[go: up one dir, main page]

WO2002044352A1 - Bacteriolytic complex, method for producing said complex and strain for carrying out said method. - Google Patents

Bacteriolytic complex, method for producing said complex and strain for carrying out said method. Download PDF

Info

Publication number
WO2002044352A1
WO2002044352A1 PCT/RU2001/000514 RU0100514W WO0244352A1 WO 2002044352 A1 WO2002044352 A1 WO 2002044352A1 RU 0100514 W RU0100514 W RU 0100514W WO 0244352 A1 WO0244352 A1 WO 0244352A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
complex
bacteriolytic
strain
baκτeρii
producing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU2001/000514
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2002044352A9 (en
Inventor
Igor Stepanovich Kulaev
Olga Andreevna Stepnaia
Irina Matveevna Zfasman
Taisiya Sergeevna Tchermenskaya
Larisa Aleksandrovna Ledova
Ljudmila Grigorevna Zubrizkaja
Vassily Konstantinovich Akimenko
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute Biokhimii I Fiziologii Mikrooorganizmov Im Gk Skrjabina Rossiiskoi Akademii Nauk (ibfm Ran)
Original Assignee
Institute Biokhimii I Fiziologii Mikrooorganizmov Im Gk Skrjabina Rossiiskoi Akademii Nauk (ibfm Ran)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute Biokhimii I Fiziologii Mikrooorganizmov Im Gk Skrjabina Rossiiskoi Akademii Nauk (ibfm Ran) filed Critical Institute Biokhimii I Fiziologii Mikrooorganizmov Im Gk Skrjabina Rossiiskoi Akademii Nauk (ibfm Ran)
Priority to KR1020027009664A priority Critical patent/KR20020073189A/ko
Priority to US10/181,498 priority patent/US7150985B2/en
Publication of WO2002044352A1 publication Critical patent/WO2002044352A1/ru
Publication of WO2002044352A9 publication Critical patent/WO2002044352A9/ru
Anticipated expiration legal-status Critical
Priority to US11/247,553 priority patent/US20060051336A1/en
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/06—Lysis of microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/64—Xanthomonas

Definitions

  • Bacteriological drugs in the form of medications for the treatment of a number of cases of illness that are caused by a medical condition. yzves ⁇ en ⁇ e ⁇ a ⁇ a ⁇ , ⁇ bladayuschy ba ⁇ e ⁇ i ⁇ li ⁇ nches ⁇ im deys ⁇ viem - liz ⁇ tsnm ( ⁇ g ⁇ v ⁇ .S.
  • the territory of the complex in the complex ensures the stability of the bacteria ( ⁇ . Stepnaya, L. Ledova, Y.S. Kulaev. Bolsimiya, 11, 15.
  • the construction site of the full-fledged uniformity, which consists of the N-Acegnlglucosa, is the Acetylmann ng-bristlegul.
  • ballast components do not have the right to operate, but it is possible that they are not affected by any historical alterations.
  • the content of bacterium enzymes in a single drug in a single bacterium activity does not exceed 50 mg of a preparation.
  • the biomass is separated by the process, which contains the political components contained in 5 Dispensed, secreted in a good way with acetic acid with the following active sedimentation of ammonium sulfate, the plant discharged, the dialyzer was dried, it was dry.
  • the content of cultivated bacteria in the single bacterium does not exceed 63 units in the culture of the bacilli.
  • the well-known Schammm-producer of the complex is the bacterium ⁇ agyütónaz satatyz ⁇ P ⁇ ⁇ -4102.
  • a disadvantageous factor in this is that due to the presence in the produced complex of minuscule components of a low high Bacteriological activity.
  • the task, to solve the problem, was sent to the claimed invention, which was obtained from a complex of bacteria bacteria.
  • Medicinal enzymes (mrumamdaza, mumamalanalannamndase, • children’s disease, bakgérioliticheskuyu dysfunction, 24-year-olds, 7
  • the proposed product is a component of a battery that disrupts a large number of human cells, including a large number of
  • the presence of an optional bacterial agent in the drug increases the bacterial activity of the latter.
  • the proposed combination of components is approximately two times smaller than the ballast components, which is purely from the results of elec- tric analysis, which is based on the results of a recent analysis.
  • the bacterial activity of the complex is 60-90 L ⁇ mg.
  • the process is designed to stabilize the Lithuanian cultural activity of the cultural railway.
  • the mass is separated from the cultural liquid from the cultural liquid complex precipitates the ammo. (70-85% of saturation), the crop dissolves, the crop is bottled, it is thoroughly dried.
  • the increased content of the magnesium sulfate in the consumer environment is large-scaled by the production of bacteriological enzymes.
  • the strain was obtained by selection on selective strains from the strain of bacteria. 10 ⁇ a ⁇ Shotostaza satraz ⁇ z ⁇ P ⁇ ⁇ -102.
  • the optional (non-wiring harnesses) direct sticks are 0.6-0.7x2.0 microns in size, and are single and optional.
  • the strain produces a bacteriocomplex, including 1 1 bacteriological enzymes (mammadase, mumamalanalaminandinase, endopeptidase, baculitic enzyme, which has a small mass of small 22 ieri),
  • a flask with a capacity of 750 ml contains 150 ml of nutrient composition (g l): glucose 5.0 liquefied 2.0 other food extract 2.5 ⁇ a 2 ⁇ 0 4 x 12 ⁇ 2 0 4.0 ⁇ 2 ⁇ 0 4 1.0
  • ⁇ 24 hours of cultivation of the active bacterial active culture is 72 L ⁇ / ml.
  • ⁇ 24 hours of cultivation of bacterial active culture liquid is 70 L / ml.
  • the activity of the culture fluid is 90 L ⁇ / ml. thirteen
  • the factory contains 6 lids of the following medium (g / l): glucose 3.0, 2.0, 2.0 fumes 2.0
  • Total Bacterium active cultural activity 14 makes 355320 L ⁇ , the sum of final activity of the final product is 360000 L ⁇ . Dry product 100% of the total content in the cultural liquid.
  • the cultivator is in good condition and is in good condition in the case of economics in case of environment 4; When the end product is sold in accordance with scheme 4.
  • the bacterial activity of the drug is 60 L mg.
  • the cost of a domestic appliance is 100%.
  • the final product obtained as a result, contains a significantly smaller number of ballasts, and is free and enriched with bacon.
  • the proposed method makes it possible to increase the availability of commercial funds in the cultural business - the price is reduced.
  • increase the yield of the end product reduce the content of the end product of the ballast proteins (Fig. 1).
  • Ba ⁇ i ⁇ litaches ⁇ y ⁇ m ⁇ le ⁇ s m ⁇ zhe ⁇ by ⁇ is ⁇ lz ⁇ van in mzdntsnne for treating in ⁇ e ⁇ tsi ⁇ nny ⁇ zab ⁇ levany, vyzvainy ⁇ ⁇ a ⁇ gennymi an ⁇ bi ⁇ gn ⁇ ust ⁇ nchivymi mi ⁇ ganizmami in chas ⁇ n ⁇ s ⁇ i in ⁇ i ⁇ u ⁇ gai, gans ⁇ l ⁇ gsh- ⁇ , sg ⁇ ma ⁇ l ⁇ gnn, ⁇ la ⁇ nng ⁇ l ⁇ gan, ⁇ sl ⁇ & Whitlock STI and ⁇ a ⁇ zhe in ve ⁇ ia ⁇ sh AJ l ⁇ chennya e ⁇ a ⁇ il ⁇ ze ⁇ z 'and mzsga ⁇ v ⁇ u ⁇ n ⁇ g ⁇ ⁇ ga ⁇ g ⁇ skosta.
  • ba ⁇ te ⁇ n ⁇ letichee ⁇ ny ⁇ m ⁇ le ⁇ s m ⁇ zhe ⁇ by ⁇ is ⁇ lz ⁇ van in nauchn ⁇ - nssled ⁇ va ⁇ els ⁇ y ⁇ a ⁇ n ⁇ e ⁇ n ⁇ luchennn ⁇ ul ⁇ u ⁇ y ⁇ le ⁇ for ⁇ luchennya ⁇ las ⁇ v, Dedicated ⁇ le ⁇ chn ⁇ g ⁇ s ⁇ de ⁇ zhim ⁇ g ⁇ to " ⁇ vedeniya genn ⁇ - inzhene ⁇ ny ⁇ ⁇ ab ⁇ , nzuchennya sg ⁇ eniya ⁇ le ⁇ chny ⁇ s ⁇ en ⁇ mi ⁇ ganim ⁇ v.
  • the products offered by the United States-based manufacturer of the complex are not intended to be used in the case of biomedical devices.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Description

