ES2894124T3 - Derivados de indol N-sustituidos - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula (I) **(Ver fórmula)** en el que R1 representa hidrógeno o metilo; R2 representa metilo, bromo, cloro, o ciano; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de indol W-sustituidos

La presente invención se relaciona con novedosos derivados de indol W-sustituidos de la fórmula (I) y su uso como productos farmacéuticos. La invención se refiere asimismo a aspectos relacionados, incluyendo procesos para la preparación de los compuestos, composiciones farmacéuticas que contienen uno o más compuestos de la fórmula (I), y su uso como moduladores del receptor EP2 de la PGE2 (también conocido como PTGER2, o sea el subtipo EP2 del receptor de PGE2). Los compuestos de la fórmula (I) se pueden utilizar especialmente en forma de agentes únicos o especialmente en combinación con uno o más agentes terapéuticos tales como, especialmente, un modulador del receptor EP4 de la PGE2 (también conocido como PTGER4, también conocido como EP4R, o sea el subtipo EP4 del receptor de PGE2); y/o quimioterapia y/o radioterapia y/o inmunoterapia en la prevención/profilaxis o el tratamiento de cánceres; en particular la prevención/profilaxis o el tratamiento del melanoma; cáncer de pulmón; cáncer de vejiga; carcinomas renales; cánceres gastrointestinales; cáncer de endometrio; cáncer de ovario; cáncer de cuello uterino y neuroblastoma.

La Prostaglandina E2 (PGE2) es un líquido bioactivo que puede provocar una amplia gama de efectos biológicos asociados a la inflamación y el cáncer. La PGE2 pertenece a la familia de los lípidos prostanoides. La ciclooxigenasa (COX) es la enzima limitadora de la velocidad en la síntesis de los mediadores biológicos denominados prostanoides, que consisten en prostaglandina PGD2, PGE2, PGF2a, prostaciclina PGI2 y tromboxano TXA2. Los prostanoides ejercen su función por medio de la activación de siete receptores transmembrana acoplados a la proteína G (GPCRs), en particular EP1, EP2, EP3 y EP4 son receptores para la PGE2. La activación tanto de EP2 como de EP4 por la PGE2 estimula la adenilato ciclasa, dando lugar a la elevación de los niveles citoplasmáticos de AMPc para iniciar múltiples eventos posteriores a causa de su efector prototípico, la Proteína cinasa A. Además, la PGE2 también puede señalizar por medio de la señalización PI3K/AKT y Ras-MAPK/ERK.

Los cánceres figuran entre las principales causas de muerte en todo el mundo. Los tumores se componen de células cancerosas malignas que proliferan de modo anormal, aunque también de un microambiente funcionalmente propicio. Este microambiente del tumor está compuesto por una compleja serie de células, componentes de la matriz extracelular y moléculas de señalización y está establecido por la comunicación alterada entre las células estromales y tumorales. A medida que los tumores se expanden, causan la producción de diversos factores que pueden contribuir al crecimiento de los tumores, tales como factores angiogénicos (que promueven el desarrollo de vasos sanguíneos) o que contribuyen a evadir el ataque de la respuesta inmunitaria del huésped. La PGE2 es uno de esos factores inmunomoduladores que se producen en los tumores.

Es un hecho ya establecido que la COX2, principalmente por medio de la PGE2, promueve el desarrollo general de tumores y está regulada a más y se correlaciona con el resultado clínico en un elevado porcentaje de cánceres comunes, especialmente el cáncer colorrectal, gástrico, esofágico, pancreático, mamario y ovárico. Los niveles de expresión elevados de COX-2 y PGE2 están asociados a la transformación neoplásica, el desarrollo celular, angiogénesis, capacidad de invasión, metástasis y evasión inmunitaria.

El hallazgo de que la COX2 se sobreexpresa y desempeña una función importante en la carcinogénesis en los cánceres gastrointestinales (GI), incluyendo, entre otros, los cánceres de esófago, gástrico y colorrectal, ha llevado al hecho de que los inhibidores de la COX (Coxibs), incluyendo Celecoxib y otros fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE), incluyendo la aspirina, están entre los agentes quimiopreventivos del cáncer más estudiados en desarrollo en la actualidad (para una reseña véase, por ejemplo, Wang R et al, Curr Pharm Des. 2013;19(1):115-25; Garcia Rodriguez LA et al, Recent Results Cancer Res. 2oi3;191:67-93, Sahin IH et al, Cancer Lett. 10 de abril de 2014;345(2):249-57; Drew DA et al, Nat Rev Cancer 2016, 16:173; Brotons C et al, Am J Cardiovasc Drugs. abril de 2015; 15(2):113)

Además de COX2 y PGE2, también los receptores de EP, especialmente EP2 y EP4, se sobreexpresan de manera aberrante en múltiples tipos de cánceres, especialmente en los cánceres gastrointestinales (GI) y el cáncer de páncreas. Más aun, la sobreexpresión de PGE2 y/o EP2 y/o EP4 se correlaciona con la progresión de las enfermedades en algunos tipos de cánceres tales como el carcinoma esofágico de células escamosas (Kuo KT et al, Ann Surg Onc 2009; 16(2), 352-60); carcinoma de células escamosas del pulmón (Alaa M et al, Int J Oncol 2009, 34(3); 805-12); cáncer de próstata (Miyata Y et al, Urology 2013, 81(1):136-42); Badawi AF y Badr MZ Int J Cancer.

2003, 103(1):84-90); carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (Gallo O et al, Hum Pathol. 2002, 33(7):708-14).

De conformidad con los estudios llevados a cabo con inhibidores de la COX en ratones, el silenciamiento de la COX1 o la COX2, la prostaglandina E sintasa 1 microsomal (mPTGES1), EP2 o EP4 dio como resultado una incidencia y progresión reducidas de tumores en diferentes modelos tumorales. A la inversa, la sobreexpresión de COX2 o mPTGES1 en ratones transgénicos dio lugar a una incidencia de tumores y carga tumoral incrementadas (para una reseña remitirse a Nakanishi M. y Rosenberg D.W., Seminars in Immunopathology 2013, 35: 123-137; FischerSM et al Cancer Prev Res (Phila) noviembre de 2011;4(11):1728-35; Fulton AM et al Cancer Res 2006; 66(20); 9794-97).

Se han llevado a cabo varios estudios farmacológicos para inhibir el desarrollo y progresión de los tumores usando antagonistas del receptor EP o inhibidores de la COX2 en diferentes modelos de tumores en ratones. Entre otros, los antagonistas de EP y/o los inhibidores de la COX2 redujeron el desarrollo y metástasis de los tumores en modelos experimentales de cáncer colorrectal (por ej., Yang L et al Cancer Res 2006, 66(19), 9665-9672; Pozzi A. et al JBC 279(28); 29797-29804), carcinomas de pulmón (Sharma S et al Cancer Res 2005 65(12), 5211-5220), cáncer gastrointestinal (Oshima H et al Gastroenterology 2011, 140(2); 596-607; Fu SL et al world J Gastroenterol 2004, 10(13); 1971-1974), cáncer de mama (Kundu N et al, Breast Cancer Res Treat 117, 2009; 235-242; Ma X et al, Oncolmmunology 2013; Xin X e t al Lab Investigation 2012, 1-14; Markosyan N et al; Breast Cancer Res 2013, 15:R75), cáncer de próstata (Xu S et al, Cell Biochem Biophys 2014, Terada et al Cancer Res 70(4) 2010; 1606-1615), cáncer de páncreas (Al-Wadei HA et al, PLOS One 2012, 7(8):e43376; Funahashi H et al, Cancer Res 2007, 67(15):7068-71). Los inhibidores de la COX2 fueron aprobados para el tratamiento de la poliposis adenomatosa familiar (FAP, por sus siglas en inglés) que es un síndrome de predisposición hereditario de cáncer colorrectal, aunque descalificados posteriormente debido a los efectos secundarios cardiovasculares.

Mecanísticamente, la señalización de PGE2 está implicada principalmente en la interferencia entre células tumorales y estromales, generando de esa manera un microambiente que es favorable para el crecimiento del tumor. En particular, la señalización de PGE2 a través de EP2 y EP4 puede, por ejemplo, (i) suprimir la citotoxicidad y la producción de citocina de los linfocitos citolíticos naturales, (ii) desviar la polarización de los macrófagos asociados a tumores hacia los macrófagos promotores de tumores M2 (ver, por ejemplo, Nakanishi Y et al Carcinogenesis 2011, 32:1333-39), (iii) regular la activación, expansión y función efectora tanto de Tregs (linfocitos T reguladores) como de MDSC (células supresoras de origen mieloide), que son potentes células inmunosupresoras que se acumulan en los tumores tanto en los pacientes como en modelos experimentales con animales (ver, por ejemplo, Sharma S et al, Cancer Res 2005, 5(12):5211-20; Sinha P et al Cancer Res 2007, 67(9), 4507-4513; Obermajer N et al, Blood 2011, 118(20):5498-5505); (iv) regular a menos la expresión de IFN-y, TNF-a IL-12 e IL-2 en células inmunitarias tales como linfocitos citolíticos naturales, linfocitos T, células dendríticas y macrófagos, deteriorando la capacidad de estas células inmunitarias para inducir la apoptosis de las células tumorales y frenar la tumorigénesis (ver, por ejemplo, Bao YS et al, Int Immunopharmacol. 2011;11(10):1599-605; Kim JG y Hahn YS, Immunol Invest. 2000;29(3):257-69; Demeuere CE et al, Eur J Immunol. 1997;27(12):3526-31; Mitsuhashi M et al, J Leukoc Biol. 2004;76(2):322-32; Pockaj BA et al , Ann Surg Oncol. 2004;11(3):328-39; (v) suprimir la activación, capacidad de respuesta a IL-2, expansion y citotoxicidad de los linfocitos T, contribuyendo de esa manera a la inmunosupresión local (ver, por ejemplo, Specht C et al, Int J Cancer 200191:705-712); (vi) inhibir la maduración de las células dendríticas, su capacidad para presentar antígenos y para producir IL-12, lo que da lugar a una activación abortiva de los linfocitos T citotóxicos (ver, por ejemplo, Ahmadi M et al, Cancer Res 2008, 68(18):7250-9; Stolina M et al, J Immunol 2000, 164:361-70); (vii) regular la angiogénesis tumoral (la formación de nuevos vasos sanguíneos para el abastecimiento de nutrientes y oxígeno) mediante la potenciación de la motilidad y supervivencia de las células endoteliales, así como también mediante el aumento de la expresión del VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular) (ver, por ejemplo, Zhang Y y Daaka Y, Blood 2011;118(19):5355-64; Jain S et al, Cancer Res. 2008; 68(19):7750-9; Wang y Klein, Molecular Carcinogenesis 2007, 46:912-923; (viii) aumentar la supervivencia de las células tumorales (mediante la señalización de PI3K/AKT y MAPK). Para una reseña remitirse, por ejemplo, a Kalinski P, J Immunol 2012, 188(1), 21-28; Obermajer N et al, Oncoimmunology 1(5), 762-4; Greenhough A et al, carcinogenesis 2009, 30(3), 377-86; Wang D y Dubois RN, Gut2006, 55, 115-122; Harris SG e al Trends Immunol 2002, 22, 144-150).

Se ha demostrado que los Coxibs (inhibidores de la Cox) hacen que las células tumorales sean más sensibles a la radiación y quimioterapia y se han llevado a cabo o se están realizando varios ensayos clínicos que combinan Coxibs con radio- y/o quimioterapia (para una reseña ver, por ej. Ghosh N et al, Pharmacol Rep. marzo-abril de 2010;62(2):233-44; Davis TW et al, Am J Clin Oncol. 2003, 26(4):S58-61; véase también Higgins JP et al, Cancer Biol Ther 2009, 8:1440-49).

Por añadidura, existe cierta evidencia de efectos aditivos y/o sinérgicos entre los Coxibs y los inhibidores del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR, por sus siglas en inglés) (ver, por ejemplo, Zhang X et al, Clin Cancer Res. 2005, 11(17):6261-9; Yamaguchi NH et al, J Gastrointest Oncol. 2014, 5(1):57-66) y con inhibidores de la aromatasa (ver, por ejemplo, Generali D et al, Br J Cancer. 2014;111(1):46-54; Lustberg MB et all, Clin Breast Cancer. agosto de 2011;11(4):221-7; Falandry C et al, Breast Cancer Res Treat. agosto de 2009;116(3):501-8); Chow LW et al, J Steroid Biochem Mol Biol. 2008, 111(1-2):13-7).

Más aun, se han observado efectos aditivos/sinérgicos en diferentes modelos de tumores en ratones al combinar aspirina (un inhibidor de la COX1/2) con un anticuerpo anti-VEGF (Motz GT et al; Nat Med 2014 20(6):607) y esta combinación está actualmente siendo investigada en ensayos clínicos (NCT02659384).

