[go: up one dir, main page]

WO2008061999A1 - Chitine-glucane d'extrait fongique de granulometrie fine - Google Patents

Chitine-glucane d'extrait fongique de granulometrie fine Download PDF

Info

Publication number
WO2008061999A1
WO2008061999A1 PCT/EP2007/062601 EP2007062601W WO2008061999A1 WO 2008061999 A1 WO2008061999 A1 WO 2008061999A1 EP 2007062601 W EP2007062601 W EP 2007062601W WO 2008061999 A1 WO2008061999 A1 WO 2008061999A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
chitin
glucan
fungal
microns
particles
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/EP2007/062601
Other languages
English (en)
Inventor
Sandrine Gautier
Jean-Michel Bruyere
Véronique MAQUET
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kitozyme SA
Original Assignee
Kitozyme SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kitozyme SA filed Critical Kitozyme SA
Priority to US12/312,656 priority Critical patent/US20100003292A1/en
Priority to EP07847236A priority patent/EP2094735A1/fr
Priority to CA002670006A priority patent/CA2670006A1/fr
Priority to BRPI0718987-7A2A priority patent/BRPI0718987A2/pt
Priority to AU2007324534A priority patent/AU2007324534B2/en
Publication of WO2008061999A1 publication Critical patent/WO2008061999A1/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J9/00—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof
    • C08J9/28—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof by elimination of a liquid phase from a macromolecular composition or article, e.g. drying of coagulum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/20—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents
    • A23L29/269—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents of microbial origin, e.g. xanthan or dextran
    • A23L29/271—Curdlan; beta-1-3 glucan; Polysaccharides produced by agrobacterium or alcaligenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L31/00—Edible extracts or preparations of fungi; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/20—Reducing nutritive value; Dietetic products with reduced nutritive value
    • A23L33/21—Addition of substantially indigestible substances, e.g. dietary fibres
    • A23L33/22—Comminuted fibrous parts of plants, e.g. bagasse or pulp
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
    • C08B37/0027—2-Acetamido-2-deoxy-beta-glucans; Derivatives thereof
    • C08B37/003—Chitin, i.e. 2-acetamido-2-deoxy-(beta-1,4)-D-glucan or N-acetyl-beta-1,4-D-glucosamine; Chitosan, i.e. deacetylated product of chitin or (beta-1,4)-D-glucosamine; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2201/00—Foams characterised by the foaming process
    • C08J2201/04—Foams characterised by the foaming process characterised by the elimination of a liquid or solid component, e.g. precipitation, leaching out, evaporation
    • C08J2201/048—Elimination of a frozen liquid phase
    • C08J2201/0482—Elimination of a frozen liquid phase the liquid phase being organic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2201/00—Foams characterised by the foaming process
    • C08J2201/04—Foams characterised by the foaming process characterised by the elimination of a liquid or solid component, e.g. precipitation, leaching out, evaporation
    • C08J2201/048—Elimination of a frozen liquid phase
    • C08J2201/0484—Elimination of a frozen liquid phase the liquid phase being aqueous
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2305/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2301/00 or C08J2303/00
    • C08J2305/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L2205/00—Polymer mixtures characterised by other features
    • C08L2205/02—Polymer mixtures characterised by other features containing two or more polymers of the same C08L -group

