RO118752B1 - Polipeptide cu rol de agenţi tensioactivi pulmonari şi compoziţie farmaceutică care le conţine - Google Patents
Polipeptide cu rol de agenţi tensioactivi pulmonari şi compoziţie farmaceutică care le conţine Download PDFInfo
- Publication number
- RO118752B1 RO118752B1 RO96-02248A RO9602248A RO118752B1 RO 118752 B1 RO118752 B1 RO 118752B1 RO 9602248 A RO9602248 A RO 9602248A RO 118752 B1 RO118752 B1 RO 118752B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- pharmaceutical composition
- ile
- lion
- phe
- wave
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 title description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 18
- 239000003580 lung surfactant Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 9
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000015227 regulation of liquid surface tension Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 11
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 claims description 6
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims description 5
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 108010007100 Pulmonary Surfactant-Associated Protein A Proteins 0.000 claims description 4
- 102100027773 Pulmonary surfactant-associated protein A2 Human genes 0.000 claims description 4
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 claims description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical group [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BHPQOIPBLYJNAW-NGZCFLSTSA-N Gly-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN BHPQOIPBLYJNAW-NGZCFLSTSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 2
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 claims 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 claims 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims 1
- 102000007620 Pulmonary Surfactant-Associated Protein C Human genes 0.000 description 46
- 108010007125 Pulmonary Surfactant-Associated Protein C Proteins 0.000 description 46
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 11
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 8
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 6
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 6
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 5
- 108010007131 Pulmonary Surfactant-Associated Protein B Proteins 0.000 description 5
- 102100032617 Pulmonary surfactant-associated protein B Human genes 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 3
- 102000047087 human SFTPC Human genes 0.000 description 3
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 101100148606 Caenorhabditis elegans pst-1 gene Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100354063 Homo sapiens SFTPC gene Proteins 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 108050004197 Trp repressor Proteins 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 1
- SXOUIMVOMIGLHO-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-indol-2-yl)prop-2-enoic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C=CC(=O)O)=CC2=C1 SXOUIMVOMIGLHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000642536 Apis mellifera Venom serine protease 34 Proteins 0.000 description 1
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100505161 Caenorhabditis elegans mel-32 gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000612671 Homo sapiens Pulmonary surfactant-associated protein C Proteins 0.000 description 1
- 101100539360 Homo sapiens UCN3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000000010 L-asparaginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000282322 Panthera Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- -1 aliphatic amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002588 alveolar type II cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940066294 lung surfactant Drugs 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000013580 millipore water Substances 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N norethisterone Chemical compound O=C1CC[C@@H]2[C@H]3CC[C@](C)([C@](CC4)(O)C#C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012946 outsourcing Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000007026 protein scission Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000004544 sputter deposition Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000017105 transposition Effects 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/785—Alveolar surfactant peptides; Pulmonary surfactant peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/08—Bronchodilators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/16—Central respiratory analeptics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Emulsifying, Dispersing, Foam-Producing Or Wetting Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la o polipeptidă cu activitate de agent tensioactiv pulmonar, cu formula generală: şi la o compoziţie farmaceutică pentru tratamentul sindroamelor de deficienţă reparatorie (RDS) la mamifere. ŕ
Description
Invenția se referă la polipeptide cu rol de agenți tensioactivi pulmonari și la o compoziție farmaceutică care îi conține, cu aplicabilitate în medicină, la tratarea sindromului de deficiență respiratorie.
Se cunoaște faptul că plămânii tuturor animalelor vertebrate conțin un amestec de substanțe care va fi denumit ca “agent tensioactiv pulmonar”.
Acesta prezintă proprietăți active de suprafață și stabilizează tensiunea superficială în regiunea alveolelor pulmonare, atât de coborâtă, încât să evite un colaps al regiunii căilor respiratorii la expirație. Acest amestec de substanțe reglează tensiunea superficială într-un mod și de o manieră dinamică, astfel că așteptatul colaps al alveolelor mici în beneficiul celor mari, conform legii lui Laplace, va fi evitat prin menționata adaptare a tensiunii superficiale.
Agentul tensioactiv pulmonar va fi dispus sub formă de corpuscule lamelare de către pneumocitele alveolare de tip II. Acestea sunt unități compacte constituite dintr-un dublu strat fosfolipidic, cu un conținut ridicat de dipalmitoil-fosfatidilcolină (DPPC) și de fosfatidilglicerină (PG). Drept alte componente esențiale, conținute în tensioactivul pulmonar, sunt proteine, desemnate ca SP-A, SP-B și SP-C. SP-A este o glicoproteină cu masă moleculară mare care joacă un rol deosebit în reglarea secreției.
Proteinele SP-C și în mai mică măsură SP-B, își asumă rolul de catalizator termodinamic la formarea filmului superificial monomolecular (a tensioactivului în sens restrâns).
Prin prezența acestor proteine, cinetica de împrăștiere va fi foarte mult accelerată. Mai întâi prin aceasta este posibilă adaptarea fără întârziere a constituției tensioactivului, de fiecare dată la necesitățile tensiunii superficiale.
Aceste proprietăți se oglindesc, de asemenea, în caracterul extrem de hidrofob al proteinelor, în special a SP-C.
Prin extracție din țesut pulmonar sau spălare cu apă de plămâni de animale, ar putea fi realizată prepararea de agenți tensioactivi pulmonar care, atât în aparate de măsură fizicochimice precum și pe modele de animale, cât și la utilizare în clinici, prezintă capacitatea de a compensa o lipsă de tensioactiv și, ca urmare sunt apte, de exemplu, pentru terapia sindromului deficienței respiratorii la copii. Aceste preparate de origine animală prezintă o serie de dezavantaje. Combinația de fosfolipide este puternic dependentă de tipul de animal, sănătatea și starea de alimentare a animalelor, putând fi limitată și egalizată numai prin adăugarea la aceste combinații a unor componenți definiți.
De asemene, conținutul de tensioactiv proteinic, precum și raportul SP-B/SP-C este coborât fiind supus acelorați dezavantaje.
în plus, intervine și dependența de eventuala construcție proteolitică a proteinei sau prezența unor descendenți modificați (de exemplu, prin oxidare la metionină) conținuți, de asemenea, în amestecurile terapeutice preparate. La o utilizare prelungită sau la aplicarea unor cantități ridicate de tensioactiv, ca de exemplu, în cazul sindromului de deficiență respiratorie la adulți (ARDS) sau în cazul altor domenii de utilizare, ca de exemplu, folosirea tensioactivului ca vehicul pentru alte substanțe dacă ar fi necesar la o aplicare pulmonară, ridicată problema noului aport de substanță străină.