Recientemente se ha demostrado que, en combinación, diferentes estrategias inmunoterapéuticas pueden tener eficacia antitumoral potenciada. Debido a las propiedades inmunomoduladoras de PGE2, los Coxibs también han sido utilizados en combinación con diferentes enfoques inmunoterapéuticos. En particular, se podrían observar efectos aditivos o hasta sinérgicos al combinar los Coxibs con vacunación con células dendríticas en un modelo de glioma de rata y en un modelo de mesotelioma o melanoma de ratón (Zhang H et al, Oncol Res. 2013;20(10):447-55; Veltman JD et al, BMC Cancer. 2010;10:464; Toomey D et al, Vaccine. 25 de junio de 2008;26(27-28):3540-9); con el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF, por sus siglas en inglés) en tumores de cerebro de ratón (Eberstál S et al, IntJCancer. 1 de junio de 2014;134(11):2748-53); con interferón gamma (IFN-y) en tumores cerebrales (Eberstál S et al, Cancer Immunol Immunother. 2012, 61(8):1191-9); con vacunación con células dendríticas o con GM-CSF en un modelo de cáncer mamario de ratón (Hahn T et al, Int J Cáncer. 2006,118(9):2220-31) y con terapia con interferón beta adenoviral (IFN-p) en un modelo de mesotelioma de ratón (DeLong P et al, Cancer Res. 15 de noviembre de 2003;63(22):7845-52). En este sentido, también se pueden contemplar efectos aditivos o incluso sinérgicos de los Coxibs y/o antagonistas de EP2 y/o EP4 con agentes que actúan sobre la proteína 4 citotóxica asociada a los linfocitos T (CTLA-4, por sus siglas en inglés) tales como anticuerpos anti-CTLA-4; anticuerpos anti-TIM-3, anticuerpos anti-Lag-3; anticuerpos anti-TIGIT o, en particular, con agentes que actúan sobre la proteína 1 de muerte celular programada (PD1, por sus siglas en inglés), tales como anticuerpos anti-PD1 o anti-PDLl (ligando de muerte celular programada 1) (Yongkui Li et al Oncoimmunology 2016, 5(2):e1074374; Zelenay 5 et al, Cell 2015, 162; 1-14; WO2013/090552, que indica un efecto sinérgico de bloqueo doble de EP2 y EP4 en combinación con agentes que actúan sobre el PD1).

La adenosina es otro factor endógeno con propiedades antiinflamatorias que se genera debido a la actividad de las ectonucleotidasas CD39 y CD73, expresadas en diversos tipos de células, incluyendo linfocitos T reguladores (Treg) (Mandapathil M et al, J Biol Chem. 2010; 285(10):7176-86). Las células inmunitarias también responden a la Adenosina, puesto que acarrean receptores para ADO, que son principalmente del tipo A2a/A2b (Hoskin DW, et al, Int J Oncol 2008, 32:527-535). La señalización a través de receptores de Adenosina y receptores de EP2/EP4 converge en la adenilil ciclasa citoplasmática, dando lugar a la regulación a más del AMPc. Se ha demostrado que la Adenosina y la PGE2 cooperan en la supresión de las respuestas inmunitarias mediadas por los linfocitos T reguladores (Mandapathil M et al, J Biol Chem. 2010; 285(36):27571-80; Caiazzo E et al, Biochem Pharmacol. 2016; 112:72-81).

Por consiguiente, los presentes antagonistas de EP2 y/o EP4 pueden ser provechosos solos o en combinación con uno o más agentes terapéuticos y/o quimioterapia y/o radioterapia y/o inmunoterapia; en particular en combinación con quimioterapia, radioterapia, inhibidores de EGFR, inhibidores de la aromatasa, factores antiangiogénicos, inhibidores de la adenosina, inmunoterapia tal como, especialmente, bloqueo de PD1 y/o PDL1, u otras terapias dirigidas, para la prevención / profilaxis o tratamiento de cánceres, notablemente para la prevención / profilaxis o tratamiento del cáncer de piel, incluyendo melanoma, incluyendo melanoma metastásico; cáncer de pulmón, incluyendo el cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de vejiga, incluyendo el cáncer de vejiga urinaria, carcinoma de células uroteliales; carcinomas renales que incluyen el carcinoma de células renales, carcinoma metastásico de células renales, carcinoma metastásico de células claras renales, cánceres gastrointestinales, incluyendo cáncer colorrectal, cáncer colorrectal metastásico, poliposis adenomatosa familiar (FAP, por sus siglas en inglés), cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de vesícula, colangiocarcinoma, carcinoma hepatocelular y cáncer de páncreas tal como adenocarcinoma pancreático o carcinoma ductal pancreático; cáncer de endometrio; cáncer de ovario; cáncer de cuello uterino; neuroblastoma; cáncer de próstata, incluyendo cáncer de próstata resistente a la castración; tumores cerebrales que incluyen metástasis cerebrales, gliomas malignos, glioblastoma multiforme, meduloblastoma, meningiomas; cáncer de mama, incluyendo carcinoma mamario triple negativo; tumores bucales; tumores nasofaríngeos; cáncer torácico; cáncer de cabeza y cuello; leucemias, incluyendo leucemia mieloide aguda, leucemia de linfocitos T del adulto; carcinomas; adenocarcinomas; carcinoma tiroideo, incluyendo carcinoma tiroideo papilar; coriocarcinoma; sarcoma de Ewing; osteosarcoma; rabdomiosarcoma; sarcoma de Kaposi; linfomas, incluyendo linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkin, linfoma MALT; mielomas múltiples y tumores inducidos por virus.

Además, los antagonistas selectivos o dobles de EP2 y/o EP4 pueden ser de utilidad en varias enfermedades o trastornos adicionales que responden, por ejemplo, al tratamiento con inhibidores de la COX2, con la ventaja de que los antagonistas de EP2 y/o Ep4 no deben poseer los potenciales efectos secundarios cardiovasculares vistos con los inhibidores de la COX2, que se deben principalmente a la interferencia con la síntesis de PGI2 y TXA2 (ver, por ejemplo, Boyd MJ et al, bioorganic and medicinal chemistry letters 21, 484, 2011). Por ejemplo, el bloqueo de la producción de prostaglandinas por los inhibidores de la COX es el tratamiento elegido para el dolor, incluyendo especialmente el dolor inflamatorio y el dolor menstrual. Por consiguiente, los antagonistas de la EP2 y/o EP4 y/o dobles de EP2/EP4 pueden ser provechosos para el tratamiento del dolor, especialmente el dolor inflamatorio. Las pruebas de ratones con inactivación de EP2 sugieren que se pueden usar antagonistas de EP2 para el tratamiento de la hiperalgesia inflamatoria (Reinold H et al, J Clin Invest 2005, 115(3):673-9). Además, los antagonistas de EP4 tienen un efecto favorable en modelos de dolor inflamatorio in vivo (por ej., Murase A, Eur J Pharmacol 2008; Clark P, J Pharmacol Exp Ther. 2008; Maubach KA Br J Pharmacol. 2009; Colucci J Bioorg Med Chem Lett. 2010, Boyd MJ et al, Bioorg Med Chem Lett 2011, Chn Q et al Br J Phramacol 2010, Nakao K et al, J Pharmacol Exp Ther. agosto de 2007;322(2):686-94). La administración de un antagonista de EP2 en combinación con uno de EP4 exhibió una inhibición significativa, aunque parcial, de la inflamación de articulaciones en un modelo de artritis inducida por colágeno en ratones (Honda T et al J Exp Med 2006, 203(2):325-35).

Los antagonistas de EP2 y/o dobles de EP2/EP4 pueden ser de utilidad para reducir la fertilidad femenina, es decir que se ha demostrado que previenen el embarazo si se utilizan como anticonceptivos en macacos (Peluffo MC et al Hum Reprod 2014). Los ratones con silenciamiento de EP2 tienen fertilidad reducida, tamaños menores de camadas y expansión del cúmulo reducida (Matsumoto et al, Biology of reproduction 2001, 64; 1557-65; Hitzaki et al, PNAS 1999, 96(18), 10501-10506; Tilley SL J Clin Inves 1999, 103(11):1539-45; Kennedy CR et al, NatMed 19995(2):217-20).

También existe una teoría de que los antagonistas de EP2 y/o EP4 pueden ser de utilidad para prevenir o tratar la endometriosis: por ejemplo, la EP2, EP3 y EP4 y COX2 se sobreexpresan en las líneas celulares y tejidos de endometriosis (por ej. Santulli P et al J Clin Endocrinol Metab 2014, 99(3):881-90); se ha demostrado que el tratamiento con antagonistas inhibe la adhesión de células endometriales in vitro (Lee J et al Biol Reprod 2013, 88(3):77; Lee J et al Fertil Steril 201, 93(8):2498-506); se ha demostrado que los inhibidores de la COX2 reducen las lesiones del endometrio en ratones por EP2 (Chuang PC et al, Am J Pathol 2010, 176(2):850-60) y se ha demostrado que el tratamiento con antagonistas induce la apoptosis de las células endometriales in vitro (Banu SK et al, MOl endocrinol 2009, 23(8) 1291-305).

Los antagonistas dobles de EP2/EP4, o la combinación de antagonistas selectivos de EP2 con un antagonista selectivo de EP4 pueden ser de uso potencial para los trastornos autoinmunitarios; por ej. se ha demostrado que son eficaces en un modelo de esclerosis múltiple en ratones (MS, por sus siglas en inglés) (Esaki Yet al PNAS 2010, 107(27):12233-8; Schiffmann S et al, Biochem Pharmacol. 2014, 87(4): 625-35; véase asimismo Kofler DM et al J Clin Invest 2014, 124(6):2513-22). La activación de la señalización de EP2 / EP 4 en células in vitro (Kojima F et al Prostaglandins Other Lipid Mediat 2009, 89:26-33) vinculó los antagonistas dobles o selectivos de EP2 y/o EP4 con el tratamiento de la artritis reumatoide. Además, se han informado niveles elevados de PGE(2) en el fluido sinovial y el cartílago de pacientes con osteoartritis (OA) y se ha demostrado que la PGE2 estimula la degradación de la matriz en los condrocitos de osteoartritis por medio del receptor EP4 (Attur M et al, J Immunol. 2008;181(7):5082-8).

La sobreexpresión de EP4 está asociada a una reacción inflamatoria aumentada en las placas ateroescleróticas de pacientes (Cipollone F et al, Artherioscler Thromb Vasc Biol 2005, 25(9); 1925-31), por consiguiente, el uso de antagonistas de EP4 y/o dobles de EP2/EP4 puede estar indicado para la estabilización de la placa y la prevención / profilaxis de los síndromes isquémicos agudos. Además, la deficiencia de EP4 suprime la aterosclerosis precoz, poniendo en peligro la supervivencia de los macrófagos (Babaev VR et al, Cell Metab. diciembre de 2008;8(6):492-501)

Los antagonistas de EP2 y/o dobles de EP2/EP4 también pueden ser de utilidad en el tratamiento de la neumonía: la administración intrapulmonar de células apoptóticas demostró que la PGE(2) a través del EP2 es responsable del deterioro subsiguiente del reclutamiento de leucocitos por el pulmón y el despeje de Streptococcus pneumoniae, así como también de la generación potenciada de IL-10 in vivo (Medeiros AI et al J Exp Med 2009206(1):61-8).

Los antagonistas de EP2 y/o dobles de EP2/EP4 pueden ser útiles, además, para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas (para una reseña, véase Cimino PJ et al, Curr Med Chem. 2008;15(19):1863-9). El receptor EP2 acelera la progresión de la inflamación en un modelo de ratón de esclerosis lateral amiotrófica (ALS) (Liang X et al, Ann Neurol 2008, 64(3):304-14); se ha demostrado que los inhibidores de la COX2 son neuroprotectores en modelos en roedores de apoplejía, enfermedad de Parkinson y ALS (para una reseña, véase Liang X et al J Mol Neurosci 2007, 33(1):94-9), se observó una neurotoxicidad reducida en ratones con silenciamiento de EP2 tratados con intoxicantes parkinsonianos (Jin J et al, J Neuroinflammation 2007, 4:2), la PGE2, a través de EP2, agrava la neurodegeneración en células cultivadas de rata (Takadera T et al, Life Sci 2006, 78(16): 1878-83); Se observó una carga de amiloide reducida en el modelo de ratón de enfermedad de Alzheimer si se cruzan con ratones con silenciamiento de EP2 (Liang X et al J Neurosci 2005, 25(44):10180-7; Keene CD et al, Am J Pathol. 2010, 177(1):346-54). Los ratones con falta de EP2 están protegidos del daño neuronal mediado por la inmunidad dependiente de CD14/innata en enfermedades neurodegenerativas (Shie FS et al Glia 2005, 52(1):70-7); la PGE2, a través de EP2, aumenta la expresión de proteína precursora de amiloide (APP, por sus siglas en inglés) en células cultivadas de mioglía de rata (Pooler AM et al Neurosci. Lett. 2004, 362(2):127-30). El antagonista de e P2 limita el deterioro oxidativo producido por la activación de la inmunidad innata (inyección intracraneal de LPS) en el cerebro y se podría usar para la demencia de Alzheimer o la asociada al VIH (Montine TJ et al, J Neurochem 2002, 83(2):463-70). En un modelo de enfermedad de Alzheimer en ratones se podría mejorar la función cognitiva mediante inhibición genética y farmacológica de la EP4 (Hoshino T et al, J Neurochem 2012, 120(5):795-805).

