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WO2015121458A2 - Composition comprenant du bifidobacterium animalis ssp. lactis - Google Patents

Composition comprenant du bifidobacterium animalis ssp. lactis Download PDF

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WO2015121458A2
WO2015121458A2 PCT/EP2015/053166 EP2015053166W WO2015121458A2 WO 2015121458 A2 WO2015121458 A2 WO 2015121458A2 EP 2015053166 W EP2015053166 W EP 2015053166W WO 2015121458 A2 WO2015121458 A2 WO 2015121458A2
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WO
WIPO (PCT)
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composition
probiotic
group
lactis
overweight
Prior art date
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PCT/EP2015/053166
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English (en)
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WO2015121458A3 (fr
Inventor
Johan QUINTENS
Jehan LIENART VAN LIDTH DE JEUDE
Corinne Grangette
Bruno Pot
Kassem MAKKI
Isabelle Wolowczuk
Jeanne ALARD
Véronique LEHRTER-VALENTI
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
VESALE PHARMA SA
Original Assignee
VESALE PHARMA SA
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Publication date
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Priority to RU2016133852A priority patent/RU2673341C2/ru
Priority to BR112016018283A priority patent/BR112016018283A2/pt
Priority to US15/118,077 priority patent/US20160354418A1/en
Priority to JP2016551748A priority patent/JP2017506637A/ja
Priority to CA2938790A priority patent/CA2938790A1/fr
Priority to CN201580008081.2A priority patent/CN106535908A/zh
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Publication of WO2015121458A3 publication Critical patent/WO2015121458A3/fr
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    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/92—Oral administration

Definitions

  • the present invention relates to a composition based on at least one probiotic for its use in the curative treatment of body weight gain in overweight humans and / or in the preventive treatment of body weight gain in the body. human being overweight or overweight.
  • the term “overweight” means that the human has an abnormal and / or excessive accumulation of body fat, mainly abdominal, which presents a risk to his health.
  • the term “overweight” also includes the particular and extreme case of the state of obesity in humans.
  • being overweight is meant in the sense of the present invention that humans underwent weight loss and has a weight considered normal (based on BMI or waist / hip) from a period between 3 and 5 years.
  • BMI Body Mass Index
  • WHO defines, based on BMI, the following threshold values for determining whether an adult is overweight or obese:
  • a normal state of weight corresponds to a BMI between 20 and 25;
  • a state of overweight corresponds to a BMI between 25 and 30;
  • a state of obesity corresponds to a BMI equal to or greater than 30.
  • BMI gives no indication as to the distribution of abdominal fat versus subcutaneous fat.
  • This index although it has the advantage of standardizing the classification for both sexes and all age groups of adult individuals, can preferably be interpreted in a complementary manner with another indicator which may be, for example, the measurement of the waist of the individual.
  • an adult male individual with a waist circumference greater than 100 cm is considered to be overweight.
  • This threshold is 88 cm in the adult woman.
  • This parameter can be generalized to all age groups by measuring the waist circumference (A) / hip circumference (H).
  • Overweight is observed for a ratio greater than 1 in the male individual and greater than 0.85 in the female individual.
  • treatment applies in the context of this invention since overweight in humans and in particular human obesity, has been recognized as a disease by the WHO.
  • the term "curative" is intended to mean the action which aims to reduce the body weight of an overweight human and / or to reduce body weight gain in humans. Overweight.
  • the curative treatment therefore involves the action that aims to achieve, preferably during and / or after diet, a body weight considered normal in humans, that is to say with a lower risk to health, in a predetermined range of values, based for example on the BMI, which is between 20 and 25, preferably equal to 22.
  • the curative action is primarily aimed at decreasing the abdominal fat in the individual or at least a decrease in the accumulation of abdominal fat.
  • the term "preventive" is intended to mean the action which aims at stabilizing the body weight of an overweight or overweight human being (i.e. has lost weight) and thus to prevent or limit body weight gain in overweight or overweight humans, preferably during and / or after diet.
  • Preventive treatment also involves the action which aims to maintain, preferably during and / or after diet, a stable body weight, preferably considered normal in humans, within a predetermined constant range of values, based, for example , on BMI (as a reminder, between 20-25), but normal body weight can also be interpreted in light of the A / H ratio of less than 0.85 in the female individual, and less than 1, 00 in the male individual.
  • BMI as a reminder, between 20-25
  • overweight and obesity have reached the proportions of a global epidemic (given that at least 3 million people die each year from overweight or obesity-related diseases) and are no longer limited to rich but now also reach low- and middle-income countries.
  • a high BMI is a factor favoring, on the one hand, the metabolic syndrome which is defined in the context of the present invention as a combination of health risks: high blood pressure, hypertriglyceridemia, low HDL cholesterol, android obesity (eg, abdominal fat accumulation), and elevated blood glucose.
  • These indicators are in fact a basis of definition that is common to the current three main known definitions: that of WHO (published in 1998 and amended in 1999), that of the National Cholesterol Education Program (NCEP-ATPIII) published in 2001, and that of the International Diabetes Federation published in 2005.
  • the metabolic syndrome is reflected in the following indicators, in a non-exhaustive manner: an abnormally high insulin level; type 2 diabetes; hypercholesterolemia (associated with a low level of "good” HDL cholesterol) hypertension a significant increase in body weight gain over time, especially for abdominal obesity hypertriglyceridemia; hepatic steatosis; the development of a systemic inflammatory state; and hypertrophy of adipocytes.
  • the risk of chronic diseases is reflected in the following indicators, in a non-exhaustive way: musculoskeletal disorders, in particular osteoarthritis; or certain types of cancers.
  • WHO World Health Assembly
  • this treatment must be low-binding when it is known that a main reason related to overweight and obesity is the lack of regular dieting associated with sometimes heavy treatment.
  • the present invention is part of a known cause-effect relationship that associates changes in the gut microbiota with the development of obesity (Ley et al., 2006. Nature, 444: 1022-1023; Nadal et al., 2008. Int J. Obes., 33 (7): 758-67).
  • the microbiota has been shown to help keep the host healthy.
  • the balanced state of the microbiota contributes to the regulation of intestinal homeostasis and the immune balance, so that any imbalance of the microbiota is interpreted as contributing to the development of the metabolic syndrome, particularly in individuals with genetic predisposition to develop this syndrome (Parks et al., Cell Metab, 2012).
  • the patent application US20100111915 presents the generic use of a composition of bacterial probiotics as an alternative in the context of the prevention of obesity in children. According to US20100111915, this use is based on the bifidogenic effects of probiotics, although this document does not provide any tangible basis for establishing that the increase in the number of bifidobacteria in the intestine could be the cause of this preventive action. of the appearance of obesity in children.
  • Document US20050112112 proposes the use of a composition of microorganisms generating sugar polymers, which are non-digestible by humans, from monosaccharides and disaccharides present in the gastrointestinal tract, thus reducing de facto absorption of sugars in the body.
  • JP 0306028 also provides an inhibitory action of the absorption by the body of cholesterol, and this, by the use of bifidobacteria combined with chitosan.
  • compositions of the state of the art if it allows a reduction of overweight or obesity and a reduction of the symptoms associated with the metabolic syndrome (we speak for example of remission), it does not allow a long-term maintenance of more than 3 to 5 years (eg healing) of body weight at the desired level of normalcy (ie, corresponding, for example, to a BMI between 20 and 25).
  • the present invention aims to overcome the lack of the state of the art by providing a composition as described in the beginning characterized in that said probiotic is Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149.
  • the composition preferably comprises the probiotic is Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 in the live state.
  • the term "living state” means a concentration of living bacteria in the composition of between 10 8 and 10 13 cfu per gram of composition.
  • this particular probiotic strain exhibits a significant positive action on satiety and also a restoration of the intestinal microbiota associated with the limitation of body weight gain.
  • composition according to the invention allows in particular the curative or preventive treatment of the disturbance of the intestinal microbiota and the inflammatory diseases associated with this disorder in overweight humans.
  • the present composition therefore advantageously targets the curative or preventive treatment of the metabolic syndrome related to overweight in humans.
  • the composition based on Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 has the following effects on the body, which are accompanied by a reduction in body weight gain under a high fat diet, preferably during and / or after a diet, or a stabilization of body weight: an improvement in insulin sensitivity; a reduction in the development of abdominal and subcutaneous fat; a reduction in the size of the adipocytes; a reduction in cellular infiltration of white adipose tissue, in particular by pro-inflammatory macrophages; a reduction of inflammatory markers; a limitation of steatosis of the liver; and a limitation or reduction in the rate of "bad" cholesterol.
  • composition according to the invention comprising at least the probiotic Bifidobacterium animalis ssp. lactis no. LMG P-28149 affects various factors related to overweight.
  • composition according to the invention may further comprise at least one or a combination of at least two probiotic elements, each element being derived from Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 and being selected from the group consisting of cell wall constituents, cell organelles, nucleic acids, cell membrane constituents, and cell metabolites.
  • the constituents of the cell wall are selected from the group consisting of peptidoglycans, proteins, polysaccharides, teichoic acid, or a combination thereof.
  • the metabolites are chosen from the group consisting of organic acids, inorganic acids, proteins, peptides, amino acids, enzymes, lipids, carbohydrates, glycolipids, glycoproteins, vitamins, salts, metals, or a combination thereof.
  • the composition according to the invention comprises butyrate, or at least one of its derivatives, and / or propionate, or at least one of its derivatives, the induction of said butyrate and / or said propionate being favored by Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149.
  • the composition according to the invention comprises at least one additional probiotic, said additional probiotic being chosen from the group consisting of the following probiotics: Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacter, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cyanobacteria, Methanobrevibacterium, Lactobacillus, Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae (non-pathogenic), Faecalibacterium, Bacteroides , Parabacteroides, Prevotella
  • composition according to the invention may furthermore comprise at least one fungus and / or yeast strain, said strain being chosen from the following group: Saccharomyces, Candida, Pichia, Debaryomyces, Torulopsis, Aspergillus, Rhizopus, Mucor, and Penicillium.
  • yeast strain chosen from the following group: Saccharomyces, Candida, Pichia, Debaryomyces, Torulopsis, Aspergillus, Rhizopus, Mucor, and Penicillium.
  • the composition according to the invention comprises a probiotic encapsulation vehicle in which said Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 and optionally said at least one additional probiotic are encapsulated.
  • said fungus and / or said yeast are also encapsulated in said vehicle.
  • the encapsulating vehicle comprises at least one substance selected from the group consisting of alginate, chitosan, pectin, pullulan, gelatin, carrageenan, agar gel or a combination thereof.
  • said at least one substance is a hydrocolloid.
  • the composition according to the invention comprises at least one nutritive source selected from the group consisting of a monosaccharide, a polysaccharide, an amino acid, a peptide, a protein, a vitamin , a yeast extract, a halide salt, an alkali metal or alkaline earth metal, an antioxidant, glycerol, zinc acetate, zinc chloride, zinc lactate, ascorbic acid , citric acid, vegetable oil, milk fat, or a combination thereof.
  • a nutritive source selected from the group consisting of a monosaccharide, a polysaccharide, an amino acid, a peptide, a protein, a vitamin , a yeast extract, a halide salt, an alkali metal or alkaline earth metal, an antioxidant, glycerol, zinc acetate, zinc chloride, zinc lactate, ascorbic acid , citric acid, vegetable oil, milk fat, or a combination thereof.
  • the composition according to the invention is a symbiotic composition comprising at least one prebiotic.
  • said at least one prebiotic is chosen, in a non-limiting manner, from the group consisting of oligosaccharides, fructo-oligosaccharides, galacto-oligosaccharides, xylooligosaccharides, inulin or its derivatives, lactulose or of its derivatives, mannan-oligosaccharides, or a combination thereof.
