ES2987798T3

ES2987798T3 - Inhibidores de la helicasa primasa para el tratamiento del cáncer en una terapia combinada con virus oncolíticos

Info

Publication number: ES2987798T3
Application number: ES19808606T
Authority: ES
Inventors: Gerald Kleymann; Christian Gege
Original assignee: Innovative Molecules GmbH
Current assignee: Innovative Molecules GmbH
Priority date: 2018-11-28
Filing date: 2019-11-27
Publication date: 2024-11-18
Anticipated expiration: 2039-11-27
Also published as: WO2020109389A1; EP3886847B8; TW202038947A; US20210401810A1; US20240408068A1; EP3886847C0; EP3886847A1; EP3886847B1

Abstract

La presente invención se refiere al uso novedoso de compuestos antivirales, que actúan como inhibidores de la helicasa primasa en una terapia de combinación con virus oncolíticos para el tratamiento de tumores, cáncer o neoplasia. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Inhibidores de la helicasa primasa para el tratamiento del cáncer en una terapia combinada con virus oncolíticos

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a los compuestos antivíricos como se definen en las reivindicaciones, que actúan como inhibidores de la helicasa primasa en una terapia combinada con herpesvirus oncolíticos para el tratamiento de tumores, cáncer o neoplasia.

Introducción

La segunda causa más común de muerte en hombres y mujeres es el cáncer. En los hombres, el cáncer de próstata y de pulmón son los más frecuentes, mientras que las mujeres tienen mayor probabilidad de desarrollar cáncer de mama. La probabilidad de desarrollar cáncer aumenta con la edad. La incidencia es poco frecuente en jóvenes, aumenta bruscamente a partir de los 35 años y alcanza una prevalencia de casi el 40 % a los 75 años.

El cáncer es un tejido maligno que puede emanar de todos los tipos de células y afectar a todos los órganos. La causa del cáncer no ha sido totalmente aclarada, pero en la mayoría de los casos hay un cambio en el material genético, lo que conduce a un desequilibrio del crecimiento celular y de la proliferación celular y, por tanto, a un cambio en la muerte celular natural o en el control del crecimiento por parte de las células o tejidos circundantes. Normalmente estas células aberrantes son destruidas por el sistema inmunitario (eliminación). El escape de la vigilancia inmunológica (inmunovigilancia) y la tolerancia de los tumores se llama inmunoedición y se define como tres pasos o etapas posteriores denominados eliminación, equilibrio y escape. Un tumor maligno (neoplasia) se produce cuando células con un crecimiento anómalo (equilibrio) se desprenden de una estructura de tejido e invaden los vasos linfáticos y sanguíneos y se propagan por todo el cuerpo (escape). El tumor es una mezcla de diferentes tipos de células, similar a un órgano, que se comunica e interactúa con todo el cuerpo. Forma un microambiente de tejido conectivo, células endoteliales y musculares, así como células del sistema inmunitario que le permiten sobrevivir, crecer y propagarse por todo el cuerpo (metástasis). Mediante una ingeniosa regulación de las células inmunitarias y la formación de nuevos vasos sanguíneos (angiogénesis), un tumor puede pasar desapercibido para el sistema inmunitario y propagarse sin obstáculos a las capas circundantes de tejido (Owyonget al.,Front. Cell Dev. Biol., 2018:6,19; Christiansenet al.,PNAS, 2011:108,4141).

El cáncer se trata con numerosos conceptos y estrategias, tales como cirugía, radioterapia, quimioterapia, inmunoterapia, virus oncolíticos, inmunoviroterapia, etc. A veces los tratamientos y terapias enumerados se combinan, aunque en muchos casos la monoterapia o la terapia combinada se asocia a efectos secundarios importantes que reducen la calidad de vida de los pacientes. La mayoría de las terapias solo extienden la esperanza de vida de los pacientes con cáncer en comparación con los pacientes no tratados, pero recientemente se ha notificado una curación en el intervalo del 10-50 % de los pacientes que sufren de tipos de cáncer seleccionados en el campo de los inhibidores de puntos de control (se otorgó un premio Nobel en 2018 por el descubrimiento del principio de la inmunoterapia con inhibidores de puntos de control) y virus oncolíticos (los herpesvirus oncolíticos (VHSo) fueron aprobados en 2015 por la FDA). Los virus oncolíticos se utilizan para infectar y matar las células tumorales y el sistema inmunitario controla la infección viral y, por lo tanto, también reconoce el tumor y posteriormente destruye el tumor primario infectado y también la metástasis.

La principal preocupación del uso de virus oncolíticos o patógenos en general es la seguridad. Por lo tanto, se utilizan cepas de laboratorio, virus o patógenos genéticamente modificados o atenuados para evitar enfermedades importantes, infecciones crónicas o la latencia causada por el patógeno, el virus de tipo salvaje o los aislados clínicos, que conducen a morbilidad o potencialmente a la muerte del paciente.

La pandemia de infecciones por herpes ha azotado a la humanidad desde la antigüedad, causando infecciones mucocutáneas, tales como herpes labial y herpes genital. Los síntomas de la enfermedad a menudo interfieren con las actividades cotidianas y, en ocasiones, las infecciones por VHS son la causa de enfermedades potencialmente mortales (encefalitis) o que afectan la visión (queratitis), especialmente en neonatos, personas mayores y la población de pacientes inmunodeprimidos, tales como pacientes trasplantados o con cáncer o pacientes con una enfermedad o síndrome de inmunodeficiencia hereditaria. Después de la infección, los herpesvirus alfa persisten de por vida en las neuronas del hospedador en forma latente, reactivándose periódicamente y, a menudo, dando como resultado un malestar psicosocial significativo para el paciente. Actualmente no hay cura disponible.

Hasta ahora, las vacunas, las interleucinas, los interferones, las proteínas terapéuticas, los anticuerpos, los inmunomoduladores y los fármacos de molécula pequeña con modos de acción específicos o inespecíficos carecían de eficacia o del perfil de seguridad necesario para sustituir a los fármacos nucleosídicos aciclovir, valaciclovir y famciclovir como primera opción de tratamiento.

Debido a preocupaciones de seguridad, muchos VHSo se modifican mediante la eliminación de la timidina quinasa, que es esencial para establecer la latencia en las neuronas y reactivarse desde la etapa latente. Por desgracia, esta actividad de la timidina quinasa (TK) es necesaria para la activación de los nucleósidos (tales como los profármacos nucleosídicos aciclovir, valaciclovir, penciclovir y famciclovir, etc.) a nucleótidos en células infectadas para tratar la infección viral.

Las tiazolilamidas conocidas son los fármacos antiherpético más potentes que se encuentran en desarrollo en la actualidad. Estos agentes antivirales actúan mediante un nuevo mecanismo de acción de helicasa primasa y muestran bajas tasas de resistenciain vitroy una eficacia superior en modelos animales en comparación con los fármacos nucleosídicos, aunque el desarrollo se ve obstaculizado por una actividad de la anhidrasa carbónica inespecífica y un perfil farmacocinético atípico. El inhibidor de la helicasa primasa, amenamevir, se ha lanzado sólo para las infecciones por varicela zóster y muestra baja eficacia, probablemente debido a la baja exposición cerebral.

La presente solicitud de patente divulga los compuestos antivirales tal como se definen en las reivindicaciones que actúan como inhibidores de la helicasa primasa para tratar el cáncer en una terapia del cáncer que utiliza herpesvirus oncolíticos. Los compuestos antivirales preferidos de la presente invención carecen de actividad de anhidrasa carbónica (o al menos muestran una reducción significativa), y presentan una solubilidad mejorada y un perfil farmacocinético adecuado para el nuevo uso de la presente invención. Es importante destacar que los inhibidores de la helicasa primasa preferidos de la presente invención presentan exposición en el sistema nervioso, donde los alfaherpesvirus neurotróficos se esconden y residen y establecen una infección crónica o latencia.

Los inhibidores de la helicasa primasa de la presente invención o, en general, el antídoto presentado en la presente solicitud, permiten un control preciso de los VHSo en cualquier momento posterior a la infección (pi) e incluso durante el uso repetido o en pacientes inmunodeprimidos, en donde el uso de virus oncolíticos es limitado debido a preocupaciones de seguridad.

Actualmente, los VHSo solo están autorizados para un uso tópico, tal como en el tratamiento del melanoma, debido a cuestiones de seguridad. Sin embargo, el verdadero potencial radica en el tratamiento sistémico de tumores sólidos dentro del cuerpo, tal como el carcinoma de páncreas y/o de colon o el glioblastoma, y no sólo en la superficie del paciente en el caso de melanoma.

En este caso, un antídoto para terminar la replicación viral de virus oncolíticos, tal como el VHSo utilizado para tratar el cáncer en cualquier parte del cuerpo incluido el cerebro, es una solución a dicho problema, en concreto, para controlar con precisión el efecto de VHSo y, por último, terminar la replicación viral cuando se haya logrado el resultado deseado del tratamiento contra el cáncer.

Técnica anterior

Bommareddyet al.analizan la técnica anterior en relación con la invención y el uso de VHSo (Anual. Rev. Cancer Biol., 2018:2, 155). Speranzaet al.analizan los modelos animales utilizados para demostrar la eficacia del VHSo (ILAR J., 2016:57, 63). Kolodkin-Galet al.describen el uso de VHSo combinado con nucleósidos, tales como ganciclovir o aciclovir (J. Virol., 2008:82, 999; o Gene Ther., 2009:16905). En la publicación de J. Virol. se utilizó aciclovir como compuesto herramienta en cultivos de células u órganos, pero no en modelos animales, para probar diversas hipótesis. La timidina quinasa del herpes convierte el ganciclovir en un quimioterapéutico tóxico, como la quimioterapia convencional, y además de esto su actividad antiviral está asociada con efectos secundarios hematotóxicos. Esta estrategia de gen suicida TK-VHS que convierte al ganciclovir en un agente quimioterapéutico también se ha empleado en otros virus, tales como los adenovirus o sindbisvirus.

El primer VHSo atenuado y modificado genéticamente (T-Vec/imlygic) se lanzó para el tratamiento tópico del melanoma humano en 2015/2016. Por cuestiones de seguridad, los VHSo se limitan al tratamiento tópico. Los VHSo de tipo salvaje y los atenuados y/o modificados genéticamente han sido estudiados exhaustivamente en ensayos clínicos.

Los VHSo también se han combinado con agentes quimioterapéuticos (fármacos tóxicos o citostáticos) para mejorar las propiedades de destrucción de células tumorales de los componentes individuales utilizados en la terapia combinada. Los VHSo también se utilizaron combinados con nucleósidos o nucleótidos. Sin embargo, algunos nucleótidos fueron retirados del mercado debido a su toxicidad, y los nucleósidos, tales como el aciclovir, el valaciclovir, el penciclovir, el famciclovir, la brivudina, son sólo moderadamente activos en dosis altas y sólo son marginalmente eficaces en el tratamiento de la encefalitis herpética debido a una CI50 insuficiente o alta en cultivos de células infectadas con VHSo y unos valores de DE50 altos en modelos animales que demuestran la necesidad de una terapia antiviral más potente y eficaz.

Se han descrito vectores de VHS oncolíticos de tipo salvaje o modificados genéticamente que expresan proteínas con actividad moduladora del sistema inmunitario, células infectadas por VHSo, tratamiento del cáncer por VHSo, diversas aplicaciones del VHSo, tales como la aplicación tópica, infusiones o inyecciones intratumorales y combinaciones del VHSo con inhibidores de puntos de control o agentes quimioterapéuticos para mejorar la actividad de destrucción de tumores de la inmunoterapia, la quimioterapia o la infección por VHSo, en diversas solicitudes de patente: AU2014342465, AU2007277703, AU2003258060, AU2002307795, AU2001026947, AU2001226951, AU1999029051, CA2928956, CA2846372, CA2634591, CA2479763, CA2398343, CA2398335, CN106068326, CN106551939, CN106974942, CN104877969, CN102206613, CN102051379, CN101768576, CN101671656, CN101560502, CN1865449, CN1425073, CN1418255, DK1252323, DK1252322, EP3371599, EP3324988, EP3268466, EP3217993, EP3184641, EP3082834, EP3063279, EP2849852, EP2753355, EP2662117, EP2307033, EP2281897, EP2177619, EP1979000, EP1685254, EP1568779, EP1494613, EP1487983, EP1406668, EP1252323, EP1252322, GB2537053, GB2516521, GB2501991, GB2374873, GB2375113, IN201617014813, JP2015221813, JP2015057054, KR1020030032913, KR1020020080383, MX2016005488, MXPA/a/2002/007061, MXPA/a/2002/007061, US2018/250352, US2018/207212, US2018/169241, US2018/071348, US2017/319638, US2017/274025, US2017/216381, US2017/035819, US2016/303174, US2016/250267, US2015/250837, US2015/232812, US2015/125425, US2015/110822, US2014/154216, US2014/154215, US2013/202639, US2013/034586, US2012/321599, US2012/164108, US2012/100109, US2011/236415, US2011/177032, US2009/311664, US2009/285860, US2009/220460, US2007/264282, US2007/003571, US2006/039894, US2004/120928, US2004/009604, US2003/113348, US2003/091537, US6428968, WO2018/115458, WO2018/118819, WO2018/026872, WO2017/218689, WO2017/189754, WO2017/181420, WO2017/143308, WO2017/076880, WO2017/013419, WO2017/013421, WO2016/146535, WO2015/089280, WO2015/066042, WO2014/047350, WO2013/190290, WO2013/167909, WO2013/036795, WO2012/056327, WO2011/119925, WO2009/148488, WO2008/013276, WO2008/008276, WO2007/075879, WO2007/052029, WO2006/002394, WO2005/049845, W02003/082200, WO2003/073918, WO2002/087625, WO2001/053506, WO2001/053505 y WO2000/054795.

