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WO2006131649A2 - Utilisation de la fumagilline et de ses derives pour augmenter la biodisponibilite des lactones macrocycliques - Google Patents

Utilisation de la fumagilline et de ses derives pour augmenter la biodisponibilite des lactones macrocycliques Download PDF

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Publication number
WO2006131649A2
WO2006131649A2 PCT/FR2006/001297 FR2006001297W WO2006131649A2 WO 2006131649 A2 WO2006131649 A2 WO 2006131649A2 FR 2006001297 W FR2006001297 W FR 2006001297W WO 2006131649 A2 WO2006131649 A2 WO 2006131649A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
alkyl
formula
compound
alkoxy
amino
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/FR2006/001297
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English (en)
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WO2006131649A3 (fr
Inventor
Michel Alvinerie
Jacques Dupuy
Anne Lespine
Jean-François SUTRA
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institut National de la Recherche Agronomique INRA
Original Assignee
Institut National de la Recherche Agronomique INRA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institut National de la Recherche Agronomique INRA filed Critical Institut National de la Recherche Agronomique INRA
Priority to AU2006256616A priority Critical patent/AU2006256616A1/en
Priority to EP06764749A priority patent/EP1888116A2/fr
Priority to BRPI0611642-6A priority patent/BRPI0611642A2/pt
Priority to US11/917,031 priority patent/US20080200402A1/en
Priority to CA002611201A priority patent/CA2611201A1/fr
Priority to MX2007015504A priority patent/MX2007015504A/es
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Publication of WO2006131649A3 publication Critical patent/WO2006131649A3/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Priority to US12/975,410 priority patent/US20110144045A1/en
Ceased legal-status Critical Current

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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K31/336—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having three-membered rings, e.g. oxirane, fumagillin
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia

Definitions

  • the invention relates to the use of fumagillin, and its analogous derivatives, as inhibitors of cellular transporters, such as ABC transporters, and more particularly of P-glycoprotein, in order to increase the bioavailability of active principles.
  • cellular transporters such as ABC transporters, and more particularly of P-glycoprotein
  • P-glycoprotein P-glycoprotein
  • Macrocyclic or LM lactones such as avermectins and milbemycines, are high performance antiparasitic agents for veterinary use (active against endo and ectoparasites, long persistence, low toxicity).
  • Avermectins are the compounds of the following general formula:
  • Another avermectin, selamectin is the compound of the following formula:
  • nemadectin is the compound of the following formula:
  • MLs are widely used in many mammals (cattle, sheep, goats, pigs, horses, dogs and cats).
  • Ivermectin is also used in human medicine for the treatment of Oncochercosis (de Silva et al,
  • LMs fatty acids
  • fatty acids such as decreased feed intake in sheep (Ali and Hennessy, 1996), fasting in horses (Alvinerie et al., 2000), co-administration of drugs (Lifschitz et al., 2002) or natural compound (Dupuy et al., 2003).
  • P-glycoprotein or Pgp is recognized as one of the major elements both on cells (Dupuy et al., 2001b), in whole animals (Alvinerie et al, 1999; Dupuy et al., 2003, Lifschitz et al., 2002) and parasites (Xu et al., 1998). Indeed, this membrane transporter of the family of "ATP binding cassette transporters", involved in the mechanisms, of polychimoresistance (multidrug resistance or
  • MDR controls the active efflux of many compounds including ivermectin and moxidectin.
  • This Pgp is present at the level of the hemato-meningeal barrier where it protects the central nervous system from the neurotoxicity of ivermectin (Roulet et al., 2003, Schinkel et al., 1994).
  • Rat hepatocytes in primary culture were used to evaluate the ability of different compounds to increase the intracellular amount of 14 C moxidectin.
  • verapamil decognized inhibitor of Pgp
  • quercetin a fiavonoid which interferes with Pgp
  • ketoconazole significantly increased the intracellular amount of 14 C moxidectin, an effect to be related to its concomitant inhibitory action on Pgp and cytochrome P450, both systems present in hepatocytes.
  • the modulation of Pgp is also useful for increasing the bioavailability of active ingredients different from LM.
  • the modulation of Pgp is for example useful in the context of cancer treatment, in order to increase the bioavailability of anticancer active ingredients.
  • AML acute myeloid leukemia
  • ALL acute lymphoblastic leukemia
  • Table 1 Use of compounds modulating Pgp activity to treat acute myeloid leukemia (AML) and acute lymphoblastic leukemia TLAL) in humans (Roos 20041
  • fumagillin and its derivatives make it possible to increase the bioavailability of LMs, which brings a new technical solution to the problem described above.
  • Fumagillin is produced by the fungus Aspergillus fumigatus, active in vivo on the microsporidiosis of bees and in vitro on the spores of Enterocytozoon Bieneusi (Fumidil B - CEVA Animal Health).
  • fumagillin has been used for 40 years to treat intestinal amoebiasis and is currently prescribed for local application for microsporidic keratoconjunctivitis.
  • fumagillin and its analogues are inhibitors of angiogenesis by inhibition of proliferation endothelial cell (Pyun et al., 2004). Because of their antiangiogenic properties, these compounds are used in human medicine for the treatment of cancers.
  • the main purpose of the invention is to provide compositions making it possible to increase the bioavailability of active principles in the human and animal body, and thus to improve the existing treatments, particularly in the context of parasitic or cancerous diseases.
  • the invention more particularly aims to provide compositions for increasing the bioavailability of macrocyclic lactones and antitumor agents.
  • the invention mainly relates to the use of at least one compound of general formula (I) below:
  • R 1 is H or a linear or branched C 1 -S alkyl
  • R 2 is H, C 1-4 alkyl, aryl, C 1-4 alkyl aryl, cycloalkyl, C 1-4 alkyl cycloalkyl, or alkenyl group of 1 to 10 carbon atoms such as that a CH 2 R 6 group , in which R 6 is a 2-methyl-1-propenyl or an isobutyl optionally substituted by a hydroxyl, amino, (alkyl)
  • R 3 is H, C 1-4 alkyl, or C 5-8 aryl which is optionally substituted by one or more halogens, such as F 5 Cl, I, Br, C 1 -C 4 alkoxyl; or C 1-4 alkyl; - R 4 is an H atom, an OH or a C 1-4 alkoxyl;
  • R 5 is of the OR 7 form, in which case the -wvvV bond represents a single bond, or R 5 is of the form.
  • R s Rg which case the bond wW ⁇ represents a bond in ⁇ or ⁇ ; - R 7 is chosen from the group consisting of: • the atom H,
  • a saturated or unsaturated C 1 -C 10 alkanoyl or alkenoyl group which may be substituted in particular by one to three substituents chosen from amino, (C 1-6 alkyl) amino, di-C 1-6 alkylamino; , nitro, halogen, hydroxy, C 1-6 alkoxy, cyano, carbamoyl, carboxyl, (C 1-6 alkoxy) carbonyl, carboxy (Cj -6 alkoxy), phenyl optionally substituted (by one to five substituents selected from halogen atoms, alkyl C 1-6, alkoxy C 1-O halogenated alkyl and nitro), and aromatic heterocyclic groups, • an aroyl group which may be substituted by a halogen atom or with C 2-6 alkyl, amino, hydroxy, C 1-6 alkoxy, cyano, carbamyl or carboxyl,
  • a heterocylcarbonyl which may be substituted by a halogen atom or by a C 2-6 alkyl, amino, hydroxy, C 1-6 alkoxy, cyano, carbamyl or carboxyl,
  • carbamoyl which may be substituted by one or two substituents selected from C 1-6 alkyl groups, which may themselves be substituted by a mono- or di- (C 1-6 alkyl) amino, alkanoyl group; C 1-6 , chloroacetyl, dichloroacetyl, trichloroacetyl, (C 1-6 alkoxy) carbonyl-methyl, carboxymethyl, optionally substituted phenyl (with one to five substituents selected from halogen atoms, C 1 alkyls). -6 , C 1-6 alkoxy halogen and nitro), naphthyl or benzoyl,.
  • C 1-10 alkyl which may optionally be epoxidized and / or substituted in particular with one to three substituents chosen from amino, (C 1-6 alkyl) -amino, di- (C 1 -alkyl) -6 ) -amino, nitro, halo, hydroxy, C 1-6 alkoxy, cyano, carbamyl, carboxyl, (C 1-6 alkoxy) -carbonyl, carboxy- (C 1-6 alkoxy), optionally substituted phenyl (by one to five substituents selected from halogen atoms, alkyl -C -6, Ci -6 alkoxy halogen, nitro alkyl), and aromatic heterocyclic groups,
  • a benzenesulphonyl which may optionally be substituted by one to three substituents chosen from C 1-6 alkyls and halogen atoms,
  • a C 1-10 alkyl-sulfonyl group which may optionally be substituted by one to three substituents selected from amino, (C 1-6 alkyl) -amino, di- (Ci -6) alkylamino, nitro, halogen , Ci -6 alkoxy, cyano, carbamoyl, carboxyl, (Cl -6 alkoxy) carbonyl, carboxy (Ci -6 alkoxy), phenyl optionally substituted (by one to five substituents selected from halogen atoms, alkyl, C 1-6 alkoxy the C 1-6 halogenated alkyl and nitro), and aromatic heterocyclic groups.
  • a sulfamoyl which may optionally be substituted by one or two substituents selected from Cl -6 alkyl and optionally substituted phenyl (with one to five substituents selected from halogen atoms, Ci -6 alkyl, the alkoxy C 1-6 alkyl halogen and nitro),
  • alkoxycarbonyl which may optionally be substituted with one to three substituents selected from amino, (C 1-6 alkyl) -amino, di-
  • R 8 and R 9 each represent an H atom, an optionally substituted hydrocarbon group or an optionally substituted acyl group, or R 8 and R 8 may form a ring together with the adjacent nitrogen atom; as an adjuvant for the preparation of a medicinal product intended to increase the bioavailability of active principles, in particular antiparasitic or anticancer active ingredients, and thus to potentiate their effects, these active ingredients being capable of being recognized and of binding to cellular transporters to be transported out of these cells without being able to reach their intracellular therapeutic target, said transporters being present in the cells of the human or animal organism to which said active ingredients are administered, and, where appropriate, in the parasite cells against which these active ingredients are administered.
  • - R 1 is H or alkyl -S linear or branched
  • R 2 is H, Ci -4 alkyl, or an alkenyl group of 1 to 10 carbon atoms such as CH 2 R 6 wherein R 6 is 2-methyl-l-propenyl.
  • the invention relates more particularly to the aforementioned use of the compound of formula (I) above corresponding to fumagillin of formula (II) below:
  • adjuvant is meant a compound that enters a pharmaceutical composition for a drug, in order to “potentiate”, that is to say to strengthen and / or make possible and / or to make faster the action of the base compound said base compound being again referred to herein as "active ingredient”.