Din cele arătate, rezolvarea acestei probleme rezidă în prepararea proteinelor pe căile tehnologiei genetice. Astfel, se pot obține proteine recombinante, în special, prin utilizarea de sisteme de producere pe cale bacteriană, în cantități practic nelimitate, și este posibilă utilizarea metodelor moderne de analiză și de control a calității, putând să se obțină un tensioactiv cu o compoziție exact definită, prin utilizarea de fosfolipide sintetice. Acesta va putea fi aplicat în mod optim pentru utilizări terapeutice.
Proteina umană SP-C (vezi formula I, cu A = H sau Phe, B = Cys și C = Met), care, în special, este importantă pentru cinetica de împrăștiere, conține în partea sa centrală exclusiv din amino acizi alifatici foarte hidrofobi, precum valina, leucina și isoleucina.
RO 118752 Β1
Lungimea acestei părți centrale (aminoacizii 12-34) permite integrarea peptidelor 50 în filmul monomolecular de fosfolipide. în secvența Pro-Cys-Cys-Pro (Poz 3- 6) ambele resturi Cys sunt tioesterificate la grupele SH- cu acid palmitic. Acidul palmitic mărește în continuare, caracterul hidrofob al ansamblului proteinic și blochează în același timp ambele grupe SH- ale cisteinei și o apără de oxidare și de formarea de punți disulfidice. Regiunea centrală (aminoacizii 13-34) formează o transmembrană helicoidală. Această regiune va 55 fi flancată la capătul N-terminal printr-o secvență polară care conține aminoacizi cu sarcina pozitivă (Lys, 10; Arg, 11).
în WO91/18015 va fi descrisă obținerea proteinelor recombinante SP-C și a mutantelor SP-C. Se propune în acesta, ca cisteină să fie înlocuită în poziția 4 și 5 cu serină. Aceasta prezintă avantajul că la preparare, palmitizarea ambelor molecule de cisteină con- 60 sumate tehnic după izolarea proteinelor foarte hidrofobe, dispare.
S-a descoperit acum în mod surprinzător că mutantele SP-C care se diferențiază de proteinele umane SP-C prin înlocuirea cisteinei din pozițiile 4 și 5 prin fenilalanină sau triptofan și înlocuirea metioninei din poziția 3 prin isoleucină, leucină sau serină nu prezintă pierderi funcționale față de SP-C din natură și sunt stabile și superioare față de acestea. 65
Prepararea prin tehnici genetice este extraordinar de simplă și prezintă beneficii ridicate. Noile polipeptide cu activitate tensioactivă pulmonară se pot obține la o foarte înaltă puritate.
Un obiect al invenției este așadar o polipeptidă cu activitate tensioactivă pulmonară, având o secvență de aminoacizi, conform formulei generale I: 70
| 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| A | Gly | Ile | Pro | B | B | Pro | Val | His | Leu | Lys |
| 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | |
| Arg | Leu | Leu | Ile | Val | Val | Val | Val | Val | Val (I) | |
| 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | |
| Leu | Ile | Val | Val | Val | Ile | Val | Gly | Ala | Leu | |
| 31 | 32 | 33 | 34 | |||||||
| Leu | C | Gly | Leu | |||||||
| în care: A = | H sau | Phe |
B = Phe sauTrp și C = Ile Leu sau Ser
Prin aplicarea invenției se obțin următoarele avantaje:
- cinetica de imprăștiere va fi mult mai accelerată ceea ce determină adaptarea mult mai rapidă a constituției agentului tensioactiv la necesitățile tensiunii superficiale; 85
- caracter extrem de hidrofob.
Un obiect preferat al invenției este o polipeptidă cu formula generală I, unde A este H sau Phe, B este Phe, iar C este Ile, în care sunt de preferat A = Η, B = Phe și C = Ile.
Un alt obiect al invenției se referă la compoziții farmaceutice care sunt caracterizate printr-un conținut din una sau mai multe polipeptide, conform invenției, și, în cazul dorit 90 conțin una sau mai multe polipeptide tensioactive pulmonare din grupele SP-A și SP-B, de preferat, SP-B.
Polipeptida, conform invenției, poate fi preparată, fie prin metodele cunoscute ale sintezei peptidice în fază solidă, fie cu ajutorul vectorilor de recombinare în alveole gazdă. Tehnicile de construire a vectorilor, de transformare a alveolelor, exprimarea proteinelor în 95 alveolele transformate pentru a fi realizate și izolarea proteinelor exprimate pentru a fi purificate sunt în sine cunoscute specialistului (a se vedea, de exemplu, W086/03408, 87/96588 și 91/18015).
RO 118752 Β1
Prepararea vectorilor pentru exprimarea de SP-C în sisteme bacteriene reia metodele convenționale ale tehnologiei DNA recombinant.
Exprimarea proteinelor SP-C hidrofobe în bacterii este în mare măsură posibilă și fără vătămare pentru alveola gazdă numai în forma susceptibilă de proteină de fuziune, ca de exemplu, împreună cu cloramfenicol acetil transferaza (CAT). De exemplu, vectorul pTrpAmpCAT /52 codifică pentru regiunea N-terminală a CAT și oferă pentru donarea fragmentelor DNA “in frame”, pentru codificarea proteinei SP-C, o (5'-)Eco R, și o secțiune (3'-)Pst 1. CAT și SP-C vor fi legate împreună pe o suprafață proteinică peste o așezare fuzionabilă, sensibilă la hidroxilamină (AsNlGIy). Astfel de vectori, precum pTrpAmpCAT 152 :: SP-C, permit exprimarea controlată a proteinei fuzionabile menționată până la fermentare.
Exprimarea proteinelor fuzionabile efectuează formarea de corpuri de incluziune în celula gazdă. După aceea, lungimea porțiunii CAT în proteina de fuziune poate să fie modificată, astfel, încât să fie obținută o mare producție de corpuri de incluziune.
Exprimarea poate să decurgă în afara mediului bacterian, într-un număr mare de sisteme gazdă, ca de exemplu, în celule materne, celule de drojdie și celule de inserție.
Elementele DNA capabile de construcție pentru diverse celule gazdă vor fi sintetizate după metode cunoscute și construite pe căi uzuale cu menționatele secvențe de dirijare în genetica celulelor gazdă.
Două oligonucleoride DNA pot fi sintetizate după metodele convenționale fosfoamidit, pe un ciclon Milli genetic/Biosearch DNA Synthesizer.