Hasta la fecha, los inhibidores de la helicasa primasa no se han aplicado combinados con VHSo para controlar con precisión la replicación del VHSo utilizado para la terapia del cáncer. Sorprendentemente, los inhibidores de la helicasa primasa descritos en el presente documento, tales como, en concreto, los de las fórmulas (I), (la) y (Ib), resultaron ser un antídoto adecuado en el nuevo uso para tratar el cáncer como se describe en el presente documento. El ejemplo 7(-) utilizado en concreto presentó además características sorprendentemente nuevas, tales como la DE50 más baja en los modelos animales notificados hasta la fecha y, debido a su exposición cerebral distintiva más alta notificada hasta la fecha, no solo se puede usar combinado con VHSo por vía tópica, sino también con VHSo inyectado sistémica o intratumoralmente en cualquier parte del cuerpo del animal o ser humano que lo necesite. Debido a la alta exposición del cerebro, incluso el tratamiento de tumores cerebrales, tales como el mortal glioblastoma, puede volverse tratable mediante el control preciso de la replicación del VHSo en el tumor con inhibidores de la helicasa primasa.

Los inhibidores de la helicasa primasa preferidos de las fórmulas (I), (la) y (Ib) de la presente invención se han descrito en los documentos WO2017/174640 y WO2019/068817. El ejemplo más destacado es la siguiente estructura:

La configuración (S) del estereocentro se confirmó mediante análisis de rayos X de un análogo cerrado. La solicitud de patente WO2019/068817 describe las propiedades beneficiosas de este inhibidor de la helicasa primasa con más detalle, por ejemplo, mejor penetración en el cerebro y ausencia de actividad carboanhidrasa inespecífica, lo cual es característico de las sulfonamidas primarias.

Inesperadamente, los inhibidores de la helicasa primasa de las fórmulas (I), (Ia) y (Ib) presentan una alta exposición cerebral en comparación con otros medicamentos antivirales convencionales y, en especial, los compuestos antiherpéticos utilizados hasta la fecha. En el caso de la terapia del herpes alfa, esto es de suma importancia, ya que los herpesvirus alfa establecen latencia en el sistema nervioso. Dicho de otro modo, aunque estos virus se esconden y residen en las células nerviosas del hospedador infectado, el tratamiento se vuelve factible incluso en este reservorio oculto de herpesvirus debido a las altas concentraciones del medicamento en este sitio tan importante.

Se pueden utilizar fármacos nucleosídicos; sin embargo, la exposición cerebral es baja y, por lo tanto, muestran una eficacia de baja a moderada en un modelo de encefalitis (al menos un orden de magnitud menos potente que los inhibidores de la helicasa primasa), deben administrarse dosis elevadas (cantidades en gramos) a los pacientes y se observa una toxicidad significativa en el caso del tratamiento con ganciclovir.

El perfil farmacocinético optimizado de los inhibidores de la helicasa primasa, tales como, en concreto, aquellos de los compuestos preferidos de la presente invención, conduce a una profunda actividad antiviral en mamíferos tratados, adecuada para el desarrollo clínico en humanos y la aplicación como antídoto para controlar los herpesvirus oncolíticos utilizados para tratar el cáncer y, por lo tanto, son especialmente adecuados en una terapia combinada con herpesvirus oncolíticos para tratar el cáncer.

Hasta ahora, no se ha descrito el uso de inhibidores de la helicasa primasa y, en concreto, de los descritos en la presente solicitud, que controle los virus oncolíticos en general o el VHSo en concreto para un uso seguro y mejorado en el tratamiento del cáncer, especialmente para el control del VHSo utilizado para terapia sistémica contra el VHSo o inyecciones intratumorales contra el VHSo para tratar el cáncer.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a los inhibidores de la helicasa primasa de acuerdo con las reivindicaciones en una terapia combinada con herpesvirus oncolíticos para el tratamiento del cáncer. Los inhibidores de la helicasa primasa de la presente invención están representados por la estructura de fórmula(I)

un enantiómero, diastereómero, tautómero, A/-óxido, solvato, formulación o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde en la fórmula (I)

X se selecciona de

R1 se selecciona de H, halógeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, hidroxialquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, halocicloalquilo C3-6, -O-alquilo C1-6, -O-haloalquilo C1-6 y -NH-alquilo C1-6;

R<2>se selecciona de H, -CN, -NO2, alquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, alquilen C0-10-cicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-heterocicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-(heteroarilo de 5 a 10 miembros), alquilen C0-10-(arilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-(heteroarilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-OR11 , alquilen C0-10-CO2R11 , alquilen C0-10-C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=O)NR<11>SO2R<13>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>SO2R<11>, alquilen C0-10-C(=O)R<11>, alquilen C0-10-C(=S)R<11>, alquilen C0-10-SR11 , alquilen C0-10-SOxR<13>, alquilen C0-10-SO3R11 , alquilen C0-10-SO2NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>SO2R<13>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>SO2NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>R<12>, en donde alquilo, alquenilo, alquinilo, alquileno, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 7 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en oxo, CN, -NO2, OR<11>, O-alquilen C2-6-OR11 , alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halógeno, CO2R11 , C(=O)NR<11>R<12>, C(=O)NR<11>SO2R<11>, C(=O)R<11>, SR<11>, SOxR<11>, SO3R11 , P(=O)(OR<11>)2, SO2NR<11>R<12>, NR<11>C(=O)R<11>, NR<11>SO2R<13>, NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, NR<11>SO2NR<11>R<12>, cicloalquilo C3-10, O-cicloalquilo C3-10, heterocicloalquilo C3-10, O-heterocicloalquilo C3-10 y NR<11>R<12>;

R<3>se selecciona de H, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, -O-alquilo C1-6, -O-haloalquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 y heterocicloalquilo C3-6, en donde alquilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo no están sustituido o están sustituidos con 1 a 5 sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, -CN, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1.3, O-haloalquilo C1.3, SO2-alquilo C1.3 y CO2H;

o R<2>y R<3>, cuando se toman junto con el nitrógeno al que están unidos, completan un anillo de 3 a 8 miembros que contiene átomos de carbono y que contiene opcionalmente 1 o 2 heteroátomos seleccionados de O, S o N, en donde el anillo no está sustituido o está sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo C1-3, SO2-alquilo C1-3 y CO2H;

R<4>se selecciona de H, alquilo C1-6, acilo C1.6, alquenilo C2-6, cicloalquilo C3-8 y heterocicloalquilo C3-8, en donde alquilo, acilo, alquenilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo no están sustituido o están sustituidos con 1 a 5 sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, -CN, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O alquilo C1.3 y O-halo-alquilo C1-3;

R<5>y R<6>y R5' y R6' se seleccionan independientemente de H, halógeno, alquilo C1-6, NH2, NH-alquilo C1.6, N(alquilo C1-6)2 y alquilen C0-6-C(=O)NH2;

o R<5>y R<6>y R5' y R6' independientemente, cuando se toman junto con el carbono al que están unidos, completan un anillo de 3 a 8 miembros que contiene átomos de carbono y que opcionalmente contiene 1 o 2 heteroátomos seleccionados de O, S o N, en donde el anillo no está sustituido o está sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo C1-3, SO2-alquilo C1-3 y CO2H;

o R<5>y R5' y R<6>y R6' independientemente, cuando se toman junto con los dos carbonos adyacentes a los que están unidos, completan un anillo de 3 a 8 miembros que contiene átomos de carbono y que opcionalmente contiene 1 o 2 heteroátomos seleccionados de O, S o N, en donde el anillo no está sustituido o está sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo C1-3, SO2-alquilo C1-3 y CO2H;

o cualquiera de R<5>, R5', R<6>y R6' junto con R<7>puede formar un anillo bicíclico de 8 a 11 miembros, que está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1.3, O-alquilo C1.3, O-haloalquilo C1-3, SO2-alquilo C1.3 y CO<2>H;

R<7>se selecciona de un arilo de 6 miembros y un heteroarilo de 5 o 6 miembros, en donde arilo y heteroarilo están opcionalmente sustituidos con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, -CN, -NO2, OH, alquilo C1-6, O-alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, O-cicloalquilo C3-6, heterocicloalquilo C3-6, O-heterocicloalquilo C3-<6>, SOy-alquilo C1.6, CO2H, C(=O)O-alquilo C1.6, arilo de 6 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, O-(arilo de 6 a 10 miembros) y O-(heteroarilo de 5 a 10 miembros), en donde alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo están opcionalmente sustituidos con 1 a 5 sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, -CN, -NO2, OH, R<13>, OR<13>, CO2R11 , NR<11>R<12>, C(=O)R<11>, C(=S)R<11>, C(=O)NR<11>R<12>, NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, NR<11>C(=O)OR<13>, OC(=O)NR<11>R<12>, C(=S)NR<11>R<12>, NR<11>C(=S)NR<11>R<12>, NR<11>C(=S)OR<13>, OC(=S)NR<11>R<12>; SOyalquilo C1.6, SOy-haloalquilo C1.6, SR<11>, SOxR<13>, SO3R11 , SO2NR<11>R<12>, NR<11>SO2R<13>y NR<11>SO2NR<11>R<12>;

R<8>se selecciona de H, -CN, -NO2, alquilo C1.10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, alquilen C0-10-cicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-heterocicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-(heteroarilo de 5 a 10 miembros), alquilen C0-10-(arilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-(heteroarilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-OR11 , alquilen C0-10-CO2R11 , alquilen C0-10-C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=O)NR<11>SO2R<13>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>SO2R<11>, alquilen C0-10-C(=O)R<11>, alquilen C0-10-C(=S)R<11>, alquilen C0-10-SR11 , alquilen C0-10-SOx-R<13>, alquilen C0-10-SO3R11 , alquilen C0-10-SO2NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>SO2R<11>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>-SO2-NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>R<12>, en donde alquilo, alquenilo, alquinilo, alquileno, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 7 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en oxo, CN, -NO2, OR<11>, O-alquilen C2-6-OR11 , alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halógeno, CO2R11 , CONR<11>R<12>, CONR<11>SO<2>R<11>, COR<11>, SOxR<11>, SO3H, PO(OH)<2>, SO<2>NR<11>R<12>, NR<11>COR<11>, NR<11>SO<2>R<11>, NR<11>-CO-NR<11>R<12>, NR<11>-SO2-NR<11>R<12>, cicloalquilo C3-10, O-cicloalquilo C3-10, heterocicloalquilo C3-10, O-heterocicloalquilo C3-10 y NR<11>R<12>;

R<9>se selecciona de alquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, alquilen C0-10-cicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-heterocicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-(heteroarilo de 5 a 10 miembros), alquilen C0-10-(arilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-(heteroarilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-OR11 , alquilen C0-10-CO2R11 , alquilen C0-10-C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=O)NR<11>SO2R<13>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>SO2R<11>, alquilen C0-10-C(=O)R<11>, alquilen C0-10-C(=S)R<11>, alquilen C0-10-SR11 , alquilen C0-10-SOxR<13>, alquilen C0-10-SO3R11 , alquilen C0-10-SO2NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>SO2R<13>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>SO2NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>R<12>, en donde alquilo, alquenilo, alquinilo, alquileno, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 7 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en oxo, CN, -NO2, OR<11>, O-alquilen C2-6-OR11 , alquilo C1-6, haloalquilo C1.6, halógeno, CO2R11 , C(=O)NR<11>R<12>, C(=O)NR<11>SO<2>R<11>, C(=O)R<11>, SR<11>, SOxR<11>, SO3R11 , P(=O)(OR<11>)<2>, SO<2>NR<11>R<12>, NR<11>C(=O)R<11>, NR<11>SO2R<13>, NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, NR<11>SO2NR<11>R<12>, cicloalquilo C3-10, O-cicloalquilo C3-10, heterocicloalquilo C3-10, O-heterocicloalquilo C3-10 y NR<11>R<12>;

R<11>se selecciona independientemente de H, alquilo C1-6, alquilen C0-6-cicloalquilo C3-10 y alquilen C0-6-heterocicloalquilo C3-10, en donde alquilo, alquileno, cicloalquilo y heterocicloalquilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 6 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1.3, O-haloalquilo C1-3, NH2, NH(alquilo C1.3), N(alquilo C1-3)2, heterocicloalquilo C3-6, cicloalquilo C3-6, SO2-NH-alquilo C1.3, SO2-N(alquilo C1-3)2 y SO2-alquilo C1.3, en donde cicloalquilo y heterocicloalquilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en F, OH, oxo, CH3, CHF2 y CF3;

R<12>se selecciona independientemente de H, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6 y cicloalquilo C3-6;

o R<11>y R<12>cuando se toman junto con el nitrógeno al que están unidos, completan un anillo de 3 a 8 miembros que contiene átomos de carbono y que contiene opcionalmente 1 o 2 heteroátomos seleccionados de O, S o N, en donde el anillo no está sustituido o está sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo Ci-3, SO2-alquilo C1.3 y CO2H;

R<13>se selecciona independientemente de alquilo C1-6, alquilen Cü<.6>-cidoalquilo C3-10 y alquilen C0-6-heterocicloalquilo C3-10, en donde alquilo, alquileno, cicloalquilo y heterocicloalquilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 6 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo C1-3, NH2, NH(alquilo C1.3), N(alquilo C1-3)2, heterocicloalquilo C3-6, cicloalquilo C3-6, SO2-NH-alquilo C1.3, SO2-N(alquilo C1-3)2 y SO2-alquilo C1.3, en donde cicloalquilo y heterocicloalquilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en F, OH, oxo, CH3, CHF2 y CF3;

n se selecciona de 0 y 1;

x se selecciona independientemente de 1 y 2;

y se selecciona independientemente de 0, 1 y 2;

y en donde opcionalmente R<1>está conectado a un residuo seleccionado de R<2>, R<3>, R<8>, R<9>o R<11>para formar un heterociclo de 5 a 8 miembros, que está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O alquilo C1-3, O-haloalquilo C1-3, SO2-alquilo C1.3 y CO2H;

o los inhibidores de la helicasa primasa están representados por una estructura de la siguiente fórmula

o un solvato, formulación o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En el contexto de la presente invención, "alquilo C1-10" significa una cadena de alquilo saturada que tiene de 1 a 10 átomos de carbono que puede ser de cadena lineal o ramificada. Algunos ejemplos del mismo incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, ferc-butilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo y decilo. Se prefiere "alquilo CW , se prefiere más "alquilo C1-4", y el más preferido es "alquilo C1-3".

