksid, morfolinil, ili piperazinil), -CCValkil (požeijno-C02-CH2CH3), -C(0)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, - C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd; pri čemu Rbje heterociklil (poželjno pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, imidazolidinil, tiazolidinil, oksazolidinil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidinil, tiomorfolinil, tiomorfolinil 1,1-dioksid, morfolinil, ili piperazinil), alkilsulfonil (poželjno G-6 alkilsulfonil), -SO2NH2, alkilsulfonamid (poželjno G-6 alkilsulfonamid), -OH, -Oalkil (poželjno -OG-6 alkil), -NH2, -NHalkil (poželjno -NHG-6 alkil), ili -N(alkil)2(poželjno - N(G-6 alkil)2); Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili G-6 alkila, pri čemu pomenuti G-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila (poželjno G-6 alkilsulfonila), -S02NH2, alkilsulfonamida (poželjno G-6 alkilsulfonamida), hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten, koji po izboru sadrži drugi hetero ostatak odabran od O, NH, N(alkil), SO, SO2, ili S, (pomenuti Rc-Rdheterociklični prstenje poželjno izabran iz grupe koju čine:

pri čemu je pomenuti Rc-Rdheterociklični prsten po izboru supstituisan sa alkilom (poželjno -C(i-6)alkilom), -S02alkilom (poželjno -S02C(i-6)alkilom), ili -C(0)alkil (poželjno -C(0)C(i-6)alkilom);

A je prsten odabran iz grupe koju čine: fenil, mono ili biciklični heteroaril (poželjno piridil, benzooksazolil, benzotiazolil, hinolinil, hinazolinil, hinoksalinil, benzimidazolil, benzotiofenil, benzofuranil, ili [l,2,4]triazolo[l,5-a]piridinil), i benzo-fuzionisan heterociklil (poželjno benzo[l,3]dioksolil, ili 2,3-dihidro-benzofuranil); pri čemu pomenuti fenil, heteroaril, ili benzo-fuzionisan heterociklil su po izboru supstituisani sa jednim, dva ili tri supstituenata koji su nezavisno odabrani iz grupe koju čine: -OH, alkil, fenil, heteroaril, alkoksi, -CN, halogen, nitro, -NH2, -NHC(0)NHCi-6alkil, i -NHC(0)G-6alkil;

R<5>i R<6>su F; i

R<7>i R<8>su H, halogen ili Ci-6alkil.

[0052] Druga realizacija pronalaska obuhvata:

FARMACEUTSKIPRIHVATLJIVE SOLI

[0053] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu takođe biti prisutna u obliku farmaceutski prihvatljivih soli.

[0054] Za upotrebu u lekovima, soli jedinjenja iz ovog pronalaska odnose se na netoksične „farmaceutski prihvatljive soli". Oblici farmaceutski prihvatljivih soli koje je odobrila FDA (Ref. International J. Pharm. 1986, 33, 201-217; J. Pharm. Sci., 1977, Jan, 66(1), pl) uključuju farmaceutski prihvatljive kisele/anjonske ili bazne/katjonske soli.

[0055] Farmaceutski prihvatljive kisele/anjonske soli obuhvataju, ali se ne ograničavaju na acetat, benzensulfonat, benzoat, bikarbonat, bitartarat, bromid, kalcijum edetat, kamsilat, karbonat, hlorid, citrat, dihidrohlorid, edetat, edisilat, estolat, ezilat, fumarat, gliceptat, glukonat, glutamat, glikolilarsanilat, heksilrezorcinat, hidrabamin, hidrobromid, hidrohlorid, hidroksinaftoat, jodid, izetionat, laktat, laktobionat, malat, maleat, mandelat, mezilat, metilbromid, metilnitrat, metilsulfat, mučat, napsilat, nitrat, pamoat, pantotenat, fosfat/difosfat, poligalakturonat, salicilat, stearat, subacetat, sukcinat, sulfat, tanat, tartarat, teoklat, tozilat i trietjodid. Organske ili neorganske soli takođe uključuju, i nisu ograničene na, jodovodoničnu, perhlornu, sumpornu, fosfornu, propionsku, glikolnu, metansulfonsku, hidroksietansulfonsku, oksalnu, 2-naftalensulfonsku, p-toluensulfonsku, cikloheksansulfaminsku, saharinsku ili trufluorosirćetnu kiselinu.

[0056]Farmaceutski prihvatljive bazne/katjonske soli uključuju, ali nisu ograničene na aluminijum, 2-amino-2-hidroksimetil-propan-l,3-diol (takođe poznat kao tris(hidroksimetil)aminometan, trometan ili „TRIS"), benzatin, t-butilamin, kalcijum, kalcijum glukonat, kalcijum hidrohlorid, hloroprokain, holin, holin bikarbonat, holin hlorid, cikloheksilamin, dietilamin, etilendiamin, litijum, LiOMe, L-lizin, magnezijum, meglumin, NH3, NH4OH, N-metil-D-glukamin, piperidin, kalijum, kalijunW-butoksid, kalijum hidroksid (vodeni), prokain, kinin, natrijum, natrijum karbonat, natrijum-2-etilheksanoat (SEH), natrijum hidroksid, trietilamin (TEA) ili cink.

[0057]Kada se koristi za lečenje u predmetnom pronalasku, termin „ primena" obuhvatiće sredstva za lečenje, poboljšavanje ili sprečavanje ovde opisanih sindroma, poremećaja ili bolesti naročito objavljenim jedinjenjem ili jedinjenjem koje bi očigledno bilo uključeno u obim pronalaska, ali nije specifično objavljeno za trenutna jedinjenja.

STEREOHEMIJSKIIZOMERNI OBLICI

[0058]Stručnjak u ovoj oblasti će shvatiti da jedinjenja formule I mogu da imaju jedan ili više asimetričnih ugljenikovih atoma u svojoj strukturi. Namera je da predmetni pronalazak u svoj obim uključi pojedinačne enantiomerne oblike jedinjenja, racemske smeše i smeše enantiomera u kojima je neki enantiomer prisutan u višku.

[0059]Termin „ pojedinačni enantiomer" kako je ovde upotrebljen definiše sve moguće homohiralne oblike koje bi mogla da imaju jedinjenja formule I i njihovi N-oksidi, adicione soli, kvaternerni amini ili fiziološki funkcionalni derivati.

[0060]Stereohemijski čisti izomerni oblici mogu se dobiti primenom principa poznatih u struci. Dijastereoizomeri mogu da se razdvoje fizičkim metodama separacije, kao što je frakciona kristalizacija i hromatografske tehnike, a enantiomeri mogu da se razdvoje jedan od drugog selektivnom kristalizacijom dijastereomernih soli sa optički aktivnim kiselinama ili bazama ili hiralnom hromatografijom. Cisti stereoizomeri mogu takođe da se dobiju sintetskim putem iz odgovarajućih stereohemijski čistih polaznih sirovina, ili putem stereoselektivnih reakcija.

[0061] Termin „ izomer" odnosi se na jedinjenja koja imaju isti sastav i molekulsku masu, ali se razlikuju po fizičkim i/ili hemijskim osobinama. Takve supstance imaju isti broj i vrstu atoma, ali se razlikuju po strukturi. Strukturna razlika može biti u konfiguraciji (geometrijski izomeri) ili u mogućnosti da rotiraju ravan polarizovane svetlosti (enantiomeri).

[0062] Termin „ stereoizomer" odnosi se na izomere identičnog sastava koji se razlikuju po rasporedu svojih atoma u prostoru. Enantiomeri i dijastereomeri su stereoizomeri naznačeni time što asimetrično supstituisani atom ugljenika deluje kao hiralni centar.

[0063] Termin „ hiralni" odnosi se na strukturne karakteristike molekula koje onemogućavaju da se preklopi sa svojim likom u ogledalu.

[0064] Termin „ enantiomer" odnosi se na jednu od dve vrste molekula koji predstavljaju lik u ogledalu onog drugog, i ne mogu da se preklope.

[0065] Termin „ dijastereomer" odnosi se na stereoizomere koji nisu likovi u ogledalu.

[0066] Simboli ,,R" i ,,S" predstavljaju konfiguraciju supstituenata oko hiralnog(ih) atoma ugljenika.

[0067] Termin „ racemat" ili „ racemska smeša" odnosi se na smešu sastavljenu od ekvimolarnih količina dve vrste enantiomera, naznačenu time što smeša nema optičku aktivnost.

[0068] Termin „ homohiralni" odnosi se na stanje enantiomerske čistoće.

[0069] Termin „ optička aktivnost" odnosi se na stepen u kome homohiralni molekul ili neracemska smeša hiralnih molekula rotiraju ravan polarizovane svetlosti.

[0070]Termin „ geometrijski izomer" odnosi se na izomere koji se razlikuju prema orijentaciji atoma supstituenata u odnosu na dvostruku vezu ugljenik-ugljenik, cikloalkilni prsten ili premošćen biciklični sistem. Atomi supstituenta (koji nisu H) sa obe strane dvostruke veze ugljenik-ugljenik mogu da imaju E ili Z konfiguraciju. U ,,E" konfiguraciji (sa suprotne strane), supstituenti su sa suprotnih strana u odnosu na dvostruku vezu ugljenik-ugljenik; u ,,Z" konfiguraciji (sa iste strane), supstituenti su sa iste strane u odnosu na dvostruku vezu ugljenik-ugljenik. Atomi supstituenta (koji nisu H) vezani za ugljenični prsten mogu biti u cis ili trans konfiguraciji. U ,,cis" konfiguraciji, supstituenti su sa iste strane u odnosu na ravan prstena; u „trans" konfiguraciji, supstituenti su sa suprotnih strana u odnosu na ravan prstena. Jedinjenja koja imaju smešu „cis" i „trans" vrsta označena su sa ,,cis/trans".

[0071]Podrazumeva se da su stereoizomeri sa različitim supstituentima, geometrijski izomeri i njihove smeše upotrebljene za dobijanje jedinjenja iz predmetnog pronalaska, dostupni na tržištu, mogu se dobiti sintetičkim putem iz polaznih sirovina dostupnih na tržištu ili mogu da se dobiju kao izomerne smeše a zatim kao odvojeni izomeri korišćenjem uobičajenih tehnika poznatih stručnjacima u ovoj oblasti.

[0072]Opisne oznake za izomere ,,R", ,,S", ,,E", ,,Z", „cis" i „trans" se upotrebljavaju kao što je ovde opisano da ukažu na konfiguraciju(e) atoma u odnosu na molekul jezgra, i namenjene su upotrebi kao što je definisano u literaturi (IUPAC preporuke za fundamentalnu stereohemiju (odeljak E), Pure Appl. Chem., 1976, 45:13-30).

[0073]Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da se dobiju kao pojedinačni izomeri, bilo izomer-specifičnom sintezom ili razdvajanjem iz izomerne smeše. Klasične tehnike razdvajanja uključuju nastajanje slobodne baze od svakog izomera iz izomernog para pomoću optički aktivne soli (a zatim frakcionom kristalizacijom i regeneracijom slobodne baze), nastajanje estra ili amida od svakog izomera izomernog para

[0074](i naknadnim hromatografskim razdvajanjem i uklanjanjem hiralne pomoćne supstance) ili razdvajanjem izomerne smeše, bilo iz polazne supstance ili iz finalnog proizvoda pomoću preparativne TLC (tankoslojne hromatografije) ili hiralne HPLC kolone.

POLIMORFII SOL VATI

[0075]Nadalje, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da imaju jedan ili više polimorfnih ili amorfnih kristalnih oblika i kao takva su uključena u oblast pronalaska. Pored toga, jedinjenja mogu da grade solvate, na primer sa vodom (tj. hidrate) ili sa uobičajenim organskim rastvaračima. Kao što je ovde upotrebljen, termin „sojvat" označava fizičku vezu jedinjenja iz predmetnog pronalaska sa jednim ili više molekula rastvarača. Fizička veza uključuje različite stepene jonske i kovalentne veze, uključujući vodoničnu vezu. U pojedinim slučajevima, solvat će moći da se izoluje, na primer kada je jedan ili više molekula rastvarača uključeno u kristalnu rešetku kristalne čvrste supstance. Termin „solvat" obuhvata i fazu rastvora i solvate koji mogu da se izoluju. Neograničavajući primeri pogodnih solvata uključuju etanolate, metanolate i slično.

[0076]Namera je da predmetni pronalazak svojim obimom obuhvati solvate jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Tako, kada se koristi za lečenje u predmetnom pronalasku, termin „ primena" obuhvatiće sredstva za lečenje, poboljšavanje ili sprečavanje sindroma, poremećaja ili bolesti koje su ovde opisane jedinjenjima iz predmetnog pronalaska ili njihovim solvatom, koji bi očigledno bio uključen u obim pronalaska čak i ako nije posebno objavljen.

TAUTOMERNI OBLICI

[0077]Neka od jedinjenja formule I mogu takođe da postoje u svojim tautomernim oblicima. Takvi oblici, mada nisu izričito pomenuti u predmetnoj primeni, uključeni su u obim predmetnog pronalaska.

DOBIJANJE JEDINJENJA IZ PREDMETNOG PRONALASKA

[0078]U toku bilo kog postupka za dobijanje jedinjenja iz predmetnog pronalaska, može biti potrebno i/ili poželjno da se zaštite osetljive ili reaktivne grupe na bilo kom molekulu o kome je reč. To se može postići pomoću klasičnih zaštitnih grupa, kao što su one opisane u knjigamaProtecting Groups, P. Kocienski, Thieme Medical Publishers, 2000; i T. W. Greene

& P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd ed. Wiley Interscience, 1999.

Zaštitne grupe mogu biti uklonjene u odgovarajućoj narednoj fazi upotrebom postupaka poznatih u struci.

OPŠTA ŠEMA REAKCIJE (uključujući referentne šeme)

[0079] Jedinjenja sa Formulom I mogu biti pripremljena pomoću postupaka poznatim onima koji su verzirani u stanju tehnike. Sledeće reakcione Šeme namenjene su samo da predstavljaju primere pronalaska i ni na koji način ne treba da ograničavaju pronalazak.

pri čemu:

XjeCl ili I ili Br;

Y je cinkat, boronska kiselina, boronatni estar ili stanan.

[0080]Šema 1 ilustruje dvostruke pravce sinteze koji dovode do jedinjenja Formule I, gde su A,R<1>,R<5>,R<6>,R<7>, iR<8>kako je definisano u Formuli I. Polazeći od dihalopiridazinaIIi prateći pravac u desno, katalizovana reakcija unakrsnog vezivanja prelaznog metala može se vršiti pomoću odgovarajuće supstituisane boronične kiseline, boronatnog estra, cinkata ili stanana V pod uslovima Suzuki reagovanja( Miyaura, N., Suzuki, A., Chem. Rev. 95:2457 ( 1995)), Negishi ( Negishi, E., i dr., J. Org. Chem. 42:1821 ( 1977)),ili uslovima Stille reagovanja( Stille, J. K., Agnew. Chem., Int. Ed. Engl, 25: 508 ( 1986)i tamošnje reference). Dobijeni piridazin VI može da se konvertuje u triazolopiridazin I reakcijom 3-halopiridazina sa različitim acilhidrazinimaIIIu 1-butanolu kod refluksa( Albright, J. D., i dr., J. Med. Chem.,

1981, 24, 592- 600).

[0081]Alternativno, sledeći pravac prema dole, reakcija 3,6-dihalopiridazinIIsa različitim acilhidrazinimaIII,zatim se sa reakcijom unakrsnog spajanja prelaznog metala sa IV dobiva triazolopiridazin I. Ovaj pravac je pogodan za generisanje biblioteke jedinjenja iz hvatača jezgra triazolopiridazina preko unakrsnih reakcija spajanja sa halogenovanim hvatačem.

[0082]Gore navedene reakcije unakrsnog spajanja aril halida sa arilboronskom kiselinom, arilcinkat ili arilstanan su se generalno izvode u inertnoj atmosferi i posredovane su sa katalizatorom kao što je paladijum tetrakis-trifenilfosfin. Ove reakcije se mogu javiti na temperaturama u rasponu od 60 °C do 150 °C u polarnim neprotonskim rastvaračima ili dvofaznim rastvorima. U većini slučajeva gde arilboronska kiselina, arilcinkat ili arilstanan nisu komercijalno dostupna mogu biti sintetisana iz odgovarajućeg aril halida ili procedurama direktne metalacije/transmetalacije. Alternativno, može da se koristi Peppsi-iPr katalizator umesto Pd(PPli3)4, videtiM. G. Organ i dr., Chemistry - A European Journal, Volume 12, Issue 18, June 14, 2006, pp: 4743- 4748,i tamošnje reference.

pri čemu Z je NH, O ili S.

[0083]Aril i heteroaril sirćetnim kiselinama može se pristupiti postupcima poznatim u struci

( Journal of Medicinal Chemistrv, 1986, 29 ( 11), 2326- 2329;Bloorganic i Medicinal

Chemistry Letters, 2004, 14( 14), 3799- 3802; EP 1229034 Al 20020807; Tetrahedron

Letters, 2003, 44 ( 35), 6745- 6747; Synthetic Communications, 1997, 27 ( 22), 3839- 3846).

Nekoliko primera sinteze aril sirćetne kiseline je ilustrovano u Šemi 2. Benzo-fuzionisano heterociklično jedinjenjeVII,( Journal of Medicinal Chemistry, 1996, 29 ( 11), 2362- 2369; Journal of Medicinal Chemistry, 1997, 40( 7), 1049- 1062),je tretirano sa N-bromsukcinimidom u ugljen tetrahloridu dajući jedinjenjeVIII.Nitrofenilsirćetna kiselina

IX,( Bioorganic i Medicinal Chemistry Letters, 1998, 8 ( 1), 17- 22; Organic Letters, 2002, 4

( 16), 2675- 2678; WO 00/ 06566, Helvitica Chemica Acta, 1976, 59 ( 3), 855- 866)se redukuje u uslovima kao što je hidrogenovanje u prisustvu paladijuma na aktivnom uglju u rastvaraču kao što je metanol dajući jedinjenje X, koje je zatim tretirano sa trietil ortoformatom u toluenu dajući jedinjenje XI. JedinjenjeXIImože biti tretirano sa adekvatnim aminom dajući Jedinjenje XIII.

[0084]Sledeća jedinjenja se mogu sintetisati postupcima poznatim u tehnici:

gde je A izabran od:

[0085]Videti, npr.,Journal of Medicinal Chemistry, 1997, 40 ( 7), 1049- 1058,i tamošnje reference; i WO 2002085888.

[0086]Sintezi aril i heteroaril acetil hlorida i hidrazida aril i heteroaril sirćetne kiseline se može pristupiti pomoću postupaka poznatih u tehnici (videti,Bulletin de la Societe Chimique deFrance, 1964, 2, 245- 247; i Helvitica Chemica Acta, 1928, 11, 609- 656).JedinjenjeXIV,gde je A kako je definisano u Formuli I je tretirano sa oksalil hloridom u DCM dajući Jedinjenje XV, koje je tretirano sa anhidrovanim hidrazinom u DCM dajući hidrazidXVI.Alternativno, JedinjenjeXIVmože biti tretirano sa sirćetnim anhidridom, što je praćeno sa hidrazinom u vodi dajući JedinjenjeXVI.metil estar sirćetne kiselineXVIImože biti tretiran sa vodenim rastvorom hidrazina u etanolu dajući JedinjenjeXVI.

[0087] Šema 4a ilustruje preduzete pravce da se dobiju jedinjenja sa FormulomIIIpri čemu R<5>i R<6>su oba F ili H, i A je kako je definisano u Formuli I. Prvi pravac za stvaranje acilhidrazida obuhvata izmenu metal-halogen odgovarajućeg aril halida XVIII sa organometalnim rastvaračem kao što je n-butillitijum što je praćeno acetilacijom sa dialkil oksalatom. Formirani acetil alkilestar XIX se zatim fluorinira sa DAST ((dimetilamino)sumpor trifluorid) u rastvaraču kao metilen hloridu tako da se gradi difluoralkilester XXI, zatim se tretmanom sa hidrazinom gradi difluoracilhidrazid III. Drugi pravac uključuje bakrom posredovano unakrsno vezivanje aril halida XVIII sa halogenovanim difluorestrom kojim se stvara intermedijar difluoralkilester XXI zatim sa tretmanom sa hidrazinom da se formira difluoracilhidrazid III. Treći pravac uključuje oksidaciju aril-sirćetnog estra XX u aril ketoestar XIX što je praćeno fluorinacijom sa DAST kojom se stvara intermedijar difluoralkilester XXI i zatim tretmanom sa hidrazinom da se formira difluoracilhidrazid III. Četvrti pravac uključuje bakrom posredovano unakrsno vezivanje aril halida XVIII sa malonatnim diestrom tako da se gradi alkildiestar XXII. Saponifikacija i zatim tretiranje sa tionil hloridom u alkoholu ili alternativno refluksovanje sa alkoholom u prisustvu kiseline dovodi do alkilestra XXI. Tretiranje sa hidrazinom dovodi do acilhidrazidaIII,pri čemu oba R<5>i R<6>suH. Šema 4b ilustruje pravac za dobijanje jedinjenja FormuleIIIpri čemu R<5>i R<6>su H, F, alkil, OH, Oalkil, NHalkil, ili N(alkil)2, i A je kako je definisano u Formuli I. Ovaj pravac obuhvata oksidaciju nekog aril estra XX u acetil alkilestar XIX što je praćeno redukcijom u alkohol XXIII što je praćeno fluorinacijom sa DAST kojom se stvara intermedijar monofluoralkilestar XXI i zatim tretmanom sa hidrazinom tako da se formira III. Alternativno jedinjenje XXIII se može direktno pretvoriti uIIItretmanom sa hidrazinom u rastvaraču kao što je metanol ili reagovanjem XXIII sa alkil halidom u prisustvu jake baze kao što je natrijum hidrid zatim tretmanom sa hidrazinom u rastvaraču kao što je metanol dajući III. Jedinjenje XX može da se konvertuje uIIItretiranjem sa alkil halidom u prisustvu baze kao što je natrijum hidrid zatim sa tretmanom sa hidrazinom u rastvaraču kao što je metanol. Konvertovanje jedinjenja XIX uIIImože biti postignuto reduktivnom aminacijom, te zatim tretiranjem sa hidrazinom u rastvaraču kao što je metanol.

gde:

R'je metil ili etil

nje 1-5

[0088]Sinteza jedinjenja FormuleIIIgde se R<5>i R<6>međusobno spajaju tako da grade prsten, i A je kako je definisano u FormuliI,može se postići sa postupcima koji su poznati iz stanja tehnike( Chemische Berichte, 119( 12), 3694- 703; 1986, Australian Journal of Chemistry,

39( 2) 271- 80; 1986, Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 13( 14), 2291- 2295; 2003).

Šema 4c ilustruje dva alternativna pravca za dobij anje acil hidrizidaIII.Počevši sa komercijalno dostupnim akrilnim estrom XXIV zatim praćeno tretiranjem sa trihalo metanom što rezultira sa formiranjem dihalo ciklila XXV, koji se zatim tretira sa organokalajem, zatim se tretira sa hidrazinom tako da gradiIII.Drugi pravac uključuje direktno dodavanje dihaloalkila u komercijalno dostupni početni materijal XXI što je praćeno sa formiranjem hidrazina čime se dobija acil hidrazinIII.

[0089]Gde:

R'je metil ili etil

JjeNiliO

[0090]Sintezi jedinjenja FormuleIIIgde se R<3>i R<6>međusobno spajaju tako da grade aziridin ili epoksid, i A je kako je definisano u FormuliI,može se takođe pristupiti sa postupcima koji su poznati iz stanja tehnike. Šema 4d ilustruje pravac putem kojeg se gradi heterociklični acil hidrazidIIIpočevši sa komercijalno dostupnim akrilnim estrom XXIV nakon čega sledi tretman sa hidrazinom.

[0091]Šeme 5a - 5e ilustruju pravce za funkcionaliziranje heteroarilnih grupa na jedinjenjima Formule I kao što su tiofen, pirazol, i furan. Kompozicija od Ri nije ograničena na opisani tekst sadržan u nastavku ali takođe uključuje komercijalno dostupne supstituisane mono ili biciklične heteroarile kao početne materijale. Ovi materijali se takođe mogu dobiti sa postupcima koji su opisani u stanju tehnike, videti( Mivaura, N, Suzuki, A., Chem. Rev.

95:2457 ( 1995)), ( Negishi, E., i dr., J. Org. Chem. 42:1821 ( 1977)), ( Stille, J. K., Agnew.

Chem., Int. Ed. Engl, 25: 508 ( 1986).

[0092]Šema 5a ilustruje korišćenje reduktivne aminacije za uvođenje amina u seriju triazolopiridazina. Hemijska reakcija počinje sa jedinjenjima Formule I pri čemu R<1>je 2,5 supstituisani-tiofen ili 2,5 supstituisani-furan, i R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, i A su kako je definisano u FormuliI.Tretiranje sa natrijum triacetoksiborohidridom i sekundarnim aminom u kiselom metanolu daje odgovarajući amin supstituisani furan ili tiofen.

[0093]Šema 5b ilustruje korišćenje saponifikacije, te zatim spajanje sa sekundarnim aminima za uvođenje amida u seriju triazolopiridazina. Ova reakcija u dva koraka počinje sa jedinjenjima Formule I pri čemu R<1>je mono ili biciklični heteroaril, iR<5>,R<6>,R<7>,R8, i A su kako je definisano u FormuliI.Tretiranje sa natrijum hidroksidom (NaOH) i 2-(lH-benzotriazol-l-il)-l,l,3,3-tetrametiluronijum heksafluorfosfatom (HBTU) u metanolu i tetrahidrofuranom što je praćeno sa 1-hidroksibenzotriazolom (HOBT), Hunig-ovom bazom (DIEA) i željenim sekundarnim aminom dovelo je do jedinjenja Formule I pri čemu R<1>je amidno supstituisani tiofen. Jedinjenja sa Formulom I u kojoj Raje -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb dobijena su na analogan način.

pri čemu Q\ Q<2>, i Q<3>su nezavisno CH ili N.

[0094]Šema 5c ilustruje korišćenje acetilacije da se uvede acilna grupa na R<1>gde R<1>je heteroaril koji sadrži azot (na primer pirazol), iR<5>,R6,R<7>,R<8>, i A su kako je definisano u Formuli I. Ovde hemijsko reagovanje koristi acilnu grupu koja je odgovarajuće supstituisana sa odlazećom grupom, poželjno sa halogenom, u rastvaraču kao što je DCM sa bazom koja deluje kao hvatač kao što je DIEA što rezultira sa acetilacijom R<1>.

pri čemu Q', Q<2>, i Q<3>su nezavisno CH ili N

[0095]Šema 5d ilustruje korišćenje sulfoksilacije da se uvede sulfoksilnu grupu na R<1>gde R<1>je heteroaril koji sadrži azot (na primer pirazol) i Raje sulfonil ili sulfonamid, i R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, i A su kako je definisano u FormuliI.Hemijsko reagovanje koristi sulfoksilnu grupu koja je odgovarajuće supstituisana sa odlazećom grupom, poželjno sa halogenom, u rastvaraču kao što je DCM sa bazom koja deluje kao hvatač kao što je DIEA što rezultira sa sulfoksilacijom R<1>.

pri čemu Q', Q<2>, i Q<3>su nezavisno CH ili N

[0096]Šema 5e ilustruje supstituciju R<1>sa Ragde je R' heteroaril koji sadrži azot (na primer pirazol), Raje alkil, aminoalkil, ili C(i-4)alkil-Rb, iR<5>,R<6>,R<7>,R<8>, i A su kako je definisano u FormuliI.Hemijska reakcija koristi alkilnu grupu koja je odgovarajuće supstituisana sa odlazećom grupom, poželjno halogenom, u rastvaraču kao što je etanol i bazom kao što je kalijum karbonat što rezultira sa alkilacijom R<1>.

REPREZENTATIVNA I REFERENTNA JEDINJENJA

[0097]Reprezentativna i referentna jedinjenja predmetnog pronalaska koja su sintetizovana putem navedenih metoda data su u nastavku. Zatim su predstavljeni primeri sinteze specifičnih jedinjenja. Poželjna jedinjenja su brojevi 17, 20, 22, 38, 39, 47, 51, 54, 55, 57, 59, 60, 61, 65, 66, 72, 73, 74, 77, 86, 87, 97, 98, 99, 100, 100b, 101, 102, 103 i 104; poželjnija jedinjenja su brojevi 39, 47, 55, 60, 61, 65, 72, 73, 74, 77, 97, i 98. Poželjnija jedinjenja su brojevi 60, 61, 97, i 98.

[0098] Primeri sinteze pojedinačnih jedinjenja su prikazani ispod.

Referentni primer 1

6-[ 6-( l- Metil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- bjpiridazin- 34lmetil]- M

[0099]

Primer 1: korak a

3- Hlor- 6-( l- metil- lH- pirazol- 4- il)- piridazin

[0100]

[0101]Balon je napunjen sa 3,6-dihlorpiridazinom (Aldrich, 297 mg, 2.0 mmol), l-Metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioksaborolan-2-il)-lH-pirazolom (499 mg, 2.4 mmol), 2 M Na2C03(4 mL) i dioksanom (4 mL). Argon u mehurićima je propuštan kroz reakciju tokom 60 sekunda, zatim je usledilo dodavanje tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma (0) (231 mg, 0.2 mmol). Reakcija je grejana na 80 °C preko noći posle čega je usledila vodena obrada korišćenjem EtOAc i fiziološkog rastvora. Organski sloj je osušen (MgS04) i koncentrovanpod vakuumomzatim je usledilo prečišćavanje hromatografijom na koloni (20 % etil acetat u heksanima) što je dalo naslovljeno jedinjenje u vidu bele čvrste supstance (183 mg, 47 %).

'H-NMR (CD3OD): 8 8.23 (IH, s), 8.08 (IH, s), 7.84 (IH, br s), 7.34 (IH, br s), 4.00 (3H, s).

Primer 1: korak b

6-[ 6-( l- Metil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil]- hin^

[01021

[0103]Hidrazid hinolin-6-il-sirćetne kiseline (188 mg, 0.93 mmol) i 3-hlor-6-(l-metil-lH-pirazol-4-il)-piridazin (202 mg, 0.93 mmol, Primer 1: korak a) rastvoreni su u butanolu (120 mL). Reakciona smeša je zagrevana do 120 °C preko noći opremljena sa vodeno hlađenim refluksnim kondenzatorom i vodom za argon. Reakcija je koncentrovanapod vakuumom,te je zatim usledilo prečišćavanje sa HPLC (5-65% CH3CN tokom 40 min) što je dalo naslovljeno jedinjenje u vidu tamne čvrste supstance (201.6 mg, 65 %). 'H-NMR (CD3OD): 8 9.08-9.04 (2H, m), 8.30-8.29 (2H, m), 8.21-8.06 (4H, m), 7.99-7.95 (IH, q,J=5.3, 3.0 Hz), 7.68-7.65 (IH, d,J= 9.8), 4.85 (2H, s), 3.89 (3H, s), 4.96 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C19H15N7: 341.37; pronađeno: 342.3 (M+H).

Referentni primer 2

6-[ 6-( lH- Pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil]- hinolin

[0104]

[0105]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (CD3OD): 5 9.08-9.05 (2H, m), 8.30 (IH, s), 8.26 (IH, m), 8.21-8.19 (2H, m), 8.15-8.12 (2H, m), 7.99-7.90 (IH, m), 7.75-7.65 (IH, m), 4.86 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C18H13N7: 327.12; pronađeno: 328.2 (M+H).

Referentni primer 3

4-[ 6-( lH- Pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil]- fenol

[0106]

[0107]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (CD3OD): 8 9.33 (IH, s), 8.67 (IH, s), 8.38-8.35 (IH, d,J=9.6 Hz), 8.26 (IH, s), 7.79-7.76 (IH,d, J=9.6 Hz), 7.28-7.26 (IH, d,J =8.6 Hz), 6.75-6.73 (IH,d, J=8.5 Hz), 4.45 (2H, s), 3.24-3.22 (2H, d,J=5.3). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci5Hi2N60: 292.11; pronađeno: 293.2 (M+H).

Referentni primer 4

4-( 6- Piridin- 3- il-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- fenol

[0108]

[0109]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (CD3OD): 5 9.41 (IH, s), 8.93-8.91 (2H,d, J =9.34 Hz), 8.42-8.40 (IH, d,J =9.6 Hz), 8.07-8.04 (IH, d,J =9.6 Hz), 8.01-7.98 (IH,t, J=7.57 Hz), 7.27-7.25 (2H,d, J= 8.8 Hz), 6.75-6.73 (2H, d,J=8.5 Hz), 4.59 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G7H13N5O: 303.11; pronađeno: 304.2 (M+H).

Referentni primer 5

4-[ 6-( 2H- Pirazol- 3- il)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil]- fenol

[0110]

[0111] Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (CD3OD/CDCI3): 5 8.56-8.53 (IH, d,J=2.2 Hz), 8.32-8.29 (IH, d,J=10.1 Hz), 8.17-8.19 (IH,d, J=10.1 Hz), 7.87 (IH, m), 7.26-7.24 (2H, d,J= 8.5 Hz), 6.75-6.72 (2H, d,J=8.5 Hz), 6.67-6.65 (IH, m), 4.49 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci5Hi2N60: 292.11; pronađeno: 293.2 (M+H).

Referentni primer 6

6-( 6- Piridin- 44l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- hinolin

[0112]

[0113]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (CD3OD): 8 9.20-9.18 (IH,d, J =5.3 Hz), 9.15-9.13 (IH,d, J =8.3 Hz), 9.00-8.99 (2H, d,J =6.5 Hz), 8.58-8.56 (2H, d,J=6.5 Hz), 8.52-8.49 (IH, d,J =9.8 Hz), 8.42 (IH, s), 8.32-8.26 (2H,d, J=8.8, 10.3 Hz), 8.16-8.14 (IH,d, J =8.9 Hz), 8.09-8.06 (IH, m), 5.07 (2H, br s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C2oHi4N6: 338.37; pronađeno: 339.3 (M+H).

Referentni primer 7

3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54lmetil)- 6- piridin- 44l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0114]

[0115]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (CD3OD): 8 8.91-8.88 (2H, d,J =6.5 Hz), 8.48-8.47 (2H,d, J =6.8 Hz), 8.34-8.31 (IH, d,J =9. 6 Hz), 8.00-7.89 (IH, d,J= 9.8 Hz), 7.15 (IH, s), 7.07-7.04 (IH, d,J= 8.0 Hz), 6.55-6.53 (IH,d, J=8.3 Hz), 4.49 (2H, s), 4.38-4.34 (2H,t, J=8.8 Hz), 3.04-3.00 (2H, d,/= 8.5 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C19H15N5O: 329.13; pronađeno: 330.2 (M+H).

Referentni primer 8

3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54lmetil)- 6-( 6- morfolin- 44l- pm

bjpiridazin

[0116]

[0117]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (CD3OD): 8 8.52-8.51 (IH, d,J= 2.5 Hz), 8.26-8.23 (IH, dd,J= 2.2, 9.3 Hz), 8.06-8.03 (IH, d,J=9.8 Hz), 7.74-7.72 (IH, d,J =9.8 Hz), 7.05-7.01 (2H, m), 6.94-6.92 (IH, d,J =9.3 Hz), 6.45-6.42 (IH, d,J=8.0 Hz), 4.33 (2H, s), 4.28-4.24 (2H,t, J=8.5 Hz), 3.64-6.32 (4H, m), 3.52-3.50 (4H, m), 2.93-2.89 (2H, t,J =8.8 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C23H22N6O2: 414.18; pronađeno: 415.3 (M+H).

Referentni primer 9

6-[ 6-( l- Propil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lme

[0118]

[0119]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (CD3OD): 8 9.18-9.16 (IH,dd, J=1.5, 5.5 Hz), 9.14-9.12 (IH,d, J=7.5 Hz), 8.46 (IH, s), 8.39 (IH, s), 8.30-8.19 (4H, m), 8.07-8.04 (IH,q, J=3.0, 5.3 Hz), 7.78-7.76 (IH,d, J= 9.6 Hz), 4.96 (2H, s), 4.24-4.20 (2H, t,J=6.8 Hz), 1.99-1.90 (2H, m), 0.91-0.93 (3H,t, J=7.3 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C21H19N7: 369.17; pronađeno: 370.3 (M+H).

