KR20180002659A - Tgf-베타 슈퍼패밀리 유형 i 및 유형 ii 수용체 이형다합체들과 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 TGF-베타 패밀리의 유형 I 세린/트레오닌 키나제 수용체의 세포외 도메인과 TGF-베타 패밀리의 유형 I 세린/트레오닌 키나제 수용체의 세포외 도메인을 포함하는 이형화학적 폴리펩티드 복합체를 제공한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII에서 선택된 유형 II 수용체의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 폴리펩티드 복합체를 제공한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7에서 선택된 유형 I 수용체의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 폴리펩티드 복합체를 제공한다. 임의선택적으로 상기 가용성 복합체는 이형이합체이다. 특정 측면들에 있어서, 이러한 가용성 폴리펩티드 복합체들은 예를 들면, 근육, 뼈, 연골, 지방, 신경 조직, 종양, 암 세포, 및/또는 적혈구 세포를 포함하는 조혈계 세포가 포함된 조직 또는 세포의 성장을 조절(촉진 또는 억제)하는데 이용될 수 있다. 특정 측면들에 있어서, 이러한 가용성 폴리펩티드 복합체들은 근육 형성, 뼈 형성, 조혈, 대사 매개변수의 개선 및 이들 조직, 세포망, 및 엔도크린 시스템을 개선시키는데 이용될 수 있다.
Description
관련 출원들에 대한 교차-참조
본 출원은 2015년 4월 6일자로 제출된 미국 가출원 일련번호 62/143,579에 대한 우선권을 주장한다. 전술한 출원의 명세서는 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다.
발명의 배경
형질변환 성장 인자-베타 (TGF-베타) 슈퍼패밀리는 공통의 서열 요소들과 구조적 모티프를 공유하는 다양한 성장 인자들을 함유한다. 이들 단백질은 척추동물과 비척추동물 모두에서 대규모 다양한 세포 유형에서 생물학적 효과를 발휘하는 것으로 알려져 있다. 슈퍼패밀리의 구성원들은 패턴 형성 및 조직 특화에 있어서 배발달 동안 중요한 기능을 수행하고, 지질생성, 근육 형성, 연골 형성, 심장 형성, 조혈, 신경 발생 및 상피 세포 분화를 비롯한 다양한 분화 과정에 영향을 줄 수 있다. 상기 패밀리는 두 개의 일반적인 계통 발생 군으로 나뉘어진다: 슈퍼패밀리의 가장 최근에 진화된 구성요소, 즉 TGF-베타, 액티빈(Activins), 및 nodal 포함하는 구성요소, 그리고 상기 슈퍼패밀리의 더 관계가 먼 단백질 계통 군, BMPs 및 GDFs을 포함하는 구성요소. Hinck (2012) FEBS Letters 586:1860-1870. TGF-베타 패밀리 구성요소들은 다양한, 그리고 대개 상보적(complementary) 생물학적 효과들을 갖는다. TGF-베타 패밀리의 구성요소의 활성을 조절함으로써, 유기체에서 유의적인 생리학적 변화를 야기시키는 것이 대개 가능하다. 예를 들면, 피에몬테(Piedmontese) 및 벨기에 푸른 소(Blue cattle) 품종은 근육량의 상당한 증가를 야기하는 GDF8 (미오스태틴으로도 불림) 유전에 기능-소실(loss-of-function) 돌연변이를 휴대한다. Grobet et al. (1997) Nat Genet., 17(1):71-4. 더욱이, 인간에 있어서, GDF8의 비활성 대립유전자는 증가된 근육량과 연관있으며, 보고에 따르면 예외적으로 강한 힘과 관련있다. Schuelke et al. (2004) N Engl J Med, 350:2682-8.
근육, 뼈, 지방, 적혈구 및 기타 조직의 변화는 TGF-베타 패밀리의 리간드에 의해 매개되는 신호 전달 (예: SMAD 1, 2, 3, 5 및/또는 8)을 강화하거나 억제함으로써 달성될 수 있다. 따라서, TGF-베타 슈퍼패밀리의 다양한 리간드의 활성을 조절하는 물질이 필요하다.
발명의 배경
부분적으로, 본 명세서에서는 최소한 하나의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 세린/트레오닌 키나제 수용체 폴리펩티드 (가령, ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7 폴리펩티드) (그리고 이의 단편들 및 변이체들 포함됨), 및 최소한 하나의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 세린/트레오닌 키나제 수용체 폴리펩티드 (가령, ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII) (그리고 이의 단편들 및 변이체들 포함)를 포함하는 이형이합체 복합체들이 제공된다. 다른 측면들에 있어서, 본 명세서에서는 최소한 2가지의 상이한 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 세린/트레오닌 키나제 수용체 폴리펩티드 (가령, ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7 폴리펩티드), (이의 단편들 및 변이체들 포함)를 포함하는 이형이합체 복합체들이 제공된다. 여전히 다른 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 세린/트레오닌 키나제 수용체 폴리펩티드 (가령, ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII), (이의 단편들 및 변이체들 포함)를 포함하는 이형이합체 복합체들이 제공된다. 임의선택적으로, 본 명세서에서 공개된 이형이합체 복합체들 (가령, ActRIIB:ALK4 이형이합체)은 이들의 상응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ActRIIB 동형이합체 및 ALK4 동형이합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 실시예들에서 보여주는 바와 같이, TGF-베타 슈퍼패밀리의 유형 I 및 유형 II 수용체 폴리펩티드들을 포함하는 이형이합체 폴리펩티드 복합체들은 신규한 리간드 결합 속성을 포함하는 신규한 성질들을 나타낸다.
이형이합체 구조는 예를 들면, 이형이합체, 이형삼합체(heterotrimers), 및 더 높은 차수의 복합체들을 포함한다. 가령, 도 1, 2, 15, 16, 17, 18, 19 참고. 일부 구체예들에 있어서 본 명세서의 이형다합체는 이형이합체다. 바람직하게는 본 명세서에서 설명된 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및 유형 II 수용체 폴리펩티드들은 이 수용체의 리간드-결합 도메인, 예를 들면, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 수용체의 세포외 도메인을 포함한다. 따라서, 특정 측면들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 단백질 복합체들은 ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII로부터 선택된 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체의 세포외 도메인, 뿐만 아니라 이의 절두형 및 변이체들, 그리고 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7로구?? 선택된 세포외 도메인, 뿐만 아니라 이의 절두형 및 변이체들을 포함한다. 바람직하게는 본 명세서에서 설명된 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및 유형 II 폴리펩티드들, 뿐만 아니라 이를 포함하는 단백질 복합체들은 가용성이다. 특정 측면들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린(neurturin), 아르테민, 페르세핀, 
, 및 (Lefty)에 결합한다. 임의선택적으로, 본 명세서의 단백질 복합체들은 10-8, 10-9, 10-10, 10-11, 또는 10-12 또는 그 이상의 KD로 하나 또는 그 이상의 이들 리간드에 결합한다. 일반적으로, 본 명세서의 이형다합체는 최소한 하나의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 하나 또는 그 이상의 활성을 길항(억제)하고, 이러한 활성에서의 변형은 예를 들면, 본 명세서에서 설명된 세포-기반 분석이 포함된 당분야에 공지된 다양한 분석법을 이용하여 측정될 수 있다. 바람직하게는 본 명세서의 이형다합체는 포유류(가령, 마우스 또는 인간)에서 최소한 4, 6, 12, 24, 36, 48, 또는 72 시간의 혈장 반감기를 나타낸다. 임의선택적으로, 본 명세서의 이형다합체는 포유류 (가령, 마우스 또는 인간)에서 최소한 6, 8, 10, 12, 14, 20, 25, 또는 30 일의 혈장 반감기를 나타낸다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 이형다합체는 제 2 폴리펩티드에 공유 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하며, 이때 제 1 폴리펩티드는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드와 상기 상호작용 쌍(pair)의 제 1 구성요소의 아미노산 서열을 포함하며, 그리고 제 2 폴리펩티드는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 아미노산 서열과 상기 상호작용 쌍의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 측면들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 이형다합체는 제 2 폴리펩티드에 공유 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하며, 이때 제 1 폴리펩티드는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드와 상기 상호작용 쌍의 제 1 구성요소의 아미노산 서열을 포함하며, 그리고 제 2 폴리펩티드는 상이한 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드의 아미노산 서열과 상기 상호작용 쌍의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함한다. 여전히 다른 측면들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 이형다합체는 제 2 폴리펩티드에 공유 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하며, 이때 제 1 폴리펩티드는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드와 상기 상호작용 쌍의 제 1 구성요소의 아미노산 서열을 포함하며, 그리고 제 2 폴리펩티드는 상이한 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 아미노산 서열과 상기 상호작용 쌍의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함한다. 임의선택적으로, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소에 직접 연계되거나, 또는 중개 서열, 이를 테면 링커(linker)가 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드의 아미노산 서열과 상기 상호작용 쌍의 제 1 구성요소의 아미노산 서열 사이에 위치할 수 있다. 유사하게, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소에 직접 연계될 수 있거나, 또는 중개 서열, 이를 테면 링커(linker)가 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 아미노산 서열과 상기 상호작용 쌍의 제 2 구성요소의 아미노산 서열 사이에 위치할 수 있다. 링커의 예로는 서열 TGGG (서열 번호: 62), TGGGG (서열 번호: 60), SGGGG (서열 번호: 61), GGGG (서열 번호: 59), 및 GGG (서열 번호: 58)을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
본 명세서에서 설명된 상호작용 쌍은 이합체화(dimerization) 또는 더 높은 차수의 다합체 형성을 촉진시키기 위하여 기획된다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 상호작용 쌍은 복합체, 구체적으로, 이형이합체 복합체 복합체를 형성하기 위하여 상호작용하는 임의의 2개 폴리펩티드 서열일 수 있지만, 작업 구체예에서는 또한 동형이합체 서열을 형성하는 상호작용 쌍이 이용될 수도 있다. 상호작용 쌍의 제 1 및 제 2 구성요소는 비대칭 쌍일 수도 있는데, 이것은 구성요소들이 자가-연합보다는 서로 선호적으로 연합된다는 것을 의미한다. 따라서, 비대칭 상호작용 쌍의 제 1 및 제2 구성요소들은 이형이합체 복합체를 만들 수 있다. 대안으로, 상호작용 쌍이 유도되지 않을 수 있는데, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 자가 연합 또는 서로 연합될 수 있고, 따라서 동일하거나 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다. 따라서, 비유도(unguided) 상호작용 쌍의 제 1 및 제2 구성요소들은 동형이합체 복합체를 만들 수 있다. 임의선택적으로, 상호작용 쌍(가령, 비대칭 쌍 또는 비유도 상호작용 쌍)의 제 1 구성 요소는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소와 공유적으로 연합한다. 임의선택적으로, 상호작용 쌍(가령, 비대칭 쌍 또는 비유도 상호작용 쌍)의 제 1 구성 요소는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소와 비-공유적으로 연합한다. 임의선택적으로, 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 쌍 (가령, 비대칭 또는 비유도 상호작용 쌍)은 상호작용 쌍의 제 2 구성요소와 공유 및 비-공유 기전 모두를 통하여 연합한다.
일부 구체예들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 면역글로불린의 Fc 도메인을 포함하는 융합 단백질이다. 유사하게, 일부 구체예들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 면역글로불린의 Fc 도메인을 포함하는 융합 단백질이다. 전통적인 Fc 융합 단백질 및 항체는 비유도 상호작용 쌍의 예시이며, 반면 조작된 Fc 도메인 변이체들은 비대칭 상호작용 쌍으로 기획되었다 [Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]. 따라서, 본 명세서에서 공개된 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 및/또는 제 2 구성요소는 면역글로불린의 불변(constant) 도메인, 예를 들면, 면역글로불린의 Fc 영역을 포함할 수 있다. 예를 들면, 상호작용 쌍의 제 1 구성요소는 IgG (IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4), IgA (IgA1 또는 IgA2), IgE, 또는 IgM 면역글로불린의 Fc 도메인으로부터 유도된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들면, 상호작용 쌍의 제 1 구성요소는 서열 번호: 200-214중 임의의 하나에 최소한 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 상호작용 쌍의 제 2 구성요소는 IgG (IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4), IgA (IgA1 또는 IgA2), IgE, 또는 IgM의 Fc 도메인으로부터 유도된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이러한 면역글로불린 도메인은 이형이합체 형성을 촉진시키는 하나 또는 그 이상의 아미노산 변형 (가령, 결손, 추가, 및/또는 치환)을 포함할 수 있다. 예를 들면, 상호작용 쌍의 제 2 구성요소는 서열 번호: 200-214중 임의의 하나에 최소한 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 및 제 2 구성요소는 동일한 면역글로불린 부류(class) 및 아형에서 유도된 Fc 도메인을 포함한다. 다른 구체예들에 있어서, 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 및 제 2 구성요소는 상이한 면역글로불린 부류 및 아형에서 유도된 Fc 도메인을 포함한다. 유사하게, 제 1 구성요소 및/또는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (가령, 비대칭 쌍 또는 비유도 상호작용 쌍)는 면역글로불린의 변형된 불변 도메인, 예를 들면, 면역글로불린의 변형된 Fc 부분을 포함한다. 예를 들면, 본 명세서의 단백질 복합체들은 서열 번호: 200-214에서 선택된 아미노산 서열에 최소한 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린의 제 1 변형된 Fc 부분 면역글로불린의 제 2 변형된 Fc 부분을 포함할 수 있는데, 이때 제 2 변형된 Fc 부분은 상기 면역글로불린의 제 1 변형된 Fc 부분의 아미노산 서열과 동일하거나 또는 상이할 수 있으며, 서열 번호: 200-214에서 선택된 아미노산 서열에 최소한 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 면역글로불린 도메인은 이형이합체 형성을 촉진시키는 하나 또는 그 이상의 아미노산 변형 (가령, 결손, 추가, 및/또는 치환)을 포함할 수 있다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 유형 I 및 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성(heteromeric) 폴리펩티드 복합체들을 제공하는데, 이때 상기 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드는 ActRIIA 수용체로부터 유도된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 ActRIIA 수용체로부터 유도된다. 예를 들면, ActRIIA 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 ActRIIA 서열 (가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, ActRIIA 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 9의 아미노산 21-30 중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 9의 아미노산 110-135중 임의의 하나 (가령, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 ActRIIA 폴리펩티드는 ActRIIA에 대하여 이종성(heterologous)인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, ActRIIA 폴리펩티드는 다합체화(multimerization) 도메인, 임의선택적으로 상기 ActRIIA 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 특정 측면들에 있어서, ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다. 예를 들면, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK1 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 임의선택적으로, 본 구체예와 다른 구체예들에서 ALK1 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 14의 아미노산 22-34중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고, 그리고 b) 서열 번호: 14의 아미노산 95-118중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 및 118)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK2 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 임의선택적으로, 본 구체예와 다른 구체예들에서 ALK2 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 18의 아미노산 21-35중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 및 35)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 18의 아미노산 99-123중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 및 123)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK3 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 임의선택적으로, 본 구체예와 다른 구체예들에서 ALK3 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 22의 아미노산 24-61중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 및 61)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 22의 아미노산 130-152중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 및 152)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK4 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 임의선택적으로, 본 구체예와 다른 구체예들에서 ALK4 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-34중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 101-126중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK5 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 임의선택적으로, 본 구체예와 다른 구체예들에서 ALK5 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 25-36중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 및 36)에서 시작되고, 그리고 b) 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 106-126중 임의의 아미노산(가령, 아미노산 잔기 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK6 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 임의선택적으로, 본 구체예와 다른 구체예들에서 ALK6 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)에서 시작되고, 그리고 b) 서열 번호: 34의 아미노산 102-126중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 구체예와 다른 구체예들에서 ALK6 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 91의 아미노산 26-62중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 ,59, 60, 61, 및 62)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 91의 아미노산 132-156중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 및 156)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK7 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 임의선택적으로, 본 구체예와 다른 구체예들에서 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38의 아미노산 21-28중 임의의 하나(가령, 아미노산 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28)에서 시작하고, 그리고 서열 번호: 38의 아미노산 92-113중 임의의 하나 (가령, 서열 번호: 38의 아미노산 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 또는 113)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 특정 측면들에 있어서, ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다. 예를 들면, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ActRIIB 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 BMPRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 MISRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 TGFBRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 유형 I 및 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들을 제공하는데, 이때 상기 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드는 ActRIIB 수용체로부터 유도된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 ActRIIB 수용체로부터 유도된다. 예를 들면, ActRIIB 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 ActRIIB 서열 (가령, 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, ActRIIB 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 1의 아미노산 20-29 중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 1의 아미노산 109-134중 임의의 하나 (가령, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드는 ActRIIB에 대하여 이종성인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, ActRIIB 폴리펩티드는 다합체화 도메인, 임의선택적으로 상기 ActRIIB 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 바람직하게는 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다 예를 들면, ActRIIB 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK1 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIB 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK2 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIB 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK3 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIB 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK4 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIB 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK5 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIB 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK6 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIB 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK7 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 특정 측면들에 있어서, ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다. 예를 들면, ActRIIA 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ActRIIB 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들면, ActRIIB 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ActRIIA 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIB 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 BMPRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIB 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 MISRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIB 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 TGFBRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 유형 I 및 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들을 제공하는데, 이때 상기 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드는 TGFBRII 수용체로부터 유도된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 TGFBRII 수용체로부터 유도된다. 예를 들면, TGFBRII 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 TGFBRII 서열 (가령, 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, TGFBRII 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 42의 아미노산 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50 또는 51중 임의의 하나에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호:42의 아미노산 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165 또는 166중 임의의 하나에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, TGFBRII 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 67의 아미노산 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44 중 임의의 하나에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호:67의 아미노산 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191중 임의의 하나에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 TGFBRII 폴리펩티드는 TGFBRII에 대하여 이종성인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, TGFBRII 폴리펩티드는 다합체화 도메인, 임의선택적으로 상기 TGFBRII 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 바람직하게는 TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다 예를 들면, TGFBRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK1 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, TGFBRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK2 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, TGFBRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK3 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, TGFBRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK4 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, TGFBRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK5 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 470에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, TGFBRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK6 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, TGFBRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK7 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 임의선택적으로, TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 하나 또는 그 이상의 추가적인 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면 본 명세서에서 설명된 ActRIIA, ActRIIB, BMPRII, 및 MISRII 폴리펩티드 (가령, 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 10, 11 46, 47, 50, 51, 71, 72, 75, 76, 79, 80, 100, 102, 118, 120, 121, 123, 401, 402, 409, 410, 411, 및 412로부터 선택된 아미노산 서열을포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드)를 포함한다. 특정 측면들에 있어서, TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다. 예를 들면, TGFBRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ActRIIA 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, TGFBRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ActRIIB 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, TGFBRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 MISRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, TGFBRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 BMPRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 유형 I 및 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들을 제공하는데, 이때 상기 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드는 BMPRII 수용체로부터 유도된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 BMPRII 수용체로부터 유도된다. 예를 들면, BMPRII 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 BMPRII 서열 (가령, 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, BMPRII 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 123-150 중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 및 150)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 BMPRII 폴리펩티드는 BMPRII에 대하여 이종성인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, BMPRII 폴리펩티드는 다합체화 도메인, 임의선택적으로 상기 BMPRII 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 바람직하게는 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다. 예를 들면, BMPRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK1 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, BMPRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK2 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, BMPRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK3 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, BMPRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK4 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, BMPRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK5 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, BMPRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK6 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, BMPRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK7 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 특정 측면들에 있어서, BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다. 예를 들면, BMPRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ActRIIA 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, BMPRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ActRIIB 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, BMPRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 MISRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, BMPRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 TGFBRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 유형 I 및 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들을 제공하는데, 이때 상기 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드는 MISRII 수용체로부터 유도된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 MISRII 수용체로부터 유도된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 MISRII 수용체로부터 유도된다. 예를 들면, 예를 들면, MISRII 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 MISRII 서열 (가령, 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, MISRII 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-24중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 및 24)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 116-149 중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 및 149)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 MISRII 폴리펩티드는 MISRII에 대하여 이종성인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, MISRII 폴리펩티드는 다합체화 도메인, 임의선택적으로 상기 MISRII 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 바람직하게는 MISRII 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다 예를 들면, MISRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK1 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, MISRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK2 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, MISRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK3 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, MISRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK4 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, MISRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK5 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, MISRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK6 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, MISRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK7 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 특정 측면들에 있어서, MISRII 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 II TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다. 예를 들면, MISRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ActRIIA 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, MISRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ActRIIB 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, MISRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 BMPRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, MISRII 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 TGFBRII 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 예를 들면, 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 ALK1 수용체로부터 유도된다. 예를 들면, ALK1 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 ALK1 서열 (가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, ALK1 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 14의 아미노산 22-34중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고, 그리고 b) 서열 번호: 14의 아미노산 95-118중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 및 118)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 ALK1 폴리펩티드는 ALK1에 대하여 이종성인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, ALK1 폴리펩티드는 다합체화 도메인, 임의선택적으로 상기 ALK1 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다 예를 들면, ALK1 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK2 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK1 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK3 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK1 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK4 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK1 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK5 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK1 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK6 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK1 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK7 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데가령 , 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 ALK2 수용체로부터 유도된다. 예를 들면, ALK2 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 ALK2 서열 (가령, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, ALK2 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 18의 아미노산 21-35중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 및 35)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 18의 아미노산 99-123중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 및 123)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 ALK2 폴리펩티드는 ALK2에 대하여 이종성인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, ALK2 폴리펩티드는 다합체화 도메인, 임의선택적으로 상기 ALK2 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다 예를 들면, ALK2 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK1 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK2 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK3 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK2 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK4 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK2 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK5 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK2 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK6 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK2 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK7 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데가령 , 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 ALK3 수용체로부터 유도된다. 예를 들면, ALK3 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 ALK3 서열 (가령, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, ALK3 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 22의 아미노산 24-61중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 및 61)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 22의 아미노산 130-152중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 및 152)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 ALK3 폴리펩티드는 ALK3에 대하여 이종성인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, ALK3 폴리펩티드는 다합체화 도메인, 임의선택적으로 상기 ALK3 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다 예를 들면, ALK3 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK2 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK3 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK1 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK3 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK4 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK3 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK5 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK3 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK6 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK3 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK7 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데가령 , 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 ALK4 수용체로부터 유도된다. 예를 들면, ALK4 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 ALK4 서열 (가령, 서열 번호: 6, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, ALK4 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 101-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 ALK4 폴리펩티드는 ALK4에 대하여 이종성인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, ALK4 폴리펩티드는 다합체화 도메인, 임의선택적으로 상기 ALK4 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK4 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다 예를 들면, ALK4 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK2 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK4 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK3 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK4 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK1 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK4 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK5 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK4 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK6 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK4 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK7 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데가령 , 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 ALK5 수용체로부터 유도된다. 예예를 들면, ALK5 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 ALK5 서열 (가령, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, ALK5 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 25-36중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 및 36)에서 시작되고, 그리고 b) 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 106-126중 임의의 아미노산(가령, 아미노산 잔기 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 ALK5 폴리펩티드는 ALK5에 대하여 이종성인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, ALK5 폴리펩티드는 다합체화 도메인, 임의선택적으로 상기 ALK5 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK5 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다 예를 들면, ALK5 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK2 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK5 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK3 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK5 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK4 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK5 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK1 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK5 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK6 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK5 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK7 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데가령 , 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 ALK6 수용체로부터 유도된다. 예예를 들면, ALK6 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 ALK6 서열 (가령, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, ALK6 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)에서 시작되고, 그리고 b) 서열 번호: 34의 아미노산 102-126중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, ALK6 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 91의 아미노산 26-62중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 ,59, 60, 61, 및 62)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 91의 아미노산 132-156중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 및 156)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 ALK6 폴리펩티드는 ALK6에 대하여 이종성인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, ALK6 폴리펩티드는 다합체화 도메인, 임의선택적으로 상기 ALK6 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK6 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다. 예를 들면, ALK6 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK2 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK6 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK3 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK6 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK4 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK6 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK5 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK6 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK1 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK6 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK7 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데 가령 , 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 2가지의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 폴리펩티드 복합체들를 제공하는데, 이때 상기 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드중 최소한 하나는 ALK7 수용체로부터 유도된다. 예를 들면, ALK7 폴리펩티드는 본 명세서에서 공개된 ALK7 서열 (가령, 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476)에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38의 아미노산 21-28중 임의의 하나(가령, 아미노산 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28)에서 시작하고, 그리고 서열 번호: 38의 아미노산 92-113중 임의의 하나 (가령, 서열 번호: 38의 아미노산 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 또는 113)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 ALK7 폴리펩티드는 ALK7에 대하여 이종성인 하나 또는 그 이상의 부분 (도메인)을 더 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 예를 들면, ALK7 폴리펩티드는 다합체화 도메인, 임의선택적으로 상기 ALK7 폴리펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이에 위치한 링커 도메인을 포함하는 이종성 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 요소를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK7 폴리펩티드를 포함하는 이형화학성 복합체들은 최소한 하나의 상이한 유형 I TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 폴리펩티드를 더 포함한다. 예를 들면, ALK7 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK2 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK7 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK3 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK7 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK4 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK7 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK5 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK7 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK6 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, ALK7 이형화학성 복합체는 본 명세서에서 설명된 ALK1 폴리펩티드를 더 포함할 수 있는데, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및464에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 공개된 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드는 당화된 아미노산, 페길화된(PEGylated) 아미노산, 파르네실화된 아미노산, 아세틸화된 아미노산, 바이오티닐화된 아미노산, 지질 모이어티에 접합된 아미노산, 그리고 유기 유도화된 물질에 접합된 아미노산에서 선택된 하나 또는 그 이상의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 설명된 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 폴리펩티드는 당화된 것이며, 예를 들면, CHO 세포와 같은 포유류 세포에서 이들 폴리펩티드의 발현으로부터 획득가능한 당화 패턴을 갖는다.
특정 측면들에 있어서 본 명세서는 본 명세서에서 설명된 임의의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 폴리펩티드를 인코드하는 핵산을 제공한다. 본 명세서에서 설명된 핵산은 발현을 위하여 프로모터에 작동가능하도록 연계될 수 있으며, 본 명세서는 이러한 재조합 폴리뉴클레오티드로 형질전환된 세포를 더 제공한다. 바람직하게는 상기 세포는 COS 세포 또는 CHO 세포와 같은 포유류 세포다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 본 명세서에서 설명된 임의의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 폴리펩티드를 만드는 방법 뿐만 아니라 이러한 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들을 만드는 방법들을 제공한다. 이러한 방법은 적합한 세포 (가령, CHO 세포 또는 COS 세포)에서 본 명세서에서 공개된 임의의 핵산을 발현시키는 것을 포함한다. 이러한 방법은 다음을 포함할 수 있다: a) 본 명세서에서 설명된 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 폴리펩티드의 발현에 적합한 조건하에 세포를 배양하고, 이때 전술한 세포는 유형 I 또는 유형 II 폴리펩티드 발현 구조체로 형질전환되며; 그리고 b) 발현된 유형 I 또는 유형 II 폴리펩티드를 회수한다. 본 명세서에서 설명된 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 폴리펩티드, 뿐만 아니라 이의 단백질 복합체들은 세포 배양물에서 단백질을 얻기 위한 임의의 공지의 기술을 이용하여 정제안된 형태, 부분적으로 정제된 형태 또는 매우 정제된 분획물로써 회수될 수 있다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 본 명세서에서 공개된 임의의 이형다합체 복합체들을 만드는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 적합한 세포 (가령, CHO 세포 또는 COS 세포)에서 본 명세서에서 공개된 임의의 핵산을 발현시키는 것을 포함한다. 이러한 방법은 다음을 포함한다: a) 본 명세서에서 설명된 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드의 코딩 서열을 포함하는 핵산과 본 명세서에서 설명된 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 코딩 서열을 포함하는 핵산을 포함하는 세포를 얻고; (b) 본 명세서에서 설명된 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및 유형 II 폴리펩티드들의 발현에 적합한 조건하에 세포를 배양하고; 그리고 c) 발현된 유형 I 또는 유형 II 폴리펩티드를 회수한다. 본 명세서에서 공개된 이형다합체 복합체들은 세포 배양물에서 단백질을 얻기 위한 임의의 공지의 기술을 이용하여 정제안된 형태, 부분적으로 정제된 형태 또는 매우 정제된 분획물이다.
본 명세서에서 설명된 임의의 단백질 복합체들은 약학 제재(preparation)에 혼입될 수 있다. 임의선택적으로, 이러한 약학 제재는 다른 폴리펩티드 성분들에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99%의 순도를 갖는다. 임의선택적으로, 본 명세서의 약학 제재는 하나 또는 그 이상의 추가적인 활성 물질들을 포함할 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체는 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의 유형 I 수용체 폴리펩티드 동형다합체를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체는 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의 유형 II 수용체 폴리펩티드 동형다합체를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체는 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의 유형 I 수용체 폴리펩티드 동형다합체를 포함하고, 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의 유형 II 수용체 폴리펩티드 동형다합체를 포함한다.
본 명세서는 TGF-베타 슈퍼패밀리의 하나 또는 그 이상의 리간드에 침범된, 예를 들면, 근육, 뼈, 지방, 적혈구 및 다른 조직과 연관된 다양한 질환 및 장애의 치료 또는 예방 방법 및 이에 사용되는 이형이합체 복합체들을 더 제공한다. 이러한 질환 및 장애는 근육 손실 또는 불충분한 근육 성장과 관련된 질환 (가령, 근육 위축, 듀시엔 근위축병, 베커 근위축병, 및 얼굴어깨위팔근육 위축중을 포함하는 근위축병; 근위축성 측색 경화증; 및 악액질) 그리고 바람직하지 못한 체중 증가와 관련된 질환(가령, 비만, 타입 2 당뇨병 또는 비-인슐린 의존성 진성 당뇨병(NIDDM), 심혈관 질환, 고혈압, 골관절염, 뇌졸중, 호흡기 장애, 및 담즙 방광 질환)을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 공개된 이형이합체 복합체들은 체지방 함량을 감소시키거나 또는 체지방 함량의 증가 속도를 감소시킬 필요가 있는 대상에서 체지방 함량을 감소시키거나 또는 체지방 함량의 증가 속도를 감소시키는데 이용될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 공개된 이형이합체 복합체들은 환자의 콜레스테롤 및/또는 트리글리세리드 수준을 감소시키는데 이용될 수 있다.
도 1a 및 1b는 유형 I 수용체 및 유형 II 수용체 폴리펩티드들을 포함하는 이형화학성 단백질 복합체들의 2가지 도시 예를 보여준다. 도 1a는 하나의 유형 I 수용체 융합 폴리펩티드와 하나의 유형 II 수용체 융합 폴리펩티드를 포함하는 이형이합체성 단백질 복합체를 나타내며, 이들은 각 폴리펩티드 쇄 안에 함유된 다합체화 도메인을 통하여 공유적으로 또는 비공유적으로 어셈블리될 수 있다. 어셈블리된 2개의 다합체화 도메인은 상호작용 쌍을 구성하고, 이들은 유도되거나 또는 비유도될 수 있다. 도 2a는 도 1a에서와 같이 2개의 이형이합체성 복합체들을 포함하는 이형사합체성(heterotetrameric) 단백질 복합체를 나타낸다. 더 높은 차수의 복합체들도 구상될 수 있다.
도 2는 유형 I 수용체 폴리펩티드 (＂I＂로 표시함)(가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6 또는 ALK7 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 464, 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 466, 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 468, 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 470, 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 472, 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 474, 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드) 및 유형 II 수용체 폴리펩티드 (＂II＂로 표시됨) (가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ActRIIA, ActRIIB, MISRII, BMPRII, 또는 TGFBRII 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 452, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 454, 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 456, 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 458, 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드)를 포함하는 이형화학성 단백질 복합체의 도시예를 보여준다. 설명된 구체예에서, 유형 I 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며, 유형 II 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂D＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 각 융합 폴리펩티드에서, 링커는 유형 I 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있다. 상호작용 쌍의 제 1 구성요소와 제 2 구성요소(C, D)는 유도된(비대칭) 쌍일 수 있으며, 이것은 쌍의 구성요소들이 자가-연합되기 보다는 서로 선호적으로 연합되거나, 또는 상호작용 쌍 은 비유도된 것일 수 있으며, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 서로 연합되거나 또는 자가-연합되고, 그리고 동일하거나 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다. 전통적인 Fc 융합 단백질 및 항체는 비유도 상호작용 쌍의 예시이며, 반면 조작된 Fc 도메인 변이체들은 유도된(비대칭) 상호작용 쌍으로 기획되었다 [가령 Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106].
도 3은 인간 ActRIIA (서열 번호: 500) 및 인간 ActRIIB (서열 번호: 2)의 세포외 도메인의 정렬을 나타내는데, 잔기들은 상자에 표시된 리간드에 직접적으로 접촉하기 위하여 다중 ActRIIB 및 ActRIIA 결정 구조의 종합적 분석에 근거하여 본 명세서에서 유추된 잔기들이다.
도 4는 세포내 도메인 (차례로 서열 번호: 501, 502, 503, 504, 505, 및 506)이 없는 다양한 척추동물 ActRIIB 전구체 단백질과, 이의 세포내 도메인 (서열 번호: 507)이 없는 인간 ActRIIA 전구체 단백질, 그리고 콘센수스(consensus) ActRII 전구체 단백질 (서열 번호: 508)의 다중 서열 배열을 보여준다.
도 5는 Clustal 2.1을 이용하여 인간 IgG 이소타입으로부터 Fc 도메인의 다중 서열 정렬을 나타낸다. 힌지 영역은 아래 점선으로 표시된다. 아래 이중선은 비대칭 쇄 페어링을 촉진하기 위하여 IgG1 Fc에서 조작된 위치와 다른 이소유형 IgG2, IgG3 및 IgG4에 대하여 대응하는 위치의 예시를 나타낸다.
도 6은 ActRIIB-Fc 동형이합체 및 ALK4-Fc 동형이합체와 비교하여 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 각 단백질 복합체의 경우, 리간드들은 리간드 신호생성 억제와 연관된 운동 상수인 koff에 의해 순위가 정해지고, 결합 친화력이 감소되는 순서 (위에서 부터 가장 단단하게 결합되는 리간드)로 나열된다. 좌측의 황색, 적색, 녹색 및 청색은 해리(off-rate) 상수의 크기를 나타낸다. 흑색 직선은 동형이합체와 비교하여 이형이합체에 대한 리간드 결합이 강화 또는 불변인 리간드를 나타내며, 한편 적색 점선은 동형이합체와 비교하여 실질적으로 결합이 감소됨을 나타낸다. 나타낸 바와 같이, ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 동형이합체와 비교하여 액티빈 B에 대하여 강화된 결합을 보이며, ActRIIB-Fc 동형이합체에서 관찰된 바와 같이, 액티빈 A, GDF8, 및 GDF11에 대하여 강력한 결합을 유지하고, 그리고 BMP9, BMP10, 및 GDF3에 대하여 실질적으로 감소된 결합을 나타낸다. ActRIIB-Fc 동형이합체와 마찬가지로, 상기 이형이합체는 BMP6에 대하여 중간-수준의 결합을 유지한다.
도 7은 ActRIIB-Fc 동형이합체와 ALK3-Fc 동형이합체와 비교하여 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 예외적으로 높은 친화력으로 BMP2 및 BMP4에 결합하고, 동형이합체와 비교하여 BMP5, BMP6, BMP7, GDF5, GDF6, 및 GDF7에 대하여 상당히 강화된 결합을 나타낸다. ActRIIB 동형이합체와 비교하여, ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 액티빈 A, 액티빈 B, BMP10, GDF8, 및 GDF11에 대하여 감소된 결합을 나타내고, 또한 이들 리간드 간에도 더 큰 정도로 구별되는데, 구체적으로 액티빈 A와 액티빈 B는 상당히 구별된다. 또한, BMP9 및 GDF3에 높은 친화력으로 결합하는 ActRIIB-Fc 동형이합체의 능력은 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체의 경우에는 존재하지 않는다.
도 8은 ActRIIB-Fc 동형이합체와 ALK7-Fc 동형이합체와 비교하여 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, 5개 리간드중 4개 (액티빈 A, BMP10, GDF8, 및 GDF11)는 ActRIIB-Fc 동형이합체에 대하여 강력한 결합을 하는데, 이들은 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체에 대하여 감소된 결합을 보이며, 예외적으로 액티빈 B는 상기 이형이합체에 대하여 단단한 결합을 유지한다. 또한, ActRIIB-Fc 동형이합체에 대하여 중간수준의 결합을 하는 3가지 리간드(GDF3, BMP6, 및 특히 BMP9)는 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체에 대하여 감소된 결합을 나타낸다. 대조적으로, BMP5는 ActRIIB-Fc:ALK7 이형이합체에 중간 강도로 결합하며, ActRIIB-Fc 동형이합체에 대하여 단지 약한 결합을 한다. 시험된 리간드들중에 ALK7-Fc 동형이합체에 결합하는 것은 없다.
도 9은 ActRIIB-Fc 동형이합체와 ALK2-Fc 동형이합체와 비교하여 ActRIIB-Fc:ALK2 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체는 액티빈 B에 선호적이며, 강력한 결합을 나타내며, 따라서 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체 (도 8)를 닮았다. 그러나, ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체는 ActRIIB-Fc 동형이합체의 BMP9 특징에 단단히 결합을 유지함으로써, 부분적으로 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc와는 상이하다. 시험된 리간드들중에 ALK2-Fc 동형이합체에 결합하는 것은 없다.
도 10은 ActRIIA-Fc 동형이합체 및 ALK4-Fc 동형이합체와 비교하여 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 액티빈 A에 강화된 결합을 나타내고, ActRIIA-Fc 동형이합체와 비교하여 액티빈 AC에 강화된 결합을 나타내면서, 액티빈 AB 및 GDF11에 대하여 강한 결합은 유지된다. 또한, ActRIIA-Fc 동형이합체, 액티빈 B에 대하여 최고 친화력을 가진 리간드는 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체에 대하여 감소된 친화력(여전히 노-친화력 범위 안에 있지만)을 나타낸다. ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 ActRIIA-Fc 동형이합체와 비교하여 BMP10에 대하여 상당히 감소된 결합을 또한 나타낸다.
도 11은 BMPRII-Fc 동형이합체와 ALK1-Fc 동형이합체와 비교하여 BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체는 ALK1-Fc 동형이합체의 BMP9 및 BMP10 특징에 대하여 강력한 결합을 대게 유지하지만; 그러나, 상기 이형이합체는 상기 동형이합체에 존재하지 않는 BMP9보다는 BMP10에 보통수준의 선택성을 나타낸다. 또한 ALK1-Fc 동형이합체와는 달리, 비록 BMPRII-Fc 동형이합체보다는 대략 10배 더 빠른 해리 속도를 갖지만, BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체는 BMP15에 결합한다.
도 12는 BMPRII-Fc 동형이합체와 ALK3-Fc 동형이합체와 비교하여 BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 ALK3-Fc 동형이합체 보다는 BMP6에 더욱 강력하게 결합하며, 이는 해리속도가 거의 10배 더 느리다는 것을 반영한다. BMP2 및 BMP4에 대개 변함없이 결합되고, 따라서 BMPRII-Fc:ALK3 이형이합체는 BMP2, BMP4, 및 BMP6의 공동 억제제로 간주될 수 있다. 이 결합 프로파일은 ALK3-Fc 동형이합체의 것과는 대조적인데, 이것은 BMP4 및 BMP2에 예외적으로 강력하게 결합하고, 이로 인하여 BMP6를 포함하는 중간-수준의 결합을 하는 4개 리간드와 비교하여 이 리간드 쌍에 대하여 상당한 선택성에 의해 식별되도록 한다.
도 13는 BMPRII-Fc 동형이합체와 ALK4-Fc 동형이합체와 비교하여 BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 몇 가지 액티빈 리간드들에 높은 또는 중간 강도로 결합함으로써, 이들 두 동형 이합체와는 상이하고, BMP15에만 오직 약하게 결합함으로써, BMPRII-Fc 동형이합체와는 상이하다 가장 눈에 띄는 것으로, BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 이형이합체성 리간드 액티빈 AB에 높은 선택성을 가지고, 강력하게 결합한다.
도 14는 TGFβRII-Fc 동형이합체 및 ALK5-Fc 동형이합체와 비교하여, 2가지의 상이한 TGFβRII-Fc:ALK5-Fc 이형이합체성 단백질 복합체들에 대한 리간드 결합 데이타를 보여준다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, TGFβRII-Fc:ALK5-Fc 이형이합체는 TGFβ1 및 TGFβ3에 대하여 상당한 친화력을 유지하면서, TGFβ2에 대해서는 높은 선택성을 가지고 있어, TGFβRII-Fc 동형이합체와는 상당히 상이하다. TGFβRII의 긴 이소형에 혼입되는 상기 이형이합체는 이의 짧은 아이소폼(isoform) 대응부와 비교하여 TGFβ2의 긴 이소형에 대응부보다 더 강력하게 그리고 선택적으로 결합한다. 시험된 리간드들중에 ALK5-Fc 동형이합체에 결합하는 것은 없다.
도 15a-15d는 유형 I 수용체 폴리펩티드 (＂I＂로 표시함)(가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6 또는 ALK7 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 464, 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 466, 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 468, 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 470, 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 472, 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 474, 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드) 및 유형 II 수용체 폴리펩티드 (＂II＂로 표시됨) (가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ActRIIA, ActRIIB, MISRII, BMPRII, 또는 TGFBRII 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 452, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 454, 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 456, 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 458, 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드)를 포함하는 이형화학성 단백질 복합체의 도시예를 보여준다. 설명된 구체예에서, 유형 I 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C1＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며, 유형 II 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂C2＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 적합한 상호작용 쌍은 본 명세서에서 설명된 바와 같이 [가령, Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]예를 들면, 중쇄 및/또는 경쇄 면역글로불린 상호작용 쌍, 절두, 및 이의 변이체들을 포함한다. 각 융합 폴리펩티드에 있어서, 링커는 유형 I 수용체 폴리펩티드 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있다. 상호작용 쌍의 제 1 구성요소와 제 2 구성요소 상호작용 쌍은 유도되지 않을 수 있는데, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 자가 연합 또는 서로 연합될 수 있고, 이들은 동일하거나 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다. 도 15a 참고. 대안으로, 상기 상호작용 쌍은 유도된(비대칭) 쌍일 수도 있는데, 이것은 구성요소들이 자가-연합보다는 서로 선호적으로 연합된다는 것을 의미한다. 도 15b 참고. 더 높은 차수의 복합체들도 구상될 수 있다. 도 15c 및 15d 참고.
도 16a-16g는 2개의 유형 I 수용체 폴리펩티드 (＂I＂로 표시함)(가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6 또는 ALK7 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 464, 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 466, 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 468, 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 470, 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 472, 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 474, 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드) 및 유형 II 수용체 폴리펩티드 (＂II＂로 표시됨) (가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ActRIIA, ActRIIB, MISRII, BMPRII, 또는 TGFBRII 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 452, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 454, 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 456, 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 458, 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드)를 포함하는 이형화학성 단백질 복합체의 도시예를 보여준다.
설명된 구체예 16A에서, 제 1 유형 I 수용체 폴리펩티드 (좌에서 우로)는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C1＂)을 포함하고, 상호작용 쌍 (＂A1＂)의 추가 제 1 구성요소를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며, 상호작용 쌍의 추가 제 1 구성요소 (＂A1＂)를 더 포함하며; 제 2 유형 I 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂C2＂)를 포함하고, 상호작용 쌍의 제 1 구성요소(＂A2＂)를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 제 1 유형 II 수용체 폴리펩티드 (좌에서 우로)는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B1＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며; 제 2 유형 II 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B2＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. A1와 A2는 동일하거나 또는 상이할 수 있고; B1와 B2는 동일하거나 또는 상이할 수 있고, 그리고 C1와 C2는 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 각 융합 폴리펩티드에서, 링커는 유형 I 수용체 폴리펩티드 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있고, 뿐만 아니라 상호작용 쌍 사이에 위치할 수도 있다. 도 9a는 비유도 상호작용 쌍의 연합 예시를 나타내는 것으로, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 자가 연합 또는 서로 연합될 수 있고, 따라서 동일하거나 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다.
설명된 구체예에서 16B, 제 1 유형 II 수용체 폴리펩티드 (좌에서 우로)는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C1＂)를 포함하고, 상호작용 쌍의 추가 제 1 구성요소 (＂A1＂)를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며; 제 2 유형 II 수용체 ActRIIB 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B2＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 제 1 유형 I 수용체 폴리펩티드 (좌에서 우로)는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B1＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며; 제 2 유형 I 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂C2＂)를 포함하고, 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂A2＂)를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 각 융합 폴리펩티드에서, 링커는 유형 I 수용체 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있고, 뿐만 아니라 상호작용 쌍 사이에 위치할 수도 있다. 도 16b는 유도된 (비대칭) 상호작용 쌍의 연합 예시이며, 이것은 구성요소들이 자가-연합보다는 서로 선호적으로 연합된다는 것을 의미한다.
적합한 상호작용 쌍은 본 명세서에서 설명된 바와 같이 [가령, Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]예를 들면, 중쇄 및/또는 경쇄 면역글로불린 상호작용 쌍, 절두, 및 이의 변이체들을 포함한다. 더 높은 차수의 복합체들도 구상될 수 있다. 도 16c-16f 참고. 유사한 방법을 이용하여, 특히 경쇄 및/또는 중쇄 면역글로불린, 절두, 또는 이의 변이체들, 상호작용 쌍을 이용하는 방법으로 항체 Fab 및 F(ab')2 복합체들을 닮은 이형이합체를 만들 수 있다 [가령, Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]. 도 16g 참고.
도 17a 및 17b는 유형 I 수용체 폴리펩티드 (＂I＂로 표시함)(가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6 또는 ALK7 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 464, 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 466, 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 468, 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 470, 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 472, 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 474, 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드) 및 유형 II 수용체 폴리펩티드 (＂II＂로 표시됨) (가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ActRIIA, ActRIIB, MISRII, BMPRII, 또는 TGFBRII 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 452, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 454, 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 456, 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 458, 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드) 그리고 항체의 리간드-결합 도메인 (가령, 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하는 항체로부터 유도된 리간드 결합 도메인)을 포함하는 이형화학성 단백질 복합체의 도시예를 보여준다. 설명된 구체예에서, 유형 I 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C1＂), 그리고 상호작용 쌍의 추가 제 1 구성요소 (＂A1＂)를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 유형 II 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B1＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 가변 중쇄 (VH) 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂C2＂)를 포함하고, 그리고 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂A2＂)를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 가변 중쇄 (VL) 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B2＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 각 융합 폴리펩티드에서, 링커는 유형 I 수용체 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이, 상호작용 쌍 사이, 그리고 VH 및 VL 폴리펩티드들과 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있다. A1와 A2는 동일하거나 또는 상이할 수 있고; B1와 B2는 동일하거나 또는 상이할 수 있고, 그리고 C1와 C2는 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 적합한 상호작용 쌍은 본 명세서에서 설명된 바와 같이 [가령, Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]예를 들면, 불변 중쇄 및/또는 경쇄 면역글로불린 상호작용 쌍, 절두, 및 이의 변이체들을 포함한다. 도 17b는 유도된 (비대칭) 상호작용 쌍의 연합 예시이며, 이것은 구성요소들이 자가-연합보다는 서로 선호적으로 연합된다는 것을 의미한다. 도 17b는 비유도 상호작용 쌍의 연합 예시를 나타내는 것으로, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 자가 연합 또는 서로 연합될 수 있고, 따라서 동일하거나 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다.
도 18은 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 싱글-트랩(단일-트랩) 폴리펩티드들의 도시 예를 보여준다. 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 싱글-트랩 폴리펩티드들은 동일하거나 또는 상이한 서열을 갖는 다수의 유형 I 수용체 도메인 (가령, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10개 또는 그 이상의 도메인)를 함유하고, 그리고 동일하거나 또는 상이한 서열을 갖는 다수의 유형 II 수용체 도메인 (가령, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10 또는 그 이상의 도메인)을 함유할 수 있다 이들 유형 I 수용체 및 유형 II 수용체 도메인은 임의의 순서로 배열될 수 있으며, 하나 또는 그 이상의 유형 I1 수용체 및 유형 II 수용체 도메인 사이에 하나 또는 그 이상의 링커 도메인 위치를 포함할 수 있다. 이러한 리간드 트랩은 본 명세서에서 설명된 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 치료제로 유용할 수 있다.
도 19a-19d는 최소한 하나의 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드를 포함하는 다합체 단백질 복합체의 도시 예를 보여준다. 설명된 구체예에서 19A 및 19B에서, 제 1 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드 (좌에서 우로)는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C1＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며; 그리고 제 2 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂C2＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. C1와 C2는 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 제 1 및 제 2 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드는 동일하거나 또는 상이할 수 있다 각 융합 폴리펩티드에서, 링커는 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있다. 적합한 상호작용 쌍은 본 명세서에서 설명된 바와 같이 [가령, Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]예를 들면, 중쇄 및/또는 경쇄 면역글로불린 상호작용 쌍, 절두, 및 이의 변이체들을 포함한다. 도 19a는 비유도 상호작용 쌍의 연합 예시를 나타내는 것으로, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 자가 연합 또는 서로 연합될 수 있고, 따라서 동일한 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다. 도 19는 유도된 (비대칭) 상호작용 쌍의 연합 예시이며, 이것은 구성요소들이 자가-연합보다는 서로 선호적으로 연합된다는 것을 의미한다. 더 높은 차수의 복합체들도 구상될 수 있다. 또한, 이러한 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 유형 I 수용체 폴리펩티드들 및/또는 하나 또는 그 이상의 유형 II 수용체 폴리펩티드들과 유사하게 공유 또는 비-공유적으로 연합될 수 있다. 도 19c 참고. 또한, 이러한 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드들은 항체의 하나 또는 그 이상의 리간드-결합 도메인 (가령, 하나 또는 그 이상의 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 이형다합체 결합-리간드들에 결합하는 항체의 리간드 결합 도메인)에 유사하게 공유 또는 비-공유적으로 연합될 수 있다. 도 19d 참고.
도 2는 유형 I 수용체 폴리펩티드 (＂I＂로 표시함)(가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6 또는 ALK7 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 464, 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 466, 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 468, 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 470, 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 472, 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 474, 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드) 및 유형 II 수용체 폴리펩티드 (＂II＂로 표시됨) (가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ActRIIA, ActRIIB, MISRII, BMPRII, 또는 TGFBRII 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 452, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 454, 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 456, 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 458, 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드)를 포함하는 이형화학성 단백질 복합체의 도시예를 보여준다. 설명된 구체예에서, 유형 I 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며, 유형 II 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂D＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 각 융합 폴리펩티드에서, 링커는 유형 I 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있다. 상호작용 쌍의 제 1 구성요소와 제 2 구성요소(C, D)는 유도된(비대칭) 쌍일 수 있으며, 이것은 쌍의 구성요소들이 자가-연합되기 보다는 서로 선호적으로 연합되거나, 또는 상호작용 쌍 은 비유도된 것일 수 있으며, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 서로 연합되거나 또는 자가-연합되고, 그리고 동일하거나 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다. 전통적인 Fc 융합 단백질 및 항체는 비유도 상호작용 쌍의 예시이며, 반면 조작된 Fc 도메인 변이체들은 유도된(비대칭) 상호작용 쌍으로 기획되었다 [가령 Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106].
도 3은 인간 ActRIIA (서열 번호: 500) 및 인간 ActRIIB (서열 번호: 2)의 세포외 도메인의 정렬을 나타내는데, 잔기들은 상자에 표시된 리간드에 직접적으로 접촉하기 위하여 다중 ActRIIB 및 ActRIIA 결정 구조의 종합적 분석에 근거하여 본 명세서에서 유추된 잔기들이다.
도 4는 세포내 도메인 (차례로 서열 번호: 501, 502, 503, 504, 505, 및 506)이 없는 다양한 척추동물 ActRIIB 전구체 단백질과, 이의 세포내 도메인 (서열 번호: 507)이 없는 인간 ActRIIA 전구체 단백질, 그리고 콘센수스(consensus) ActRII 전구체 단백질 (서열 번호: 508)의 다중 서열 배열을 보여준다.
도 5는 Clustal 2.1을 이용하여 인간 IgG 이소타입으로부터 Fc 도메인의 다중 서열 정렬을 나타낸다. 힌지 영역은 아래 점선으로 표시된다. 아래 이중선은 비대칭 쇄 페어링을 촉진하기 위하여 IgG1 Fc에서 조작된 위치와 다른 이소유형 IgG2, IgG3 및 IgG4에 대하여 대응하는 위치의 예시를 나타낸다.
도 6은 ActRIIB-Fc 동형이합체 및 ALK4-Fc 동형이합체와 비교하여 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 각 단백질 복합체의 경우, 리간드들은 리간드 신호생성 억제와 연관된 운동 상수인 koff에 의해 순위가 정해지고, 결합 친화력이 감소되는 순서 (위에서 부터 가장 단단하게 결합되는 리간드)로 나열된다. 좌측의 황색, 적색, 녹색 및 청색은 해리(off-rate) 상수의 크기를 나타낸다. 흑색 직선은 동형이합체와 비교하여 이형이합체에 대한 리간드 결합이 강화 또는 불변인 리간드를 나타내며, 한편 적색 점선은 동형이합체와 비교하여 실질적으로 결합이 감소됨을 나타낸다. 나타낸 바와 같이, ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 동형이합체와 비교하여 액티빈 B에 대하여 강화된 결합을 보이며, ActRIIB-Fc 동형이합체에서 관찰된 바와 같이, 액티빈 A, GDF8, 및 GDF11에 대하여 강력한 결합을 유지하고, 그리고 BMP9, BMP10, 및 GDF3에 대하여 실질적으로 감소된 결합을 나타낸다. ActRIIB-Fc 동형이합체와 마찬가지로, 상기 이형이합체는 BMP6에 대하여 중간-수준의 결합을 유지한다.
도 7은 ActRIIB-Fc 동형이합체와 ALK3-Fc 동형이합체와 비교하여 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 예외적으로 높은 친화력으로 BMP2 및 BMP4에 결합하고, 동형이합체와 비교하여 BMP5, BMP6, BMP7, GDF5, GDF6, 및 GDF7에 대하여 상당히 강화된 결합을 나타낸다. ActRIIB 동형이합체와 비교하여, ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 액티빈 A, 액티빈 B, BMP10, GDF8, 및 GDF11에 대하여 감소된 결합을 나타내고, 또한 이들 리간드 간에도 더 큰 정도로 구별되는데, 구체적으로 액티빈 A와 액티빈 B는 상당히 구별된다. 또한, BMP9 및 GDF3에 높은 친화력으로 결합하는 ActRIIB-Fc 동형이합체의 능력은 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체의 경우에는 존재하지 않는다.
도 8은 ActRIIB-Fc 동형이합체와 ALK7-Fc 동형이합체와 비교하여 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, 5개 리간드중 4개 (액티빈 A, BMP10, GDF8, 및 GDF11)는 ActRIIB-Fc 동형이합체에 대하여 강력한 결합을 하는데, 이들은 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체에 대하여 감소된 결합을 보이며, 예외적으로 액티빈 B는 상기 이형이합체에 대하여 단단한 결합을 유지한다. 또한, ActRIIB-Fc 동형이합체에 대하여 중간수준의 결합을 하는 3가지 리간드(GDF3, BMP6, 및 특히 BMP9)는 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체에 대하여 감소된 결합을 나타낸다. 대조적으로, BMP5는 ActRIIB-Fc:ALK7 이형이합체에 중간 강도로 결합하며, ActRIIB-Fc 동형이합체에 대하여 단지 약한 결합을 한다. 시험된 리간드들중에 ALK7-Fc 동형이합체에 결합하는 것은 없다.
도 9은 ActRIIB-Fc 동형이합체와 ALK2-Fc 동형이합체와 비교하여 ActRIIB-Fc:ALK2 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체는 액티빈 B에 선호적이며, 강력한 결합을 나타내며, 따라서 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체 (도 8)를 닮았다. 그러나, ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체는 ActRIIB-Fc 동형이합체의 BMP9 특징에 단단히 결합을 유지함으로써, 부분적으로 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc와는 상이하다. 시험된 리간드들중에 ALK2-Fc 동형이합체에 결합하는 것은 없다.
도 10은 ActRIIA-Fc 동형이합체 및 ALK4-Fc 동형이합체와 비교하여 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 액티빈 A에 강화된 결합을 나타내고, ActRIIA-Fc 동형이합체와 비교하여 액티빈 AC에 강화된 결합을 나타내면서, 액티빈 AB 및 GDF11에 대하여 강한 결합은 유지된다. 또한, ActRIIA-Fc 동형이합체, 액티빈 B에 대하여 최고 친화력을 가진 리간드는 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체에 대하여 감소된 친화력(여전히 노-친화력 범위 안에 있지만)을 나타낸다. ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 ActRIIA-Fc 동형이합체와 비교하여 BMP10에 대하여 상당히 감소된 결합을 또한 나타낸다.
도 11은 BMPRII-Fc 동형이합체와 ALK1-Fc 동형이합체와 비교하여 BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체는 ALK1-Fc 동형이합체의 BMP9 및 BMP10 특징에 대하여 강력한 결합을 대게 유지하지만; 그러나, 상기 이형이합체는 상기 동형이합체에 존재하지 않는 BMP9보다는 BMP10에 보통수준의 선택성을 나타낸다. 또한 ALK1-Fc 동형이합체와는 달리, 비록 BMPRII-Fc 동형이합체보다는 대략 10배 더 빠른 해리 속도를 갖지만, BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체는 BMP15에 결합한다.
도 12는 BMPRII-Fc 동형이합체와 ALK3-Fc 동형이합체와 비교하여 BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 ALK3-Fc 동형이합체 보다는 BMP6에 더욱 강력하게 결합하며, 이는 해리속도가 거의 10배 더 느리다는 것을 반영한다. BMP2 및 BMP4에 대개 변함없이 결합되고, 따라서 BMPRII-Fc:ALK3 이형이합체는 BMP2, BMP4, 및 BMP6의 공동 억제제로 간주될 수 있다. 이 결합 프로파일은 ALK3-Fc 동형이합체의 것과는 대조적인데, 이것은 BMP4 및 BMP2에 예외적으로 강력하게 결합하고, 이로 인하여 BMP6를 포함하는 중간-수준의 결합을 하는 4개 리간드와 비교하여 이 리간드 쌍에 대하여 상당한 선택성에 의해 식별되도록 한다.
도 13는 BMPRII-Fc 동형이합체와 ALK4-Fc 동형이합체와 비교하여 BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체성 단백질 복합체에 대한 리간드 결합 데이타를 나타낸다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 몇 가지 액티빈 리간드들에 높은 또는 중간 강도로 결합함으로써, 이들 두 동형 이합체와는 상이하고, BMP15에만 오직 약하게 결합함으로써, BMPRII-Fc 동형이합체와는 상이하다 가장 눈에 띄는 것으로, BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 이형이합체성 리간드 액티빈 AB에 높은 선택성을 가지고, 강력하게 결합한다.
도 14는 TGFβRII-Fc 동형이합체 및 ALK5-Fc 동형이합체와 비교하여, 2가지의 상이한 TGFβRII-Fc:ALK5-Fc 이형이합체성 단백질 복합체들에 대한 리간드 결합 데이타를 보여준다. 도 6과 같이 형식은 동일하다. 나타낸 바와 같이, TGFβRII-Fc:ALK5-Fc 이형이합체는 TGFβ1 및 TGFβ3에 대하여 상당한 친화력을 유지하면서, TGFβ2에 대해서는 높은 선택성을 가지고 있어, TGFβRII-Fc 동형이합체와는 상당히 상이하다. TGFβRII의 긴 이소형에 혼입되는 상기 이형이합체는 이의 짧은 아이소폼(isoform) 대응부와 비교하여 TGFβ2의 긴 이소형에 대응부보다 더 강력하게 그리고 선택적으로 결합한다. 시험된 리간드들중에 ALK5-Fc 동형이합체에 결합하는 것은 없다.
도 15a-15d는 유형 I 수용체 폴리펩티드 (＂I＂로 표시함)(가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6 또는 ALK7 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 464, 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 466, 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 468, 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 470, 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 472, 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 474, 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드) 및 유형 II 수용체 폴리펩티드 (＂II＂로 표시됨) (가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ActRIIA, ActRIIB, MISRII, BMPRII, 또는 TGFBRII 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 452, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 454, 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 456, 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 458, 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드)를 포함하는 이형화학성 단백질 복합체의 도시예를 보여준다. 설명된 구체예에서, 유형 I 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C1＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며, 유형 II 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂C2＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 적합한 상호작용 쌍은 본 명세서에서 설명된 바와 같이 [가령, Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]예를 들면, 중쇄 및/또는 경쇄 면역글로불린 상호작용 쌍, 절두, 및 이의 변이체들을 포함한다. 각 융합 폴리펩티드에 있어서, 링커는 유형 I 수용체 폴리펩티드 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있다. 상호작용 쌍의 제 1 구성요소와 제 2 구성요소 상호작용 쌍은 유도되지 않을 수 있는데, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 자가 연합 또는 서로 연합될 수 있고, 이들은 동일하거나 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다. 도 15a 참고. 대안으로, 상기 상호작용 쌍은 유도된(비대칭) 쌍일 수도 있는데, 이것은 구성요소들이 자가-연합보다는 서로 선호적으로 연합된다는 것을 의미한다. 도 15b 참고. 더 높은 차수의 복합체들도 구상될 수 있다. 도 15c 및 15d 참고.
도 16a-16g는 2개의 유형 I 수용체 폴리펩티드 (＂I＂로 표시함)(가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6 또는 ALK7 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 464, 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 466, 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 468, 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 470, 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 472, 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 474, 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드) 및 유형 II 수용체 폴리펩티드 (＂II＂로 표시됨) (가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ActRIIA, ActRIIB, MISRII, BMPRII, 또는 TGFBRII 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 452, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 454, 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 456, 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 458, 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드)를 포함하는 이형화학성 단백질 복합체의 도시예를 보여준다.
설명된 구체예 16A에서, 제 1 유형 I 수용체 폴리펩티드 (좌에서 우로)는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C1＂)을 포함하고, 상호작용 쌍 (＂A1＂)의 추가 제 1 구성요소를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며, 상호작용 쌍의 추가 제 1 구성요소 (＂A1＂)를 더 포함하며; 제 2 유형 I 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂C2＂)를 포함하고, 상호작용 쌍의 제 1 구성요소(＂A2＂)를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 제 1 유형 II 수용체 폴리펩티드 (좌에서 우로)는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B1＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며; 제 2 유형 II 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B2＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. A1와 A2는 동일하거나 또는 상이할 수 있고; B1와 B2는 동일하거나 또는 상이할 수 있고, 그리고 C1와 C2는 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 각 융합 폴리펩티드에서, 링커는 유형 I 수용체 폴리펩티드 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있고, 뿐만 아니라 상호작용 쌍 사이에 위치할 수도 있다. 도 9a는 비유도 상호작용 쌍의 연합 예시를 나타내는 것으로, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 자가 연합 또는 서로 연합될 수 있고, 따라서 동일하거나 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다.
설명된 구체예에서 16B, 제 1 유형 II 수용체 폴리펩티드 (좌에서 우로)는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C1＂)를 포함하고, 상호작용 쌍의 추가 제 1 구성요소 (＂A1＂)를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며; 제 2 유형 II 수용체 ActRIIB 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B2＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 제 1 유형 I 수용체 폴리펩티드 (좌에서 우로)는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B1＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며; 제 2 유형 I 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂C2＂)를 포함하고, 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂A2＂)를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 각 융합 폴리펩티드에서, 링커는 유형 I 수용체 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있고, 뿐만 아니라 상호작용 쌍 사이에 위치할 수도 있다. 도 16b는 유도된 (비대칭) 상호작용 쌍의 연합 예시이며, 이것은 구성요소들이 자가-연합보다는 서로 선호적으로 연합된다는 것을 의미한다.
적합한 상호작용 쌍은 본 명세서에서 설명된 바와 같이 [가령, Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]예를 들면, 중쇄 및/또는 경쇄 면역글로불린 상호작용 쌍, 절두, 및 이의 변이체들을 포함한다. 더 높은 차수의 복합체들도 구상될 수 있다. 도 16c-16f 참고. 유사한 방법을 이용하여, 특히 경쇄 및/또는 중쇄 면역글로불린, 절두, 또는 이의 변이체들, 상호작용 쌍을 이용하는 방법으로 항체 Fab 및 F(ab')2 복합체들을 닮은 이형이합체를 만들 수 있다 [가령, Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]. 도 16g 참고.
도 17a 및 17b는 유형 I 수용체 폴리펩티드 (＂I＂로 표시함)(가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6 또는 ALK7 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 464, 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 466, 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 468, 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 470, 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 472, 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 474, 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드) 및 유형 II 수용체 폴리펩티드 (＂II＂로 표시됨) (가령, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 인간 또는 다른 종의 ActRIIA, ActRIIB, MISRII, BMPRII, 또는 TGFBRII 단백질의 세포외 도메인, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 452, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 454, 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 456, 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 458, 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 폴리펩티드) 그리고 항체의 리간드-결합 도메인 (가령, 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하는 항체로부터 유도된 리간드 결합 도메인)을 포함하는 이형화학성 단백질 복합체의 도시예를 보여준다. 설명된 구체예에서, 유형 I 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C1＂), 그리고 상호작용 쌍의 추가 제 1 구성요소 (＂A1＂)를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 유형 II 수용체 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B1＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 가변 중쇄 (VH) 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂C2＂)를 포함하고, 그리고 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂A2＂)를 더 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 가변 중쇄 (VL) 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂B2＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. 각 융합 폴리펩티드에서, 링커는 유형 I 수용체 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이, 상호작용 쌍 사이, 그리고 VH 및 VL 폴리펩티드들과 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있다. A1와 A2는 동일하거나 또는 상이할 수 있고; B1와 B2는 동일하거나 또는 상이할 수 있고, 그리고 C1와 C2는 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 적합한 상호작용 쌍은 본 명세서에서 설명된 바와 같이 [가령, Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]예를 들면, 불변 중쇄 및/또는 경쇄 면역글로불린 상호작용 쌍, 절두, 및 이의 변이체들을 포함한다. 도 17b는 유도된 (비대칭) 상호작용 쌍의 연합 예시이며, 이것은 구성요소들이 자가-연합보다는 서로 선호적으로 연합된다는 것을 의미한다. 도 17b는 비유도 상호작용 쌍의 연합 예시를 나타내는 것으로, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 자가 연합 또는 서로 연합될 수 있고, 따라서 동일하거나 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다.
도 18은 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 싱글-트랩(단일-트랩) 폴리펩티드들의 도시 예를 보여준다. 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 싱글-트랩 폴리펩티드들은 동일하거나 또는 상이한 서열을 갖는 다수의 유형 I 수용체 도메인 (가령, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10개 또는 그 이상의 도메인)를 함유하고, 그리고 동일하거나 또는 상이한 서열을 갖는 다수의 유형 II 수용체 도메인 (가령, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10 또는 그 이상의 도메인)을 함유할 수 있다 이들 유형 I 수용체 및 유형 II 수용체 도메인은 임의의 순서로 배열될 수 있으며, 하나 또는 그 이상의 유형 I1 수용체 및 유형 II 수용체 도메인 사이에 하나 또는 그 이상의 링커 도메인 위치를 포함할 수 있다. 이러한 리간드 트랩은 본 명세서에서 설명된 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 치료제로 유용할 수 있다.
도 19a-19d는 최소한 하나의 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드를 포함하는 다합체 단백질 복합체의 도시 예를 보여준다. 설명된 구체예에서 19A 및 19B에서, 제 1 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드 (좌에서 우로)는 상호작용 쌍의 제 1 구성요소 (＂C1＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이며; 그리고 제 2 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소 (＂C2＂)를 포함하는 융합 폴리펩티드의 일부이다. C1와 C2는 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 제 1 및 제 2 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드는 동일하거나 또는 상이할 수 있다 각 융합 폴리펩티드에서, 링커는 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드와 대응하는 상호작용 쌍의 구성요소 사이에 위치할 수 있다. 적합한 상호작용 쌍은 본 명세서에서 설명된 바와 같이 [가령, Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]예를 들면, 중쇄 및/또는 경쇄 면역글로불린 상호작용 쌍, 절두, 및 이의 변이체들을 포함한다. 도 19a는 비유도 상호작용 쌍의 연합 예시를 나타내는 것으로, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 자가 연합 또는 서로 연합될 수 있고, 따라서 동일한 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다. 도 19는 유도된 (비대칭) 상호작용 쌍의 연합 예시이며, 이것은 구성요소들이 자가-연합보다는 서로 선호적으로 연합된다는 것을 의미한다. 더 높은 차수의 복합체들도 구상될 수 있다. 또한, 이러한 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 유형 I 수용체 폴리펩티드들 및/또는 하나 또는 그 이상의 유형 II 수용체 폴리펩티드들과 유사하게 공유 또는 비-공유적으로 연합될 수 있다. 도 19c 참고. 또한, 이러한 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 단일-쇄 트랩 폴리펩티드들은 항체의 하나 또는 그 이상의 리간드-결합 도메인 (가령, 하나 또는 그 이상의 유형 I 수용체: 유형 II 수용체 이형다합체 결합-리간드들에 결합하는 항체의 리간드 결합 도메인)에 유사하게 공유 또는 비-공유적으로 연합될 수 있다. 도 19d 참고.
발명의 상세한 설명
1. 개요
부분적으로, 본 명세서는 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인과 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인을 포함하는 이형다합체 복합체들, 최소한 2가지의 상이한 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드들의 세포외 도메인을 포함하는 이형다합체 복합체들, 최소한 2가지의 상이한 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드들의 세포외 도메인을 포함하는 이형다합체 복합체들, 이러한 이형다합체 복합체들을 만드는 방법, 그리고 이의 용도에 관계한다. 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 일부 구체예들에 있어서, 이형다합체 복합체들은 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7로부터 선택된 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 유사하게, 일부 구체예들에 있어서, 이들 이형다합체 복합체들은 ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII로부터 선택된 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 동형다합체 복합체 (가령, ActRIIB:ActRIIB 동형이합체 복합체 또는 ALK4:ALK4 동형이합체 복합체와 비교하여 ActRIIB:ALK4 이형이합체)의 대응하는 시료에 있어서 변경된 TGFβ 슈퍼패밀리 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다.
TGF-β 슈퍼패밀리는 TGF-베타, 액티빈, nodals, 골 형성 단백질 (BMPs), 성장 및 분화 인자 (GDFs), 및 항-Mullerian 호르몬 (AMH)을 포함하는 30가지 이상의 분비된 인자로 구성된다. 가령, Weiss et al. (2013) Developmental Biology, 2(1): 47-63 참고. 척추동물 및 무척추동물 모두에서 발결되는 상기 슈퍼패밀리의 구성요소들은 다양한 조직에서 편재적으로 발현되며, 동물의 살아있는 기간에 걸쳐 발생의 최초 단계에서 기능을 한다. 또한, TGF-β 슈퍼패밀리 단백질은 줄기 세포-재생, 장배형성(gastrulation), 분화, 장기 형태형성 및 성인 조직 항상성의 주요 매개체이다. 이러한 산재된 활동과 일관되게, TGF-β 슈퍼패밀리의 비정상 신호 전달은 자가면역 질환, 심혈관 질환, 섬유성 질환 및 암을 비롯한 광범위한 인간 병리와 관련된다.
TGF- 베타 수퍼패밀리의 리간드는 하나의 단합체의 중심 3-1/2 회전 나선이 다른 단합체의 베타-가닥에 의해 형성된 오목 표면을 싸는 동일한 이합체 구조를 공유한다. TGF-베타 패밀리 구성요소의 대부분은 분자간 이황화결합에 의해 더 안정된다. 이 이황화 결합은 '시스테인 매듭 (cysteine knot)' 모티프라고 불리는 모티프를 생성하는 다른 2 개의 디설파이드 결합에 의해 형성된 고리를 통과한다. 가령, Lin et al., (2006) Reproduction 132: 179-190 and Hinck et al. (2012) FEBS Letters 586: 1860-1870 참고.
TGF-베타 슈퍼패밀리 신호생성은 유형 I 및 유형 II 세린/트레오닌 키나제 수용체의 이형화학성 복합체에 의해 중개되며, 리간드 자극시 하류 SMAD 단백질 (가령, SMAD 단백질 1, 2, 3, 5, 및 8)를 인산화시키고 활성화시킨다. 가령, Massague (2000) Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 1:169-178. 이들 유형 I 및 유형 II 수용체는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 특이성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다. 일반적으로, 유형 I 수용체는 세포내 신호생성을 중개하며, 한편 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하기 위해서는 유형 II 수용체가 필요하다. 유형 I 및 II 수용체는 리간드 결합 후 안정적 복합체를 형성하고, 유형 II 수용체에 의해 유형 I 수용체가 인산화된다.
TGF-베타 패밀리는 이들이 결합하는 유형 I 수용체와 이들이 활성화시키는 Smad 단백질을 기반으로 2가지 계통발생 군으로 나뉠 수 있다. 하나는 좀더 최근에 발생된 군으로써, 가령, TGF-베타, 액티빈, GDF8, GDF9, GDF11, BMP3 및 nodal을 포함하며, Smads 2 및 3를 활성화시키는 유형 I 수용체를 통하여 신호를 전달한다 [Hinck (2012) FEBS Letters 586:1860-1870]. 다른 군은 상기 슈퍼패밀리에서 더 거리가 먼 관련 단백질을 포함하는데, 가령, BMP2, BMP4, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF1, GDF5, GDF6, 및 GDF7을 포함하며, Smads 1, 5, 및 8을 통하여 신호를 전달한다.
TGF-베타 아이소폼은 TGF-베타 슈퍼패밀리의 근간(founding) 구성요소들이며, 그중 포유류에서 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3으로 명시된 3가지 아이소폼이 있다. 성숙 생물활성 TGF-베타 리간드들은 동형이합체로 기능을 하고, 주로 유형 I 수용체 ALK5를 통하여 신호를 생성하지만, 내피 세포에서 ALK1을 통하여 추가적으로 신호를 생성한다는 것을 또한 밝혀냈다. 가령, Goumans et al. (2003) Mol Cell 12(4): 817-828. TGF-베타1은 가장 풍부하게, 그리고 가장 산재적으로 발현되는 아이소폼이다. TGF-베타1은 상처 치유에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있고, 구조적으로 활성의 TGF-베타1 이식유전자(transgene)를 발현시키는 마우스는 섬유증을 발생한다. 가령, Clouthier et al., (1997) J Clin. Invest. 100(11): 2697-2713 참고. TGF-베타1은 T 세포 활성화 및 T 조절 세포 유지에 또한 관련된다. 가령, Li et al., (2006) Immunity 25(3): 455-471 참고. TGF-베타2 발현은 인간 교모세포종 세포에서 먼저 설명되었으며, 배아 신경계의 뉴우런 및 성성아교세포에서 발행된다. TGF-베타2는 T 림프구의 인터루킨-2-의존적 성장을 억제하는 것으로 알려져 있다. TGF-베타3은 인간 횡문근육종 세포계에서 최초로 단리되었고, 그 이후 폐 선암종 및 신장 암종 세포계에서도 발견되었다. TGF-베타3은 입천장 및 폐 형태형성에 중요한 것으로 알려져 있다. 가령, Kubiczkova et al., (2012) Journal of Translational Medicine 10:183 참고.
액티빈은 TGF-베타 슈퍼패밀리의 구성요소이며, 난포-자극 호르몬 분비의 조절물질로써 처음으로 발현되었지만, 추후 다양한 생식 및 비-생식 역할이 특징화되었다. 매우 밀접하게 관련된 2개의 β 소단위 (차례로 βAβA, βBβB, 및 βAβB)의 동형/이형이합체인 3가지 주요 액티빈 형태(A, B, 및 AB)가 있다. 인간 게놈은 또한 주로 간에서 발현되는 액티빈 C 및 액티빈 E를 또한 인코드하며, 그리고 βC 또는 βE를 함유하는 이종이합체 형태 또한 공지되어 있다. TGF-베타 슈퍼패밀리에서, 액티빈은 난소 및 태반 세포에서 호르몬 생성을 자극하고, 신경 세포 생존을 지원하며, 세포 유형에 따라 세포주기 진행에 긍정적 또는 부정적 영향을 미칠 수 있고, 양서류 배아에서 최소한 중배엽 분화를 유도할 수 있는 독특하고 다기능을 하는 인자들이다. 가령, DePaolo et al. (1991) Proc Soc Ep Biol Med. 198:500-512; Dyson et al. (1997) Curr Biol. 7:81-84; 그리고 Woodruff (1998) Biochem Pharmacol. 55:953-963 참고. 몇 가지 조직에서, 액티빈 신호생성은 이것의 관련된 이형이합체, 인히빈에 의해 길항된다. 예를 들면, 뇌하수체로부터 난포-자극 호르몬 (FSH) 분비 조절에 있어서, 액티빈은 FSH 합성 및 분비를 촉진시키지만, 한편 인히빈은 FSH 합성 및 분비를 감소시킨다. 액티빈 생활성을 조절하고 및/또는 액티빈에 결합하는 다른 단백질은 폴리스태틴 (FS), 폴리스태틴-관련된 단백질 (FSRP, 또한 FLRG 또는 FSTL3으로도 알려짐), 및 α2-마크로글로블린을 포함한다.
본 명세서에서 설명된 바와 같이, ＂액티빈 A＂에 결합하는 물질은 βA 소단위에 특이적으로 결합하는 물질이며, 단리된 βA 소단위 또는 이합체 복합체 (가령, βAβA 동형이합체 또는 βAβB 이형이합체)로 나타낸다. 이형이합체 복합체 (가령, βAβB 이형이합체)의 경우, ＂액티빈 A＂에 결합하는 물질은 βA 소단위 안에 존재하는 에피토프(epitopes)에 특이적이지만, 이 복합체의 비-βA 소단위 (가령, 복합체의 βB 소단위 ) 안에 존재하는 에피토프에는 결합하지 않는다. 유사하게, ＂액티빈 A＂를 길항(억제)하는 것으로 본 명세서에서 공개된 물질은 단리된 βA 소단위 또는 이합체 복합체 (가령, βAβA 동형이합체 또는 βAβB 이형이합체)에서 βA 소단위에 의해 중개되는 하나 또는 그 이상의 활성을 억제하는 물질이다. βAβB 이형이합체의 경우, ＂액티빈 A＂를 억제하는 물질은 βA 소단위의 하나 또는 그 이상의 활성을 특이적으로 억제하지만, 이 복합체의 비-βA 소단위 (가령, 이 복합체의 βB 소단위)의 활성은 억제하지 못하는 물질이다. 이 원리는 또한 ＂액티빈 B＂, ＂액티빈 C＂, 및 ＂액티빈 E＂에 결합하고, 및/또는 억제하는 물질들에 적용된다. ＂액티빈 AB＂, ＂액티빈 AC＂, ＂액티빈 AE＂, ＂액티빈 BC＂, 또는 ＂액티빈 BE＂을 길항하는 본 명세서에서 공개된 물질은 βA 소단위에 의해 중개되는 하나 또는 그 이상의 활성을 억제하고, 그리고 βB 소단위에 의해 중개되는 하나 또는 그 이상의 활성을 억제하는 물질들이다. 상기 동일한 원리는 ＂액티빈 AC＂, ＂액티빈 AE＂, ＂액티빈 BC＂, 또는 ＂액티빈 BE＂에 결합하고, 및/또는 억제하는 물질들에 적용된다.
Nodal 단백질은 중배엽 및 내배엽 유도 그리고 형성, 뿐만 아니라 후속적인 축 구조의 조직화, 이를 테면, 조기 배발생에서 심장 및 위의 조직화에 기능을 한다. 발생중인 척추 배아의 배쪽 조직은 주변 세포를 모집하여 비-축척 배아 구조를 형성하는 동안, 척주 및 척추 전판의 축 구조에 주로 기여한다는 것이 증명되었다. Nodal은 유형 I 및 유형 II 수용체 모두와 SMAD 단백질로 알려진 세포내 작동체(effectors)를 통하여 신호생성을 하는 것으로 보인다. ActRIIA 및 ActRIIB는 nodal의 유형 II 수용체로 기능을 한다는 사상은 연구에 의해 뒷받침된다. 가령, Sakuma et al. (2002) Genes Cells. 2002, 7:401-12. Nodal 리간드들은 SMAD2를 인산화시키는 액티빈 유형 I 및 유형 II 수용체를 활성화시키는 이들의 공-인자들 (가령, Cripto 또는 Cryptic)과 상호작용한다고 제안되었다. Nodal 단백질은 중배엽 형성, 전방 패천화 및 좌우 축 사양을 포함하여 초기 척추 배아에 중요한 여러 가지 사건에 연루되어 있다. 실험적 증거에 의하면, nodal 신호생성은 이전에 액티빈 및 TGF-베타에 특이적으로 반응하는 것으로 보이는 루시퍼라제(luciferase) 리포터인 pAR3-Lux를 활성화시킨다는 사실이 입증되었다. 그러나, nodal은 뼈 형성 단백질에 특이적으로 반응하는 리포터인, pTlx2-Lux는 유도할 수 없다. 최근 결과는 nodal 신호생성은 SMAD2와 SMAD3에 의해 중재된다는 직접적인 생화학적 증거를 제공하는데, TGF-베타 및 액티빈에 의해 SMAD2와 SMAD3의 신호 전달도 또한 중재된다. 추가 증거에서 나타낸 바와 같이, 세포외 단백질 Cripto 또는 Cryptic는 nodal 신호생성에 필요하며, 이는 액티빈 또는 TGF-베타 신호생성과 구별된다.
BMPs 및 GDFs는 함께, TGF-베타 슈퍼패밀리의 특징적인 폴드(characteristic fold)를 공유하는 시스테인-매듭 사이토킨의 패밀리를 형성한다. 가령, Rider et al. (2010) Biochem J., 429(1):1-12 참고. 이 패밀리는 예를 들면, BMP2, BMP4, BMP6, BMP7, BMP2a, BMP3, BMP3b (GDF10로도 알려짐), BMP4, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8, BMP8a, BMP8b, BMP9 (GDF2로도 알려짐), BMP10, BMP11 (GDF11로도 알려짐), BMP12 (GDF7로도 알려짐), BMP13 (GDF6로도 알려짐), BMP14 (GDF5로도 알려짐), BMP15, GDF1, GDF3 (VGR2로도 알려짐), GDF8 (미오스태틴로도 알려짐), GDF9, GDF15, 및 decapentaplegic을 포함한다. 뼈 형성을 유도할 수 있는 능력(이로 인하여 BMPs로 불림)외에도, BMP/GDF는 광범위한 조직의 발생에 형태형성적 활성을 보여준다. BMP/GDF 동종-이합체 및 이형-이합체는 I 형과 II 형의 수용체 이합체의 조합과 상호작용하여, 여러 가지 가능한 신호 생성 복합체를 생성하고, SMAD 전사 인자의 두 경쟁 세트 중 하나의 활성화를 유도한다. BMP/GDFs는 매우 특이적이며, 국소화된 기능을 갖는다. 이들은 다양한 방식으로 조절되는데, BMP/GDF 발현의 발생 제한, 그리고 사이토킨에 고친화력으로 결합하는 몇 가지 특이적인 BMP 길항 단백질의 분비를 통하여 조절된다. 신기하게도, 다수의 이들 길항제들은 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들을 닮았다.
성장 및 분화 인자-8 (GDF8)은 또한 미오스태틴으로 알려져 있다. GDF8은 골격근량의 음성 조절인자로써, 발생중인 그리고 성인 골격근에서 상당히 발현된다. 유전자삽입 마우스에서 GDF8 null 돌연변이는 골격근의 눈에 띄는 비대 및다형성을 특징으로 한다. 가령, McPherron et al., Nature (1997) 387:83-90 참고. 소에서 GDF8의 자연 발생 돌연변이에서 골격근량의 비슷한 증가가 있고, 그리고 인간에서 현저하게 나타난다. 가령, Ashmore et al. (1974) Growth, 38:501-507; Swatland and Kieffer, J. Anim. Sci. (1994) 38:752-757; McPherron and Lee, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1997) 94:12457-12461; Kambadur et al., Genome Res. (1997) 7:910-915; 및 Schuelke et al. (2004) N Engl J Med, 350:2682-8 참고. 연구에 따르면, 사람의 HIV 감염과 관련된 근육 소모는 GDF8 단백질 발현 증가를 수반한다. 가령, Gonzalez-Cadavid et al., PNAS (1998) 95:14938-43 참고. 또한, GDF8은 근육 특이적 효소 (예: 크레아틴 키나제)의 생산을 조절하고, 근섬유 세포 증식을 조절할 수 있다. 가령, 국제 특허 출원 공개. WO 00/43781 참고 GDF8 프로펩티드(propeptide)는 성숙한 GDF8 도메인 이합체에 비공유 결합하여, 그 생물학적 활성을 불활성화시킬 수 있다. 가령, Miyazono et al. (1988) J. Biol. Chem., 263: 6407-6415; Wakefield et al. (1988) J. Biol. Chem., 263; 7646-7654; 그리고 Brown et al. (1990) Growth Factors, 3: 35-43 참고. GDF8 또는 구조적으로 관련된 단백질에 결합하고, 이들의 생물학적 활성을 억제시키는 다른 단백질은 폴리스태틴, 그리고 잠재적으로, 폴리스태틴-관련된 단백질을 포함한다. 가령, Gamer et al. (1999) Dev. Biol., 208: 222-232 참고.
BMP11로도 알려진, GDF11은 ,마우스 발생 동안 꼬리싹(tail bud), 팔다리싹(limb bud), 상악 및 하악 아치, 그리고 후근 신경절에서 발현되는 분비 단백질이다. 가령, McPherron et al. (1999) Nat. Genet., 22: 260-264; 그리고 Nakashima et al. (1999) Mech. Dev., 80: 185-189 참고. GDF11은 중배엽 및 신경 조직 모두에서 패턴화에 독특한 역할을 한다. 가령, Gamer et al. (1999) Dev Biol., 208:222-32 참고. GDF11은 병아리 날개 발달에있어서 연골 형성 및 근형성의 음성 조절자인 것으로 나타났다. 가령, Gamer et al. (2001) Dev Biol., 229:407-20 참고. 근육에서 GDF11의 발현은 GDF8과 유사한 방식으로 근육 성장을 조절하는 역할을 암시한다. 또한, 뇌에서 GDF11의 발현은 GDF11이 또한 신경계의 기능과 관련된 활성을 가질 수 있음을 시사한다. 흥미로운 것은, GDF11은 후각 상피의 신경 발생을 억제하는 것으로 밝혀졌다. 가령, Wu et al. (2003) Neuron., 37:197-207 참고. 따라서, GDF11은 근육 질환 및 신경 퇴행성 질환(가령, 근위축성 측색 경화증)과 같은 질병의 치료에서 시험관내 및 생체내 적용될 수 있다.
골형성 단백질-1 (OP-1)로도 불리는 BMP7은 연골 및 뼈 형성을 유도하는 것으로 잘 알려져 있다. 또한, BMP7은 다양한 생리학적 과정을 조절한다. 예를 들면, BMP7은 상피 골 형성의 현상을 담당하는 골 유도 인자일 수 있다. BMP7은 칼슘 조절과 뼈 항상성에 역할을 한다는 것을 발견했다. 액티빈과 마찬가지로, BMP7은 유형 II 수용체, ActRIIA 및 ActRIIB에 결합한다. 그러나, BMP7 및 액티빈은 이형화학성 수용체 복합체 안으로 별개의 유형 I 수용체들을 모집한다. 관찰된 주요 BMP7 유형 I 수용체는 ALK2이었고, 액티빈은 ALK4 (ActRIIB)에 배타적으로 결합하였다. BMP7 및 액티빈은 별개의 생물학적 반응을 유도하였고, 상이한 SMAD 경로들을 활성화시켰다. 가령, Macias-Silva et al. (1998) J Biol Chem. 273:25628-36 참고.
항-Mullerian 호르몬 (AMH)은 Mullerian-억제성 물질 (MIS)로도 알려져 있으며, TGF-베타 패밀리 당단백질이다. 한 가지 AMH-연합된 유형 II 수용체가 확인되었으며, AMHRII로 지정되거나, 대안으로 MISRII으로 지정되었다. AMH는 인간 수컷 배에서 Mullerian 관의 퇴행을 유도한다. AMH는 생식 연령의 여성에서 발현되며, 생리주기 또는 임신에 따라 변동하지 않지만 난모세포의 양과 질이 감소함에 따라 점진적으로 감소하는 것으로 나타났으며, 이는 AMH가 난소 생리학의 생물표지자 역할을할 수 있음을 시사한다. 가령, Zec et al., (2011) Biochemia Medica 21(3): 219-30 참고.
대체명으로 ACVRLK1로도 또한 알려진 ACVRL1 유전자의 산물인 액티빈 수용체-유사 키나제-1 (ALK1)는 유형 I 수용체이며, 이의 발현은 주로 내피세포에 한정된다. 가령, OMIM entry 601284 참고. ALK1은 BMP9 및 BMP10과 같은 TGF-베타 패밀리 리간드의 결합에 의해 활성화되며, ALK1 신호생성은 발달 및 병적 혈관 형성의 조절에 중요하다. ALK1 발현은 초기 마우스 발달에서 혈관 신생 및 혈관 형성 부위와 겹치고, ALK1 녹아웃 마우스는 심각한 혈관 이상으로 인하여, 배아일(embryonic day) 11.5일 시점에 죽게된다 (가령, Cunha and Pietras (2011) Blood 117(26):6999-7006 참고) ALK1 발현은 간 성상 세포 (hepatic stellate cell) 및 연골 세포와 같은 다른 세포 유형에서도 기술되어있다. 추가적으로, 액티빈 수용체-유사 키나제-2 (ALK2)와 함께, ALK1은 간엽 줄기 세포에서 BMP9-유도된 골 형성 신호생성에 중요하다는 것이 발견되었다. 가령, Cunha and Pietras (2011) Blood 117(26):6999-7006 참고.
다른 이음으로 ActRIA 또는 ACVRLK2으로도 알려진 ACVR1 유전자의 산물인 ALK2는 유형 I 수용체로써, 액티빈 및 BMPs에 결합한다. ALK2는 ALK2 녹아웃 마우스가 장배형성 후에 곧 죽기 때문에 배아 발생에 중요하다. 가령, Mishina et al. (1999) Dev Biol. 213: 314-326 and OMIM entry 102576 참고. ALK2에서 구조적 활성 돌연변이는 진행성 골화성 섬유이형성증 (FOP)과 연합된다. FOP는 근육, 힘줄 및 인대를 비롯한 섬유 조직이 자발적으로 또는 손상되었을 때, 골화를 유발하는 희귀한 유전 질환이다. 입니다. ALK2의 코돈 206에서 아르기닌에서-히스티딘으로의 돌연변이는 사람에서 FOP와 관련된 자연 발생 돌연변이다. 이 돌연변이는 리간드의 결합없이 ALK2를 통해 BMP-특이적 신호생성을 유도한다. 가령, Fukuda et al., (2009) J Biol Chem. 284(11):7149-7156 and Kaplan et al., (2011) Ann N.Y. Acad Sci. 1237: 5-10 참고.
다른 이름으로 ACVRLK3으로 알려진 BMPR1A 유전자의 산물인 액티빈 수용체-유사 키나제-3 (ALK3)은 유형 I 수용체로써 BMP 패밀리에서 다중 리간드들의 영향을 중개한다. 산재된 조직 발현을 갖는 여러 유형 I 수용체와는 달리, ALK3는 보다 특화된 기능과 일관되게, 제한적 발현 패턴을 나타낸다. 가령, ten Dijke (1993) Oncogene, 8: 2879-2887 and OMIM entry 601299 참고. ALK3은 일반적으로 BMP2, BMP4, BMP7 및 BMP 패밀리의 다른 구성요소들에 대한 고친화성 수용체로 알려져 있다. BMP2 및 BMP7은 골아 세포 분화의 강력한 자극제이며, 척추 융합 및 특정 위관절(non-union) 골절에서 골 형성을 유도하기 위해 임상적으로 사용된다. ALK3는 골아 세포에서 BMP2 및 BMP4 신호 생성을 매개하는 주요 수용체로 간주된다. 가령, Lavery et al. (2008) J. Biol. Chem. 283: 20948-20958 참고. 동종접합성 ALK3 녹아웃 마우스는 초기 배아 발생 (~ 9.5 일)에서 죽었지만, 골모세포에서 ALK3의 조건부 파괴를 갖는 성체 마우스는 새로 형성된 뼈가 조직 파괴의 증거를 보였음에도 불구하고, 골량이 증가된 것으로 최근 보고되었다. 가령, Kamiya (2008) J. Bone Miner. Res., 23:2007-2017; 및 Kamiya (2008) Development 135: 3801-3811 참고. 이 발견은 임상적으로 뼈를 만들 때 사용되는 BMP2와 BMP7 (ALK3의 리간드)의 효과와는 대조적이어서 놀랍다.
다른 이름으로 ACVRLK4로도 알려진 ACVR1B 유전자의 산물인 액티빈 수용체-유사 키나제-4 (ALK4)는 유형 I 수용체이며, 액티빈, nodal 및 GDFs를 포함하는 다수의 TGF-베타 패밀리 리간드에 대한 신호생성을 변환시킨다. ALK4 돌연변이는 췌장암과 관련되며, 주요 음성 절두된 ALK4 아이소폼의 발현은 인간 뇌하수체 종양에서 상당히 발현된다. 가령, Tsuchida et al., (2008) Endocrine Journal 55(1):11-21 and OMIM entry 601300 참고.
액티빈 수용체-유사 키나제-5 (ALK5)는 TGFBR1 유전자의 산물이며, 대부분의 세포 타입에서 광범위하게 발현된다. TGF-베타, 액티빈, 및 GDF-8을 포함하는 몇 가지 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들은 ALK5를 통하여 신호생성하며, 하류 Smad 2 및 Smad 3을 활성화시킨다. ALK5가 결핍된 마우스는 난황낭과 태반의 혈관 발달에 심각한 결함을 나타내고, 적혈구가 순환하지 않으며 임신-중기에 죽는다. 이 배아는 정상적인 조혈 가능성을 가지나, 내피 세포의 증식과 부적절한 이동을 촉진시키는 것으로 밝혀졌다. 따라서, ALK5-의존적 신호생성은 혈관 신생에 중요하지만 조혈 전구 세포 및 기능성 조혈의 발달에는 중요하지 않다. 가령, Larsson et al., (2001) The EMBO Journal, 20(7): 1663-1673 and OMIM entry 190181 참고. 내피세포에서, ALK5는 공조적으로 작용하고, ALK1 신호생성에 반대되도록 작용한다. ALK5는 세포 이동 및 증식을 억제하며, 특히 ALK1의 반대 효과를 나타낸다. 가령, Goumans et al. (2003) Mol Cell 12(4): 817-828 참고. 추가적으로, ALK5는 근육 성장을 음성적으로 조절하는 것으로 보인다. 근위축병의 마우스 모델에서 ALK5의 녹다운은 섬유증을 감소시키고, 근육 성장과 연관된 유전자의 발현을 증가시킨 것으로 밝혀졌다. 가령, Kemaladewi et al., (2014) Mol Ther Nucleic Acids 3, e156 참고.
액티빈 수용체-유사 키나제-6 (ALK6)은 BMPR1B 유전자의 산물이며, 이의 결핍은 인간과 마우스 모두에서 연골형성이상증과 사지 결함과 연관된다. 가령, Demirhan et al., (2005) J Med Genet. 42:314-317 참고. ALK6은 발달 동안 골격 전체에 널리 발현되며, 마우스에서 연골 형성에 필요하다. 가령, Yi et al., (2000) Development 127:621-630 and OMIM entry 603248 참고.
액티빈 수용체-유사 키나제-7 (ALK7)은 ACVR1C 유전자의 산물이다. ALK7 null 마우스는 생존 가능하고, 가임가능하며, 골격이나 사지 기형을 나타내지 않는다. ALK7을 통한 GDF3 신호 전달은 인슐린 감수성 및 비만에서 중요한 역할을 하는 것으로 보인다. 이것은 Alk7 null 마우스가 지방 축적 감소 및 식이-유도 비만에 대한 저항성을 나타내는 결과에 의해 뒷받침된다. 가령, Andersson et al., (2008) PNAS 105(20): 7252-7256 참고. ALK7 매개 Nodal 신호 전달은 다양한 암 세포계에서 종양 촉진 및 종양 억제 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다. 가령, De Silva et al., (2012) Frontiers in Endocrinology 3:59 and OMIM entry 608981 참고.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂ActRII＂는 유형 II 액티빈 수용체의 패밀리를 말한다. 이 패밀리는 ACVR2A 유전자에 의해 인코드되는 액티빈 수용체 유형 IIA (ActRIIA)와 및 ACVR2B 유전자에 의해 인코드되는 액티빈 수용체 유형 IIB (ActRIIB)를 모두 포함한다. ActRII 수용체는 액티빈, GDF8 (미오스태틴), GDF11, 및 BMPs의 하위집단, 주로 BMP6 및 BMP7을 포함하는 다양한 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드에 결합하는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체다. ActRII 수용체는 근육 및 신경근 장애들 (가령, 근위축병, 근위축성 측색 경화증 (ALS), 및 근육 위축), 바람직하지 못한 뼈/연골 성장, 지방 조직 장애들 (가령, 비만), 대사 장애들 (가령, 타입 2 당뇨병), 및 신경퇴행성 장애들을 포함하는 다양한 생물학적 장애에 연구된다. 가령, Tsuchida et al., (2008) Endocrine Journal 55(1):11-21, Knopf et al., U.S.8,252,900, 및 OMIM entries 102581 and 602730 참고.
형질변환 성장 인자 베타 수용체 II (TGFBRII)는 TGFBR2 유전자에 의해 인코드되며, TGF-베타 리간드들에 결합하고, 하류 Smad 2 및 Smad 3 작동체에 결합하는 것으로 알려진 유형 II 수용체다. 가령, Hinck (2012) FEBS Letters 586: 1860-1870 and OMIM entry 190182 참고. TGFBRII를 통한 TGF-베타 신호생성은 T-세포 증식, T 조절 세포의 유지 및 전연골 줄기 세포(precartilaginous stem cell)증식에 주요하다. 가령, Li et al., (2006) Immunity 25(3): 455-471 및 Cheng et al., Int. J. Mol. Sci. 2014, 15, 12665-12676 참고.
뼈 형태생성 단백질 수용체 II (BMPRII)는 BMPR2 유전자에 의해 인코드되고, 특정 BMP 리간드들에 결합하는 것으로 보이는 유형 II 수용체다. 일부 경우들에 있어서, BMPRII에 효과적인 리간드 결합은 적절한 TGFBR 유형 I 수용체의 존재에 의존적이다. 가령, Rosenzweig et al., (1995) PNAS 92:7632-7636 참고. BMPRII에서 돌연변이는 인간에서 폐 고혈압과 연합된다. OMIM entry 600799 참고.
AMHR2 유전자의 산물인 
-억제성 물질 수용체 II (MISRII)는 항-
호르몬 유형 II 수용체로도 알려져 있으며, 유형 II TGF-베타 수용체다. MISRII는 MIS 리간드에 결합하지만, 신호 유도를 위하여 적절한 유형 I 수용체, 이를 테면 ALK3 또는 ALK6을 필요로 한다. 가령, Hinck (2012) FEBS Letters 586:1860-1870 and OMIM entry 600956 참고. MISRII는 인간 남성에서 성 분화에 관련되며, 
퇴행에 요구된다. AMH는 생식 연령의 여성에서 발현되며, 생리주기 또는 임신에 따라 변동하지 않지만 난모세포의 양과 질이 감소함에 따라 점진적으로 감소하는 것으로 나타났으며, 이는 AMH가 난소 생리학의 생물표지자 역할을할 수 있음을 시사한다. 가령, Zec et al., (2011) Biochemia Medica 21(3): 219-30 and OMIM entry 600956 참고.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 하나 또는 그 이상의 TGFβ 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, Mullerian-억제성 물질 (MIS), 및 Lefty)에 의해 개시되는 세포내 신호생성 유도 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성)를 길항하기 위하여, a) TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인 (가령, ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7)과 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인 (가령, ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII)을 포함하는 이형다합체 복합체들; b) 최소한 2개의 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 (가령, ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7)의 세포외 도메인을 포함하는 이형다합체 복합체들과 최소한 2개의 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 (가령, ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII)의 세포외 도메인을 포함하는 이형다합체 복합체들, 바람직하게는 가용성 이형다합체 복합체의 용도에 관계한다. 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 이러한 길항제 이형다합체 복합체는 예를 들어, 근육 손실, 불충분한 근육 성장, 신경퇴행, 골 손실, 감소된 골밀도 및/또는 무기화, 불충분한 골 성장, 대사 장애, 예를 들어, 비만 및 적혈구 세포 장애, 가령, 빈혈과 연관된 다양한 장애/병의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.
구체적으로, 본 명세서의 데이터는 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인과 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인을 포함하는 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들과 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 보유한다는 것을 증명한다.
이 명세서에서 사용 된 용어는 일반적으로 본 개시 내용 및 각 용어가 사용되는 특정 상황에서 당해 분야의 통상적인 의미를 갖는다. 특정 용어는 명세서의 구성 및 방법을 설명하고, 이를 작성하고 사용하는 방법에 대해 당업자에게 추가 지침을 제공하기 위해 아래 또는 다른 곳에서 논의된다. 어떤 용어의 사용의 범위나 의미는 그것이 사용되는 특정 상황에서 명백해질 것이다.
용어 ＂이형태(heteromer)＂ 또는 ＂이형다합체(heteromultimer)＂는 최소한 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드를 포함하는 복합체이며, 이때 제 2 폴리펩티드는 제 1 폴리펩티드의 서열에서 최소한 하나의 아미노산 잔기가 상이하다. 상이 이형태는 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드에 의해 형성된 ＂이형이합체를 포함하거나, 또는 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드에 추가하여 폴리펩티드가 존재하는 더 큰 차수의 구조를 만들 수 있다. 이형다합체의 예시적인 구조는 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 이형이합체는 본 명세서에서 X:Y로 표현되거나, 또는 대등하게 X-Y로 표현되는데, 이때 X는 제 1 폴리펩티드를 나타내고, Y는 제 2 폴리펩티드를 나타낸다. 고차 이형태와 올리고머 구조는 본 명세서에서 상응하는 방식으로 명시된다. 특정 구체예들에 있어서, 이형다합체는 재조합에 의한 (가령, 하나 또는 그 이상의 폴리펩티드 구성요소들이 재조합 단백질일 수 있다), 단리된 및/또는 정제된 것일 수 있다.
모든 문법적 형태 및 단어 변이에서 ＂상동성(Homologous)＂이란 동일한 유기체 종에서 슈퍼패밀리의 단백질을 포함하는 ＂공통적인 진화 기원＂을 포함하는 두개 단백질간의 상관관계를 지칭하거나, 뿐만 아니라 상이한 유기체 종의 상동성 단백질을 지칭한다. 이러한 단백질 (및 이의 인코딩 핵산)은 서열 상동성을 갖고, 동일성 (%) 또는 특정 잔기 또는 모티프 및 보존된 위치의 존재 여부와 관계없이, 서열 유사성에 의해 반영되는 바와 같은 서열 상동성을 갖는다. 그러나, 일반적인 용도 및 당해 출원에서, ＂상동성＂이라는 용어는 ＂매우＂와 같은 부사로 수식될 때 서열 유사성을 지칭할 수 있고, 일반적인 진화적 기원과 관련될 수도 있고 또는 그렇지 않을 수 도 있다.
용어 ＂서열 유사성(sequence similarity)＂은 모든 문법적 형태에서 일반적인 진화론적 기원을 공유하거나 공유하지 않을 수 있는 핵산 또는 아미노산 서열 간의 동일성 또는 일치 정도를 의미한다.
기준 폴리펩티드 (또는 뉴클레오티이드) 서열에 대한 ＂서열 동일성 백분율(%)＂은 후보 서열의 아미노산 잔기(또는 핵산)이 기준 폴리펩티드(뉴클레오티드) 서열에의 아미노산 잔기(또는 핵산)과 동일한 아미노산 잔기 (또는 핵산)의 백분율로 정의되는데, 이때 서열을 정렬시킨 후 최대 서열 동일성 백분율을 얻기 위하여 필요하다면 갭을 도입하고, 보존적 치환은 상기 서열의 동일성의 일부분으로 간주되지 않는다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 정렬은 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업계의 기술 범위 내에 있는 다양한 방법으로 성취될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체 길이에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열을 정렬하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적을 위해, 아미노산 (핵산) 서열 동일성 %값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 Genentech, Inc.에 의해 작성되었으며, 소스 코드(source code)는 미국 저작권청 (Washington D.C., 20559)에 사용자 문서로 제출되어 미국 저작권 등록 번호 TXU510087에 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 캘리포니아주 사우스 샌프란시스코의 Genentech, Inc.에서 공개적으로 입수할 수 있으며, 소스 코드에서 컴파일할 수도 있다. ALIGN-2 프로그램은 디지털 UNIX V4.0D를 포함하여 UNIX 운영 체제에서 사용하도록 컴파일해야 한다. 모든 서열 비교 매개변수는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며 가변적이지 않다.
