WO2005116036A1

WO2005116036A1 - Derives de curcumol, composition en comprenant, et leur utilisation pour la fabrication de medicaments

Info

Publication number: WO2005116036A1
Application number: PCT/CN2005/000730
Authority: WO
Inventors: Shulong Wang; Dianwu Guo; Zhaoke Meng
Original assignee: Hangzhou Minsheng Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Hangzhou Minsheng Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2004-05-26
Filing date: 2005-05-26
Publication date: 2005-12-08
Anticipated expiration: 2006-11-26
Also published as: EP1749830B1; EP1749830A1; EP1749830A4; CN1950376B; US7700584B2; US20070191360A1; CN1704417A; CN1950376A

Description

莪术醇衍生物、含该衍生物的组合物及所述衍生物的制药用途技术领域

本发明涉及莪术醇衍生物、含该衍生物的组合物及所述衍生物在制备抗肿瘤、抗病毒药物中的应用。

背景技术

莪术为姜科植物蓬莪术、广西莪术或温莪术（温郁金）的根茎。味苦、辛，性温。能行气破血，消积止痛。主治症瘕痞块、淤血经闭、食积胀痛。其挥发性油用于治疗宫颈癌，已经收入 1977年中国药典（第 463页）。其有效成分为挥发性油，含量为 1%-2.5%，油中主要成分为多种倍半萜类：莪术酮、莪术双酮、新郁金二酮、表莪术醇、莪术烯、莪术醇、异莪术醇、原莪术醇、去氢莪术二酮等二十余种化学成分。而莪术醇和莪二酮是莪术油中治疗癌症主要的有效成分。

莪术醇（Oircumol) ，也叫姜黄环氧奥醇、姜黄醇。分子式： C₁₅H₂₄O₂，分子量： 236.34, [CASJ4871-97-0, 熔点 141-142 ，具有以下的结构式：

莪术醇 75mg/Kg皮下注射对小鼠肉瘤 37、宫颈癌、艾氏腹水癌 EAC均有较高的抑制率。肿瘤明显减小者，可见瘤组织周围纤维细胞明显增多，内有一层淋巴细胞，吞噬细胞包围肿瘤细胞等免疫反应出现。

莪术醇不但有明显的抗肿瘤作用，而且还有免疫、升白、抗血栓、抗菌、保肝、防肾衰竭等作用。同时，无明显的毒性，副作用也比较小。

所以，莪术醇是一种十分有用的天然药物，但是也存在着不少的缺陷-

1、水溶性极差，难于制成合适浓度的稳定的药液。 '

2、瘤体和局部注射时，疼痛较重。推注过快会出现胸闷、面部潮红、呼吸困难等症状。

3、治疗肿瘤的种类有局限性。

4、毒性比较大。虽然对早期宫颈癌的治疗总有效率达到 70%以上，但是，还存在进一步提高药效的可能。

发明内容

本发明的一个目的是提供稳定性、溶解性好，在脂相和水相中的分配系数更佳、抗肿瘤、抗肿瘤的谱更广、药效更好、毒性小的莪术醇衍生物。

本发明的另一个目的是提供含有所述莪术醇衍生物的药物组合物

本发明的再一个目的是提供所述的莪术醇衍生物在制药中的应用。

本发明是通过如下的构思实现的：一种具有下式 I 结构的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐：

其中， Y选自

-OH或 -OR

R¹选自 H、 R、 RCO或 H0₃S;

所述的 R选自 H; 饱和的或不饱和的直链 C_WQ烃基；饱和的或不饱和的带支链的 C₃__1Q烃基，或。烃醚， C₃— _1Q烃硫醚；饱和的或不饱和的、任选地被一个或多个选自硝基、磺酸基、卤原子和羟基的取代基所取代的 C₃.₈环烃基或 C,

- 12芳径基；

其中 P 为 0或 N， Z为一个或多个选自 H、羟基，饱和的或不饱和的直链 d—₆烃基- 饱和的或不饱和的带支链的 C₃_₆烃基， n-1-3 ; 或者

R¹为咖啡酸、藤黄酸、异藤黄酸、新藤黄酸或甘草酸的酰基；

R²选自 F; CI; Br_; I； H; -OH; -OR; -HS0₃; -N0₃; RNH-; R'NR",其中 R'和 R"可相同或不同，各自选自如所述 R所限定的基团； H₂NRNH-_; 或者 R²为选自吡啶 ^吡咯基、唑基、三氮唑基、四唑基、二噁」 ^等、二噁二唑基、哌啶基、 ^N —、 ^>、〇。、 ^"^ 或— ^HN~ T_;

条件是 I ¹、 R²不同时为 H,

当 Y为 -OH或 -OR¹时， Y二为单键，

当 Y为- CHR²时，所述的衍生物具有通式 II：

II

其中 R¹, R²的定义同上，

R³选自 F; CI; Br; I； H; -OH; -HS0₃; -N0₃; -RNH; R'NR",其中 R，和

R"可相同或不同，为 R，可以不相同，各自选自如所述 R所限定的基团，· H₂NRNH-,- 或者 R²为选自吡啶基、吡咯基、咪唑基、三氮唑基、四唑基、二噁唑基、二噁二唑基、哌啶基、 ^Ν —、 ~ Ώ、

或— ^hn" °^r。在优选的技术方案中，所述的芳烃基优选地选自 Ar -、 ArCH₂ -、 ArCH₂CH₂-、 CH₃ArCH₂CH , Ar-为苯基，或是被 F、 Cl、 Br, I、硝基、磺酸基或 1-3个羟基取代的苯基。当 ¥为=01^时， R²宜为 H; R¹宜为 H0₃S、丙酰基、丁酰基、异丁酰基或苯甲酰基。

在另一个优选的实施方案中，当 ¥为=0151²时， R²为 H， R¹为 1^)₃8或 &0₃8。最好的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐选自下列化合物：

III

28 莪术醇甲醚正丁胺盐酸盐 CH₃ CH₃CH₂CH₂CH₂NH-

29 莪术醇乙醚硝酸酯 CH₃CH₂ - -N0₃ 或者，所述的衍生物或其药学上可接受的盐有下式结构-

II

式中各基团的定义如下:

或者，所述的衍生物或其药学上可接受的盐有下式结构:

I

式中各基团的定义如下：

在本发明的另一个最佳实施方案中，最好的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐选自下列化合物-

莪术醇对羟苯胺 H -HN-^ — OH

— OH

莪术醇对羟苯胺盐酸盐 H -HM-^

莪术醇丙酯 CH₃ CH₂CO- H 莪术醇丁酯 CH₃CH₂CH₂C0 H 莪术醇异丁酯 ( CH₃) H

2CH₂CO- 莪术醇苯甲酸酯 H

莪术醇单溴化物 H -Br

莪术醇磺酸酯 HS0₃- H 莪术醇磺酸酯钠盐 NaS0₃- H

莪术醇哌嗪 H HN^

莪术醇哌嗪盐酸盐 H HV N 莪术醇正丁胺 H CH₃CH₂CH₂CH₂NH- 莪术醇正丁胺盐酸盐 H CH₃CH₂CH₂CH₂NH- 莪术醇叔丁胺 H ( CH₃) ₃CNH- 莪术醇叔丁胺盐酸盐 H ( CH₃ ) ₃CNH- 本发明也提供了一种抗肿瘤或抗病毒的药物组合物，它包含药物有效量的如上所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂和 / 或添加剂。

本发明进一步提供了如上所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐在制备预防和 /或治疗肿瘤的药物中的应用。

本发明也提供了如上所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗病毒药物中的应用，其中所述的病毒选自 HIV 病毒、流感病毒、肝炎病毒和疱疹病毒。

莪术醇是莪术油中含量比较多的一个组分，对市售的莪术油经过分离提纯后得到纯度比较高（可以达到 75%以上，需要时可以达到 99%以上）的莪术醇，这种较高纯度的莪术醇用作对其进行结构修饰的反应原料。下面将分类介绍莪术醇衍生物的一般制备方法- 莪术醇的加氢物的制备

将莪术醇溶解于适当的有机溶剂（如甲醇等）中，加入少量的加氢催化剂（钯碳等），在室温常压强烈搅拌下通入氢气。就可以得到莪术醇 S、 12位碳碳双键被氢加成了的莪术醇的衍生物。

莪术醇（^FIC上的羟基）酯化物的制备

莪术醇 ⁶C上存在羟基，所以它就具有一般醇的通性，能够以通常的方法来制备莪术醇的酯：如以莪术醇为起始原料，溶解于适当的有机溶剂（如异丙醚、

DMF、二氧六环，、甲苯、二氯甲垸、氯仿、乙酸等）中，与羧酸在催化剂（对甲苯磺酸、二甲胺磺酰氯与二甲胺与 DMAP复合、二苯胺与 DPAT复合、 DMAP与 DPC复合、有机钕，对甲苯磺酸等）存在下反应；与酰氯在缚酸剂（如吡啶、三乙胺等）的存在下反应；酸酐回流反应，都能生成相应的莪术醇酯，然后，经过分离、纯化处理，得到纯度较高的莪术醇酯。除非另作说明，下列流程中 "r.t.' 代表 "室温" ， "reflux"代表 "回流" ， "or"代表或， "hr"代表 "小时" 1、莪术醇与酰氯的酯化

莪术醇溶解于氯仿中与等摩尔或过量的酰氯在缚酸剂过量的三乙胺存在下，在常温或回流数小时，即可以得到相应的莪术醇酯（下式中 R的限定同上）：

2、莪术醇与酸酐的酯化

莪术醇溶解羧酸中（一般为乙酸）中与过量的酸酐，回流数小时，即可以得到相应于酸酐的莪术醇酯（下式中 R的限定同上）：

3、莪术醇在有机钛试剂催化剂与有机酸的酯化

莪术醇溶解于二氯甲烷中，在有机钛试剂作催化剂及三甲基氯硅烷为辅助催化剂作用下，等当量的酸酐作脱水剂，几乎等摩尔的羧酸和莪术醇在室温下就可以高收率地生成莪术醇相应的酯（下式中 R¹为 R， R的限定同上， R²OH为莪术醇）：

