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WO2006118004A1 - 潰瘍性大腸炎または間質性肺炎の病期判定方法並びにそのための試薬キット - Google Patents

潰瘍性大腸炎または間質性肺炎の病期判定方法並びにそのための試薬キット Download PDF

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WO2006118004A1
WO2006118004A1 PCT/JP2006/307939 JP2006307939W WO2006118004A1 WO 2006118004 A1 WO2006118004 A1 WO 2006118004A1 JP 2006307939 W JP2006307939 W JP 2006307939W WO 2006118004 A1 WO2006118004 A1 WO 2006118004A1
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WO
WIPO (PCT)
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pge
mum
ulcerative colitis
urine
remission
Prior art date
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PCT/JP2006/307939
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English (en)
French (fr)
Inventor
Mutsunori Fujiwara
Isao Okayasu
Yuzo Hayashi
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Fujirebio Inc
Original Assignee
Fujirebio Inc
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Publication date
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Priority to NZ562455A priority patent/NZ562455A/en
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    • G01N33/88—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving prostaglandins or their receptors
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    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/12—Pulmonary diseases
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    • Y10T436/200833—Carbonyl, ether, aldehyde or ketone containing
    • Y10T436/201666—Carboxylic acid

Definitions

  • the present invention relates to a method for determining the stage of ulcerative colitis or interstitial pneumonia and a reagent kit therefor.
  • Ulcerative colitis is known as an intractable inflammatory disease, and the number of patients (recipients of specific diseases) was 77,073 in 2002, increasing by about 5,000 every year. It has been reported.
  • the ulcerative colitis is an inflammatory disease of the large intestine that causes erosions and ulcers in the mucosa of the large intestine. The cause of this disease is thought to be the involvement of enteric bacteria, abnormal autoimmune reactions in which immune functions do not function normally, or involvement of changes in dietary habits, but it has not been clarified yet. Characteristic symptoms are diarrhea with or without melena and frequent abdominal pain.
  • the lesion has the property of spreading continuously and ascending (oral) from the rectum, and at the maximum, the rectal force also spreads throughout the colon. This disease is classified as follows according to the spread and course of the lesion.
  • PGs prostaglandins
  • GC-MS gas chromatography mass spectrometry
  • RIA radioimmunoassay
  • EIA enzyme immunoassay
  • Patent Document 1 Known as an important chemical mediator involved in the inflammatory response in the living body, there is a method for measuring the main metabolites in urine (PGE Main Urinary Metabolite, hereinafter referred to as “PGE—MUM”) by enzyme-linked immunosorbent assay using a competitive method. Reported! (Patent Document 1).
  • a score obtained by quantifying a value obtained by measuring the PGE-MUM from a urine sample obtained from the ulcerative colitis patient and a plurality of clinical symptoms (clinical disease activity) of the ulcerative colitis patient has attempted to relate the total score (revised Talstad score) to one another (Non-Patent Document 1).
  • interstitial pneumonia is known as one of the intractable inflammatory diseases!
  • Interstitial pneumonia is a general term for cases that eventually cause fibrosis of the alveoli due to inflammation of the interstitium. Cases such as idiopathic pulmonary fibrosis, nonspecific interstitial pneumonia, idiopathic organized pneumonia are known.
  • Patent Document 2 Studies have been made to correlate the measured value of osteobontin in plasma with the symptoms of interstitial pneumonia.
  • SP-D surfatatant protein D
  • SP-A surfatatant protein A
  • sharui sucrose antigen KL-6 sharui sucrose antigen KL-6
  • Patent Document 1 Japanese Patent Laid-Open No. 61-11664
  • Patent Document 2 JP-A-2005-030852
  • Non-Patent Document 1 Digestion 2000; 61: 201-206
  • Active phase A state of complaining of bloody stool and endoscopically disappearing blood vessel images, easily bleeding, erosion, or ulcers.
  • Remission phase A state in which bloody stool has disappeared, endoscopically the findings during the active period have disappeared, and a blood vessel image has appeared.
  • Non-Patent Document 1 there is a correlation between the result of measuring the PGE-MUM and the revised Talstad score representing the active phase and remission phase of the ulcerative colitis
  • the criteria for determining the stage without performing endoscopy are shown, the present invention requires continuation of medication for cases judged to be in remission based on the revised Talstad score.
  • the cases immediately before the remission shown in FIG. The items used for judgment in the revised Talstad score are diarrhea, body temperature, tachycardia, erythrocyte sedimentation rate, hemoglobin, leukocytes, platelets, total protein, albumin, iron, etc. Score and sum this score to get the revised Talstad score Eyes had.
  • interstitial pneumonia will recur and cause various problems such as the risk of transition to lung cancer as well as progression. It is known.
  • the present invention provides a method for objectively classifying the stage immediately before the remission of the ulcerative colitis existing between the active period and the remission period in detail, and the observation findings by the endoscope so far
  • Another object of the present invention is to provide a simple staging method for determining the stage of the ulcerative colitis, which has been difficult to determine even by analyzing a tissue sample collected from a living body.
  • the present invention also provides a method for objectively classifying in detail the stage of activity of the interstitial pneumonia and the stage of inactivity of the interstitial pneumonia, which has been difficult to determine until now.
  • the purpose is to provide a simple staging method for determining the stage of pneumonia.
  • the present inventors collected force urine from a patient diagnosed as being in remission of ulcerative colitis, and previously determined the PGE-MUM concentration contained in the urine as a basic value. If the patient's PGE-MUM concentration exceeds this basal value and is less than 3 times the basal value, the patient's stage is remission of the ulcerative colitis. We found that it corresponds to the last term.
  • the present inventors collected urine from a patient who was diagnosed as being inactive during interstitial pneumonia. If the value of the PGE-MUM concentration contained in the urine is grasped in advance as a basic value and the PGE-MUM concentration of the patient exceeds the basic value, the disease of the patient It has also been found that the period corresponds to the active period of interstitial pneumonia, and the present invention has been completed.
  • the present invention provides the following (1) to (10).
  • PGE-MUM prostaglandin major metabolite
  • the patient's urinary PGE—MUM concentration value is determined to be the pre-remission phase of ulcerative colitis when it exceeds this basic value and is within 3 times the basic value.
  • the value of PGE—MUM concentration in the urine is determined to be the remission phase of ulcerative colitis when it is in the range below this basic value.
  • a method for determining a stage between a period immediately before remission of the ulcerative colitis and a period of remission of the ulcerative colitis is a method for determining a stage between a period immediately before remission of the ulcerative colitis and a period of remission of the ulcerative colitis.
  • the remission period of the ulcerative colitis is when the Mats classification is in a range of less than 2,
  • the present invention by quantitatively measuring the PGE-MUM in urine, it is possible to easily discriminate between the stage immediately before remission of the ulcerative colitis and the stage of remission of the ulcerative colitis. became. Further, it has become possible to easily distinguish the stage of the interstitial pneumonia from the active stage and the inactive stage of the interstitial pneumonia by quantitatively measuring the PGE-MUM in the urine.
  • the present invention provides a determination method based on observation by an endoscope or the like that requires skill and skill that have been used in the past and which requires expensive examination costs, and analysis of a pathological tissue sample collected from a living body. Therefore, it is possible to replace the above-mentioned method with an examination such as inserting an endoscope into the body of the patient with the ulcerative colitis or the patient with the interstitial pneumonia, or the body of the patient.
