[go: up one dir, main page]

WO2010123065A1 - 癌抗原ヘルパーペプチド - Google Patents

癌抗原ヘルパーペプチド Download PDF

Info

Publication number
WO2010123065A1
WO2010123065A1 PCT/JP2010/057149 JP2010057149W WO2010123065A1 WO 2010123065 A1 WO2010123065 A1 WO 2010123065A1 JP 2010057149 W JP2010057149 W JP 2010057149W WO 2010123065 A1 WO2010123065 A1 WO 2010123065A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
peptide
cells
drb1
helper
mhc class
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2010/057149
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
治夫 杉山
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
International Institute of Cancer Immunology Inc
Original Assignee
International Institute of Cancer Immunology Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to KR1020177010731A priority Critical patent/KR20170046192A/ko
Priority to CN201080028991.4A priority patent/CN102803487B/zh
Priority to JP2011510358A priority patent/JP5730191B2/ja
Priority to CA2757764A priority patent/CA2757764C/en
Priority to SG2011074200A priority patent/SG175178A1/en
Priority to KR1020117027758A priority patent/KR101785738B1/ko
Priority to DK10767122.4T priority patent/DK2423310T3/en
Priority to BRPI1014998A priority patent/BRPI1014998A2/pt
Priority to US13/265,805 priority patent/US9266932B2/en
Priority to NZ595707A priority patent/NZ595707A/xx
Priority to MX2011011132A priority patent/MX2011011132A/es
Priority to AU2010240099A priority patent/AU2010240099B2/en
Priority to ES10767122.4T priority patent/ES2528766T3/es
Application filed by International Institute of Cancer Immunology Inc filed Critical International Institute of Cancer Immunology Inc
Priority to RU2011147479/10A priority patent/RU2588442C2/ru
Priority to HK12107953.6A priority patent/HK1167427B/en
Priority to EP10767122.4A priority patent/EP2423310B1/en
Publication of WO2010123065A1 publication Critical patent/WO2010123065A1/ja
Priority to IL215668A priority patent/IL215668A0/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Priority to ZA2011/08336A priority patent/ZA201108336B/en
Priority to IL228948A priority patent/IL228948A0/en
Priority to US14/994,801 priority patent/US20160176939A1/en
Priority to US15/831,484 priority patent/US10759840B2/en
Priority to US16/937,619 priority patent/US11732018B2/en
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/82—Translation products from oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001152—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
    • A61K39/001153—Wilms tumor 1 [WT1]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0635—B lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0645—Macrophages, e.g. Kuepfer cells in the liver; Monocytes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies

Definitions

  • the present invention relates to a WT1 helper peptide, a polynucleotide encoding the peptide, WT1-specific helper T cells induced by the peptide, and a pharmaceutical composition for cancer treatment / prevention containing these.
  • This application claims priority to Japanese Patent Application No. 2009-105286 filed on April 23, 2009, and incorporates the entire contents of Japanese Patent Application No. 2009-105286. is there.
  • the WT1 gene (Wilms' tumor 1 gene) is a gene identified as a responsible gene for Wilms tumor, which is a renal cancer of children (Non-patent Documents 1 and 2), and is a transcription factor having a zinc finger structure. Initially, the WT1 gene was considered to be a tumor suppressor gene, but subsequent studies (Non-Patent Documents 3 to 6) showed that it functions rather as an oncogene in hematopoietic tumors and solid tumors.
  • mice immunized with the WT1 peptide or WT1 cDNA reject the transplanted WT1 gene-expressing tumor cells with high probability (Non-patent Documents 7 and 10), but normal tissues that endogenously express the WT1 gene.
  • WT1-specific CTLs can be induced not only in mice but also in humans, and such CTLs have toxic activity against tumor cells that highly express WT1 gene, but endogenously express WT1 gene. It was strongly suggested that normal cells do not have a damaging activity (Non-patent Documents 7, 10 to 14).
  • helper T cells specific for cancer antigens is important for efficiently inducing CTL.
  • Helper T cells CD4 positive T cells
  • Activated helper T cells produce cytokines such as IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, or interferon (IFN), and proliferation, differentiation of B cells and other subsets of T cells , And promote maturity.
  • Non-patent Document 16 the antigenic peptide that binds to the MHC class II molecule efficiently activates CTL and the like through the induction of helper T cells to enhance the immune function. So far, regarding WT1, only antigen peptides that bind to HLA-DRB1 * 0401 and HLA-DRB1 * 0405 of the MHC class II molecule (Non-patent Document 17 and Patent Document 1) have been reported. It was necessary to find the antigenic peptide.
  • the solution of the present invention is to provide a peptide that binds to a wide range of MHC class II molecules to induce WT1-specific helper T cells, a polynucleotide encoding the peptide, WT1 helper T cells induced by the peptide, and It is providing the pharmaceutical composition for cancer treatment / prevention containing these.
  • the present inventors have conducted intensive research to solve the above problems. Then, the present inventors show that a peptide having a part of a continuous amino acid sequence encoding a WT1 protein functions as a cancer antigen helper peptide, that is, is bound to an MHC class II molecule on an antigen-presenting cell. It was found that WT1-specific helper T cells were induced, and it was shown that these can be used as a pharmaceutical composition for treating / preventing cancer.
  • the present invention (1) A peptide having an amino acid sequence consisting of consecutive amino acids derived from WT1 protein, wherein the amino acid sequence is (A) the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3; (B) the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4; (C) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5; and (d) an amino acid sequence represented by (a) to (c), wherein one or several amino acids are substituted, deleted, or added.
  • MHC class II molecules are DRB1 * 0101, DRB1 * 0405, DRB1 * 0802, DRB1 * 0803, DRB1 * 0901, DRB1 * 1201, DRB1 * 1403, DRB1 * 1501, DRB1 * 1502, DPB1 * 0201, DPB1 * 0202, DPB1 * 0402, DPB1 * 0501, DPB1 * 0901, DQB1 * 0301, DQB1 * 0302, DQB1 * 0401, DQB1 * 0501, DQB1 * 0601, DQB1 * 0602, and DRB5 * 0102
  • the MHC class II molecule is selected from the group consisting of DRB1 * 0101, DRB1 * 0405, DRB1 * 1502, DPB1 * 0201, DPB1 * 0202, and DQB1 * 0601 (1) or (2 )
  • the peptide according to (5) a polynucleotide
  • a method for inducing WT1-specific helper T cells (15) A kit for inducing WT1-specific helper T cells, comprising the peptide according to any one of (1) to (4) as an essential component; (16) For preventing or treating cancer comprising the peptide according to any one of (1) to (4), the polynucleotide according to (5), or the vector according to (6) as an essential component kit, (17) A method for determining the presence or amount of WT1-specific helper T cells in a subject having the MHC class II molecule according to (3) or (4), (A) reacting the peptide according to any one of (1) to (4) with the subject-derived sample; (B) examining the presence or amount of cytokines contained in the sample; A method comprising steps, Is to provide.
  • FIG. 1 shows the results of measuring cell proliferation after stimulating each peptide-specific T cell line prepared by pulsing three types of peptides (mWT1 35 , mWT1 86 , and mWT1 294 ) with each peptide.
  • FIG. 2 stimulates each peptide-specific T cell line generated by pulsing three peptides (mWT1 35 , mWT1 86 , and mWT1 294 ) with each corresponding peptide in the presence of anti-MHC class I or II antibodies. Then, the results of measuring cell proliferation are shown. In the figure,-represents no peptide stimulation.
  • FIG. 3 shows each corresponding WT1 peptide-specific T cell line with C1498 cells pulsed with C1498 cells, three peptides (mWT1 35 , mWT1 86 , and mWT1 294 ) and C1498 cells forced to express WT1 protein. The result of having measured the cell proliferation of is shown.
  • the cpm on the vertical axis represents the count per minute.
  • FIG. 4 shows the results of measuring the IFN- ⁇ production ability of each peptide-specific T cell line prepared by pulsing three types of peptides (mWT1 35 , mWT1 86 , and mWT1 294 ).
  • FIG. 5 shows the results of measuring the CTL cytotoxic activity of three peptides (mWT1 35 , mWT1 86 , and mWT1 294 ).
  • Black circles show the results of experiments performed using RMAS cells pulsed with WT1 126 peptide (MHC class I restricted peptide).
  • White circles show the results of experiments performed using control RMAS cells.
  • FIG. 6 shows a time-series schematic diagram of tumor transplantation and immunization in a tumor transplantation experiment. Immunization with mWT1 35 helper peptide was performed on days 7, 14, and 21 after subcutaneous implantation of WT1-expressing leukemia cells into mice, and dissection was performed on day 29.
  • FIG. 7 shows tumor size in mice immunized with mWT1 35 helper peptide and the percentage of individuals with no disease. Of the mice immunized with mWT1 35 helper peptide, 4 out of 10 were disease free. On the other hand, among the mice immunized with the control, none of the 9 mice that were disease-free existed.
  • FIG. 8 shows disease-free survival in mice immunized with mWT1 35 helper peptide.
  • FIG. 9 shows the cytotoxic activity of CTL in mice immunized with mWT1 35 helper peptide.
  • the black circles are the results of experiments conducted using RMAS cells pulsed with mWT1 126 peptide (MHCI peptide).
  • White circles show the results of experiments performed using control RMAS cells. Numbers in parentheses indicate tumor diameter mm.
  • FIG. 10 shows the cytotoxic activity of mWT1-specific CTL in control mice.
  • the black circles are the results of experiments conducted using RMAS cells pulsed with mWT1 126 peptide (MHCI peptide).
  • White circles show the results of experiments performed using control RMAS cells. Numbers in parentheses indicate tumor diameter mm.
  • FIG. 10 shows the cytotoxic activity of mWT1-specific CTL in control mice.
  • the black circles are the results of experiments conducted using RMAS cells pulsed with mWT1 126 peptide (MHCI peptide).
  • White circles show the results of experiments performed using control
  • FIG. 11 shows the cytotoxic activity of mWT1 126 peptide-specific CTL (left diagram) and the percentage of WT1 126 tetramer positive T cells (right diagram) by administration of mWT1 35 peptide.
  • FIG. 12 shows the measurement results of cell proliferation by stimulation with WT1 35 peptide in peripheral blood mononuclear cells of healthy individuals having each MHC class II molecule.
  • FIG. 13 shows responders (DRB1 * 0101/0405, DPB1 * 0201/0402, DQB1 * 0401 / 0501-positive healthy persons (PBMCs derived from healthy persons A)), and Stimulators (DRB1 * 0405/0901, DPB1 * 0201 / 0501, DQB1 * 0303 / 0401-positive healthy person (PBMC derived from healthy person B)) shows the measurement results of cell proliferation.
  • the vertical axis represents the amount of 3 H-thymidine incorporated (cpm).
  • the horizontal axis represents the types of various antibodies added (no addition, anti-HLA-DR antibody, anti-HLA-DP antibody, and anti-HLA-DQ antibody).
  • FIG. 14 shows responders (DRB1 * 0101/0405, DPB1 * 0201/0402, DQB1 * 0401 / 5011-positive healthy person (PBMC derived from healthy person A)) and Stimulators (DRB1 * 0405/0803, DPB1 * 0202 / 0501, DQB1 * 0401/0601 positive healthy person (PBMC derived from healthy person G)) shows the measurement results of cell proliferation.
  • the vertical axis represents the amount of 3 H-thymidine incorporated (cpm).
  • the horizontal axis represents the types of various antibodies added (no addition, anti-HLA-DR antibody, anti-HLA-DP antibody, and anti-HLA-DQ antibody).
  • FIG. 15 shows responders (DRB1 * 0101/0405, DPB1 * 0201/0402, DQB1 * 0401/0501 PBMC derived from a healthy person (healthy person A)) and Stimulators (DRB1 * 0101/0803, DPB1 * 0501 / -, Shows the measurement results of cell proliferation in the case of treatment with DQB1 * 0501 / 0601-positive healthy person (PBMC derived from healthy person H).
  • the vertical axis represents the amount of 3 H-thymidine incorporated (cpm).
  • the horizontal axis represents the types of various antibodies added (no addition, anti-HLA-DR antibody, anti-HLA-DP antibody, and anti-HLA-DQ antibody).
  • FIG. 16 shows responders (DRB1 * 0405/0803, DPB1 * 0202/0501, DQB1 * 0401 / 0601-positive healthy person (PBMC derived from healthy person G)), and Stimulator (L cell into which DQB1 * 0601 gene was introduced).
  • the vertical axis shows the ratio of the amount of IFN- ⁇ in T cells.
  • the horizontal axis represents the presence or absence (+ or ⁇ ) of a pulse due to the WT1 35 peptide.
  • FIG. 17 shows responder (DRB1 * 1502/1502, DPB1 * 0201/0901, DQB1 * 0601/0601 positive healthy person (PBMC derived from healthy person D)), Stimulator (PBMC derived from the same healthy person as Responder).
  • the measurement result of a cell proliferation at the time of processing by is shown.
  • the vertical axis represents the amount of 3 H-thymidine incorporated (cpm).
  • the horizontal axis represents the types of various antibodies added (no addition, anti-HLA-DR antibody, anti-HLA-DP antibody, and anti-HLA-DQ antibody).
  • the vertical axis shows the ratio of the amount of IFN- ⁇ in T cells.
  • the horizontal axis represents the presence or absence (+ or ⁇ ) of a pulse due to the WT1 35 peptide.
  • the present invention relates to a peptide having an amino acid sequence consisting of amino acids derived from mouse or human WT1 protein.
  • WT1 gene is, for example, hematopoietic tumor such as leukemia, myelodysplastic syndrome, multiple myeloma, malignant lymphoma, stomach cancer, colon cancer, lung cancer, breast cancer, germ cell cancer, liver cancer, skin cancer, bladder cancer, prostate cancer, It is highly expressed in solid cancers such as uterine cancer, cervical cancer and ovarian cancer. Therefore, many peptides of the present invention are present in cancer cells that express the WT1 gene.
  • the peptide of the present invention is a peptide having an amino acid sequence consisting of consecutive amino acids derived from the human WT1 protein shown in SEQ ID NO: 2, retains the ability to bind to the following MHC class II molecules, and has a WT1-specific helper T It is a peptide having the ability to induce cells.
  • the amino acid sequence and length are not specifically limited, However, When a peptide is too long, it will become easy to receive the effect
  • the length of the peptide of the present invention is preferably 10 to 25 amino acids, more preferably 15 to 21 amino acids, still more preferably 16 to 20 amino acids, such as 17 amino acids, 18 amino acids, or 19 amino acids.
  • Specific examples of peptides of the present invention SEQ ID NO: amino acid sequence shown in 3; SEQ ID NO: amino acid sequence shown in 4; SEQ ID NO: is to have the amino acid sequence shown in 5.
  • the peptides of the present invention include variants of the above peptides. There are several variants, for example, 1 to 9, preferably 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, and more preferably 1 to 2 in one amino acid sequence of the above.
  • one amino acid may comprise a peptide selected from the group consisting of amino acid sequences substituted, deleted or added. Substitution of amino acids in the peptide may be performed with any kind of amino acid at any position. Conservative amino acid substitution is preferred. For example, a Glu residue may be replaced with an Asp residue, a Phe residue with a Tyr residue, a Leu residue with an Ile residue, an Ala residue with a Ser residue, and a His residue with an Arg residue. Good. The addition or deletion of amino acids is preferably performed at the N-terminal and C-terminal in the peptide, but may be performed within the sequence.
  • a preferred embodiment of the peptide of the present invention has SEQ ID NO: 3.
  • any of the above peptides is required to have the ability to bind to MHC class II molecules and to induce WT1-specific helper T cells.
  • the MHC class II molecule to which the peptide of the present invention binds may belong to any subclass of HLA-DR, HLA-DQ, and HLA-DP.
  • a peptide that retains the ability to bind to MHC class II molecules and has the ability to induce WT1-specific helper T cells is referred to as a WT1 helper peptide.
  • the peptide having the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3 is also referred to as WT1 35 peptide, WT1 35 helper peptide, or WT1 35 peptide.
  • the peptide of the present invention is also a peptide having an amino acid sequence consisting of consecutive amino acids derived from the mouse WT1 protein shown in SEQ ID NO: 1, wherein the amino acid sequence is in position 9 of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4.
  • a peptide in which the amino acid residue is substituted with leucine (SEQ ID NO: 6); or a peptide in which the amino acid residue at the 11th position of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5 is substituted with serine (SEQ ID NO: 7) Also good.
  • the peptide of the present invention has several amino acid sequences shown in SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7, for example, 1 to 9, preferably 1 to 5, 1 to 4, and 1 to 3.
  • more preferably 1 amino acid may comprise a peptide selected from the group consisting of amino acid sequences substituted, deleted or added.
  • the peptide having the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6 is also referred to as mWT1 86 peptide or mWT1 86 helper peptide
  • the peptide having the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7 is used as mWT1 294 peptide or mWT1 294 helper. Also called a peptide.
  • the peptide of the present invention is derived from the WT1 protein, may be composed of the above-mentioned continuous amino acid sequence, and may contain these. Therefore, the peptide of the present invention may be, for example, a peptide itself composed of the above amino acid sequence, or a WT1 protein containing the above amino acid sequence or a part thereof.
  • the peptide of the present invention may also be a modified form of the above amino acid sequence. An amino acid residue in the amino acid sequence can be modified by a known method.
  • Such a modified product may be, for example, a product obtained by subjecting a functional group in the side chain of an amino acid residue constituting a peptide to esterification, alkylation, halogenation, phosphorylation, sulfonation, amidation, or the like.
  • various substances can be bound to the N-terminus and / or C-terminus of the peptide containing the amino acid sequence.
  • amino acids, peptides, analogs thereof and the like may be bound.
  • these substances are bound to the peptide of the present invention, these substances are treated with, for example, an in vivo enzyme or a process such as intracellular processing, and finally a peptide having the above amino acid sequence is generated.
  • helper T cells can be obtained by being presented on the cell surface as a complex with MHC class II molecules.
  • These substances may regulate the solubility of the peptide of the present invention, may improve the stability such as protease resistance, and are specific for a given tissue / organ, for example.
  • the peptide of the present invention may be delivered, or it may have an action of enhancing the uptake efficiency of antigen-presenting cells.
  • These substances may also be those that increase the ability to induce CTL, for example, helper peptides other than the peptides of the present invention.
  • the modified form of the peptide of the present invention may be one in which the amino group of the N-terminal amino acid or the carboxyl group of the C-terminal amino acid is modified.
  • the amino group modifying group of the N-terminal amino acid include an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms having 1 to 6 carbon atoms, a phenyl group, a cycloalkyl group, and an acyl group.
  • Specific examples of the acyl group include 1 carbon atom.
  • alkanoyl groups having 1 to 6 carbon atoms carbonyl groups substituted with cycloalkyl groups having 5 to 7 carbon atoms, alkylsulfonyl groups having 1 to 6 carbon atoms, phenylsulfonyl groups , An alkoxycarbonyl group having 2 to 6 carbon atoms, an alkoxycarbonyl group substituted with a phenyl group, a carbonyl group substituted with a cycloalkoxy having 5 to 7 carbon atoms, a phenoxycarbonyl group, and the like.
  • Examples of the peptide in which the carboxyl group of the C-terminal amino acid is modified include an ester form and an amide form.
  • ester form examples include an alkyl ester having 1 to 6 carbon atoms and a carbon number substituted with a phenyl group from 0 carbon atoms. 6 alkyl esters, cycloalkyl esters having 5 to 7 carbon atoms, and the like.
  • amides include amides, amides substituted with one or two alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms, phenyl An amide substituted with one or two alkyl groups having 0 to 6 carbon atoms substituted with a group, an amide containing a nitrogen atom of the amide group to form a 5- to 7-membered azacycloalkane, and the like .
  • modified form of the peptide of the present invention may be one in which amino acid residues are bonded by bonds other than peptide bonds such as carbon-carbon bond, carbon-nitrogen bond, and carbon-sulfur bond.
  • the peptides of the present invention may contain one or more D-form amino acids.
  • peptides of the present invention, and the mutants and modifications of the present invention described above are examples, and those skilled in the art can easily assume variations thereof, manufacture them, examine their effects, and use them.
  • the peptide of the present invention can be synthesized by a method usually used in the art or a modification thereof. Such synthetic methods include, for example, Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966; The Proteins, Vol 2, Academic Press Inc., New York, 1976; Peptide Synthesis, Maruzen Co., Ltd., 1975; Maruzen Co., Ltd., 1985; Drug Development, Vol. 14, Peptide Synthesis, Hirokawa Shoten, 1991, etc.
  • the peptide of the present invention can also be produced using genetic engineering techniques based on nucleotide sequence information encoding the peptide of the present invention. Such genetic engineering techniques are well known to those skilled in the art. These methods are based on the methods described in the literature (Molecular Cloning, T. Maniatis et al., CSH Laboratory (1983), DNA Cloning, DM. Can be done.
  • helper T cells by binding of the peptide of the present invention or a candidate peptide thereof to the above MHC class II molecule is, for example, a known method such as the method described in Cancer Immunol. Immunother. 51: 271 (2002), It can be examined by the method described in the examples of the present specification.
  • the peptide of the present invention activates helper T cells (CD4 positive T cells)
  • the peptide of the present invention is effective in inducing and maintaining CTL differentiation and activating effector cells such as macrophages. It can be used for the treatment or prevention of cancer.
  • the present invention relates to a polynucleotide encoding the WT1 helper peptide (hereinafter also referred to as WT1 polynucleotide).
  • the polynucleotide of the present invention may be DNA or RNA.
  • the base sequence of the polynucleotide of the present invention can be determined based on the amino acid sequence of the WT1 helper peptide.
  • the polynucleotide can be produced by, for example, a DNA or RNA synthesis method, a PCR method, or the like.
  • the polynucleotide encoding the peptide of the present invention includes a polynucleotide that hybridizes with a complementary sequence of the polynucleotide under stringent conditions and encodes a peptide having an activity equivalent to that of the peptide of the present invention. included.
  • hybridize under stringent conditions the hybridization used here is, for example, Sambrook J. et al. , Frisch E. F. , Maniatis T. It can be performed according to the usual methods described in the author, Molecular Cloning 2nd Edition (Molecular Cloning 2nd edition), Cold Spring Harbor Laboratory Issue (Cold Spring Harbor Laboratory press), and the like.
  • stringent conditions means, for example, 6 ⁇ SSC (a solution containing 1.5M NaCl, 0.15M trisodium citrate is 10 ⁇ SSC), and a solution containing 50% formamide at 45 ° C. After the hybrid was formed at 2 ° SSC and washed at 50 ° C. (Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1989), 6.3.1-6.3.6). And the like.
  • the present invention relates to an expression vector (hereinafter, also referred to as WT1 expression vector) containing the above polynucleotide.
  • the type of expression vector, the sequence contained in addition to the above polynucleotide sequence, and the like can be appropriately selected according to the type and purpose of the host into which the expression vector is introduced, and include plasmids, phage vectors, virus vectors and the like.
  • examples of the vector include plasmid vectors such as pUC118, pUC119, pBR322, and pCR3, and phage vectors such as ⁇ ZAPII and ⁇ gt11.
  • examples of the vector include pYES2, pYEUra3, and the like.
  • examples of the host include pAcSGHisNT-A and the like.
  • examples thereof include plasmid vectors such as pKCR, pCDM8, pGL2, pcDNA3.1, pRc / RSV, and pRc / CMV, and viral vectors such as retrovirus vectors, adenovirus vectors, and adeno-associated virus vectors. It is done.
  • the vector may appropriately have factors such as a promoter capable of inducing expression, a gene encoding a signal sequence, a selection marker gene, and a terminator.
  • a sequence expressed as a fusion protein with thioredoxin, His tag, GST (glutathione S-transferase) or the like may be added so that isolation and purification can be facilitated.
  • a GST fusion protein vector such as pGEX4T
  • an appropriate promoter such as lac, tac, trc, trp, CMV, SV40 early promoter
  • a vector having a tag sequence such as Myc, His, etc. (Eg, pcDNA3.1 / Myc-His)
  • a vector (pET32a) that expresses a fusion protein with thioredoxin and His tag can be used.
  • the expression vector of the present invention is administered to a subject to produce a WT1 helper peptide in vivo, and WT1-specific helper T cells induced thereby are various cytokines (for example, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, or interferon (IFN), etc.) and promote the proliferation, differentiation and maturation of B cells and other T cells. Therefore, using the WT1 expression vector of the present invention, it is possible to specifically damage tumor cells having MHC class I molecules and highly expressing WT1.
  • WT1-specific helper T cells induced thereby are various cytokines (for example, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, or interferon (IFN), etc.) and promote the proliferation, differentiation and maturation of B cells and other T cells. Therefore, using the WT1 expression vector of the present invention, it is possible to specifically damage tumor cells having MHC class I molecules and highly expressing WT1.
  • the present invention relates to an antibody against the WT1 helper peptide or a polynucleotide encoding the peptide (hereinafter also referred to as WT1 antibody).
  • the antibody of the present invention may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody. Methods for producing these antibodies are already well known, and the antibodies of the present invention can also be produced according to these conventional methods (Current protocols Molecular Biology edit. Ausubel et al. (1987) Publish. John Wiley and Sons. Section 11.12 ⁇ 11.13, Antibodies; A Laboratory Manual, Lane, H, D. et al., Cold Spring Harber Laboratory Press Publishing New York 1989).
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for treating or preventing cancer, comprising the WT1 helper peptide, WT1 polynucleotide, or WT1 expression vector.
  • WT1 gene is, for example, hematopoietic tumor such as leukemia, myelodysplastic syndrome, multiple myeloma, malignant lymphoma, stomach cancer, colon cancer, lung cancer, breast cancer, germ cell cancer, liver cancer, skin cancer, bladder cancer, prostate cancer, Since it is highly expressed in solid cancers such as uterine cancer, cervical cancer and ovarian cancer, the pharmaceutical composition of the present invention can be used for the treatment or prevention of cancer expressing WT1 gene.
  • WT1-specific helper T cells induced by the WT1 helper peptide contained in the pharmaceutical composition are various cytokines (for example, IL-2 , IL-4, IL-5, IL-6, or interferon (IFN)), and promote the proliferation, differentiation, and maturation of B cells and other subsets of T cells. Therefore, tumor cells having MHC class I molecules and high WT1 expression can be specifically damaged using the peptide of the present invention.
  • cytokines for example, IL-2 , IL-4, IL-5, IL-6, or interferon (IFN)
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain, for example, a carrier, an excipient and the like in addition to the WT1 helper peptide, WT1 polynucleotide, or WT1 expression vector as an active ingredient. Since the WT1 helper peptide contained in the pharmaceutical composition of the present invention induces WT1-specific helper T cells, the pharmaceutical composition of the present invention contains an appropriate adjuvant in order to enhance the induction efficiency, or It may be administered with a suitable adjuvant.