4、莪术醇在 DMAP与 DPC催化下与有机酸的酯化

莪术醇溶解于二氧六环中，与略为过量的羧酸，在 DMAP与 DPC催化下， 70 反应约 100小时，就可以高收率地生成莪术醇相应的酯（下式中 R的限定同上）：

(leq)

(1.2eq)

5、莪术在对甲苯磺酸催化下与有机酸的酯化

莪术醇溶解于甲苯中，与过量的羧酸，在对甲苯磺酸催化下，回流分水反应，生成莪术醇相应的酯（下式中 R的限定同上） -

(leq) ( 1-1.5eq )

6、莪术醇溶解于适当的有机溶剂（DMF、乙酸乙酯或吡啶等）中与氯化亚砜反应，经过处理后，再用碱性溶液处理，得到莪术醇的硫酸酯：

相似的，以上述制备得到的莪术醇的加氢衍生物为原料，同样能进行上述 1-6 的反应，制备获得相应的莪术醇氢化物的酯。

莪术醇（⁶C上的羟基）醚化物的制备莪术醇⁶ c上存在羟基，所以它也就具有一般醇的通性，莪术醇溶于适当的有机溶剂中（如异丙醚、 DMF、二氧六环，、甲苯、二氯甲垸、氯仿）能够与硫酸二酯（ROS0₂OI 或与碘垸（RI) 在碱性的溶液中反应生成相应的醚，然后，经过分离、纯化处理，得到纯度较髙的莪术醇醚。

1、莪术醇溶解于异丙醚和二氯甲烷中（下式中 R的限定同上）：

( 1.3eq)

2、莪术醇溶解于异丙醚和二氯甲垸中与碘烷反应（下式中 R的限定同上）：

(leq) ( 1.3eq ) 相似的，以上述制备得到的莪术醇的加氢衍生物为原料，同样能进行上述 1-2 的反应，制备获得相应的莪术醇氢化物的醚。

莪术醇 s_C与 i²C之间存在着双键，它和其它的烯烃化合物一样具有被加成和被氧化的性质。它极易与卤素、卤化氢起加成反应，生成莪术醇的双卤化物、单卤化物；也能被氢、氢化锂铝等还原，生成莪术醇的氢化物，同时也能够被烷基环氧化合物所加成，生成莪术醇的环氧化合物；还可以被高锰酸钾等氧化剂氧化，生成莪术醇的氧化物、双羟基化合物。

经过上述反应得到的莪术醇的卤化物上的卤原子在适当的有机溶剂中，在室温时就极易被: NH、 - R' NR' ' (R'、 R' '为 R, 可以不相同）、 H₂NRNH -，其中 R的限定如上所定义，或为杂原子环基团，如吡啶、吡咯、咪唑、三氮唑、四唑、二噁唑、二噁二唑、哌啶（只要分子中含有氮氢键： ) 或其简单的衍生物、 i 、 ^→CH 、 "^ . 或— ^hn—€Γ (邻、间或对位）（其中 R的限定如上所定义或为 Η) 取代而生成相应的胺类衍生物。

1、莪术醇与卤素加成物的制备

莪术醇溶解于适当的有机溶剂（如氯仿、甲醇等）中，在室温或低于 o°c时，就极易与卤素（X₂， X为 Cl₂、 Br₂、 1₂，最佳为 Br₂) 发生加成反应，生成在 ⁸C、 ¹²C各加一个卤原子的莪术醇的衍生物。

制备得到的双卤化物，在无水的有机溶剂中，碱性时很容易脱去一个卤化氢，而得到使 ⁸C与 ¹²C之间的双键得以恢复的单卤化物

也可以以上述制备得到的莪术醇（⁶C上的羟基）酯化物、莪术醇的（⁶C上的羟基）醚化物（R的限定同上，但是不包括带有双键的烯烃类）为起始原料，溶解于适当的有机溶剂（如氯仿、甲醇等）中，在室温或低于 0°C时，与卤素发生加成反应，生成在 ⁸C、 ¹²C各加一个卤原子的莪术醇相应衍生物。相似的制备得到的双卤化物，在无水的有机溶剂中，碱性时很容易脱去一个卤化氢，而得到使 ¾与 ¹²C之间的双键得以恢复的单卤化物：

莪术醇醚衍生物的卤化及卤化氢的脱除：

莪术醇酯化衍生物的卤化及卤化氢的脱除：

莪术醇硫酸酯衍生物的卤化及卤化氢的脱除-

莪术醇与卤化氢的加成方法与莪术醇与卤素的加成方法相同，只是 ⁸C 加上 —个 H， ⁱ²C加上一个 X。

将上述制备得到的溴化物或氯化物溶解在无水甲醇中，加入氟化物（例如 NH₄F、 NaF) 室温下反应，就可以得到相应的莪术醇的氟取代物。

R含有双键的莪术醇酯的卤化物的制备方法为：先以莪术醇的卤化物为原料，然后以上述莪术醇酯化的方法来获得。

莪术醇卤化物中卤原子置换产物的制备

将上述制备得到的衍生物（或莪术醇）卤化物（单卤化物或双卤化物）中的一种（主要为溴化物）溶解于适当的无水有机溶剂（乙腈、四氢呋喃等）中，加入千燥过量（一般 2-3.5倍摩尔量）的胺类 R²-H (在此 R²为胺类，包括含氮杂环）在室温下反应 3小时以上，产物经过硅胶柱分离；或者经过重结晶来提纯，得到相应的莪术醇胺类衍生物或其盐（R R²的限定同上）。

单卤化物（⁸C与 ¹²C之间为双键）的胺化（Ε R²的限定同上）：

(leq) (2-5eq) 单卤化物（⁸C与 ¹²C之间为单键）的胺化（R R²的限定同上）：

(leq) (2.5eq) 双卤化物的胺化，双卤化物的胺化得到的大部分的是 ^sc与 ¹²C恢复了双键胺化衍生物（式 II ) 和少量的双胺化物（式 ΠΙ ) ( R R²的限定同上）：

(leq) (3.5eq) 莪术醇（或上述制备得到的莪术醇衍生物）的单卤化物（⁸C与 ¹²c含双键或单键）溶解于适当的有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酮等），室温与氢氧化钠的水溶液置换反应，其中的卤原子被羟基所取代（R¹的限定同上） -

上述反应得到的 ¹²C增加了一个羟基的莪术醇酯衍生物， ¹²c 的羟基也能发生酯化和醚化反应，得到相应的莪术醇的衍生物（R¹的限定同上）：

莪术醇的卤化物（主要为溴化物）溶解于适当的溶剂（甲醇水溶液 50%- 95% 等）中，与硝酸银溶液反应，就可以制备得到莪术醇相应的硝酸酯衍生物。

莪术醇中双键被氧化的衍生物的制备

莪术醇在适当的有机溶剂中（丙酮、乙酸、丙酸等）， ⁸C与 ¹²C之间的双键很容易被高锰酸钾、双氧水等氧化试剂所氧化而生成莪术醇的双羟基衍生物或莪术醇的酮衍生物。

莪术醇在等摩尔高锰酸钾和中性到碱性的丙酮溶液中氧化，生成莪术醇的双羟基衍生物. -

莪术醇在过量的高锰酸钾乙酸溶液中氧化，生成莪术醇酮衍生物:

在本反应中生成的衍生物也能酯化和醚化，得到相应的酯或醚。

莪术醇环氧衍生物的制备

将莪术醇溶解于适当的有机溶剂（氯仿、二氯甲烷等）中，在室温下加入间氯过氧苯甲酸反应，然后用 5%的氢氧化钠溶液洗涤几次，用无水硫酸钠干燥，

真空脱除有机溶剂。再经过硅胶柱分离，得到通式（III) 中∑为 1 的化合物此化合物在微酸性溶液中打开氧环，从而得到通式（）中 R²为 OH、 R³为 H的化合物。而开环后的化合物，经过酯化（或烷基化）反应（采用方法一莪术醇 ^SC 上的羟基酯化、方法二的垸基化反应）即可以得到通式（II ) 中 ^为11， R²为 OR¹的化合物（其中 R¹的限定如上所定义）。附图简述

图 1显示了对本发明化合物和莪术醇进行测定,得到的乙遨肝炎病毒 e抗原样品 OD₄₅。测定值。

图 2显示了对本发明化合物和莪术醇进行测定，得到的与阳性对照相比较，样品 HBeAg的降低百分率具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步详尽阐述。

制备实施例一莪术醇（⁶C上的羟基）酯化物的制备

( 1 ) 2.48克（95%， 0.01摩尔）莪术醇溶解于 50毫升氯仿中，加入少量的无水硫酸镁搅拌 3小时，过滤除去硫酸镁，再加入少量三乙胺后，在室温下滴加乙酰氯 1.06克（98%， 0.1 1摩尔）放置反应 24小时。然后倾入碎冰中，用冷水洗涤氯仿溶液直到中性，水相弃之。有机相用无水硫酸镁干燥，真空脱除氯仿。得到淡黄色的产物，以 95 : 5 '的 60-90 石油谜：乙酸乙酯以及 200-300目的硅胶柱子分离后得到母体上的羟基被酯化的乙酸酯莪术醇。即式（）中的 R¹为 CH₃CO 的衍生物（1号化合物） 1.55克无色至白色的油状物。收率： 58%, HPLC : 99.5%。

釆用美国 ThermoFinnigam公司 FlashEAl l l2型元素分析仪分析发现： C 73.554%, H 9.308%；分子式 ( C₁₇H₂₆0₃ ) 计算： C 73.344% , H 9.414%。

Finnigan MAT8430质谱仪分析得出产物的分子量为 278。

釆用 BmkerACF-300型核磁共振仪，以 CDC1₃为溶剂检测，图谱显示有 17个碳信号， 26个质子信号。

这确证得到的产物是 1号化合物。

( 2 ) 将 2.48克（95% , 0.01摩尔）莪术醇溶解于 50毫升二氧六环中，加入少量的无水硫酸镁搅拌 3小时，过滤除去硫酸镁，加入适量的 DMAP与 DPC，再加入 0.91克 CH₃CH₂COOH ( 98% , 0.012摩尔）在 70 反应 100小时，然后将反应物倾入冰水中，用乙醚或乙酸乙酯等溶剂多次提取此倾析物中的目标产物，弃水相，合并有机相，并无硫酸镁干燥后除去有机溶剂，得到的粗品用硅胶柱分离，得到纯度较高莪术醇丙酸酯无色油状物 2.15克。即式（III )中的 R¹为 CH₃CH₂CC 的衍生物，收率 82.1%。 HPLC: 98.8%。

