ES2528033T3 - Efectos terapéuticos de las briostatinas sobre la alteración de la memoria inducida por isquemia/accidente vascular cerebral y lesiones cerebrales - Google Patents

Abstract

Composición farmacéutica que comprende un activador de la proteína quinasa C (PKC) y un portador farmacéuticamente aceptable para su uso en un medicamento eficaz para tratar, como mínimo, un síntoma de apoplejía, en la que se administra a un paciente una cantidad de dicha composición farmacéutica eficaz para el tratamiento de, como mínimo, un síntoma de apoplejía, y la administración empieza en un periodo de tiempo seleccionado: dentro de 1 día, dentro de 2 días, dentro de 3 días, entre 1 y 2 días, y entre 1 y 3 días tras la apoplejía, en la que dicho activador de PKC es briostatina-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ó 18.

Description

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DESCRIPCIÓN

Efectos terapéuticos de las briostatinas sobre la alteración de la memoria inducida por isquemia/accidente vascular cerebral y lesiones cerebrales

CAMPO DE LA INVENCION

La presenten invención se refiere a una composición farmacéutica que se utiliza en un medicamento efectivo en el tratamiento de, como mínimo, un síntoma de apoplejía y que comprende un activador de la proteína quinasa C (PKC).

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

A. Apoplejía

Una apoplejía, también conocido como trastorno cerebrovascular (TCV), es una lesión neurológica aguda en la que se interrumpe el riego sanguíneo a una parte del cerebro. El riego sanguíneo al cerebro se puede interrumpir de varias formas, entre ellas la oclusión (apoplejía isquémica, embólica o trombótica) o la ruptura de vasos sanguíneos (apoplejía hemorrágica). Una apoplejía lleva a una pérdida repentina de la función neuronal debido a la alteración de la perfusión cerebral. Dicha alteración de la perfusión suele ser arterial, pero en ocasiones puede ser venosa.

La parte del cerebro afectada por la alteración de la perfusión deja de recibir la cantidad adecuada de oxígeno. Este hecho desencadena la cascada isquémica que provoca daños graves o la muerte de las células cerebrales, e impide el funcionamiento de dicha parte del cerebro. La apoplejía es una emergencia médica y puede provocar daños neurológicos permanentes o incluso la muerte del paciente si no se diagnostica y se trata en su fase temprana. Es la tercera causa principal de muerte y la principal causa de minusvalía en adultos en los Estados Unidos y en los países europeos industrializados. De media, se produce una apoplejía cada 45 segundos y una persona muere a causa de esta enfermedad cada 3 minutos. De cada 5 muertes debidas a la apoplejía, 2 se dan en hombres y 3 en mujeres.

A pesar de tratarse de una emergencia médica y del descubrimiento de los múltiples agentes que se han mostrado efectivos en la detención del proceso de isquemia cerebral en estudios preclínicos, actualmente la única opción disponible para tratar la apoplejía isquémica es el tratamiento trombolítico mediante rTPA. Dicho tratamiento se ha diseñado para conseguir una recanalización temprana, que depende del tiempo (se debe realizar el tratamiento durante las 3 horas siguientes al episodio). La eficacia en la detención del desarrollo del infarto de rTPA y otros agentes potenciales, depende de su administración temprana o incluso antes de que se produzca el episodio isquémico, si es posible. El breve espacio temporal para realizar el tratamiento de la apoplejía isquémica implica que solo un 5% de los pacientes candidatos pueden recibir la terapia trombolítica intravenosa efectiva.

Se producen daños significativos en el cerebro durante la apoplejía isquémica tras el episodio isquémico inmediato. Los daños cerebrales “retardados” y la muerte celular causados por la apoplejía o isquemia cerebral representan un fenómeno bien conocido, representando una oportunidad de tratamiento. Las neuronas del centro del infarto de apoplejías graves y focalizadas mueren de forma inmediata y no se pueden recuperar mediante la utilización de fármacos. Sin embargo, la penumbra isquémica, que consiste en el tejido cerebral que envuelve el centro del infarto de apoplejías isquémicas, y las neuronas y la red sensitiva en casos de isquemia cerebral generalizada son mantenidos por un aporte sanguíneo reducido. Los daños en este tejido cerebral de penumbra se producen de forma “retardada”, empezando en la segunda fase a las 4-6 horas, o en días o semanas en la conocida como tercera fase, tras la apoplejía o isquemia cerebral. Tras una isquemia cerebral de aproximadamente 15 minutos, por ejemplo, las células piramidales CA 1 del hipocampo empiezan a degenerar en 2-3 días, y llegan a la máxima extensión de muerte celular tras una semana del episodio isquémico. Las estructura neuronales sensitivas, en isquemias cerebrales generalizadas, y la penumbra isquémica son tejidos de riesgo. El hecho de salvarlas mediante una actuación o los daños adicionales que se pueden producir durante los días o semanas siguientes, determinan diferencias drásticas en las minusvalías a largo plazo.