  • an examination such as inserting an endoscope into the body of the patient with the ulcerative colitis or the patient with the interstitial pneumonia, or the body of the patient.
  • the above-mentioned ulcerative colitis in which the results do not depend on individual differences in the judgment of the doctors who conduct the examination, which also gives the patient any physical or mental burden associated with the operation of collecting internal tissue etc.
  • stage of interstitial pneumonia can be easily determined, not only can it be easy to determine the choice of a therapeutic drug, discontinuation of treatment, etc., but also the therapeutic effect can be easily determined, and the patient's QOL (Quality of Life) can be improved and medical expenses can be reduced.
  • FIG. 1 shows a pathological photograph of a patient with ulcerative colitis in remission. Cell nuclei showing some inflammatory cell infiltration are observed as black dots.
  • FIG. 2 shows a pathological photograph of a patient with ulcerative colitis immediately before remission. Nuclei of cells showing many inflammatory cell infiltrates are observed as black dots.
  • FIG. 3 shows pathological photographs of patients with ulcerative colitis in active phase. Numerous inflammatory cell infiltrates Cell nuclei are observed as black spots, and crypt abscesses due to cell infiltration, a characteristic of active phase, are observed.
  • PGE—MUM (7alpha-hydroxy-5,11-diketotetranor-prosta-1,16-dioic acid) measured by the method of the present invention is a major component of PGE and E, particularly PGE, in urine.
  • E particularly PGE
  • the concentration of PGE-MUM can be measured using urine as a specimen, for example, by GC-MS, HPLC, immunoassay using anti-PGE-MUM antibody, or the like.
  • the measurement of the PGE-MUM concentration value is preferably carried out by an immunoassay method because a large amount of samples can be easily measured simultaneously. In consideration of alkali treatment with sodium hydroxide or the like. It is preferable to carry out by a measurement method to obtain a chemically stable bicyclo form.
  • the anti-PGE-MUM antibody used in the immunoassay include a polyclonal antibody or a monoclonal antibody with respect to the antibody.
  • the antibody used in the present invention is preferably a polyclonal antibody or a monoclonal antibody that is an antibody that specifically reacts with bicyclized PGE-MUM (hereinafter referred to as bicyclo PGE-MUM).
  • a polyclonal antibody can be produced according to the method described in JP-A-6111664 (Patent Document 1).
  • the PGE-MUM is a hapten.
  • the PGE-MUM is converted into a PGE-MUM bicyclo form by alkali treatment, and bound with an appropriate protein such as bovine serum albumin (BSA), globulin, thyroglobulin, hemoglobin, etc., and then suspended with an appropriate adjuvant.
  • BSA bovine serum albumin
  • globulin globulin
  • thyroglobulin hemoglobin, etc.
  • the monoclonal antibody is produced by immunizing an animal using the PGE-MUM bicyclo isomer used in the preparation of the polyclonal with the above-mentioned appropriate protein as an immunogen, and obtained from the spleen. It can be produced from a hyperidoma produced by cell fusion of cells and tumor cells.
  • the above-mentioned ibridoma can be obtained by the following method.
  • the PGE-MUM bicyclo-binding protein obtained as described above, together with Freund's complete adjuvant, is divided into several times and administered intraperitoneally or intravenously to animals such as mice every 2 to 3 weeks. So immunize.
  • antibody-producing cells derived from the spleen and the like are fused with tumor cells that can be grown in vitro such as cells from the myeloma line (myeloma cells).
  • a fusion method it can be carried out with polyethylene glycol according to the usual method of Köhler and Milstein (Nature, 256, 495, 1 975), or with Sendai Wils.
  • the immunological measurement of the PGE-MUM is carried out.
  • this immunoassay enzyme immunoassay (EIA), fluorescent immunoassay, luminescence classified by labeling substances that are preferably performed by immunoassay based on the well-known competitive method for the PGE-MUM of the measurement target substance. Examples include immunoassay and radioimmunoassay (RIA).
  • labeled antigen is used in the competition method.
  • the labeling substance include enzymes, fluorescent substances, luminescent substances, and radioisotopes.
  • the labeling substance and the antigen can be bound by a known method for forming a covalent bond or a non-covalent bond.
  • the binding method include a method of creating a covalent bond using a condensing agent, a method of using various cross-linking agents, etc. (for example, “Protein Nucleic Acid Enzyme”, Vol. 31, pages 37-45). (See 1985).
  • a functional group present in the antigen can be used.
  • a functional group such as a thiol group, an amino group, a carboxyl group, or a hydroxyl group is introduced by a conventional method, and then a labeled antigen is bound by the above-described binding method.
  • a labeled antigen is bound by the above-described binding method.
  • the noncovalent bond method include physical adsorption.
  • the measurement of the PGE-MUM is preferably performed by, for example, the immunoassay described below.
  • a label that has bound or does not bind to the antibody by competitively reacting with a predetermined amount of the labeled PGE-MUM, the anti-PGE-MUM antibody, and the PGE-MUM sample to be measured. Quantification of the PGE-MUM in the specimen.
  • bicyclo PGE-MU M (bicyclo PGE-MUM) is preferably used as the PGE-MUM
  • anti-PGE-MUM antibody is, for example, anti-bicyclo PGE-MUM. Is preferably used.
  • an anti-immunoglobulin antibody is further added, precipitated, separated, and the standard bound to the complex. It can be carried out by measuring a labeling substance or an unbound labeling substance. This method is called a two-antibody method, and can also be carried out by a method using a chi-coal filter.
  • the anti-immunoglobulin antibody is also carried out by measuring an anti-immunoglobulin antibody bound to a solid phase, a labeled substance bound to the solid phase, or a labeled substance not bound to the solid phase.
  • the anti-immunoglobulin antibody can be bound to the solid phase by a well-known method, for example, a physical adsorption method, a chemical binding method using a cross-linking agent or a covalent bond, or a binding method using an avidin-piotine bond.
  • a well-known method for example, a physical adsorption method, a chemical binding method using a cross-linking agent or a covalent bond, or a binding method using an avidin-piotine bond.
  • the labeling substance is selected in accordance with the labeling substance.
  • the staging reagent kit of the present invention includes the labeled PGE-MUM reagent and the anti-PGE-MUM antibody reagent. More preferably, the bicyclo PGE-MUM reagent and the anti-bicyclo PGE-MUM antibody reagent are included. In addition to the anti-immunoglobulin antibody reagent that binds to the anti-PGE MUM antibody, the kit includes specimen diluent, reagent diluent, standard PGE-MUM of known concentration, etc. as necessary. It is configured by adding a stop solution. [0021] Examples of the specimen for performing the PGE-MUM measurement used in the present invention include urine collected by force such as humans and animals.
  • the specimen used for the determination of the stage immediately before the remission of the ulcerative colitis and the remission stage of the ulcerative colitis is the ulcerative colitis collected under the treatment management with the administration of an anti-inflammatory agent. Use patient urine.
  • the urine of the interstitial pneumonia patient collected under treatment management accompanied by the administration of an anti-inflammatory agent is used. use.
  • anti-inflammatory agents used in the present invention include steroid cortical hormones and non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs).