Los antagonistas de EP2 y/o dobles de EP2/EP4 también pueden ser útiles para tratar la enfermedad poliquística de riñón autosómica dominante (ADPKD): La PGE2, a través del EP2 induce la cistogénesis de las células epiteliales renales humanas y se ha encontrado que EP2 se sobreexpresaba en muestras de los pacientes (Elberg G et al, Am J Physiol Renal Physiol 2007, 293(5):F1622-32).

Los antagonistas de EP4 y/o dobles de EP2/EP4 también pueden resultar provechosos para tratar la osteoporosis: la PGE2 estimula la resorción ósea principalmente a través de EP4 y parcialmente a través de EP2 (Suzawa T et al, Endocrinology. abril de 2000;141(4):1554-9), los ratones con silenciamiento de EP4 exhiben resorción ósea menoscabada (Miyaura C et al, J Biol Chem 2000, 275(26): 19819-23) y un antagonista de EP4 exhibió la inhibición parcial de la osteogénesis y resorción ósea osteoclástica estimuladas por la PGE(2) (Tomita M et al, Bone. enero de 2002;30(1):159-63).

WO2008/152093 da a conocer moduladores selectivos del receptor EP2 que comprenden un anillo de indol ligado al resto de la molécula en la posición 3, y un resto pirimidina que, sin embargo, no está sustituido con un sustituyente aromático directamente ligado. WO2006/044732 da a conocer compuestos de pirimidina que son moduladores de PGD2 y que se afirma que son útiles, por ej., en el tratamiento de enfermedades alérgicas. WO2008/006583 da a conocer derivados de pirimidina que son inhibidores de la ALK-5. WO2006/044732 y WO2008/039882 revelan ciertos derivados de pirimidina como antagonistas del receptor de prostaglandina D2. Los derivados de pirimidin-2-ilo fueron dados a conocer en WO2013/020945, WO2012/127032, WO2011/144742, Bioorg. Med. Chem 2011, 21(13) 4108­ 4114 y Bioorg. Med. Chem 2011, 21(1) 66-75. Se conocen ciertos compuestos de indol-1-acetamida como compuestos de la literatura, por ej. CAS 1448123-30-5 y CAS 1448075-88-4. Otros compuestos de los cuales se afirma que son activos agentes anticancerosos son los dados a conocer en WO2006/128129, WO2008/008059 y Bioorg. Med. Chem 2013, 21(2), 540-546. WO2013/163190 y WO2015/058031 revelan ciertos inhibidores de la ADN-PK que interactúan con los procesos de reparación del ADN. Se piensa que los compuestos divulgados son útiles para sensibilizar las células cancerosas y aumentar la eficacia tanto de la quimioterapia como de la radioterapia contra el cáncer. EP1661896 da a conocer derivados de pirrolopirimidina-tiona que portan un sustituyente ligado por 2-aminoetilo en el nitrógeno pirrolo, que muestra actividad inhibidora de GSK-3 en lugar de ser moduladores del receptor EP2 de prostaglandina 2.

La presente invención da a conocer novedosos derivados de indol W-sustituidos de la fórmula (I) que son moduladores del receptor EP2 de prostaglandina 2. Los presentes compuestos pueden ser útiles, por consiguiente, en forma de agentes únicos o especialmente en combinación con uno o más agentes terapéuticos tales como, especialmente, un modulador del receptor EP4 de la PGE2, para la prevención / profilaxis o tratamiento de enfermedades que responden al bloqueo de los receptores EP2 (o, si se utilizan en combinación con un modulador del receptor EP4 de la PGE2, al bloqueo tanto de los receptores EP2 como EP4) tales como, especialmente, cánceres; así como también el dolor, incluyendo especialmente el dolor inflamatorio y el dolor menstrual; endometriosis; síndromes isquémicos agudos en pacientes ateroscleróticos; neumonía; enfermedades neurodegenerativas incluyendo esclerosis lateral amiotrófica, apoplejía; enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer y demencia asociada al VIH; enfermedad renal poliquística autosómica dominante y para el control de la fertilidad femenina.

1) Un primer aspecto de la invención se relaciona con compuestos de la fórmula (I)

Fórmula (I)

en la que

R1 representa hidrógeno o metilo;

R2 representa metilo, bromo, cloro o ciano.

La presente invención incluye asimismo compuestos de la fórmula (I) isotópicamente marcados, especialmente marcados con 2H (deuterio) de acuerdo con las formas de realización 1) a 7), compuestos que son idénticos a los compuestos de la fórmula (I) excepto que se ha reemplazado uno o más átomos, en cada caso, por un átomo con el mismo número atómico pero con masa atómica diferente de la masa atómica encontrada habitualmente en la naturaleza. Los compuestos de la fórmula (I) isotópicamente marcados, especialmente marcados con 2H (deuterio) y sus sales están dentro del alcance de la presente invención. La sustitución de hidrógeno con el isótopo más pesado 2H (deuterio) puede llevar a una mayor estabilidad metabólica, dando como resultado, por ej. una vida media incrementada in-vivo o necesidad de dosis reducida, o puede llevar a la inhibición reducida de enzimas del citocromo P450, dando lugar, por ej., a un perfil de seguridad mejorado. En una forma de realización de la invención, los compuestos de la fórmula (I) no son isotópicamente marcados, o sólo son marcados con uno o más átomos de deuterio. En una sub-forma de realización, los compuestos de la fórmula (I) no son isotópicamente marcados en absoluto. Los compuestos isotópicamente marcados de la fórmula (I) se pueden preparar de manera análoga a los procedimientos descritos más adelante, aunque utilizando la variación isotópica apropiada de los reactivos o materiales de partida adecuados.

En esta solicitud de patente, un enlace dibujado en forma de línea de guiones exhibe el punto de anexión del radical dibujado. Por ejemplo, el radical que se ilustra a continuación

es el grupo 2-metil-1H-indol-1-ilo.

Cuando se utiliza la forma plural para los compuestos, sales, composiciones farmacéuticas, enfermedades y demás, esto se ha de entender también como un único compuesto, sal o similar.

Cualquier referencia a los compuestos de la fórmula (I) de acuerdo con las formas de realización 1) a 7) se ha de entender que se refiere asimismo a las sales (y especialmente las sales farmacéuticamente aceptables) de esos compuestos, según corresponda y resulte oportuno.

La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales que retienen la actividad biológica pretendida del presente compuesto y exhiben mínimos efectos toxicológicos perjudiciales. Esas sales incluyen las sales de adición de ácidos y/o bases inorgánicas u orgánicas, dependiendo de la presencia de grupos básicos y/o ácidos en el presente compuesto. Como referencia ver, por ejemplo, “Handbook of Phramaceutical Salts. Properties, Selection and Use.”, P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.), Wiley-VCH, 2008; y “Pharmaceutical Salts and Co-crystals”, Johan Wouters y Luc Quéré (Eds.), RSC Publishing, 2012.

Las definiciones aquí presentadas se han de aplicar de manera uniforme a los compuestos de la fórmula (I), según lo definido en cualquiera de las formas de realización 1) a 6), y, mutatis mutandis, en toda la descripción y las reivindicaciones, a menos que otra definición expresamente expuesta constituya una definición más amplia o más restrictiva. Se ha de entender que una definición o definición preferida de un término define y puede reemplazar al término respectivo de manera independiente de (y en combinación con) cualquier definición o definición preferida de todos o cualquiera de los otros términos definidos en la presente.

Siempre que se indique que un sustituyente es opcional, se entiende que ese sustituyente puede estar ausente, en cuyo caso todas las posiciones con valencia libre (a las cuales podría estar anexado el sustituyente opcional; como por ejemplo, en un anillo aromático, teniendo los átomos de carbono del anillo y/o los átomos de nitrógeno del anillo una valencia libre) están sustituidas con hidrógeno cuando resulte apropiado. De igual modo, en caso de utilizarse el término “opcionalmente” en el contexto de uno o más heteroátomos (del anillo), el término significa que el o los respectivos heteroátomos opcionales, o similares, están ausentes (es decir que un cierto resto no contiene uno o más heteroátomos / es un carbociclo / o similar), o el o los respectivos heteroátomos adicionales, o similares, están presentes de acuerdo con lo definido explícitamente.

El término “halógeno” significa flúor, cloro, bromo o yodo; especialmente flúor, cloro o bromo; preferentemente flúor o cloro.

El término “alquilo”, utilizado solo o en combinación, se refiere a un grupo hidrocarburo saturado de cadena recta o ramificada que contiene de uno a seis átomos de carbono. El término “alquilo(C^{x -y} )” (siendo cada uno de x e Y un número entero), se refiere a un grupo alquilo según lo antes definido, que contiene x a y átomos de carbono. Por ejemplo, un grupo alquilo(C^{i - 6} ) contiene de uno a seis átomos de carbono. Son ejemplos de grupos alquilo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, 3-metil-butilo, 2,2-dimetil-propilo y 3,3-dimetil-butilo. Para que no haya lugar a dudas, en caso de referirse a un grupo como, por ej., propilo o butilo, esto se refiere a n-propilo, respectivamente n-butilo. Son preferibles metilo y etilo. Es muy preferible metilo.

El término “alcoxi”, utilizado solo o en combinación, se refiere a un grupo alquil-O - en el que el grupo alquilo es como se definió anteriormente. El término “alcoxi(C^{x -y} )” (siendo cada uno de x e y un número entero) se refiere a un grupo alcoxi de acuerdo con lo definido anteriormente que contiene de x a y átomos de carbono. Por ejemplo, un grupo alcoxi(C ^{i - 4} ) se refiere a un grupo de la fórmula alquilo(C^{i - 4} )-O - en el cual el término “alquilo(C^{i - 4} )” tiene el significado dado anteriormente. Los ejemplos de grupos alcoxi son metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, secbutoxi y terc-butoxi. Son preferibles etoxi y especialmente metoxi.

El término "fluoroalquilo”, utilizado solo o en combinación, se refiere a un grupo alquilo de acuerdo con lo definido anteriormente que contiene de uno a tres átomos de carbono, en el cual se han reemplazado uno o más (y posiblemente todos) de los átomos de hidrógeno con flúor. El término “fluoroalquilo(C^{x -y} )” (siendo cada uno de x e y un número entero) se refiere a un grupo fluoroalquilo de acuerdo con lo definido anteriormente, que contiene de x a y átomos de carbono. Por ejemplo, un grupo fluoroalquilo (C^{1 - 3} ) contiene de uno a tres átomos de carbono, en los que se han reemplazado de uno a siete átomos de hidrógeno con flúor. Los ejemplos representativos de grupos fluoroalquilo incluyen trifluorometilo, 2-fluoroetilo, 2,2-difluoroetilo y 2,2,2-trifluoroetilo. Son preferibles los grupos fluoroalquilo(C¹ ) tales como trifluorometilo.

El término "fluoroalcoxi”, utilizado solo o en combinación, se refiere a un grupo alcoxi de acuerdo con lo definido anteriormente, que contiene de uno a tres átomos de carbono, en el cual se han reemplazado uno o más (y posiblemente la totalidad) de los átomos de hidrógeno con flúor. El término “fluoroalcoxi(C^{x -y} )” (siendo cada uno de x e y un número entero) se refiere a un grupo fluoroalcoxi de acuerdo con lo definido anteriormente que contiene de x a y átomos de carbono. Por ejemplo, un grupo fluoroalcoxi(C^{1 - 3} ) contiene de uno a tres átomos de carbono, en los que se han reemplazado de uno a siete átomos de hidrógeno con flúor. Los ejemplos representativos de grupos fluoroalcoxi incluyen trifluorometoxi, difluorometoxi, 2-fluoroetoxi, 2,2-difluoroetoxi y 2,2,2-trifluoroetoxi. Son preferibles los grupos fluoroalcoxi(C¹ ) tales como trifluorometoxi y difluorometoxi, así como también 2,2,2-trifluoroetoxi.

El término "cicloalquilo”, utilizado solo o en combinación, se refiere a un anillo hidrocarburo monocíclico saturado que contiene de tres a seis átomos de carbono. El término "cicloalquilo(C^{x -y} )” (siendo cada uno de x e y es un número entero), se refiere a un grupo cicloalquilo de acuerdo con lo definido anteriormente que contiene de x a y átomos de carbono. Por ejemplo, un grupo cicloalquilo(C^{3 -6} ) contiene de tres a seis átomos de carbono. Los ejemplos de grupos cicloalquilo son ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. Son preferibles ciclopropilo, ciclobutilo y ciclopentilo; especialmente ciclopropilo.

El término "ciano" se refiere a un grupo -CN.

Los compuestos de la fórmula (I) están sustituidos con un grupo ácido carboxílico -COOH; se entiende que dicho grupo ácido carboxílico puede estar presente en forma de un grupo profármaco. Dichos profármacos están abarcados dentro del alcance de la presente invención. En ciertos casos, los compuestos que comprenden dichos grupos ácido carboxílico profármacos pueden exhibir en sí mismos actividad biológica sobre el receptor EP2, en tanto que, en otros casos, dichos compuestos que comprenden esos grupos ácido carboxílico como profármacos requieren la escisión (por ej., enzimática) del profármaco para exhibir actividad biológica sobre el receptor EP2. Los profármacos del grupo funcional ácido carboxílico son muy conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, J. Rautio (Ed.) Prodrugs and Targeted Delivery: Towards Better ADME Properties, Volumen 47, Wiley 2010, iSb N: 978-3-527-32603-7; H. Maag en Stella, V., Borchardt, R., Hageman, M., Oliyai, R., Maag, H.,Tilley, J. (Eds.) Prodrugs: Challenges and Rewards, Springer 2007, ISBN 978-0-387-49785-3).