  • Preferred adjuvants include, but are not limited to, complete or incomplete Freund's adjuvant, aluminum hydroxide, and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may also contain a known cancer antigen peptide other than the WT1 helper peptide as an active ingredient, for example, a WT1 126 peptide that induces WT1-specific CTL (Oka et al, Cancer).
  • a WT1 126 peptide that induces WT1-specific CTL (Oka et al, Cancer).
  • Immunotherapy targeting Wilms 'tumor gene WT1 product Journal of Immunology, 164: 1873-1880, 2000 and Oka et al.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may also be administered in combination with known cancer antigen peptides.
  • a known cancer antigen peptide such as the WT1 126 peptide can be administered before or after administering the pharmaceutical composition of the present invention. Since the pharmaceutical composition of the present invention has the feature of activating B cells and other T cells by inducing WT1-specific helper T cells, it was induced by administering a known cancer antigen peptide. It is possible to further enhance the activity of CTL and significantly increase the therapeutic effect.
  • the administration method of the pharmaceutical composition of the present invention can be appropriately selected according to conditions such as the type of disease, the state of the subject, and the target site.
  • the administration method include, but are not limited to, intradermal administration, subcutaneous administration, intramuscular administration, intravenous administration, nasal administration, and oral administration.
  • the administration method may be lymphocyte therapy or DC (dendritic cell) therapy.
  • the amount of the peptide contained in the pharmaceutical composition of the present invention, the dosage form of the pharmaceutical composition, the number of administrations and the like can be appropriately selected according to conditions such as the type of disease, the state of the subject, the target site, etc.
  • the peptide dosage is usually 0.0001 mg to 1000 mg, preferably 0.001 mg to 10000 mg.
  • the present invention relates to a method for treating or preventing cancer, which comprises administering an effective amount of the pharmaceutical composition to a subject having the MHC class II molecule.
  • the cancer to be treated or prevented may be any cancer that expresses the WT1 gene, for example, hematopoietic tumors such as leukemia, myelodysplastic syndrome, multiple myeloma, malignant lymphoma, gastric cancer, Including solid cancers such as colon cancer, lung cancer, breast cancer, germ cell cancer, liver cancer, skin cancer, bladder cancer, prostate cancer, uterine cancer, cervical cancer, ovarian cancer.
  • the present invention relates to the use of the above WT1 helper peptide, WT1 polynucleotide, or WT1 expression vector for treating or preventing cancer.
  • the present invention in yet another aspect, relates to the use of a WT1 helper peptide for producing a pharmaceutical composition for treating or preventing cancer.
  • the present invention relates to the use of a WT1 polynucleotide or WT1 expression vector for producing a pharmaceutical composition containing the WT1 polynucleotide or WT1 expression vector.
  • the present invention relates to a cell containing the above WT1 helper peptide, WT1 polynucleotide, or WT1 expression vector.
  • the cell of the present invention can be produced, for example, by transforming a host cell such as Escherichia coli, yeast, insect cell or animal cell using the above expression vector.
  • a method for introducing an expression vector into a host cell various methods can be appropriately selected and used.
  • the peptide of the present invention can also be produced by culturing transformed cells and recovering and purifying the produced WT1 helper peptide.
  • the present invention relates to an antigen-presenting cell (for example, dendritic cell, B-lymphocyte, macrophage, etc.) that presents the WT1 helper peptide via the MHC class II molecule.
  • the antigen-presenting cell of the present invention is induced by the WT1 helper peptide.
  • WT1-specific helper T cells are efficiently induced.
  • the present invention is directed to culturing immature antigen-presenting cells in the presence of a WT1 helper peptide, and inducing antigen-presenting cells that present the WT1 helper peptide via the MHC class II molecule from the immature antigen-presenting cells.
  • the present invention relates to a method for inducing an antigen-presenting cell that presents a WT1 helper peptide via an MHC class II molecule.
  • immature antigen-presenting cells refer to cells that can mature to become antigen-presenting cells, such as dendritic cells, B-lymphocytes, macrophages, and the like.
  • the subject from which the immature antigen-presenting cell is derived may be any one as long as it has the above MHC class II molecule. Since immature antigen-presenting cells are contained in, for example, peripheral blood mononuclear cells, such cells may be cultured in the presence of the WT1 helper peptide.
  • the present invention provides an antigen-presenting cell that presents a WT1 helper peptide via the MHC class II molecule to a subject having the same molecule as the MHC class II molecule. It relates to a method for treating or preventing.
  • the administration method of antigen-presenting cells can be appropriately selected according to conditions such as the type of disease, the state of the subject, and the target site. Examples of the method include, but are not limited to, intravenous administration, intradermal administration, subcutaneous administration, intramuscular administration, nasal administration, and oral administration.
  • the present invention provides a method for preventing or treating cancer, characterized by inducing an antigen-presenting cell that presents a WT1 helper peptide via the MHC class II molecule.
  • A reacting a sample with a nucleic acid having a nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of WT1 protein (SEQ ID NO: 2) or a partial sequence thereof, or the WT1 helper peptide,
  • B obtaining an antigen-presenting cell that presents the WT1 helper peptide contained in the sample via the MHC class II molecule
  • C relates to a method comprising the step of administering the antigen-presenting cell to a subject having the same molecule as the MHC class II molecule.
  • the sample in the method may be any sample as long as it may contain lymphocytes or dendritic cells, and examples thereof include a subject-derived sample such as blood, a cell culture solution, and the like.
  • the reaction in the above method may be performed using a general method, and is preferably performed using electroporation.
  • Obtaining antigen-presenting cells can be performed using methods known to those skilled in the art. Those skilled in the art can appropriately determine the culture conditions of the cells in the sample in each step.
  • the method for administering the antigen-presenting cell may be as described above.
  • the present invention relates to a WT1-specific helper T cell induced by the WT1 helper peptide.
  • the helper T cells of the present invention are induced, proliferated and activated by recognizing a complex of a WT1 helper peptide and an MHC class II molecule.
  • Activated WT1-specific helper T cells produce cytokines such as IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, or interferon (IFN), and are a subset of B cells and other subsets of T cells. Promotes proliferation, differentiation and maturation. Therefore, the helper T cell of the present invention can specifically damage tumor cells having MHC class I molecules and highly expressing WT1.
  • the present invention is characterized in that peripheral blood mononuclear cells are cultured in the presence of a WT1 helper peptide, and WT1-specific helper T cells are induced from the peripheral blood mononuclear cells.
  • the present invention relates to a method for inducing helper T cells.
  • the subject from which the peripheral blood mononuclear cells are derived may be any as long as it has the MHC class II molecule.
  • WT1-specific helper T cells are derived from helper T cell progenitor cells in the peripheral blood mononuclear cells.
  • the subject's hematopoietic tumor or solid cancer can be treated or prevented.
  • the peripheral blood mononuclear cells in this specification include immature antigen-presenting cells (for example, precursors such as dendritic cells, B-lymphocytes, and macrophages) that are precursors of antigen-presenting cells. Since immature antigen-presenting cells are contained in, for example, peripheral blood mononuclear cells, such cells may be cultured in the presence of the WT1 helper peptide.
  • the present invention relates to a kit for inducing WT1-specific helper T cells comprising the WT1 helper peptide as an essential component.
  • the kit is used for the above-described method for inducing WT1-specific helper T cells.
  • the kit of the present invention may contain, for example, a means for obtaining peripheral blood mononuclear cells, an adjuvant, a reaction container, and the like. In general, an instruction manual is attached to the kit. WT1-specific helper T cells can be efficiently induced using the kit of the present invention.
  • the present invention relates to a method for treating or preventing cancer, which comprises administering WT1-specific helper T cells to a subject having the MHC class II molecule.
  • the administration method of WT1-specific helper T cells can be appropriately selected according to conditions such as the type of disease, the state of the subject, and the target site. Examples of the administration method include, but are not limited to, intravenous administration, intradermal administration, subcutaneous administration, intramuscular administration, nasal administration, and oral administration.
  • the present invention relates to a kit for preventing or treating cancer comprising the WT1 helper peptide, WT1 polynucleotide, or WT1 expression vector as an essential component.
  • the kit induces antigen-presenting cells that present the WT1 helper peptide via the MHC class II molecule.
  • the kit of the present invention may include, for example, a sample obtaining means, a reaction container, and the like in addition to the above essential components.
  • an instruction manual is attached to the kit.
  • the present invention provides a method for determining the presence or amount of WT1-specific helper T cells in a subject having the MHC class II molecule, comprising: (A) reacting the complex of the WT1 helper peptide and the MHC class II molecule with the subject-derived sample; (B) examining the presence or amount of helper T cells recognizing the complex contained in the sample;
  • the present invention relates to a method including steps.
  • the subject-derived sample may be any sample as long as it may contain lymphocytes, and examples thereof include body fluids such as blood and lymph, and tissues.
  • the complex of the WT1 helper T cell and the MHC class II molecule may be in the form of, for example, a tetramer or a pentamer using a method known to those skilled in the art such as the biotin streptavidin method.
  • the presence or amount of helper T cells that recognize such complexes can be measured by methods known to those skilled in the art.
  • the complex may be labeled.
  • a known label such as a fluorescent label or a radioactive label can be used. Labeling makes it easier and faster to determine the presence or amount of helper T cells. Using the method of this aspect of the present invention, cancer diagnosis, prognosis, and the like are possible.
  • the present invention also provides a composition comprising a complex of a WT1 helper peptide and the MHC class II molecule for determining the presence or amount of WT1-specific helper T cells in a subject having the MHC class II molecule.
  • the present invention provides a kit for determining the presence or amount of WT1-specific helper T cells in a subject having the MHC class II molecule, comprising a complex of a WT1 helper peptide and the MHC class II molecule.
  • the invention provides a method for determining the presence or amount of WT1-specific helper T cells in a subject having the MHC class II molecule, comprising: (A) reacting the WT1 helper peptide with the subject-derived sample; (B) examining the presence or amount of cytokines contained in the sample;
  • the present invention relates to a method including steps.
  • the subject-derived sample may be any as long as it may contain lymphocytes, and examples thereof include peripheral blood mononuclear cells, blood, body fluid, tissue, etc., preferably peripheral blood mononuclear It is a sphere.
  • the reaction in the step (a) can be performed using the WT1 helper peptide in the subject-derived sample using a general technique.
  • the presence or amount of cytokine contained in the sample can be measured by methods known to those skilled in the art.
  • the cytokine may be one that can be induced by helper T cells such as interferon ⁇ and interleukin 10.
  • the cytokine may be labeled.
  • a known label such as a fluorescent label or a radioactive label can be used.
  • the present invention provides a method for obtaining WT1-specific helper T cells using a complex of a WT1 helper peptide and the MHC class II molecule, (A) reacting the sample with the complex; (B) obtaining a helper T cell that recognizes the complex contained in the sample;
  • the complex of the WT1 helper peptide and the MHC class II molecule which is related to the method including the steps, is as described above.
  • the sample may be any sample as long as it may contain lymphocytes, and examples thereof include a subject-derived sample such as blood, a cell culture solution, and the like. Acquisition of helper T cells that recognize the complex can be performed using methods known to those skilled in the art, such as FACS and MACS.
  • the obtained WT1-specific helper T cells can be cultured and used for the treatment or prevention of various cancers.
  • the present invention also relates to a WT1-specific helper T cell that can be obtained by a method of obtaining a WT1-specific helper T cell using a complex of a WT1 helper peptide and the MHC class II molecule.
  • the present invention relates to a kit for obtaining WT1-specific helper T cells comprising a complex of a WT1 helper peptide and the MHC class II molecule.
  • the present invention provides a cancer cancer characterized by using the WT1-specific helper T cell, the antigen-presenting cell that presents the WT1 helper peptide via the MHC class II molecule, or the WT1 antibody. It relates to a diagnostic method.
  • WT1-specific helper T cells are used in the diagnostic method of the present invention.
  • the helper T cell, antigen presenting cell or antibody is incubated with a sample from a subject having the MHC class II molecule or administered to a subject having the MHC class II molecule, and then the helper T cell, antigen presenting Cancer, for example, can be diagnosed by determining the position, site, amount, etc. of cells or antibodies.
  • the helper T cell, antigen-presenting cell or antibody may be labeled. By attaching such a label, the diagnostic method of the present invention can be efficiently carried out.
  • the present invention provides the WT1-specific helper T cell, the antigen-presenting cell that presents the WT1 helper peptide via the MHC class II molecule, or an antibody against the WT1 helper peptide or a polynucleotide encoding the peptide
  • the present invention relates to a cancer diagnostic kit comprising an antibody against
  • the leftmost column indicates “adequacy” as a candidate peptide sequence, and the greater the number of ⁇ , the higher the suitability for the Ramsensee et al. Law. No mark indicates that it is not very suitable.
  • [] in the column of “candidate peptide sequences that bind to MHC class II molecules” in Tables 1 to 6 indicates that one amino acid can be selected from the amino acid group listed therein.
  • the notation [FLM] means any one of amino acids F, L, and M.
  • [VYI (AL)] it is either one of the amino acids V, Y, or I, or any one of A, L. means.
  • x represents any amino acid.
  • the “program name” of the program used to list the candidate peptide sequences is described.
  • the candidate WT1 peptides were visually selected from Tables 1 to 6, and the peptides shown in Table 7 below were identified as preferred candidate peptides for MHC class II molecules. The function of was analyzed.
  • WT1 peptide-specific cell line Preparation of WT1 peptide-specific cell line and measurement of cell growth ability
  • the WT1 peptide was emulsified with incomplete Freund's adjuvant (Montanide ISA51), and 100 ⁇ g / mouse equivalent of WT1 peptide was inoculated into the skin of the mouse. This immunization was performed three times every week, and the spleen was taken out one week after the final immunization to prepare splenocytes.
  • the spleen cells were pulsed with the same WT1 peptide used for immunization of each mouse, and spleen cells of irradiated non-immunized mice were used as stimulators three times at 10-day intervals, followed by the fourth stimulation.
  • WT1 35 peptides each mouse spleen cells immunized with WT1 86 peptide or WT1 294 peptide, WT1 35 peptide, in response to WT1 86 peptide or WT1 294 peptide-pulsed stimulator, grown (FIG. 1A ⁇ C ).
  • each WT1 peptide is pulsed, and spleen cells of irradiated non-immunized mice are used to stimulate three times in vitro at 10-day intervals, and then the fourth stimulation is pulsed to each peptide described above.
  • MHC class I antibody D b antibody
  • MHC class II antibody a b antibody
  • C1498 cells that do not express WT1 protein after irradiating non-immunized mouse spleen cells pulsed with each WT1 peptide and stimulated three times in vitro at 10 day intervals and then irradiated, Proliferative responses were measured by 3 H incorporation using C1498 cells pulsed with each WT1 peptide or C1498 cells introduced with a WT1 gene to express WT1 protein as a stimulator. As a result, a proliferative response was caused to C1498 cells pulsed with the same WT1 peptide as WT1 peptide immunized in vivo and C1498 cells introduced with the WT1 gene and expressing WT1 protein (FIG. 3).
  • WT1 35 peptide, WT1 86 peptide and WT1 294 peptide were produced by the intracellular process of endogenous WT1 protein and presented on MHC class II molecules. From the above, these three WT1 peptides were shown to be MHC class II-restricted WT1 peptides.
  • each WT1 peptide was pulsed and stimulated three times at 10 day intervals in vitro using splenocytes of non-immunized mice irradiated, and then IFN- ⁇ and IL in the culture supernatant The concentration of -4 was measured using an ELISA kit (BIOSOURCE Immunoassay Kit, Invitrogen).
  • splenocytes from two separate mice pulsed each WT1 peptide and reacted to splenocytes from irradiated non-immunized mice, producing interferon ⁇ but producing little interleukin-4.
  • FIG. 4 This demonstrates that these three WT1 peptides induce Th1-type WT1-specific helper T cells.
  • WT1-specific cytotoxic T cells CTL
  • WT1 126 peptide MHC class I
  • WT1 126 peptide MHC class I
  • WT1 35 peptide MHC class II
  • WT1 126 peptide MHC class I
  • WT1 86 WT1 86
  • Mice were immunized three times with peptide (MHC class II) or WT1 126 peptide (MHC class I) + WT1 294 peptide (MHC class II), and then splenocytes of mice were prepared.
  • this spleen cell was stimulated once with WT1 126 peptide (MHC class I) once in vitro, and on the 6th day after WT1 126 peptide (MHC class I) pulsed, RMAS cells were used as target cells. Injury activity was measured. RMAS cells not pulsed with WT1 126 peptide (MHC class I) were used as control target cells.
  • MHC class I WT1 126 peptide
  • MHC class II WT1 helper peptide
  • WT1-specific cytotoxic T cells were induced (FIG. 5). This demonstrated that the three WT1 peptides (MHC class II) are WT1-specific helper peptides.
  • WT1-expressing C1498 leukemia cells were transplanted subcutaneously into mice at a rate of 2.5 ⁇ 10 5 per mouse, and once a week thereafter, once a week for a total of 3 times, WT1 35 helper peptide 50 ⁇ g / Mice were administered intradermally with Freund's incomplete adjuvant (FIG. 6).
  • physiological saline was intradermally administered together with Freund's incomplete adjuvant instead of the WT1 35 helper peptide.
  • Subcutaneous tumor diameter was measured over time, and disease-free survival up to 29 days after subcutaneous transplantation was calculated.
  • the mouse on the 29th day after the start of the experiment was dissected, the spleen was removed, and the WT1-specific immune response was analyzed using splenocytes.
  • the spleen was removed and spleen cells were prepared at the time of dissection of WT1 35 helper peptide (MHC class II) immunized and control mice.
  • the spleen cells were stimulated once with WT1 126 peptide (MHC class I), the WT1 126 peptide RMAS cells pulsed with (MHC class I) in the target cell to the 6 days later, the cytotoxic activity of the spleen cells It was measured.
  • WT1-specific cytotoxic T cells were induced in all four mice of the WT1 35 helper peptide (MHC class II) immunized group (FIG. 9).
  • WT1-specific cytotoxic T cells were induced very weakly in the three mice in the control group (FIG. 10). In one mouse, no induction of WT1-specific cytotoxic T cells was observed. Clearly, the induction of WT1-specific cytotoxic T cells was low compared to the WT1 35 helper peptide (MHC class II) immunized group (FIGS. 9 and 10).
  • WT1 35 class II helper peptide This is induced by administration of the WT1 35 class II helper peptide to induce WT1-specific helper T cells, and by the action of the WT1-specific helper T cells, it is induced in an immune response to the WT1 protein expressed by the transplanted tumor cells.
  • WT1-specific cytotoxic T cells were shown to be strongly amplified in vivo, and this result demonstrated the usefulness of the WT1 35 helper peptide.
  • mice of the WT1 35 helper peptide (MHC class II) immunized group and the control group was analyzed. Briefly, from the lysis rate (%) when RMAS cells pulsed with WT1 126 peptide (MHC class I) were used as target cells in the above experiment, the lysis rate (%) when RMAS cells were used as target cells. ) Minus the cell solubility (%) was defined as the specific solubility (%) (left figure in FIG. 11).
  • the splenocytes prepared above and fluorescently labeled WT1 tetramer H-2Db WT1 Tetramer-RFMPNAPYL-PE
  • CD3-positive, CD8-positive, and WT1 tetramer-positive cells were designated as WT1-specific cytotoxic T cells (FIG. 11 right figure).
  • WT1-specific cytotoxic T cells FIG. 11 right figure.
  • Peripheral blood mononuclear cells were prepared from 6 healthy individuals having DRB1, DPB1, DQB1 or DRB5 subclass molecules shown in FIG. After adding WT1 35 helper peptide to this peripheral blood mononuclear cell and culturing for 1 week, these peripheral blood mononuclear cells were pulsed with WT1 35 helper peptide, and irradiated peripheral blood mononuclear cells of the same person were stimulated. As a result, stimulation was performed 4 times every week, and 3 H uptake was measured on the 6th day.
  • CTL cytotoxic T cells
  • mouse WT1 86 peptide and WT1 294 peptide are amino acid sequences at the positions of the peptide surrounded by a square with human WT1 86 peptide (SEQ ID NO: 4) and WT1 294 peptide (SEQ ID NO: 5). Is one different.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • DPB1 * 0201/0402 DQB1 * 0401 / 0501-positive healthy person (hereinafter referred to as healthy person A)) are treated with WT1 35 peptide.
  • Responder was adjusted by stimulating 5 times.
  • HLA class II type is another healthy person that is different (DRB1 * 0405/0901, DPB1 * 0201/0501, DQB1 * 0303/0401 healthy individuals of positive (that a healthy person B)) derived from peripheral blood mononuclear cells (PBMC ) was pulsed with WT1 35 peptide to form a Stimulator, and cell proliferation (the amount of 3 H-thymidine incorporated (cpm)) was measured. In this measurement, no antibody was added, anti-HLA-DR antibody was added (+ a-DR), anti-HLA-DP antibody was added (+ a-DP), or anti-HLA-DQ antibody was added (+ a-DQ). Measurements were made under conditions.
  • a common HLA class II type that is positive for both the Responder and Stimulator shows the restriction of the WT1 35 peptide.
  • proliferation was suppressed under the condition where anti-DR antibody was added, and DRB1 * 0405 was common in healthy people A and B. Therefore, WT1 35 peptide was restricted to DRB1 * 0405. It was shown that.
  • healthy person different from the healthy person A (DRB1 * 0405/0803, DPB1 * 0202/0501, DQB1 * 0401/0601 healthy individuals positive (called healthy individual G)) but using PBMC from The experiment was conducted under the same conditions as the above experiment. As a result, as shown in FIG.
  • PBMC derived from a healthy person G was used as a responder, and L cells into which the DQB1 * 0601 gene was introduced as a stimulator.
  • the difference in the amount of IFN- ⁇ due to the presence or absence of a pulse using WT1 35 peptide of L cells was measured.
  • the percentage of intracellular IFN- ⁇ production was measured using FACS, a technique well known to those skilled in the art.
  • the responder was activated by the pulse of the WT1 35 peptide to the L cell, indicating that the WT1 35 peptide is DQB1 * 0601 restricted.
  • Experiments with healthy human B showed that WT1 35 peptide is restricted to DRB1 * 0405 or 0901 and to DPB1 * 0201 or 0501.
  • Experiments with healthy human C showed that WT1 35 peptide was restricted to DRB1 * 0802 or 1201 and to DPB1 * 0201 or 0501.
  • An experiment using a healthy person D showed that WT1 35 peptide is restricted to DRB1 * 1502, since DRB1 * 1502 is a homozygote (FIG. 17).
  • WT1 35 peptide was shown to be restricted to DPB1 * 0201 or 0901.
  • Experiments with healthy person E showed that the WT1 35 peptide is restricted to DRB1 * 0405 or 0901 and to DPB1 * 0202 or 0501.
  • Experiments with healthy human F showed that WT1 35 peptide is restricted to DRB1 * 1403 or 1502.
  • Experiments with healthy individuals G showed that the WT1 35 peptide is restricted to DPB1 * 02
  • the difference in the amount of IFN- ⁇ due to the presence or absence of a pulse using the WT1 35 peptide was measured.
  • the percentage of intracellular IFN- ⁇ production was measured using FACS, a technique well known to those skilled in the art.
  • the ratio of the amount of IFN- ⁇ was remarkably increased by pulsing with WT1 35 peptide (FIG. 18). This indicates that the WT1 35 peptide is constrained to any of DRB1 * 0101, DRB1 * 1501, DPB1 * 0201, DPB1 * 0402, DQB1 * 0501, or DQB1 * 0602.
  • MHC class II molecule-restricted WT1 peptides various types of MHC class II molecule-restricted WT1 peptides, polynucleotides encoding the peptides, pharmaceutical compositions containing these, and the like are provided.
  • the present invention can be used in the field of development and production of various hematopoietic tumors that are expressed, preventive drugs for fixed cancer, or therapeutic drugs.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)

