WO2008108001A1

WO2008108001A1 - ガラクト脂質

Info

Publication number: WO2008108001A1
Application number: PCT/JP2007/054598
Authority: WO
Inventors: Assunta Napolitano; Virginia Carbone; Paola Saggese; Cosimo Pizza; Kinya Takagaki
Original assignee: Toyo Shinyaku Co Ltd
Current assignee: Toyo Shinyaku Co Ltd
Priority date: 2007-03-02
Filing date: 2007-03-02
Publication date: 2008-09-12
Anticipated expiration: 2009-09-02
Also published as: JPWO2008108001A1

Abstract

本発明により、新規なモノガラクトシルジアシルグリセロール化合物およびジガラクトシルジアシルグリセロール化合物、ならびにそれらの誘導体；ならびにそれらの製造方法が提供される。本発明によれば、これらの化合物を含む食品もまた提供される。

Description

ガラクト脂質

技術分野

本発明は、ガラタト脂質に関する。より詳細には、モノガラクトシルジァシルグリセロール (MG D G) およぴジガラクトシルジァシルグリセロール明

(D GD G) 化合物に関する。書

背景技術

Ipomoea batatas L. (サツマィモ）は、多くの国で栽培されている塊根多年生植物であり、その食用根は、生のまま、または種々の様式で調理された後に食されている。

上部は、草本であり、世界の多くの地域で生鮮野菜として消費されている。サツマィモ葉は、生物活性を有するアントシァニン成分およびポリフエノール成分の優れた供給源である。 1 5の異なるアントシァニン化合物および 6 の異なるポリフエノール化合物が同定され、定量された。野菜、茶として、麵、パン、菓子中で使用される場合のサッマイモ葉の栄養組成おょぴ生理学的機能に関する近年の研究は、それらが、有益なポリフエノール化合物のための有益な食物供給源になり得ることを示唆した。さらに、それらは、ビタミン B、鉄、カルシウム、亜およびタンパク質に富む。

特に、サツマィモの種々の部分（すなわち、葉、蔓、茎、および地下茎）から、制癌剤、または癌の予防のための食物および飲料のための原料を生産する可能性を記載した特許文献における報告がある（特開平 7— 2 5 8 1 0 0号公報）。この公報には、この活性が、癌細胞の増殖を抑制し、分化を促進し得る糖脂質画分に起因することが記載されている。この画分がどのような糖脂質を含むかは確認されていなかった。

糖脂質の構造決定に関して、グリセ口糖脂質の脂肪酸ァシル基の構造を決定するために、質量分析に基づく分析アプローチが使用されている。詳細には、 G. G. Orgambideら（Lipids, 第 28卷， 1993年，第 975頁より）は、ダリセロ脂質混合物のメタノリシス後'、続く脂肪酸メチルエステル誘導体の GC/M S分析で、市販標準品との保持時間および質量スぺクトルの比較によって脂肪酸を同定した。別の分析ストラテジーでは、グリセ口脂質の負イオン高速原子衝撃質量分析（FAB/MS) で生じたカルポキシイオン（RC00— ) の衝突解離（CID) スペクトルパターンを正規標準品のパターンと比較して脂肪酸の構造を決定した（N. J. Jansenら， Lipids, 第 21卷， 1986年，第 580頁より、および N. J. Jansenら， Lipids, 第 22巻， 1987年，第 480頁より）。いずれの場合とも、その脂肪酸メチルエステル誘導体または遊離カルポキシイオン力 S、グリセ口脂質混合物のどの成分から、およびそれらのグリセロール骨格のどの位置から生じるのかを見出すことはできなかった。

グリセ口脂質に含まれる小麦粉由来のモノガラクトシルジァシルグリセ口ール (MG D G) およびジガラタトシルジァシルグリセロール (D G D G) の構造決定が、 FABイオン化で生じた、ガラタト脂質にナトリウムが付加した分子（ [M+Na] +) の正イオン CIDスぺクトルによって推定された（Y. H. Kimら， J. Mass Spectrom. , 第 32卷， 1987年, 第 968頁より、および Y. H. Kimら， Microchemical Journal, 第 68卷， 2001年，第 143頁より）。この場合、ァシル鎖中の二重結合の位置を決定することはできたが、この実験は、純粋な化合物について行われたので、これは、混合物分析に信頼性のある技術を表すというわけではない。

MG D Gおよび D G D G化合物クラスのグリセ口ール骨格上のァシル鎖の結合位置決定のために、 HPLC連結エレクトロスプレーイオン化四重極イオントフップタンアム質量分 ίΠ" (electrospray ionization— quadrupole ion tra p tandem mass spectrometry coupled with HPLC： HPLC-ESI/QITMS/MS) 力 S 採用されたが、このアプローチは、ァシル鎖中の二重結合の位置を解明するのに有用ではなかった（G. Guellaら， Rapid Commun. Mass Spectrom. , 第 1 7卷， 2003年，第 1982頁より、および W. Wangら， Rapid Commun. Mass Spect rom. , 第 13卷， 1999年，第 1189頁より）。

MG D Gおよび D G D Gのようなガラクトシルグリセロールは、その生理活性もまた注目されている。例えば、抗炎症性（A. Brunoら， Eur. J. phar macol. , 第 524卷， 2005年，第 159頁より）および発癌抑制作用が知られている。発明の開示

本発明者らは、サツマィモ葉の低極性画分の画分から、いくつかの新規なガラクト脂質、モノガラクトシルジァシルグリセロール（MG D G) およびジガラクトシルジァシルグリセロール（D G D G) 化合物を見出した。

本発明は、以下の構造式（I ) を有するモノガラクトシルジァシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を提供する：

ここで、

はパルミチン酸ァシル鎖であり、そして R ₂はリノレン酸ァシル鎖であるか；

は α -リノレン酸ァシル鎖であり、そして R ₂は 9, 12-ノナデカジエン酸ァシル鎖であるか；

R ₁は 9, 12 -ノナデカジェン酸ァシル鎖であり、そして R₂は α -リノレン酸ァシル鎖であるか；

R はァラキジン酸ァシル鎖であり、そして R ₂はォレイン酸ァシル鎖であるか；

Riはァラキジン酸ァシル鎖であり、そして R₂はリノール酸ァシル鎖であるか；

は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R₂はリノール酸ァシル鎖であるか；

1^は 11 -エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R₂は α-リノレン酸ァシル鎖であるか；

は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R₂は 9， 12-ノナデカジエン酸ァシル鎖であるか；

は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R₂は 11-エイコセン酸ァシル鎖であるか；または

尺ェはヘンエイコサン酸ァシル鎖であり、そして R₂は α-リノレン酸ァシル鎖である。

本発明はまた、以下の構造式（I I) を有するジガラクトシルジァシルグリセロールイ匕合物あるいはその誘導体を提供する：

ここで、

■R はパルミチン酸ァシル鎖であり、そして R ₂は 9, 12-ノナデカジエン酸ァシル鎖であるか；

は 9, 12 -ノナデカジエン酸ァシル鎖であり、そして R ₂は α -リノレン酸ァシル鎖であるか；

は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R ₂はパルミチン酸ァシル鎖であるか；

1^は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R ₂は α -リノレン酸ァシル鎖であるか；

は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R ₂は 9, 12-ノナデカジエン酸ァシル鎖であるか；または

1^は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R ₂は 11-エイコセン酸ァシル鎖である。

本発明はまた、上記モノガラクトシルジァシルグリセ口ール化合物あるいはその誘導体から選択される少なくとも 1つを含有する食品を提供する。また、上記ジガラタトシルジァシルグリセロール化合物あるいはその誘導体からなる群から選択される少なくとも 1つを含有する食品を提供する。

1つの実施態様では、上記食品は、さらに、麦若葉およびケールからなる群から選択される少なくとも 1つを含有する。

さらなる実施態様では、上記食品は、さらに、難消化性デキストリン、ォリゴ糖、および乳酸菌からなる群から選択される少なくとも 1つを含有する。本発明はまた、上記モノガラクトシルジァシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を製造する方法を提供し、この方法は、

( 1 ) サッマイモ葉をメタノール抽出に供する工程、

( 2 ) 固相抽出によって低極性画分を分離する工程、および

( 3 ) 高速液体クロマトグラフィーを用いて分離する工程を含む。

'本発明はまた、上記ジガラタトシルジァシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を製造する方法を提供し、この方法は、

(1) サッマイモ葉をメタノール抽出に供する工程、

(2) ·固相抽出によって低極性画分を分離する工程、および

(3) 高速液体クロマトグラフィーを用いて分離する工程

を含む。図面の簡単な説明

図 1は、 [M+Na] +イオンが m/z 829.9でぁる])^000化合物（1 1) の

C- ESI/MS/MSスペクトルを示すグラフである。（a) は全体スぺクトルであり、（b) は高分子量領域であり、そして .（c) は低分子量領域である。図 2は、 [M+Na] +イオンが m/z 991.9でぁる0&0。化合物（24) のし C-ESI/MS/MSスぺクトルを示すグラフである。 (a) は全体スぺクトルであり、（ b ) は高分子量領域であり、 .そして（ c ) は低分子量領域である。図 3は、 [M+Na] +イオンが m/z 813.9でぁるMGDG化合物（7) の LC - ESI/MS/MSスぺクトルを示すグラフである。 (a) は全体スぺクトルであり、そして（b) は高分子量領域である。発明を実施するための最良の形態