Finnigan MAT8430质谱仪分析得出产物的分子量为 292。采用 BmkerACF-300型核磁共振仪，以 CDC1₃为溶剂检测，图谱显示有 18个碳信号， 28个质子信号。

( 3 ) 将 2.48克（95%， 0.01摩尔）莪术醇溶解于 30毫升乙酐中，加热回流数小时，然后将反应物冷却倾入冰水中，用氢氧化钠溶液中和过量的乙酐，调节水—溶液的 PH值到 7-8，用乙醚或乙酸乙酯等溶剂多次提取倾析物中的目标产物，弃水相，合并有机相，并无硫酸镁干燥后除去有机溶剂，得到的粗品用硅胶柱分离，得到纯度较高莪术醇丙酸酯淡黄色油状物 1.8克。即 1号化合物，收率 64%。 HPLC: 99.1 %。

(4) 将 2.48克（95%， 0.01摩尔）莪术醇溶解于 50毫升氯仿中，加入对甲基苯甲酰氯 1.9克（97%， 0.012摩尔）和 5毫升吡啶，加热回流数小时，然后将反应物冷却后倾入冰水中，用乙醚或乙酸乙酯等溶剂多次提取倾析物中的目标产物，'弃水相，合并有机相，并无硫酸镁干燥后除去有机溶剂，得到的粗品用硅胶柱分离，得到纯度较高莪术醇对甲基苯甲酸酯白色的油状物 2.3克。即通式（）中的 R¹为 CH₃ArCO的衍生物（如下式 X V所示），收率 64.7%。 HPLC: 99.5 %。

Finnigan MAT8430质谱仪分析得出产物的分子量为 354。

采用 BrukerACF-300型核磁共振仪，以 CDC1₃为溶剂检测，图谱显示有 23个碳信号， 30个质子信号。

XV

( 5) 将 1克莪术醇溶解于 30毫升的 DMF中，再取 2毫升氯化亚砜溶解于 10 毫升 DMF中。将氯化亚砜滴加到莪术醇溶液中，控制反应液温度在 20— 25°C，保持反应 3小时。然后将反应物倾入 100毫升水中，水解 2小时，用 60毫升乙醚提取，得到油状的莪术醇硫酸酯，再经过硅胶柱分离得到 0.87克产物， HPLC: 98.5%。将其溶解于 5毫升甲醇，用 1N 氢氧化钠溶液调节使 PH为 8。蒸干，残余物用乙酸乙酯处理。得到棕黄色粉末，莪术醇硫酸酯钠盐。此盐易溶于水。即得到通式（III)中的 R¹为 H0₃S或 Na0₃S的衍生物（20号化合物或 21号化合物）。将 Na0₃S衍生物检测：

以 00₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 15个^信号， 23个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 354。制备实施例二莪术醇（⁶C上的羟基）垸基化物的制备

在一个带有搅拌、 0-50 温度计和 25亳升恒压滴液漏斗的 100毫升三口烧瓶中，加入莪术醇 2.45克（0.01摩尔， 96%) ，异丙醚 60毫升，二氯甲垸 5毫升，搅拌完全溶解后，加入少量的无水硫酸镁搅拌 3小时，过滤除去硫酸镁。取 1.55 克硫酸二甲酯（0.012摩尔）溶解于加有 10毫升干燥过的异丙醚的恒压滴液漏斗中，开启搅拌，控制溶液温度在 35 ，缓慢地滴加硫酸二甲酯溶液。滴加完成后，滴加氢氧化钠溶液（0.025摩尔）继续搅拌反应 12小时以上。然后将反应物倾入 60克冰水中，用乙醚 70毫升分三次提取（30、 30、 10毫升），合并乙醚溶液。用水洗涤乙醚，直至中性，再用无水硫酸镁干燥乙醚溶液，过滤除去硫酸钠，室温真空脱除乙醚得到深褐色的固体，用 1 : 50-100倍 200-300目的硅胶，以石油醚：乙酸乙酯 =95: 5为洗脱液，得到含量： 99.2% (HPLC) 的 ⁶C上的羟基被甲氧基化了的莪术醇衍生物（即通式 III中 R¹为 CH₃-， R²为 H的化合物） 1.9克。收率： 76%， MP: 71-73 。

元素分析发现： C 76.935%， H 10.296%。

分子式 (C₁₆H₂₆0₂) 计算： C 76.752%, H 10.467%。

以。0 ₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 16个碳信号， 26个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 250。

这说明得到的反应产物就是我们需要的目标物，即 ⁶C转化为甲氧基的莪术醇甲醚衍生物。结构式如下

莪术醇甲醚衍生物莪术醇硫酸酯钠盐制备实施例三莪术醇与卤素加成物的制备

( 1 ) 将莪术醇 2.45克（0.01摩尔， 96%) 溶解于 45毫升甲醇中，加入少量的无水硫酸镁干燥后，过滤除去硫酸镁。保持反应物料在 5-10Ό和较好的搅拌下缓慢地向莪术醇的甲醇溶液中滴加干燥的液溴 0.61亳升（3.15克 /毫升， 0.012摩尔）。加完溴素后继续搅拌反应 5— 30分钟，直到溶液基本退色，真空除去甲醇后，得到粗的莪术醇溴化物，可以直接用于实施例六。或将此淡黄色的粗品经过硅胶柱的分离得到比较纯的目标产物，接近无色的很稠的油状物 2.81克。收率 71%, HPLC: 99.2%。即得到式 II中 R¹为 H， R²、 R³都为溴原子的莪术醇的双溴化物（30号化合物）。

元素分析发现: C 45.630%， H 6.028%。

分子式 (C₁₅H₂₄0₂Br₂) 计算： C 45.477%, H 6.107% 。

以。00₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 15个碳信号， 24个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 396。

这说明得到的反应产物就是我们需要的目标物，第 30号化合物。

(2) 将步骤（1 ) 得到的双溴化物 2克（0.005摩尔）溶解于 40毫升无水甲醇中，加入少量的无水硫酸镁搅拌干燥过滤除去硫酸镁后，加入干燥过的含氢氧化钠 0.21克（95%， 0.005摩尔）的甲醇溶液。在室温下放置反应 12小时以上，然后将深色的反应物倒入水中，用乙醚分多次提取，用水洗涤乙醚，直到洗液 PH 值为 7左右，无水硫酸镁干燥乙醚后，真空除去溶剂，得到颜色较深的粘稠物，经过硅胶柱分离，可以得到 8与 12位碳碳原子间脱除了一个溴化氢而形成了双键的莪术醇衍生物。得到了莪术醇的单溴代衍生物（第 34号化合物） 0.83克，收率 53%， HPLC: 98.2%，淡黄色油状物（式 I ) 。 R¹为 H 、 R²为 Br。

元素分析发现： C 57.214%， H 7.650%。

分子式 ( C₁₅H₂₄0₂Br) 计算： C 56.967%, H 7.649%。

以。0 ₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 15个碳信号， 24个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 316。

这确证得到的反应产物就是第 34号化合物。

制备实施例四莪术醇与氢卤酸加成物的制备

将莪术醇 2.45克（0.01摩尔， 96%) 溶解于 45毫升甲醇中，加入少量的无水硫酸镁搅干燥后，过滤除去硫酸镁，保持反应物料在 5-10Ό和较好的搅拌下缓 ½地向莪术醇的甲醇溶液中导入干燥的过量的溴化氢（加入溴化氢的摩尔数为莪术醇的 1.2倍左右），加完后继续搅拌反应物 1小时左右，得到粗的莪术醇深褐色的一溴化物，将此粗品经过硅胶柱的分离得到比较纯的目标产物莪术醇单溴化物，即得到通式（II)中 R³为溴原子 R²为 H的莪术醇单卤化物（第 34号化合物）。

元素分析发现： C 57.965%， H 7.582%。

分子式 (C₁₅H₂₅0₂Br) 计算： C 56.786%, H 7.943%。

以。0。1₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 15个碳信号， 25个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 317。

这说明得到的反应产物就是我们需要的目标物。

制备实施例五、莪术醇加氢物的制备

( 1 ) 将莪术醇 2.45克（0.01摩尔， 96%) 溶解于 45毫升甲醇中，加入少量的无水硫酸镁搅拌干燥后过滤除去硫酸镁，加入少量的加氢催化剂（钯碳等），在室温常压强烈搅拌下通入氢气。通氢反应维持 24小时以上，结束加氢反应后，过滤回收钯碳。将滤液室温下真空除去溶剂甲醇，得到淡黄色的油状物，经过硅胶柱分离，即可以得到莪术醇 8-12位碳碳双键被氢加成了的接近无色粉末化合物（莪术醇的二氢衍生物）， 1.9克， HPLC: 98.1%，熔点： 75-77°C，即得到通式（II) 中 R¹为 H， R²、 R³都为 H的莪术醇的二氢衍生物（第 33号化合物）。

元素分析发现： C 75.832%， H 10.856%。

分子式 ( C₁₅H₂₆0₂) 计算： C 75.581%, H 10.994%。

以 CDC1₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 15个碳信号， 26个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 238。这说明得到的反应产物就是我们需要的目标物。

( 2) 莪术醇 1克（96%, 0.004摩尔）溶解于 50毫升的无水乙醚中，在常温下，向反应液中滴加氢化铝锂（约 0.005摩尔），加完后继续搅拌 3小时，真空除去乙醚，得到淡黄色的粉末，柱子分离，得到白色粉末 0.58克，收率 61%，HPLC: 98%、熔点： 78-80Ό。即得到通式（II) 中 R²、 R³都为 H的莪术醇衍生物（第 33号化合物）。

元素分析发现： C 75.832%， H 10.856%。

分子式 ( C₁₅H₂₆O₂) 计算： C 75.581%, H 10.994%。

以 CDC1₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 15个碳信号， 26个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 238。