Prima oligonucleotidă - DNA formează lanțul fals DNA cu o lungime de 118 nucleotide. Acesta codifică (în direcția 5' - 3') pentru un Eco R, specific 5' - final, în scopul unei subclonări viitoare a hidroxilaminei Asn/Gly la poziția de fisurare și proteina umană SPC începând cu Gly-25 și terminând cu Leu - 58 a secvenței mesager corespunzând la Gly 1 respectiv Leu - 34 din formula I. Aici, alăturat a fost tradusă secvența cunoscută de aminoacid a proteinei umane SP-C, conform regulilor codului genetic DNA. Secvența va fi modificată în mod obișnuit, astfel că cisteina va fi înlocuită în pozițiile 28 și 29 ale secvenței mesagere SP-C cu fenilalanină sau triptofan, iar metionina va fi înlocuită în poziția 56 a secvenței proteinei mesager prin isoleucină, leucină sau serină, în mod suplimentar, pe această cale pot fi considerate și multiplele codificări utilizate pentru alveolele gazdă. O secvență SPC modificată, care conține fenilalanină în pozițiile 4 și 5 și isoleucină în poziția 32 (numerotarea conform formulei I) va fi desemnată conform codului uzual pe litere, pentru ambii aminoacizi, cu SP-C 34 (FF/I). De asemenea, lanțul fals - DNA conține un TAA - cod stop la capătul translației ribosomale precum și un Pst 1 - specific 3*-final.
Al doua ologonucleotidă DNA prezintă lanțul complementar necodificabil (antifals) care constă din 110 nucleoizi.
Fragmentul SP-C-DNA obținut sintetic va fi donat într-un vector de expresie propriu, ca de exemplu, pTRpAmpCAT 152. Acest vector constă din pKK233 (farmacia) care conține o genă cu rezistență la ampicilină împreună cu un derivat de la pBR322. Promotorul trc va putea fi înlocuit printr-un alt promotor trp precum pTrpAmpCAT 152. Alți promotori inductibili sunt, de asemenea, posibil de schimbat.
Pentru subclonarea fragmentelor SP-C vor fi mai întâi hibridizate între ele oligonucleotidele DNA complementare. Dublul lanț - DNA rezultat din aceasta, prezintă capete suplimentare cu un singur lanț (Eco R/PstJ.
Construirea în vectorul DNA se desfășoară pe căi uzuale după diferarea Eco Rt/Pst,
- a vectorului DNA, purificarea fragmentelor vectorului DNA dorite prin electroforeză în gel de agaroză prin hibridizarea lui SP-C - DNA a fragmentelor de vector pe capetele coezive.
în final, ambele fragmente vor fi legate între ele prin legătură covalentă, conform metodelor cunoscute.
Pentru amplificarea de DNA izolarea plasmidelor se vor utiliza protocoluri obișnuite, de exemplu, se vor folosi celulele E. coli MM-294 în componenți de clorură de calciu, iar 150 pentru selecția celulelor purtătoare de plasmide se va placa cu ampicilină peste lame LB cu agar. Din coloniile rezistente la ampicilină conținute, se va izola plasmida DNA se va analiza cu combinații adecvate de enzime de restricție.
Clonele cu mostrele fragmentelor de DNA de restricție așteptate vor fi selectate. Prin secvențializarea completă a secvențelor de plasmide se va confirma inserția corect produsă 155 a secvenței SP-C 34 (FF/I).
Vectorii plasmidă, astfel obținuți, permit exprimarea proteinelor fuzionabile CAT:: SP
- C subcontrolul promotorilor - Trp (sau a altor promotori).
Proteina fuzionabilă recombinantă se precipită în alveolele gazdă după inducție, sub formă de corpuri de inducție.160
Proteina fuzionabilă CAT 152 :: SP-C 34 (FF/I) prezintă următoarele secvențe de aminoacizi arătate mai jos, codificate cu litere:
20 30 4050
MEKKIT TGYTT VDISQ WHRKE HFEAF QSVAQ CTYNQ TVQLD ITAFL KTVKK 165
| 60 | 70 | 80 | 90 | 100 | |
| NKHKF | YPAFI | HILAR LMNAH | PEFRM AMKDG ELVIW | DSVHP CYRVF | HEQTE |
| 110 | 1 20 | 130 | 140 | 150 | |
| TFSSL | WSEYH | DDFRQ FLHIY | SQDVA CYGEN LAYFP | KGFIE NMFFV | SANPE |
| 160 | 170 180 | 186 | 170 |
FNGIP FEPYH LKRLL IVVW WLIV WIVG ALLIG L
10 20 3034
Cei 34 aminoacizi ai SP-C (FF/I) în pozițiile 153 până la 186 ale proteinelor fuzionabile sunt caracterizați prin subliniere și indicarea pozițiilor 1 la 34.
Scindarea ulterioară cu hidroxilamină pentru separarea de CAT SP-C rezultă între 175 Asn -152 Gly -153 (corespunzător aminoacidului 1 în SP-C - peptidă). îndepărtarea purificarea peptidei SP-C se desfășoară conform metodei uzuale din chimia proteinelor.
Polipeptidele, conform invenției, vor putea fi luate singure sau în combinație între ele în compușii farmaceutici, după cum este nevoie, pentru a fi aplicate la tratamentul necesar căilor respiratorii. Compozițiile respective nu sunt proprii numai tratamentelor în cazul 180 sindroamelor respiratorii la noi născuți, persoane adulte sunt bune și pentru tratarea pneumoniilor bronșitelor. în afară de aceasta, polipeptidele .conform invenției, sunt potrivite ca vehicul pentru nenumărate substanțe medicale aplicate prin inhalație.
Compușii conțin pe lângă polipeptide, fosfolipide, în special, acele fosfolipide pe care le conțin combinațiile naturale de tensioactiv pulmonar, precum, de preferință, dipalmitoil- 185 fosfotidilcolină (DPPC), palmitoiloleilfosfo-tidilglicerol (POPG) și/sau fosfatidilglicerol (PG).
Pentru stabilirea unei visco-zități oportune, combinațiile conțin ioni de calciu sau de magneziu, precum și clorură de sodiu. Specialistul se orientează la stabilirea tipului cantității părților componente singulare ale compușilor spre combinațiile de agenți tensioactivi pulmonari din natură, altele dintre prezentările conform stadiului tehnic, ca de exemplu, EP-A 190 0119056 și 0406732.
De preferat, compușii, conform invenției, conțin de la 80 până la 95%, în greutate, fosfolipide, de la 0,5 până la 3,0%, în greutate, polipeptide de la 4 până la 7%, în greutate, acizi grași de preferat acid palmitinic 1 până la 3% în greutate clorură de calciu.
RO 118752 Β1
Exemplu de realizare:
1. Elementul originar de producție
Elementul originar de producție, E coli 199 se trage din E. Coli L 12 originar MM 294, care va putea fi scos sub numărul 5208 din Colecția Germană de Microorganisme Culturi de Celule GmbH (DSM Braunschweig).