La expresión "haloalquilo C1-10" o "haloalquilo CW , respectivamente, significa que uno o más átomos de hidrógeno en la cadena de alquilo son reemplazados por un halógeno, como se define a continuación. Un ejemplo preferido del mismo es la formación de un grupo -CF3.

La expresión "hidroxialquilo C1-6" significa que uno o más átomos de hidrógeno en la cadena de alquilo, como se ha definido anteriormente, son reemplazados por un grupo hidroxilo (-OH). Entre los ejemplos del mismo se incluyen hidroximetilo, 1-hidroxietilo, 2-hidroxietilo, 1,2-dihidroxietilo, 3-hidroxipropilo, 2-hidroxipropilo, 1-hidroxipropilo, 1-hidroxipropan-2-ilo, 2-hidroxipropan-2-ilo, 2,3-dihidroxipropilo, 1,3-dihidroxipropan-2-ilo, 3-hidroxi-2-metilpropilo, 2-hidroxi-2-metilpropilo, 1-hidroxi-2-metilpropilo, etc. Un ejemplo preferido del mismo es hidroximetilo (-CH2OH).

"Alquenilo C2-10" significa una cadena de alquilo que tiene de 1 a 10 átomos de carbono y que puede ser de cadena lineal o ramificada, que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono. Algunos ejemplos del mismo incluyen etenilo, propenilo, decenilo, 2-metilenhexilo y (2E,4E)-hexa-2,4-dienilo. Se prefiere "alquenilo C2-6".

"Alquinilo C2-10" significa una cadena de alquilo que tiene de 1 a 10 átomos de carbono y que puede ser de cadena lineal o ramificada, que contiene al menos un triple enlace carbono-carbono. Algunos ejemplos del mismo incluyen etenilo, propinilo y decinilo. Se prefiere "alquinilo C2-6".

Un "alquileno C0-10" significa que el grupo respectivo es divalente y conecta el residuo unido con la parte restante de la molécula. Además, en el contexto de la presente invención, "alquileno C0" pretende representar un enlace. Se prefiere "alquileno C0-6".

Un grupo cicloalquilo C3-10 o carbociclo C3-10 significa un sistema de anillo saturado o parcialmente insaturado, mono, bi-, espiro- o multicíclico que comprende de 3 a 10 átomos de carbono. Algunos ejemplos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, biciclo[2.2.2]octilo, biciclo[2.2.1]heptilo, adamantilo y pentaciclo[4.2.0.0<2,5>0<38>0<47>]octilo. Se prefiere un grupo cicloalquilo C3-6. Se prefiere más un grupo ciclopropilo.

Un grupo heterocicloalquilo C3-10 significa un anillo saturado o parcialmente insaturado de 3 a 10 miembros, mono-, bi-, espiro- o multicíclico, en donde 1, 2 o 3 átomos de carbono están reemplazados por 1, 2 o 3 heteroátomos, respectivamente, en donde los heteroátomos se seleccionan independientemente de N, O, S, SO y SO2. Entre los ejemplos se incluyen epoxidilo, oxetanilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, piperidinilo, piperazinilo, tetrahidropiranilo, 1,4-dioxanilo, morfolinilo, 4-quinuclidinilo, 1,4-dihidropiridinilo y 3,6-dihidro-2/7-tiopiranilo. El grupo heterocicloalquilo C3-10 heterocicloalquilo puede estar conectado a través de un átomo de carbono o nitrógeno. Se prefiere un grupo heterocicloalquilo C3-6.

Un sistema de anillo heteroaromático mono- o bicíclico de 5 a 10 miembros (dentro de la solicitud también denominado heteroarilo) que contiene hasta 5 heteroátomos significa un anillo heteroaromático monocíclico, tal como pirrolilo, imidazolilo, furanilo, tiofenilo, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo, oxadiazolilo y tiadiazolilo. Se prefieren los anillos heteroaromáticos monocíclicos de 5 a 6 miembros. También significa un sistema de anillo bicíclico en donde el heteroátomo o heteroátomos pueden estar presentes en uno o ambos anillos, incluidos los átomos de cabeza de puente. Algunos ejemplos del mismo incluyen quinolinilo, isoquinolinilo, quinoxalinilo, benzoimidazolilo, benzoisoxazolilo, benzodioxanilo, benzofuranilo, benzoxazolilo, indolilo, indolizinilo y pirazolo[1,5-a]pirimidinilo. El átomo de nitrógeno o azufre del sistema heteroarilo también puede oxidarse opcionalmente al correspondiente N-óxido, S-óxido o S,S-dióxido. Si no se indica de otra manera, el sistema heteroarilo puede estar conectado a través de un átomo de carbono o nitrógeno. Algunos ejemplos de heterociclos W-enlazados son

Un sistema de anillo aromático mono- o bicíclico de 6 a 10 miembros (en la solicitud también denominado arilo) significa un anillo de carbonos aromático, tal como fenilo o naftalenilo. Se prefieren los anillos aromáticos de 5 a 6 miembros (arilo), tales como, en concreto, fenilo.

La expresión "heterociclo de 5 a 8 miembros", que puede formarse cuando R1 está conectado a un residuo seleccionado de R2, R3, R8, R9 o R11, contiene los elementos de la fórmula (I) y forma un sistema de anillo parcialmente saturado opcionalmente sustituido, por ejemplo,

El término "W-óxido" indica compuestos, en donde el nitrógeno en el sistema heteroaromático (preferentemente piridinilo) está oxidado. Dichos compuestos se pueden obtener de manera conocida haciendo reaccionar un compuesto de la presente invención (tal como en un grupo piridinilo) con H2O2 o un perácido en un disolvente inerte.

Halógeno se selecciona de flúor, cloro, bromo y yodo, siendo preferidos el flúor y el cloro.

Además, los compuestos de la presente invención están parcialmente sujetos a tautomería. Por ejemplo, si un grupo heteroaromático que contiene un átomo de nitrógeno en el anillo está sustituido con un grupo hidroxi en el átomo de carbono adyacente al átomo de nitrógeno, puede aparecer la siguiente tautomería:

Un grupo cicloalquilo C3-10 o heterocicloalquilo C3-10 puede estar conectado de forma lineal o espirocíclica, por ejemplo, cuando el ciclohexano está sustituido con el grupo heterocicloalquilo oxetano, son posibles las siguientes estructuras:

El experto en la materia apreciará que cuando las listas de sustituyentes alternativos incluyen miembros que, por sus requisitos de valencia u otras razones, no se puede utilizar para sustituir a un grupo concreto, la lista está destinada a ser leída con el conocimiento del experto para incluir solo aquellos miembros de la lista que sean adecuados para sustituir al grupo concreto.

La rotación óptica (representada como (-) o (+) en el texto) utilizada en el nombre del compuesto y el número de ejemplo se relaciona con el valor medido a 365 nm, si no se indica de otra manera.

El inhibidor de la helicasa primasa conocido con el nombre "pritelivir" tiene la siguiente estructura y se describen varios polimorfos o formas de sal en los documentos WO2013/045491, EP2573086, EP2602258, WO2013/045479, WO2018/095576, WO2018/096170 y WO2018/096177:

El mesilato monohidrato de pritelivir parece ser la sal más preferida.

El inhibidor de la helicasa primasa conocido con el nombre "amenamevir" tiene la siguiente estructura y se describe en los documentos WO2002/038554, WO2005/014559, WO2006/082821 y WO2009/123169:

Los compuestos utilizados o preparados en la presente invención pueden estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable o de un solvato. La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales preparadas a partir de bases o ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptables, incluidos bases o ácidos inorgánicos y bases o ácidos orgánicos. En caso de que los compuestos de la presente invención contengan uno o más grupos ácidos o básicos, la invención también comprende sus sales farmacéutica o toxicológicamente aceptables correspondientes, en concreto sus sales farmacéuticamente utilizables. Por tanto, los compuestos de la presente invención que contienen grupos ácidos pueden utilizarse de acuerdo con la invención, por ejemplo, en forma de sales de metales alcalinos, sales de metales alcalinotérreos o sales de amonio. Algunos ejemplos más precisos de dichas sales incluyen sales de sodio, sales de potasio, sales de calcio, sales de magnesio o sales con amoniaco o aminas orgánicas, tales como, por ejemplo, etilamina, etanolamina, trietanolamina o aminoácidos. Los compuestos de la presente invención que contienen uno o más grupos básicos, es decir, grupos que pueden estar protonados, se pueden usar de acuerdo con la invención en forma de sus sales de adición de ácidos con ácidos orgánicos o inorgánicos. Algunos ejemplos de ácidos adecuados incluyen cloruro de hidrógeno, bromuro de hidrógeno, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido metanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácidos naftalenodisulfónicos, ácido oxálico, ácido acético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido salicílico, ácido benzoico, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido piválico, ácido dietilacético, ácido malónico, ácido succínico, ácido pimélico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido málico, ácido sulfamínico, ácido fenilpropiónico, ácido glucónico, ácido ascórbico, ácido isonicotínico, ácido cítrico, ácido adípico y otros ácidos conocidos para el experto en la materia. Si los compuestos de la presente invención contienen simultáneamente grupos ácidos y básicos en la molécula, la invención también incluye, además de las formas de sal mencionadas, sales internas o betaínas (iones bipolares). Las sales respectivas pueden obtenerse por métodos habituales que son conocidos para un experto en la materia, por ejemplo, poniendo en contacto estos con un ácido o base orgánico o inorgánico en un disolvente o dispersante, o mediante intercambio aniónico o intercambio catiónico con otras sales. La presente invención también incluye todas las sales de los compuestos de la presente invención que, debido a su baja compatibilidad fisiológica, no son directamente adecuadas para su uso en productos farmacéuticos, pero que pueden usarse, por ejemplo, como intermedios para reacciones químicas o para la preparación de sales farmacéuticamente aceptables. En función del patrón de sustitución, los compuestos específicos de acuerdo con la invención pueden existir en formas estereoisómeras que se comportan como imagen e imagen especular (enantiómeros) o que no se comportan como imagen e imagen especular (diastereómeros). La invención se refiere tanto a los enantiómeros o diastereómeros como a sus respectivas mezclas. Al igual que los diastereómeros, las formas racémicas se pueden separar en componentes estereoisómeros uniformes de una manera conocida.

En un aspecto no cubierto por el texto de las reivindicaciones, la presente divulgación incluye aquellos compuestos que sólo se convierten en los compuestos activos reales de las fórmulas (I), (la) y (Ib), una vez dentro del cuerpo (los llamados profármacos). Las realizaciones preferidas de la presente invención se refieren a los siguientes inhibidores de la helicasa primasa:

En una realización especialmente preferida de la invención, los inhibidores de la helicasa primasa están representados por la fórmula (la) y/o (Ib):

en donde los sustituyentes tienen el significado definido anteriormente,

o un solvato, formulación o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otra realización preferida combinada con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, los inhibidores de la helicasa primasa están representados por la fórmula (la) y/o (Ib),

en donde

en la fórmula (Ia), X es

y en la fórmula (Ib), X es

o w NR8

\ ' " S > R9

o un solvato, formulación o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otra realización más preferida, combinada con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, n es 0.

En otra realización más preferida combinada con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, los inhibidores de la helicasa primasa están representados por la fórmula

en donde

R<20>se selecciona de alquilo C1-4 y cicloalquilo C3-6, en donde alquilo y cicloalquilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en F o Me;

R<21>se selecciona de F, Cl, OH, Me, OMe, CHF2, CF3, OCHF2, OCF3; e

Y se selecciona de nitrógeno o carbono,

o un solvato, formulación o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otra realización más preferida combinada con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, el inhibidor de la helicasa primasa se selecciona del grupo que consiste en

o un solvato, formulación o sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

(-)-N-Metilo-N-(4-metil-5-(S-metilsulfonimidoil)tiazol-2-il)-2-(4-(piridin-2-il)fenil)acetamida,

(-)-(S)-2-(2',5'-Difluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-N-metil-N-(4-metil-5-(S-metilsulfonimidoil)tiazol-2-il)acetamida,

(-)-N-(5-(Ciclopropanosulfonimidoil)-4-metiltiazol-2-il)-N-metil-2-(4-(piridin-2-il)fenil)acetamida, y

(-)-N-(5-(Ciclopropanosulfonimidoil)-4-metiltiazol-2-il)-2-(2',5'-difluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-N-metilacetamida.

En una realización alternativa preferida combinada con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, el inhibidor de la helicasa primasa se selecciona de

o un solvato, formulación o sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización más preferida combinada con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, el inhibidor de la helicasa primasa es

o un solvato, formulación o sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización alternativa más preferida combinada con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, el inhibidor de la helicasa primasa es

o un solvato, formulación o sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización alternativa preferida combinada con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, el inhibidor de la helicasa primasa es amenamevir.