这说明得到的反应产物就是我们需要的目标物莪术醇的二氢衍生物（第 33号化合物）。

制备实施例六莪术醇卤化物中卤原子置换产物的制备

( 1 )将制备实施例三 ( 1 )制备得到的莪术醇溴化物 6.0克 ( 66%, 0.01摩尔) 溶解于 80毫升乙腈中，加入少量的无水硫酸镁搅拌干燥三小时后，过滤除去硫酸镁，加入干燥过的正丁胺 2.6克（98%， 0.033摩尔）在室温下放置 24小时以上，室温真空除去溶剂。将此浅黄色的混合物用 50毫升水和 60毫升乙酸乙酯溶解置于梨形分液漏斗中，用氨水等碱液调节溶液的 PH值大于 9，充分摇动，水层再用 10毫升乙酸乙酯提一次。合并乙酸乙酯，用水洗（20毫升 *4) , 加水 40 毫升，用盐酸调节溶液的 PH值小于 7，充分摇动，最佳为 3，弃乙酸乙酯。酸性的水溶液用 20毫升的乙醚分 3次洗涤，弃乙醚。新的乙酸乙酯 60毫升与水相混合，调节 PH值大于 9，充分摇动，水层再用 10毫升乙酸乙酯提一次。乙酸乙酯合并后用水洗（20毫升 *4) ，然后用无水硫酸镁干燥，常温下真空除去乙酸乙酯，得到淡色的晶体 3.2克。经过硅胶柱分离得到相应的莪术醇正丁胺化合物，

(或者用丙酮重结晶）得到无色颗粒晶体 2.2克。收率 71.66%， HPLC: 99.8%。熔点： 104-106°C。即得到通式（III) 中 ^为 H， R²为 CH₃CH₂CH₂CH₂NH的衍生物（第 13号化合物）。

元素分析发现： C 74.402%， H 10.650% ,Ν 4.62%。

分子式 ( C₁₉H₃₃0₂N) 计算： C 74.267%, H 10.749% ,Ν 4.56%。

以。0 ₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 19个碳信号， 33个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 307。

这说明得到的反应产物就是第 13号化合物。 ·

将上述制备得到的莪术醇正丁胺衍生物溶解于丙酮中，在 20-30Ό时，搅拌下滴加浓盐酸（或通入 HCL气体），使溶液的 ΡΗ值为 6-7，溶液中迅速就有白色的莪术醇正丁胺衍生物盐酸盐固体析出，过滤洗涤并干燥，即得到高纯度的莪术醇正丁胺衍生物盐酸盐晶体（第 14号化合物）。 HPLC: 99.95%, 熔点： 127- 129°C。

(2) 将实施例三（1 ) 制备得到的莪术醇溴化物 6.0克（66%， 0.01摩尔）溶解于 80毫升乙腈中，加入少量的无水硫酸镁搅拌干燥三小时后，过滤除去硫酸镁，加入干燥过的叔丁胺 2.6克（98%， 0.033摩尔）在室温下放置 24小时以上，室温真空除去溶剂。将此浅黄色的混合物用 50毫升水和 60毫升乙酸乙酯溶解置于梨形分液漏斗中，用氨水等碱液调节溶液的 PH值大于 9, 充分摇动，水层再用 10毫升乙酸乙酯提一次。合并乙酸乙酯，用水洗（20毫升 *4) ，加水 40毫升，用盐酸调节溶液的 PH值小于 7，充分摇动，最佳为 3，弃乙酸乙酯。酸性的水溶液用 20毫升的乙醚分 3次洗涤，弃乙醚。新的乙酸乙酯 60毫升与水相混合，调节 PH值大于 9，充分摇动，水层再用 10毫升乙酸乙酯提一次。乙酸乙酯合并后用水洗（20毫升 X 4) ，然后用无水硫酸镁干燥，常温下真空除去乙酸乙酯，得到淡色的晶体 3.0克。经过硅胶柱分离得到相应的莪术醇叔丁胺衍生物，无色固体 2.0克（第 15号化合物）。收率 65.4%， HPLC: 98.8%。

熔点： 79-80°C。即得到通式（III) 中 R¹为 H， R²为（CH₃) ₃CNH-的衍生物。以 0 ₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 19个碳信号， 33个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 307。

这说明得到的反应产物就是我们需要的目标物。结构式如下：

莪术醇叔丁胺衍生物莪术醇叔丁胺衍生物盐酸盐

将上述制备得到的莪术醇叔丁胺衍生物溶解于丙酮中，在 20-30Ό时，搅拌下滴加浓盐酸（或通入 HCL气体），使溶液的 PH值为 6-7，蒸干丙酮析出白色的莪术醇叔丁胺衍生物盐酸盐粉末固体 (第 16号化合物)，结构式如上。 HPLC: 99.95%, 熔点： 115-116。C。

( 3 ) 将实施例三（1 ) 制备得到的莪术醇溴化物 6.0克（66%， 0.01摩尔）溶解于 80毫升乙腈中，加入少量的无水硫酸镁搅拌干燥三小时后，过滤除去硫酸镁，加入对羟基苯胺 3.34克（98%， 0.03摩尔）在室温下放置 24小时以上，室温真空除去溶剂。将此深色的混合物用 50毫升水和 100毫升乙酸乙酯溶解置于梨形分液漏斗中，用氨水等碱液调节溶液的 PH值大于 9，充分摇动，水层再用 10毫升乙酸乙酯提一次。合并乙酸乙酯，用 PH值 8-9的水洗（20毫升 *4) ，然后加水 40毫升，用盐酸调节溶液的 PH值小于 7，充分摇动，最佳为 3，弃乙酸乙酯。酸性的水溶液用 20毫升的乙醚分 3次洗涤，弃乙醚。新的乙酸乙酯 100 毫升与酸性水相混合，调节 PH值大于 8-9，充分摇动，水层再用 10毫升乙酸乙酯提一次。乙酸乙酯合并后用水洗（20毫升 *4) ，有机相然后用无水硫酸镁干燥，常温下真空除去乙酸乙酯，得到淡黄色的固体 3.8克。经过硅胶柱分离得到相应的莪术醇的对羟苯胺化合物（或者经过重结晶），得到白色晶体 2.3克。收率 67.1%， HPLC: 99.2% 熔点： 108-110。C。即得到通式 (III) 中 R¹为 H, R² 为 HOArNH-的衍生物（第 5号化合物）。结构式如下：

莪术醇的对羟苯胺衍生物莪术醇对羟苯胺盐酸盐

将上述制备得到的莪术醇对羟基苯胺衍生物溶解于丙酮中，在 40-5CTC时，搅拌下滴加浓盐酸（或通入 HCL气体），使溶液的 PH值为 5-6，放置后析出淡黄色的莪术醇胺化物盐酸盐晶体。将此晶体在水中用活性炭脱色重结晶，即得到类白色的高纯度的莪术醇对羟苯胺盐酸盐晶体（第 6号化合物，结构式如上）， HPLC: 99.89%, 熔点： 147,5-149.5°。。将此盐酸盐检测：

以。0 ₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 21个碳信号， 30个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 379.5。

这说明得到的反应产物就是我们需要的目标物。

(4) 将实施例三（1 ) 制备得到的莪术醇溴化物 6.0克（66%， 0.01摩尔）溶解于 80毫升乙腈中，加入少量的无水硫酸镁搅拌干燥三小时后，过滤除去硫酸镁，加入对无水哌嗪 2.90克（98%， 0.031摩尔）在室温下放置 24小时以上，室温真空除去溶剂。将此淡黄色的混合物用 50毫升水和 100毫升乙酸乙酯溶解置于梨形分液漏斗中，充分摇动，水层再用 10毫升乙酸乙酯提一次。合并乙酸乙酯，用水洗（20毫升 *4) , 然后加水 40毫升，用盐酸调节溶液的 PH值为 3，弃乙酸乙酯。酸性的水溶液用 20毫升的乙醚分 3次洗涤，弃乙醚。新的乙酸乙酯 100毫升与酸性水相混合，调节 PH值大于 9，充分摇动，水层用 10毫升乙酸乙酯再提一次。乙酸乙酯合并后用水洗（20毫升 *4) ，有机相然后用无水硫酸镁干燥，常温下真空除去乙酸乙酯，得到白色的固体 3.1克。经过硅胶柱分离得到相应的莪术醇的哌嗪衍生物（或者经过重结晶），得到白色晶体 2.3克。收率 7L8%, HPLC: 99.2%。熔点： 128-130°C。即得到通式（III) 中 R¹为 H， R²为 ^H "的衍生物（第 7号化合物）。

以。0 ₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 19个碳信号， 32个质子信号。

质谱仪分析得出产物的分子量为 320。

这确证得到的反应产物是第 7号化合物。

将上述制备得到的莪术醇哌嗪衍生物溶解于丙酮中，在 40-50°C时，搅拌下滴加浓盐酸（或通入 HCL气体），使溶液的 PH值为 5-6，放置后析出白色的莪术醇胺化物盐酸盐晶体。将此晶体在水中用活性炭脱色重结晶，即得到类白色的高纯度的莪术醇哌嗪盐酸盐晶体（第 8号化合物）， HPLC: 99.89%,熔点： 150-152 °C。

相似地，釆用上述方法，用乙胺与莪术醇的双卤化物反应，得到米色的粉末晶体，莪术醇乙胺衍生物，即得到通式（III) 中 R¹为 H， R²为 CH₃CH₂NH的衍生物，熔点： 92-94 °C。收率： 76%。

( 5) 将实施例三（1 ) 制备得到的莪术醇溴化物 6.0克（66%， 0.01摩尔）溶解于 40毫升的甲醇水溶液（甲醇：水 =90: 10) 中。在室温下， 10小时内滴加 30%的氢氧化钠水溶液 1.5克，再放置反应 24小时以上，调节溶液的 PH到中性，加入 40毫升水，用 50毫升乙酸乙酯多次提取，合并乙醚用水洗涤多次。然后用少量的无水硫酸钠干燥，真空除去溶剂，得到深褐色的粘稠的油状物 1.4克，经过硅胶柱的分离，得到莪术醇的二羟基衍生物，浅色晶体 0.87克，收率； 65%，熔点： 163- 165°C， HPLC: 98.3%。即得到通式（Π ) 中 R³、 R²为 OH的化合物 (第 32号化合物，莪术醇双羟基化合物）。

