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EP1592660A1 - Aminopropanediols acyles et analogues et leurs utilisations therapeutiques - Google Patents

Aminopropanediols acyles et analogues et leurs utilisations therapeutiques

Info

Publication number
EP1592660A1
EP1592660A1 EP04710412A EP04710412A EP1592660A1 EP 1592660 A1 EP1592660 A1 EP 1592660A1 EP 04710412 A EP04710412 A EP 04710412A EP 04710412 A EP04710412 A EP 04710412A EP 1592660 A1 EP1592660 A1 EP 1592660A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
group
compound
formula
compounds
atom
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP04710412A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Rapha[L Darteil
Karine Caumont-Bertrand
Jamila Najib
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Genfit SA
Original Assignee
Genfit SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genfit SA filed Critical Genfit SA
Publication of EP1592660A1 publication Critical patent/EP1592660A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/52—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C327/00—Thiocarboxylic acids
    • C07C327/20—Esters of monothiocarboxylic acids
    • C07C327/30—Esters of monothiocarboxylic acids having sulfur atoms of esterified thiocarboxyl groups bound to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups

Definitions

  • the present invention relates to new acylated aminopropanediols and their nitrogen and sulfur analogues, pharmaceutical compositions comprising them, their therapeutic applications, in particular for the treatment of cerebral ischemia. It also relates to a process for the preparation of these derivatives.
  • the compounds of the invention have advantageous pharmacological, antioxidant and anti-inflammatory properties.
  • the invention also describes the methods of therapeutic treatment using these compounds and pharmaceutical compositions containing them.
  • the compounds of the invention can be used in particular for preventing or treating cerebrovascular accidents.
  • cerebrovascular pathology (150,000 new cases per year) represents the third cause of death and the first cause of disability in adults.
  • Ischemic and hemorrhagic accidents respectively concern 80% and 20% of this pathology.
  • Ischemic strokes are an important therapeutic issue to reduce the morbidity and mortality of this condition. Advances have been made not only in the treatment of the acute phase of ischemia but also in its prevention. It is also important to note that the identification and management of risk factors are essential to the treatment of this pathology.
  • Drug treatments for ischemic strokes are based on different strategies.
  • a first strategy is to prevent the occurrence of ischemic strokes by preventing risk factors (high blood pressure, high cholesterol, diabetes, atrial fibrillation, etc.) or by preventing thrombosis, in particular using anti - platelet aggregators or anticoagulants (Adams 2002) and (Gorelick 2002).
  • a second strategy is to treat the acute phase of ischemia in order to reduce the long-term consequences (Lutsep and Clark 2001).
  • the pathophysiology of cerebral ischemia can be described as follows: the penumbra zone, the intermediate zone between the heart of the ischemia - where the neurons are necrotized - and the intact nervous tissue, is the site of a pathophysiological cascade which leads to neuronal death within a few days if reperfusion is not ensured or if neuroprotection is not effective enough.
  • the first event which occurs within the first few hours, is a massive release of glutamate which results in neuronal depolarization as well as cellular edema.
  • the entry of calcium into the cell induces mitochondrial damage promoting the release of free radicals as well as the induction of enzymes which cause the membrane degradation of neurons.
  • NF-B transcription factors
  • This activation induces inflammatory processes such as the induction of adhesion proteins at the endothelial level, the infiltration of the ischemic focus by neutrophils, microglial activation, induction of enzymes such as nitric oxide (NO) synthase type II or cyclooxygenase type II.
  • NO nitric oxide
  • cyclooxygenase type II enzymes
  • NO or prostanoids which are toxic to the cell. All of these processes result in a phenomenon of apoptosis causing irreversible lesions (Dirnagl, ladecola et al. 1999).
  • prophylactic neuroprotection is based on experimental bases demonstrating resistance to ischemia in animal models. Indeed, various procedures applied prior to the realization of an experimental cerebral ischemia make it possible to make it less severe. Different stimuli make it possible to induce resistance to cerebral ischemia: preconditioning (brief ischemia preceding prolonged ischemia); thermal stress; administration of a low dose of bacterial lipopolysaccharide (Bordet, Deplanque et al. 2000). These stimuli induce resistance mechanisms which activate signals triggering the protective mechanisms. Different triggering mechanisms have been highlighted: cytokines, pathways of inflammation, free radicals, NO, ATP-dependent potassium channels, adenosine.
  • PPARs ( ⁇ , ⁇ , ⁇ ) belong to the family of hormone activated nuclear receptors. When activated by an association with their ligand, they heterodimerize with the Retinoid-X-Re ⁇ ptor (RXR) and then bind to a Peroxisome Proliferator Response Elements ”(PPREs) which are located in the promoter sequence of the target genes. The binding of PPAR to PPRE thus induces the expression of the target gene (Fruchart, Staels et al. 2001).
  • PPARs are distributed in a wide variety of organs, but with a certain specificity for each of them, with the exception of PPAR ⁇ , the expression of which seems ubiquitous.
  • the expression of PPAR ⁇ is particularly important in the liver and along the intestinal wall whereas PPAR ⁇ is mainly expressed in adipose tissue and the spleen.
  • PPAR ⁇ is mainly expressed in adipose tissue and the spleen.
  • ⁇ , ⁇ , ⁇ the three subtypes ( ⁇ , ⁇ , ⁇ ) are expressed!
  • Cells such as oligodendrocytes as well as astrocytes express more particularly the PPAR ⁇ subtype (Kainu, Wikstrom et al. 1994).
  • the target genes of PPARs control the metabolism of lipids and carbohydrates.
  • PPARs participate in other biological processes.
  • PPARs The activation of PPARs by their ligands induces a change in the transcriptional activity of genes which modulate the inflammatory process, antioxidant enzymes, angiogenesis, cell proliferation and differentiation, apoptosis, the activities of iNOS, MMPases and TIMPs. (Smith, Dipreta et al. 2001) and (Clark 2002).
  • Free radicals are involved in a very broad spectrum of pathologies such as allergies, cancer initiation and promotion, cardiovascular pathologies (atherosclerosis, ischemia), genetic and metabolic disorders (diabetes), infectious and degenerative diseases (Prion, etc. .) as well as ophthalmic problems (Mates, Perez-Gomez et al. 1999).
  • ROS Reactive oxygen species
  • the management of ROS is done via an antioxidant system which includes an enzymatic and non-enzymatic component.
  • the enzymatic system consists of several enzymes whose characteristics are as follows: - Superoxide dismutase (SOD) destroys the superoxide radical by converting to peroxide. The latter is itself supported by a other enzyme system.
  • SOD Superoxide dismutase
  • a low level of SOD is constantly generated by aerobic respiration.
  • Three classes of SOD have been identified in humans, each containing Cu, Zn, Fe, Mri, or Ni as a cofactor.
  • the three forms of human SOD are distributed as follows: Cu-Zn SOD at the cytosolic level, Mn-SOD at the mitochondrial level and an extracellular SOD.
  • Catalase is very effective in converting hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) into water and oxygen. Hydrogen peroxide is catabolized enzymatically in aerobic organisms. Catalase also catalyzes the reduction of a variety of hydroperoxides (ROOH).
  • ROOH hydroperoxides
  • Glutathione peroxidase contains selenium as a cofactor and catalyzes the reduction of hydroperoxides (ROOH and H 2 O 2 ) using glutathione, and thus protects cells against oxidative damage.
  • Non-enzymatic antioxidant cell defenses are made up of molecules that are synthesized or provided by food.
  • antioxidant molecules present in different cellular compartments.
  • Detoxifying enzymes are for example responsible for eliminating free radicals and are essential for the life of the cell.
  • the three most important types of antioxidant compounds are carotenoids, vitamin C and vitamin E (Gilgun-Sherki, Melamed et al. 2001).
  • the inventors have developed new compounds capable of preventing the appearance of the risk factors described above and capable of exerting a prophylactic activity in term of neuroprotection, but also to ensure active neuroprotection in the acute phase of ischemic strokes.
  • the compounds according to the invention have at the same time properties of PPAR activators, antioxidants and anti-inflammatory drugs and, as such, the compounds have a high therapeutic or prophylactic potential for ischemic strokes.
  • the present invention thus provides a new family of compounds having advantageous pharmacological properties and usable for the curative or preventive treatment of cerebral ischemia. It also relates to a process for the preparation of these derivatives.
  • G2 and G3 independently represent an oxygen atom, a sulfur atom or an N-R4 group, G2 and G3 cannot simultaneously represent an N-R4 group,
  • R and R4 independently represent a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group, saturated or not, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms,
  • R1, R2 and R3, identical or different, represent a hydrogen atom, a CO-R5 group or a group of formula CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, at least one of the groups R1, R2 or R3 being a group of formula CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6,
  • R5 is a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, optionally comprising a cyclic group, the main chain of which contains from 1 to 25 carbon atoms,
  • X is a sulfur atom, a selenium atom, an SO group or an SO 2 group
  • n is an integer between 0 and 11
  • R6 is a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, optionally comprising a cyclic group, the main chain of which contains from 3 to 23 carbon atoms, preferably 10 to 23 carbon atoms and optionally one or more heterogroups chosen from an oxygen atom, a sulfur atom, a selenium atom, an SO group and an S0 group 2)
  • the group or groups R5, identical or different preferably represent a linear or branched, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted alkyl group, the main chain of which comprises from 1 to 20 carbon atoms, even more preferably 7 to 17 carbon atoms, even more preferably 14 to 17.
  • the group or groups R5, identical or different may also represent a group lower alkyl containing 1 to 6 carbon atoms, such as in particular the methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, pentyl or hexyl radical.
  • the group or groups R6, which are identical or different, preferably represent a linear or branched, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted alkyl group, the main chain of which comprises from 3 to 23 carbon atoms, preferably 13 to 20 carbon atoms, even more preferably 14 to 17 carbon atoms, and even more preferably 14 carbon atoms.
  • saturated long chain alkyl groups for R5 or R6 are in particular the groups C7H15, C10H21, C11H23, C13H27, C14H29, C15H31, C 16 H 33 , C 17 H 35 .
  • unsaturated long chain alkyl groups for R5 or R6 are in particular the groups C14H27, C14H25, C15H29,
  • Examples of branched long chain alkyl groups are in particular the groups (CH 2 ) n-CH (CH3) C2H 5 , or (CH2) 2 + ⁇ -C (CH 3 ) 2 - (CH2) n "-CH3 (x being an integer equal to or between 1 and 11, n 'being an integer equal to or between 1 and 22, n "being an integer equal to or between 1 and 5, n '" being an integer equal to or between 0 and 22, and (2x + n'") being less than or equal to 22, preferably less than or equal to 20).
  • alkyl groups R5 or R6 may optionally include a cyclic group.
  • cyclic groups are especially cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl and cyclohexyl.
  • the alkyl groups R5 or R6 may be optionally substituted by one or more substituents, identical or different.
  • This invention also relates to the optical and geometric isomers of these compounds, their racemates, their salts, their hydrates and their mixtures.
  • the compounds of formula (la) are the compounds of formula (I) according to the invention in which only one of the groups R1, R2 or R3 represents a hydrogen atom.
  • the compounds of formula (Ib) are the compounds of formula (I) according to the invention in which two of the groups R1, R2 or R3 represent a hydrogen atom.
  • the present invention also includes the prodrugs of the compounds of formula (I), which, after administration in a subject, will transform into compounds of formula (I) and or the metabolites of the compounds of formula (I) which exhibit therapeutic activities, especially for the treatment of cerebral ischemia, comparable to the compounds of formula (I).
  • X most preferably represents a sulfur or selenium atom and advantageously a sulfur atom.
  • n is preferably between 0 and 3, more specifically between 0 and 2 and is in particular equal to 0.
  • R6 can comprise one or more heterogroups, preferably 0, 1 or 2, more preferably 0 or 1, chosen from an oxygen atom, a sulfur atom, a selenium atom, an SO group and an SO 2 group.
  • a specific example of a CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 group according to the invention is the group CO-CH2-S-C14H 2 9.
  • Preferred compounds within the meaning of the invention are therefore compounds of general formula (I) above in which at least one of the groups R1, R2 and R3 represents a group CO- (CH 2 ) 2n + ⁇ -X-R6 in which X represents a sulfur or selenium atom and preferably a sulfur atom and / or R6 is a saturated and linear alkyl group comprising from 3 to 23 carbon atoms, preferably 13 to 20 carbon atoms, preferably 14 to 17, more preferably 14 to 16, and even more preferably 14 carbon atoms.
  • R1, R2 and R3 are groups CO- (GH2) 2n + - 6, identical or different, in which X represents a sulfur or selenium atom and preferably a sulfur atom.
  • G2 represents an oxygen or sulfur atom, and preferably an oxygen atom.
  • R2 advantageously represents a group of formula CO- (CH2) 2n + -R6 î®l ue defined above.
  • Particularly preferred compounds are the compounds of general formula (I) above in which: * G3 is an N-R4 group in which R4 is a hydrogen atom or a methyl group, and G2 is an oxygen atom; and or
  • R2 represents a group CO- (CH 2 ) 2n + ⁇ -X-R6 as defined above.
  • FIG. 1 Examples of preferred compounds according to the invention are represented in FIG. 1.
  • the present invention more particularly relates to compounds chosen from:
  • the subject of the present invention is also a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, in a pharmaceutically acceptable carrier, at least one compound of general formula (I) as described above, including the compounds of formula (I) in which the G2R2 and G3R3 groups simultaneously represent hydroxyl groups, optionally in association with another therapeutic active.
  • This composition is in particular intended to treat a cerebrovascular pathology, such as cerebral ischemia or a hemorrhagic stroke.
  • Another object of the present invention thus relates to any pharmaceutical composition
  • any pharmaceutical composition comprising in a support acceptable on the plan pharmaceutical at least one compound of formula (I) as described above, including the compounds of formula (I) in which the groups G2R2 and G3R3 simultaneously represent hydroxyl groups.
  • the compounds of formula (I), including the compounds of formula (I) in which the groups G2R2 and G3R3 simultaneously represent hydroxyl groups have both PPAR activator properties , antioxidants and anti-inflammatories and have a prophylactic and curative neuroprotective activity for cerebral ischemia.
  • the invention also relates to the use of a compound as defined above for the preparation of a pharmaceutical composition intended for the implementation of a method of treatment or prophylaxis in humans or in animals .
  • the invention also relates to a method of treatment of cerebrovascular pathologies and more particularly of cerebral ischemia, comprising the administration to a subject, in particular human, of an effective dose of a compound of formula (I) or of a pharmaceutical composition as defined above, including the compounds of general formula (I) in which the groups G2R2 and G3R3 simultaneously represent hydroxyl groups.
  • the compounds of formula (I) used are as defined above and also include 3- (tetradecylthioacetylamino) propane-1,2-diol.
  • compositions according to the invention advantageously comprise one or more excipients or vehicles, acceptable on the pharmaceutical plan. Mention may be made, for example, of saline, physiological, isotonic, buffered solutions, etc., compatible with pharmaceutical use and known to those skilled in the art.
  • the compositions may contain one or more agents or vehicles chosen from dispersants, solubilizers, stabilizers, surfactants, preservatives, etc.
  • Agents or vehicles usable in formulations are in particular methylcellulose, hydroxymethylcellulose, carboxymethylcellulose, polysorbate 80, mannitol, gelatin, lactose, vegetable oils, acacia, etc.
  • compositions may be formulated in the form of an injectable suspension, gels, oils, tablets, suppositories, powders, capsules, capsules, etc., optionally by means of dosage forms or devices ensuring sustained and / or delayed release.
  • an agent such as cellulose, carbonates or starches is advantageously used.
  • the compounds or compositions according to the invention can be administered in different ways and in different forms.
  • they can for example be administered systemically, orally, parenterally, by inhalation or by injection, such as for example by intravenous, intramuscular, subcutaneous, trans-dermal, intra-arterial, etc.
  • the compounds are generally packaged in the form of liquid suspensions, which can be injected using syringes or infusions, for example.
  • the compounds are generally dissolved in saline, physiological, isotonic, buffered solutions, etc., compatible with pharmaceutical use and known to those skilled in the art.
  • compositions can contain one or more agents or vehicles chosen from dispersants, solubilizers, emulsifiers, stabilizers, surfactants, preservatives, buffers, etc.
  • Agents or vehicles that can be used in liquid and / or injectable formulations are in particular methylcellulose, hydroxymethylcellulose, carboxymethylcellulose, polysorbate 80, mannitol, gelatin, lactose, vegetable oils, acacia, liposomes, etc. .
  • the compounds can thus be administered in the form of gels, oils, tablets, suppositories, powders, capsules, capsules, aerosols, etc., optionally by means of dosage forms or devices ensuring sustained and / or delayed release.
  • an agent such as cellulose, carbonates or starches is advantageously used.
  • the compounds can be administered orally in which case the agents or vehicles used are preferably chosen from water, gelatin, gums, lactose, starch, magnesium stearate, talc, an oil, polyalkylene glycol, etc. .
  • the compounds are preferably administered in the form of solutions, suspensions or emulsions with in particular water, oil or polyalkylene glycols to which it is possible to add, in addition to preservatives, stabilizers, emulsifiers , etc., salts to adjust the osmotic pressure, buffers, etc.
  • the flow rate and / or the dose injected can be adapted by a person skilled in the art depending on the patient, the pathology concerned, the mode of administration, etc.
  • the compounds are administered in doses which can vary between 1 ⁇ g and 2 g per administration, preferably from 0.1 mg to 1 g per administration.
  • the administrations can be daily or repeated several times a day, if necessary.
  • the compositions according to the invention can also comprise other agents or active principles.
  • the invention also relates to processes for the preparation of the compounds as defined above.
  • the compounds of the invention can be prepared from commercial products, using a combination of chemical reactions known to those skilled in the art.
  • G3 are oxygen or sulfur atoms or an NH group
  • R is a hydrogen atom and
  • the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3 are hydrogen atoms or represent a CO-R5 or CO- (CH2) 2n + rX-R6 group can be obtained according to different methods which allow the synthesis of compounds in which the groups carried by the same heteroatom (nitrogen or oxygen) have the same meaning.
  • a first mode a molecule of 1-aminoglycerol, 1, 3-diaminoglycerol or 1,2-diaminoglycerol (obtained by adapting the protocol described by (Morris, Atassi et al.
  • A1 is a reactive group chosen for example from OH, Cl and OR7, R7 being an alkyl group
  • a ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + ⁇ -X- R6 optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
  • This reaction makes it possible to obtain respective particular forms of compounds of formula (I), called compounds (lla-c), and can be implemented by adapting the protocols described (Urakami and Kakeda 1953), (Shealy, Frye et al . 1984), (Marx, Piantadosi et al. 1988) and (Rahman, Ziering et al. 1988) or (Nazih, Cordier et al. 1999).
  • the groups carried by the same heteroatom, respectively, (R1 and R3) and (R1 and R2) have the same meaning.
  • the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms or a NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + - 6, can be obtained from a compound of formula (Ia-c) and a compound of formula A ° -CO- A2 in which A2 is a reactive group chosen for example between OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2 n + ⁇ -X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
  • R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2 n + X-R5, can be obtained according to following steps :
  • reaction of 1-aminoglycerol, 1, 3-diaminoglycerol or 1,2-diaminoglycerol with a compound (PG) 2 O in which PG is a protective group to give a compound of general formula (IIIa-c).
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Nazih, Cordier et al. 2000) and (Kotsovolou, Chiou et al. 2001) in which (PG) 2 ⁇ represents di-tert-butyl dicarbonate;
  • a compound of formula (I) according to the invention is reacted, in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R and R2 are hydrogen atoms and (iii ) R1, R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen for example between OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + rX-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
  • the compounds of formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R and R2 are hydrogen atoms and (iii) R1 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (GHa iX-R ⁇ ) can be obtained from a compound of formula (IIa) as defined above with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and CI, and A ° is the group R5 or the group (CH2) 2n + - 6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
  • the compounds of formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, can be obtained from a compound of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R, R2 and R3 represent a hydrogen atom and (iii) R1 is a CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + ⁇ -X-R6 group (composed of formula (IIa)) according to the following steps (diagram 2): a) reaction of the compound of formula (IIa) with a compound PG-E in which PG is a protective group and E is a reactive group chosen, for example, from OH or a halogen, to give a compound of general formula (V) in which
  • reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988) and (Gaffney and Reese 1997) in which PG-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9-ol or also 9-chloro-9-phenylxanthene;
  • a ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + rX-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
  • the reaction may advantageously be implemented by adapting the protocols described by (Nazih, Cordier et al., 2000) and (Kotsovolou, Chiou et al., 2001) wherein (PG) 2 0 represents the di-tert-butyl dicarbonate;
  • A2 is a reactive group chosen, for example, between OH and Cl
  • a ° is the group R5 or the group (CH2 1-X-R6, optionally in the presence of coupling agents or known activators of those skilled in the art to obtain a compound of formula (XI) in which R and R4 represent different linear or branched alkyl groups, saturated or unsaturated, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms, R3 represents the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + rX-R6 and PG is a protective group; f) deprotection of the compound (XI) according to conditions known to those skilled in the art.
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988) and (Gaffney and Reese 1997) in which PG'-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9- ol or also 9-chloro-9-phenylxanthene;
  • LG in which LG a reactive group chosen, for example, from iodine, bromine, etc., in the presence of possible activators known to a person skilled in the art to give a compound of general formula (XVId-f);
  • This reaction scheme allows the synthesis of compounds of general formula (I) in which the groups carried by the same heteroatom (nitrogen or sulfur) respectively (R2 and R3), (R1 and R3) and (R1 and R2) have the same meaning .
  • the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are sulfur atoms or an NH group, (ii) R is a d atom hydrogen and (iii) R1, R2 and R3 are hydrogen atoms or represent a CO-R5 or CO- (CH2) 2n + rX-R6 group can be prepared from the compounds of formula (IIIa-c) by a process comprising:
  • This reaction scheme allows the synthesis of compounds of general formula (I) in which the groups carried by the same heteroatom (nitrogen or sulfur) respectively (R2 and R3), (R1 and R3) and (R1 and R2) have the same meaning .
  • the compounds of general formula (I) in which (i) the group G2 and G3 represent sulfur atoms or an N-R4 group, (ii) R and R4 independently represent groups as defined above, (iii) R1 is a hydrogen atom and (iv) R2 and R3, identical or different, represent a CO-R5 group or a GO- (CH 2 ) 2 n + -R6 group, can be obtained according to the following methods:
  • R and R4 independently represent different linear or branched alkyl groups, saturated or unsaturated, optionally substituted, having from 1 to 5 carbon atoms, (iv) R1 is a hydrogen atom and (v) R2 and R3, identical or different, represent a CO-R5 group or a CO- (CH) 2n + ⁇ -X-R6 group are obtained in the following manner (diagram 7):
  • the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 represents an N-R4 group, (ii) G3 is a sulfur atom, (iii) R and R4 represent independently of the different linear or branched alkyl groups, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising from 1 to 5 carbon atoms, (iv) R1 is a hydrogen atom and (v) R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or a CO- (GH2) 2n + -R6 group are obtained in the following manner:
  • LG-E in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen for example from mesyl, tosyle, etc., to give a compound of general formula (XXVII) in which PG represents a protective group; c) reaction of the compound (XXVII) with a compound of formula R4-NH 2 in which R4 represents a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms and NH 2 represents the amino function , according to the method described by (Ramalingan, Raju et al. 1995), to obtain a compound of formula (XXVIII) in which R and R4 independently represent different linear or branched alkyl groups, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising 1 to 5 carbon atoms;
  • the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 is a sulfur atom, (ii) G3 is an oxygen atom, (iii) R is an atom hydrogen, (iv) R1 and R2 represent a group CO-R5 or GO- (GH2) 2n + ⁇ - -R @ e (v) R3 is a hydrogen atom or represents a group CO-R5 or GO- (GH2 ) 2n + - 6, can be prepared from the compounds of formula (V) by the following process (scheme 9B):
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988) and (Gaffney and Reese 1997) in which PG-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-
  • reaction can advantageously be carried out works by adapting the protocols described by (Nazih, Cordier et al. 2000) and (Kotsovolou, Chiou et al. 2001) in which (PG) 2 ⁇ represents di-tert-butyl dicarbonate;
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988) and (Gaffney and Reese 1997), in which PG-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9- ol or also 9-chloro-9-phenylxanthene;
  • R6 optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art for obtaining a compound of general formula (XLVIII) in which R1 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO - (CH 2 ) 2n + rX-R6;
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988) and (Gaffney and Reese 1997) in which PG'-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9- ol or also 9-chloro-9-phenylxanthene;
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Nazih, Cordier et al. 2000) and (Kofsovolou, Ghiou et al. 2001) in which (P) 2 ⁇ represents di-tert-butyl dicarbonate;
  • R2 and R3, identical, are hydrogen atoms or represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + ⁇ -X-R6 and (v) R1 represents a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, can be prepared from the compounds of formula (IIIa) according to the following process (diagram 13):
  • FIG. 1 Structure of particular compounds according to the invention, the preparation of which is described in Examples 2, 4, 5, 6, 8, 10 to 14, 16, 18, 19, 21 and 23 noted in FIG. 1A.2 1A.4, 1A.5, 1A.6, 1A.8, 1A.10, 1A.11, 1A.12, 1A.13, 1A.14, 1A.16, 1A.18, 1A.19, 1A. 21 and 1A.23.