La presente invención proporciona una nueva estrategia de tratamiento que comprende la administración temporal, periódica o crónica de un activador de PKC, tal como se define en la reivindicación 1 a un individuo que padezca una apoplejía o isquemia cerebral durante un amplio margen terapéutico tras un episodio isquémico tal y como se define en la reivindicación 1.

B. Proteína quinasa C

Se ha identificado que la PKC es una de las mayores familias de genes serina/treonina proteínas quinasa sin receptor. Desde que a principios de los años ochenta Nishizuka y sus colaboradores (Kikkawa y otros (1982) J. Biol. Chem. 257: 13341) descubrieron la PKC, y la identificaron como un receptor principal de los ésteres de forbol (Ashendel y otros (1983) Cancer Res., 43: 4333), se han atribuido múltiples mecanismos de señalización fisiológica a esta enzima. El amplio interés que despierta la PKC reside en su capacidad única de activarse in vitro mediante 2 15

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calcio y diacilglicerol (y sus miméticos con éster de forbol), un efector cuya formación está acoplada al recambio de fosfolípidos mediante la acción de factores de crecimiento y de diferenciación.

Se ha demostrado que la activación de la PKC mejora el aprendizaje y la memoria. (WO 2002/087423; WO 2003/075930; patente provisional de Estados Unidos con número de solicitud 60/287.721; patente provisional de Estados Unidos con número de solicitud 60/362.081; patente de Estados Unidos 2003/0171385 A1; y patente de Estados Unidos 2004/0235889 A1). Sin embargo, previamente al presente documento, la mejora del aprendizaje y la memoria mediante la administración de PKC no se había identificado como un mecanismo para el tratamiento de los déficits de memoria y daños cerebrales derivados de una apoplejía. Además, no se había reconocido la capacidad de los activadores de PKC detallados en el presente documento, especialmente aquellos compuestos que mejoran el aprendizaje y la memoria, de recuperación de las funciones cerebrales tras una apoplejía o isquemia.

Históricamente, el tratamiento de la apoplejía se limitaba a unas pocas opciones de tratamiento disponibles. El único tratamiento farmacológico disponible actualmente, por ejemplo, consiste en antitrombóticos (terapia trombolítica; como por ejemplo inyecciones intravenosas de activador tisular del plasminógeno), que se deben administrar durante las 3 horas siguientes al episodio isquémico. A pesar de que se hayan estudiado muchos tipos de neuroprotectores en ensayos clínicos, no se ha aprobado utilización clínica de ninguno de ellos, a causa de su ineficacia especialmente cuando se utiliza post-apoplejía o por su toxicidad asociada. Los compuestos presentados en la presente invención fueron eficaces cuando el tratamiento empezó 24 horas tras la isquemia en un modelo animal con dosis que se habían demostrado bien toleradas en humanos (dosis de briostatina-1). Se ha descubierto que algunos compuestos dirigidos a la proteína quinasa C (PKC) como la briostatina-1, un activador directo de PKC, y ácido metilcatecol diacético, un derivado del metilcatecol, un potenciador o un medio para activar o movilizar el factor de crecimiento nervioso (NGF), el factor neurotrópico derivado del cerebro (BNDF) u otros factores neurotrópicos, que es quizás uno de los objetivos de PKC, son útiles en el tratamiento de los daños cerebrales y disfunciones de la memoria inducidos en casos de isquemia cerebral en ratas (un modelo animal de apoplejía). En la presente invención se da a conocer el desarrollo de dichas sustancias como elementos terapéuticos para el tratamiento de la apoplejía.

El documento WO 2006/031337 describe composiciones que comprenden una combinación de activadores de PKC e inhibidores de PKC y métodos para modular la actividad α-secretasa para mejorar o aumentar la capacidad cognitiva y/o reducir la neurodegeneración en individuos que padezcan enfermedades que afectan la capacidad cognitiva. En dichas composiciones es preferente utilizar las lactonas macrocíclicas como activadores de PKC.