Gena proteinei fuzionabile CAT 152 :: SP-C 34 (FF/I) a vectorului de exprimare conținut, pTrpAmp CAT 152 ·.·. SP-C 34 (FF/I) a fost derivată din secvența DNA p BR 322 a unui derivat colE1 - [E. Weber (ed) (1988) Ministerul RFG pentru Cercetare și Tehnologie, Siguranță Biologică). în proteina plasmid pKK233-2, existentă în orice farmacie, promotorul trese scoate afară cu Eco R/HindBfiind înlocuit printr-un promotor - tresintetic (pTrp233). Acesta impune a se clona regiunea - promotor (locul de unire pentru RNA polimeraza) regiunea operator (locul de unire a represorului trp) secvență Shine/Delgarno - (S/D) precum și locul de restricție. în spatele promotorului - trp va fi înseriată porțiunea 5' a cloramfenicol acetil transferazei, codificată de gena (CAT 152), porțiune a aminoacizilor 152.
La secvența parțială CAT 152-DNA va fuziona un fragment genetic sintetic codificat pentru aminoacizii 34 asemănător SP-C (FF/I) uman.
Unitatea de transcripție funcțională CAT :·. SP-C (FF/I) va fi închisă printr-o secvență terminator de transcripție TA2· Construcția menținută va fi desem-nată cu pTrpAmp CAT 152 :; SP-C 34 (FF/I).
Vectorul pTrpAmpCAT 152:: SP34 (FF/I) prezintă următoarele elemente funcționale:
- Gena - CAT 152 :: SP-C 34 (FF/I) guvernează asupra promotorului trp și a terminatorului de transcripție Τ,Τ2;
- Regiunea “ori” și regiunile învecinate vor guverna asupra numărului copiei plasmidelor;
- Amp® - Gen.
După aducerea plasmidelor în celulele gazdă, acestea se dispun peste un număr mare de copii ale trp - promotor a genelor CAT -.·. SP-C (FF/I) controlate. Represorul trp va fi livrat singur de către celula gazdă.
în afară de concentrația de triptofan în mediu, respectiv, dincolo de β-ΙΑΑ (acidul βindolil acrilic) producția farmaceutică va fi controlată de către CAT :: SP-C.
2. Fermentația tip “batch
Mediul de cultură (a se vedea mai jos compoziția) (o precultură sau o cultură de pornire 17) se inoculează cu o cultură glicerimică dintr-o eprubetă Working Cell Bank într-un aparat de agitare va fi inoculat la 37°C sub agitare sub o puternică presiune de selecție de ampicilină. Creșterea va fi urmărită sub densitate optică, la 578 mm. în cazul când cultura de pornire E. Coli 199 atinge o densitate optică de peste 3, atunci 10 I de fermentat va fi inoculat cu respectiva celulă, iar creșterea bacteriilor continuă sub o presiune de selecție de ampicilină redusă.
Imediat ce densitatea optică atinge o valoare între 5 și 6 cei 10 I de cultură sunt trecuți în 1001 sub același tratament și se inoculează în continuare. După o creștere suficientă se va induce prin adaos de, spre exemplu 40 mg/l β-ΙΑΑ pe romotorul Trp CAT :: SP-C (FF/I) condus - unitate de transcripție. După inducție se va fermenta pentru încă 4 - 5 h pentru recolta de celule.
în timpul fermentației presiunea parțială de oxigen (pO2), valoarea pH-ului și temperatura masei de fermentație se vor lua în stăpânire și se vor regla în mod direct on-line.
Valoarea pH-ului se va menține constantă cu hidroxid de sodiu, presiunea parțială de oxigen (pO2) se va regla prin aport de oxigen și prin reglarea vitezei de agitare.
Pe cale off-line se vor preciza densitatea optică la 578 mm și concentrația sursei de
C în mediu. Formarea spumei va fi stăpânită cu un senzor de spumare și în situații speciale, pentru combaterea spumei se va aplica un agent antispumare.
RO 118752 Β1
Se vor preleva peste alicote din masa de cultură la diverse intervale de timp. După 245 lipsa bacteriilor, pentru controlul exprimării, proteinele E. coli vor fi separat extrase pe gel de poliacrilamidă colorate. Partea procentuală a proteinei dominante raportată la proteina totală E. coli va fi precizată densi-tometric. Scurt timp după inducția genelor recombinate apare o nouă asociere dominantă de proteine (r CAT :: SP-C). Mediul de cultură prezintă următoarele combinații: 250
I
Peptonă din soia 27,0 g/l, autolizat de drojdie KAV 14,0 g/l, NaCI 5,0 g/l, K2HPO4 x 3H2O 6,0 g/l, KH2PO4 3,0 g/l, MgSO4 0,5 g/l, glicerină (99,5%) 30,0 g/l, agent antispumare J673 (Structol Comp.) 0,2 ml/l, L-triptofan 80,0 mg/l și ampicilină 20 mg/l pentru preinocul 1 și 5 mg/l pentru inocul 2 și la 100 I mediu de fermentație.
Mai înainte de autoclavare sterilizarea mediului de cultură complex, valoarea pH-ului 255 se va stabili la pH=6,8 cu hidroxid de sodiu 2N. Pentru inoculul în vas de fermentație de 10 I se va utiliza o viteză de amestecare de 750 tur/ min un debit de aer de 10 l/min, la temperatura de 37°C, iar pentru cultura principală în fermentatorul de 1001, condițiile folosite vor fi o viteză de amestecare de 400 tur/min, un aport de aer de 70 l/min la 37°C. Agentul antispumare va fi adăugat după necesitate printr-o pulverizare unică. 260
La circa 4 h după inducție, celulele vor fi separate prin filtrare și/sau centrifugare din mediul de cultură. Masa de celule umede va fi introdusă într-un recipient din oțel inoxidabil cu ajutorul a 101 de desagregant cu pH = 8,0, se agită timp de16 h la 4°C (în timpul nopții în spații de răcire) prin vibrație.
Suspensia amestecată de celule va fi introdusă într-un omogenizator cu presiune 265 ridicată (> 700 bar) la temperatura camerei și iarăși va fi adunată într-un recipient din oțel inoxidabil steril. Corpurile de incluziune vor fi imediat separate la 4°C prin filtrare și/sau prin centrifugare (centrifugă Sorvell RC2-B, 27,000 g), după care vor fi resuspendate în desagregant (circa 1 I) și, de exemplu, se iau porțiuni de circa 350 ml și se trec într-un vas rotund de 1 I, unde vor fi liofilizate circa 96 h. 270
Dintr-o fermentație la volum de 1001 se obțin aproximativ 200 g corpuri de inclusiune uscate, cu un conținut de proteine fusionabile de peste 20% în greutate. Corpurile de inclusiune liofilizate au o durată de depozitare, la -20°C, de mai multe luni.