En otra realización alternativa más preferida combinada con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, el inhibidor de la helicasa primasa es

o un solvato, formulación o sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra realización alternativa preferida combinada con cualquiera de las realizaciones anteriores o siguientes, el inhibidor de la helicasa primasa es mesilato de pritelivir monohidrato.

La presente invención se refiere a los inhibidores de la helicasa primasa descritos para su uso en el tratamiento y profilaxis de la terapia del cáncer con herpesvirus oncolíticos combinados con dichos compuestos para controlar con precisión la actividad de los herpesvirus oncolíticos.

En otro aspecto, la invención se refiere a los compuestos descritos de la presente invención para su uso como antídoto para los herpesvirus oncolíticos utilizados en el tratamiento y profilaxis del cáncer controlando la actividad de los herpesvirus oncolíticos y/o para controlar, tratar o prevenir infecciones virales causadas por los herpesvirus oncolíticos utilizados como efecto secundario no deseado del tratamiento del cáncer.

En el sentido de la presente invención, el término "antídoto" se refiere a un compuesto que tiene actividad para controlar y. en especial, disminuir y/o inactivar el herpesvirus oncolítico utilizado en el tratamiento o la profilaxis del cáncer.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica para el uso en una terapia combinada con herpesvirus oncolíticos para el tratamiento o la profilaxis del cáncer de acuerdo con la presente invención, en donde dicha composición farmacéutica comprende al menos un inhibidor de la helicasa primasa de acuerdo con la fórmula (I) como se define en cualquier parte del presente documento.

Dicha composición farmacéutica puede utilizarse como antídoto en la terapia combinada de la presente invención, en donde dicha composición farmacéutica y/o el inhibidor de la helicasa primasa comprendido en ella actúa para controlar, modular, inhibir o bloquear la actividad de los herpesvirus oncolíticos utilizados en la terapia del cáncer y que son sensibles a dichos inhibidores.

Las composiciones farmacéuticas descritassuprapueden comprender además al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable y/o al menos un excipiente y/o al menos una sustancia activa adicional, tal como, en concreto, compuestos activos antivirales o inmunomoduladores, incluidos inhibidores de puntos de control, que son eficaces en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado con infecciones de herpesvirus oncolíticos utilizadas en el tratamiento del cáncer.

El cáncer que se va a tratar en la terapia combinada de acuerdo con la presente invención es preferentemente un cáncer sólido.

El cáncer que se va a tratar en la terapia combinada de acuerdo con la presente invención puede ser una enfermedad cancerosa seleccionada de cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de páncreas, cáncer de riñón, cáncer de cerebro, melanoma y glioblastoma, etc.

Los virus oncolíticos utilizados en la terapia combinada de acuerdo con la presente invención son herpesvirus oncolíticos.

Los herpesvirus oncolíticos utilizados en la terapia combinada de acuerdo con la presente invención comprenden herpesvirus oncolíticos y células infectadas por herpesvirus oncolíticos, que se seleccionan preferentemente de un herpesvirus oncolítico de tipo salvaje, un aislado clínico o una cepa de herpesvirus de laboratorio o un herpesvirus oncolítico modificado genéticamente o multimutado, opcionalmente atenuado o potenciado.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a un kit (kit de partes o preparación combinada) que comprende al menos uno de los inhibidores de la helicasa primasa de acuerdo con la fórmula (I) o la composición farmacéutica que lo comprende como se describe en cualquier parte del presente documento y al menos un herpesvirus oncolítico. Dicho herpesvirus oncolítico se selecciona preferentemente de un herpesvirus oncolítico de tipo salvaje, una cepa de laboratorio, un aislado clínico y un herpesvirus oncolítico genéticamente modificado o multimutado. En dicho kit, el inhibidor o inhibidores de la helicasa primasa o la composición farmacéutica que los comprende se disponen (envasan) separados de dicho al menos un herpesvirus oncolítico. En principio, los kits de piezas adecuados son bien conocidos.

De acuerdo con la presente invención, dicho kit está destinado a ser utilizado en el tratamiento o la profilaxis del cáncer como se describe en cualquier parte del presente documento.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a la composición farmacéutica y/o a los inhibidores de la helicasa primasa de acuerdo con la fórmula (I) descritasuprapara su uso en una terapia combinada con herpesvirus oncolíticos para el tratamiento y la profilaxis de infecciones por herpes oncolíticos en pacientes con cáncer potencialmente con un sistema inmunitario deprimido, tales como pacientes con SIDA, pacientes que tienen una inmunodeficiencia genética o hereditaria, pacientes trasplantados; en recién nacidos y lactantes; en pacientes positivos a herpes, en especial, pacientes positivos a herpes simple oncolíticos, para suprimir la recidiva o la excreción de virus oncolíticos; pacientes, en especial, en pacientes positivos a herpes, en especial, pacientes positivos a herpes simple oncolíticos, que son resistentes a la terapia antiviral nucleosídica, tal como el aciclovir, el penciclovir, el famciclovir, el ganciclovir, el valaciclovir y/o el foscarnet o el cidofovir. Estas infecciones por herpes oncolíticos pueden aparecer como un efecto secundario no deseado en el tratamiento del cáncer con los herpesvirus oncolíticos.

Los inhibidores de la helicasa primasa o la composición farmacéutica como se describe en cualquier parte del presente documento se pueden administrar en el uso terapéutico de la presente invención mediante infusión, inyección, inyección intratumoral o aplicación tópica o transdérmica de los herpesvirus oncolíticos o células infectadas por herpesvirus oncolíticos y/o de los inhibidores de la helicasa primasa o la composición farmacéutica que los comprende.

De acuerdo con la presente invención, un compuesto que es activo como inhibidor de la helicasa primasa se caracteriza por un valor de CI50 (VHS-1/Vero) en un ensayoin vitrode selectividad de actividad VHS-1 en células Vero como se describe en los ejemplos de la presente invención de preferentemente CI50 inferior a 100 pM, más preferentemente CI50 inferior a l0 pM y es especial preferentemente CI50 inferior a 1 pM.

De acuerdo con la presente invención, un compuesto que es activo como inhibidor de la helicasa primasa se caracteriza por un valor de DE50 un modelo animalin vivocomo se describe en los ejemplos de la presente invención de preferentemente DE50 inferior a 10 mg/kg para VHS-1 o VHS-2, más preferentemente inferior a 5 mg/kg para VHS-1, y en especial preferentemente inferior a 2 mg/kg para VHS-1.

Los inhibidores de la helicasa primasa preferidos de la presente invención se caracterizan preferentemente por no mostrar inhibición de la anhidrasa carbónica o por mostrar una inhibición reducida de la anhidrasa carbónica, tal como, en especial, la inhibición de la anhidrasa carbónica I y/o de la anhidrasa carbónica II. En el sentido de la presente invención, la inhibición nula o reducida de la anhidrasa carbónica se define en concreto por unos valores de CI50 (concentración inhibidora) en un ensayo de actividad anhidrasa carbónica II de acuerdo con R. Iyeret al.J. Biomol. Screen., 2006:11, 782 y/o en un ensayo de actividad anhidrasa carbónica I de acuerdo con A. R. Katritzkyet al.J. Med. Chem., 1987:30, 2058 de CI50 >2,0 pM, preferentemente >3,0 pM, más preferentemente >5,0 pM. Aún más preferentemente, la inhibición nula o reducida de la anhidrasa carbónica en el sentido de la presente invención se define en concreto por unos valores de CI50 (concentración inhibidora) en un ensayo de actividad anhidrasa carbónica II humana de CI50 > 2,0 pM, preferentemente >3,0 pM, más preferentemente >5,0 pM y lo más preferentemente >10 pM.

Los inhibidores de la helicasa primasa o las composiciones farmacéuticas de la presente invención se consideran para el uso en la profilaxis y el tratamiento del cáncer en seres humanos, así como en animales.

Los herpesvirus oncolíticos utilizados en la terapia combinada de la presente invención son herpesvirus que codifican una helicasa y/o primasa al inhibir las enzimas helicasa y/o primasa.

Más específicamente, los herpesvirus oncolíticos utilizados en la terapia combinada de la presente invención son herpesvirus cuyo ácido nucleico codifica una helicasa y/o primasa y las enzimas relacionadas pueden ser inhibidas por los inhibidores de la helicasa primasa de la presente invención, preferentemente en concentraciones inferiores a 100 pMin vitro.

Algunos ejemplos específicos de herpesvirus oncolíticos incluyen los virus del herpes simple o, más concretamente, el HHV1, también llamado VHS-1 y/o el HHV2, también llamado VHS-2. Algunos ejemplos concretos de herpesvirus oncolíticos son las cepas de tipo salvaje, tal como la cepa de VHS-1 KOS, una cepa de laboratorio, tal como la cepa VHS-1 (F), o un aislado clínico obtenido de vesículas herpéticas de pacientes, tal como la cepa de VHS-1 17, un virus del herpes simple multimutado atenuado, tal como el VHS-1 G207, y un virus oncolítico modificado genéticamente, tal como el talimogen laherparepvec (T-Vec).

Además, en un aspecto no reivindicado, la invención se refiere a un método para tratar el cáncer con herpesvirus oncolíticos combinados con el inhibidor de la helicasa primasa de acuerdo con la fórmula (I) como se describe en cualquier parte de este documento o un trastorno que está asociado con infecciones por herpesvirus oncolíticos (como efecto secundario del tratamiento del cáncer),tal como la enfermedad del herpes, comprendiendo dichos métodos administrar a un ser humano o animal que lo necesite una cantidad eficaz de un inhibidor de helicasa primasa de la presente invención o de una composición farmacéutica que comprende al menos uno de dichos inhibidores de helicasa primasa como se describe en cualquier parte del presente documento.

En su uso práctico, los inhibidores de helicasa primasa usados en la presente invención se pueden combinar como el principio activo en mezcla íntima con un vehículo farmacéutico de acuerdo con técnicas convencionales de preparación de compuestos farmacéuticos. El vehículo puede adoptar una amplia diversidad de formas en función de la forma de preparación deseada para la administración, por ejemplo, oral, tópica o parenteral (incluida intravenosa). En la preparación de las composiciones para formas farmacéuticas orales, puede emplearse cualquiera de los medios farmacéuticos habituales, tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes aromatizantes, conservantes, agentes colorantes y similares en el caso de preparaciones líquidas orales, tales como, por ejemplo, suspensiones, elixires y soluciones; o vehículos, tales como almidones, azúcares, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el caso de preparaciones sólidas orales, tales como, por ejemplo, polvos, cápsulas duras y blandas y comprimidos, prefiriéndose las preparaciones sólidas orales frente a las preparaciones líquidas.

Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas representan la forma farmacéutica unitaria oral más ventajosa, en cuyo caso se emplean, obviamente, vehículos farmacéuticos sólidos. Si se desea, los comprimidos pueden recubrirse mediante técnicas convencionales acuosas o no acuosas. Dichas composiciones y preparados deben contener al menos un 0,1 por ciento del inhibidor o inhibidores de la helicasa primasa. El porcentaje de inhibidor de la helicasa primasa activo en estas composiciones, por supuesto, puede variar y puede ser, de forma conveniente, entre aproximadamente el 2 por ciento a aproximadamente el 60 por ciento del peso de la unidad. La cantidad del inhibidor o inhibidores de la helicasa primasa en dichas composiciones terapéuticamente útiles es tal que se obtendrá una dosis eficaz. El inhibidor o inhibidores de la helicasa primasa también se pueden administrar por vía intranasal, tal como, por ejemplo, gotas líquidas o aerosol o en forma de colirios.

Los comprimidos, las pastillas, las cápsulas y similares también pueden contener un aglutinante, tal como goma de tragacanto, goma arábiga, almidón de maíz o gelatina; excipientes, tales como fosfato dicálcico; un agente disgregante, tal como almidón de maíz, almidón de patata, ácido algínico; un lubricante, tal como estearato de magnesio; y un agente edulcorante, tal como sacarosa, lactosa o sacarina. Cuando una forma farmacéutica unitaria es una cápsula, puede contener, además de materiales del tipo anterior, un vehículo líquido, tal como un aceite graso.

Puede haber otros materiales diversos en forma de recubrimientos o para modificar la forma física de la forma farmacéutica unitaria. Por ejemplo, los comprimidos pueden estar recubiertos con goma laca, con azúcar o con ambos. Un jarabe o un elixir puede contener, además del principio activo, sacarosa como agente edulcorante, metil- y propilparabenos como conservantes, un colorante y un aromatizante, tal como sabor a cereza o naranja.

El inhibidor o los inhibidores de la helicasa primasa utilizados en la presente invención también pueden administrarse por vía parenteral. Se pueden preparar soluciones o suspensiones del inhibidor o inhibidores de la helicasa primasa en agua adecuadamente mezclada con un tensioactivo, tal como la hidroxipropilcelulosa. También se pueden preparar dispersiones en glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos en aceites. En condiciones normales de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservante para prevenir el crecimiento de microorganismos.

Las formas farmacéuticas adecuadas para el uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser fluida hasta el punto de que pueda inyectarse fácilmente. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento y ha de protegerse frente a la acción contaminante de microorganismos, tales como bacterias y hongos. El vehículo puede ser un disolvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido), mezclas adecuadas de los mismos y aceites vegetales.