  • Figure 2 Evaluation of the antioxidant properties of compounds according to the invention on the oxidation of LDL by copper (Cu).
  • Figure 3 Evaluation of the properties of PPAR ⁇ agonists of compounds according to the invention with the Gal4 / PPAR ⁇ transactivation system.
  • Example 2 the compounds according to the invention used in the examples for measuring or evaluating activity will be abbreviated as "Ex 2" to denote the compound according to the invention, the preparation of which is described in example 2.
  • GGM Thin layer chromatographies
  • the column chromatographies were carried out on silica gel 60 with a particle size 40-63 ⁇ m (reference 9385-5000 MERCK).
  • the melting points (PF) were measured using a BUCHI B 540 device by the capillary method.
  • IR infrared
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • Mass spectra were performed on a PERKIN-ELMER SCIEX API 1 spectrometer (ESI-MS for Electrospray lonization Mass Spectrometry) or on an APPLIED BIOSYSTEMS Voyager DE-STR spectrometer of MALDI-TOF type (Matrix-Assisted Laser Desorption / lonization - Time Of Flight).
  • the product is obtained in the form of a colorless oil which crystallizes slowly.
  • 1,3- (di-fert-butoxycarbonylamino) -propan-2-ql (1 g; 3.45 mmol), tetradecylthioacetic acid (example 1) (0.991 g; 3.45 mmol) and dimethylaminopyridine ( 0.042 g; 0.34 mmol) are dissolved in dichloromethane (40 ml) at 0 ° C before adding dropwise dicyclohexylcarbodiimide (0.709 g; 3.45 mmol), diluted in dichloromethane ,. The reaction medium is left stirring at 0 ° C for 30 min and then brought to room temperature.
  • the 1,3-diamino-2-tetradecylthioacetyloxypropane dihydrochloride (example 10) (0.400 g; 0.92 mmol) and the tetradecylthioacetic acid (example 1) (0.532 g; 1.84 mmol) are dissolved in dichloromethane (50 ml) at 0 ° C before adding triethylamine (0.3 ml; 2.1 mmol), dicyclohexylcarbodiimide (0.571 g; 2.77 mmol) and f hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.249 g; 1.84 mmol).
  • the 2,3-diaminopropionic acid hydrochloride (1 g; 7 mmol) is dissolved in methanol (40 ml). The medium is cooled by an ice bath before adding dropwise the thionyl chloride (2.08 ml; 28 mmol). The medium is brought to room temperature and then brought to reflux for 20 hours. The solvent is evaporated and the residue is triturated in heptane. The resulting precipitate is filtered, rinsed and dried to give a white-yellow solid.
  • Methyl 2,3-diaminopropanoate dihydrochloride (example 13a) (0.500 g; 2.62 mmol) and tetradecylthioacetic acid (example 1) (1.51 g; 5.23 mmol) are dissolved in dichloromethane (80 ml) at 0 ° C before adding triethylamine (0.79 ml), dicyclohexylcarbodiimide (1.62 g; 7.85 mmol) and
  • EXAMPLE 14 Preparation of 2.3-ditetradecylthioacetylamino-1-tetradecylthioacetyloxypropane 2,3-ditetradecylthioacetylaminopropan-1-ol (example 13) (0.200 g; 0.32 mmol) is dissolved in tetrahydrofuran (40 ml) before adding dicycloheimidecarbyl mg; 0.32 mmol), dimethylaminopyridine (39 mg; 0.32 mmol) and tetradecylthioacetic acid (Example 1) (91 mg; 0.32 mmol). The mixture is left stirring at room temperature for 20 hours.
  • the product obtained (0.48 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-ethyl acetate 98-2) and allows the desired product to be obtained in the form of an ocher solid. Efficiency: 84%
  • CHSH-CH 2 -SH CHSH-CH 2 -SH); 3.26-3.35 (m, 2H, BOGNH-CH 2 -GHSH-CH 2 -SH); 3.43-3.52 (m, 2H, BOGNH-GH 2 -GH-CH 2 -SH); 4.91 (m, 2H, SH); 5.08 (s, 1H, -NHBOC).
  • Example 17 This compound is obtained according to the procedure described above (Example 15) from 1- (tert-butyloxycarbonylamino) -2,3-dissetradécylthioacétyl-thiopropane
  • 3-tetradecylthioacetylamino-1-triphenylmethyloxypropan-2-ol (2 g; 3.31 mmol) is dissolved in toluene (100 ml) before adding imidazole (0.564 g; 8.28 mmol), triphenylphosphine ( 2.171 g; 8.28 mmol) and iodine (1.681 g; 6.62 mmol) in this order.
  • the reaction medium is left under stirring at room temperature for 20 hours.
  • a saturated solution of sodium bisulfite is added until complete discoloration of the reaction medium.
  • Hydrated sodium hydrogen sulfate 38 mg; 0.68 mmol is suspended in ethanol (20 ml) before adding 2-iodo-3-tetradecylthioacetylamino-1-triphenylmethyloxypropane (example 20b) (200 mg; 0.28 mmol).
  • the reaction medium is heated to 70 ° G. 238 mg of hydrated sodium hydrogen sulfate are added over several days. After 6.5 days, the solvent is evaporated, the residue taken up in dichloromethane and washed with water. The aqueous phase is reextracted and the combined organic phases are washed with a 0.5N hydrochloric acid solution and then with a saturated solution of sodium chloride, dried over magnesium sulfate.
  • reaction medium is left under stirring at room temperature for 17 hours and 0.5 equivalents of imidazole, triphenylphosphine and iodine are added. After 21 hours of reaction, a saturated solution of sodium sulfite is added until the reaction medium is completely discolored.
  • the phases are decanted and the aqueous phase is extracted twice with toluene.
  • the combined organic phases are washed with a saturated aqueous sodium chloride solution, dried over magnesium sulfate, filtered and the solvent evaporated.
  • the residue obtained (11.02 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-ethyl acetate 95-5) to give the desired compound in the form of a yellow paste which is rapidly reacted.
  • the compounds according to the invention were prepared in the form of an emulsion as described below.
  • the emulsion comprising a compound according to the invention and phosphatidylcholine (PC) is prepared according to the protocol of Spooner et al. (Spooner, Clark et al. 1988).
  • the compound according to the invention is mixed with the PC in a 4: 1 ratio (w / w) in chloroform, the mixture is dried under nitrogen, then evaporated overnight under vacuum, the resulting powder is taken up by 0 , 16 M of potassium chloride containing 0.01 M of EDTA then the lipid particles are dispersed by ultrasound for 30 minutes at 37 ° C.
  • the liposomes formed are then separated by ultracentrifugation (ultracentrifuge XL 80, Beckman Coulter, Villepinte, France) at 25,000 rpm for 45 minutes to recover liposomes whose size is greater than 100 nm and approaches that of chylomicrons.
  • Liposomes consisting solely of PC are prepared in parallel to serve as a negative control.
  • the composition of the liposomes in compounds according to the invention is estimated using the enzymocolorimetric assay kit for triglycerides. The assay is performed against a standard range, prepared using the CFAS lipid calibrator (Ref. No. 759350, Boehringer Mannheim GmbH, Germany). The standard range was built from 16 to 500 ⁇ g / ml.
  • liposomes containing the compounds according to the invention, thus prepared are used in the in vitro experiments described in Examples 26, 27 and 28.
  • the LDLs are prepared according to the method described by Lebeau et al. (The beautiful,
  • test compounds are prepared at 10 "2 M in ethanol and diluted in PBS to have final concentrations ranging from 0.1 to 100 ⁇ M for a total ethanol concentration of 1% (v / v ).
  • EDTA is removed from the LDL preparation by dialysis.
  • the oxidation then takes place at 30 ° C. by adding 100 ⁇ l of a solution with 16.6 ⁇ M of copper sulphate to 800 ⁇ L of LDL (125 ⁇ g of proteins per ml) and 100 ⁇ L of a solution of the compound to test.
  • the formation of dienes, the species to be observed, is measured by optical density at 234 nm in the samples treated with the compounds in the presence or absence of copper.
  • the measurement of the optical density at 234 nm is carried out every 10 minutes for 8 hours using a thermostated spectrophotometer (Kontron Uvikon 930). The analyzes are carried out in triplicate.
  • FIG. 2 shows that the compounds according to the invention Ex 2, 4, 5, 6 and 11 have intrinsic antioxidant properties.
  • FIG. 2a shows that the compounds according to the invention induce a lag lag phase of more than 13% for the compound Ex 2 up to 34.3% for the compound Ex 4.
  • the compounds according to the invention do not seem modify the oxidation rate (see Figure 2b) or the quantity of dienes formed (see Figure 2c).
  • the compounds according to the invention, tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23.
  • the measurement of the oxidation of LDL is carried out by the method of TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive Substances).
  • the LDLs are oxidized with copper sulphate and the lipid peroxidation is determined as follows:
  • the TBARS are measured using a spectrophotometric method, the lipid hydroperoxidation is measured in using peroxide-lipid oxidation dependent on iodide iodine.
  • the results are expressed in nmol of malonodialdehyde (MDA) or in nmol of hydroperoxide per mg of proteins.
  • MDA malonodialdehyde
  • the results obtained previously, by measuring the inhibition of the formation of conjugated dienes, are confirmed by the experiments of measurement of lipid peroxidation of LDL.
  • the compounds according to the invention therefore also effectively protect LDL against lipid peroxidation induced by copper (oxidizing agent).
  • Example 26 Measurement of the antioxidant properties of the compounds according to the invention on cell cultures
  • the cell lines used for this type of experiment are of the neuronal, neuroblastoma (human) and PC12 (rat) cells type.
  • PC12 cells were prepared from a rat pheochromocytoma and are characterized by Greene and Tischler (Greene and Tischler 1976). These cells are commonly used for studies of neuronal differentiation, signal transduction and neuronal death.
  • the PC12 cells are cultured as previously described (Farinelli, Park et al. 1996), in complete RPMI medium (Invitrogen) supplemented with 10% horse serum and 5% fetal calf serum.
  • the mRNAs are extracted from the cells in culture treated or not with the compounds according to the invention. The extraction is carried out using reagents from the Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) according to the supplier's instructions. The mRNAs are then assayed by spectrometry and quantified by quantitative RT-PCR using the Light Cycler Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche) on a Light Cycler System device (Roche, France). Pairs of primers specific for Super Oxide Dismutase (SOD), Catalase and Glutathione Peroxidase (GPx) genes, antioxidant enzymes, are used as probes.
  • SOD Super Oxide Dismutase
  • GPx Glutathione Peroxidase
  • Pairs of primers specific for the ⁇ -actin and cyclophilin genes are used as control probes.
  • the increase in the expression of mRNAs, measured by quantitative RT-PCR, of the genes of the antioxidant enzymes is demonstrated in the different cell types used, when the cells are treated with the compounds according to the invention.
  • the antioxidant properties of the compounds are also evaluated using a fluorescent indicator, the oxidation of which is followed by the appearance of a fluorescent signal.
  • the reduction in intensity of the fluorescent signal emitted is measured in the cells treated with the compounds as follows: the PC12 cells cultured as previously described (black plate 96 wells transparent background, Falcon) are incubated with increasing doses of peroxide hydrogen (0.25 mM - 1 mM) in serum-free medium for 2 and 24 hours.
  • DCFDA dichlorodihydrofluorescein diacetate
  • the different cell lines (cell models mentioned above) as well as the cells in primary culture are treated as above.
  • the cell supernatant is recovered after the treatment and the cells are lysed and recovered for the determination of the protein concentration.
  • the detection of lipid peroxidation is determined as follows: lipid peroxidation is measured using thiobarbituric acid (TBA) which reacts with lipoperoxidation of aldehydes such as malonodialdehyde (MDA).
  • TSA thiobarbituric acid
  • MDA malonodialdehyde
  • the supernatant from cells is collected (900 ⁇ l) and 90 ⁇ l of butylated hydroxytoluene are added thereto (Moriiere, Moysan et al. 1991).
  • the compounds according to the invention advantageously have intrinsic antioxidant properties which make it possible to slow down and / or inhibit the effects of oxidative stress.
  • the inventors also show that the compounds according to the invention are capable of inducing the expression of the genes of antioxidant enzymes. These particular characteristics of the compounds according to the invention allow the cells to fight more effectively against oxidative stress and therefore to be protected from damage caused by free radicals.
  • Example 27 Evaluation of the activation of PPARs in vitro by the compounds according to the invention
  • the nuclear receptors belonging to the PPAR subfamily which are activated by two major classes of pharmaceutical compounds, fibrates and glitazones, which are widely used in human clinics for the treatment of dyslipidemias and diabetes, play an important role in homeostasis lipid and carbohydrate.
  • the following experimental data show that the compounds according to the invention activate PPAR ⁇ in vitro.
  • PPARs The activation of PPARs is evaluated in vitro in lines of fibroblastic type RK13 or in a hepatocyte line HepG2, by measuring the transcriptional activity of chimeras consisting of the DNA binding domain of the yeast transcription factor Gal4 and of the ligand binding domain of the different PPARs.
  • the example presented below is given for HepG2 cells.
  • the HepG2 cells come from EGAGG (Porton Down, UK) and are cultured in DMEM medium supplemented with 10% vol / vol fetal calf serum, 100 U / ml penicillin (Gibco, Paisley, UK) and 2 mM L- Glutamine (Gibco,
  • the culture medium is changed every two days.
  • the cells are stored at 37 ° C. in a humid atmosphere containing 5% carbonic acid and 95% air.
  • the plasmids pG5TkpGL3, pRL-CMV, pGal4-hPPAR ⁇ , pGal4-hPPAR ⁇ and pGal4-f have been described by Rascourt et al. (Raspe, Madsen et al. 1999).
  • the constructs pGal4-mPPAR ⁇ and pGal4-hPPAR ⁇ were obtained by cloning into the vector pGal4-f DNA fragments amplified by PCR corresponding to the DEF domains of the mouse PPAR ⁇ and human PPAR ⁇ nuclear receptors respectively.
  • the HepG2 cells are seeded in 24-well culture dishes at the rate of 5 ⁇ 10 4 cells / well, are transfected for 2 hours with the reporter plasmid pG5TkpGL3 (50 ng / well), the expression vectors pGal4-f, pGal4- mPPAR ⁇ , pGal4-hPPAR ⁇ , pGal4-hPPAR ⁇ or pGal4-hPPAR ⁇ (100 ng / well) and the vector for controlling the transfection efficiency pRL-CMV (1 ng / well) according to the protocol described above (Raspe, Madsen et al . 1999) and incubated for 36 hours with the test compounds.
  • the cells are lysed (Gibco, Paisley, UK) and the luciferase activities are determined using the Dual-Luciferase TM Reporter Assay System assay kit (Promega, Madison, Wl, USA) according to the supplier's instructions.
  • the protein content of the cell extracts is then evaluated using the Bio-Rad Protein Assay assay kit (Bio-Rad, M ⁇ nchen, Germany) according to the supplier's instructions.
  • the inventors demonstrate an increase in luciferase activity in cells treated with the compounds according to the invention and transfected with the plasmid pGal4-hPPAR ⁇ . This induction of luciferase activity indicates that the compounds according to the invention are activators of PPAR ⁇ .
  • An example of results obtained with compounds according to the invention is presented in FIG. 3.
  • FIG. 3 HepG2 cells, transfected with the plasmids of the Gal4 / PPAR ⁇ system, are incubated with different concentrations (5, 15, 50 and 100 ⁇ M) of the compounds according to the invention (Ex 2, Ex 4, Ex 5, Ex 6 , Ex 11) for 24 h and with different vehicle concentrations (PC) noted 1, 2, 3, 4 as controls respectively for the concentrations 5, 15, 50 and 100 ⁇ M of the compounds according to the invention (according to 4: 1 ratio w / w described in Example 24 (Method for preparing the compounds of formula (I) according to the invention)).
  • the results are represented by the induction factor (luminescent signal of the treated cells divided by the luminescent signal of the untreated cells) according to the different treatments.
  • the compound according to the invention Ex 5 also induces an increase in the induction factor with a dose effect of 10.5 to 100 ⁇ M, 7 to 50 ⁇ M, 2.5 to 15 ⁇ M and 1.2 to 5 ⁇ M.
  • the compound according to the invention Ex 6 also induces an increase in the luminescent signal, revealing an activity on the nuclear receptor PPAR ⁇ .
  • the induction factors for compound Ex 6 are 14.5 to 100 ⁇ M, 9.6 to 50 ⁇ M, 2.2 to 15 ⁇ M and 1.1 to 5 ⁇ M.
  • the vehicle PC liposome
  • cytokines and free radicals The inflammatory response appears in many neurological disorders, such as cerebral ischemia, and inflammation is one of the important factors in neurodegeneration.
  • One of the first reactions of glia cells to stroke is to release cytokines and free radicals.
  • cytokines and free radicals The consequence of this release of cytokines and free radicals is an inflammatory response in the brain which can lead to the death of neurons (Rothwell 1997).
  • Cell lines and primary cells are grown as described above.
  • the lipopolysaccharide (LPS), bacterial endotoxin (Escherichia coli 0111: B4) (Sigma, France) is reconstituted in distilled water and stored at 4 ° C.
  • the cells are treated with an LPS concentration of 1 ⁇ g / ml for 24 hours.
  • the cell culture medium is completely changed.
  • TNF- ⁇ is an important factor in the inflammatory response to stress (oxidant for example).
  • the culture medium of the stimulated cells is removed and the amount of TNF- ⁇ is evaluated with an ELISA-TNF- ⁇ kit (Immunotech, France ).
  • the samples are diluted 50 times in order to be in line with the standard range (Chang, Hudson et al. 2000).
  • the anti-inflammatory property of the compounds according to the invention is characterized in the following manner: the culture medium of the cells is completely changed and the cells are incubated with the compounds to be tested for 2 hours. After this incubation, LPS is added to the culture medium at a final concentration of 1 ⁇ g / ml. After 24 hours of incubation, the cell supernatant is recovered and stored at -80 ° C when it is not treated directly. The cells are lysed and the amount of protein is measured, using the Bio-Rad Protein Assay assay kit (Bio-Rad, Kunststoff, Germany) according to the supplier's instructions.
  • the measurement of the decrease in TNF- ⁇ secretion favored by the treatment with the test compounds is expressed in pg / ml / ⁇ g of protein and reported as a percentage relative to the control. This shows that the compounds according to the invention have anti-inflammatory properties.
  • A- / Prophylactic model 1 / Treatment of animals
  • Wistar rats weighing 200 to 350 g were used for this experiment.
  • the animals are kept under a 12 hr light / dark cycle at a temperature of 20 ⁇ 3 ° C. Animals have free access to water and food. Food gain and weight gain are recorded.
  • the animals are treated by gavage with the compounds according to the invention.
  • CMC carboxymethylcellulose
  • Tween 0.16% a sodium salt of carboxymethylcellulose of medium viscosity (Ref. C4888, Sigma-aldrich, France).
  • the Tween used is Polyoxyethylenesorbitan Monooleate (Tween 80, Ref. P8074, Sigma-aldrich, France).
  • Brains are quickly frozen and sectioned.
  • the sections are colored in Cresyl purple.
  • the non-colored areas of the brain sections were considered to be injured by the infarction.
  • Analysis of the brain sections of animals treated with the compounds according to the invention reveals a marked reduction in the volume of the infarction compared to the untreated animals.
  • the compounds according to the invention are administered to animals before ischemia (prophylactic effect), they are capable of inducing neuroprotection.
  • the brains of rats are frozen, crushed and reduced to powder and then resuspended in saline.
  • the different enzymatic activities are then measured as described by the following authors: superoxide dismutase (Flohe and Otting 1984); glutathione peroxidase (Paglia and Valentine 1967); glutathione reductase (Spooner, Delides et al. 1981); glutathione-S-transferase (Habig and Jakoby 1981); catalase (Aebi 1984).
  • superoxide dismutase Flohe and Otting 1984
  • glutathione peroxidase Paglia and Valentine 1967
  • glutathione reductase Spooner, Delides et al. 1981
  • glutathione-S-transferase Habig and Jakoby 1981
  • catalase Aebi 1984.
  • the various enzymatic activities mentioned above are increased in the preparations of brains of animals treated with the compounds
  • Animals as described above are used for this experiment.
  • the animals are anesthetized using an intraperitoneal injection of 300 mg / kg of chloral hydrate.
  • a rectal probe is placed and the body temperature is maintained at 37 ⁇ 0.5 ° C. Blood pressure is measured during the whole experiment.
  • the right carotid is updated using a medial cervical incision.
  • the pterygopalatine artery was ligated at its origin and an arteriotomy is performed in the external carotid artery in order to slip a nylon monofilament into it.
  • This filament is then gently advanced into the common carotid artery and then into the internal carotid artery in order to close off the origin of the middle cerebral artery. After 1 hour, the filament is removed to allow reperfusion. 2 / Treatment of animals:
  • Animals having undergone prior ischemia-reperfusion are treated with the compounds according to the invention by the oral route (as already described in a CMC + Tween vehicle) one or more times after the reperfusion (600 mg / kg / d or 2 administrations of 300mg / kg / d).
  • the animals previously treated or not treated with the compounds according to the invention are killed by an overdose of pentobarbital.
  • Brains are quickly frozen and sectioned.
  • the sections are colored in Cresyl purple.
  • the non-colored areas of the brain sections are considered to be injured by the infarction.
  • a curative treatment treatment of the acute phase
  • the animals treated with the compounds according to the invention have reduced damage to the brain level compared to the untreated animals.
  • the volume of the infarction is reduced when the compounds according to the invention are administered for 24, 48 or 72 hours after ischemia-reperfusion.
  • the compounds according to the invention therefore have neuroprotective activity during treatment subsequent to acute ischemia.
  • the use of the compounds according to the invention shows that these new compounds have an intrinsic antioxidant activity, capable of delaying and reducing the effects of oxidative stress.
  • they induce the expression of the genes of antioxidant enzymes, which combined with their antioxidant nature makes it possible to strengthen anti-radical protections.
  • the compounds according to the invention have an anti-inflammatory power and the property of activating the nuclear receptor PPAR ⁇ .

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Abstract

La présente invention concerne d' aminopropanediols acylés et leurs analogues azotés et sulfurés de formule générale (I), dans laquelle R, R1, R2, R3, G2 et G3 sont définis comme dans les revendications, des compositions pharmaceutiques les comprenant ainsi que leurs applications en thérapeutique, notamment pour le traitement de l'ischémie cérébrale.

Description

AMINOPROPANEDIOLS ACYLES ET ANALOGUES ET LEURS UTILISATIONS THERAPEUTIQUES
La présente invention concerne de nouveaux aminopropanediols acylés et leurs analogues azotés et sulfurés, des compositions pharmaceutiques les comprenant, leurs applications en thérapeutique, notamment pour le traitement de l'ischémie cérébrale. Elle a également trait à un procédé de préparation de ces dérivés.
Les composés de l'invention possèdent des propriétés pharmacologiques, anti-oxydantes et anti-inflammatoires avantageuses. L'invention décrit également les procédés de traitement thérapeutique utilisant ces composés et des compositions pharmaceutiques les contenant. Les composés de l'invention sont utilisables en particulier pour prévenir ou traiter les accidents vasculaires cérébraux. En. France, la pathologie vasculaire cérébrale (150000 nouveaux cas par an) représente la troisième cause de mortalité et la première cause de handicap chez l'adulte. Les accidents ischémiques et hémorragiques concernent respectivement 80% et 20% de cette pathologie. Les accidents ischémiques cérébraux constituent un enjeu thérapeutique important pour diminuer la morbidité et la mortalité de cette affection. Des avancées ont été faites non seulement dans le traitement de la phase aiguë de l'ischémie mais également dans sa prévention. Il est aussi important de noter que l'identification et la prise en charge des facteurs de risque sont essentielles au traitement de cette pathologie. Les traitements médicamenteux des accidents ischémiques cérébraux sont fondés sur différentes stratégies. Une première stratégie consiste à prévenir la survenue des accidents ischémiques cérébraux par la prévention des facteurs de risque (hypertension artérielle, hypercholestérolémie, diabète, fibrillation auriculaire, etc.) ou par la prévention de la thrombose, en particulier à l'aide d'anti-aggrégants plaquettaires ou d'anticoagulants (Adams 2002) et (Gorelick 2002). Une deuxième stratégie consiste à traiter la phase aiguë de l'ischémie, afin d'en diminuer les conséquences à long terme (Lutsep and Clark 2001 ).
La physiopathologie de l'ischémie cérébrale peut être décrite de la façon suivante : la zone de pénombre, zone intermédiaire entre le coeur de l'ischémie — où les neurones sont nécrosés — et le tissu nerveux intact, est le siège d'une cascade physiopathologique qui aboutit en quelques jours à la mort neuronale si la reperfusion n'est pas assurée ou si la neuroprotection n'est pas assez efficace. Le premier événement, qui survient dans les premières heures, est une libération massive de glutamate qui aboutit à une dépolarisation neuronale ainsi qu'à un œdème cellulaire. L'entrée de calcium dans la cellule induit des dégâts mitochondriaux favorisant la libération de radicaux libres ainsi que l'induction d'enzymes qui provoquent la dégradation membranaire des neurones. L'entrée de calcium et la production de radicaux libres activent à leur tour certains facteurs de transcription, comme NF- B. Cette activation induit des processus inflammatoires comme l'induction de protéines d'adhésion au niveau endothélial, l'infiltration du foyer ischémique par les polynucléaires neutrophiles, l'activation microgliale, l'induction d'enzymes comme l'oxyde nitrique (NO) synthase de type Il ou la cyclooxygénase de type II. Ces processus inflammatoires conduisent à la libération de NO ou de prostanoïdes qui sont toxiques pour la cellule. L'ensemble de ces processus aboutit à un phénomène d'apoptose provoquant des lésions irréversibles (Dirnagl, ladecola et al. 1999).