本発明者らは、固相抽出を用いてサッマイモ葉のメタノール抽出物の低極性画分を分離し、そして液体クロマトグラフィー連結エレクトロスプレーィオン化四重極飛行時間タンデム質量分析（liquid chromatography coupled to electrospray ionization - quadrupole time of flight tandem mass spe ctrometry： HPLC-ESI/QToFMS/MS) に基づく分析法を開発し、サツマィモ葉に含まれる糖脂質の構造を解明した。本発明者らは、上記分析法により、糖脂質中の脂肪酸ァシル基の組成およぴ結合位置を決定し、そしてァシル鎖中の二重結合の位置を解明できた。糖の組成おょぴコンフオメーシヨンを、一次元および二次元 NMR (核磁気共鳴）を用いて決めた。さらに、グリセロール骨格の 2つの炭素に結合している脂肪酸の不飽和二重結合の位置の決定を確認し、そしていくつかの場合には、誘導体化した脂肪酸のガスクロマトグラフィー質量分析（GC/MS) によつて立体構造も決定した。

このストラテジ一により、 1 6の新規おょぴ 1 0の既知のガラクト脂質を単離および特徴づけできた。本発明者らの知る限り、これは、サツマィモ葉におけるガラタト脂質組成の最初の報告である。

ガラタト脂質は、グリセ口脂質の 1種である。ガラタト脂質には、モノガラクトシルジァシルグリセロール (MG D G) およびジガラクトシルジァシルグリセロール（D G D G) が含まれる。 MG D Gは、グリセロール骨格の sn - 1位およぴ sn- 2位に 2つの脂肪酸ァシル基が結合し、およびグリセ口ールの sn- 3位に 1つのガラクトースがエーテル結合している構造を有する。 D G D Gは、グリセロール骨格の sn- 1位おょぴ sn- 2位に 2.つの脂肪酸ァシル基が結合し、およびグリセロールの sn 3位に 2つのガラクトースがエーテル結合している構造を有する。以下、本明細書中で単に「ガラクト脂質」という場合、 MG D Gおよび D GD Gの両方共に言及している。

本発明は、以下に説明するような新規なガラグト脂質を提供する。

より詳細には、本発明は、以下の構造式 ( I ) を有するモノガラクトシルジァシルグリセ口ール化合物あるいはその誘導体を提供する：

ここで、

. はパルミチン酸ァシル鎖であり、そして R₂は α-リノレン酸ァシル鎖であるか；

！^は -リノレン酸ァシル鎖であり、そして R₂は 9, 12 -ノナデカジエン酸ァシル鎖であるか；

は 9, 12 -ノナデカジエン酸ァシル鎖であり、そして R₂は α -リノレン酸ァシル鎖であるか；

R iはァラキジン酸ァシル鎖であり、そして R ₂はォレイン酸ァシル鎖であるか；

R はァラキジン酸ァシル鎖であり、そして R ₂はリノ一ル酸ァシル鎖であるか；

は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、ぞして R₂はリノール酸ァシル鎖であるか；

は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R₂は α-リノレン酸ァシル鎖であるか；

R ₁は 11-エイコセン酸ァシノレ鎖であり、そして R ₂は 9, 12-ノナデカジェン酸ァシル鎖であるか；

1^は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R₂は 11-エイコセン酸ァシル鎖であるか；または

はヘンエイコサン酸ァシル鎖であり、そして R₂は a-リノレン酸ァシル鎖である。本発明はまた、以下の構造式（I I) を有するジガラクトシルジァシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を提供する：

ここで、

R ₁はパルミチン酸ァシル鎖であり、そして R ₂は 9， 12-ノナデカジェン酸ァシル鎖であるか；

は 9， 12-ノナデカジエン酸ァシル鎖であり、そして R₂は α-リノレン酸ァシル鎖であるか；

は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R₂はパルミチン酸ァシル鎖であるか；

は 11 -エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R₂は α-リノレン酸アシノレ鎖であるか；

は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R₂は 9， 12 -ノナデカジエン酸ァシル鎖であるか；または

R ₁は 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R ₂は 11-エイコセン酸ァシル鎖である。

本発明のガラクト脂質中のァシル鎖の脂肪酸としては、以下が挙げられる：パルミチン酸（C16:0) ；ステアリン酸（C18:0) ；ォレイン酸（C18:l n-9) ；リノール酸（C18:2 ή- 6) ； α-リノレン酸（C18:3 n- 3) ；ノナデカジエン酸（C19 : 2) 、特に 9位および 12位に二重結合を有する；ァラキジン酸（C20 : 0) ； 11-エイコセン酸（C20 : l n- 9) ；およびヘンエイコサン酸 (C2l : 0) 。不飽和脂肪酸の場合、二重結合はシス型またはトランス型であり得る。リノール酸および α -リノレン酸は、通常、シス型の二重結合を有する。ノナデカジエン酸またほ 11' -エイコセン酸では、二重結合は、シス型またはトランス型であり得る。

本発明のガラタト脂質は、サッマイモ葉から製造され得る。サッマイモの品種は、特に限定されない。例えば、ジョイホワイト、コガネセンガン、シ口ユタカ、サツマスターチ、アヤムラサキ、すいおうなどの品種のサッマイモ茎葉が用いられ得る。

本発明に用いられるサツマィモ葉としては、サツマィモの栽培時に、地上部に出ている苗条の葉が好ましい。地上から、好ましくは 1 0 c m以上、より好ましくは 3 0 c m以上、さらに好ましくは 6 0 c m以上に成長した苗条の葉が用いられる。また、サツマィモの茎が地中から外に出ている位置から先端までの長さを測定した場合に、その長さが、好ましくは 3 0 0 c m以内、より好ましくは 2 0 0 c m以内、さらに好ましくは 1 5 0 c m以内である苗条の葉が用いられる。 3 0 0 c mを超えると'、苗条の先端部が地面についてしまい、害虫などの害を受けやすくなるので、十分な量の葉が得られなくなる場合がある。

特に、本発明においては、緑色を保持している状態の苗条、すなわちサッマイモ苗条の若葉を用いることが好ましい。本明細書において「サツマィモ苗条の若葉」とは、サッマイモ苗条の先端部から 6 0 c m以内の葉をいう。上述したようなサッマイモ葉は、好ましくは付着した泥などを水で洗浄した後に、後述する加工が施されてもよい。

( 1 ) 加熱処理

加熱処理は、サッマイモ葉中の酵素の失活による品質の安定化、およぴサツマィモ葉の褪色を防ぐ目的で行われる。加熱処理としては、例えば、ブランチング処理（例えば、湯通し）、乾熱処理、マイクロウェーブ処理、赤外線または遠赤外線処理、水蒸気処理などが挙げられる。これらの加熱処理のうち、ブランチング処理が好ましく用いられる。さらに、処理工程の便宜上、必要に応じて、サッマイモ葉を長径 1 0〜3 0 c m程度に裁断してから、各処理を行ってもよい。

ブランチング処理を行う場合、サッマイモ葉の色、すなわち緑色植物の色素であるクロロフィルの色が褪色しないようにするために、当業者が通常用いる方法でプランチング処理を行なえばよい。そのようなブランチング処理としては、例えば、湯通しが挙げられる。ブランチング処理は、用いる植物体によって、最適条件が大きく異なる。場合によっては、ブランチング処理によって、風味おょぴ栄養素が損なわれ、有用成分の生理活性が失活することもある。したがって、本発明では、好ましくは p Hが 5 . 4以上、より好ましくは 5 . 6〜8 . 4、さらに好ましくは 5 . 6〜8 . 0、最も好ましくは 5 . 6〜7 . 6の熱水でブランチング処理を行う。このようなブランチング処理によって、抗酸化活性などの活性が高く、かつポリフエノールなどの成分の含有量が高いサッマイモ葉を効率よく得ることができる。

ブランチング処理を行なう場合、風味を改善する点から、熱水の量に対して食塩を 0 . 0 1〜 5質量。 /₀、好ましくは 0 . 2〜 3質量％の割合で添加することが好ましい。このように食塩を添加することにより、さらに緑色が鮮やかになり、かつ風味がよいサッマイモ葉を得ることができる。

乾熱処理、マイクロウェーブ処理、赤外線または遠赤外線処理、およぴ水蒸気処理を行う場合は、 p Hが調整された溶液をサツマィモ葉に噴霧するなどの p H調整処理を行った後、これらの処理を行うことが好ましい。 p H調整処理は、当業者が通常用いる方法で行なわれる。例えば、塩基性条件下に調整する場合は、水酸化ナトリウム、重曹、炭酸カルシウム (卵殻カルシゥム、ホタテ貝殻カルシウム、サンゴカルシウムなど）、これらの炭酸カルシゥムを焼成して得られる酸化カルシウムなどの溶液を用レ、て処理すればよ、。さらに、アルカリイオン水などを用いてもよい。一方、酸性条件下に調整するには、酢酸、クェン酸、ァスコルビン酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸などの有機酸の溶液を用いればよい。これらの p H調整剤の量は、用いる調整剤によつて適宜調整すればよレ、。