  • NSAIDs non-steroidal anti-inflammatory drugs
  • These flame retardants can be used alone or in combination of two or more.
  • the sample can be measured by using a sample collected without storing urine, using a sample stored for one day.
  • the collected urine is preferably stored at a low temperature and below -20 ° C until it is used for measurement.
  • the measurement of the value of the PGE-MUM concentration contained in the specimen may be performed based on the total amount of the collected specimen, or a part of the collected specimen may be measured by Talechun. It may be done in consideration of correction.
  • the measurement of the value of the PGE-MUM concentration contained in the specimen is performed on a part of the collected specimen in consideration of correction by Creathun.
  • the baseline values for patients with ulcerative colitis are PGE-MU M contained in the urine of patients diagnosed as being in remission for ulcerative colitis under treatment management with administration of anti-inflammatory agents. It can be obtained by measuring the concentration value by the method described above.
  • PGE contained in the urine of patients diagnosed as being inactive with interstitial pneumonia under treatment management with anti-inflammatory agent administration It can be obtained by measuring the value of M UM concentration by the method explained above.
  • administer anti-inflammatory drugs to patients diagnosed in the remission period or the inactive period and collect urine at a specified time, etc. Is preferred.
  • the basic value is determined in consideration of an inter-measurement error of the reagent for measuring the PGE-MUM estimated in advance through test evaluation.
  • a pathological score according to Matts Classification can be used as a method for determining the stage of ulcerative colitis.
  • the Mats classification is performed by analyzing multiple tissue specimens that have also been biomedical with an endoscope! ⁇ All tissue specimens are scored 1 to 5 and the average score is determined. The The Mats classification is shown in Table 1.
  • the mean value of the pathological score is less than 2 in the remission period of the ulcerative colitis, and 2 or more and less than 3 in the ulcerative colitis Three or more were classified as the active phase of the ulcerative colitis immediately before the remission of the inflammation. Based on the pathological judgment, it is usually determined that the medication treatment is continued immediately before the remission of the ulcerative colitis and the active period of the ulcerative colitis.
  • the method for determining the stage of interstitial pneumonia is performed by measuring the PGE-MUM contained in the urine of the patient with interstitial pneumonia.
  • the method for measuring the PGE-MUM is exactly the same as in the case of the ulcerative colitis described above.
  • the urine PGE Based on the value of PGE-MUM concentration contained in the urine of a patient with interstitial pneumonia diagnosed as being inactive in the interstitial pneumonia under treatment management with administration of an anti-inflammatory agent, the urine PGE— When the value of MUM concentration exceeds the basic value, it is judged as the active phase of interstitial pneumonia,
  • the present invention provides a method for easily determining the stage of ulcerative enterocolitis by measuring the value of the PGE-MUM concentration in a specimen.
  • the present invention provides a method for easily determining the stage of interstitial pneumonia by measuring the value of PGE-MUM concentration in a sample.
  • the PGE-MUM measured in the present invention is excreted in urine due to increased production of PGE and Z or PGE-MUM in various inflammatory diseases, for example, inflammatory bowel disease, colon cancer or colon It can be a diagnostic marker for inflammation of the lamina intestinal due to adenoma and lung cancer.
  • PGE-MUM measurement is a marker for confirming the activity of cyclosogenase (COX-2), a prostaglandin synthase, and the action of drugs such as COX-2 inhibitors.
  • Steroid corticosteroids and sazaropirin were administered as anti-inflammatory agents to patients with symptoms of ulcerative colitis.
  • a sample for measurement was prepared by adding 700 ⁇ l of 0.1 M phosphate buffer (pH 7.3) containing 0.1 M NaCl and 0.1% gelatin.
  • urine or standard sample solution of each concentration containing PGE—MUM bicyclo
  • 125 1 to 125 1 labeled PGE—MUM solution and diluted first antibody solution were mixed in an amount of 100 ⁇ 1 each and incubated at 37 ° C for 60 minutes.
  • ulcerative colitis seek pathological scores (Mats classification) for multiple (10 or more) tissue specimens collected from living organisms and classify them into remission, just prior to remission, or active period, and the patient's urine About PGE— MUM was measured. The results are shown in Table 2.
  • the basal value placed under treatment management with the administration of anti-inflammatory agents varies from individual to individual, the aforementioned PGE-MUM concentration was generally 10 ng / ml.
  • the PGE-MUM concentration was the base value for all samples other than sample B-4 It exceeded 1 Ong / ml and was less than 30 ng / ml, which is 3 times the basal value, and there was a correlation between the pathological judgment and the PGE-MUM concentration.
  • Figures 1-3 show the pathological photographs of patients with the above-mentioned ulcerative colitis that have been determined to be in the remission period, immediately before remission, or active stage according to the Matz classification. The relationship between each stage and PGE-MUM concentration also correlates well, confirming the pathological photographic ability.
  • the active phase of interstitial pneumonia means a stage in which interstitial inflammation progresses or fibrosis of the patient progresses.
  • the concentration of the PGE-MUM was determined by the same procedure as in Example 1. As a result, patient power showing symptoms of acute gastritis or chronic gastritis was obtained. There was no significant correlation between the concentration of PGE-MUM in urine and the progression of the patient's symptoms.
  • the concentration of the PGE-MUM was determined by the same procedure as in Example 1, and the patient's ability to exhibit thyroiditis symptoms was obtained. — There was no significant correlation between the concentration of MUM and the progression of the patient's symptoms.
  • the concentration of the PGE-MUM was determined by the same procedure as in Example 1, and the patient's force with the purulent lesions was obtained. There was no significant correlation between the PGE-MUM concentration and the progression of the patient's symptoms.
