WO2002007708A1

WO2002007708A1 - Injection de lentinane sous forme de poudre lyophilisee et son procede de preparation

Info

Publication number: WO2002007708A1
Application number: PCT/CN2001/000311
Authority: WO
Inventors: Peiyuan Cheng; Jing Weng; Yigong Fang
Original assignee: NANJING NEW@HIGH TECHNOLOGY INDUSTRY DEVELOPING ZONE
Current assignee: NANJING NEW@HIGH TECHNOLOGY INDUSTRY DEVELOPING ZONE
Priority date: 2000-07-19
Filing date: 2001-02-28
Publication date: 2002-01-31
Anticipated expiration: 2003-01-19
Also published as: CN1288729A; RU2003101392A; AU2001246339A1; JP2004504341A; RU2303978C2; CN1126547C; US20040242534A1; US7091336B2

Description

香菇多糖冻干粉针剂及其制备方法本发明是关于一种生物反应调节剂及其制备方法，更特别的是关于一种无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂及其制备方法。

香菇中含蛋白质、杂多糖和香菇多糖等多种成分。香菇多糖

( Lentinan ) 是日本学者千原吴郎从香菇子实体中提取、分离、纯化的一种多糖，其一级结构是以 β - ( 1-3 ) 葡萄糖为主链， β - ( 1-6 ) 葡萄糖为侧链的葡聚糖。据文献报道，香菇多糖是一种生物反应调节剂，对多种肿瘤有强的抑制作用，对化学诱癌剂、病毒诱癌剂有预防效果，特别是对于手术后微转移有效，同时具有给药剂量小、副作用小和使用安全等优点。 1985年日本厚生省批准香菇多糖作为抗肿瘤新药上市。我国 1988年开始进口 ·日本味之素的香菇多糖冻干剂，并用于临床，但日本进口的香菇多糖冻干剂的配方为香菇多糖、右旋糖酐和甘露醇。由于右旋糖酐为发酵产物，作为药用临床上已发现其有过敏性休克导致死亡的案例多起。

在中国专利申请 CN— 96116294. 5中公开了一种香菇多糖注射液及其制备方法，其将香菇多糖溶解在氢氧化钠溶液中，然后加入柠檬酸调节 ΡΗ值，过滤、消毒得香菇多糖注射液，尽管其可能是有效的，但与本发明的剂型及主要产品的分子量及分子量分布等均不同。

本发明的目的是提供一种不含会产生不良反应的成份的香菇多糖冻千粉针剂。

本发明的目的之二是提供一种制备不含会产生不良反应的成份的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法。

本发明的目的之三是提供一种不含右旋糖酐的香菇多糖冻干粉针剂。

本发明的目的之四是提供一种不含右旋糖酐的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法。

本发明的这些以及其它目的将通过下列详细说明来进一步描述和体 ϊΐο

在本发明中，无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂基本上由下述重量配比原料组成：香菇多糖 0. 50〜1. 40份，冻干赋形剂 50〜140份。进一步的，本发明的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂基本上由下述重量配比原料组成：香菇多糖 0. 70〜； L. 40份，冻干赋形剂 70〜140份。

在本发明中，无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂也可以基本上由下述重量配比原料组成：番菇多糖 0. 80〜1. 20份，冻干赋形剂 80〜120份。

本发明的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂如有必要也可以加入其它医学上可以接受或混用的添加剂和治疗药物，当然，这些添加剂和治疗药物不能破坏香菇多糖本身的疗效，但绝对不含右旋糖酐。

如有必要，在本发明中还可加入或与其它抗肿瘤药物混用，适宜的抗肿瘤药物和辅剂可以是熊胆粉、红景天、人参、西洋参、冬虫夏草、灵芝和雪莲花等。

在本发明的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂中，所述的冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖中的一种，较好的冻干赋形剂是甘露醇，如有必 -要和可能，也可以使用甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖中的任意二者或三者的混合物。

本发明的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，取香菇多糖 0. 50〜1. 40重量份，用 20〜70重量份的 0. 5〜1. 0摩尔浓度的碱液溶解完全，然后加酸液中和至PH为6. 0〜8. 0，再与冻干赋形剂 50〜140重量份混合均匀，过滤除菌，分装入瓶，冻干后，封口等步骤组成。

进一步的，本发明的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，由取香菇多糖 0. 70〜1. 40重量份，用 20〜60重量份的 0. 5〜1. 0摩尔浓度的碱液溶解完全，然后加酸液中和至PH为6. 0〜8. 0，再与冻干赋形剂 70〜140重量份混合均匀，过滤除菌，分装入瓶，冻干后，封口等步骤组成。