Le concept de neuroprotection prophylactique s'appuie sur des bases expérimentales mettant en évidence une résistance vis-à-vis de l'ischémie dans des modèles animaux. En effet, différentes procédures appliquées préalablement à la réalisation d'une ischémie cérébrale expérimentale permettent de rendre celle-ci moins sévère. Différents stimuli permettent d'induire une résistance à l'ischémie cérébrale : le préconditionnement (ischémie brève précédant une ischémie prolongée) ; un stress thermique ; l'administration d'une faible dose de lipopolysaccharide bactérien (Bordet, Deplanque et al. 2000). Ces stimuli induisent des mécanismes de résistance qui activent des signaux déclenchant les mécanismes de protection. Différents mécanismes de déclenchement ont été mis en évidence : cytokines, voies de l'inflammation, radicaux libres, NO, canaux potassique ATP dépendant, adénosine. Le délai observé entre le déclenchement des événements précoces et la résistance à l'ischémie provient de la nécessité d'une synthèse protéique. Différents types de protéines ont été décrits comme induisant la résistance à l'ischémie : les protéines du choc thermique, les enzymes anti-oxydantes et les protéines anti- apoptotiques (Nandagopal, Dawson et al. 2001).
Il existe donc un réel besoin de composés capables de prévenir l'apparition des facteurs de risque de l'accident vasculaire cérébral tels que l'athérosclérose, le diabète, l'obésité, etc., capables d'exercer une activité prophylactique en terme de neuroprotection mais également d'assurer une neuroprotection active dans la phase aiguë des accidents ischémiques cérébraux.
Les PPARs (α,β,γ) appartiennent à la famille des récepteurs nucléaires activés par les hormones. Lorsqu'ils sont activés par une association avec leur ligand, ils s'hétérodimérisent avec le Retinoïd-X-Reœptor (RXR) et se fixent alors sur des a Peroxisome Proliferator Response Eléments » (PPREs) qui sont localisés dans la séquence des promoteurs des gènes cibles. La fixation de PPAR sur le PPRE induit ainsi l'expression du gène cible (Fruchart, Staels et al. 2001).
Les PPARs sont distribués dans une grande variété d'organes, mais avec une certaine tissu-spécificité pour chacun d'entre eux à l'exception de PPARβ dont l'expression semble ubiquitaire. L'expression de PPARα est particulièrement importante au niveau du foie et le long de la paroi intestinale alors que PPARγ s'exprime principalement dans le tissu adipeux et la rate. Au niveau du système nerveux central les trois sous types (α, β, γ) sont exprimés! Les cellules telles que les oligodendrocytes ainsi que les astrocytes expriment plus particulièrement le sous-type PPARα (Kainu, Wikstrom et al. 1994). Les gènes cibles des PPARs contrôlent le métabolisme des lipides et des glucides. Cependant, des découvertes récentes suggèrent que les PPARs participent à d'autres processus biologiques. L'àctivation des PPARs par leurs ligands induit un changement d'activité transcriptionnelle de gènes qui modulent le processus inflammatoire, les enzymes antioxydantes, l'angiogénèse, la prolifération et la différenciation cellulaire, l'apoptose, les activités des iNOS, MMPases et TIMPs (Smith, Dipreta et al. 2001 ) et (Clark 2002).
Les radicaux libres interviennent dans un spectre très large de pathologies comme les allergies, l'initiation et la promotion cancéreuse, les pathologies cardiovasculaires (athérosclérose, ischémie), les désordres génétiques et métaboliques (diabètes), les maladies infectieuses et dégénératives (Prion, etc.) ainsi que les problèmes ophtalmiques (Mates, Perez-Gomez et al. 1999).
Les espèces réactives oxygénées (ROS) sont produites pendant le fonctionnement normal de la cellule. Les ROS sont constituées de radicaux hydroxyle (OH), de l'anion superoxyde (Oa"), du peroxyde d'hydrogène (H2O2) et de l'oxyde nitrique (NO). Ces espèces sont très labiles et, du fait de leur grande réactivité chimique, constituent un danger pour les fonctions biologiques des cellules. Elles provoquent des réactions de peroxydation lipidique, l'oxydation de certaines enzymes et des oxydations très importantes des protéines qui mènent à leur dégradation. La protection vis-à-vis de la peroxydation lipidique est un processus essentiel chez les organismes aérobies, car les produits de peroxydation peuvent causer des dommages à l'ADN. Ainsi un dérèglement ou une modification de l'équilibre entre la production, la prise en charge et l'élimination des espèces radicalaires par les défenses antioxydantes naturelles conduisent à la mise en place de processus délétères pour la cellule ou l'organisme.
La prise en charge des ROS se fait via un système antioxydant qui comprend une composante enzymatique et non enzymatique.. Le système enzymatique se compose de plusieurs enzymes dont les caractéristiques sont les suivantes : - La superoxyde dismutase (SOD) détruit le radical superoxyde en le convertissant en peroxyde. Ce dernier est lui même pris en charge par un autre système enzymatique. Un faible niveau de SOD est constamment généré par la respiration aérobie. Trois classes de SOD ont été identifiées chez l'homme, elles contiennent chacune du Cu, Zn, Fe, Mri, ou Ni comme cofacteur. Les trois formes de SOD humaines sont réparties de la manière suivante : Cu-Zn SOD au niveau cytosolique, Mn-SOD au niveau mitochondriale et une SOD extracellulaire.
- La catalase est très efficace pour convertir le peroxyde d'hydrogène (H2O2) en eau et en oxygène. Le peroxyde d'hydrogène est catabolisé de manière enzymatique dans les organismes aérobies. La catalase catalyse également la réduction d'une variété d'hydroperoxydes (ROOH).
- La glutathion peroxydase contient du sélénium comme cofacteur et catalyse la réduction d'hydroperoxydes (ROOH et H2O2) en utilisant du glutathion, et protège ainsi les cellules contre les dommages oxydatifs.
Les défenses cellulaires antioxydantes non enzymatiques sont constituées par des molécules qui sont synthétisées ou apportées par l'alimentation.
Il existe des molécules antioxydantes présentes dans différents compartiments cellulaires. Les enzymes detoxifiantes sont par exemple chargées d'éliminer les radicaux libres et sont indispensables à la vie de la cellule. Les trois types de composés antioxydants les plus importants sont les caroténoïdes, la vitamine C et la vitamine E (Gilgun-Sherki, Melamed et al. 2001 ).
Pour éviter le phénomène d'apoptose induit par l'ischémie cérébrale et ses conséquences secondaires, les inventeurs ont mis au point de nouveaux composés capables de prévenir l'apparition des facteurs de risque décrits ci- dessus et capables d'exercer une activité prophylactique en terme de neuroprotection, mais également d'assurer une neuroprotection active dans la phase aiguë des accidents ischémiques cérébraux.
Les inventeurs ont également mis en évidence que les composés selon l'invention ont à la fois des propriétés d'activateurs PPAR, d'antioxydants et d'antiinflammatoires et, à ces titres, les composés présentent un haut potentiel thérapeutique ou prophylactique des accidents ischémiques cérébraux.
La présente invention propose ainsi une nouvelle famille de composés possédant des propriétés pharmacologiques avantageuses et utilisables pour le traitement curatif ou préventif de l'ischémie cérébrale. Elle a également trait à un procédé de préparation de ces dérivés.
Les composés de l'invention répondent à la formule générale (I) :
dans laquelle :
o G2 et G3 représentent indépendamment un atome d'oxygène, un atome de soufre ou un groupe N-R4, G2 et G3 ne pouvant représenter de façon simultanée un groupe N-R4,
• R et R4 représentent indépendamment un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbone,
• R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe CO-R5 ou un groupe de formule CO- (CH2)2n+rX-R6, l'un au moins des groupes R1, R2 ou R3 étant un groupe de formule CO-(CH2)2n+rX-R6, • R5 est un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comprenant éventuellement un groupement cyclique, dont la chaîne principale comporte de 1 à 25 atomes de carbone,
• X est un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO ou un groupe SO2,
• n est un nombre entier compris entre 0 et 11 ,
• R6 est un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comprenant éventuellement un groupe cyclique, dont la chaîne principale comporte de 3 à 23 atomes de carbone, de préférence 10 à 23 atomes de carbone et éventuellement un ou plusieurs hétérogroupes choisis parmi un atome d'oxygène, un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO et un groupe S02)
à l'exclusion des composés de formule (I) dans laquelle G2R2 et G3R3 représentent simultanément des groupes hydroxyle.
Dans les composés de formule générale (I) selon l'invention, le ou les groupes R5, identiques ou différents, représentent préférentiellement un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, substitué ou non, dont la chaîne principale comporte de 1 à 20 atomes de carbone, encore plus préférentiellement 7 à 17 atomes de carbone, encore plus préférentiellement 14 à 17. Dans les composés de formule générale (I) selon l'invention, le ou les groupes R5, identiques ou différents, peuvent aussi représenter un groupe alkyle inférieur comportant 1 à 6 atomes de carbone, tel que notamment le radical méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, pentyle ou hexyle. Dans les composés de formule générale (I) selon l'invention, le ou les groupes R6, identiques ou différents, représentent préférentiellement un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, substitué ou non, dont la chaîne principale comporte de 3 à 23 atomes de carbone, préférentiellement 13 à 20 atomes de carbone, encore plus préférentiellement 14 à 17 atomes de carbone, et encore plus préférentiellement 14 atomes de carbone.
Des exemples particuliers de groupes alkyle à chaîne longue saturée pour R5 ou R6 sont notamment les groupes C7H15, C10H21, C11H23, C13H27, C14H29, C15H31, C16H33, C17H35. Des exemples particuliers de groupes alkyle à chaîne longue insaturée pour R5 ou R6 sont notamment les groupes C14H27, C14H25, C15H29,
C17H29, G17H31, C17H33, C19H29, C19H31, C21H31, C21H35, C2lH37, C21H39, C23H45 ou les chaînes alkyle des acides eicosapentaènoïque (EPA) C20:s (5, 8, 11, 14, 17) et docosahexaènoïque (DHA) C22:6( , 7, 10, 13, 16, 19).
Des exemples de groupes alkyle à chaîne longue ramifiée sont notamment les groupes (CH2)n-CH(CH3)C2H5, ou (CH2)2 +ι-C(CH3)2-(CH2)n"-CH3 (x étant un nombre entier égal à ou compris entre 1 et 11 , n' étant un nombre entier égal à ou compris entre 1 et 22, n" étant un nombre entier égal à ou compris entre 1 et 5, n'" étant un nombre entier égal à ou compris entre 0 et 22, et (2x+n'") étant inférieur ou égal à 22, de préférence inférieur ou égal à 20).
Comme indiqué ci-avant, les groupes alkyle R5 ou R6 peuvent éventuellement comprendre un groupe cyclique. Des exemples de groupes cycliques sont notamment le cyclopropyle, le cyclobutyle, le cyclopentyle et le cyclohexyle.
Comme indiqué ci-avant, les groupes alkyle R5 ou R6 peuvent être éventuellement substitués par un ou plusieurs substituants, identiques ou différents. Les substituants sont choisis de préférence parmi un atome d'halogène (iode, chlore, fluor, brome) et un groupe -OH, =O, -NO2) -NH2, -CN, -O-CH3, -CH2-OH, -CH2OCH3, -CF3 et -COOZ (Z étant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, de préférence comportant de 1 à 5 atomes de carbone).
Cette invention concerne également les isomères optiques et géométriques de ces composés, leurs racémates, leurs sels, leurs hydrates et leurs mélanges.
Les composés de formule (la) sont les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle un seul des groupes R1 , R2 ou R3 représente un atome d'hydrogène.
Les composés de formule (Ib) sont les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle deux des groupes R1 , R2 ou R3 représentent un atome d'hydrogène.
La présente invention inclut également les prodrogues des composés de formule (I), qui, après administration chez un sujet, vont se transformer en composés de formule (I) et ou les métabolites des composés de formule (I) qui présentent des activités thérapeutiques, notamment pour le traitement de l'ischémie cérébrale, comparables aux composés de formule (I).
Par ailleurs, dans le groupe CO-(GH2)2n+rX-R6, X représente tout préférentiellement un atome de soufre ou de sélénium et avantageusement un atome de soufre.
Par ailleurs, dans le groupe CO-(GH2)2n+ -R6, n est de préférence compris entre 0 et 3, plus spécifiquement compris entre 0 et 2 et est en particulier égal à 0.
Dans les composés de formule générale (I) selon l'invention, R6 peut comporter un ou plusieurs hetérogroupes, de préférence 0, 1 ou 2, plus préférentiellement 0 ou 1, choisis parmi un atome d'oxygène, un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO et un groupe SO2. Un exemple spécifique de groupe CO-(CH2)2n+rX-R6 selon l'invention est le groupe CO-CH2-S-C14H29.
Des composés préférés au sens de l'invention sont donc des composés de formule générale (I) ci-dessus dans laquelle au moins un des groupes R1 , R2 et R3 représente un groupe CO-(CH2)2n+ι-X-R6 dans lequel X représente un atome de soufre ou de sélénium et de préférence un atome de soufre et/ou R6 est un groupe alkyle saturé et linéaire comprenant de 3 à 23 atomes de carbone, préférentiellement 13 à 20 atomes de carbone, de préférence 14 à 17, plus préférentiellement 14 à 16, et encore plus préférentiellement 14 atomes de carbone.
D'autres composés particuliers selon l'invention sont ceux dans lesquels au moins deux des groupes R1, R2 et R3 sont des groupes CO-(GH2)2n+ - 6, identiques ou différents, dans lesquels X représente un atome de soufre ou de sélénium et de préférence un atome de soufre.
Des composés particuliers selon l'invention sont ceux dans lesquels G2 représente un atome d'oxygène ou de soufre, et de préférence un atome d'oxygène. Dans ces composés, R2 représente avantageusement un groupe de formule CO-(CH2)2n+ -R6 î®l ue défini ci-avant.
Des composés particulièrement préférés sont les composés de formule générale (I) ci-dessus dans laquelle : * G3 est un groupe N-R4 dans lequel R4 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, et G2 est un atome d'oxygène ; et/ou
• R2 représente un groupe CO-(CH2)2n+ι-X-R6 tel que défini ci-avant.
D'autres composés préférés sont les composés de formule générale (I) ci- dessus dans laquelle R1, R2 et R3, identiques ou différents, de préférence identiques, représentent un groupe CO-(CH2)2n+ι-X-R6 tel que défini ci-avant, dans lesquels X représente un atome de soufre ou de sélénium et de préférence un atome de soufre et ou R6 est un groupe alkyle saturé et linéaire comprenant de 13 à 17 atomes de carbone, de préférence 14 à 17, encore plus préférentiellement 14 atomes de carbone, dans lesquels ri est de préférence compris entre 0 et 3, et en particulier égal à 0. De manière plus spécifique, des composés préférés sont les composés de formule générale (I) dans laquelle R1 , R2 et R3 représentent des groupes CO-CH2-S-C14H29.
Des exemples de composés préférés selon l'invention sont représentés sur la Figure 1. Ainsi, la présente invention a plus particulièrement pour objet des composés choisis parmi :
- 1-tétradécylthioacétylamino-2,3-(dipalmitoyloxy)propane ;
- 3-tétradécylthioacétylamino-1 ,2-(ditétradécylthioacétyloxy)propane ;
- 3-palmitoylamino-1 ,2-(ditétradécylthioacétyloxy)propane ; - 1 ,3-di(tétradécylthioacétylamino)propan-2-ol ;
- 1 ,3-diamino-2-(tétradécylthioacétyloxy)propane;
- 1 ,3-ditétradécylthioacétylamino-2-(tétradécylthioacétyloxy)propane ;
- 1 ,3-dioléoylamino-2-(tétradécylthioacétyloxy)propane ;
- 1 ,3-ditétradécylthioacétylamino-2-(tétradécylthioacétylthio)propane ; et - 1 -tétradécylthioacétylamino-2,3-di(tétradécylthioacétylthio)propane.
La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique, au moins un composé de formule générale (I) tel que décrit ci- dessus, y compris les composés de formule (I) dans laquelle les groupes G2R2 et G3R3 représentent simultanément des groupements hydroxyle, éventuellement en association avec un autre actif thérapeutique. Cette composition est en particulier destinée à traiter une pathologie vasculaire cérébrale, telle que l'ischémie cérébrale ou un accident hémorragique cérébral.
Un autre objet de la présente invention concerne ainsi toute composition pharmaceutique comprenant dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique au moins un composé de formule (I) tel que décrit ci-dessus, y compris les composés de formule (I) dans laquelle les groupes G2R2 et G3R3 représentent simultanément des groupements hydroxyle.
II s'agit avantageusement d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prophylaxie des pathologies vasculaires cérébrales et plus particulièrement de l'ischémie cérébrale ou des accidents vasculaires cérébraux. Il a en effet été trouvé de manière surprenante que les composés de formule (I) , y compris les composés de formule (I) dans laquelle les groupes G2R2 et G3R3 représentent simultanément des groupements hydroxyle, possèdent à la fois des propriétés d'activateurs PPAR, d'antioxydants et d'anti-inflammatoires et possèdent une activité de neuroprotection prophylactique et curative pour l'ischémie cérébrale.
L'invention concerne également l'utilisation d'un composé tel que défini ci- avant pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à la mise en œuvre d'une méthode de traitement ou de prophylaxie chez l'Homme ou chez l'animal.
L'invention concerne également une méthode de traitement des pathologies vasculaires cérébrales et plus particulièrement de l'ischémie cérébrale, comprenant l'administration à un sujet, notamment humain, d'une dose efficace d'un composé de formule (I) ou d'une composition pharmaceutique tels que définis ci-avant, y compris les composés de formule générale (I) dans laquelle les groupes G2R2 et G3R3 représentent simultanément des groupements hydroxyle.
Avantageusement, les composés de formule (I) utilisés sont tels que définis ci-dessus et comprennent également le 3-(tétradécylthioacétylamino)propane- 1,2-diol.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention comprennent avantageusement un ou plusieurs excipients ou véhicules, acceptables sur le plan pharmaceutique. On peut citer par exemple des solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles avec un usage pharmaceutique et connues de l'homme du métier. Les compositions peuvent contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants, solubilisants, stabilisants, surfactants, conservateurs, etc. Des agents ou véhicules utilisables dans des formulations (liquides et/ou injectables et/ou solides) sont notamment la methylcellulose, l'hydroxymethylcellulose, la carboxyméthylcellulose, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, les huiles végétales, l'acacia, etc. Les compositions peuvent être formulées sous forme de suspension injectable, de gels, huiles, comprimés, suppositoires, poudres, gélules, capsules, etc., éventuellement au moyen de formes galéniques ou de dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de formulation, on utilise avantageusement un agent tel que la cellulose, des carbonates ou des amidons.
Les composés ou compositions selon l'invention peuvent être administrés de différentes manières et sous différentes formes. Ainsi, ils peuvent être par exemple administrés de manière systémique, par voie orale, parentérale, par inhalation ou par injection, comme par exemple par voie intraveineuse, intra- musculaire, sous-cutanée, trans-dermique, intra-artérielle, etc. Pour les injections, les composés sont généralement conditionnés sous forme de suspensions liquides, qui peuvent être injectées au moyen de seringues ou de perfusions, par exemple. A cet égard, les composés sont généralement dissous dans des solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles avec un usage pharmaceutique et connues de l'homme du métier. Ainsi, les compositions peuvent contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants, solubilisants, émulsifiants, stabilisants, surfactants, conservateurs, tampons, etc. Des agents ou véhicules utilisables dans des formulations liquides et/ou injectables sont notamment la methylcellulose, l'hydroxymethylcellulose, la carboxyméthylcellulose, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, les huiles végétales, l'acacia, les liposomes, etc. Les composés peuvent ainsi être administrés sous forme de gels, huiles, comprimés, suppositoires, poudres, gélules, capsules, aérosols, etc., éventuellement au moyen de formes galéniques ou de dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de formulation, on utilise avantageusement un agent tel que la cellulose, des carbonates ou des amidons.
Les composés peuvent être administrés oralement auquel cas les agents ou véhicules utilisés sont choisis préférentiellement parmi l'eau, la gélatine, les gommes, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le talc, une huile, le polyalkylène glycol, etc.
Pour une administration parentérale, les composés sont préférentiellement administrés sous la forme de solutions, suspensions ou émulsions avec notamment de l'eau, de l'huile ou des polyalkylènes glycols auxquels il est possible d'ajouter, outre des agents conservateurs, stabilisants, émulsifiants, etc., des sels permettant d'ajuster la pression osmotique, des tampons, etc.
Il est entendu que le débit et/ou la dose injectée peuvent être adaptés par l'homme du métier en fonction du patient, de la pathologie concernée, du mode d'administration, etc. Typiquement, les composés sont administrés à des doses pouvant varier entre 1 μg et 2 g par administration, préférentiellement de 0,1 mg à 1 g par administration. Les administrations peuvent être quotidiennes ou répétées plusieurs fois par jour, le cas échéant. D'autre part, les compositions selon l'invention peuvent comprendre, en outre, d'autres agents ou principes actifs.
L'invention concerne également des procédés de préparation des composés tels que définis ci-avant. Les composés de l'invention peuvent être préparés à partir de produits du commerce, en mettant en œuvre une combinaison de réactions chimiques connues de l'homme du métier. Selon un procédé de l'invention, les composés de formule (I) dans lesquels (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, de soufre ou un groupe N-R4, (ii) R et, le cas échéant R4, représentent de façon identique, un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et (iii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+ι-X-R6, sont obtenus à partir d'un composé de formule (I) dans laquelle (i) G2 ou G3 sont des atomes d'oxygène, de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6, et d'un composé de formule A1-LG dans laquelle A1 représente le groupe R ou, le cas échéant, R4 et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi Cl, Br, mésyl, tosyl, etc., en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
Selon un premier mode, les composés de formule (I) dans lesquels (i) G2 et
G3 sont des atomes d'oxygène, de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3, identiques, représentent un groupe GO- (CH2)2n+ι-X-R6, sont obtenus à partir d'un composé de formule (I) dans laquelle (i) G2 ou G3 sont des atomes d'oxygène, de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1 , R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène et d'un composé de formule A°-CO-Â dans laquelle A est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH, Cl, O-CO-A° et O-R7, R7 étant un groupe alkyle, et A° est le groupe (CH2)2n+ X- 6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 peuvent être obtenus selon différentes méthodes qui permettent la synthèse de composés dans lesquels les groupes portés par un même hétéroatome (azote ou oxygène) ont la même signification. Selon un premier mode, on fait réagir une molécule de 1-aminoglycérol, de 1 ,3-diaminoglycérol ou de 1,2-diaminoglycérol (obtenu en adaptant le protocole décrit par (Morris, Atassi et al. 1997)) avec un composé de formule A°-CO-A1 dans laquelle A1 est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH, Cl et OR7, R7 étant un groupe alkyle, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X-R6 en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier. Cette réaction permet l'obtention respective de formes particulières de composés de formule (I), nommées composés (lla-c), et peut être mise en œuvre en adaptant des protocoles décrits (Urakami and Kakeda 1953), (Shealy, Frye et al. 1984), (Marx, Piantadosi et al. 1988) et (Rahman, Ziering et al. 1988) ou (Nazih, Cordier et al. 1999). Dans les composés (llb-c), les groupements portés par un même hétéroatome, respectivement, (R1 et R3) et (R1 et R2) ont la même signification.
(Ha) (Hb) (lie)
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO- (CH2)2n+ - 6, peuvent être obtenus à partir d'un composé de formule (lla-c) et d'un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier. Cette réaction permet la synthèse de composés dans lesquels les groupements portés par un même hétéroatome (azote ou oxygène), respectivement (R1 et R2), (R1 et R3) ou (R2 et R3) ont la même signification. Cette réaction est avantageusement réalisée selon le protocole décrit par exemple dans (Urakami and Kakeda 1953) et (Nazih, Cordier et al. 1999). Selon un autre procédé particulier de l'invention (schéma 1 ), les composés de formule (I) dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène ou un groupe
NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ X-R5, peuvent être obtenus selon les étapes suivantes :
a) réaction du 1-aminoglycérol, du 1 ,3-diaminoglycérol ou du 1,2- diaminoglycérol avec un composé (PG)2O dans lequel PG est un groupement protecteur pour donner un composé de formule générale (llla-c). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Nazih, Cordier et al. 2000) et (Kotsovolou, Chiou et al. 2001) dans lesquels (PG)2θ représente le dicarbonate de di-tert-butyle ;
b) réaction du composé de formule (llla-c) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (IVa-c), dans laquelle R2 et R3 représentent un groupe CO-R5 ou CO-(GH2)2n+ - 6 et PG est un groupement protecteur ;
c) déprotection du composé (IVa-c), selon des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représente un atomes d'oxygène ou un groupe NH, (ii) R et R1 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R2 et R3 représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ;
d) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représentent un atome d'oxygène ou un groupe NH, (ii) R et R1 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R2 et R3 représentent un groupe CO- R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
(Illa) 011b) (IIIc)
(IVa) (IVb) (Wc)
a. protection ; b. acylation ; c. déprotection ; d. amidification schéma 1 Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH )2n+ι-X-R6, peuvent être obtenus de différentes façons.