  • bioavailability of an active ingredient is meant the amount of active ingredient actually present in a human or animal body, and / or the amount of active ingredient actually present in a given part of a human or animal body, particularly in a particular organ (s) of a human or animal organism, and in particular in a subset of cells of one or more determined type (s) of a human or animal organism.
  • Bioavailability may also refer to the proportion of the active ingredient administered to a human or animal organism that is actually active or capable of activity in that organism.
  • the invention more particularly relates to the aforementioned use of the compounds of formula (I) above, and in particular compounds of formula (Ia), (Ib), and fumagillin of formula (II), for the preparation a medicinal product intended to increase the bioavailability of active principles, more particularly antiparasitic active ingredients, which can be recognized and bind to cellular transporters
  • ATP-dependent also designated ABC (ATP Binding Cassette) or ATP binding sequence transporters, these carriers being described in particular in Dean et al. (2001), Genome Research, 11: 1156-1166, and Dean et al. (2001), Journal of Lipid Research, 42: 1007-1017.
  • ABC ATP Binding Cassette
  • ATP binding sequence transporters these carriers being described in particular in Dean et al. (2001), Genome Research, 11: 1156-1166, and Dean et al. (2001), Journal of Lipid Research, 42: 1007-1017.
  • the invention relates more particularly to the aforementioned use of the compounds of formula (I) above, and in particular compounds of formula (Ia) 3 (Ib), and fumagillin of formula (II), for the preparation of a medicinal product intended to increase the bioavailability of active principles, more particularly antiparasitic active ingredients, which can be recognized and to bind to ABC transporters chosen from P-glycoprotein (Pgp, also designated ABCB1), ABCC transporters (ABCCl to 8, still designated MRP1 to 8), or ABC G2 transporters.
  • Pgp P-glycoprotein
  • ABCC transporters ABCCl to 8, still designated MRP1 to 8
  • ABC G2 transporters ABCCl to 8
  • the invention more particularly relates to the aforementioned use of the compounds of formula (I) above, and in particular compounds of formula (Ia), (Ib), and fumagillin of formula (II), as inhibitors of the transport function of cellular transporters by interaction between these compounds and these transporters, for the preparation of a medicinal product intended to increase the bioavailability of active principles, more particularly antiparasitic active ingredients, which can be recognized and to link to these carriers.
  • the invention relates more particularly to the aforementioned use of the compounds of formula (I) above, and in particular compounds of formula (Ia), (Ib), and fumagillin of formula (II), as inhibitors of the transport function of Pgp by interaction between these compounds and Pgp, for the preparation of a medicinal product intended to increase the bioavailability of active principles, more particularly antiparasitic active ingredients, which can be recognized and to bind to the Pgp.
  • the compounds of formula (I) mentioned above are used as adjuvants for the preparation of a medicament intended to increase the bioavailability of antiparasitic or anticancer active ingredients chosen from the substrates of cell transporters, and more particularly the ABC substrates, transporters defined above, in particular Pgp, in the context of the treatment of parasitic or cancerous pathologies.
  • the compounds of formula (I) mentioned above used as adjuvants for the preparation of a medicinal product intended to increase the bioavailability of antiparasitic or anticancer active ingredients in the context of the treatment of parasitic or cancerous pathologies are chosen from compounds of formula (Ia),
  • the above-mentioned compound of formula (I) used as adjuvant for the preparation of a medicament for the treatment of parasitic or cancerous pathologies is fumagillin of formula (II).
  • the aforementioned use of the compounds of formula (I) above, and more particularly compounds of formula (Ia), (Ib), and fumagillin of formula (II) is characterized in that the Antiparasitic active ingredients are selected from macrocyclic lactones, such as avermectins and milbemycines.
  • the aforementioned use of the compounds of formula (I) above, and more particularly compounds of formula (Ia), (Ib), and fumagillin of formula (II), is characterized in that the antiparasitic active ingredients are chosen from 'avermectins, such as ivermectin, abamectin, doramectin,
  • Peprinomectin or selamectin for the treatment of endoparasitic and ectoparasitic parasitic diseases.
  • the aforementioned use of the compounds of formula (I) above, and more particularly compounds of formula (Ia), (Ib), and fumagillin of formula (II), is characterized in that the antiparasitic active ingredients are chosen from milbemycins, such as moxidectin or nemadectin, in the context of the treatment of endoparasitic or ectoparasitic parasitic diseases.
  • the endoparasitic diseases concern the affections by internal parasites, whereas the ectoparasitic diseases concern the affections by external parasites.
  • LM the gastro-intestinal strongyloses (adult and larva L3 or L4): Haemonchus,
  • hypodermoses All larval stages: Hypoderma bovis and lineatum;
  • the aforementioned use of the compounds of formula (I) above, and more particularly compounds of formula (Ia), (Ib), and fumagillin of formula (II), is characterized in that the anti-cancer active ingredients are chosen from the substrates of cellular transporters, and more particularly from the ABC transporters substrates defined above, in particular Pgp, in the context of the treatment of cancers, and more particularly cancers resistant to chemotherapies.
  • chemotherapy resistant cancers cancers that in response to chemical treatments overexpress cellular transporters, such as ABC-transporters, especially P-gp. By discharging the active ingredient out of the cell, these carriers reduce or neutralize the expected therapeutic effect.
  • the anticancer active ingredients which are substrates of the above-mentioned cellular transporters, and more particularly of Pgp are in particular:
  • antitumour antibiotics of the anthracycline type and in particular:
  • daunurubicin and doxorubicin used in the treatment of acute leukemia, acute myeloid leukemia in acute transformation, Hodgkin's and non-Hodgkin's lymphoma
  • Mitoxantrone used in the treatment of acute myeloid or lymphocytic leukemia, breast cancer, prostate cancer, ovarian cancer
  • adriamycin used in the treatment of acute leukemias, chronic myeloid leukemias in acute transformation, Hodgkin's and non-Hodgkin's lymphomas
  • actinomycin D used in the same cases as adriamycin
  • docetaxel used in the treatment of lymphoma, breast cancer, esophagus, stomach, bladder, prostate, uterus
  • paclitaxel used in the treatment of cancer ovarian, lung, AIDS-related Kaposi's sarcoma
  • alkaloids and in particular:
  • vinblastine used in the treatment of breast, bladder, testicular and lymphoma cancer
  • vincristine used in the treatment of leukemia, lymphomas, sarcomas, lung cancer, uterus, brain
  • epipodophyllotoxins and in particular: etoposide (used in the treatment of testicular cancer and certain types of lung cancer),
  • Another aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition characterized in that it comprises at least one compound of formula (I) as defined above in combination with one or more active principles that can be recognized and bind to the aforementioned cellular carriers, and more particularly to
  • the invention more particularly relates to a pharmaceutical composition as defined above, comprising at least one compound of formula (I) selected from compounds of formula (Ia), (Ib) or (II) defined above.
  • said pharmaceutical composition is characterized in that the active ingredients in combination with a compound of formula (I) as defined above, and more particularly with a compound of formula (Ia), (Ib) , or fumagillin of formula (II), are antiparasitic or anticancer active ingredients.
  • said pharmaceutical composition is characterized in that it comprises at least one compound of formula (I) as defined above, and more particularly a compound of formula (Ia), (Ib), or fumagillin of formula (II), in combination with antiparasitic active ingredients selected from macrocyclic lactones, such as avermectins and milbemycines.
  • said pharmaceutical composition is characterized in that the antiparasitic active ingredients are chosen from avermectins, such as ivermectin, abamectin, doramectin, eprinomectin or selamectin.
  • avermectins such as ivermectin, abamectin, doramectin, eprinomectin or selamectin.
  • said pharmaceutical composition is characterized in that the antiparasitic active ingredients are chosen from milbemycins, such as moxidectin or nemadectin.
  • the above-mentioned pharmaceutical composition is characterized in that it contains at least one compound of formula (I) as defined above, and more particularly a compound of formula (Ia), (Ib), or fumagillin. of formula (II), at a dosage suitable for daily administration of from about 0.2 to about 2 mg / kg.
  • the above-mentioned pharmaceutical composition is characterized in that the antiparasitic active principle, and the compound of formula (I) as defined above, and more particularly the compound of formula (Ia), (Ib), or the fumagillin of formula (II) are present in a weight ratio of from about 1: 1 to about 1: 100, in particular from about 1: 1 to about 1:20.
  • the compound of formula (I) as defined above, and more particularly the compound of formula (Ia), (Ib), or the fumagillin of formula (II), must in fact be determined in excess relative to to the active ingredient, because its affinity for the aforementioned cellular transporters, in particular the Pgp, is lower than that of the active principle.
  • the invention relates more particularly to a pharmaceutical composition as defined above, comprising fumagillin of formula (II) above, in combination with one or more antiparasitic active ingredients as defined above.
  • the aforementioned pharmaceutical composition is characterized in that it comprises at least one compound of formula
  • this pharmaceutical composition comprises at least one compound of formula
  • this composition is characterized in a particularly advantageous manner in that it contains at least one compound of formula (I), (Ia), (Ib) or (II) defined above at a dosage suitable for a daily administration of about 0.2 to about 2 mg / kg; and even more advantageously, this pharmaceutical composition is characterized in that the anti-cancer active principle, and the compound of formula (I), (Ia), (Ib) or (II) defined above, are present in a report by weight from about 1: 1 to about
  • the invention more particularly relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising at least one compound of formula (I) as defined above, and more particularly a compound of formula (I), (Ia), (Ib), or fumagillin. of formula (II), in combination with at least one anthracycline antitumor antibiotic and / or a taxane and / or an alkaloid and / or an epipodophyllotoxin as mentioned above.
  • the invention relates more particularly to a pharmaceutical composition as defined above, comprising fumagillin of formula (II) above, in combination with one or more anticancer active ingredients as defined above.
  • compositions according to the invention are furthermore advantageously characterized in that they are in a form that can be administered parenterally or orally.
  • Another subject of the invention relates to combination products for simultaneous use, separate or spread over time, in therapy, especially antiparasitic or anticancer, using an active ingredient that can be recognized and bind to above-mentioned cellular transporters , and more particularly to
  • the compound of formula (I) in the combination products is chosen from the compounds of formula (Ia), (Ib) or (II) defined above.
  • the combination products according to the invention are characterized in that they contain at least one active principle that can be recognized and bind to the above-mentioned cellular transporters, and more particularly to the ABC carriers defined below. above, in particular to Pgp, and at least one compound of formula (I) as defined above, and more particularly a compound of formula (Ia), (Ib), or fumagillin of formula (II), in a weight ratio of about 1: 1 to about 1: 100 and in particular about 1: 1 to about 1:20.
  • the combination products according to the invention for simultaneous use, separate or spread over time, in antiparasitic therapy, are characterized in that they contain at least one antiparasitic active ingredient, and at least one compound of formula (I) as defined above, and more particularly a compound of formula (Ia), (Ib), or fumagillin of formula (II).
