WO2008035566A1

WO2008035566A1 - Cell activator, collagen production promoter, collagenase activity inhibitor, melanin formation inhibitor, antioxidant agent, antiinflammatory agent, fat accumilation inhibitor, external preparation for skin, and food

Info

Publication number: WO2008035566A1
Application number: PCT/JP2007/067216
Authority: WO
Inventors: Yoko Asano; Yumi Mimasu; Tetsuo Shoji; Tatsuo Yamamura
Original assignee: Noevir Co Ltd
Current assignee: Noevir Co Ltd
Priority date: 2006-09-19
Filing date: 2007-09-04
Publication date: 2008-03-27
Anticipated expiration: 2009-03-19
Also published as: CN101516329A; JP5159074B2; JP2008074728A

Description

明細書

細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、脂肪蓄積抑制剤、皮膚外用剤及び食品技術分野

[0001] 本発明は、ドウァバンガ（Duabanga grandiflora)の柚出物を含有する細朐賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、脂肪蓄積抑制剤、皮膚外用剤及び食品に関する。

背景技術

[0002] 加齢に伴う皮膚の弾性低下ゃシミ及び肥満といった老化症状の要因として、細胞機能低下、コラーゲン等の細胞外マトリックス成分の減少や変性、紫外線によるメラ二ン産生や色素沈着及び細胞の酸化傷害、脂肪の蓄積等が挙げられる。このような老化症状を防止 '改善するために、従来、様々な有効成分の検索及び配合検討がなされてきた。細胞賦活剤としては、ボンカンのエッセンス（特許文献 1参照）、コラーゲン産生促進剤としては、ブナ科ブナ属植物の木の芽からの抽出物（特許文献 2参照）、コラゲナーゼ活性阻害剤としては、キイチゴ、チヨウジ、ビヮ、マダワ、レンゲソゥ力選ばれる 1種以上の植物抽出物（特許文献 3参照）、メラニン産生抑制剤としては、ダィウイキヨゥ（大茴香）のエッセンス（特許文献 4参照）、抗酸化剤としては、サルォガセ科サルォガセ属植物の抽出物（特許文献 5参照）、抗炎症剤としては、茶ポリフエノール類 (特許文献 6)、脂肪蓄積抑制剤としては、クエルシトリン (特許文献 7参照）が知られている。

[0003] なお、ドウァバンガの抽出物を有効成分とする細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、脂肪蓄積抑制剤、皮膚外用剤及び食品に関する先行技術は認められなレ、。

特許文献 1：特開 2001— 131045号公報

特許文献 2 :特開平 10— 203952号公報

特許文献 3：特開 2003— 183122号公報

特許文献 4 :特開平 11 302149号公報特許文献 5：特開平 10— 182413号公報

特許文献 6：特開平 6— 9391号公報

特許文献 7：特開 2000— 344673号公報

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0004] 従来用いられて!/、る細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、脂肪蓄積抑制剤、皮膚外用剤及び食品は、本質的な効果としては不十分な場合もあり、より優れた有効成分の開発が期待されていた。本発明は、このような従来の問題点に鑑みてなされたものであり、天然由来で安全性が高ぐ効果のより優れた細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、脂肪蓄積抑制剤、皮膚外用剤及び食品を提供することを目的とする。

課題を解決するための手段

[0005] 本発明者らは、上記の課題を解決するため、種々の天然物について検討を行った結果、ドウァバンガ（Duabanga grandiflora)の柚出物に傷れた細朐賦活作用、コラーゲン産生促進作用、コラゲナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、抗酸化作用及、抗炎症作用及び脂肪蓄積抑制作用を見出し、本発明を完成するに至つた。すなわち、本発明は、ドウァバンガ（Duabanga grandiflora)の柚出物を含有する細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、脂肪蓄積抑制剤、皮膚外用剤及び食品を提供するものである。

[0006] ドウァバンガの抽出物としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝液、極性有機溶媒、超臨界流体及び亜臨界流体からなる群より選ばれる少なくとも 1種でドウァバンガを抽出した抽出物が適用できる。

[0007] な力、でも、（1)常温常圧下、低級アルコール水溶液で抽出した抽出物、（2)高温高圧下、水で抽出した抽出物が好適である。低級アルコール水溶液や水で抽出した後、凍結乾燥等を行って水分を除去してもよい。

[0008] 細胞賦活、コラーゲン産生促進、コラゲナーゼ活性阻害、メラニン産生抑制、抗酸化、抗炎症及び脂肪蓄積抑制の効果がより優れることから、ドウァバンガとしてドウァバンガ乾燥粉砕物を用いることが好まし!/、。

[0009] ドウァバンガの抽出物は、 DPPHラジカル消去剤及び SOD様活性剤（スーパーォキサイド消去剤）として機能することにより、抗酸化効果を生じるものと考えられる。また、ドウァバンガの抽出物は、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤及びホスホリパーゼ A2活性阻害剤として機能することにより、抗炎症効果を生じるものと考えられる。

発明の効果

[0010] 本発明によれば、優れた効果を有する細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤及び脂肪蓄積抑制剤を提供すること力できる。また、ドウァバンガの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、シヮ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミといった皮膚老化症状の防止'改善に優れた効果を発揮する老化防止改善用皮膚外用剤やメラニン産生抑制に優れた効果を発揮する美白用皮膚外用剤、抗炎症性に優れた効果を発揮する抗炎症用皮膚外用剤、脂肪蓄積抑制に優れた効果を発揮する痩身用皮膚外用剤を提供することができる。更に、ドウァバンガの抽出物を食品に配合することにより、美容、健康維持や栄養補給に優れた効果を発揮する食品を提供することができる。

発明を実施するための最良の形態

[0011] 本発明におレヽて用いられるドウァバンガ（Duabanga grandiflora)は、ハマザクロ科ドウァバンガ属の植物である。ドウァバンガ（Duabanga grandiflora)は、ヒマラヤ東部からニューギユアにかけて分布する落葉の高木で、幹は垂直に立ち、高さは 10 〜40mになる。材は建築材ゃ茶箱に用いられ、果実は酸味があり、食用にされること力 ^sある。

[0012] ドウァバンガの抽出物は、ドウァバンガ原料（抽出の対象であるドウァバンガをいう。

)を抽出して得られるものである。抽出には、ドウァバンガの全草又はその葉、幹、茎、枝、枝葉、果皮、果実、樹皮、樹液、種子、根茎、根皮、根、花穂、頭花、花等の 1 又は 2以上の箇所を用いることができる力抽出が容易且つ効率的になることから、ドゥァバンガの花、葉、茎又は樹皮を用いるとよい。ドウァバンガは、生のままで抽出してもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を施してから抽出することが好ましい。

[0013] 抽出方法としては、抽出溶媒に浸漬する方法か、超臨界流体又は亜臨界流体を用いる方法が適用できる。抽出効率を上げるため、撹拌しながら抽出する力、、抽出溶媒中においてドウァバンガ原料をホモジナイザーやミキサー等によって均一化しながら由出してあよレヽ。