  • the composition according to the invention comprises a first enteric coating covering said Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 and optionally said at least one additional probiotic.
  • the first enteric coating is selected from the group consisting of ethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, carboxymethyl cellulose, polymers (such as Eudragit®), or a combination thereof.
  • the composition further comprises a second outer coating selected from the group consisting of alginate, chitosan, pectin, pullulan, gelatin, carrageenan, agar gel, cellulose, hemicellulose , ethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, or a combination thereof.
  • composition according to the invention comprises one or more biocompatible excipients.
  • composition according to the invention may be intended for the curative or preventive treatment of excessive body weight gain (that is to say considerably more than the weight gain that accompanies pregnancy) in the pregnant woman or the woman who has given birth or in the man in couvade or having been in couvade.
  • the composition may be in the form of a food composition, a food based on the composition or a dietary supplement comprising Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149, preferably in the living state.
  • the term "food composition” is intended to mean a composition commonly found on the food market (for example, snacks, prepared meals, beverages, etc.). ).
  • the term "food supplement” is intended to mean a foodstuff whose purpose is to provide an addition of nutrients or substances having a nutritional and / or physiological effect.
  • the composition may be provided for use and intake orally, or sublingually, but also respiratory, preferably nasal or bronchial, or rectal.
  • the composition may also be a liquid injectable composition based on at least one element derived from the probiotic and intended to be injected subcutaneously.
  • composition according to the invention may be packaged in the form of tablets, globules, capsules, granules, powders, fluids, liquids, creams or sprays.
  • the composition can be used for the curative or preventive treatment of excessive body weight gain (that is to say largely exceeding the weight gain that accompanies pregnancy) in the pregnant woman or who has given birth or in the man in couvade or having been in couvade.
  • the present invention also relates to a non-therapeutic cosmetic use of a composition comprising at least probiotic, in the overweight or overweight human, said probiotic being Bifidobactehum animalis ssp. lactis No. LMG P-28149.
  • said composition for a non-therapeutic cosmetic use comprises at least one additional probiotic chosen from the group consisting of the following probiotics: Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacter, Deferribacteres, Deinococcus , Thermus, Cyanobacteria, Methanobrevibacterium, Lactobacillus, Peptos eptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae (non-pathogenic), Faecalibacterium, Bacteroides , Parabacteroides, Prevo
  • said composition for a non-therapeutic cosmetic use comprises a strain of fungus and / or yeast selected from the group consisting of Saccharomyces, Candida, Pichia, Debaryomyces, Torulopsis, Aspergillus, Rhizopus, Mucor , and Penicillium.
  • said Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 and optionally said at least one additional probiotic are encapsulated in an encapsulation vehicle.
  • said encapsulation vehicle comprises at least one substance chosen from the group consisting of alginate, chitosan, pectin, pulluian, gelatin, carrageenan, agar gel or a combination thereof.
  • said composition for a non-therapeutic cosmetic use comprises at least one nutritive source selected from the group consisting of a monosaccharide, a polysaccharide, an amino acid, a peptide, a protein, a vitamin, a yeast extract, an alkali metal or alkaline earth metal halide salt, an antioxidant, glycerol, zinc acetate, zinc chloride, zinc lactate, ascorbic acid, citric acid, vegetable oil, milk fat, or a combination thereof.
  • a nutritive source selected from the group consisting of a monosaccharide, a polysaccharide, an amino acid, a peptide, a protein, a vitamin, a yeast extract, an alkali metal or alkaline earth metal halide salt, an antioxidant, glycerol, zinc acetate, zinc chloride, zinc lactate, ascorbic acid, citric acid, vegetable oil, milk fat, or a combination thereof.
  • said composition for non-therapeutic cosmetic use further comprises at least one prebiotic, thereby forming a symbiotic composition.
  • said composition for a non-therapeutic cosmetic use comprises a first enteric coating covering said Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 and optionally said at least one additional probiotic.
  • said first enteric coating is selected from the group consisting of ethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, carboxymethyl cellulose, Eudragit®, or a combination of them.
  • said composition for a non-therapeutic cosmetic use comprises a second outer coating selected from the group consisting of alginate, chitosan, pectin, pullulan, gelatin, carrageenan, agar gel, cellulose, hemicellulose, ethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, or a combination thereof.
  • composition for a non-therapeutic cosmetic use further comprises one or more biocompatible excipients.
  • the present invention also relates to a culture medium of the probiotic Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 comprising at least one protein source and at least one source of carbohydrates, said culture medium being characterized in that it further comprises glutathione.
  • Glutathione is a tripeptide involved in maintaining the redox potential of cell cytoplasm and in a number of detoxification and elimination reactions of reactive oxygen species.
  • such a culture medium comprising glutathione optimizes the efficacy of the strain LMG P-28149 of the probiotic Bifidobacterium animalis ssp. lactis, for which it has been observed a curative or preventive action on body weight gain in overweight or overweight humans.
  • the culture medium according to the invention comprises glutathione in a concentration of between 20 and 30 g / l of culture medium.
  • said protein source of said culture medium is selected from the group consisting of a whey peptone, a casein peptone, a plant or bacterial peptone, and a combination of these. this.
  • said source of carbohydrates of said culture medium comprises at least one sugar or a mixture of sugars, which are chosen from the group consisting of lactose, glucose, galactose, fructose and maltodextrin. , starch, trehalose, maltotriose, and a combination thereof.
  • said culture medium further comprises at least one amino sugar, for example glucosamine or galactosamine.
  • said culture medium further comprises at least one yeast extract.
  • said culture medium further comprises at least one egg extract.
  • the present invention also relates to a process for the fermentation manufacture of probiotic Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149, said method comprising at least one step of culturing said probiotic in a culture medium according to the invention.
  • Lactis alone or in combination with at least one other probiotic, induces a decrease in body weight gain together with an improvement in inflammatory and metabolic parameters in the mammal, especially the overweight rodent, including insulin resistance. .
  • the metabolic protective effects of the composition based on the probiotic strain according to the invention which are moreover associated with a restoration, within the adipose tissues, of the expression of PPARy and cellular remodeling, and a protective effect against hepatic steatosis.
  • the composition based on the strain according to the invention also allows a modulation of the expression of the receptors bound to the transport of fatty acids, and in particular a restoration of the G protein-coupled receptors (GPR41 and GPR43) involved in the transport of short-chain fatty acids (SCFA), which are important players in the satiety mechanism induced by nutrient uptake.
  • GPR41 and GPR43 G protein-coupled receptors involved in the transport of short-chain fatty acids (SCFA)
  • SCFA short-chain fatty acids
  • MCP-1, IL-6, TNF-alpha, etc. pro-inflammatory cytokines and chemokines
  • the strain according to the invention also makes it possible to restore the lipid profile and the glucose metabolism in the mammal, preventing the risk of developing diseases directly related to the metabolic syndrome, such as dyslipidemia (and therefore type diabetes). 2) and hyperglycemia.
  • Figure 1 illustrates, in the mouse developing overweight and then obesity, the action of Ls33 on (A) the evolution of body weight gain (in%), (B) glucose tolerance (GT) ), (C) the weight (mass) of the epididymal adipose tissue (EWAT), and (D) the weight (mass) of the subcutaneous adipose tissue (SCWAT).
  • the data are expressed on average (from 10 to 15 mice per group) + standard deviation to the mean (SEM). ** p ⁇ 0.01; *** p ⁇ 0.001.
  • * corresponds to the comparison between the lipid-enriched diet (HFD) and the control diet (LFD) with identical interventional treatment (measurement of the effect of the diet).
  • Figure 2 illustrates in the developing mouse overweight and then obesity, the action of the Mix on (A) the change in body weight gain (in%), (B) the cumulative intake of food (in gram / day / mouse), (C) insulin tolerance (IT), and (D) GT.
  • the data are expressed on average (from 5 to 14 mice per group) + standard deviation to the mean (SEM). ** p ⁇ 0.01; *** p ⁇ 0.001; # p ⁇ 0.05; m p>0.01; ## p ⁇ 0.001.
  • * corresponds to the comparison between the HFD diet and the LFD regimen with identical interventional treatment (measurement of the effect of the scheme).
  • * corresponds to the comparison between the Mix vs the phosphate buffered saline (PBS) identical regime (measuring the effect of the probiotic or mixture of probiotics according to the invention).
  • PBS phosphate buffered saline
  • Figure 3 illustrates in the developing mouse overweight and then obesity, the action of the Mix on (A) the weight (mass) of EWAT, (B) the weight (mass) of SCWAT, (C) the amount of leptin in the blood (ng / ml), (D) the amount of adiponectin in the blood ( ⁇ / ⁇ ⁇ ), (E) the histology of EWAT (sections representative of each of the experimental groups), and ( F) the size distribution of adipocytes in EWATs.
  • the data are expressed on average (10 to 15 mice per group) + standard deviation to the mean (SEM).
  • FIG. 4 illustrates in the mouse during the development of overweight then obesity, the action of the Mix on (A) the cellular composition of the EWATs (expression analysis of monocyte / macrophage specific genes (F4 / 80, CD68 , CD11b, CD11c), regulatory T cells (FoxP3) and chemokine MCP-1), (B) the presence of macrophages in EWATs (F4 / 80 specific immunofluorescent staining and quantification in terms of integrated density [IntDen] ), (C) inflammation of the EWATs (gene expression analysis of pro-inflammatory cytokines Tnfa, IL-1a, IL-6 and IL-17), and (D) expression of PPAR gamma (PPARy) at the level of messenger RNA (left, gene expression) and protein (center and right, westem-blot and quantification [arbitrary unit: AU]).
  • A the cellular composition of the EWATs (expression analysis of monocyte / macrophage specific genes (F
  • FIG. 5 illustrates in the mouse during the development of overweight then obesity, the action of the Mix on (A) factors involved in lipid metabolism (expression analysis of the FABP1, APO Cil, and CD36 genes)
  • B short-chain fatty acid (SCCC or SCFA) receptors, by expression analysis of the GPR41 and GPR43 genes).
  • the data are expressed on average (from 5 to 14 mice per group) + standard deviation to the mean (SEM). ** p ⁇ 0.01; *** p ⁇ 0.001; ** p ⁇ 0.01; # p ⁇ 0.001.
  • Figure 5 (C) illustrates the level of production of total SCFA (SCFA) (left) and proportional levels of acetate, butyrate and propionate (right) after 24 and 48h incubation with the probiotic mix mix in the Model simulating the intestinal ecosystem (SHIME), in vitro. *** compared to time 0.
  • SCFA total SCFA
  • SHIME Model simulating the intestinal ecosystem
  • Figure 7 illustrates in the developing mouse overweight and then obesity, the action of the Mix on (A) the weight (mass) of the pancreas, liver and spleen, (B) the accumulation of droplets lipid (steatosis, see histological sections representative of each of the experimental groups), and (C) different markers of inflammation or involved in lipid metabolism or insulin response (mcp-1 expression analysis, IL-6, TNF ⁇ , IL-10, IL-17, srebp-1c, APOCII Fabp1 and IRS2). The data are expressed on average (from 5 to 14 mice per group) + standard deviation to the mean (SEM).
  • FIGS. 8a and 8b illustrate the impact of probiotic Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 according to the invention on the weight gain over time depending on whether the probiotic was cultured (FIG. 8a) or uncultivated (FIG. 8b) in a culture medium according to the invention.
  • LFD low fat diet
  • HFD high fat diet
  • HFD B. lactis fat-rich diet associated with taking the composition according to the invention when the probiotic is cultured in the presence of glutathione (FIG. 8a) or in the absence of glutathione (FIG. 8b).
  • the tests were performed on male C57BL / 6J mice, 5 weeks old at the beginning of the experiment.
  • the Ls33 strain of Lactobacillus L salivarius was provided by Danisco (Madison, WI, USA).