  • the combination products according to the invention are characterized in that the antiparasitic active ingredients are chosen from macrocyclic lactones, such as avermectins and milbemycines.
  • the combination products according to the invention are characterized in that the antiparasitic active ingredients are chosen from avermectins, such as ivermectin, abamectin, doramectin, Eprinomectin or Selamectin for the treatment of endoparasitic and ectoparasitic parasitic diseases.
  • avermectins such as ivermectin, abamectin, doramectin, Eprinomectin or Selamectin for the treatment of endoparasitic and ectoparasitic parasitic diseases.
  • said combination products are characterized in that the antiparasitic active ingredients are chosen from milbemycins, such as moxidectin or nemadectin, in the context of the treatment of endoparasitic or ectoparasitic parasitic diseases.
  • milbemycins such as moxidectin or nemadectin
  • said combination products are characterized in that they contain at least one antiparasitic active principle, and at least one compound of formula (I) as defined above, and more particularly fumagillin of formula (II). ), in a weight ratio of about 1: 1 to about 1: 1 OO and in particular of about 1: 1 to about 1:20.
  • the invention more particularly relates to the combination products for simultaneous use, separate or spread over time, in pest control therapy, characterized in that they contain at least one antiparasitic active ingredient such. as defined above, and fumagillin of formula (II) as mentioned above.
  • the combination products according to the invention for a simultaneous use, separate or spread over time, in cancer therapy, are characterized in that they contain at least one anticancer active principle, and minus a compound of formula (I) as defined above, and more particularly a compound of formula (Ia), (Ib), or fumagillin of formula (II).
  • said combination products are characterized in that the anticancer active ingredients are chosen from the substrates of the abovementioned cellular transporters, and more particularly from the ABC transporters substrates defined above, in particular Pgp, as part of the treatment.
  • cancers and more particularly cancer resistant to chemotherapy and are more particularly selected from anthracycline antitumor antibiotics, taxanes, alkaloids and epipodophyllotoxins as mentioned above.
  • said combination products are characterized in that they contain at least one anticancer active principle, and at least one compound of formula (I) as defined above, and more particularly a compound of formula (Ia ), (Ib), or fumagillin of formula (II), in a weight ratio of about 1: 1 to about 1: 100 and in particular about 1: 1 to about 1:20.
  • the subject of the invention is the combination products for simultaneous, separate or spread over time use in anticancer therapy, characterized in that they contain at least one anti-cancer active principle as defined above, and the fumagillin of formula (II) as mentioned above.
  • FIG. 1 represents the area under the curve (AUC) of 14 C moxidectin after two distinct treatments: in blank, the control (moxidectin); in black: treatment with fumagillin.
  • the ordinate axis is in ⁇ g.mL.h "1. It has p ⁇ 0.01 for treatment with fumagillin (result significantly different from the control).
  • Figure 2 shows the effect of different compounds on the accumulation of rhodamine 123 in LLCPK1 cells transfected with murine Pgp.
  • concentration of the compound On the abscissa: the concentration of the compound; on the ordinate, the percentage of accumulation of Rho 123 relative to the control (Rho 123 / protein content).
  • Rho 123 / protein content In white, ivermectin; in plain gray, the valspodar; hatched, fumagillin.
  • Figure 3 shows the accumulation of Rho 123 in Mdrla LLC-PK1 cells after treatment with fumagillin.
  • concentration of fumagillin in ⁇ M On the abscissa, the concentration of fumagillin in ⁇ M; on the ordinate, the percentage of effect with respect to the effect of valspodar (modeling according to the HiIl model).
  • the intracellular concentration of the 14 C moxidectin in rat hepatocytes is first demonstrates the ability of fumagillin increase (Example 1). Subsequently, its ability to interfere with Pgp function on porcine Pgp-transfected epithelial cells (Mdr Ia-LLCPK1) is summarized, as summarized in Example 2.
  • the Pgp transport function is evaluated. by the intracellular accumulation of rhodamine 123, a proven substrate of Pgp. This model is particularly suitable for detecting compounds interacting with Pgp (Hamada et al., 2003).
  • phosphate buffered saline (PBS 10X), fetal calf serum, Hanks' saline solution (HBSS) without phenol red, penicillin, streptomycin and geniticin (G418) come from InVitrogen (Cergy Pontoise , France).
  • the culture dishes are from Nunclon (Roskilde, Denmark), culture flasks and 24-well cell culture plates from Sarstedt France
  • rat hepatocytes The isolation and culturing of rat hepatocytes has been described previously (Dupuy et al, 2001b).
  • the hepatocytes are distributed in culture dishes and maintained at 37 ° C. for 12 hours (oven 5% CO 2 ).
  • the cells are cultured in the presence of 5 ⁇ M of 14 C moxidectin (control) +/- 100 ⁇ M of fumagillin. After 0, 6,
  • Cells transfected with murine Pgp were cultured in medium 199 supplemented with penicillin (100 units / ml) and streptomycin (100 ⁇ g / ml), 10% fetal calf serum and geniticin sulfate ( G418, 400 ⁇ g / ml) as a Pgp selection agent.
  • the confluent cells are subcultured by trypsinization each week and the medium is renewed twice a week. They are maintained at 37 ° C. in a controlled atmosphere at 5% CO 2 .
  • the intracellular accumulation of Rho 123 is measured.
  • the Mdrla-LLCPK1 cells are distributed on cell culture plates (24 wells) at a rate of 1.5 ⁇ 10 5 cells / well. They are cultured for 48 hours at 37 ° C. to reach confluence in 1 ml of medium without G418. The medium is removed and the cells washed with 0.5 ml of PBS IX. The cells are cultured for 2 hours at 37 ° C.
  • the culture medium is removed, the cells washed with 0.5 ml of PBS IX to remove excess Rho 123 .
  • the cells are lysed by the addition of 0.3 ml of PBS IX / 0.5% sodium dodecyl sulfate (50/50, v / v) in each well.
  • 14 C-moxidectin is quantified in the medium and hepatocytes by an HPLC technique coupled with on-line radioactivity detection (Dupuy et al., 2001b). This technique allows the detection and quantification of 14 C moxidectin and its major metabolite (C 29 monohydroxymethyl moxidectin) in rat hepatocytes. The radioactivity is measured by liquid scintillation counting (Kontron Beta V counter). The total initial radioactivity of the initial medium at 5 ⁇ M of 14 C moxidectin +/- 100 ⁇ M of fumagillin was 100%.
  • the areas under the time-concentration curve are calculated from the first to the last experimental point using the trapezium method (Gibaldi and Perrier, 1982).
  • Rho 123 The fluorescence of Rho 123 is measured using a fluorimeter (Perkin Elmer
  • the VSP is defined as the compound for which the accumulation of Rho 123 is maximal and therefore corresponds to a 100% inhibition of the Pgp.
  • the results obtained were modeled according to the model of
  • the viability of rat hepatocyte cultures is greater than 80% and no morphological change is observed during the 72 h of culture, regardless of the treatment.
  • the main compound detected is moxidectin and the intracellular amounts are reported in Table 2 below.
  • the decrease in moxidectin concentration in hepatocytes was faster in controls (6 hours post-treatment) than in those treated with fumagillin (24 hours post-treatment).
  • the concentration of the major metabolite increases from 6 h to reach its maximum value 24 h after treatment and its kinetics of production is not affected.
  • the exposure of cells to moxidectin is quantified by the area under the time-concentration curve calculated over the duration of the experiment ( Figure 1). Fumagillin significantly increases the amount of moxidectin in hepatocytes by 65% over the 72 h period.
  • Table 2 Amount of 14 C moxidectin in rat hepatocytes in culture after treatment with moxidectin +/- fumagillin (100 ⁇ M)
  • Rho 123 Intracellular accumulation of Rho 123 was followed to evaluate the effect of fumagillin on Pgp activity in Mdrla-LLCPK1 cells. This model has been validated with 2 compounds recognized as agents interfering with Pgp: IVM and
  • VSP The fluorescence results were normalized with respect to the protein amount.
  • the effect induced by the VSP (10 ⁇ M) is considered as the maximum value (100%) of accumulation of Rho 123 in the cells (FIG. 2).
  • the 5 ⁇ M IVM has an inhibitory power very close to the VSP since it generates an effect representing 95% of the VSP effect.
  • Fumagillin (10 to 100 ⁇ M) increased the amount of intracellular Rho 123.
  • the results were then expressed in percentage of accumulation with respect to the VSP and were modeled using the HiIl model. A sigmoidal curve was thus generated ( Figure 3).
  • Emax The maximum effect (Emax), defined as the maximum amount of Rho 123 in the cells in the presence of fumagillin, is reached at concentrations of 50 ⁇ M of fumagillin and represents 43.7% of the effect obtained in the presence of VSP.
  • LC50 the concentration required to reach 50% of the maximum effect, is obtained in the presence of 10 ⁇ M for fumagillin and accounted for 21.8% of the VSP effect. Discussion of the experiments In veterinary medicine, LMs remain the most effective antiparasitic compounds due in particular to their broad spectrum of action and their unique mechanism of action. To ensure the durability of these compounds, it is urgent to optimize their use.
  • One of the strategies is to increase bioavailability • compound, since the effectiveness of LM is directly related to the presence of the drug in the systemic circulation for a sufficient time period.
  • rat hepatocytes in primary culture are a particularly suitable tool for studying the function of Pgp and Pgp / cytochrome P450 3A interactions (Dupuy et al, 2001b, Hirsch-Ernst et al. 2001). Indeed, Pgp is expressed in hepatocytes and its expression is increased over time (Hirsch-Ernst et al., 1998).
  • fumagillin a drug used in veterinary and human medicine, to increase the amount of intracellular moxidectin in rat hepatocytes was evaluated. Surprisingly, fumagillin induced
  • fumagillin acquires a new interest in the field of veterinary medicine, as regulator of the Pgp. Due to the emergence of resistance to macrocyclic lactones in many species and the lack of development of new effective pest management principles in the medium term, there is an urgent need to develop strategies that aim to maintain the effectiveness of MLs. Fumagillin thus makes it possible to increase the efficacy of LM against parasites by increasing the amount of drug in the resistant parasites.
  • Such an approach for potentiating the action of a compound released by Pgp by the co-administration of a substance to overcome resistance phenomena is used in human cancer chemotherapy.
  • Clinical trials are currently being conducted in patients with cancer and developing resistance to anticancer drugs.
  • the use of Pgp inhibitory molecules in combination with an anticancer drug increases the amount of drug in these patients in order to have increased therapeutic efficacy (List et al., 2001).
  • avermectins have been shown to increase the amount of antitumor drugs in cancer cells (Korystov et al., 2004). It is therefore possible to use macrocyclic lactones in cancer chemotherapy.