加熱処理における加熱温度は、 8 0 °Cより高い温度、好ましくは 9 0 °C以上の温度とするのがよい。加熱時間は、 5分以下、好ましくは 3分以下、最も好ましくは 1 0秒〜 3分とするのがよい。

加熱処理後のサッマイモ葉は、緑色おょぴ風味を維持する上で、直ちに冷却することが好ましい。冷却は、加熱処理後のサッマイモ葉を冷却水中に浸漬する、冷風を当てて急冷するなど、当業者が通常用いる方法で行えばよレ、。例えば、冷却水に浸漬して冷却する場合、 3 0 °C以下の水、好ましくは 2 o °c以下の水を用いればよい。冷却の温度が低いほど、サッマイモ葉は鮮ゃかな緑色になり、見た目に美しい。冷却時間は、サツマィモ葉の処理量に応じた任意の時間であるが、サツマィモ葉自身が冷却温度と同等の温度になるまで行うことが好ましい。

( 2 ) 乾燥処理および粉末ィ匕処理

乾燥は、加工前のサッマイモ葉の品質保持が可能となるために、好ましく用いられる。乾燥は、当業者が通常用いる任意の乾燥方法を用いて行われる。乾燥処理は、乾燥方法に応じた乾燥機、例えば、熱風乾燥機、高圧蒸気乾燥機、電磁波乾燥機、直火式加熱機、回転式通風乾燥機、凍結乾燥機、減圧濃縮機などを用いて行われる。これらの中でも、コストおよび乾燥効率の面から、熱風乾燥機、直火式乾燥機、および回転式通風乾燥機が好ましい。

乾燥は、乾燥物中の水分含量が 5質量％以下となるように行うことが好ましい。乾燥処理は、常圧下では、 6 0 ~ 1 5 0 °C程度の温度で行うことにより、風味がよく、色鮮やかなサッマイモ葉の乾燥粉末を得ることができる。減圧下では、 6 0。C以下、好ましくはサツマィモ葉が凍結する温度以上でかつ 6 0 °C以下で行えば、栄養成分の損失を少なくしつつ、乾燥を行うことが可能である。' '

サッマイモ葉をそのまま乾燥する場合は、 2段階で乾燥を行うことが好ましい。 2段階乾燥は、例えば、熱風乾燥機などを用いて行うことができる。 2段階乾燥は、まず、水分含有量が 2 5質量％以下となるまで、 6 0〜8 0 °Cの温度で一次乾燥する。次いで、一次乾燥したサッマイモ葉の水分含有量が 5質量％以下となるまで、一次乾燥よりも高い温度で二次乾燥する。このとき、一次乾燥の乾燥温度が 6 0 °C未満の場合は、乾燥速度が遅くなり、二次乾燥の乾燥温度が 1 0 0 °Cを超える場合は、焦げを生じることがある。したがって、二次乾燥の温度は、好ましくは 7 0〜9 0 °Cであり、より好ましくは 8 0 °C前後に調整することでポリフヱノールの含有量が高く色鮮やかなサツマィモ葉粉末を得ることができる。

一次乾燥と二次乾燥との温度差は、約 5〜1 5 °Cであることが好ましく、約 1 0 °Cであることがより好ましい。例えば、 9 0 °Cで二次乾燥する場合、 —次乾燥の温度は、 7 5〜8 5 °Cであることが好ましく、約 8 0 °Cであることがより好ましい。

このような 2段階の乾燥工程を行うことにより、乾燥時間が短縮されると同時に、サッマイモ葉の緑色おょぴ風味が維持される。温度差を上記のように一定範囲に設定することにより、乾燥工程における緑葉の水分管理が容易になり、効率的に乾燥が行われる。

このようにして乾燥されたサッマイモ葉は、さらに粉末化処理を施して乾燥粉末としてもよい。サッマイモ葉の乾燥粉末を得るためには、製造上のコストおよび乾燥の効率の点から、熱風乾燥機、直火式加熱機、および回転式通風乾燥機が好ましく用いられる。サツマィモ葉の乾燥粉末は、さらに粒径を'小さくかつ均一にするために微粉末化処理を行ってもよい。サツマィモ葉は、茎部、葉部、および葉柄部と異なる部位を持つので、粉砕の効率を上げる観点からは、粗粉砕工程または微粉砕工程を経ることが好ましい。

粗粉碎 0：程は、乾燥したサッマイモ葉をカッター、スライサー、ダイサーなどの当業者に公知の任意の機械または装置により、乾燥した緑葉をカツトする工程である。カットされた緑葉の大きさは、好ましくは長径が 2 O mm 以下であり、より好ましくは 0 . 1〜： L O mmである。

微粉砕工程は、この粗粉砕されたサッマイモ葉を微粉碎し、微粉砕粉末を得る工程である。微粉砕工程では、 9 0質量％が 2 0 0メッシュ区分を通過するように、微粉碎される。微粉碎は、例えば、クラッシャー、ミル、ブレンダ一、石臼などの当業者が通常用いる機械または装置を用いて行われる。加熱殺菌処理を行う場合は、微粉碎工程の前に行われる。この加熱殺菌処理を施すことにより、粗粉碎されたサッマイモ葉を均一に加熱することができ、緑葉の香味を良好にし、効率のよい殺菌を行うことができる。この加熱処理は、 1 1 0 °C以上で行い、高圧殺菌機、加熱殺菌機、加圧蒸気殺菌機などを用いることができる。 ' 例えば、加圧蒸気殺菌による加熱処理の場合、粗粉碎されたサッマイモ葉は、例えば、 0 . 5〜1 0 k g / c m²の加圧下、 1 1 0〜2 0 0 °Cの飽和水蒸気により、 2〜1 0秒間加熱殺菌処理される。必要に応じて、飽和水蒸気による加熱時に含んだ水分をさらに乾燥する。

このように微粉碎することにより食感がよくなり、好ましくは、粗粉砕、加熱処理、および微粉砕の工程を順に経ることにより、さらに食感がよくなり、食品などに添加した場合、均一に混ざりやすくなる。

乾燥処理前のサッマイモ葉を粗粉碎して細片状、ペースト状などにしてから、上記の乾燥処理を行い、乾燥粉末を調製してもよい。すなわち、粉末化処理は、乾燥処理を施されたサッマイモ葉を用いて行ってもよく、未乾燥 (例えば、生葉、湯通しされたサッマイモ葉など）のサッマイモ葉を用いて行ってもよい。

サツマィモ葉に後述の圧搾処理などを施して得た搾汁に、上記の乾燥機を用いて乾燥処理を施してもよい。サツマィモ葉の搾汁を用いて乾燥処理を行う場合は、製造上のコストゃ乾燥の効率の面から、減圧濃縮機が好ましい。このように乾燥処理を行うことによって、搾汁の粉末（以下、「エキス末」という場合がある）が得られる。

さらに、サツマィモ葉の搾汁をエキス末とする場合、スプレードライヤーなどの噴霧乾燥機を用いて粉末化してもよレ、。噴霧乾燥機を用いる場合には、回収率を上げるために、必要に応じてデキストリン、シクロデキストリン、デンプン、およびマルトースのような賦形剤を添加して行われる。好ましくはデキストリンが用いられる。例えば、デキストリンの添加によって粉末ィ匕を容易にするために、搾汁とデキストリンとの質量比は、 1 ： 1 0〜5 ： 1 が好ましい。

エキス末を得るための乾燥は、エキス末中の水分含量が 5質量％以下となるように行うことが好ましい。 ·

( 3 ) 圧搾処理

圧搾処理は、例えば、圧搾機などを用いて行われる。これによつてサツマィモ葉の搾汁が得られる。得られた搾汁に上述のような乾燥処理などを施さずそのまま用いる場合は、 8 0 °C〜1 3 0 °Cで加熱殺菌を行うことが好ましい。

したがって、以下、「サツマィモ葉」という場合は、単に生鮮葉だけでなく、上記（1 ) 〜（3 ) のような加工が施されたサッマイモ葉も包含する。本発明のガラクト脂質は、例えば、以下の実施例に記載するように、上記サツマィモ葉のメタノール抽出物をメタノール Z水 Zァセトニトリルを移動相として使用する固相抽出法に供することにより、分離および回収され得る。以下の実施例は、本発明のガラクト脂質の分離手順を詳述しているが、本発明のガラクト脂質の入手方法はこれに限定されない。

本発明のガラクト脂質あるいはその誘導体を製造する方法もまた提供され、この方法は、（1) サッマイモ葉をメタノール抽出に供する工程、（2) 固相抽出によって低極性画分を分離する工程、および（3) 高速液体クロマトグラフィーを用いて分離する工程を含む。

抽出処理は、サツマィモ葉（生葉、乾燥粉末、エキス末など）にメタノール（含水メタノールも含む）を加えることによって行われる。

低極性画分は、例えば、上記抽出物を C- 18 sep-pakカートリッジ（Waters

Corporation, Milford, Massachusetts, USA) を通過させることにより分離され得る。このカートリッジは、メタノール、水、および 0.2%蟻酸で予め調整され得、 0.2%蟻酸おょぴ 0.2%蟻酸/メタノール（50:50、 v/v) で洗浄され得、その後低極性画分は、メタノールで溶出され得る。溶出された低極性画分は、例えば、メタノール Z水/ァセトニトリル (90.5： 7： 2.5) の移動相（溶出法 A) によって分離され得る。さらに、 .低極性画分の分離のために、メタノールノ水 Zァセトニトリル（82:5 : 15:2.5) の移動相（溶出法