[0014] 抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ィソブタノール、 n—へキサノーノレ、メチノレアミノレアノレコーノレ、 2—ェチノレブタノ一ノレ、 n ーォクチルアルコール等の低級アルコール（炭素数 6以下のアルコールをいう。 )；グリセリン、エチレングリコーノレ、エチレングリコーノレモノメチノレエーテノレ、トリエチレングリコーノレ、プロピレングリコーノレ、プロピレングリコーノレモノメチノレエーテノレ、プロピレングリコーノレモノェチノレエーテノレ、ジプロピレングリコーノレ、 1 , 3—ブチレングリコーノレ、へキシレングリコール等の多価アルコール又はその誘導体；ェチルエーテル、プロピノレエーテル、イソプロピルエーテル、 _n—ブチルエーテル等のエーテル；酢酸ェチノレ、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル等のエステル；アセトン、ェチルメチルケトン、メチルイソブチルケトン、メチルー n—プロピルケトン等のケトン等の溶媒を用いることができ、これらより 1種又は 2種以上を選択して用いる。なお、水を除く上記抽出溶媒は極性有機溶媒に該当する。

[0015] 抽出溶媒としてはまた、スクヮラン、ワセリン、パラフィンワックス、パラフィン油等の炭化水素；ォリーブ油、小麦胚芽油、米油、ゴマ油、マ力ダミアンナッツ油、アルモンド油、ヤシ油等の植物油脂；牛脂、豚脂、鯨油等の動物油脂；生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等の無機塩類を添加した極性溶媒や界面活性剤を添カロした溶媒を用いることもできる。更に、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、ェタン、プロパン、一酸化二窒素、クロロジフルォロメタン、クロ口トリフルォロメタン、キセノン、アンモニア、メタノール、エタノール等の 1種又は 2種以上の超臨界流体又は亜臨界流体を用いてもよい。すなわち、水、二酸化炭素、エチレン、プロピレン、ェタン、プロパン、一酸化二窒素、クロロジフルォロメタン、クロ口トリフルォロメタン、キセノン、アンモニア、メタノール、エタノール等を用いて、ドウァバンガの超臨界抽出又は亜臨界抽出を行ってもよい。 [0016] 抽出の際のドウァバンガ原料と抽出溶媒との比率は、特に限定されないが、原料 1 に対して溶媒 0.；!〜 1000質量倍とするのが好ましぐ抽出が容易且つ効率的になること力も、 0. 5〜； 100質量倍とするのがより好ましい。抽出温度としては、 5°C程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なる力 1時間〜 14日間程度とするのが適切である。

[0017] また、抽出は常温（室温、例えば 10〜40°C)、常圧（1気圧 =約1001^½)で行うことも、オートクレーブ等を用いて高温（例えば、 50°C〜200°C、好ましくは 50〜； 150 °C)高圧（例えば、 lOOkPa超 500kPa以下、好ましくは lOOkPa超 300kPa以下）で fiうことあでさる。

[0018] 超臨界抽出、亜臨界抽出を行う際は、用いる流体の臨界温度以上且つ臨界圧力以上にて抽出することが好ましい。例えば、超臨界流体として二酸化炭素を用いる場合は、 31°C以上且つ 7. 3MPa以上にて、メタノールを用いる場合は、 239°C以上且つ 8. IMPa以上にて、水を用いる場合は、 374°C以上且つ 22. IMPa以上にて抽出することが好ましい。

[0019] ドウァバンガの抽出として特に好ましいのは、常温常圧下における低級アルコール水溶液（例えば、メタノール水溶液又はエタノール水溶液、特には、エタノール水溶液）による抽出、高温（例えば、 50〜200°C、好ましくは、 50〜； 150°C、特には、 120 °C)高圧下における水による抽出である。このような抽出を行うことで、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤又は脂肪蓄積抑制剤としての機能に優れた抽出物を効果的且つ確実に得ること力 Sでさる。

[0020] ドウァバンガの抽出物としては、（1)ドウァバンガの抽出液、（2)ドウァバンガの抽出液を濃縮及び/又は乾固した後に水又は極性有機溶媒に再度溶解したもの、 (3)ドゥァバンガの抽出液に生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理又はカラムクロマトグラフィー等による分画処理を施したもの、（4)ドウァバンガの抽出液及び上記処理を施したドウァバンガの抽出液を凍結乾燥し、使用時に水又は極性有機溶媒に再度溶解して用いられる状態にしたもの等が挙げられる。

[0021] ここで、ドウァバンガの抽出液とは、ドウァバンガ原料から抽出された成分が抽出溶媒中に分散又は溶解した状態のものをいう。また、上記極性有機溶媒としては、上述した低級アルコール、多価アルコール、エーテル、エステル、ケトン等が挙げられる。

[0022] ドウァバンガの抽出物は、優れた細胞賦活作用、コラーゲン産生促進作用、コラゲナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、抗酸化作用、抗炎症作用及び脂肪蓄積抑制作用を有し、細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、脂肪蓄積抑制剤、皮膚外用剤及び食品として禾 IJ用すること力 Sでさる。

[0023] ドウァバンガの抽出物を有効成分とする細胞賦活剤は、種々の細胞に対する細胞賦活作用を有し、特に真皮線維芽細胞に対して優れた細胞賦活効果を発揮する。細胞賦活剤中におけるドウァバンガの抽出物の含有量は、細胞賦活剤全量基準で、 0. 0001〜； 100質量⁰ /₀カ好まし <、 0. 00；!〜 50質量⁰ /₀カより好ましレヽ。

[0024] ドウァバンガの抽出物を有効成分とするコラーゲン産生促進剤は、コラーゲン産生促進作用を有し、特に真皮線維芽細胞における I、 III及び IV型コラーゲン産生に対して優れたコラーゲン産生促進効果を発揮する。コラーゲン産生促進剤中におけるドゥァバンガの抽出物の含有量は、コラーゲン産生促進剤全量基準で、 0. 0001〜； 10 0質量％が好ましぐ 0. 00；!〜 50質量％がより好ましい。

[0025] ドウァバンガの抽出物を有効成分とするコラゲナーゼ活性阻害剤は、コラゲナーゼ

(コラーゲン分解酵素）活性阻害作用を有し、特に I型コラゲナーゼによる I型コラーゲンの分解を抑制することによって、優れた抗老化効果を発揮する。コラゲナーゼ活性阻害剤中におけるドウァバンガの抽出物の含有量は、コラゲナーゼ活性阻害剤全量基準で、 0. 0001〜； 100質量⁰ /₀カ好まし <、 0. 00；!〜 50質量⁰ /₀カより好ましレヽ。

[0026] ドウァバンガの抽出物を有効成分とするメラニン産生抑制剤は、メラニン産生抑制作用を有し、シミ 'ソバカスといった色素沈着症状に対して、優れた美白効果を発揮する。メラニン産生抑制剤中におけるドウァバンガの抽出物の含有量は、メラニン産生抑制剤全量基準で、 0. 0001〜； 100質量％が好ましぐ 0. 00；!〜 50質量％がより好ましい。