  • the mixture of probiotics (referenced as Mix in the examples which follow) comprises two different strains: a strain of L rhamnosus LMG S-28148 and a strain of Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 in a cfu (colony-forming units) ratio of 1: 1 (10 9 total cfu).
  • the diets imposed on the mice come in a first low-fat diet (LFD: D12450B, 10% kcal from fat) and a second high-fat diet (HFD: D12492, 60% kcal from fat) .
  • the diets were provided by the Society Research Diet.
  • each mouse was orally administered with 30 ⁇ l of Ls33 - 10 9 cfu (colony-forming units or, the number of colony-forming units present in the oral composition) in sterilized water ( 1 ⁇ 20) (LS33-H 2 0), sterilized water (group H 2 0) or mixture of probiotics (mix group, and 5 August 10 cfu for each strain) in phosphate buffered saline (PBS) (mix group -PBS or PBS group).
  • PBS phosphate buffered saline
  • EWAT epididymal white
  • SCWAT subcutaneous adipose tissue
  • IP intraperitoneal
  • GTT glucose tolerance
  • ITT insulin
  • Glucose levels in the blood were measured by a commercially available automatic glucose meter (eg, a ACCU-CHEK® performa) on a blood sample taken from the tail before glucose injection (GTT) or insulin (ITT) and at different times after glucose injection (GTT) or insulin (ITT).
  • a commercially available automatic glucose meter eg, a ACCU-CHEK® performa
  • Plasma levels of leptin, adiponectin, MCP-, and insulin were measured using commercially available ELISA kits.
  • Levels of non-esterified fatty acids (NEFA), triglycerides, glycerol, HDL cholesterol, and LDL cholesterol were determined using commercially available assay kits (for example, the Abcam kit developed by Cambridge , GB). Histologic and immunohistochemical analyzes
  • EWAT liver and white adipose tissue samples
  • H & E hematoxylin eosin
  • RNA fragments of white adipose tissue, liver and intestine were extracted (according to the method known to those skilled in the art) and then retro-transcribed (a quantity of 1 ⁇ g was retranscribed for each of the above-mentioned tissue categories).
  • the quantitative real-time PCR (Polymerase Chain Reaction) technique (RT-qPCR) was carried out according to a protocol known to those skilled in the art.
  • the data are expressed as mean ⁇ standard deviation (SEM). Statistical analyzes were performed using the Kruskal Wallis test followed by the Mann-Whitney U test. Differences between the experimental groups are considered to be statistically significant when the p value is less than 0.05.
  • the SHIME reactor which simulates the human gastrointestinal tract was set up according to a procedure well known to those skilled in the art.
  • SCCC or SCFA short chain fatty acid
  • PBS-Ca PBS-Ca
  • GIBCO Ficoil
  • PBMC Peripheral blood mononuclear cells
  • This example illustrates the impact of Ls33 on the development of overweight and obesity in mice.
  • Figure 1 illustrates, for a course of 15 weeks in Ls33 or water and a low fat diet (LFD) diet or high fat diet (HFD), the following indicators:
  • C the insulin tolerance test (ITT) performed 14 weeks after starting the diet: blood glucose levels were measured after intraperitoneal injection (IP) of insulin. The results show normalized levels (as a% of glucose levels measured before injection) + SEM and averages + SEM of AUC values for each normalized glucose curve after insulin injection ;
  • Glucose Tolerance Test performed after 12 weeks of regimen. Glucose levels (in mg / dl) were measured in mice after IP glucose injection and AUC values were calculated.
  • Insulin (ng ml) 0.72 ⁇ 0.37 0.98 ⁇ 0.24 2.96 ⁇ 0.57 * 1, 57 ⁇ 0.23 *
  • the HOMA-IR index (fasting insulin level / fasting glucose level) / 22.5) was significantly reduced in mice of the HDF-Mix group, compared to the control group (32.04 + 5.86 vs 81, 57 + 19.63; p ⁇ 0.01), indicating improved insulin sensitivity, confirmed by the results of the insulin tolerance test (see Figure 2C).
  • mice treated with the Mix are less intolerant to glucose injections (see FIG. 2D).
  • Example 2 Action of the Mix on the inflammation of white adipose tissues
  • the scale is 00 ⁇ ; and
  • the HFD-Mix group shows a marked decrease in EWAT and SCWAT fat masses (see Figures 3A and 3B).
  • mice of the HFD control group developed hepatic steatosis
  • the administration of the mixture of probiotics Mix makes it possible to limit the presence of lipid droplets in the tissues (see Figure 7B).
  • leptin blood levels appear to be significantly lower in the HFD-Mix group (see Figure 3C), while adiponectin levels tend to be higher (see figure 3D).
  • the histology of epididymal adipose tissue showed a higher density in small adipocytes in mice of the HFD-Mix group (see Figure 3E and 3F).
  • the adipose tissues are markedly infiltrated by cells surrounding the adipocytes (marked by an arrow in FIG. 3E), the tissue samples taken from the mice of the group having received the probiotic mix are less marked by this infiltration.
  • Figure 4 illustrates in overweight mice the action of the Mix on inflammation of adipose tissue.
  • Figure 4A in comparison with the control LFD tissues, the expression levels of several specific markers of monocytes / macrophages (F4 / 80, Cd68, Cd11b, and Cd11c) are increased in the mice of the HFD group then that the rates relative to the Foxp3 marker are decreased.
  • Example 4 Mix action on the microbiota and level of colonization by Akkermansia muciniphila
  • results illustrated in FIG. 6 show a change in the composition of the microbiota of the HFD-Mix mice, with in particular a restoration of the level of colonization by Akkermansia muciniphila in the mice subjected to the HFD diet and treated with the probiotic strain or the mixture probiotics according to the invention.
  • FIGS. 8a and 8b illustrate the impact of probiotic Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 according to the invention on the weight gain over time depending on whether the probiotic was cultured (FIG. 8a) or uncultivated (FIG. 8b) in a culture medium according to the invention.
  • FIGS. 8a and 8b As can be seen by comparing FIGS. 8a and 8b, and more particularly the HFD B. lactis curves, when a high-fat diet is associated with a setting of the composition according to the invention in which the probiotic Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 is obtained by culturing in a medium of culture comprising glutathione, a significant decrease in weight gain over time is observed (FIG. 8a), which is not the case when taking a composition according to the invention which comprises the probiotic obtained by placing in culture in a culture medium not comprising glutathione (FIG. 8b).
  • EWAT epididymal white adipose tissue
  • HDL High density lipids
  • NEFA Non-esterified fatty acid
  • PBS Phosphate phosphate buffer
  • PBMC Mononuclear peripheral blood cells
  • SCWAT White subcutaneous adipose tissue

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Abstract

Composition à base d'au moins probiotique pour son utilisation dans le traitement curatif de la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids et/ou dans le traitement préventif de la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids ou ayant été en surpoids, ledit probiotique étant Bifidobacterium animalis ssp. Iactis n° LMG P-28149.

Description

Composition comprenant do Bifidobacterium animalis sso. lactîs
La présente invention concerne une composition à base d'au moins probiotique pour son utilisation dans le traitement curatif de la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids et/ou dans le traitement préventif de la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids ou ayant été en surpoids.
Par les termes « en surpoids », on entend, au sens de la présente invention, que l'être humain présente une accumulation anormale et/ou excessive de graisse corporelle, principalement abdominale, ce qui présente un risque pour sa santé. Dans le cadre de la présente invention, le terme « surpoids » comprend aussi le cas particulier, et extrême, de l'état d'obésité chez l'être humain.
Par les termes « ayant été en surpoids », il faut entendre au sens de la présente invention que l'être humain a subi une perte de poids et présente un poids considéré comme normal (basé sur BMI ou tour de taille/hanche) depuis une période comprise entre 3 et 5 ans.
Il est difficile d'élaborer un indice simple qui permette de mesurer le surpoids et l'obésité au niveau d'un panel d'une population donnée. Par exemple, l'échelle utilisée pour mesurer l'indice de surpoids et d'obésité chez les enfants et les adolescents, de par le fait que leur organisme subit un certain nombre de changements physiologiques liés à leur croissance, diffère de celui utilisé chez l'adulte. Dès lors, en fonction de l'âge, l'OMS (Organisation Mondiale de la Santé) met à la disposition du public, différentes méthodes de mesure du poids corporel en fonction de l'âge de l'individu ou de l'âge moyen de l'échantillon d'individus.
A titre illustratif, le surpoids peut s'évaluer chez l'adulte sur base de l'Indice de Masse Corporelle (IMC ou BMI pour Body Mass Index), qui représente une mesure simple du poids par rapport à la taille couramment utilisée pour estimer le surpoids et l'obésité chez l'adulte. Il correspond au poids divisé par le carré de la taille, exprimé en kg/m2. L'IMC présente l'avantage de s'appliquer aux deux sexes et à toutes les tranches d'âge adultes. Il doit toutefois être considéré comme une indication approximative car il ne correspond pas nécessairement au même pourcentage de masse graisseuse selon les individus.
Dans ce contexte, l'OMS définit, sur base de l'IMC, les valeurs seuils suivantes pour déterminer si un adulte présente un surpoids ou une obésité :
- un état normal de poids correspond à un IMC compris entre 20 et 25 ; - un état de surpoids correspond à un IMC compris entre 25 et 30; et
- un état d'obésité correspond à un IMC égal ou supérieur à 30.
Toutefois, il est à noter que l'IMC ne donne aucune indication quant à la répartition de la graisse abdominale par rapport à la graisse sous-cutanée.
Cet indice, même s'il présente l'avantage d'uniformiser la classification aux deux sexes et à toutes les tranches d'âge des individus adultes, peut de préférence être interprété de manière complémentaire avec un autre indicateur qui peut être, par exemple, la mesure du tour de taille de l'individu.
Ainsi, un individu masculin adulte présentant un tour de taille supérieur à 100 cm est considéré comme étant en surpoids. Ce seuil est de 88 cm chez la femme adulte.
Ce paramètre peut être généralisé à toutes les tranches d'âge en mesurant le rapport tour de taille (A) / tour de hanches (H).
Le surpoids est observé pour un rapport supérieur à 1 chez l'individu masculin et supérieur à 0,85 chez l'individu de sexe féminin. Le terme « traitement » s'applique dans le cadre de cette invention dès lors que le surpoids chez l'être humain et en particulier l'obésité humaine, a été reconnu comme une maladie par l'OMS.
Par le terme « curatif », il faut entendre, au sens de la présente invention, l'action qui vise à réduire le poids corporel d'un être humain en surpoids et/ou à réduire la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids. Le traitement curatif implique donc l'action qui vise à atteindre, de préférence pendant et/ou après diète, un poids corporel considéré comme normal chez l'être humain, c'est-à-dire avec un risque moindre pour la santé, dans une plage de valeurs prédéterminée, basée, par exemple sur l'IMC, qui est compris entre 20 et 25, de préférence égal à 22.
Par les termes « risque moindre pour la santé », il y a lieu d'interpréter dans le cadre de la présente invention que, à un poids corporel considéré normal, le risque de développer un syndrome métabolique est négligeable.
En particulier, l'action curative vise principalement la diminution de la graisse abdominale chez l'individu ou au moins une diminution de l'accumulation de la graisse abdominale.
Par le terme « préventif », il faut entendre, au sens de la présente invention, l'action qui vise à stabiliser le poids corporel d'un être humain en surpoids ou qui a été en surpoids (c'est-à-dire qui a perdu du poids) et donc à empêcher ou limiter la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids ou qui a été en surpoids, de préférence pendant et/ou après diète. Le traitement préventif implique aussi l'action qui vise à maintenir, de préférence pendant et/ou après diète, un poids corporel stable, de préférence considéré comme normal chez l'être humain, dans une plage constante de valeurs prédéterminée, basée, par exemple, sur l'IMC (pour rappel, entre 20-25), mais le poids corporel normal peut aussi être interprété à la lumière du rapport A/H inférieur à 0,85 chez l'individu de sexe féminin, et inférieur à 1 ,00 chez l'individu de sexe masculin. Actuellement, à l'échelle mondiale, le surpoids et l'obésité sont responsables (du fait des maladies associées, comme le diabète de type 2 ou les maladies cardiovasculaires) de plus décès que l'insuffisance pondérale.