El documento WO 2004/004641 describe un método para aumentar la capacidad cognitiva en seres humanos y animales y comprende la administración a dicho ser humano o animal de un activador de PKC en una cantidad eficaz para aumentar la capacidad cognitiva en un portador farmacéuticamente aceptable, en el que el activador de PKC es una lactona macrocíclica, un benzolactamo, una pirrolidona o una combinación de dichos compuestos. El activador de PKC es eficaz para el tratamiento de la disfunción cognitiva de una enfermedad neurológica o de un trastorno asociado a daños cerebrales provocados por apoplejía, un accidente durante la anestesia, traumatismo craneal, hipoglicemia, envenenamiento por monóxido de carbono, intoxicación por litio o una deficiencia de vitaminas.

El documento WO 2004/047857 describe la utilización del factor de crecimiento del fibroblasto 18 (FGF-18) para mejorar el aprendizaje y la memoria. También se describen métodos de medición de niveles de expresión de FGF18 y el sistema nervioso central y la utilización de dichas mediciones para la diagnosis. Se espera que los compuestos y los métodos descritos sean útiles en las áreas de aprendizaje asociativo, memoria consolidada, desarrollo y análisis de fármacos y en el tratamiento de ciertas enfermedades asociadas con el deterioro del funcionamiento del hipocampo, tal y como la demencia debida a la enfermedad de Alzheimer.

El documento WO 2008/013573 describe métodos de estimulación del crecimiento celular, remodelación sináptica y consolidación de memoria a largo plazo comprendiendo la etapa de contacto entre una cantidad eficaz de activador de PKC con una proteína quinasa C (PKC) en un individuo con pérdida de memoria, frenando o revertiendo dicha pérdida de memoria. Como activador de la PKC se pueden utilizar lactonas macrocíclicas, por ejemplo una briostatina, un benzolactamo o una pirrolidona.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención da a conocer una composición farmacéutica que comprende un activador de la proteína quinasa C (PKC), tal como se define en la reivindicación 1, y un portador farmacéuticamente aceptable para utilizar en un medicamento efectivo para tratar, como mínimo, un síntoma de la apoplejía, en el que se realiza una administración, tal como se define en la reivindicación 1.

El activador de PKC es una lactona macrocíclica que es una briostatina seleccionada entre briostatina-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ó 18. Más preferentemente la briostatina es briostatina-1.

La administración de la composición farmacéutica de la presente invención empieza en un periodo de tiempo que se selecciona: entre 1 día, 2 días, 3 días, 1 y 2 días, y 1 y 3 días tras la apoplejía. En otra realización, la administración 3 15

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de la composición farmacéutica de la presente invención empieza dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ó 24 horas tras dicha apoplejía. En otra realización adicional, la administración de la composición farmacéutica de la presente invención empieza dentro de 1 y 3, 1 y 5, 1 y 10, 1 y 24, 3 y 5, 3 y 10, 3 y 24, 5 y 10, 5 y 24, ó 10 y 24 horas tras dicha apoplejía. En otra realización adicional, la administración de la composición farmacéutica de la presente invención empieza tras 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ó 24 horas de dicha apoplejía o episodio isquémico. En otra realización adicional, la administración de la composición farmacéutica de la presente invención empieza dentro de 1, 2 ó 3 días tras dicha apoplejía o suceso isquémico.

En una realización, el tratamiento que comprende la administración de la composición farmacéutica de la presente invención continua durante aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ó 12 semanas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA FIGURA

La figura 1 representa el comportamiento de ratas en un laberinto espacial de agua durante ensayos de entrenamiento. Los datos se muestran en forma de ± SEM. Bri, briostatina-1; Isq, isquemia cerebral; MCDA, ácido 4-metilcatecol-diacético.

La figura 2 representa la relación de cuadrantes objetivo durante el test de muestra. Bri, briostatina-1; Isq, isquemia cerebral; MCDA, ácido 4-metilcatecol-diacético*: p < 0,05. NS: p > 0,05.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

A. Definiciones

En el presente documento “administración” de una composición comprende cualquier tipo de administración, comprendiendo oral, subcutánea, intraperitoneal, e intramuscular.

En el presente documento “una cantidad eficaz” es una cantidad suficiente para reducir uno o más síntomas asociados con una apoplejía.

En el presente documento “activador de la proteína quinasa C” o “activador PKC” es una sustancia que incrementa la tasa de la reacción que cataliza la proteína quinasa C al unirse a dicha proteína quinasa C.

En el presente documento “individuo” significa un mamífero.