Abstract

　本発明は、ＷＴ１タンパク質由来の連続するアミノ酸からなるアミノ酸配列を有するＷＴ１ペプチドであって、ＭＨＣクラスＩＩ分子と結合してＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導するペプチド、ならびにこれらを含む医薬組成物などに関する。

Description

癌抗原ヘルパーペプチド
　本発明は、ＷＴ１ヘルパーペプチド、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ペプチドにより誘導されるＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞、およびこれらを含む癌治療／予防用医薬組成物などに関する。なお、本願は、２００９年４月２３日出願の日本国特許出願第２００９－１０５２８６に対して優先権を主張するものであり、日本国特許出願第２００９－１０５２８６の全内容を本願に組み込むものである。
　ＷＴ１遺伝子（Ｗｉｌｍｓ’　ｔｕｍｏｒ　１　ｇｅｎｅ）は、小児の腎癌であるウイルムス腫瘍の責任遺伝子として同定された遺伝子であり（非特許文献１および２）、ジンクフィンガー構造を有する転写因子である。当初、ＷＴ１遺伝子は癌抑制遺伝子であるとされたが、その後の研究（非特許文献３～６）により、造血器腫瘍や固形癌においてはむしろ癌遺伝子として働くことが示された。
　ＷＴ１遺伝子が多くの悪性腫瘍において高発現していることから、変異のない自己タンパク質であるＷＴ１遺伝子産物の生体内における免疫原性の有無が検証されてきた。その結果、腫瘍細胞で高発現しているＷＴ１遺伝子由来のタンパク質は細胞内プロセッシングにより断片化され、生じたペプチドがＭＨＣクラスＩ分子と複合体を形成して細胞表面に提示されること、およびかかる複合体を認識する細胞傷害性Ｔ細胞（以下、ＣＴＬともいう）がＷＴ１ペプチドワクチネーションにより誘導され得ることが明らかとなった（非特許文献７～９）。さらに、ＷＴ１ペプチドまたはＷＴ１　ｃＤＮＡで免疫されたマウスは、移植されたＷＴ１遺伝子発現腫瘍細胞を高い確率で拒絶するが（非特許文献７および１０）、ＷＴ１遺伝子を内在的に発現している正常組織は誘導されたＣＴＬによって傷害されないことも示された（非特許文献７）。これまでに、マウスだけでなくヒトにおいてもＷＴ１特異的ＣＴＬの誘導が可能であり、かかるＣＴＬがＷＴ１遺伝子を高発現する腫瘍細胞に対しては傷害活性を有するが、ＷＴ１遺伝子を内在的に発現する正常細胞には傷害活性を有さない可能性が強く示唆された（非特許文献７、１０～１４）。
　一方で、ＣＴＬが効率的に誘導されるためには、癌抗原に特異的なヘルパーＴ細胞の存在が重要であることが報告されている（非特許文献１５）。ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４陽性Ｔ細胞）は、抗原提示細胞のＭＨＣクラスＩＩ分子と抗原ペプチドとの複合体を認識して誘導、増殖、および活性化される。活性化されたヘルパーＴ細胞は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、またはインターフェロン（ＩＦＮ）のごときサイトカインを産生し、Ｂ細胞およびその他のＴ細胞のサブセットの増殖、分化、および成熟を促進する。このことから、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する抗原ペプチドは、ヘルパーＴ細胞の誘導を介することによりＣＴＬなどを効率的に活性化して免疫機能を増進すると考えられる（非特許文献１６）。これまで、ＷＴ１に関しては、ＭＨＣクラスＩＩ分子のＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０４０１およびＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０４０５に結合する抗原ペプチド（非特許文献１７および特許文献１)のみが報告されており、その他のサブタイプに対する抗原ペプチドを見出す必要があった。
国際公開２００５／０４５０２７号公報
Daniel A. Haber et al., Cell. 1990 Jun 29;61(7):1257-69. Call KM et al., Cell. 1990 Feb 9;60(3):509-20. Menke AL et al., Int Rev Cytol. 1998;181:151-212. Review. Yamagami T et al., Blood. 1996 Apr 1;87(7):2878-84. Inoue K et al., Blood. 1998 Apr 15;91(8):2969-76. Tsuboi A et al., Leuk Res. 1999 May;23(5):499-505. Oka Y et al., J Immunol. 2000 Feb 15;164(4):1873-80. Melief CJ et al., Immunol Rev. 1995 Jun;145:167-77. Ritz J, J Clin Oncol. 1994 Feb;12(2):237-8. Tsuboi A et al., J Clin Immunol. 2000 May;20(3):195-202. Oka Y et al., Immunogenetics. 2000 Feb;51(2):99-107. Ohminami H et al., Blood. 2000 Jan 1;95(1):286-93. Gao L et al., Blood. 2000 Apr 1;95(7):2198-203. Ohminami H et al., Blood. 2000 Jan 1;95(1):286-93. Cancer. Res. 62:6438, 2002 J.Immunol. Immunother., 24:195, 2001 Cancer. Immunol. Immunother. 51:271, 2002
　したがって、本発明の解決課題は、広範なＭＨＣクラスＩＩ分子に結合してＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導するペプチド、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ペプチドにより誘導されるＷＴ１ヘルパーＴ細胞、およびこれらを含む癌治療／予防用医薬組成物を提供することである。
　本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行った。そして、本発明者らは、ＷＴ１タンパク質をコードする連続するアミノ酸配列の一部を有するペプチドが、癌抗原ヘルパーペプチドとして機能すること、すなわち、抗原提示細胞上でＭＨＣクラスＩＩ分子に結合して提示され、ＷＴ１特異的なヘルパーＴ細胞を誘導することを知見し、これらを癌の治療／予防用医薬組成物として用いることが可能なことを示した。
　すなわち、本発明は、
　（１）ＷＴ１タンパク質由来の連続するアミノ酸からなるアミノ酸配列を有するペプチドであって、前記アミノ酸配列が、
　　（ａ）配列番号：３に示すアミノ酸配列；
　　（ｂ）配列番号：４に示すアミノ酸配列；
　　（ｃ）配列番号：５に示すアミノ酸配列；および
　　（ｄ）（ａ）～（ｃ）に示すアミノ酸配列において、１個もしくは数個のアミノ酸が、置換、または欠失もしくは付加されたアミノ酸配列
からなる群から選択されるペプチドであって、ＭＨＣクラスＩＩ分子と結合してＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導するペプチド、
　（２）アミノ酸配列が配列番号：３に示すアミノ酸配列である、（１）記載のペプチド、
　（３）ＭＨＣクラスＩＩ分子が、ＤＲＢ１＊０１０１、ＤＲＢ１＊０４０５、ＤＲＢ１＊０８０２、ＤＲＢ１＊０８０３、ＤＲＢ１＊０９０１、ＤＲＢ１＊１２０１、ＤＲＢ１＊１４０３、ＤＲＢ１＊１５０１、ＤＲＢ１＊１５０２、ＤＰＢ１＊０２０１、ＤＰＢ１＊０２０２、ＤＰＢ１＊０４０２、ＤＰＢ１＊０５０１、ＤＰＢ１＊０９０１、ＤＱＢ１＊０３０１、ＤＱＢ１＊０３０２、ＤＱＢ１＊０４０１、ＤＱＢ１＊０５０１、ＤＱＢ１＊０６０１、ＤＱＢ１＊０６０２、およびＤＲＢ５＊０１０２からなる群から選択されるものである、（１）または（２）に記載のペプチド、
　（４）ＭＨＣクラスＩＩ分子が、ＤＲＢ１＊０１０１、ＤＲＢ１＊０４０５、ＤＲＢ１＊１５０２、ＤＰＢ１＊０２０１、ＤＰＢ１＊０２０２、およびＤＱＢ１＊０６０１からなる群から選択されるものである、（１）または（２）に記載のペプチド、
　（５）（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチドをコードするポリヌクレオチド、
　（６）（５）記載のポリヌクレオチドを含有する発現ベクター、
　（７）（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチド、または（５）記載のポリヌクレオチドに対する抗体、
　（８）（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチド、（５）記載のポリヌクレオチド、または（６）記載のベクターを含む、癌を治療または予防するための医薬組成物、
　（９）（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチド、（５）記載のポリヌクレオチド、または（６）記載のベクターの有効量を、（３）または（４）記載のＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象に投与することを特徴とする、癌を治療または予防するための方法、
　（１０）癌を治療または予防するための、（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチド、（５）記載のポリヌクレオチド、または（６）記載のベクターの使用、
　（１１）（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチドを（３）または（４）記載のＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する、抗原提示細胞、
　（１２）未熟抗原提示細胞を（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチドの存在下で培養し、該未熟抗原提示細胞から前記ペプチドを（３）または（４）記載のＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞を誘導することを特徴とする、抗原提示細胞の誘導方法、
　（１３）（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチドにより誘導される、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞、
　（１４）末梢血単核球を（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチドの存在下で培養し、該末梢血単核球からＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導することを特徴とする、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の誘導方法、
　（１５）（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチドを必須構成成分として含む、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導するためのキット、
　（１６）（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチド、（５）記載のポリヌクレオチド、または（６）記載のベクターを必須構成成分として含む、癌を予防または治療するためのキット、
　（１７）（３）または（４）記載のＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象におけるＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の存在または量を決定する方法であって、
　（ａ）（１）～（４）のいずれか１つに記載のペプチドを該対象由来試料と反応させ；次いで、
　（ｂ）該試料に含まれるサイトカインの存在または量を調べる、
工程を含む方法、
を提供するものである。
　本発明によれば、ＤＲＢ１＊０１０１、ＤＲＢ１＊０４０５、ＤＲＢ１＊０８０２、ＤＲＢ１＊０８０３、ＤＲＢ１＊０９０１、ＤＲＢ１＊１２０１、ＤＲＢ１＊１４０３、ＤＲＢ１＊１５０１、ＤＲＢ１＊１５０２、ＤＰＢ１＊０２０１、ＤＰＢ１＊０２０２、ＤＰＢ１＊０４０２、ＤＰＢ１＊０５０１、ＤＰＢ１＊０９０１、ＤＱＢ１＊０３０１、ＤＱＢ１＊０３０２、ＤＱＢ１＊０４０１、ＤＱＢ１＊０５０１、ＤＱＢ１＊０６０１、ＤＱＢ１＊０６０２、およびＤＲＢ５＊０１０２のごとき多種類のＭＨＣクラスＩＩ分子に結合するＷＴ１ヘルパーペプチド、およびこれらを含む癌の治療／予防用医薬組成物などが得られるので、非常に広範囲の対象（特に、日本人の大部分が上記分子を有する）におけるインビボおよびインビトロでのＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の誘導が可能となる。さらに、本発明により、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞が誘導されることから、ＷＴ１を高度に発現する癌においてＴ細胞やＢ細胞を効果的に活性化することができる。
図１は、３種ペプチド（ｍＷＴ１３５、ｍＷＴ１８６、およびｍＷＴ１２９４）をパルスして作成した各ペプチド特異的Ｔ細胞株を各ペプチドで刺激した後に細胞増殖を測定した結果を示す。図中、－はペプチド刺激なしを表す。 図２は、３種ペプチド（ｍＷＴ１３５、ｍＷＴ１８６、およびｍＷＴ１２９４）をパルスして作成した各ペプチド特異的Ｔ細胞株を抗ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ抗体の存在下で各々の対応するペプチドで刺激した後に細胞増殖を測定した結果を示す。図中、－はペプチド刺激なしを表す。縦軸のｃｐｍは、１分あたりのカウントを表す。 図３は、Ｃ１４９８細胞、３種ペプチド（ｍＷＴ１３５、ｍＷＴ１８６、およびｍＷＴ１２９４）をパルスしたＣ１４９８細胞、ならびにＷＴ１タンパク質を強制発現させたＣ１４９８細胞による、各々の対応するＷＴ１ペプチド特異的Ｔ細胞株の細胞増殖を測定した結果を示す。縦軸のｃｐｍは、１分あたりのカウントを表す。 図４は、３種ペプチド（ｍＷＴ１３５、ｍＷＴ１８６、およびｍＷＴ１２９４）をパルスして作成した各ペプチド特異的Ｔ細胞株におけるＩＦＮ－γ産生能を測定した結果を示す。 図５は、３種ペプチド（ｍＷＴ１３５、ｍＷＴ１８６、およびｍＷＴ１２９４）のＣＴＬ細胞傷害活性を測定した結果を示す。黒丸は、ＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチド）をパルスしたＲＭＡＳ細胞を用いて行った実験の結果を示す。白丸は、コントロールＲＭＡＳ細胞を用いて行った実験の結果を示す。 図６は、腫瘍移植実験において、腫瘍移植と免疫を行った時系列的な略図を示す。マウスへのＷＴ１発現白血病細胞の皮下移植後７、１４、２１日目にｍＷＴ１３５ヘルパーペプチドによる免疫を施し、２９日目に解剖を行った。下向きの白抜き矢印は、コントロール（ＰＢＳ）を皮内投与（ＩＦＡ／３０μｌ）した時期を示す。下向きの黒色矢印は、ｍＷＴ１３５ヘルパーペプチドを皮内投与（５０μＭ／ＩＦＡ／３０μｌ）した時期を示す。 図７は、ｍＷＴ１３５ヘルパーペプチドで免疫されたマウスにおける腫瘍の大きさおよび無病であったマウスの個体数の割合を示す。ｍＷＴ１３５ヘルパーペプチドで免疫されたマウスでは、１０匹中４匹が無病であった。一方、コントロールで免疫されたマウスでは、無病であったマウスが９匹中存在しなかった。 図８は、ｍＷＴ１３５ヘルパーペプチドで免疫されたマウスにおける無病生存率を示す。 図９は、ｍＷＴ１３５ヘルパーペプチドで免疫されたマウスにおけるＣＴＬの細胞傷害活性を示す。黒丸は、ｍＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣＩペプチド）をパルスしたＲＭＡＳ細胞を用いて行った実験の結果である。白丸は、コントロールＲＭＡＳ細胞を用いて行った実験の結果を示す。（）内の数字は腫瘍径ｍｍを示す。 図１０は、コントロールマウスにおけるｍＷＴ１特異的ＣＴＬの細胞傷害活性を示す。黒丸は、ｍＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣＩペプチド）をパルスしたＲＭＡＳ細胞を用いて行った実験の結果である。白丸は、コントロールＲＭＡＳ細胞を用いて行った実験の結果を示す。（）内の数字は腫瘍径ｍｍを示す。 図１１は、ｍＷＴ１３５ペプチドの投与によるｍＷＴ１１２６ペプチド特異的ＣＴＬの細胞傷害活性（左図）およびＷＴ１１２６テトラマー陽性Ｔ細胞の割合（右図）を示す。 図１２は、各ＭＨＣクラスＩＩ分子を有する健常人の末梢血単核球におけるＷＴ１３５ペプチド刺激による細胞増殖の測定結果を示す。 図１３は、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ（ＤＲＢ１＊０１０１／０４０５、ＤＰＢ１＊０２０１／０４０２、ＤＱＢ１＊０４０１／０５０１陽性の健常人（健常人Ａ）由来のＰＢＭＣ）を、Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ（ＤＲＢ１＊０４０５／０９０１、ＤＰＢ１＊０２０１／０５０１、ＤＱＢ１＊０３０３／０４０１陽性の健常人（健常人Ｂ）由来のＰＢＭＣ）で処理した場合における、細胞増殖の測定結果を示す。縦軸は、取り込まれた３Ｈ－チミジン量（ｃｐｍ）を示す。横軸は、添加した各種抗体の種類（添加なし、抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体、抗ＨＬＡ－ＤＰ抗体、および抗ＨＬＡ－ＤＱ抗体）を表す。 図１４は、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ（ＤＲＢ１＊０１０１／０４０５、ＤＰＢ１＊０２０１／０４０２、ＤＱＢ１＊０４０１／０５０１陽性の健常人（健常人Ａ）由来のＰＢＭＣ）を、Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ（ＤＲＢ１＊０４０５／０８０３、ＤＰＢ１＊０２０２／０５０１、ＤＱＢ１＊０４０１／０６０１陽性の健常人（健常人Ｇ）由来のＰＢＭＣ）で処理した場合における、細胞増殖の測定結果を示す。縦軸は、取り込まれた３Ｈ－チミジン量（ｃｐｍ）を示す。横軸は、添加した各種抗体の種類（添加なし、抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体、抗ＨＬＡ－ＤＰ抗体、および抗ＨＬＡ－ＤＱ抗体）を表す。 図１５は、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ（ＤＲＢ１＊０１０１／０４０５、ＤＰＢ１＊０２０１／０４０２、ＤＱＢ１＊０４０１／０５０１を有する健常人（健常人Ａ）由来のＰＢＭＣ）を、Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ（ＤＲＢ１＊０１０１／０８０３、ＤＰＢ１＊０５０１／－、ＤＱＢ１＊０５０１／０６０１陽性の健常人（健常人Ｈ）由来のＰＢＭＣ）で処理した場合における、細胞増殖の測定結果を示す。縦軸は、取り込まれた３Ｈ－チミジン量（ｃｐｍ）を示す。横軸は、添加した各種抗体の種類（添加なし、抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体、抗ＨＬＡ－ＤＰ抗体、および抗ＨＬＡ－ＤＱ抗体）を表す。 図１６は、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ（ＤＲＢ１＊０４０５／０８０３、ＤＰＢ１＊０２０２／０５０１、ＤＱＢ１＊０４０１／０６０１陽性の健常人（健常人Ｇ）由来のＰＢＭＣ）を、Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ（ＤＱＢ１＊０６０１遺伝子を導入したＬ細胞）で処理した場合における、ＩＦＮ－γ産生能の測定結果を示す。縦軸は、Ｔ細胞中のＩＦＮ－γ量の割合を示す。横軸は、ＷＴ１３５ペプチドによるパルスの有無（＋または－）を表す。 図１７は、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ（ＤＲＢ１＊１５０２／１５０２、ＤＰＢ１＊０２０１／０９０１、ＤＱＢ１＊０６０１／０６０１陽性の健常人（健常人Ｄ）由来のＰＢＭＣ）を、Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒと同一の健常人由来のＰＢＭＣ）で処理した場合における、細胞増殖の測定結果を示す。縦軸は、取り込まれた３Ｈ－チミジン量（ｃｐｍ）を示す。横軸は、添加した各種抗体の種類（添加なし、抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体、抗ＨＬＡ－ＤＰ抗体、および抗ＨＬＡ－ＤＱ抗体）を表す。 図１８は、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ（ＤＲＢ１＊０１０１／１５０１、ＤＰＢ１＊０２０１／０４０２、ＤＱＢ１＊０５０１／０６０２陽性の健常人（健常人Ｉ）由来のＰＢＭＣ）を、Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒと同一の健常人由来のＰＢＭＣ）で処理した場合における、ＩＦＮ－γ産生能の測定結果を示す。縦軸は、Ｔ細胞中のＩＦＮ－γ量の割合を示す。横軸は、ＷＴ１３５ペプチドによるパルスの有無（＋または－）を表す。
　本発明は、１の態様において、マウスまたはヒトＷＴ１タンパク質由来のアミノ酸からなるアミノ酸配列を有するペプチドに関するものである。ＷＴ１遺伝子は、例えば、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫などの造血器腫瘍、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌などの固形癌において高度に発現する。従って、本発明のペプチドは、ＷＴ１遺伝子を発現する癌の細胞に多く存在する。
　本発明のペプチドは、配列番号：２に示すヒトＷＴ１タンパク質由来の連続するアミノ酸からなるアミノ酸配列を有するペプチドであり、以下に示すＭＨＣクラスＩＩ分子との結合能を保持し、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の誘導能を有するペプチドである。本発明のペプチドは、上記特徴を有する限り、そのアミノ酸配列および長さは特に限定されないが、ペプチドが長すぎると蛋白分解酵素の作用を受けやすくなり、短すぎるとペプチド収容溝にうまく結合できない。本発明のペプチドの長さは、好ましくは１０～２５アミノ酸、より好ましくは１５～２１アミノ酸、さらに好ましくは１６～２０アミノ酸、例えば１７アミノ酸、１８アミノ酸、あるいは１９アミノ酸である。本発明のペプチドの具体例は、配列番号：３に示すアミノ酸配列；配列番号：４に示すアミノ酸配列；配列番号：５に示すアミノ酸配列を有するものである。さらに本発明のペプチドは、上記ペプチドの変異体も包含する。変異体は、例えば上記のうちの１つのアミノ酸配列において、数個、例えば、１～９個まで、好ましくは、１～５個、１～４個、１～３個、さらに好ましくは１～２個、より好ましくは１個のアミノ酸が、置換、または欠失もしくは付加されたアミノ酸配列からなる群から選択されるペプチドを含んでもよい。ペプチド中のアミノ酸の置換はいずれの位置でいずれの種類のアミノ酸との間で行われてもよい。保存的なアミノ酸置換が好ましい。例えば、Ｇｌｕ残基をＡｓｐ残基に、Ｐｈｅ残基をＴｙｒ残基に、Ｌｅｕ残基をＩｌｅ残基に、Ａｌａ残基をＳｅｒ残基に、Ｈｉｓ残基をＡｒｇ残基に置換してもよい。アミノ酸の付加もしくは欠失は、ペプチド中のＮ末端およびＣ末端で行うことが好ましいが、配列内部において行われてもよい。本発明のペプチドの好ましい具体例は配列番号：３を有する。但し、上記のいずれのペプチドであっても、ＭＨＣクラスＩＩ分子との結合能を保持し、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の誘導能を有することが条件となる。ここで、本発明のペプチドが結合するＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱ、ＨＬＡ－ＤＰのいずれのサブクラスに属するものであってもよい。好ましくは、ＤＲＢ１＊０１０１、ＤＲＢ１＊０４０５、ＤＲＢ１＊０８０２、ＤＲＢ１＊０８０３、ＤＲＢ１＊０９０１、ＤＲＢ１＊１２０１、ＤＲＢ１＊１４０３、ＤＲＢ１＊１５０１、ＤＲＢ１＊１５０２、ＤＰＢ１＊０２０１、ＤＰＢ１＊０２０２、ＤＰＢ１＊０４０２、ＤＰＢ１＊０５０１、ＤＰＢ１＊０９０１、ＤＱＢ１＊０３０１、ＤＱＢ１＊０３０２、ＤＱＢ１＊０４０１、ＤＱＢ１＊０５０１、ＤＱＢ１＊０６０１、ＤＱＢ１＊０６０２、およびＤＲＢ５＊０１０２からなる群から選択される分子である。より好ましくは、ＤＲＢ１＊０１０１、ＤＲＢ１＊０４０５、ＤＲＢ１＊１４０３、ＤＲＢ１＊１５０２、ＤＰＢ１＊０２０１、ＤＰＢ１＊０２０２、ＤＰＢ１＊０９０１、ＤＱＢ１＊０３０１、ＤＱＢ１＊０６０１またはＤＲＢ５＊０１０２であり、最も好ましくは、ＤＲＢ１＊０１０１、ＤＲＢ１＊０４０５、ＤＲＢ１＊１５０２、ＤＰＢ１＊０２０１、ＤＰＢ１＊０２０２、またはＤＱＢ１＊０６０１である。本明細書では、ＭＨＣクラスＩＩ分子との結合能を保持し、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の誘導能を有するペプチドをＷＴ１ヘルパーペプチドという。また、下記の実施例では、配列番号３に示すアミノ酸配列を有するペプチドをＷＴ１３５ペプチド、ＷＴ１３５ヘルパーペプチドまたはＷＴ１３５ペプチドともいう。
　本発明のペプチドはまた、配列番号：１に示すマウスＷＴ１タンパク質由来の連続するアミノ酸からなるアミノ酸配列を有するペプチドであって、前記アミノ酸配列が、配列番号：４に示すアミノ酸配列の第９位のアミノ酸残基がロイシンに置換されたペプチド（配列番号：６）；あるいは配列番号：５に示すアミノ酸配列の第１１位のアミノ酸残基がセリンに置換されたペプチド（配列番号：７）であってもよい。さらに、本発明のペプチドは、配列番号：６または配列番号：７に示すアミノ酸配列において、数個、例えば、１～９個まで、好ましくは、１～５個、１～４個、１～３個、さらに好ましくは１～２個、より好ましくは１個のアミノ酸が、置換、または欠失もしくは付加されたアミノ酸配列からなる群から選択されるペプチドを含んでもよい。下記の実施例では、配列番号：６に示すアミノ酸配列を有するペプチドを、ｍＷＴ１８６ペプチドまたはｍＷＴ１８６ヘルパーペプチドともいい、配列番号：７に示すアミノ酸配列を有するペプチドを、ｍＷＴ１２９４ペプチドまたはｍＷＴ１２９４ヘルパーペプチドともいう。