B) もまた用いられ得る。それにより個々のガラクト脂質が得られ得る。サツマィモ葉から分離おょぴ回収されたガラクト脂質は、必要に応じて、合成吸着剤（ダイアイオン HP 20、セファビース S P 8 2 5、アンバーライト XAD4、 MC I g e 1 CHP 20 Pなど）、デキストラン樹脂（セフアデックス LH— 20など) などを用いて、当業者が通常用いる方法で精製されてもよい。

本発明のガラタト脂質は、誘導体の形態でもあり得る。天然に存在する形態で見られ得る任意の誘導体、例えば、ガラクトース残基のアルコール性 0H が種々の置換基で置換されている誘導体、および食物または薬学的に受容可能である任意の誘導体が含まれ得る。

本発明のガラクト脂質あるいはその誘導体は、その生物学的活性に基づいて、医薬品、食物および飲料、ならびに化粧品への利用が考えられる。上記生物学的活性としては、例えば、抗腫瘍作用、抗炎症作用、抗酸化作用などが挙げられる。本発明のガラグト脂質は、抗コレステロール作用、血流改善作用などを有する機能性食品、サプリメント、ならびに肌質改善効果、美容効果、および保湿効果を有する化粧料の製造に用いられ得る。食品原料、医薬品原料、賦形剤、増量剤、結合剤、增粘剤、乳化剤、.着色料、香料、または調味料のような添加成分とともに用いられ得る。

本発明のガラタト脂質あるいはその誘導体は、以下に説明するように、食品に配合され得る。例えば、ローヤルゼリー、プロポリス、ビタミン類（A、 C、 D、 E、 K、葉酸、パントテン酸、ピオチン、これらの誘導体など）、ミネラル（鉄、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、セレンなど）、 α—リポ酸、レシチン、ポリフエノール（フラボノイド類、これらの誘導体など）、カロテノイド（リコピン、ァスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルティンなど）、キサンチン誘導体（カフェインなど）、脂肪酸、タンパク質（コラーゲン、エラスチンなど）、ムコ多糖類（ヒアルロン酸など）、アミノ糖（グノレコサミン、ァセチルダノレコサミン、ガラクトサミン、ァセチノレガラクトサミン、ノィラミン酸、ァセチルノイラミン酸、へキソサミン、それらの塩など）、オリゴ糖（イソマルトオリゴ糖、環状オリゴ糖など）、リン脂質およぴその誘導体 (ホスファチジルコリン、スフインゴミエリン、セラミドなど）、含硫化合物 (ァリイン、セパェン、タウリン、ダルタチオン、メチルスルホニルメタンなど）、糖アルコール、リグナン類 (セサミンなど) 、これらを含有する動植物抽出物、根菜類（ゥコン、ショウガなど）、麦若葉末などのイネ科植物の緑葉、ケールなどのアブラナ科植物の緑葉、難消化性デキストリン（例えば、とうもろこし、芋などの澱粉より製造され、市販されている）、乳酸菌（特に腸内への到達効率の高い乳酸菌、例えば、有胞子性め乳酸菌、腸溶性物質をコーティングする方法などによって調製された乳酸菌、腸内への到達率が高い特定株の乳酸菌、ビフィドバクテリゥム ·ロンガム、ラクトバチルス .カゼィ、ラクトバチルス ·ァシドフィルス、ラタトパチルス 'ヘルべチカス、ラタトバチルス .デルプロイキ、ストレプトコッカス ·サーモブイラスなどの亜種）などとともに食品に配合され得る。

粉末形態の食品は、水などに分散させて青汁の形態として利用し得る。特に、従来の青汁の原料である麦若葉、ケール、明日葉、桑葉などの緑葉、好ましくは、麦若葉またはケールの粉末と混合し得る。さらに、食品は、植物発酵ジュース、野菜ジュース（例えば、人参ジュース）、植物抽出物、果汁などの飲料形態とすることも可能である。難消化性デキストリン、オリゴ糖、および乳酸菌のような素材もまた、食品に好適に配合され得る。

食品は、用途に応じて、顆粒、錠剤、カプセル剤（ハードカプセル、ソフトカプセルなど）、丸剤、粉末状、液状、ティーバッグ状、飴状などの形態に加工される。このような加工食品は、そのまま食してもよぐ、あるいは水、湯、牛乳などに溶いて飲んでもよい。粉末などをティーバッグの形態で提供すれば、湯などに浸漬して得られる抽出液を飲料として利用し得る。実施例

1 . 実験手法

1 . 1 · 材料

HPLC用メタノール（MeOH) を： [. T. Baker (Baker Mallinckrodt, Phillipsb urg, NJ， USA) から購入した。ァセトニトリノレ (ACN) および蟻酸を Carlo E rba (Milan, Italy) から入手した。 HPLC用水 (18mQ ) を、 Millipore Mill i - Q浄水装置（Millipore Corp. , Bedford, MA, USA) を用いて調製した。 1. 2. 試料の調製

風乾粉末化したサッマイモ葉の試料（3 g) を 60mMの MeOHで室温にて 8日間抽出した。抽出物を濾過し、収量 313.13mgを得た。ポリフエノールおよびアントシァニンから低極性成分を分離するために、メタノール抽出物を、 C - 18 sep - pakカー卜ジッシ (Waters■ Corporation, Milford, Massachusetts, USA) を通過させた。このカートリッジは、メタノール、水、および 0.2%蟻酸で予め調整しておいた。 0.2%蟻酸および 0.2%蟻酸/メタノール（50:50、 v/v) で洗浄した後、低極性成分をメタノールで溶出させ、そしてクロマトグラフィー分析に用いた。

1. 3. HPLC- UV分析

C - 18 sep - pakカートリッジ分離からのメタノール画分を、デュアルラムダ吸光度検出器 (Waters Corporation, Milford, Massachusetts, USA) を備えた Alliance HPLCを用いて、 HPLCによって分析した。個々のガラクト脂質を、 1ml/分の流速のメタノール/水 Zァセトニトリル (90.5： 7： 2.5) の移動相（溶出法 A) によって、 Hypersil BDS C18カラム（250mmX4.6膽、 5 ^m) (Thermo, Bellefonte, PA, USA) 上で無勾配溶出した。検出は 205η mで実施した。

より極性の高いガラクト脂質の分離性を向上させるために、メタノールノ水 Zァセトニトリル（82.5 : 15:2.5) の移動相（溶出法 B) もまた用いた。

1. 4. 讓分析

および¹³ C NMRスぺクトルを、 Bruker DRX-600 MHzスぺクトロメーターにて T=300Kで記録した。 NMR試料を調製し、この試料を CD₃0D (Sigma Aldri ch, 99.96%D) 中に溶解した。スペクトルの基準合わせのために、溶媒のシグナルを内部基準として、補正した 1!、 δ =3.34ppm； ¹³C=49. Oppm) 。 1 . 5 . 液体クロマトグラフィー/エレクトロスプレー質量分析（LC- ESI/M Sおよび LC- ESI/MS/MS)

C-18 sep - pakカートリッジ分離からのメタノール画分を、オンライン型 L C-ESI/MSにより分析した。こめ分析には、 Alliance HPLCに連結され、そして直交 Zスプレー供給源と面した Waters Q-Tof Microハイプリッド四極子直交加速飛行時間型質量分析計（Waters Corporation, Milford, Massachuset ts, USA) を用いた。個々のガラタト脂質を、上記クロマトグラフィー条件を用いて分離した。酸性溶媒を用いた場合のイオン化への寄与を検証するために、蟻酸 0. 2%を溶離剤に添加した両クロマトグラフィ^ ·法もまた行った。溶出物をエレクトロスプレーイオン源に直接注入し、そして MS1スぺクトルおよび MS/MSスぺクトルを正イオンモードで得、製造者により提供されるソフトウェア（Waters Mass Lynx 4. 0ソフトウェア）を用いて解明した。脱溶媒和および供給源の温度はそれぞれ、 180°Cおよび 100°Cであった。ガラクト脂質の検出のために至適化した操作条件は、以下の通りであった：キヤビラリー電圧 3400V、試料コーン電圧 40V、抽出電圧 1. 5V、衝撃セル電圧 7V。 30〜 45Vの範囲の衝撃エネルギーを用いて、測定走査モードで MS/MSスぺクトルを得た。 MS/MSスぺクトノレは、 50〜1500m/z領域で記録した。 1 . 6 . 脂肪酸メチルエステルの調製

HPLCで分離したガラクト脂質を、 2 %硫酸を含むメタノール溶液 2. 5mlに 8 0°Cにて 4時間曝露し、エステル交換反応に供した。反応終了後、反応管を冷却した。次いで、水 2. 0mlおよびへキサン 1. 0mlを各反応管に添加し、密封後、ボルテックスにより 10分間混合した。反応管を 4000r_Pmにて 1分間遠心して相分離を促進し、そして;^キサン相を GC測定用バイアルに移した。残った水相にへキサン 1. 0mlを添加し、そして抽出を上記のように行った。この工程を 2回繰り返した。

