WO2005077458A1

WO2005077458A1 - 化学発光利用化粧・美容方法、皮膚照射美容用発光体及び化粧・美容用具

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Publication number: WO2005077458A1
Application number: PCT/JP2005/002079
Authority: WO
Inventors: Shigeaki Tamura; Akiko Enomoto; Masaki Uda
Original assignee: OMNIGLOW JAPAN CO Ltd; Fancl Corp
Current assignee: OMNIGLOW JAPAN CO Ltd; Fancl Corp
Priority date: 2004-02-13
Filing date: 2005-02-10
Publication date: 2005-08-25
Anticipated expiration: 2006-08-13
Also published as: CN1917919A; EP1721634A4; US20070172439A1; JP5074691B2; EP1721634A1; CA2556402A1; JPWO2005077458A1

Abstract

化学発光を用いた美容法、化粧法及び皮膚照射美容用発光体及び美容用具の提供。

Description

明細書

化学発光利用化粧 ·美容方法、皮膚照射美容用発光体及び化粧 ·美容用具

技術分野

[0001] 本発明は、低出力の発光である化学発光を用いた美容法、化粧法及び皮膚照射美容用発光体及び化粧用具、美容用具等に関する。

背景技術

[0002] スキンケアや皮膚の活性ィ匕等を目的として光を用いる技術思想は見あたらな、。特に、化学発光は美容やィ匕粧に活用されていない。

化粧の分野では、光は皮膚にダメージを与える原因の一つであって、避けるべきものとして扱われ、多くの光遮断用や防護用の化粧品が提案されている。例外的な使用としては、積極的に日焼け色を出すために日焼けサロンなどでの利用がされている。

また、治療的な使用として、レーザー光を局部的に使用する利用法も提供されている。

レーザー光のような強い光を利用する提案としては、次のようなものがある。

特許文献 1 (特開 2004— 733号公報)レーザー脱毛装置、特許文献 2 (特開 2003 12487号公報)美容液を皮膚に塗布し、その上力もレーザー光を照射して脱毛等のレーザートリートメントを行う、特許文献 ₃ (特開平 11— 342213号公報)肌、特に顔面の肌の気になる箇所にレーザー光の吸収率を高め且つ常に一定の吸収効果を得るように新陳代謝を促進して美容的処置効果に優れた美肌づくりを可能とするレーザ一光吸収補助テープとそれを利用した美容処置法。

[0003] 日焼け増進目的外の光の利用は、治療的な利用が多ぐ日光のような強い光は、皮膚の炎症や日焼け後の色素沈着や皮膚の老化促進の原因となるものとされ、美容や化粧に積極的に利用されてヽな、。

特許文献 1：特開 2004— 733号公報

特許文献 2 :特開 2003— 12487号公報特許文献 3：特開平 11—342213号公報

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0004] 本発明者らは、新しい美容法、化粧法を研究開発する過程で、化学発光による光の皮膚に対する作用を見出し、本発明を完成するに至った。本発明は、化学発光を利用した新しい美容法及び化粧法さらに美容用具、化粧用具、化粧剤、美容剤を提供するものである。

課題を解決するための手段

[0005] 本発明は、 2液成分を混合することにより数分から数時間の高温の発熱を伴わない光を発する化学発光体を皮膚に近接あるいは当接することを利用して、美容作用、化粧作用を施すものである。

[0006] (1) 化学発光によって得られた光を皮膚に照射することによる美容方法又は化粧方法。

(2) 光が 300— 1200nmの波長域力も選択されることを特徴とする（1)記載の美容方法又は化粧方法。

(3) 皮膚が、顔及び身体であることを特徴とする（1)又は（2)記載の美容方法又は化粧方法。

(4) 化学発光が 2液の混合によって発光することを特徴とする（1)一 (3)の、ずれかに記載の美容方法又は化粧方法。

(5) 皮膚外用剤を塗布後あるいはパック剤を施しつつ光を該塗布部に照射することを特徴とする（1)一（4)のいずれかに記載の美容方法又は化粧方法。

(6) 皮膚外用剤あるいはパック剤が化粧組成物ある!/、は美容組成物であることを特徴とする（5)に記載の美容方法又は化粧方法。

(7) 化学発光剤を含有することを特徴とする皮膚照射美容用又は化粧用発光体。

(8) 化学発光剤が混合によって発光する 2液性の化学発光剤を分離状態で、一つの容器に収納し、使用時に混合して皮膚に照射することを特徴とする（7)記載の皮膚照射美容用又は化粧用発光体。

(9) 皮膚に照射する光の波長域を 300— 1200nmの波長域力も選択されることを特徴とする (7)又は (8)記載の皮膚照射美容用又は化粧用発光体。

(10) 皮膚外用剤又は服用剤と請求項 (7)— (9)のいずれかに記載の皮膚照射美容用又は化粧用発光体とを組み合わせたことを特徴とする美容用具又は化粧用具。

(11) 化学発光による光を皮膚へ照射することによる美白化粧方法又は美白美容方法。

(12) 化学発光による光を皮膚へ照射してメラニン産生細胞増殖抑制及び Z又はメラニン合成抑制することを特徴とする請求項 (12)記載の美白化粧方法又は美白美容方法。

(13) 化学発光による光が、青蛍光、黄蛍光、緑蛍光、オレンジ蛍光、赤蛍光から選択される 1種又は 2種以上の組み合わせであることを特徴とする（11)又は（12)記載の美白化粧方法又は美白美容方法。

(14) 化学発光による光を皮膚へ照射する発光剤を含有する美白用発光体。

(15) 発光剤が、化学発光による光を皮膚へ照射してメラニン産生細胞の増殖を抑制及び Z又はメラニンの合成を抑制する発光剤であることを特徴とする（14)記載の発光体。

(16) 発光剤が、青蛍光、黄蛍光、緑蛍光、オレンジ蛍光、赤蛍光から選択される 1 種又は 2種以上の蛍光を発光する発光剤であることを特徴とする（14)又は（15)記載の発光体。

(17) ォリーブ葉エキスを皮膚面へ塗布、あるいはパック剤として施しつつあるいは服用後に、化学発光として青色蛍光を皮膚へ照射することを特徴とする（11)一（13) のいずれかに記載の美白化粧方法又は美白美容方法。

(18) 青色化学発光蛍光剤を含有する美白用発光体と、ォリーブ葉エキスを含有する皮膚外用剤あるいはパック剤及び Z又は服用剤との組み合せ力なることを特徴とする美白化粧用具又は美白美容用具。

(19) オレンジ蛍光、赤蛍光、緑蛍光、黄蛍光の 4種の内 1種又は複数の化学発光による光を皮膚へ照射して線維芽細胞を増殖及び Z又はコラーゲン合成を促進することを特徴とする化粧方法又は美容方法。

(20) ァスコルビン酸又はその塩及び Z又はァスコルビン酸誘導体を皮膚面へ塗布、あるいはノック剤として施しつつ、あるいは服用後にオレンジ蛍光、赤蛍光、緑蛍光

、黄蛍光の 4種の内 1種又は複数の化学発光による光を皮膚へ照射することを特徴とする（19)記載の線維芽細胞を増殖及び Z又はコラーゲン合成を促進することを特徴とする化粧方法又は美容方法。

(21) 皮膚へ照射して線維芽細胞を増殖及び Z又はコラーゲン合成を促進するィ匕学発光による光としてオレンジ蛍光、赤蛍光、緑蛍光、黄蛍光の 4種の内 1種又は複数の蛍光を発光する発光剤を含有することを特徴とする発光体。

(22) (21)記載の発光体と、ァスコルビン酸又はその塩及び Z又はァスコルビン酸誘導体を含有する皮膚外用剤あるいはパック剤及び Z又は服用剤との組み合せからなることを特徴とする化粧用具又は美容用具。

(23) 青蛍光を皮膚へ照射することによる光老化抑制方法。

(24) 化学発光による青蛍光を皮膚へ照射することによりピリジンダイマーの生成を抑制することを特徴とする（23)記載の光老化抑制方法。

(25) 光回復酵素（フォトリアーゼ)を皮膚面へ塗布あるいはパック剤として施しつつ及び Z又は服用後に青蛍光を皮膚へ照射することを特徴とする（23)又は（24)記載の光老化抑制方法。

(26) 青蛍光を皮膚へ照射する化学発光剤を含有することを特徴とする光老化抑制用発光体。

(27) 青蛍光を皮膚へ照射する化学発光剤と光回復酵素 (フォトリアーゼ)を含有する皮膚外用剤あるいはパック剤及び Z又は服用剤との組み合せ力なることを特徴とする光老化抑制用化粧用具又は美容用具。