En el presente documento un “portador aceptable farmacéuticamente” es una composición química con la que se puede combinar la sustancia activa y que, según la combinación, se puede utilizar para administrar la sustancia activa a un individuo. En el presente documento un éster o una sal “aceptable fisiológicamente” es un éster o una sal de la sustancia activa que es compatible con todos los otros componentes de la composición farmacéutica, y que no es dañino para el individuo al que se administra la composición.

En el presente documento “portador aceptable farmacéuticamente” también comprende sin limitarse a los mismos, uno o varios de los elementos siguientes: excipientes; agentes activos de superficie; agentes dispersantes; diluentes inertes; agentes granulantes y disgregantes; agentes aglomerantes; agentes lubricantes; agentes endulzantes; agentes aromatizantes; agentes colorantes; conservantes; composiciones fisiológicamente degradables como la gelatina; vehículos y disolventes acuosos; vehículos y disolventes oleosos; agentes de suspensión; agentes humectantes o dispersantes; agentes emulsionantes, emolientes; tampones; sales; agentes espesantes; cargas; antioxidantes; antibióticos; agentes antifúngicos; agentes estabilizantes; y materiales poliméricos o hidrofóbicos farmacéuticamente aceptables. Otros “ingredientes adicionales” que se pueden añadir a las composiciones farmacéuticas de la presente invención se conocen bien en la materia y se describen, por ejemplo, en Genaro, ed., 1985, Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton Pa., que se incorporan como referencia al presente documento.

Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento se pueden preparar mediante cualquier método conocido o desarrollado posteriormente en la técnica de la farmacología. En general, dichos métodos de preparación comprenden la etapa de asociación de la sustancia activa con el portador o uno o más compuestos accesorios, y posteriormente, si fuera necesario o deseable, conformar o empaquetar el producto en unidades monodosis o multidosis.

A pesar de que las descripciones de composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento están centradas principalmente en composiciones farmacéuticas adecuadas para administrar de forma ética a seres humanos, los expertos en la materia comprenderán que dichas composiciones generalmente se pueden administrar a todo tipo de animales. Se entiende que se puede llevar a cabo la modificación de las composiciones farmacéuticas diseñadas para la administración en seres humanos para adecuarlas a la administración a varios animales, y los farmacólogos especializados en veterinaria pueden diseñar y llevar a cabo dichas modificaciones simplemente con 4 10

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poca o ninguna experimentación. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar incluyendo pero sin limitarse a los mismos, seres humanos y otros primates, y otros mamíferos.

A pesar del progreso hacia el desarrollo de nuevos agentes terapéuticos y la disponibilidad de diversos modelos animales, sigue existiendo una acuciante necesidad de desarrollo de modelos animales mejores para llevar a cabo análisis.

B. Proteína quinasa C (PKC)

La familia de genes de la PKC comprende actualmente 11 genes que se dividen en 4 subgrupos: 1) PKC clásica α, βi, β2(β1y β2 son formas del mismo gen generadas por corte y empalme) y γ, 2) nuevas PKCδ, ε, η,y θ, 3) PKC atípicas ζ, λ, η y i y 4) PKC µ. La PKC µ se parece a las nuevas isoformas de PKC pero se diferencia de estas porque posee un dominio transmembrana putativo (revisado por Blohe y otros (1994) Cancer Metast. Rev. 13:411; Ilug y otros (1993) Biochem J. 291: 329; Kikkawa y otros (1989) Ann. Rev. Biochem. 58:31). Las isoformas α, β1, β2y γ son dependientes de C2+, fosfolípidos y diacilglicerol y representan las isoformas habituales de PKC, mientras que otras isoformas de PKC también se activan mediante fosfolípidos y diacilglicerol, pero no son dependientes de Ca2+ . Todas las isoformas abarcan 5 regiones variables (V1-V5), y las isoformas α, β y γ comprenden cuatro dominios estructurales muy conservados (C1-C4). Todas las isoformas salvo α, β y γ carecen del dominio C2, las isoformas λ y η carecen también de nueve de dos dominios de dedos de zinc enriquecidos en cisteína en C1 a los que se une el diacilglicerol. El dominio C1 también contiene la secuencia del pseudosustrato que está muy conservada en todas las isoformas, y que realiza la función de autorregulación al bloquear el lugar de unión del sustrato para dar lugar a una conformación inactiva de la enzima (House y otros (1987) Science 238, 1726).

