ES2344677T3

ES2344677T3 - Medicamentos para enfermedades articulares.

Info

Publication number: ES2344677T3
Application number: ES00908017T
Authority: ES
Inventors: Isao Serizawa; Keisei Maekawa; Janos Illes; Erzsebet Neszmeli
Original assignee: Richter Gedeon Nyrt; Takata Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Richter Gedeon Nyrt; Takata Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1999-03-10
Filing date: 2000-03-10
Publication date: 2010-09-03
Anticipated expiration: 2020-03-10
Also published as: KR100728096B1; UA72913C2; AU2942500A; DK1166788T3; EE04660B1; PT1166788E; KR20010108343A; SK287223B6; EE200100478A; WO2000053194A1; PL200848B1; ATE466584T1; EP1166788B8; CN1165315C; DE60044341D1; EP1166788A1; US6608043B1; JP2003089647A; CA2364451A1; CZ301736B6

Abstract

Complejo de ácido hialurónico y zinc para su utilización en el tratamiento de enfermedades artríticas.

Description

Medicamentos para enfermedades articulares.

Campo de la técnica

La presente invención se refiere a un complejo de ácido hialurónico y zinc para su utilización en el tratamiento de enfermedades artríticas, tales como artritis reumatoide.

Antecedentes de la técnica

Las enfermedades artríticas, que incluyen enfermedades tales como artritis reumatoide, osteoartritis y artritis traumática, son enfermedades inflamatorias que provocan la destrucción del cartílago y del hueso mediada por la inflamación de la membrana sinovial de la articulación. Se observa neogénesis vascular, invasión de linfocitos, así como proliferación y activación de células sinoviales en la membrana sinovial inflamada. Las células sinoviales activadas producen mediadores químicos tales como citoquinas, prostaglandinas y metaloproteinasas de matriz, y se considera que causan la destrucción del cartílago y del hueso (Harris, E.D., New England Journal of Medicine, Vol. 322, p. 1277-1289 (1990); y Cash, J.M. y col., New England Journal of Medicine, vol. 330, p. 1368-1375 (1994)).

El ácido hialurónico en forma de sal sódica es conocido por ser eficaz para el tratamiento de enfermedades artríticas (referencia: Yamamoto, M. y col., "Clinical Evaluation of High Molecular Sodium Hyaluronate (NRD) on Osteoarthritis of the Knee", Jpn Pharmacol. Ther. Vol. 21, No. 3, (1993)). Además, el zinc es conocido por ser eficaz para el tratamiento de la artritis (A. Frigo, y col., "Copper and Zinc in Inflammation", inflammation and drug therapy series, Vol. IV, Kluwer Academic Publishers, p. 133-142 (1989)).

Sin embargo, aunque el ácido hialurónico (típicamente en forma de sal sódica) es en cierta medida conocido para el tratamiento de enfermedades artríticas, ya que es favorable en términos de sus propiedades de biocompatibilidad y fluidez, no tiene esencialmente ningún efecto contra la proliferación y activación de las células sinoviales. Además, tampoco se pueden obtener efectos terapéuticos satisfactorios con el uso del zinc.

La WO 90/10020 describe soluciones acuosas que contienen hialuronato de zinc que se pueden utilizar en el tratamiento de la úlcera crural, decúbito, heridas que no cicatrizan, provocadas por quemaduras, radiación o calor, acné vulgar y acné conglobata.

La WO 87/05517 A describe sales de oro de ácido hialurónico que se pueden administrar vía intraarticular con el fin de proporcionar una acción continua del oro en el tratamiento de enfermedades artríticas como artritis reumatoide.

La WO 97/49412 A se refiere a composiciones que contienen una forma autoreticulable enlazada de ácido hialurónico, las cuales pueden contener opcionalmente ácido hialurónico salificado con zinc como componente adicional. Dichas composiciones se pueden utilizar en el tratamiento de artropatías debido a sus propiedades viscoelásticas únicas.