(28) 化学発光蛍光及び Z又は化学発光近赤外線を皮膚へ照射することにより血流量を増加させる方法。

(29) 化学発光蛍光がオレンジ蛍光であることを特徴とする（28)記載の血流量増加方法。

(30) 蛍光及び Z又は近赤外線を発光する化学発光剤を含有する血流量増加用発光体。

(31) 蛍光がオレンジ蛍光であることを特徴とする（30)記載の血流量増加用発光体。

(32) (30)又は（31)に記載された血流量増加用発光体と皮膚外用剤とを組み合わせることを特徴とする化粧用具又は美容用具。

(33) 皮膚外用剤力 Sスキンケア化粧料、フェイスパック剤、湿布剤、貼付剤、経皮吸収剤のいずれかであることを特徴とする（10)、（18)、（22)、（27)、（32)のいずれかに記載の美容用具又は化粧用具。

(34) (7)、（8)、（9)、（10)、（14)、（15)、（16)、（18)、（21)、（22)、（26)、 (27 )、（30)、（31)、（32)に記載された発光体、美容用具又は化粧用具のいずれかは、フェイス被覆用、身体被覆用であることを特徴とする皮膚被覆材。

発明の効果

(1)化学発光による光を利用するため、皮膚や人体にダメージを与えない低ェネルギ一の光及び発熱を伴わない光を利用することができるので安全である。

(2) 2液性の化学発光剤を用い、使用時に混合することにより発光させることができるので、携帯性に優れ、使用場所や使用時間に制限が少なぐ利便性が高い。

(3)化学発光は、波長をコントロールでき、紫外力赤外までの幅広い波長域力特定の波長を利用することができる。また、高輝度発光も利用することができる。

(4)化学発光体は、点力広、面積までカバーできる大きさに設計することができるので、適用場所、面積に応じて利用可能である。

(5)発光時間が数分から 10時間以上までコントロールできるので、応用性が広い。

(6)細胞賦活作用 ·効果がある。

(7)化粧品 ·医薬部外品や経皮吸収剤や服用剤 (経口剤)等と組み合わせて使用することもできる。組み合わせによって、相乗作用 ·効果が期待できる。

(8)美容成分や化学成分を配合したものとの併用により相乗効果が得られる。

(9)美白効果を奏する。特に、メラニン産生細胞増殖抑制作用やメラニン合成抑制作用による美白作用を確認できた。特に、青蛍光、緑蛍光、黄蛍光、オレンジ蛍光、赤蛍光には美白効果が期待できる。

(10)皮膚を日光などの紫外線に暴露しても、その後、皮膚に蛍光を照射することによって、メラニンの合成を抑制し、皮膚の黒色化及びシミ、ソバカスの生成を抑制することが可能である。

(11)青色蛍光照射とォリーブ葉エキスを併用することによりヒトメラノサイト増殖率低減効果を相乗的に高めることができる。

(12)化学発光による光を皮膚に照射することにより抗老化をは力ることができる。特に、オレンジ蛍光、赤蛍光、緑蛍光照射することによって線維芽細胞の増殖、コラーゲン合成を促進することができ、ァスコルビン酸やその誘導体を併用することによってさらに線維芽細胞の増殖、コラーゲンの合成を促進することができ、相乗的改善効果を発揮することができる。

(13)化学発光による光を皮膚照射することにより、光老化抑制効果を奏することができる。特に、青色蛍光を照射することにより紫外線による皮膚細胞の DNA損傷を抑制し、光老化を抑制することができる。フォトリアーゼを併用することによりさらに作用効果を高めることができる。

(14)化学発光による光を皮膚照射することにより血流改善作用 ·効果がある。特に、近赤外線、オレンジ蛍光を皮膚に照射することにより、血流量を増加することができる

(15)本発明の化学発光体は、軽量小型で形状、大きさ、厚さ、柔軟性等設計自由度が大きぐ使用制限が少ない。本発明の化学発光照射体は、顔や身体の各部位の使用する箇所に合わせて、形状、大きさを構成することができる。軽量小型かつ柔軟性を付与することがきる。粘着剤を用いて皮膚へ貼着可能である。

図面の簡単な説明

[図 1(a)]赤蛍光分光放射輝度グラフ

[図 1(b)]緑蛍光分光放射輝度グラフ

[図 1(c)]青蛍光分光放射輝度グラフ

[図 1(d)]黄色蛍光分光放射輝度グラフ

[図 2]高輝度タイプ蛍光分光輝度放射輝度グラフ

[図 3]通常蛍光タイプの照度変化を示すグラフ

[図 4]高輝度蛍光タイプの照度変化を示すグラフ

[図 5]血管幅経過観察グラフ [図 6]細胞増殖率を示すグラフ

[図 7]蛍光照射による B16細胞増殖への影響を示すグラフ

[図 8]蛍光照射によるメラニン合成率への影響を示すグラフ

[図 9]高輝度青色蛍光照射によるヒト三次元皮膚モデルにおけるメラニン合成抑制を示すグラフ

[図 10]高輝度青色蛍光照射によるヒトメラノサイト増殖を示すグラフ

[図 11]線維芽細胞増殖率を示すグラフ

[図 12]コラーゲン合成率を示すグラフ

[図 13]各蛍光色照射における線維芽細胞増殖率（1%血清含培地)を示すグラフ

[図 14]各蛍光色照射における線維芽細胞増殖率 (5%血清含培地)を示すグラフ

[図 15]高輝度蛍光照射における線維芽細胞増殖率を示すグラフ

[図 16]高輝度青色蛍光照射によるフォトリア一ゼ活生促進効果を示すグラフ

[図 17]近赤外線 (IR)化学発光体発光スペクトルグラフ

[図 18]近赤外線 (IR)化学発光体の出力グラフ

[図 19]血流量を示す画像

[図 20]近赤外線 (IR)蛍光照射による血流量を示すグラフ

発明を実施するための最良の形態

[0009] 本発明は、化学発光による光を照射することにより、美白、抗老化、抗光老化、血流改善、照射部位及びその近縁の皮膚温の上昇、細胞の増殖に関する作用効果がある。これらの作用効果は、照射する波長や輝度によっても異なる。

これらの作用を美容やィ匕粧あるいは医用に単独で利用することもできる。また、経皮吸収剤や経口吸収剤と組み合わせて、吸収促進をは力ることができる。

この化学発光による光は、発熱を伴わない発光であり、形状、大きさ、凹凸のある皮膚面への追従性、使用時間、保存性などの特性を備えているので、安全性、利便性が非常に高い。利用できる化学発光は、発光剤の配合によって、波長や強度、時間を調整することにより、作用効果をコントロールすることができる。発光の種類としては、各種の蛍光色、赤外線等が挙げられる。

[0010] 具体的な美容分野としては、老化現象によって顕著になるしみ、そばかす、くすみ、くま、肌の明るさの減少、はり、小じわ、しわ、たるみ対策に有効である。

老化現象の原因として、血行不良による肌色の赤みの低下、び慢的なメラニンの沈着、皮膚の弾力などが低下することにより皮膚表面の凹凸による影、角層の肥厚などによる透明性の低下、皮膚表面での乱反射による艷の低下、加齢に伴う皮膚の黄色化などをあげることができる。これらの現象が端的には「肌のくすみ」として現れ、その境界は不明瞭であって、化粧によるカバーリングが難しいものである。

上記したィ匕学発光による光の照射により、血流の促進による透明性及び明るさの向上、代謝活性の促進、細胞賦活によって、くすみの原因を始め老化現象の原因に対処できるものである。

[0011] この化学発光の皮膚への照射は、化粧分野、医薬部外品、化粧剤、美容剤、化粧用具、美容用具、医療用具、美容皮膚科、スポーツ障害治療用、筋肉疲労治療用などに応用可能である。

その他の応用性として、高輝度の発光体を利用して、日常リズムの微調整 (サ一力ディアンリズム）、自律神経の調整を期待することができる。細胞増殖促進を利用することにより、傷口の快復促進用具に活用することができる。発光創傷帯や-キビ後の快復仕上化粧具等に応用が期待できる。皮膚温の上昇及び血流改善作用は、代謝を促進し、老廃物を除去する効果や、育毛促進効果が期待できる。この機能と経皮吸収剤とを組み合わせることにより、経皮吸収剤の作用効果を促進できる。例えば、フェイスマスクなどのスキンケアや湿布薬との組み合わせが有効である。