1 . 7 . ガスクロマトグラフィー質量分析（GC/MS)

脂肪酸メチルエステル分析を、キヤビラリ一力ラム（30m X 0. 25mm内径、 0. 25 /z mフィルム厚） DB-1 (J&W Scientific, Folsom, CA， USA) と適合したガスクロマ卜グラフ GC System 6890 Series (Agilent Technologies, Palo Al to, CA, USA) を備えた GCTTM直交加速飛行時間型（oa- T0F) GC質量分析計 (Waters Corporation, Milford, Massachusetts, USA) ¾：用レヽて行つた。分析を、以下の分析条件を用いて行った：注入は、スプリットレスモードであり、注入器温度は 280°Cであり、イオン源温度は 200°Cであり、そして GC /MSインターフェース温度は 300°Cであった。初期オーブン温度は 40°C (5 分）であり、 4 °C /分で 60°Cにまで上げるようプログラムし、次いで 15で Z 分で 150°Cに、そして 3 °C/分で 280°Cに加熱し、続レ、て 20°CZ分で 300°Cにまで加熱した。総実行時間は 60分であつた。ヘリゥムがキヤリァガスであり、そして l ml/分がカラム流であった。

質量分析を、 70eVイオン化エネルギーで行い、 50^500質量範囲を走査時間 0. 5秒で分析した。

2 . 結果

2 . 1 . 紫外分光おょぴ HPLC分析

NMR分析および GC/MS分析のクロマトグラフィー条件を至適化し、純粋な化合物を単離するために、 C-18 sep - pakカートリッジ分離からのメタノール画分で HPLC- UV予備分析を行った。上記溶出法 Aは、極性の低い化合物は良好に分離したが、より極性の高い化合物を分析するには適していなかった。この理由のため、有機溶剤と水との比が異なる別の溶出法 Bを設定した。これらの溶出法を用いて、全部で 2 6の化合物を分離および回収した。詳細には、溶出法 Aで 1 6、そして溶出法 Bで 1 0の化合物を分離および回収した（表 1および表 2 ) 。以下の表 1および表 2中に、 aの上付き文字を有する化合物は溶出法 Aで、 bの上付き文字を有する化合物は溶出法 Bで分離および回収されたことを示す。

2 . 2 . MR分析

単離された純粋な化合物について¹ H NMRを測定したデータの分析により、グリセ口脂質の存在が確認された。このことは、 D-グリセロール単位のプロトンシグナル H-2が、 D-グリセロール単位の C- 2位に 0-ァシル基が結合している場合に特徴的な δ 5. 29の吸収を示したことから確認された（G. L. Sassak iら， J. Nat. Prod. , 第 62卷， 1999年，第 844頁より）。糖に特徴的な吸収帯をさらに調べることにより、これらの化合物がガラタト脂質であり、そして 2つの分子群があることを同定した。これらの分子群は、ジ- 0 -ァシルグリセ口ール骨格に 0—結合しているガラクトピラノースの数が異なることにより分類された。

第一の分子群について、 NMRと選択的一次元 T0CSY (全相関分光法）ス. ベクトルとを組み合わせた分析により、 1単位の β - D -ガラクトビラノシルの存在が突き止められた。実際、グリセロールへの j3 -グリコシド化が、ァノメリックカーボン（C1，位）が低磁場シフトしていること ( δ 105) およびプロトン（HI，位）が高磁場シフトしていること ( δ 4. 26) によって、ならぴに ³ JHI- -H2-のカップリング定数が大きな値であること (J>7Hz) によって確認された。さらに、 ³J_H2,__H3，のカップリング定数が大きな値であること（J〉9H z) と共に、糖部に含まれる H4，位のプロトンのカップリング定数が小さな値であること（δ 3· 86、 J<3Hz) により、構成糖がガラクトースであることが判明した。

第二の分子群について、ァノマー領域の HSQC (Heteronuclear Single Qua ntum Correlation：異種核一量子相関）スぺクトルを調べることにより、糖部分が二糖からなることが分かった。選択的一次元 T0CSYスぺクトルにより、 1単位のひ - D-ガラクトピラノシルおよび 1単位の J3-D -ガラクトピラノシルの存在が確認された。 M，が δ³.⁹1 (Jく³ Hz) および H³，が δ³.⁵³の（J>⁹H z) のプロトンシグナルと共に 'δ 4.²⁸ (J=7.3Hz) のァノマーシグナルから、 D-グリセロール部分と）3-ガラクトピラノース糖とが結合していることが確認できた。 H2" が S3.82 (³J_{Hl i} =3.6Hz、 ³ J_H =9.5Hz) および H4" が δ 3.94 (J<3Hz) のプロトンシグナルと共に δ4.90 (J=3.6Hz) のァノマーシグナルから、 α-ガラクトピラノース糖の存在が確認された。

最終的に、 HMBC (異種核多結合相関： Heteronuclear Multiple Bond Corr elation) スペクトルにより、外側に位置す.る α -ガラクトースの CI〃と j3 -ガラクトピラノースの H - 6'のプロトン対との間に有意な相関が見られたことから、（1"→6' ) - 0 -グリコシド結合が明らかとなった。

これらの結果により、糖部分の糖単位数によってガラクト脂質に 2つの群 (モノガラクトシルジァシルグリセロール (MGDG) およぴジガラクトシルジァシルグリセロール（DGDG) ) があること、およびそれらの脂肪酸の飽和度おょぴァシル鎖長が異なることが判明した。

2. 3. LC- ESI/MSおよび LC- ESI/MS/MS分析

2. 3. 1. LC- ESI/MS分析

ガラクト脂質の構造をさらに解明するために、 C - 18 sep - pakカートリッジで分離したメタノール画分を、異なる移動相を用いて LC - ESI/MS分析に供した。詳細には、異なる極性を有するガラクト脂質の分離を向上させるため、有機相率が異なる 2つの溶出システムを用いた（すなわち、有機溶媒の含有 ' 割合を変更させた）。さらに、移動相に 0.2%蟻酸を含むまたは含まずに分析を行い、ガラクト脂質の分離および電子スプレーされた場合の挙動への影響を調べた。実際に、ガラタト脂質含量に富むメタノール画分の MS分析の際の挙動は、溶媒として用いた蟻酸の酸強度にしたがって異なった。

酸性溶媒を用いた溶出条件下で、質量スペクトルは、 [M+Na] +イオンに加えて、ガラクトシル部分からの消失が優先的に生じることから、 [M+H- 1 62] +および [M+H- 180] ⁺の'イオンを生じた。さらに、これらの分子種が L C- ESI/MSの装置内で衝突および崩壌を起こすことから、ジァシルグリセロール構造から脂肪酸ァシル基が遊離脂肪酸として消失して、他のフラグメントイオンを生じた。これは、一般に [R_xC0+74] +イオンフラグメントとして観測される。

これらの実験条件では、 [R_xC0] +イオンもまた存在した。ここで X= lまたは 2であり、これは、 X= 1の場合はグリセロール骨格の sn- 1位、そして、 X= 2の場合は sn - 2位から遊離し生じたものである。

逆に、非酸性溶出条件では、装置内での自発的なフラグメント化は生じにくく、質量スペクトルは、 [M+Na] +イオンのみを示し、 [M+H- 162] +おょぴ [M+H-180] +のフラグメントはわずかも存在しなかった。

これらの結果により、各ガラクト脂質の脂肪酸組成を決定することができた。すなわち、 C16:0 パルミチン酸（またはへキサデカン酸）； C18:0 ステアリン酸（またはォクタデカン酸）； C18:l ォクタデセン酸； C18:2 ォクタデカジエン酸； C18:3 ォクタデカトリェン酸； C19:2 ノナデカジエン酸； C20:0 ァラキジン酸（またはエイコサン酸）； C20:l エイコセン酸；および C21:0 ヘンエイコサン酸の中の 1つまたは 2つの脂肪酸が、ガラクト脂質中の脂肪酸として存在することが分かったが、立体構造については決定できなかった。 2. 3. 2. LC- ESI/MS/MS分析

LC- ESI/MS/MS実験では、 [M+Na] ⁺前駆イオンにより生じる [M+Na - 00₂ H] +および [M+Na- R₂C0₂H] +のフラグメントの相対強度を算出することによつて、ァシル鎖の立体構造を決め、そして混合物中に存在するガラクト脂質を同定した。

溶出溶媒の酸強度は、 MS/MSスぺクトルの断片化パターンにも影響した。実際、 MG D G化合物について酸性条件下で測定した LC- ESI/MS/MSのデータは、ガラクトース部分の開裂により生じたフラグメントイオンに加え、 [M +H-162] +ィオン形成を伴う断片化を検出しゃすいことを示した。

D G D G化合物は 2つのガラクトシル単位を有するので、その MS/MSスぺクトルでは、二番目の糖（すなわち外側に位置する糖）の消失により [M+ H-162] +MG D Gイオン誘導体から得られた生成物のフラグメントイオンもまた、検出可能であった。

一方、これまでに言及したフラグメントに加えて、いずれの種類のガラクト脂質（MG D Gおよび D G D G) についても、グリコシド結合の開裂（これは、主に中性条件で促進される）によって得られる中性脂肪酸の消失は、 [M+Na-R^O^] +および [M+Na - R₂C0₂H] +のフラグメントを生じた。この知見により、これが、脂肪酸組成おょぴそれらの結合の配置に関する情報を簡便に提供する電子的な分析方法であることが示唆された。