БΛΚΎΕΡИΟЛИΤШΕСΚШ ΚΟΜПЛΕΚС, СГЮСΟБ ΕГΟ ПΟЛУЧΕΗИЯ й ΙПΤΑΜΜ ДГΙЯ ΟСУЩДСΤΒЛΕΗЙЯ СПΟСΟΕΑ. Οбласτь теχниκн. йзοбρеτения οгаοсятся κ οбласти биοτеχнοлοгии, медицины и веτеρинаρни бοлее τοчнο κаеаеτся баκτеρиοлигнчесκοгο κοмπлеκса, οни мοιуτ быτь неποльзοваны πρн ποлученнн лечебнοго πρеπаρаτа для медицинсκиχ и веτеρинаρныχ целей.
Пρедшесτвуτοщнй уροвень.
Извесτнο нсποльзοванне баκтеρиοлжгичесκнχ πρеπаρатов в κачесτве леκаρственныχ сρедсτв для лечення ρяда забοлеваннй, вызванныχ πаτοгеннοй миκροφлοροй, в τοм, чκсле усτοйчнвοй κ аиτнбнοτнκам. йзвесτен πρеπаρаτ, οбладающий баκτеρиοлиτнчесκим дейсτвием - лизοцнм (Εгοροв Η.С. Οснοвы учення οб анτибнοτнκаχ. 1979, 'Εысшая тκοла", сτρ. 347- 349). Лκзοцнм янчнοгο белκа аκгавен в οτнοшении узκοгο сπеκτρа мнκροορганнзмοв, κοτορый οгρаничен, в οснοвнοм, мнκροκοκκамн. Пο сπециφκчнοсга дейсгоня на πеπτидοглшсан κлегοчнοй стенκн мшψοορганнзмοв лизοцим яΕляеτся муρамидазοй, το есть ρазρушаеτ связь между муρамοвοй κислοτοй н глюκοзаминοм с οбρазοванием φρагменτοκ с муρамοвοй κнслοτοй на ρедуцнρутощем κøнце.
Именнο иοэτοму лизοцнм лнзиρуег узκий сπеκτρ гρамποлοжиτельныχ лшκροορганизмοв. Β часπιοсга, οн не лизиρуеτ κлеτοчные стснκи сτаφилοκοοсοв - гρамποлοШ'Ггельныχ πаτοгенныχ баκτеρий, οτлнчиτельиοй чеρτοй κοτορыχ являеτся нэлнчне πенτаглнιщнοвοгο мρ'жπеπτнднοгο мοсτиκа, цρидающегο дοποлннτельную жесτκ.οсть нχ κлеτοчнοн сτенκе. Κροме τοгο, κаκ бοльганнсτвο φеρменτныχ πρеπаρаτοв- лшοцим недοсτаτοчнο сτабилеи. Εсе вышесκазайнοе κасаегся и лизοцимοв из дρугаχ истοчииκοв- наπρимеρ, ρасτиτельиыχ или баκтеρиальныχ.
Известен τаκже φеρменτньш πρеπаρаτ на οсиοве бяκτеρиοлиτичесκиχ φеρмеяτοв - лизοсτаφин (ΒсΜτκϋег С.Α., ΒсЫιсЪа.гΑ \Г.Τ. Ι.уяοεΙаρЫη: а χκж Ьасϊеποϊуϋс щшχύ, Гοг Ше δϊаρϊιуϊοсοссиз. 1964, Ρгοс.οГ Ше Νаϋοη. Αсз<18сϊ.ШΑ, ν.51, _Ν-> 37 ρ. 415-421.)
Οднаκο οи не сτабнлеи и ненοльзуеτся τοльκο в лабορаτορнοй πρаκгиκе. Извссτен κοмπлеκс баκτеρяοлнτнчесκюс φеρменτοв, лизиρ^αοщий φамποлοжнτельиые миκροορганизмы, в часτнοсτи πаτοгенные мнοжесτвешю усτοйчивые κ анτнбиοτнκам сτаφилοκοκш н дρугне мнκροορганнзмы, ποлученный из κульτуρальнοй жидκοстн баκτеρии ΧаηЙютοηаз сатρезϊш ΒΚПΜ Β-41 2 πатенτ Κϋ 1 49227. κπ. С12 Ν 9 00 , 1 84).
Κοмπлеκс баκτеρиοлнτнчссκнχ φеρменτοв нз κулыуρальнοй жидκοсτн баκтеρнн ΧаπЙютοηаΞ сатρеэϊπε являеτся οснοвοй для 2 πρеπаρаτοв: πρеπаρаτ, исποльзуемын в меднιщне, ποлучнл названне лизοамидаза., а исποльзуемын в веτеρннаρни - лнзοмасτ.
Β егο сοсτав вχοдяτ τρи баκι-еρиοлиτичесκиχ φеρменτа: муρамидаза, муρамοнлалаιшнамидаза, эндοπеπτидаза, высοκοποлимвρнын ποлнсшсаρид, προтеаза и балласτные κοмποнеиτы (Ο.Α.Сгсπная, ЛΑЛедοва, И.СΚулаев 'Ъаκтеρнοлиτичесκие ' φеρмяшы" в "Усπегсн бнοлοгачесκοй τεнмнй", τ.ΧΧΧΤΧ, ΟΗ1*Й ПΗЦ ΡΑΗ, Пущннο, 1999, сτρ. 341-346).
Сοοτнοшение κοмποненτοв в κοмгоιеκсе, усτашвленнοе авτορами, еοсτавляеτ , мас. %: бажτφиοлиτичесκне φеρменτы ( муρамндаза, муρшοштштιятщаз'ά эндοπенτндазэ ) 1,0-2,0, πρυτеаза 0,5-1-0, балластπые κυмποненτы 4,0-8,0, ποлисаχаρид οсτальнοе.
Τρи баκгеρиοлиτнчесκиχ φеρменτа οбладаюτ ρазнοй субсτρаτнοй сπециφичнοсτью πο οтаοгоению κ πеπτндοглнκзнам κлеτοчныχ сτенοκ мнκροορганнзмοв: а) муρамндаза - аналοг лизοцима иο сπециφичиοсга- б) муρамοшιалагашамидаза, οτщешшющая иеιτгадную часτь πеπτидοπшκана οг ποлнсаχаρидиοйа в) эндοπеπτидаза, ρазρушающая связн внуτρн межπеπτнднызс мοсшκοв κле-шчнοй етенκи. За счеτ эτοгο иρеиаρаτ аκτивнο ρазρушаеτ κлеτκн шнροκοгο сπеκгρа гρамποлοжиτельныχ мнϊφθορганнзмοв, в τοм числе πаτοгенныχ сτρсπτοκοκ.κοБ и сгаφшιοκοκκοв.
Благοдаρя иаличию в лнзοамидазе προτеазы и двуχ из баκτеρиοлиτичесκиχ φеρменτοв лнзοамндазы - ндοπеπτндазы н м}?ρамοилаланинамидазы, οбладающиχ οднοвρемκннο н προτеοлнτичесκοн аκτнвнοсτью, πρеπаρаτ χοροшο οчнщаеτ ρаны οτ неκροτичесκнχ масс.
Пοлисаχаρнд в сοсτаве κοмπлеκса οбесπечиваеτ сτабнльнοсть баκτеρиοлшΗчесκюс φеρмвнτοв (Ο. ΑСтеπная, ЛΑ. Ледοва, Й.С.Κулаев. Бнοχимия, τ.58, вьга. 10, 1993 , сτρ. 1523-1528 ). Сτρуκτуρа ποлнсаχаρида οбρазοваиа нοвτορяшщейся единнцен, сοсτοящей нз Ν-ацегнлглюκοзамнна, Ν- ацеτилманнуροнοвοй н Ν-щетнлгалаκτуροнοвοй κислοг. (Ь.Μ. ЬϊкΙюйЬегвΙον, &.Ν. 8еηсΚеηкον а, Υ.Α. Εшгеϊ еЬ аϊ. ΕΕΕЙ Ьейеге, Ν 368, 1995, ρ. 113- 116)