この化学発光剤は、薄ぐ柔軟性のある包装体に収容することができ、包装体の発光面を皮膚へ直接接触して用いることができる。発光面は、光透過性とすることが好ましい。化学発光剤を収容した包装体の大きさは、使用部位に合わせて作ることができる。また、発光体の担持体として不織布やスポンジなどを利用することもできる。全体を柔軟性にあるいは皮膚接触面側を柔軟にして皮膚接触なじみを良くすることができる。柔軟性材料の例として、シリコーン榭脂などの柔軟性と透明性のある合成榭脂フィルムを挙げることができる。

[0012] 化学発光による光を皮膚へ照射することにより、美白作用を奏することが認められた。化学発光は、紫外線と異なり、蛍光を照射することによりメラニン合成を促進することはなぐメラニン産生細胞の増殖を抑制し、細胞でのメラニンの合成を抑制する作用がある。青蛍光、黄蛍光、緑蛍光、オレンジ蛍光、赤蛍光の各化学発光において効果が確認できた。

青色蛍光と黄色蛍光においてメラニン合成抑制効果が認められ、特に青色蛍光照射だけで 20%のメラニン合成抑制効果が認められた。

赤蛍光、高輝度タイプの緑蛍光、高輝度タイプのオレンジ蛍光では、メラノサイトの増殖の抑制が認められ、細胞数が減少することで^ラニン量は減少すると考えられる。

蛍光照射は、活性ィ匕したメラノサイトの増殖を選択的に抑制しメラニン産生細胞の増殖が抑制され、かつ、各細胞でのメラニン合成を抑制して、美白機能を果たす。化学発光照射を利用して、美白化粧や美白美容を行うことができる。

[0013] 化学発光による光と経皮吸収剤の組み合わせ効果を、ォリーブ葉エキスを用いて確認することができた。蛍光として青色蛍光を用いて確認した。

ォリーブ葉エキス経皮吸収ある、は経口吸収させた状態で高輝度タイプ青色蛍光照射をすることによって、ヒトメラノサイト増殖率が低下することが認められ、ォリーブ葉エキスの塗布あるいは服用と高輝度タイプ青色蛍光を皮膚に照射を併用することにより、ヒトメラノサイトの増殖が抑制され、美白効果が期待できる。

ォリーブ葉エキスなどを経皮吸収剤として用いる具体的な手段としては、化粧料成分として液状にあるいはパック剤成分などとして用いることができる。

[0014] 化学発光による光を皮膚に照射することにより、紫外線照射によるメラニン合成を抑制して、紫外線暴廳こよる黒色化などを抑制する美白機能、美容機能を発揮する。

UVB照射によりメラニン合成が促進されるが、高輝度タイプ青色蛍光を照射することにより、 UVB照射によるメラニン合成促進が抑制されることを確認できた。従って、皮膚を日光などの紫外線に暴露しても、その後、皮膚に高輝度タイプ青色蛍光などの化学発光蛍光を照射することによって、メラニンの合成を抑制し、皮膚の黒色化及びシミ、ソバカスの生成を抑制することが可能となる。

[0015] 化学発光による光を皮膚へ照射することにより、皮膚の老化抑制があることが認められた。皮膚の老化原因として、線維芽細胞の再生力が弱くなつたり、コラーゲン合成力が弱くなることが挙げられる。化学発光を皮膚照射することにより、線維芽細胞増殖、コラーゲン合成促進機能があることが確認した。化学発光は、オレンジ蛍光、赤蛍光、緑蛍光、黄蛍光等を例示することができる。

例えば、オレンジ蛍光、赤蛍光、緑蛍光、黄蛍光、高輝度タイプのオレンジ蛍光、高輝度タイプの緑蛍光を照射することにより線維芽細胞を増殖し、線維芽細胞のコラ一ゲン合成を促進する。

化学発光と経皮吸収剤や経口吸収剤の組み合わせによる線維芽細胞増殖及びコラーゲン合成促進を確認することができた。組み合わせ剤として、ァスコルビン酸誘導体を用いた。

化学発光による光を皮膚に照射することにより、皮膚中のコラーゲン量が増大し、ハリの向上、シヮの改善、弾力性、柔軟性の改善等により老化防止効果をは力ることができる。さらに、ァスコルビン酸誘導体等を含有する剤と併用することにより相乗的な改善効果をはカゝることができる。併用剤としては、液体化粧料やパック剤、服用剤を禾 IJ用することがでさる。

[0016] 化学発光による光を皮膚へ照射することにより、皮膚の光老化抑制があることが認められた。

細胞では UVBの照射により DNAが損傷し、ピリミジンダイマーが生成される。これを繰り返し蓄積することで、光老化が進行すると言われている。光合成能力を持つ原核生物にはこの DNA塩基の二量ィ匕を修復する「光回復酵素（フォトリアーゼ）」が存在しており、このフォトリアーゼの活性ィ匕を、化学発光による光を照射することにより実現できることを確認した。

例えば、高輝度タイプ青色蛍光を照射することによりピリミジンダイマーの含有率を低減した。さらに、ピリミジンダイマーの含有率の低減率を上げることができるフォトリァーゼと高輝度タイプ青色蛍光を併用することにより、相乗的にピリミジンダイマーの含有率を低減することができ光老化の抑制効果を増強できる。

[0017] 各種の蛍光を照射し、線維芽細胞増殖促進効果が認められた。

貧栄養状況下での化学発光照射によって繊維芽細胞の増殖促進が認められ、化学発光の機能を確認することができた。例えば、通常タイプの赤蛍光、緑蛍光、黄蛍光、高輝度タイプオレンジ蛍光、高輝度タイプ緑蛍光で細胞賦活効果が認められた。最も活性がある蛍光色は緑色である。

[0018] 化学発光による光を照射することにより血流量を増カロさせることができた。

化学発光による光を皮膚へ照射することにより、血流量を増加させることができる。血流改善、皮膚温の上昇を直接的に計ることができ、代謝促進、経皮吸収促進、照射箇所への内服剤の作用増進を血流改善によって可能となる。

化学発光による光としては、例えば、近赤外線やオレンジ蛍光を使用することができる。

[0019] <化学発光体 >

化学発光は、化学的に光を発生させる二成分システムを利用して行われ、通常、「ォキサレート」（シユウ酸塩又はシユウ酸エステル)成分および「ァクチベータ一」成分と称される化学溶液状の二成分を化学反応させることにより化学ルミネセンス光を発生させる。

上記二成分は、種々の方法によって活性ィ匕前に物理的に分離される。多くの場合、一方の成分を含有する封止脆弱性ガラス容器を、他方の成分を含有する外側柔軟容器内に収容する。この外側容器は、第 2成分および充填脆弱性ガラス容器の両方を内包するため封止される。内側ノィアルとの密接、例えば、屈曲により生じる力によつてガラス容器が破壊されて、第 1成分が放出される結果、第 1及び第 2成分が混合されて発光する。化学ルミネセンス発光装置の目的は使用可能な光出力を得ることにあるので、外側容器は、通常、化学ルミネセンスシステムにより生じた光をその容器壁を透過させることが可能な、ポリエチレン、ポリプロピレン、シリコーン榭脂等の透明または半透明材料カゝら構成される。化学ルミネセンス用組成物により、種々の色彩光を発生させることができる。この装置は、特に選択された部所からのみ光を透過させるように工夫することもできる。容器を構成する包装要素は、照射部位に馴染むように柔軟性フィルムなどを用いることができる。

[0020] 化学発光は、種々提案されている。例えば、特開 2003— 238823号公報 (ィ匕学ルミネッセンス用組成物）、特開 2002-138278号公報（化学発光システム）、特開平 1 1 045602号公報（化学発光体）、特表 2003— 532253号公報（化学発光法による発光素子)等をあげることができる。

[0021] 化学発光体の組成は、蛍光剤が配合された A液と酸化剤が配合された B液で構成される。 A液は、エステル液と、蛍光物質、フタル酸ジブチル等カゝら構成され、 B液は、過酸化水素、触媒、フタル酸ブチル等カゝら構成される。これらの A液と B液は分離された状態で一つの容器に収納され、使用時に混合して発光反応させて用いる。

2成分の例として、過酸ィ匕水素成分とォキサレートエステル蛍光体成分が使用され、化学ルミネセンス触媒としてサリチル酸リチウム等のカルボン酸リチウム塩触媒などの二成分ィ匕学ルミネセンスシステム用触媒が使用される。二成分ィ匕学ルミネセンスシステム用触媒により、反応の活性エネルギーが低下でき、発光プロセスの温度依存性を減少させることができる。