Selon une première méthode, on fait réagir un composé de formule (I) selon l'invention, dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R et R2 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R1, R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6, avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
Selon ce mode de préparation, les composés de formule (I) dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R et R2 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R1 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO- (GHa i-X-Rβ, peuvent être obtenus à partir d'un composé de formule (lia) tel que défini ci-avant avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et CI, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ - 6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
Selon un autre procédé particulier de l'invention, les composés de formule (I) dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6, peuvent être obtenus à partir d'un composé de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R, R2 et R3 représentent un atome d'hydrogène et (iii) R1 est un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6 (composé de formule (lia)) selon les étapes suivantes (schéma 2) : a) réaction du composé de formule (lia) avec un composé PG-E dans lequel PG est un groupement protecteur et E est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH ou un halogène, pour donner un composé de formule générale (V) dans laquelle R1 est un groupe CO-R5 ou CO-
(CH2)2n+rX-R6. La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Marx, Piantadosi et al. 1988) et (Gaffney and Reese 1997) dans lesquels PG-E peut représenter le chlorure de triphénylméthyle ou le 9-phénylxanthène-9-ol ou encore lé 9- chloro-9-phénylxanthène ;
b) réaction du composé de formule (V) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (VI), dans laquelle R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH )2n+rX-R6 et PG est un groupement protecteur ;
c) déprotection du composé (VI), dans des conditions connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R et R3 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(GH2)2n+rX-R6 ;
d) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R et R3 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH )2n+ι-X-R6 avec un composé de formule A°- CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre
OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
(lia) (V) (VI)
a : protection ; b : estérification ; c : déprotection ; d : estérification schéma 2
Les étapes ci-dessus peuvent être réalisées avantageusement selon les protocoles décrits par (Marx, Piantadosi et al. 1988).
Selon un autre procédé de l'invention, les composés de formule (I) dans lesquels (i) G2 ou G3 représentent un atome d'oxygène ou un groupe N-R4, (ii) au moins un des groupes G2 ou G3 représente un groupe N-R4, (iii) R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et (iv) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe C0-R5 ou un groupe GO-(CH2)2n+rX-R6, sont obtenus par réaction d'un composé de formule (I) dans laquelle (i) l'un des groupes G2R2 ou G3R3 représente un groupe hydroxyle et l'autre groupe G2R2 ou G3R3 représente un groupe NR4R2 ou NR4R3 respectivement avec, R2 ou R3 représentant un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6, (ii) R et R4 représentent indépendamment un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et (iii) R1 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+ι-X-R6, avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est lé groupé R5 ou le groupe (CH2)2n+rX-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier. Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) l'un des groupes G2R2 ou G3R3 représente un groupe hydroxyle et l'autre groupe G2R2 ou G3R3 représente un groupe NR4R2 ou NR4R3 respectivement avec, R2 ou R3 représentant un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6, 00 R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et (iii) R1 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH )2n+rX-R6 sont obtenus à partir d'un composé de formule (I) selon l'invention dans laquelle l'un des groupes G2R2 ou G3R3 représente un groupe hydroxyle et l'autre groupe G2R2 ou G3R3 représente un groupe NR4R2 ou NR4R3 respectivement avec, R2 ou R3 représentant un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6, (ii) R et R4 représentent indépendamment un groupe tel que défini ci-avant et (iii) R1 est un atome d'hydrogène avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A0 est le groupe R5 ou le groupe (GH2)2n+rX-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
Dans un premier mode, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome d'oxygène, (ii) G3 représente un groupe N-R4, (iii) R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, (iv) R1 et R2 sont des atomes d'hydrogène et (v) R3 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6 sont obtenus de la façon suivante (schéma 3) :
a) réaction du 1-aminoglycérol avec un composé de formule R-CHO dans laquelle R représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et CHO est la fonction aldéhyde en présence d'agents réducteurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule (VII) dans laquelle R est un groupe tel que défini plus avant. Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Antoniadou-Vyzas, Foscolos et al. 1986) ;
b) réaction d'un composé de formule (VII) avec un composé (PG)2θ dans lequel PG est un groupement protecteur pour donner un composé de formule générale (VIII). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Nazih, Cordier et al. 2000) et (Kotsovolou, Chiou et al. 2001) dans lesquels (PG)20 représente le dicarbonate de di-tert-butyle ;
c) réaction d'un composé de formule (VIII) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (IX) en adaptant la procédure décrite par [Kitchin, Bethell et al. 1994 ] ;
d) réaction d'un composé composé de formule (IX) avec un composé de formule R4-NH2 dans laquelle R4 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et NH2 représente la fonction amin , selon la méthode décrite par (Ramalingan, Raju et al. 1095), pour obtenir un composé de formule (X) dans laquelle R et R4, éventuellement différents, sont tels que définis ci-avant ;
e) réaction d'un composé de formule (X) avec un composé de formule A°-
CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2 1-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule (XI) dans laquelle R et R4 représentent des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, R3 représente le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX-R6 et PG est un groupement protecteur ; f) déprotection du composé (XI) selon des conditions connues de l'homme de métier.
(VII) (VIII)
a. amination réductrice ; b. protection ; c. acϋvation ; d. substitution ; e. amidification ; f. déprotection
Schéma 3
Selon un second mode, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G3 est un atome d'oxygène, (ii) G2 représente un groupe N-R4, (iii) R et R4 représentent des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, (iv) R1 et R3 sont des atomes d'hydrogène et (v) R2 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6 sont obtenus de la façon suivante (schéma 4) :
a) réaction d'un composé de formule (VIII) avec un composé PG'-E dans lequel PG' est un groupement protecteur et E est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH ou un halogène, pour donner un composé de formule générale (XII) dans laquelle R représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et PG un autre groupement protecteur tel que défini plus avant. La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Marx, Piantadosi et al. 1988) et (Gaffney and Reese 1997) dans lesquels PG'-E peut représenter le chlorure de triphénylméthyle ou le 9-phénylxanthène-9-ol ou encore le 9-chloro-9-phénylxanthène ;
b) réaction d'un composé de formule (XII) tel que défini ci-avant avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XIII) dans laquelle R représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et PG et PG" sont des groupements protecteurs, en adaptant la procédure décrite par (Kitchin,
Bethell et al. 1994) ;
c) réaction d'un composé de formule (XIII) tel que défini ci-avant avec un composé de formule R4-NHa dans laquelle R4 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et NH2 représente la fonction aminé, selon la méthode décrite par (Ramalingan, Raju et al. 1995), pour obtenir un composé de formule (XIV) dans laquelle R et R4 sont indépendamment tels que définis ci-avant ;
d) réaction d'un composé de formule (XIV) avec un composé de formule A°- CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule (XV) dans laquelle R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, R2 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO- (CH )2n+rX-R6, PG et PG' sont des groupements protecteurs ;
e) déprotection d'un composé de formule (XV) dans des conditions classiques connues de l'homme du métier pour obtenir un composé de formule générale (I) selon l'invention dans laquelle (i) R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, (ii) R1 et R3 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R2 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+ι-X-R6.
pαv) (XV)
a. protection ; b. activation ; c. substitution ; d. amidification ; e. déprotection
Schéma 4
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 peuvent être obtenus selon différents procédés.
Selon un premier mode, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH )2n+ι-X-R6, R1, R2 et/ou R3 ayant la même signification s'ils sont portés par un même hétéroatome (soufre ou azote), peuvent être obtenus de la façon suivante (schéma 5A) :
a) réaction d'un composé de formule (lla-c) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XVIa-c) ;
b) réaction d'un composé de formule (XVIa-c) avec un composé de formule Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, préférentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, préférentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XVIIa-c). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;
c) déprotection d'un composé de formule (XVIIa-c), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, et par exemple en milieu basique, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représentent un atome de soufre ou un groupe NH et (ii) R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe CO-R5 ou CO-(GH2)2n+ι-X-R6 ;
d) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représentent un atome de soufre ou un groupe NH et (ii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6, avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
(Ha) (Hb) (Ile)
(XVIa) (XVIb) (XVIc)
( XVHa) (XVIIb) (XVIIc)
a. activation ; b. substitution ; c. déprotection ; d. acylation schéma 5A
Selon un mode de synthèse similaire, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6, R1 , R2 et/ou R3 ayant la même signification s'ils sont portés par un même hétéroatome (soufre ou azote), peuvent être obtenus de la façon suivante (schéma 5B) :
a) réaction d'un composé de formule (lla-c) avec un composé de formule
(LG)2 dans laquelle LG un groupe réactif choisi par exemple parmi iode, brome, etc., en présence d'éventuels activateurs connus de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (XVId-f) ;
b) réaction d'un composé de formule (XVId-f) avec un composé de formule
HS"B+ dans laquelle B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, préférentiellement le sodium pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représentent un atome de soufre ou un groupe NH et (ii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe CO-R5 ou
GO-(CH2)2n+ι-X-R6 ;
c) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représentent un atome de soufre ou un groupe NH et (ii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe
GO-R5 ou GO-(GH2)2n+rX-R6, avec un composé de formule A°-GO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (GH )2n+rX-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier. (Ha) (Ilb) (Hc) a
(XVId) (XVIe) (XVIf) b b b
a. acϋvation ; b. substitution ; c. acylation schéma 5B
Ce schéma réactionnel permet la synthèse de composés de formule générale (I) dans laquelle les groupements portés par un même hétéroatome (azote ou soufre) respectivement (R2 et R3), (R1 et R3) et (R1 et R2) ont la même signification.
Les étapes ci-dessus peuvent être réalisées avantageusement selon les protocoles décrits par (Adams, Doyle et al. 1960) et (Gronowitz, Herslôf et al. 1978). Selon un autre procédé de l'invention (schéma 6), les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1 , R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 peuvent être préparés à partir des composés de formule (llla-c) par un procédé comprenant :
a) la réaction d'un composé de formule (llla-c) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XVIIIa-c) dans laquelle PG représente un groupement protecteur ;
b) la réaction d'un composé de formule (XVI lla-c) avec un composé de formule Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, préférentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, préférentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XIXa-c). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1 78) ;
c) la déprotection de l'atome de soufre d'un composé (XIXa-c) dans des conditions connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (XXa-c) ;
d) la réaction d'un composé de formule générale (XXa-c) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXIa-c) dans laquelle R2 et R3 représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ; e) la déprotection d'un composé de formule (XXIa-c) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour obtenir un composé de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupe NH, (ii) R et R1 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R2 et R3 représentent un atome d'hydrogène, un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6.
f) la réaction d'un composé de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupe NH, (ii) R et R1 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R2 et R3 représentent un atome d'hydrogène, un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
Ce schéma réactionnel permet la synthèse de composés de formule générale (I) dans laquelle les groupements portés par un même hétéroatome (azote ou soufre) respectivement (R2 et R3), (R1 et R3) et (R1 et R2) ont la même signification.
Les étapes ci-dessus peuvent être réalisées avantageusement selon les protocoles décrits par (Adams, Doyle et al. 1960), (Gronowitz, Herslôf et al. 1978), (Bhatia and Hajdu 1987) et (Murata, Ikoma et al. 1991).
a. acϋvab'on ; b. substitution ; c. déprotection ; d. acylation ; e. déprotection ; f. amidifieation schéma 6 Les composés de formule générale (I) dans lesquels (i) G2 et G3 représentent des atomes de soufre ou un groupe N-R4, (ii) R et R4 représentent indépendamment un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, (iii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou un groupe CO- (CH2)2n+ι-X-R6, sont obtenus par réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) le groupe G2 ou G3 représentent un atome de soufre ou un groupe N-R4, (ii) R et R4 représentent indépendamment des groupes tels que définis ci-avant, (iii) R1 est un atome d'hydrogène et (iv) R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+ι-X-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
Les composés de formule générale (I) dans laquelle (i) le groupe G2 et G3 représentent des atomes de soufre ou un groupe N-R4, (ii) R et R4 représentent indépendamment des groupes tels que définis ci-avant, (iii) R1 est un atome - d'hydrogène et (iv) R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou un groupe GO-(CH2)2n+ -R6, peuvent être obtenus selon les méthodes suivantes :
Dans un premier mode, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) le groupe G2 est un atome de soufre, (ii) G3 représente un groupe
N-R4, (iii) R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, (iv) R1 est un atome d'hydrogène et (v) R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH )2n+ι-X-R6 sont obtenus de la façon suivante (schéma 7) :
a) réaction d'un composé de formule (XI) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XXII) dans laquelle PG représente un groupement protecteur ;
b) réaction d'un composé de formule (XXII) avec un composé de formule Ac- S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, préférentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, préférentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XXIII). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;
c) déprotection de l'atome de soufre d'un composé de formule (XXIII) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (XXIV) ;
d) réaction d'un composé de formule générale (XXIV) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (C^ X- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXV) dans laquelle R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe GO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ;
e) déprotection du composé de formule (XXV) dans des conditions connues de l'homme de métier.
(XI) (xxm (XXIII)
(XXIV)
(XXV) a. acbvation ; b. substitution ; c. déprotection ; d. acylation ; e. déprotection schéma 7
Selon une autre méthode (schéma 8), les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 représente un groupe N-R4, (ii) G3 est un atome de soufre, (iii) R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, (iv) R1 est un atome d'hydrogène et (v) R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(GH2)2n+ -R6 sont obtenus de la façon suivante :
a) réaction du composé de formule (IX) avec un composé de formule Ac-S" B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, préférentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, préférentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XXVI). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;
b) réaction d'un composé de formule (XXVI) avec un composé de formule
LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XXVII) dans laquelle PG représente un groupement protecteur ; c) réaction du composé (XXVII) avec un composé de formule R4-NH2 dans laquelle R4 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et NH2 représente la fonction aminé, selon la méthode décrite par (Ramalingan, Raju et al. 1995), pour obtenir un composé de formule (XXVIII) dans laquelle R et R4, représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones ;
d) réaction d'un composé de formule générale (XXVIII) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXIX) ;
e) déprotection de l'atome de soufre d'un composé de formule (XXIX) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale
f) réaction d'un composé de formule générale (XXX) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A0 est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXXI) dans laquelle R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ;
g) déprotection d'un composé de formule (XXXI) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier. (IX) (XXVI) (XXVII)
(XXVIII) (XXDQ
(XXX) (XXXI) a. substitution ; b. aclivaϋon ; c. substitution ; d. amidifieation ; e. déprotection ; f. acylation ; g. déprotection schéma 8
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome de soufre, (ii) G3 est un atome d'oxygène, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv) R1 et R2 représentent un groupe GO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 et (v) R3 est un atome d'hydrogène ou représente un groupe CO-R5 ou CO- (CH2)2n+ X- 6, peuvent être préparés à partir des composés de formule (V) par le procédé suivant (schéma 9A):
a) réaction du composé (V) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XXXII) dans laquelle PG représente un groupement protecteur ;
b) réaction d'un composé de formule (XXXII) avec un composé de formule Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, préférentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, préférentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XXXIII). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf ét al. 1978) ;
c) déprotection de l'atome de soufre d'un composé (XXXIII), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (XXXIV) ;
d) réaction d'un composé de formule générale (XXXIV) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXXV) dans laquelle R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe GO-R5 ou GO-(GH2)2n+ - 6 ;
e) déprotection d'un composé (XXXV) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome de soufre, G3 est un atome d'oxygène, R et R3 sont des atomes d'hydrogène et R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+r - 6 ;
f) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 est un atome de soufre, (ii) G3 est un atome d'oxygène, (iii) R et R3 sont des atomes d'hydrogène et (iv) R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou GO-(GH2)2n+rX-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (C^ - R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
(XXXIII)
(V) (XXXII)
(XXXIV) (XXXV)
a. acϋvation ; b. substitution ; c. déprotection ; d. acylation ; e. déprotection ; f. acylation schéma 9A
Selon une méthode de synthèse similaire, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome de soufre, (ii) G3 est un atome d'oxygène, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv) R1 et R2 représentent un groupe CO-R5 ou GO-(GH2)2n+ι- -R@ e (v) R3 est un atome d'hydrogène ou représente un groupe CO-R5 ou GO-(GH2)2n+ - 6, peuvent être préparés à partir des composés de formule (V) par le procédé suivant (schéma 9B):
a) réaction du composé (V) avec un composé de formule (LG)2 dans laquelle LG un groupe réactif choisi par exemple parmi iode, brome, etc., pour donner un composé de formule générale (XXXI la) dans laquelle PG représente un groupement protecteur ;
b) réaction d'un composé de formule (XXXI la) avec un composé de formule HS"B+ dans laquelle B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, préférentiellement le sodium pour donner un composé de formule générale (XXXIV) ; . c) réaction d'un composé de formule générale (XXXIV) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXXV) dans laquelle R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6 ;
d) déprotection d'un composé (XXXV) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome de soufre, G3 est un atome d'oxygène, R et R3 sont des atomes d'hydrogène et R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe GO-R5 ou GQ-(GH2)2n+ X- 6 ;
e) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 est un atome de soufre, (ii) G3 est un atome d'oxygène, (iii) R et R3 sont des atomes d'hydrogène et (iv) R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou GO-(GH2)2n+ι- -R6 avec un composé de formule A°-GO-Â2 dans laquelle Â2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et CI, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ - R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
(XXXIV)
(V) (XXXIIa)
(XXXV)
a. acbvation ; b. substitution ; c. acylation ; d. déprotection ; e. acylation
schéma 9B
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome de soufre, (ii) G3 est un atome d'oxygène, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv) R1 et R3 représentent un atome d'hydrogène ou un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6, identiques ou différents, et (v) R2 représente un groupe CO-R5 ou CO-(GH2)2n+rX-R6, peuvent être préparés à partir des composés de formule (llla) par le procédé suivant (schéma 10):
a) réaction d'un composé de formule (llla) avec un composé PG'-E dans lequel PG' est un groupement protecteur et E est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH ou un halogène, pour donner un composé de formule générale (XXXVI) dans laquelle PG est un autre groupe protecteur tel que défini plus -avant. La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Marx, Piantadosi et al. 1988) et (Gaffney and Reese 1997) dans lesquels PG-E peut représenter le chlorure de triphénylméthyle ou le 9-phénylxanthène-
9-ol ou encore le 9-chloro-9-phénylxanthène ;
b) réaction du composé (XXXVI) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XXXVII) dans laquelle PG et PG' représentent des groupements protecteurs judicieusement choisis tels que définis plus avant ;
c) réaction d'un composé de formule (XXXVII) avec un composé de formule
Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, préférentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, préférentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XXXVIII). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;
d) déprotection de l'atome de soufre d'un composé (XXXVIII), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (XXXIX) ;
e) réaction d'un composé de formule générale (XXXIX) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A0 est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ - R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XL) dans laquelle R2 représente un groupe CO-R5 ou CO- (CH2)2n+ι-X-R6 ;
f) déprotection d'un composé (XL) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome de soufre, G3 est un atome d'oxygène, R, R1 et R3 sont des atomes d'hydrogène et R2 représente un groupe CO- R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6 (composé XLI) ;
g) réaction d'un composé de formule (XLI) avec un composé (PG)20 dans lequel PG est un groupement protecteur pour donner un composé de formule générale (XLII). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Nazih, Cordier et al. 2000) et (Kotsovolou, Chiou et al. 2001) dans lesquels (PG)2θ représente le dicarbonate de di-tert-butyle ;
h) réaction d'un composé de formule générale (XLII) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH )2n+rX- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule (XLIII) ;
i) déprotection d'un composé (XLIII) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome de soufre, G3 est un atome d'oxygène, R et R1 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ X-R6 ;
j) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome de soufre, G3 est un atome d'oxygène, R et R1 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe
CO-R5 ou CO-(GH2)2n+ι-X-R6 avec un composé de formule A°-GO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et CI, et A° est le groupe R5 ou le groupe (GH2)2n+ X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
(ma) (XXXVI) (XXXVII)
(xxxviii) (xxxix) (XL)
(XU) (XLII)
a. protection ; b. acb'vation ; c. subsitution ; d. deprotection ; e. acylation ; f. déprotection ; g : protection ; h : acylation ; i : déprotection ; j : amidifieation schéma 10
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome d'oxygène, (ii) G3 est un atome de soufre, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv) R1 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 et (v) R2 représente un atome d'hydrogène ou un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6, peuvent être préparés à partir des composés de formule (lia) selon le procédé suivant (schéma 11) :
a) réaction d'un composé de formule (Ha) tel que défini ci-avant, avec un composé de formule LG-E (en quantité stoechiométrique) dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale
(XLIV) ; b) réaction d'un composé de formule (XLIV) avec un composé de formule Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, préférentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, préférentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XLV). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;
c) réaction d'un composé de formule (XLV) avec un composé PG-E dans lequel PG est un groupement protecteur et E est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH ou un halogène, pour donner un composé de formule générale (XLVI). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Marx, Piantadosi et al. 1988) et (Gaffney and Reese 1997), dans lesquels PG-E peut représenter le chlorure de triphénylméthyle ou le 9-phénylxanthène-9-ol ou encore le 9-chloro-9-phénylxanthène ;
d) déprotection de l'atome de soufre d'un composé (XLVI), dans des conditions connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (XLVII) ;
e) réaction d'un composé de formule générale (XLVII) avec un composé de formule A°-GO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X-
R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour, obtenir un composé de formule générale (XLVIII) dans laquelle R1 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ;
f) déprotection d'un composé de formule (XLVIII), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome d'oxygène, G3 est un atome de soufre, R et R2 sont des atomes d'hydrogène et R1 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+r X-R6 ;
g) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome d'oxygène, G3 est un atome de soufre, R et R2 sont des atomes d'hydrogène et R1 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH )2n+ι-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
(XLVI) (XLVII)
(XLVIII)
a. activation ; b. substitution ; c. protection ; d. déprotection sélective ; e. acylation ; f. déprotection ; g. acylation schéma 11
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome d'oxygène, (ii) G3 est un atome de soufre, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv) R1 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6, identiques ou différents, et (v) R3 représente un groupe CO- R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6, peuvent être préparés à partir des composés de formule (llla) selon le procédé suivant (schéma 12) :
a) réaction d'un composé de formule (llla) tel que défini ci-avant, avec un composé de formule LG-E (en quantité stoechiométrique) dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XLIX) ;
b) réaction d'un composé de formule (XLIX) avec un composé de formule Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, préférentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, préférentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (L). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;
c) réaction d'un composé de formule (L) avec un composé PG'-E dans lequel PG' est un groupement protecteur et E est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH ou un halogène, pour donner un composé de formule générale (Ll). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Marx, Piantadosi et al. 1988) et (Gaffney and Reese 1997) dans lesquels PG'-E peut représenter le chlorure de triphénylméthyle ou le 9-phénylxanthène-9-ol ou encore le 9-chloro-9-phénylxanthène ;
d) déprotection de l'atome de soufre d'un composé (Ll), dans des conditions connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formuie générale (LU) ; e) réaction d'un composé de formule générale (LU) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (LUI) dans laquelle R3 représente un groupe CO-R5 ou CO-
f) déprotection d'un composé de formule (LIN), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome d'oxygène, G3 est un atome de soufre, R et R2 sont des atomes d'hydrogène et R3 représente un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6 (composé LIV) ;
g) réaction d'un composé de formule (LIV) avec un composé (P )2θ dans lequel PG est un groupement protecteur pour donner un composé de formule générale (LV). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Nazih, Cordier et al. 2000) et (Kofsovolou, Ghiou et al. 2001) dans lesquels (P )2θ représente le dicarbonate de di-tert-butyle ;
h) réaction d'un composé de formule générale (LV) avec un composé de formule A°-GO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule (LVI) ;
i) déprotection d'un composé (LVI) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G3 est un atome de soufre, G2 est un atome d'oxygène, R et R1 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ; j) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle G3 est un atome de soufre, G2 est un atome d'oxygène, R et R1 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH )2n+rX-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
(llla) (XUX) (L)
(Ll) (LÏI) (LIII)
(LIV) (LV)
a. acu'vation ; b. substitution ; c. protection ; d. déprotection ; e. acylation ; f. déprotection ; g : protectio h : acylation ; i : déprotection ; j : amidifieation schéma 12
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome d'oxygène, (ii) G3 est un atome de soufre, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv)
R2 et R3, identiques, sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6 et (v) R1 représente un groupe CO-R5 ou CO- (CH2)2n+rX-R6, peuvent être préparés à partir des composés de formule (llla) selon le procédé suivant (schéma 13) :
a) réaction d'un composé de formule (llla) tel que défini ci-avant, avec un composé de formule (LG)2 (en quantité stoechiométrique) dans laquelle LG un groupe réactif choisi par exemple parmi iode, brome, etc., pour donner un composé de formule générale (XLIXa) ;
b) réaction d'un composé de formule (XLIXa) avec un composé de formule
Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, préférentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, préférentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (L) ;
c) déprotection de l'atome de soufre d'un composé (L), dans des conditions connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (LVII) ;
d) réaction d'un composé de formule générale (LVII) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (LVI) dans laquelle R2 et R3 représentent un même groupe CO¬
RS ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ;
e) déprotection d'un composé de formule (LVI), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome d'oxygène, G3 est un atome de soufre, R et R2 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3 représentent un même groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6 ; f) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome d'oxygène, G3 est un atome de soufre, R et R2 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3 représentent un même groupe CO-R5 ou CO- (CH2)2n+ι-X-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.