  • the present invention is particularly useful for staging for the ulcerative colitis and staging for the interstitial pneumonia. It can be seen that

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Abstract

　従来潰瘍性大腸炎や間質性肺炎の病期の判定に使用されていた内視鏡による熟練を要した粘膜病変の観察や生体より採取した病理組織標本の解析による判定方法とは異なり、容易に病態を判別することができ、治療薬の選択、治療効果の程度、投薬中止などを判断することができる方法であって、尿中に含まれる物質を数値化することにより定量的に病期を判定する方法を提供する。 　尿中のプロスタグランディンＥ主要代謝物（ＰＧＥ－ＭＵＭ）の濃度の値を測定し、潰瘍性大腸炎の寛解直前期(Pre-remission phase)と潰瘍性大腸炎の寛解期(Remission phase)との病期を判定する。 　また尿中の前記ＰＧＥ－ＭＵＭの濃度の値を測定し、間質性肺炎の活動期と間質性肺炎の非活動期との病期を判定する。

Description

明 細 書
潰瘍性大腸炎または間質性肺炎の病期判定方法並びにそのための試薬 キット
技術分野
[0001] 本発明は、潰瘍性大腸炎または間質性肺炎の病期判定方法およびそのための試 薬キットに関する。
背景技術
[0002] 潰瘍性大腸炎は難治性炎症疾患として知られ、患者数 (特定疾患受給者)は、平 成 14年度 77, 073人であり、毎年約 5, 000人づっ増加していることが報告されてい る。前記潰瘍性大腸炎は、大腸の粘膜にびらんや潰瘍ができる大腸の炎症性疾患 である。この疾患の原因は、腸内細菌の関与や免疫機能が正常に機能しない自己 免疫反応の異常、あるいは食生活の変化の関与などが考えられているが、未だ明ら かにはなっていない。特徴的な症状としては、下血を伴う又は伴わない下痢とよく起 こる腹痛である。病変は直腸カゝら連続的に、そして上行性（口側）に広がる性質があり 、最大で直腸力も結腸全体に広がる。この疾患は病変の広がりや経過などにより下 記のように分類されている。
(1)病変の広がりによる分類:全大腸炎、左側大腸炎、直腸炎
(2)病期の分類:活動期、寛解期
(3)重要度による分類:軽症、中等症、重症、劇症
(4)臨床経過による分類:再燃寛解型、慢性持続型、急性劇症型、初回発作型 前記潰瘍性大腸炎の診断には、臨床症状として持続性又は反復性の粘血、血便、 あるいはその既往により行い、更に結腸又は S状結腸内の内視鏡検査と生検を併用 し、必要に応じて高度でし力も多大な費用を要する注腸 X線検査や全大腸内視鏡検 查を行っている。まず、臨床症状から得られたデータを解析し、手術の要否、治療薬 の選択、治療薬投与の中止決定など最適な治療方法の選択が行われる。更に病態 を確認するため内視鏡検査が行われるが、前記潰瘍性大腸炎の活動期には穿孔や 腸管粘膜の損傷による出血の危険も伴い、度重なる検査は、医療経済上における多 大な負担に加え、検査患者への負担と苦痛を伴う方法であった。
[0003] また、プロスタグランディン類 (以下 PGsと 、う）やその誘導体は、生体内でさまざま な病態との関係が報告され、簡便な操作で微量の PGsを定量する方法が知られてい る。この測定法としては、ガスクロマトグラフィー質量分析法 (GC-MS)、放射免疫測 定法 (RIA)、酵素免疫測定法 (EIA)などである。プロスタグランディン E (PGE)は、
2
生体内の炎症反応に関与する重要なケミカルメディエーターとして知られ、その尿中 の主要代謝物（PGE Main Urinary Metabolite,以下「PGE— MUM」という。）を競合 法によって酵素免疫法で測定する方法が報告されて!、る (特許文献 1)。
[0004] 加えて、前記潰瘍性大腸炎患者から得た尿検体から前記 PGE— MUMを測定し た値と前記潰瘍性大腸炎患者の複数の臨床症状 (臨床疾患活性)を数値化したスコ ァの合計スコア（改訂タルスタッドスコア）とを関係づけようとする試みが本発明者らに よってなされて!/、る（非特許文献 1)。
[0005] 一方、難治性炎症疾患の一つとして間質性肺炎が知られて!/、る。
この間質性肺炎は間質の炎症に伴い肺胞の線維化を最終的に引き起こす症例の 総称であり、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、特発性器質化肺炎等の症例 が知られている。
この間質性肺炎はその発生のメカニズムが十分に解明されておらず、その診断に は高度な経験が要求され、個々の症例について患者の症例、各種採取データの検 查結果等を総合的に判断しなければならないという困難が伴う。
この問題を解決するために、血漿中のォステオボンチン量を測定した値と前記間質 性肺炎の症状とを関連付けようとする検討もなされている (特許文献 2)。
またこの間質性肺炎の症状を判断するマーカーとして、サーファタタントプロテイン D (SP— D)、サーファタタントプロテイン A (SP— A)、シァルイ匕糖鎖抗原 KL— 6等が 知られている。
し力しこれらのマーカーは、前記間質性肺炎の症状が進行してしまった後にその結 果として検出されることから、前記間質性肺炎の病期の段階を判定する手段としてこ れらのマーカーに依存する方法は必ずしも適切なものではないことが判明している。 特許文献 1：特開昭 61— 11664号公報 特許文献 2 :特開 2005— 030852号公報
非特許文献 1 : Digestion 2000; 61: 201-206
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0006] まず前記潰瘍性大腸炎については、これまでの潰瘍性大腸炎は病期によって、以 下のように大きく 2つの期に分類されて 、た。
活動期 (Active phase)：血便を訴え、内視鏡的に血管透見像の消失、易出血性、 びらん、又は潰瘍などを認める状態。
寛解期（Remission phase)：血便が消失し、内視鏡的には活動期の所見が消失し、 血管透見像が出現した状態。
[0007] しかしながら、前記潰瘍性大腸炎について前記活動期と前記寛解期との間には寛 解直前期 (Pre-remission phase)と呼ばれる移行病期があり、病理学的には前記活動 期に近 、寛解直前期から前記寛解期に近 、寛解直前期に至る広 、範囲の病像が 観察される。前記寛解期に近い症例では、客観性をもって判断することが難しぐ臨 床的には症状が消失しているものの、投薬を中止する力否かの判断には、内視鏡に よる観察所見と生体力も採取した 10箇所以上の病理組織標本の解析を行 、、全て の組織標本を以下に示すマッツ (Matts)分類によってスコア化し、スコアの平均値を 求め、長年の経験により判断をしていた。もし前記寛解直前期を寛解したと判断し投 薬を中止すると、前記潰瘍性大腸炎の再発のみならず、大腸癌への移行のリスクな ど様々な問題を生ずることが知られて 、る。