一方の成分を、不織布やスポンジなどに含浸して用いることもでき、可撓性と体の凹凸への追従性を向上させることができる。

[0022] さらに具体的な成分として、特開 2003— 238823号公報に開示された次のような成分を使用することができる。化学ルミネセンス反応成分溶液としては、化学ルミネセンス反応成分であるォキサレート又はァクチべ一ターを含有する。ォキサレート (シユウ酸塩またはシユウ酸エステル）としては、通常の化学ルミネセンス反応に使用されるものであれば特に制限は無ぐビス（2, 6—ジクロロー 4 -トロフエ-ル）ォキサレート、ビス（2, 4, 6—トリクロ口フエ-ル）ォキサレート、ビス（3—トリフルォロメチルー 4 -トロフ工 -ル）ォキサレート、ビス（2—メチルー 4, 6—ジニトロフエ-ル）ォキサレート、ビス（1, 2—ジメチルー 4, 6—ジ-トロフエ-ル）ォキサレート、ビス（2, 4—ジクロ口フエ-ル）ォキサレート、ビス（2, 5—ジ-トロフエ-ル）ォキサレート、ビス（2—フオルミルー 4—ニトロフエ-ル）ォキサレート、ビス（ペンタクロロフエ-ル）ォキサレート、ビス（1, 2—ジヒドロ 2—ォキソ 1 ピリジル）グリオキサール、ビス N—フタルミジルォキサレート、ビス（2 , 4, 5—トリクロ口— 6 カルボペントキシフエ-ル）ォキサレート、ビス（2, 4, 5—トリクロ口— 6 カルボブトキシフエ-ル）ォキサレート、ビス（2, 4, 6—トリクロ口フエ-ル）ォキサレート、ビス（2, 4, 5—トリクロ口— 6—ペントキシフエ-ル）ォキサレートが例示される

[0023] ァクチべ一ターとしては、通常過酸化物成分が使用される。過酸化物成分としては、過酸化水素化合物溶液、過酸化水素化合物、または希釈剤により希釈された過酸化化合物溶液を含む。上記過酸化水素化合物は、過酸化水素と過酸化水素を生成する化合物とを含む。過酸ィヒ物成分においては、過酸ィヒ水素が好ましぐ過酸化水素と溶媒との溶液として、又は、過ホウ酸ナトリウム、過酸化ナトリウム、などの無水過酸ィ匕水素化合物として使用できる。また、過酸ィ匕水素を生成できるならば、如何なる化合物でも使用できる。ァクチべ一ター溶液を形成する溶媒としては、特に制限されな!ヽが、クェン酸トリェチル及びフタル酸ジメチルが好ましく使用される。

[0024] 第 1のポリマー榭脂粒子および第 2のポリマー榭脂粒子は、種々のポリマーが使用され、具体例としては、これに限定されないが、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビュル、ポリメチルメタアタリレート、ポリビュルべンゾエート、ポリビニルアセテート、セルロースポリビュルピロリドン、ポリアクリルアミド、エポキシド類、シリコーン類、ポリビュルブチラール、ポリウレタン、ナイロン類、ポリアセタール、ポリカーボネート、ポリエステル類およびポリエーテル類が挙げられる。また、架橋ポリマーを使用することができ、例えば、ポリスチレンポリジビュルベンゼン、ポリアクリルアミドーポリメチレンビスアクリルアミド、ポリブタジエン共重合体等が使用できる。中でも、ポリ塩化ビニル榭脂が好ましい。

[0025] 蛍光剤としては、特開 2002— 138278号公報に例示されている次のような成分を使用することができる。例えば、アントラセン、置換アントラセン、ベンゾアントラセン、フエナントレン、置換フエナントレン、ナフタセン、置換ナフタセン、ペンタセン、置換ペンタセン、ペリレン、置換ペリレン、ビオラントロン、置換ビオラントロン等の、少なくとも 3つの縮合環を有する共役多環芳香族化合物が挙げられる。上記化合物の置換基としては、フエ-ル基、低級アルキル基 (C クロ口基、ブロモ基、シァノ基、

1一 C )、

16

アルコキシ基 (C

1一 C )が例示される。好適な蛍光物質としては、 9, 10 ビス（フエ二 16

ルェチュル）アントラセン、 1ーメトキシー 9, 10 ビス（フエ-ルェチュル）アントラセン、ペリレン、 1, 5—ジクロロ一 9, 10—ビス（フエ-ルェチュル）アントラセン、 1, 8—ジクロ口— 9, 10—ビス（フエ-ルェチュル）アントラセン、ルブレン、モノクロ口及びジクロロ置換 9, 10 ビス（フエ-ルェチュル）アントラセン、 5, 12—ビス（フエ-ルェチュル）テトラセン、 9, 10—ジフエ二ルアントラセン、 16, 17—ジへキシルォキシビオラントロン、 2 ーメチルー 9, 10 ビス— (フエ-ルェチュル）アントラセン、 9, 10 ビス— (4ーメトキシフェ-ル）—2 クロ口アントラセン、 9, 10 ビス— (4 エトキシフエ-ル）— 2 クロロアントラセン、 16, 17—ジデシクロキシビオラントロン、「ルモゲン'レッド」（「LUMOGEN R ED」、赤色を発するペリレンジカルボキシイミド蛍光剤）、 ( TLUMOGEN YELLO W」、黄色を発するペリレンジカルボキシイミド蛍光剤）、 ( TLUMOGEN ORANGE 」、オレンジ色を発するペリレンジカルボキシイミド蛍光剤）、 5, 12 ビス（フエ-ルェチニル）ナフタセン、 5, 6, 11, 12—テトラフヱ-ルナフタセン及びこれらの混合物が挙げられる。

[0026] これらの組み合わせによって、 300— 1200nmの波長の発光を得ることができ、さらに触媒等を配合することにより、発光反応速度の制御も可能である。発光波長や発光強度は剤や量を調整することにより工夫することができる。本発明の実施例では、強弱 2種類の蛍光強度と近赤外線を用いて、実験を試みている。便宜上、強い方を高輝度タイプと称している。

現在治療などに用いられているレーザー波長は、 560— 1200nmであるから、化学発光によって得られる光の波長はこれらを十分にカバーして、る。 IPL (Intense Pulsed Light) : 560— 1200nm、 LLLT (低反応レベルレーザー： low reactivelevel laser therapy) : 830nm、スポーツ障害治療などに用いられるレーザー波長： 630nm 、 780nm, 800nm, 830nm, 904mnなど力 ^実用されて!ヽる。

[0027] <化学発光剤 >

本実施例では、輝度の強弱の 2種類の蛍光を用いており、輝度の高い方を「高輝度タイプ」と称し、低い方を「通常タイプ」という用語を便宜上使用している。蛍光の発光力は、発光剤の設計によって変更可能であるので、本実施例は、次の特性の発光を用いた。

本発明の実施例では、日本ォムニグロ一株式会社製 CYALUME Light shape (サイァリウムライトシエープ)ブルー（以下「青蛍光」と、う）、ライトシエープグリーン（以下「緑蛍光」と、う）、ライトシエ一プイエロー（以下「黄蛍光」 t 、う）、ライトシヱープオレンジ (以下「オレンジ蛍光」と!、う）、ライトシエ一ブレッド (以下「赤蛍光」と!、う）の通常タイプ 5種類と、高輝度タイプの蛍光体である「高輝度タイプ青蛍光」、「高輝度タイプ緑蛍光」、「高輝度タイプ黄蛍光」「高輝度タイプオレンジ蛍光」、「高輝度タイプ赤蛍光」の 5種類を用いた。

上記 5種類の通常タイプ分光放射輝度は、赤蛍光が波長 605nmで 800 X 10— ⁵W Z(sr'm²'nm)超、黄蛍光が 550nmで 260 X 10— ⁵WZ (sr'm²'nm)超、緑蛍光が 510nmで 450 X 10— ⁵WZ (sr'm²'nm)超、青蛍光力 50nmで 260 X 10— ⁵WZ (sr • m² · nm)超のピークを示した。

上記 5種類の高輝度タイプ分光放射輝度は、高輝度タイプ赤蛍光が波長 660nm で 0. 006WZ (sr'm²'nm)超、高輝度タイプオレンジ蛍光が 625nmで約 0. 009W Z(sr'm²'nm)、 525nmで約 0. 004WZ (sr·m²·nm)、高輝度タィプ黄蛍光が55 5nmで 0. 011WZ (sr'm²'nm)超、高輝度タイプ緑蛍光が 520nmで 0. 015W/ ( sr'm²'nm)超、高輝度タイプ青蛍光が 450nmで 0. 007WZ (sr'm²'nm)超のピークを示した。