Referentni primer 10

Morfolin- 44l-[ 5-( 3- hinolin- 64lmetil- fl, 2, 4] triazolof4, 3- b] pm

metanon

[0120]

[0121]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (CD3OD): 8 9.22-9.20 (IH,d, J= 2.2 Hz), 8.72-8.70 (2H, m), 8.41-8.40 (IH, t,J= 2.2 Hz), 8.28-8.23 (2H, m), 7.91-7.89 (2H, m), 7.77-7.74 (IH, dd,J=2.0, 8.8 Hz), 7.44-7.41 (IH, q,J =4.2), 4.55 (2H, s), 3.73 (4H, br s), 3.51 (2H, br s), 3.38 (2H, br s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C25H21N7O2: 451.18; pronađeno: 452.4 (M+H).

Referentni primer 11

6-( 6- Piridin- 3Hl-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- hinolin

[0122]

Primer 11: korak a

3- Hlor- 6- piridin- 3- il- piridazin

[0123]

[0124]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao stoje opisano u Primeru 1: korak a. 'H-NMR (CDCI3): 8 9.21(lH,dd,/=1.0, 2.5 Hz), 8.77(1H, dd,/= 1.8, 4.8 Hz), 8.46 (IH, ddd,/=1.8, 2.5, 8.1 Hz), 7.89 (IH,d, J=8.8 Hz), 7.64 (IH,d, J=8.8 Hz), (IH,ddd, J=1.0, 4.8, 8.1 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C9H6C1N3: 191.0/192.0 pronađeno: 192.2/194.4 (M+H/M+2+H).

Primer 11: korak b

6-( 6- Piridin- 34l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- hinolin

[0125]

[0126]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1: korak b. 'H-NMR (CD3OD): 5 9.81 (IH, m), 9.50 (IH, m), 9.27 (IH, m), 9.25 (IH, dd,J=1.5, 5.3 Hz), 9.16 (IH, m), 8.86 (IH,d, J=9.9 Hz), 8.71 (IH, d,J =9.6 Hz), 8.58 (IH, m), 8.42 (IH, m), 8.40 (IH, m), 8.36 (IH, m), 8.14 (IH, dd,J=5.3, 8.3 Hz), 5.22 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C20H16N6: 338.1; pronađeno: 339.3 (M+H).

Referentni primer 12

6- Piridin- 34l- 3-[ l, 2, 4] triazolo[ l, 5- a] piridin- 64lmetil-[ l, 2, 4] triazolo[ 4^

[0127]

Primer 12: korak a

Dietil estar 2-[ l, 2, 4] Triazolo[ l, 5- a] piridin- 6- il- malonske kiseline

[0128]

[0129]Dietil malonat (400 uL) dodat je u smešu 6-jodo-[l,2,4]triazolo[l,5-a]piridina (245 mg, 1 mmol), bakar jodida (19 mg, 0.1 mmol), bifenil-2-ola (34 mg, 0.2 mmol), i CS2CO3u THF (5 mL). Heterogeni rastvor je mešan tokom 16 h kod 70 °C. Posle hlađenja, smeša je razdeljena između hloroforma (40 mL) i aq. NH4CI (20 mL). Organski sloj je ispran sa NH4CI (3x15 mL), NaHC03(20 mL), i fiziološkim rastvorom (20 mL) zatim je osušen preko Na2S04. Koncentrovanje rastvora posle čega je sledilo Si02fleš hromatografsko prečišćavanje dalo je produkt (170 mg, 61 %) u vidu bezbojnog stakla. 'H-NMR (CDCI3): 5 8.77 (IH, m), 8.37 (IH, s), 7.78 (IH, dd,J=0.9, 9.1 Hz), 7.69 (IH, dd,J=1.8, 9.3 Hz), 4.76 (IH, s), 4.27 (4H, m), 1.30 (6H, t,J =7.3 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C13H15N3O4: 277.1; pronađeno: 278.2 (M+H).

Primer 12: korak b

Hidrazid [ l, 2, 4] Triazolo[ l, 5- a] piridin- 6- il- sirćetne kiseline

[0130]

[0131]U rastvor dietil estra 2-[l,2,4]Triazolo[l,5-a]piridin-6-il-malonske kiseline kako je pripremljeno u Primeru 12: korak a (170 mg, 0.6 mmol) u dioksanu (4 mL) i MeOH (6 mL) dodato je 2N NaOH (1.2 mL, 2.4 mmol). Reakcija je mešana tokom 4 h kod sobne temperature, zatim je rastvor podešen do pH~2 sa 0.5N HC1. Rastvor je mešan tokom 1 h (dolazi do dekarboksilacije) i isparljive komponente suuklonjene pod vakuumom.Ostatak je rastvoren u suvom MeOH (15 mL), ohlađen u ledenom kupatilu, i dodat je tionil hlorid (500 uL, 6.8 mmol) kap po kap. Rastvor je mešan tokom 4 h kod sobne temperature, filtriran, i isparljive komponente suuklonjene pod vakuumom.'H-NMR (CD3OD/CDCI3): 8 9.23 (IH,

s), 9.15 (IH, s), 8.26 (IH, d, J= 8.6 Hz), 8.15 (IH, d, J= 8.6 Hz), 4.02 (2H, s), 3.77 (3H, s).

Ostatak je rastvoren u EtOH (10 mL) i dodat je hidrazin (50 uL). Rastvor je grejan na 70 °C tokom 14 h i isparljive komponente suuklonjene pod vakuumom.Ostatak je tri puta ponovno rastvoren u EtOH i koncentrovan pod vakuumom da se ukloni višak hidrazina. Materijal je upotrebljen bez daljeg prečišćavanja. 'H-NMR

[0132](DMSO-de): 8 9.34 (IH, br s), 8.81 (IH, s), 8.46 (IH, s), 7.79 (IH, d,J=9.0 Hz), 7.56 (IH, dd, 7 = 1.5, 9.0 Hz), 3.45 (2H, s, maskirano sa H20 vrhom).

Primer 12: korak c

6- Piridin- 34l- 3-[ l, 2, 4] triazolo[ l, 5- a] piridin- 64lmetil-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] p

[0133]

[0134]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1: korak b. 'H-NMR (CD3OD): 5 9.48 (IH, s), 9.09 (IH, s), 8.96 (IH,ddd, J=1.5, 2.0, 8.1 Hz), 8.94 (IH, d,

J= 5.0 Hz), 8.57 (IH, s), 8.46 (IH, d, J = 9.6 Hz), 8.06 (IH, d, J = 9.6 Hz), 8.03 (IH, m, J =

5.3, 8.1 Hz), 7.85 (IH, d,J =9.4 Hz), 4.89 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci7Hi2N8: 328.1; pronađeno: 329.3 (M+H).

Referentni primer 13

6-( 6- Piridin- 34l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- benzotiazol- 24la

[0135]

[0136] Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1 iz hidrazida (2-amino-benzotiazol-6-il)-sirćetne kiseline (0.65 mmol) i 3-hlor-6-piridin-3-il-piridazina (0.34 mmol) da se dobije žuta čvrsta supstanca. 'H NMR (DMSO-d6) 5 9.30 (IH, d,J =1.6 Hz),

8.78 (IH, dd, J = 4.8 Hz, 1.7 Hz), 8.50 (IH, m), 8.49 (IH, d, J = 9.5 Hz), 8.01 (IH, d, J = 9.6

Hz), 7.69 (IH, s), 7.64 (IH, ddd,J =8.1 Hz, 4.8 Hz, 1.0 Hz), 7.42 (2H, s), 7.26 (2H, s), 4.61 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci8HiiN7S: 359.1; pronađeno 360.3 (M+H).

Referentni primer14

3-( 2- Hlor- piridin- 44lmetil)- 6- piridin- 34l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 34)] piridazin

[0137]

Primer 14: korak a

Dietil estar 2-( 2- hlor- piridin- 4- il)- malonske kiseline

[0138]

[0139]Naslovljeno jedinjenje je dobijeno u vidu bezbojnog ulja iz 2-hlor-4-jodopiridina (4.18 mmol) pomoću postupka od Henesija i Buhvalda (Org. Lett. 2002, 4, 269). 'H NMR (CDCb) 5 8.37 (IH, dd,7= 21 Hz, 5.2 Hz), 7.35 (IH, dd,J =49 Hz, 1.4 Hz), 7.24 (IH, ddd,7= 55 Hz, 5.2 Hz, 1.5 Hz), 4.23 (4H, m), 3.61 (IH, s), 1.28 (6H, m). ESI-MS (m/z): Izračunato za G2H14NO4CI: 271.1; pronađeno 272.1 (M+H).

Primer 14: korak b

( 2- Hlor- piridin- 4- il)- sirćetnakiselina

[0140]

[0141]Produkt iz prethodnog koraka (2.43 mmol) je rastvoren u metanolu (20 mL), tretiran sa 2N vodenim rastvorom NaOH (4.0 mL), i mešan na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Reakcija je tretirana sa 2N vodenog rastvora HC1 (4.0 mL), koncentrovana do suvapod vakuumom,rastvorena u metanolu, i filtrirana. Koncentrovanjefiltrata pod vakuumomdalo je jedinjenje iz naslova u vidu higroskopne žute čvrste supstance. 'H NMR (DMSO-dć) 8 8.32 (IH, d, 7= 5.1 Hz), 7.43 (IH, s), 7.32 (IH, dd,7 =5.1 Hz, 1.5 Hz), 3.64 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C7H6N02C1: 171.0; pronađeno 172.1 (M+H).

Primer 14: korak c

Hidrazid ( 2- hlor- piridin- 4- il)- sirćetnekiseline

[0142]

[0143]Jedinjenje iz naslova dobijeno je u vidu svetio žute čvrste supstance od produkta iz prethodnog koraka (2.43 mmol) prema postupku iz Primera 17: korak b. 'H NMR (400 MHz, CDCI3/CD3OD) 8 8.30(d,J= 5.0 Hz, IH), 7.34 (m, IH), 7.22 (dd,J =5.1 Hz, 1.5 Hz, IH), 3.48 (s, 2H).

Primer 14: korak d

[01441

[0145] Naslovljeno jedinjenje pripremljeno je kao što je opisano u Primeru 1 u vidu bledo narandžaste čvrste supstance iz hidrazida (2-hlor-piridin-4-il)-sirćetne kiseline (0.61 mmol) i 3-hlor-6-piridin-3-il-piridazina (0.33 mmol). 'H NMR (CDCI3/CD3OD) 8 9.17 (IH, d,J= 2.6 Hz), 8.79 (IH, dd,/=4.9 Hz, 1.6 Hz), 8.32 (IH, d,J =4.6 Hz), 8.30 (IH, d,J= 9.5 Hz), 8.28 (IH,ddd, J=8.0 Hz, 2.4 Hz, 1.6 Hz), 7.70 (IH,d, J=9.6 Hz), 7.58 (IH, m), 7.47 (IH, s), 7.34 (IH, m), 4.67 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za GeHnNeCl: 322.1; pronađeno 323.3 (M+H).

Referentni primer 15

6-[ 6-( l- Metansulfonil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil^

[0146]

[0147]U rastvor 6-[6-(lH-Pirazol-4-il)-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-ilmetil]-hinolina kako je pripremljen u Primeru 3(10 mg, 0.03 mmol) i DIEA (9 uL, 0.05 mmol) u DCM (2 mL) dodat je metan sulfonilhlorid (4 uL, 0.05 mmol). Reakcija je mešana kod sobne temperature preko noći. Reakcija je koncentrovanapod vakuumomzatim je prečišćena sa HPLC (5-65 % CH3CN tokom 35 min) što je dalo naslovljeno jedinjenje (3.1 mg, 31 %) u vidu bele čvrste supstance. 'H-NMR (CD3OD): 8 9.06-9.00 (2H, q,J= 5.3, 7.0 Hz), 8.89 (IH, s), 8.44 (IH, s), 8.29-8.10 (4H, m), 7.96-7.92 (IH, q,J =5.3, 3.0), 7.75-7.73 (IH, d,J =9.8Hz), 4.87(2H, s), 3.42(3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci9Hi5N702S: 405.10; pronađeno: 406.1 (M+H).

Referentni primer16

6-{ 6-[ l-( 2- Metoksi- etil)- lH- pirazol- 44l]-[ l, 2, 4jtriazolo[ 4, 3- b] piridaz metilj- hinolin

[0148]

[0149] U rastvor 6-[6-(lH-Pirazol-4-il)-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-ilmetil]-hinolina kako je pripremljen u Primeru 3 (19 mg, 0.06 mmol) i K2CO3(12 mg, 0.09 mmol) u EtOH (2 mL) dodat je 2-brometil metil etar (8 uL, 0.09 mmol). Reakcija je mešana kod sobne temperature preko noći. Reakcija je koncentrovanapod vakuumomzatim je prečišćena sa HPLC (5-65 % CH3CN tokom 35 min) što je dalo naslovljeno jedinjenje (2.8 mg, 15%) au vidu bistrog stakla. 'H-NMR (CD3OD): 8 9.05-9.03 (IH, dd,/=3.7, 5.3 Hz), 9.02-8.99 (IH,d, J=7.8 Hz), 8.32 (IH, s), 8.27 (IH, s), 8.18-8.08 (4H, m), 7.95-7.91 (IH, q,J =3.0, 5.5 Hz), 7.66-7.63 (IH,d, J=9.8 Hz), 4.84 (2H, s), 4.30-4.28 (2H, t, 4.8 Hz), 3.70-3.76 (2H, t,J =5.3 Hz), 3.23 (2H, br s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C21H19N7O: 385.17; pronađeno: 386.2 (M+H).

Referentni primer 17

4-( 6- Tiofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- fenol

[0150]

Primer/ 7: korak a

3- Hlor- 6- tiofen- 2- il- piridazin

[0151]

[0152] 3,6-dihlorpiridizin (149.9 mg, 1 mmol) i 2-cink bromid-tiofen (Aldrich, 0.5 M, 1 mL, 0.5 mmol) su kombinovani sa THF (2 mL) i propuštani kroz argon u mehurićima tokom 60 sekunda. U reakcionu smešu dodat je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0) (12 mg, 0.01 mmol). Reakcija je grejana na 65 °C preko noći. Reakcija jekoncentrovana pod vakuumom,adsorbovana na siliku, te je zatim sledilo prečišćavanje hromatografijom na koloni (20 % etil acetat u heksanima) što je dalo naslovljeno jedinjenje u vidu bele čvrste supstance. 'H-NMR (CD3OD): 8 7.75-7.73 (IH, d,J= 9.0 Hz), 7.67-7.66 (IH, dd,/= 1.2, 3.7 Hz), 7.53-7.52 (IH,d, J=5.0 Hz), 7.50-7.48 (IH, d,J=8.5 Hz), 7.18-7.16 (IH, t,J= 5.3 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C8H5CN2S: 195.98; pronađeno: 197.2 (M+H).

Primer/ 7: korak b

Hidrazid ( 4- hidroksi- fenil)- sirćetne kiseline

[0153]

[0154]U rastvor metil estra (4-Hidroksi-fenil)-sirćetne kiseline (5 g, 30.08 mmol) u MeOH (20 mL, anhidrovanom) dodat je hidrazin (3.77 mL, 120.35 mmol) i zatim grejan na 55 °C tokom 1 čas. Beli talog se formirao tokom zagrevanja. Reakcija je zatim ohlađena na sobnu temperaturu i mešana tokom jednog dodatnog časa da olakša taloženje čvrste supstance. Reakcija je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana sa MeOH i osušena što je dalo željeni produkt (4.3 g, 86%) u vidu bele čvrste supstance. 'H-NMR (DMSO): 8 9.20 (IH, s), 9.10 (IH, s), 7.04-7.02 (2H,d, J=8.6 Hz), 6.67-6.65 (2H,d, J=8.6 Hz), 4.17-4.16 (2H, s), 4.11-4.09 (IH, q,/=5.0, 5.5 Hz).

Primer/ 7: korak c

4-( 6- Tiofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- fenol

[0155]

[0156]Rastvor koji je sadržavao 3-hlor-6-tiofen-2-il-piridazin (58 mg, 0.29 mmol) Primer 17: korak a i hidrazid (4-hidroksi-fenil)-sirćetne kiseline (120 mg, 0.58 mmol) u butanolu (5 mL) grejan je do refluksa preko noći. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i čvrste supstance su filtrirane i isprane sa MeOH. Čvrsta supstanca je rekristalizovana iz MeOH da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu tamne čvrste supstance. 'H-NMR (CD3OD/CDCI3): 8 8.12-8.10 (IH, d,J =9.34 Hz), 7.83-7.82 (IH,d, J =3.7 Hz), 7.78-7.76 (IH,d, J=9.8 Hz), 7.67-7.65 (IH, d,J= 5.0 Hz), 7.34-7.32 (2H, d,J= 6.5 Hz), 7.22-7.21 (IH, m), 6.77-6.75 (2H, d,J= 8.3 Hz), 4.49 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C16H12N4OS: 308.07; pronađeno: 309.2 (M+H).

Referentni primer 18

4-( 6- Tiazol- 2- il-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- fenol

[0157]

Primer18: korak a

3- Hlor- 6- tiazol- 2- il- piridazin

[0158]

[0159]3,6-dihlorpiridizin (149.9 mg, 1 mmol) i 2-cink bromid-tiazol (0.5 M Aldrich, 2.4 mL, 1.2 mmol) su rastvoreni u THF (2 mL) i propuštaju se kroz mehuriće argona tokom 60 sekunda. U reakcionu smešu dodat je Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0) (57 mg, 0.05 mmol). Reakcija je grejana na 65 °C preko noći. Analiza sa LCMS pokazala je konverziju do produkta sa 60% -ESI-MS (m/z): Izračunato za C7H4CIN3S: 196.98; pronađeno: 198.2. Zbog toga su dodati drugi deo 2-cink bromid-tiazola (0.5 M Aldrich, 2.4 mL, 1.2 mmol) i Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0) (57 mg, 0.05 mmol) i zagrevanje je nastavljeno u toku 4 sata dok reakcija nije završena. Reakcija je koncentrovanapod vakuumom,adsorbovana na silicijum dioksid zatim je sledilo prečišćavanje hromatografijom na koloni (20 % etil acetat u heksanima) što je dalo naslovljeno jedinjenje u vidu bele čvrste supstance. 'H-NMR (CD3OD): 5 8.32-8.30 (IH, d,J=9.0 Hz), 7.95-7.94 (IH, d,J=3.0 Hz), 7.84-7.81 (IH, d,J =9.09 Hz), 7.73-7.72 (IH,d, J=3.2 Hz).

Primer 18: korak b

[0160]

[0161]3-hlor-6-tiazol-2-il-piridazin (20 mg, 0.10 mmol) i hidrazid (4-hidroksi-fenil)-sirćetne kiseline (20 mg, 0.12 mmol) kombinovani su u butanolu (5 mL), sipani u vodom ispunjeni kondenzator i zagrevani na 120 °C preko noći. Reakcija je koncentrovanapod vakuumomzatim je prečišćena sa HPLC (10-80% CH3CN tokom 25 min) što je dalo naslovljeno jedinjenje (11.5 mg, 37%) u vidu bele čvrste supstance. 'H-NMR (CD3OD/CDCI3): 5 8.26-8.24 (IH, d,J =9.6 Hz), 8.17-8.15 (IH, d,J =9.6 Hz), 8.05-8.04 (IH, d,J =3.2 Hz), 7.82-7.81 (IH,d, J=3.0 Hz), 7.32-7.30 (2H, t,J= 8.6 Hz), 6.77-6.74 (2H, d,J=8.3 Hz), 4.53 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G5H11N5OS: 309.07; pronađeno: 310.2 (M+H).

Referentni primer 19

3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54lmetil)- 6- piridin- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0162]

Primer 20: korak a

3- Hlor- 6-( 2- propil- tiazol- 5- il)- piridazin

[0165]

[0166]N-butillitijum (2.5M u heksanima, 1.3 mL, 3.3 mmol) dodat je kap po kap tokom 2 min u rastvor 2-propiltiazola (380 mg, 3 mmol) u THF (8 mL) kod 78 °C. Posle mešanja tokom 45 min kod -78 °C, dodat je rastvor cink hlorida (0.5M u THF, 7 mL, 3.5 mmol). Rastvor je mešan tokom 1 h, tokom kojih je zagrevan do sobne temperature. Dodati su tetrakis-trifenilfosfin (172 mg, 0.15 mmol) i 3,6-dihlorpiridazin i reakcija je grejana na 68 °C tokom 16 h. Posle hlađenja do sobne temperature, dodati su metanol (3 mL) i 2N HC1 (2 mL). pH je podešen do~8 sa Na2C03i smeša je razdeljena između EtOAc (50 mL) i vode (30 mL). Organski sloj je ispran sa vodom (2x10 mL) i fiziološkim rastvorom (20 mL) i osušen je preko Na2S04. Koncentracija rastvorapod vakuumompraćena sa SiChfleš hromatografijom dovela je da produkta u vidu beličaste čvrste supstance (200 mg, 28%). 'H-NMR (CDCh): 8 8.16 (IH, s), 7.77 (IH, d, J = 8.8 Hz), 7.53 (IH, d, J = 8.8 Hz), 3.04 (2H, t, J =7.6 Hz), 1.89 (2H, sekstet,/= 7.6 Hz), 1.06 (2H, t,J =7.6 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za G0H10CIN3S: 239.0/241.0; pronađeno: 240.2/242.2 (M+H; M+2+H).

Primer 20: korak b

6-[ 6-( 2- Propil4iazol- 54l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil]- M

[0167]

[0168]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17: korak b. 'H-NMR (CD3OD): 8 9.29 (IH,d, J=8.3), 9.26 (IH, d,J =4.8 Hz), 8.97 (IH, s), 8.72 (d, IH,/= 9.9 Hz), 8.60 (IH,d, J =9.9 Hz), 8.55 (IH, s), 8.37 (2H, s), 8.15 (IH, dd,J =5.6, 8.3 Hz), 5.11 (2H, s), 7.98 (d, IH,J=9.9 Hz), 3.26 (IH,t, J=7.6 Hz), 1.94 (2H, sekstet,/=7.3 Hz), 1.06 (2H,t, J=7.3 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C2iHi8N6S: 386.1; pronađeno: 387.3

(M+H).

Referentni primer 21

6-( 6- Tiofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- benzooksazol- 2- ilamin

[0169]

[0170]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17. 'H-NMR (CDCh): 8 8.05-8.03 (IH, d,J= 9.6 Hz), 7.66-7.65 (IH, ddJ= 1.2, 3.6 Hz), 7.46-7.44 (IH, d,J=9.8 Hz), 7.23-7.15 (2H, m), 4.64 (2H, s), 3.49 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci7Hi2N6OS: 348.08; pronađeno: 349.3 (M+H).

Referentni primer 22

3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54lmetil)- 64iofen- 24l-[ l, 2, 4] triazo

[0171]

[0172] Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17. 'H-NMR (CDCh): 5 8.05-8.03 (IH, d,J= 9.8 Hz), 7.67-7.66 (IH, dd,J= 1.0, 3.7 Hz), 7.56-7.55 (IH,d, J=1.0, 5.0 Hz), 7.47-7.44 (IH, d,J= 9.8 Hz), 7.35 (IH, s), 7.29-7.27 (IH, m), 7.19-7.16 (IH,q, J=3.7 Hz), 6.72-6.70 (IH, d,/= 8.0 Hz), 4.53-4.49 (4H, m), 3.18-3.13 (2H, t,J =8.8 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci8Hi4N4OS: 334.09; pronađeno: 335.2 (M+H).

Referentni primer 23

3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54lmeitl)- 6-( 3- metil4iofen- 24l)- fl,^

[0173]

[0174]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17. 'H-NMR (CDCh): 5 8.06-8.04 (IH, d,J= 9.8 Hz), 7.42-7.41 (IH, d,J =5.0 Hz), 7.40-7.37 (IH, d,J =9.6 Hz), 7.28 (IH, s), 7.20-7.18 (IH, d,J =6.82 Hz), 7.02-7.00 (IH, d,J= 5.0 Hz), 6.71-6.69 (IH,d, J=8.0 Hz), 4.56-4.49 (4H, m), 3.17-3.12 (2H, d,J= 8.5 Hz), 2.55 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci9Hi6N4OS: 348.10; pronađeno: 349.2 (M+H).

Referentni primer 24

3- Benzil- 6- tiofen- 2il- ll, 2, 4Jtriazolol4, 3- bJpiridazin

[0175]

[0176] Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17 iz hidrazida fenilsirćetne kiseline (0.67 mmol) i 3-hlor-6-tiofen-2-il-piridazina (0.21 mmol). 'H NMR (400 MHz, CDCh) 8 8.05 (IH, d,J= 9.8 Hz), 7.66 (IH, dd,J= 3.8 Hz, 1.3 Hz), 7.55 (IH, dd,J=5.0 Hz, 1.0 Hz), 7.53 (2H, m), 7.46 (IH,d, J =9.9 Hz), 7.31 (2H, m), 7.24 (IH,t, J =7.5 Hz), 7.17 (IH, dd,J= 5.0 Hz, 3.8 Hz), 4.60 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C16H12N4S: 292.1; pronađeno 293.2 (M+H).

Referentni primer 25

3-( 4- Metoksi- benzil)- 6- tiofen- 2- il-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0177]

[0178]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao stoje opisano u Primeru 17 iz hidrazida 4-metoksi-fenilsirćetne kiseline (1.39 mmol) i 3-hlor-6-tiofen-2-il-piridazina (0.32 mmol) u vidu bledo narandžaste čvrste supstance. 'H NMR (CD3OD) 8 8.17 (IH,d, J=9.8 Hz), 7.92 (IH, dd,J= 3.8 Hz, 1.2 Hz), 7.88 (IH, d,J=9.9 Hz), 7.74 (IH, dd,J=5.0 Hz, 1.0 Hz), 7.40 (2H, d,/= 8.8 Hz), 7.23 (IH, dd,J=5.0 Hz, 3.8 Hz), 6.88 (2H, d,/=8.9 Hz,), 4.51 (s, 2H), 3.75 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G7H14N4OS: 322.1; pronađeno 323.2 (M+H).

Referentni primer 26

3-( 4- Fluor- benzil)- 64iofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0179]

[0180]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17 iz hidrazida 4-fluorfenilsirćetne kiseline (1.04 mmol) i 3-hlor-6-tiofen-2-il-piridazina (0.52 mmol) u vidu bledo braon čvrste supstance. 'H NMR (CD3OD) 8 8.19 (IH, d,J =9.9 Hz), 7.93 (IH, dd,J =3.8 Hz, 0.9 Hz), 7.90 (IH, d,J=9.9 Hz), 7.75 (IH, dd,J =5.0 Hz, 1.0 Hz), 7.50 (2H, dd,J =9.0 Hz, 5.3 Hz), 7.24 (IH, dd,J=5.3 Hz, 3.8 Hz), 7.06 (2H, t,J =8.8 Hz), 4.59 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci6HnFN4S: 310.1; pronađeno 311.2 (M+H).

Referentni primer 27

3-( 4- Nitro- benzil)- 6- tiofen- 2- il-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0181]

Primer 27: korak a

Hidrazid 4- nitrofenilsirćetne kiseline

[0182]

[0183]Rastvor 4-nitrofenilsirćetne kiseline (2.81 mmol) u suvom dihlormetanu (10 mL) tretiran je sa 2N rastvorom oksalil hlorida (3.0 mL) i DMF (0.02 mL) pomoću šprica, i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom lh. Reakcija je koncentrovana dosuva pod vakuumomi sirovi produkt je rastvoren u suvom dihlormetanu (20 mL), tretiran sa anhidrovanim hidrazinom (11.1 mmol) pomoću šprica, i mešan na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Dobijena suspenzija je filtrirana, čvrste supstance se isprane sa dihlormetanom, rastvorene u MeOH/CHiCh, filtrirane, i filtrat je koncentrovanpod vakuumomdajući naslovno jedinjenje u vidu narandžaste čvrste supstance. 'H NMR (DMSO-dć) 8 8.17 (2H, d,J=8.8 Hz,), 7.54 (2H,d, J=8.8 Hz), 3.54 (2H, s).

Primer 27: korak b

3-( 4- Nitro- benzil)- 6- tiofen- 2- il-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0184]

[0185JJedinjenje iz naslova dobijeno je u vidu bledo tamne čvrste supstance od produkta iz prethodnog koraka (0.52 mmol) i 3-hlor-6-tiofen-2-il-piridazina (0.27 mmol), kako je pripremljeno u Primeru 17: korak a pomoću postupka iz Primera 16: korak b. 'H NMR (CDCh) 5 8.18 (2H, d,J= 8.8 Hz,), 8.09 (IH,d, J =9.7 Hz,), 7.67 (3H, m), 7.58 (IH, dd,J =5.0 Hz, 1.0 Hz), 7.51 (IH, d,J =9.8 Hz), 7.19 (IH, dd,J= 5.1 Hz, 3.7 Hz), 4.70 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C16H11N5O2S: 337.1; pronađeno 338.2 (M+H).

Referentni primer 28

4-( 6- Tiofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- fenilamin

[0186]

[0187] Produkt iz prethodnog primera (0.20 mmol) hidrogenizovan je preko 10 tež. % paladijuma (0) na ugljeniku (9 mg) u 2:1 EtOH/THF (12 mL) kod sobne temperature i pritiska tokom 2 dana, te je filtriran preko Celite 521, koncentrovan, i prečišćen dvaput sa preparativnom TLC (10% MeOH/CHiCk na silicijum dioksidu) dajući naslovno jedinjenje u vidu bledo žute čvrste supstance. 'H NMR (CDCI3/CD3OD) 8 8.08 (IH, d,J=10.0 Hz), 7.78(IH, dd, J= 3.8 Hz, 1.0 Hz), 7.67 (IH, d, J= 9.9 Hz), 7.63 (IH, dd, J= 5.0 Hz,1.0 Hz), 7.29 (2H, d,J=8.6 Hz), 7.21 (IH, dd,J=5.0 Hz, 3.8 Hz), 6.69 (2H, d,J=8.6 Hz), 4.03 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci6Hi3N5S: 307.1; pronađeno 308.2 (M+H).

Referentni primer 29

N-[ 4-( 6- Tiofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- fem^ e

[0188]

[0189] Produkt iz prethodnog primera (0.09 mmol) tretiranje sa acetil hloridom (0.14 mmol) i trietilaminom (1.43 mmol) u anhidrovanom CH2CI2(5 mL) kod temperature okoline tokom 24 h, koncentrovan, te prečišćen sa preparativnom TLC (10% MeOH/CLbCh na silicijum dioksidu) dajući naslovno jedinjenje u vidu bledo žute čvrste supstance. 'H NMR (CD3OD) 8 8.18 (IH,d, J =9.7 Hz), 7.93 (IH, m), 7.90 (IH, d,J=9.7 Hz), 7.75 (IH, dd,J=5.1 Hz, 1.1 Hz), 7.52 (2H, m), 7.42 (2H, m), 7.24 (IH,dd, J=5.1 Hz, 3.8 Hz), 4.56 (2H, s), 2.10 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci8Hi5N5OS: 349.1; pronađeno 350.3 (M+H).

Referentni primer 30

l- Etil- 3-[ 4-( 64iofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- fe

[0190]

[0191] Produkt iz Primera 32 (0.12 mmol) tretiran je sa etil izocijanatom (0.19 mmol) i trietilaminom (0.72 mmol) u anhidrovanom CH2CI2(5 mL) kod temperature okoline tokom 18 h, koncentrovan, te prečišćen dva puta sa preparativnom TLC (10% MeOH/OHhCk zatim 7.5% MeOH/CH2Cb na silicijum dioksidu) dajući naslovno jedinjenje u vidu žute čvrste supstance. 'H NMR (CDCI3/CD3OD) 8 8.05 (IH, d,J=9.9 Hz), 7.70 (1H, dd,J= 3.8 Hz, 1.2 Hz), 7.59 (IH, dd,J=5.0 Hz, 1.0 Hz), 7.55 (IH, d,J=9.7 Hz), 7.40 (2H,d, J=8.5 Hz),

7.28 (2H, d, J= 8.7 Hz), 7.18 (IH dd, / = 5.0 Hz, 3.8 Hz), 4.51 (2H s,), 3.21 (2H, q, J= 7.3

Hz), 1.11 (3H,t, J=7.3 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci9Hi8N6OS: 378.1; pronađeno 379.2 (M+H).

Referentni primer 31

3-( 6- Metoksi- piridin- 34lmetil)- 64iofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0192]

Primer31: korak a

( 6- Metoksi- piridin- 3- il)- metanol

[0193]

[0194]Rastvor metil 6-metoksi-nikotinata (50 mmol) u anhidrovanom metanolu (60 mL) je tretiran sa natrijum borohidridom (122 mmol) kod 0 °C, zagrejan na sobnu temperaturu tokom 18 h, zatim je grejan do refluksa tokom 6 h. Nepotpuni reakcioni produkt je koncentrovan do suvapod vakuumom,rastvoren u anhidrovanom 1,4-dioksanu (70 mL), tretiran sa još natrijum borohidrida (122 mmol), i grejan do refluksa tokom 18 h. Posle hlađenja da temperature okoline, reakcija je ugašena sa metanolom, filtrirana preko grubog frita od stakla, čvrste supstance su isprane sa metanolom, i filtrat je koncentrovan. Ostatak je više puta rastvoren u metanolu, filtriran, i koncentrovanpod vakuumomsve dok nisu rastvorene se čvrste supstance, zatim je trituriran sa 10% MeOH/CEhCh, filtriran, i koncentrovan. Nečisti produkt je zatim adsorbovan na silikagel, sipan na 9.5 x 5.5 cm čep od silikagela, i eluiran sa gradijentom od 0 do 15% MeOH/CHCb, te su čiste frakcije koncentrovanepod vakuumomdajući naslovno jedinjenje u vidu bledo žutog ulja. 'H NMR

(CDCh) 5 8.08 (IH, d, J = 2.5 Hz), 7.61 (IH, dd, / = 8.5 Hz, 2.4 Hz), 6.74 (IH, d, J = 8.5

Hz), 4.60 (2H, s), 3.92 (3H, s).

Primer 31: korak b

Metil estar sumporne kiseline 6- metoksi- piridin- 3- ilmetil estar

[0195]

[0196]Produkt iz prethodnog koraka (31.3 mmol) je rastvoren u anhidrovanom dihlormetanu (30 mL) i trietilaminu (6.5 mL), tretiran kap po kap sa metansulfonil hloridom (38.7 mmol) kod temperature okoline, i reakcija je mešana tokom 2 dana. Reakcija je isprana sa vodom, vodeni sloj ekstrahovan 3 puta sa CH2CI2, kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2S04, filtrirani, i filtrat je koncentrovanpod vakuumomdajući naslovno jedinjenje u vidu žutog ulja. 'H NMR (CDCb) 5 8.09 (IH, d,J =2.3 Hz), 7.65 (IH, dd,J=8.5 Hz, 2.4 Hz), 6.77 (IH d,J =8.5 Hz), 4.57 (2H, s), 3.93 (3H, s), 3.41 (3H, s).

Primer 31: korak c

( 6- Metoksi- piridin- 3- il)- acetonitril

[0197]

[0200]Produkt iz prethodnog koraka (14.2 mmol) je rastvoren u reagensu etanolu (35 mL), tretiran sa rastvorom kalijum hidroksida (56.7 mmol) u vodi (35 mL), te grejan do refluksa tokom 20 h. Reakcija je koncentrovana dosuva pod vakuumom,ostatak je rastvoren u vodi, acidifikovan do pH 5 sa vodenim rastvorom 10% v/v HC1, te ponovno koncentrovan do suvapod vakuumom.Sirovi proizvod je trituriran sa 10% MeOH/CHCb, filtriran, te je filtrat e koncentrovan i osušenpod vakuumompreko noći dajući naslovno jedinjenje u vidu veoma higroskopne bledo žute čvrste supstance. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7.91 (IH, s), 7.57

(IH, dd,J =8.5 Hz, 1.8 Hz), 6.65 (IH,d, J=8.6 Hz), 3.79 (3H, s), 3.51 (IH, bs), 3.13 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za CSH9NO3: 167.1; pronađeno 168.2 (M+H).