Ηедοсτаτκοм эτοгο κοмπлеκса являеτся το, чτο нз за яаличиа πρаκτичесκи ποлοвнны бажτφнο,ιшτнчесκиκ ' φеρменτοв в денаτуρнροваπнοй φορмз и баллзсτныχ κοмποненτοв недοсτаτοчнο высοκа егο бэκтеρκοлн'гачесκая аκτнвнοеτь. Κροме τοгο, балласτные κοмποненτы не οбладаюτ ШΪДИЦΗΗСΚИΜ дейстенем, нο вοзмοжнο вοзниκнοвение на ниχ аллеρгачесκиχ ρеаκцшι
йзвестен сποсοб ποлучения κοмπлеκса лиτнчесκнχ φеρменτοв (πаτенτ Юϋ 1774658, κл. С Ι.2Ν 9/36, 1990), вκлючаюιций κуτιьτивнροванне πггамма προдуценτа ΧаηΙοтοηаа сатρезϊπз ΒΚПΜ Β- 1402 на жндκοй шιτаτельнοй сρеде, сοдеρжащей глюκοзу, баκτοπеπτοн, белκοвο-ви'ϊаминный κοнцеιггρаτ (БΒΚ в κοличесτве 2,5-6,0 г/л и минеρальные сοли, в услοвняχ аэρацшι и πеρемешиваιтая с ποследз'тощим выделением целевοгο προдуκτа, πρи эτοм часτь БΒΚ внοсяτ в исχοдную сρеду. Сοдеρжэнне баκгеρиοли-гачесκюс φеρменτοв в κульτуρальнοй жидκοсга в единицаχ баκτφнοлитачесκοй аκτнвнοсτн сοсτавляеτ 40-60 ед мл. βыделеиие προвοдяτ πο сποсοбу выделешта κοмплеκса лиτичеαшχ φеρменτοв, οπисашюму в πаτеиτе Κϋ 1755581, (κл. С12Ν9/36, 1990), в вκлючающему οχлаждение φильτρаτа κульτуρальнοй жндκοсга, οсаждешϊе целевοιο яροдуκτа ορганнчесκим ρасτвορнτелем, οκлаждеяне я οτделение οсадκа, диализа и лнοφнльную суотκу, πρи чем πеρед οсаждением φнльτρаτ οκлаждаюτ, ποдκнсляюτ дο ρΗ 3,5 - 5,0, дοбавляюτ 2,5 - 3,5 οбъема οэαιажден- нοгο эτанοла, выдеρжнваюτ без πеρемешивания на χοлοду.
Сοдеρжание баκгеρнοлнτнчееκнχ φеρментов в ιτρеπаρаτе в единнцаχ баκтеρнοлнτнчесκοй аκτивнοсτи не πρевышэеτ 50 ед мг иρеπаρаτа.
Βыχοд гσгοвοгο πρеπаρаτа οτ сοдеρжания лиτичесκοгο κοмπлеκса κульτуρальнοй жидκοсга - 40-60 %
И сοдеρжанне баκτеρиοлиτичесκнχ φеρменτοв в κуπьτуρальнοй жндκοсти и выχοд гοτοвοгο πρенаρаτа πρн οсущесτвленнн эτοго сποсοба недοсτаτοчнο велиκн.
Ηаибοлее близκим κ πρедлагаемοму сποсοбу πο еοвοκуιшοстκ сущесτвеиныχ пρнзнаκοв н дοсτнгаемοму эφφеκχу являеτся сποсοб ποлучення κοмπлеκса лнτичесκиχ φеρменτοв (πаτенτ ϊШ 1549227. κл. С12 Ν 9/00,1984), κοτορый πρедусмаτρнваеτ κульτнвиροвание баκτеρин Χаη&οгшшаз сатρезΜз
ΒΚПΜ Β-4102 на πнτаτельнοй сρеде. сοдеρжащей следующне κοвдποнеты
(г/лнτρ): глюκοза 2,0 - 12,0 баκτοπеπτοн 2,0 - 6,0 белκοвο-внτамннный κοнценτρаτ 2,5 - 6,0
ΝазΗΡСЦ 12Η20 0,5 - 4,0
ΕИ2Ρ04 0,)/ - 1,0
ΝаСΙ 0,35 - 1,0
Μ§δ04 7Η30 0,2 - 3,0
Ρс8θ4 7Η20 0,01 - 0,1 вοда дο лиτρа.
Пροцесе πρеκρащаюτ ποсле дοсτижения сτабильнοн лигнчесκοй аκτнвнοсτи κульτуρальнοй жидκοсτн. Заτем биοмассу οτделяюг цеιπρяφугиροвянием, κοмгоιеκс лиτичесκиχ φеρменτοв, сοдеρжащиχся в 5 ρасгаυρе, выделяюτ дροбным οсаждеинем ацеτοнοм с ποследуюшнм φρаκциοнным οсаждением сульφаτοм аммοния, οсадοκ ρасτвορяюτ, ρасτвορ диализуюτ, лиοφильнο сушаτ.
Сοдеρжанне баκτеρиοлιшϊчесιшχ φеρменτοв в κульτуρальнοй жндκοсτи в единнцаχ баκτеρиοлиτнчесκοй аκτнвнοсτи не πρевышаеτ 63 ед мл.
Βьπсοд гοτοвοгο πρеπаρаτа недοсτаτοчнο высοκ - οн сοсτавляеτ οτ сοдеρжания лнтачесκοгο κοмπлеκса в κуздьτуρальнοй жндκοеτи ΟΚΟЛΟ 20 %
Ηедοсτаτκοм уκазаннοгο сποсοба являеτся το, чτο белκοвο-виτамннный κοнценτρаτ в насτοящее вρемя не выπусκаеτся οτечесτвеннοй προмышленнοсτью ввнду τοгο, чгο егο προизвοдсгеο являеτся неэκοлοгачным; исποльзοванне в сοсτаве сρеды дοροгοсτοящегο имπορτнοгο баκτοπеπτοна φнρмы Ωϊϊсο (СΙПΑ) неρациοнальнο, τаκ κаκ значнτельнο увеличнваеτ сτοнмοсть κοиечяοгο προдуκга.
Κροме τοгο, неποльзοвание для οсаждения φеρменτοв из κульτуρадьнοй жидκοсτи ιψοдуценτа эτанοла ΕШ 1755581), κаκ н ацеτοна ΕШ 1549227) πρнвοдиτ κ иеοбρаτимοй денаτуρации πρимеρнο ποлοвины баκτеρиοлнτнчесκиχ, οπρеделяющиχ τеρаπевτичесκοе дейсτвие πρеπаρаτа, φеρмзнτοв, сοдеρжащиχся в κульτуρальнοй жидκοсτи (πο ρезульτаτам οηρеделення баκгеρиοли'гачесκοй аκτивнοсτи и элеκτροφορеτичесκοму аиализу), а, следοваτельиο, κ значиτельнοмууменьшенню выχοда προдуκτа (Φиг. 1).
Β ΓΟΤΟБЫΧ πρеπаρагаχ лизοаг^ндазы, ποлученныχ πο извесτным сποсοбам , πρнсуτсτвуеτ значнτельнοе κοлнчесτвο мннορныχ κοмποиенτοв - балласτныχ белκοв (Φиг.1), κοτορые, не имея меднцинсκοгο эφφеκга, мοгуτ вызываτь аллеρгачееκую ρеаκцию.
Известен шгамм-προдуценτ κοмπлеκса - баκτеρин Χагйютοηаз сатρезйτз ΒΚПΜ Β-4102.
Ηедοсτаτκοм эτοгο πтамма-ιψοдуценτа являеτся το, чτο из-за наличня в προдуциρуемοм κοмπлеκсе минορныχ κοмποненτοв недοсτаτοчнο высοκа б баκтсρиοлнτичееκая аκτивнοсτь.