ガラクト脂質ァシル鎖中の脂肪酸の不飽和度および二重結合の位置の決定は、 MS/MSスぺクトルの高分子量領域を分析することによって達成された。

2 . 4 . 脂肪酸 GC/MS分析

グリセ口ール骨格の 2つの炭素に結合している脂肪酸が何であるかを確認するために、 HPLCにより分離された純粋なガラクト脂質をエステル交換反応に供し、得られた脂肪酸メチルエステルを GC/MSにより分析した。純粋なガラクト脂質の脂肪酸組成は、 MS/MSスぺクトルから推定したものと一致し、そしていくつかの場合、ポリ不飽和脂肪酸二重結合の正確な構造形態も決めることができた。脂肪酸メチルエステルの GC/MS分析により、以下の脂肪酸の存在が確実に立証された：パルミチン酸（C1⁶:0) 、ステアリン酸（C18:

0) 、ォレイン酸（C18:l n - 9 シス）、リノール酸（C18:2 n- 6 シス）、 α -リノレン酸（CI⁸:³ η - 3 シス）、ノナデカジエン酸（CI⁹:²) 、ァラキジン酸（C20:0) 、 11-エイコセン酸（C20:l n- 9 シス）、およびヘンエイコサン酸（C21:0) 。

(実施例 1)

MS/MSスペクトルは、 MGDGおよび DGDGの中で、 Cの数が大きい上位シリーズ（すなわち、グリセロール骨格の 2つの炭素に、少なくとも 1つは C20:0、 C20:l、および C21:0である脂肪酸が結合している）の化合物について、とりわけ高分子量領域において、より複雑なスペクトルを生じ、既に記載したフラグメントに加えて、種々の強いフラグメントイオンを生じた。

LC-ESI/MSクロマトグラムにおいて、溶出法 Bにて 71.59分の保持時間で、質量スペクトルが m/z 829.9のピークを示した化合物（表 1中の化合物 1

1) が存在した。それは、グリセロール骨格の 2つの炭素にエイコセン酸 (C20:l) およびリノレン酸（C18:3) が結合している MGDGにナトリウムが付加している分子に相当した。

図 1は、化合物 (1 1) の LC- ESI/MS/MSスペクトルを示す。（a) は全体スペクトルであり、（b) は高分子量領域であり、そして（c) は低分子量領域である。図 1 (a) では、 m/z 519.6および 551.5の 2つのフラグメントイオンピークが顕著に検出された。これらはそれぞれ、イコセン酸（C20: 1) およびリノレン酸（C18:3) の 2つの脂肪酸が消失した結果であると考えられ、それにより、脂肪酸組成を決定できた。 MGDG分子における各脂肪酸ァシル鎖の結合位置を、 [M+Na-R_xC0₂H] +イオンの相対強度により決定した。具体的には、 sn- 1位にエイコセン酸（20:1) 、および sn- 2位にリノレン酸（18 : 3) の脂肪酸ァシル鎖が存在すると確認、された。

文献値によれば、低分子量領域は、糖部に関連したフラグメントイオンを示す。以下、図 1 ( c ) に言及して説明する。グリコシド結合の開裂によつて、 m/z 185. 1および m/z 203. 1のフラグメントイオンピークを生じ、これらは、糖環からヒドロキシル基が脱離したもの（m/z 185. 1) と保持されたもの（m/z 203. 1) にナトリゥムが付加したイオンであると判断された。

また、 m/z 243. 2のフラグメントイオンピークは、ガラクトシルグリセ口ール骨格から 2つの中性脂肪酸が同時に開裂したものである。

さらに、このスぺクトル領域では、 m/z 261. 3、 293. 2、および 335. 4のピークも見られ、これらは、既に説明した [RiCO] +、 [R₂C0] +、および [R₂C 0+74] +のフラグメントイオンに対応した。

また、 m/z 301. 3および 315. 3のナトリウム結合イオンはそれぞれ、一方の脂肪酸が消失すると共に、他方の脂肪酸のァシル鎖の一部分が脱離したことによって形成された。この脱離は、上記他方の脂肪酸のァシル鎖の力ルポ二ル炭素から 2つまたは 3つ離れた位置の炭素までの部分で生じた。

脂肪酸ァシル鎖中の二重結合の位置に関する情報は、以下に説明するように、 MS/MSスぺクトルの高分子量領域の分析で得られた。

飽和脂肪酸ァシル鎖の典型的な断片化では、親イオンからの C_nH_2nの消失に起因するフラグメントイオンのみが検出可能であった。さらに、不飽和脂肪酸ァシル鎖が存在する場合では、 C_nH_2n_₂および C_nH_2n+2の消失もまた報告されている（Y. H. Kimら，前出） ₀

そこで、 m/z 829. 9の [M+Na] +イオンの MS/MSスぺクトルの高分子量領域を細かく分析した (図 1 ( b ) ) 。この分析により、 [M+Na- 18] +イオンに起因する m/z 811. 9のピークが観察された。これらの後者の 2つのピークにより、 sn-2脂肪酸ァシル鎖のカルボ-ル炭素から 15個離れた位置の炭素に第一の二重結合が位置することが突き止められた。代わりに、フラグメントイオンの起点が m/z 771. 8から m/z 5δ1· 5までの範囲の間にあることを説明する、 2つの異なる断片化経路が仮定され得た。それらのうち第一の経路は、 2つの脂肪酸ァシル鎖のもっぱら一方でのフラグメント化に関係するが、それは、エネルギー的に優位ではなく、そこで生じるフラグメントイオンは強度がやや弱い。

それに対して、 2つの脂肪酸ァシル基が同時に断片化し、検出されると、より多くのフラグメントイオンのピークについて説明することができる。例えば、 m/z 811. 9のイオンから始まって、 m/z 755. 8のフラグメントイオンは、 sn - 2脂肪酸ァシル基の C₃H₄およぴ sn- 1脂肪酸ァシル基の CH₄のそれぞれの消失、または両ァシル鎖の 2つの C₂H₄の消失のいずれかによつて形成され得た。

そこで、 771. 8— 551. 5の分子量範囲の MS/MSスペクトルを分析した。その結果、 sn- 2ァシル基の二重結合が 9番目および 1 2番目の炭素に位置し、そして sn-1ァシル基の二重結合が 1 1番目の炭素に位置していることを突き止め、前者は、 9, 12， 15-ォクタデカトリェン酸であることが確認され、および後者は、 11 -エイコセン酸に起因することが分かった。

C2グリセ口ール位置に結合している脂肪酸ァシル鎖中の二重結合の位置を立証するには、 m/z 519. 6の

+イオンの断片化経路の分析による C_nH_2n、 C_nH_2n_₂、および C_nH_2n+2の消失の算定もまた有用であった。

明らかに、 MS/MSスペクトルの高分子量領域には、 [M+Na - 180] +イオンによる m/z 649. 7のフラグメントイオンのピークもまた生じていた。

(実施例 2 )

上記実施例 1と同じ LC- ESI/MSクロマトグラムに、質量スぺクトルで m/z 9 91. 9のピークを呈示した、溶出法 Bにて保持時間 53. 08分の化合物（2 4 ) が存在した。このピークは、 D G D Gにナトリゥムが付カ卩された分子のィォンに相当した。この D G D Gは、グリセロール骨格の sn- 3位に 2単位のガラクトシルが結合していることを除いて、実施例 1の MGDG分子と同じ脂肪酸パターンを提示している。

図 2は、化合物（24) の LC- ESI/MS/MSスペクトルを示す。（a) は全体スペクトルであり、（b) は高分子量領域であり、そして（c) は低分子量領域である。 MS/MSスペクトル（図 2) は、上記実施例 1の化合物 1 1の M GD G分子に非常に類似したフラグメント化パターンを示した。

図 2 (a) に示されるように、 [M+Na- RCCyfl +イオンおよび [M+Na - R₂ C0₂H] +イオンに関連した m/z 681.7および 713.7の 2つのフラグメントィォンピークが顕著に検出された。これらは、分析している分子中の 2つの脂肪酸の立体構造および組成に関して有益であった。この DGDGは、 C1グリセロール位置に C20:lァシル鎖を、そして C2位.置に C18: 3ァシル鎖をそれぞれ提示すると結論した。