本发明的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，也可以由取香菇多糖 0. 80〜： L. 20重量份，用 20〜80重量份的 0. 5〜1. 0摩尔浓度的碱液溶解，然后加酸液中和至1¾为6. 0〜8. 0，再与冻干赋形剂 40〜120重量份混合均匀，过滤除菌，分装入瓶，冻干后，封口等步骤组成。

在本发明的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法中，所用的冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖中的一种，较好的冻干赋形剂是甘露醇；所用的碱为氢氧化钠，所用的酸为盐酸。

在本发明的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法中，香菇多糖与冻干赋形剂混匀后，过滤除菌，测含量（含量测定釆用经典的蒽酮硫酸法），灌装于安瓿或西林瓶中，冻干，封口或压盖，检漏或轧盖，贴标签，上述封口或压盖以前的各步操作均在无菌条件下进行。

在本发明中，所使用的香菇多糖包括单香菇多糖和多组份香菇多糖，其为现有技术公知的，并可以从市场购得。进一步的，香菇多糖的提取、分离、纯化方法可参考 Nature 1965, 222， 687- 8和 CN— 94115876以及其它专利或非专利文献，上述文献在此并入本发明。

本发明的香菇多糖冻干粉针剂手术前使用或化疗前使用， 1〜 2毫克 / 次，每周两次；或 2毫克 /次，每周 1〜2次。用时溶于 250毫克生理盐水或葡萄糖液中，静脉滴注。治疗癌性胸腹水患者，腔内注射 4〜8毫克 /次。具体病例应遵医嘱。

本发明的香菇多糖冻干剂经临床验证疗效确切，制剂稳定性极好，并且由于不含可能引起过敏副作用的右旋糖酐，所以临床使用更安全。而且，由于注射—用香菇多糖冻干粉针剂不含右旋糖酐，所用含量测定方法无需先进行特殊装置的柱层析分离去右旋糖酐，可以直接采用蒽酮硫酸法，使含量检测更准确、简便。

一、本发明产品的分子量、分子式、化学结构式

1、分子量测定

经高效凝胶渗透色谱，采用普适校正曲线方法测定分子量大多在 40〜80万之间。

2、碳核磁共振谱（见表 1)

表 1

C 香菇多糖样品 Lentinan ^w 解析

1 104.6 104.6 β— D— (1-3) 葡萄糖

2 74.5 74.3 β— D— (1-3) 葡萄糖

3 87.7 87.7 β— D— (1-3) 葡萄糖

4 70.2 70.2 β— D— (1-3) 葡萄糖

5 77.8 ' 77.9 β -D- (1-3) 葡萄糖

6 62.5 62.5 β一 D— (1-3) 葡萄糖

1 ' 104.9 104.6 β -D- (1-6) 葡萄糖

6. 71.5 71.5 β一 D— (1-6) 葡萄糖 3、红外光谱图（见图 1 )

4、分子式

经微量元素分析结果表明，分子式为（C₆H100₅) n

5、化学结构式：

经高碘酸氧化及 Smith降解等化学反应结合光谱分析法，香菇多糖的一级结构如下：

二、制剂稳定性考察结果与结论

本发明产品经高温（40° (：、 60°C、 80°C ) 、高湿（RH92. 5 %、 RH75 %、 25 °C ) 及光照 OOOLx ) 等影响因素试验后，外观性状、溶解后澄明度、 PH值、含量及无菌检査均符合要求。

本发明产品加速试验（40 °C RH75 % ) 3个月的考察结果，外观性状、溶解后澄明度、 PH值、含量、杂质及无菌检查均符合要求。

本发明产品在室温分别留样考察 1、 3、 5、 12、 18和 24个月，经定期取样检查各项项目均符合要求，故本品有效期至少为两年。

在本发明中，所有的原料及辅料等均可以从市场购得，使用的赋形剂除特别指出的外均为注射剂用固体。

以下通过具体实施例来进一步说明本发明，但实施例仅用于说明，并不能限制本发明范围。

在本发明中，若非特指，所有的份、量均为以总重量为基础的重量单位。

例 1

本实施例通过 II期和 III期临床试验来证明本发明的香菇多糖冻干剂有较好的疗效。

一、 II期临床试验：

临床试验由国家指定医疗单位采取双盲、随机方法进行二期临床试验，对各类癌症患者 240例采用联合化疗加安慰剂（冻干粉针剂）作为对照组以及联合化疗加香菇多糖作为试验组的试验结果表明，试验组 108 例， CR+PR 67例，总有效率 62%，对照组 104例， CR+PR 44例，总有效率 43.2%, 两者相比， P值 <0.01，其中胃癌试验组总有效率 56.6%，对照组 19.4%， P值〈0.01，非小细胞肺癌试验组总有效率 33.3%，对照组 11.5%, P值〈0.05。试验组治疗前后淋巴细胞转化率， NK细胞活性和 T4/T8比值均显著高于对照治疗前后的变化， P<0.01。初步试用香菇多糖治疗癌性胸腹水的有效率（13/17) 76.5%的结果与国外文献报道近似。