Puede emplearse cualquier vía de administración adecuada para proporcionar a un mamífero, especialmente a un ser humano, una dosis eficaz del inhibidor o inhibidores de la helicasa primasa de la presente invención. Por ejemplo, se pueden emplear la vía oral, rectal, tópica, parenteral (incluida intravenosa), ocular, pulmonar, nasal y similares. Las formas farmacéuticas incluyen comprimidos, trociscos, dispersiones, suspensiones, soluciones, cápsulas, cremas, pomadas, aerosoles y similares. Preferentemente, el inhibidor o inhibidores de la helicasa primasa de la presente invención se administran por vía oral o en forma de colirio, más preferentemente, los compuestos de la presente invención se administran por vía oral.

La dosis eficaz del inhibidor o inhibidores de la helicasa primasa empleados puede variar en función del inhibidor de la helicasa primasa concreto empleado, el modo de administración, la afección que se está tratando y la gravedad de la afección que se está tratando. Tal dosis puede ser confirmada con facilidad por un experto en la materia.

El inhibidor o inhibidores de la helicasa primasa de la presente invención también pueden estar presentes combinados con otros ingredientes activos, en concreto, con uno o más principios activos que presenten efectos ventajosos en el tratamiento de cualquiera de los trastornos o enfermedades descritos en el presente documento. Muy especialmente, los compuestos de la presente invención están presentes en una composición junto con al menos otra sustancia activa que sea eficaz en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado a infecciones virales (compuestos activos antivirales), preferentemente una enfermedad o trastorno asociado a infecciones virales causadas por herpesvirus, tal como, en concreto, por virus del herpes simple y/o con al menos otro principio activo que se administra en el tratamiento o alivio de la enfermedad cancerosa y/o en el tratamiento o alivio de los efectos secundarios que se producen en la terapia del cáncer. Dicha al menos otra sustancia activa que es eficaz en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado con infecciones virales (compuestos activos antivirales) se selecciona preferentemente del grupo que consiste en fármacos nucleosídicos, tales como el aciclovir, el valaciclovir, el penciclovir, el ganciclovir, el famciclovir y el trifluridina, así como compuestos, tales como el foscarnet y el cidofovir o su éster de cidofovir [(S)-HPMPC] que contiene un resto hexaetilenglicol. Por consiguiente, la presente invención se refiere además a una composición farmacéutica que comprende uno o más de los inhibidores de la helicasa primasa de la presente invención como se describe en el presente documento y al menos un vehículo y/o excipiente farmacéuticamente aceptable y/o al menos otra sustancia activa que es eficaz en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado con infecciones virales (compuestos activos antivirales) y/o que es eficaz en el tratamiento o alivio de la enfermedad cancerosa y/o para tratar o aliviar los efectos secundarios que aparecen en la terapia del cáncer.

PARTE EXPERIMENTAL

Los inhibidores de la helicasa primasa de la presente invención, tal como, en concreto, el compuesto de ejemplo7(-),pueden prepararse mediante una combinación de métodos conocidos en la técnica y/o utilizando los procedimientos descritos en los documentos WO2017/174640 y en WO2019/068817. Los procedimientos se pueden aplicar a las estructuras descritas en el documento WO2018/127207:

Ejemplo 1: 5-(2,5-Difluorofeml)-W-metM-W-(4-metN-5-sulfamoNtiazol-2-M)-2,3-dihidro-1H-mden-2-carboxamida (1)

A partir del 5-bromo-2,3-dihidro-1H-inden-2-carboxilato de metilo disponible en el mercado, se preparó el compuesto diana racémico1de manera similar a lo descrito en el ejemplo 21 en el documento WO2018/127207 en forma de un sólido blanco. RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-da) 8: 7,64 (s, 2H), 7,43 (s, 1H), 7,40-7,32 (m, 4H), 7,27-7,20 (m, 1H), 4,18-4,04 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,45-3,24 (m, 4H), 2,49 (s, 3H). MS encontrado: 464,0 [M+H]+.

Ejemplo 2 y 3: (-)-5-(2,5-Difluorofeml)-W-metN-W-(4-metN-5-sulfamoNtiazol-2-M)-2,3-dihidro-1H-mden-2-carboxamida (2) y (+)-5-(2,5-difluorofeml)-W-metN-N-(4-metN-5-sulfamoNtiazol-2-M)-2,3-dihidro-1H-mden-2-carboxamida (3)

Los compuestos del título se prepararon y caracterizaron posteriormente mediante la separación de la mezcla racémica.1mediante cromatografía SFC quiral utilizando las siguientes condiciones:

Fase estacionaria: OD-H (4,6*100 * 5 pm); volumen de inyección: 5; codisolvente: IPA; temperatura de la columna, 40 °C; caudal de CO2: 2,4; caudal del codisolvente: 1,6; codisolvente: 40%; flujo total: 4; presión frontal: 163; contrapresión: 120; longitud de onda de inicio/parada de PDA 214/359 nm.

El ejemplo2es el enantiómero que eluye en primer lugar (tiempo de retención: 2,65 min). Dicho enantiómero se caracteriza además por una rotación óptica específica positiva de [a]25589 nm 110,81° (c = 0,879 g/100 ml, CH3CN).

El ejemplo3es el enantiómero que eluye en segundo lugar (tiempo de retención: 3,33 min). Dicho enantiómero se caracteriza además por una rotación óptica específica negativa de [a]25589 nm -101,61° (c = 1,018 g/100 ml, CH3CN).

Ejemplo 4:

Etapa 1: 5-(2,5-Difluorofenil)-N-metilo-A/-(4-metil-5-(metiltio)tiazol-2-il)-2,3-dil'iidro-1H-inden-2-carboxamida(4a)

A una solución de ácido 5-(2,5-difluorofeml)-2,3-d¡h¡dro-1H-¡nden-2-carboxílico (550 mg, 2,00 mmol), HATU (1,14 g, 3.00 mmol) y Et3N (606 mg, 6,00 mmol) en DMF (10 ml) se le añadió W ^-dim etil^m etiltio^iazol^-am ina (348 mg, 2.00 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante la noche, se diluyó con AE (30 ml) y se lavó con agua (30 ml) dos veces. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se concentró y purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (CH2Ch:EtOAc = 10:1) para obtener el compuesto4aen forma de un sólido blanco.

Etapa 2: 5-(2.5-D¡fluorofen¡l)-M-met¡lo-M-(4-met¡l-5-(met¡lsulf¡n¡l)t¡azol-2-¡l)-2.3-d¡h¡dro-1H-¡nden-2-carboxam¡da(4b)

A una solución de compuesto4a(800 mg, 1,86 mmol) en CH2Ch (15 ml) se le añadió ácido m-CPBA (321 mg, pureza del 85 %). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 min y se repartió entre CH2Ch y solución de carbonato de sodio al 5 %. La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4, se concentró y purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (CH2Ch:EtOAc = 1:1,5) para obtener el compuesto4ben forma de un sólido blanco.

Etapa 3: ((2-(5-(2.5-D¡fluorofen¡l)-M-met¡l-2.3-d¡h¡dro-1H-¡nden-2-carboxam¡do)-4-met¡lt¡azol-5-¡l)(met¡l)(oxo)-I6-sulfaneiliden)carbamato de tere-butilo(4c)

Se añadieron óxido de magnesio (269 mg, 6,72 mmol), carbamato de tere-butilo (393 mg, 3,36 mmol), Rh2(OAc)4 (75 mg, 0,17 mmol) y (diacetoxi)yodobenceno (811 mg, 2,52 mmol) a una solución del compuesto4b(750 mg, 1,68 mmol) en CH2Cl2 (15 ml). La mezcla se agitó a 40 °C durante una noche, se enfrió hasta la temperatura ambiente y se filtró a través de un lecho corto de Celite. El disolvente se evaporó y el producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: EtOAc = 2:1) para obtener el compuesto4cen forma de un sólido blanco.

Etapa 4: 5-í2.5-D¡fluorofen¡l)-A/-met¡l-A/-í4-met¡l-5-ÍS-met¡lsulfon¡m¡do¡l)t¡azol-2-¡l)-2.3-d¡h¡dro-1H-¡nden-2-carboxam¡da(4)

A temperatura ambiente, se añadió el compuesto4c(800 mg, 1,43 mmol) a una solución agitada de ácido trifluoroacético (5 ml) en CH2Ch (10 ml) y se continuó agitando durante 3 h. La mezcla se concentró, luego se resolvió en CH2Cl2, se lavó con NaHCO3 saturado (2 * 40 ml), se secó sobre Na2SO4, se concentró y purificó por TLC preparativa (éter de petróleo: EtOAc = 1:1,5) para obtener el compuesto4en forma de un sólido blanco. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8: 7,64 (s, 1H), 7,40-7,32 (m, 4H), 7,27-7,20 (m, 1H), 4,67 (s a, 1H), 4,14-4,06 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,45-3,37 (m, 2H), 3,30-3,24 (m, 2H), 3,14 (s, 3H), 2,53 (s, 3H). MS encontrado: 462,1 [M+H]+.

Ejemplo 5 al ejemplo 9: 5-(2,5-D¡fluorofeml)-W-met¡l-W-(4-met¡l-5-(S-met¡lsulfomm¡do¡l)t¡azol-2-M)-2,3-d¡h¡dro-IH-inden-2-carboxamida (cuatro pos¡bles estereo¡sómeros)

Los compuestos del título se prepararon y caracterizaron posteriormente mediante la separación de la mezcla racémica.4mediante cromatografía SFC quiral utilizando las siguientes condiciones:

Fase estacionaria: AY-H (4,6*100 * 5 pm); volumen de inyección: 5; codisolvente: EtOH/CH3CN; temperatura de la columna, 39,9 °C; caudal de CO2: 2,2; caudal del codisolvente: 1,8; codisolvente: 45 %; flujo total: 4; presión frontal: 155; contrapresión: 117; longitud de onda de inicio/parada de PDA 214/359 nm.

El ejemplo5es el enantiómero que eluye en primer lugar (tiempo de retención: 1,42 min);

El ejemplo6es el enantiómero que eluye en segundo lugar (tiempo de retención: 1,97 min);

El ejemplo8es el enantiómero que eluye en tercer lugar (tiempo de retención: 4,23 min);

El ejemplo9es el enantiómero que eluye en cuarto lugar (tiempo de retención: 7,77 min).

Ejemplo 10: 2-(2',5'-Difluoro-[1,1'-bifeml]-4-M)-W-metN-W-(4-metN-5-sulfamoNtiazol-2-N)acetamida (10)

El compuesto10se puede preparar como se describe en F. Cartaet al.en J. Med. Chem., 2017:60, 3154.

Actividad in vitro

Se midió la actividadin vitrode los nuevos compuestos como se describe en los documentos WO2017/174640 y WO2019/068817.

EjemploCI50 (VHS-1 que infecta a Vero) CI50 (VHS-2 que infecta a Vero) CI50 (VHS-1 resistente a ACV) Aciclovir 0,5-3 jm 0,5-3 jm >25 jM

7(-)10-50 nM 10-50 nM 10-50 nM

116 nM 50 nM 16 nM

22 jM 16 jM 2 jM

30,5 nM 16 nM 0,5 nM

4750 nM 1,5 jM 750 nM

520 jM 20 jM 20 jM

675 nM 750 nM 75 nM

8175 nM 1,5 jM 175 nM

910 jM 45 jM 10 jM

Actividad in vivo

Modelo animal de VHSo

Evaluación de la eficacia de un tratamiento con virus oncolíticos en presencia y ausencia de un compuesto de ensayo virostático potencial (ejemplo7(-)) en un modelo de ratón portador de tumores CT26 subcutáneos inoculados bilateralmente singénicos.

Diseño experimental:

Se inocularon células tumorales CT26 (500000 células en 100 j l) por vía subcutánea de forma bilateral en los flancos derecho e izquierdo de ratones Balbc/j hembra inmunocompetentes de 9 semanas de edad después de 20 días de aclimatación (proveedor: Laboratorios Charles River - BP 0109 - F 69592 L'Arbresle Cedex).

La ventilación y el tratamiento del aire se realizaron mediante recambio frecuente (25 volúmenes/hora en función de la densidad de animales alojados) y temperatura controlada a aproximadamente 21-22 °C. La humedad se mantuvo aproximadamente al 50 %. La iluminación artificial se mantuvo durante 12 horas al día. Se controló a diario la cantidad y el acceso a alimentos (pienso) y bebida (agua del grifo).

Los ratones fueron alojados en jaulas colectivas, con 4 animales por jaula (jaula de 530 cm2). Las jaulas fueron renovadas una vez por semana por el cuidador de los animales.

Línea de células tumorales colorrectales CT26. Se cultivaron célulasin vitrode acuerdo con las especificaciones del proveedor, es decir, RPMI 1640 suplementado con FBS en una concentración final del 10 %.

Antes de la inoculación en ratones, la viabilidad celular se evaluó mediante análisis de citometría de flujo y selección de células viables. Se preparó una suspensión celular de acuerdo con el recuento de células viables.

El procedimiento de inoculación de los tumores colorrectales CT26 en ratones fue el siguiente:

• Al final del período de aclimatación de 20 días, y con el fin de identificar al animal a lo largo de todo el procedimiento experimental (en especial para el control del volumen tumoral), los ratones fueron identificados mediante tatuaje.

• El día antes de la inoculación de células tumorales, a los ratones se les afeitó el lugar de la inyección con anestesia de gas isoflurano (al 4 % en la inducción y al 2 % durante el mantenimiento).

• El día de la inoculación, los ratones fueron anestesiados con gas con isoflurano al 4 % en la inducción e isoflurano al 2 % para mantener la anestesia.

• Las células tumorales que se van a inocular se resuspendieron en PBS estéril y el volumen necesario se cargó en una jeringa de 1 ml con una aguja de calibre 26 (500000 células/100 jl).