Primer 31: korak e

Metil estar ( 6- metoksi- piridin- 3- il)- sirćetne kiseline

[0201]

[0202]Produkt iz prethodnog koraka (7.88 mmol) je rastvoren u suvom metanolu pod argonom, ohlađen na -10 °C, i tretiran sa tionil hloridom (20.5 mmol) putem šprica. Posle zagrevanja do sobne temperature i mešanja preko noći, reakcija je koncentrovanapod vakuumom,i ostatak je rastvoren u CH2CI2. Rastvor se ispire sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCOs i fiziološkim rastvorom, osušen je preko Na2S04, filtriran, i filtrat je koncentrovanpod vakuumomdajući naslovno jedinjenje u vidu bledo žutog ulja. 'H NMR

(CDCh) 8 8.04 (IH, d, J= 2.4 Hz), 7.53 (IH, dd, J= 8.5 Hz, 2.5 Hz), 6.73 (IH, d, J= 8.6

Hz), 3.92 (3H, s), 3.70 (3H, s), 3.55 (2H, s).

Primer 31: korak f

Hidrazid ( 6- metoksi- piridin- 3- il)- sirćetne kiseline

[0203]

[0204]Jedinjenje iz naslova dobij eno je u vidu bele čvrste supstance od produkta iz prethodnog koraka (5.34 mmol) pomoću postupka iz Primera 17: korak b. 'H NMR (400 MHz, DMSO-de) 8 9.20 (bs, IH), 8.00 (d, / = 2.6 Hz, IH), 7.58 (dd,J =8.4 Hz, 2.5 Hz, IH), 6.75 (d, /= 8.3 Hz, IH), 4.21 (bs, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.29 (s, 2H). ESI-MS (m/z): Izračunato zaC8HnN302: 181.1; pronađeno 182.1 (M+H).

Primer31: korak g

3-( 6- Metoksi- piridin- 34lmetil)- 64iofen- 24l-[ l, 2, 4jtriazolo[ 4, 34)] piridazin

[02051

[0206JNaslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17 od produkta iz prethodnog koraka (1.40 mmol) i 3-hlor-6-tiofen-2-il-piridazin (0.58 mmol) u vidu bledo žute čvrste supstance. 'H NMR (CD3OD) 8 8.29 (IH, d,J=2.5 Hz), 8.19 (IH, d,J=9.9 Hz), 7.93

(IH, dd, J = 3.8 Hz, 1.3 Hz), 7.90 (IH, d, J = 9.9 Hz), 7.78 (IH, dd, J= 8.6 Hz, 2.5 Hz), 7.75

(IH,dd, J=5.1 Hz, 1.1 Hz), 7.24 (IH,dd, J=5.1 Hz, 3.8 Hz), 6.78 (IH,d, J=8.6 Hz), 4.54 (2H, s), 3.88 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci6Hi3N5OS: 323.1; pronađeno 324.2

(M+H).

Referentni primer 32

5-( 6- Tiofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- lH- piridin- 2- on

[0207]

[0208] Produkt iz prethodnog primera (0.23 mmol) je rastvoren u anhidrovanom dihlormetanu (10 mL), tretiran sa IN rastvorom boron tribromida (4.0 mL) u CH2CI2, i grejan do refluksa tokom 2 d. Reakcija je koncentrovana do suvapod vakuumom,rastvorena u EtOAc, i ekstrahovana sa vodenim rastvorom NaHC03i NaCl. Kombinovani vodeni slojevi su koncentrovani dosuva pod vakuumomi triturirani sa 10% MeOH/CH2Cl2, filtrirani, a upareni filtrat je prečišćen sa preparativnom TLC (15% MeOH/CH2Cl2na silicijum dioksidu) dajući naslovno jedinjenje u vidu bledo žute čvrste supstance. 'H NMR (CD3OD) 8 8.21 (IH,

d, J = 9. 9 Hz), 7.96 (IH, m), 7.93 (IH, d, J = 9.8 Hz), 7.76 (IH, m), 7.73 (IH, dd, J = 9.4 Hz,

2.5 Hz), 7.62 (IH, m), 7.26 (IH, dd,J=5.3 Hz, 3.8 Hz), 6.54 (IH, d,J= 9.6 Hz), 4.42 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C15H11N5OS: 309.1; pronađeno 310.3 (M+H).

Referentni primer 33

3- Piridin- 4- ilmetil- 6- tiofen- 2- il-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0209]

[0210]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17 iz hidrazida 4-piridinsirćetne kiseline (1.81 mmol) i 3-hlor-6-tiofen-2-il-piridazina (0.58 mmol) u vidu bledo žute čvrste supstance. 'H NMR (CD3OD) 5 8.50 (2H dd,J=4.6 Hz, 1.4 Hz), 8.22 (IH d,J=9.6 Hz), 7.94 (IH, dd,J=3.8 Hz, 1.2 Hz), 7.93 (IH, d,J=9.8 Hz), 7.74 (IH, dd,J =5.0 Hz, 1.0 Hz), 7.52 (2H, m), 7.23 (IH, dd,J=5.3 Hz, 3.8 Hz), 4.69 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G5H11N5S: 293.1; pronađeno 294.2 (M+H).

Referentni primer 34

3-( l- Oksi- piridin- 44lmetil)- 64iofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0211]

[0212] Produkt iz prethodnog primera (0.20 mmol) tretiran je sa 3-hlorperoksibenzojevom kiselinom (0.26 mmol) u CHCI3 kod 0 °C, zagrejan na sobnu temperaturu tokom 5 h, ispran za vodenim rastvorom NaHCCb, vodom, te fiziološkim rastvorom, a kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa CH2CI2. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2S04, filtrirani, i upareni filtrat je prečišćen sa preparativnom TLC (10% MeOH/CH2Cb na silicijum dioksidu) dajući naslovno jedinjenje u vidu bledo žute čvrste supstance. 'H NMR (CD3OD) 6 8.32 (2H, m), 8.24 (IH, d,J= 9. 9 Hz), 7.95 (IH, dd,J =3.8 Hz, 1.1 Hz), 7.94 (IH,d, J =9.8 Hz), 7.75(IH, dd, J=5.1 Hz, 1.1 Hz), 7.65(2H, d, J=7.1 Hz), 7.24 (IH, dd,J =5.1 Hz, 3.8 Hz), 4.72 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G5H11N5OS: 309.1; pronađeno 310.3 (M+H).

Referentni primer 35

3- Benzo- furan- 54lmetil- 64iofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolol4, 3- b] piridazin

[0213]

Primer 35: korak a 5- Brommetil- benzofuran[02141

[0215]N-bromsukcinimid (5.0 mmol) dodat je u rastvor 2,3-dihidrobenzofuran-5-il sirćetne kiseline (5.0 mmol) i benzoil peroksida (lOmg) u ugljen tetrahloridu (100 mL) i refluksovan tokom 3 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana i koncentrovana. Proizvod je rekristalisan iz etil acetata: heksana (2:1) dajući naslovno jedinjenje u vidu bele čvrste supstance. 'H NMR (CD3OD) 5 7.62 (IH,d, J =2.4 Hz), 7.52 (IH, d,J =0.8 Hz), 7.46 (IH, d,J =8.4 Hz), 7.21 (IH, dd,7= 1.6, 8.4 Hz), 6.74 (IH,d, J=3.2 Hz), 3.74 (2H, s).

Primer 35: korak b

Benzofuran- 5- il- sirćetna kiselina

[0216]

[0217]N-bromsukcinimid (0.89 g, 5.0 mmol) dodat je u rastvor 2,3-dihidrobenzofuran-5-il sirćetne kiseline (0.89 g, 5.0 mmol) i benzoil peroksida (lOmg) u ugljen tetrahloridu (100 mL) i refluksovan tokom 3 časa. Smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana i koncentrovana. Produkt je rekristalisan iz etil acetata: heksana (2:1) dajući 0.39 g (44%) bele čvrste supstance. 'H NMR (CD3OD) 8 7.62 (IH, d,J= 2.4 Hz), 7.52 (IH, d,J=0.8 Hz), 7.46 (IH, d,J =8.4 Hz), 7.21 (IH, dd,J= 1.6, 8.4 Hz), 6.74 (IH, d,J= 3.2 Hz), 3.74 (2H, s).

Primer 35: korak c

Hidrazid benzofuran- 5- il- sirćetne kiseline

[0218]

[0219]Jedinjenje iz naslova dobij eno je u vidu žute čvrste supstance od produkta iz prethodnog koraka (1.15 mmol) pomoću postupka iz Primera 17: korak b. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 9.22 (IH, bs), 7.96 (IH,d, J=2.2 Hz), 7.53 (IH, d,J=1.5 Hz), 7.50 (IHd, J =8.6 Hz), 7.20 (IH, dd,J= 8.4 Hz, 2.0 Hz), 6.93 (IH, dd,J =2.2 Hz, 1.0 Hz), 4.24 (2H, bs), 3.43 (2H, s).

Primer 35: korak d

3- Benzofuran- 5- ilmetil- 6- tiofen- 2- il-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0220]

[0221] Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17 od produkta iz prethodnog koraka (0.63 mmol) i 3-hlor-6-tiofen-2-il-piridazina (0.34 mmol) u vidu bledo žute čvrste supstance. 'H NMR (400 MHz, CDCh) 8 8.04 (IH, d,J=9. 9 Hz), 7.75 (IH, d,J =1.3 Hz), 7.66 (IH, dd,J=3.8 Hz, 1.1 Hz), 7.58 (IH, d,J=2.3 Hz), 7.56 (IH, dd,J=5.2 Hz, 1.1 Hz), 7.46 (3H, m), 7.17 (IH, dd,J=5.0 Hz, 3.8 Hz), 6.72 (lH,m), 4.69 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C18H12N4OS: 332.1; pronađeno 333.3 (M+H).

Referentni primer 36

3- Benzo[ bjtiofen- 54lmetil- 6- tiofen- 2- il-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0222]

Primer 36: korak a

Benzo[ b] tiofen- 5- il- sirćetna kiselina

[0223]

[0224]Jedinjenje iz naslova je dobijeno tretiranjem 5-metilbenzotiofena sa NBS u ugljen tetrahloridu, što je praćeno tretiranjem sa natrijum cijanidom u DMF i zatim je refluksovano sa vodenim natrijum hidroksidom u etanolu. 'H NMR (CD3OD) 8 8.02-8.00 (IH, d,J= 8.2 Hz), 7.84-7.83 (IH, m), 7.82 (IH, s), 7.51-7.50 (IH, d,J= 5.0 Hz), 7.35-7.33 (IH, d,J =9.7 Hz), 3.76 (2H, s).

Primer 36: korak b

Hidrazid benzo[ bjtiofen- 5- il- sirćetne kiseline

[0225]

[0226]Jedinjenje iz naslova dobijeno je u vidu žute čvrste supstance od produkta iz prethodnog koraka (1.08 mmol) pomoću postupka iz Primera 17: korak b. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 9.24 (IH, bs), 7.91 (IH, d,J =8.3 Hz), 7.75 (IH, d,J =1.0 Hz), 7.73 (IH,d, J =5.8 Hz), 7.42 (IH, d,J =5.3 Hz), 7.26 (IH, dd,J =8.3 Hz, 1.8 Hz), 4.21 (2H, bs), 3.46 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G0H10N2OS: 206.1; pronađeno 207.1 (M+H).

Primer 36: korak c

3- Benzofb] tiofen- 5- ilmetil- 6- tiofen- 2- il- fl, 2, 4] triazolof4, 3- b] piridazin

[0227]

[0228]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17 od produkta iz prethodnog koraka (0.53 mmol) i 3-hlor-6-tiofen-2-il-piridazina (0.26 mmol) u vidu bledo žute čvrste supstance. 'H NMR (CD3OD) 8 8.17 (IH, d,J=9.9 Hz), 7.98 (IH, m), 7.90 (IH,

dd, J= 3.8 Hz, 1.0 Hz), 7.86 (IH, d, J = 9.8 Hz), 7.85 (IH, d, J = 8.4 Hz), 7.74 (IH, dd, J =

5.0 Hz, 1.3 Hz), 7.55 (IH, d,J=5.5 Hz), 7.46 (IH, dd,/=8.3 Hz, 1.7 Hz), 7.34 (IH,d, J =

5.6 Hz), 7.22 (IH, dd,J= 5.0 Hz, 3.8 Hz), 4.71 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci8H,2N4S2: 348.1; pronađeno 349.2 (M+H).

Referentni primer 37

3- Benzo[ l, 3] dioksol- 5- ilmetil- 6- tiofen- 2- il-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0229]

Primer 37: korak a

Hidrazid benzo[ l, 3] dioksol- 5- il- sirćetne kiseline

[0230]

[0231]Jedinjenje iz naslova dobijeno je u vidu bledo ružičaste čvrste supstance iz 3,4-(metilendioksi)-fenilsirćetne kiseline (1.74 mmol) pomoću postupka iz Primera 17: korak b.

'H NMR (DMSO-de) 8 9.13 (IH, bs), 6.82 (IH, d,J= 5.3 Hz), 6.81 (IH, d,J=4.4 Hz), 6.69 (IH, dd,J =7.9 Hz, 1.6 Hz), 5.96 (2H, s), 4.18 (IH,d, J=4.3 Hz), 3.24 (2H, s).

Primer 37: korak b

[0232]

[0233]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17 od produkta iz prethodnog koraka (0.39 mmol) i 3-hlor-6-tiofen-2-il-piridazina (0.21 mmol) u vidu bele čvrste supstance. 'H NMR (CDCh) 8 8.05 (IH,d, J=9.8 Hz), 7.67 (IH, dd, /= 3.8 Hz, 1.2

Hz), 7.56 (IH, dd, J= 5.1 Hz, 1.1 Hz), 7.46 (IH, d, J= 9.8 Hz), 7.18 (IH, dd,/= 5.0 Hz, 3.8

Hz), 7.00 (m, 2H), 6.75(IH,d,J= 7.8 Hz), 5.90 (2H, s), 4.51 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C18H12N4OS: 336.1; pronađeno 337.2 (M+H).

Referentni primer 38

6-( 6- Tiofen- 24l-[\, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- benzotiazol- 2- ilamin

[0234]

Primer 38: korak a

Etil estar ( 2- amino- benzotiazol- 6- il)- sirćetne kiseline

[0235]

[0236]Rastvor (2-amino-benzotiazol-6-il)-sirćetne kiseline (0.61 mmol, kako je pripremljeno u Meyer i dr. u J. Med. Chem. 1997, 40, 1060) u apsolutnom etanolu (10 mL) tretiranje sa 3 kapi koncentrovane H2SO4i približno 1 g suvog 4A molekularnog sita, te je grejan do refluksa tokom 3 d. Reakcija je koncentrovana do suvapod vakuumom,podeljena između CH2CI2i zasićenog vodenog rastvora NaHCCb, filtrirana, i faze su razdvojene. Vodeni sloj je ekstrahovan sa CH2CI2, i kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom i fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2S04, filtrirani, a filtrat je koncentrovanpod vakuumomdajući naslovno jedinjenje u vidu žute čvrste supstance. 'H NMR (CDCh) 8 7.50 (IH, m), 7.41 (IH, d,J=8.3 Hz), 7.20 (IH, dd,/= 8.2 Hz, 1.9 Hz), 4.15 (2H, q,J =7.2 Hz), 3.65 (2H, s), 3.42 (4H, s [NH2+ H20]), 1.26 (3H, t,/=7.1 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za G1H12N2O2S: 236.1; pronađeno 237.1 (M+H).

Primer 38: korak b

Hidrazid ( 2- amino- benzotiazol- 6- il)- sirćetne kiseline

[0237]

[0238]Jedinjenje iz naslova dobijeno je u vidu žute čvrste supstance od produkta iz prethodnog koraka (0.40 mmol) pomoću postupka iz Primera 17: korak b. 'H NMR (400 MHz, DMSO-de) 8 9.18 (bs, IH), 7.51( d, J=1.5 Hz, IH), 7.40 (bs, 2H), 7.24(d, J=8.1 Hz, IH), 7.08 (dd,J= 8.1 Hz, 1.8 Hz, IH), 4.25 (bs, 2H). Masena spektroskopija (LCMS, ESI pos.): Izračunato za C9H10N4OS: 222.1; pronađeno 223.1 (M+H).

Primer 38: korak c

6-( 6- Tiofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- benzotiazol- 2- ilamin

[02391

[0240]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17 od produkta iz prethodnog koraka (0.36 mmol) i 3-hlor-6-tiofen-2-il-piridazina (0.22 mmol) u vidu žute čvrste supstance. 'H NMR (DMSO-d6) 8 8.36 (IH,d, J=9.8 Hz), 8.08 (IH, dd,J=3.8 Hz, 1.2 Hz), 7.94 (IH, d,J= 9.6 Hz), 7.87 (IH dd,J=5.1 Hz, 1.4 Hz), 7.68 (IH, s), 7.41 (2H, m), 7.26 (3H, m), 4.51 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G7H12N6S2: 364.1; pronađeno 365.3 (M+H).

Referentni primer 39

6-( 6- Tiofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- hinolin

[0241]

[0242]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 17. 'H-NMR (CDCh): 8 8.13-8.11 (IH,d, J =8.5 Hz), 8.08-8.05 (2H, m), 7.96-7.95 (IH, d,J= 1.7 Hz), 7.90-7.87 (IH, dd,J =2.0, 2.0 Hz), 7.66-7.65 (IH, dd, / = 1.0, 1.0 Hz), 7.57-7.56 (IH, dd, J= 1.3, 1.3 Hz), 7.48-7.46 (IH,d, J=9.8 Hz), 7.38-7.35 (IH, q, J = 4.2 Hz), 7.18-7.16 (IH, dd, J = 3.7 Hz), 4.79 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C19H13N5S: 343.04; pronađeno: 344.3

(M+H).

Referentni primer 40

3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 5<lmetil)- 6-( 5- morfolin- 44lmetil- fura

4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0243]

Primer 40: korak a

6- Hlor- 3-( 2, 3- dihidro- benzofuran- 54lmetil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0244]

[0245]Hidrazid (2,3-dihidro-benzofuran-5-il)-sirćetne kiseline (633 mg, 3.3 mmol) i 3,6-dihlorpiridizin (Aldrich, 447 mg, 3.0 mmol) su kombinovani i rastvoreni u butanolu (120 mL). Reakciona smeša je zagrevana do 120 °C preko noći. Reakciona smeša postala je žuta i mutna. Posle hlađenja do sobne temperature reakcija je filtrirana i isprana sa MeOH dajući željeni produkt (816 mg, 95%) u vidu tamne čvrste supstance. 'H-NMR (CD3OD): 5 8.06-8.03 (IH, d,J=9.6 Hz), 7.27 (IH, s), 7.08-7.06 (IH,d, J=9.6 Hz), 6.72-6.70 (IH,d, J=8.6 Hz), 4.55-4.50 (2H, t,J=8.8 Hz), 4.46 (2H, s), 3.18-3.14 (2H,/, J=8.58 Hz).

Primer 40: korak b

5-[ 3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54lmetil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] pirM^

karbaldehid

[0246]

[02471Praćena je opšta procedura za Suzuki-jevo unakrsno povezivanje kako je opisano u Primeru 1 korišćenjem 2-karbaldehid-furan-5-boronske kiseline (24 mg, 0.7 mmol) i 6-hlor-3-(2,3-dihidro-benzofuran-5-ilmetil)-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazina (41 mg, 0.14 mmol). ESI-MS (m/z): Izračunato za C19H14N4O3: 347.2; pronađeno: 346.11 (M+H).

Primer 40: korak c

3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54lmetil)- 6-( 5- morfolin- 44lmetil- furan- 24l)- fl

bjpiridazin

[0248]

[0249] 5-[3-(2,3-Dihidro-benzofuran-5-ilmetil)-[l,2,4]triazolo[[4,3-b]piridazin-6-il]-furan-2-karbaldehid (21.6 mg, 0.06 mmol), morfolin (6.5 uL, 0.07 mmol) i AcOH (2 kapi) su kombinovani u DCM (lmL). U ovo je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (19 mg, 0.09 mmol) i reakcija je mešana kod sobne temperature tokom 2 časa. Reakcija je koncentrovanapod vakuumomzatim je prečišćena sa HPLC (5-65 % CH3CN tokom 35 min) što je dalo naslovljeno jedinjenje (5.9 mg, 27%) u vidu čvrste supstance. 'H-NMR (CD3OD/CDCI3): 8 8.23-8.21 (IH,d, J=9.6 Hz), 7.81-7.78 (IH, d,J=9.8 Hz), 7.42-7.41 (IH,d, J= 3.5 Hz), 7.22 (IH, s), 7.17-7.15 (IH,d, J =9.6 Hz), 6.99-6.98 (IH,d, J=3.5 Hz), 6.67-6.65 (IH, d,J =8.3 Hz), 4.57 (2H, s), 4.45-4.38 (4H, m), 3.94 (4H, br s), 3.40-3.33 (4H, m), 3.17-3.13 (2H,t, J=8.8 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C23H23N5O3: 417.18; pronađeno: 418.3 (M+H).

Referentni primer41

3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54lmetil)- 6-( 3- metoksi- piridin- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo

bjpiridazin

[0250]

[0251]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 40. 'H-NMR (CD3OD): 8 8.63 (IH, s), 8.44-8.43 (IH,d, J =5.3 Hz), 8.20-8.17 (IH, d,J= 9.8 Hz), 7.88-7.87 (IH,d, J=5.3 Hz), 7.80-7.77 (IH,d, J = 9. 6Hz), 7.12 (IH, s), 7.02-7.00 (IH, d,J =8.0 Hz), 6.56-6.54 (IH, d,J=8.3 Hz), 4.44 (2H, s), 4.41-4.37 (2H,t, J=8.3 Hz), 4.00 (3H, s), 3.06-3.01 (2H, t,J =8.3 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C20H17N5O2: 359.14; pronađeno: 360.3 (M+H).

Referentni primer 42

3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54lmetil)- 6-( 5- morfolin- 44lmetil4iofen- 24l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0252]

[0253]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 40. 'H-NMR (CD3OD): 8 8.14-8.12 (IH, d, 9.8 Hz), 7.85-7.84 (IH,d, J =3.7 Hz), 7.81-7.79 (IH, d,J =9.8 Hz), 7.35-7.34 (IH,d, J =3.7 Hz), 7.13 (IH, s), 7.08-7.06 (IH,d, J= 8.8 Hz), 6.56-6.54 (IH,d, J=8.0 Hz), 4.60 (2H, s), 4.40-4.36 (4H, m), 3.84 (2H, br s), 3.29 (2H, br s), 3.21 (2H, m), 3.05-3.01 (2H,/, J=8.8 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C23H23N5O2S: 433.16; pronađeno: 434.3 (M+H).

Referentni primer 43

6-( 6- Imidazol- 14l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- hinolin

[0254]

[0255] Smeša 6-(6-hlor-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-ilmetil)-hinolina, imidazola, i kalijum karbonata mešana je u DMF (3 mL) tokom 8 h na 100 °C. Dodat je vodeni rastvor HC1 (0.5 N) i isparljive komponente su uklonjene pod vakuumom. Prečišćavanje sa HPLC (5-35% B tokom 45 min) dalo je produkt kao so TFA. Ostatak je rastvoren u vodenom rastvoru IN HC1 (5 mL) i isparljive komponente su uklonjene pod vakuumom. Posle dva ponavljanja, produkt-dihidrohlorid je osušen pod visokim vakuumom da se dobije staklasta čvrsta supstanca (53 mg, 44% prinos). 'H-NMR (CD3OD): 8 9.60 (IH, s), 9.17 (IH, dd, J=

1.5, 5.3 Hz), 9.10 (IH, m), 8.58 (IH, d, J= 9.9 Hz), 8.38 (IH, m), 8.36 (IH, m), 8.27 (IH, m),

8.23 (IH, m), 8.05 (IH, dd, /= 5.3, 8.3 Hz), 7.98 (IH, d, J= 9.9 Hz), 7.72 (IH, s), 5.12 (2H, s), 4.98 (2H, m). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci8Hi3N7: 327.1; pronađeno: 328.3 (M+H).

Referentni primer44

6-[ 6-( 4- Brom4midazol- 14l)-[ l, 2, 4jtriazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil]- M

[02561

[0257] Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 43. 'H-NMR (CD3OD): 8 9.21 (2H, m), 8.72 (IH,d, J=1.5 Hz), 8.59 (IH,d, J =9.9 Hz), 8.45 (IH, m),8.32 (IH, dd, J=1.8, 8.8 Hz), 8.27 (IH, br d, /= 8.8),8.17 (IH, d, J =1.5 Hz), 8.11 (IH, dd, /= 5.7,8.3 Hz), 8.10 (IH,d, J =9.9 Hz), 5.01 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci8Hi2BrN7: 405.0/406.0; pronađeno: 406.3/408.3 (M+H/M+H+2).

Referentni primer 45

4-( 6- Imidazol- 14l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- fenol

[0258]

Primer45: korak a4-( 6- Hlor-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- fenol

[0259]

[0260]Hidrazid (4-hidroksi-fenil)-sirćetne kiseline (lOg, 0.06 mol) i 3,6-dihlorpiridizin (Aldrich, 8.96g, 0.06 mol) pomešani su i rastvoreni u butanolu (120 mL). Reakciona smeša je zagrevana do 100 °C preko noći. Reakciona smeša postala je žuta i mutna. Posle hlađenja do sobne temperature reakcija je filtrirana i isprana sa MeOH što je dovelo do željenog produkta (11.5 g, 36%) u vidu žuto braon čvrste supstance. 'H-NMR (CD3OD): 8 9.3 (IH, br s), 8.44-8.42 (IH,d, J=9.6 Hz), 7.48-7.45 (IH,d, J =9.6 Hz), 7.12-7.09 (2H,d, J=8.6 Hz), 6.70-6.68 (2H,d, J=8.6 Hz), 4.35 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G2H9CIN4O: 260.05; pronađeno: 261.2 (M+H).

Primer 45: korak b

4-( 6- ImidazolA4l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- fenol

[0261]

[0262]Jedinjenje iz naslova dobijeno je iz 4-(6-hlor-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-ilmetil)-fenola (Primer 45: korak a) i imidazola kako je opisano u Primeru 43. 'H-NMR (CD3OD): 8

9.78 (IH, /, J = 1.3 Hz), 8.54 (IH, d, J= 9.9 Hz), 8.38 (IH, t, J= 1.8 Hz), 7.97 (IH, d, J =

9.9 Hz), 7.83 (IH, dd,J=1.3, 1.8 Hz), 7.23 (2H, d,J =8.6 Hz), 6.72 (2H, d,J= 8.6 Hz), 4.53 (s, 2H). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci5Hi2N60: 292.1; pronađeno: 293.2 (M+H).

Referentni primer 46

4-( 6- Pirazol- l- il-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- fenol

[0263]

[0264JNaslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 43. 'H-NMR (CDCI3/CD3OD): 8 8.48 (IH, dd,J =0.5, 2.8 Hz), 8.24 (IH,d, J =9. 9 Hz), 8.13 (IH,d, J =9. 9 Hz), 7.86 (IH, dd, J= 1.3, 1.8 Hz), 7.26 (2H,d, J=8.6 Hz), 6.78 (2H, d,J=8.6 Hz), 6.65 (IH, dd,J=1.8, 2.8 Hz), 4.50 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci5Hi2N60: 292.1; pronađeno: 293.2 (M+H).

Referentni primer 47

( 4- Metil- piperazin- 14l)-[ 5-( 3- hinolin- 64lmetil-[ l, 2, 4] triazo

ilj- metanon

[0265]

Primer 47: korak a

6-( 6- Hlor-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- hinolin

[0266]

[0267]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 45. 'H-NMR (CDCh): 8 9.17-9.16 (IH,d, J=6.5 Hz), 8.91-8.88 (IH,d, J=9.0 Hz), 8.50-8.48 (IH,d, J=9.6 Hz), 8.28-8.25 (IH, d,J= 8.5 Hz), 8.14 (IH, s), 8.06-8.03 (IH, dd,J= 2.0, 8.8 Hz), 7.93-7.90 (IH,d, J=9.8 Hz), 6.72-6.70 (IH, d,J=8.0 Hz), 4.80 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G5H10CIN5: 295.06; pronađeno: 296.3 (M+H).

Primer47: korak b

Etil estar 5-( 3- hinolin- 64lmetil- fl, 2, 4Jtriazolof4, 3- bJpiridazin- 64l) 4iofe

kiseline

[0268]

[0269]U balon koji sadrži 6-(6-hlor-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-ilmetil)-hinolin kako je pripremljeno u Primeru 47: korak a (625 mg, 2.11 mmol) i Pd(PPh3)4(120 mg, 0.10 mmol) pod argonom dodat je 5-etoksikarboniltiofenil-2-cink bromid (0.5M u THF, 12.7 mL, 6.35 mmol). Rastvor je grejan na 68 °C kroz 3h, tokom kojeg je polazni materijal konzumiran od strane LC-MS. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i ugašena dodavanjem metanola (5 mL) te zatim 3N HC1 (6 mL). Dodat je dodatni metanol (5 mL) i izopropanol (5 mL) uz mešanje, te zatim 2N NaOH za podešavanje pH~8. Posle mešanja tokom lh, talog je sakupljen da se dobije naslovljeno jedinjenje (480 mg, 54%) kontaminirano sa solima cinka. Materijal je upotrebljen bez daljeg prečišćavanja. 'H-NMR (DMSO-dć): 5 8.84 (IH, dd,J =1.5, 4.0 Hz), 8.42 (IH, d,J= 9.9 Hz), 8.30 (IH, m), 8.07 (IH,d, J =4.0 Hz), 7.97 (3H, m), 7.84 (IH, d,/= 8.1 Hz), 7.77 (IH, dd,J= 2.0, 8.8 Hz), 7.49 (IH, dd,J= 4.3, 8.3 Hz), 4.75 (2H, s), 4.33 (2H, q,J=7.1 Hz), 1.33 (2H, t,J=7.1 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C22H17N5O2S: 415.1 pronađeno: 416.2 (M+H).

Primer 47: korak c

( 4- Metil- piperazin- 14l)-[ 5-( 3- hinolin- 64lmetil- ll, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridaz

ilj- metanon

[0270]

[0271]U suspenziju etil estra 5-(3-hinolin-6-ilmetil-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-6-il)-tiofen-2-karboksilne kiseline kako je pripremljeno u Primeru 47: korak a (100 mg, 0.24 mmol) u THF (4 mL) i MeOH (2 mL) dodato je 2N NaOH (0.25 mL, 0.5 mmol) što je dalo tamnu ali mnogo homogeniju mešavinu. Posle mešanja tokom 2h, dodato je IN HC1 za podešavanje pH~2. Rastvarači su uklonjeni pod vakuumom i ostatak je osušen u visokom vakuumu. U ostatak je dodat HBTU (114 mg, 0.3 mmol) i HOBt (70 mg, 0.5 mmol) što je praćeno dodavanjem DMF (3 mL). DIEA (265 uL, 1.5 mmol) u mešanu suspenziju za poboljšanje homogenosti. Posle mešanja tokom 30 min, dodat je 1-metilpiperazin (110 uL, 1 mmol) i reakcija je mešana tokom lh. Dodata je voda (1 mL) i isparljive komponente su uklonjene pod vakuumom. Ostatak je prečišćen sa RP-HPLC (5-35% B tokom 45 min). Produkt so TFA je tri puta rastvorena u 1:1 MeOH/2N HC1 (15 mL) i koncentrovano da se dobije produkt - hidrohloridna so (41 mg, 36%) u vidu svetio žute čvrste supstance. 'H-NMR (CD3OD): 5 9.28 (IH, dd, J = 1.3, 8.3 Hz), 9.25 (IH, dd, J = 1.5, 5.6 Hz), 8.68 (IH, d, J = 9.9 Hz), 8.59 (IH, d, J = 9.9 Hz), 8.55 (IH, m), 8.37 (2H, m), 8.16 (IH, dd, J = 5.3, 8.3 Hz), 8.12 (IH, d, J = 4.0 Hz), 7.60 (IH, d, J = 4.0 Hz), 5.10 (2H, s), 4.57 (2H, m), 3.62 (4H, m), 3.30 (2H, m), 2.99 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C25H23N7OS: 469.2; pronađeno: 470.2

(M+H).

Referentni primer 48

Etil estar 5-[ 3-( 4- Hidroksi- benzil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 64l] 4iofen- 2- to

kiseline

[0272]

[0273]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCI3/CD3OD): 5 8.18 (IH, d,J=9.9 Hz), 7.84 (IH, d,J=4.0 Hz), 7.82 (IH, d,J=4.0 Hz), 7.79 (IH, d,J =9. 9 Hz), 7.33 (2H, d,/=8.6 Hz), 6.78 (2H, d,J=8.6 Hz), 4.51 (2H, s), 4.40 (IH, q, J= 7.7 Hz), 1.46 (IH, t,/=7.7 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C19H16N4O3S: 380.1; pronađeno: 381.2 (M+H).

Referentni primer 49

( 3- dimetilamino- propil)- amid 5-[ 3-( 4- hidroksi- benzil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 6- il]-tiofen- 2- karboksilne kiseline

[0274]

[0275]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CD3OD): 5 8.59 (IH, d,J= 9.9 Hz), 8.52 (IH, d,J =9. 9 Hz), 8.12 (IH,d, J =4.0 Hz), 7.90 (IH,d, J =4.0 Hz), 7.36 (2H, d,J=8.6 Hz), 6.80 (2H, d,J=8.6 Hz), 4.63 (2H, s), 3.54 (2Ht, J=6.6 Hz), 3.27 (2H, m), 2.95 (s, 6H), 2.12 (2H, m). ESI-MS (m/z): Izračunato za C22H24N6O2S: 436.2; pronađeno: 437.2 (M+H).

Referentni primer 50

{ 5-[ 3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54lmetil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] pirida^

metil- piperazin- l- il)- metanon

[0276]

Primer 50: korak a

Etil estar 5-[ 3-( 2, 3- dihidro- benzofuran- 54lmetil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 6- il]-tiofen- 2- karboksilne kiseline

[0277]

[0278]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR

(CDCh): 8 8.12 (IH, d, J = 9.6 Hz), 7.81 (IH, d, J = 4.0 Hz), 7.62 (IH, d, J= 4.0 Hz), 7.46

(IH, d, J = 9. 6 Hz), 7.37 (IH, m), 7.25 (IH, m), 6.72 (IH, d, J = 8.0 Hz), 4.52 (m, 4H), 4.43

(2H,q, J=7.1 Hz), 3.17 (2H, m), 1.44 (3H, t,/=7.1 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C21H18N4O3S: 406.1; pronađeno: 407.2 (M+H).

Primer 50: korak b

{ 5-[ 3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 541metil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] pirid^

metil- piperazin- l- il)- metanon

[0279]

[0280]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR

(CDCh): 8 8.07 (IH, d, J = 9.9 Hz), 7.57 (IH, d, / = 3.8 Hz), 7.45 (IH, d, J = 9.9 Hz), 7.34

(IH, m), 7.29 (IH, d,J=3.8 Hz), 7.25 (IH, dd,J=1.8, 8.1 Hz), 6.71 (IH, d,J=8.1 Hz), 4.51 (2H,t, J =8.6 Hz), 4.50 (2H, s), 3.80 (4H,i, J=4.9 Hz), 3.17 (2H,t, J=8.6 Hz), 2.50 (4H,i, J=4.9 Hz), 2.36 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C24H24N6O2S: 460.2; pronađeno: 461.2 (M+H).

Referentni primer 51

bis-( 2- metoksi- etil)- amid 5-[ 3-( 2, 3- dihidro- benzofuran- 5- ilmetil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3-b] piridazin- 6- il]- tiofen- 2- karboksilne kiseline

[0281]

[0282]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CHCI3/CD3OD): 8 8.13 (IH, d,J=9.9 Hz), 7.69 (IH, d,J=4.0 Hz), 7.66 (IH, d,J=9. 9 Hz), 7.56 (IH, d,/=4.0 Hz), 7.33 (IH, m), 7.24 (IH, dd,J= 1.8, 8.1 Hz), 6.71 (IH, d,J =8.3 Hz), 4.53 (2H,t, J=8.8 Hz), 4.51 (2H, s), 3.83 (4H, m), 3.68 (4H, m), 3.41 (6H, s), 3.19 (2H,t, J=8.8 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C25H27N5O4S: 493.2; pronađeno: 494.3 (M+H).