Definitions

  • the invention relates to a chitin-glucan copolymer in the form of a powder with a fine and controlled granulometry, in particular a very fine particle size, which can be used in particular in the field of cosmetics, and particularly the use of a copolymer between chitin and beta -glucans to prevent or reduce the signs of skin aging.
  • the invention also relates to such a polymer in the form of porous materials, in particular for its use in tissue engineering.
  • beta-glucans derived from yeasts, fungi, cereals, or plants
  • beta-type the carbons being bound, depending on the species from which they are extracted, with a more or less branched structure: beta (1,3) (1,6) for beta-glucans derived from the yeast Saccharomyces cer ⁇ visiae; beta (1, 3) for the main chain (connected in the beta position (1, 6) by short chains) of schizophyllan, derived from the common Schizophyllum fungus; beta (1,4) for beta-glucans from cereals such as oats, barley, wheat; beta (1,4) for the main chain (connected to the beta position (1,6) by short chains) for x
  • Beta-glucans are valued in cosmetics for their effects (which differ according to the molecule considered) revitalizing, anti-inflammatory, protective against UV radiation, soothing, immunostimulant, anti-aging, anti-wrinkle, anti-acne, etc., which lead to an improvement in the symptoms of skin aging or acne.
  • the beta-glucans sought in cosmetics are generally water-soluble so that they can be incorporated into the aqueous phase of the emulsions, which limits the choice in terms of molecules that can be used in cosmetics.
  • the insoluble beta-glucans have very interesting cosmetic and dermatological properties, but can not be incorporated into the cosmetic formulas because of their shape in hard, irritating particles, etc.
  • the few water-soluble beta-glucans that can be used in cosmetics are presented in the form of extracts or solutions rich in beta-glucans.
  • chitin mainly carboxymethylchitine and chitosan
  • chitin for cosmetic use and its derivatives are industrially obtained from shells of crustaceans - shrimp, crab - crustaceans being a major cause of allergies. Cases of allergy to creams containing chitin derivatives have also been published (Cleenewerck MB, Martin P, Laurent D.
  • chitin the polymer consisting of N-acetyl-D-glucosamine units obtained from crustacean shells or from microscopic algae is not known to prevent or reduce the effects of aging. skin.
  • Chitosan which is the polymer derived from chitin, carrying cationic charges, consisting of D-glucosamine / N-acetyl-D-glucosamine units, its derivatives (succinamide) and its salts (for example lactate, ascorbate, glycolate, succinate ) are used in cosmetics for their properties substantîve, filmogenic, moisturizing, antimicrobial, anti-aging, hydrating, improving the appearance of cellulite, improving the touch of the formulas.
  • this chitin-glucan copolymer can advantageously be produced in a highly pure and economically profitable manner by a process in successive steps, as described in the patent EP1483299B1 (US 2005/130273 A1 or WO 03068824 A1).
  • a fine, white, non-odorous powder with a chitin-glucan copolymer content of greater than 90% is obtained.
  • This powder is soluble in no solvent, neither aqueous nor organic, which a priori compromises its use in cosmetics.
  • Different applications are described in patent applications FR 05 07066 and FR 06 51415.
  • the main object of the invention is to solve the new technical problem consisting in the provision of a chitin-glucan copolymer having a form suitable for a cosmetic use, and in particular in dermocosmetics or in dermatology, and / or adapted for medical or pharmaceutical use, and / or adapted for use as a dietary supplement for humans or animals.
  • the object of the invention is also to solve the new technical problem consisting in the provision of a chitin-glucan copolymer in the form of a suspension or of an emulsion or dispersion, particularly usable in the field of cosmetics, and in particular of the dermocosmetic or dermatology.
  • the object of the present invention is in particular to provide a dermocosmetic composition for carrying out a care of the body and / or of the face, such as a moisturizing, firming, protective or anti-wrinkle treatment (described in particular by an evaluation of the relief of the skin by profiometry). ) or anti-aging.
  • the present invention also aims to solve the technical problems mentioned above by providing a naturally occurring substance which has safety, skin and ocular tolerance, very good hypoallergenicity, while being readily available in large volume, and a cost compatible with the use as a cosmetic ingredient.
  • the present invention also aims to optimize a dietary supplement composition allowing easy oral administration and promoting the bioavailability and health effects of the chitin-glucan copolymer.
  • the present invention also aims to provide a chitin-glucan powder for adjusting and optimizing its physicochemical and biological properties according to the intended application, as dermocosmetic and dermatological composition, dietary supplement composition, composition of functional food, auxiliary technology for the treatment of drinks, composition for medical devices such as healing products.
  • the invention also aims to provide a natural substance of non-animal origin, excellent purity, well characterized, obtained by a production process that ensures reproducibility and traceability.
  • the present invention also aims to provide a natural substance, of the polysaccharide type, stable in powder and suspension, easy to formulate, compatible with all of the most commonly used ingredients, and which allows the preparation of stable cosmetic formulations of which the characteristics are in perfect adequacy with their use, for example with a perfectly homogeneous texture and whose sensory qualities (viscosity, texture, touch) are excellent.
  • the aim of the invention is to propose a cosmetic active agent which makes it possible to prevent or reduce the effects of skin aging, to moisturize the skin in a lasting manner, to tone it up, and / or to firm it up, to make it look uniform and smooth, reduce the squamous condition, protect against external aggressions such as drought and / or pollution by heavy metals, allow it to restore its barrier function.
  • the object of the invention is also to propose a cosmetic ingredient having a water retention capacity and an important viscosifying power.
  • the invention also aims to provide a porous material used for example in tissue engineering and cell culture or used as a material in cosmetics or pharmaceuticals. Summary of the invention
  • the inventors have surprisingly been able on the one hand to prepare stable dispersions of chitin-glucan, and stable suspensions of chitin-glucan, in particular in water without additive, and on the other hand, to prepare stable emulsions containing in particular high concentrations of chitin-glucan.
  • chitin-glucan the inventors mean a chitin-glucan copolymer according to the present invention.
  • the invention relates to a polysaccharide of fungal origin comprising predominantly a chitin-glucan copolymer, said polysaccharide having a fine particle size.
  • the invention also relates to a finely ground powder of a fungal extract comprising at least one finely ground chitin-glucan copolymer.
  • the particles of fine particle size have at least 70% by weight of the particles less than 500 microns ( ⁇ m), and preferably less than 355 microns ( ⁇ m). Still more preferably at least 50%, preferably 60%, by weight of the particles have a size less than 250 microns ( ⁇ m), and preferably less than 150 microns ( ⁇ m).
  • particle size less than X microns means particles having a size allowing them to pass through a sieve whose mesh size is X microns.
  • One embodiment provides at least 50% by weight of particles smaller than 65 mesh (about 149 ⁇ m), and preferably less than 100 mesh (about 230 ⁇ m).
  • the particle size is advantageously controlled by choosing, especially after sieving or classification, a particular size fraction as needed.
  • the fractions referred to in the examples are hereby incorporated by reference in their generality, particularly with respect to the type of co-polymer which may be any of those described in the present invention.
  • the chitin-glucan copolymer comprises a ratio between the N-acetyl-D-glucosamine units of chitin and the beta-glucan D-glucose units of between 95: 5 and 15:85 (m / m).
  • the polysaccharide of fungal origin comprises more than 70% of chitin-glucan copolymer in mass relative to the total mass of the extract of fungal origin, preferably greater than 85%.
  • sequences between the D-glucose units are predominantly beta (1,3).
  • the fungal extract is derived from the mycelium of a fungus of the Ascomycete type, and in particular Aspergillus niger, and / or a Basidiomycete fungus, and in particular Lentinula edodes (shiitake) and / or Agaricus bisporus.
  • the chitin portion of the chitin-glucan copolymer are N-acetyl-D-glucosamine units, and at most 15% are D-glucosamine units. It is preferred that the micrometric particle size fungal extract is a hydrolyzate of the chitin-glucan copolymer.
  • the ratio of chitin to beta-glucan is between 90:10 and 30:70 (m / m).
  • the invention also relates to a composition comprising a polysaccharide or a fungal extract of fine particle size as defined above, especially in the form of suspension or emulsion or dispersion.
  • the composition is a cosmetic composition, in particular a dermocosmetic or dermatological composition.
  • the polysaccharide of the fine-grained fungal extract is used at a concentration of between 0.01 and 10%, and preferably between 0.05 and 5%, by weight of the total composition.
  • the invention also relates to the use of a composition as defined above for exercising a cosmetic care, preferably dermocosmetic or dermatological, characterized in that the care is selected from the group consisting of a body or facial care , to improve, in particular in a durable and significant way the hydration of the skin, to increase the water retention power of the skin in particular in the long term, to improve the barrier function of the skin, to exert an anti-aging effect, to improve the appearance of the skin, improve the homogeneity of the skin, in particular by making it smoother, more homogeneous, softer, healthier, improve the firmness and tone of the skin, and promote the attachment of the epidermis to the dermis.
  • a cosmetic care preferably dermocosmetic or dermatological
  • the care is selected from the group consisting of a body or facial care , to improve, in particular in a durable and significant way the hydration of the skin, to increase the water retention power of the skin in particular in the long term, to improve the barrier function of the skin, to exert
  • the term "product having an anti-aging effect” means a product or a composition which makes it possible to slow skin aging, in particular by improving the protection of the skin and / or the skin defense activities, by reducing the effects of skin aging.
  • external aggressions such as radiation, dry air, cold, pollution, especially heavy metals, free radicals, including UV radiation, as well as skin wrinkles.
  • the invention also relates to a composition as defined above for reducing the depth of wrinkles or slowing down or preventing the appearance of wrinkles.
  • the cosmetic compositions advantageously comprise from 0.1 to 2% of the chitin-glucan copolymer of fine particle size.
  • the invention also relates to the use of a composition as defined above as a dietary supplement composition, preferably to obtain an effect chosen from the group consisting of an antioxidant, hypocholesterolemic, hypolipidemic, immune system stimulation and hypoglycemic effect. , especially in the case of diabetes, and an effect of prevention and / or treatment, and / or fight against a pathology selected from the group consisting of dyslipidemia, atherosclerosis, obesity, a disease related to obesity, cardiovascular disease, metabolic syndrome, diabetes, and hyperuricemia.
  • the copolymer of the fungal extract of fine granulometry is used as the active ingredient.
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising as active ingredient at least one copolymer or an extract of fungal origin, as defined above.
  • the invention relates in particular to the use in tissue engineering of a porous material obtained from the polysaccharide or extract of fungal origin according to the present invention, and thus also relates to porous material obtained from the polysaccharide or extract of origin fungal according to the present invention.
  • This porous material can be obtained in particular by lyophilization.
  • the invention also relates to the use of at least one polysaccharide or an extract of fungal origin, as defined above as excipient of a composition, in particular a cosmetic composition, preferably dermatological or dermocosmetic.
  • the invention further relates to a process for the preparation of a fungal extract of fine particle size comprising: a) extracting and purifying a chitin-glucan copolymer from a fungal biomass, said copolymer of this fungal extract being insoluble in water or an organic solvent, b) steps, simultaneous, or separated independently of their order, filtration, drying, grinding, and classification of particles, starting from dry or solvated chitin-glucan, allowing to obtain micrometric particles of which at least 70% by weight, preferably 75%, and even more preferably 80%, particles are smaller than 500 microns ( ⁇ m), and preferably less than 355 microns ( ⁇ m).
  • step b) of the process for preparing the fungal granulometry extract makes it possible to obtain at least 50%, preferably 60%, and even more preferably 70%, by weight of the total particles obtained, having a smaller size. 250 microns, preferably less than 125 microns.
  • step b) it is thus possible in step b) to implement a simultaneous filtration, drying, and grinding step, and then a separate classification step.
  • the invention also relates to the device that we equipment to implement the method according to the present invention.
  • compositions according to the invention make it possible to obtain formulations with a pleasant and soft feel, which is very advantageous in the field of cosmetics in particular.
  • the stability, texture, color, feel, viscosity and rheology of the emulsions or suspensions obtained are perfectly suited to the production of facial or body care creams, including for babies.
  • the excellent cutaneous tolerance (in vitro and in vivo in humans) and ocular (in vitro), as well as the hypoaliergenicity (in vivo in humans, according to the Maibach-Marzulli procedure) of a copolymer chitin-glucan have been established.
  • the solution proposed by the inventors is all the more advantageous insofar as a purified chitin-glucan copolymer derived from fungal sources, in particular but not exclusively, of the Ascomycete type is available in large quantities as an industrial by-product. It is particularly preferred to use as fungal source Aspergillus niger mycelium.
  • the chitin-glucan copolymer extracted from Ascomycete fungi mycelium can be formulated easily, although not water-soluble, especially in the form of a cosmetic composition.
  • the inventors have surprisingly discovered that when the chitin-glucan compound derived from mushroom sources is in the form of a powder of fine granulometry, it is entirely suitable for the preparation of a composition that makes it possible to solve the problems. techniques mentioned above.
  • the chitin-glucan powder advantageously obtained according to the process described in the PCT patent application WO03 / 068824, or in the French patent application FR 0507066 is prepared in such a way as to obtain a fine and controlled particle size, especially by filtration, grinding, drying and / or classification of the particles.
  • a method is selected for obtaining particles of which at least 70% by weight, preferably 75%, and even more preferably 80%, particles are smaller than 500 microns ( ⁇ m), and preferably less than 355 microns ( ⁇ m).
  • the particles have at least 50% by weight, preferably 60%, and more preferably 70%, particles have a size less than 250 microns ( ⁇ m), and preferably less than 150 microns ( ⁇ m).
  • a process for preparing the chitin-glucan powder is used so as to obtain, for the most part, particles having a size of less than 250 microns.
  • the particles according to the present invention consist essentially of particles having a size of less than 125 ⁇ m, even less than 90 microns, and in particular are obtained after classification to obtain a narrow distribution.
  • Granulometry means the more or less spherical shape, the size and the particle size distribution of the chitin-glucan powder. This parameter which characterizes the powdered ingredient influences on the one hand the manner in which it can be formulated, that is to say, to incorporate it into a solid or liquid composition such as a food matrix, a cosmetic cream, a liquid food or cosmetic, a medical or pharmaceutical device. Depending on the particle size obtained, and in particular according to the appearance or the desired final shape, the composition obtained will be more or less homogeneous.
  • Particle size and particle size distribution are characterized by conventional techniques such as light diffraction (eg Malvern Instruments Mastersizer 2000 laser diffraction system), scanning electron microscopy followed by image analysis, or sieving through successive sieves followed by gravimetric measurement.
  • light diffraction eg Malvern Instruments Mastersizer 2000 laser diffraction system
  • scanning electron microscopy followed by image analysis or sieving through successive sieves followed by gravimetric measurement.
  • a homogeneous cream containing the chitin-glucan copolymer can be obtained.
  • This allows in particular to incorporate this copolymer after formation of an emulsion, even at a high concentration (for example 2%), and achieve a perfectly homogeneous texture and whose sensory qualities (viscosity, texture, feel) are excellent.
  • the fraction of the particles having the smallest size is therefore advantageously used.
  • the product forms palpable grains in the spreading of the cream, and / or the formulation is not stable over time, which is not desired in the case of a topical composition, and in particular in a care cream.
  • a powder of fine and controlled granulometry can be used for the preparation of so-called functional foods, such as biscuits, pasta, confectionery, diet bars, breads, drinks, butters, margarines, etc.
  • the fine-grained powder can be used in the form of an aqueous dispersion, and can be used in the composition of medical devices such as healing and / or haemostatic systems.
  • the chitin-glucan of fine particle size can be implemented in the form of a cohesive porous material, having good mechanical stability, and of porosity greater than 80%, preferably greater than 90%, by techniques porogens well known to those skilled in the art.
  • the porous material can be prepared either from a concentrated aqueous dispersion in the form of a chitin-glucan paste alone, or from a dispersion of a mixture of chitin-glucan and other insoluble compounds and dispersible, or starting from a dispersion of chitin-glucan in an aqueous phase in which a polymer or other substance is solubilized.
  • the porosimetry and the mechanical properties of the materials obtained are a function of the formulation parameters, in particular the particle size of the chitin-glucan, the composition of the mixture, the concentration of the starting dispersion, as well as the parameters for implementing the dispersion.
  • the chitin-glucan of fine particle size advantageously has a good affinity both with components present in the aqueous phase and in the oily phase, which favors the incorporation process.
  • the fine particle size chitin-glucan powder may be produced industrially according to various processes, depending on the particle size targeted, either starting from the chitin-glucan in dry powder, or starting from the chitin-glucan solvated in an aqueous or organic medium, or still starting from chitin-glucan incorporated into a more complex medium such as an oil-in-water or water-in-oil emulsion.
  • the inventors mean, by processes for the preparation of fine particle size powder, all the solid-liquid and solid-solid processes for filtration, drying, grinding, homogenization, particle size reduction, and classification of particles, applied to solids, solvated solids, and solvated complex media such as emulsions, colloidal suspensions, etc.
  • the various industrial separation processes can be used starting from solvated chitin-glucan, as for example with a conical dryer, a N ⁇ tsche filter, a plate filter, a belt filter, a fluidized bed dryer, atomization equipment. to achieve complete or partial drying of chitin-glucan.
  • the methods can be applied to the solvated chitin-glucan as such or after grinding the solvated chitin-glucan.
  • the various industrial fragmentation processes for obtaining fine and controlled particle size powders can be applied to the totally or partially dried product, or to the solvated product, such as, for example, flail, hammer, pebble and knife milling processes.
  • the various industrial processes for separating powders can be used to reduce the width of the size distribution or to select a specific size, as for example with sieving equipment and dynamic and static classification.
  • the present invention relates to a method for obtaining a chitin-glucan powder of water-insoluble fungal origin or an organic solvent, having a fine particle size, for preparing stable chitin-glucan copolymer particles in an aqueous solution or organic in particular for preparing a suspension or emulsion.
  • the step of obtaining the powder of fine particle size is performed before or after the preparation of the emulsion or suspension or dispersion.
  • This suspension or dispersion or emulsion contains substances generally used in the field of cosmetics and advantageously allow the formulation of a cosmetic composition.
  • Cosmetic compositions generally contain from 0.01 to 10% by weight of the compositions according to the present invention, in particular from 0.01 to 10% by weight in the form of suspension or emulsion, relative to the weight of the total composition.
  • the inventors mean by derivatives of the chitin-glucan copolymer all the compounds being obtained starting from chitin-glucan, by physical or chemical modification, according to physical, chemical and enzymatic processes.
  • the present invention relates to a polysaccharide of fungal origin comprising a polymer comprising beta-glucan chains, said beta-glucan chains consisting essentially of linkages of D-glucose units via (1,3) -linked bonds, and preferably comprising at least 80% by mass of beta-glucan chains whose chain of D-glucose is in position (1,3) relative to the percentage of the total mass of beta-glucan, in particular for the manufacture of a cosmetic formulation.
  • a chitin-glucan copolymer may advantageously be obtained according to the method described in the PCT patent application WO03 / 068824, and the French patent application FR 0507066 filed by KitoZyme SA on July 4, 2005. This process is described in particular in application FR 0507066 pages 18, line 14 and following. Aspergillus niger is preferably used as a fungal source in this process.
  • the sequence of D-glucose units and the proportion between alpha (1,6) chitin and beta-glucan chains depend on the fungus and the strain. For example, it has been shown by the inventors that a mycelium Aspergillus niger contains the chitin-glucan copolymer with a mass ratio between chitin and beta-glucan between 30:70 and 60:40, with a sequence of D-units. glucose predominantly beta type (1,3).
  • the copolymer is generally in the form of a white powder. It is essentially insoluble in aqueous and organic solvents regardless of temperature and pH. It is hygroscopic, generally able to absorb about 10 times its mass in water.
  • This chitin-glucan powder may for example be produced by industrial processes so as to obtain a product of fine particle size according to the present invention.
  • the present invention relates to an advantageously purified extract of fungal source, and preferentially Ascomycete mushroom mycelium such as Aspergillus niger.
  • the hydrolysates of the purified extracts that is to say the lower molecular weight copolymers of chitin and beta-glucan, also form part of the invention.
  • the present invention also covers, under the term "chitin-glucan copolymer” or “chitin-glucan”, all the compounds obtained from chitin-glucan, by physical or chemical modification of the copolymer, according to a physical, chemical or enzymatic process, in the extent to which the properties of the chitin-glucan copolymer remain equivalent for the intended applications, and wherein the copolymers are insoluble in water and an organic solvent in the particle size range of the present invention, but formable in the form of a dispersion, emulsion, or suspension.
  • Aspergillus niger which is a co-product of the industrial production of citric acid for the food and pharmaceutical industry, make it a raw material of choice for cosmetics use.
  • Other fungal sources containing the chitin and beta-glucan polysaccharides can also be exploited, for example Basidiomycetes, in particular the fungi Lentinula edodes (shiitake) and Aga n ' eus bisporus.
  • the inventors mean by "polysaccharides of fungal origin" purified extracts of cell walls of fungi composed mainly of polysaccharides of chitin and beta-glucan, in the form of copolymers, and their derivatives.
  • the purified extracts comprise a content preferably of chitin-glucan greater than 70% by weight relative to the total mass of the extract, preferably greater than 80%, preferably greater than 85% and more preferably greater than 90%.
  • chitin-glucan a pure copolymer extracted from the cell walls of fungi which is constituted by links of the N-acetyl-D-glucosamine units and possibly a minority proportion of the D-glucosamine units linked to each other by linkages. of type (1,6) of alpha conformation (chitin linkage), and of links of D-glucose units linked together by beta (1,3) or beta (1,3) linkages (1,6) , or beta (1, 3) (1,4), and preferably beta (1,3) (beta-glucan links) ").
  • the polysaccharides of the fungal cell walls are separated into two groups according to their solubility in an alkaline medium, and that the skeleton of the cell walls is insoluble.
  • the insoluble fraction consists of polymers of chitin and beta-glucan, in variable proportions depending on the species, that the beta-glucan units are linked by chains of variable structure, and that the link between the chitin linkages and beta-glucan is stable as shown for example by Siestma & Wessels for Saccharomyces cerevisiae (Zygomycete), Neurospora crassa (Ascomycete), Aspergillus nidulans (Ascomycete) and Coprinus cinereus (Basidiomycete) [Siestma JH & Wessels JG.
  • the fungal extract according to the present invention can be obtained from fungal mycelial cell wall of different groups, including the groups Zygomycetes, Basidiomycetes, Ascomycetes (of which Aspergillus niger is a part) and Deuteromycetes and / or a mixture thereof.
  • Said mushroom source must be chosen so as to allow the extraction of a polysaccharide as defined above and hereinafter.
  • the present invention covers all the fungi that make it possible to obtain the chitin-glucan polymer defined in the present application. The ratio of chitin to beta-glucan is between 95: 5 and
  • the chitin part of the chitin-glucan copolymer is preferably composed of at least 85% N-acetyl-D-glucosamine units and at most 15% D-glucosamine units, preferably at least 90% d-glucosamine units. N-acetyl-D-glucosamine units and at most 10% of D-glucosamine units.
  • the invention relates to a suspension or dispersion comprising a solvent and at least one fine-grained copolymer according to the present invention.
  • This suspension or this dispersion is carried out according to conventional methods.
  • the invention also relates to an emulsion comprising the fine-grained copolymer according to the present invention.
  • This emulsion is produced according to conventional methods, with either water or oil as a continuous phase.
  • the emulsion is first prepared and then the chitin-glucan copolymer is added.
  • This makes it possible in particular to prepare the emulsion in the temperature conditions usually applied industrially for its preparation, without taking the risk of degrading the copolymer.
  • the compounds according to the present invention are prepared in particular in the form of cosmetic or pharmaceutical compositions, preferably in topical form.
  • the excipient contains, for example, at least one compound chosen from the group consisting of preservatives, antioxidants, stabilizers, conditioners, moisturizers, emollients, emulsifiers, surfactants and thickeners. , matting agents, texture agents, gloss agents, film formers, solubilizers, pigments, dyes, fragrances, and sunscreens.
  • excipients are preferably selected from the group consisting of amino acids and their derivatives, polyglycerols, esters, polymers and cellulose derivatives, lanolin derivatives, phospholipids, sucrose stabilizers, natural waxes and the like.
  • synthetic oils vegetable oils, triglycerides, unsaponifiables, silicones and derivatives thereof, protein hydrolysates, lipo / water-soluble esters, betaines, aminoxides, glycines, and parabens.
  • the other fatty substances that may be present in the oily phase are, for example, fatty acids containing from 8 to 30 carbon atoms, such as stearic acid, lauric acid, palmitic acid and oleic acid; waxes such as lanolin, beeswax, paraffin waxes, or microcrystalline waxes, synthetic waxes; silicone resins; and silicone elastomers.
  • fatty acids containing from 8 to 30 carbon atoms such as stearic acid, lauric acid, palmitic acid and oleic acid
  • waxes such as lanolin, beeswax, paraffin waxes, or microcrystalline waxes, synthetic waxes
  • silicone resins such as silicone resins, and silicone elastomers.
  • compositions are formulated in a form chosen from the group consisting of an aqueous or oily solution, an aqueous cream or gel or an oily gel, in particular in a pot or in a tube, in particular a shower gel, a shampoo; a milk ; an emulsion, a microemulsion or a nanoemulsion, especially oil-in-water or water-in-oil or multiple or silicone; a lotion, in particular in a glass or plastic bottle or in a measuring or aerosol flask; a lightbulb ; a liquid soap; a dermatological bread; an ointment ; a mousse; an anhydrous product, preferably liquid, pasty or solid, for example in the form of a stick, especially in the form of lipstick.
  • the invention also relates to a composition administered orally to a human or an animal, preferably a mammal, to obtain an effect selected from the group consisting of an antioxidant effect, hypocholesterolemic, hypolipidemic, immune system stimulation, hypoglycemic, especially in the case of diabetes, and an effect of prevention and / or treatment, and / or fight against a pathology selected from the group consisting of dyslipidemia, atherosclerosis, obesity, an illness related to obesity , cardiovascular disease, metabolic syndrome, diabetes, and hyperuricemia.
  • the control of the particle size of the chitin-glucan powder, especially obtaining a powder of fine particle size advantageously allows a better bioavailability of the product.
  • the invention also relates to a pharmaceutical or dietary supplement composition
  • a pharmaceutical or dietary supplement composition comprising as active principle at least one polysaccharide or an extract of fungal origin, as defined above.
  • the present invention also relates to a method for treating, preventing, or controlling a pathology, especially that mentioned above, comprising the oral administration of an effective amount to a subject in need of a composition comprising minus a polysaccharide as defined in the description above and hereinafter.
  • the present invention also relates to a method for decreasing mass or preventing or combating the uptake of a human or an animal, and preferably a mammal. This method relates in particular to an aesthetic care.
  • the present invention also relates to a method of cosmetic care, in particular the body or the face, which care is advantageously chosen from the care mentioned above.
  • the present invention relates to the use of a product of the present invention for the manufacture of a composition intended in particular for use in one of the methods described above or for exerting one of the effects described above. above and below.
  • an effective amount of between 0.01 and 10% of the polysaccharide of fungal origin according to the present invention is advantageously used in cosmetics or in pharmaceuticals by weight of the total composition.
  • an effective amount of between 0.01 and 10% of the polysaccharide of fungal origin according to the present invention is advantageously used in cosmetics or in pharmaceuticals by weight of the total composition.
  • An effective amount generally comprised between 0.001 and 100% by weight of the product according to the present invention relative to the total weight of the composition to be administered as a dietary supplement.
  • the products are administered in the form of capsules, granules, or tablets, they may be used pure or at any other concentration, together with other active ingredients or excipients. If incorporated into foods, the product concentration is less than 15%, and preferably less than 10%. It is advantageous to administer between 1 and 30 g per day per person produced according to the invention depending on the weight of the person.
  • the invention also covers a) cohesive porous solid materials obtained by the use of fungal extracts in the form of fine and controlled particle size particles and b) cohesive porous composite solid materials comprising a synthetic polymeric matrix or of natural origin (animal or plant) in which are distributed particles of fungal extracts in the form of particles of fine and controlled particle size.
  • the cohesive porous materials of the present invention are obtained by using polymers of chitin or chitin-glucan in the form of particles of fine and controlled particle size.
  • the present invention covers cohesive porous composite materials whose matrix is chitosan and in which are distributed chitin particles and / or chitin-glucan fine and controlled particle size.
  • a “composite” material within the meaning of the present invention is an assembly of at least two materials.
  • a “cohesive” material in the sense of the present invention is a material characterized by its ability to remain stable and in the form of a monolith even under the action of external forces and stresses (compression, stretching, elongation ...) as opposed to the friable material. Therefore, the cohesive material is capable of being shaped to give it a shape and size suitable for its application (such as a specific anatomical shape implant).
  • a “porous” material within the meaning of the present invention is a material characterized by the presence of pores whose size, number, morphology, interconnectivity, degree of isotropy / anisotropy ... are adjusted and controlled.
  • the state of the art reveals numerous documents relating to the preparation of porous materials of natural polymers, such as chitosan or synthetic polymers such as polyurethane, PLA (polylactic acid), PGA (polyglycolic acid), PLGA (lactic acid and glycolic acid copolymer) ...
  • the state of the art also discloses some documents relating to the preparation of compositions rich in fungal extracts containing chitin, chitosan glucan. None, however, report the preparation of porous solid cohesive materials from these fungal extracts.
  • patent RU2086247 discloses a composition obtained from the mycelium of lower fungi ⁇ Aspergillus nige ⁇ and containing a chitosan-glucan complex in order to prepare an anti-scald system.
  • the method of preparation includes a step of washing and alkaline treatment directly from the biomass, followed by a lyophilization step.
  • Sacchachitin is a composition rich in chitin extracted from the fruit of the fungus Ganoderma tsugae, whose action on healing has been described by SH Su et al.
  • JP2006273912 discloses a molded material composed of beta-glucan and chitosan. It does not reveal that these materials are porous. In addition, they do not include in their composition chitin-glucan copolymers. The state of the art thus reveals no document relating to cohesive porous materials obtained from fungal extracts such as chitin or a chitin-glucan copolymer in the form of particles of fine and controlled particle size. Porous materials comprising chitosan and a second compound have been widely described.
  • PGA Bomaterials, 24 (2003), 1047-1057
  • polyacrylic acid Macromolecular Bioscience, 3 (10), 2003, 540-545
  • natural polymers such as gelatin (Polymer International, 49 (12), 2000, 1596-1599, CN 1097980), collagen (WO0016817, KR2002017552, CN1406632, CN1387922, RU2254145), cellulose or silk (JP2000027027), cellulose oxidized (US2006172000), inorganic compounds such as hydroxyapathite (Journal of Biomaterial Science, Polymer Edition, 13 (9), 2002, 1021-1032) ...
  • US2003190346 covers a method for preparing a composite sponge made of chitosan and of chitin hydrogel, the particular form of the present invention not being contemplated.
  • CN 1485097 covers a method of preparing a sponge from chitosan / chitin. This document does not specify whether it is a composite material or materials consisting of either chitosan or chitin. The abstract of this document reveals that the first step in preparing the sponge consists in solubilizing the starting material, which indicates that it is a question of preparing a sponge essentially of chitosan since it is well known that chitin is insoluble. except under very particular conditions (dimethylacetamide-LiCl system).
  • No document discloses a composite material composed of chitosan and chitin-glucan copolymer. Indeed, it is well known to those skilled in the art that the chitin-glucan copolymers are insoluble regardless of the solvent. It is also well known that the methods for preparing a composite material and in particular a biodegradable composite material initially include solubilization and a homogeneous mixture of the solubilized compounds, before proceeding to the phase of removal of the solvent. seen from prepare the solid material.
  • the technical problem encountered in preparing a solid (in particular porous) material for chitin or chitin-glucan or for preparing a solid (in particular porous) composite material composed of a polymeric matrix, for example a biodegradable matrix, as the first compound and chitin or chitin-glucan as the second compound is therefore to solubilize, in a first step, chitin or chitin-glucan for its mixing with the solution containing chitosan.
  • the present invention provides a technical solution to this problem by proposing the use of chitin and / or chitin-glucan copolymer of controlled fine granulometry in the form of a suspension, dispersion or emulsion capable of being mixed with a solution. biodegradable polymer as a matrix.
  • the present invention provides a technical solution for the preparation of a porous solid of chitin or chitin-glucan by the use of a supension, dispersion or emulsion containing chitin or the chitin-glucan copolymer of fine granulometry and controlled.
  • the cohesive porous materials of the present invention cover a) cohesive porous materials prepared from fungal extracts, preferably chitin polymers and / or copolymers of chitin-glucan in the form of fine and controlled particle size particles and more preferably chitin-glucan copolymers of fine and controlled particle size.
  • cohesive porous composite materials comprising, as a matrix, also called a dispersing agent, a polymer and, as second compound, also called dispersed agent, fungal extracts, preferably chitin polymers or copolymers of chitin-glucan in the form of particles of granulometry fine and controlled.
  • the invention further relates to:
  • a porous material comprising at least one fungal extract, preferably at least one chitin polymer and / or a chitin-glucan copolymer, in the form of particles having a particle size of less than 500 microns ( ⁇ m).