＂항진하다(Agonize)＂는 모든 문법적 형태로 단백질 및/또는 유전자를 활성화 (예 : 단백질의 유전자 발현을 활성화 또는 증폭하거나 비활성 단백질을 활성화상태로 유도함으로써)하거나 단백질 및 단백질을 증가시키는 과정을 의미한다.
＂길항하다(Antagonize)＂는 모든 문법적 형태로 단백질 및/또는 유전자를 억제(예 : 단백질의 유전자 발현을 억제 또는 감소시키거나 활성 단백질을 비활성화상태로 유도함으로써)하거나 단백질 및 단백질을 감소시키는 과정을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 다른 언급이 없는 한, ＂X에 실질적으로 결합하지 않는다＂는 한 물질이 ＂X＂에 대하여 약 10-7, 10-6, 10-5, 10-4, 또는 그 이상 (가령, KD 를 결정하는데 이용된 분석에 의해 탐지가능한 결합이 없음)의 KD를 갖는다는 의미이고, 이때 ＂X＂는 명시된 물질, 이를 테면 단백질 또는 핵산이다.
명세서 및 청구 범위에 걸쳐 수치와 관련하여 사용되는 용어 ＂약(about)＂ 및 ＂대략(approximately)＂이란 당업자에게 친숙하고 수용가능한 정확도의 구간을 나타낸다. 일반적으로, 이러한 정확도 구간은 ± 10%이다. 대안으로, 그리고 특히 생물학적 계통에서, 용어 ＂약＂ 및 ＂대략＂은 주어진 값의 크기의 차수, 바람직하게는 ≤5 배,보다 바람직하게는 ≤2 배 이내의 값을 의미할 수 있다.
여기에 개시된 수치 범위는 범위를 정의하는 수치를 포함한다.
용어 ＂a＂및 ＂an＂은 용어가 사용된 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한, 복수형을 포함한다. 용어 ＂하나 또는 이상의＂ 및 ＂최소 하나의＂은 물론 교환할 수 있는 용어로 ＂하나＂(또는 ＂하나＂)라는 용어를 사용할 수 있다. 더욱이, 본 명세서에서 사용 된 ＂및/또는＂은 둘 또는 그 이상의 특정 특징 또는 구성 요소의 각각의 구체적인 설명으로서 취해질 것이다. 따라서, 구절에서 사용된 용어 ＂및/또는＂, 이를 테면 ＂A 및/또는 B＂는 ＂A와 B＂, ＂A 또는 B＂, ＂A＂ (단독), 및 ＂B＂ (단독)을 포함한다. 마찬가지로, ＂A, B, 및 / 또는 C＂와 같은 문구에 사용된 ＂및/또는＂이라는 용어는 다음 각 측면을 포함하는 것으로 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A와 C; A와 B; B와 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).
본 명세서 전반에 걸쳐, ＂포함한다＂라는 단어 또는 ＂포함하는＂또는 ＂포함하는＂과 같은 변형은 명시된 정수 또는 정수 그룹을 포함하지만, 다른 정수 또는 정수 그룹을 배제하지 않는다는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다.
2.
TGF
-베타
슈퍼패밀리
유형 I 수용체 및 유형 II 수용체 복합체
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드들 (가령, 인간 또는 다른 종으로부터 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7 단백질, 이를 테면 본 명세서에서 설명된 것들, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 464, 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 466, 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 468, 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 470, 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 472, 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 474, 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476)과 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드들 (가령, 인간 또는 다른 종으로부터 ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII 단백질, 이를 테면 본 명세서에서 설명된 것들, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 452, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 454, 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 456, 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 458, 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462)를 포함하는 이형다합체 복합체; 최소한 2가지의 상이한 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드들 (가령, 인간 또는 다른 종으로부터 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7 단백질, 이를 테면 본 명세서에서 설명된 것들, 가령, 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 464, 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 466, 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 468, 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 470, 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 472, 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 474, 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476)를 포함하는 이형다합체; 그리고 최소한 2가지의 상이한 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드들 (가령, 인간 또는 다른 종으로부터 ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII 단백질, 이를 테면 본 명세서에서 설명된 것들, 가령, 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 452, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 454, 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 456, 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 458, 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462)를 포함하는 이형다합체 복합체들에 관계하며, 이들은 본 명세서에서 일반적으로 ＂이형다합체 복합체(heteromultimer complexes)＂ 또는 ＂이형다합체(heteromultimers)＂로 지칭된다. 바람직하게는 이형다합체는 가용성이며, 가령, 이형다합체는 최소한 하나의 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드의 가용성 부분과 최소한 하나의 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 가용성 부분(도메인)을 포함한다. 일반적으로, TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및 유형 II 수용체의 세포외 도메인은 유형 I 및 유형 II 수용체의 가용성 부분에 상응한다. 따라서, 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체는 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인 (가령, 하나 또는 그 이상의 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및/또는 ALK7 수용체 세포외 도메인) 및/또는 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인 (가령, 하나 또는 그 이상의 ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및/또는 MISRII 수용체 세포외 도메인)을 포함한다. ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, ALK7, ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII의 예시적인 세포외 도메인은 본 명세서에서 설명되며, 이러한 서열, 뿐만 아니라 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 본 명세서의 발현에 따라 이용될 수 있다 (가령, 이형다합체 조성물들 및 이의 용도들). 본 명세서의 이형다합체는 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 고차 올리고머 구조를 포함한다. 가령, 도 1, 2, 및 15-17 참고. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체는 이형이합체이다.
3 개의 핑커-톡신 폴드(three-finger toxin fold)로 알려진 구조적 모티프는 유형 I 및 유형 II 수용체에 의한 리간드 결합에 중요하며, 각각의 단합체 수용체의 세포외 도메인 안에 다양한 위치에 위치한 10, 12 또는 14 개의 보존 된 시스테인 잔기에 의해 형성된다. 가령, Greenwald et al. (1999) Nat Struct Biol 6:18-22; Hinck (2012) FEBS Lett 586:1860-1870 참고. 이들 보존된 시스테인들의 가장 바깥쪽에 의해 구획이 표시되는 TGFβ 슈퍼패밀리 수용체의 코어 리간드-결합 도메인은 다음에 상응한다: 서열 번호: 1(ActRIIB 전구체)의 위치 29-109 ; 서열 번호: 9(ActRIIA 전구체)의 위치 30-110; 서열 번호: 14 (ALK1 전구체)의 위치 34-95; 서열 번호: 18 (ALK2 전구체)의 위치 35-99; 서열 번호: 22 (ALK3 전구체)의 위치 61-130; 서열 번호: 26 및 83 (ALK4 전구체)의 위치 34-101; 서열 번호: 30 및 87 (ALK5 전구체)의 위치 36-106; 서열 번호: 34 (ALK6 아이소폼 B 전구체)의 위치 32-102; 서열 번호: 38, 305, 및 309 (ALK7 전구체)의 위치 28-92; 서열 번호: 42 (TGFBRII 아이소폼 B 전구체)의 위치 51-143; 서열 번호: 46 및 71 (BMPRII 전구체)의 위치 34-123 ; 서열 번호: 50, 75, 및 79 (MISRII 전구체)의 위치 24-116; 서열 번호: 67 (TGFBRII 아이소폼 A 전구체)의 위치 44-168; 그리고 서열 번호: 91 (ALK6 아이소폼 A 전구체)의 위치 62-132. 이러한 시스테인으로 구분된 코어 서열에 인접한 구조적으로 덜 규칙적인 아미노산은 반드시 리간드 결합을 바꾸지 않고도 어느 한 말단에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 또는 37개 잔기가 절두될 수 있다. N-말단 및/또는 C-말단 절두를 위한 예시적인 세포외 도메인은 서열 번호: 2, 3, 5, 6, 10, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 51, 68, 72, 76, 80, 84, 88, 92, 302, 306, 310, 및 313을 포함한다.
바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체는 BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty를 포함하나, 이에 한정되지 않은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드에 결합 및/또는 이의 활성을 억제(길항)한다. 구체적으로, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGFβ 슈퍼패밀리 리간드들에 의해 개시되는 신호생성 유도 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성)를 길항하는데 이용될 수 있으며, 이는 예를 들면, 세포-기반 분석, 이를 테면 본 명세서에서 설명된 것들을 이용하여 측정될 수 있다. 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 이러한 길항제 이형다합체 복합체는 예를 들어, 근육 손실, 불충분한 근육 성장, 신경퇴행, 골 손실, 감소된 골밀도 및/또는 무기화, 불충분한 골 성장, 및/또는 비만의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 이들의 응하는 동형다합체 복합체와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일(가령, ALK4:ActRIIB 이형이합체 vs. 대응하는 ActRIIB 또는 ALK4 동형이합체)을 갖는다
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂ActRIIB＂는 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 ActRIIB 단백질로부터 유래된 변이체로부터 액티빈 수용체 유형 IIB (ActRIIB) 단백질의 패밀리를 나타낸다. ActRIIB에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. ActRIIB 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂ActRIIB 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 ActRIIB 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 이러한 변이체 ActRIIB 폴리펩티드들의 예는 본 명세서 뿐만 아니라 국제 특허 출원 공개 번호. WO 2006/012627, WO 2008/097541, 및 Wo 2010/151426에서 제공되며, 이들은 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다. 본원에 기술된 모든 ActRIIB 관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 ActRIIB 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 1)의 번호에 기초한다.
인간 ActRIIB 전구체 단백질 서열은 다음과 같다:
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시되며; 잠재적인 내인성 N-연계된 당화 부위는 이중 밑줄로 표시된다.
프로세스된 (성숙) 세포외 ActRIIB 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
GRGEAETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWRNSSGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTHLPEAGGPEVTYEPPPTAPT (서열 번호: 2).
일부 구체예들에 있어서, N-말단에 ＂SGR…＂ 서열을 갖는 상기 단백질이 만들어질 수 있다. 세포외 도메인의 C-말단 ＂꼬리(tail)＂는 한줄 밑줄로 나타낸다. 결손된 ＂꼬리＂를 갖는 서열(Δ15 서열)은 다음과 같다:
GRGEAETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWRNSSGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTHLPEA (서열 번호: 3).
서열 번호: 1의 위치 64에 알라닌 (A64)을 갖는 ActRIIB 형태 또한 문헌에 보고되었다. 가령, Hilden et al. (1994) Blood, 83(8): 2163-2170 참고. A64 치환을 갖는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함하는 ActRIIB-Fc 융합 단백질은 액티빈과 GDF11에 대하여 상대적으로 낮은 친화력을 갖는다는 출원인이 확인하였다. 대조적으로, 위치 64에 아르기닌 (R64)을 갖는 동일한 ActRIIB-Fc 융합 단백질은 액티빈과 GDF11에 대하여 낮은 나노몰에서 높은 피코몰 범위의 친화력을 갖는다. 따라서, R64를 갖는 서열은 본 명세서에서 인간 ActRIIB의 ＂야생형＂ 기준 서열로 이용된다.
위치 64에 알라닌을 갖는 ActRIIB 형태는 다음과 같다:
1 MTAPWVALAL LWGSLCAGS G RGEAETRECI YYNANWELER TNQSGLERCE
51
GEQDKRLHCY
ASWANSSGTI
ELVKKGCWLD
DFNCYDRQEC
VATEENPQVY
101 FCCCEGNFCN ERFTHLPEAG GPEVTYEPPP TAPTLLTVLA YSLLPIGGLS
151
LIVLLAFWMY RHRKPPYGHV DIHEDPGPPP PSPLVGLKPL QLLEIKARGR
201
FGCVWKAQLM NDFVAVKIFP LQDKQSWQSE REIFSTPGMK HENLLQFIAA
251
EKRGSNLEVE LWLITAFHDK GSLTDYLKGN IITWNELCHV AETMSRGLSY
301
LHEDVPWCRG EGHKPSIAHR DFKSKNVLLK SDLTAVLADF GLAVRFEPGK
351
PPGDTHGQVG TRRYMAPEVL EGAINFQRDA FLRIDMYAMG LVLWELVSRC
401
KAADGPVDEY MLPFEEEIGQ HPSLEELQEV VVHKKMRPTI KDHWLKHPGL
451
AQLCVTIEEC WDHDAEARLS AGCVEERVSL IRRSVNGTTS DCLVSLVTSV
501
TNVDLPPKES SI (서열 번호: 4)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
대체 A64 형태의 프로세스된 (성숙) 세포외 ActRIIB 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
GRGEAETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWANSSGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTHLPEAGGPEVTYEPPPTAPT (서열 번호: 5)
일부 구체예들에 있어서, N-말단에 ＂SGR…＂ 서열을 갖는 상기 단백질이 만들어질 수 있다. 세포외 도메인의 C-말단 ＂꼬리＂는 한줄 밑줄로 나타낸다. 결손된 ＂꼬리＂를 갖는 서열(Δ15 서열)은 다음과 같다:
GRGEAETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWANSSGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTHLPEA (서열 번호: 6)
인간 ActRIIB 전구체 단백질를 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 7), 이는 Genbank 기준 서열 NM_001106.3의 뉴클레오티드 25-1560을 나타내며, 이것은 ActRIIB 전구체의 아미노산 1-513를 인코드한다. 나타낸 바와 같이, 서열은 위치 64에 아르기닌을 제공하며, 대신 알라닌을 제공하기 위하여 변형될 수 있다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
1
ATGACGGCGC CCTGGGTGGC CCTCGCCCTC CTCTGGGGAT CGCTGTGCGC
51
CGGCTCTGGG CGTGGGGAGG CTGAGACACG GGAGTGCATC TACTACAACG
101
CCAACTGGGA GCTGGAGCGC ACCAACCAGA GCGGCCTGGA GCGCTGCGAA
151
GGCGAGCAGG ACAAGCGGCT GCACTGCTAC GCCTCCTGGC GCAACAGCTC
201
TGGCACCATC GAGCTCGTGA AGAAGGGCTG CTGGCTAGAT GACTTCAACT
251
GCTACGATAG GCAGGAGTGT GTGGCCACTG AGGAGAACCC CCAGGTGTAC
301
TTCTGCTGCT GTGAAGGCAA CTTCTGCAAC GAACGCTTCA CTCATTTGCC
351
AGAGGCTGGG GGCCCGGAAG TCACGTACGA GCCACCCCCG ACAGCCCCCA
401
CCCTGCTCAC GGTGCTGGCC TACTCACTGC TGCCCATCGG GGGCCTTTCC
451
CTCATCGTCC TGCTGGCCTT TTGGATGTAC CGGCATCGCA AGCCCCCCTA
501
CGGTCATGTG GACATCCATG AGGACCCTGG GCCTCCACCA CCATCCCCTC
551
TGGTGGGCCT GAAGCCACTG CAGCTGCTGG AGATCAAGGC TCGGGGGCGC
601
TTTGGCTGTG TCTGGAAGGC CCAGCTCATG AATGACTTTG TAGCTGTCAA
651
GATCTTCCCA CTCCAGGACA AGCAGTCGTG GCAGAGTGAA CGGGAGATCT
701
TCAGCACACC TGGCATGAAG CACGAGAACC TGCTACAGTT CATTGCTGCC
751
GAGAAGCGAG GCTCCAACCT CGAAGTAGAG CTGTGGCTCA TCACGGCCTT
801
CCATGACAAG GGCTCCCTCA CGGATTACCT CAAGGGGAAC ATCATCACAT
851
GGAACGAACT GTGTCATGTA GCAGAGACGTGTCACGAGG CCTCTCATAC
901
CTGCATGAGG ATGTGCCCTG GTGCCGTGGC GAGGGCCACA AGCCGTCTAT
951
TGCCCACAGG GACTTTAAAA GTAAGAATGT ATTGCTGAAG AGCGACCTCA
1001
CAGCCGTGCT GGCTGACTTT GGCTTGGCTG TTCGATTTGA GCCAGGGAAA
1051
CCTCCAGGGG ACACCCACGG ACAGGTAGGC ACGAGACGGT ACATGGCTCC
1101
TGAGGTGCTC GAGGGAGCCA TCAACTTCCA GAGAGATGCC TTCCTGCGCA
1151
TTGACATGTTGCCATGGGG TTGGTGCTGT GGGAGCTTGT GTCTCGCTGC
1201
AAGGCTGCAG ACGGACCCGT GGATGAGTAC ATGCTGCCCT TTGAGGAAGA
1251
GATTGGCCAG CACCCTTCGT TGGAGGAGCT GCAGGAGGTG GTGGTGCACA
1301
AGAAGATGAG GCCCACCATT AAAGATCACT GGTTGAAACA CCCGGGCCTG
1351
GCCCAGCTTT GTGTGACCAT CGAGGAGTGC TGGGACCATG ATGCAGAGGC
1401
TCGCTTGTCC GCGGGCTGTG TGGAGGAGCG GGTGTCCCTG ATTCGGAGGT
1451
CGGTCAACGG CACTACCTCG GACTGTCTCG TTTCCCTGGT GACCTCTGTC
1501
ACCAATGTGG ACCTGCCCCC TAAAGAGTCA AGCATC (서열 번호: 7)
프로세스된 세포외 인간 ActRIIB 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다 (서열 번호: 8). 나타낸 바와 같이, 서열은 위치 64에 아르기닌을 제공하며, 대신 알라닌을 제공하기 위하여 변형될 수 있다.
1
GGGCGTGGGG AGGCTGAGAC ACGGGAGTGC ATCTACTACA ACGCCAACTG
51
GGAGCTGGAG CGCACCAACC AGAGCGGCCT GGAGCGCTGC GAAGGCGAGC
101
AGGACAAGCG GCTGCACTGC TACGCCTCCT GGCGCAACAG CTCTGGCACC
151
ATCGAGCTCG TGAAGAAGGG CTGCTGGCTA GATGACTTCA ACTGCTACGA
201
TAGGCAGGAG TGTGTGGCCA CTGAGGAGAA CCCCCAGGTG TACTTCTGCT
251
GCTGTGAAGG CAACTTCTGC AACGAACGCT TCACTCATTT GCCAGAGGCT
301
GGGGGCCCGG AAGTCACGTA CGAGCCACCC CCGACAGCCC CCACC
(서열 번호: 8)
인간 ActRIIB 세포외 도메인과 인간 ActRIIA 세포외 도메인의 아미노산 서열 배열은 도 3에 도시된다. 이 정렬은 ActRII 리간드에 직접적으로 접촉하는 것으로 보이는 두 수용체 안에 아미노산 잔기들을 나타낸다. 예를 들면, 상기 복합 ActRII 구조에서 ActRIIB-리간드 결합 포켓은 잔기 Y31, N33, N35, L38 내지 T41, E47, E50, Q53 내지 K55, L57, H58, Y60, S62, K74, W78 내지 N83, Y85, R87, A92, 및 E94 내지 F101에 의해 부분적으로 한정됨을 나타낸다. 이들 위치에서, 보존 돌연변이가 용인될 것으로 예상된다.
또한, ActRIIB는 척추동물간에 잘-보존되며, 세포외 도메인의 큰 스트레취(stretches)는 완벽하게 보존된다. 예를 들면, 도 4는 다양한 ActRIIB 오르소로그(orthologs)와 비교하여 인간 ActRIIB 세포외 도메인의 다중-서열 배열을 도시한다. ActRIIB에 결합하는 많은 리간드들이 매우 보존되어 있다. 따라서, 이들 배열로부터, ActRIIB- 리간드 결합의 정상적 활성에 중요한 리간드 결합 도메인 안에 주요 아미노산 위치를 예측할 수 있을 뿐만 아니라, 정상 ActRIIB- 리간드 결합 활성을 크게 변화시키지 않으면서 치환을 용인할 수 있는 아미노산 위치를 예측할 수 있다. 따라서, 본원에 개시된 방법에 따라 유용한 활성을 가진 인간 ActRIIB 변이체 폴리펩티드는 다른 척추 동물 ActRIIB의 서열의 상응하는 위치에 하나 또는 그 이상의 아미노산을 포함할 수 있거나, 또는 인간 또는 다른 척추 동물 서열에서와 유사한 잔기를 포함할 수 있다. 다음 실시예들은 활성 ActRIIB 변이체를 정의하는 접근법을 설명하지만, 이에 제한하고자 함은 아니다. 인간 세포외 도메인 (서열 번호: 2)의 L46은 제노푸스 ( xenopus ) ActRIIB (서열 번호: 505)에서 발린이며, 따라서 이 위치는 변경될 수 있고, 임의선택적으로 또다른 소수성 잔기, 이를 테면 V, I 또는 F로 변경될 수 있거나, 또는 비-극성 잔기 이를 테면 A로 변경될 수 있다. 인간 세포외 도메인에서 E52는 제노푸스에서 K이며, 이것은 이 부위가 다양한 광범위한 변화, 가령, 극성 잔기, 이를 테면 E, D, K, R, H, S, T, P, G, Y 그리고 아마도 A를 포함하는 변화를 용인할 것임을 나타낸다. 인간 세포외 도메인에서 T93은 제노푸스에서 K이며, 이것은 이 위치에서 다양한 구조적 변이를 용인하는데, 극성 잔기, 이를 테면 S, K, R, E, D, H, G, P, G 및 Y를 선호함을 나타낸다. 인간 세포외 도메인에서 F108은 제노푸스에서 Y이며, 따라서 Y 또는 다른 소수성 기, 이를 테면 I, V 또는 L이 용인되어야 함을 나타낸다. 인간 세포외 도메인에서 E111은 제노푸스에서 K이며, 이것은 이 위치에서 D, R, K 및 H, 뿐만 아니라 Q와 N을 포함하는 하전된 잔기가 용인될 수 있음을 나타낸다. 인간 세포외 도메인에서 R112는 제노푸스에서 K이며, 이것은 이 위치에서 R 및 H를 포함하는 염기성 잔기가 용인됨을 나타낸다. 인간 세포외 도메인에서 위치 119의 A는 상대적으로 덜 보존되며, 설치류에서는 P이고, 제노푸스에서는 V이며, 따라서 이 위치는 기본적으로 임의의 아미노산이 용인되어야 함을 나타낸다.
더욱이, ActRII 단백질은 당해 분야에서 구조적 및 기능적 특징, 특히 리간드 결합에 관해 특징 지워져 왔다[Attisano et al. (1992) Cell 68(1):97-108; Greenwald et al. (1999) Nature Structural Biology 6(1): 18-22; Allendorph et al. (2006) PNAS 103(20: 7643-7648; Thompson et al. (2003) The EMBO Journal 22(7): 1555-1566; 뿐만 아니라 U.S. 특허 번호: 7,709,605, 7,612,041, 및 7,842,663]. 본원의 교시 외에도, 이들 참고 문헌은 하나 또는 그 이상의 정상 활성 (예: 리간드 결합 활성)을 보유하는 ActRIIB 변이체를 생성하는 방법에 대한 충분한 지침을 제공한다.
3 개의 핑커-톡신 폴드(three-finger toxin fold)로 알려진 구조적 모티프는 유형 I 및 유형 II 수용체에 의한 리간드 결합에 중요하며, 각각의 단합체 수용체의 세포외 도메인 안에 다양한 위치에 보존된 시스테인 잔기에 의해 형성된다. [Greenwald et al. (1999) Nat Struct Biol 6:18-22; 그리고 Hinck (2012) FEBS Lett 586:1860-1870]. 따라서, 이러한 보존된 시스테인의 가장 바깥쪽에 의해 경계가 표시되는 인간 ActRIIB의 핵심 리간드-결합 도메인은 서열 번호 1(ActRIIB 전구체)의 29-109 위치에 상응한다. 따라서, 이러한 시스테인으로 경계가 표시되는 코어 서열에 인접한 구조적으로 덜 규칙적인 아미노산은 반드시 리간드 결합을 바꾸지 않고도 N-말단에서 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28개 잔기 및/또는 C-말단에서 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 잔기가 절두될 수 있다. N-말단 및/또는 C-말단 절두에 대한 예시적인 ActRIIB 세포외 도메인은 서열 번호: 2, 3, 5, 및 6을 포함한다.
Attisano et al.는 ActRIIB의 세포외 도메인의 C- 말단에서 프롤린 매듭의 결손은 액티빈에 대한 수용체의 친화력을 감소 시킨다는 것을 보여 주었다. 본 서열 번호: 1의 아미노산 20-119을 함유하는 ActRIIB-Fc 융합 단백질, ＂ActRIIB(20-119)-Fc＂는 ActRIIB(20-134)-Fc와 비교하여 GDF11 및 액티빈에 감소된 결합을 가지며, 이는 프롤린 매듭 영역과 완벽한 막에 인접한(juxtamembrane) 도메인을 포함한다 (가령, U.S. 특허 번호. 7,842,663 참고). 그러나, ActRIIB(20-129)-Fc 단백질은 비록 프롤린 매듭 영역이 파괴되었지만, 야생형에 비교하여 유사하지만, 다소 감소된 활성을 유지한다.
따라서, 아미노산 134, 133, 132, 131, 130 및 129 (서열 번호: 1에 대하여)에서 종료되는 ActRIIB 세포외 도메인은 모두 활성인 것으로 예상되지만, 134 또는 133에서 종료되는 구조체는 대부분 활성일 것이다. 유사하게, 잔기 129-134(서열 번호: 1에 대하여)중 임의의 위치에서 돌연변이는 큰 폭으로 리간드-결합 친화력을 변경시키지 않을 것으로 예상된다. 이를 뒷받침하는 것으로, P129 및 P130 (서열 번호: 1에 대하여)의 돌연변이는 실질적으로 리간드 결합을 감소시키지 않는 것으로 알려져있다. 따라서, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드는 아미노산 109 (최종 시스테인)와 같이 빨리 종료될 수 있지만, 그러나, 109와 119에서 또는 그 사이 (가령, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 또는 119)에서 종료되는 형태는 감소된 리간드 결합을 갖는 것으로 예상된다. 아미노산 119 (서열 번호: 1에 대하여)은 잘 보존되지 않고, 따라서 용이하게 변경 또는 절두된다. 128 (서열 번호: 1에 대하여)에서 또는 그 이후에 종료되는 ActRIIB 폴리펩티드들은 리간드-결합 활성을 유지해야만 한다. 서열 번호: 1에 대하여 119와 127에서 또는 그 사이 (가령, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 또는 127)에서 종료되는 ActRIIB 폴리펩티드들은 중간 결합 능력을 가질 것이다. 이들중 임의의 것은 임상 또는 실험 환경에 따라 바람직하게 사용될 수 있다.
ActRIIB의 N-말단에서, 아미노산 29 또는 그 전에 (서열 번호: 1에 대하여) 시작하는 단백질은 리간드-결합 활성을 보유하는 것으로 예상된다. 아미노산 29는 초기 시스테인을 나타낸다. 위치 24 (서열 번호: 1에 대하여)에서 알라닌-에서-아스파라긴으로의 돌연변이는 리간드 결합에 실질적인 영향없이 N-연계된 당화 서열을 도입한다[U.S. 특허 번호. 7,842,663]. 이로써 신호 절단(cleavage) 펩티드와 아미노산 20-29에 상응하는 시스테인 교차(cross)-연계된 영역에서 돌연변이는 잘 용인된다는 것이 확인된다. 구체적으로, 위치 20, 21, 22, 23, 및 24 (서열 번호: 1에 대하여)에서 시작하는 ActRIIB 폴리펩티드들은 전반적으로 리간드-결합 활성을 유지해야만 하고, 위치 25, 26, 27, 28, 및 29 (서열 번호: 1에 대하여)에서 시작하는 ActRIIB 폴리펩티드들 또한 리간드-결합 활성을 유지하는 것으로 예상된다. 가령, 22, 23, 24, 또는 25에서 시작되는 ActRIIB 구조체가 최고 활성을 가질 것이라고 U.S. 특허 번호. 7,842,663에서 설명하고 있다.
이와 함께, ActRIIB의 일반적인 활성 부분(가령, 리간드-결합 부분)은 서열 번호: 1의 아미노산 29-109를 포함한다. 따라서, ActRIIB 폴리펩티드들은 예를 들면, 서열 번호: 1의 아미노산 20-29중 임의의 하나에 대응하는 잔기 (가령, 서열 번호: 1의 아미노산 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29)에서 시작하고, 서열 번호: 1의 임의의 하나의 아미노산 109-134에 대응하는 잔기 (가령, 아미노산 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134중 임의의 하나에서 끝나는)에서 끝나는 ActRIIB의 부분에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성될 수 있다. 다른 예로는 서열 번호: 1의 위치 20-29 (가령, 위치 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29중 임의의 하나) 또는 21-29 (가령, 위치 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29중 임의의 하나)에서 시작하고, 서열 번호: 1의 위치 119-134 (가령, 위치 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134중 임의의 하나), 119-133 (가령, 위치 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 또는 133중 임의의 하나), 129-134 (가령, 위치 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134), 또는 129-133 (가령, 위치 129, 130, 131, 132, 또는 133중 임의의 하나)에서 끝나는 폴리펩티드들을 포함한다. 다른 예로는 서열 번호: 1의 위치 20-24 (가령, 위치 20, 21, 22, 23, 또는 24중 임의의 하나), 21-24 (가령, 위치 21, 22, 23, 또는 24중 임의의 하나), 또는 22-25 (가령, 위치 22, 22, 23, 또는 25중 임의의 하나)에서 시작하고, 서열 번호: 1의 위치 109-134 (가령, 위치 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134중 임의의 하나), 119-134 (가령, 위치 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134중 임의의 하나) 또는 129-134 (가령, 위치 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134중 임의의 하나)에서 종료되는 구조체들을 포함한다. 이 범위 안에 변이체들, 특히, 서열 번호: 1의 대응하는 부분에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 변이체들이 특히 고려된다.
본 명세서에 설명된 변형은 다양한 방식으로 결합될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, ActRIIB 변이체는 리간드-결합 포켓 안에 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 15개의 보존 아미노산을 포함하고, 리간드-결합 포켓에서 위치 40, 53, 55, 74, 79 및/또는 82에 0, 1, 또는 그 이상의 비-보존 변경을 포함한다. 가변성이 특히 잘 용인될 수 있는 결합 포켓 외부의 위치는 세포외 도메인의 아미노 및 카르복시 말단 (상기 언급한 바와 같음) 및 위치 42-46 및 65-73 (서열 번호: 1과 관련)을 포함한다. 위치 65에서 아스파라긴에서-알라닌으로의 변경(N65A)은 A64 배경에서 리간드 결합을 실질적으로 개선시키고, 따라서 R64 베경에서 리간드 결합에 유해한 효과를 가지지 않는 것으로 예상된다[U.S. 특허 번호. 7,842,663]. 이 변화는 아마도 A64 배경에서 N65의 당화를 제거하여, 이 영역에서의 중요한 변화가 용인될 수 있음을 보여준다. R64A 변화가 잘 용인되지는 않지만, R64K는 잘 용인되고, 따라서 H와 같은 또 다른 염기성 잔기는 64 번 위치에서 용인될 수 있다[U.S. 특허 번호. 7,842,663]. 추가적으로, 당업계에 기술된 돌연변이 유발 프로그램의 결과는 ActRIIB에서 종종 보존에 유익한 아미노산 위치들이 있음을 나타낸다. 서열 번호: 1에 있어서, 이들은 위치 80 (산성 또는 소수성 아미노산), 위치 78 (소수성, 특히 트립토판), 위치 37 (산성, 특히 아스파르트산 또는 글루탐산), 위치 56 (염기성 아미노산), 위치 60 (소수성 아미노산, 특히 페닐알라닌 또는 티로신)을 포함한다. 따라서, 본 명세서는 ActRIIB 폴리펩티드들에서 보존될 수 있는 아미노산 틀을 제공한다. 보존되는 것이 바람직할 수 있는 기타 위치는 다음과 같다: 모두 서열 번호:1에 대하여 위치 52 (산성 아미노산), 위치 55 (염기성 아미노산), 위치 81 (산성), 98 (극성 또는 하전된, 특히 E, D, R 또는 K).
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 명세서에 따라 사용되는 ActRIIB 폴리펩티드들 은 가용성이다 (가령, ActRIIB의 세포외 도메인). 다른 바람직한 구체예들에서, 본 명세서에 따라 사용되는 ActRIIB 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합한다. 따라서, 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서에 따라 사용되는 ActRIIB 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들의 활성(가령, Smad 신호생성 억제)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체는 서열 번호: 1의의 아미노산 20-29에 대응하는 잔기 (가령, 서열 번호: 1의 아미노산 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29중 임의의 하나에서 시작)에서 시작하고, 서열 번호: 1의 아미노산 109-134에 대응하는 위치 (가령, 아미노산 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134중 임의의 하나에서 종료되는)에서 종료되는 ActRIIB의 부분에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체는 서열 번호:1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 다른 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체는 서열 번호:1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하며, 이때 서열 번호: 1의 L79에 대응하는 위치의 아미노산은 산성 아미노산이 아니다 (가령, 자연 발생적 D 또는 E 아미노산 잔기가 아니거나, 또는 인공적인 산성 아미노산).
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂ActRIIA＂는 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 ActRIIA 단백질로부터 유래된 변이체로부터 액티빈 수용체 유형 IIA (ActRIIA) 단백질의 패밀리를 나타낸다. ActRIIA에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. ActRIIA 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂ActRIIA 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 ActRIIA 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 이러한 변이체 ActRIIA 폴리펩티드들의 예는 본 명세서 뿐만 아니라 국제 특허 출원 공개 번호. WO 2006/012627에서 제공되며, 이들은 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다. 본원에 기술된 모든 ActRIIA 관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 ActRIIA 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 9)의 번호에 기초한다.
인간 ActRIIA 전구체 단백질 서열은 다음과 같다:
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시되며; 잠재적인 내인성 N-연계된 당화 부위는 이중 밑줄로 표시된다.
프로세스된 세포외 인간 ActRIIA 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
ILGRSETQECLFFNANWEKDRTNQTGVEPCYGDKDKRRHCFATWKNISGSIEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVEKKDSPEVYFCCCEGNMCNEKFSYFPEMEVTQPTSNPVTPKPP (서열 번호: 10)
세포외 도메인의 C-말단 ＂꼬리＂는 한줄 밑줄로 나타낸다. 결손된 ＂꼬리＂를 갖는 서열(Δ15 서열)은 다음과 같다:
ILGRSETQECLFFNANWEKDRTNQTGVEPCYGDKDKRRHCFATWKNISGSIEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVEKKDSPEVYFCCCEGNMCNEKFSYFPEM (서열 번호: 11)
인간 ActRIIA 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 12), 이는 대응하는 Genbank 기준 서열 NM_001616.4의 뉴클레오티드 159-1700에 상응한다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
1
atgggagctg ctgcaaagtt ggcgtttgcc gtctttctta tctcctgttc
51
ttcaggtgct atacttggta gatcagaaac tcaggagtgt cttttcttta
101
atgctaattg ggaaaaagac agaaccaatc aaactggtgt tgaaccgtgt
151
tatggtgaca aagataaacg gcggcattgt tttgctacct ggaagaatat
201
ttctggttcc attgaaatag tgaaacaagg ttgttggctg gatgatatca
251
actgctatga caggactgat tgtgtagaaa aaaaagacag ccctgaagta
301
tatttttgtt gctgtgaggg caatatgtgt aatgaaaagt tttcttattt
351
tccggagatg gaagtcacac agcccacttc aaatccagtt acacctaagc
401
caccctatta caacatcctg ctctattcct tggtgccact tatgttaatt
451
gcggggattg tcatttgtgc attttgggtg tacaggcatc acaagatggc
501
ctaccctcct gtacttgttc caactcaaga cccaggacca cccccacctt
551
ctccattact aggtttgaaa ccactgcagt tattagaagt gaaagcaagg
601
ggaagatttg gttgtgtctg gaaagcccag ttgcttaacg aatatgtggc
651
tgtcaaaata tttccaatac aggacaaaca gtcatggcaa aatgaatacg
701
aagtctacag tttgcctgga atgaagcatg agaacatatt acagttcatt
751
ggtgcagaaa aacgaggcac cagtgttgat gtggatcttt ggctgatcac
801
agcatttcat gaaaagggtt cactatcaga ctttcttaag gctaatgtgg
851
tctcttggatgaactgtgt catattgcag aaaccatggc tagaggattg
901
gcatatttac atgaggatat acctggccta aaagatggcc acaaacctgc
951
catatctcac agggacatca aaagtaaaatgtgctgttg aaaaacaacc
1001
tgacagcttg cattgctgac tttgggttgg ccttaaaatt tgaggctggc
1051
aagtctgcag gcgataccctggacaggtt ggtacccgga ggtacatggc
1101
tccagaggta ttagagggtg ctataaactt ccaaagggat gcatttttga
1151
ggatagatat gtatgccatg ggattagtcc tatgggaact ggcttctcgc
1201
tgtactgctg cagatggacc tgtagatgaa tacatgttgc catttgagga
1251
ggaaattggc cagcatccat ctcttgaaga catgcaggaa gttgttgtgc
1301
ataaaaaaaa gaggcctgtt ttaagagatt attggcagaa acatgctgga
1351
atggcaatgc tctgtgaaac cattgaagatgttgggatc acgacgcaga
1401
agccaggtta tcagctggat gtgtaggtga aagaattacc cagatgcaga
1451
gactaacaaa tattattacc acagaggaca ttgtaacagt ggtcacaatg
1501
gtgacaaatg ttgactttcc tcccaaagaa tctagtcta
(서열 번호: 12)
프로세스된 세포외 ActRIIA 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
1
atacttggta gatcagaaac tcaggagtgt cttttcttta atgctaattg
51
ggaaaaagac agaaccaatc aaactggtgt tgaaccgtgt tatggtgaca
101
aagataaacg gcggcattgt tttgctacct ggaagaatat ttctggttcc
151
attgaaatag tgaaacaagg ttgttggctg gatgatatca actgctatga
201
caggactgat tgtgtagaaa aaaaagacag ccctgaagta tatttttgtt
251
gctgtgaggg caatatgtgt aatgaaaagt tttcttattt tccggagatg
301
gaagtcacac agcccacttc aaatccagtt acacctaagc caccc
(서열 번호: 13)
활성을 가진 (가령, 리간드 결합) ActRIIA 폴리펩티드의 일반적인 형태는 서열 번호: 9의 아미노산 30에서 시작되고, 아미노산 110에서 종료되는 폴리펩티드를 포함하는 것이다. 따라서, 본 명세서의 ActRIIA 폴리펩티드들은 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 임의선택적으로, 본 명세서의 ActRIIA 폴리펩티드들은 임의선택적으로 위치 1-5 (가령, 1, 2, 3, 4, 또는 5) 또는 3-5 (가령, 3, 4, 또는 5) 범위 위치에서 시작하고, 110-116 (가령, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 또는 116) 또는 110-115 (가령, 110, 111, 112, 113, 114, 또는 115) 범위 위치에서 종료되는 서열 번호: 9의 아미노산 12-82에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고, 리간드 결합 포켓 안에 1, 2, 5, 10 또는 15개의 보존 아미노산을 포함하고, 그리고 서열 번호: 9에 대하여 리간드-결합 포켓 안에 위치 40, 53, 55, 74, 79 및/또는 82에 0개, 1개 또는 그 이상의 비-보존 변경을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 발명의 용도에 이용되는 ActRIIA 폴리펩티드들 (가령, ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체들과 이의 용도들)은 가용성 (가령, ActRIIA의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 ActRIIA 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성의 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 409, 또는 410중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 409, 또는 410중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함, 이들로 기본적으로 구성, 또는 구성된다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂TGFBRII＂는 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 단백질로부터 유래된 변이체로부터 형질변환 성장 인자-베타 수용체 II (TGFBRII)의 패밀리를 나타낸다. TGFBRII에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. TGFBRII 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂TGFBRII 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 TGFBRIIA 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 본원에 기술된 모든 TGFBRII 관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 TGFBRII 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 42)의 번호에 기초한다.
기본형(canonical) 인간 TGFBRII 전구체 단백질 서열 (NCBI Ref Seq NP_003233.4) 다음과 같다:
1 mgrgllrglw plhivlwtri as tipphvqk svnndmivtd nngavkfpql
51 ckfcdvrfst cdnqkscmsn csitsicekp qevcvavwrk ndenitletv
101 chdpklpyhd filedaaspk cimkekkkpg etffmcscss decndniifs
151 eeyntsnpdl llvifqvtgi sllpplgvai sviiifycyr vnrqqklsst
201 wetgktrklm efsehcaiil eddrsdisst canninhnte llpieldtlv
251 gkgrfaevyk aklkqntseq fetvavkifp yeeyaswkte kdifsdinlk
301 henilqflta eerktelgkq ywlitafhak gnlqeyltrh viswedlrkl
351 gsslargiah lhsdhtpcgr pkmpivhrdl kssnilvknd ltcclcdfgl
401 slrldptlsv ddlansgqvg tarymapevl esrmnlenve sfkqtdvysm
451 alvlwemtsr cnavgevkdy eppfgskvre hpcvesmkdn vlrdrgrpei
501 psfwlnhqgi qmvcetltec wdhdpearlt aqcvaerfse lehldrlsgr
551 scseekiped gslnttk (서열 번호: 42)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 TGFBRII 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
TIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQ (서열 번호: 43)
TGFBRII 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호:44), 이는 Genbank 기준 서열 NM_003242.5의 뉴클레오티드 383-2083에 상응한다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
ATGGGTCGGGGGCTGCTCAGGGGCCTGTGGCCGCTGCACATCGTCCTGTGGACGCGTATCGCCAGC ACGATCCCACCGCACGTTCAGAAGTCGGTTAATAACGACATGATAGTCACTGACAACAACGGTGCAGTCAAGTTTCCACAACTGTGTAAATTTTGTGATGTGAGATTTTCCACCTGTGACAACCAGAAATCCTGCATGAGCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCACAGGAAGTCTGTGTGGCTGTATGGAGAAAGAATGACGAGAACATAACACTAGAGACAGTTTGCCATGACCCCAAGCTCCCCTACCATGACTTTATTCTGGAAGATGCTGCTTCTCCAAAGTGCATTATGAAGGAAAAAAAAAAGCCTGGTGAGACTTTCTTCATGTGTTCCTGTAGCTCTGATGAGTGCAATGACAACATCATCTTCTCAGAAGAATATAACACCAGCAATCCTGACTTGTTGCTAGTCATATTTCAAGGGCATCCAGATGGTGTGTGAGACGTTGACTGAGTGCTGGGACCACGACCCAGAGGCCCGTCTCACAGCCCAGTGTGTGGCAGAACGCTTCAGTGAGCTGGAGCATCTGGACAGGCTCTCGGGGAGGAGCTGCTCGGAGGAGAAGATTCCTGAAGACGGCTCCCTAAACACTACCAAA (서열 번호: 44)
프로세스된 세포외 TGFBRII 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
ACGATCCCACCGCACGTTCAGAAGTCGGTTAATAACGACATGATAGTCACTGACAACAACGGTGCAGTCAAGTTTCCACAACTGTGTAAATTTTGTGATGTGAGATTTTCCACCTGTGACAACCAGAAATCCTGCATGAGCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCACAGGAAGTCTGTGTGGCTGTATGGAGAAAGAATGACGAGAACATAACACTAGAGACAGTTTGCCATGACCCCAAGCTCCCCTACCATGACTTTATTCTGGAAGATGCTGCTTCTCCAAAGTGCATTATGAAGGAAAAAAAAAAGCCTGGTGAGACTTTCTTCATGTGTTCCTGTAGCTCTGATGAGTGCAATGACAACATCATCTTCTCAGAAGAATATAACACCAGCAATCCTGACTTGTTGCTAGTCATATTTCAA (서열 번호: 45)
TGFBRII의 대체 아이소폼, 아이소폼 A (NP_001020018.1)은 다음과 같다:
1 mgrgllrglw plhivlwtri as tipphvqk sdvemeaqkd eiicpscnrt
51 ahplrhinnd mivtdnngav kfpqlckfcd vrfstcdnqk scmsncsits
101 icekpqevcv avwrkndeni tletvchdpk lpyhdfiled aaspkcimke
151 kkkpgetffm cscssdecnd niifseeynt snpdlllvif qvtgisllpp
201 lgvaisviii fycyrvnrqq klsstwetgk trklmefseh caiileddrs
251 disstcanni nhntellpie ldtlvgkgrf aevykaklkq ntseqfetva
301 vkifpyeeya swktekdifs dinlkhenil qfltaeerkt elgkqywlit
351 afhakgnlqe yltrhviswe dlrklgssla rgiahlhsdh tpcgrpkmpi
401 vhrdlkssni lvkndltccl cdfglslrld ptlsvddlan sgqvgtarym
451 apevlesrmn lenvesfkqt dvysmalvlw emtsrcnavg evkdyeppfg
501 skvrehpcve smkdnvlrdr grpeipsfwl nhqgiqmvce tltecwdhdp
551 earltaqcva erfselehld rlsgrscsee kipedgslnt tk
(서열 번호: 67)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 TGFBRII 폴리펩티드 서열 (아이소폼 A)은 다음과 같다:
TIPPHVQKSDVEMEAQKDEIICPSCNRTAHPLRHINNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQ (서열 번호: 68)
TGFBRII 전구체 단백질 (아이소폼 A)을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 69), 이는 Genbank 기준 서열 NM_001024847.2의 뉴클레오티드 383-2158에 상응한다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
ATGGGTCGGGGGCTGCTCAGGGGCCTGTGGCCGCTGCACATCGTCCTGTGGACGCGTATCGCCAGC ACGATCCCACCGCACGTTCAGAAGTCGGATGTGGAAATGGAGGCCCAGAAAGATGAAATCATCTGCCCCAGCTGTAATAGGACTGCCCATCCACTGAGACATATTAATAACGACATGATAGTCACTGACAACAACGGTGCAGTCAAGTTTCCACAACTGTGTAAATTTTGTGATGTGAGATTTTCCACCTGTGACAACCAGAAATCCTGCATGAGCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCACAGGAAGTCTGTGTGGCTGTATGGAGAAAGAATGACGAGAACATAACACTAGAGACAGTTTGCCATGACCCCAAGCTCCCCTACCATGACTTTATTCTGGAAGATGCTGCTTCTCCAAAGTGCATTATGAAGGAAAAAAAAAAGCCTGGTGAGACTTTCTTCATGTGTTCCTGTAGCTCTGATGAGTGCAATGACAACATCATCTTCTCAGAAGAATATAACACCAGCAATCCTGACTTGTTGCTAGTCATATTTCAAGGGCATCCAGATGGTGTGTGAGACGTTGACTGAGTGCTGGGACCACGACCCAGAGGCCCGTCTCACAGCCCAGTGTGTGGCAGAACGCTTCAGTGAGCTGGAGCATCTGGACAGGCTCTCGGGGAGGAGCTGCTCGGAGGAGAAGATTCCTGAAGACGGCTCCCTAAACACTACCAAA (서열 번호: 69)
프로세스된 세포외 TGFBRII 폴리펩티드 (아이소폼 A)를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
ACGATCCCACCGCACGTTCAGAAGTCGGATGTGGAAATGGAGGCCCAGAAAGATGAAATCATCTGCCCCAGCTGTAATAGGACTGCCCATCCACTGAGACATATTAATAACGACATGATAGTCACTGACAACAACGGTGCAGTCAAGTTTCCACAACTGTGTAAATTTTGTGATGTGAGATTTTCCACCTGTGACAACCAGAAATCCTGCATGAGCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCACAGGAAGTCTGTGTGGCTGTATGGAGAAAGAATGACGAGAACATAACACTAGAGACAGTTTGCCATGACCCCAAGCTCCCCTACCATGACTTTATTCTGGAAGATGCTGCTTCTCCAAAGTGCATTATGAAGGAAAAAAAAAAGCCTGGTGAGACTTTCTTCATGTGTTCCTGTAGCTCTGATGAGTGCAATGACAACATCATCTTCTCAGAAGAATATAACACCAGCAATCCTGACTTGTTGCTAGTCATATTTCAA (서열 번호: 70).
전술한 TGFβRII 아이소폼 (서열 번호: 42, 43, 67, 및 68)은 TGFβRII 아이소폼 C에서 자연발생적으로 생성된 TGFβRII ECD의 C-말단 부근에 위치한 글루탐산염 잔기의 쌍 (서열 번호: 42의 위치 151과 152; 서열 번호: 43의 위치 129와 130; 서열 번호: 67의 위치 176과 177; 또는 서열 번호: 68의 위치 154와 155) 사이에 36개의 아미노산 (서열 번호: 95)을 통합할 수 있다(Konrad et al., BMC Genomics 8:318, 2007).
GRCKIRHIGS NNRLQRSTCQ NTGWESAHVM KTPGFR (서열 번호: 95)
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 발명의 용도에 이용되는 TGFBRII 폴리펩티드들 (가령, TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체들과 이의 용도들)은 가용성 (가령, TGFBRII의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 TGFBRII 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성의 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 상기에서 설명된 바와 같이, 서열 번호: 95의 삽입과 함께, 또는 삽입없이, 서열 번호: 42, 43, 67, 또는 68의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 95의 삽입과 함께, 또는 삽입없이, 서열 번호: 42, 43, 67, 또는 68의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂BMPRII＂는 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 BMPRII 단백질로부터 유래된 변이체로부터 뼈 형태생성 단백질 수용체 유형 IIA (BMPRII) 단백질의 패밀리를 나타낸다. BMPRII에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. BMPRII 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂BMPRII 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 BMPRII 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 본원에 기술된 모든 BMPRII 관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 BMPRII 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 46)의 번호에 기초한다.
기본형 인간 BMPRII 전구체 단백질 서열 (NCBI Ref Seq NP_001195.2) 다음과 같다:
1 mtsslqrpwr vpwlpwtill vstaaa sqnq erlcafkdpy qqdlgigesr
51 ishengtilc skgstcyglw ekskgdinlv kqgcwshigd pqechyeecv
101 vtttppsiqn gtyrfcccst dlcnvnften fpppdttpls pphsfnrdet
151 iiialasvsv lavlivalcf gyrmltgdrk qglhsmnmme aaasepsldl
201 dnlkllelig rgrygavykg slderpvavk vfsfanrqnf inekniyrvp
251 lmehdniarf ivgdervtad grmeyllvme yypngslcky lslhtsdwvs
301 scrlahsvtr glaylhtelp rgdhykpais hrdlnsrnvl vkndgtcvis
351 dfglsmrltg nrlvrpgeed naaisevgti rymapevleg avnlrdcesa
401 lkqvdmyalg liyweifmrc tdlfpgesvp eyqmafqtev gnhptfedmq
451 vlvsrekqrp kfpeawkens lavrslketi edcwdqdaea rltaqcaeer
501 maelmmiwer nksvsptvnp mstamqnern lshnrrvpki gpypdyssss
551 yiedsihhtd sivknisseh smsstpltig eknrnsinye rqqaqarips
601 petsvtslst nttttnttgl tpstgmttis empypdetnl httnvaqsig
651 ptpvclqlte edletnkldp kevdknlkes sdenlmehsl kqfsgpdpls
701 stsssllypl iklaveatgq qdftqtangq aclipdvlpt qiyplpkqqn
751 lpkrptslpl ntknstkepr lkfgskhksn lkqvetgvak mntinaaeph
801 vvtvtmngva grnhsvnsha attqyangtv lsgqttnivt hraqemlqnq
851 figedtrlni nsspdehepl lrreqqaghd egvldrlvdr rerpleggrt
901 nsnnnnsnpc seqdvlaqgv pstaadpgps kprraqrpns ldlsatnvld
951 gssiqigest qdgksgsgek ikkrvktpys lkrwrpstwv istesldcev
1001 nnngsnravh sksstavyla eggtattmvs kdigmncl
(서열 번호: 46)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 BMPRII 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
SQNQERLCAFKDPYQQDLGIGESRISHENGTILCSKGSTCYGLWEKSKGDINLVKQGCWSHIGDPQECHYEECVVTTTPPSIQNGTYRFCCCSTDLCNVNFTENFPPPDTTPLSPPHSFNRDET (서열 번호: 47)
BMPRII 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며( (서열 번호: 48), Genbank 기준 서열 NM_001204.6의 뉴클레오티드 1149-4262 은 다음과 같다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
ATGACTTCCTCGCTGCAGCGGCCCTGGCGGGTGCCCTGGCTACCATGGACCATCCTGCTGGTCAGCACTGCGGCTGCTTCATAAAACTTGCAGTAGAAGCAACTGGACAGCAGGACTTCACACAGACTGCAAATGGCCAAGCATGTTTGATTCCTGATGTTCTGCCTACTCAGATCTATCCTCTCCCCAAGCAGCAGAACCTTCCCAAGAGACCTACTAGTTTGCCTTTGAACACCAAAAATTCAACAAAAGAGCCCCGGCTAAAATTTGGCAGCAAGCACAAATCAAACTTGAAACAAGTCGAAACTGGAGTTGCCAAGATGAATACAATCAATGCAGCAGAACCTCATGTGGTGACAGTCACCATGAATGGTGTGGCAGGTAGAAACCACAGTGTTAACTCCCATGCTGCCACAACCCAATATGCCAATGGGACAGTACTATCTGGCCAAACAACCAACATAGTGACACATAGGGCCCAAGAAATGTTGCAGAATCAGTTTATTGGTGAGGACACCCGGCTGAATATTAATTCCAGTCCTGATGAGCATGAGCCTTTACTGAGACGAGAGCAACAAGCTGGCCATGATGAAGGTGTTCTGGATCGTCTTGTGGACAGGAGGGAACGGCCACTAGAAGGTGGCCGAACTAATTCCAATAACAACAACAGCAATCCATGTTCAGAACAAGATGTTCTTGCACAGGGTGTTCCAAGCACAGCAGCAGATCCTGGGCCATCAAAGCCCAGAAGAGCACAGAGGCCTAATTCTCTGGATCTTTCAGCCACAAATGTCCTGGATGGCAGCAGTATACAGATAGGTGAGTCAACACAAGATGGCAAATCAGGATCAGGTGAAAAGATCAAGAAACGTGTGAAAACTCCCTATTCTCTTAAGCGGTGGCGCCCCTCCACCTGGGTCATCTCCACTGAATCGCTGGACTGTGAAGTCAACAATAATGGCAGTAACAGGGCAGTTCATTCCAAATCCAGCACTGCTGTTTACCTTGCAGAAGGAGGCACTGCTACAACCATGGTGTCTAAAGATATAGGAATGAACTGTCTG (서열 번호: 48)
세포외 BMPRII 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
TCGCAGAATCAAGAACGGCTATGTGCGTTTAAAGATCCGTATCAGCAAGACCTTGGGATAGGTGAGAGTAGAATCTCTCATGAAAATGGGACAATATTATGCTCGAAAGGTAGCACCTGCTATGGCCTTTGGGAGAAATCAAAAGGGGACATAAATCTTGTAAAACAAGGATGTTGGTCTCACATTGGAGATCCCCAAGAGTGTCACTATGAAGAATGTGTAGTAACTACCACTCCTCCCTCAATTCAGAATGGAACATACCGTTTCTGCTGTTGTAGCACAGATTTATGTAATGTCAACTTTACTGAGAATTTTCCACCTCCTGACACAACACCACTCAGTCCACCTCATTCATTTAACCGAGATGAGACA (서열 번호: 49)
BMPRII의 대체 아이소폼, 아이소폼 2 (GenBank: AAA86519.1) 다음과 같다:
1 mtsslqrpwr vpwlpwtill vstaaa sqnq erlcafkdpy qqdlgigesr
51
ishengtilc
skgstcyglw
ekskgdinlv
kqgcwshigd
pqechyeecv
101
vtttppsiqn
gtyrfcccst
dlcnvnften
fpppdttpls
pphsfnrdet
151 iiialasvsv lavlivalcf gyrmltgdrk qglhsmnmme aaasepsldl
201 dnlkllelig rgrygavykg slderpvavk vfsfanrqnf inekniyrvp
251 lmehdniarf ivgdervtad grmeyllvme yypngslcky lslhtsdwvs
301 scrlahsvtr glaylhtelp rgdhykpais hrdlnsrnvl vkndgtcvis
351 dfglsmrltg nrlvrpgeed naaisevgti rymapevleg avnlrdcesa
401 lkqvdmyalg liyweifmrc tdlfpgesvp eyqmafqtev gnhptfedmq
451 vlvsrekqrp kfpeawkens lavrslketi edcwdqdaea rltaqcaeer
501 maelmmiwer nksvsptvnp mstamqnerr (서열 번호: 71)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 BMPRII 폴리펩티드 서열 (아이소폼 2) 다음과 같다:
SQNQERLCAFKDPYQQDLGIGESRISHENGTILCSKGSTCYGLWEKSKGDINLVKQGCWSHIGDPQECHYEECVVTTTPPSIQNGTYRFCCCSTDLCNVNFTENFPPPDTTPLSPPHSFNRDET (서열 번호: 72)
인간 BMPRII 전구체 단백질 (아이소폼 2)을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호:73), Genbank 기준 서열 U25110.1의 뉴클레오티드 163-1752에 상응한다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
ATGACTTCCTCGCTGCAGCGGCCCTGGCGGGTGCCCTGGCTACCATGGACCATCCTGCTGGTCAGCACTGCGGCTGCTGGAAGATAATGCAGCCATAAGCGAGGTTGGCACTATCAGATATATGGCACCAGAAGTGCTAGAAGGAGCTGTGAACTTGAGGGACTGTGAATCAGCTTTGAAACAAGTAGACATGTATGCTCTTGGACTAATCTATTGGGAGATATTTATGAGATGTACAGACCTCTTCCCAGGGGAATCCGTACCAGAGTACCAGATGGCTTTTCAGACAGAGGTTGGAAACCATCCCACTTTTGAGGATATGCAGGTTCTCGTGTCTAGGGAAAAACAGAGACCCAAGTTCCCAGAAGCCTGGAAAGAAAATAGCCTGGCAGTGAGGTCACTCAAGGAGACAATCGAAGACTGTTGGGACCAGGATGCAGAGGCTCGGCTTACTGCACAGTGTGCTGAGGAAAGGATGGCTGAACTTATGATGATTTGGGAAAGAAACAAATCTGTGAGCCCAACAGTCAATCCAATGTCTACTGCTATGCAGAATGAACGTAGG (서열 번호: 73)
세포외 BMPRII 폴리펩티드 (아이소폼 2)를 인코딩하는 핵산 서열은 다음과 같다:
TCGCAGAATCAAGAACGGCTATGTGCGTTTAAAGATCCGTATCAGCAAGACCTTGGGATAGGTGAGAGTAGAATCTCTCATGAAAATGGGACAATATTATGCTCGAAAGGTAGCACCTGCTATGGCCTTTGGGAGAAATCAAAAGGGGACATAAATCTTGTAAAACAAGGATGTTGGTCTCACATTGGAGATCCCCAAGAGTGTCACTATGAAGAATGTGTAGTAACTACCACTCCTCCCTCAATTCAGAATGGAACATACCGTTTCTGCTGTTGTAGCACAGATTTATGTAATGTCAACTTTACTGAGAATTTTCCACCTCCTGACACAACACCACTCAGTCCACCTCATTCATTTAACCGAGATGAGACA (서열 번호: 74)
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 발명의 용도에 이용되는 BMPRII 폴리펩티드들 (가령, BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체들과 이의 용도들)은 가용성 (가령, BMPRII의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 BMPRII 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성의 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 411, 또는 412중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 411, 또는 412중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 MISRII 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂MISRII＂는 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 MISRII 단백질로부터 유래된 변이체로부터 
억제성 물질 수용체 유형 II (MISRII) 단백질의 패밀리를 나타낸다. MISRII에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. MISRII 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂MISRII 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 MISRII 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 본원에 기술된 모든 MISRII 관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 MISRII 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 50)의 번호에 기초한다.
기본형 인간 MISRII 전구체 단백질 서열 (NCBI Ref Seq NP_065434.1) 다음과 같다:
1 mlgslglwal lptavea ppn rrtcvffeap gvrgstktlg elldtgtelp
51
rairclysrc
cfgiwnltqd
raqvemqgcr
dsdepgcesl
hcdpsprahp
101 spgstlftcs cgtdfcnany shlpppgspg tpgsqgpqaa pgesiwmalv
151 llglflllll llgsiilall qrknyrvrge pvpeprpdsg rdwsvelqel
201 pelcfsqvir egghavvwag qlqgklvaik afpprsvaqf qaeralyelp
251 glqhdhivrf itasrggpgr llsgpllvle lhpkgslchy ltqytsdwgs
301 slrmalslaq glaflheerw qngqykpgia hrdlssqnvl iredgscaig
351 dlglalvlpg ltqppawtpt qpqgpaaime agtqrymape lldktldlqd
401 wgmalrradi yslalllwei lsrcpdlrpd sspppfqlay eaelgntpts
451 delwalavqe rrrpyipstw rcfatdpdgl relledcwda dpearltaec
501 vqqrlaalah pqeshpfpes cprgcpplcp edctsipapt ilpcrpqrsa
551 chfsvqqgpc srnpqpactl spv (서열 번호: 50)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 MISRII 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
PPNRRTCVFFEAPGVRGSTKTLGELLDTGTELPRAIRCLYSRCCFGIWNLTQDRAQVEMQGCRDSDEPGCESLHCDPSPRAHPSPGSTLFTCSCGTDFCNANYSHLPPPGSPGTPGSQGPQAAPGESIWMAL (서열 번호: 51)
MISRII 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 52), Genbank 기준 서열 NM_020547.2의 뉴클레오티드 81-1799에 상응한다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
ATGCTAGGGTCTTTGGGGCTTTGGGCATTACTTCCCACAGCTGTGGAAGCA CCCCCAAACAGGCGAACCTGTGTGTTCTTTGAGGCCCCTGGAGTGCGGGGAAGCACAAAGACACTGGGAGAGCTGCTAGATACAGGCACAGAGCTCCCCAGAGCTATCCGCTGCCTCTACAGCCGCTGCTGCTTTGGGATCTGGAACCTGACCCAAGACCGGGCACAGGTGGAAATGCAAGGATGCCGAGACAGTGATGAGCCAGGCTGTGAGTCCCTCCACTGTGACCCAAGTCCCCGAGCCCACCCCAGCCCTGGCTCCACTCTCTTCACCTGCTCCTGTGGCACTGACTTCTGCAATGCCAATTACAGCCATCTGCCTCCTCCAGGGAGCCCTGGGACTCCTGGCTCCCAGGGTCCCCAGGCTGCCCCAGGTGAGTCCATCTGGATGGCACTGCCCAGAAGCACGGCTGACAGCTGAGTGTGTACAGCAGCGCCTGGCTGCCTTGGCCCATCCTCAAGAGAGCCACCCCTTTCCAGAGAGCTGTCCACGTGGCTGCCCACCTCTCTGCCCAGAAGACTGTACTTCAATTCCTGCCCCTACCATCCTCCCCTGTAGGCCTCAGCGGAGTGCCTGCCACTTCAGCGTTCAGCAAGGCCCTTGTTCCAGGAATCCTCAGCCTGCCTGTACCCTTTCTCCTGTG (서열 번호: 52)
세포외 인간 MISRII 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
CCCCCAAACAGGCGAACCTGTGTGTTCTTTGAGGCCCCTGGAGTGCGGGGAAGCACAAAGACACTGGGAGAGCTGCTAGATACAGGCACAGAGCTCCCCAGAGCTATCCGCTGCCTCTACAGCCGCTGCTGCTTTGGGATCTGGAACCTGACCCAAGACCGGGCACAGGTGGAAATGCAAGGATGCCGAGACAGTGATGAGCCAGGCTGTGAGTCCCTCCACTGTGACCCAAGTCCCCGAGCCCACCCCAGCCCTGGCTCCACTCTCTTCACCTGCTCCTGTGGCACTGACTTCTGCAATGCCAATTACAGCCATCTGCCTCCTCCAGGGAGCCCTGGGACTCCTGGCTCCCAGGGTCCCCAGGCTGCCCCAGGTGAGTCCATCTGGATGGCACTG (서열 번호: 53)
인간 MISRII 전구체 단백질 서열의 대체 아이소폼, 아이소폼 2 (NCBI Ref Seq NP_001158162.1)은 다음과 같다:
1 mlgslglwal lptavea ppn rrtcvffeap gvrgstktlg elldtgtelp
051 rairclysrc cfgiwnltqd raqvemqgcr dsdepgcesl hcdpsprahp
101 spgstlftcs cgtdfcnany shlpppgspg tpgsqgpqaa pgesiwmalv
151 llglflllll llgsiilall qrknyrvrge pvpeprpdsg rdwsvelqel
201 pelcfsqvir egghavvwag qlqgklvaik afpprsvaqf qaeralyelp
251 glqhdhivrf itasrggpgr llsgpllvle lhpkgslchy ltqytsdwgs
301 slrmalslaq glaflheerw qngqykpgia hrdlssqnvl iredgscaig
351 dlglalvlpg ltqppawtpt qpqgpaaime agtqrymape lldktldlqd
401 wgmalrradi yslalllwei lsrcpdlrpa vhhpsnwpmr qnwaiplplm
451 sygpwqcrrg gvptshppga alpqtlmg (서열 번호: 75)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 MISRII 폴리펩티드 서열 (아이소폼 2)은 다음과 같다:
PPNRRTCVFFEAPGVRGSTKTLGELLDTGTELPRAIRCLYSRCCFGIWNLTQDRAQVEMQGCRDSDEPGCESLHCDPSPRAHPSPGSTLFTCSCGTDFCNANYSHLPPPGSPGTPGSQGPQAAPGESIWMAL (서열 번호: 76)
MISRII 전구체 단백질 (아이소폼 2) 을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 77), Genbank 기준 서열 NM_001164690.1의 뉴클레오티드 81-1514에 상응한다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
ATGCTAGGGTCTTTGGGGCTTTGGGCATTACTTCCCACAGCTGTGGAAGCATGGCCTCACTCAGCCCCCTGCCTGGACCCCTACTCAACCACAAGGCCCAGCTGCCATCATGGAAGCTGGCACCCAGAGGTACATGGCACCAGAGCTCTTGGACAAGACTCTGGACCTACAGGATTGGGGCATGGCCCTCCGACGAGCTGATATTTACTCTTTGGCTCTGCTCCTGTGGGAGATACTGAGCCGCTGCCCAGATTTGAGGCCTGCAGTCCACCACCCTTCCAACTGGCCTATGAGGCAGAACTGGGCAATACCCCTACCTCTGATGAGCTATGGGCCTTGGCAGTGCAGGAGAGGAGGCGTCCCTACATCCCATCCACCTGGCGCTGCTTTGCCACAGACCCTGATGGGC (서열 번호: 77)
프로세스된 가용성 (세포외) 인간 MISRII 폴리펩티드 (아이소폼 2)를 인코딩하는 핵산 서열은 다음과 같다:
CCCCCAAACAGGCGAACCTGTGTGTTCTTTGAGGCCCCTGGAGTGCGGGGAAGCACAAAGACACTGGGAGAGCTGCTAGATACAGGCACAGAGCTCCCCAGAGCTATCCGCTGCCTCTACAGCCGCTGCTGCTTTGGGATCTGGAACCTGACCCAAGACCGGGCACAGGTGGAAATGCAAGGATGCCGAGACAGTGATGAGCCAGGCTGTGAGTCCCTCCACTGTGACCCAAGTCCCCGAGCCCACCCCAGCCCTGGCTCCACTCTCTTCACCTGCTCCTGTGGCACTGACTTCTGCAATGCCAATTACAGCCATCTGCCTCCTCCAGGGAGCCCTGGGACTCCTGGCTCCCAGGGTCCCCAGGCTGCCCCAGGTGAGTCCATCTGGATGGCACTG (서열 번호: 78)
인간 MISRII 전구체 단백질 서열의 대체 아이소폼, 아이소폼 3 (NCBI Ref Seq NP_001158163.1)은 다음과 같다:
1 mlgslglwal lptavea ppn rrtcvffeap gvrgstktlg elldtgtelp
51
rairclysrc
cfgiwnltqd
raqvemqgcr
dsdepgcesl
hcdpsprahp
101 spgstlftcs cgtdfcnany shlpppgspg tpgsqgpqaa pgesiwmalv
151 llglflllll llgsiilall qrknyrvrge pvpeprpdsg rdwsvelqel
201 pelcfsqvir egghavvwag qlqgklvaik afpprsvaqf qaeralyelp
251 glqhdhivrf itasrggpgr llsgpllvle lhpkgslchy ltqytsdwgs
301 slrmalslaq glaflheerw qngqykpgia hrdlssqnvl iredgscaig
351 dlglalvlpg ltqppawtpt qpqgpaaime dpdglrelle dcwdadpear
401 ltaecvqqrl aalahpqesh pfpescprgc pplcpedcts ipaptilpcr
451 pqrsachfsv qqgpcsrnpq pactlspv(서열 번호: 79)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 MISRII 폴리펩티드 서열 (아이소폼 3)은 다음과 같다:
PPNRRTCVFFEAPGVRGSTKTLGELLDTGTELPRAIRCLYSRCCFGIWNLTQDRAQVEMQGCRDSDEPGCESLHCDPSPRAHPSPGSTLFTCSCGTDFCNANYSHLPPPGSPGTPGSQGPQAAPGESIWMAL (서열 번호: 80)
인간 MISRII 전구체 단백질 (아이소폼 3) 을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 81), Genbank 기준 서열 NM_001164691.1의 뉴클레오티드 81-1514에 상응한다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
ATGCTAGGGTCTTTGGGGCTTTGGGCATTACTTCCCACAGCTGTGGAAGCATGGCCTCACTCAGCCCCCTGCCTGGACCCCTACTCAACCACAAGGCCCAGCTGCCATCATGGAAGACCCTGATGGGCTGAGGGAGCTCCTAGAAGACTGTTGGGATGCAGACCCAGAAGCACGGCTGACAGCTGAGTGTGTACAGCAGCGCCTGGCTGCCTTGGCCCATCCTCAAGAGAGCCACCCCTTTCCAGAGAGCTGTCCACGTGGCTGCCCACCTCTCTGCCCAGAAGACTGTACTTCAATTCCTGCCCCTACCATCCTCCCCTGTAGGCCTCAGCGGAGTGCCTGCCACTTCAGCGTTCAGCAAGGCCCTTGTTCCAGGAATCCTCAGCCTGCCTGTACCCTTTCTCCTGTG (서열 번호: 81)
프로세스된 가용성 (세포외) 인간 MISRII 폴리펩티드 (아이소폼 3)를 인코딩하는 핵산 서열은 다음과 같다:
CCCCCAAACAGGCGAACCTGTGTGTTCTTTGAGGCCCCTGGAGTGCGGGGAAGCACAAAGACACTGGGAGAGCTGCTAGATACAGGCACAGAGCTCCCCAGAGCTATCCGCTGCCTCTACAGCCGCTGCTGCTTTGGGATCTGGAACCTGACCCAAGACCGGGCACAGGTGGAAATGCAAGGATGCCGAGACAGTGATGAGCCAGGCTGTGAGTCCCTCCACTGTGACCCAAGTCCCCGAGCCCACCCCAGCCCTGGCTCCACTCTCTTCACCTGCTCCTGTGGCACTGACTTCTGCAATGCCAATTACAGCCATCTGCCTCCTCCAGGGAGCCCTGGGACTCCTGGCTCCCAGGGTCCCCAGGCTGCCCCAGGTGAGTCCATCTGGATGGCACTG (서열 번호: 82)
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 발명의 용도에 이용되는 MISRII 폴리펩티드들 (가령, MISRII 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체들과 이의 용도들)은 가용성 (가령, MISRII의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 MISRII 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성의 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 또는 80의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 또는 80의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드로 구성되거나 또는 필수적으로 구성된다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂ALK1＂은 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 ALK1 단백질로부터 유래된 변이체로부터 액티빈 수용체-유사 키나제-1 단백질의 패밀리를 나타낸다. ALK1에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. ALK1 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂ALK1 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 ALK1 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 본원에 기술된 모든 ALK1 관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 ALK1 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 14)의 번호에 기초한다.
인간 ALK1 전구체 단백질 서열 (NCBI Ref Seq NP_000011.2)은 다음과 같다:
1 mtlgsprkgl lmllmalvtq g dpvkpsrgp lvtctcesph ckgptcrgaw
51
ctvvlvreeg
rhpqehrgcg
nlhrelcrgr
ptefvnhycc
dshlcnhnvs
101 lvleatqpps eqpgtdgqla lilgpvlall alvalgvlgl whvrrrqekq
151 rglhselges slilkaseqg dsmlgdllds dcttgsgsgl pflvqrtvar
201 qvalvecvgk grygevwrgl whgesvavki fssrdeqswf reteiyntvl
251 lrhdnilgfi asdmtsrnss tqlwlithyh ehgslydflq rqtlephlal
301 rlavsaacgl ahlhveifgt qgkpaiahrd fksrnvlvks nlqcciadlg
351 lavmhsqgsd yldignnprv gtkrymapev ldeqirtdcf esykwtdiwa
401 fglvlweiar rtivngived yrppfydvvp ndpsfedmkk vvcvdqqtpt
451 ipnrlaadpv lsglaqmmre cwypnpsarl talrikktlq kisnspekpk
501 viq (서열 번호: 14)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 ALK1 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
DPVKPSRGPLVTCTCESPHCKGPTCRGAWCTVVLVREEGRHPQEHRGCGNLHRELCRGRPTEFVNHYCCDSHLCNHNVSLVLEATQPPSEQPGTDGQ (서열 번호: 15)
인간 ALK1 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 16), 이는 Genbank 기준 서열 NM_000020.2의 뉴클레오티드 284-1792에 상응한다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
ATGACCTTGGGCTCCCCCAGGAAAGGCCTTCTGATGCTGCTGATGGCCTTGGTGACCCAGGGA GACCCTGTGAAGCCGTCTCGGGGCCCGCTGGTGACCTGCACGTGTGAGAGCCCACATTGCAAGGGGCCTACCTGCCGGGGGGCCTGGTGCACAGTAGTGCTGGTGCGGGAGGAGGGGAGGCACCCCCAGGAACATCGGGGCTGCGGGAACTTGCACAGGGAGCTCTGCAGGGGGCGCCCCACCGAGTTCGTCAACCACTACTGCTGCGACAGCCACCTCTGCAACCACAACGTGTCCCTGGTGCTGGAGGCCACCCAACCTCCTTCGGAGCAGCCGGGAACAGATGGCCAGCCTCTCAGGCCTAGCTCAGATGATGCGGGAGTGCTGGTACCCAAACCCCTCTGCCCGACTCACCGCGCTGCGGATCAAGAAGACACTACAAAAAATTAGCAACAGTCCAGAGAAGCCTAAAGTGATTCAA (서열 번호: 16)
프로세스된 세포외 ALK1 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
GACCCTGTGAAGCCGTCTCGGGGCCCGCTGGTGACCTGCACGTGTGAGAGCCCACATTGCAAGGGGCCTACCTGCCGGGGGGCCTGGTGCACAGTAGTGCTGGTGCGGGAGGAGGGGAGGCACCCCCAGGAACATCGGGGCTGCGGGAACTTGCACAGGGAGCTCTGCAGGGGGCGCCCCACCGAGTTCGTCAACCACTACTGCTGCGACAGCCACCTCTGCAACCACAACGTGTCCCTGGTGCTGGAGGCCACCCAACCTCCTTCGGAGCAGCCGGGAACAGATGGCCAG (서열 번호: 17)
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 발명의 용도에 이용되는 ALK1 폴리펩티드들 (가령, ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체들과 이의 용도들)은 가용성 (가령, ALK1의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 ALK1 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성의 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 413, 또는 414의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 413, 또는 414의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂ALK2＂는 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 ALK2 단백질로부터 유래된 변이체로부터 액티빈 수용체-유사 키나제-2 단백질의 패밀리를 나타낸다. ALK2에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. ALK2 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂ALK2 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 ALK2 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 본원에 기술된 모든 ALK2-관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 ALK2 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 18)의 번호에 기초한다.
인간 ALK2 전구체 단백질 서열 (NCBI Ref Seq NP_001096.1)은 다음과 같다:
1 mvdgvmilpv limialpsps medekpkvnp klymcvcegl scgnedhceg
51
qqcfsslsin
dgfhvyqkgc
fqvyeqgkmt
cktppspgqa
veccqgdwcn
101 rnitaqlptk gksfpgtqnf hlevgliils vvfavcllac llgvalrkfk
151 rrnqerlnpr dveygtiegl ittnvgdstl adlldhscts gsgsglpflv
201 qrtvarqitl lecvgkgryg evwrgswqge nvavkifssr dekswfrete
251 lyntvmlrhe nilgfiasdm tsrhsstqlw lithyhemgs lydylqlttl
301 dtvsclrivl siasglahlh ieifgtqgkp aiahrdlksk nilvkkngqc
351 ciadlglavm hsqstnqldv gnnprvgtkr ymapevldet iqvdcfdsyk
401 rvdiwafglv lwevarrmvs ngivedykpp fydvvpndps fedmrkvvcv
451 dqqrpnipnr wfsdptltsl aklmkecwyq npsarltalr ikktltkidn
501 sldklktdc (서열 번호: 18)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 ALK2 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
MEDEKPKVNPKLYMCVCEGLSCGNEDHCEGQQCFSSLSINDGFHVYQKGCFQVYEQGKMTCKTPPSPGQAVECCQGDWCNRNITAQLPTKGKSFPGTQNFHLE (서열 번호: 19)
인간 ALK2 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 20), 이는 Genbank 기준 서열 NM_001105.4의 뉴클레오티드 431-1957에 상응한다. 신호 서열은 밑줄로 표시된다.
ATGGTAGATGGAGTGATGATTCTTCCTGTGCTTATCATGATTGCTCTCCCCTCCCCTAGT ATGGAAGATGAGAAGCCCAAGGTCAACCCCAAACTCTACATGTGTGTGTGTGAAGGTCTCTCCTGCGGTAATGAGGACCACTGTGAAGGCCAGCAGTGCTTTTCCTCACTGAGCATCAACGATGGCTTCCACGTCTACCAGAAAGGCTGCTTCCAGGTTTATGAGCAGGGAAAGATGACCTGTAAGACCCCGCCGTCCCCTGGCCAAGCCGTGGAGTGCTGCCAAGGGGACTGGTGTAACAGGAACATCACGGCCCAGCTGCCCACTAAAGGAAAATCCTTCCCTGGAACACAGAATTTCCACTTGGAGGACATTAACCTCTCTGGCCAAGCTAATGAAAGAATGCTGGTATCAAAATCCATCCGCAAGACTCACAGCACTGCGTATCAAAAAGACTTTGACCAAAATTGATAATTCCCTCGACAAATTGAAAACTGACTGT (서열 번호: 20)
세포외 ALK2 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
ATGGAAGATGAGAAGCCCAAGGTCAACCCCAAACTCTACATGTGTGTGTGTGAAGGTCTCTCCTGCGGTAATGAGGACCACTGTGAAGGCCAGCAGTGCTTTTCCTCACTGAGCATCAACGATGGCTTCCACGTCTACCAGAAAGGCTGCTTCCAGGTTTATGAGCAGGGAAAGATGACCTGTAAGACCCCGCCGTCCCCTGGCCAAGCCGTGGAGTGCTGCCAAGGGGACTGGTGTAACAGGAACATCACGGCCCAGCTGCCCACTAAAGGAAAATCCTTCCCTGGAACACAGAATTTCCACTTGGAG (서열 번호: 21)
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 발명의 용도에 이용되는 ALK2 폴리펩티드들 (가령, ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체들과 이의 용도들)은 가용성 (가령, ALK2의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 ALK2 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성의 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 18, 또는 19의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 18 또는 19의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 ALK3 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂ALK3＂는 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 ALK3 단백질로부터 유래된 변이체로부터 액티빈 수용체-유사 키나제-3 단백질의 패밀리를 나타낸다. ALK3에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. ALK3 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂ALK3 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 ALK3 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 본원에 기술된 모든 ALK3-관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 ALK3 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 22)의 번호에 기초한다.
인간 ALK3 전구체 단백질 서열 (NCBI Ref Seq NP_004320.2)은 다음과 같다:
1 mpqlyiyirl lgaylfiisr vqg qnldsml hgtgmksdsd qkksengvtl apedtlpflk
61
cycsghcpdd
ainntcitng
hcfaiieedd
qgettlasgc
mkyegsdfqc
kdspkaqlrr
121 tieccrtnlc nqylqptlpp vvigpffdgs irwlvllism avciiamiif sscfcykhyc
181 ksissrrryn rdleqdeafi pvgeslkdli dqsqssgsgs glpllvqrti akqiqmvrqv
241 gkgrygevwm gkwrgekvav kvfftteeas wfreteiyqt vlmrhenilg fiaadikgtg
301 swtqlylitd yhengslydf lkcatldtra llklaysaac glchlhteiy gtqgkpaiah
361 rdlksknili kkngscciad lglavkfnsd tnevdvplnt rvgtkrymap evldeslnkn
421 hfqpyimadi ysfgliiwem arrcitggiv eeyqlpyynm vpsdpsyedm revvcvkrlr
481 pivsnrwnsd eclravlklm secwahnpas rltalrikkt lakmvesqdv ki
(서열 번호: 22)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 ALK3 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
1 qnldsmlhgt gmksdsdqkk sengvtlape dtlpflkcyc sghcpddain ntcitnghcf
61 aiieeddqge ttlasgcmky egsdfqckds pkaqlrrtie ccrtnlcnqy lqptlppvvi
121 gpffdgsir (서열 번호: 23)
인간 ALK3 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 24), 이는 Genbank 기준 서열 NM_004329.2의 뉴클레오티드 549-2144에 상응한다. 신호 서열은 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
1 atgcctcagc tatacattta catcagatta ttgggagcct atttgttcat catttctcgt
61 gttcaagga c agaatctgga tagtatgctt catggcactg ggatgaaatc agactccgac
121
cagaaaaagt
cagaaaatgg
agtaacctta
gcaccagagg
ataccttgcc
ttttttaaag
181
tgctattgct
cagggcactg
tccagatgat
gctattaata
acacatgcat
aactaatgga
241
cattgctttg
ccatcataga
agaagatgac
cagggagaaa
ccacattagc
ttcagggtgt
301
atgaaatatg
aaggatctga
ttttcagtgc
aaagattctc
caaaagccca
gctacgccgg
361
acaatagaat
gttgtcggac
caatttatgt
aaccagtatt
tgcaacccac
actgccccct
421 gttgtcatag gtccgttttt tgatggcagc attcgatggc tggttttgct catttctatg
481 gctgtctgca taattgctat gatcatcttc tccagctgct tttgttacaa acattattgc
541 aagagcatct caagcagacg tcgttacaat cgtgatttgg aacaggatga agcatttatt
601 ccagttggag aatcactaaa agaccttatt gaccagtcac aaagttctgg tagtgggtct
661 ggactacctt tattggttca gcgaactatt gccaaacaga ttcagatggt ccggcaagtt
721 ggtaaaggcc gatatggaga agtatggatg ggcaaatggc gtggcgaaaa agtggcggtg
781 aaagtattct ttaccactga agaagccagc tggtttcgag aaacagaaat ctaccaaact
841 gtgctaatgc gccatgaaaa catacttggt ttcatagcgg cagacattaa aggtacaggt
901 tcctggactc agctctattt gattactgat taccatgaaa atggatctct ctatgacttc
961 ctgaaatgtg ctacactgga caccagagcc ctgcttaaat tggcttattc agctgcctgt
1021ggtctgtgcc acctgcacac agaaatttat ggcacccaag gaaagcccgc aattgctcat
1081cgagacctaa agagcaaaaa catcctcatc aagaaaaatg ggagttgctg cattgctgac
1141ctgggccttg ctgttaaatt caacagtgac acaaatgaag ttgatgtgcc cttgaatacc
1201agggtgggca ccaaacgcta catggctccc gaagtgctgg acgaaagcct gaacaaaaac
1261cacttccagc cctacatcat ggctgacatc tacagcttcg gcctaatcat ttgggagatg
1321gctcgtcgtt gtatcacagg agggatcgtg gaagaatacc aattgccata ttacaacatg
1381gtaccgagtg atccgtcata cgaagatatg cgtgaggttg tgtgtgtcaa acgtttgcgg
1441ccaattgtgt ctaatcggtg gaacagtgat gaatgtctac gagcagtttt gaagctaatg
1501tcagaatgct gggcccacaa tccagcctcc agactcacag cattgagaat taagaagacg
1561cttgccaagtggttgaatc ccaagatgta aaaatc (서열 번호: 24)
세포외 인간 ALK3 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
1 cagaatctgg atagtatgct tcatggcact gggatgaaat cagactccga ccagaaaaag
61 tcagaaaatg gagtaacctt agcaccagag gataccttgc cttttttaaa gtgctattgc
121 tcagggcact gtccagatgtgctattaat aacacatgca taactaatgg acattgcttt
181 gccatcatag aagaagatga ccagggagaa accacattag cttcagggtg tatgaaatat
241 gaaggatctg attttcagtg caaagattct ccaaaagccc agctacgccg gacaatagaa
301 ttgtcgga ccaatttatg taaccagtat ttgcaaccca cactgccccc tgttgtcata
361 ggtccgtttt ttgatggcag cattcga (서열 번호: 25)
활성을 가진 (가령, 리간드 결합) ALK3 폴리펩티드의 일반적인 형태는 서열 번호: 22의 임의의 아미노산 위치 25-31 (가령, 위치 25, 26, 27, 28, 29, 30, 또는 31)에서 시작하고, 서열 번호: 22의 임의의 아미노산 위치 140-152(가령, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 또는 152)에서 종료되는 폴리펩티드를 포함하는 것이다. U.S. 특허 8,338,377 참고, 이들의 교시는 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 발명의 용도에 이용되는 ALK3 폴리펩티드들 (가령, ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체들과 이의 용도들)은 가용성 (가령, ALK3의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 ALK3 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성의 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 22의 임의의 아미노산 위치 25-31 (가령, 위치 25, 26, 27, 28, 29, 30, 또는 31)에서 시작하고, 서열 번호: 22의 임의의 and 아미노산 위치 140-153 (가령, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 또는 152)에서 종료되는 아미노산을 포함하거나, 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 407, 또는 408의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 407, 또는 408의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 ALK4 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂ALK4＂는 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 ALK4 단백질로부터 유래된 변이체로부터 액티빈 수용체-유사 키나제-4 단백질의 패밀리를 나타낸다. ALK4에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. ALK4 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂ALK4 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 ALK4 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 본원에 기술된 모든 ALK4-관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 ALK4 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 26)의 번호에 기초한다.
기본형 인간 ALK4 전구체 단백질 서열 (NCBI Ref Seq NP_004293)은 다음과 같다:
1 maesagassf fplvvlllag sgg sgprgvq allcactscl qanytcetdg acmvsifnld
61 gmehhvrtci pkvelvpagk pfyclssedl rnthccytdy cnridlrvps ghlkepehps
121 mwgpvelvgi iagpvfllfl iiiivflvin yhqrvyhnrq rldmedpsce mclskdktlq
181 dlvydlstsg sgsglplfvq rtvartivlq eiigkgrfge vwrgrwrggd vavkifssre
241 erswfreaei yqtvmlrhen ilgfiaadnk dngtwtqlwl vsdyhehgsl fdylnrytvt
301 iegmiklals aasglahlhm eivgtqgkpg iahrdlkskn ilvkkngmca iadlglavrh
361 davtdtidia pnqrvgtkry mapevldeti nmkhfdsfkc adiyalglvy weiarrcnsg
421 gvheeyqlpy ydlvpsdpsi eemrkvvcdq klrpnipnww qsyealrvmg kmmrecwyan
481 gaarltalri kktlsqlsvq edvki (서열 번호: 26)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 인간 ALK4 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
SGPRGVQALLCACTSCLQANYTCETDGACMVSIFNLDGMEHHVRTCIPKVELVPAGKPFYCLSSEDLRNTHCCYTDYCNRIDLRVPSGHLKEPEHPSMWGPVE (서열 번호: 27)
인간 ALK4 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 28), 이는 Genbank 기준 서열 NM_004302.4의 뉴클레오티드 78-1592에 상응한다. 신호 서열은 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
ATGGCGGAGTCGGCCGGAGCCTCCTCCTTCTTCCCCCTTGTTGTCCTCCTGCTCGCCGGCAGCGGCGGG TCCGGGCCCCGGGGGGTCCAGGCTCTGCTGTGTGCGTGCACCAGCTGCCTCCAGGCCAACTACACGTGTGAGACAGATGGGGCCTGCATGGTTTCCATTTTCAATCTGGATGGGATGGAGCACCATGTGCGCACCTGCATCCCCAAAGTGGAGCTGGTCCCTGCCGGGAAGCCCTTCTACTGCCTGAGCTCGGAGGACCTGCGCAACACCCACTGCTGCTACACTGACTACTGCAACAGGATCGACTTGAGGGTGCCCAGTGGTCACCTCAAGGAGCCTGAGCACCCGTCCATGTGGGGCCCGGTGGAGGATGGGGAAGATGATGCGAGAGTGTTGGTATGCCAACGGCGCAGCCCGCCTGACGGCCCTGCGCATCAAGAAGACCCTCTCCCAGCTCAGCGTGCAGGAAGACGTGAAGATC (서열 번호: 28)
세포외 ALK4 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
TCCGGGCCCCGGGGGGTCCAGGCTCTGCTGTGTGCGTGCACCAGCTGCCTCCAGGCCAACTACACGTGTGAGACAGATGGGGCCTGCATGGTTTCCATTTTCAATCTGGATGGGATGGAGCACCATGTGCGCACCTGCATCCCCAAAGTGGAGCTGGTCCCTGCCGGGAAGCCCTTCTACTGCCTGAGCTCGGAGGACCTGCGCAACACCCACTGCTGCTACACTGACTACTGCAACAGGATCGACTTGAGGGTGCCCAGTGGTCACCTCAAGGAGCCTGAGCACCCGTCCATGTGGGGCCCGGTGGAG (서열 번호: 29)
인간 ALK4 전구체 단백질 서열의 대체 아이소폼, 아이소폼 C (NCBI Ref Seq NP_064733.3)은 다음과 같다:
1 maesagassf fplvvlllag sgg sgprgvq allcactscl qanytcetdg acmvsifnld
61 gmehhvrtci pkvelvpagk pfyclssedl rnthccytdy cnridlrvps ghlkepehps
121 mwgpvelvgi iagpvfllfl iiiivflvin yhqrvyhnrq rldmedpsce mclskdktlq
181 dlvydlstsg sgsglplfvq rtvartivlq eiigkgrfge vwrgrwrggd vavkifssre
241 erswfreaei yqtvmlrhen ilgfiaadnk adcsfltlpw evvmvsaapk lrslrlqykg
301 grgrarflfp lnngtwtqlw lvsdyhehgs lfdylnrytv tiegmiklal saasglahlh
361 meivgtqgkp giahrdlksk nilvkkngmc aiadlglavr hdavtdtidi apnqrvgtkr
421 ymapevldet inmkhfdsfk cadiyalglv yweiarrcns ggvheeyqlp yydlvpsdps
481 ieemrkvvcd qklrpnipnw wqsyealrvm gkmmrecwya ngaarltalr ikktlsqlsv
541 qedvki (서열 번호: 83)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 ALK4 폴리펩티드 서열 (아이소폼 C)은 다음과 같다:
SGPRGVQALLCACTSCLQANYTCETDGACMVSIFNLDGMEHHVRTCIPKVELVPAGKPFYCLSSEDLRNTHCCYTDYCNRIDLRVPSGHLKEPEHPSMWGPVE (서열 번호: 84)
인간 ALK4 전구체 단백질(아이소폼 C)을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 85), 이는 Genbank 기준 서열 NM_020328.3의 뉴클레오티드 78-1715에 상응한다. 신호 서열은 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
ATGGCGGAGTCGGCCGGAGCCTCCTCCTTCTTCCCCCTTGTTGTCCTCCTGCTCGCCGGCAGCGGCGGG TCCGGGCCCCGGGGGGTCCAGGCTCTGCTGTGTGCGTGCACCAGCTGCCTCCAGGCCAACTACACGTGTGAGACAGATGGGGCCTGCATGGTTTCCATTTTCAATCTGGATGGGATGGAGCACCATGTGCGCACCTGCATCCCCAAAGTGGAGCTGGTCCCTGCCGGGAAGCCCTTCTACTGCCTGAGCTCGGAGGACCTGCGCAACACCCACTGCTGCTACACTGACTACTGCAACAGGATCGACTTGAGGGTGCCCAGTGGTCACCTCAAGGAGCCTGAGCACCCGTCCATGTGGGGCCCGGTGGAGGCTGCCATATTACGACTTAGTGCCCTCTGACCCTTCCATTGAGGAAATGCGAAAGGTTGTATGTGATCAGAAGCTGCGTCCCAACATCCCCAACTGGTGGCAGAGTTATGAGGCACTGCGGGTGATGGGGAAGATGATGCGAGAGTGTTGGTATGCCAACGGCGCAGCCCGCCTGACGGCCCTGCGCATCAAGAAGACCCTCTCCCAGCTCAGCGTGCAGGAAGACGTGAAGATC (서열 번호: 85)
세포외 ALK4 폴리펩티드 (아이소폼 C)를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
TCCGGGCCCCGGGGGGTCCAGGCTCTGCTGTGTGCGTGCACCAGCTGCCTCCAGGCCAACTACACGTGTGAGACAGATGGGGCCTGCATGGTTTCCATTTTCAATCTGGATGGGATGGAGCACCATGTGCGCACCTGCATCCCCAAAGTGGAGCTGGTCCCTGCCGGGAAGCCCTTCTACTGCCTGAGCTCGGAGGACCTGCGCAACACCCACTGCTGCTACACTGACTACTGCAACAGGATCGACTTGAGGGTGCCCAGTGGTCACCTCAAGGAGCCTGAGCACCCGTCCATGTGGGGCCCGGTGGAG
(서열 번호: 86)
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 발명의 용도에 이용되는 ALK4 폴리펩티드들 (가령, ALK4 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체들과 이의 용도들)은 가용성 (가령, ALK4의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 ALK4 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성의 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 403, 또는 404중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 403, 또는 404중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 ALK5 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂ALK5＂는 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 ALK5 단백질로부터 유래된 변이체로부터 액티빈 수용체-유사 키나제-5 단백질의 패밀리를 나타낸다. ALK5에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. ALK5 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂ALK5 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 ALK5 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 본원에 기술된 모든 ALK5-관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 ALK5 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 30)의 번호에 기초한다.
기본형 인간 ALK5 전구체 단백질 서열 (NCBI Ref Seq NP_004603.1)은 다음과 같다:
1 meaavaaprp rllllvlaaa aaaa aallpg atalqcfchl ctkdnftcvt dglcfvsvte
61 ttdkvihnsm ciaeidlipr drpfvcapss ktgsvtttyc cnqdhcnkie lpttvksspg
121 lgpvelaavi agpvcfvcis lmlmvyichn rtvihhrvpn eedpsldrpf isegttlkdl
181 iydmttsgsg sglpllvqrt iartivlqes igkgrfgevw rgkwrgeeva vkifssreer
241 swfreaeiyq tvmlrhenil gfiaadnkdn gtwtqlwlvs dyhehgslfd ylnrytvtve
301 gmiklalsta sglahlhmei vgtqgkpaia hrdlksknil vkkngtccia dlglavrhds
361 atdtidiapn hrvgtkryma pevlddsinm khfesfkrad iyamglvfwe iarrcsiggi
421 hedyqlpyyd lvpsdpsvee mrkvvceqkl rpnipnrwqs cealrvmaki mrecwyanga
481 arltalrikk tlsqlsqqeg ikm (서열 번호: 30)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 ALK5 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
AALLPGATALQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVEL (서열 번호: 31)
인간 ALK5 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 32), 이는 Genbank 기준 서열 NM_004612.2의 뉴클레오티드 77-1585에 상응한다. 신호 서열은 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
ATGGAGGCGGCGGTCGCTGCTCCGCGTCCCCGGCTGCTCCTCCTCGTGCTGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGCG GCGGCGCTGCTCCCGGGGGCGACGGCGTTACAGTGTTTCTGCCACCTCTGTACAAAAGACAATTTTACTTGTGTGACAGATGGGCTCTGCTTTGTCTCTGTCACAGAGACCACAGACAAAGTTATACACAACAGCATGTGTATAGCTGAAATTGACTTAATTCCTCGAGATAGGCCGTTTGTATGTGCACCCTCTTCAAAAACTGGGTCTGTGACTACAACATATTGCTGCAATCAGGACCATTGCAATAAAATAGAACTTCCAACTACTGTAAAGTCATCACCTGGCCTTGGTCCTGTGGAACTGTAAAATTATGAGAGAATGTTGGTATGCCAATGGAGCAGCTAGGCTTACAGCATTGCGGATTAAGAAAACATTATCGCAACTCAGTCAACAGGAAGGCATCAAAATG (서열 번호: 32)
세포외 인간 ALK5 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
GCGGCGCTGCTCCCGGGGGCGACGGCGTTACAGTGTTTCTGCCACCTCTGTACAAAAGACAATTTTACTTGTGTGACAGATGGGCTCTGCTTTGTCTCTGTCACAGAGACCACAGACAAAGTTATACACAACAGCATGTGTATAGCTGAAATTGACTTAATTCCTCGAGATAGGCCGTTTGTATGTGCACCCTCTTCAAAAACTGGGTCTGTGACTACAACATATTGCTGCAATCAGGACCATTGCAATAAAATAGAACTTCCAACTACTGTAAAGTCATCACCTGGCCTTGGTCCTGTGGAACTG (서열 번호: 33)
인간 ALK5 전구체 단백질 서열의 대체 아이소폼, 아이소폼 2 (NCBI Ref Seq XP_005252207.1)은 다음과 같다:
1 meaavaaprp rllllvlaaa aaaa aallpg atalqcfchl ctkdnftcvt dglcfvsvte
61 ttdkvihnsm ciaeidlipr drpfvcapss ktgsvtttyc cnqdhcnkie lpttgpfsvk
121 sspglgpvel aaviagpvcf vcislmlmvy ichnrtvihh rvpneedpsl drpfisegtt
181 lkdliydmtt sgsgsglpll vqrtiartiv lqesigkgrf gevwrgkwrg eevavkifss
241 reerswfrea eiyqtvmlrh enilgfiaad nkdngtwtql wlvsdyhehg slfdylnryt
301 vtvegmikla lstasglahl hmeivgtqgk paiahrdlks knilvkkngt cciadlglav
361 rhdsatdtid iapnhrvgtk rymapevldd sinmkhfesf kradiyamgl vfweiarrcs
421 iggihedyql pyydlvpsdp sveemrkvvc eqklrpnipn rwqscealrv makimrecwy
481 angaarltal rikktlsqls qqegikm (서열 번호: 87)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 ALK5 폴리펩티드 서열 (아이소폼 2)은 다음과 같다:
AALLPGATALQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTGPFSVKSSPGLGPVEL (서열 번호: 88)
인간 ALK5 전구체 단백질 (아이소폼 2)을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 89), Genbank 기준 서열 XM_005252150.1의 뉴클레오티드 77-1597에 상응한다. 신호 서열은 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
ATGGAGGCGGCGGTCGCTGCTCCGCGTCCCCGGCTGCTCCTCCTCGTGCTGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGCG GCGGCGCTGCTCCCGGGGGCGACGGCGTTACAGTGTTTCTGCCACCTCTGTACAAAAGACAATTTTACTTGTGTGACAGATGGGCTCTGCTTTGTCTCTGTCACAGAGACCACAGACAAAGTTATACACAACAGCATGTGTATAGCTGAAATTGACTTAATTCCTCGAGATAGGCCGTTTGTATGTGCACCCTCTTCAAAAACTGGGTCTGTGACTACAACATATTGCTGCAATCAGGACCATTGCAATAAAATAGAACTTCCAACTACTGGCCCTTTTTCAGTAAAGTCATCACCTGGCCTTGGTCCTGTGGAACTGTAAAATTATGAGAGAATGTTGGTATGCCAATGGAGCAGCTAGGCTTACAGCATTGCGGATTAAGAAAACATTATCGCAACTCAGTCAACAGGAAGGCATCAAAATG (서열 번호: 89)
프로세스된 세포외 ALK5 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
GCGGCGCTGCTCCCGGGGGCGACGGCGTTACAGTGTTTCTGCCACCTCTGTACAAAAGACAATTTTACTTGTGTGACAGATGGGCTCTGCTTTGTCTCTGTCACAGAGACCACAGACAAAGTTATACACAACAGCATGTGTATAGCTGAAATTGACTTAATTCCTCGAGATAGGCCGTTTGTATGTGCACCCTCTTCAAAAACTGGGTCTGTGACTACAACATATTGCTGCAATCAGGACCATTGCAATAAAATAGAACTTCCAACTACTGGCCCTTTTTCAGTAAAGTCATCACCTGGCCTTGGTCCTGTGGAACTG (서열 번호: 90)
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 발명의 용도에 이용되는 ALK5 폴리펩티드들 (가령, ALK5 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체들과 이의 용도들)은 가용성 (가령, ALK5의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 ALK5 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성의 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 30, 31, 87, 또는 88의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 30, 31, 87, 또는 88의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 ALK6 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂ALK6＂는 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 ALK6 단백질로부터 유래된 변이체로부터 액티빈 수용체-유사 키나제-6 단백질의 패밀리를 나타낸다. ALK6에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. ALK6 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂ALK6 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 ALK6 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 본원에 기술된 모든 ALK6-관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 ALK6 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 34)의 번호에 기초한다.