これらの蛍光の計測例をグラフとして、通常タイプの蛍光の例を図 1 (a)—図 1 (d) に、高輝度タイプ例を図 2に示す。

[0028] <照射蛍光特性 >

蛍光の照度の経時変化特性を表 1、表 2,図 3、図 4に示す。表 1及び図 3は通常タイブの緑蛍光、青蛍光、オレンジ蛍光、赤蛍光の値を示す。表 2及び図 4は高輝度タイブの緑蛍光、オレンジ蛍光、青蛍光、赤蛍光の値を示す。これらは実施例 2から実施例 7において使用する。

[0029] [表 1]

[0030] [表 2] 高輝度タイブの蛍光照度の経時変化経過時間（分）照度単位 1 X 直後 1分後 5分後 10分後 15分後 20分後 25分後 30分後高輝度緑 2940 1319 671 482 378 31 1 253 219 高輝度黄 1900 1063. 3 505. 3 313. 3 248. 0 214. 3 182. 5 160. 0 高輝度オレンシ" 1633 403 217 180 136 106 88 75 咼輝度青 1 166. 7 260. 3 157. 0 117. 3 89. 3 76. 3 62. 4 55. 2 実施例 1

[0031] <血流改善 >

化学発光による光を皮膚に照射することによって、血管幅の拡張が確認でき、血流改善効果を確認することができた。

本実施例には、オレンジ蛍光の化学発光体を用いた。

観察実験は、血管幅の観察を 15分力も 65分までの 50分間オレンジ蛍光を照射、 1 00分間おいて 185分から 205分までの 20分間再度オレンジ発光を照射し、その前後も含めて 235分間観察した血管幅経過グラフを図 5に示した。これによつて、照射開始 15分後血管幅の拡幅が始まり、照射 30分後の 45分力も照射停止した 65分間で拡張した状態に保ち、照射停止後 80分間以上かけて開始前の血管幅に戻り、再照射した 185分力も拡張に転じ停止するまでの 40分間拡張し、停止（205分)後 30 分間かけてほぼ定常に戻ったことが観察できた。

[0032] 血管幅の測定は次のとおりである。

測定方法

恒温恒湿の測定室にて、室温 23°C、湿度 30%の条件下で測定をする。

1.定室にて 10分一 15分安静に保ち、左手中指の一定個所を測定する。

2.数回測定し、安定している部位にオレンジ蛍光の照射を 10分間隔 50分間測定する。

3.その後、 1時間ほどインターバルタイムをとり、再度安定にしてからオレンジ蛍光の照射を行う。

4. 10分間隔で 20分間測定する。 [0033] 赤色蛍光の化学発光体を用い前腕内側部 2箇所の皮膚に光を照射し、照射域の肘側 A部と非照射域の手首側 B部の皮膚温度の変化を観察したところ、皮膚温度の上昇が認められ、血流改善と皮膚外用剤と併用することによって、経皮吸収の促進が期待できる結果を得た。計測結果を表 3に示す。

5回のモニターの平均では、被照射域 B部では、赤色照射によって 0. 4°C、照射近縁の手首部位では、赤色蛍光の照射によって 0. 7°Cの温度の上昇作用があることが確認できた。

[0034] [表 3] ffi照皮瘠 .

[0035] 従って、熱を発しない化学発光による光を皮膚に照射することにより、血管幅を拡張し、照射部位及びその近縁部位の皮膚温を上昇させることが分力つた。

[0036] <細胞増殖 >

赤蛍光、青蛍光、オレンジ蛍光の 3種類の化学発光による光を皮膚細胞に照射し、その後の細胞増殖を観察した。結果を図 6に示す。

PMG (細胞増殖試験の指標として使用）と同等の増殖率をオレンジ蛍光と赤蛍光で観察できた。

なお、 PMGは、「リン酸- L-ァスコルビルマグネシウム」の略である。

コントロールと比較して、 PMG添加系とオレンジ蛍光照射系において細胞増殖が有意に促進された。

[0037] 試験は次の方法により行った。

1.細胞:正常ヒト皮膚線維芽細胞 (NHF)

2.化学発光体： CYALUME Light shape (サイァリウムライトシエープ）

ブルー（青蛍光）、オレンジ (オレンジ蛍光）、レッド（赤蛍光）発売元：日本ォムニグロー株式会社

3.アツセィ方法：

(1) NHFを 2.0 X 10⁴cells/well、 DMEM' 10%S(+)で 24well plateに播種。

(2) 5 日間培養しコンフルェントにした後、無色無血清 DMEMへ交換した。

(3)蛍光を照射（4hr)。ポジティブコントロールは lOOmM PMG添加系とした。

(4)細胞形態観察 ( X 40)。

(5)細胞増殖を MTT Assayを用い、測定波長 540nm、対照波長 655nmの比色定量を行なった。細胞増殖率は無処置群のコントロールを 100%として以下の式で計算した。

4.計算式：

細胞増殖率 (%)=([サンプル添カ卩 OD(540nm)]— [サンプル添カ卩 OD(655nm)])Z ([コントロール OD(540nm)]— [コントロール OD(655nm)]) X 100

実施例 2

[0038] 〈带光照射によるメラニン合成〉

蛍光を細胞に照射することによりメラノーマ細胞の増殖抑制とメラニン合成抑制があることを確認した。メラノーマ細胞増殖に与える影響について表 4及び図 7に示し、細胞のメラニン合成に与える影響について表 5及び図 8に示した。

(試験方法）

細胞：マウス黒色細胞種 (B16細胞）化学発光体：（日本ォムニグロー株式会社製）

通常タイフ。

フレー（青蛍光）、ォレンシ'、（ォレンシ'、蛍光）、レッド（赤蛍光）、グリーン (緑蛍光)、イェロー (黄蛍光）高輝度タイフ。

ォレンシ'、（ォレンシ'、蛍光）、レッド（赤蛍光）、ク'、リーン（緑蛍光）アツセィ方法： 1. B16細胞を 3.6 X 10³cells/well、 ΜΕΜ· 10%S(+)'クレコサミン培地で 24well

plateに播種。 n=8

2. 5 days培養した後、 ΜΕΜ· 10%S(+)'テオフィリン培地へ培地交換。

3.通常タイプは 4hr、高輝度タイプは 30min蛍光発光体をプレート〖こ接触させて蛍光を照射。コントロールは蛍光非照射系、ホ。シ'、ティフ'、コントロールは ImM VC (ァスコルビン酸）添カ卩系とした。

4.照射開始 3日後に細胞を回収し、 0.1%SDS生理食塩水で細胞を溶解し、 260nm (細胞量の指標）と 475nm (メラニン量の指標）の吸光度を測定し、細胞増殖率と、単位細胞あたりのメラニン合成率を算出した。

B16細胞増殖率について表 4及び図 7に示し、単位細胞あたりのメラニン合成率について表 5及び図 8に示した。

十异式

B16細胞増殖率（％) =サンフ。ル Abs(260nm)Zコントロール Abs(260nm) X 100 単位細胞あたりのメラニン合成率 (%)= [サンフ。ル Abs(475nm)Zサンフ。ル Abs(260nm)] Z [コントロール Abs(475nm)Zコントロール Abs(260nm)] X 100

[0039] [表 4]

[0040] [表 5] し ontr '、■·· 冃緑ォレンシ"

処理赤緑ォレンシ、' ol ImM 通常通'吊' 通常通常通常高輝度高輝度メラニン

合成

100 65. 28 92. 77 93. 88 94. 08 92. 62 92. 48 103. 86 率

( % )

S. D. 6. 77 14. 91 12. 53 7. 71 6. 10 5. 91 4. 72 8. 37 4. 66 有 ,&

pく 0. 001 pく 0. 05 4ffi p<0. 05 4M-

[0041] 表 4及び図 7に示された結果から、通常タイプの赤蛍光、高輝度タイプの緑蛍光、高輝度タイフ。のォレンシ'、蛍光を照射することによりメラノーマ細胞の増殖を有意に抑制した。

赤蛍光、高輝度タイプの緑蛍光、ォレンシ'、蛍光を皮膚に照射することにより、メラノ一マ細胞の増殖が抑制され、メラノサイトの増殖が抑制されることが明ら力となった。以上力本発明の実施により美白効果が期待できる。