En particulier, le surpoids et l'obésité ont atteint les proportions d'une épidémie mondiale (compte tenu que près de 3 millions de personnes au moins décèdent chaque année de pathologies liées à leur surpoids ou leur obésité) et ne sont plus limités aux pays dits riches mais touchent désormais également les pays à revenu faible ou intermédiaire.
Il est en outre démontré qu'un IMC élevé, parfois conjointement à un rapport A/H élevé, constitue un facteur favorisant, d'une part, le syndrome métabolique qui est défini dans le cadre de la présente invention comme une association de facteurs de risques pour la santé : une hypertension artérielle, une hypertriglycéridémie, un taux bas en cholestérol HDL, un état d'obésité androïde (par exemple, une accumulation de graisse abdominale), et une élévation de la glycémie. Ces indicateurs constituent de fait une base de définition qui est commune aux actuelles trois définitions principales connues : celle de l'OMS (publiée en 1998 puis amendée en 1999), celle du National Cholestérol Education Program (NCEP-ATPIII) publiée en 2001 , et celle de la Fédération Internationale du Diabète publiée en 2005.
En pratique, le syndrome métabolique se traduit par les indicateurs suivants, de manière non exhaustive : un taux d'insuline anormalement élevé ; un diabète de type 2 ; une hypercholestérolémie (associée à un taux bas de « bon » cholestérol HDL) ; une hypertension ; une augmentation significative de la prise de poids corporel au cours du temps, surtout s'il s'agit d'une obésité abdominale ; une hypertriglycéridémie ; une stéatose hépatique ; le développement d'un état inflammatoire systémique; et une hypertrophie des adipocytes. Par ailleurs, le risque de maladies chroniques se traduit par les indicateurs suivants, de manière non exhaustive : les troubles musculo-squelettiques, en particulier l'arthrose; ou certains types de cancers.
La problématique de prise de poids corporel incontrôlée amenant au surpoids chez l'être humain est donc un problème sociétal avéré ayant un impact non négligeable sur la santé, au niveau mondial.
C'est dans cette perspective que l'OMS a établi, dans sa stratégie mondiale de prévention de la prise de poids excessive, des recommandations concernant l'alimentation et l'exercice physique. Adoptée par l'Assemblée Mondiale de la Santé (AMS) en 2004, cette stratégie définit les mesures nécessaires pour encourager les gens à suivre une alimentation saine et à faire régulièrement de l'exercice.
Toutefois, si cette stratégie repose sur des recommandations prévenant la prise de poids, elle ne propose pas d'indications quant aux traitements curatif et préventif de la prise de poids chez les individus en surpoids ou ayant été en surpoids et qui présentent un risque de reprise de poids. En effet, actuellement, la problématique de prise de poids incontrôlée ne cible plus seulement les individus normopondéraux (c'est-à- dire qui présentent un IMC normal et/ou un tour de taille normal) susceptibles de prendre du poids, mais surtout les individus déjà en surpoids dès lors que l'OMS indique que près de 1 ,4 milliard de personnes âgées de 20 ans et plus présentent d'ores et déjà un surpoids. Parmi elles, plus de 200 millions d'hommes et près de 300 millions de femmes sont obèses, et globalement, plus d'un adulte sur dix dans le monde est obèse.
Il existe donc un réel besoin de disposer d'un traitement qui permette la réduction ou la prévention du surpoids et de l'obésité chez l'être humain en surpoids. De préférence, ce traitement doit être peu contraignant dès lors que l'on sait qu'une raison principale liée au surpoids et à l'obésité est le manque d'assiduité à suivre un régime précis associé à un traitement qui peut être parfois lourd.
En particulier, la présente invention s'inscrit dans le cadre d'une relation de cause à effet connue qui associe des modifications du microbiote intestinal au développement de l'obésité (Ley et∞., 2006. Nature, 444: 1022-1023; Nadal et∞., 2008. Int J. Obes., 33(7): 758-67).
De nombreuses études ont été menées dans ce contexte et ont alimentées l'état de l'art actuel incluant un large panel de documents mentionnant l'utilisation de traitements à base de probiotiques dans le cadre du surpoids et de l'obésité.
En particulier, il a été montré que le microbiote contribue à maintenir l'hôte en bonne santé. En effet, l'état équilibré du microbiote contribue à la régulation de l'homéostasie intestinale et à l'équilibre immunitaire, de sorte que, tout déséquilibre du microbiote est interprété comme participant au développement du syndrome métabolique, en particulier chez les individus présentant une prédisposition génétique à développer ce syndrome (Parks et al., Cell Metab, 2012).
La mise en évidence de la relation microbiote - prise de poids a été le moteur pour un large panel d'études qui ont fait l'objet de différentes demandes de brevet, dont les plus pertinentes sont commentées ci-dessous.
Il y a tout d'abord lieu de mentionner la demande de brevet internationale WO2007043933 qui propose l'utilisation des souches de Lactobacillus casei F19 et L acidophilus NCFB 1748, et le Bifidobacterium lactis Bb12, sous la forme de laits fermentés, pour réduire l'appétit et le dépôt des graisses dans certains tissus, et ainsi, contrôler le poids corporel, chez l'être humain. Cependant, il semble que ce soit plutôt l'action conjointe du calcium et des protéines laitières qui soient à l'origine de l'effet revendiqué dans cette demande plutôt que la présence des souches de bactéries susmentionnées. En outre, cet effet ne cible que l'expression des gènes liés au métabolisme de l'intestin grêle et ne porte donc pas sur les autres organes et tissus impliqués dans la prise de poids.
Ensuite, le document US20100061967A1 propose également l'utilisation d'une composition de bactéries pour moduler l'expression des peptides régulant le mécanisme de satiété, cette modulation prenant place de manière exclusive dans le tractus gastro- intestinal.
La demande de brevet internationale WO2009153662 divulgue quant à elle l'utilisation d'une composition à base de Bifidobacte esa et de Lactobacilles dans le traitement du diabète, une maladie reprise dans la liste des indicateurs associés au syndrome métabolique induit par le surpoids ou l'obésité, et ce, en se basant exclusivement sur la capacité que présentent ces microorganismes à réduire l'inflammation des tissus périphériques mais sans pour autant agir sur le système nerveux central, et donc par exemple sur le mécanisme de la régulation centrale de la satiété.
En outre, le document US20100150890 renseigne l'utilisation de probiotiques bactériens dans une composition pour stimuler la fonction du système nerveux sympathique de sorte que le métabolisme, et donc la dépense énergétique, soit stimulée. Toutefois, il a été montré que le tonus sympathique est également actif chez certains individus obèses et, ainsi, son activation ne constitue pas une alternative fiable dans le cadre du traitement du surpoids et de l'obésité.
La demande de brevet US20100111915 présente l'utilisation générique d'une composition de probiotiques bactériens comme une alternative dans le cadre de la prévention de l'obésité chez l'enfant. Selon US20100111915, cette utilisation se base sur les effets bifidogènes des probiotiques, bien que ce document ne renseigne aucun fondement tangible qui permette d'établir que l'augmentation du nombre de bifidobactéries dans l'intestin puisse être à l'origine de cette action préventive de l'apparition de l'obésité chez l'enfant. Le document US20050112112 propose l'utilisation d'une composition de microorganismes générant des polymères de sucre, non- digestibles par l'être humain, à partir de monosaccharides et de disaccharides présents dans le tractus gastro-intestinal, réduisant ainsi de facto l'absorption de sucres dans le corps.
Enfin, le document JP 0306028 renseigne par ailleurs une action inhibitrice de l'absorption par l'organisme du cholestérol, et ce, par l'utilisation de bifidobactéries combinées au chitosan.
Malheureusement, l'utilisation des compositions de l'état de la technique, si elle permet une réduction du surpoids ou de l'obésité et une réduction des symptômes associés au syndrome métabolique (on parle par exemple de rémission), elle ne permet pas un maintien à long terme de plus de 3 à 5 ans (on parle par exemple de guérison) du poids corporel au niveau de normalité souhaité (c'est-à-dire correspondant par exemple à un IMC entre 20 et 25).
Dans le cadre de la présente invention, il y a lieu de distinguer la rémission de la guérison. Un individu est dit en rémission si, lors des examens médicaux (mesure du poids, du tour de taille, etc.), on ne décèle plus de surpoids. Mais on ne parle de guérison qu'après un certain délai supplémentaire, qui varie en fonction du type de surpoids. En général, quand la rémission dure depuis 3 ou 5 ans, il est considéré qu'il y a guérison.
La présente invention a pour but de pallier le manquement de l'état de la technique en fournissant une composition telle que décrite au début caractérisée en ce que ledit probiotique est Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149.
La souche selon l'invention a été déposée par le BCCM (Belgian Coordinated Collections of Micro-organisms) et le LMG (Laboratorium voor Microbiologie - Bacteriënverzameling) le 27 janvier 2014 selon le traité de Budapest, sous le numéro LMG P-28149. Dans le cadre de la présente invention, la composition comprend de préférence le probiotique est Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 à l'état vivant. Par les termes « à l'état vivant », on entend une concentration en bactéries vivantes dans la composition comprise entre 108 et 1013 cfu par gramme de composition.
Dans le cadre de la présente invention, il a été observé que cette souche de probiotique particulière présente une action positive significative sur la satiété et également une restauration du microbiote intestinal associé à la limitation de prise de poids corporel.
II a été notamment observé le rôle de la présence du
Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 dans la recolonisation du tractus intestinal par Akkermansia muciniphila, une bactérie réputée pour son rôle dans la prévention de l'obésité chez l'être humain dont le niveau est fortement réduit chez l'individu en surpoids ou obèse.
En outre, il a été par ailleurs observé de manière surprenante l'action anti-inflammatoire et immuno-régulatrice de la souche selon l'invention qui est associée à la restauration de l'expression du facteur de transcription PPARy, impliqué dans la fonction des lymphocytes T régulateurs du tissu adipeux blanc.
Ainsi, la composition selon l'invention permet notamment le traitement curatif ou préventif du dérèglement du microbiote intestinal et des maladies inflammatoires associées à ce dérèglement chez l'être humain en surpoids.
La présente composition vise donc de manière avantageuse le traitement curatif ou préventif du syndrome métabolique lié au surpoids chez l'être humain.
Il a donc été démontré, selon la présente invention, que la composition à base du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P- 28149 présente notamment les effets suivants sur l'organisme, lesquels s'accompagnent d'une réduction du gain de poids corporel sous régime riche en graisses, de préférence pendant et/ou après une diète, ou d'une stabilisation du poids corporel : une amélioration de la sensibilité à l'insuline ; une réduction du développement de la masse graisseuse abdominale et sous-cutanée ; une réduction de la taille des adipocytes ; une réduction de l'infiltration cellulaire des tissus adipeux blancs, en particulier par les macrophages pro-inflammatoires ; une réduction des marqueurs inflammatoires ; une limitation de la stéatose du foie ; et une limitation ou une réduction du taux de « mauvais » cholestérol.
Comme on peut le constater, la composition suivant l'invention comprenant au moins le probiotique Bifidobacterium animaiis ssp. lactis n° LMG P-28149 agit sur divers facteurs liés au surpoids.