La inyección del virus (virus del herpes simple VHS-1 o vehículo) se realizó con una jeringa de insulina con aguja de calibre 29G (0,5 ml) cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de 40 mm3 (el día 7). En este momento, el virus se inyectó por vía intratumoral (50 j l correspondientes a 5 * 106 VHS-1 (grupos experimentales 3, 5, 6 y 8) o 100 j l correspondientes a 1 * 108 VHS-1 (grupos experimentales 4 y 7)), en el tumor del flanco derecho.

El virus VHS-1 se proporcionó en forma de un vial a una concentración de solución madre (en 1 * 109 ufp/ml). El vehículo del virus, ya sea para la dilución de la solución madre del virus o para la administración del vehículo del virus, fue medio DMEM con glucosa 4,5 g/l con glutamina (Lonza) FBS al 10 % (Sigma Aldrich) penicilina/estreptomicina al 1 % (100 U) (Lonza) HEPES 1 mM (Lonza), según se indica. En el grupo experimental 2, se inyectaron 50 j l de vehículo del virus en el tumor del flanco derecho.

Los grupos farmacológicos de animales (8 animales por grupo, 64 animales en total) se organizaron de la siguiente manera:

1.Grupo de control sin tratamiento con el virus:vehículo de compuesto de ensayo (200 jl, DMSO al 5 %; hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) al 0,5 % en PBS) para sonda oral (aplicador de suspensión convencional con aguja de calibre 20), una vez al día, durante 10 días y comenzando 72 h después de la inyección del virus en los otros grupos.

2.Grupo tratado con vehículo del virus de control: 50 pl de vehículo del virus,inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aprox. 40 mm3,con vehículo del compuesto de ensayo,sonda oral, una vez al día, durante 10 días y comenzando 72 h después de la inyección del vehículo del virus.

3.Grupo tratado con VHS-1 (cantidad 1; 5x106 ufp): 50 pl de VHS-1(5 * 106), inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aprox. 40 mm3,con vehículo del compuesto de ensayo,sonda oral, una vez al día, durante 10 días y comenzando 72 horas después de la inyección del virus, ycon vehículo anti-PD1/anti-CTLA4,inyección intraperitoneal (200 j l de PBS) el mismo día de la inyección del virus, y luego 3 administraciones espaciadas 3 días entre sí (día 7, 10, 13 y 16).

4.Grupo tratado con VHS-1 (cantidad 2; 1x10® ufp): 100 pl de VHS-1(1*108) inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aprox. 40 mm3,con vehículo del compuesto de ensayo, sonda oral, una vez al día, durante 10 días y comenzando 72 h después de la inyección del virus.

5.Grupo tratado con el compuesto de ensayo-VHS-1 (cantidad 1; 5 x 106 ufp): 50 pl de VHS-1(5 * 106), inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aprox. 40 mm3,con el ejemplo 7(-)(10 mg/kg, solución madre 20 mg/ml en DMSO, 1 mg/ml final, DMSO al 5 %; HPMC al 0,5 % en PBS (p/v), la suspensión ha sido sonicada (baño de ultrasonidos de 2 minutos, temperatura ambiente)), sonda oral (200 jl), una vez al día, durante 10 días y comenzando 72 horas después de la inyección del virus, ycon vehículo anti-PD1/anti-CTLA4,inyección intraperitoneal (200 jl, PBS) el mismo día de la inyección del virus, y luego 3 administraciones espaciadas 3 días entre sí (día 7, 10, 13 y 16).

6.Grupo tratado con compuesto de ensayo-VHS-1 (cantidad 1; 5 x 106 ufp)y grupo tratado con anti-PD1(anti-PD1)-(clon RMP1-14)/anti-CTLA4(anti-CTLA4)-(clon UC10-4F10-11): 50 pl de VHS-1(5*106) inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de 40 mm3,con el ejemplo 7(-)(10 mg/kg), sonda oral, una vez al día, durante 10 días y comenzando 72 horas después de la inyección del virus, ycon la combinación de anticuerpos anti-PD1/anti-CTLA4,inyección intraperitoneal (200 jl, 5 mg/kg, solución madre 1 mg/ml) el mismo día de la inyección del virus y luego 3 administraciones espaciadas 3 días entre sí (día 7, 10, 13 y 16).

7.Grupo tratado con el compuesto de ensayo-VHS-1 (cantidad 2; 1 x 108 ufp): 100 pl de VHS-1(1 * 108), inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aprox. 40 mm3,con el ejemplo 7(-)(10 mg/kg), sonda oral, una vez al día, durante 10 días y comenzando 72 h después de la inyección del virus.

8.Grupo tratado con el compuesto de ensayo-VHS-1 inactivo (cantidad 1; 5x106 ufp): 50 pl de VHS-1(5*106) inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de 40 mm3,con el ejemplo 7(-)(10 mg/kg), sonda oral, una vez al día, durante 13 días y comenzando inmediatamente después de la inyección del virus.

Todos los esquemas de tratamiento y seguimiento se realizaron de acuerdo con lafigura 1.

Seguimiento de los animales

Tal como se ha mencionado anteriormente, el volumen tumoral y el peso corporal de los animales se midieron y registraron tres veces por semana. Un volumen tumoral superior a 2500 mm3 para un tumor o 3500 mm3 para ambos tumores, o una pérdida de peso superior al 15 % respecto al peso inicial del animal (medido el día 6) se consideraron criterios de valoración. De manera similar, si el ratón (i) estaba postrado, o (ii) ya no limpiaba su pelaje (el pelo estaba erizado y no brillante), (iii) era menos móvil, también se consideraron criterios de valoración. Cuando se cumplía al menos una de estas condiciones, los ratones se sacrificaban mediante dislocación cervical, que se producía de forma aislada de los demás animales. Todos estos cambios de comportamiento y de peso se registraron en un archivo al que tenían acceso el personal del animalario (comité de bienestar animal) y las personas directamente implicadas en el estudio.

Dolor, procedimientos para reducir, evitar y mitigar cualquier forma de sufrimiento animal

Para minimizar el dolor, el sufrimiento y la ansiedad relacionados con el modelo, los animales se sometieron a un seguimiento regular: cada 2 días. La observación incluyó criterios fiables, tales como pérdida de peso y cambio de postura. Se realizó un enriquecimiento ambiental para minimizar la ansiedad. Para las etapas quirúrgicas (inyección subcutánea de células tumorales), la anestesia se logró utilizando isoflurano (al 4 % en la inducción y al 2 % durante el mantenimiento).

Destino de los animales al final del procedimiento experimental

Los animales que superaron los criterios de valoración mencionados (ver secciones anteriores) fueron sacrificados mediante dislocación cervical. Al final del estudio, los animales restantes fueron procesados para tomar muestras de órganos y sacrificados.

Evaluación de la respuesta antitumoral

A partir del día 6 después de la inoculación bilateral de células tumorales CT26, todos los grupos de animales experimentales, cada uno compuesto por 8 ratones, se sometieron a un seguimiento 3 veces por semana durante un período de aproximadamente 2 semanas (del día 6 al día 19) para los siguientes parámetros:

• Tamaño tumoral: medido mediante examen físico, 3 veces por semana (durante los primeros días posteriores a la inoculación de células tumorales, se realizó un seguimiento más estrecho para no pasar por alto el promedio del volumen tumoral para la inyección del virus);

• Peso corporal: seguimiento 3 veces por semana;

• Supervivencia: 3 veces por semana, representado en forma de un diagrama de Kaplan-Meier.

Muestra de criterio de valoración y recogida de órganos

a. Recogida temprana

El día 13 después de la inoculación de células tumorales, se procesaron 4 ratones del grupo experimental 4 (tratados solo con el virus VHS-1 a 1*108 ufp) para tomar muestras de órganos y se sacrificaron. Los ratones fueron anestesiados con gas isoflurano al 4 % en la inducción y al 2 % durante el mantenimiento) y tratados con un analgésico (buprenorfina, 0,1 mg/kg, inyección subcutánea) antes de la punción cardíaca para la recogida de muestras de plasma. Además, se recogieron el hígado, el cerebro, y los tumores del flanco derecho e izquierdo, se congelaron instantáneamente y se conservaron a -80 °C hasta su posterior análisis.

Se recogieron otras muestras de ratones sacrificados antes del final del estudio para comprender mejor el motivo de la muerte. En el día 13 después de la inoculación del tumor, un ratón del grupo experimental 6 (tratado con el virus VHS-1 - 5*106 ufp,ejemplo 7(-)72 h después de la inyección del virus y la combinación de anticuerpos anti-PD1/anti-CTLA-4) tuvo que ser sacrificado debido a la pérdida de peso corporal y a la presencia de un absceso en los ganglios linfáticos maxilares. Se recogió una muestra de este absceso inmediatamente después de la eutanasia por dislocación cervical, se congeló instantáneamente y se conservó a -80 °C hasta su envío al patrocinador para su posterior análisis. Este tipo de absceso también se observó en un ratón del grupo experimental 8, tratado con el virus VHS-1 - 5*106 inactivado, inmediatamente seguido de la administración delejemplo 7(-). En el día 16 después de la inoculación del tumor, este ratón fue anestesiado con gas isoflurano al 5 % en la inducción) y se recogió por punción retroorbital sangre y se introdujo en tubos recubiertos con heparina. El plasma obtenido se conservó a -80 °C hasta su posterior análisis.

b. Recogida final

Al final del período de seguimiento de la eficacia (el día 19 después de la inoculación de células tumorales, aproximadamente 3-4 h después del último tratamiento con el compuesto de ensayo), todos los ratones supervivientes fueron anestesiados con gas isoflurano (al 4 % en la inducción y al 2 % durante el mantenimiento) antes de la toma de muestras de sangre mediante punción retroorbital y se introdujo en tubos recubiertos con heparina para la recolección de plasma. Además, se recogieron los tumores, se congelaron instantáneamente y se conservaron a -80 °C hasta su posterior análisis.

Resultados del experimento con VHSo

Los volúmenes tumorales del flanco izquierdo y derecho aumentaron desde el día 0 hasta el día 7 en todos los grupos de animales (inoculación con células CT-26 y fase sin tratamiento del experimento).

El volumen tumoral más alto se midió en el grupo del vehículo, como se esperaba, en el día 19. La inyección del vehículo en los tumores del flanco derecho condujo a un crecimiento tumoral retardado en comparación con el vehículo.(figura 2).Las figuras 2A y 2B muestran la mediana del volumen tumoral (mm3), mientras que la figura 2C presenta el seguimiento del volumen tumoral de ratones individuales a lo largo del tiempo.

La inyección intratumoral del virus VHS reduce el crecimiento del tumor (fue capaz de afectar citolíticamente a las células tumorales) de manera dependiente de la dosis en los tumores tratados del flanco derecho (figura 2A) y en los tumores no tratados del flanco izquierdo (figura 2B).

Resultados de la figura 2A:

Mediana del volumen tumoral (mm3)- Tumores del flanco derecho

Resultados de la figura 2B:

Mediana del volumen tumoral (mm3) - Tumores del flanco izquierdo

Las inyecciones intratumorales más altas de VHS conducen a una reducción más fuerte del crecimiento del tumor hacia el día 19. Sin embargo, la dosis más alta provoca la muerte del 50 % de los ratones. Cuando el grupo de ratones con dosis alta se trata posteriormente con elejemplo 7(-), los ratones pueden ser rescatados y la reducción del crecimiento del tumor prevalece significativamente. Por tanto, se pueden aplicar dosis virales más altas y no es necesario atenuar el virus oncolítico para su uso, como se demostró con el aislado clínico de VHS, ya que puede ser controlado por el antiviral delejemplo 7(-).Además, el virus no sólo se puede utilizar de forma tópica sino también sistémica, ya que una viremia general como se describe anteriormente también puede ser controlada por dicho compuesto antiviral debido a su perfil farmacocinético preferido y su alta exposición cerebral.

La inhibición o el control de los herpesvirus oncolíticos, por ejemplo, con elejemplo 7(-), se demostró midiendo el ADN viral dentro de muestras tumorales tratadas. Los tumores se recogieron como se describe anteriormente, se congelaron instantáneamente en nitrógeno líquido y se extrajo el ADN de muestras de tumores de aproximadamente 25 mg con un kit QlAamp DNA Mini (n.° de catálogo 51326) en una máquina QlAcube. Se cuantificaron 10 pl del volumen de elución que contenía 200 pl de ADN de VHS con un kit Argene VHS R-gene (referencia: 69-004B) y se normalizó a una muestra de tumor de 1 gramo (ver más abajo).

El número de copias de VHS-1 por gramo de tumor el día 19 (final del estudio) es más alto en el grupo 4 de virus en dosis alta no tratado y más bajo en el grupo 3 de virus en dosis baja. La carga viral se puede reducir con los compuestos de los grupos 5, 6, 7 y 8. El tratamiento con compuesto, por ejemplo, elejemplo 7(-), 2 horas después de la infección ("post infection", pi) conduce a la mayor reducción en la carga de ADN viral en comparación con el tratamiento retrasado 72 horas después de la infección.

No se detectaron virus en los grupos 1 y 2 no infectados.

Los tumores de ratones moribundos no tratados del grupo 4 de virus en dosis alta tenían una media de copias de VHS-1/g de tumor de aproximadamente 6 * 109. Esto es al menos 3 órdenes de magnitud mayor que en los animales supervivientes de este grupo o de grupos tratados con compuestos para controlar la replicación viral.