Referentni primer 52

( 2- morfolin- 4- il- etil)- amid 5-[ 3-( 2, 3- dihidro- benzofuran- 5- ilmetil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3-b] piridazin- 6- il] tiofen- 2- karboksilne kiseline

[0283]

[0284]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCI3/CD3OD): 5 8.24 (IH, d,J=9.9 Hz), 7.89 (IH, d,J=3.8 Hz), 7.85 (IH, d,J=4.0 Hz), 7.76 (IH, d,J=4.0 Hz), 7.34 (IH, m), 7.21 (IH, dd,J= 1.8, 8.1 Hz), 6.70 (IH, d,J =8.4 Hz), 4.52 (2H,t, J=8.6 Hz), 4.51 (2H, s), 4.12 (2H, m), 3.91 (2H m), 3.84 (2H, t,J =6.0 Hz), 3.70 (2H, m), 3.48 (2H, t,J=6.0 Hz), 3.27 (2H, m), 3.20 (2H,t, J=8.6 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C25H26N6O3S: 490.2; pronađeno: 491.3 (M+H).

Referentni primer53

( 3- metil- butil)- amid 5-[ 3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 5- ilmetil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin-6- il] tiofen- 2- karboksilne kiseline

[0285]

[0286] Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCI3/CD3OD): 5 8.58 (IH, d,J=8.8 Hz), 8.28 (IH, d,J=8.8 Hz), 7.94 (IH, d,/=2.8

Hz), 7.76 (IH, d, J = 2.8 Hz), 7.36 (IH, m), 7.22 (IH, br d, J = 8.1 Hz), 6.70 (IH, d, J = 8.1

Hz), 4.59 (2H, s), 4.54 (2H, t,J=8.8 Hz), 4.55 (2H, m), 3.22 (2H,t, J=8.6 Hz), 1.71 (IH, septet,J =6.6 Hz), 1.56 (2H, m), 0.98 (6H,d, J=6.6 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C24H25N5O2S: 447.2; pronađeno: 448.3 (M+H).

Referentni primer 54

( l, l- Diokso- lX64iomorfolin- 44l)-[ 5-( 3- hinolin- 64lmetil-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b^

il)- tiofen- 2- il]- metanon

[0287]

[0288]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CD3OD): 8 9.24 (2H, m), 8.62 (IH,d, J =9.6 Hz), 8.53 (2H, m), 8.34 (2H, m), 8.16 (IH, dd,J=5.3, 8.3 Hz), 8.09 (IH,d, J=4.0 Hz), 7.58 (IH,d, J=4.0 Hz), 5.08 (2H, s), 4.19 (4H, m), 3.29 (4H, m). ESI-MS (m/z): Izračunato za C24H20N6O3S2: 504.1; pronađeno: 505.2 (M+H).

Referentni primer 55

( 4- Izopropil- piperazin- 14l)-[ 5-( 3- hinolin- 64lmetil-[ l, 2, 4] triazo

tiofen- 2- il]- metanon

[0289]

[0290]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CD3OD): 5 9.28 (2H, m), 8.67 (IH,d, J =9.9 Hz), 8.59 (IH,d, J =9. 9 Hz), 8.57 (IH, m), 8.38 (2H, m), 8.18 (IH, dd,J =5.4, 8.4 Hz), 8.11 (IH,d, J =4.0 Hz), 7.58 (IH, d,J= 4.0 Hz), 5.12 (2H, s), 4.64 (2H, m), 3.65 (5H, m), 3.33 (2H, m), 1.47 (6H,d, J=6.3 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C27H27N7OS: 497.2; pronađeno: 498.3 (M+H).

Referentni primer 56

( 4- Metansulfonil- piperazin- 14l)-[ 5-( 3- hinolin- 64lmetil-[ l£

il)- tiofen- 2- il]- metanon

[0291]

[0292] Jedinjenje iz naslova dobijeno je kako je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CD3OD): 8 9.26 (2H, m), 8.53 (2H, m), 8.37 (IH, m), 8.32 (2H, m), 8.13 (IH, m), 8.05 (2H, s), 7.53 (IH, m), 5.05 (2H, s), 3.91 (4H, m), 3.37 (4H, m), 2.92 (2H, m). ESI-MS (m/z): Izračunato za C25H23N7O3S2: 533.1; pronađeno: 534.2 (M+H).

Primer 57

6-[ Difluor-( 64iofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34l)- metil]- hinolin

[0293]

Primer 57: korak a

Metil estar okso- hinolin- 6- il- sirčetne kiseline

[0294]

[0295] U rastvor metil 6-hinolinacetata (1.2 g, 6 m mmol) u dioksanu (30 mL) dodat je selenijum dioksid (1.65 g, 15 mmol). Smeša je grejana do refluksa tokom 3 dana, ohlađena do sobne temperature, filtrirana kroz Celite i koncentrovana. Ostatak je prečišćen sa hromatografijom (metilen hlorid do 5% etil acetat u hloridu) do bele čvrste supstance (0.75 g, 58%). 'H-NMR (CDCh): 8 9.07-9.06 (IH,q, J =1.7, 2.5 Hz), 8.62-8.61 (IH, d,J=1.7 Hz), 8.32-8.31 (2H, m), 8.22-8.20 (IH,d, J= 8.8 Hz), 7.54-7.51 (IH, q, /= 8.8Hz), 4.05 (3H, s).

Primer 57: korak b

Metil estar difluor- hinolin- 6- il- sirćetne kiseline

[0296]

[0297]U rastvor metil estra oksa-hinolin-6-il-sirćetne kiseline (0.72 g, 3.3 mmol) u metilen hloridu (20 mL) dodat je (dimetilamino)sumpor trifluorid (mL, 41 mmol) kod 0 °C. Smeša je mešana kod sobne temperature tokom 2 dana, sipana na led, ekstrahovana sa metilen hloridom (50 mL x 3). Rastvor metilen hlorida je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen sa hromatografijom (0-10% etil acetat u metilen hloridu) dajući belu čvrstu supstancu (0.68 g, 87%). 'H-NMR (CDCh): 8 9.02-9.01 (IH, dd, /= 1.7, 2.5 Hz), 8.26-8.23(IH, d, J= 8.0 Hz),8.21-8.19(IH, d, J =8.8 Hz), 8.13-8.12 (IH, s), 7.91-7.89 (IH, dd, /= 2.0, 2.0 Hz), 7.51-7.48 (IH, q,J=4.0 Hz), 3.8 (3H, s).

Primer 57: korak c

Hidrazid difluor- hinolin- 6- il- sirćetne kiseline

[0298]

[0299]U rastvor metil acetata difluor-hinolin-6-sirćetne kiseline (670 mg, 2.83 mmol) u metanolu (20 mL) dodat je anhidrovani hidrazin (2 mL). Smeša je grejana do refluksa tokom 2h, ohlađena do sobne temperature, koncentrovana i osušena u visokom vakuumu dajući svetio narandžastu čvrstu supstancu (680 mg, 100%). 'H-NMR (DMSO): 8 9.02-9.01 (IH, dd,J= 1.7 Hz), 8.56-8.54 (IH,d, J= 9.3 Hz), 8.28 (IH, s), 8.17-8.15 (1 H,d, J= 8.8 Hz), 7.91-7.88 (IH, dd, / = 2.0, 2.0 Hz), 7.66-7.63 (IH,q, J=4.0 Hz).

Primer 57: korak d

6-[ Difluor-( 64iofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34l)- metil]- hino

[0300]

[0301]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1: korak b. 'H-NMR (CDCh): 8 9.00-8.98 (IH, dd,J=1.7, 4.0 Hz), 8.36 (IH, s), 8.29-8.22 (2H, m), 8.15-8.10 (2H, m), 7.68-7.67 (IH, dd,J=3.7, 1.2 Hz), 7.59-7.57 (2H, m), 7.50-7.46 (IH, q,J =4.2 Hz), 7.18-7.16 (IH, t,J=3.7 Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C19H11F2N5S: 397.07; pronađeno: 380.3(M+H).

Primer 58

3- fDifluor-( 4- metoksi- fenil)- metilJ- 64iofen- 24l- fl, 2, 4JM

[0302]

[0303]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 57. 'H-NMR (CDCh): 5 8.14-8.12 (IH,d, J= 9. 8Hz), 7.75-7.73 (2H,d, J=9.0 Hz), 7.69-7.86 (IH, dd,J =3.5, 1.0 Hz), 7.59-7.56 (2H, t), 7.19-7.17 (IH,d, J=3. 7 Hz), 7.00-6.97 (2H,d, J=9.0 Hz), 3.83 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C17H12F2N4OS: 358.07; pronađeno: 359.2 (M+H).

Primer 59

6-[ Difluor-( 6- piridin- 34l-[ l, 2, 4] triazolof4, 3- b] piridaz

[0304]

[03051Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 57. 'H-NMR (DMSO): 8 9.17 (IH, s), 8.97 (IH, d,J= 4.3 Hz), 8.77 (IH, m), 8.32-8.39 (4H, m), 8.23 (IH,d, J=8.9 Hz), 8.08 (IH, dd, 8.9, 2.0 Hz), 7.85 (IH,J= 9.8 Hz), 7.58 (IH, m). ESI-MS (m/z): Izračunato za C20H11F2N6: 374.11; pronađeno: 375.3 (M+H).

Primer 60

6-[ Difluor-( 6- piridin- 44l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34l)- mettt^

[0306]

[03071Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 57. 'H-NMR (DMSO): 8 9.27 (IH, d, J = 3.7 Hz), 9.03 (2H,d, J =5.7 Hz), 8.00 (IH, d, J = 5.8 Hz), 8.84

(IH, d, J = 9.8 Hz), 8.76 (IH, s), 8.46 (IH, d, J = 9.2 Hz), 8.38 (3H, m), 8.28 (IH, d, J = 9.1

Hz), 7.96 (IH, dd, 8.2, 4.7Hz). ESI-MS (m/z): Izračunato za C20H11F2N6: 374.11; pronađeno: 375.3 (M+H).

Primer 61

6-{ Difluor-[ 6-( l- metil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34l]- m

[0308]

Primer 61: korak a

6- jodohinolin

[0309]

[0310]Natrijum jodid (4.32 g, 28.8 mmol), bakar (I) jodid (137 mg, 0.72 mmol) i N,N-dimetil-cikloheksan-l,2-diamin (0.227 mL, 1.44 mmol) i 6-bromhinolin (3g, 14.4 mmol) u dioksanu (15 mL) su napunjeni u 25 mL epruvetu za mikrotalasnu. Epruveta je isprana sa azotom i zapečaćena čepom od Teflona i azot u mehurićima je propuštan u rastvor tokom 10 minuta, omogućavajući gasu da izađe kroz iglu. Posle uklanjanja igle, reakciona smeša je mešana na 110 °C tokom 15 časova. Zatim je zelena suspenzija ostavljena da dostigne sobnu temperaturu, sipana na ledenu vodu i ekstrahovana sa dihlormetanom. Organski sloj je sakupljen, osušen (MgS04), filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirova smeša je hromatografisana preko silikagela sa CH2CI2100% i C^Ck/MeOH : 95/5 do prinosa 3.56 g (97%) 6-jodohinolina u vidu svetio žute čvrste supstance. 'H-NMR (DMSO): 5 8.93 (IH, dd,J=1.5, 4.1 Hz), 8.47 (IH,d, J=2.0 Hz), 8.33 (IH, d,J=8.6 Hz), 8.02 (IH, dd,J=2.0, 8.6 Hz), 7.80 (IH,d, J=8.6 Hz), 7.56 (IH, dd,/=4.1, 8.6 Hz).

Primer 61: korak b

Etil estar difluor- hinolin- 6- il- kiseline

[0311]

[0312]U suspenziju 6-jodohinolina (10.2 g, 40 mmol) i bakra (0) (nano-prah, 5.59 g, 88 mmol) u suvom DMSO (97 mL) dodato je 8.93g (44 mmol) etil bromdifluoracetata. Reakciona smeša je mešana pod azotom na 55 °C tokom 15 časova. Reakcija je ostavljena da dostigne sobnu temperaturu i smeša je sipana preko rastvor amonijum hlorida. Dodat je etil acetat i dobivena smeša je filtrirana preko Celita. Organski sloj je sakupljen, osušen (MgS04), filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirova smeša je hromatografisana preko silikagela sa CH2CI2100% i CH2Cl2/MeOH : 95/5 do prinosa 5.07g etil estra difluorhinolin-6-il-sirćetne kiseline u vidu bledo žutog ulja (50%). 'H-NMR (CDCh): 5 9.1 (IH, m), 8.27 (IH, m), 8.20 (2H, m), 8.15 (IH, m), 7.91 (lH,m), 7.52 (lH,m), 4.33 (2H, q,/=7.1 Hz), 1.31 (3H,t, J=7.1 Hz).

Primer 61: korak c

Hidrazid difluor- hinolin- 6- il- sirćetne kiseline

[03131

[0314]U rastvor etil estra difluor-hinolin-6-il-sirćetne kiseline (5.5 g, 21.9 mmol) u metanolu (85 mL) dodat je hidrat hidrazin (5.3 mL, 109.5 mmol). Smeša je grejana na 45 °C tokom 10 min., ohlađena do sobne temperature, koncentrovana, i dodata u dihlormetan. Organski sloj je osušen preko MgS04, filtriran ikoncentrovan pod vakuumomdajući bledo narandžastu čvrstu supstancu (4.4 g, 85%).

Primer 61: korak d

3- hlor- 6-( l- metil- lH- pirazol- 4- il)- piridazin

[0315]

[0316]Balon je napunjen sa 3,6-dihlorpiridazinom (Aldrich, 23.91 g, 160.5 mmol), 1-Metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioksaborolan-2-il)-lH-pirazolom (20 g, 96 mmol), 2.0 M Na2C03(96 mL) i dioksan (65 mL). Azot u mehurićima je propuštan kroz reakciju tokom 60 sekundi zatim je usledilo dodavanje dihlorbis(trifenilfosfin)paladijum (0) (6.75 g, 9.6 mmol). Reakcija je grejana na 80 °C preko noći nakon čega je usledila vodena obrada korišćenjem AcOEt i rastvora K2CO3. Posle filtracije preko celita, organski sloj je osušen (MgS04) ikoncentrovan pod vakuumom.Prva frakcija jedinjenja (10.2 g) dobivena je kristalizacijom u rastvaraču (dihlormetan). Filtrat je prečišćen sa kolonskom hromatografijom (CH2C12100% i CEhCh/MeOH : 95/5). Ove dve frakcije su prikupljene i isprane sa diizopropiletrom dajući naslovljeno jedinjenje u vidu žute čvrste supstance (12.7 g, 68 %).

Primer 61: korak e

6-( Difluor-[ 6-( lmetil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34tf

[0317]

[0318]Smeša 3-hlor-6-(l-metil-lH-pirazol-4-il)-piridazin (korak d) (4.57g, 23.6 mmol) i difluor-hinolin-6-il-sirćetne kiseline hidrazid (korak c) (5.60 g, 23.6 mmol) u n-butanolu (125 mL) grejana je na 130 °C preko noći. Smeša je ohlađena do sobne temperature, nakon čega je usledila vodena obrada korišćenjem AcOEt i rastvora K2CO3. Organski sloj je osušen

(MgSO/t) i koncentrovanpod vakuumom.Ostatak je prečišćen fleš kolonskom hromatografijom (prva hromatografija: CH2CI2100% i ClrbCh/MeOH : 88/12 zatim sa drugom kolonom sa toluenom/iPrOH/NH4OH : 85/15/2) dajući naslovljeno jedinjenje (5.5 g, 62%). M.p= 199.7 °C.

Primer61: Sinteza hidrohloridne soli

[0319] U 1 g (2.65 mmol) 6-(difluor-[6-(lmetil-lH-pirazol-4-il)-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]-metil)-hinolina u MeOH (5 mL) kap po kap je dodato 2 mL HC1 u izopropanolu (5 do 6N). Talog je filtriran i osušen pod vakuumom do prinosa 1.01 g hidrohloridne soli (Ci9Hi3F2N7, 1.30 HC1, 0.60 H20). 'H NMR (DMSO) : 8 9.26 (IH, d,J=4.5 Hz), 9.16 (IH,d, J =8.0 Hz), 8.70 (IH, s), 8.58-8.48 (2 H, m), 8.27 (1 H, d, J = 9.1 Hz), 8.09 (1 H, s), 7.97 (1 H, dd, J = 8.3 Hz, 4.8 Hz),

7.85 (1 H, d,J =10 Hz) 3.93 (3 H, s). Anal (C19H13F2N7, 1.30 HC1, 0.60 H20) Izračunato C, 52.41; H, 3.59; N, 22.52. Pronađeno C, 52.19; H, 3.72; N, 22.53.

[0320] Alternativno, naslovno jedinjenje se može dobiti kako je opisano u Primeru 57. 'H-NMR (DMSO): 8 9.30 (IH, d, J = 4.1 Hz), 9.16 (IH, d, J = 8.4Hz), 8.80 (IH, s), 8.51 (3H, m), 8.33 (IH, d, J = 8.6 Hz), 8.09 (IH, s), 8.04 (IH, m), 7.86 (IH, d, J = 9.7 Hz), 3.93 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci9Hi3F2N7: 377.36; pronađeno: 378.4 (M+H).

Referentni primer 62

3-( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54lmetil)- 6-( l- metil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triaz

bjpiridazin

[0321]

[0322]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (DMSO): 8 8.78 (IH, s), 8.33 (IH, d, J = 8.6 Hz), 8.09 (IH, s), 7.86 (IH, d, J = 9.7 Hz), 7.08

(IH, d, J= 9.6 Hz), 6.87 (IH, m), 6.64(1H, d, J= 8.3 Hz), 5.11 (2H, s), 4.53 (2H, t, J = 8.8

Hz), 3.92 (3H, s), 3.20 (2H,t, J=8.6 Hz), ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci8Hi6N60: 332.14; pronađeno: 333.3 (M+H).

Referentni primer 63

6-[ 6-( l- Metil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lm 1- oksid

[0323]

[0324]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCh): 5 8.71 (IH, d, J= 8.8 Hz), 8.48 (IH, d,J=6.0 Hz), 8.06 (IH, d,J=9.5 Hz), 7.98 (IH, s), 7.90 (3H, m), 7.66 (IH,d, J=8.5 Hz), 7.30 (2H, m), 4.78 (2H, s), 4.01 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G9H15N7O: 357.13; pronađeno: 358.20 (M+H).

Referentni primer 64

6-( 6- Pirimidin- 54l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- hinolin

[0325]

[0326]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (DMSO): 5 9.50 (IH, s), 9.38 (IH, s), 8.86 (IH,dd, J=5.6, 1.8 Hz), 8.57 (IH,d, J=9.5 Hz), 8.33 (IH, d,J= 8.6 Hz), 8.07 (IH,d, J =9.7 Hz), 8.00 (2H, m), 7.84 (IH, dd, / = 8.9, 2.0 Hz), 7.71 (IH,q, J=4.4 Hz), 4.86 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C19H13N7: 339.12; pronađeno: 340.30 (M+H).

Referentni primer 65

6-( 6- Hinolin- 34l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil)- hinolin

[0327]

[0328] Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (DMSO): 8 9.60 (IH,d, J=2.2 Hz), 9.13 (IH, d,J=2.3 Hz), 8.86 (IH, d,J=4.1 Hz), 8.56 (IH,d, J =9.6 Hz), 8.35 (IH,d, J =8.6 Hz), 8.12 (3H, m), 8.04 (2H, m), 7.91 (2H, m), 7.74 (IH, t,J=8.1 Hz), 7.51 (IH, q,J=4.2 Hz), 4.89 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C24Hi6N6: 388.14; pronađeno: 389.30 (M+H).

Primer 66

6-[ Difluor-( 6- hinolin- 34l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34l)- metil]- hino

[03291

[0330]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 57. 'H-NMR (DMSO): 8 9.52 (IH, d,J =2.2 Hz), 9.01 (IH, d,J =4.2 Hz), 8.64 (IH, d,J =2.1 Hz), 8.36 (2H,d, J=S. 6Hz), 8.30 (2H, m), 8.23 (IH, m), 8.11 (IH, m), 7.95 (IH,d, J =7.6 Hz), 7.85 (2H, m), 7.69 (IH, m), 7.50 (IH, q,J=4.1 Hz). EST-MS (m/z): Izračunato za C24H14F2N6: 424.12; pronađeno: 425.30 (M+H).

Referentni primer 67

2- Hlor- 6-( 6- piridin- 34l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- hinolin

[0331]

Primer 67: korak a

Metil estar ( l- hidroksi- hinolin- 6- il)- sirćetne kiseline

[0332]

[0333] m-Perhlorbenzojeva kiselina (6.85g, 39.8 mmol) dodata je u rastvor komercijalno dostupnog metil estra hinolin-6-il-sirćetne kiseline (5.00 g, 24.8 mmol) u 1,2-dimetoksietanu kod sobne temperature i mešana tokom 2 časa. Dodata je voda i rastvor je podešen do baznog pH 9-10 sa zasićenim kalijum karbonatom i produkt je ekstrahovan sa etil acetatom dajući kvantitativni prinos metil estra (l-hidroksi-hinolin-6-il)-sirćetne kiseline. 'H NMR (400 MHz, CDCh) 8 7.99 (d, IH, J=8.4Hz), 7.93 (d, IH, J=8.4Hz), 7.65 (m, IH), 7.60 (m, IH), 7.32 (d, IH, J=8.8Hz), 7.19 (s, IH), 3.74 (s, 2H), 3.65 (s, 3H).

Primer 67: korak b

Metil estar ( 2- hlor- hinolin- 6- il)- sirćetne kiseline

[0334]

[0335] Metil estar (l-hidroksi-hinolin-6-il)-sirćetne kiseline (l.Og, 4.61 mmol) refluksovan je tokom 25 minuta u fosfornom oksihloridu (30 mL). Višak fosfornog oksihlorida je uparen, dodat je zasićeni natrijum bikarbonat i sirova smeša je ekstrahovana nekoliko puta sa etil acetatom. Produkt je prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silikagelu u heksanu: etil acetatu (1:1) dajući 0.219g (20%) metil estra (2-hlor-hinolin-6-il)-sirćetne kiseline. 'H NMR (400 MHz, CDCh) 8 7.99 (d, IH, J=8.4Hz), 7.93 (d, IH, J=8.8Hz), 7.63 (m, IH), 7.60 (dd, IH, J=2.0, 8.4Hz), 7.30 (d, IH, J=8.8Hz), 3.73 (s, 2H), 3.64 (s, 3H).

Primer 67: korak c

Hidrazid ( 2- Hlor- hinolin- 6- il)- sirćetne kiseline

[0336]

[0337]Metil estar (2-Hlor-hinolin-6-il)-sirćetne kiseline (0.160g, 0.679 mmol), hidrazin (0.218g, 6.79 mmol) i metanol (3mL) su mešani kod sobne temperature. Reakcija je uparena dajući hidrazid (2-hlor-hinolin-6-il)-sirćetne kiseline. Ovo jedinjenje nije prečišćeno i koristi se direktno u sledećem koraku. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 9.39 (m, IH), 8.43 (d, IH, J=9.2Hz), 7.91 (m, 2H), 7.75 (m, IH), 7.58 (m, IH), 4.30 (bs, 2H), 3.57 (s, 2H).

Primer 67: korak d

[0338]

[0339] Hidrazid (2-hlor-hinolin-6-il)-sirćetne kiseline (0.030 g, 0.127 mmol) i 3-hlor-6-piridin-3-il-piridazin (0.024 g, 0.127 mmol) grejani su kod refluksa u butanolu (0.5 mL) kroz nekoliko časova. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je prečišćen pomoću reverzno fazne HPLC na Cl8 koloni eluiranjem sa acetonitrilom u vodi (0.1% TFA) dajući 0.017 g (35%) 2-hlor-6-(6-piridin-3-il-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-ilmetil)-hinolin. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.38 (m, IH), 8.88 (d, IH, J=5.2Hz), 8.85 (m, IH), 8.42 (d, IH, J=9.6Hz), 8.31 (d, IH, J=8.8Hz), 8.06 (s, IH), 8.03 (m, IH), 7.92 (m, 3H), 7.50 (d, IH, J=8.8Hz), 4.93 (s, 2H). Masena spektroskopija (LCMS, ESI pos.): Izračunato za C20H13CIN6; pronađeno: 373.3, 375.3 (M+H).

Referentni primer 68

3-( 4- Metoksi- benzil)- 6-( 6- piridin- 34l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34^

hinazolin- 4- on

[0340]

Primer 68: korak a

6- Jodo- 3H- hinazolin- 4- on

[0341]

[0342] Rastvor 2-amino-5-jodo-benzojeve kiseline (5.00g, 19.0 mmol) i formamida (3.43g, 76.0 mmol) grejan je na 150°C tokom 4 časa i zatim je ohlađen do sobne temperature. Dodata je voda i rastvor je filtriran i ispran sa vodom nekoliko puta dajući 3.6 g (70%) 6-jodo-lH-hinazolin-4-ona. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 12.39 (s, IH), 8.37 (s, IH), 8.11 (s, IH), 8.09 (dd, IH, J=2.0, 8.8Hz), 7.45 (d, IH, J=8.8Hz).

Primer 68: korak b

6- Jodo- 3-( 4- metoksi- benzil)- 3H- hinazolin- 4- on

[0343]

[0344] 6-Jodo-lH-hinazolin-4-on (0.50g, 1.84 mmol) dodat je u rastvor natrijum hidrida (0.110 g, 2.76 mmol) u THF (lOmL) i mešan kod sobne temperature tokom jednog časa. dodat je l-hlormetil-4-metoksi-benzen (0.345 g, 2.21 mmol) i reakcija je mešana tokom nekoliko časova. Dodata je voda i sirovi produkt je ekstrahovan iz etil acetata i uparen pod vakuumom. Produkt je prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silikagelu u heksanu: etil acetatu (4:1) dajući 0.69 g (96%) 6-jodo-3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-ona. 'H NMR (400 MHz, CDCh) 8 8.57 (d, IH, J=2.0Hz), 8.01 (s, IH), 7.90 (dd, IH, J=2.0, 8.8Hz), 7.33 (d, IH, J=8.8Hz), 7.22 (d, 2H, J=8.0Hz), 6.80 (d, 2H, J=8.8Hz), 5.03 (s, 2H), 3.70 (s, 3H).

Primer 68: korak c

Dietil estar 2-[ 3-( 4- metoksi- benzil)- 4- okso- 3, 4- dihidro- hinazolin- 6- il]- malonske kiseline

[0345]

[0346]Rastvor 6-jodo-3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on (0.69g, 1.75 mmol), dietil estra malonske kiseline (0.56g, 3.49 mmol), bakar jodida (0.016g, 0.090 mmol), bifenil-2-ola (0.029g, 0.175 mmol) i cezijum karbonata (0.86g, 2.63 mmol) u THF (lOmL) grejan je na 70°C u zatvorenoj epruveti tokom 24 časa. Rastvor je zatim ohlađen na sobnu temperaturu, dodat je zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i sirovi produkt je ekstrahovan iz etil acetata. Produkt je prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silikagelu u heksanu: etil acetatu (1:1) dajući 0.51 g (69%) dietil estra 2-[3-(4-metoksi-benzil)-4-okso-3,4-dihidro-hinazolin-6-il]-malonske kiseline. 'H NMR (400 MHz, CDCh) 8 8.21 (m, IH), 8.05 (s, IH), 7.80 (dd, IH, J=2.0, 8.4Hz), 7.62 (d, IH, J=8.4Hz), 7.22 (d, 2H, J=8.8Hz), 6.78 (d, 2H, J=8.8Hz), 5.05 (s, 2H),4.69 (s, IH), 4.15 (m, 4H), 3.70 (s, 3H), 1.19 (m, 6H).

Primer 68: korak d

Metil estar l3-( 4- metoksi- benzil)- 4- okso- 3, 4- dihidro- hinazolin- 6- il]- sirćetne kiseline

[0347]

[0348]Natrijum hidroksid [2N] (0.59mL) je dodat u rastvor dietil estra 2-[3-(4-metoksi-benzil)-4-okso-3,4-dihidro-hinazolin-6-il]-malonske kiseline (0.250g, 0.590 mmol) u metanolu (5 mL) i mešan kod sobne temperature kroz nekoliko časova. Sirova reakciona smeša je zatim uparenapod vakuumom,dodato je IN HC1 i produkt je ekstrahovan sa etil acetatom dajući 0.141g metil estra [3-(4-metoksi-benzil)-4-okso-3,4-dihidro-hinazolin-6-il]-sirćetne kiseline. Ovo je rastvoreno u smeši toluen/metanol [8/1] (3 mL) i dodat je trimetilsilildiazometan [2.OM] (0.22 mL) kod sobne temperature i mešano do prestanka penušanja. Reakcija je zatim uparenapod vakuumomi prečišćena pomoću kolonske hromatografije na silikagelu u heksanu: etil acetatu (1:1) dajući 0.119 g (60%) metil estra [3-(4-metoksi-benzil)-4-okso-3,4-dihidro-hinazolin-6-il]-sirćetne kiseline. Masena spektroskopija (LCMS, ESI pos.): Izračunato za G9H18N2O4; pronađeno: 339.1, 340.1

(M+H).

Primer 68: korak e

Hidrazid [ 3-( 4- metoksi- benzil)- 4- okso- 3, 4- dihidro- hinazolin- 6- il]- sirćetne kiseline

[0349]

[0350] Metil estar [3-(4-metoksi-benzil)-4-okso-3,4-dihidro-hinazolin-6-il]-sirćetne kiseline (0.050g, 0.148 mmol) i hidrazin (0.047g, 0.148 mmol) mešani su na 50°C u metanolu (5mL) kroz nekoliko časova. Reakcija je zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana dajući 0.030 g (60%) hidrazida [3-(4-metoksi-benzil)-4-okso-3,4-dihidrohinazolin-6-il]-sirćetne kiseline. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 10.09 (s, IH), 9.33 (s, IH), 8.85 (m, IH), 8.53 (d, IH, J=2.0, 8.4Hz), 8.42 (d, IH, J=8.4Hz), 8.14 (d, 2H, J=8.4Hz), 7.70 (d, 2H, J=8.4Hz), 5.93 (s, 2H), 5.04 (bs, 2H), 4.52 (s, 3H), 4.31 (s, 2H).

Primer 68: korak f

3-( 4- Metoksi- benzil)- 6-( 6- piridin- 34l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- 3

hinazolin- 4- on

[0351]

[0352]Hidrazid [3-(4-metoksi-benzil)-4-okso-3,4-dihidro-hinazolin-6-il]-sirćetne kiseline (0.024 g, 0.071 mmol) i 3-hlor-6-piridin-3-il-piridazin (0.012 g, 0.063 mmol) grejani su na 130°C u butanolu (0.5mL) kroz nekoliko časova. Jedinjenje je prečišćeno pomoću reverzno fazne HPLC na C18 koloni eluiranjem sa acetonitrilom u vodi (0.1% TFA) dajući 0.016 g (53%) 3-(4-metoksi-benzil)-6-(6-piridin-3-il[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-ilmetil)-3H hinazolin-4-on. 'H NMR (400 MHz, CDCh) 5 9.08 (m, IH), 8.71 (dd, IH, J=4.8, 1.6Hz), 8.39 (m, IH), 8.25 (m, IH, 8.13 (d, IH, J=9.6Hz), 7.99 (s, IH), 7.77 (dd, IH, J=8.4, 2.0Hz), 7.58 (d, IH, J=8.4Hz), 7.48 (d, IH, J=9.6Hz), 7.41 (m, IH), 7.21 (d, 2H, J=8.4Hz), 6.77 (d, 2H, J=8.8Hz), 5.05 (s, 2H), 5.05 (s, 2H), 4.71 (s, 2H), 3.70 (s, 3H). Masena spektroskopija (LCMS, ESI pos.): Izračunato za C27H21N7O2; pronađeno: 476.1, 477.2 (M+H).

Referentni primer 69

6-( 6- Piridin- 34l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- 3H- hinazolin- 4- o

[0353]

[0354] 3-(4-Metoksi-benzil)-6-(6-piridin-3-il-[l,2,4]triazolo[43-b]piridazin-3-ilmetil)-3H hinazolin-4-on (0.010 mg, 0.021 mmol) je tretiran sa trifluorsirćetnom kiselinom (1 mL) i anisolom (0.1 mL) i grejan na 90°C tokom 18 časova. Jedinjenje je prečišćeno pomoću reverzno fazne HPLC na Cl 8 koloni eluiranjem sa acetonitrilom u vodi (0.1% TFA) dajući 0.0026 g (35%) 6-(6-piridin-3-il-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-ilmetil)-3H-hinazolin-4-on.

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 9.32 (m, IH), 8.79 (m, IH), 8.53 (m, 2H), 8.20 (m, IH), 8.10 (s, IH), 8.03 (d, IH, J=10.0Hz), 7.89 (d, IH, J=8.4Hz), 7.66 (m, 2H), 4.80 (s, 2H). Masena spektroskopija (LCMS, ESI pos.): Izračunato za C19H13N7O; pronađeno: 356.3, 357.3 (M+H).

Referentni primer 70

6-[ 6-( l- Metil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil]^

[0355]

Primer 70: korak a

Dietil estar 2- hinazolin- 6- il- malonske kiseline

[0356]

[0357]Rastvor 6-jodo-hinazolina (0.500g, 1.95 mmol), dietil estra malonske kiseline (0.93g, 5.81 mmol), bakar jodida (0.019g, 0.097 mmol), bifenil-2-ol (0.033g, 0.195 mmol) i cezijum karbonata (0.953 g, 2.93 mmol) u THF (5mL) grejan je na 70°C u zatvorenoj epruveti tokom 24 časa. Rastvor je zatim ohlađen na sobnu temperaturu, dodat je zasićeni amonijum hlorid i sirovi produkt je ekstrahovan iz etil acetata. Produkt je prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silikagelu u heksanu: etil acetatu (1:1) dajući 0.39 g (80%) dietil estra 2-hinazolin-6-il-malonske kiseline. 'H NMR (400 MHz, CDCh) 8 9.37 (bs, 2H), 7.96 (m, 3H), 4.78 (s, IH), 4.18 (m, 4H), 1.19 (m, 6H).

Primer 70: korak b

Hinazolin- 6- il- sirćetne kiseline

[0358]

[0359]Natrijum hidroksid [2M] (0.77 mL) dodat je u rastvor dietil estra 2-hinazolin-6-il-malonske kiseline (0.20g, 0.77 mmol) u metanolu (10 mL) i mešan kod sobne temperature kroz nekoliko časova. Reakcija je uparena, dodat je etil acetat i zatim je dodato IN HC1 kap po kap sve dok jedinjenje nije prešlo u organski sloj. Organski sloj je uparen dajući 0.123 g (85%) hinazolin-6-il-sirćetne kiseline. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 9.56 (s, IH), 9.26 (s, IH), 7.95 (m, 3H), 3.85 (s, 2H).

Primer 70: korak c

Hidrazid hinazolin- 6- il- sirćetne kiseline

[0360]

[0361]Rastvor hinazolin-6-il-sirćetne kiseline (0.025g, 0.133 mmol), tionil hlorida (O.lmL) i metanola (2mL) grejan je na 60°C tokom 6 časova. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i uparena nekoliko puta sa dihlormetanom dajući metil estar hinazolin-6-il-sirćetne kiseline. Ovo je rastvoreno u rastvoru metanola (2mL) i hidrazina (0.06lmL) i mešano kod sobne temperature kroz nekoliko časova. Reakcija je uparena pod vakuumom dajući hidrazid hinazolin-6-il-sirćetne kiseline. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 9.56 (s, IH), 9.33 (bs, IH), 9.26 (s, IH), 7.96 (m, 3H), 4.25 (bs, 2H), 3.84 (s, 2H).