(IHa)
(LVI)
a- activation ; b. substitution ; c. déprotection ; d. acylation ; e. déprotection ; f : amidifieation
schéma 13
La faisabilité, la réalisation et d'autres avantages de l'invention sont illustrés plus en détails dans les exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs.
LEGENDE DES FIGURES :
Figure 1 : Structure de composés particuliers selon l'invention dont la préparation est décrite aux exemples 2, 4, 5, 6, 8, 10 à 14, 16, 18, 19, 21 et 23 notés sur la figure respectivement 1A.2, 1A.4, 1A.5, 1A.6, 1A.8, 1A.10, 1A.11, 1A.12, 1A.13, 1A.14, 1A.16, 1A.18, 1A.19, 1A.21 et 1A.23. Figure 2 : Evaluation des propriétés antioxydantes de composés selon l'invention sur l'oxydation des LDL par le cuivre (Cu).
- Figure 2-a : formation de diènes conjugués en fonction du temps ou Lag-Phase.
- Figure 2-b : vitesse de formation des diènes.
- Figure 2-c : quantité maximum de diènes conjugués formés.
Figure 3: Evaluation des propriétés d'agonistes PPARα de composés selon l'invention avec le système de transactivation Gal4/PPARα.
EXEMPLES :
Pour faciliter la lecture du texte, les composés selon l'invention utilisés dans les exemples de mesure ou d'évaluation d'activité seront notés de manière abrégée telle que « Ex 2 » pour désigner le composé selon l'invention dont la préparation est décrite à l'exemple 2.
Les chro atographies sur couche mince (GGM) ont été effectuées sur des plaques de gel de silice OF254 MERCK d'épaisseur 0,2 mm. On utilise l'abréviation Rf pour désigner le facteur de rétention (rétention factor).
Les chromatographies sur colonne ont été réalisées sur gel de silice 60 de granulométrie 40-63 μm (référence 9385-5000 MERCK).
Les points de fusion (PF) ont été mesurés à l'aide d'un appareil BUCHI B 540 par la méthode des capillaires.
Les spectres infra-rouge (IR) ont été réalisés sur un spectromètre à transformée de Fourier BRUKER (Vector 22).
Les spectres de résonance magnétique nucléaire (RMN) ont été enregistrés sur un spectromètre BRUKER AC 300 (300 MHz). Chaque signal est repéré par son déplacement chimique, son intensité, sa multiplicité (notée s pour singulet, si pour singulet large, d pour doublet, dd pour doublet dédoublé, t pour triplet, td pour triplet dédoublé, quint pour quintuplet et m pour multiplet) et sa constante de couplage (J).
Les spectres de masse (SM) ont été réalisés sur un spectromètre PERKIN- ELMER SCIEX API 1 (ESI-MS pour Electrospray lonization Mass Spectrometry) ou sur un spectromètre APPLIED BIOSYSTEMS Voyager DE-STR de type MALDI-TOF(Matrix-Assisted Laser Desorption/lonization - Time Of Flight).
EXEMPLE 1 : Préparation de l'acide tétradécvIthioacétiqueL'hvdroxyde de potassium (34.30 g, 0.611 mol), l'acide mercaptoacétique (20.9 ml, 0.294 mol) et le 1-bromotétradécane (50 ml, 0.184 mol) sont ajoutés dans l'ordre au méthanol (400 ml). Ce mélange est placé sous agitation pendant une nuit à température ambiante. Au mélange réactionnel précédent est alors ajoutée une solution d'acide chlorhydrique concentré (60 ml) dissous dans l'eau (800 ml). L'acide tetradecylthioacetique précipite. Le mélange est laissé sous agitation une nuit à température ambiante. Le précipité est ensuite filtré, lavé cinq fois à l'eau puis séché au dessiccateur. Le produit est recristallisé dans le méthanol. Rendement : 94%. Rf (dichlorométhane-méthanol 9-1) : 0.60 PF°: 67-68°G
IR : vCO acide 1726 et 1684 cm"1
RMN (1H, CDCI3) : 0.84-0.95 (t, 3H, -CH3, J=6.5Hz) ; 1.20-1.45 (massif, 22H, - CH2-) ; 1.55-1.69 (quint, 2H, -CH2-GH2-S-, J=6.5Hz) ; 2.63-2.72 (t, 2H, CH2-CH2- S-, J=7.3Hz) ; 3.27 (s, 2H, S-CH2-COOH) SM (ESI-MS) : M-1 = 287
EXEMPLE 2 : Préparation du 3-(tétradécylthioacétylamino)propane-1.2-diol
L'acide tetradecylthioacetique (exemple 1) (14.393 g ; 50 mmol) et le 3-amino- propane-1 ,2-diol (5 g ; 55 mmol) sont placés dans un ballon et chauffés à 190°C pendant 1 heure. Le mélange réactionnel est ramené à température ambiante puis repris par du chloroforme et lavé une fois à l'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et portée à sec. Le résidu est placé sous agitation dans l'éther. Le produit est isolé par filtration. Rendement : 22%.
Rf (dichlorométhane-méthanol 9-1) : 0.60 PF : 89-92°C
IR : vNH et OH 3282 cm-1 ; vCO amide 1640 cm-1
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 3H, -CH3, J=6.5Hz) ; 1.26 (massif, 22H, -CH2-) ; 1.57 (m, 2H, -CH2-CH2-S-) ; 2.54 (t, 2H, -CH2-CH2-S-, J=7.6Hz) ; 3.27 (s, 2H, S-CH2- CONH-) ; 3.47 (m, 2H, -CONH-CH2-CHOH-CH2OH) ; 3.58 (m, 1H, -CONH-CH2- CHOH-CH2OH) ;3.81 (m, 2H, -CONH-CH2-CHOH-CH2OH) ; 7.33 (si, 1H, - CONH-).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 362 (M+H) ; M+23 = 385 (M+Na+) ; M+39 = 400 (M+K+)
EXEMPLE 3 : 3-(palmitoylamlno)propane-1.2-dlol
Ce composé est synthétisé selon la procédure précédemment décrite (exemple
2) à partir du 3-amino-propane-1 ,2-diol et de l'acide palmitique.
Rendement : 86% Rf (dichlorométhane-méthanol 9-1) : 0.50
IR : vNH et OH 3312 cm"1 ; vCO amide 1633 cm"1
PF : 104-108°C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 3H, -CH3, J=6.5Hz) ; 1.28 (massif, 24H, -CH2-) ; 1.64
(m, 2H, -CH2-CH2-CO-) ; 2.24 (m, 2H, -CH2-CH2-CO-) ; 3.43 (m, 2H, -CONH- CH2-CHOH-CH2OH) ; 3.55 (m, 2H, -CONH-CH2-CHOH-CH2OH) ; 3.78 (m, 1H, -
CONH-CH2-CHOH-CH2OH) ; 5.82 (si, 1H, -CONH-).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 330 (M+H)
EXEMPLE 4; Préparation du 1.2-(dipalmitoyloxy)-3- tétradécylthioacétylaminopropane
Le 3-(tétradécylthioacétylamino)propane-1,2-diol (1 g ; 2.77 mmol) (exemple 2) est dissous dans le dichlorométhane (200 ml) puis la dicyclohexylcarbodiimide (1.426 g ; 6.91 mmol), la diméthylaminopyridine (0.845 g ; 6.91 mmol) et l'acide palmitique (1.773 g ; 6.91 mmol) sont ajoutés. Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante pendant 48 heures. Le précipité de dicyclohexylurée est filtré et lavé au dichlorométhane. Le filtrat est évaporé sous vide. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-cyclohexane 6-4) (rendement : 28%). Rf (dichlorométhane-cyclohexane 7-3) : 0.28 PF : 73-75°C IR : vNH 3295 cm"1 ; vCO ester 1730 cm"1 ; vCO amide 1663 cm"1 RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, -CH3, J = 6.5 Hz) ; 1.26 (massif, 70H, -CH2-) ; 1.57 (massif, 6H, -CH2-CH2-S- et OCOCH2-CH2) ; 2.33 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7.3Hz) ; 2.51 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7.3Hz) ; 3.22 (s, 2H, S-CH2-CONH-) ; 3.47 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-) ; 3.62 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd- ) ; 4.12 (dd, 1H, -CHaHb-CH-GHcHd-, J=12.1 Hz et J=5.7Hz) ; 4.36 (dd, 1H, - CHaHb-CH-GHcHd-, J=12.1Hz et J=4.4Hz) ; 5.15 (m, 1H, -CHaHb-GH-GHaHb- ) ; 7.20 (m, 1H, -NHCO-).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 838 (M+H) ; M+23 = 860 (M+Na*) ; M+39 = 876 (M+K+)
EXEMPLE 5 : Préparation du 1.2-(ditétradlécvithioacétyl@2sv)-3- tétradécylthioacétylaminopropane
Ce composé est synthétisé selon la procédure précédemment décrite (exemple
4) à partir du 3-(tétradécylthioacétylamino)propane-1 ,2-diol (exemple 2) et de l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1 ). Rendement : 41 %
Rf (dichlorométhane) : 0.23
IR : vNH 3308 cm"1 ; vCO ester 1722 et 1730 cm"1 ; vCO amide 1672 cm"1
PF : 65-67°C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, -CH3, J=6.4Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2-) ; 1.59 (massif, 6H, -CH2-CH2-S-) ; 2.53 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7.3Hz) ;
2.64 (t, 4H, CH2-CH2- S-CH2-COO-, J=7.3Hz) ; 3.23 (s, 4H, S-CH2-COO-) ; 3.24
(s, 2H, S-CH2-CONH-) ; 3.52 (m, 1 H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-) ; 3.67 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-) ; 4.22 (dd, 1H, -CHaHb-CH-CHcHd-, J=12.2Hz et J=5.4Hz) ; 4.36 (dd, 1H, -CHaHb-CH-CHcHd-, J=12.2Hz et J=3.9Hz) ; 5.19 (m, 1H, -CHaHb-CH-CHaHb-) ; 7.18 (m, 1H, -NHCO-).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 902 (M+H) ; M+23 = 924 (M+Na+) ; M+39 = 940 (M+K+)
EXEMPLE 6 : Préparation du 1.2-(ditétradécylthioacétyloxy)-3- palmitoylaminopropane Ce composé est synthétisé selon la procédure précédemment décrite (exemple 4) à partir du 3-(palmitoylamino)propane-1 ,2- diol (exemple 3) et de l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1 ). Rendement : 8%
Rf (acétate d'éthyle-cyclohexane 2-8) : 0.33 IR : vNH 3319 cm"1 ; vCO ester 1735 cm"1 ; vCO amide 1649 cm"1 PF : 82-83°C RMN (1H, CDCIs) : 0.89 (t, 9H, -GH3, J=6.4H∑) ; 1.26 (massif, 68H, -GH2-) ; 1.60 (massif, 6H, -GH2-CH2-S- et -CH2-CH2-GONH-) ; 2.18 (t, 2H, -CH2-CH2-CONH-, J=6.8Hz) ; 2.64 (massif, 4H, CH2-CH2- S-CH2-COO-) ; 3.22 (s, 2H, -S-CH2-COO- ) ; 3.24 (s, 2H, -S-CH2-COO-) ; 3.47 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-) ; 3.62 (m, 1H, -GONH-GHaHfo-GH-GHcHd-) ; 4.23 (dd, 1H, -GHaHb-GH-CHcHd-, J=11.9H∑ et J=5.6Hz) ; 4.36 (ύύ, 1 H, -GHaHb-GH-GHct-M-, J=12.2H∑ et J=4Hz) ; 5.15 (m, 1H, -GHaHb-CH-GHaHb-) ; 5.85 (m, 1H, -NHCO-). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 870 (M+H)
EXEMPLE 7 : Préparation du 1.3-di(oléoylamino)propan-2-ol L'acide oléique (5.698 g ; 0.020 mol) et le 1 ,3-diaminopropan-2-ol (1 g ; 0.011 mol) sont placés dans un ballon et chauffés à 190°C pendant 2 heures. Le milieu réactionnel est ramené à température ambiante puis repris par du chloroforme et lavé par de l'eau. La phase aqueuse est extraite par du chloroforme et les phases organiques sont groupées, séchées sur sulfate de magnésium puis filtrées et évaporées à sec pour fournir un résidu huileux noir (6.64 g) qui est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-méthanol 99-1 ). Le produit obtenu est ensuite lavé par de l'éther et filtré. Rendement : 23%
Rf (dichlorométhane-méthanol 95-5) : 0.43 IR : vNH 3306 cm"1 ; vCO amide 1646 et 1630 cm"1 PF : 88-92°C RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 6H, -CH3, J=6.2Hz) ; 1.28 (massif, 68H, -CH2-) ; 1.61- 1.66 (massif, 4H, -CH2-CH2-CONH-) ; 1.98-2.02 (massif, 8H, -CH2-CH=CH-CH2-) ; 2.23 (t, 4H, -CH2-CH2-CONH-, J=7.0Hz) ; 3.25-3.42 (massif, 4H, -CONH-CH2- CH-CH2-) ; 3.73-3.80 (m, 1H, -CONH-CH2-CH-CH2-) ; 5.30-5.41 (massif, 4H, - CH2-CH=CH-CH2-) ; 6.36 (massif, 2H, -NHCO-). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 619 (M+H+) ; M+23 = 641 (M+Na+) ; M+39 = 657 (M+K+)
EXEMPLE 8 : Préparation du 1.3-di(tétradécylthioacétviamino)propan-2-ol
Ce composé est synthétisé selon la procédure précédemment décrite (exemple 7) à partir du 1 ,3-diaminopropan-2-ol et de l'acide tetradecylthioacetique
(exemple 1 ).
Rendement : 94%
Rf (dichlorométhane-méthanol 95-5) : 0.44
IR : vNH 3275 cm"1 ; vGO amide 1660 et 1633 cm"1 PF : 101-104°C
RMN (1H, GDCI3) : 0.89 (l, 6H, -GH3, J=6.3Hz) ; 1.28 (massif, 44H, -GH2-) ; 1.57-
1.62 (massif, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-) ; 2.55 (t, 4H, -GH2-CH2-S-CH2-
CONH-, J=7.2Hz) ; 3.26 (s, 4H,-S-CH2-GONH-) , 3.32-3.36 (massif, 2H, -CONH-
CHaHb-CH-CHaHb-NHCO-) ; 3.43-3.49 (massif, 2H, -CONH-CHaH -CH- CHaHb- NHCO-) ; 3.82-3.84 (m, 1 H, -CONH-CH2-CH-CH2-NHGO-) ; 7.44 (si, 2H, -
NHCO-).
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 653 (M+Na+) ; M+39 = 669 (M+K+)
EXEMPLE 9 : Préparation du 1.3-di(stéaroylamino)propan-2-ol Ce composé est synthétisé selon la procédure précédemment décrite (exemple 7) à partir du 1 ,3-diaminopropan-2-ol et de l'acide stéarique. Rendement : 73% Rf (dichlorométhane-méthanol 95-5) : 0.28 IR : vNH 3306 cm"1 ; vCO amide 1647 et 1630 cm"1 PF : 123-130°C
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 645 (M+Na+)
EXEMPLE 10 : Préparation du dichlorhvdrate de 1.3-diamino-2- (tétradécylthioacétyloxy)propane
Préparation du 1.3-di(tert-hutyloxycarbonylamino)propan-2-ol (exemple 10a) Le 1 ,3-diaminopropan-2-ol (3 g ; 0.033 mol) est dissous dans du méthanol (300 ml) avant d'ajouter la triéthylamine (33 ml et goutte à goutte) et le dicarbonate de di-tert-butyle [(BOC)20] (21.793 g ; 0.100 mol). Le milieu réactionnel est chauffé à 40-50°C pendant 20 min puis laissé sous agitation à température ambiante pendant une heure. Après évaporation du solvant, l'huile incolore résiduelle est purifiée par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-méthanol
95-5). Le produit est obtenu sous forme d'huile incolore qui cristallise lentement.
Rendement : quantitatif
Rf (dichlorométhane-méthanol 95-5) : 0.70
IR : vNH 3368 cm"1 ; vGO carbamate 1690 cm"1 PF : 98-100°G
RMN (1H, GDGI3) : 1.45 (massif, 18H, -GH3- (BOC)) ; 3.02 (si, 1H, OH) ; 3.15-
3.29 (massif, 4H, BOCNH-CH2-CH-Crî2-NHBOG) ; 3.75 (m, 1 H, BOCNH-CH2-
CH-CH2-NHBOC) ; 5.16 (massif, 2H, -NHBOC).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 291 (M+H+) ; M+23 = 313 (M+Na+) ; M+39 = 329 (M+K+)
Préparation du 1.3-di(tert-butyloxycarbonylamino)-2-(tétradécylthioacétyloxy)- pro ane (exemple 10b)
Le 1,3-(di-fert-butoxycarbonylamino)-propan-2-ql (exemple 10a) (1 g ; . 3.45 mmol), l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1) (0.991 g ; 3.45 mmol) et la diméthylaminopyridine (0.042 g ; 0.34 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (40 ml) à 0°C avant d'ajouter goutte à goutte la dicyclohexylcarbodiimide (0.709 g ; 3.45 mmol), diluée dans le dichlorométhane,. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 30 min puis ramené à température ambiante. Après 20 heures de réaction, le précipité de dicyclohexylurée est filtré. Le filtrat est porté à sec. Le résidu huileux est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-cyclohexane 5-5 puis dichlorométhane-acétate déthyle 98-2).
Rendement : 52%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) : 0.43
IR : vNH 3369 cm"1 ; vCO carbamate 1690 cm"1; vCO ester 1719 cm"1
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 3H, CH3, J=6.3Hz) ; 1.26 (massif, 22 H, -CH2-) ; 1.45 (massif, 18H, -CH3- (BOC)) ; 1.56-1.66 (m, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 2.64 (t,
2H, -CH2-CH2-S-CH2-CO, J=7.5Hz) ; 3.20 (s, 2H, CH2-S-CH2-CO ) ; 3.35
(massif, 4H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 4.89 (m, 1H, BOCNH-CH2-CH-
CH2-NHBOC) ; 5.04 (massif, 2H, -NHBOC).
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 583 (M+Na+) ; M+39 = 599 (M+K+)
Préparation du dichlorhvdrate de 1.S-diamino-2-(tétradécylthioacétyloxy)DroDane
(exemple 10)
Le 1 ,3-(dife/f-butoxycarbonylamino)-2-tétradécylthioacétyioxypropane (exemple
10b) (0.800 g ; 1.43 mmol) est dissous dans de l'éther diéthylique (50 ml) saturé en acide chiorhydrique gaz. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité formé est ensuite filtré et lavé par de l'éther.
Rendement : 88%
Rf (dichlorométhane-méthanol 7-3) : 0.37 IR : vNH23049 et 3099 cm"1 ; vCO ester 1724 cm"1
PF : 224°C (décomposition)
RMN (1H, CDCI3) : 0.86 (t, 3H, CH3, J=6.3Hz) ; 1.24 (massif, 22 H, -CH2-) ; 1.48-
1.55 (m, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 2.57 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CO, J=7.2Hz) ;
3.16 (massif, 4H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NH) ; 3.56 (s, 2H, CH2-S-CH2-CO) ; 5.16 (m, 1 H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NH) ; 8.43 (massif, 6H, -NH2.HCI).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 361 (M+H+) ; M+23 = 383 (M+Na+) ; M+39 = 399
(M+K+) EXEMPLE 11 : Préparation du 1.3-ditétradécylthioacétylamino-2- (tétradécylthioacétyloxy)propane
Le dichlorhydrate de 1,3-diamino-2-tétradécylthioacétyloxypropane (exemple 10) (0.400 g ; 0.92 mmol) et I' acide tetradecylthioacetique (exemple 1 ) (0.532 g ; 1.84 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (50 ml) à 0°C avant d'ajouter la triéthylamine (0.3 ml ; 2.1 mmol), la dicyclohexylcarbodiimide (0.571 g ; 2.77 mmol) et f hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.249 g ; 1.84 mmol). Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 1 heure puis ramené à température ambiante pendant 48 heures. Le précipité de dicyclohexyluree est filtré et rincé par du dichlorométhane . Le filtrat est évaporé sous vide. Le résidu obtenu (1.40 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane puis dichlorométhane-acétate d'éthyle 9-1). Rendement : 74% Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 8-2) : 0.25
IR : vNH 3279, 3325 cm"1 ; vGO ester 1731 cm"1 ; vCO amide 1647, 1624 cm"1 PF : 87-89X
RMN (1H, CDCI3) : 089 (t, 9H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2-) ; 1.55- 1.60 (massif, 6H, -CH2-GH2-S-GH2-GO) ; 2.55 (t, 4H, -GH2-CH2-S-GH2-GQNH-, J=7.2Hz) ; 2.65 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-COO-, J=7.2Hz) ; 3.21 (s, 2H, -GH2-S- CH2-COO-) ; 3.25 (s, 4H, -GH2-S-CH2-CONH-) ; 3.40-3.49 (m, 2H, -GONH- CHaHb-CH-GHaHb-NHCO-) ; 3.52-3.61 (m, 2H, -CONH-CHaHb-CH-CHaHb- NHGO-) ; 4.96 (m, 1H, -GONH-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 7.42 (massif, 2H, -NHCO-). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 901 (M+H+) ; M+23 = 923 (M+Na+) ; M+39 = 939 (M+K+)
EXEMPLE 12 : Préparation du 1.3-dioléoylamino-2-
(tétradécylthioacétyloxy)propane Le produit est obtenu selon la procédure décrite exemple 11 à partir du dichlorhydrate de 1,3-diamino-2-tétradécylthioacétyloxypropane (exemple 10) et de l'acide oléique. Rendement : 15%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 8-2) : 0.38 IR : vNH 3325 cm"1 ; vCO ester 1729 cm"1 ; vCO amide 1640 et 1624 cm'1 PF : 57-59°C RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.26 (massif, 62H, -CH2-) ; 1.59- 1.74 (massif, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 1.92-2.03 (massif, 8H, -CH2-CH=CH- CH2-) ; 2.22 (t, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7.2Hz) ; 2.65 (t, 2H, -CH2-CH2-S- CH2-COO-, J=7.4Hz) ; 3.19 (s, 2H, -CH2-S-CH2-COO-) ; 3.25-3.34 (m, 2H, - CONH-CHaHb-CH-CHaHb-NHCO-) ; 3.56-3.65 (m, 2H, -CONH-CHaH -CH- CHaHb-NHCO-) ; 4.87 (m, 1H, -CONH-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 5.34 (massif, 4H, - CH2-CH=CH-CH2-) ; 6.27 (massif, 2H, -NHCO-). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 889 (M+H+) ; M+23 = 912 (M+Na+)
EXEMPLE 13 : Préparation d 2.3-ditétradécylthioacétylaminopropan-1-ol
Préparation du dichlorhydrate de 2.3-diaminoproDanoate de méthyle (exemple
13a)
Le chlorhydrate d'acide 2,3-diaminopropionique (1g ; 7 mmol) est dissous dans le méthanol (40 ml). Le milieu est refroidi par un bain de glace avant d'ajouter goutte à goutte le chlorure de thionyle (2.08 ml ; 28 mmol). Le milieu est ramené à température ambiante puis porté à reflux pendant 20 heures. Le solvant est évaporé et le résidu est trituré dans de l'heptane. Le précipité résultant est filtré, rincé et séché pour donner un solide blanc-jaune.
Rendement : 94% Rf : (dichlorométhane-méthanol 9-1 ) : 0.03
IR : vNH2 2811 cm"1 ; vCO ester 1756 cm"1
PF : 170-180°C (décomp.)
RMN (1H, CDCI3) : 3.78 (s, 3H, -CH3) ; 4.33 (m, 3H, -CH2- et-CH-) ; 8.77 (m, 3H,
-NH2.HCI) ; 9.12 (m, 3H, -NH2.HCI) Préparation du 2.3-ditétradécylthioacétylaminopropanoate de méthyle (exemple
13b)
Le dichlorhydrate de 2,3-diaminopropanoate de méthyle (exemple 13a) (0.500 g ; 2.62 mmol) et l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1) (1.51 g ; 5.23 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (80 ml) à 0°C avant d'ajouter la triéthylamine (0.79 ml), la dicyclohexylcarbodiimide (1.62 g ; 7.85 mmol) et
Phydroxybenzotriazole (0.707 g ; 5.23 mmol). Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 1 heure puis ramené à température ambiante pendant 48 heures. Le précipité de dicyclohexyluree est filtré et rincé par du dichlorométhane et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (3.68 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) pour fournir le composé souhaité sous forme de poudre blanche.