  • the porous material comprises a fungal extract as defined above.
  • the invention also relates to a process for preparing a porous material characterized in that it comprises a step of dispersing, or emulsifying, or suspension of at least one fungal extract in the form of particles having a particle size of less than 500 microns in a solvent, then removing this solvent and obtaining a porous material comprising the fungal extract.
  • the particles of chitin polymers or chitin-glucan copolymers used for the porous material have a particle size less than
  • particles of chitin-glucan copolymers having this fine and controlled particle size distribution are used.
  • the invention also relates to a porous composite material comprising a matrix and a dispersed agent, said matrix, also called dispersing agent, being at least one type of polymer, and the dispersing agent being at least one fungal extract, and preferably a polymer of chitin or a chitin-glucan copolymer, in the form of particles having a particle size of less than 500 microns ( ⁇ m).
  • the porous material comprises a fungal extract as defined above.
  • the porous composite material comprises particles of chitin or chitin-glucan of the invention with a particle size of less than 250 ⁇ m, more preferably less than 90 ⁇ m and even more preferentially less than 63 ⁇ m.
  • particles of chitin-glucan copolymers having this fine and controlled particle size distribution are used.
  • the invention covers a process for preparing a porous composite material comprising a matrix and an agent dispersed in the matrix, characterized in that it comprises (i) a step of solubilizing a polymer capable of forming the matrix of the material porous composite, (ii) a step of dispersing, or emulsifying, or suspending at least one fungal extract in the form of particles having a particle size of less than 500 microns in the polymer solution, (iii) a step of removing the solvent from the polymer solution comprising the fungal extract, (iv) obtaining a composite material comprising the porous polymer forming the matrix and the fungal extract forming the dispersed agent.
  • the porous or composite porous material may form a layer or more of a composite material.
  • polymers of natural origin may be chosen from the group consisting of glycosaminoglycans (GAG), in particular hyaluronic acid or hyaluronate, chondroitin sulfate or heparin, collagens, alginates, dextrans, chitosans and their mixtures
  • synthetic polymers chosen from the group consisting of polyurethanes, polyacrylates ... or biodegradable synthetic polymers, in particular chosen from the group consisting of synthetic biodegradable polyesters such as homopolymers and copolymers based on lactic acid, glycolic acid, epsilon-caprolactone and p-dioxanone or any other natural polyester such as those of the family of polyhydroxyalkanoates such as homo- and copolymers based on hydroxybutyrate, hydroxyvalerate, polyorthoesters. .. or a polymeric matrix resulting from their combination or combination of polymers natural and synthetic polymers.
  • the matrix is a biodegradable polymer.
  • the biodegradable polymeric matrix is chitosan of any molecular weight and any degree of acetylation.
  • the mass ratio between the polymer of chitin or chitin-glucan and chitosan (or biodegradable polymer) is between 5: 95 and 95: 5, preferably between 20:80 and 80:20.
  • the preferred composition has a weight ratio of from 40:60 to 60:40, preferably of from 45:50 to 55:45, and still more preferably of from about 50:50.
  • porous cohesive materials of the invention are of any shape, any geometry and any size, preferably in the form of porous membranes, three-dimensional porous supports such as flat supports, porous foams, microcarriers or porous beads, porous fibers, porous tubes ...
  • the porous cohesive materials have a density of at least
  • the cohesive porous composite materials have a Young's modulus (which expresses the compressive strength) of at least 0.05 MPa.
  • the mechanical properties of the porous materials can be modulated in particular as a function of the size of the particles of the dispersed agent, the mass ratio between the matrix and the dispersed agent and the method of preparation, in particular the concentration of the chitosan solution at departure. Surprisingly, it has been found that the weight ratio of about 50: 50 between chitosan and the chitin-glucan copolymer has the best compressive strength.
  • the materials of the invention cover different sizes of the total pores and porosities, different morphologies (circular, elongated, fibrillar ...), different degrees of interconnectivity, degrees of isotropy or anisotropy of the pores, different roughness of the walls. pores ... as a function of the concentration of the suspension of chitin or chitin-glucan particles, their size chosen from the fine and controlled granulometry, the ratio by weight between these particles and the polymer matrix and the method of preparation of these materials.
  • the cohesive porous materials of the invention have the advantages of providing easily manipulable and adaptable chitin and chitin-glucan materials capable of being applied temporarily or permanently (in the form of dressings, tampons, implants, patches etc.). ..) / in cosmetic or pharmaceutical applications for which the beneficial effect of these compounds is sought, or in combination (for example impregnation, adsorption, absorption, inclusion in the pores, etc.) with other active agents.
  • the porous composite materials of the invention have the advantage of combining the beneficial effects of the biodegradable polymer matrix and chitin and / or chitin-glucan copolymer fine and controlled particle size.
  • the fine particles of chitin or chitin-glucan can be anchored in the porous structure of the polymer matrix conferring on it a rough structure and characterized by a higher specific surface area.
  • the method of preparation of cohesive porous materials' a 'and cohesive porous composite materials ⁇ b' comprises a first stage of suspension, emulsion, or dispersion, chitin particles or chitin-glucan fine particle size and controlled either in water to prepare the material V, or in a solution of a polymer matrix to prepare the material y b '.
  • the mixture is subjected to drying or removal of solvent according to blowing techniques known to those skilled in the art.
  • pore-forming techniques lyophilization, supercritical fluid foaming (supercritical CO 2 ), extraction of porogenic salts, immersion-precipitation, electrospinntng, emulsion modeling (solid free-forming) are suitable for completion of this step.
  • the drying step is lyophilization.
  • the method comprises a first step (i) of suspending the chitin polymer or preferably the chitin-glucan copolymer of the invention of granulometry and controlled in water in a mass ratio between 05: 95 and 30: 70, preferably 05: 95 and 20: 80, followed by homogenization for at least 30 minutes to prepare a paste.
  • the dough is frozen by any method of freezing, in particular by placing the dough in a freezer at -18 ° C.
  • the frozen mixture is lyophilized to yield a cohesive porous material.
  • the method comprises a first step (i) of dissolving the biodegradable polymer matrix in a solvent and according to experimental conditions allowing its solubilization complete.
  • the chitosan is solubilized at a rate of 1 to 10% in a dilute acid solution at a concentration of between 0.5 and 5%, preferably between 0.5 and 2%.
  • the acids that can be used for this stage, the mineral acids, for example hydrochloric acid, hydrofluoric acid, phosphonic acid ...
  • a second step (ii) the fine and controlled particle size particles of chitin or chitin-glucan are dispersed in the solution containing the polymer matrix, homogenized for at least 1 minute and then poured into a mold chosen according to the size, the geometry and the properties of the porous composite material to be prepared.
  • the mass ratios between the polymer of the matrix and the dispersing agent are between 10: 90 and 90:10.
  • the mixture is subjected to freezing by any freezing technique.
  • the frozen mixture is freeze-dried.
  • the composite material obtained is porous.
  • the density, the size and the morphology of the pores, the mechanical properties, in particular the compressive strength of the material, are adjustable, according to this embodiment of the invention, as a function of the concentration of the polymer matrix, ratios of mass between the polymer matrix and the dispersed agent, the nature of the solvent of the matrix, the type of mold, the filling volume of this mold, and the freezing conditions.
  • Fig. 1 shows the recording conditions of the carbon-13 nuclear magnetic resonance (13C-NMR) solid-phase spectrum of a chitin-glucan copolymer.
  • Figure 2 shows the solid phase 13 C-NMR spectrum of a chitin-glucan copolymer.
  • FIG. 3 represents four photographs by scanning electron microscopy of chitin-glucan particles (lot L26) according to the present invention, and in particular fractions of size 100-200 ⁇ m (fraction 100-200), of size
  • FIG. 4 shows a scanning electron microscopy photograph of the particles according to the present invention (batch L32), after drying by an atomization method (magnification ⁇ 750).
  • FIG. 5 represents an optical profilometric graph, showing the height of the grooves (Rz) as a function of the distance on the skin, obtained after 16 weeks on 1 subject (left forearm: cream T1, 5 based on chitin-glucan right forearm: placebo cream).
  • the graphs show that the microreliefs are significantly attenuated (mean value Rz 7.0 ⁇ m with chitin-glucan versus 9.6 ⁇ m with placebo) and that the skin is more tense.
  • Figure 6 shows two photographs by scanning electron microscopy of a porous chitin-glucan material.
  • Figure 7 shows a scanning electron micrograph of a porous mixed material of chitin-glucan and chitosan (chitin-glucan / chitosan 10:90, m / m) in longitudinal section.
  • FIGS. 8A-C show scanning electron microscopy photographs of a composite porous material of chitin-glucan and chitosan obtained for three samples (FIG. 8A: chitosan / chitin-glucan ratio (m / m) of 25/75, Figure 8B: chitosan / chitin-glucan ratio (m / m) 50/50 and Figure 8C: chitosan / chitin-glucan ratio (m / m) 75/25).
  • the size of the chitin-glucan particles is less than 63 ⁇ m.
  • the photographs on the left represent a longitudinal section and the photographs on the right a cross section.
  • FIGS. 9A and 9B show photographs by scanning electron microscopy of a composite porous material of chitin-glucan and of chitosan obtained for four samples obtained with chitin-glucan particles having a particle size greater than 250 ⁇ m
  • Figure 9A left picture; chitosan / chitin-glucan ratio (m / m) 25/75 and grain size between 250 and 500 ⁇ m
  • Figure 9A right picture: chitosan / chitin-glucan ratio (m / m) of 25/75 and grain size between 500 and 1000 ⁇ m
  • Figure 9B left picture: chitosan / chitin-glucan ratio (m / m) 50/50 and grain size between 250 and 500 ⁇ m
  • Figure 9B right picture: chitosan / chitin-glucan ratio (m / m) of 50/50 and grain size of between 500 and 1000 ⁇ m.
  • each example has a general scope.
  • a mass of 50 kg (dry weight) of wet Aspergillus niger mycelium is suspended in a 0.5 N hydrochloric acid solution and then filtered.
  • the solid is then suspended in 1N sodium hydroxide solution and filtered.
  • the solid material is washed 4 times with water, then filtered with a filter press and dried using a conical dryer. It is then suspended in ethanol, then filtered and dried.
  • About 15 kg of chitin-glucan (lot L25) are obtained.
  • the molecular characteristics and the composition of eight batches of chitin-glucan obtained according to this method are given in Table 1.
  • the chitin / glucan mass ratio is calculated from the solid-phase carbon-13 nuclear magnetic resonance (NMR) spectrum recorded under the conditions shown in FIG. 1 according to the method briefly described below.
  • the spectrum of the chitin-glucan compound (lot L28) is shown in FIG. 2.
  • the proportion of beta-glucan is determined from the area of the following four resonance bands: 104 ppm (carbon 1 of chitin and beta -glucan), 23 ppm (CH 3 carbon of chitin), 55 ppm (chitin carbon 2) and 61 ppm (chitin and beta glucan carbon 6), using pure chitin as a reference.
  • Glucan (mol%) (formula 1)
  • the chitin / glucan mass ratio of the 8 batches of chitin-glucan in Table 1 is on average 39:61 ⁇ 2 (m / m).
  • the proportion of D-glucosamine units (NGIc), expressed in mol% of the chitin portion, can be estimated from the NMR spectrum, as described by Heux et al. [Heux L, Brugnerotto J, Desbrieres J, Versali MF & Rinaudo M. (2000) Solid state NMR for determination of the degree of acetylation of chitin and chitosan. Biomacromolecules 1: 746].
  • the proportion of D-glucosamine units is determined by potentiometric titration with sodium hydroxide, suspended in an excess of hydrochloric acid.
  • chitin-glucan obtained according to Example 1 (batch L25) are milled in a hammer mill (Fitzmill model D, Fitzpatrick) equipped with filters of different geometry and sieve size from 20 to 100 mesh (references A, B, C, D in Table 1).
  • Four batches of chitin-glucan powder are obtained, the size distribution of which, determined by sieving on calibrated sieves and gravimetry, is that indicated in Table 1.
  • the 100-200 ⁇ m fraction of batch L25 is the product used to prepare the test cream (reference Tl, 5) of Example C1.
  • a paste containing 0.15 kg of chitin-glucan (lot L25) in 3.75 liters of water is prepared using a blender.
  • the paste is spray-dried at a temperature of 200 ° C. 0.15 kg of a powder is obtained whose cumulative size distribution is that given in Table A3.1.
  • the photograph of Figure 5 represents the particles observed by scanning electron microscopy.
  • the atomization technique of the solvated chitin-glucan makes it possible to obtain predominantly a fine and homogeneous particle size, 73% of the particles having a diameter of less than 125 ⁇ m.
  • chitin-glucan solvated in ethanol is dried in a N ⁇ tsche filter at a temperature of 60 ° C. for 12 hours.
  • 50 kg of a chitin-glucan powder (lot L16) are obtained whose cumulative size distribution is that given in Table A4.1.
  • the tapped (or packed) density of the chitin-glucan powder thus obtained is 0.71 g / cm 3 .
  • the resulting powder is sieved to select particles smaller than 90 ⁇ m in size.
  • This fraction is used for the preparation of the formulations of Examples 14 to 20.
  • This fraction less than 90 microns observed by scanning electron microscopy reveals an average size determined by image analysis of 43 ⁇ 18 microns.
  • the density typed by the size fraction less than 90 ⁇ m, determined according to the method of European Pharmacopoeia 2.9.15, is 0.61 g / cm 3 .
  • the dried chitin-glucan [L07073CG] is milled in a disk mill and then sieved through a 125 mesh (or 120 mesh) sized mesh screen introduced into an industrial sieving machine.
  • the particle size dispersion obtained after each grinding cycle is given in Table A5.1.
  • An emulsion-type cream has been prepared based on chitin-glucan (lot L31),
  • EXAMPLE B2 (Study of the cutaneous tolerance and moisturizing power of a simple cream based on chitin-qlucan in variable concentration
  • Biometrological measurements A possible erythema, sign of irritation, was sought by corneometry, by measuring the parameter a * given by the reflectance colorimetry evaluated according to CIE L * a * b * standards (Chroma Meter® CR200 Minolta).
  • a possible alteration of the barrier function was sought by measuring the insensitive water loss (PIE) in g / m 2 / hr (Tewameter®, C + K Electronic).
  • the PIE is 5 to 7 g / m 2 / hr for normal skin, and 15 to 20 g / m 2 / hr for dry skin.
  • the dynamics of water impregnation of the stratum corneum under occlusion was measured.
  • the rate of water accumulation (RWA) or water accumulation rate was evaluated over a period of 30 seconds (RWA 30) by the ratio of the difference between the values at T30s and TOs and the value at TOs. The higher the value, the more the stratum corneum is dry and permeable to water, allowing it to escape without capturing the equivalent of the PIE.
  • Protocol- Cyanoacrylate surface biopsies were taken from the forearms of 15 healthy volunteers to collect the stratum corneum.
  • the creams containing chitin-glucan in a variable concentration of 0 to 2% are those of Example 5 (from 0.5 to 2.5%). They were diluted with 50:50 (v / v) water to ensure intimate contact between the products and the stratum corneum. The solutions were deposited for 2 hours on the stratum corneum samples. At the end of this contact, the samples were thoroughly rinsed with water. After drying, they were stained for 1 min with an alcoholic solution of basic fuschine and toluidine blue.
  • chitin-glucan The clinical evaluation of the sensitizing potential and hypoallergenicity of chitin-glucan is carried out according to the Maibach-Marzulli protocol, on 50 volunteers with normal skin (37 ⁇ 2 years), for 6 weeks.
  • a paste of 10% concentration is prepared by dispersing the chitin-glucan (L25) in water.
  • the paste is applied to the skin using a Finn Chamber® occlusive patch.
  • Possible signs of erythema, edema, dryness and appearance of vesicles are observed, to characterize the irritant potential (induction phase) and the sensitizing potential of the product (challenge phase).
  • chitin-glucan is considered non-irritating and non-sensitizing. It can therefore carry the claim "hypoallergenic".
  • the evaluation of the primary irritation of chitin-glucan on the skin is carried out by applying the chitin-glucan (L25) in the form of a 10% aqueous paste (as in Example B4), applied to the skin in a Finn Chamber® occlusive patch for 24 hours.
  • the study is carried out on 10 subjects. Observations to detect signs of erythema, edema and changes in skin structure are performed 30 minutes and 24 hours after detachment of the patch under dermatological control. All of the Results of the study indicate that chitin-glucan (dispersed to 10% in water) can be classified as non-irritating to the skin.
  • ocular irritation of chitin-glucan (L25) is performed by the HET-CAM test on the chorioallantoic membrane of embryonated chicken eggs (hen's egg chorio-allantoic membrane test), according to Luepke et al. [Fd Chem Toxic 23, 287, 1985], officially recognized as an alternative to animal testing (OJ of 26/12/1996).
  • the chitin-glucan dispersed at 5% in water is deposited on the surface of the membrane and put in contact for 20 seconds. The test is repeated on four eggs. Chitin-glucan 5% has the lowest score, classifying it as virtually non-irritating to the chorioallantoic membrane of the chicken egg.
  • phase A The ingredients of phase A are mixed at 80 ° C., and the ingredients of phase B are mixed at 75 ° C.
  • Phase B is added to Phase A, and the The mixture is homogenized with a blender and allowed to cool.
  • Ingredients C and S are finally added at 40 ° C.
  • Example C1 Day creams containing different batches of chitin-glucan of variable particle size, at a concentration of 1.5%, were prepared according to the same protocol as that of Example C1: an unscreened non-milled batch (L25), and the 3 batches. L25 crushed and fractionated from Example A2. The ease of formulation and the characteristics of the creams obtained are those of Table C2.1.
  • Table C2.1 Characteristics of creams prepared with chitin-glucan powders (L25) of different granulometries; The sensory aspects (visual and touch) are ranked from 1 to 5, the score 5 corresponding to the best sensory impressions. The ease of formulation is ranked from 0 to 5, the score 1 corresponding to the greatest ease of formulation.
  • a lip balm formula is prepared with four different granulometries of the chitin-glucan powder and the ingredients of Table C3.1.
  • the powders having a particle size of less than 125, 90, 50 and 30 ⁇ m are produced according to the method of Example A5, at a concentration of 1.5%.
  • the particle size fraction with a diameter of less than 30 ⁇ m is obtained after an additional micronization step using an air jet mill.
  • phase A The ingredients of phase A are mixed at 60 ° C. and then the mixture is cooled to 45 ° C.
  • the ingredients of phase B are mixed with phase A and the mixture is stirred for 2-3 minutes.
  • the mixture is inserted into the final packaging immediately, the solidification point being approximately 40 ° C.
  • the sensory characteristics of the lip balms obtained are those in Table C3.2.
  • a water-in-oil emulsion type sunscreen emulsion is prepared with chitin-glucan (1.5%) and the ingredients of Table C4.1.
  • Chitin-glucan powders of three different granulometries prepared according to Example A5 were used: ⁇ 125 ⁇ m, ⁇ 90 ⁇ m and ⁇ 50 ⁇ m.
  • the sensory aspects are ranked from 1 to 5, the score 5 corresponding to the best sensory impressions.
  • the ease of formulation is ranked from 0 to 5, the score 5 corresponding to the greatest ease of formulation.
  • a chitin-glucan powder with a diameter of less than 90 ⁇ m, to guarantee a visual appearance in accordance with the requirements of the manufacturers.
  • a copolymer having particles having a diameter of less than 125 ⁇ m is suitable for oil-in-water emulsions.
  • aqueous tonic solution is prepared with chitin-glucan (1.5%) and the ingredients of Table C5.1.
  • Chitin-glucan powders of two different granulometries were used: ⁇ 30 ⁇ m and ⁇ 10 ⁇ m. The powders are prepared as in Example C3.
  • the ease of formulation the sensory aspects are ranked from 1 to 5, the score 5 corresponding to the best sensory impressions.
  • the ease of formulation is ranked from 0 to 5, the score 5 corresponding to the greatest ease of formulation. It is seen from this example that to prepare a tonic solution of acceptable appearance and that the chitin-glucan particles remain in stable suspension, it is necessary that the particle diameter is less than 10 microns.
  • a night cream of the "water-in-oil" emulsion type is prepared with chitin-glucan (1.5%) and the ingredients of table C6.1. These ingredients all meet the certification criteria of the Federal Association of German Commercial and Industrial Companies for medicines, dietary products, dietary supplements and body care (BDIH). The cream can get the BDIH mark indicating that it has been controlled by this association.
  • Chitin-glucan powders of three different granulometries prepared according to Example C3 were used: ⁇ 125 ⁇ m, ⁇ 90 ⁇ m and ⁇ 50 ⁇ m.
  • the sensory aspects are ranked from 1 to 5, the score 5 corresponding to the best sensory impressions.
  • the ease of formulation is ranked from 0 to 5, the score 5 corresponding to the greatest ease of formulation.
  • phase A The ingredients of phase A are mixed at a temperature of 50-60 ° C.
  • the ingredients of phase B are added to phase A and the mixture is homogenized.
  • C is added with stirring, and the mixture is homogenized until complete incorporation.
  • D is added and the mixture is homogenized until complete incorporation.
  • EXAMPLE C8 Formulation of a day care
  • a day care formulation containing 1.5% chitin-glucan can be prepared according to the formulation described in Cl.
  • phase A The ingredients of phase A are mixed.
  • the ingredients of phase B are mixed.
  • Phase B is added to phase A, and the mixture is homogenized for 10 minutes at 400 rpm.
  • the powder C is added to the B / A mixture and the mixture is homogenized at 400 rpm for 1 hour.
  • the pH is adjusted between 4.8 and 5.4 with phase D.
  • a firming cream for the bust containing 1.5% chitin-glucan can be prepared according to the formulation described below.
  • Procedure - The ingredients of phase A are mixed at 80 ° C., and the ingredients of phase B are mixed at 85 ° C. Phase B is added to phase A, and the mixture is homogenized for 5 minutes at 10,000 rpm and then allowed to cool to 40 ° C. The ingredients of phases C and D are added to the emulsion with stirring.
  • Procedure- The ingredients of phase A are mixed at 75 ° C., then the ingredients of phase B are mixed at 80 ° C. Phase A is added to phase B, and the mixture is homogenized for 3 minutes at 10,000 rpm. , then allowed to cool to 40 ° C. The ingredients of phases C and D are added to the emulsion with stirring, then the mixture is homogenized for 1 minute at 10,000 revolutions / minute. The chitin-glucan powder (E) is added and the whole is stirred for 60 minutes (for a final quantity of 200 g).
  • a hand cream containing 1.5% chitin-glucan can be prepared according to the formulation described below.
  • phase A The ingredients of phase A are mixed at 65 ° C, then the ingredients of phase B are mixed at 65 ° C.
  • Phase A is added to phase B, and the mixture is homogenized for 3 minutes at 10,000 rpm, then allowed to cool to 40 ° C.
  • Ingredients C are added in a re-emulsion, and the mixture is cooled, then mixed with minus 30 minutes.
  • an anti-acne lotion containing 1.5% chitin-glucan can be prepared according to the formulation described below.
  • phase A The ingredients of phase A are mixed.
  • the ingredients of phase B are mixed.
  • Phase A is added to phase B, and the mixture is homogenized for 3 minutes at 10,000 rpm (for a final amount of 200 g).
  • an anti-psoriasis care containing 1.5% chitin-glucan can be prepared according to the formulation described below.
  • Procedure- The ingredients of phase A are mixed.
  • the ingredients of phase C are mixed, and phase C is heated to 75 ° C.
  • Phase C is added to phase A with stirring, and the mixture is homogenized for 3 minutes at 10,000 rpm and then cooled to 40 ° C.
  • the ingredients of phase B are mixed, then phase B is added to the mixture.
  • the mixture is homogenized for 1 minute at 10,000 rpm (for a final quantity of 400 g).
  • Example C1 illustrates the effects of the cream described in Example C1, which contains 1.5% of chitin-glucan (reference Tl, 5) on various characteristics of the skin, in particular in the context of skin aging, cream and his placebo being applied to the forearm of elderly subjects for a period of 4 months.
  • the placebo cream being a formulation that is already very moisturizing, the study clearly shows the effects of ground chitin-glucan.
  • Protocol- The study included 20 male volunteers, aged 58 ⁇ 4 years, who blindly applied the chitin-glucan cream (Tl, 5) and the placebo cream, each on a forearm, to 2 times a day for 4 months. Five types of clinical and biometric examinations were performed monthly.
  • the squamometry X consists in taking the surface of the stratum corneum by a transparent self-adhesive disc applied during about ten seconds under a pressure of 110 g / cm 2 provided by a dynamometer.
  • the stratum corneum sample is stained with a solution of toluidine blue and basic fuschine.
  • the color defined by Chroma C * measured in reflectance colorimetry (Chroma Meter Minolta) evaluates the state of xerosis.
  • a "normal" skin, smooth and well hydrated, has a squamometric index C * of about 5 to 7. The higher the value, the thicker the stratum corneum, and the rough and dry skin.
  • Chroma C * obtained subsequently are those of Table D1.1.
  • M1 one month
  • M2 the second month
  • M4 the first and fourth months
  • NS values not significantly different; MO means 0 months, etc.
  • the ULEV method (Visioscan) is a non-invasive method that highlights the squamous condition of the skin, especially fine dander in the process of detachment, and characterizes the cohesion of the comeuocytes of the stratum corneum. The measurement is expressed as a percentage of the skin area affected by the process. When the skin is smooth and the cohesive stratum corneum, the ULEV percentage is low, of the order of 5-6%. At inclusion in the study (MO), and after one month of treatment (M1), the percentage of skin area affected by the desquamation process was similar at both treated sites, approximately 8-9%. The values obtained next are those of Table D1.2.
  • the placebo TO formulation provided a significant improvement (p ⁇ 0.001) in the first month, and it persisted during the rest of the study to reach a value of 7.4% at 4 months.
  • the Tl, 5 formulation also brought a significant improvement which appeared in the first month (p ⁇ 0.01) and which strengthened in the following months (p ⁇ 0.001). This was reflected in improvements between the first and fourth months (p ⁇ 0.01) and between the second and fourth months (p ⁇ 0.05).
  • the comparison between the two treated sites demonstrates the superiority of the Tl formulation in the second month (p ⁇ 0.01) as well as in the third and fourth months (p ⁇ 0.001) compared to the placebo cream.
  • NS values not significantly different; MO means 0 months, etc.
  • the TO formulation significantly reduced (p ⁇ 0.01) the Rz value at the end of the fourth month of treatment.
  • the formulation Tl, 5 reduced the Rz value highly (p ⁇ 0.001) by the second month of treatment, until the end of the study.
  • the improvement was also marked between the first and third months of treatment (p ⁇ 0.05) and between the first and fourth months (p ⁇ 0.001) and the second and fourth months (p ⁇ 0 , 05).
  • the Tl, 5 formulation proved to be the most effective from the first month (p ⁇ 0.01), as well as the following months (p ⁇ 0.001).
  • Figure 5 shows the profilometry graphs obtained on both forearms of a subject after 16 weeks of application of cream T1, and cream TO.
  • NS values not significantly different; MO means O month, etc.
  • the propagation time of an ultrasonic wave in the skin (RRTM, resonance running time measurement, value arbitrary) is measured between two slats affixed to the skin, by a Reviscometer.
  • the RRTM is a good indicator of the intrinsic tension and the tonicity of the skin, because the more the skin is tonic and tense, the less the skin folds in relief, and the faster the ultrasonic wave propagates.
  • the RRTM is also influenced by the state of the stratum corneum, its cohesion, it is even shorter than the stratum corneum is normalized.
  • the RRTM values are similar between the two sites at the start of the study and after one month of the test. The values obtained next are those in Table D1.4.
  • the TO formulation did not result in any change in the RRTM value during treatment.
  • Formulation Tl, 5 induced a significant reduction in RRTM after three months (p ⁇ 0.01) and four months (p ⁇ 0.001), as well as between the first and second months (p ⁇ 0.01) respectively. and the third and fourth months (p ⁇ 0.001).
  • Tl, 5 cream was significantly better after two and three months (p ⁇ 0.01), and after four months (p ⁇ 0.001).
  • NS values not significantly different; MO means 0 months, etc.
  • the capacitance values are similar at both sites at the start of the study. The values obtained next are those in Table D1.5.
  • the TO placebo formulation significantly increased capacitance after one month (p ⁇ 0.05) and after four months (p ⁇ 0.001). In the intermediate times of two and three months, no effect of the application of creams is observed on the capacitance measurement.
  • the Tl, 5 formulation allows a significant increase in capacitance after one month (p ⁇ 0.05), as well as after 2 and 4 months (p ⁇ 0.001). A significant increase (p ⁇ 0.05) in capacitance is also observed between the first and fourth months. Tl, 5 cream is significantly more effective than placebo cream after one month (p ⁇ 0.05), and even more significantly performant at 2 and 4 (p ⁇ 0.001).
  • EXAMPLE D2 Study of the effects of the daily application of a day cream based on chitin-qlucan 1.5% concentration for 4 months on the wrinkles and topoloqie of surface of the skin in the region of the eye of elderly subjects
  • This example illustrates the effects of a cream based on 1.5% chitin-glucan on various skin characteristics, particularly in the context of skin aging, the test cream and its placebo being applied to the area of the skin.
  • the day cream is an oil-in-water emulsion prepared with the ingredients of Table D2.1, with chitin-glucan of particle size less than 125 microns produced according to Example A5, and without chitin-glucan for the placebo cream.
  • the skin embossment parameters were characterized from photographs of the skin impression in a SilFIo ® gel analyzed with the aid of Skin Image Analyzer ® . The photographs are taken at an angle of 35 ° to allow viewing of the shadows.
  • the Quantirides ® image analysis software provides the total wrinkled surface, all wrinkles having a minimum surface area of 0.03 mm 2 being detected. It also provides the number and average depth of wrinkles, especially wrinkles of the skin's microrelief. The variation of the parameters is then calculated by comparing;
  • X t and X t o are the average values of parameter X obtained with test cream or placebo at time t and tO
  • X ⁇ t and Xr t o are the average values of parameter X obtained with the test cream (with chitin-glucan) at times t and tO
  • Xp t and Xp t o are the average values of the parameter X obtained with the placebo cream (without chitin-glucan) at time t and tO
  • an oil-in-water emulsion cream containing 1.5% chitin-glucan with a particle size of less than 125 ⁇ m makes it possible to smooth the surface of the skin in the region of the crow's feet and to reduce obviously the number and depth of the wrinkles, in particular the folds of the micro-relief.
  • the relief of the skin is characterized by:
  • the biological model used includes a reconstructed human epidermis (0.5 cm 2 , 5 days) and fibroblasts from normal human epidermis (PF2, eighth pass) arranged in a 24-well plate (reconstructed epidermis and 120000 fibroblasts per well) grown in a supplemented DMEM / HAM F12 co-culture medium.
  • the chitin-glucan cream with a particle size of less than 125 ⁇ m at a concentration of 1.5% therefore exerts an anti-aging action on the skin, the pro-collagen type I being the precursor of collagen, the main component of the extracellular matrix of the dermis.
  • Protocol- Langerhans cells are dendritic cells located mainly in the deepest layers of the epidermis. Containing no melanin, they are very sensitive to external aggressions such as exposure to UV radiation. In case of external stress, they tend to migrate from the epidermis to the dermis, then trigger the activation of lymphocytes. The number of healthy Langerhans cells present in the epidermis is therefore used as an indicator of skin damage related to stress and aging.
  • the model used is a skin explant from a biopsy (4 cm 2 ) grown on a 6-well plate in culture medium
  • Two studies are carried out: a cytotoxicity study, and a study of the effect of chitin-glucan cream on the number of Langerhans cells in the explants having been or not irradiated with UVB.
  • UVB irradiation Effects of UVB irradiation on the number of healthy Langerhans cells present in the explant.
  • a first topical application is performed, the explant is incubated for 24 hours, then one hour after a second topical application the explants are irradiated with UVB (0.75 J / cm 2 ) in the UVB + group, and not irradiated in the UVB group. .
  • the explants are then incubated for 16 hours. Two explants per group are used.
  • Immunohistochemistry The explants are frozen, and three sections per explant are fixed in an acetone / methanol mixture and then incubated with an anti-CDla-FUC antibody (AbCys LO-CDIa-FOS) and the Hoechst nuclei marker for 1 hour. The sections are observed by fluorescence microscopy. Only Langerhans cells with marked fluorescence and "normal" morphologies evidenced by the presence of dendrites are counted.
  • AbCys LO-CDIa-FOS anti-CDla-FUC antibody
  • -LCUv + Treatment is the number of Langerhans cells in the explant treated and exposed to UVB
  • EXAMPLE ⁇ '- Effects of oral administration of a chitin- ⁇ lucan powder of ⁇ ranulometry less than 500 ⁇ m on the parameters characterizing the cardiovascular risks in humans This example aims to highlight the anti-atherosclerosis, antioxidant, hypocholesterolemic, lipid-lowering effect of oral administration of chitin-quinucan with a particle size of less than 500 ⁇ m in humans.
  • the model used is the man with a normal weight or a slight overweight and a cholesterol between 1.3 and 2.5g / l under standard diet.
  • the chitin-glucan with a particle size of less than 500 ⁇ m (obtained according to the method of Example A5) is administered at a rate of 4.5 g / day, in 3 doses, 30 minutes before the main meals. The effects over a period of 4 weeks are studied.
  • the control group receives the equivalent of 4.5 g / day of placebo.
  • This is heavy Kaolin for internal use of pharmaceutical grade. 30 male subjects aged 20 to 50 years, with a body mass index between 18 and 28 kg / m 2 and a cholesterolemia between 1.3 and 2.5 g / 1 are divided into two groups randomly in single blind (10 controls / 20 treated).
  • a medical examination, a review of the blood parameters considered for the study and a food questionnaire will be carried out during the selection of subjects.
  • Food consumption, biochemical and antioxidant parameters and anthropometric parameters are measured 3 times during the study (at the beginning, at 2 weeks and at the end of the study).
  • the blood samples allow the analysis of the biochemical and antioxidant parameters listed in the table El.
  • the anthropometric measurements relate to the follow-up of the weight, its measurement of the size, the circumference of the waist, the circumference of the arm, the circumference of the thigh and the blood pressure.
  • a chitin-glucan paste is prepared by homogenizing 100 g of a chitin-glucan powder of fine granulometry (L25, fraction ⁇ 90 ⁇ m) with 900 g of water, for at least 1 hour. The dough is frozen at -18 ° C and freeze-dried. A porous, cohesive material is obtained with good performance mechanical. Observation by scanning electron microscopy ( Figure 6) reveals a very aerobic isotropic and fibrillar structure.
  • a solution of 2% chitosan in 1% acetic acid is prepared.
  • a fine particle size chitin-glucan powder (L16, fraction ⁇ 90 ⁇ m) is dispersed therein and homogenized for 2 minutes. The dispersion is frozen at -18 ° C and freeze-dried.
  • a porous, cohesive material is obtained with good mechanical strength. Observation by scanning electron microscopy (FIG. 7, longitudinal section) reveals a non-fibrillar, interconnected porous structure, the pores having a certain orientation.
  • Different granulometries of chitin-glucan are prepared according to the method of Example A5.
  • the fraction having a particle diameter of less than 63 ⁇ m, and the fractions having a diameter between 125 and 250 ⁇ m, 250 and 500 ⁇ m, 500 and 1000 ⁇ m are separated by sieving.
  • the chitosan of molecular weight 42K (molecular weight determined by capillary viscometry) and degree of acetylation of 11% is dissolved in acetic acid (1%) to form a solution of concentration equal to 2% (m / m).
  • a given weight of chitin-glucan particles of controlled particle size is added to a given volume of this solution.
  • a volume of 4 ml of suspension is homogenized by magnetic stirring for 2-3 min before being poured into a mold (diamond shape) and frozen. The sample is then placed on the tray of a lyophilizer to remove the solvent by sublimation under vacuum for 48h.
  • Cohesive porous composite materials of different compositions were prepared by varying the weight ratio of chitosan and chitin-glucan as well as the particle size of the chitin-glucan powder.
  • Composite materials in the form of foams obtained by lyophilization were characterized in terms of microstructure by scanning electron microscopy (SEM).
  • SEM scanning electron microscopy
  • the compressive strength of the foam expressed by the Young's modulus is determined using axial compression tests on an Instron 5566 traction-compression bench equipped with a low force cell. The samples were preloaded at 0.03 N, and deformed at a rate of 0.2 mm / min. The Young's modulus is determined from the initial linear region of the stress / strain curve. The density was determined gravimetrically (volume / mass of the foam). The results are reported in Table F3.1.
  • the SEM photomicrographs are those of FIG. 8.
  • the chitin-glucan particles are distributed homogeneously over the thickness of the foam, their density logically increasing with their initial proportion.
  • the particles are found here and there within the pores and often anchored in the walls of the pores themselves.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Cardiology (AREA)