Dans le cadre de la présente invention, il a été aussi démontré l'action préventive et curative sur la prise de poids ainsi que l'action sur le syndrome métabolique chez l'être humain en surpoids, non seulement de la souche spécifique Bifidobacterium animaiis ssp. lactis n° LMG P-28149, à l'état vivant ou non, mais aussi des composés issus de cette souche.
Dans ce contexte, la composition selon l'invention peut comprendre en outre au moins un ou une combinaison d'au moins deux éléments de probiotique, chaque élément étant issu du Bifidobacterium animaiis ssp. lactis n° LMG P-28149 et étant choisi parmi le groupe constitué de constituants de la paroi cellulaire, des organites cellulaires, des acides nucléiques, des constituants de la membrane cellulaire, et des métabolites cellulaires.
A titre illustratif et non-limitatif, les constituants de la paroi cellulaire sont choisis dans le groupe constitué de peptidoglycanes, de protéines, de polysaccharides, de l'acide téichoïque, ou d'une combinaison de ces derniers.
A titre illustratif et non-limitatif, les métabolites sont choisis dans le groupe constitué des acides organiques, des acides inorganiques, des protéines, des peptides, des acides aminés, des enzymes, des lipides, des carbohyd rates, des glycolipides, des glycoprotéines, des vitamines, des sels, des métaux, ou une combinaison de ceux-ci.
Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention comprend du butyrate, ou au moins un de ses dérivés, et/ou du propionate, ou au moins un de ses dérivés, l'induction dudit butyrate et/ou dudit propionate étant favorisée par Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149.
Eventuellement, la composition selon l'invention comprend au moins un probiotique additionnel, ledit probiotique additionnel étant choisi dans le groupe constitué des probiotiques suivants : Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacters, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cyanobacteria, Methanobrevibacterium, Lactobacillus, Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae (non-pathogène), Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Akkermansia, Bacillus, Butyrivibrio, et Clostridium, ou une combinaison de ceux-ci.
De préférence, la composition selon l'invention peut comprendre en outre au moins une souche de champignon et/ou de levure, ladite souche étant choisie dans le groupe suivant : Saccharomyces, Candida, Pichia, Debaryomyces, Torulopsis, Aspergillus, Rhizopus, Mucor, et Pénicillium.
De préférence, la composition selon l'invention comprend un véhicule d'encapsulation de probiotique dans lequel ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel sont encapsulés.
De manière avantageuse, ledit champignon et/ou ladite levure sont également encapsulés dans ledit véhicule. Alternativement, le véhicule d'encapsulation comprend au moins une substance choisie dans le groupe constitué de l'alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar ou une combinaison de ceux-ci.
De manière préférentielle, ladite au moins une substance est un hydrocolloïde.
De manière avantageuse, la composition selon l'invention comprend au moins une source nutritive choisie dans le groupe constitué d'un monosaccaride, d'un polysaccharide, d'un aminoacide, d'un peptide, d'une protéine, d'une vitamine, d'un extrait de levure, un sel d'halogénure, d'un métal alcalin ou alcalinoterreux, d'un antioxydant, de glycérol, d'acétate de zinc, de chlorure de zinc, de lactate de zinc, d'acide ascorbique, d'acide citrique, d'une huile végétale, de graisse de lait, ou une combinaison de ceux-ci.
Dans un mode particulier de réalisation, la composition selon l'invention est une composition symbiotique comprenant au moins un prébiotique.
De préférence, ledit au moins un prébiotique est choisi, de manière non limitative, dans le groupe constitué des oiigosaccharides, des fructo-oligosaccharides, des galacto-oligosaccharides, des xylo- oligosaccharides, de l'inuline ou de ses dérivés, du lactulose ou de ses dérivés, des mannane-oligosaccharides, ou une combinaison de ces derniers.
De manière préférentielle, la composition selon l'invention comprend un premier revêtement entérique recouvrant ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel. En particulier, le premier revêtement entérique est choisi dans le groupe constitué de l'éthyle cellulose, de l'hydroxypropyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, de polymères (comme par exemple l'Eudragit®), ou une combinaison de ceux-ci. Alternativement, la composition comprend en outre un deuxième revêtement externe choisi dans le groupe constitué de l'alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar, de la cellulose, de l'hémicellulose, de l'éthyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, ou une combinaison de ceux- ci.
Dans un autre mode de réalisation éventuel, la composition selon l'invention comprend un ou plusieurs excipients biocompatibles.
La composition selon l'invention peut être destinée au traitement curatif ou préventif de la prise de poids corporel excessive (c'est-à-dire dépassant largement la prise de poids accompagnant la grossesse) chez la femme enceinte ou la femme qui a accouché ou chez l'homme en couvade ou ayant été en couvade.
Selon l'invention, la composition peut se présenter sous la forme d'une composition alimentaire, d'un aliment à base de la composition ou encore d'un complément alimentaire comprenant du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, de préférence à l'état vivant.
Par les termes « composition alimentaire », il faut entendre au sens de la présente invention une composition que l'on retrouve communément sur le marché de l'alimentaire (par exemple, les en-cas, les plats préparés, des boissons, etc.).
Par les termes « complément alimentaire », il faut entendre au sens de la présente invention une denrée alimentaire dont le but est de fournir un complément de nutriments ou de substances ayant un effet nutritionnel et/ou physiologique.
Selon l'invention, la composition peut être prévue pour une utilisation et une prise par voie orale, ou sublinguale, mais également respiratoire, de préférence nasale ou bronchique, ou encore rectale. La composition peut être aussi une composition liquide injectable à base d'au moins un élément issu du probiotique et destinée à être injectée par sous-cutanée.
De manière préférentielle, la composition selon l'invention peut être conditionnée sous forme de comprimés, de globules, de gélules, de granules, de poudres, de fluides, de liquides, de crèmes ou de sprays.
Selon l'invention, la composition peut être utilisée pour le traitement curatif ou préventif de la prise de poids corporel excessive (c'est-à-dire dépassant largement la prise de poids accompagnant la grossesse) chez la femme enceinte ou qui a accouché ou chez l'homme en couvade ou ayant été en couvade.
D'autres formes de réalisation et d'utilisation de la composition thérapeutique suivant l'invention sont indiquées dans les revendications annexées.
La présente invention porte également sur une utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition comprenant au moins probiotique, chez l'être humain en surpoids ou ayant été en surpoids, ledit probiotique étant Bifidobactehum animalis ssp. lactis n° LMG P-28149.
De préférence, ladite composition pour une utilisation cosmétique non-thérapeutique comprend au moins un probiotique additionnel choisi dans le groupe constitué des probiotiques suivants : Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacters, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cyanobacteria, Methanobrevibacterium, Lactobacillus, Peptos eptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae (non-pathogène), Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Akkermansia, Bacillus, Butyrivibrio, et Clostridium, ou une combinaison de ceux-ci. Avantageusement, ladite composition pour une utilisation cosmétique non-thérapeutique comprend une souche de champignon et/ou de levure choisie dans le groupe constitué de Saccharomyces, de Candida, de Pichia, de Debaryomyces, de Torulopsis, d'Aspergillus, de Rhizopus, de Mucor, et de Pénicillium.
Préférentiellement, dans ladite composition pour une utilisation cosmétique non-thérapeutique, ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel sont encapsulés dans un véhicule d'encapsulation.
Avantageusement, dans ladite composition pour une utilisation cosmétique non-thérapeutique, ledit véhicule d'encapsulation comprend au moins une substance choisie dans le groupe constitué de l'alginate, du chitosan, de la pectine, du pulluian, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar ou une combinaison de ceux-ci.
Avantageusement, ladite composition pour une utilisation cosmétique non-thérapeutique comprend au moins une source nutritive choisie dans le groupe constitué d'un monosaccaride, d'un polysaccharide, d'un aminoacide, d'un peptide, d'une protéine, d'une vitamine, d'un extrait de levure, un sel d'halogénure d'un métal alcalin ou alcalinoterreux, un antioxydant, de glycérol, d'acétate de zinc, de chlorure de zinc, de lactate de zinc, d'acide ascorbique, d'acide citrique, d'une huile végétale, de graisse de lait, ou une combinaison de ceux-ci.
De préférence, ladite composition pour une utilisation cosmétique non-thérapeutique comprend en outre au moins un prébiotique, formant ainsi une composition symbiotique.
De façon préférée, ladite composition pour une utilisation cosmétique non-thérapeutique comprend un premier revêtement entérique recouvrant ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P- 28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel. Avantageusement, dans ladite composition pour une utilisation cosmétique non-thérapeutique, ledit premier revêtement entérique est choisi dans le groupe constitué de l'éthyle cellulose, de l'hydroxypropyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, de l'Eudragit®, ou une combinaison de ceux-ci.
De façon préférée, ladite composition pour une utilisation cosmétique non-thérapeutique comprend un deuxième revêtement externe choisi dans le groupe constitué de l'alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar, de la cellulose, de l'hémicellulose, de l'éthyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, ou une combinaison de ceux-ci.
De façon avantageuse, ladite composition pour une utilisation cosmétique non-thérapeutique comprend en outre un ou plusieurs excipients biocompatibles.
D'autres formes d'utilisation cosmétique non-thérapeutique de la composition selon l'invention sont indiquées dans les revendications annexées.
La présente invention porte également sur un milieu de culture du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P- 28149 comprenant au moins une source protéique et au moins une source de carbohydrates, ledit milieu de culture étant caractérisé en ce qu'il comprend en outre du glutathion.
Le glutathion est un tripeptide intervenant dans le maintien du potentiel redox du cytoplasme des cellules et dans un certain nombre de réactions de détoxification et d'élimination d'espèces réactives de l'oxygène.
De façon surprenante, il a été montré, dans le cadre de la présente invention, qu'un tel milieu de culture comprenant du glutathion optimise l'efficacité de la souche n° LMG P-28149 du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis, pour laquelle il a été observé une action curative ou préventive sur la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids ou ayant été en surpoids.
De préférence, le milieu de culture selon l'invention comprend du glutathion en une concentration comprise entre 20 et 30 g/l de milieu de culture.
Avantageusement, selon l'invention, ladite source protéique dudit milieu de culture est choisie dans le groupe constitué d'une peptone de lactosérum, d'une peptone de caséine, d'une peptone végétale ou bactérienne, et d'une combinaison de celles-ci.
De préférence, selon l'invention, ladite source de carbohyd rates dudit milieu de culture comprend au moins un sucre ou un mélange de sucres, lesquels sont choisis dans le groupe constitué par le lactose, le glucose, le galactose, le fructose, la maltodextrine, l'amidon, le tréhalose, le maltotriose, et une combinaison de ceux-ci.
De préférence, selon l'invention, ledit milieu de culture comprend en outre au moins un sucre aminé, par exemple la glucosamine ou la galactosamine.
De préférence, selon l'invention, ledit milieu de culture comprend en outre au moins un extrait de levure.
De préférence, selon l'invention, ledit milieu de culture comprend en outre au moins un extrait d'œuf.
D'autres formes du milieu de culture selon l'invention sont indiquées dans les revendications annexées.
La présente invention porte également sur un procédé de fabrication par fermentation du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, ledit procédé comprenant au moins une étape de mise en culture dudit probiotique dans un milieu de culture selon l'invention.
D'autres formes du procédé selon l'invention sont indiquées dans les revendications annexées. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront de la description donnée ci-après, à titre non-limitatif et en faisant référence aux exemples décrits ci-dessous.
Ces exemples reprennent des résultats obtenus chez la souris qui ont été complétés par des résultats obtenus in vitro à partir de cellules immunes isolées de sang humain.
Bien que les résultats des tests repris dans les exemples 1 à 4 ci-dessous aient été obtenus chez la souris, il est entendu que des résultats similaires attendus chez l'être humain.
En particulier, il a été démontré dans le cadre de la présente invention, un effet spécifique à la souche sur la prise de poids corporel chez le mammifère, en particulier chez le rongeur.