この場合、 2つの脂肪酸ァシル鎖の断片化は、その際に 1つの鎖でのみ関与した。 m/z 991.9の [M+Na] +イオンで始まり、 sn- 2ァシル鎖での断片化が進行して、最終的に関連プロピル誘導体を生じた /z 769.8 ; 図 2 (b) ) 。

sn-1ァシル鎖での断片化についても同じである。この場合、先に sn- 2ァシル鎖の不完全な断片化で、そして引き続いて sn-1ァシル鎖が関与することにより、より強いパターンもまた検出可能であった。

sn- 2ァシル鎖では、 m/z 973.9で [M+Na - 18] +イオンから始まって、 C₂H₄ の消失により生じた m/z 945.9のフラグメントイオンピークが顕著に検出され、他方、 C₅H₈の消失により生じた m/z 905.9のフラグメントイオンピークが検出された。さらに、 C₈H₁₂およぴ ₂の消失により、 m/z 865.9および 853.8 のイオンピークが生じた。このプロフィールによっても、分析したフラグメント配列への 1つ、 2つ、および 3つそれぞれの二重結合の存在の関与が説明できた。考慮したフラグメント配列の質量範囲に含まれる生じたフラグメントイオンを、より詳細に分析した。この分析により、 C_nH_2nおよび C_nH_2n_₂から 1つの炭素が抜けた（n = lの単位が抜けた）と評価され、それらのそれぞれのフラグメントイオンピークが、分子量 1 4または 1 2に相当し、二重結合の位置の指標となる。このようにして、 sn - 2ァシル鎖の二重結合の正確な位置が 9番目、 1 2番目、および 1 5番目の炭素にあると決定し、 C 2グリセロール位置に連結している脂肪酸は、 9， 12， 15-ォクタデカトリェン酸であることが確認された。

同様にして、 sn- 1脂肪酸ァシル鎖では、その 1つの二重結合がカルボニル炭素から 1 1個離れた炭素に位置していたことが分かった。これにより、 C1 グリセ口ール位置に 11 -エイコセン酸が存在すると結論寸けた。

MS/MSスぺクトルに m/z 829. 9および 667. 7の 2つのフラグメントイオンが存在した。これらのイオンは、各々がガラクトース部分に対応する、 2つの連続した分子量 162の消失により生じた。このことにより、この糖が、実施例 1の MG D G化合物よりも分子量の高い同族化合物であると確認された。実施例 1と同様にして、 2つの中性脂肪酸が同時に開裂されることによつて、 m/z 405. 5のナトリウム結合イオンが生成し、他方、一方の脂肪酸ァシル鎖の消失、および他方の脂肪酸のァシル鎖の一部分の脱離によって、 m/z 463. 5および 477. 5のナトリウム結合イオンが生じた。 m/z 533. 7および 551. 7 の [M+Na- Ι^0₂Η] +イオンおょぴ [M+Na - R₂C0₂H] +イオンが検出されたことから、代わりに、上記一方の脂肪酸ァシル鎖が、外側のガラクトースを欠く D GD G分子から消失されたことが説明された。

さらに、 MS/MSスぺクトルでは、 m/z 293. 3、 335. 5、および 367. 1の [R^ 0] +、 [R₂C0+74] +および [R^O +74] +フラグメントイオンもまた、示された。

(実施例 3 ) cの数が小さい下位シリーズに属するガラタト脂質（すなわち、グリセ口ール骨格の 2つの炭素に、 C16:0、 18:0、 18:1、 18:2、 18:3、 19:2の脂肪酸が結合している構造を有する MGDGおよび DGDG) については、 MS/MS スぺクトルは、上位シリーズから得られる情報ほど有益ではないようであつた。それにも関わらず、上位シリーズに属するガラクト脂質の質量スぺクトルとの比較により、これらの化合物についてもまた、精密な構造決定を実施することができた。

これらのスペクトルでは、 [M+Na- R_xC0₂H] +フラグメントイオンが最も顕著に検出され、さらに [M+Na - 162] +、 [M+Na- 180] +、および [R_xC0+7 4] +フラグメントィオンも共に検出された。他に生じたフラグメントイオンはほとんどなかった。

質量スぺクトルで m/z 813.9の [M+Na] +イオンを呈示する、 LC- ESI/MSク口マトグラムで溶出法 Bにて 67.47分の保持時間の化合物（7) を例に挙げる。図 3は、化合物（7) の MS/MSスペクトルを示す。（a) は全体スぺクトルであり、そして（b) は高分子量領域である。図 3 (a) に示されるように、 MS/MSスぺクトルは、 m/z 519.5および 535.5の.2つの強いイオンを示した。これらは、 [M+Na-„1] . +フラグメントイオンおよび [M+Na- R₂C0₂ H] +フラグメントイオンに相当する。この質量差は、ノナデカジエン酸（C1 9:2) およびリノレン酸（C18:3) のそれぞれの消失と考えられる。さらに、これらの 2つのフラグメントイオン間の強度の差により、ノナデカジエノィル鎖（C19:2) 力 sn-1位に結合し、そして他方のァシル鎖が、 sn - 2位に結合していることが明らかになった。

スぺクトルの高分子量領域（図 3 (b) ) は、それぞれ [M+Na- 162] ⁺おょぴ [M+Na-180] +による m/z 651.8および 633.8の 2つの生じたフラグメントイオンの存在を示した。さらに、スぺクトルの低分子量領域では、 m/z 26 1.3および 335· 4の [R₂C0] +フラグメントイオンおよび [R₂C0+74] +フラグメントイオンと共に、 m/z 185. 1および 203. 2の既に記載したフラグメントィォンピークが見られた。

実施例 1または 2に記載するように、ァシル鎖中の二重結合の位置は、スぺクトルの高分子量領域の断片化パターンの分析により決定した。

この下位シリーズに属するガラクト脂質の MS/MSスぺクトルでは、脂肪酸ァシル鎖の断片化は、その際に 1つの鎖でのみ関与した。これは、 Kimら (前出）により報告されたように、両ァシル鎖に共通のフラグメントイオンをしばしば生じ、そしてアルキル末端からの (¾の消失から常に始まる。

sn - 1ァシル鎖では、 C_nH_2nが連続して消失し、 m/z 755· 8および 727. 7のフラグメントイオンが生じた。一方、 m/z 715. 9のフラグメントイオンが生じたことにより、 1 2番目の炭素に ω—二重位脣があることがマークされた。二番目の二重結合の位置は、 C_nH_2nおよび C_nH_2n_₂の消失に関連した m/z 701. 9、 68 7. 8、および 675. 8のイオンにしたがって、 9番目の炭素であると立証された。これらの結果により、 9， 12-ノナデカジエン酸が sn - 1グリセロール位置にあると立証された。

sn-2ァシル鎖に関する断片化パターンでは、上記のように CH₄がまず消失することにより m/z 797. 8のフラグメントイオンが生じ、そして C_nH_2n-₂の消失によって m/z 757. 8のフラグメントイオンが生じていた。 C_nH_2n—₂は n = 3であり、そして鎖の 1 5番目の炭素に二重結合があることが示唆される。

引き続き、 sn-2了シル鎖では C_nH_2nおよぴ C_nH_2n_₂が、そして sn- 1ァシル鎖では CH₄が消失したことが、 m/z 743. 8、 727. 7、 715. 9、 687. 8、および 675. 8のフラグメントイオンピークが検出されたことにより説明された。これにより、 9番目おょぴ 1 2番目の炭素に別に 2つの二重結合があることを突き止め、そして sn-2グリセロール位置に 9， 12, 15-ォクタデカトリェン酸があることを確認した。

二重結合の位置の決定が正確であることを検証するために、 HPLCでの分離により回収した試料をメタノール抽出し、そしてこの化合物を GC/MS分析に供した。保持時間および質量スぺクトルに関して脂肪酸メチルエステルの正規標準品と比較したところ、上記の結果と一致した。これにより、この化合物に 9, 12 -ノナデカジエン酸および一リノレン酸が存在することが確認できた。 '

これらの 2つの脂肪酸はまた、別の MGDG化合物の脂肪酸の組成分析においても観察された。その化合物は、 LC- ESI/MSクロマトグラムで溶出法 B にて 73.35分の保持時間で溶出され、そして MS/MSスぺクトルにおいて、 m/z 813.55の [M+Na] +イオンを呈示した（表 1中の化合物 6) 。この結果を説明するために、ァシル鎖の結合位置が異なると考えた。この化合物における MS/MSスぺクトルの m/z 535.5および 519.5 [M+Na-R^O^] +フラグメントイオンおよび [M+Na- R₂C0₂H] +の 2つのフラグメントイオンの相対強度を算定し、 sn - 1グリセロール位にリノレン酸が、そして sn - 2グリセロール位にノナデカジエン酸が位置していたことを確認した。 MS/MSスぺクトル研究により、両ァシル鎖の二重結合の位置を決め、 α-リノレン酸および 9， 12 -ノナデ力ジェン酸であることが確認された。

(実施例 4)

同様に、異なる極性度を有するガラクト脂質の分離を向上させるために 2 つの溶出法（Αおよび Β) を用いて溶出した化合物のァシル鎖に対する脂肪酸組成、立体構造、および二重結合の位置によって、混合物中に存在する全てのガラタト脂質を決定した。この結果は、下記の表 1および表 2に記載したとおりである。したがって、実施例 1~3に記載した化合物（化合物 1 1、 24、 7および 6) に加えて、表 1および表 2中の化合物 1、 8〜10、 1 2〜 14、 17、 22、 23、 25、 26により示される新規なガラクト脂質を得ることができた。以下の表 1および表 2に、同定されたガラクト脂質の種々の化合物を示す。表 1は、構造式（I) を有する MGDGを示し、そして表 2は、構造式（I I) を有する DGDGを示す。表 1およぴ表 2中、および R₂はそれぞれ、グリセ口ール骨格の sn- 1位に結合している脂肪酸ァシル基および sn- 2位に結合している脂肪酸ァシル基を示す _ό 脂肪酸ァシル基の表記は、生合成を論ずる場合の表記に従う。二重結合の位置は、カルボニル基と反対側から番号を付して記載しているので、例えば、 9位、 12位、および 1 5位にシス二重結合を有する -リノレン酸は、「C18:3 n - 6 シス」と表記した。