Abstract

La présente invention concerne un copolymère chitine-glucane sous forme de particules micrométriques. La présente invention fournit notamment une composition comprenant un copolymère chitine-glucane sous forme de particules micrométriques pour la préparation de compositions cosmétiques, notamment dermatologique ou dermocosmétique. En particulier la présente invention concerne une composition cosmétique pour effectuer un soin du visage ou du corps comme hydrater, raffermir ou lisser la peau, et exercer un effet anti-vieillissement, y compris anti-rides. L'invention a également pour but de fournir un matériau poreux utilisable par exemple en ingénierie tissulaire ou en culture cellulaire ou utilisable comme matériau en cosmétique ou en pharmaceutique.

Description

Chitine-glucane d'extrait fongique de qranulométrie fine
L'invention concerne un copolymère chitine-glucane sous forme de poudre de granulométrie fine et contrôlée, en particulier de très fine granulométrie, utilisable notamment dans le domaine de la cosmétique, et particulièrement l'utilisation d'un copolymère entre la chitine et des beta-glucanes pour prévenir ou réduire les signes du vieillissement cutané.
L'invention concerne également un tel polymère sous forme de matériaux poreux, notamment pour son utilisation en ingénierie tissulaire.
Etat de l'art
II est connu que certains polysaccharides exercent une action hydratante pour les couches supérieures de l'épiderme, ou même permettent de prévenir ou d'atténuer certains des signes du vieillissement cutané. En particulier, les ingrédients à base de beta-glucanes, le schizophyllane, le xyloglucane, l'acide hyaluronique, les galactomannanes, la chitine sont fréquemment employés dans les produits de soin cosmétiques. Ces polysaccharides se distinguent des ingrédients de type alpha- hydroxyacide, qui agissent en desquamant l'épiderme, ce qui favorise un renouvellement cellulaire rapide mais peut altérer les couches inférieures de l'épiderme. La plupart des ingrédients anti-âge agissent sur le renouvellement des cellules de la peau ou du collagène. Or un mécanisme de renouvellement du collagène pose le problème de la compatibilité avec la législation en matière de produits cosmétiques, dont on ne peut pas revendiquer une pénétration transcutanée. Traiter les signes du vieillissement cutané va au-delà de la notion de rides et du renouvellement cellulaire, et rares sont les actifs disponibles aujourd'hui qui adressent le problème de manière globale et réellement efficace. Parmi les polysaccharides à effet « anti-âge », les beta-glucanes, issus de levures, de champignons, de céréales, ou de plantes, sont une famille de polysaccharides purs constitués d'unités D-glucose, liées entre elles par des liaisons de type bêta, les carbones étant liés variant selon l'espèce dont ils sont extraits, avec une structure plus ou moins branchée : bêta(l,3)(l,6) pour les beta-glucanes issus de la levure Saccharomyces cerβvisiae ; bêta(l,3) pour la chaîne principale (branchée en position bêta(l,6) par des chaînes courtes) du schizophyllane, issu du champignon Schizophyllum commune ; bêta(l,4) pour les beta-glucanes issus de céréales comme l'avoine, l'orge, le blé ; bêta(l,4) pour la chaîne principale (branchée en position bêta(l,6) par des chaînes courtes) pour le xyloglucane issu de plantes. La solubilité en milieu aqueux des beta-glucanes dépend de leur structure, de la longueur des chaînes macromoléculaires et de l'organisation tri-dimensionnelle des chaînes.
Les beta-glucanes sont appréciés en cosmétique pour leurs effets (qui diffèrent selon la molécule considérée) revitalisant, anti-inflammatoire, protecteur contre les radiations UV, apaisant, immunostimulant, anti-âge, anti-ride, antiacné, etc, qui conduisent à une amélioration des symptômes du vieillissement cutané ou de l'acné. Les beta-glucanes recherchés en cosmétique sont généralement hydrosolubles pour pouvoir être incorporés dans la phase aqueuse des émulsions, ce qui limite le choix en terme de molécules utilisables en cosmétique. En effet, les beta-glucanes non solubles ont des propriétés cosmétiques et dermatologiques très intéressantes, mais ne peuvent pas être incorporés aux formules cosmétiques en raison de leur forme en particules dures, irritantes, etc. Les quelques beta-glucanes hydrosolubles utilisables en cosmétique sont présentés sous la forme d'extraits ou de solutions riches en beta-glucanes.
D'autre part, des usages cosmétiques des dérivés hydrosolubles de la chitine (carboxyméthylchitine et chitosane principalement) sont connus, par exemple dans des crèmes de soin, comme agent filmogène, hydratant, améliorant l'aspect des peaux sujettes à la cellulite par exemple, ou également pour la préparation de microsphères. Cependant, la chitine à usage cosmétique et ses dérivés sont industriellement obtenus à partir de carapaces de crustacés - crevette, crabe -, les crustacés étant un des principaux responsables d'allergies. Des cas d'allergies à des crèmes contenant des dérivés de chitine ont d'ailleurs été publiés (Cleenewerck MB, Martin P, Laurent D. Allergie contact dermatitis due to a moisturizing body cream with chitin. Contact Dermatitis 31, 196, 1994 ; Pereira F, Pereira C, Lacerda MH. Contact dermatitis due to a cream containing chitin and a carbitol. Contact Dermatitis 38, 290, 1998).
A la connaissance des inventeurs, la chitine (le polymère constitué des unités N-acétyl-D-glucosamine) obtenue au départ des carapaces de crustacés ou au départ d'algues microscopiques n'est pas connue comme pouvant prévenir ou réduire les effets du vieillissement cutané. Le chitosane, qui est le polymère dérivé de la chitine, portant des charges cationiques, constitué des unités D- glucosamine/N-acétyl-D-glucosamine, ses dérivés (succinamide) et ses sels (par exemple lactate, ascorbate, glycolate, succinate) sont utilisés en cosmétique pour leurs propriétés substantîve, filmogène, hydratantes, antimîcrobienne, anti-âge, hydratant, améliorant l'aspect de la cellulite, améliorant du toucher des formules.
Les inventeurs ont déjà montré que l'on peut isoler et purifier un copolymère composé de deux types de chaînes, chitine [poly(N-acétyl-D- glucosamine)] et bêta-glucane [poly(D-glucose)] à partir de champignons. Les parois des cellules du mycélium de certains champignons, comme Aspergillus niger{ûe type Ascomycète), sont constituées des deux polysaccharides liés entre eux de manière covalente dans un réseau tridimensionnel dénommé « chitine- glucane ». Or ce copolymère chitine-glucane peut être avantageusement produit de manière hautement pure et économiquement rentable par un procédé en étapes successives, comme décrit dans le brevet EP1483299B1 (US 2005/130273 Al ou WO 03068824 Al). On obtient une poudre fine, blanche, non odorante, dont la teneur en copolymère chitine-glucane est supérieure à 90%. Cette poudre n'est soluble dans aucun solvant, ni aqueux, ni organique, ce qui a priori compromet son usage en cosmétique. Différentes applications sont décrites dans les demandes de brevets FR 05 07066 et FR 06 51415.
Des usages médicaux de compositions à base d'extraits fongiques contenant la chitine et les beta-glucanes ont été décrits auparavant, en particulier comme actifs cicatrisants de plaies. Cependant ces différentes utilisations, par exemple sous forme de pansements, ne sont a priori pas adaptées pour une formulation cosmétique.
Buts de l'invention L'invention a pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un copolymère chitine-glucane présentant une forme adaptée à une utilisation cosmétique, et en particulier en dermocosmétique ou en dermatologie, et/ou adaptée à une utilisation médicale ou pharmaceutique, et/ou adaptée à une utilisation comme complément alimentaire pour l'homme ou l'animal.
L'invention a également pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un copolymère chitine-glucane sous forme de suspension ou d'émulsion ou de dispersion, notamment utilisable dans le domaine de la cosmétique, et en particulier de la dermocosmétique ou de la dermatologie.
La présente invention a notamment pour but de fournir une composition dermocosmétique pour réaliser un soin du corps et/ou du visage, comme un soin hydratant, raffermissant, protecteur, ou anti-rides (décrit notamment par une évaluation du relief de la peau par profïlométrie) ou anti-âge. La présente invention a également pour but de résoudre les problèmes techniques mentionnés ci-dessus en fournissant une substance d'origine naturelle qui présente innocuité, tolérance cutanée et oculaire, une très bonne hypoallergénicité, tout en étant aisément disponible en grand volume, et à un coût compatible avec l'usage comme ingrédient cosmétique. La présente invention a également pour but d'optimiser une composition de complément alimentaire permettant une administration orale aisée et favorisant la biodisponibilité et les effets sur la santé du copolymère chitine- glucane.
La présente invention a également pour but de fournir une poudre de chitine-glucane permettant d'ajuster et d'optimiser ses propriétés physico- chimiques et biologiques selon l'application envisagée, comme composition dermocosmétique et dermatologique, composition de complément alimentaire, composition d'aliment fonctionnel, auxiliaire de technologie pour le traitement des boissons, composition pour des dispositifs médicaux comme par exemple des produits cicatrisants. L'invention a également pour but de fournir une substance naturelle d'origine non animale, d'excellente pureté, bien caractérisée, obtenue par un procédé de production qui garantit reproductibilité et traçabiiité.
La présente invention a également pour but de fournir une substance naturelle, de type polysaccharïde, stable en poudre et en suspension, facile à formuler, compatible avec l'ensemble des ingrédients les plus couramment employés, et qui permette la préparation de formulations cosmétique stables dont les caractéristiques sont en adéquation parfaite avec leur usage, par exemple avec une texture parfaitement homogène et dont les qualités sensorielles (viscosité, texture, toucher) sont excellentes. L'invention a pour but de proposer un actif cosmétique permettant de prévenir ou de réduire les effets du vieillissement cutané, d'hydrater la peau de manière durable, de la tonifier, et/ou de la raffermir, de lui rendre un aspect homogène et lisse, de diminuer l'état squameux, de la protéger contre les agressions extérieures comme la sécheresse et/ou pollution par les métaux lourds, de lui permettre de restaurer sa fonction barrière. L'invention a pour but de proposer également un ingrédient cosmétique ayant un pouvoir de rétention d'eau et un pouvoir viscosifiant important.
L'invention a également pour but de fournir un matériau poreux utilisable par exemple en l'ingénierie tissulaire et culture cellulaire ou utilisable comme matériau en cosmétique ou en pharmaceutique. Résumé de l'invention
Afin de résoudre les problèmes techniques mentionnés ci-dessus, les inventeurs sont partis de l'action des substances de type bêta-glucane en cosmétique qu'ils connaissaient. Cependant aucune composition à base d'un copolymère chitine-glucane n'aurait pu être a priori utilisable dans la mesure où la poudre obtenue, comme par exemple selon le procédé décrit dans la demande de brevet PCT WO 03068824, n'est pas soluble en phase aqueuse ou organique.
Les inventeurs ont cependant découvert de manière surprenante que l'on pouvait résoudre les problèmes techniques mentionnés ci-dessus en utilisant une poudre de granulométrie très fine et contrôlée d'un copolymère chitine-glucane.
Cette solution est tout à fait surprenante dans la mesure où l'homme du métier s'attendait à ce que les particules finement broyée de ce copolymère soient également insolubles et qu'elle se présenteraient de la même manière que les beta-glucanes non solubles, c'est-à-dire sous forme de particules dures et irritantes pour la peau.
Les inventeurs ont pu de manière surprenante d'une part préparer des dispersions stables de chitine-glucane, et des suspensions stables de chitine- glucane, en particulier dans l'eau sans additif, et d'autre part, préparer des émulsions stables contenant notamment des concentrations élevées en chitine- glucane.
Par «chitine-glucane», les inventeurs entendent un copolymère de chitine- glucane selon la présente invention.
En particulier l'invention concerne un polysaccharide d'origine fongique comprenant majoritairement un copolymère chitine-glucane, ledit polysaccharide ayant une granulométrie fine.
L'invention concerne également une poudre finement broyée d'un extrait fongique comprenant au moins un copolymère chitine-glucane finement broyé.
Avantageusement, les particules de granulométrie fine ont au moins 70% en poids des particules une taille inférieure à 500 microns (μm), et de préférence inférieure à 355 microns (μm). Encore de préférence au moins 50%, de préférence 60%, en poids des particules ont une taille inférieure à 250 microns (μm), et de préférence inférieure à 150 microns (μm).
On entend par « taille de particules inférieure à X microns » des particules ayant une dimension leur permettant le passage au travers d'un tamis dont la taille des mailles est de X microns.
Un mode de réalisation permet d'obtenir au moins 50% en poids des particules d'une taille inférieure à 65 mesh (environ 149 μm), et de préférence inférieure à 100 mesh (environ 230 μm). La granulométrie est avantageusement contrôlée en choisissant, notamment après tamisage ou classification, une fraction de taille particulière en fonction des besoins. Les fractions auxquelles il est fait référence dans les exemples sont inclues ici par référence dans leur généralité, notamment vis-à-vis du type de co-polymère qui peut être l'un quelconque de ceux décrits dans la présente invention.
Avantageusement, le copolymère de chitine-glucane comprend un rapport entre les unités N-acétyl-D-glucosamine de la chitine et les unités D-glucose des beta-glucanes compris entre 95:5 et 15:85 (m/m).
Avantageusement, le polysaccharide d'origine fongique comprend plus de 70 % de copolymère chitine-glucane en masse par rapport à la masse totale de l'extrait d'origine fongique, de préférence supérieure à 85 %.
Avantageusement, les enchaînements entre les unités D-glucose sont majoritairement de type bêta(l,3).
De préférence l'extrait fongique est issu du mycélium d'un champignon du type Ascomycète, et en particulier de Aspergillus niger, et/ou d'un champignon Basidiomycète, et en particulier Lentinula edodes (shiitake) et/ou Agaricus bisporus.
Avantageusement, au moins 85 % de la partie chitine du copolymère chitine-glucane sont des unités N-acétyl-D-glucosamine, et qu'au plus 15 % sont des unités D-glucosamine. On préfère que l'extrait fongique de taille de particules micrométrique soit un hydrolysat du copolymère chitine-glucane.
Avantageusement, le rapport entre la chitine et le bêta-glucane est compris entre 90:10 et 30:70 (m/m). L'invention concerne également une composition comprenant un polysaccharide ou un extrait fongique de granulométrie fine tel que défini précédemment, notamment sous forme de suspension ou d'émulsion ou dispersion.
Avantageusement, la composition est une composition cosmétique, en particulier dermocosmétique ou dermatologique.
De préférence le polysaccharide de l'extrait fongique de granulométrie fine est utilisé à une concentration comprise entre 0,01 et 10%, et de préférence entre 0,05 et 5%, en poids de la composition totale.
L'invention concerne également l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus pour exercer un soin cosmétique, de préférence dermocosmétique ou dermatologique, caractérisée en ce que le soin est choisi parmi le groupe consistant en un soin du corps ou du visage, pour améliorer, notamment de manière durable et significative l'hydratation de la peau, augmenter le pouvoir de rétention de l'eau de la peau notamment à long terme, améliorer la fonction barrière de la peau, exercer un effet anti-âge , améliorer l'aspect de la peau, améliorer l'homogénéité de la peau, notamment en la rendant plus lisse, plus homogène, plus douce, plus saine, améliorer la fermeté et la tonicité de la peau, et favoriser l'accrochage de l'épiderme au derme.
On entend par produit présentant un effet anti-âge un produit ou une composition qui permet de ralentir le vieillissement cutané, notamment par le fait d'améliorer la protection de la peau et/ou les activités de défense de la peau, de réduire les effets d'agressions extérieures, telles que les rayonnements, la sécheresse de l'air, le froid, la pollution notamment pas les métaux lourds, les agressions libérant des radicaux libres, et notamment les agressions par radiation UV, ainsi que par le fait de réduire les rides cutanée. L'invention concerne également une composition telle que définie ci- dessus pour diminuer la profondeur des rides ou ralentir ou prévenir l'apparition des rides.
Les compositions cosmétiques comprennent avantageusement de 0.1 à 2% du copolymère chitine-glucane de granulométrie fine.
L'invention concerne encore l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus comme composition de complément alimentaire de préférence pour obtenir un effet choisi parmi le groupe consistant en un effet antioxydant, hypocholestérolémiant, hypolipidémiant, de stimulation du système immunitaire, hypoglycémique, notamment dans le cas de diabète, et un effet de prévention et/ou de traitement, et/ou de lutte contre une pathologie choisie parmi le groupe consistant en la dyslipidémie, l'athérosclérose, l'obésité, d'une maladie liée à l'obésité, une maladie cardiovasculaire, le syndrome métabolique, le diabète, et l'hyperuricémie. De préférence dans cette composition de complément alimentaire, le copolymère de l'extrait fongique de granulométrie fine est utilisé comme principe actif.
L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant à titre de principe actif au moins un copolymère ou un extrait d'origine fongique, tel que défini précédemment.
L'invention concerne notamment l'utilisation en l'ingénierie tissulaire d'un matériau poreux obtenu à partir du polysaccharide ou extrait d'origine fongique selon la présente invention, et concerne donc également matériau poreux obtenu à partir du polysaccharide ou extrait d'origine fongique selon la présente invention. Ce matériau poreux peut être obtenu notamment par lyophilisation.
L'invention concerne également l'utilisation d'au moins un polysaccharide ou un extrait d'origine fongique, tel que défini précédemment comme excipient d'une composition, notamment d'une composition cosmétique, de préférence dermatologique ou dermocosmétique. L'invention concerne encore un procédé de préparation d'un extrait fongique de granulométrie fine comprenant : a) l'extraction et la purification d'un copolymère chitine-glucane à partir d'une biomasse fongique, ledit copolymère de cet extrait fongique étant insoluble dans l'eau ou un solvant organique, b) des étapes, simultanées, ou séparées indépendamment de leur ordre, de filtration, de séchage, de broyage, et de classification des particules, au départ du chitine-glucane sec ou solvaté, permettant d'obtenir des particules micrométriques dont au moins 70% en poids, de préférence 75%, et encore de préférence 80%, des particules ont une taille inférieure à 500 microns (μm), et de préférence inférieure à 355 microns (μm).
De préférence l'étape b) du procédé de préparation de l'extrait fongique de granulométrie permet d'obtenir au moins 50%, de préférence 60%, et encore de préférence 70%, en poids des particules totales obtenues, ayant une taille inférieure à 250 microns, de préférence inférieure à 125 μm.
On peut ainsi à l'étape b) mettre en œuvre une étape simultanée de filtration, de séchage, et de broyage, puis une étape séparée de classification.
L'invention concerne également le dispositif que nous appareillage pour mettre en oeuvre le procédé selon la présente invention.
Description détaillée de l'invention
Les compositions selon l'invention permettent d'obtenir des formulations avec un toucher agréable et doux, ce qui est très avantageux dans le domaine de la cosmétique notamment.
En particulier, la stabilité, la texture, la couleur, le toucher, la viscosité et la rhéologie des émulsions ou suspensions obtenues sont parfaitement adaptées à la production de crèmes de soin du visage ou du corps, y compris pour les bébés. Enfin, l'excellente tolérance cutanée {in vitro et in vivo chez l'homme) et oculaire {in vitro), ainsi que l'hypoaliergénicité {in vivo chez l'homme, selon la procédure de Maibach-Marzulli) d'un copolymère chitine-glucane ont été établies. La solution proposée par les inventeurs est d'autant plus avantageuse dans la mesure où un copolymère chitine-glucane purifié issu de sources fongiques, notamment mais pas exclusivement, de type Ascomycète est disponible en grande quantité en tant que sous-produit industriel. II est notamment préféré d'utiliser comme source fongique le mycélium à'Aspergillus niger.
Selon l'invention, Ie copolymère chitine-glucane extrait du mycélium de champignons de type Ascomycète peut être formulé aisément, bien que non hydrosoluble, notamment sous forme d'une composition cosmétique. Les inventeurs ont découvert de manière surprenante que quand le composé chitine-glucane issu des sources de champignons se présente sous la forme d'une poudre de granulométrie fine, il est tout à fait adapté à la préparation d'une composition permettant de résoudre les problèmes techniques mentionnés ci-dessus. La poudre de chitine-glucane avantageusement obtenue selon le procédé décrit dans la demande de brevet PCT WO03/068824, ou dans la demande de brevet français FR 0507066 est préparée de manière à obtenir une granulométrie fine et contrôlée notamment par des procédés de filtration, de broyage, de séchage et/ou de classification des particules. Lorsqu'une granulométrie fine est recherchée, on sélectionne un procédé pour obtenir des particules dont au moins 70% en poids, de préférence 75%, et encore de préférence 80%, des particules ont une taille inférieure à 500 microns (μm), et de préférence inférieure à 355 microns (μm).
Avantageusement, les particules ont au moins 50% en poids, de préférence 60%, et encore de préférence 70%, des particules ont une taille inférieure à 250 microns (μm), et de préférence inférieure à 150 microns (μm).
De préférence, on met en œuvre un procédé de préparation de la poudre de chitine-glucane de manière à obtenir majoritairement des particules ayant une taille inférieure à 250 microns. Avantageusement, les particules selon la présente invention sont constituées essentiellement de particules ayant une taille inférieure à 125 μm, voire inférieure à 90 μm, et notamment sont obtenues après classification pour obtenir une distribution étroite.
Il est possible de mettre en oeuvre le procédé de préparation de la poudre par l'une quelconque des techniques connues de l'homme du métier. Il est avantageux de sélectionner une technique permettant de contrôler au mieux la granulométrie et de manière bien définie.
Par granulométrie on entend la forme, plus ou moins sphérique, la taille et la distribution de taille des particules de la poudre de chitine-glucane. Ce paramètre qui caractérise l'ingrédient en poudre influence d'une part la manière dont on peut le formuler, c'est-à-dire l'incorporer dans une composition solide ou liquide comme une matrice alimentaire, une crème cosmétique, un liquide alimentaire ou cosmétique, un dispositif médical ou pharmaceutique. Selon la granulométrie obtenue, et notamment selon l'aspect ou la forme finale désirée, la composition obtenue sera plus ou moins homogène. La granulométrie et la distribution de taille des particules sont caractérisées par les techniques classiques telles que la diffraction de lumière (par exemple un système de diffraction laser Mastersizer 2000 de Malvern Instruments), la microscopie électronique à balayage suivi d'une analyse d'image, ou le tamisage sur tamis successifs suivi d'une mesure gravimétrique. Avantageusement, il a été établi de manière surprenante qu'en ajustant la distribution de taille des particules de manière à obtenir une taille de particules inférieure à 125 μm, on peut obtenir une crème homogène contenant le copolymère chitine-glucane. Cela permet notamment d'incorporer ce copolymère après formation d'une émulsion, même à une concentration élevée (par exemple 2%), et atteindre une texture parfaitement homogène et dont les qualités sensorielles (viscosité, texture, toucher) sont excellentes. On utilise donc avantageusement les la fraction des particules ayant la taille la plus faible.
Lorsque la taille des particules est plus importante, l'ingrédient n'apporte plus ces qualités sensorielles, le produit forme des grains palpables à l'étalement de la crème, et/ou la formulation n'est pas stable dans le temps, ce qui n'est pas désiré dans le cas d'une composition topique, et notamment dans une crème de soin.
Avantageusement, une poudre de granulométrie fine et contrôlée peut être utilisée pour Ia préparation d'aliments dits fonctionnels, comme des biscuits, pâtes, confiseries, barres diététiques, pains, boissons, beurres, margarines, etc..
Avantageusement, la poudre de granulométrie fine peut être mise en œuvre sous la forme d'une dispersion aqueuse, et entrer dans la composition de dispositifs médicaux comme des systèmes cicatrisant et/ou hémostatiques. De manière surprenante, le chitine-glucane de granulométrie fine peut être mise en œuvre sous la forme d'un matériau poreux cohésif, présentant une bonne stabilité mécanique, et de porosité supérieure à 80%, de préférence supérieure à 90%, par des techniques porogènes bien connues de l'homme du métier. Le matériau poreux peut être préparé soit en partant d'une dispersion aqueuse concentrée sous la forme d'une pâte de chitine-glucane seul, soit en partant d'une dispersion d'un mélange de chitine-glucane et d'autres composés insolubles et dispersables, soit en partant d'une dispersion de chitine-glucane dans une phase aqueuse dans laquelle un polymère ou une autres substance est solubilisé. La porosimétrie et les propriétés mécaniques des matériaux obtenus est fonction des paramètres de formulation, notamment de la granulométrie du chitine-glucane, de la composition du mélange, de la concentration de la dispersion de départ, ainsi que des paramètres de mise en œuvre de la dispersion.
Pour la préparation de produits dermocosmétiques et dermatologiques, le chitine-glucane de granulométrie fine, avec des particules de taille étant de préférence inférieure à 125 μm, possède avantageusement une bonne affinité à la fois avec des composantes présents en phase aqueuse et en phase huileuse, ce qui favorise le procédé d'incorporation.
La poudre de chitine-glucane de granulométrie fine peut être produite industriellement selon divers procédés, en fonction de la granulométrie visée, soit au départ du chitine-glucane en poudre sèche, soit au départ du chitine-glucane solvaté en milieu aqueux ou organique, ou encore au départ du chitine-glucane incorporé dans un milieu plus complexe comme une émulsion huile dans eau ou eau dans huile. Les inventeurs entendent par procédés de préparation de poudre de granulométrie fine tous les procédés solide-liquide et solide-solide de filtration, de séchage, de broyage, d'homogénéisation, de réduction de taille des particules, et de classification des particules, appliqués aux solides, aux solides solvatés, et aux milieux complexes solvatés tels que les émulsions, les suspensions colloïdales, etc.
Les différents procédés de séparation industriels peuvent être utilisés au départ de chitine-glucane solvaté, comme par exemple avec un sécheur conique, un filtre Nϋtsche, un filtre à plaque, un filtre à bande, un sécheur à lit fluidisé, un équipement d'atomisation, pour parvenir à un séchage complet ou partiel du chitine-glucane. Les procédés peuvent être appliqués sur le chitine-glucane solvaté tel quel ou après broyage du chîtine-glucane solvaté. Les différents procédés industriels de fragmentation pour obtenir des poudres de granulométrie fine et contrôlée peuvent être appliqués sur le produit totalement ou partiellement séché, ou sur le produit solvaté, comme par exemple les procédés de broyage à fléaux, à marteaux, à galets, à couteaux, à lames, à disque, à contre-jet d'air, et les procédés de désintégration, par exemple aux ultrasons et de micronisation. Les différents procédés industriels de séparation des poudres peuvent être employés pour diminuer la largeur de la distribution de taille ou sélectionner une taille spécifique, comme par exemple avec des équipements de tamisage et de classification dynamique et statique.
Ainsi, la présente invention concerne un procédé pour obtenir une poudre de chitine-glucane d'origine fongique insoluble dans l'eau ou un solvant organique, ayant une granulométrie fine, pour préparer les particules du copolymère chitine-glucane stables dans une solution aqueuse ou organique notamment pour préparer une suspension ou émulsion.
L'étape permettant d'obtenir la poudre de granulométrie fine est réalisée avant ou après la préparation de l'émulsion ou de la suspension ou de la dispersion. Cette suspension ou dispersion ou émulsion contient des substances généralement utilisées dans le domaine la cosmétique et permettent avantageusement la formulation d'une composition cosmétique.
Des compositions cosmétiques contiennent généralement de 0,01 à 10% en poids des compositions selon la présente invention, notamment de 0,01 à 10% en poids sous forme de suspension ou d'émulsion, par rapport au poids de la composition totale.
Les inventeurs entendent par dérivés du copolymère chitine-glucane tous les composés étant obtenus au départ de chitine-glucane, par modification physique ou chimique, selon des procédés physiques, chimiques et enzymatiques.
La présente invention concerne en particulier un polysaccharide d'origine fongique comprenant un polymère comprenant des chaînes bêta-glucane, lesdites chaînes de bêta-glucane consistant essentiellement d'enchaînements d'unités D-glucose via des liaisons en position (1,3), et de préférence comprenant au moins 80% en masse de chaînes bêta-glucane dont l'enchaînement de D-glucose est en position (1,3) par rapport au pourcentage de la masse total de bêta-glucane, notamment pour la fabrication d'une formulation cosmétique. Un copolymère chitine-glucane peut être avantageusement obtenu selon le procédé décrit dans la demande de brevet PCT WO03/068824, et la demande de brevet français FR 0507066 déposée par KitoZyme S.A. le 4 juillet 2005. Ce procédé est décrit en particulier dans la demande FR 0507066 pages 18, ligne 14 et suivantes. On utilise de préférence Aspergillus niger comme source fongique dans ce procédé.
L'enchaînement des unités D-glucose et la proportion entre les chaînes alpha(l,6)-chitine et beta-glucanes dépendent du champignon et de la souche. Par exemple, il a été montré par les inventeurs qu'un mycélium û' Aspergillus niger contient le copolymère chitine-glucane avec un rapport massique entre chitine et bêta-glucane entre 30:70 et 60:40, avec un enchaînement des unités D-glucose principalement du type bêta(l,3). Le copolymère se présente généralement sous la forme d'une poudre blanche. Il est essentiellement insoluble dans les solvants aqueux et organiques quelle que soit la température et Ie pH. Il est hygroscopique, pouvant généralement absorber environ 10 fois sa masse en eau. Cette poudre de chitine-glucane peut par exemple être produite par des procédés industriels de manière à obtenir un produit de granulométrie fine selon la présente invention.
La présente invention concerne un extrait, avantageusement purifié, de source fongique, et préférentiellement du mycélium de champignons de type Ascomycète comme û'Aspergillus niger. Les hydrolysats des extraits purifiés, c'est-à-dire les copolymères de chitine et bêta-glucane de masse moléculaire inférieure, font également partie de l'invention. La présente invention couvre également sous le terme « copolymère de chitine-glucane » ou « chitine- glucane » tous les composés obtenus au départ de chitine-glucane, par modification physique ou chimique du copolymère, selon un procédé physique, chimique ou enzymatique, dans la mesure où les propriétés du copolymère chitine-glucane restent équivalentes pour les applications envisagées, et où les copolymères sont insoluble dans l'eau et un solvant organique dans la plage de granulométrie de la présente invention, mais formulable sous forme de dispersion, d'émulsion, ou de suspension. La disponibilité et la qualité en particulier û'Aspergillus niger, qui est un co-produit de la production industrielle d'acide citrique à destination de l'industrie alimentaire et pharmaceutique, en font une matière première de choix pour les usages en cosmétique. D'autres sources fongiques contenant les polysaccharides chitine et bêta-glucane peuvent également être exploitées, comme par exemple les Basidiomycètes, notamment les champignons Lentinula edodes (shiitake) et Aga n'eus bisporus.