二、 III期临床试验

在中华医学会组织领导下，由中山医科大学肿瘤医院作为负责单位，全国 40余家医院参加了三期临床，进一步考察了香菇多糖临床疗效及不良反应，完成可评价指标病列 1106例，包括全身用药 1047例和胸腹水 59病例。

1、并用化疗试验组（565例）总有效率 41.1%，对照组（301例） 25.2%, 两组有显著性差异（P<0.01) ，其中胃癌、 NSCLC (非小细胞肺癌）的总有效率试验明显高于对照组（P<0.01) 。 NSCLC的化疗增效作用在此之前未见临床报道日本味之素公司同类产品有此作用。

2、胸腹水：共 59例，总有效率 52.5%。

3、本试验同时观察了患者细胞免疫功能的变化，结果显示试验三项指标（NK细胞活性 T3 T4/8) 均明显高于对照组，在各主要病种均显示了香菇多糖提高细胞免疫功能的价值。

4、活动状态 (PS)

全组 1647例，并用化疗试验组（565例）治疗后 28.5%病人 PS有改善 (治疗后比治疗前有显著性差异 P<0.01) ，而对照组仅 6.6%的病人有改善（治疗后比治疗前无差异 P>0.05) ，试验组与对照组比较有显著差异 (P〈0.01) 。

5、减轻化、放疗毒副反应

并用化疗、术后并用化疗：血 WBC.P_t下降发生率，试验组明显低于对照组（P<0.01 ) ，胃肠毒性、肝功能损害试验组亦低于对照组 (P<0.01) ，恶心呕吐的发生率试验组明显低于对照组（P<0.01) 。在此之前未见临床报道日本味之素公司同类产品有此作用。

6、不良反应

在所有全身应用香菇多糖的 1121例病人中有 2例出现颜面潮红， 1例胸闷，共计 3例，占 0.27%，减慢滴注速度或停药后短期内恢复。日本香菇多糖 Lentinan II、 III期临床试验计 469例，不良反应发生 32例，占 6.8

%。

实施例 2:

取注射用香菇多糖原料 2.00克（纯度 98%) ，加 60毫升 1M的氢氧化钠溶液，让其自然溶胀，然后搅拌使其完全溶解，加少量注射用水稀释，搅匀，加 1M盐酸中和至 PH为 6.8〜7.0，加市售 20%甘露醇注射液 1000毫升，搅拌均匀，除菌过滤，测含量（含量测定采用经典的蒽酮硫酸法），加注射用水至药液浓度为每 2毫升溶液含香菇多糖 1毫克，分装为 2毫升 /瓶，进行冷冻干燥，出箱、封口、检漏、目检和贴标签即为成

P

ΡΠ

实施例 3:

取注射用香菇多糖 3克，在搅拌下分次逐渐溶于 100毫升 0.8M氢氧化钠溶液中，并使其完全溶解，然后慢慢加入 0.8M盐酸中和，至 ra为 7.0〜 7.2。取市售注射用甘露醇 300克，加 1600毫升注射用水加热溶解，力 Π0.1 % W/V注射用活性炭于 85C加热 15分钟，冷却至 60°C时用 3号砂芯滤棒过滤，滤液中加入香菇多糖溶液，然后用滤膜进行除菌过滤，测含量，加注射用水至药液浓度为每 2毫升溶液含香菇多糖 1.5毫克，灌封于安瓿中，每瓶 2毫升至冻干箱中进行冻干，出箱后封口，检漏，贴标签即得。

实施例 4:

取注射用香菇多糖原料（市售） 4.00克（纯度 98%) ，力 Π120毫升 1M 的氢氧化钠溶液，让其自然溶胀，搅拌溶解，加少量注射用水稀释，搅匀，加盐酸中和至?^{为6.8〜7.0，加注射用甘露醇 400克，加注射用水至总体积为 3200毫升，搅拌均匀，除菌过滤，测含量，加注射用水至药液浓度为每 2毫升溶液含香菇多糖 2毫克，分装为 2毫升 /瓶，进行冷冻干燥，出箱，封口，检漏，目检，贴标签。

