[go: up one dir, main page]

PL200848B1 - Zastosowanie kompleksu kwasu hialuronowego i cynku do wytwarzania środka do leczenia - Google Patents

Zastosowanie kompleksu kwasu hialuronowego i cynku do wytwarzania środka do leczenia

Info

Publication number
PL200848B1
PL200848B1 PL350289A PL35028900A PL200848B1 PL 200848 B1 PL200848 B1 PL 200848B1 PL 350289 A PL350289 A PL 350289A PL 35028900 A PL35028900 A PL 35028900A PL 200848 B1 PL200848 B1 PL 200848B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
zinc
hyaluronic acid
complex
use according
synovial
Prior art date
Application number
PL350289A
Other languages
English (en)
Other versions
PL350289A1 (en
Inventor
Isao Serizawa
Keisei Maekawa
Janos Illes
Erzsebet Neszmeli
Original Assignee
Richter Gedeon Vegyeszet
Takata Seiyaku Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Richter Gedeon Vegyeszet, Takata Seiyaku Co filed Critical Richter Gedeon Vegyeszet
Publication of PL350289A1 publication Critical patent/PL350289A1/xx
Publication of PL200848B1 publication Critical patent/PL200848B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/728—Hyaluronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompleksu kwasu hialuronowego i cynku do wytwa- rzania srodka do leczenia zapalnej choroby stawów oraz do wytwarzania srodka do leczenia insulino- zale znej proliferatywnej retynopatii cukrzycowej lub srodka do leczenia inwazji z lo sliwego guza lub przerzutów. Kompleks ten synergistycznie inhibituje proliferacje komórek maziowych i hamuje metalo- proteaz e matrycow a MMP-9, która jest wytwarzana przez komórki maziowe. PL PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy zastosowanie kompleksu kwasu hialuronowego i cynku do wytwarzania środka do leczenia zapalnych chorób stawów.
Choroby zapalne stawów, a w tym takie choroby jak reumatoidalne zapalenie stawów, zapalenie kości i stawów i urazowe zapalenie stawów, są chorobami, które wywołują destrukcję chrząstki i kości poś rednio poprzez stan zapalny maziowej bł ony stawowej. Neogeneza naczyniowa, inwazja limfocytowa oraz proliferacja i aktywacja komórek maziowych jest obserwowana w stanie zapalnym błony maziowej. Aktywowane komórki maziowe wytwarzają mediatory chemiczne, takie jak cytokiny, prostaglandyny i metaloproteazy matrycowe, i uważa się, że powodują destrukcję chrząstki i kości (Harris, E.D., New England Journal od Medicine, wol. 322, str. 1277-1289 (1990); oraz Cash, J. M., et al., New England Journal od Medicine, wol. 330, str. 1368-1375 (1994)).
Kwas hialuronowy w postaci soli sodowej jest znany jako skuteczny w leczeniu zapalnej choroby stawów (źródło: Yamamoto, M, et. al., „Clinical evaluation of High Molecular Sodium Hyaluronate (NRD) on Osteoarthritis of the Knee”, Jpn Pharmacol. Ther, wol. 21, nr 3, (1993)). Ponadto, wiadomo, że cynk jest skuteczny w leczeniu zapalenia stawów (A. Frigo, et al., „Copper and Zinc in Inflammation”, Inflamation and drug therapy series, wol. IV, Kluwer Academic Publishers, str. 133-142 (1989)).
Jednakże, chociaż kwas hialuronowy (zwykle w postaci soli sodowej) jest używany do leczenia zapalenia stawów, to nie jest skuteczny względem proliferacji i aktywowania komórek maziowych. Ponadto, również przy zastosowaniu samego cynku nie można uzyskać zadowalających efektów terapeutycznych.
Zgodne z wynalazkiem jest zastosowanie kompleksu kwasu hialuronowego i cynku do wytwarzania środka do leczenia zapalnej choroby stawów, przy czym korzystnie kompleks kwasu hialuronowego i cynku ma ciężar cząsteczkowy 100 do 2.000, a zwłaszcza ciężar cząsteczkowy 1.000. Proporcja wagowa kwasu hialuronowego do cynku korzystnie wynosi od 5:1 do 20:1, a bardziej korzystnie 10:1.
Zgodnie z wynalazkiem kompleks kwasu hialuronowego i cynku jest stosowany do wytwarzania środka do leczenia zapalnej choroby stawów, takiej jak reumatoidalne zapalenie stawów, zapalenie kości i stawów, wodniak stawu lub gwałtowne destruktywne zmiany zwyrodnieniowe w stawie biodrowym (malum coxae), a zwłaszcza do wytwarzania środka do leczenia reumatoidalnego zapalenia stawów.