Ρасκρыτие нзοбρетення.
Задача, на ρешение κοτοροй наπρавлены заявляемые юοбρеτениа, ποлученне κοмπлеκса баκтеρиοлнτΗчесκнχ φеρменτοв.
Τеχничееκий ρезульτаτ- κοτορый мοжеτ быτь ποлучеи πρи οсу- щесτвлении нзοбρеτения заκлючаеτся в увеличенни κοличесτва и сοдеρжания баκτеρнοлиτичесκиχ φеρмйнτοв в κульτуρальнοй жндκοсτн баκτеρин- προдуценτа, увеличенни выχοда προдуκτа, οπτнмнзацнκ сοсτава κοнечнοго προдуκга ужньшенне сοдеρжания в κοнечнοм προдуκτе балластныχ белκοв), усκορении προцесса ποлучення гοτοвοгο προдуκτа.
Пρи эτοм τаюκе προисχοдиτ удешевление лροдуκτа н усκορение προцесса егο ποлучеиня.
[Ιοсτавленная задача ρетаеτся τем, чτο πρедлагаемый бажτеρиοлиτичесκий κοмπлеκс προдуцнρуется гатаммοм баιсгеρни ΧаπЙюгаοгаз сатρезϊπз Ж,1 и κροме бажτеρиοли'дачееκиχ. φеρменτοв муρамндазы, муρамοилаланинамидазы, эιщοπеπτидазы - , ποлисаχаρида н προτеазы, οн дοποлниτельнο сοдеρжиτ баκτеρиοлнτϊ-гчесκнй φеρменτ, имеющий мοлеκуляρнуто массу οκοлο 22 κДа
Пρн эτοм κοмποненτы сοдеρжатся в κοмπлеκсе следующем сοοтаοшении, мас. %: Εаκτеρнοлнτичесκие φеρменτы (муρамндаза, муρамοнлаланннамндаза, •шдοπеπτидаза, баκгеρиοлиτι-ιчесκий φеρменτ, имеющий мшιеκуляρную массу οκοлο 22 κДа) 2-5, προтеаза 1-2, балласτные κοмποненτы 24, ποлнсаχаρнд οстаπьнοе. 7 Пρедлагаемый πρеπаρаτ - κοмπлеκс баκτеρнοлнτнчесκнχ φеρменτοв ρазρушаеτ κлеτκи гρамποлοэκнτельиыχ миκροορганизмοв, в τοм числе πаτο- генныχ мнοжесτвеннο усτοйчивыχ κ анτнбиοτиκам ( Τаблица ϊ.)
Ηаличие дοиοлннτельнοгο баκτеρиοлнτичееκοгο φеρменτа в πρеπаρаτе увеличиваеτ баκτеρиοлнτнчесκую аκτивнοсτь ποследнегο. Пρедлагаемый κοмгоιеκс еοдеρжнτ πρимеρнο в два ρаза меньгае балласτныχ κοмποненτοв, чτο οчевнднο из ρезульτаτοв элеκτροφορеτичесκοгο анализа, πρедсτавленныχ на Φнг.1. Баκτеρнοлнтачесκая аκτивиοсть κοмπлеκса сοсτавляеτ 60-90 ЛΕ мг.
Сущнοсτь πρедлагаемοгο сποсοба ποлучення баκτеρиοлиτнчесκοгο κοмгаιеκса заκлючаеτся в τοм, чτο шτамм-προдуценτ ΧаπЙютοηаз сатρез&τз ΧΙЛ κульτнвиρуюτ на πиτаτельнοй сρеде, сοдеρжащей глюκοзу, πеπτοн, дροжжевοй эκсτρаκτ или дροжжевοй авτοлнзаτ, φοсφορнοκнслые сοли наτρня и κалия, сеρнοκнслый магний, χπορисτый κалий, сеρнοκислοе железο и вοду πρи следующем сοдеρжанин κοмποненτοв ( г/диτρ): глюκοза - 2,0 - 6,0 ; πеπτοн - 1,5 - 6,0; дροжжевοй эκсτρаκτ - 1,0 - 6,0; или дροжжевοн авτοлизаτ с аминным азοτοм 440490 мг/лиτρ - 40-300 мл; Νа2ΗΡθ4.12Η20 - 4,0 - 5,0;
ΚΗ2Ρ04 1,0 - 2,0;
Μё804.7Η20 4,0 - 6,0;
ΚСΙ 0,4 - 1,60 ;
Ρе804.7Η20 0,05 - 0,20 вοда дο лиτρа.
. Пροцесс πρеκρащаюτ πο дοстнженин сτабильиοй литачесκοй аκгивнοсτи κульτуρальнοй жндκοсга. Бнοмассу οτделяюτ ценτρиφуτнροваннем, из κульτуρальнοй жидκοсга φеρменτный κοмπлеκс οсаждаюτ сульφаτοм аммοння (70-85% насыщения), οсадοκ ρасτвορяюτ, ρасτвορ днализуюτ, лнοφильнο сушаτ.
Τеχннчесκнй эφφеκτ πρн исποльзοвании πρедлагаемοгο сποсοба дοсτнгаеτся τем, чτο в извесτнοм сиοсοбе κульτивиροванне шτамма баκτеρни ΧаиЙюгаοηаз саюρези-ϊз. ΧЫ προвοдяτ на πиτаτельиοй φеде, сοдеρжащей глюκοзу, πеπτοн, дροжжевοн эκсτρаκг илн дροжжевοй авτοлнзаτ, φοсφορнοκислые сοли наτρия и κалия, сеρнοκислый магннн, χлορисτый κалий, сеρнοκнслοе железο н вοду πρи следующем сοдеρжанин κοмποненτοв ( г/лнτρ): глюκοза - 2,0 - 6,0; πеπτοн - 1,5 - 6,0; дροжжевοн эκсτρаκτ - 1,0 - 6,0; илн дροжжевοй авτοлизаτ с аминным азοτοм 440490 мг лнτρ - 40-300 мл; Νа2ΗΡ04.12Η20 - 4,0 - 5,0;
ΚΗ2Ρ04 . , 1,0 - 2,0;
Μ§Ю4.7Η20 4,0 - 6,0;
ΚСΙ 0,4 - 1,60 ;
Ρе804.7Η20 0,05 - 0,20 вοда дο лиτρа, а οсаждение κοмгоιеκса суπьφаτοм аммοния προвοдяτ неποсρедсτБβниο из κульτуρальнοй жидκοсга.
Пρедлагаемые κοмποненτы πнτаτельнοй сρеды и нχ сοοέнοшеиня ποзвοлягоτ сделаτь сρеду дешевле н ποвыснτь сοдеρжанне баκτеρиοлнτичесκнχ φеρменггοв в κульτуρальнοй жндκοсτи προдуцеиτа с 30-60 ЛΕ мга (в швесτныχ сποсοбаχ) дο 70-90 ЛΕ/мπс, снтнτь сοдеρжание в ней балласгаыχ белκοв (Φиг.1).
Баκгеρнοлшичесκую аκτнвнοсть в προцессе κульτивнροвання и в χοде выделення φеρменτнοго κοмπлеκса οπρеделяюτ следующим οбρазοм: κ 2 мл сусπензин лиοφилизнροванныχ κлеτοκ δΙаρЬуΙοсοесиз аигеиз 209-Ρ в 0,01 Μ τρис-ΗСΙ буφеρе, ρΗ 8,4-8,5 с κοнценτρацней 0,5-0, 6 еднниц οητнчесκοй шютаοсτи, προгρеτοй в τеченне 10 мннуг πρн 37 С, дοбавляюτ 0,1 мл προбы, смесь ииκубиρуюτ 5 минуτ πρн 37 С. Ακτивнοсτь ρассчиτываюτ πο φορмуле