[0027] ドウァバンガの抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、抗酸化作用を有し、特に DP PHラジカル消去作用、 SOD様活性作用（スーパーオキサイド消去作用）及び過酸化脂質耐性作用に基づく抗酸化作用によって優れた効果を発揮する。抗酸化剤中におけるドウァバンガの抽出物の含有量は、抗酸化剤全量基準で、 0. 0001 - 100 質量％が好ましぐ 0. 00；!〜 50質量％がより好ましい。

[0028] ドウァバンガの抽出物を有効成分とする抗炎症剤は、抗炎症作用を有し、特にヒアルロニダーゼ活性阻害作用及びホスホリパーゼ A2活性阻害作用に基づく抗炎症作用によって優れた効果を発揮する。抗炎症剤中におけるドウァバンガの抽出物の含有量は、抗炎症剤全量基準で、 0. 0001〜； 100質量％力 S好ましく、 0. 00；!〜 50質量％がより好ましい。

[0029] ドウァバンガの抽出物を有効成分とする脂肪蓄積抑制剤は、脂肪蓄積抑制作用を有し、特に皮下脂肪細胞に蓄積する中性脂肪に対して優れた脂肪蓄積抑制効果を発揮する。脂肪蓄積抑制剤におけるドウァバンガの抽出物の含有量は、脂肪蓄積抑制剤全量基準で、 0. 0001〜； 100質量％が好ましぐ 0. 00；!〜 50質量％がより好ましい。

[0030] また、ドウァバンガの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、皮膚老化症状の防止'改善に優れた効果を発揮する老化防止改善用の皮膚外用剤やメラニン産生抑制に優れた効果を発揮する美白用皮膚外用剤、抗炎症性に優れた効果を発揮する抗炎症用皮膚外用剤、脂肪蓄積抑制に優れた効果を発揮する痩身用皮膚外用剤を得ること力 Sできる。皮膚外用剤に配合する際のドウァバンガの抽出物の配合量は、皮膚外用剤の種類や使用目的等によって調整することができるが、一般に、皮膚外用剤全量基準で、 0. 000001 - 10. 0質量％であり、効果や安定性等の点から、 0. 00001 -5. 0質量⁰ /₀力ましぐより好まし <は、 0. 0001 - 1. 0質量⁰ /₀である。

[0031] ドウァバンガの抽出物を配合する皮膚外用剤（細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤

、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、脂肪蓄積抑制剤等として適用できる皮膚外用剤）の剤形は任意であり、例えば、ローション等の可溶化系、クリームや乳液等の乳化系、カラミンローション等の分散系として提供することができる。更に、噴射剤と共に充填したエアゾール、軟膏、顆粒、散剤、固形状等の種々の剤形で提供することができる。形態も任意であり、例えば、化粧水、乳液、美容液、保湿クリーム等の基礎化粧料；日焼け止めクリーム、日焼け止めローション、日焼けオイル、カーマインローション等のサンケア商品；ファンデーション、アイライナ一、マスカラ、アイカラー、チークカラー、口紅等のメイクアップ化粧料;洗顔料、ボディーシャンプー、ヘアシャンプー等の洗浄料；リンス、トリートメント、ヘアクリーム、ヘアオイル、整髪剤等の毛髪用化粧料;香水又は防臭制汗剤の形態で提供することができる。

[0032] なお、ドウァバンガの抽出物を配合する皮膚外用剤には、ドウァバンガの抽出物の他に、必要に応じて、通常医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料、毛髪用化粧料及び洗浄料に配合される、油性成分、界面活性剤、保湿剤、顔料、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬剤、香料、樹脂、防菌防黴剤、アルコ一ル類等を適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤又は脂肪蓄積抑制剤との併用も可能である。

[0033] 更に、ドウァバンガの抽出物は、美容、健康維持や栄養補給を目的とする食品、飲料及び医薬品にも用いることができる。ドウァバンガの抽出物を配合する食品、飲料及び医薬品の剤形は任意であり、例えば、ドリンク剤や点滴剤などの液剤、ガムや飴などの固形剤、又はカプセル、粉末、顆粒、錠剤などの一般的な剤形で提供することができる。

[0034] なお、ドウァバンガの抽出物を配合する食品、飲料及び医薬品には、ドウァバンガの抽出物の他に、必要に応じて、通常食品、飲料、医薬品及び医薬部外品に配合される、糖類、塩類、アルコール類、アミノ酸、着色料、香料、甘味料、酸味料、防腐剤、増粘剤、薬剤等を適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤又は脂肪蓄積抑制剤との併用も可能である

〇

実施例

[0035] 以下に、ドウァバンガの抽出物の製造例、各作用を評価するための実験について更に詳細に説明するが、本発明はこれによって何ら限定されるものではない。

[0036] [製造例 1] ドウァバンガの花、葉、茎又は樹皮の乾燥粉砕物 100gに 2. Okgの 50容量％ェタノール水溶液を加えて、室温にて撹拌しながら 2時間抽出した後、濾過により不溶物を取り除いた。濾別した抽出上清を減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、ドウァバンガの抽出物を得た。

[0037] [製造例 2]

ドウァバンガの花、葉、茎又は樹皮の乾燥粉砕物 100gに 2. Okgの精製水を加え、オートクレープを用いて 120°Cにて 20分間加熱抽出した後、濾過により不溶物を取り除いた。濾別した抽出上清に凍結乾燥処理を施し、ドウァバンガの抽出物を得た。

[0038] 上記製造例によって得られたドウァバンガの抽出物を用いて、各作用を評価するための実験を行った。

[0039] [実施例 1] 真皮線維芽細胞賦活作用の評価実験

この評価実験には、製造例 1に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの葉の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を 96ウェルマイク口プレートに 1ゥエル当り 2· 0 X 10⁴個となるように播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 1質量％のゥシ胎児血清（FB S)を添加したものを用いた。 24時間培養後、培地を、 1質量°/^83添加 DMEM培地にて各試料濃度に調製したサンプル培養液に交換し、更に 24時間培養した。

[0040] 48時間培養後、サンプル培養液を、 MTT試薬を 400 μ g/mL含有するように調製した培地に交換し、更に 2時間培養した。 MTT (3—(4, 5 ジメチルー 2 チアゾリル） 2, 5 ジフエニルテトラゾリゥムブ口ミド）は、細胞内の脱水素酵素により還元されると、テトラゾリゥム環が開環して青色の不溶性フオルマザンを生じる。そこで、生じたフオルマザンを 2 プロパノールで抽出し、マイクロプレートリーダーで 550nmの吸光度を測定した。同時に濁度として 650nmの吸光度を測定し、両測定値の差によつて真皮線維芽細胞賦活作用を評価した。なお、サンプル培養液の他に、ネガティブコントロールとして 1質量％?83添加 DMEM培地を、ポジティブコントロールとして 5質量°/ 83添加 DMEM培地を用いた。