Zgodne z wynalazkiem jest też zastosowanie kompleksu kwasu hialuronowego i cynku do wytwarzania środka do leczenia insulinozależnej proliferatywnej retynopatii cukrzycowej lub środka do leczenia inwazji złośliwego guza lub przerzutów, przy czym korzystnie stosuje się kompleks kwasu hialuronowego i cynku mający ciężar cząsteczkowy 100 do 2.000, a zwłaszcza ciężar cząsteczkowy 1.000. Proporcja wagowa kwasu hialuronowego do cynku korzystnie wynosi od 5:1 do 20:1, a bardziej korzystnie 10:1.
Wynalazek umożliwia skuteczne leczenie zapalnych chorób stawów wskutek inhibitowania proliferacji i aktywowania komórek maziowych, które mają udział w etiologii zapalnych chorób stawów, takich jak reumatoidalne zapalenie stawów, a zwłaszcza poprzez hamowanie czynności metaloproteaz matrycowych.
W rezultacie prowadzenia rozmaitych badań , został o stwierdzone, ż e aczkolwiek kwas hialuronowy (sól sodowa) nie ma zasadniczo działania inhibitującego proliferację i aktywowanie komórek maziowych, a działanie cynku inhibitujące proliferację i aktywowanie komórek maziowych, a zwłaszcza metaloproteazy matrycowej, jest wyjątkowo słabe, to związek kwasu hialuronowego i cynku wykazuje niespodziewanie niezwykle silne działanie inhibitujące proliferację komórek maziowych oraz działanie hamujące metaloproteazy matrycowe wskutek efektu synergii, konkretnie wzajemnie wzmożonego oddziaływania obydwu składników.
Opis rysunków
Figura 1 przedstawia rosnące efekty inhibitujące HA/Zn, Na-HA i Zn na komórki maziowe u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RASC), fig. 2 - rosnące efekty inhibitujące HA/Zn, Na-HA i Zn na komórki maziowe u pacjentów z zapaleniem kości i stawów (OASC), fig. 3 - rosnące efekty inhibitujące HA/Zn, Na-HA i Zn na komórki maziowe u pacjentów z urazowym zapaleniem stawów (TASC).
Sposoby praktycznej realizacji wynalazku
Środkiem aktywnym w zastosowaniu według wynalazku jest kompleks kwasu hialuronowego i cynku. Kwas hialuronowy zwykle wystę puje w postaci soli sodowej i stanowi makroczą steczkę schaPL 200 848 B1 rakteryzowaną przez Meyer'a et al. (J. Bio/. Chem., wol. 107, str. 629 (1934)). Kwas hialuronowy jest wysoce lepkim glukozoaminoglikanem zawierającym na przemian fragmenty składowe kwasu β1,3-glukuronowego i ei,4-glukozaminy, a jego ciężar cząsteczkowy znajduje się w zakresie od 50 do kilku milionów. Kwas hialuronowy znajduje się w tkance łącznej wszystkich ssaków i jest obecny w wysokich stężeniach w skórze, ciele szklistym oka, płynie maziowym, pępowinie i tkance chrząstkowej. Ponieważ kwas hialuronowy jest podstawowym składnikiem tkanki łącznej, to jest biokompatybilny, bioadsorbowalny i nie-immunogenny. W konsekwencji kwas hialuronowy wykazuje liczne, korzystne działania biologiczne poprzez smarowanie i ochronę chrząstki stawowej.
W kompleksie kwasu hialuronowego i cynku stosowanym według wynalazku, proporcja kwasu hialuronowego i cynku znajduje się w zakresie, w którym składniki te wykazują działania synergistyczne pod względem inhibitowania proliferacji komórek maziowych i hamowania metaloproteazy matrycowej MMP-9, a ciężar cząsteczkowy kompleksu kwasu hialuronowego i cynku wynosi 100 do 2.000. Kompleks kwasu hialuronowego i cynku może być przykładowo wytwarzany poprzez zmieszanie na wodnego roztworu hialuronianu sodu i wodnego roztworu soli cynku, takiej jak chlorek cynku (europejski opis patentowy nr EP 0413016).