元素分析发现： C 66.873%， H 9.458%。

分子式（C₁₅H₂₆O₄) 计算： C 66.636%， H 9.693%。

以。0 ₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 15个碳信号， 26个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 270。

莪术醇双羟基化合物莪术醇的双硝酸酯衍生物

( 6) 将实施例三（1 ) 制备得到的莪术醇溴化物 6.0克（66%， 0.01摩尔）溶解于 60毫升甲醇中，向此溶液中滴加含有 3.6克（99%、 0.02摩尔）硝酸银 10 亳升的水溶液，常温下放置过夜，就有大量的类白色絮状沉淀析出，加 60毫升水和乙醚（1 : 1 ) ，分两次提取，水相回收溴化银，乙醚相用 40毫升分两次洗涤，用无水硫酸钠干燥，真空除去溶剂，就可以得到莪术醇的双硝酸酯衍生物，即分别得到通式（ ) R³、 R²被 >^0₃置换了的系列衍生物。结构式如上（第 31 号化合物，莪术醇的双硝酸酯衍生物）。

制备实施例七莪术醇中双键被氧化的衍生物的制备

( 1 ) 、将莪术醇 2.45克（0.01摩尔， 96% ) 溶解于 40毫升乙腈中，用溶解了 1.6克高锰酸钾（98%， 0.01摩尔）的水溶液，在常温下放置，直到溶液的紫红色完全褪去，然后真空除去乙腈，用 1 : 1的乙酸乙酯-水 100毫升提取，弃水相，乙酸乙酯用水洗涤两次，然后用无水硫酸钠干燥，除去溶剂后得到深色的固体，经过硅胶柱分离得到类白色晶体 2.1 克，收率， 77.7%，熔点： 163-165Ό , HPLC: 98.8%。即得到通式（II ) 中 R¹为 H、 R²、 R³为 OH的化合物（莪术醇双羟基化合物），此类化合物在水中溶解度较大。

元素分析发现： C 66.873%， H 9.458%。

分子式 (C₁₅H₂₆0₄) 计算： C 66.636%, H 9.693%。

以 CDC1₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 15个碳信号， 26个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 270。

这说明得到的反应产物就是我们需要的目标物。

得到的莪术醇双羟基衍生物经过垸基化、或酯化得到通式（Π ) 中 R⁵、 R⁶都为 WO的莪术醇衍生物， R¹的限定如上所定义。

(2) 将莪术醇 2.45克（0.01摩尔， 96%) 溶解 40毫升乙酸中，加入溶有 4 克的高锰酸钾的水溶液，加热汇流数小时后，真空除去有机溶剂后，用 100毫升的 50%的乙酸乙酯和水提取，乙酸乙酯用水洗涤多次后，用无水硫酸钠干燥，真空除去溶剂，得到深色的固体，硅胶柱分离得到白色的莪术醇酮衍生物 1.45克，收率： 61%， HPLC: 98%, 熔点： 138-140°C。即通式（III) 中 Z为 0的第 31 号化合物。

元素分析发现： C 70.865%， H 9.102%。

分子式 ( C₁₄H₂₂0₃) 计算： C 70.560%, H 9.305%

以。00₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 14个碳信号， 22个质子信号。质谱仪分析得出产物的分子量为 238。

制备实施例八莪术醇环氧衍生物的制备

将莪术醇 1克（96%， 0.004摩尔）溶解于 100毫升氯仿中，在室温下加入间氯过氧苯甲酸 2克（98%， 0.011摩尔）， 15-20°C反应 8小时，然后用 5%的氢氧化钠溶液洗涤几次，

再用水洗涤到中性，用无水硫酸钠干燥，真空脱除溶剂。再经过硅胶柱分离，得到通式（）中 Z为的莪术醇的环氧衍生物（第 48号化合物）。得到白色粉末 0.504克，收率： 50%， HPLC: 98.5%。熔点： 130-132Ό 元素分析发现： C 70.865%， H 9.102%。

分子式 ( C₁₅H₂₄0₃) 计算： C 71.035%, H 9.046%。

以。00₃为溶剂，磁共振仪检测，图谱显示有 15个碳信号， 24个质子信号, 质谱仪分析得出产物的分子量为 252。

此化合物在微酸性溶液中打开氧环，从而得到通式（Π ) 中 R²为 OH、 R³为 H的化合物。而开环后的化合物，经过酯化（或垸基化）反应（采用方法一莪术醇 ⁶C上的羟基酯化、方法二的垸基化反应）即可以得到通式（II ) 中 R³为 H， R²为 OR¹的化合物（其中 R¹的限定如上所定义）。

试验实施例

实施例一化合物体外肿瘤细胞抑制率的检测

1. 试验化合物

1—49个新化合物和莪术醇 E共 50个。

2、材料

( 1 ) MTT 以 O.Olmol/L的磷酸盐缓冲液（PBS) 溶解 MTT，调节浓度到 4mg/ml, 过滤除菌，贮存于 4Ό的冰箱中。

(2) MTT裂解液的配制 80 g的十二垸基磺酸钠溶解在 200 ml的 DMF 中，水浴加温使之溶解，加入 200 ml蒸馏水，用 1 : 1的 80%乙酸和 1N的 HC1 调节 PH到 4.7。

( 3 ) 使用的肿瘤细胞株

U-937 人组织细胞淋巴瘤'

A-549 人肺腺癌细胞

Bel-7402 人肝癌细胞

MCF-7 人乳腺腺癌细胞

Hela 人宫颈癌细胞

HL-60 人早幼粒白血病细胞

SMMC-7721 人肝癌细胞

LLC 小鼠 Lewis月巿癌

3、操作方法

( 1 ) 单细胞悬液接种于 96孔板（X 3 ) (用 PRMI-1640基础培养基将细胞稀释到 3 X 10⁴个 / ml，每孔加入 200ug稀释好的细胞）， 37°C， 5%的 CO" 饱和湿度下培养 24小时。每组 4个平行样。

( 2 ) 除去培养基，取新配制培养基按表中浓度制备（15个化合物）抗癌药物溶液，每孔加入 200ug，培养 48小时。

( 3 ) 每孔加入 2mg/ ml的 MTT20ug，孵化 4小时。

( 4) 吸出孔中培养液，快速翻转培养板甩去培养液，加入 DMSO150ug/孔，室温下震荡 10分钟。

( 5 ) 用酶联检测仪测 OD值

。

( 6 ) 按下式分别计算细胞生长抑制率（inhibition rate IR) 。

IR(%)=[1- (实验组平均 OD值 /对照组平均 OD值)] X 100%

实验结果如附表一所示。实验结果表明，所有的化合物对 hda的抑制率都大于 50%。

重复三次同样的试验过程，结果见下表一、二、三。

表一化合物体外抗肿瘤生物活性测试筛选结果测试指标：抑制率浓度： 5(^g/ml

Ο Ο

样品名结果 (％) 结果 (％) 禾结果结果结果(％) 结果(％) 结果 (％) ON

(%) (%) (%)

U-937 A-549 Bel-7402 MCF-7 SMMC-7721 HL-60 Hela LLC

1 45.45 -9.16 32.12 45.6 23.10 23.12 51.23 1. 30

2 71.17 4.93 23.33 45.98 12.35 12.34 70.56 2.98

3 91.72 7.76 14.41 32.15 8.02 3.21 69.23 6.89

4 52.23 10.51 43.21 49.23 5.30 42.1 73.22 1.01

5 93.95 90.32 80.21 90.32 85.01 91.32 94.36 3.21

6 90.92 91.84 81.84 91.89 86.12 93.21 95.26 88.23

7 93.01 65.32 55.44 88.32 3.34 90.56 . 90.38 85.42

8 90.26 60.5 54.32 89.12 4.50 91.95 91.87 12.1

9 87.32 65.21 45.32 56.47 1.21 86.32 82.36 4.83

10 85.20 62.31 44.68 56.32 7.79 87.20 4.18

1 1 85.3 60.12 43.25 58.39 33.88 70.23 91.64 1 1.77

C.000/S00ZN3/X3d 9C09ll/S00Z OAV

表二（复蹄）化合物体外抗肿瘤生物活性测试筛选结果测试指标：抑制率浓度： 5(^g/ml

样品宋结果结果结果结果结果结果（％) 结果（％)

名 ( %) (%) (%) (%) ( %) ( %)

U-937 A-549 Be卜 7402 MCF-7 SMMC-7721 HL-60 Hela LLC

1 34.26 -6.32 25.32 41.02 28.23 12.03 55.98 1. 30

2 70.30 9.23 12.78 41.78 14.67 17.98 75.23 0.32

3 93.01 10.32 11.00 22.35 8.96 4.89 70.23 0.02

4 51.00 14.03 43.02 50.09 1.96 40.01 70.12 0.23

5 95.56 90.00 81.54 91.02 86.91 90.89 92.31 85.07

6 94.12 92.84 81.84 91.89 86.12 93.21 95.26 87.02

7 90.00 67.23 60.23 85.01 1.23 91.02 89.30 -2.99

8 91.32 58.56 50.45 85.23 2.30 90.17 92.00 1.02

9 71.32 60.45 24.32 54.23 1 1.23 85.02 80.23 2.31

10 80.20 55.06 40.32 53.26 4.44 85.03 86.49 2.36

1 1 85.01 56.32 43.25 57.39 22.13 68.23 89.02 1.23

12 80.23 65.01 38.02 55.01 32.09 61.20 85.36 -1.23

13 45.10 3.56 30.25 50.36 0.23 .0.79 65.92 1.32

14 81.23 9.23 23.56 54.23 3.21 4.35 76.32 - 14.29

15 50.12 12.33 31.20 60.12 -8.60 2.98 71.42 - 10.12

16 80.12 10.19 8.99 50.32 2.63 15.00 70.32 0.22

17 85.12 5.23 -10.90 50.32 0.32 90.12 92.36 2.31

18 69.23 -0.32 11.23 54.32 0.69 7.32 65.03 0.22

19 42.23 3.10 8.95 0.16 12.301 55.98 50.27 -16.00

20 90.32 13.00 5.36 16.32 1.23 92.37 90.56 9.37

21 89.46 20.01 2.13 85.23 -1.82 90.89 90.1 1 1.89

22 50.23 12.36 0.23 85.02 40.32 21.03 61.88 -6.41

23 83.00 -1.89 10.77 23.66 4.96 13.56 60.23 13.20

24 52.31 0.32 4.32 35.02 12.30 0.98 50.12 1.32

N3/X3d 9C09ll/S00i ΟΛΧ 表三（复筛）化合物体外抗肿瘤生物活性测试筛选结果

实施例二化合物体外抗肿瘤 IC₅。的实验

1. 被试验的化合物

5-14、 17、 20、 21、 E共 15个化合物以 5-FU为阳性对照。

2、材料

( 1 ) MTT 以 0.01mol/L的磷酸盐缓冲液（PBS) 溶解 MTT，调节浓度到 4mg/ml, 过滤除菌，贮存于 4°C的冰箱中。

( 2) MTT裂解液的配制 80 g的十二烷基磺酸钠溶解在 200 ml的 DMF 中，水浴加温使之溶解，加入 200 ml蒸馏水，用 1 : 1的 80%乙酸和 1N的 HC1 调节 PH到 4.7。