기본형 인간 ALK6 전구체 단백질 서열 (NCBI Ref Seq NP_001194.1)은 다음과 같다:
1 mllrsagkln vgt kkedges taptprpkvl rckchhhcpe dsvnnicstd gycftmieed
61 dsglpvvtsg clglegsdfq crdtpiphqr rsiecctern ecnkdlhptl pplknrdfvd
121 gpihhralli svtvcslllv liilfcyfry krqetrprys igleqdetyi ppgeslrdli
181 eqsqssgsgs glpllvqrti akqiqmvkqi gkgrygevwm gkwrgekvav kvfftteeas
241 wfreteiyqt vlmrhenilg fiaadikgtg swtqlylitd yhengslydy lksttldaks
301 mlklayssvs glchlhteif stqgkpaiah rdlksknilv kkngtcciad lglavkfisd
361 tnevdippnt rvgtkrympp evldeslnrn hfqsyimadm ysfglilwev arrcvsggiv
421 eeyqlpyhdl vpsdpsyedm reivcikklr psfpnrwssd eclrqmgklm tecwahnpas
481 rltalrvkkt lakmsesqdi kl (서열 번호: 34)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 ALK6 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
KKEDGESTAPTPRPKVLRCKCHHHCPEDSVNNICSTDGYCFTMIEEDDSGLPVVTSGCLGLEGSDFQCRDTPIPHQRRSIECCTERNECNKDLHPTLPPLKNRDFVDGPIHHR (서열 번호: 35)
인간 ALK6 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 36), 이는 Genbank 기준 서열 NM_001203.2의 뉴클레오티드 275-1780에 상응한다. 신호 서열은 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
ATGCTTTTGCGAAGTGCAGGAAAATTAAATGTGGGCACC AAGAAAGAGGATGGTGAGAGTACAGCCCCCACCCCCCGTCCAAAGGTCTTGCGTTGTAAATGCCACCACCATTGTCCAGAAGACTCAGTCAACAATATTTGCAGCACAGACGGATATTGTTTCACGATGATAGAAGAGGATGACTCTGGGTTGCCTGTGGTCACTTCTGGTTGCCTAGGACTAGAAGGCTCAGATTTTCAGTGTCGGGACACTCCCATTCCTCATCAAAGAAGATCAATTGAATGCTGCACAGAAAGGAACGAATGTAATAAAGACCTACACCCTACACTGCCTCCATTGAAAAACAGAGATTTTGTTGATGGACCTATACACCACAGGACTCATGACAGAATGCTGGGCTCACAATCCTGCATCAAGGCTGACAGCCCTGCGGGTTAAGAAAACACTTGCCAAAATGTCAGAGTCCCAGGACATTAAACTC (서열 번호: 36)
프로세스된 세포외 ALK6 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
AAGAAAGAGGATGGTGAGAGTACAGCCCCCACCCCCCGTCCAAAGGTCTTGCGTTGTAAATGCCACCACCATTGTCCAGAAGACTCAGTCAACAATATTTGCAGCACAGACGGATATTGTTTCACGATGATAGAAGAGGATGACTCTGGGTTGCCTGTGGTCACTTCTGGTTGCCTAGGACTAGAAGGCTCAGATTTTCAGTGTCGGGACACTCCCATTCCTCATCAAAGAAGATCAATTGAATGCTGCACAGAAAGGAACGAATGTAATAAAGACCTACACCCTACACTGCCTCCATTGAAAAACAGAGATTTTGTTGATGGACCTATACACCACAGG (서열 번호: 37)
인간 ALK6 전구체 단백질 서열의 대체 아이소폼, 아이소폼 2 (NCBI Ref Seq NP_001243722.1)은 다음과 같다:
1 mgwleelnwq lhifllills mhtra nfldn mllrsagkln vgtkkedges taptprpkvl
61 rckchhhcpe dsvnnicstd gycftmieed dsglpvvtsg clglegsdfq crdtpiphqr
121 rsiecctern ecnkdlhptl pplknrdfvd gpihhralli svtvcslllv liilfcyfry
181 krqetrprys igleqdetyi ppgeslrdli eqsqssgsgs glpllvqrti akqiqmvkqi
241 gkgrygevwm gkwrgekvav kvfftteeas wfreteiyqt vlmrhenilg fiaadikgtg
301 swtqlylitd yhengslydy lksttldaks mlklayssvs glchlhteif stqgkpaiah
361 rdlksknilv kkngtcciad lglavkfisd tnevdippnt rvgtkrympp evldeslnrn
421 hfqsyimadm ysfglilwev arrcvsggiv eeyqlpyhdl vpsdpsyedm reivcikklr
481 psfpnrwssd eclrqmgklm tecwahnpas rltalrvkkt lakmsesqdi kl (서열 번호: 91)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 ALK6 폴리펩티드 서열 (아이소폼 2)은 다음과 같다:
NFLDNMLLRSAGKLNVGTKKEDGESTAPTPRPKVLRCKCHHHCPEDSVNNICSTDGYCFTMIEEDDSGLPVVTSGCLGLEGSDFQCRDTPIPHQRRSIECCTERNECNKDLHPTLPPLKNRDFVDGPIHHR (서열 번호: 92)
인간 ALK6 전구체 단백질 (아이소폼 2)을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며, Genbank 기준 서열 XM_001256793.1의 뉴클레오티드 22-1617에 상응한다. 신호 서열은 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
ATGGGTTGGCTGGAAGAACTAAACTGGCAGCTTCACATTTTCTTGCTCATTCTTCTCTCTATGCACACAAGGGCA AACTTCCTTGATAACATGCTTTTGCGAAGTGCAGGAAAATTAAATGTGGGCACCAAGAAAGAGGATGGTGAGAGTACAGCCCCCACCCCCCGTCCAAAGGTCTTGCGTTGTAAATGCCACCACCATTGTCCAGAAGACTCAGTCAACAATATTTGCAGCACAGACGGATATTGTTTCACGATGATAGAAGAGGATGACTCTGGGTTGCCTGTGGTCACTTCTGGTTGCCTAGGACTAGAAGGCTCAGATTTTCAGTGTCGGGACACTCCCATTCCTCATCAAAGAAGATCAATTGAATGCTGCACAGAAAGGAACGAATGTAATAAAGACCTACACCCTACACTGCCTCCATTGAAAAACAGAGATTTTGTTGATGGACCTATACACCACAGGACTCATGACAGAATGCTGGGCTCACAATCCTGCATCAAGGCTGACAGCCCTGCGGGTTAAGAAAACACTTGCCAAAATGTCAGAGTCCCAGGACATTAAACTC (서열 번호: 93)
프로세스된 세포외 ALK6 폴리펩티드를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
AACTTCCTTGATAACATGCTTTTGCGAAGTGCAGGAAAATTAAATGTGGGCACCAAGAAAGAGGATGGTGAGAGTACAGCCCCCACCCCCCGTCCAAAGGTCTTGCGTTGTAAATGCCACCACCATTGTCCAGAAGACTCAGTCAACAATATTTGCAGCACAGACGGATATTGTTTCACGATGATAGAAGAGGATGACTCTGGGTTGCCTGTGGTCACTTCTGGTTGCCTAGGACTAGAAGGCTCAGATTTTCAGTGTCGGGACACTCCCATTCCTCATCAAAGAAGATCAATTGAATGCTGCACAGAAAGGAACGAATGTAATAAAGACCTACACCCTACACTGCCTCCATTGAAAAACAGAGATTTTGTTGATGGACCTATACACCACAGG (서열 번호: 94)
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 발명의 용도에 이용되는 ALK6 폴리펩티드들 (가령, ALK6 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체들과 이의 용도들)은 가용성 (가령, ALK6의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 ALK6 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성의 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 34, 35, 91, 또는 88의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 34, 35, 91, 또는 92의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 ALK7 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들에 관계한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂ALK7＂는 임의의 종으로부터 그리고 이 유발 또는 다른 변형에 의해 그러한 ALK7 단백질로부터 유래된 변이체로부터 액티빈 수용체-유사 키나제-7 단백질의 패밀리를 나타낸다. ALK7에 대한 언급은 현재 확인된 형태중 하나를 참조로 한다. ALK7 패밀리의 구성요소는 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예상 세린/트레오닌 키나제 활성을 갖는 세포질 도메인을 포함하는 막경유 단백질이다.
용어 ＂ALK7 폴리펩티드＂는 뿐만 아니라 ALK7 패밀리 구성원의 자연 발생적 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 뿐만 아니라, 유용한 활성을 보유하는 그의 임의의 변이체 (돌연변이체, 단편, 융합체 및 펩티드 유사체를 포함함)를 포함한다. 본원에 기술된 모든 ALK7-관련 폴리펩티드에 대한 아미노산의 넘버링은 달리 명시하지 않는 한, 하기에 제공된 인간 ALK7 전구체 단백질 서열 (서열 번호: 38)의 번호에 기초한다.
인간 ALK7의 4가지 자연 발생적 아이소폼이 설명되었다. 기본형 인간 ALK7 아이소폼 1 전구체 단백질 (NCBI Ref Seq NP_660302.2)의 서열은 다음과 같다:
1 mtralcsalr qallllaaaa elspglkcvc llcdssnftc qtegacwasv mltngkeqvi
61 kscvslpeln aqvfchssnn vtkteccftd fcnnitlhlp taspnapklg pmelaiiitv
121 pvcllsiaam ltvwacqgrq csyrkkkrpn veeplsecnl vnagktlkdl iydvtasgsg
181 sglpllvqrt iartivlqei vgkgrfgevw hgrwcgedva vkifssrder swfreaeiyq
241 tvmlrhenil gfiaadnkdn gtwtqlwlvs eyheqgslyd ylnrnivtva gmiklalsia
301 sglahlhmei vgtqgkpaia hrdiksknil vkkcetcaia dlglavkhds ilntidipqn
361 pkvgtkryma pemlddtmnv nifesfkrad iysvglvywe iarrcsvggi veeyqlpyyd
421 mvpsdpsiee mrkvvcdqkf rpsipnqwqs cealrvmgri mrecwyanga arltalrikk
481 tisqlcvked cka (서열 번호: 38)
신호 펩티드는 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
프로세스된 세포외 ALK7 아이소폼 1 폴리펩티드 서열은 다음과 같다:
ELSPGLKCVCLLCDSSNFTCQTEGACWASVMLTNGKEQVIKSCVSLPELNAQVFCHSSNNVTKTECCFTDFCNNITLHLPTASPNAPKLGPME (서열 번호: 39)
인간 ALK7 전구체 단백질을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 40), 이는 Genbank 기준 서열 NM_145259.2의 뉴클레오티드 244-1722에 상응한다. 신호 서열은 한줄 밑줄로 표시되어 있고; 세포외 영역은 굵은 체로 표시된다.
ATGACCCGGGCGCTCTGCTCAGCGCTCCGCCAGGCTCTCCTGCTGCTCGCAGCGGCCGCC GAGCTCTCGCCAGGACTGAAGTGTGTATGTCTTTTGTGTGATTCTTCAAACTTTACCTGCCAAACAGAAGGAGCATGTTGGGCATCAGTCATGCTAACCAATGGAAAAGAGCAGGTGATCAAATCCTGTGTCTCCCTTCCAGAACTGAATGCTCAAGTCTTCTGTCATAGTTCCAACAATGTTACCAAAACCGAATGCTGCTTCACAGATTTTTGCAACAACATAACACTGCACCTTCCAACAGCATCACCAAATGCCCCAAAACTTGGACCCATGGAGAGTCATGGGGAGAATAATGCGTGAGTGTTGGTATGCCAACGGAGCGGCCCGCCTAACTGCTCTTCGTATTAAGAAGACTATATCTCAACTTTGTGTCAAAGAAGACTGCAAAGCC (서열 번호: 40)
프로세스된 세포외 ALK7 폴리펩티드 (아이소폼 1)를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다:
GAGCTCTCGCCAGGACTGAAGTGTGTATGTCTTTTGTGTGATTCTTCAAACTTTACCTGCCAAACAGAAGGAGCATGTTGGGCATCAGTCATGCTAACCAATGGAAAAGAGCAGGTGATCAAATCCTGTGTCTCCCTTCCAGAACTGAATGCTCAAGTCTTCTGTCATAGTTCCAACAATGTTACCAAAACCGAATGCTGCTTCACAGATTTTTGCAACAACATAACACTGCACCTTCCAACAGCATCACCAAATGCCCCAAAACTTGGACCCATGGAG (서열 번호: 41)
인간 ALK7, 아이소폼 2 (NCBI Ref Seq NP_001104501.1)의 대체 아이소폼의 아미노산 서열은 다음과 같이 이의 프로세스된 형태로 제시되고 (서열 번호: 301), 이때 세포외 도메인은 굵은 체로 표시된다.
1 mltngkeqvi kscvslpeln aqvfchssnn vtkteccftd fcnnitlhlp taspnapklg
61 pmelaiiitv pvcllsiaam ltvwacqgrq csyrkkkrpn veeplsecnl vnagktlkdl
121 iydvtasgsg sglpllvqrt iartivlqei vgkgrfgevw hgrwcgedva vkifssrder
181 swfreaeiyq tvmlrhenil gfiaadnkdn gtwtqlwlvs eyheqgslyd ylnrnivtva
241 gmiklalsia sglahlhmei vgtqgkpaia hrdiksknil vkkcetcaia dlglavkhds
301 ilntidipqn pkvgtkryma pemlddtmnv nifesfkrad iysvglvywe iarrcsvggi
361 veeyqlpyyd mvpsdpsiee mrkvvcdqkf rpsipnqwqs cealrvmgri mrecwyanga
421 arltalrikk tisqlcvked cka (서열 번호: 301)
세포외 ALK7 폴리펩티드 (아이소폼 2)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MLTNGKEQVIKSCVSLPELNAQVFCHSSNNVTKTECCFTDFCNNITLHLPTASPNAPKLGPME (서열 번호: 302).
프로세스된 ALK7 폴리펩티드 (아이소폼 2)을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며 (서열 번호: 303), 이는 NCBI 기준 서열 NM_001111031.1의 뉴클레오티드 279-1607에 상응한다. 세포외 도메인은 굵은 체로 표시된다.
atgctaaccaatggaaaagagcaggtgatcaaatcctgtgtctcccttccagaactgaatgctcaagtcttctgtcatagttccaacaatgttaccaaaaccgaatgctgcttcacagatttttgcaacaacataacactgcaccttccaacagcatcaccaaatgccccaaaacttggacccatggagagtcatggggagaataatgcgtgagtgttggtatgccaacggagcggcccgcctaactgctcttcgtattaagaagactatatctcaactttgtgtcaaagaagactgcaaagcc (서열 번호: 303)
세포외 ALK7 폴리펩티드 (아이소폼 2)를 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다: (서열 번호: 304):
atgctaaccaatggaaaagagcaggtgatcaaatcctgtgtctcccttccagaactgaatgctcaagtcttctgtcatagttccaacaatgttaccaaaaccgaatgctgcttcacagatttttgcaacaacataacactgcaccttccaacagcatcaccaaatgccccaaaacttggacccatggag (서열 번호: 304)
대체 인간 ALK7 전구체 단백질, 아이소폼 3 (NCBI Ref Seq NP_001104502.1)의 아미노산 서열은 다음과 같고(서열 번호: 305), 여기에서 신호 펩티드는 한줄 밑줄로 나타낸다.
1 mtralcsalr qallllaaaa elspglkcvc llcdssnftc qtegacwasv mltngkeqvi
61 kscvslpeln aqvfchssnn vtkteccftd fcnnitlhlp tglpllvqrt iartivlqei
121 vgkgrfgevw hgrwcgedva vkifssrder swfreaeiyq tvmlrhenil gfiaadnkdn
181 gtwtqlwlvs eyheqgslyd ylnrnivtva gmiklalsia sglahlhmei vgtqgkpaia
241 hrdiksknil vkkcetcaia dlglavkhds ilntidipqn pkvgtkryma pemlddtmnv
301 nifesfkrad iysvglvywe iarrcsvggi veeyqlpyyd mvpsdpsiee mrkvvcdqkf
361 rpsipnqwqs cealrvmgri mrecwyanga arltalrikk tisqlcvked cka
(서열 번호: 305)
프로세스된 ALK7 폴리펩티드 (아이소폼 3)의 아미노산 서열은 다음과 같다 (서열 번호: 306). 이 아이소폼은 막경유 도메인이 결여되어 있고, 따라서 전체가 가용성인 것으로 제안된다 (Roberts et al., 2003, Biol Reprod 68:1719-1726). 서열 번호: 306의 N-말단 변이체들은 하기에서 설명된 바와 같이 예측된다.
1 elspglkcvc llcdssnftc qtegacwasv mltngkeqvi kscvslpeln aqvfchssnn
61 vtkteccftd fcnnitlhlp tglpllvqrt iartivlqei vgkgrfgevw hgrwcgedva
121 vkifssrder swfreaeiyq tvmlrhenil gfiaadnkdn gtwtqlwlvs eyheqgslyd
181 ylnrnivtva gmiklalsia sglahlhmei vgtqgkpaia hrdiksknil vkkcetcaia
241 dlglavkhds ilntidipqn pkvgtkryma pemlddtmnv nifesfkrad iysvglvywe
301 iarrcsvggi veeyqlpyyd mvpsdpsiee mrkvvcdqkf rpsipnqwqs cealrvmgri
361 mrecwyanga arltalrikk tisqlcvked cka (서열 번호: 306)
프로세스안된 ALK7 폴리펩티드 전구체 단백질 (아이소폼 3)을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며 (서열 번호: 307), 이는 NCBI 기준 서열 NM_001111032.1의 뉴클레오티드 244-1482에 상응한다. 신호 서열은 직선 밑줄로 표시된다.
atgacccgggcgctctgctcagcgctccgccaggctctcctgctgctcgcagcggccgccaagtatcccaaaccagtggcaaagttgtgaagcactccgagtcatggggagaataatgcgtgagtgttggtatgccaacggagcggcccgcctaactgctcttcgtattaagaagactatatctcaactttgtgtcaaagaagactgcaaagcc (서열 번호: 307)
프로세스된 ALK7 폴리펩티드 (아이소폼 3)을 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다 (서열 번호: 308):
aagtatcccaaaccagtggcaaagttgtgaagcactccgagtcatggggagaataatgcgtgagtgttggtatgccaacggagcggcccgcctaactgctcttcgtattaagaagactatatctcaactttgtgtcaaagaagactgcaaagcc (서열 번호: 308)
대체 인간 ALK7 전구체 단백질, 아이소폼 4 (NCBI Ref Seq NP_001104503.1)의 아미노산 서열은 다음과 같고(서열 번호: 309), 여기에서 신호 펩티드는 한줄 밑줄로 나타낸다.
1 mtralcsalr qallllaaaa elspglkcvc llcdssnftc qtegacwasv mltngkeqvi
61 kscvslpeln aqvfchssnn vtkteccftd fcnnitlhlp tdngtwtqlw lvseyheqgs
121 lydylnrniv tvagmiklal siasglahlh meivgtqgkp aiahrdiksk nilvkkcetc
181 aiadlglavk hdsilntidi pqnpkvgtkr ymapemlddt mnvnifesfk radiysvglv
241 yweiarrcsv ggiveeyqlp yydmvpsdps ieemrkvvcd qkfrpsipnq wqscealrvm
301 grimrecwya ngaarltalr ikktisqlcv kedcka (서열 번호: 309)
프로세스된 ALK7 폴리펩티드 (아이소폼 4)의 아미노산 서열은 다음과 같다 (서열 번호: 310). ALK7 아이소폼 3과 같이, 아이소폼 4는 막경유 도메인이 결여되어 있고, 따라서 전체가 가용성인 것으로 제안된다 (Roberts et al., 2003, Biol Reprod 68:1719-1726). 서열 번호: 310의 N-말단 변이체들은 하기에서 설명된 바와 같이 예측된다.
1 elspglkcvc llcdssnftc qtegacwasv mltngkeqvi kscvslpeln aqvfchssnn
61 vtkteccftd fcnnitlhlp tdngtwtqlw lvseyheqgs lydylnrniv tvagmiklal
121 siasglahlh meivgtqgkp aiahrdiksk nilvkkcetc aiadlglavk hdsilntidi
181 pqnpkvgtkr ymapemlddt mnvnifesfk radiysvglv yweiarrcsv ggiveeyqlp
240 yydmvpsdps ieemrkvvcd qkfrpsipnq wqscealrvm grimrecwya ngaarltalr
301 ikktisqlcv kedcka (서열 번호: 310)
프로세스안된 ALK7 폴리펩티드 전구체 단백질 (아이소폼 4)을 인코드하는 핵산 서열은 하기에 나타내며(서열 번호: 311), 이는 뉴클레오티드 244-1244 of NCBI 기준 서열 NM_001111033.1의 뉴클레오티드 244-1244에 상응한다. 신호 서열은 직선 밑줄로 표시된다.
atgacccgggcgctctgctcagcgctccgccaggctctcctgctgctcgcagcggccgccgagctctcgccaggactgaagtgtgtatgtcttttgtgtgattcttcaaactttacctgccaaacagaaggagcatgttgggcatcagtcatgctaaccaatggaaaagagcaggtgatcaaatcctgtgtctcccttccagaactgaatgctcaagtcttctgtcatagttccaacaatgttaccaaaaccgaatgctgcttcacagatttttgcaacaacataacactgcaccttccaacagataatggaacttggactcaactttggctggtatctgaatatcatgaacagggctccttatatgactatttgaatagaaatatagtgaccgtggctggaatgatcaagctggcgctctcaattgctagtggtctggcacaccttcatatggagattgttggtacacaaggtaaacctgctattgctcatcgagacataaaatcaaagaatatcttagtgaaaaagtgtgaaacttgtgccatagcggacttagggttggctgtgaagcatgattcaatactgaacactatcgacatacctcagaatcctaaagtgggaaccaagaggtatatggctcctgaaatgcttgatgatacaatgaatgtgaatatctttgagtccttcaaacgagctgacatctattctgttggtctggtttactgggaaatagcccggaggtgttcagtcggaggaattgttgaggagtaccaattgccttattatgacatggtgccttcagatccctcgatagaggaaatgagaaaggttgtttgtgaccagaagtttcgaccaagtatcccaaaccagtggcaaagttgtgaagcactccgagtcatggggagaataatgcgtgagtgttggtatgccaacggagcggcccgcctaactgctcttcgtattaagaagactatatctcaactttgtgtcaaagaagactgcaaagcctaa (서열 번호: 311)
프로세스된 ALK7 폴리펩티드 (아이소폼 4)을 인코드하는 핵산 서열은 다음과 같다 (서열 번호: 312):
gagctctcgccaggactgaagtgtgtatgtcttttgtgtgattcttcaaactttacctgccaaacagaaggagcatgttgggcatcagtcatgctaaccaatggaaaagagcaggtgatcaaatcctgtgtctcccttccagaactgaatgctcaagtcttctgtcatagttccaacaatgttaccaaaaccgaatgctgcttcacagatttttgcaacaacataacactgcaccttccaacagataatggaacttggactcaactttggctggtatctgaatatcatgaacagggctccttatatgactatttgaatagaaatatagtgaccgtggctggaatgatcaagctggcgctctcaattgctagtggtctggcacaccttcatatggagattgttggtacacaaggtaaacctgctattgctcatcgagacataaaatcaaagaatatcttagtgaaaaagtgtgaaacttgtgccatagcggacttagggttggctgtgaagcatgattcaatactgaacactatcgacatacctcagaatcctaaagtgggaaccaagaggtatatggctcctgaaatgcttgatgatacaatgaatgtgaatatctttgagtccttcaaacgagctgacatctattctgttggtctggtttactgggaaatagcccggaggtgttcagtcggaggaattgttgaggagtaccaattgccttattatgacatggtgccttcagatccctcgatagaggaaatgagaaaggttgtttgtgaccagaagtttcgaccaagtatcccaaaccagtggcaaagttgtgaagcactccgagtcatggggagaataatgcgtgagtgttggtatgccaacggagcggcccgcctaactgctcttcgtattaagaagactatatctcaactttgtgtcaaagaagactgcaaagcctaa (서열 번호: 312)
렛에서 전장(full-length) 전장 ALK7 (아이소폼 1)의 신호서열 (NCBI 기준 서열 NP_620790.1 참고)과 인간과 렛 ALK7 간의 높은 수준의 서열 동일성에 근거하여, 인간 ALK7 아이소폼 1의 프로세스된 형태는 다음과 같을 것으로 예상된다 (서열 번호: 313).
1 lkcvcllcds snftcqtega cwasvmltng keqvikscvs lpelnaqvfc hssnnvtkte
61 ccftdfcnni tlhlptaspn apklgpme (서열 번호: 313)
프로세스된 ALK7 아이소폼 1의 활성 변이체들이 예측되는데, 이때 서열 번호: 39는 N-말단에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개 아미노산이 절두되며, 서열 번호: 313은 N-말단에서 1 또는 2개 아미노산이 절두된다. 서열 번호: 313과 일관되게, 인간 ALK7 아이소폼 3 (서열 번호: 306) 및 인간 ALK7 아이소폼 4 (서열 번호: 310)의 프로세스된 형태에서 루신은 N-말단 아미노산으로 추가 예상된다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체에 관계하며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 바람직하게는 본 발명의 용도에 이용되는 ALK7 폴리펩티드들 (가령, ALK7 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체 복합체들과 이의 용도들)은 가용성 (가령, ALK7의 세포외 도메인)이다. 다른 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 용도에 이용되는 ALK7 폴리펩티드들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하고 및/또는 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성의 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 38, 39, 112, 114, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 405, 또는 406의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 38, 39, 112, 114, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 405, 또는 406의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드로 구성되거나, 또는 필수적으로 구성된다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIB 이형다합체는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드들은 산성 아미노산 (가령, 자연 발생적 D 또는 E 아미노산 또는 인공적인 산성 아미노산)을 포함하지 않는다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIB 이형다합체는 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 ActRIIB 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ActRIIB 이형다합체는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드들은 산성 아미노산 (가령, 자연 발생적 D 또는 E 아미노산 또는 인공적인 산성 아미노산)을 포함하지 않는다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK2:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK2 및/또는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ActRIIB 이형다합체는 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK2 및 ActRIIB 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK2:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ActRIIB 이형다합체는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드들은 산성 아미노산 (가령, 자연 발생적 D 또는 E 아미노산 또는 인공적인 산성 아미노산)을 포함하지 않는다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK3:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK3 및/또는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ActRIIB 이형다합체는 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK3 및 ActRIIB 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK3:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469 및 470중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIB 이형다합체는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드들은 산성 아미노산 (가령, 자연 발생적 D 또는 E 아미노산 또는 인공적인 산성 아미노산)을 포함하지 않는다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK4:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK4 및/또는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIB 이형다합체는 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK4 및 ActRIIB 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK4:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIB 이형다합체는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드들은 산성 아미노산 (가령, 자연 발생적 D 또는 E 아미노산 또는 인공적인 산성 아미노산)을 포함하지 않는다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK5:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK5 및/또는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIB 이형다합체는 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK5 및 ActRIIB 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK5:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473 및 474중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 91의 아미노산 62-132에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ActRIIB 이형다합체는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드들은 산성 아미노산 (가령, 자연 발생적 D 또는 E 아미노산 또는 인공적인 산성 아미노산)을 포함하지 않는다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK6:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK6 및/또는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ActRIIB 이형다합체는 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK6 및 ActRIIB 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK6:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 38, 305, 및 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:ActRIIB 이형다합체는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB 폴리펩티드들은 산성 아미노산 (가령, 자연 발생적 D 또는 E 아미노산 또는 인공적인 산성 아미노산)을 포함하지 않는다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK7:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK7 및/또는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:ActRIIB 이형다합체는 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK7 및 ActRIIB 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK7:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 ActRIIA의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 ActRIIA 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK2:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK2 및/또는 ActRIIA의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK2 및 ActRIIA 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK2:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK3:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK3 및/또는 ActRIIA의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK3 및 ActRIIA 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK3:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK4:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK4 및/또는 ActRIIA의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK4 및 ActRIIA 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK4:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK5:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK5 및/또는 ActRIIA의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK5 및 ActRIIA 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK5:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ActRIIB 이형다합체는 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473 및 474중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 91의 아미노산 62-132에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK6:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK6 및/또는 ActRIIA의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK6 및 ActRIIA 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK6:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:ActRIIB 이형다합체들은 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 38, 305, 및 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK7:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK7 및/또는 ActRIIA의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK7 및 ActRIIA 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK7:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:TGFBRII 이형다합체는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461 및 462중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 TGFBRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 TGFBRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, ALK1:TGFBRII 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:TGFBRII 이형다합체는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461 및 462중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK2:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK2 및/또는 TGFBRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK2 및 TGFBRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK2:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:TGFBRII 이형다합체는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461 및 462중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK3:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK3 및/또는 TGFBRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK3 및 TGFBRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK3:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461 및 462중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK4:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK4 및/또는 TGFBRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK4 및 TGFBRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK4:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, ALK4:TGFBRII 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK5폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461 및 462중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK5:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK5 및/또는 TGFBRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK5 및 TGFBRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK5:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, ALK5:TGFBRII 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:TGFBRII 이형다합체는 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473 및 474중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 91의 아미노산 62-132에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461 및 462중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK6:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK6 및/또는 TGFBRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK6 및 TGFBRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK6:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, ALK6:TGFBRII 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:TGFBRII 이형다합체들은 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 38, 305, 및 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461 및 462중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK7:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK7 및/또는 TGFBRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK7 및 TGFBRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK7:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, ALK7:TGFBRII 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:MISRII 이형다합체는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457 및 458중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 50, 75 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:MISRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 MISRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:MISRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:MISRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 MISRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:MISRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:MISRII이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:MISRII 이형다합체는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457 및 458중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 50, 75 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK2:MISRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK2 및/또는 MISRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:MISRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:MISRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK2 및 MISRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK2:MISRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:MISRII이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:MISRII 이형다합체는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457 및 458중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 50, 75 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK3:MISRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK3 및/또는 MISRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:MISRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:MISRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK3 및 MISRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK3:MISRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:MISRII이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ActRIIA 이형다합체는 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457 및 458중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 50, 75 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK4:MISRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK4 및/또는 MISRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:MISRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:MISRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK4 및 MISRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK4:MISRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:MISRII이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:MISRII 이형다합체는 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK5폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457 및 458중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 50, 75 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK5:MISRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK5 및/또는 MISRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:MISRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:MISRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK5 및 MISRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK5:MISRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:MISRII이형다합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:MISRII 이형다합체는 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473 및 474중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 91의 아미노산 62-132에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457 및 458중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 50, 75 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK6:MISRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK6 및/또는 MISRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:MISRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:MISRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK6 및 MISRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK6:MISRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:MISRII이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:MISRII 이형다합체들은 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 38, 305, 및 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457 및 458중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 50, 75 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK7:MISRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK6 및/또는 MISRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:MISRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:MISRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK7 및 MISRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK7:MISRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:MISRII 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 BMPRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:BMPRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 BMPRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK2:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK2 및/또는 BMPRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:BMPRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK2 및 BMPRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK2:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK3:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK3 및/또는 BMPRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:BMPRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK3 및 BMPRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK3:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:BMPRII이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK4:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK4 및/또는 BMPRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:BMPRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK4 및 BMPRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK4:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK5폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK5:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK5 및/또는 BMPRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:BMPRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK5 및 BMPRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK5:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473 및 474중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102 또는 서열 번호: 91의 아미노산 62-132에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK6:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK6 및/또는 BMPRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:BMPRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK6 및 BMPRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK6:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:BMPRII 이형다합체들은 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 38, 305, 및 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:BMPRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK7:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK7 및/또는 BMPRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:BMPRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK7 및 BMPRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK7:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK7:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 ALK2의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 ALK2동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK2이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 ALK2의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 ALK2동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:ALK2 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK2이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK3 이형다합체는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK3 이형다합체는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:ALK3 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 ALK3의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK3 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK3 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 ALK3 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:ALK3 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK3이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK4 이형다합체는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK4이형다합체들은 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:ALK4 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 ALK4의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK4 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK4 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 ALK4 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:ALK4 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK4이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK4 이형다합체는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK4이형다합체들은 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:ALK4 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 ALK4의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK4 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK4 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 ALK4 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:ALK4 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK4이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK5 이형다합체는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK5 이형다합체들은 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK5폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:ALK5 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 ALK5의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK5 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK5 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 ALK5 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:ALK5 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK5이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK6 이형다합체는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK6 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102 또는 서열 번호:91의 아미노산 62-132의 아미노산에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:ALK6 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK1 및/또는 ALK6의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK6 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK6 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 ALK6 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:ALK6 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK6이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK7 이형다합체는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463 및 464중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK1 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK7이형이합체는 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 38, 305, 및 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK1:ALK7 이형이합체는 가용성 (가령, ALK1 및/또는 ALK7의 세포외 도메인을 포함)이다. 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK7 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK7 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK1 및 ALK7 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK1:ALK7 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK1:ALK7이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK3 이형다합체는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK3 이형다합체는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK2:ALK3 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ALK2 및/또는 ALK3의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK3 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK3 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK2 및 ALK3동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK2:ALK3 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK3 이형이합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK4 이형다합체는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK4이형다합체들은 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK2:ALK4 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK2 및/또는 ALK4의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK4 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK4 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK2 및 ALK4 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK2:ALK4 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK4 이형이합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK5 이형다합체는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK5이형다합체들은 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK2:ALK5 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK2 및/또는 ALK5의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK5 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK5 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK2 및 ALK5 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK2:ALK5 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK5 이형이합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK6 이형다합체는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK6 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102 또는 서열 번호:91의 아미노산 62-132의 아미노산에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK2:ALK6 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK2 및/또는 ALK6의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK6 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK6 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK2 및 ALK6 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK2:ALK6 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK6 이형이합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK7 이형다합체는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465 및 466중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK7이형이합체는 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 38, 305, 및 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK2:ALK7 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK2 및/또는 ALK7의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK7 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK7 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK2 및 ALK7 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK2:ALK7 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK2:ALK7 이형이합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK4 이형다합체는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK4이형다합체들은 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK3:ALK4 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK3 및/또는 ALK4의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK4 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK4 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK3 및 ALK4 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK3:ALK4 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK4이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK5 이형다합체는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK5 이형다합체들은 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK3:ALK5 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK3 및/또는 ALK5의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK5 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK5 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK3 및 ALK5 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK3:ALK5 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK5이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK6 이형다합체는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK6 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102 또는 서열 번호:91의 아미노산 62-132의 아미노산에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK3:ALK6 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK3 및/또는 ALK6의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK6 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK6 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK3 및 ALK6 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK3:ALK6 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK6이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK7 이형다합체는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK7이형이합체는 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 38, 305, 및 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK3:ALK7 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK3 및/또는 ALK7의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK7 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK7 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK3 및 ALK7 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK3:ALK7 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK3:ALK7 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK5 이형다합체들은 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK5 이형다합체들은 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK4:ALK5 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK4 및/또는 ALK5의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK5 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK5 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK4 및 ALK5 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK4:ALK5 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK5 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK6 이형다합체들은 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK6 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102 또는 서열 번호:91의 아미노산 62-132의 아미노산에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK4:ALK6 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK4 및/또는 ALK6의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK6 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK6 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK4 및 ALK6 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK4:ALK6 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK6 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK7 이형다합체들은 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK4 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK7이형이합체는 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 38, 305, 및 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK4:ALK7 이형이합체는 가용성 (가령, ALK4 및/또는 ALK7의 세포외 도메인을 포함)이다. 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK7 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK7 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK4 및 ALK7 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK4:ALK7 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK4:ALK7 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ALK6 이형다합체들은 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ALK6 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102 또는 서열 번호:91의 아미노산 62-132의 아미노산에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK5:ALK6 이형다합체들은 가용성이다 (가령, ALK5 및/또는 ALK6의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ALK6 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ALK6 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK5 및 ALK6 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK5:ALK6 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ALK6 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ALK7 이형다합체들은 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK5 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ALK7 이형이합체는 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 38, 305, 및 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK5:ALK7 이형이합체는 가용성 (가령, ALK5 및/또는 ALK7의 세포외 도메인을 포함)이다. 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ALK7 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ALK7 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK5 및 ALK7 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK5:ALK7 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK5:ALK7 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ALK7 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102 또는 서열 번호:91의 아미노산 62-132의 아미노산에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK6 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ALK7 이형이합체는 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 38, 305, 및 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ALK7 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ALK6:ALK7 이형이합체는 가용성 (가령, ALK5 및/또는 ALK7의 세포외 도메인을 포함)이다. 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ALK7 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ALK7 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ALK6 및 ALK7 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ALK6:ALK7 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ALK6:ALK7 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:ActRIIB 이형다합체는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:ActRIIB 이형다합체는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109 또는 서열 번호: 1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ActRIIA:ActRIIA 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ActRIIA 및/또는 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:ActRIIB 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ActRIIA 및 ActRIIB 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ActRIIA:ActRIIB 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:ActRIIB 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:BMPRII 이형다합체는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:BMPRII 이형다합체는 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 BMPRII폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ActRIIA:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ActRIIA 및/또는 BMPRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:BMPRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ActRIIA 및 BMPRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ActRIIA:BMPRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:BMPRII 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:TGFBRII 이형다합체는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:TGFBRII 이형다합체들은 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461 및 462중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ActRIIA:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ActRIIA 및/또는 TGFBRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:TGFBRII 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ActRIIA 및 TGFBRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ActRIIA:TGFBRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:TGFBRII 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:MISRII 이형다합체는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIA 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457 및 458중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 50, 75 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ActRIIA:MISRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ActRIIA 및/또는 MISRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:MISRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:MISRII 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ActRIIA 및 MISRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ActRIIA:MISRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIA:MISRII 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:BMPRII 이형다합체는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109 또는 서열 번호: 1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:BMPRII 이형다합체는 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의ActRIIB:BMPRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ActRIIB 및/또는 BMPRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:BMPRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:BMPRII 이형다합체 복합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ActRIIB 및 BMPRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ActRIIB:BMPRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:BMPRII 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:TGFBRII 이형다합체는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109 또는 서열 번호: 1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:TGFBRII 이형다합체들은 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461 및 462중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ActRIIB:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ActRIIB 및/또는 TGFBRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:TGFBRII 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ActRIIB 및 TGFBRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ActRIIB:TGFBRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:TGFBRII 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:MISRII 이형다합체는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453 및 454중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109 또는 서열 번호: 1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 ActRIIB 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457 및 458중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 50, 75 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 ActRIIB:MISRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, ActRIIB 및/또는 MISRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:MISRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:MISRII 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, ActRIIB 및 MISRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 ActRIIB:MISRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 ActRIIB:MISRII 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 BMPRII:TGFBRII 이형다합체는 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 BMPRII폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 BMPRII:TGFBRII 이형다합체들은 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461 및 462중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 BMPRII:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, BMPRII 및/또는 TGFBRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 BMPRII:TGFBRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 BMPRII:TGFBRII 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, BMPRII 및 TGFBRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 BMPRII:TGFBRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 BMPRII:TGFBRII 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 BMPRII:TGFBRII 이형다합체는 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 BMPRII 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 BMPRII:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457 및 458중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 50, 75 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 BMPRII:MISRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, BMPRII 및/또는 MISRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 BMPRII:MISRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 BMPRII:MISRII 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, BMPRII 및 MISRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 BMPRII:MISRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 BMPRII:MISRII 이형다합체는 이형이합체이다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 이형다합체에 관계하는데, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들, 및 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드가 포함되며, 여기에는 이의 단편들, 기능성 변이체들 그리고 변형된 형태들이 포함된다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGFBRII:MISRII 이형다합체들은 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461 및 462중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 TGFBRII 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGFBRII:MISRII 이형다합체 복합체들은 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457 및 458중 임의의 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 50, 75 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 기본적으로 구성된 최소한 하나의 MISRII 폴리펩티드를 포함한다. 바람직하게는 본 명세서의 TGFBII:MISRII 이형다합체 복합체들은 가용성이다 (가령, TGFBII 및/또는 MISRII의 세포외 도메인을 포함한다). 다른 바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGFBRII:MISRII 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하고 및/또는 이의 활성 (가령, Smad 2/3 및/또는 Smad 1/5/8 신호생성 유도)을 억제(길항)한다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGFBRII:MISRII 이형다합체들은 이들의 대응하는 동형다합체 복합체들 (가령, TGFBRII 및 MISRII 동형다합체)와 비교하여 상이한 리간드 결합 특이성/프로파일을 갖는다. 본 명세서의 TGFBRII:MISRII 이형다합체들은 가령, 이형이합체, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함한다. 특정 선호적인 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGFBRII:MISRII 이형다합체는 이형이합체이다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 치료 효과 또는 안정성을 강화시킬 목적으로(가령, 생체내 반감기 및 단백질분해에 대한 저항성), TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 (가령, ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7) 및/또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 (가령, ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII)의 구조를 변경시켜 기능적 변이체의 제조를 고려한다. 아미노산 치환, 결손, 추가, 또는 이의 조합들에 의해 변이체들이 만들어질 수 있다. 예를 들면, 류신을 이소류신 또는 발린으로 치환, 아스파르테이트를 글루탐산염으로 치환, 트레오닌을 세린으로 치환, 또는 아미노산을 구조적으로 관련된 아미노산 (가령, 보존 돌연변이)으로 단리된 치환은 생성 분자의 생물학적 활성에 주요한 영향을 주지 않을 것으로 합리적으로 예측할 수 있다. 보존 치환은 아미노산 측쇄가 관련된 아미노산 패밀리 안에서 일어나는 것이다. 본 명세서의 폴리펩티드의 아미노산 서열의 변화로 기능적 동소체가 생성되는 지의 여부는 생성된 변이체 폴리펩티드가 이의 야생형 폴리펩티드와 유사한 방식으로 세포 안에서 반응을 만드는 능력, 또는 예를 들면, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty을 포함하는 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드들에 결합하는 능력을 평가함으로써 용이하게 결정될 수 있다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서는 치료 효과 또는 안정성을 강화시킬 목적으로(가령, 증가된 반감기 및/또는 단백질분해에 대한 증가된 저항성), TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 및/또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 구조를 변경시켜 기능적 변이체의 제조를 고려한다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 이들 폴리펩티드의 당화를 변경시키기 위하여, 본 명세어서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 (가령, ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7) 및/또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 (가령, ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII) 수용체의 특이적 돌연변이를 고려한다. 이러한 돌연변이는 하나 또는 그 이상의 당화 부위, 이를 테면 O-연계된 또는 N-연계된 당화 부위를 도입 또는 제거하도록 선택될 수 있다. 아스파라긴-연계된 당화 인지 부위는 일반적으로 적절한 세포의 당화 효소에 의해 특이적으로 인지되는 삼펩티드 서열, 아스파라긴-X-트레오닌 또는 아스파라긴-X-세린 (여기에서 ＂X＂는 임의의 아미노산임)이다. 이러한 변형은 하나 또는 그 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 상기 폴리펩티드(O-연계된 당화 부위의 경우)에 추가 또는 치환시켜 만들 수도 있다. 당화 인지 부위의 제1 또는 제3 아미노산 위치중 하나 또는 둘 모두에서 다양한 아미노산 치환 또는 결손 (및/또는 제 2 위치에서 아미노산 결손)으로 변형된 삼펩티드 서열에서 비-당화가 초래된다. 폴리펩티드의 탄소화물 모이어티의 수를 증가시키는 다른 수단은 상기 단백질에 화학 또는 효소적으로 글리코시드를 결합시키는 것이다. 이용되는 결합 방식에 따라, 이들 당(들)은 (a) 아르기닌 및 히스티딘; (b) 자유 카르복실기; (c) 자유 술포히드릴기, 이를 테면 시스테인의 기; (d) 자유 히드록실 기, 이를 테면 세린, 트레오닌, 또는 히드록시프롤린; (e) 방향족 잔기, 이를 테면 페닐알라닌, 티로신, 또는 트립토탄의 기; 또는 (f) 글루타민의 아미드 기에 부착될 수 있다. 폴리펩티드 상에 있는 하나 또는 그 이상의 탄수화물 모이어티는 화학적 및/또는 효소적으로 제거될 수 있다. 화학적 탈당화는 예를 들면, 트리플루오로메탄설폰산 또는 이에 등가의 화합물에 대한 폴리펩티드의 노출을 필요할 수 있다. 이 처리는 아미노산 서열을 손상시키지 않으면서, 연계당 (N-아세틸 글루코사민 또는 N-아세틸 갈락토사민)을 제외한 대부분 또는 모든 당을 절단하게 된다. 폴리펩티드상의 탄수화물 모이어티의 효소 절단은 Thotakura et al. [Meth. Enzymol. (1987) 138:350].에서 설명된 바와 같이, 다양한 엔도- 및 엑소-글리코시다제의 사용에 의해 이루어질 수 있다. 포유류, 효모, 곤충 및 식물 세포는 모두 펩티드의 아미노산 서열에 의해 영향을 받을 수 있는 상이한 당화 패턴을 도입시킬 수 있기 때문에 폴리펩티드의 서열은 이용되는 발현계 유형에 따라 적절하게 조정될 수 있다. 일반적으로, 인간에 사용하기 위한 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및 II 수용체 복합체들은 적절한 당화를 제공하는 포유류 세포계, 이를 테면 HEK293 또는 CHO 세포계에서 발현될 수 있지만, 다른 포유류 발현 세포계 또한 마찬가지로 유용할 것으로 예상된다.
본 명세서는 돌연변이체, 특히 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 (가령, ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7) 및/또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 (가령, ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII)의 복합 돌연변이체, 뿐만 아니라 절두 돌연변이체를 만드는 방법을 더 고려한다. 복합 돌연변이체의 푸울은 기능적으로 활성인 (가령, 리간드 결합) TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 서열을 동정하는데 특히 유용하다. 이러한 복합 라이브러리들을 스크리닝하는 목적은 변경된 성질, 이를 테면 변경된 약동학적 또는 변경된 리간드 결합을 갖는 폴리펩티드들 변이체를 만들기 위함을 수도 있다. 다양한 스크리닝 분석이 하기에 제공되며, 이러한 분석을 이용하여 변이체들을 평가할 수 있다. 예를 들면, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및 II 수용체 복합체 변이체들은 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하는 능력, TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드가 TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체에 결합하는 것을 방해하는 능력, 및/또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드에 의해 야기되는 신호생성을 간섭하는 등력에 대하여 스크리닝될 수 있다.
본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체 활성은 예를 들면, 세포-기반 또는 생체내 분석에서 또한 테스트될 수 있다. 예를 들면, 근육 세포에서 근육 생성과 관련된 유전자의 발현 또는 단백질의 활성에 있어서 이형다합체 복합체의 효과가 평가될 수 있다. 필요에 따라 이러한 평가는 하나 또는 그 이상의 재조합 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 단백질 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty) 존재하에 실행될 수 있고, 세포는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및 II 수용체 복합체, 및 임의선택적으로, TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드를 만들기 위하여 형질감염될 수 있다. 유사하게, 본 명세서의 이형다합체 복합체는 마우스 또는 다른 동물에게 투여될 수 있으며, 하나 또는 그 이상의 측정, 이를 테면 근육 형성 및 강도는 당분야에서 인지된 방법들을 이용하여 평가될 수 있다. 유사하게, 이형다합체, 또는 이의 변이체들의 활성은 골모세포, 지방세포, 및/또는 이들 세포의 성생에 임의의 효과를 위한 신경 세포에서 예를 들면, 본 명세서에서 설명된 바와 같이 분석과 당분야의 공통적인 지식에 의해 테스트될 수 있다. SMAD-반응성 리포터 유전자를 이러한 세포계에서 이용하여 하류 신호생성에 대한 효과를 모니터할 수 있다.
기준 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체와 비교하여 선택성이 증가된 또는 전반적으로 효능이 증가된 복합-유도된 변이체가 만들어질 수 있다. 이러한 변이체들은 재조합 DNA 구조체로부터 발현될 때, 유전자 요법 프로토콜에 이용될 수 있다. 유사하게, 돌연변이유발은 대응하는 변형안된 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체와 상당히 상이한 세포내 반감기를 갖는 변이체를 만들 수 있다. 예를 들면, 변형된 단백질은 변형되지 않은 폴리펩티드의 파괴 또는 그렇지 않으면 불활성화를 초래하는 단백질분해 또는 다른 세포 과정에 더 안정적이거나 덜 안정적이될 수 있다. 이러한 변이체 및 이들을 코딩하는 유전자는 폴리펩티드의 반감기를 조절함으로써 폴리 펩티드 복합체 수준을 변경 시키는데 이용될 수 있다. 예를 들면, 짧은 반감기는 더욱 일시적인 생물학적 효과를 일으킬 수 있고, 유도성 발현 시스템의 일부는 세포 안에 재조합 폴리펩티드 복합체 수준을 더 엄밀하게 조절할 수 있다. Fc 융합 단백질에서, 예를 들면, 면역원성, 반감기, 및 용해도를 포함하는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 하나 또는 그 이상의 활성을 변경시키기 위하여 링커(존재한다면) 및/또는 Fc 부분에 돌연변이를 만들 수 있다.
잠재적 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 II 수용체 서열의 최소한 일부분을 포함하는 각 폴리펩티드의 라이브러리를 인코드하는 유전자의 축중 라이브러리에 의해 복합 라이브러리가 만들어질 수 있다. 예를 들면, 합성 올리고뉴클레오티드의 혼합물은 유전자 서열에 효소적으로 결찰되어, 잠재적 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 II 수용체를 인코드하는 뉴클레오티드 서열의 축중 세트는 개별 폴리펩티드로 발현되거나, 또는 대안으로, 더 큰 융합 단백질 (가령, 파아지 디스플레이의 경우)로 발현가능하다.
잠재적 상동체(homologs)의 라이브러리는 축중 올리고뉴클레오티드 서열로부터 만들어질 수 있는 많은 방법들이 있다. 축중 유전자 서열의 화학적 합성은 자동 DNA 합성기에서 실행될 수 있고, 그 다음 합성 유전자는 적절한 발현 벡터 안에 결찰될 수 있다. 축중 올리고뉴클레오티드의 합성은 당분야에 잘 공지되어 있다. 가령, Narang, SA (1983) Tetrahedron 39:3; Itakura et al. (1981) Recombinant DNA, Proc. 3rd Cleveland Sympos. Macromolecules, ed. AG Walton, Amsterdam: Elsevier pp273-289; Itakura et al. (1984) Annu. Rev. Biochem. 53:323; Itakura et al. (1984) Science 198:1056; Ike et al. (1983) Nucleic Acid Res. 11:477 참고. 이러한 기술은 다른 단백질의 유도된 진화에 이용되어 왔다. 가령, Scott et al., (1990) Science 249:386-390; Roberts et al. (1992) PNAS USA 89:2429-2433; Devlin et al. (1990) Science 249: 404-406; Cwirla et al., (1990) PNAS USA 87: 6378-6382; 뿐만 아니라 U.S. 특허 번호: 5,223,409, 5,198,346, 및 5,096,815 참고.
대안으로, 다른 형태의 돌연변이유발을 이용하여 조합 라이브러리를 만들 수 있다. 예를 들면, TGF-베타 슈퍼패밀리 본 명세서의 이형다합체 복합체들이 만들어지고, 예를 들면, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발를 이용한 스크리닝[가령, Ruf et al. (1994) Biochemistry 33:1565-1572; Wang et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:3095-3099; Balint et al. (1993) Gene 137:109-118; Grodberg et al. (1993) Eur. J. Biochem. 218:597-601; Nagashima et al. (1993) J. Biol. Chem. 268:2888-2892; Lowman et al. (1991) Biochemistry 30:10832-10838; 그리고 Cunningham et al. (1989) Science 244:1081-1085], 링커 스캐닝 돌연변이유발 [가령, Gustin et al. (1993) Virology 193:653-660; 그리고 Brown et al. (1992) Mol. Cell Biol. 12:2644-2652; McKnight et al. (1982) Science 232:316], 포화 돌연변이유발 [가령, Meyers et al., (1986) Science 232:613]; PCR 돌연변이유발 [가령, Leung et al. (1989) Method Cell Mol Biol 1:11-19]; 또는 화학적 돌연변이유발을 포함하는 무작위 돌연변이유발[가령, Miller et al. (1992) A Short Course in 박테리아 Genetics, CSHL Press, Cold Spring Harbor, NY; 그리고 Greener et al. (1994) Strategies in Mol Biol 7:32-34]에 의해 단리될 수 있다. 링커 스캐닝 돌연변이유발은 특히 복합적 환경에서 TGF-베타 수퍼 패밀리 유형 I 및/또는 II 수용체 폴리펩티드의 절두된 (생물 활성) 형태를 확인하는 매력적인 방법이다.
점 돌연변이 및 절두에 의해 만들어진 복합 라이브러리의 유전자 산물을 스크리닝하기 위한, 그리고 이와 같은 경우, 특정 성질을 갖는 유전자 산물의 cDNA 라이브러리를 스크리닝하기 위한 광범위한 기술이 당분야에 공지되어 있다. 이러한 기술은 TGF-베타 슈퍼패밀리 본 명세서의 이형다합체 복합체들의 복합 돌연변이유발에 의해 생성된 유전자 라이브러리의 신속한 스크리닝에 일반적으로 적합할 것이다. 큰 유전자 라이브러리를 스크리닝하는 가장 광범위하게 이용되는 기술은 전형적으로 유전자 라이브러리를 복제가능한 발현 벡터에 클로닝하고, 적절한 세포를 벡터의 생성 라이브러리로 형질전환시키고, 원하는 활성의 탐지는 해당 유전자의 산물이 탐지되는 해당 유전자를 인코드하는 벡터를 상대적으로 용이하게 단리할 수 있는 조건하에 복합 유전자를 발현시키는 것을 포함한다. 바람직한 분석에는 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty) 결합 분석 및/또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드-매개된 세포 신호생성 분석이 포함된다.
특정 구체예들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및 II 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 II 수용체 폴리펩티드에 자연적으로 존재하는 임의의 것에 추가하여 해독후-변형을 더 포함할 수 있다. 이러한 변형은 아세틸화, 카르복실화, 당화, 인산화, 지질화 및 아실화를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 그 결과, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및 II 이형다합체 복합체는 비-아미노산 원소, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 지질, 다당류 또는 단당류 및 인산염을 포함할 수 있다. 다른 이형다합체 복합체 변이체의 기능에 대하여 본 명세서에 기재된 바와 같이 이형다합체 복합체의 기능에서 이러한 비-아미노산 요소들의 효과를 테스트할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드가 초기 형태의 폴리펩티드를 절단함으로써 세포에서 생산되는 경우, 해독 후 가공은 또한 단백질의 정확한 폴딩 및/또는 기능에 중요할 수 있다. 상이한 세포들 (가령, CHO, HeLa, MDCK, 293, WI38, NIH-3T3 또는 HEK293)은 이러한 해독후 활성에 대하여 특이적 세포 기전 및 특징들을 보유하고, 그리고 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들 뿐만 아니라 이를 포함하는 이형이합체의 정확한 변형 및 프로세싱을 확보하도록 선택될 수 있다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서의 폴리펩티드들은 최소한 하나의 유형 II 수용체 폴리펩티드에 공유적, 또는 비-공유적으로 연합된 최소한 하나의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체들을 만들 수 있다. 바람직하게는 본 명세서의 폴리펩티드들은 이형이합체성 복합체를 형성하지만, 더욱 고차의 이형이합체 복합체들 (이형이합체), 이를 테면, 이형삼합체, 이형사합체, 및 추가 올리고머 구조를 포함하나, 이에 한정되지 않은 것들이 포함된다 (가령, 도 1, 2, 및 15-17 참고). 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들은 최소한 하나의 다합체화 도메인을 포함한다. 본 명세서에서 공개된 바와 같이, 용어 ＂다합체화 도메인(multimerization domain)＂은 최소한 제 1 폴리펩티드와 최소한 제 2 폴리펩티드 사이에 공유 또는 비-공유 상호작용을 촉진시키는 아미노산 또는 아미노산 서열을 지칭한다. 본 명세서의 폴리펩티드들은 다합체화 도메인에 공유적 또는 비-공유적으로 결합될 수 있다. 바람직하게는 다합체화 도메인은 이형다합체 형성 (가령, 이형이합체 형성)을 촉진시키고, 임의선택적으로 동형다합체 형성 (가령, 동형이합체 형성)을 방해 또는 그렇지 않으면 이의 형성을 선호하지 않고, 이로 인하여 원하는 이형다합체가 증가되도록 하기 위하여, 제 1 폴리펩티드 (가령, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 폴리펩티드)와 제 2 폴리펩티드 (가령, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 폴리펩티드) 간의 상호작용을 촉진시킨다(가령, 도 2 참고).
당 업계에 공지된 많은 방법을 사용하여 본 발명의 TGF-β 수퍼 패밀리 복합체를 생성시킬 수 있다. 예를 들면, 제 1 폴리펩티드 (가령, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 폴리펩티드)에 있는 자연 발생적 아미노산을 자유 티올-함유하는 잔기, 이를 테면 시스테인로 대체하여, 이러한 자유 티올이 제 2 폴리펩티드 (가령, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 폴리펩티드)에 있는 또다른 자유 티올-함유하는 잔기과 반응하고, 이황화결합이 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드들 사이에 형성되도록 함으로써, 비-자연 발생적 이황화결합이 구축될 수 있다. 이형다합체 형성을 촉진시키는 상호작용의 추가 예로는 Kjaergaard et al., WO2007147901에서 설명된 이온 상호작용; Kannan et al., U.S.8,592,562에서 설명된 정전기적 스티어링; Christensen et al., U.S.20120302737에서 설명된 코일드-코일 상호작용; Pack & Plueckthun,(1992) Biochemistry 31: 1579-1584에서 설명된 류진 지퍼; Pack et al., (1993) Bio/Technology 11: 1271-1277에서 설명된 나선-턴-나선 모티프를 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 다양한 세그먼트(segments)의 연계는 가령, 공유 결합 이를 테면 화학적 교차-연계, 펩티드 링커, 이황화물 다리 등을 통하여 얻어지거나, 또는 친화력 상호작용, 이를 테면 아비딘-비오틴 또는 류신 지퍼 기술에 의해 획득될 수 있다.
특정 측면들에 있어서, 다합체화 도메인은 상호작용 쌍의 하나의 성분을 포함할 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 폴리펩티드들은 단백질 복합체들은 제 2 폴리펩티드와 공유 또는 비-공유적으로 연합된 제 1 폴리펩티드를 포함하는 단백질 복합체를 형성할 수 있으며, 이때 제 1 폴리펩티드는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드와 상기 상호작용 쌍(pair)의 제 1 구성요소의 아미노산 서열을 포함하며, 그리고 제 2 폴리펩티드는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 폴리펩티드의 아미노산 서열과 상기 상호작용 쌍의 제 2 구성요소의 아미노산 서열을 포함한다. 상기 상호작용 쌍은 복합체, 구체적으로, 이형이합체 복합체 복합체를 형성하기 위하여 상호작용하는 임의의 2개 폴리펩티드 서열일 수 있지만, 작업 구체예에서는 또한 동형이합체 복합체를 형성하는 상호작용 쌍이 이용될 수도 있다. 쌍의 구성요소의 하나의 구성요소는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 464, 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 466, 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 468, 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 470, 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 472, 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 474, 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 476, 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 452, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 454, 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 456, 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 458, 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462중 임의의 하나의 서열에 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 기본적으로 구성되거나 또는 구성된 폴리펩티드 서열을 포함하는 본 명세서에서 설명된 바와 같이 다음은 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 폴리펩티드에 융합시킬 수 있다. 개선된 성질/활성 이를 테면, 증가된 혈청 반감기를 부여하거나, 또는 개선된 성질/활성을 제공하기 위하여 또다른 모이어티가 부착된 어뎁터로 작용하는 상호작용 쌍이 선택될 수 있다. 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 개선된 성질/활성, 이를 테면 개선된 혈청 반감기를 제공하기 위하여 상호작용 쌍의 한 성분 또는 양쪽 성분에 부착될 수 있다.
상호작용 쌍의 제 1 및 제 2 구성요소는 비대칭 쌍일 수도 있는데, 이것은 구성요소들이 자가-연합보다는 서로 선호적으로 연합된다는 것을 의미한다. 따라서, 비대칭 상호작용 쌍의 제 1 및 제2 구성요소들은 이형이합체 복합체를 만들 수 있다. (가령, 도 2 참고). 대안으로, 상호작용 쌍이 유도되지 않을 수 있는데, 이는 쌍의 구성요소들이 실질적인 선호없이 자가 연합 또는 서로 연합될 수 있고, 따라서 동일하거나 또는 상이한 아미노산 서열을 보유할 수 있다. 따라서, 비유도(unguided) 상호작용 쌍의 제 1 및 제2 구성요소들은 동형이합체 복합체를 만들 수 있다. 임의선택적으로, 상호작용 쌍(가령, 비대칭 쌍 또는 비유도 상호작용 쌍)의 제 1 구성 요소는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소와 공유적으로 연합한다. 임의선택적으로, 상호작용 쌍(가령, 비대칭 쌍 또는 비유도 상호작용 쌍)의 제 1 구성 요소는 상호작용 쌍의 제 2 구성요소와 비-공유적으로 연합한다.
특이적 예로써, 본 명세서는 면역글로불린의 불변 도메인, 이를 테면 면역글로불린의 CH1, CH2, 또는 CH3 도메인 또는 Fc 도메인을 포함하는 폴리펩티드에 융합된 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 폴리펩티드들을 포함하는 융합 단백질을 제공한다. 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 유도된 Fc 도메인이 본 명세서에서 제공된다. CDC 또는 ADCC 활성을 감소시키는 다른 돌연변이들이 공지되어 있고, 집합적으로 이들 임의의 변이체은 본 명세서에 포함되며, 본 명세서의 이형이합체 복합체의 유익한 성분으로 이용될 수 있다. 임의선택적으로, 서열 번호: 208의 IgG1 Fc 도메인은 잔기, 이를 테면 Asp-265, Lys-322, 및 Asn-434 (대응하는 전장 IgG1에 따라 번호매김됨)에서 하나 또는 그 이상의 돌연변이를 갖는다. 특정 경우들에서, 하나 또는 그 이상의 이들 돌연변이 (가령, Asp-265 돌연변이)를 갖는 돌연변이체 Fc 도메인은 야생형 Fc 도메인와 비교하여 Fcγ 수용체에 대한 결합 능력이 감소된다. 다른 경우들에서, 하나 또는 그 이상의 이들 돌연변이 (가령, Asn-434 돌연변이)를 갖는 돌연변이체 Fc 도메인은 야생형 Fc 도메인와 비교하여 MHC 부류 I-관련된 Fc-수용체 (FcRN)에 결합하는 능력이 증가된다.
인간 IgG1 (G1Fc)의 Fc 부분에 이용될 수 있는 고유한 아미노산 서열은 하기에 예시된다 (서열 번호: 208). 점선은 힌지 영역을 나타내며, 직선은 자연 발생적 변이체를 갖는 위치를 나타낸다. 부분적으로, 본 명세서는 서열 번호: 208에 대하여 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 제공한다. G1Fc에서 자연 발생적 변이체는 서열 번호: 208에서 이용된 넘버링 체계에 따라 E134D 및 M136L을 포함할 수 있다(Uniprot P01857 참고).
인간 IgG2 (G2Fc)의 Fc 부분에 이용될 수 있는 고유한 아미노산 서열은 하기에 예시된다 (서열 번호: 209). 점선은 힌지 영역을 나타내며, 이중 밑줄은 이 서열에서 데이터 베이스가 충돌하는 위치를 나타낸다 (UniProt P01859). 부분적으로, 본 명세서는 서열 번호: 209에 대하여 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 제공한다.
인간 IgG3 (G3Fc)의 Fc 부분에 이용도리 수 있는 2가지 예시 아미노산 서열을 하기에 나타낸다. G3Fc의 힌지 영역은 다른 Fc 쇄의 길이의 최대 4배가될 수 있고, 유사한 17개-잔기 세그먼트를 앞세우고, 3개의 동일한 15개-잔기 세그먼트를 포함한다. 하기에 나타낸 제 1 G3Fc 서열(서열 번호: 210)은 단일 15개-잔기 세그먼트로 구성된 짧은 힌지 영역을 포함하며, 반면 제 2 G3Fc 서열 (서열 번호: 211)은 전장 힌지 영역을 포함한다. 각 경우에서, 점선은 힌지 영역을 나타내며, 직선은 UniProt P01859에 따른 자연 발생적 변이체를 갖는 위치를 나타낸다. 부분적으로, 본 명세서는 서열 번호: 210 및 211에 대하여 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 제공한다.
G3Fc (예를 들면, Uniprot P01860)에서 자연 발생적 변이체들은 서열 번호: 210에 이용된 넘버링 체계로 전환될 때 E68Q, P76L, E79Q, Y81F, D97N, N100D, T124A, S169N, S169del, F221Y를 포함하며, 본 명세서는 이들 변이중 하나 또는 그 이상을 함유하는 G3Fc 도메인이 포함된 융합 단백질을 제공한다. 또한, 인간 면역글로불린 IgG3 유전자 (IGHG3)는 상이한 힌지 길이에 의해 특징화되는 구조적 다형태를 나타낸다[Uniprot P01859]. 특히, 변이체 WIS는 대부분의 V 영역과 모든 CH1 영역이 부족하다. 힌지 영역에 정상적으로 존재하는 11개에 추가하여 위치 7에 여분의 쇄간 이황화결합이 있다. 변이체 ZUC는 대부분의 V 영역, 모든 CH1 영역, 그리고 일부 힌지가 부족하다. 변이체 OMM은 대립형질 형태 또는 또다른 감마 쇄 하위부류를 나타낼 수 있다. 본 명세서는 하나 또는 그 이상의 이들 변이체를 함유하는 G3Fc 도메인이 포함된 추가적인 융합 단백질을 제공한다.
인간 IgG4 (G4Fc)의 Fc 부분에 이용될 수 있는 고유한 아미노산 서열은 하기에 예시된다 (서열 번호: 212). 점선은 힌지 영역을 나타낸다. 부분적으로, 본 명세서는 서열 번호: 212에 대하여 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 필수적으로 구성되거나, 또는 구성되는 폴리펩티드를 제공한다.
Fc 도메인 안에 다양하게 조작된 돌연변이는 G1Fc 서열 (서열 번호: 208)에 대하여 나타내며, G2Fc, G3Fc, 및 G4Fc에서 유사 돌연변이는 도 5에서 G1Fc와의 배열로부터 유도될 수 있다. 동일하지 않은 힌지 길이로 인하여, 아이소타입 배열(도 5)에 근거한 유사체 Fc 위치는 서열 번호: 208, 209, 210, 및 212에서 상이한 아미노산 번호를 소유한다. 힌지, CH2, 및 CH3 영역 (가령, 서열 번호: 208, 209, 210, 211, 또는 212)으로 구성된 면역글로불린 서열에서 주어진 아미노산 위치는 Uniprot 데이타베이스와 같이, IgG1 중쇄 불변 도메인 (CH1, 힌지, CH2, 및 CH3 영역으로 구성됨) 전체를 포괄할 때, 동일한 위치가 아닌 상이한 번호로 확인될 것이라는 것을 또한 인지할 수 있을 것이다 예를 들면, 인간 G1Fc 서열 (서열 번호: 208), 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 (Uniprot P01857), 및 인간 IgG1 중쇄에서 선택된 CH3 위치 간의 대응성은 다음과 같다.
단일 세포계로부터 비대칭 면역글로불린-기반의 단백질의 대량 생산에서 발생되는 문제는 ＂쇄 연합 문제＂로 알려져 있다. 이중특이적 항체의 생산에서 주로 직면하는 바와 같이, 쇄 연합 문제는 상이한 중쇄 및/또는 경쇄가 단일 세포주에서 생성될 때 본질적으로 얻어지는 다수의 조합 중에서 원하는 다중 결합 단백질을 효율적으로 생산하려는 도전에 관한 것이다 [예를 들면, Klein et al (2012) mAbs 4:653-663 참고]. 이 문제는 두 개의 다른 중쇄와 두 개의 다른 경쇄가 동일한 세포에서 생산될 때 가장 심각한데, 이 경우 일반적으로 단 하나만을 원할 때, 총 16 개의 가능한 사슬 조합이 있다 (비록 일부는 동일하지만). 그럼에도 불구하고, 동일한 원리는 오직 2 개의 상이한 (비대칭) 중쇄를 혼입시키는 원하는 다중쇄 융합 단백질의 수율 감소를 설명한다.
허용가능한 수율로 바람직한 비대칭 융합 단백질을 생산하기 위해 단일 세포주에서 Fc-함유 융합 폴리펩티드 쇄의 바람직한 페어링을 증가시키는 다양한 방법이 당업계에 공지되어있다[예를 들면, Klein et al (2012) mAbs 4:653-663; 및 Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106 참고]. Fc-함유 쇄들의 바람직한 페어링을 얻는 방법은 하전-기반의 페어링 (정전기적 스티어링), ＂노브-인투-홀(knobs-into-holes)＂ 입체적 페어링, SEEDbody 페어링, 및 류신 지퍼-기반의 페어링을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 예를 들면, Ridgway et al (1996) Protein Eng 9:617-621; Merchant et al (1998) Nat Biotech 16:677-681; Davis et al (2010) Protein Eng Des Sel 23:195-202; Gunasekaran et al (2010); 285:19637-19646; Wranik et al (2012) J Biol Chem 287:43331-43339; US5932448; WO 1993/011162; WO 2009/089004, 및 WO 2011/034605 참고. 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 이들 방법을 이용하여 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및 유형 II 수용체 폴리펩티드들, 최소한 2가지의 상이한 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드들, 그리고 최소한 2가지의 상이한 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드들을 포함하는 이형이합체를 만들 수 있다. 도 15-17 참고.
예를 들면, 이를 테면 Arathoon et al., U.S.7,183,076 및 Carter et al., U.S.5,731,168에서 설명된 바와 같이, 구멍에 맞는 돌기(protuberance-into-cavity) (노브-인투-홀) 상보적 영역을 작제함으로써 특정 폴리펩티드간의 상호작용이 촉진될 수 있다. ＂돌기(Protuberances)＂는 제 1 폴리펩티드 (가령, 제 1 상호작용 쌍)의 경계면의 작은 아미노산 측쇄를 더 큰 측쇄 (가령, 티로신 또는 트립토판)로 대체함으로써 구축된다. 상기 돌기에 동일한 또는 더 작은 크기의 상보적 ＂구멍＂은 제 2 폴리펩티드 (가령, 제 2 상호작용 쌍)의 경계면에서 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 측쇄 (가령, 알라닌 또는 트레오닌)로 대체함으로써 임의선택적으로 만든다. 제 1 또는 제 2 폴리펩티드의 경계면에 적절하게 위치되고, 적합한 크기의 돌기 또는 구멍이 존재하는 경우, 인접한 경계면에서 각각 대응하는 구멍 또는 돌기만 제조하면 된다.
중성 pH (7.0)에서, 아스파르트산 및 글루탐산은 음으로 하전되며, 리신, 아르기닌 및 히스티딘은 양으로 하전된다. 이들 하전된 잔기를 이용하여 이형이합체 형성을 촉진시키고, 동시에 동형이합체 형성을 방해할 수 있다. 인력 상호작용은 반대 하전 간에 일어나며, 척력 상호작용은 유사한 하전 사이에 발생된다. 부분적으로, 본 명세서에서 공개된 단백질 복합체들은 하전된 경계면 잔기의 부위 지향된 돌연변이유발을 실행함으로써,이형다합체 형성 (가령, 이형이합체 형성)을 촉진시키는 인력 상호작용, 그리고 임의선택적으로 동형이합체 형성 (가령, 동형이합체 형성)을 방해하는 척력 상호작용을 이용한다.
예를 들면, IgG1 CH3 도메인 경계면은 도메인-도메인 상호작용: Asp356-Lys439', Glu357-Lys370', Lys392-Asp399', 및 Asp399-Lys409' [제 2 쇄에서 잔기 넘버링은 (')로 표시됨]에 관여하는 4가지 독특한 하전 잔기 쌍을 포함한다. IgG1 CH3 영역의 잔기를 지정하기 위해 여기에 사용된 넘버링 체계는 Kabat의 EU 번호 체계에 부합함을 유의해야 한다. CH3-CH3 도메인 상호 작용에 존재하는 2-배 대칭 때문에, 각각의 독특한 상호 작용은 구조에서 두 번 나타난다 (가령, Asp-399-Lys409' 및 Lys409-Asp399'). 야생형 서열, K409-D399'는 이형이합체와 동형이합체 형성을 모두 선호한다. 제 1 쇄에서 전하 극성을 전환시키는 단일 돌연변이 (예 : K409E; 양전하를 음전하로)는 제 1 쇄 동형이합체 형성에 바람직하지 않은 상호 작용을 유도한다. 부적절한 상호작용은 동일한 전하 사이에 발생하는 척력 작용으로 인해 발생한다(음성-음성; K409E-D399'과 D399-K409E'). 제 2 쇄에서 전하 극성을 전환시키는 단일 돌연변이 (D399K'; 음전하를 양전하로)는 제 2 쇄 동형이합체 형성에 바람직하지 않은 상호 작용을 유도한다(K409'-D399K'와 D399K-K409') . 그러나, 동시에 이들 두 돌연변이 (K409E와 D399K')는 이형이합체 형성에 대한 우호적인 상호작용 (K409E-D399K'와 D399-K409')을 유도한다.
이형이합체 형성 및 동형이합체 방지에 있어서 정전기 스티어링 효과는 추가적인 전하 잔기의 돌연변이에 의해 추가로 강화될 수 있는데, 이들은 제 2 쇄에서 예를 들면, Arg355 및 Lys360을 포함하는 반대 하전된 잔기와 페어링되거나, 또는 되지 않을 수 있다. 하기 표는 본원에 개시된 폴리펩티드 복합체의 이형다합체 형성을 향상시키기 위해 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있는 가능한 전하 변화 돌연변이를 열거한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 출원의 융합 단백질에서 CH3-CH3 경계면을 만드는 하나 또는 그 이상의 잔기는 하전된 아미노산으로 대체되고, 따라서 상호작용은 정전기적으로 비선호적으로 된다. 예를 들면, 경계면에 있는 양-하전된 아미노산 (가령, 리신, 아르기닌, 또는 히스티딘)은 음으로 하전된 아미노산 (가령, 아스파르트산 또는 글루탐산)으로 대체된다. 전술한 치환에 대한 대안으로, 또는 이와 복합되어, 경계면에서 음으로-하전된 아미노산은 양으로-하전된 아미노산으로 대체된다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 아미노산은 원하는 하전 특징을 갖는 비-자연 발생적 아미노산으로 대체된다. 음으로 하전된 잔기 (Asp 또는 Glu)를 His으로 돌연변이시키면, 측쇄 부피가 증가되고, 이는 입체적 문제를 야기할 수 있음을 주지해야 한다. 더욱이, His 양성자 공여자- 및 수용자-형태는 국소 환경에 따라 달라진다. 이러한 문제는 설계 전략과 함께 고려되어야 한다. 경계면 잔기는 인간 및 마우스 IgG 하위부류에서 매우 보존되어 있기 때문에, 본 명세서에서 공개된 정전기 스티어링 효과는 인간 및 마우스 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4에 적용될 수 있다. 이 전략은 또한 CH3 도메인 경계면에서 하전되지 않은 잔기를 하전된 잔기로 변형시키는 것으로 확장될 수 있다.
부분적으로, 본 명세서는 전하 페어링 (정전기적 스티어링)에 근거하여 상보적으로 작제된 Fc 서열을 이용한 비대칭 Fc-함유 폴리펩티드 쇄들의 바람직한 페어링을 제공한다. 정전기적 상보성을 갖는 Fc 서열 쌍의 하나는 구조체의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드에 임의선택적 링커와 함께, 또는 링커 없이 융합되어, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 수용체 융합 폴리펩티드를 만들 수 있다. 이 단일 쇄는 원하는 다중쇄 구조체 (가령, TGF-베타 슈퍼패밀리 이형화학성 복합체) 생성을 선호하는 제1 Fc에 상보적인 Fc 서열과 함께 선택 세포에서 공동발현될 수 있다. 정전기적 스티어링에 기반을 둔 본 실시예에서, 서열 번호: 200 [인간 G1Fc(E134K/D177K)] 및 서열 번호: 201 [인간 G1Fc(K170D/K187D)]는 상보적 Fc 서열의 예가 되며, 이때 조작된 아미노산 치환은 이중 밑줄로 나타내며, 구조체의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드는 서열 번호: 200 또는 서열 번호: 201에 융합될 수 있지만, 이들 모두에 융합되지는 않는다. 고유의 hG1Fc, 고유의 hG2Fc, 고유의 hG3Fc, 및 고유의 hG4Fc 간에 아미노산 동일성 수준이 높다면, hG2Fc, hG3Fc, 또는 hG4Fc의 대응하는 위치에서 아미노산 치환 (도 5)으로 상보적 Fc 쌍이 생성되며, 이는 하기 상보적 hG1Fc 쌍(서열 번호: 200 및 201)을 대신하여 이용될 수 있음을 인지할 것이다.
부분적으로, 본 명세서는 입체적 상보성에 근거하여 상보적으로 작제된 Fc 서열을 이용한 비대칭 Fc-함유 폴리펩티드 쇄들의 바람직한 페어링을 제공한다. 부분적으로, 본 명세서는 입체적 상보성의 예로써 노브-인투-홀 페어링(knobs-into-holes pairing)을 제공한다. 입체적 상보성을 갖는 Fc 서열 쌍의 하나는 구조체의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드에 임의선택적 링커와 함께, 또는 링커 없이 융합되어, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 융합 폴리펩티드를 만들 수 있다. 이 단일 쇄는 원하는 다중쇄 구조체 생성을 선호하는 제1 Fc에 상보적인 Fc 서열과 함께 선택 세포에서 공동발현될 수 있다. 노브-인투-홀에 기반을 둔 본 실시예에서, 서열 번호: 202 [인간 G1Fc(T144Y)]] 및 서열 번호: 203 [인간 G1Fc(Y185T)]는 상보적 Fc 서열의 예가 되며, 이때 조작된 아미노산 치환은 이중 밑줄로 나타내며, 구조체의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드는 서열 번호: 202 또는 서열 번호: 203에 융합될 수 있지만, 이들 모두에 융합되지는 않는다. 고유의 hG1Fc, 고유의 hG2Fc, 고유의 hG3Fc, 및 고유의 hG4Fc 간에 아미노산 동일성 수준이 높다면, hG2Fc, hG3Fc, 또는 hG4Fc의 대응하는 위치에서 아미노산 치환 (도 5)으로 상보적 Fc 쌍이 생성되며, 이는 하기 상보적 hG1Fc 쌍(서열 번호: 202 및 203)을 대신하여 이용될 수 있음을 인지할 것이다.
조작된 이황화결합과 복합된 노브-인투-홀 페어링에 근거한 Fc 상보성의 예는 서열 번호: 204 [hG1Fc(S132C/T144W)] 및 서열 번호: 205 [hG1Fc(Y127C/T144S/L146A/Y185V)]에서 공개된다. 상기 조작된 아미노산 치환은 이중 밑줄로 나타내며, 구조체의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드는 서열 번호: 204 또는 서열 번호: 205에 융합될 수 있지만, 이들 모두에 융합되지는 않는다. 고유의 hG1Fc, 고유의 hG2Fc, 고유의 hG3Fc, 및 고유의 hG4Fc 간에 아미노산 동일성 수준이 높다면, hG2Fc, hG3Fc, 또는 hG4Fc의 대응하는 위치에서 아미노산 치환 (도 5)으로 상보적 Fc 쌍이 생성되며, 이는 하기 상보적 hG1Fc 쌍(서열 번호: 204 및 205)을 대신하여 이용될 수 있음을 인지할 것이다.
부분적으로, 본 명세서는 인간 IgG의 β-가닥 세그먼트와 IgA CH3 도메인이 서로 맞물리게 되도록 작제된 Fc 서열을 이용한 비대칭 Fc-함유 폴리펩티드 쇄들의 바람직한 페어링을 제공한다 이러한 방법들은 가닥-교환 조작된(engineered) 도메인 (SEED) CH3 이형이합체를 이용하여 SEEDbody 융합 단백질이 형성되는 것을 포함한다 [예를 들면, Davis et al (2010) Protein Eng Design Sel 23:195-202 참고]. SEEDbody 상보성을 갖는 Fc 서열 쌍의 하나는 구조체의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드에 임의선택적 링커와 함께, 또는 링커 없이 융합되어, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 융합 폴리펩티드를 만들 수 있다. 이 단일 쇄는 원하는 다중쇄 구조체 생성을 선호하는 제1 Fc에 상보적인 Fc 서열과 함께 선택 세포에서 공동발현될 수 있다. SEEDbody (Sb) 페어링에 기반을 둔 본 실시예에서, 서열 번호: 206 [hG1Fc(SbAG)] 및 서열 번호: 207 [hG1Fc(SbGA)]는 상보적 IgG Fc 서열의 예가 되며, 이때 IgG Fc 조작된 아미노산 치환은 이중 밑줄로 나타내며, 구조체의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드는 서열 번호: 206 또는 서열 번호: 207에 융합될 수 있지만, 이들 모두에 융합되지는 않는다. 고유의 hG1Fc, 고유의 hG2Fc, 고유의 hG3Fc, 및 고유의 hG4Fc 간에 아미노산 동일성 수준이 높다면, hG1Fc, hG2Fc, hG3Fc, 또는 hG4Fc의 대응하는 위치에서 아미노산 치환 (도 5)으로 Fc 단합체가 생성되며, 이는 하기 상보적 IgG-IgA 쌍(서열 번호: 206 및 207)을 대신하여 이용될 수 있음을 인지할 것이다.
부분적으로, 본 명세서는 Fc CH3 도메인의 C-말단에 부착된 절단가능한 류신 지퍼 도메인를 갖는 비대칭 Fc-함유 폴리펩티드 쇄의 바람직한 페어링을 제공한다. 류신 지퍼의 부착은 이형이합체성 항체 중쇄들의 선호적 어셈블리를 제공하는데 충분하다. 가령, Wranik et al (2012) J Biol Chem 287:43331-43339 참고. 본 명세서에서 공개된 바와 같이, 류신 지퍼-형성 가닥에 부착된 Fc 서열 쌍의 하나는 구조체의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 수용체 폴리펩티드에 임의선택적 링커와 함께, 또는 링커 없이 융합되어, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 융합 폴리펩티드를 만들 수 있다 이 단일 쇄는 원하는 다중쇄 구조체 생성을 선호하는 상보적 류신 지퍼-형성 가닥에 부착된 Fc 서열과 함께 선택 세포에서 공동발현될 수 있다. 정제 후 박테리아 엔도단백질분해효소 Lys-C로 이 구조체의 단백질분해성 절단으로 류신 지퍼 도메인이 방출되며, 고유의 Fc의 구조와 동일한 Fc 구조체가 생성된다. 류신 지퍼 페어링에 기반을 둔 본 실시예에서, 서열 번호: 213 [hG1Fc-Ap1 (산성)] 및 서열 번호: 214 [hG1Fc-Bp1 (염기성)]는 상보적 IgG Fc 서열의 예가 되며, 이때 조작된 상보적 류신 지퍼 서열은 밑줄로 표시되며, 이 구조체의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 유형 II 폴리펩티드는 서열 번호: 213 또는 서열 번호: 214에 융합될 수 있지만, 이들 모두에 융합되지는 않는다. 고유의 hG1Fc, 고유의 hG2Fc, 고유의 hG3Fc, 및 고유의 hG4Fc 간에 아미노산 동일성 수준이 높다면, hG1Fc, hG2Fc, hG3Fc, 또는 hG4Fc에 임의선택적 링커와 함께 또는 링커없이 부착된 류신 지퍼-형성 서열 (도 5)은 하기 상보적 류신 지퍼-형성 쌍(서열 번호: 213 및 214)에 이용될 수 있는 Fc 단합체를 만들 수 있음을 인지할 것이다.
1
THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE
51
VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK
101
VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF
151
YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV
201
FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGGSAQ LEKELQALEK ENAQLEWELQ
251
ALEKELAQGA T (서열 번호: 213)
1
THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE
51
VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK
101
VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF
151
YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV
201
FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGGSAQ LKKKLQALKK KNAQLKWKLQ
251
ALKKKLAQGA T (서열 번호: 214)
상기에서 설명된 바와 같이, 허용가능한 수율로 바람직한 비대칭 융합 단백질을 생산하기 위해 단일 세포주에서 Fc-함유 융합 폴리펩티드 쇄의 바람직한 페어링을 증가시키는 다양한 방법이 당업계에 공지되어있다[Klein et al (2012) mAbs 4:653-663; 및 Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106 참고]. 또한, 본 명세서에서 설명된 바와 같은 이형이합체는TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 폴리펩티드를 포함하는 중쇄 및 경쇄 융합 단백질의 조합을 이용하여 만들어 질 수 있다. 예를 들면, 일부 구체예들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 링커 도메인과 함께, 또는 링커 도메인 없이 CH1 도메인의 최소 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, 또는 IgA2)에 융합될 수 있다. 유사하게, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 경쇄 불변 도메인 (CL)의 최소 일부를 포함하는 면역글로불린 경쇄 (카파 또는 람다)에 링커 도메인과 함께, 또는 링커 도메인 없이 융합될 수 있다. 대체 구체예들에서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 링커 도메인과 함께, 또는 링커 도메인 없이, CH1 도메인의 최소한 부분을 포함하는 면역글로불린 중쇄 (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, 또는 IgA2)에 융합될 수 있으며, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 링커 도메인과 함께, 또는 링커 도메인 없이, 경쇄 불변 도메인 (CL)의 최소한 부분을 포함하는 면역글로불린 경쇄 (카파 또는 람다)에 융합될 수 있다. 이 디자인은 경쇄와 헤테로 이형이합체화되는 중쇄의 자연적 능력을 이용한다. 구체적으로, 중쇄와 경쇄의 이형이합체화는 CH1와 CL에서 일어나며, 이는 이황화물 다리를 통하여 두 도메인의 공유적 연계에 의해 일반적으로 안정화된다. 전장 중쇄, 또는 힌지 영역을 포함하는 중쇄의 최소한 부분을 이용하는 구조체들은 2개의 ＂경쇄＂와 2개의 ＂중쇄＂를 포함하는 항체-유사 분자를 만든다. 도 16 참고. 이 디자인의 잠재적 장점은 자연 발생적 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드-리간드-TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 복합체를 더 많이 모방할 수 있고, 필적가능한 단일 이량이합체보다 리간드에 대하여 더 높은 친화력을 나타낼 수 있다는 점이다. 일부 구체예들에 있어서, 이 디자인은 예를 들면, CH1 도메인과 힌지 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 절두(F(ab')2-유사 분자를 만든다) 뿐만 아니라 CH1 도메인 또는 이의 단편만을 포함하는 절두 (Fab-유사 분자를 만든다)가 포함된 다양한 중쇄 절두를 혼입함으로써 변형될 수 있다. 도 16g 참고. 이러한 이형다합체 구조체를 기획하는 다양한 방법들은 US 2009/0010879, Klein et al [(2012) mAbs 4:653-663], 및 Spiess et al [(2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]에서 설명되며, 이의 내용은 전문에 참고자료에 편입된다.
일부 구체예들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드-CL:TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드-CH1 이형이합체 쌍을 포함하는 복합체의 최소한 하나의 가지(branch)와 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드-CL:TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 r-CH1 이형이합체 쌍을 포함하는 최소한 2 가지가 포함된 항체-유사 이형이합체를 만드는 것이 바람직하다. 가령, 도 16b. 이러한 이형이합체 복합체들은 예를 들면, 중쇄와 경쇄 비대칭 페어링 기술의 조합을 이용하여 만들어질 수 있다 [Spiess et al (2015) Molecular Immunology 67(2A): 95-106]. 예를 들면, CrossMab 기술[Schaefer et al (2011). Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108: 11187-11192]에서, 경쇄 미스페어링은 도메인 교차 및 노브-인투-홀을 이용하여 이형이합체화된 중쇄에 의해 극복된다[Merchant et al (1998) Nat. Biotechnol. 16: 677-681]. 도메인 교차의 경우, 가변 도메인 또는 불변 도메인은 중쇄와 경쇄 사이에서 교체되어, 2개의 비대칭 Fab 팔이 형성되어 가변 도메인의 구조적 그리고 기능적 온전성은 보존되면서, 동계(cognate) 경쇄 페어링이 유도된다 [Fenn et al (2013) PLoS ONE 8: e61953]. 경쇄 미스페어링을 극복하는 대체 방법은 직각(orthogonal) Fab 경계면을 갖도록 중쇄와 경쇄를 기획하는 것이다 [Lewis (2014) Nat. Biotechnol. 32: 191-198]. 이것은 VH/VL 및 CH1/CL 경계면에서 돌연변이를 식별해내기 위하여 X-선 결정학과 복합된 컴퓨터 모델링[Das et al (2008) Annu. Rev. Biochem.77: 363-382]에 의해 이루어졌다. 이 방법을 이용하여 만들어진 이형이합체의 경우 중쇄/경쇄 미스페어링을 최소화하기 위하여 VH/VL 및 CH1/CL 경계면 모두에 돌연변이를 반드는 것이 필요할 수 있다. 설계된 직교 Fab 경계면은 단일 숙주 세포에서 효율적인 IgG 생산을 촉진하기 위해 중쇄 이형이합체화 전략과 함께 사용될 수 있다. 정전기적 스티어링은 또한 그러한 이형이합체의 작제를 용이하게 하기 위해 직교 Fab 경계면을 생성하는데 사용될 수 있다. 펩티드 링커는 ＂LUZ-Y＂의 형태로 알려진 경쇄와 중쇄의 동계 페어링을 확보하는데 이용될 수 있는데 [Wranik et al (2012) J. Biol. Chem. 287: 43331-43339], 이때 중쇄 이형이합체화는 류신 지퍼를 이용하여 실현되며, 이때 루이신 지퍼는 시험관에서 단백질분해에 의해 후속적으로 제거될 수 있다.
대안으로, 이형이합체는 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 하나 또는 그 이상의 단일-쇄 리간드 트랩을 포함하며, 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드들 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드들 뿐만 아니라 추가적인 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드:TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 단일 쇄 리간드 트랩에 임의선택적으로 공유적 또는 비-공유적으로 연합될 수 있다 [US 2011/0236309 및 US2009/0010879]. 도 12 참고. 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 단일-쇄 리간드 트랩은 다가(multivalent)가 되기 위하여 임의의 다합체화 도메인, 이를 테면 코일드-코일 Fc 도메인에 융합을 요구하지 않는다. 일반적으로, 본 명세서의 단일-쇄 리간드 트랩은 최소한 하나의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 도메인과 하나의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 도메인을 포함한다. 본 명세서에서 일반적으로 결합 도메인 (BD)으로써 지칭되는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드와 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 도메인은 임의선택적으로 링커 영역에 연결될 수 있다.
예를 들면, 한 측면에서, 본 명세서는 다음의 구조를 갖는 폴리펩티드를 포함하는 이형이합체를 제공한다:
(<BD1>-링커1)k-[<BD2>-링커2-{<BD3>-링커3} f]n-(<BD4>)m-(링커4-BD5>d)h
여기에서: n 및 h는 독립적으로 1 보다 크거나 또는 같고; d, f, m, 및 k는 독립적으로 고; BD1, BD2, BD3, BD4, 및 BD5는 독립적으로 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 도메인이며, 이때 BD1, BD2, BD3, 및 BD4중 최소한 하나는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 도메인이며, 이때 BD1, BD2, BD3, 및 BD4중 최소한 하나는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 도메인이며, 그리고 링커1, 링커2, 링커3, 및 링커 4는 독립적으로 0이거나 또는 이보다 크다. 일부 구체예에서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드:TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 단일-쇄 트랩은 최소한 2가지의 상이한 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드:TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 단일-쇄 트랩은 최소한 2가지의 상이한 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 폴리펩티드들을 포함한다. 일부 구체예에서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드:TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 단일-쇄 트랩은 최소한 2가지의 상이한 링커를 포함한다. d, f, h, k, m 및 n에 대해 선택된 값에 따라, 이형다합체 구조는 다양한 조합으로 다수의 반복 단위를 포함할 수 있거나 비교적 간단한 구조일 수 있다.
또다른 측면에서, 본 명세서는 다음의 구조를 갖는 폴리펩티드를 포함하는 이형이합체를 제공한다:
<BD1>-링커1-<BD2>
여전히 또다른 측면에서, 본 명세서는 다음의 구조를 갖는 폴리펩티드를 포함하는 이형이합체를 제공한다:
<BD1>-(링커2-<BD2>)n
여기에서 n은 1보다 크거나 또는 같다.
본 발명의 또다른 측면은 다음의 구조를 갖는 폴리펩티드를 포함하는 이형이합체를 제공하는 것이다다:
(<BD1>-링커1-<BD1>)f-링커2-(<BD2>-링커3-<BD3>)g
이때 f와 g는 1보다 크거나 이와 같다.
BD2와 BD3이 동일하고, f와 g가 동일한 수인 한 구체예에서, 이것은 링커의 차이에 따라 링커 2 주위에 실질적으로 거울 대칭인 대칭 구조를 초래할 수 있다. BD2가 BD3와 상이한 경우 및/또는 여기에서 f 와 g가 상이한 수인 경우, 상이한 구조가 만들어질 것이다. 본원의 개시 및 당업계의 지식에 비추어 적절한 결합 도메인, 링커 및 반복 빈도를 선택하는 것은 당업자의 능력 내에 있다. 본원에 따른 이러한 단일-쇄 리간드 트랩의 특정 비 제한적인 예는 도 18에 개략적으로 나타낸다.
링커 (1, 2, 3, 및 4)는 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 상기 링커 영역은 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드와 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 구축된 리단그-결합 도메인과 명백히 구별되는 세그먼트를 제공하고, 따라서 결합 도메인의 화학적 변형없이, 보조 분자(가령, 안정도를 증가시키는데 유용한 분자, 이를 테면 PEGylation 모이어티)에 접합하는데 이용될 수 있다. 링커는 목적 리간드에 대한 수용체 또는 TGF-β 슈퍼패밀리의 또다른 수용체의 세포외 부분의 천연 구조화되지 않은 영역의 서열과 동일한 또는 이로부터 보존 변형 유래된 비구조적 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 다른 경우에, 그러한 링커는 전체적으로 조성 및 기원이 인공적이지만, 관심있는 리간드에 매우 근접하게될 때 정전 기적 또는 입체 장애 장애가 발생할 가능성이 낮은 비-구조적 가요성 링커를 제공하도록 선택된 아미노산을 함유할 것이다. 링커 길이는 링커의 N-말단 및 C-말단의 각각에 결합 도메인이 위치하여 이들의 천연 리간드 상의 천연 결합 부위와 결합하다면 수용가능한 것으로 간주되며, 이렇게 결합된 결합 도메인의 경우, 이 리간드는 결합 도메인 중 단지 하나의 결합에 의해 결합되는 것보다 더 높은 친화력으로 결합된다. 일부 경우들에 있어서, 천연 또는 인공 기원의 링커에서 아미노산 잔기의 수는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 및/또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 리간드에서 2개 결합 부위에 동시(다리에 의해 연결된) 결합의 경우 요구되는 최소 거리와 동일하거나 또는 더 클 수 있도록 선택된다. 예를 들면, 임의의 방식에 제한되지 않고, 상기 링커 길이는 약 1- 10개 아미노산, 10-20개 아미노산, 18-80개 아미노산, 25-60개 아미노산, 35-45개 아미노산 사이일 수 있거나, 또는 임의의 다른 적합한 길이가될 수 있다.
링커는 폴리펩티드의 정제를 용이하게 하도록 기획될 수 있다. 선택된 정확한 정제 방법은 예를 들어. 어떠한 변형이 필요한지를 결정할 것이며, His 태그와 같은 정제 ＂태그＂의 첨가가 고려되나, 이에 한정되지 않으며; 다른 예에서, 링커는 화물(cargo) 또는 보조 분자의 첨가를 용이하게 하는 영역을 포함할 수 있다. 그러한 첨가가 링커의 비구조화되는 성질에 영향을 미치거나 잠재적 정전기적 또는 입체적 영향을 초래하는 경우, 2 개의 결합 도메인이 리간드상의 각각의 부위에 결합할 수 있도록 링커 길이를 적절히 증가시켜야 할 것이다. 본원의 방법 및 교시에 비추어, 이러한 결정은 당업자에 의해 일상적으로 이루어질 수 있다.
또한, 현재의 디자인은 다른 화물 분자 (예: 형광 분자와 같은 이미징 물질), 독소 등의 연결을 허용한다. 예를 들면, 임의의 방식으로 제한되는 것을 원하지 않지만, 단일-쇄 폴리펩티드들이 변형되어 하나 또는 그 이상의 화물 및/또는 보조 분자 (본 명세서에서 집합적으로 R1, R2, R3, R4, 등으로 지칭된다)를 추가한다:
이용가능한 R 치환체의 일반성(generality)에 제한 없이, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9는 존재하거나 존재하지 않을 수 있으며; 존재하는 경우, 이들은 동일하거나 또는 상이할 수 있으며, 독립적으로 다음중 하나 또는 그 이상이될 수 있다: 표적화를 위한 융합 단백질, 예를 들면, 이를 테면 항체 단편 (가령, 단일 쇄 Fv) 및/또는 단일 도메인 항체 (sdAb)가될 수 있지만, 이에 국한되지 않으며; 방사능요법 및/또는 촬상(imaging) 물질, 예를 들면, 방사능뉴클레오티드 (가령, 123I, 111In, 18F, 64C, 68Y, 124I, 131I, 90Y, 177Lu, 57Cu, 213Bi, 211At), 형광 염료 (가령, Alexa Fluor, Cy 염료) 및/또는 형광 단백질 테그(가령, GFP, DsRed)를 포함하나 이에 국한되지 않으며; 화학요법용 세포독성 물질, 예를 들면, 독소루비친, 칼리케아미친, 마이탄시노이드 유도체 (가령, DM1, DM4), 톡신 (가령, 절두된 슈도모나스 엔도톡신 A, 디프테리아 톡신)을 포함하나 이에 국한되지 않으며; 나노입자-기반의 운반체, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 약물에 접합된 폴리머, 나노운반체 또는 촬상제 (가령, 폴리머 N-(2-히드록시프로필)메타아크릴아미드 (HPMA), 글루탐산, PEG, 덱스트란)을 포함하나, 이에 국한되지 않으며; 약물 (예를 들면, 독소루비친, 캄포토테신, 파클리탁셀, 팔라티네이트를 포함하나 이에 국한되지 않으며); 나노운반체, 예를 들면, 나노쉘 또는 리포좀을 포함하나, 이에 국한되지 않으며; 촬상(imaging) 물질, 예를 들면, 초자성 산화철 (SPIO)을 포함하나 이에 국한되지 않으며; 덴드리머; 및/또는 리간드 정제, 농축 및 격리에 이용되는 고형 지지물 (가령, 나노입자, 비활성 수지, 적합한 실리카 지지물).
일반적으로, 입체 또는 정전기 문제를 일으킬 수 있으므로 모든 가능한 위치에 화물 또는 보조 분자를 갖는 것이 바람직한 것은 아니다. 그러나, 화물 또는 보조 분자를 구조물상의 임의의 주어진 위치 또는 위치에 부가하는 효과는 결합 도메인 사이의 링커를 모델링하고, 그리고 링커와 본 명세서에서 교시된 TGF- 베타 수퍼 패밀리 I 형 수용체 폴리 펩티드 및 TGF- 베타 수퍼 패밀리 II 형 수용체 폴리 펩티드 사이에 입체적 그리고 정전기 비-양립성을 감소시키고, 분자의 기계적 예너지를 실질적으로 최소화시키기 위한 분자 역학 시뮬레이션을 실행함으로써, 본 명세서에서 교시된 바에 따라 통상적으로 결정될 수 있다.
결합 기능에서의 간섭의 가능성을 줄이기 위해, 결합 도메인보다는 오히려 결합 분자의 링커 부분에 화물 또는 부속 분자를 첨가하는 것이 바람직할 수 있다. 그러나, 결합 도메인에 추가도 가능하고, 경우에 따라 바람직할 수 있으며, 이러한 추가 효과는 본원에 기재된 바와 같이 제안된 추가가 있는 결합제 및 링커를 미리 모델링함으로써, 통상적으로 결정될 수 있다.
접합 방법은 1 차 아민, 숙신이미딜 (NHS) 에스테르 및 술퍼히드릴-반응성 기와 같은 공통 반응기를 통한 접합을 가능하게 하는 상업적 키트를 사용하여 수행될 수 있다. 일부 예를 들면 다음과 같고, 이에 한정되지 않는다: Alexa Fluor 488 단백질 라벨링 키트 (Molecular Probes, Invitrogen detection technologies) 및 PEGylation 키트 (Pierce Biotechnology Inc.).
특정 측면들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드:TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 단일-쇄 트랩은 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드들 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 뿐만 아니라 추가적인 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드:TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 단일 쇄 리간드 트랩과 공유적 또는 비-공유적 연합되어 더 높은 차원의 이형이합체가 만들어질 수 있고, 이들은 본 명세서에서 설명된 방법에 따라 이용될 수 있다. 가령, 도 19 참고. 예를 들면, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드: TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 단일 쇄 리간드 트랩은 본 명세서에서 설명된 바와 같이 다합체화 도메인을 더 포함할 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드:TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 단일 쇄 리간드 트랩은 Ig 면역글로불린의 불변 도메인을 포함한다. 이러한 면역글로불린 불변 도메인은 최소한 하나의 단일-쇄 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드:TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 트랩을 포함하는 대칭 또는 비대칭 복합체를 촉진시키기 위하여 선택될 수 있다.
특정 측면들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드: TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 단일-쇄 트랩, 또는 이러한 트랩의 조합을 TGF-베타 슈퍼패밀리 길항제로 이용하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이 TGF-베타 슈퍼패밀리 장애 또는 질환 (가령, 신장 질환 및/또는 대사 장애 또는 상태)을 치료 또는 예방할 수 있다.
융합 단백질의 상이한 요소들(가령, 면역글로불린 Fc 융합 단백질)은 원하는 기능성과 일관된 방식으로 정렬될 수 있음을 인지할 것이다. 예를 들면, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드 도메인은 이종성 도메인의 C-말단에 위치하거나, 대안으로, 이종성 도메인이 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드 도메인의 C-말단에 위치할 수 있다. TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드 도메인 및 이종성 도메인은 융합 단백질에서 인접해있을 필요는 없고, 추가적인 도메인 또는 아미노산 서열이 이들 도메인의 C- 또는 N-말단 또는 이들 도메인 사이에 포함될 수 있다.
예를 들면, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 융합 단백질은 A-B-C 형태로 아미노산 서열을 포함할 수 있다. B 부분은 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드 도메인에 상응한다. A와 C 부분은 독립적으로 0, 1, 또는 하나 이상의 아미노산일 수 있고, A와 C 부분 모두 존재하는 경우 B에 대하여 이종성(heterologous)이다. A 및/또는 C 부분은 B 부분에 링커 서열을 경유하여 부착될 수 있다. 링커는 글리신 (가령, 2-10개, 2-5개, 2-4개, 2-3개 글리신 잔기)이 많거나, 또는 글리신과 프롤린 잔기가 많을 수 있고, 예를 들면, 트레오닌/세린 및 글리신의 단일 서열 또는 트레오닌/세린 및/또는 글리신의 반복 서열을 포함할 수 있고, 가령, GGG (서열 번호: 58), GGGG (서열 번호: 59), TGGGG (서열 번호: 60), SGGGG (서열 번호: 61), TGGG (서열 번호: 62), 또는 SGGG (서열 번호: 63) 단일항, 또는 반복부를 포함할 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 융합 단백질은 A-B-C 형태로 아미노산 서열을 포함할 수 있는데, 이때 A는 리더(신호) 서열이며, B는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드 도메인으로 구성되고, C는 생체내 안정성, 생체내 반감기, 취입/투여, 조직 국소화 또는 분포, 단백질 복합체 형성, 및/또는 정제중 하나 또는 그 이상을 강화하는 폴리펩티드 부분이다. 특정 구체예들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 융합 단백질은 A-B-C 형태로 아미노산 서열을 포함할 수 있는데, 이때 A는 TPA 리더 서열, B는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드 도메인으로 구성되며, C는 면역글로불린 Fc 도메인이다. 바람직한 융합 단백질은 다음의 서열 번호중 임의의 하나에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다: 100, 102, 104, 106, 112, 114, 115, 117, 118, 120, 121, 123, 124, 126, 127, 129, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 및 416.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 수용체 이형다합체 복합체들은 원하는 성질을 부여하기 위하여 하나 또는 그 이상의 이종성 부분 (도메인)을 더 포함한다. 예를 들면, 일부 융합 도메인은 친화력 크로마토그래피에 의한 융합 단백질의 단리에 특히 유용하다. 이러한 융합 도메인의 잘 알려진 예로는 폴리히스티딘, Glu-Glu, 글루타티온 S-전달효소 (GST), 티오레독신, 단백질 A, 단백질 G, an 면역글로불린 중쇄 불변 영역 (Fc), 말토즈 결합 단백질 (MBP), 또는 인간 혈청 알부민을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 친화력 정제를 목적으로, 친화력 크로마토그래피를 위한 관련 매트릭스, 이를 테면 글루타티온-, 아밀라제-, 및 니켈- 또는 코발트- 접합된 수지가 이용된다. 이러한 매트릭스중 많은 것들이 '키트' 형태로 이용가능한데, 이를 테면 Pharmacia GST 정제 시스템 및 (HIS6) 융합 쌍과 함께 유용한 QIAexpressTM 시스템(Qiagen)이 있다. 또다른 예로써, 리간드 트랩 폴리펩티드들의 탐지를 용이하게 하기 위하여 융합 도메인이 선택될 수 있다. 이러한 탐지 도메인의 예로는 다양한 형광 단백질 (가령, GFP) 뿐만 아니라 ＂에피토프 테그＂를 포함하는데, 특이적 항체가 이용가능한 짧은 펩티드 서열이 일반적이다. 특정 단클론 항체에 용이하게 이용되는 잘 공지된 에피토프 테그는 FLAG, 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 (HA), 및 c-myc 테그를 포함한다. 일부 경우에서 융합 도메인은 프로테아제 절단 부위, 이를 테면 인자(factor) Xa 또는 트롬빈에 대한 절단부위를 가지고, 이에 의해 관련 프로테아제가 이 융합 단백질을 부분적으로 절단하고, 이로 인하여 이로부터 재조합 단백질이 유리된다. 유리된 단백질은 후속 크로마토그래피 분리에 의해 융합 단백질로부터 단리될 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들은 이 펩티드들을 안정화시킬 수 있는 하나 또는 그 이상의 변형을 포함한다. 예를 들면, 이러한 변형은 폴리펩티드의 시험관내 반감기를 강화시키고, 폴리펩티드의 순환 반감기를 강화시키고 및/또는 폴리펩티드의 단백질분해를 감소시킨다. 이러한 안정화 변형에는 융합 단백질 (예를 들면, TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드 도메인 및 안정화제 도메인을 포함하는 융합 단백질), 당화 부위의 변형 (예를 들면, 본 명세서의 폴리펩티드에 당화 부위 추가 포함), 및 탄수화물 모이어티의 변형 (예를 들면, 본 명세서의 폴리펩티드로부터 탄수화물 모이어티 제거 포함)이 포함되나, 이에 국한되지 않는다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 ＂안정화제 도메인＂은 융합 단백질인 경우 융합 도메인 (가령, 면역글로불린 Fc 도메인)을 지칭하고, 뿐만 아니라 비단백질성(nonproteinaceous) 변형 이를 테면 탄수화물 모이어티, 또는 비단백질성 모이어티, 이를 테면 폴리에틸렌 글리콜을 또한 포함한다.