Liczne zapalne choroby stawów są uważane za wynikające z proliferacji i aktywowania komórek maziowych, wywoływanych przez pewne czynniki. Aktywowane komórki maziowe wytwarzają mediatory chemiczne, takie jak cytokiny, prostaglandyny i metaloproteazy matrycowe, i powodują destrukcję kości i chrząstki prowadzącą do zapalenia stawów. Metaloproteazy matrycowe (MMP) obejmują MMP1, która rozkłada kolagen typu l i II, MMP-3, która również rozkłada kolagen chrząstkowy poza wyżej wymienionymi kolagenami, oraz MMP-9, która rozkłada żelatynowane postacie kolagenu typu l i II na kolageny o niższym ciężarze cząsteczkowym, oraz rozkłada kolagen typu IV, kolagen typu V, kolagen typu IX i proteoglikan chrząstkowy (Sapata, l., et al., Biochem. Biophys. Acta, wol. 370, str. 510-523, 1974; Murphy, G., et al., Biochem. J., 203, str. 209-221, 1982; Morel, F., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., wol. 191, str. 269-274, 1993; Hibbs, M.S., Matrix Supple., wol. 1, str. 51-57, 1992; Murphy, G., et al., Biochem. J., wol. 277, str. 277-279, 1991; Hibbs, M.S., et al., J. Biol. Chem., wol. 260, str. 2493-2500, 1995). Uważa się, że te wszystkie czynniki są zaangażowane w destrukcję stawu.
Aczkolwiek komórki maziowe od pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów, z zapaleniem kości i stawów i z urazem mogą być hodowane in vitro, to rozwój tych komórek jest inhibitowany w zależności od stężenia przez kompleks kwas hialuronowy/cynk w stężeniu 100 do 300 μg/ml. A zatem kompleks kwas hialuronowy/cynk jest użyteczny w leczeniu zapalnych chorób stawów, takich jak reumatoidalne zapalenie stawów, zapalenie kości i stawów, urazowe zapalenie stawów, wodniak stawu i gwałtowne destrukcyjne malum coxae (zmiany zwyrodnieniowe w stawie biodrowym). Zdolność do inhibitowania proliferacji komórek maziowych jest uważana za umożliwiającą objawowe leczenie reumatoidalnego zapalenia stawów.
W hodowli in vitro komórek maziowych od pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów, zapaleniem kości i stawów i urazem, metaloproteaza matrycowa MMP-9 z komórek maziowych pochodnych reumatoidalnego zapalenia stawów jest inhibitowana przez kompleks kwas hialuronowy/cynk w stężeniu 100 μg/ml lub mniejszym. A zatem kompleks kwas hialuronowy/cynk jest użyteczny jako supresor metaloproteazy matrycowej MMP-9 z komórek maziowych z reumatoidalnego zapalenia stawów, w szczególności użyteczny jako środek do leczenia insulino-zależnej proliferacyjnej retynopatii cukrzycowej lub inhibitor złośliwej inwazji guza lub przerzutów.
Jak wskazano w praktycznych realizacjach, hialuronian sodu zasadniczo nie inhibituje proliferacji komórek maziowych, jak i zasadniczo nie hamuje metaloproteazy matrycowej MMP-9. Ponadto, chociaż chlorek cynku inhibituje proliferację komórek maziowych jak również hamuje metaloproteazę matrycową MMP-9, to jednak kompleks kwas hialuronowy/cynk wykazuje silniejsze inhibitowanie proliferacji komórek maziowych i hamowanie metaloproteazy matrycowej MMP-9 niż chlorek cynku.
Sposoby podawania kompleksu kwas hialuronowy/cynk są to sposoby zwykle stosowane w przypadku innych farmaceutyków. W szczególności wymieniony kompleks może być podawany doustnie lub pozajelitowo, przy czym podawanie infekcyjne jest szczególnie korzystne. Skuteczna dawka kompleksu kwasu hialuronowego/cynku w zastosowaniu według wynalazku wynosi 0,01 do 1 mg, a korzystnie 0,03 mg do 0,5 mg na staw na podanie na osobę. Nie zaobserwowano, aby stosowanie kompleksu kwas hialuronowy/cynk wywoływało objawy toksyczności ogólnoustrojowej, nawet gdy był podawany podskórnie szczurom i myszom w fizykalnie dopuszczalnej maksymalnej dawce 200 mg/kg.
PL 200 848 B1
Środek do leczenia zapalenia stawów oraz środki do leczenia insulino-zależnej proliferatywnej retynopatii cukrzycowej lub do leczenia inwazji złośliwego guza lub przerzutów mogą zawierać 0,001% do 1%, a korzystnie 0,01% do 0,5% kompleksu kwas hialuronowy/cynk z rutynowo stosowanym nośnikiem farmaceutycznym. Przykłady rutynowo stosowanych nośników farmaceutycznych obejmują podłoża zwykle stosowane w aplikacjach terapeutycznych, takie jak chitosan, skrobia, pektyna, HPMC i alginian sodu, lepiszcza, takie jak żywica tragakanty, guma arabska, skrobia kukurydziana i żelatyna, zaróbki, takie jak celuloza krystaliczna i mannitol, środki dezintegrujące, takie jak skrobia kukurydziana, α-skrobia i kwas alginowy, środki smarne, takie jak stearynian magnezu, słodziki, takie jak sukroza, laktoza i sacharyna, środki smakowe, takie jak mięta pieprzowa, miętowy i wiśniowy, oraz antyseptyki.