Les inventeurs entendent par « polysaccharides d'origine fongique » les extraits purifiés de parois cellulaires de champignons composés majoritairement de polysaccharides de chitine et de bêta-glucane, sous forme de copolymères, et leurs dérivés. Les extraits purifiés comprennent une teneur de préférence en chitine-glucane supérieure à 70% en masse par rapport à la masse totale de l'extrait, de préférence supérieur à 80%, de préférence supérieure à 85% et encore de préférence supérieure à 90%.
Les inventeurs entendent par « chitine-glucane » un copolymère pur extrait des parois cellulaires de champignons qui est constitué de chaînons des unités N-acétyl-D-glucosamine et éventuellement d'une proportion minoritaire des unités D-glucosamine liées entre elles par des enchaînements de type (1,6) de conformation alpha (chaînon chitine), et de chaînons des unités D-glucose liées entre elles par des enchaînements de type bêta(l,3), ou bêta(l,3)(l,6), ou bêta(l,3)(l,4), et préférentiellement bêta(l,3) (chaînons bêta-glucane) »). II est généralement admis que les polysaccharides des parois cellulaires des champignons sont séparés en deux groupes selon leur solubilité en milieu alcalin, et que le squelette des parois cellulaires est insoluble. Il est également connu que la fraction insoluble est constituée de polymères de chitine et de bêta- glucane, en proportions variables selon les espèces, que les unités bêta-glucane sont liées par des enchaînement de structure variable, et que la liaison entre les chaînons chitine et bêta-glucane est stable comme montré par exemple par Siestma & Wessels pour Saccharomyces cerevisiae (Zygomycete), Neurospora crassa (Ascomycete), Aspergillus nidulans (Ascomycete) et Coprinus cinereus (Basidiomycete) [Siestma JH & Wessels JG. (1981) Solubility of (l,3)-beta-D- (l,6)-beta-D-glucane in fungal walls : importance of presumed linkage between glucan and chitin. (1981) J. Gen. Microbiol. 125 :209]. Il est connu que les chaînons chitine et bêta-glucane de la fraction insoluble û' Aspergillus niger sont liés entre eux de manière covalente, comme cité par exemple par Stagg CM et Feather MS [Biochim. Biophys. (1973) Acta 320:64]. Des méthodes de détermination de la nature du lien covalent entre les chaînons chitine et bêta- glucane ont été décrites par exemple par Fontaine et al. pour Aspergillus fumigatus [Fontaine T, Simenel C, Dubreucq G, Adam O, Delepierre M, Lemoine J, Vorgias CE, Diaquin M & Latgé JP. (2000) Molecular organization of the alkali- insoluble fraction of Aspergillus fumigatus cell wall, J. Bio. Chem. 275:27594], et par Kollar et al. pour la levure Saccharomyces cerevisiae [Kollar R, Petrakovas E, Ashwell G, Robbins P & Cabib E. (1995) Architecture of the yeast cell wall, the linkage between chitin and beta(l,3)glucan, J. Biol. Chem. 270:1170].
L'extrait fongique selon la présente invention peut être obtenu à partir de paroi cellulaire de mycélium fongique de différents groupes, incluant les groupes des Zygomycetes, Basidiomycetes, Ascomycetes (dont Aspergillus niger fait partie) et Deuteromycetes et/ou un mélange de ceux-ci. Ladite source de champignons doit être choisie de manière à permettre l'extraction d'un polysaccharide tel que défini ci-dessus et ci-après. Il existe des sources de champignons qui comprennent des bêta-glucanes, mais ces unités sont solubles dans l'eau notamment, ou ne comprennent pas ou peu de chaînes de structure chitine, et ne permettent donc pas d'obtenir le polysaccharide de la présente invention. La présente invention couvre l'ensemble des champignons qui permettent d'obtenir le polymère chitine-glucane défini dans la présente demande. Le rapport entre la chitine et le bêta-glucane est compris entre 95:5 et
5:95, de préférence entre 70:30 et 10:90 (m/m). La partie chitine du copolymère chitine-glucane est composée de préférence d'au moins 85% d'unités N-acétyl-D- glucosamine et d'au plus 15% d'unités D-glucosamine, préférentiellement d'au moins 90% d'unités N-acétyl-D-glucosamine et d'au plus 10% d'unités D- glucosamine.
L'invention concerne en particulier une suspension ou une dispersion comprenant un solvant et au moins un copolymère de granulométrie fine selon la présente invention. Cette suspension ou cette dispersion est réalisée selon les méthodes classiques.
L'invention concerne également une émulsion comprenant le copolymère de granulométrie fine selon la présente invention. Cette émulsion est réalisée selon les méthodes classiques, avec soit l'eau soit l'huile comme phase continue.
Avantageusement Pémulsion est d'abord préparée, puis le copolymère chitine-glucane est ajouté. Ceci permet notamment de préparer l'émulsion dans les conditions de température habituellement appliquées industriellement pour sa préparation, sans prendre le risque de dégrader le copolymère.
Les composés selon la présente invention sont préparés notamment sous forme de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques, de préférence sous forme topique. De ce fait, pour ces compositions, l'excipient contient par exemple au moins un composé choisi parmi le groupe consistant en les conservateurs, les antioxydants, les stabilisants, les conditionneurs, les hydratants, les émollients, les émulsifiants, les tensioactifs, les épaississants, les agents matifiant, les agents de texture, les agents de brillance, les agents filmogènes, les solubilisants, les pigments, les colorants, les parfums, et les filtres solaires. Ces excipients sont de préférence choisis parmi le groupe consistant en les acides aminés et leurs dérivés, les polyglycérols, les esters, les polymères et dérivés de cellulose, les dérivés de lanoline, les phospholipides, les stabilisants à base de sucrose, les cires naturelles et synthétiques, les huiles végétales, les triglycérides, les insaponifiables, les silicones et ses dérivés, les hydrolysats de protéines, les esters lipo/hydrosolubles, les betaines, les aminoxides, les glycines, et les parabens.
Comme huiles utilisables dans la composition de l'invention, on peut citer par exemple: les huiles hydrocarbonées d'origine animale, telles que le perhydrosqualène; les huiles hydrocarbonées d'origine végétale, telles que les triglycérides liquides d'acides gras comportant de 4 à 10 atomes de carbone comme les triglycérides des acides heptanoïque ou octanoïque ou encore, par exemple les huiles de tournesol, de maïs, de soja, de courge, de pépins de raisin, de sésame, de noisette, d'abricot, de macadamia, d'arara, de ricin, d'avocat, les triglycérides des acides caprylique/caprique, l'huile de jojoba, l'huile de beurre de karité; les esters et les éthers de synthèse, notamment d'acides gras, les esters hydroxylés les esters de polyol ; et les esters du pentaérythritol ; les hydrocarbures linéaires ou ramifiés, d'origine minérale ou synthétique, tels que les huiles de paraffine, volatiles ou non, et leurs dérivés, la vaseline; les alcools gras; les huiles fluorées partiellement hydrocarbonées et/ou siliconées; les huiles de silicone comme les polyméthylsiloxanes (PDMS) volatiles ou non à chaîne siliconée linéaire ou cyclique, liquides ou pâteux à température ambiante, notamment les cyclopolydiméthylsiloxanes (cyclométhicones); les silicones phénylées; et leurs mélanges. Différents excipients sont illustrés dans les exemples de formulations.
Les autres corps gras pouvant être présents dans la phase huileuse sont par exemple les acides gras comportant de 8 à 30 atomes de carbone, comme l'acide stéarique, l'acide laurique, l'acide palmitique et l'acide oléîque; les cires comme la lanoline, la cire d'abeille, les cires de paraffine, ou les cires micro- cristallines, les cires synthétiques ; les résines de silicone; et les élastomères de silicone.
Avantageusement, les compositions précitées sont formulées sous une forme choisie parmi le groupe consistant en une solution, aqueuse ou huileuse, une crème ou un gel aqueux ou un gel huileux, notamment en pot ou en tube, notamment un gel douche, un shampoing ; un lait ; une émulsion, une microémulsion ou une nanoémulsion, notamment huile-dans-eau ou eau-dans- huile ou multiple ou siliconée ; une lotion, notamment en flacon de verre, de plastique ou en flacon doseur ou en aérosol ; une ampoule ; un savon liquide ; un pain dermatologique ; une pommade ; une mousse ; un produit anhydre, de préférence liquide, pâteux ou solide, par exemple sous forme de bâtonnet, notamment sous forme de rouge à lèvre.
L'invention concerne également une composition administrée par voie orale à un être humain ou un animal, de préférence un mammifère, pour obtenir un effet choisi parmi le groupe consistant en un effet antioxydant, hypocholestérolémiant, hypolipidémiant, de stimulation du système immunitaire, hypoglycémique, notamment dans le cas de diabète, et un effet de prévention et/ou de traitement, et/ou de lutte contre une pathologie choisie parmi le groupe consistant en la dyslipidémie, l'athérosclérose, l'obésité, une maladie liée à l'obésité, une maladie cardio-vasculaire, le syndrome métabolique, le diabète, et rhyperuricémie. Le contrôle de la granulométrie de la poudre de chitine-glucane, notamment l'obtention d'une poudre de granulométrie fine, permet avantageusement une meilleure biodisponibilité du produit.
L'invention concerne également une composition pharmaceutique ou de complément alimentaire comprenant à titre de principe actif au moins un polysaccharide ou un extrait d'origine fongique, tel que défini précédemment.
La présente invention concerne également une méthode de traitement, de prévention, ou de lutte contre une pathologie, notamment celle mentionnée ci- dessus, comprenant l'administration par voie orale d'une quantité efficace un sujet en ayant besoin d'une composition comprenant au moins un polysaccharide tel que défini dans la description ci-dessus et ci-après.
La présente invention concerne également une méthode pour diminuer la masse ou prévenir ou lutter contre Ia prise de masse d'un être humain ou un animal, et de préférence un mammifère. Cette méthode concerne notamment un soin esthétique. La présente invention concerne également une méthode de soin cosmétique, notamment du corps ou du visage ces soins son avantageusement choisi parmi les soins cités plus haut.
Ainsi, la présente invention concerne l'utilisation d'un produit de la présente invention pour la fabrication d'une composition destinée notamment à être utilisée dans l'une des méthodes décrites ci-dessus ou pour exercer l'un des effets décrits ci-dessus et ci-après.
L'homme du métier détermine aisément par les méthodes classiques les quantités efficaces des produits de l'invention à utiliser. On utilise avantageusement en cosmétique ou en pharmaceutique une quantité efficace comprise entre 0,01 et 10% du polysaccharide d'origine fongique selon la présente invention en poids de la composition totale. De préférence on utilise
0,05 à 5%, et encore de préférence de 0,1 à 2% en poids de la composition totale. Par application topique, une à deux applications par jour est avantageuse.
On utilise une quantité efficace généralement comprise entre 0,001 et 100% en poids du produit selon la présente invention par rapport au poids total de la composition à administrer sous forme de complément alimentaire. Si les produits sont administrés sous forme de gélules, granules, ou comprimés, ils peuvent être utilisés purs ou à toute autre concentration, accompagnés d'autres composants actifs ou d'excipients. S'ils sont incorporés dans des aliments, la concentration en produit est inférieure à 15%, et de préférence inférieure à 10%. Il est avantageux d'administrer entre 1 et 30 g du par jour par personne produit selon l'invention en fonction du poids de la personne.
L'invention couvre aussi a) des matériaux solides poreux cohésifs obtenus par la mise en œuvre d'extraits fongiques sous forme de particules de granulométrie fine et contrôlée et b) des matériaux solides composites poreux cohésîfs comprenant une matrice polymérique synthétique ou d'origine naturelle (animale ou végétale) au sein de laquelle sont répartis des particules d'extraits fongiques sous forme de particules de granulométrie fine et contrôlée.
Plus généralement, les matériaux poreux cohésifs de la présente invention sont obtenus par la mise en oeuvre de polymères de chitine ou de chitine- glucane sous forme de particules de granulométrie fine et contrôlée.
Plus particulièrement aussi, la présente invention couvre des matériaux composites poreux cohésifs dont la matrice est le chitosane et au sein de laquelle sont réparties des particules de chitine ou/et de chitine-glucane de granulométrie fine et contrôlée.
Un matériau « composite » au sens de la présente invention est un assemblage d'au moins deux matériaux.
Un matériau « cohésif » au sens de la présente invention est un matériau caractérisé par son aptitude à rester stable et sous la forme d'un monolithe même sous l'action de forces et de contraintes externes (compression, étirement, élongation...), par opposition au matériau friable. Par conséquent, le matériau cohésif est susceptible d'être façonné pour lui conférer une forme et une taille adaptées à son application (comme par exemple un implant de forme anatomique spécifique). Un matériau « poreux » au sens de la présente invention est un matériau caractérisé par la présence de pores dont la taille, le nombre, la morphologie, l'interconnectivité, le degré d'isotropie/anisotropie... sont ajustés et contrôlés.
L'état de l'art révèle de nombreux documents relatifs à la préparation de matériaux poreux de polymères naturels, tels que le chitosane ou des polymères synthétiques tels que le polyuréthane, le PLA(acide polylactique), PGA (acide polyglycolique), le PLGA (copolymère d'acide lactique et d'acide glycolique)... L'état de l'art révèle également quelques documents relatifs à la préparation de compositions riches en extraits fongiques contenant de la chitine, du chitosane- glucane. Aucun cependant ne fait état de Ia préparation de matériaux solides poreux cohésifs à partir de ces extraits fongiques. Par exemple le brevet RU2086247 révèle une composition obtenue au départ du mycélium de champignons inférieurs {Aspergillus nigeή et contenant un complexe chitosane- glucane en vue de préparer un système anti-brûlure. La méthode de préparation inclut une étape de lavage et de traitement alcalin directement à partir de la biomasse, suivis d'une étape de lyophilisation. Cependant le document ne fait pas état d'un produit obtenu sous la forme d'un matériau poreux. La Sacchachitin est une composition riche en chitine extraite du fruit du champignon Ganoderma tsugae, dont l'action sur la cicatrisation a été décrite par SH Su et al. (Development of fungal mycelia as skin subsitutes : effects on wound healing and fibroblasts, Biomaterials 20, 61-68, 1999 ; Fungal mycelia as the source of chitin and polysaccharides and their applications as skin subsitutes, Biomaterials 18, 1169-1174, 1997) et par Hung et al. (Cytotoxicity and immunogenicity of Sacchachitin and mechanism of action on skin wound healing, J Biomed Mater Res 56, 93-100, 2001).
JP2006273912 divulgue un matériau moulé composé de beta-glucane et de chitosane. Il ne révèle pas que ces matériaux sont poreux. De plus ils n'incluent pas dans leur composition des copolymères chitine-glucane. L'état de l'art ne révèle donc aucun document relatif à des matériaux poreux cohésifs obtenus à partir d'extraits fongiques comme par exemple la chitine ou un copolymère de chitin-glucane sous la forme de particules de granulométrie fine et contrôlée. Des matériaux poreux comprenant du chitosane et un second composé ont été largement décrits. Parmi de nombreux exemples de second composé on peut citer un polymère synthétique comme le PGA (Bïomaterials, 24 (2003), 1047-1057), ou l'acide polyacrylique (Macromolecular Bioscience, 3(10), 2003, 540-545), des polymères naturels comme la gélatine (Polymer International, 49(12), 2000, 1596-1599, CN 1097980), le collagène (WO0016817, KR2002017552, CN1406632, CN1387922, RU2254145), la cellulose ou la soie (JP2000027027), la cellulose oxydée (US2006172000) , des composés inorganiques comme l'hydroxyapathite (Journal of Biomaterial Science, Polymer édition, 13(9), 2002, 1021-1032)... US2003190346 couvre une méthode de préparation d'une éponge composite constituée de chitosane et d'hydrogel de chitine, la forme particulière de la présente invention n'étant pas envisagée. CN 1485097 couvre une méthode de préparation d'une éponge au départ de chitosane/chîtine. Ce document ne spécifie pas s'il s'agit d'un matériau composite ou des matériaux constitués soit de chitosane, soit de chitine. L'abrégé de ce document révèle que la première étape pour préparer l'éponge consiste à solubiliser le matériel de départ ce qui indique qu'il s'agit de préparer une éponge essentiellement de chitosane puisqu'il est bien connu que la chitine est insoluble, sauf dans des conditions très particulières (système diméthylacétamide-LîCI). Aucun document ne révèle un matériau composite composé de chitosane et de copolymère de chitine-glucane. En effet, il est bien connu de l'homme de l'art que les copolymères de chitine-glucane sont insolubles quel que soit le solvant. Il est également bien connu que les méthodes de préparation d'un matériau composite et en particulier un matériau composite biodégradable incluent au départ, une solubilisation et un mélange homogène des composés solubilisés et ce, avant de procéder à la phase d'élimination du solvant en vue de préparer le matériau solide. Le problème technique rencontré pour préparer un matériau solide (en particulier poreux) de chitine ou de chitine-glucane ou pour préparer un matériau composite solide (en particulier poreux) composé d'une matrice polymérique, par exemple biodégradable, comme premier composé et de chitine ou de chitin-glucane comme second composé est donc de solubiliser, en une première étape, la chitine ou le chitine-glucane en vue de son mélange avec la solution contenant le chitosane.
La présente invention apporte une solution technique à ce problème en proposant l'utilisation de chitine ou/et de copolymère de chitine-glucane de granulométrie fine et contrôlée sous la forme d'une suspension, dispersion ou émulsion susceptible d'être mélangée avec une solution du polymère biodégradable servant de matrice.
De même la présente invention apporte une solution technique à la préparation d'un solide poreux de chitine ou de chitine-glucane par l'utilisation d'une supsension, dispersion ou émulsion contenant la chitine ou le copolymère de chitine-glucane de granulométrie fine et contrôlée.
Les matériaux poreux cohésifs de la présente invention couvrent a) des matériaux poreux cohésifs préparés à partir d'extraits fongiques, préférentiellement des polymères de chitine et /ou des copolymères de chitine-glucane sous forme de particules de granulométrie fine et contrôlée et plus préférentiellement des copolymères de chitine-glucane de granulométrie fine et contrôlée. b) des matériaux composites poreux cohésifs comprenant comme matrice, encore dénommée agent dispersant, un polymère et comme second composé, encore dénommé agent dispersé, des extraits fongiques, préférentiellement des polymères de chitine ou des copolymères de chitine-glucane sous forme de particules de granulométrie fine et contrôlée. En particulier l'invention concerne encore :
Un matériau poreux comprenant au moins un extrait fongique, préférentiel lement au moins un polymère de chitine et /ou un copolymère de chitine-glucane, sous forme de particules de granulométrie inférieure à 500 microns (μm).
Avantageusement, le matériau poreux comprend un extrait fongique tel que défini précédemment.
L'invention concerne encore un procédé de préparation d'un matériau poreux caractérisé en ce qu'il comprend une étape de dispersion, ou de mise en émulsion, ou de suspension d'au moins un extrait fongique sous forme de particules de granulométrie inférieure à 500 microns dans un solvant, puis l'élimination de ce solvant et l'obtention d'un matériau poreux comprenant l'extrait fongique.
Les particules de polymères de chitine ou de copolymères de chitine- glucane utilisés pour le matériaux poreux 'a'ont une granulométrie inférieure à
250 μm, plus préférentiel lement inférieure à 90 μm et encore plus préférentiellement inférieure à 63 μm. Préférentiellement on utilise des particules de copolymères chitine-glucane ayant cette granulométrie fine et contrôlée.
L'invention concerne aussi un matériau composite poreux comprenant une matrice et un agent dispersé, ladite matrice, encore dénommée agent dispersant, étant au moins un type de polymère, et l'agent dispersé étant au moins un extrait fongique, et préférentiellement un polymère de chitine ou un copolymère de chitine-glucane, sous forme de particules de granulométrie inférieure à 500 microns (μm). Avantageusement, le matériau poreux comprend un extrait fongique tel que défini à précédemment.
Le matériau composite poreux ^'comprend des particules de chitine ou de chitine-glucane de l'invention de granulométrie inférieure à 250 μm, plus préférentiellement inférieure à 90 μm et encore plus préférentiellement inférieure à 63 μm. Préférentiellement on utilise des particules de copolymères chitine- glucane ayant cette granulométrie fine et contrôlée. L'invention couvre un procédé de préparation d'un matériau composite poreux comprenant une matrice et un agent dispersé dans la matrice, caractérisé en ce qu'il comprend (i) une étape de solubilisation d'un polymère apte à former la matrice du matériau composite poreux, (ii) une étape de dispersion, ou de mise en émulsion, ou de suspension d'au moins un extrait fongique sous forme de particules de granulométrie inférieure à 500 microns dans la solution de polymère, (iii) une étape d'élimination du solvant de la solution de polymère comprenant l'extrait fongique, (iv) l'obtention d'un matériau composite comprenant le polymère poreux formant la matrice et l'extrait fongique formant l'agent dispersé.
Le matériau poreux ou composite poreux peut former une couche ou plusieurs d'un matériau composite.
La matrice polymérique du matériau composite poreux *b' peut être d'origine naturelle, animale ou végétale (un polymère de la Matrice Extracellulaire
(MEC). En particulier les polymères d'origine naturelle (encore dénommés biopolymères) peuvent être choisis dans le groupe constitué des giycosaminoglycanes (GAG), en particulier l'acide hyaiuronique ou l'hyaluronate, le sulfate de chondroitine ou l'héparine, des collagènes, des alginates, des dextranes, des chitosanes et de leurs mélanges
On pourra aussi choisir des polymères de synthèse choisis dans la groupe constitué des polyuréthanes, des polyacrylates... ou des polymères de synthèse biodégradables, en particulier choisis dans le groupe constitué des polyesters biodégradables de synthèse tels que les homopolymères et copolymères basés sur l'acide lactique, l'acide glycolique, l'epsilon-caprolactone et la p-dioxanone ou encore tout autre polyester naturel comme ceux de la famille des polyhydroxyalcanoates comme les homo- et copolymères basés sur l'hydroxybutyrate, l'hydroxyvalérate, les polyorthoesters... ou une matrice polymérique issue de leur combinaison ou de la combinaison de polymères naturels et de polymères de synthèse . Préférentiellement la matrice est un polymère biodégradable.
Préférentiellement la matrice polymérique biodégradable est le chitosane de n'importe quelle masse moléculaire et de n'importe quel degré d'acétylation. Le rapport en masse entre le polymère de chitine ou de chitine-glucane et de chitosane (ou polymère biodégradable) est compris entre 5 :95 et 95 :5, préférentiellement entre 20 :80 et 80 :20. La composition préférée a un rapport en masse compris entre 40 :60 et 60 :40, de préférence entre 45 :55 et 55 :45, et encore de préférence d'environ 50 :50. Les matériaux poreux cohésifs de l'invention sont de n'importe quelle forme, n'importe quelle géométrie et n'importe quelle taille, préférentiellement sous la forme de membranes poreuses, supports poreux tridimensionnels tels que supports plans, mousses poreuses, de microporteurs ou billes poreuses, de fibres poreuses, de tubes poreux... Les matériaux poreux cohésifs ont une masse volumique d'au moins de
0.005 g/cm3.
Les matériaux composites poreux cohésifs présentent un module de Young (qui exprime la résistance à la compression) d'au moins de 0.05 MPa. Les propriétés mécaniques des matériaux poreux sont modulables notamment en fonction de la taille des particules de l'agent dispersé, du rapport en masse entre la matrice et l'agent dispersé et la méthode de préparation en particulier de la concentration de la solution de chitosane au départ. De façon surprenante, on a constaté que le rapport en masse d'environ 50 :50 entre chitosane et le copolymère chitine-glucane présente la meilleure résistance à la compression. Les matériaux de l'invention couvrent différentes tailles des pores et porosités totales, différentes morphologies (circulaires, allongées, fibrillaires...), différents degrés d'interconnectivité, degrés d'isotropie ou d'anisotropie des pores, différentes rugosités de la parois des pores... en fonction de la concentration de la suspension de particules de chitine ou chitine-glucane, de leur taille choisie parmi la granulométrie fine et contrôlée, du rapport en poids entre ces particules et la matrice polymère et de la méthode de préparation de ces matériaux.
Les matériaux poreux cohésifs de l'invention présentent les avantages de proposer des matériaux de chitine et chîtine-glucane facilement manipulables et adaptables, capables d'être appliqués temporairement ou de façon permanente (sous la forme de pansements, tampons, implants, patches etc...)/ dans des applications cosmétiques ou pharmaceutiques pour lesquelles l'effet bénéfique de ces composés est recherché, ou en combinaison (par exemple imprégnation, adsorption, absorption, inclusion dans les pores, ...) avec d'autres agents actifs. De même les matériaux composites poreux de l'invention présentent l'intérêt de combiner les effets bénéfiques de la matrice polymère biodégradable et de la chitine et/ou du copolymère chitine-glucane de granulométrie fine et contrôlée. De plus, les fines particules de chitine ou de chitine-glucane peuvent être ancrées dans la structure poreuse de la matrice polymère lui conférant une structure rugueuse et caractérisée par une surface spécifique plus élevée. Ces caractéristiques peuvent constituer un avantage pour l'utilisation de ce matériau dans des domaines d'application tels que la culture cellulaire ou la reconstruction tissulaire pour lesquels l'adhésion cellulaire est un enjeu important.
La méthode de préparation des matériaux poreux cohésifs 'a' et des matériaux composites poreux cohésifs λb' comporte une première étape de mise en suspension, en émulsion, ou de dispersion, de particules de chitine ou de chitine-glucane de granulométrie fine et contrôlée soit dans l'eau en vue de préparer le matériau V, soit dans une solution d'une matrice polymère en vue de préparer le matériau yb'. Dans une seconde étape, le mélange est soumis à un séchage ou élimination de solvant selon des techniques porogènes connues de l'homme de l'art. Parmi les techniques porogènes, la lyophilisation, le moussage en fluide supercritique (CO2 supercritique), l'extraction de sels porogènes, l'immersion-précipitation, l'électrospinntng, le modelage d'émulsion (solid free- forming) conviennent pour la réalisation de cette étape. Préférentiel lement, l'étape de séchage est une lyophilisation. Selon un mode particulier de réalisation de l'invention pour préparer le matériau poreux cohésif 'a', la méthode comprend une première étape (i) consistant à suspendre le polymère de chitine ou préférentiellement le copolymère de chitine-glucane de l'invention de granulométrie fine et contrôlée dans l'eau selon un rapport en masse compris entre 05 :95 et 30 :70, préférentiellement 05 :95 et 20 :80, suivie d'une homogénéisation pendant au moins 30 minutes en vue de préparer une pâte. En une seconde étape (ii), la pâte est congelée par n'importe quelle méthode de congélation, notamment en plaçant la pâte dans un congélateur à -18°C. Dans une troisième étape (iii), le mélange congelé est soumis à une lyophilisation pour conduire à un matériau poreux cohésif.
Selon un mode particulier de réalisation de l'invention pour préparer un matériau composite poreux cohésif λb', la méthode comprend une première étape (i) de mise en solution de la matrice polymère biodégradable dans un solvant et selon des conditions expérimentales permettant sa solubilisation complète. Préférentiellement, le chitosane est solubilisé à raison de 1 à 10% dans une solution d'acide dilué à une concentration comprise entre 0.5 et 5 %, préférentiellement entre 0.5 et 2%, Parmi les acides utilisables pour cette étape, les acides minéraux comme par exemple l'acide chlorhydrique, l'acide fluorhydrique, l'acide phosphonique... ou les acides organiques comme par exemple l'acide acétique, l'acide formique, l'acide lactique, l'acide glycolique, l'acide gluconique, l'acide citrique, l'acide succinique, l'acide glutamique... conviennent. En une seconde étape (ii), les particules de granulométrie fine et contrôlée de chitine ou de chitine-glucane sont dispersées dans la solution contenant la matrice polymère, homogénéisée pendant au moins 1 minute puis versée dans un moule choisi en fonction de la taille, la géométrie et les propriétés du matériau composite poreux à préparer. Les rapports en masse entre le polymère de la matrice et l'agent dispersé est compris entre 10 :90 et 90 :10. En une troisième étape (iii) le mélange est soumis à une congélation par n'importe quelle technique de congélation. En une dernière étape (iv), le mélange congelé est soumis une lyophilisation. Le matériau composite obtenu est poreux. La masse volumique, la taille et la morphologie des pores, les propriétés mécaniques, notamment de résistance à la compression du matériau, sont ajustables, selon ce mode de réalisation de l'invention, en fonction de concentration de la matrice polymère, des rapports en masse entre la matrice polymère et l'agent dispersé, la nature du solvant de la matrice, le type de moule, le volume de remplissage de ce moule, et les conditions de congélation.
Sur les figures :
La figure 1 représente les conditions d'enregistrement du spectre de résonance magnétique nucléaire du carbone 13 (13C-RMN) en phase solide d'un copolymère de chitine-glucane.
La figure 2 représente le spectre de 13C-RMN en phase solide d'un copolymère de chitine-glucane.
La figure 3 représente quatre photographies par microscopie électronique à balayage des particules de chitine-glucane (lot L26) selon la présente invention, et notamment des fractions de taille 100-200 μm (fraction 100-200), de taille
<100 μm (fraction <100), de taille 500-1000 μm (fraction 500-1000), et de taille
250-500 μm (fraction 250-500).
La figure 4 représente une photographie par microscopie électronique à balayage des particules selon la présente invention (lot L32), après séchage par un procédé d'atomisation (grossissement x 750).
La figure 5 représente un graphique de profilométrie optique, portant la hauteur des sillons (Rz) en fonction de la distance sur la peau, obtenus après 16 semaines sur 1 sujet (avant-bras gauche : crème Tl, 5 à base de chîtine- glucane ; avant-bras droit : crème TO placebo). Les graphiques montrent que les microreliefs sont significativement atténués (valeur moyenne Rz 7.0 μm avec chitine-glucane versus 9.6 μm avec le placebo) et que la peau est plus tendue.
La figure 6 représente deux photographies par microscopie électronique à balayage d'un matériau poreux de chitine-glucane. La figure 7 représente une photographie par microscopie électronique à balayage d'un matériau poreux mixte de chitïne-glucane et de chitosane (chitine- glucan/chitosane 10:90, m/m) en coupe longitudinale.