Los ejemplos específicos de profármacos, por ejemplo, los adecuados para dichos grupos -COOH son:

• grupos éster-CO -O-P1 en los que P1 es, por ejemplo, alquilo(C^{i - 4} ); cicloalquilo(C^{3 -6} ) en el que el cicloalquilo(C^{3 -6}) contiene opcionalmente un átomo de oxígeno en el anillo; cicloalquilo(C^{3 -6} )-alquilo(C ^{i - 3} ) en el que el cicloalquilo(C^{3 -6} ) contiene opcionalmente un átomo de oxígeno en el anillo; fluoroalquilo(C ^{i - 3} ); hidroxi-alquilo(C^{2 -4}) o alcoxi(C^{i - 4} )-alquilo(C^{2 - 4} ) (especialmente P1 es alquilo(C^{i - 4} ), en particular metilo o etilo);

• grupos -CO -N H -SO ²-R S3 en los que RS3 representa alquilo(C^{i - 4} ), cicloalquilo(C^{3 -6} ) en el que el cicloalquilo(C^{3 -6} ) contiene opcionalmente un átomo de oxígeno en el anillo; cicloalquil(C^{3 -6} )-alquilo(C ^{i - 3} ) en el que el cicloalquilo(C^{3 -6}) contiene opcionalmente un átomo de oxígeno en el anillo; fluoroalquilo(C ^{i - 3} ), fenilo, -N H ² ; (especialmente RS3 es alquilo(C^{i - 4} ), cicloalquilo(C^{3 -6} ) o fenilo; en particular metilo);

• grupos — CO-R01 en los que RO1 representa -O -C H ²-C O -R 04, en el que RO4 representa hidroxi o alcoxi(C ^{i - 4} ), o -N[alquilo(C ^{i - 4} )]² (especialmente -C O -O -C H ²-COOH, -C O -O -C H ²-CO-N(CH ³)²);

• grupos -C O -R 01 en los que R01 representa -O -C H ²-O -C O -R 05, en el que R05 representa alquilo(C^{i - 4} ) o alcoxi(C ^{i - 4} ) (especialmente -C O -O -C H ²-O -CO -O -etilo , -C O -O -C H ²-O-CO-propilo);

• grupos -C O -R 01 en los que R01 representa -O -C H ²-C H ²-N[alquilo(C ^{i - 4} )]² (especialmente -C O -O -C H ²-C H ²-N(CH³)²); y

• grupos-CO -R01 en los que R01 representa 5-m etil-2-oxo-[i,3]dioxol-4-il)-m etiloxi-.

Siempre que se utiliza la palabra “entre” para describir un intervalo numérico, se ha de entender que los puntos finales del intervalo indicado están explícitamente incluidos en el intervalo. Por ejemplo: si se indica que un intervalo de temperatura es de entre 40 °C y 80 °C, esto significa que los puntos finales 40 °C y 80 °C están incluidos en el intervalo; o si se define que una variable es un número entero entre i y 4, esto significa que la variable es el entero i, 2, 3 o 4.

A menos que se utilice con respecto a las temperaturas, el término “aproximadamente” situado antes de un valor numérico “X” se refiere, en la presente solicitud, a un intervalo que se extiende desde X menos i0 % de X a X más i0 % de X, y preferentemente a un intervalo que se extiende desde X menos 5 % de X a X más 5 % de X. En el caso específico de las temperaturas, el término “aproximadamente” situado antes de una temperatura “Y” se refiere, en la presente solicitud, a un intervalo que se extiende desde la temperatura Y menos i0 °C a Y más i0 °C , y preferentemente a un intervalo que se extiende desde Y menos 5 °C a Y más 5 °C. Además, la expresión “temperatura ambiente” se refiere, en el presente contexto, a una temperatura de aproximadamente 25 °C.

En adelante se presentan otras formas de realización de la invención:

2) Una segunda forma de realización se relaciona con compuestos de acuerdo con la forma de realización i), en los cuales R1 representa hidrógeno.

3) Otra forma de realización se relaciona con compuestos de acuerdo con la forma de realización i), en los cuales R1 representa metilo.

4) Otra forma de realización se relaciona con compuestos de acuerdo con una cualquiera de las formas de realización i ) a 3), en los cuales R2 representa metilo.

5) Otra forma de realización se relaciona con compuestos de acuerdo con una cualquiera de las formas de realización i ) a 3), en los cuales R2 representa cloro o bromo (especialmente cloro).

6) Otra forma de realización se relaciona con compuestos de acuerdo con una cualquiera de las formas de realización i ) a 3), en los cuales R2 representa ciano.

7) Otra forma de realización se relaciona con los compuestos más preferidos de acuerdo con la forma de realización i ) que son seleccionados entre los siguientes compuestos:

Ácido 4—[6—[2—(2—metil—indol—1—il)—etilamino]—pirimidin—4—il]—benzoico;

Ácido 4—[6-[2-(2-ciano-indol-1-il)-etilam ino]-pirim idin-4-il}-benzoico;

Ácido 4 -(6-[2-(2,7-dimetil-indol-1-il)-etilamino]-pirim idin-4-il}-benzoico;

Ácido 4 -(6-[2-(2-cloro-indol-1-il)-etilamino]-pirim idin-4-il}-benzoico; y

Ácido 4 -(6-[2-(2-bromo-indol-1-il)-etilamino]-pirim idin-4-il}-benzoico.

Los compuestos de la fórmula (I) de acuerdo con las formas de realización 1) a 7) y sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser utilizados como medicamentos, por ej., en forma de composiciones farmacéuticas para la administración entérica (como, especialmente, oral, por ej., en forma de comprimido o cápsula) o parenteral (incluyendo por aplicación tópica o inhalación).

La producción de las composiciones farmacéuticas se puede realizar de manera que resulte familiar para una persona con capacitación en la técnica (ver, por ejemplo, Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 21a Edición (2005), Parte 5, “Pharmaceutical Manufacturing” [publicado por Lippincott Williams & Wilkins]) transformando a los compuestos descritos de la fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables, opcionalmente en combinación con otras sustancias de valor terapéutico, en una forma de administración galénica junto con materiales portadores sólidos o líquidos adecuados, no tóxicos, inertes, terapéuticamente compatibles y, si resulta conveniente, los coadyuvantes farmacéuticos habituales.

La presente invención también se relaciona con un procedimiento para la prevención / profilaxis o tratamiento de una enfermedad o trastorno mencionado en la presente, que comprende administrar a un sujeto una cantidad farmacéuticamente activa de un compuesto de la fórmula (I) de acuerdo con las formas de realización 1) a 7).

En una forma de realización preferida de la invención, la cantidad administrada está comprendida entre 1 mg y 2000 mg por día, especialmente entre 5 mg y 1000 mg por día, más específicamente entre 25 mg y 500 mg por día, especialmente entre 50 mg y 200 mg por día.

Siempre que se utiliza la palabra “entre” para describir un intervalo numérico, se ha de entender que los puntos finales del intervalo indicado están explícitamente incluidos en el intervalo. Por ejemplo: si se indica que un intervalo de temperatura es de entre 40 °C y 80 °C, esto significa que los puntos finales 40 °C y 80 °C están incluidos en el intervalo; o si se define que una variable es un número entero entre 1 y 4, esto significa que la variable es el entero 1, 2, 3 o 4.

A menos que se utilice con respecto a las temperaturas, el término “aproximadamente” situado antes de un valor numérico “X” se refiere, en la presente solicitud, a un intervalo que se extiende desde X menos 10 % de X a X más 10 % de X, y preferentemente a un intervalo que se extiende desde X menos 5 % de X a X más 5 % de X. En el caso específico de las temperaturas, el término “aproximadamente” situado antes de una temperatura “Y” se refiere, en la presente solicitud, a un intervalo que se extiende desde la temperatura Y menos 10 °C a Y más 10 °C, y preferentemente a un intervalo que se extiende desde Y menos 5 °C a Y más 5 °C.

Para evitar toda duda posible, si se describe que los compuestos son ventajosos para la prevención / profilaxis o tratamiento de ciertas enfermedades, dichos compuestos son igualmente adecuados para usar en la preparación de un medicamento para la prevención / profilaxis o tratamiento de dichas enfermedades. De igual modo, dichos compuestos también son adecuados en un procedimiento para la prevención / profilaxis o tratamiento de dichas enfermedades, que comprende la administración a un sujeto (mamífero, especialmente humano) que lo necesita, una cantidad eficaz de dicho compuesto.

Los compuestos de la fórmula (I) de acuerdo con las formas de realización 1) a 7) son útiles para la prevención / profilaxis o tratamiento de trastornos relacionados con el EP2 y/o, en caso de utilizarse en combinación con un modulador del receptor EP4 de la PGE2, con ambos receptores, EP2 y EP4.

Los compuestos que inhiben el receptor EP4 son, en particular, los compuestos 4-[[4-(5 -m etoxi-2-piridinil)fenoxi]metil]-5-metil-N-[(2-metilfenil)sulfonil]-2-furancarboxamida (BGC-20-1531, BGC20-1531; WO2004/067524); N—[[2,4—(2—etil—4,6—dimetil—1H—imidazo[4,5—c]piridin—1—il)feniletilamino]carbonil]—4—metil— bencensulfonamida (Grapiprant, AAT-007, CJ-023423, MR-10A7, RQ-00000007, RQ-07, RQ-7-; W02002/032900); ácido 4-[(1S)-1-[p-(difluorometil)-1-m etil-5-[3-(trifluorometil)fenoxi]-1H-pirazol-4-il]carbonil]amino]etil]-benzoico (E-7046, ER-886046-00; W02012/039972); CR-6086 (W02012/076063); ONO-4578 (W02016/111347) y ácido 4-[1(S)-[5-Cloro-2-(3-fluorofenoxi)piridin-3-ilcarboxamido]etil]benzoico (AaT-008, RQ-08, RQ-00000008; W02005/021508); así como también los compuestos dados a conocer en los documentos WO2017/066633 W02017/014323 W02016/111347 W02016/021742 W02015/179615 W02015/147020; W02015/091475 W02015/094912 W02015/094902 W02014/200075 W02014/186218 W02014/126746; W02014/122267 W02014/086739 W02014/004230 W02014/004229 W02013/004290 W02012/103071; W02012/076063 W02012/043634 W02012/039972 W02010/034110 W02010/032123 W02010/019796; W02009/139373 W02009/005076 W02008/123207 W02008/116304 W02008/104055 W02008/017164; W02007/143825 W02007/121578 W02006/122403 W02005/105733 W02005/105732 W02005/037812; W02005/021508 W02004/067524 W02003/099857 W02003/086390 W02003/087061 W02002/064564; W02002/050032 W02002/050033; W02002/032422; W02001/072302.

Ciertos compuestos de la fórmula (I) de acuerdo con las formas de realización 1) a 7) exhiben su actividad biológica como moduladores del receptor de prostaglandina 2 EP2 en un entorno biológico, (es decir en presencia de una o más enzimas con capacidad para romper un enlace covalente ligado a un grupo carbonilo tal como una amidasa, una esterasa o cualquier equivalente adecuado de las mismas con capacidad para separar un grupo profármaco de un grupo ácido carboxílico.

Las enfermedades o trastornos relacionados con el EP2 y/o, si se utiliza dicho compuesto en combinación con un modulador del receptor EP4 de la PGE2, o con ambos receptores EP2 y EP4, son especialmente

• cáncer (notablemente melanoma, incluyendo melanoma metastásico; cáncer de pulmón que incluye cáncer de pulmón de células no pequeñas; cáncer de vejiga que incluye cáncer de vejiga urinaria, carcinoma de células uroteliales, carcinomas renales, incluyendo carcinoma de células renales, carcinoma metastásico de células renales, carcinoma metastásico de células claras renales; cánceres gastrointestinales incluyendo cáncer colorrectal, cáncer colorrectal metastásico, poliposis adenomatosa familiar (FAP, por sus siglas en inglés), cáncer esofágico, cáncer gástrico, cáncer de vesícula biliar, colangiocarcinoma, carcinoma hepatocelular y cáncer de páncreas tal como adenocarcinoma pancreático o carcinoma ductal pancreático; cáncer de endometrio; cáncer de ovario; cáncer de cuello uterino; neuroblastoma; cáncer de próstata incluyendo cáncer de próstata resistente a la castración; tumores cerebrales incluyendo metástasis, gliomas malignos, glioblastoma multiforme, meduloblastoma, meningiomas; cáncer mamario, incluyendo carcinoma mamario triple negativo; tumores bucales; tumores nasofaríngeos; cáncer torácico; cáncer de cabeza y cuello; leucemias, incluyendo leucemia mieloide aguda, leucemia de linfocitos T del adulto; carcinomas; adenocarcinomas; carcinoma tiroideo, incluyendo carcinoma tiroideo papilar; coriocarcinoma; sarcoma de Ewing; osteosarcoma; rabdomiosarcoma; sarcoma de Kaposi; linfoma, incluyendo linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkin, linfoma MALT; mielomas múltiples y tumores inducidos por virus; especialmente melanoma; cáncer de pulmón; cáncer de vejiga; carcinomas renales; cánceres gastrointestinales; cáncer de endometrio; cáncer de ovario; cáncer de cuello uterino y neuroblastoma);

así como también otras enfermedades o trastornos relacionados con los receptores EP2 y/o EP4 tales como:

dolor (notablemente dolor inflamatorio y dolor menstrual);

endometriosis;

enfermedad de riñón poliquístico autosómica dominante;

síndromes isquémicos agudos en pacientes con aterosclerosis;

neumonía y

enfermedades neurodegenerativas, incluyendo esclerosis lateral amiotrófica, apoplejía; enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer y demencia asociada al VIH;

• y además, los antagonistas de EP2 y/o EP4 se pueden utilizar para controlar la fertilidad femenina.