Przykłady
P r z y k ł a d 1. Działanie inhibitujące proliferację komórek maziowych.
Działania kompleksu kwasu hialuronowego i cynku (HA/Zn) w zastosowaniu według wynalazku oraz działania hialuronianu sodu (NaHA) oraz cynku (Zn) jako porównawczą próbą kontrolną, badano na komórkach maziowych (RASC) od pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RA), komórkach maziowych (OASC) od pacjentów z zapaleniem kości i stawów (OA) i komórkach maziowych (TASC) od pacjentów z urazowym zapaleniem stawów (TA).
Użyte substancje testowe obejmowały HA/Zn (szarża nr A65242, 1% roztwór, Gedeon-Richter, Ltd.), hialuronian sodu (Na-HA, szarża nr KK4001, Q.P. Corp.) i chlorek cynku (Zn, szarżą nr ESH1413, Wako Pure Chemical Ind., Ltd.). Zawczasu wyznaczono ilościowe wartości zawartości kwasu hialuronowego i cynku w wyżej wymienionym roztworze HA/Zn (ciężar właściwy; d2020 = 1,0134). Ponieważ ilość kwasu hialuronowego wyniosła 99% (105,0% jeśli przeliczono na hialuronian sodu), a ilość cynku wyniosła 1,07 mg/ml, gdy wyżej wymieniony 1% został przypisany wartości 100, to proporcja wagowa kwasu hialuronowego do cynku w wymienionym HA/Zn została uznana za wynoszącą 10:1 (Na-HA:Zn). Substancje testowe badano w stężeniach 10 μg/ml, 30 μg/ml, 100 μg/ml, 150 μg/ml, 200 μg/ml, 250 μg/ml i 300 μg/ml dla HA/Zn, te same stężenia jak HA/Zn dla Na-HA i 1/10 stężeń HA/ZN dla Zn.
Próbki tkanki błony maziowej pobierano ze stawu kolanowego pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RA) (5 przypadków, wiek 65,6 ± 10,6 lat) i pacjentów z zapaleniem kości i stawów (OA) (6 przypadków, wiek 73,4 ± 8,9 lat) w trakcie chirurgicznego wstawiania sztucznego stawu, oraz ze stawu kolanowego pacjentów z urazowym zapaleniem stawu (TA) (6 przypadków, wiek 25,6 ± 6,7 lat) w trakcie chirurgii atroskopowej. Po pobraniu próbek, próbki natychmiast umieszczono w probówkach (50 ml miarowe probówki wirówkowe, Iwaki) zawierających DMEM (środowisko Dulbecco modyfikowane przez Eagle) i przechowywano w 4°C. Następnie tkankę błony maziowej przemyto na czystym stanowisku, usunięto inne tkanki, błonę maziową pocięto na cienkie segmenty i separowano na indywidualne komórki maziowe (SC) poprzez działanie enzymem (kolagenaza i trypsyna, Wako Pure Chemical Ind., Ltd.) do użycia w testach.
Wszystkie hodowle SC prowadzono z użyciem DMEM zawierającego 10% deaktywowanej termicznie (56°C, 30 min.) bydlęcej surowicy płodowej (FCS, Dainippom Pharmaceutical Co., Ltd.) i mieszanym roztworem przeciwciał (penicylina: 100 jednostek/ml, streptomycyna: 100 μg/ml, fungizon: 25 ng/ml).
3
Komórki maziowe inokulowano na mikropłytce (96 studzienkowej, Iwaki) w stężeniu 3,55 x 103 komórek/0,1 ml/studzienkę (1 x 104 komórek/cm2) i wstępnie hodowano przez 2 dni w 37°C w atmosferze złożonej z 5% CO2 i 95% powietrza. Następnie środowisko zastąpiono środowiskiem zawierającym wyżej wymienione leki przygotowane w różnych stężeniach, a następnie prowadzono hodowlę w 37°C w atmosferze złożonej z 5% CO2 i 95% powietrza aż do dnia 12 od dodania leku. Środowiska zastępowano co 4 dni środowiskami zawierającymi lek w trakcie okresu hodowli. Pomiary proliferacji komórek przeprowadzano w dniach 4, 8 i 12 stosownie do metody4) MTT (New Biochemistry Experiments and Lectures 12, Molecular Immunology l - Immune cells and cytokines, 358, 1989). Wyniki wyrażono poprzez absorbancję optyczną, która wykazywała dodatnią korelację z liczbą komórek.