Debido a estas características estructurales, se cree que varias isoformas de las PKC tienen un papel muy especializado en la transducción de señal en respuesta a estímulos fisiológicos (Nishizuka (1989) Cancer 10: 1892), así como en la transformación y diferenciación neoplásica (Glazer (1994) Protein Kinase C, J. F. Kuo, ed., Oxford U. Press, en las páginas 171-198). Si quiere consultar una descripción sobre los moduladores conocidos de PKC véase PCT/US97/08141, y las patentes de Estados Unidos no. 5.652.232; 6.080.784; 5.891.906; 5.962.498; 5.955.501;

5.891.870 y 5.962.504.

Existen cada vez más evidencias que prueban que las isoenzimas PKC individuales tienen un papel significativo en procesos biológicos, que aportan la base para la explotación farmacéutica. Una de ellas es el diseño específico (preferentemente de isoenzimas específicas) de activadores de PKC. Este enfoque es complejo partiendo del hecho de que el dominio catalítico no es el dominio principalmente responsable de la especificidad de isoenzima de PKC. Este factor puede aportar una manera de anular el efecto de otras vías de transducción de señal con efectos biológicos opuestos. De forma alternativa, induciendo la regulación negativa de PKC tras una activación intensa y breve, los activadores de PKC pueden tener un efecto antagonista a largo plazo. Actualmente se están realizando ensayos clínicos de la actividad anticancerígena de la briostatina. Se sabe que la briostatina se une con el dominio regulador de la PKC y activa dicha enzima. Las briostatinas son ejemplos de activadores de PKC selectivos para la enzima (véase, por ejemplo, el documento WO 97/43268;). Si quiere consultar una descripción sobre los moduladores conocidos de PKC véase el documento WO 97/43268 A1, las patentes de Estados Unidos no. 5.652.232; 6.043.270; 6.080.784; 5.891.906; 5.962.498; 5.955.501; 5.891.870 y 5.962.504.

Se han identificado varias clases de activadores de la PKC. Sin embargo, los ésteres de forbol no son compuestos adecuados para un posible desarrollo de fármacos debido a su actividad promotora de tumores (Ibarreta y otros (1999) Neuro Report 10(5&6): 1035-40). Las lactonas macrocíclicas son compuestos de especial interés (por ejemplo, la clase de la briostatina y la clase de la neristatina) que estimulan PKC. De la clase de las briostatinas, se ha demostrado que la briostatina-1 activa PKC y carece de actividad promotora de tumores. La briostatina-1 también resulta especialmente útil, como activador de PKC, ya que la curva de respuesta a la dosis de briostatina-1 es bifásica. Además, la briostatina-1 presenta una regulación diferencial de las isoenzimas de PKC, comprendiendo PKCα, PKCδ y PKCε. La briostatina-1 se ha sometido a estudios de toxicidad y seguridad para la salud en animales y seres humanos y se está estudiando como agente anticancerígeno. Los estudios han determinado que el efecto adverso principal de la briostatina-1 en el ser humano es la mialgia. Un ejemplo de dosis efectiva es 40 µg/m2 por semana, administrado por inyección intravenosa.

Las lactonas macrocíclicas, en especial la briostatina-1, están descritas en la patente de Estados Unidos 4.560.774. Las lactonas macrocíclicas y sus derivados se describen en la patente de Estados Unidos 6.187.568, la patente de Estados Unidos 6.043.270, la patente de Estados Unidos 5.393.897, la patente de Estados Unidos 5.072.004, la patente de Estados Unidos 5.196.447, la patente de Estados Unidos 4.833.257, y la patente de Estados Unidos

4.611.066. Las patentes citadas anteriormente describen varios compuestos y varias utilizaciones de las lactonas macrocíclicas comprendiendo su utilización como agentes antiinflamatorios o antitumorales. (Szallasi y otros (1994) Journal of Biological Chemistry 269(3): 21 18-24; Zhang y otros (1996) Cancer Research 56: 802-808; Hennings y otros (1987) Carcinogenesis 8(9): 1343-1346; Varterasian y otros (2000) Clinical Cancer Research 6: 825-828; Mutter y otros (2000) Bioorganic & Medicinal Chemistry 8: 1841-1860).

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Tal como también observará un especialista ordinario en la materia, los compuestos de lactonas macrocíclicas y sus derivados, especialmente la clase de la briostatina, se pueden utilizar en técnicas de síntesis combinatoria y por lo tanto se pueden generar bibliotecas de compuestos para optimizar parámetros farmacológicos, comprendiendo, pero sin limitación la eficacia y la seguridad para la salud de las composiciones. Además, dichas bibliotecas se pueden

5 estudiar para determinar los miembros que modulan preferentemente la α-secretasa y/o PKC.