( 3 ) 使用的肿瘤细胞株

U-937 人组织细胞淋巴瘤

A-549 人肺腺癌细胞

Bel-7402 人肝癌细胞

MCF-7 人乳腺腺癌细胞

Hela 人宫颈癌细胞

HL-60 人早幼粒白血病细胞

SMMC-7721 人肝癌细胞 LLC 小鼠 Lewis肺癌

3、操作方法

( 1 )单细胞悬液接种于 96孔板（用 PRMI-1640基础培养基将细胞稀释到 3*10⁴ 个 / ml, 每孔加入 200ug稀释好的细胞）， 37°C， 5%的 C0₂，饱和湿度下培养 24 小时。每组 4个平行样。

(2) 除去培养基，取新配置培养基按系列浓度制备（50个化合物）抗癌药物溶液，每孔加入 200ug，培养 48小时。

( 3 ) 每孔加入 2mg/ ml的 MTT20ug，孵化 4小时。

(4) 吸出孔中培养液，快速翻转培养板甩去培养液，加入 DMSO150ug/孔，室温下震荡 10分钟。

( 5) 用酶联检测仪测 OD值

。

( 6) 绘制细胞活力曲线图，求出 IC₅₀。

实验结果

实验结果如下表四所示，实验数据表明，所有的化合物对 hela和 u-937的 IC₅。比 E和阳性 5-FU对照接近或小，证明很多新化合物的活性比母核莪术醇和阳性 5-FU强。化合物 5、 6对所选的 8种肿瘤细胞都有很强的抑制作用，是广谱的抗肿瘤化合物。化合物 7、8 除了对 hela和 U-937有很好的活性外，对 U-937、 HL-60 活性也很好。

药用化合物筛选生物活性测试报告（ic₅。)

实施例三化合物抗动物体内肿瘤活性实验

化合物抗小鼠移植肉瘤 S-180活性实验

1、筛选的化合物

我们选取了其中的第 6号化合物（莪术醇对羟苯胺盐酸盐）、第 S号化合物（莪术醇哌嗪酸盐）、第 21号化合物（莪术醇硫酸酯钠盐）等三个化合物。

2、材料

( 1 ) 体重 IS- 22g昆明鼠为实验鼠；

( 2) 用注射用水（其中化合物 6溶解是需要加入 1%的表面活性剂）将三个化合物分别配制成 lOOmg/ml的溶液备用。 5-FU、喜树碱为阳性对照物对小鼠的用药量为 30mg/kg、 1 mg/kg; '

( 3 ) 0.9%的生理盐水； (4 ) 接种的肿瘤株为；

肉瘤 S-180

3、给药方式

静脉注射。

4、实验方法

参照中华人民共和国药政管理局《新药（西药）临床前指导原则》和徐叔云等主编的《药物实验方法学》中相关的方法。取 20-22kg昆明小鼠 120只，雄性，正常词养 3天无异常，常规腋下小鼠肉瘤 S-180, 4小时后称重，随机分组 10只 /组，共 12组。第一组给生理盐水 0.3毫升，为阴性对照组；第二组给 5-FU0.6mg/ 只，为阳性对照组；第三组给羟基喜树碱 0.02mg/只，为阳性对照组。第四、五、六组注射浓度 10%的化合物 6 ，分别为 0.4ml/只、 0.2ml/ 只、 0.1ml/只；第七、八、九组注射浓度 10%的化合物 8 ，分别为 0.4ml/只、 0.2ml/只、 0.1ml/只；第十、 ^一、十二组注射浓度 10%的化合物 20 ，分别为 0.4ml/只、 0.2ml/ 只、 0.1ml/只；接种次日开始给药，隔日连续给药， 1 次 /天，共六次。末次给药后次日称重处死，剥取肿瘤称后称体重和瘤重，按公式： [ (对照组平均瘤重-实验组平均瘤重） /对照组平均瘤重] X 100%。计算肿瘤抑制率，并对数据进行统计学处理。上述实验在相同条件下重复三次。

实验结果见下表五；实验结果表明：对于小鼠肉瘤 S-180, 化合物 6在三个不同的浓度下，都有较好的抑制效果；化合物 8只有在浓度达到 40m_g/kg，才有抑制效果；而化合物 21几乎无抑制效果。

ί

表五（第一次）化合物抗小鼠移植肉瘤 S-180活性实验结果（X士 SD， n=10)

表五（第二次重复）化合物抗小鼠移植肉瘤 S-180活性实验结果（X± SD， n=10 )

化合物抗小鼠移植肝癌 Η22活性实验

重复化合物抗小鼠移植肉瘤 S-180活性实验操作，但是接种的肿瘤株为肝癌 Η22 , 上述实验在相同条件下重复三次。

实验结果见下表六。实验结果表明：对于小鼠移植肝癌 Η22，第 6号化合物在三个不同的浓度下，都有较好的抑制效果；第 8号化合物只有在浓度达到 40mg/kg, 才有一定的抑制效果；而第 21号化合物几乎无抑制效果。

表六（第一次）化合物抗小鼠肝癌 H22活性实验结果（X± SD， n=10)

表六（第二次）化合物抗小鼠肝癌 H22活性实验结果（X土 SD， n=10 ) 翻 mm 平坳種撇嚀麵（g)

(joag/kg) (_g)给药前 (g)给药后 (%)

― 21.2 222 3.02±0.30

5-FU 30 19.6 21.3 1·19±0.31 60.5 二 1 20.3 202 1.00±028 66.9 四化^ !6 40 20.8 22.4 121 ±0.31 60.3 五 20 20.3 22.0 1·58±029 47.7 八 10 20.1 21.0 2.6±0·37 13.9 七化^ /8 40 20.4 21.4 1.93±0.36 36.1 八 20 21.8 21.9 2.9±0.39 4.0 九 10 21.0 22.3 3.10±0.33 一十化^ !21 40 20.5 22.1 3.0±0.31 1.0

20 20.3 22.0 3.02±0.41 一十二 10 192 22.1 3.03+029 一附表六（第三次）化合物抗小鼠肝癌 H22活性实验结果（X土 SD， n=10 )

化合物抗小鼠移植宫颈癌 U14活性实验

重复化合物抗小鼠移植肉瘤 S-180活性实验操作，但是

( 1 ) 接种的肿瘤株为小鼠宫颈癌 U14;

( 2) 所用小鼠都为雌鼠。

上述实验在相同条件下重复三次

实验结果见下表七。实验结果表明：对于小鼠移植宫颈癌 U14，化合物 6、 8、 21在三个不同的浓度下，都有较好的抑制效果；当给药浓度为 20mg/kg以上时，对于小鼠移植宫颈癌 U14的抑制率都达到 50%以上，当给药浓度为 40mg/kg时，对于小鼠移植宫颈癌 U14的抑制率都达到 60%以上，而化合物 6、21更是达到 70% 以上。化合物抗小鼠宫颈癌 U14活性实验结果（X士 SD,

表七（第二次）化合物抗小鼠宫颈癌 U14活性实验结果（X士 SD， n=10 ) 娜 ij 平渐植平坳植摧摔

(mgkg (g)给纖 (g)给药后鍵 _(g) (%)

)

一 19.8 22.6 3. 0±0.30

5-FU 30 20.0 21.3 1.95±0.31 42.6 三 ¾«碱 1 20.6 22.3 1.82±028 46.5 四化^ 16 40 19.9 21.6 0.90±0.31 73.5 五 20 20.3 21.6 120±0·29 64.7 六 10 21.5 22.0 2.3+0.37 32.3 七化^ !8 40 20.3 212 120±0.36 64.7 八 20 19.6 20.9 1.51 ±0.39 55.6 九 10 20.9 21.9 2.08 ±033 38.8 十化^ /21 40 19.8 21.0 0·89±0.31 73.8 20 19.9 21.1 1.46+0.41 57.1 十二 10 20.6 22.5 1.59±0.29 532 表七（第三次）化合物抗小鼠宫颈癌 U14活性实验结果（X± SD， n=10)

化合物抗小鼠移植肺癌 Lewis活性实验

重复化合物抗小鼠移植肉瘤 S-180活性实验操作，但是

( 1 ) 接种的肿瘤株为小鼠肺癌 Lewis;

( 2) 化合物为 6， 8和 21不再做活性实验；

( 3 ) 实验鼠为六组。

上述实验在相同条件下重复三次

实验结果见下表八。实验结果表明：对于移植小鼠肺癌 Lewis, 化合物 6在三个不同的浓度下，都有一定的的抑制效果；分别为： 51.6%、 44.8%、 29.4% 当给药浓度为 40mg/kg时，对于小鼠肺癌 Lewis的抑制率与阳性对照的喜树碱相当，与 5-FU相近。表八（第一次）化合物抗小鼠肺癌 Lewis活性实验结果（X土 SD， n=10)