[0008] 前記非特許文献 1にお!/、ては、前記 PGE— MUMを測定した結果と、前記潰瘍性 大腸炎の病態の活動期と寛解期とを表す改訂タルスタッドスコアとが相関することが 示され、内視鏡検査を行わずに病期を判断する基準は示されているものの、改訂タ ルスタッドスコアで寛解期と判断される症例の中には投薬の継続を要する本発明で 示す前記寛解直前期の症例が含まれる場合があり、区別することができな力つた。改 訂タルスタッドスコアで判定に用いられる項目としては、下痢、体温、頻脈、赤血球沈 降速度、ヘモグロビン、白血球、血小板、総タンパク質、アルブミン、鉄などであり、測 定した各項目の数値をスコア化し、このスコアを合計して改訂タルスタッドスコアを求 めていた。
[0009] 一方、間質性肺炎についても活動期と非活動期との判断が難しぐこれらの病期を 判定するためには前記間質性肺炎の患者に対する聴診、 X線検査等に加え、肺組 織の生検による病理組織学的診断等が必要であった。特に前記肺組織の生検を実 施するためには前記患者の気道に内視鏡を挿入する等して前記肺組織の生検に必 要な量の肺組織を実際に前記患者の体内から採取する必要があり、前記患者に対 する身体的、精神的負担は多大なるものがあった。
さらに前記間質性肺炎の病期を非活動期と判断し投薬を中止すると、前記間質性 肺炎が再発し、さらに進行するのみならず肺癌への移行のリスクなど様々な問題を生 ずることち知られている。
また先の特許文献 2による方法についても前記間質性肺炎の患者の血漿または血 清を採取し、多段階の操作を経てこれらに含まれるォステオボンチン量を定量する必 要があった。
[0010] 本発明は、活動期と寛解期の間に存在する前記潰瘍性大腸炎の寛解直前期の病 期を詳細に客観的に分類する方法を提供し、これまで内視鏡による観察所見や生体 より採取した組織標本の解析によっても判断が難しかった前記潰瘍性大腸炎の病期 につ 、て判定するための簡便な病期判定方法を提供することを目的とする。
また本発明は、前記間質性肺炎の活動期と前記間質性肺炎の非活動期との病期 を詳細に客観的に分類する方法を提供し、これまで判断することが難しかった前記 間質性肺炎の病期について判定するための簡便な病期判定方法を提供することを 目的とする。
課題を解決するための手段
[0011] 本発明者らは鋭意研究した結果、潰瘍性大腸炎の寛解期にあると診断された患者 力 尿を採取し、その尿に含まれる前記 PGE— MUM濃度の値を基礎値として事前 に把握しておき、前記患者の前記 PGE— MUM濃度がこの基礎値を超え前記基礎 値の 3倍以下の値の範囲を示すときは、前記患者の病期は前記潰瘍性大腸炎の寛 解直前期に対応することを見出した。
さら〖こ本発明者らは、間質性肺炎の非活動期にあると診断された患者力ゝら尿を採 取し、その尿に含まれる前記 PGE— MUM濃度の値を基礎値として事前に把握して おき、前記患者の前記 PGE— MUM濃度がこの基礎値を超える範囲を示すときは、 前記患者の病期は前記間質性肺炎の活動期に対応することをも見出し、本発明を 完成するに至った。
すなわち、本発明は以下の（1)から（10)を提供する。
(1)消炎剤投与を伴う治療管理下において、潰瘍性大腸炎の寛解期にあると診断さ れた患者の尿中に含まれるプロスタグランディン主要代謝物 (PGE-MUM)を測定 することにより得られた前記尿中の PGE— MUM濃度の値を基礎値とし、
前記患者の尿中の PGE— MUM濃度の値力この基礎値を超え前記基礎値の 3倍 以下の範囲にあるときを潰瘍性大腸炎の寛解直前期 (Pre-remission phase)と判定し 前記患者の尿中の PGE— MUM濃度の値力この基礎値以下の範囲にあるときを 潰瘍性大腸炎の寛解期 (Remission phase)と判定することを特徴とする、
前記潰瘍性大腸炎の寛解直前期と、前記潰瘍性大腸炎の寛解期との病期判定方 法。
(2)前記潰瘍性大腸炎の寛解直前期は、潰瘍性大腸炎の病理学的スコア (マヅッ分 類）が 2〜3の範囲にある場合とし、
前記潰瘍性大腸炎の寛解期は、前記マッツ分類が 2未満の範囲にある場合とする ことを特徴とする上記（1)に記載の病期判定方法。
(3)消炎剤投与を伴う治療管理下において、間質性肺炎の患者の尿中に含まれるプ ロスタグランデイン主要代謝物 (PGE-MUM)を測定すること〖こよる、間質性肺炎の 活動期 (Active phase)と、前記間質性肺炎の非活動期 (Non-active phase)との病期判 定方法。
(4)前記間質性肺炎の非活動期にあると診断された患者の尿中に含まれる PGE— MUMを測定することにより得られた前記尿中の PGE— MUM濃度の値を基礎値と し、
前記患者の尿中の PGE— MUM濃度の値力この基礎値を超える範囲にあるときを 間質性肺炎の活動期と判定し、 前記患者の尿中の PGE— MUM濃度の値力この基礎値以下の範囲にあるときを 間質性肺炎の非活動期と判定することを特徴とする、上記 (3)に記載の病期判定方 法。
(5)前記 PGE— MUMを抗 PGE— MUM抗体により免疫測定することを特徴とする 上記（1)〜 (4)の 、ずれかに記載の病期判定方法。
(6)標識された PGE— MUM試薬、及び抗 PGE— MUM抗体試薬とを含む検体中 の PGE— MUM測定による、潰瘍性大腸炎の病理学的スコア（マッツ分類）によって 分類された潰瘍性大腸炎の寛解直前期 (Pre-remission phase)と潰瘍性大腸炎の寛 解期 (Remission phase)との病期判定用試薬キット。
(7)標識された PGE— MUM試薬、及び抗 PGE— MUM抗体試薬とを含む検体中 の PGE— MUM測定による、間質性肺炎の活動期 (Active phase)と間質性肺炎の非 活動期 (Non-active phase)との病期判定用試薬キット。
(8)抗 PGE— MUM抗体が抗 PGE— MUMポリクローナル抗体である上記（6)又は (7)の 、ずれかに記載の病期判定用試薬キット。
(9)抗 PGE— MUM抗体が抗 PGE— MUMモノクローナル抗体である上記（6)又 は（7)のいずれかに記載の病期判定用試薬キット。
(10)更に抗 PGE— MUM抗体と反応する抗ィムノグロブリン抗体試薬を含む上記（ 6)〜（9)の 、ずれかに記載の病期判定用試薬キット。
発明の効果
本発明によれば、尿中の前記 PGE— MUMを定量測定することにより前記潰瘍性 大腸炎の寛解直前期と前記潰瘍性大腸炎の寛解期との病期を簡便に判別すること が可能になった。また、尿中の前記 PGE— MUMを定量測定することにより前記間 質性肺炎の活動期と前記間質性肺炎の非活動期との病期を簡便に判別することが 可會 になった。
加えて本発明の方法によれば、従来使用されていた熟練を要し、しかも高額な検 查費用を要する内視鏡等による観察や生体より採取した病理組織標本の解析による 判定方法を本発明の方法に代替することができることから、前記潰瘍性大腸炎の患 者や前記間質性肺炎の患者の体内に内視鏡を挿入する等の検査や前記患者の体 内組織等を採取する施術等に伴う身体的、精神的負担を前記患者に一切与えること もなぐ検査を実施する医師等の判断の個人差に結果が依存することもなぐ前記潰 瘍性大腸炎または前記間質性肺炎について容易にその病期を判定することができる ことから、治療薬の選択、投薬中止などの判断が容易となるばかりか、治療効果の判 定が容易となり、患者の QOL(Quality of Life)の向上や医療費の削減が可能となる。 図面の簡単な説明