Przeprowadzono analizę statystyczną poprzez testowanie jednorodnej wariancji z zastosowaniem metody Bartlett'a na poziomie istotnym 5%. Jeśli wariancja była jednorodna, dane testowano przeprowadzając jednogałęziowy układ izowariancji (1-gałęziowa ANOVA), a w przypadku zaobserwowania znaczących różnic, przeprowadzano wielokrotny test porównawczy z wartościami średnimi z użyciem metody Dunnett'a lub Tukey'a. W przypadku niejednorodnej wariancji, dane testowano z użyciem testu Kruskal-Wallis'a, a kolejność testowano z użyciem wielokrotnego testu porównawczego według nieparametrycznej metody Dunnett'a lub Tukey'a.
PL 200 848 B1
Wyniki uzyskane dla RASC, OASC i TASC, odpowiednio, przedstawiono na fig. 1, 2 i 3. Na tych wykresach gwiazdka (*) wskazuje znaczącą różnicę względem grupy bez dodatku leku przy p < 0,05, natomiast podwójna gwiazdka (**) wskazuje znaczącą różnicę przy p < 0,01.
Jak widać z tych wykresów, chociaż proliferacja nie była znacząco inhibitowana dla którejkolwiek z komórek maziowych wskutek dodania Na-HA, to w przypadku dodania HA/Zn proliferacja komórek maziowych była znacząco inhibitowana zależnie od dodanej ilości leku. Ponadto znaczące inhibitowanie proliferacji komórek maziowych obserwowano również w przypadku dodania Zn. Jednakże, inhibitowanie komórek maziowych było większe z HA/Zn niż z Zn, a jeśli weźmie się pod uwagę, że proliferacja nie była inhibitowana w przypadku dodania Na-HA, to wykazano, że HA/Zn ma działania synergistyczne w porównaniu z przypadkami zastosowania samego Na-HA lub samego Zn.
P r z y k ł a d 2. Działanie hamujące na metaloproteazę matrycową MMP-9 w supernatancie hodowli komórek maziowych.
Komórki maziowe inokulowano na płytkach do hodowli (średnica: 35 mm, Iwaki) do stężenia 10 x 104 komórek/2 ml/płytkę (1 x 104 komórek/cm2) i wstępnie hodowano przez 2 dni w 37°C w atmosferze złożonej z 5% CO2 i 95% powietrza. Następnie środowiska zastąpiono środowiskami zawierającymi lek, a próbki supernatantów z hodowli pobrano dnia 8 hodowli w tych samych warunkach, a następnie przechowywano w -80°C do pomiaru. Stężenia HA/Zn i Na-HA po dodaniu wynosiły
100 μg/ml (stężenie finalne), natomiast stężenie Zn wynosiło 10 μg/ml (stężenie finalne). Ilość metaloproteazy matrycowej MMP-9 w supernatancie mierzono z użyciem EIA (oznaczenie enzymatyczne). Celem przeanalizowania wyników obliczonych jako stężenie w supernatancie na komórkę, wyniki przekształcono w wartości podzielone przez wartość absorbancji optycznej komórek maziowych przez MTT w tym czasie. Ponadto wartość tą dalej wyrażono jako wartość względem próby kontrolnej o indywidualnej wartości każdej grupy z dodatkiem leku, przypisując próbie kontrolnej (grupa bez dodatku leku) wartość 100%.
W rezultacie, w przypadku przypisania próbie kontrolnej (bez dodatku leku) wartości 100%, wytwarzanie MMP-9 wynosiło 0% dla dodatku HA/Zn, 100% dla dodatku Na-HA i 50% dla dodatku Zn. Zatem działanie hamujące MMP-9 HA/Zn zostało potwierdzone, i że jest synergistyczne względem indywidualnych składników, Na-HA lub Zn.
Jak ujawniono powyżej, kompleks kwasu hialuronowego i cynku według niniejszego wynalazku ma działanie, które synergistycznie inhibituje proliferację komórek maziowych i hamuje metaloproteazę matrycową MMP-9 wytwarzaną przez komórki maziowe w porównaniu ze swymi składnikami, kwasem hialuronowym i cynkiem, co czyni go użytecznym jako środek do leczenia zapalnych chorób stawów, takich jak reumatoidalne zapalenie stawów.
P r z y k ł a d 3
Preparat
Kwas hialuronowy cynk Mannitol Woda do iniekcji Całość
0,2 g
5,0 g odpowiednia ilość 100 ml
Sposób przygotowania
Po rozpuszczeniu 5 g mannitolu lub glukozy w 80 ml wody do iniekcji, dodano małymi porcjami kwas hialuronowy cynk i mieszano do rozpuszczenia. Roztwór przesączono i wprowadzono do ampułek. Ampułki sterylizowano w sterylizatorze natryskowym (około 105°C) przez 30 minut, otrzymując zastrzyki.
Do przygotowania preparatu z przykładu 4 podobnie zastosowano procedurę według powyższego sposobu.
P r z y k ł a d 4
Preparat
Kwas hialuronowy cynk
Glukoza
Woda do iniekcji Całość
0,2 g
5,0 g odpowiednia ilość 100 ml
PL 200 848 B1