表 1

保持時間 (分） M M + Na⁺ Ri R₂

1 69.18^a 752.54° 775.53 C16:0 C18: 3 n- 3 シス

2 64.35^a 778.56 801.55 C18 :2 n-6シス C18 :2 n- -6シス

3 47.53^a 776.54 799.53 C18 :2 n-6シス C18. 3 n- 3 シス

4 55.77^a 780.57 803.56 C18: 3 n— 3 シス C18: 0

5 36.05^a 774.53 797.52 C18: 3 n— 3 シス C18: 3 n- 3 シス

6 73.35^b 790.56° 813.55 C18: 3 n-3 シス C19: 2

7 67.47^b 790.56° 813.55 C19:2 C18: 3 n- 3 シス

8 17.29^a 812.64° 835.63 C20:0 C18: 1 n- 9 シス

9 16.63^a 810.62° 833.61 C20.0 C18 :2 n- -6シス

10 14.26^a 808.62° 831.59 C20:1 n-9 トランス C18 :2 n- -6シス

11 806.59° 829.58 C20:1 n-9 卜ランス C18: 3 n- 3 シス

12 15.45^b 822.62° 845.61 C20:1 n— 9 卜ランス C19: 2

13 15.97^b 838.65° 861.64 C20:1 n— 9 トランス C20:1 n-9 卜ランス

14 15.32^b 822.62° 845.61 C21 :0 C18: 3 n- 3 シス a:溶出法 Aによる

b:溶出法 Bによる

c:新規ガラクト脂質

表 2

保持時間 (分） M M + Na⁺ Ri R₂

15 71.87³ 916.61 939.60 C16:0 C18 :2 n-6シス

16 53.90³ 914.59 937.58 C16:0 C18: 3 n-3 シス

17 16.33³ 930.63° 953.62 C16:0 C19:2

18 97.78^a 942.63 965.62 C18.0 C18: 3 n-3 シス

19 52.64^a 940.61 963.60 C18: 2 n-6 シス C18 :2 n-6シス

20 37.16^a 938.59 961.58 C18: 2 n— 6 シス C18: 3 n-3 シス

21 27.53^a 936.58 959.57 C18: 3 n— 3 シス C18: 3 n-3 シス

22 53.73^b 952.61° 975.60 C19:2 C18: 3 n-3 シス

23 15.19^a 946.66° 969.65 C20:1 n-9 トランス 016:0

24 53.08^b 968.64^c 991,63 C20:1 n— 9 トランス C18: 3 n-3 シス

25 13.10 984.67° 1007.66 C20:1 n-9 トランス C19:2

26 12.62^b 1000.70° 1023.69 C20:1 n-9 トランス C20:1 n— 9 卜ランス a:溶出法 Aによる

b:溶出法 Bによる

c:新規ガラクト脂質

(実施例 5)

サッマイモの種芋を植え込み、茎の長さ（地面から外に出ている部分の長さ) が 150 cm程度となるまで栽培した。次いで、サッマイモ苗条の先端部から 60 c mの部分（苗条の若葉）を刈り取り、水で 2回洗浄して 1 k g のサッマイモ葉を得た。 '

得られたサッマイモ葉を 5 mm程度にカットし、 pH8. 0に調整した 2 Lの熱水（90°C) へサッマイモ葉を 1分間浸漬した。次いで、 25°Cの水で冷却し、冷却したサッマイモ葉を 30秒間遠心分離してある程度まで脱水した。脱水後、水分量が約 20質量％となるまで、乾燥機中 70°Cで 2時間温風乾燥（一次乾燥）し、さらに最終水分量が 3質量％となるように、 8 0°Cで 4時間温風乾燥（二次乾燥）した。次いで、 150°Cの飽和水蒸気を用いて、 3秒間加圧蒸気殺菌した。次いで、サツマィモ葉に含まれている水を温風乾燥で乾燥した後、 200メッシュ区分を 90質量％が通過するようにハンマーミルを用いて微粉碎し、サツマィモ葉の乾燥粉末（80 g) を得た。

上記粉末を用いて、下記の配合量で食品（錠剤； 2.00mg/錠）を製造し得る。 ·

<原料 > 配合量（質量％) サッマイモ葉乾燥粉末 5 大麦若葉末 11 ァスコノレビン酸 10 結晶セノレロース 14 ショ糖エステノレ 4 還元麦芽糖 30 二酸化ケイ素 1 トレ/ヽロース 25 (実施例 6 )

上記実施例 5の乾燥粉末を用いて、下記の配合量で食品（顆粒）を製造し昏る。

<原料 > 配合量（質量％) サッマイモ葉乾燥粉末 2 ケール乾燥粉末 3 3 茶カテキン 1 0 結晶セルロース 2 0

(実施例 7 )

上記実施例 5の乾燥粉末および難消化性デキストリンを用いて、食品を製造し得る。 (実施例 8 )

上記実施例 5の乾燥粉末およびオリゴ糖を用いて、食品を製造し得る。

(実施例 9 )

上記実施例 5の乾燥粉末および乳酸菌を用いて、食品を製造し得る。産業上の利用可能性

本発明のガラタト脂質は、その生物学的活性に基づいて、医薬品、食物および飲料、ならびに化粧品への利用が考えられる。上記生物学的活性としては、例えば、抗腫瘍作用、抗炎症作用、抗酸化作用などが挙げられる。本発明のガラタト脂質は、抗コレステロール作用、血流改善作用などを有する機能性食品、サプリメント、ならびに肌質改善効果、美容効果、および保湿効果を有する化粧料の製造に用いられ得る。

Claims

請求の範囲

1. 以下の構造式を有するモノガラクトシルジァシルグリセロールイ匕合物であって、

Riがパルミチン酸ァシル鎖であり、そして R₂が α-リノレン酸ァシル鎖であるか；

力 c -リノレン酸ァシル鎖であり、そして R₂が 9, 12-ノナデカジエン酸ァシル鎖であるか；

が 9， 12-ノナデカジエン酸ァシル鎖であり、そして R₂が α-リノレン酸ァシル鎖であるか； +

R がァラキジン酸ァシル鎖であり、そして R₂がォレイン酸ァシル鎖であるか；

R がァラキジン酸ァシル鎖であり、そして R₂がリノ一ル酸ァシル鎖であるか；

が 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R ₂がリノール酸ァシル鎖であるか；

が 1卜エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R₂が α-リノレン酸ァシル鎖であるか；

が 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R₂が 9, 12 -ノナデカジエン酸ァシル鎖であるか；

が 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R ₂が 11 -エイコセン酸ァシル鎖であるか；または

1^がヘンエイコサン酸ァシル鎖であり、そして尺₂が0； -リノレン酸ァシル鎖である、化合物

あるいはその誘導体。

2 . 請求項 1に記載のモノガラタトシルジァシルグリセ口ール化合物あるいはその誘導体から選択される少なくとも 1つを含有する、食品。

3 . さらに、麦若葉およびケールからなる群から選択される少なくとも 1つを含有する、請求項 2に記載の食品。

4 . さらに、難消化性デキストリン、オリゴ糖、および乳酸菌からなる群から選択される少なくとも 1つを含有する、請求項 2または 3に記載の食品。

5 . 請求項 1に記載のモノガラクトシルジァシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を製造する方法であって、

( 1 ) サッマイモ葉をメタノール抽出に供する工程、

( 2 ) 固相抽出によって低極性画分を分離する工程、および

( 3 ) 高速液体クロマトグラフィーを用いて分離する工程

を含む、方法。

6 . 以下の構造式を有するジガラクトシルジァシルグリセ口ール化合物であつて、

ここで、

がパルミチン酸ァシル鎖であり、そして R ₂が 9， 12-ノナデカジエン酸ァシル鎖であるか；

1^が 9， 12 -ノナデカジエン酸ァシル鎖であり、そして ₂がひ -リノレン酸ァシル鎖であるか；

R が 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R ₂がパルミチン酸ァシル鎖であるか；

が 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R ₂が α -リノレン酸ァシル鎖であるか；

が 11-エイコセン酸ァシル鎖であり、そして R ₂が 9， 12-ノナデカジエン酸ァシル鎖であるか；または

1^が1卜ェィコセン酸ァシル鎖であり、そして R ₂が 11-エイコセン酸ァシル鎖である、化合物

あるいはその誘導体。

7 . 請求項 6に記載のジガラクトシルジァシルグリセロール化合物あるいはその誘導体から選択される少なくとも 1つを含有する、食品。

8. さらに、麦若葉おょぴケールからなる群から選択される少なくとも 1つを含有する、請求項 7に記載の食品。

9. さらに、難消化性デキストリン、オリゴ糖、および乳酸菌からなる群から選択される少なくとも 1つを含有する、請求項 7または 8に記載の食品。

10. 請求項 6に記載のジガラタトシルジァシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を製造する方法であって、

(1) サッマイモ葉をメタノーノレ抽出に供する工程、

(2) 固相抽出によって低極性画分を分離する工程、および

(3) 高速液体クロマトグラフィーを用いて分離する工程

を含む、方法。