Les figures 8A-C représentent des photographies par microscopie électronique à balayage d'un matériau poreux composite de chitine-glucane et de chitosane obtenus pour trois échantillons (Figure 8A : proportion chitosane/chitine-glucane (m/m) de 25/75, Figure 8B : proportion chitosane/chitine-glucane (m/m) de 50/50 et Figure 8C : proportion chitosane/chitine-glucane (m/m) de 75/25). Pour chacun des échantillons la taille des particules de chitine-glucane est inférieure à 63 μm. Les photographies de gauche représentent une section longitudinale et celles de droite un section transversale.
Les figures 9A et 9B représentent des photographies par microscopie électronique à balayage d'un matériau poreux composite de chitine-glucane et de chitosane obtenus pour quatre échantillons obtenus avec des particules de chitine-glucane ayant une granulométrie supérieure à 250 μm
Figure 9A photo de gauche ; proportion chitosane/chitine-glucane (m/m) de 25/75 et taille des grains comprise entre 250 et 500 μm
Figure 9A photo de droite : proportion chitosane/chitine-glucane (m/m) de 25/75 et taille des grains comprise entre 500 et lOOOμm
Figure 9B photo de gauche : proportion chitosane/chitine-glucane (m/m) de 50/50 et taille des grains comprise entre 250 et 500 μm
Figure 9B photo de droite : proportion chitosane/chitine-glucane (m/m) de 50/50 et taille des grains comprise entre 500 et lOOOμm D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à l'homme de l'art suite à la lecture de la description explicative qui fait référence à des exemples qui sont donnés seulement à titre d'illustration et qui ne sauraient en aucune façon limiter la portée de l'invention.
Les exemples font partie intégrante de la présente invention et toute caractéristique apparaissant nouvelle par rapport à un état de la technique antérieure quelconque à partir de la description prise dans son ensemble, incluant les exemples, fait partie intégrante de l'invention dans sa fonction et dans sa généralité.
Ainsi, chaque exemple a une portée générale.
D'autre part, dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire, et la température est exprimée en degré Celsius sauf indication contraire, et la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire.
EXEMPLES
Le procédé d'obtention des copolymères chitine-glucane obtenus ci- dessous est décrit dans les demandes de brevets WO 03/068824 et FR 05.07066.
SERIE EXEMPLES VT REiAnFS A LA PREPARATION D'UN COPOLYMERE DE CHITINE-GLUCANE ET DE PARTICULES DE CELUI-CI DE GRANULOMETRIE VARIABLE ET CONTROLEE
EXEMPLE Al - Préparation d'un copolvmère chitine-glucane à partir du mycélium d'Aspergillus niger
Une masse de 50 kg (poids sec) de mycélium ά'Aspergillus niger humide est mise en suspension dans une solution d'acide chlorhydrique 0.5 N, puis filtrée. La matière solide est ensuite mise en suspension dans une solution d'hydroxyde de sodium 1 N, puis filtrée. La matière solide est lavée 4 fois à l'eau, puis filtré à l'aide d'un filtre-presse et séchée à l'aide dans un sécheur conique (conical dryer). Elle est ensuite mise en suspension dans l'éthanol, puis filtrée et séchée. On obtient environ 15 kg de chitine-glucane (lot L25).
Les caractéristiques moléculaires et la composition de huit lots de chitine- glucane obtenus selon ce procédé sont données dans le tableau 1. Le rapport massique chitine/glucane est calculé à partir du spectre de résonance magnétique nucléaire (RMN) du carbone 13 en phase solide enregistré dans les conditions indiquées à la figure 1 selon la méthode décrite brièvement ci-dessous. Le spectre du composé chitine-glucane (lot L28) est présenté à la figure 2. La proportion en bêta-glucane est déterminée à partir de l'aire des quatre bandes de résonance suivantes : 104 ppm (carbone 1 de la chitine et du bêta-glucane), 23 ppm (carbone CH3 de la chitine), 55 ppm (carbone 2 de la chitine) et 61 ppm (carbone 6 de la chitine et du bêta-glucane), en prenant comme référence la chitine pure. Par exemple, on peut effectuer le calcul selon la Formule 1, où I' est l'aire des signaux des carbones, et où [ ]œ indique la valeur du rapport pour le chitine-glucane analysé et [ ]c pour la chitine de référence. Cl est le carbone 1 de la chitine et du bêta-glucane et C2 est le carbone 2 de la chitine.
Glucane (mol%) = (formule 1)
Figure imgf000035_0001
Le rapport massique chitine/glucane des 8 lots de chitine-glucane du tableau 1 est en moyenne de 39:61 ± 2 (m/m).
La proportion d'unités D-glucosamine (NGIc), exprimée en % molaire de la partie chitine, peut être estimée à partir du spectre RMN, comme décrit par Heux et al. [Heux L, Brugnerotto J, Desbrières J, Versali MF & Rinaudo M. (2000) Solid state NMR for détermination of the degree of acetylation of chitin and chitosan. Biomacromolecules 1:746]. La proportion d'unités D-glucosamine est déterminée par titrage potentiométrique par l'hydroxyde de sodium, en suspension dans un excès d'acide chlorhydrique.
La qualité microbiologique du chitine-glucane (lot L26) et les résultats de recherche d'agents pathogènes sont donnés dans le tableau 2.
La distribution de taille de la poudre de chitine-glucane (lot L25) est donnée dans le tableau 3. Tableau Al.1- Caractéristiques moléculaires et composition de différents lots de copolymère chitine-glucane
Figure imgf000036_0001
* écart-type sur le résultat de 4 calculs du rapport chitine-glucane ; **LQ : limite de sensibilité de la méthode d'analyse par Ion Cou pied Plasma (5.3 ppm)
Tableau Al.2 - Qualité microbiologique d'un lot de chitine-glucane (L26)
Figure imgf000036_0002
On comprend ainsi des tableaux précédents que le copolymère selon la présente invention à un degré de pureté élevé. Tableau A1.3- Distribution de taille d'un lot de chitîne-glucane (L25)
Figure imgf000037_0001
On comprend de ce tableau que la distribution de taille des particules obtenues selon le procédé de l'exemple 1 est très large.
EXEMPLE A2 - Préparation de poudre de chitine-αlucane de αranulométrie variable par broyage
Pour réduire la granulométrie de manière contrôlée et variable, 15 kg de chitine-glucane obtenus selon l'exemple 1 (lot L25) sont broyés dans un broyeur à marteaux (Fitzmill model D, Fitzpatrick) équipé de filtres de différentes géométrie et taille de tamis de 20 à 100 mesh (références A, B, C, D au tableau 1). On obtient ainsi quatre lots de poudre de chitine-glucane dont la distribution de taille, déterminée par tamisage sur tamis calibrés et gravimétrie, est celle indiquée au tableau 1.
Tableau A2.1- Distribution de taille d'un lot de chitine-glucane obtenu par broyage à l'aide de différents types de tamis
Figure imgf000037_0002
Figure imgf000038_0001
On comprend de ce tableau que l'on obtient aisément des particules de faible taille, en dessous de 200 μm par exemple, en broyant la poudre de chitine- glucane avec un tamis fin, par exemple de 100 ou 65 mesh.
Les lots de chitine-glucane broyés avec les différents tamis sont rassemblés par fraction par tamisage sur tamis calibrés, et les poudres sont observées par microscopie électronique à balayage après métallisation au platine (figure 4). La longueur et la largeur des particules est calculée après analyse d'une centaine de particules par échantillon (tableau A2.2).
Tableau A2.2- Dimensions des fractions de chitine-glucane broyé (lot L25) observées par SEM
Figure imgf000038_0002
Figure imgf000039_0001
On comprend de ce tableau que la technique de broyage à marteau produit des particules non sphériques, ovoïdes, comme le révèle l'observation par microscopie électronique à balayage de la figure 4.
La fraction 100-200 μm du lot L25 est le produit est utilisé pour préparer la crème test (référence Tl,5) de l'exemple Cl .
EXEMPLE A3 - Préparation de poudres de chitine-Qlucane de granulométrie fine et contrôlée obtenue par atomisation de chitine-αlucane solvatée
Pour obtenir une poudre de chitine-glucane de granulométrie fine avec des particules de géométrie sphérique, une pâte contenant 0,15 kg de chitine- glucane (lot L25) dans 3,75 litres d'eau est préparée à l'aide d'un mixeur. La pâte est séchée par atomisation à une température de 2000C, On obtient 0,15 kg d'une poudre dont la distribution de taille cumulée est celle donnée au tableau A3.1. La photographie de la figure 5 représente les particules observées par microscopie électronique à balayage.
Tableau A3.1 - Distribution de taille d'un lot de chitine-glucane (L25) après séchage par atomisation
Figure imgf000039_0002
Figure imgf000040_0001
On comprend de ce résultat que la technique d'atomisation du chitine- glucane solvaté permet d'obtenir majoritairement une taille de particules fine et homogène, 73% des particules ayant un diamètre inférieur à 125 μm.
EXEMPLE A4 - Préparation de poudres de chitine-αlucane de pranulométrie fine et contrôlée obtenue par séchage de chitine-glucane solvaté dans un filtre Nϋtsche
Pour obtenir une poudre de chitine-glucane fine, une pâte contenant
50 kg de chitine-glucane solvaté dans l'éthanol est séchée dans un filtre Nϋtsche à une température de 600C pendant 12 heures. On obtient 50 kg d'une poudre de chitine-glucane (lot L16) dont la distribution de taille cumulée est celle donnée au tableau A4.1. La masse volumique tapée (ou tassée) de la poudre de chitine- glucane ainsi obtenue, déterminée selon la méthode de la Pharmacopée Européenne 2.9.15, est de 0.71 g/cm3.
Tableau A4.1- Distribution de taille d'un lot de chitine-glucane après séchage (lot L16)
Figure imgf000040_0002
On comprend de ce résultat que la technique de séchage du chitine- glucane par filtre Nϋtsche à partir du chitine-glucane solvaté dans l'éthanol permet d'obtenir majoritairement une taille de particules fine et homogène, avec 60% des particules ayant un diamètre inférieur à 125 μm.
On fractionne par tamisage la poudre obtenue pour en sélectionner les particules de taille inférieure à 90 μm. Cette fraction est utilisée pour la préparation des formulations des exemples 14 à 20. Cette fraction inférieure à 90 μm observée par microscopie électronique à balayage révèle une taille moyenne déterminée par analyse d'image de 43 ± 18 μm. La masse volumique tapée de la fraction de taille inférieure à 90 μm, déterminée selon la méthode de la Pharmacopée Européenne 2.9.15, est de 0.61 g/cm3.
10
EXEMPLE A5 : Préparation de poudre de chitine-olucane de pranulométrie inférieure à 125 υm par broyage et tamisage
Pour obtenir une poudre de granulométrie inférieure à 125 μm, un lot de
15 chitine-glucane [L07073CG] séché est broyé dans un broyeur à disques, puis tamisé sur un tamis calibré d'ouverture de maille égale à 125 μm (ou 120 mesh) introduit dans une tamiseuse industrielle. La dispersion granulométrique obtenue après chaque cycle de broyage est donnée dans le tableau A5.1.
20 Tableau A5.1— Dispersion granulométrique de la poudre de chitine- glucane avant broyage
Figure imgf000041_0001
Figure imgf000042_0001
On comprend grâce à ces tableaux l'importance et l'efficacité de l'étape de broyage et tamisage pour augmenter le rendement d'obtention des particules. Une proportion nettement plus élevée de poudre de granulométrie inférieure à 125 μm est obtenue après le premier broyage. Cette proportion est encore augmentée après un second broyage. Cet exemple montre une proportion élevée (plus de 50% m/m) de particules ayant une granulométrie inférieure à 90 μm, et même une proportion importante de particules ayant une granulométrie inférieure à 50 μm (plus de 25% m/m).
10
SERIE D'EXEMPLES B : Exemples de préparation de CREMES SIMPLES A BASE DE CHUINE-GLUCANE destinées aux études de tolérance et résultats des études de tolérance au chitine-qlucane
15
Ces exemples ont notamment pour but de montrer l'innocuité d'un copolymère de chitine-glucane sous la forme de particules (et ce, quelles que soient leurs tailles). Ces compositions simples se limitent à être un support d'étalement du copolymère de chitine-glucane sur la peau en vue de l'étude de
20 tolérance.
EXEMPLE Bl- Préparation d'une crème simple à base de chitin-glucane destinées aux études de tolérance
Une crème de type émulsion a été préparée à base de chitine-glucane (lot L31),
25 ce dernier étant incorporé dans la phase aqueuse, le pâte obtenue étant homogénéisée pendant environ Ih à l'aide d'un broyeur à couteaux (Ultraturax,
10 000 tr/min.) : une émulsion simple contenant le chitine-glucane en concentration variable de 0 à 2,5% (tableau Bl-I). Une formule placebo (référence CO) a été préparée dans les mêmes conditions sans chitine-glucane.
Tableau Bl.1- Composition des crèmes cosmétiques simples à base de chitine- glucane à une concentration de X% (références CX)
Figure imgf000043_0001
On prépare ainsi CO, C0,5, Cl ,0, Cl,5, C2,0 et C2,5.
EXEMPLE B2 (Etude de la tolérance cutanée et du pouvoir hydratant d'une crème simple à base de chitine-qlucane en concentration variable
Protocole- Une série de 4 crèmes de type émulsion huile dans eau, contenant une concentration en chitine-glucane de 0.5 à 2%, dont la composition est donnée à l'exemple Bl, a été testée par application sur l'avant-bras de 13 volontaires, âgés de 46 ans en moyenne (de 32 à 61 ans), dont la peau est sensible au niveau de ce site. Les crèmes sont comparées à une crème placebo sans chitine-glucane (référence CO). Les produits ont été appliqués 2 fois par jour sur des zones délimitées sur chaque avant-bras (3 zones de 6,25 cm2). Trois types de mesures biométrologiques ont été effectué toutes les 2 semaines pendant 6 semaines afin de rechercher la tolérance et l'efficacité des produits. L'examen clinique initial n'a rien révélé d'anormal chez aucun des sujets. Les évaluations ont été réalisées le matin, en respectant un intervalle d'au moins 10 heures après la dernière application des produits. Mesures biométrologiques- Un éventuel érythème, signe d'irritation, a été recherché par cornéométrie, par la mesure du paramètre a* donné par la colorimétrie en réflectance évaluée selon les normes CIE L*a*b* (Chroma Meter® CR200 Minolta). Une altération éventuelle de la fonction barrière a été recherchée par la mesure de la perte insensible en eau (PIE) en g/m2/hr (Tewameter®, C+K Electronic). La PIE est de 5 à 7 g/m2/hr pour une peau normale, et de 15 à 20 g/m2/hr pour une peau sèche. La dynamique de l'imprégnation en eau de la couche cornée sous occlusion a été mesurée. Le « rate of water accumulation » (RWA) ou taux d'accumulation en eau a été évalué sur une période de 30 secondes (RWA 30) par le rapport entre la différence entre les valeurs à T30s et à TOs et la valeur à TOs. Plus la valeur est élevée, plus la couche cornée est sèche et perméable à l'eau, laissant fuir sans la capturer l'équivalent de la PIE.
Statistiques- A chaque temps d'évaluation, la comparaison inter-produit a été réalisée par le test non paramétrique de Friedman suivi du test de Dunn. Pour chaque produit, la comparaison au cours du temps a été réalisée selon les mêmes modalités. Pour chaque paramètre, des différences significatives entre les valeurs obtenues aux différents temps ont été recherchées par le test apparié non paramétrique de Friedman suivi du test de Dunn.
Résultats- Les valeurs de a*, PIE et RWA30, mesurées au moins 10 heures après application des 5 crèmes aux temps 0, 2, 4, et 6 semaines sont consignées dans le tableau B2.1 . Jusqu'à la concentration maximale de chitine- glucan de 2.0% étudiée, aucun signe d'érythème, d'irritation ou d'altération de la barrière cutanée n'a été observé pendant toute la période de 6 semaines, comme démontré par les valeurs de a* et de PIE qui n'augmentent pas. Il a au contraire été mis en évidence que le taux d'accumulation en eau à la surface coméenne sous occlusion (RWA30) est significativement plus faible après application des crèmes à base de chitine-glucane, ce qui indique une meilleure capacité de la peau à retenir l'eau à la surface. Cet effet est observé dès la deuxième semaine d'application pour les concentrations de 1.5 et 2.0%, et dès la quatrième semaine pour les concentrations de 0.5 et 1.0%.
Tableau B2.1- Résultats de colorimétrie en réflectance (a*), perte insensible en eau (PIE) et dynamique de l'imprégnation en eau (RWA30, « rate of water accumulation » sur 30 secondes)
Temps Référence a* pIE RWA30 (semaine) de Ia g/m2/hr crème
Semaine 0 CO 5.36±0.60 5.52±0.72 1.05±0.48 (placebo)
C0,5 5.39±0.62 5.50±0.60 l.ll±0.49
Cl,0 5.39±0.60 5.49±0.70 1.15±0.46
Cl,5 5.42±0.55 5.41±0.66 1.14±0.50
C2,0 5.38±0.56 5.49±0.62 1.16±0.49
Semaine 2 CO 5.4±0.5 i 5.45±0.66 0.96±0.48 1 (placebo)
C0,5 5.4±0.5 1 5.42±0.69 1.01±0.53 x
Cl7O 5.4±0.4 * 5.42±0.63 0.88±0.46
Cl,5 5.3±0.5 1 5.36±0.56 0.74±0.47 2
C2,0 5.1±0.42 5.25±0.60 0.65±0.42 2
Semaine 4 CO 5.47±0.49 * 5.65±1.05 0.91±0.42 1 (placebo)
C0,5 5.49±0.41 * 5.58±0.86 0.83±0.46
Cl,0 5.42±0.38 1 5.57±0.88 0.70±0.39 2
Cl,5 5.24±0.31 2 5.53±0.85 0.62±0.36 2
C2,0 5.20±0.31 2 5.42±0.96 0.57±0.38 2
Semaine 6 CO 5.42±0.67 1 5.48±0.76 1 0.83±0.36 1 (placebo)
C0,5 5.39±0.55 1 5.47±0.68 1 0.76±0.42 1
Cl,0 5.38±0.54 1 5.38±0.71 0.68±0.35 1
Cl,5 5.32±0.53 1 4.98±1.45 2 0.56±0.35 2
C2,0 5.18±0.49 2 5.21±0.49 2 0.46±0.34 2 1(2 les valeurs portant un chiffre différent en exposant sont significativement différentes (p<0.02) l'une de l'autre, au sein d'une série de mesure au même temps.
EXEMPLE B3 Etude de la tolérance par cornéoxénométrie sur couche cornée in vitro de crèmes simples à base de chitine-qlucane en concentration variable
Protocole- Des biopsies de surface au cyanoacrylate ont été prélevées au niveau des avant-bras de 15 volontaires sains pour prélever la couche cornée. Les crèmes contenant le chitine-glucane en concentration variable de 0 à 2% sont celles de l'exemple 5 (de 0,5 à 2,5%). Elles ont été diluée par de l'eau à 50:50 (v/v) afin de pouvoir garantir un contact intime entre les produits et la couche cornée. Les solutions ont été déposées pendant 2 heures sur les prélèvements de couche cornée. A l'issue de ce contact, les échantillons ont été abondamment rincés à l'eau. Après séchage, ils ont été colorés pendant 1 min par une solution alcoolique de fuschine basique et de bleu de toluidine. Après rinçage à l'eau et séchage, la couleur de chaque échantillon a été mesurée par colorimétrie en réflectance pour le mode L* et Chroma C*. La différence en L* et C* correspond à l'indice colorimétrique de douceur (ICD). Un ICD supérieur à 40 indique un produit très doux pour la peau.
Résultats- Les valeurs d'ICD calculées pour les 5 crèmes sont consignées dans le tableau B3.1 . Supérieures à 70 quelle que soit la concentration en chitine-glucane dans la formule appliquée, elles reflètent l'excellente tolérance des 6 produits.
Tableau B3.1- Indice colorimétrique de douceur (ICD = L*-C*) de la couche cornée après 2 heures de contact avec les solutions contenant les crèmes à base de chitine-glucane diluées par 2
Figure imgf000047_0001
Figure imgf000048_0001
EXEMPLE B4 - Evaluation clinique du potentiel irritant et sensibilisant du chitine-glucane
L'évaluation clinique du potentiel sensibilisant et de l'hypoallergénicité du chitine-glucane est effectuée selon le protocole de Maibach-Marzulli, sur 50 volontaires à peau normale (37 ± 2 ans), pendant 6 semaines. Une pâte de concentration 10% est préparée en dispersant le chitine-glucane (L25) dans l'eau. La pâte est appliquée sur la peau à l'aide d'un patch occlusif de type Finn Chamber®. Les signes éventuels d'érythème, d'cedème, de sécheresse et l'apparition de vésicules sont observés, pour caractériser le potentiel irritant (phase d'induction) et le potentiel sensibilisant du produit (phase de challenge). Au vu de l'ensemble des observations, le chitine-glucane est considéré comme non-irritant et non-sensibîlisant. Il peut donc porter la revendication « hypoallergénique ».
EXEMPLE B5 - Irritation primaire cutanée du chitine-qlucane, étude in vivo sur volontaires
L'évaluation de l'irritation primaire du chitine-glucane sur la peau est réalisée en appliquant le chitine-glucane (L25) sous la forme d'une pâte aqueuse à 10% (comme dans l'exemple B4), appliqué sur la peau dans un patch occlusif de type Finn Chamber®, pendant 24 heures. L'étude est réalisée sur 10 sujets. Les observations visant à détecter les signes d'érythème, d'cedème et les modifications de la structure de la peau sont effectuées 30 minutes et 24 heures après le détachement du patche, sous contrôle dermatologique. L'ensemble des résultats de l'étude indique que le chitine-glucane (dispersé à 10% dans l'eau) peut être classé non irritant pour la peau.
EXEMPLE B6 - Irritation oculaire du chitine-qlucane (in vitro, méthode HET- CAM)
L'évaluation de l'irritation oculaire du chitine-glucane (L25) est effectuée par le test du HET-CAM sur la membrane chorioallantoïdienne d'ceufs de poule embryonnés (hen's egg test chorio-allantoic membrane), selon Luepke et al. [Fd Chem Toxic 23, 287, 1985], reconnu officiellement comme alternative à l'expérimentation animale (JO du 26/12/1996). Le chitine-glucane dispersé à 5% dans l'eau est déposé à la surface de la membrane et mis en contact pendant 20 secondes. Le test est répété sur quatre œufs. Le chitine-glucane à 5% obtient le score le plus faible, le classant comme pratiquement non irritant pour la membrane chorioallantoïdienne de l'œuf de poule.
SERIE D'EXEMPLES C : PREPARAΗON DE SUSPENSIONS, DISPERSIONS, EMULSIONS à base de Chitine-Glucane de granulométrie fine et contrôlée
EXEMPLE Cl - Crème de jour à base de chitine-qlucane, destinées à l'étude des propriétés sur volontaires âgés
Tableau Cl.l- Composition des crèmes test placebo (référence TO) et à base de chitine-glucane (lot L25) à une concentration de 1,5% (référence Tl, 5)
Figure imgf000049_0001
Figure imgf000050_0001
Figure imgf000050_0002
Figure imgf000051_0001
Procédure de préparation de Ia crème test (référence Tl,5)
Les ingrédients de la phase A sont mélangés à 800C, puis les ingrédients de la phase B sont mélangés à 75°C. La phase B est ajoutée à la phase A, et le mélange est homogénéisé avec un mixeur, puis laissé à refroidir. Les ingrédients C et S sont enfin ajoutés à 400C.
Tableau C1.2- Caractéristiques des crèmes TO et Tl,5
Figure imgf000052_0001
EXEMPLE C2 - Influence de la αranulométrie du chitine-αlucane sur la préparation et les caractéristiques sensorielles de crèmes cosmétiques à base de chitine-glucane contenant du chitine-glucane de granulométrie variable
Des crèmes de jour contenant différents lots de chitine-glucane de granulométrie variable, à la concentration 1.5%, ont été préparées selon le même protocole que celui de l'exemple Cl : un lot non broyé non tamisé (L25), et les 3 lots L25 broyés et fractionnés de l'exemple A2. La facilité de formulation et les caractéristiques des crèmes obtenues sont celles du tableau C2.1.
Tableau C2.1 - Caractéristiques des crèmes préparées avec les poudres de chitine-glucane (L25) de différentes granulométries ; Les aspects sensoriels (visuel et toucher) sont classés de 1 à 5, le score 5 correspondant aux meilleures impressions sensorielles. La facilité de formulation est classée de 0 à 5, le score 1 correspondant à la plus grande facilité de formulation.
Figure imgf000052_0002
Figure imgf000053_0001
On comprend aisément de ce tableau que plus la taille des particules est fine, plus il est facile d'incorporer le chitine-glucane dans une crème cosmétique et meilleures sont les impressions sensorielles. On voit également que l'incorporation du chitine-glucane finement broyé, en particulier à partir de la fraction 50-90 μm, permet de viscosifier de manière importante la crème, ce qui est très avantageux pour le formulateur.
EXEMPLE C3 - Influence de la αranulométrie de la poudre de chitine-αlucane sur la préparation et les caractéristiques d'un baume à lèyres
Une formule de baume à lèvres est préparée avec quatre granulométries différentes de la poudre de chitine-glucane et les ingrédients du tableau C3.1. Les poudres de granulométrie inférieure à 125, 90, 50 et 30 μm sont produites selon la méthode de l'exemple A5, à une concentration de 1,5%. La fraction de granulométrie de diamètre inférieur à 30 μm est obtenue après une étape de micronisation supplémentaire à l'aide d'un broyeur à jet d'air.
Tableau C3.1
Figure imgf000054_0001
Protocole- Les ingrédients de la phase A sont mélangés à 600C, puis le mélange est refroidi à 45°C. Les ingrédients de la phase B sont mélangés à la phase A et le mélange est agité 2-3 minutes. Le mélange est inséré dans le conditionnement final immédiatement, le point de solidification étant de 400C environ. Les caractéristiques sensorielles des baumes à lèvres obtenues sont celles du tableau C3.2.
Tableau C3.2- Caractéristiques sensorielles des baumes à lèvres en fonction de la granulométrie du chitine-glucane
Figure imgf000054_0002
Figure imgf000055_0001
*les aspects sensoriels (visuel et toucher) sont classés de 1 à 6, le score 6 correspondant aux meilleures impressions sensorielles.
On voit de cet exemple que pour pouvoir obtenir un baume à lèvres de qualité professionnelle, d'aspect homogène, avec un toucher sur les lèvres agréable, il faut utiliser une poudre de chitine-glucane dont le diamètre est inférieur à 30 μm. Avec les poudres de diamètre supérieur à 30 μm, le baume à lèvres paraît inhomogène, les particules de chitine-glucane sont visibles et perçues au toucher.
EXEMPLE C4 - Préparation d'une émulsion de protection solaire
Une émulsion de protection solaire de type émulsion « eau dans huile » est préparée avec le chitine-glucane (1,5%) et les ingrédients du tableau C4.1. Des poudres de chitine-glucane de trois granulométries différentes préparées selon l'exemple A5 ont été utilisées : <125 μm, <90 μm et <50 μm.
Tableau C4.1
Figure imgf000055_0002
Figure imgf000056_0001
Tableau C4.2- Caractéristiques des émulsions de protection solaire en fonction de la granulométrie du chitine-glucane
Figure imgf000056_0002
Figure imgf000057_0001
*les aspects sensoriels (visuel et toucher) sont classés de 1 à 5, le score 5 correspondant aux meilleures impressions sensorielles. La facilité de formulation est classée de 0 à 5, le score 5 correspondant à la plus grande facilité de formulation.
On voit de cet exemple que pour une formulation de type émulsion eau dans huile comme cette émulsion de protection solaire, il est préférable d'utiliser une poudre de chitine-glucane de diamètre inférieur à 90 μm, pour garantir un aspect visuel conforme aux exigences des fabricants. Selon d'autres essais, un copolymère possédant des particules ayant diamètre inférieur à 125 μm est approprié aux émulsions huile dans eau.
EXEMPLE C5 - Préparation d'une solution tonique
Une solution tonique aqueuse est préparée avec le chitine-glucane (1,5%) et les ingrédients du tableau C5.1. Des poudres de chitine-glucane de deux granulométries différentes ont été utilisées : <30 μm et <10 μm. Les poudres sont préparées comme à l'exemple C3.
Tableau C5.1
Figure imgf000058_0001
Protocole- Mélanger les ingrédients de la phase A dans l'ordre. Ajouter l'eau lentement. Ajuster le pH à 5-6 avec B, ajouter le chitine-glucane et mélanger pendant quelques minutes.
Tableau C5.2- Caractéristiques de la solution tonique en fonction de la granulométrie du chitine-glucane
Figure imgf000058_0002
*la facilité de formulation les aspects sensoriels (visuel et toucher) sont classés de 1 à 5, le score 5 correspondant aux meilleures impressions sensorielles. La facilité de formulation est classée de 0 à 5, le score 5 correspondant à la plus grande facilité de formulation. On voit de cet exemple que pour préparer une solution tonique d'apparence acceptable et pour que les particules de chitine-glucane restent en suspension stable, il faut que le diamètre des particules soit inférieur à 10 μm.
EXEMPLE C6 - Préparation d'une crème de nuit contenant des ingrédients certi fiables par le BDIH
Une crème de nuit de type émulsion « eau dans huile » est préparé avec le chitine-glucane (1,5%) et les ingrédients du tableau C6.1. Ces ingrédients répondent tous aux critères de certification de l'association fédérale des entreprises commerciales et industrielles allemandes pour les médicaments, les produits diététiques, les compléments alimentaires et les soins corporels (BDIH). La crème peut obtenir la marque BDIH indiquant qu'elle a été contrôlée par cette association.
Des poudres de chitine-glucane de trois granulométries différentes préparées selon l'exemple C3 ont été utilisées : <125 μm, <90 μm et <50 μm.
Tableau C6.1
Figure imgf000059_0001
Figure imgf000060_0001
Tableau C6.2- Caractéristiques des crèmes de nuit en fonction de la granulométrie du chitine-giucane
Figure imgf000060_0002
*les aspects sensoriels (visuel et toucher) sont classés de 1 à 5, le score 5 correspondant aux meilleures impressions sensorielles. La facilité de formulation est classée de 0 à 5, le score 5 correspondant à la plus grande facilité de formulation.
On voit de cet exemple que pour formuler un soin de type émulsion eau dans huile comme cette crème de nuit, il est préférable d'utiliser une poudre de chitine-giucane de diamètre inférieur à 90 μm pour garantir un aspect visuel conforme aux exigences des fabricants.
EXEMPLE C7 - Préparation de formules de soin de type émulsion « eau dans silicone »
Deux formules de soin de type émulsion « eau dans silicone » sont préparées avec une concentration de chitine-giucane de 1,5% et les ingrédients des tableaux C7. la et C7. Ib.
Tableau C7.1a- Ingrédients de la formule 1
Figure imgf000060_0003
Figure imgf000061_0001
Protocole- Les ingrédients de la phase A sont mélangés à une température de 50-600C. Les ingrédients de la phase B sont ajoutés à la phase A et le mélange est homogénéisé. C est ajouté sous agitation, et le mélange est homogénéisé jusqu'à incorporation complète. D est ajouté et le mélange est homogénéisé jusqu'à incorporation complète. EXEMPLE C8- Formulation d'un soin de jour
On peut par exemple préparer une formulation soin de jour contenant 1,5% de chitine-glucane selon la formulation décrite à Cl.
EXEMPLE C9- Formulation d'un lait de soin pour le corps
Deux formules de lait de soin pour le corps, sans chitine-glucane (a) et avec chitine-glucane (b), sont décrites ci-dessous.
Figure imgf000062_0001
Figure imgf000063_0001
Protocole- Les ingrédients de la phase A sont mélangés. Les ingrédients de la phase B sont mélangés. La phase B est ajoutée à la phase A, et le mélange est homogénéisé pendant 10 minutes à 400 tr/min. La poudre C est ajoutée au mélange B/A et le mélange est homogénéisé à 400 tr/min pendant 1 heure. Le pH est ajusté entre 4.8 et 5.4 avec la phase D.
EXEMPLE ClO- Formulation d'une crème raffermissante pour le buste
On peut par exemple préparer une crème raffermissante pour le buste contenant 1,5% de chitine-glucane selon la formulation décrite ci-dessous.
Figure imgf000063_0002
Figure imgf000064_0001
Figure imgf000065_0001
Procédure- Les ingrédients de la phase A sont mélangés à 800C, puis les ingrédients de la phase B sont mélangés à 85°C. La phase B est ajoutée à la phase A, et le mélange est homogénéisé pendant 5 minutes à 10000 tours/minute, puis laissé à refroidir à 400C. Les ingrédients des phases C et D sont ajoutés dans l'émulsion sous agitation.
EXEMPLE CIl - Formulation d'un lait de soin pour bébé
On peut par exemple préparer un lait de soin pour bébé contenant 1,5% de chitine-glucane selon la formulation décrite ci-dessous.
Figure imgf000065_0002
Figure imgf000066_0001
Procédure- Les ingrédients de la phase A sont mélangés à 75°C, puis les ingrédients de la phase B sont mélangés à 800C. La phase A est ajoutée à la phase B, et le mélange est homogénéisé pendant 3 minutes à 10000 rpm, puis laissé à refroidir à 4O0C. Les ingrédients des phases C et D sont ajoutés dans l'émulsion sous agitation, puis le mélange est homogénéisé pendant 1 minute à 10000 tours/minute. La poudre de chitine-glucane (E) est ajoutée et l'ensemble est agité pendant 60 minutes (pour une quantité finale de 200 g).
EXEMPLE C12- Formulation d'une crème pour les mains
On peut par exemple préparer une crème pour les mains contenant 1,5% de chitine-glucane selon la formulation décrite ci-dessous.
Figure imgf000066_0002
Figure imgf000067_0001
Figure imgf000067_0002
Protocole- Les ingrédients de la phase A sont mélangés à 65°C, puis les ingrédients de la phase B sont mélangés à 65°C. La phase A est ajoutée à la phase B, et le mélange est homogénéisé pendant 3 minutes à 10000 tours/minute, puis laissé à refroidir à 4O0C. Les ingrédients C sont ajoutés dans rémulsion, et le mélange est refroidit, puis mélanger au moins 30 minutes. EXEMPLE C13- Formulation d'une lotion anti-acné