3. Scindarea proteinelor purificarea peptidelor liofile SP-C (FF/I)
100 g de corpuri de incluziune vor fi dizolvate sub o ușoară încălzire în 1,6 I soluție 275 de clorhidrat de guanidină (917,1 g). Resturile nedizolvate se vor îndepărta prin filtrare pe un filtru cutat. Pentru scindarea proteinelor fuzio-nabile la poziția de legare Asn-Gly i se va adăuga o soluție de 167 g de hidroxid/clorură de amoniu și se stabilește pH-ul soluției cu ajutorul unei soluții 2N de hidroxid de sodiu, la valoarea 9,6. Soluția cu materialul scindat se va lăsa după aceea timp de 3-4 zile sub agitare, la temperatura camerei. La sfârșitul timpului 280 de reacție se adaugă 6,4 I dezagregat tampon-Tris (pH=8,0) după care SP-C (FF/I) se separă și, cu ajutorul unei centrifuge (centrifugă Sorvall RC2-B 20.000 g) se separă. Supernatantul va fi decantat, peletele de SP-C se trec din nou în 400 - 500 ml dezagregant (tampon Tris), se repun în stare de suspensie prin agitare prin aceleași modalități, se centrifughează din nou, timp de 30 min. 285
Peletele de SP-C se vor trece într-un amestec de cloroform metanol acidulat cu HCI (1,751 cloroform -1,75 I metanol + circa 30 ml acid clorhidric dublu normal). Această soluție de SP-C brut va fi în continuare purificată prin HPLC preparat pe C8-Reverse-Phase Material. Extractul în cloroform - metanol va fi diluat în raport de circa 1:2 cu metanol de 90%, înainte de a fi adus pe coloana HPLC cu preparat. Din această soluție se încarcă, de 290 exemplu, o coloană (diametrul 5 cm) cu circa 400 mg SP-C (FF/I) (de exemplu, cu 21 extract brut diluat). Prin tratament acid (pH=2 - 3) produsul obținut - SP-C (FF/I) va fi eluat cu
RO 118752 Β1 gradiente de apă/izo-propanol (a se vedea tratamentele de separare). După circa 30 min de cromatografie se vor strânge 4-6 fracțiuni de câte 200 ml, în domeniul în care SP-C este eluat (detecția U.V. la 200 nm). Fracțiunile vor fi supravizate cu HPLC analitic în mod corespunzător colectate.
Dacă probele trebuie să fie depozitate, vor fi congelate în azot lichid conversate la -80°C în incintă frigorific.
Produsul SP-C (FF/I) va fi menținut la o puritate de 98,5 - 99,5%.
Tratamente de separare
Coloană: Kromasil C8 100A 16 pm 300 mm + 50 mm I.D.
Eluant: A = HPLC - apă de la Millipore - Anlage
B = i - ProH gradient linear
C = 60 mmol/l HCI (diluat din HCI fumans)
| Gradient timp | %B | %B | %C | debit (ml/min) |
| 0 | 45 | 50 | 5 | 100 |
| 10 | 45 | 50 | 5 | 100 |
| 55 | 0 | 95 | 5 | 100 |
| 65 | 0 | 95 | 5 | 100 |
| 75 | 45 | 50 | 5 | 100 |
| 85 | 45 | 50 | 5 | 100 |
| 90 | 45 | 50 | 5 | 0,2 |
4. Construcția internă a SP-C (FF/I) într-o matrice fosfopolipeptidică
Peptidă liofilă SP-C (FF/I) sub formă de soluție în izopropanol suferă o transpoziție cu componenții matricei de fosfolipidă prin pulverizare într-o soluție diluată de sare de bucătărie (0,065% w/w NaCI) precipită la temperatura camerei în amestec omogen. Din suspensia de agent tensioactiv pulmonar se separă LSF cu ajutorul unei centrifuge cu cupe, se resuspendă după separare într-o soluție de electrolit (NaCI, CaCI2) stabilind totodată pH-ul cu o soluție normală de hidroxid de sodiu la valoarea de 6,5. Această soluție apoasă va fi pusă în fiole de liofilizare de 20 ml. Datele prezentate mai jos în exemplul de realizare, sunt corespunzătoare preparării a 10 g de agent tensioactiv pulmonar.
7,00 g dipalmitoilfosfotidilcolină (DPPC), 3,08 g, palmitoiloleilfosfatid-ilglicerol - sare de amoniu- (POPG x NH4 0,25 g acid palmitinic se dizolvă în 200 ml izopropanol 90% la temperatura de 40°C după care amestecul se răcește la temperatura camerei.
Soluția de fosfolipide obținută va fi asociată cu un litru soluție având 200 mg SP-C (FF/I) purificat obținută de la operația de purificare prin HPLC. Soluția de pulverizare obținută va fi tratată sub agitare cu o soluție de bicarbonat (5 ml soluție bicarbonat de sodiu) 5% până la o valoare pH = 4,5.
Soluția va fi pulberizată cu o viteză de pulverizare de 25 ml/min, printr-o duză în 9,6 I soluție diluată de clorură de sodiu (0,065% w/w) sub o agitație puternică. Se formează astfel o soluție opalescentă, iar după o depozitare de 2 h la 4 - 8°C tratarea acesteia prin pulverizare cu o soluție de electrolit (3,0 g) clorură de calciu și 61,3 g clorură de sodiu (în 300 ml apă), preparatul de pneumo-surfactant va precipita. Suspensia de pneumo-surfactant (volum total 10,8 -11,0 I) va fi depozitată peste noapte la 4°C după care va fi centrifugată timp de 30 min într-o centrifugă cu cupe Sorvall (RC2-B) la 16000 g.
Produsul de centrifugare va fi suspendat în jumătate de volum de soluție de clorură de sodiu 0,65% pentru îndepărtarea resturilor de izo-propanol înglobate, și centrifugat din nou. Această procedură se va repata în total de 3 - 4 ori.
Produsul ultimei centrifugări va fi reluat cu 400 ml soluție de clorură de sodiu 0,65%, după care se va aduce pH-ul la valoarea 6,5 cu o soluție decinormală de hidroxid de sodiu și va fi proționat la 6,2 g pe 20 ml fiolă. Conținutul din balon va fi liofilizat după cum urmează:
R0118752 Β1 se congelează peste 6 h la -45°C la presiune normală, se usucă prin congelare timp de 54 h la presiunea de 0,16 m bar temperatura de -20°C după care pentru uscarea intensivă ulterioară, încă 5 h la -20°C, 0,02 mbar.
Se obțin 65-66 fiole din care fiecare conțin 0,150 g surfactant pulmonar (fără sare). 345 Probele uscate de surfactant pulmonar vor fi depozitate în frigider la 4°C vor trebui să fie resuspendate în apă sau în ser fiziologic înainte de utilizare.