바람직한 구체예들에 있어서, 본 명세서의 방법에 따라 이용되는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들 은 단리된 폴리펩티드 복합체들이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단리된 단백질 (또는 단백질 복합체) 또는 폴리펩티드 (또는 폴리펩티드 복합체)은 자연 환경의 성분으로부터 단리된 것이다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 복합체는 예를 들면, 전기영동 (가령, SDS-PAGE, 등전초점조절 (IEF), 모세관전기이동) 또는 크로마토그래피 (가령, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 측정되었을 때, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상의 순도로 정제된다. 항체 순도의 측정 방법은 당분야에 공지되어 있다 [가령, Flatman et al., (2007) J. Chromatogr. B 848:79-87]. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 이형다합체 제재는 실질적으로 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 동형다합체 및/또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 동형다합체가 없다. 예를 들면, 일부 구체예들에 있어서, 이형다합체 제재는 약 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 동형다합체를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 이형다합체 제재는 약 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 동형다합체를 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 이형다합체 제재는 약 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드 동형다합체와 약 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의 TGF-베타 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드 동형다합체를 포함한다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들, 뿐만 아니라 이의 이형다합체 복합체들은 당분야에 공지된 다양한 기술에 의해 만들어질 수 있다. 예를 들면, 본 명세서의 폴리펩티드들은 표준 단백질 화학 기술, 이를 테면 Bodansky, M. Principles of Peptide Synthesis, Springer Verlag, Berlin (1993) and Grant G. A. (ed.), Synthetic Peptides: A User's Guide, W. H. Freeman and Company, New York (1992)에서 설명된 것을 이용하여 합성될 수 있다. 또한, 자동화된 펩티드 합성기는 상업적으로 이용가능하다(가령, Advanced ChemTech Model 396; Milligen/Biosearch 9600 참고). 대안으로, 본 명세서의 폴리펩티드들과 이의 단편들 또는 변이체들을 포함하는 복합체들은 당분야에 공지된 다양한 발현 시스템 [가령, 대장균(E. coli), 중국 헴스터 난소 (CHO) 세포, COS 세포, 베큘로바이러스]을 이용하여 재조합적으로 만들어질 수 있다. 추가 구체예에서, 본 명세서의 변형된 또는 변형안된 폴리펩티드들은 예를 들면, 프로테아제, 가령, 트립신, 터모리신(thermolysin), 키모트립신, 펩신, 또는 쌍형성된 염기성 아미노산 전환 효소(PACE)를 이용하여 재조합에 의해 만들어진 전장 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드를 절단하여 만들 수 있다. 단백질분해가능한 절단 부위는 컴퓨터 분석(시판되는 소프트웨어, 가령, MacVector, Omega, PCGene, Molecular Simulation, Inc.)을 이용하여 식별해낼 수 있다.
TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드:TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드 본 명세서의 이형이합체 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하는 리간드에 결합하고, 길항하는 항체에 있어서, 이 항체는 이중특이적 항체로 기획될 수 있는데, 이 이중특이적 항체는 그러한 리간드의 에피토프에 결합하고, 유형 I 수용체와 결합 경쟁하는 제 1 부분, 그리고 유형 II 수용체와 결합경쟁하고, 이러한 리간드에 결합하는 제 2 부분을 포함하는 항체로 기획될 수 있음도 고려된다. 이와 같은 방식에서, 단일 리간드를 표적으로 하는 이중특이적 항체는 ALK7:ActRIIB 이형다합체에 의해 부여될 수 있는 이중 유형 I-유형 II 수용체 결합 차단을 모방하도록 기획될 수 있다. 유사하게, 2개 또는 그 이상의 항체의 조합을 이용하여 동일한 효과를 획득할 수 있는데, 이때 최소한 제 1 항체는 이러한 리간드의 에피토프에 결합하여 제 1 항체는 유형 I 수용체의 결합과 경쟁하고, 최소한 제 2 항체는 이러한 리간드의 에피토프에 결합하고, 유형 II 수용체의 결합과 경쟁한다.
B.
TGFβ
슈퍼패밀리
유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들을 인코드하는 핵산
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 본 명세서에서 공개된 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 (이의 단편, 기능적 변이체들, 및 융합 단백질을 포함)를 인코드하는 단리된 및/또는 재조합 핵산을 제공한다. 예를 들면, 서열 번호: 12는 자연 발생적 인간 ActRIIA 전구체 폴리펩티드를 인코드하고, 반면 서열 번호: 13은 ActRIIA의 성숙, 세포외 도메인을 인코드한다. 대상 핵산은 단일-가닥이거나 또는 이중 가닥일 수 있다. 이러한 핵산은 DNA 또는 RNA 분자일 수 있다. 이들 핵산은 예를 들면, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들을 만드는데 이용될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단리된 핵산(들)은 자연 환경의 성분으로부터 단리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 핵산 분자를 보통 포함하는 세포 안에 있는 핵산 분자를 포함하지만, 상기 핵산 분자는 자연 염색체 위치와는 상이한 염색체 위치에 존재하거나 또는 염색체외부에 존재한다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들을 인코드하는 핵산은 서열 번호: 7, 8, 12, 13, 16, 17, 20, 21, 24, 25, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 40, 41, 44, 45, 48, 49, 52, 53, 69, 70, 73, 74, 77, 78, 81, 82, 85, 86, 89, 90, 93, 94, 303, 304, 307, 308, 311, 312, 101, 105, 113, 116, 119, 122, 125, 128, 131, 134, 137, 140, 및 143중 임의의 하나의 변이체인 핵산을 포함하는 것으로 이해된다. 변이체 뉴클레오티드 서열은 대립형질 변이체들이 포함된, 하나 또는 그 이상의 뉴클레오티드 치환, 추가, 또는 결손에 의해 상이한 서열을 포함하며, 따라서, 서열 번호: 7, 8, 12, 13, 16, 17, 20, 21, 24, 25, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 40, 41, 44, 45, 48, 49, 52, 53, 69, 70, 73, 74, 77, 78, 81, 82, 85, 86, 89, 90, 93, 94, 303, 304, 307, 308, 311, 312, 101, 105, 113, 116, 119, 122, 125, 128, 131, 134, 137, 140, 및 143중 임의의 하나에서 명시된 뉴클레오티드 서열과는 상이한 코딩 서열을 포함할 것이다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들은 서열 번호: 7, 8, 12, 13, 16, 17, 20, 21, 24, 25, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 40, 41, 44, 45, 48, 49, 52, 53, 69, 70, 73, 74, 77, 78, 81, 82, 85, 86, 89, 90, 93, 94, 303, 304, 307, 308, 311, 312, 101, 105, 113, 116, 119, 122, 125, 128, 131, 134, 137, 140, 및 143에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 단리된 또는 재조합 핵산 서열에 의해 인코드된다. 당업자는 서열 번호: 7, 8, 12, 13, 16, 17, 20, 21, 24, 25, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 40, 41, 44, 45, 48, 49, 52, 53, 69, 70, 73, 74, 77, 78, 81, 82, 85, 86, 89, 90, 93, 94, 303, 304, 307, 308, 311, 312, 101, 105, 113, 116, 119, 122, 125, 128, 131, 134, 137, 140, 및 143에 상보적 서열에 대하여 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열은 본 명세서의 범위 안에 있다는 것을 인지할 것이다. 추가 구체예들에서, 본 명세서의 핵산 서열은 단리되거나, 재조합되거나, 및/또는 이종성 뉴클레오티드 서열에 융합되거나 또는 DNA 라이브러리 안에 있을 수 있다.
다른 구체예들에 있어서, 본 명세서의 핵산은 매우 엄격한(stringent) 조건하에서 서열 번호: 7, 8, 12, 13, 16, 17, 20, 21, 24, 25, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 40, 41, 44, 45, 48, 49, 52, 53, 69, 70, 73, 74, 77, 78, 81, 82, 85, 86, 89, 90, 93, 94, 303, 304, 307, 308, 311, 312, 101, 105, 113, 116, 119, 122, 125, 128, 131, 134, 137, 140, 및 143로 지정된 뉴클레오티드 서열, 서열 번호: 7, 8, 12, 13, 16, 17, 20, 21, 24, 25, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 40, 41, 44, 45, 48, 49, 52, 53, 69, 70, 73, 74, 77, 78, 81, 82, 85, 86, 89, 90, 93, 94, 303, 304, 307, 308, 311, 312, 101, 105, 113, 116, 119, 122, 125, 128, 131, 134, 137, 140, 및 143의 보체 서열 또는 이의 단편에 혼성화되는 뉴클레오티드 서열을 또한 포함한다. 당업자는 DNA 혼성화를 촉진시키는 적절한 엄격 조건은 가변적일 수 있다는 것을 용이하게 이해할 것이다. 예를 들면, 6.0 x 염화나트륨/구연산나트륨 (SSC)에서 약 45 ℃에서 혼성화, 이어서 50 ℃에서 2.0 x SSC의 세척으로 실행할 수 있다. 예를 들면, 세척 단계에서 염 농도는 50 ℃에서 약 2.0 x SSC의 낮은 엄격성으로부터 50 ℃에서 0.2 x SSC의 높은 엄격성에서 선택될 수 있다. 또한, 세척 단계의 온도는 약 22 ℃의 낮은 엄격성 조건으로부터 약 65 ℃의 높은 엄격성 조건으로 증가될 수 있다. 온도 및 염이 변화될 수 있거나, 또는 다른 변수가 변화되는 동안 온도 또는 염 농도는 일정하게 유지될 수 있다. 한 구체예에서, 본 명세서는 실온에서 6 x SSC의 낮은 엄격성 조건하에 혼성화되고, 이어서 실온에서 2 x SSC에서 세척된 핵산을 제공한다.
유전자 코드에서 축중성으로 인하여 서열 번호: 7, 8, 12, 13, 16, 17, 20, 21, 24, 25, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 40, 41, 44, 45, 48, 49, 52, 53, 69, 70, 73, 74, 77, 78, 81, 82, 85, 86, 89, 90, 93, 94, 303, 304, 307, 308, 311, 312, 101, 105, 113, 116, 119, 122, 125, 128, 131, 134, 137, 140, 및 143에서 제시된 핵산과 상이한 단리된 핵산 역시 본 명세서의 범위 안에 있다. 예를 들면, 다수의 아미노산이 하나 이상의 삼중항으로 지정된다. 동일한 아미노산을 특정하는 코돈, 또는 동의코돈 (예를 들면, CAU와 CAC는 히스티딘의 경우 동의코돈임)으로 이 단백질의 아미노산 서열에 영향을 주지 않은 ＂침묵(silent)＂ 돌연변이가 된다. 그러나, 포유류 세포 중에 본 단백질의 아미노산 서열의 변화를 유도하는 DNA 서열 다형성이 존재할 것으로 기대된다. 당업자는 특정 단백질을 코딩하는 핵산의 하나 이상의 뉴클레오티드 (뉴클레오티드의 최대 약 3 내지 5 %)에서의 이러한 변이가 자연 대립 유전자 변이로 인해 주어진 종의 개체들 사이에 존재할 수 있음을 인식할 것이다. 임의의 그리고 이러한 모든 뉴클레오티드 변이 및 생성된 아미노산 다형성은 본 명세서의 범위 안에 있다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 재조합 핵산은 발현 구조체 안에서 하나 또는 그 이상의 조절 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계될 수 있다. 조절 뉴클레오티드 서열은 발현에 이용되는 숙주 세포에 일반으로 적절할 것이다. 다양한 숙주 세포에 있어서 다수 유형의 적절한 발현 벡터 및 적합한 조절 서열이 당분야에 공지되어 있다. 전형적으로, 전술한 하나 또는 그 이상의 조절 뉴클레오티드 서열은 프로모터 서열, 리더 또는 신호 서열, 리보좀 결합 부위, 전사 개시 및 종료 서열, 해독 개시 및 종료 서열, 및 인핸서 또는 활성자 서열을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 당분야에 공지된 구성 또는 유도성 프로모터는 본 명세서에서 고려된다. 상기 프로모터는 자연 발생적 프로모터이거나, 또는 하나 이상의 프로모터 요소들이 복합된 하이브리드 프로모터일 수 있다. 발현 구조체는 세포 안 에피좀 상에, 이를 테면 플라스미드로 존재하거나, 또는 발현 구조체는 염색체 안에 삽입될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 발현 벡터는 선택가능한 표지 유전자를 포함하여, 형질전환된 숙주 세포의 선별이 가능하다. 선택가능한 표지 유전자는 당분야에 공지되어 있으며, 이용되는 숙주 세포에 따라 가변적일 것이다.
본 명세서의 특정 측면들에 있어서, 대상 핵산은 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드를 인코드하고, 최소 하나의 조절 서열에 작동가능하도록 연계된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터 안에 제공된다. 조절 서열은 당분야에서 인지되는 것으로, TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드의 발현 지시를 위하여 선택된다. 따라서, 용어 조절 서열은 프로모터, 인핸서, 및 기타 발현 조절 요소들을 포함한다. 예시적인 조절 서열은 Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, Academic Press, San Diego, CA (1990)에서 설명되고 있다. 예를 들면, 조절 서열에 작동가능하도록 연계된 DNA 서열의 발현을 조절하는 다양안 발현 조절 서열은 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들을 인코드하는 DNA 서열을 발현시키기 위하여 이들 벡터에 이용될 수 있다. 이러한 유용한 발현 조절 서열은, 예를 들면, SV40의 초기 및 후기 프로머터, tet 프로모터, 아데노바이러스 또는 사이토메갈로바이러스 즉각 초기 프로모터, RSV 프로모터, lac 시스템, trp 시스템, TAC 또는 TRC 시스템, T7 RNA 중합효소에 의해 발현이 지시되는 T7 프로모터, 파아지 람다의 주요 오퍼레이터 및 프로모터 영역, fd 피복 단백질의 조절 영역, 3-포스포글리세레이트 키나제 또는 다른 글리콜분해 효소의 프로모터, 산 포스파타제의 프로모터, 가령, Pho5, 효모 α-메이팅 인자들의 프로모터, 베큘로바이러스 시스템의 폴리헤드곤 프로모터, 또는 진핵 세포 또는 이의 바이러스의 발현을 제어하는 것으로 알려진 기타 서열, 및 다양한 이의 조합들을 포함한다. 발현 벡터의 설계는 형질전환될 숙주 세포의 선택 및/또는 발현되기를 원하는 단백질의 유형과 같은 인자에 좌우될 수 있음을 알아야 한다. 더욱이, 벡터의 복사체 수, 복사체 수를 조절하는 능력, 그리고 이 벡터에 의해 인코드되는 임의의 다른 단백질, 가령, 항생제 표지 등의 발현이 또한 고려된다.
본 명세서의 재조합 핵산은 원핵 또는 진핵 세포 (효모, 조류, 곤충 또는 포유류), 또는 이둘 모두에서 발현하는데 적합한 벡터에 클론된 유전자 또는 이의 일부분을 결찰시킴으로써 만들어질 수 있다. 재조합 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드의 생산을 위한 발현 비이클은 플라스미드와 다른 벡터를 포함한다. 예를 들면, 적합한 벡터는 다음의 유형의 플라스미드를 포함한다: 원핵 세포, 이를 테면 대장균에서 발현을 위한 pBR322-유도된 플라스미드, pEMBL-유도된 플라스미드, pEX-유도된 플라스미드, pBTac-유도된 플라스미드 및 pUC-유도된 플라스미드.
일부 포유류 발현 벡터는 박테리아에서 벡터의 증식을 실행하는 원핵(prokaryotic) 서열과 진핵 세포에서 발현된 진핵(eukaryotic) 전사 단위를 모두 포함한다. pcDNAI/amp, pcDNAI/neo, pRc/CMV, pSV2gpt, pSV2neo, pSV2-dhfr, pTk2, pRSVneo, pMSG, pSVT7, pko-neo 및 pHyg 유도된 벡터는 진핵 세포의 형질감염에 적합한 포유류 발현 벡터의 예들이다. 이들 벡터중 일부는 박테리아 플라스미드, 이를 테면 pBR322의 서열로 변형되어, 진핵 세포와 원핵 세포 모두에서 복제 및 약물 저항성 선별이 가능하다. 대안으로, 바이러스, 이를 테면 소의 유두종 바이러스 (BPV-1), 또는 Epstein-Barr 바이러스 (pHEBo, pREP-유도된 그리고 p205)의 유도체들이 진핵 세포에서 단백질의 일시적 발현에 이용될 수 있다. 다른 바이러스 (레트로바이러스 포함) 발현 시스템의 예는 하기 유전자 요법 운반 시스템의 설명에서 찾아볼 수 있다. 플라스미드의 준비 및 숙주 유기체의 형질전환에 이용되는 다양한 방법들이 당분야에 공지되어 있다. 원핵 세포와 진핵 세포 모두에 적합한 다른 발현 시스템, 뿐만 아니라 전반적인 재조합 과정은 가령, Molecular Cloning A Laboratory Manual, 3rd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001)을 참고한다. 일부 경우들에 있어서, 베큘로바이러스 발현 시스템의 사용에 의해 재조합 폴리펩티드를 발현시키는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 베큘로바이러스 발현 시스템의 예로는 pVL-유도된 벡터 (이를 테면 pVL1392, pVL1393 및 pVL941), pAcUW-유도된 벡터 (이를 테면 pAcUW1), 및 pBlueBac-유도된 벡터 (이를 테면 ß-gal 함유 pBlueBac III)을 포함한다.
바람직한 구체예에서, CHO 세포에서 해당 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들의 생산을 위하여 벡터가 기획되는데, 이를 테면 Pcmv-Script 벡터 (Stratagene, La Jolla, Calif.), pcDNA4 벡터 (Invitrogen, Carlsbad, Calif.) 및 pCI-neo 벡터 (Promega, Madison, Wisc.)가 있다. 자명한 바와 같이, 해당 유전자 구조체들을 이용하여 배양물에서 증식된 세포 안에서 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드를 발현시켜, 정제용 융합 단백질 또는 변이체 단백질이 포함된 단백질이 생산될 수 있다.
본 명세서는 하나 또는 그 이상의 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들에 대한 코딩 서열이 포함된 재조합 유전자로 형질감염된 숙주 세포에 또한 관계한다. 상기 숙주 세포는 임의의 원핵 세포 또는 진핵 세포일 것이다. 예를 들면, 본 명세서의 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드는 박테리아 세포, 이를 테면 대장균, 곤충 세포 (가령, 베큘로바이러스 발현 시스템을 이용), 효모, 또는 포유류 세포 [가령, 중국 헴스터 난소 (CHO) 세포계]에서 발현될 수 있다. 당업자들에게는 다른 적합한 숙주 세포들이 또한 알려져 있다.
따라서, 본 명세서는 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들을 만드는 방법에 더 관계한다. 예를 들면, TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드를 인코드하는 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포는 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드의 발현을 허용하는 적절한 조건하에서 배양될 수 있다. 상기 폴리펩티드는 분비되고, 이 폴리펩티드를 함유하는 세포와 배지 혼합물로부터 단리될 수 있다. 대안으로, TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드는 수득된 그리고 용해된 세포로부터 획득된 세포질 또는 막 분획으로부터 단리될 수 있다. 세포 배양물은 숙주 세포, 배지 및 다른 부산물을 포함한다. 세포 배양에 적합한 배지는 당분야에 공지되어 있다. 해당 폴리펩티드들은 이온-교환 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 한외여과, 전기영동, TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드들의 특정 에피토프에 특이적인 항체를 이용한 면역친화력 정제, 그리고 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드에 융합된 도메인에 결합하는 물질을 이용한 친화력 정제 (가령, 단백질 A 컬럼을 이용하여 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체-Fc 및/또는 유형 II 수용체-Fc 융합 단백질을 정제할 수 있다)를 포함하는 단백질을 정제하는데 공지된 기술을 이용하여 세포 배양 배지, 숙주 세포, 또는 이 둘 모두로부터 단리될 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드은 정제를 용이하게 하는 도메인을 함유하는 융합 단백질이다.
일부 구체예들에 있어서, 예를 들면, 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제된다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다. TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체-Fc 및/또는 유형 II 수용체-Fc 융합 단백질은 크기 압출 크로마토그래피에 의해 측정하였을 때, >90%, >95%, >96%, >98%, 또는 >99%의 순도이고, SDS PAGE에 의해 측정하였을 때 >90%, >95%, >96%, >98%, 또는 >99%의 순도를 가질 수 있다. 목표 수준의 순도는 포유류 시스템, 특히 비-인간 영장류, 설치류(마우스), 및 인간에 바람직한 결과를 얻는데 충분한 정도이어야 한다.
또다른 구체예에서, 재조합 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드의 원하는 부분의 N-말단에서 정제 리더 서열, 이를 테면 폴리-(His)/엔테로키나제 절단 부위 서열을 인코드하는 융합 유전자에 의해 Ni2 + 금속 수지를 이용한 친화력 크로마토그래피에 의해 발현된 융합 단백질이 정제될 수 있다. 상기 정제 리더 서열은 엔테로키나제의 처리에 의해 후속적으로 제거되어, 정제된 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드가 제공된다. 가령, Hochuli et al. (1987) J. 크로마토그래피 411:177; 및 Janknecht et al. (1991) PNAS USA 88:8972 참고.
융합 유전자를 만드는 기술은 공지되어 있다. 기본적으로, 상이한 폴리펩티드 서열을 인코드하는 다양한 DNA 단편의 결합은 결찰을 위한 블런트-단부 또는 스태거(stagger)-단부를 이용, 적절한 말단을 제공하기 위한 제한효소 절단, 바람직하지 못한 결합 및 효소적 결찰을 피하기 위하여 적절한 알칼리 포스포타제 처리와 같은 코헤시브 단부(cohesive ends)의 메우기를 이용하는 통상의 기술에 따라 실행된다. 또다른 구체예에서, 융합 유전자는 자동화된 DNA 합성기가 포함된 통상적인 기술에 의해 합성될 수 있다. 대안으로, 유전자 단편들의 PCR 증폭은 2개의 연속 유전자 단편 간에 상보적 오버헹(overhangs)을 만드는 엥커 프라이머를 이용하여 실행되고, 후속적으로 어닐링시켜 키메라 유전자 서열을 만들 수 있다. , 가령, Current Protocols in Molecular Biology, eds. Ausubel et al., John Wiley & Sons: 1992 참고.
4. 스크리닝 분석
특정 측면들에 있어서, 본 명세서는 TGFβ 슈퍼패밀리 수용체의 항진제 또는 길항제인 화합물(물질)의 동정을 위한 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및 유형 II 수용체 이형다합체 복합체들의 용도에 관계한다. 이 스크리닝을 통하여 동정된 화합물들은 연골, 근육, 지방 및/또는 뉴런과 같은 조직을 조절하여 생체 내 또는 시험 관내에서 조직 성장을 조절하는 그들의 능력을 평가하기 위하여 테스트될 수 있다. 이들 화합물은 예를 들면, 동물 모델에서 테스트될 수 있다.
TGFβ 슈퍼패밀리 리간드 신호생성 (가령, SMAD 2/3 및/또는 SMAD 1/5/8 신호생성)을 표적화함으로써, 조직 성장을 조절하는 치료제의 스크리닝하는 여러 방법들이 있다. 특정 구체예들에 있어서, 화합물의 고-처리량 스크리닝은 선택된 세포계에 TGFβ 슈퍼패밀리 수용체-매개된 효과를 교란시키는 물질을 동정하기 위하여 실행될 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 분석은 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체가 이의 결합 쌍, 이를 테면 TGFβ 슈퍼패밀리 리간드 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)에 결합하는 것을 특이적으로 방해 또는 감소시키는 화합물을 선별 및 동정하기 위하여 실행된다. 대안으로, 상기 분석은 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체가 이의 결합 쌍 이를 테면 TGFβ 슈퍼패밀리 리간드에 결합을 강화시키는 화합물을 동정하는데 이용될 수 있다. 추가 구체예에서, 상기 화합물은 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체와 상호작용하는 능력에 의해 동정될 수 있다.
다양한 분석 형태가 충분할 것이며, 본 명세서의 내용에서, 본 명세서에서 명시적으로 설명되지 않았던 분석 또한 당업자에 의해 인지될 수 있다. 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 본 발명의 테스트 화합물 (물질들)은 임의의 복합 화학적 방법에 의해 만들어질 수 있다. 대안으로, 대상 화합물은 생체내 또는 시험관내에서 합성된 자연 발생적 생물분자일 수 있다. 조직 성장의 조절물질로 작용하는 능력을 검사하게되는 화합물 (물질들)은 예를 들면, 박테리아, 효모, 식물 또는 다른 유기체(가령, 천연 산물)에 의해 만들어지거나, 화학적으로 만들어지거나 (가령, 펩티도모방체가 포함된 소 분자), 또는 재조합에 의해 만들어질 수 있다. 본 발명에 의해 고려되는 테스트 화합물은 비-펩티딜 유기 분자, 펩티드, 폴리펩티드들, 펩티도모방체, 당, 호르몬, 및 핵산 분자를 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 테스트 물질은 약 2,000 Daltons 미만의 분자량을 갖는 작은 유기 분자다.
본 명세서의 테스트 화합물은 단일, 별개의 엔터티, 또는 복합 화학에 의해 만들어진 더 큰 복합체 라이브러리로 제공될 수 있다. 이들 라이브러리는 예를 들면, 알코올, 알킬 할로겐화물, 아민, 아미드, 에스테르, 알데히드, 에테르 및 다른 부류의 유기 화합물을 포함할 수 있다. 테스트 화합물을 테스트 시스템에 특히 초기 스크리닝 단계에 제공하는 것은 단리된 형태 또는 화합물의 혼합물의 형태가될 수 있다. 임의선택적으로, 화합물은 임의로 다른 화합물로 유도체화될 수 있고, 이 화합물의 단리를 용이하게 하는 유도체화기를 가질 수 있다. 유도체화기의 비-제한적인 예로는 비오틴, 플루오레세인, 디곡시게닌(digoxygenin), 녹색 형광 단백질, 동위원소, 폴리히스티딘, 자성 비드, 글루타티온 S-전달효소 (GST), 광활성화가능한 교차링커 또는 임의의 이의 조합들을 포함한다.
화합물과 천연 추출물의 라이브러리를 테스트하는 많은 약물-스크리닝 프로그램에서, 주어진 시간 동안 조사되는 화합물의 수를 최대화하기 위해서는 높은 처리량의 분석이 바람직하다. 정제되거나 반-정제된 단백질로 유도될 수 있는 것과 같이, 세포가 없는 시스템에서 수행되는 분석은 신속한 개발을 가능하게 하고, 시험 화합물에 의해 중재되는 분자 표적의 상대적으로 용이한 탐지하기 위해 생성될 수 있다는 점에서 대개 ＂1 차＂스크린으로 선호된다. 더욱이, 테스트 화합물의 세포 독성 또는 생물 이용성의 효과는 시험관내 시스템에서는 일반적으로 무시할 수 있고, 대신 분자 표적 상에 이 약물의 효과에 주로 집중되는데, 이것은 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체와 이의 결합 쌍 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty) 사이에 결합 친화력의 변경으로 주로 현시될 수 있다.
단순히 설명을 목적으로, 본 발명의 예시적인 스크리닝 분석에서 본석의 의도에 적절한 경우 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드에 보통 결합할 수 있는 단리 및 정제된 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체를 관심 대상의 화합물에 접촉시킨다. 그 다음 상기 화합물과 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 혼합물에 적절한 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty)를 함유하는 조성물을 추가한다. 이형다합체-슈퍼패밀리 리간드 복합체들의 탐지 및 정량화는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체와 이의 결합 단백질 간의 복합체 형성을 억제(또는 촉진)시키는 이 화합물의 효과를 결정하는 수잔을 제공한다. 상기 화합물의 효과는 다양한 농도의 테스트 화합물을 이용하여 얻은 데이터로부터 용량-반응 곡선을 만들어 평가될 수 있다. 더욱이, 대조 분석은 비교를 위한 기준을 제공하기 위해 수행될 수있다. 예를 들면, 대조 분석에서, 단리 및 정제된 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체를 함유하는 조성물에 추가하고, 이 테스트 화합물이 없을 때 이형다합체-리간드 복합체 형성을 정량화한다. 일반적으로, 반응물이 혼합될 수 있는 순서는 다양할 수 있고, 동시에 혼합될 수 있음을 이해할 것이다. 더욱이, 정제된 단백질 대신하여 세포 추출물 및 용해물을 사용하여 적절한 무-세포 검정 시스템을 만들 수 있다.
TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체가 또다른 단백질에 결합하는 것은 다양한 기술에 의해 탐지될 수 있다. 예를 들면, 면역분석 또는 크로마토그래피 탐지에 의해 탐지가능하도록 라벨된 단백질 이를 테면, 방사능라벨된 (가령, 32P, 35S, 14C 또는 3H), 형광으로 라벨된 (가령, FITC), 또는 효소적으로 라벨된 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체 및/또는 이의 결합 단백질을 이용하여 복합체 형성 조절이 정량화될 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체와 이의 결합 단백질의 상호작용 정도를 직접 또는 간접적으로 측정함에 있어서, 형광 편광 분석 및 형광 공명 에너지 전달(FRET) 분석의 사용을 고려한다. 더욱이, 다른 방식의 탐지, 이를 테면 광학 도파관(waveguides) ( 가령, PCT 공개 WO 96/26432 및 U.S. Pat. No. 5,677,196), 표면 플라스몬 공명 (SPR), 표면 전하 센서, 및 표면력 센서등은 본 명세서의 많은 구체예에 양립가능하다.
더욱이, 본 명세서는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체와 이의 결합 쌍 사이의 상호작용을 파괴 또는 강화시키는 물질들을 동정하기 위한 ＂2-하이브리드 분석＂으로 알려진 상호작용 트랩 분석의 사용을 고려한다. 가령, U.S. Pat. No. 5,283,317; Zervos et al. (1993) Cell 72:223-232; Madura et al. (1993) J Biol Chem 268:12046-12054; Bartel et al. (1993) Biotechniques 14:920-924; 및 Iwabuchi et al. (1993) Oncogene 8:1693-1696 참고. 특정 구체예에서, 본 명세서는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체와 이의 결합 단백질 간의 상호작용을 해리시키는 화합물 (가령, 소분자 또는 펩티드)를 동정하기 위한 역 2-하이브리드 시스템의 사용을 고려한다 [가령, Vidal and Legrain, (1999) Nucleic Acids Res 27:919-29; Vidal and Legrain, (1999) Trends Biotechnol 17:374-81; 및 U.S. 특허 5,525,490; 5,955,280; 그리고 5,965,368 참고].
특정 구체예들에 있어서, 상기 대상 화합물은 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체와 상호작용하는 능력에 의해 동정된다. 상기 화합물과 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체 간의 상호작용은 공유 또는 비-공유적일 수 있다. 예를 들면, 광-가교, 방사능라벨된 리간드 결합, 및 친화력 크로마토그래피가 포함된 시험관내 생화학적 방법을 이용하여 단백질 수준에서 이러한 상호작용이 동정될 수 있다. 가령, Jakoby WB et al. (1974) Methods in Enzymology 46:1 참고. 특정 경우에서, 상기 화합물은 기전-기반의 분석, 이를 테면 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체에 결합하는 화합물을 탐지하는 분석에서 스크리닝될 수 있다. 이 분석은 고형-상 또는 유체-상 결합 사건을 포함할 수 있다. 대안으로, TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체를 인코드하는 유전자는 리포터 시스템 (가령, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 또는 녹색 형광 단백질)과 함께 세포 안으로 형질감염되고, 라이브러리, 바람직하게는 고처리량 스크리닝 또는 이 라이브러리의 개별 구성요소들에 대하여 스크리닝될 수 있다. 다른 기전-기반의 결합 분석이 이용될 수 있는데, 예를 들면, 자유 에너지의 변화를 탐지하는 결합 분석이 이용될 수 있다. 결합 분석은 웰, 비드 또는 칩에 고정된 표적으로 또는 고정된 항체에 의해 포집된 표적 또는 모세관 전기영동에 의해 해리되는 표적으로 실행될 수 있다. 상기 결합된 화합물은 발색 종점 또는 형광 또는 표면 플라스몬 공명을 이용하여 탐지될 수 있다.
5. 예시적인 치료 용도
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 조합을 이용하여 TGFβ 슈퍼패밀리 수용체(가령, ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, ALK7, ActRIIA, ActRIIB, BMPRII, TGFBRII, 및 MISRII) 및/또는 TGFβ 슈퍼패밀리 리간드 (가령, BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty).의 비정상적인 활성과 연관된 질환 또는 상태를 치료 또는 방지할 수 있다 이들 질환, 장애들 또는 상태는 일반적으로 ＂TGFβ 슈퍼패밀리-연합된 상태＂ 또는 ＂TGFβ 슈퍼패밀리-연합된 장애들＂로 본 명세서에서 지칭된다. 특정 구체예들에 있어서, 본 발명은 본 명세서에서 설명된 바와 같은, TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 조합의 치료 효과량을 이러한 치료 또는 예방을 요하는 개체에게 투여하는 방법을 제공한다. 본 명세서의 임의의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 본 명세서에서 공개된 개별 치료 또는 조합된 치료에 잠재적으로 이용될 수 있다. 이들 방법은 특히 예를 들면, 설치류, 영장류 및 인간이 포함된 포유류의 치료 및 예방을 목적으로 한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 장애 또는 상태를 ＂방지하는＂ 치료는 통계적 시료에서 처리안된 대조 시료와 비교하여 처리된 시료에서 장애 또는 상태의 발생이 감소되거나, 또는 처리안된 대조 시료와 비교하여 장애 또는 상태의 하나 또는 그 이상의 증상의 개시를 지연시키거나 또는 그 중증도를 감소시키는 화합물을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 ＂치료하는＂은 특정 상태가 일단 확립되면 그 상태의 개선 또는 제거를 포함한다. 어느 경우에나, 예방 또는 치료는 의사 또는 다른 건강 관리 제공자에 의해 제공된 진단 및 치료제 투여의 의도된 결과로 식별될 수 있다.
TGFβ 슈퍼패밀리 수용체-리간드 복합체들은 조직 성장 뿐만 아니라 이를 테면 다양한 구조의 정확한 형성과 같은 초기 발달과정, 또는 성 발달, 뇌하수체 호르몬 생성 그리고 뼈 및 연골 생성을 포함하는 발달 후 하나 이상의 능력에서 필수적인 역할을한다. 따라서, TGFβ 슈퍼패밀리-연합된 상태/장애들은 비정상적 조직 성장 및 발달 결함을 포함한다. 또한, TGFβ 슈퍼패밀리-연합된 상태는 세포 성장 및 분화 장애, 이를 테면 염증, 알레르기, 자가면역 질환, 감염성 질환, 및 종양을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
예시적인 TGFβ 슈퍼패밀리-연합된 상태는 신경근 장애들 (가령, 근위축병 및 근육 위축), 울혈성 폐쇄성 폐 질환 (및 COPD와 연합된 근육 소모), 근육 소비 증후군, 근육감소증, 악액질, 지방 조직 장애들 (가령, 비만), 타입 2 당뇨병 (NIDDM, 성인-개시 당뇨병), 및 뼈 퇴행성 질환 (가령, 골다공증)을 포함한다. 다른 예시적인 TGFβ 슈퍼패밀리-연합된 상태는 근육퇴행성 및 신경근 장애들, 조직 복구 (가령, 상처 치류), 신경퇴행성 질환 (가령, 근위축성 측색 경화증), 및 면역학적 장애들 (가령, 림프구의 비정상적 증식 또는 기능과 관련된 장애들)을 포함한다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 근위축병 치료의 일부분으로 이용된다. 용어 ＂근위축병＂은 골격근 및 때때로 심장과 호흡기 근육이 점진적으로 약화되고, 악화되는 것을 특징으로 하는 퇴행성 근육 질환을 말한다. 근위축병은 근육의 미세한 변화로 시작하는 점진적 근육 소모 및 약화를 특징으로 하는 유전적 질환이다. 근육이 시간이 지남에 따라 퇴화됨으로써, 사람의 근력은 감소된다. 대상 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들이 포함된 치료에 의해 치료될 수 있는 예시적인 근위축병은 다음을 포함한다: 듀시엔 근위축병 (DMD), 베커 근위축병 (BMD), 에메리-드레이푸스 근위축병 (EDMD), 사지연결근육(limb-girdle) 근위축병 (LGMD), 안면견갑상완 근위축병 (FSH 또는 FSHD) (또한 랑도우지-데제린으로도 알려짐), 근긴장 이영양증 (MMD; 또한 스테인에르트(Steinert)의 질환으로도 알려짐), 눈인두 근위축병 (OPMD), 말단근위축병 (DD), 선천적 근위축병 (CMD)을 포함한다.
듀시엔 근위축병 (DMD)은 1860년대 프랑스 신경학자 Guillaume Benjamin Amand Duchenne에 의해 처음으로 기술되었다. 베커 근위축병 (BMD)은 독일 의사 Peter Emil Becker의 이름을 따서 부른 것으로, 그는 1950 년대에 DMD 변종을 최초로 기술했다. DMD는 남성에서 가장 흔히 유행하는 유전 질환 중 하나로, 3,500명중 한 명 꼴로 영향을 준다. DMD는 X 염색체의 짧은 팔에 위치한 디스트로핀 유전자가 결함이 있을 때 발생한다. 남성은 X 염색체의 사본 하나만 가지고 있기 때문에, 은 디스트로핀 유전자의 사본 하나만 가지고 있다. 디스트로핀 단백질이 없으면, 수축과 이완주기 동안 근육이 쉽게 손상된다. 질병의 초기에 근육이 재생 작용에 의해 보상되지만, 나중에 근육 전구 세포는 진행되는 손상을 따라 잡을 수 없으며 건강한 근육은 기능이 없는 섬유-지방 조직으로 대체된다.
BMD는 디스트로핀 유전자에서 상이한 돌연변이로 인한 것이다. BMD 환자는 약간의 디스트로핀을 가지고 있지만, 불충분하거나 질이 낮다. 일부 디스트로핀의 존재는 BMD 환자에서 근육을 DMD 환자의 근육만큼 심각하거나 빠르게 퇴행하는 것으로부터 보호한다.
동물 연구에서 DMD 및 BMD 환자의 경우 GDF8 신호 전달 경로 억제가 질병의 다양한 측면을 효과적으로 치료할 수 있음을 나타났다 (Bogdanovich et al., 2002, Nature 420:418-421; Pistilli et al., 2011, Am J Pathol 178:1287-1297). 따라서, TGF-베타 슈퍼패밀리 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 GDF8 억제제 (길항제)로 작용하여, DMD 및 BMD 환자의 생체에서 GDF8 및/또는 관련된 TGFβ 슈퍼패밀리 리간드들에 의한 신호생성을 차단시키는 대체 수단을 구성한다.
유사하게, TGF-베타 슈퍼패밀리 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 근육 성장을 필요로 하는 다른 질환 상태에서 근육량을 증가시키는 효과적인 수단을 제공할 수 있다. 예를 들면, 근위축성 측색 경화증 (ALS), 또는 루게릭 질환 또는 운동 신경 질환은 골격근 수축에 필요한 중추 신경계의 구성 요소인 운동 신경을 공격하는 만성적, 진행성 및 난치성 CNS 장애다. ALS에서 운동 뉴런은 악화되고, 결국 죽게 되고, 비록 사람의 뇌는 정상적으로 기능을 발휘하고 기민하지만, 근육 수축의 시작은 척수 수준에서 차단된다. ALS가 발병되는 사람은 전형적으로 40 세에서 70 세 사이이며 퇴화되는 첫 번째 운동 뉴런은 팔이나 다리를 자극하는 뉴런이다. ALS 환자는 걷는데 어려움을 겪을 수도 있고, 물건을 떨어 뜨릴 수도 있고, 넘어질 수도 있고, 발음이 분명하지 않거나, 웃거나 우는 것이 통제가 되지 않을 수 있다. 이 질환이 진행됨에 따라, 팔다리의 근육은 사용하지 않음으로써 위축되기 시작한다. 근육 약화로 쇠약해지고, 결국 환자는 휠체어가 필요하거나 침대에 누워있어야 한다. 대부분의 ALS 환자는 호흡 부전, 또는 질병 발생 후 3 ~ 5 년 안에 폐렴 같은 인공 호흡기 합병증으로 사망한다.
TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들에 의헤 증가된 근육량의 촉진은 또한 근육 소모 질환을 앓고 있는 사람들에게 도움이될 수 있다. Gonzalez-Cadavid et al. (supra)는 GDF8 발현은 사람의 무-지방량과 반비례하며, GDF8 유전자 발현의 증가는 AIDS 소모성 증후군 남성의 체중 감소와 관련이 있다고 보고하였다. AIDS 환자에서 GDF8의 기능을 억제함으로써, AIDS 환자의 삶의 질을 크게 향상시키면서, AIDS 증상을 적어도 완전히 제거되지는 못하더라도 완화시킬 수 있다.
GDF8 기능의 상실은 영양 섭취 감소 없이, 지방 손실과 관련되기 때문에(Zimmers et al., supra; McPherron and Lee, supra), 대상 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 비만 및 타입 2 당뇨병의 발달을 지연 또는 방지하기 위한 치료물질로 추가 이용될 수 있다.
암성 식욕부진-악액질 증후군은 암의 가장 쇠약하고 생명을 위협하는 양상 중 하나다. 이 증후군은 많은 종류의 암의 공통적인 특징인데- 사망한 암 환자의 약 80 %에 존재함-, 그리고 삶의 질이 낮아지고, 화학 요법에 대한 저조한 반응의 원인으로써, 비슷한 종양이 있지만 체중 감소가 없는 환자보다 생존 기간이 짧아지게 되는 원인이 된다. 질병이 발생하기 전 6개월 이내 몸무게의 5% 이상의 비자발적인 체중 감소가 6 개월 이내에 발생할 경우 암 환자에서 악액질이 의심된다. 식욕 부진, 지방과 근육 조직의 낭비, 심리적 고통과 관련하여 악액질은 암과 숙주 사이의 복합적인 상호 작용으로 발생한다. 암 악액질은 사이토킨 생산, 지질 동원 및 단백질 분해-유도 인자의 방출 및 중개 대사의 변화에 영향을 미친다. 비록 식욕 부진은 일반적이지만, 식이 섭취량 감소만으로는 암 환자에서 볼 수 있는 신체 조성 변화를 설명할 수 없으며, 영양 섭취를 늘리는 것으로 소비 증후군을 역전시킬 수 없다. 현재, 악액질 과정을 조절하거나 역전시킬 수 있는 치료법은 없다. 성체 마우스에서 GDF8의 전신 과발현이 인간 악액질 증후군에서 볼 수 있는 것과 유사한 심한 근육 및 지방 손실을 유도하는 것으로 밝혀졌기 때문에(Zimmers et al., supra), 대상 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체 약학 조성물들은 근육 성장이 요구되는 악액질 증후군의 증상을 예방, 치료 또는 경감 시키는데 유리하게 사용될 수 있다. 상기에서 설명한 바와 같이, 근육 손실을 예방, 치료 또는 경감시키는데 유용한 헤테로 복합체의 예는 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc이다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 뼈 및/또는 연골 형성을 유도하는 방법, 뼈 손실을 방지하는 방법, 뼈의 무기화를 증가시키는 방법, 뼈의 탈회를 방지하는 방법 및/또는 뼈의 밀도를 증가시키는 방법에 사용될 수 있다. TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들는 골다공증 발병에 대한 보호 수단으로서, 준임상적 저 골밀도로 진단된 환자에게 유용할 수 있다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 인간 및 다른 동물의 뼈 골절 및 연골 결함 치료에 의학적 유용성이 있을 수 있다. 본 발명의 방법 및 조성물은 폐쇄 및 개방 골절 감소 및 인공 관절의 개선된 고정에서 예방 용도로 사용될 수 있다. 골 형성제에 의해 유발된 신생 골 형성은 선천성, 외상성 또는 종양 절제술로 인한 두개 안면 결함의 치료에 유용하며, 미용 성형 수술에도 유용하다. 더욱이, 본 발명의 방법 및 조성물은 치주 질환의 치료 및 다른 치아 복구 과정에서 사용될 수 있다. 특정 경우에서, TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 뼈 형성 세포를 끌어들이고, 뼈 형성 세포의 성장을 자극하거나, 뼈 형성 세포의 전구 세포 분화를 유도하는 환경을 제공할 수 있다. TGF-베타 슈퍼패밀리 본 명세서의 이형다합체 복합체들은 골다공증의 치료에 또한 유용할 수 있다. 또한, TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 연골 결함의 복구 및 골관절염의 예방/역전에 이용될 수 있다. 상기한 바와 같이, 뼈 형성을 유도하고, 뼈 손실을 방지하고, 뼈의 미네랄화을 증가시키고, 뼈의 탈미네랄화를 방지하고 및/또는 뼈 밀도를 증가시키는데 유용한이형화학성 복합체들의 예는 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 및 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc이다.
Rosen et al. (ed) Primer on the Metabolic Bone Diseases and Disorders of Mineral Metabolism, 7th ed. American Society for Bone and Mineral Research, Washington D.C. (참고자료에 편입됨)은 TGF-β 수퍼패밀리 이형다합체 복합체 또는 TGF- 베타 수퍼패밀리 이형다합체 복합체의 조합으로 처리될 수 있는 골 질환에 대한 광범위한 논의를 제공한다. 여기에 부분 목록이 제공된다. 뼈 소실을 특징으로 하는 또는 원인이 되는 상태, 이를 테면 골다공증 (2차 골다공증 포함), 부갑상선항진증, 만성 신장 질환 미네랄 뼈 장애, 성 호르몬 박탈 또는 제거 (가령, 안드로겐 및/또는 에스트로겐), 글루코코르티코이드 치료, 류마티스 관절염, 중화상, 부갑상선항진증, 고칼슘혈증, 저칼슘혈증, 저인산혈증, 골연화증 (종양-유도된 골연화증 포함), 고인산혈증, 비타민 D 결핍, 부갑상선항진증 (가족성 부갑상선항진증 포함) 및 가부갑상선기능저하증, 뼈로 종양 전이, 종양 또는 화학요법 결과로 뼈 소실, 뼈 및 골수 종양(가령, 다발성 골수종), 허혈성 뼈 장애들, 치주 질환 및 구강 뼈 소실, 쿠싱 질환, 파제트 질환, 갑상선항진증, 만성 설사 상태 또는 흡수불량, 신요세관산증, 또는 신경성 식욕부진에 본 발명의 방법 및 조성물이 적용될 수 있다. 본 발명의 방법 및 조성물들은 비-연합 골절, 치유 속도가 느린 골절을 포함하는 뼈 형성 또는 치유 실패, 태아 및 신생아 뼈 이형성증 (가령, 저칼슘혈증, 고칼슘혈증, 칼슘 수용체 결함 및 비타민 D 결핍), 골괴사 (턱뼈 괴사 포함) 및 골 불완전 형성을 특징으로 하는 상태에 또한 적용될 수 있다. 추가적으로, 동화작용 효과는 그러한 길항제가 뼈 손상 또는 부식과 관련된 뼈 통증의 감소를 야기할 할 것이다. 항-재흡수 효과의 결과로써, 이러한 길항제는 비정상적 뼈 형성, 이를 테면 골모세포성 종양 전이 (예를 들어, 1 차 전립선 또는 유방암과 관련된), 골형성 골육종, 골감화증, 진행성 골밀도 형성장애, 골내막 골형성과다증, 골반문증(osteopoikilosis) 및 선모양뼈과다증(melorheostosis) 등이있다의 장애 치료에 유용할 수 있다. 치료될 수 있는 다른 질환으로는 섬유성 이형성증 (dysplasia)과 연골형성장애 (chondrodysplasias)가 있다.
또다른 특이적 구체예에서, 본 명세서는 골절 및 연골 및/또는 골 결손 또는 치주 질환과 관련된 다른 상태를 치료하기 위한 치료 방법 및 조성물을 제공한다. 본 발명은 상처 치유 및 조직 복구를 위한 치료 방법 및 조성물을 추가로 제공한다. 상처의 종류에는 화상, 절개 및 궤양이 포함되지만, 이에 국한되지는 않는다. 가령, PCT 공개 No. WO 84/01106 참고. 이러한 조성물들은 약학으로 수용가능한 비이클, 운반체, 또는 매트릭스에 혼합된 본 명세서의 최소한 하나의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 치료효과량을 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 뼈 소실을 야기하는 상태, 이를 테면 골다공증, 부갑상선항진증, 쿠싱 질환, 갑상선항진증, 만성 설사 상태 또는 흡수불량, 신요세관산증, 또는 신경성 식욕부진에 적용될 수 있다. 여성이거나, 체중이 적고, 좌식 생활 방식을 선호하는 것은 골다공증(골 미네랄 밀도 감소로 골절 위험으로 이어짐)의 위험 요소라는 것은 흔히 인지되는 사실이다. 그러나, 골다공증은 또한 특정 약물의 장기간 사용으로 발생할 수 있다. 약물 또는 다른 의학적 상태로 인한 골다공증은 2 차 골다공증으로 알려져 있다. 쿠싱 질환에서는 신체가 생성하는 과량의 코티솔이 골다공증과 골절을 유발한다. 이차성 골다공증과 관련된 가장 흔한 약물은 부신피질 호르몬에 의해 자연적으로 생성되는 호르몬인 코티솔처럼 작용하는 약물의 부류인 코르티코스테로이드이다. 적절한 수준의 갑상선 호르몬이 골격 형성에 필요하지만, 과도한 갑상선 호르몬은 시간이 지남에 따라 뼈 질량을 감소시킬 수 있다. 알루미늄을 함유한 제산제는 신장 문제가 있는 사람, 특히 투석중인 사람이 과다 복용했을 때 뼈가 소실될 수 있다. 2차 골다공증을 야기할 수 있는 다른 약물로는 발작을 예방하는데 이용되는 페니토인 (Dilantin) 및 바르비투레이트; 메토트렉세이트 (Rheumatrex, Immunex, Folex PFS), 일부 관절염, 암 및 면역장애용 약물; 사이클로스포린 (Sandimmune, Neoral), 일부 자가면역 질환을 치료하고, 장기 이식 환자에서 면역계를 억제하는데 이용되는 약물; 전립선 암 및 자궁내막증 치료에 이용되는 황체형성 호르몬-방출 호르몬 항진제 (Lupron, Zoladex); 헤파린(Calciparine, Liquaemin), 항응고 약물; 그리고 고콜레스테롤을 치료하는데 이용되는 콜레스티라민 (Questran) 및 콜레스티폴 (Colestid)을 포함한다. 암 치료로 인한 뼈 손실은 널리 알려져 있으며, 암 치료로 인한 골 손실 (CTIBL)이라고 한다. 뼈 전이는 뼈에 구멍을 만드는데, 이는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체로 치료하여 교정할 수 있다. 뼈 소실은 또한 잇몸 질환, 즉 잇몸에 있는 박테리아가 독소와 유해한 효소를 생성하는 만성 감염에 의해 유발될 수 있다.
추가 구체예에서, 본 명세서는 비정상적이거나 원치않는 뼈 성장과 관련된 질병 또는 장애를 치료하기 위한 방법 및 치료제를 제공한다. 예를 들면, 선천적 장애 진행성 골화성 섬유이형성증 (FOP) 환자는 자발적으로 또는 조직 외상에 대한 반응으로 연조직의 진행성 이소성 뼈의 성장에 시달리고 삶의 질에 큰 영향을 미친다. 추가적으로, 고관절 대체 수술 후 비정상적인 뼈의 성장이 일어나서 수술 결과를 망칠 수 있다. 이것은 본 방법 및 조성물이 치료 학적으로 유용할 수 있는 병리학적 뼈 성장 및 상황의 좀더 일반적인 예이다. 동일한 방법 및 조성물들은 다른 형태의 비정상적 뼈 성장 (가령, 외상, 화상 또는 척수 손상 후 뼈의 병리학적 성장)을 치료하고), 그리고 전이성 전립선 암 또는 골육종과의 연관하여 볼 수 있는 비정상적인 뼈 성장과 관련된 바람직하지 않은 상태를 치료 또는 예방하는데 유용할 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 암 환자에서 뼈 형성을 촉진시키는데 이용될 수 있다. 특정 종양 (가령, 전립선, 유방, 다발성 골수종 또는 부갑상선항진증을 야기하는 임의의 종양)을 가진 환자는 종양-유도된 뼈 소실, 뼈 전이, 및 치료 물질들로 인하여 뼈 소실 위험이 높다. 이러한 환자는 뼈 소실 또는 뼈 전이의 증황이 없더라도 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 복합체의 조합으로 치료될 수 있다. 환자는 뼈 소실 또는 뼈 전이 증황에 대해 모니터딩받을 수 있고, 및 위험 증가를 암시하는 경우 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체로 치료받을 수 있다. 일반적으로, 골밀도의 변화를 평가하기 위해 DEXA 스캔을 사용하고, 뼈 전이의 가능성을 평가하기 위해 뼈 리모델링의 지표를 사용할 수 있다. 혈청 표지가 모니터링될 수 있다. 뼈 특이적 알칼리 포스파타제 (BSAP)는 골모세포에 존재하는 효소다. BSAP의 혈중 농도는 뼈 전이 및 뼈 재형성을 증가시키는 다른 상태의 환자에서 증가한다. 오스테오칼신 및 프로콜라겐 펩티드 또한 뼈 형성 및 뼈 전이와 관련있다. 전립선 암에 의한 뼈 전이가 있는 환자에서 BASP의 증가가 탐지되었고, 그리고 정도는 덜 하지만, 유방암으로 인한 뼈 전이에서도 탐지되었다. 뼈로 전이된 전립선 암의 경우 BMP7 수치가 높았지만, 방광암, 피부암, 간암 또는 폐암으로 인하여 뼈 전이에서는 높지 않았다. 유형 I 카르복시-말단 텔로펩티드 (ICTP)는 뼈의 재흡수 동안 형성된 콜라겐에서 발견된 가교결합이다. 뼈가 끊임없이 부서지고, 재형성되기 때문에 ICTP는 신체 전체에서 발견될 것이다. 그러나, 뼈 전이 부위에서 상기 수준은 정상 뼈의 영역에서보다 훨씬 높을 것이다. ICTP는 전립선 암, 폐암 및 유방암으로 인한 골 전이에서 높다. 또다른 콜라겐 가교결합, 유형 I N-말단 텔로펩티드 (NTx)은 뼈 전환 동안 ICTP와 함께 생성된다. NTx의 양은 폐암, 전립선암, 및 유방암이 포함된 임의의 상이한 유형의 암에 의해 야기되는 뼈 전이에서 증가된다. 또한, NTx의 수준은 골전이의 진행에 따라 증가한다. 따라서, 이 표지는 전이 뿐만 아니라, 질병의 정도를 측정하는 데 사용될 수 있다. 재흡수의 다른 표지는 피리디놀린과 데옥시피리디놀린을 포함한다. 재흡수 표지 또는 뼈 전이의 재흡수 표지의 임의 증가는 환자에서 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합을 이용한 치료의 필요를 나타낸다.
본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 다른 뼈-활성 약학 물질들과 함께 공동-투여될 수 있다. 공동 투여(Conjoint administration)는 단일 공동-제형의 투여, 동시 투여 또는 별도의 시간에 투여에 의해 이루어질 수 있다. TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 다른 뼈-활성 물질들과 함께 투여될 때 특히 유익할 수 있다. 환자는 TGF-beta 수퍼패밀리 이형다합체 복합제와 칼슘 보충제, 비타민 D, 적절한 운동 및/또는 경우에 따라 다른 약물을 복용하는는 경우 장점을 얻을 수 있다. 다른 약물의 예로 비스포스포네이트 (알렌드로네이트, 이반드로네이트 및 리세드로네이트), 칼시토닌, 에스트로겐, 부갑상선 호르몬 및 랄록시펜이 있다. 비스포스포네이트 (알렌드로네이트, 이반드로네이트 및 리세드로네이트), 칼시토닌, 에스트로겐 및 랄록시펜은 뼈 재구성(remodeling) 주기에 영향을 미치며, 항 흡수제로 분류된다. 뼈 재구성은 뼈 재흡수와 뼈 형성의 두 단계로 구분된다. 항-흡수 약물 치료는 골-재구성 주기의 뼈 흡수 부분을 느리게하거나 중단시키지만, 주기의 뼈-형성 부분을 늦추지는 않는다. 그 결과, 새로운 형성은 골 흡수보다 더 빠른 속도로 계속되고, 골밀도는 시간이 지남에 따라 증가할 수 있다. 부갑상선 호르몬의 한 형태인 테리파라티드(Teriparatide)는 뼈 재구성 주기에서 뼈 형성의 속도를 증가시킨다. 알렌드로네이트는 폐경기 골다공증 예방 (1 일 5mg 또는 주당 1회 35mg)과 치료 (1 일 10mg 또는 1 주일에 1 번 70mg)에 대한 승인을 받았다. 알렌드로네이트는 골 손실을 줄이고, 골 밀도를 높이며, 척추, 손목 및 고관절 골절의 위험을 줄여준다. 알렌드로네이트는 또한 이러한 약물 (즉, 프레드니손 및 코르티손)의 장기간 사용 및 남성 골다공증 치료의 결과로서 남성 및 여성에서 글루코코르티코이드에 의해 유도된 골다공증 치료를 위해 승인되었다. 알렌드로네이트와 비타민 D는 폐경기 여성 (1 주일에 한번 70mg과 비타민 D)의 골다공증 치료제 및 골다공증 남성의 골량 개선 치료제로 승인 받았다. 이반드로네이트는 폐경기 골다공증 예방 및 치료제로 승인되었다. 한 달에 한 번 알약을 복용할 경우(150mg), 이반드로네이트는 매월 같은 날에 복용해야 한다. 이반드로네이트는 골 손실을 줄이고, 골 밀도를 높이며, 척추 골절의 위험을 줄여준다. 리세드로네이트는 폐경기 골다공증 예방 및 치료제로 승인 받았다. 리세드로네이트는 매일 (5mg 용량) 또는 매주 (35mg 용량, 또는 칼슘과 함께 35mg 용량) 복용하면, 뼈 손실을 느리게 하고 골밀도를 증가시키며, 척추 및 비-척추 골절의 위험을 감소시킨다. 리세드로네이트는 또한 남성과 여성이 이들 약물 (가령, 프레드니손 또는 코르티손)의 장기간 사용으로 인한 글루코코르티코이드에 의한 골다공증을 예방 및/또는 치료하는 용도로 사용이 승인되었다. 칼시토닌은 칼슘 조절 및 골 대사에 관여하는 자연 발생 호르몬이다. 폐경된지 5 년 이상이 경과한 여성에서 칼시토닌은 뼈 손실을 줄이고, 척추 골밀도를 높이며, 골절과 관련된 통증을 완화시킬 수 있다. 칼시토닌은 척추 골절의 위험을 줄인다. 칼시토닌은 주사 (50-100IU 매일) 또는 비강 스프레이 (매일 200IU)로 제공된다.
환자가 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합과 추가적인 뼈-활성 약물을 함께 제공받으면 유익할 수 있다. 에스트로겐 요법 (ET)/호르몬 요법 (HT)은 골다공증 예방에 승인되었다. ET는 폐경기 여성에서 뼈 손실을 줄이고, 척추와 고관절의 골밀도를 높이며, 엉덩이 및 척추 골절의 위험을 줄이는 것으로 나타났다. ET는 매일 약 0.3mg의 저용량 또는 약 0.625mg의 표준 용량을 제공하며, 70 세 이후에 시작한 경우에도 효과가 있는 알약 또는 피부 패치 형태로 가장 일반적으로 투여된다. 에스트로겐 단독으로 복용하면, 여성의 자궁 내막 암(자궁 내막 암) 발병 위험이 높아질 수 있다. 이러한 위험을 제거하기 위해, 건강 관리 제공자는 온전한 자궁을 갖고 있는 여성의 경우 에스트로겐 (호르몬 대체 요법 또는 HT)과 함께 프로제스테론 호르몬을 처방한다. ET/HT는 폐경 증상을 완화시키고, 뼈 건강에 유익한 영향을 미치는 것으로 나타났다. 부작용으로는 질 출혈, 유방 압통, 기분 장애 및 담낭 질환이 있을 수 있다. 하루 60mg의 랄록시펜 (Raloxifene)은 폐경기 골다공증의 예방 및 치료를 위해 승인되었다. 그것은 잠재적인 단점이 없이, 에스트로겐의 유익한 효과를 제공하기 위해 개발된 선택적 에스트로겐 수용체 조절물질(Selective Estrogen Receptor Modulators) (SERMs)라고 불리는 약물의 한 종류이다. 랄록시펜은 골량을 증가시키고, 척추 골절의 위험을 감소시킨다. 랄록시펜이 고관절 및 비-척추 골절의 위험을 줄일 수 있음을 입증하는 데이터는 아직 없다. 부갑상선 호르몬의 한 형태인 테리파라티드는 폐경기 여성과 골절 위험이 높은 남성의 골다공증 치료제로 승인되었다. 이 약물은 새로운 뼈 형성을 자극하고, 뼈의 미네랄 밀도를 상당히 증가시킨다. 폐경기 여성에서 척추, 고관절, 발, 갈비뼈 및 손목에 골절 감소 기록이 있다. 남성의 경우 척추에서 골절 감소기록이 있지만, 다른 부위의 골절 감소를 평가할 수 있는 데이터가 충분하지 않다. 테리파라티드는 최대 24 개월 동안 매일 주사로 자가-투여된다.
다른 구체예들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 들은 동물의 체지방 함량을 조절하고, 이와 관련된 상태, 특히 이와 관련된 건강을 해치는 상태를 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 본 발명에 따르면, 체중을 조절(관리)하는 것은 체중을 줄이거 나 늘리거나, 체중 증가속도를 줄이거나 늘리거나, 체중 감소 속도를 줄이거나 늘리는 것을 의미할 수 있으며, 체중을 적극적으로 유지하거나, 또는 (예 : 그렇지 않으면 체중을 증가시키거나 감소시킬 수 있는 외부 또는 내부 영향에 대해).크게 변화시키지 않을 수도 있다. 본 명세서의 한 구체예는 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합를 필요로 하는 동물(가령, 인간)에게 투여함으로써 체중을 조절하는 것에 관계한다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 동물의 체중 감소 및/또는 체중 증가를 감소시키기 위해, 보다 구체적으로는 비만의 위험이 있거나 비만으로 고통받는 환자의 비만을 치료 또는 개선하기 위해 사용될 수 있다. 또다른 특이적 구체예에서, 본 발명은 체중의 증가 또는 유지할 수 없는 동물(예를 들어, 소모성 증후군을 가진 동물)을 치료하는 방법 및 화합물 에 관한 것이다. 그러한 방법은 체중 및/또는 체질량을 증가시키거나, 체중 및/또는 체질량 손실을 감소시키거나, 바람직하지 않게 낮거나 (예를 들어, 건강에 해로운) 체중 및/또는 체질량과 관련된 상태를 개선 시키는데 효과적이다. 또한, 높은 콜레스테롤 장애 (가령, 고콜레스테롤혈증 또는 이상지질혈증)은 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합에 의해 치료될 수 있다.
특정 측면들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 적혈구 수준을 증가시키고, 빈혈을 치료 또는 예방하며, 및/또는 이의 치료를 필요로 하는 대상에서 비효율적 인 적혈구형성을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 특정 측면들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 특히 다요인 기원의 빈혈 치료에 사용되는 적혈구 수를 증가시키기 위한 기존의 치료 방법과 함께 사용할 수 있다. 적혈구 수준을 증가시키기 위한 통상적인 치료 접근법은 예를 들어 적혈구 수혈, 하나 이상의 EPO 수용체 활성화제의 투여, 조혈 줄기 세포 이식, 면역억제성 생물학적 제제 및 약물 (예컨대, 코르티코스테로이드)을 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 비효율적인 적혈구 생성증 및/또는 비효율적인 적혈구 생성과 관련된 장애의 치료를 요하는 피험자에서 이를 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 특정 측면들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합은 빈혈 또는 비효과적인 적혈구생성 장애, 특히 다요인 기원의 빈혈을 치료하는 데 사용되는 통상적인 치료 방법과 함께 사용될 수 있다.
일반적으로, 본 명세서에서 설명된 질환 또는 상태의 치료 또는 예방은 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합의 ＂유효량＂을 투여하여 이루어진다. 물질의 유효량이란 필요한 치료 또는 예방 결과를 달성하는데 필요한 투여량 및 필요한 시간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 본 발명의 약제의 ＂치료학적 유효량＂은 질환 상태, 개체의 나이, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 유도하는 약제의 능력에 따라 달라질 수 있다. 물질의 ＂예방차원의 유효량＂이란 원하는 예방 결과를 달성하는데 필요한 투여량 및 필요한 시간 동안 효과적인 양을 지칭한다.
특정 구체예들에 있어서, TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 임의선택적으로 EPO 수용체 활성자와 복합된 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 복합체는 건강한 개인 및 선택된 환자 집단에서 적혈구, 헤모글로빈 또는 망상 적혈구 수준을 높이기 위해 사용될 수 있다. 적절한 환자 모집단의 예는 바람직하지 않게 적혈구가 적거나 헤모글로빈 수치가 낮은 환자, 예를 들어 빈혈이 있는 환자 및 바람직하지 않은 적혈구 또는 헤모글로빈 수치가 바람직하지 않게 발생하는 위험이 있는 환자, 예를 들어, 상당한 출혈이 발생할 수 있는 주요 수술 또는 기타 과정을 곧 받게될 환자를 포함한다. 한 구체예에서, 적혈구 수준을 증가시키기 위하여 적절한 적혈구 수준을 가지고 있는 환자는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체, 또는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 조합으로 처리되고, 그 다음 혈액을 뽑아내고, 추후 수혈을 위하여 보관한다.
임의선택적으로 EPO 수용체 활성자와 복합된, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 빈혈 환자에서 적혈구 수치, 헤모글로빈 수치 및/또는 적혈구 용적률을 증가시키는데 사용될 수 있다. 사람의 헤모글로빈 및/또는 적혈구 용적률을 관찰할 때, 개인차가 고려되기는 하지만, 적절한 연령 및 성별 범주에 있어서, 정상 수준보다 낮은 수준은 빈혈을 나타낼 수 있다. 예를 들면, 약 10-12.5g/dl, 전형적으로 약 11.0g/dl의 헤모글로빈 수준은 건강 성인에서 정상 범위 내에 있는 것으로 간주되지만, 치료 측면에서, 목표 수준이 더 낮으면 많지는 않지만 심혈관 부작용을 야기할 수 있다[가령, Jacobs et al. (2000) Nephrol Dial Transplant 15, 15-19 참고]. 대안으로, 적혈구용적률수준 (이 세포가 차지하는 혈액 시료의 용적 백분율)은 빈혈의 척도로 이용될 수 있다. 건강한 사람의 적혈구용적률수준은 성인 남성의 경우 약 41-51 %이며, 성인 여성의 경우 35-45 %이다. 특정 구체예들에 있어서, 환자는 적혈구세포, 헤모글로빈, 및/또는 적혈구용적률의 표적 수준으로 복원시키려는 목적의 투약 요법으로 치료받을 수 있다. 헤모글로빈과 적혈구용적률수준은 사람마다 다르므로, 각 환자에 맞게 표적 헤모글로빈 및 / 또는 헤마토크리트 수치를 개별화할 수 있다.
빈혈은 조직 손상, 감염 및/또는 만성 질환, 특히 암을 가진 환자에서 빈번하게 관찰된다. 일부 피험자에서, 빈혈은 낮은 에리스로포에틴 수치 및/또는 골수 내 에리트로포에틴에 대한 부적절한 반응으로 구별된다[가령, Adamson (2008) Harrison's Principles of Internal Medicine, 17th ed.; McGraw Hill, New York, pp 628-634 참고]. 빈혈의 잠재적인 원인은 혈액 손실, 영양 결핍 (예 : 단백질 식이 섭취 감소), 약물 반응, 골수와 관련된 다양한 문제 및 많은 질병을 들 수 있다. 더 구체적으로, 다양한 장애 및 상태와 연한된 빈혈은 예를 들면, 골수 이식; 고형 종양 (가령, 유방암, 폐암, 및 결장); 림프계 종양 (가령, 만성 림프구 백혈병, 비-호지킨 림프종, 및 호지킨 림프종); 조혈 시스템의 종양 (가령, 백혈병, 골수형성이상 증후군 및 다발성 골수종); 방사능 요법; 화학요법 (가령, 백금 함유 섭생); 류마티스 관절염, 기타 염증 관절성피진, 전신 홍반성 루프스 (SLE), 급성 또는 만성 피부 질환 (가령, 건선), 염증 장 질환 (가령, 크론 질환 및 궤양성 결장염)을 포함하나, 이에 한정되지 않은 염증 및 자가면역 질환; 특발성 또는 선천적 병을 포함하는 급성 또는 만성 신장 질환 또는 신부전; 급성 또는 만성 간 질환; 급성 또는 만성 출혈; 환자의 동종- 또는 자가 항체로 인하여 및/또는 종교적 이유 (가령, 일부 여호아의 증인)로 인하여 수혈이 불가능한 상황; 감염 (가령, 말라리아 및 골수염); 예를 들면, 겸상적혈구 질환 (빈혈), 지중해빈혈을 포함하는 헤모글로빈병증; 약물 사용 또는 남용 (가령, 알코올 남용); 수혈을 피하기 위한 임의의 원인으로 인한 소아 빈혈환자; 그리고 순환계 과부하 우려 때문에 수혈을 받을 수 없는 빈혈이 있는 심폐 질환을 가진 환자 또는 노인 환자를 포함한다[가령, Adamson (2008) Harrison's Principles of Internal Medicine, 17th ed.; McGraw Hill, New York, pp 628-634 참고]. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들 은 본원에 개시된 하나 이상의 장애 또는 상태와 관련된 빈혈을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다.
많은 인자들이 암-관련된 빈혈에 기여할 수 있다. 일부는 질병 과정 자체 및 인터루킨-1, 인터페론 감마 및 종양 괴사 인자와 같은 염증성 사이토킨의 생성과 관련 있다 [Bron et al. (2001) Semin Oncol 28(Suppl 8):1-6]. 그것의 효과중, 염증은 중요한 철 조절 펩티드 헵시딘(hepcidin)을 유도하고, 그로 인하여 대식 세포에서 철 방출을 억제하고, 일반적으로 적혈구 생성을 위한 철 가용성을 제한한다[가령, Ganz (2007) J Am Soc Nephrol 18:394-400 참고]. 다양한 경로를 통한 혈액 손실 또한 암-관련 빈혈의 원인이될 수 있다. 암 진행으로 인한 빈혈의 유병률은 암 유형에 따라 다르며, 전립선암 5 %에서 다발성 골수종의 90 %까지 다양하다. 암-관련된 빈혈은 피로 회복, 삶의 질 감소, 치료 효능 감소, 사망률 증가등 환자에게 중대한 결과를 초래한다. 일부 구체예들에 있어서, 임의선택적으로 EPO 수용체 활성자와 복합된, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 암-관련된 빈혈을 치료하는데 이용될 수 있다.
저증식성(hypoproliferative) 빈혈은 일차 장애 또는 골수의 실패로 발생할 수 있다. 저증식성 빈혈은 만성 질환의 빈혈, 신장 질환의 빈혈, 저대사 상태와 연합된 빈혈, 및 암과 연합된 빈혈을 포함한다. 이러한 유형의 각각에서, 내인성 에리트로포에틴 수치는 관찰된 빈혈의 정도에 대해 부적절하게 낮다. 기타 저증식성 빈혈은 초기 단계 철-결핍 빈혈, 및 골수 손상에 의한 빈혈을 포함한다. 이러한 유형의 각각에서, 내인성 에리트로포에틴 수치는 관찰된 빈혈의 정도에 대해 적절하게 상승된다. 눈에 띄는 예로는 암 및/또는 화학요법 약물 또는 암 방사선 요법으로 인한 골수 억제가 있다. 임상 시험에 대한 광범위한 검토 결과, 화학요법 후 환자의 100 %에서 경미한 빈혈이 발생할 수 있지만, 그 중 80 %에서 중증의 빈혈이 발생할 수 있다 [가령, Groopman et al. (1999) J Natl Cancer Inst 91:1616-1634]. 골수억제성 약물은 예를 들면 다음을 포함한다: 1) 알킬레이팅 물질들, 이를 테면 질소 무스타드 (가령, 멜파란) 및 니트로소우레아 (가령, 스트렙토조신); 2) 항대사물질, 이를 테면 엽산 길항제 (가령, 메토트렉세이트), 퓨린 유사체 (가령, 티오구아닌), 및 피리미딘 유사체 (가령, 겜시타빈); 3) 세포독성 항생제, 이를 테면 안트라사이클린 (가령, 독소루비친); 4) 키나제 억제제 (가령, 게피티니브); 5) 유사분열 억제제, 이를 테면 탁산 (가령, 파클리탁셀) 및 빈카 알칼로이드 (가령, 비노렐빈); 6) 단클론 항체(가령, 리투시마브); 그리고 7) 토포이소메라제 억제제 (가령, 토포테칸 및 에토포시드). 또한, 낮은 대사율을 초래하는 상태는 경증부터 중등도의 저 증식성 빈혈을 유발할 수 있다. 이러한 상태 중 내분비 결핍 상태가 있다. 예를 들면, 빈혈은 애디슨 병, 갑상선 기능 항진증, 부갑상선 기능 항진증, 또는 거세되거나 에스트로겐으로 치료받은 남성에게서 발생할 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 임의선택적으로 EPO 수용체 활성자와 복합된, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 과증식성 빈혈을 치료하는데 이용될 수 있다.
만성 신장 질환은 때로 저증식성 빈혈과 연관되며, 빈혈의 정도는 신장 장애의 정도에 따라 다르다. 이러한 빈혈은 주로 적혈구 생성의 부적절한 생산과 적혈구의 생존 감소로 인한 것이다. 만성 신장 질환은 대개 수십 년 또는 수십 년에 걸쳐 점진적으로 말기 (5 기) 질병으로 진행되며, 이때 환자가 살기 위해서는 투석 또는 신장 이식이 필요하다. 빈혈은 종종 이 과정 초기에 발병하며, 병이 진행됨에 따라 악화된다. 신장 질환의 빈혈의 임상 결과는 잘 기록되어 있으며, 좌심실 비대의 발달, 인지 기능의 손상, 삶의 질 감소 및 면역 기능의 변화가 포함된다[가령, Levin et al. (1999) Am J Kidney Dis 27:347-354; Nissenson (1992) Am J Kidney Dis 20(Suppl 1):21-24; Revicki et al. (1995) Am J Kidney Dis 25:548-554; Gafter et al., (1994) Kidne Int 45:224-231 참고]. 일부 구체예들에 있어서, 임의선택적으로 EPO 수용체 활성자와 복합된, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 급성 또는 만성 신장 질환 또는 부전과 연합된 빈혈을 치료하는데 이용될 수 있다.
외상이나 산후 출혈과 같이 상당한 양의 급성 출혈로 인한 빈혈은 출혈성 급성 출혈-후 빈혈로 알려져 있다. 급성 혈액 손실은 다른 혈액 성분과 함께 적혈구가 고갈되기 때문에 초기에 빈혈없이 혈액량 감소를 일으킨다. 그러나, 혈량저하증은 급속하게 액체를 혈관밖에서 혈관 격실로 옮기는 생리학적 기전을 유발하여 혈액 희석 및 빈혈을 유발한다. 만성적인 경우, 혈액 손실은 점차적으로 신체 철 저장을 고갈시키고, 결국 철 결핍을 유도한다. 일부 구체예들에 있어서, 임의선택적으로 EPO 수용체 활성자와 복합된, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 급성 혈액 상실로 인한 빈혈을 치료할 수 있다.
철-결핍성 빈혈은 음성적 철 균형 및 철분-결핍성 적혈구 생성을 중간단계로 포함하는 철분 결핍 진행의 최종 단계이다. 철 결핍은 임신, 부적절한 식이, 장 흡수불량, 급성 또는 만성 염증, 급성 또는 만성 출혈과 같은 상태에서 볼 수 있듯이, 철 수요 증가, 철분 섭취 감소 또는 철 손실 증가로 인해 발생할 수 있다. 이런 종류의 경증-중등도의 빈혈증에 이르면, 골수는 저증식성을 유지하며, RBC 형태는 대체로 정상이지만; 그러나 경미한 빈혈증조차도 소세형 저색소의 RBCs를 유발할 수 있고, 심각한 철분-결핍성 빈혈로의 전환은 골수의 과다 증식과 점차 빈번하게 퍼지는 소세포성 및 저색소성 RBCs를 동반한다 [가령, Adamson (2008) Harrison's Principles of Internal Medicine, 17th ed.; McGraw Hill, New York, pp 628-634 참고]. 철-결핍성 빈혈에 대한 적절한 치료법은 원인과 중증도에 따라 달라지지만, 경구용 철 제제, 비경 구용 철 제제 및 RBC 수혈을 주요 통상적 옵션으로 사용한다. 일부 구체예들에 있어서, 임의선택적으로 EPO 수용체 활성자와 복합된, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 만성 철-결핍을 치료하는데 사용될 수 있다.
골수형성이상 증후군 (MDS)은 골수 혈액 세포의 비효율적 인 생산과 급성 골수성 백혈병으로의 전환 위험을 특징으로 하는 다양한 혈액학적 상태의 집합이다. MDS 환자의 경우, 혈액 줄기 세포는 건강한 적혈구, 백혈구 또는 혈소판으로 성숙하지 않는다. MDS 장애는 예를 들어, 난치성 빈혈, 관상 철아구가 있는 난치성 빈혈, 과도한 분출(blasts)을 동반한 난치성 빈혈, 형질변환시 과도한 분출을 동반하는 난치성 빈혈, 다발성 골수이형성증을 가진 난치성 적혈구감소증 및 단리된 5q 염색체 이상과 관련된 골수이형성 증후군을 포함한다. 이러한 질환이 조혈 세포의 양과 질 모두에서 비가역적 결함으로 나타나기 때문에, 대부분의 MDS 환자는 만성 빈혈에 시달리고 있다. 따라서, 적혈구 수준을 높이기 위해 MDS 환자는 최종적으로 성장 인자 (예 : 적혈구 생성 인자 또는 G-CSF)로 수혈 및 / 또는 치료를 필요로 한다. 그러나, 많은 MDS 환자는 그러한 치료의 빈도로 인해 부작용이 발생을 나타낸다. 예를 들면, 적혈구 수혈을 자주 받는 환자는 여분의 철분이 축적되어 조직 및 기관 손상을 입을 수 있다. 따라서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들 은 MDS를 가진 환자를 치료하는데 이용될 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, MDS를 앓고 있는 환자는 임의선택적으로 EPO 수용체 활성자와 복합된, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들을 이용하여 치료될 수 있다. 다른 구체예들에 있어서, MDS를 앓고 있는 환자는 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들과 MDS 치료를 위한 하나 또는 그 이상의 추가적인 치료 물질들, 예를 들면, 탈리도미드, 레날리도미드, 아자시타빈, 데시타빈, 에리트로포에틴, 데페록사민, 항흉선세포 글로블린, 필 피그라스트림(G-CSF)을 포함하는 복합물을 이용하여 치료될 수 있다.
철동태(ferrokinetic) 연구에 기초한 재생 불량성 빈혈, 출혈, 말초 혈류 용해와 기본적으로 구별되는[가령, Ricketts et al. (1978) Clin Nucl Med 3:159-164], 비효율적인 적혈구 생성은 다양한 종류의 빈혈을 설명하는데, 이때 성숙한 RBC의 생산은 골수에 존재하는 적혈구 전구체 (erythroblast)의 수를 감안할 때 예상되는 것보다 적을 것으로 예상된다 [Tanno et al. (2010) Adv Hematol 2010:358283]. 이러한 빈혈에서 조직 저산소증은 성숙한 적혈구의 비효율적인 생산으로 인해 에리스로포에틴 수치가 상승함에도 불구하고 지속된다. 에리스로포에틴 수치가 높아지면 적혈모구가 엄청나게 팽창하여 골수외 적혈구 생성으로 인해 비장 비대 (비장 확장)[가령, Aizawa et al. (2003) Am J Hematol 74:68-72], 적혈모구-유도된 골 병증[가령, Di Matteo et al. (2008) J Biol Regul Homeost Agents 22:211-216 참고], 그리고 치료요법적 RBC 수혈이 없을 경우에도 조직 철 과부하[가령, Pippard et al. (1979) Lancet 2:819-821]로 이어지게 되는 악순환이 결국 발생한다. 따라서, 적혈구생성 효과를 부양함으로써, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 전술한 순환을 끊을 수 있고, 따라서 기저 빈혈 뿐만 아니라 상승된 적혈구 생성 수준, 비장 비대, 골 병리 및 조직 철분 과부하와 관련된 합병증을 완화시킨다. 일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 빈혈 및 EPO 수치 상승, 뿐만 아니라 비장 비대, 적혈구모세포-유도된 골 병리, 철분 과다증 및 부수적인 병리를 포함하는 비효과적인 적혈구생성을 치료하거나 예방하는데 사용할 수 있다. 비장 비대의 경우, 그러한 병리에는 흉부 또는 복부 통증 및 망상 내피 증식이 포함된다. 골수외 조혈은 비장에서 뿐만 아니라 다른 조직에서 골수외 조혈성 가종양의 형태로 발생할 수 있다[가령, Musallam et al. (2012) Cold Spring Harb Perspect Med 2:a013482 참고]. 적혈구모세포에 의해 유도된 골 병리의 경우, 부수적인 병리학은 낮은 골 미네랄 밀도, 골다공증 및 뼈 통증을 포함한다[가령, Haidar et al. (2011) Bone 48:425-432 참고]. 철 과부하의 경우, 부수적 병리에는 헵시딘 억제 및 식이 철의 과습수 [가령, Musallam et al. (2012) Blood Rev 26(Suppl 1):S16-S19], 다발성 엔도크린병증 및 간 섬유증/경화 [가령, Galanello et al. (2010) Orphanet J Rare Dis 5:11], 및 철-과부하 심근병증 [Lekawanvijit et al., 2009, Can J Cardiol 25:213-218]을 포함한다.
비효율적 인 적혈구 생성의 가장 흔한 원인은 고유의 알파 및 베타 헤모글로빈 쇄의 생성 불균형이 적혈구 성숙 동안 세포 자가사멸을 증가시키는 유전적 헤모글로빈 병증인, 지중해성 빈혈 증후군 (thalassemia syndromes)이다[가령, Schrier (2002) Curr Opin Hematol 9:123-126]. 지중해빈혈은 전세계적으로 가장 빈번한 유전적 질환 중 하나이며, 역학적인 패턴의 변화 예측은 미국 및 전세계적으로 증가되는 공중 보건 문제에 기여할 것이다 [Vichinsky (2005) Ann NY Acad Sci 1054:18-24]. 지중해빈혈 증후군은 이의 중증도에 따라 명명된다. 따라서, α-지중해빈혈은 사소한 α-지중해빈혈(α-지중해빈혈 성향으로도 알려짐; 2개의 발병된 α-글로빈 유전자), 헤모글로빈 H 질환 (3개의 발병된 α-글로빈 유전자), 및 주요 α-지중해빈혈 (태아수종(hydrops fetalis)으로도 알려짐; 4개의 발병된 α-글로빈 유전자)을 포함한다. β-지중해빈혈은 사소한 β-지중해빈혈(β-지중해빈혈 성향으로도 알려짐; 1개의 발병된 β-글로빈 유전자), 중간 수준의 β-지중해빈혈 (2개의 발병된 β-글로빈 유전자), 헤모글로빈 E 지중해빈혈 (2개의 발병된 β-글로빈 유전자), 및 주요 β-지중해빈혈(쿨레이 빈혈로도 알려짐; 2개의 발병된 β-글로빈 유전자, β-글로빈 단백질의 완전한 부재를 초래함)를 포함한다. β-지중해빈혈은 다중 장기에 영향을 주며, 상당한 유병률 및 치사율과 관련되며, 현재 평생 치료를 요한다. 최근 몇 년 사이에 정기적인 수혈과 철분의 킬레이트화를 통하여 β-지중해빈혈에 대한 기대 수명이 증가했지만, 수혈과 철분의 과도한 위장 흡수로 인한 철 과다는 심장병, 혈전증, 생식기능 저하증, 갑상선기능 저하증, 당뇨병, 골다공증 및 골감소증과 같은 심각한 합병증을 일으킬 수 있다[가령, Rund et al. (2005) N Engl J Med 353:1135-1146]. 특정 구체예들에 있어서, 임의선택적으로 EPO 수용체 활성자와 복합된, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 지중해빈혈 증후군을 치료 또는 예방하는데 이용될 수 있다.
일부 구체예들에 있어서, 임의선택적으로 EPO 수용체 활성자와 복합된, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 지중해빈혈 증후군 이외에 비효과적인 적혈구생성 장애를 치료하는데 이용될 수 있다. 이러한 장애들은 철적혈모구성 빈혈 (유전된 또는 후천적); 적혈구생성이상 빈혈 (유형 I 및 II); 겸상적혈구 빈혈; 유전공모양적혈구증; 피루베이트 키나제 결핍; 거대적혈모구성 빈혈, 이를 테면 엽산 결핍 (선천적 질환, 섭취 감소, 증가된 요구로 인한), 코발아민 결핍 (선천적 질환, 치명적 빈혈, 손상된 흡수, 췌장 부전, 또는 섭취 감소로 인한), 특정 약물, 또는 설명안되는 원인 (선천적 적혈구생성이상 빈혈, 난치성 거대적혈모구 빈혈, 또는 적혈구백혈병)에 의한 잠재적 원인; 예를 들면, 골수섬유증 (골수화생) 및 척수황폐(myelophthisis)을 포함하는 골수로(myelophthisic) 빈혈; 선천적 적혈구생성 포르피린증; 그리고 납 중독을 포함한다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 비효과적인 적혈구생성의 보조 요법과 함께 이용될 수 있다. 이러한 치료법은 적혈구 또는 전체 혈액을 수혈하여 빈혈을 치료하는 것이다. 만성 또는 유전성 빈혈에서 철 항상성에 대한 정상적인 기전은 반복적인 수혈에 압도되어, 결국 심장, 간 및 내분비선과 같은 생명 조직에 철의 독성 및 잠재적 치명적인 축적을 일으킨다. 따라서, 비효율적인 적혈구 생성을 만성적으로 앓고 있는 환자를 위한 보조 요법은 소변 및/또는 대변에서 철 배설을 촉진하고, 이로써 조직 철분 과부하를 방지하거나 또는 역전시키는 하나 이상의 철 킬레이트 분자를 이용한 치료를 포함한다[가령, Hershko (2006) Haematologica 91:1307-1312; Cao et al. (2011), Pediatr Rep 3(2):e17]. 효과적인 철-킬레이트제는 히드록시 라디컬 및 산화 생성물의 촉매 생성을 통해 대부분의 철 독성의 원인이 되는 비-트랜스페린 결합 철의 산화된 형태인 제2철(ferric iron)에 선택적으로 결합하고, 중화시킬 수 있어야 한다[가령, Esposito et al. (2003) Blood 102:2670-2677]. 이들 물질은 구조적으로 다양하지만, 모두 1:1 (헥사벤테이트 물질), 2:1 (트리덴테이트) 또는 3:1 (바이덴테이트)의 화학양론적 양으로 개별 철 원자와 중화 8 면체 배위 착물을 형성할 수 있는 산소 또는 질소 공여 원자를 가지고 있다.[Kalinowski et al. (2005) Pharmacol Rev 57:547-583]. 일반적으로, 효과적인 철-킬레이팅 물질들은 또한 상대적으로 분자량이 낮고(가령, 700 달톤 미만), 발병된 조직에 접근할 수 있도록 물과 지질에 모두 용해된다. 철-킬레이팅 분자의 특정 예로는 매일 비경구 투여를 요구하는 박테리아 기원의 헥사덴테이트 물질, 그리고 경구 활성 합성 물질 데페리프론(바이덴테이트) 및데페라시록스 (트리덴테이트)를 포함한다. 2 가지 철 킬레이트제의 당일 투여로 구성된 병용 요법은 킬레이션 단독 요법에 반응하지 않는 환자에게도 효과적일 뿐만 아니라 디레록사민만으로 환자의 순응도를 떨어뜨리는 문제를 극복하는 데에도 도움이 된다[Cao et al. (2011) Pediatr Rep 3(2):e17; Galanello et al. (2010) Ann NY Acad Sci 1202:79-86].
본 명세서에서 사용된 바와 같이, ＂병용 투여＂ 또는 ＂공동 투여＂는 제 2 요법이 여전히 신체에서 효과적이도록 투여하는 임의의 형태를 의미한다 (예를 들어, 두 화합물이 환자에서 동시에 효과적이며, 두 화합물의 공조상승효과를 포함할 수 있음). 유효성은 혈액, 혈청 또는 혈장에서 측정가능한 약물 농도와 관련이 없을 수도 있다. 예를 들면, 상이한 치료 화합물은 동일한 제형 또는 별도 제형으로, 동시, 순차적 또는 상이한 일정에 의해 투여될 수 있다. 따라서, 그러한 치료를 받는 개인은 다른 치료법의 결합된 효과로부터 이익을 얻을 수 있다. 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 하나 또는 그 이상의 다른 추가적인 물질들 또는 보조 요법과 동시에, 이보다 앞서, 또는 후속적으로 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 치료제는 특정 약제에 대해 결정된 투여량 및/또는 일정으로 투여될 것이다. 요법에서 사용하는 특정 조합은 본 명세서의 길항제와 치료 및/또는 달성될 바람직한 치료 효과의 양립 가능성을 고려할 것이다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 비효과적인 적혈구생성을 위한 헵시딘 또는 헵시단 항진제와 함께 이용될 수 있다. 간에서 주로 생성되는 순환하는 폴리펩티드인 헵시딘은 흡수성 장 세포, 간세포 및 대식세포에 국소화된 철-방출 단백질인 페로포르틴(ferroportin)의 분해를 유도할 수 있는 능력으로 인해 철 대사의 마스터 조절자로 간주된다. 대체로, 헵시딘은 세포외 철의 이용가능성을 감소시키므로, 헵시딘 항진제는 비효율적인 적혈구생성의 치료에 유익할 수 있다[가령, Nemeth (2010) Adv Hematol 2010:750643]. 이 견해는 β-지중해빈혈의 마우스 모델에서 증가된 헵시딘 발현의 유익한 효과에 의해 뒷받침된다[Gardenghi et al. (2010) J Clin Invest 120:4466-4477].
임의선택적으로 EPO 수용체 활성자와 복합된, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 과소크기의(소적혈구), 과다크기의(대적혈구), 기형의, 또는 비정상적인 색을 띈 (저색소성) RBCs에 의해 부분적으로 특징화되는 무질서화된 RBC 성숙의 빈혈 치료에 또한 적합할 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들 및 EPO 수용체 활성자의 치료효과량을 개인에게 투여함으로써, 이를 필요로 하는 개인의 빈혈을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 EPO의 부작용에 민감한 환자에서 이들 활성자의 필요 투여량을 감소시키기 위하여 EPO 수용체 활성자와 복합하여 이용될 수 있다. 이들 방법은 환자의 치료 및 예방 치료에 사용될 수 있다.
본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 특히 EPO 수용체 활성자의 낮은 투여 범위에서 적혈구 세포를 증가시키기 위하여 EPO 수용체 활성자와 복합하여 이용될 수 있다. 이것은 고용량의 EPO 수용체 활성화제와 관련된 공지된 오프-타겟(off-target) 효과 및 위험을 감소시키는데 유익할 수 있다. EPO의 주요 부작용으로는 예를 들어 적혈구용적률 또는 헤모글로빈 수준의 과도한 증가 및 적혈구증가증이 포함된다. 적혈구용적률수준이 상승하면 고혈압 (특히 고혈압의 악화) 및 혈관 혈전증이 유발될 수 있다. 보고된 EPO의 다른 부작용 중 일부는 고혈압과 관련이 있으며, 두통, 인플루엔자-유사 증후군, 선로 폐쇄(obstruction of shunts) 혈전증으로 인한 심근 경액 및 뇌경련, 고혈압 뇌증 및 적혈구 혈액 세포 부전이 있다. 가령, Singibarti (1994) J. Clin Investig 72(suppl 6), S36-S43; Horl et al. (2000) Nephrol Dial Transplant 15(suppl 4), 51-56; Delanty et al. (1997) Neurology 49, 686-689; 그리고 Bunn (2002) N Engl J Med 346(7), 522-523).
본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들이 EPO와는 상이한 기전으로 작용한다면, 이들 길항제는 EPO에 잘 반응하지 않은 환자의 적혈구 세포 및 헤모글로빈 수준을 증가시키는데 유용할 수 있다. 예를 들면, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체는 정상 내지 증가된 용량의 EPO (> 300IU/kg/주)을 투여하여도 목표 수준까지 헤모글로빈 수준을 증가시키지 못한 환자에게 유익할 수 있다. 부적절한 EPO 반응을 보이는 환자는 모든 유형의 빈혈에서 발견되지만, 비-반응자는 암 환자와 말기 신장질환 환자에서 더 빈번하게 관찰된다. EPO에 대한 부적절한 반응은 구성적 (EPO를 사용한 첫 번째 치료 시 관찰됨)이거나 후천적 (EPO 반복 치료 시 관찰됨)일 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 환자에서 하나 또는 그 이상의 혈액의 매개변수를 측정함으로써, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들로 치료되었던, 그리고 치료될 후보자의 환자를 관리하는 방법을 제공한다. 혈액의 매개변수는 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 길항제로 치료하는 동안 투여량을 조정 및/또는 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 길항제의 적절한 유지 투여량을 평가하기 위하여, 치료하는 동안 혈액의 매개변수를 모니터하기 위하여 본 명세서의 길항제로 치료될 후보 환자에 대한 적절한 투여량을 평가하는데 이용될 수 있다. 하나 또는 그 이상의 혈액의 매개변수가 정상 수분 범위 밖에 있다면, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여는 감소, 지연 또는 종료될 수 있다.
본원에서 제공된 방법에 따라 측정될 수있는 혈액 매개변수는 예를 들어, 적혈구 수준, 혈압, 철 저장 및 당 업계에서 인정된 방법을 사용하여 증가된 적혈구 수준과 상호 관련이 있는 체액에서 발견되는 다른 물질을 포함한다. 이러한 매개변수는 환자의 혈액 시료를 이용하여 측정될 수 있다. 적혈구 수준, 헤모글로빈 수준, 및/또는 적혈구용적률수준의 증가는 혈압 증가의 원인이될 수 있다.
한 구체예에서, 만일 하나 또는 그 이상의 혈액의 매개변수가 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들로 치료되는 후보 환자에서 정상 범위 밖에 있거나 또는 정상 범위의 상한에 있다면, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여 개시는 자연적으로 또는 치료 중재를 통하여 상기 혈액의 매개변수가 정상 수준으로 복귀되거나, 또는 자연적 또는 치료 중재를 통하여 수용가능한 수준으로 복귀될 때까지 지연될 수 있다. 예를 들면, 후보자 환자가 고혈압 또는 사전-고혈압(pre-hypertensive) 환자일 경우, 환자는 혈압 강하제로 치료되어 환자의 혈압을 낮출 수 있다. 각 환자의 상태에 적합한 혈압 강하제는 다음을 포함하여 사용할 수 있다: 예를 들면, 이뇨제, 아드레날린 억제제 (알파 차단제 및 베타 차단제 포함), 기관지확장제, 칼슘 채널 차단제, 앙지오텐신-전환 효소 (ACE) 억제제, 또는 앙지오텐신 II 수용체 차단제. 혈압은 식이 요법과 운동 요법을 사용하여 치료할 수도 있다. 유사하게, 후보자 환자가 정상보다 낮은 또는 정상 범위의 하위 수준의 철 저장을 가지고 있다면, 환자의 철 저장이 정상 또는 허용가능한 상태로 돌아올 때까지 환자는 적절한 식이 요법 및/또는 철 보충제를 사용하여 치료할 수 있다. 정상 수준이상의 적혈구 세포 수준 및/또는 헤모글로빈 수준을 갖는 환자의 경우, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여는 이들 수준이 정상 또는 허용 수준으로 회복될 때까지 지연될 수 있다.
특정 구체예들에 있어서,만일 하나 또는 그 이상의 혈액의 매개변수가 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들로 치료되는 후보 환자에서 정상 범위 밖에 있거나 또는 정상 범위의 상한에 있다면, 투여 개시가 지연되지 않을 수 있다. 그러나, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여량 또는 투여 빈도는 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여시 발생되는 혈액의 매개변수의 수용불가한 증가 위험을 감소시킬 수 있는 양으로 설정될 수 있다. 대안으로, 이러한 환자를 위하여, 바람직하지 못한 수준의 혈액의 매개변수를 해결하는 치료 물질과 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들을 복합하여 치료 섭생이 개발될 수 있다. 예를 들면, 환자가 고혈압을 갖는 경우, 본 명세서의 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들과 혈압 강하제의 투여를 포함하는 치료 요법이 설계될 수 있다. 바람직한 수준 이하의 철 저장을 갖는 환자의 경우, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들과 철 보충의 치료 섭생이 개발될 수 있다.
한 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 혈액의 매개변수의 기준 매개변수(들)은 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들로 치료되는 후보 환자를 위하여 확립될 수 있고, 적절한 투여 섭생은 기준 값(들)에 근거하여 확립된다. 대안으로, 환자의 병력에 근거하여 확립된 기준 매개변수를 이용하여 환자에게 적절한 투여 섭생을 알려줄 수 있다. 예를 들면, 만일 건강한 환자가 상기 정의된 정상 범위를 초과하는 기준 혈압치를 갖는다면, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들로 치료받기 전, 상기 환자의 혈압을 일반 모집단에 대하여 정상으로 간주되는 범위로 혈압을 낮출 필요가 없다 . 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들을 이용한 치료 전, 하나 또는 그 이상의 혈액의 매개변수에 대한 환자의 기준값은 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들로 치료하는 동안 혈액 매개변수에 임의의 변화를 모니터링하기 위한 상대적 비교 값으로 이용될 수도 있다 .
특정 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 혈액의 매개변수는 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들로 치료받는 환자에서 측정된다. 상기 혈액의 매개변수는 치료 동안 환자를 모니터링하고, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여 조정 또는 종료 또는 또다른 치료 물질의 추가 투여를 위하여 이용될 수 있다. 예를 들면, 만일 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여로 혈압의 증가, 적혈구세포 수준 증가, 또는 헤모글로빈 수준 증가, 또는 철 저장 감소를 초래한다면, 하나 또는 그 이상의 혈액의 매개변수에 대한 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 효과를 감소시키기 위하여 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들는 감소된 양으로 또는 감소된 빈도로 투여될 수 있다. 만일 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여로 환자에 불리한 하나 또는 그 이상의 혈액의 매개변수의 변화를 초래한다면, 본 명세서의하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 상기 혈액의 매개변수(들)이 수용가능한 수준으로 복귀될 때까지 일시적으로, 또는 영구적으로 종료될 수 있다. 유사하게, 만일 하나 또는 그 이상의 혈액의 매개변수가본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여량 또는 빈도 감소 후에도 수용가능한 범위로 들어가지 않는다면, 투여는 종료될 수 있다. 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여의 감소 또는 종료의 대안 또는 추가하여, 상기 혈액의 매개변수(들)의 바람직하지 못한 수준을 해결하는 추가 치료제, 이를 테면, 예를 들면, 혈압강하제 또는 철 보충제가 이 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들면, 만일 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들로 치료되는 환자가 상승된 혈압을 갖는다면, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여는 동일한 수준으로 지속되며, 혈압강하제가 치료 섭생에 추가되며, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 투여는 감소되고 (가령, 양 및/또는 빈도) 그리고 혈압강하제가 치료 섭생에 추가되거나, 또는 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들의 치료는 종료되고, 이 환자는 혈압강하제로 치료될 수 있다.
6. 약학 조성물
특정 측면들에 있어서, 본 명세서의 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체들은 단독으로 또는 약학 제형 (또한 치료 조성물 또는 약학 조성물로도 지칭됨)의 성분으로 투여될 수 있다. 약학 제형은 이 안에 포함된 활성 성분 (가령, 본 명세서의 물질)의 생물학적 활성이 효과가 있도록 하고, 그리고 이 제형이 투여될 예정인 대상에 대하여 수용불가능한 독성이 있는 추가 성분을 포함하지 않는 형태의 제제를 말한다. 대상 화합물은 인간 또는 동물 용 의약에 사용하기 위한 임의의 편리한 방법으로 투여 용으로 제형화될 수 있다. 예를 들면, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 물질들은 약학으로 수용가능한 운반체와 함께 제형화될 수 있다. 약학으로 수용가능한 운반체는 활성 성분이외에 약학 제형 안에 있는 성분을 말하며, 일반적으로 대상에게 비독성이다. 약학으로 수용가능한 운반체는 완충액, 부형제, 안정화제, 및/또는 보존제다. 일반적으로, 본 명세서에 이용되는 약학 제형은 대상에게 투여될 때, 발열원이 없고, 생리학적으로-수용가능한 형태이다. 본 명세서에서 설명된 것들 이외의 치료에 유용한 물질은 상기에서 설명된 바와 같이, 본 명세서의 방법에서 해당 물질과 복합 투여될 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 조성물들은 비경구 [가령, 정맥 (I.V.) 주사, 동맥내 주사, 골내 주입, 근육 주사, 척수강 내 주사, 피하 주사 또는 피내 주사]로 투여될 것이다. 비경구 투여에 적합한 약학 조성물들은 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 물질들과 하나 이상의 약학적으로 허용되는 멸균 등장성 수성 또는 비수용액, 분산액, 현탁액 또는 유화액, 또는 사용 직전에 멸균 주사 용액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 멸균 분말을 포함할 수 있다. 주사가능한 용액 또는 분산액은 항산화제, 완충액, 세균발육억제제, 현탁제, 증점제 또는 제형을 의도된 수용자의 혈액과 등장성으로 만드는 용질을 함유할 수 있다. 본 발명의 약학 제형에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 식물성 오일 (예: 올리브 오일), 주사가능한 유기 에스테르 (예, 에틸 올레에이트) 및 이들의 적합한 혼합물을 포함한다. 적절한 유동성은 예를 들어, 코팅 물질 (예: 레시틴)의 사용, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지 그리고 계면 활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
일부 구체예들에 있어서, 본 명세서의 치료 방법은 상기 약학 조성물을 전신 투여하거나, 또는 임플란트 또는 장치로부터 국소적으로 투여하는 것을 포함한다. 또한, 상기 약학 조성물은 표적 조직 부위 (가령, 골수 또는 근육)에 운반하기 위한 형태에 포집되거나 또는 주입될 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 조성물은 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 물질을 표적 조직 부위 (가령, 골수 또는 근육)로 운반할 수 있는 매트릭스를 포함할 수 있는데, 이 매트릭스는 발생 조직에 대한 구조를 제공하고, 체내로 최적으로 흡수될 수 있다. 예를 들면, 상기 매트릭스는 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 물질의 지연 방출을 제공할 수 있다. 이러한 매트릭스는 다른 이식된 의학 용도에 현재 사용되는 재질로 형성될 수 있다.
매트릭스 재질은 생체적합성, 생분해성, 기계적 성질, 미용적 외관 및 경계면 성질중 하나 또는 그 이상에 의해 선택될 수 있다. 해당 조성물의 특정 용도가 적절한 제형을 규정할 것이다. 상기 조성물에 대한 잠재적 매트릭스는 생분해가능하며, 화학적으로 황산칼슘, 인산삼칼슘, 히드록시아파타이트, 폴리락트산 및 폴리안하이드리드로 규정될 수 있다. 다른 잠재적 물질은 예를 들면, 뼈 또는 피부 콜라겐을 포함하는 생분해가능하며, 생물학적으로 잘 규정된 물질이다. 또한 매트릭스는 순수 단백질 또는 세포외 매트릭스 성분들로 구성된다. 다른 잠재적 매트릭스는 비-생분해성이며, 화학적으로 예를 들면, 소결(sintered) 히드록시아파타이트, 바이오글라스, 알루미네이트 또는 기타 세라믹을 포함한 비-생분해성이며, 화학적으로 규정된다. 매트릭스는 예를 들면, 폴리락트산 및 히드록시아파타이트 또는 콜라겐 및 인산삼칼슘을 포함하는 전술한 유형의 물질의 조합을 포함할 수도 있다. 바이오 세라믹은 공극 크기, 입자 크기, 입자 형태 및 생분해성중 하나 또는 그 이상을 변경시키기 위하여 조성물(예, 칼슘-알루미네이트-포스페이트) 및 공정이 변경될 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 약학 조성물은 국소적으로 투여될 수 있다. 상기 약학 조성물의 ＂국소 적용＂ 또는 ＂국소적＂이라는 것은 피부, 상처 부위 및 점막이 포함된 신체 표면에 상기 약학 조성물을 접촉시키는 것을 의미한다. 국소 약학 조성물들은 다양한 적용 형태를 가질 수 있고, 전형적으로 조성물이 투여될 때 조직 부근 또는 조직에 직접 접촉되는 약물-함유층을 포함한다. 국소 투여에 적합한 약학 조성물은 액체, 겔, 크림, 로션, 연고, 포말, 페이스트, 퍼티(putty), 반-고체 또는 고체 형태로 제형화된 조성물 안에 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 하나 또는 그 이상의 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체 폴리펩티드 복합체를 포함할 수 있다. 액체, 겔, 크림, 로션, 연고, 포말, 페이스트, 퍼티 안에 조성물들은 표적 조직에 이 조성물을 펴바르거나, 분무하거나, 문지르거나, 토닥이거나 또는 롤링시켜 적용시킬 수 있다. 또한 이 조성물은 멸균 드레싱, 경피 패치, 고약 또는 붕대에 스며들어 있을 수 있다. 퍼티, 반고형 또는 고형의 조성물은 변형가능한 형태일 수 있다. 이들은 탄성 또는 비-탄성일 수 있다 (가령, 유연성 또는 경직). 특정 측면들에 있어서, 상기 조성물은 조성물의 일부를 형성하고, 동일하거나 또는 상이한 조성물들의 섬유, 미립자 또는 다중층을 포함할 수 있다.