On peut par exemple préparer une lotion anti-acné contenant 1,5% de chitine-glucane selon la formulation décrite ci-dessous.
Figure imgf000068_0001
Procédure
Les ingrédients de la phase A sont mélangés. Les ingrédients de la phase B sont mélangés. La phase A est ajoutée à la phase B, et le mélange est homogénéisé pendant 3 minutes à 10000 tours/minute (pour une quantité finale de 200 g).
EXEMPLE C14 - Formulation d'un soin anti-psoriasis
On peut par exemple préparer un soin anti-psoriasis contenant 1,5% de chitine- glucane selon la formulation décrite ci-dessous.
Figure imgf000069_0001
Figure imgf000070_0001
Procédure- Les ingrédients de la phase A sont mélangés. Les ingrédients de la phase C sont mélangés, et la phase C est portée à 75°C. La phase C est ajoutée à la phase A sous agitation, et le mélange est homogénéisé pendant 3 minutes à 10000 tours/minute, puis refroidi à 400C. Les ingrédients de la phase B sont mélangés, puis la phase B est ajoutée à l'émulsion C/A. Le mélange est homogénéisé pendant 1 minute à 10000 tours/minute (pour une quantité finale de 400 g).
SERIE D'EXEMPLES 'D'. EFFETS DE LA' PPLICAΗON REGULIERE DE CREMES COSMETIQUES A BASE DE CHUINE-GLUCAAiE SUR LES CARACTERISΗQUES DE LA PEAU
EXEMPLE Dl- Etude des effets de l'application quotidienne d'une crème de jour à base de chitine-αlucane de concentration 1,5% pendant 4 mois sur les paramètres biométriques de la peau de sujets âgés
Cet exemple illustre les effets de la crème décrite à l'exemple Cl, qui contient 1,5% de chitine-glucane (référence Tl,5) sur différentes caractéristiques de la peau, en particulier dans le cadre du vieillissement cutané, la crème et son placebo étant appliqués sur l'avant-bras de sujets âgés pendant une période de 4 mois. La crème placebo étant une formulation elle-même déjà très hydratante, l'étude met bien les effets du chitine-glucane broyé en évidence. Protocole- L'étude a porté sur 20 volontaires masculins, âgés de 58 ± 4 ans, qui ont appliqué en aveugle la crème à base de chïtine-glucane (Tl, 5) et la crème placebo, chacune sur un avant-bras, à raison de 2 fois par jour pendant 4 mois. Cinq types d'examens cliniques et biométrologiques ont été effectués mensuellement. A chaque temps d'évaluation, la comparaison inter-produit a été réalisée par le test non paramétrique de Friedman, suivi du test de Dunn. Pour chaque produit, la comparaison au cours du temps a été réalisée selon les mêmes modalités. Pour chaque paramètre, les différences significatives entre les valeurs obtenues aux différents temps ont été recherchées par le test apparié non paramétrique de Friedman suivi du test de Dunn (valeur p). Résultats-
1-Evaluation de la structure de la surface de la peau rêche par squamométrie X- La squamométrie X consiste à prélever la surface de la couche cornée par un disque transparent auto-adhésif appliqué pendant une dizaine de secondes sous une pression de 110 g/cm2 assurée par un dynamomètre. Le prélèvement de couche cornée est coloré par une solution de bleu de toluidine et de fuschine basique. La couleur définie par le Chroma C* mesuré en colorimétrie par réflectance (Chroma Meter Minolta) évalue l'état de xérose. Une peau « normale », lisse et bien hydratée, a un indice squamométrique C* d'environ 5 à 7. Plus la valeur est élevée, plus la couche cornée est épaisse, et la peau rugueuse et sèche.
A l'initiation de l'étude (MO), les deux sites devant recevoir les formulations à tester avaient des valeurs d'indice de squamométrie équivalentes. Les valeurs du Chroma C* obtenues ensuite sont celles du tableau Dl.1. Pour la formulation TO, une diminution significative a été observée après un mois (Ml) de traitement (p < 0,05), ainsi que les mois suivants (p < 0,001). Pour la formulation Tl,5, l'amélioration était très significative et était présente dès le deuxième mois (M2) de traitement (p < 0,001). Elle l'était également entre le premier et le troisième mois (M3) (p < 0,01), et le premier et le quatrième mois (M4) (p < 0,001). La comparaison entre l'efficacité des deux formulations a révélé une nette supériorité de Tl,5 dès la fin du premier mois de traitement et pendant les mois suivants (p < 0,001). Tableau Dl.l- Indice squamométrique (Chroma C*) indiquant l'état squameux de la peau
Figure imgf000072_0001
NS : valeurs non signiflcativement différentes ; MO signifiant 0 mois, etc.
2. Evaluation de l'hétérogénéité de la couleur de la peau par ultraviolet light enhanced visualisation (ULEV)- La méthode ULEV (Visioscan) est une méthode non invasive qui met en évidence l'état squameux de la peau, en particulier les fines squames en voie de détachement, et caractérise la cohésion des coméocytes de la couche cornée. La mesure est exprimée en pourcentage de la surface cutanée affectée par le processus. Lorsque la peau est lisse et la couche cornée cohésive, le pourcentage ULEV est faible, de l'ordre de 5-6%. Lors de l'inclusion dans l'étude (MO), et après un mois de traitement (Ml), le pourcentage de la surface cutanée affectée par le processus de desquamation était similaires sur les deux sites traités, environ 8-9%. Les valeurs obtenues ensuite sont celles du tableau Dl.2. La formulation placebo TO a apporté une amélioration significative (p < 0,001) dès le premier mois, et celle-ci a persisté pendant le reste de l'étude pour atteindre une valeur de 7,4% à 4 mois. La formulation Tl,5 a également apporté une amélioration significative qui s'est manifestée dès le premier mois (p < 0,01) et qui s'est renforcée les mois suivants (p < 0,001). Cela s'est manifesté par des améliorations entre le premier et le quatrième mois (p < 0,01) et entre le deuxième et le quatrième mois (p < 0,05). La comparaison entre les deux site traités démontre la supériorité de la formulation Tl, 5 au deuxième mois (p < 0,01) ainsi qu'aux troisième et quatrième mois (p < 0,001) par rapport à la crème placebo.
Tableau D1.2 Pourcentage de la surface cutanée affectée par le processus de desquamation (mesuré par ULEV « ultraviolet light enhanced visualisation », Visioscan)
Figure imgf000074_0001
NS : valeurs non significativement différentes ; MO signifiant 0 mois, etc.
3. Evaluation du relief de la peau par profilométrie optique- Le relief de la peau a été observé par profilométrie optique de manière non invasive (caméra Hitachi), et les graphes de profilométrie sont analysés pour calculer la profondeur moyenne de la rugosité de la peau Rz (μm).
A l'entrée dans l'étude (MO), aucune différence dans la valeur Rz n'était présente entre les deux sites. Les valeurs de profondeur moyenne obtenues ensuite sont celles du tableau Dl.3. La formulation TO a réduit significativement (p<0,01) la valeur Rz à l'issue du quatrième mois de traitement. La formulation Tl, 5 a réduit la valeur Rz de manière hautement significative (p<0,001) dès le deuxième mois de traitement, jusqu'à la fin de l'étude. L'amélioration s'est également marquée entre le premier et le troisième mois de traitement (p<0,05) ainsi qu'entre le premier et le quatrième mois (p<0,001) et le deuxième et le quatrième mois (p<0,05). Par rapport à la crème placebo, la formulation Tl,5 s'est avérée être la plus efficace dès le premier mois (p< 0,01), ainsi que les mois suivants (p< 0,001).
La figure 5 présente les graphiques de profilométrie obtenue sur les deux avant-bras d'un sujet après 16 semaines d'application de la crème Tl,5 et de la crème TO.
Tableau D1.3 - Profondeur moyenne de la rugosité de la peau Rz (μm), par profilométrie optique
Figure imgf000075_0001
Comparaison inter-temps (p)
Figure imgf000075_0002
NS : valeurs non significativement différentes ; MO signifiant O mois, etc.
4. Evaluation de la tonicité/élasticité de la peau par la mesure de la vitesse de propagation intracutanée d'un train d'ondes ultrasonores- Le temps de propagation d'une onde ultrasonore dans la peau (RRTM, résonance running time measurement, valeur arbitraire) est mesuré entre deux lamelles apposées sur la peau, par un Reviscometer. Le RRTM est un bon indicateur de la tension intrinsèque et de la tonicité de la peau, car plus la peau est tonique et tendue, moins la peau forme des plis en relief, et plus vite l'onde ultrasonore se propage. Ainsi, plus le RRTM est court, plus les parties constitutives de la peau sont tendues. Le RRTM est également influencée par l'état de la couche cornée, sa cohésion, il est d'autant plus court que la couche cornée est normalisée.
Les valeurs RRTM sont similaires entre les deux sites au départ de l'étude et après un mois de l'essai. Les valeurs obtenues ensuite sont celles du tableau Dl.4. La formulation TO n'a entraîné aucune modification de la valeur RRTM au cours du traitement. La formulation Tl,5 a induit une réduction significative de RRTM après trois mois (p < 0,01) et quatre mois (p < 0,001), ainsi qu'entre le premier et, respectivement le deuxième mois (p < 0,01) et les troisième et quatrième mois (p < 0,001). Par rapport à la formule placebo, la crème Tl, 5 s'est avérée significativement plus performante après deux et trois mois (p < 0,01), ainsi qu'après quatre mois (p < 0,001).
Tableau D1.4- Vitesse de propagation d'une onde ultrasonore dans la peau (unité arbitraire RRTM, Reviscometer)
Figure imgf000077_0001
NS : valeurs non significativement différentes ; MO signifiant 0 mois, etc.
5. Evaluation de l'hydratation de la couche cornée par la mesure de capacitance- L'hydratation de la couche cornée est évaluée par la mesure de capacitance électrique à l'aide d'un Comeometer (valeur arbitraire). La capacitance de la peau est proportionnelle à la teneur en eau de la peau et à l'état d'hydratation des cornéocytes de la couche cornée. Une peau bien hydratée présente une capacitance de 65, une peau très sèche de 30 à 40.
Les valeurs de capacitance sont similaires sur les deux sites à l'initiation de l'étude. Les valeurs obtenues ensuite sont celles du tableau Dl.5. La formulation placebo TO a permis d'accroître la capacitance de manière significative après un mois (p < 0,05) et après quatre mois (p < 0,001). Dans les temps intermédiaires de deux et trois mois, aucun effet de l'application des crèmes n'est observé sur la mesure de capacitance. La formulation Tl,5 permet un accroissement significatif de la capacitance après un mois (p < 0,05), ainsi qu'après 2 et 4 mois (p < 0,001). Une augmentation significative (p < 0,05) de la capacitance est aussi observée entre le premier et le quatrième mois. La crème Tl,5 est significativement plus performante que la crème placebo après un mois (p < 0,05), et encore plus significativement performante à 2 et 4 (p < 0,001).
Tableau D1.5- Hydratation de la couche cornée par détermination de la
Figure imgf000078_0001
capacitance électrique de la peau (Corneometer) NS : valeurs non significativement différentes ; MO signifiant O mois, etc.
Conclusions- Les cinq paramètres biométrologiques indiquent tous la supériorité de la crème à base de chitine-glucane (T0,5) par rapport à Ia crème placebo (TO) contenant les mêmes ingrédients excepté le chitine-glucane. La peau âgée devient plus lisse, moins squameuse, plus hydratée, plus ferme et moins xérotique. Les résultats indiquent que la crème à base de chitine-glucane exerce un ensemble d'actions qui permet à la peau de retrouver son élasticité, et par là de paraître plus lisse, avec moins de relief, plus radieuse, permettant de le qualifier d'ingrédient anti-âge. Les résultats sont en partie expliqués par un effet hydratant important et prolongé, comme indiqué par les tests de cornéométrie et de capacitante, mais d'autres mécanismes d'action plus profond et durable entrent également en jeu, permettant à la peau de restaurer sa fonction barrière et de voir ses activités métaboliques et défensives stimulées.
EXEMPLE D2 - Etude des effets de l'application quotidienne d'une crème de jour à base de chitine-qlucane de concentration 1,5% pendant 4 mois sur les rides et la topoloqie de surface de la peau dans la région de l'œil de sujets âgés
Cet exemple illustre les effets d'une crème à base de 1,5% de chitine-glucane sur différentes caractéristiques de la peau, en particulier dans le cadre du vieillissement cutané, la crème test et son placebo étant appliqués sur la zone du coin de l'œil de sujets âgés quotidiennement pendant une période de 4 mois. La crème de jour est une émulsion de type huile dans eau préparée avec les ingrédients du Tableau D2.1, avec du chitine-glucane de granulométrie inférieure à 125 μm produit selon l'exemple A5, et sans chitine-glucane pour la crème placebo.
Tableau D2.1- Crème de jour avec chitine-glucane de granulométrie <125 μm (test) et sans chitine-glucane (placebo)
Figure imgf000079_0001
Figure imgf000080_0001
Protocole- L'étude en simple aveugle et en intra-individuel a porté sur 21 volontaires féminins, âgés de 59 ± 1 ans (entre 52 et 65 ans) ayant des rides profondes au niveau des pattes d'oies, qui ont appliqué la crème à base de chitine-glucane (crème test) et la crème sans chitine-glucane (placebo) sur la peau dans la région du coin de l'œil (patte d'oie), à raison de 2 fois par jour pendant 4 mois. Au début de l'étude puis après 1, 2, 3 et 4 mois d'utilisation, les paramètres de relief de la peau ont été caractérisés à partir de photographies des empreinte de la peau dans un gel SilFIo® analysées à l'aide du Skin Image Analyser®. Les photographies sont prises à un angle de 35° pour permettre la visualisation des zones d'ombres. Le logiciel d'analyse d'image Quantirides® fournit la surface totale ridée, toutes les rides ayant une surface minimum de 0.03 mm2 étant détectées. Il fournit aussi le nombre et la profondeur moyenne des rides, en particulier des rides du microrelief de la peau. On calcule ensuite la variation des paramètres en comparant ;
• La moyenne du paramètre pour tous les volontaires au temps t avec la moyenne du paramètre au temps zéro (Δl)
• La moyenne du paramètre pour tous les volontaires à un temps t pour la zone traitée par la crème test avec chitine-glucane avec la moyenne du paramètre pour la zone traitée par la crème placebo (Δ2) Selon les formules suivantes :
Δl(°/o) = Xt ~ Xt0 100
Δ2 = (X τt — Xτt0) — (XPt — Xpt0 ) et
Figure imgf000081_0001
Où : Xt et Xto sont les valeurs moyennes du paramètre X obtenues avec la crème test ou le placebo aux temps t et tO
Xτt et Xrto sont les valeurs moyennes du paramètre X obtenues avec la crème test (avec chitine-glucane) aux temps t et tO
Xpt et Xpto sont les valeurs moyennes du paramètre X obtenues avec la crème placebo (sans chitine-glucane) aux temps t et tO
Statistiques- Les différences significatives entre deux paramètres (temps t versus temps zéro, ou crème test versus placebo) ont été recherchées par le test apparié non paramétrique de Friedman suivi du test de Dunn.
Résultats- Tableau D2.2- Variation de la moyenne des paramètres du relief de la peau au temps t par rapport au temps zéro pour la crème avec chitine-glucane (test) et sans chitine-glucane (placebo)
Figure imgf000082_0001
NS : différence non significative
Tableau D2.3- Variation de la moyenne des paramètres du relief de la peau pour tous les volontaires à un temps t pour la zone traitée par la crème test avec chitine-glucane par rapport à la variation de la moyenne du paramètre pour la zone traitée par Ia crème placebo
Figure imgf000083_0001
On déduit de cet exemple qu'une crème de type émulsion huile dans eau contenant 1,5% de chitine-glucane de granulométrie inférieure à 125 μm permet de lisser la surface de la peau dans la région de la patte d'oie et de réduire visiblement le nombre et la profondeur des rides, en particulier des plis du micro- relief. Le relief de la peau est caractérisée par :
• une surface totale ridée significativement plus faible dès 3 mois d'utilisation de la crème à base de chitine-glucane, à la fois par rapport au temps zéro (Δl) et par rapport à l'utilisation de la crème placebo (Δ2)
• une profondeur et un nombre de plis du micro-relief significativement plus faibles après 4 mois d'utilisation de la crème à base de chitine-glucane, à la fois par rapport au temps zéro (Δl) et par rapport à l'utilisation de la crème placebo (Δ2) EXEMPLE 'D3' . Effet anti-âge d'une composition contenant du chitine-αlucane de αranulométrie fine et contrôlée. Etude de la production de pro-collagène I dans un modèle de co-culture d'épiderme humain reconstruit et de fibroblastes humain en présence de chitine-glucane
Le modèle biologique utilisé comprend un épiderme reconstruit humain (0.5 cm2, 5 jours) et des fibroblastes en provenance d'épiderme humain normal (PF2, huitième passage) disposés dans une plaque à 24 puits (un épiderme reconstruit et 120000 fibroblastes par puit), cultivés dans un milieu de co-culture DMEM/HAM F12 supplémenté.
Une formulation simple de type émulsion huile dans eau préparée avec les ingrédients du tableau D3.1, avec un chitine-glucane (Lot L25) de granulométrie inférieure à 125 μm, est appliquée en topique sur l'épiderme (5 mg/cm2). Deux études sont réalisées : une étude de cytotoxicité (viabilité cellulaire de l'épiderme et des fibroblastes), et une étude de la production de pro-collagène I dans le milieu de culture.
Tableau D3.1
Figure imgf000084_0001
Cytotoxicité- Après application topique de la crème test, l'épiderme en co- culture avec les fibroblastes sont incubés à 370C avec 5% CO2 pendant 48 heures. La viabilité cellulaire des fibroblastes et de l'épiderme est estimée par marquage colorimétrique des cellules vivantes au MTT (bromure de dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium), ainsi que par une évaluation visuelle de la morphologie des cellules des fibroblastes. La viabilité cellulaire des cultures traitées avec la crème test est comparée avec celle des cultures non traitée (contrôle). 3 cultures par type de traitement sont réalisées. Les résultats sont ceux du Tableau D3.2.
Tableau D3.2- Effet de l'application topique d'une crème contenant 1.5% de chitine-glucane sur la viabilité d'un épiderme reconstruit dans une co-culture de fibroblastes et des fibroblastes, après un temps de contact de 48 heures
Figure imgf000085_0001
Production de pro-collagène I- Les co-cultures épiderme/fibroblastes sont placées dans 3 conditions différentes :
-application topique de la crème test avec chitine-glucane 1,5% -aucun traitement (contrôle)
-ajout d'une solution de TGF-β et d'acide ascorbique pour supplémenter le milieu de culture et maximiser la production de collagène par les fibroblastes (référence)
3 co-cultures par condition sont incubées à 370C avec 5% CO2 pendant 48 heures. La concentration en pro-collagène I en solution dans le milieu est déterminée par un test ELISA (pro-collagen type I C-peptide EIA kit, BioWhittaker MKlOl). La comparaison entre les résultats des différents groupe est calculée par i'analyse des variance (ANOVA) avec le test de comparaison multiple de Dunnett (Tableau D3.3).
Tableau D3.3- Effet de l'application topique d'une crème à base de chitine- glucane sur la production de pro-collagène type I dans les milieux de co-culture épiderme/fibroblaste (n=3) ; paramètre p pour la comparaison avec le groupe contrôle
Figure imgf000086_0001
On apprend de cet exemple que l'application topique d'une crème à base de chitine-glucane de granulométrie inférieure à 125 μm à la concentration de 1,5% sur un épiderme reconstruit en co-culture avec des fibroblastes est non toxique pour l'épiderme et les fibroblastes, et qu'elle favorise de manière très significative la production de pro-collagène de type I dans le milieu de culture (sécrété par les cellules de l'épiderme et/ou les fibroblastes) par rapport au groupe contrôle sans traitement. La crème à base de chitine-glucane de granulométrie inférieure à 125 μm à la concentration de 1,5% exerce donc une action anti-âge sur la peau, le pro-collagène de type I étant le précurseur du collagène, le principal composant de la matrice extracellulaire du derme.
EXEMPLE %D4' Effet anti-âge d'une composition contenant du chitine-glucane de granulométrie fine et contrôlée. Evaluation des effets protecteurs du chitine- glucane sur les cellules de Langerhans dans des biopsies de peau humaine exposées aux radiations UVB
Protocole- Les cellules de Langerhans sont des cellules dendritiques localisées majoritairement dans les couches les plus profondes de l'épiderme. Ne contenant pas de mélanine, elles sont très sensibles aux aggressions extérieures comme l'exposition aux radiations UV. En cas de stress externe, elles ont tendance à migrer de l'épiderme vers le derme, puis à déclencher l'activation des lymphocytes. On utilise donc le nombre de cellules de Langerhans saines présentes dans l'épiderme comme un indicateur des dommages de la peau liés au stress et au vieillissement. Le modèle utilisé est un explant de peau provenant d'une biopsie (4 cm2), cultivé sur une plaque à 6 puits dans un milieu de culture
(DMEM, L-glutamine 2 mM, pénicilline-streptomycine 50 UI/ml-50 μg/ml), sérum de veau fétal 10% à 37°C (95% air et 5% CO2). On compare les effets des 3 traitements suivants :
-contrôle sans traitement topique
-application topique de 5 mg/cm2 d'une crème contenant 1,5% de chitine- glucane de granulométrie inférieure à 125 μm, préparée selon l'exemple 29
-application topique de 5 mg/cm2 d'une crème de protection solaire d'indice de protection 20 (référence)
Deux études sont réalisées : une étude de la cytotoxicité, et une étude de l'effet de la crème à base de chitine-glucane sur le nombre de cellules de Langerhans dans les explants ayant été ou non irradiés aux UVB.
Cytotoxicité- Elle est caractérisée par la viabilité cellulaire des cellules de l'expiant (visualisation par le test MTT comme à l'exemple 29), 24 heures après traitement. Les résultats sont ceux du tableau D4.1. Tableau D4.1- Effet de l'application topique d'une crème contenant 1.5% de chitine-glucane sur la viabilité d'un explant de peau après un temps de contact de 48 heures sur l'épiderme
Figure imgf000088_0001
Effets de l'irradiation par les UVB sur le nombre de cellules de Langerhans saines présentes dans l'expiant. Une première application topique est effectuée, l'expiant est incubé pendant 24 heures, puis une heure après une deuxième application topique les explants sont irradiés aux UVB (0.75 J/cm2) dans le groupe UVB+, et non irradié dans le groupe UVB-. Les explants sont ensuite incubés pendant 16 heures. Deux explants par groupe sont utilisés.
Immunohistochimie- Les explants sont congelés, et trois sections par explant sont fixées dans un mélange acétone/méthanol puis incubées avec un anticorps anti-CDla-FUC (AbCys LO-CDIa-FOS) et le marqueur de noyaux Hoechst pendant 1 heure. Les sections sont observées par microscopie de fluorescence. Seules les cellules de Langerhans ayant une fluorescence marquée et une morphologies « normale » mise en évidence par la présence de dendrites sont comptées.
On calcule un taux de protection par rapport au contrôle non irradié aux UVB selon la formule suivante : p(o/o) = LCtraité^ - LCcontrôle^ χ±∞ LCcontroIeuv_ -LCcontroleuv+
Où : -LCtraitéuv+ est le nombre de cellules de Langerhans dans l'expiant traité et exposé aux UVB
-LCcontrôleuv+ est le nombre de cellules de Langerhans dans l'expiant non traité et exposé aux UVB -LCcontrôleuv- est le nombre de cellules de Langerhans dans l'expiant non traité et non exposé aux UVB Les résultats sont ceux du tableau D4.2.
Tableau D4.2- Nombre de cellules de Langerhans (LC) marquées par un anticorps anti-CDla dans l'épiderme d'un explant de peau traité par une crème à base de chitine-glucane et exposé (UVB+) ou non (UVB-) aux radiations UVB, par comparaison avec un contrôle non traité et une référence traitée par une crème de protection solaire d'indice 20 ; taux de protection
Figure imgf000089_0001
On conclut de cet exemple que l'application topique d'une crème à base de chitine-glucane de granulométrie inférieure à 125 μm à la concentration de 1,5% permet de préserver une grande partie des cellules de Langerhans dans l'épiderme d'un explant de peau ayant subi une exposition aux UVB. Un taux de protection de 51% aux dommages liés à l'exposition des UVB est calculé, une crème de protection d'indice 20 ayant un taux de protection de 100%. Cet effet protecteur aux radiations UVB participe à l'effet anti-âge du composé chitine- glucane.
EXEMPLE Ε'- Effets de l'administration orale d'une poudre de chitine-αlucane de αranulomέtrie inférieure à 500 μm sur les paramètres caractérisant les risques cardio vasculaires chez l'homme Cet exemple vise à mettre en évidence l'effet anti-athérosclérose, antioxydant, hypocholestérolémiant, hypolipidémiant de l'administration orale de chitine- qlucane de granulométrie inférieure à 500 μm chez l'homme
Le modèle utilisé est l'homme présentant un poids normal ou un léger surpoids et une cholestérolémie comprise entre 1,3 et 2,5g/l sous régime alimentaire standard. Le chitine-glucane de granulométrie inférieure à 500 μm (obtenu selon la méthode de l'exemple A5) est administré à raison de 4,5 g/jour, en 3 prises, 30 minutes avant les repas principaux. Les effets sur une période de 4 semaines sont étudiés. Le groupe témoin reçoit l'équivalent de 4,5 g/jour de placebo. Celui-ci est du Kaolin lourd à usage interne de grade pharmaceutique. 30 sujets masculins âgées de 20 à 50 ans, présentant un indice de masse corporel compris entre 18 et 28 kg/m2 et une cholestérolémie comprise entre 1,3 et 2,5 g/1 sont répartis en deux groupes de façon aléatoire en simple aveugle (10 contrôles/ 20 traités). Une visite médicale, un bilan des paramètres sanguins considérés pour l'étude et un questionnaire alimentaire seront réalisés lors de la sélection des sujets. La consommation alimentaire, les paramètres biochimiques et antioxydants et les paramètres anthropométriques sont mesurés 3 fois au cours de l'étude (au début, à 2 semaines et à la fin de l'étude). Les prélèvements sanguins permettent l'analyse des paramètres biochimiques et antioxydants repris dans le tableau El. Les mesures anthropométrique portent sur le suivi du poids, Sa mesure de la taille, du tour de taille, le tour de bras, le tour de cuisse et la tension artérielle.
Une consommation régulière de polysaccharides végétaux sous forme de poudre de granulométrie contrôlée, tel que le chitine-glucane, exerce un effet préventif sur des maladies métaboliques telles que l'hypercholestérolémie, les maladies cardiovasculaires ou par extension le syndrome métabolique et l'obésité.
Tableau El- Paramètres biochimiques et antioxydants suivis au cours de l'expérimentation chez l'homme
Figure imgf000091_0001
Tableau E2- Influence de la prise de chitine-glucane sur paramètres biochimiques et antioxydants
Figure imgf000092_0001
On constate que la prise orale de chitine-glucane de granulométrie inférieure à 500 μm améliore de manière significative les profils lipidique, antioxydant et les paramètres associés chez le sujet humain. Ceci permet de conclure que la consommation régulière de chitine-glucane est bénéfique dans la prévention de l'athérosclérose et par extension aux pathologies associées.
SERIE d'EXEMPLES Ψ' - Matériaux cohésifs poreux comprenant au moins du chitine-αlucane de granulométrie fine et contrôlée
EXEMPLE Fl- Mise en œuyre du chitine-αlucane sous forme d'un matériau poreux
On prépare une pâte de chitine-glucane en homogénéisant 100 g d'une poudre de chitine-glucane de granulométrie fine (L25, fraction<90μm) avec 900 g d'eau, pendant au moins 1 heure. La pâte est congelée à -18°C, puis lyophilisée. On obtient un matériau poreux, cohésif, avec une bonne tenue mécanique. L'observation par microscopie électronique à balayage (figure 6) révèle une structure très aérée isotrope et fibrillaire.
EXEMPLE F2- Mise en œuyre du chitine-alucane et du chitosane sous forme d'un matériau composite poreux cohésif
On prépare une solution de chitosane à 2% dans l'acide acétique à 1%. On y disperse une poudre de chitine-glucane de granulométrie fine (L16, fraction<90 μm), et on homogénéise pendant 2 minutes. La dispersion est congelée à -18°C, puis lyophilisée. On obtient un matériau poreux, cohésif, avec une bonne tenue mécanique. L'observation par microscopie électronique à balayage (figure 7, coupe longitudinale) révèle une structure poreuse non fibrillaire, interconnectée, les pores présentant une certaine orientation.
EXEMPLE F3 - Préparation d'un matériau composite poreux composite avant la chitosane comme matrice polymère et des particules de copolymère chitin- glucane comme agent dispersé : influence de la αranuométrie sur les propriétés mécaniques et morphologiques
Différentes granulométries de chitine-glucane sont préparées selon la méthode de l'exemple A5. La fraction ayant un diamètre de particules inférieur à 63 μm, et les fractions ayant un diamètre compris entre 125 et 250 μm, 250 et 500 μm, 500 et 1000 μm sont séparées par tamisage.
Le chitosane de masse moléculaire 42K (masse moléculaire déterminée par viscosimétrie capillaire) et degré d'acétylation de 11% est dissout dans l'acide acétique (1%) pour former une solution de concentration égale à 2% (m/m). Un poids donné de particules de chitine-glucane de granulométrie contrôlée est ajouté à un volume donné de cette solution. Un volume de 4 ml de suspension est homogénéisée par agitation magnétique pendant 2-3 min avant d'être coulée dans un moule (de forme losange) et congelée. L'échantillon est ensuite placé sur le plateau d'un lyophilisateur pour éliminer le solvant par sublimation sous vide pendant 48h.
Des matériaux composites poreux cohésifs de différentes compositions ont été préparées en faisant varier la proportion pondérale de chitosane et de chitine- glucane ainsi que la granulométrie de la poudre de chitine-glucane.
Des matériaux composites sous forme de mousses de différents formats ont été produits en faisant varier la taille du moule- exemples : nacelles de pesée hexagonale en polystyrène, petit format : 4ml de solution ; grand format : 15ml de solution. Les paramètres de formulation des mousses préparées sont repris au Tableau F3.1 ci-dessous.
Tableau F3.1- Mélanges chitosane / chitine-glucane et propriétés des matériaux composites poreux cohésifs
Figure imgf000094_0001
Les matériaux composites sous forme de mousses obtenues par lyophilisation ont été caractérisées en terme de microstructure par microscopie électronique à balayage (MEB). La résistance à la compression des mousses exprimée par le module de Young est déterminée à l'aide d'essais de compression axiale sur un banc de traction-compression Instron 5566, équipé d'une cellule de faible force. Les échantillons ont été soumis à une précharge de 0.03 N, et déformés avec une vitesse de 0.2 mm/min. Le module de Young est déterminé à partir de la région linéaire initiale de la courbe stress/strain. La masse volumique a été déterminée par gravimétrie (volume/masse de la mousse). Les résultats sont reportés dans le tableau F3.1. Les microphotographies MEB sont celles de la figure 8.
On comprend ainsi du tableau F3.1 que la masse volumique des mousses augmente à mesure que la proportion du chitïne-glucane, augmente. De façon surprenante, on constate que c'est pour une proportion équivalente chitosane/chitine-glucane (50/50), que le module de Young est le plus élevé, alors qu'il est significativement plus faible pour les proportions 75/25 et 25/75. Une proportion d'environ 50% de particules de chitine-glucane constitue donc la proportion optimale pour améliorer les propriétés mécaniques des mousses et, en l'occurrence, la résistance à la compression axiale.
On constate également sur la figure 8 que les particules de chitine-glucane sont réparties de façon homogène sur l'épaisseur de la mousse, leur densité augmentant logiquement avec leur proportion initiale. Les particules se retrouvent ça et là au sein des pores et souvent ancrées dans les parois même des pores.
Des enregistrements d'images obtenues par MEB (figure 9) réalisées pour les échantillons A5 et B5 (taille des particules de chitine-glucane comprise entre 500 et 1000 μm) ainsi que pour des échantillons A4 et B4 (taille des particules comprises entre 250 et 500 μm) révèlent que l'homogénéité de structure n'existe plus. Les particules ont une taille trop élevée sédimentent et se concentrent dans la partie inférieure de l'échantillon après lyophilisation. Cet exemple démontre qu'en vue de la mise en oeuvre du copolymère de chitine-glucane dans un matériau composite poreux, ce copolymère doit présenter une granulométrie fine et contrôlée.