La WO 88/07060 se refiere a composiciones adecuadas para el tratamiento de trastornos artríticos que comprenden un soporte farmacéuticamente aceptable y al menos dos compuestos seleccionados de entre el grupo consistente en ácido hialurónico o sales solubles en agua del mismo, corticosteroides y compuestos capaces de mantener la integridad del cartílago articular.

Descripción de la invención

A partir de la realización de varios estudios para resolver los problemas mencionados anteriormente, los inventores de la presente invención descubrieron que, aunque el ácido hialurónico (sal sódica) no tiene efectos inhibidores de la proliferación y activación de las células sinoviales y de que los efectos inhibidores del zinc sobre la proliferación y activación de las células sinoviales, y en particular sobre las metaloproteinasas de matriz, son sumamente bajos, sorprendentemente un complejo de ácido hialurónico y zinc tiene efectos inhibidores extremadamente potentes sobre la proliferación de las células sinoviales, así como efectos sobre la supresión de las metaloproteinasas de matriz, gracias a sus efectos sinérgicos: a saber, una interacción sinérgica de potenciación de ambos constituyentes, conduciendo así a la conclusión de la presente invención.

La presente invención se refiere a la utilización de un complejo de ácido hialurónico y zinc para la producción de un agente para el tratamiento de enfermedades artríticas.

Las realizaciones preferentes de la invención se evidencian a partir de la descripción siguiente, así como de las reivindicaciones dependientes adjuntas.

Breve descripción de las figuras

Figura 1: gráfico que muestra los efectos inhibidores del crecimiento de Ha/Zn, Na-HA y Zn en células sinoviales procedentes de pacientes con artritis reumatoide (RASC).

Figura 2: gráfico que muestra los efectos inhibidores del crecimiento de HA/Zn, Na-HA y Zn en células sinoviales procedentes de pacientes con osteoartritis (OASC).

Figura 3: gráfico que muestra los efectos inhibidores del crecimiento de HA/Zn, Na-HA y Zn en células sinoviales procedentes de pacientes con artritis traumática (TASC).

Realización de la invención

El ingrediente activo de la presente invención es un complejo de ácido hialurónico y zinc. El ácido hialurónico se presenta habitualmente en forma de sal sódica, y es una macromolécula descrita por Meyer y col., (J. Biol. Chem., Vol. 107, p. 629 (1934)). El ácido hialurónico es un glucosaminoglicano muy viscoso que posee componentes alternativos de ácido \beta-1,3-glucurónico y \beta-1,4-glucosamina, oscilando su peso molecular entre 50 kD y varios millones de D. El ácido hialurónico se encuentra en el tejido conectivo de todos los mamíferos y está presente a altos niveles en la piel, en el cuerpo vítreo del ojo, el fluido sinovial, el cordón umbilical y el tejido cartilaginoso. Debido a que el ácido hialurónico es un componente fundamental del tejido conectivo, es biocompatible, bioabsorbible y no inmunogénico. Por consiguiente, el ácido hialurónico demuestra tener numerosas funciones biológicas en forma de lubricación y protección del cartílago articular.

En el complejo de ácido hialurónico y zinc de la presente invención, la relación entre el ácido hialurónico y el zinc se encuentra en un rango tal que estos componentes demuestran efectos sinergísticos en cuanto a la inhibición de la proliferación de células sinoviales y la supresión de la metaloproteinasa de matriz MMP-9. En cuanto a la proporción en peso, la relación entre el ácido hialurónico y el zinc se sitúa en el rango de 5:1 a 20:1, y preferentemente 10:1. El peso molecular del complejo de ácido hialurónico y zinc utilizado en la presente invención es preferentemente de 100 kD a 2.000 kD, siendo especialmente preferente un peso molecular de aproximadamente 1.000 kD. El complejo de ácido hialurónico y zinc de la presente invención se puede producir mediante mezcla, por ejemplo, de una solución acuosa de hialuronato de sodio y una solución acuosa de una sal de zinc tal como cloruro de zinc (especificación de patente europea Nº EP 0413016).