액체 안에 국소 조성물은 약학으로 수용가능한 용액, 에멀션, 미이크로에멀션, 및 현탁액을 포함할 수 있다. 활성 성분(들)에 추가하여, 액체 투약형은 당분야에서 통상적으로 이용하는 비활성 희석액, 예를 들면, 물 또는 기타 용매, 가용화 물질 및/또는 유화제 [가령, 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 또는 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (가령, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 검, 올리브, 피마자, 및 참깨유), 글리세롤, 테트라히드로퓨릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 및 이의 혼합물]을 포함할 수 있다.
전형적인 겔, 크림, 로션, 연고, 반고형 또는 고형 조성물은 하나 또는 그 이상의 농후 물질들, 이를 테면 폴리사카라이드, 합성 폴리머 또는 단백질-기반의 폴리머를 포함할 수 있다. 본 발명의 한 구체예에서, 겔형성 물질은 적절하게 비독성이며, 원하는 점도를 제공하는 것이다. 농후 물질들은 다음의 폴리머, 코폴리머, 및 단합체를 포함한다: 비닐피롤리돈, 메타아크릴아미드, 아크릴아미드 N-비닐이미다졸, 카르복시 비닐, 비닐 에스테르, 비닐 에테르, 실리콘, 폴리에틸렌옥시드, 폴리에틸렌글리콜, 비닐알코올, 아크릴레이트 나트륨, 아크릴레이트, 말레산, NN-디메틸아크릴아미드, 디아세톤 아크릴아미드, 아크릴아미드, 아크릴로일 몰포린, 플루로닉, 콜라겐, 폴리아크릴아미드, 폴리아크릴레이트, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐렌, 폴리비닐 실리케이트, 당(가령, 슈크로스, 포도당, 갈락토사민, 갈락토스, 트레할로스, 만노스, 또는 락토즈)로 치환된 폴리아크릴레이트, 아크릴아미도프로판 술폰산, 테트라메톡시오르소실리케이트, 메틸트리메톡시오르소실리케이트, 테트라알콕시오르소실리케이트, 트리알콕시오르소실리케이트, 글리콜, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 폴리사카라이드, 알기네이트, 덱스트란, 시클로덱스트린, 셀룰로오스, 변형된 셀룰로오스, 산화된 셀룰로오스, 치토산, 치틴, 구아르, 카라기난, 히알루론산, 이눌린, 전분, 변형된 전분, 아가로스, 메틸셀룰로오스, 식물 검, 히알루로난, 젤라틴, 글리코사미노글리칸, 카르복시메틸 셀룰로오스, 히드록시에틸 셀룰로오스, 히드록시 프로필 메틸 셀룰로오스, 펙틴, 저-메톡시 펙틴, 교차-연계된 덱스트란, 전분-아크릴로니트릴 접합 코폴리머, 전분 폴리아크릴레이트 나트륨, 히드록시에틸 메타아크릴레이트, 히드록실 에틸 아크릴레이트, 폴리비닐렌, 폴리에틸비닐에테르, 폴리메틸 메타크릴레이트, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 폴리알카노에이트, 폴리락트산, 폴리락테이트, 폴리(3-히드록시부티레이트), 술폰화된 하이드로겔, AMPS (2-아크릴아미도-2-메틸-1-프로판술폰산), SEM (술포에틸메타크릴레이트), SPM (술포프로필 메타크릴레이트), SPA (술포프로필 아크릴레이트), N,N-디메틸-N-메타아크릴옥시에틸-N-(3-술포프로필)암모니움 베타인, 메타아크릴산 아미노프로필-디메틸 암모니움 술포베타인, SPI (이타코닌산-비스(1-프로필 술포니자시드-3) 에스테르 디-칼륨 염), 이타코닌산s, AMBC (3-아크릴아미도-3-메틸부타논산), 베타-카르복시에틸 아크릴레이트 (아크릴산 이합체), 및 말레 무수물-메틸비닐 에테르 폴리머, 이의 유도체들, 이의 염들, 이의 산, 및 이의 조합들. 특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 약학 조성물들은 예를 들면, 캡슐, 카시에(cachets), 알약, 테블릿, 로젠지(풍미제 베이스, 이를 테면 슈크로스 및 아카시아 또는 트라가탄 이용), 분말, 과립, 또는 수성 또는 비-수성 액체에 용액 또는 현탁액, 수중유(oil-in-water) 또는 유중수(water-in-oil) 에멀션, 또는 엘릭시르(elixir) 또는 시럽, 또는 캔디 (비활성 베이스, 이를 테면 젤라틴 및 글리세린, 또는 슈크로스 및 아카시아 이용), 및/또는 구강 세척제로 경구 투여될 수 있는데, 이들 각각은 본 명세서의 사전 결정된 양의 화합물 및 임의선택적으로 하나 또는 그 이상의 활성 성분을 함유한다. 본 명세서의 화합물 및 임의선택적으로 하나 또는 그 이상의 다른 활성 성분은 또한 볼루스(bolus), 연질약(electuary), 또는 페이스트로 또한 투여될 수 있다.
경구 투여를 위한 고체 투약형 (가령, 캡슐, 테블릿, 알약, 당의정, 분말 및 과립)에서, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 화합물은 예를 들면, 구연산나트륨, 인산이칼슘, 충전제 또는 전색제(extender) (가령, 전분, 락토스, 슈크로스, 포도당, 만니톨, 및 실리카산), 결합제 (가령, 카르복시메틸셀룰로오스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 슈크로스, 및 아카시아), 습윤제 (가령, 글리세롤), 붕해 물질 (가령, 한천-한천, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 실리케이트, 및 탄산 나트륨), 용액 지체 물질 (가령, 파라핀), 흡수 가속화제 (가령, 4차 암모니움 화합물), 습윤 물질 (가령, 세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트), 흡수제 (가령, 카올린 및 벤토나이트 진흙), 윤활제 (가령, 활석, 스테아레이트 칼슘, 스테아레이트 마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 라우릴 술페이트 나트륨), 발색 물질, 및 이의 혼합물을 포함하는 하나 또는 그 이상의 약학으로 수용가능한 운반체와 혼합될 수 있다. 캡슐, 테블릿 및 알약의 경우, 상기 약학 제형 (조성물)은 완충 물질을 또한 포함할 수 있다. 유사한 형태의 고체 조성물은 가령, 락토스 또는 유당을 포함하는 하나 또는 그 이상의 부형제 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜을 이용하여 연질 및 경질 충전된 젤라틴 캡슐 안에 충전물로 이용될 수 있다.
상기 약학 조성물의 경구 투여를 위한 액체 투약형은 약학으로 수용가능한 에멀션, 마이크로에멀션, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함할 수 있다. 활성 성분(들)에 추가하여, 액체 투약형은 당분야에서 통상적으로 이용하는 비활성 희석액, 예를 들면, 물 또는 기타 용매, 가용화 물질 및/또는 유화제 [가령, 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 또는 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (가령, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 검, 올리브, 피마자, 및 참깨유), 글리세롤, 테트라히드로퓨릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 및 이의 혼합물]을 포함할 수 있다. 비활성 희석제 이외에, 경구 제형은 예를 들면, 가습 물질, 유화 및 현탁 물질, 감미 물질, 풍미 물질, 발색 물질, 향료 물질, 보존 물질, 및 이의 조합들을 포함하는 어쥬번트를 또한 포함할 수 있다.
현탁액은 활성 화합물 이외에, 예를 들어 에톡시화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨, 소르비탄 에스테르, 미정질 셀룰로즈, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 한천-한천, 트라가탄 및 이들의 조합을 포함할 수 있다.
미생물의 작용 및/또는 성장의 예방은 파라벤, 클로로부탄올 및 페놀 소르브산을 비롯한 다양한 항박테리아 및 항진균제를 포함시킴으로써 확보될 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 조성물에 예를 들어, 당 또는 염화나트륨을 포함하는 등장화제를 포함시키는 것이 바람직할 수 있다. 또한, 예를 들어, 모노스테아르산 알루미늄 및 젤라틴을 포함하는 흡수를 지연시키는 물질을 포함시킴으로써 주사가능한 약형의 연장된 흡수가 이루어질 수 있다.
투여 섭생은 본 발명의 하나 이상의 물질의 작용을 변형시키는 다양한 인자를 고려하는 주치의에 의해 결정될 것이다. 적혈구 세포 형성을 촉진시키는 TGF-베타 슈퍼패밀리 이형다합체 복합체의 경우, 환자의 적혈구 수, 헤모글로빈 수치, 원하는 목표 적혈구 수, 환자의 나이, 환자의 식단, 억제된 적혈구 세포 수준에 원인이될 수 있는 질병의 중증도, 기여할 수 있는 질병의 중증도, 투여 시간 및 다른 임상 인자들을 포함하지만 이에 국한되지는 다양한 인자들을 포함할 수 있다. 최종 조성물에 기타 공지의 활성 물을 추가하면 이 약형에 또한 영향을 줄 수 있다. 다음의 하나 또는 그 이상의 적혈구 세포 수준, 헤모글로빈 수준, 망상세포 수준, 및 조혈 과정의 다른 지표의 주기적 측정에 의해 진행을 모니터할 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서는 본 명세서에 따른 하나 또는 그 이상의 물질의 생체내 생산을 위한 유전자 요법을 또한 제공한다. 그러한 치료는 상기 나열된 바와 같은 하나 이상의 장애를 갖는 세포 또는 조직 내로 약물 서열을 도입함으로써 그의 치료 효과를 얻을 수 있다. 상기 물질 서열의 전달은 예를 들어, 키메라 바이러스 또는 콜로이드성 분산 시스템과 같은 재조합 발현 벡터를 사용하여 달성될 수 있다. 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 물질 서열의 바람직한 치료 전달은 표적화된 리포좀을 사용하는 것이다.
본 명세서에서 교시된 바와 같이, 유전자 요법에 이용될 수 있는 다양한 바이러스 벡터는 아데노바이러스, 헤르페스 바이러스, 유두종, 또는 RNA 바이러스 (가령, 레트로바이러스)를 포함한다. 레트로바이러스 벡터는 뮤린 또는 조류 레트로바이러스의 유도체일 수 있다. 단일 외부 유전자가 삽입될 수 있는 레트로바이러스 벡터의 예로는 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다: 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스 (MoMuLV), 하베이 뮤린 육종 바이러스 (HaMuSV), 뮤린 유방 종양 바이러스 (MuMTV), 및 라우스 육종 바이러스 (RSV). 다수의 추가 레트로바이러스 벡터가 다중 유전자를 혼입할 수 있다. 이들 모든 벡터는 선택가능한 표지의 유전자를 전달 또는 혼입하여, 형질유도된 세포를 동정 및 생성할 수 있다. 레트로바이러스 벡터는 예를 들면, 당, 당지질, 또는 단백질을 부착시킴으로써, 표적-특이적으로 만들어질 수 있다. 항체를 이용한 바람직한 표적화가 이루어진다. 당업자는 특이적 폴리뉴클레오티드 서열을 레트로바이러스 게놈 안에 삽입시키거나 또는 바이러스 외피에 부착시켜, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 물질을 함유하는 레트로바이러스 벡터의 표적 특이적 운반이 가능하다는 것을 인지할 것이다.
대안으로, 조직 배양 세포는 통상적인 인산칼슘 형질감염에 의해 레트로바이러스 구조 유전자 (gag, pol, 및 env)를 인코드하는 플라스미드로 직접적으로 형질감염될 수 있다. 이들 세포는 관심 대상의 유전자를 함유하는 벡터 플라스미드로 형질감염된다. 생성 세포는 레트로바이러스 벡터를 배양 배지로 방출한다.
본 발명의 하나 또는 그 이상의 물질에 대한 또다른 표적화된 전달 시스템은 콜로이드성 분산 시스템이다. 콜로이드성 분산 시스템은 예를 들면, 거대분자 복합체, 나노캡슐, 미소구, 비드, 그리고 수중유 에멀션, 미셀, 혼합 미셀 및 리포좀을 포함하는 지질-기반 시스템을 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 본 명세서의 바람직한 콜로이드 시스템은 리포좀이다. 리포좀은 인공 막 소포로, 시험관 및 생체내 운반 비이클로 유용하다. RNA, DNA, 및 고유 비리온은 수성 내부에 포집되고, 생물학적 활성 형태로 세포로 운반된다. 가령, Fraley, et al. (1981) Trends Biochem. Sci., 6:77 참고. 리포좀 비이클을 이용한 효과적인 유전자 전달 방법은 당분야에 공지되어 있다. 가령, Mannino, et al. (1988) Biotechniques, 6:682, 1988.
리포좀의 조성물은 통상 인지질의 조합으로, 스테로이드 (가령,콜레스테롤)를 포함할 수 있다. 리포좀의 물리적 성질은 pH, 이온 강도 그리고 이가양이온 존재에 따라 달라진다. 다른 인지질 또는 다른 지질이 또한 이용될 수 있는데, 예를 들면 포스파티딜 화합물 (가령, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜콜린, 포스파티딜세린, 포스파티딜에탄올아민, 스핑고리피드, 세레브로시드, 및 강글리오시드), 난 포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 및 디스테아로일포스파티딜콜린이 포함된다. 리포좀의 표적화는 예를 들면, 장기(organ)-특이성, 세포-특이성, 및 소기관-특이성에 기반을 두고, 당분야에 공지되어 있다.
예증
지금부터 본 발명이 일반적으로 기술되며, 단지 본 발명의 특정 구체예 및 실시 양태는 예시하기 위한 목적으로 포함되는 것으로, 이에 본 발명을 제한하려는 의도는 아니며, 하기 실시 예를 참조함으로써 보다 용이하게 이해될 것이다.
실시예
1.
ActRIIB
-
Fc
:
ALK4
-
Fc
이형이합체
생성
출원인은 인간 ActRIIB 및 인간 ALK4의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 별도로 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭되며, 이들 각 서열은 하기에서 제시된다.
ActRIIB-Fc 또는 ALK4-Fc 동형이합체 복합체와 반대로, ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형화학성 복합체의 형성을 촉진하는 방법은 비대칭 이형화학성 복합체 형성을 유도하기 위하여 Fc 도메인의 아미노산 서열에 변경을 도입시키는 것이다. Fc 도메인을 이용하여 비대칭 상호작용 쌍을 만드는 많은 상이한 방법들이 본 명세서에서 설명된다.
한 가지 방법에서, 차례로 서열 번호: 100-102 및 104-106의 ActRIIB-Fc 및 ALK4-Fc 폴리펩티드 서열에서 설명된 바와 같이, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다. ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드 및 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드는 각각 조직 플라스미노겐 활성자 (TPA) 리더를 이용한다: MDAMKRGLCCVLLLCGAVFVSP (서열 번호: 98).
ActRIIB-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 100)는 하기에 나타낸다:
리더 (신호) 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 ActRIIB 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신 (K)이 제거된, 서열 번호: 100의 아미노산 서열이 제공된다.
이 ActRIIB-Fc 융합 단백질은 다음의 핵산 서열 (서열 번호: 101)에 의해 인코드된다:
1
ATGGATGCATGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC
51
AGTCTTCGTT TCGCCCGGCG CCTCTGGGCG TGGGGAGGCT GAGACACGGG
101
AGTGCATCTA CTACAACGCC AACTGGGAGC TGGAGCGCAC CAACCAGAGC
151
GGCCTGGAGC GCTGCGAAGG CGAGCAGGAC AAGCGGCTGC ACTGCTACGC
201
CTCCTGGCGC AACAGCTCTG GCACCATCGA GCTCGTGAAG AAGGGCTGCT
251
GGCTAGATGA CTTCAACTGC TACGATAGGC AGGAGTGTGT GGCCACTGAG
301
GAGAACCCCC AGGTGTACTT CTGCTGCTGT GAAGGCAACT TCTGCAACGA
351
GCGCTTCACT CATTTGCCAG AGGCTGGGGG CCCGGAAGTC ACGTACGAGC
401
CACCCCCGAC AGCCCCCACC GGTGGTGGAA CTCACACATG CCCACCGTGC
451
CCAGCACCTG AACTCCTGGG GGGACCGTCA GTCTTCCTCT TCCCCCCAAA
501
ACCCAAGGAC ACCCTCATGA TCTCCCGGAC CCCTGAGGTC ACATGCGTGG
551
TGGTGGACGT GAGCCACGAA GACCCTGAGG TCAAGTTCAA CTGGTACGTG
601
GACGGCGTGG AGGTGCATATGCCAAGACA AAGCCGCGGG AGGAGCAGTA
651
CAACAGCACG TACCGTGTGG TCAGCGTCCT CACCGTCCTG CACCAGGACT
701
GGCTGAATGG CAAGGAGTAC AAGTGCAAGG TCTCCAACAA AGCCCTCCCA
751
GCCCCCATCG AGAAAACCAT CTCCAAAGCC AAAGGGCAGC CCCGAGAACC
801
ACAGGTGTAC ACCCTGCCCC CATCCCGGAA GGAGATGACC AAGAACCAGG
851
TCAGCCTGAC CTGCCTGGTC AAAGGCTTCT ATCCCAGCGA CATCGCCGTG
901
GAGTGGGAGA GCAATGGGCA GCCGGAGAAC AACTACAAGA CCACGCCTCC
951
CGTGCTGAAG TCCGACGGCT CCTTCTTCCT CTATAGCAAG CTCACCGTGG
1001
ACAAGAGCAG GTGGCAGCAG GGGAACGTCT TCTCATGCTC CGTGATGCAT
1051
GAGGCTCTGC ACAACCACTA CACGCAGAAG AGCCTCTCCC TGTCTCCGGG
1101
TAAA (서열 번호: 101)
성숙 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 102)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된다.
1
GRGEAETREC IYYNANWELE RTNQSGLERC EGEQDKRLHC YASWRNSSGT
51
IELVKKGCWL DDFNCYDRQE CVATEENPQV YFCCCEGNFC NERFTHLPEA
101
GGPEVTYEPP PTAPTGGGTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS
151
RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS
201
VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS
251
RKEMTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT PPVLKSDGSF
301
FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGK
(서열 번호: 102)
ALK4-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 104)의 상보적 형태는 다음과 같다:
1
MDAMKRGLCC VLLLCGAVFV SPGASGPRGV QALLCACTSC LQANYTCETD
51
GACMVSIFNL DGMEHHVRTC IPKVELVPAG KPFYCLSSED LRNTHCCYTD
101
YCNRIDLRVP SGHLKEPEHP SMWGPVETGG GTHTCPPCPA PELLGGPSVF
151
LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP
201
REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG
251
QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY
301
DTTPPVLDSD GSFFLYSDLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL
351
SLSPG (서열 번호: 104)
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 100 및 102의 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신이 아스파르트산으로 대체됨)이 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 104의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
ALK4-Fc 융합 단백질은 다음 핵산 (서열 번호: 105)에 의해 인코드된다:
1
ATGGATGCATGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC
51
AGTCTTCGTT TCGCCCGGCG CCTCCGGGCC CCGGGGGGTC CAGGCTCTGC
101
TGTGTGCGTG CACCAGCTGC CTCCAGGCCA ACTACACGTG TGAGACAGAT
151
GGGGCCTGCTGGTTTCCAT TTTCAATCTG GATGGGATGG AGCACCATGT
201
GCGCACCTGC ATCCCCAAAG TGGAGCTGGT CCCTGCCGGG AAGCCCTTCT
251
ACTGCCTGAG CTCGGAGGAC CTGCGCAACA CCCACTGCTG CTACACTGAC
301
TACTGCAACA GGATCGACTT GAGGGTGCCC AGTGGTCACC TCAAGGAGCC
351
TGAGCACCCG TCCATGTGGG GCCCGGTGGA GACCGGTGGT GGAACTCACA
401
CATGCCCACC GTGCCCAGCA CCTGAACTCC TGGGGGGACC GTCAGTCTTC
451
CTCTTCCCCC CAAAACCCAA GGACACCCTC ATGATCTCCC GGACCCCTGA
501
GGTCACATGC GTGGTGGTGG ACGTGAGCCA CGAAGACCCT GAGGTCAAGT
551
TCAACTGGTA CGTGGACGGC GTGGAGGTGC ATAATGCCAA GACAAAGCCG
601
CGGGAGGAGC AGTACAACAG CACGTACCGT GTGGTCAGCG TCCTCACCGT
651
CCTGCACCAG GACTGGCTGA ATGGCAAGGA GTACAAGTGC AAGGTCTCCA
701
ACAAAGCCCT CCCAGCCCCC ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AGCCAAAGGG
751
CAGCCCCGAG AACCACAGGT GTACACCCTG CCCCCATCCC GGGAGGAGAT
801
GACCAAGAAC CAGGTCAGCC TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTATCCCA
851
GCGACATCGC CGTGGAGTGG GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAACAACTAC
901
GACACCACGC CTCCCGTGCT GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTATAG
951
CGACCTCACC GTGGACAAGA GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT
1001
GCTCCGTGAT GCATGAGGCT CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC
1051
TCCCTGTCTC CGGGT (서열 번호:105)
성숙 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 106)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1
SGPRGVQALL CACTSCLQAN YTCETDGACM VSIFNLDGME HHVRTCIPKV
51
ELVPAGKPFY CLSSEDLRNT HCCYTDYCNR IDLRVPSGHL KEPEHPSMWG
101
PVETGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD
151
VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN
201
GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR EEMTKNQVSL
251
TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYDTTP PVLDSDGSFF LYSDLTVDKS
301
RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP G (서열 번호: 106)
차례로 서열 번호: 102 및 서열 번호: 106의 ActRIIB-Fc 및 ALK4-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK4-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 방법에서, 차례로 서열 번호: 401-402 및 403-404의 ActRIIB-Fc 및 ALK4-Fc 폴리펩티드 서열에서 설명된 바와 같이, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드 및 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드는 각각 조직 플라스미노겐 활성자 (TPA) 리더를 이용한다: MDAMKRGLCCVLLLCGAVFVSP (서열 번호: 98).
ActRIIB-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 401)은 하기에 나타낸다:
리더 (신호) 서열 및 링커서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 401의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드 다음과 같다:
1
GRGEAETREC IYYNANWELE RTNQSGLERC EGEQDKRLHC YASWRNSSGT
51
IELVKKGCWL DDFNCYDRQE CVATEENPQV YFCCCEGNFC NERFTHLPEA
101
GGPEVTYEPP PTAPTGGGTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS
151
RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS
201
VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPC
251
REEMTKNQVS LWCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT PPVLDSDGSF
301
FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGK
(서열 번호:402)
상보적 형태의 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 403) 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거될 수 있다.
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 401 및 102의 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK4 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 403의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK4-Fc 융합 단백질 서열은 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거될 수 있다.
1
SGPRGVQALL CACTSCLQAN YTCETDGACM VSIFNLDGME HHVRTCIPKV
51
ELVPAGKPFY CLSSEDLRNT HCCYTDYCNR IDLRVPSGHL KEPEHPSMWG
101
PVETGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD
151
VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN
201
GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVCTLPPSR EEMTKNQVSL
251
SCAVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF LVSKLTVDKS
301
RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK (서열 번호: 404)
차례로 서열 번호: 402 및 서열 번호:404의 ActRIIB-Fc 및 ALK4-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK4-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
2.
ActRIIB
-
Fc
동형이합체 및
ALK4
-
Fc
동형이합체와
비교하여 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc
이형이합체의
리간드
결합 프로파일
상기에서 설명된 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 ActRIIB-Fc 및 ALK4-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다. ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체, ActRIIB-Fc 동형이합체, 및 ALK4-Fc 동형이합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
리간드 해리 속도는 리간드 트랩을 평가하는 특별히 유의적인 매개변수다. 생체에 투여된 가용성 수용체-Fc 단백질은 리간드의 고유 수용체와 일정한 경쟁에 있다. TGF베타 슈퍼패밀리의 내생 리간드는 전형적으로 세포 표면에서 동족(cognate) 수용체에 결합할 때, 다단계 신호 유도 공정은 분자 시간 규모에서 상대적으로 느리게 촉발된다. 리간드 결합 사건으로부터 세포내 신호를 생성하는데 상당한 시간이 요구되기 때문에 고유의 수용체는 부분적으로 리간드로부터 천천히 해리된다. 리간드와 효과적으로 경쟁하는 가용성 수용체-Fc 단백질의 경우, 이 리간드와 상기 복합체의 해리속도는 리간드와 고유의 수용체에 대한 해리 속도와 유사하거나, 또는 이보다 느려야 한다. 리간드 결합은 역동적인 과정이며, 리간드의 일부분은 항상 결합안된 형태이므로, 가능한 한 오랫동안 표적 리간드를 포획하기 위하여는 것이 수용체-Fc 단백질의 투여분량이 치료 적으로 중요하다. 포획된 리간드에 우호적으로 결합 평형을 변화시키는 한 가지 방법은 억제제의 농도 (투여분량 수준)를 높이는 것이지만 내성과 안전성을 감소시키는 오프-타겟 효과를 유발할 수 있다. 바람직한 접근법은 낮은 농도의 억제제에서 효과적인 수준의 리간드 길항 작용을 달성하기 위해, 리간드 결합 선택성과 함께 더 느린 리간드 해리속도 (더 긴 포획시간)을 갖는 억제제를 사용하는 것이다.
이들 비교 결합 데이타는 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체가 ActRIIB-Fc 또는 ALK4-Fc 동형이합체에 대하여 변경된 결합 프로파일/선택성을 갖는다는 것이 실증한다. ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 동형이합체와 비교하여 액티빈 B에 대하여 강화된 결합을 보이며, ActRIIB-Fc 동형이합체에서 관찰된 바와 같이, 액티빈 A, GDF8, 및 GDF11에 대하여 강력한 결합을 유지하고, 그리고 BMP9, BMP10, 및 GDF3에 대하여 실질적으로 감소된 결합을 나타낸다. 구체적으로, BMP9는 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체에 대하여 낮은 친화력 또는 탐지불가능한 친화력을 나타내고, 한편 이 리간드는 ActRIIB-Fc 동형이합체에 강력하게 결합한다. ActRIIB-Fc 동형이합체와 마찬가지로, 상기 이형이합체는 BMP6에 대하여 중간-수준의 결합을 유지한다. 도 6 참고.
따라서 이들 결과로부터 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 ActRIIB-Fc 동형이합체와 비교하였을 때, 액티빈 A, 액티빈 B, GDF8, 및 GDF11의 더 큰 선택적 길항제라는 것을 실증된다. 따라서, ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 특정 용도에서 ActRIIB-Fc 동형이합체보다 더 유용할 것이며, 이때 이러한 선택적 길항작용이 유익하다. 실시예는 하나 또는 그 이상의 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 AC, GDF8, 및 GDF11의 길항작용을 유지하지만, 하나 또는 그 이상의 BMP9, BMP10, 및 BMP6의 길항작용은 최소화시키는 것이 바람직한 치료 용도를 포함한다.
실시예
3. 마우스에서
ActRIIB
-
Fc
동형이합체와
비교하였을 때, ActRIIB-Fc:ALK4-Fc
이형이합체의
활성 프로파일
동형이합체와 이형이합체성 복합체들은 생체내 활성 프로파일의 차이를 조사하기 위하여 마우스에서 테스트되었다. 야생형 C57BL/6 마우스에게 대략 10 주령에서 시작하여 4주간 주당 2회 ActRIIB-Fc 동형이합체 (10 mg/kg), ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체 (3 또는 10 mg/kg), 또는 비이클 (인산염-완충된 염수, PBS)을 피하로 투여하였다 (한 집단에서 n = 9마리 ). ALK4-Fc 동형이합체는 표면 플라스몬 공명에서 측정하였을 때 무-세포 조건하에서 높은 친화력으로 리간드에 결합하는 능력이 없기 때문에 생체내에서 테스트되지 않았다. 연구 종점은 다음을 포함한다: 체중; 시작 및 연구 종료(4주)에 핵자기공명(NMR)에 의해 측정된 제지방량 및 지방총량; 시작 및 연구 종료(4주)에 이중 에너지 X-선 흡광분석(DEXA)에 의해 측정된 총 골 미네랄 밀도; 그리고 4주차에 측정된 비복근(gastrocnemius), 대퇴직근, 및 흉근의 중량.
연구 결과는 상기 표에 요약된다. 예상한 바와 같이, ActRIIB-Fc 동형이합체는 신체 조성물에서 상당한 변화를 여기하였고, 이는 GDF8 및 액티빈 억제의 공지 효과와 일관된다. ActRIIB-Fc 동형이합체를 사용한 야생형 마우스의 치료는 비히클 처리 대조군과 비교하여 연구 과정 동안 체중이 두 배 이상 증가했다. 이 순 체중 증가와 함께 제지방량과 총 골 미네랄 밀도의 유의적인 증가뿐만 아니라, 비이클과 비교하여 지방총량의 현저한 감소가 있었다. 제지방 (전형적으로 마우스의 체중의 약 70%)이 지방량(전형적으로 체중의 약 10%)보다 훨씬 더 많기 때문에, 제지방 및 지방 조직에서 표준화된(백분율-기반) 변화는 이들 대응에서 절대 변화와는 상이하다는 점을 인지해야 한다. 비복근, 대퇴근, 및 흉근이 포함된 개별 골근육은 ActRIIB-Fc 동형이합체를 이용한 치료 과정에서 비이클 대조와 비교하여 중량에서 모두 유의적으로 증가되었다.
ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 이들 두 복합체의 차등적인 리간드 선택성에도 불구하고, ActRIIB-Fc 동형이합체와 놀라울 정도로 유사한 효과를 만든다. 상기 표에 나타낸 바와 같이, 10 mg/kg의 용량 수준에서 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체로 마우스를 치료하면, 열거된 모든 종점에 대하여 동일한 용량 수준에서 ActRIIB-Fc 동형이합체의 효과와 정합되거나, 거의 정합되거나, 또는 이 효과를 초과한다. 3 mg/kg에서 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체의 효과는 10 mg/kg과 비교하여 몇 가지 종점에서 약하게 감쇠되었으며, 따라서 투여분량-효과 상관관계에 대한 증거를 제시한다.
따라서, ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 골격근 및 뼈에는 유익한 동화성(anabolic) 효과를, 그리고 지방 조직에는 이화성(catabolic) 효과를 발휘하는데, 이들은 ActRIIB-Fc 동형이합체의 효과와 매우 유사하다. 그러나, ActRIIB 동형이합체와는 달리, ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 BMP9 및 BMP10에 매우 낮은 친화력 또는 일시적 결합만을 나타내고, 따라서 이들 리간드에 의해 매개되는 공정, 이를 테면 혈관신생을 동시에 억제하지는 않을 것이다. 이 신규한 선택성은 예를 들면, 근육과 뼈에는 자극 효과를, 그리고 변경된 혈관신생은 필요하지 않지만, 지방에는 저해 효과를 필요로 하는 환자의 치료에 유용할 것이다.
실시예
4.
ActRIIB
-
Fc
:
ALK3
-
Fc
이형이합체의
생성
출원인은 인간 ActRIIB 및 인간 ALK3의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
제 1 방법으로, ActRIIB-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 1에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 100-102로 제공된다.
상보적 ALK3-Fc 융합 단백질은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
1
MDAMKRGLCC VLLLCGAVFV SPGAQNLDSM LHGTGMKSDS DQKKSENGVT
51
LAPEDTLPFL KCYCSGHCPD DAINNTCITN GHCFAIIEED DQGETTLASG
101
CMKYEGSDFQ CKDSPKAQLR RTIECCRTNL CNQYLQPTLP PVVIGPFFDG
151
SIRTGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD
201
VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN
251
GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR EEMTKNQVSL
301
TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYDTTP PVLDSDGSFF LYSDLTVDKS
351
RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP G (서열 번호: 115)
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신은 아스파르트산으로 대체됨)이 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 115의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
ALK3-Fc 융합 단백질은 다음 핵산 (서열 번호: 116)에 의해 인코드된다:
1
ATGGATGCATGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC
51
AGTCTTCGTT TCGCCCGGCG CCCAGAATCT GGATAGTATG CTTCATGGCA
101
CTGGGATGAA ATCAGACTCC GACCAGAAAA AGTCAGAAATGGAGTAACC
151
TTAGCACCAG AGGATACCTT GCCTTTTTTA AAGTGCTATT GCTCAGGGCA
201
CTGTCCAGAT GATGCTATTA ATAACACATG CATAACTAAT GGACATTGCT
251
TTGCCATCAT AGAAGAAGAT GACCAGGGAG AAACCACATT AGCTTCAGGG
301
TGTATGAAAT ATGAAGGATC TGATTTTCAG TGCAAAGATT CTCCAAAAGC
351
CCAGCTACGC CGGACAATAG AATGTTGTCG GACCAATTTTGTAACCAGT
401
ATTTGCAACC CACACTGCCC CCTGTTGTCA TAGGTCCGTT TTTTGATGGC
451
AGCATTCGAA CCGGTGGTGG AACTCACACTGCCCACCGT GCCCAGCACC
501
TGAACTCCTG GGGGGACCGT CAGTCTTCCT CTTCCCCCCA AAACCCAAGG
551
ACACCCTCAT GATCTCCCGG ACCCCTGAGG TCACATGCGT GGTGGTGGAC
601
GTGAGCCACG AAGACCCTGA GGTCAAGTTC AACTGGTACG TGGACGGCGT
651
GGAGGTGCAT AATGCCAAGA CAAAGCCGCG GGAGGAGCAG TACAACAGCA
701
CGTACCGTGT GGTCAGCGTC CTCACCGTCC TGCACCAGGA CTGGCTGAAT
751
GGCAAGGAGT ACAAGTGCAA GGTCTCCAAC AAAGCCCTCC CAGCCCCCAT
801
CGAGAAAACC ATCTCCAAAG CCAAAGGGCA GCCCCGAGAA CCACAGGTGT
851
ACACCCTGCC CCCATCCCGG GAGGAGATGA CCAAGAACCA GGTCAGCCTG
901
ACCTGCCTGG TCAAAGGCTT CTATCCCAGC GACATCGCCG TGGAGTGGGA
951
GAGCAATGGG CAGCCGGAGA ACAACTACGA CACCACGCCT CCCGTGCTGG
1001
ACTCCGACGG CTCCTTCTTC CTCTATAGCG ACCTCACCGT GGACAAGAGC
1051
AGGTGGCAGC AGGGGAACGT CTTCTCATGC TCCGTGATGC ATGAGGCTCT
1101
GCACAACCAC TACACGCAGA AGAGCCTCTC CCTGTCTCCG GGT
(서열 번호: 116)
성숙 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 117)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1
GAQNLDSMLH GTGMKSDSDQ KKSENGVTLA PEDTLPFLKC YCSGHCPDDA
51
INNTCITNGH CFAIIEEDDQ GETTLASGCM KYEGSDFQCK DSPKAQLRRT
101
IECCRTNLCN QYLQPTLPPV VIGPFFDGSI RTGGGTHTCP PCPAPELLGG
151
PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA
201
KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS
251
KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
301
ENNYDTTPPV LDSDGSFFLY SDLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT
351
QKSLSLSPG (서열 번호: 117)
차례로 서열 번호: 102 및 서열 번호:117의 ActRIIB-Fc 및 ALK3-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK3-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
차례로 서열 번호: 401-402 및407-408의 ActRIIB-Fc 및 ALK3-Fc 폴리펩티드 서열에서 설명된 바와 같이 비대칭 Fc 융합 단백질을 이용하여 이형다합체 복합체의 형성을 촉진시키는 또다른 방법에 있어서, 상보적 소수성 상호작용 및 추가적인 분자간 이황화결합을 도입시키기 위하여 Fc 도메인이 변경된다. ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드 서열은 실시예 1에서 논의된다.
상보적 형태의 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 407)는 다음과 같다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 401 및 102의 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK3 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 407의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 408)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신(K)이 제거될 수 있다.
1
GAQNLDSMLH GTGMKSDSDQ KKSENGVTLA PEDTLPFLKC YCSGHCPDDA
51
INNTCITNGH CFAIIEEDDQ GETTLASGCM KYEGSDFQCK DSPKAQLRRT
101
IECCRTNLCN QYLQPTLPPV VIGPFFDGSI RTGGGTHTCP PCPAPELLGG
151
PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA
201
KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS
251
KAKGQPREPQ VCTLPPSREE MTKNQVSLSC AVKGFYPSDI AVEWESNGQP
301
ENNYKTTPPV LDSDGSFFLV SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT
351
QKSLSLSPGK (서열 번호: 408)
차례로 서열 번호: 402 및 서열 번호:408의 ActRIIB-Fc 및 ALK3-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK3-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
5.
ActRIIB
-
Fc
동형이합체와
ALK3
-
Fc
동형이합체와
비교하여 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc
이형이합체
리간드
결합 프로파일
상기에서 설명된 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 ActRIIB-Fc 및 ALK3-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다. ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체, ActRIIB-Fc 동형이합체, 및 ALK3-Fc 동형이합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
이들 비교 결합 데이타는 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체가 ActRIIB-Fc 동형이합체 또는 ALK3-Fc 동형이합체에 대하여 변경된 결합 프로파일/선택성을 갖는다는 것이 실증한다. ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 예외적으로 높은 친화력으로 BMP2 및 BMP4에 결합하고, 동형이합체와 비교하여 BMP5, BMP6, BMP7, GDF5, GDF6, 및 GDF7에 대하여 상당히 강화된 결합을 나타낸다. ActRIIB 동형이합체와 비교하여, ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 액티빈 A, 액티빈 B, BMP10, GDF8, 및 GDF11에 대하여 감소된 결합을 나타내고, 또한 이들 리간드 간에도 더 큰 정도로 구별되는데, 구체적으로 액티빈 A와 액티빈 B는 상당히 구별된다. 또한, BMP9 및 GDF3에 높은 친화력으로 결합하는 ActRIIB-Fc 동형이합체의 능력은 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체의 경우에는 존재하지 않는다. 도 7 참고.
따라서 이 결과들은 ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체가 액티빈 B, GDF5/GDF6/GDF7 리간드 하위패밀리, 그리고 가장 두드러진 BMP9을 제외한 몇 가지 주요 BMP 리간드들의 선택적 억제제임이을 증명한다. 따라서, ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 특정 용도에서 ActRIIB-Fc 동형이합체 또는 ALK3-Fc 동형이합체보다 더 유용할 것이며, 이때 이러한 선택적 길항작용이 유익하다. 실시예는 BMP2, BMP4, BMP5, 및 BMP6 또는 액티빈 B의 길항작용은 유지하지만, 동화성 근육 효과를 가진 하나 또는 그 이상의 리간드들 (가령, 액티빈 A 및 GDF8) 또는 혈관신생 효과를 가진 리간드들 (가령, BMP9 및 BMP10)의 길항작용은 최소화시키는 것이 바람직한 치료 용도를 포함한다.
실시예
6. 마우스에서
ActRIIB
-
Fc
동형이합체
및
ALK3
-
Fc
동형이합체와
비교하여
ActRIIB
-
Fc
:
ALK3
-
Fc
이형이합체의
활성 프로파일
동형이합체와 이형이합체성 복합체들은 생체내 활성 프로파일의 차이를 조사하기 위하여 마우스에서 테스트되었다. 야생형 C57BL/6 마우스에게 대략 10 주령에서 시작하여 6.5주간(46일) 동안 주당 2회 ActRIIB-Fc 동형이합체 (10 mg/kg), ALK3-Fc 동형이합체(10 mg/kg), ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체 (3 또는 10 mg/kg), 또는 비이클 (인산염-완충된 염수, PBS)을 정맥으로 투여하였다 (한 집단에서 n = 5마리 ). 연구 종점은 다음을 포함한다: 체중; 시작 및 연구 종료(4주)에 핵자기공명(NMR)에 의해 측정된 지방총량; 시작 및 연구 종료(6.5주)에 이중 에너지 X-선 흡광분석(DEXA)에 의해 측정된 총 골 미네랄 밀도; 그리고 6.5주차에 측정된 비복근(gastrocnemius), 대퇴직근, 및 흉근의 중량.
연구 결과는 상기 표에 요약된다. 예상대로, ActRIIB-Fc 동형이합체는 비이클과 비교하여 체중과 총 골 미네랄 밀도를 현저히 증가시켰으며, 지방총량을 유의적으로 감소시켰다. 또한 예상대로, ALK3-Fc 동형이합체는 비히클에 비해 총 골 미네랄 밀도를 유의적으로 증가시켰지만, ActRIIB-Fc 동종이합체와 달리 체중 또는 지방총량을 현저하게 변화시키지 않았다. ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 ActRIIB-Fc 동형이합체 또는 ALK3-Fc 동형이합체와는 눈에 띄게 상이한 활성 프로파일을 나타내었다. 어느 한 투여 량에서 ActRIIB-Fc:ALK4-Fc 이형이합체로 마우스를 처리하면, 이들중 어느 동형이합체와 마찬가지로 골 미네랄 밀도를 유의적으로 증가시켰다. 그러나, ALK3-Fc 동형이합체와 달리, ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 지방량을 유의적으로 감소시켰지만, ActRIIB-Fc 동형이합체와는 달리, ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 체중의 변화없이 지방량을 상당히 감소시켰다. 따라서, ActRIIB-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 지방 조직에 잠재적으로 유익한 효과와 함께, 뼈에 유익한 효과를 발휘한다. 이 신규한 선택성은 예를 들면, 뼈에는 자극 효과를, 그리고 변경된 체중은 필요하지 않지만, 지방에는 저해 효과를 필요로 하는 환자의 치료에 유용할 것이다.
실시예
7.
ActRIIB
-
Fc
:
ALK7
-
Fc
이형이합체의
생성
출원인은 인간 ActRIIB 및 인간 ALK7의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK7-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
제 1 방법으로, ActRIIB-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 1에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 100-102로 제공된다.
상보적 ALK7-Fc 융합 단백질은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다(서열번호:112):
신호 서열 및 링커서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신은 아스파르트산으로 대체됨)이 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 112의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
ALK7-Fc 융합 단백질은 다음 핵산 (서열 번호: 113)에 의해 인코드된다:
1
ATGGATGCATGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC
51
AGTCTTCGTT TCGCCCGGCG CCGGACTGAA GTGTGTATGT CTTTTGTGTG
101
ATTCTTCAAA CTTTACCTGC CAAACAGAAG GAGCATGTTG GGCATCAGTC
151
ATGCTAACCA ATGGAAAAGA GCAGGTGATC AAATCCTGTG TCTCCCTTCC
201
AGAACTGAAT GCTCAAGTCT TCTGTCATAG TTCCAACAAT GTTACCAAAA
251
CCGAATGCTG CTTCACAGAT TTTTGCAACA ACATAACACT GCACCTTCCA
301
ACAGCATCAC CAAATGCCCC AAAACTTGGA CCCATGGAGA CCGGTGGTGG
351
AACTCACACTGCCCACCGT GCCCAGCACC TGAACTCCTG GGGGGACCGT
401
CAGTCTTCCT CTTCCCCCCA AAACCCAAGG ACACCCTCAT GATCTCCCGG
451
ACCCCTGAGG TCACATGCGT GGTGGTGGAC GTGAGCCACG AAGACCCTGA
501
GGTCAAGTTC AACTGGTACG TGGACGGCGT GGAGGTGCAT AATGCCAAGA
551
CAAAGCCGCG GGAGGAGCAG TACAACAGCA CGTACCGTGT GGTCAGCGTC
601
CTCACCGTCC TGCACCAGGA CTGGCTGAAT GGCAAGGAGT ACAAGTGCAA
651
GGTCTCCAAC AAAGCCCTCC CAGCCCCCAT CGAGAAAACC ATCTCCAAAG
701
CCAAAGGGCA GCCCCGAGAA CCACAGGTGT ACACCCTGCC CCCATCCCGG
751
GAGGAGATGA CCAAGAACCA GGTCAGCCTG ACCTGCCTGG TCAAAGGCTT
801
CTATCCCAGC GACATCGCCG TGGAGTGGGA GAGCAATGGG CAGCCGGAGA
851
ACAACTACGA CACCACGCCT CCCGTGCTGG ACTCCGACGG CTCCTTCTTC
901
CTCTATAGCG ACCTCACCGT GGACAAGAGC AGGTGGCAGC AGGGGAACGT
951
CTTCTCATGC TCCGTGATGC ATGAGGCTCT GCACAACCAC TACACGCAGA
1001
AGAGCCTCTC CCTGTCTCCG GGT (서열 번호: 113)
성숙 ALK7-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 114)는 다음과 같을 것으로 예상되고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1
GLKCVCLLCD SSNFTCQTEG ACWASVMLTN GKEQVIKSCV SLPELNAQVF
51
CHSSNNVTKT ECCFTDFCNN ITLHLPTASP NAPKLGPMET GGGTHTCPPC
101
PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV
151
DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP
201
APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV
251
EWESNGQPEN NYDTTPPVLD SDGSFFLYSD LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH
301
EALHNHYTQK SLSLSPG (서열 번호: 114)
차례로 서열 번호: 102 및 서열 번호:114의 ActRIIB-Fc 및 ALK7-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK7-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
차례로 서열 번호: 401-402 및405-406의 ActRIIB-Fc 및 ALK7-Fc 폴리펩티드 서열에서 설명된 바와 같이 비대칭 Fc 융합 단백질을 이용하여 이형다합체 복합체의 형성을 촉진시키는 또다른 방법에 있어서, 상보적 소수성 상호작용 및 추가적인 분자간 이황화결합을 도입시키기 위하여 Fc 도메인이 변경된다. ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드 서열은 실시예 1에서 논의된다.
상보적 형태의 ALK7-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 405) 다음과 같다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 401 및 102의 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK7 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 더욱이, Fc 도메인의 C-말단 리신 잔기는 결손될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 405의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK7-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 406)는 다음과 같을 것으로 예상되고, 임의선택적으로 C-말단에 리신은 제거된다.
1
GLKCVCLLCD SSNFTCQTEG ACWASVMLTN GKEQVIKSCV SLPELNAQVF
51
CHSSNNVTKT ECCFTDFCNN ITLHLPTASP NAPKLGPMET GGGTHTCPPC
101
PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV
151
DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP
201
APIEKTISKA KGQPREPQVC TLPPSREEMT KNQVSLSCAV KGFYPSDIAV
251
EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLVSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH
301
EALHNHYTQK SLSLSPGK (서열 번호: 406)
차례로 서열 번호: 402 및 서열 번호:406의 ActRIIB-Fc 및 ALK7-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK7-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
8.
ActRIIB
-
Fc
동형이합체
및
ALK7
-
Fc
동형이합체와
비교하여 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc
이형이합체
리간드
결합 프로파일
상기에서 설명된 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 ActRIIB-Fc 및 ALK7-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다.. ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체, ActRIIB-Fc 동형이합체, 및 ALK7-Fc 동형이합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
이들 비교 결합 데이타는 ActRIIB-Fc:ALK6-Fc 이형이합체가 ActRIIB-Fc 동형이합체 또는 ALK6-Fc 동형이합체에 대하여 상이한 결합 프로파일을 갖는다는 것이 실증한다. 흥미로운 것은, 5개 리간드중 4개 (액티빈 A, BMP10, GDF8, 및 GDF11)는 ActRIIB-Fc 동형이합체에 대하여 강력한 결합을 하는데, 이들은 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체에 대하여 감소된 결합을 보이며, 예외적으로 액티빈 B는 상기 이형이합체에 대하여 단단한 결합을 유지한다. 또한, ActRIIB-Fc 동형이합체에 대하여 중간수준의 결합을 하는 3가지 리간드(GDF3, BMP6, 및 특히 BMP9)는 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체에 대하여 감소된 결합을 나타낸다. 대조적으로, BMP5는 ActRIIB-Fc:ALK7 이형이합체에 중간 강도로 결합하며, ActRIIB-Fc 동형이합체에 대하여 단지 약한 결합을 한다. 시험된 리간드들중에 ALK7-Fc 동형이합체에 결합하는 것은 없다. 도 8 참고.
따라서 이들 결과로부터 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체는 ActRIIB-Fc 동형이합체와 비교하였을 때, 액티빈 B의 더 큰 선택적 길항제라는 것을 실증된다. 따라서, ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체는 특정 용도에서 ActRIIB-Fc 동형이합체보다 더 유용할 것이며, 이때 이러한 선택적 길항작용이 유익하다. 실시예은 액티빈 B의 길항작용은 유지하면서, 그러나 하나 또는 그 이상의 액티빈 A, GDF3, GDF8, GDF11, BMP9, 또는 BMP10의 길항작용을 최소화하는 것이 바람직한 치료 용도를 포함한다.
실시예
9.
ActRIIB
-
Fc
:
ALK2
-
Fc
이형이합체의
생성
출원인은 인간 ActRIIB 및 인간 ALK2의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIB-Fc:ALK2-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
제 1 방법으로, ActRIIB-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 1에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 100-102로 제공된다.
상보적 ALK2-Fc 융합 단백질은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다(서열번호:136):
신호 서열 및 링커서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신은 아스파르트산으로 대체됨)이 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 136의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
ALK2-Fc 융합 단백질은 다음 핵산 (서열 번호: 137)에 의해 인코드된다:
1
ATGGATGCATGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC
51
AGTCTTCGTT TCGCCCGGCG CCATGGAAGTGAGAAGCCC AAGGTCAACC
101
CCAAACTCTA CATGTGTGTG TGTGAAGGTC TCTCCTGCGG TAATGAGGAC
151
CACTGTGAAG GCCAGCAGTG CTTTTCCTCA CTGAGCATCA ACGATGGCTT
201
CCACGTCTAC CAGAAAGGCT GCTTCCAGGT TTATGAGCAG GGAAAGATGA
251
CCTGTAAGAC CCCGCCGTCC CCTGGCCAAG CTGTGGAGTG CTGCCAAGGG
301
GACTGGTGTA ACAGGAACAT CACGGCCCAG CTGCCCACTA AAGGAAAATC
351
CTTCCCTGGA ACACAGAATT TCCACTTGGA GACCGGTGGT GGAACTCACA
401
CATGCCCACC GTGCCCAGCA CCTGAACTCC TGGGGGGACC GTCAGTCTTC
451
CTCTTCCCCC CAAAACCCAA GGACACCCTC ATGATCTCCC GGACCCCTGA
501
GGTCACATGC GTGGTGGTGG ACGTGAGCCA CGAAGACCCT GAGGTCAAGT
551
TCAACTGGTA CGTGGACGGC GTGGAGGTGC ATAATGCCAA GACAAAGCCG
601
CGGGAGGAGC AGTACAACAG CACGTACCGT GTGGTCAGCG TCCTCACCGT
651
CCTGCACCAG GACTGGCTGA ATGGCAAGGA GTACAAGTGC AAGGTCTCCA
701
ACAAAGCCCT CCCAGCCCCC ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AGCCAAAGGG
751
CAGCCCCGAG AACCACAGGT GTACACCCTG CCCCCATCCC GGGAGGAGAT
801
GACCAAGAAC CAGGTCAGCC TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTATCCCA
851
GCGACATCGC CGTGGAGTGG GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAACAACTAC
901
GACACCACGC CTCCCGTGCT GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTATAG
951
CGACCTCACC GTGGACAAGA GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT
1001
GCTCCGTGAT GCATGAGGCT CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC
1051
TCCCTGTCTC CGGGT (서열 번호: 137)
성숙 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 138)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1 MEDEKPKVNP KLYMCVCEGL SCGNEDHCEG QQCFSSLSIN DGFHVYQKGC
51 FQVYEQGKMT CKTPPSPGQA VECCQGDWCN RNITAQLPTK GKSFPGTQNF
101 HLETGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD
151 VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN
201 GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR EEMTKNQVSL
251 TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYDTTP PVLDSDGSFF LYSDLTVDKS
301 RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP G (서열 번호: 138)
차례로 서열 번호: 102 및 서열 번호:138의 ActRIIB-Fc 및 ALK2-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK2-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
차례로 서열 번호: 401-402 및421-422의 ActRIIB-Fc 및 ALK2-Fc 폴리펩티드 서열에서 설명된 바와 같이 비대칭 Fc 융합 단백질을 이용하여 이형다합체 복합체의 형성을 촉진시키는 또다른 방법에 있어서, 상보적 소수성 상호작용 및 추가적인 분자간 이황화결합을 도입시키기 위하여 Fc 도메인이 변경된다. ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드 서열은 실시예 1에서 논의된다.
상보적 형태의 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 421)는 다음과 같다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 401 및 102의 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK2 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 더욱이, Fc 도메인의 C-말단 리신 잔기는 결손될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 421의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 422)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
MEDEKPKVNP KLYMCVCEGL SCGNEDHCEG QQCFSSLSIN DGFHVYQKGC
51
FQVYEQGKMT CKTPPSPGQA VECCQGDWCN RNITAQLPTK GKSFPGTQNF
101
HLETGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD
151
VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN
201
GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVCTLPPSR EEMTKNQVSL
251
SCAVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF LVSKLTVDKS
301
RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK (서열 번호: 422)
차례로 서열 번호: 402 및 서열 번호:422의 ActRIIB-Fc 및 ALK2-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK2-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
10.
ActRIIB
-
Fc
동형이합체
및
ALK2
-
Fc
동형이합체와
비교하여 ActRIIB-Fc:ALK2-Fc
이형이합체
리간드
결합 프로파일
상기에서 설명된 ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 ActRIIB-Fc 및 ALK2-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다.. ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체, ActRIIB-Fc 동형이합체, 및 ALK2-Fc 동형이합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
이들 비교 결합 데이타는 ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체가 ActRIIB-Fc 동형이합체 또는 ALK2-Fc 동형이합체와는 상이한 리간드 결합 프로파일을 갖는다는 것이 실증한다. ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체는 액티빈 B에 선호적이며, 강력한 결합을 나타내며, 따라서 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc 이형이합체 (실시예 8)를 닮았다. 그러나, ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체는 ActRIIB-Fc 동형이합체의 BMP9 특징에 단단히 결합을 유지함으로써, 부분적으로 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc와는 상이하고, 반면 ActRIIB-Fc:ALK7-Fc는 BMP9가 적어도 존재한다면 이에 매우 약하게 결합한다. 시험된 리간드들중에 ALK2-Fc 동형이합체에 결합하는 것은 없다. 도 9 참고.
이들 결과로부터 ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체는 ActRIIB-Fc 동형이합체와 비교하였을 때, 액티빈 B의 더 큰 선택적 길항제라는 것을 실증된다. 따라서, ActRIIB-Fc:ALK2-Fc 이형이합체는 이러한 선택적 길항작용이 유익한 특정 용도에서 유용할 것이다. 실시예는 주로 액티빈 B의 길항작용을 유지하고, 추가로 BMP9, GDF8, 및 GDF11의 부차적인 길항작용을 보충하는 것이 바람직한 치료 용도를 포함한다.
실시예
11.
ActRIIB
-
Fc
:
ALK5
-
Fc
이형이합체의
생성
출원인은 인간 ActRIIB 및 인간 ALK5의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIB-Fc:ALK5-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIB-Fc:ALK5-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
제 1 방법으로, ActRIIB-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 1에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 100-102로 제공된다.
상보적 ALK5-Fc 융합 단백질은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다(서열번호:139):
신호 서열 및 링커서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIB-Fc:ALK5-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신은 아스파르트산으로 대체됨)이 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 139의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
ALK5-Fc 융합 단백질은 다음 핵산 (서열 번호: 140)에 의해 인코드된다:
1
ATGGATGCATGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC
51
AGTCTTCGTT TCGCCCGGCG CCGCGCTGCT CCCGGGGGCG ACGGCGTTAC
101
AGTGTTTCTG CCACCTCTGT ACAAAAGACA ATTTTACTTG TGTGACAGAT
151
GGGCTCTGCT TTGTCTCTGT CACAGAGACC ACAGACAAAG TTATACACAA
201
CAGCATGTGT ATAGCTGAAA TTGACTTAAT TCCTCGAGAT AGGCCGTTTG
251
TATGTGCACC CTCTTCAAAA ACTGGGTCTG TGACTACAAC ATATTGCTGC
301
AATCAGGACC ATTGCAATAA AATAGAACTT CCAACTACTG TAAAGTCATC
351
ACCTGGCCTT GGTCCTGTGG AAACCGGTGG TGGAACTCAC ACATGCCCAC
401
CGTGCCCAGC ACCTGAACTC CTGGGGGGAC CGTCAGTCTT CCTCTTCCCC
451
CCAAAACCCA AGGACACCCT CATGATCTCC CGGACCCCTG AGGTCACATG
501
CGTGGTGGTG GACGTGAGCC ACGAAGACCC TGAGGTCAAG TTCAACTGGT
551
ACGTGGACGG CGTGGAGGTG CATAATGCCA AGACAAAGCC GCGGGAGGAG
601
CAGTACAACA GCACGTACCG TGTGGTCAGC GTCCTCACCG TCCTGCACCA
651
GGACTGGCTG AATGGCAAGG AGTACAAGTG CAAGGTCTCC AACAAAGCCC
701
TCCCAGCCCC CATCGAGAAA ACCATCTCCA AAGCCAAAGG GCAGCCCCGA
751
GAACCACAGG TGTACACCCT GCCCCCATCC CGGGAGGAGTGACCAAGAA
801
CCAGGTCAGC CTGACCTGCC TGGTCAAAGG CTTCTATCCC AGCGACATCG
851
CCGTGGAGTG GGAGAGCAAT GGGCAGCCGG AGAACAACTA CGACACCACG
901
CCTCCCGTGC TGGACTCCGA CGGCTCCTTC TTCCTCTATA GCGACCTCAC
951
CGTGGACAAG AGCAGGTGGC AGCAGGGGAA CGTCTTCTCTGCTCCGTGA
1001
TGCATGAGGC TCTGCACAAC CACTACACGC AGAAGAGCCT CTCCCTGTCT
1051
CCGGGT (서열 번호: 140)
성숙 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 141)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1
ALLPGATALQ CFCHLCTKDN FTCVTDGLCF VSVTETTDKV IHNSMCIAEI
51
DLIPRDRPFV CAPSSKTGSV TTTYCCNQDH CNKIELPTTV KSSPGLGPVE
101
TGGGTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH
151
EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE
201
YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL
251
VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYDTTPPVL DSDGSFFLYS DLTVDKSRWQ
301
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG (서열 번호: 141)
차례로 서열 번호: 102 및 서열 번호:141의 ActRIIB-Fc 및 ALK5-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK5-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
차례로 서열 번호: 401-402 및423-424의 ActRIIB-Fc 및 ALK5-Fc 폴리펩티드 서열에서 설명된 바와 같이 비대칭 Fc 융합 단백질을 이용하여 이형다합체 복합체의 형성을 촉진시키는 또다른 방법에 있어서, 상보적 소수성 상호작용 및 추가적인 분자간 이황화결합을 도입시키기 위하여 Fc 도메인이 변경된다. ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드 서열은 실시예 1에서 논의된다.
상보적 형태의 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 423)는 다음과 같다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 401 및 102의 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK5 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 더욱이, Fc 도메인의 C-말단 리신 잔기는 결손될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 423의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 424)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
ALLPGATALQ CFCHLCTKDN FTCVTDGLCF VSVTETTDKV IHNSMCIAEI
51
DLIPRDRPFV CAPSSKTGSV TTTYCCNQDH CNKIELPTTV KSSPGLGPVE
101
TGGGTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH
151
EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE
201
YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV CTLPPSREEM TKNQVSLSCA
251
VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLVS KLTVDKSRWQ
301
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGK (서열 번호: 424)
차례로 서열 번호: 402 및 서열 번호:424의 ActRIIB-Fc 및 ALK5-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK5-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ActRIIB-Fc:ALK5-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
12.
ActRIIB
-
Fc
동형이합체
및
ALK5
-
Fc
동형이합체와
비교하여 ActRIIB-Fc:ALK5-Fc
이형이합체
리간드
결합 프로파일
상기에서 설명된 ActRIIB-Fc:ALK5-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 ActRIIB-Fc 및 ALK5-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다.. ActRIIB-Fc:ALK5-Fc 이형이합체, ActRIIB-Fc 동형이합체, 및 ALK5-Fc 동형이합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
실시예
13.
ActRIIB
-
Fc
:
ALK6
-
Fc
이형이합체의
생성
인간 ActRIIB 및 인간 ALK6의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIB-Fc:ALK5-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK6-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIB-Fc:ALK6-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
제 1 방법으로, ActRIIB-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 1에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 100-102로 제공된다.
상보적 ALK6-Fc 융합 단백질은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다(서열번호:142):
신호 서열 및 링커서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIB-Fc:ALK6-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신은 아스파르트산으로 대체됨)이 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 142의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
ALK6-Fc 융합 단백질은 다음 핵산 (서열 번호: 143)에 의해 인코드된다:
1
Atggatgcatgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc
51
agtcttcgtt tcgcccggcg ccaagaaaga ggatggtgag agtacagccc
101
ccaccccccg tccaaaggtc ttgcgttgta aatgccacca ccattgtcca
151
gaagactcag tcaacaatat ttgcagcaca gacggatatt gtttcacgat
201
gatagaagag gatgactctg ggttgcctgt ggtcacttct ggttgcctag
251
gactagaagg ctcagatttt cagtgtcggg acactcccat tcctcatcaa
301
agaagatcaa ttgaatgctg cacagaaagg aacgaatgta ataaagacct
351
acaccctaca ctgcctccat tgaaaaacag agattttgtt gatggaccta
401
tacaccacag gaccggtggt ggaactcaca catgcccacc gtgcccagca
451
cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa
501
ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg
551
acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc
601
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag
651
cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga
701
atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc
751
atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt
801
gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc
851
tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg
901
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac gacaccacgc ctcccgtgct
951
ggactccgac ggctccttct tcctctatag cgacctcacc gtggacaaga
1001
gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct
1051
ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggt
(서열 번호: 143)
성숙 ALK6-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 144)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1
KKEDGESTAP TPRPKVLRCK CHHHCPEDSV NNICSTDGYC FTMIEEDDSG
51
LPVVTSGCLG LEGSDFQCRD TPIPHQRRSI ECCTERNECN KDLHPTLPPL
101
KNRDFVDGPI HHRTGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR
151
TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV
201
LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR
251
EEMTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYDTTP PVLDSDGSFF
301
LYSDLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP G
(서열 번호: 144)
차례로 서열 번호: 102 및 서열 번호:144의 ActRIIB-Fc 및 ALK6-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK6-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
차례로 서열 번호: 401-402 및425-426의 ActRIIB-Fc 및 ALK6-Fc 폴리펩티드 서열에서 설명된 바와 같이 비대칭 Fc 융합 단백질을 이용하여 이형다합체 복합체의 형성을 촉진시키는 또다른 방법에 있어서, 상보적 소수성 상호작용 및 추가적인 분자간 이황화결합을 도입시키기 위하여 Fc 도메인이 변경된다. ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드 서열은 실시예 1에서 논의된다.
상보적 형태의 ALK6-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 425)는 다음과 같다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 401 및 402의 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK6 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 더욱이, Fc 도메인의 C-말단 리신 잔기는 결손될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 425의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK6-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 426)는 다음과 같을 수 있고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
KKEDGESTAP TPRPKVLRCK CHHHCPEDSV NNICSTDGYC FTMIEEDDSG
51
LPVVTSGCLG LEGSDFQCRD TPIPHQRRSI ECCTERNECN KDLHPTLPPL
101
KNRDFVDGPI HHRTGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR
151
TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV
201 LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVCTLPPSR
251
EEMTKNQVSL SCAVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF
301
LVSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK
(서열 번호: 426)
차례로 서열 번호: 402 및 서열 번호:426의 ActRIIB-Fc 및 ALK6-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIB-Fc:ALK6-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ActRIIB-Fc:ALK6-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
14.
ActRIIA
-
Fc
:
ALK4
-
Fc
이형이합체
생성
출원인은 인간 ActRIIA 및 인간 ALK4의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 별도로 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIA-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다. 제 1 방법에서, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다.
ActRIIA-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 118) 하기에 나타낸다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 ActRIIA 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 118의 아미노산 서열이 제공된다.
이 ActRIIA-Fc 융합 단백질은 다음의 핵산 서열 (서열 번호: 119)에 의해 인코드된다:
1
ATGGATGCATGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC
51
AGTCTTCGTT TCGCCCGGCG CCGCTATACT TGGTAGATCA GAAACTCAGG
101
AGTGTCTTTT CTTTAATGCT AATTGGGAAA AAGACAGAAC CAATCAAACT
151
GGTGTTGAAC CGTGTTATGG TGACAAAGAT AAACGGCGGC ATTGTTTTGC
201
TACCTGGAAG AATATTTCTG GTTCCATTGA AATAGTGAAA CAAGGTTGTT
251
GGCTGGATGA TATCAACTGC TATGACAGGA CTGATTGTGT AGAAAAAAAA
301
GACAGCCCTG AAGTATATTT CTGTTGCTGT GAGGGCAATTGTGTAATGA
351
AAAGTTTTCT TATTTTCCGG AGATGGAAGT CACACAGCCC ACTTCAAATC
401
CAGTTACACC TAAGCCACCC ACCGGTGGTG GAACTCACAC ATGCCCACCG
451
TGCCCAGCAC CTGAACTCCT GGGGGGACCG TCAGTCTTCC TCTTCCCCCC
501
AAAACCCAAG GACACCCTCTGATCTCCCG GACCCCTGAG GTCACATGCG
551
TGGTGGTGGA CGTGAGCCAC GAAGACCCTG AGGTCAAGTT CAACTGGTAC
601
GTGGACGGCG TGGAGGTGCA TAATGCCAAG ACAAAGCCGC GGGAGGAGCA
651
GTACAACAGC ACGTACCGTG TGGTCAGCGT CCTCACCGTC CTGCACCAGG
701
ACTGGCTGATGGCAAGGAG TACAAGTGCA AGGTCTCCAA CAAAGCCCTC
751
CCAGCCCCCA TCGAGAAAAC CATCTCCAAA GCCAAAGGGC AGCCCCGAGA
801
ACCACAGGTG TACACCCTGC CCCCATCCCG GAAGGAGATG ACCAAGAACC
851
AGGTCAGCCT GACCTGCCTG GTCAAAGGCT TCTATCCCAG CGACATCGCC
901
GTGGAGTGGG AGAGCAATGG GCAGCCGGAG AACAACTACA AGACCACGCC
951
TCCCGTGCTG AAGTCCGACG GCTCCTTCTT CCTCTATAGC AAGCTCACCG
1001
TGGACAAGAG CAGGTGGCAG CAGGGGAACG TCTTCTCATG CTCCGTGATG
1051
CATGAGGCTC TGCACAACCA CTACACGCAG AAGAGCCTCT CCCTGTCTCC
1101
GGGTAAA (서열 번호: 119)
성숙 ActRIIA-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 120)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된다.
1
ILGRSETQEC LFFNANWEKD RTNQTGVEPC YGDKDKRRHC FATWKNISGS
51
IEIVKQGCWL DDINCYDRTD CVEKKDSPEV YFCCCEGNMC NEKFSYFPEM
101
EVTQPTSNPV TPKPPTGGGT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
151
SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV
201
SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP
251
SRKEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLKSDGS
301
FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK
(서열 번호: 120)
제 1 방법으로, 상보적 ALK4-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 1에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 104-106으로 제공된다.
차례로 서열 번호: 120 및 서열 번호:106의 ActRIIA-Fc 및 ALK4-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIA-Fc:ALK4-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 제 2 방법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다.
ActRIIA-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 409) 하기에 나타낸다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 409의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ActRIIA-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 410)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된다.
1
ILGRSETQEC LFFNANWEKD RTNQTGVEPC YGDKDKRRHC FATWKNISGS
51
IEIVKQGCWL DDINCYDRTD CVEKKDSPEV YFCCCEGNMC NEKFSYFPEM
101
EVTQPTSNPV TPKPPTGGGT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
151
SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV
201
SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP
251
CREEMTKNQV SLWCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS
301
FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK
(서열 번호: 410)
제 2 방법으로, 상보적 ALK4-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 1에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 403-404로 제공된다.
차례로 서열 번호: 410 및 서열 번호:404의 ActRIIA-Fc 및 ALK4-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIA-Fc:ALK4-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
15.
ActRIIA
-
Fc
동형이합체
및
ALK4
-
Fc
동형이합체와
비교하여 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc
이형이합체의
리간드
결합 프로파일
상기에서 설명된 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 ActRIIA-Fc 및 ALK4-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다. ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체, ActRIIA-Fc 동형이합체, 및 ALK4-Fc 동형이합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
이들 비교 결합 데이타는 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체가 ActRIIA-Fc 또는 ALK4-Fc 동형이합체에 대하여 변경된 결합 프로파일/선택성을 갖는다는 것이 실증한다. 예를 들면, ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 액티빈 A에 강화된 결합을 나타내고, ActRIIA-Fc 동형이합체와 비교하여 액티빈 AC에 강화된 결합을 나타내면서, 액티빈 AB 및 GDF11에 대하여 강한 결합은 유지된다. 또한, ActRIIA-Fc 동형이합체, 액티빈 B에 대하여 최고 친화력을 가진 리간드는 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체에 대하여 감소된 친화력(여전히 노-친화력 범위 안에 있지만)을 나타낸다. ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 ActRIIA-Fc 동형이합체와 비교하여 BMP10에 대하여 상당히 감소된 결합을 또한 나타낸다. 도 10 참고.
이들 결과로부터 ActRIIA-Fc:ALK2-Fc 이형이합체는 ActRIIA-Fc 동형이합체와 비교하였을 때, 액티빈 B보다는 액티빈 A와 액티빈 AB의 더 큰 선택적 길항제라는 것을 실증된다. 또한, ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 ActRIIA-Fc 동형이합체와 비교하였을 때, 액티빈 AC에 대하여 실질적으로 증가된 친화력을 보유하며, 그리고 BMP10에 대하여 상당히 감소된 친화력을 보유한다. 따라서, ActRIIA-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 특정 용도에서 ActRIIA-Fc 동형이합체보다 더 유용할 것이며, 이때 이러한 선택적 길항작용이 유익하다. 실시예는 액티빈 B보다는 액티빈 A 및/또는 액티빈 AB를 선호적으로 길항하고, BMP10의 억제를 피하면서, 액티빈 AC의 강력한 억제를 얻는 것이 바람직한 치료 용도를 포함한다.
실시예
16.
BMPRII
-
Fc
:
ALK1
-
Fc
이형이합체의
생성
출원인은 인간 BMPRII 및 인간 ALK1의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 별도로 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체는 차례로 BMPRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭되며, 이들 각 서열은 하기에서 제시된다.
이형화학성 BMPRII-Fc:ALK1-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다. 제 1 방법에서, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다.
BMPRII-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 121)은 하기에 나타낸다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 BMPRII-Fc 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 121의 아미노산 서열이 제공된다.
BMPRII-Fc 융합 단백질은 다음의 핵산 서열 (서열 번호: 122)에 의해 인코드된다:
1
ATGGATGCATGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC
51
AGTCTTCGTT TCGCCCGGCG CCTCGCAGAA TCAAGAACGC CTATGTGCGT
101
TTAAAGATCC GTATCAGCAA GACCTTGGGA TAGGTGAGAG TAGAATCTCT
151
CATGAAAATG GGACAATATT ATGCTCGAAA GGTAGCACCT GCTATGGCCT
201
TTGGGAGAAA TCAAAAGGGG ACATAAATCT TGTAAAACAA GGATGTTGGT
251
CTCACATTGG AGATCCCCAA GAGTGTCACT ATGAAGAATG TGTAGTAACT
301
ACCACTCCTC CCTCAATTCA GAATGGAACA TACCGTTTCT GCTGTTGTAG
351
CACAGATTTTGTAATGTCA ACTTTACTGA GAATTTTCCA CCTCCTGACA
401
CAACACCACT CAGTCCACCT CATTCATTTA ACCGAGATGA GACCGGTGGT
451
GGAACTCACA CATGCCCACC GTGCCCAGCA CCTGAACTCC TGGGGGGACC
501
GTCAGTCTTC CTCTTCCCCC CAAAACCCAA GGACACCCTC ATGATCTCCC
551
GGACCCCTGA GGTCACATGC GTGGTGGTGG ACGTGAGCCA CGAAGACCCT
601
GAGGTCAAGT TCAACTGGTA CGTGGACGGC GTGGAGGTGC ATAATGCCAA
651
GACAAAGCCG CGGGAGGAGC AGTACAACAG CACGTACCGT GTGGTCAGCG
701
TCCTCACCGT CCTGCACCAG GACTGGCTGA ATGGCAAGGA GTACAAGTGC
751
AAGGTCTCCA ACAAAGCCCT CCCAGCCCCC ATCGAGAAAA CCATCTCCAA
801
AGCCAAAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT GTACACCCTG CCCCCATCCC
851
GGAAGGAGAT GACCAAGAAC CAGGTCAGCC TGACCTGCCT GGTCAAAGGC
901
TTCTATCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGG GAGAGCAATG GGCAGCCGGA
951
GAACAACTAC AAGACCACGC CTCCCGTGCT GAAGTCCGAC GGCTCCTTCT
1001
TCCTCTATAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC
1051
GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT GCATGAGGCT CTGCACAACC ACTACACGCA
1101
GAAGAGCCTC TCCCTGTCTC CGGGTAAA (서열 번호: 122)
성숙 BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 123)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된다.
1
SQNQERLCAF KDPYQQDLGI GESRISHENG TILCSKGSTC YGLWEKSKGD
51
INLVKQGCWS HIGDPQECHY EECVVTTTPP SIQNGTYRFC CCSTDLCNVN
101
FTENFPPPDT TPLSPPHSFN RDETGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP
151
KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ
201
YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE
251
PQVYTLPPSR KEMTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP
301
PVLKSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP
351
GK (서열 번호: 123)
상보적 형태의 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 124)는 다음과 같다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 121 및 123의 BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신이 아스파르트산으로 대체됨)이 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 124의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
ALK1-Fc 융합 단백질은 다음의 핵산 (서열 번호: 125)에 의해 인코드된다:
1
ATGGATGCATGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC
51
AGTCTTCGTT TCGCCCGGCG CCGACCCTGT GAAGCCGTCT CGGGGCCCGC
101
TGGTGACCTG CACGTGTGAG AGCCCACATT GCAAGGGGCC TACCTGCCGG
151
GGGGCCTGGT GCACAGTAGT GCTGGTGCGG GAGGAGGGGA GGCACCCCCA
201
GGAACATCGG GGCTGCGGGA ACTTGCACAG GGAGCTCTGC AGGGGCCGCC
251
CCACCGAGTT CGTCAACCAC TACTGCTGCG ACAGCCACCT CTGCAACCAC
301
AACGTGTCCC TGGTGCTGGA GGCCACCCAA CCTCCTTCGG AGCAGCCGGG
351
AACAGATGGC CAGCTGGCCA CCGGTGGTGG AACTCACACTGCCCACCGT
401
GCCCAGCACC TGAACTCCTG GGGGGACCGT CAGTCTTCCT CTTCCCCCCA
451
AAACCCAAGG ACACCCTCAT GATCTCCCGG ACCCCTGAGG TCACATGCGT
501
GGTGGTGGAC GTGAGCCACG AAGACCCTGA GGTCAAGTTC AACTGGTACG
551
TGGACGGCGT GGAGGTGCAT AATGCCAAGA CAAAGCCGCG GGAGGAGCAG
601
TACAACAGCA CGTACCGTGT GGTCAGCGTC CTCACCGTCC TGCACCAGGA
651
CTGGCTGAAT GGCAAGGAGT ACAAGTGCAA GGTCTCCAAC AAAGCCCTCC
701
CAGCCCCCAT CGAGAAAACC ATCTCCAAAG CCAAAGGGCA GCCCCGAGAA
751
CCACAGGTGT ACACCCTGCC CCCATCCCGG GAGGAGATGA CCAAGAACCA
801
GGTCAGCCTG ACCTGCCTGG TCAAAGGCTT CTATCCCAGC GACATCGCCG
851
TGGAGTGGGA GAGCAATGGG CAGCCGGAGA ACAACTACGA CACCACGCCT
901
CCCGTGCTGG ACTCCGACGG CTCCTTCTTC CTCTATAGCG ACCTCACCGT
951
GGACAAGAGC AGGTGGCAGC AGGGGAACGT CTTCTCATGC TCCGTGATGC
1001
ATGAGGCTCT GCACAACCAC TACACGCAGA AGAGCCTCTC CCTGTCTCCG
1051
GGT (서열 번호: 125)
성숙 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 126)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
차례로 서열 번호: 123 및 서열 번호:126의 BMPRII-Fc 및 ALK1-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, BMPRII-Fc:ALK1-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 제 2 방법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다.
BMPRII-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 411)은 하기에 나타낸다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 411의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 412)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신(K)이 제거된다.
상보적 형태의 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 413)은 다음과 같다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 411 및 412의 BMPRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK1 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 413의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 414)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
차례로 서열 번호: 412 및 서열 번호:414의 BMPRII-Fc 및 ALK1-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, BMPRII-Fc:ALK1-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 BMPRII-Fc:ALK1-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
17.
BMPRII
-
Fc
동형이합체
및
ALK1
-
Fc
동형이합체와
비교하여 BMPRII-Fc:ALK1-Fc
이형이합체의
리간드
결합 프로파일
상기에서 설명된 BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 BMPRII-Fc 및 ALK1-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다. BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체, BMPRII-Fc 동형이합체, 및 ALK1-Fc 동형이합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
이들 비교 결합 데이타에서 BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체는 BMPRII-Fc 동형이합체와 상이한, 그러나 ALK1-Fc 동형이합체와는 유사한 결합 프로파일/선택성을 갖는다는 것이 설명된다. 예를 들면, BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체는 ALK1-Fc 동형이합체의 BMP9 및 BMP10 특징에 대하여 강력한 결합을 대게 유지하지만; 그러나, 상기 이형이합체는 상기 동형이합체에 존재하지 않는 BMP9보다는 BMP10에 보통수준의 선택성을 나타낸다. 또한 ALK1-Fc 동형이합체와는 달리, 비록 BMPRII-Fc 동형이합체보다는 대략 더 약한 크기의 친화력으로 BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체는 BMP15에 결합한다. 도 11 참고. 따라서, BMPRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체는 BMP9 및 특히 BMP10의 선택적 길항작용이 유익한, 가령, 혈관신생의 억제하는 특정 치료 용도, 또는 BMP15의 길항 작용이 또한 유익한 용도에 기대이상으로 유용할 것이다.
실시예
18.
BMPRII
-
Fc
:
ALK2
-
Fc
이형이합체의
생성
출원인은 인간 BMPRII 및 인간 ALK2의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 BMPRII-Fc:ALK2-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 별도로 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체는 차례로 BMPRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭되며, 이들 각 서열은 본원에서 제시된다.
이형화학성 BMPRII-Fc:ALK2-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다. 제 1 방법에서, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다. BMPRII-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 16에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 121-123으로 제공된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 BMPRII-Fc:ALK2-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 실시예 16에서 나타낸 것과 같이, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 BMPRII-Fc 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 121 및 123의 아미노산 서열들이 제공된다.
상보적인 ALK2-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 9에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 136-138로 제공된다. 상기 서열 번호: 121 및 123의 BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 실시예 9에서 나타낸 것과 같이 2개의 아미노산 치환 (리신이 아스파르트산으로 대체됨)이 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 136 및 138의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
차례로 서열 번호: 123 및 서열 번호:138의 BMPRII-Fc 및 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드는 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, BMPRII-Fc:ALK2-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 제 2 방법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 411-412)는 실시예 16에서 논의된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 BMPRII-Fc:ALK2-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 실시예 16에서 나타낸 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 BMPRII-Fc 폴리펩티드의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 411 및 412의 아미노산 서열들이 제공된다.
상보적 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 421-422)의 폴리펩티드 서열은 실시예 9에서 논의된다. 상기 서열 번호: 411-412의 BMPRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 실시예 9에 나타낸 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK2 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 411 -412의 아미노산 서열들이 제공된다.
차례로 서열 번호: 412 및 서열 번호:422의 BMPRII-Fc 및 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드는 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, BMPRII-Fc:ALK2-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 BMPRII-Fc:ALK2-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
19.
BMPRII
-
Fc
동형이합체
및
ALK2
-
Fc
동형이합체와
비교하여 BMPRII-Fc:ALK2-Fc
이형이합체의
리간드
결합 프로파일
상기에서 설명된 BMPRII-Fc:ALK2-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 BMPRII-Fc 및 ALK2-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다. BMPRII-Fc:ALK2-Fc 이형이합체, BMPRII-Fc 동형이합체, 및 ALK2-Fc 동형이합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
실시예
20.
BMPRII
-
Fc
:
ALK3
-
Fc
이형이합체의
생성
출원인은 인간 BMPRII 및 인간 ALK3의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 별도로 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체는 차례로 BMPRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭되며, 이들 각 서열은 본원에서 제시된다.
이형화학성 BMPRII-Fc:ALK3-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다. 제 1 방법에서, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다. BMPRII-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 16에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 121-123으로 제공된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 실시예 16에서 나타낸 것과 같이, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 BMPRII-Fc 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 121 및 123의 아미노산 서열들이 제공된다.
상보적인 ALK3-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 4에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 115-117로 제공된다. 상기 서열 번호: 121 및 123의 BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 실시예 4에서 나타낸 것과 같이 2개의 아미노산 치환 (리신이 아스파르트산으로 대체됨)이 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 115 및 117의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
차례로 서열 번호: 123 및 서열 번호:117의 BMPRII-Fc 및 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드는 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, BMPRII-Fc:ALK3-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 제 2 방법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 411-412)는 실시예 16에서 논의된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 실시예 16에서 나타낸 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 BMPRII-Fc 폴리펩티드의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 411 및 412의 아미노산 서열들이 제공된다.
상보적 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 407-408)의 폴리펩티드 서열은 실시예 4에서 논의된다. 상기 서열 번호: 411-412의 BMPRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 실시예 4에 나타낸 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK3 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 407 및 408의 아미노산 서열들이 제공된다.
차례로 서열 번호: 412 및 서열 번호:408의 BMPRII-Fc 및 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드는 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, BMPRII-Fc:ALK3-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 BMPRII-Fc:ALK3-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
21.
BMPRII
-
Fc
동형이합체
및
ALK3
-
Fc
동형이합체와
비교하여 BMPRII-Fc:ALK3-Fc
이형이합체의
리간드
결합 프로파일
상기에서 설명된 BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 BMPRII-Fc 및 ALK3-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다. BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체, BMPRII-Fc 동형이합체, 및 ALK3-Fc 동형이합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
이들 비교 결합 데이타에서 BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 BMPRII-Fc 동형이합체와 명백하게 달리 리간드 결합 선택성을 갖지만, ALK3-Fc 동형이합체의 선택성과도 또한 상이하다. BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 ALK3-Fc 동형이합체 보다는 BMP6에 더욱 강력하게 결합하며, 이는 해리속도가 거의 10-배 더 느리다는 것을 반영한다. BMP2 및 BMP4에 대개 변함없이 결합되고, 따라서 BMPRII-Fc:ALK3 이형이합체는 BMP2, BMP4, 및 BMP6의 공동 억제제로 간주될 수 있다. 이 결합 프로파일은 ALK3-Fc 동형이합체의 것과는 대조적인데, 이것은 BMP4 및 BMP2에 예외적으로 강력하게 결합하고, 이로 인하여 BMP6를 포함하는 중간-수준의 결합을 하는 4개 리간드와 비교하여 이 리간드 쌍에 대하여 상당한 선택성에 의해 식별되도록 한다. 도 12 참고. 따라서, BMPRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체는 BMP2, BMP4, 및 BMP6의 결합 길항작용이 유익한 특정 치료 용도에 기대이상으로 유용할 것이다.
실시예
22.
BMPRII
-
Fc
:
ALK4
-
Fc
이형이합체의
생성
출원인은 인간 BMPRII 및 인간 ALK4의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 별도로 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체는 차례로 BMPRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭되며, 이들 각 서열은 본원에서 제시된다.
이형화학성 BMPRII-Fc:ALK4-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다. 제 1 방법에서, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다. BMPRII-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 16에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 121-123으로 제공된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 실시예 16에서 나타낸 것과 같이, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 BMPRII-Fc 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 121 및 123의 아미노산 서열들이 제공된다.
상보적인 ALK4-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 1에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 104-106로 제공된다. 상기 서열 번호: 121 및 123의 BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 실시예 1에서 나타낸 것과 같이 2개의 아미노산 치환 (리신이 아스파르트산으로 대체됨)이 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 104 및 106의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
차례로 서열 번호: 123 및 서열 번호:106의 BMPRII-Fc 및 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드는 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, BMPRII-Fc:ALK4-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 제 2 방법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 411 및 412)는 실시예 16에서 논의된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 실시예 16에서 나타낸 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 BMPRII-Fc 폴리펩티드의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 411 및 412의 아미노산 서열들이 제공된다.
상보적 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 403 및 404)의 폴리펩티드 서열은 실시예 1에서 논의된다. 상기 서열 번호: 411 및 412의 BMPRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 실시예 1에 나타낸 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK4 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 403 및 404의 아미노산 서열들이 제공된다.
차례로 서열 번호: 412 및 서열 번호:404의 BMPRII-Fc 및 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드는 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, BMPRII-Fc:ALK4-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 BMPRII-Fc:ALK4-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
23.
BMPRII
-
Fc
동형이합체
및
ALK4
-
Fc
동형이합체와
비교하여 BMPRII-Fc:ALK4-Fc
이형이합체의
리간드
결합 프로파일
상기에서 설명된 BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 BMPRII-Fc 및 ALK4-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다. BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체, BMPRII-Fc 동형이합체, 및 ALK4-Fc 동형이합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
이들 비교 결합 데이타에서 BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 BMPRII-Fc 동형이합체 또는 ALK4-Fc 동형이합체와 명백하게 달리 리간드 결합 선택성을 갖는다. BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 몇 가지 액티빈 리간드들에 높은 또는 중간 강도로 결합함으로써, 이들 두 동형 이합체와는 상이하고, BMP15에만 오직 약하게 결합함으로써, BMPRII-Fc 동형이합체와는 상이하다 가장 눈에 띄는 것으로, BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 이형이합체성 리간드 액티빈 AB에 강력하게 그리고 선호적으로 결합한다. 도 13 참고. 따라서, BMPRII-Fc:ALK4-Fc 이형이합체는 액티빈 A, 액티빈 B, 및 특히 액티빈 AB의 길항작용이 유리하고, 이때 BMP15 (배란에 상당히 연루된)의 길항작용은 피해야 하는 특정 치료 용도에 기대이상으로 유용할 것이다.
실시예
24.
TGFβRII
-
Fc
:
ALK1
-
Fc
이형이합체의
생성
출원인은 인간 TGFβRII의 짧은(원뿔형) 아이소형과 인간 ALK1의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 TGFβRII-Fc:ALK1-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 별도로 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체들은 각각 TGFβRIIshort-Fc 융합 폴리펩티드 및 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭되며, 이들 각 서열은 본원에서 제공된다.
이형화학성 TGFβRIIshort-Fc:ALK1-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다. 제 1 방법에서, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다.
TGFβRIIshort-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 127)은 하기에 나타낸다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는TGFβRIIsho rt-Fc:ALK1-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 TGFβRIIs hort-Fc 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 127의 아미노산 서열이 제공된다.
TGFβRIIshort-Fc 융합 단백질은 다음의 핵산 서열 (서열 번호: 128)에 의해 인코드된다:
1
ATGGATGCATGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC
51
AGTCTTCGTT TCGCCCGGCG CCACGATCCC ACCGCACGTT CAGAAGTCGG
101
TTAATAACGA CATGATAGTC ACTGACAACA ACGGTGCAGT CAAGTTTCCA
151
CAACTGTGTA AATTTTGTGTGTGAGATTT TCCACCTGTG ACAACCAGAA
201
ATCCTGCATG AGCAACTGCA GCATCACCTC CATCTGTGAG AAGCCACAGG
251
AAGTCTGTGT GGCTGTATGG AGAAAGAATG ACGAGAACAT AACACTAGAG
301
ACAGTTTGCC ATGACCCCAA GCTCCCCTAC CATGACTTTA TTCTGGAAGA
351
TGCTGCTTCT CCAAAGTGCA TTATGAAGGA AAAAAAAAAG CCTGGTGAGA
401
CTTTCTTCAT GTGTTCCTGT AGCTCTGATG AGTGCAATGA CAACATCATC
451
TTCTCAGAAG AATATAACAC CAGCAATCCT GACACCGGTG GTGGAACTCA
501
CACATGCCCA CCGTGCCCAG CACCTGAACT CCTGGGGGGA CCGTCAGTCT
551
TCCTCTTCCC CCCAAAACCC AAGGACACCC TCATGATCTC CCGGACCCCT
601
GAGGTCACAT GCGTGGTGGT GGACGTGAGC CACGAAGACC CTGAGGTCAA
651
GTTCAACTGG TACGTGGACG GCGTGGAGGT GCATAATGCC AAGACAAAGC
701
CGCGGGAGGA GCAGTACAAC AGCACGTACC GTGTGGTCAG CGTCCTCACC
751
GTCCTGCACC AGGACTGGCT GAATGGCAAG GAGTACAAGT GCAAGGTCTC
801
CAACAAAGCC CTCCCAGCCC CCATCGAGAA AACCATCTCC AAAGCCAAAG
851
GGCAGCCCCG AGAACCACAG GTGTACACCC TGCCCCCATC CCGGAAGGAG
901
ATGACCAAGA ACCAGGTCAG CCTGACCTGC CTGGTCAAAG GCTTCTATCC
951
CAGCGACATC GCCGTGGAGT GGGAGAGCATGGGCAGCCG GAGAACAACT
1001
ACAAGACCAC GCCTCCCGTG CTGAAGTCCG ACGGCTCCTT CTTCCTCTAT
1051
AGCAAGCTCA CCGTGGACAA GAGCAGGTGG CAGCAGGGGA ACGTCTTCTC
1101
ATGCTCCGTG ATGCATGAGG CTCTGCACAA CCACTACACG CAGAAGAGCC
1151
TCTCCCTGTC TCCGGGTAAA (서열 번호: 128)
성숙 TGFβRIIshort-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 129) 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거될 수 있다.
1
TIPPHVQKSV NNDMIVTDNN GAVKFPQLCK FCDVRFSTCD NQKSCMSNCS
51
이의ICEKPQE VCVAVWRKND ENITLETVCH DPKLPYHDFI LEDAASPKCI
101
MKEKKKPGET FFMCSCSSDE CNDNIIFSEE YNTSNPDTGG GTHTCPPCPA
151
PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG
201
VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP
251
IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRKEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW
301
ESNGQPENNY KTTPPVLKSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA
351
LHNHYTQKSL SLSPGK (서열 번호: 129)
상보적인 ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 16에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 124-126로 제공된다. 서열 번호: 127 및 129의 TGFβRIIshort-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 실시예 16에서 나타낸 것과 같이 2개의 아미노산 치환 (리신이 아스파르트산으로 대체됨)이 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 124 및 126의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
차례로 서열 번호: 129 및 서열 번호:126의 TGFβRIIshort-Fc 및 ALK1-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, TGFβRIIshort-Fc:ALK1-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
상기에서 설명된 ALK1-Fc 폴리펩티드(서열 번호: 126)가 짧은 아이소폼의 세포외 도메인의 위치에 TGFβRII (TGFβRIIlong)의 긴 아이소폼(A)의 세포외 도메인을 포함하는 Fc 융합 단백질과 쌍을 이룬 변이체 TGFβRII-Fc:ALK1-Fc 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
TGFβRIIlong-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 130)은 하기에 나타낸다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는TGFβRIIlo ng-Fc:ALK1-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 130의 아미노산 서열이 제공된다.
TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질은 다음의 핵산 서열 (서열 번호: 131)에 의해 인코드된다:
1
ATGGATGCATGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC
51
AGTCTTCGTT TCGCCCGGCG CCACGATCCC ACCGCACGTT CAGAAGTCGG
101
ATGTGGAAAT GGAGGCCCAG AAAGATGAAA TCATCTGCCC CAGCTGTAAT
151
AGGACTGCCC ATCCACTGAG ACATATTAAT AACGACATGA TAGTCACTGA
201
CAACAACGGT GCAGTCAAGT TTCCACAACT GTGTAAATTT TGTGATGTGA
251
GATTTTCCAC CTGTGACAAC CAGAAATCCT GCATGAGCAA CTGCAGCATC
301
ACCTCCATCT GTGAGAAGCC ACAGGAAGTC TGTGTGGCTG TATGGAGAAA
351
GAATGACGAG AACATAACAC TAGAGACAGT TTGCCATGAC CCCAAGCTCC
401
CCTACCATGA CTTTATTCTG GAAGATGCTG CTTCTCCAAA GTGCATTATG
451
AAGGAAAAAA AAAAGCCTGG TGAGACTTTC TTCATGTGTT CCTGTAGCTC
501
TGATGAGTGC AATGACAACA TCATCTTCTC AGAAGAATAT AACACCAGCA
551
ATCCTGACAC CGGTGGTGGA ACTCACACAT GCCCACCGTG CCCAGCACCT
601
GAACTCCTGG GGGGACCGTC AGTCTTCCTC TTCCCCCCAA AACCCAAGGA
651
CACCCTCATG ATCTCCCGGA CCCCTGAGGT CACATGCGTG GTGGTGGACG
701
TGAGCCACGA AGACCCTGAG GTCAAGTTCA ACTGGTACGT GGACGGCGTG
751
GAGGTGCATA ATGCCAAGAC AAAGCCGCGG GAGGAGCAGT ACAACAGCAC
801
GTACCGTGTG GTCAGCGTCC TCACCGTCCT GCACCAGGAC TGGCTGAATG
851
GCAAGGAGTA CAAGTGCAAG GTCTCCAACA AAGCCCTCCC AGCCCCCATC
901
GAGAAAACCA TCTCCAAAGC CAAAGGGCAG CCCCGAGAAC CACAGGTGTA
951
CACCCTGCCC CCATCCCGGA AGGAGATGAC CAAGAACCAG GTCAGCCTGA
1001
CCTGCCTGGT CAAAGGCTTC TATCCCAGCG ACATCGCCGT GGAGTGGGAG
1051
AGCAATGGGC AGCCGGAGAA CAACTACAAG ACCACGCCTC CCGTGCTGAA
1101
GTCCGACGGC TCCTTCTTCC TCTATAGCAA GCTCACCGTG GACAAGAGCA
1151
GGTGGCAGCA GGGGAACGTC TTCTCATGCT CCGTGATGCTGAGGCTCTG
1201
CACAACCACT ACACGCAGAA GAGCCTCTCC CTGTCTCCGG GTAAA
(서열 번호: 131)
성숙 TGFβRIIlong-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 132)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거될 수 있다.
1
TIPPHVQKSD VEMEAQKDEI ICPSCNRTAH PLRHINNDMI VTDNNGAVKF
51
PQLCKFCDVR FSTCDNQKSC MSNCS이의IC EKPQEVCVAV WRKNDENITL
101
ETVCHDPKLP YHDFILEDAA SPKCIMKEKK KPGETFFMCS CSSDECNDNI
151
IFSEEYNTSN PDTGGGTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT
201
PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL
251
TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRK
301
EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLKSDGSFFL
351
YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG K
(서열 번호: 132)
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 제 2 방법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다.
TGFβRIIshort-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 415)은 하기에 나타낸다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 TGFβRIIshort-Fc:ALK1-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 415의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 TGFβRIIshort-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 416)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거될 수 있다.
1
TIPPHVQKSV NNDMIVTDNN GAVKFPQLCK FCDVRFSTCD NQKSCMSNCS
51
이의ICEKPQE VCVAVWRKND ENITLETVCH DPKLPYHDFI LEDAASPKCI
101
MKEKKKPGET FFMCSCSSDE CNDNIIFSEE YNTSNPDTGG GTHTCPPCPA
151
PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG
201
VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP
251
IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPCREEMTKN QVSLWCLVKG FYPSDIAVEW
301
ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA
351
LHNHYTQKSL SLSPGK (서열 번호: 416)
상보적 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 413 및 414)의 폴리펩티드 서열은 실시예 16에서 논의된다. 서열 번호: 415 및 416의 TGFβRIIshort-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 실시예 16에 나타낸 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK1 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 413 및 414의 아미노산 서열들이 제공된다.
차례로 서열 번호: 416 및 서열 번호:126의 TGFβRIIshort-Fc 및 ALK1-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, TGFβRII-Fc:ALK1-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
상기에서 설명된 ALK1-Fc 폴리펩티드(서열 번호: 414)가 짧은 아이소폼의 세포외 도메인의 위치에 TGFβRII (TGFβRIIlong)의 긴 아이소폼(A)의 세포외 도메인을 포함하는 Fc 융합 단백질과 쌍을 이룬 변이체 TGFβRII-Fc:ALK1-Fc 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다
TGFβRIIlong-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 417)은 하기에 나타낸다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 TGFβRIIlong-Fc:ALK1-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 417의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 TGFβRIIlong-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 418)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거될 수 있다.
1
TIPPHVQKSD VEMEAQKDEI ICPSCNRTAH PLRHINNDMI VTDNNGAVKF
51
PQLCKFCDVR FSTCDNQKSC MSNCS이의IC EKPQEVCVAV WRKNDENITL
101
ETVCHDPKLP YHDFILEDAA SPKCIMKEKK KPGETFFMCS CSSDECNDNI
151
IFSEEYNTSN PDTGGGTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT
201
PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL
251
TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPCRE
301
EMTKNQVSLW CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL
351
YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG K
(서열 번호: 418)
차례로 서열 번호: 418 및 서열 번호:414의 TGFβRIIlong-Fc 및 ALK1-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, TGFβRIIlong-Fc:ALK1-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 TGFβRII-Fc:ALK4-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예 25. TGFβRII - Fc 동형이합체 및 ALK1 - Fc 동형이합체와 비교하여 TGFβRII- Fc : ALK1 - Fc 이형이합체의 리간드 결합 프로파일
상기에서 설명된 TGFβRIIshort-Fc:ALK1-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 TGFβRIIshort-Fc 및 ALK1-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다. TGFβRIIshort-Fc:ALK1-Fc 이형이합체, TGFβRIIshort-Fc 동형이합체, 및 ALK1-Fc 동형이합체는 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
실시예
26.
TGFβRII
short
-
Fc
:
ALK5
-
Fc
이형이합체의
생성
출원인은 인간 TGFβRII의 짧은(원뿔형) 아이소형과 인간 ALK5의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 TGFβRIIshort-Fc:ALK5-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 별도로 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체들은 각각 TGFβRIIshort-Fc 융합 폴리펩티드 및 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭되며, 이들 각 서열은 본원에서 제공된다.
이형화학성 TGFβRIIshort-Fc:ALK5-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다. 제 1 방법에서, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다. TGFβRIIshort-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 24에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 127-129로 제공된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는TGFβRIIshort-Fc:ALK5-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 실시예 24에 나타낸 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 TGFβRIIshort-Fc 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 127 및 129의 아미노산 서열들이 제공된다.
상보적인 ALK5-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 11에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 139-141로 제공된다. 서열 번호: 127 및 129의 TGFβRIIshort-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 실시예 11에서 나타낸 것과 같이 2개의 아미노산 치환 (리신이 아스파르트산으로 대체됨)이 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 139 및 141의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
차례로 서열 번호: 129 및 서열 번호:141의 TGFβRIIshort-Fc 및 ALK5-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, TGFβRIIshort-Fc:ALK5-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 제 2 방법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. TGFβRIIshort-Fc 융합 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 415-416)는 실시예 24에서 논의된다 가능한 동형이합체 복합체보다는 TGFβRIIshort-Fc:ALK5-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 실시예 24에서 나타낸 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 TGFβRIIshort-Fc 폴리펩티드의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 415- -416의 아미노산 서열들이 제공된다.
상보적 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 423-424)의 폴리펩티드 서열은 실시예 11에서 논의된다. 서열 번호: 415-416의 TGFβRIIshort-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 실시예 11에 나타낸 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK1 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 423- -424의 아미노산 서열들이 제공된다.
차례로 서열 번호: 416 및 서열 번호:424의 TGFβRIIshort-Fc 및 ALK5-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, TGFβRIIshort-Fc:ALK5-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 TGFβRIIshort-Fc:ALK5-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
27.
TGFβRII
long
-
Fc
:
ALK5
-
Fc
이형이합체의
생성
출원인은 인간 TGFβRII의 긴(A) 아이소폼의 세포외 도메인과 인간 ALK5의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 TGFβRIIlong-Fc:ALK5-Fc 이형화학성 복합체를 작제하였으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 별도로 Fc 도메인에 융합되어 있다. 개별 구조체들은 각각 TGFβRIIlong-Fc 융합 폴리펩티드 및 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭되며, 이들 각 서열은 본원에서 제공된다.
이형화학성 TGFβRIIlong-Fc:ALK5-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다. 제 1 방법에서, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다. TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 24에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 130-132로 제공된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는TGFβRIIlong-Fc:ALK5-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 실시예 24에 나타낸 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 130 및 132의 아미노산 서열들이 제공된다.
상보적인 ALK5-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 11에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 139-141로 제공된다. 서열 번호: 130 및 132의 TGFβRIIlong-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 실시예 11에서 나타낸 것과 같이 2개의 아미노산 치환 (리신이 아스파르트산으로 대체됨)이 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 139 및 142의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
차례로 서열 번호: 132 및 서열 번호:141의 TGFβRIIlong-Fc 및 ALK5-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, TGFβRIIlong-Fc:ALK5-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 제 2 방법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. TGFβRIIlong-Fc 융합 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 417-418)는 실시예 24에서 논의된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 TGFβRIIlong-Fc:ALK5-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 실시예 24에서 나타낸 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 TGFβRIIlong-Fc 폴리펩티드의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 417- -418의 아미노산 서열들이 제공된다.
상보적 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 423-424)의 폴리펩티드 서열은 실시예 11에서 논의된다. 서열 번호: 417-418의 TGFβRIIlong-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 실시예 11에 나타낸 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ALK1 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 423- -424의 아미노산 서열들이 제공된다.
차례로 서열 번호: 418 및 서열 번호:424의 TGFβRIIlong-Fc 및 ALK5-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, TGFβRIIlong-Fc:ALK5-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 TGFβRIIlong-Fc:ALK5-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예 28. TGFβRII - Fc 동형이합체 및 ALK5 - Fc 동형이합체와 비교하여 TGFβRII- Fc : ALK5 - Fc 이형이합체의 활성 프로파일
실시예 26-27에서 설명된 TGFβRIIshort-Fc:ALK5-Fc 이형이합체성 복합체의 리간드 결합 선택성을 TGFβRIIshort-Fc 및 ALK5-Fc 동형이합체 복합체의 것과 비교하기 위하여 BiacoreTM-기반의 결합 분석이 이용되었다. 상기 이형화학성 또는 동형화학성 단백질 복합체들은 항-Fc 항체를 이용하여 상기 시스템에 독립적으로 포집되어 있다. 리간드들을 주입하고, 포집된 수용체 단백질 위로 흐르도록 하였다. 결과는 아래 표에 요약되어 있고, 효과적인 리간드 트랩의 리간드 해리속도(kd)는 회색 음영으로 나타낸다.