实施例四体外抗 HIV-1蛋白酶（HIV-1 PR) 活性筛选

测试原理： HIV-1蛋白酶在最佳反应条件和反应体系中可齊荧光标记底物切开，检测酶反应产物中荧光强度来反映酶的活性。在反应体系中加入样品可用于筛选该酶的抑制剂。

测试材料和方法：

1 . HIV-1 PR: 外购， -85 °C保存。

2. 样品处理：样品临用前溶于 DMSO配成适当浓度，并用双蒸水作 5倍稀释，各 5个稀释度。

3. 阳性对照药：印地那韦（indinavir) , 由葛兰素公司提供。

4. 测试方法：样品稀释后加入含有荧光标记底物反应缓冲液中，并加入基因工程靶酶，在最佳反应条件下孵育，用 FLUO star Galaxy荧光仪测定荧光值。测试结果： '

表九样品抗 HIV-1蛋白酶初筛报告

品在不同浓度下的抑制率及 IC

50 10 2.0 0.40 0.08 IC50

样品名 ( U ( μ ( μ ( μ ( U ( μ

g/ml) g/ml) g/ml) g/ml) g/ml) g/ml)

化合物 2 12.66 12.20 2.98 8.64 4.13 ―

化合物 3 5.55 12.06 9.64 13.48 4.98 一

化合物 5 1.01 11.22 10.30 9.00 4.38 一

化合物 6 7.07 13.15 2.99 1.7 0.89 一

化合物 7 1.43 3.51 4.31 6.32 14.06 一

化合物 8 1.40 0.62 5.27 2.64 9.74 ―

化合物 17 9.94 6.15 -6.00 10.71 3.78

化合物 20 12.68 9.46 10.57 7.44 8.76 一

化合物 21 5.47 10.16 5.86 14.77 8.74 ―

化合物 23 1.39 11.23 13.69 11.14 11.88 ―

化合物 24 -0.63 2.57 11.62 13.48 3.32 一

化合物 33 9.14 1.30 10.63 11.41 13.21 一

化合物 47 0.56 1.78 12.94 12.32 6.89 一 10nM

92.1

注：表中 "一"表示样品在初始浓度物抑制 HTV-l Pr活性；

" * "表示样品自身有荧光，干扰检测系统，测定结果不准确。

实验结果表明：以 200ug/ml浓度筛选，发现各个化合物均无活性。实施例五体外抗 HIV-1逆转录酶（HIV-1 RT) 活性筛选

测试原理：将 HIV-1逆转录酶作用的模版包被在酶标版上，在最适酶反应条件和反应体系中， HIV-1 RT可将含有 Biotin-dUTP底物加到反应模版上，用链亲合素标记的辣根过氧化物酶检测酶反应物中 Biotin-dUTP掺入量来反映酶的活性。在反应体系中加入样品可用于筛选该酶的抑制剂。

测试材料和方法：

1. HIV-1 RT: 外购。

3. 阳性对照药：奈韦拉平（NVP) ，由常州三厂生产。

4. 测试方法：样品稀释后加入含有 Biotin-dUTP合基因工程靶酶的反应 Buffer 中，在最佳反应条件下孵育，以亲合素标记歌德辣根过氧化物酶系统显色，测定 0D₄₅。值。

注：表中 "一" 表示样品在初始浓度无抑制 HIV-1 RT的活性。

* 表示样品在初始浓度有抑制 HIV-1 RT的活性。

实验结果表明：第 2、 3号化合物在浓度为 120ug/ml时，抑制率为 60%，新化合物抗 HIV-1逆转录酶，只是有活性，但是效果并不佳。实施例六体外抗 HIV-1整合酶 (HIV-1 IN)活性筛选

测试原理：用合成的 30个寡核苷酸作供体底物，用合成的 20个寡核苷酸作为靶底物，在 96孔板包被供体底物加入纯化的 HIV-1整合酶，进行 ELISA反应，检测靶 DNA的链转移的产物，以生物素标记的碱性磷酸酶系统显色, 酶标仪测定 OD值。在反应体系中加入样品可用于筛选该酶的抑制剂。测试材料和方法：

1 . HIV-1 IN: 外购。

2. 样品处理：样品 11个，临用前溶于水或 DMSO配成适当浓度，再作 5倍稀释，. 4个稀释度。原液两个液体样品用 DMSO稀释 100倍后再作 5倍稀释， 4 个稀释度。性对照药： S-y，上海有机所提供。

3 . 供体底物和靶底物：上海生工合成。

4. 测试方法：样品稀释后加入供体底物包被 96孔板中，并加入含有基因工程靶酶和 biotin-靶底物的反应 Buffer中，在最佳反应条件下孵育，以生物素标记的碱性磷酸酶系统显色，测定 405ηηι 吸收值 OD值。测试结果：

表十一样品抗 HIV-1整合酶初筛报告初始浓度 IC₅₀ 初始浓度 ic₅₀

编号

( g/ml) ( g/ml) ( g/ml) ( g/ml) 化合物 2 1/1000(原液） 35.681 化合物 20 100 39.820

化合物 3 1/1000(原液） 35.983 化合物 21 100 - 化合物 5 100 - 化合物 23 100 一

化合物 6 100 - 化合物 24 100 - 化合物 7 100 - 化合物 33 100 - 化合物 8 100 - 化合物 47 100 一

化合物 17 100 - 一

S-y 0.545 注：表中 "-"表示样品在初始浓度抑制 HIV-1 IN活性的百分率小于 50%。实验结果表明：第 20号化合物对 HIV- 1整合酶 (HIV-1 IN)有比较好的抑制作用， IC₅。为 39.820ug/ml。实施例七抗流感甲、乙型病毒活性筛选

测试原理：以 MDCK (狗肾）细胞为病毒宿主，测定样品抑制病毒引起细胞病变程度（CPE) 。

测试材料和方法：

1. 病毒株：流感甲型病毒（济防 90-15 ) ，流感乙型病毒（济防 97-13 ) ，在鸡胚尿囊腔内培养传代（2003.8) ， -80°C保存。

2 .样品处理：样品溶于 DMSO, 再用培养液配成适宜初始浓度，用培养液作 3倍稀释，各 8个稀释度。

3 .阳性对照药：病毒唑 (RBV)，浙江康裕药业有限公司 (批号 960501)。

4 .测试方法： MDCK细胞接种 96孔培养板,置 5%C0₂， 37°C培养 24小时。

MDCK细胞分别加入流感甲型病毒 10-³ ( 60倍 TCID₅。）、流感乙型病毒 10'² ( 30 倍 TCID₅。），37°C吸附 2小时后倾去病毒液，分别加入不同稀释度药物。设病毒对照和细胞对照， 37°C 培养 36小时，观察结果，记录 CPE，计算各样品抗流感病毒半数抑制浓度 (ic₅。)。

测试结果：

表十二抗流感甲、乙型病毒初筛报告

对流感甲型对流感乙型

TC₅₀

样品编号

( g/ml ) ^IC5。 SI ^IC5。 SI

( g/ml ) ( g/ml )

25 >1000

21 >1000 47.72 20.96 一一

E >1000 一一 ― 一

6 192.45 一一一一

14 143.17 一 ―

8 192.45 ― - 原液的

2

1/12150 - ― 一一原液的

3

1/8403 ― ― -

RBV >2000 2.06 970.87 6.17 324.15 注：（1 ) 表中 "」，表示样品在最大无毒剂量无抗流感甲、乙型病毒活性。 (2) TC₅₀: 药物半数有毒浓度； IC₅。：药物对病毒半数抑制浓度； SI: 选择指数， SI=TC₅。/IC₅。。

实验结果表明：第 20号化合物有活性，但是，活性不是很强。实施例八抗疱疹病毒的药物筛选

材料和方法

实验样品：第 3-8、 14、 17、 19、 20、 21、 43化合物和莪术醇 E，分别用 PBS 或无水乙醇配制成母液浓度， 0.45um滤器过滤除菌，置于 4Ό避光保存备用。

病毒和细胞：口膜疱疹病毒（VSV) ， 293， BHK细胞由中国科学院武汉病毒所肝炎及基因治疗组液氮保存。细胞在。0₂培养箱中 37°C培养，培养液为 DMEM培养基加 10%胎牛血清（Gibico公司）

病毒制备及滴度测定： VSV感染 BHK细胞增殖病毒， 2〜3天后离心去沉淀， 00730 收集细胞上清，用 TCID₅。法测病毒滴度，一 80Ό避光保存备用。

药物筛选：将 293细胞计数，按 1.5X10⁴/孔接种于 96? 中 37°C C0₂培养过夜，将实验样品按一定浓度加入到细胞中，并用 MOI=5X10-³的 VSV感染细胞，同时设阴性阳性对照。感染后 12、 24小时观察细胞的病变情况，并用数码相机照相。

实验结果：样品感染 24小时后细胞病变及细胞状态见下表十三，

样品抗疱症病毒初步筛选实验结果

部分感染 12小时后细胞病变及细胞状态：由于样品的使用浓度较高（200μ g/ml) ，对细胞的毒性较大，我们降低样品浓度（50Pg/ml) 进行筛选实验，结果见下表十四。样品浓度（μ 细胞病变及 3胞状态

样品编号 g/ml) 样品 +VSV 样品

14 50 病变好

43 50 病变好

E 50 病变好

VSV MOI= 0.005 病变病变

PBS +培养基 1% 病变好

乙醇 +培养基 1% 病变好初筛样品感染 12、 24小时后细胞病变及细胞状态

第一轮初筛后，结果初步显示 13个样品中， 21号具有一定的抗 VSV的活性。进一步采用不同的实验浓度，对第 21号化合物进行药物筛选实验，实验结果如下：

实验结果表明：第 21号化合物在浓度为 200 μ g/ml时具有一定的抗 VSV的活性。实施例九抗乙肝病毒的筛选

1材料和方法

1.1实验样品

样品编号 6， 16， 14， 2， 3, 24， 17， 20, 33,莪术醇， 25， 47, 21，分别用 PBS 或无水乙醇配制成母液浓度， 0.45mn滤器过滤除菌，置于 4 避光保存备用。