En effet, la prise de la souche LMG P-28149 du probiotique Bifldobacterium animalis ssp. Lactis, seule ou en combinaison avec au moins un autre probiotique, induit une diminution du gain de poids corporel conjointement à une amélioration des paramètres inflammatoires et métaboliques chez le mammifère, en particulier le rongeur, en surpoids, y compris la résistance à l'insuline.
En particulier, il a été démontré, dans le cadre de la présente invention, les effets protecteurs métaboliques de la composition à base de la souche de probiotique selon l'invention qui sont par ailleurs associés à une restauration, au sein des tissus adipeux, de l'expression du PPARy et du remodelage cellulaire, et d'un effet protecteur contre la stéatose hépatique.
La composition à base de la souche selon l'invention permet aussi une modulation de l'expression des récepteurs liés au transport des acides gras, et en particulier une restauration des récepteurs couplés à la protéine G (GPR41 et GPR43) impliqués dans le transport des acides gras à chaînes courtes (AGCC) qui sont les acteurs importants du mécanisme de satiété induit par la prise de nutriments. En outre, il est démontré l'action positive de la souche selon l'invention sur la taille des adipocytes et sur la production de cytokines et chimiokines pro-inflammatoires (MCP-1 , IL-6, TNF-alpha, etc.), certaines d'entre elles étant directement à l'origine de la résistance à l'insuline.
II a été observé que la souche selon l'invention permet par ailleurs un rétablissement du profil lipidique et du métabolisme du glucose chez le mammifère, prévenant le risque de développer des maladies directement liées au syndrome métabolique comme la dyslipidémie (et donc le diabète de type 2) et l'hyperglycémie.
Enfin, il a été démontré le lien entre la prise de la souche de probiotique selon l'invention et la recolonisation du tractus intestinal par YAkkermansia, une bactérie réputée pour son rôle dans la prévention de l'obésité chez l'être humain et fortement diminuée chez l'individu en surpoids ou obèse.
La figure 1 illustre, chez la souris en cours de développement de surpoids puis d'obésité, l'action du Ls33 sur (A) l'évolution du gain de poids corporel (en %), (B) la tolérance au glucose (GT), (C) le poids (masse) du tissu adipeux épididymaire (EWAT), et (D) le poids (masse) du tissu adipeux sous-cutané (SCWAT). Les données sont exprimées en moyenne (de 10 à 15 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). ** p<0,01 ; *** p<0,001. * correspond à la comparaison entre le régime enrichi en lipides (HFD) vs le régime contrôle (LFD) à traitement interventionnel identique (mesure de l'effet du régime).
La figure 2 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d'obésité, l'action du Mix sur (A) l'évolution du gain de poids corporel (en %), (B) la prise cumulée de nourriture (en gramme/jour/souris), (C) la tolérance à l'insuline (IT), et (D) la GT. Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; #p<0,05 ; m p>0,01 ; ##p<0,001. * correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l'effet du régime). * correspond à la comparaison entre le Mix vs le tampon phosphate salin (PBS) à régime identique (mesure de l'effet du probiotique ou mélange de probiotiques selon l'invention).
La figure 3 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d'obésité, l'action du Mix sur (A) le poids (masse) du EWAT, (B) le poids (masse) du SCWAT, (C) la quantité de leptine dans le sang (ng/ml), (D) la quantité d'adiponectine dans le sang (μ /τη\), (E) l'histologie du EWAT (coupes représentatives de chacun des groupes expérimentaux), et (F) la distribution de la taille des adipocytes dans les EWAT. Les données sont exprimées en moyenne (10 à 15 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; #p<û,05 ; ^ O.01 ; **p<0,001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l'effet du régime). Correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l'effet du probiotique ou mélange de probiotiques selon l'invention).
La figure 4 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d'obésité, l'action du Mix sur (A) la composition cellulaire des EWAT (analyse d'expression de gènes spécifiques des monocytes/macrophages (F4/80, CD68, CD11b, CD11c), des lymphocytes T régulateurs (FoxP3) et de la chimiokine MCP-1 ), (B) la présence de macrophages dans les EWAT (marquage immunofluorescent spécifique de F4/80 et quantification en terme de densité intégrée [IntDen]), (C) l'inflammation des EWAT (analyse d'expression de gènes des cytokines pro-inflammatoires Tnfa, IL-1a, IL-6 et IL-17), et (D) l'expression de PPAR gamma (PPARy), au niveau de l'ARN messager (gauche, expression génique) et de la protéine (centre et droit, westem-blot et quantification [en unité arbitraire : A.U.]). Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; mp<0,01 ; #p<0,001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l'effet du régime), "correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l'effet du probiotique ou mélange de probiotiques.
La figure 5 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d'obésité, l'action du Mix sur (A) des facteurs impliqués dans le métabolisme des lipides (analyse d'expression des gènes FABP1, APO Cil, et CD36), (B) des récepteurs aux acides gras à chaîne courte (AGCC ou SCFA, en anglais), par analyse d'expression des gènes GPR41 et GPR43). Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; **p<0,01 ; # p<0,001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l'effet du régime), "correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l'effet du probiotique ou mélange de probiotiques).
La figure 5(C) illustre le niveau de production des AGCC (SCFA) totaux (gauche) et des niveaux proportionnels d'acétate, de butyrate et de propionate (droite) après 24 et 48h d'incubation avec le mélange probiotique Mix dans le modèle simulant l'écosystème intestinal (SHIME), in vitro. *** comparé au temps 0.
La figure 6 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d'obésité, l'effet du Mix sur (A) la composition du microbiote intestinal et en particulier sur la population de Bifidobacteria et d1 Akkermansia muciniphila. (B) L'espèce de Bifidobacterium détectée chez les souris HFD traitées ou non par le mix a été déterminée par analyse TGGE pour 5 souris représentatives des groupes HFD-PBS et HFD-Mix. Les marqueurs M1 ou M2 correspondent aux mélanges des souches indiquées.*p<0,05 ; **p<0,01 ; #p<0s05 ; ""pO.01. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l'effet du régime), "correspond à la comparaison entre le Mix vs Se PBS à régime identique (mesure de l'effet du probiotique ou du mélange de probiotiques selon l'invention),
La figure 7 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d'obésité, l'action du Mix sur (A) le poids (masse) du pancréas, du foie et de la rate, (B) l'accumulation des gouttelettes lipidiques (stéatose, voir les coupes histologiques représentatives de chacun des groupes expérimentaux), et (C) différents marqueurs de l'inflammation ou impliqués dans le métabolisme lipidique ou la réponse à l'insuline (analyse d'expression des gènes mcp-1, IL-6, TNFa, IL-10, IL-17, srebp-1c, APOCII Fabpl et IRS2). Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; ##p<0,01 ; #p<0,001 ; # p>0,0001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l'effet du régime). * correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l'effet du probiotique ou du mélange de probiotiques selon l'invention).
Les figures 8a et 8b illustrent l'impact du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 suivant l'invention sur le gain de poids au cours du temps selon que le probiotique a été cultivé (figure 8a) ou non cultivé (figure 8b) dans un milieu de culture selon l'invention. LFD = régime pauvre en graisse ; HFD= régime riche en graisse ; HFD B. lactis = régime riche en graisse associé une prise de la composition selon l'invention lorsque le probiotique est cultivé en présence de glutathion (figure 8a) ou en absence de glutathion (figure 8b).
Le protocole suivant a été observé pour récolter les résultats in vivo discutés dans les exemples 1 à 4 qui suivent.
Protocoles in vivo
Souris, souches de bactéries, et réaimes
Les tests ont été réalisés sur des souris mâles C57BL/6J, âgées de 5 semaines au début de l'expérimentation. La souche Ls33 de Lactobacillus L salivarius a été fournie par Danisco (Madison, Wl, Etats-Unis).
Le mélange de probiotiques (référencé comme Mix dans les exemples qui suivent) comprend deux souches différentes : une souche de L rhamnosus LMG S-28148 et une souche de Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 dans un rapport en cfu (colony-forming units) de 1 :1 (109 cfu total). Les régimes imposés aux souris se déclinent en un premier régime à bas taux de graisses (LFD : D12450B ; 10% kcal provenant de graisses) et en un second régime à haut taux de graisses (HFD : D12492, 60% kcal provenant de graisses). Les régimes ont été fournis par la Société Research Diet.
Protocole de traitement des animaux
5 jours consécutifs par semaine, chaque souris a reçu une administration orale de 30 pL de Ls33 - 109 cfu (colony-forming units ou, le nombre d'unités formatrices de colonie présentes dans la composition orale) dans de l'eau stérilisée ( ½0) (groupe Ls33-H20), d'eau stérilisée (groupe H20), ou du mélange de probiotiques (groupe Mix ; 5 108 cfu pour chaque souche) dans le tampon phosphate salin (PBS) (groupe Mix-PBS ou groupe PBS).
Après une semaine de traitement, les souris traitées au Ls33, à l'eau, au Mix, ou au PBS ont été assignées de façon aléatoire à un régime LFD (n=5 par groupe) ou HFD (n=15 par groupe). Le poids corporel et la prise de nourriture ont été enregistrés de manière hebdomadaire.
Lors du sacrifice, le sang, les tissus adipeux blancs épididymaires (EWAT) et sous-cutanés (SCWAT), le foie, la rate, l'intestin grêle, et le pancréas ont été collectés. Tests de tolérance à l'insuline et au glucose Les tests de tolérance au glucose (GTT) et à l'insuline (ITT) ont été réalisés après, respectivement 12 et 14 semaines de régime. Les animaux ont été mis à jeun pendant une période de 6 heures avant de recevoir une administration intra-péritonéale (IP) de glucose (D-glucose, g/kg de poids corporel) (GTT) ou d'insuline (0.75 lU/kg de poids corporel) (ITT). Les taux de glucose dans le sang ont été mesurés par un glucomètre automatique disponible dans le commerce (par exemple, un ACCU-CHEK® performa) sur un échantillon de sang prélevé au niveau de la queue avant l'injection de glucose (GTT) ou d'insuline (ITT) et à différents temps après injection de glucose (GTT) ou d'insuline (ITT).
Analyses sanguines
Les taux plasmatiques de leptine, adiponectine, MCP- , et insuline ont été mesurés en utilisant des trousses ELISA commercialisées. Les taux en acide gras non-estérifiés (NEFA), en triglycérides, en glycérol, en cholestérol HDL, et en cholestérol LDL ont été déterminés en utilisant des trousses d'analyse disponibles sur le marché (par exemple, le kit Abcam développé par Cambridge, GB). Analyses histologigues et immuno-histochimigues
Les échantillons de foie et de tissus adipeux blancs (EWAT) ont été fixés dans une solution de paraformaldéhyde à 4% , inclus ensuite en paraffine et enfin coupés, déposés sur lame puis colorés à l'hématoxyline éosine (H&E). L'analyse morphométrique des tissus adipeux blancs (EWAT), au moins 10 champs (ce qui représente environs 100 adipocytes) par section a été réalisée en utilisant le programme d'imagerie Image J (NIH image, National Center for Biotechnology Information). Analyses de l'expression des gènes L'ARN total des fragments de tissus adipeux blancs, de foie et d'intestin a été extrait (selon la méthode connue de l'homme de l'art) pour être ensuite rétro-transcrit (une quantité de 1 \ig a été retranscrite pour chacune des catégories de tissus susmentionnées). La technique de PCR (Polymerase Chain Reaction) quantitative en temps réel (RT-qPCR) a été réalisée selon un protocole connu de l'homme de l'art.
Analyses statistiques
Les données sont exprimées en moyenne + écart-type à la moyenne (SEM). Les analyses statistiques ont été réalisées en utilisant le test de Kruskal Wallis suivi du test de Mann-Whitney U. Les différences entre les groupes expérimentaux sont considérées comme étant statistiquement significatives lorsque la valeur p est inférieure à 0,05.