이들 비교 결합 데이타에서 TGFβRII-Fc:ALK5-Fc 이형이합체의 리간드 결합 프로파일은 임의의 리간드에 결합하지 않는 TGFβRII-Fc 동형이합체와 ALK5-Fc 동형이합체와는 상당히 상이함을 나타낸다. 평형 해리상수 (KD)에 근거하여, TGFβRII-Fc 동형이합체는 TGFβ1보다 TGFβ1 와 TGFβ3에 훨씬 더 큰 친화력으로 결합하였는데, 이때 3개의 TGFβ 리간드에 대한 해리속도는 유사하였다. 대조적으로, TGFβRII-Fc:ALK5-Fc 이형이합체는 TGFβ1/TGFβ3보다는 TGFβ2에 높은 선택성을 나타내었다. 구체적으로, TGFβRIIlong-Fc:ALK5-Fc 이형이합체는 TGFβRII-Fc 동형이합체보다 대략 5배 크기의 친화력으로 TGFβ2에 결합하고, 해리속도는 대략 4배 정도 더 느리다. TGFβRIIlong-Fc:ALK5-Fc 이형이합체는 짧은 아이소폼을 함유하는 이형이합체보다 더 강력하게 TGFβ2에 또한 결합하였다. 도 14 참고. TGFβRII-Fc:ALK5-Fc 이형이합체는 BMP9 또는 BMP10에 결합할 수 없었고(데이타는 나타내지 않음), 이것으로 이들TGFβRII-Fc:ALK5-Fc 이형이합체는 TGFβRII-Fc:ALK1-Fc 이형이합체와 구별된다 (실시예 25 참고). 2가지 TGFβRII-Fc:ALK5-Fc 이형이합체의 센소그램에서 각 단백질의 상당한 분획이 비활성임을 나타내는 낮은 신호 크기를 나타내었다.
표면 플라스몬 공명에 의해 얻은 이들 데이터를 잘 해석하기 위해서, A549 세포에 리포터 유전자 분석을 이용하여 TGFβRII 융합 단백질이 TGFβ1, TGFβ2, 및 TGFβ3의 활성을 저해하는 능력을 측정하였다. 이 분석은 리포터 플라스미드 pGL3(CAGA)12-반딧불이 루시퍼라제 (Dennler et al, 1998, EMBO 17: 3091-3100) 및 pRLCMV-renilla 루시퍼라제로 형질감염된 인간 폐 암종 세포계에 기초하며, 이때 후자는 형질감염 효과를 제어하기 위한 것이다. CAGA 모티프는 TGFβ-반응성 유전자 (예를 들면, PAI-1)의 프로모터에 존재하며, 이 벡터는 SMAD2 및 SMAD3을 통한 신호생성 인자에 일반적으로 사용된다.
분석 첫날, A549 세포 (ATCC®: CCL-185™)는 웰당 6.5x104 세포로 48-웰 플레이트에 분포시키고, 하룻밤 동안 항온처리되었다. 다른 언급이 없는 한, 모든 항온처리는 조직 배양 배양기에서 37℃ 및 5% CO2 에서 실행된다. 둘째 날, 10 μg pGL3(CAGA)12-반딧불이 루시퍼라제, 100 ng pRLCMV-renilla 루시퍼라제, 30 μL X-tremeGENE 9 (Roche Applied Science), 및 970 μL OptiMEM (Invitrogen)이 함유된 용액으로 실온에서 30분간 선배양되었고, 그 다음 0.1% BSA이 보충된 24 mL Eagle's 최소 필수 배지 (EMEM, ATCC®)에 추가되었다. 도말된 세포에서 배지를 제거하였고, 형질감염 혼합물은 하룻밤 동안 배양을 위하여 세포 (500 μl/웰)에 제공되었다. 셋째날, 배지를 제거하였고, 세포는 하기에서 설명된 바와 같이, 리간드 및 억제제 혼합물과 함께 하룻밤 동안 항온처리되었다.
48-웰 플레이트에서 200 μL 용적의 분석 완충액 (EMEM + 0.1 % BSA)에서 일련의 테스트 물질의 희석액이 만들어졌다. 테스트 리간드를 함유하는 동량의 분석 완충액이 추가되어 이미 결정된 EC50 와 동일한 최종 리간드 농도를 얻었다. 인간 TGFβ1, TGFβ2, 및 TGFβ3는 PeproTech로부터 구하였다. 테스트 용액은 30분간 항온처리하였고, 그 다음 250 μL의 혼합물을 형질감염된 세포에 추가하였다. 테스트 물품의 각 농도는 이중으로 측정되었다. 테스트 용액을 하룻밤 항온처리 후, 세포를 인산염-완충된 염수로 헹구고, 그 다음 수동 용해 완충액 (Promega E1941)으로 용해시킨 후, -70℃에서 하룻밤 동안 보관하였다. 4일째와 최종 일에, 플레이트를 가볍게 흔들면서 실온에 이르도록 하였다. 세포 용애물은 화학발광 플레이트(96-웰)로 옮기고, 표준화된 루시퍼라제 활성을 측정하기 위하여, 이중-루시퍼라제 리포터 분석 시스템 (Promega E1980)의 시약으로 광도계(luminometer)에서 분석하였다.
이 분석을 이용하여 TGFβRII 리간드들에 의한 세포 신호생성을 억제하는 TGFβRII의 능력을 비교하였다. 결과는 하기 표에 나타낸다.
TGFβRII-Fc 동형이합체의 결과는 야생형 TGFβRIIshort-Fc 및 TGFβRIIlong-Fc 동형이합체 (del Re et al., J Biol Chem 279:22765, 2004)와 관련된 기존 보고와 일치하였다. 이 실험에서, TGFβRIIshort-Fc 동형이합체는 TGFβ1 및 TGFβ3를 효과적으로 저해하였지만, 동형이합체 10 nM 최대 농도에서 TGFβ2를 저해하지는 못하였다. 이 결과는 TGFβRII-Fc 동형이합체에 대한 TGFβ2의 낮은 결합 친화력과는 일치하지만, 이의 느린 해리 속도와는 이상하게 일치되지 않았다 (상기 결합 결과 참고). 대조적으로, TGFβRII-Fc:ALK5-Fc 이형이합체는 세포 환경에서 3개 TGFβ 리간드 모두를 효과적으로 저해하였다. 따라서, TGFβRII-Fc:ALK5-Fc 이형이합체는 TGFβ2의 선호적인 길항작용 - 또는 TGFβ1, TGFβ2, 및 TGFβ3의 복합된 길항작용 -이 유리한 특정 치료 용도에서 기대이상으로 유용할 것이다.
실시예
29.
MISRII
-
Fc
:
ALK3
-
Fc
이형이합체의
생성
인간 MISRII및 인간 ALK3의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 MISRII-Fc:ALK3-Fc이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 별도로 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 MISRII-Fc 융합 폴리펩티드와 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭된다.
이형화학성 MISRII-Fc:ALK3-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다. 제 1 방법에서, 하나의 Fc 도메인이 상호작용 면에 있는 양이온 아미노산을 도입시키도록 변경되고, 한편 또다른 Fc 도메인은 이 상호작용 면에 음이온 아미노산을 도입시키도록 변경된다.
MISRII-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 133)은 하기에 나타낸다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 MISRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 MISRII 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 133의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 MISRII-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 135)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거될 수 있다.
1
PPNRRTCVFF EAPGVRGSTK TLGELLDTGT ELPRAIRCLY SRCCFGIWNL
51
TQDRAQVEMQ GCRDSDEPGC ESLHCDPSPR AHPSPGSTLF TCSCGTDFCN
101
ANYSHLPPPG SPGTPGSQGP QAAPGESIWM ALTGGGTHTC PPCPAPELLG
151
GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN
201
AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI
251
SKAKGQPREP QVYTLPPSRK EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ
301
PENNYKTTPP VLKSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY
351
TQKSLSLSPG K (서열 번호: 135)
제 1 방법으로, 상보적 ALK3-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 41에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 115-117으로 제공된다.
차례로 서열 번호: 135 및 서열 번호:117의 MISRII-Fc 및 ALK3-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, MISRII-Fc:ALK3-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다. 상기에서 설명된 ALK3-Fc 단백질(서열 번호: 117)에 MISRII 아이소폼 1의 세포외 도메인 자리에 MISRII 아이소폼 2의 세포외 도메인 또는 MISRII 아이소폼 3의 세포외 도메인을 포함하는 Fc 용합 단백질과 페어링시킴으로써, 유사한 이형화학성 복합체들이 생성될 수 있다.
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 제 2 방법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경될 수 있다.
MISRII-Fc 폴리펩티드 서열 (서열 번호: 419)은 하기에 나타낸다:
리더 서열 및 링커는 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 MISRII-Fc:ALK3-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 419의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 MISRII-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 420)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거될 수 있다.
1
PPNRRTCVFF EAPGVRGSTK TLGELLDTGT ELPRAIRCLY SRCCFGIWNL
51
TQDRAQVEMQ GCRDSDEPGC ESLHCDPSPR AHPSPGSTLF TCSCGTDFCN
101
ANYSHLPPPG SPGTPGSQGP QAAPGESIWM ALTGGGTHTC PPCPAPELLG
151
GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN
201
AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI
251
SKAKGQPREP QVYTLPPCRE EMTKNQVSLW CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ
301
PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY
351
TQKSLSLSPG K (서열 번호: 420)
제 2 방법으로, 상보적 ALK3-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 4에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 407-408로 제공된다.
차례로 서열 번호: 420 및 서열 번호:408의 MISRII-Fc 및 ALK3-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, MISRII-Fc:ALK3-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다. 상기에서 설명된 ALK3-Fc 단백질(서열 번호: 408)에 상기에서 설명된 MISRII 아이소폼 1의 세포외 도메인 자리에 MISRII 아이소폼 2의 세포외 도메인 또는 MISRII 아이소폼 3의 세포외 도메인을 포함하는 Fc 용합 단백질과 페어링시킴으로써, 유사한 이형화학성 복합체들이 생성될 수 있다.
다양한 MISRII-Fc:ALK3-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
30.
ActRIIA
-
Fc
:
ActRIIB
-
Fc
이형이합체의
생성
인간 ActRIIA 및 인간 ActRIIB의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIA-Fc:ActRIIB-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIA-Fc 융합 폴리펩티드와 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIA-Fc:ActRIIB-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
정전기적
접근법
제 1 방법으로, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 14에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 118-120으로 제공된다.
상보적 ActRIIB-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 153)의 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIA-Fc:ActRIIB-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신은 아스파르트산으로 대체됨)이 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 153의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ActRIIB-Fc 융합 단백질 서열은 다음과 같고(서열 번호: 154), 그리고 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
GRGEAETREC IYYNANWELE RTNQSGLERC EGEQDKRLHC YASWRNSSGT
51
IELVKKGCWL DDFNCYDRQE CVATEENPQV YFCCCEGNFC NERFTHLPEA
101
GGPEVTYEPP PTAPTGGGTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS
151
RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS
201
VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS
251
REEMTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYDTT PPVLDSDGSF
301
FLYSDLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGK
(서열 번호: 154)
차례로 서열 번호: 120 및 서열 번호:154의 ActRIIA-Fc 및 ActRIIB-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIA-Fc:ActRIIB-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역
정전기적
접근법
역 접근법에서, 수용체 세포외 도메인은 상기 제 1 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 이 실시예에서, ActRIIA-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 151)의 대체 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIA-Fc:ActRIIB-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신은 아스파르트산으로 대체됨)이 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 151의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ActRIIA-Fc 융합 단백질 서열은 다음과 같고(서열 번호: 152), 그리고 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
ILGRSETQEC LFFNANWEKD RTNQTGVEPC YGDKDKRRHC FATWKNISGS
51
IEIVKQGCWL DDINCYDRTD CVEKKDSPEV YFCCCEGNMC NEKFSYFPEM
101
EVTQPTSNPV TPKPPTGGGT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
151
SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV
201
SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP
251
SREEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYDT TPPVLDSDGS
301
FFLYSDLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK
(서열 번호: 152)
ActRIIB-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 1에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 100-102로 제공된다.
차례로 서열 번호: 152 및 서열 번호:102의 ActRIIA-Fc 및 ActRIIB-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:ActRIIB-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ActRIIA-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 14에서 서열 번호: 409-410로 제공된다.
상보적 형태의 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 453)은 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 409-410의 ActRIIA-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ActRIIB-Fc융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 453의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 454)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
GRGEAETREC IYYNANWELE RTNQSGLERC EGEQDKRLHC YASWRNSSGT
51
IELVKKGCWL DDFNCYDRQE CVATEENPQV YFCCCEGNFC NERFTHLPEA
101
GGPEVTYEPP PTAPTGGGTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS
151
RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS
201
VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVCTLPPS
251
REEMTKNQVS LSCAVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT PPVLDSDGSF
301
FLVSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGK
(서열 번호: 454)
차례로 서열 번호: 410 및 서열 번호:454의 ActRIIA-Fc 및 ActRIIB-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:ActRIIB-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역 소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 바로 직전에 설명된 바와 같이 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. 그러나, 이 접근법에서 수용체 세포외 도메인은 상기 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 이 실시예에서, ActRIIA-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 451)의 대체 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 401-402의 ActRIIB-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ActRIIA-Fc융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 451의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ActRIIA-Fc 융합 단백질 서열은 다음과 같고(서열 번호: 452), 그리고 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
ILGRSETQEC LFFNANWEKD RTNQTGVEPC YGDKDKRRHC FATWKNISGS
51
IEIVKQGCWL DDINCYDRTD CVEKKDSPEV YFCCCEGNMC NEKFSYFPEM
101
EVTQPTSNPV TPKPPTGGGT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI
151
SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV
201
SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVCTLPP
251
SREEMTKNQV SLSCAVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS
301
FFLVSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK
(서열 번호: 452)
ActRIIB-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 1에서 서열 번호: 401-402로 제공된다.
차례로 서열 번호: 452 및 서열 번호:402의 ActRIIA-Fc 및 ActRIIB-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:ActRIIB-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ActRIIA-Fc:ActRIIB-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
31.
ActRIIA
-
Fc
:
BMPRII
-
Fc
이형이합체의
생성
인간 ActRIIA 및 인간 BMPRII의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIA-Fc:BMPRII-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIA-Fc 융합 폴리펩티드와 BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIA-Fc:BMPRII-Fc의 형성은 실시예 30에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
정전기적
접근법
제 1 방법으로, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 14에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 118-120으로 제공된다.
상보적 BMPRII-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 155)의 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIA-Fc:BMPRII-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신은 아스파르트산으로 대체됨)이 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 155의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 BMPRII-Fc 융합 단백질 서열은 다음과 같고(서열 번호: 156), 그리고 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
SQNQERLCAF KDPYQQDLGI GESRISHENG TILCSKGSTC YGLWEKSKGD
51
INLVKQGCWS HIGDPQECHY EECVVTTTPP SIQNGTYRFC CCSTDLCNVN
101
FTENFPPPDT TPLSPPHSFN RDETGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP
151
KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ
201
YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE
251
PQVYTLPPSR EEMTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYDTTP
301
PVLDSDGSFF LYSDLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP
351
GK (서열 번호: 156)
차례로 서열 번호: 120 및 서열 번호:156의 ActRIIA-Fc 및 BMPRII-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIA-Fc:BMPRII-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역
정전기적
접근법
역 접근법에서, 수용체 세포외 도메인은 상기 제 1 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소에 연계된다. 본 실시예에서, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 30에서 서열 번호: 151-152로 제공된다.
BMPRII-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 16에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 121-123으로 제공된다.
차례로 서열 번호: 152 및 서열 번호:123의 ActRIIA-Fc 및 BMPRII-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:BMPRII-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ActRIIA-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 14에서 서열 번호: 409-410로 제공된다.
상보적 형태의 BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 455)은 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 409-410의 ActRIIA-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 455의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 BMPRII-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 456)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
SQNQERLCAF KDPYQQDLGI GESRISHENG TILCSKGSTC YGLWEKSKGD
51
INLVKQGCWS HIGDPQECHY EECVVTTTPP SIQNGTYRFC CCSTDLCNVN
101
FTENFPPPDT TPLSPPHSFN RDETGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP
151
KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ
201
YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE
251
PQVCTLPPSR EEMTKNQVSL SCAVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP
301
PVLDSDGSFF LVSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP
351
GK (서열 번호: 456)
차례로 서열 번호: 410 및 서열 번호:456의 ActRIIA-Fc 및 BMPRII-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:BMPRII-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역 소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 바로 직전에 설명된 바와 같이 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. 그러나, 이 접근법에서 수용체 세포외 도메인은 상기 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 본 실시예에서, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 30에서 서열 번호: 451-452로 제공된다.
BMPRII-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 16에서 서열 번호: 411-412로 제공된다.
차례로 서열 번호: 452 및 서열 번호:412의 ActRIIA-Fc 및 BMPRII-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:BMPRII-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ActRIIA-Fc:BMPRII-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
32.
ActRIIA
-
Fc
:
MISRII
-
Fc
이형이합체의
생성
인간 ActRIIA 및 인간 MISRII의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIA-Fc:MISRII-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIA-Fc 융합 폴리펩티드와 MISRII-Fc 융합 폴리펩티드로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIA-Fc:MISRII-Fc의 형성은 실시예 30에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
정전기적
접근법
제 1 방법으로, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 14에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 118-120으로 제공된다.
상보적 MISRII-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 161)의 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIA-Fc:MISRII-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신은 아스파르트산으로 대체됨)이 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 161의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 MISRII-Fc 융합 단백질 서열은 다음과 같고(서열 번호: 162), 그리고 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
PPNRRTCVFF EAPGVRGSTK TLGELLDTGT ELPRAIRCLY SRCCFGIWNL
51
TQDRAQVEMQ GCRDSDEPGC ESLHCDPSPR AHPSPGSTLF TCSCGTDFCN
101
ANYSHLPPPG SPGTPGSQGP QAAPGESIWM ALTGGGTHTC PPCPAPELLG
151
GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN
201
AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI
251
SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ
301
PENNYDTTPP VLDSDGSFFL YSDLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY
351
TQKSLSLSPG K (서열 번호: 162)
차례로 서열 번호: 120 및 서열 번호:162의 ActRIIA-Fc 및 MISRII-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIA-Fc:MISRII-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역
정전기적
접근법
역 접근법에서, 수용체 세포외 도메인은 상기 제 1 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소에 연계된다. 본 실시예에서, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 30에서 서열 번호: 151 및 152로 제공된다.
MISRII-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 29에서 서열 번호: 133 및 135 로 제공된다.
차례로 서열 번호: 152 및 서열 번호:135의 ActRIIA-Fc 및 MISRII-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:MISRII-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ActRIIA-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 14에서 서열 번호: 409-410로 제공된다.
상보적 형태의 MISRII-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 457)는 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 409-410의 ActRIIA-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 MISRII-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 457의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 MISRII-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 458)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
PPNRRTCVFF EAPGVRGSTK TLGELLDTGT ELPRAIRCLY SRCCFGIWNL
51
TQDRAQVEMQ GCRDSDEPGC ESLHCDPSPR AHPSPGSTLF TCSCGTDFCN
101
ANYSHLPPPG SPGTPGSQGP QAAPGESIWM ALTGGGTHTC PPCPAPELLG
151
GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN
201
AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI
251
SKAKGQPREP QVCTLPPSRE EMTKNQVSLS CAVKGFYPSD IAVEWESNGQ
301
PENNYKTTPP VLDSDGSFFL VSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY
351
TQKSLSLSPG K (서열 번호: 458)
차례로 서열 번호: 410 및 서열 번호:458의 ActRIIA-Fc 및 MISRII-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:MISRII-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역 소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 바로 직전에 설명된 바와 같이 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. 그러나, 이 접근법에서 수용체 세포외 도메인은 상기 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 본 실시예에서, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 30에서 서열 번호: 451-452로 제공된다.
MISRII-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 29에서 서열 번호: 419-420로 제공된다.
차례로 서열 번호: 452 및 서열 번호:420의 ActRIIA-Fc 및 MISRII-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:MISRII-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ActRIIA-Fc:MISRII-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
33.
ActRIIA
-
Fc
:
TGFβRII
short
-
Fc
이형이합체의
생성
인간 ActRIIA 및 인간 TGFβRIIshort의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIA-Fc:TGFβRIIshort-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIA-Fc 융합 단백질과 TGFβRIIshort-Fc 융합 단백질로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIA-Fc:TGFβRIIshort-Fc의 형성은 실시예 30에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
정전기적
접근법
제 1 방법으로, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 14에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 118-120으로 제공된다.
상보적 TGFβRIIshort-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 157)의 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIA-Fc: TGFβRIIshort-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신은 아스파르트산으로 대체됨)이 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 157의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 TGFβRIIshort-Fc 융합 단백질 서열은 다음과 같고(서열 번호: 158), 그리고 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
TIPPHVQKSV NNDMIVTDNN GAVKFPQLCK FCDVRFSTCD NQKSCMSNCS
51
이의ICEKPQE VCVAVWRKND ENITLETVCH DPKLPYHDFI LEDAASPKCI
101
MKEKKKPGET FFMCSCSSDE CNDNIIFSEE YNTSNPDTGG GTHTCPPCPA
151
PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG
201
VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP
251
IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW
301
ESNGQPENNY DTTPPVLDSD GSFFLYSDLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA
351
LHNHYTQKSL SLSPGK (서열 번호: 158)
차례로 서열 번호: 120 및 서열 번호:158의 ActRIIA-Fc 및 TGFβRIIshort-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIA-Fc:TGFβRIIshort-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역
정전기적
접근법
역 접근법에서, 수용체 세포외 도메인은 상기 제 1 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소에 연계된다. 본 실시예에서, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 30에서 서열 번호: 151-152로 제공된다.
TGFβRIIshort-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 24에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 127-129로 제공된다.
차례로 서열 번호: 152 및 서열 번호:129의 ActRIIA-Fc 및 TGFβRIIshort-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:TGFβRIIs hort-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ActRIIA-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 14에서 서열 번호: 409-410로 제공된다.
상보적 형태의 TGFβRIIshort-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 459)는 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 409-410의 ActRIIA-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 TGFβRIIshort-Fc융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 459의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 TGFβRIIshort-Fc 융합 단백질 서열 (서열 번호: 460)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
TIPPHVQKSV NNDMIVTDNN GAVKFPQLCK FCDVRFSTCD NQKSCMSNCS
51
ITSICEKPQE VCVAVWRKND ENITLETVCH DPKLPYHDFI LEDAASPKCI
101
MKEKKKPGET FFMCSCSSDE CNDNIIFSEE YNTSNPDTGG GTHTCPPCPA
151
PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG
201
VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP
251
IEKTISKAKG QPREPQVCTL PPSREEMTKN QVSLSCAVKG FYPSDIAVEW
301
ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLVSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA
351
LHNHYTQKSL SLSPGK (서열 번호: 460)
차례로 서열 번호: 410 및 서열 번호:460의 ActRIIA-Fc 및 TGFβRIIshort-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:TGFβRIIshort-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역 소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 바로 직전에 설명된 바와 같이 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. 그러나, 이 접근법에서 수용체 세포외 도메인은 상기 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 본 실시예에서, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 30에서 서열 번호: 451-452로 제공된다.
TGFβRIIshort-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 24에서 서열 번호: 415-416로 제공된다.
차례로 서열 번호: 452 및 서열 번호:416의 ActRIIA-Fc 및 TGFβRIIshort-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:TGFβRIIshort-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ctRIIA-Fc:TGFβRIIshort-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
34.
ActRIIA
-
Fc
:
TGFβRII
long
-
Fc
이형이합체의
생성
인간 ActRIIA 및 인간 TGFβRIIlong의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ActRIIA-Fc:TGFβRIIlong-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ActRIIA-Fc 융합 단백질과 TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIA-Fc:TGFβRIIlong-Fc의 형성은 실시예 30에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
정전기적
접근법
제 1 방법으로, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 14에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 118-120으로 제공된다.
상보적 TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 159)의 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ActRIIA-Fc:TGFβRIIlong-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (리신은 아스파르트산으로 대체됨)이 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 159의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질 서열은 다음과 같고(서열 번호: 160), 그리고 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
TIPPHVQKSD VEMEAQKDEI ICPSCNRTAH PLRHINNDMI VTDNNGAVKF
51
PQLCKFCDVR FSTCDNQKSC MSNCS이의IC EKPQEVCVAV WRKNDENITL
101
ETVCHDPKLP YHDFILEDAA SPKCIMKEKK KPGETFFMCS CSSDECNDNI
151
IFSEEYNTSN PDTGGGTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT
201
PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL
251
TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE
301
EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYDTTPP VLDSDGSFFL
351
YSDLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG K
(서열 번호: 160)
차례로 서열 번호: 120 및 서열 번호:160의 ActRIIA-Fc 및 TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ActRIIA-Fc:TGFβRIIlong-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역
정전기적
접근법
역 접근법에서, 수용체 세포외 도메인은 상기 제 1 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소에 연계된다. 본 실시예에서, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 30에서 서열 번호: 151-152로 제공된다.
TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 24에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 130-132로 제공된다.
차례로 서열 번호: 152 및 서열 번호:132의 ActRIIA-Fc 및 TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:TGFβRIIlong-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ActRIIA-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 14에서 서열 번호: 409-410로 제공된다.
상보적 형태의 TGFβRIIlong-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 461)는 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 409-410의 ActRIIA-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 4개의 아미노산 치환이 ActRIIB-Fc융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 461의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질 서열 (서열 번호: 462)은 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거될 수 있다.
1
TIPPHVQKSD VEMEAQKDEI ICPSCNRTAH PLRHINNDMI VTDNNGAVKF
51
PQLCKFCDVR FSTCDNQKSC MSNCS이의IC EKPQEVCVAV WRKNDENITL
101
ETVCHDPKLP YHDFILEDAA SPKCIMKEKK KPGETFFMCS CSSDECNDNI
151
IFSEEYNTSN PDTGGGTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT
201
PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL
251
TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVCTLPPSRE
301
EMTKNQVSLS CAVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL
351
VSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG K
(서열 번호: 462)
차례로 서열 번호: 410 및 서열 번호:462의 ActRIIA-Fc 및 TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:TGFβRIIlong-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역 소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 바로 직전에 설명된 바와 같이 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. 그러나, 이 접근법에서 수용체 세포외 도메인은 상기 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 본 실시예에서, ActRIIA-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 30에서 서열 번호: 451-452로 제공된다.
TGFβRIIlong-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 24에서 서열 번호: 417-418로 제공된다.
차례로 서열 번호: 452 및 서열 번호:418의 ActRIIA-Fc 및 TGFβRIIlong-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ActRIIA-Fc:TGFβRIIlong-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ctRIIA-Fc:TGFβRIIlong-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
35. 2개의 유형 II 수용체를 포함하는 추가
이형이합체
생성
실시예 30에서 설명된 것과 유사한 방법으로 2개의 유형 II 수용체를 포함하는 추가 이형이합체 단백질 복합체가 유도될 수 있다. 이들 변이체 이형이합체의 아미노산 서열이 다음 표에 공개되며, 완벽하게 하기 위하여 2개의 유형 II 수용체를 포함하는 것으로 이미 논의된 이형이합체 (실시예 30-34)를 또한 포함한다. 실시예 30-34에서 공개된 바와 같이, 각 수용체-Fc 융합 단백질의 C-말단 리신은 임의선택적으로 포함되거나, 또는 생략될 수 있다.
각 경우에서, 2가지의 상이한 유형 II 수용체의 세포외 도메인 (ECD)이 포함된 가용성 이형화학성 복합체가 생성될 수 있으며, 이들은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 각 경우에서, 상기 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 이형화학성 단백질 복합체가 생성될 수 있다. 각 경우에서, 다양한 이형화학성 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
36.
ALK1
-
Fc
:
ALK2
-
Fc
이형이합체의
생성
인간 ALK1 및 인간 ALK2의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ALK1-Fc:ALK2-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ALK1-Fc 융합 단백질과 ALK2-Fc 융합 단백질로 지칭된다.
이형화학성 ALK1-Fc:ALK2-Fc의 형성은 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
정전기적
접근법
제 1 방법으로, ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 16에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 124-126으로 제공된다.
상보적 ALK2-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 173)의 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ALK1-Fc:ALK2-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 173의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
성숙 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 174)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1 MEDEKPKVNP KLYMCVCEGL SCGNEDHCEG QQCFSSLSIN DGFHVYQKGC
51 FQVYEQGKMT CKTPPSPGQA VECCQGDWCN RNITAQLPTK GKSFPGTQNF
101 HLETGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD
151 VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN
201 GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR KEMTKNQVSL
251 TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLKSDGSFF LYSKLTVDKS
301 RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP G (서열 번호: 174)
차례로 서열 번호: 126 및 서열 번호:174의 ALK1-Fc 및 ALK2-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ALK1-Fc:ALK2-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역
정전기적
접근법
역 접근법에서, 수용체 세포외 도메인은 상기 제 1 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 이 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 171)의 대체 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다.
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ALK1-Fc:ALK2-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 171의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
성숙 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 172)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1
DPVKPSRGPL VTCTCESPHC KGPTCRGAWC TVVLVREEGR HPQEHRGCGN
51
LHRELCRGRP TEFVNHYCCD SHLCNHNVSL VLEATQPPSE QPGTDGQLAT
101
GGGTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE
151
DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY
201
KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRKEMT KNQVSLTCLV
251
KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLK SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ
301
GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPG (서열 번호: 172)
ALK2-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 9에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 136-138로 제공된다.
차례로 서열 번호: 172 및 서열 번호:138의 ALK1-Fc 및 ALK2-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체ALK1-Fc:ALK2-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 16에서 서열 번호: 413-414로 제공된다.
상보적 형태의 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 465)는 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 413-414의 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 465의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 466)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1 MEDEKPKVNP KLYMCVCEGL SCGNEDHCEG QQCFSSLSIN DGFHVYQKGC
51
FQVYEQGKMT CKTPPSPGQA VECCQGDWCN RNITAQLPTK GKSFPGTQNF
101
HLETGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD
151
VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN
201
GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPCR EEMTKNQVSL
251
WCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS
301
RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK (서열 번호: 466)
차례로 서열 번호: 414 및 서열 번호:466의 ALK1-Fc 및 ALK2-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체ALK1-Fc:ALK2-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역 소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 바로 직전에 설명된 바와 같이 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. 그러나, 이 접근법에서 수용체 세포외 도메인은 상기 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 이 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 463)의 대체 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다.
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 421-422의 ALK2-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 463의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK1-Fc 융합 단백질 서열은 다음과 같고(서열 번호: 464), 그리고 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
DPVKPSRGPL VTCTCESPHC KGPTCRGAWC TVVLVREEGR HPQEHRGCGN
51
LHRELCRGRP TEFVNHYCCD SHLCNHNVSL VLEATQPPSE QPGTDGQLAT
101
GGGTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE
151
DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY
201
KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPCREEMT KNQVSLWCLV
251
KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ
301
GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK (서열 번호: 464)
ALK2-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 9에서 서열 번호: 421-422로 제공된다.
차례로 서열 번호: 464 및 서열 번호:422의 ALK1-Fc 및 ALK2-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK2-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ALK1-Fc:ALK2-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
37.
ALK1
-
Fc
:
ALK3
-
Fc
이형이합체의
생성
인간 ALK1 및 인간 ALK3의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ALK1-Fc:ALK3-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ALK1-Fc 융합 단백질과 ALK3-Fc 융합 단백질로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIA-Fc:ALK3-Fc의 형성은 실시예 36에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
정전기적
접근법
제 1 방법으로, ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 16에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 124-126으로 제공된다.
상보적 ALK3-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 175)의 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ALK1-Fc:ALK3-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 175의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
성숙 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 176)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1
GAQNLDSMLH GTGMKSDSDQ KKSENGVTLA PEDTLPFLKC YCSGHCPDDA
51
INNTCITNGH CFAIIEEDDQ GETTLASGCM KYEGSDFQCK DSPKAQLRRT
101
IECCRTNLCN QYLQPTLPPV VIGPFFDGSI RTGGGTHTCP PCPAPELLGG
151
PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA
201
KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS
251
KAKGQPREPQ VYTLPPSRKE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
301
ENNYKTTPPV LKSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT
351
QKSLSLSPG (서열 번호: 176)
차례로 서열 번호: 126 및 서열 번호:176의 ALK1-Fc 및 ALK3-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ALK1-Fc:ALK3-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역
정전기적
접근법
역 접근법에서, 수용체 세포외 도메인은 상기 제 1 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소에 연계된다. 본 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 36에서 서열 번호: 171-172로 제공된다.
ALK3-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 4에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 115-117로 제공된다.
차례로 서열 번호: 172 및 서열 번호:117의 ALK1-Fc 및 ALK3-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK3-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 16에서 서열 번호: 413-414로 제공된다.
상보적 형태의 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 467)은 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 413-414의 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 467의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK3-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 468)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
GAQNLDSMLH GTGMKSDSDQ KKSENGVTLA PEDTLPFLKC YCSGHCPDDA
51
INNTCITNGH CFAIIEEDDQ GETTLASGCM KYEGSDFQCK DSPKAQLRRT
101
IECCRTNLCN QYLQPTLPPV VIGPFFDGSI RTGGGTHTCP PCPAPELLGG
151
PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA
201
KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS
251
KAKGQPREPQ VYTLPPCREE MTKNQVSLWC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
301
ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT
351
QKSLSLSPGK (서열 번호: 468)
차례로 서열 번호: 414 및 서열 번호:468의 ALK1-Fc 및 ALK3-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK3-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역 소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 바로 직전에 설명된 바와 같이 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. 그러나, 이 접근법에서 수용체 세포외 도메인은 상기 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 본 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 36에서 서열 번호: 463-464로 제공된다.
ALK3-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 4에서 서열 번호: 407-408로 제공된다.
차례로 서열 번호: 464 및 서열 번호:408의 ALK1-Fc 및 ALK3-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK3-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ALK1-Fc:ALK3-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
38.
ALK1
-
Fc
:
ALK4
-
Fc
이형이합체
생성
인간 ALK1 및 인간 ALK4의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ALK1-Fc:ALK4-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ALK1-Fc 융합 단백질과 ALK4-Fc 융합 단백질로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIA-Fc:ALK4-Fc의 형성은 실시예 36에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
정전기적
접근법
제 1 방법으로, ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 16에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 124-126으로 제공된다.
상보적 ALK4-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 177)의 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ALK1-Fc:ALK4-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 177의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
성숙 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 178)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1
SGPRGVQALL CACTSCLQAN YTCETDGACM VSIFNLDGME HHVRTCIPKV
51
ELVPAGKPFY CLSSEDLRNT HCCYTDYCNR IDLRVPSGHL KEPEHPSMWG
101
PVETGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD
151
VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN
201
GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR KEMTKNQVSL
251
TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLKSDGSFF LYSKLTVDKS
301
RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP G (서열 번호: 178)
차례로 서열 번호: 126 및 서열 번호:178의 ALK1-Fc 및 ALK4-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ALK1-Fc:ALK4-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역
정전기적
접근법
역 접근법에서, 수용체 세포외 도메인은 상기 제 1 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소에 연계된다. 본 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 36에서 서열 번호: 171-172로 제공된다.
ALK4-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 1에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 104-106로 제공된다.
차례로 서열 번호: 172 및 서열 번호:106의 ALK1-Fc 및 ALK4-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK4-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 16에서 서열 번호: 413-414로 제공된다.
상보적 형태의 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 469)은 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 413-414의 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 469의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK4-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 470)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
SGPRGVQALL CACTSCLQAN YTCETDGACM VSIFNLDGME HHVRTCIPKV
51
ELVPAGKPFY CLSSEDLRNT HCCYTDYCNR IDLRVPSGHL KEPEHPSMWG
101
PVETGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD
151
VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN
201
GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPCR EEMTKNQVSL
251
WCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS
301
RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK (서열 번호: 470)
차례로 서열 번호: 414 및 서열 번호:470의 ALK1-Fc 및 ALK4-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK4-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역 소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 바로 직전에 설명된 바와 같이 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. 그러나, 이 접근법에서 수용체 세포외 도메인은 상기 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 본 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 36에서 서열 번호: 463-464로 제공된다.
ALK4-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 4에서 서열 번호: 403-404로 제공된다.
차례로 서열 번호: 464 및 서열 번호:404의 ALK1-Fc 및 ALK4-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK4-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ALK1-Fc:ALK4-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
39.
ALK1
-
Fc
:
ALK5
-
Fc
이형이합체
생성
인간 ALK1 및 인간 ALK5의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ALK1-Fc:ALK5-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ALK1-Fc 융합 단백질과 ALK5-Fc 융합 단백질로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIA-Fc:ALK5-Fc의 형성은 실시예 36에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
정전기적
접근법
제 1 방법으로, ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 16에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 124-126으로 제공된다.
상보적 ALK5-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 179)의 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ALK1-Fc:ALK5-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 179의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
성숙 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 180)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1
ALLPGATALQ CFCHLCTKDN FTCVTDGLCF VSVTETTDKV IHNSMCIAEI
51
DLIPRDRPFV CAPSSKTGSV TTTYCCNQDH CNKIELPTTV KSSPGLGPVE
101
TGGGTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH
151
EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE
201
YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRKEM TKNQVSLTCL
251
VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL KSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ
301
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG (서열 번호: 180)
차례로 서열 번호: 126 및 서열 번호:180의 ALK1-Fc 및 ALK5-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ALK1-Fc:ALK5-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역
정전기적
접근법
역 접근법에서, 수용체 세포외 도메인은 상기 제 1 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소에 연계된다. 본 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 36에서 서열 번호: 171-172로 제공된다.
ALK5-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 11에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 139-141으로 제공된다.
차례로 서열 번호: 172 및 서열 번호:141의 ALK1-Fc 및 ALK5-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK5-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 16에서 서열 번호: 413-414로 제공된다.
상보적 형태의 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 471)은 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 413-414의 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 471의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK5-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 472)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
ALLPGATALQ CFCHLCTKDN FTCVTDGLCF VSVTETTDKV IHNSMCIAEI
51
DLIPRDRPFV CAPSSKTGSV TTTYCCNQDH CNKIELPTTV KSSPGLGPVE
101
TGGGTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH
151
EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE
201
YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPCREEM TKNQVSLWCL
251
VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ
301
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGK (서열 번호: 472)
차례로 서열 번호: 414 및 서열 번호:472의 ALK1-Fc 및 ALK5-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK5-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역 소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 바로 직전에 설명된 바와 같이 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. 그러나, 이 접근법에서 수용체 세포외 도메인은 상기 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 본 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 36에서 서열 번호: 463-464로 제공된다.
ALK5-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 16에서 서열 번호: 423-424로 제공된다.
차례로 서열 번호: 464 및 서열 번호:424의 ALK1-Fc 및 ALK5-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK5-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ALK1-Fc:ALK5-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
40.
ALK1
-
Fc
:
ALK6
-
Fc
이형이합체
생성
인간 ALK1 및 인간 ALK6의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ALK1-Fc:ALK6-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ALK1-Fc 융합 단백질과 ALK6-Fc 융합 단백질로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIA-Fc:ALK6-Fc의 형성은 실시예 36에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
정전기적
접근법
제 1 방법으로, ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 16에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 124-126으로 제공된다.
상보적 ALK6-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 181)의 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ALK1-Fc:ALK6-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 181의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
성숙 ALK6-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 182)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1
KKEDGESTAP TPRPKVLRCK CHHHCPEDSV NNICSTDGYC FTMIEEDDSG
51
LPVVTSGCLG LEGSDFQCRD TPIPHQRRSI ECCTERNECN KDLHPTLPPL
101
KNRDFVDGPI HHRTGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR
151
TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV
201
LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR
251
KEMTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLKSDGSFF
301
LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP G
(서열 번호: 182)
차례로 서열 번호: 126 및 서열 번호:182의 ALK1-Fc 및 ALK6-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ALK1-Fc:ALK6-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역
정전기적
접근법
역 접근법에서, 수용체 세포외 도메인은 상기 제 1 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소에 연계된다. 본 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 36에서 서열 번호: 171-172로 제공된다.
ALK6-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 13에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 142-144으로 제공된다.
차례로 서열 번호: 172 및 서열 번호:144의 ALK1-Fc 및 ALK6-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK6-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 16에서 서열 번호: 413-414로 제공된다.
상보적 형태의 ALK6-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 473)은 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 413-414의 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 ALK6-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 473의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK6-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 474)는 다음과 같고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 제거될 수 있다.
1
KKEDGESTAP TPRPKVLRCK CHHHCPEDSV NNICSTDGYC FTMIEEDDSG
51
LPVVTSGCLG LEGSDFQCRD TPIPHQRRSI ECCTERNECN KDLHPTLPPL
101
KNRDFVDGPI HHRTGGGTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR
151
TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV
201 LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPCR
251
EEMTKNQVSL WCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF
301
LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK
(서열 번호: 474)
차례로 서열 번호: 414 및 서열 번호:474의 ALK1-Fc 및 ALK6-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK6-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역 소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 바로 직전에 설명된 바와 같이 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. 그러나, 이 접근법에서 수용체 세포외 도메인은 상기 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 본 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 36에서 서열 번호: 463-464로 제공된다.
ALK6-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 13에서 서열 번호: 425-426로 제공된다.
차례로 서열 번호: 464 및 서열 번호:426의 ALK1-Fc 및 ALK6-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 ALK1-Fc:ALK6-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ALK1-Fc:ALK6-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
41.
ALK1
-
Fc
:
ALK7
-
Fc
이형이합체
생성
인간 ALK1 및 인간 ALK7의 세포외 도메인을 포함하는 가용성 ALK1-Fc:ALK7-Fc 이형화학성 복합체를 작제할 수 있으며, 상기 세포외 도메인 각각은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 개별 구조체는 차례로 ALK1-Fc 융합 단백질과 ALK7-Fc 융합 단백질로 지칭된다.
이형화학성 ActRIIA-Fc:ALK7-Fc의 형성은 실시예 36에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유도될 수 있다.
정전기적
접근법
제 1 방법으로, ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 16에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 124-126으로 제공된다.
상보적 ALK7-Fc 융합 단백질 (서열 번호: 183)의 폴리펩티드 서열은 TPA 리더를 이용하고, 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 가능한 동형이합체 복합체보다는 ALK1-Fc:ALK7-Fc 이형이합체의 형성을 촉진시키기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (산성 아미노산이 리신으로 대체됨)이 상기 융합 단백질의 Fc 도메인에 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된, 서열 번호: 183의 아미노산 서열이 제공될 수 있다.
성숙 ALK7-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 184)는 다음과 같이 예상되고, 임의선택적으로 C-말단에 리신이 추가된다.
1
GLKCVCLLCD SSNFTCQTEG ACWASVMLTN GKEQVIKSCV SLPELNAQVF
51
CHSSNNVTKT ECCFTDFCNN ITLHLPTASP NAPKLGPMET GGGTHTCPPC
101
PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV
151
DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP
201
APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRKEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV
251
EWESNGQPEN NYKTTPPVLK SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH
301
EALHNHYTQK SLSLSPG (서열 번호: 184)
차례로 서열 번호: 126 및 서열 번호:184의 ALK1-Fc 및 ALK7-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ALK1-Fc:ALK7-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역
정전기적
접근법
역 접근법에서, 수용체 세포외 도메인은 상기 제 1 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소에 연계된다. 본 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 36에서 서열 번호: 171-172로 제공된다.
ALK7-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열과 이를 인코드하는 서열은 실시예 7에서 제공된 바와 같이 서열 번호: 112-114로 제공된다.
차례로 서열 번호: 172 및 서열 번호:114의 ALK1-Fc 및 ALK7-Fc 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ALK1-Fc:ALK7-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. ALK1-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 16에서 서열 번호: 413-414로 제공된다.
상보적 형태의 ALK7-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 475)는 다음과 같다:
리더 서열 및 링커 서열은 밑줄로 표시된다. 상기 서열 번호: 413-414의 ALK1-Fc 융합 폴리펩티드와 함께 이형이합체 형성을 유도하기 위하여, 상기 이중 밑줄로 표시된 바와 같이, 2개의 아미노산 치환 (세린이 시스테인으로 그리고 트레오닌이 트립토판으로 대체됨)이 ALK7-Fc 융합 폴리펩티드의 Fc 도메인으로 도입될 수 있다. 임의선택적으로 C-말단으로부터 리신이 제거된, 서열 번호: 475의 아미노산 서열이 제공된다.
성숙 ALK7-Fc 융합 폴리펩티드 (서열 번호: 476)는 다음과 같을 것으로 예상되고, 임의선택적으로 C-말단에 리신은 제거된다.
1
GLKCVCLLCD SSNFTCQTEG ACWASVMLTN GKEQVIKSCV SLPELNAQVF
51
CHSSNNVTKT ECCFTDFCNN ITLHLPTASP NAPKLGPMET GGGTHTCPPC
101
PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV
151
DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP
201
APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPCREEMT KNQVSLWCLV KGFYPSDIAV
251
EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH
301
EALHNHYTQK SLSLSPGK (서열 번호: 476)
차례로 서열 번호: 414 및 서열 번호:476의 ALK1-Fc 및 ALK7-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ALK1-Fc:ALK7-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
역 소수성 접근법
비대칭 Fc 융합 단백질을 이용한 이형다합체 복합체들의 형성을 촉진시키는 또다른 접근법에서, 바로 직전에 설명된 바와 같이 상보적 소수성 상호작용과 추가적인 분자간 이황화결합을 도입하도록 Fc 도메인이 변경된다. 그러나, 이 접근법에서 수용체 세포외 도메인은 상기 접근법과 비교하여 Fc 상호작용 쌍의 반대 부위 구성 요소 모두에 연계된다. 본 실시예에서, ALK1-Fc 융합 단백질의 대체 폴리펩티드 서열은 실시예 36에서 서열 번호: 463-464로 제공된다.
ALK7-Fc 융합 단백질의 폴리펩티드 서열은 실시예 7에서 서열 번호: 405-406로 제공된다.
차례로 서열 번호: 464 및 서열 번호:406의 ALK1-Fc 및 ALK7-Fc 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, ALK1-Fc:ALK7-Fc을 포함하는 이형화학성 복합체가 생성될 수 있다.
다양한 ALK1-Fc:ALK7-Fc 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
42. 2개의 유형 I 수용체를 포함하는 추가
이형이합체
생성
실시예 36에서 설명된 것과 유사한 방법으로 2개의 유형 I수용체를 포함하는 추가 이형이합체 단백질 복합체가 유도될 수 있다. 이들 변이체 이형이합체의 아미노산 서열이 다음 표에 공개되며, 완벽하게 하기 위하여 2개의 유형 I 수용체를 포함하는 것으로 이미 논의된 이형이합체 (실시예 36-41)를 또한 포함한다. 실시예 36-41에서 공개된 바와 같이, 각 수용체-Fc 융합 단백질의 C-말단 리신은 임의선택적으로 포함되거나, 또는 생략될 수 있다.
각 경우에서, 2가지의 상이한 유형 I 수용체의 세포외 도메인이 포함된 가용성 이형화학성 복합체가 생성될 수 있으며, 이들은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 각 경우에서, 상기 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 이형화학성 단백질 복합체가 생성될 수 있다. 각 경우에서, 다양한 이형화학성 단백질 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
실시예
43. 유형 I 수용체와 유형 II 수용체를 포함하는 추가
이형이합체
생성
실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방법으로 유형 I수용체와 유형 II 수용체를 포함하는 추가 이형이합체 단백질 복합체가 유도될 수 있다. 이들 변이체 이형이합체의 아미노산 서열이 다음 표에 공개되며, 완벽하게 하기 위하여 유형 I수용체와 유형 II 수용체를 포함하는 것으로 이미 논의된 이형이합체(실시예 1-29)를 또한 포함한다. 실시예 1-29에서 공개된 바와 같이, 각 수용체-Fc 융합 단백질의 C-말단 리신은 임의선택적으로 포함되거나, 또는 생략될 수 있다.
각 경우에서, 유형 I수용체와 유형 II 수용체의 세포외 도메인이 포함된 가용성 이형화학성 복합체가 생성될 수 있으며, 이들은 이 세포외 도메인과 Fc 도메인 사이에 위치한 링커와 함께, 각각 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 각 경우에서, 상기 융합 단백질은 CHO 세포계에서 공동-발현되고, 정제되어, 변이체 이형화학성 단백질 복합체가 생성될 수 있다. 각 경우에서, 다양한 이형화학성 단백질 복합체들의 정제는 다음중 3개 또는 그 이상이 임의의 순서로 포함된 일련의 컬럼 크로마토그래피에 의해 실행될 수 있다: 단백질 A 크로마토그래피, Q 세파로즈 크로마토그래피, 페닐세파로즈 크로마토그래피, 크기 압출 크로마토그래피, 및 양이온 교환 크로마토그래피. 상기 정제는 바이러스 여과 및 완충액 교환으로 완성될 수 있다.
전체적으로, 이들 실시예는 이형화학성 복합체의 내용에 있어서 유형 I 및 유형 II 수용체 폴리펩티드들은 이들의 동형복합체와 비교하여 변경된 선택성을 나타내는 신규한 결합 포켓을 형성하여 치료물질로 사용가능한 신규한 단백질 물질들을 만든다는 것을 실증하였다.
SEQUENCE LISTING
<110> ACCELERON PHARMA INC.
<120> TGF-BETA SUPERFAMILY TYPE I AND TYPE II RECEPTOR HETEROMULTIMERS
AND USES THEREOF
<130> PHPH-080-WO1
<140> PCT/US2016/000033
<141> 2016-04-06
<150> 62/143,579
<151> 2015-04-06
<160> 509
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 512
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr
145 150 155 160
Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro
165 170 175
Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu
180 185 190
Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln
195 200 205
Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys
210 215 220
Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys
225 230 235 240
His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn
245 250 255
Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser
260 265 270
Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys
275 280 285
His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp
290 295 300
Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg
305 310 315 320
Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val
325 330 335
Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro
340 345 350
Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu
355 360 365
Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile
370 375 380
Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys
385 390 395 400
Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu
405 410 415
Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val
420 425 430
His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro
435 440 445
Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp
450 455 460
Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu
465 470 475 480
Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu
485 490 495
Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile
500 505 510
<210> 2
<211> 115
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105 110
Ala Pro Thr
115
<210> 3
<211> 100
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala
100
<210> 4
<211> 512
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr
145 150 155 160
Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro
165 170 175
Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu
180 185 190
Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln
195 200 205
Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys
210 215 220
Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys
225 230 235 240
His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn
245 250 255
Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser
260 265 270
Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys
275 280 285
His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp
290 295 300
Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg
305 310 315 320
Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val
325 330 335
Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro
340 345 350
Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu
355 360 365
Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile
370 375 380
Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys
385 390 395 400
Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu
405 410 415
Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val
420 425 430
His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro
435 440 445
Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp
450 455 460
Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu
465 470 475 480
Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu
485 490 495
Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile
500 505 510
<210> 5
<211> 115
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser
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Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
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Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
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Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105 110
Ala Pro Thr
115
<210> 6
<211> 100
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala
100
<210> 7
<211> 1536
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 7
atgacggcgc cctgggtggc cctcgccctc ctctggggat cgctgtgcgc cggctctggg 60
cgtggggagg ctgagacacg ggagtgcatc tactacaacg ccaactggga gctggagcgc 120
accaaccaga gcggcctgga gcgctgcgaa ggcgagcagg acaagcggct gcactgctac 180
gcctcctggc gcaacagctc tggcaccatc gagctcgtga agaagggctg ctggctagat 240
gacttcaact gctacgatag gcaggagtgt gtggccactg aggagaaccc ccaggtgtac 300
ttctgctgct gtgaaggcaa cttctgcaac gaacgcttca ctcatttgcc agaggctggg 360
ggcccggaag tcacgtacga gccacccccg acagccccca ccctgctcac ggtgctggcc 420
tactcactgc tgcccatcgg gggcctttcc ctcatcgtcc tgctggcctt ttggatgtac 480
cggcatcgca agccccccta cggtcatgtg gacatccatg aggaccctgg gcctccacca 540
ccatcccctc tggtgggcct gaagccactg cagctgctgg agatcaaggc tcgggggcgc 600
tttggctgtg tctggaaggc ccagctcatg aatgactttg tagctgtcaa gatcttccca 660
ctccaggaca agcagtcgtg gcagagtgaa cgggagatct tcagcacacc tggcatgaag 720
cacgagaacc tgctacagtt cattgctgcc gagaagcgag gctccaacct cgaagtagag 780
ctgtggctca tcacggcctt ccatgacaag ggctccctca cggattacct caaggggaac 840
atcatcacat ggaacgaact gtgtcatgta gcagagacga tgtcacgagg cctctcatac 900
ctgcatgagg atgtgccctg gtgccgtggc gagggccaca agccgtctat tgcccacagg 960
gactttaaaa gtaagaatgt attgctgaag agcgacctca cagccgtgct ggctgacttt 1020
ggcttggctg ttcgatttga gccagggaaa cctccagggg acacccacgg acaggtaggc 1080
acgagacggt acatggctcc tgaggtgctc gagggagcca tcaacttcca gagagatgcc 1140
ttcctgcgca ttgacatgta tgccatgggg ttggtgctgt gggagcttgt gtctcgctgc 1200
aaggctgcag acggacccgt ggatgagtac atgctgccct ttgaggaaga gattggccag 1260
cacccttcgt tggaggagct gcaggaggtg gtggtgcaca agaagatgag gcccaccatt 1320
aaagatcact ggttgaaaca cccgggcctg gcccagcttt gtgtgaccat cgaggagtgc 1380
tgggaccatg atgcagaggc tcgcttgtcc gcgggctgtg tggaggagcg ggtgtccctg 1440
attcggaggt cggtcaacgg cactacctcg gactgtctcg tttccctggt gacctctgtc 1500
accaatgtgg acctgccccc taaagagtca agcatc 1536
<210> 8
<211> 345
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 8
gggcgtgggg aggctgagac acgggagtgc atctactaca acgccaactg ggagctggag 60
cgcaccaacc agagcggcct ggagcgctgc gaaggcgagc aggacaagcg gctgcactgc 120
tacgcctcct ggcgcaacag ctctggcacc atcgagctcg tgaagaaggg ctgctggcta 180
gatgacttca actgctacga taggcaggag tgtgtggcca ctgaggagaa cccccaggtg 240
tacttctgct gctgtgaagg caacttctgc aacgaacgct tcactcattt gccagaggct 300
gggggcccgg aagtcacgta cgagccaccc ccgacagccc ccacc 345
<210> 9
<211> 513
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 9
Met Gly Ala Ala Ala Lys Leu Ala Phe Ala Val Phe Leu Ile Ser Cys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe
20 25 30
Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu
35 40 45
Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp
50 55 60
Lys Asn Ile Ser Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu
65 70 75 80
Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp
85 90 95
Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu
100 105 110
Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn
115 120 125
Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Tyr Tyr Asn Ile Leu Leu Tyr Ser Leu
130 135 140
Val Pro Leu Met Leu Ile Ala Gly Ile Val Ile Cys Ala Phe Trp Val
145 150 155 160
Tyr Arg His His Lys Met Ala Tyr Pro Pro Val Leu Val Pro Thr Gln
165 170 175
Asp Pro Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Leu Gly Leu Lys Pro Leu
180 185 190
Gln Leu Leu Glu Val Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys
195 200 205
Ala Gln Leu Leu Asn Glu Tyr Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Ile Gln
210 215 220
Asp Lys Gln Ser Trp Gln Asn Glu Tyr Glu Val Tyr Ser Leu Pro Gly
225 230 235 240
Met Lys His Glu Asn Ile Leu Gln Phe Ile Gly Ala Glu Lys Arg Gly
245 250 255
Thr Ser Val Asp Val Asp Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Glu Lys
260 265 270
Gly Ser Leu Ser Asp Phe Leu Lys Ala Asn Val Val Ser Trp Asn Glu
275 280 285
Leu Cys His Ile Ala Glu Thr Met Ala Arg Gly Leu Ala Tyr Leu His
290 295 300
Glu Asp Ile Pro Gly Leu Lys Asp Gly His Lys Pro Ala Ile Ser His
305 310 315 320
Arg Asp Ile Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Asn Asn Leu Thr Ala
325 330 335
Cys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ala Leu Lys Phe Glu Ala Gly Lys Ser
340 345 350
Ala Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro
355 360 365
Glu Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg
370 375 380
Ile Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Ala Ser Arg
385 390 395 400
Cys Thr Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu
405 410 415
Glu Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Asp Met Gln Glu Val Val
420 425 430
Val His Lys Lys Lys Arg Pro Val Leu Arg Asp Tyr Trp Gln Lys His
435 440 445
Ala Gly Met Ala Met Leu Cys Glu Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His
450 455 460
Asp Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Gly Glu Arg Ile Thr
465 470 475 480
Gln Met Gln Arg Leu Thr Asn Ile Ile Thr Thr Glu Asp Ile Val Thr
485 490 495
Val Val Thr Met Val Thr Asn Val Asp Phe Pro Pro Lys Glu Ser Ser
500 505 510
Leu
<210> 10
<211> 115
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro
115
<210> 11
<211> 100
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met
100
<210> 12
<211> 1539
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 12
atgggagctg ctgcaaagtt ggcgtttgcc gtctttctta tctcctgttc ttcaggtgct 60
atacttggta gatcagaaac tcaggagtgt cttttcttta atgctaattg ggaaaaagac 120
agaaccaatc aaactggtgt tgaaccgtgt tatggtgaca aagataaacg gcggcattgt 180
tttgctacct ggaagaatat ttctggttcc attgaaatag tgaaacaagg ttgttggctg 240
gatgatatca actgctatga caggactgat tgtgtagaaa aaaaagacag ccctgaagta 300
tatttttgtt gctgtgaggg caatatgtgt aatgaaaagt tttcttattt tccggagatg 360
gaagtcacac agcccacttc aaatccagtt acacctaagc caccctatta caacatcctg 420
ctctattcct tggtgccact tatgttaatt gcggggattg tcatttgtgc attttgggtg 480
tacaggcatc acaagatggc ctaccctcct gtacttgttc caactcaaga cccaggacca 540
cccccacctt ctccattact aggtttgaaa ccactgcagt tattagaagt gaaagcaagg 600
ggaagatttg gttgtgtctg gaaagcccag ttgcttaacg aatatgtggc tgtcaaaata 660
tttccaatac aggacaaaca gtcatggcaa aatgaatacg aagtctacag tttgcctgga 720
atgaagcatg agaacatatt acagttcatt ggtgcagaaa aacgaggcac cagtgttgat 780
gtggatcttt ggctgatcac agcatttcat gaaaagggtt cactatcaga ctttcttaag 840
gctaatgtgg tctcttggaa tgaactgtgt catattgcag aaaccatggc tagaggattg 900
gcatatttac atgaggatat acctggccta aaagatggcc acaaacctgc catatctcac 960
agggacatca aaagtaaaaa tgtgctgttg aaaaacaacc tgacagcttg cattgctgac 1020
tttgggttgg ccttaaaatt tgaggctggc aagtctgcag gcgataccca tggacaggtt 1080
ggtacccgga ggtacatggc tccagaggta ttagagggtg ctataaactt ccaaagggat 1140
gcatttttga ggatagatat gtatgccatg ggattagtcc tatgggaact ggcttctcgc 1200
tgtactgctg cagatggacc tgtagatgaa tacatgttgc catttgagga ggaaattggc 1260
cagcatccat ctcttgaaga catgcaggaa gttgttgtgc ataaaaaaaa gaggcctgtt 1320
ttaagagatt attggcagaa acatgctgga atggcaatgc tctgtgaaac cattgaagaa 1380
tgttgggatc acgacgcaga agccaggtta tcagctggat gtgtaggtga aagaattacc 1440
cagatgcaga gactaacaaa tattattacc acagaggaca ttgtaacagt ggtcacaatg 1500
gtgacaaatg ttgactttcc tcccaaagaa tctagtcta 1539
<210> 13
<211> 345
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 13
atacttggta gatcagaaac tcaggagtgt cttttcttta atgctaattg ggaaaaagac 60
agaaccaatc aaactggtgt tgaaccgtgt tatggtgaca aagataaacg gcggcattgt 120
tttgctacct ggaagaatat ttctggttcc attgaaatag tgaaacaagg ttgttggctg 180
gatgatatca actgctatga caggactgat tgtgtagaaa aaaaagacag ccctgaagta 240
tatttttgtt gctgtgaggg caatatgtgt aatgaaaagt tttcttattt tccggagatg 300
gaagtcacac agcccacttc aaatccagtt acacctaagc caccc 345
<210> 14
<211> 503
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 14
Met Thr Leu Gly Ser Pro Arg Lys Gly Leu Leu Met Leu Leu Met Ala
1 5 10 15
Leu Val Thr Gln Gly Asp Pro Val Lys Pro Ser Arg Gly Pro Leu Val
20 25 30
Thr Cys Thr Cys Glu Ser Pro His Cys Lys Gly Pro Thr Cys Arg Gly
35 40 45
Ala Trp Cys Thr Val Val Leu Val Arg Glu Glu Gly Arg His Pro Gln
50 55 60
Glu His Arg Gly Cys Gly Asn Leu His Arg Glu Leu Cys Arg Gly Arg
65 70 75 80
Pro Thr Glu Phe Val Asn His Tyr Cys Cys Asp Ser His Leu Cys Asn
85 90 95
His Asn Val Ser Leu Val Leu Glu Ala Thr Gln Pro Pro Ser Glu Gln
100 105 110
Pro Gly Thr Asp Gly Gln Leu Ala Leu Ile Leu Gly Pro Val Leu Ala
115 120 125
Leu Leu Ala Leu Val Ala Leu Gly Val Leu Gly Leu Trp His Val Arg
130 135 140
Arg Arg Gln Glu Lys Gln Arg Gly Leu His Ser Glu Leu Gly Glu Ser
145 150 155 160
Ser Leu Ile Leu Lys Ala Ser Glu Gln Gly Asp Ser Met Leu Gly Asp
165 170 175
Leu Leu Asp Ser Asp Cys Thr Thr Gly Ser Gly Ser Gly Leu Pro Phe
180 185 190
Leu Val Gln Arg Thr Val Ala Arg Gln Val Ala Leu Val Glu Cys Val
195 200 205
Gly Lys Gly Arg Tyr Gly Glu Val Trp Arg Gly Leu Trp His Gly Glu
210 215 220
Ser Val Ala Val Lys Ile Phe Ser Ser Arg Asp Glu Gln Ser Trp Phe
225 230 235 240
Arg Glu Thr Glu Ile Tyr Asn Thr Val Leu Leu Arg His Asp Asn Ile
245 250 255
Leu Gly Phe Ile Ala Ser Asp Met Thr Ser Arg Asn Ser Ser Thr Gln
260 265 270
Leu Trp Leu Ile Thr His Tyr His Glu His Gly Ser Leu Tyr Asp Phe
275 280 285
Leu Gln Arg Gln Thr Leu Glu Pro His Leu Ala Leu Arg Leu Ala Val
290 295 300
Ser Ala Ala Cys Gly Leu Ala His Leu His Val Glu Ile Phe Gly Thr
305 310 315 320
Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala His Arg Asp Phe Lys Ser Arg Asn Val
325 330 335
Leu Val Lys Ser Asn Leu Gln Cys Cys Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala
340 345 350
Val Met His Ser Gln Gly Ser Asp Tyr Leu Asp Ile Gly Asn Asn Pro
355 360 365
Arg Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Asp Glu Gln
370 375 380
Ile Arg Thr Asp Cys Phe Glu Ser Tyr Lys Trp Thr Asp Ile Trp Ala
385 390 395 400
Phe Gly Leu Val Leu Trp Glu Ile Ala Arg Arg Thr Ile Val Asn Gly
405 410 415
Ile Val Glu Asp Tyr Arg Pro Pro Phe Tyr Asp Val Val Pro Asn Asp
420 425 430
Pro Ser Phe Glu Asp Met Lys Lys Val Val Cys Val Asp Gln Gln Thr
435 440 445
Pro Thr Ile Pro Asn Arg Leu Ala Ala Asp Pro Val Leu Ser Gly Leu
450 455 460
Ala Gln Met Met Arg Glu Cys Trp Tyr Pro Asn Pro Ser Ala Arg Leu
465 470 475 480
Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys Thr Leu Gln Lys Ile Ser Asn Ser Pro
485 490 495
Glu Lys Pro Lys Val Ile Gln
500
<210> 15
<211> 97
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 15
Asp Pro Val Lys Pro Ser Arg Gly Pro Leu Val Thr Cys Thr Cys Glu
1 5 10 15
Ser Pro His Cys Lys Gly Pro Thr Cys Arg Gly Ala Trp Cys Thr Val
20 25 30
Val Leu Val Arg Glu Glu Gly Arg His Pro Gln Glu His Arg Gly Cys
35 40 45
Gly Asn Leu His Arg Glu Leu Cys Arg Gly Arg Pro Thr Glu Phe Val
50 55 60
Asn His Tyr Cys Cys Asp Ser His Leu Cys Asn His Asn Val Ser Leu
65 70 75 80
Val Leu Glu Ala Thr Gln Pro Pro Ser Glu Gln Pro Gly Thr Asp Gly
85 90 95
Gln
<210> 16
<211> 1509
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 16
atgaccttgg gctcccccag gaaaggcctt ctgatgctgc tgatggcctt ggtgacccag 60
ggagaccctg tgaagccgtc tcggggcccg ctggtgacct gcacgtgtga gagcccacat 120
tgcaaggggc ctacctgccg gggggcctgg tgcacagtag tgctggtgcg ggaggagggg 180
aggcaccccc aggaacatcg gggctgcggg aacttgcaca gggagctctg cagggggcgc 240
cccaccgagt tcgtcaacca ctactgctgc gacagccacc tctgcaacca caacgtgtcc 300
ctggtgctgg aggccaccca acctccttcg gagcagccgg gaacagatgg ccagctggcc 360
ctgatcctgg gccccgtgct ggccttgctg gccctggtgg ccctgggtgt cctgggcctg 420
tggcatgtcc gacggaggca ggagaagcag cgtggcctgc acagcgagct gggagagtcc 480
agtctcatcc tgaaagcatc tgagcagggc gacagcatgt tgggggacct cctggacagt 540
gactgcacca cagggagtgg ctcagggctc cccttcctgg tgcagaggac agtggcacgg 600
caggttgcct tggtggagtg tgtgggaaaa ggccgctatg gcgaagtgtg gcggggcttg 660
tggcacggtg agagtgtggc cgtcaagatc ttctcctcga gggatgaaca gtcctggttc 720
cgggagactg agatctataa cacagtgttg ctcagacacg acaacatcct aggcttcatc 780
gcctcagaca tgacctcccg caactcgagc acgcagctgt ggctcatcac gcactaccac 840
gagcacggct ccctctacga ctttctgcag agacagacgc tggagcccca tctggctctg 900
aggctagctg tgtccgcggc atgcggcctg gcgcacctgc acgtggagat cttcggtaca 960
cagggcaaac cagccattgc ccaccgcgac ttcaagagcc gcaatgtgct ggtcaagagc 1020
aacctgcagt gttgcatcgc cgacctgggc ctggctgtga tgcactcaca gggcagcgat 1080
tacctggaca tcggcaacaa cccgagagtg ggcaccaagc ggtacatggc acccgaggtg 1140
ctggacgagc agatccgcac ggactgcttt gagtcctaca agtggactga catctgggcc 1200
tttggcctgg tgctgtggga gattgcccgc cggaccatcg tgaatggcat cgtggaggac 1260
tatagaccac ccttctatga tgtggtgccc aatgacccca gctttgagga catgaagaag 1320
gtggtgtgtg tggatcagca gacccccacc atccctaacc ggctggctgc agacccggtc 1380
ctctcaggcc tagctcagat gatgcgggag tgctggtacc caaacccctc tgcccgactc 1440
accgcgctgc ggatcaagaa gacactacaa aaaattagca acagtccaga gaagcctaaa 1500
gtgattcaa 1509
<210> 17
<211> 291
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 17
gaccctgtga agccgtctcg gggcccgctg gtgacctgca cgtgtgagag cccacattgc 60
aaggggccta cctgccgggg ggcctggtgc acagtagtgc tggtgcggga ggaggggagg 120
cacccccagg aacatcgggg ctgcgggaac ttgcacaggg agctctgcag ggggcgcccc 180
accgagttcg tcaaccacta ctgctgcgac agccacctct gcaaccacaa cgtgtccctg 240
gtgctggagg ccacccaacc tccttcggag cagccgggaa cagatggcca g 291
<210> 18
<211> 509
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 18
Met Val Asp Gly Val Met Ile Leu Pro Val Leu Ile Met Ile Ala Leu
1 5 10 15
Pro Ser Pro Ser Met Glu Asp Glu Lys Pro Lys Val Asn Pro Lys Leu
20 25 30
Tyr Met Cys Val Cys Glu Gly Leu Ser Cys Gly Asn Glu Asp His Cys
35 40 45
Glu Gly Gln Gln Cys Phe Ser Ser Leu Ser Ile Asn Asp Gly Phe His
50 55 60
Val Tyr Gln Lys Gly Cys Phe Gln Val Tyr Glu Gln Gly Lys Met Thr
65 70 75 80
Cys Lys Thr Pro Pro Ser Pro Gly Gln Ala Val Glu Cys Cys Gln Gly
85 90 95
Asp Trp Cys Asn Arg Asn Ile Thr Ala Gln Leu Pro Thr Lys Gly Lys
100 105 110
Ser Phe Pro Gly Thr Gln Asn Phe His Leu Glu Val Gly Leu Ile Ile
115 120 125
Leu Ser Val Val Phe Ala Val Cys Leu Leu Ala Cys Leu Leu Gly Val
130 135 140
Ala Leu Arg Lys Phe Lys Arg Arg Asn Gln Glu Arg Leu Asn Pro Arg
145 150 155 160
Asp Val Glu Tyr Gly Thr Ile Glu Gly Leu Ile Thr Thr Asn Val Gly
165 170 175
Asp Ser Thr Leu Ala Asp Leu Leu Asp His Ser Cys Thr Ser Gly Ser
180 185 190
Gly Ser Gly Leu Pro Phe Leu Val Gln Arg Thr Val Ala Arg Gln Ile
195 200 205
Thr Leu Leu Glu Cys Val Gly Lys Gly Arg Tyr Gly Glu Val Trp Arg
210 215 220
Gly Ser Trp Gln Gly Glu Asn Val Ala Val Lys Ile Phe Ser Ser Arg
225 230 235 240
Asp Glu Lys Ser Trp Phe Arg Glu Thr Glu Leu Tyr Asn Thr Val Met
245 250 255
Leu Arg His Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ser Asp Met Thr Ser
260 265 270
Arg His Ser Ser Thr Gln Leu Trp Leu Ile Thr His Tyr His Glu Met
275 280 285
Gly Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Gln Leu Thr Thr Leu Asp Thr Val Ser
290 295 300
Cys Leu Arg Ile Val Leu Ser Ile Ala Ser Gly Leu Ala His Leu His
305 310 315 320
Ile Glu Ile Phe Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala His Arg Asp
325 330 335
Leu Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Asn Gly Gln Cys Cys Ile
340 345 350
Ala Asp Leu Gly Leu Ala Val Met His Ser Gln Ser Thr Asn Gln Leu
355 360 365
Asp Val Gly Asn Asn Pro Arg Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met Ala Pro
370 375 380
Glu Val Leu Asp Glu Thr Ile Gln Val Asp Cys Phe Asp Ser Tyr Lys
385 390 395 400
Arg Val Asp Ile Trp Ala Phe Gly Leu Val Leu Trp Glu Val Ala Arg
405 410 415
Arg Met Val Ser Asn Gly Ile Val Glu Asp Tyr Lys Pro Pro Phe Tyr
420 425 430
Asp Val Val Pro Asn Asp Pro Ser Phe Glu Asp Met Arg Lys Val Val
435 440 445
Cys Val Asp Gln Gln Arg Pro Asn Ile Pro Asn Arg Trp Phe Ser Asp
450 455 460
Pro Thr Leu Thr Ser Leu Ala Lys Leu Met Lys Glu Cys Trp Tyr Gln
465 470 475 480
Asn Pro Ser Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys Thr Leu Thr
485 490 495
Lys Ile Asp Asn Ser Leu Asp Lys Leu Lys Thr Asp Cys
500 505
<210> 19
<211> 103
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 19
Met Glu Asp Glu Lys Pro Lys Val Asn Pro Lys Leu Tyr Met Cys Val
1 5 10 15
Cys Glu Gly Leu Ser Cys Gly Asn Glu Asp His Cys Glu Gly Gln Gln
20 25 30
Cys Phe Ser Ser Leu Ser Ile Asn Asp Gly Phe His Val Tyr Gln Lys
35 40 45
Gly Cys Phe Gln Val Tyr Glu Gln Gly Lys Met Thr Cys Lys Thr Pro
50 55 60
Pro Ser Pro Gly Gln Ala Val Glu Cys Cys Gln Gly Asp Trp Cys Asn
65 70 75 80
Arg Asn Ile Thr Ala Gln Leu Pro Thr Lys Gly Lys Ser Phe Pro Gly
85 90 95
Thr Gln Asn Phe His Leu Glu
100
<210> 20
<211> 1527
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 20
atggtagatg gagtgatgat tcttcctgtg cttatcatga ttgctctccc ctcccctagt 60
atggaagatg agaagcccaa ggtcaacccc aaactctaca tgtgtgtgtg tgaaggtctc 120
tcctgcggta atgaggacca ctgtgaaggc cagcagtgct tttcctcact gagcatcaac 180
gatggcttcc acgtctacca gaaaggctgc ttccaggttt atgagcaggg aaagatgacc 240
tgtaagaccc cgccgtcccc tggccaagcc gtggagtgct gccaagggga ctggtgtaac 300
aggaacatca cggcccagct gcccactaaa ggaaaatcct tccctggaac acagaatttc 360
cacttggagg ttggcctcat tattctctct gtagtgttcg cagtatgtct tttagcctgc 420
ctgctgggag ttgctctccg aaaatttaaa aggcgcaacc aagaacgcct caatccccga 480
gacgtggagt atggcactat cgaagggctc atcaccacca atgttggaga cagcacttta 540
gcagatttat tggatcattc gtgtacatca ggaagtggct ctggtcttcc ttttctggta 600
caaagaacag tggctcgcca gattacactg ttggagtgtg tcgggaaagg caggtatggt 660
gaggtgtgga ggggcagctg gcaaggggag aatgttgccg tgaagatctt ctcctcccgt 720
gatgagaagt catggttcag ggaaacggaa ttgtacaaca ctgtgatgct gaggcatgaa 780
aatatcttag gtttcattgc ttcagacatg acatcaagac actccagtac ccagctgtgg 840
ttaattacac attatcatga aatgggatcg ttgtacgact atcttcagct tactactctg 900
gatacagtta gctgccttcg aatagtgctg tccatagcta gtggtcttgc acatttgcac 960
atagagatat ttgggaccca agggaaacca gccattgccc atcgagattt aaagagcaaa 1020
aatattctgg ttaagaagaa tggacagtgt tgcatagcag atttgggcct ggcagtcatg 1080
cattcccaga gcaccaatca gcttgatgtg gggaacaatc cccgtgtggg caccaagcgc 1140
tacatggccc ccgaagttct agatgaaacc atccaggtgg attgtttcga ttcttataaa 1200
agggtcgata tttgggcctt tggacttgtt ttgtgggaag tggccaggcg gatggtgagc 1260
aatggtatag tggaggatta caagccaccg ttctacgatg tggttcccaa tgacccaagt 1320
tttgaagata tgaggaaggt agtctgtgtg gatcaacaaa ggccaaacat acccaacaga 1380
tggttctcag acccgacatt aacctctctg gccaagctaa tgaaagaatg ctggtatcaa 1440
aatccatccg caagactcac agcactgcgt atcaaaaaga ctttgaccaa aattgataat 1500
tccctcgaca aattgaaaac tgactgt 1527
<210> 21
<211> 309
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 21
atggaagatg agaagcccaa ggtcaacccc aaactctaca tgtgtgtgtg tgaaggtctc 60
tcctgcggta atgaggacca ctgtgaaggc cagcagtgct tttcctcact gagcatcaac 120
gatggcttcc acgtctacca gaaaggctgc ttccaggttt atgagcaggg aaagatgacc 180
tgtaagaccc cgccgtcccc tggccaagcc gtggagtgct gccaagggga ctggtgtaac 240
aggaacatca cggcccagct gcccactaaa ggaaaatcct tccctggaac acagaatttc 300
cacttggag 309
<210> 22
<211> 532
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 22
Met Pro Gln Leu Tyr Ile Tyr Ile Arg Leu Leu Gly Ala Tyr Leu Phe
1 5 10 15
Ile Ile Ser Arg Val Gln Gly Gln Asn Leu Asp Ser Met Leu His Gly
20 25 30
Thr Gly Met Lys Ser Asp Ser Asp Gln Lys Lys Ser Glu Asn Gly Val
35 40 45
Thr Leu Ala Pro Glu Asp Thr Leu Pro Phe Leu Lys Cys Tyr Cys Ser
50 55 60
Gly His Cys Pro Asp Asp Ala Ile Asn Asn Thr Cys Ile Thr Asn Gly
65 70 75 80
His Cys Phe Ala Ile Ile Glu Glu Asp Asp Gln Gly Glu Thr Thr Leu
85 90 95
Ala Ser Gly Cys Met Lys Tyr Glu Gly Ser Asp Phe Gln Cys Lys Asp
100 105 110
Ser Pro Lys Ala Gln Leu Arg Arg Thr Ile Glu Cys Cys Arg Thr Asn
115 120 125
Leu Cys Asn Gln Tyr Leu Gln Pro Thr Leu Pro Pro Val Val Ile Gly
130 135 140
Pro Phe Phe Asp Gly Ser Ile Arg Trp Leu Val Leu Leu Ile Ser Met
145 150 155 160
Ala Val Cys Ile Ile Ala Met Ile Ile Phe Ser Ser Cys Phe Cys Tyr
165 170 175
Lys His Tyr Cys Lys Ser Ile Ser Ser Arg Arg Arg Tyr Asn Arg Asp
180 185 190
Leu Glu Gln Asp Glu Ala Phe Ile Pro Val Gly Glu Ser Leu Lys Asp
195 200 205
Leu Ile Asp Gln Ser Gln Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Leu Pro Leu
210 215 220
Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala Lys Gln Ile Gln Met Val Arg Gln Val
225 230 235 240
Gly Lys Gly Arg Tyr Gly Glu Val Trp Met Gly Lys Trp Arg Gly Glu
245 250 255
Lys Val Ala Val Lys Val Phe Phe Thr Thr Glu Glu Ala Ser Trp Phe
260 265 270
Arg Glu Thr Glu Ile Tyr Gln Thr Val Leu Met Arg His Glu Asn Ile
275 280 285
Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp Ile Lys Gly Thr Gly Ser Trp Thr Gln
290 295 300
Leu Tyr Leu Ile Thr Asp Tyr His Glu Asn Gly Ser Leu Tyr Asp Phe
305 310 315 320
Leu Lys Cys Ala Thr Leu Asp Thr Arg Ala Leu Leu Lys Leu Ala Tyr
325 330 335
Ser Ala Ala Cys Gly Leu Cys His Leu His Thr Glu Ile Tyr Gly Thr
340 345 350
Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala His Arg Asp Leu Lys Ser Lys Asn Ile
355 360 365
Leu Ile Lys Lys Asn Gly Ser Cys Cys Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala
370 375 380
Val Lys Phe Asn Ser Asp Thr Asn Glu Val Asp Val Pro Leu Asn Thr
385 390 395 400
Arg Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Asp Glu Ser
405 410 415
Leu Asn Lys Asn His Phe Gln Pro Tyr Ile Met Ala Asp Ile Tyr Ser
420 425 430
Phe Gly Leu Ile Ile Trp Glu Met Ala Arg Arg Cys Ile Thr Gly Gly
435 440 445
Ile Val Glu Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr Tyr Asn Met Val Pro Ser Asp
450 455 460
Pro Ser Tyr Glu Asp Met Arg Glu Val Val Cys Val Lys Arg Leu Arg
465 470 475 480
Pro Ile Val Ser Asn Arg Trp Asn Ser Asp Glu Cys Leu Arg Ala Val
485 490 495
Leu Lys Leu Met Ser Glu Cys Trp Ala His Asn Pro Ala Ser Arg Leu
500 505 510
Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys Thr Leu Ala Lys Met Val Glu Ser Gln
515 520 525
Asp Val Lys Ile
530
<210> 23
<211> 129
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 23
Gln Asn Leu Asp Ser Met Leu His Gly Thr Gly Met Lys Ser Asp Ser
1 5 10 15
Asp Gln Lys Lys Ser Glu Asn Gly Val Thr Leu Ala Pro Glu Asp Thr
20 25 30
Leu Pro Phe Leu Lys Cys Tyr Cys Ser Gly His Cys Pro Asp Asp Ala
35 40 45
Ile Asn Asn Thr Cys Ile Thr Asn Gly His Cys Phe Ala Ile Ile Glu
50 55 60
Glu Asp Asp Gln Gly Glu Thr Thr Leu Ala Ser Gly Cys Met Lys Tyr
65 70 75 80
Glu Gly Ser Asp Phe Gln Cys Lys Asp Ser Pro Lys Ala Gln Leu Arg
85 90 95
Arg Thr Ile Glu Cys Cys Arg Thr Asn Leu Cys Asn Gln Tyr Leu Gln
100 105 110
Pro Thr Leu Pro Pro Val Val Ile Gly Pro Phe Phe Asp Gly Ser Ile
115 120 125
Arg
<210> 24
<211> 1596
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 24
atgcctcagc tatacattta catcagatta ttgggagcct atttgttcat catttctcgt 60
gttcaaggac agaatctgga tagtatgctt catggcactg ggatgaaatc agactccgac 120
cagaaaaagt cagaaaatgg agtaacctta gcaccagagg ataccttgcc ttttttaaag 180
tgctattgct cagggcactg tccagatgat gctattaata acacatgcat aactaatgga 240
cattgctttg ccatcataga agaagatgac cagggagaaa ccacattagc ttcagggtgt 300
atgaaatatg aaggatctga ttttcagtgc aaagattctc caaaagccca gctacgccgg 360
acaatagaat gttgtcggac caatttatgt aaccagtatt tgcaacccac actgccccct 420
gttgtcatag gtccgttttt tgatggcagc attcgatggc tggttttgct catttctatg 480
gctgtctgca taattgctat gatcatcttc tccagctgct tttgttacaa acattattgc 540
aagagcatct caagcagacg tcgttacaat cgtgatttgg aacaggatga agcatttatt 600
ccagttggag aatcactaaa agaccttatt gaccagtcac aaagttctgg tagtgggtct 660
ggactacctt tattggttca gcgaactatt gccaaacaga ttcagatggt ccggcaagtt 720
ggtaaaggcc gatatggaga agtatggatg ggcaaatggc gtggcgaaaa agtggcggtg 780
aaagtattct ttaccactga agaagccagc tggtttcgag aaacagaaat ctaccaaact 840
gtgctaatgc gccatgaaaa catacttggt ttcatagcgg cagacattaa aggtacaggt 900
tcctggactc agctctattt gattactgat taccatgaaa atggatctct ctatgacttc 960
ctgaaatgtg ctacactgga caccagagcc ctgcttaaat tggcttattc agctgcctgt 1020
ggtctgtgcc acctgcacac agaaatttat ggcacccaag gaaagcccgc aattgctcat 1080
cgagacctaa agagcaaaaa catcctcatc aagaaaaatg ggagttgctg cattgctgac 1140
ctgggccttg ctgttaaatt caacagtgac acaaatgaag ttgatgtgcc cttgaatacc 1200
agggtgggca ccaaacgcta catggctccc gaagtgctgg acgaaagcct gaacaaaaac 1260
cacttccagc cctacatcat ggctgacatc tacagcttcg gcctaatcat ttgggagatg 1320
gctcgtcgtt gtatcacagg agggatcgtg gaagaatacc aattgccata ttacaacatg 1380
gtaccgagtg atccgtcata cgaagatatg cgtgaggttg tgtgtgtcaa acgtttgcgg 1440
ccaattgtgt ctaatcggtg gaacagtgat gaatgtctac gagcagtttt gaagctaatg 1500
tcagaatgct gggcccacaa tccagcctcc agactcacag cattgagaat taagaagacg 1560
cttgccaaga tggttgaatc ccaagatgta aaaatc 1596
<210> 25
<211> 387
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 25
cagaatctgg atagtatgct tcatggcact gggatgaaat cagactccga ccagaaaaag 60
tcagaaaatg gagtaacctt agcaccagag gataccttgc cttttttaaa gtgctattgc 120
tcagggcact gtccagatga tgctattaat aacacatgca taactaatgg acattgcttt 180
gccatcatag aagaagatga ccagggagaa accacattag cttcagggtg tatgaaatat 240
gaaggatctg attttcagtg caaagattct ccaaaagccc agctacgccg gacaatagaa 300
tgttgtcgga ccaatttatg taaccagtat ttgcaaccca cactgccccc tgttgtcata 360
ggtccgtttt ttgatggcag cattcga 387
<210> 26
<211> 505
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 26
Met Ala Glu Ser Ala Gly Ala Ser Ser Phe Phe Pro Leu Val Val Leu
1 5 10 15
Leu Leu Ala Gly Ser Gly Gly Ser Gly Pro Arg Gly Val Gln Ala Leu
20 25 30
Leu Cys Ala Cys Thr Ser Cys Leu Gln Ala Asn Tyr Thr Cys Glu Thr
35 40 45
Asp Gly Ala Cys Met Val Ser Ile Phe Asn Leu Asp Gly Met Glu His
50 55 60
His Val Arg Thr Cys Ile Pro Lys Val Glu Leu Val Pro Ala Gly Lys
65 70 75 80
Pro Phe Tyr Cys Leu Ser Ser Glu Asp Leu Arg Asn Thr His Cys Cys
85 90 95
Tyr Thr Asp Tyr Cys Asn Arg Ile Asp Leu Arg Val Pro Ser Gly His
100 105 110
Leu Lys Glu Pro Glu His Pro Ser Met Trp Gly Pro Val Glu Leu Val
115 120 125
Gly Ile Ile Ala Gly Pro Val Phe Leu Leu Phe Leu Ile Ile Ile Ile
130 135 140
Val Phe Leu Val Ile Asn Tyr His Gln Arg Val Tyr His Asn Arg Gln
145 150 155 160
Arg Leu Asp Met Glu Asp Pro Ser Cys Glu Met Cys Leu Ser Lys Asp
165 170 175
Lys Thr Leu Gln Asp Leu Val Tyr Asp Leu Ser Thr Ser Gly Ser Gly
180 185 190
Ser Gly Leu Pro Leu Phe Val Gln Arg Thr Val Ala Arg Thr Ile Val
195 200 205
Leu Gln Glu Ile Ile Gly Lys Gly Arg Phe Gly Glu Val Trp Arg Gly
210 215 220
Arg Trp Arg Gly Gly Asp Val Ala Val Lys Ile Phe Ser Ser Arg Glu
225 230 235 240
Glu Arg Ser Trp Phe Arg Glu Ala Glu Ile Tyr Gln Thr Val Met Leu
245 250 255
Arg His Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp Asn Lys Asp Asn
260 265 270
Gly Thr Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val Ser Asp Tyr His Glu His Gly
275 280 285
Ser Leu Phe Asp Tyr Leu Asn Arg Tyr Thr Val Thr Ile Glu Gly Met
290 295 300
Ile Lys Leu Ala Leu Ser Ala Ala Ser Gly Leu Ala His Leu His Met
305 310 315 320
Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Gly Ile Ala His Arg Asp Leu
325 330 335
Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Asn Gly Met Cys Ala Ile Ala
340 345 350
Asp Leu Gly Leu Ala Val Arg His Asp Ala Val Thr Asp Thr Ile Asp
355 360 365
Ile Ala Pro Asn Gln Arg Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met Ala Pro Glu
370 375 380
Val Leu Asp Glu Thr Ile Asn Met Lys His Phe Asp Ser Phe Lys Cys
385 390 395 400
Ala Asp Ile Tyr Ala Leu Gly Leu Val Tyr Trp Glu Ile Ala Arg Arg
405 410 415
Cys Asn Ser Gly Gly Val His Glu Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr Tyr Asp
420 425 430
Leu Val Pro Ser Asp Pro Ser Ile Glu Glu Met Arg Lys Val Val Cys
435 440 445
Asp Gln Lys Leu Arg Pro Asn Ile Pro Asn Trp Trp Gln Ser Tyr Glu
450 455 460
Ala Leu Arg Val Met Gly Lys Met Met Arg Glu Cys Trp Tyr Ala Asn
465 470 475 480
Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys Thr Leu Ser Gln
485 490 495
Leu Ser Val Gln Glu Asp Val Lys Ile
500 505
<210> 27
<211> 103
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 27
Ser Gly Pro Arg Gly Val Gln Ala Leu Leu Cys Ala Cys Thr Ser Cys
1 5 10 15
Leu Gln Ala Asn Tyr Thr Cys Glu Thr Asp Gly Ala Cys Met Val Ser
20 25 30
Ile Phe Asn Leu Asp Gly Met Glu His His Val Arg Thr Cys Ile Pro
35 40 45
Lys Val Glu Leu Val Pro Ala Gly Lys Pro Phe Tyr Cys Leu Ser Ser
50 55 60
Glu Asp Leu Arg Asn Thr His Cys Cys Tyr Thr Asp Tyr Cys Asn Arg
65 70 75 80
Ile Asp Leu Arg Val Pro Ser Gly His Leu Lys Glu Pro Glu His Pro
85 90 95
Ser Met Trp Gly Pro Val Glu
100
<210> 28
<211> 1515
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 28
atggcggagt cggccggagc ctcctccttc ttcccccttg ttgtcctcct gctcgccggc 60
agcggcgggt ccgggccccg gggggtccag gctctgctgt gtgcgtgcac cagctgcctc 120
caggccaact acacgtgtga gacagatggg gcctgcatgg tttccatttt caatctggat 180
gggatggagc accatgtgcg cacctgcatc cccaaagtgg agctggtccc tgccgggaag 240
cccttctact gcctgagctc ggaggacctg cgcaacaccc actgctgcta cactgactac 300
tgcaacagga tcgacttgag ggtgcccagt ggtcacctca aggagcctga gcacccgtcc 360
atgtggggcc cggtggagct ggtaggcatc atcgccggcc cggtgttcct cctgttcctc 420
atcatcatca ttgttttcct tgtcattaac tatcatcagc gtgtctatca caaccgccag 480
agactggaca tggaagatcc ctcatgtgag atgtgtctct ccaaagacaa gacgctccag 540
gatcttgtct acgatctctc cacctcaggg tctggctcag ggttacccct ctttgtccag 600
cgcacagtgg cccgaaccat cgttttacaa gagattattg gcaagggtcg gtttggggaa 660
gtatggcggg gccgctggag gggtggtgat gtggctgtga aaatattctc ttctcgtgaa 720
gaacggtctt ggttcaggga agcagagata taccagacgg tcatgctgcg ccatgaaaac 780
atccttggat ttattgctgc tgacaataaa gataatggca cctggacaca gctgtggctt 840
gtttctgact atcatgagca cgggtccctg tttgattatc tgaaccggta cacagtgaca 900
attgagggga tgattaagct ggccttgtct gctgctagtg ggctggcaca cctgcacatg 960
gagatcgtgg gcacccaagg gaagcctgga attgctcatc gagacttaaa gtcaaagaac 1020
attctggtga agaaaaatgg catgtgtgcc atagcagacc tgggcctggc tgtccgtcat 1080
gatgcagtca ctgacaccat tgacattgcc ccgaatcaga gggtggggac caaacgatac 1140
atggcccctg aagtacttga tgaaaccatt aatatgaaac actttgactc ctttaaatgt 1200
gctgatattt atgccctcgg gcttgtatat tgggagattg ctcgaagatg caattctgga 1260
ggagtccatg aagaatatca gctgccatat tacgacttag tgccctctga cccttccatt 1320
gaggaaatgc gaaaggttgt atgtgatcag aagctgcgtc ccaacatccc caactggtgg 1380
cagagttatg aggcactgcg ggtgatgggg aagatgatgc gagagtgttg gtatgccaac 1440
ggcgcagccc gcctgacggc cctgcgcatc aagaagaccc tctcccagct cagcgtgcag 1500
gaagacgtga agatc 1515
<210> 29
<211> 309
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 29
tccgggcccc ggggggtcca ggctctgctg tgtgcgtgca ccagctgcct ccaggccaac 60
tacacgtgtg agacagatgg ggcctgcatg gtttccattt tcaatctgga tgggatggag 120
caccatgtgc gcacctgcat ccccaaagtg gagctggtcc ctgccgggaa gcccttctac 180
tgcctgagct cggaggacct gcgcaacacc cactgctgct acactgacta ctgcaacagg 240
atcgacttga gggtgcccag tggtcacctc aaggagcctg agcacccgtc catgtggggc 300
ccggtggag 309
<210> 30
<211> 503
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 30
Met Glu Ala Ala Val Ala Ala Pro Arg Pro Arg Leu Leu Leu Leu Val
1 5 10 15
Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr
20 25 30
Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys
35 40 45
Val Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys
50 55 60
Val Ile His Asn Ser Met Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg
65 70 75 80
Asp Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr
85 90 95
Thr Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro
100 105 110
Thr Thr Val Lys Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Leu Ala Ala
115 120 125
Val Ile Ala Gly Pro Val Cys Phe Val Cys Ile Ser Leu Met Leu Met
130 135 140
Val Tyr Ile Cys His Asn Arg Thr Val Ile His His Arg Val Pro Asn
145 150 155 160
Glu Glu Asp Pro Ser Leu Asp Arg Pro Phe Ile Ser Glu Gly Thr Thr
165 170 175
Leu Lys Asp Leu Ile Tyr Asp Met Thr Thr Ser Gly Ser Gly Ser Gly
180 185 190
Leu Pro Leu Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala Arg Thr Ile Val Leu Gln
195 200 205
Glu Ser Ile Gly Lys Gly Arg Phe Gly Glu Val Trp Arg Gly Lys Trp
210 215 220
Arg Gly Glu Glu Val Ala Val Lys Ile Phe Ser Ser Arg Glu Glu Arg
225 230 235 240
Ser Trp Phe Arg Glu Ala Glu Ile Tyr Gln Thr Val Met Leu Arg His
245 250 255
Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp Asn Lys Asp Asn Gly Thr
260 265 270
Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val Ser Asp Tyr His Glu His Gly Ser Leu
275 280 285
Phe Asp Tyr Leu Asn Arg Tyr Thr Val Thr Val Glu Gly Met Ile Lys
290 295 300
Leu Ala Leu Ser Thr Ala Ser Gly Leu Ala His Leu His Met Glu Ile
305 310 315 320
Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala His Arg Asp Leu Lys Ser
325 330 335
Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Asn Gly Thr Cys Cys Ile Ala Asp Leu
340 345 350
Gly Leu Ala Val Arg His Asp Ser Ala Thr Asp Thr Ile Asp Ile Ala
355 360 365
Pro Asn His Arg Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu
370 375 380
Asp Asp Ser Ile Asn Met Lys His Phe Glu Ser Phe Lys Arg Ala Asp
385 390 395 400
Ile Tyr Ala Met Gly Leu Val Phe Trp Glu Ile Ala Arg Arg Cys Ser
405 410 415
Ile Gly Gly Ile His Glu Asp Tyr Gln Leu Pro Tyr Tyr Asp Leu Val
420 425 430
Pro Ser Asp Pro Ser Val Glu Glu Met Arg Lys Val Val Cys Glu Gln
435 440 445
Lys Leu Arg Pro Asn Ile Pro Asn Arg Trp Gln Ser Cys Glu Ala Leu
450 455 460
Arg Val Met Ala Lys Ile Met Arg Glu Cys Trp Tyr Ala Asn Gly Ala
465 470 475 480
Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys Thr Leu Ser Gln Leu Ser
485 490 495
Gln Gln Glu Gly Ile Lys Met
500
<210> 31
<211> 102
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 31
Ala Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu
1 5 10 15
Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val
20 25 30
Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val Ile His Asn Ser Met Cys Ile
35 40 45
Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg Asp Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro
50 55 60
Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr Thr Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp
65 70 75 80
His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro Thr Thr Val Lys Ser Ser Pro Gly
85 90 95
Leu Gly Pro Val Glu Leu
100
<210> 32
<211> 1509
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 32
atggaggcgg cggtcgctgc tccgcgtccc cggctgctcc tcctcgtgct ggcggcggcg 60
gcggcggcgg cggcggcgct gctcccgggg gcgacggcgt tacagtgttt ctgccacctc 120
tgtacaaaag acaattttac ttgtgtgaca gatgggctct gctttgtctc tgtcacagag 180
accacagaca aagttataca caacagcatg tgtatagctg aaattgactt aattcctcga 240
gataggccgt ttgtatgtgc accctcttca aaaactgggt ctgtgactac aacatattgc 300
tgcaatcagg accattgcaa taaaatagaa cttccaacta ctgtaaagtc atcacctggc 360
cttggtcctg tggaactggc agctgtcatt gctggaccag tgtgcttcgt ctgcatctca 420
ctcatgttga tggtctatat ctgccacaac cgcactgtca ttcaccatcg agtgccaaat 480
gaagaggacc cttcattaga tcgccctttt atttcagagg gtactacgtt gaaagactta 540
atttatgata tgacaacgtc aggttctggc tcaggtttac cattgcttgt tcagagaaca 600
attgcgagaa ctattgtgtt acaagaaagc attggcaaag gtcgatttgg agaagtttgg 660
agaggaaagt ggcggggaga agaagttgct gttaagatat tctcctctag agaagaacgt 720
tcgtggttcc gtgaggcaga gatttatcaa actgtaatgt tacgtcatga aaacatcctg 780
ggatttatag cagcagacaa taaagacaat ggtacttgga ctcagctctg gttggtgtca 840
gattatcatg agcatggatc cctttttgat tacttaaaca gatacacagt tactgtggaa 900
ggaatgataa aacttgctct gtccacggcg agcggtcttg cccatcttca catggagatt 960
gttggtaccc aaggaaagcc agccattgct catagagatt tgaaatcaaa gaatatcttg 1020
gtaaagaaga atggaacttg ctgtattgca gacttaggac tggcagtaag acatgattca 1080
gccacagata ccattgatat tgctccaaac cacagagtgg gaacaaaaag gtacatggcc 1140
cctgaagttc tcgatgattc cataaatatg aaacattttg aatccttcaa acgtgctgac 1200
atctatgcaa tgggcttagt attctgggaa attgctcgac gatgttccat tggtggaatt 1260
catgaagatt accaactgcc ttattatgat cttgtacctt ctgacccatc agttgaagaa 1320
atgagaaaag ttgtttgtga acagaagtta aggccaaata tcccaaacag atggcagagc 1380
tgtgaagcct tgagagtaat ggctaaaatt atgagagaat gttggtatgc caatggagca 1440
gctaggctta cagcattgcg gattaagaaa acattatcgc aactcagtca acaggaaggc 1500
atcaaaatg 1509
<210> 33
<211> 306
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 33
gcggcgctgc tcccgggggc gacggcgtta cagtgtttct gccacctctg tacaaaagac 60
aattttactt gtgtgacaga tgggctctgc tttgtctctg tcacagagac cacagacaaa 120
gttatacaca acagcatgtg tatagctgaa attgacttaa ttcctcgaga taggccgttt 180
gtatgtgcac cctcttcaaa aactgggtct gtgactacaa catattgctg caatcaggac 240
cattgcaata aaatagaact tccaactact gtaaagtcat cacctggcct tggtcctgtg 300
gaactg 306
<210> 34
<211> 502
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 34
Met Leu Leu Arg Ser Ala Gly Lys Leu Asn Val Gly Thr Lys Lys Glu
1 5 10 15
Asp Gly Glu Ser Thr Ala Pro Thr Pro Arg Pro Lys Val Leu Arg Cys
20 25 30
Lys Cys His His His Cys Pro Glu Asp Ser Val Asn Asn Ile Cys Ser
35 40 45
Thr Asp Gly Tyr Cys Phe Thr Met Ile Glu Glu Asp Asp Ser Gly Leu
50 55 60
Pro Val Val Thr Ser Gly Cys Leu Gly Leu Glu Gly Ser Asp Phe Gln
65 70 75 80
Cys Arg Asp Thr Pro Ile Pro His Gln Arg Arg Ser Ile Glu Cys Cys
85 90 95
Thr Glu Arg Asn Glu Cys Asn Lys Asp Leu His Pro Thr Leu Pro Pro
100 105 110
Leu Lys Asn Arg Asp Phe Val Asp Gly Pro Ile His His Arg Ala Leu
115 120 125
Leu Ile Ser Val Thr Val Cys Ser Leu Leu Leu Val Leu Ile Ile Leu
130 135 140
Phe Cys Tyr Phe Arg Tyr Lys Arg Gln Glu Thr Arg Pro Arg Tyr Ser
145 150 155 160
Ile Gly Leu Glu Gln Asp Glu Thr Tyr Ile Pro Pro Gly Glu Ser Leu
165 170 175
Arg Asp Leu Ile Glu Gln Ser Gln Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Leu
180 185 190
Pro Leu Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala Lys Gln Ile Gln Met Val Lys
195 200 205
Gln Ile Gly Lys Gly Arg Tyr Gly Glu Val Trp Met Gly Lys Trp Arg
210 215 220
Gly Glu Lys Val Ala Val Lys Val Phe Phe Thr Thr Glu Glu Ala Ser
225 230 235 240
Trp Phe Arg Glu Thr Glu Ile Tyr Gln Thr Val Leu Met Arg His Glu
245 250 255
Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp Ile Lys Gly Thr Gly Ser Trp
260 265 270
Thr Gln Leu Tyr Leu Ile Thr Asp Tyr His Glu Asn Gly Ser Leu Tyr
275 280 285
Asp Tyr Leu Lys Ser Thr Thr Leu Asp Ala Lys Ser Met Leu Lys Leu
290 295 300
Ala Tyr Ser Ser Val Ser Gly Leu Cys His Leu His Thr Glu Ile Phe
305 310 315 320
Ser Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala His Arg Asp Leu Lys Ser Lys
325 330 335
Asn Ile Leu Val Lys Lys Asn Gly Thr Cys Cys Ile Ala Asp Leu Gly
340 345 350
Leu Ala Val Lys Phe Ile Ser Asp Thr Asn Glu Val Asp Ile Pro Pro
355 360 365
Asn Thr Arg Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met Pro Pro Glu Val Leu Asp
370 375 380
Glu Ser Leu Asn Arg Asn His Phe Gln Ser Tyr Ile Met Ala Asp Met
385 390 395 400
Tyr Ser Phe Gly Leu Ile Leu Trp Glu Val Ala Arg Arg Cys Val Ser
405 410 415
Gly Gly Ile Val Glu Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr His Asp Leu Val Pro
420 425 430
Ser Asp Pro Ser Tyr Glu Asp Met Arg Glu Ile Val Cys Ile Lys Lys
435 440 445
Leu Arg Pro Ser Phe Pro Asn Arg Trp Ser Ser Asp Glu Cys Leu Arg
450 455 460
Gln Met Gly Lys Leu Met Thr Glu Cys Trp Ala His Asn Pro Ala Ser
465 470 475 480
Arg Leu Thr Ala Leu Arg Val Lys Lys Thr Leu Ala Lys Met Ser Glu
485 490 495
Ser Gln Asp Ile Lys Leu
500
<210> 35
<211> 113
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 35
Lys Lys Glu Asp Gly Glu Ser Thr Ala Pro Thr Pro Arg Pro Lys Val
1 5 10 15
Leu Arg Cys Lys Cys His His His Cys Pro Glu Asp Ser Val Asn Asn
20 25 30
Ile Cys Ser Thr Asp Gly Tyr Cys Phe Thr Met Ile Glu Glu Asp Asp
35 40 45
Ser Gly Leu Pro Val Val Thr Ser Gly Cys Leu Gly Leu Glu Gly Ser
50 55 60
Asp Phe Gln Cys Arg Asp Thr Pro Ile Pro His Gln Arg Arg Ser Ile
65 70 75 80
Glu Cys Cys Thr Glu Arg Asn Glu Cys Asn Lys Asp Leu His Pro Thr
85 90 95
Leu Pro Pro Leu Lys Asn Arg Asp Phe Val Asp Gly Pro Ile His His
100 105 110
Arg
<210> 36
<211> 1506
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 36
atgcttttgc gaagtgcagg aaaattaaat gtgggcacca agaaagagga tggtgagagt 60
acagccccca ccccccgtcc aaaggtcttg cgttgtaaat gccaccacca ttgtccagaa 120
gactcagtca acaatatttg cagcacagac ggatattgtt tcacgatgat agaagaggat 180
gactctgggt tgcctgtggt cacttctggt tgcctaggac tagaaggctc agattttcag 240
tgtcgggaca ctcccattcc tcatcaaaga agatcaattg aatgctgcac agaaaggaac 300
gaatgtaata aagacctaca ccctacactg cctccattga aaaacagaga ttttgttgat 360
ggacctatac accacagggc tttacttata tctgtgactg tctgtagttt gctcttggtc 420
cttatcatat tattttgtta cttccggtat aaaagacaag aaaccagacc tcgatacagc 480
attgggttag aacaggatga aacttacatt cctcctggag aatccctgag agacttaatt 540
gagcagtctc agagctcagg aagtggatca ggcctccctc tgctggtcca aaggactata 600
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tggttcagag agacagaaat atatcagaca gtgttgatga ggcatgaaaa cattttgggt 780
ttcattgctg cagatatcaa agggacaggg tcctggaccc agttgtacct aatcacagac 840
tatcatgaaa atggttccct ttatgattat ctgaagtcca ccaccctaga cgctaaatca 900
atgctgaagt tagcctactc ttctgtcagt ggcttatgtc atttacacac agaaatcttt 960
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acaaatgaag ttgacatacc acctaacact cgagttggca ccaaacgcta tatgcctcca 1140
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tatagttttg gcctcatcct ttgggaggtt gctaggagat gtgtatcagg aggtatagtg 1260
gaagaatacc agcttcctta tcatgaccta gtgcccagtg acccctctta tgaggacatg 1320
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gagtgtctaa ggcagatggg aaaactcatg acagaatgct gggctcacaa tcctgcatca 1440
aggctgacag ccctgcgggt taagaaaaca cttgccaaaa tgtcagagtc ccaggacatt 1500
aaactc 1506
<210> 37
<211> 339
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 37
aagaaagagg atggtgagag tacagccccc accccccgtc caaaggtctt gcgttgtaaa 60
tgccaccacc attgtccaga agactcagtc aacaatattt gcagcacaga cggatattgt 120
ttcacgatga tagaagagga tgactctggg ttgcctgtgg tcacttctgg ttgcctagga 180
ctagaaggct cagattttca gtgtcgggac actcccattc ctcatcaaag aagatcaatt 240
gaatgctgca cagaaaggaa cgaatgtaat aaagacctac accctacact gcctccattg 300
aaaaacagag attttgttga tggacctata caccacagg 339
<210> 38
<211> 493
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 38
Met Thr Arg Ala Leu Cys Ser Ala Leu Arg Gln Ala Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ala Ala Ala Ala Glu Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu
20 25 30
Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala
35 40 45
Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
50 55 60
Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn
65 70 75 80
Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr
85 90 95
Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met
100 105 110
Glu Leu Ala Ile Ile Ile Thr Val Pro Val Cys Leu Leu Ser Ile Ala
115 120 125
Ala Met Leu Thr Val Trp Ala Cys Gln Gly Arg Gln Cys Ser Tyr Arg
130 135 140
Lys Lys Lys Arg Pro Asn Val Glu Glu Pro Leu Ser Glu Cys Asn Leu
145 150 155 160
Val Asn Ala Gly Lys Thr Leu Lys Asp Leu Ile Tyr Asp Val Thr Ala
165 170 175
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Leu Pro Leu Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala
180 185 190
Arg Thr Ile Val Leu Gln Glu Ile Val Gly Lys Gly Arg Phe Gly Glu
195 200 205
Val Trp His Gly Arg Trp Cys Gly Glu Asp Val Ala Val Lys Ile Phe
210 215 220
Ser Ser Arg Asp Glu Arg Ser Trp Phe Arg Glu Ala Glu Ile Tyr Gln
225 230 235 240
Thr Val Met Leu Arg His Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp
245 250 255
Asn Lys Asp Asn Gly Thr Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val Ser Glu Tyr
260 265 270
His Glu Gln Gly Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Asn Arg Asn Ile Val Thr
275 280 285
Val Ala Gly Met Ile Lys Leu Ala Leu Ser Ile Ala Ser Gly Leu Ala
290 295 300
His Leu His Met Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala
305 310 315 320
His Arg Asp Ile Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Cys Glu Thr
325 330 335
Cys Ala Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala Val Lys His Asp Ser Ile Leu
340 345 350
Asn Thr Ile Asp Ile Pro Gln Asn Pro Lys Val Gly Thr Lys Arg Tyr
355 360 365
Met Ala Pro Glu Met Leu Asp Asp Thr Met Asn Val Asn Ile Phe Glu
370 375 380
Ser Phe Lys Arg Ala Asp Ile Tyr Ser Val Gly Leu Val Tyr Trp Glu
385 390 395 400
Ile Ala Arg Arg Cys Ser Val Gly Gly Ile Val Glu Glu Tyr Gln Leu
405 410 415
Pro Tyr Tyr Asp Met Val Pro Ser Asp Pro Ser Ile Glu Glu Met Arg
420 425 430
Lys Val Val Cys Asp Gln Lys Phe Arg Pro Ser Ile Pro Asn Gln Trp
435 440 445
Gln Ser Cys Glu Ala Leu Arg Val Met Gly Arg Ile Met Arg Glu Cys
450 455 460
Trp Tyr Ala Asn Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys
465 470 475 480
Thr Ile Ser Gln Leu Cys Val Lys Glu Asp Cys Lys Ala
485 490
<210> 39
<211> 93
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 39
Glu Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser
1 5 10 15
Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu
20 25 30
Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu
35 40 45
Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr
50 55 60
Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro
65 70 75 80
Thr Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met Glu
85 90
<210> 40
<211> 1479
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 40
atgacccggg cgctctgctc agcgctccgc caggctctcc tgctgctcgc agcggccgcc 60
gagctctcgc caggactgaa gtgtgtatgt cttttgtgtg attcttcaaa ctttacctgc 120
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acagcatcac caaatgcccc aaaacttgga cccatggagc tggccatcat tattactgtg 360
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tatttgaata gaaatatagt gaccgtggct ggaatgatca agctggcgct ctcaattgct 900
agtggtctgg cacaccttca tatggagatt gttggtacac aaggtaaacc tgctattgct 960
catcgagaca taaaatcaaa gaatatctta gtgaaaaagt gtgaaacttg tgccatagcg 1020
gacttagggt tggctgtgaa gcatgattca atactgaaca ctatcgacat acctcagaat 1080
cctaaagtgg gaaccaagag gtatatggct cctgaaatgc ttgatgatac aatgaatgtg 1140
aatatctttg agtccttcaa acgagctgac atctattctg ttggtctggt ttactgggaa 1200
atagcccgga ggtgttcagt cggaggaatt gttgaggagt accaattgcc ttattatgac 1260
atggtgcctt cagatccctc gatagaggaa atgagaaagg ttgtttgtga ccagaagttt 1320
cgaccaagta tcccaaacca gtggcaaagt tgtgaagcac tccgagtcat ggggagaata 1380
atgcgtgagt gttggtatgc caacggagcg gcccgcctaa ctgctcttcg tattaagaag 1440
actatatctc aactttgtgt caaagaagac tgcaaagcc 1479
<210> 41
<211> 279
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 41
gagctctcgc caggactgaa gtgtgtatgt cttttgtgtg attcttcaaa ctttacctgc 60
caaacagaag gagcatgttg ggcatcagtc atgctaacca atggaaaaga gcaggtgatc 120
aaatcctgtg tctcccttcc agaactgaat gctcaagtct tctgtcatag ttccaacaat 180
gttaccaaaa ccgaatgctg cttcacagat ttttgcaaca acataacact gcaccttcca 240
acagcatcac caaatgcccc aaaacttgga cccatggag 279
<210> 42
<211> 567
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 42
Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu
1 5 10 15
Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val
20 25 30
Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro
35 40 45
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
50 55 60
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
65 70 75 80
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
85 90 95
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
100 105 110
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
115 120 125
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn
130 135 140
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu
145 150 155 160
Leu Leu Val Ile Phe Gln Val Thr Gly Ile Ser Leu Leu Pro Pro Leu
165 170 175
Gly Val Ala Ile Ser Val Ile Ile Ile Phe Tyr Cys Tyr Arg Val Asn
180 185 190
Arg Gln Gln Lys Leu Ser Ser Thr Trp Glu Thr Gly Lys Thr Arg Lys
195 200 205
Leu Met Glu Phe Ser Glu His Cys Ala Ile Ile Leu Glu Asp Asp Arg
210 215 220
Ser Asp Ile Ser Ser Thr Cys Ala Asn Asn Ile Asn His Asn Thr Glu
225 230 235 240
Leu Leu Pro Ile Glu Leu Asp Thr Leu Val Gly Lys Gly Arg Phe Ala
245 250 255
Glu Val Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln Asn Thr Ser Glu Gln Phe Glu
260 265 270
Thr Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Tyr Glu Glu Tyr Ala Ser Trp Lys
275 280 285
Thr Glu Lys Asp Ile Phe Ser Asp Ile Asn Leu Lys His Glu Asn Ile
290 295 300
Leu Gln Phe Leu Thr Ala Glu Glu Arg Lys Thr Glu Leu Gly Lys Gln
305 310 315 320
Tyr Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Ala Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr
325 330 335
Leu Thr Arg His Val Ile Ser Trp Glu Asp Leu Arg Lys Leu Gly Ser
340 345 350
Ser Leu Ala Arg Gly Ile Ala His Leu His Ser Asp His Thr Pro Cys
355 360 365
Gly Arg Pro Lys Met Pro Ile Val His Arg Asp Leu Lys Ser Ser Asn
370 375 380
Ile Leu Val Lys Asn Asp Leu Thr Cys Cys Leu Cys Asp Phe Gly Leu
385 390 395 400
Ser Leu Arg Leu Asp Pro Thr Leu Ser Val Asp Asp Leu Ala Asn Ser
405 410 415
Gly Gln Val Gly Thr Ala Arg Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Glu Ser
420 425 430
Arg Met Asn Leu Glu Asn Val Glu Ser Phe Lys Gln Thr Asp Val Tyr
435 440 445
Ser Met Ala Leu Val Leu Trp Glu Met Thr Ser Arg Cys Asn Ala Val
450 455 460
Gly Glu Val Lys Asp Tyr Glu Pro Pro Phe Gly Ser Lys Val Arg Glu
465 470 475 480
His Pro Cys Val Glu Ser Met Lys Asp Asn Val Leu Arg Asp Arg Gly
485 490 495
Arg Pro Glu Ile Pro Ser Phe Trp Leu Asn His Gln Gly Ile Gln Met
500 505 510
Val Cys Glu Thr Leu Thr Glu Cys Trp Asp His Asp Pro Glu Ala Arg
515 520 525
Leu Thr Ala Gln Cys Val Ala Glu Arg Phe Ser Glu Leu Glu His Leu
530 535 540
Asp Arg Leu Ser Gly Arg Ser Cys Ser Glu Glu Lys Ile Pro Glu Asp
545 550 555 560
Gly Ser Leu Asn Thr Thr Lys
565
<210> 43
<211> 144
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 43
Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val
1 5 10 15
Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys
20 25 30
Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn
35 40 45
Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala
50 55 60
Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His
65 70 75 80
Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser
85 90 95
Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe
100 105 110
Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser
115 120 125
Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu Leu Leu Val Ile Phe Gln
130 135 140
<210> 44
<211> 1701
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 44
atgggtcggg ggctgctcag gggcctgtgg ccgctgcaca tcgtcctgtg gacgcgtatc 60
gccagcacga tcccaccgca cgttcagaag tcggttaata acgacatgat agtcactgac 120
aacaacggtg cagtcaagtt tccacaactg tgtaaatttt gtgatgtgag attttccacc 180
tgtgacaacc agaaatcctg catgagcaac tgcagcatca cctccatctg tgagaagcca 240
caggaagtct gtgtggctgt atggagaaag aatgacgaga acataacact agagacagtt 300
tgccatgacc ccaagctccc ctaccatgac tttattctgg aagatgctgc ttctccaaag 360
tgcattatga aggaaaaaaa aaagcctggt gagactttct tcatgtgttc ctgtagctct 420
gatgagtgca atgacaacat catcttctca gaagaatata acaccagcaa tcctgacttg 480
ttgctagtca tatttcaagt gacaggcatc agcctcctgc caccactggg agttgccata 540
tctgtcatca tcatcttcta ctgctaccgc gttaaccggc agcagaagct gagttcaacc 600
tgggaaaccg gcaagacgcg gaagctcatg gagttcagcg agcactgtgc catcatcctg 660
gaagatgacc gctctgacat cagctccacg tgtgccaaca acatcaacca caacacagag 720
ctgctgccca ttgagctgga caccctggtg gggaaaggtc gctttgctga ggtctataag 780
gccaagctga agcagaacac ttcagagcag tttgagacag tggcagtcaa gatctttccc 840
tatgaggagt atgcctcttg gaagacagag aaggacatct tctcagacat caatctgaag 900
catgagaaca tactccagtt cctgacggct gaggagcgga agacggagtt ggggaaacaa 960
tactggctga tcaccgcctt ccacgccaag ggcaacctac aggagtacct gacgcggcat 1020
gtcatcagct gggaggacct gcgcaagctg ggcagctccc tcgcccgggg gattgctcac 1080
ctccacagtg atcacactcc atgtgggagg cccaagatgc ccatcgtgca cagggacctc 1140
aagagctcca atatcctcgt gaagaacgac ctaacctgct gcctgtgtga ctttgggctt 1200
tccctgcgtc tggaccctac tctgtctgtg gatgacctgg ctaacagtgg gcaggtggga 1260
actgcaagat acatggctcc agaagtccta gaatccagga tgaatttgga gaatgttgag 1320
tccttcaagc agaccgatgt ctactccatg gctctggtgc tctgggaaat gacatctcgc 1380
tgtaatgcag tgggagaagt aaaagattat gagcctccat ttggttccaa ggtgcgggag 1440
cacccctgtg tcgaaagcat gaaggacaac gtgttgagag atcgagggcg accagaaatt 1500
cccagcttct ggctcaacca ccagggcatc cagatggtgt gtgagacgtt gactgagtgc 1560
tgggaccacg acccagaggc ccgtctcaca gcccagtgtg tggcagaacg cttcagtgag 1620
ctggagcatc tggacaggct ctcggggagg agctgctcgg aggagaagat tcctgaagac 1680
ggctccctaa acactaccaa a 1701
<210> 45
<211> 432
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 45
acgatcccac cgcacgttca gaagtcggtt aataacgaca tgatagtcac tgacaacaac 60
ggtgcagtca agtttccaca actgtgtaaa ttttgtgatg tgagattttc cacctgtgac 120
aaccagaaat cctgcatgag caactgcagc atcacctcca tctgtgagaa gccacaggaa 180
gtctgtgtgg ctgtatggag aaagaatgac gagaacataa cactagagac agtttgccat 240
gaccccaagc tcccctacca tgactttatt ctggaagatg ctgcttctcc aaagtgcatt 300
atgaaggaaa aaaaaaagcc tggtgagact ttcttcatgt gttcctgtag ctctgatgag 360
tgcaatgaca acatcatctt ctcagaagaa tataacacca gcaatcctga cttgttgcta 420
gtcatatttc aa 432
<210> 46
<211> 1038
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 46
Met Thr Ser Ser Leu Gln Arg Pro Trp Arg Val Pro Trp Leu Pro Trp
1 5 10 15
Thr Ile Leu Leu Val Ser Thr Ala Ala Ala Ser Gln Asn Gln Glu Arg
20 25 30
Leu Cys Ala Phe Lys Asp Pro Tyr Gln Gln Asp Leu Gly Ile Gly Glu
35 40 45
Ser Arg Ile Ser His Glu Asn Gly Thr Ile Leu Cys Ser Lys Gly Ser
50 55 60
Thr Cys Tyr Gly Leu Trp Glu Lys Ser Lys Gly Asp Ile Asn Leu Val
65 70 75 80
Lys Gln Gly Cys Trp Ser His Ile Gly Asp Pro Gln Glu Cys His Tyr
85 90 95
Glu Glu Cys Val Val Thr Thr Thr Pro Pro Ser Ile Gln Asn Gly Thr
100 105 110
Tyr Arg Phe Cys Cys Cys Ser Thr Asp Leu Cys Asn Val Asn Phe Thr
115 120 125
Glu Asn Phe Pro Pro Pro Asp Thr Thr Pro Leu Ser Pro Pro His Ser
130 135 140
Phe Asn Arg Asp Glu Thr Ile Ile Ile Ala Leu Ala Ser Val Ser Val
145 150 155 160
Leu Ala Val Leu Ile Val Ala Leu Cys Phe Gly Tyr Arg Met Leu Thr
165 170 175
Gly Asp Arg Lys Gln Gly Leu His Ser Met Asn Met Met Glu Ala Ala
180 185 190
Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asp Leu Asp Asn Leu Lys Leu Leu Glu Leu
195 200 205
Ile Gly Arg Gly Arg Tyr Gly Ala Val Tyr Lys Gly Ser Leu Asp Glu
210 215 220
Arg Pro Val Ala Val Lys Val Phe Ser Phe Ala Asn Arg Gln Asn Phe
225 230 235 240
Ile Asn Glu Lys Asn Ile Tyr Arg Val Pro Leu Met Glu His Asp Asn
245 250 255
Ile Ala Arg Phe Ile Val Gly Asp Glu Arg Val Thr Ala Asp Gly Arg
260 265 270
Met Glu Tyr Leu Leu Val Met Glu Tyr Tyr Pro Asn Gly Ser Leu Cys
275 280 285
Lys Tyr Leu Ser Leu His Thr Ser Asp Trp Val Ser Ser Cys Arg Leu
290 295 300
Ala His Ser Val Thr Arg Gly Leu Ala Tyr Leu His Thr Glu Leu Pro
305 310 315 320
Arg Gly Asp His Tyr Lys Pro Ala Ile Ser His Arg Asp Leu Asn Ser
325 330 335
Arg Asn Val Leu Val Lys Asn Asp Gly Thr Cys Val Ile Ser Asp Phe
340 345 350
Gly Leu Ser Met Arg Leu Thr Gly Asn Arg Leu Val Arg Pro Gly Glu
355 360 365
Glu Asp Asn Ala Ala Ile Ser Glu Val Gly Thr Ile Arg Tyr Met Ala
370 375 380
Pro Glu Val Leu Glu Gly Ala Val Asn Leu Arg Asp Cys Glu Ser Ala
385 390 395 400
Leu Lys Gln Val Asp Met Tyr Ala Leu Gly Leu Ile Tyr Trp Glu Ile
405 410 415
Phe Met Arg Cys Thr Asp Leu Phe Pro Gly Glu Ser Val Pro Glu Tyr
420 425 430
Gln Met Ala Phe Gln Thr Glu Val Gly Asn His Pro Thr Phe Glu Asp
435 440 445
Met Gln Val Leu Val Ser Arg Glu Lys Gln Arg Pro Lys Phe Pro Glu
450 455 460
Ala Trp Lys Glu Asn Ser Leu Ala Val Arg Ser Leu Lys Glu Thr Ile
465 470 475 480
Glu Asp Cys Trp Asp Gln Asp Ala Glu Ala Arg Leu Thr Ala Gln Cys
485 490 495
Ala Glu Glu Arg Met Ala Glu Leu Met Met Ile Trp Glu Arg Asn Lys
500 505 510
Ser Val Ser Pro Thr Val Asn Pro Met Ser Thr Ala Met Gln Asn Glu
515 520 525
Arg Asn Leu Ser His Asn Arg Arg Val Pro Lys Ile Gly Pro Tyr Pro
530 535 540
Asp Tyr Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Glu Asp Ser Ile His His Thr Asp
545 550 555 560
Ser Ile Val Lys Asn Ile Ser Ser Glu His Ser Met Ser Ser Thr Pro
565 570 575
Leu Thr Ile Gly Glu Lys Asn Arg Asn Ser Ile Asn Tyr Glu Arg Gln
580 585 590
Gln Ala Gln Ala Arg Ile Pro Ser Pro Glu Thr Ser Val Thr Ser Leu
595 600 605
Ser Thr Asn Thr Thr Thr Thr Asn Thr Thr Gly Leu Thr Pro Ser Thr
610 615 620
Gly Met Thr Thr Ile Ser Glu Met Pro Tyr Pro Asp Glu Thr Asn Leu
625 630 635 640
His Thr Thr Asn Val Ala Gln Ser Ile Gly Pro Thr Pro Val Cys Leu
645 650 655
Gln Leu Thr Glu Glu Asp Leu Glu Thr Asn Lys Leu Asp Pro Lys Glu
660 665 670
Val Asp Lys Asn Leu Lys Glu Ser Ser Asp Glu Asn Leu Met Glu His
675 680 685
Ser Leu Lys Gln Phe Ser Gly Pro Asp Pro Leu Ser Ser Thr Ser Ser
690 695 700
Ser Leu Leu Tyr Pro Leu Ile Lys Leu Ala Val Glu Ala Thr Gly Gln
705 710 715 720
Gln Asp Phe Thr Gln Thr Ala Asn Gly Gln Ala Cys Leu Ile Pro Asp
725 730 735
Val Leu Pro Thr Gln Ile Tyr Pro Leu Pro Lys Gln Gln Asn Leu Pro
740 745 750
Lys Arg Pro Thr Ser Leu Pro Leu Asn Thr Lys Asn Ser Thr Lys Glu
755 760 765
Pro Arg Leu Lys Phe Gly Ser Lys His Lys Ser Asn Leu Lys Gln Val
770 775 780
Glu Thr Gly Val Ala Lys Met Asn Thr Ile Asn Ala Ala Glu Pro His
785 790 795 800
Val Val Thr Val Thr Met Asn Gly Val Ala Gly Arg Asn His Ser Val
805 810 815
Asn Ser His Ala Ala Thr Thr Gln Tyr Ala Asn Gly Thr Val Leu Ser
820 825 830
Gly Gln Thr Thr Asn Ile Val Thr His Arg Ala Gln Glu Met Leu Gln
835 840 845
Asn Gln Phe Ile Gly Glu Asp Thr Arg Leu Asn Ile Asn Ser Ser Pro
850 855 860
Asp Glu His Glu Pro Leu Leu Arg Arg Glu Gln Gln Ala Gly His Asp
865 870 875 880
Glu Gly Val Leu Asp Arg Leu Val Asp Arg Arg Glu Arg Pro Leu Glu
885 890 895
Gly Gly Arg Thr Asn Ser Asn Asn Asn Asn Ser Asn Pro Cys Ser Glu
900 905 910
Gln Asp Val Leu Ala Gln Gly Val Pro Ser Thr Ala Ala Asp Pro Gly
915 920 925
Pro Ser Lys Pro Arg Arg Ala Gln Arg Pro Asn Ser Leu Asp Leu Ser
930 935 940
Ala Thr Asn Val Leu Asp Gly Ser Ser Ile Gln Ile Gly Glu Ser Thr
945 950 955 960
Gln Asp Gly Lys Ser Gly Ser Gly Glu Lys Ile Lys Lys Arg Val Lys
965 970 975
Thr Pro Tyr Ser Leu Lys Arg Trp Arg Pro Ser Thr Trp Val Ile Ser
980 985 990
Thr Glu Ser Leu Asp Cys Glu Val Asn Asn Asn Gly Ser Asn Arg Ala
995 1000 1005
Val His Ser Lys Ser Ser Thr Ala Val Tyr Leu Ala Glu Gly Gly
1010 1015 1020
Thr Ala Thr Thr Met Val Ser Lys Asp Ile Gly Met Asn Cys Leu
1025 1030 1035
<210> 47
<211> 124
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 47
Ser Gln Asn Gln Glu Arg Leu Cys Ala Phe Lys Asp Pro Tyr Gln Gln
1 5 10 15
Asp Leu Gly Ile Gly Glu Ser Arg Ile Ser His Glu Asn Gly Thr Ile
20 25 30
Leu Cys Ser Lys Gly Ser Thr Cys Tyr Gly Leu Trp Glu Lys Ser Lys
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Leu Val Lys Gln Gly Cys Trp Ser His Ile Gly Asp
50 55 60
Pro Gln Glu Cys His Tyr Glu Glu Cys Val Val Thr Thr Thr Pro Pro
65 70 75 80
Ser Ile Gln Asn Gly Thr Tyr Arg Phe Cys Cys Cys Ser Thr Asp Leu
85 90 95
Cys Asn Val Asn Phe Thr Glu Asn Phe Pro Pro Pro Asp Thr Thr Pro
100 105 110
Leu Ser Pro Pro His Ser Phe Asn Arg Asp Glu Thr
115 120
<210> 48
<211> 3114
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 48
atgacttcct cgctgcagcg gccctggcgg gtgccctggc taccatggac catcctgctg 60
gtcagcactg cggctgcttc gcagaatcaa gaacggctat gtgcgtttaa agatccgtat 120
cagcaagacc ttgggatagg tgagagtaga atctctcatg aaaatgggac aatattatgc 180
tcgaaaggta gcacctgcta tggcctttgg gagaaatcaa aaggggacat aaatcttgta 240
aaacaaggat gttggtctca cattggagat ccccaagagt gtcactatga agaatgtgta 300
gtaactacca ctcctccctc aattcagaat ggaacatacc gtttctgctg ttgtagcaca 360
gatttatgta atgtcaactt tactgagaat tttccacctc ctgacacaac accactcagt 420
ccacctcatt catttaaccg agatgagaca ataatcattg ctttggcatc agtctctgta 480
ttagctgttt tgatagttgc cttatgcttt ggatacagaa tgttgacagg agaccgtaaa 540
caaggtcttc acagtatgaa catgatggag gcagcagcat ccgaaccctc tcttgatcta 600
gataatctga aactgttgga gctgattggc cgaggtcgat atggagcagt atataaaggc 660
tccttggatg agcgtccagt tgctgtaaaa gtgttttcct ttgcaaaccg tcagaatttt 720
atcaacgaaa agaacattta cagagtgcct ttgatggaac atgacaacat tgcccgcttt 780
atagttggag atgagagagt cactgcagat ggacgcatgg aatatttgct tgtgatggag 840
tactatccca atggatcttt atgcaagtat ttaagtctcc acacaagtga ctgggtaagc 900
tcttgccgtc ttgctcattc tgttactaga ggactggctt atcttcacac agaattacca 960
cgaggagatc attataaacc tgcaatttcc catcgagatt taaacagcag aaatgtccta 1020
gtgaaaaatg atggaacctg tgttattagt gactttggac tgtccatgag gctgactgga 1080
aatagactgg tgcgcccagg ggaggaagat aatgcagcca taagcgaggt tggcactatc 1140
agatatatgg caccagaagt gctagaagga gctgtgaact tgagggactg tgaatcagct 1200
ttgaaacaag tagacatgta tgctcttgga ctaatctatt gggagatatt tatgagatgt 1260
acagacctct tcccagggga atccgtacca gagtaccaga tggcttttca gacagaggtt 1320
ggaaaccatc ccacttttga ggatatgcag gttctcgtgt ctagggaaaa acagagaccc 1380
aagttcccag aagcctggaa agaaaatagc ctggcagtga ggtcactcaa ggagacaatc 1440
gaagactgtt gggaccagga tgcagaggct cggcttactg cacagtgtgc tgaggaaagg 1500
atggctgaac ttatgatgat ttgggaaaga aacaaatctg tgagcccaac agtcaatcca 1560
atgtctactg ctatgcagaa tgaacgcaac ctgtcacata ataggcgtgt gccaaaaatt 1620
ggtccttatc cagattattc ttcctcctca tacattgaag actctatcca tcatactgac 1680
agcatcgtga agaatatttc ctctgagcat tctatgtcca gcacaccttt gactataggg 1740
gaaaaaaacc gaaattcaat taactatgaa cgacagcaag cacaagctcg aatccccagc 1800
cctgaaacaa gtgtcaccag cctctccacc aacacaacaa ccacaaacac cacaggactc 1860
acgccaagta ctggcatgac tactatatct gagatgccat acccagatga aacaaatctg 1920
cataccacaa atgttgcaca gtcaattggg ccaacccctg tctgcttaca gctgacagaa 1980
gaagacttgg aaaccaacaa gctagaccca aaagaagttg ataagaacct caaggaaagc 2040
tctgatgaga atctcatgga gcactctctt aaacagttca gtggcccaga cccactgagc 2100
agtactagtt ctagcttgct ttacccactc ataaaacttg cagtagaagc aactggacag 2160
caggacttca cacagactgc aaatggccaa gcatgtttga ttcctgatgt tctgcctact 2220
cagatctatc ctctccccaa gcagcagaac cttcccaaga gacctactag tttgcctttg 2280
aacaccaaaa attcaacaaa agagccccgg ctaaaatttg gcagcaagca caaatcaaac 2340
ttgaaacaag tcgaaactgg agttgccaag atgaatacaa tcaatgcagc agaacctcat 2400
gtggtgacag tcaccatgaa tggtgtggca ggtagaaacc acagtgttaa ctcccatgct 2460
gccacaaccc aatatgccaa tgggacagta ctatctggcc aaacaaccaa catagtgaca 2520
catagggccc aagaaatgtt gcagaatcag tttattggtg aggacacccg gctgaatatt 2580
aattccagtc ctgatgagca tgagccttta ctgagacgag agcaacaagc tggccatgat 2640
gaaggtgttc tggatcgtct tgtggacagg agggaacggc cactagaagg tggccgaact 2700
aattccaata acaacaacag caatccatgt tcagaacaag atgttcttgc acagggtgtt 2760
ccaagcacag cagcagatcc tgggccatca aagcccagaa gagcacagag gcctaattct 2820
ctggatcttt cagccacaaa tgtcctggat ggcagcagta tacagatagg tgagtcaaca 2880
caagatggca aatcaggatc aggtgaaaag atcaagaaac gtgtgaaaac tccctattct 2940
cttaagcggt ggcgcccctc cacctgggtc atctccactg aatcgctgga ctgtgaagtc 3000
aacaataatg gcagtaacag ggcagttcat tccaaatcca gcactgctgt ttaccttgca 3060
gaaggaggca ctgctacaac catggtgtct aaagatatag gaatgaactg tctg 3114
<210> 49
<211> 372
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 49
tcgcagaatc aagaacggct atgtgcgttt aaagatccgt atcagcaaga ccttgggata 60
ggtgagagta gaatctctca tgaaaatggg acaatattat gctcgaaagg tagcacctgc 120
tatggccttt gggagaaatc aaaaggggac ataaatcttg taaaacaagg atgttggtct 180
cacattggag atccccaaga gtgtcactat gaagaatgtg tagtaactac cactcctccc 240
tcaattcaga atggaacata ccgtttctgc tgttgtagca cagatttatg taatgtcaac 300
tttactgaga attttccacc tcctgacaca acaccactca gtccacctca ttcatttaac 360
cgagatgaga ca 372
<210> 50
<211> 573
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 50
Met Leu Gly Ser Leu Gly Leu Trp Ala Leu Leu Pro Thr Ala Val Glu
1 5 10 15
Ala Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val
20 25 30
Arg Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu
35 40 45
Leu Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile
50 55 60
Trp Asn Leu Thr Gln Asp Arg Ala Gln Val Glu Met Gln Gly Cys Arg
65 70 75 80
Asp Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser Leu His Cys Asp Pro Ser Pro
85 90 95
Arg Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Thr Leu Phe Thr Cys Ser Cys Gly
100 105 110
Thr Asp Phe Cys Asn Ala Asn Tyr Ser His Leu Pro Pro Pro Gly Ser
115 120 125
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Gln Gly Pro Gln Ala Ala Pro Gly Glu Ser
130 135 140
Ile Trp Met Ala Leu Val Leu Leu Gly Leu Phe Leu Leu Leu Leu Leu
145 150 155 160
Leu Leu Gly Ser Ile Ile Leu Ala Leu Leu Gln Arg Lys Asn Tyr Arg
165 170 175
Val Arg Gly Glu Pro Val Pro Glu Pro Arg Pro Asp Ser Gly Arg Asp
180 185 190
Trp Ser Val Glu Leu Gln Glu Leu Pro Glu Leu Cys Phe Ser Gln Val
195 200 205
Ile Arg Glu Gly Gly His Ala Val Val Trp Ala Gly Gln Leu Gln Gly
210 215 220
Lys Leu Val Ala Ile Lys Ala Phe Pro Pro Arg Ser Val Ala Gln Phe
225 230 235 240
Gln Ala Glu Arg Ala Leu Tyr Glu Leu Pro Gly Leu Gln His Asp His
245 250 255
Ile Val Arg Phe Ile Thr Ala Ser Arg Gly Gly Pro Gly Arg Leu Leu
260 265 270
Ser Gly Pro Leu Leu Val Leu Glu Leu His Pro Lys Gly Ser Leu Cys
275 280 285
His Tyr Leu Thr Gln Tyr Thr Ser Asp Trp Gly Ser Ser Leu Arg Met
290 295 300
Ala Leu Ser Leu Ala Gln Gly Leu Ala Phe Leu His Glu Glu Arg Trp
305 310 315 320
Gln Asn Gly Gln Tyr Lys Pro Gly Ile Ala His Arg Asp Leu Ser Ser
325 330 335
Gln Asn Val Leu Ile Arg Glu Asp Gly Ser Cys Ala Ile Gly Asp Leu
340 345 350
Gly Leu Ala Leu Val Leu Pro Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ala Trp Thr
355 360 365
Pro Thr Gln Pro Gln Gly Pro Ala Ala Ile Met Glu Ala Gly Thr Gln
370 375 380
Arg Tyr Met Ala Pro Glu Leu Leu Asp Lys Thr Leu Asp Leu Gln Asp
385 390 395 400
Trp Gly Met Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ile Tyr Ser Leu Ala Leu Leu
405 410 415
Leu Trp Glu Ile Leu Ser Arg Cys Pro Asp Leu Arg Pro Asp Ser Ser
420 425 430
Pro Pro Pro Phe Gln Leu Ala Tyr Glu Ala Glu Leu Gly Asn Thr Pro
435 440 445
Thr Ser Asp Glu Leu Trp Ala Leu Ala Val Gln Glu Arg Arg Arg Pro
450 455 460
Tyr Ile Pro Ser Thr Trp Arg Cys Phe Ala Thr Asp Pro Asp Gly Leu
465 470 475 480
Arg Glu Leu Leu Glu Asp Cys Trp Asp Ala Asp Pro Glu Ala Arg Leu
485 490 495
Thr Ala Glu Cys Val Gln Gln Arg Leu Ala Ala Leu Ala His Pro Gln
500 505 510
Glu Ser His Pro Phe Pro Glu Ser Cys Pro Arg Gly Cys Pro Pro Leu
515 520 525
Cys Pro Glu Asp Cys Thr Ser Ile Pro Ala Pro Thr Ile Leu Pro Cys
530 535 540
Arg Pro Gln Arg Ser Ala Cys His Phe Ser Val Gln Gln Gly Pro Cys
545 550 555 560
Ser Arg Asn Pro Gln Pro Ala Cys Thr Leu Ser Pro Val
565 570
<210> 51
<211> 132
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 51
Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val Arg
1 5 10 15
Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu Leu
20 25 30
Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile Trp
35 40 45
Asn Leu Thr Gln Asp Arg Ala Gln Val Glu Met Gln Gly Cys Arg Asp
50 55 60
Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser Leu His Cys Asp Pro Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Thr Leu Phe Thr Cys Ser Cys Gly Thr
85 90 95
Asp Phe Cys Asn Ala Asn Tyr Ser His Leu Pro Pro Pro Gly Ser Pro
100 105 110
Gly Thr Pro Gly Ser Gln Gly Pro Gln Ala Ala Pro Gly Glu Ser Ile
115 120 125
Trp Met Ala Leu
130
<210> 52
<211> 1719
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 52
atgctagggt ctttggggct ttgggcatta cttcccacag ctgtggaagc acccccaaac 60
aggcgaacct gtgtgttctt tgaggcccct ggagtgcggg gaagcacaaa gacactggga 120
gagctgctag atacaggcac agagctcccc agagctatcc gctgcctcta cagccgctgc 180
tgctttggga tctggaacct gacccaagac cgggcacagg tggaaatgca aggatgccga 240
gacagtgatg agccaggctg tgagtccctc cactgtgacc caagtccccg agcccacccc 300
agccctggct ccactctctt cacctgctcc tgtggcactg acttctgcaa tgccaattac 360
agccatctgc ctcctccagg gagccctggg actcctggct cccagggtcc ccaggctgcc 420
ccaggtgagt ccatctggat ggcactggtg ctgctggggc tgttcctcct cctcctgctg 480
ctgctgggca gcatcatctt ggccctgcta cagcgaaaga actacagagt gcgaggtgag 540
ccagtgccag agccaaggcc agactcaggc agggactgga gtgtggagct gcaggagctg 600
cctgagctgt gtttctccca ggtaatccgg gaaggaggtc atgcagtggt ttgggccggg 660
cagctgcaag gaaaactggt tgccatcaag gccttcccac cgaggtctgt ggctcagttc 720
caagctgaga gagcattgta cgaacttcca ggcctacagc acgaccacat tgtccgattt 780
atcactgcca gccggggggg tcctggccgc ctgctctctg ggcccctgct ggtactggaa 840
ctgcatccca agggctccct gtgccactac ttgacccagt acaccagtga ctggggaagt 900
tccctgcgga tggcactgtc cctggcccag ggcctggcat ttctccatga ggagcgctgg 960
cagaatggcc aatataaacc aggtattgcc caccgagatc tgagcagcca gaatgtgctc 1020
attcgggaag atggatcgtg tgccattgga gacctgggcc ttgccttggt gctccctggc 1080
ctcactcagc cccctgcctg gacccctact caaccacaag gcccagctgc catcatggaa 1140
gctggcaccc agaggtacat ggcaccagag ctcttggaca agactctgga cctacaggat 1200
tggggcatgg ccctccgacg agctgatatt tactctttgg ctctgctcct gtgggagata 1260
ctgagccgct gcccagattt gaggcctgac agcagtccac cacccttcca actggcctat 1320
gaggcagaac tgggcaatac ccctacctct gatgagctat gggccttggc agtgcaggag 1380
aggaggcgtc cctacatccc atccacctgg cgctgctttg ccacagaccc tgatgggctg 1440
agggagctcc tagaagactg ttgggatgca gacccagaag cacggctgac agctgagtgt 1500
gtacagcagc gcctggctgc cttggcccat cctcaagaga gccacccctt tccagagagc 1560
tgtccacgtg gctgcccacc tctctgccca gaagactgta cttcaattcc tgcccctacc 1620
atcctcccct gtaggcctca gcggagtgcc tgccacttca gcgttcagca aggcccttgt 1680
tccaggaatc ctcagcctgc ctgtaccctt tctcctgtg 1719
<210> 53
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 53
cccccaaaca ggcgaacctg tgtgttcttt gaggcccctg gagtgcgggg aagcacaaag 60
acactgggag agctgctaga tacaggcaca gagctcccca gagctatccg ctgcctctac 120
agccgctgct gctttgggat ctggaacctg acccaagacc gggcacaggt ggaaatgcaa 180
ggatgccgag acagtgatga gccaggctgt gagtccctcc actgtgaccc aagtccccga 240
gcccacccca gccctggctc cactctcttc acctgctcct gtggcactga cttctgcaat 300
gccaattaca gccatctgcc tcctccaggg agccctggga ctcctggctc ccagggtccc 360
caggctgccc caggtgagtc catctggatg gcactg 396
<210> 54
<400> 54
000
<210> 55
<400> 55
000
<210> 56
<400> 56
000
<210> 57
<400> 57
000
<210> 58
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 58
Gly Gly Gly
1
<210> 59
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 59
Gly Gly Gly Gly
1
<210> 60
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 60
Thr Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 61
Ser Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 62
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 62
Thr Gly Gly Gly
1
<210> 63
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 63
Ser Gly Gly Gly
1
<210> 64
<400> 64
000
<210> 65
<400> 65
000
<210> 66
<400> 66
000
<210> 67
<211> 592
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 67
Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu
1 5 10 15
Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp
20 25 30
Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Asp Glu Ile Ile Cys Pro Ser Cys Asn
35 40 45
Arg Thr Ala His Pro Leu Arg His Ile Asn Asn Asp Met Ile Val Thr
50 55 60
Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp
65 70 75 80
Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys
85 90 95
Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val
100 105 110
Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp
115 120 125
Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro
130 135 140
Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met
145 150 155 160
Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu
165 170 175
Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu Leu Leu Val Ile Phe Gln Val
180 185 190
Thr Gly Ile Ser Leu Leu Pro Pro Leu Gly Val Ala Ile Ser Val Ile
195 200 205
Ile Ile Phe Tyr Cys Tyr Arg Val Asn Arg Gln Gln Lys Leu Ser Ser
210 215 220
Thr Trp Glu Thr Gly Lys Thr Arg Lys Leu Met Glu Phe Ser Glu His
225 230 235 240
Cys Ala Ile Ile Leu Glu Asp Asp Arg Ser Asp Ile Ser Ser Thr Cys
245 250 255
Ala Asn Asn Ile Asn His Asn Thr Glu Leu Leu Pro Ile Glu Leu Asp
260 265 270
Thr Leu Val Gly Lys Gly Arg Phe Ala Glu Val Tyr Lys Ala Lys Leu
275 280 285
Lys Gln Asn Thr Ser Glu Gln Phe Glu Thr Val Ala Val Lys Ile Phe
290 295 300
Pro Tyr Glu Glu Tyr Ala Ser Trp Lys Thr Glu Lys Asp Ile Phe Ser