[0014] [図 1]寛解期の潰瘍性大腸炎患者病理写真を示す。いくらかの炎症性細胞浸潤を示 す細胞の核が黒 、点として観察される。
[図 2]寛解直前期の潰瘍性大腸炎患者病理写真を示す。多くの炎症性細胞浸潤を 示す細胞の核が黒 、点として観察される。
[図 3]活動期の潰瘍性大腸炎患者病理写真を示す。多くの炎症性細胞浸潤を示す 細胞の核が黒い点として、また活動期の特徴である細胞浸潤による陰窩膿瘍が観察 される。
発明を実施するための最良の形態
[0015] 本発明の方法により測定される PGE— MUM ( 7alpha- hydroxy- 5 , 11 - diketotetrano r- prosta- 1,16- dioic acid)は、 PGEと E、殊に PGEの尿中への主要代謝物として
1 2 2
見出される。前記 PGE— MUMの濃度の値を測定するに際しては、検体として尿を 用いて、例えば GC— MS、 HPLC、抗 PGE— MUM抗体を用いた免疫測定法など によって実施することができる。前記 PGE— MUMの濃度の値の測定は、多量の検 体を同時に簡便に測定することができるため、免疫測定法で実施することが好ましく 、水酸ィ匕ナトリウム等によるアルカリ処理をカ卩えて化学的に安定なビシクロ体とする測 定法により実施することが好ましい。前記免疫測定法に用いる抗 PGE— MUM抗体 としては、例えば、前記抗体に関してはポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体 等を挙げることができる。本発明に使用する抗体は、ビシクロ化した PGE— MUM ( 以下ビシクロ PGE-MUMと 、う）に特異的に反応する抗体であるポリクローナル抗体 又はモノクローナル抗体等であれば好ましい。前記抗体に関しては、例えば特開昭 6 1 11664号 (特許文献 1)に記載の方法に従 、ポリクローナル抗体を製造すること ができる。前記抗体の製造にあたっては、前記 PGE— MUMがハプテンであるので 、まず前記 PGE— MUMをアルカリ処理により PGE— MUMのビシクロ体とし、適当 なタンパク質、例えば牛血清アルブミン（BSA)、グロブリン、サイログロブリン、へモシ ァニンなどと結合させた後、適当なアジュバントと懸濁混合して動物 (ラット、マウス、 モルモット、ゥサギ、ィヌ、ネコ、ヒッジ、ャギなど）に投与間隔を空けて投与し、所定 期間経過後動物の血清を採取し、公知の方法で処理をすることにより、ポリクローナ ル抗体を取得することができる。
[0016] また、モノクローナル抗体は、前記ポリクローナルの作成時に用いた PGE— MUM のビシクロ体を、前記した適当なタンパク質と結合させて免疫原として用いて動物を 免疫し、脾臓より得られるモノクローナル抗体産生細胞と腫瘍細胞とを細胞融合する ことによって作成されるハイプリドーマより産生させることができる。
[0017] 前記ノ、イブリドーマは、次の方法で得ることができる。上述のようにして得た PGE— MUMのビシクロ体結合タンパク質をフロイントの完全アジュバンドとともに、数回に 分けて、マウスなどの動物に、 2〜3週間おきに、腹腔内又は静脈投与することによつ て免疫する。次いで、脾臓などに由来する抗体産生細胞と、骨髄腫ラインからの細胞 (ミエローマ細胞)などの試験管内で増殖可能な腫瘍細胞とを融合させる。融合方法 としては、ケーラーとミルシュタインの常法（ネーチヤ一（Nature)、 256卷、 495頁、 1 975年）に従ってポリエチレングリコールによって行うことができ、又はセンダイウィル スなどによって行うこともできる。
[0018] 上記方法により得られる抗 PGE— MUM抗体を用いて、前記 PGE— MUMの免 疫測定を実施する。この免疫測定法としては、測定対象物質の前記 PGE— MUM に対する周知の競合法による免疫測定法で行うことが好ましぐ標識物質で分類した 酵素免疫測定法 (EIA)、蛍光免疫測定法、発光免疫測定法、放射免疫測定法 (RIA) などを挙げることができる。
通常、競合法には標識された抗原が用いられる。標識物質としては、例えば、酵素 、蛍光物質、発光物質、放射性同位元素などである。標識物と抗原との結合方法は 、公知の共有結合又は非共有結合を作る方法を利用して製造することができる。結 合の方法には、例えば縮合剤を用いて共有結合を作成する方法、各種架橋剤を用 いる方法などを挙げることができる（例えば「蛋白質核酸酵素」別冊 31号、 37〜45頁 (1985)参照)。共有結合による方法では、抗原に存在する官能基を用いることがで きる他、例えばチオール基、アミノ基、カルボキシル基、水酸基などの官能基を常法 により導入したのち、前記結合法により標識抗原を製造することができる。また非共有 結合による方法としては物理吸着法などを挙げることができる。
[0019] 前記 PGE— MUMの測定は、例えば以下に記載の免疫測定法で実施することが 好ましい。所定量の前記標識された PGE— MUM、前記抗 PGE— MUM抗体、測 定実施する PGE— MUMを含有する検体とを競合的に反応させ、前記抗体と結合し た又は結合しな力つた標識された抗原の量力 前記検体中の前記 PGE— MUMを 定量する。
先に説明した通り、前記 PGE— MUMとしては、例えばビシクロ化した PGE— MU M (ビシクロ PGE— MUM)を使用することが好ましく、前記抗 PGE— MUM抗体とし ては、例えば抗ビシクロ PGE— MUMを使用することが好ましい。
前記抗体と結合した標識された抗原を結合しな力つたものと分離するためには、更 に抗ィムノグロブリン抗体とを加えて、沈殿させて分離して、複合体に結合している標 識物質又は結合していない標識物質を測定することにより実施することができる。こ の方法は二抗体法と呼ばれ、チヤ一コールフィルターを用いた方法などによっても実 施することもできる。前記抗ィムノグロブリン抗体は、固相に結合させた抗ィムノグロブ リン抗体、固相に結合した標識物質又は結合していない標識物質を測定することに よっても実施される。前記抗ィムノグロブリン抗体は、周知の方法、例えば物理吸着 法、架橋剤又は共有結合を利用した化学結合法、アビジン ピオチン結合を利用し た結合法などにより固相に結合させることができる。前記標識物質の測定にあたって は前記標識物質に対応して選択することは言うまでもない。
[0020] 本発明の病期判定用試薬キットには、前記標識された PGE— MUM試薬、前記抗 PGE— MUM抗体試薬が含まれる。より好ましくは、前記ビシクロ PGE— MUM試薬 、前記抗ビシクロ PGE— MUM抗体試薬が含まれる。更にキットには、前記抗 PGE MUM抗体と結合する抗ィムノグロブリン抗体試薬のほか、必要に応じて検体希釈 液、試薬希釈液、既知濃度の標準 PGE— MUM等、 EIAにあっては、基質、停止液 等を加えて構成される。 [0021] 本発明に使用する前記 PGE— MUMの測定を実施する検体としては、例えばヒト、 動物など力 採取される尿を挙げることができる。