　本発明のペプチドは、ＷＴ１タンパク質由来であって、上記の連続するアミノ酸配列からなっていてもよく、これらを含むものであってもよい。従って、本発明のペプチドは、例えば、上記アミノ酸配列からなるペプチドそのものであってもよく、あるいは上記アミノ酸配列を含むＷＴ１タンパク質またはその一部であってもよい。本発明のペプチドはまた、上記アミノ酸配列の修飾体であってもよい。上記アミノ酸配列中のアミノ酸残基を公知の方法にて修飾することができる。そのような修飾体は、例えばペプチドを構成するアミノ酸残基の側鎖中の官能基にエステル化、アルキル化、ハロゲン化、リン酸化、スルホン化、アミド化などを施したものであってもよい。また、上記アミノ酸配列を含むペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に、種々の物質を結合させることができる。例えば、アミノ酸、ペプチド、それらのアナログ等を結合させてもよい。本発明のペプチドにこれらの物質が結合している場合、これらの物質が例えば、生体内酵素などにより、あるいは細胞内プロセッシングなどの過程により処理され、最終的に上記アミノ酸配列からなるペプチドを生じるものであってもよく、ＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体として細胞表面に提示されることにより、ヘルパーＴ細胞誘導効果を得ることができる。これらの物質は、本発明のペプチドの溶解性を調節するものであってもよく、耐プロテアーゼ作用等その安定性を向上させるものであってもよく、また例えば、所定の組織・器官に特異的に本発明のペプチドをデリバリーするようなものであってもよく、あるいはまた抗原提示細胞の取込み効率を増強させる作用などを有するものであってもよい。これらの物質はまた、ＣＴＬ誘導能を増大させるもの、例えば、本発明のペプチド以外のヘルパーペプチドであってもよい。
　本発明のペプチドの修飾体は、そのＮ末端アミノ酸のアミノ基、またはＣ末端アミノ酸のカルボキシル基が修飾されたものであってもよい。Ｎ末端アミノ酸のアミノ基の修飾基としては、例えば１～３個の炭素数１から６のアルキル基、フェニル基、シクロアルキル基、アシル基が挙げられ、アシル基の具体例としては炭素数１から６のアルカノイル基、フェニル基で置換された炭素数１から６のアルカノイル基、炭素数５から７のシクロアルキル基で置換されたカルボニル基、炭素数１から６のアルキルスルホニル基、フェニルスルホニル基、炭素数２から６のアルコキシカルボニル基、フェニル基で置換されたアルコキシカルボニル基、炭素数５から７のシクロアルコキシで置換されたカルボニル基、フェノキシカルボニル基等が挙げられる。Ｃ末端アミノ酸のカルボキシル基を修飾したペプチドとしては、例えばエステル体およびアミド体が挙げられ、エステル体の具体例としては、炭素数１から６のアルキルエステル、フェニル基で置換された炭素数０から６のアルキルエステル、炭素数５から７のシクロアルキルエステル等が挙げられ、アミド体の具体例としては、アミド、炭素数１から６のアルキル基の１つまたは２つで置換されたアミド、フェニル基で置換された炭素数０から６のアルキル基の１つまたは２つで置換されたアミド、アミド基の窒素原子を含んで５から７員環のアザシクロアルカンを形成するアミド等が挙げられる。
　さらに本発明のペプチドの修飾体は、炭素－炭素結合、炭素－窒素結合、炭素－硫黄結合などのペプチド結合以外の結合によってアミノ酸残基が結合したものであってもよい。さらに本発明のペプチドは１またはそれ以上のＤ－体アミノ酸を含んでいてもよい。
　本発明のペプチド、ならびに上で述べた本発明の変異体および修飾体は例示であり、当業者であれば容易にそのバリエーションを想定し、製造し、効果を調べ、用いることができる。
　本発明のペプチドは、当該技術分野において通常用いられる方法またはそれらの変法を用いて合成することができる。かかる合成方法は、例えば、Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966；The Proteins, Vol 2, Academic Press Inc., New York, 1976；ペプチド合成、丸善（株），1975；ペプチド合成の基礎と実験、丸善（株），1985；医薬品の開発　続　第１４巻・ペプチド合成、広川書店，1991などに記載されている。本発明のペプチドはまた、本発明のペプチドをコードするヌクレオチド配列情報に基づき、遺伝子工学的手法を用いて製造することもできる。かかる遺伝子工学的手法は、当業者に周知のものである。これらの手法は、前述のように文献記載の方法(Molecular Cloning, T.Maniatis et al.,CSH Laboratory(1983)、DNA Cloning, DM.Glover, IRL PRESS(1985))や後述の方法などに準じて行うことができる。
　本発明のペプチドあるいはその候補ペプチドが上記ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合してヘルパーＴ細胞を誘導することは、例えばCancer Immunol. Immunother. 51:271(2002)に記載の方法などの公知の方法や、本明細書実施例に記載の方法などにより調べることができる。
　本発明のペプチドはヘルパーＴ細胞（ＣＤ４陽性Ｔ細胞）を活性化するので、ＣＴＬの分化の誘導や維持およびマクロファージなどのエフェクター細胞の活性化作用を発揮するため、本発明のペプチドは効率的な癌の治療または予防に使用可能である。
　本発明は、別の態様において、上記ＷＴ１ヘルパーペプチドをコードするポリヌクレオチド（以下、ＷＴ１ポリヌクレオチドともいう）に関するものである。本発明のポリヌクレオチドは、ＤＮＡであってもＲＮＡであってもよい。本発明のポリヌクレオチドの塩基配列は、上記ＷＴ１ヘルパーペプチドのアミノ酸配列に基づき決定できる。前記ポリヌクレオチドは、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ合成方法、ＰＣＲ法などにより製造することができる。
　本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドには、当該ポリヌクレオチドの相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドであって本発明のペプチドと同等の活性を有するペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。ここに、「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」に関して、ここで使用されるハイブリダイゼーションは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ　Ｊ．，　Ｆｒｉｓｃｈ　Ｅ．　Ｆ．，　Ｍａｎｉａｔｉｓ　Ｔ．著、モレキュラークローニング第２版（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　２ｎｄ　ｅｄｉｔｉｏｎ）、コールド　スプリング　ハーバー　ラボラトリー発行（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｐｒｅｓｓ）等に記載される通常の方法に準じて行うことができる。また「ストリンジェントな条件下」とは、例えば、６×ＳＳＣ（１．５Ｍ　ＮａＣｌ、０．１５Ｍ　クエン酸三ナトリウムを含む溶液を１０×ＳＳＣとする）、５０％ホルムアミドを含む溶液中で４５℃にてハイブリッドを形成させた後、２×ＳＳＣで５０℃にて洗浄するような条件（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，　Ｎ．　Ｙ．　（１９８９），　６．３．１－６．３．６）等を挙げることができる。
　本発明は、さらなる別の態様において、上記ポリヌクレオチドを含有する発現ベクター（以下、ＷＴ１発現ベクターともいう）に関するものである。発現ベクターの種類、上記ポリヌクレオチド配列以外に含まれる配列等は、当該発現ベクターを導入する宿主の種類、目的等に応じて適宜選択でき、プラスミド、ファージベクター、ウイルスベクター等が挙げられる。例えば、宿主が大腸菌の場合、ベクターとしては、ｐＵＣ１１８、ｐＵＣ１１９、ｐＢＲ３２２、ｐＣＲ３等のプラスミドベクター、λＺＡＰＩＩ、λｇｔ１１などのファージベクターが挙げられる。宿主が酵母の場合、ベクターとしては、ｐＹＥＳ２、ｐＹＥＵｒａ３などが挙げられる。宿主が昆虫細胞の場合には、ｐＡｃＳＧＨｉｓＮＴ－Ａなどが挙げられる。宿主が動物細胞の場合には、ｐＫＣＲ、ｐＣＤＭ８、ｐＧＬ２、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐＲｃ／ＣＭＶなどのプラスミドベクターや、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクターなどのウイルスベクターが挙げられる。前記ベクターは、発現誘導可能なプロモーター、シグナル配列をコードする遺伝子、選択用マーカー遺伝子、ターミネーターなどの因子を適宜有していても良い。また、単離精製が容易になるように、チオレドキシン、Ｈｉｓタグ、あるいはＧＳＴ（グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ）等との融合タンパク質として発現する配列が付加されていても良い。この場合、宿主細胞内で機能する適切なプロモーター（ｌａｃ、ｔａｃ、ｔｒｃ、ｔｒｐ、ＣＭＶ、ＳＶ４０初期プロモーターなど）を有するＧＳＴ融合タンパクベクター（ｐＧＥＸ４Ｔなど）や、Ｍｙｃ、Ｈｉｓなどのタグ配列を有するベクター（ｐｃＤＮＡ３．１／Ｍｙｃ－Ｈｉｓなど）、さらにはチオレドキシンおよびＨｉｓタグとの融合タンパク質を発現するベクター（ｐＥＴ３２ａ）などを用いることができる。
　本発明の発現ベクターを対象に投与し、生体内においてＷＴ１ヘルパーペプチドを産生させ、それにより誘導されたＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞は各種サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、またはインターフェロン（ＩＦＮ）など）を産生し、Ｂ細胞およびその他のＴ細胞の増殖、分化、成熟を促進する。従って、本発明のＷＴ１発現ベクターを用いて、ＭＨＣクラスＩ分子を有し、かつＷＴ１高発現である腫瘍細胞を特異的に傷害することができる。
　本発明は、別の態様において、上記ＷＴ１ヘルパーペプチドまたは該ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対する抗体（以下、ＷＴ１抗体ともいう）に関するものである。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のいずれであってもよい。これらの抗体の製造方法は、すでに周知であり、本発明の抗体もこれらの常法に従って製造することができる（Current protocols in Molecular Biology edit. Ausubel et al. (1987) Publish. John Wiley and Sons. Section 11.12～11.13、Antibodies; A Laboratory Manual, Lane, H, D.ら編, Cold Spring Harber Laboratory Press 出版 New York 1989）。
　本発明は、上記ＷＴ１ヘルパーペプチド、ＷＴ１ポリヌクレオチド、またはＷＴ１発現ベクターを含む、癌を治療または予防するための医薬組成物に関するものである。ＷＴ１遺伝子は、例えば、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫などの造血器腫瘍、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌などの固形癌において高度に発現するため、本発明の医薬組成物を、ＷＴ１遺伝子を発現している癌の治療または予防のために用いることができる。本発明の医薬組成物がＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象に投与されると、該医薬組成物に含まれるＷＴ１ヘルパーペプチドにより誘導されたＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞は、各種サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、またはインターフェロン（ＩＦＮ）など）を産生し、Ｂ細胞およびその他のＴ細胞のサブセットの増殖、分化、成熟を促進する。従って、本発明のペプチドを用いて、ＭＨＣクラスＩ分子を有し、かつＷＴ１高発現である腫瘍細胞を特異的に傷害することができる。
　本発明の医薬組成物は、有効成分としての上記ＷＴ１ヘルパーペプチド、ＷＴ１ポリヌクレオチド、またはＷＴ１発現ベクター以外に、例えば、担体、賦形剤などを含んでいてもよい。本発明の医薬組成物に含まれるＷＴ１ヘルパーペプチドは、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導することから、その誘導効率を増強させるために、本発明の医薬組成物は適当なアジュバントを含むか、あるいは適当なアジュバントと共に投与されてもよい。好ましいアジュバントとしては、例えば、完全または不完全フロイントアジュバント、水酸化アルミニウムなどが挙げられるがこれらに限定されない。また、本発明の医薬組成物は、有効成分として上記ＷＴ１ヘルパーペプチド以外の公知な癌抗原ペプチド、例えば、ＷＴ１特異的ＣＴＬを誘導するＷＴ１１２６ペプチドなどを一緒に含んでもよい（Oka et al, Cancer immunotherapy targeting Wilms' tumor gene WT1 product. Journal of Immunology, 164:1873-1880, 2000およびOka et al. Human cytotoxic T-lymphocyte responses specific for peptides of the wild-type Wilms' tumor gene (WT1) product. Immunogenetics, 51: 99-107,2000）。
　本発明の医薬組成物はまた、公知な癌抗原ペプチドと組み合わせて投与されてもよい。例えば、本発明の医薬組成物を投与する前または後に、公知な癌抗原ペプチド、例えば、ＷＴ１１２６ペプチドを投与することができる。本発明の医薬組成物は、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導することによりＢ細胞やその他のＴ細胞を活性化するという特徴を有することから、公知の癌抗原ペプチドを投与することにより誘導されたＣＴＬの活性をより増強し、治療効果を著しく上昇させることが可能である。
　本発明の医薬組成物の投与方法は、疾患の種類、対象の状態、標的部位などの条件に応じて適宜選択することができる。前記投与方法は、例えば、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、経鼻投与、経口投与などが挙げられるが、これらに限らない。さらに、前記投与方法は、リンパ球療法またはＤＣ（樹状細胞）療法であってもよい。本発明の医薬組成物に含まれるペプチドの量、医薬組成物の剤形、投与回数などは、疾患の種類、対象の状態、標的部位などの条件に応じて適宜選択できるが、１回あたりのペプチド投与量は、通常、０．０００１ｍｇ～１０００ｍｇ、好ましくは、０．００１ｍｇ～１００００ｍｇである。
　本発明は、別の態様において、有効量の上記医薬組成物を、上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象に投与することを特徴とする、癌を治療または予防するための方法に関するものである。治療または予防される癌は、ＷＴ１遺伝子を発現するものであればいずれのものであってもよく、例えば、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫などの造血器腫瘍、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌などの固形癌を含む。
　本発明は、別の態様において、癌を治療または予防するための、上記ＷＴ１ヘルパーペプチド、ＷＴ１ポリヌクレオチド、またはＷＴ１発現ベクターの使用に関する。
　本発明は、なお別の態様において、癌を治療または予防するための医薬組成物を製造するためのＷＴ１ヘルパーペプチドの使用に関する。
　本発明は、さらなる別の態様において、上記ＷＴ１ポリヌクレオチドまたはＷＴ１発現ベクターを含む医薬組成物を製造するためのＷＴ１ポリヌクレオチドまたはＷＴ１発現ベクターの使用に関するものである。
　本発明は、別の態様において、上記ＷＴ１ヘルパーペプチド、ＷＴ１ポリヌクレオチド、またはＷＴ１発現ベクターを含有する細胞に関するものである。本発明の細胞は、例えば、大腸菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などの宿主細胞を上記発現ベクターを用いて形質転換させることにより製造することができる。宿主細胞への発現ベクターの導入方法は、種々の方法を適宜選択して用いることができる。形質転換した細胞を培養し、産生されたＷＴ１ヘルパーペプチドを回収・精製することにより、本発明のペプチドを製造することもできる。
　本発明は、なお別の態様において、上記ＷＴ１ヘルパーペプチドを上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、Ｂ－リンパ球、マクロファージなど）に関するものである。本発明の抗原提示細胞は、上記ＷＴ１ヘルパーペプチドにより誘導される。本発明の抗原提示細胞を用いることで、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞が効率よく誘導される。
　本発明は、さらなる別の態様において、未熟抗原提示細胞をＷＴ１ヘルパーペプチドの存在下で培養し、該未熟抗原提示細胞からＷＴ１ヘルパーペプチドを上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞を誘導することを特徴とする、ＷＴ１ヘルパーペプチドをＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞の誘導方法に関するものである。本明細書における未熟抗原提示細胞は、成熟して抗原提示細胞、例えば、樹状細胞、Ｂ－リンパ球、マクロファージなどになり得る細胞をいう。未熟抗原提示細胞が由来する対象は、上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を有するものであればいずれのものであってもよい。未熟抗原提示細胞は、例えば、末梢血単核球などに含まれているため、かかる細胞を上記ＷＴ１ヘルパーペプチドの存在下で培養してもよい。
　本発明は、別の態様において、ＷＴ１ヘルパーペプチドを上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞を、前記ＭＨＣクラスＩＩ分子と同一の分子を有する対象に投与することを特徴とする、癌を治療または予防するための方法に関するものである。抗原提示細胞の投与方法は、疾患の種類、対象の状態、標的部位などの条件に応じて適宜選択することができる。当該方法は、例えば、静脈内投与、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、経鼻投与、経口投与などが挙げられるが、これらに限らない。
　本発明は、なお別の態様において、ＷＴ１ヘルパーペプチドを上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞を誘導することを特徴とする、癌を予防または治療するための方法であって、
　（ａ）試料とＷＴ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号：２）をコードするヌクレオチド配列もしくはその部分配列を有する核酸または上記ＷＴ１ヘルパーペプチドを反応させ、
　（ｂ）該試料中に含まれるＷＴ１ヘルパーペプチドを上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞を得、
　（ｃ）前記抗原提示細胞を前記ＭＨＣクラスＩＩ分子と同一の分子を有する対象に投与する
工程を含む方法に関するものである。前記方法における試料は、リンパ球または樹状細胞が含まれている可能性があればいずれのものであってもよく、例えば、血液などの対象由来試料、細胞培養液などが挙げられる。上記方法における反応は、一般的な手法を用いて行われてよく、好ましくは、エレクトロポレーションを用いて行われる。抗原提示細胞の取得は、当業者に既知の方法を用いて行うことができる。各工程における試料中の細胞の培養条件は、当業者が適宜決定することができる。抗原提示細胞の投与方法は、上述の如くであってもよい。
　本発明は、さらなる態様において、上記ＷＴ１ヘルパーペプチドにより誘導される、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞に関するものである。本発明のヘルパーＴ細胞は、ＷＴ１ヘルパーペプチドとＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体を認識して誘導、増殖、および活性化される。活性化されたＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、またはインターフェロン（ＩＦＮ）のごときサイトカインを産生し、Ｂ細胞およびその他のＴ細胞のサブセットの増殖、分化、成熟を促進する。従って、本発明のヘルパーＴ細胞を用いて、ＭＨＣクラスＩ分子を有し、かつＷＴ１高発現である腫瘍細胞を特異的に傷害することができる。
　本発明は、別の態様において、末梢血単核球をＷＴ１ヘルパーペプチドの存在下で培養し、該末梢血単核球からＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導することを特徴とする、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の誘導方法に関するものである。末梢血単核球が由来する対象は、上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を有していればいずれであってもよい。末梢血単核球をＷＴ１ヘルパーペプチドの存在下で培養することで、末梢血単核球中のヘルパーＴ細胞前駆細胞からＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞が誘導される。本発明により得られたＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象に投与することで、対象の造血器腫瘍、固形癌を治療または予防することができる。ここで、本明細書における末梢血単核球には、抗原提示細胞の前駆体である未熟抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、Ｂ－リンパ球、マクロファージなどの前駆体）が含まれるものとし、未熟抗原提示細胞は、例えば、末梢血単核球などに含まれているため、かかる細胞を上記ＷＴ１ヘルパーペプチドの存在下で培養してもよい。
　本発明は、さらなる別の態様において、上記ＷＴ１ヘルパーペプチドを必須構成成分として含む、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導するためのキットに関するものである。好ましくは、該キットは上記ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の誘導方法に用いられる。本発明のキットは、上記ＷＴ１ヘルパーペプチドのほかに、例えば、末梢血単核球の取得手段、アジュバント、反応容器等を含んでいてもよい。一般的には、キットには取扱説明書を添付する。本発明のキットを用いて、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を効率よく誘導できる。
　本発明は、なお別の態様において、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を、上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象に投与することを特徴とする、癌を治療または予防するための方法に関するものである。ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の投与方法は、疾患の種類、対象の状態、標的部位などの条件に応じて適宜選択することができる。前記投与方法は、例えば、静脈内投与、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、経鼻投与、経口投与などが挙げられるが、これらに限らない。
　さらに、本発明は、上記ＷＴ１ヘルパーペプチド、ＷＴ１ポリヌクレオチド、またはＷＴ１発現ベクターを必須構成成分として含む、癌を予防または治療するためのキットに関するものである。該キットは、上記ＷＴ１ヘルパーペプチドを上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞を誘導することを特徴とするキットである。また、本発明のキットは、上記必須構成成分のほかに、例えば、試料の取得手段、反応容器等を含んでいてもよい。一般的には、キットには取扱説明書を添付する。本発明のキットを用いて、ＷＴ１ヘルパーペプチドを上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞を効率よく得ることができ、この抗原提示細胞を投与することにより癌の治療または予防に用いることができる。
　本発明は、別の態様において、上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象におけるＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の存在または量を決定する方法であって、
　（ａ）上記ＷＴ１ヘルパーペプチドと上記ＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体を該対象由来試料と反応させ；次いで、
　（ｂ）該試料に含まれる該複合体を認識するヘルパーＴ細胞の存在または量を調べる、
工程を含む方法に関するものである。対象由来試料は、リンパ球が含まれている可能性があればいずれのものであってもよく、例えば、血液、リンパ液などの体液、組織などが挙げられる。ＷＴ１ヘルパーＴ細胞とＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体は、例えば、ビオチンストレプトアビジン法などの当業者に既知の方法を用いて、例えば、テトラマー、ペンタマーなどの形態にされていてもよい。かかる複合体を認識するヘルパーＴ細胞の存在または量は、当業者に既知の方法により測定することができる。本発明のこの態様において、上記複合体は標識されたものであってもよい。標識としては、蛍光標識、放射性標識などの公知のものを使用することができる。標識することで、ヘルパーＴ細胞の存在または量の決定が容易かつ迅速になる。本発明のこの態様の方法を用いて、癌の診断、予後診断などが可能になる。
　従って、本発明はまた、上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象におけるＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の存在または量を決定するための、ＷＴ１ヘルパーペプチドと上記ＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体を含む組成物を提供する。
　さらに、本発明は、ＷＴ１ヘルパーペプチドと上記ＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体を含む、上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象におけるＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の存在または量を決定するためのキットを提供する。