Le protocole suivant a été observé pour récolter les résultats in vitro discutés dans les exemples 5 et 6.
Protocole in vitro
Simulateur de l'écosystème microbien humain - modèle SHIME
Le réacteur SHIME qui simule le tractus gastro-intestinal humain a été mis en place selon une procédure bien connue de l'homme de l'art.
Le Mix a été ajouté dans le réacteur et les productions d'acides gras à chaîne courte (AGCC ou SCFA, en anglais) ont été mesurés aux temps t=0, t=24 h, et t=48h d'incubation à 37°C sous atmosphère anaérobie.
Evaluation de l'effet anti-inflammatoire de la souche Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 sur des cellules sanguines humaines
Du sang humain frais, obtenu à partir de quatre donneurs sains, a été dilué dans un rapport 1 :1 avec du PBS-Ca (GIBCO), déposé sur une couche de Ficoil (GIBCO) et centrifugé à 400 xg pendant 30 minutes à 20°C.
Les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) ont été isolées du sang après centrifugation et suspendues dans un volume final de 50 ml en utilisant du PBS-Ca, pour ensuite être lavées trois fois à 750 xg pendant 10 minutes à 20°C. Les PBMC ont ensuite été resuspendues dans un milieu RPMI (GIBCO), complété par 10% (v/v) de sérum de veau décomplémenté (sérum porté à 56°C pendant 30 minutes), 1% (p/v) de L-glutamine (GIBCO), et de la gentamycine (30pg/ml) (GIBCO). Les PBMC ont été comptées et leur nombre ajusté à 2 x 106 cellules par ml. La préparation est distribuée (1 ml) dans des plaques de culture à 24 puits.
Exemple 1 : Ls33 vs Mix
Cet exemple illustre l'impact du Ls33 sur le développement du surpoids et de l'obésité chez la souris.
La figure 1 illustre, pour une cure de 15 semaines en Ls33 ou en eau et un régime en nourriture à bas taux de graisses (LFD) ou à haut taux de graisses (HFD), les indicateurs suivants :
(A) l'évolution du gain de poids corporel, exprimé en pourcentage par rapport au poids mesuré au jour j=0 ;
(B) le test de tolérance au glucose (GTT) réalisé après 12 semaines de régime. Les taux de glucose (en mg/dl) ont été mesurés chez les souris, directement après une période de mise à jeun de 6 heures, aux temps t (en min) indiqués sur le graphe, après injection intra- péritonéale (IP) de glucose (qui correspond au temps t=0).
(C) le poids (masse) du tissu adipeux épididymaire (EWAT) (en g) après 15 semaines de régime (pesé lors du sacrifice) ;
- (D) le poids (masse) du tissu adipeux sous-cutané
(SCWAT) (en g) après 15 semaines de régime (pesé lors du sacrifice). Comme le montrent les résultats présentés sur cette figure, la souche Ls33, malgré son activité anti-inflammatoire démontrée in vitro et dans d'autres modèles pathologiques (i.e. inflammations intestinales), ne montre aucun effet (positif ou négatif) sur les différents indicateurs A à D.
A l'inverse, l'administration du mélange Mix montre des effets de protection significatifs. Ces résultats sont illustrés à la figure 2.
Cette figure illustre, après 17 semaines de traitement par le mélange de probiotiques (Mix) ou le PBS et pour un régime à bas taux de graisses (LFD) ou à haut taux de graisses (HFD), les résultats correspondants :
(A) à l'évolution du gain de poids corporel (exprimé en pourcentage par rapport au poids mesuré au jour j=0) ;
(B) à la prise cumulée de nourriture par souris et par jour (g/jour/souris) ;
(C) au test de tolérance à l'insuline (ITT) réalisé 14 semaines après le démarrage du régime : les taux de glucose dans le sang ont été mesurés après injection intrapéritonéale (IP) d'insuline. Les résultats montrent les taux normalisés (en % par rapport aux taux de glucose mesurés avant injection) + SEM et les moyennes + SEM des valeurs de l'aire sous la courbe (AUC) pour chaque courbe de glucose normalisée après injection de l'insuline ;
(D) au test de tolérance au glucose (GTT) réalisé après 12 semaines de régime. Les taux de glucose (en mg/dl) ont été mesurés chez la souris après injection IP de glucose et les valeurs d'AUC ont été calculées.
Pour le groupe de souris HFD-Mix, il a été observé un gain de poids corporel moins important (gain de 80,97% + 4,96%) que celui obtenu dans le groupe HFD-PBS (gain de 113,51 % + 4,89%) (voir figure 2A). Comme le montre la figure 2B, les souris du groupe HFD traitées par le mélange de probiotiques Mix présentent une diminution de la prise de nourriture cumulée (Food intake, FI). De manière intéressante, les effets bénéfiques observés sur la prise de poids corporel et l'indice FI sont apparus rapidement après le début du traitement (à partir de la quatrième semaine).
L'administration du mélange Mix améliore l'homéostasie du glucose pour le groupe HFD comme le montrent les taux moindres en glucose et en insuline de la table 1 ci-dessous :
Table 1
Groupes / LFD-PBS LFD-Mix HFD-PBS HFD-Mix
Indicateurs
Glucose (mg dt) 180,4 ± 30,88 160,3 ± 28,96 231 ,67 ± 21 ,7* 198,43 ± 15**
Insuline (ng ml) 0,72 ± 0,37 0,98 ± 0,24 2,96 ± 0,57 * 1 ,57 ± 0,23*
NEFA (mmol/l) 0,85 ± 0,06 1 ,07 ± 0,07 1 ,06 ± 0,03 0,9 ± 0,08
Glycérol (mmol/l) 0,13 ± 0,06 0,24 ± 0,05 0,38 ± 0,1 0,34 ± 0,05
Triglycéride (mmol/l) 0,4 ± 0,009 0,46 ± 0,02 0,41 ± 0,03 0,41 ± 0,03
Cholestérol (mmol/l) 1 ,35 ± 0,05 1 ,33 ± 0,05 1 ,94 ± 0,04*** 1 ,72 ± 0,3***
HDL (mmol/1) 1 ,09 ± 0,04 1 ,07 ± 0,04 1 ,5 ± 0,01 *** 1 ,35 ± 0,02***
LDL (mmol/l) 0,25 ± 0,01 0,26 ± 0,01 0,45 ± 0,04*** 0,36 ± 0,02***
Les données de cette table sont exprimées en moyenne + écart-type à la moyenne (SEM) (correspondant à 5 et 14 souris par groupe).* p<0,05 ; *** p<0,001 ; *p<0,05 ; **p<0,01 ; ***p<0,001. * correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l'effet du régime). * correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l'effet du probiotique ou du mélange de probiotiques).
Par ailleurs, comme le montre la table 1 , si les effets du Mix restent limités aux taux de NEFA, de glycérol et de triglycérides, il démontre une action hypocholestérolémiante puisqu'il est associé à une diminution du taux de cholestérol total et de HDL cholestérol.
En outre, l'indice HOMA-IR ((taux d'insuline à jeun/ taux de glucose à jeun)/22,5) est significativement réduit chez les souris du groupe HDF-Mix, comparé au groupe contrôle (32,04 + 5,86 vs 81 ,57 + 19,63 ; p<0,01 ), ce qui indique une sensibilité améliorée à l'insuline, confirmée par les résultats du test de tolérance à l'insuline (voir figure 2C).
De même, les souris traitées par le Mix sont moins intolérantes aux injections de glucose (voir figure 2D).
Exemple 2 : action du Mix sur l'inflammation des tissus adipeux blancs
La figure 3 illustre les effets du Mix sur :
(A) le poids (masse) de l'EWAT (en g) ;
- (B) le poids (masse) du SCWAT (en g) ;
(C) les quantités de leptine dans le sang (en ng/ml) mesurés par la méthode ELISA (méthode de dosage immuno- enzymatique) dans le sérum de souris préalablement mises à jeun pendant 6 heures ;
- (D) les quantités d'adiponectine dans le sang (en pg/ml) mesurés par la méthode ELISA dans le sérum de souris préalablement mises à jeun pendant 6 heures ;
(E) l'histologie des tissus adipeux épididymaires (présentation de coupes colorées à l'hématoxyline et à l'éosine représentatives de chacun des groupes expérimentaux). L'échelle est de 100 μιτι. Les flèches noires indique la présence d'infiltration cellulaire; et
(F) la distribution de la taille des adipocytes du EWAT. Les résultats sont présentés en % d'adipocytes par classe de tailles (0-20 μιη, 20-40, etc.), tandis que la figure 7 illustre l'action du Mix sur :
- (A) le poids (masse) du pancréas, du foie, et de la rate (en g);
(B) l'accumulation de gouttelettes lipidiques (/'.e. stéatose) dans le foie (présentation de coupes, colorées par H&E, représentatives de chacun des groupes expérimentaux). L'échelle est de 00 μιτι ; et (C) l'expression de gènes codant des cytokines pro- et anti-inflammatoires et des récepteurs impliqués dans le transport et le métabolisme des lipides, dans le foie.
En comparaison avec les groupes contrôle HFD, le groupe HFD-Mix présente une diminution marquée des masses adipeuses EWAT et SCWAT (voir figures 3A et 3B).
Une diminution marquée des poids (masses) du pancréas, du foie, et de la rate est également observée chez les individus du groupe HFD-Mix (voir figure 7A).
En outre, alors que les souris du groupe de contrôle HFD ont développé une stéatose hépatique, l'administration du mélange de probiotiques Mix permet de limiter la présence de gouttelettes de lipides dans les tissus (voir figure 7B).
En concordance avec la diminution de la masse de tissus adipeux blancs, les taux sanguins de leptine s'avèrent être significativement plus bas dans le groupe HFD-Mix (voir figure 3C), alors que les taux d'adiponectine ont tendance à être plus élevés (voir figure 3D).
L'histologie des tissus adipeux épididymaires a montré une densité plus élevée en petits adipocytes chez les souris du groupe HFD- Mix (voir figure 3E et 3F).
Il est à noter que, si chez les souris du groupe contrôle, les tissus adipeux sont infiltrés de manière marquée par des cellules qui entourent les adipocytes (marquées par une flèche sur la figure 3E), les échantillons de tissus prélevés chez les souris du groupe ayant reçu le Mix de probiotiques sont moins marqués par cette infiltration.
Lors du développement de l'obésité, les macrophages sont recrutés dans les tissus adipeux blancs alors que les cellules-T régulatrices FoxP3+CD4+ quittent ces tissus.
La figure 4 illustre chez la souris en surpoids l'action du Mix sur l'inflammation des tissus adipeux. Comme le montre la figure 4A, en comparaison avec les tissus LFD contrôles, les niveaux d'expression de plusieurs marqueurs spécifiques de monocytes/macrophages (F4/80 ; Cd68 ; Cd11 b ; et Cd11c) sont augmentés chez les souris du groupe HFD alors que les taux relatifs au marqueur Foxp3 sont diminués.
L'administration du mélange de probiotiques Mix diminue de manière significative l'expression induite par le régime HFD des marqueurs de monocytes/macrophages et augmente les niveaux d'expression du marqueur Foxp3.
L'impact du mélange Mix, et donc de la souche de probiotique selon l'invention, sur le recrutement des macrophages dans les tissus adipeux est appuyé par les résultats illustrés à la figure 4B.
Conformément à la diminution du recrutement des macrophages conjointement à une augmentation de l'accumulation en lymphocytes Treg anti-inflammatoires, il est montré dans cet exemple que les tissus adipeux épididymaires chez la souris traitée par le mélange Mix présentent un niveau d'inflammation moindre que les tissus contrôles, comme le démontrent les niveaux d'expression réduits pour les ARN messagers spécifiques de Γ II6, du Tnfa, de ΓΙΜα, et de ΓΙΙ-17 (voir figure 4C).