Rendement : 96%
Rf : (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.63 IR : vNH amide 3276 cm"1 ; vCO ester 1745 cm"1 ; vCO amide 1649 cm"1
PF : 81.5-82.5°C
RMN (1H, CDGI3) : 0.89 (i, 6H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.26-1.37 (massif, 44H, -CH2-) ;
1.56-1.61 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH) ; 2.50-2.60 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-
GONH-) ; 3.22 (s, 2H, -GH2-S-CH GOMH-) ; 3.25 (s, 2H, -CH2-S-CM2-GQi\!H-) ; 3.74 (m, 2H, H3GO(GO)-GH-CH2-NHGO-) ; 3.79 (s, 3H, -GOOCH3) ; 4.64-4.70
(m, 1H, H3CO(GO)-CH-GH2-NHGO-) ; 7.79 (d, 2H, -NHGO-, J=7.3H∑).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 659 (M+H+) ; M+23 = 681 (M+Na+) ; M+39 = 697
(M+K+)
Préparation du 2.3-ditétradécylthioacétylaminopropan-1-ol (exemple 13)
Le borohydrure de sodium (316 mg ; 8.4 mmol) est dissous dans le tétrahydrofurane (40 ml). Le mélange réactionnel est refroidi dans un bain de glace avant d'ajouter le 2,3-ditétradécylthioacétylaminopropanoate de méthyle (exemple 13b) (500 mg ; 0.76 mmol) par petites portions. Le milieu réactionnel est ramené à température ambiante et laissé sous agitation. Après 4 jours de réaction, 20 ml d'eau sont ajoutés. Le produit, qui précipite, est filtré, rincé par de l'eau puis séché au dessiccateur pour fournir une poudre blanche. Rendement : 76%
Rf : (dichlorométhane-méthanol 95-5) : 0.53
IR : vOH alcool 3436 cm"1 ; vNH amide 3313 et 3273 cm"1 ; vCO amide 1648 et 1622 cm"1 PF : 100.2 à 102.2°C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 6H, CH3, J=6.2Hz) ; 1.26 (massif, 44H, -CH2-) ; 1.59 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH) ; 2.50-2.56 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.23 (s, 2H, -CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.27 (s, 2H, -CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.50-3.91 (massif, 5H, -OCO-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 7.38 (d, 2H, -NHCO-, J=7.1Hz). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 631 (M+H+) ; M+23 = 653 (M+Na+) ; M+39 = 669 (M+K+)
EXEMPLE 14 : Préparation du 2.3-ditétradécylthioacétylamino-1- tétradécylthioacétyloxypropane Le 2,3-ditétradécylthioacétylaminopropan-1-ol (exemple 13) (0.200 g ; 0.32 mmol) est dissous dans le tetrahydrofuranne (40 ml) avant d'ajouter la dicyclohexylcarbodiimide (65 mg ; 0.32 mmol), la diméthylaminopyridine (39 mg ; 0.32 mmol) et l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1) (91 mg ; 0.32 mmol). Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité de dicyclohexyluree est filtré, rincé au tetrahydrofuranne et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (1 g) est purifié par flash chromatographie (éluant dichlorométhane) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 59% Rf : (dichlorométhane-acétate d'éthyle 8-2) : 0.49
IR : vNH amide 3281 cm"1 ; vCO ester 1736 cm"1 ; vCO amide 1641 cm"1
PF : 95.4 à 97.3°C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.4Hz) ; 1.27-1.34 (massif, 66H, -CH2-) ;
1.54-163 (m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 2.53 (t, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7.2Hz) ; 2.65 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-COO-, J=7.2Hz) ; 3.21 (s, 2H, -CH2-S- CH2-CONH-) ; 3.23 (s, 2H, -CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.25 (s, 2H, -CH2-S-CH2-COO- ) ; 3.46-3.56 (m, 2H, -OCO-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 4.22-4.25 (m, 2H, -OCO-CH2- CH-CH2-NHCO-) ; 4.29-4.39 (m, 1 H, -OCO-CH2-CH-CH2-NHCO-).; 7.29 (t, 1H, - NHCO-) ; 7.38 (d, 1 H, -NHCO-, J=7.6Hz). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 901 (M+H+)
EXEMPLE 15 : Préparation du dichlorhydrate de 1.3-diamino-2- (tétradécylthioacétylthio)propane
Préparation du 1.3-di(tert-butyloxycarbonylamino)-2-(p-toluènesulfonyloxy) propane (exemple 15a) Le 1,3-di(tert-butyloxycarbonylamino)propan-2-ol (exemple 10a) (2.89 g ; 10 mmol) et la triéthylamine (2.22 ml ; 16 mmol) sont dissous dans du dichlorométhane anhydre (100 ml). Le mélange réactionnel est refroidi dans un bain de glace avant d'ajouter goutte à goutte le chlorure de tosyle (2.272 g ; 12 mmol) dissous dans du dichlorométhane (30 ml). Après addition, le milieu réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 72 heures. 1 équivalent de chlorure et 1.6 de triéthylamine sont ajoutés au bout dé 48 heures. De l'eau est ajoutée pour stopper la réaction et le milieu est décanté. Le phase organique est lavée plusieurs fois à l'eau. Les phases aqueuses sont groupées et réextraites par du dichlorométhane . La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et le solvant évaporé. Le résidu obtenu (6.44 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane puis dichlorométhane-méthanol 99-1) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de solide blanc. Rendement : 48% Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.70
IR : vNH 3400 cm"1 ; vCO ester 1716 cm"1 ; vCO carbamate 1689 cm"1
PF : 104-111°C
RMN (1H, CDCI3) : 1.42 (s, 18H, CH3 (BOC)) ; 2.46 (s, 3H, CH3 ) ; 3.22 et 3.41
(massif, 4H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 4.56 (m, 1H, BOCNH-CH2-CH- CH2-NHBOC) ; 5.04-5.11 (massif, 2H, -NHBOC) ; 7.36 (d, 2H, aromatiques, J=8.5Hz) ; 7.36 (d, 2H, aromatiques, J=8.5Hz). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 467 (M+Na+) ; M+39 = 483 (M+K+) Préparation du 1.3-di(tert-butyloxycarbonylamino)-2-acétylthiopropane (exemple 15b)
Le 1 ,3-(dife/f-butoxycarbonylamino)-2-(p-toluènesulfonyloxy)prôpane (exemple 15a) (0.500 g ; 1.12 mmol) et le thioacétate de potassium (0.161 g ; 1.41 mmol) sont dissous dans l'acétone et le milieu est porté à reflux pendant 48 heures. Un équivalent de thioacétate de potassium est ajouté après 24 heures de reflux. La réaction est ramenée à température ambiante puis le solvant est évaporé. Le résidu est repris par de l'éther diéthylique et filtré sur Célite®. Le filtrat est évaporé. Le produit obtenu (0.48 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 98-2) et permet d'obtenir le produit souhaité sous forme de solide ocre. Rendement : 84%
Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.45 IR: vNH 3350 cm"1 ; vCO ester 1719 cm"1 ; vCO carbamate 1691 cm"1 PF : 93-96°G
RMN (1H, CDGI3) : 1.45 (s, 18H, GH3 (BOC)) ; 2.34 (s, 3H, CH3 ) ; 3.23-3.32 (m, 2H, BOGNH-GHaHb-GH-GHaHb-NHBOG) ; 3.38-3.43 (m, 2H, BOGNH-GHaHb-CH- CHaHb-NHBOC) ; 3.58-3.66 (m, 1H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 5.22 (massif, 2H, -NHBOC). SM (MALDI-TOF) : +23 = 371 (M+Na*)
Préparation du 1,3-di(tert-butyloxycarbonylamino)-2-mercaptopropane (exemple
15c)
A une solution de potasse à 20% dans le méthanol (2.14 ml ; 12.4 mmol), désoxygénée par un courant d'azote, est ajouté le 1 ,3-di(fe/f- butoxycarbonylamino)-2-(acétylthio)propane (exemple 15b) (0.380 g ; 1.2 mmol) dilué dans du méthanol (10 ml). Le mélange réactionnel est maintenu sous azote et sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le milieu est alors acidifié (pH6) par de l'acide acétique puis les solvants sont évaporés sous vide. Le résidu est repris par de l'eau et extrait par du chloroforme. Les phases organiques sont groupées, séchées sur sulfate de magnésium puis filtrées et évaporées pour donner le produit souhaité sous forme de solide blanc qui est rapidement remis en réaction. Rendement : 90%
Rf (dichlorométhane -méthanol 98-2) : 0.56 IR : vNH 3370 cm"1 ; vCO carbamate 1680 cm"1
RMN (1H, CDCI3) : 1.46 (s, 18H, CH3 (BOC)) ; 2.98-3.12 (massif, 3H, BOCNH- CHaHb-CH-CHaHb-NHBOC et BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 3.46-3.50 (m, 2H, BOCNH-CHaHb-CH-CHaHb-NHBOC) ; 5.27 (massif, 2H, -NHBOC).
Préparation du 1.3-di(tert-butyloxycarbonylamino)-2-(tétradécylthioacétylthio) propane (exemple 15d)
Le 1,3-[di(fe/f-butoxycarbonylamino)]-2-mercaptopropane (exemple 15c) (0.295 g ; 0.963 mmol) est dissous dans le dichlorométhane (40 ml) avant d'ajouter la dicyclohexylcarbodiimide (0.199 g ; 0.963 mmol), la diméthylaminopyridine (0.118 g ; 0.963 mmol) et l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1) (0.278 g ; 0.963 mmol). Le mélange réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante et l'évolution de la réaction est suivie par CGM. Après 20 heures de réaction, le précipité de dicyclohexyluree est filtré, rincé au dichlorométhane et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (0.73 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 72%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) : 0.29 IR : vNH 3328 cm"1 ; vCO thioester 1717 cm"1 ; vCO carbamate 1687 cm"1 PF : 47-51 °C
RMN (1H, CDCIs) : 0.88 (t, 9H, CH3, J=6.1Hz) ; 1.26 (massif, 22H, -CH2-) ; 1.44 (s, 18H, CH3 (BOC)) ; 1.53-1.65 (m, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 2.59 (t, 2H, - CH2-CH2-S-CH2-COS-, J=7.8Hz) ; 3.21-3.30 (m, 2H, BOCNH-CHaHb-CH-CHaHb- NHBOC) ; 3.40 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.42-3.49 (m, 2H, BOCNH-CHaHb- CH-CHaHb-NHBOC) ; 3.62-3.65 (m, 1H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 5.24 (massif, 2H, -NHBOC). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 599 (M+Na+) ; M+39 = 615 (M+K+) Préparation du dichlorhydrate de 1.3-diamino-2-(tétradécylthioacétylthio)propane
(exemple 15)
Le 1 ,3-[di(tet -butoxycarbonylamino)]-2-tétradécylthioacétylthiopropane (exemple 15d) (0.300 g ; 0.52 mmol) est dissous dans l'éther saturé en acide chiorhydrique gaz (55 ml). Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante. Après 96 heures de réaction, le précipité formé est filtré, rincé plusieurs fois à l'éther diéthylique et séché pour donner le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 59%
Rf (dichlorométhane -méthanol 9-1) : 0.11
IR: vNH.HCI 2700-3250 cm"1 ; vCO thioester 1701 cm"1
PF : 181°C (décomposition)
RMN (1H, GDGI3) : 0.86 (t, 3H, GH3, J=6Hz) ; 1.24 (massif, 22H, -CH2-) ; 1.49- 1.54 (m, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 2.59 (m, 2H, -CH2-CH2-S-GH2-COS-) ; 2.80-2.84 (m, 1H, BOCNH-CHaHb-CH-GHaHb-MHBOG) ; 3.03-3.09 (m, 1H, BOGNH-CHaHb-GH-GHaH -NHBOG) ; 3.14 (s, 2H, CH2-S-CH2-GOS-) ; 3.27-3.38 (m, 2H, BOCNH-CHaHb-CH-CHaHb-NHBOC) ; 3.86-3.90 (m, 1H, BOCNH-CH2- CH-GH2-NHBOC) ; 8.21 et 8.52 (2m, 2H+4H, NH2.HGI).
EXEMPLE 18 : Préparation du 1.3<litétradécylthloacétylamlno-2- tétradéc¥Jf toacétylthio)propanβ
Le dichlorhydrate de 1,3-diamino-2-tétradécylthioacétylthiopropane (exemple 15)
(100 mg ; 0.225 mmol) et l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1) (130 mg ; 0.450 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (30 ml) à 0°C avant d'ajouter la triéthylamine (68 μl), la dicyclohexylcarbodiimide (139 mg ; 0.675 mmol) et hydroxybenzotriazole (61 mg ; 0.450 mmol). Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 1 heure puis ramené à température ambiante pendant 48 heures. Le précipité de dicyclohexyluree est filtré et rincé par du dichlorométhane et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (430 mg) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 82%
Rf (dichlorométhane -méthanol 98-2) : 0.54 IR : vCO thioester 1660 cm"1 ; vCO amide 1651 cm"1 PF : 83-85°C RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2-) ; 1.56- 1.62 (massif, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 2.56 (t, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7.5Hz) ; 2.61 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-, J=7Hz) ; 3.26 (s, 4H, CH2-S-CH2- CONH-) ; 3.42 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.44-3.49 (m, 2H, -CONH-CHaHb-CH- CHaHb-NH-CO) ; 3.55-3.61 (m, 2H, -CONH-CHaHb-CH-CHaHb-NHCO-) ; 3.70- 3.71 (m, 1 H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 7.58-7.62 (m, 2H, NHCO). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 917 (M+H+) ; M+23 = 939 (M+Na+)
EXEMPLE 17: Préparation du chlorhydrate de 1-amino-2,3- di(tétradécylthioacétylthio)propane
Préparation du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)propane-2.3-diol (exemple 17a) Le 1-aminopropane-2,3-diol (5 g ; 55 mmol) est dissous dans le méthanol (200 ml) avant d'ajouter goutte à goutte la triéthylamine (0.5 ml par mmol d'aminé) et le dicarbonate de di-tert-butyle [(BOG)20] où BOC correspond à tertbutyloxycarbonyle (1 .97 g ; 82 mmol). Le milieu réactionnel est chauffé à 40- 50°C pendant 20 min puis laissé sous agitation à température ambiante pendant une heure. Après évaporation du solvant, l'huile incolore résiduelle est purifiée par chromatographie sur gel de silice avec l'éluant dichlorométhane-méthanol 95-5 et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme d'huile incolore qui cristallise lentement. Rendement : 99%
Rf (dichlorométhane-méthanol 9-1) : 0.39 IR : vNH 3350 cm"1 ; vCO ester 1746 cm"1 ; vCO amide 1682 cm"1 PF < 15°C RMN (1H, CDCI3) : 1.44 (s, 9H, CH3 (BOC)) ; 3.16-3.31 (m, 2H, BOCNH-CH2- CH-CH2-OH) ; 3.44 (massif, 2H, OH) ; 3.16-3.31 (m, 2H, BOCNH-CH2-CH-CH2- OH) ; 3.71-3.78 (m, 1 H, BOCNH-CH2-CH-CH2-OH) ; 5.24 (m, 1H, -NHBOC). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 214 (M+Na+)
Préparation du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2.3-di(o-toluènesulfonyloχy) propane (exemple 17b) Ce composé est obtenu selon la procédure précédemment décrite (exemple
15a) à partir du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-propane-2,3-diol (exemple 17a) et du chlorure de p-toluènesulfonyle. Le produit est obtenu sous forme d'une poudre blanche.
Rendement : 45% Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.49
IR : vNH 3430 cm"1 ; vCO ester et carbamate 1709 cm"1
PF : 12-116°C
RMN ( H, CDCI3) : 1.40 (s, 9H, CH3 (BOC)) ; 2.46 (s, 6H, CH3) ; 3.26-3.45 (m,
2H, BOGNH-CH2-CH-GH2-OTs) ; 4.04-4.14 (m, 2H, BOCNH-CH2-CH-CH2-OTs) ; 4.68 (m, 1H, BOCNH-CH2-CH-GH2-OTs) ; 4.71 (s, 1H, -NHBOC) ; 7.34 (d, 4H, aromatiques, J=8.5Hz) ; 7.69 (d, 2H, aromatiques, J=8.1 Hz) ; 7.76 (d, 2H, aromatiques, J=8.1Hz).
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 522 (M+Na+) ; M+39 = 538 (M+K+)
Préparation du 1-(tert-butyloxyœrbonylamino)-2.3-di(Θcétylthio)propane
(exemple 17c)
Ce composé est obtenu selon la procédure précédemment décrite (exemple
15b) à partir du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2,3-di(p-toluènesulfonyloxy)- propane (exemple 17b) et du thioacétate de potassium. Le produit est obtenu sous forme d'un solide blanc.
Rendement : 59%
Rf (dichlorométhane -acétate d'éthyle 95-5) : 0.55
IR : vNH 3430 cm"1 ; vCO thioester 1718 cm"1 ; vCO carbamate 1690 cm"1
PF : 62-63°C RMN (1H, CDCI3) : 1.45 (s, 9H, CH3 (BOC)) ; 2.35 (s, 3H, CH3) ; 2.37 (s, 3H,
CH3) ; 3.12-3.38 (massif, 4H, BOCNH-CH2-CH-CH2-SCO-) ; 3.69-3.78 (m, 1H,
BOCNH-CH2-CH-CH2-SCO-) ; 5.02 (s, 1H, -NHBOC). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 330 (M+Na+)
Préparation du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2.3-dimercaptoprooane (exemple
17 ) Ce composé est obtenu selon la procédure précédemment décrite (exemple
15c) par saponification du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2,3-di(acétylthio)- propane (exemple 17c). Le produit est obtenu sous forme d'un solide blanc qui est rapidement remis en réaction.
Rendement : 95% Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) : 0.45
IR : vNH 3368 cm"1 ; vCO carbamate 1688 cm"1
PF : 62-63°C
RMN (1H, CDCI3) : 1.46 (s, 9H, CH3 (BOC)) ; 3.04-3.11 (m, 1H, BOCNH-CH2-
CHSH-CH2-SH) ; 3.26-3.35 (m, 2H, BOGNH-CH2-GHSH-CH2-SH) ; 3.43-3.52 (m, 2H, BOGNH-GH2-GH-CH2-SH) ; 4.91 (m, 2H, SH) ; 5.08 (s, 1H, -NHBOC).
Préparation du 1-(tert-butyloχycarbonylamino)-2. S-di(têtradécylthioacétylthio) propane (exemple 17e)
Ce composé est obtenu selon la procédure précédemment décrite (exemple 15d) à partir du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2,3-dimercaptopropane (exemple
1 d) et de l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1 ). Le produit est obtenu sous forme d'un solide blanc.
Rendement : 50%
Rf (dichlorométhane) : 0.38 IR : vNH 3421 cm"1 ; vCO thioester 1721 cm"1 ; vCO carbamate 1683 cm"1
PF : 60-62°C
RMN (1H, CDCIs) : 0.87 (t, 6H, CH3, J=6.3Hz) ; 1.26 (massif, 44H, -CH2-) ; 1.45
(s, 9H, CH3 (BOC)) ; 1.57-1.62 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-) ; 2.60 (t, 4H, -
CH2-CH2-S-CH2-COS-, J=6.9Hz) ; 3.17-3.29 (m, 2H, BOCNH-CHaHb-CH-CHaHb- NHBOC) ; 3.29-3.38 (m, 2H, BOCNH-CHaHb-CH-CHaHb-NHBOC) ; 3.41 (s, 2H,
CH2-S-CH2-COS-) ; 3.43 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.76-3.80 (m, 1H, BOCNH-
CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 5.03 (s, 1H, -NHBOC). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 786 (M+Na+)
Préparation du chlorhydrate de 1-amino-2.3-di(téiradécylthioacétylthio)oropane
(exemple 17) Ce composé est obtenu selon la procédure précédemment décrite (exemple 15) à partir du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2,3-ditétradécylthioacétyl-thiopropane
(exemple 17e). Le produit est obtenu sous forme d'un solide blanc.
Rendement : 43%
Rf (dichlorométhane) : 0.19 IR : vNH.HCI 2700-3250 cm"1 ; vCO thioester 1701 et 1676 cm"1
PF : 117-128°C
RMN (1H, CDCI3) : 0.86 (t, 6H, CH3, J=6Hz) ; 1.24 (massif, 44H, -CH2) ; 1.51 (m,
4H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-) ; 2.61 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-) ; 2.93-3.04
(m, 2H, -S-CHaHb-CH-CHaHb-NH2.HGI) ; 3.11-3.20 (m, 2H, -S-GHaMb-GH-GHaHb- NH2.HCI) ; 3.59-3.63 (massif, 4H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.72-3.84 (m, 1H, -S-CH2-
CH-CH2-NH2.HCI) ; 8.12 (m, 3H, NH2.HCI).
EXEMPLE 18: Préparation du 1-tétradécylthioacétylamino-2.3- riiÇtétradéeylthioacétyllhfotoropane
Le chlorhydrate de 1-amino-2,3-ditétradécylthioacétylthiopropane (exemple 17)
(100 mg ; 0.140 mmol) et l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1) (62 mg ;
0.210 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (40 ml) à 0°G avant d'ajouter la triéthylamine (43ml), la dicyclohexylcarbodiimide (59 mg ; 0.28 mmol) et l'hydroxybenzotriazole (29 mg ; 0.210 mmol). Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 1 heure puis ramené à température ambiante pendant 24 heures. Le milieu est ensuite chauffé à reflux léger pendant 48 heures puis porté à sec. Le résidu obtenu (310 mg) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane -cyclohexane 8-2) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 96% Rf (dichlorométhane) : 0.20 IR : vNH amide 3306 cm"1 ; vCO thioester 1674 cm'1 ; vCO amide 1648 cm"1 PF : 78-80°C
RMN (1H, CDCIs) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2) ; 1.58-
1.62 (massif, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-) ; 2.56 (t, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-,
J=7.5Hz) ; 2.61 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7Hz) ; 3.26 (s, 4H, CH2-S-
CH2-COS-) ; 3.42 (s, 2H, CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.44-3.49 (m, 2H, -S-CHaHb-CH-
CHaHb-NHCO-) ; 3.55-3.61 (m, 2H, -S-CHaHb-CH-CHaHb-NHCO-) ; 3.70-3.71 (m,
1 H, -S-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 7.58-7.62 (m, 1 H, NHCO).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 934 (M+H+) ; M+23 = 956 (M+Na+) ; M+39 = 972
(M+K+ )
EXEMPLE 19 : Préparation du 1-tétradécylthioacétv.thio-2.3- di(tétradécylthioacétylamino)propane
Préparation du 2.3-di(tétradécylthioacétylamino)-1-iodopropane (exemple 19a) Le 2,3-ditétradécylthioacétylaminopropan-1-ol (exemple 13) (0.200 g ; 0.317 mmol) est dissous dans le toluène (30 ml) avant d'ajouter l'imidazole (0.054 g ;
0.792 mmol), la triphénylphosphine (0.208 g ; 0.792 mmol) et l'iode (0.161 g ;
0.634 mmol) dans cet ordre. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation et chauffé à 75-80°G. Après 6 heures de réaction, le solvant est évaporé et le produit résiduel obtenu est utilisé sans autre purification.
Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.55
Préparation du 2,3-di(tétradécylthioacétylamino)-1-mercaptopropane (exemple 19b) L'hydrogenosulfure de sodium (0.089 g ; 1.59 mmol) est ajouté au 2,3- ditétradécylthioacétylamino-1-iodopropane (exemple 19a) (0.235 g ; 0.32 mmol) dissous dans de l'acétone (80 ml). Le milieu réactionnel est porté à 70°C pendant 16 heures. Le solvant est évaporé et le résidu est repris par de l'eau et extrait par du chloroforme. La phase aqueuse est acidifiée à pH6 par de l'acide acétique puis réextraite par du chloroforme. Les phases organiques sont séchées sur sulfate de magnésium puis filtrées et le solvant est évaporé. Le résidu obtenu est utilisé sans autre purification Préparation du 1-tétradécylthioacétylthio-2.3-di(tétradécylthioacétylamino) propane (exemple 19)
Le 2,3-ditétradécylthioacétylamino-1-mercaptopropane (exemple 19b) (0.205 g ;
0.32 mmol) est dissous dans le tetrahydrofuranne (50 ml) avant d'ajouter la dicyclohexylcarbodiimide (98 mg ; 0.47 mmol), la dimethylaminopyridine (58 mg ;
0.47 mmol) et l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1) (137 mg ; 0.47 mmol).
Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité de dicyclohexyluree est filtré, rincé au tetrahydrofuranne et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (1.14 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane) pour obtenir le composé souhaité sous forme de poudre ocre.