[0041] サンプル培養液における真皮線維芽細胞賦活作用は、ネガティブコントロール (コントロール）における真皮線維芽細胞賦活作用を 100としたときの相対値として評価した。表 1は、その評価結果を示すものである。

[0042] [表 1]

[0043] 表 1に示したように、サンプル培養液にお!/、ては、試料濃度依存的に真皮線維芽細胞賦活作用が認められた。このこと力、ら、ドウァバンガの抽出物は、真皮線維芽細胞賦活作用を有することが明らかとなった。

[0044] [実施例 2] I型コラーゲン産生促進作用の評価実験

この評価実験には、製造例 2に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの葉の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を 96ウェルマイク口プレートに 1ゥエル当たり 2· 0 X 10⁴個となるように播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 0. 5質量％のゥシ胎児血清 (FBS)を添加したものを用いた。 24時間培養後、培地を、 0. 5質量°/ 83添加 DM EM培地にて各試料濃度に調製したサンプル培養液に交換し、更に 24時間培養した。

[0045] 培養上清中に分泌された I型コラーゲンの量は酵素免疫吸着測定法 (ELISA)を用いて測定した。まず、培養上清中の I型コラーゲンをゥサギ抗ヒト I型コラーゲンポリクローナル抗体（CHEMICON)と反応させた後、二次抗体としてペルォキシダーゼ標識抗ゥサギ IgGポリクローナル抗体（HISTOFINE；ニチレイ）を用いて標識した。次に、標識したペルォキシダーゼに対し 2, 2' アジノビス（3 ェチルベンゾチアゾリン 6—スルホン酸)ジアンモニア塩 (ABTS)及び過酸化水素を添加し反応させた後、マイクロプレートリーダーで 405nmの吸光度を測定した。

[0046] PIERCE社製 BCA Protein Reagent Assay kitにて各ゥエルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りの I型コラーゲン産生量によって I型コラーゲン産生促進作用を評価した。なお、サンプル培養液の他に、ネガティブコントロールとして 0. 5質 i%FBS添加 DMEM培地を、ポジティブコントロールとして 50 Mの Lーァスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩 (VCPMg)を含有する 0. 5質量％?83添加 D MEM培地を用いた。

[0047] I型コラーゲン産生促進作用は、ネガティブコントロール（コントロール）における単位タンパク量当りの I型コラーゲン産生量を 100としたときの相対値として評価した。表 2は、その評価結果を示すものである。

[0048] [表 2]

[0049] 表 2に示したように、サンプル培養液においては、コントロールと比べて顕著な I型コラーゲン産生促進作用が認められた。このこと力、ら、ドウァバンガの抽出物は、 I型コラ一ゲン産生促進作用を有することが明らかとなった。

[0050] [実施例 3] III型コラーゲン産生促進作用の評価実験

この評価実験には、製造例 1に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの葉の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を 96ウェルマイク口プレートに 1ゥエル当たり 2· 0 X 10⁴個となるように播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 5質量％のゥシ胎児血清（F BS)を添加したものを用いた。 24時間培養後、培地を、 0. 5質量°/^83添加 DME M培地にて各試料濃度に調製したサンプル培養液に交換し、更に 24時間培養した

〇

[0051] 培養上清中に分泌された III型コラーゲンの量は酵素免疫吸着測定法 (ELISA)を用いて測定した。まず、培養上清中の III型コラーゲンをゥサギ抗ヒト III型コラーゲンポリクローナル抗体（CHEMICON)と反応させた後、二次抗体としてペルォキシダーゼ標識抗ゥサギ IgGポリクローナル抗体（HISTOFINE；ニチレイ）を用いて標識した。次に、標識したペルォキシダーゼに対し 2, 2'—アジノビス（3—ェチルベンゾチアゾリンー 6—スルホン酸）ジアンモニア塩 (ABTS)及び過酸化水素を添加し反応させた後、マイクロプレートリーダーで 405nmの吸光度を測定した。 [0052] PIERCE社製 BCA Protein Reagent Assay kitにて各ゥエルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りの III型コラーゲン産生量によって III型コラーゲン産生促進作用を評価した。なお、コントロールとして 0. 5質量°/(^83添加 DMEM培地を用いた。

[0053] III型コラーゲン産生促進作用は、コントロールにおける単位タンパク量当りの III型コラーゲン産生量を 100としたときの相対値として評価した。表 3は、その評価結果を示すものである。

[0054] [表 3]

[0055] 表 3に示したように、サンプル培養液においては、コントロールと比べて顕著な III型コラーゲン産生促進作用が認められた。このこと力、ら、ドウァバンガの抽出物は、 III型コラーゲン産生促進作用を有することが明ら力、となった。

[0056] [実施例 4] IV型コラーゲン産生促進作用の評価実験

この評価実験には、製造例 2に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの花の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。ヒト真皮線維芽細胞を 96ウェルマイク口プレートに 1ゥエル当たり 2· 0 X 10⁴個となるように播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 5質量％のゥシ胎児血清（FBS) を添加したものを用いた。 24時間培養後、培地を、 5質量°/ 83添加 DMEM培地にて各試料濃度に調製したサンプル培養液に交換し、更に 5日間培養した。

[0057] 培養上清中に分泌された IV型コラーゲンの量は、サンドイッチ ELISA法を用いて測定した。まず、培養上清中の IV型コラーゲンを IV型コラーゲンに対するモノクロ一ナル抗体 (認識部位： α 2鎖）と反応させた後、ビォチン化ポリクローナル抗体と反応させた。

[0058] 次に、アビジン化ホースラディッシュペルォキシダーゼを添加し、ビォチン化ポリクローナル抗体のビォチン部と結合させた。ペルォキシダーゼの基質となる 3, 3' , 5, 5' ーテトラメチルベンジジンを添加し発色させ、マイクロプレートリーダーで 650nmの吸光度を測定した。

[0059] PIERCE社製 BCA Protein Reagent Assay kitにて各ゥエルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りの IV型コラーゲン産生量によって IV型コラーゲン産生促進作用を評価した。なお、コントロールとして 5質量°/(^83添加 DMEM培地を用いた。

[0060] IV型コラーゲン産生促進作用は、コントロールにおける単位タンパク量当りの IV型コラーゲン産生量を 100としたときの相対値として評価した。表 4は、その評価結果を示すものである。

[0061] [表 4]

[0062] 表 4に示したように、サンプル培養液においては、試料濃度依存的に IV型コラーゲン産生促進作用が認められた。このこと力、ら、ドウァバンガの抽出物は、 IV型コラーゲン産生促進作用を有することが明らかとなった。

[0063] [実施例 5] コラゲナーゼ活性阻害作用の評価実験

この評価実験には、製造例 1に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの樹皮の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。トリス塩酸緩衝液に試料を添加し、各濃度のサンプル溶液を調製した。サンプル溶液に、 I型コラゲナーゼ標品と、フルォレセインイソチオシァネート（FITC)で標識した I型コラーゲン 0. 25 mg/mLを添加し、 37°Cにて 2時間インキュベートした。これに酵素反応停止液を添加し、 37°Cにて 30分間インキュベートした。エタノール沈殿法により、分解されたコラ一ゲンを含む上清を得た。蛍光分光光度計を用いて上清の蛍光強度 (励起波長 49 5nm、蛍光波長 520nm)を測定した。