Claims (12)

1. Zastosowanie kompleksu kwasu hialuronowego i cynku do wytwarzania środka do leczenia zapalnej choroby stawów.
2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że wymieniony kompleks kwasu hialuronowego i cynku ma ciężar cząsteczkowy 100 do 2.000.
3. Zastosowanie według zastrz. 2, znamienne tym, ż e wymieniony kompleks kwasu hialuronowego i cynku ma ciężar cząsteczkowy 1.000.
4. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, albo 3, znamienne tym, ż e proporcja wagowa kwasu hialuronowego do cynku wynosi od 5:1 do 20:1.
5. Zastosowanie według zastrz. 4, znamienne tym, że proporcja wagowa kwasu hialuronowego do cynku wynosi 10:1.
6. Zastosowanie wedł ug zastrz. 1 albo 2, albo 3, znamienne tym, ż e wymienioną zapalną chorobą stawów jest reumatoidalne zapalenie stawów, zapalenie kości i stawów, wodniak stawu lub gwałtowne destruktywne zmiany zwyrodnieniowe w stawie biodrowym (malum coxae).
7. Zastosowanie według zastrz. 6, znamienne tym, że wymienioną zapalną chorobą stawów jest reumatoidalne zapalenie stawów.
8. Zastosowanie kompleksu kwasu hialuronowego i cynku do wytwarzania ś rodka do leczenia insulino-zależnej proliferatywnej retynopatii cukrzycowej lub środka do leczenia inwazji złośliwego guza lub przerzutów.
9. Zastosowanie według zastrz. 8, znamienne tym, ż e wymieniony kompleks kwasu hialuronowego i cynku ma ciężar cząsteczkowy 100 do 2.000.
10. Zastosowanie według zastrz. 9, znamienne tym, że wymieniony kompleks kwasu hialuronowego i cynku ma ciężar cząsteczkowy 1.000.
11. Zastosowanie według zastrz. 8 albo 9, albo 10, znamienne tym, że proporcja wagowa kwasu hialuronowego do cynku wynosi od 5:1 do 20:1.
12. Zastosowanie według zastrz. 11, znamienne tym, że proporcja wagowa kwasu hialuronowego do cynku wynosi 10:1.
PL350289A 1999-03-10 2000-03-10 Zastosowanie kompleksu kwasu hialuronowego i cynku do wytwarzania środka do leczenia PL200848B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP06371899A JP2003089647A (ja) 1999-03-10 1999-03-10 関節性疾患治療剤
PCT/JP2000/001487 WO2000053194A1 (en) 1999-03-10 2000-03-10 Remedies for joint diseases