实施例 5

取注射用香菇多糖原料 2.00克（纯度 98%) ，加 50毫升 1M的氢氧化钠溶液，让其自然溶胀，搅拌溶解，加适量注射用水稀释，搅匀，加 1M 盐酸中和至 .8〜7.0，加注射用葡萄糖 200克，加注射用水 1600毫升，搅拌均匀，除菌过滤，测含量，加注射用水至药液浓度为每 2毫升溶液含香菇多糖 2毫克，分装， '2毫升 /瓶，进行冷冻干燥，出箱，封口，检漏，目检，贴标签。

实施例 6:

取注射用香菇多糖原料 2.00克（纯度 98%) ，加 60毫升 1M的氢氧化钠溶液，让其自然溶胀，搅拌完全溶解，加适量注射用水稀释，搅匀，加11^盐酸中和至？[½.8〜7.0，加注射用乳糖 200克，加注射用水 3200毫升，搅拌均匀，除菌过滤，测含量，加注射用水至药液浓度为每 2毫升溶液含香菇多糖 1毫克，分装， 2毫升 /瓶，进行冷冻干燥，出箱，封口，检漏，目检，贴标签。

实施例 7:

取注射用香菇多糖原料 6.00克（纯度 98%) ，力 IU80毫升 1M的氢氧化钠溶液，让其自然溶胀，搅拌溶解，加少量注射用水稀释，搅匀，加 1M盐酸中和，至?116.8〜7.0，加注射用甘露醇 400克，加注射用水 3200毫升，搅拌均匀，除菌过滤，测含量，加注射用水至药液浓度为每 2毫升溶液含香菇多糖 3毫克，分装， 2毫升 /瓶，进行冷冻干燥，出箱，封口，检漏，目检，贴标签。

实施例 8:

取注射用香菇多糖原料 6.00克（纯度 98%) ，力口 180毫升 1M的氢氧化钠溶液，让其自然溶胀，搅拌溶解，加少量注射用水稀释，搅匀，加 1M盐酸中和，至？^1为6.8〜7.0，加注射用葡萄糖 400克，加注射用水 3200 毫升，搅拌均匀，除菌过滤，测含量，加注射用水至药液浓度为每 2毫升溶液含香菇多糖 3毫克，分装， 2毫升 /瓶，进行冷冻干燥，出箱，封口，检漏，目检，贴标签。

实施例 9:

取注射用香菇多糖原料 8.00克（纯度 98%) ，力口240毫升 1M的氢氧化钠溶液，让其自然溶胀，搅拌溶解，加少量注射用水稀释，搅匀，加 1M盐酸中和， ¾PH 6.8〜7.0，加注射用蔗糖 400克，加注射用水 3200毫升，搅拌均匀，除菌过滤，测含量，加注射用水至药液浓度为每 2毫升溶液含香菇多糖 4毫克，分装， 2毫升 /瓶，进行冷冻干燥，出箱，封口，检漏，目检，贴标签。

实施例 10:

取注射用香菇多糖原料 8.00克（纯度 98%) ，力 Π240毫升 1M的氢氧化钠溶液，让其自然溶胀，搅拌溶解，加少量注射用水稀释，搅匀，加 1M盐酸中和，至? .8〜7.0，加注射用葡萄糖 400克，加注射用水 3100毫升，搅拌均匀，除菌过滤，测含量，加注射用水至药液浓度为每 2毫升溶液含香菇多糖 4毫克，分装， 2毫升 /瓶，进行冷冻干燥，出箱，封口，检漏，目检，贴标签。

实施例 11:

取注射用香菇多糖原料 8.0克（纯度 98%) ，力 Π240毫升 1M的氢氧化钠溶液，让其自然溶胀，搅拌溶解，加少量注射用水稀释，·搅匀，加 1M 盐酸中和，至 PH6.8〜7.0, 加注射用乳糖 400克，加注射用水 3100毫升，搅拌均匀，除菌过滤，测含量，加注射用水至药液浓度为每 2毫升溶液含香菇多糖 4毫克，分装， 2毫升 /瓶，进行冷冻干燥，出箱，封口，检漏，目检，贴标签。

实施例 12

除采用注射用香菇多糖 8.0克（纯度 98%) 、力口 240毫升 0.8M氢氧化钠溶液、加盐酸调？^1为6.0〜6.2，加注射用甘露醇 400克，加注射用水 3100毫升之外，其余同实施例 11。

实施例 13

除采用注射用香菇多糖 4.0克（纯度 98%) 、力 Π200毫升 0.8M氢氧化钠溶液、加盐酸调？1^为6.3〜6.4，加注射用乳糖 200克，加注射用水 3100 毫升之外，其余同实施例 5。