  • Avermectins inhibits multidrug resistance of tumor cells. Eur J Pharmacol 493, 57-64.
  • Ivermectin resistance in nematodes may be caused by alteration of P-glycoprotein homolog. MolBiochemParasitol 91, 327-335.

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Abstract

L'invention concerne l'utilisation de la fumagilline, et de ses dérivés analogues, en tant qu'inhibiteurs des transporteurs cellulaires, tels que les transporteurs ABC, et plus particulièrement de la P-glycoprotéine, afin d'augmenter la biodisponibilité de principes actifs susceptibles d'être utilisés dans le traitement de pathologies telles que les cancers ou les maladies parasitaires, et en particulier afin d'augmenter la biodisponibilité des lactones macrocycliques.

Description

UTILISATION DE LA FUMAGILLINE ET DE SES DERIVES POUR AUGMENTER LA BIODISPONIBILITE DES LACTONES MACROCYCLIQUES
L'invention concerne l'utilisation de la fumagilline, et de ses dérivés analogues, en tant qu'inhibiteurs des transporteurs cellulaires, tels que les transporteurs ABC, et plus particulièrement de la P-glycoprotéine, afin d'augmenter la biodisponibilité de principes actifs susceptibles d'être utilisés dans le traitement de pathologies telles que les cancers ou les maladies parasitaires, et en particulier afin d'augmenter la biodisponibilité des lactones macrocycliques.
Les lactones macrocycliques ou LM, telles que les avermectines et milbemycines, sont des molécules antiparasitaires à usage vétérinaire très performantes (actives contre les endo et ectoparasites, longue rémanence, faible toxicité). Les avermectines sont les composés de formule générale suivante :
Figure imgf000002_0001
L'ivermectine Bla est le composé de formule précédente avec X = -CH2CH2- et R1= CH(CH3)CH2CH3 ; l'abamectine Bla est le composé de formule précédente avec X = -CH=CH- et R1= CH(CH3)CH2CH3 ; la doramectine est le composé de formule précédente avec X = -CH=CH- et R1= cyclohéxyle ; l'éprinomectine est le composé de formule précédente avec X = -CH=CH-, R1= CH(CH3)CH2CH3, et R2 = NHCOCH3. Une autre avermectine, la sélamectine, est le composé de formule suivante :
Figure imgf000003_0001
Les milbemycines constituent une autre famille de LM. Parmi les milbemycines, la némadectine est le composé de formule suivante :
Figure imgf000003_0002
et la moxidectine est le composé de formule suivante
Figure imgf000003_0003
Les avantages des LM sont à l'origine d'une large utilisation chez de nombreux mammifères (bovins, ovins, caprins, porcs, équins, chiens et chats). L'ivermectine est aussi utilisée en médecine humaine pour le traitement de l'Oncochercose (de Silva et al,
1997). La place des lactones macrocycliques dans le marché des médicaments vétérinaires est économiquement importante.
Cependant, en raison d'un usage non adapté (utilisation de posologie ou de voies, non préconisées et / ou utilisation chez des espèces pour lesquelles' il n'existe pas d'autorisation de mise sur le marché), des phénomènes de résistance parasitaire sont apparus chez de nombreuses espèces. En raison de l'absence de développement de nouvelles molécules, il est primordial d'optimiser l'utilisation des lactones macrocycliques (LM) en respectant leur sécurité d'usage. L'activité antiparasitaire de ces composés est directement liée à la concentration de principe actif dans l'organisme animal. Ainsi, l'optimisation de leur efficacité passe par l'augmentation de la quantité de médicament chez l'animal hôte après administration. Des méthodes physiologiques et pharmacologiques ont été utilisées pour augmenter la biodisponibilité des LM telles que la diminution de la ration alimentaire chez le mouton (Ali and Hennessy, 1996), la mise à jeun chez des chevaux (Alvinerie et al., 2000), la co-administration de médicaments (Lifschitz et al., 2002) ou de composé naturel (Dupuy et al., 2003). Parmi les nombreux facteurs pouvant moduler la biodisponibilité des LM, la P- glycoprotéine ou Pgp est reconnue comme un des éléments majeurs aussi bien sur des cellules (Dupuy et al., 2001b), chez l'animal entier (Alvinerie et al, 1999; Dupuy et al., 2003; Lifschitz et al., 2002) que chez les parasites (Xu et al., 1998). En effet, ce transporteur membranaire de la famille des « ATP binding cassette transporters », impliqué dans les mécanismes, de polychimiorésistances (résistances multidrogues ou
MDR), contrôle l'efflux actif de nombreux composés dont Pivermectine et la moxidectine. Cette Pgp est présente au niveau de la barrière hémato-méningée où elle protège le système nerveux central de la neurotoxicité de l'ivermectine (Roulet et al., 2003; Schinkel et al., 1994). L'implication de la Pgp dans l'élimination des LM par les voies biliaires et intestinales, voies majeures d'élimination, a été démontrée (Laffont et al, 2002).
Les hépatocytes de rat en culture primaire ont été utilisés pour évaluer l'aptitude de différents composés à augmenter la quantité intracellulaire de 14C moxidectine. Dans ce modèle, le verapamil (inhibiteur reconnu de la Pgp) ou la quercetine (un fiavonoïde naturel qui interfère avec la Pgp) augmentent de manière significative la quantité de 14C moxidectiήe dans les hépatocytes de rat (Dupuy et al., 2001b; Dupuy et al., 2003). De même, le kétoconazole majore de façon importante la quantité intracellulaire de 14C moxidectine, effet à relier à son action inhibitrice concomitante sur les Pgp et les cytochromes P450, deux systèmes présents dans les hépatocytes.
De plus, la modulation de la Pgp est également utile pour augmenter la biodisponibilité de principes actifs différents des LM. La modulation de la Pgp est par exemple utile dans le cadre du traitement du cancer, afin d'augmenter la biodisponibilité de principes actifs anticancéreux. Ainsi, plusieurs agents modulateurs de la Pgp ont été utilisés récemment pour traiter des leucémies aiguës myéloblastiques (LAM) et des leucémies aiguës lymphoblastiques (LAL) chez l'homme (Roos 2004), comme cela est résumé dans le tableau 1 ci-dessous :
Tableau 1 : utilisation de composés modulant l'activité de la Pgp pour traiter des leucémies aiguës myéloblastiques (LAM) et des leucémies aiguës lymphoblastiques TLAL) chez l'homme (Roos 20041
Type de cancer Traitement composés modulant l'activité Pgp
LAM Daunorubicine Cyclosporine
LAM Etoposide, mitoxantrone Cyclosporine
LAM Etoposide, daunorubicine Valspodar (PSC 833)
LAM, LAL Mitoxantrone Quinine
De façon surprenante, les inventeurs ont découvert que la fumagilline et ses dérivés permettent d'augmenter la biodisponibilité des LM, ce qui apporte une solution technique nouvelle au problème décrit ci-dessus.
La fumagilline est produite par le champignon Aspergillus fumigatus, active in vivo sur la microsporidiose des abeilles et in vitro sur les spores d'Enterocytozoon Bieneusi (Fumidil B - CEVA Santé Animale). Chez l'homme, la fumagilline est utilisée depuis quarante ans pour traiter l'amibiase intestinale et est actuellement prescrite en application locale pour la kératoconjonctivite à microsporidie. De plus, la fumagilline et ses analogues sont des inhibiteurs de l'angiogénèse par inhibition de la prolifération cellulaire endothéliale (Pyun et al., 2004). En raison de leurs propriétés antiangiogéniques, ces composés sont utilisés en médecine humaine pour le traitement des cancers.
L'invention a principalement pour but de fournir des compositions permettant d'augmenter la biodisponibilité de principes actifs dans l'organisme humain et animal, et ainsi d'améliorer les traitements existants, notamment dans le cadre des maladies parasitaires ou cancéreuses.
L'invention a plus particulièrement pour but de fournir des compositions permettant d'augmenter la biodisponibilité des lactones macrocycliques et des agents antitumoraux. L'invention concerne principalement l'utilisation d'au moins un composé de formule générale (I) suivante :
dans lequel :
- R1 est H ou un alkyle en C1-S linéaire ou ramifié ;
- R2 est H, un alkyle en C1-4, un aryle, un aryle alkyle en C1-4, un cycloalkyle, un cycloalkyle alkyle en C1-4, ou un groupe alcényle de 1 à 10 atomes de carbone tel qu'un groupe CH2R6, dans lequel R6 est un 2-méthyl-l-propényle ou un isobutyle éventuellement substitué par un groupe hydroxyle, amino, (alkyle en
C1.3)-amino ou di(alkyle en d-3)-amino ;
- R3 est un atome H, un alkyle en C1-4, ou un aryle en C5-8 qui est éventuellement substitué par un ou plusieurs halogènes, tel que F5 Cl, I, Br, un alcoxyle en C1^ ou un alkyle en Ci-4 ; - R4 est un atome H, un OH ou un alcoxyle en C1-4 ;
- R5 est de la forme OR7, auquel cas la liaison -wvvV représente une liaison simple, ou R5 est de la forme .