中でも、前記潰瘍性大腸炎の寛解直前期と前記潰瘍性大腸炎の寛解期との病期 判定に使用する検体としては、消炎剤投与を伴う治療管理下において採取された前 記潰瘍性大腸炎患者の尿を使用する。
また、前記間質性肺炎の活動期と非活動期との病期判定に使用する検体としては 、消炎剤投与を伴う治療管理下にお 、て採取された前記間質性肺炎患者の尿を使 用する。
本発明に使用する消炎剤としては、例えば、ステロイド皮質ホルモン、非ステロイド 系消炎鎮痛剤（non-steroidal anti-inflammatory drug, NSAID)等を例示することがで きる。
これらの消炎剤は一種もしくは二種以上を使用することができる。
[0022] 前記検体は、一日分を蓄尿した検体を用いる力 蓄尿せず採取した検体用いて測 定を行うこともできる。採取した尿は測定に用いるまで低温、マイナス 20°C以下で保 存することが好ましい。
[0023] また、前記検体に含まれる前記 PGE— MUM濃度の値の測定は、採取される前記 検体全量を基準として実施してもよいし、採取される前記検体の一部について、タレ ァチュンによる補正を考慮して実施してもよ 、。
操作の簡便性から、前記検体に含まれる前記 PGE— MUM濃度の値の測定は、 採取される前記検体の一部について、クレアチュンによる補正を考慮して実施するこ とが好ましい。
[0024] 次に本発明に使用する基礎値について説明する。
前記潰瘍性大腸炎患者の基礎値にっ 、ては、消炎剤投与を伴う治療管理下にお いて潰瘍性大腸炎の寛解期にあると診断された患者の尿中に含まれる PGE— MU M濃度の値を上記に説明した方法により測定することにより得ることができる。
また前記間質性肺炎患者の基礎値につ!ヽても、消炎剤投与を伴う治療管理下に おいて間質性肺炎の非活動期にあると診断された患者の尿中に含まれる PGE— M UM濃度の値を上記に説明した方法により測定することにより得ることができる。 前記基礎値を求めるときは、前記寛解期あるいは前記非活動期と診断された患者 に対して消炎剤等の投与を施行した上で、一日蓄尿あるいは定められた時刻等に尿 を採取することが好ましい。
また前記基礎値を定めるに際しては予め試験評価して見積もられた前記 PGE— M UMを測定する試薬の測定間誤差等を考慮して定めることが好ましい。
[0025] 前記潰瘍性大腸炎の病期を判定する方法には、マッツ分類 (Matts Classification) による病理学的スコアを用いることができる。マッツ分類は、内視鏡により生体力も採 取した複数の組織標本の解析を行!ヽ、全ての組織標本につ!、て 1〜5にスコア化し、 スコアの平均値を求めて判断される。マッツ分類を表 1に示す。
[0026] [表 1] マッツ（Matts)分類
Figure imgf000012_0001
[0027] 前記潰瘍性大腸炎の病態を判断するためのマッツ分類によれば、病理学的スコア の平均値が 2未満を前記潰瘍性大腸炎の寛解期、 2以上 3未満を前記潰瘍性大腸 炎の寛解直前期、 3以上を前記潰瘍性大腸炎の活動期と分類した。病理学的判断 によって、通常、前記潰瘍性大腸炎の寛解直前期と前記潰瘍性大腸炎の活動期で は、投薬治療を継続すると判断される。
[0028] 前記間質性肺炎の病期を判定する方法は、前記間質性肺炎の患者の尿中に含ま れる前記 PGE— MUMを測定することにより実施される。 前記 PGE— MUMの測定方法は、先に説明した前記潰瘍性大腸炎の場合と全く 同様である。
消炎剤投与を伴う治療管理下において、前記間質性肺炎の非活動期にあると診断 された間質性肺炎の患者の尿中に含まれる PGE - MUM濃度の値を基礎値とし、 前記尿中の PGE— MUM濃度の値がこの基礎値を超える範囲にあるときは間質性 肺炎の活動期 (Active phase)と判定され、
前記尿中の PGE— MUM濃度の値がこの基礎値以下の範囲にあるときを間質性 肺炎の非活動期 (Non-active phase)と判定される。
[0029] 本発明は、検体中の PGE— MUMの濃度の値を測定することにより前記潰瘍性大 腸炎の病期判定を容易に行う方法を提供する。
さらに本発明は、検体中の PGE— MUMの濃度の値を測定することにより前記間 質性肺炎の病期判定を容易に行う方法を提供する。
また、本発明で測定される前記 PGE— MUMは、各種の炎症性疾患において PG E及び Z又は PGE— MUM産生亢進に起因し尿中に排出されるため、例えば炎症 性腸疾患、大腸癌又は大腸腺腫による粘膜固有層の炎症、肺癌等の診断マーカー になりうる。
更に、 PGE— MUM測定は、プロスタグランディン合成酵素であるシクロォキシゲ ナーゼ（COX— 2)の活性や COX— 2インヒビターなどの薬剤の作用を確認するマー カーともなる。
実施例 1
[0030] 以下実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明が実施例に限定される ものではない。
実施例 1 PGE— MUMの測定
潰瘍性大腸炎の症状を示す患者に対し、消炎剤としてステロイド皮質ホルモンおよ びサザロピリンを投与した。
これらの患者の尿中 PGE— MUMの抽出、定量には Inagawaらの液相二抗体法に よる RIA測定法 (Adv.PG.TX丄 T.Res.,11, 191-196(1983))で行った。すなわち、測定 前まで- 80°Cで保存した各病期の前記潰瘍性大腸炎患者の尿 (一日分蓄尿） 100 IX 1 を反応容器に分注し、同量の 2N NaOHを添加し、 1時間室温に放置し前記 PGE— MUMをビシクロ体化した後、 2N HC1 100 1を加えて中和した。次に、 0.1M NaCl と 0.1%ゼラチンを含む 0.1Mリン酸緩衝液 (pH7.3)を 700 μ 1添カ卩して測定用サンプルと した。反応操作法としては、尿又は各濃度の標準試料液 (PGE— MUMのビシクロ 体含有） 100 1に1251標識 PGE— MUM溶液及び希釈第 1抗体溶液 (ゥサギ抗ヒト PG E— MUM抗体;特開昭 61— 11664号 (特許文献 1)参照）を各々 100 μ 1カ卩えて混合 し、 37°C、 60分間インキュベートした。
[0031] その後、各サンプルに正常ゥサギ血清（50倍希釈;第一ラジオアイソトープ社製)及 び第 2抗体（ 10倍希釈したヒッジ抗ゥサギ IgG抗体；第一ラジオアイソトープ社製)を 各々 100 μ 1カ卩えて 4°Cにて更にー晚インキュベートした。次に、 4°C、 3000rpmで 10分 間遠心分離を行い、上清を取り除き沈殿物の放射活性をオート ゥエル カウンター RAW-300 (島津製作所社製)で測定し、尿中 PGE— MUMを測定した。同様に標準 試料液について測定を行い、検量線を作成した。また、各尿についての測定結果と 、前記検量線から PGE— MUMの濃度を求めた。
[0032] 潰瘍性大腸炎患者は、生体から採取した複数（10箇所以上)の組織標本について 病理学的スコア (マッツ分類)を求め寛解期、寛解直前期又は活動期に分類し、その 患者尿について PGE— MUMの測定を行った。その結果を表 2に示す。
[0033] [表 2]
病理学的ス コ ア P G E - M U M
病 期 試料 No.