Otras enfermedades o trastornos relacionados con los receptores de EP2 y/o EP4 son trastornos autoinmunitarios tales como, especialmente, esclerosis múltiple, artritis reumatoide y osteoartritis; y osteoporosis.

Los compuestos de la fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las formas de realización 1) a 7) son útiles, en particular, como agentes terapéuticos para la prevención / profilaxis o tratamiento de un cáncer. Se pueden utilizar como agentes terapéuticos únicos, en los que para la prevención / profilaxis o tratamiento de un cáncer se utilizan dichos compuestos preferentemente en combinación con un modulador del receptor EP4 de la PGE2; y, además, opcionalmente en combinación con uno o más agentes para quimioterapia y /o radioterapia y /o terapia dirigida. Dicho tratamiento combinado se puede realizar en forma simultánea, separada o en el curso de un período de tiempo.

La invención se relaciona, además, por consiguiente, con composiciones farmacéuticas que comprenden un material portador farmacéuticamente aceptable y:

• un compuesto de la fórmula (I) de acuerdo con cualquiera de las formas de realización 1) a 7); y/o

un modulador del receptor EP4 de la PGE2; y/o

• y uno o más agentes quimioterapéuticos citotóxicos.

La invención se relaciona además, por consiguiente, con un kit que comprende

• una composición farmacéutica, comprendiendo dicha composición un material portador farmacéuticamente aceptable y:

> un compuesto de la fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las formas de realización 1) a 7);

• e instrucciones para usar dicha composición farmacéutica para la prevención / profilaxis o tratamiento de un cáncer, en combinación con quimioterapia y /o radioterapia y /o terapia dirigida.

Los términos "radioterapia" o "terapia de radiación” u “oncología de radiación” se refieren al uso médico de la radiación ionizante en la prevención / profilaxis (terapia adyuvante) y / o al tratamiento del cáncer; incluyendo radioterapia externa e interna.

La expresión "terapia dirigida" se refiere a la prevención / profilaxis (terapia adyuvante) y / o al tratamiento del cáncer con uno o más agentes anti-neoplásicos tales como moléculas o anticuerpos que actúan sobre tipos específicos de células cancerosas o células estromales. Algunas terapias dirigidas bloquean la acción de ciertas enzimas, proteínas u otras moléculas implicadas en el desarrollo y diseminación de las células cancerosas. Otros tipos de terapias dirigidas ayudan al sistema inmunitario a destruir las células cancerosas (inmunoterapias); o a inhibir la angiogénesis, el desarrollo y formación de nuevos vasos sanguíneos en el tumor; o a administrar sustancias tóxicas directamente a las células cancerosas y destruirlas. Un ejemplo de terapia dirigida que es especialmente adecuada para combinarse con los compuestos de la presente invención es la inmunoterapia, especialmente inmunoterapia dirigida al receptor de muerte celular programada 1 (receptor PD-1) o su ligando p D -L1 (Zelenay et al., 2015, Cell 162, 1-14; Yongkui Li et al., Oncoimmunology 2016, 5(2):e1074374).

Cuando se utiliza en combinación con los compuestos de la fórmula (I), la expresión "terapia dirigida" se refiere especialmente a agentes tales como:

a) Inhibidores o anticuerpos bloqueantes del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR, por sus siglas en inglés) (por ejemplo, Gefitinib, Erlotinib, Afatinib, Icotinib, Lapatinib, Panitumumab, Zalutumumab, Nimotuzumab, Matuzumab y Cetuximab);

b) inhibidores de la vía de RAS/RAF/MEK (por ejemplo, Vemurafenib, Sorafenib, Dabrafenib, GDC-0879, PLX-4720, LGX818, RG7304, Trametinib (GSK1120212), Cobimetinib (GDC-0973/XL518), Binimetinib (MEK162, ARRY-162), Selumetinib (AZD6244));

c) Inhibidores de la aromatasa (por ejemplo, Exemestano, Letrozol, Anastrozol, Vorozol, Formestano, Fadrozol); d) Inhibidores de la angiogénesis, especialmente inhibidores de la señalización del VEGF tales como Bevacuzimab (Avastina), Ramucirumab, Sorafenib o Axitinib;

e) Inhibidores del punto de control inmunitario (por ejemplo: anticuerpos anti-PD1 tales como Pembrolizumab (Lambrolizumab, MK-3475), Nivolumab, Pidilizumab (CT-011), AMP-514/MED10680, PDR001, SHR-1210; REGN2810, BGBA317; proteínas de fusión dirigidas a p D -1 tales comoAMP-224; agentes anti-PD1 de pequeñas moléculas tales como, por ejemplo, los compuestos dados a conocer en los documentos WO2015/033299, WO2015/044900 y WO2015/034820; anticuerpos anti-PD1L, tales como BMS-936559, atezolizumab (MPDL3280A, RG7446), MEDI4736, avelumab (MSB0010718C), durvalumab (MEDI4736); anticuerpos anti-PDL2, tales como AMP224; anticuerpos anti-CTLA-4, tales como ipilimumab, tremilmumab; anticuerpos anti-gen de activación de linfocitos 3 (LAG-3), tales como BMS-986016, IMP701, MK-4280, ImmuFact IMP321; anticuerpos anti-inmunoglobulina de linfocitos T mucina-3 (TIM-3), tales como MBG453; anticuerpos anti-CD137/4-1BB tales como BMS-663513 / urelumab, PF-05082566; anticuerpos contra el inmunorreceptor de linfocitos T con dominios de Ig e ITIM (TIGIT), tales como RG6058 (anti-TIGIT, MTIG7192A);

f) Estrategias de vacunación (por ejemplo, vacunación con células dendríticas, vacunación con péptidos o proteínas (por ejemplo, con el péptido gp100 o el péptido MAGE-A3);

g) La reintroducción de células cancerosas originarias del paciente o alogénicas (no propias) genéticamente modificadas para secretar factores inmunomoduladores tales como la vacuna de células tumorales transfectadas con el gen del factor estimulador de colonias de granulocitos y monocitos (GMCSF) (GVAX) o la vacuna de células tumorales transfectadas en el gen del ligando de tirosina cinasa 3 relacionada con Fms 3 (Flt-3) (FVAX), o la vacuna basada en tumores GM-CSF con potenciación del receptor tipo Toll (TEGVAX);

h) Inmunoterapias de adopción basadas en linfocitos T, incluyendo linfocitos T modificados con el receptor antigénico quimérico (CAR) (por ejemplo, CTL019);

i) Terapia basada en citocinas o inmunocitocinas (por ejemplo, Interferón alfa, interferón beta, interferón gamma, interleucina 2, interleucina 15);

j) Agonistas del receptor tipo Toll (TLR) (por ejemplo, resiquimod, imiquimod, glucopiranosilo lípido A, oligodesoxinucleótidos CpG);

k) Análogos de talidomida (por ejemplo, Lenalidomida, Pomalidomida);

l) Inhibidores de la indolamin-2,3-Dioxgenasa (IDO) y/o Triptófeno-2,3-Dioxigenasa (TDO) (por ejemplo, RG6078 / NLG919 / GDC-0919; Indoximod / 1MT (1-metiltriptófano), INCB024360 / Epacadostat, PF-06840003 (EOS200271), F001287);

m) Activadores de receptores co-estimuladores de linfocitos T (por ejemplo, anti-OX40/CD134 (superfamilia del receptor de factor de necrosis tumoral, miembro 4, como RG7888 (MOXR0916), 9B12; MEDI6469, GSK3174998, MEDI0562), anti-ligando OX40/CD252; anticuerpos anti-gen relacionado como la familia de TNFR inducido por glucocorticoides (GITR) (como TRX518, MEDI1873, MK-4166, BMS-986156), anti-CD40 (miembro 5 de la superfamilia del receptor de TNF) (tales como Dacetuzumab (SGN-40), HCD122, CP-870,893, RG7876, ADC-1013, APX005M, SEA-CD40); anticuerpos anti-Ligando CD40 (tales como BG9588); anticuerpos anti-CD27 tales como Varlilumab);

n) Moléculas que se unen a un antígeno específico de tumores así como un marcador superficial de linfocitos T, tales como anticuerpos biespecíficos (por ejemplo, RG7802 dirigido a CEA y CD3) o fragmentos de anticuerpos, proteínas miméticas de anticuerpos tales como las proteínas de repetición de anquirina diseñadas (DARPINS), captador de linfocitos T biespecíficos (BITE, por ejemplo, AMG103, AMG330);

o) Anticuerpos o inhibidores de bajo peso molecular dirigidos al receptor del factor estimulante de colonias 1 (CSF-1R) (por ejemplo, Emactuzumab (RG7155), Cabiralizumab (FPA-008), PLX3397);

p) Agentes dirigidos a puntos de control de células inmunitarias en linfocitos citolíticos naturales tales como anticuerpos contra receptores tipo inmunoglobulina contra células citolíticas (KIR), por ejemplo, Lirilumab (IPH2102/BMS-986015);

q) Agentes dirigidos a los receptores de adenosina o las ectonucleasas CD39 y CD73 que convierten ATP a Adenosina, tales como MEDI9447 (anticuerpo anti-CD73), PBF-509; CPI-444 (antagonista del receptor de adenosina A2a).

Cuando se utilizan en combinación con los compuestos de la fórmula (I), los inhibidores del punto de control inmunitario son los enumerados bajo d), y son especialmente preferibles los que se dirigen al receptor de muerte celular programada 1 (receptor PD-1) o su ligando PD-L1.

El término "quimioterapia" se refiere al tratamiento del cáncer con uno o más agentes anti-neoplásicos citotóxicos (“agentes quimioterapéuticos citotóxicos”). La quimioterapia se utiliza con frecuencia en combinación con otros tratamientos del cáncer, tales como radioterapia o cirugía. El término se refiere especialmente a agentes quimioterapéuticos citotóxicos convencionales que actúan destruyendo las células que se dividen rápidamente, una de las principales propiedades de la mayoría de las células cancerosas. La quimioterapia puede emplear un fármaco en un momento (quimioterapia con agente único) o varios fármacos al mismo tiempo (quimioterapia combinatoria o poliquimioterapia). La quimioterapia que utiliza fármacos que se convierten a la actividad citotóxica sólo tras la exposición a la luz se denomina fotoquimioterapia o terapia fotodinámica.

La expresión “agente quimioterapéutico citotóxico” o “agente quimioterapéutico” se refiere, en el presente contexto, a un agente anti-neoplásico activo que induce apoptosis o muerte celular necrótica. Cuando se utiliza en conexión con los compuestos de la fórmula (I), la expresión se refiere especialmente a agentes quimioterapéuticos citotóxicos convencionales tales como:

a) agentes alquilantes (por ejemplo, mecloretamina, clorambucilo, ciclofosfamida, ifosfamida, estreptozocina, carmustina, lomustina, melfalán, dacarbazina, temozolomida, fotemustina, tiotepa o altretamina; especialmente ciclofosfamida, carmustina, melfalán, dacarbazina o temozolomida);

b) fármacos de platino (especialmente cisplatino, carboplatino u oxaliplatino);

c) fármacos de antimetabolitos (por ejemplo, 5-fluorouracilo, ácido fólico/leucovorina, capecitabina, 6 -mercaptopurina, metotrexato, gemcitabina, citarabina, fludarabina o pemetrexed; especialmente 5-fluorouracilo, ácido fólico/leucovorina, capecitabina, metotrexato, gemcitabina o pemetrexed);

d) antibióticos antitumorales (por ejemplo, daunorubicina, doxorubicina, epirubicina, idarubicina, actinomicina-D, bleomicina, mitomicina-C o mitoxantrona; especialmente doxorubicina);

e) inhibidores de la mitosis (por ejemplo, paclitaxel, docetaxel, ixabepilona, vinblastina, vincristina, vinorelbina, vindesina o estramustina; especialmente paclitaxel, docetaxel, ixabepilona o vincristina); o

f) inhibidores de la topoisomerasa (por ejemplo, etopósido, tenipósido, topotecano, irinotecano, diflomotecano o elomotecano; especialmente etopósido o irinotecano).