/ \
Rs Rg auquel cas la liaison ^wW représente une liaison en α ou β ; - R7 est choisi parmi le groupe composé de : • l'atome H,
• un groupe alcanoyle ou alcènoyle en C1- io, saturé ou insaturé, qui peut être substitué notamment par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1-6)-amino, di-(alkyl en Ci^-amino, nitro, halogéno, hydroxy, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1-6)-carbonyle, carboxy- (alcoxy en Cj-6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-O les alkyles halogènes et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques, • un groupe aroyle qui peut être substitué par un atome d'halogène ou par un alkyle en C2-6, amino, hydroxy, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle ou carboxyle,
• un hétérocyle-carbonyle qui peut être substitué par un atome d'halogène ou par un alkyle en C2-6, amino, hydroxy, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle ou carboxyle,
. un carbamyle, qui peut être substitué par un ou deux substituants choisis parmi les groupes alkyles en C1-6, eux-mêmes pouvant être substitués par un groupe mono- ou di-(alkyle en C1-6)-amino, alcanoyle en C1-6, chloroacétyle, dichloroacétyle, trichloroacétyle, (alcoxy en C1-6) - carbonyle - méthyle, carboxy- méthyle, phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogènes et nitro), naphtyle ou benzoyle, . un alkyle en C1-10 à chaîne droite ou ramifiée, qui peut éventuellement être époxydé et / ou substitué notamment par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1-6)-amino, di- (alkyl en C1-6)-amino, nitro, halogéno, hydroxy, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1-6)-carbonyle, carboxy- (alcoxy en C1-6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en Cj-6, les alcoxy en Ci-6 les alkyles halogènes et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques,
• un alcényle en Ci-10 à chaîne droite ou ramifiée, • un alcynyle en Ci-10 à chaîne droite ou ramifiée,
• un résidu d'hydrocarbure cycloaliphatique,
• un (aminé cyclique)-carbonyle,
• un benzène-sulfonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi les alkyles en C1-6 et les atomes d'halogène,
• un C1-10 alkyle-sulfonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1-6)-amino, di-(alkyl en Ci-6)-amino, nitro, halogéno, alcoxy en Ci-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en Ci-6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en Ci-6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogènes et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques, . un sulfamyle, qui peut éventuellement être substitué par un ou deux substituants choisis parmi les alkyles en Ci-6 et un phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en Ci-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogènes et nitro),
• un alcoxy-carbonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1-6)-amino, di-
(alkyl en C1-6)-amino, nitro, halogéno, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en Ci-6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en Ci-6-), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogènes et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques,
• un phénoxycarbonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi les atomes d'halogène et les alkyles en Ci-6, . C(O)-NH-C(O)-CH2-Cl ;
- R8 et R9 représentent chacun un atome H, un groupe hydrocarboné éventuellement substitué ou un groupe acyle éventuellement substitué, ou bien R8 et Rg peuvent constituer un cycle conjointement avec l'atome d'azote adjacent ; en tant qu'adjuvant pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs, notamment de principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux, et donc de potentialiser leurs effets, ces principes actifs étant susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires pour être transportés hors de ces cellules sans pouvoir atteindre leur cible thérapeutique intracellulaire, lesdits transporteurs étant présents dans les cellules de l'organisme humain ou animal auquel sont administrés lesdits principes actifs, et, le cas échéant, dans les cellules des parasites contre lesquels ces principes actifs sont administrés.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de composés de formule (I) choisis parmi les composés de formule (Ia) suivante :
Figure imgf000009_0001
dans laquelle R1, R2, R3, et R4 sont tels que définis ci-dessus. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée de composés de formule (I) choisis parmi les composés de formule (Ib) suivante :
Figure imgf000009_0002
dans laquelle : - R1 est H ou un alkyle en Ci-S linéaire ou ramifié ;
- R2 est H, un alkyle en Ci-4, ou un groupe alcényle de 1 à 10 atomes de carbone tel qu'un groupe CH2R6, dans lequel R6 est un 2-méthyl-l-propényle.
L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée du composé de formule (I) ci-dessus correspondant à la fumagilline de formule (II) suivante :
Figure imgf000010_0001
Par « adjuvant » on entend un composé qui entre dans une composition pharmaceutique pour un médicament, afin de « potentialiser », c'est à dire de renforcer et / ou rendre possible et / ou de rendre plus rapide l'action du composé de base, ledit composé de base étant encore appelé ici « principe actif ».
Par « biodisponibilité » d'un principe actif on entend la quantité de principe actif effectivement présente dans un organisme humain ou animal, et / ou la quantité de principe actif effectivement présente dans une partie déterminée d'un organisme humain ou animal, en particulier dans un ou des organe(s) déterminé(s) d'un organisme humain ou animal, et en particulier dans un sous-ensemble de cellules d'un ou plusieurs type(s) déterminé(s) d'un organisme humain ou animal. La « biodisponibilité » peut également désigner la proportion du principe actif administré à un organisme humain ou animal qui est effectivement active ou susceptible d'activité dans ledit organisme.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (Ia), (Ib), et de la fumagilline de formule (II), pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs, plus particulièrement de principes actifs antiparasitaires, susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires
ATP dépendants, encore désignés transporteurs ABC (ATP Binding Cassette) ou transporteurs à séquences de liaison à l'ATP, ces transporteurs étant décrits notamment dans Dean et al. (2001), Génome Research, 11 : 1156-1166, et Dean et al. (2001), Journal ofLipid Research, 42 :1007-1017. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (Ia)3 (Ib), et de la fumagilline de formule (II), pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs, plus particulièrement de principes actifs antiparasitaires, susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs ABC choisis parmi la P-glycoprotéine (Pgp, encore désignée ABCBl), les transporteurs ABCC (ABCCl à 8, encore désignés MRPl à 8), ou les transporteurs ABC G2.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (Ia), (Ib), et de la fumagilline de formule (II), en tant qu'inhibiteurs de la fonction de transport des transporteurs cellulaires par interaction entre ces composés et ces transporteurs, pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs,- plus particulièrement de principes actifs antiparasitaires, susceptibles d'être reconnus et de se lier à ces transporteurs. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (Ia), (Ib), et de la fumagilline de formule (II), en tant qu'inhibiteurs de la fonction de transport de la Pgp par interaction entre ces composés et la Pgp, pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs, plus particulièrement de principes actifs antiparasitaires, susceptibles d'être reconnus et de se lier à la Pgp.
De manière avantageuse, les composés de formule (I) susmentionnée, sont utilisés en tant qu'adjuvants pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux choisis parmi les substrats des transporteurs cellulaires, et plus particulièrement des substrats des ABC, transporteurs définis ci-dessus, notamment de la Pgp, dans le cadre du traitement de pathologies parasitaires ou cancéreuses.
Avantageusement les composés de formule (I) susmentionnée utilisés en tant qu'adjuvants pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux dans le cadre du traitement de pathologies parasitaires ou cancéreuses sont choisis parmi les composés de formule (Ia),
(Ib), et la fumagilline de formule (II).
De préférence, le composé de formule (I) susmentionnée utilisé en tant qu'adjuvant pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de pathologies parasitaires ou cancéreuses est la fumagilline de formule (II). De manière avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et plus particulièrement des composés de formule (Ia), (Ib), et de la fumagilline de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les lactones macrocycliques, telles que les avermectines et les milbemycines. De manière avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et plus particulièrement des composés de formule (Ia), (Ib), et de la fumagilline de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi' les avermectines, telles que Pivermectine, l'abamectine, la doramectine,
Péprinomectine ou la sélamectine, dans le cadre du traitement des maladies parasitaires endoparasitaires et ectoparasitaires.
De manière avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et plus particulièrement des composés de formule (Ia), (Ib), et de la fumagilline de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les milbemycines, telles que la moxidectine ou la némadectine, dans le cadre du traitement des maladies parasitaires endoparasitaires ou ectoparasitaires.
Les maladies endoparasitaires concernent les affections par parasites internes, tandis que les maladies ectoparasitaires concernent les affections par parasites externes.
Parmi les maladies parasitaires avantageusement traitées par les LM et entrant donc dans le cadre de l'invention on compte notamment : - les strongyloses gastro-intestinales (adulte et larve L3 ou L4) : Haemonchus,
Ostertagia, Trichostrongylus, Cooperia, Oesophagostonum, Nematodirus, Bunostonum ;
- les strongyloses pulmonaires : Dictyocaulus viviparus ;
- les hypodermoses (tous les stades larvaires) : Hypoderma bovis et lineatum ;
- les gales sarcoptiques et psoroptiques ; - les phtyrioses ;
- la filariose ;
- l'onchocercose.
De manière également avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et plus particulièrement des composés de formule (Ia), (Ib), et de la fumagilline de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs anticancéreux sont choisis parmi les substrats des transporteurs cellulaires, et plus particulièrement des substrats des ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment de la Pgp, dans le cadre du traitement des cancers, et plus particulièrement des cancers résistants aux chimiothérapies. Par « cancers résistants aux chimiothérapies » on entend cancers qui en réponse aux traitements chimiques surexpriment des transporteurs cellulaires, tels que les ABC- transporteurs, notamment la P-gp. En effluant le principe actif hors de la cellule, ces transporteurs diminuent ou neutralisent l'effet thérapeutique attendu. Les principes actifs anticancéreux qui sont des substrats des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement de la Pgp, sont notamment :
- les antibiotiques antitumoraux de type anthracycline, et notamment :
* la daunurubicine et la doxorubicine (utilisées dans le traitement des leucémies aiguës, des leucémies myéloïdes chroniques en transformation aiguë, des lymphomes hodgkiniens et non hodgkiniens),
* la mitomycine C (utilisée dans le traitement des cancers du sein, de l'estomac, de l'œsophage, de la vessie),
* la mitoxantrone (utilisée dans le traitement de la leucémie myéloïde ou lymphocytaire aiguë, du cancer du sein, de la prostate, de l'ovaire),
* l'adriamycine (utilisée dans le traitement des leucémies aiguës, des leucémies myéloïdes chroniques en transformation aiguë, des lymphomes hodgkiniens et non hodgkiniens), * l'actinomycine D (utilisée dans les mêmes cas que l'adriamycine),
- les taxanes, et notamment :
* le docétaxel (utilisé dans le traitement des lymphomes, du cancer du sein, de l'œsophage, de l'estomac, de la vessie, de la prostate, de l'utérus), * le paclitaxel (utilisé dans le traitement du cancer de l'ovaire, du poumon, du sarcome de Kaposi lié au SIDA),
- les alcaloïdes, et notamment :
* la vinblastine (utilisée dans le traitement du cancer du sein, de la vessie, des testicules et des lymphomes), * la vincristine (utilisée dans le traitement de la leucémie, des lymphomes, des sarcomes, du cancer du poumon, de l'utérus, du cerveau),
- les épipodophyllotoxines, et notamment : * l'étoposide (utilisé dans le traitement du cancer des testicules et de certains types de cancer du poumon),
* l'irinotécan (utilisé dans le traitement du cancer colorectal),
* le téniposide (utilisé dans le traitement du cancer du poumon, du cerveau, du sein),
* le topotécan.
Un autre aspect de l'invention concerne une composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) tel que défini ci- dessus en association avec un ou plusieurs principes actifs susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement à des
ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment à de la Pgp, pour être transportés hors des cellules de l'organisme humain ou animal.
L'invention a plus particulièrement pour objet une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, comprenant au moins un composé de formule (I) choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus.
Selon un mode de réalisation préféré, ladite composition pharmaceutique est caractérisée en ce que les principes actifs en association avec un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement avec un composé de formule (Ia), (Ib), ou la fumagilline de formule (II), sont des principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux. Selon un mode de réalisation plus particulier, ladite composition pharmaceutique est caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou la fumagilline de formule (II), en association avec des principes actifs antiparasitaires choisis parmi les lactones macrocycliques, telles que les avermectines et les milbemycines. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, ladite composition pharmaceutique est caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les avermectines, telles que l'ivermectine, l'abamectine, la doramectine, l'éprinomectine ou la sélamectine.
Selon un autre mode de réalisation particulièrement préféré, ladite composition pharmaceutique est caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les milbemycines, telles que la moxidectine ou la némadectine.
De manière avantageuse, la composition pharmaceutique susmentionnée est caractérisée en ce qu'elle contient au moins un composé de formule (I) tel que défini ci- dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou la fumagilline de formule (II), à un dosage approprié pour une administration journalière d'environ 0,2 à environ 2 mg/kg.