(Οο - Ω) χ Ρ
Ε (ед/мл) =
I χ 0,01 χ 0,1
где - οπτичесκая πлοτнοсτь προбы ποсле ннκубацни
Βο - οπτнчесκая ШΙΟΤΉΟСΤЬ κοнτροля;
Ь - вρемя ннκубацни, минуτы;
Ρ - ρазведение προбы;
0,01 - οπτнчесκая πлοτнοсτь, сοοτвеτеτвующая 1 еднннце аκτнвнοсτи
0,1 - οбъем προбы, миллилиτρы. ( πатенτ П 549227).
Увеличенне в πнτаτельнοй сρеде сοдеρжання сульφаτа магння сτнмулнρуеτ προдуκцню баκτеρиοлиτичесκиχ φеρментов.
Ηзменение сχемы вьзделения - иеκлючение нз сχевды οчнсτκи дροбнοгο οсаэκдення ацеτοнοм (πатенτ Κϋ 1549227) нли сπнρτοм (πаτенτ Κϋ 1755581)- сοκρащаеτ длиτельнοсτь προцесса ποлучения κοнечнοгο προдуκτа и увеличиБаеτ выχοд целевοгο προдуκτа с 20%-50% (в нзвесгаыχ сποсοбаχ) дο 80-100% οτ сοдеρжання в κульτуρальнοй жнд&οсτи
Для οсуще<гτвлеиия πρедлагаемοгο сποсοба πρедлагаеτся, шτамм баκτеρин
ΧаηШοтοηаз са /тρезϊπз. ΧЫ - προдуценг баκтеρишιнгичесκοгο' / κοмπлеκса.
Шτамм баκтеρии Χаιйютοηаз сатρезύчϋз ΧΤ_1 деποииροван вο
Βсеροссинсκοй κοллеκции мшροορганнзмοв πρи Инстаτуτа биοχимни и φнзиοлοгни мнκροορганнзмοв нм Г-Κ. Сκρябнна ΡΑΗ (г. Пущинο Μοсκοвсκοй οбласга, ηροсπеκτΗауκи 5) πο нοмеροм ΒΚΜ Β- 2249 Д
Шτамм ποлучен πугем селеκции на селеκτивиыχ сρедаχ из шτамма баκτеρин 10 ΧаηШοтοηаз сатρезϊι з ΒΕПΜ Β- 102.
Κз'льτуρальнο-мορφοлοгичесκне πρизнаκн шτамма.
Ηеποдвнжные (οτсуτсτвне жгуτиκοв) πρямые πалοчκи ρазмеροм 0.6-0.7x2.0 мκм, ρаеποлοженные οдинοчяο и ποиаρнο.
Ηа сτандаρτныχ πиτаτельныχ φедаχ (ΜПΑ, ΒΒΙ,, Βеект Οϊсктазοη) οбρазуеτ κρуглые κοлοнии 2 мм и бοлее в днамеτρе, выπуκлые, гладκне, блесτящне. елнзнсτые. κρая ροвные, желτые, неπροзρачные. Βьщеляеτ в πнτаτельную сρеду чеρнο-κορнчневый ηнгменτ, вρемя ποявления κοτοροгο и инτенсивнοсτь зависиτ οτ сοсτава сρеды. Имееτ муκοидный ροсτ на агаρнзοваннοй сρеде с 5% глюκοзы. Οκρаеκа πο Гρаму меτοдοм Гρегеρсена (Сге^егзеπ, 1978) - гρамοτρициτельная.
Биοχимичесκие πρизнаκи.
Αназροб. Χемοορганοτροφ. Ηуждаегея в φаκτορаχ ροста.
Οκсндазο- и κаτалазοποлοжигельный.
Οиτимальная темπеρаτуρа ροсτа. +25-30 С, ρасτеτ ιψи +4 С и слабο πρи + 37°С.
Ηе οбладаеτ сποсοбнοстью κ деннτρнφнκацнн. Οбρазуст κнеяοτу в аэροбныχ услοвняχ из глюκοзы.
Гндροлнзуеτ желаτин, эсκулнн, κазеин.
Οбρазувτ Η^ из πеπτοта.
Ρасτег на сρедаχ, сοдеρжащшс дο 4%ΝаСΙ.
Идентаφнκация προведенная на οснοваннн οπρеделнτеля Беρги ( Βещеу'з таηиа ο зузϊетаϋс Ьасϊеϊ'ϊοϊοду. Ε<3з.. Νοеϊ &. Κπе§ , ΙοЬη С Ηοϊϊ. ΒаШтοге; ГοηсΙοη ЖШатз &, 1¥ϊ!ктз. 1984, ν.1. ) ποзвοляеτ οτнестн данную баκτеρню κ виду ΧаηЙютοηаз сатρезЬгсз нлн κ ροду ГузοЬасΙег. Пο сοвοκуπнοеτи имеющиχся πρнзнаκοв κульτуρа οτнеееиа κ вщгу ΧаηЙютοηаз сатρеε&ϊз.
Штамм ΧаηШοтοηаз еатρезϊπз ΧЫ не πаτοгенен для челοвеκа н жнвοтаыχ. Шτамм προдуциρуеτ баκтеρиοлиτичесκин κοмπлеκс, вκлючающий 1 1 баκтеρнοлигичесκне φеρменτы (муρамндазу, муρамοнлаланинамндазу, эндοπеπτидазу, баκгеρиοлиτнчесκий φеρменτ, имеющий мοлеκуляρную массу οκοлο 22 κДа), προτеазу, κнслый высοκοмοлеκуляρный ποлнсаχаρнд, н балласτные κοмποненτы.
Ηа Φиг. 1. πρедсτавлены белκοвые сπеκτρы баκτеρидаиτичесκшс κοмгоιеκсοв,
(элеκτροφορез в ποлиаκρнламиднοм геле), ποлученныχ πο извесгаьш и πρедлагаемοму сποсοбам..
Βοзмοжнοсτь οсущесгеления сποсοба ποдτвеρждается следующими иρимφами, нο не οгρаничнваеτся нми.
Пρнмеρ 1.
Β κοлбу емκοстыο 750 мл внοсяτ 150 мл πиτаτельнοй сρеды сοсτава (г л): глюκοза 5,0 леπτοн 2,0 дροжжевοй эκсτρаκτ 2,5 Νа2ΗΡ04 х 12Η20 4,0 ΚΗ2Ρ04 1,0
ΚСΙ 0,5
Μ§804 χ7Η20 3,0
Figure imgf000013_0001
вοда дο .ιшτρа, дοвοдяτ ρΗ сρеды до 7,0 10% -ным ρасτвοροм ΝаΟΗ. Κοлбу сο сρедοн е сτеρилнзуюτ. Β стеρнльную κοлбу сο сρедοй внοсяτ 10% ннοκуляτа баκτеρнй Χаηϊϊюгаοηаз сатρез&τз ΧЫ н κульτнвнρуюτ в τечение 24 чаеοв πρн 29 С на κачачκе (200 οбοροτοв в минуτу;. Баκτеρнальные κлегκн οτделяюτ ценτρнφугиροваннем.
Κ 24 часам κультавиροвання баκτеρиοлнτнчесκая аκτнвнοсгь κульτуρальнοн жндκοсτн сοсτавляеτ 72 ЛΕ/мл.
Пρнмеρ 2. 12
Κультавнρуτοг πггамм ΧаηШοтοηаз сатρезϊгϊз ΧГЛ , κаκ уκазаиο в πρимеρе 1 на сρеде следугощегο сοсτава, г/л: глюκοза 5,0 πеιггοн 2,0 дροжжевοй авτοлнзаτ 100 мл
Νа2ΗΡ04 12Η2С 4,2 ΚΗ2Ρ04 1,0
ΚСΙ 0,6
Μ§804 7Η20 5,0 ΕЪδ04 7Η20 0,1 вοда дο лиτρа.
Κ 24 часам κульτнвиροвання баκтеρнοлнгиϊϊесκая аκτнвнοсгь κульτуρальнοй жидκοсти сοсτавляст 70 ЛΕ/мл.