[0064] 試料無添加のトリス塩酸緩衝液を用いた場合の蛍光強度をコントロール蛍光強度とし、サンプル溶液を用いた場合の蛍光強度をサンプル蛍光強度としたとき、下式によつて求めた値をコラゲナーゼ活性阻害率とした。コラゲナーゼ活性阻害率によってコラゲナーゼ活性阻害作用を評価した。表 5は、その評価結果を示すものである。 { (コントロール蛍光強度—サンプル蛍光強度）/コントロール蛍光強度 } χ 100 (%) [表 5]

[0066] 表 5に示したように、コラゲナーゼ活性阻害率は、試料濃度に依存して増加した。このこと力、ら、ドウァバンガの抽出物は、コラゲナーゼ活性阻害作用を有することが明ら力、となった。

[0067] [実施例 6] メラニン産生抑制作用の評価実験

この評価実験には、製造例 1に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの葉の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。 B16マウスメラノーマ（ B 16F0)細胞を 90mmディッシュに 1ディッシュ当たり 18000個となるように播種した。播種培地には、ダノレべッコ改変ィーグノレ培地（DMEM)に 5質量⁰ /₀のゥシ胎児血清（FBS)を添加したものを用いた。 24時間培養後、培地を、 5質量°/^83添加 DM EM培地にて各試料濃度に調製したサンプル培養液に交換し、更に 5日間培養した

[0068] なお、サンプル培養液の代わりに、試料無添加の 5質量°/^83添加 DEME培地を用いたものをネガティブコントロールとし、乳酸ナトリウムを 50mMの濃度で含有する 5質量°/(^83添加 DMEM培地を用いたものをポジディブコントロールとした。

[0069] 培養終了後、トリプシン処理にて細胞を回収し、 1. 5mLマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。得られた沈殿物の黒化状況を肉眼にて目視判定した。表 6は、目視判定の基準を示すものである。ネガディブコントロールを判定 5、ポジディブコントロールを判定 1とし、目視判定の基準とした。

[0070] また、上記得られた沈殿物に組織溶解剤（商品名： Solvable)を添加して煮沸した後、室温まで冷却し、分光光度計 (HITACHI製分光光度計 U— 3010)により 500η mの吸光度を測定した。上記判定及び 500nm吸光度によって、メラニン産生抑制作用を評価した。表 7は、その評価結果を示すものである。

[0071] [表 6]

[0072] [表 7]

[0073] 表 7に示したように、試料を 10 g/mL添加したサンプル培養液を用いた場合には、ポジティブコントロールと比べて僅かな黒化し力、認められなかった。このこと力、ドウァバンガの抽出物は、メラニン産生抑制作用及びそれに基づく美白作用を有することが明らかとなった。

[0074] [実施例 7] DPPHラジカル消去作用の評価実験

この評価実験には、製造例 1に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの葉の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。 50容量％エタノールにて各試料濃度に調製したサンプル溶液を、 96ウェルマイク口プレートに 100 しずつ添加した。更にそこへ、 0. 2mMの 1 , 1ージフエニノレー 2—ピクリルヒドラジノレ（DP PH)エタノール溶液を 100 a Lずつ添加した。

[0075] 十分に混合後、室温にて喑所に 24時間静置した後、 DPPHラジカルに由来する 5 16nmの吸光度を測定した。サンプル溶液の代わりに 50容量％エタノールのみを添カロした場合の吸光度を (A)、サンプル溶液を添加した場合の吸光度を (B)としたとき、下式によって求めた値を DPPHラジカル消去率とした。 DPPHラジカル消去率によつて DPPHラジカル消去作用を評価した。表 8は、その評価結果を示すものである。

{1-(B)/(A)}X100(%)

[表 8]

[0077] 表 8より、ドウァバンガの抽出物は DPPHラジカル消去作用に基づく抗酸化作用を有することが明らかとなった。

[0078] [実施例 8] SOD様活性作用の評価実験

この評価実験には、製造例 1に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの葉の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。 0.25mMの WST— lとlmMのHypoxanthineを含むHANK，S( + )溶液75_ίuLに、 HANK，S( + )溶液にて各試料濃度に調製したサンプル溶液 25 Lを添加した。更に、 Xanthine O xidase25_i L(0.0075Units)を添カロし、 37。Cにて 15分間反応させた後、 450nm の吸光度を測定した。

[0079] サンプル溶液の代わりに HANK' S ( + )溶液のみを添加した場合の吸光度を (A) 、サンプル溶液を添加した場合の吸光度を (B)としたとき、下式によって求めた値をスーパーオキサイドァニオン消去率とした。スーパーオキサイドァニオン消去率によつて SOD様活性作用を評価した。表 9は、その評価結果を示すものである。

{1-(B)/(A)}X100(%)

[0080] [表 9]

表 9に示したように、スーパーオキサイドァニオン消去率は、試料濃度に依存して増加した。このこと力、ら、ドウァバンガの抽出物は、 SOD様活性作用に基づく抗酸化作用を有することが明らかとなった。 [実施例 9] 過酸化脂質耐性の評価実験

この評価実験には、製造例 1に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの花の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。ヒト表皮細胞株 HaCa Tを 96ゥエルプレートに 1ゥエル当り 2· 0 X 10⁴個となるように播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 10質量％のゥシ胎児血清（FBS)を添加したものを用いた。 24時間培養後、培地を、 10質量°/ 83添加 DMEM培地にて各試料濃度に調製したサンプル培養液に交換した。

[0082] 更に 24時間培養後、培養液を、任意濃度の t プチルヒドロペルォキシドを含む Η anks ( + )溶液に交換した。 2時間培養後、溶液を、 150 g/mLのニュートラルレツドを含む PBS (—）に交換し、 37°Cにて 2時間培養した。 PBS (—）を、 1容量％の酢酸を含む 50容量％エタノール水溶液に交換し、細胞内に取り込まれたニュートラノレレッドを抽出した。抽出液の 540nmの吸光度を測定し、細胞生存率を求めることによつて過酸化脂質耐性を評価した。なお、コントローノレとして、 10%FBS添加 DMEM 培地にて、試料及び tーブチルヒドロペルォキシド無添加で培養したものを用いた。過酸化資質耐性は、ネガティブコントロールの細胞生存率を 100としたときの相対値として評価した。表 10は、その評価結果を示すものである。

[0083] [表 10]

[0084] 表 10に示したように、細胞生存率は、試料濃度に依存して増加した。このことから、ドウァバンガの抽出物は、過酸化脂質耐性及びそれに基づく抗酸化作用を有することが明らかとなった。