Primer70: korak d

6-[ 6-( l- Metil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 34)] piridazin- 3ilmetil] 4tm^

[0362]

[0363] Hidrazid hinazolin-6-il-sirćetne kiseline (0.032 g, 0.158 mmol) i 3-hlor-6-(l-metil-lH-pirazol-4-il)-piridazin (0.031 g, 0.158 mmol) grejani su na 165°C u butanolu (2 mL) tokom pet časova. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, uparena pod vakuumom i prečišćena pomoću kolonske hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 5% metanolom u dihlormetanu dajući 0.0031 g (7%) 6-[6-(l-metil-lH-pirazol-4-il)-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-ilmetil]-hinazolina. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8.45 (s, IH), 8.29 (s, IH), 8.06 (d, 2H, J=9.6Hz), 7.60 (d, 2H, J=9.6Hz), 7.55 (m, IH), 7.17 (d, IH, J=8.0Hz), 6.08 (s, IH), 4.58 (m, 2H), 3.89 (s, 3H). Masena spektroskopija (LCMS, ESI pos.): Izračunato za Ci8Hi4N8; pronađeno: 343.3 (M+H).

Referentni primer 71

6-[ 6-( l- Metil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil]- M

[0364]

Primer 71: korak a

6- Jodo4tinoksalin

[0365]

[0366] Rastvor 4-jodo-benzen-l,2-diamina (0.46 g, 1.96 mmol), etandiala [40% u vodi] (2.25 mL), sirćetne kiseline (1 mL) i etanola (20 mL) grejani su na 100°C kroz nekoliko časova i zatim ohlađeni do sobne temperature. Dodata je voda i sirovi produkt je ekstrahovan sa etil acetatom. Produkt je prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silikagelu sa heksanom: etil acetatom (1:1) dajući 0.323 g (64%) 6-jodo-hinoksalina. 'H NMR (400 MHz, CDCh) 8 8.77 (dd, 2H, J=2.0, 8.8Hz), 8.46 (d, IH, 2.0Hz), 7.96 (dd, IH, J=2.0, 8.8Hz), 7.75 (d, IH, J=8.8Hz).

Primer 71: korak b

Hinoksalin- 6- il- sirćetna kiselina

[0367]

[0368]Rastvor 6-jodo-hinoksalina (0.323 g, 1.26 mmol), dietil estra malonske kiseline (0.404 g, 2.52 mmol), bakar jodida (0.012 g, 0.063 mmol), bifenil-2-ola (0.021g, 0.126 mmol) i cezijum karbonata (0.616 g, 1.89 mmol) u THF (5mL) grejan je na 70°C u zatvorenoj epruveti tokom 24 časa. Rastvor je zatim ohlađen na sobnu temperaturu, dodata je voda i sirovi produkt je ekstrahovan iz etil acetata. Produkt je prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silikagelu u heksanu: etil acetatu (1:1) dajući dietil estar 2-hinoksalin-6-il-malonske kiseline.

[0369] Dietil estar 2-hinoksalin-6-il-malonske kiseline (0.066g, 0.229 mmol) dodat je u rastvor natrijum hidroksida [2N] (0.229 mL) u metanolu (2mL) i mešan tokom nekoliko časova kod sobne temperature. Reakcija je zatim uparena pod vakuumom, dodato je IN HC1 i produkt je ekstrahovan sa etil acetatom dajući 0.030 g (70%) hinoksalin-6-il-sirćetnu kiselinu. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 12.6 (bs, IH), 8.93 (dd, 2H, J=2.0, 6.0Hz), 8.05 (d, IH, 8.8Hz), 7.99 (m, IH), 7.79 (dd, IH, J=2.0, 8.8Hz), 3.89 (s, 2H).

Primer 71: korak c

Hidrazid hinoksalin- 6- il- sirćetne kiseline

[0370]

[0371]Trimetilsilildiazometan [2.OM u heksanima] (0.08mL) dodat je kap po kap u rastvor hinoksalin-6-il-sirćetne kiseline (0.030 g, 0.159 mmol) u toluenu/metanolu [8/1] (0.5mL) i mešan do prestanka penušanja. Reakcija je zatim uparena i sirovi produkt je prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silikagelu u heksanu: etil acetatu (1:1) dajući 0.013g metil estra hinoksalin-6-il-sirćetne kiseline. Ovo je dodato u rastvor hidrazina (0.1 mL) u metanolu i mešano kod sobne temperature preko noći. Reakciona smeša je uparena pod vakuumom dajući 0.019 g hidrazida hinoksalin-6-il-sirćetne kiseline. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 9.77 (bs, IH), 9.35 (m, 2H), 8.46 (d, IH, J=8.8Hz), 8.39 (m, IH), 8.19 (dd, IH, .1=2.0, 8.8Hz), 4.68 (bs, 2H), 4.07 (s, 2H).

Primer 71: korak d

6-[ 6-( l- Metil- lH- pirazol- 44l)- ll, 2, 4] triazolol4, 3- b] piridazin- 3ilmetil]- hin^

[0372]

[0373]Hidrazid hinoksalin-6-il-sirćetna kiselina (0.019 g, 0.094 mmol) i 3-hlor-6-(l-metil-lH-pirazol-4-il)-piridazin (0.018 g, 0.094 mmol) grejani su na 125°C u butanolu (2 mL) tokom četiri časa. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu, uparena pod vakuumom i prečišćena pomoću kolonske hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 5% metanolom u dihlormetanu dajući 0.0029 g (15%) 6-[6-(l-metil-lH-pirazol-4-il)-[l,2,4]triazolo[4,3b]piridazin-3-ilmetil]-hinoksalina. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8.77 (m, 2H), 8.16 (s, IH), 8.09 (m, IH), 8.07 (d, IH, J=10.0Hz), 8.00 (m, 2H), 7.85 (dd, IH, J=8.8, 2.0Hz), 7.56 (d, IH, J=9.6Hz), 4.79 (s, 2H), 3.94 (s, 3H). Masena spektroskopija (LCMS, ESI pos.): Izračunato za C18H14N8; pronađeno: 343.3, 344.3 (M+H).

Referentni primer 72

6-( 6- Benzo[ b] tiofen- 24l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- hinolin

[0374]

[0375]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCh): 5 9.20-9.13 (IH, dd), 8.69-8.67 (IH, d, J = 8.6 Hz), 8.50-8.48 (IH, d, J = 8.5 Hz), 8.26-8.23 (2H, m), 8.17-8.15 (IH, d, J = 9.8 Hz), 7.95-7.93 (IH, d, J = 7.3 Hz), 7.80-7.77 (IH, q, J = 5.0 Hz), 7.69-7.67 (IH, d, J = 9.6 Hz), 7.51-7.42 (2H, m), 4.90 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C23H15N5S: 393.47; pronađeno: 394.3.

Referentni primer73

6-[ 6-( lH- Pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3ilmetil]- hinolin- l- ol

[0376]

[0377]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCh): 5 8.92-8.90 (IH, dd), 8.54-8.53 (IH, d, J = 7.4 Hz), 8.16-8.14 (IH, d, J = 8.8 Hz), 8.06 (IH, m), 8.02-7.97 (2H, m), 7.66-7.60 (2H, m), 7.53-7.48(2H, m), 7.08-7.05 (IH, m), 7.51-7.42 (2H, m), 4.72 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci8Hi3N70: 343.34; pronađeno: 345.2.

Referentni primer 74

6-[ 6-( 5- Metil- 4, 5- dihidro- tiofen- 24l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lm

[0378]

[0379]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCh): 8 9.07-8.98 (2H, m), 8.27 (IH, s), 8.16-7.98 (3H, m), 7.75-7.73 (IH, d, J = 8.8 Hz), 7.60-7.59 (IH, d, J = 3.8 Hz), 6.79-6.77 (IH, m), 4.06-4.02 (IH, t, J = 6.5 Hz), 3.91 (IH, s), 3.21-3.20 (3H, m), 2.45 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C20H17N5S: 359.12; pronađeno: 358.2.

Referentni primer 75

3-[ 4-( 3- Hinolin- 64lmetil-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] pirid^

[0380]

[0381]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCh): 8 8.94-8.92 (IH, d, J = 6.3 Hz), 8.61-8.59 (IH, d, J = 8.9 Hz), 8.20-8.17 (IH, d, J = 8.3Hz), 8.05-7.93 (5H, m), 7.71-7.67 (IH, m), 7.36-7.33 (IH, d, J = 9.6 Hz), 4.72 (2H, s), 4.22-4.20 (2H, m), 3.45-3.42 (2H, m), 1.95-1.95 (2H, m). ESI-MS (m/z): Izračunato za C21H19N7O: 385.17; pronađeno: 386.31.

Referentni primer 76

6-[ 6-( 1H- Pirazol- 44l)-[ 1, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3- ilmetil]- hinolin

[0382]

[0383]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCh): 5 9.05-9.02 (IH, d, J = 6.3 Hz), 8.60-8.57 (IH, d, J = 7.5 Hz), 8.27-8.06 (4H, m), 7.75-7.73 (IH, d, J = 9.0 Hz), 7.59-7.56 (IH, d, J = 9.8 Hz), 7.50-7.48 (IH, d, J = 9.8 Hz), 4.85 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci8Hi3N7: 327.12; pronađeno: 328.32.

Referentni primer 77

6- f6-( 5- Hlor- 4, 5- dihidro- tiofen- 24l)- fl, 2, 4Jtriazolof4, 3- bJpiridaz

[0384]

[0385]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCh): 5 9.18-9.11 (2H, m), 8.38 (IH, s), 8.28-8.22 (3H, m), 8.06-8.04 (IH, q, J = 5.3 Hz), 7.91-7.89 (IH, d, J = 9.0 Hz), 7.80-7.79 (IH, d, J = 4.2 Hz), 7.14-7.13(1H, d, J = 4.0 Hz), 4.94 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G9H14CIN5S: 377.05; pronađeno: 378.3.

Referentni primer 78

6-[ 6-( 3H- Benzotriazol- 54l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lm

[0386]

[0387]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCh): 5 9.02 (IH, s), 8.61-8.60 (IH, d, J = 3.7 Hz), 8.22-8.19 (IH, d, J = 8.0 Hz), 8.13-8.11 (IH, d, J = 9.6 Hz), 7.78 (IH, s), 7.70-7.68 (IH, d, J = 8.5 Hz), 7.55-7.57(lH, d, J = 9.6 Hz), 7.47-7.44 (IH, q, J = 4.5 Hz), 7.40-7.37 (IH, d, J = 10.4 Hz), 4.67 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C21H14N8: 378.13; pronađeno: 379.3.

Referentni primer 79

6-[ 6-( 2- Metil- 3H- benzoimidazol- 54l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] pirid^

[0388]

[0389]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 47. 'H-NMR (CDCh): 8 9.15 (IH, s), 8.76-75 (IH, d, J = 3.7 Hz), 8.45-8.42 (IH, d, J = 8.0 Hz), 8.30-8.27 (IH, d, J = 9.6 Hz), 7.84-7.81 (IH, d, J = 9.6 Hz), 7.69 (IH, s), 7.54-7.52(lH, d, J = 9.6 Hz), 7.43-7.40 (IH, d, J = 8.3 Hz), 4.78 (2H, s), 2.66 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C23H17N7: 391.15; pronađeno: 392.3.

Referentni primer 80

6-[ 6-( lH- Indol- 24l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil]- hinolin

[03901

[0391]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (DMSO-de): 8 11.94 (IH, s), 9.21 (IH, m), 9.04 (IH, d,J= 8.9 Hz), 8.43 (IH, s), 8.40 (IH,

d, J= 9.8 Hz), 8.32 (IH, d, J= 8.5 Hz), 8.26 (IH, m), 8.04 (IH, d, J=9J Hz), 8.00 (IH, dd,

/ = 8.4 Hz, 5.0 Hz), 7.67 (IH, d, J= 7.8 Hz), 7.59 (IH, d, /= 8.1 Hz), 7.53 (IH, d, J = 1.2

Hz), 7.27 (IH, t,J=7.6 Hz), 7.09 (IH,/, J=7.7 Hz), 4.97 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C23H16N6: 376.1; pronađeno: 377.3 (M+H).

Referentni primer 81

6-( 6- Benzofuran- 2il-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3ilmetil)- hinolin

[0392]

[0393]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (DMSO-de): 5 9.07 (IH, m), 8.75 (IH, m), 8.49 (IH,d, J= 9.9 Hz), 8.17 (2H, m), 8.06 (2H, m), 8.00 (IH, d, J= 9.9 Hz), 7.80 (3H, m), 7.51 (IH, m), 7.38 (IH, t,J=7.1 Hz), 4.88 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C23H15N5O: 377.1; pronađeno: 378.3 (M+H).

Referentni primer 82

3-( 2- Metil- benzotiazol- 6- ilmetil)- 6-( l- metil- lH- pirazol- 4- il)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0394]

[0395] Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H NMR (CDCI3/CD3OD) S 8.07 (IH,d, J =9.8 Hz), 8.03 (2H, m), 7.90 (IH, m), 7.86 (IH,d, J=8.3 Hz), 7.55 (IH, dd,/= 8.3 Hz, 1.8 Hz), 7.39 (IH,d, J =9.7 Hz), 4.70 (2H, s), 4.02 (3H, s), 2.81 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za Ci8Hi5N7S: 361.1; pronađeno: 362.3 (M+H).

Referentni primer 83

5-( 3- Hinolin- 6ilmetil-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 6il)- nikotino^

[0396]

[0397]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H NMR (CDCI3/CD3OD) 5 9.39 (IH,d, J =2.2 Hz), 9.05 (IH, d,J=1.8 Hz), 8.83 (IH, dd,/=4.3 Hz, 1.5 Hz), 8.58 (IH,t, J =2.0 Hz), 8.34 (IH,d, J =9.6 Hz), 8.21 (IH, m), 8.05 (IH,d, J =8.8 Hz), 7.93 (IH, d,J =1.7 Hz), 7.80 (IH, dd,J= 8.9 Hz, 2.0 Hz), 7.71 (IH, d,J=9.9 Hz), 7.47(IH,dd,J=8.3 Hz, 4.5 Hz), 4.88 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C21H13N7: 363.1; pronađeno: 364.3 (M+H).

Referentni primer 84

6-[ 6-( lH- Indol- 54l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil]- hinolin

[0398]

[0399]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (DMSO-de): 5 11.50 (IH, s), 9.25 (IH, d, J= 4.0 Hz), 9.12 (IH,d, J=8.3 Hz), 8.39 (4H, m), 8.23 (IH, dd,J= 8.8 Hz, 1.9 Hz), 8.08 (IH,d, J=9.9 Hz), 8.04 (IH, dd,J= 8.3 Hz, 5.2 Hz),

7.87 (IH, dd, J = 8.6 Hz, 1.5 Hz), 7.55 (IH, d, J = 8.6 Hz), 7.47 (IH, t, J = 2.7 Hz), 6.58

(IH, s), 4.94 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C23Hi6N6: 376.1; pronađeno: 377.3

(M+H).

Referentni primer 85

6-[ 6-( l- Metil- lH4ndol- 54l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 3ilmetil]- hin^

[0400]

[0401]Produkt iz prethodnog primera (0.074 g, 0.197 mmol) je rastvoren u suvom N,N-dimetilformamidu (10 mL) pod argonom, tretiran sa 60% natrijum hidridom u mineralnom ulju (0.014 g, 0.350 mmol), i mešan na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta. Reakcija je tretirana sa jodometanom (0.020 mL, 0.320 mmol) putem šprica, te je mešana narednih 18 h, razblažena sa vodom, i ekstrahovana tri puta sa dihlormetanom i dva puta etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2S04, filtriran, i filtrat je uparenpod vakuumomdajući čvrstu supstancu boje jantara. Ovo je rastvoreno u vrućem anhidrovanom acetonitrilu (10 mL), tretirano kap po kap sa 0.53 N HCl/MeCN (0.75 mL, 0.40 mmol) uz mućkanje, i ohlađeno na 0°C. Suspenzija je filtrirana preko finog sinterovanog stakla i čvrste supstance su isprane dva puta sa etrom i osušene pod visokim vakuumom dajući naslovno jedinjenje u vidu narandžaste čvrste supstance. 'H-NMR (DMSO-de): 5 9.24 (IH, d,J=4.1 Hz), 9.10 (IH, d,J=8.3 Hz), 8.38 (4H, m), 8.22 (IH,d, J

= 8.6 Hz), 8.09 (IH, d, J= 10.1 Hz), 8.04 (IH, m), 7.93 (IH, d, J = 8.5 Hz), 7.61 (IH, d, J =

8.8 Hz), 7.45 (IH, s), 6.58 (IH, s), 4.94 (2H, s), 3.85 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C24Hi8N6: 390.1; pronađeno: 391.3 (M+H).

Primer 86

6-{ Difluor-[ 6-( 2- metil- piridin- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridadn- 34l]- m

[0402]

[0403] Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (DMSO-de): 8 9.15 (IH, bs), 8.86 (2H, m), 8.80 (IH, d,J=10.6 Hz), 8.67 (IH, s), 8.33 (IH,d, J=7.9 Hz), 8.28 (IH,d, J=10.1 Hz), 8.20 (3H, m), 7.83 (IH, m), 2.75 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C21H14N6F2: 388.4; pronađeno: 389.3 (M+H). Alternativno, mogu da se koriste Peppsi-iPr katalizator sa KOtBu i izopropilni alkohol umesto Pd(PPh3)4sa Na2C03u dioksanu.

Referentni primer 87

6-[ 6-( 2- Metil- piridin- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil]- hinoU

[0404]

[0405]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (CDCh): 8 8.88 (IH, dd,J= 4.3 Hz, 1.8 Hz), 8.70 (IH,d, J= 4.6 Hz), 8.21 (IH, d,J =9.5

Hz), 8.11 (IH, m), 8.08 (IH, d, J= 8.5 Hz), 7.89 (IH, d, / = 1.8 Hz), 7.84 (IH, dd, J= 8.6

Hz, 2.0 Hz), 7.61 (IH, s), 7.58 (IH, m), 7.52 (IH,d, J=9.8 Hz), 7.39 (IH, dd,J=8.3 Hz, 4.3 Hz), 4.86 (2H, s), 2.68 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C2iHieNe: 352.1; pronađeno: 353.3 (M+H).

Referentni primer 88

5-( 3- Hinolin- 64lmetil-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 64l)- piridin- 24lam

[04061

[0407]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (DMSO-de): 8 8.85 (IH, dd,J=4.4 Hz, 1.8 Hz), 8.68 (IH,d, J =2.0 Hz), 8.32 (IH, m), 8.30 (IH, d,J =9.9 Hz), 8.09 (IH, dd,J =8.8 Hz, 2.6 Hz), 7.97 (2H, m), 7.86 (IH,d, J =9.9 Hz), 7.80 (IH, dd,J=8.6 Hz, 2.1 Hz), 7.50 (IH, dd, /= 8.3 Hz, 4.1 Hz), 6.64 (2H, bs), 6.57 (IH,d, J=8.6 Hz), 4.77 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C20H15N7: 353.1; pronađeno: 354.3

(M+H).

Referentni primer 89

6-/ 6-( 6Metoksipiridin- 34l)- ll, 2, 4Jtriazolol4, 3- bJpiridazin- 3ilm

[0408]

[0409]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H NMR (CDCI3/CD3OD) 8 8.87 (IH, dd, /= 4.0 Hz, 1.8 Hz), 8.74 (IH,d, J=2.0 Hz), 8.15 (IH, d,J =9.9 Hz), 8.14 (IH, dd,J= 8.8 Hz, 2.5 Hz), 8.10 (IH, m), 8.06 (IH,d, J= 8.9 Hz), 7.87 (IH, m), 7.84 (IH, m), 7.49 (IH,d, J=9.8 Hz), 7.37 (IH, dd, / = 8.2 Hz, 4.1 Hz), 6.90 (IH,d, J=8.8 Hz), 4.82 (2H, s), 4.03 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C2iHi6N60: 368.1; pronađeno: 369.3 (M+H).

Referentni primer 905-( 3- Hinolin- 6ilmetil[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 6il)- lH- piridin- 2- on

[0410]

[0411]Produkt iz prethodnog primera (0.063 g, 0.171 mmol) je rastvoren u suvom dihlormetanu (5 mL) pod argonom, tretiran sa IN boron tribromidom u dihlormetanu (1.25 mL, 1.25 mmol), te je mešan na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija nije završena sa TLC, zato je grejana na 50°C pod refluksnim kondenzatorom tokom 20 h, ohlađena do sobne temperature, i ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCCh. Vodeni sloj je ekstrahovan nekoliko puta sa dihlormetanom i etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom i fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2S04, te filtrirani. Upareni filtrat je zatim prečišćen pomoću preparativne TLC na silikagelu (20% MeOH/CPhCh) dajući naslovno jedinjenje u vidu svetio žute čvrste supstance. 'H NMR (CDCI3/CD3OD) 8 8.82 (IH, dd,J =

4.3 Hz, 2.6 Hz), 8.19 (IH, d, J = 8.3 Hz), 8.15 (IH, d, J = 9. 9 Hz), 8.14 (IH, dd, / = 9.6 Hz,

2.7 Hz), 8.05 (IH, d, J = 8.6 Hz), 8.01 (IH, d, J = 2.7 Hz), 7.88 (IH, s), 7.83 (IH, dd, / = 8.6

Hz, 1.8 Hz), 7.51(IH, d, J = 9. 6 Hz), 7.45 (IH, dd, J= 8.3 Hz, 4.3 Hz), 6.71 (IH, d, J= 9. 9Hz), 4.81 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C2oHi4N60: 354.1; pronađeno: 355.4 (M+H).

Referentni primer91

5-( 6- Piridin- 34l-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil)- hinolin

[0412]

[0413]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H NMR (CDCI3/CD3OD) 8 9.16 (IH, d,J=1.6 Hz), 8.92 (2H, m), 8.80 (IH, dd,J=4.8 Hz, 1.6 Hz),

8.18 (IH, d, J= 9. 6 Hz), 8.16 (IH, m), 8.05 (IH, d, J = 8.3 Hz), 7.76 (IH, m), 7.69 (IH, dd,

/ = 8.3 Hz, 7.0 Hz), 7.51 (IH,d, J =9. 6 Hz), 7.49 (2H, m), 5.09 (2H, s). ESI-MS (nVz): Izračunato za C20H14N6: 338.1; pronađeno: 339.3 (M+H).

Referentni primer 923-( 2- Metilbenzotiazol- 64lmetil)- 6- piridin- 34l[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin

[0414]

[0415]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H NMR (CDCI3/CD3OD) 5 9.17 (IH,d, J= 1.7Hz), 8.77 (IH, dd,J=4.9 Hz, 1.3 Hz), 8.30 (IH, dd,J

= 6 Hz, 2 Hz), 8.25 (IH, d, J = 9.5 Hz), 7.92 (IH, d, J=\ 3 Hz), 7.87 (IH, d, J = 8.3 Hz),

7.67 (IH,d, J= 9.9 Hz), 7.57 (2H, m), 4.77 (2H, s), 2.81 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C19H14N6S: 358.1; pronađeno: 359.2 (M+H).

Referentni primer 93

6-[ 6-( l- Metil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lm

[0416]

[0417]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (DMSO-de): 5 8.67 (2H, bs), 8.54 (IH, s), 8.31 (IH,d, J=9.9 Hz), 8.18 (IH, s), 7.82 (IH,d, .7=1.1Hz), 7.67 (IH,d, J=9.9 Hz), 7.37 (2H, m), 4.55 (2H, s), 3.94 (3H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za G7H14N8S: 362.1; pronađeno: 363.2 (M+H).

Referentni primer 94

Dimetil-{ 6-[ 6-( l- metil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridaz

benzotiazol- 2- il}- amin

[0418]

[0419]Produkt iz prethodnog primera (0.046 g, 0.127 mmol) rastvoren je u suvom N,N-dimetilformamidu (5 mL) pod argonom, tretiran sa 60% natrijum hidridom u mineralnom ulju (0.013 g, 0.325 mmol) i jodometanom (0.040 mL, 0.642 mmol), te je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Reakcija je koncentrovana dosuva pod vakuumom,rastvorena u 10% MeOH/CEhCh, filtrirana, i filtrat je prečišćen dva puta sa preparativnom TLC na silikagelu (prvo sa 10%, zatim sa 5% MeOH/CEbCh) dajući naslovno jedinjenje u vidu žute čvrste supstance. 'H NMR (CDCh) 5 8.02 (IH, d,J=9.6 Hz), 7.98 (IH, m), 7.91 (IH, s), 7.67 (IH,

d, J= 1.8 Hz), 7.48 (IH, d, J= 8.4 Hz), 7.38 (IH, m), 7.23 (IH, d, J= 9.6 Hz), 4.61 (2H, s),

4.01 (3H, s), 3.17 (6H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C^HigNgS: 390.1; pronađeno: 391.3

(M+H).

Referentni primer 95

6-[ 6-( 2- Hlor- piridin- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34lmetil]- M

[0420]

[0421]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H-NMR (DMSO-de): 8 8.44 (IH, dd,J=4.3 Hz, 1.5 Hz), 8.59 (IH, d,J=4.6 Hz), 8.30 (IH, d,J=9.8 Hz), 8.20 (IH, m), 8.06 (IH,d, J =8.5 Hz), 7.93 (IH, m), 7.88 (IH, m), 7.82 (IH, dd,J=8.8 Hz, 2.0 Hz), 7.77 (IH, dd,J =5.3 Hz, 1.5 Hz), 7.63 (IH,d, J=9.5 Hz), 7.45 (IH, dd,J=8.4 Hz, 4.3 Hz), 4.87 (2H, s). ESI-MS (m/z): Izračunato za C2oHi3N6Cl: 372.1; pronađeno: 373.4

(M+H).

Referentni primer 96

5-( 3- Hinolin- 64lmetil-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 64l)- piridin- 2-^

[04221

[0423]Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1. 'H NMR (CDCI3/CD3OD) 8 9.31 (IH,d, J=2.3 Hz), 8.83 (IH, dd,/=4.5 Hz, 1.6 Hz), 8.42 (IH, dd,J

= 8.2 Hz, 4.2 Hz), 8.33 (IH, d, J = 9.6 Hz), 8.19 (IH, m), 8.05 (IH, d, J= 8.7 Hz), 7.94 (IH,

d, J = 8.1 Hz), 7.89 (IH, d, J = 1.6 Hz), 7.81 (IH, dd, J = 8.7 Hz, 1.9 Hz), 7.69 (IH, d, J =

9.7 Hz), 7.45 (IH, dd,J= 8.4 Hz, 4.3 Hz), 4.87 (s, 2H). ESI-MS (m/z): Izračunato za C21H0N7: 363.1; pronađeno: 364.3 (M+H).

Primer 97

{ 5-[ 3-( Difluor- hinolin- 64l- metil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 64l] tw^

piperazin- l- il)- metanon

[0424]

Primer 97: korak a

Etil estar 5-( 6- hlor- piridazin- 3- il)- tiofen- 2- karboksilne kiseline

[0425]

[0426]U suvi balon koji sadrži 3,6-dihlor-piridazin (2.8 g, 18.8 mmol) i 5-etoksikarboniltiofenil-2-cink bromida (0.5 M u THF, 16 ml, 8 mmol) u 100 mL suvog dioksana dodat je Pd(PPh3)4(450 mg, 0.39 mmol). Dobiveni rastvor grejan je na 60 °C preko noći u atmosferi N2, te ostavljen da se ohladi na 20 °C. Reakcija je ugašena sa dodavanjem 15 mL metanola što je praćeno dodavanjem 3N HC1 (10 mL). Smeša je ostavljena da se meša na 20 °C tokom još 1 časa. Dodata je zasićena NaHCCb da se smeša neutralizuje. Posle tretiranja sa vodom, smeša je ekstrahovana sa CH2CI2, osušena preko Na2S04i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen na koloni dajući etil estar 5-(6-hlor-piridazin-3il)-tiofen-2-karboksilne kiseline (1.4 g, 65%). 'H NMR (CDCh) 87.81 (d,J=3.9 Hz, IH), 7.77(d, /= 9.1 Hz, IH), 7.63 (d, /= 3.9 Hz, IH), 7.55 (d, /= 9.1 Hz, IH), 4.38 (q, 2H), 1.40(t, 3H); MS (ES) m/z 269(M+H<+>).

Primer 97: korak b

5-[ 3-( Dilfuor- hinolin- 64l- metil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 64l] 4iofa

kiselina

[0427]

[0428]Smeša etil estra 5-(6-hlor-piridazin-3-il)-tiofen-2-karboksilne kiseline pripremljenog u koraku a (54 mg, 0.20 mmol), hidrazida difluor-hinolin-6-il-sirćetne kiseline (Primer 57: korak c) (71 mg, 0.30 mmol) i n-butanola (3 mL) se kombinuje u zatvorenoj epruveti i greje na 130 °C u uljnom kupatilu tokom 4.5 časova. Smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa dihlormetanom (30 mL) i ispire se sa zasićenom NaHCCb(1 x). Vodeni sloj je ekstrahovan sa dihlormetanom (2 x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgS04, filtrirani,upareni pod vakuumomi sirovi produkt je hromatografisan da se dobije intermedijar etil estar (62.4 mg) 68% prinosa. Etil estar je rastvoren u smeši 2:1 tetrahidrofuran/metanol (3 mL) i tretiran sa 2N NaOH (0.14 mL). Smeša je mešana tokom 3 časa kod 20 °C, uparenapod vakuumom,razblažena sa vodom (10 mL), i acidifikovana sa 6 N HC1 do pH 2. Čvrsti taloži su sakupljeni i osušeni da se dobije produkt 97a (60 mg, 100%). 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 9.03 (m, IH); 8.64 (d, /= 9.8 Hz, IH), 8.59 (d, /= 9.0 Hz, IH), 8.49 (s, IH), 8.20 - 8.17 (m, 2H), 8.12 (d, /= 4.0 Hz, IH), 8.03 (dd, / = 9.2, 2.1 Hz, IH), 7.79 (d, / = 4.3 Hz, IH), 7.65 (dd,J=8.3, 4.2 Hz, IH); MS (m/z): 424 (MH<+>).

Primer 97: korak c

[ 5-[ 3-( Difluor- hinolin- 64l- metil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 64l]^

piperazin- l- il)- metanon

[0429]

[0430] U rastvor jedinjenja pripremljenog u koraku b (50 mg, 0.12 mmol) u suvom DMF 5 mL redom su dodati HATU (0.112 g, 0.29 mmol), HOBt (0.023 g, 0.17 mmol) i DIEA (0.1 mL, 0.57 mmol). Dobijena smeša je mešana na RT tokom 30 minuta i dodat je N-metilpiperazin. Mešanje je nastavljeno tokom jednog dodatnog časa i dodata je voda (20 mL). Dodat je dihlormetan (20 mL) i slojevi su razdvojeni. Sloj CH2CI2je osušen preko MgS04, uparenpod vakuumomi hromatografisan (CthCh/MeOH sa 0.1% Et3N) da se dobije jedinjenje u vidu tamne čvrste supstance. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8.97 (m, IH), 8.57 (d, J = 7.9 Hz, IH), 8.49 (s, IH), 8.35 (d, J = 9.8 Hz, IH), 8.19 (d, J = 9.2 Hz, IH), 8.07 (dd, J = 9.1, 1.9 Hz, IH), 8.01 (d, J = 9.6 Hz, IH), 7.88 (d, J = 3.7 Hz, IH), 7.66 (dd, J = 4.4, 4.3 Hz, IH), 7.44 (d, J = 3.8 Hz, IH), 3.86 (m, 4H), 2.82 (m, 4H), 2.57 (s, 3H); MS (m/z): 506

(MH<+>).

Primer 98

{ 5-[ 3-( Difluor- hinolin- 64l- metlzil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- y

metansulfonil- piperazin- l- il)- metanon

[0431]

[0432] U rastvor jedinjenja pripremljenog u Primeru 97b (1.0 g, 2.3 mmol u suvom CH2CI2(100 ml) redom su dodati 1-metansulfonil-piperazin (460 mg, 2.8 mmol), EDC (560 mg, 2.8 mmol), DMAP (340 mg, 2.8 mmol). Dobijena smeša je mešana na 20 °C preko noći. Posle tretiranja sa vodom, organski sloj je odvojen, ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SC>4. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ostatak je prečišćen na koloni dajući željeni produkt u vidu bele čvrste supstance (680 mg, 51%). 'H NMR (CDCI3) 89.03 (s, IH), 8.31 (d,/=11.2 Hz IH), 8.1 l(m, 4H) 7.61 (d,/=3.8Hz, IH), 7.57(d,/=9.8 Hz, IH) 7.49 (m, IH), 7.31 (d, / = 3.8 Hz, IH) 3.90 (m, 4H), 3.34 (m, 4H), 2.86 (s, 3H); MS (ES) m/z 570.2(M+H<+>).

Primer 99

6-{ Difluor-[ 6-( l- metansulfonil- 1H- pirazol- 44l)-[ 1, 2, 4] triazoto

hinolin

[0433]

Primer 99: korak a

Tert- butil estar 4-( 6- hlor- piridazin- 3- il)- pirazol- l- karboksilne kiseline

[0434]

[0435]Smeša 3,6-dihlor-piridazina (1.06 g, 6.98 mmol) i tert-butil estra 4-(4,4,5,5-tetrameti1-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-pirazol-l-karboksilne kiseline (1.47 g, 5.0 mmol) u 2.0 M kalijum karbonata (10 mL, 20 mmol) i 1,4-dioksana (40 mL) se degasira kućnim vakuumom tokom 15 min te se posle toga propušta kroz argon tokom~10 min, zatim je dodat Peppsi-ipr (340 mg, 0.5 mmol). Posle ispiranja sa argonom kroz sledećih~10 min, smeša je grejana na 70 °C tokom 4 h i ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom kroz Celite, i odvojen je filtrat. Vodeni rastvor je ekstrahovan sa CH2CI2i kombinovane organske faze su osušene preko Na2S04, koncentrovane, te prečišćene na koloni da se dobije 0.65 g željenog produkta (46%). 'H NMR(DMSO) 5 9.08(s, IH), 8.47 (s, IH), 8.31 (d,J=9.0 Hz, IH), 8.01 (d,J=9.0 Hz, IH), 1.59 (s, 3H); MS (ES) m/z 280.8(M+H<+>).

Primer 99: korak b

6-{ Difluor-[ 6-( lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34l]- metty^

[0436]

[0437]Balon od 100 ml koji sadrži smešu 3-hlor-6-(tert-butil estar pirazol-1-karboksilne kiseline)-piridazina (140 mg, 0.5 mmol), hidrazida difluor-hinolin-6-il-sirćetne kiseline (130 mg, 0.55 mmol) i katalitičku količinu 3N HC1 u 40 mL izopropanola grejana je na 80 °C preko noći. Reakciona smeša je neutralizovana sa NaHCCh i ekstrahovana sa CH2CI2. Rastvarač je uklonjenpod vakuumomi ostatak je prečišćen sa fleš hromatografijom da se dobije 110 mg (61 %) željenog produkta. 'H NMR(CDCh) 5 10.2(bs, IH), 8.83 (d, / = 9.23Hz, IH), 8.42 (m, IH), 8.19-8.31 (m, 4H), 7.77 (d, / = 9.0 Hz, IH), 7.60 (d, / = 9.0 Hz, IH), 7.45-7. 57 (m, 2H); MS (ES) m/z 364.0 (M+H<+>).

Primer 99: korak c

6-{ Difluor-[ 6-( l- metansulfonil- lH- pirazol- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridaz

hinolin

[0438]

[0439]U suvi balon od 50 mL koji sadrži 6-{difluor-[6-(lH-pirazol-3-il)-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]-metil}-hinolin (110 mg, 0.303 mmol), trietilamin (120 mg, 1.2 mmol) u CH2CI2(6 mL) dodat je metansulfonil hlorid (138 mg,1.21 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 90 min, sve dok TLC nije pokazala daje reakcija završena. Smeša je zatim neutralizovana pomoću zasićene NaHCCb, ekstrahovana sa CH2CI2, osušena preko Na2S04, koncentrovana u vakuumu i prečišćena na koloni dajući 113 mg (85%) ciljanog jedinjenja. 'H NMR (CDCh) 5 9.02 (dd,J=4.3, 1.3 Hz, IH) 8.44 (d,J=9.4 Hz, IH), 8.23-8.30 (m, 5H), 8.03 (d, /= 6.4 Hz, IH), 7.51 (dd, J = 9.7, 4.0 Hz, IH), 7.43 (d,J=9.8 Hz, IH), 3.45 (s, 3H); MS (ES) m/z 442.1 (M+H<+>).