El elevado rendimiento del análisis de productos naturales y del caldo de fermentación de las bibliotecas combinatorias ha dado lugar al descubrimiento de varios medicamentos nuevos. Actualmente, la generación y análisis de la diversidad de los productos químicos se ha convertido en la forma principal para descubrir compuestos 10 principales, y sin duda se trata de un avance fundamental y principal en el descubrimiento de fármacos. Además, incluso después de haber identificado el compuesto "principal", las técnicas de combinatoria representan una herramienta valiosa para optimizar la actividad biológica deseada. Se aprecia que la reacción en el individuo lleva directamente a la creación de bibliotecas combinatorias de compuestos para realizar el análisis de actividades farmacéuticas u otras biológicas o relacionadas con el ámbito médico o cualidades relacionadas con materiales. Una 15 biblioteca combinatoria para desempeñar los objetivos de la presente invención es una mezcla de compuestos relacionados químicamente, que se pueden cribar conjuntamente en busca de una propiedad específica; dichas bibliotecas pueden estar en solución o unidas de forma covalente a un soporte sólido. La preparación de varios compuestos relacionados en una única reacción reduce significativamente y simplifica el número de procesos de cribado que se deben llevar a cabo. El cribado en búsqueda de una propiedad biológica apropiada se puede realizar

20 siguiendo los métodos convencionales. Por consiguiente, la presente invención también proporciona métodos de determinación de la capacidad de uno o varios compuestos de la invención de unirse para modular de forma eficaz la α-secretasa y/o la PKC.

En la materia existen diversas técnicas para generar bibliotecas combinatorias como las descritas a continuación,

25 pero se comprenderá que la presente invención no pretende limitarse a los ejemplos y descripciones anteriores. (Véase, por ejemplo, Blondelle y otros (1995) Trends Anal. Chem. 14:83; patentes de Estados Unidos 5.359.115; 5.362.899; Estados Unidos 5.288.514: Publicación PCT WO 94/08051; Chen y otros (1994) JACCS 1 6:266 1: Kerr y otros (1993) JACCS I 1 5:252; Publicaciones PCT W092/10092; W093/09668; W091/07087; y W093/20242). En consecuencia, se pueden sintetizar y cribar en varias bibliotecas del orden de aproximadamente 16 a 1.000.000 o

30 más diversómeros para buscar una actividad o propiedad particular.

La tabla siguiente resume las características estructurales de la briostatina-1 que dispone de dos anillos de pirano y un acetal cíclico de 6 miembros.

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Nombre

Afin. PKC (nM) MW Descripción

Briostatina-1

1,35 988 2 piranos + 1 acetal cíclico + macrocíclico

imagen1

Briostatina-1; Ki – 1,35 nM

40 Los compuestos de la presente invención se pueden administrar mediante varias vías, y las formas de posología comprenden la administración oral, rectal, parenteral (como por ejemplo subcutánea, intramuscular e intravenosa), epidural, intratecal, intraarticular, tópica y bucal. El intervalo de dosis adecuada para el ser humano depende de diversos factores incluyendo la edad, el peso y el estado del paciente, y la vía de administración.

45 Las referencias a cualquier compuesto del presente documento comprende el racemato así como los enantiómeros por separado.

EJEMPLOS

50 Los ejemplos siguientes permiten realizar una descripción adicional de la presente invención.

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EJEMPLO 1: Modelo de apoplejía de isquemia generalizada

Se dividieron aleatoriamente ratas (macho, Wistar, 200-225 g) en 6 grupos (8 en cada uno) y se mantuvieron en jaulas durante 1 semana previamente al experimento. La restricción transitoria o permanente del flujo sanguíneo al cerebro y la aportación de oxigeno conllevan apoplejía isquémica. El modelo de isquemia generalizada que se utilizó para inducir la deficiencia de memoria vascular fue de una oclusión de dos vasos combinada con hipoxia sistémica en un periodo reducido. Se llevó a cabo la ligación bilateral de las arterias carótidas comunes con el animal bajo los efectos de la anestesia (pentobarbital, 60 mg/kg, i.p.). Transcurrida una semana de recuperación tras la cirugía, se sometieron las ratas a 14 minutos de hipoxia (5% de oxígeno en un recipiente de cristal). Las ratas de control (los vehículos control y con operación simulada) se sometieron a la misma incisión para aislar ambas arterias carótidas comunes y a 14 minutos de aire (en el recipiente de cristal). Se mantuvo la temperatura corporal a 37-37,5ºC mediante una fuente de luz de calentamiento durante la cirugía y hasta que los animales se recuperaron completamente.