[0085] [実施例 10] ヒアルロニダーゼ活性阻害作用の評価実験

この評価実験には、製造例 1に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの葉の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。市販のヒアルロン酸力リウム塩（ヒト臍の緒由来）を 0· 9mg/mLになるように、 0· 1Mリン酸緩衝液（ρΗ7· 0)に溶解し、基質溶液とした。市販のヒアルロニダーゼ（ゥシ精巣由来）を 5300unit /mLとなるように、 0. 1Mリン酸緩衝液 (ρΗ7· 0)に溶解し、酵素溶液とした。なお、酵素溶液は用時調製とした。

[0086] 試験管に、 0. 1Mリン酸緩衝液 (ρΗ7. 0)にて各試料濃度に調製したサンプル溶液 0. lmLと酵素溶液 0. 03mLを入れ、 37°Cにて 20分間反応させた。次に活性化剤を 0. 06mL加え、 37°Cにて 20分間反応させた。更に基質溶液を 0. 15mL加え、 37°Cにて 1時間反応させた。 0. 4N NaOH 0. 06mLを加え反応を停止させた後すぐに氷冷し、ホウ酵緩衝液 (pH9. 1)を 0. 06mL添加し、 3分間煮沸した後更に氷冷した。

[0087] p— DABA溶液（エールリツヒ試薬）を 2· OmL添加し、 37°Cにて 20分間反応させた後、各試験管から 96ウェルマイク口プレートに移しかえ、マイクロプレートリーダーを用いて 585nmにおける吸光度を測定した。ヒアルロニダーゼの活性が阻害されると、ヒアルロン酸の分解産物である N—Acetylglucosamin (GlcNAc)が減少し、 Morg an— Elson反応による吸光度が低くなる。

[0088] 試料無添加の 0. 1Mリン酸緩衝液を用いた場合の吸光度をコントロール吸光度、サンプル溶液を用いた場合の吸光度をサンプル吸光度としたとき、下式によって求めた値をヒアルロニダーゼ活性阻害率とした。ヒアルロニダーゼ活性阻害率によってヒアルロニダーゼ活性阻害作用を評価した。表 11は、その評価結果を示すものであ

{ (コントロール吸光度—サンプル吸光度）/コントロール吸光度 } χ 100 (%)

[0089] [表 11]

表 11に示したように、ヒアルロニダーゼ活性阻害率は、試料濃度に依存して増加した。このこと力、ら、ドウァバンガの抽出物は、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用及びそれに基づく抗炎症作用を有することが明らかとなった。 [実施例 11] ホスホリパーゼ A2活性阻害作用の評価実験

この評価実験には、製造例 1に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの花の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。各濃度の試料と 20ng /mLのホスホリパーゼ A2 (PLA2)と 3· 3mMの DTNB (5, 5—ジチォビス（2—二ト口安息香酸)を含む溶液を調製し、室温にて 10分間静置した。そこへ、 PLA2の基質である Diheptanoyl Thio— PC (1 , 2—ビス（ヘプタノィルチオ）グリセ口ホスホコリン）を 1. 66mMとなるように添カロし、室温にて 45分間反応させた。

[0091] この反応で、 PLA2が基質を分解することによって生じるチオールは、 DTNBを還元して 5—メルカプトー2—二トロ安息香酸を生じる。そこで、 5—メルカプトー2—二ト口安息香酸の吸収極大波長である 414nmにおける吸光度を測定した。また、 PLA2 の代わりにバッファーを添加した場合の吸光度を測定し、両測定値の差を求めた。試料無添加時の値を (A)、試料添加時の値を (B)としたとき、下式によって求めた値を PLA2活性阻害率とした。 PLA2活性阻害率によって、 PLA2活性阻害作用を評価した。表 12には、その評価結果を示すものである。

[0092] [表 12]

表 12に示したように、 PLA2活性阻害率は、試料濃度に依存して増加した。このこと力、ら、ドウァバンガの抽出物は、 PLA2活性阻害作用及びそれに基づく抗炎症作用を有することが明らかとなった。

[実施例 12] 脂肪蓄積抑制作用の評価実験

この評価実験には、製造例 2に記載の製造方法によって得られたドウァバンガの葉の抽出物を試料として用いた。評価は、以下の手順で行った。皮下脂肪由来正常ヒト前駆脂肪細胞 Cryo HPRAD— SQ (三光純薬株式会社）を 96ゥエルプレートに 1ゥエル当り 5. 0 X 10³個となるように播種した。播種培地には、 10質量％の FBS、 2m Mの L—グルタミン、 100units/mLのペニシリン、及び 100 g/mLのストレプトマイシンを含む PGM培地を用いた。 2日間培養後、培地交換を行った。新たな培地には、 10〃 Gのインシュリン、 1 μ Μのデキサメタゾン、 200〃 Μのインドメタシン、及び 500 H Μの 3—イソブチルー 1ーメチルキサンチンを含む PGM—分化用培地に各濃度の試料を添加したものを用いた。コントロールには、試料無添加の PGM—分化用培地を用いた。

[0094] この培地にて前駆脂肪細胞の脂肪細胞への分化誘導を開始し、コントロールの細胞が成熟して細胞内に多数の脂肪滴が蓄積されるまで、 10日〜； 14日間培養した。細胞を回収し、 10容量％中性緩衝ホルムアルデヒド液を用いて細胞を固定し、 PBS (一）にて洗浄した。細胞に 0. 5質量対容量％のオイルレッド Ο溶液を添加して、 37 °Cにて 2時間培養し、脂肪を染色した。細胞を PBS ( - )にて洗浄した後、メタノールによって色素を抽出した。

[0095] 抽出液について、マイクロプレートリーダーで 550nmにおける吸光度を測定した。

同時に濁度として 650nmの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて中性脂肪細胞蓄積量を求めた。試料添加培地における中性脂肪細胞蓄積量は、コントロールにおける中性脂肪細胞蓄積量を 100とした相対値として評価した。表 13は、その評価結

[0096] [表 13]

[0097] 表 13に示したように、脂肪細胞蓄積量は、試料濃度が高くなるほど減少した。このこと力、ら、ドウァバンガの抽出物は、脂肪細胞蓄積抑制作用を有することが明ら力、となつた。

[0098] 続!/、て、本発明に係るドウァバンガの抽出物を配合した皮膚外用剤（細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、脂肪蓄積抑制剤等として適用できる皮膚外用剤)及び飲料の処方例を示す。なお、以下、特に明記しない限り、それぞれの成分の配合量は質量％を意味す

[0099] [処方例 1]化粧水

[表 14]

[0100] 製法：（1)に（²)〜（5)を溶解したアルコール相を、（6)〜（9)を均一に混合、溶解した水相に添加して、均一に混合することにより調製する。

[0101] [処方例 2] O/W乳化型クリーム

[表 15]

成分配合量（質量％)