Rendement : 10%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 98-2) : 0.19
IR : vGO thioester 1711 -1745 cm"1 ; vCO amide 1651 cm"1 PF : 48.8 à 49.8°C
RMN (1H, GDGI3) : 0.89 (t, 9H, GH3, J=6.3Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2) ; 1.58
(m, 6H, -CH2-CH2-S-GH2-GOS-) ; 2.46-55 (m, 4H, -GH2-CH2-S-CH2-GONH) ;
2.65 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-, J=7.4Hz) ; 3.24 (s, 2H, CH2-S-CH2-CONH-) ;
3.26 (s, 2H, GH2-S-CH2-GONH-) ; 3.66 (t, 2H, -GOS-GH2-GH-GM2-NHGO) ; 3.79 (t, 2H, GH2-S-CH2-GOS-, J=6.3Hz) ; 4.31-4.41 (m, 2H, -COS-CH2-GH-GH2-
NHGO) ; 5.00-5.05 (m, 1H, -GOS-GH2-GH-GH2-NHCO) ; 7.33 (si, 1H, NHGO) ;
9.27 (d, 1 H, NHGO, J=8.6Hz).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 917 (M+H+) ; M+23 = 939 (M+Na+) ; M+39 = 955 (M+K+ )
EXEMPLE 20 : Préparation de 3-tétradécylthioacétylamino-2- tétradécylthioacétylthiopropan-1-ol
Préparation du 3-tétradécylthioacétylamino-1-triphénylméthyloxyoropan-2-ol (exemple 20a)
Le chlorotriphénylméthane (2.833 g ; 10.16 mmol) est ajouté à une solution de 3- tétradécylthioacétylaminopropane-1,2-diol (exemple 2) (3 g ; 8.30 mmol) dans la pyridine (2.5 ml). Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à 50°C pendant 24 heures. Le solvant est évaporé sous vide. Le résidu obtenu est repris par de l'eau et extrait par du dichlorométhane. La phase organique est lavée par une solution aqueuse d'acide chiorhydrique 1 N puis par une solution aqueuse d'eau saturée en chlorure de sodium. Elle est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et le solvant est évaporé. Le résidu obtenu (6.36 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlrométhan-acétate d'éthyle 98-2) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 69% Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 8-2 ) : 0.61 IR : vNH amide 3225 cm"1 ; vCO amide1654 cm"1 PF : 62.6 à 65.4°C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 3H, CH3, J=6.7Hz) ; 1.26 (massif, 22H, -CH2) ; 1.50- 1.57 (m, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-) ; 2.48 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH, J=7.2Hz) ; 3.01 (m, 1H, OH) ; 3.17 (s, 2H, GH2-S-CH2-CONH-) ; 3.19 (m, 2H, -O- GH2-CH-GH2-NHGO ou trityl-0-GH2-GH-CH2-NHCO) ; 3.27-3.36 (m, 1 H, -0-CH2- CH-CH2-NHCO ou trityl-0-CH2-CH-GH2-NHCO) ; 3.54-3.62 (m, 1H, -0-CH2-CH- CH2-NHCO ou trityl-0-CH2-GH-CH2-NHCO) ; 3.93 (m, 1H, -0-CH2-GH-CH2- NHCO) ; 7.16 (t, 1H, NHGO, J=5.7Hz) ; 7.23-7.35 (massif, 9H, H aromatiques) ; 7.41-7.45 (massif, 6H, H aromatiques). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 626 (M+Na+).
Préparation du 2-iodo-3-tétradécylthioacétylamino-1-triphénylméthyloχyprooane
(exemple 20b)
Le 3-tétradécylthioacétylamino-1-triphénylméthyloxypropan-2-ol (exemple 20a) (2 g ; 3.31 mmol) est dissous dans le toluène (100 ml) avant d'ajouter l'imidazole (0.564 g ; 8.28 mmol), la triphénylphosphine (2.171 g ; 8.28 mmol) et l'iode (1.681 g ; 6.62 mmol) dans cet ordre. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Une solution saturée en bisulfite de sodium est ajoutée jusqu'à décoloration complète du milieu réactionnel. Les phases sont séparées ; la phase aqueuse est extraite par du toluène, les phases organiques sont groupées, lavées par une solution saturée en chlorure de sodium, séchées sur sulfate de magnésium puis filtrées. Après évaporation du solvant, le résidu obtenu (4.65 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlrométhane) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme d'huile jaune. Rendement : 21% Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5 ) : 0.58
IR : vCO amide 1668 cm*1 ; vCHarom. monosubstitué 748 et 698 cm'1 RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 3H, CH3, J=6.5Hz) ; 1.26 (massif, 20H, -CH2) ; 1.53- 1.63 (m, 2H, -CH2-CH2-CH2-S-CH2-CONH-) ; 2.63 (m, 2H, -CH2-CH2-CH2-S-CH2- CONH) ; 3.13-3.30 (m, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH) ; 3.34 (s, 2H, CH2-S-CH2- CONH-) ; 3.67-3.71 (m, 2H, -0-CH2-GH-CH2-NHCO ou trityl-0-CH2-CH-CH2- NHCO) ; 3.88-3.94 (m, 2H, -0-CH2-CH-CH2-NHCO ou trityl-0-CH2-CH-CH2- NHCO) ; 4.76 (m, 1H, -0-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 7.25-7.36 (massif, 9H, H aromatiques) ; 7.45-7.49 (massif, 6H, H aromatiques). SM (MALDI-TOF) : M-127 ≈ 586 (M-l)
Préparation du 2-mercapto-3-fêtradécylthioacétylamino-1- triphénylméthyloxypropane (exemple 20c)
L'hydrogénosulfate de sodium hydraté (38 mg ; 0.68 mmol) est mis en suspension dans l'éthanol (20 ml) avant d'ajouter le 2-iodo-3- tétradécylthioacétylamino-1-triphénylméthyloxypropane (exemple 20b) (200 mg ; 0.28 mmol). Le milieu réactionnel est chauffé à 70°G. 238 mg d'hydrogénosulfate de sodium hydraté sont ajoutés sur plusieurs jours. Après 6.5 jours, le solvant est évaporé, le résidu repris dans du dichlorométhane et lavé par de l'eau. La phase aqueuse est réextraite et les phases organiques regroupées sont lavées par une solution d'acide chiorhydrique 0.5N puis par une solution saturée en chlorure de sodium, séchées sur sulfate de magnésium. Le sel est filtré et le solvant évaporé. Le résidu obtenu est utilisé sans autre purification. Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5 ) : 0.33 Préparation du 3-tétradécylthioacétylamino-2-tétradécylthioacétylthio-1- triphénylméthyloxy-orooane (exemple 20d)
Le 2-mercapto-3-tétradécylthioacétylamino-1-triphénylméthyloxypropane
(exemple 20c) (174 mg ; 0.28 mmol) est dissous dans le tetrahydrofuranne (20 ml) avant d'ajouter la dicyclohexylcarbodiimide (88 mg ; 0.42 mmol), la dimethylaminopyridine (51 mg ; 0.42 mmol) et l'acide tetradecylthioacetique (121 mg ; 0.42 mmol). Le mélange réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante. Après 20 heures de réaction, le solvant est évaporé. Le résidu obtenu (450 mg) est purifié par flash chromatographie (éluant dichlorométhane- cyclohexane 3-7 à 5-5) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 76% Rf (dichlorométhane) : 0.39 IR : vGO thioester et amide 1745 à 1640 cm"1 PF : 48.5 à 51.9°C
RMN (1H, CDGIs) : 0.89 (t, 6H, GH3, J=6.3Hz) ; 1.26 (massif, 44H, -CH2) ; 1.62 (m, 4H, -GH2-GH2-S-CH2-CO-) ; 2.42 (t, 2H, -CH2-CH2-S-GH2-CONH-, J=7.5Hz) ; 2.68 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-, J=7.5Hz) ; 3.14 (s, 2H, CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.25 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.50-3.59 (m, 1H, -O-GH2-GH-GH2-NHCO ou trityl-0-GM2-CH-CH2-NHGO) ; 3.66-3.72 (m, 1 H, -0-GH2-GH-GH2-NHGO ou trityl- O-CH2-GH-GH2-NHGO) ; 3.96 (m, 1H, -0-GH2-GH-CH2-NHCO ou trityl-0-CH2- CH-CH2-NHGO) ; 3.54-3.62 (m, 1H, -0-CH2-CH-CH2-NHGO ou trityl-0-Crî2-GH- CH2-NHCO) ; 5.16 (m, 1H, -O-CH2-GH-CH2-NHCO) ; 7.04 (m, 1H, NHCO, J=5.7Hz) ; 7.25-7.34 (massif, 9H, H aromatiques) ; 7.42-7.45 (massif, 9H, H aromatiques).
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 889 (M+Na+)
Préparation du 3-tétradécylthioacétylamino-2-tétradécylthioacétylthiopropan-1-ol (exemple 20) Le 3-tétradécylthioacétylamino-2-tétradécylthioacétylthio-1 -triphénylméthyloxy- propane (exemple 20d) (187 mg ; 0.21 mmol) est dissous dans l'éther saturé en acide chlrohydrique gaz (12 ml). Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité formé est filtré et rincé par de l'éther diéthylique pour donner le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 52% Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2 ) : 0.48 IR : vCO thioester 1704 ; vCO amide 1646 cm"1 PF : 88.4 à 94.1°C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 6H, CH3, J=6.4Hz) ; 1.26-1.37 (massif, 44H, -CH2) ; 1.55-1.61 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 2.55 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7Hz) ; 2.65 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-, J=7Hz) ; 3.26 (s, 2H, CH2-S-CH2- CONH-) ; 3.27 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.36-3.38 (m, 1H, -0-CH2-CH-CH2- NHCO) ; 3.58-3.64 (m, 1H, -0-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 4.02 (m, 1H, -0-CH2-CH- CH2-NHCO) ; 4.11-4.25 (m, 2H, HO-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 7.34 (m, 1H, NHGO). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 670 (M+Na+)
EXEMPLE 21 : Préparation de 3-tétradécylthioacétylamino-l- tétradécylthiacétyloxy-2"tétradécylthioacétylthiopropane
Le 3-tétradécylthioacétylamino-2-tétradécylthioacétylthiopropan-1 -ol (exemple
20) (64 mg ; 0.10 mmol) est dissous dans le tetrahydrofuranne (7 ml) avant d'ajouter la dicyclohexylcarbodiimide (31 mg ; 0.15 mmol), la dimethylaminopyridine (18 mg ; 0.15 mmol) et l'acide letradecylthioacetique (exemple 1) (43 mg ; 0.15 mmol). Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité de dicyclohexyluree est filtré et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (140 mg) est purifié par flash chromatographie (éluant dichlorométhane) pour donner le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 17%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 98-2 ) : 0.23 IR : vCO ester 1730 cm"1 ; vCO thioester 1671 cm"1 ; vCO amide 1645 cm"1 PF : 59.0 à 63.4°C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.5Hz) ; 1.26-1.37 (massif, 66H, -CH2) ; 1.58-1.63 (m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 2.53 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7.6Hz) ; 2.61-2.67 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-COS- et -CH2-CH2-S-CH2-COO-) ;
3.23 (s, 4H, CH2-S-CH2-CONH- et CH2-S-CH2-COO-) ; 3.24 (s, 2H, CH2-S-CH2-
COS-) ; 3.50-3.57 (m, 1H, -0-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 3.63-3.72 (m, 1 H, -0-CH2-
CH-CH2-NHCO) ; 4.19-4.25 (m, 1H, -0-CH2-CH-CH2-OCO) ; 3.63-3.72 (m, 1H, -
O-CH2-CH-CH2-OCO) ; 5.19 (m, 1H, -0-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 7.20 (m, 1H,
NHCO).
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 940 (M+Na+)
EXEMPLE 22 : Préparation du chlorhydrate de 1-amino-2- tétradécylthioacétyloxy-3-tétradécylthioacétylthiopropane
Préparation du 1-tert-butyloxycarbonylamino-3-iodoprooan-2-ol (exemple 22a) Le 1-[(ferf-butyloxycarbonyl)amino]propane-2,3-diol (exemple 17a) (3.88 g ; 20 mmol) est dissous dans le toluène (250 ml) avant d'ajouter l'imidazole (1.73 g ; 25 mmol), la triphénylphosphinè (6.65 g ; 25 mmol) et l'iode (5.15 g ; 20 mmol) dans cet ordre. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 17 heures et 0.5 équivalents d'imidazole, de triphénylphosphinè et d'iode sont ajoutés. Après 21 heures de réaction, une solution saturée en sulfite de sodium est ajoutée jusqu'à décoloration totale du milieu réactionnel. Les phases sont décantées et la phase aqueuse est extraite 2 fois par du toluène. Les phases organiques regroupées sont lavées par une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées et le solvant évaporé. Le résidu obtenu (11.02 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) pour donner le composé souhaité sous forme de pâte jaune qui est rapidement remis en réaction. Rendement : 41 % Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.24 IR : vNH amide 3387 cm"1 ; vCO carbamate 1678 cm"1 Préparation du 3-acétylthio-1-tert-butyloχycarbonylaminooropan-2-ol (exemple 22b)
Le 1-(ferf-butyloxycarbonylamino)-3-iodopropan-2-ol (exemple 22a) (2 g ; 6.64 mmol) et le thioacétate de potassium (0.948 g ; 8.30 mmol) sont dissous dans l'acétone (30 ml) et le milieu est porté à reflux pendant 16 heures. Le solvant est évaporé sous vide. Le résidu obtenu est repris par de l'éther diéthylique puis filtré sur Célite® et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (1.69 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 98-2) puis repurifié par flash chromatographie (éluant dichlorométhane) pour donner le composé souhaité sous forme d'huile jaune. Rendement : 27%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5 ) : 0.31
IR : vNH amide 3367 cm"1 ; vCO thioester 1744 cm"1 ; vCO carbamate 1697 cm"1 RMN (1H, GDGI3) : 1.26 (m, 9H, CH3 (boc)) ; 2.37 (s, 3H, COGH3) ; 3.04 (m, 1H, - NH-CH2-GH-CH2-S- ou -NHGH2-CH-GH2-S-) ; 3.24 (m, 1 H, -NH-CH2-GH-GH2-S- ou -NHCH2-GH-CH2-S-) ; 3.30-3.41 (m, 2H, -NH-GH2-GH-GH2-S- ou -NHCH2- GH-CH2-S-) ; 4.86 (si, 1H, OH) ; 4.96 (m, 1H, -NH-CH2-CM-GH2-S-).
Préparation du 1-tert-hutyloxycarbonylamino-3-mercaotθDropan-2-ol (exemple 22c)
A une solution de potasse à 20% (3.49 ml ; 12.31 mmol) dans le méthanol, désoxygénée par un courant d'azote, est ajouté le 3-acétylthio-1-tert- butyloxycarbonylaminopropan-2-ol (exemple 22b) (0.307 g ; 1.23 mmol) dilué dans un minimum de méthanol (7 ml). Le milieu est maintenu sous azote et laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le milieu réactionnel est acidifié à pH6 par de l'acide acétique puis concentré à sec. Le résidu obtenu est repris par de l'eau est extrait par du dichlorométhane puis la phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et concentrée. Le résidu huileux obtenu est utilisé sans autre purification et immédiatement remis en réaction.
Rendement : 78% Rf (dichlorométhane-actétate d'éthyle) : 0.07
Préparation du 1 -tert-butyloxycarbonylamino-2-tétradécylthioacétyloxy-3- tétradécylthioacétylthiooropane (exemple 22d) Le 1-(te/f-butyloxycarbonylamino)-3-mercaptopropan-2-ol (exemple 22c) (0.200 g ; 96 mmol) est dissous dans le dichlorométhane (50 ml) avant d'ajouter la dicyclohexylcarbodiimide (0.398 g ; 1.93 mmol), la dimethylaminopyridine (0.236 g ; 1.93 mmol) et l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1) (0.557 g ; 1.93 mmol). Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité de dicyclohexyluree est filtré, rincé au dichlorométhane et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (1.2 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane) pour donner le composé souhaité sous forme de pâte blanche. Rendement : 47% Rf (dichlorométhane) : 0.26
IR : vNH amide 3314 cm"1 ; vCO ester, amide et thioester 1682 à 1744 cm"1 RMN (1H, GDGI3) : 0.89 (t, 6H, CH3, J=6.5Hz) ; 1.27 (massif, 40H, CH2) ; 1.45 (massif, 9H, CH3 (BOC)) ; 1.56-1.63 (m, 4H, -CH2-CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 2.65 (m, 4H, -CH2-GH2-S-GH2-GO-) ; 2.92 (s, 4H, -GH2-S-CH2-GO-) ; 2.96 (m, 4H, - CH2-S-GH2-CO-) ; 3.24-3.40 (m, 2H, -NH-CM2-GH-CH2-S- ou -NHGH2-GH-CH2- S-) ; 3.44-3.51 (m, 2H, -NH-CH2-GH-CH2-S- ou -NHGH2-CH-GH2-S-) ; 4.91 (m, 1H, -NH-CH2-CH-CH2-S-) ; 5.19 (m, 1 H, NHGO). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 770 (M+Na+)
Préparation du chlorhydrate de 1-amino-2-tétradécylthioacétyloxy-3- tétradécylthioacétylthi propane (exemple 22)
Le 1-(tert-butoxycarbonylamino)-2-tétradécylthioacétyloxy-3-tétradécylthioacétyl- thiopropane (exemple 22d) (300 mg ; 0.40 mmol) est dissous dans de l'éther diéthylique saturé en acide chiorhydrique gaz (70 ml) et le milieu réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 72 heures. Le précipité formé est filtré, rincé par de l'éther diéthylique puis séché pour fournir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 42%
IR : vCO ester 1733 cm"1 ; vCO thioester 1692 cm"1 PF : 82°C (décomp)
RMN (1H, CDCI3) : 0.86 (t, 6H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.24 (massif, 44H, -CH2) ; 1.52 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 2.52-2.62 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 3.07- 3.15 (massif, 4H, -S-CH2-CH-CH2-NH2) ; 3.40 (s, 2H, CH2-S-CH2-COO-) ; 3.61 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 5.12 (m, 1H, -S-CH2-CH-CH2-NH2) ; 8.01 (m, 3H, -
EXEMPLE 23 : Préparation de 1-tétradécylthioacétylamino-2- tétradécylthiacétyloxy-3-tétradécylthioacétylthiopropane
Le chlorhydrate de 3-amino-2-tétradécylthioacétyloxy-1-tétradécylthioacétyl- thiopropane (exemple 22) (100 mg ; 0.15 mmol) et l'acide tetradecylthioacetique (exemple 1) (63 mg ; 0.22 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (30 ml) à 0°C avant d'ajouter la triéthylamine (0.044 ml), la dicyclohexylcarbodiimide (60 mg ; 0.29 mmol) et l'hydroxybenzotriazole (30 mg ; 0.22 mmol). Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 1 heure puis ramené à température ambiante pendant 48 heures. Le précipité de dicyclohexyluree est filtré et rincé par du dichlorométhane et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (263 mg) est purifié par flash chromatographie (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 98-2) pour donner le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 98%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5 ) : 0.38 IR : vNH amide 3340 cm"1 ; vCO ester 1727 cm"1 ; vCO amide et thioester 1655 et 1669 cm"1
PF : 63.9 à 67.1°C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.2Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2) ; 1.54- 1.66 (m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 2.52-2.67 (m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 3.08 (m, 1H, -S-CH2-CH-CH2-NHCO ou -S-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 3.21 (s, 2H, CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.23 (s, 2H, CH2-S-CH2-COO-) ; 3.27 (m, 1H, -S-CH2-CH- CH2-NHCO ou -S-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 3.43 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.50 (m, 1H, -S-CH2-CH-CH2-NHCO ou -S-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 3.62 (m, 1H, -S- CH2-CH-CH2-NHCO ou -S-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 5.06 (m, 1H, -COS-CH2-CH-
CH2-NHCO) ; 7.24 (t, 1 H, -NHCO, J=6.7Hz)
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 918 (M+H+) ; M+23 = 940 (M+Na+)
EXEMPLE 24 : Méthode de préparation des composés de formule l\) selon l'invention.
Pour conduire les expériences in vitro décrites dans les exemples suivants, les composés selon l'invention ont été préparés sous forme d'une emulsion telle que décrite ci-après.
L'émulsion comprenant un composé selon l'invention et de la phosphatidylcholine (PC) est préparée selon le protocole de Spooner et al. (Spooner, Clark et al. 1988). Le composé selon l'invention est mélangé à la PC selon un rapport 4:1 (w/w) dans du chloroforme, la mixture est séchée sous azote, puis évaporée toute la nuit sous vide, la poudre qui en résulte est reprise par 0,16 M de chlorure de potassium contenant 0,01 M d'EDTA puis les particules lipidiques sont dispersées par ultra-sons pendant 30 minutes à 37°C. Les liposomes formés sont ensuite séparés par ultracentrifugation (ultracentrifugeuse XL 80, Beckman Coulter, Villepinte, France) à 25000 tr/m pendant 45 minutes pour récupérer les liposomes dont la taille est supérieure à 100 nm et se rapproche de celle des chylomicrons. Des liposomes constitués uniquement de PC sont préparés en parallèle pour servir de témoin négatif. La composition des liposomes en composés selon l'invention est estimée en utilisant le kit de dosage enzymocolorimétrique des triglycérides. Le dosage est effectué contre une gamme standard, préparée grâce au calibrateur des lipides CFAS (Réf. N° 759350, Boehringer Mannheim GmbH, Allemagne). La gamme standard a été construite de 16 à 500 μg/ml. 100 μl de chaque dilution d'échantillon ou de gamme étalon sont déposés par puits d'une plaque de titration (96 puits). Ensuite 200 μl de réactifs triglycérides (Réf. 701912, Boehringer Mannheim GmbH, Allemagne) sont rajoutés dans chaque puits, et l'ensemble de la plaque est incubé pendant 30 min. à 37°C. La lecture des Densités Optiques (DO) est effectuée à 492 nm sur le spectrophotomètre. Les concentrations en triglycérides de chaque échantillon sont calculées après construction de la courbe étalon selon une fonction linéaire y=ax+b, où y représente les DO et x les concentrations en triglycérides.
Les liposomes contenant les composés selon l'invention, ainsi préparés sont utilisés dans les expériences in vitro décrites dans les exemples 26, 27 et 28.
EXEMPLE 25 : Evaluation des propriétés antioxydantes des composés selon l'invention
A-/Protection de l'oxydation des LDL par le cuivre :
L'oxydation des LDL est une modification importante et joue un rôle prépondérant dans la mise en place et le développement de l'athérosclérose (Jurgens, Hoff et al. 1987). Le protocole suivant permet la mise en évidence dés propriétés antioxydantes des composés. Sauf mention différente, les réactifs proviennent de chez Sigma (St Quentin, France).
Les LDL sont préparés suivant la méthode décrite par Lebeau et al. (Lebeau,
Furman et al. 2000). Les solutions de composés à tester sont préparées à 10"2 M dans de l'éthanol et diluées dans du PBS pour avoir des concentrations finales allant de 0,1 à 100 μM pour une concentration totale d'éthanol de 1 % (v/v).
Avant l'oxydation, l'EDTA est retiré de la préparation de LDL par dialyse. L'oxydation a ensuite lieu à 30°C en ajoutant 100 μl d'une solution à 16,6 μM de sulfate de cuivre à 800 μL de LDL (125 μg de protéines par ml) et 100 μL d'une solution du composé à tester. La formation de diènes, l'espèce à observer, se mesure par densité optique à 234 nm dans les échantillons traités avec les composés en présence ou en absence de cuivre. La mesure de la densité optique à 234 nm est réalisée toutes les 10 minutes pendant 8 heures à l'aide d'un spectrophotomètre thermostaté (Kontron Uvikon 930). Les analyses sont réalisées en triplicata. Nous considérons que les composés ont une activité antioxydante lorsqu'ils induisent un décalage de phase par rapport à l'échantillon témoin. Les inventeurs mettent en évidence que les composés selon l'invention retardent l'oxydation des LDL (induite par le cuivre), ceci indiquant que les composés selon l'invention possèdent un caractère antioxydant intrinsèque. Un exemple de résultats obtenus avec des composés selon l'invention est présenté dans la figure 2.
La figure 2 montre que les composés selon l'invention Ex 2, 4, 5, 6 et 11, possèdent des propriétés antioxydantes intrinsèques. La figure 2a montre que les composés selon l'invention induisent un décalage de la lag phase de plus de 13% pour le composé Ex 2 jusqu'à 34,3% pour le composé Ex 4. Les composés selon l'invention ne semblent pas modifier la vitesse d'oxydation (voir figure 2b) ni la quantité de diènes formés (voir figure 2c).
B-/Evaluation de la protection conférée par les composés selon l'invention vis-à- vis de la peroxydation lipidique :
Les composés selon l'invention, testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23. La mesure de l'oxydation des LDL est réalisée par la méthode des TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive Substances).
Selon le même principe que celui décrit précédemment, les LDL sont oxydés avec du sulfate de cuivre et la peroxydation lipidique est déterminée de la manière suivante : Les TBARS sont mesurés à l'aide d'une méthode spectrophotométrique, l'hydroperoxydation lipidique est mesurée en utilisant l'oxydation peroxyde-lipide dépendante de l'iodure en iode. Les résultats sont exprimés en nmol de malonodialdehyde (MDA) ou en nmol d'hydroperoxyde par mg de protéines. Les résultats obtenus précédemment, en mesurant l'inhibition de la formation de diènes conjugués, sont confirmés par les expériences de mesure de peroxydation lipidique des LDL. Les composés selon l'invention, protègent donc également de manière efficace les LDL contre la peroxydation lipidique induite par le cuivre (agent oxydant). Exemple 26 : Mesure des propriétés antioxydantes des composés selon l'invention sur des cultures de cellules
A-/Protocole de culture :
Les lignées cellulaires utilisées pour ce type d'expériences sont de type neuronales, neuroblastomes (humains) et cellules PC12 (rat). Les cellules PC12 ont été préparées à partir d'un pheochromocytome de rat et sont caractérisées par Greene et Tischler (Greene and Tischler 1976). Ces cellules sont couramment utilisées pour des études de différenciation neuronale, transduction du signal et mort neuronale. Les cellules PC12 sont cultivées comme précédemment décrit (Farinelli, Park et al. 1996), dans du milieu complet RPMI (Invitrogen) complémenté avec 10% de sérum de cheval et 5% de sérum de veau fœtal.
Des cultures (primaires) de cellules endothéliales et de muscles lisses sont également utilisées. Les cellules sont commandées chez Promocell (Promocell GmBH, Heidelberg) et sont cultivées selon les indications du fournisseur. Les cellules sont traitées avec différentes doses de composés selon l'invention de 5 à 100 μM pendant 24 heures. Les cellules sont alors récupérées et l'augmentation de l'expression des gènes d'intérêt est évaluée par PGR quantitative.