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL350289A1 PL350289A1 (en) 2002-12-02
PL200848B1 true PL200848B1 (pl) 2009-02-27

Family

ID=13237463

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL350289A PL200848B1 (pl) 1999-03-10 2000-03-10 Zastosowanie kompleksu kwasu hialuronowego i cynku do wytwarzania środka do leczenia

Country Status (21)

Country Link
US (1) US6608043B1 (pl)
EP (1) EP1166788B8 (pl)
JP (1) JP2003089647A (pl)
KR (1) KR100728096B1 (pl)
CN (1) CN1165315C (pl)
AT (1) ATE466584T1 (pl)
AU (1) AU2942500A (pl)
BG (1) BG65681B1 (pl)
CA (1) CA2364451C (pl)
CY (1) CY1109773T1 (pl)
CZ (1) CZ301736B6 (pl)
DE (1) DE60044341D1 (pl)
DK (1) DK1166788T3 (pl)
EA (1) EA005010B1 (pl)
EE (1) EE04660B1 (pl)
ES (1) ES2344677T3 (pl)
PL (1) PL200848B1 (pl)
PT (1) PT1166788E (pl)
SK (1) SK287223B6 (pl)
UA (1) UA72913C2 (pl)
WO (1) WO2000053194A1 (pl)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUP0303779A2 (en) * 2003-11-20 2006-02-28 Richter Gedeon Vegyeszet Pharmaceutical compositions containing hyaluronan complex for the treatment of sclerosis multiplex
ITRM20030590A1 (it) * 2003-12-22 2005-06-23 Univ Siena Formulazione a base di polimetafosfati per la cura di artropatie microcristalline.
US20070238677A1 (en) * 2004-03-17 2007-10-11 Locomogene, Inc. Pharmaceutical Composition Containing Hshrd3
US20070099867A1 (en) * 2005-05-24 2007-05-03 Glycoscience Laboratories, Inc. Pharmaceutical agent containing hyaluronan as an active ingredient
NO20064337L (no) * 2005-09-26 2007-03-27 Glycoscience Lab Inc Farmasoytisk middel inneholdende hyaluronan som en aktiv ingrediens
JP2009091248A (ja) * 2006-01-17 2009-04-30 Toshitsu Kagaku Kenkyusho:Kk 外傷性神経障害および／または運動機能障害の治療薬
WO2008068854A1 (ja) 2006-12-05 2008-06-12 Glycoscience Laboratories, Inc. 変形性関節症の治療剤
FR2927255B1 (fr) * 2008-02-07 2011-08-12 Keysan Consulting Produits injectables biocompatibles a liberation de zinc et/ou de sel de saccharide sous forme de zinc et leurs utilisations.
US8462765B2 (en) * 2008-08-20 2013-06-11 Qualcomm Incorporated Method and apparatus to perform ranging operations for wireless stations
JP5587637B2 (ja) * 2009-04-10 2014-09-10 生化学工業株式会社 マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤及びその用途
HUP0900717A3 (en) 2009-11-18 2012-02-28 Richter Gedeon Nyrt Pharmaceutical composition for urological use containing zinc hyaluronate
US8524662B2 (en) 2010-12-28 2013-09-03 Depuy Mitek, Llc Compositions and methods for treating joints
US8455436B2 (en) 2010-12-28 2013-06-04 Depuy Mitek, Llc Compositions and methods for treating joints
US8398611B2 (en) 2010-12-28 2013-03-19 Depuy Mitek, Inc. Compositions and methods for treating joints
US8623839B2 (en) 2011-06-30 2014-01-07 Depuy Mitek, Llc Compositions and methods for stabilized polysaccharide formulations
ES2665254T3 (es) * 2011-07-12 2018-04-25 Holy Stone Healthcare Co., Ltd. Composiciones que comprenden ácido hialurónico para tratamiento y prevención de enfermedades relacionadas con las mucosas
US9682099B2 (en) 2015-01-20 2017-06-20 DePuy Synthes Products, Inc. Compositions and methods for treating joints