　本発明は、さらになお別の態様において、上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象におけるＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の存在または量を決定する方法であって、
　（ａ）上記ＷＴ１ヘルパーペプチドを該対象由来試料と反応させ；次いで、
　（ｂ）該試料に含まれるサイトカインの存在または量を調べる、
工程を含む方法に関するものである。対象由来試料は、リンパ球が含まれている可能性があればいずれのものであってもよく、例えば、末梢血単核球、血液、体液、組織などが挙げられ、好ましくは末梢血単核球である。上記工程（ａ）における反応は、上記ＷＴ１ヘルパーペプチドを上記対象由来試料中で一般的な手法を用いて行うことができる。各工程における試料中の細胞の培養条件は、当業者が適宜決定することができる。試料に含まれるサイトカインの存在または量は、当業者に既知の方法により測定することができる。サイトカインは、インターフェロンγ、インターロイキン１０などのヘルパーＴ細胞により誘導されうるものであってもよい。本発明のこの態様において、上記サイトカインは標識されたものであってもよい。標識としては、蛍光標識、放射性標識などの公知のものを使用することができる。前記サイトカインの存在または量を指標とすることにより、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の存在または量を容易かつ迅速に調べることが可能となる。
　本発明は、さらなる態様において、ＷＴ１ヘルパーペプチドと上記ＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体を用いて、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を得る方法であって、
　（ａ）試料と複合体を反応させ、
　（ｂ）該試料中に含まれる該複合体を認識するヘルパーＴ細胞を得る、
工程を含む方法に関するものである、ＷＴ１ヘルパーペプチドと上記ＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体については上述の通りである。試料は、リンパ球が含まれている可能性があればいずれのものであってもよく、例えば、血液などの対象由来試料、細胞培養液などが挙げられる。複合体を認識するヘルパーＴ細胞の取得は、例えば、ＦＡＣＳ、ＭＡＣＳなど当業者に既知の方法を用いて行うことができる。得られたＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を培養し、種々の癌の治療または予防に用いることも可能になる。
　従って、本発明はまた、ＷＴ１ヘルパーペプチドと上記ＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体を用いて、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を得る方法により得ることのできる、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞に関するものである。
　さらに、本発明は、ＷＴ１ヘルパーペプチドと上記ＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体を含む、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を得るためのキットに関するものである。
　本発明は、さらなる別の態様において、上記ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞、ＷＴ１ヘルパーペプチドを上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞、または上記ＷＴ１抗体を用いることを特徴とする、癌の診断方法に関するものである。好ましくは、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞が本発明の診断方法に用いられる。例えば、上記ヘルパーＴ細胞、抗原提示細胞または抗体を上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象由来の試料とインキュベーションする、あるいは上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象に投与し、次に該ヘルパーＴ細胞、抗原提示細胞または抗体の例えば、位置、部位、量等を決定することで、癌の診断が可能となる。上記ヘルパーＴ細胞、抗原提示細胞または抗体は、標識されたものであってもよい。かかる標識を付すことで、本発明の診断方法を効率よく実施することができる。
　本発明は、なお別の態様において、上記ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞、ＷＴ１ヘルパーペプチドを上記ＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞、あるいはＷＴ１ヘルパーペプチドに対する抗体または該ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対する抗体を必須構成成分として含む、癌の診断用キットに関するものである。
　以下に実施例を示して本発明を具体的かつ詳細に説明するが、実施例は本発明を限定するものと解してはならない。
ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する候補ＷＴ１ペプチドの選択
　ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合するペプチド配列を探索するため、Ｒａｍｍｅｎｓｅｅらにより示された方法を用いた（Rammensee et al, Immunogenetics 41:178-228,1995）。具体的には、表中の右端に記載のプログラムとＲａｍｍｅｎｓｅｅらの法則を併用することにより選択した。この方法により、ＷＴ１３５ペプチドに関しては、表１および２、ＷＴ１８６に関しては、表３および４、ＷＴ１２９４ペプチドに関しては、表５および６に示すペプチド配列まで絞り込んだ。表１～６中、左端の列は、候補ペプチド配列としての「適性」を示し、○の数が多い程Ｒａｍｍｅｎｓｅｅらの法則に対して適性が高いことを表す。無印は、あまり適性がないことを示す。また、表１～６の「ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する候補ペプチド配列」の列における［　］内は、その中に列挙されたアミノ酸群から１つのアミノ酸を選択することができることを示す。例えば、［ＦＬＭ］と表記した場合には、アミノ酸Ｆ、Ｌ、Ｍのうちいずれか１つのアミノ酸であることを意味する。また、［ＶＹＩ（ＡＬ）］と表記した場合には、アミノ酸Ｖ、Ｙ、Ｉのうちいずれか１つのアミノ酸であるか、あるいはＡ、Ｌのうちいずれか１つのアミノ酸であるかのどちらかを意味する。ｘは、いかなるアミノ酸であってもよいことを示す。右端の列には、候補ペプチド配列を列挙するのに用いたプログラムの「プログラム名」を記載する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　次いで、表１～６の中から候補となるＷＴ１ペプチドを目視にて選択し、以下の表７に示すペプチドをＭＨＣクラスＩＩ分子の好ましい候補ペプチドと同定し、下記のごとく、これらのペプチドについて実際の機能を解析した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
ＷＴ１ペプチド特異的細胞株の調製および細胞増殖能の測定
　まず、上記ＷＴ１ペプチドを不完全フロイントアジュバント（モンタナイドISA51）でエマルジョン化し、１００μｇ／マウス相当量のＷＴ１ペプチドをマウスの皮内に接種した。この免疫を１週間毎に３回行い、最終免疫の１週間後に脾臓を取り出し、脾細胞を調製した。この脾細胞を、各マウスの免疫に用いたものと同一のＷＴ１ペプチドでパルスし、放射線照射した非免疫マウスの脾細胞をｓｔｉｍｕｌａｔｏｒとして用い、１０日間隔で３回刺激した後、４回目の刺激を表７に記載された各ペプチド（ＷＴ１３５、ＷＴ１８６またはＷＴ１２９４ペプチド）でパルスし、放射線照射した非免疫マウスの脾細胞をｓｔｉｍｕｌａｔｏｒとして用いて、３Ｈ取り込み実験により各ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒに対する増殖反応を測定した。コントロールペプチドとしてＷＴ１ペプチドとは無関係なＯＶＡ（卵白アルブミン）ペプチドを用いた。その結果、ＷＴ１３５ペプチド、ＷＴ１８６ペプチドまたはＷＴ１２９４ペプチドで免疫したマウスの脾細胞は各々、ＷＴ１３５ペプチド、ＷＴ１８６ペプチドまたはＷＴ１２９４ペプチドをパルスしたｓｔｉｍｕｌａｔｏｒに反応し、増殖した（図１Ａ～Ｃ）。
　上述のごとく、各ＷＴ１ペプチドをパルスし、放射線照射した非免疫マウスの脾細胞を用いて、インビトロで１０日間隔で３回刺激した後、４回目の刺激を上述の各ペプチドをパルスし、放射線照射した非免疫マウスの脾細胞をｓｔｉｍｕｌａｔｏｒとして用いて増殖反応を測定する際に、培養液に、ＭＨＣクラスＩ抗体（Ｄｂ抗体）あるいはＭＨＣクラスＩＩ抗体（Ａｂ抗体）を添加し、３Ｈの取り込みを測定した。その結果、ＷＴ１３５ペプチド、ＷＴ１８６ペプチドおよびＷＴ１２９４ペプチドを各々パルスしたｓｔｉｍｕｌａｔｏｒに対する増殖反応が、ＭＨＣクラスＩＩ抗体の添加で抑制された（図２Ａ～Ｃ）。
　上述のごとく、各ＷＴ１ペプチドをパルスし、放射線照射した非免疫マウスの脾細胞を用いて、インビトロで１０日間隔で３回刺激した後、放射線照射した、ＷＴ１タンパク質を発現しないＣ１４９８細胞、上述の各ＷＴ１ペプチドをパルスしたＣ１４９８細胞、あるいはＷＴ１遺伝子を導入してＷＴ１タンパク質を発現するようにしたＣ１４９８細胞をｓｔｉｍｕｌａｔｏｒとして用いて、増殖反応を３Ｈの取り込みにより測定した。その結果、インビボで免疫したＷＴ１ペプチドと同じＷＴ１ペプチドでパルスしたＣ１４９８細胞およびＷＴ１遺伝子を導入されＷＴ１タンパクを発現するようになったＣ１４９８細胞に対しては、増殖反応を起こした（図３）。このことは、ＷＴ１３５ペプチド、ＷＴ１８６ペプチドおよびＷＴ１２９４ペプチドが内在性のＷＴ１タンパク質の細胞内プロセスによって産生され、ＭＨＣクラスＩＩ分子上に提示されることを明らかにした。以上より、これら３種のＷＴ１ペプチドはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ＷＴ１ペプチドであることが示された。
ＩＦＮγ産生能の測定
　上述のごとく、各ＷＴ１ペプチドをパルスし、放射線照射した非免疫マウスの脾細胞を用いてインビトロで１０日間隔で３回刺激した後、培養上清中のＩＦＮ－γとＩＬ－４の濃度をＥＬＩＳＡキット（BIOSOURCE Immunoassay Kit, Invitrogen）を用いて測定した。その結果、２匹の別々のマウスの脾細胞は、各ＷＴ１ペプチドをパルスし、放射線照射した非免疫マウスの脾細胞に反応し、インターフェロンγを産生したが、インターロイキン４をほとんど産生しなかった（図４）。このことは、これら３種類のＷＴ１ペプチドがＴｈ１タイプのＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導することを明らかにする。
ＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の測定
　ＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ）単独、ＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ）＋ＷＴ１３５ペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）、ＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ）＋ＷＴ１８６ペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）、あるいはＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ）＋ＷＴ１２９４ペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）で、マウスを３回免疫した後、マウスの脾細胞を調製した。次に、この脾細胞をＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ）を用いてインビトロで１回刺激後６日目に、ＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ）をパルスしたＲＭＡＳ細胞を標的細胞に用いて、細胞傷害活性を測定した。コントロールの標的細胞としては、ＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ）をパルスしていないＲＭＡＳ細胞を用いた。その結果、ＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ）＋ＷＴ１ヘルパーペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）で免疫したマウスの脾細胞は、ＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣＩクラスＩ）単独で免疫したマウスの脾細胞に比し、より強くＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞を誘導した（図５）。このことは、３種類のＷＴ１ペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）がＷＴ１特異的ヘルパーペプチドであることを実証した。
腫瘍移植実験
　ＷＴ１発現Ｃ１４９８白血病細胞を、１匹のマウスあたり２．５×１０５個の割合でマウスの皮下に移植し、その１週間後から毎週１回、計３回、ＷＴ１３５ヘルパーペプチド　５０μｇ/マウスをフロイント不完全アジュバントとともに皮内投与した（図６）。コントロールとしては、ＷＴ１３５ヘルパーペプチドの代わりに生理食塩水をフロイント不完全アジュバントとともに皮内投与した。継時的に皮下の腫瘍径を測定するとともに、皮下移植後２９日までの無病生存率を算定した。その結果、コントロール群では、全匹腫瘍が拡大したが、一方、ＷＴ１３５ヘルパーペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）の免疫群では、１０匹中４匹で腫瘍の増殖が完全に抑制された（図７）。ＷＴ１３５ヘルパーペプチド免疫群とコントロール群との間に有意差（ｐ＜０．０５）が認められた（図８）。このことは、ＷＴ１３５ヘルパーペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）がインビボで腫瘍免疫を誘導する能力を有するＷＴ１ペプチドであることを実証した。
　次に、上記の実験開始後２９日目のマウスを解剖し、脾臓を摘出し、脾細胞を用いてＷＴ１特異的免疫応答を解析した。簡単に説明すると、ＷＴ１３５ヘルパーペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）免疫群およびコントロール群のマウスの解剖時に、脾臓を摘出し、脾細胞を調製した。この脾細胞を、ＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ）で１回刺激し、その６日後にＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ）をパルスしたＲＭＡＳ細胞を標的細胞にして、この脾細胞の細胞傷害活性を測定した。コントロールとしては、ＲＭＡＳ細胞を標的細胞にして、この脾細胞の細胞傷害活性を測定した。その結果、ＷＴ１３５ヘルパーペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）免疫群のマウスは、４匹ともにＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞が誘導されていた（図９）。一方、コントロール群のマウス３匹では、ＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞が極めて弱く誘導されていた（図１０）。１匹においては、ＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞の誘導は見られなかった。明らかに、ＷＴ１３５ヘルパーペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）免疫群に比し、ＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞の誘導が低かった（図９および１０）。このことは、ＷＴ１３５クラスＩＩヘルパーペプチドの投与によってＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞が誘導され、このＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の働きにより、移植した腫瘍細胞が発現するＷＴ１タンパク質に免疫応答して誘導されたＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞がインビボで強く増幅したことを示しており、この結果は、ＷＴ１３５ヘルパーペプチドの有用性を実証した。
　次いで、上記のＷＴ１３５ヘルパーペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）免疫群およびコントロール群のマウスにおける特異的溶解度について解析した。簡単に説明すると、上記実験によりＷＴ１１２６ペプチド（ＭＨＣクラスＩ）をパルスしたＲＭＡＳ細胞を標的細胞にした時の細胞溶解率（％）から、ＲＭＡＳ細胞を標的細胞にした時の細胞溶解率（％）を引いた細胞溶解度（％）を特異的溶解度（％）とした（図１１左図）。また、上記で調製した脾細胞と、蛍光標識したＷＴ１テトラマー（Ｈ－２Ｄｂ　ＷＴ１　Ｔｅｔｒａｍｅｒ－ＲＦＭＰＮＡＰＹＬ－ＰＥ）とを４℃で２０分間インキュベートし、洗浄した後、蛍光標識したＣＤ３抗体、ＣＤ８抗体で染色し、再洗浄し、ＦＡＣＳで解析した。ＣＤ３陽性、ＣＤ８陽性、ＷＴ１テトラマー陽性細胞を、ＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞とした（図１１右図）。その結果、ＷＴ１３５ヘルパーペプチド（ＭＨＣクラスＩＩ）免疫群のマウスの脾細胞では、コントロール群のマウスの脾細胞に比べて、有意に高く（ｐ＜０．０５）ＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞が誘導されていた（図１１）。
ヒトにおけるＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の増殖能の測定
　図１２に示されるＤＲＢ１、ＤＰＢ１、ＤＱＢ１またはＤＲＢ５サブクラス分子を有する健常人６人から末梢血単核球を調製した。この末梢血単核球にＷＴ１３５ヘルパーペプチドを添加し、１週間培養した後、これらの末梢血単核球をＷＴ１３５ヘルパーペプチドでパルスし、放射線照射した同一人の末梢血単核球をｓｔｉｍｕｌａｒとして１週間毎に計４回刺激し、６日目に３Ｈの取り込みを測定した。健常人６人全員において、末梢血単核球がＷＴ１３５ヘルパーペプチドに反応し、増殖した（図１２）。このことは、ＷＴ１３５ヘルパーペプチドが表記のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合し、増殖反応を引き起こす機能を有することを示した。また、表８に示すように、マウスＷＴ１８６ペプチドおよびＷＴ１２９４ペプチドは、ヒトＷＴ１８６ペプチド（配列番号：４）およびＷＴ１２９４ペプチド（配列番号：５）と四角で囲ったペプチドの位置においてアミノ酸配列が１個異なる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
ＷＴ１ ３５ ペプチドのＨＬＡクラスＩＩ分子拘束性
　さらに、ＷＴ１３５ペプチドのＨＬＡクラスＩＩ分子拘束性を調べるため、以下に簡潔に説明されるごとく当業者間で周知な方法により実験を行った。まず、健常人（ＤＲＢ１＊０１０１／０４０５、ＤＰＢ１＊０２０１／０４０２、ＤＱＢ１＊０４０１／０５０１陽性の健常人（以下、健常人Ａという））由来の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をＷＴ１３５ペプチドで５回刺激してＲｅｓｐｏｎｄｅｒを調整した。次いで、ＨＬＡクラスＩＩタイプが異なる別の健常人（ＤＲＢ１＊０４０５／０９０１、ＤＰＢ１＊０２０１／０５０１、ＤＱＢ１＊０３０３／０４０１陽性の健常人（健常人Ｂという））由来の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）にＷＴ１３５ペプチドをパルスしてＳｔｉｍｕｌａｔｏｒとし、細胞の増殖（取り込まれた３Ｈ－チミジン量（ｃｐｍ））を測定した。この測定の際、抗体の添加なし、抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体の添加（＋ａ－ＤＲ）、抗ＨＬＡ－ＤＰ抗体の添加（＋ａ－ＤＰ）、または抗ＨＬＡ－ＤＱ抗体の添加（＋ａ－ＤＱ）の条件下で測定を行った。ＲｅｓｐｏｎｄｅｒとＳｔｉｍｕｌａｔｏｒの両方で陽性を示す共通のＨＬＡクラスＩＩタイプが、ＷＴ１３５ペプチドの拘束性を示す。実験の結果、図１３に示すように、抗ＤＲ抗体を添加した条件下において増殖が抑制され、健常人ＡとＢにおいてＤＲＢ１＊０４０５が共通であることから、ＷＴ１３５ペプチドがＤＲＢ１＊０４０５拘束性であることが示された。
　次いで、Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒとして、健常人Ａと異なる健常人（ＤＲＢ１＊０４０５／０８０３、ＤＰＢ１＊０２０２／０５０１、ＤＱＢ１＊０４０１／０６０１陽性の健常人（健常人Ｇという））由来のＰＢＭＣを用いることを除いて、上記実験と同じ条件下で実験を行った。その結果、図１４に示すように、抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体または抗ＨＬＡ－ＤＰ抗体を添加した条件下で増殖が抑制され、健常人Ａと健常人ＧにおいてＤＲＢ１＊０４０５、ＤＰＢ１＊０２０１およびＤＰＢ１＊０２０２が共通であることから（ＤＰＢ１＊０２０１とＤＰＢ１＊０２０２は類似性が高いため、クロスして反応することから、共通とみなした）、ＷＴ１３５ペプチドがＤＲＢ１＊０４０５、ＤＰＢ１＊０２０１およびＤＰＢ１＊０２０２拘束性であることが示された。
　次に、Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒとして健常人Ａと異なる健常人（ＤＲＢ１＊０１０１／０８０３、ＤＰＢ１＊０５０１／－、ＤＱＢ１＊０５０１／０６０１陽性（健常人Ｈという））由来のＰＢＭＣを用いることを除いて、上記実験と同じ条件下で実験を行った。その結果、図１５に示すように、抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体を添加した条件下で増殖が抑制され、健常人Ａと健常人ＨにおいてＤＲＢ１＊０１０１が共通であることから、ＷＴ１３５ペプチドがＤＲＢ１＊０１０１拘束性であることが示された。
　さらに、ＷＴ１３５ペプチドの拘束性を調べるため、ｒｅｓｐｏｎｄｅｒとして健常人Ｇ由来のＰＢＭＣを用い、ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒとしてＤＱＢ１＊０６０１遺伝子を導入したＬ細胞を使用した。Ｌ細胞のＷＴ１３５ペプチドを用いたパルスの有無によるＩＦＮ－γ量の相違を測定した。細胞内のＩＦＮ－γ産生の割合を、当業者に周知な手法であるＦＡＣＳを用いて測定した。その結果、図１６に示すように、ＷＴ１３５ペプチドのＬ細胞へのパルスにより、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒが活性化されることから、ＷＴ１３５ペプチドがＤＱＢ１＊０６０１拘束性であることが示された。
　次に、ＲｅｓｐｏｎｄｅｒとＳｔｉｍｕｌａｔｏｒに同一健常人由来のＰＢＭＣを用いて、上記と同様に実験を行った。本実験で用いた健常人が有するＨＬＡクラスＩＩ分子の種類を以下の表９にまとめる。
（表９．本実験で用いた健常人が有するＨＬＡクラスＩＩ分子の種類）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　その結果、健常人Ａ～Ｅ由来のＰＢＭＣを用いて実験を行った場合、抗ＤＲ抗体または抗ＤＰ抗体を添加すると、取り込まれた３Ｈ－チミジン量（ｃｐｍ）が減少することから、増殖が抑制されることがわかった。また、健常人Ｆ由来のＰＢＭＣを用いた場合、抗ＤＲ抗体のみを添加すると増殖が抑制された。さらに、健常人Ｇ由来のＰＢＭＣを用いた場合、抗ＨＬＡ－ＤＰ抗体のみを添加すると増殖が抑制された。健常人Ａを用いた実験により、ＷＴ１３５ペプチドは、ＤＲＢ１＊０１０１または０４０５に対して、およびＤＰＢ１＊０２０１または０４０２に対して拘束性であることが示された。健常人Ｂを用いた実験により、ＷＴ１３５ペプチドは、ＤＲＢ１＊０４０５または０９０１に対して、およびＤＰＢ１＊０２０１または０５０１に対して拘束性であることが示された。健常人Ｃを用いた実験により、ＷＴ１３５ペプチドは、ＤＲＢ１＊０８０２または１２０１に対して、およびＤＰＢ１＊０２０１または０５０１に対して拘束性であることが示された。健常人Ｄを用いた実験により、ＷＴ１３５ペプチドは、ＤＲＢ１＊１５０２がホモ接合体であることから、ＤＲＢ１＊１５０２に対して拘束性であることが示された（図１７）。加えて、ＷＴ１３５ペプチドがＤＰＢ１＊０２０１または０９０１に対して拘束性であることが示された。健常人Ｅを用いた実験により、ＷＴ１３５ペプチドは、ＤＲＢ１＊０４０５または０９０１に対して、およびＤＰＢ１＊０２０２または０５０１に対して拘束性であることが示された。健常人Ｆを用いた実験により、ＷＴ１３５ペプチドは、ＤＲＢ１＊１４０３または１５０２に対して拘束性であることが示された。健常人Ｇを用いた実験により、ＷＴ１３５ペプチドは、ＤＰＢ１＊０２０２または０５０１に対して拘束性であることが示された。
　また、ＲｅｓｐｏｎｄｅｒとＳｔｉｍｕｌａｔｏｒとして健常人Ｉ由来のＰＢＭＣを用いて、ＷＴ１３５ペプチドを用いたパルスの有無によるＩＦＮ－γ量の相違を測定した。細胞内のＩＦＮ－γ産生の割合を、当業者に周知な手法であるＦＡＣＳを用いて測定した。その結果、ＷＴ１３５ペプチドでパルスすることによりＩＦＮ－γ量の割合が著しく増加した（図１８）。このことは、ＷＴ１３５ペプチドがＤＲＢ１＊０１０１、ＤＲＢ１＊１５０１、ＤＰＢ１＊０２０１、ＤＰＢ１＊０４０２、ＤＱＢ１＊０５０１、またはＤＱＢ１＊０６０２のいずれかに対して拘束性であることを示す。
　本発明により、多種類のＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性のＷＴ１ペプチド、該ペプチドをコードするポリヌクレオチドおよびこれらを含む医薬組成物などが提供されるので、医薬品などの分野、例えば、ＷＴ１遺伝子を高度に発現している種々の造血器腫瘍、固定癌の予防薬、または治療薬の開発、製造分野において利用可能である。