B-/Mesure des ARMm : Les ARNm sont extraits des cellules en culture traitées ou non avec les composés selon l'invention. L'extraction est réalisée à l'aide des réactifs du kit Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) selon les indications du fournisseur. Les ARNm sont ensuite dosés par spectrométrie et quantifiés par RT-PCR quantitative à l'aide du kit Light Cycler Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche) sur un appareil Light Cycler System (Roche, France). Des paires d'amorces spécifiques des gènes de la Super Oxyde Dismutase (SOD), de la Catalase et de la Glutathion Peroxydase (GPx), enzymes anti-oxydantes, sont utilisées comme sondes. Des paires d'amorces spécifiques des gènes β- actine et cyclophiline sont utilisées comme sondes témoin. L'augmentation de l'expression des ARNm, mesurée par RT-PCR quantitative, des gènes des enzymes antioxydantes est mise en évidence dans les différents types cellulaires utilisés, lorsque les cellules sont traitées avec les composés selon l'invention.
C-/Contrôle du stress oxydatif :
Mesure des espèces oxydantes dans les cellules en culture : Les propriétés antioxydantes des composés sont également évaluées à l'aide d'un indicateur fluorescent dont l'oxydation est suivie par l'apparition d'un signal fluorescent. La diminution d'intensité du signal fluorescent émis est mesurée dans les cellules traitées avec les composés de la manière suivante : les cellules PC12 cultivées comme précédemment décrit (plaque noire 96 puits fonds transparent, Falcon) sont incubées avec des doses croissantes de peroxyde d'hydrogène (0,25 mM - 1 mM) dans du milieu sans sérum pendant 2 et 24 heures. Après l'incubation, le milieu est enlevé et les cellules sont incubées avec une solution de diacétate de dichlorodihydrofluorescéine (DCFDA, Molecular Probes, Eugène, USA) 10 μM dans du PBS pendant 30 min à 37°G et dans une atmosphère contenant 5% d'acide carbonique. Les cellules sont ensuite rincées avec du PBS. La détection de la fluorescence émise par l'indicateur de l'oxydation est mesurée à l'aide d'un fluorimètre (Tecan Ultra 384) à une longueur d'onde d'excitation de 495 nm et une longueur d'onde d'émission de 535 nm. Les résultats sont exprimés en pourcentage de protection par rapport au témoin oxydé.
L'intensité de fluorescence est plus faible dans les cellules incubées avec les composés selon l'invention que dans les cellules non traitées. Ces résultats indiquent que les composés selon l'invention favorisent l'inhibition de la production d'espèces oxydantes dans des cellules soumises à un stress oxydatif. Les propriétés antioxydantes décrites précédemment sont également efficaces pour induire une protection antiradicalaire dans des cellules en culture. D-/Mesure de la peroxydation lipidique :
Les différentes lignées cellulaires (modèles cellulaires cités précédemment) ainsi que les cellules en culture primaire sont traitées comme précédemment. Le surnageant des cellules est récupéré après le traitement et les cellules sont lysées et récupérées pour la détermination de la concentration protéique. La détection de la peroxydation lipidique est déterminée de la manière suivante : la peroxydation lipidique est mesurée à l'aide d'acide thiobarbiturique (TBA) qui réagit avec la lipoperoxydation des aldéhydes tel que le malonodialdéhyde (MDA). Après les traitements, le surnageant dès cellules est collecté (900 μl) et 90 μl d'hydroxytoluène butylé y sont ajoutés (Moriiere, Moysan et al. 1991). 1 ml d'une solution de TBA à 0,375% dans 0.25M d'acide chiorhydrique contenant 15% d'acide trichloroacétique est également ajouté aux milieux réactionnels. Le mélange est chauffé à 80°C pendant 15 min, refroidit sur glace et la phase organique est extraite avec du butanol. L'analyse de la phase organique se fait par spectrofluorométrie (?exc=515 nm et ?em=550 nm) à l'aide du spectrofluorimètre Shimazu 1501 (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japon). Les TBARS sont exprimés en équivalents MDA en utilisant comme standard le tétraéthoxypropane. Les résultats sont normalisés par rapport au contenu en protéines. La diminution de la peroxydation lipidique observée dans les cellules traitées avec les composés selon l'invention confirme les résultats obtenus précédemment.
Les composés selon l'invention présentent avantageusement des propriétés antioxydantes intrinsèques qui permettent de ralentir et/ou d'inhiber les effets d'un stress oxydatif. Les inventeurs montrent également que les composés selon l'invention sont capables d'induire l'expression des gènes d'enzymes antioxydantes. Ces caractéristiques particulières des composés selon l'invention permettent aux cellules de lutter plus efficacement contre le stress oxydatif et donc d'être protégées vis-à-vis des dommages induits par les radicaux libres.
Exemple 27 : Evaluation de l'activation des PPARs in vitro par les composés selon l'invention Les récepteurs nucléaires membres de la sous-famille des PPARs qui sont activés par deux classes majeures de composés pharmaceutiques, les fibrates et les glitazones, abondamment utilisées en clinique humaine pour le traitement des dyslipidemies et du diabète, jouent un rôle important dans l'homéostasie lipidique et glucidique. Les données expérimentales suivantes montrent que les composés selon l'invention activent PPARα in vitro.
L'activation des PPARs est évaluée in vitro dans des lignées de type fibroblastique RK13 ou dans une lignée hépatocytaire HepG2, par la mesure de l'activité transcriptionnelle de chimères constituées du domaine de liaison à l'ADN du facteur de transcription Gal4 de levure et du domaine de liaison du ligand des différents PPARs. L'exemple présenté ci-dessous est donné pour les cellules HepG2.
A-/Protocoles de culture
Les cellules HepG2 proviennent de l'EGAGG (Porton Down, UK) et sont cultivées dans du milieu DMEM supplémenté de 10% vol/vol sérum de veau foetal, 100 U/ml pénicilline (Gibco, Paisley, UK) et 2 mM L-Glutamine (Gibco,
Paisley, UK). Le milieu de culture est changé tous les deux jours. Les cellules sont conservées à 37°C dans une atmosphère humide contenant 5% d'acide carbonique et 95% d'air.
B-/Description des plasmides utilisés en transfection
Les plasmides pG5TkpGL3, pRL-CMV, pGal4-hPPARα, pGal4-hPPARγ et pGal4-f ont été décrits par Raspé et al. (Raspe, Madsen et al. 1999). Les constructions pGal4-mPPARα et pGal4-hPPARβ ont été obtenues par clonage dans le vecteur pGal4-f de fragments d'ADN amplifiés par PCR correspondants aux domaines DEF des récepteurs nucléaires PPARα de souris et PPARβ humain respectivement.
C-/Transfection Les cellules HepG2 sont ensemencées dans des boîtes de culture de 24 puits à raison de 5x104 cellules/puits, sont transfectées pendant 2 heures avec le plasmide rapporteur pG5TkpGL3 (50 ng/puits), les vecteurs d'expression pGal4-f , pGal4-mPPARα, pGal4-hPPARα, pGal4-hPPARγ ou pGal4-hPPARβ (100 ng/puits) et le vecteur de contrôle de l'efficacité de transfection pRL-CMV (1 ng/puits) suivant le protocole décrit précédemment (Raspe, Madsen et al. 1999) et incubées pendant 36 heures avec les composés testés. A l'issue de l'expérience, les cellules sont lysées (Gibco, Paisley, UK) et les activités luciférase sont déterminées à l'aide du kit de dosage Dual-Luciferase™ Reporter Assay System (Promega, Madison, Wl, USA) selon la notice du fournisseur. Le contenu en protéines des extraits cellulaires est ensuite évalué à l'aide du kit de dosage Bio-Rad Protein Assay (Bio-Rad, Mϋnchen, Allemagne) selon la notice du fournisseur.
Les inventeurs mettent en évidence une augmentation de l'activité luciférase dans les cellules traitées avec les composés selon l'invention et transfectées avec le plasmide pGal4-hPPARα. Cette induction de l'activité luciférase indique que les composés selon l'invention, sont des activateurs de PPARα. Un exemple de résultats obtenus avec des composés selon l'invention est présenté dans la figure 3.
Figure 3 : les cellules HepG2, transfectées avec les plasmides du système Gal4/PPARα, sont incubées avec différentes concentrations (5, 15, 50 et 100 μM) des composés selon l'invention (Ex 2, Ex 4, Ex 5, Ex 6, Ex 11 ) pendant 24h ainsi qu'avec différentes concentrations de véhicule (PC) notées 1 , 2, 3, 4 à titre de contrôles respectivement pour les concentrations 5, 15, 50 et 100 μM des composés selon l'invention (suivant le rapport 4 :1 w/w décrit dans l'exemple 24 (Méthode de préparation des composés de formule (I) selon l'invention)). Les résultats sont représentés par le facteur d'induction (signal luminescent des cellules traitées divisé par le signal luminescent des cellules non traitées) en fonction des différents traitements. Plus le facteur d'induction est élevé meilleure est la propriété d'agoniste pour PPARα. Les résultats montrent que le composé selon l'invention Ex 2 favorise l'induction du signal luminescent d'un facteur maximal de 19,8 à 50 μM, de 19,2 à 100 μM, de 7,7 à 15 μM et de 1,5 à 5 μM. Le composé selon l'invention Ex 5 induit également une augmentation du facteur d'induction avec un effet dose de 10,5 à 100 μM, 7 à 50 μM, 2,5 à 15 μM et 1 ,2 à 5 μM. Le composé selon l'invention Ex 6 induit aussi une augmentation du signal luminescent, révélateur d'une activité sur le récepteur nucléaire PPARα. Les facteurs d'induction pour le composé Ex 6 sont de 14,5 à 100 μM, 9,6 à 50 μM, 2,2 à 15 μM et 1,1 à 5 μM. En revanche lorsque les cellules sont incubées avec le véhicule (liposome de PC) aucune induction significative n'est observée. Ces résultats montrent que les composés selon l'invention testés possèdent, de manière significative, la propriété de ligand vis à vis de PPARα et permettent aussi son activation au niveau transcriptionnel.
Exemple 28 : évaluation des propriétés anti-inflammatoires des composés selon l'inver
La réponse inflammatoire apparaît dans de nombreux désordres neurologiques, comme, les ischémies cérébrales.De plus, l'inflammation est l'un des facteurs importants de la neurodégênérescence. Lors d'accidents cérébraux, une des premières réactions des cellules de la glie est de libérer des cytokines et des radicaux libres. La conséquence de cette libération de cytokines et de radicaux libres est une réponse inflammatoire au niveau cérébral qui peut mener à la mort des neurones (Rothwell 1997). Les lignées cellulaires et les cellules primaires sont cultivées comme décrit précédemment.
Le lipopolysaccharide (LPS), endotoxine bactérienne (Escherichia coli 0111 :B4) (Sigma, France) est reconstitué dans de l'eau distillée et conservé à 4°C. Les cellules sont traitées avec une concentration de LPS de 1 μg/ml pendant 24 heures. Pour éviter toute interférence avec d'autres facteurs, le milieu de culture des cellules est totalement changé. Le TNF-α est un facteur important de la réponse inflammatoire à un stress (oxydant par exemple). Pour évaluer la sécrétion de TNF-α en réponse à une stimulation par des doses croissantes de LPS, le milieu de culture des cellules stimulées est prélevé et la quantité de TNF-α est évaluée avec un kit ELISA- TNF-α (Immunotech, France). Les échantillons sont dilués 50 fois afin d'être en adéquation avec la gamme étalon (Chang, Hudson et al. 2000). La propriété anti-inflammatoire des composés selon l'invention est caractérisée de la manière suivante : le milieu de culture des cellules est totalement changé et les cellules sont incubées avec les composés à tester pendant 2 heures. Après cette incubation, du LPS est rajouté au milieu de culture à une concentration finale de 1 μg/ml. Après 24 heures d'incubation, le surnageant de cellules est récupéré et stocké à -80°C lorsqu'il n'est pas traité directement. Les cellules sont lysées et la quantité de protéines est mesurée, à l'aide du kit de dosage Bio-Rad Protein Assay (Bio-Rad, Munich, Allemagne) selon la notice du fournisseur.
La mesure de la diminution de sécrétion de TNF-α favorisée par le traitement avec les composés testés est exprimée en pg/ml/μg de protéine et rapportée en pourcentage par rapport au témoin. Ceci montre que les composés selon l'invention possèdent des propriétés anti-inflammatoires.
Exemple 29 : Evaluation des effets neuro-protecteurs des composés selon l'invention dans un modèle d'isehémie-reperfusion cérébral
A-/Modèle Prophylactique : 1 / Traitement des animaux
1.1 Animaux et administration des composés
Des rats Wistar de 200 à 350 g ont été utilisés pour cette expérience.
Les animaux sont maintenus sous un cycle lumière/obscurité de 12 h à une température de 20±3°C. Les animaux ont un accès libre à l'eau et à la nourriture. La prise de nourriture et la prise de poids sont enregistrées.
Les animaux sont traités par gavage avec les composés selon l'invention
(600 mg/kg/jour) suspendus dans un véhiculé (carboxyméthylcellulose 0,5% (CMC) et Tween 0,1%) ou traités avec le véhicule susmentionné, pendant 14 jours avant l'induction de l'ischémie par occlusion de l'artère cérébrale moyenne. La carboxyméthylcellulose utilisée est un sel de sodium de carboxyméthylcellulose de viscosité moyenne (Réf. C4888, Sigma-aldrich, France). Le Tween utilisé est le Polyoxyethylenesorbitan Monooleate (Tween 80, Réf. P8074, Sigma-aldrich, France).
1.2 Induction d'une ischémie-reperfusion par occlusion intraluminale de l'artère moyenne cérébrale : Les animaux sont anesthésies à l'aide d'une injection intra-péritonéale de 300 mg/kg d'hydrate de chloral. Une sonde rectale est mise en place et la température du corps est maintenue à 37±0,5°C. La pression artérielle est mesurée au cours de toute l'expérience. Sous un microscope chirurgical, la carotide droite est mise à jour à l'aide d'une incision cervicale médiale. L'artère pterygopalatine est ligaturée à son origine et une artériotomie est réalisée dans l'artère carotide externe afin d'y glisser un mono-filament de nylon. Ce filament est alors doucement avancé dans l'artère carotide commune puis dans l'artère carotide interne afin d'obturer l'origine de l'artère cérébrale moyenne. Après 1 heure, le filament est retiré pour permettre la reperfusion.
2/ Mesure du volume de l'infarctus cérébral :
24 heures après la reperfusion, les animaux préalablement traités ou non traités avec les composés selon l'invention sont tués par une overdose de pentobarbital.
Les cerveaux sont rapidement congelés et sectionnés. Les sections sont colorées au violet Cresyl. Les zones non colorées des sections cérébrales ont été considérées comme lésées par l'infarctus. Les aires (de l'infarctus et des deux hémisphères) sont mesurées, les volumes de l'infarctus et des deux hémisphères sont calculés et le volume de l'infarctus corrigé est calculé par la formule suivante (Volume de l'infarctus corrigé = Volume de l'infarctus - (volume de l'hémisphère droit - volume de l'hémisphère gauche)) pour compenser l'œdème cérébral. L'analyse des coupes de cerveaux d'animaux traités avec les composés selon l'invention révèle une nette diminution du volume de l'infarctus par rapport aux animaux non traités. Lorsque les composés selon l'invention sont administrés aux animaux avant l'ischémie (effet prophylactique), ils sont capables d'induire une neuroprotection.
3/ Mesure de l'activité des enzymes anti-oxydantes :
Les cerveaux des rats sont congelés, écrasés et réduits en poudre puis resuspendus dans une solution saline. Les différentes activités enzymatiques sont ensuite mesurées comme décrit par les auteurs suivants : superoxide dismutase (Flohe and Otting 1984) ; glutathion peroxidase (Paglia and Valentine 1967); glutathion reductase (Spooner, Delides et al. 1981) ; glutathion-S-transferase (Habig and Jakoby 1981) ; catalase (Aebi 1984). Les différentes activités enzymatiques mentionnées ci-dessus sont augmentées dans les préparations de cerveaux des animaux traités avec les composés selon l'invention.
B-/Modèle curatif ou traitement de la phase aiguë :
1/ Induction d'une ischémie-reperfusion par occlusion intralumm' ale de l'artère moyenne cérébrale.
Des animaux tels que décrits précédemment sont utilisés pour cette expérience. Les animaux sont anesthésies à l'aide d'une injection intra-péritonéale de 300 mg/kg d'hydrate de chloral. Une sonde rectale est mise en place et la température du corps est maintenue à 37±0,5°C. La pression artérielle est mesurée au cours de toute l'expérience.
Sous un microscope chirurgical, la carotide droite est mise à jour à l'aide d'une incision cervicale médiale. L'artère pterygopalatine a été ligaturée à son origine et une artériotomie est réalisée dans l'artère carotide externe afin d'y glisser un mono-filament de nylon. Ce filament est ensuite doucement avancé dans l'artère carotide commune puis dans l'artère carotide interne afin d'obturer l'origine de l'artère cérébrale moyenne. Après 1 heure, le filament est retiré pour permettre la reperfusion. 2/ Traitement des animaux :
Les animaux ayant subi une ischémie-reperfusion préalable sont traités par les composés selon l'invention par voie orale (tel que déjà décrit dans un véhicule CMC + Tween) une ou plusieurs fois après la reperfusion (600mg/kg/j ou 2 administrations de 300mg/kg/j).
3/ Mesure du volume de l'infarctus cérébral :
24, 48 ou 72 heures après la reperfusion, les animaux préalablement traités ou non traités avec les composés selon l'invention sont tués par une overdose de pentobarbital.
Les cerveaux sont rapidement congelés et sectionnés. Les sections sont colorées au violet Cresyl. Les zones non colorées des sections cérébrales sont considérées comme lésées par l'infarctus. Les aires (de l'infarctus et des deux hémisphères) sont mesurées, les volumes de l'infarctus et des deux hémisphères sont calculés et le volume de l'infarctus corrigé est calculé par la formule suivante (Volume de l'infarctus corrigé = Volume de l'infarctus - (volume de l'hémisphère droit - volume de l'hémisphère gauche)) pour compenser l'œdème cérébral. Dans les cas d'un traitement curatif (traitement de la phase aiguë), les animaux traités avec les composés selon l'invention ont des dommages au niveau cérébral réduits par rapport aux animaux non traités. En effet le volume de l'infarctus est diminué lorsque les composés selon l'invention sont administrés durant 24, 48 ou 72 heures après l'ischémie-reperfusion.
Les composés selon l'invention ont donc une activité neuroprotectrice lors d'un traitement consécutif à une ischémie aiguë.
L'utilisation des composés selon l'invention, dans différents modèles expérimentaux, montre que ces nouveaux composés possèdent une activité antioxydante intrinsèque, capable de retarder et de réduire les effets d'un stress oxydatif. De plus, ils induisent l'expression des gènes des enzymes antioxydantes, ce qui associé à leur caractère antioxydant permet de renforcer les protections anti-radicalaires. Par ailleurs, les composés selon l'invention possèdent un pouvoir anti-inflammatoire et la propriété d'activer le récepteur nucléaire PPARα.
Enfin, l'utilisation des composés selon l'invention dans un modèle d'ischémie- reperfusion chez l'animal montre l'effet bénéfique sur la neuroprotection aussi bien avec un traitement préventif que curatif.
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Claims

REVENDICATIONS
1. Composés de formule générale (I) :
(D
dans laquelle :
G2 et G3 représentent indépendamment un atome d'oxygène, un atome de soufre ou un groupe N-R4, G2 et G3 ne pouvant représenter de façon simultanée un groupe N-R4,
o R et R4 représentent indépendamment un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbone,
R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe CO-R5 ou un groupe de formule CO- (CH )2n+ι-X-R6, l'un au moins des groupes R1, R2 ou R3 étant un groupe de formule CO-(CH2)2n+ι-X-R6,
R5 est un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comprenant éventuellement un groupement cyclique, dont la chaîne principale comporte de 1 à 25 atomes de carbone, • X est un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO ou un groupe S02,
• n est un nombre entier compris entre 0 et 11 ,
• R6 est un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comprenant éventuellement un groupe cyclique, dont la chaîne principale comporte de 3 à 23 atomes de carbone, de préférence 10 à 23 atomes de carbone et éventuellement un ou plusieurs hetérogroupes choisis parmi un atome d'oxygène, un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO et un groupe S02,
à l'exclusion des composés de formule (I) dans laquelle G2R2 et G3R3 représentent simultanément des groupes hydroxyle,
leurs isomères optiques et géométriques, leurs racémates, leurs sels, leurs hydrates et leurs mélanges.
2. Composés selon la revendication 1, caractérisés en ce qu' un seul des groupes R1, R2 ou R3 représente un atome d'hydrogène.
3. Composés selon la revendication 1 ou 2, caractérisés en ce que, dans le groupe CO-(GH2)2n+rX-R6, X représente un atome de soufre ou de sélénium et avantageusement un atome de soufre.
4. Composés selon la revendication 1, 2 ou 3, caractérisés en ce que, dans le groupe CO-(CH2)2n+rX-R6, n est compris entre 0 et 3, plus spécifiquement compris entre 0 et 2 et est en particulier égal à 0.
5. Composés selon l'une des revendications précédentes, caractérisés en ce que R6 comporte un ou plusieurs hetérogroupes, de préférence 0, 1 ou 2, plus préférentiellement 0 ou 1, choisis parmi un atome d'oxygène, un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO et un groupe SO2.
6. Composés selon l'une des revendications précédentes, caractérisés en ce que CO-(CH2)2n+ι-X-R6 est le groupe CO-CH2-S-C14H29.
7. Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisés en ce qu'au moins un des groupes R1, R2 et R3 représente un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6 dans lequel X représente un atome de soufre ou de sélénium et de préférence un atome de soufre et ou R6 est un groupe alkyle saturé et linéaire comprenant de 3 à 23 atomes de carbone, préférentiellement 13 à 20 atomes de carbone, de préférence 14 à 17, plus préférentiellement 14 à 16, et encore plus préférentiellement 14 atomes de carbone.
8. Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisés en ce qu'au moins deux des groupes R1, R2 et R3 sont des groupes CO-(CH2)2n+ι-X-R , identiques ou différents, dans lesquels X représente un atome de soufre ou de sélénium, de préférence un atome de soufre.
9. Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisés en ce que G2 représente un atome d'oxygène ou de soufre, de préférence un atome d'oxygène.
10. Composés selon la revendication précédente, caractérisés en ce que R2 représente un groupe de formule CO-(CH2)2n+rX-R6.
11. Composés selon l'une quelconque des revendications 1à 8, caractérisés en ce que :
• G3 est un groupe N-R4 dans lequel R4 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, et G2 est un atome d'oxygène ; et/ou • R2 représente un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6.
12. Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisés en ce que R1, R2 et R3, identiques ou différents, de préférence identiques, représentent un groupe CO-(CH2)2n+ι-X-R6, dans lesquels X représente un atome de soufre ou de sélénium et de préférence un atome de soufre et/ou R6 est un groupe alkyle saturé et linéaire comprenant de 13 à 17 atomes de carbone, de préférence 14 à 17, encore plus préférentiellement 14 atomes de carbone, dans lesquels n est de préférence compris entre 0 et 3, et en particulier égal à 0, plus spécifiquement, R1 , R2 et R3 représentant des groupes CO-CH2-S-C14H29.
13. Composés de formule (I) telle que définie à la revendication 1 , choisis parmi : - 1-tétradécylthioacétylamino-2,3-(dipalmitoyloxy)propane ;
- 3-tétradécylthioacétylamino-1 ,2-(ditétradécylthioacétyloxy)propane ;
- 3-palmitoylamino-1 ,2-(ditétradéeylthioacétyloxy)propane ;
1 ,3-d (tétradécylthioacétylamino)propan-2-ol ; :amino-2-(tétradécylthioacétyloxy) propane; itétradécylthioacétylamino-2-(tétradécylthioacétyloxy)propane ;
1 ,3-d ioléoylamino-2-(têtradécylthioacétyloxy)propane ; 1,3-d itétradécylthioacétylamino-2-(tétradécylthioacétylthio)propane ; et
- 1-tétradécylthioacétylamino-2,3-di(tétradécylthioacétylthio)propane.
14. Composition pharmaceutique comprenant, dans un support pharmaceutiquement acceptable, au moins un composé de formule (I) tel que défini dans l'une des revendications précédentes, y compris un composé de formule (I) dans laquelle les groupes G2R2 et G3R3 représentent simultanément des groupements hydroxyle.
15. Composition pharmaceutique selon la revendication précédente destinée au traitement ou à la prophylaxie des pathologies vasculaires cérébrales et plus particulièrement de l'ischémie cérébrale ou des accidents vasculaires cérébraux.
16. Utilisation d'un composé de formule (I) défini selon l'une des revendications 1 à 13, y compris un composé de formule (I) dans laquelle les groupes G2R2 et G3R3 représentent simultanément des groupements hydroxyle, pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à un traitement préventif ou curatif chez l'homme ou chez l'animal.
17. Utilisation selon la revendication précédente, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique est destinée au traitement et/ou à la prophylaxie de pathologies vasculaires cérébrales et plus particulièrement de l'ischémie cérébrale ou des accidents vasculaires cérébraux.
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