Cuando se utilizan en combinación con los compuestos de la fórmula (I), los agentes quimioterapéuticos citotóxicos preferidos son los agentes alquilantes antes citados (notablemente fotemustina, ciclofosfamida, ifosfamida, carmustina, dacarbazina y profármacos de los mismos, tales como, especialmente, temozolomida o las sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos; en particular temozolomida); inhibidores de la mitosis (notablemente paclitaxel, docetaxel, ixabepilona; o las sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos; en particular paclitaxel); fármacos de platino (notablemente cisplatino, oxaliplatino y carboplatino); así como también etopósido y gemcitabina.

La quimioterapia puede administrarse con intención curativa o puede apuntar a prolongar la vida o a paliar síntomas.

• La quimioterapia de modalidad combinada es el uso de fármacos con otros tratamientos para el cáncer, tales como terapia de radiación o cirugía.

• La quimioterapia de inducción es el tratamiento del cáncer de primera línea con un fármaco quimioterapéutico. Este tipo de quimioterapia se utiliza con intención curativa.

• La quimioterapia de consolidación es la administrada después de la remisión a fin de prolongar el tiempo libre de enfermedad total y mejorar la supervivencia general. El fármaco que se administra es el mismo fármaco que logró la remisión.

• La quimioterapia de intensificación es idéntica a la quimioterapia de consolidación, excepto que se utiliza un fármaco diferente de la utilizada en la quimioterapia de inducción.

• La quimioterapia combinatoria conlleva el tratamiento de un paciente con un número de fármacos diferentes en forma simultánea. Los fármacos difieren en su mecanismo y sus efectos secundarios. La mayor ventaja es la minimización de las posibilidades de desarrollar resistencia a un agente cualquiera. Además, con frecuencia se pueden utilizar los fármacos en dosis inferiores, reduciendo la toxicidad.

• La quimioterapia neoadyuvante se administra antes de un tratamiento local tal como cirugía, y está destinado a encoger el tumor primario. También se administra a cánceres con alto riesgo de enfermedad micrometastásica.

• La quimioterapia adyuvante se aplica tras un tratamiento local (radioterapia o cirugía). Se puede utilizar cuando hay poca evidencia de cáncer presente, aunque sí existe riesgo de recurrencia. También es de utilidad para destruir las posibles células cancerosas que se hayan diseminado a otras partes del cuerpo. Estas micrometástasis pueden ser tratadas con quimioterapia adyuvante y esta puede reducir las tasas de recidiva causadas por estas células diseminadas.

• La quimioterapia de mantenimiento es un tratamiento repetido en bajas dosis para prolongar la remisión.

• La quimioterapia de recuperación o quimioterapia paliativa se administra sin intención curativa, sino simplemente para reducir la carga tumoral y aumentar la expectativa de vida. Para estos regímenes, generalmente se espera mejorar el perfil de toxicidad.

“Simultáneamente”, al referirse a un tipo de administración, significa, en la presente solicitud, que el tipo de administración en cuestión consiste en la administración de dos o más principios activos y/o tratamientos aproximadamente al mismo tiempo; en la que se entiende que una administración simultánea ha de llevar a la exposición del sujeto a los dos o más principios activos y/o tratamientos al mismo tiempo. Cuando se administran simultáneamente, se pueden administrar dichos dos o más principios activos en una combinación de dosis fijas, o en una combinación equivalente de dosis no fijas (por ej., utilizando dos o más composiciones farmacéuticas diferentes a administrar por la misma vía de administración aproximadamente al mismo tiempo) o mediante una combinación de dosis no fijas utilizando dos o más vías de administración diferentes; en la que dicha administración lleva a una exposición esencialmente simultánea del sujeto a los dos o más principios activos y/o tratamientos. Por ejemplo, cuando se utilizan en combinación con quimioterapia y/o terapia dirigida adecuada, sería posible utilizar los presentes antagonistas de EP2/EP4 "simultáneamente".

“Combinación de dosis fijas”, en referencia a un tipo de administración, significa, en la presente solicitud, que el tipo de administración en cuestión consiste en la administración de una sola composición farmacéutica que comprende los dos o más principios activos.

“Por separado”, en referencia a un tipo de administración, significa, en la presente solicitud, que el tipo de administración en cuestión consiste en la administración de dos o más principios activos y/o tratamientos en diferentes puntos temporales, en la que se entiende que una administración separada ha de llevar a una fase de tratamiento (por ej., por lo menos 1 hora, notablemente por lo menos 6 horas, especialmente por lo menos 12 horas) en la que se expone al sujeto a los dos o más principios activos y/o tratamientos al mismo tiempo; aunque una administración separada también puede llevar a una fase del tratamiento en la cual, durante un determinado período de tiempo (por ej., por lo menos 12 horas, especialmente por lo menos un día) se expone al sujeto a sólo uno de los dos o más principios activos y/o tratamientos. La administración separada se refiere especialmente a situaciones en las que se da por lo menos uno de los princpios activos y/o tratamientos con una periodicidad sustancialmente diferente de la administración diaria (tal como una o dos veces por día) (por ej., en laa que se da un principio activo y/o tratamiento, por ej., una vez o dos veces por día, y se da la otra, por ej., cada dos días o una vez por semana o incluso con distancias mayores). Por ejemplo, cuando se utilizan en combinación con radioterapia, sería posible usar los presentes antagonistas de EP2/EP4 "por separado".

La expresión administración “en el curso de un período de tiempo” se refiere, en la presente solicitud, a la administración sucesiva de dos o más principios activos y/o tratamientos en diferentes momentos. El término se refiere, en particular, a un procedimiento de administración de acuerdo con el cual toda la administración de uno de los principios activos y/o tratamientos se completa antes de comenzar la administración del otro / otros. De esta manera, es posible administrar uno de los principios activos y/o tratamientos durante varios meses antes de administrar el o los otros principios activos y/o tratamientos.

La administración “en el curso de un período de tiempo” también abarca situaciones en las que se utilizaría el compuesto de fórmula (I) en un tratamiento que comienza una vez terminado un tratamiento quimioterapéutico (por ejemplo, una quimioterapia de inducción) y/o un tratamiento radioterapéutico y/o un tratamiento de terapia dirigida inicial, en la que dicho tratamiento se aplicaría opcionalmente en combinación con otro tratamiento quimioterapéutico y/o tratamiento radioterapéutico y/o tratamiento de terapia dirigida en curso (por ejemplo, en combinación con una quimioterapia de consolidación, una quimioterapia de intensificación, una quimioterapia adyuvante o una quimioterapia de mantenimiento; o equivalentes radioterapéuticos de las mismas); en las que dicho tratamiento quimioterapéutico y/o radioterapéutico y/o tratamiento de terapia dirigida en curso adicional se aplicaría simultáneamente, por separado o en el curso de un período de tiempo en el sentido de que “no se administran con la misma periodicidad”.

Los compuestos de la fórmula (I) definidos en las formas de realización 1) a 7), especialmente en combinación con un modulador del receptor EP4 de la PGE2, son de utilidad asimismo en un procedimiento para modular la respuesta inmunitaria en un sujeto que tiene un tumor, que comprende la administración de una cantidad eficaz del compuesto de fórmula (I); en la que dicha cantidad eficaz reactiva el sistema inmunitario en el tumor de dicho sujeto; en la que dicha cantidad eficaz especialmente:

• contrarresta la polarización de macrófagos asociados a tumores hacia macrófagos M2 promotores de tumores; y/o • regula a menos la activación, expansión y/o la función efectora de las células inmunosupresoras que se han acumulado en un tumor (especialmente de linfocitos T reguladores (Tregs) y/o células supresoras de origen mieloide (MDSC, por sus siglas en inglés)); y/o

• regula a más la expresión de IFN-y y/o TNF-a y/o la IL-12 y/o IL-2 en células inmunitarias tales como células citolíticas naturales, linfocitos T, células dendríticas y macrófagos (llevando a la inducción de la apoptosis de las células tumorales y/o a una tumorigénesis restringida); y/o

• contrarresta directa o indirectamente la activación suprimida, la capacidad de respuesta a la IL-2 y la expansión de los linfocitos T citotóxicos (reduciendo de esa manera la inmunosupresión local).

Los compuestos de la fórmula (I) definidos en las formas de realización 1) a 7), especialmente en combinación con un modulador del receptor EP4 de la PGE2, son de utilidad asimismo en un procedimiento para disminuir el desarrollo de tumores y/o reducir el tamaño de los tumores en un sujeto que presenta un tumor, que comprende la administración de una cantidad eficaz del compuesto de la fórmula (I); en la que dicha cantidad eficaz regula a menos la angiogénesis tumoral (especialmente mediante la reducción de la motilidad y/o supervivencia de las células endoteliales y/o mediante la reducción de la expresión de VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular)); y/o en la que dicha cantidad eficaz disminuye la supervivencia de las células tumorales y/o induce apoptosis de las células tumorales (especialmente mediante la inhibición de la señalización de PI3K/AKT y MAPK).

Los compuestos de la fórmula (I) definidos en las formas de realización 1) a 7), especialmente en combinación con un modulador del receptor EP4 de la PGE2, también son de utilidad en un procedimiento para modular la respuesta inmunitaria que presenta un tumor, que comprende la administración de una cantidad eficaz del compuesto de la fórmula (I); en la que dicha cantidad eficaz reactiva el sistema inmunitario en el tumor de dicho sujeto; en la que dicha cantidad efectiva activa la citotoxicidad y la producción de citocinas de las células citolíticas naturales y/o los linfocitos T citotóxicos.

Parte Experimental

I. Química

Todas las temperaturas se expresan en °C. Se utilizaron materiales de partida existentes en el comercio tal como se recibieron sin más purificación. A menos que se indique específicamente lo contrario, todas las reacciones se llevaron a cabo en artículos de vidrio secados en horno bajo atmósfera de nitrógeno. Los compuestos fueron purificados por cromatografía instantánea en columna en gel de sílice o por HPLC preparativa. Los compuestos descritos en la invención se caracterizan por datos de LC-MS (el tiempo de retención t^R se da en min; el peso molecular obtenido del espectro de masa se expresa en g/mol) usando las condiciones enumeradas a continuación. En casos en que los compuestos de la presente invención aparecen en forma de mezcla de isómeros conformacionales, especialmente visibles en sus espectros de LC-MS, se expone el tiempo de retención del confórmero más abundante.

Equipamiento de análisis de LC-MS:

Bomba de HPLC: Bomba de gradiente binario, Agilent G4220A o equivalente

Automuestreador: Gilson LH215 (con inyector Gilson 845z) o equivalente

Compartimento de columna: Dionex TCC-3000RS o equivalente

Desgasificador: Dionex SRD-3200 o equivalente

Bomba de reposición: Dionex HPG-3200SD o equivalente

Detector de DAD: Agilent G4212A o equivalente

Detector de MS: Analizador de masa cuadripolar simple, Thermo Finnigan MSQPlus o equivalente

Detector de ELS: Sedere SEDEX 90 o equivalente

Procedimiento de LC-MS A

Columna: Zorbax SB-ac (3,5 pm, 4,6 x 50 mm). Condiciones: MeCN [eluyente A]; agua 0,04 % TFA [eluyente B]. Gradiente: 95 % B ^ 5 % B en un lapso de 1,5 min (caudal: 4,5 ml/min). Detección: UV/Vis MS, el t^R se expresa en min.

Equipamiento para la HPLC preparativa:

Bomba de HPLC Gilson 333/334 equipada con desgasificador Gilson LH215, Dionex SRD-3200, Bomba de reposición Dionex ISO-3100A, detector de DAD Dionex DAD-3000, detector de MS Analizador de masa cuadripolar simple, Thermo Finnigan MSQ Plus, divisor de caudal MRA100-000, detector de ELS Polymer Laboratories PL-ELS1000

Condiciones básicas para la HPLC preparativa

Columna: Waters XBridge (10 pm, 75 x 30 mm). Condiciones: MeCN [eluyente A]; agua NH⁴OH 0,5 % (25 % ac.) [eluyente B]; Gradiente: ver la Tabla 1 (caudal: 75 ml/min), el porcentaje inicial del Eluyente A (x) se determina según la polaridad del compuesto que se ha de purificar. Detección: UV/Vis MS

Tabla 1

HPLC preparativa con condiciones ácidas

Columna: Waters Atlantis T3 (10 |jm, 75 x 30 mm). Condiciones: MeCN [eluyente A]; agua HCO2H 0,5 % [eluyente B]; Gradiente ver la Tabla 2 (caudal: 75 ml/min), el porcentaje inicial del Eluyente A (x) se determina según la polaridad del compuesto que se ha de purificar. Detección: UV/Vis MS

Tabla 2

Abreviaturas (que se utilizaron anteriormente o se utilizan en lo sucesivo):

ac. acuoso

atm atmósfera

boc terc-butiloxicarbonilo

d días

DCM diclorometano

DIPEA diisopropil-etilamina, base de Hünig

DMF dimetilformamida

DMSO dimetilsulfóxido

Et2O éter dietílico

EtOAc acetato de etilo

EtOH etanol

Ej. ejemplo

FC cromatografía instantánea en gel de sílice

h hora(s)

hept heptano(s)

HPLC cromatografía líquida de alta resolución

LC-MS cromatografía líquida - espectrometría de masa

Lit. Literatura

MeCN acetonitrilo

MeOH metanol

ml mililitro

min minuto(s)

MW microondas

Ph fenilo

PPh3 trifenilfosfina

prep. preparativa

MR mezcla de reacción

TA temperatura ambiente

s s egundo(s)

sat. saturado (si no se indica lo contrario: ac. sat.)

tBu terc-butilo = butilo terciario

TEA trietilamina

TFA ácido trifluoroacético

THF tetrahidrofurano

TLC cromatografía de capa fina

tR tiempo de retención

triflato trifluorometansulfonato

A - Preparación de derivados de haluro de pirim idina de fórmula (111)

A.1. 6 -C lo ro -N -(2 -(2 -m etil-1H -indo l-1 -il)e til)p irim id in -4 -am ina

A una solución de 4,6-dicloropirimidina (3,00 g, 20,1 mmol) en 2-propanol (50 ml) a TA se agrega 2-(2-m etil-1H -indol-1-il)etan-1-amina (3,68 g, 21,1 mmol) y TEA (3,08 ml, 22,2 mmol). La mezcla así obtenida es mantenida a reflujo durante 2 h, luego se deja enfriar a TA y se concentra bajo presión reducida. Se reparte el residuo entre una solución ac. sat. de NaHCO3 y EtOAc. Se separan las capas y se extrae la capa acuosa una vez más con EtOAc. Se lavan las capas orgánicas combinadas con agua, solución salina, se secan sobre MgSO4, se filtran y se separa el disolvente al vacío para dar el producto buscado en forma de polvo amarillo (5,45 g, 94 %). LC-MS A: tR = 0,87 min;

[M+H]+ = 287,13.