Se considera que muchas enfermedades inflamatorias artríticas se deben a la proliferación y activación de las células sinoviales causadas por algún factor. Las células sinoviales activadas producen mediadores químicos como citoquinas, prostaglandinas y metaloproteinasas de matriz, y provocan la destrucción del hueso y del cartílago, conduciendo a la inflamación articular. Las metaloproteinasas de matriz (MMP) incluyen MMP-1, que descompone el colágeno de tipo I y tipo II, MMP-3 que descompone también el colágeno cartilaginoso además de los colágenos mencionados anteriormente, y MMP-9, que descompone las formas gelatinizadas del colágeno de tipo I y de tipo II en colágenos de peso molecular más bajo, y descompone el colágeno de tipo IV, el colágeno de tipo V, el colágeno de tipo IX, así como el proteoglicano cartilaginoso (Sapata, I., y col., Biochem. Biophys. Acta., Vol. 370, p. 510-523, 1974; Murphy, G. y col., Biochem. J., Vol. 203, p. 209-221, 1982; Morel, F. y col., Biochem. Biophys. Res. Commun., Vol. 191, p. 269-274, 1993; Hibbs, M.S., Matrix Supple., Vol. 1, p. 51-57, 1992; Murphy, G. y col., Biochem. J., Vol. 277, p. 277-279, 1991; Hibbs, M.S. y col., J. Biol. Chem., Vol. 260, p. 2493-2500, 1995). Se cree que están implicados en la destrucción de las articulaciones.

Aunque las células sinoviales procedentes de pacientes con artritis reumatoide, osteoartritis y strauma puedan desarrollarse in vitro, el desarrollo de estas células es inhibido de forma dependiente de la concentración por el complejo ácido hialurónico/zinc de la presente invención a una concentración de 100 a 300 \mug/ml. Por tanto, el complejo ácido hialurónico/zinc de la presente invención sirve para el tratamiento de enfermedades artríticas tales como artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedades artríticas traumáticas, hidrartrosis y coxartrosis rápidamente destructiva. Se considera que la capacidad para inhibir la proliferación de células sinoviales permite el tratamiento nosotrópico de la artritis reumatoide (publicación de patente japonesa no examinada Nº 7-145062).

En el cultivo in vitro de células sinoviales procedentes de pacientes con artritis reumatoide, osteoartritis y traumas, la metaloproteinasa de matriz MMP-9 procedente de células sinoviales que tienen su origen en la artritis reumatoide se suprime por medio del complejo ácido hialurónico/zinc de la presente invención a una concentración de 100 \mug/ml o inferior. Por tanto, el complejo ácido hialurónico/zinc de la presente invención es útil como supresor de la metaloproteinasa de matriz MMP-9 de las células sinoviales en la artritis reumatoide. Aquí, el supresor de la metaloproteinasa de matriz MMP-9 mencionado anteriormente es, por ejemplo, un agente para el tratamiento de la retinopatía diabética proliferativa en insulino-dependientes o un inhibidor de la invasión de tumores malignos o metástasis.

Tal como se indica en las realizaciones, el hialuronato de sodio no inhibe sustancialmente la proliferación de las células sinoviales, ni tampoco suprime sustancialmente la metaloproteinasa de matriz MMP-9. Además, aunque el cloruro de zinc inhibe la proliferación de las células sinoviales y suprime la metaloproteinasa de matriz MMP-9, el complejo ácido hialurónico/zinc de la presente invención muestra una inhibición más fuerte de la proliferación de las células sinoviales y de la supresión de la metaloproteinasa de matriz MMP-9 que el cloruro de zinc.

Por tanto, los efectos inhibidores de la proliferación de las células sinoviales y los efectos de supresión de la metaloproteinasa de matriz MMP-9 del complejo ácido hialurónico/zinc de la presente invención son sinergísticos con relación al ácido hialurónico y al zinc, constituyentes del complejo mencionado anteriormente.