(1) スクヮラン 10.00

(2) ミリスチン酸ォクチルドデシル 5.00

(3) 水素添加大豆リン脂質 0.20

(4) バチルアルコール 3.00

(5) 硬化油 2.00

(6) ステアリン酸 1.50

(7) 親油型モノステアリン酸グリセリン 1.50

(8) モノステアリン酸ポリグリセリル 1.50

(9) ベへニルアルコール 0.80

(10) モノミリスチン酸ポリグリセリル 0.70

(11) サラシミツロウ 0.30

(12) 混合脂肪酸トリグリセリド 0.10

(13) d- δ一トコフエ口一ル 0.05

(14) 抽出物（製造例 1 ) 0.50

(15) 精製水残量

(16) キサンタンガム（1質量％水溶液） 20.00

(17) 1 , 3—ブチレングリコール 15.00

(18) パラォキシ安息香酸エステル 0.10

(19) 水酸化ナトリウム（10質量％水溶液） 2.00

(20) 香料 0.15

(21) エタノール 2.00

口 PT 100.00

[0102] 製法：（1)〜（； 14)の油相成分及び（15)〜（； 18)の水相成分をそれぞれ 80°Cに加熱し、混合均一化した後、水相に油相を添加する。（19)を加えてホモミキサーにて乳化する。撹拌しながら冷却し、 40°Cで予め混合、溶解した（20)、（21)を添加し、撹拌、均一化する。

[0103] [処方例 3]美容液

[表 16] 成分配合量（質量％)

( 1 ) ジステアリン酸ポリグリセリル 2.50

(2) トリ一 2—ェチルへキサン酸グリセリル 8.00

(3) 水素添加大豆リン脂質 0.50

(4) 親油型モノステアリン酸グリセリン 0.50

(5) ベへニルアルコ一ル 0.50

(6) 抽出物（製造例 1 ) 0.20

(7) グリセリン 7.50

(8) 精製水残量

(9) キサンタンガム（1質量％水溶液） 40.00

( 1 0) エタノール 8.00

口 PT 1 00.00

[0104] 製法：（1)〜（5)及び（6)〜（9)の成分をそれぞれ 70°Cに加熱し混合、溶解した後、両成分を混合してホモミキサーで乳化する。撹拌しながら冷却し、 40°Cで（10)の成分を添加し、混合、均一化する。

[0105] [処方例 4]化粧水

[表 17]

[0106] 製法：（1)の成分に予め混合しておいた成分（2)と（3)を加え、（4)〜（； 10)の成分を順次添加して、混合、溶解、均一化する。

[0107] [処方例 5]クレンジングクリーム [表 18]

製法：（1)〜（8)の油相成分を混合、加熱溶解して 70°Cとする。一方（9)〜（； 12)の水相成分を混合、溶解して 70°Cに加熱する。この水相成分に前記油相成分を徐々に添加した後、（13)を添加しホモミキサーにて均一に乳化する。乳化後、 40°Cまで冷却した後、（14)を添加し混合する。

[処方例 6] W/O乳化型クリーム

[表 19]

成分配合量（質量％)

(1) スクヮラン 15.00

(2) デカメチルシクロペンタシロキサン 15.00

(3) 架橋型メチルポリシロキサン 1.00

(4) ジメチコンコポリオ一ル 3.00

(5) クオタニゥム一 18ヘクトライト 1.00

(6) 抽出物（製造例 1 ) 1.00

(7) 1， 3—ブチレングリコール 8.00

(8) メチルパラベン 0.20

(9) 精製水残量

(10) 香料 0.10

A f-L

口口 T 100.00 製法：（1)〜（5)を混合した油相に、（6)〜（9)の水相を撹拌しながら徐々に添加しホモミキサーにて乳化する。乳化後、（10)を添加し混合する。

[表 20]

製法：（3)、（7)を（11)に添加し均質とした後、（1)及び (2)に (4)〜（6)を溶解させて加え、 70°Cに加熱して均一に溶解させる。次いで冷却して 40°Cにて（9)、 (10) を添加し、最後に（8)を加えて中和する。

[処方例 8]ヘアリンス

[表 21]

[0112] 製法：（9)に（5)、（7)を加え、 70°Cに加熱する。一方（1)〜（4)を混合、溶解し、 7 0°Cに加熱する。この油相を撹拌しながら先に調製した水相に徐々に加えて予備乳化し、ホモミキサーを加えて均一とした後冷却し、 40°Cにて ½)、（8)を添加する。

[0113] [処方例 9]ヘアトリートメント

[表 22]

成分配合量（質量％)

(1) ポリオキシエチレン（30E. Ο. ；)ベへニルエーテル 4.00

(2) 自己乳化型グリセリルモノステアレ一ト 6.00

(3) ミリスチン酸イソプロピル 5.00

(4) へキシルデカノ一ル 5.00

(5) スクヮラン 3.00

(6) 精製ラノリン 3.00

(7) ステアリン酸 5.00

(8) 抽出物（製造例 1 ) 1.00

(9) ラウリルジメチルァミノ酢酸べタイン 5.00

(10) グリセリン 10.00

(11) 精製水残量

(12) 香料 0.20

口 ηΤ 100.00

[0114] 製法：（1)〜（8)の油相成分を混合、加熱して 80°Cとする。一方、（9)〜（； 11)の水相成分を混合、加熱して 85°Cとし、これに前記油相を添加して乳化し、冷却後 40°C にて（12)を添加する。

[0115] [処方例 10]ヘアフォーム

[表 23]

原液処方

成分配合量（質量％) モノォレイン酸ポリオキシエチレン（20E.

(1) 1.00 O. )ソルビタン

(2) ジプロピレングリコール 8.00

(3) 塩化ステアリルトリメチルアンモニゥム 0.10

(4) エタノール 15.00

(5) クェン酸 0.10

(6) 香料 0.10

(7) パラォキシ安息香酸エステル 0.10 イソス亍ァロイル加水分解コラ一ゲン 'ァミノメ

(8) 0.10 チルプロパンジォ一ル塩

ビニルピロリドン ·Ν, Ν—ジメチルアミノエチル

(9) 2.00 メタクリル酸共重合体

ポリオキシエチレン■メチルポリシロキサン共

(10) 1.00

重合体

(11) 精製水残量

(12) 抽出物（製造例 1 ) 0.20

口口 Ί 100.00

[0116] 製法：（1)〜（； 11)を混合し、 75°Cまで加熱溶解した後、ホモミキサーにて均質に混合する。その後冷却を行い、 40°Cで（12)を添加し、混合する。

[表 24]

[0117] 製法：缶に ωを充填し、バルブ装着後 (b)を充填する。

[0118] [処方例 11]ヘアワックス

[表 25] 成分配合量（質量％)