305 310 315 320
Asp Ile Asn Leu Lys His Glu Asn Ile Leu Gln Phe Leu Thr Ala Glu
325 330 335
Glu Arg Lys Thr Glu Leu Gly Lys Gln Tyr Trp Leu Ile Thr Ala Phe
340 345 350
His Ala Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr Leu Thr Arg His Val Ile Ser
355 360 365
Trp Glu Asp Leu Arg Lys Leu Gly Ser Ser Leu Ala Arg Gly Ile Ala
370 375 380
His Leu His Ser Asp His Thr Pro Cys Gly Arg Pro Lys Met Pro Ile
385 390 395 400
Val His Arg Asp Leu Lys Ser Ser Asn Ile Leu Val Lys Asn Asp Leu
405 410 415
Thr Cys Cys Leu Cys Asp Phe Gly Leu Ser Leu Arg Leu Asp Pro Thr
420 425 430
Leu Ser Val Asp Asp Leu Ala Asn Ser Gly Gln Val Gly Thr Ala Arg
435 440 445
Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Glu Ser Arg Met Asn Leu Glu Asn Val
450 455 460
Glu Ser Phe Lys Gln Thr Asp Val Tyr Ser Met Ala Leu Val Leu Trp
465 470 475 480
Glu Met Thr Ser Arg Cys Asn Ala Val Gly Glu Val Lys Asp Tyr Glu
485 490 495
Pro Pro Phe Gly Ser Lys Val Arg Glu His Pro Cys Val Glu Ser Met
500 505 510
Lys Asp Asn Val Leu Arg Asp Arg Gly Arg Pro Glu Ile Pro Ser Phe
515 520 525
Trp Leu Asn His Gln Gly Ile Gln Met Val Cys Glu Thr Leu Thr Glu
530 535 540
Cys Trp Asp His Asp Pro Glu Ala Arg Leu Thr Ala Gln Cys Val Ala
545 550 555 560
Glu Arg Phe Ser Glu Leu Glu His Leu Asp Arg Leu Ser Gly Arg Ser
565 570 575
Cys Ser Glu Glu Lys Ile Pro Glu Asp Gly Ser Leu Asn Thr Thr Lys
580 585 590
<210> 68
<211> 169
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 68
Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln
1 5 10 15
Lys Asp Glu Ile Ile Cys Pro Ser Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu
20 25 30
Arg His Ile Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val
35 40 45
Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys
50 55 60
Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys
65 70 75 80
Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu
85 90 95
Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His
100 105 110
Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu
115 120 125
Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp
130 135 140
Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn
145 150 155 160
Pro Asp Leu Leu Leu Val Ile Phe Gln
165
<210> 69
<211> 1776
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 69
atgggtcggg ggctgctcag gggcctgtgg ccgctgcaca tcgtcctgtg gacgcgtatc 60
gccagcacga tcccaccgca cgttcagaag tcggatgtgg aaatggaggc ccagaaagat 120
gaaatcatct gccccagctg taataggact gcccatccac tgagacatat taataacgac 180
atgatagtca ctgacaacaa cggtgcagtc aagtttccac aactgtgtaa attttgtgat 240
gtgagatttt ccacctgtga caaccagaaa tcctgcatga gcaactgcag catcacctcc 300
atctgtgaga agccacagga agtctgtgtg gctgtatgga gaaagaatga cgagaacata 360
acactagaga cagtttgcca tgaccccaag ctcccctacc atgactttat tctggaagat 420
gctgcttctc caaagtgcat tatgaaggaa aaaaaaaagc ctggtgagac tttcttcatg 480
tgttcctgta gctctgatga gtgcaatgac aacatcatct tctcagaaga atataacacc 540
agcaatcctg acttgttgct agtcatattt caagtgacag gcatcagcct cctgccacca 600
ctgggagttg ccatatctgt catcatcatc ttctactgct accgcgttaa ccggcagcag 660
aagctgagtt caacctggga aaccggcaag acgcggaagc tcatggagtt cagcgagcac 720
tgtgccatca tcctggaaga tgaccgctct gacatcagct ccacgtgtgc caacaacatc 780
aaccacaaca cagagctgct gcccattgag ctggacaccc tggtggggaa aggtcgcttt 840
gctgaggtct ataaggccaa gctgaagcag aacacttcag agcagtttga gacagtggca 900
gtcaagatct ttccctatga ggagtatgcc tcttggaaga cagagaagga catcttctca 960
gacatcaatc tgaagcatga gaacatactc cagttcctga cggctgagga gcggaagacg 1020
gagttgggga aacaatactg gctgatcacc gccttccacg ccaagggcaa cctacaggag 1080
tacctgacgc ggcatgtcat cagctgggag gacctgcgca agctgggcag ctccctcgcc 1140
cgggggattg ctcacctcca cagtgatcac actccatgtg ggaggcccaa gatgcccatc 1200
gtgcacaggg acctcaagag ctccaatatc ctcgtgaaga acgacctaac ctgctgcctg 1260
tgtgactttg ggctttccct gcgtctggac cctactctgt ctgtggatga cctggctaac 1320
agtgggcagg tgggaactgc aagatacatg gctccagaag tcctagaatc caggatgaat 1380
ttggagaatg ttgagtcctt caagcagacc gatgtctact ccatggctct ggtgctctgg 1440
gaaatgacat ctcgctgtaa tgcagtggga gaagtaaaag attatgagcc tccatttggt 1500
tccaaggtgc gggagcaccc ctgtgtcgaa agcatgaagg acaacgtgtt gagagatcga 1560
gggcgaccag aaattcccag cttctggctc aaccaccagg gcatccagat ggtgtgtgag 1620
acgttgactg agtgctggga ccacgaccca gaggcccgtc tcacagccca gtgtgtggca 1680
gaacgcttca gtgagctgga gcatctggac aggctctcgg ggaggagctg ctcggaggag 1740
aagattcctg aagacggctc cctaaacact accaaa 1776
<210> 70
<211> 507
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 70
acgatcccac cgcacgttca gaagtcggat gtggaaatgg aggcccagaa agatgaaatc 60
atctgcccca gctgtaatag gactgcccat ccactgagac atattaataa cgacatgata 120
gtcactgaca acaacggtgc agtcaagttt ccacaactgt gtaaattttg tgatgtgaga 180
ttttccacct gtgacaacca gaaatcctgc atgagcaact gcagcatcac ctccatctgt 240
gagaagccac aggaagtctg tgtggctgta tggagaaaga atgacgagaa cataacacta 300
gagacagttt gccatgaccc caagctcccc taccatgact ttattctgga agatgctgct 360
tctccaaagt gcattatgaa ggaaaaaaaa aagcctggtg agactttctt catgtgttcc 420
tgtagctctg atgagtgcaa tgacaacatc atcttctcag aagaatataa caccagcaat 480
cctgacttgt tgctagtcat atttcaa 507
<210> 71
<211> 530
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 71
Met Thr Ser Ser Leu Gln Arg Pro Trp Arg Val Pro Trp Leu Pro Trp
1 5 10 15
Thr Ile Leu Leu Val Ser Thr Ala Ala Ala Ser Gln Asn Gln Glu Arg
20 25 30
Leu Cys Ala Phe Lys Asp Pro Tyr Gln Gln Asp Leu Gly Ile Gly Glu
35 40 45
Ser Arg Ile Ser His Glu Asn Gly Thr Ile Leu Cys Ser Lys Gly Ser
50 55 60
Thr Cys Tyr Gly Leu Trp Glu Lys Ser Lys Gly Asp Ile Asn Leu Val
65 70 75 80
Lys Gln Gly Cys Trp Ser His Ile Gly Asp Pro Gln Glu Cys His Tyr
85 90 95
Glu Glu Cys Val Val Thr Thr Thr Pro Pro Ser Ile Gln Asn Gly Thr
100 105 110
Tyr Arg Phe Cys Cys Cys Ser Thr Asp Leu Cys Asn Val Asn Phe Thr
115 120 125
Glu Asn Phe Pro Pro Pro Asp Thr Thr Pro Leu Ser Pro Pro His Ser
130 135 140
Phe Asn Arg Asp Glu Thr Ile Ile Ile Ala Leu Ala Ser Val Ser Val
145 150 155 160
Leu Ala Val Leu Ile Val Ala Leu Cys Phe Gly Tyr Arg Met Leu Thr
165 170 175
Gly Asp Arg Lys Gln Gly Leu His Ser Met Asn Met Met Glu Ala Ala
180 185 190
Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asp Leu Asp Asn Leu Lys Leu Leu Glu Leu
195 200 205
Ile Gly Arg Gly Arg Tyr Gly Ala Val Tyr Lys Gly Ser Leu Asp Glu
210 215 220
Arg Pro Val Ala Val Lys Val Phe Ser Phe Ala Asn Arg Gln Asn Phe
225 230 235 240
Ile Asn Glu Lys Asn Ile Tyr Arg Val Pro Leu Met Glu His Asp Asn
245 250 255
Ile Ala Arg Phe Ile Val Gly Asp Glu Arg Val Thr Ala Asp Gly Arg
260 265 270
Met Glu Tyr Leu Leu Val Met Glu Tyr Tyr Pro Asn Gly Ser Leu Cys
275 280 285
Lys Tyr Leu Ser Leu His Thr Ser Asp Trp Val Ser Ser Cys Arg Leu
290 295 300
Ala His Ser Val Thr Arg Gly Leu Ala Tyr Leu His Thr Glu Leu Pro
305 310 315 320
Arg Gly Asp His Tyr Lys Pro Ala Ile Ser His Arg Asp Leu Asn Ser
325 330 335
Arg Asn Val Leu Val Lys Asn Asp Gly Thr Cys Val Ile Ser Asp Phe
340 345 350
Gly Leu Ser Met Arg Leu Thr Gly Asn Arg Leu Val Arg Pro Gly Glu
355 360 365
Glu Asp Asn Ala Ala Ile Ser Glu Val Gly Thr Ile Arg Tyr Met Ala
370 375 380
Pro Glu Val Leu Glu Gly Ala Val Asn Leu Arg Asp Cys Glu Ser Ala
385 390 395 400
Leu Lys Gln Val Asp Met Tyr Ala Leu Gly Leu Ile Tyr Trp Glu Ile
405 410 415
Phe Met Arg Cys Thr Asp Leu Phe Pro Gly Glu Ser Val Pro Glu Tyr
420 425 430
Gln Met Ala Phe Gln Thr Glu Val Gly Asn His Pro Thr Phe Glu Asp
435 440 445
Met Gln Val Leu Val Ser Arg Glu Lys Gln Arg Pro Lys Phe Pro Glu
450 455 460
Ala Trp Lys Glu Asn Ser Leu Ala Val Arg Ser Leu Lys Glu Thr Ile
465 470 475 480
Glu Asp Cys Trp Asp Gln Asp Ala Glu Ala Arg Leu Thr Ala Gln Cys
485 490 495
Ala Glu Glu Arg Met Ala Glu Leu Met Met Ile Trp Glu Arg Asn Lys
500 505 510
Ser Val Ser Pro Thr Val Asn Pro Met Ser Thr Ala Met Gln Asn Glu
515 520 525
Arg Arg
530
<210> 72
<211> 124
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 72
Ser Gln Asn Gln Glu Arg Leu Cys Ala Phe Lys Asp Pro Tyr Gln Gln
1 5 10 15
Asp Leu Gly Ile Gly Glu Ser Arg Ile Ser His Glu Asn Gly Thr Ile
20 25 30
Leu Cys Ser Lys Gly Ser Thr Cys Tyr Gly Leu Trp Glu Lys Ser Lys
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Leu Val Lys Gln Gly Cys Trp Ser His Ile Gly Asp
50 55 60
Pro Gln Glu Cys His Tyr Glu Glu Cys Val Val Thr Thr Thr Pro Pro
65 70 75 80
Ser Ile Gln Asn Gly Thr Tyr Arg Phe Cys Cys Cys Ser Thr Asp Leu
85 90 95
Cys Asn Val Asn Phe Thr Glu Asn Phe Pro Pro Pro Asp Thr Thr Pro
100 105 110
Leu Ser Pro Pro His Ser Phe Asn Arg Asp Glu Thr
115 120
<210> 73
<211> 1590
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 73
atgacttcct cgctgcagcg gccctggcgg gtgccctggc taccatggac catcctgctg 60
gtcagcactg cggctgcttc gcagaatcaa gaacggctat gtgcgtttaa agatccgtat 120
cagcaagacc ttgggatagg tgagagtaga atctctcatg aaaatgggac aatattatgc 180
tcgaaaggta gcacctgcta tggcctttgg gagaaatcaa aaggggacat aaatcttgta 240
aaacaaggat gttggtctca cattggagat ccccaagagt gtcactatga agaatgtgta 300
gtaactacca ctcctccctc aattcagaat ggaacatacc gtttctgctg ttgtagcaca 360
gatttatgta atgtcaactt tactgagaat tttccacctc ctgacacaac accactcagt 420
ccacctcatt catttaaccg agatgagaca ataatcattg ctttggcatc agtctctgta 480
ttagctgttt tgatagttgc cttatgcttt ggatacagaa tgttgacagg agaccgtaaa 540
caaggtcttc acagtatgaa catgatggag gcagcagcat ccgaaccctc tcttgatcta 600
gataatctga aactgttgga gctgattggc cgaggtcgat atggagcagt atataaaggc 660
tccttggatg agcgtccagt tgctgtaaaa gtgttttcct ttgcaaaccg tcagaatttt 720
atcaacgaaa agaacattta cagagtgcct ttgatggaac atgacaacat tgcccgcttt 780
atagttggag atgagagagt cactgcagat ggacgcatgg aatatttgct tgtgatggag 840
tactatccca atggatcttt atgcaagtat ttaagtctcc acacaagtga ctgggtaagc 900
tcttgccgtc ttgctcattc tgttactaga ggactggctt atcttcacac agaattacca 960
cgaggagatc attataaacc tgcaatttcc catcgagatt taaacagcag aaatgtccta 1020
gtgaaaaatg atggaacctg tgttattagt gactttggac tgtccatgag gctgactgga 1080
aatagactgg tgcgcccagg ggaggaagat aatgcagcca taagcgaggt tggcactatc 1140
agatatatgg caccagaagt gctagaagga gctgtgaact tgagggactg tgaatcagct 1200
ttgaaacaag tagacatgta tgctcttgga ctaatctatt gggagatatt tatgagatgt 1260
acagacctct tcccagggga atccgtacca gagtaccaga tggcttttca gacagaggtt 1320
ggaaaccatc ccacttttga ggatatgcag gttctcgtgt ctagggaaaa acagagaccc 1380
aagttcccag aagcctggaa agaaaatagc ctggcagtga ggtcactcaa ggagacaatc 1440
gaagactgtt gggaccagga tgcagaggct cggcttactg cacagtgtgc tgaggaaagg 1500
atggctgaac ttatgatgat ttgggaaaga aacaaatctg tgagcccaac agtcaatcca 1560
atgtctactg ctatgcagaa tgaacgtagg 1590
<210> 74
<211> 372
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 74
tcgcagaatc aagaacggct atgtgcgttt aaagatccgt atcagcaaga ccttgggata 60
ggtgagagta gaatctctca tgaaaatggg acaatattat gctcgaaagg tagcacctgc 120
tatggccttt gggagaaatc aaaaggggac ataaatcttg taaaacaagg atgttggtct 180
cacattggag atccccaaga gtgtcactat gaagaatgtg tagtaactac cactcctccc 240
tcaattcaga atggaacata ccgtttctgc tgttgtagca cagatttatg taatgtcaac 300
tttactgaga attttccacc tcctgacaca acaccactca gtccacctca ttcatttaac 360
cgagatgaga ca 372
<210> 75
<211> 478
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 75
Met Leu Gly Ser Leu Gly Leu Trp Ala Leu Leu Pro Thr Ala Val Glu
1 5 10 15
Ala Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val
20 25 30
Arg Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu
35 40 45
Leu Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile
50 55 60
Trp Asn Leu Thr Gln Asp Arg Ala Gln Val Glu Met Gln Gly Cys Arg
65 70 75 80
Asp Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser Leu His Cys Asp Pro Ser Pro
85 90 95
Arg Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Thr Leu Phe Thr Cys Ser Cys Gly
100 105 110
Thr Asp Phe Cys Asn Ala Asn Tyr Ser His Leu Pro Pro Pro Gly Ser
115 120 125
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Gln Gly Pro Gln Ala Ala Pro Gly Glu Ser
130 135 140
Ile Trp Met Ala Leu Val Leu Leu Gly Leu Phe Leu Leu Leu Leu Leu
145 150 155 160
Leu Leu Gly Ser Ile Ile Leu Ala Leu Leu Gln Arg Lys Asn Tyr Arg
165 170 175
Val Arg Gly Glu Pro Val Pro Glu Pro Arg Pro Asp Ser Gly Arg Asp
180 185 190
Trp Ser Val Glu Leu Gln Glu Leu Pro Glu Leu Cys Phe Ser Gln Val
195 200 205
Ile Arg Glu Gly Gly His Ala Val Val Trp Ala Gly Gln Leu Gln Gly
210 215 220
Lys Leu Val Ala Ile Lys Ala Phe Pro Pro Arg Ser Val Ala Gln Phe
225 230 235 240
Gln Ala Glu Arg Ala Leu Tyr Glu Leu Pro Gly Leu Gln His Asp His
245 250 255
Ile Val Arg Phe Ile Thr Ala Ser Arg Gly Gly Pro Gly Arg Leu Leu
260 265 270
Ser Gly Pro Leu Leu Val Leu Glu Leu His Pro Lys Gly Ser Leu Cys
275 280 285
His Tyr Leu Thr Gln Tyr Thr Ser Asp Trp Gly Ser Ser Leu Arg Met
290 295 300
Ala Leu Ser Leu Ala Gln Gly Leu Ala Phe Leu His Glu Glu Arg Trp
305 310 315 320
Gln Asn Gly Gln Tyr Lys Pro Gly Ile Ala His Arg Asp Leu Ser Ser
325 330 335
Gln Asn Val Leu Ile Arg Glu Asp Gly Ser Cys Ala Ile Gly Asp Leu
340 345 350
Gly Leu Ala Leu Val Leu Pro Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ala Trp Thr
355 360 365
Pro Thr Gln Pro Gln Gly Pro Ala Ala Ile Met Glu Ala Gly Thr Gln
370 375 380
Arg Tyr Met Ala Pro Glu Leu Leu Asp Lys Thr Leu Asp Leu Gln Asp
385 390 395 400
Trp Gly Met Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ile Tyr Ser Leu Ala Leu Leu
405 410 415
Leu Trp Glu Ile Leu Ser Arg Cys Pro Asp Leu Arg Pro Ala Val His
420 425 430
His Pro Ser Asn Trp Pro Met Arg Gln Asn Trp Ala Ile Pro Leu Pro
435 440 445
Leu Met Ser Tyr Gly Pro Trp Gln Cys Arg Arg Gly Gly Val Pro Thr
450 455 460
Ser His Pro Pro Gly Ala Ala Leu Pro Gln Thr Leu Met Gly
465 470 475
<210> 76
<211> 132
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 76
Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val Arg
1 5 10 15
Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu Leu
20 25 30
Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile Trp
35 40 45
Asn Leu Thr Gln Asp Arg Ala Gln Val Glu Met Gln Gly Cys Arg Asp
50 55 60
Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser Leu His Cys Asp Pro Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Thr Leu Phe Thr Cys Ser Cys Gly Thr
85 90 95
Asp Phe Cys Asn Ala Asn Tyr Ser His Leu Pro Pro Pro Gly Ser Pro
100 105 110
Gly Thr Pro Gly Ser Gln Gly Pro Gln Ala Ala Pro Gly Glu Ser Ile
115 120 125
Trp Met Ala Leu
130
<210> 77
<211> 1434
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 77
atgctagggt ctttggggct ttgggcatta cttcccacag ctgtggaagc acccccaaac 60
aggcgaacct gtgtgttctt tgaggcccct ggagtgcggg gaagcacaaa gacactggga 120
gagctgctag atacaggcac agagctcccc agagctatcc gctgcctcta cagccgctgc 180
tgctttggga tctggaacct gacccaagac cgggcacagg tggaaatgca aggatgccga 240
gacagtgatg agccaggctg tgagtccctc cactgtgacc caagtccccg agcccacccc 300
agccctggct ccactctctt cacctgctcc tgtggcactg acttctgcaa tgccaattac 360
agccatctgc ctcctccagg gagccctggg actcctggct cccagggtcc ccaggctgcc 420
ccaggtgagt ccatctggat ggcactggtg ctgctggggc tgttcctcct cctcctgctg 480
ctgctgggca gcatcatctt ggccctgcta cagcgaaaga actacagagt gcgaggtgag 540
ccagtgccag agccaaggcc agactcaggc agggactgga gtgtggagct gcaggagctg 600
cctgagctgt gtttctccca ggtaatccgg gaaggaggtc atgcagtggt ttgggccggg 660
cagctgcaag gaaaactggt tgccatcaag gccttcccac cgaggtctgt ggctcagttc 720
caagctgaga gagcattgta cgaacttcca ggcctacagc acgaccacat tgtccgattt 780
atcactgcca gccggggggg tcctggccgc ctgctctctg ggcccctgct ggtactggaa 840
ctgcatccca agggctccct gtgccactac ttgacccagt acaccagtga ctggggaagt 900
tccctgcgga tggcactgtc cctggcccag ggcctggcat ttctccatga ggagcgctgg 960
cagaatggcc aatataaacc aggtattgcc caccgagatc tgagcagcca gaatgtgctc 1020
attcgggaag atggatcgtg tgccattgga gacctgggcc ttgccttggt gctccctggc 1080
ctcactcagc cccctgcctg gacccctact caaccacaag gcccagctgc catcatggaa 1140
gctggcaccc agaggtacat ggcaccagag ctcttggaca agactctgga cctacaggat 1200
tggggcatgg ccctccgacg agctgatatt tactctttgg ctctgctcct gtgggagata 1260
ctgagccgct gcccagattt gaggcctgca gtccaccacc cttccaactg gcctatgagg 1320
cagaactggg caatacccct acctctgatg agctatgggc cttggcagtg caggagagga 1380
ggcgtcccta catcccatcc acctggcgct gctttgccac agaccctgat gggc 1434
<210> 78
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 78
cccccaaaca ggcgaacctg tgtgttcttt gaggcccctg gagtgcgggg aagcacaaag 60
acactgggag agctgctaga tacaggcaca gagctcccca gagctatccg ctgcctctac 120
agccgctgct gctttgggat ctggaacctg acccaagacc gggcacaggt ggaaatgcaa 180
ggatgccgag acagtgatga gccaggctgt gagtccctcc actgtgaccc aagtccccga 240
gcccacccca gccctggctc cactctcttc acctgctcct gtggcactga cttctgcaat 300
gccaattaca gccatctgcc tcctccaggg agccctggga ctcctggctc ccagggtccc 360
caggctgccc caggtgagtc catctggatg gcactg 396
<210> 79
<211> 478
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 79
Met Leu Gly Ser Leu Gly Leu Trp Ala Leu Leu Pro Thr Ala Val Glu
1 5 10 15
Ala Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val
20 25 30
Arg Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu
35 40 45
Leu Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile
50 55 60
Trp Asn Leu Thr Gln Asp Arg Ala Gln Val Glu Met Gln Gly Cys Arg
65 70 75 80
Asp Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser Leu His Cys Asp Pro Ser Pro
85 90 95
Arg Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Thr Leu Phe Thr Cys Ser Cys Gly
100 105 110
Thr Asp Phe Cys Asn Ala Asn Tyr Ser His Leu Pro Pro Pro Gly Ser
115 120 125
Pro Gly Thr Pro Gly Ser Gln Gly Pro Gln Ala Ala Pro Gly Glu Ser
130 135 140
Ile Trp Met Ala Leu Val Leu Leu Gly Leu Phe Leu Leu Leu Leu Leu
145 150 155 160
Leu Leu Gly Ser Ile Ile Leu Ala Leu Leu Gln Arg Lys Asn Tyr Arg
165 170 175
Val Arg Gly Glu Pro Val Pro Glu Pro Arg Pro Asp Ser Gly Arg Asp
180 185 190
Trp Ser Val Glu Leu Gln Glu Leu Pro Glu Leu Cys Phe Ser Gln Val
195 200 205
Ile Arg Glu Gly Gly His Ala Val Val Trp Ala Gly Gln Leu Gln Gly
210 215 220
Lys Leu Val Ala Ile Lys Ala Phe Pro Pro Arg Ser Val Ala Gln Phe
225 230 235 240
Gln Ala Glu Arg Ala Leu Tyr Glu Leu Pro Gly Leu Gln His Asp His
245 250 255
Ile Val Arg Phe Ile Thr Ala Ser Arg Gly Gly Pro Gly Arg Leu Leu
260 265 270
Ser Gly Pro Leu Leu Val Leu Glu Leu His Pro Lys Gly Ser Leu Cys
275 280 285
His Tyr Leu Thr Gln Tyr Thr Ser Asp Trp Gly Ser Ser Leu Arg Met
290 295 300
Ala Leu Ser Leu Ala Gln Gly Leu Ala Phe Leu His Glu Glu Arg Trp
305 310 315 320
Gln Asn Gly Gln Tyr Lys Pro Gly Ile Ala His Arg Asp Leu Ser Ser
325 330 335
Gln Asn Val Leu Ile Arg Glu Asp Gly Ser Cys Ala Ile Gly Asp Leu
340 345 350
Gly Leu Ala Leu Val Leu Pro Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ala Trp Thr
355 360 365
Pro Thr Gln Pro Gln Gly Pro Ala Ala Ile Met Glu Asp Pro Asp Gly
370 375 380
Leu Arg Glu Leu Leu Glu Asp Cys Trp Asp Ala Asp Pro Glu Ala Arg
385 390 395 400
Leu Thr Ala Glu Cys Val Gln Gln Arg Leu Ala Ala Leu Ala His Pro
405 410 415
Gln Glu Ser His Pro Phe Pro Glu Ser Cys Pro Arg Gly Cys Pro Pro
420 425 430
Leu Cys Pro Glu Asp Cys Thr Ser Ile Pro Ala Pro Thr Ile Leu Pro
435 440 445
Cys Arg Pro Gln Arg Ser Ala Cys His Phe Ser Val Gln Gln Gly Pro
450 455 460
Cys Ser Arg Asn Pro Gln Pro Ala Cys Thr Leu Ser Pro Val
465 470 475
<210> 80
<211> 132
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 80
Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val Arg
1 5 10 15
Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu Leu
20 25 30
Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile Trp
35 40 45
Asn Leu Thr Gln Asp Arg Ala Gln Val Glu Met Gln Gly Cys Arg Asp
50 55 60
Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser Leu His Cys Asp Pro Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Thr Leu Phe Thr Cys Ser Cys Gly Thr
85 90 95
Asp Phe Cys Asn Ala Asn Tyr Ser His Leu Pro Pro Pro Gly Ser Pro
100 105 110
Gly Thr Pro Gly Ser Gln Gly Pro Gln Ala Ala Pro Gly Glu Ser Ile
115 120 125
Trp Met Ala Leu
130
<210> 81
<211> 1434
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 81
atgctagggt ctttggggct ttgggcatta cttcccacag ctgtggaagc acccccaaac 60
aggcgaacct gtgtgttctt tgaggcccct ggagtgcggg gaagcacaaa gacactggga 120
gagctgctag atacaggcac agagctcccc agagctatcc gctgcctcta cagccgctgc 180
tgctttggga tctggaacct gacccaagac cgggcacagg tggaaatgca aggatgccga 240
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agccatctgc ctcctccagg gagccctggg actcctggct cccagggtcc ccaggctgcc 420
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cagctgcaag gaaaactggt tgccatcaag gccttcccac cgaggtctgt ggctcagttc 720
caagctgaga gagcattgta cgaacttcca ggcctacagc acgaccacat tgtccgattt 780
atcactgcca gccggggggg tcctggccgc ctgctctctg ggcccctgct ggtactggaa 840
ctgcatccca agggctccct gtgccactac ttgacccagt acaccagtga ctggggaagt 900
tccctgcgga tggcactgtc cctggcccag ggcctggcat ttctccatga ggagcgctgg 960
cagaatggcc aatataaacc aggtattgcc caccgagatc tgagcagcca gaatgtgctc 1020
attcgggaag atggatcgtg tgccattgga gacctgggcc ttgccttggt gctccctggc 1080
ctcactcagc cccctgcctg gacccctact caaccacaag gcccagctgc catcatggaa 1140
gaccctgatg ggctgaggga gctcctagaa gactgttggg atgcagaccc agaagcacgg 1200
ctgacagctg agtgtgtaca gcagcgcctg gctgccttgg cccatcctca agagagccac 1260
ccctttccag agagctgtcc acgtggctgc ccacctctct gcccagaaga ctgtacttca 1320
attcctgccc ctaccatcct cccctgtagg cctcagcgga gtgcctgcca cttcagcgtt 1380
cagcaaggcc cttgttccag gaatcctcag cctgcctgta ccctttctcc tgtg 1434
<210> 82
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 82
cccccaaaca ggcgaacctg tgtgttcttt gaggcccctg gagtgcgggg aagcacaaag 60
acactgggag agctgctaga tacaggcaca gagctcccca gagctatccg ctgcctctac 120
agccgctgct gctttgggat ctggaacctg acccaagacc gggcacaggt ggaaatgcaa 180
ggatgccgag acagtgatga gccaggctgt gagtccctcc actgtgaccc aagtccccga 240
gcccacccca gccctggctc cactctcttc acctgctcct gtggcactga cttctgcaat 300
gccaattaca gccatctgcc tcctccaggg agccctggga ctcctggctc ccagggtccc 360
caggctgccc caggtgagtc catctggatg gcactg 396
<210> 83
<211> 546
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 83
Met Ala Glu Ser Ala Gly Ala Ser Ser Phe Phe Pro Leu Val Val Leu
1 5 10 15
Leu Leu Ala Gly Ser Gly Gly Ser Gly Pro Arg Gly Val Gln Ala Leu
20 25 30
Leu Cys Ala Cys Thr Ser Cys Leu Gln Ala Asn Tyr Thr Cys Glu Thr
35 40 45
Asp Gly Ala Cys Met Val Ser Ile Phe Asn Leu Asp Gly Met Glu His
50 55 60
His Val Arg Thr Cys Ile Pro Lys Val Glu Leu Val Pro Ala Gly Lys
65 70 75 80
Pro Phe Tyr Cys Leu Ser Ser Glu Asp Leu Arg Asn Thr His Cys Cys
85 90 95
Tyr Thr Asp Tyr Cys Asn Arg Ile Asp Leu Arg Val Pro Ser Gly His
100 105 110
Leu Lys Glu Pro Glu His Pro Ser Met Trp Gly Pro Val Glu Leu Val
115 120 125
Gly Ile Ile Ala Gly Pro Val Phe Leu Leu Phe Leu Ile Ile Ile Ile
130 135 140
Val Phe Leu Val Ile Asn Tyr His Gln Arg Val Tyr His Asn Arg Gln
145 150 155 160
Arg Leu Asp Met Glu Asp Pro Ser Cys Glu Met Cys Leu Ser Lys Asp
165 170 175
Lys Thr Leu Gln Asp Leu Val Tyr Asp Leu Ser Thr Ser Gly Ser Gly
180 185 190
Ser Gly Leu Pro Leu Phe Val Gln Arg Thr Val Ala Arg Thr Ile Val
195 200 205
Leu Gln Glu Ile Ile Gly Lys Gly Arg Phe Gly Glu Val Trp Arg Gly
210 215 220
Arg Trp Arg Gly Gly Asp Val Ala Val Lys Ile Phe Ser Ser Arg Glu
225 230 235 240
Glu Arg Ser Trp Phe Arg Glu Ala Glu Ile Tyr Gln Thr Val Met Leu
245 250 255
Arg His Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp Asn Lys Ala Asp
260 265 270
Cys Ser Phe Leu Thr Leu Pro Trp Glu Val Val Met Val Ser Ala Ala
275 280 285
Pro Lys Leu Arg Ser Leu Arg Leu Gln Tyr Lys Gly Gly Arg Gly Arg
290 295 300
Ala Arg Phe Leu Phe Pro Leu Asn Asn Gly Thr Trp Thr Gln Leu Trp
305 310 315 320
Leu Val Ser Asp Tyr His Glu His Gly Ser Leu Phe Asp Tyr Leu Asn
325 330 335
Arg Tyr Thr Val Thr Ile Glu Gly Met Ile Lys Leu Ala Leu Ser Ala
340 345 350
Ala Ser Gly Leu Ala His Leu His Met Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly
355 360 365
Lys Pro Gly Ile Ala His Arg Asp Leu Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val
370 375 380
Lys Lys Asn Gly Met Cys Ala Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala Val Arg
385 390 395 400
His Asp Ala Val Thr Asp Thr Ile Asp Ile Ala Pro Asn Gln Arg Val
405 410 415
Gly Thr Lys Arg Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Asp Glu Thr Ile Asn
420 425 430
Met Lys His Phe Asp Ser Phe Lys Cys Ala Asp Ile Tyr Ala Leu Gly
435 440 445
Leu Val Tyr Trp Glu Ile Ala Arg Arg Cys Asn Ser Gly Gly Val His
450 455 460
Glu Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr Tyr Asp Leu Val Pro Ser Asp Pro Ser
465 470 475 480
Ile Glu Glu Met Arg Lys Val Val Cys Asp Gln Lys Leu Arg Pro Asn
485 490 495
Ile Pro Asn Trp Trp Gln Ser Tyr Glu Ala Leu Arg Val Met Gly Lys
500 505 510
Met Met Arg Glu Cys Trp Tyr Ala Asn Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala
515 520 525
Leu Arg Ile Lys Lys Thr Leu Ser Gln Leu Ser Val Gln Glu Asp Val
530 535 540
Lys Ile
545
<210> 84
<211> 103
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 84
Ser Gly Pro Arg Gly Val Gln Ala Leu Leu Cys Ala Cys Thr Ser Cys
1 5 10 15
Leu Gln Ala Asn Tyr Thr Cys Glu Thr Asp Gly Ala Cys Met Val Ser
20 25 30
Ile Phe Asn Leu Asp Gly Met Glu His His Val Arg Thr Cys Ile Pro
35 40 45
Lys Val Glu Leu Val Pro Ala Gly Lys Pro Phe Tyr Cys Leu Ser Ser
50 55 60
Glu Asp Leu Arg Asn Thr His Cys Cys Tyr Thr Asp Tyr Cys Asn Arg
65 70 75 80
Ile Asp Leu Arg Val Pro Ser Gly His Leu Lys Glu Pro Glu His Pro
85 90 95
Ser Met Trp Gly Pro Val Glu
100
<210> 85
<211> 1638
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 85
atggcggagt cggccggagc ctcctccttc ttcccccttg ttgtcctcct gctcgccggc 60
agcggcgggt ccgggccccg gggggtccag gctctgctgt gtgcgtgcac cagctgcctc 120
caggccaact acacgtgtga gacagatggg gcctgcatgg tttccatttt caatctggat 180
gggatggagc accatgtgcg cacctgcatc cccaaagtgg agctggtccc tgccgggaag 240
cccttctact gcctgagctc ggaggacctg cgcaacaccc actgctgcta cactgactac 300
tgcaacagga tcgacttgag ggtgcccagt ggtcacctca aggagcctga gcacccgtcc 360
atgtggggcc cggtggagct ggtaggcatc atcgccggcc cggtgttcct cctgttcctc 420
atcatcatca ttgttttcct tgtcattaac tatcatcagc gtgtctatca caaccgccag 480
agactggaca tggaagatcc ctcatgtgag atgtgtctct ccaaagacaa gacgctccag 540
gatcttgtct acgatctctc cacctcaggg tctggctcag ggttacccct ctttgtccag 600
cgcacagtgg cccgaaccat cgttttacaa gagattattg gcaagggtcg gtttggggaa 660
gtatggcggg gccgctggag gggtggtgat gtggctgtga aaatattctc ttctcgtgaa 720
gaacggtctt ggttcaggga agcagagata taccagacgg tcatgctgcg ccatgaaaac 780
atccttggat ttattgctgc tgacaataaa gcagactgct cattcctcac attgccatgg 840
gaagttgtaa tggtctctgc tgcccccaag ctgaggagcc ttagactcca atacaaggga 900
ggaaggggaa gagcaagatt tttattccca ctgaataatg gcacctggac acagctgtgg 960
cttgtttctg actatcatga gcacgggtcc ctgtttgatt atctgaaccg gtacacagtg 1020
acaattgagg ggatgattaa gctggccttg tctgctgcta gtgggctggc acacctgcac 1080
atggagatcg tgggcaccca agggaagcct ggaattgctc atcgagactt aaagtcaaag 1140
aacattctgg tgaagaaaaa tggcatgtgt gccatagcag acctgggcct ggctgtccgt 1200
catgatgcag tcactgacac cattgacatt gccccgaatc agagggtggg gaccaaacga 1260
tacatggccc ctgaagtact tgatgaaacc attaatatga aacactttga ctcctttaaa 1320
tgtgctgata tttatgccct cgggcttgta tattgggaga ttgctcgaag atgcaattct 1380
ggaggagtcc atgaagaata tcagctgcca tattacgact tagtgccctc tgacccttcc 1440
attgaggaaa tgcgaaaggt tgtatgtgat cagaagctgc gtcccaacat ccccaactgg 1500
tggcagagtt atgaggcact gcgggtgatg gggaagatga tgcgagagtg ttggtatgcc 1560
aacggcgcag cccgcctgac ggccctgcgc atcaagaaga ccctctccca gctcagcgtg 1620
caggaagacg tgaagatc 1638
<210> 86
<211> 309
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 86
tccgggcccc ggggggtcca ggctctgctg tgtgcgtgca ccagctgcct ccaggccaac 60
tacacgtgtg agacagatgg ggcctgcatg gtttccattt tcaatctgga tgggatggag 120
caccatgtgc gcacctgcat ccccaaagtg gagctggtcc ctgccgggaa gcccttctac 180
tgcctgagct cggaggacct gcgcaacacc cactgctgct acactgacta ctgcaacagg 240
atcgacttga gggtgcccag tggtcacctc aaggagcctg agcacccgtc catgtggggc 300
ccggtggag 309
<210> 87
<211> 507
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 87
Met Glu Ala Ala Val Ala Ala Pro Arg Pro Arg Leu Leu Leu Leu Val
1 5 10 15
Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr
20 25 30
Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys
35 40 45
Val Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys
50 55 60
Val Ile His Asn Ser Met Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg
65 70 75 80
Asp Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr
85 90 95
Thr Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro
100 105 110
Thr Thr Gly Pro Phe Ser Val Lys Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val
115 120 125
Glu Leu Ala Ala Val Ile Ala Gly Pro Val Cys Phe Val Cys Ile Ser
130 135 140
Leu Met Leu Met Val Tyr Ile Cys His Asn Arg Thr Val Ile His His
145 150 155 160
Arg Val Pro Asn Glu Glu Asp Pro Ser Leu Asp Arg Pro Phe Ile Ser
165 170 175
Glu Gly Thr Thr Leu Lys Asp Leu Ile Tyr Asp Met Thr Thr Ser Gly
180 185 190
Ser Gly Ser Gly Leu Pro Leu Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala Arg Thr
195 200 205
Ile Val Leu Gln Glu Ser Ile Gly Lys Gly Arg Phe Gly Glu Val Trp
210 215 220
Arg Gly Lys Trp Arg Gly Glu Glu Val Ala Val Lys Ile Phe Ser Ser
225 230 235 240
Arg Glu Glu Arg Ser Trp Phe Arg Glu Ala Glu Ile Tyr Gln Thr Val
245 250 255
Met Leu Arg His Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp Asn Lys
260 265 270
Asp Asn Gly Thr Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val Ser Asp Tyr His Glu
275 280 285
His Gly Ser Leu Phe Asp Tyr Leu Asn Arg Tyr Thr Val Thr Val Glu
290 295 300
Gly Met Ile Lys Leu Ala Leu Ser Thr Ala Ser Gly Leu Ala His Leu
305 310 315 320
His Met Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala His Arg
325 330 335
Asp Leu Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Asn Gly Thr Cys Cys
340 345 350
Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala Val Arg His Asp Ser Ala Thr Asp Thr
355 360 365
Ile Asp Ile Ala Pro Asn His Arg Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met Ala
370 375 380
Pro Glu Val Leu Asp Asp Ser Ile Asn Met Lys His Phe Glu Ser Phe
385 390 395 400
Lys Arg Ala Asp Ile Tyr Ala Met Gly Leu Val Phe Trp Glu Ile Ala
405 410 415
Arg Arg Cys Ser Ile Gly Gly Ile His Glu Asp Tyr Gln Leu Pro Tyr
420 425 430
Tyr Asp Leu Val Pro Ser Asp Pro Ser Val Glu Glu Met Arg Lys Val
435 440 445
Val Cys Glu Gln Lys Leu Arg Pro Asn Ile Pro Asn Arg Trp Gln Ser
450 455 460
Cys Glu Ala Leu Arg Val Met Ala Lys Ile Met Arg Glu Cys Trp Tyr
465 470 475 480
Ala Asn Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys Thr Leu
485 490 495
Ser Gln Leu Ser Gln Gln Glu Gly Ile Lys Met
500 505
<210> 88
<211> 106
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 88
Ala Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu
1 5 10 15
Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val
20 25 30
Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val Ile His Asn Ser Met Cys Ile
35 40 45
Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg Asp Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro
50 55 60
Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr Thr Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp
65 70 75 80
His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro Thr Thr Gly Pro Phe Ser Val Lys
85 90 95
Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Leu
100 105
<210> 89
<211> 1521
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 89
atggaggcgg cggtcgctgc tccgcgtccc cggctgctcc tcctcgtgct ggcggcggcg 60
gcggcggcgg cggcggcgct gctcccgggg gcgacggcgt tacagtgttt ctgccacctc 120
tgtacaaaag acaattttac ttgtgtgaca gatgggctct gctttgtctc tgtcacagag 180
accacagaca aagttataca caacagcatg tgtatagctg aaattgactt aattcctcga 240
gataggccgt ttgtatgtgc accctcttca aaaactgggt ctgtgactac aacatattgc 300
tgcaatcagg accattgcaa taaaatagaa cttccaacta ctggcccttt ttcagtaaag 360
tcatcacctg gccttggtcc tgtggaactg gcagctgtca ttgctggacc agtgtgcttc 420
gtctgcatct cactcatgtt gatggtctat atctgccaca accgcactgt cattcaccat 480
cgagtgccaa atgaagagga cccttcatta gatcgccctt ttatttcaga gggtactacg 540
ttgaaagact taatttatga tatgacaacg tcaggttctg gctcaggttt accattgctt 600
gttcagagaa caattgcgag aactattgtg ttacaagaaa gcattggcaa aggtcgattt 660
ggagaagttt ggagaggaaa gtggcgggga gaagaagttg ctgttaagat attctcctct 720
agagaagaac gttcgtggtt ccgtgaggca gagatttatc aaactgtaat gttacgtcat 780
gaaaacatcc tgggatttat agcagcagac aataaagaca atggtacttg gactcagctc 840
tggttggtgt cagattatca tgagcatgga tccctttttg attacttaaa cagatacaca 900
gttactgtgg aaggaatgat aaaacttgct ctgtccacgg cgagcggtct tgcccatctt 960
cacatggaga ttgttggtac ccaaggaaag ccagccattg ctcatagaga tttgaaatca 1020
aagaatatct tggtaaagaa gaatggaact tgctgtattg cagacttagg actggcagta 1080
agacatgatt cagccacaga taccattgat attgctccaa accacagagt gggaacaaaa 1140
aggtacatgg cccctgaagt tctcgatgat tccataaata tgaaacattt tgaatccttc 1200
aaacgtgctg acatctatgc aatgggctta gtattctggg aaattgctcg acgatgttcc 1260
attggtggaa ttcatgaaga ttaccaactg ccttattatg atcttgtacc ttctgaccca 1320
tcagttgaag aaatgagaaa agttgtttgt gaacagaagt taaggccaaa tatcccaaac 1380
agatggcaga gctgtgaagc cttgagagta atggctaaaa ttatgagaga atgttggtat 1440
gccaatggag cagctaggct tacagcattg cggattaaga aaacattatc gcaactcagt 1500
caacaggaag gcatcaaaat g 1521
<210> 90
<211> 318
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 90
gcggcgctgc tcccgggggc gacggcgtta cagtgtttct gccacctctg tacaaaagac 60
aattttactt gtgtgacaga tgggctctgc tttgtctctg tcacagagac cacagacaaa 120
gttatacaca acagcatgtg tatagctgaa attgacttaa ttcctcgaga taggccgttt 180
gtatgtgcac cctcttcaaa aactgggtct gtgactacaa catattgctg caatcaggac 240
cattgcaata aaatagaact tccaactact ggcccttttt cagtaaagtc atcacctggc 300
cttggtcctg tggaactg 318
<210> 91
<211> 532
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 91
Met Gly Trp Leu Glu Glu Leu Asn Trp Gln Leu His Ile Phe Leu Leu
1 5 10 15
Ile Leu Leu Ser Met His Thr Arg Ala Asn Phe Leu Asp Asn Met Leu
20 25 30
Leu Arg Ser Ala Gly Lys Leu Asn Val Gly Thr Lys Lys Glu Asp Gly
35 40 45
Glu Ser Thr Ala Pro Thr Pro Arg Pro Lys Val Leu Arg Cys Lys Cys
50 55 60
His His His Cys Pro Glu Asp Ser Val Asn Asn Ile Cys Ser Thr Asp
65 70 75 80
Gly Tyr Cys Phe Thr Met Ile Glu Glu Asp Asp Ser Gly Leu Pro Val
85 90 95
Val Thr Ser Gly Cys Leu Gly Leu Glu Gly Ser Asp Phe Gln Cys Arg
100 105 110
Asp Thr Pro Ile Pro His Gln Arg Arg Ser Ile Glu Cys Cys Thr Glu
115 120 125
Arg Asn Glu Cys Asn Lys Asp Leu His Pro Thr Leu Pro Pro Leu Lys
130 135 140
Asn Arg Asp Phe Val Asp Gly Pro Ile His His Arg Ala Leu Leu Ile
145 150 155 160
Ser Val Thr Val Cys Ser Leu Leu Leu Val Leu Ile Ile Leu Phe Cys
165 170 175
Tyr Phe Arg Tyr Lys Arg Gln Glu Thr Arg Pro Arg Tyr Ser Ile Gly
180 185 190
Leu Glu Gln Asp Glu Thr Tyr Ile Pro Pro Gly Glu Ser Leu Arg Asp
195 200 205
Leu Ile Glu Gln Ser Gln Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Leu Pro Leu
210 215 220
Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala Lys Gln Ile Gln Met Val Lys Gln Ile
225 230 235 240
Gly Lys Gly Arg Tyr Gly Glu Val Trp Met Gly Lys Trp Arg Gly Glu
245 250 255
Lys Val Ala Val Lys Val Phe Phe Thr Thr Glu Glu Ala Ser Trp Phe
260 265 270
Arg Glu Thr Glu Ile Tyr Gln Thr Val Leu Met Arg His Glu Asn Ile
275 280 285
Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp Ile Lys Gly Thr Gly Ser Trp Thr Gln
290 295 300
Leu Tyr Leu Ile Thr Asp Tyr His Glu Asn Gly Ser Leu Tyr Asp Tyr
305 310 315 320
Leu Lys Ser Thr Thr Leu Asp Ala Lys Ser Met Leu Lys Leu Ala Tyr
325 330 335
Ser Ser Val Ser Gly Leu Cys His Leu His Thr Glu Ile Phe Ser Thr
340 345 350
Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala His Arg Asp Leu Lys Ser Lys Asn Ile
355 360 365
Leu Val Lys Lys Asn Gly Thr Cys Cys Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala
370 375 380
Val Lys Phe Ile Ser Asp Thr Asn Glu Val Asp Ile Pro Pro Asn Thr
385 390 395 400
Arg Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met Pro Pro Glu Val Leu Asp Glu Ser
405 410 415
Leu Asn Arg Asn His Phe Gln Ser Tyr Ile Met Ala Asp Met Tyr Ser
420 425 430
Phe Gly Leu Ile Leu Trp Glu Val Ala Arg Arg Cys Val Ser Gly Gly
435 440 445
Ile Val Glu Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr His Asp Leu Val Pro Ser Asp
450 455 460
Pro Ser Tyr Glu Asp Met Arg Glu Ile Val Cys Ile Lys Lys Leu Arg
465 470 475 480
Pro Ser Phe Pro Asn Arg Trp Ser Ser Asp Glu Cys Leu Arg Gln Met
485 490 495
Gly Lys Leu Met Thr Glu Cys Trp Ala His Asn Pro Ala Ser Arg Leu
500 505 510
Thr Ala Leu Arg Val Lys Lys Thr Leu Ala Lys Met Ser Glu Ser Gln
515 520 525
Asp Ile Lys Leu
530
<210> 92
<211> 131
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 92
Asn Phe Leu Asp Asn Met Leu Leu Arg Ser Ala Gly Lys Leu Asn Val
1 5 10 15
Gly Thr Lys Lys Glu Asp Gly Glu Ser Thr Ala Pro Thr Pro Arg Pro
20 25 30
Lys Val Leu Arg Cys Lys Cys His His His Cys Pro Glu Asp Ser Val
35 40 45
Asn Asn Ile Cys Ser Thr Asp Gly Tyr Cys Phe Thr Met Ile Glu Glu
50 55 60
Asp Asp Ser Gly Leu Pro Val Val Thr Ser Gly Cys Leu Gly Leu Glu
65 70 75 80
Gly Ser Asp Phe Gln Cys Arg Asp Thr Pro Ile Pro His Gln Arg Arg
85 90 95
Ser Ile Glu Cys Cys Thr Glu Arg Asn Glu Cys Asn Lys Asp Leu His
100 105 110
Pro Thr Leu Pro Pro Leu Lys Asn Arg Asp Phe Val Asp Gly Pro Ile
115 120 125
His His Arg
130
<210> 93
<211> 1596
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 93
atgggttggc tggaagaact aaactggcag cttcacattt tcttgctcat tcttctctct 60
atgcacacaa gggcaaactt ccttgataac atgcttttgc gaagtgcagg aaaattaaat 120
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cgttgtaaat gccaccacca ttgtccagaa gactcagtca acaatatttg cagcacagac 240
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tgcctaggac tagaaggctc agattttcag tgtcgggaca ctcccattcc tcatcaaaga 360
agatcaattg aatgctgcac agaaaggaac gaatgtaata aagacctaca ccctacactg 420
cctccattga aaaacagaga ttttgttgat ggacctatac accacagggc tttacttata 480
tctgtgactg tctgtagttt gctcttggtc cttatcatat tattttgtta cttccggtat 540
aaaagacaag aaaccagacc tcgatacagc attgggttag aacaggatga aacttacatt 600
cctcctggag aatccctgag agacttaatt gagcagtctc agagctcagg aagtggatca 660
ggcctccctc tgctggtcca aaggactata gctaagcaga ttcagatggt gaaacagatt 720
ggaaaaggtc gctatgggga agtttggatg ggaaagtggc gtggcgaaaa ggtagctgtg 780
aaagtgttct tcaccacaga ggaagccagc tggttcagag agacagaaat atatcagaca 840
gtgttgatga ggcatgaaaa cattttgggt ttcattgctg cagatatcaa agggacaggg 900
tcctggaccc agttgtacct aatcacagac tatcatgaaa atggttccct ttatgattat 960
ctgaagtcca ccaccctaga cgctaaatca atgctgaagt tagcctactc ttctgtcagt 1020
ggcttatgtc atttacacac agaaatcttt agtactcaag gcaaaccagc aattgcccat 1080
cgagatctga aaagtaaaaa cattctggtg aagaaaaatg gaacttgctg tattgctgac 1140
ctgggcctgg ctgttaaatt tattagtgat acaaatgaag ttgacatacc acctaacact 1200
cgagttggca ccaaacgcta tatgcctcca gaagtgttgg acgagagctt gaacagaaat 1260
cacttccagt cttacatcat ggctgacatg tatagttttg gcctcatcct ttgggaggtt 1320
gctaggagat gtgtatcagg aggtatagtg gaagaatacc agcttcctta tcatgaccta 1380
gtgcccagtg acccctctta tgaggacatg agggagattg tgtgcatcaa gaagttacgc 1440
ccctcattcc caaaccggtg gagcagtgat gagtgtctaa ggcagatggg aaaactcatg 1500
acagaatgct gggctcacaa tcctgcatca aggctgacag ccctgcgggt taagaaaaca 1560
cttgccaaaa tgtcagagtc ccaggacatt aaactc 1596
<210> 94
<211> 393
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 94
aacttccttg ataacatgct tttgcgaagt gcaggaaaat taaatgtggg caccaagaaa 60
gaggatggtg agagtacagc ccccaccccc cgtccaaagg tcttgcgttg taaatgccac 120
caccattgtc cagaagactc agtcaacaat atttgcagca cagacggata ttgtttcacg 180
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<210> 95
<211> 36
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 95
Gly Arg Cys Lys Ile Arg His Ile Gly Ser Asn Asn Arg Leu Gln Arg
1 5 10 15
Ser Thr Cys Gln Asn Thr Gly Trp Glu Ser Ala His Val Met Lys Thr
20 25 30
Pro Gly Phe Arg
35
<210> 96
<400> 96
000
<210> 97
<400> 97
000
<210> 98
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 98
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro
20
<210> 99
<400> 99
000
<210> 100
<211> 368
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 100
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr
20 25 30
Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn
35 40 45
Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His
50 55 60
Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys
65 70 75 80
Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys
85 90 95
Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly
100 105 110
Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro
115 120 125
Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr
130 135 140
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
145 150 155 160
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
165 170 175
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
180 185 190
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
195 200 205
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
210 215 220
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
225 230 235 240
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
245 250 255
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
260 265 270
Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
275 280 285
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
290 295 300
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys
305 310 315 320
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
325 330 335
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
340 345 350
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360 365
<210> 101
<211> 1104
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 101
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg cctctgggcg tggggaggct gagacacggg agtgcatcta ctacaacgcc 120
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gagaaccccc aggtgtactt ctgctgctgt gaaggcaact tctgcaacga gcgcttcact 360
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aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggaa ggagatgacc 840
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 900
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gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1080
agcctctccc tgtctccggg taaa 1104
<210> 102
<211> 343
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 102
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105 110
Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
115 120 125
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
130 135 140
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145 150 155 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
165 170 175
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
180 185 190
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
195 200 205
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
210 215 220
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225 230 235 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys
245 250 255
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
260 265 270
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
275 280 285
Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
290 295 300
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305 310 315 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 103
<400> 103
000
<210> 104
<211> 355
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 104
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Pro Arg Gly Val Gln Ala
20 25 30
Leu Leu Cys Ala Cys Thr Ser Cys Leu Gln Ala Asn Tyr Thr Cys Glu
35 40 45
Thr Asp Gly Ala Cys Met Val Ser Ile Phe Asn Leu Asp Gly Met Glu
50 55 60
His His Val Arg Thr Cys Ile Pro Lys Val Glu Leu Val Pro Ala Gly
65 70 75 80
Lys Pro Phe Tyr Cys Leu Ser Ser Glu Asp Leu Arg Asn Thr His Cys
85 90 95
Cys Tyr Thr Asp Tyr Cys Asn Arg Ile Asp Leu Arg Val Pro Ser Gly
100 105 110
His Leu Lys Glu Pro Glu His Pro Ser Met Trp Gly Pro Val Glu Thr
115 120 125
Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
130 135 140
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
145 150 155 160
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
165 170 175
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
180 185 190
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
195 200 205
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
210 215 220
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
225 230 235 240
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
245 250 255
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
260 265 270
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
275 280 285
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro
290 295 300
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr
305 310 315 320
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
325 330 335
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
340 345 350
Ser Pro Gly
355
<210> 105
<211> 1065
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 105
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg cctccgggcc ccggggggtc caggctctgc tgtgtgcgtg caccagctgc 120
ctccaggcca actacacgtg tgagacagat ggggcctgca tggtttccat tttcaatctg 180
gatgggatgg agcaccatgt gcgcacctgc atccccaaag tggagctggt ccctgccggg 240
aagcccttct actgcctgag ctcggaggac ctgcgcaaca cccactgctg ctacactgac 300
tactgcaaca ggatcgactt gagggtgccc agtggtcacc tcaaggagcc tgagcacccg 360
tccatgtggg gcccggtgga gaccggtggt ggaactcaca catgcccacc gtgcccagca 420
cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 480
atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 540
gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 600
cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 660
gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 720
atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 780
cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 840
ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 900
gacaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctatag cgacctcacc 960
gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1020
ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggt 1065
<210> 106
<211> 331
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 106
Ser Gly Pro Arg Gly Val Gln Ala Leu Leu Cys Ala Cys Thr Ser Cys
1 5 10 15
Leu Gln Ala Asn Tyr Thr Cys Glu Thr Asp Gly Ala Cys Met Val Ser
20 25 30
Ile Phe Asn Leu Asp Gly Met Glu His His Val Arg Thr Cys Ile Pro
35 40 45
Lys Val Glu Leu Val Pro Ala Gly Lys Pro Phe Tyr Cys Leu Ser Ser
50 55 60
Glu Asp Leu Arg Asn Thr His Cys Cys Tyr Thr Asp Tyr Cys Asn Arg
65 70 75 80
Ile Asp Leu Arg Val Pro Ser Gly His Leu Lys Glu Pro Glu His Pro
85 90 95
Ser Met Trp Gly Pro Val Glu Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro
100 105 110
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
115 120 125
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
130 135 140
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
145 150 155 160
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
165 170 175
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
180 185 190
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
195 200 205
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
210 215 220
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
225 230 235 240
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
245 250 255
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
260 265 270
Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
275 280 285
Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
290 295 300
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
305 310 315 320
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325 330
<210> 107
<400> 107
000
<210> 108
<400> 108
000
<210> 109
<400> 109
000
<210> 110
<400> 110
000
<210> 111
<400> 111
000
<210> 112
<211> 341
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 112
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu
20 25 30
Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala
35 40 45
Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
50 55 60
Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn
65 70 75 80
Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr
85 90 95
Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met
100 105 110
Glu Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
115 120 125
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
130 135 140
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
145 150 155 160
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
165 170 175
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
180 185 190
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
195 200 205
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
210 215 220
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
225 230 235 240
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
245 250 255
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
260 265 270
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr
275 280 285
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp
290 295 300
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
305 310 315 320
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
325 330 335
Ser Leu Ser Pro Gly
340
<210> 113
<211> 1023
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 113
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg ccggactgaa gtgtgtatgt cttttgtgtg attcttcaaa ctttacctgc 120
caaacagaag gagcatgttg ggcatcagtc atgctaacca atggaaaaga gcaggtgatc 180
aaatcctgtg tctcccttcc agaactgaat gctcaagtct tctgtcatag ttccaacaat 240
gttaccaaaa ccgaatgctg cttcacagat ttttgcaaca acataacact gcaccttcca 300
acagcatcac caaatgcccc aaaacttgga cccatggaga ccggtggtgg aactcacaca 360
tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca 420
aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac 480
gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat 540
aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc 600
ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 660
aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa 720
ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 780
acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg 840
cagccggaga acaactacga caccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 900
ctctatagcg acctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc 960
tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg 1020
ggt 1023
<210> 114
<211> 317
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 114
Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys
20 25 30
Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln
35 40 45
Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe
50 55 60
Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro
65 70 75 80
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115 120 125
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
130 135 140
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145 150 155 160
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
165 170 175
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
180 185 190
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
195 200 205
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
210 215 220
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
225 230 235 240
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
245 250 255
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
260 265 270
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
275 280 285
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
290 295 300
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
305 310 315
<210> 115
<211> 381
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 115
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Gln Asn Leu Asp Ser Met Leu His
20 25 30
Gly Thr Gly Met Lys Ser Asp Ser Asp Gln Lys Lys Ser Glu Asn Gly
35 40 45
Val Thr Leu Ala Pro Glu Asp Thr Leu Pro Phe Leu Lys Cys Tyr Cys
50 55 60
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65 70 75 80
Gly His Cys Phe Ala Ile Ile Glu Glu Asp Asp Gln Gly Glu Thr Thr
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Leu Ala Ser Gly Cys Met Lys Tyr Glu Gly Ser Asp Phe Gln Cys Lys
100 105 110
Asp Ser Pro Lys Ala Gln Leu Arg Arg Thr Ile Glu Cys Cys Arg Thr
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Asn Leu Cys Asn Gln Tyr Leu Gln Pro Thr Leu Pro Pro Val Val Ile
130 135 140
Gly Pro Phe Phe Asp Gly Ser Ile Arg Thr Gly Gly Gly Thr His Thr
145 150 155 160
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
165 170 175
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
180 185 190
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
195 200 205
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
210 215 220
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
225 230 235 240
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
245 250 255
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
260 265 270
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
275 280 285
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
290 295 300
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
305 310 315 320
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
325 330 335
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
340 345 350
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
355 360 365
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
370 375 380
<210> 116
<211> 1143
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 116
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
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aagtgctatt gctcagggca ctgtccagat gatgctatta ataacacatg cataactaat 240
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tgtatgaaat atgaaggatc tgattttcag tgcaaagatt ctccaaaagc ccagctacgc 360
cggacaatag aatgttgtcg gaccaattta tgtaaccagt atttgcaacc cacactgccc 420
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tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca 540
aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac 600
gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat 660
aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc 720
ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 780
aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa 840
ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 900
acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg 960
cagccggaga acaactacga caccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 1020
ctctatagcg acctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc 1080
tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg 1140
ggt 1143
<210> 117
<211> 359
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 117
Gly Ala Gln Asn Leu Asp Ser Met Leu His Gly Thr Gly Met Lys Ser
1 5 10 15
Asp Ser Asp Gln Lys Lys Ser Glu Asn Gly Val Thr Leu Ala Pro Glu
20 25 30
Asp Thr Leu Pro Phe Leu Lys Cys Tyr Cys Ser Gly His Cys Pro Asp
35 40 45
Asp Ala Ile Asn Asn Thr Cys Ile Thr Asn Gly His Cys Phe Ala Ile
50 55 60
Ile Glu Glu Asp Asp Gln Gly Glu Thr Thr Leu Ala Ser Gly Cys Met
65 70 75 80
Lys Tyr Glu Gly Ser Asp Phe Gln Cys Lys Asp Ser Pro Lys Ala Gln
85 90 95
Leu Arg Arg Thr Ile Glu Cys Cys Arg Thr Asn Leu Cys Asn Gln Tyr
100 105 110
Leu Gln Pro Thr Leu Pro Pro Val Val Ile Gly Pro Phe Phe Asp Gly
115 120 125
Ser Ile Arg Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
130 135 140
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
165 170 175
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
180 185 190
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
195 200 205
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
210 215 220
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
225 230 235 240
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
245 250 255
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
260 265 270
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
275 280 285
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
290 295 300
Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
305 310 315 320
Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
325 330 335
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
340 345 350
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
355
<210> 118
<211> 369
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 118
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr
20 25 30
Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn
35 40 45
Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His
50 55 60
Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys
65 70 75 80
Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys
85 90 95
Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly
100 105 110
Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr
115 120 125
Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly
130 135 140
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
145 150 155 160
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
165 170 175
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
180 185 190
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
195 200 205
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
210 215 220
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
225 230 235 240
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
245 250 255
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
260 265 270
Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
275 280 285
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
290 295 300
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
305 310 315 320
Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
325 330 335
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
340 345 350
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
355 360 365
Lys
<210> 119
<211> 1107
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 119
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg ccgctatact tggtagatca gaaactcagg agtgtctttt ctttaatgct 120
aattgggaaa aagacagaac caatcaaact ggtgttgaac cgtgttatgg tgacaaagat 180
aaacggcggc attgttttgc tacctggaag aatatttctg gttccattga aatagtgaaa 240
caaggttgtt ggctggatga tatcaactgc tatgacagga ctgattgtgt agaaaaaaaa 300
gacagccctg aagtatattt ctgttgctgt gagggcaata tgtgtaatga aaagttttct 360
tattttccgg agatggaagt cacacagccc acttcaaatc cagttacacc taagccaccc 420
accggtggtg gaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 480
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 540
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 600
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 660
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 720
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 780
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg gaaggagatg 840
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 900
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 960
aagtccgacg gctccttctt cctctatagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1020
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1080
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1107
<210> 120
<211> 344
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 120
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
115 120 125
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
130 135 140
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
145 150 155 160
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
165 170 175
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
180 185 190
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
195 200 205
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
210 215 220
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
225 230 235 240
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr
245 250 255
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
260 265 270
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
275 280 285
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
290 295 300
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
305 310 315 320
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
325 330 335
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 121
<211> 376
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 121
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gln Asn Gln Glu Arg Leu Cys
20 25 30
Ala Phe Lys Asp Pro Tyr Gln Gln Asp Leu Gly Ile Gly Glu Ser Arg
35 40 45
Ile Ser His Glu Asn Gly Thr Ile Leu Cys Ser Lys Gly Ser Thr Cys
50 55 60
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65 70 75 80
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
180 185 190
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
195 200 205
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
210 215 220
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
225 230 235 240
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
245 250 255
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
260 265 270
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr
275 280 285
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
290 295 300
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
305 310 315 320
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
325 330 335
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
340 345 350
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
355 360 365
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 122
<211> 1128
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 122
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg cctcgcagaa tcaagaacgc ctatgtgcgt ttaaagatcc gtatcagcaa 120
gaccttggga taggtgagag tagaatctct catgaaaatg ggacaatatt atgctcgaaa 180
ggtagcacct gctatggcct ttgggagaaa tcaaaagggg acataaatct tgtaaaacaa 240
ggatgttggt ctcacattgg agatccccaa gagtgtcact atgaagaatg tgtagtaact 300
accactcctc cctcaattca gaatggaaca taccgtttct gctgttgtag cacagattta 360
tgtaatgtca actttactga gaattttcca cctcctgaca caacaccact cagtccacct 420
cattcattta accgagatga gaccggtggt ggaactcaca catgcccacc gtgcccagca 480
cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 540
atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 600
gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 660
cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 720
gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 780
atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 840
cccccatccc ggaaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 900
ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 960
aagaccacgc ctcccgtgct gaagtccgac ggctccttct tcctctatag caagctcacc 1020
gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1080
ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaa 1128
<210> 123
<211> 352
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 123
Ser Gln Asn Gln Glu Arg Leu Cys Ala Phe Lys Asp Pro Tyr Gln Gln
1 5 10 15
Asp Leu Gly Ile Gly Glu Ser Arg Ile Ser His Glu Asn Gly Thr Ile
20 25 30
Leu Cys Ser Lys Gly Ser Thr Cys Tyr Gly Leu Trp Glu Lys Ser Lys
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Leu Val Lys Gln Gly Cys Trp Ser His Ile Gly Asp
50 55 60
Pro Gln Glu Cys His Tyr Glu Glu Cys Val Val Thr Thr Thr Pro Pro
65 70 75 80
Ser Ile Gln Asn Gly Thr Tyr Arg Phe Cys Cys Cys Ser Thr Asp Leu
85 90 95
Cys Asn Val Asn Phe Thr Glu Asn Phe Pro Pro Pro Asp Thr Thr Pro
100 105 110
Leu Ser Pro Pro His Ser Phe Asn Arg Asp Glu Thr Gly Gly Gly Thr
115 120 125
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
145 150 155 160
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
165 170 175
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
180 185 190
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
195 200 205
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
210 215 220
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
225 230 235 240
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
245 250 255
Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
260 265 270
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
275 280 285
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys
290 295 300
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
305 310 315 320
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
325 330 335
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 124
<211> 351
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 124
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Asp Pro Val Lys Pro Ser Arg Gly
20 25 30
Pro Leu Val Thr Cys Thr Cys Glu Ser Pro His Cys Lys Gly Pro Thr
35 40 45
Cys Arg Gly Ala Trp Cys Thr Val Val Leu Val Arg Glu Glu Gly Arg
50 55 60
His Pro Gln Glu His Arg Gly Cys Gly Asn Leu His Arg Glu Leu Cys
65 70 75 80
Arg Gly Arg Pro Thr Glu Phe Val Asn His Tyr Cys Cys Asp Ser His
85 90 95
Leu Cys Asn His Asn Val Ser Leu Val Leu Glu Ala Thr Gln Pro Pro
100 105 110
Ser Glu Gln Pro Gly Thr Asp Gly Gln Leu Ala Thr Gly Gly Gly Thr
115 120 125
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
145 150 155 160
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
165 170 175
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
180 185 190
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
195 200 205
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
210 215 220
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
225 230 235 240
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
245 250 255
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
260 265 270
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
275 280 285
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
290 295 300
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser
305 310 315 320
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
325 330 335
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
340 345 350
<210> 125
<211> 1053
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 125
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg ccgaccctgt gaagccgtct cggggcccgc tggtgacctg cacgtgtgag 120
agcccacatt gcaaggggcc tacctgccgg ggggcctggt gcacagtagt gctggtgcgg 180
gaggagggga ggcaccccca ggaacatcgg ggctgcggga acttgcacag ggagctctgc 240
aggggccgcc ccaccgagtt cgtcaaccac tactgctgcg acagccacct ctgcaaccac 300
aacgtgtccc tggtgctgga ggccacccaa cctccttcgg agcagccggg aacagatggc 360
cagctggcca ccggtggtgg aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 420
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 480
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 540
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 600
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 660
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 720
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 780
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 840
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacga caccacgcct 900
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctatagcg acctcaccgt ggacaagagc 960
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1020
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggt 1053
<210> 126
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 126
Asp Pro Val Lys Pro Ser Arg Gly Pro Leu Val Thr Cys Thr Cys Glu
1 5 10 15
Ser Pro His Cys Lys Gly Pro Thr Cys Arg Gly Ala Trp Cys Thr Val
20 25 30
Val Leu Val Arg Glu Glu Gly Arg His Pro Gln Glu His Arg Gly Cys
35 40 45
Gly Asn Leu His Arg Glu Leu Cys Arg Gly Arg Pro Thr Glu Phe Val
50 55 60
Asn His Tyr Cys Cys Asp Ser His Leu Cys Asn His Asn Val Ser Leu
65 70 75 80
Val Leu Glu Ala Thr Gln Pro Pro Ser Glu Gln Pro Gly Thr Asp Gly
85 90 95
Gln Leu Ala Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
100 105 110
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
115 120 125
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
130 135 140
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
145 150 155 160
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
165 170 175
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
180 185 190
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
195 200 205
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
210 215 220
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
225 230 235 240
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
245 250 255
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
260 265 270
Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
275 280 285
Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
290 295 300
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
305 310 315 320
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 127
<211> 390
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 127
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys
20 25 30
Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys
35 40 45
Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp
50 55 60
Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu
65 70 75 80
Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn
85 90 95
Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp
100 105 110
Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys
115 120 125
Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu
130 135 140
Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro
145 150 155 160
Asp Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
165 170 175
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
180 185 190
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
195 200 205
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
210 215 220
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
225 230 235 240
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
245 250 255
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
260 265 270
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
275 280 285
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn
290 295 300
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
305 310 315 320
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
325 330 335
Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
340 345 350
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
355 360 365
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
370 375 380
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 128
<211> 1170
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 128
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg ccacgatccc accgcacgtt cagaagtcgg ttaataacga catgatagtc 120
actgacaaca acggtgcagt caagtttcca caactgtgta aattttgtga tgtgagattt 180
tccacctgtg acaaccagaa atcctgcatg agcaactgca gcatcacctc catctgtgag 240
aagccacagg aagtctgtgt ggctgtatgg agaaagaatg acgagaacat aacactagag 300
acagtttgcc atgaccccaa gctcccctac catgacttta ttctggaaga tgctgcttct 360
ccaaagtgca ttatgaagga aaaaaaaaag cctggtgaga ctttcttcat gtgttcctgt 420
agctctgatg agtgcaatga caacatcatc ttctcagaag aatataacac cagcaatcct 480
gacaccggtg gtggaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 540
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 600
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 660
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 720
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 780
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 840
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccggaaggag 900
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 960
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1020
ctgaagtccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1080
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1140
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1170
<210> 129
<211> 366
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 129
Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val
1 5 10 15
Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys
20 25 30
Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn
35 40 45
Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala
50 55 60
Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His
65 70 75 80
Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser
85 90 95
Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe
100 105 110
Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser
115 120 125
Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Thr Gly Gly Gly Thr His Thr
130 135 140
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
145 150 155 160
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
165 170 175
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
180 185 190
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
195 200 205
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
210 215 220
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
225 230 235 240
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
245 250 255
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
260 265 270
Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
275 280 285
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
290 295 300
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp
305 310 315 320
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
325 330 335
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
340 345 350
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360 365
<210> 130
<211> 415
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 130
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys
20 25 30
Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Asp Glu Ile Ile Cys Pro Ser
35 40 45
Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu Arg His Ile Asn Asn Asp Met Ile
50 55 60
Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe
65 70 75 80
Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser
85 90 95
Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val
100 105 110
Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys
115 120 125
His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala
130 135 140
Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe
145 150 155 160
Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe
165 170 175
Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Thr Gly Gly Gly Thr His
180 185 190
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
195 200 205
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
210 215 220
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
225 230 235 240
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
245 250 255
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
260 265 270
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
275 280 285
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
290 295 300
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
305 310 315 320
Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
325 330 335
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
340 345 350
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser
355 360 365
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
370 375 380
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
385 390 395 400
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
405 410 415
<210> 131
<211> 1245
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 131
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg ccacgatccc accgcacgtt cagaagtcgg atgtggaaat ggaggcccag 120
aaagatgaaa tcatctgccc cagctgtaat aggactgccc atccactgag acatattaat 180
aacgacatga tagtcactga caacaacggt gcagtcaagt ttccacaact gtgtaaattt 240
tgtgatgtga gattttccac ctgtgacaac cagaaatcct gcatgagcaa ctgcagcatc 300
acctccatct gtgagaagcc acaggaagtc tgtgtggctg tatggagaaa gaatgacgag 360
aacataacac tagagacagt ttgccatgac cccaagctcc cctaccatga ctttattctg 420
gaagatgctg cttctccaaa gtgcattatg aaggaaaaaa aaaagcctgg tgagactttc 480
ttcatgtgtt cctgtagctc tgatgagtgc aatgacaaca tcatcttctc agaagaatat 540
aacaccagca atcctgacac cggtggtgga actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 600
gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 660
atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 720
gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 780
gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 840
tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 900
gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc 960
ccatcccgga aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1020
tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1080
accacgcctc ccgtgctgaa gtccgacggc tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg 1140
gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1200
cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaa 1245
<210> 132
<211> 391
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 132
Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln
1 5 10 15
Lys Asp Glu Ile Ile Cys Pro Ser Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu
20 25 30
Arg His Ile Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val
35 40 45
Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys
50 55 60
Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys
65 70 75 80
Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu
85 90 95
Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His
100 105 110
Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu
115 120 125
Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp
130 135 140
Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn
145 150 155 160
Pro Asp Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
165 170 175
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
180 185 190
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
195 200 205
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
210 215 220
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
225 230 235 240
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
245 250 255
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
260 265 270
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
275 280 285
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys
290 295 300
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
305 310 315 320
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
325 330 335
Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
340 345 350
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
355 360 365
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
370 375 380
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 133
<211> 385
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 133
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val
20 25 30
Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val Arg Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu
35 40 45
Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu Leu Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr
50 55 60
Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile Trp Asn Leu Thr Gln Asp Arg Ala Gln
65 70 75 80
Val Glu Met Gln Gly Cys Arg Asp Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser
85 90 95
Leu His Cys Asp Pro Ser Pro Arg Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Thr
100 105 110
Leu Phe Thr Cys Ser Cys Gly Thr Asp Phe Cys Asn Ala Asn Tyr Ser
115 120 125
His Leu Pro Pro Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Gln Gly Pro
130 135 140
Gln Ala Ala Pro Gly Glu Ser Ile Trp Met Ala Leu Thr Gly Gly Gly
145 150 155 160
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
165 170 175
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
180 185 190
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
195 200 205
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
210 215 220
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
225 230 235 240
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
245 250 255
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
260 265 270
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
275 280 285
Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
290 295 300
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
305 310 315 320
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
325 330 335
Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
340 345 350
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
355 360 365
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
370 375 380
Lys
385
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<400> 134
000
<210> 135
<211> 361
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 135
Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val Arg
1 5 10 15
Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu Leu
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Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile Trp
35 40 45
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50 55 60
Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser Leu His Cys Asp Pro Ser Pro Arg
65 70 75 80
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115 120 125
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165 170 175
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
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245 250 255
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met
260 265 270
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
275 280 285
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
290 295 300
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305 310 315 320
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
325 330 335
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360
<210> 136
<211> 355
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 136
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Met Glu Asp Glu Lys Pro Lys Val
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Tyr Met Cys Val Cys Glu Gly Leu Ser Cys Gly Asn
35 40 45
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50 55 60
Asp Gly Phe His Val Tyr Gln Lys Gly Cys Phe Gln Val Tyr Glu Gln
65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
130 135 140
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
145 150 155 160
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
225 230 235 240
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
245 250 255
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
260 265 270
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
275 280 285
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro
290 295 300
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr
305 310 315 320
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
325 330 335
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340 345 350
Ser Pro Gly
355
<210> 137
<211> 1065
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 137
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg ccatggaaga tgagaagccc aaggtcaacc ccaaactcta catgtgtgtg 120
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cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 480
atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 540
gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 600
cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 660
gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 720
atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 780
cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 840
ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 900
gacaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctatag cgacctcacc 960
gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1020
ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggt 1065
<210> 138
<211> 331
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 138
Met Glu Asp Glu Lys Pro Lys Val Asn Pro Lys Leu Tyr Met Cys Val
1 5 10 15
Cys Glu Gly Leu Ser Cys Gly Asn Glu Asp His Cys Glu Gly Gln Gln
20 25 30
Cys Phe Ser Ser Leu Ser Ile Asn Asp Gly Phe His Val Tyr Gln Lys
35 40 45
Gly Cys Phe Gln Val Tyr Glu Gln Gly Lys Met Thr Cys Lys Thr Pro
50 55 60
Pro Ser Pro Gly Gln Ala Val Glu Cys Cys Gln Gly Asp Trp Cys Asn
65 70 75 80
Arg Asn Ile Thr Ala Gln Leu Pro Thr Lys Gly Lys Ser Phe Pro Gly
85 90 95
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100 105 110
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
115 120 125
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
130 135 140
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
145 150 155 160
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
165 170 175
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
180 185 190
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
195 200 205
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
210 215 220
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
225 230 235 240
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
245 250 255
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
260 265 270
Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
275 280 285
Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
290 295 300
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Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325 330
<210> 139
<211> 352
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 139
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr Ala
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275 280 285
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu
290 295 300
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys
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Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
325 330 335
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
340 345 350
<210> 140
<211> 1056
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 140
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg ccgcgctgct cccgggggcg acggcgttac agtgtttctg ccacctctgt 120
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cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggt 1056
<210> 141
<211> 328
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 141
Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys
1 5 10 15
Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser
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Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val Ile His Asn Ser Met Cys Ile Ala
35 40 45
Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg Asp Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser
50 55 60
Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr Thr Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp His
65 70 75 80
Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro Thr Thr Val Lys Ser Ser Pro Gly Leu
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Gly Pro Val Glu Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
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Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
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Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
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325
<210> 142
<211> 365
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 142
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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195 200 205
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Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
225 230 235 240
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
245 250 255
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
340 345 350
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
355 360 365
<210> 143
<211> 1095
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 143
atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60
tcgcccggcg ccaagaaaga ggatggtgag agtacagccc ccaccccccg tccaaaggtc 120
ttgcgttgta aatgccacca ccattgtcca gaagactcag tcaacaatat ttgcagcaca 180
gacggatatt gtttcacgat gatagaagag gatgactctg ggttgcctgt ggtcacttct 240
ggttgcctag gactagaagg ctcagatttt cagtgtcggg acactcccat tcctcatcaa 300
agaagatcaa ttgaatgctg cacagaaagg aacgaatgta ataaagacct acaccctaca 360
ctgcctccat tgaaaaacag agattttgtt gatggaccta tacaccacag gaccggtggt 420
ggaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 480
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 540
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 600
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 660
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 720
aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 780
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 840
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 900
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<210> 144
<211> 341
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 144
Lys Lys Glu Asp Gly Glu Ser Thr Ala Pro Thr Pro Arg Pro Lys Val
1 5 10 15
Leu Arg Cys Lys Cys His His His Cys Pro Glu Asp Ser Val Asn Asn
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35 40 45
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65 70 75 80
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Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
145 150 155 160
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
165 170 175
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
180 185 190
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
195 200 205
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
210 215 220
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
225 230 235 240
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
245 250 255
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
260 265 270
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr
275 280 285
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp
290 295 300
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
305 310 315 320
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
325 330 335
Ser Leu Ser Pro Gly
340
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<400> 145
000
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<400> 146
000
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000
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000
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000
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<400> 150
000
<210> 151
<211> 369
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 151
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
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65 70 75 80
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145 150 155 160
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
165 170 175
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
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Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu
305 310 315 320
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys
325 330 335
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
340 345 350
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
355 360 365
Lys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 152
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35 40 45
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
165 170 175
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
180 185 190
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195 200 205
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
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Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
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245 250 255
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
260 265 270
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
275 280 285
Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
290 295 300
Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
305 310 315 320
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
325 330 335
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
340 345 350
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360 365
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 154
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
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100 105 110
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115 120 125
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
130 135 140
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
210 215 220
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
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245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 155
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
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Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
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275 280 285
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Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
340 345 350
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Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 156
Ser Gln Asn Gln Glu Arg Leu Cys Ala Phe Lys Asp Pro Tyr Gln Gln
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Gly Asp Ile Asn Leu Val Lys Gln Gly Cys Trp Ser His Ile Gly Asp
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Ile Gln Asn Gly Thr Tyr Arg Phe Cys Cys Cys Ser Thr Asp Leu
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100 105 110
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115 120 125
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Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
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180 185 190
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195 200 205
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
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Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
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260 265 270
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275 280 285
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Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
325 330 335
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 157
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Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
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385 390
<210> 158
<211> 366
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 158
Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val
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355 360 365
<210> 159
<211> 415
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 159
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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180 185 190
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195 200 205
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
210 215 220
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
225 230 235 240
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
245 250 255
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
260 265 270
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275 280 285
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
290 295 300
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305 310 315 320
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405 410 415
<210> 160
<211> 391
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 160
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115 120 125
Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp
130 135 140
Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn
145 150 155 160
Pro Asp Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
165 170 175
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
180 185 190
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
195 200 205
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
210 215 220
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
225 230 235 240
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
245 250 255
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
260 265 270
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
275 280 285
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
290 295 300
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
305 310 315 320
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp
325 330 335
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
340 345 350
Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
355 360 365
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
370 375 380
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 161
<211> 385
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 161
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val
20 25 30
Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val Arg Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu
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Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu Leu Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr
50 55 60
Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile Trp Asn Leu Thr Gln Asp Arg Ala Gln
65 70 75 80
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Leu His Cys Asp Pro Ser Pro Arg Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Thr
100 105 110
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115 120 125
His Leu Pro Pro Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Gln Gly Pro
130 135 140
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145 150 155 160
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
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210 215 220
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225 230 235 240
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
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260 265 270
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
275 280 285
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
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305 310 315 320
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu
325 330 335
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys
340 345 350
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
355 360 365
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370 375 380
Lys
385
<210> 162
<211> 361
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 162
Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val Arg
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Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu Leu
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Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile Trp
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Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser Leu His Cys Asp Pro Ser Pro Arg
65 70 75 80
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Gly Thr Pro Gly Ser Gln Gly Pro Gln Ala Ala Pro Gly Glu Ser Ile
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130 135 140
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
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Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
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Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
195 200 205
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
225 230 235 240
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
245 250 255
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
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Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
275 280 285
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
290 295 300
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305 310 315 320
Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
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Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
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<400> 170
000
<210> 171
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 171
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Asp Pro Val Lys Pro Ser Arg Gly
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115 120 125
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
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Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
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Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
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Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys
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Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
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Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
325 330 335
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
340 345 350
<210> 172
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 172
Asp Pro Val Lys Pro Ser Arg Gly Pro Leu Val Thr Cys Thr Cys Glu
1 5 10 15
Ser Pro His Cys Lys Gly Pro Thr Cys Arg Gly Ala Trp Cys Thr Val
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
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Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
165 170 175
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
180 185 190
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
195 200 205
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
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Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
245 250 255
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
260 265 270
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
275 280 285
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
290 295 300
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
305 310 315 320
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 173
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Met Glu Asp Glu Lys Pro Lys Val
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Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
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Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
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Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
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340 345 350
Ser Pro Gly
355
<210> 174
<211> 331
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 174
Met Glu Asp Glu Lys Pro Lys Val Asn Pro Lys Leu Tyr Met Cys Val
1 5 10 15
Cys Glu Gly Leu Ser Cys Gly Asn Glu Asp His Cys Glu Gly Gln Gln
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35 40 45
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115 120 125
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
130 135 140
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
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Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
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180 185 190
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
195 200 205
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
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Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
225 230 235 240
Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
245 250 255
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
260 265 270
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser
275 280 285
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
290 295 300
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
305 310 315 320
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325 330
<210> 175
<211> 381
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 175
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Gln Asn Leu Asp Ser Met Leu His
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Asn Leu Cys Asn Gln Tyr Leu Gln Pro Thr Leu Pro Pro Val Val Ile
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Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
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Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
245 250 255
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
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Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
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Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
355 360 365
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
370 375 380
<210> 176
<211> 359
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 176
Gly Ala Gln Asn Leu Asp Ser Met Leu His Gly Thr Gly Met Lys Ser
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325 330 335
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355
<210> 177
<211> 355
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 177
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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195 200 205
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Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
245 250 255
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260 265 270
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
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355
<210> 178
<211> 331
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 178
Ser Gly Pro Arg Gly Val Gln Ala Leu Leu Cys Ala Cys Thr Ser Cys
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20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
130 135 140
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
145 150 155 160
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
165 170 175
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
180 185 190
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
195 200 205
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
210 215 220
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
225 230 235 240
Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
245 250 255
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
260 265 270
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser
275 280 285
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
290 295 300
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
305 310 315 320
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325 330
<210> 179
<211> 352
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 179
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr Ala
20 25 30
Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val
35 40 45
Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val
50 55 60
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65 70 75 80
Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr Thr
85 90 95
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100 105 110
Thr Val Lys Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Thr Gly Gly Gly
115 120 125
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130 135 140
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
145 150 155 160
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
165 170 175
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
225 230 235 240
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
245 250 255
Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
260 265 270
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
275 280 285
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
290 295 300
Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
305 310 315 320
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
325 330 335
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
340 345 350
<210> 180
<211> 328
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 180
Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys
1 5 10 15
Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser
20 25 30
Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val Ile His Asn Ser Met Cys Ile Ala
35 40 45
Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg Asp Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser
50 55 60
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65 70 75 80
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130 135 140
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195 200 205
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225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
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275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
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Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 181
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 181
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
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355 360 365
<210> 182
<211> 341
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 182
Lys Lys Glu Asp Gly Glu Ser Thr Ala Pro Thr Pro Arg Pro Lys Val
1 5 10 15
Leu Arg Cys Lys Cys His His His Cys Pro Glu Asp Ser Val Asn Asn
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50 55 60
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65 70 75 80
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115 120 125
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
130 135 140
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
145 150 155 160
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
165 170 175
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180 185 190
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
195 200 205
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
325 330 335
Ser Leu Ser Pro Gly
340
<210> 183
<211> 341
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 183
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu
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Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
130 135 140
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
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Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
165 170 175
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195 200 205
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225 230 235 240
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260 265 270
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275 280 285
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Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
305 310 315 320
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
325 330 335
Ser Leu Ser Pro Gly
340
<210> 184
<211> 317
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 184
Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys
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115 120 125
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
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Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
225 230 235 240
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
245 250 255
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260 265 270
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
275 280 285
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<400> 185
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<400> 186
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000
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<400> 188
000
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<400> 189
000
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<400> 190
000
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<400> 191
000
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<400> 192
000
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<400> 193
000
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<400> 194
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<400> 195
000
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<400> 196
000
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<400> 197
000
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<400> 198
000
<210> 199
<400> 199
000
<210> 200
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 200
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
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Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
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Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys
225
<210> 201
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 201
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys
225
<210> 202
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 202
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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100 105 110
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Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
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Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys
225
<210> 203
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 203
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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195 200 205
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210 215 220
Lys
225
<210> 204
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 204
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
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50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65 70 75 80
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100 105 110
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Lys
225
<210> 205
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 205
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
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<210> 206
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<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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245 250 255
His Met Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala His Arg
260 265 270
Asp Ile Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Cys Glu Thr Cys Ala
275 280 285
Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala Val Lys His Asp Ser Ile Leu Asn Thr
290 295 300
Ile Asp Ile Pro Gln Asn Pro Lys Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met Ala
305 310 315 320
Pro Glu Met Leu Asp Asp Thr Met Asn Val Asn Ile Phe Glu Ser Phe
325 330 335
Lys Arg Ala Asp Ile Tyr Ser Val Gly Leu Val Tyr Trp Glu Ile Ala
340 345 350
Arg Arg Cys Ser Val Gly Gly Ile Val Glu Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr
355 360 365
Tyr Asp Met Val Pro Ser Asp Pro Ser Ile Glu Glu Met Arg Lys Val
370 375 380
Val Cys Asp Gln Lys Phe Arg Pro Ser Ile Pro Asn Gln Trp Gln Ser
385 390 395 400
Cys Glu Ala Leu Arg Val Met Gly Arg Ile Met Arg Glu Cys Trp Tyr
405 410 415
Ala Asn Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys Thr Ile
420 425 430
Ser Gln Leu Cys Val Lys Glu Asp Cys Lys Ala
435 440
<210> 302
<211> 63
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 302
Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu
1 5 10 15
Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr
20 25 30
Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His
35 40 45
Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met Glu
50 55 60
<210> 303
<211> 1329
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 303
atgctaacca atggaaaaga gcaggtgatc aaatcctgtg tctcccttcc agaactgaat 60
gctcaagtct tctgtcatag ttccaacaat gttaccaaaa ccgaatgctg cttcacagat 120
ttttgcaaca acataacact gcaccttcca acagcatcac caaatgcccc aaaacttgga 180
cccatggagc tggccatcat tattactgtg cctgtttgcc tcctgtccat agctgcgatg 240
ctgacagtat gggcatgcca gggtcgacag tgctcctaca ggaagaaaaa gagaccaaat 300
gtggaggaac cactctctga gtgcaatctg gtaaatgctg gaaaaactct gaaagatctg 360
atttatgatg tgaccgcctc tggatctggc tctggtctac ctctgttggt tcaaaggaca 420
attgcaagga cgattgtgct tcaggaaata gtaggaaaag gtagatttgg tgaggtgtgg 480
catggaagat ggtgtgggga agatgtggct gtgaaaatat tctcctccag agatgaaaga 540
tcttggtttc gtgaggcaga aatttaccag acggtcatgc tgcgacatga aaacatcctt 600
ggtttcattg ctgctgacaa caaagataat ggaacttgga ctcaactttg gctggtatct 660
gaatatcatg aacagggctc cttatatgac tatttgaata gaaatatagt gaccgtggct 720
ggaatgatca agctggcgct ctcaattgct agtggtctgg cacaccttca tatggagatt 780
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gtgaaaaagt gtgaaacttg tgccatagcg gacttagggt tggctgtgaa gcatgattca 900
atactgaaca ctatcgacat acctcagaat cctaaagtgg gaaccaagag gtatatggct 960
cctgaaatgc ttgatgatac aatgaatgtg aatatctttg agtccttcaa acgagctgac 1020
atctattctg ttggtctggt ttactgggaa atagcccgga ggtgttcagt cggaggaatt 1080
gttgaggagt accaattgcc ttattatgac atggtgcctt cagatccctc gatagaggaa 1140
atgagaaagg ttgtttgtga ccagaagttt cgaccaagta tcccaaacca gtggcaaagt 1200
tgtgaagcac tccgagtcat ggggagaata atgcgtgagt gttggtatgc caacggagcg 1260
gcccgcctaa ctgctcttcg tattaagaag actatatctc aactttgtgt caaagaagac 1320
tgcaaagcc 1329
<210> 304
<211> 189
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 304
atgctaacca atggaaaaga gcaggtgatc aaatcctgtg tctcccttcc agaactgaat 60
gctcaagtct tctgtcatag ttccaacaat gttaccaaaa ccgaatgctg cttcacagat 120
ttttgcaaca acataacact gcaccttcca acagcatcac caaatgcccc aaaacttgga 180
cccatggag 189
<210> 305
<211> 413
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 305
Met Thr Arg Ala Leu Cys Ser Ala Leu Arg Gln Ala Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ala Ala Ala Ala Glu Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu
20 25 30
Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala
35 40 45
Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
50 55 60
Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn
65 70 75 80
Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr
85 90 95
Leu His Leu Pro Thr Gly Leu Pro Leu Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala
100 105 110
Arg Thr Ile Val Leu Gln Glu Ile Val Gly Lys Gly Arg Phe Gly Glu
115 120 125
Val Trp His Gly Arg Trp Cys Gly Glu Asp Val Ala Val Lys Ile Phe
130 135 140
Ser Ser Arg Asp Glu Arg Ser Trp Phe Arg Glu Ala Glu Ile Tyr Gln
145 150 155 160
Thr Val Met Leu Arg His Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp
165 170 175
Asn Lys Asp Asn Gly Thr Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val Ser Glu Tyr
180 185 190
His Glu Gln Gly Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Asn Arg Asn Ile Val Thr
195 200 205
Val Ala Gly Met Ile Lys Leu Ala Leu Ser Ile Ala Ser Gly Leu Ala
210 215 220
His Leu His Met Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala
225 230 235 240
His Arg Asp Ile Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Cys Glu Thr
245 250 255
Cys Ala Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala Val Lys His Asp Ser Ile Leu
260 265 270
Asn Thr Ile Asp Ile Pro Gln Asn Pro Lys Val Gly Thr Lys Arg Tyr
275 280 285
Met Ala Pro Glu Met Leu Asp Asp Thr Met Asn Val Asn Ile Phe Glu
290 295 300
Ser Phe Lys Arg Ala Asp Ile Tyr Ser Val Gly Leu Val Tyr Trp Glu
305 310 315 320
Ile Ala Arg Arg Cys Ser Val Gly Gly Ile Val Glu Glu Tyr Gln Leu
325 330 335
Pro Tyr Tyr Asp Met Val Pro Ser Asp Pro Ser Ile Glu Glu Met Arg
340 345 350
Lys Val Val Cys Asp Gln Lys Phe Arg Pro Ser Ile Pro Asn Gln Trp
355 360 365
Gln Ser Cys Glu Ala Leu Arg Val Met Gly Arg Ile Met Arg Glu Cys
370 375 380
Trp Tyr Ala Asn Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys
385 390 395 400
Thr Ile Ser Gln Leu Cys Val Lys Glu Asp Cys Lys Ala
405 410
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<211> 393
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 306
Glu Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser
1 5 10 15
Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu
20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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85 90 95
Leu Gln Glu Ile Val Gly Lys Gly Arg Phe Gly Glu Val Trp His Gly
100 105 110
Arg Trp Cys Gly Glu Asp Val Ala Val Lys Ile Phe Ser Ser Arg Asp
115 120 125
Glu Arg Ser Trp Phe Arg Glu Ala Glu Ile Tyr Gln Thr Val Met Leu
130 135 140
Arg His Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp Asn Lys Asp Asn
145 150 155 160
Gly Thr Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val Ser Glu Tyr His Glu Gln Gly
165 170 175
Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Asn Arg Asn Ile Val Thr Val Ala Gly Met
180 185 190
Ile Lys Leu Ala Leu Ser Ile Ala Ser Gly Leu Ala His Leu His Met
195 200 205
Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala His Arg Asp Ile
210 215 220
Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Cys Glu Thr Cys Ala Ile Ala
225 230 235 240
Asp Leu Gly Leu Ala Val Lys His Asp Ser Ile Leu Asn Thr Ile Asp
245 250 255
Ile Pro Gln Asn Pro Lys Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met Ala Pro Glu
260 265 270
Met Leu Asp Asp Thr Met Asn Val Asn Ile Phe Glu Ser Phe Lys Arg
275 280 285
Ala Asp Ile Tyr Ser Val Gly Leu Val Tyr Trp Glu Ile Ala Arg Arg
290 295 300
Cys Ser Val Gly Gly Ile Val Glu Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr Tyr Asp
305 310 315 320
Met Val Pro Ser Asp Pro Ser Ile Glu Glu Met Arg Lys Val Val Cys
325 330 335
Asp Gln Lys Phe Arg Pro Ser Ile Pro Asn Gln Trp Gln Ser Cys Glu
340 345 350
Ala Leu Arg Val Met Gly Arg Ile Met Arg Glu Cys Trp Tyr Ala Asn
355 360 365
Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys Thr Ile Ser Gln
370 375 380
Leu Cys Val Lys Glu Asp Cys Lys Ala
385 390
<210> 307
<211> 1239
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 307
atgacccggg cgctctgctc agcgctccgc caggctctcc tgctgctcgc agcggccgcc 60
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ggaacttgga ctcaactttg gctggtatct gaatatcatg aacagggctc cttatatgac 600
tatttgaata gaaatatagt gaccgtggct ggaatgatca agctggcgct ctcaattgct 660
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catcgagaca taaaatcaaa gaatatctta gtgaaaaagt gtgaaacttg tgccatagcg 780
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<210> 308
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 308
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<210> 309
<211> 336
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 309
Met Thr Arg Ala Leu Cys Ser Ala Leu Arg Gln Ala Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ala Ala Ala Ala Glu Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu
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Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala
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Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
50 55 60
Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn
65 70 75 80
Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr
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Leu His Leu Pro Thr Asp Asn Gly Thr Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val
100 105 110
Ser Glu Tyr His Glu Gln Gly Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Asn Arg Asn
115 120 125
Ile Val Thr Val Ala Gly Met Ile Lys Leu Ala Leu Ser Ile Ala Ser
130 135 140
Gly Leu Ala His Leu His Met Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro
145 150 155 160
Ala Ile Ala His Arg Asp Ile Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys
165 170 175
Cys Glu Thr Cys Ala Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala Val Lys His Asp
180 185 190
Ser Ile Leu Asn Thr Ile Asp Ile Pro Gln Asn Pro Lys Val Gly Thr
195 200 205
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Ile Phe Glu Ser Phe Lys Arg Ala Asp Ile Tyr Ser Val Gly Leu Val
225 230 235 240
Tyr Trp Glu Ile Ala Arg Arg Cys Ser Val Gly Gly Ile Val Glu Glu
245 250 255
Tyr Gln Leu Pro Tyr Tyr Asp Met Val Pro Ser Asp Pro Ser Ile Glu
260 265 270
Glu Met Arg Lys Val Val Cys Asp Gln Lys Phe Arg Pro Ser Ile Pro
275 280 285
Asn Gln Trp Gln Ser Cys Glu Ala Leu Arg Val Met Gly Arg Ile Met
290 295 300
Arg Glu Cys Trp Tyr Ala Asn Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg
305 310 315 320
Ile Lys Lys Thr Ile Ser Gln Leu Cys Val Lys Glu Asp Cys Lys Ala
325 330 335
<210> 310
<211> 316
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 310
Glu Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser
1 5 10 15
Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu
20 25 30
Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu
35 40 45
Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr
50 55 60
Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro
65 70 75 80
Thr Asp Asn Gly Thr Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val Ser Glu Tyr His
85 90 95
Glu Gln Gly Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Asn Arg Asn Ile Val Thr Val
100 105 110
Ala Gly Met Ile Lys Leu Ala Leu Ser Ile Ala Ser Gly Leu Ala His
115 120 125
Leu His Met Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala His
130 135 140
Arg Asp Ile Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Cys Glu Thr Cys
145 150 155 160
Ala Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala Val Lys His Asp Ser Ile Leu Asn
165 170 175
Thr Ile Asp Ile Pro Gln Asn Pro Lys Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met
180 185 190
Ala Pro Glu Met Leu Asp Asp Thr Met Asn Val Asn Ile Phe Glu Ser
195 200 205
Phe Lys Arg Ala Asp Ile Tyr Ser Val Gly Leu Val Tyr Trp Glu Ile
210 215 220
Ala Arg Arg Cys Ser Val Gly Gly Ile Val Glu Glu Tyr Gln Leu Pro
225 230 235 240
Tyr Tyr Asp Met Val Pro Ser Asp Pro Ser Ile Glu Glu Met Arg Lys
245 250 255
Val Val Cys Asp Gln Lys Phe Arg Pro Ser Ile Pro Asn Gln Trp Gln
260 265 270
Ser Cys Glu Ala Leu Arg Val Met Gly Arg Ile Met Arg Glu Cys Trp
275 280 285
Tyr Ala Asn Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys Thr
290 295 300
Ile Ser Gln Leu Cys Val Lys Glu Asp Cys Lys Ala
305 310 315
<210> 311
<211> 1011
<212> DNA
<213> Homo sapiens
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atgacccggg cgctctgctc agcgctccgc caggctctcc tgctgctcgc agcggccgcc 60
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<210> 312
<211> 951
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 312
gagctctcgc caggactgaa gtgtgtatgt cttttgtgtg attcttcaaa ctttacctgc 60
caaacagaag gagcatgttg ggcatcagtc atgctaacca atggaaaaga gcaggtgatc 120
aaatcctgtg tctcccttcc agaactgaat gctcaagtct tctgtcatag ttccaacaat 180
gttaccaaaa ccgaatgctg cttcacagat ttttgcaaca acataacact gcaccttcca 240
acagataatg gaacttggac tcaactttgg ctggtatctg aatatcatga acagggctcc 300
ttatatgact atttgaatag aaatatagtg accgtggctg gaatgatcaa gctggcgctc 360
tcaattgcta gtggtctggc acaccttcat atggagattg ttggtacaca aggtaaacct 420
gctattgctc atcgagacat aaaatcaaag aatatcttag tgaaaaagtg tgaaacttgt 480
gccatagcgg acttagggtt ggctgtgaag catgattcaa tactgaacac tatcgacata 540
cctcagaatc ctaaagtggg aaccaagagg tatatggctc ctgaaatgct tgatgataca 600
atgaatgtga atatctttga gtccttcaaa cgagctgaca tctattctgt tggtctggtt 660
tactgggaaa tagcccggag gtgttcagtc ggaggaattg ttgaggagta ccaattgcct 720
tattatgaca tggtgccttc agatccctcg atagaggaaa tgagaaaggt tgtttgtgac 780
cagaagtttc gaccaagtat cccaaaccag tggcaaagtt gtgaagcact ccgagtcatg 840
gggagaataa tgcgtgagtg ttggtatgcc aacggagcgg cccgcctaac tgctcttcgt 900
attaagaaga ctatatctca actttgtgtc aaagaagact gcaaagccta a 951
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 313
Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln
1 5 10 15
Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu
20 25 30
Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val
35 40 45
Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr
50 55 60
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 401
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr
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Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys
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Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly
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Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr
130 135 140
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
145 150 155 160
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
165 170 175
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
180 185 190
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
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Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
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Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
225 230 235 240
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
245 250 255
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
260 265 270
Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys
275 280 285
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
290 295 300
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
305 310 315 320
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
325 330 335
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
340 345 350
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360 365
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 402
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105 110
Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
115 120 125
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
130 135 140
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145 150 155 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
165 170 175
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
180 185 190
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
195 200 205
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
210 215 220
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225 230 235 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys
245 250 255
Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
260 265 270
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
275 280 285
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
290 295 300
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305 310 315 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 403
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 403
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Pro Arg Gly Val Gln Ala
20 25 30
Leu Leu Cys Ala Cys Thr Ser Cys Leu Gln Ala Asn Tyr Thr Cys Glu
35 40 45
Thr Asp Gly Ala Cys Met Val Ser Ile Phe Asn Leu Asp Gly Met Glu
50 55 60
His His Val Arg Thr Cys Ile Pro Lys Val Glu Leu Val Pro Ala Gly
65 70 75 80
Lys Pro Phe Tyr Cys Leu Ser Ser Glu Asp Leu Arg Asn Thr His Cys
85 90 95
Cys Tyr Thr Asp Tyr Cys Asn Arg Ile Asp Leu Arg Val Pro Ser Gly
100 105 110
His Leu Lys Glu Pro Glu His Pro Ser Met Trp Gly Pro Val Glu Thr
115 120 125
Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
130 135 140
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
145 150 155 160
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
165 170 175
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
180 185 190
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
195 200 205
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
210 215 220
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
225 230 235 240
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
245 250 255
Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
260 265 270
Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
275 280 285
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
290 295 300
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr
305 310 315 320
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
325 330 335
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
340 345 350
Ser Pro Gly Lys
355
<210> 404
<211> 332
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 404
Ser Gly Pro Arg Gly Val Gln Ala Leu Leu Cys Ala Cys Thr Ser Cys
1 5 10 15
Leu Gln Ala Asn Tyr Thr Cys Glu Thr Asp Gly Ala Cys Met Val Ser
20 25 30
Ile Phe Asn Leu Asp Gly Met Glu His His Val Arg Thr Cys Ile Pro
35 40 45
Lys Val Glu Leu Val Pro Ala Gly Lys Pro Phe Tyr Cys Leu Ser Ser
50 55 60
Glu Asp Leu Arg Asn Thr His Cys Cys Tyr Thr Asp Tyr Cys Asn Arg
65 70 75 80
Ile Asp Leu Arg Val Pro Ser Gly His Leu Lys Glu Pro Glu His Pro
85 90 95
Ser Met Trp Gly Pro Val Glu Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro
100 105 110
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
115 120 125
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
130 135 140
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
145 150 155 160
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
165 170 175
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
180 185 190
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
195 200 205
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
210 215 220
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg
225 230 235 240
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly
245 250 255
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
260 265 270
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
275 280 285
Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
290 295 300
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
305 310 315 320
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 405
<211> 342
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 405
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu
20 25 30
Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala
35 40 45
Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
50 55 60
Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn
65 70 75 80
Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr
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Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met
100 105 110
Glu Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
115 120 125
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
130 135 140
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
145 150 155 160
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
165 170 175
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
180 185 190
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
195 200 205
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
210 215 220
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
225 230 235 240
Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
245 250 255
Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
260 265 270
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
275 280 285
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys
290 295 300
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
305 310 315 320
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
325 330 335
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 406
<211> 318
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 406
Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys
20 25 30
Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln
35 40 45
Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe
50 55 60
Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro
65 70 75 80
Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met Glu Thr Gly Gly Gly Thr His Thr
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
115 120 125
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
130 135 140
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
145 150 155 160
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
165 170 175
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
180 185 190
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
195 200 205
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
210 215 220
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
225 230 235 240
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
245 250 255
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
260 265 270
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
275 280 285
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
290 295 300
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
305 310 315
<210> 407
<211> 382
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 407
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Gln Asn Leu Asp Ser Met Leu His
20 25 30
Gly Thr Gly Met Lys Ser Asp Ser Asp Gln Lys Lys Ser Glu Asn Gly
35 40 45
Val Thr Leu Ala Pro Glu Asp Thr Leu Pro Phe Leu Lys Cys Tyr Cys
50 55 60
Ser Gly His Cys Pro Asp Asp Ala Ile Asn Asn Thr Cys Ile Thr Asn
65 70 75 80
Gly His Cys Phe Ala Ile Ile Glu Glu Asp Asp Gln Gly Glu Thr Thr
85 90 95
Leu Ala Ser Gly Cys Met Lys Tyr Glu Gly Ser Asp Phe Gln Cys Lys
100 105 110
Asp Ser Pro Lys Ala Gln Leu Arg Arg Thr Ile Glu Cys Cys Arg Thr
115 120 125
Asn Leu Cys Asn Gln Tyr Leu Gln Pro Thr Leu Pro Pro Val Val Ile
130 135 140
Gly Pro Phe Phe Asp Gly Ser Ile Arg Thr Gly Gly Gly Thr His Thr
145 150 155 160
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
165 170 175
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
180 185 190
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
195 200 205
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
210 215 220
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
225 230 235 240
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
245 250 255
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
260 265 270
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
275 280 285
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
290 295 300
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
305 310 315 320
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
325 330 335
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
340 345 350
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
355 360 365
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375 380
<210> 408
<211> 360
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 408
Gly Ala Gln Asn Leu Asp Ser Met Leu His Gly Thr Gly Met Lys Ser
1 5 10 15
Asp Ser Asp Gln Lys Lys Ser Glu Asn Gly Val Thr Leu Ala Pro Glu
20 25 30
Asp Thr Leu Pro Phe Leu Lys Cys Tyr Cys Ser Gly His Cys Pro Asp
35 40 45
Asp Ala Ile Asn Asn Thr Cys Ile Thr Asn Gly His Cys Phe Ala Ile
50 55 60
Ile Glu Glu Asp Asp Gln Gly Glu Thr Thr Leu Ala Ser Gly Cys Met
65 70 75 80
Lys Tyr Glu Gly Ser Asp Phe Gln Cys Lys Asp Ser Pro Lys Ala Gln
85 90 95
Leu Arg Arg Thr Ile Glu Cys Cys Arg Thr Asn Leu Cys Asn Gln Tyr
100 105 110
Leu Gln Pro Thr Leu Pro Pro Val Val Ile Gly Pro Phe Phe Asp Gly
115 120 125
Ser Ile Arg Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
130 135 140
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
165 170 175
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
180 185 190
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
195 200 205
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
210 215 220
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
225 230 235 240
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
245 250 255
Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
260 265 270
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
275 280 285
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
290 295 300
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
305 310 315 320
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
325 330 335
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
340 345 350
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360
<210> 409
<211> 369
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 409
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr
20 25 30
Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn
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Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His
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Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys
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Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly
100 105 110
Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr
115 120 125
Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly
130 135 140
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
145 150 155 160
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
165 170 175
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
180 185 190
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
195 200 205
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
210 215 220
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
225 230 235 240
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
245 250 255
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
260 265 270
Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
275 280 285
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
290 295 300
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
305 310 315 320
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
325 330 335
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
340 345 350
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
355 360 365
Lys
<210> 410
<211> 344
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 410
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
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Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
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Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
130 135 140
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
145 150 155 160
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
165 170 175
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
180 185 190
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
195 200 205
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
210 215 220
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
225 230 235 240
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr
245 250 255
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
260 265 270
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
275 280 285
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
290 295 300
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
305 310 315 320
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
325 330 335
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 411
<211> 376
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 411
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gln Asn Gln Glu Arg Leu Cys
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Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
245 250 255
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
260 265 270
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Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
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Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
305 310 315 320
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
325 330 335
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
340 345 350
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
355 360 365
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 412
<211> 352
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 412
Ser Gln Asn Gln Glu Arg Leu Cys Ala Phe Lys Asp Pro Tyr Gln Gln
1 5 10 15
Asp Leu Gly Ile Gly Glu Ser Arg Ile Ser His Glu Asn Gly Thr Ile
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Leu Cys Ser Lys Gly Ser Thr Cys Tyr Gly Leu Trp Glu Lys Ser Lys
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Gly Asp Ile Asn Leu Val Lys Gln Gly Cys Trp Ser His Ile Gly Asp
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65 70 75 80
Ser Ile Gln Asn Gly Thr Tyr Arg Phe Cys Cys Cys Ser Thr Asp Leu
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115 120 125
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165 170 175
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195 200 205
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
210 215 220
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
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Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
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Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
275 280 285
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
290 295 300
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
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Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
325 330 335
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 413
<211> 352
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 413
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Asp Pro Val Lys Pro Ser Arg Gly
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Cys Arg Gly Ala Trp Cys Thr Val Val Leu Val Arg Glu Glu Gly Arg
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115 120 125
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Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
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Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
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180 185 190
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195 200 205
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
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Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
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Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
325 330 335
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 414
<211> 328
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 414
Asp Pro Val Lys Pro Ser Arg Gly Pro Leu Val Thr Cys Thr Cys Glu
1 5 10 15
Ser Pro His Cys Lys Gly Pro Thr Cys Arg Gly Ala Trp Cys Thr Val
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Val Leu Glu Ala Thr Gln Pro Pro Ser Glu Gln Pro Gly Thr Asp Gly
85 90 95
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Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
115 120 125
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130 135 140
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
145 150 155 160
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
165 170 175
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
180 185 190
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
195 200 205
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
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Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
225 230 235 240
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
245 250 255
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
260 265 270
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
275 280 285
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
290 295 300
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
305 310 315 320
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 415
<211> 390
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 415
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
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20 25 30
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Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
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Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
245 250 255
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
260 265 270
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Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
325 330 335
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
340 345 350
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
355 360 365
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
370 375 380
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
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<211> 366
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 416
Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val
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Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys
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Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn
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50 55 60
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Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
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Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
260 265 270
Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
275 280 285
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290 295 300
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
305 310 315 320
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
325 330 335
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
340 345 350
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360 365
<210> 417
<211> 415
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 417
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys
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Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser
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245 250 255
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275 280 285
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290 295 300
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
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<210> 418
<211> 391
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 418
Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln
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Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
225 230 235 240
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245 250 255
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290 295 300
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305 310 315 320
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
370 375 380
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 419
<211> 385
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 419
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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130 135 140
Gln Ala Ala Pro Gly Glu Ser Ile Trp Met Ala Leu Thr Gly Gly Gly
145 150 155 160
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
165 170 175
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
180 185 190
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
195 200 205
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
210 215 220
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
225 230 235 240
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
245 250 255
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
260 265 270
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
275 280 285
Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
290 295 300
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
305 310 315 320
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
325 330 335
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
340 345 350
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
355 360 365
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
370 375 380
Lys
385
<210> 420
<211> 361
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 420
Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val Arg
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Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu Leu
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Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile Trp
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Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser Leu His Cys Asp Pro Ser Pro Arg
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130 135 140
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
145 150 155 160
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
165 170 175
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
180 185 190
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
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210 215 220
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
275 280 285
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
290 295 300
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
305 310 315 320
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
325 330 335
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
340 345 350
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360
<210> 421
<211> 356
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 421
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Met Glu Asp Glu Lys Pro Lys Val
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
145 150 155 160
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
260 265 270
Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
275 280 285
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290 295 300
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr
305 310 315 320
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
325 330 335
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
340 345 350
Ser Pro Gly Lys
355
<210> 422
<211> 332
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 422
Met Glu Asp Glu Lys Pro Lys Val Asn Pro Lys Leu Tyr Met Cys Val
1 5 10 15
Cys Glu Gly Leu Ser Cys Gly Asn Glu Asp His Cys Glu Gly Gln Gln
20 25 30
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Gly Cys Phe Gln Val Tyr Glu Gln Gly Lys Met Thr Cys Lys Thr Pro
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165 170 175
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195 200 205
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245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
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Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 423
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr Ala
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Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
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Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
340 345 350
Lys
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<211> 329
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 424
Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys
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165 170 175
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
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Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro
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Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
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275 280 285
Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
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Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 425
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
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Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
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Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360 365
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<211> 342
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 426
Lys Lys Glu Asp Gly Glu Ser Thr Ala Pro Thr Pro Arg Pro Lys Val
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Leu Arg Cys Lys Cys His His His Cys Pro Glu Asp Ser Val Asn Asn
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50 55 60
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115 120 125
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
130 135 140
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
145 150 155 160
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
165 170 175
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
180 185 190
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
195 200 205
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
210 215 220
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
225 230 235 240
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Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
305 310 315 320
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<210> 450
<400> 450
000
<210> 451
<211> 369
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 451
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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355 360 365
Lys
<210> 452
<211> 344
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 452
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
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<211> 368
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 453
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr
20 25 30
Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn
35 40 45
Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His
50 55 60
Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys
65 70 75 80
Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys
85 90 95
Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly
100 105 110
Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro
115 120 125
Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr
130 135 140
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
145 150 155 160
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
165 170 175
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
180 185 190
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
195 200 205
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
210 215 220
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
225 230 235 240
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
245 250 255
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu
260 265 270
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys
275 280 285
Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
290 295 300
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
305 310 315 320
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
325 330 335
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
340 345 350
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360 365
<210> 454
<211> 343
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 454
Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly
20 25 30
Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser
35 40 45
Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His
85 90 95
Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr
100 105 110
Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
115 120 125
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
130 135 140
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145 150 155 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
165 170 175
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
180 185 190
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
195 200 205
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
210 215 220
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225 230 235 240
Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
245 250 255
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
260 265 270
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
275 280 285
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser
290 295 300
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305 310 315 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 455
<211> 376
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 455
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gln Asn Gln Glu Arg Leu Cys
20 25 30
Ala Phe Lys Asp Pro Tyr Gln Gln Asp Leu Gly Ile Gly Glu Ser Arg
35 40 45
Ile Ser His Glu Asn Gly Thr Ile Leu Cys Ser Lys Gly Ser Thr Cys
50 55 60
Tyr Gly Leu Trp Glu Lys Ser Lys Gly Asp Ile Asn Leu Val Lys Gln
65 70 75 80
Gly Cys Trp Ser His Ile Gly Asp Pro Gln Glu Cys His Tyr Glu Glu
85 90 95
Cys Val Val Thr Thr Thr Pro Pro Ser Ile Gln Asn Gly Thr Tyr Arg
100 105 110
Phe Cys Cys Cys Ser Thr Asp Leu Cys Asn Val Asn Phe Thr Glu Asn
115 120 125
Phe Pro Pro Pro Asp Thr Thr Pro Leu Ser Pro Pro His Ser Phe Asn
130 135 140
Arg Asp Glu Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
145 150 155 160
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
165 170 175
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
180 185 190
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
195 200 205
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
210 215 220
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
225 230 235 240
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
245 250 255
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
260 265 270
Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
275 280 285
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
290 295 300
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
305 310 315 320
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
325 330 335
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
340 345 350
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
355 360 365
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 456
<211> 352
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 456
Ser Gln Asn Gln Glu Arg Leu Cys Ala Phe Lys Asp Pro Tyr Gln Gln
1 5 10 15
Asp Leu Gly Ile Gly Glu Ser Arg Ile Ser His Glu Asn Gly Thr Ile
20 25 30
Leu Cys Ser Lys Gly Ser Thr Cys Tyr Gly Leu Trp Glu Lys Ser Lys
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Leu Val Lys Gln Gly Cys Trp Ser His Ile Gly Asp
50 55 60
Pro Gln Glu Cys His Tyr Glu Glu Cys Val Val Thr Thr Thr Pro Pro
65 70 75 80
Ser Ile Gln Asn Gly Thr Tyr Arg Phe Cys Cys Cys Ser Thr Asp Leu
85 90 95
Cys Asn Val Asn Phe Thr Glu Asn Phe Pro Pro Pro Asp Thr Thr Pro
100 105 110
Leu Ser Pro Pro His Ser Phe Asn Arg Asp Glu Thr Gly Gly Gly Thr
115 120 125
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
145 150 155 160
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
165 170 175
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
180 185 190
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
195 200 205
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
210 215 220
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
225 230 235 240
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu
245 250 255
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys
260 265 270
Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
275 280 285
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
290 295 300
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
305 310 315 320
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
325 330 335
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 457
<211> 385
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 457
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val
20 25 30
Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val Arg Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu
35 40 45
Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu Leu Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr
50 55 60
Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile Trp Asn Leu Thr Gln Asp Arg Ala Gln
65 70 75 80
Val Glu Met Gln Gly Cys Arg Asp Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser
85 90 95
Leu His Cys Asp Pro Ser Pro Arg Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Thr
100 105 110
Leu Phe Thr Cys Ser Cys Gly Thr Asp Phe Cys Asn Ala Asn Tyr Ser
115 120 125
His Leu Pro Pro Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Gln Gly Pro
130 135 140
Gln Ala Ala Pro Gly Glu Ser Ile Trp Met Ala Leu Thr Gly Gly Gly
145 150 155 160
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
165 170 175
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
180 185 190
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
195 200 205
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
210 215 220
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
225 230 235 240
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
245 250 255
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
260 265 270
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
275 280 285
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
290 295 300
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
305 310 315 320
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
325 330 335
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
340 345 350
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
355 360 365
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
370 375 380
Lys
385
<210> 458
<211> 361
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 458
Pro Pro Asn Arg Arg Thr Cys Val Phe Phe Glu Ala Pro Gly Val Arg
1 5 10 15
Gly Ser Thr Lys Thr Leu Gly Glu Leu Leu Asp Thr Gly Thr Glu Leu
20 25 30
Pro Arg Ala Ile Arg Cys Leu Tyr Ser Arg Cys Cys Phe Gly Ile Trp
35 40 45
Asn Leu Thr Gln Asp Arg Ala Gln Val Glu Met Gln Gly Cys Arg Asp
50 55 60
Ser Asp Glu Pro Gly Cys Glu Ser Leu His Cys Asp Pro Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ala His Pro Ser Pro Gly Ser Thr Leu Phe Thr Cys Ser Cys Gly Thr
85 90 95
Asp Phe Cys Asn Ala Asn Tyr Ser His Leu Pro Pro Pro Gly Ser Pro
100 105 110
Gly Thr Pro Gly Ser Gln Gly Pro Gln Ala Ala Pro Gly Glu Ser Ile
115 120 125
Trp Met Ala Leu Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
130 135 140
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
145 150 155 160
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
165 170 175
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
180 185 190
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
195 200 205
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
210 215 220
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
225 230 235 240
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
245 250 255
Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
260 265 270
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro
275 280 285
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
290 295 300
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
305 310 315 320
Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
325 330 335
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
340 345 350
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360
<210> 459
<211> 390
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 459
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys
20 25 30
Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys
35 40 45
Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp
50 55 60
Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu
65 70 75 80
Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn
85 90 95
Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp
100 105 110
Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys
115 120 125
Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu
130 135 140
Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro
145 150 155 160
Asp Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
165 170 175
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
180 185 190
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
195 200 205
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
210 215 220
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
225 230 235 240
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
245 250 255
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
260 265 270
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
275 280 285
Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
290 295 300
Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
305 310 315 320
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
325 330 335
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys
340 345 350
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
355 360 365
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
370 375 380
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 460
<211> 366
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 460
Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val
1 5 10 15
Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys
20 25 30
Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn
35 40 45
Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala
50 55 60
Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His
65 70 75 80
Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser
85 90 95
Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe
100 105 110
Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser
115 120 125
Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Thr Gly Gly Gly Thr His Thr
130 135 140
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
145 150 155 160
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
165 170 175
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
180 185 190
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
195 200 205
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
210 215 220
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
225 230 235 240
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
245 250 255
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
260 265 270
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
275 280 285
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
290 295 300
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
305 310 315 320
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
325 330 335
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
340 345 350
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360 365
<210> 461
<211> 415
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 461
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys
20 25 30
Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Asp Glu Ile Ile Cys Pro Ser
35 40 45
Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu Arg His Ile Asn Asn Asp Met Ile
50 55 60
Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe
65 70 75 80
Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser
85 90 95
Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val
100 105 110
Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys
115 120 125
His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala
130 135 140
Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe
145 150 155 160
Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe
165 170 175
Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Thr Gly Gly Gly Thr His
180 185 190
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
195 200 205
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
210 215 220
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
225 230 235 240
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
245 250 255
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
260 265 270
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
275 280 285
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
290 295 300
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro
305 310 315 320
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala
325 330 335
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
340 345 350
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
355 360 365
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
370 375 380
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
385 390 395 400
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
405 410 415
<210> 462
<211> 391
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 462
Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln
1 5 10 15
Lys Asp Glu Ile Ile Cys Pro Ser Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu
20 25 30
Arg His Ile Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val
35 40 45
Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys
50 55 60
Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys
65 70 75 80
Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu
85 90 95
Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His
100 105 110
Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu
115 120 125
Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp
130 135 140
Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn
145 150 155 160
Pro Asp Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
165 170 175
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
180 185 190
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
195 200 205
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
210 215 220
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
225 230 235 240
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
245 250 255
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
260 265 270
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
275 280 285
Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
290 295 300
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
305 310 315 320
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
325 330 335
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser
340 345 350
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
355 360 365
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
370 375 380
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
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<211> 352
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 463
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Asp Pro Val Lys Pro Ser Arg Gly
20 25 30
Pro Leu Val Thr Cys Thr Cys Glu Ser Pro His Cys Lys Gly Pro Thr
35 40 45
Cys Arg Gly Ala Trp Cys Thr Val Val Leu Val Arg Glu Glu Gly Arg
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65 70 75 80
Arg Gly Arg Pro Thr Glu Phe Val Asn His Tyr Cys Cys Asp Ser His
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Leu Cys Asn His Asn Val Ser Leu Val Leu Glu Ala Thr Gln Pro Pro
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His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
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Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
145 150 155 160
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
165 170 175
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
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Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
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Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 464
Asp Pro Val Lys Pro Ser Arg Gly Pro Leu Val Thr Cys Thr Cys Glu
1 5 10 15
Ser Pro His Cys Lys Gly Pro Thr Cys Arg Gly Ala Trp Cys Thr Val
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Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
195 200 205
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225 230 235 240
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
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Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
260 265 270
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275 280 285
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Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
305 310 315 320
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 465
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Met Glu Asp Glu Lys Pro Lys Val
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Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
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Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
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Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
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Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
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Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
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Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
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Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
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Ser Pro Gly Lys
355
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<211> 332
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 466
Met Glu Asp Glu Lys Pro Lys Val Asn Pro Lys Leu Tyr Met Cys Val
1 5 10 15
Cys Glu Gly Leu Ser Cys Gly Asn Glu Asp His Cys Glu Gly Gln Gln
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Cys Phe Ser Ser Leu Ser Ile Asn Asp Gly Phe His Val Tyr Gln Lys
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Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
195 200 205
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
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Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg
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Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
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Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
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Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 467
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Gln Asn Leu Asp Ser Met Leu His
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Gly Pro Phe Phe Asp Gly Ser Ile Arg Thr Gly Gly Gly Thr His Thr
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
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Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
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Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
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Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 468
Gly Ala Gln Asn Leu Asp Ser Met Leu His Gly Thr Gly Met Lys Ser
1 5 10 15
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 469
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Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
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Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
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245 250 255
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260 265 270
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340 345 350
Ser Pro Gly Lys
355
<210> 470
<211> 332
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 470
Ser Gly Pro Arg Gly Val Gln Ala Leu Leu Cys Ala Cys Thr Ser Cys
1 5 10 15
Leu Gln Ala Asn Tyr Thr Cys Glu Thr Asp Gly Ala Cys Met Val Ser
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Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 471
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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340 345 350
Lys
<210> 472
<211> 329
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 472
Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys
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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<210> 473
<211> 366
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 473
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
165 170 175
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
180 185 190
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
195 200 205
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
210 215 220
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
225 230 235 240
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
245 250 255
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
260 265 270
Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
275 280 285
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
290 295 300
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
305 310 315 320
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
325 330 335
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
340 345 350
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360 365
<210> 474
<211> 342
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 474
Lys Lys Glu Asp Gly Glu Ser Thr Ala Pro Thr Pro Arg Pro Lys Val
1 5 10 15
Leu Arg Cys Lys Cys His His His Cys Pro Glu Asp Ser Val Asn Asn
20 25 30
Ile Cys Ser Thr Asp Gly Tyr Cys Phe Thr Met Ile Glu Glu Asp Asp
35 40 45
Ser Gly Leu Pro Val Val Thr Ser Gly Cys Leu Gly Leu Glu Gly Ser
50 55 60
Asp Phe Gln Cys Arg Asp Thr Pro Ile Pro His Gln Arg Arg Ser Ile
65 70 75 80
Glu Cys Cys Thr Glu Arg Asn Glu Cys Asn Lys Asp Leu His Pro Thr
85 90 95
Leu Pro Pro Leu Lys Asn Arg Asp Phe Val Asp Gly Pro Ile His His
100 105 110
Arg Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
115 120 125
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
130 135 140
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
145 150 155 160
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
165 170 175
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
180 185 190
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
195 200 205
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
210 215 220
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
225 230 235 240
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
245 250 255
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
260 265 270
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
275 280 285
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
290 295 300
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
305 310 315 320
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
325 330 335
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 475
<211> 342
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 475
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu
20 25 30
Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala
35 40 45
Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
50 55 60
Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn
65 70 75 80
Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr
85 90 95
Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met
100 105 110
Glu Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
115 120 125
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
130 135 140
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
145 150 155 160
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
165 170 175
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
180 185 190
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
195 200 205
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
210 215 220
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
225 230 235 240
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
245 250 255
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
260 265 270
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
275 280 285
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
290 295 300
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
305 310 315 320
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
325 330 335
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 476
<211> 318
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 476
Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys
20 25 30
Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln
35 40 45
Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe
50 55 60
Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro
65 70 75 80
Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met Glu Thr Gly Gly Gly Thr His Thr
85 90 95
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
115 120 125
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
130 135 140
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
145 150 155 160
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
165 170 175
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
180 185 190
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
195 200 205
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
210 215 220
Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
225 230 235 240
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
245 250 255
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
260 265 270
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
275 280 285
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
290 295 300
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
305 310 315
<210> 477
<400> 477
000
<210> 478
<400> 478
000
<210> 479
<400> 479
000
<210> 480
<400> 480
000
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<400> 481
000
<210> 482
<400> 482
000
<210> 483
<400> 483
000
<210> 484
<400> 484
000
<210> 485
<400> 485
000
<210> 486
<400> 486
000
<210> 487
<400> 487
000
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<400> 488
000
<210> 489
<400> 489
000
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<400> 490
000
<210> 491
<400> 491
000
<210> 492
<400> 492
000
<210> 493
<400> 493
000
<210> 494
<400> 494
000
<210> 495
<400> 495
000
<210> 496
<400> 496
000
<210> 497
<400> 497
000
<210> 498
<400> 498
000
<210> 499
<400> 499
000
<210> 500
<211> 116
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 500
Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn
1 5 10 15
Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly
20 25 30
Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser
35 40 45
Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn
50 55 60
Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr
85 90 95
Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro
100 105 110
Lys Pro Pro Thr
115
<210> 501
<211> 150
<212> PRT
<213> Rattus sp.
<400> 501
Met Thr Ala Pro Trp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Pro
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Pro Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser
145 150
<210> 502
<211> 150
<212> PRT
<213> Sus sp.
<400> 502
Met Thr Ala Pro Trp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Val Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser
145 150
<210> 503
<211> 150
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 503
Met Thr Ala Pro Trp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Pro Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser
145 150
<210> 504
<211> 150
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 504
Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser
145 150
<210> 505
<211> 150
<212> PRT
<213> Bos sp.
<400> 505
Met Thr Ala Pro Trp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Arg Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Val Gly Gly Leu Ser
145 150
<210> 506
<211> 150
<212> PRT
<213> Xenopus sp.
<400> 506
Met Gly Ala Ser Val Ala Leu Thr Phe Leu Leu Leu Leu Ala Thr Phe
1 5 10 15
Arg Ala Gly Ser Gly His Asp Glu Val Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr
20 25 30
Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Lys Thr Asn Gln Ser Gly Val Glu
35 40 45
Arg Leu Val Glu Gly Lys Lys Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser
50 55 60
Trp Arg Asn Asn Ser Gly Phe Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp
65 70 75 80
Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Ile Ala Lys Glu
85 90 95
Glu Asn Pro Gln Val Phe Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Tyr Cys Asn
100 105 110
Lys Lys Phe Thr His Leu Pro Glu Val Glu Thr Phe Asp Pro Lys Pro
115 120 125
Gln Pro Ser Ala Ser Val Leu Asn Ile Leu Ile Tyr Ser Leu Leu Pro
130 135 140
Ile Val Gly Leu Ser Met
145 150
<210> 507
<211> 150
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 507
Met Gly Ala Ala Ala Lys Leu Ala Phe Ala Val Phe Leu Ile Ser Cys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe
20 25 30
Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu
35 40 45
Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp
50 55 60
Lys Asn Ile Ser Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu
65 70 75 80
Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp
85 90 95
Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu
100 105 110
Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn
115 120 125
Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Tyr Tyr Asn Ile Leu Leu Tyr Ser Leu
130 135 140
Val Pro Leu Met Leu Ile
145 150
<210> 508
<211> 154
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
consensus polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Thr, Ala or not present
<220>
<221> MOD_RES
<222> (121)..(121)
<223> Pro, Ala, Val or Met
<400> 508
Met Thr Ala Pro Trp Ala Ala Xaa Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu
1 5 10 15
Cys Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr
20 25 30
Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu
35 40 45
Arg Leu Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser
50 55 60
Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp
65 70 75 80
Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu
85 90 95
Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn
100 105 110
Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Xaa Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr
115 120 125
Glu Pro Lys Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr
130 135 140
Ser Leu Leu Pro Ile Gly Gly Leu Ser Met
145 150
<210> 509
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
6xHis tag
<400> 509
His His His His His His
1 5
Claims (496)
- TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드, 임의선택적으로 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체의 세포외 도메인, 그리고 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드, 임의선택적으로 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체의 세포외 도메인을 포함하는 재조합 이형다합체 복합체, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK1, ALK2, ALK3, ALK4, ALK5, ALK6, 및 ALK7에서 선택되며, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIA, ActRIIB, TGFBRII, BMPRII, 및 MISRII에서 선택되는 재조합 이형다합체 복합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK1 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIA 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK2 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIA 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK3 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIA 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK4 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIA 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK5 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIA 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK6 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIA 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK7 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIA 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK1 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIB 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK2 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIB 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK3 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIB 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK4 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIB 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK5 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIB 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK6 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIB 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK7 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIB 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK1 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 TGFBRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK2 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 TGFBRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK3 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 TGFBRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK4 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 TGFBRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK5 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 TGFBRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK6 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 TGFBRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK7 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 TGFBRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK1 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 BMPRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK2 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 BMPRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK3 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 BMPRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK4 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 BMPRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK5 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 BMPRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK6 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 BMPRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK7 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 BMPRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK1 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 MISRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK2 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 MISRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK3 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 MISRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK4 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 MISRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK5 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 MISRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK6 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 MISRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK7 폴리펩티드이고, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 MISRII 폴리펩티드인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 2, 9, 16, 23, 또는 30중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 15의 서열과 비교하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 2, 9, 16, 23, 또는 30중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 3, 10, 17, 24, 또는 31중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 19의 서열과 비교하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 3, 10, 17, 24, 또는 31중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 4, 11, 18, 25, 또는 32중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 31-140과 비교하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 4, 11, 18, 25, 또는 32중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 31-140을 포함하는 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 4, 11, 18, 25, 또는 32중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 23의 서열과 비교하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 4, 11, 18, 25, 또는 32중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 5, 12, 19, 26, 또는 33중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 27, 84, 104, 106, 403, 및 404에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 5, 12, 19, 26, 또는 33중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 27, 84, 104, 106, 403, 및 404에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 6, 13, 20, 27, 또는 34중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 31 또는 88의 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 6, 13, 20, 27, 또는 34중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 31 또는 88의 아미노산 서열을 포함하는 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체
- 청구항 7, 14, 21, 28, 또는 35중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 35 또는 92의 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 7, 14, 21, 28, 또는 35중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 35 또는 92의 아미노산 서열을 포함하는, 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 8, 15, 22, 29, 또는 36중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 39, 112, 114, 302, 306, 310, 313, 405, 및 406에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 8, 15, 22, 29, 또는 36중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 39, 112, 114, 302, 306, 310, 313, 405, 및 406에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 2-8중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 10 또는 11에서 선택된 서열과 비교하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 2-8중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 10 또는 11에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 9-15중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 2, 3, 5, 6, 100, 102, 401, 및 402에서 선택된 서열과 비교하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 9-15중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 2, 3, 5, 또는 6에서 선택된 서열과 비교하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열 번호: 1의 L79에 대응하는 위치는 산성 아미노산 (가령, D 또는 E 아미노산 잔기)인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 9-15중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는서열 번호: 2, 3, 5, 6, 100, 102, 401, 및 402에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 9-15중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 2, 3, 5, 또는 6에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 이로 구성된 또는 필수적으로 구성되며, 이때 서열 번호: 1의 L79에 대응하는 위치는 산성 아미노산 (가령, D 또는 E 아미노산 잔기)인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 9-15중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호:1의 아미노산 29-100에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 9-15중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호:1의 아미노산 29-109에 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열이고, 이때 서열 번호: 1의 L79에 대응하는 위치는 산성 아미노산 (가령, D 또는 E 아미노산 잔기)인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 9-15중 어느 한 항에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호:1의 아미노산 25-131에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 9-15중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호:1의 아미노산 25-131에 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열이고, , 이때 서열 번호: 1의 L79에 대응하는 위치는 산성 아미노산 (가령, D 또는 E 아미노산 잔기)인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 16-22중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 43, 68, 129, 또는 416의 서열과 비교하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 16-22중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 43, 68, 129, 또는 416의 아미노산 서열을 포함하는, 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 23-29중 임의의 한 항에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 47, 72, 123, 또는 412의 서열과 비교하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 23-29중 임의의 한 항에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 47, 72, 123, 또는 412의 아미노산 서열을 포함하는, 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 30-36중 임의의 한 항에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 51, 76, 또는 80의 서열과 비교하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 30-36중 임의의 한 항에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 51, 76, 또는 80의 아미노산 서열로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1-68중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 복합체는 이형이합체인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1-69중 임의의 어느 한 항에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인은 상호작용 쌍의 최소한 하나의 이종성 부분, 제 1 또는 제 2 구성요소를 더 포함하는 융합 단백질인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1-70중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인은 상호작용 쌍의 최소한 하나의 이종성 부분, 제 1 또는 제 2 구성요소를 더 포함하는 융합 단백질인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 70 또는 71에 있어서, 이때 상기 이종성 부분은 IgG 중쇄의 불변영역을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 72에 있어서, 이때 IgG 중쇄의 불변 영역은 면역글로불린 Fc 도메인인, 재조합 이형다합체.
- 청구항 72 또는 73에 있어서, 이때 이종성 부분은 서열 번호: 200-212중 임의의 하나에서 선택된 서열에 대하여 최소한 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 73에 있어서, 이때 상기 면역글로불린 Fc 도메인은 서열 번호: 200-212중 임의의 하나에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 이로 구성된 또는 필수적으로 구성된, 재조합 이형다합체.
- 청구항 73-75중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 면역글로불린 Fc 도메인은 이형이합체 형성을 촉진시키는 하나 또는 그 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 73-76중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 면역글로불린 Fc 도메인은 이형이합체 형성을 억제시키는 하나 또는 그 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1-77중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인은 당화된 아미노산, 페길화된(PEGylated) 아미노산, 파르네실화된 아미노산, 아세틸화된 아미노산, 바이오티닐화된 아미노산, 지질 모이어티에 접합된 아미노산, 그리고 유기 유도화된 물질에 접합된 아미노산에서 선택된 하나 또는 그 이상의 변형된 아미노산 잔기를 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1-78중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드의 세포외 도메인은 당화된 아미노산, 페길화된(PEGylated) 아미노산, 파르네실화된 아미노산, 아세틸화된 아미노산, 바이오티닐화된 아미노산, 지질 모이어티에 접합된 아미노산, 그리고 유기 유도화된 물질에 접합된 아미노산에서 선택된 하나 또는 그 이상의 변형된 아미노산 잔기를 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 78에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 수용체 폴리펩티드는 당화되며, CHO 세포 안에서 유형 I 수용체 폴리펩티드의 발현으로부터 획득가능한 당화 패턴을 갖는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 79에 있어서, 이때 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 II 수용체 폴리펩티드는 당화되며, CHO 세포 안에서 유형 I 수용체 폴리펩티드의 발현으로부터 획득가능한 당화 패턴을 갖는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 1-81중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 이형다합체 복합체는 다음의 특징중 하나 또는 그 이상을 갖는, 재조합 이형다합체:
i) 최소한 10-7 M의 KD으로 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드에 결합하고; 그리고
ii) 세포에서 TGFβ 슈퍼패밀리 유형 I 및/또는 유형 II 수용체-매개된 신호생성 유도를 억제한다. - 청구항 1-82중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 이형다합체 복합체는 BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty중 하나 또는 그 이상에 결합하는, 이형다합체 복합체.
- 청구항 1-83중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 이형다합체 복합체는 세포-기반 분석에서 하나 또는 그 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 활성을 억제하는, 이형다합체 복합체.
- 청구항 84에 있어서, 이때 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 BMP2, BMP2/7, BMP3, BMP4, BMP4/7, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP9, BMP10, GDF3, GDF5, GDF6/BMP13, GDF7, GDF8, GDF9b/BMP15, GDF11/BMP11, GDF15/MIC1, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 액티빈 A, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 E, 액티빈 AB, 액티빈 AC, 액티빈 AE, 액티빈 BC, 액티빈 BE, nodal, 신경아교세포-유도된 신경영양성 인자 (GDNF), 뉴르투린, 아르테민, 페르세핀, MIS, 및 Lefty에서 선택되는, 이형다합체 복합체.
- 청구항 1-85중 임의의 한 항에 따른 이형다합체와 약학으로 수용가능한 운반체를 포함하는 약학 제재.
- 청구항 1-85중 임의의 한 항에 따른 이형다합체의 효과량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 근육 소실 또는 불충분한 근육 성장과 연합된 장애를 가진 환자를 치료하는 방법.
- 청구항 87에 있어서, 이때 환자는 근육 위축을 갖고 있는, 방법.
- 청구항 87에 있어서, 이때 상기 환자는 근위축병을 갖고 있는, 방법.
- 청구항 89에 있어서, 이때 근위축병은 듀시엔 근위축병인, 방법.
- 청구항 90에 있어서, 이때 상기 환자는 청소년이며, 듀시엔 근위축병으로 진단받은 1 내지 5년 이내에 치료를 시작하는 방법.
- 청구항 89에 있어서, 이때 근위축병은 안면견갑상완형(facioscapulohumeral) 근위축병인, 방법.
- 청구항 87에 있어서, 이때 상기 환자는 근위축성 측색 경화증을 갖고 있는, 방법.
- 청구항 93에 있어서, 이때 상기 환자는 근위축성 측색 경화증으로 진단을 받은 후 치료를 받는, 방법.
- 청구항 87에 있어서, 이때 상기 장애는 암 또는 암 요법과 연합된 악액질인, 방법.
- 청구항 1-85중 임의의 한 항에 따른 이형다합체의 효과량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 신경퇴행과 연합된 장애를 가진 환자를 치료하는 방법.
- 청구항 96에 있어서, 이때 상기 장애는 근위축성 측색 경화증인 방법.
- 청구항 1-85중 임의의 한 항에 따른 이형다합체의 효과량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 대상에서 체지방 함량 감소 또는 체지방 함량 증가 속도를 감소시키는 방법.
- 청구항 1-85중 임의의 한 항에 따른 이형다합체의 효과량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 대상에서 바람직하지 못한 체중 증가와 연합된 장애를 치료하는 방법.
- 청구항 99에 있어서, 이때 전술한 장애는 비만, 비-인슐린 의존성 진성 당뇨병 (NIDDM), 심혈관 질환, 고혈압, 골관절염, 뇌졸중, 호흡기 질환 및 담낭 질환에서 선택된, 방법.
- 청구항 1-85중 임의의 한 항에 따른 이형다합체의 효과량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 환자의 콜레스테롤 및/또는 트리글리세리드들을 감소시키는 방법.
- 청구항 1-85중 임의의 한 항에 따른 이형다합체의 효과량을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 금육감소증 치료 방법.
- ALK1 폴리펩티드와 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 103에 있어서에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호:9 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 103에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 21-135에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 103에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 9의 아미노산 21-30 중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 9의 아미노산 110-135중 임의의 하나 (가령, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 103-106중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 103-106중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 103-106중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14의 아미노산 22-118에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 103-106중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 14의 아미노산 22-34중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고, 그리고 b) 서열 번호: 14의 아미노산 95-118중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 87, 96, 88, 89, 90, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 및 118)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 103-106중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK2 폴리펩티드와 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 112에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 112에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 21-35에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 112에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 9의 아미노산 21-30 중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 9의 아미노산 110-135중 임의의 하나 (가령, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 112-115중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 112-115중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 112-115중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18 아미노산 21-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 112-115중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는
서열 번호:18의 아미노산 21-35중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 및 35)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:18의 아미노산 99-123중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 및 123)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 112-115중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK3 폴리펩티드와 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 121에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 121에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 21-135에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 121에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 9의 아미노산 21-30 중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 9의 아미노산 110-135중 임의의 하나 (가령, 110, 111, 121, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 121-124중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 121-124중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 121-124중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 24-152에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 121-124중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는
서열 번호:22의 아미노산 24-61중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 및 61)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호 22의 아미노산 130-152중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 및 152)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 121-124중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK4 폴리펩티드와 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 130에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 130에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 21-135에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 130에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 9의 아미노산 21-30 중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 9의 아미노산 110-135중 임의의 하나 (가령, 110, 111, 130, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 130-133중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 130-133중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 130-133중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 130-133중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 101-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 130-133중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK5 폴리펩티드와 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 139에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 139에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 21-135에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 139에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 9의 아미노산 21-30 중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 9의 아미노산 110-135중 임의의 하나 (가령, 110, 111, 139, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 139-142중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 139-142, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 139-142중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 25-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 139-142중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는
서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 25-36중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 및 36)에서 시작하고, 그리고및
b) 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 106-126중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 139-142중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK6 폴리펩티드와 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 148에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 148에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 21-135에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 148에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 9의 아미노산 21-30 중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 9의 아미노산 110-135중 임의의 하나 (가령, 110, 111, 148, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 148-151중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 148-151중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 148-151중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34의 아미노산 14-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 148-151중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:34의 아미노산 102-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 148-151, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 148-151중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 91의 아미노산 62-132에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 148-151중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 91의 아미노산 26-156에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 148-151중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:34의 아미노산 102-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - ALK7 폴리펩티드와 ActRIIA 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 160에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 30-110에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 160에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9의 아미노산 21-135에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 160에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 9의 아미노산 21-30 중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30)에서 시작하고, 그리고 b) 서열 번호: 9의 아미노산 110-135중 임의의 하나 (가령, 110, 111, 160, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 160-163중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 서열 번호: 9, 10, 11, 118, 120, 151, 152, 409, 410, 451, 및 452중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 160-163중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 160-163중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 21-133에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 160-163중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 21-28중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 및 28)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 92-133중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 및 133)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 160-163중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK1 폴리펩티드와 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 169에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 169에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 169에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 1의 아미노산 20-29 중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 1의 아미노산 109-134중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 172에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 169-172중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 169-172중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14의 아미노산 22-118에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 169-172중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 14의 아미노산 22-34중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고, 그리고 b) 서열 번호: 14의 아미노산 95-118중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 87, 96, 88, 89, 90, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 및 118)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 169-172중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK2 폴리펩티드와 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 178에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 178에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 178에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 1의 아미노산 20-29 중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29)에서 시작하고, 그리고b) 서열 번호: 1의 아미노산 109-134중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 178에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 178-182중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 178-182중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 21-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 178-182중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는
서열 번호:18의 아미노산 21-35중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 및 35)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:18의 아미노산 99-123중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 및 123)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 178-182중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK3 폴리펩티드와 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 187에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 187에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 187에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 1의 아미노산 20-29 중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 1의 아미노산 109-134중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 187중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 187-190중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 187-190중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 24-152에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 187-190중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는
서열 번호:22의 아미노산 24-61중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 및 61)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호 22의 아미노산 130-152중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 및 152)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 187-190중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK4 폴리펩티드와 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 196에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 196에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 196에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 1의 아미노산 20-29 중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 1의 아미노산 109-134중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 196에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 196-200중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 130-133중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 196-200중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 101-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 196-200중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK5 폴리펩티드와 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 205에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 205에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 205에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 1의 아미노산 20-29 중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 1의 아미노산 109-134중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 205에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 205-209중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 205-209중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 25-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 205-209중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는
서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 25-36중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 및 36)에서 시작하고, 그리고및
b) 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 106-126중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 205-209중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK6 폴리펩티드와 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 214에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 214에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 214에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 1의 아미노산 20-29 중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 1의 아미노산 109-134중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 214에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 214-218중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 214-218중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34의 아미노산 12-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 214-218중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:34의 아미노산 102-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 214-218중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 214-218중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 91의 아미노산 62-132에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 214-218중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 91의 아미노산 26-156에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 214-218중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:34의 아미노산 102-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - ALK7 폴리펩티드와 ActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 226에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 29-109에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 226에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1의 아미노산 25-131에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 226에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 1의 아미노산 20-29 중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 1의 아미노산 109-134중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 226에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 100, 102, 153, 154, 401, 402, 453, 및 454중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 226-230중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체
- 청구항 226-230중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 226-230중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 21-28중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 및 28)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 92-133중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 및 133)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 226-230중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK1 폴리펩티드와 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 235에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 235에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-150에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 235에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고,
b) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 123-150중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 및 150)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 235에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 235-239중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14중 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 235-239중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14의 아미노산 22-118에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 235-239중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 14의 아미노산 22-34중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고, 그리고 b) 서열 번호: 14의 아미노산 95-118중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 87, 96, 88, 89, 90, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 및 118)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 235-239중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK2 폴리펩티드와 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 244에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 244에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-150에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 244에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고,
b) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 123-150중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 및 150)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 244에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 244-248중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 244-248중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18의 아미노산 21-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 244-248중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는
서열 번호:18의 아미노산 21-35중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 및 35)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:18의 아미노산 99-123중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 및 123)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 244-248중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK3 폴리펩티드와 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 253에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 253에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-150에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 253에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고,
b) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 123-150중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 및 150)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 253에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 253-257중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 253-257중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 24-152에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 253-257중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는
서열 번호:22의 아미노산 24-61중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 및 61)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호 22의 아미노산 130-152중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 및 152)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 253-257중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK4 폴리펩티드와 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 262에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 262에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-150에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 262에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고, 그리고
b) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 123-150중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 및 150)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 262에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 262-266중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 262-266중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 262-266중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 101-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 262-266중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK5 폴리펩티드와 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 271에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 271에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 271에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고, 그리고
b) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 123-150중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 및 150)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 271에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 271-275중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 271-275중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 25-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 271-275중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는
서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 25-36중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 및 36)에서 시작하고, 그리고및
b) 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 106-126중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 271-275중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK6 폴리펩티드와 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 280에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 280에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-150에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 280에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고, 그리고
b) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 123-150중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 및 150)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 280에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 280-284중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 280-284중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34의 아미노산 14-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 280-284중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:34의 아미노산 102-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 280-284중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 280-284중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 91의 아미노산 62-132에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 280-284중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 91의 아미노산 26-156에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 280-284중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:34의 아미노산 102-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - ALK7 폴리펩티드와 BMPRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 280에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 34-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 292에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-150에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 292에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 27-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고, 그리고
b) 서열 번호: 46 또는 71의 아미노산 123-150중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 및 150)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 292에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 서열 번호: 46, 47, 71, 72, 121, 123, 155, 156, 411, 412, 455, 및 456중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 292-296중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 292-29중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 21-133에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 292-296중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 21-28중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 및 28)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 92-133중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 및 133)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 292-296중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK1 폴리펩티드와 TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 301에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 44-163에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 301에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 23-191에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 301에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 301에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 301에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 23-166에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 301에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 301중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 301-308중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 301-308중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14의 아미노산 22-118에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 301-308중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 14의 아미노산 22-34중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고, 그리고 b) 서열 번호: 14의 아미노산 95-118중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 87, 96, 88, 89, 90, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 및 118)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 301-308중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK2 폴리펩티드와 TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 313에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 44-163에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 313에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 23-191에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 313에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 313에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 313에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 23-166에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 313에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 313중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 313-320중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 313-320중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18의 아미노산 21-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 313-320중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는
서열 번호:18의 아미노산 21-35중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 및 35)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:18의 아미노산 313-320중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 및 123)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 313-320중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK3 폴리펩티드와 TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 325에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 325에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 23-191에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 325에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 325에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 325에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 23-166에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 325에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 325중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체
- 청구항 325-332중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 325-332중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 24-152에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 325-332중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는
서열 번호:22의 아미노산 24-61중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 및 61)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호 22의 아미노산 130-152중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 및 152)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 325-332중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK4 폴리펩티드와 TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 337에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 44-163에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 337에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 23-191에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 337에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 337에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체
- 청구항 337에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 23-166에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 337에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 337중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 337-344중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 337-345중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 337-345중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 101-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 337-345중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK5 폴리펩티드와 TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 349에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 44-163에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 350에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 23-191에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 350에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 350에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 350에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 23-166에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 350에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 350중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 350-356중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 350-357중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 350-357중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는
서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 25-36중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 및 36)에서 시작하고, 그리고및
b) 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 106-126중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 350-357중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK6 폴리펩티드와 TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 361에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는서열 번호: 67의 아미노산 44-163에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 362에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 23-191에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 362에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 362에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 362에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 23-166에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 362에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 362중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 362-368중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 362-369중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34의 아미노산 14-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 362-369중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:34의 아미노산 102-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 362-369중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 362-369중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 91의 아미노산 62-132에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 362-369중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 91의 아미노산 26-156에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 362-369중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:34의 아미노산 102-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - ALK7 폴리펩티드와 TGFBRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 376에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 23-166에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 377에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 67의 아미노산 23-191에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 377에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 377에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 51-143에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 377에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42의 아미노산 23-166에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 377에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호:67의 아미노산 23-44중 임의의 하나 (가령, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 또는 44)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 67의 아미노산 163-191중 임의의 하나 (가령, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190 또는 191)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 377중 임의의 한 항에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 서열 번호: 42, 43, 67, 68, 127, 129, 130, 132, 157, 158, 159, 160, 415, 416, 417, 418, 459, 460, 461, 및 462중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 377-383중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 377-384중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 377-384중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 21-28중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 및 28)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 92-133중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 및 133)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 377-384중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK1 폴리펩티드와 MISRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 388에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 389에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-149에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 389에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-24중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 및 24)에서 시작하고,
b) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 116-149중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 및 149)에서 끝나는 폴리펩티드에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 이형다합체. - 청구항 389중 임의의 한 항에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 389-392중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14의 아미노산 34-95에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 389-393중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14의 아미노산 22-118에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 389-394중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 a) 서열 번호: 14의 아미노산 22-34중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 및 34)에서 시작되고, 그리고 b) 서열 번호: 14의 아미노산 95-118중 임의의 아미노산 (가령, 아미노산 잔기 87, 96, 88, 89, 90, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 및 118)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 389-394중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 서열 번호: 14, 15, 124, 126, 171, 172, 413, 414, 463, 및 464중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK2 폴리펩티드와 MISRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 397에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 398에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-149에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 398에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-24중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 및 24)에서 시작하고,
b) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 116-149중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 및 149)에서 끝나는 폴리펩티드에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 이형다합체. - 청구항 398중 임의의 한 항에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 398-401중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18의 아미노산 35-99에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 398-402중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18의 아미노산 21-123에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 398-402중 임의의 한 항에 있어서, 405. 청구항 313-320중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는
서열 번호:18의 아미노산 21-35중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 및 35)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:18의 아미노산 99-123중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 및 123)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 398-402중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 서열 번호: 18, 19, 136, 138, 173, 174, 421, 422, 465, 및 466중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK3 폴리펩티드와 MISRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 406에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 407에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-149에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 407에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-24중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 및 24)에서 시작하고,
b) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 116-149중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 및 149)에서 끝나는 폴리펩티드에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 이형다합체. - 청구항 407중 임의의 한 항에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 407-410중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 61-130에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 407-411중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22의 아미노산 24-152에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 407-411중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는
서열 번호:22의 아미노산 24-61중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 및 61)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호 22의 아미노산 130-152중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 및 152)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 407-411중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 서열 번호: 22, 23, 115, 117, 175, 176, 407, 408, 467, 및 468중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK4 폴리펩티드와 MISRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 415에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 416에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-149에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 416에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-24중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 및 24)에서 시작하고,
b) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 116-149중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 및 149)에서 끝나는 폴리펩티드에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 이형다합체. - 청구항 416중 임의의 한 항에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 416-419중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 416-420중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 416-420중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 23-34중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 101-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 416-420중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 서열 번호: 26, 27, 83, 84, 104, 106, 177, 178, 403, 404, 469, 및 470중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK5 폴리펩티드와 MISRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 424에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 425에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-149에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 425에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-24중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 및 24)에서 시작하고,
b) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 116-149중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 및 149)에서 끝나는 폴리펩티드에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 이형다합체. - 청구항 425중 임의의 한 항에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 425-428중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 36-106에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 425-429중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 25-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 425-429중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는
서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 25-36중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 및 36)에서 시작하고, 그리고및
b) 서열 번호: 30 또는 87의 아미노산 106-126중 임의의 하나(가령, 아미노산 잔기 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 425-429중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 서열 번호: 30, 31, 87, 88, 139, 141, 179, 180, 423, 424, 471, 및 472중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK6 폴리펩티드와 MISRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 433에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 434에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-149에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 434에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-24중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 및 24)에서 시작하고,
b) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 116-149중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 및 149)에서 끝나는 폴리펩티드에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 이형다합체. - 청구항 434중 임의의 한 항에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 280-284중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34의 아미노산 32-102에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 434-438중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34의 아미노산 14-126에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 434-439중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호:34의 아미노산 102-126중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 434-439중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 34, 35, 91, 92, 142, 144, 181, 182, 425, 426, 473, 및 474중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 434-439중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 91의 아미노산 62-132에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 434-439중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 서열 번호: 91의 아미노산 26-156에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 434-439중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 34의 아미노산 14-32 (가령, 아미노산 잔기 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 및 32)중 임의의 하나에서 시작하고,
b) 서열 번호: 34의 아미노산 102-126 (가령, 아미노산 잔기 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126)에서 종료되는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 재조합 이형다합체. - ALK7 폴리펩티드와 MISRII 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체.
- 청구항 445에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 24-116에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 446에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-149에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 446에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 17-24중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 및 24)에서 시작하고,
b) 서열 번호: 50, 75, 또는 79의 아미노산 116-149중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 및 149)에서 끝나는 폴리펩티드에 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 이형다합체. - 청구항 446중 임의의 한 항에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 서열 번호: 50, 51, 75, 76, 79, 80, 133, 135, 161, 162, 419, 420, 457, 및 458중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 446-449중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 28-92에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 446-450중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 21-133에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 446-450중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는
a) 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 21-28중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 및 28)에서 시작하고, 그리고
b) 서열 번호: 38, 305, 또는 309의 아미노산 92-133중 임의의 하나 (가령, 아미노산 잔기 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 및 133)에서 끝나는 폴리펩티드에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체. - 청구항 446-450중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ALK7 폴리펩티드는 서열 번호: 38, 39, 301, 302, 305, 306, 309, 310, 313, 112, 114, 183, 184, 405, 406, 475, 및 476중 임의의 하나에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ALK1 폴리펩티드와 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체에 있어서, 이때 상기 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK1 폴리펩티드가 아닌, 재조합 이형다합체.
- 청구항 454에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드는 본 명세서의 ALK1 서열 (가령, 서열 번호: 14의 아미노산 34-95)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 454 또는 455에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK2 폴리펩티드, ALK3 폴리펩티드, ALK4 폴리펩티드, ALK5 폴리펩티드, ALK6 폴리펩티드, 및 ALK7 폴리펩티드로 구성된 군에서 선택되는 재조합 이형다합체.
- 청구항 456에 있어서, 이때 ALK1 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 다음에서 선택되는, 이형다합체:
a) 본 명세서에서 공개된 ALK2 서열 (가령, 서열 번호: 18의 아미노산 35-99)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK2 폴리펩티드,
b) 본 명세서에서 공개된 ALK3 서열 (가령, 서열 번호:22의 아미노산 61-130)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK3 폴리펩티드,
c) 본 명세서에서 공개된 ALK4 서열 (가령, 서열 번호:26 또는 83의 아미노산 34-101)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK4 폴리펩티드,
d) 본 명세서에서 공개된 ALK5 서열 (가령, 서열 번호:30 또는 87의 아미노산 36-106)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK5 폴리펩티드,
e) 본 명세서에서 공개된 ALK6 서열 (가령, 서열 번호:34의 아미노산 32-102)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK6 폴리펩티드,
f) 본 명세서에서 공개된 ALK7 서열 (가령, 서열 번호:38, 305 또는 309의 아미노산 28-92)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK7 폴리펩티드, - ALK2 폴리펩티드와 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체에 있어서, 이때 상기 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK2 폴리펩티드가 아닌, 재조합 이형다합체.
- 청구항 459에 있어서에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드는 폴리펩티드는 본 명세서의 ALK2 서열 (가령, 서열 번호: 18의 아미노산 35-99)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 458 또는 459에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK3 폴리펩티드, ALK4 폴리펩티드, ALK5 폴리펩티드, ALK6 폴리펩티드, 및 ALK7 폴리펩티드로 구성된 군에서 선택되는 재조합 이형다합체.
- 청구항 460에 있어서, 이때 ALK2 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 다음에서 선택되는, 이형다합체:
a) 본 명세서에서 공개된 ALK3 서열 (가령, 서열 번호:22의 아미노산 61-130)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK3 폴리펩티드,
b) 본 명세서에서 공개된 ALK4 서열 (가령, 서열 번호:26 또는 83의 아미노산 34-101)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK4 폴리펩티드,
c) 본 명세서에서 공개된 ALK5 서열 (가령, 서열 번호:30 또는 87의 아미노산 36-106)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK5 폴리펩티드,
d) 본 명세서에서 공개된 ALK6 서열 (가령, 서열 번호:34의 아미노산 32-102)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK6 폴리펩티드,
e) 본 명세서에서 공개된 ALK7 서열 (가령, 서열 번호:38, 305 또는 309의 아미노산 28-92)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK7 폴리펩티드, - ALK3 폴리펩티드와 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체에 있어서, 이때 상기 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK3 폴리펩티드가 아닌, 재조합 이형다합체.
- 청구항 462에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드는 본 명세서의 ALK3 서열 (가령, 서열 번호:22의 아미노산 61-130)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 462 또는 463에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK4 폴리펩티드, ALK5 폴리펩티드, ALK6 폴리펩티드, 및 ALK7 폴리펩티드로 구성된 군에서 선택되는 재조합 이형다합체
- 청구항 464에 있어서, 이때 ALK3 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 다음에서 선택되는, 이형다합체:
a) 본 명세서에서 공개된 ALK4 서열 (가령, 서열 번호:26 또는 83의 아미노산 34-101)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK4 폴리펩티드,
b) 본 명세서에서 공개된 ALK5 서열 (가령, 서열 번호:30 또는 87의 아미노산 36-106)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK5 폴리펩티드,
c) 본 명세서에서 공개된 ALK6 서열 (가령, 서열 번호:34의 아미노산 32-102)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK6 폴리펩티드,
d) 본 명세서에서 공개된 ALK7 서열 (가령, 서열 번호:38, 305 또는 309의 아미노산 28-92)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK7 폴리펩티드, - ALK4 폴리펩티드와 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체에 있어서, 이때 상기 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK4 폴리펩티드가 아닌, 재조합 이형다합체.
- 청구항 466에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드는 본 명세서의 ALK4 서열 (가령, 서열 번호: 26 또는 83의 아미노산 34-101)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 466 또는 467에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK5 폴리펩티드, ALK6 폴리펩티드, 및 ALK7 폴리펩티드로 구성된 군에서 선택되는 재조합 이형다합체
- 청구항 470에 있어서, 이때 ALK4 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 다음에서 선택되는, 이형다합체:
a) 본 명세서에서 공개된 ALK5 서열 (가령, 서열 번호:30 또는 87의 아미노산 36-106)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK5 폴리펩티드,
b) 본 명세서에서 공개된 ALK6 서열 (가령, 서열 번호:34의 아미노산 32-102)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK6 폴리펩티드,
c) 본 명세서에서 공개된 ALK7 서열 (가령, 서열 번호:38, 305 또는 309의 아미노산 28-92)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK7 폴리펩티드, - ALK4 폴리펩티드와 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체에 있어서, 이때 상기 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK5 폴리펩티드가 아닌, 재조합 이형다합체.
- 청구항 470에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드는 본 명세서의 ALK5 서열 (가령, 서열 번호:30 또는 87의 아미노산 36-106)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 470 또는 471에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK6 폴리펩티드, 및 ALK7 폴리펩티드로 구성된 군에서 선택되는 재조합 이형다합체.
- 청구항 472에 있어서, 이때 ALK5 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 다음에서 선택되는, 이형다합체:
a) 본 명세서에서 공개된 ALK6 서열 (가령, 서열 번호:34의 아미노산 32-102)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK6 폴리펩티드,
b) 본 명세서에서 공개된 ALK7 서열 (가령, 서열 번호:38, 305 또는 309의 아미노산 28-92)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ALK7 폴리펩티드, - ALK6 폴리펩티드와 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체에 있어서, 이때 상기 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK6 폴리펩티드가 아닌, 재조합 이형다합체.
- 청구항 474에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드는 본 명세서의 ALK6 서열 (가령, 서열 번호:34의 아미노산 32-102)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 474 또는 475에 있어서, 이때 ALK6 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 I 수용체 폴리펩티드는 ALK7 폴리펩티드인 재조합 이형다합체.
- 청구항 476에 있어서, ALK7 폴리펩티드는 본 명세서의 ALK7 서열 (가령, 서열 번호:38, 305 또는 309의 아미노산 28-92)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- ActRIIA 폴리펩티드와 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체에서, 이때 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIA 폴리펩티드가 아닌, 재조합 이형다합체.
- 청구항 478에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드는 ActRIIA 서열 (가령, 서열 번호:9의 아미노산 30-110)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 478 또는 479에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIB 폴리펩티드, BMPRII 폴리펩티드, TGFBRII 폴리펩티드, 및 MISRII 폴리펩티드로 구성된 군에서 선택되는 재조합 이형다합체.
- 청구항 480에 있어서, 이때 ActRIIA 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드는 다음에서 선택되는, 이형다합체:
a) 본 명세서에서 공개된 ActRIIB(가령, 서열 번호:1의 아미노산 29-109)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ActRIIB 폴리펩티드,
b) 본 명세서에서 공개된 BMPRII(가령, 서열 번호:47 또는 71의 아미노산 34-123)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 BMPRII 폴리펩티드,
c) 본 명세서에서 공개된 TGFBRII 서열 (가령, 서열 번호:67의 아미노산 44-163)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 TGFBRII 폴리펩티드,
d) 본 명세서에서 공개된 MISRII 서열 (가령, 서열 번호:50, 75 또는 79의 아미노산 24-116)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 MISRII 폴리펩티드. - ActRIIB 폴리펩티드와 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체에서, 이때 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드는 ActRIIB 폴리펩티드가 아닌, 재조합 이형다합체.
- 청구항 482에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드는 ActRIIB 서열 (가령, 서열 번호:1의 아미노산 29-109)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 482 또는 483에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드는 BMPRII 폴리펩티드, TGFBRII 폴리펩티드, 및 MISRII 폴리펩티드로 구성된 군에서 선택되는 재조합 이형다합체.
- 청구항 484에 있어서, 이때 ActRIIB 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드는 다음에서 선택되는, 이형다합체:
b) 본 명세서에서 공개된 BMPRII(가령, 서열 번호:47 또는 71의 아미노산 34-123)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 BMPRII 폴리펩티드,
c) 본 명세서에서 공개된 TGFBRII 서열 (가령, 서열 번호:67의 아미노산 44-163)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 TGFBRII 폴리펩티드,
d) 본 명세서에서 공개된 MISRII 서열 (가령, 서열 번호:50, 75 또는 79의 아미노산 24-116)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 MISRII 폴리펩티드. - BMPRII 폴리펩티드와 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체에서, 이때 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드는 BMPRII 폴리펩티드가 아닌, 재조합 이형다합체.
- 청구항 486에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드는 본 명세서의 BMPRII 서열 (가령, 서열 번호:46 또는 71의 아미노산 34-123)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 486 또는 487에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드는 TGFBRII 폴리펩티드, 및 MISRII 폴리펩티드로 구성된 군에서 선택되는 재조합 이형다합체.
- 청구항 488에 있어서, 이때 BMPRII 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드는 다음에서 선택되는, 이형다합체:
a) 본 명세서에서 공개된 TGFBRII 서열 (가령, 서열 번호:67의 아미노산 44-163)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 TGFBRII 폴리펩티드,
b) 본 명세서에서 공개된 MISRII 서열 (가령, 서열 번호:50, 75 또는 79의 아미노산 24-116)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 MISRII 폴리펩티드. - TGFBRII 폴리펩티드와 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드를 포함하는 재조합 이형다합체에서, 이때 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드는 TGFBRII 폴리펩티드가 아닌, 재조합 이형다합체.
- 청구항 490에 있어서, 이때 TGFBRII 폴리펩티드는 본 명세서의 TGFBRII 서열 (가령, 서열 번호:67의 아미노산 44-163)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 청구항 490 또는 491에 있어서, 이때TGFBRII 폴리펩티드가 아닌 최소한 하나의 추가적인 TGF-베타 유형 II 수용체 폴리펩티드는 MISRII 폴리펩티드인 재조합 이형다합체.
- 청구항 492에 있어서, 이때 MISRII 폴리펩티드는 본 명세서의 MISRII 서열 (가령, 서열 번호:50, 75 또는 79의 아미노산 24-116)에 대하여 최소한 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 재조합 이형다합체.
- 표: ＂유형 II:유형 II 수용체 이형이합체＂에서 설명된 재조합 이형다합체.
- 표: ＂유형 I:유형 I 수용체 이형이합체＂에서 설명된 재조합 이형다합체.
- 표: ＂유형 I:유형 II 수용체 이형이합체＂에서 설명된 재조합 이형다합체.
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