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Esto significa que los dos constituyentes del complejo mencionado anteriormente muestran un sinergismo de potenciación en el caso del efecto mencionado anteriormente.

Para el complejo ácido hialurónico/zinc de la presente invención, se pueden aplicar los métodos de administración normalmente utilizados para los productos farmacéuticos. A saber, el complejo mencionado anteriormente se puede administrar vía oral o parenteral, y es particularmente preferente la administración por inyección. La dosis efectiva del complejo ácido hialurónico/zinc de la presente invención es de 0,01 mg a 1 mg, y preferentemente de 0,03 mg a 0,5 mg por articulación y por administración por persona. No se ha observado que el complejo ácido hialurónico/zinc de la presente invención provoque síntomas de toxicidad sistémica, incluso cuando se administra de forma subcutánea a ratas y ratones a la máxima dosis físicamente permitida, de 200 mg/kg.

El agente para el tratamiento de enfermedades artríticas y supresor de la metaloproteinasa de matriz MMP-9 de la presente invención puede contener del 0,001% al 1%, y preferentemente del 0,01% al 0,5%, del complejo ácido hialurónico/zinc de la presente invención con un soporte farmacéutico habitual. Ejemplos de soportes farmacéuticos habituales incluyen las bases típicamente empleadas en aplicaciones terapéuticas, tales como quitosano, almidón, pectina, HP-MC y alginato de sodio, aglutinantes como goma tragacanto, goma arábiga, almidón de maíz y gelatina, vehículos como celulosa cristalina y manitol, agentes disgregantes como almidón de maíz, almidón-\alpha y ácido algínico, lubricantes como estearato de magnesio, edulcorantes como sacarosa, lactosa y sacarina, aromatizantes tales como hierbabuena, menta y cereza, así como antisépticos.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos proporcionan una explicación detallada de la presente invención a través de sus realizaciones.

Ejemplo 1 Efecto Inhibidor de la Proliferación de Células Sinoviales

Los efectos del complejo de ácido hialurónico y zinc (HA/Zn) de la presente invención, así como los efectos del hialuronato de sodio (Na-HA) y zinc (Zn) como controles de comparación se sometieron a prueba en células sinoviales (RASC) procedentes de pacientes con artritis reumatoide (RA), células sinoviales (OASC) procedentes de pacientes con osteoartritis (OA) y células sinoviales (TASC) procedentes de pacientes con artritis traumática (TA).

Las sustancias utilizadas para el ensayo se componían de HA/Zn (Lote Nº A65242, solución al 1%, Gedeon-Richter, Ltd.), hialuronato de sodio (Na-HA, Lote Nº KK4001, Q.P. Corp.) y cloruro de zinc (Zn, Lote Nº ESH1413, Wako Pure Chemical Ind. Ltd.). Se determinaron previamente los valores cuantitativos del contenido en ácido hialurónico y zinc incluidos en la solución de HA/Zn mencionada anteriormente (gravedad específica; d^{20}_{20} = 1,0134). Debido a que la cantidad de ácido hialurónico era del 99% (del 105,0% cuando se calculó como hialuronato de sodio) y que la cantidad de zinc era de 1,07 mg/ml cuando se asigna un valor de 100 al 1% mencionado anteriormente, se consideró que la relación en peso entre el ácido hialurónico y al zinc en dicho HA/Zn era 10:1 (Na-HA:Zn). Se sometieron a prueba las sustancias del ensayo a concentraciones de 10 \mug/ml, 30 \mug/ml, 100 \mug/ml, 150 \mug/ml, 200 \mug/ml, 250 \mug/ml y 300 \mug/ml para HA/Zn, las mismas concentraciones que HA/Zn para Na-HA, y a 1/10 las concentraciones de HA/Zn para Zn.