En outre, il est montré que le traitement à base du mélange Mix limite la diminution en PPARy (à la fois au niveau de l'ARN messager et de la protéine) induite par le régime HFD (voir figure 4D). Exemple 3 : action du Mix sur le métabolisme des lipides de l'intestin grêle et la production d'acides gras à chaîne courte (AGCC/SCFA)
Il est démontré dans cet exemple que les niveaux d'expression des gènes (GPR41 et GPR43) qui sont responsables du transport des acides gras à chaîne courte {SCFAs, pour Short-Chain Fatty Acids) sont diminués dans l'intestin grêle des souris soumises au régime HFD, ce qui indique que dans le groupe HFD, les AGCC sont en moindrer mesure d'agir positivement puisque ces derniers sont moins détectés, tandis qu'ils sont significativement augmentés chez Ses animaux traités avec le mélange Mix sous régime HFD (voir figure 5B).
Réciproquement, l'administration du Mix a pour effet de limiter l'augmentation des gènes impliqués dans le métabolisme lipidique induits par un régime alimentaire gras (voir figure 5A).
Exemple 4 : action du Mix sur le microbiote et le niveau de colonisation par Akkermansia muciniphila
Une analyse de certaines bactéries du microbiote a été réalisée par PCR quantitative (qPCR) à partir du contenu caecal des souris qui ont été soumises au régime HFD conjointement ou non à une prise du Mix, et d'autre part, des souris soumises au régime LFD conjointement ou non à une prise du Mix.
Les résultats illustrés à la figure 6 montrent un changement de la composition du microbiote des souris HFD-Mix, avec en particulier une restauration du niveau de colonisation par Akkermansia muciniphila chez les souris soumises au régime HFD et traitées avec la souche de probiotique ou le mélange de probiotiques selon l'invention.
Exemple 5 : action du Mix sur la production d'AGCC : utilisation du modèle SHIME
Dans cet exemple, un modèle dynamique in vitro de simulation de l'intestin, qui est destiné à reproduire l'écosystème microbien de l'intestin humain, a été employé.
Comme le montrent les résultats issus de cette simulation (voir la figure 5C), l'utilisation de la souche n° LMG P-28149 du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. Lactis permet une augmentation, dans un délai de 48h après inoculation, de la production des AGCCs totaux (total SCFAs), favorisant la production dans l'intestin de butyrate et de propionate, deux métabolites qui favorisent la satiété induite par la prise de nutriments chez l'être humain. Les taux en butyrate et propionate produits dans le colon ascendant associé au réacteur SHIME avant (T0) et après (T24h et T48h) incubation du mélange Mix selon l'invention sont repris en table 2. Ces données sont exprimées en mmol/L + SED.
Table 2
Période / T0 T24h T48h
Produits
Acétate 3,53 ± 0,38 10,96 ± 0,91 3,10 ± 0,16
Propionate 1 ,10 ± 0,03 3,87 ± 0,51 7,07 ± 0,16
Isobutyrate 0,00 ± 0,00 0,24 ± 0,05 1,30 ± 0,05
Butyrate 0,69 ± 0,07 3,25 ± 0,27 12,27 ± 0,22
Isovalérate 0,11 ± 0,00 0,50 ± 0,05 2,44 ± 0,04
Isocaproate 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00
Caproate 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00
Total 5 , 44 ± 0,33 18,84 + 1,46 26,19 ± 0,36
Mise en évidence de l'importance du glutathion dans le milieu de culture de la souche Bifîdobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P- 28149
Les figures 8a et 8b illustrent l'impact du probiotique Bifîdobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 suivant l'invention sur le gain de poids au cours du temps selon que le probiotique a été cultivé (figure 8a) ou non cultivé (figure 8b) dans un milieu de culture selon l'invention.
Comme on peut le constater en comparant les figures 8a et 8b et plus particulièrement les courbes HFD B. lactis, lorsqu'un régime alimentaire riche en graisse est associé à une prise de la composition selon l'invention dans laquelle le probiotique Bifîdobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 est obtenu par mise en culture dans un milieu de culture comprenant du glutathion, une diminution significative du gain de poids au cours du temps est observée (figure 8a), ce qui n'est pas le cas lors de la prise d'une composition selon l'invention qui comprend le probiotique obtenu par mise en culture dans un milieu de culture ne comprenant pas de glutathion (figure 8b).
Il est bien entendu que la présente invention n'est en aucune façon limitée aux formes de réalisations décrites ci-dessus et que bien des modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre des revendications annexées.
Liste des abréviations
AGCC (SCFA) : Acide gras à chaîne courte
EWAT : Tissus adipeux blancs épididymaires
GT(T) : (Test) de tolérance au glucose
HDL : Lipides à haute densité
H&E : Hématoxyline et éosine
HFD : Régime riche en graisses
IMC : Indice de Masse Corporelle
(HOMA)-IR : (Modèle homéostatique) pour apprécier la résistance à l'insuline
IT(T) : (Test) de tolérance à l'insuline
(V)LDL : Lipide à (très) faible densité
LFD : Régime pauvre en graisses
NEFA : Acide gras non-estérifié
PBS : Tampon phosphate salin
PBMC : Cellules mononuclées du sang périphérique
SCWAT : Tissus adipeux blancs sous-cutanés
SEM : Ecart-type à la moyenne
SHIME : Simulator of the Human Intestinal Microbial Ecosystem
WAT : Tissus adipeux blancs

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition à base d'au moins probiotique pour son utilisation dans le traitement curatif de la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids et/ou dans le traitement préventif de la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids ou ayant été en surpoids, caractérisée en ce que ledit probiotique est Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149.
2. Composition selon la revendication 1 , pour une utilisation selon la revendication 1 , comprenant au moins un probiotique additionnel choisi dans le groupe constitué des probiotiques suivants : Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacters, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cyanobacteria, Methanobrevibacterium, Lactobacillus, Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae (non-pathogène), Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Akkermansia, Bacillus, Butyrivibrio, et Clostridium, ou une combinaison de ceux-ci.
3. Composition selon la revendication 1 ou 2, pour une utilisation selon la revendication 1 , comprenant une souche de champignon et/ou de levure choisie dans le groupe constitué de Saccharomyces, de Candida, de Pichia, de Debaryomyces, de Torulopsis, d'Aspergilius, de Rhizopus, de Mucor, et de Pénicillium.
4. Composition selon quelconque des revendications précédentes, pour une utilisation selon la revendication 1 , dans laquelle ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel sont encapsulés dans un véhicule d'encapsulation.
5. Composition selon !a revendication 4, pour une utilisation selon la revendication 1 , dans laquelle ledit véhicule d'encapsulation comprend au moins une substance choisie dans le groupe constitué de l'aiginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar ou une combinaison de ceux-ci.
6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour une utilisation selon la revendication 1 , comprenant au moins une source nutritive choisie dans le groupe constitué d'un monosaccaride, d'un polysaccharide, d'un aminoacide, d'un peptide, d'une protéine, d'une vitamine, d'un extrait de levure, un sel d'halogénure d'un métal alcalin ou alcalinoterreux, un antioxydant, de glycérol, d'acétate de zinc, de chlorure de zinc, de lactate de zinc, d'acide ascorbique, d'acide citrique, d'une huile végétale, de graisse de lait, ou une combinaison de ceux-ci.
7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour une utilisation selon la revendication 1 , comprenant en outre au moins un prébiotique, formant ainsi une composition symbiotique.
8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, pour une utilisation selon la revendication 1 , comprenant un premier revêtement entérique recouvrant ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel.
9. Composition selon la revendication 8, pour une utilisation selon la revendication 1 , dans laquelle ledit premier revêtement entérique est choisi dans le groupe constitué de l'éthyle cellulose, de l'hydroxypropyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, de l'Eudragit®, ou une combinaison de ceux-ci.
10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour une utilisation selon la revendication 1 , comprenant un deuxième revêtement externe choisi dans le groupe constitué de l'alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar, de la cellulose, de l'hémicellulose, de l'éthyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, ou une combinaison de ceux-ci.
11. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour une utilisation selon la revendication 1 , comprenant en outre un ou plusieurs excipients biocompatibles.
12. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition comprenant au moins probiotique, chez l'être humain en surpoids ou ayant été en surpoids, ledit probiotique étant Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149.
13. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition selon la revendication 12, ladite composition comprenant au moins un probiotique additionnel choisi dans le groupe constitué des probiotiques suivants : Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacters, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cyanobacteria, Methanobrevibacterium, Lactobacillus, Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae (non-pathogène), Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Akkermansia, Bacillus, Butyrivibrio, et Clostridium, ou une combinaison de ceux-ci.
14. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition selon la revendication 12 ou 13, ladite composition comprenant une souche de champignon et/ou de levure choisie dans le groupe constitué de Saccharomyces, de Candida, de Pichia, de Debaryomyces, de Torulopsis, ô'Aspergillus, de Rhizopus, de Mucor, et de Pénicillium.
15. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 14, dans laquelle ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel sont encapsulés dans un véhicule d'encapsulation.
16. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition selon la revendication 15, dans laquelle ledit véhicule d'encapsulation comprend au moins une substance choisie dans le groupe constitué de l'alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar ou une combinaison de ceux-ci.
17. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 16, ladite composition comprenant au moins une source nutritive choisie dans le groupe constitué d'un monosaccaride, d'un polysaccharide, d'un aminoacide, d'un peptide, d'une protéine, d'une vitamine, d'un extrait de levure, un sel d'halogénure d'un métal alcalin ou alcalinoterreux, un antioxydant, de glycérol, d'acétate de zinc, de chlorure de zinc, de lactate de zinc, d'acide ascorbique, d'acide citrique, d'une huile végétale, de graisse de lait, ou une combinaison de ceux-ci.
18. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 17, ladite composition comprenant en outre au moins un prébiotique, formant ainsi une composition symbiotique.
19. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 18, ladite composition comprenant un premier revêtement entérique recouvrant ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel.
20. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition selon la revendication 19, dans laquelle ledit premier revêtement entérique est choisi dans le groupe constitué de l'éthyle cellulose, de l'hydroxypropyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, de udragit®, ou une combinaison de ceux-ci.
21. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 20, ladite composition comprenant un deuxième revêtement externe choisi dans le groupe constitué de l'alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar, de la cellulose, de l'hémicellulose, de l'éthyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, ou une combinaison de ceux-ci.
22. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 21 , ladite composition comprenant en outre un ou plusieurs excipients biocompatibles.
23. Milieu de culture du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 comprenant au moins une source protéique et au moins une source de carbohydrates, ledit milieu de culture étant caractérisé en ce qu'il comprend en outre du glutathion.
24. Milieu de culture selon la revendication 23, caractérisé en ce que le glutathion est présent en une concentration comprise entre 20 et 30 g/l de milieu de culture.
25. Milieu de culture selon la revendications 23 ou 24, caractérisé en ce ladite source de carbohydrates comprend au moins un sucre ou un mélange de sucres, lesquels sont choisis dans le groupe constitué par le lactose, le glucose, le galactose, le fructose, la maltodextrine, l'amidon, le tréhalose, le maltotriose, et une combinaison de ceux-ci.
26. Milieu de culture selon l'une quelconque des revendications 23 à 25, caractérisé en ce qu'il comprend en outre au moins un sucre aminé, par exemple la glucosamine ou la gaiactosamine.
27. Milieu de culture selon l'une quelconque des revendications 23 à 26, caractérisé en ce qu'il comprend en outre au moins un extrait de levure.
28. Procédé de fabrication par fermentation du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, ledit procédé comprenant au moins une étape de mise en culture dudit probiotique dans un milieu de culture selon l'une quelconque des revendications 23 à 27.
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