A.1.1. 2 -(2-M etil-1H -indo l-1 -il)e tan-1 -am ina

A una solución de 2-metilindol (10,04 g, 75 mmol) en tolueno (200 ml) se agrega clorhidrato de 2-cloroetilamina (17,4 g, 150 mmol), NaOH recién molido (21,00 g, 525 mmol) e hidrógeno sulfato de tetrabutil amonio (2,037 g, 6 mmol). La mezcla así obtenida es calentada a reflujo y agitada durante 17 h. Luego es enfriada a TA y filtrada a través de un papel filtro. Se tritura el residuo dos veces con tolueno y se filtra. Se concentra el filtrado bajo presión reducida, y se purifica el residuo por FC, empleando un gradiente de DCM/MeOH de 100:0 a 95:5. Después de la concentración de las fracciones que contienen el producto, se obtiene el compuesto del título (13,2 g, 99 %) en forma de resina amarilla: LC-MS A: tR = 0,54 min; [M+H]+ = 175,31.

A .2.1-(2 -((6 -C lo rop irim id in -4 -il)am ino)e til)-1H -indo l-2 -carbon itrilo

Se prepara el compuesto del título de acuerdo con la síntesis de A.1. antes descrita empleando 2,2,2-trifluoroacetato de 2-(2-ciano-1H-indol-1-il)etan-1-am inio; LC-MS A: tR = 0,85 min; [M+H]+ = 298,05.

A.2.1. 2,2,2-trifluoroacetato de 2 -(2 -C iano-1H -indo l-1 -il)e tan -1 -am in io

Se trata una solución de (2-(2-ciano-1H-indol-1-il)etil)carbamato de terc-butilo (2,08 g, 6,56 mmol) en DCM (20 ml) con TFA (20 ml) y se agita la MR durante 1h a TA. Se separan los disolventes al vacío. Se tritura el residuo tres veces en Et2O, para dar el compuesto del título en forma de polvo beige (1,56 g, 81%). LC-MS A: tR = 0,82 min; [M+H]+ = 186,25.

A.2.2. (2-(2-C iano-1H -indo l-1-il)e til)carbam ato de te rc -bu tilo

Se agrega NaH (0,27 g, 6,75 mmol) en porciones a una solución de 1H-indol-2-carbonitrilo (0,80 g, 5,63 mmol) en DMF (25 ml) y se agita la MR a TA durante 15 min. Se agrega gota a gota una solución de N-Boc-2-bromoetil-amina (1,30 g, 5,63 mmol) en DMF (10 ml) y se calienta la MR a 85 °C y se agita a esta temperatura durante 17 h, luego se enfría a TA y se reparte entre Et2O y H2O. Se vuelve a extraer la capa acuosa con Et2O (x3). Se secan las capas orgánicas combinadas sobre MgSO4, se filtran y concentran bajo presión reducida, para dar el compuesto del título en forma de aceite marrón. LC-MS A: tR = 0,90 min; [M+H-Boc]+ = 186,27.

A.3. 6 -C loro-N -(2 -(2 ,7 -d im etil-1H -indo l-1 -il)e til)p irim id in -4 -am ina

Se prepara el compuesto del título de acuerdo con la síntesis de A.1. antes descrita empleando 2-(2-m etil-1H -indol-1-il)etan-1-amina; LC-MS A: tR = 0,91 min; [M+H]+ = 301,19.

A.3.1. 2 -(2-M etil-1H -indo l-1 -il)e tan-1 -am ina

Se prepara el compuesto del título de acuerdo con la síntesis de A.1.1. antes descrita empleando 2,7-dimetilindol; LC-MS A: tR = 0,58 min; [M+H]+ = 189,26.

B - Preparación de ejemplos

Procedimiento general A: Acoplamiento de Suzuki con Pd(PPh3)4

Se purga con argón una mezcla del respectivo derivado de haluro de pirimidina (II) (0,15 mmol), ácido 4 -carboxifenilborónico (0,18 mmol), y K2CO32M (0,3 ml, 0,6 mmol) en etanol (3 ml), se agrega tetrakis-(trifenilfosfina)-paladio (0,0075 mmol) y se calienta la MR a 90 °C de un día para otro. De lo contrario, se puede ejecutar la reacción en un aparato de microondas, a 120 °C durante 10 -30 min. Se filtra la MR a través de un filtro de MicroFiber de vidrio de 0,45 um, se lava con EtOH/MeCN y DMF. Se purifica el producto filtrado por HPLC preparativa o por FC. Como alternativa, se diluye con agua, si es necesario se ajusta el pH y se extrae con EtOAc (3x). Se secan los extractos orgánicos combinados (MgSO4) y se concentran bajo presión reducida. Se purifica el residuo por HPLC preparativa o por FC.

Ejemplo 1: Ácido 4 -{6 -[2 -(2 -M e til- ind o l-1 -il)-e tilam ino ]-p ir im id in -4 -il}-b en zo ico

Se prepara el compuesto del título de acuerdo con el procedimiento general A antes descrito empleando 6 -c loro-N -(2-(2-metil-1H-indol-1-il)etil)pirim idin-4-amina (A.1.) y se obtiene en forma de sólido blancuzco; LC-MS A: tR = 0,67 min; [M+H]+ = 373,09.

Ejemplo 2: Ácido 4 -{6 -[2 -(2 -C ian o -ind o l-1 -il)-e tila m in o ]-p ir im id in -4 -il}-be nzo ico

Se prepara el compuesto del título de acuerdo con el procedimiento general A antes descrito empleando 1 -(2 -((6 -cloropirimidin-4-il)amino)etil)-1H-indol-2-carbonitrilo (A.2.) y se obtiene en forma de sólido blanco; LC-MS A: tR = 0,56 min; [M+H]+ = 384,16.

Ejemplo 3: Ácido 4 -{6 -[2 -(2 ,7 -D im e til- indo l-1 -il)-e tilam ino ]-p ir im id in -4 -il}-benzo ico

Se prepara el compuesto del título de acuerdo con el procedimiento general A antes descrito empleando 6 -c loro-N -(2-(2,7-dimetil-1H-indol-1-il)etil)pirimidin-4-amina (A.3.) y se obtiene en forma de sólido amarillo claro; LC-MS A: tR = 0,69 min; [M+H]+ = 386,92.

Ejemplo 4: Ácido 4 -{6 -[2 -(2 -C lo ro -ind o l-1 -il)-e tila m in o ]-p ir im id in -4 -il}-be nzo ico

Se carga un vial de MW con 4-(6-((2-(2-oxoindolin-1-il)etil)amino)pirimidin-4-il)benzoato de terc-butilo (200 mg, 0,465 mmol), DCM (3 ml) y POCl3 (0,0848 ml, 0,929 mmol), se sella y agita bajo reflujo durante 6h. Se enfría la MR a 0 °C y se inactiva cuidadosamente con NaOH al 32 % hasta obtener un pH básico, y luego se agrega cuidadosamente más agua. Se extrae la capa acuosa con DCM (x 3). Se lavan las capas orgánicas con solución salina, se secan sobre MgSO4, se filtran y concentran bajo presión reducida. Se agrega MeOH y se separa el disolvente bajo presión reducida. Se disuelve el residuo en etanol (2 ml) y H2O (1 ml), se agrega hidróxido de litio monohidrato (101 mg, 2,38 mmol) y se calienta la mezcla a 105 °C durante 1h. Se filtra la mezcla de reacción sobre un filtro de vidrio MicroFiber de 0,45 um y se purifica por HPLC prep básica para dar el compuesto del título en bruto en forma de sólido blanco (16 mg, 9 %). LC-MS A: tR = 0,69 min; [M+H]+ = 393,13.

a) 4-(6-((2-(2-Oxomdolm-1-N)etN)ammo)pmmidm-4-N)benzoato de te rc-bu tilo

Se prepara el compuesto del título de acuerdo con el procedimiento general A antes descrito empleando 1 -(2 -((6 -cloropirimidin-4-il)amino)etil)indolin-2-ona y ácido 4-terc-butoxicarbonilfenilborónico; LC-MS A: tR = 0,75 min;

[M+H]+ = 431,07.

b) 1-(2-((6-C lorop irim id in-4-il)am ino)e til)indo lin -2-ona

Se prepara el compuesto del título de acuerdo con la síntesis de A.1. antes descrita empleando 1-(2-aminoetil)indolin-2-ona,; LC-MS A: tR = 0,70 min; [M+H]+ = 289,13.

Ejemplo 5: Ácido 4 -{6 -[2 -(2 -B ro m o -in do l-1 -il)-e tilam ino ]-p irim id in -4 -il}-b en zo ico

Se carga un vial de MW con 4-(6-((2-(2-oxoindolin-1-il)etil)amino)pirimidin-4-il)benzoato de etilo (60 mg, 0,149 mmol), DCM (2 ml) y POBr3 (64 mg, 0,224 mmol), se sella y se agita bajo reflujo durante 1 h. Se enfría la MR a TA, se agrega imidazol (12,3 mg, 0,179 mmol) y se mantiene la MR a reflujo durante 48 h. Se enfría la MR y se inactiva meticulosamente con NaHCO3 ac. sat. y se extrae con DCM (x 3). Se lavan las capas orgánicas con solución salina, se secan sobre MgSO4, se filtran y concentran bajo presión reducida. Se disuelve el residuo en etanol (2 ml) y H2O (1 ml), se agrega hidróxido de litio monohidrato (35 mg, 0,83 mmol) y se lleva la mezcla a reflujo de un día para otro. Se filtra la mezcla de reacción sobre un filtro de vidrio de 0,45 um MicroFiber y se purifica por HpLC prep. básica para dar el compuesto del título en bruto en forma de sólido amarillo (1 mg, 1 %). Lc-Ms A: tR = 0,69 min; [M+H]+ = 438,85.

a) 4-(6-((2-(2-O xo indolin-1-il)e til)am ino)p irim id in -4-il)benzoato de etilo

Se prepara el compuesto del título de acuerdo con el procedimiento general A antes descrito empleando 1 -(2 -((6 -cloropirimidin-4-il)amino)etil)indolin-2-ona, (ejemplo 4-b) y ácido 4-etoxicarbonilfenilborónico; LC-MS A: tR = 0,69 min; [M+H]+ = 402,94.

Ensayos biológicos in vitro

Se determinan las actividades antagonistas de los compuestos de fórmula (I) sobre los receptores EP2 y EP4 de conformidad con los siguientes procedimientos experimentales.

El ensayo emplea las líneas celulares PathHunterTM HEK 293 PTGER2 y PTGER4 de b-arrestina de DiscoverX. El sistema se basa en la Tecnología de Complementación de Fragmentos de Enzima. Dos fragmentos complementarios de la enzima b-galactosidasa se expresan dentro de células transfectadas en forma estable. Se fusiona la mayor porción de la b-gal, denominada EA por Enzyme Acceptor (Aceptor enzimático), al extremo C de la b-arrestina 2. El fragmento más pequeño, denominado identificador ProLinkTM, se fusiona a PTGER2 (EP2) o PTRGER4 (EP4) en el extremo C. Tras la activación, se recluta la b-arrestina, lo que fuerza la interacción de ProLink y EA, permitiendo la complementación de los dos fragmentos de b-gal y la formación de una enzima funcional con capacidad para hidrolizar el sustrato y generar una señal quimioluminiscente.