Se muestreó tejido de la membrana sinovial procedente de la articulación de la rodilla de pacientes con artritis reumatoide (RA) (5 casos, 65,6 \pm 10,6 de edad) y pacientes con osteoartritis (OA) (6 casos, 73,4 \pm 8,9 de edad) durante la cirugía de sustitución de articulación artificial y procedente de la articulación de la rodilla de pacientes con artritis traumática (TA) (6 casos, 25,6 \pm 6,7 de edad) durante la cirugía artroscópica. Después del muestreo, se colocaron inmediatamente las muestras en tubos (tubos volumétricos de centrifugación de 50 ml, Iwaki) que contenían DMEM (Medio de Eagle modificado por Dulbecco) y se almacenaron a 4ºC. Más tarde, se lavó el tejido de la membrana sinovial en una mesa limpia, se eliminó el tejido extraño, se cortó la membrana sinovial en secciones finas y se aisló en células sinoviales individuales (SC) mediante tratamiento con enzimas (colagenasa y tripsina, Wako Pure Chemical Ind., Ltd.) para su uso en los ensayos.

El cultivo de todas las SC se realizó por medio de DMEM que contenía un 10% de suero de ternera fetal desactivado con calor (56ºC, 30 min) (FCS, Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) y una solución con mezcla de anticuerpos (penicilina: 100 unidades/ml, estreptomicina: 100 \mug/ml, fungizona: 25 ng/ml).

Se inocularon las células sinoviales (SC) en una microplaca (96 pocillos, Iwaki) a una concentración de 3,55 x 10^{3} células/0,1 ml/pocillo (1 x 10^{4} células/cm^{2}) y se precultivaron durante 2 días a 37ºC en una fase vapor que se componía de un 5% de CO_{2} y un 95% de aire. Más tarde, se sustituyeron los medios por otros que contenían los medicamentos mencionados anteriormente preparados a varias concentraciones, seguido de cultivo a 37ºC en una fase vapor consistente en un 5% de CO_{2} y un 95% de aire hasta el día 12 después de la adición del medicamento. Se sustituyeron los medios cada 4 días por otros que contenían el medicamento durante el período de cultivo. La medición de la proliferación celular se realizó los días 4, 8 y 12 según el método^{4)} MTT (New Biochemistry Experiments and Lectures 12, Molecular Immunology I - Immune cells and cytokines, 358, 1989). Los resultados se expresaron mediante la absorbancia óptica, que indicó una correlación positiva con el número de células.

Se realizó el análisis estadístico sometiendo a prueba la varianza uniforme por medio del método de Bartlett a un nivel de significancia del 5%. Cuando la varianza fue uniforme, se ensayaron los datos mediante la realización de una disposición en una vía de isovarianza (ANOVA de 1 vía) y en caso de que se observase una diferencia significativa, se llevó a cabo una prueba de comparación múltiple sobre los valores medios utilizando el método de Dunnett o Tukey. En caso de varianza no uniforme, se sometieron a prueba los datos por medio del ensayo de Kruskal-Wallis y se ensayó el orden utilizando una prueba de comparación múltiple de acuerdo con el método no paramétrico de Dunnett o
Tukey.

Los resultados obtenidos para RASC, OASC y TASC se muestran respectivamente en las Fig. 1, 2 y 3. En estos gráficos, los asteriscos (*) indican una diferencia notable con respecto al grupo de no adición de medicamento con p < 0,05, mientras que los asteriscos dobles (**) indican una diferencia significativa a p < 0,01.

Tal como indican estos gráficos, aunque la proliferación no estaba notablemente inhibida para ninguna de las células sinoviales por la adición de Na-HA, en el caso de adición de HA/Zn, la proliferación de células sinoviales fue significativamente inhibida dependiendo de la cantidad añadida. Además, se observó también una inhibición notable de la proliferación de células sinoviales en el caso de la adición de Zn. Sin embargo, la inhibición de la proliferación de células sinoviales fue mayor con HA/Zn que con Zn y, cuando se consideró que la proliferación no estaba inhibida en el caso de adición de Na-HA, se confirmó que HA/Zn tenía efectos sinergísticos en comparación con los casos de utilización de Na-HA o Zn solo.