Primer 100

6-{[ 6-( 2- Etinil- piridin- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34l]- difluor- metil}^^

[0440]

Primer 100: korak a 3- Hlor- 6-( 2- hlor- piridin- 4- il)- piridazin[04411

[0442]Smeša 3,6-dihlor-piridazina (1.04 g, 6.98 mmol) i 2-hlorpiridin boronske kiseline (1.00 g, 6.37 mmol) u 2.0 M kalijum karbonata (10 mL, 20 mmol) i 1,4-dioksana (20 mL) propuštana je kroz argon tokom~10 min, zatim je dodat bis(trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorid (236 mg, 0.336 mmol). Posle ispiranja sa argonom kroz sledećih~10 min, smeša je grejana na 80 °C tokom 18 h i ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom kroz Celite, i filtrat je odvojen. Vodeni rastvor je ekstrahovan sa CH2CI2i kombinovane organske faze su osušene, koncentrovane, i prečišćene na koloni da se dobije 296 mg (21%) Primera 100a u vidu čvrste supstance: 'H NMR (400 MHz, CDCh) 5 8.58 (d, / = 5.1 Hz, 1 H), 8.00 (m, 1 H), 7.90 (dd, / = 5.5, 1.6 Hz, 1 H), 7.89 (d,J =9.0 Hz, 1 H), 7.68 (d, / = 9.0 Hz, 1 H); MS (ES) m/z: 226/228 (M+H<+>).

Primer 100: korak b

6-{[ 6-( 2- Hlor- piridin- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34l]- difl^

[0443]

[0444]Epruveta za pritisak koja sadrži smešu 3-hlor-6-(2-hlor-piridin-4-il)-piridazina (200 mg, 0.884 mmol) i hidrazida difluor-hinolin-6-il-sirćetne kiseline (314 mg, 1.32 mmol) u butanolu (7 mL) isprana je sa argonom i zatim zatvorena. Posle grejanja na 102 °C tokom 64 h, rastvarač je uklonjenpod vakuumomi ostatak je prečišćen sa fleš hromatografijom da se dobije 134 mg (37%) Primera 100b: 'H NMR (400 MHz, CDCh) 5 9.04 (m, 1 H), 8.62 (d,J= 5.1 Hz, 1 H), 8.37 - 8.33 (m, 4 H), 8.07 (dd, / = 9.0, 2.0 Hz, 1 H), 7.83 (m, 1 H), 7.75 (dd,J= 5.1, 1.6 Hz, 1 H),7.67 (d, .7=9.8 Hz, 1 H), 7.58 (m, 1 H); MS (ES) m/z: 409/411 (M+H<+>).

Primer 100: korak c

6-{[ 6-( 2- Etinil- piridin- 44l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34l]- difluorm

[0445]Smeša 100b (60 mg, 0.15 mmol) u DMF (0.7 mL) i Et2NH (0.45 mL) je degasirana sa argonom tokom~5 min, i zatim su dodati trifenilfosfin (8 mg, 0.031 mmol), Cul (3 mg, 0.016 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum (II) dihlorid (10 mg, 0.014 mmol). Degasiranje je nastavljeno tokom oko 5 min i dodat je trimetilsililacetilen. Smeša je grejana mikrotalasima na 120 °C tokom 50 minuta i koncentrovanapod vakuumom.Ostatak je prečišćen sa hromatografijom dajući 10 mg (14%) 6-{difluor-[6-(2-trimetilsilaniletinil-piridin-4-il)-[l,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]-metil}-hinolina. Gore pomenuti produkt (10 mg, 0.021 mmol) u THF (1.2 mL) tretiran je sa 0.1 M NaOH (0.2 mL, 0.02 mmol) tokom 1 h i koncentrovan. Ostatak je podeljen između CH2CI2i vode. Organski sloj je osušen, koncentrovan, te hromatografisan da se dobije 8 mg (94%) Primera 100: 'H NMR (400 MHz, CDCh) 8 8.96 (d,J=4.3 Hz, 1 H), 8.74 (d,J=5.1 Hz, 1 H), 8.29 - 8.19 (m, 4 H), 8.00 - 7.98 (m, 1 H), 7.92 (s, 1 H), 7.72 (dd, /= 5.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.62 (d,J=9.8 Hz, 1 H), 7.45 (dd,J =8.2, 4.3 Hz, 1 H), 3.26 (s, 1 H); MS (ES) m/z: 399 (M+H<+>).

Primer101

4-[ 3-( Difluor4iinolin- 64l- metil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 34)] piridazin- 64

[0446]

[0447]Smeša 6- {[6-(2-hlor-piridin-4-il)-[ 1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]-difluor-metil}-hinolina (videti Primer 100b) (50 mg, 0.122 mmol) u DMF (4 mL) i Zn(CN)2(43 mg, 0.367 mmol) se degasira sa kućnim vakuumom tokom~5 min, te je zatim dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (13.4 mg, 0.012 mmol). Smeša je grejana mikrotalasima na 190 °C tokom 20 min. Posle tretiranja sa vodom, rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ciljano jedinjenje, 21 mg (41%), dobijeno je prečišćavanjem na koloni. 'H NMR(CDCh) 8 9.04 (dd, /= 4.2, 1.6 Hz, IH), 8.95 (d,J=5.12 Hz, IH), 8.41 (d,J=9.8 Hz, IH), 8.22-8.35 (m, 4H), 8.00-8.05 (m, 2H), 7.70(d, /= 9.8 Hz, IH), 7.54 (dd, /= 8.2, 3.8 Hz, IH); MS (ES) m/z 400.3(M+H<+>).

Primer 102

{ 5-[ 3-( Benzofuran- 54l- difluor- metil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 6^

metil- piperazin- l- il)- metanon

[0448]

Primer 102: korak a

Etil estar ( 2, 3- dihidro- benzofuran- 5- il)- okso- sirćetne kiseline

[04491

[0450]Čvrsti A1C13 (5.55 g, 0.042 M) dodat je u delovima u ledeni (0 °C) rastvor dihidrobenzofurana (5.0 g, 0.042 M) i etil oksalil hlorida (4.5 mL, 0.042 M) u suvom dihlormetanu (80 mL). Po završetku dodavanja tamni rastvor je zagrejan do RT i mešan tokom 2 časa. Dobivena reakciona smeša polako je sipana u koncentrovan vodeni rastvor HCl/led (5 mL/200 mL). Vodena smeša je mešana tokom 20 minuta i dodat je dihlormetan (150 mL). Slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa dihlormetanom (1 x). Kombinovani CH2CI2ekstrakti su osušeni preko MgSCU, filtrirani, uparenipod vakuumomi sirovo ulje je prečišćeno sa hromatografijom (Heksan/EtOAc) da se dobije željeni proizvod u vidu ulja (4.8 g) 54%.<[>H NMR (400 MHz, CDCh) 87.88 (s, IH), 7.86 (d, J = 8.3 Hz, IH), 6.85 (d, J = 8.8 Hz, IH), 4.72 (t, J = 9 Hz, 2H), 4.45 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.28 (t, J = 9.2 Hz, 2H), 1.42 (t, J = 7.2 Hz, 3H). MS (m/z): 221 (MH<+>).

Primer 102: korak b

Etil estar benzofuran- 5- il- okso- sirćetne kiseline

[0451]

[0452]N-Bromsukcinimid (3.88 g, 0.022 M) polagano je dodat u rastvor jedinjenja pripremljenog u koraku a (4.8 g, 0.022 M) i benzoil peroksida (0.030 g, 0.12 mmol) u ugljen tetrahloridu (80 mL). Smeša je mešana kod refluksa tokom 3 časa, ohlađena na sobnu temperaturu, uparena do suva i hromatografisana (Heptan/EtOAc) da se dobije produkt u vidu ulja (3.8 g) 100%. 'H NMR (400 MHz, CDCh) 6 8.32 (s, IH) 8.02 (dd, J = 8.7, 1.8 Hz, IH), 7.73 (d, J = 2.1 Hz, IH), 7.61 (d, J = 8.8 Hz, IH), 6.88 (s, IH), 4.48 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.46 (t, J = 7.1 Hz, 3H). MS (m/z): 219 (MH<+>).

Primer 102: korak c

Etil estar benzofuran- 5- il- difluor- sirćetne kiseline

[0453]

[0454]U ledeni rastvor (0 °C) jedinjenja pripremljenog u koraku b (0.895 g, 4.1 mmol) u dihlormetanu (10 mL) polagano je dodat (dietilamino)sumpor trifluorid (DAST) (5 g, 31.0 mmol). Smeša je grejana do RT i mešanje je nastavljeno tokom 24 časa. Reakciona smeša je zatim sipana u ledenu vodu (100 mL) i ekstrahovana sa CH2CI2(2 x 100 mL). Kombinovani ekstrakti CH2CI2osušeni su preko MgSCM, filtrirani, uparenipod vakuumomi hromatografisani (Heksan/CH2C12) da se dobije željeni proizvod (0.8 g, 79%). 'H NMR (400 MHz, CDCh) 5 7.88 (s, IH), 7.70 (d, J = 1.8 Hz, IH), 7.56 (m, 2H), 6.83 (d, J = 1.7 Hz, IH), 4.32 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 1.31 (t, J = 6.8 Hz, 3H); MS (m/z): 241 (MH<+>).

Primer 102: korak d

Hidrazid benzofuran- 5- il- difluor- sirćetne kiseline

[0455]

[0456]Smeša jedinjenja pripremljenog u koraku c (127 mg, 0.53 mmol) i hidrazina (0.28 mL, 8.9 mmol) u suvom metanolu (3 mL) mešana je kod refluksa tokom 3 časa, ohlađena na sobnu temperaturu iuparena pod vakuumomda se dobije polučvrsti produkt (0.12 g) 99%. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 8.12 (s, IH), 7.90 (s, IH), 7.76 (d, J = 9.1 Hz, IH), 7.52 (dd, J= 8.5, 1.5 Hz, IH), 7.09 (d, J = 1.3 Hz, IH)

Primer 102: korak e

Etil estar 5-[ 3-( benzofuran- 54l- difluor- metil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin^

karboksilne kiseline

[0457]

[0458]U smešu jedinjenja pripremljenog u koraku d (0.115 g, 0.51 mmol) i jedinjenja pripremljenog u Primeru 97a (165 mg 0.61 mmol) u n-butanolu (3 mL) dodata je jedna kap 3N HC1. Smeša je grejana na 130 °C u uljnom kupatilu tokom 3 časa, ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena sa dihlormetanom (20 mL) i isprana sa zasićenom NaHCCh(1 x). Ekstrakt CH2CI2je osušen preko MgSCn, filtriran iuparen pod vakuumom.Sirova preostala polučvrsta supstanca prečišćena je sa hromatografijom da se dobije željeni proizvod (35 mg) 16%. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 8.20 (d, J = 9.8 Hz, IH), 8.19 (m, 4H), 7.88 (d, J = 3.8 Hz, IH), 7.78 (d, J = 9.0 Hz, IH), 7.63 (J = 9.1 Hz, IH), 7.09 (s, IH), 4.38 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.37 (t, J = 6.9 Hz, 3H). MS (m/z): 441 (MH<+>).

Primer 102: korak f

{ 5-[ 3-( Benzofuran- 54l- dilfuor- metil)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazm^

metil- piperazin- l- il)- metanon

[0459]

[0460]Jedinjenje pripremljeno u koraku e rastvoreno je u smeši 2:1 THF/metanol (3 mL) i tretirano sa 2N NaOH (0.15 mL). Smeša je mešana tokom 3 časa kod RT, uparenapod vakuumom,razblažena sa vodom (10 mL), i acidifikovana sa 6 N HC1 na pH 2. Čvrsti beli taloži su sakupljeni, osušeni pod sniženim pritiskom, rastvoreni u DMF (2 mL) i tretirani redom sa HATU (0.0.62 g, 0.16 mmol), HOBt (0.013 g, 0.09 mmol) i DIEA (0.06 mL, 0.32 mmol). Dobijena smeša je mešana na RT tokom 30 minuta i dodat je N-Metilpiperazin (0.014 mL, 0.14 mmol). Mešanje je nastavljeno tokom jednog dodatnog časa i dodata je voda (20 mL). Dodat je dihlormetan (20 mL) i slojevi su razdvojeni. Sloj CH2CI2je osušen preko MgS04, uparenpod vakuumomi hromatografisan (CH2CI2/ 0 - 10%MeOH) da se dobije čvrsti produkt. Rekristalizacija sa EtOAc dala je jedinjenje iz naslova u vidu beličaste čvrste supstance. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 8.60 (d, J = 9.8, IH), 8.17 - 8.07 (m, 4H), 7.79 (d, J = 9.1 Hz, IH), 7.65 (dd, J = 8.5, 2.1 Hz, IH), 7.50 (d, J = 3.9 Hz, IH), 7.08 (s, IH), 3.67 (m, 4H), 3.34 (m, 4H), 2.32 (s, 3H); MS (m/z): 495 (MH<+>).

Primer 103

( 5-{ 3-[( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54l)- difluor- metil]-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] p^

tiofen- 2- il)-( 4- metil- piperazin- l- il)- metanon

[0461]

Primer 103: korak a

Etil estar ( 2, 3- eihidro- benzofuran- 5- il)- difluor- sirćetne kiseline

[0462]

[0463]U ledeni rastvor (0 °C) jedinjenja pripremljenog u koraku a iz Primera 102 (1.0 g, 4.54 mmol) u dihlormetanu (20 mL) polagano je dodat (dietilamino)sumpor trifluorid (DAST) (5 g, 31.0 mmol). Smeša je grejana do RT i mešanje je nastavljeno tokom 24 časa. Reakciona smeša je zatim sipana u ledenu vodu (80 mL) i ekstrahovana sa CH2CI2(2 x 100 mL). Kombinovani CH2CI2ekstrakti su osušeni preko MgS04, filtrirani, uparenipod vakuumomi hromatografisani (Heksan/EtOAc) da se dobije željeni proizvod. 'H NMR (400 MHz, CDCh) 8 7.42 (s, IH), 7.36 (dd, J = 8.5, 1.9 Hz, IH), 6.81 (d, J= 8.9 Hz, IH), 4.62 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 4.30 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.24 (t, J = 8.9 Hz, IH), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, IH).

Primer 103: korak b

etil estar 5-{ 3-/( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54l)- difluor- metilJ- ll, 2, 4Jtriazolo/ 4, 3

6- il}- tiofen- 2- karboksilne kiseline

[0464]

[0465]Rastvor jedinjenja pripremljenog u koraku a (0.30 g, 1.24 mmol) u CH3OH (10 mL) tretiran je sa hidrazinom (0.58 mL, 18.6 mmol). Dobijena smeša je mešana kod refluksa tokom 2.5 časa, ohlađena na sobnu temperaturu i uparena do suva. Ostatak (0.28 g, 1.22 mmol) se kombinuje sa jedinjenjem pripremljenim u koraku a iz Primera 97 (0.66 g, 2.4 mmol) u n-butanolu (5 mL), greje u 130 °C uljnom kupatilu tokom 3 časa, hladi na sobnu temperaturu, razblažuje sa dihlormetanom (20 mL) i ispire sa zasićenom NaHC03 (1 x). Ekstrakt CH2CI2je osušen preko MgS04, filtriran, uparen pod vakuumom i hromatografisan (CH2CI2/O - 10% MeOH) da se dobije željeni proizvod (78 mg) 14%. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 8.62 (d, J = 9.74 Hz, IH), 8.19 (dd, J = 9.8, 3.7 Hz, 2H), 7.90 (d, J = 3.8 Hz, IH), 7.64 (s, IH), 7.37 (d, J = 9.9 Hz, IH), 6.88 (d, J = 8.5 Hz, IH), 4.61(t, J = 8.7 Hz, 2H), 4.36 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.28(t, J = 8.3 Hz, 2H), 1.34 (t, J = 7.2 Hz). MS (m/z): 443 (MH<+>)

Primer 103: korak c

( 5-{ 3-[( 2, 3- Dihidro- benzofuran- 54l)- difluor- metil]-[ l, 2, 4] triazolo[^

tiofen- 24l)-( 4- metil- piperazin- l- il)- metanon

[0466]

[0467] Jedinjenje pripremljeno u koraku b je rastvoreno u smeši 2:1 THF/metanol (3 mL) i tretirano sa 2N NaOH (0.15 mL). Smeša je mešana tokom 3 časa kod RT, uparenapod vakuumom,razblažena sa vodom (10 mL), te je acidifikovana sa 6 N HC1 na pH 2. Čvrsti beli taloži su sakupljeni, osušeni pod sniženim pritiskom, rastvoreni u DMF (3 mL) i tretirani sa HATU (0.12 g, 0.31 mmol), HOBt (24 mg, 0.18 mmol) i DIEA (0.1 mL, 1.04 mmol) redom. Dobijena smeša je mešana na RT tokom 30 minuta i dodat je N-metilpiperazin (0.027 mL, 0.24 mmol). Mešanje je nastavljeno tokom jednog dodatnog časa i dodata je voda (20 mL). Dodat je dihlormetan (20 mL) i slojevi su razdvojeni. Sloj CH2CI2je osušen preko MgS04i uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen sa HPLC reverzne faze (Varian Prostar HPLC, Pursuit prep. kolona, CH3CN/H2O koja sadrži 0.1% TFA). Krajnje jedinjenje je filtrirano kroz kasetu sa HCO3i osušeno pod sniženim pritiskom dajući jedinjenje iz naslova. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 8.58 (d, J = 9.7 Hz, IH), 8.16 (d, J = 9.6 Hz, IH), 8.08 (d, J = 3.7 Hz, IH) 7.58 (s, IH), 7.49 (d, J = 3.9 Hz, IH), 7.41 (d, J = 8.6 Hz, IH), 6.88 (d, J = 7.8 Hz, IH), 4.59 (t, J = 8.5 Hz, 2H) 3.65 (m, 4H), 3.25 (t, J = 8.9 Hz, 2H), 2.36 (m, 4H), 2.22 (s, 3H); MS (m/z): 497 (MH<+>)

Primer104

6-{ Difluor-[ 6-( 2- propil4iazol- 54l)-[ l, 2, 4] triazolo[ 4, 3- b] piridazin- 34^

[0468]

[0469]Epruveta za pritisak koja sadrži smešu 3-hlor-6-(2-propil-tiazol-5-il)-piridazina (Primer 20, korak a) (36 mg, 0.15 mmol) i hidrazida difluor-hinolin-6-il-sirćetne kiseline (71 mg, 0.30 mmol) u butanolu (2 mL) isprana je sa argonom i zatim zatvorena. Posle grejanja na 95 °C tokom 64 h, rastvarač je uklonjenpod vakuumomi ostatak je prečišćen sa fleš hromatografijom da se dobije 60 mg (95%) od 8 u vidu svetio braon čvrste supstance: 'H NMR (400 MHz, CDCh) 5 9.03 (dd,J=4.3, 1.6 Hz, 1 H), 8.36 (m, 3 H), 8.18 (d,J=9.4 Hz, 2 H), 8.16 - 8.14 (m, 1H), 7.58 (d, /= 9.4 Hz, 2 H), 3.06 (t, J= 7.6 Hz, 2 H),1.93 - 1.88 (m,

2 H), 1.08 (t,/=7.4 Hz, 3 H); MS (ES) m/z: 423 (M+H<+>).

BIOLOŠKA AKTIVNOST

[0470] Sledeći reprezentativni eksperimenti su obavljeni da bi se odredila biološka aktivnost jedinjenja iz obima pronalaska. Oni su navedeni kao ilustracija pronalaska i nisu ograničavajući.

PRIMER A

Kloniranje, ekspresija i prečišćavanje rekombinantnog c-Met proteina

[0471] Ovaj primer opisuje kloniranje, ekspresiju i prečišćavanje domena citoplazme c-Met koji ima c-Met receptor aktivnosti tirozin kinaze. Domen citoplazme ima 435 aminokiselina, i pokazuje veliku homologiju sa SRC porodicom tirozin kinaza( Park i dr., 1987, Proc Nad

AcadSci USA. 84( 18) :63 79- 83).

[0472] cDNK za domen citoplazme Met receptora, koja sadrži domen tirozin kinaze, umnožena je pomoću PCR. Oligonukleotidi su sintetisani na uobičajeni način pomoću Gibco-BRL (Carlsbad, CA). Direktni oligonukleotid metkinF2 je identičan nukleotidima 3068 -3097 nukleotidne sekvence navedene u NM 000245, osim što su nukleotidi između 3073 i 3078 izmenjeni da bi se stvorilo BamHI mesto u svrhu kloniranja. Povratni oligonukleotid metkinR2a je identičan nukleotidima 4378-4348 komplementarne sekvence navedene u NM 000245, osim što su nukleotidi između 4372 i 4367 izmenjeni da bi se stvorilo XhoI mesto (podvučeno) u svrhu kloniranja. Oligonukleotidi su upotrebljeni kao PCR prajmeri za umnožavanje cDNK domena citoplazme Met receptora iz Quick Clone cDNK placente (Clontech; Palo Alto, CA). Umnožavanje je obavljeno pomoću Taq DNK polimeraze (Gibco-BRL; Carlsbad, CA), 1,25 mmol/1 svake dNTP, 200 nmol/1 svakog oligo, u zapremini od 50 ul. Profil termociklera je bio 30 ciklusa za svaki, koji obuhvata 30 sekundi na 94 °C, 30 sekundi na 60 °C i 1 minut na 72 °C, u Perkin Elmer 9600 termocikleru.

[0473] Umnožena cDNK za domen citoplazme Met receptora klonirana je na ekspresioni vektor. PCR proizvod digestiran je sa BamHI (New England Biolabs; Beverlv, MA) i XhoI (New England Biolabs). Digestiranih 1,3 kb proizvoda izolovano je i prečišćeno na 1% agaroza gelu pomoću Gene Clean (Qbiogene; Irvine, CA). Vektor pFastBacHTa (Gibco-BRL) digestiran je sa BamHI i XhoI (New England Biolabs), i 4,7 kb linearnog fragmenta je prečišćeno na 1% agaroza gelu pomoću Gene Clean (BiolOl). Fragment Met cDNK od 1,3 kb ligiran je za pFastBacHTa vektor na 4 °C tokom 16 sati, pomoću T4 DNK ligaze (New England Biolabs)u krajnjoj zapremini od 10 ul. Kloniranje cDNK klona Met domena citoplazme na BamHI mesto pFastBacHTa postavilo je cDNK u okvir sa His-6 markerom vektora, da bi se omogućila ekspresija N-terminalnog Hiss-markiranog proteina. Polovina ligacione smeše (5 uL) upotrebi)ena je za transformaciju 50 ul DH5ot kompetentnih ćelija E. coli (Gibco-BRL). Smeša za transformaciju je zasejana na LB agarozne ploče sa 100 |ug/ml ampicilina i inkubirana 16 sati na 37 °C. Kolonije su uzete sa tih ploča i uzgajane u LB bujonu sa 100 ug/ml ampicilinal6 sati. DNK plazmid je izolovan pomoću Qiagen reagenasa za prečišćavanje plazmida DNK (Qiagen; Valencia, CA) i izvršenje skrining klonova putem digestije sa BamHI/XhoI. Tri klona koja su imala fragment odgovarajuće veličine izdvojena iz smeše za digestovanje podneta su u ACGT, Ine radi analize sekvence DNK.

[0474] Jedan klon, pFastBacHTmetkin-15, nije sadržao mutacije u kloniranom domenu citoplazme c-Met, i upotrebljen je za stvaranje rekombinantnog bakulovirusa za ekspresiju. Rekombinantni bakulovirus je generisan pomoću Gibco BRL Bac-To-Bac sistema, prema protokolu proizvođača. Ukratko, DHlOBac ćelije su transformisane pomoću pFastBacHTmetkin-15, odabrani su klonovi, izolovana je virusna DNK, i urađen je PCR skrining za isečak Met cDNK. Sf9 ćelije insekta su transficirane rekombinantnom DNK bakulovirusa. Medijumi sa PO koncentracijom virusa su sakupljeni, i upotrebljeni za dve uzastopne ture umnožavanja virusa.

[0475] Višestruke koncentracije umnoženog soja virusa upotrebljene su za infekciju Sf9 ćelija. Ćelije su sakupljane 24, 48 i 72 sata nakon transfekcije. Inficirane Sf9 ćelije su lizirane u rastvoru sa 50 mmol/1 Tris-HCl pH 8,0, 150 mmol/1 NaCl, 150 mmol/1 imidazola, 1,0 mmol/1 PMSF, 0,5% NP40, 3,5 ug/ml leupeptina, 3,5 |ug/ml aprotinina, i ukupna koncentracija proteina je određena BCA eksperimentom (Pierce; Rockford, IL). Lizati ćelija su razdvojeni na 4-15% SDS-PAGE a zatim preneti na nitroceluloznu membranu za imunoblot analizu. Nitrocelulozni blotovi su testirani sa anti-His6 antitelom da bi se potvrdila ekspresija His-markiranog proteina met kinaze. Optimalan odnos koncentracije virusa prema Sf9 ćelijama određen je ispitivanjem lizata sakupljenih pri različitim uslovima infekcije. Maksimalno ponovno dobijanje proteina bilo je 48 sati nakon infekcije.

[04761Izvršena je ekspresija/prečišćavanje His-markiranog domena citoplazme Met receptora u malom obimu. Sf9 ćelije insekta transficirane rekombinantnim bakulovirusom koji eksprimira His-markirani domen citoplazme Met receptora lizirane su u puferu sa 50 mmol/1 Tris-HCl pH 8,0, 150 mmol/1 NaCl, 150 mmol/1 imidazola, 1,0 mmol/1 PMSF, 0,5% NP40, 3,5 ug/ml leupeptina, 3.5 ug/ml aprotinina. Lizat je inkubiran sa 5 ml 50% rastvora perlica Ni-agaroze (Qiagen) u PBS-u tokom 2 sata rotacije na 4°C, da bi se uhvatio His-markirani protein. Lizat sa His-markiranim proteinom vezanim za perlice Ni-agaroze nanet je na kolonu od 10 ml. Perlice Ni-agaroze su spakovane, i propušten je supernatant. Spakovana kolona je zatim isprana sa 60 ml pufera za ispiranje (isti kao pufer za lizu). Na kolonu je dodato 5 ml pufera za eluiranje (50 mmol/1 Tris-HCl pH 8, 150 mmol/1 NaCl, 150 mmol/1 imidazola, 1,0 mmol/1 PMSF), i sakupljeno je 10 frakcija od po 0,5 ml. Mali alikvoti svake frakcije su razdvojeni pomoću 4-15% SDS-PAGE a zatim su ili preneti na nitrocelulozu za imunoblot analizu, ili obrađeni za kumasi bojenje (Bio-Safe Safe Coomassie, Bio-Rad). Glavna traka proteina na kumasi obojenom gelu imala je odgovarajuću veličinu za His6-MetKin (52 kD), što odgovara His-markiranom proteinu detektovanom imunoblot tehnikom. Koncentracija proteina procenjena na osnovu kumasi obojenog gela iznosila je oko 2 mg/ml.

[0477]Rekombinantni virusni soj je prenet u ugovornu laboratoriju, Pan Vera (Madison, WI), radi ekspresije u velikom obimu i prečišćavanja His6-MetKin u količini dovoljnoj za skrining visokog kapaciteta. Povećanjem obima na 60 1 i četvorostepenim prečišćavanjem dobijeno je 98,4 mg proteina čistoće veće od 95%.

PRIMER B

Ispitivanje sa Delfia autofosforilacionom kinazom na c-Met

[0478] DELFIA TRF test je razvijen za skrining jedinjenja koja snižavaju autofosforilaciju, i time kinaznu aktivnost c-Met. DELFIA test nije radioaktivan. Autofosforilacija c-Met meri se anti-fosfotirozin antitelom vezanim za Europium marker.

[0479] Najveća prednost ovog formata je da dopušta razvoj testa autofosforilacije upotrebom Ni-helatnih ploča koje vezuju heksa-his marker na rekombinantnoj Met kinazi. Test autofosforilacije omogućava da se upotrebi poznati supstrat za fosforilaciju, sama Met kinaza. DELFIA Met test za autofosforilaciju je veoma osetljiv, sa odnosom signala i šuma većim od 50:1.

[0480] Postupak testa za skrining je sledeći. Prečišćeni His6 markirani domen citoplazme c-Met razblažen je do koncentracije od 500 ng/ml u puferu za razblaživanje enzima (50 mmol/1 Tris-HCl, pH 8,0, 0,1% BSA) i raspoređen na test ploče u zapremini od 50 ul po mestu. Odabrane su za upotrebu Black opaque HisGrab niklovane ploče sa 96 mesta (Pierce, Rockford, II). Zatim je 2,5 ul jedinjenja u 40% DMSO dodato u mesta za ispitivanje, a samo 2,5 ul 40% DMSO dodato je u mesta koja predstavljaju negativnu kontrolu. Reakcija autofosforilacije je inicirana nakon dodavanja 50 ul reakcionog pufera, 50 mmol/1 Tris-HCl, pH 8,0, 10 mmol/1 MgCb, 0,1 mmol/1 Na3V04, 1 mmol/1 DTT, 1 umol/1 ATP. Ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi 1 h, i nakon toga dva puta isprane sa 200 ul PBS po mestu. Anti-fosfotirozinsko antitelo konjugovano sa europijumom, Eu-PY20 proizvođača Perkin Elmer, razblaženo je do 50 ng/ml u Delfia AB puferu (Perkin Elmer, Boston, MA), dodato na test ploče sa 96 mesta u zapremini od 100 ul po mestu, i inkubirano na sobnoj temperaturi 2 sata. Test ploče su zatim isprane 4 puta, sa po 200 ul Delfia pufera za ispiranje (Perkin Elmer) po mestu. Nakon završnog ispiranja, na svako mesto test ploče dodato je po 150 jul Delfia rastvora za pojačavanje (Perkin Elmer), i ploča je inkubirana 1 sat na sobnoj temperaturi. Ploče su očitane na instrumentu LJL Analvst (Molecular Devices; Sunnvvale, CA), sa parametrima filtera od 360 ekscitacija, 620 emisija i 410 interferencija. IC50vrednosti su izračunate uz upotrebu Graphpad Prism softvera (Graphpad Software; San Diego, CA).

PRIMER C

ELISA test zasnovan na ćelijama, za c-Met fosforilaciju

[0481] ELISA test zasnovan na ćelijama razvijen je za procenu sposobnosti jedinjenja da inhibiraju HGF stimulisanu c-Met fosforilaciju u ćelijama.

[0482]Ćelije SI 14 su zasejane u posude sa 96 mesta tretirane kulturom tkiva, u koncentraciji od 5 X IO<4>po mestu. Nakon inkubacije od 16 - 20 sati, hranljivi medijum je uklonjen i zamenjen medijumom bez seruma sa dodatkom 0,5% BSA. Ispitivano jedinjenje je zatim dodato i inkubirano sa ćelijama 60 minuta, a zatim je tokom 15 minuta dodavan 1 ul HGF na 2,5 ug/ul. Ćelije su zatim lizirane dodatkom 25 ul ledenog 3x RIPA pufera (50 mmol/1 Tris HC1, pH 7,5, 1% Triton, 1% IGEPAL, 0,25% dezoksiholne kiseline, 150 mmol/1 NaCl, 1 mmol/1 natrijum ortovanidata, 1 mmol/1 natrijum fluorida i 1 tableta koktela inhibitora proteaza (Boheringer Mannheim, cat. br. 1697498). Ćelijski lizati su zatim prebačeni na NUNC Maxisorp ploče prevučene anti-c-Met receptorskim antitelom AF276 (R&D Svstems). Lizati su inkubirani sa pločama prevučenim antitelom 1 sat na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane Delfia puferom za ispiranje (Perkin Elmer, Boston, MA) i sa 100 ul 0,25 ug/ml anti-fosfotirozinskog antitela PT66 konjugovanog sa europijumom (Perkin Elmer, Boston, MA). Nakon još jednog sata inkubacije na sobnoj temperaturi, ploče su isprane tri puta Delfia puferom za ispiranje (Perkin Elmer). Nakon finalnog ispiranja, dodato je 150 ml Delfia rastvora za pojačavanje (Perkin Elmer), i inkubirano je 60 minuta. Ploče su očitane na instrumentu LJL Analvst (Molecular Devices; Sunnvvale, CA), sa parametrima filtera od 360 ekscitacija, 620 emisija i 410 interferencija. IC50vrednosti su izračunate uz upotrebu Graphpad Prism softvera (Graphpad Software; San Diego, CA).

PRIMER D

HepG2 test rasipanja ćelija

Uvod

[0483] Humani faktor rasta (HGF) i njegov receptor (c-Met) uključeni su u motilitet ćelija. Zaista, HGF je takođe identifikovan kao faktor rasipanja (SF), na osnovu svog snažnog efekta na motilitet određenih vrsta ćelija. Ćelijski motilitet je ključan za patološke procese kod onkoloških bolesti, a najvažnije, kod utvrđivanja metastatskih lezija udaljenih od primarnog tumora i formiranja novih krvnih sudova (angiogeneza). Jedna od hipoteza o lečenju je da ovo pokretanje vrsta ćelija može biti smanjeno ili eliminisano upotrebom inhibitora c-Met kinaze. (Pogledajte: Jiang, W.C, Martin, T.A., Parr, C, Davies, G., Matsumoto, K. i Nakamura, T. Critical Revievvs in Oncology/Hematology 53 (2005) 35-69. i reference koje su tu navedene.) Treba takođe napomenuti da je ćelijski motilitet, a naročito u pogledu angiogeneze, važan za stanja drugih bolesti.

Metode

[0484]Rasipanje ćelija je mereno RT-CES (Real-Time Cell Electronic Sensing) sistemom kompanije ACEA Biosciences Inc. (San Diego, CA). RT-CES sistem koristi specijalizovane RT-ACE mikrotitarske ploče (kat: RCD96, ACEA Biosciences Inc.) za neinvazivnu kvantifikaciju ćelijskog statusa u realnom vremenu. Interakcija ćelija sa površinom ploča, koje su integrisane sa mikroelektronskim setom senzora, dovodi do stvaranja impedance odgovora ćelija-elektroda. Veća vrednost impedance ukazuje na veće vezivanje ćelija, a time i na manje rasipanje ćelija.

[0485]50 ul test medijuma (MEM sa dodatkom 10% FBS, 2 mmol/1 L-glutamina, 1,5 g/l natrijum bikarbonata, 1 mmol/1 natrijum piruvata i 0,1 mmol/1 neesencijalnih aminokiselina) dodato je u RT-ACE ploče sa 96 mesta, i snimano 30 min na RT-CES. 50 ul HepG2 ćelija (kat: HB-8065, ATCC) dodato je na svako mesto (50ul @ 104 ćelije/ml = 5000 ćelija/mestu). Ploča je očitana na RT-CES-u i inkubirana 20-24 sata. Nakon 20 - 24 sata inkubacije, na svako mesto je dodato po 50 ul test medijuma sa različitim koncentracijama ispitivanih jedinjenja, i inkubirano 1 sat. Najzad, 50 ul test medijuma sa 160 ng/ml HGF dodato je na svako mesto (40 ng/ml u 200ul). Ploča je inkubirana i čitana u RT-CES-u 20-24 sata, a vreme snimanja je bilo svakih 15 minuta. Pozitivna kontrola je bila HGF bez jedinjenja a negativna kontrola je bila bez HGF i bez jedinjenja. Sva određivanja su urađena u duplikatu, i IC50vrednosti su izračunate uz upotrebu GraphPad Prism softvera (GraphPad Software; San Diego, CA).