în fiola de liofilizare sunt conținute:
95,6 mg Dipalmitoilfosfatidilcolină
45,1 mg Palmitoiloleilfosfatidilglicenol - sare de amoniu 350
2.7 mg SP-C (FF/I)
6.8 mg Acid palmitic
2.9 mg Clorură de calciu (anhidră)
Claims (11)
- Revendicări 3551. Polipeptidă cu activitate de agent tensioactiv pulmonar cu formula generală I:
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 A Gly Ile Pro B B Pro Val His Leu Lys 360 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Arg Leu Leu Ile Val Val Val Val Val Val (I) 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Leu Ile Val Val Val Ile Val Gly Ala Leu 31 32 33 34 365 Leu C Gly Leu caracterizată prin aceea că, A este H sau Phe, B este Phe sau Trp și C este Ile, Leu sau Ser. - 2. Polipeptidă, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, A este H sauPhe, B este Phe și C este Ile. 370
- 3. Polipeptidă, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, A este Phe, B este Phe și C este Ile.
- 4. Polipeptidă, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, A este Η, B este Phe și C este Ile.
- 5. Compoziție farmaceutică pentru tratamentul sindroamelor de defi-ciență respi- 375 ratorie (RDS) la mamifere, caracterizată prin aceea că, conține o cantitate eficientă de polipeptidă definită în revendicările 1-4, eficientă pentru a trata sindromul de deficiență respiratorie la respectivul mamifer și un excipient sau un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic.
- 6. Compoziție farmaceutică, conform revendicării 5, caracterizată prin aceea că, 380 mai conține o polipeptidă cu activitate de agent tensioactiv pulmonar din grupa SP-A și SP-B.
- 7. Compoziție farmaceutică, conform revendicării 6, caracterizată prin aceea că, conține SP-B.
- 8. Compoziție farmaceutică .conform revendicării 5, caracterizată prin aceea că, 385 conține fosfolipide.
- 9. Compoziție farmaceutică .conform revendicării 8, caracterizată prin aceea că, fosfolipidele sunt selectate dintre dipalmitoil fosfotidilcolina, palmito-iloleilfosfaditilglicerol și/sau fosfatidilglicerol.RO 118752 Β1390
- 10. Compoziție farmaceutică, conform revendicării 8, caracterizată prin aceea că, conține electroliți și acid palmitic.
- 11. 'Compoziție farmaceutică, conform revendicării 10, caracterizată prin aceea că, electrolitul este reprezentat de săruri de calciu și/sau sodiu.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4418936A DE4418936A1 (de) | 1994-05-31 | 1994-05-31 | Polypeptid |
| PCT/EP1995/002028 WO1995032992A1 (de) | 1994-05-31 | 1995-05-27 | Synthetische peptidanaloge des lungenoberflächenproteins sp-c |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO118752B1 true RO118752B1 (ro) | 2003-10-30 |
Family
ID=6519392
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RO96-02248A RO118752B1 (ro) | 1994-05-31 | 1995-05-27 | Polipeptide cu rol de agenţi tensioactivi pulmonari şi compoziţie farmaceutică care le conţine |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5874406A (ro) |
| EP (1) | EP0764172B1 (ro) |
| JP (1) | JP3359638B2 (ro) |
| KR (1) | KR100355626B1 (ro) |
| CN (1) | CN1130374C (ro) |
| AT (1) | ATE275154T1 (ro) |
| AU (1) | AU690280B2 (ro) |
| BG (1) | BG63210B1 (ro) |
| BR (1) | BR9507811B1 (ro) |
| CA (1) | CA2191344C (ro) |
| CY (1) | CY2552B1 (ro) |
| CZ (1) | CZ286976B6 (ro) |
| DE (2) | DE4418936A1 (ro) |
| DK (1) | DK0764172T3 (ro) |
| EE (1) | EE03775B1 (ro) |
| ES (1) | ES2227548T3 (ro) |
| FI (1) | FI118126B (ro) |
| HU (1) | HU220191B (ro) |
| NO (1) | NO317149B1 (ro) |
| NZ (1) | NZ287447A (ro) |
| PL (1) | PL181234B1 (ro) |
| PT (1) | PT764172E (ro) |
| RO (1) | RO118752B1 (ro) |
| RU (1) | RU2145611C1 (ro) |
| SI (1) | SI0764172T1 (ro) |
| SK (1) | SK282441B6 (ro) |
| UA (1) | UA35636C2 (ro) |
| WO (1) | WO1995032992A1 (ro) |
Families Citing this family (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2322097A (en) * | 1996-03-27 | 1997-10-17 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Lyophilized pulmonary surfactant peptide compositions |
| DE19851119C2 (de) | 1998-11-06 | 2001-05-31 | Byk Gulden Lomberg Chem Fab | Behälter und Vorrichtung zur Blindung der Verabreichung von nicht festen pharmazeutischen Darreichungsformen bei der klinischen Prüfung |
| IT1308180B1 (it) * | 1999-02-12 | 2001-12-07 | Chiesi Farma Spa | Peptidi sintetici aventi la capacita' di diminuire la tensionesuperficiale e loro impiego nella preparazione di un surfattante |
| WO2000076535A1 (en) * | 1999-06-11 | 2000-12-21 | Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh | Pharmaceutical preparation containing modifications of surfactant protein b (sp-b) and surfactant protein c (sp-c) |
| ES2278609T3 (es) * | 1999-06-17 | 2007-08-16 | Altana Pharma Ag | Esteres tensioactivos de la proteina c. |
| AU6083899A (en) | 1999-09-16 | 2001-04-17 | Aventis Behring Gmbh | Combination of c1-inh and lung surfactant for the treatment of respiratory disorders |
| AU2003201A (en) * | 1999-12-01 | 2001-06-12 | Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh | Novel use of lung surfactant |
| JP2003522138A (ja) * | 2000-02-11 | 2003-07-22 | アルタナ ファルマ アクチエンゲゼルシャフト | 慢性肺疾患の予防および治療のための肺表面活性剤の新規使用 |
| US6660833B1 (en) * | 2000-02-29 | 2003-12-09 | Harbor-Ucla Research And Education Institute | Respiratory distress syndrome therapy with peptide analogs of human SP-B |
| US20040254112A1 (en) * | 2000-04-12 | 2004-12-16 | Dietrich Hafner | Use of pulmonary surfactant for the early treatment of acute pulmonary diseases |
| DE10018022A1 (de) * | 2000-04-12 | 2001-10-31 | Byk Gulden Lomberg Chem Fab | Neue Verwendung von Lungensurfactant zur Prophylaxe oder Frühbehandlung von akuten Lungenerkrankungen |
| JP2003530356A (ja) * | 2000-04-12 | 2003-10-14 | アルタナ ファルマ アクチエンゲゼルシャフト | 急性肺疾患の予防又は早期治療のための肺表面活性物質の新規使用 |