Ηρнмеρ 3.
Κульτнвиρуюτ шτ^даι-προдуценτ, κаκ уκазанο в πρимеρе 1, на сρеде следующегο еοеτава, г/л: глюκοза 5,0 πеπτοн 2,0 дροжжевοи эκсгааκτ 2,0
-Νа2ΗΡ04 12Η20 4,2
ΚΗ2Ρ04 1,0 κсι 0,6
Μβ804 7Η20 5,0
Ρе804 7Η20 οд вοда дο лиτρа.
Κ 24 часам κульτивнροвания аκτивнοсτь κульτуρальнοй жидκοсти 90 ЛΕ/мл. 13
Пρимеρ 4.
Β φеρмеиτеρ Αχжум виοсяτ 6 лшροв πнτаτельнοй сρеды следующегο сοсτава ( г/л): глюκοза 3,0 πеπτοн 2,0 дροжжевοй эκсτρаюг 2,0
Νа2ΗΡ0 χ12Η204,2
ΚΗ2ΡΟ4 1,0
ΚСΙ 0,6
Figure imgf000015_0001
вοда дο лиτρа.
2 стеρилнзуюτ иρи 0,5 κге/см 30 минуг.
Β φеρме|ηгеρ внοсяτ сτеρилыю 300 мл ποсевиοгο маτеρнала, выρащеююгο ш сρеде вышеуκазаинοгο сοсτава. Κульτивнροвание ведуг πρн 29 С, ποдаче вοздуχа 0.3 οбъешι на 1 οбъем сρеды в минугу, чτοбы πаρцнальнοе давление κис- лοροда в сρеде не οπусκалοсь ниже 30 % οτ насыщения.
Пοддеρживаюτ ρΗ сρеды в инτеρвале 6,2-7,5 , ποдавая в φеду сοοτвеτсτБеннο 10%-ньш ρасτвορ ΝаΟΗ πρи егο ποннжвнни или 10%-ный ρастаορ ΗСΙ πρн ποвышеιши ρΗ . Κ 24 часам κульτнвнροвания аκτивнοсть κульτуρальнοй жидκοсга сοсτавляег 70 ЛΕ'мл. '
Κ οκлажденнοй κульτуρальнοй эκндκοсτн {5β лнτρа) дοбавляюτ сульφаτ аммοння дο 80% насьαцення, выдеρжнвэюτ 12 часοв, οτделяюτ οсадοκ цешρнφугиροваннем. Οсадοκ ρасτвορяюτ Б вοде, дналнзуюτ, ποсле дналнза πο- лучаюτ 500 мл ρасгаορа, еοдеρжащегο баκгеρнοлигнчесκнй κοмгоιеκс.
Ρаствορ лиοφильнο сушаτ, ποлγчаюτ οκοлο 5 г πρеπаρаτа с аκτивиοсτью 72 ЛΕ/мг πρеπаρаτа.
Суммаρная баκтеρиοлнτнчееκан аκτнвнοсτь κульτуρальиοй жндκοсга 14 сοсτавляеτ 355320 ЛΕ, суммаρиая аκτнвнοсτь κοнечнοгο προдуκτа 360000 ЛΕ. Βыχοд гοτοвοгο πρσдуκга 100% οτ сοдеρжания в κульτуρальнοй жидκοсга.
Ρезульτаτы элеκτροφορеτичееκοгο анализа πρеπаρаτοв лизοамидазы, ποлученныχ πο извесτным снοеοбам и πο πρедлагаемοму сποсοбу πρедсгавлены на Φиг. 1. Пρнмеρ 5.
Κульτуρу-προдуценτ ΧаηЙютοηаз еатρезϊϊτз Χ1_1 выρащнваюτ в φзρменτеρе Αнκум κаκ в πρнмеρе 4 на сρеде, οπиеаннοй в πρнмеρе 2. Κ 24 часам аκτнвнοсть κульτуρальнοй жидκοсτи сοсτавляеτ 65 ЛΕ/мл. Пρи ποлученин κοнечнοгο προдуκτа πο сχеме, πρиведеннοй в πρимзρе 4. Баκτеρиοлнτнчесκая аκτивнοсτь πρеπаρага - 60 ЛΕ мг. Βыχοд κοиечнοгο προдуκга сοсτаБляеτ 100%.
Элеκгροφορеτнчесκнй анзлиз κοнечныχ προдуκгοв ποκазал, чτο πρи исποльзοванни извесгаыχ сποсοбοв ποлучения κοмπлеκса κοнечный προдуκτ нмееτ бοльшοе κοличесгвο балласτныχ белκοв, πρнчем мнοгие из ниχ наχοдяτся в πρеπаρаτе в τаκοм же κοлнчесгве, чτο н баκгеρиοлиτнчееκие φеρменτы.
Κοнечнын προдуκτ, ποлученный πρедлагаемьш сποеοбοм, сοдеρжиτ значнτельнο меньшее κοлнчесτвο балласτшιχ бе,лκοв и οбοгащен баκτеρиοлиτнчесκимн φеρменτамн.
Данные Τаблицы 1 ποκазываюτ, чτο πρедлагаемый πρеяаρаτ πο еρавнеишο с швесτыым лнзиρуеτ дοποдииτельнο Ю шτаммοв баκτеρнй еемн видοв и κροме τοгο, лизнρуеτ дοποлннτельнο κлеτκи 18 κлнннчесκнχ шτаммοв зοлοтаеτοгο сτаφилοκοκκа, выделенныχ неποсρедсτвеннο οτ бοльныχ.
Τаκнм οбρазοм, πρедлагаемьш сποсοб ποзвοляеτ ποвысиτь еοдеρжанне баκтеρнοлнτнчесκнχ φеρмеиτοв в κульτуρальнοй жндκοсга προдуценτа - Χаπϊιютοηз? еатρези'ϊз ΧЫ, увеличнτь выχοд κοнечнοгο προдуκτа, умеиьшиτь сοдеρжанне в κοнечнοм προдуκге балластныχ белκοв (Φиг.1).
Κροмв τοгο, сποсοб сοκρащаеτ вρемя προцесса ποлучения κοиечиοгο προдуκτа, уменыπаеτ сτοимοсτь κοнечнοгο προдуκτа. 1 5 Пροмышлеιшая πρнмеиимοсτь.
Баκτφиοлитачесκий κοмπлеκс мοжеτ быτь исποльзοван в мзднцнне для лечения инφеκциοнныχ забοлеваний , вызваиныχ πаτοгенными анτπбиσгнκο устοнчивыми миκροορганизмами , в часτнοсτи, в χиρуιρгаи, гансκοлοгш-ι, сгοмаτοлοгнн, οτοлаρннгοлοган, κ слι&т л гни, а τаκже в веτβρκиаριш дяя лπчення еτаφилοκοκκοзэ κз' и мзсгаτοв κρуπнοгο ροгаτοгο сκοτа.
Κροме τοгο, баκтеρнοлэтичееκнй κοмπлеκс мοжеτ быτь исποльзοван в научнο- нсследοваτельсκοй πρаκτнκе πρн παлученнн κульτуρы κлеτοκ, для ποлучення προτοπласτοв, выделення κлеτοчнοгο сοдеρжимοгο с целью «ροведения геннο- инженеρныχ ρабοτ, нзучення сгροения κлеτοчныχ сτенοκ миκροορганимοв. Цρедлагаемые штш-προдуценτ баκτеρнοлнτичесκοгο κοмπлеκса н сиοсοб егο ποлученна мοгуτ бьнъ исποльзοваны в биοτеχнοлοгаи для προизвοдсша πρеπаρаτа κοмπлеκса
Τаблица 1 16
ϊν&нотοбιιιьш гаегсτρ дейсτвдш бяясϊ'еρиο-ιштаιчссгалж κшшлжеснα
Figure imgf000018_0001
ЗΑΜΕΗЯЮЩИЙ ЛИСΤ (ПΡΑΒИЛΟ 26)