(マッツ分類） ng/ml)
A-l 1 . 7 5 . 3 9
A-2 1 . 0 4 . 0 9 寛解期
A-3 1 . 0 1 1 . 3 7
(Remission phase)
A-4 1 . 8 1 8 . 1 3
A-5 1 . 8 5 - 3 9
B-l 2. 8 1 8 . 1 3 寛解直前期 B-2 2. 8 2 8 . 7 2
(Pre - remission B-3 2. 8 2 0 . 6 1
hase B-4 2. 0 9 . 8 0
B-5 2. 8 2 7. 2 4 c-i 3 . 6 6 0 . 9 4
C-2 4 . 6 3 4 4. 9 7 活動期
C-3 3 . 2 3 3 . 9 8
(Active phase)
C-4 4. 4 7 4. 3 3
C-5 4. 6 3 6 2 . 8 9
[0034] 消炎剤投与を伴う治療管理下に置かれた基礎値は各個人差力 Sあるものの、概ね前 記 PGE— MUM濃度として 10ng/mlであった。
表 2に示す通り、マッツの分類により、病理学的スコアが 2未満で寛解期と判断され た患者試料につ!、て試料 A-3および試料 A-4以外にっ 、ては、レ、ずれも前記 PGE MUM濃度が lOng/ml未満であり、病理学的判断と前記 PGE— MUM濃度とが 相関をしていた。また、マッツの分類で、病理学的スコアが 2以上 3未満の寛解直前 期と判別された患者試料について試料 B-4以外の試料については、いずれも、前記 PGE - MUM濃度が基礎値である 1 Ong/mlを超え、基礎値の 3倍である 30ng/ml以 下であり、病理学的判断と前記 PGE— MUM濃度とがよ 1、相関を示した。
また、マッツ分類により寛解期、寛解直前期又は活動期の各病期と判断をされた前 記潰瘍性大腸炎患者の病理写真を図 1〜 3に示す。各病期と PGE— MUM濃度と の関係もよく相関してレ、ることが、病理写真力もも確認することができる。
実施例 2
[0035] 実施例 1の場合における各病期の前記潰瘍性大腸炎患者の尿に替えて、各病期 の前記間質性肺炎患者の尿を使用した他は、実施例 1の場合と全く同様の操作によ り前記 PGE— MUMの濃度を求めた。 なお患者に対し、消炎剤として、ステロイド皮質ホルモンおよび非ステロイド系消炎 鎮痛剤を投与した。
結果を表 3に示す。
ここで前記間質性肺炎の活動期とは、患者の間質の炎症が進行したり、患者の肺 胞の繊維化が進行したりする病期を意味する。
聴診、 X線検査、および生検材料による病理学的検査等により前記間質性肺炎の 非活動期と診断された各患者の基礎値は概ね lOng/ml以下であつたのに対し、前 記間質性肺炎の活動期と診断された各患者の尿中の PGE— MUM濃度は、試料 D - 2以外は 10ng/mlを超えるものであった。
この様に前記間質性肺炎の場合においても病理学的判断と前記 PGE— MUM濃 度とがよく相関を示した。
[0036] [表 3]
Figure imgf000016_0001
[0037] [比較例 1]
急性胃炎または慢性胃炎の症状を示す患者について、実施例 1の場合と全く同様 の操作により前記 PGE— MUMの濃度を求めたところ、前記急性胃炎または慢性胃 炎の症状を示す患者力 得られた尿中の前記 PGE— MUMの濃度と、前記患者の 症状の進行度との間に有意な相関は認められな力つた。
[0038] [比較例 2]
GPT ( = ALT)の値が 200IUZL以下の症状を示す C型肝炎の症状を示す患者 について、実施例 1の場合と全く同様の操作により前記 PGE— MUMの濃度を求め たところ、前記 C型肝炎の症状を示す患者から得られた尿中の前記 PGE— MUMの 濃度と、前記患者の症状の進行度との間に有意な相関は認められなかった。
B型肝炎の症状を示す患者の場合も、上記と同様に前記患者の症状の進行度との 間に有意な相関は認められなかった。
[0039] [比較例 3]
甲状腺炎の症状を示す患者について、実施例 1の場合と全く同様の操作により前 記 PGE— MUMの濃度を求めたところ、前記甲状腺炎の症状を示す患者力 得ら れた尿中の前記 PGE— MUMの濃度と、前記患者の症状の進行度との間に有意な 相関は認められな力つた。
[0040] [比較例 4]
直径 2cm以下の化膿性病変が生じた患者について、実施例 1の場合と全く同様の 操作により前記 PGE— MUMの濃度を求めたところ、前記化膿性病変が生じた患者 力 得られた尿中の前記 PGE— MUMの濃度と、前記患者の症状の進行度との間 に有意な相関は認められなかった。
[0041] 上記実施例 1〜2および比較例 1〜4の結果に示される通り、本発明は前記潰瘍性 大腸炎に関する病期判定および前記間質性肺炎に関する病期判定に対して特に有 用な方法であることが分かる。
[0042] 本明糸田書 ίま、 2005年 4月 14曰出願の特願 2005— 117521に基づく。この内容【ま すべてここに含めておく。

Claims

請求の範囲
[1] 消炎剤投与を伴う治療管理下において、潰瘍性大腸炎の寛解期にあると診断され た患者の尿中に含まれるプロスタグランディン主要代謝物 (PGE-MUM)を測定す ることにより得られた前記尿中の PGE— MUM濃度の値を基礎値とし、
前記患者の尿中の PGE— MUM濃度の値力この基礎値を超え前記基礎値の 3倍 以下の範囲にあるときを潰瘍性大腸炎の寛解直前期 (Pre-remission phase)と判定し 前記患者の尿中の PGE— MUM濃度の値力この基礎値以下の範囲にあるときを 潰瘍性大腸炎の寛解期 (Remission phase)と判定することを特徴とする、
前記潰瘍性大腸炎の寛解直前期と、前記潰瘍性大腸炎の寛解期との病期判定方 法。
[2] 前記潰瘍性大腸炎の寛解直前期は、潰瘍性大腸炎の病理学的スコア (マヅッ分類
)が 2〜3の範囲にある場合とし、
前記潰瘍性大腸炎の寛解期は、前記マッツ分類が 2未満の範囲にある場合とする ことを特徴とする請求項 1に記載の病期判定方法。
[3] 消炎剤投与を伴う治療管理下において、間質性肺炎の患者の尿中に含まれるプロ スタグランデイン主要代謝物 (PGE-MUM)を測定すること〖こよる、間質性肺炎の活 動期 (Active phase)と、前記間質性肺炎の非活動期 (Non-active phase)との病期判定 方法。
[4] 前記間質性肺炎の非活動期にあると診断された患者の尿中に含まれる PGE— M UMを測定することにより得られた前記尿中の PGE— MUM濃度の値を基礎値とし、 前記患者の尿中の PGE— MUM濃度の値力この基礎値を超える範囲にあるときを 間質性肺炎の活動期と判定し、
前記患者の尿中の PGE— MUM濃度の値力この基礎値以下の範囲にあるときを 間質性肺炎の非活動期と判定することを特徴とする、請求項 3に記載の病期判定方 法。
[5] 前記 PGE— MUMを抗 PGE— MUM抗体により免疫測定することを特徴とする請 求項 1な!、し 4の 、ずれか 1項に記載の病期判定方法。
[6] 標識された PGE— MUM試薬、及び抗 PGE— MUM抗体試薬とを含む検体中の
PGE— MUM測定による、潰瘍性大腸炎の病理学的スコア (マッツ分類）によって分 類された潰瘍性大腸炎の寛解直前期 (Pre-remission phase)と潰瘍性大腸炎の寛解 期 (Remission phase)との病期判定用試薬キット。
[7] 標識された PGE— MUM試薬、及び抗 PGE— MUM抗体試薬とを含む検体中の
PGE— MUM測定による、間質性肺炎の活動期 (Active phase)と間質性肺炎の非活 動期 (Non-active phase)との病期判定用試薬キット。
[8] 抗 PGE— MUM抗体が抗 PGE— MUMポリクローナル抗体である請求項 6又は 7 の！、ずれか 1項に記載の病期判定用試薬キット。
[9] 抗 PGE— MUM抗体が抗 PGE— MUMモノクローナル抗体である請求項 6又は 7 の！、ずれか 1項に記載の病期判定用試薬キット。
[10] 更に抗 PGE— MUM抗体と反応する抗ィムノグロブリン抗体試薬を含む請求項 6 な 、し 9の 、ずれか 1項に記載の病期判定用試薬キット。
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