Claims

REVENDICATIONS
1. Extrait fongique comprenant au moins un copolymère chitine-glucane sous forme de particules micrométriques dont au moins 70% des particules en poids ont une taille inférieure à 500 microns (μm).
2. Extrait fongique, selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'au moins 70% en poids des particules de copolymère chitine-glucane ont une taille inférieure à 355 microns (μm).
3. Extrait fongique, selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le copolymère de chitine-glucane comprend un rapport entre les unités N-acétyl-D- glucosamine de la chitine et les unité D-glucose des beta-glucanes compris entre 95:5 et 15:85 (m/m).
4. Extrait fongique, selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le polysaccharide d'origine fongique comprend plus de 70 % de copolymère chitine-glucane en masse par rapport à la masse totale de l'extrait d'origine fongique.
5. Extrait fongique, l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il est issus d'un champignon choisi parmi le groupe constitué d'un champignon du type Ascomycète, de type Aspergillus niger, de type Basidiomycète, de type Lent/nu/a edodes (shiitake), de type Agaricus bisporus (Champignon de Paris), et d'un mélange quelconque de ceux-ci.
6. Extrait fongique, selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'extrait fongique est un hydrolysat du copolymère chitine-glucane.
7. Extrait fongique, selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les particules micrométriques ont au moins 50% en poids des particules ayant une taille inférieure à 250 microns (μm).
8. Extrait fongique, selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les particules micrométriques ont une taille inférieure à 125μm, et de préférence comprise entre 50 microns (μm) et 90 microns (μm).
9. Extrait fongique, selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les particules micrométriques ont une taille inférieure à 90 microns
(μm).
10. Composition comprenant un extrait fongique tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 9.
11. Composition, selon la revendication 10, caractérisée en ce que la composition est une composition cosmétique.
12. Composition, selon la revendication 10 ou 11, caractérisée en ce que le polysaccharide ou l'extrait fongique est utilisé à une concentration comprise entre
0,01 et 10% en poids de la composition totale.
13. Composition sous forme de suspension ou d'émulsion ou de dispersion comprenant un solvant et au moins un extrait fongique tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 9.
14. Utilisation d'une composition telle que définie selon l'une quelconque des revendications 10 à 13, pour exercer un soin cosmétique, dermocosmétique, ou dermatologique, caractérisée en ce que le soin est choisi parmi le groupe consistant en un soin du corps ou du visage, pour améliorer l'hydratation de la peau, augmenter le pouvoir de rétention de l'eau de la peau, améliorer la fonction barrière de la peau, améliorer la protection de la peau et/ou les activités de défense de la peau, exercer un effet anti-âge, améliorer l'aspect de la peau, améliorer l'homogénéité de la peau, améliorer la fermeté et la tonicité de la peau, et favoriser l'accrochage de l'épiderme au derme.
15. Utilisation d'une composition telle que définie selon l'une quelconque des revendications 10 à 13, pour diminuer les rides ou ralentir ou prévenir l'apparition des rides.
16. Utilisation d'une composition telle que définie selon l'une quelconque des revendications 10 à 13, comme composition de complément alimentaire de préférence pour obtenir un effet choisi parmi le groupe consistant en un effet antioxydant, hypocholestérolémiant, hypolipidémiant, de stimulation du système immunitaire, hypoglycémique, notamment dans le cas de diabète, et un effet de prévention et/ou de lutte contre une pathologie choisie parmi le groupe consistant en la dyslipïdémie, l'athérosclérose, l'obésité, d'une maladie liée à l'obésité, une maladie cardiovasculaire, le syndrome métabolique, le diabète, et l'hyperuricémie.
17. Composition de complément alimentaire comprenant à titre de principe actif au moins un extrait d'origine fongique, tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 9.
18. Composition pharmaceutique comprenant à titre de principe actif au moins un extrait d'origine fongique, tel que défini à l'une quelconque des revendications l à 9.
19. Utilisation d'un extrait d'origine fongique, tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 9 ou d'une composition telle que définie selon l'une quelconque des revendications 10 à 13, comme excipient d'une composition.
20. Procédé de préparation d'un extrait fongique comprenant : a) l'extraction et la purification d'un copolymère chitine-glucane à partir d'une biomasse fongique, ledit copolymère de cet extrait fongique étant insoluble dans l'eau ou un solvant organique, b) des étapes, simultanées, ou séparées indépendamment de leur ordre, de filtration, de séchage, de broyage, et de classification des particules obtenues après broyage au départ du chitine-glucane sec ou solvaté, permettant d'obtenir des particules micrométriques dont au moins 70% des particules en poids ont une taille inférieure à 500 microns (μm)
21. Matériau poreux comprenant au moins un extrait fongique, préférentiellement au moins un polymère de chitine et /ou un copolymère de chitine-glucane, sous forme de particules de granulométrie inférieure à 500 microns (μm).
22. Matériau poreux, selon la revendication 21, caractérisé en ce que le matériau poreux comprend un extrait fongique tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 9.
23. Matériau poreux, selon la revendication 21 ou 22, caractérisé en ce que l'extrait fongique a une granulométrie inférieure à 250 microns, et de préférence inférieure à 90 microns, et encore de préférence inférieure à 63 microns.
24. Procédé de préparation d'un matériau poreux caractérisé en ce qu'il comprend une étape de dispersion, ou de mise en émulsion, ou de suspension d'au moins un extrait fongique sous forme de particules de granulométrie inférieure à 500 microns dans un solvant, puis la l'élimination de ce solvant et l'obtention d'un matériau poreux comprenant l'extrait fongique.
25. Matériau composite poreux comprenant une matrice et un agent dispersé, ladite matrice, encore dénommée agent dispersant, étant au moins un type de polymère, et l'agent dispersé étant au moins un extrait fongique, et préférentiel lement un polymère de chitine ou un copolymère de chitine-glucane, sous forme de particules de granulométrie inférieure à 500 microns (μm).
26. Matériau composite poreux, selon la revendication 25, caractérisé en ce que le matériau poreux comprend un extrait fongique tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 9.
27. Matériau composite poreux, selon la revendication 25 ou 26, caractérisé en ce que l'extrait fongique a une granulométrie inférieure à 250 microns, et de préférence inférieure à 90 microns, et encore de préférence inférieure à 63 microns.
28. Procédé de préparation d'un matériau composite poreux comprenant une matrice et un agent dispersé dans la matrice, caractérisé en ce qu'il comprend (i) une étape de solubilisation d'un polymère apte à former la matrice du matériau composite poreux, (ii) une étape de dispersion, ou de mise en émulsion, ou de suspension d'au moins un extrait fongique sous forme de particules de granulométrie inférieure à 500 microns dans la solution de polymère, (Hi) une étape d'élimination du solvant de la solution de polymère comprenant l'extrait fongique, (iv) l'obtention d'un matériau composite comprenant le polymère poreux formant la matrice et l'extrait fongique formant l'agent dispersé.
PCT/EP2007/062601 2006-11-20 2007-11-20 Chitine-glucane d'extrait fongique de granulometrie fine Ceased WO2008061999A1 (fr)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12/312,656 US20100003292A1 (en) 2006-11-20 2007-11-20 Fine-granulometry fungal extract chitine-glucane
EP07847236A EP2094735A1 (fr) 2006-11-20 2007-11-20 Chitine-glucane d'extrait fongique de granulometrie fine
CA002670006A CA2670006A1 (fr) 2006-11-20 2007-11-20 Chitine-glucane d'extrait fongique de granulometrie fine
BRPI0718987-7A2A BRPI0718987A2 (pt) 2006-11-20 2007-11-20 Extrato fúngico com quitina-glicano de granulometria fina
AU2007324534A AU2007324534B2 (en) 2006-11-20 2007-11-20 Fine-granulometry fungal extract chitine-glucane

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0654998A FR2908771B1 (fr) 2006-11-20 2006-11-20 Chitine-glucane d'extrait fongique de granulometrie fine
FR0654998 2006-11-20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2008061999A1 true WO2008061999A1 (fr) 2008-05-29

Family

ID=37963641

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2007/062601 Ceased WO2008061999A1 (fr) 2006-11-20 2007-11-20 Chitine-glucane d'extrait fongique de granulometrie fine

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20100003292A1 (fr)
EP (1) EP2094735A1 (fr)
CN (1) CN101583630A (fr)
AU (1) AU2007324534B2 (fr)
BR (1) BRPI0718987A2 (fr)
CA (1) CA2670006A1 (fr)
FR (1) FR2908771B1 (fr)
WO (1) WO2008061999A1 (fr)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120053261A1 (en) * 2009-05-13 2012-03-01 Kitozyme S.A. Adhesive composition

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2941151B1 (fr) * 2009-01-22 2012-05-11 Caster Extrait de lentinus pour son action sur la cellulite et les amas graisseux.
KR20200060734A (ko) 2012-03-23 2020-06-01 파마73, 에스.에이. 피키아 파스토리스 바이오매스로부터 제조된 천연 바이오복합재 분말, 제조방법, 및 부형제로서의 이의 용도
JP6746497B2 (ja) * 2014-01-29 2020-08-26 プール・モア・ビューティ・エルエルシーＰｏｕｒ Ｍｏｉ Ｂｅａｕｔｙ， Ｌｌｃ スキンケアのための方法
US11077060B2 (en) 2014-05-21 2021-08-03 Pharma73, S. A. Chitin-glucan complex, its preparation, and uses
US10092609B2 (en) 2015-01-16 2018-10-09 James A. Wieser Process for preparing medicinal mycological preparations
US10806769B2 (en) 2016-03-31 2020-10-20 Gojo Industries, Inc. Antimicrobial peptide stimulating cleansing composition
US10874700B2 (en) 2016-03-31 2020-12-29 Gojo Industries, Inc. Sanitizer composition with probiotic/prebiotic active ingredient
EP3544575A1 (fr) 2016-11-23 2019-10-02 GOJO Industries, Inc. Composition désinfectante comprenant une substance active probiotique/prébiotique
CN106591219A (zh) * 2016-12-22 2017-04-26 叶宗耀 一种表皮细胞培养基
US20210340491A1 (en) * 2018-08-31 2021-11-04 Nissan Chemical Corporation Medium composition for suspension culture of adhesive cells
BR112021009515B1 (pt) * 2018-11-26 2024-02-15 Colgate-Palmolive Company Composição para cuidados pessoais, método para preparar a mesma e uso de carreador, óleos vegetais e sais de pirrolidona carboxilato para contato com a pele fundamentos da invenção
WO2021046073A1 (fr) 2019-09-05 2021-03-11 Dupont Nutrition Biosciences Aps Composition d'aliment pour animaux
CN114727637B (zh) * 2019-11-18 2024-07-26 三菱商事生命科学株式会社 成形食品加工用组合物
CN115651096A (zh) * 2022-11-04 2023-01-31 齐鲁工业大学 一种从真菌中提取甲壳素-葡聚糖的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3914413A (en) * 1971-02-10 1975-10-21 Leslie L Balassa Process for facilitating wound healing with N-acetylated partially depolymerized chitin materials
US4368322A (en) * 1978-06-14 1983-01-11 Anic, S.P.A. Chitosan-glucan complex, method for its production and end uses
GB2259709A (en) * 1991-09-19 1993-03-24 British Textile Tech Production of chitin/chitosan
EP1550674A1 (fr) * 2002-10-08 2005-07-06 Ricom Corporation Polysaccharide contenant du chitosane, son procede de production et son utilisation
EP1483299B1 (fr) * 2002-02-12 2006-08-16 Kitozyme S.A. Derives de membranes cellulaires provenant de la biomasse et leur preparation

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3914413A (en) * 1971-02-10 1975-10-21 Leslie L Balassa Process for facilitating wound healing with N-acetylated partially depolymerized chitin materials
US4368322A (en) * 1978-06-14 1983-01-11 Anic, S.P.A. Chitosan-glucan complex, method for its production and end uses
GB2259709A (en) * 1991-09-19 1993-03-24 British Textile Tech Production of chitin/chitosan
EP1483299B1 (fr) * 2002-02-12 2006-08-16 Kitozyme S.A. Derives de membranes cellulaires provenant de la biomasse et leur preparation
EP1550674A1 (fr) * 2002-10-08 2005-07-06 Ricom Corporation Polysaccharide contenant du chitosane, son procede de production et son utilisation

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KUCERA J: "Fungal mycelium-the source of chitosan for chromatography", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B: BIOMEDICAL SCIENCES & APPLICATIONS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 808, no. 1, 25 August 2004 (2004-08-25), pages 69 - 73, XP004517709, ISSN: 1570-0232 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120053261A1 (en) * 2009-05-13 2012-03-01 Kitozyme S.A. Adhesive composition
US8835528B2 (en) * 2009-05-13 2014-09-16 Synolyne Pharma Adhesive composition

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0718987A2 (pt) 2014-02-18
FR2908771A1 (fr) 2008-05-23
FR2908771B1 (fr) 2011-07-29
EP2094735A1 (fr) 2009-09-02
AU2007324534B2 (en) 2014-01-16
CA2670006A1 (fr) 2008-05-29
AU2007324534A1 (en) 2008-05-29
CN101583630A (zh) 2009-11-18
US20100003292A1 (en) 2010-01-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2094735A1 (fr) Chitine-glucane d&#39;extrait fongique de granulometrie fine
FR2997406A1 (fr) Polymere de hyaluronate et de glucomannane
EP3525889B1 (fr) Extrait d&#39;anigozanthos flavidus pour son utilisation cosmétique
CN101415731B (zh) 新型低分子透明质酸和/或其盐以及使用其的化妆品、医药组合物和食品组合物
FR2882366A1 (fr) Polymere reticule de carbohydrate, notamment a base de polysaccharides et/ou de polyols
KR101916750B1 (ko) 마유 또는 동백유를 함유하는 나노 에멀젼을 포함하는 화장료 조성물
EP3174603B1 (fr) Extrait de camellia japonica et compositions cosmétiques le comprenant
WO2014104171A1 (fr) Composition antivieillissement pour l&#39;extérieur de la peau et procédé de production associé
FR2929511A1 (fr) Nouveau principe actif stimulant la proliferation et/ou l&#39;activite des fibroblastes.
FR2742987A1 (fr) Utilisation dans le domaine de la cosmetique et de la pharmacie, notamment de la dermatologie, d&#39;un extrait d&#39;eriobotrya japonica pour stimuler la synthese des glycosaminoglycanes
EP2655420A1 (fr) Polymere saccharidique obtenu a partir de manihot esculenta, procede d&#39;obtention et utilisation comme principe actif cosmetique tenseur de la peau
WO2008029877A1 (fr) agent anti-vieillissement, agent de blanchiment cutané, agent antioxydant et agent anti-inflammatoire
WO2019142921A1 (fr) Composition cosmétique
FR2959126A1 (fr) Utilisation cosmetique d&#39;oligoglucomannanes d&#39;amorphophallus konjac
CN108852928A (zh) 一种抗衰老舒敏保湿凝胶及其制备方法
FR2991583A1 (fr) Composition cosmetique comprenant un extrait de rhus coriaria
WO2015036704A1 (fr) Utilisation cosmetique ou dermatologique d&#39;un extrait de tapirira guyanensis
EP2868313A1 (fr) Association vitamine C et acide hyaluronique pour le traitement des effets du vieillissement cutané
WO2008078846A1 (fr) Composition cosmétique pour lutter contre le vieillissement de la peau
JP2007176832A (ja) アファニゾメノン（Ａｐｈａｎｉｚｏｍｅｎｏｎ）属の抽出物を含む皮膚老化防止組成物
US20240225989A9 (en) Coated particle, method for producing same, and cosmetic
WO2023186353A1 (fr) Dextrines hyperbranchees pour leur utilisation topique pour la prevention ou le traitement d&#39;au moins un symptome de l&#39;inflammation cutanee
EP4192417A1 (fr) Utilisation d&#39;une composition cosmetique pour peaux matures sous forme d&#39;un film sec et soluble comprenant un extrait de tropaeolum majus et un extrait de lens esculenta
JP2005350422A (ja) 活性酸素消去剤

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200780049901.8

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 07847236

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2007847236

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2670006

Country of ref document: CA

Ref document number: 2007847236

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2007324534

Country of ref document: AU

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2007324534

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20071120

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12312656

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: PI0718987

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20090520