Claims

17 Φορмула изοбρеτения
1. Баκτеρиοлиτичесκий κοмπлеκс, προдуциρуемый баκτеρией вида Χаηύютοηаз сатρезϊπз, вκлючающий баκτеρиοлиτичесκие φеρменτы -муρамидазу, муρамοилаланинамидазу, эндοπеπτидазу, προτеазу и ποлисаχаρид, οτличающийся τем, чτο οн προдуциρуеτся шτаммοм баκτеρии Χаηύютοηаз сатρезπιз ΒΚΜ Β-2249 Д и дοποлниτельнο сοдеρжиτ баκτеρиοлиτичесκий φеρменτ с мοлеκуляρнοй массοй οκοлο 22_κДа.
2. Сποсοб ποлучения баκτеρиοлиτичесκοгο κοмπлеκса, вκлючающий κульτивиροвание шτамма баκτеρии вида Χаηйιοтοηаз сатρезητз на πиτа- τельнοй сρеде, οτделение биοмассы οτ κульτуρальнοй жидκοсτи ценτρиφугиροванием, οсаждение κοмπлеκса сульφаτοм аммοния, диализ ρасτвορеннοгο οсадκа и лиοφильную сушκу целевοгο προдуκτа, οτличающийся τем, чτο κульτивиρуюτ шτамм баκτеρии Χаηйютοηаз сатρезϊгϊз ΒΚΜ Β- 2249Д, а в κачесτве πиτаτельнοй сρеды исποльзуюτ сρеду, сοдеρжащую глюκοзу, πеπτοн, дροжжевοй эκсτρаκτ или дροжжевοй авτοлизаτ, φοсφορнοκислые сοли наτρия и κалия, сеρнοκислый магний, χлορисτый κалий, сеρнοκислοе железο и вοду πρи следующем сοдеρжании κοмποненτοв (г/лиτρ):
глюκοза - 2,0 - 6,0 ; πеπτοн - 1,5 - 6,0; дροжжевοй эκсτρаκτ - 1,0 - 6,0; или дροжжевοй авτοлизаτ с аминным азοτοм 440-490 мг/лиτρ - 40-300 мл;
Νа2ΗΡ04.12Η20 - 4,0 - 5,0;
ΚΗ2Ρ04 1,0 - 2,0;
Μ§304.7Η20 4,0 - 6,0;
ΚСΙ 0,4 - 1,60 ;
Ρе804.7Η20 0,05 - 0,20 вοда дο лиτρа.,
ЗΑΜΕΗЯЮЩИЙ ЛИСΤ (ПΡΑΒИЛΟ 26) 18
οсаждение κοмπлеκса сульφаτοм аммοния προвοдяτ неποсρедсτвеннο из κульτуρальнοй жидκοсτи.
3. Шτамм баκτеρий ΧаηШοтοηаз сатρезϊήз ΒΚΜ Β-2249 Д - προдуценτ баκτеρиοлиτичесκοгο κοмπлеκса.
ЗΑΜΕΗЯЮЩИЙ ЛИСΤ (ПΡΑΒИЛΟ 26)
PCT/RU2001/000514 2000-11-29 2001-11-28 Bacteriolytic complex, method for producing said complex and strain for carrying out said method. Ceased WO2002044352A1 (en)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020027009664A KR20020073189A (ko) 2000-11-29 2001-11-28 용균 복합체, 그 제조 방법 및 그 방법을 실현하기 위한균주
US10/181,498 US7150985B2 (en) 2000-11-29 2001-11-28 Bacteriolytic complex, method for producing said complex and strain for carrying out said method
US11/247,553 US20060051336A1 (en) 2000-11-29 2005-10-11 Bacteriolytic complex, method of its production, and strain for realization of the method

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000129650/13A RU2193063C2 (ru) 2000-11-29 2000-11-29 Бактериолитический комплекс, способ его получения и штамм для осуществления способа
RU2000129650 2000-11-29

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US11/247,553 Division US20060051336A1 (en) 2000-11-29 2005-10-11 Bacteriolytic complex, method of its production, and strain for realization of the method

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2002044352A1 true WO2002044352A1 (en) 2002-06-06
WO2002044352A9 WO2002044352A9 (en) 2002-10-24

Family

ID=20242623

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2001/000514 Ceased WO2002044352A1 (en) 2000-11-29 2001-11-28 Bacteriolytic complex, method for producing said complex and strain for carrying out said method.