[0042] 表 5及び図 8に示された結果から、青蛍光、黄蛍光照射系で単位細胞あたりの有意なメラニン合成抑制が認められた。

[0043] 紫外線と異なり、蛍光を照射することによりメラニン合成を促進することはなぐ青と黄色蛍光において有意なメラニン合成抑制効果が認められた。特に青色蛍光照射では 20%のメラニン合成抑制効果が認められた。

通常タイプの赤蛍光、高輝度タイプの緑蛍光、高輝度タイプのォレンシ'、蛍光では、メラノサイトの増殖の抑制が認められた。細胞数が減少することで^ラニン量は減少していると考えられる。

蛍光照射が線維芽細胞の増殖を抑制しな力つたことからも、活性ィ匕したメラノサイトの増殖を選択的に抑制し、美白が期待できる。

実施例 3

[0044] <メラニン合成試験 >

(試験方法）

三次元皮膚モデル (メラノダーム（MEL-300A) ) (MatTeK社製）に lW/m²の強度における lj/m²の UVB照射及び/又は高輝度タイプ青色蛍光（日本ォムニグロ一株式会社製) 1時間照射を紫外線照射後 0、 48、 96時間後に行い、 7日間培養した。

三次元皮膚モデルを 1N水酸ィ匕ナトリウムで煮沸溶解し、メラニン量の指標となる 350nmの吸光度を測定し、以下の式によりメラニン合成率を算出した。結果を図 9に示した。

UVB、高輝度タイプ青色蛍光!/ヽずれも照射しな!、組織の溶解液をコントロールとした。

式： [メラニン合成率] = [各処置時組織溶解液の 350nm吸光度] Z [コントロール組織溶解液の 350nm吸光度] X 100

[0045] ヒト三次元皮膚モデルにおいて、 UVB照射によりメラニン合成が促進される力高輝度タイプ青色蛍光を照射することにより、 UVB照射によるメラニン合成促進が抑制されることが確認された。従って、皮膚を日光などの紫外線に暴露しても、その後、皮膚に青色蛍光などの蛍光を照射することによって、メラニンの合成を抑制し、皮膚の黒色化及びシミ、ソバカスの生成を抑制し、美白効果を期待できる。またあわせて、皮膚の抗光老化が期待できる。

実施例 4

[0046] くヒトメラノサイト増殖試験〉

(実験方法）

ヒトメラノサイトを 20000 cells/cm²で HMGS添加ヒト表皮メラニン細胞用基礎培地 medium 154S (倉敷紡績株式会社製）を用いて 24wellプレートに播種した。

24時間インキュベート後、ォリーブ葉エキス（下記製造例）またはブランクとして 50% ブチレングリコール水溶液を添加した培地に置換し、高輝度タイプ青色蛍光（日本ォムニグロ一株式会社製)を 1時間照射後、 72時間培養した。

細胞を PBS (-)で洗浄後、 1 W/W% デシル硫酸ナトリウム含有 PBS (-)で溶解して得た細胞溶解液の 260 nmの吸光度を測定し、以下の式で細胞増殖率を算出した。

ブランクを添加し、高輝度タイプ青色蛍光非照射の細胞溶解液をコントロールとした。

結果を図 10にォリーブ葉エキスの添加濃度とメラノサイト増殖率の関係として示しォリーブ葉エキス

(ォリーブ葉エキス製造例）

乾燥ォリーブ葉 lkgを 90 W/W%エタノールに 1週間浸漬後、濃縮'凍結乾燥後、 50 w/wy 'チレンダリコール水溶液に 1 w/w%に溶解した。

式： [細胞増殖率] = [サンプル添加時吸光度 (260 nm)]Z [コントロール吸光度 (260 nm) ] X 100

[0047] ヒトメラノサイト増殖は、高輝度タイプ青色蛍光の 1時間照射による変化が認められなカゝつたが、ォリーブ葉エキスを添加した場合には高輝度タイプ青色蛍光照射によつて、ヒトメラノサイト増殖率が有意に (ォリーブ葉エキス 0. 5%添加時)低下した。

高輝度タイプ青色蛍光照射を併用することによりォリーブ葉エキスのヒトメラノサイト増殖率低減効果を相乗的に高めることができた。従って、青色蛍光を皮膚に照射することにより、ヒトメラノサイトの増殖が抑制される。したがって美白効果が期待できる。実施例 5

[0048] 〈線維芽細胞増殖及びコラーゲン合成促進試験〉

通常タイプの赤蛍光、高輝度タイプのオレンジ蛍光を用いて線維芽細胞に照射し、線維芽細胞の増殖及び線維芽細胞のコラーゲン合成促進を確認した。試験結果を繊維芽細胞にっ、ては表 6及び図 11に、コラーゲン合成にっ、ては表 7及び図 12 に示した。

(試験方法）

細胞：線維芽細胞（NHF)

化学発光体：（日本ォムニグロー株式会社製）

通常タイプレッド (赤蛍光）

高輝度タイフ。オレンジ (ォレンシ'、蛍光）、コラーゲン量測定キット： I型コラーケ'、ン C末端フ。口へ。フ。チド (PIP)量を Takara PIP kitで測定。

アツセィ方法：

(1) NHFを 2.0 X 10⁴cells/well、 DMEM' 10%S(+)で 24well plateに播種。 (2) 5 日間培養しコンフルェントにした後、無色無血清 DMEMへ交換した。

(3)蛍光発光体を 24well plateに接触させ、蛍光を照射（30min)。ポジティブコントロールは lOOmM PMG (リン酸- L-ァスコルビルマグネシウム）添カ卩系とした。

(4)照射開始 24時間後に培地上清を回収した。

I型コラーケ'、ン C末端プ口へ。フ。チド (PIP)量を Takara PIP kitで測定し、次いで細胞増殖を MTT Assayを用い、測定波長 540nm、対照波長 655nmの比色定量を行なった。細胞増殖率は無処置群のコントロールを 100%として以下の式で計昇した。

コラーゲン合成率は PIP量と MTT Assayの結果を用いて以下の式で計算した。

コラーゲン合成率（％) ={サンプル PIP量 Z ([サンプル添カ卩 OD(540nm)]— [サンプル添カ卩 OD(655nm)])}Z{コントロール PIP量 Z ([コントロール OD(540nm)] - [コント口ール OD(655nm)])}X 100

[0049] [表 6]

[0050] 表 6及び図 11に示した線維芽細胞の増殖試験結果から、通常タイプの赤蛍光、高輝度タイフ。のォレンシ'、蛍光照射 24時間後に細胞増殖率を測定するコラーゲン合成促進試験系において、通常タイプの赤蛍光、高輝度タイプのォレンシ'、蛍光照射ともに有意に線維芽細胞の増殖を促進した。 PMG併用時においても、通常タイプの赤蛍光、高輝度タイプのォレンシ'、蛍光照射で有意に線維芽細胞が増殖することを確認した。

[0051] [表 7]

[0052] 表 7及び図 12に示した計測データから、単位細胞あたりのコラーゲン合成率において、通常タイフ。の赤蛍光、高輝度タイフ。のォレンシ'、蛍光照射系で有意な PMGと同程度のコラーゲン合成促進が認められた。

[0053] 通常タイプの赤蛍光、高輝度タイプのオレンジ蛍光を線維芽細胞に照射することにより、線維芽細胞の増殖及びコラーゲン合成が促進される。また、 PMGと併用することにより、さらに線維芽細胞が増殖し、コラーゲン合成が促進される。従って、皮膚に通常タイフ。の赤蛍光、高輝度タイプのオレンジ蛍光等の化学発光蛍光を照射すると、皮膚中のコラーゲン量が増大し、ハリの向上、シヮの改善、弾力性、柔軟性の改善、老化防止効果が期待できる。さらに、 PMGを含有する皮膚外用剤と併用することにより相乗的な改善効果が期待できる。

実施例 6

[0054] <蛍光照射による線維芽細胞増殖 >

各種の蛍光を線維芽細胞に照射することにより線維芽細胞の増殖作用を確認した。次の試験を行い、測定結果を図 13、 14、 15に示した。まとめの評価結果を表 8に示した。（試験方法）

細胞：線維芽細胞（NHF)

蛍光発光体：（日本ォムニグロー株式会社製）通常タイプの蛍光

フレー (青蛍光)、ォレンシ'、 (オレンシ'、蛍光)、レッド (赤蛍光)、イエロー (黄蛍光)、ク'、リーン (緑蛍光)、高輝度タイプの蛍光オレンシ'、高輝度タイフ。 (オレンシ'、蛍光)、グリーン高輝度タイプ (緑蛍光）アツセィ方法： 1. NHFを 2.5 X 10⁴cells/ml、 DMEM' 10%S(+)で 96well plateに播種。