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU600483B2 (en) * 1986-03-14 1990-08-16 Bio-Technology General Corporation Heavy metal salts of hyaluronic acid
US4746504A (en) * 1986-03-14 1988-05-24 Bio-Technology General Corp. Heavy metal salts of hyaluronic acid and their use as antimicrobial agents
CA1327354C (en) * 1987-03-19 1994-03-01 David Cullis-Hill Anti-inflamatory compounds and compositions
AU616502B2 (en) * 1988-04-22 1991-10-31 Medvet Science Pty. Ltd. Treatment of inflammatory disorders in humans
HU203372B (en) * 1989-02-24 1991-07-29 Richter Gedeon Vegyeszet Process for producing hyaluronic associates and pharmaceutical compositions and cosmetics comprising such active ingredient
CZ202591A3 (cs) * 1991-07-02 1993-01-13 Hypro Vyzkum Prostředek pro prevenci dekubitft a topickou terapii kožních lézt
US5744442A (en) * 1992-08-26 1998-04-28 Bristol Meyers Squibb Company Regulation of cellular invasiveness
IT1281877B1 (it) * 1995-05-10 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Sali di metalli pesanti di succinil derivati dell'acido ialuronico e loro impiego come potenziali agenti terapeutici
IT1288290B1 (it) * 1996-06-21 1998-09-11 Fidia Spa In Amministrazione S Acido ialuronico autoreticolato e relative composizioni farmaceutiche per il trattamento delle artropatie
EP0834319A1 (en) * 1996-10-07 1998-04-08 Kartar Dr. Lalvani Mineral and vitamin combinations in arthritic pain

Also Published As

Publication number Publication date
KR100728096B1 (ko) 2007-06-14
UA72913C2 (en) 2005-05-16
AU2942500A (en) 2000-09-28
DK1166788T3 (da) 2010-08-23
EE04660B1 (et) 2006-08-15
PT1166788E (pt) 2010-06-25
KR20010108343A (ko) 2001-12-07
SK287223B6 (sk) 2010-03-08
EE200100478A (et) 2003-02-17
WO2000053194A1 (en) 2000-09-14
ATE466584T1 (de) 2010-05-15
ES2344677T3 (es) 2010-09-03
EP1166788B8 (en) 2010-06-16
CN1165315C (zh) 2004-09-08
DE60044341D1 (de) 2010-06-17
EP1166788A1 (en) 2002-01-02
US6608043B1 (en) 2003-08-19
JP2003089647A (ja) 2003-03-28
CA2364451A1 (en) 2000-09-14
CZ301736B6 (cs) 2010-06-09
SK12502001A3 (sk) 2002-02-05
PL350289A1 (en) 2002-12-02
CY1109773T1 (el) 2014-09-10
BG105885A (en) 2002-06-28
EP1166788A4 (en) 2007-10-10
EA200100963A1 (ru) 2002-02-28
EA005010B1 (ru) 2004-10-28
CN1343122A (zh) 2002-04-03
BG65681B1 (bg) 2009-06-30
CA2364451C (en) 2011-08-02
CZ20013110A3 (cs) 2002-01-16
EP1166788B1 (en) 2010-05-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL200848B1 (pl) Zastosowanie kompleksu kwasu hialuronowego i cynku do wytwarzania środka do leczenia
EP0296620A2 (en) Use of N-acetylneuraminic-acid salts for the preparation of a medicament for decongesting nasal mucous membranes
US20080132585A1 (en) Separate type medical material
JP5047814B2 (ja) 骨関節症におけるヒアルロン酸のアミド誘導体
EP1640026A1 (en) Adhesion inhibiting material for vertebral/spinal operation
CA2064575A1 (en) Pharmaceutical compositions containing aromatic polymers and therapeutic methods using the same
CA2212458C (en) Vascular intimal hyperplasia-inhibitory composition
JP3751202B2 (ja) 関節性疾患治療剤
US20050026867A1 (en) Hyaluronic acid-associated superoxide dismutase mimics and their use in the treatment of joint pain
US20220280555A1 (en) Composition Comprising Hyaluronic Acid and Pluronic for Preventing or Treating Articular and Cartilage Injury
JP4754137B2 (ja) グリコサミノグリカン誘導体およびその使用
JPWO2000053194A1 (ja) 関節性疾患治療剤
CN102159218B (zh) 用于医学用途的新型几丁低聚物组合物
JPWO2001012675A1 (ja) グリコサミノグリカン誘導体およびその使用
Waddell et al. Viscosupplementation: Evidence for a Mechanism of Action
SK1332000A3 (en) A pharmaceutical composition active in reducing production of mcp-1 protein
HK1106161B (en) Amide derivatives of hyaluronic acid in osteoarthrosis
WO2014164723A1 (en) Short-chain fatty acid hexosamine analogs and their use in tissue engineering applications