Ensayo con hEP2 b-arrestina:

Se desprenden las células de b-arrestina HEK 293 PTGER2 (DiscoverX 93-021-4C1) de las placas de cultivo con un tampón de disociación de células (Invitrogen, 13151-014), y se recogen en medio de cultivo (GM: DMEM Glutamax-1 (Invitrogen 32430) / FCS al 10 %, Penicilina 1 %/estreptomicina). Se siembran 5000 células por pocillo de una placa de 384 pocillos (Greiner 781080 blanca con fondo blanco) en 20 ul por pocillo de GM. Se incuba la placa a 37 °C, con CO2 al 5 % durante 24 horas.

Se preparan soluciones de reserva de los compuestos de ensayo en una concentración de 10 mM en DMSO, y se diluyen en serie en DMSO a las concentraciones indispensables para las curvas de respuesta a la dosis inhibitoria (intervalo de concentraciones analizadas 10 pM-2 nM o 1 pM-0,2 nM).

Se utiliza PGE2 (Cayman 14010, solución de reserva: 10 mM en DMSO) como agonista en una concentración final de 5 |jM, que corresponde a CE80.

Se transfieren cinco microlitros de los compuestos diluidos a una placa de ensayo. Se preincuba la placa durante 15 minutos a 37 °C. Luego se transfieren cinco microlitros de PGE2 (conc. final 5 j M) a la placa de ensayo. Se incuba la placa durante 120 minutos a 37 °C.

Se descongelan los componentes del Kit PathHunter Glo Detection y se mezclan de acuerdo con las instrucciones del fabricante: 1 parte de sustrato Galacton Star con 5 partes de Solución Emerald IITM y 19 partes de tampón de ensayo celular PathHunter, respectivamente. Se transfieren doce j l de reactivo a la placa de ensayo y se incuba durante 1 hora a temperatura ambiente en la oscuridad. Se leen los recuentos de luminiscencia en un lector BMG Fluostar Optima de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Para cada concentración de compuesto se calcula el porcentaje de actividad en comparación con el valor del control de DMSO en términos de promedio ± STDEV. (se mide cada concentración por duplicado)

Se generan los valores y curvas de CI50 con el software XLfit (IDBS) empleando el modelo de respuesta a dosis de un sitio 203. Cuando se midieron los compuestos múltiples veces, se presentan los valores medios.

Ensayo de b-arrestina hEP4:

Se separan las células de b-arrestina HEK 293 PTGER4 (DiscoverX 93-030-4C1) de las placas de cultivo con un tampón de disociación celular (Invitrogen, 13151-014) y se recogen en medio de cultivo (GM: DMEM Glutamax-I (Invitrogen 32430)/FCS 10%, penicilina 1 %/estreptomicina). Se siembran 5000 células por pocillo de una placa de 384 pocillos (Greiner 781080 blanca con fondo blanco) en 20 pl por pocillo de GM. Se incuba la placa a 37 °C, con CO2 al 5 % durante 24 horas.

Se preparan soluciones de reserva de los compuestos de ensayo en una concentración de 10 mM en DMSO, y se diluyen en serie en DMSO a las concentraciones indispensables para las curvas de respuesta a la dosis inhibitoria (intervalo de concentraciones analizadas 10 j M -2 nM o 1 j M -0,2 nM).

Se utiliza PGE2 (Cayman 14010, solución de reserva: 10 uM en DMSO) como agonista en una concentración final de 20 nM, que corresponde a CE80.

Se transfieren cinco microlitros de los compuestos diluidos a la placa de ensayo. Se preincuba la placa durante 15 minutos a 37 °C. Luego se transfieren cinco microlitros de PGE2 (conc. final 20 nM) a la placa de ensayo. Se incuba la placa durante 120 minutos a 37 °C.

Se descongelan los componentes del Kit de Detección PathHunter Glo y se mezclan de acuerdo con las instrucciones del fabricante: 1 parte de Sustrato Galacton Star con 5 partes de Solución Emerald IITM y 19 partes de tampón de Ensayo Celular PathHunter, respectivamente. Se transfieren doce j l de reactivo a la placa de ensayo y se incuban durante 1 hora a temperatura ambiente en la oscuridad. Se leen los recuentos de luminiscencia en un lector BMG Fluostar Optima de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Para cada concentración de compuesto se calcula el porcentaje de actividad en comparación con el valor del control de DMSO en términos de promedio ± STDEV. (se mide cada concentración por duplicado)

Se generan los valores y curvas de CI50 con el software XLfit (IDBS) empleando el modelo de respuesta a dosis de un sitio 203. Cuando se midieron los compuestos múltiples veces, se presentan los valores medios.

Se determinan las actividades antagonistas de los compuestos de la fórmula (I) sobre los receptores EP2 y EP4 de conformidad con los siguientes procedimientos experimentales.

Se utilizan líneas de células tumorales humanas que expresan de manera endógena el EP4 o EP2 y se supervisa la acumulación de AMPc en las células tras la estimulación de la PGE2. Las células de glioblastoma SF295 expresan altas cantidades de EP2 endógeno y no expresan EP4, mientras que las células de cáncer mamario BT549 expresan altos niveles de EP4 endógeno y niveles muy bajos de EP2.

Como procedimiento de detección de AMPc se utilizó el kit de HTRF (fluorescencia homogénea resuelta en el tiempo) Cisbio (kit HTRF cAMP dynamic 2 20.000 pruebas Cisbio Cat. N.° 62AM4PEC), que se basa en un inmunoensayo competitivo empleando un anticuerpo anti-AMPc marcado con criptato y AMPc marcado con d2. El AMPc nativo producido por las células o AMPc sin marcar (en el caso de la curva patrón) compiten con el AMPc marcado con d2 agregado en forma exógena (aceptor) para unirse al anti-AMPc-Eu3+ Criptato monoclonal (donador). Se obtiene una señal FRET (Transferencia de Energía Fluorescente por Resonancia) solo si el anticuerpo anti-AMPc marcado se une al AMPc marcado con d2; por consiguiente, la señal específica, (es decir la transferencia de energía) es inversamente proporcional a la concentración de AMPc en el patrón o la muestra.

Ensayo de AMPc hEP2:

Se desprenden las células SF295 (NCI/n.° 0503170) de las placas de cultivo con un tampón de disociación celular (Invitrogen, 13151-014), y se recogen en medio de cultivo (Gm : RPMI1640 (Invitrogen 21875)/FCS 10 %, penicilina 1 %/estreptomicina). Se cuentan y lavan las células y se resuspenden en tampón de ensayo (AB; HBSS, HEPES 20 mM, BSA 0,2 %; IBMX 2 mM). Se siembran 4.000 células en 5 |jl de AB por pocilio de una placa de 384 pocilios de pequeño volumen (negro con fondo plano, Greiner 784076).

Se preparan soluciones de reserva de los compuestos de ensayo en una concentración de 10 mM en DMSO y se diluyen en serie en DMSO a las concentraciones indispensables para las curvas de respuesta a la dosis inhibitoria (intervalo de concentraciones analizadas 30 jM - 0,4 nM; 30 jM - 0,015 nM o 1 jM - 0,01 nM).

Se utiliza PGE2 (Cayman 14010, solución de reserva: 75 mM en DMSO) como agonista en una concentración final de 75 nM, que corresponde a CE80.

Se transfieren 2,5 j l de los compuestos diluidos a la placa de ensayo. Se preincuba la placa durante 45 minutos a temperatura ambiente. Posteriormente, se transfieren 2,5 j l de PGE2 (conc. final 75 jM ) a la placa de ensayo. Se incuba la placa durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se agregan cinco j l de cada uno del donador (criptato anti-AMPc) y el aceptor (AMPc-d2) y se incuba la placa durante una hora más a temperatura ambiente en la oscuridad y luego se lee empleando un lector BMG LABTECH PHERAstar (Excitación : 337 nm, Emisión : 620 y 665 nm).

Se convierten los valores Delta F (fluorescencia) obtenidos (665 nm/620 nM) a valores de % de AMPc empleando las mediciones del calibrador de AMPc provisto en el kit. Para cada concentración de compuesto, se calcula el porcentaje de AMPc en comparación con el valor del control de DMSO en términos de promedio ± STDEV (se mide cada concentración por duplicado).

Se generan los valores y curvas de CI50 con el software XLfit (IDBS) empleando el modelo de respuesta a dosis en un sitio 203. Cuando se determinan los compuestos múltiples veces, se presentan los valores medios.

Ensayo de AMPc en hEP4:

Se desprenden las células BT549 (NCI/n.° 0507282) de las placas de cultivo con un tampón de disociación celular (Invitrogen, 13151-014) y se recogen en medio de cultivo (GM: RPMI1640 (Invitrogen 21875) /FCS 10 %, penicilina 1 %/estreptomicina). Las células se cuentan, se lavan y se resuspenden en tampón de ensayo (AB; HBSS, HEPES 20 mM, BSA 0,2 %; IBMX 2 mM). Se siembran 4.000 células en 5 j l de AB por pocillo de una placa de 384 pocillos de pequeño volumen (negro con fondo plano, Greiner 784076).

Se preparan soluciones de reserva de los compuestos de ensayo en una concentración de 10 mM en DMSO, y se diluyen en serie en DMSO a las concentraciones indispensables para las curvas de respuesta a la dosis inhibitoria (intervalo de concentraciones analizadas 30 jM - 0,4 nM; 30 jM - 0,015 nM o 1 jM - 0,01 nM).

Se utiliza PGE2 (Cayman 14010, solución de reserva: 6 jM en DMSO) como agonista en una concentración final de 6 nM, que corresponde a CE80.

Se transfieren 2,5 j l de los compuestos diluidos a la placa de ensayo. Se preincuba la placa durante 45 minutos a temperatura ambiente. Posteriormente, se transfieren 2,5 j l de PGE2 (conc. final 6 nM) a la placa de ensayo. Se incuba la placa durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se agregan cinco j l de cada uno del donador (criptato anti-AMPc) y el aceptor (AMPc-d2) y se incuba la placa durante una hora más a temperatura ambiente en la oscuridad y luego se lee empleando un lector BMG LABTECH PHERAstar (Excitación : 337 nm, Emisión : 620 y 665 nm).

Se convierten los valores Delta F (fluorescencia) obtenidos (665 nm/620 nM) a valores de % de AMPc empleando las mediciones del calibrador de AMPc provisto en el kit. Para cada concentración de compuesto, se calcula el porcentaje de AMPc en comparación con el valor del control de DMSO en términos de promedio ± STDEV (se mide cada concentración por duplicado).

Se generan los valores y curvas de CI50 con el software XLfit (IDBS) empleando el modelo de respuesta a la dosis en un sitio 203. Cuando se determinan los compuestos múltiples veces, se presentan los valores medios.

Las actividades antagonistas de los compuestos ejemplificados están consignadas en la Tabla 3:

Tabla 3:

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (I)

Fórmula (I)

en el que

R1 representa hidrógeno o metilo;

R2 representa metilo, bromo, cloro, o ciano;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto según la reivindicación 1; en el que R1 representa hidrógeno;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. Un compuesto según la reivindicación1; en el que R1 representa metilo;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3; en el que R2 representa metilo;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

5. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3; en el que R2 representa cloro;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

6. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3; en el que R2 representa ciano;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

7. Un compuesto según la reivindicación 1 seleccionado del grupo que consiste en:

Ácido 4—[6—[2—(2—metil—indol—1—il)—etilamino]—pirimidin—4—il]—benzoico;

Ácido 4—{6-[2-(2-ciano-indol-1-il)-etilamino]-pirim idin-4-il}-benzoico;

Ácido 4—{6—[2—(2,7—dimetil—indol—1—il)—etilamino]—pirimidin—4—il}—benzoico;

Ácido 4—{6-[2-(2-cloro-indol-1-il)-etilamino]-pirim idin-4-il}-benzoico y

Ácido 4—(6-[2-(2-bromo-indol-1-il)-etilamino]-pirim idin-4-il}-benzoico;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

8. Una composición farmacéutica que comprende, como principio activo, un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y por lo menos un excipiente terapéuticamente inerte.

9. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar como medicamento.

10. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en la prevención o tratamiento de enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en cáncer; dolor; endometriosis; enfermedad renal poliquística autosómica dominante; síndromes isquémicos agudos en pacientes ateroescleróticos; neumonía y enfermedades neurodegenerativas; o para usar en el control de la fertilidad femenina.

11. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en la prevención o tratamiento de un cáncer seleccionado entre melanoma; cáncer de pulmón; cáncer de vejiga; carcinomas renales; cánceres gastrointestinales; cáncer de endometrio; cáncer de ovario; cáncer de cuello uterino y neuroblastoma.

12. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en la preparación de un medicamento para la prevención o tratamiento de enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en cáncer; dolor; endometriosis; enfermedad renal poliquística autosómica dominante; síndromes isquémicos agudos en pacientes ateroescleróticos; neumonía y enfermedades neurodegenerativas; o para el control de la fertilidad femenina.

13. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en un procedimiento para modular una respuesta inmunitaria en un sujeto que presenta un tumor; en el que dicho procedimiento reactiva el sistema inmunitario en el tumor de dicho sujeto.

14. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en la prevención o tratamiento de cáncer; en el que dicho compuesto se utiliza en combinación con un modulador del receptor EP4 de la PGE2; y, además, opcionalmente en combinación con uno o más agentes quimioterapéuticos y/o radioterapia y/o terapia dirigida.