2.翌日に無色 DMEM調製 5%、 1%FBS含有培地へ培地交換。

3.化学発光体をプレートに接触させて蛍光を照射した。

蛍光を照射（0.5、 1、 2、 4hr、高輝度タイプは 0.5hrのみ)。

5%CO、 37°Cで 5日間培養。

2

4. MTT Assayを用い、測定波長 540nm、対照波長 655nmの比色定量を行なった。細胞増殖率は無処置群のコントロールを 100%として以下の式で計算した。細胞増殖率 (%)=([サンプル添カ卩 OD(540nm)]— [サンプル添カ卩 OD(655nm)])Z ([コントロール OD(540nm)]— [コントロール OD(655nm)]) X 100。

[0055] [表 8]

有意差 (0は負の有意差）

[0056] 通常タイプの蛍光を照射した計測結果を示した図 13、図 14及び表 8のデータから、 5%FBS培地では緑蛍光照射 lhr、 4hr、黄蛍光照射 2hrで有意な細胞増殖促進効果が認められた。

1%FBS培地では、赤蛍光照射 2hr、緑蛍光照射 0.5hr、 lhr、 4hr、黄蛍光照射 2hrで有意な細胞増殖促進効果が認められた。

黄蛍光照射系では 2hrまでは照射時間に依存して増加する傾向が観察された。

[0057] 高輝度タイプ（0.5hr照射系）の蛍光を照射した計測結果を示した図 15及び表 8のデータから、高輝度タイフ。では 1%FBS'DMEM培地においてォレンシ'、蛍光と緑蛍光照射系で有意な細胞増殖促進効果が認められた。特に緑蛍光においては約 1.5倍の増殖が認められた。

5%FBS添加培地にぉ、ては緑蛍光照射のみにぉ、て有意な細胞増殖促進効果が認められた。

[0058] 本試験系にお、て、 FBS濃度が低、ほど細胞増殖促進効果が現れ易!、傾向が認められた。

通常タイプの赤蛍光、緑蛍光、黄蛍光において細胞賦活効果が認められ、 FBS濃度が高いにもかかわらず、緑蛍光において細胞賦活活性が認められた。

また、高輝度タイプでは、ォレンシ"蛍光、緑蛍光で細胞賦活効果が認められ、同様に FBS濃度の高い系で緑蛍光に活性が認められた。以上より、最も活性が確実である蛍光色は緑色である可能性が示唆された。

実施例 7

[0059] くフォトリアーゼ活性増進試験〉

細胞では UVBの照射により DNAが損傷し、ピリミジンダイマーが生成される。これを繰り返し蓄積することで、光老化が進行すると言われている。光合成能力を持つ原核生物にはこの DNA塩基の二量ィ匕を修復する「光回復酵素（フォトリアーゼ）」が存在しており、このフォトリアーゼは可視光により活性ィ匕されることが知られている（フレダランスジャーナル 2002年 6月号 49— 53ページ)。本酵素は可視光で活性があがると報告されて、るが、蛍光発光体で活性があがることは報告されて、な、。

高輝度青色蛍光照射によるフォトリアーゼ活性に対する作用を検討し、蛍光発光体と化粧品有効成分の併用による効果を検討した。 [0060] (実験方法）

ヒトケラチノサイト 7.0 X 10⁵ cellsを φ 60 mm dish,へ播種した。ー晚インキュベートした後 Hanks (-)に置換し、 UVBを 0. 5 J/m² (1 W/m²)照射した。さらに Humedia- KG添加 EpiLife (倉敷紡績株式会社製)へ置換し、サンプル (ブランクは 50%ブチレンダリコール、フォトリアーゼは 0. 04Units、 0. 4Units (ピリミジンダイマー修復活性）添カロ後、高輝度タイプ青色蛍光 (ォムニグロ一株式会社製)を 1時間照射した。フォトリアーゼ無添加、高輝度タイプ青色蛍光非照射をコントロールとした。

UVB照射 6時間後に DNAzol reagent (インビトロジェン株式会社製）を用いて定法に従って細胞から DNAを回収した。

ピリミジンダイマー量を測定しその結果を図 16に示した。

[0061] (ピリミジンダイマー量を測定法）

本 DNAを用い、以下に示す方法でピリミジンダイマー量を測定した。

1%硫酸プロタミン液を 96 wellプレートに播種し、 37°Cで 2時間インキュベートした。滅菌水でプレートを洗浄し、乾燥後、抽出 DNAを 2 gずつ各 wellに播種し、 37°Cで 20hrインキュベートした。 0.05%Tween20含有 PBS(PBS-T)で洗浄し、 2%スキムミルク含有 PBSを入れ、 37°C1時間インキュベートした。 PBS-Tで洗浄し、 2%スキムミルク含有 PBSで調製したチミンダイマーモノクローナル抗体を入れ、 37°Cで 1時間インキュベートした。 PBS-Tで洗浄し、 HRP結合ャギ抗マウス IgG抗体を播種し、 37°Cで 1時間インキュペートした。 PBS(PBS- T)で洗浄後、さらに PBS (-)で洗浄した。 3,3，, 5,5， tetramethylbenzidine溶液（1- StepTMTurbo TMB- ELISA(pierce社製)）を添カ卩し、室温でインキュベート後、 2N硫酸で反応を止めた。 450nmの吸光度を測定し、 DNA2 μ gあたりのピリミジンダイマー含有率を下の式で算出した。

フォトリアーゼはシァノバクテリア属の anacystis nidulans由来を使用し、フォトリア一ゼを 41UnitsZmL含有する AGI Dermatics社の PHOTOSOMES(R)を用いて添カロした。

式： [ピリミジンダイマー含有率 ] = [サンプル添加時吸光度 (450 nm)]Z [コント口ール吸光度（450nm) ] X 100

[0062] 図 16に測定されたピリミジンダイマーの含有率を示した。フォトリアーゼ無添加系において、高輝度タイプ青色蛍光を照射することによりピリミジンダイマーの含有率がコントロールの約 1/2に低減した。

フォトリアーゼを 0. 04Unit、 0. 4Unit添カ卩するとピリミジンダイマーの含有率がコントロールと比べてともに約 1Z2に低減する力フォトリア一ゼの添力卩量を 0. 04Uni tから 10倍量の 0. 4Unitにしても、ピリミジンダイマー含有率の低減効果に差が無かつた。しかし、高輝度タイプ青色蛍光とフォトリアーゼを併用するとピリミジンダイマーの含有率が低減し、特に、 0. 4Unitと高輝度タイプ青色蛍光を併用することにより、ピリミジンダイマー含有率をコントロールの約 1/4に低減することができた。

コントロールと比べて、有意にピリミジンダイマー含有率を低減できたのは、高輝度タイプ青色蛍光照射、フォトリアーゼ 0. 04Unif高輝度タイプ青色蛍光併用系、及びフォトリアーゼ 0. 4Unit'高輝度タイプ青色蛍光併用系であり、フォトリア一ゼと高輝度タイプ青色蛍光を併用することにより、相乗的に光老化を抑制できる。

特に、化学発光の照射あるいはフォトリアーゼを作用することにより、光老化を抑制することが可能である。高輝度タイプ青色蛍光の照射あるいはフォトリアーゼを併用して高輝度タイプ青色蛍光を照射することにより紫外線による皮膚細胞の DNA損傷を抑制し、光老化を抑制することができる。

実施例 8

[0063] <化学発光近赤外線照射による血流増加試験 >

化学発光によって得られる近赤外線を皮膚に照射して、血流量の変化を観察した化学発光によって得られる近赤外線の計測例を図 17、 18に示す。

試験条件を表 9に示し、画像例を図 19に示し、各被験者の血流量変化状態を図 2 0に示す。

[0064] [表 9] 近赤外発光体ヒト照射試験測定条件全天候室を使用

湿度 35%

室温 24°C 土 3

外光は出来る限りシャツとァゥ卜した

(測定時には照明は使用しない）

IR 化学発光体 R本ォムニグ口一社特注品

CYALUME 6インチスティックタイプ

ブランク未発光の

日本ォムニグロ一社 CYALUME 6インチステイクタイプ照射方法ステイクを発光後 5回上下に振り

肌に接触させて照射をした

被験者 5名

人数測定 10分前より全天候室内で安静にしてもらう

測定機 Perimed社 PIM Π レーザードップラー血流計

測定位置左腕測定用ヘッドからの距離を 5 cm

計測ェリア 3cm X 3 cm

IR化学発光体近赤外線

測定回数 3回測定

1 ：測定

2 ：近赤外化学発光体 15分照射後

3 ：照射後 10分後

画像処理測定者により初期値を調整している

初期値は 2回 3回目測定時には固定として画像変化をみている画像判定血流量が大きいほど、明度が高く画像に表示される。画像解析画像の明度の平均値を求めた。

近赤外光照射前の明度を 1とし、近赤外光照射後の明度を算出し、比較した。

被験者の一人の画像を例示した測定前、 15分照射直後、 15分照射後 10分経過時を示した図 19 (a) (b) ( から、画像の明るい部分が増加していることが認められ、照射終了後 10分経過しても血流量が増加して、る様子が把握できる。