EJEMPLO 2: Tratamiento con briostatina y MCDA

Se administró briostatina-1 a 20 µg/m2 (i.v. en la cola, 2 dosis/semana, 10 dosis), empezando 24 horas tras el final del episodio hipóxico. Se administró ácido 4-metilcatecol-diacético (MCDA, un potenciador potencial de NGF y BDNF) a 1,0 mg/kg (i.p., diariamente durante el mismo periodo de 5 semanas) a diferentes grupos de ratas.

Una semana tras la última administración de briostatina-1, MCDA o vehículo, se entrenó a las ratas en la tarea de aprendizaje en el recorrido del laberinto espacial de agua (2 ensayos de entrenamiento al día durante 4 días), y a continuación se realizó un test de una muestra. Se produjo una plataforma visible de la prueba tras el test de la muestra. En la figura 1 aparecen los resultados del experimento.

En general se detectó una diferencia significativa de aprendizaje entre los 6 grupos (Figura 1; F5,383 = 27,480, p < 0,001; ANOVA). Los análisis detallados revelaron que el grupo isquémico no fue capaz de aprender la tarea del laberinto espacial de agua, pues no había una diferencia significativa en latencia de escape en los ensayos (F7,63 = 0,102, p > 0,05), un aprendizaje significativamente inferior en comparación con las ratas del grupo de control (diferencia de grupo: F1,127 = 79,751, p < 0,001), mientras que las ratas de los otros 5 grupos aprendieron la tarea (las ratas isquémicas con tratamiento MCDA: p < 0,05 y los otros 4 grupos: p < 0,001 tras los ensayos). El tratamiento con briostatina-1 mejoró significativamente su comportamiento (grupo isquémico con el tratamiento de briostatina-1, frente a las ratas isquémicas: F1,127 = 72,782, p < 0,001), a un nivel de comportamiento que no difirió a nivel estadísticamente significativo del de las ratas de control (grupo isquémico con tratamiento de briostatina-1 frente a ratas de control: F1,127 = 0,001, p > 0,05). El tratamiento de MCDA también mejoró el aprendizaje de las ratas isquémicas (ratas isquémicas con tratamiento MCDA frente a ratas isquémicas: F1,127 = 15,584, p < 0,001), pero la diferencia de isquemia con ratas con tratamiento de MCDA y ratas de control seguía siendo significativa tras el tratamiento de 5 semanas (isquemia con tratamiento MCDA frente a ratas de control: F1,127 = 16,618, p < 0,001). No había diferencias entre los grupos de control y de briostatina -1 solamente (briostatina-1 frente a control: F1,127 = 0,010, p > 0,05) ni entre el grupo de control y los grupos de solamente MCDA (MCDA frente a control: F1,127 = 0,272, p > 0,05).

Las ratas del grupo isquémico no mostraron una preferencia de objetivos en el test de la muestra (F3,31 = 0,096, p > 0,05), mientras que todas las ratas de los otros 5 grupos mostraron preferencia por un cuadrante como objetivo en el test de la muestra (todas p < 0,005). Se analizaron los datos mediante utilización de la relación de cuadrantes objetivo (dividiendo la distancia del cuadrante objetivo por la media de los valores de los cuadrantes no objetivo durante el test de la muestra; figura 2). Se detectó una diferencia significativa en las relaciones de cuadrante objetivo entre los grupos (F5,47 = 5,081, p < 0,001). Los análisis detallados mostraron diferencias de grupo entre las ratas de control y las isquémicas (F1,15 = 9,451, p < 0,01), entre las isquémicas y las isquémicas con tratamiento de briostatina-1 (F1,15 = 10,328, p < 0,01), y entre las isquémicas con tratamiento de MCDA y las ratas isquémicas (F1,15 = 5,623, p < 0,05), pero no había diferencias entre las ratas de control y las isquémicas con tratamiento de briostatina-1 (F1,15 = 0,013, -p > 0,05), de entre las isquémicas con tratamiento de MCDA y los grupos de control (F1,15 = 2.997, p > 0,05), entre las ratas del control y las ratas tratadas solamente con briostatina (F1,15 = 0,064, p > 0,05), y entre las ratas del control y las ratas tratadas solamente con MCDA (F1,15 = 0,0392, p > 0,05). Un test de plataforma visible realizado tras el test de la muestra reveló que no había diferencia significativa entre los grupos (F5,47 = 0,115, p > 0,05), lo que indicaba que no había diferencias significativas de grupo en las capacidades sensomotoras de las ratas.