Claims (17)

  1. 　ＷＴ１タンパク質由来の連続するアミノ酸からなるアミノ酸配列を有するペプチドであって、前記アミノ酸配列が、
    　　（ａ）配列番号：３に示すアミノ酸配列；
    　　（ｂ）配列番号：４に示すアミノ酸配列；
    　　（ｃ）配列番号：５に示すアミノ酸配列；および
    　　（ｄ）（ａ）～（ｃ）に示すアミノ酸配列において、１個もしくは数個のアミノ酸が、置換、または欠失もしくは付加されたアミノ酸配列
    からなる群から選択されるペプチドであって、ＭＨＣクラスＩＩ分子と結合してＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導するペプチド。
  2. 　アミノ酸配列が配列番号：３に示すアミノ酸配列である、請求項１記載のペプチド。
  3. 　ＭＨＣクラスＩＩ分子が、ＤＲＢ１＊０１０１、ＤＲＢ１＊０４０５、ＤＲＢ１＊０８０２、ＤＲＢ１＊０８０３、ＤＲＢ１＊０９０１、ＤＲＢ１＊１２０１、ＤＲＢ１＊１４０３、ＤＲＢ１＊１５０１、ＤＲＢ１＊１５０２、ＤＰＢ１＊０２０１、ＤＰＢ１＊０２０２、ＤＰＢ１＊０４０２、ＤＰＢ１＊０５０１、ＤＰＢ１＊０９０１、ＤＱＢ１＊０３０１、ＤＱＢ１＊０３０２、ＤＱＢ１＊０４０１、ＤＱＢ１＊０５０１、ＤＱＢ１＊０６０１、ＤＱＢ１＊０６０２、およびＤＲＢ５＊０１０２からなる群から選択されるものである、請求項１または２に記載のペプチド。
  4. 　ＭＨＣクラスＩＩ分子が、ＤＲＢ１＊０１０１、ＤＲＢ１＊０４０５、ＤＲＢ１＊１５０２、ＤＰＢ１＊０２０１、ＤＰＢ１＊０２０２、およびＤＱＢ１＊０６０１からなる群から選択されるものである、請求項１または２に記載のペプチド。
  5. 　請求項１～４のいずれか１項記載のペプチドをコードするポリヌクレオチド。
  6. 　請求項５記載のポリヌクレオチドを含有する発現ベクター。
  7. 　請求項１～４のいずれか１項記載のペプチド、または請求項５記載のポリヌクレオチドに対する抗体。
  8. 　請求項１～４のいずれか１項記載のペプチド、請求項５記載のポリヌクレオチド、または請求項６記載のベクターを含む、癌を治療または予防するための医薬組成物。
  9. 　請求項１～４のいずれか１項記載のペプチド、請求項５記載のポリヌクレオチド、または請求項６記載のベクターの有効量を、請求項３または４記載のＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象に投与することを特徴とする、癌を治療または予防するための方法。
  10. 　癌を治療または予防するための、請求項１～４のいずれか１項記載のペプチド、請求項５記載のポリヌクレオチド、または請求項６記載のベクターの使用。
  11. 　請求項１～４のいずれか１項記載のペプチドを請求項３または４記載のＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する、抗原提示細胞。
  12. 　未熟抗原提示細胞を請求項１～４のいずれか１項記載のペプチドの存在下で培養し、該未熟抗原提示細胞から前記ペプチドを請求項３または４記載のＭＨＣクラスＩＩ分子を介して提示する抗原提示細胞を誘導することを特徴とする、抗原提示細胞の誘導方法。
  13. 　請求項１～４のいずれか１項記載のペプチドにより誘導される、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞。
  14. 　末梢血単核球を請求項１～４のいずれか１項記載のペプチドの存在下で培養し、該末梢血単核球からＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導することを特徴とする、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の誘導方法。
  15. 　請求項１～４のいずれか１項記載のペプチドを必須構成成分として含む、ＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞を誘導するためのキット。
  16. 　請求項１～４のいずれか１項記載のペプチド、請求項５記載のポリヌクレオチド、または請求項６記載のベクターを必須構成成分として含む、癌を予防または治療するためのキット。
  17. 　請求項３または４記載のＭＨＣクラスＩＩ分子を有する対象におけるＷＴ１特異的ヘルパーＴ細胞の存在または量を決定する方法であって、
    　（ａ）請求項１～４のいずれか１項記載のペプチドを該対象由来試料と反応させ；次いで、
    　（ｂ）該試料に含まれるサイトカインの存在または量を調べる、
    工程を含む方法。
PCT/JP2010/057149 2009-04-23 2010-04-22 癌抗原ヘルパーペプチド Ceased WO2010123065A1 (ja)

Priority Applications (22)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES10767122.4T ES2528766T3 (es) 2009-04-23 2010-04-22 Péptido auxiliar antigénico de cáncer
JP2011510358A JP5730191B2 (ja) 2009-04-23 2010-04-22 癌抗原ヘルパーペプチド
CA2757764A CA2757764C (en) 2009-04-23 2010-04-22 Cancer antigen helper peptide
SG2011074200A SG175178A1 (en) 2009-04-23 2010-04-22 Cancer antigen helper peptide
KR1020117027758A KR101785738B1 (ko) 2009-04-23 2010-04-22 암 항원 헬퍼 펩티드
DK10767122.4T DK2423310T3 (en) 2009-04-23 2010-04-22 Cancer antigen peptide helps
BRPI1014998A BRPI1014998A2 (pt) 2009-04-23 2010-04-22 peptídio auxiliador de antígeno de câncer
US13/265,805 US9266932B2 (en) 2009-04-23 2010-04-22 Cancer antigen helper peptide
NZ595707A NZ595707A (en) 2009-04-23 2010-04-22 Cancer antigen helper peptide
MX2011011132A MX2011011132A (es) 2009-04-23 2010-04-22 Peptido auxiliar del antigeno del cancer.
CN201080028991.4A CN102803487B (zh) 2009-04-23 2010-04-22 癌抗原辅助肽
KR1020177010731A KR20170046192A (ko) 2009-04-23 2010-04-22 암 항원 헬퍼 펩티드
AU2010240099A AU2010240099B2 (en) 2009-04-23 2010-04-22 Cancer antigen helper peptide
RU2011147479/10A RU2588442C2 (ru) 2009-04-23 2010-04-22 Хелперный пептид ракового антигена
HK12107953.6A HK1167427B (en) 2009-04-23 2010-04-22 Cancer antigen helper peptide
EP10767122.4A EP2423310B1 (en) 2009-04-23 2010-04-22 Cancer antigen helper peptide
IL215668A IL215668A0 (en) 2009-04-23 2011-10-10 Cancer antigen helper peptide
ZA2011/08336A ZA201108336B (en) 2009-04-23 2011-11-14 Cancer antigen helper peptide
IL228948A IL228948A0 (en) 2009-04-23 2013-10-17 Antibody against cancer antigen-helping peptide
US14/994,801 US20160176939A1 (en) 2009-04-23 2016-01-13 Cancer antigen helper peptide
US15/831,484 US10759840B2 (en) 2009-04-23 2017-12-05 Cancer antigen helper peptide
US16/937,619 US11732018B2 (en) 2009-04-23 2020-07-24 Cancer antigen helper peptide

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2009105286 2009-04-23
JP2009-105286 2009-04-23

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US13/265,805 A-371-Of-International US9266932B2 (en) 2009-04-23 2010-04-22 Cancer antigen helper peptide
US14/994,801 Division US20160176939A1 (en) 2009-04-23 2016-01-13 Cancer antigen helper peptide

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010123065A1 true WO2010123065A1 (ja) 2010-10-28

Family

ID=43011181

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2010/057149 Ceased WO2010123065A1 (ja) 2009-04-23 2010-04-22 癌抗原ヘルパーペプチド

Country Status (19)

Country Link
US (4) US9266932B2 (ja)
EP (1) EP2423310B1 (ja)
JP (2) JP5730191B2 (ja)
KR (2) KR20170046192A (ja)
CN (3) CN113045636A (ja)
AR (1) AR076349A1 (ja)
AU (1) AU2010240099B2 (ja)
BR (1) BRPI1014998A2 (ja)
CA (1) CA2757764C (ja)
CO (1) CO6470802A2 (ja)
DK (1) DK2423310T3 (ja)
ES (1) ES2528766T3 (ja)
IL (2) IL215668A0 (ja)
MX (1) MX2011011132A (ja)
NZ (1) NZ595707A (ja)
SG (1) SG175178A1 (ja)
TW (1) TWI517859B (ja)
WO (1) WO2010123065A1 (ja)
ZA (1) ZA201108336B (ja)

Cited By (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012046730A1 (ja) * 2010-10-05 2012-04-12 国立大学法人大阪大学 ヘルパーｔ細胞の活性化方法
WO2013089252A1 (ja) * 2011-12-14 2013-06-20 国立大学法人 高知大学 ヘルパーｔ細胞誘導性ポリペプチドの改変
CN103797369A (zh) * 2011-09-14 2014-05-14 株式会社癌免疫研究所 抗wt1抗体的测定方法
WO2014098012A1 (ja) * 2012-12-17 2014-06-26 大塚製薬株式会社 ヘルパーt細胞の活性化方法
EP2762160A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 Nitto Denko Corporation Wt1 peptide cancer vaccine composition for mucosal administration
EP2762156A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 Nitto Denko Corporation Tape preparation of WT1 peptide cancer vaccine for transdermal administration
EP2762159A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 Nitto Denko Corporation WT1 peptide cancer vaccine composition for transdermal administration
EP2762152A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 Nitto Denko Corporation WT1 peptide cancer vaccine composition for transdermal administration
WO2016047797A1 (ja) * 2014-09-27 2016-03-31 大日本住友製薬株式会社 注射用医薬組成物
WO2016093326A1 (ja) * 2014-12-11 2016-06-16 株式会社癌免疫研究所 血管新生病の免疫療法
JP2016155813A (ja) * 2013-03-29 2016-09-01 大日本住友製薬株式会社 Ｗｔ１抗原ペプチドコンジュゲートワクチン
WO2018101309A1 (ja) 2016-11-30 2018-06-07 大日本住友製薬株式会社 Ｗｔ１ヘルパーペプチド及びこれと癌抗原ペプチドコンジュゲート体との組合せ
WO2018181648A1 (ja) 2017-03-30 2018-10-04 大日本住友製薬株式会社 Ｗｔ１癌抗原ペプチドおよびこれを含むペプチドコンジュゲート体
US10124046B2 (en) 2003-11-05 2018-11-13 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. HLA-DR-binding antigen peptide derived from WT1
US10139395B2 (en) 2007-02-27 2018-11-27 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Method for activation of helper T cell and composition for use in the method
WO2018219299A1 (en) * 2017-05-31 2018-12-06 Carsgen Therapeutics Co., Ltd. Compositions and methods of cellular immunotherapy
US10588952B2 (en) 2013-03-29 2020-03-17 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Conjugate vaccine using trimming function of ERAP1
WO2020067453A1 (ja) 2018-09-28 2020-04-02 大日本住友製薬株式会社 注射用組成物
WO2021230247A1 (ja) 2020-05-12 2021-11-18 大日本住友製薬株式会社 癌を処置するための医薬組成物
WO2023017836A1 (ja) 2021-08-12 2023-02-16 株式会社癌免疫研究所 癌を処置または予防するための医薬組成物および方法

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1951281B1 (en) 2005-10-17 2015-04-15 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Wt1 hla class ii-binding peptides and compositions and methods comprising same
US9265816B2 (en) 2006-04-10 2016-02-23 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof
AR076349A1 (es) 2009-04-23 2011-06-01 Int Inst Cancer Immunology Inc Peptido auxiliar del antigeno del cancer
US20150104413A1 (en) 2012-01-13 2015-04-16 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof
US10815273B2 (en) 2013-01-15 2020-10-27 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof
CN105377291B (zh) 2013-01-15 2019-04-02 纪念斯隆凯特林癌症中心 免疫原性wt-1肽和其使用方法
WO2015129790A1 (ja) * 2014-02-26 2015-09-03 株式会社バイオイミュランス Ｗｔ１抗原性ポリペプチド、及び該ポリペプチドを含む抗腫瘍剤
EP4043569A1 (en) * 2018-02-15 2022-08-17 National University Corporation Asahikawa Medical University Cancer antigen peptide

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005045027A1 (ja) 2003-11-05 2005-05-19 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Ｗｔ１由来のｈｌａ−ｄｒ結合性抗原ペプチド
JP2005518192A (ja) * 2001-10-30 2005-06-23 コリクサ コーポレイション Ｗｔ１特異的免疫療法のための組成物および方法
WO2008105462A1 (ja) * 2007-02-27 2008-09-04 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. ヘルパーｔ細胞の活性化方法およびそのための組成物
JP2009511637A (ja) * 2005-10-17 2009-03-19 スローン−ケターリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ Ｈｌａクラスｉｉ結合ｗｔ１ペプチド及びその組成物、並びにその作成方法