PRIMER E

U87MG ksenograft model glioblastoma tumora

Uvod

[0486]U87MG ćelijska linija glioblastoma (Piedmont Research Center LLC) eksprimira c-Met receptor i odgovara na humani faktor rasta (HGF). Ova studija je istraživala da li je lečenje c-Met inhibitorom efikasno protiv U87MG ksenograft modela tumora glioblastoma. U ovoj studiji korišćen je test inhibicije rasta tumora (TGI) da bi seper os(p.o.) ispitala monoterapija jedinjenjem u grupama od petnaest atimičnih miševa. Kontrolna grupa je dobijala nosač, 20% hidroksipropil beta ciklodekstrin (HPBCD). Svi tretmani su počeli1. dana(Dl) kod miševa kod kojih su potvrđeni subkutani (s.c.) U87MG tumori.

Metodei materijali

Miševi

[0487] Ženke atimičnih miševa (Harlan) bile su 10-11 nedelja starosti, sa telesnom masom u opsegu od 18,1-25,0 g 1. dana studije. Životinje su dobijalead Ubitumvodu (reversna osmoza, 1 ppm Cl) i NIH 31 Modified and Irradiated Lab Diet<®>'koja se sastoji od 18,0% sirovih proteina, 5,0% sirove masti i 5,0% sirovih vlakana. Miševi su bili smešteni u ozračenoj laboratorijskoj pokrivci za životinje ALPHA-dri<®>bed-o-cobs<®>, u statičkim mikroizolatorima na 12-časovnom svetlosnom ciklusu na 21-22 °C (70-72 °F) i 40-60% vlage. Sve životinje su bile smeštene u prostorijama Laboratorije za medicinu životinja, koja je u potpunosti akreditovana od strane Američkog udruženja za procenu i akreditaciju laboratorijske nege životinja{ American Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care ( AAALAC)).Svi postupci u koje su uključene životinje sprovođeni su u saglasnosti sa NIHVodičem za negu i upotrebu laboratorijskih životinja,a sve protokole je odobrio Interni komitet za negu i upotrebu životinja (IACUC).

Implantacija tumora

[0488] Ksenografti su inicirani od fragmenata humanog glioblastoma tumora U87MG koji su održavani serijom transplantacija u atimične miševe. Svaki test miš je subkutano dobio fragment tumora U87MG (1 mm<3>) implantiran u desni bok, a rast tumora je praćen kako je prosečna veličina dostizala 200 mm<3>. Dvanaest dana kasnije, 1. dana studije, životinje su podeljene u 4 grupe (n=12-15 miševa po grupi), a individualna zapremina tumora je bila u opsegu 172-352 mm<3>dok je srednja zapremina tumora u grupi bila 216 mm<3>. Zapremina tumora je izračunata pomoću formule:

Tumor Volumc =

2

gde je w=širina a /=dužina tumora u mm. Težina tumora može da se proceni uz pretpostavku da je 1 mg ekvivalentan sa 1 mm<3>zapremine tumora.

Lečenje lekovima

[0489] Rastvori za doziranje jedinjenja iz predmetnog pronalaska svake nedelje su pripremani sveži, u nosaču koji se sastoji od 20% hidroksipropil beta ciklodekstrina (HPBCD) u vodi. U svim grupama, zapremina doziranja od 0,2 ml/mišu od 20 g bila je prilagođena masi svake životinje. Doze su davane uzimajući u obzir oblik HCL soli jedinjenja.

Analiza inhibicije rasta tumora (TGI)

[0490] TGI je izračunat iz razlike između medijane zapremina tumora kod miševa lečenih nosačem i miševa lečenih lekom, izražen kao procenat medijane zapremine tumora kontrolne grupe lečene nosačem, pomoću sledeće jednačine:

o/^r-M (Mcdian Tumor Volumc CMltrol - Mcdian Tumor Volumc^ ^

%TGI- Mcdi; an Tumor Volumcxl00

MTV (n) je definisano kao medijana zapremine tumora (MTV) za broj životinja,n,koje tog dana ostaju u studiji.

Toksičnost

[0491] Životinje su svakodnevno merene prvih pet dana studije, a nakon toga dva puta nedeljno. Miševi su često pregledani da bi se uočili neželjeni sporedni efekti vezani za lek, i primećeni klinički znaci toksičnosti su zapisivani. Prihvatljiva toksičnost je definisana kao srednji gubitak telesne mase (BW) grupe tokom studije manji od 20%, i ne više od jedne smrti vezane za lečenje (TR) na deset životinja. Smrt je klasifikovana kao TR ako može da se pripiše sporednim efektima lečenja, što dokazuju klinički znaci i/ili nekropsija, ili je nastupila usled nepoznatih razloga u toku perioda doziranja ili tokom 10 dana od poslednje doze. Smrt je klasifikovana kao nevezana za lečenje (NTR) ako nema dokaza da je smrt vezana za sporedna dejstva leka. Smrt je klasifikovana kao nevezana za lečenje i nepoznatog uzroka (NTRu) ako je uzrok smrti nepoznat.

Statističke i grafičke analize

[0492] Man-VitnijevUtest, za analizu medijana, korišćen je za određivanje statističkog značaja razlike između MTV. Prism 3.03 (GraphPad) za Windows je korišćen za statističke analize i grafičke prezentacije. Rast tumora je predstavljen kao medijana zapremine tumora u odnosu na vreme, za svaku studijsku grupu. Pored toga, krajnja zapremina tumora i krajnji procenat inhibicije rasta tumora (%TGI) takođe su predstavljeni na dijagramu ili na odvojenom grafikonu. (<*>= p < 0,05,<**>= p < 0,01,<***>= p < 0,001). Rezultati studije rasta tumora U87MG prikazani su na Slici1,Slici 2 i Slici 3.

[0493]Slika 1: Referentni Primer 1 je primenjen oralno (p.o.) u dozama od 30 i 50 mg/kg dva puta dnevno (b.i.d.), tokom 21 uzastopnog dana. Obe doze su proizvele statistički značajnu, dozno zavisnu inhibiciju rasta tumora U87MG koji su rasli subkutano kod atimičnih miševa. Poslednjeg dana lečenja (21. dan) doze od 30 i 50 mg/kg smanjile su srednju zapreminu tumora za 66% (p< 0,001), odnosno 97% (p< 0,00 l),u poređenju sa srednjom zapreminom tumora grupe lečene nosačem. Regresija tumora je primećena kod doze od 50 mg/kg.

[0494] Slika 2: Primer 61 je primenjen p.o. u dozama od 25, 50 i 75 mg/kg. Sve doze su proizvele statistički značajnu inhibiciju rasta tumora U87MG uzgajanih subkutano kod atimičnih miševa (p< 0,01). Regresija tumora je takođe primećena kod sve tri doze. Doza od 25 mg/kg je primenjivana jednom dnevno (q.d.) 1. dana i b.i.d. do 12. dana. Doza od 50 mg/kg je primenjivana b.i.d. 7 dana, sa 24 h pauze, a zatim q.d. do 12. dana. Kao doza od 50 mg/kg, doza od 75 mg/kg je primenjivana b.i.d. 7 dana, sa 24 h pauze, a zatim q.d. do 12. dana.

[0495] Slika 3: Primer 61 je primenjen p.o. u dozama od 25, 50 i 75 mg/kg. Poslednjeg dana lečenja (12. dan), srednja zapremina tumora je smanjena za 94% (p < 0,01), 96% (p < 0,01), odnosno 97% (p < 0,01) za doze od 25, 50, odnosno 75 mg/kg.

[0496] Doza od 25 mg/kg je primenjivana jednom dnevno (q.d.) 1. dana i b.i.d. do 12. dana. Doza od 50 mg/kg je primenjivana b.i.d. 7 dana, sa 24 h pauze, a zatim q.d. do 12. dana. Kao doza od 50 mg/kg, doza od 75 mg/kg je primenjivana b.i.d. 7 dana, sa 24 h pauze, a zatim q.d. do 12. dana.

Primer F

Model tumora SI 14

Metode

Miševi

[0497] Ženke atimičnih miševa (CD-1, nu/nu, starosti 9-10 nedelja) nabavljene su od Charles River Laboratories (Wilmington, MA), i čuvane su prema standardima NIH. Svi miševi su držani u grupama (5 miševa po kavezu) u uslovima čistih prostorija u sterilnim mikro-izolatorskim kavezima pri 12-časovnom ciklusu svetlosti i tame, u prostoriji održavanoj na 21-22 °C sa 40-50% vlažnosti. Miševi su hranjeni ozračenom standardnom hranom za glodare i vodomad libitum.Sve životinje su bile smeštene u prostorijama Laboratorije za medicinu životinja, koja je u potpunosti akreditovana od strane Američkog udruženja za procenu i akreditaciju laboratorijske nege životinja (American Association for Assessment and Accreditation of Laboratorv Animal Care (AAALAC)). Svi postupci u koje su uključene životinje sprovođeni su u saglasnosti sa NIHVodičem za negu i upotrebu laboratorijskih životinja,a sve protokole je odobrio Interni komitet za negu i upotrebu životinja (IACUC).

SI 14 Tumori

[0498]Mišja NIH 3T3 dobijena ćelijska linija SI 14, koja je dizajnirana da prekomerno eksprimira i humani faktor rasta (HGF) i humani c-Met receptor, umnožena je u DMEM medijumu (Life Technologies, Bethesda, MD). Neposredno pre injektovanja, ćelije su isprane prebrajane i ponovo suspendovane u PBS-u. Ženke atimičnih miševa težine najmanje 20-21 g su subkutano inokulirane u levu ingvinalnu butnu oblast, sa 5 x IO<6>ćelija u distribucionoj zapremini od 0,1 ml. Tumori su ostavljeni da rastu 5 dana.

Lečenje lekovima

[0499]Miševi su oralno dobijali dozu od 100 mg/kg jedinjenja u 20% HPBCD, ili nosač

(20% HPBCD, kontrolna grupa). Doziranje je nastavljeno 4 uzastopna dana. Jedinjenja iz predmetnog pronalaska su pripremana sveža svakodnevno, kao bistar rastvor u 20% HPBCD, i primenjivana na gore opisani način. Telesna masa je merena na kraju studije, i gubitak telesne mase >10% korišćen je kao indikacija nedostatka podnošljivosti jedinjenja. Neprihvatljiva toksičnost je definisana kao gubitak telesne mase >20% tokom studije. Miševi su svakodnevno pažljivo pregledani pri svakoj dozi, da bi se uočili vidljivi klinički znaci neželjenih sporednih efekata vezanih za lek. U studiji nisu zapažene značajne promene telesne mase ni ponašanja.

Analiza

[0500]Na dan završetka studije, određena je krajnja zapremina tumora i krajnja telesna masa svake životinje. Miševi su žrtvovani eutanazijom, pomoću 100% CO2, i tumori su odmah isečeni u netaknutom stanju i izmereni, gde je krajnja težina vlažnog tumora (u gramima) služila kao primarna krajnja tačka efikasnosti. Prism 3.03 (GraphPad) za Windows je korišćen za statističke analize i grafičke prezentacije. Rezultati studije tumora SI 14 prikazani

su na Slici 4.

[0501] Slika 4:Primer 61 je primenjivan p.o. u dozi od 100 mg/kg q.d., četiri uzastopna dana. Kod svih 5 miševa lečenih Primerom 61, tumori SI 14 su regradirali. Osim toga, tumori kod tri od pet miševa su do kraja studije regradirali do tumora koji se ne mogu napipati ni uočiti.

BIOLOŠKI PODACI

[0502]Aktivnost referentnih jedinjenja i reprezentativnih jedinjenja iz ovog pronalaska je prikazana u donjoj tabeli. Sve aktivnosti su izražene u uM i podaci su prihvaćeni kao validni ako je 95% interval pouzdanosti izračunat pomoću Graphpad-a bio u okviru dvostruke vrednosti IC50.

UPOTREBA ZA LEČENJE / PREVENCIJU

[0503] U drugom aspektu ovog pronalaska, jedinjenja iz pronalaska mogu da se primene za inhibiciju aktivnosti ili ekspresije tirozin kinaze, uključujući c-Met aktivnost, snižavanje aktivnosti ili ekspresije kinaze, uključujući c-Met aktivnost, i modulaciju c-Met u ćeliji ili ispitaniku, ili za lečenje poremećaja vezanih za aktivnost c-Met kinaze ili ekspresiju u ispitaniku. Veruje se da inhibicija c-Met aktivnosti indirektno moduliše ekspresiju c-Met.

[0504] Ovde je takođe objavljen metod za snižavanje ili inhibiranje kinazne aktivnosti c-Met, i modulacije ekspresije c-Met u ćeliji, koji sadrži korak u kome je ćelija u kontaktu sa jedinjenjem formule I. Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje formule I za snižavanje ili inhibiranje kinazne aktivnosti c-Met, i modulacije ekspresije c-Met u ispitaniku. Ovde je takođe objavljen metod za inhibiciju ćelijske proliferacije kod ćelije, koji sadrži korak u kome je ćelija u kontaktu sa jedinjenjem formule I.

[0505] Kinazna aktivnost c-Met, ili ekspresija c-Met u ćeliji ili ispitaniku mogu se odrediti postupcima dobro poznatim u struci, kao što je ovde opisani test za c-Met kinazu. Inhibicija aktivnosti c-Met kinaze u ćelijama može takođe da se izmeri određivanjem nivoa c-Met fosforilacije koristeći format ELISA testa, kao što je onaj ovde opisan, ili pomoću Western Blotting postupka.

[0506] Termin „ ispitanik" kao što je ovde upotrebljen, odnosi se na životinju, poželjno je sisara, najpoželjnije čoveka, koji je predmet lečenja, opažanja ili eksperimenta.

[0507] Termin ,, u kontaktu" kao što je ovde upotrebljen, odnosi se na dodavanje jedinjenja u ćelije, tako da ćelije preuzimaju jedinjenje.

[0508] U drugim otelotvorenjima ovog aspekta, predmetni pronalazak objavljuje i metode profilakse i terapeutske metode za lečenje ispitanika sa rizikom (ili podložnog) da razvije ćelijski proliferativni poremećaj ili poremećaj vezan za c-Met. Takvi poremećaji uključuju prethodno postojeća stanja vezana za ekspresiju (ili prekomernu ekspresiju) c-Met i/ili mutaciju c-Met.

[0509]U jednom primeru, pronalazak daje jedinjenje formule I za sprečavanje poremećaja ćelijske proliferacije ili poremećaja vezanog za c-Met kod ispitanika, uključujući primenu na ispitaniku profilaktički efikasne količine farmaceutske smeše koja sadrži jedinjenje formule I i farmaceutski prihvatljiv nosač. Primena pomenutog profilaktičkog sredstva može da se dogodi pre ispoljavanja simptoma karakterističnih za poremećaj ćelijske proliferacije ili poremećaj vezan za c-Met, tako da se bolest ili poremećaj spreči, ili alternativno, da se uspori njeno napredovanje.

[0510]U drugom primeru, pronalazak se odnosi na jedinjenje formule I za lečenje poremećaja ćelijske proliferacije ili poremećaja vezanog za c-Met kod ispitanika, uključujući primenu na ispitaniku terapeutski efikasne količine farmaceutske smeše koja sadrži jedinjenje formule I i farmaceutski prihvatljiv nosač. Primena pomenutog terapeutskog sredstva može da se dešava istovremeno sa ispoljavanjem simptoma karakterističnih za poremećaj, tako da pomenuto terapeutsko sredstvo služi kao terapija koja kompenzuje poremećaj ćelijske proliferacije ili poremećaje vezane za c-Met.

[0511]U drugom primeru, pronalazak se odnosi na jedinjenje formule I za modulaciju poremećaja ćelijske proliferacije ili poremećaja vezanog za c-Met kod ispitanika, tako da modulacija na nivou c-Met ekspresije ili c-Met aktivnosti može delovati na poboljšanje poremećaja ćelijske proliferacije ili poremećaja vezanog za c-Met, uključujući primenu na ispitaniku terapeutski efikasne količine farmaceutske smeše koja sadrži jedinjenje formule I i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0512]Termin „ profilaktički efikasna količina" odnosi se na količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog sredstva koja inhibira ili odlaže nastanak poremećaja kod ispitanika, kako traže istraživač, veterinar, lekar ili drugo kliničko lice.

[0513]Termin „ terapeutski efikasna količina", kao što je ovde upotrebljen, odnosi se na količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog sredstva koja izaziva biološki ili medicinski odgovor kod ispitanika, koji traže istraživač, veterinar, lekar ili drugo kliničko lice, a koji uključuje ublažavanje simptoma bolesti ili poremećaja koji se leče.

[0514]U struci su poznati postupci za određivanje terapeutski i profilaktički efikasnih doza za trenutnu farmaceutsku smešu.

[0515]Kao što je ovde upotrebljen, termin „ smeša" treba da obuhvati proizvod koji sadrži naznačene sastojke u naznačenim količinama, kao i svaki proizvod koji nastaje, direktno ili indirektno, od kombinacija za naznačene sastojke u naznačenim količinama.

[0516]Kao što su ovde upotrebljeni, termini „ poremećaji vezani za c- Met" ili „ poremećaji vezani za c- Met receptor tirozin kinaze" uključivaće bolesti vezane za aktivnost c-Met, ili koje je obuhvataju, na primer prekomerna aktivnost c-Met, i stanja koja prate te bolesti. Termin „ prekomerna aktivnost c- Met" odnosi se na 1) c-Met ekspresiju u ćelijama koje normalno ne eksprimiraju c-Met; 2) c-Met aktivnost ćelija koje normalno nemaju aktivni c-Met; 3) povećanu ekspresiju c-Met koja dovodi do neželjene ćelijske proliferacije; ili 4) mutacije koje dovode do konstitutivne aktivacije c-Met. Primeri „ poremećaja vezanih za c- Met" uključuju poremećaje koji su rezultat preterane stimulacije c-Met usled abnormalno velike količine c-Met ili mutacija c-Met, ili poremećaje koji su rezultat abnormalno velike količine c-Met aktivnosti usled abnormalno velike količine c-Met ili mutacija c-Met.

[0517]Poznato je da je prekomerna aktivnost c-Met uključena u patogenezu nekih bolesti, kao što su poremećaji ćelijske proliferacije, neoplastični poremećaji i kanceri.

[0518]Termin „ poremećaji ćelijske proliferacije" odnosi se na neželjenu proliferaciju ćelija na jednoj ili više podgrupa ćelija u višećelijskom organizmu, koja ima za posledicu štetu (tj. neprijatnost ili skraćenje očekivanog životnog veka) nanetu višećelijskim organizmima. Poremećaji ćelijske proliferacije mogu da nastanu kod različitih vrsta životinja i kod ljudi. Poremećaji ćelijske proliferacije obuhvataju neoplastične poremećaje (kao što je ovde upotrebljen, „ neoplastični poremećaj" se odnosi na tumor nastao usled abnormalnog ili nekontrolisanog rasta ćelija) i druge poremećaje ćelijske proliferacije.

[0519] Primeri poremećaja ćelijske proliferacije vezanih za C-Met uključuju tumore i kancere - na primer, nasledni i sporadični papilarni renalni karcinom, kancer dojke, kolorektalni kancer, karcinom želuca, gliom, kancer jajnika, hepatocelularni karcinom, karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinom testisa, karcinom bazalnih ćelija, karcinom jetre, sarkom, maligni pleuralni mezoteliom, melanom, multipli mijelom, osteosarkom, kancer pankreasa, kancer prostate, sinovijalni sarkom, kancer štitne žlezde, nemikrocelularni kancer pluća (NSCLC) i mikrocelularni kancer pluća, tranzicioni ćelijski karcinom mokraćne bešike, karcinom testisa, karcinom bazalnih ćelija, karcinom jetre - uključujući leukemije, limfome i mijelome - na primer, akutna limfocitna leukemija (ALL), akutna mijeloidna leukemija (AML), akutna promijelocitna leukemija (APL), hronična limfocitna leukemija (CLL), hronična mijeloidna leukemija (CML), hronična neutrofilna leukemija (CNL), akutna neizdiferencirana leukemija (AUL), anaplastični krupnoćelijski limfom (ALCL), prolimfocitna leukemija (PML), juvenilna mijelomonocitna leukemija (JMML), ALL T-ćelija kod odraslih, AML sa trilinearnom mijelodisplazijom (AML/TMDS), mešovita leukemija (MLL), sindromi mijelodisplazije (MDS), mijeloproliferativni poremećaji (MPD), multipli mijelom (MM), mijeloidni sarkom, ne-Hodžkinov limfom i Hodžkinova bolest (poznata i kao Hodžkinov limfom) i bolesti vezane za nastajanje nove vaskulature, kao što je reumatoidni artritis i retinopatija. Drugi poremećaji ćelijske proliferacije kod kojih je uključena prekomerna aktivnost c-Met u njihovu patogenezu uključuju kancere kod kojih c-Met aktivnost doprinosi invazivnom/metastatskom fenotipu, uključujući kancere kod kojih c-Met nije prekomerno eksprimiran niti na drugi način izmenjen.

[0520] U daljem otelotvorenju ovog aspekta, pronalazak obuhvata kombinovanu terapiju za lečenje ili inhibiranje početka poremećaja ćelijske proliferacije ili poremećaja vezanog za c-Met kod ispitanika. Kombinovana terapija obuhvata primenu na subjektu terapeutski ili profilaktički efikasne količine jedinjenja formule I, i jednu ili više drugih terapija protiv ćelijske proliferacije, uključujući hemoterapiju, terapiju zračenjem, gensku terapiju i imunoterapiju.

[0521] U otelotvorenju predmetnog pronalaska, jedinjenje iz predmetnog pronalaska može se primenjivati u kombinaciji sa hemoterapijom. Kao što je ovde upotrebljena, hemoterapija se odnosi na hemoterapiju koja uključuje hemoterapeutski agens. U ovde objavljenim kombinovanim postupcima lečenja može da se primeni niz hemoterapeutskih agenasa. Hemoterapeutski agensi razmatrani kao primer uključuju, ali ne isključivo, jedinjenja platine (npr. cisplatin, karboplatin, oksaliplatin); taksane (npr. paklitaksel, docetaksel); jedinjenja kamptotecina (irinotekan, topotekan); vinka alkaloide (npr. vinkristin, vinblastin, vinorelbin); anti-tumorske derivate nukleozida (npr. 5-fluorouracil, leukovorin, gemcitabin, kapecitabin); alkilujuće agense (npr. ciklofosfamid, karmustin, lomustin, tiotepa); epipodofilotoksine / podofilotoksine (npr. etopozid, tenipozid); inhibitore aromataze (npr. anastrozol, letrozol, eksemestan); anti-estrogena jedinjenja (npr. tamoksifen, fulvestrant), antifolate (npr. premetreksed dinatrijum); hipometilujuće agense (npr. azacitidin); biološke lekove (npr. gemtuzamab, cetuksimab, rituksimab, pertuzumab, trastuzumab, bevacizumab, erlotinib); antibiotike/antraciline (npr. idarubicin, aktinomicin D, bleomicin, daunorubicin, doksorubicin, mitomicin C, daktinomicin, karminomicin, daunomicin); antimetabolite (npr. klofarabin, aminopterin, citozin arabinozid, metotreksat); tubulin-vezujuće agense (npr. kombretastatin, kolhicin, nokodazol); inhibitore topoizomeraze (npr. kamptotecin); agense za diferencijaciju (npr. retinoidi, vitamin D i retinoinska kiselina); agense koji blokiraju metabolizam retinoinske kiseline (RAMBA) (npr. akutan); inhibitore kinaze (npr. flavoperidol, imatinib mezilat, gefitinib); inhibitore farneziltransferaze (npr. tipifarnib); inhibitore histon deacetilaze; inhibitore ubikvuitin-proteazomskog puta (npr. bortezomib, Jondelis).

[0522] Dalji korisni agensi uključuju verapamil, antagonist kalcijuma za koji je utvrđeno da je koristan u kombinaciji sa antineoplastičnim agensima da bi se uspostavila hemosenzitivnost ćelija tumora rezistentnih na prihvaćene hemoterapeutske agense, i da bi se povećala efikasnost takvih jedinjenja kod maligniteta osetljivih na lekove. Pogledajte referencu Simpson WG, The calcium channel blocker verapamil and cancer chemotherapv. Cell Calcium. 1985 Dec;6(6):449-67. Pored toga, hemoterapeutski agensi koji će se tek pojaviti razmatrani su kao korisni u kombinaciji sa jedinjenjem iz predmetnog pronalaska.

[0523] U drugom otelotvorenju predmetnog pronalaska, jedinjenje iz predmetnog pronalaska može se primenjivati u kombinaciji sa terapijom zračenjem. Kao što je ovde upotrebljena, „ terapija zračenjem" („radijaciona terapija") se odnosi na terapiju koja obuhvata izlaganje radijaciji ispitanika kome je to potrebno. Takva terapija je poznata stručnjacima u ovoj oblasti. Odgovarajuća šema radijacione terapije biće slična onima koje se već koriste u kliničkom lečenju, gde se radijaciona terapija koristi sama ili u kombinaciji sa drugim hemoterapeuticima.

[0524] U drugom otelotvorenju predmetnog pronalaska, jedinjenje iz predmetnog pronalaska može se primenjivati u kombinaciji sa genskom terapijom. Kao što je ovde upotrebljena, „ genska terapija" se odnosi na terapiju usmerenu na određene gene koji su uključeni u razvoj tumora. Moguće strategije genske terapije uključuju obnovu oštećenih gena za sprečavanje kancera, transdukciju ili transfekciju ćelija sa antisens DNK koja odgovara genima koji šifriraju faktore rasta i njihove receptore, strategija zasnovanih na RNK, kao što su ribozimi, RNK mamci, antisens informacione RNK i mali interferentni RNK molekuli (siRNK) i takozvani „geni samoubice".

[0525] U drugom otelotvorenju predmetnog pronalaska, jedinjenje iz predmetnog pronalaska može se primenjivati u kombinaciji sa imunoterapijom. Kao što je ovde upotrebljena, „ imunoterapija" se odnosi na terapiju koja ima za cilj određeni protein uključen u razvoj tumora putem antitela specifičnih za taj protein. Na primer, monoklonska antitela protiv vaskularnog endotelijalnog faktora rasta upotrebljena su za lečenje kancera.

[0526] Tamo gde se koristi drugi farmaceutski preparat pored jedinjenja iz predmetnog pronalaska, dva farmaceutska preparata mogu biti primenjena istovremeno (npr. u odvojenim ili zajedničkim smešama) prema bilo kom redosledu, približno u isto vreme, ili prema razdvojenim šemama doziranja. U poslednjem slučaju, dva jedinjenja će biti primenjena u periodu i u količini i na način koji je dovoljan da se obezbedi postizanje povoljnog ili sinergijskog efekta. Podrazumeva se da poželjni metod i redosled primene i odgovarajuća doza i režim za svaku komponentu iz kombinacije zavise od posebnog hemoterapeutskog agensa koji se primenjuje zajedno sa jedinjenjem iz predmetnog pronalaska, njegovog puta primene, konkretnog tumora koji se leči i konkretnog domaćina koji se leči.

[0527] Kao što će razumeti oni sa prosečnim veštinama u struci, odgovarajuće doze hemoterapeutskog agensa biće uopšteno slične ili manje od onih koje se već koriste u kliničkim terapijama gde se hemoterapeutici primenjuju sami ili u kombinaciji sa drugim hemoterapeuticima.

[0528]Optimalan metod i redosled primene i veličinu doze i režim mogu lako da odrede stručnjaci za ovu oblast klasičnim metodama, i uz upotrebu ovde iznetih informacija.

[0529]Samo kao primer, jedinjenja platine se povoljno koriste u dozi od 1 do 500 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) površine tela, na primer 50 do 400 mg/m<2>, konkretno za cisplatin u dozi od oko 75 mg/m<2>a za karboplatin oko 300mg/m<2>po turi lečenja. Cisplatin se ne apsorbuje oralno, i stoga mora da se daje putem injekcije, intravenski, subkutano, intratumorski ili intraperitonealno.

[0530]Samo kao primer, jedinjenja taksana se povoljno primenjuju u dozi od 50 do 400 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) površine tela, na primer 75 do 250 mg/m<2>, konkretno za paklitaksel u dozi od oko 175 do 250 mg/m<2>a za docetaksel oko 75 do 150 mg/m<2>po turi lečenja.

[0531]Samo kao primer, jedinjenja kamptotecina se povoljno primenjuju u dozi od 0,1 do 400 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) površine tela, na primer 1 do 300 mg/m<2>, konkretno za irinotekan u dozi od oko 100 do 350 mg/m<2>a za topotekan oko 1 do 2 mg/m<2>po turi lečenja.

[0532]Samo kao primer, vinka alkaloidi mogu povoljno da se primenjuju u dozi od 2 do 30 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) površine tela, konkretno za vinblastin u dozi od oko 3 do 12 mg/m<2>, za vinkristin u dozi od oko 1 do 2 mg/m<2>a za vinorelbin u dozi oko 10 do 30mg/m<2>po turi lečenja.

[0533]Samo kao primer, antitumorski derivati nukleozida mogu povoljno da se primenjuju u dozi od 200 do 2500 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) površine tela, na primer 700 do 1500 mg/m<2>. 5-fluorouracil (5-FU) se uobičajeno koristi putem intravenske primene, u dozama u opsegu od 200 do 500 mg/m<2>(poželjno od 3 do 15 mg/kg/dan). Gemcitabin se povoljno primenjuje u dozi od oko 800 do 1200 mg/m<2>a kapecitabin se povoljno primenjuje u dozi od oko 1000 do 2500 mg/m<2>po turi lečenja.

[0534]Samo kao primer, alkilujući agensi mogu povoljno da se primenjuju u dozi od 100 do 500 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) površine tela, na primer 120 do 200 mg/m<2>, konkretno za ciklofosfamid u dozi od oko 100 do 500 mg/m<2>, za hlorambucil u dozi od oko 0,1 do 0,2 mg/kg telesne mase, za karmustin u dozi od oko 150 do 200 mg/m<2>, a za lomustin u dozi od oko 100 do 150 mg/m<2>po turi lečenja.

[0535]Samo kao primer, derivati podofilotoksina mogu povoljno da se primenjuju u dozi od 30 do 300 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) površine tela, na primer 50 do 250 mg/m<2>, konkretno za etoposid u dozi od oko 35 do 100 mg/m<2>a za teniposid oko 50 do 250 mg/m<2>po turi lečenja.

[05361Samo kao primer, derivati antraciklina mogu povoljno da se primenjuju u dozi od 10 do 75 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) površine tela, na primer 15 do 60 mg/m<2>, konkretno za doksorubicin u dozi od oko 40 do 75 mg/m<2>, za daunorubicin u dozi od oko 25 do 45 mg/m<2>, a za idarubicin u dozi od oko 10 do 15 mg/m<2>po turi lečenja.

[0537]Samo kao primer, anti-estrogena jedinjenja mogu povoljno da se primenjuju u dozi od oko 1 do 100 mg dnevno, u zavisnosti od konkretnog agensa i stanja koje se leči. Tamoksifen se povoljno primenjuje oralno, u dozi od oko 5 do 50 mg, poželjno 10 do 20 mg dva puta dnevno, nastavljajući terapiju dovoljno dugo da se postigne i održi terapeutski efekat. Toremifen se povoljno primenjuje oralno, u dozi od oko 60 mg jednom dnevno, nastavljajući terapiju dovoljno dugo da se postigne i održi terapeutski efekat. Anastrozol se povoljno primenjuje oralno, u dozi od oko 1 mg jednom dnevno Droloksifen se povoljno primenjuje oralno, u dozi od oko 20-100 mg jednom dnevno. Raloksifen se povoljno primenjuje oralno, u dozi od oko 60 mg jednom dnevno. Eksemestan se povoljno primenjuje oralno, u dozi od oko 25 mg jednom dnevno.

[0538]Samo kao primer, biološki lekovi mogu povoljno da se primenjuju u dozi od 1 do 5 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) površine tela, ili kao što je poznato u struci, ukoliko je to različito. Na primer, trastuzumab se povoljno primenjuje u dozi od 1 do 5 mg/m<2>, konkretno 2 do 4mg/m<2>po turi lečenja.

[0539]Doze se mogu primenjivati, na primer jednom, dva puta, tri ili više puta po turi lečenja, koje može biti ponavljano, na primer, svakih 7, 14, 21 ili 28 dana.

[0540]Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se primenjivati kod ispitanika sistemski, na primer, intravenski, oralno, subkutano, intramuskularno, intradermalno ili parenteralno. Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu takođe da se primenjuju na ispitanika lokalno. Neograničavajući primeri lokalnih sistema za isporuku uključuju upotrebu intraluminalnih medicinskih sredstava, koja obuhvataju katetere za intravaskularnu isporuku lekova, žice, farmakološke stentove i endoluminalne obloge.

[0541]Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu dalje biti primenjena na ispitaniku u kombinaciji sa ciljnim agensom, kako bi se dobila visoka lokalna koncentracija jedinjenja na ciljanom mestu. Pored toga, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu biti formulisana za brzo oslobađanje ili sporo oslobađanje, sa ciljem da se lekovi ili agensi održe u kontaktu sa ciljnim tkivima u periodu koji se kreće od nekoliko sati do nekoliko nedelja.

[0542]Predmetni pronalazak takođe daje farmaceutsku smešu koja sadrži jedinjenje formule I povezano sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Farmaceutsko jedinjenje može da sadrži između oko 0,1 mg i 1000 mg, poželjno je oko 100 do 500 mg jedinjenja, i može biti konstituisano u bilo kakav oblik pogodan za izabrani način primene.

[0543]Fraze „ farmaceutski prihvatljiv" odnose se na molekulske vrste i jedinjenja koja ne proizvode neželjene, alergijske ili druge nepovoljne reakcije kada se primenjuju na životinji ili čoveku, kako je prikladno. Otkriće podjednako obuhvata veterinarsku primenu, pa „farmaceutski prihvatljive" formulacije uključuju formulacije za kliničku i/ili veterinarsku primenu.

[0544]Nosači obuhvataju neophodne i inertne farmaceutske ekscipijense, uključujući, ali se ne ograničavajući na vezivače, agense za suspendovanje, lubrikanse, aromate, zaslađivače, konzervanse, boje i glazure. Smeše prikladne za oralnu primenu uključuju čvrste oblike, kao što su pilule, tablete, obložene tablete, kapsule (svaki oblik uključuje formulacije za trenutno oslobađanje, tempirano oslobađanje i odloženo oslobađanje), granule i praškove, i tečne oblike, kao što su rastvori, sirupi, eliksiri, emulzije i suspenzije. Korisni oblici za parenteralnu primenu uključuju sterilne rastvore, emulzije i suspenzije.

[0545] Farmaceutska smeša iz predmetnog pronalaska takođe uključuje farmaceutsku smešu za sporo oslobađanje jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Smeša uključuje nosač za sporo oslobađanje (tipično, polimerski nosač) i jedinjenje iz predmetnog pronalaska.

[0546] Biodegradabilni nosači za sporo oslobađanje dobro su poznati u struci. To su supstance koje mogu da grade čestice koje u sebi zarobe aktivno jedinjenje(a), i polako se raspadaju/rastvaraju u pogodnoj sredini (npr. vodenoj, kiseloj, baznoj, itd.) i pri tome se raspadaju/rastvaraju u telesnim fluidima i otpuštaju u njih aktivno jedinjenje(a). Cestice su poželjno nanočestice (tj. u opsegu prečnika od oko 1 do 500 nm, poželjno oko 50-200 nm u prečniku, a najpoželjnije oko 100 nm u prečniku).