(1) キャンデリラロゥ 4.00

(2) ベへニルアルコール 1.00

(3) 流動パラフィン 20.00

(4) スクヮラン 10.00

(5) ポリオキシエチレン（1 OE. O. )ォレイルエーテル 3.00

(6) 香料 0.20

(7) 高重合ポリエチレングリコール 0.10

(8) ォキシベンゾン 0.05 ビニルピロリドン■ N , N—ジメチルアミノエチルメタ

(9) 1.00 クリル酸共重合体ジェチル硫酸塩液

(10) 抽出物（製造例 1 ) 0.50

(11) キサンタンガム 0.10

(12) カルボキシビ二ルポリマ一 0.05

(13) ヒドロキシプロピルメチルセル口一ス 0.20

(14) プロピレングリコール 10.00

(15) 2—アミノー 2—メチルー 1一プロパノール 0.10

(16) 精製水残量

(17) 加水分解シルク 0.10

口≡4- 100.00

[0119] 製法：（1)〜（； 10)を混合溶解して油相とする。一方、（11)〜（； 15)を（16)に添加し、溶解して水相とする。次いで、 75°Cにて水相に油相を添加し、ホモミキサーにて均一に乳化する。その後冷却を行い、 40°Cで（17)を添加し混合する。

[0120] [処方例 12]へアジエル

[表 26]

成分配合量（質量％)

(1) 精製水残量

(2) カルボキシビ二ルポリマ一 0.70

Ν—メタクリロイルォキシェチル Ν， Ν—ジメチルァ

(3) ンモニゥム一ひ一 Ν—メチルカルボキシベタイン -メ 5.00 タクリル酸アルキルエステル共重合体

(4) グリセリン 5.00

(5) エタノール 10.00 モノラウリン酸ポリオキジエチレン（20Ε. Ο. )ソ

(6) 1.50 ルビタン

(7) 香料 0.20

(8) ェデト酸三ナトリウム 0.05

(9) 抽出物（製造例 1 ) 0.10

(10) 水酸化ナトリウム（ 10質量％水溶液） 0.50

口口 τ 100.00

[0121] 製法：（1)に（2)及び（3)を溶解する。次いで (4)〜（9)を順次添加し均一化した後

、（10)を添加して中和する。

[0122] [処方例 13]トニック

[表 27]

[0123] 製法：（1)〜（6)のアルコール相を混合し、均一化しておく。 50°Cで溶解した成分（ 7)にアルコール相を加え、予め均一化してお!/、た成分（8)と（9)を加えて混合した後、ろ過する。

[0124] [処方例 14]洗顔料

[表 28]

[0125] 製法：（1)〜（6)の油相及び（7)〜（； 10)の水相をそれぞれ 75°Cに混合加熱溶解した後、油相に水相を加えてケン化する。冷却後 40°Cで（11)を添加して混合する。

[0126] [処方例 15]ボディシャンプー

[表 29]

[0127] 製法：（1)〜（3)の油相及び (4)〜（7)の水相をそれぞれ 75°Cに混合加熱溶解した後、油相に水相を加えてケン化する。冷却後 40°Cで（8)を添加して混合する。

[処方例 16]メイクアップベース

[表 30]

[0128] 製法：（12)〜（14)を（6)で混練し、これを（7)〜（9)の水相に添加、混合し、 70°C に加熱する。一方、（1)〜（5)の油相成分を混合、加熱して 70°Cとする。（10)を加えた水相に油相を撹拌しながら添加して乳化する。 40°Cまで冷却した後、（11)を添加する。

[0129] [処方例 17] O/W乳化型ファンデーション

[表 31]

[0130] 製法：（11)〜（； 15)を（7)で混練し、これを（6)〜 (9)の水相に添加、混合し、 70。C に加熱する。一方、（1)〜（5)の油相成分を混合、加熱して 70°Cとする。（10)を加えた水相に油相を撹拌しながら添加して乳化する。 40°Cまで冷却した後、（16)を添加する。

[0131] [処方例 18]W/0乳化型ファンデーション

[表 32]

[0132] 製法：（8)〜（； 11)の油相成分を均一に混合し、（1)〜（7)を添加してホモミキサーで分散させ油相分散液を調製する。加熱溶解した（12) （14)を油相分散液に添加し乳化する。最後に（15)を添加して均一に混合する。

[0133] [処方例 19]ツーウェイファンデーション

[表 33]

成分配合量（質量％)

(1) シリコーン処理タルク残量

(2) シリコーン処理マイ力 20.00

(3) シリコーン処理二酸化チタン 10.00

(4) シリコーン処理微粒子二酸化チタン 2.00

(5) フッ素処理ベンガラ 0.45

(6) フッ素処理黄酸化鉄 2.20

(7) フッ素処理黒酸化鉄 0.22

(8) ステアリン酸亜鉛 1.00

(9) ナイロンパウダ一 5.00

(10) スクヮラン 5.00

(11) 固形パラフィン 0.50

(12) ジメチルポリシロキサン 4.00

(13) リンゴ酸ジイソステアリル 1.00

(14) パラメトキシケィ皮酸ォクチル 2.00

(15) 酢酸トコフ Iロール 0.05

(16) 抽出物（製造例 1 ) 0.50

口 ρΤ 100.00

[0134] 製法：（1)〜（9)の粉体相をハンマーミルで粉砕した後、ブレンダ一で混合し均一化する。（10)〜（； 15)の油相を 80°Cで溶解し均一化した後、粉体相に添加して混練する。その後、ハンマーミルで粉砕し、篩過したバルタを金皿に圧縮成型する。産業上の利用可能性

[0135] 以上に示したとおり、本発明によれば、優れた効果を有する細胞賦活剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤及び脂肪蓄積抑制剤を提供することができる。また、ドウァバンガの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、シヮ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミといった皮膚老化症状の防止'改善に優れた効果を発揮する老化防止改善用皮膚外用剤やメラニン産生抑制に優れた効果を発揮する美白用皮膚外用剤ゃ抗炎症性に優れた効果を発揮する抗炎症用皮膚外用剤を提供することができる。更に、ドウァバンガの抽出物を食品、飲料及び医薬品に配合することにより、美容、健康維持や栄養補給に優れた効果を発揮する食品、飲料及び医薬品を提供することができる。

Claims

請求の範囲

[1] ドウァバンガ（Duabanga Pranriiflor の柚.屮 ι 含有十ろ， -とを特徴とする細胞賦活剤。

[2] Pゥァバン刀 (Duabmiga grand if lor_a)の抽出物を含有する: -とを特徴とするコラ一ゲン産生促進剤。

[³] ドウノバンガ（Duabanga grandiflor の栌含有 +ろ -とを特徴とするコラゲナーゼ活性阻害剤。

[⁴] ドウァバンガ（Duabanpa grandiflr^ の^,屮, 含有 +ろ- -とを特徴とするメラニン産生抑制剤。

[⁵] ドウハノガ（Duabanga grand if lm ^^の^,屮,物含右+ ' -とを特徴とする抗酸化剤。

[6] ドウァバンガ

の^出物含有 + -とを特徴とする抗炎症剤。

[⁷] ドウ ⁷バン刀 (Duabanga grand if lora の抽出物を含有す -とを特徴とする脂肪蓄積抑制剤。

[⁸] トヮバンガ（Duabanga gran tiflora)の .屮,物含有十ろ -とを特徴とする皮膚外用剤。

[⁹] トヮノ 'ハンガ（Duabanga grandiflora)の抽.屮！物含有チ -とを特徴とする食品