| RU2161501C1 (ru) * | 2000-06-29 | 2001-01-10 | Санкт-Петербургская Общественная Организация "Санкт-Петербургский Институт Биорегуляции И Геронтологии Сзо Рамн" | Способ получения пептидов, обладающих тканеспецифической активностью, и фармацевтические композиции на их основе |
| EP1435994B1 (de) | 2001-10-11 | 2010-05-19 | Nycomed GmbH | Neue verwendung von lungensurfactant |
| WO2003053455A1 (en) | 2001-12-12 | 2003-07-03 | Penn State Research Foundation | Surfactant prevention of lung complications from cancer chemotherapy |
| ATE457736T1 (de) | 2004-08-06 | 2010-03-15 | Nycomed Gmbh | Zusammensetzung aus einem pulmonalen surfactant und einem von tnf stammenden peptid |
| US7582312B2 (en) * | 2004-11-15 | 2009-09-01 | Discovery Laboratories, Inc. | Methods to produce lung surfactant formulations via lyophilization and formulations and uses thereof |
| US7464012B2 (en) * | 2004-12-10 | 2008-12-09 | L'air Liquide, Societe Anonyme A Directoire Et Conseil De Surveillance Pour L'etude Et L'exploitation Des Procedes Georges Claude | Simplified process simulator |
| US8337815B2 (en) | 2004-12-23 | 2012-12-25 | Discovery Laboratories, Inc. | Pulmonary surfactant formulations |
| SI1841458T1 (sl) | 2005-01-06 | 2012-04-30 | Discovery Lab Inc | Zdravljenje s predpisanim odmerjanjem surfaktanta za zdravljenje ali preprečevanje bronhopulmonalne displazije |
| DE102005014650B3 (de) | 2005-03-31 | 2006-08-17 | Altana Pharma Ag | Anordnung aus Katheter und Anschlussstück sowie Ventil zum Durchführen eines Katheters |
| DE102005016229B3 (de) | 2005-04-08 | 2006-06-14 | Altana Pharma Ag | Trockenvernebler |
| EP2063903A1 (en) * | 2006-09-19 | 2009-06-03 | Discovery Laboratories, Inc. | Pulmonary surfactant formulations and methods for promoting mucus clearance |
| US7951781B2 (en) | 2006-11-02 | 2011-05-31 | University Of Iowa Research Foundation | Methods and compositions related to PLUNC surfactant polypeptides |
| EP2009023A1 (en) * | 2007-06-04 | 2008-12-31 | Rentschler Beteiligungs GmbH | Novel peptides and their use for the treatment of edema |
| US8048043B2 (en) | 2007-06-08 | 2011-11-01 | Chiesi Farmaceutici S. P. A. | Method of administration of a pulmonary surfactant |
| WO2010068754A2 (en) | 2008-12-10 | 2010-06-17 | Paka Pulmonary Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for delivery of medicaments to the lungs |
| WO2011029525A1 (en) | 2009-09-08 | 2011-03-17 | Chiesi Farmaceutici S.P.A. | A therapeutic combination comprising a pulmonary surfactant and antioxidant enzymes |
| RU2415676C1 (ru) * | 2009-12-09 | 2011-04-10 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Гармония" | Способ получения средства, обладающего тканеспецифической активностью, и средство, полученное данным способом (варианты) |
| CN103052380B (zh) | 2010-08-23 | 2015-11-25 | 塔科达有限责任公司 | 包含治疗活性物质的湿润颗粒 |
| WO2013120058A2 (en) * | 2012-02-09 | 2013-08-15 | University Of Rochester | Novel sp-b & sp-c peptides, synthetic lung surfactants, and use thereof |
| US20130303726A1 (en) * | 2012-04-17 | 2013-11-14 | Chiesi Farmaceutici S.P.A. | Method for the preparation of surfactant peptides |
| WO2013188016A2 (en) | 2012-05-04 | 2013-12-19 | Discovery Laboratories, Inc. | Surfactant therapy for exposure to ionizing radiation |
| AU2015226287B2 (en) | 2014-03-05 | 2019-01-31 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Humidifier for humidifying an aerosol |
| EP3106090A1 (en) | 2015-06-15 | 2016-12-21 | CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. | System for effective breath-synchronized delivery of medicament to the lungs |
| HK1247140A1 (zh) | 2015-04-22 | 2018-09-21 | 奇斯药制品公司 | 用於药物有效地呼吸同步递送到肺部的方法和系统 |
| US11311691B2 (en) | 2015-04-28 | 2022-04-26 | Chiesi Farmaceutici S.P.A | Device for facilitating the administration of a medicament to the lung by a catheter |
| WO2016174269A1 (en) | 2015-04-30 | 2016-11-03 | University Of Bremen | A novel skin medical and cosmetic care product |
| EP3490649A1 (en) | 2016-07-28 | 2019-06-05 | Chiesi Farmaceutici S.p.A. | Method and system for delivery of an aerosolized medicament |
| CN109890446B (zh) | 2016-10-26 | 2022-03-22 | 奇斯药制品公司 | 用于帮助通过导管向肺给送药剂的装置 |
| CA3043792A1 (en) | 2016-12-22 | 2018-06-28 | Chiesi Farmaceutici S.P.A. | A therapeutic combination comprising a pulmonary surfactant and a steroid for the treatment of evolving bpd |
| CN107163148A (zh) * | 2017-05-15 | 2017-09-15 | 重庆理工大学 | 肺表面活性蛋白b前肽的重组蛋白及其制备方法和应用 |
| TW201927286A (zh) | 2017-12-15 | 2019-07-16 | 義大利商凱西製藥公司 | 用於噴霧投藥之包含肺表面張力素的藥學調配物 |
| WO2019115771A1 (en) | 2017-12-15 | 2019-06-20 | Pari Pharma Gmbh | Nebuliser system, holding system, combination comprising nebuliser system and holding system, and aerosol administration method |
| JP7378425B2 (ja) | 2018-04-23 | 2023-11-13 | シエシー ファルマセウティチィ ソシエタ ペル アチオニ | 肺サーファクタントおよびｂｐｄの予防のためのステロイドを含む治療的組合せ |
| CN109001466A (zh) * | 2018-07-19 | 2018-12-14 | 新疆维吾尔自治区人民医院 | 一种用于osa的肺表面活性蛋白试剂盒及其应用 |
| EP3666315A1 (en) | 2018-12-14 | 2020-06-17 | PARI Pharma GmbH | Aerosol delivery device and method of operating the aerosol delivery device |
| EP3666316A1 (en) | 2018-12-14 | 2020-06-17 | PARI Pharma GmbH | Aerosol delivery device and method of operating the aerosol delivery device |
| EP3843105A1 (en) | 2019-12-23 | 2021-06-30 | PARI Pharma GmbH | Control device for aerosol nebulizer system |
| US20230257446A1 (en) | 2020-01-28 | 2023-08-17 | Chiesi Farmaceutici S.P.A. | Polypeptides having improved properties |
| EP4411745A1 (en) | 2023-02-01 | 2024-08-07 | Pari Medical Holding GmbH | Medical evaluation method, aerosol nebulizer and medical evaluation system |