[0547] Predmetni pronalazak takođe daje metode za pripremu farmaceutskih smeša iz ovog pronalaska. Jedinjenje formuleI,kao aktivni sastojak, dobro se pomeša sa farmaceutskim nosačem prema klasičnim farmaceutskim tehnikama za mešanje, u kojima nosač može da bude u veoma raznovrsnim oblicima, što zavisi od oblika željenog preparata za primenu, tj. oralni ili parenteralni, kao što je intramuskularni. Prilikom pripreme smeša u oralnom doznom obliku, može da se primeni bilo koji uobičajeni farmaceutski medijum. Tako, za tečne oralne preparate, kao što su, na primer, suspenzije, eliksiri i rastvori, pogodni nosači i aditivi uključuju vodu, glikole, ulja, alkohole, arome, konzervanse, boje i slično; za čvrste oralne preparate kao što su, na primer, praškovi, kapsule, obložene tablete, gel kapsule i tablete, pogodni nosači i aditivi uključuju škrobove, šećere, rastvarače, agense za granulaciju, lubrikanse, vezivače, agense za dezintegraciju i slično. Zbog lakoće primene, tablete i kapsule predstavljaju najpovoljniji pojedinačni oralni dozni oblik, u kom slučaju se očigledno koriste čvrsti farmaceutski nosači. Po želji, tablete mogu biti obložene šećerom ili enterički obložene. Za parenteralne preparate, nosač će obično sadržati sterilnu vodu, mada mogu biti uključeni i drugi sastojci, na primer, radi poboljšanja rastvorljivosti ili za konzervisanje. Injektabilne suspenzije mogu takođe da se pripreme, i u tom slučaju mogu da se upotrebe prikladni tečni nosači, agensi za suspendovanje i slično. Prilikom pripreme za sporo otpuštanje, nosač za sporo otpuštanje, tipično polimerski nosač, i jedinjenje iz predmetnog pronalaska prvo se rastvore ili disperguju u organskom rastvaraču. Dobij eni organski rastvor se zatim dodaje u vodeni rastvor, da bi se dobila emulzija tipa ulje u vodi. Poželjno, vodeni rastvor sadrži površinski aktivni agens(e). Zatim se organski rastvarač uklanja uparavanjem iz emulzije tipa ulje u vodi, da bi se dobila koloidna suspenzija čestica koja sadrži nosač za sporo otpuštanje i jedinjenje iz predmetnog pronalaska.

[0548] Ove farmaceutske smeše će sadržati, po doznoj jedinici, npr. tableti, kapsuli, prašku, injekciji, kašičici i slično, količinu aktivnog sastojka koja je potrebna da se isporuči efikasna doza, kao što je gore opisano. Ove farmaceutske smeše će ovde sadržati, po doznoj jedinici, npr. tableti, kapsuli, prašku, injekciji, supozitoriji, kašičici i slično, od oko 0,01 do 200 mg/kg telesne mase dnevno. Poželjno, opseg je od oko 0,03 do 100 mg/kg telesne mase dnevno, najpoželjnije, od oko 0,05 do oko 10 mg/kg telesne mase dnevno. Jedinjenja mogu biti primenjena prema režimu od 1 do 5 puta dnevno. Međutim, doza može da varira u zavisnosti od potreba pacijenata, ozbiljnosti stanja koje se leči i jedinjenja koje se koristi. Može se upotrebiti ili dnevna primena ili post-periodično doziranje.

[0549] Poželjno, te smeše su u jediničnim doznim oblicima, kao što su tablete, pilule, kapsule, praškovi, granule, sterilni parenteralni rastvori ili suspenzije, dozirani aerosol ili tečni sprejevi, kapi, ampule, auto-injektorska sredstva ili supozitorije; za oralnu parenteralnu, intranazalnu, sublingvalnu ili rektalnu primenu, ili za primenu putem inhalacije ili insuflacije. Alternativno, smeša može biti prisutna u obliku pogodnom za primenu jednom nedeljno ili jednom mesečno; na primer, nerastvorna so aktivnog jedinjenja, kao što je dekanoatna so, može biti prilagođena da obezbedi depo preparat za intramuskularnu injekciju. Za pripremu čvrstih smeša kao što su tablete, glavni aktivni sastojak se pomeša sa farmaceutskim nosačem, npr. klasičnim sastojcima za tabletiranje, kao što je kukuruzni škrob, laktoza, saharoza, sorbitol, talk, stearinska kiselina, magnezijum stearat, dikalcijum fosfat ili gume, i drugim farmaceutskim rastvaračima, npr. vodom, da bi se formirala čvrsta smeša za predformulaciju, koja sadrži homogenu smešu jedinjenja iz predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutske prihvatljive soli. Kada se kaže da su te predformulacije homogene, misli se daje aktivni sastojak ravnomerno dispergovan u smeši, tako da smeša može lako biti podeljena na jednako efikasne dozne oblike, kao što su tablete, pilule i kapsule. Ova smeša za čvrste predformulacije se zatim deli na jedinične dozne oblike, gore opisane vrste, koji sadrže od 0,1 do oko 500 mg aktivne supstance iz predmetnog pronalaska. Tablete ili pilule nove smeše mogu da se oblože ili na drugi način konstituišu da bi se dobio dozni oblik koji pruža prednost produženog dejstva. Na primer, tableta ili pilula može da sadrži unutrašnju i spoljašnju doznu komponentu, pri čemu je ova druga u obliku omota preko prve. Dve komponente mogu biti razdvojene enteričnim slojem koji služi da spreči dezintegraciju u želucu i da dozvoli prelazak nedirnute unutrašnje komponente u duodenum, ili da njeno otpuštanje bude odloženo. Za takav enterički sloj mogu da se koriste različiti materijali ili glazure, i takvi materijali uključuju niz polimernih kiselina sa takvim materijalima kao što je šelak, acetil alkohol i celuloza acetat.

[0550] Tečni oblici u kojima može biti sadržano jedinjenje formuleI,za oralnu primenu ili za injekciju, uključuju vodene rastvore, pogodno aromatizovane sirupe, vodene ili uljane suspenzije, i aromatizovane emulzije sa jestivim uljima, kao što je ulje pamučnog semena, susamovo ulje, kokosovo ulje ili ulje od kikirikija, kao i eliksire i slične farmaceutske nosače. Pogodni agensi za dispergovanje ili suspendovanje za vodene suspenzije uključuju sintetičke i prirodne gume, kao što je tragakant, akacija, alginat, dekstran, natrijum karboksimetil celuloza, metilceluloza, polivinil pirolidon ili želatin. Tečni oblici u pogodno aromatizovanim agensima za dispergovanje ili suspendovanje mogu takođe da sadrže sintetičke i prirodne gume, na primer, tragakant, akaciju, metil celulozu i slično. Za parenteralnu primenu su željene sterilne suspenzije i rastvori. Izotonični preparati koji generalno sadrže pogodne konzervanse koriste se kada se želi intravenska primena.

[0551] Povoljno, jedinjenja formule I mogu da se primene kao jedna dnevna doza, ili ukupna dnevna doza može biti primenjena u podeljenim dozama od dva, tri ili četiri puta dnevno. Nadalje, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se primenjivati u intranazalnom obliku putem topikalne primene prikladnih intranazalnih nosača, ili putem transdermalnih flastera koji su dobro poznati onima koji su prosečno upoznati sa strukom. Da bi bili primenjeni u obliku sistema za transdermalnu isporuku, dozna primena će, naravno, biti kontinualna a ne sa prekidima u toku doznog režima.

[0552] Na primer, za oralnu primenu u obliku tablete ili kapsule, aktivna komponenta leka može da se kombinuje sa oralnim, netoksičnim, farmaceutski prihvatljivim inertnim nosačem, kao što je etanol, glicerol, voda i slično. Štaviše, kada je poželjno ili potrebno, pogodna veziva, lubrikansi, agensi za dezintegraciju i za bojenje mogu takođe da se dodaju u smešu. Pogodni vezivači uključuju, bez ograničenja, škrob, želatin, prirodne šećere kao što je glukoza ili beta-laktoza, kukuruzne zaslađivače, prirodne i sintetičke gume, kao što je akacija, tragakant ili natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid i slično. Dezintegratori uključuju, bez ograničenja, škrob, metil celulozu, agar, bentonit, ksantan gumu i slično.

[0553]Dnevna doza proizvoda iz predmetnog pronalaska može da bude različita, u širokom opsegu između 1 i 5000 mg po odraslom čoveku dnevno. Za oralnu primenu, smeše su poželjno dobijene u obliku tableta koje sadrže 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, 50,0, 100, 150, 200, 250 i 500 miligrama aktivne supstance za simptomatsko podešavanje doze prema pacijentu koga treba lečiti. Efikasna količina leka se obično daje na doznom nivou od oko 0,01 mg/kg do oko 200 mg/kg telesne mase dnevno. Naročito, opseg je od oko 0,03 do oko 15 mg/kg telesne mase dnevno, a još specifičnije, od oko 0,05 do oko 10 mg/kg telesne mase dnevno. Jedinjenje iz predmetnog pronalaska može se primenjivati po režimu od najviše četiri ili više puta dnevno, poželjno 1 do 2 puta dnevno.

[0554]Optimalne doze za primenu mogu lako da odrede stručnjaci u ovoj oblasti, i variraće u zavisnosti od konkretnog jedinjenja koje se koristi, načina primene, jačine preparata, načina primene i napredovanja stanja bolesti. Pored toga, faktori vezani za konkretnog pacijenta koji se leči, uključujući njegove godine, masu, ishranu i vreme primene, uzrokuju potrebu prilagođavanja doze.

[0555]Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu takođe biti primenjena u obliku lipozomskih sistema za isporuku, kao što su male unilamelarne vezikule, velike unilamelarne vezikule i multilamelarne vezikule. Lipozomi mogu da se formiraju iz različitih vrsta lipida, uključujući ali se ne ograničavajući na amfipatične lipide, kao što su fosfatidilholini, sfingomijelini, fosfatidiletanolamini, fosfatidilholini, kardiolipini, fosfatidilserini, fosfatidilgliceroli, fosfatidinske kiseline, fosfatidilinozitoli, diacil trimetilamonijum propani, diacil dimetilamonijum propani i stearilamini, neutralni lipidi, kao što su trigliceridi, i njihove kombinacije. Oni mogu da sadrže holesterol ili da budu bez holesterola.

[0556]Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu takođe da se primenjuju lokalno. Može da se koristi svako sredstvo za isporuku, kao što su kateteri za intravaskularnu isporuku leka, žice, farmakološki stentovi i endoluminalne obloge. Sistem za isporuku za takvo sredstvo može da sadrži kateter za lokalnu infuziju koji isporučuje jedinjenje brzinom koju kontroliše lice koje vrši primenu.

[0557]Predmetni pronalazak obezbeđuje sredstvo za isporuku leka koje obuhvata intraluminalno medicinsko sredstvo, poželjno stent, i terapeutsko doziranje jedinjenja iz pronalaska.

[0558]Termin „stent" odnosi se na bilo koje sredstvo koje može da se isporučuje kateterom. Stent se rutinski koristi za sprečavanje vaskularnog zatvaranja usled fizičkih anomalija, kao što je neželjeni unutrašnji rast vaskularnog tkiva usled operativne traume. On često ima cevastu, rešetkastu strukturu koja se širi, pogodnu da bude ostavljena u lumenu kanala da bi se smanjila opstrukcija. Stent ima površinu koja je u kontaktu sa zidom lumena i površinu koja je izložena lumenu. Površina koja je u kontaktu sa zidom lumena je spoljašnja površina cevčice, a površina izložena lumenu je unutrašnja površina cevčice. Stent može biti polimerni, metalni, ili polimerni i metalni, opciono može biti biodegradabilan.

[0559]Stentovi se obično ubacuju u lumen u neekspandovanom obliku, a zatim se šire samostalno, ili uz pomoć drugog sredstvain situ.Tipičan metod ekspanzije dešava se pomoću upotrebe angioplastičnog balona na kateteru, koji se naduvava u stenoziranom sudu ili telesnom prolazu, da bi se napregnuo i prekinuo opstrukcije vezane za komponente zida suda, i da bi se dobio uvećani lumen. Samošireći stentovi opisani u patentu U.S. 6,776,796 (Falotico et al.) mogu takođe da se upotrebe. Kombinacija stenta sa lekovima, agensima ili jedinjenjima koja sprečavaju upalu i proliferaciju može da obezbedi najefikasnije lečenje za post-angioplastičnu restenozu.

[0560] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu biti u sastavu stenta ili vezana za njega na više načina, uz upotrebu različitog broja biokompatibilnih materijala. U jednom primeru otelotvorenja, jedinjenje je direktno ubačeno u polimerni matriks, kao što je polimer polipirol, i zatim prevučeno preko spoljne površine stenta. Jedinjenje se spira sa matriksa difuzijom kroz polimer. Stentovi i metode za nanošenje lekova na stent u obliku prevlake su detaljno objašnjeni u struci. U drugom primeru otelotvorenja, stent je prvo prevučen osnovnim slojem koji je sadržao rastvor jedinjenja, etilen-ko-vinilacetat i polibutilmetakrilat. Zatim je stent nadalje prevučen spoljnim slojem koji se sastojao samo od polibutilmetakrilata. Spoljašnji sloj deluje kao difuziona barijera koja sprečava da se jedinjenje previše brzo spere i uđe u okolna tkiva. Debljina spoljašnjeg sloja ili gornjeg premaza određuje brzinu spiranja jedinjenja sa matriksa. Stentovi i metode za nanošenje prevlaka su detaljno objašnjeni u WIPO publikaciji WO9632907, U.S. Publication No. 2002/0016625 i u referencama koje su tu navedene.

[0561]Rastvor jedinjenja iz pronalaska i biokompatibilni materijali/polimeri mogu biti ubačeni u ili na stent na više načina. Na primer, rastvor može biti naprskan na stent, ili stent može biti potopljen u rastvor. U poželjnom otelotvorenju, rastvor je naprskan na stent i osušen. U drugom primeru otelotvorenja, rastvor može biti polarno naelektrisan, a stent električno izmenjen da ima suprotno naelektrisanje. Na taj način, jedinjenje i stent će se uzajamno privlačiti. Upotrebom ove vrste postupka prskanja, može se smanjiti otpad i može se postići bolja kontrola debljine sloja. Jedinjenje je poželjno samo vezano za spoljnu površinu stenta koja uspostavlja kontakt sa jednim tkivom. Međutim, kod nekih jedinjenja može biti prevučen ceo stent. Kombinacija doze jedinjenja koja se nanosi na stent i polimernog sloja koji kontroliše oslobađanje leka važna je za efikasnost leka. Jedinjenje poželjno ostaje na stentu najmanje tri dana, pa do oko šest meseci i duže, poželjno između sedam i trideset dana.

[0562]Bilo koji broj neerodibilnih biokompatibilnih polimera može biti upotrebljen zajedno sa jedinjenjima iz pronalaska. Važno je istaći da različiti polimeri mogu biti upotrebljeni za različite stentove. Na primer, gore opisani matriks od etilen-ko-vinilacetata i polibutilmetakrilata dobro deluje sa stentovima od nerđajućeg čelika. Drugi polimeri mogu da se koriste efikasnije sa stentovima od drugih materijala, uključujući materijale koji imaju superelastične osobine, kao što su legure nikla i titanijuma.

[0563]Restenoza je uzročnik značajnog broja morbiditeta i mortaliteta nakon koronarne angioplastike. Restenoza se dešava kombinacijom četiri procesa, uključujući elastične osobine, nastajanje tromba, intimalnu hiperplaziju i remodelovanje ekstracelulamog matriksa. Nedavno je identifikovano više faktora rasta koji imaju ulogu u tim procesima koji dovode do restenoze.Pogledajte:Schiele TM et. al., 2004, "Vascular restenosis - striving for therapv." Expert Opin Pharmacother. 5(11):2221-32. Vaskularne glatke mišićne ćelije (VSMC) eksprimiraju c-Met receptor. Izloženost hepatocitnom faktoru rasta, Ugandu za c-Met, stimuliše te ćelije da ispolje migratorni fenotip.Pogledajte:Taher et.al., Hepatocvte growth factor triggers signaling cascades mediating vascular smooth muscle cell migration. Biochem Biophvs Res Commun. (2002) 298(l):80-6; Morishita R, Aoki M, Yo Y, Ogihara T. Hepatocvte growth factor as cardiovascular hormone: role of HGF in the pathogenesis of cardiovascular disease. Endocr J. (2002) Jun;49(3):273-84. Pošto VSMC migracija iz medijuma u intimu arterija ima ulogu u razvijanju ateroskleroze i restenoze, veruje se da antagonisti aktivnosti c-Met kinaze predstavljaju održivu terapeutsku strategiju u lečenju ovih bolesti.

[0564]U skladu sa tim, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za lečenje poremećaja vezanih za c-Met, uključujući restenozu, intimalnu hiperplaziju ili upalu u zidovima krvnog suda, uključujući kontrolisanu isporuku, oslobađanjem sa intraluminalnog medicinskog sredstva, kao što je stent, jedinjenja iz pronalaska u terapeutski efikasnim količinama.

[0565]Metode uvođenja stenta u telesni lumen su dobro poznate, i stentovi prevučeni jedinjenjem iz predmetnog pronalaska se poželjno uvode pomoću katetera. Kao što će moći da procene oni sa prosečnim znanjem u struci, metode će neznatno da se razlikuju, u zavisnosti od mesta implantacije stenta. U slučaju koronarne implantacije stenta, balon kateter koji nosi stent ubacuje se u koronarnu arteriju, i stent se postavlja na željeno mesto. Balon se naduvava, šireći stent. Kako se stent širi, stent dolazi u kontakt sa zidom lumena. Kada se stent postavi, balon se izduva i ukloni. Stent ostaje na mestu, pri čemu je površina u kontaktu sa lumenom koja nosi jedinjenje u direktnom kontaktu sa površinom zida lumena. Implantacija stenta može po potrebi da bude praćena antikoagulacionom terapijom.

[0566]Optimalni uslovi za isporuku jedinjenja za upotrebu na stentu iz pronalaska mogu da variraju u zavisnosti od različitih lokalnih sistema za isporuku, kao i osobina i koncentracija upotrebljenih jedinjenja. Uslovi koji mogu biti optimizovani uključuju, na primer, koncentracije jedinjenja, distribucionu zapreminu, brzinu isporuke, dubinu prodiranja u zid suda, proksimalni pritisak naduvavanja, količinu i veličinu perforacija i nameštanje balona katetera za isporuku leka. Uslovi mogu biti optimizovani za inhibiciju proliferacije ćelija glatkih mišića na mesto povrede tako da se ne desi značajna blokada arterije usled restenoze, što se meri, na primer proliferativnom sposobnošću ćelija glatkih mišića, ili promenom vaskularne rezistencije ili prečnika lumena. Optimalni uslovi mogu biti određeni na osnovu podataka iz studija na životinjskim modelima, pomoću rutinskih kompjuterskih metoda.

[0567]Drugi alternativni metod za primenu jedinjenja iz ovog pronalaska može da bude vezivanje jedinjenja za ciljni agens, što upućuje konjugat na nameravano mesto dejstva, tj. do vaskularnih endotelijalnih ćelija ili ćelija tumora. Mogu da se koriste antitela i neantitela kao ciljni agensi. Usled specifične interakcije između ciljnog agensa i odgovarajućeg partnera za vezivanje, jedinjenje iz predmetnog pronalaska može biti primenjeno u velikim lokalnim koncentracijama na ciljanom mestu ili u njegovoj blizini, i tako efikasnije leči poremećaje na ciljanom mestu.

[0568]Antitela - ciljni agensi uključuju antitela ili njihove antigen-vezujuće fragmente, koji se vezuju za komponentu tumorske ćelije, tumorske vaskulature ili strome tumora, koja može da bude cilj ili je pristupačna. „Komponenta koja može da bude cilj ili je pristupačna" tumorske ćelije, tumorske vaskulature ili strome tumora, poželjno je površinski eksprimirana komponenta, površinski pristupačna ili lokalizovana na površini. Antitela - ciljni agensi takođe uključuju antitela ili njihove antigen-vezujuće fragmente, koji se vezuju za intracelularnu komponentu koja se oslobađa iz nekrotične ćelije tumora. Poželjno, takva antitela su monoklonska antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti, koji se vezuju za nerastvorne intracelularne antigene prisutne u ćeliji koji se mogu indukovati da budu permeabilni, ili u ćelijama-duhovima suštinski svih neoplastičnih i normalnih ćelija, ali nisu prisutni ili pristupačni na spoljašnjosti normalnih živih ćelija sisara. U predmetnom pronalasku, komponenta koja može da bude cilj ili je pristupačna može biti c-Met receptor, jer je pristupačan i eksprimiran na ciljnim tkivima ili u njihovoj blizini.

[0569]Kao što je ovde upotrebljen, termin „antitelo" široko obuhvata svaki imunološki vezujući agens, kao što je IgG, IgM, IgA, IgE, F(ab')2, univalentni fragment kao što je Fab', Fab, Dab, kao i konstruisana antitela, kao što su rekombinantna antitela, humanizovana antitela, biospecifična antitela, i slično. Antitela mogu biti ili poliklonska ili monoklonska, mada su poželjna monoklonska. U struci postoji veoma širok spektar antitela koja su imunološki specifična za površinu ćelija praktično svake vrste solidnog tumora (pogledajte Zbirnu tabelu monoklonskih antitela kod solidnih tumora u US Patent No. 5,855,866 to Thorpe et al). Stručnjacima u oblasti su poznati metodi za proizvodnju i izolovanje antitela na tumor (US Patent No.5,855,866 to Thorpe et al., and US Patent No.6,34,2219 to Thorpe et al.).

[0570]Dobro su poznate tehnike vezivanja terapeutske komponente za antitela, pogledajte npr.Amon et al, " Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer

Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. ( eds.), pp. 243- 56

( Alan R. Liss, Inc. 1985) ; Hellstrom et al, " Antibodies For Drug Delivery", in Controlled

Drug Delivery ( 2nd Ed.), Robinson et al. ( eds.), pp. 623- 53 ( Marcel Dekker, Inc. 1987) ;

Thoi' pe, " Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in

Monoclonal Antibodies ' 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. ( eds.), pp.

475- 506 ( 1985).Slične tehnike se takođe mogu primeniti za vezivanje jedinjenja iz pronalaska za neantitela - ciljne agense. Stručnjaci u ovoj oblasti znaju, ili mogu da odrede, metode za stvaranje konjugata sa neantitelima - ciljnim agensima, kao što su mali molekuli, oligopeptidi, polisaharidi ili druga polianjonska jedinjenja.

[0571]Mada bilo koja vezujuća komponenta koja je prilično stabilna u krvi može biti upotrebljena za vezivanje jedinjenja iz predmetnog pronalaska za ciljni agens, poželjne su biološki oslobodive veze i/ili selektivno raskidivi spejseri ili linkeri. „Biološki oslobodive veze" i „selektivno raskidivi spejseri ili linkeri" još su prilično stabilni u krvotoku, ali mogu da se oslobode, raskinu ili hidrolizuju samo ili prvenstveno pod određenim uslovima, tj. u određenom okruženju, ili u kontaktu sa konkretnim agensom. Takve veze uključuju, na primer, disulfidne i trisulfidne veze i veze labilne u kiseloj sredini, kao što opisuje U.S. Pat. Nos. 5, 474,765 i 5,762,918, a veze osetljive na enzime, uključujući peptidne veze, estre, amide, fosfodiestre i glikozide, kao što opisuje U.S. Pat. Nos. 5,474,765 i 5,762,918. Takve osobine selektivnog otpuštanja olakšavaju odloženo oslobađanje jedinjenja iz konjugata na nameravanom ciljanom mestu.

[0572]Predmetni pronalazak daje farmaceutsku smešu koja uključuje efikasnu količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska vezanu za ciljni agens i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0573]Nadalje, predmetni pronalazak daje jedinjenje formule I vezano za ciljni agens za lečenje poremećaja vezanog za c-Met, naročito tumora.

[0574]Kada se proteini kao što su antitela ili faktori rasta, ili polisaharidi koriste kao ciljni agensi, oni se poželjno primenjuju u obliku injektabilnih smeša. Injektabilni rastvor antitela biće dat u venu, arteriju ili u spinalnu tečnost tokom perioda od 2 minuta do oko 45 minuta, poželjno od 10 do 20 minuta. U određenim slučajevima, intradermalna i intrakavitalna primena pogodna je kod tumora ograničenih na oblasti bliske određenim regijama kože i/ili konkretnim telesnim šupljinama. Pored toga, intratekalna primena može biti korišćena za tumore koji se nalaze u mozgu.

[0575] Terapeutski efikasne doze jedinjenja iz predmetnog pronalaska vezanog za ciljni agens zavise od osobe, vrste bolesti, stanja bolesti, načina primene i drugih kliničkih varijabli. Efikasne doze mogu lako da se odrede pomoću podataka iz životinjskih modela. Eksperimentalne životinje sa solidnim tumorima često se koriste za optimizaciju odgovarajućih terapeutskih doza pre prenošenja u kliničko okruženje. Poznato je da su takvi modeli veoma pouzdani u predviđanju strategije protiv kancera. Na primer, miševi sa solidnim tumorima se mnogo koriste za predklinička ispitivanja, da se odredi radni opseg terapeutskog agensa koji daje korisne antitumorske efekte uz minimalnu toksičnost.

[0576] Dok prethodna specifikacija daje principe predmetnog pronalaska, sa primerima datim kao ilustracija, podrazumeva se da u praksi pronalazak obuhvata sve uobičajene varijacije, adaptacije i/ili modifikacije koje su u opsegu sledećih patentnih zahteva i njihovih ekvivalenata.

Claims

1. Jedinj enj e sa formulom I: i N-oksidi, farmaceutski prihvatljive soli, solvati, te njihovi stereohemijski izomeri, naznačeno time što: R<1>je mono ili biciklični heteroaril, ili piridin-2-on-il, pri čemu je pomenuti heteroaril po izboru supstituisan sa jednim, dva ili tri Rasupstituenata; pri čemu Raje -NH2, halogen, alkoksi, alkiletar, alkiltio, alkilsulfonil, fenilsulfonil, heteroarilsulfonil, heterociklilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, alkil, aminoalkil, alkilamino, fenil, heteroaril, cijano, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterociklil, -CCh-alkil, -C(0)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd; pri čemu Rb je heterociklil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, -OH, -Oalkil, - NH2, -NHalkil, ili -N(alkil)2; Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili Ci-6alkila, pri čemu pomenuti Ci-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila, -SO2NH2, alkilsulfonamida, hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten, koji po izboru sadrži drugi hetero ostatak odabran od O, NH, N(alkil), SO, SO2, ili S; pri čemu pomenuti Rc-Rdheterociklični prstenje po izboru supstituisan sa alkilom, - S02alkilom, ili -C(0)alkilom; A je prsten odabran iz grupe koju čine: fenil, mono ili biciklični heteroaril, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, i benzo-fuzionisan heterociklil; pri čemu pomenuti fenil, heteroaril, ili benzo-fuzionisan heterociklil su po izboru supstituisani sa jednim do tri supstituenata koji su nezavisno odabrani iz grupe koju čine: -OH, alkil, fenil, heteroaril, alkoksi, -CN, halogen, nitro, -NH2, - N(CH3)2, -NHC(0)NHCi-6alkil, i -NHC(0)Ci-6alkil; R5 i R6 su F; i R<7>i R<8>su H, halogen ili Ci-6alkil.

2. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time što R<1>je mono ili biciklični heteroaril, ili piridin-2-on-5-il, pri čemu pomenuti heteroaril je po izboru supstituisan sa jednim, dva ili tri Rasupstituenta; R7 i R8 su H.

3. Jedinjenje prema zahtevu 2, naznačeno time što Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenila, heteroarila, ili Ci-6 alkila, pri čemu pomenuti Ci-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od: -N(CH.3)2, morfolinila, piperidinila, piperazinila, N-metil piperazinila, alkilsulfonila, -SO2NH2, alkilsulfonamida, hidroksila, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten koji je izabran iz grupe koju čine: piperidinil, morfolinil, i piperazinil, pri čemu pomenuti piperazinil je po izboru supstituisan sa alkilom, -SChalkilom, ili -C(0)alkilom.

4. Jedinjenje prema zahtevu 3, naznačeno time što A je prsten odabran iz grupe koju čine: fenil, mono ili biciklični heteroaril, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, i benzo-fuzionisan heterociklil; pri čemu pomenuti fenil, heteroaril, ili benzo-fuzionisan heterociklil su po izboru supstituisani sa jednim supstituentom nezavisno odabranim iz grupe koju čine: -OH, alkil, fenil, heteroaril, alkoksi, -CN, halogen, nitro, -NH2, -N(CH3)2, - NHC(0)NHCi-6alkil, i -NHC(0)Ci-6alkil.

5. Jedinjenje prema zahtevu 4, naznačeno time što A je prsten odabran iz grupe koju čine: 2,3 dihidrobenzofuran-5-il, hinolin-6-il, hinolin-6-il-N-oksid, 2-amino benzotiazol-6-il, 4-metoksifenil, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, i 4-hidroksi fenil.

6. Jedinjenje prema zahtevu 5, naznačeno time što R<1>je mono ili biciklični heteroaril, ili piridin-2-on-5-il, pri čemu pomenuti heteroaril je po izboru supstituisan sa jednim Rasupstituentom.

7. Jedinjenje prema zahtevu 6, naznačeno time što R<1>je tiofen-2-il, tiazol-2-il, pirazolil, imidazolil, piridin-2-on-5-il, ili piridil, pri čemu pomenuti tiofen-2-il, tiazol-2-il, pirazolil, imidazolil, i piridil mogu biti po izboru supstituisani sa jednim Ra supstituentom.

8. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što R<1>je mono ili biciklični heteroaril, pri čemu pomenuti heteroaril je po izboru supstituisan sa jednim, dva ili tri Rasupstituenata; pri čemu Raje halogen, alkoksi, alkiletar, alkiltio, alkilsulfonil, fenilsulfonil, heteroarilsulfonil, heterociklilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, alkil, aminoalkil, alkilamino, fenil, heteroaril, cijano, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterociklil, -CCh-alkil, -C(0)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -C(i-4)alkil-N'-metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd; pri čemu Rb je heterociklil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, -OH, -Oalkil, - NH2, -NHalkil, ili -N(alkil)2; Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenil, heteroaril, ili Ci-6alkil, pri čemu pomenuti Ci-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim iz grupe koju čine: -N(CH3)2, morfolinil, piperidinil, piperazinil, N-metil piperazinil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, hidroksil, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten, koji po izboru sadrži drugi hetero ostatak odabran od O, NH, N(alkil), SO, SO2, ili S, pri čemu pomenuti Rc-Rdheterociklični prstenje po izboru supstituisan sa alkil, -S02alkil, ili - C(0)alkil; A je prsten odabran iz grupe koju čine: fenil, mono ili biciklični heteroaril, i benzo-fuzionisan heterociklil; pri čemu pomenuti fenil, heteroaril, ili benzo-fuzionisan heterociklil su po izboru supstituisani sa jednim, dva ili tri supstituenata koji su nezavisno odabrani iz grupe koju čine: -OH, alkil, fenil, heteroaril, alkoksi, -CN, halogen, nitro, -NH2, -NHC(0)NHCi-6alkil, i -NHC(0)Ci-6alkil; i R<7>i R<8>su H, halogen ili Ci-6alkil.

9. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što R1 je tiofen-2-il, tiazol-2-il, pirazolil, imidazolil, piridin-2-on-5-il,ili piridil, pri čemu pomenuti tiofen-2-il, tiazol-2-il, pirazolil, imidazolil, i piridil mogu biti po izboru supstituisani sa jednim Rasupstituentom; pri čemu Raje -NH2, halogen, alkoksi, alkiletar, alkiltio, alkilsulfonil, fenilsulfonil, heteroarilsulfonil, heterociklilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, alkil, aminoalkil, alkilamino, fenil, heteroaril, cijano, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterociklil, -CCh-alkil, -C(0)-Rb, -C(i-4)alkil-morfolinil, -C(i-4)alkil-piperidinil, -C(i-4)alkil-piperazinil, -Qi-4)alkil-N<*->metil piperazinil, -C(i-4)alkil-Rb, -C(0)NH-C(i-4)alkil-Rb, ili -C(0)NRcRd; pri čemu Rb je heterociklil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, -OH, -Oalkil, - NH2, -NHalkil, ili -N(alkil)2; Rci Rdsu nezavisno izabrani od: H, fenil, heteroaril, ili Ci-6alkil, pri čemu pomenuti Ci-6alkil može po izboru biti supstituisan sa jednim supstituentom odabranim iz grupe koju čine: -N(CH3)2, morfolinil, piperidinil, piperazinil, N-metil piperazinil, alkilsulfonil, -SO2NH2, alkilsulfonamid, hidroksil, i alkoksi; ili Rci Rdzajedno mogu da grade 5 do 7 člani heterociklični prsten koji je izabran iz grupe koju čine: piperidinil, morfolinil, i piperazinil, pri čemu pomenuti piperazinil je po izboru supstituisan sa alkilom, -S02alkilom, ili -C(0)alkilom; A je prsten odabran iz grupe koju čine: 2,3 dihidrobenzofuran-5-il, hinolin-6-il, hinolin-6-il-N-oksid, 2-amino benzotiazol-6-il, 4-metoksifenil, 3-(4-metoksi-benzil)-3H-hinazolin-4-on-6-il, hinazolin-4-on-6-il, 2-dimetil-amino benzotiazol-6-il, i 4-hidroksi fenil; i R7 i R8 su H.

10. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što je izabrano iz grupe koju čine: i N-oksidi, farmaceutski prihvatljive soli, solvati, te njihovi stereohemijski izomeri.

11. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što je izabrano iz grupe koju čine: i N-oksidi, farmaceutski prihvatljive soli, solvati, te njihovi stereohemijski izomeri

12. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što je i N-oksidi, farmaceutski prihvatljive soli, i njegovi solvati.

13. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što je i njegove farmaceutski prihvatljive soli.

14. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što je

15. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što je i N-oksidi, farmaceutski prihvatljive soli, i njihovi solvati.

16. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što je i njegove farmaceutski prihvatljive soli.

17. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što je

18. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što je izabrano iz grupe koju čine: i N-oksidi, farmaceutski prihvatljive soli, solvati, i njihovi stereohemijski izomeri.

19. Farmaceutska kompozicija naznačena time što sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-18 i farmaceutski prihvatljiv nosač.

20. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-18 naznačeno time što se koristi kao lek.

21. Korišćenje jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1-18 naznačeno time što je za proizvodnju medikamenta za lečenje poremećaja proliferacije ćelija.

22. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-18 naznačeno time što se koristi za smanjenje ili inhibiciju aktivnosti kinaze c-Met kod subjekta.

23. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-18 naznačeno time što se koristi za modulaciju ekspresije c-Met kod subjekta.

24. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 19 naznačena time što se koristi za sprečavanje kod subjekta poremećaja u vezi sa c-Met.

25. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 19 naznačena time što je za korišćenje za lečenje kod subjekta poremećaja u vezi sa c-Met.

26. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 19 naznačena time što je za korišćenje za modulaciju kod subjekta poremećaja u vezi sa c-Met.

27. Farmaceutska kompozicija za korišćenje prema zahtevu 24 ili 25 ili 26 naznačena time što dodatno sadrži administraciju bilo kojeg od hemoterapeutskog sredstva, genske terapije, imuno terapije i terapije zračenjem.

28. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-18 naznačeno time što je za korišćenje za lečenje poremećaja u vezi sa c-Met ili proliferativnog poremećaja ćelija koji sadrži kontrolisanu isporuku pomenutog jedinjenja pomoću oslobađanja iz intraluminalnog medicinskog uređaja u terapeutski efikasnoj količini.

29. Jedinjenje za korišćenje prema zahtevu 28, naznačeno time što pomenuti intraluminalni medicinski uređaj sadrži stent.

30. Farmaceutska kompozicija koja sadrži efikasnu količinu jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1-18 naznačena time što je konjugovana na agens za ciljanje i farmaceutski prihvatljiv nosač.

31. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-18 naznačeno time što je konjugovano na agens za ciljanje za upotrebu u lečenju poremećaja u vezi sa c-Met.

32. Kombinacija hemoterapeutskog agensa i jedinjenja naznačena time što je jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-18.

33. Postupak za dobij anje jedinjenja prema zahtevu 1, naznačen time što pomenuti postupak obuhvata a) reagovanje jedinjenja sa formulom IV: sa jedinjenjem sa formulom V: pri čemu X je Cl ili I ili Br, i Y je cinkat, boronična kiselina, boronatni estar ili stanan i varijable su kako je definisano u zahtevu 1; ili b) reagovanje jedinjenja sa formulom III: sa jedinjenjem sa formulom VI: pri čemu varijable su kako je definisano u zahtevu 1 i pri čemu X je Cl ili I ili Br.