画像を数値ィ匕して各被験者の血流量の変化を表したグラフ図 20から、照射前より照射後で血流量が 1. 5倍から 3倍増カロしていることが確認された。照射終了 10分後も全員低下することなぐ増カロしていることが把握され、短時間の照射で長時間の作用効果が認められた。

実施例 9

[0066] <使用体感試験 >

短辺 50mm、長辺 70mmの楕円形で中央部厚 8mmの光透過性フィルム製の緑蛍光パックを用いた。対象として非蛍光の同形状のパックを使用した。

被験者 5人について、右の頰に発光しないもの（ブランク）を使用、左の頰に緑発光する蛍光パックを使用した。 1日 1回夜 30分間、 5日間左右の頰にあてたのちァンケートにより、肌の張りについて回答を得た。結果を表 10に示した。

結果は、 1日目力全員が肌の張りの改善が感じられ、 3日目には 3人が 5日目には 4人が張りの改善を感じている。感じない人は 0人であり、化学発光蛍光の照射によつて肌の張り改善効果があることが確認できた。

緑蛍光照射により違和感を感じるものはいな力つた。

[0067] [表 10] 感じる少し感じる感じない

1 曰巨 5

3 曰巨 3 2

5 曰目 4 1

Claims

請求の範囲

[1] 化学発光によって得られた光を皮膚に照射することによる美容方法又は化粧方法

[2] 光が 300— 1200nmの波長域力も選択されることを特徴とする請求項 1記載の美容方法又は化粧方法。

[3] 皮膚が、顔及び身体であることを特徴とする請求項 1又は 2記載の美容方法又は化粧方法。

[4] 化学発光が 2液の混合によって発光することを特徴とする請求項 1一 3のいずれかに記載の美容方法又は化粧方法。

[5] 皮膚外用剤を塗布後あるいはパック剤を施しつつ光を該塗布部に照射することを特徴とする請求項 1一 4のいずれかに記載の美容方法又は化粧方法。

[6] 皮膚外用剤あるいはパック剤が化粧組成物ある、は美容組成物であることを特徴とする請求項 5に記載の美容方法又は化粧方法。

[7] 化学発光剤を含有することを特徴とする皮膚照射美容用又は化粧用発光体。

[8] 化学発光剤が混合によって発光する 2液性の化学発光剤を分離状態で、一つの容器に収納し、使用時に混合して皮膚に照射することを特徴とする請求項 7記載の皮膚照射美容用又は化粧用発光体。

[9] 皮膚に照射する光の波長域を 300— 1200nmの波長域力も選択されることを特徴とする請求項 7又は 8記載の皮膚照射美容用又は化粧用発光体。

[10] 皮膚外用剤又は服用剤と請求項 7— 9のいずれかに記載の皮膚照射美容用又は化粧用発光体とを組み合わせたことを特徴とする美容用具又は化粧用具。

[11] 化学発光による光を皮膚へ照射することによる美白化粧方法又は美白美容方法。

[12] 化学発光による光を皮膚へ照射してメラニン産生細胞増殖抑制及び Z又はメラ二ン合成抑制することを特徴とする請求項 11記載の美白化粧方法又は美白美容方法

[13] 化学発光の発光色が、青蛍光、黄蛍光、緑蛍光、オレンジ蛍光、赤蛍光から選択される 1種又は 2種以上の組み合わせであることを特徴とする請求項 11又は 12記載の美白化粧方法又は美白美容方法。

[14] 化学発光による光を皮膚へ照射する発光剤を含有する美白用発光体。

[15] 発光剤が、化学発光による光を皮膚へ照射してメラニン産生細胞の増殖を抑制及び Z又はメラニンの合成を抑制する発光剤であることを特徴とする請求項 14記載の発光体。

[16] 発光剤が、青蛍光、黄蛍光、緑蛍光、オレンジ蛍光、赤蛍光から選択される 1種又は 2種以上の蛍光を発光する発光剤であることを特徴とする請求項 14又は 15記載の発光体。

[17] ォリーブ葉エキスを皮膚面へ塗布ある、はパック剤として施しつつある!/、は服用後に、化学発光として青色蛍光を皮膚へ照射することを特徴とする請求項 11一 13のいずれかに記載の美白化粧方法又は美白美容方法。

[18] 青色化学発光蛍光剤を含有する美白用発光体と、ォリーブ葉エキスを含有する皮膚外用剤あるいはパック剤及び Z又は服用剤との組み合せ力なることを特徴とする美白化粧用具又は美白美容用具。

[19] オレンジ蛍光、赤蛍光、緑蛍光、黄蛍光の 4種の内 1種又は複数の化学発光による光を皮膚へ照射して線維芽細胞を増殖及び Z又はコラーゲン合成を促進することを特徴とする化粧方法又は美容方法。

[20] ァスコルビン酸又はその塩及び Z又はァスコルビン酸誘導体を皮膚面へ塗布、あるいはパック剤として施しつつ、あるいは服用後にオレンジ蛍光、赤蛍光、緑蛍光、黄蛍光の 4種の内 1種又は複数の化学発光による光を皮膚へ照射することを特徴とする請求項 19記載の線維芽細胞を増殖及び Z又はコラーゲン合成を促進することを特徴とする化粧方法又は美容方法。

[21] 皮膚へ照射して線維芽細胞を増殖及び Z又はコラーゲン合成を促進する化学発光としてオレンジ蛍光、赤蛍光、緑蛍光、黄蛍光の 4種の内 1種又は複数の蛍光を発光する発光剤を含有することを特徴とする発光体。

[22] 請求項 21記載の発光体と、ァスコルビン酸又はその塩及び Z又はァスコルビン酸誘導体を含有する皮膚外用剤あるいはパック剤及び Z又は服用剤との組み合せからなることを特徴とする化粧用具又は美容用具。

[23] 青蛍光を皮膚へ照射することによる光老化抑制方法。

[24] 化学発光による青蛍光を皮膚へ照射することによりピリジンダイマーの生成を抑制することを特徴とする請求項 23記載の光老化抑制方法。

[25] 光回復酵素（フォトリアーゼ)を皮膚面へ塗布、あるいはパック剤として施しつつ及び Z又は服用後に青蛍光を皮膚へ照射することを特徴とする請求項 23又は 24記載の光老化抑制方法。

[26] 青蛍光を皮膚へ照射する化学発光剤を含有することを特徴とする光老化抑制用発光体。

[27] 青蛍光を皮膚へ照射する化学発光剤と光回復酵素 (フォトリアーゼ)を含有する皮膚外用剤あるいはパック剤及び Z又は服用剤との組み合せ力なることを特徴する光老化抑制用化粧用具又は美容用具。

[28] 化学発光蛍光及び Z又は化学発光近赤外線を皮膚へ照射することにより血流量を増加させる方法。

[29] 化学発光蛍光がオレンジ蛍光であることを特徴とする請求項 28記載の血流量増加方法。

[30] 蛍光及び Z又は近赤外線を発光する化学発光剤を含有する血流量増加用発光体。

[31] 蛍光がオレンジ蛍光であることを特徴とする請求項 30記載の血流量増加用発光体

[32] 請求項 30又は 31に記載された血流量増加用発光体と皮膚外用剤とを組み合わせることを特徴とする化粧用具又は美容用具。

[33] 皮膚外用剤がスキンケア化粧料、フェイスパック剤、湿布剤、貼付剤、経皮吸収剤のヽずれ力であることを特徴とする請求項 10、 18、 22、 27、 32の!/、ずれ力に記載の美容用具又は化粧用具。

[34] 請求項 7、 8、 9、 10、 14、 15、 16、 18、 21、 22, 26, 27, 30、 31、 32に記載された発光体、美容用具又は化粧用具のいずれかは、フェイス被覆用、身体被覆用であることを特徴とする皮膚被覆材。