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Ejemplo 2 Efecto Supresor sobre la Metaloproteinasa de Matriz MMP-9 en Sobrenadantes de Cultivos de Células Sinoviales

Se inocularon células sinoviales en placas de cultivo (diámetro: 35 mm, Iwaki) a una concentración de 10 x 10^{4} células/2 ml/placa (1 x 10^{4} células/cm^{2}), y se precultivaron durante 2 días a 37ºC en una fase vapor que se componía de un 5% de CO_{2} y un 95% de aire. Más tarde, se sustituyeron los medios por otros que contenían cada medicamento y se muestrearon los sobrenadantes de cultivo el día 8 del cultivo en las mismas condiciones, seguido del almacenamiento a -80ºC hasta la medición. Las concentraciones añadidas de HA/Zn y Na-HA fueron de 100 \mug/ml (concentración final), mientras que la concentración de Zn fue de 10 \mug/ml (concentración final). La cantidad de metaloproteinasa de matriz MMP-9 en el sobrenadante se midió utilizando EIA (Inmunoensayo con Enzimas). Con el fin de examinar los resultados calculados como concentración en el sobrenadante por célula, se convirtieron los resultados en valores divididos por el valor de la absorbancia óptica de las células sinoviales por MTT en aquel momento. Además, este valor se expresó también como valor relativo con respecto al control del valor individual de cada grupo de adición de medicamento, mientras se asignaba al control (grupo de no adición de medicamento) un valor del
100%.

Como consecuencia, en el caso de asignar al control (no adición de medicamento) un valor del 100%, la producción de MMP-9 fue del 0% para la adición de HA/Zn, del 100% para la adición de Na-HA y del 50% para la adición de Zn. Por tanto, se confirmó que el efecto supresor sobre MMP-9 de HA/Zn era sinergístico con respecto al de sus constituyentes, Na-HA o Zn, solo.

Tal como se ha descrito anteriormente, el complejo de ácido hialurónico y zinc de la presente invención tiene efectos que inhiben sinergísticamente la proliferación de las células sinoviales y suprimen la metaloproteinasa de matriz MMP-9 producida por las células sinoviales en comparación con sus constituyentes, el ácido hialurónico y el zinc, convirtiéndolo así en un agente útil para el tratamiento de enfermedades artríticas tales como artritis reumatoide.

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Ejemplo 3 Formulación

1

Método de preparación

Después de disolver 5 g de manitol o glucosa en 80 ml de agua para inyección, se añadió en pequeñas partes el ácido hialurónico/zinc, se agitó y se disolvió. Se filtró la solución y se rellenó una ampolla con ella. Se esterilizó la ampolla en un esterilizador de ducha (aproximadamente 105ºC) durante 30 minutos para preparar una inyección.

Para la formulación del Ejemplo 4, se empleó de forma similar el procedimiento de acuerdo con este método.

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Ejemplo 4 Formulación

2

Claims

1. Complejo de ácido hialurónico y zinc para su utilización en el tratamiento de enfermedades artríticas.

2. Complejo según la reivindicación 1, caracterizado porque dicho complejo de ácido hialurónico y zinc tiene un peso molecular de aproximadamente 100 kD a aproximadamente 2.000 kD.

3. Complejo según la reivindicación 2, caracterizado porque dicho complejo de ácido hialurónico y zinc tiene un peso molecular de aproximadamente 1.000 kD.

4. Complejo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la relación en peso entre el ácido hialurónico y el zinc es de 5:1 a 20:1.

5. Complejo según la reivindicación 4, caracterizado porque la relación en peso entre el ácido hialurónico y el zinc es aproximadamente de 10:1.

6. Complejo según las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque dicha enfermedad artrítica es artritis reumatoide, osteoartritis, hidratrosis o coxartrosis rápidamente destructiva.

7. Complejo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque dicha enfermedad artrítica es artritis reumatoide.

8. Utilización de un complejo de ácido hialurónico y zinc para la producción de un agente para el tratamiento de enfermedades artríticas.