EJEMPLO 3: Tratamiento con briostatina

Se indujo isquemia/hipoxia cerebral generalizada a ratas macho Wistar (225-250 g) al ocluir de forma permanente y bilateral las arterias carótidas comunes, en combinación con 14 minutos de bajo suministro de oxígeno (aproximadamente el 5%). Se administró briostatina-1 a 15 µg/m2 (por la vena de la cola, 2 dosis/semana, 10 dosis), empezando aproximadamente 24 horas tras el final del episodio isquémico/hipóxico. Se realizaron tareas de aprendizaje espacial (2 ensayos durante 4 días) y de memoria (un test de la muestra de 1 minuto, 24 horas tras el último ensayo) 9 días tras la última dosis. En general, se detectó una diferencia significativa entre los grupos (F3,255 = 31,856, p < 0,001) y los grupos por ensayo (F21,255 = 1,648, p < 0,05). La isquemia cerebral generalizada dificultó 7 E08725396

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el aprendizaje espacial (ratas isquémicas frente a ratas con operación simulada F1,127 = 79,751, p > 0,001). La dificultad del aprendizaje se recuperó mediante el tratamiento con briostatina-1 (briostatina-1 + isquémicas frente a ratas isquémicas: F1,127 = 50,233, p < 0,001), mientras que la briostatina-1 por sí sola no afectó al aprendizaje (briostatina-1 frente a ratas con operación simulada: F1,127 = 2,258, p > 0,05; 9 días tras la última dosis).

5 En el test de retención de memoria, las ratas con operación simulada mostraron preferencia por un cuadrante objetivo. Dicha buena retención de memoria no se observó en las ratas isquémicas, lo que implica una disfunción en la memoria espacial. El tratamiento con briostatina-1 restauró eficazmente la retención de memoria tras un episodio de isquemia hasta llegar al nivel de las ratas con operación simulada. La briostatina-1 por sí sola no tuvo efectos

10 significativos en la preferencia de cuadrante objetivo en comparación con la de las ratas de control. Se detectó una diferencia significativa en las proporciones de cuadrante (calculadas dividiendo la distancia media de nado al cuadrante objetivo por la distancia de nado media en los cuadrantes no objetivo; F3,31 = 6,181, p < 0,005) entre grupos. Los análisis detallados revelaron diferencias significativas entre ratas isquémicas y ratas con operación simulada (F1,15 = 9,451, p < 0,01), entre ratas isquémicas y ratas con tratamiento de briostatina-1 (F1,15 = 10,328,

15 p < 0,01), pero no se detectaron diferencias significativas entre ratas isquémicas con tratamiento de briostatina-1 y ratas de control con operación simulada (F1,15 = 0,0131, p > 0,05) y entre ratas de control con operación simulada y ratas tratadas solamente con briostatina-1 (F1,15 = 0,161, p > 0,05). Estos resultados demuestran que la isquemia/hipoxia cerebral provocan disfunciones del aprendizaje espacial y de la memoria, cuando se analizaron 7 semanas tras un episodio de isquemia. La disfunción era duradera y no recuperable, durante el tiempo sin

20 intervención adecuada, pero se recuperó mediante el tratamiento crónico con briostatina-1, incluso cuando dicho tratamiento empezó 24 horas tras el episodio de isquemia, un amplio margen terapéutico.

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Claims (3)

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   REIVINDICACIONES

   1. Composición farmacéutica que comprende un activador de la proteína quinasa C (PKC) y un portador farmacéuticamente aceptable para su uso en un medicamento eficaz para tratar, como mínimo, un síntoma de

   5 apoplejía, en la que se administra a un paciente una cantidad de dicha composición farmacéutica eficaz para el tratamiento de, como mínimo, un síntoma de apoplejía, y la administración empieza en un periodo de tiempo seleccionado: dentro de 1 día, dentro de 2 días, dentro de 3 días, entre 1 y 2 días, y entre 1 y 3 días tras la apoplejía, en la que dicho activador de PKC es briostatina-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ó 18.

   10 2. Composición farmacéutica, según la reivindicación 1, en la que la briostatina es briostatina-1.

2. 3. Composición farmacéutica, según la reivindicación 1, en la que el tratamiento se prolonga durante un periodo seleccionado entre 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, y 6 semanas.

   15 4. Composición farmacéutica, según la reivindicación 1, en la que el tratamiento revierte los daños cerebrales inducidos por la apoplejía.

3. 5. Composición farmacéutica, según la reivindicación 1, en la que el tratamiento revierte las disfunciones de

   memoria inducidas por la apoplejía. 20

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