| EP4464354A1 (en) | 2023-05-15 | 2024-11-20 | Pari Medical Holding GmbH | Method of operating an inhalation device, inhalation device and inhalation device system for providing inhalation process/breath guiding |
| EP4464236A1 (en) | 2023-05-15 | 2024-11-20 | Pari Medical Holding GmbH | Method of operating an inhalation device, inhalation device and inhalation device system for providing inhalation process feedback |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59164724A (ja) * | 1983-03-10 | 1984-09-17 | Tokyo Tanabe Co Ltd | サ−フアクタント及びそれを含有する呼吸窮迫症候群治療剤 |
| US5104853A (en) * | 1984-12-11 | 1992-04-14 | California Biotechnology Inc. | Alveolar surfactant proteins having cys to ser mutations |
| US4933280A (en) * | 1984-12-11 | 1990-06-12 | California Biotechnology Inc. | Recombinant DNA sequence encoding Alveolar Surfactant Protein |
| US5169761A (en) * | 1984-12-11 | 1992-12-08 | California Biotechnology Inc. | Dna encoding and expression systems for alveolar surfactant proteins |
| US4659805A (en) * | 1984-12-11 | 1987-04-21 | California Biotechnology, Inc. | Recombinant alveolar surfactant protein |
| US5013720A (en) * | 1986-05-06 | 1991-05-07 | Abbott Laboratories | SAP-6-Val proteins and methods |
| ATE163013T1 (de) * | 1987-11-04 | 1998-02-15 | Byk Gulden Lomberg Chem Fab | Alveolare oberflächenaktive proteine |
| US5260273A (en) * | 1988-01-06 | 1993-11-09 | The Scripps Research Institute | Pulmonary surfactant protein and related polypeptide |
| SE8803713D0 (sv) * | 1988-10-18 | 1988-10-18 | Kabigen Ab | Biologically active lipoprotein and its use |
| DE3921954A1 (de) * | 1989-07-04 | 1991-01-17 | Thomae Gmbh Dr K | Niedrig-viskose, hochkonzentrierte surfactant-suspension |
| JPH05294996A (ja) * | 1992-04-17 | 1993-11-09 | Tokyo Tanabe Co Ltd | 合成ペプチド、それを含有する肺サーファクタント及び呼吸窮迫症候群治療剤 |
-
1994
- 1994-05-31 DE DE4418936A patent/DE4418936A1/de not_active Withdrawn
-
1995
- 1995-05-27 CA CA002191344A patent/CA2191344C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-27 UA UA96114479A patent/UA35636C2/uk unknown
- 1995-05-27 CN CN95194374A patent/CN1130374C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-27 AT AT95920906T patent/ATE275154T1/de active
- 1995-05-27 US US08/750,194 patent/US5874406A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-27 ES ES95920906T patent/ES2227548T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-27 JP JP50030596A patent/JP3359638B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-27 AU AU26169/95A patent/AU690280B2/en not_active Expired
- 1995-05-27 DK DK95920906T patent/DK0764172T3/da active
- 1995-05-27 HU HU9603249A patent/HU220191B/hu unknown
- 1995-05-27 PL PL95317420A patent/PL181234B1/pl unknown
- 1995-05-27 BR BRPI9507811-8A patent/BR9507811B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-05-27 DE DE59510941T patent/DE59510941D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-27 EP EP95920906A patent/EP0764172B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-27 WO PCT/EP1995/002028 patent/WO1995032992A1/de not_active Ceased
- 1995-05-27 SI SI9530712T patent/SI0764172T1/xx unknown
- 1995-05-27 NZ NZ287447A patent/NZ287447A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-05-27 EE EE9600175A patent/EE03775B1/xx unknown
- 1995-05-27 CZ CZ19963502A patent/CZ286976B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-05-27 SK SK1524-96A patent/SK282441B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1995-05-27 RU RU96124768A patent/RU2145611C1/ru active
- 1995-05-27 PT PT95920906T patent/PT764172E/pt unknown
- 1995-05-27 KR KR1019960706778A patent/KR100355626B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-27 RO RO96-02248A patent/RO118752B1/ro unknown
-
1996
- 1996-11-27 NO NO19965052A patent/NO317149B1/no not_active IP Right Cessation
- 1996-11-29 FI FI964766A patent/FI118126B/fi not_active IP Right Cessation
- 1996-12-04 BG BG101028A patent/BG63210B1/bg unknown
-
2006
- 2006-02-20 CY CY0600006A patent/CY2552B1/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RO118752B1 (ro) | Polipeptide cu rol de agenţi tensioactivi pulmonari şi compoziţie farmaceutică care le conţine | |
| US20070166283A1 (en) | Compositions and methods for the treatment of hemophilia a | |
| US4886748A (en) | DNA encoding flagellin and vector having the same | |
| JP2738428B2 (ja) | トロンビンによるプロテインｃの活性化を促進する作用を有するペプチド | |
| AU622102B2 (en) | A pharmaceutical containing tissue protein pp4, a process for the preparation of pp4 and for the pasteurization thereof, and the use of pp4 | |
| HUT74901A (en) | Alfa-1-antichymotrypsin analogues having elastase inhibitory activity | |
| Lugtenberg et al. | Pore protein e of the outer membrane of Escherichia coli K12 | |
| US5451659A (en) | Polypeptide, DNA fragment encoding the same, drug composition containing the same and process for producing the same | |
| JP2862870B2 (ja) | 新規ペプチド | |
| JP3290661B2 (ja) | 陸蛭からの新規トロンビン阻害性蛋白質 | |
| JP3004788B2 (ja) | アルギニンデイミナーゼ発現ベクター、形質転換微生物およびアルギニンデイミナーゼの製造法 | |
| KR0147294B1 (ko) | 혈액 응고 억제제에 대한 해독제로서의 인자 viii의 용도 | |
| Nariya et al. | Identification of the essential amino acid residues in lukS for the hemolytic activity of staphylococcal leukocidin towards rabbit erythrocytes | |
| JPH0680697A (ja) | ヒト好中球エラスターゼ阻害活性を有する天然型ポリペプチドおよびそれを含有する医薬製剤 | |
| JPH08333400A (ja) | 抗血栓活性を有する融合蛋白質及びその製法 | |
| JP2824503B2 (ja) | エリスロポエチン活性増強物質およびその製造法 | |
| MXPA96005986A (en) | Synthetic analogues of peptide protein of the pulmonary surface s | |
| JPH0330693A (ja) | 新規生理活性ポリペプチド | |
| JPH02177896A (ja) | 新規生理活性ポリペプチド | |
| Bensoussan | Production of recombinant allergen birch pollen betv1a modified with hydrophobic moieties in the host escherichia coli | |
| JPS63188395A (ja) | 新規生理活性ポリペプチド | |
| HK1000891B (en) | Synthetic peptide analogs of lung surfactant protein sp-c |