De manière avantageuse, la composition pharmaceutique susmentionnée est caractérisée en ce que le principe actif antiparasitaire, et le composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement le composé de formule (Ia), (Ib), ou la fumagilline de formule (II), sont présents dans rapport en poids compris entre environ 1 : 1 et environ 1:100, en particulier entre environ 1 : 1 et environ 1 :20.
En général le composé de formule (I) tel que défini ci-dessus,, et plus particulièrement le composé de formule (Ia), (Ib), ou la fumagilline de formule (II), doit en effet être dosé en excès par rapport au principe actif, car son affinité pour les transporteurs cellulaires susmentionnés, notamment la Pgp, est inférieure à celle du principe actif.
L'invention concerne plus particulièrement une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, comprenant de la fumagilline de formule (II) susmentionnée, en association avec un ou plusieurs principes actifs antiparasitaires tels que définis ci-dessus.
Selon un autre mode de réalisation préféré, la composition pharmaceutique susmentionnée est caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule
(I) tel que défini ci-dessus en association avec des principes actifs anticancéreux choisis parmi .les substrats des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement des substrats des ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment de la Pgp ; de préférence cette composition pharmaceutique comprend au moins un composé de formule
(I) choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus ; cette composition est caractérisée de façon particulièrement avantageuse en ce qu'elle contient au moins un composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus à un dosage approprié pour une administration journalière d'environ 0,2 à environ 2 mg/kg ; et de manière encore plus avantageuse, cette composition pharmaceutique est caractérisée en ce que le principe actif anticancéreux, et le composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus, sont présents dans un rapport en poids compris entre environ 1 : 1 et environ
1 : 100 et en particulier entre environ 1 : 1 et environ 1:20. L'invention a plus particulièrement pour objet une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (I), (Ia), (Ib), ou la fumagilline de formule (II), en association avec au moins un antibiotique antitumoral de type anthracycline et / ou un taxane et / ou un alcaloïde et / ou une épipodophyllotoxinè tels que mentionnés ci-dessus. L'invention concerne plus particulièrement une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, comprenant de la fumagilline de formule (II) susmentionnée, en association avec un ou plusieurs principes actifs anticancéreux tels que définis ci-dessus.
Dans leurs divers modes de réalisations, les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont en outre caractérisées de façon avantageuse en ce qu'elles se présentent sous une forme administrable par voie parentérale, ou orale.
Un autre objet de l'invention concerne des produits de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie, notamment antiparasitaire ou anticancéreuse, utilisant un principe actif susceptible d'être reconnu et de se lier à des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement à des
ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment à de la Pgp, pour être transporté hors des cellules de l'organisme humain ou animal, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif tel que défini ci-dessus, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, ,et plus particulièrement de la fumagilline de formule (II). Avantageusement, le composé de formule (I) dans les produits de combinaison est choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus.
De manière préférée, les produits de combinaison selon l'invention sont caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif susceptible d'être reconnu et de se lier à des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement à des ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment à de la Pgp, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou de la fumagilline de formule (II), dans un rapport en poids d'environ 1 : 1 à environ 1 : 100 et en particulier d'environ 1 : 1 à environ 1 :20.
Plus particulièrement, les produits de combinaison selon l'invention, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie antiparasitaire, sont caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif antiparasitaire, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou de la fumagilline de formule (II).
De manière avantageuse, les produits de combinaison selon l'invention sont caractérisés en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les lactones macrocycliques, telles que les avermectines et les milbemycines.
Dans un mode de réalisation plus particulier, les produits de combinaison selon l'invention sont caractérisés en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi, les avermectines, telles que l'ivermectine, l'abamectine, la doramectine, l'éprinomectine ou la sélamectine, dans le cadre du traitement des maladies parasitaires endoparasitaires et ectoparasitaires.
Plus particulièrement, lesdits produits de combinaison sont caractérisés en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les milbemycines, telles que la moxidectine ou la némadectine, dans le cadre du traitement des maladies parasitaires endoparasitaires ou ectoparasitaires.
De manière avantageuse, lesdits produits de combinaison sont caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif antiparasitaire, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement de la fumagilline de formule (II), dans un rapport en poids d'environ 1 : 1 à environ 1 : 1 OO et en particulier d'environ 1 : 1 à environ 1:20.
L'invention a plus particulièrement pour objet les produits de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie antiparasitaire, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif antiparasitaire tel . que défini ci-dessus, et la fumagilline de formule (II) telle que susmentionnée.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, les produits de combinaison selon l'invention, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie cancéreuse, sont caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif anticancéreux, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou de la fumagilline de formule (II).
De manière préférée, lesdits produits de combinaison sont caractérisés en ce que les principes actifs anticancéreux sont choisis parmi les substrats des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement des substrats des ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment de la Pgp, dans le cadre du traitement des cancers et plus particulièrement des cancers résistants aux chimiothérapies, et sont plus particulièrement choisis parmi les antibiotiques antitumoraux de type anthracycline, les taxanes, les alcaloïdes et les épipodophyllotoxines tels que mentionnés ci-dessus.
De manière particulièrement préférée, lesdits produits de combinaison sont caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif anticancéreux, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou de la fumagilline de formule (II), dans un rapport en poids d'environ 1 : 1 à environ 1 : 100 et en particulier d'environ 1 : 1 à environ 1 :20.
L'invention a plus particulièrement pour objet les produits de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie anticancéréuse, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif anticancéreux tel que défini ci-dessus, et la fumagilline de formule (II) telle que susmentionnée.
Description des figures La figure 1 représente l'aire sous la courbe (AUC) de la 14C moxidectine après deux traitements distincts : en blanc, le témoin (moxidectine) ; en noir : le traitement avec la fumagilline. L'axe des ordonnées est en μg.mL.h"1. On a p<0,01 pour le traitement avec la fumagilline (résultat significativement différent du témoin).
La figure 2 représente l'effet de différents composés sur l'accumulation de rhodamine 123 dans des cellules LLCPKl transfectées avec la Pgp murine. En abscisse : la concentration du composé ; en ordonnée, le pourcentage d'accumulation de Rho 123 par rapport au témoin (Rho 123 / contenu protéique). En blanc, l'ivermectine ; en gris uni, le valspodar ; en hachuré, la fumagilline.
La figure 3 représente l'accumulation de Rho 123 dans des cellules Mdrla LLC- PKl après traitement par la fumagilline. En abscisse, la concentration de fumagilline en μM ; en ordonnée, le pourcentage d'effet par rapport à l'effet du valspodar (modélisation selon le modèle de HiIl).
Partie expérimentale Dans cette partie expérimentale, on démontre d'abord la capacité de la fumagilline a augmenter la concentration intracellulaire de la 14C moxidectine dans les hépatocytes de rat (exemple 1). Ensuite on évalue sa capacité à interférer avec la fonction Pgp sur des cellules épithéliales de rein de porc transfectées avec la Pgp murine (Mdr Ia-LLCPKl), comme cela est résumé dans l'exemple 2. La fonction de transport de la Pgp est évaluée par l'accumulation intracellulaire de la rhodamine 123, substrat avéré de la Pgp. Ce modèle est particulièrement adapté pour la détection de composés interagissant avec la Pgp (Hamada et al., 2003).
Composés chimiques et milieux
La solution standard de C moxidectine (radiopureté = 98,2%, pureté chimique > 99%, activité spécifique = 14,8 μCi/mg) a été fourme par Fort-Dodge Santé Animale
(Tours, France). La fumagilline a été fournie par CEVA Santé Animale (Libourne, France). Le valspodar (VSP) a été gracieusement fourni par Novartis (Basel, Suisse). Le diméthyl-sulfoxide (DMSO), le sodium dodécyl sulfate (SDS), le collagène, la rhodamine 123 (Rho123), la trypsine-EDTA et l'ivermectine ont été achetés chez Sigma Chimie (Saint-Quentin Fallavier, France). Le milieu 199, le tampon phosphate salin (PBS 10X), le sérum de veau fœtal, la solution saline de Hanks' (HBSS) sans rouge phénol, la pénicilline, la streptomycine et la géniticine (G418) proviennent d'InVitrogen (Cergy Pontoise, France). Les boîtes de culture sont de chez chez Nunclon (Roskilde, Danemark), les flasques de culture et les plaques de culture cellulaire 24 puits de chez Sarstedt France
(Orsay, France). Le kit acide bicinchoninic provient de chez Interchim (Montluçon, France). L'acétonitrile et le méthanol (qualité RS pour la chromatographie Liquide Haute performance) ont été achetés chez Carlo Erba (Milan, Italie). L'eau utilisée lors de cette étude était de qualité ultra-pure (appareil MiIIiQ AlO, Millipore SA, Saint-Quentin, France).
Isolement des hépatocytes, mise en culture et traitements
L'isolement et la mise en culture des hépatocytes de rat ont été décrits précédemment (Dupuy et al, 2001b). Les hépatocytes sont répartis dans des boîtes de culture et maintenus à 37°C pendant 12 heures (étuve 5% CO2). Les cellules sont cultivées en présence de 5μM de 14C moxidectine (témoin) +/- 100 μM de fumagilline. Après 0, 6,
24, 48 et 72 h les incubations sont stoppées (n = 3 pour chaque traitement), les milieux collectés et les hépatocytes récoltés par dissociation mécanique dans du tampon phosphate salin (PBS IX). Les milieux et les hépatocytes sont stockés à -2O0C jusqu'à analyse par Chromatographie Liquide Haute Performance (HPLC). Mdrla-LLCPKl et accumulation intracellulaire de rhodamine 123 (Rho123)
Les cellules transfectées avec la Pgp murine (Mdrla-LLCPKl) ont été cultivées dans du milieu 199 supplémenté en pénicilline (100 unités/ml) et streptomycine (100 μg/ml), 10% de sérum de veau fœtal et de la géniticine sulfate (G418, 400 μg/ml) comme agent de sélection de la Pgp. Les cellules à confluence sont repiquées par trypsinisation chaque semaine et le milieu renouvelé 2 fois par semaine. Elles sont maintenues à 37°C en atmosphère contrôlée à 5% de CO2. Afin de suivre la fonction de transport via la Pgp dans les cellules Mdrla-LLCPKl, l'accumulation intracellulaire de Rho123 est mesurée. Les cellules Mdrla-LLCPKl sont réparties sur des plaques de culture cellulaire (24 puits) à raison de 1.5.105 cellules/puits. Elles sont cultivées 48 heures à 37°C pour atteindre la confluence dans 1 ml de milieu sans G418. Le milieu est éliminé et les cellules lavées avec 0.5 ml de PBS IX. Les cellules sont cultivées 2 heures à 37°C avec 0.2 ml de milieu HBSS contenant 10 μM de Rho123 (HBSS/DMSO, 50/50, v/v) +/- 5 μM de VSP (dans DMSO) +/- 10 μM d'IVM (dans DMSO) +/- 1, 5, 10, 50 et 100 μM de fumagilline (dans DMSO). Après 2 heures, le milieu de culture est éliminé, les cellules lavées avec 0,5 ml de PBS IX pour éliminer l'excès de Rho123. Les cellules sont lysées par l'addition de 0,3 ml de PBS IX/ 0.5 % sodium dodécyl sulfate (50/50, v/v) dans chaque puits. Après 10 minutes à température ambiante, 0,3 ml de PBS IX est ajouté dans chaque puits puis le lysat total (0,6 ml) est transféré dans un tube plastique de 2 ml et stocké à -20°C jusqu'à son analyse par spectrofluorimétrie.