1.2病毒和细胞 HBV重组杆状病毒（vAcGFPHBVc) ， sf 、 He_PG2细胞由中国科学院武汉病毒所肝炎及基因治疗组液氮保存。细胞在 C0₂培养箱（FORMA公司） 37 培养，培养液为 DMEM培养基加 10%胎牛血清（Gibico公司）

1.3病毒制备及滴度测定

1.4乙型肝炎病毒 e抗原的检测（ELISA方法）：过程简述如下：

1. 将反应板及试剂置于 37 平衡 30分钟，待测样品置于室温平衡 30分钟；

2. 每孔加入待测样品 50ul，设阴阳性对照各 2孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各 1滴，并设空白对照 1孔；

3. 每孔加入酶结合物 1滴（空白对照除外），混匀，封板，置于 37 孵育 30 分钟；

4. 洗板机洗板：洗涤 5次后拍干；

5. 每孔加入显色剂 A液、 B液各一滴，混匀，封板，置于 37 孵育 15分钟；

6. 每孔加入终止液 1滴，混匀；

7. 酶标仪读数，取波长 450nm，空白孔校零。

乙型肝炎病毒 e抗原诊断试剂盒购自上海实业科华生物技术有限公司。

1.5药物筛选

将 HepG2细胞计数，按 1.5X 10⁴/孔接种于 96孔板中 37CO ₂培养过夜， | 验样品按一定浓度加入到细胞中 37 孵浴 24小时后，用 MOI=100的 vAcGFPHB^ 转导处理的 HepG2细胞，同时设阴性阳性对照。感染后 4天后观察细胞的生长情并用乙型肝炎病毒 e抗原诊断试剂盒测定上清中的乙型肝炎病毒 e抗原。

2实验结果

2.1乙型肝炎病毒 e抗原的检测结果

第一轮初筛后，排除药品对细胞的影响，结果初步显示 13个样品中，化合物 6， 16， 2号具有抗 HBV的活性。编号样品浓度 ( g/mi) 细胞状态 HBeA 的 OD₄₅₀ (阳性测定值） /阳性值 χΐοο%

6 200 正常 0.126 93.42723

16 200 正常 0.502 73.81325

14 200 差 0.053 97.23516

2 200 正常 0.607 68.33594

3 200 正常 2.61 -36.1502

24 200 正常 2.387 -24.5179

17 200 差 0.073 96.19197

20 200 正常 2.201 -14.8148

33 200 差 0.068 96.45279 莪术醇 200 正常 2.654 -38.4455

25 200 差 2.527 -31.8206

47 200 差 0.365 80.95983

21 200 生长迟缓 0.137 92.85342

+ 正常 1.917

- 正常 0.057 附图 1显示了乙型肝炎病毒 e抗原样品 OD₄₅。测定值，其中横坐标代表试验样品编号，它们各自与本发明化合物的对应关系如下所示：

图中编号： 1， 2, 3, 4, 5, 6, 7, A, B, C, D, E, F, 化合物编号 6, 16, 14, 2, 3, 24， 17, 20, 33, 莪术醇， 25, 47, 21,

POSITIVE代表阳性对照

NEGATIVE代表阴性对照

附图 2显示了与阳性对照相比较，样品 HbeAg的降低百分率，图中各编号的含义与图 1中的相同。

Claims

权利要求

1 . 一种具有下式 I结构的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐:

其中， Y选自

-OH或 -OR

R¹选自 H、 R、 RCO或 H0₃S ;

所述的 R选自 H; 饱和的或不饱和的直链。烃基；饱和的或不饱和的带支链的 C₃—_1Q烃基，或 C₃— i。烃醚，。烃硫醚；饱和的或不饱和的、任选地被一个或多个选自硝基、磺酸基、卤原子和羟基的取代基所取代的 C₃.₈环烃基或^ - ₁₂芳烃基；

为 S， 0或 N， Z为一个或多个选自 H、羟基，饱和的或不饱和的直链 C^₆烃基饱和的或不饱和的带支链的 C₃_₆烃基， _n=l-3 _; 或者

R²选自 F; CI; Br; I； H; -OH; -OR; -HS0₃ ; -N0₃ ; RNH-, R'NR ",其中

R'和 R"可相同或不同，各自选自如所述 R所限定的基团； H₂NRNH-_;

或者 R²为选自吡啶基、吡咯基、咪唑基、三氮唑基、四唑基、二噁唑基、二噁二唑基、哌啶基、

条件是 R R²不同时为 Η,

当 Υ为 -OH或 -OR¹时，为单键，当 Y为- CHR²时，所述的衍生物具有通式 Π:

II

其中 R¹ , R²的定义同上，

R³选自 F; CI; Br; I； H; -OH; -HS0₃ ; -N0₃ ; -RNH; R'NR",其中 R'和 R"可相同或不同，为 R，可以不相同，各自选自如所述 R所限定的基团； H₂NRNH- _; 或者 R²为选自吡啶^ 吡咯基、 _n咪挫 _n基、三氮唑基、四唑基、二基、二噁二唑基、哌啶基、 ^Ν _、 00、 ^{ΝΗ_ Ν} 、或— ^hn^3°^r。

2. 根据权利要求 1所述的莪术醇衍生物基基或其药学上可接受的盐，其中所述的芳烃基选自 Ar -、 ArCH₂-、 ArCH₂CH₂-、 CH₃ArCH₂CH₂-， Ar-为苯基，或是被 F、 C Br、 I、硝基、磺酸基或 1-3个羟基取代的苯基。

3. 根据权利要求 1所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐，其中 Y为 =CHR²,所述的衍生物具有下式 III结构：

III

4. 根据权利要求 3所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐，其中 R²为

H。

5 . 根据权利要求 3所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐，其中 R¹为 H0₃S、丙酰基、丁酰基、异丁酰基或苯甲酰基。

6. 根据权利要求 3所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐，其中 R²为 H， R¹为 H0₃S、丙酰基、丁酰基、异丁酰基或苯甲酰基。

7. 根据权利要求 3所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐，其中 R²为 H， R¹为 H0₃S或 Na0₃S。

8. 根据权利要求 1所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐，其中所述的衍生物或其药学上可接受的盐选自下列化合物：

编号化合物简称 R¹ R²

1 莪术醇乙酯 CH₃CO- H

2 莪术醇丁酯 CH₃CH₂CH₂C0 H

3 莪术醇异丁酯 (CH₃) H

2CH₂CO-

4 莪术醇苯甲酸酯 H

5 莪术醇对羟苯胺 H ~ ^HN_0^— °^H

— OH

6 莪术醇对羟苯胺盐酸盐 -H -^

H

7 莪术醇哌嗪 H HN N

8 莪术醇哌嗪盐酸盐 H HN二 N

9 莪术醇杂环乙胺 H

10 莪术醇杂环乙胺盐酸盐 H - o

11 3， 4-二羟基苯胺 H

12 3, 4-二羟基苯胺盐酸盐 H — ζΖ

13 莪术醇正丁胺 H CH₃CH₂CH₂CH₂NH-

14 莪术醇正丁胺盐酸盐 H CH₃CH₂CH₂CH₂NH-

15 莪术醇叔丁胺 H (CH₃) ₃CNH-

16 莪术醇叔丁胺盐酸盐 H (CH₃) ₃CNH-

17 莪术醇单溴化物 H -Br

18 莪术醇单羟基 H -OH 19 莪术醇单硝酸酯 H -NO3

20 莪术醇磺酸酯 HS0₃- H

21 莪术醇磺酸酯钠盐 NaS0₃- H

22 莪术醇丙烯酸酯 CH₂=CHCO- H

23 莪术醇二乙醇胺 , Η (CH₃CH₂) ₂N-

24 莪术醇二乙醇胺盐酸盐 Η ( CH₃CH₂) ₂N-

25 莪术醇甲醚 CH₃ H

26 莪术醇甲醚溴化物 CH₃ -Br

27 莪术醇甲醚正丁胺 CH₃ CH₃CH₂CH₂CH₂NH-

28 莪术醇甲醚正丁胺盐酸盐 CH₃ CH₃CH₂CH₂CH₂NH-

29 莪术醇乙醚硝酸酯 CH3CH2- -NO3 或者，所述的衍生物或其药学上可接受的盐有下式结构:

II

式中各基团的定义如下- 编号化^ » R¹ R² R³

30 H -Br -Br

31 讓旨 H -N0₃ -NO3

32 H -OH -OH

33 H H H

34 H H -Br

35 H H -OH

36 ^βτ^ί謹旨 H H -NO3

37 H H

38 H H

39 H -HN-^ — OH

或者，所述的衍生物或其药学上可接受的盐有下式结构:

I

式中各基团的定义如下：

9. 根据权利要求 1 所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐，其中所述的衍生物或其药学上可接受的盐选自下列化合物：

莪术醇对羟苯胺 H OH 莪术醇对羟苯胺盐酸盐 H -HM- Q— OH 莪术醇丙酯 CH₃ CH₂CO- H 莪术醇丁酯 CH₃CH₂CH₂C0 H 莪术醇异丁酯 ( CH₃) H

2CH₂CO- 莪术醇苯甲酸酯 o~∞ H

莪术醇单溴化物 H -Br

莪术醇磺酸酯 HSO3- H

莪术醇磺酸酯钠盐 NaS0₃- H

莪术醇哌嗪 H HN二 N 莪术醇哌嗪盐酸盐 H HN二 N 莪术醇正丁胺 H CH₃CH₂CH₂CH₂NH- 莪术醇正丁胺盐酸盐 H CH₃CH₂CH₂CH₂NH- 莪术醇叔丁胺 H ( CH₃) ₃CNH- 莪术醇叔丁胺盐酸盐 H ( CH₃ ) ₃CNH-

10. 一种抗肿瘤或抗病毒的药物组合物，它包含药物有效量的如权利要求 1 一 9 任一所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂和 /或添加剂。

11 . 如权利要求 1;~9 任一所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐在制备预防和 /或治疗肿瘤的药物中的应用。

12. 如权利要求 1一 9 任一所述的莪术醇衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗病毒药物中的应用。

13. 根据权利要求 12所述的应用，其中所述的病毒选自 HIV病毒、流感病毒、疱疹病毒和乙肝病毒。