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5622835A (en) * 1994-04-28 1997-04-22 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology WT1 monoclonal antibodies
JPH08289780A (ja) * 1995-04-20 1996-11-05 Japan Organo Co Ltd 微生物等の検出方法、この検出方法に用いる抗体、及びこの抗体を産生する新規ハイブリドーマ
US7144581B2 (en) 2000-10-09 2006-12-05 Corixa Corporation Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy
AU6407899A (en) 1998-09-30 2000-04-17 Corixa Corporation Compositions and methods for wt1 specific immunotherapy
US7655249B2 (en) 1998-09-30 2010-02-02 Corixa Corporation Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy
US7063854B1 (en) * 1998-09-30 2006-06-20 Corixa Corporation Composition and methods for WTI specific immunotherapy
US20030039635A1 (en) 1998-09-30 2003-02-27 Corixa Corporation Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy
US20030072767A1 (en) 1998-09-30 2003-04-17 Alexander Gaiger Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy
US7901693B2 (en) * 1998-09-30 2011-03-08 Corixa Corporation Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy
US20030215458A1 (en) 1998-09-30 2003-11-20 Corixa Corporation Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy
AU7859900A (en) 1999-10-04 2001-05-10 Corixa Corporation Compositions and methods for wt1 specific immunotherapy
US20040043950A1 (en) * 2002-01-03 2004-03-04 Board Of Regents, The University Of Texas System WT1 antisense oligos for the inhibition of breast cancer
US7312243B1 (en) * 2003-08-29 2007-12-25 Jay Pravda Materials and methods for treatment of gastrointestinal disorders
US8470976B2 (en) * 2006-06-17 2013-06-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for targeting macromolecules into the nucleus
EP2102355B1 (en) * 2006-12-14 2016-03-02 Bolder Biotechnology, Inc. Long acting proteins and peptides and methods of making and using the same
EP2337795A2 (en) * 2008-10-01 2011-06-29 Dako Denmark A/S Mhc multimers in cancer vaccines and immune monitoring
AR076349A1 (es) 2009-04-23 2011-06-01 Int Inst Cancer Immunology Inc Peptido auxiliar del antigeno del cancer
CA2813557C (en) 2010-10-05 2021-05-04 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Method for activating helper t cell
HK1251184A1 (zh) 2014-12-11 2019-01-25 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. 血管生成性疾病的免疫疗法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005518192A (ja) * 2001-10-30 2005-06-23 コリクサ コーポレイション Ｗｔ１特異的免疫療法のための組成物および方法
WO2005045027A1 (ja) 2003-11-05 2005-05-19 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Ｗｔ１由来のｈｌａ−ｄｒ結合性抗原ペプチド
JP2009511637A (ja) * 2005-10-17 2009-03-19 スローン−ケターリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ Ｈｌａクラスｉｉ結合ｗｔ１ペプチド及びその組成物、並びにその作成方法
WO2008105462A1 (ja) * 2007-02-27 2008-09-04 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. ヘルパーｔ細胞の活性化方法およびそのための組成物

Non-Patent Citations (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Basis and Experiments of Peptide Synthesis", 1985, MARUZEN CO., LTD.
"DNA Cloning, DM. Glover", 1985, IRL PRESS
"Molecular Biology", 1989, JOHN WILEY & SONS, pages: 6.3.1 - 6.3.6
"Peptide Synthesis", 1975, MARUZEN CO., LTD.
"Peptide Synthesis", vol. 14, 1991, HIROKAWA SHOTEN CO., article "Development of Medicines (continuation"
"Peptide Synthesis, Interscience", 1966
"The Proteins", vol. 2, 1976, ACADEMIC PRESS INC.
AUSUBEL ET AL.: "Current protocols in Molecular Biology", 1987, JOHN WILEY AND SONS (PUB.
CALL KM ET AL., CELL, vol. 60, no. 3, 9 February 1990 (1990-02-09), pages 509 - 20
CANCER IMMUNOL. IMMUNOTHER., vol. 51, 2002, pages 271
CANCER. IMMUNOL. IMMUNOTHER., vol. 51, 2002, pages 271
CANCER. RES., vol. 62, 2002, pages 6438
DANIEL A. HABER ET AL., CELL, vol. 61, no. 7, 29 June 1990 (1990-06-29), pages 1257 - 69
FUJIKI F. ET AL.: "A WT1 protein-derived, naturally processed 16-mer peptide, WT1(332), is a promiscuous helper peptide for induction of WT1-specific Th1-type CD4(+) T cells", MICROBIOL.IMMUNOL., vol. 52, no. 12, 2008, pages 591 - 600, XP002590600 *
FUJIKI F. ET AL.: "Identification and characterization of a WT1 (Wilms Tumor Gene) protein-derived HLA-DRB1*0405-restricted 16-mer helper peptide that promotes the induction and activation of WT1-specific cytotoxic T lymphocytes", J.IMMUNOTHER., vol. 30, no. 3, 2007, pages 282 - 293, XP008167201 *
FUMIHIRO FUJIKI ET AL.: "WT1 Tokuiteki CD4+ Helper T Saibo o HLA-class II Kosokusei ni Yudo Dekiru WT1 Peptide no Dotei to sono Yuyosei no Kento", THE JAPANESE SOCIETY FOR IMMUNOLOGY GAKUJUTSU SHUKAI KIROKU, vol. 35, 2005, pages 187, XP008168936 *
GAO L ET AL., BLOOD., vol. 95, no. 7, 1 April 2000 (2000-04-01), pages 2198 - 203
GUO Y. ET AL.: "Direct recognition and lysis of leukemia cells by WT1-specific CD4+ T lymphocytes in an HLA class II-restricted manner", BLOOD, vol. 106, no. 4, 2005, pages 1415 - 8, XP055100496 *
INOUE K ET AL., BLOOD., vol. 91, no. 8, 15 April 1998 (1998-04-15), pages 2969 - 76
J. IMMUNOL. IMMUNOTHER., vol. 24, 2001, pages 195
KNIGHTS A.J. ET AL.: "Prediction of an HLA-DR- binding peptide derived from Wilms' tumour 1 protein and demonstration of in vitro immunogenicity of WT1(124-138)-pulsed dendritic cells generated according to an optimised protocol", CANCER IMMUNOL.IMMUNOTHER., vol. 51, no. 5, 2002, pages 271 - 281, XP002473128 *
LANE, H. D. ET AL.: "Antibodies; A Laboratory Manual", 1989, COLD SPRING HARBER LABORATORY PRESS (PUB.
LEHE C. ET AL.: "The Wilms' tumor antigen is a novel target for human CD4+ regulatory T cells: implications for immunotherapy", CANCER RES., vol. 68, no. 15, 2008, pages 6350 - 6359, XP055082460 *
MAY R.J. ET AL.: "Peptide epitopes from the Wilms' tumor 1 oncoprotein stimulate CD4+ and CD8+ T cells that recognize and kill human malignant mesothelioma tumor cells", CLIN.CANCER RES., vol. 13, no. 15 PT, 2007, pages 4547 - 4555, XP002544528 *
MELIEF CJ ET AL., IMMUNOL REV., vol. 145, June 1995 (1995-06-01), pages 167 - 77
MENKE AL ET AL., INT REV CYTOL., vol. 181, 1998, pages 151 - 212
OHMINAMI H ET AL., BLOOD., vol. 95, no. 1, 1 January 2000 (2000-01-01), pages 286 - 93
OKA ET AL.: "Cancer immunotherapy targeting Wilms' tumor gene WT1 product", JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 164, 2000, pages 1873 - 1880
OKA ET AL.: "Human cytotoxic T-lymphocyte responses specific for peptides of the wild-type Wilms' tumor gene (WT1) product", IMMUNOGENETICS, vol. 51, 2000, pages 99 - 107
OKA Y ET AL., IMMUNOGENETICS., vol. 51, no. 2, February 2000 (2000-02-01), pages 99 - 107
OKA Y ET AL., J IMMUNOL., vol. 164, no. 4, 15 February 2000 (2000-02-15), pages 1873 - 80
RAMMENSEE ET AL., IMMUNOGENETICS, vol. 41, 1995, pages 178 - 228
RITZ J, J CLIN ONCOL., vol. 12, no. 2, February 1994 (1994-02-01), pages 237 - 8
SAMBROOK J., FRISCH E. F., MANIATIS T.: "Molecular Cloning, 2nd edition,", COLD SPRING HARBOR LABORATORY PRESS
T. MANIATIS ET AL.: "Molecular Cloning", 1983, CSH LABORATORY
TSUBOI A ET AL., J CLIN IMMUNOL., vol. 20, no. 3, May 2000 (2000-05-01), pages 195 - 202
TSUBOI A ET AL., LEUK RES., vol. 23, no. 5, May 1999 (1999-05-01), pages 499 - 505
YAMAGAMI T ET AL., BLOOD., vol. 87, no. 7, 1 April 1996 (1996-04-01), pages 2878 - 84

Cited By (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10124046B2 (en) 2003-11-05 2018-11-13 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. HLA-DR-binding antigen peptide derived from WT1
US11027003B2 (en) 2003-11-05 2021-06-08 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. HLA-DR-binding antigen peptide derived from WT1
US10139395B2 (en) 2007-02-27 2018-11-27 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Method for activation of helper T cell and composition for use in the method
US11555814B2 (en) 2007-02-27 2023-01-17 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Method for activation of helper t cell and composition for use in the method
US10654892B2 (en) 2010-10-05 2020-05-19 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Method for activating helper T cell
EA037547B1 (ru) * 2010-10-05 2021-04-12 Интернешнл Инститьют Оф Кэнсер Иммунолоджи, Инк. Способ активации хелперных т-клеток
WO2012046730A1 (ja) * 2010-10-05 2012-04-12 国立大学法人大阪大学 ヘルパーｔ細胞の活性化方法
US12415833B2 (en) 2010-10-05 2025-09-16 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Method for activating helper T cell
US9851356B2 (en) 2011-09-14 2017-12-26 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Method for measuring anti-WT1 antibody
CN103797369A (zh) * 2011-09-14 2014-05-14 株式会社癌免疫研究所 抗wt1抗体的测定方法
EP2792745A4 (en) * 2011-12-14 2015-08-05 Univ Kochi Nat Univ Corp Modification of helper t cell-inducing polypeptide
JPWO2013089252A1 (ja) * 2011-12-14 2015-04-27 国立大学法人高知大学 ヘルパーｔ細胞誘導性ポリペプチドの改変
CN104136609A (zh) * 2011-12-14 2014-11-05 国立大学法人高知大学 辅助性t细胞诱导多肽的修饰
WO2013089252A1 (ja) * 2011-12-14 2013-06-20 国立大学法人 高知大学 ヘルパーｔ細胞誘導性ポリペプチドの改変
JPWO2014098012A1 (ja) * 2012-12-17 2017-01-12 大塚製薬株式会社 ヘルパーｔ細胞の活性化方法
WO2014098012A1 (ja) * 2012-12-17 2014-06-26 大塚製薬株式会社 ヘルパーt細胞の活性化方法
US9833493B2 (en) 2012-12-17 2017-12-05 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Method for activating helper T cell
EP2762152A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 Nitto Denko Corporation WT1 peptide cancer vaccine composition for transdermal administration
EP2762159A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 Nitto Denko Corporation WT1 peptide cancer vaccine composition for transdermal administration
EP2762156A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 Nitto Denko Corporation Tape preparation of WT1 peptide cancer vaccine for transdermal administration
EP2762160A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 Nitto Denko Corporation Wt1 peptide cancer vaccine composition for mucosal administration
JP2021059580A (ja) * 2013-03-29 2021-04-15 大日本住友製薬株式会社 Ｗｔ１抗原ペプチドコンジュゲートワクチン
US11759509B2 (en) 2013-03-29 2023-09-19 Sumitomo Pharma Co., Ltd. WT1 antigen peptide conjugate vaccine
JP7248247B2 (ja) 2013-03-29 2023-03-29 住友ファーマ株式会社 Ｗｔ１抗原ペプチドコンジュゲートワクチン
JP2019069970A (ja) * 2013-03-29 2019-05-09 大日本住友製薬株式会社 Ｗｔ１抗原ペプチドコンジュゲートワクチン
JP2016155813A (ja) * 2013-03-29 2016-09-01 大日本住友製薬株式会社 Ｗｔ１抗原ペプチドコンジュゲートワクチン
JPWO2014157692A1 (ja) * 2013-03-29 2017-02-16 大日本住友製薬株式会社 Ｗｔ１抗原ペプチドコンジュゲートワクチン
US10588952B2 (en) 2013-03-29 2020-03-17 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Conjugate vaccine using trimming function of ERAP1
JPWO2016047797A1 (ja) * 2014-09-27 2017-07-06 大日本住友製薬株式会社 注射用医薬組成物
WO2016047797A1 (ja) * 2014-09-27 2016-03-31 大日本住友製薬株式会社 注射用医薬組成物
US10471136B2 (en) 2014-09-27 2019-11-12 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Pharmaceutical composition for injection
JP2020015742A (ja) * 2014-09-27 2020-01-30 大日本住友製薬株式会社 注射用医薬組成物
US10525096B2 (en) 2014-12-11 2020-01-07 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Immunotherapy for angiogenic disease
AU2015362379B2 (en) * 2014-12-11 2020-05-14 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Immunotherapy for angiogenic disease
KR20170092660A (ko) * 2014-12-11 2017-08-11 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 혈관 신생병의 면역 요법
KR102797324B1 (ko) * 2014-12-11 2025-04-22 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 혈관 신생병의 면역 요법
US11369656B2 (en) 2014-12-11 2022-06-28 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Immunotherapy for angiogenic disease
US11413322B2 (en) 2014-12-11 2022-08-16 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Immunotherapy for angiogenic disease
WO2016093326A1 (ja) * 2014-12-11 2016-06-16 株式会社癌免疫研究所 血管新生病の免疫療法
JPWO2016093326A1 (ja) * 2014-12-11 2017-09-14 株式会社癌免疫研究所 血管新生病の免疫療法
WO2018101309A1 (ja) 2016-11-30 2018-06-07 大日本住友製薬株式会社 Ｗｔ１ヘルパーペプチド及びこれと癌抗原ペプチドコンジュゲート体との組合せ
US12383608B2 (en) 2016-11-30 2025-08-12 Sumitomo Pharma Co., Ltd. WT1 helper peptides and combinations of WT1 helper peptide and conjugate of cancer antigen peptides
JPWO2018101309A1 (ja) * 2016-11-30 2019-11-21 大日本住友製薬株式会社 Ｗｔ１ヘルパーペプチド及びこれと癌抗原ペプチドコンジュゲート体との組合せ
JP7209963B2 (ja) 2016-11-30 2023-01-23 住友ファーマ株式会社 Ｗｔ１ヘルパーペプチド及びこれと癌抗原ペプチドコンジュゲート体との組合せ
WO2018181648A1 (ja) 2017-03-30 2018-10-04 大日本住友製薬株式会社 Ｗｔ１癌抗原ペプチドおよびこれを含むペプチドコンジュゲート体
WO2018219299A1 (en) * 2017-05-31 2018-12-06 Carsgen Therapeutics Co., Ltd. Compositions and methods of cellular immunotherapy
KR20210068060A (ko) 2018-09-28 2021-06-08 다이니뽄 스미토모 세이야쿠 가부시키가이샤 주사용 조성물
WO2020067453A1 (ja) 2018-09-28 2020-04-02 大日本住友製薬株式会社 注射用組成物
WO2021230247A1 (ja) 2020-05-12 2021-11-18 大日本住友製薬株式会社 癌を処置するための医薬組成物
WO2023017836A1 (ja) 2021-08-12 2023-02-16 株式会社癌免疫研究所 癌を処置または予防するための医薬組成物および方法
KR20240046880A (ko) 2021-08-12 2024-04-11 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 암을 처치 또는 예방하기 위한 의약 조성물 및 방법

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2010123065A1 (ja) 2012-10-25
CO6470802A2 (es) 2012-06-29
KR20170046192A (ko) 2017-04-28
KR101785738B1 (ko) 2017-10-17
TW201041593A (en) 2010-12-01
CN105622749B (zh) 2021-03-09
US11732018B2 (en) 2023-08-22
DK2423310T3 (en) 2015-02-02
US20180170986A1 (en) 2018-06-21
MX2011011132A (es) 2011-11-18
AR076349A1 (es) 2011-06-01
EP2423310B1 (en) 2014-12-17
HK1167427A1 (en) 2012-11-30
CN102803487B (zh) 2016-01-20
CA2757764C (en) 2018-03-13
JP5730191B2 (ja) 2015-06-03
RU2011147479A (ru) 2013-05-27
IL215668A0 (en) 2012-01-31
US9266932B2 (en) 2016-02-23
JP2015177799A (ja) 2015-10-08
US10759840B2 (en) 2020-09-01
BRPI1014998A2 (pt) 2016-04-26
CN105622749A (zh) 2016-06-01
US20210107957A1 (en) 2021-04-15
AU2010240099A1 (en) 2011-11-03
IL228948A0 (en) 2013-12-31
US20160176939A1 (en) 2016-06-23
US20120045465A1 (en) 2012-02-23
CA2757764A1 (en) 2010-10-28
KR20120030380A (ko) 2012-03-28
TWI517859B (zh) 2016-01-21
EP2423310A4 (en) 2012-11-14
JP6145475B2 (ja) 2017-06-14
ZA201108336B (en) 2012-08-29
EP2423310A1 (en) 2012-02-29
CN102803487A (zh) 2012-11-28
CN113045636A (zh) 2021-06-29
ES2528766T3 (es) 2015-02-12
NZ595707A (en) 2013-05-31
SG175178A1 (en) 2011-11-28
AU2010240099B2 (en) 2015-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6145475B2 (ja) 癌抗原ヘルパーペプチド
KR101391561B1 (ko) Ｈｌａ-ａ*3303 구속성 ｗｔ1 펩티드, 및 그것을 포함하는 의약 조성물
JP4886507B2 (ja) Ｗｔ１由来の癌抗原ペプチド
JP2018093870A (ja) ヘルパーｔ細胞の活性化方法
WO2014098012A1 (ja) ヘルパーt細胞の活性化方法
US7601801B2 (en) HLA-A24 binding cancer antigen peptide derived from livin
EP2363468A1 (en) Tumor antigen peptide and use thereof
AU2014288127A1 (en) Tumor antigen peptide
RU2588442C2 (ru) Хелперный пептид ракового антигена
HK1167427B (en) Cancer antigen helper peptide

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201080028991.4

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 10767122

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2757764

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2010767122

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 215668

Country of ref document: IL

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 595707

Country of ref document: NZ

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2011510358

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13265805

Country of ref document: US

Ref document number: MX/A/2011/011132

Country of ref document: MX

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2010240099

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20100422

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 8559/CHENP/2011

Country of ref document: IN

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20117027758

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2011147479

Country of ref document: RU

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 11160137

Country of ref document: CO

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: PI1014998

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: PI1014998

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20111020