Country Status (5)

Country Link
US (2) US7150985B2 (ru)
KR (1) KR20020073189A (ru)
CN (1) CN1266271C (ru)
RU (1) RU2193063C2 (ru)
WO (1) WO2002044352A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2367469C2 (ru) * 2007-05-23 2009-09-20 Закрытое акционерное общество "Биологические исследования и системы" Фармацевтическая композиция для местного применения, обладающая антибактериальным и некролитическим действием, на основе лизоамидазы

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2296576C2 (ru) * 2005-05-18 2007-04-10 Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ БАКТЕРИЦИДНЫМ ДЕЙСТВИЕМ В ОТНОШЕНИИ ВЕГЕТАТИВНЫХ И СПОРОВЫХ КЛЕТОК Bacillus anthracis, СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
RU2407782C2 (ru) * 2009-02-20 2010-12-27 Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН ЛИТИЧЕСКАЯ ПРОТЕАЗА AlpA БАКТЕРИИ LYSOBACTER SP. XL1, ФРАГМЕНТ ДНК, КОДИРУЮЩИЙ ЛИТИЧЕСКУЮ ПРОТЕАЗУ AlpA БАКТЕРИИ LYSOBACTER SP. XL1, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКОЙ ПРОТЕАЗЫ AlpA БАКТЕРИИ LYSOBACTER SP. XL1
RU2408725C2 (ru) * 2009-02-20 2011-01-10 Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН ЛИТИЧЕСКАЯ ПРОТЕАЗА AlpB БАКТЕРИИ Lysobacter sp. XLI, ФРАГМЕНТ ДНК, КОДИРУЮЩИЙ ЛИТИЧЕСКУЮ ПРОТЕАЗУ AlpB БАКТЕРИИ Lysobacter sp. XLI, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКОЙ ПРОТЕАЗЫ AlpB БАКТЕРИИ Lysobacter sp. XLI
WO2013087764A1 (en) * 2011-12-14 2013-06-20 Fraunhofer Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Process for degrading a biofilm on surfaces of objects
RU2744107C1 (ru) * 2020-10-05 2021-03-02 Общество с ограниченной ответственностью «Газпромнефть Научно-Технический Центр» Штамм бактерий Xanthomonas fuscans - продуцент ксантановой камеди

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1353877A (en) * 1972-10-12 1974-05-22 Nat Food Research Inst Directo Lytic enzymes
US3816260A (en) * 1971-03-29 1974-06-11 Kikkoman Shoyu Co Ltd Bacterial cellwall lytic enzyme and process for producing the same
US3963577A (en) * 1973-09-28 1976-06-15 Ljubov Nikolaevna Shinkarenko Lytic enzyme and method of preparing same
RU1549227C (ru) * 1984-10-04 1995-12-20 Институт биохимии и физиологии микроорганизмов РАН Способ получения комплекса литических ферментов

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1774658A1 (ru) * 1990-11-05 1995-09-10 Институт Биохимии И Физиологии Микроорганизмов Ан Ссср Способ получения комплекса литических ферментов
SU1755581A1 (ru) * 1990-11-05 1995-08-20 Институт Биохимии И Физиологии Микроорганизмов Ан Ссср Способ выделения комплекса литических ферментов

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3816260A (en) * 1971-03-29 1974-06-11 Kikkoman Shoyu Co Ltd Bacterial cellwall lytic enzyme and process for producing the same
GB1353877A (en) * 1972-10-12 1974-05-22 Nat Food Research Inst Directo Lytic enzymes
US3963577A (en) * 1973-09-28 1976-06-15 Ljubov Nikolaevna Shinkarenko Lytic enzyme and method of preparing same
RU1549227C (ru) * 1984-10-04 1995-12-20 Институт биохимии и физиологии микроорганизмов РАН Способ получения комплекса литических ферментов

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Stepnaya O.A. et al.; "Bakteriolitichesky komplex lizoamidaza., 1. Opredelenie prirody vzaimodeistviya fermentov i polisakharida, vkhodyaschikh v sostav komplexa", Biokhimiya, M. Nauka, 1993, volume 58, publication 10, pages 1523-1528. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2367469C2 (ru) * 2007-05-23 2009-09-20 Закрытое акционерное общество "Биологические исследования и системы" Фармацевтическая композиция для местного применения, обладающая антибактериальным и некролитическим действием, на основе лизоамидазы

Also Published As

Publication number Publication date
WO2002044352A9 (en) 2002-10-24
RU2193063C2 (ru) 2002-11-20
US20030148497A1 (en) 2003-08-07
US20060051336A1 (en) 2006-03-09
US7150985B2 (en) 2006-12-19
KR20020073189A (ko) 2002-09-19
CN1266271C (zh) 2006-07-26
CN1396952A (zh) 2003-02-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Gale Factors influencing bacterial deamination: Aspartase II: its occurrence in and extraction from Bacterium coli and its activation by adenosine and related compounds
US3810820A (en) Urate oxidase and process for the production thereof
PT2560506E (pt) Processo para a produção de um produto natural fermentado
WO2002044352A1 (en) Bacteriolytic complex, method for producing said complex and strain for carrying out said method.
JPS6128389A (ja) ラクタ−ゼ調製物の精製方法
JPH03272657A (ja) アルコール耐性付与醗酵物の製造方法及びアルコール耐性付与醗酵食品
CN105969743A (zh) 降解甲醛的微生物酶制剂的制备工艺
KR0149831B1 (ko) 복합효소의 반응으로 생성되는 건강식품 및 그 제조방법
JPH0257182A (ja) 新規ケラタン硫酸分解酵素並びにそれを生産する微生物及び方法
CN107058266B (zh) 一种通过发酵工艺制备溶菌酶的方法
JP2000166583A (ja) 枯草菌等が産生する無機物及びその酸塩と副産物及びその誘導体
RU2824212C1 (ru) Способ получения пептидной фракции из водорастворимых белков микроводорослей, обладающей антибиотическими свойствами
RU2158302C2 (ru) Питательная среда для роста бифидо- и лактобактерий
CN114806920B (zh) 一种双歧杆菌的培养基及其培养方法与应用
CN103215314A (zh) 一种鱼鳞经双菌种多酶系发酵生产护肤品原料的方法
RU2117041C1 (ru) Питательная среда для культивирования эшерихий
JPH0998779A (ja) トレハロース合成酵素、その製法及びそれを用いたトレハロースの製造法
JPH0391478A (ja) コラーゲン分解酵素の製造方法
Căpitănescu et al. Ovine antivenom for Vipera ammodytes
CN105567619B (zh) 一种产胆盐水解酶变异体的基因工程菌及其制备方法
WO2003018742A2 (en) Recombinant l-asparaginase erwinia caratovora
WOLF CONTRIBUTIONS TO THE BIOCHEMISTRY OF PATHOGENIC ANAEROBES. ¹ VI. THE PROTEOLYTIC ACTION OF BACILLUS SPOROGENES (METCHNIKOFF) AND BACILLUS WELCHII.
JPS59159779A (ja) スエヒロタケによるグルコアミラーゼの製造法
JPS6317046B2 (ru)
SU1406160A1 (ru) Способ получени эндонуклеазы рестрикции Fок1 из FLаVовастеRIUм океаNокоIтеS

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): CN KR US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 10181498

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1020027009664

Country of ref document: KR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 018042473

Country of ref document: CN

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1020027009664

Country of ref document: KR

AK Designated states

Kind code of ref document: C2

Designated state(s): CN KR US

COP Corrected version of pamphlet

Free format text: PAGE 1/1, DRAWINGS, REPLACED BY A NEW PAGE 1/1; DUE TO LATE TRANSMITTAL BY THE RECEIVING OFFICE