Quantification et analyse des données : 14C moxidectine dans les hépatocytes en culture
La 14C moxidectine est quantifiée dans le milieu et les hépatocytes par une technique HPLC couplée à une détection de radioactivité en ligne (Dupuy et al., 2001b). Cette technique permet de détecter et de quantifier la 14C moxidectine et son métabolite majeur (C29 monohydroxymethyl moxidectine) dans les hépatocytes de rat. La radioactivité est mesurée par comptage en scintillation liquide (compteur Kontron Beta V). La radioactivité initiale totale du milieu initial à 5 μM de 14C moxidectine +/- 100 μM de fumagilline correspondait à la valeur 100%. Grâce à la concentration de moxidectine détectée dans les hépatocytes (ng.ml"1) et au pourcentage de radioactivité initiale introduite, les aires sous la courbe temps-concentrations sont calculées du premier au dernier point expérimental en utilisant la méthode des trapèzes (Gibaldi and Perrier, 1982).
Quantification et analyse des données : accumulation de la Rho123 dans Mdrla- LLCPKl
La fluorescence de la Rho123 est mesurée à l'aide d'un fluorimètre (Perkin Elmer
LS50B, λmax excitation = 507 nm ; λmax émission = 529 nm) puis normalisée avec le contenu protéique de chaque puits (dosage par réaction colorimétrique, kit BCA). Les résutats sont exprimés en pourcentage d'accumulation de Rho 123 dans les cellules traitées (VSP ou IVM ou fumagilline) par rapport aux cellules témoins contenant de la
Rho seule. Afin de comparer les différentes molécules, le VSP est défini comme le composé pour lequel l'accumulation de Rho123 est maximale et correspond donc à une inhibition de 100% de la Pgp. Les résultats obtenus ont été modélisés selon le modèle de
HiIl (logiciel Scientist, Micromath research, Saint Louis, USA). Analyse statistique
La moyenne et la déviation standard ont été déterminées pour tous les paramètres étudiés. Toutes les données ont été soumises à un test de Fischer (PLSD Fischer test) via le logiciel Statview (Abacus Concept, Berkeley, USA). Dans tous les cas, une valeur, de p < 0.05 est considérée comme significative. Exemple 1 : hépatocytes de rat
La viabilité des cultures d'hépatocytes de rat (exclusion du bleu trypan) est supérieure à 80% et aucun changement morphologique n'est observé lors des 72 h de culture, quel que soit le traitement. Le composé principal détecté est la moxidectine et les quantités intracellulaires sont rapportées dans le tableau 2 ci-dessous. Le métabolite majeur correspondant au C2g monohydroxymethyl déjà décrit lors d'une étude précédente (Dupuy et al., 2001b), ne représente que 4% (valeur maximale) du principe parental. La fumagilline augmente significativement la quantité de moxidectine intracellulaire avec un maximum à 6 h chez les témoins et après 24 h chez les cellules traitées par la fumagilline. La diminution de la concentration en moxidectine dans les hépatocytes est plus rapide dans les témoins (6 heures post-traitement) que dans ceux traités par la fumagilline (24 heures post-traitement). La concentration du métabolite majeur augmente à partir de 6 h pour atteindre sa valeur maximale 24 h après traitement et sa cinétique de production n'est pas affectée. L'exposition des cellules à la moxidectine est quantifiée par l'aire sous la courbe temps-concentration calculée sur la durée de l'expérimentation (Figure 1). La fumagilline augmente significativement de 65 % la quantité de moxidectine dans les hépatocytes sur la période de 72 h.
Tableau 2 : quantité de 14C moxidectine dans les hépatocytes de rat en culture a après traitement par la moxidectine +/- fumagilline (100 μM)
Durée de culture Λ, . , ,. .
Λ/r . , ,. Moxidectine +
,, . Moxidectine „ .„.
(heure) fumagilline
0 4,5 ± 1,25 7,05 + 0,24
6 72,95 + 9,98 79,29 + 1,01
24 52,60 + 5,94 82,94 ± 14,97** •
48 22,19 + 4,00 27,88 ± 2,67
72 11,98 + 1,30 16,22 + 1,21
Les valeurs représentent la moyenne ± écart type de 3 boîtes de culture différentes. ** significativement différent des cellules traitées par la moxidectine. P < 0.01 Exemple 2 : Mdr Ia-LLCPKl ,
L'accumulation intracellulaire de la Rho123 a été suivie pour évaluer l'effet de la fumagilline sur l'activité de la Pgp dans les cellules Mdrla-LLCPKl. Ce modèle a été validé à l'aide de 2 composés reconnus comme agents interférant avec la Pgp : l'IVM et le
VSP. Les résultats de fluorescence ont été normalisés par rapport à la quantité protéique. L'effet induit par le VSP (10 μM) est considéré comme la valeur maximale (100%) d'accumulation de Rho 123 dans les cellules (figure 2). L'IVM à 5 μM a une puissance inhibitrice très proche du VSP puisqu'elle génère un effet représentant 95% de l'effet VSP. La fumagilline (10 à 100 μM) a permis d'augmenter la quantité de Rho 123 intracellulaire. Les résultats ont été alors exprimés en pourcentage d'accumulation par rapport au VSP et ont été modélisés à l'aide du modèle de HiIl. Une courbe sigmoïde a été ainsi générée (figure 3). L'effet maximal (Emax), défini comme la quantité maximale de Rho123 dans les cellules en présence de fumagilline, est atteint à des concentration de 50 μM de fumagilline et représente 43,7% de l'effet obtenu en présence de VSP. LΕC50, concentration nécessaire pour atteindre 50% de l'effet maximal, est obtenu en présence de 10 μM pour la fumagilline et représentait 21,8% de l'effet VSP. Discussion sur les expériences En médecine vétérinaire, les LM restent les composés antiparasitaires les plus efficaces en raison notamment de leur large spectre d'action et de leur mécanisme unique d'action. Pour assurer la pérennité de ces composés il est urgent d'optimiser leur utilisation. Une des stratégies consiste à augmenter la biodisponibilité du • composé, puisque l'efficacité des LM est directement liée à la présence du médicament dans la circulation systémique pendant une durée de temps suffisante. Les méthodes pharmacologiques avec administration de composés chimiques ou naturels (Dupuy et al.,
2003; Lifschitz et al., 2002) sont principalement basées sur l'implication de transporteurs actifs tels que la Pgp, qui modulent la biodisponibilité des LM chez l'animal et chez les parasites. Grâce à l'utilisation d'inhibiteurs de la Pgp la biodisponibilité de l'IVM chez le rat (Alvinerie et al., 1999) et de la moxidectine chez le mouton (Dupuy et al., 2003) a pu être augmentée. De plus, l'efficacité antiparasitaire a été accrue par la co-administration de LM et d'agents interférant avec la Pgp chez des souches de parasites résistants à l'ivermectine et à la moxidectine. Ceci montre que la Pgp pourrait jouer un rôle dans la résistance des nématodes aux LM (Molento and Prichard, 1999). Des études précédentes ont montré que les hépatocytes de rat en culture primaire représentent un outil particulièrement adapté à l'étude de la fonction de la Pgp et des interactions Pgp/cytochrome P450 3A (Dupuy et al, 2001b ; Hirsch-Ernst et al., 2001). En effet, la Pgp est exprimée dans les hépatocytes et son expression est augmentée avec le temps (Hirsch-Ernst et al., 1998). Ici la capacité de la fumagilline, médicament utilisé en médecine vétérinaire et humaine, à augmenter la quantité de moxidectine intracellulaire dans les hépatocytes de rat a été évaluée. De manière surprenante, la fumagilline a induit
• une accumulation intracellulaire de la moxidectine. Par comparaison aux résultats précédemment obtenus avec ce modèle cellulaire, l'accumulation intracellulaire de moxidectine obtenue avec la fumagilline (100 μM) est comparable à celle obtenue avec la quercétine avec un effet maximal 24 heures après le traitement (Dupuy et al., 2003). La diminution en fonction du temps de la concentration de moxidectine dans les hépatocytes (témoins, traités par la fumagilline) et aussi notée avec la quercétine peut être attribuée à l'activité des cytochromes P450 qui est à l'origine de la production de métabolites qui sont rapidement expulsé hors des hépatocytes. Ces résultats montrent que la fumagilline peut moduler l'accumulation intracellulaire de moxidectine dans le système cellulaire utilisé ici. L'effet obtenu avec le vérapamil ou la quercétine met certainement en jeu l'implication de la Pgp dans l'accumulation de moxidectine dans le modèle hépatocytes puisque ces composés sont connus pour interférer avec la Pgp. L'influence de la fumagilline sur l'accumulation intracellulaire de Rho dans des cellules Mdr Ia-LL CPKl (Schinkel et al., 1995) a également été étudiée. Ces cellules surexpriment la Pgp murine et possèdent peu ou pas d'autres transporteurs de la même famille (ABC-transporteurs) ou de cytochromes P450. Une étude récente a montré que différents LM permettaient de moduler l'effiux de la Rho123 et l'accumulation de calcéïne dans des cellules tumorales (Korystov et al., 2004). Dans notre modèle, la fumagilline a permis d'augmenter la quantité de Rho123 d'une manière dépendant de la dose, ce qui implique une interaction avec la Pgp. La modélisation de l'effet de la fumagilline a permis de corréler le pourcentage d'accumulation de Rho123 par rapport à un l'effet induit par un inhibiteur reconnu (VSP) de la Pgp. L'effet maximal obtenu avec lOOμM de fumagilline correspond à 43% de l'effet VSP. Or aucune donnée n'existait jusqu'ici sur l'interaction entre la fumagilline et la Pgp ou d'autres ABC-transporteurs. Ces résultats montrent que l'augmentation de moxidectine observée dans les hépatocytes de rat en présence de fumagilline est associée à un effet inhibiteur de ce composé sur la fonction Pgp. A ce titre la fumagilline acquiert un intérêt nouveau dans le domaine de la médecine vétérinaire, comme agent régulateur de la Pgp. En raison de l'émergence de résistance aux lactones macrocycliques dans de nombreuses espèces et de l'absence de développement de nouveaux principes antiparasitaires performants à moyen terme, il est urgent de développer des stratégies qui visent à faire perdurer l'efficacité des LM. La fumagilline permet ainsi d'accroître l'efficacité des LM vis-à-vis des parasites en majorant la quantité de médicament au sein des parasites résistants.