Una dosis viral alta es tan eficaz como una infección viral del tumor con una dosis baja, cuando el virus oncolítico en dosis baja se combina con inhibidores de puntos de control (figura 2). De esta manera se puede controlar una combinación de la dosis óptima del virus oncolítico con los compuestos reivindicados, puede combinarse con inhibidores de puntos de control y usarse para tumores dentro del animal experimental o en pacientes en la clínica.

Por último, la respuesta inmunitaria desencadenada no solo conduce a una reducción del tamaño del tumor del flanco derecho inyectado con VHSo (figura 2A), sino también a una reducción del tamaño del tumor no tratado en el flanco izquierdo (figura 2B).

La nueva exposición a los ratones que eliminaron los tumores del flanco izquierdo y derecho con células tumorales CT-26 conduce al rechazo completo de las células tumorales CT-26 o, en otras palabras, no se pueden hacer crecer tumores en ratones que eliminaron los tumores, lo que indica una respuesta inmunitaria adaptativa a las células tumorales CT-26.

En un segundo experimento, se analizó la eficacia de una serie de inhibidores de la helicasa primasa (ejemplo 10,pritelivir y amenamevir) combinados con viroterapia oncolítica repetida en dosis constantes en un modelo de ratón portador de tumores CT26 subcutáneos inoculados bilateralmente singénicos para demostrar que este concepto puede aplicarse en general a la clase de inhibidores de la helicasa primasa.

Se utilizaron los métodos del primer experimento y, en el segundo experimento, se modificó el diseño experimental de la siguiente manera:

1. El herpesvirus oncolítico, a diferencia del primer experimento, fue inyectado varias veces en una dosis constante a intervalos distintos.

2. Además deejemplo 7(-)utilizado en el primer experimento, en el segundo experimento se probó la eficacia de una serie de inhibidores de la helicasa primasa para habilitar la clase de inhibidores de la helicasa primasa en general.

El esquema del segundo experimento se muestra en la figura 3.

Se organizaron los grupos farmacológicos de animales (10 animales por grupo, 80 animales en total y 5 animales por grupo en el grupo satélite; se utilizaron 50 animales en total para el análisis de muestras de plasma y tumores) de la siguiente manera:

1.Grupo de control sin tratamiento con el virus:vehículo compuesto de ensayo, sonda oral, una vez al día, durante 2 días y comenzando 48 h después de cada punto temporal de inyección del virus.

2.Grupo tratado con vehículo del virus de control:100 pl de vehículo del virus mediante inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aproximadamente 50 mm3 (es decir, el día 11), luego 2 inyecciones espaciadas 5 días entre sí; con vehículo del compuesto de ensayo, sonda oral, una vez al día, durante 2 días y comenzando 48 h después de cada punto temporal de inyección del virus.

3.Grupo tratado con VHS-1 (5 x 107ufp):100 pl de VHS-1 (5 x 107) mediante inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aproximadamente 50 mm3 (es decir, el día 11), luego 2 inyecciones espaciadas 5 días entre sí; con vehículo del compuesto de ensayo, sonda oral, una vez al día, durante 2 días y comenzando 48 h después de cada punto temporal de inyección del virus y con vehículo anti-PD-1, inyección intraperitoneal (100 pl de PBS) el mismo día de la inyección del virus, y luego 3 administraciones espaciadas 3 días entre sí (días 11, 14, 17 y 20).

4.Grupo tratado con VHS-1 (5 x 107 ufp) anti-PD1:100 pl de VHS-1 (5 x 107 ufp) inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aproximadamente 50 mm3 (es decir, el día 11), luego 2 inyecciones espaciadas 5 días entre sí; con vehículo del compuesto de ensayo, sonda oral, una vez al día, durante 2 días y comenzando 48 h después de cada punto temporal de inyección del virus y con anti-PD-1 (5 mg/kg), inyección intraperitoneal el mismo día de la inyección del virus, y luego 3 administraciones espaciadas 3 días entre sí (días 11, 14, 17 y 20).

5.Grupo tratado con VHS-1 (5 x 107 ufp)-Ejemplo 10:100 pl de VHS-1 (5 x 107 ufp) inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aproximadamente 50 mm3 (es decir, el día 11), luego 2 inyecciones espaciadas 5 días entre sí; conejemplo 10(10 mg/kg), sonda oral, una vez al día, durante 2 días y comenzando 48 h después de cada punto temporal de inyección del virus (días 13, 14, 18, 19, 23 y 24).

6.Grupo tratado con VHS-1 (5 x 1 O7 ufp)-pritelivir:100 pl de VHS-1 (5 x 107 ufp) inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aproximadamente 50 mm3 (es decir, el día 11), luego 2 inyecciones espaciadas 5 días entre sí; con pritelivir (10 mg/kg), sonda oral, una vez al día, durante 2 días y comenzando 48 h después de cada punto temporal de inyección del virus (días 13, 14, 18, 19, 23 y 24).

7.Grupo tratado con VHS-1 (5 x 107 ufp)-amenamevir:100 pl de VHS-1 (5 x 107 ufp) inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aproximadamente 50 mm3 (es decir, el día 11), luego 2 inyecciones espaciadas 5 días entre sí; con amenamevir (10 mg/kg), sonda oral, una vez al día, durante 2 días y comenzando 48 h después de cada punto temporal de inyección del virus (días 13, 14, 18, 19, 23 y 24).

8.Grupo tratado con VHS-1 (5 x 107 ufp)-Ejemplo 1 O anti-PD1:100 pl de VHS-1 (5 x 107 ufp) inyección intratumoral cuando los tumores alcanzaron un volumen promedio de aproximadamente 50 mm3 (es decir, el día 11), luego 2 inyecciones espaciadas 5 días entre sí; conejemplo 10(10 mg/kg), sonda oral, una vez al día, durante 2 días y comenzando 48 h después de cada punto temporal de inyección del virus (días 13, 14, 18, 19, 23 y 24) y con anti-PD-1 (5 mg/kg), inyección intraperitoneal el mismo día de la inyección del virus y luego 3 administraciones espaciadas 3 días entre sí (días 11, 14, 17 y 20).

Resultados del segundo experimento con VHSo

El volumen tumoral más alto se midió en el grupo del vehículo, como se esperaba, en el día 19. La inyección del vehículo en los tumores del flanco derecho conduce a un retraso en el crecimiento del tumor en comparación con el vehículo (animales satélite de la figura 4A y 4B).

La inyección intratumoral del virus VHS reduce el crecimiento del tumor (es decir, la inyección intratumoral del virus VHS fue capaz de afectar citolíticamente a las células tumorales) de manera dependiente de la dosis en los tumores tratados del flanco derecho en el primer experimento (figura 2A) y en los tumores no tratados del flanco izquierdo (figura 2B). Múltiples inyecciones intratumorales del virus VHS en el segundo experimento (figura 4A y B) redujeron el crecimiento de los tumores tan eficientemente como una única inyección de virus en dosis alta en el primer experimento (figura 2A y B).

Las inyecciones intratumorales más altas de VHS (primer experimento) o la inyección intratumoral múltiple de VHS en el segundo experimento conducen a una reducción más fuerte del crecimiento del tumor el día 19 o 21, respectivamente. Sin embargo, las dosis más altas o dosis múltiples más bajas de VHS provocan la muerte de un número significativo de ratones. Cuando el grupo de ratones con dosis alta es tratado posteriormente con elejemplo 7(-)en el primer experimento o una serie de otros inhibidores de la helicasa primasa (ejemplo 10,pritelivir o amenamevir) en el segundo experimento, los ratones pudieron ser rescatados y la reducción del crecimiento del tumor prevalece significativamente. Por tanto, se pueden aplicar dosis virales más altas o múltiples y no es necesario atenuar el virus oncolítico para su uso, como se demostró con el aislado clínico de VHS, ya que puede ser controlado por el antiviral delejemplo 7(-)o con inhibidores de la helicasa primasa en general.

La inhibición o el control de los herpesvirus oncolíticos, por ejemplo, con elejemplo 7(-), se demostró midiendo el ADN viral dentro de muestras tumorales tratadas. La supervivencia de los ratones se analizó el día 21 en el segundo experimento. El tratamiento de ratones con inhibidores de la helicasa primasa rescata significativamente a los ratones de la muerte (ver la tabla a continuación, número de animales muertos por día) mientras prevalece el efecto antitumoral del virus oncolítico (figura 4).

Número de animales muertos por día:

El análisis de la carga viral como se describió anteriormente para el primer experimento reveló un alto número de copias de VHS en los tumores del flanco derecho tratados con el virus oncolítico y la ausencia de ADN de VHS en 10 muestras de plasma seleccionadas al azar y tumores del flanco izquierdo, lo que implica que el efecto antitumoral en el tumor del flanco izquierdo no tratado con virus oncolíticos está mediado muy probablemente por el sistema inmunitario estimulado (datos no mostrados).

Descripción de las figuras

Figura 1:Esquemas de tratamiento y seguimiento del experimento con el modelo animal de VHSo.

Figura 2A y 2B:Volumen tumoral medio (mm3) de ratones portadores de CT26 (inoculados bilateralmente) tratados solo con vehículo (n = 8), vehículo del virus (n = 8), virus VHS-1 - 5 *10® (n = 8), virus VHS-1 - 1 *108 (n = 8), combinación de virus VHS-1 - 5 * 10® yejemplo 7(-)72 h pi (n = 8), combinación de virus VHS-1 - 5*10® yejemplo 7(-)72 h pi y mAb anti-PD1/anti-CTLA4 (n = 8), combinación de virus VHS-1 -1 * 108 yejemplo 7(-)72 h pi (n = 8), virus VHS-1 - 5 * 10® inactivado inmediatamente con elejemplo 7(-)(n = 8). Se presentan datos paratumores del flanco derecho (A-panel superior)ytumores del flanco izquierdo (B)-panel inferior)como la media ± EEM. Nota adicional:No se calculó la media si se sacrificó más de un animal en el grupo experimental.

Figura 2C: Volumen tumoral individual (mm3) detumores del flanco izquierdo y derechoen ratones portadores de CT2® (inoculados bilateralmente) tratados solo con vehículo (n = 8), vehículo del virus (n = 8), virus VHS-1 -5*10® ufp (n = 8), virus VHS-1 -1 * 108 ufp (n = 8), combinación de virus VHS-1 -5*10® ufp yejemplo 7(-)(n = 8), combinación de virus VHS-1 - 5 * 10® ufp yejemplo 7(-)y anticuerpos anti-PD1/anti-CTLA4 (n = 8), combinación de virus VHS-1 - 1*108 ufp yejemplo 7(-)(n = 8), virus VHS-1 - 5 * 10® ufp inactivado 2 horas después con elejemplo 7(-)(n = 8).

Figura 3:Esquema de tratamiento y seguimiento del segundo experimento con animales con VHSo.

Figura 4A:Volumen tumoral medio (mm3) de ratones portadores de CT2® (inoculados bilateralmente)eficacia en ratonestratados solo con vehículo por sonda oral (n = 10), vehículo del virus (n = 10), virus VHS-1 - 5 * 107 ufp (n = 10), combinación de virus VHS-1 - 5 * 107 ufp y anti-PD1 (n = 10), combinación de virus VHS-1 - 5 * 107 ufp yejemplo 10combinación (n = 10), combinación de virus VHS-1 - 5 * 107 ufp y pritelivir (n = 10), combinación de virus VHS-1 - 5 * 107 ufp y amenamevir (n = 10), o combinación de virus VHS-1 - 5 * 107 ufpejemplo 10y anti-PD1 (n = 10). Se presentan datos paratumores del flanco izquierdo (panel izquierdo)ytumores del flanco derecho (panel derecho)como la media ± EEM.

Figura 4B:Volumen tumoral medio (mm3) de ratones portadores de CT26 (inoculados bilateralmente)ratones satélitetratados solo con vehículo por sonda oral (n = 5), vehículo del virus (n = 5), virus VHS-1 - 5 * 107 ufp (n = 5), combinación de virus VHS-1 - 5 * 107 ufp y anti-PD1 (n = 5), combinación de virus VHS-1 - 5 * 107 ufp yejemplo 10(n = 5), combinación de virus VHS-1 - 5 * 107 ufp y pritelivir (n = 5), combinación de virus VHS-1 -5 * 107 ufp y amenamevir (n = 5), o combinación de virus VHS-1 - 5 * 107 ufpejemplo 10y anti-PD1 (n = 5). Se presentan datos paratumores del flanco izquierdo (panel izquierdo)ytumores del flanco derecho (panel derecho)como la media ± EEM.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Inhibidores de la helicasa primasa para su uso en una terapia combinada con herpesvirus oncolíticos para el tratamiento del cáncer, en donde los inhibidores de la helicasa primasa se seleccionan de compuestos que tienen una estructura de fórmula (I)

un enantiómero, diastereómero, tautómero, A/-óxido, solvato, formulación o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde X se selecciona de