实施例 14

除采用注射用香菇多糖 4.0克（纯度 98%) 、加 50毫升 0.8M氢氧化钠溶液、加盐酸调^为6.5〜6.6，加注射用蔗糖 200克，加注射用水 3100毫升之外，其余同实施例 4。

实施例 15

除采用注射用香菇多糖 1.0克（纯度 98%) 、加 50毫升 0.8M氢氧化钠溶液、加盐酸调？^1为6.0〜6.2，加注射用甘露醇 200克，加注射用水 3100 毫升，药液浓度 0.5毫克 /每 2毫升之外，其余同实施例 4。

实施例 16 除采用注射用香菇多糖 1.0克（纯度 98%) 、加 50毫升 1M氢氧化钠溶液、加盐酸调？1^为7.0〜7.2，加注射用葡萄糖 200克，加注射用水 3200毫升之外，其余同实施例 15。

实施例 17

除采用香菇多糖 1.0克（纯度 98%) 、加 50毫升 0.8M氢氧化钠溶液、加盐酸调？^1为7.4〜7.6，加注射用蔗糖 200克，加注射用水 3200毫升之外，其余同实施例 15。

实施例 18

除采用香菇多糖 1.0克（纯度 98%) 、加 50毫升 0.8M氢氧化钠溶液、加柠檬酸调？1^为7.6〜7.8，加注射用乳糖 200克，加注射用水 3200毫升之外，其余同实施例 15。

实施例 19

除采用香菇多糖 2.0克（纯度 98%) 、加 60毫升 0.8M氢氧化钠溶液、加盐酸调PH为7.8〜8.0，加注射用甘露醇 200克，加注射用水 3100毫升之外，其余同实施例 6。

实施例 20

除采用香菇多糖 2.0克（纯度 98%) 、加 50毫升 1.0M氢氧化钠溶液、加盐酸调？^1为7.8〜8.0，加注射用葡萄糖 100克，加注射用甘露醇 100克，加注射用水 3100毫升之外，其余同实施例 6。

实施例 21

除采用香菇多糖 2.0克（纯度 98%) 、力 IU00毫升 1.0M氢氧化钠溶液、加盐酸调 1¾为 7.0〜7.1，加注射用乳糖 100克，加注射用甘露醇 100 克，加注射用水 3000毫升之外，其余同实施例 6。

在本发明中，实施例仅用于说明，但并不能限制本发明的权利要求范围，任何改进和改变均应理解在本发明的范围中，受本发明的权利要求的限制。

Claims

1、一种无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于其基本上由下述重量配比原料组成：香菇多糖 0. 50〜1. 40份，冻干赋形剂 50〜： L40 份。

2、如权利要求 1所述的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于其基本上由下述重量配比原料组成：香菇多糖 0. 70〜1. 40份，冻干赋形剂 70〜140份。

3、如权利要求 1所述的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于其基本上由下述重量配比原料组成：香菇多糖 0. 80〜1. 20份，冻干赋形剂 80〜120份。

4、如权利要求 1〜3所述的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于其不含右旋糖酐。

5、如权利要求 1〜3所述的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖中的一种。

6、如权利要求 1〜3所述抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于冻干赋形剂是甘露醇。

7、一种无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于取香菇多糖 0. 50〜1. 40重量份，用 20〜70重量份的 0. 5〜1. 0摩尔浓度的碱液溶解，然后加酸液中和至？1"1为6. 0〜8. 0，再与冻干赋形剂 50〜140重量份混合均匀，过滤除菌，分装入瓶，冻干后，封口。

8、如权利要求 7所述的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于取香菇多糖 0. 70〜1. 40重量份，用 20〜60重量份的 0. 5〜 1. 0摩尔浓度的碱液溶解，然后加酸液中和至?^1为6. 0〜8. 0，再与冻干赋形剂 70〜 140重量份混合均匀，过滤除菌，分装入瓶，冻干后，封口。

9、如权利要求 7所述的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于取香菇多糖 0. 80〜1. 20重量份，用 20〜80重量份的 0. 5〜 1. 0摩尔浓度的碱液溶解，然后加酸液中和至?^1为6. 0〜8. 0，再与冻干赋形剂 40〜120重量份混合均匀，过滤除菌，分装入瓶，冻干后，封口。

10、如权利要求 7所述的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于所述的冻干赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖中的一种。

11、如权利要求 7所述的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于所述的冻干赋形剂是甘露醇。

12、如权利要求 7〜9所述的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于所述的碱为氢氧化钠。 '

13、如权利要求 7〜9所述的无菌抗肿瘤的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于所述的酸为盐酸。