Une telle approche de potentialisation de l'action d'un composé efflué par la Pgp par la co-administration d'une substance pour palier aux phénomènes de résistance est utilisée en chimiothérapie cancéreuse humaine. Des essais cliniques sont actuellement conduits chez des patients atteints de cancer et développant des résistances aux anticancéreux. L'utilisation de molécules inhibitrices de la fonction Pgp en association avec un anticancéreux permet de majorer la quantité de médicament chez ces patients afin d'avoir une efficacité thérapeutique accrue (List et al., 2001). Récemment, il a été démontré que les avermectines pouvaient majorer la quantité de médicaments antitumoraux dans des cellules cancéreuses (Korystov et al., 2004). Il est donc envisageable d'utiliser des lactones macrocycliques en chimiothérapie cancéreuse.
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Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'au moins un composé de formule générale (I) suivante :
Figure imgf000027_0001
dans lequel :
- R1 est H ou un alkyle en C1-S linéaire ou ramifié ;
- R2 est H, un alkyle en C1-4, un aryle, un aryle alkyle en Cj-4, un cycloalkyle, un cycloalkyle alkyle en C1-4, ou un groupe alcényle de 1 à 10 atomes de carbone tel qu'un groupe CH2R6, dans lequel R6 est un 2-méthyl-l-propényle ou un isobutyle éventuellement substitué par un groupe hydroxyle, amino, (alkyle en C1-3)-amino ou di(alkyle en C1-3)-amino ;
- R3 est un atome H, un alkyle en C1-4, ou un aryle en C5-8 qui est éventuellement substitué par un ou plusieurs halogènes, tel que F, Cl, I, Br, un alcoxyle en C1-4 ou un alkyle en C1-4 ;
- R4 est un atome H, un OH ou un alcoxyle en C1-4 ;
- R5 est de la forme OR7, auquel cas la liaison -wv\^ représente une liaison simple, ou R5 est de la forme , .
R8 \ auquel cas la liaison ^^ représente une liaison en α ou β ;
- R7 est choisi parmi le groupe composé de :
• l'atome H,
• un groupe alcanoyle ou alcènoyle en C1- 10, saturé ou insaturé, qui peut être substitué notamment par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1-6)-amino, di-(alkyl en C1-6)-amino, nitro, halogéno, hydroxy, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1-6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en C1-6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en Cj-6 les alkyles halogènes et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques,
. un groupe aroyle qui peut être substitué par un atome d'halogène ou par un alkyle en C2-6, amino, hydroxy, alcoxy en Ci-6, cyano, carbamyle ou carboxyle,
. un hétérocyle-carbonyle qui peut être substitué par un atome d'halogène ou par un alkyle en C2-6, amino, hydroxy, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle ou carboxyle, . un carbamyle, qui peut être substitué par un ou deux substituants choisis parmi les groupes alkyles en C1-6, eux-mêmes pouvant être substitués par un groupe mono- ou di-(alkyle en C1-6)-amino, alcanoyle en C1-6, chloroacétyle, dichloroacétyle, trichloroacétyle, (alcoxy en C1-6) - carbonyle - méthyle, carboxy- méthyle, phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogènes et nitro), naphtyle ou benzoyle,
• un alkyle en C1-Io à chaîne droite ou ramifiée, qui peut éventuellement être époxydé et / ou substitué notamment par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1-6)-amino, di- (alkyl en C1-6)-amino, nitro, halogéno, hydroxy, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en Ci-6)-carbonyle, carboxy- (alcoxy en Ci-6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en
C1-6, les alcoxy en Ci-6 les alkyles halogènes et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques,
• un alcényle en C^o à chaîne droite ou ramifiée,
• un alcynyle en CMO à chaîne droite ou ramifiée, . un résidu d'hydrocarbure cycloaliphatique,
• un (aminé cyclique)-carbonyle,
• un benzène-sulfonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi les alkyles en Ci-6 et les atomes d'halogène, • un CJ-10 alkyle-sulfonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en Ci-6)-amino, di-(alkyl en Ci-6)-amino, nitro, halogéno, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1-6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en Ci-6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en Ci-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogènes et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques,
• un sulfamyle, qui peut éventuellement être substitué par un ou deux substituants choisis parmi les alkyles en Ci-6 et un phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en Ci-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogènes et nitro),
• un alcoxy-carbonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en Ci-6)-amino, di-
(alkyl en C1-6)-amino, nitro, halogéno, alcoxy en Ci-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1-6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en C1-6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogènes et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques,
. un phénoxycarbonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi les atomes d'halogène et les alkyles en Ci-6, . C(O)-NH-C(O)-CH2-Cl ;
- R8 et R.9 représentent chacun un atome H, un groupe hydrocarboné éventuellement substitué ou un groupe acyle éventuellement substitué, ou bien R.8 et Rg peuvent constituer un cycle conjointement avec l'atome d'azote adjacent ; en tant qu'adjuvant pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter -la biodisponibilité de principes actifs, et donc de potentialiser leurs effets, ces principes actifs étant susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires présents dans les cellules de l'organisme humain ou animal auquel sont administrés lesdits principes actifs, et, le cas échéant, dans les cellules des parasites contre lesquels ces principes actifs sont administrés, pour être transportés hors de ces cellules sans pouvoir atteindre leur cible thérapeutique intracellulaire.
2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle le composé de formule (I) est le composé de formule (Ia) suivante :
Figure imgf000030_0001
dans laquelle R1, R2, R3, et R4 sont tels que définis dans la revendication 1.
3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le composé de formule I) est le composé de formule (Ib) suivante :
Figure imgf000030_0002
dans laquelle :
- R1 est H ou un alkyle en C1-8 linéaire ou ramifié ;
- R2 est H, un alkyle en C1-4, ou un groupe alcényle de 1 à 10 atomes de carbone tel qu'un groupe CH2R6, dans lequel R6 est un 2-méthyl-l-propényle.
4. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le composé de formule I) est la fumagilline de formule (II) suivante :
Figure imgf000031_0001
5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, d'un composé de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires ATP dépendants, encore désignés transporteurs ABC (ATP Binding Cassette) ou transporteurs à séquences de liaison à l'ATP, tels que les transporteurs ABC choisis parmi la P- glycoprotéine (Pgp, encore désignée ABCBl), les transporteurs ABCC (ABCCl à 8, encore désignés MRPl à 8), ou les transporteurs ABC G2.
6. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, d'un composé de formule (I) en tant qu'inhibiteur de la fonction de transport des transporteurs cellulaires par interaction entre ce composé et ces transporteurs, pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs susceptibles d'être reconnus et de se lier à ces transporteurs.
7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, d'un composé de formule (I) en tant qu'inhibiteurs de la fonction de transport de la Pgp par interaction entre ces composés et la Pgp, pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs susceptibles d'être reconnus et de se lier a la Pgp.
8. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7, d'un composé de formule (I) choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib), ou (II), en tant qu'adjuvant pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux dans le cadre du traitement de pathologies parasitaires ou cancéreuses.
9. Utilisation selon- la revendication 8, caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les lactones macrocycliques, telles que les avermectines, notamment l'ivermectine, l'abamectine, la doramectine, Péprinomectine ou la sélamectine, ou telles que les milbemycines, notamment la moxidectine ou la némadectine, dans le cadre du traitement des maladies parasitaires endoparasitaires ou ectoparasitaires.
10. Utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que les principes actifs anticancéreux sont choisis parmi les substrats des transporteurs cellulaires, notamment de la Pgp, notamment parmi les antibiotiques antitumoraux de type anthracycline, tels que la daunurubicine, la doxorubicine, la mitomycine C, la mitoxantrone, Padriamycine, et Pactinomycine D, ou parmi les taxanes, tels que le docétaxel, et le paclitaxel, ou parmi les alcaloïdes, tels que la vinblastine, et la vincristine, ou parmi les épipodophyllotoxines, tels que Pétoposide, Pirinotécan, le téniposide, et le topotécan, dans le cadre du traitement des cancers et plus particulièrement des cancers résistants aux chimiothérapies.
11. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) défini dans la revendication 1, en association avec un ou plusieurs principes actifs susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires tels que définis dans l'une des revendications 5 à 7.
12. Composition pharmaceutique selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis dans l'une des revendications 2 à 4.
13. Composition pharmaceutique selon la revendication 11 ou 12, caractérisée en ce que les principes actifs en association avec le composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II), sont des principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux, tels que définis dans les revendications 9 et 10.
14. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 11 à 13, caractérisée en ce qu'elle contient un composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) défini dans l'une des revendications 1 à 4, à un dosage approprié pour une administration journalière d'environ 0,2 à environ 2 mg/kg.
15. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 11 à 14, caractérisée en ce que le principe actif et le composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) défini dans l'une des revendications 1 à 4 sont présents dans un rapport en poids compris entre environ 1 : 1 et environ 1 : 100, et en particulier entre environ 1 : 1 et environ 1 :20.
16. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 11 à 15, caractérisée en ce qu'elle comprend de la fumagilline de formule (II) telle que définie dans la revendication 4, en association avec un ou plusieurs principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux, tels que définis dans les revendications 9 et 10.
17. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 11 à 16, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme administrable par voie parentérale, ou orale.
18. Produits de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie utilisant un principe actif susceptible d'être reconnu par des transporteurs cellulaires tels que définis dans l'une des revendications 5 à 7, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif tel que défini ci-dessus, et un composé de formule (I) tel que défini dans la revendication 1.
19. Produits de combinaison selon la revendication 18, caractérisés en ce que le composé de formule (I) est choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis dans l'une des revendications 2 à 4.
20. Produits de combinaison selon la revendication 18 ou 19, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie antiparasitaire, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif tel que défini dans la revendication 9, et un composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) définis dans l'une des revendications 1 à 4.
21. Produits de combinaison selon la revendication 18 ou 19, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie anticancéreuse, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif tel que défini dans la revendication 10, et un composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) définis dans l'une des revendications 1 à 4.
22. Produits de combinaison selon l'une des revendications 18 à 21, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif susceptible d'être reconnu par des transporteurs cellulaires, et un composé de formule (I), dans un rapport en poids d'environ 1 : 1 à environ 1 : 100, et en particulier d'environ 1 : 1 à environ 1 :20.
23. Produits de combinaison selon l'une des revendications 18 à 22, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif antiparasitaire ou anticancéreux tel que défini dans la revendication 9 ou 10, et la fumagilline de formule (II) telle que définie dans la revendication 4.
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