R<1>se selecciona de H, halógeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, hidroxialquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, halocicloalquilo C3-6, -O-alquilo C1-6, -O-haloalquilo C1-6 y -NH-alquilo C1-6; R<2>se selecciona de H, -CN, -NO2, alquilo C1.10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, alquilen C0-10-cicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-heterocicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-(heteroarilo de 5 a 10 miembros), alquilen C0-10-(arilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-(heteroarilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-OR11 , alquilen C0-10-CO2R11 , alquilen C0-10-C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=O)NR<11>SO2R<13>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>SO2R<11>, alquilen C0-10-C(=O)R<11>, alquilen C0-10-C(=S)R<11>, alquilen C0-10-SR11 , alquilen C0-10-SOxR<13>, alquilen C0-10-SO3R11 , alquilen C0-10-SO2NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>SO2R<13>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>SO2NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>R<12>, en donde alquilo, alquenilo, alquinilo, alquileno, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 7 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en oxo, CN, -NO2, OR<11>, O-alquilen C2-6-OR11 , alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halógeno, CO2R11 , C(=O)NR<11>R<12>, C(=O)NR<11>SO2R<11>, C(=O)R<11>, SR<11>, SOxR<11>, SO3R11 , P(=O)(OR<11>)2, SO2NR<11>R<12>, NR<11>C(=O)R<11>, NR<11>SO2R<13>, NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, NR<11>SO2NR<11>R<12>, cicloalquilo C3-10, O-cicloalquilo C3-10, heterocicloalquilo C3-10, O-heterocicloalquilo C3-10 y NR<11>R<12>; R<3>se selecciona de H, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, -O-alquilo C1-6, -O-haloalquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 y heterocicloalquilo C3-6, en donde alquilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo están sustituidos con 1 a 5 sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, -CN, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo C1.3, SO2-alquilo C1-3 y CO2H; o R<2>y R<3>, cuando se toman junto con el nitrógeno al que están unidos, completan un anillo de 3 a 8 miembros que contiene átomos de carbono y que contiene opcionalmente 1 o 2 heteroátomos seleccionados de O, S o N, en donde el anillo no está sustituido o está sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo C1-3, SO2-alquilo C1-3 y CO2H; R<4>se selecciona de H, alquilo C1-6, acilo C1.6, alquenilo C2-6, cicloalquilo C3-8 y heterocicloalquilo C3-8, en donde alquilo, acilo, alquenilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo o están sustituidos con 1 a 5 sustituyentes seleccionados<independientemente de halógeno,>-C<n>,<OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3y O-halo-alquilo C1.3;>R<5>y R<6>y R<5>' y R<6>' se seleccionan independientemente de H, halógeno, alquilo C1-6, NH2, NH-alquilo C1.6, N(alquilo C1-6)2 y alquilen C0-6-C(=O)NH2; o R<5>y R<6>y R<5>' y R<6>' independientemente, cuando se toman junto con el carbono al que están unidos, completan un anillo de 3 a 8 miembros que contiene átomos de carbono y que opcionalmente contiene 1 o 2 heteroátomos seleccionados de O, S o N, en donde el anillo no está sustituido o está sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo C1-3, SO2-alquilo C1-3 y CO2H; o R<5>y R<5>' y R<6>y R<6>' independientemente, cuando se toman junto con los dos carbonos adyacentes a los que están unidos, completan un anillo de 3 a 8 miembros que contiene átomos de carbono y que opcionalmente contiene 1 o 2 heteroátomos seleccionados de O, S o N, en donde el anillo no está sustituido o está sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo C1-3, SO2-alquilo C1-3 y CO2H; o cualquiera de R<5>, R<5>', R<6>y R<6>' junto con R<7>puede formar un anillo bicíclico de 8 a 11 miembros, que está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1.3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo C1.3, SO2-alquilo C1.3 y CO2H; R<7>se selecciona de un arilo de 6 miembros y un heteroarilo de 5 o 6 miembros, en donde arilo y heteroarilo están opcionalmente sustituidos con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, -CN, -NO2, OH, alquilo C1-6, O-alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, O-cicloalquilo C3-6, heterocicloalquilo C3-6, O-heterocicloalquilo C3-<6>, SOy-alquilo C1.6, CO2H, C(=O)O-alquilo C1-6, arilo de 6 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, O-(arilo de 6 a 10 miembros) y O-(heteroarilo de 5 a 10 miembros), en donde alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo están opcionalmente sustituidos con 1 a 5 sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, -CN, -NO2, OH, R<13>, OR<13>, CO2R11 , NR<11>R<12>, C(=O)R<11>, C(=S)R<11>, C(=O)NR<11>R<12>, NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, NR<11>C(=O)OR<13>, OC(=O)NR<11>R<12>, C(=S)NR<11>R<12>, NR<11>C(=S)NR<11>R<12>, NR<11>C(=S)OR<13>, OC(=S)NR<11>R<12>; SOyalquilo C1.6, SOy-haloalquilo C1.6, SR<11>, SOxR<13>, SO3R11 , SO2NR<11>R<12>, NR<11>SO2R<13>y NR<11>SO2NR<11>R<12>; R<8>se selecciona de H, -CN, -NO2, alquilo C1.10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, alquilen C0-10-cicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-heterocicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-(heteroarilo de 5 a 10 miembros), alquilen C0-10-(arilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-(heteroarilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-OR11 , alquilen C0-10-CO2R11 , alquilen C0-10-C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=O)NR<11>SO2R<13>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>SO2R<11>, alquilen C0-10-C(=O)R<11>, alquilen C0-10-C(=S)R<11>, alquilen C0-10-SR11 , alquilen C0-10-SOx-R<13>, alquilen C0-10-SO3R11 , alquilen C0-10-SO2NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>SO2R<11>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>-SO2-NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>R<12>, en donde alquilo, alquenilo, alquinilo, alquileno, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 7 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en oxo, CN, -NO2, OR<11>, O-alquilen C2-6-OR11 , alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halógeno, CO2R11 , CONR<11>R<12>, CONR<11>SO<2>R<11>, COR<11>, SOxR<11>, SO3H, PO(OH)<2>, SO<2>NR<11>R<12>, NR<11>COR<11>, NR<11>SO<2>R<11>, NR<11>-CO-NR<11>R<12>, NR<11>-SO2-NR<11>R<12>, cicloalquilo C3-10, O-cicloalquilo C3-10, heterocicloalquilo C3-10, O-heterocicloalquilo C3-10 y NR<11>R<12>; R<9>se selecciona de alquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, alquilen C0-10-cicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-heterocicloalquilo C3-10, alquilen C0-10-(heteroarilo de 5 a 10 miembros), alquilen C0-10-(arilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-(heteroarilo de 6 a 10 miembros), alquilen C0-10-OR11 , alquilen C0-10-CO2R11 , alquilen C0-10-C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-C(=O)NR<11>SO2R<13>, alquilen C0-10-C(=S)NR<11>SO2R<11>, alquilen C0-10-C(=O)R<11>, alquilen C0-10-C(=S)R<11>, alquilen C0-10-SR11 , alquilen C0-10-SOxR<13>, alquilen C0-10-SO3R11 , alquilen C0-10-SO2NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)R<11>, alquilen C0-10-NR<11>SO2R<13>, alquilen C0-10-NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>C(=S)NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>SO2NR<11>R<12>, alquilen C0-10-NR<11>R<12>, en donde alquilo, alquenilo, alquinilo, alquileno, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 7 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en oxo, CN, -NO2, OR<11>, O-alquilen C2-6-OR11 , alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halógeno, CO2R11 , C(=O)NR<11>R<12>, C(=O)NR<11>SO<2>R<11>, C(=O)R<11>, SR<11>, SOxR<11>, SO3R11 , P(=O)(OR<11>)<2>, SO<2>NR<11>R<12>, NR<11>C(=O)R<11>, NR<11>SO2R<13>, NR<11>C(=O)NR<11>R<12>, NR<11>SO2NR<11>R<12>, cicloalquilo C3-10, O-cicloalquilo C3-10, heterocicloalquilo C3-10, O-heterocicloalquilo C3-10 y NR<11>R<12>; R<11>se selecciona independientemente de H, alquilo C1-6, alquilen C0-6-cicloalquilo C3-10 y alquilen C0-6-heterocicloalquilo C3-10, en donde alquilo, alquileno, cicloalquilo y heterocicloalquilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 6 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1.3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo C1.3, NH2, NH(alquilo C1.3), N(alquilo C1-3)2, heterocicloalquilo C3-6, cicloalquilo C3-6, SO2-NH-alquilo C1.3, SO2-N(alquilo C1-3)2 y SO2-alquilo C1.3, en donde cicloalquilo y heterocicloalquilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en F, OH, oxo, CH3, CHF2 y CF3; R<12>se selecciona independientemente de H, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6 y cicloalquilo C3-6; o R<11>y R<12>cuando se toman junto con el nitrógeno al que están unidos, completan un anillo de 3 a 8 miembros que contiene átomos de carbono y que contiene opcionalmente 1 o 2 heteroátomos seleccionados de O, S o N, en donde el anillo no está sustituido o está sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1-3, O-haloalquilo C1-3, SO2-alquilo C1-3 y CO2H; R<13>se selecciona independientemente de alquilo C1-6, alquilen C0-6-cicloalquilo C3-10 y alquilen C0-6-heterocicloalquilo C3-10, en donde alquilo, alquileno, cicloalquilo y heterocicloalquilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 6 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O-alquilo C1.3, O-haloalquilo C1-3, NH2, NH(alquilo C1.3), N(alquilo C1-3)2, heterocicloalquilo C3-6, cicloalquilo C3-6, SO2-NH-alquilo C1.3, SO2-N(alquilo C1-3)2 y SO2-alquilo C1.3, en donde cicloalquilo y heterocicloalquilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en F, OH, oxo, CH3, CHF2 y CF3; n se selecciona de 0 y 1; x se selecciona independientemente de 1 y 2; y se selecciona independientemente de 0, 1 y 2; y en donde opcionalmente R<1>está conectado a un residuo seleccionado de R<2>, R<3>, R<8>, R<9>o R<11>para formar un heterociclo de 5 a 8 miembros, que está opcionalmente sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NO2, OH, oxo, alquilo C1-3, haloalquilo C1-3, O alquilo C1-3, O-haloalquilo C1-3, SO2-alquilo C1-3 y CO2H; o tienen una estructura de la siguiente fórmula

o un solvato, una formulación o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
2. Inhibidores de la helicasa primasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, que tienen una estructura de la fórmula (Ia) o (Ib)

en donde en la fórmula (Ia), X es q^N R 8 V 4 S ,''R9 y en la fórmula (Ib), X es o w NR8 Y S> r9 o un solvato, una formulación o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
3. Inhibidores de la helicasa primasa para su uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, que se representan por la fórmula

en donde R<20>se selecciona de alquilo C1-4 y cicloalquilo C3-6, en donde alquilo y cicloalquilo no están sustituidos o están sustituidos con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en F o Me; R<21>se selecciona de F, Cl, OH, Me, OMe, CHF2, CF3, OCHF2, OCF3; e Y se selecciona de nitrógeno o carbono, o un solvato, una formulación o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
4. Inhibidores de la helicasa primasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que se seleccionan del grupo que consiste en

o un solvato, una formulación o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
5. Inhibidores de la helicasa primasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que tienen una estructura seleccionada de

o un solvato, una formulación o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
6. Un inhibidor de la helicasa primasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que es

o un solvato, una formulación o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
7. Una composición farmacéutica para su uso como antídoto en una terapia combinada con herpesvirus oncolíticos para el tratamiento del cáncer, que comprende al menos un inhibidor de la helicasa primasa como se define en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que actúa para controlar, modular, inhibir o bloquear la actividad de herpesvirus oncolíticos sensibles a dichos inhibidores utilizados en la terapia del cáncer, y que puede comprender además al menos un vehículo y/o un excipiente farmacéuticamente aceptables y/o al menos una sustancia activa adicional, tales como compuestos activos antivirales o inmunomoduladores, incluidos inhibidores de puntos de control, que es eficaz en el tratamiento de una enfermedad o un trastorno asociados a infecciones por virus oncolíticos utilizados en el tratamiento del cáncer.
8. Los inhibidores de la helicasa primasa o la composición farmacéutica para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el cáncer que se va a tratar es un cáncer sólido, preferentemente la enfermedad cancerosa se selecciona de cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de páncreas, cáncer de riñón, cáncer de cerebro, melanoma y glioblastoma, etc.
9. Los inhibidores de la helicasa primasa o la composición farmacéutica para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la terapia del cáncer comprende la infusión, inyección, inyección intratumoral o aplicación tópica o transdérmica de los herpesvirus oncolíticos o células infectadas por herpesvirus oncolíticos y/o de los inhibidores de la helicasa primasa o la composición farmacéutica que los comprende.
10. Los inhibidores de la helicasa primasa o la composición farmacéutica para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde los herpesvirus oncolíticos o las células infectadas con herpesvirus oncolíticos se seleccionan de un herpesvirus oncolítico de tipo salvaje, un aislado clínico o una cepa de herpesvirus de laboratorio o un herpesvirus oncolítico modificado genéticamente o multimutado, opcionalmente atenuado o potenciado.
11. Un kit que comprende al menos uno de los inhibidores de la helicasa primasa o la composición farmacéutica como se define en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores y al menos un herpesvirus oncolítico seleccionado de un herpesvirus oncolítico de tipo salvaje, una cepa de laboratorio, un aislado clínico y un herpesvirus oncolítico genéticamente modificado o multimutado.
12. El kit de acuerdo con la reivindicación 11 para el uso en el tratamiento del cáncer como se define en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores.
13. Los inhibidores de la helicasa primasa o la composición farmacéutica como se define en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso en una terapia combinada con herpesvirus oncolíticos para el tratamiento y la profilaxis de infecciones por herpes oncolíticos en pacientes con cáncer potencialmente con un sistema inmunitario deprimido, tales como pacientes con SIDA, pacientes que tienen una inmunodeficiencia genética o hereditaria, pacientes trasplantados; en recién nacidos y lactantes; en pacientes positivos a herpes, en especial, pacientes positivos a herpes simple oncolíticos, para suprimir la recidiva o la excreción de virus oncolíticos; pacientes, en especial, en pacientes positivos a herpes, en especial, pacientes positivos a herpes simple oncolíticos, que son resistentes a la terapia antiviral nucleosídica, tal como el aciclovir, el penciclovir, el famciclovir, el ganciclovir, el valaciclovir y/o el foscarnet o el cidofovir.